FR2550715A1 - COMPARTMENTED CENTRIFUGATION CHAMBER FOR LARGE SCALE DENSITY GRADIENT ULTRACENTRIFUGATION - Google Patents
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Abstract
A.CHAMBRE DE CENTRIFUGATION COMPARTIMENTEE POUR L'ULTRACENTRIFUGATION A GRADIENT DE DENSITE A GRANDE ECHELLE; B.CHAMBRE CARACTERISEE EN CE QUE LES PAROIS OU LAMELLES 10 SONT POSITIONNEES PENDANT LA CENTRIFUGATION DANS LES PLANS COINCIDANT AVEC LES LIGNES DE FORCE CENTRIFUGE 18 ET PARALLELES A L'AXE DE ROTATION 16 OU AU MOINS, LES PAROIS OU LAMELLES 10 SONT NETTEMENT PROCHES DES PLANS 10; C.L'INVENTION CONCERNE UNE CHAMBRE DE CENTRIFUGATION COMPARTIMENTEE POUR L'ULTRACENTRIFUGATION A GRADIENT DE DENSITE A GRANDE ECHELLE, NOTAMMENT POUR LA SEPARATION DE CELLULES, ORGANELLES OU MACROMOLECULES OU ANALOGUES.A. COMPARTMENTAL CENTRIFUGATION CHAMBER FOR LARGE-SCALE DENSITY GRADIENT ULTRACENTRIFUGATION; B. CHAMBER CHARACTERIZED IN THAT THE WALLS OR SLATS 10 ARE POSITIONED DURING CENTRIFUGATION IN THE PLANS COINCIDING WITH THE CENTRIFUGAL FORCE LINES 18 AND PARALLEL TO THE ROTATION AXIS 16 OR AT LEAST, THE WALLS OR SLATS 10 ARE CLEARLY CLOSE TO THE PLANS 10; C. THE INVENTION CONCERNS A COMPARTIMENTED CENTRIFUGATION CHAMBER FOR LARGE-SCALE GRADIENT DENSITY ULTRACENTRIFUGATION, IN PARTICULAR FOR THE SEPARATION OF CELLS, ORGANS OR MACROMOLECULES OR SIMILAR.
Description
Chambre de centrifugation compartimentée pour l'ultracentrifugation àCompartmentalized centrifuge chamber for ultracentrifugation at
gradient de densité à grande échelle. large-scale density gradient.
La présente invention concerne une chambre de The present invention relates to a chamber of
centrifugation pour la séparation de particules en suspension par centrifugation à gradient de densité. centrifugation for the separation of particles in suspension by density gradient centrifugation.
La séparation de particules biologiques telles que cellules, organelles et macromolécules obtenue en exploitant leurs différences en densité ou en taille est The separation of biological particles such as cells, organelles and macromolecules obtained by exploiting their differences in density or size is
une méthode couramment utilisée dans le domaine biomédical. a method commonly used in the biomedical field.
La centrifugation par gradient de densité est utilisée pour séparer des particules de différentes den10 sités Tubes de centrifugation d'un volume compris entre environ 10 ml et 50 ml sont habituellement utilisées Density gradient centrifugation is used to separate particles of different densities. Centrifuge tubes with a volume of between about 10 ml and 50 ml are usually used.
cette fin.this end.
Etant donné que les gradients de densité deviennent de moins en moins stables lorsque l'on augmente le 15 volume des tubes et qu'une turbulence apparaît lors de l'accélération et la décélaration de la centrifugeuse, des tubes de plus grand volume peuvent difficilement être Since the density gradients become less and less stable when the volume of the tubes is increased and turbulence occurs during the acceleration and deceleration of the centrifuge, larger volume tubes may be difficult to accommodate.
utilisés pour le traitement de grandes quantités. used for the treatment of large quantities.
Si l'on désire séparer des échantillons de grands volumes, il est nécessaire de répartir les aliquotes entre plusieurs tubes à gradient de taille réduite, ce qui If it is desired to separate large volumes of samples, it is necessary to distribute the aliquots among a plurality of reduced gradient tubes.
prend du temps.takes time.
On peut utiliser différents types de rotors zonaux pour la centrifugation à gradient de densité à Different types of zonal rotors can be used for density gradient centrifugation at
grande quantité, mais ceux-ci sont onéreux et des équipe- large quantities, but these are expensive and
ments supplémentaires tels que des dispositifs de pompage additional devices such as pumping devices
sont alors nécessaires.are then necessary.
Des réceptacles et dispositifs pour la centrifugation qui sont subdivisés en deux compartiments ou plus sont décrits dans les brevets U S N 3 456 876 et DE-OS 2 648 844 (République Fédérale d'Allemagne) Les subdivisions sont destinées à réduire la distance de sédimentation pour les très petites particules, essentiellement dans le cas des particules dont la vitesse de sédimentation est inférieure à 10-2 unités de Svedberg, 10 telles que les macromolécules biologiques, ce qui a pour conséquence une réduction globale du temps requis pour la sédimentation L'unité "Svedberg" est une unité du système métrique, utilisée communément en centrifugation dont la Containers and devices for centrifugation which are subdivided into two or more compartments are described in US Patent Nos. 3,456,876 and DE-OS 2,648,844 (Federal Republic of Germany). The subdivisions are intended to reduce the sedimentation distance for very small particles, essentially in the case of particles with a sedimentation rate of less than 10-2 Svedberg units, such as biological macromolecules, which results in an overall reduction in the time required for sedimentation. Svedberg "is a unit of the metric system, commonly used in centrifugation whose
dimension est de 10-13 sec.dimension is 10-13 sec.
Cependant, ces dispositifs sont conçus pour la 15 sédimentation de très petites particules par ultracentrifugation et ne sont pas utilisables pour la centrifugation à gradient de depsité La densité, qui est le critère prépondérant en manière de centrifugation à gradient de However, these devices are designed for the sedimentation of very small particles by ultracentrifugation and are not suitable for the dexterity gradient centrifugation. The density, which is the predominant criterion for centrifugation at a gradient of
densité est d'importance mineure en comparaison avec d'autres 20 paramètres dans le cas de la sédimentation. density is of minor importance in comparison with other parameters in the case of sedimentation.
L'objectif de la présente invention est de créer un dispositif pour la centrifugation à grandient de densité à grande échelle (pour des volumes compris entre plus de cent millilitres et quelques litres), qui soit simple, efficace et qui puisse être utilisé en combinaison avec des centrifugeuses de laboratoire et les rotors aà The object of the present invention is to provide a large-scale density centrifuge device (for volumes of more than 100 milliliters to a few liters) which is simple, effective and can be used in combination with laboratory centrifuges and rotors
godets pivotants habituels, qui sont couramment disponibles. usual swivel buckets, which are commonly available.
Le gradient de densité doit être mécaniquement stable et les turbulences indésirables doivent être effica30 cement prévenues En particulier, le gradient de densité doit être suffisamment stable pour résister aux forces de rotation qui apparaissent lors de l'accélération et la décélération du rotor de la centrifugeuse et qui ont tendance à causer des tourbillons inacceptables dans les The density gradient must be mechanically stable and the undesirable turbulence must be effectively prevented. In particular, the density gradient must be sufficiently stable to withstand the rotational forces which appear during the acceleration and deceleration of the rotor of the centrifuge and which tend to cause unacceptable vortices in the
tubes à gradient de grande taille.gradient tubes of large size.
D'une façon générale, les objectifs de cette invention sont atteints en subdivisant une chambre de centrifugation de grande taille en plusieurs compartiments disposés comme indiqué plus loin, ceci au moyen de parois ou de lamelles La caractéristique principale de cette invention est la présence des parois qui sont orientées suivant les plans radiaux et verticaux pendant la centri10 fugation, c'est-à-dire dans les plans coïncidant avec les In general, the objects of this invention are achieved by subdividing a large centrifuge chamber into several compartments arranged as indicated below, this by means of walls or slats. The main feature of this invention is the presence of the walls. which are oriented in radial and vertical planes during centrifugation, that is, in planes coinciding with the
lignes de force centrifuge et parallèles à l'axe de rotation. Centrifugal lines of force parallel to the axis of rotation.
L'invention sera décrite en aux dessins annexés dans lesquels: détail en se référant The invention will be described in the accompanying drawings in which: detail with reference
La figure 1 est une vue en coupe dans la direc- FIG. 1 is a sectional view in the direction
tion de l'axe de rotation; la figure 2 est ligne 2-2 de la figure 1; la figure 3 est 20 figure 1; une vue en coupe suivant la une coupe axiale suivant la la figure 4 est ligne 4-4 de la figure 3; la figure 5 est lisation comprenant une par 25 la figure 6 est de la figure 5; la figure 7 est une vue en coupe suivant la une vue suivant un mode de réa'tie du support intégré; une coupe suivant la ligne 6-6 une vue en perspective suivant rotation axis; Figure 2 is line 2-2 of Figure 1; Figure 3 is Figure 1; a sectional view along the axial section of Figure 4 is line 4-4 of Figure 3; Fig. 5 is an embodiment including one in Fig. 6 and Fig. 5; Figure 7 is a sectional view according to a view according to a mode of réa'tie integrated support; a section along line 6-6 a perspective view next
une autre variante de réalisation.another variant embodiment.
Suivant les figures 1 et 2, la disposition des 30 parois de séparation 10 se trouve dans une chambre de According to FIGS. 1 and 2, the arrangement of the partition walls 10 is in a chamber of
centrifugation 12 installée dans le rotor à godets pivotants 14 d'une grande centrifugeuse de laboratoire. centrifugation 12 installed in the rotating bucket rotor 14 of a large laboratory centrifuge.
Cette disposition est telle que les parois (lamelles) 10 contrecarrent de la façon la plus efficace les This arrangement is such that the walls (slats) 10 counteract in the most effective way the
forces de rotation apparaissant en plus de la force centri- rotational forces appearing in addition to the centric force
fuge lors de l'accélération et la décélération d'une centrifugeuse; la formation de tourbillons est ainsi empêchée sans que la sédimentation ni le flottement radiaux des particules soient affectés En particulier, la disposition des parois exactement dans la direction radiale fuge during the acceleration and deceleration of a centrifuge; the formation of vortices is thus prevented without the radial sedimentation or floating of the particles being affected In particular, the arrangement of the walls exactly in the radial direction
prévient les "effets de paroi", c'est-à-dire la sédimentation de particules sur les parois. prevents "wall effects", that is, sedimentation of particles on the walls.
L'adjonction de parois perpendiculaires à l'axe de rotation n'apporte aucune autre stabilisation notable. 10 Une autre particularité caractéristique de cette invention est le fait qu'elle comprend une communication hydrostatique entre les compartiments individuels 20 au fond de la chambre à gradient, ce qui rend possible la The addition of walls perpendicular to the axis of rotation provides no other significant stabilization. Another characteristic feature of this invention is the fact that it comprises a hydrostatic communication between the individual compartments 20 at the bottom of the gradient chamber, which makes possible the
mise en couches et le fractionnement du gradient de densité 15 de façon simultanée dans chacun des compartiments. layering and fractionating the density gradient simultaneously in each of the compartments.
Le principal avantage de cette invention est sa possibilité à obtenir rapidement et simplement la mise en couches et le fractionnement d'un gradient de densité de grande taille Dans le cas de la centrifugation de volumes 20 supérieurs à 200 ml, il est possible d'économiser de façon considérable le temps et la main-d'oeuvre par rapport au procédé qui consiste à distribuer le même volume entre des The main advantage of this invention is its ability to quickly and simply layer and fractionate a large density gradient. In the case of centrifugation of volumes greater than 200 ml, it is possible to save time and labor in comparison with the process of distributing the same volume between
petits tubes à gradient de densité. small density gradient tubes.
Les "effets de paroi" sont évités grâce à la forme 25 en secteur des compartiments 20 et ainsi le pouvoir de résolution de la séparation par gradient à densité est amélioré par rapport aux tubes à gradient de densité à "Wall effects" are avoided due to the sectoral shape of the compartments 20 and thus the resolving power of the density gradient separation is improved over the density gradient tubes at
parois parallèles que l'on rencontre communément. parallel walls that we commonly meet.
De plus, il devient aisé de concevoir cette 30 chambre à gradient de densité compartimentée comme un système complètement isolé pour la séparation par gradient In addition, it becomes easy to design this compartmentalized density gradient chamber as a completely isolated system for gradient separation.
de densité en milieu stérile.of density in sterile medium.
En comparaison avec les rotors zonaux, qui sont aussi destinées à la centrifugation par gradient de In comparison with the zonal rotors, which are also intended for centrifugation by gradient of
densité à grande échelle, cette invention présente l'avan- large-scale density, this invention presents the advantage
tage d'être potentiellement moins onéreuse et plus commode d'emploi La chambre à gradient de densité étant facilement transportable, il est possible de remplir et de fractionner le gradient dans différents endroits Les avantages par rapport aux rotors zonaux sont les plus marqués lors de la séparation de particules biologiques relativement grandes telles que des cellules complètes et des grandes particules subcellulaires, car seules des forces centrifuges faibles As the gradient density chamber is easily transportable, it is possible to fill and fractionate the gradient in different locations. The advantages over the zonal rotors are most pronounced at the time. separation of relatively large biological particles such as whole cells and large subcellular particles, as only weak centrifugal forces
ou modérées sont nécessaires.or moderate are necessary.
Les figures 3 et 4 montrent la chambre prête Figures 3 and 4 show the room ready
à la centrifugation.centrifugation.
Les éléments essentiels nécessaires au remplissage et au fractionnement simultanés font partie intégrante de la chambre de centrifugation De plus, la chambre com15 plète est un système fermé avec seulement deux raccords pour The essential elements necessary for simultaneous filling and splitting are an integral part of the centrifuge chamber. Moreover, the complete chamber is a closed system with only two connections for
le remplissage et la vidange.filling and emptying.
La chambre de centrifugation se compose de trois ensembles fonctionnels: ( 1) la partie inférieure 22 qui contient un canal 20 de communication 24 avec des ouvertures étroites 26 à la base de chaque compartiment 20 ( 4 dans le cas de la figure 4) Ces ouvertures d'admission 26 divergent sous forme de pyramides oblongues creuses 28 Les compartiments individuels 20 communiquent hydrostatiquement par le canal 24 A 25 son point le plus extérieur 30, ce canal 24 communique avec un tuyau résistant à la pression hydrostatique qui sort de la chambre et qui y est attaché par sa partie supérieure pendant la centrifugation Toutes les solutions peuvent aussi bien entrer que sortir de la chambre par ce tuyau Le 30 raccord entre le tuyau et le canal commun doit pouvoir résister à la pression hydrostatique multipliée par la The centrifuge chamber is composed of three functional assemblies: (1) the lower part 22 which contains a communication channel 24 with narrow openings 26 at the base of each compartment 20 (4 in the case of FIG. 4) These openings The individual compartments 20 communicate hydrostatically through the channel 24 at its outermost point 30, this channel 24 communicates with a hydrostatic pressure-resistant hose which leaves the chamber and which It is attached by its upper part during the centrifugation. All solutions can enter as well as exit the chamber through this pipe. The connection between the pipe and the common channel must be able to withstand the hydrostatic pressure multiplied by the
force centrifuge pendant la centrifugation. centrifugal force during centrifugation.
( 2) la partie médiane 32 comprenant les compartiments 20 en forme de secteur, oblongs et juxtaposés. 35 ( 3) la partie supérieure 34, conçue de façon similaire à la partie inférieure 22 qui comprend un raccord pour tuyau 35 situé au point le plus élevé 36 (2) the middle part 32 comprising the sector-shaped compartments 20, oblong and juxtaposed. (3) the upper portion 34, similar in design to the lower portion 22 which includes a pipe fitting 35 located at the highest point 36
de son canal commun 38.of its common channel 38.
Les deux raccords pour tuyaux peuvent être fermé par des obturateurs adaptables sur les embouts de "Luer" si nécessaire. Le gradient de densité est d'abord mis en couches par le bas de la chambre en commençant par la solution la moins dense et plus tard extrait couche par couche, soit par fractionnement ascendant, c'est-à-dire 10 en introduisant une solution dense par l'orifice du bas, soit par fractionnement descendant, c'est-à-dire en extrayant les différentes fractions directement par l'orifice et The two hose connections can be closed with adapters on the "Luer" tips if necessary. The density gradient is first layered through the bottom of the chamber starting with the least dense solution and later extracted layer by layer, either by upward fractionation, i.e., introducing a solution. dense by the bottom orifice, either by downward fractionation, that is to say by extracting the different fractions directly through the orifice and
le tuyau du bas Dans chacun des cas les couches correspondantes dans les différents compartiments se rejoignent 15 dans un canal commun. In each case the corresponding layers in the different compartments meet in a common channel.
La chambre de centrifugation compartimentée peut être conçue comme un accessoire pour n'importe quelle grande centrifugeuse de laboratoire à godets pivotants Les dimensions détaillées de la chambre de centrifugation dépendent de la géométrie de la centrifugeuse destinée à être utilisée La chambre de centrifugation peut être suspendue au rotor par l'intermédiaire soit de pivots intégrés, The compartmentalized centrifuge chamber can be designed as an accessory for any large laboratory centrifuge with rotating buckets. The detailed dimensions of the centrifuge chamber depend on the geometry of the centrifuge to be used. The centrifuge chamber can be suspended from the centrifuge chamber. rotor via either integral pivots,
soit d'un support séparé.a separate support.
Les figures 5 et 6 montrent un mode de réalisa25 tion qui comprend une partie du support intégrée 42 par laquelle la chambre est suspendue aux pivots 40 d'un rotor 14 à godets pivotants Les parois extérieures 44 et la partie inférieure 22 de la chambre peuvent être des FIGS. 5 and 6 show an embodiment which comprises a portion of the integrated support 42 through which the chamber is suspended from the pivots 40 of a rotor 14 with pivoting buckets. The outer walls 44 and the lower part 22 of the chamber can be of the
parties intégrées de la partie du support 42. integrated parts of the support part 42.
Les matériaux constituant le dispositif seront choisis en fonction des différents besoins Lorsque la chambre doit être utilisée en milieu stérile, des matériaux résistant à l'autoclave tels que métaux, verre ou silicone The materials constituting the device will be chosen according to the different needs When the chamber is to be used in a sterile environment, autoclave resistant materials such as metals, glass or silicone
sont avantageux.are advantageous.
Il est possible de réaliser la chambre de centrifugation à gradient démontable en 2, 3 ou plus d'éléments à It is possible to realize the demountable gradient centrifuge chamber in 2, 3 or more elements to
des fins de nettoyage.cleaning purposes.
Ces éléments correspondent aux parties fonc5 tionnelles décrites précédemment Des rainures complémentaires, équipées d'un joint et situées au niveau de la surface de contact de la partie inférieure 22 faisant face aux parois de la partie médiane 32, assurent un contact ferme entre les deux parties Lorsque la chambre de centri10 fugation est montée, la rigidité de l'ensemble est assurée par des vis, des attaches, ou autres pièces assurant une liaison Pendant la centrifugation, l'étanchéité de pièces These elements correspond to the functional parts described above. Complementary grooves, equipped with a seal and located at the contact surface of the lower part 22 facing the walls of the middle part 32, ensure firm contact between the two parts. When the centrifugation chamber is mounted, the rigidity of the assembly is ensured by screws, fasteners, or other parts ensuring a connection. During the centrifugation, the sealing of parts
entre elles est assurée principalement par la force centrifuge. between them is ensured mainly by the centrifugal force.
La figure 7 qui est une vue en perspective, montre un mode de réalisation différent Un tube de centrifugation à grande taille 50 est compartimenté par une pièce à insérer comprenant des lamelles l Oa et des pièces assurant une liaison fixe 52 et 54 Les dimensions détaillées des lamelles l Oa et de pièces 52 et 54 sont adaptées au tube et au rotor utilisé de façon que les lamelles l Oa sont positionnées pendant la centrifugation dans les plans coincidant avec les lignes de force centrifuge 18 a et parallèles FIG. 7, which is a perspective view, shows a different embodiment. A large centrifuge tube 50 is compartmentalized by an insert part comprising lamellae Oa and parts providing a fixed connection 52 and 54. lamellae Oa and parts 52 and 54 are adapted to the tube and the rotor used so that the lamellae Oa are positioned during centrifugation in the planes coinciding with the lines of centrifugal force 18a and parallel
à l'axe de rotation 16 a.to the axis of rotation 16 a.
RE V E N D I CA T I O N SRE V E N D I CA T IO N S
1 ) Chambre ( 12) de centrifugation compartimentée, subdivisée par des parois ou lamelles en plusieurs compartiments ( 20) communiquant hydrostatiquement, devant être 5 utilisée conjointement avec une centrifugeuse et un rotor à godet ( 14) pivotants ou à angle fixe, chambre caractérisée en ce que les parois ou lamelles ( 10) sont positionnées pendant le centrifugation dans les plans coincidant avec les lignes de force centrifuge ( 18) et parallèles à l'axe de rotation ( 16), ou au moins, les parois ou lamelles 1) Chamber (12) compartmentalized centrifugation, divided by walls or slats in several compartments (20) communicating hydrostatically, to be used in conjunction with a centrifuge and a rotor bucket (14) pivoting or fixed angle, chamber characterized in that the walls or lamellae (10) are positioned during centrifugation in the planes coinciding with the centrifugal force lines (18) and parallel to the axis of rotation (16), or at least the walls or lamellae
( 10) sont nettement proches des plans ( 10). (10) are clearly close to the planes (10).
2 ) Chambre de centrifugation compartimentée selon 2) compartmentalized centrifugation chamber according to
la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est suspendue au rotor ( 14) au moyen d'un godet ou d'un support. claim 1, characterized in that it is suspended from the rotor (14) by means of a bucket or a support.
3 ) Chambre de centrifugation compartimentée selon la revendication 1, caractériséeen ce qu'elle est suspendue au rotor ( 14) par l'intermédiaire d'un support intégré 3) compartmentalized centrifugation chamber according to claim 1, characterized in that it is suspended from the rotor (14) via an integrated support
ou séparé ( 42).or separate (42).
4 ) Chambre de centrifugation compartimentée 20 selon l'une quelconque des revendications 1, 2 ou 3, 4) compartmentalized centrifugation chamber 20 according to any one of claims 1, 2 or 3,
caractérisée en ce qu'elle constitue un système entièrement clos, excepté les raccords obturables destinés aux tuyaux characterized in that it constitutes a fully enclosed system, except for closable fittings for pipes
d'entrée/sortie ( 35).input / output (35).
) Chambre de centrifugation compartimentée 25 selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 3 ou 4, ) Compartmentalized centrifugation chamber according to any one of claims 1, 2, 3 or 4,
caractérisée en ce qu'elle comprend deux ou plus, parties pouvant être démontées à des fins de nettoyage, soit: a) une partie inférieure avec des ouvertures d'admission pour chacun des compartiments, qui communique d'un côté et diver30 ge en forme de cône ou de pyramide creuse, b) une partie médiane comprenant les compartiments ( 20) et, c) une partie supérieure ( 34) qui est conçue de façon characterized in that it comprises two or more parts that can be disassembled for cleaning purposes, namely: a) a lower part with inlet openings for each of the compartments, which communicates on one side and shape-wise cone or hollow pyramid, b) a medial portion comprising the compartments (20) and, c) an upper portion (34) which is designed so
similaire à la partie inférieure ( 22). similar to the lower part (22).
6 ) Chambre de centrifugation compartimentée selon 6) compartmentalized centrifugation chamber according to
l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en any of claims 1 to 5, characterized in that
ce qu'elle constitue de matériaux résistant à la chaleur what it constitutes of heat-resistant materials
d'un autoclave.an autoclave.
7 ) Chambre de centrifugation compartimentée 7) Chamber of centrifugation compartmentalized
selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de dispositif à usage according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it is in the form of a device for use
unique stérile ou non stérile.single sterile or non-sterile.
8 ) Chambre de centrifugation compartimentée 8) Chamber of centrifugation compartmentalized
selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, carac10 térisée en ce qu'elle comprend des clapets ou robinets, intégrés dans des canaux ou des tuyaux. according to any one of claims 1 to 7, characterized in that it comprises valves or faucets integrated in channels or pipes.
9 ) Chambre de centrifugation compartimentée 9) Chamber of centrifugation compartmentalized
selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle communique pendant la centrifugation 15 avec une pièce non rotative soit en permanence, soit à un according to any one of claims 1 to 8, characterized in that it communicates during centrifugation 15 with a non-rotating part either permanently or at a
instant donné, rendant ainsi possible le transvasement de fluides. given moment, thus making it possible to transfer fluids.
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |