FI80383B - Foerfarande foer framstaellning av ett terapeutiskt anvaendbart immunoglobulinkonjugat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ett terapeutiskt anvaendbart immunoglobulinkonjugat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI80383B FI80383B FI841260A FI841260A FI80383B FI 80383 B FI80383 B FI 80383B FI 841260 A FI841260 A FI 841260A FI 841260 A FI841260 A FI 841260A FI 80383 B FI80383 B FI 80383B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- immunoglobulin
- formula
- conjugate
- antibody
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/04—Dimeric indole alkaloids, e.g. vincaleucoblastine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6805—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a vinca alkaloid
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/828—Cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
1 80383
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten immunoglobulii-nikonjugaattien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti 5 käyttökelpoisen konjugaatln valmistamiseksi, joka sisältää Vinca-alkaloidlosan, joka on kovalenttisesti liittynyt
immunoglobuliiniin tai immunoglobuliinifragmenttiin, ja jolla on kaava I
,n *R3 10 7' 6' Ay 4
>-n · · R
li; , ,,8' i 3' ,...r5 12* 1 1 2' 13'^ Α16^ΐ8·> 15 14- 15' I . il H i o j 20 ! I [iö—| A) ^VT¥ /CH3 CH.,0—1 4,. CH 2 25 3 j OCOXCOIg
r2 : 0H
r! jossa Ig merkitsee immunoglobuliinia tai immunoglobuliini-30 fragmenttia, johon on liittynyt yksi tai useampi Vinca-alkaloidiryhmä; ja X on suoraketjuinen Cx_4-alkyleeni; R1 on COOq_3-alkyyli tai CONH2; R2 on CH3 tai CHO; ja käsiteltäessä R4 ja R5 erillisinä, R5 on H, R4 on etyyli ja R3 on H tai OH; ja käsiteltäessä R4 ja R5 yhdessä niiden 35 hiiliatomien kanssa, joihin ne ovat sitoutuneet, ne muo- 2 80383 dostavat oksiraanirenkaan ja R3 on etyyli. Uusilla immuno-globuliinikonjugaateilla on farmaseuttisia ominaisuuksia ja erityisesti sytostaattista aktiivisuutta.
Eräs ryhmä yhdisteitä, jotka ovat sytostaattista 5 ja laajasti käytettyjä syövän hoidossa, ovat Vinca-suvun kasveista saatavat indoli-dihydroindolialkaloidit sekä niistä valmistetut lääkeaineet. Näiden lääkkeiden kemote-rapeuttisen käytön tehokkuutta rajoittavat potilaassa ilmenevät haitalliset sivuvaikutukset, ja näiden vaikutusten 10 minimoimista on paljon tutkittu. Esimerkiksi GB-patentti-julkaisussa 2 090 837 kuvataan vindesiinin, joka on yksi niistä Vinca-alkaloidilääkeaineista, joihin edellä viitattiin, immunoglobuliinln kanssa muodostamaa konjugaattia, jossa vindesiiniosa on liittynyt suoraan vindesiinimole-15 kyylin 3-aseman kautta. Koska immunoglobuliini on vasta-aine, konjugaatti kerääntyy vaikutuskohtaan vähentäen myrkyllistä vaikutusta muihin kudoksiin ja mahdollisesti vähentäen potilaassa ilmeneviä haitallisia sivuvaikutuksia.
Uusi konjugaatti on Vinca-alkaloidin, kuten esimer-20 kiksi kasvaimia vastaan vaikuttavan dimeerisen 4-asetoksi-tai 4-hydroksi( indoli-dihydroindoli)alkaloidin, johdannainen ja immunoglobuliiniosaan voi olla kovalenttisesti liittyneenä yksi tai useampia sellaisia Vinca-alkaloidi-osia.
25 Immunoglobuliini tai immunoglobuliinifragmentti on vasta-aine tai vasta-ainefragmentti, jolla on antigeeniä tunnistavat ominaisuudet. Edullinen immunoglobuliinimate-riaali on vasta-aine tai vasta-ainefragmentti, joka soveltuu ihmiskehossa esiintyvien ei-toivottujen solujen pin-30 nalla olevien antigeenien tunnistamiseen. Myös toisenlaiset immunoglobuliinimateriaalit voivat tulla kysymykseen, koska niillä saattaa olla käyttöä eläinten hoidossa ja vertailukokeissa sekä varsinaisissa kokeissa.
3 80383
Uudet konjugaatit ovat käyttökelpoisia muun muassa syöpien hoidossa. Ne voivat olla tehokkaampia ja niillä on vähemmän sivuvaikutuksia, koska ne kykenevät lisäämään sytotoksisen lääkeaineen pitoisuutta vaikutuskohdassa.
5 Lääkeaineosan sitoutuminen "väliryhmän" -OCOXCO- välityk sellä tekee usein mahdolliseksi suuremman lääkeainemäärän liittämisen tuotettavaan immunoglobuliinin ja voi siten lisätä konjugaatin tehokkuutta. Konjugaatit soveltuvat myös käytettäviksi epäsuorissa menetelmissä, joissa niitä 10 käytetään solun pinnan antigeeneille spesifisten vasta-aineiden tunnistamiseen.
Immunoglobuliini tai immunoglobuliinifragmentti voidaan muuntaa yhtä tai useampaa esitettyä Vinca-alkaloi-diryhmää käyttäen.
15 Jotkut tunnetuista Vinca-alkaloideista, joista edellä mainittuja konjugaatteja valmistetaan, sisältävät esimerkiksi edellä esitetyn kaavan 1 mukaisen Vinca-alka-loidiosan, jossa 4-asema on eri tavoin substituoitu, kuten esimerkiksi: 20 vinblastiini, jossa R1 on C00CH3 , R2 on metyyli, R3 on hydroksyyli, R4 on etyyli, R5 on vety ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi; vindesiini, jossa R1 on C0NH2, R2 on metyyli, R3 on hydroksyyli, R4 on etyyli, R5 on vety ja substituenttina 4-25 asemassa on -OH; vinkristiini, jossa R1 on C00CH3 , R2 on formyyli, R3 on hydroksyyli, R4 on etyyli, R5 on vety ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi; leurosidiini, jossa R1 on COOCH3, R2 on metyyli, R3 on 30 etyyli, R4 on hydroksyyli, R5 on vety ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi; VLB "A" (4'-deoksivinblastiini), jossa R1 on COOCH3, R2 on metyyli, R3 ja R5 ovat vetyjä, R4 on etyyli ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi; 4 80383 VLB "B" (4’-deoksileurosidiini), jossa R1 on COOCH3, R2 on metyyli, R3 on etyyli, R4 ja R5 ovat vetyjä ja substi-tuenttina 4-asemassa on asetoksi; leurosiini, jossa R1 on COOCH3, R2 on metyyli, R3 on etyy-5 li, R4 ja R5 muodostavat yhdessä α-epoksidirenkaan (oksi-raanirenkaan) ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi; ja leuroformiini (N-formyylileurosiini), jossa R1 on COOCH3, R2 on formyyli, R3 on etyyli, R4 ja R5 muodostavat yhdessä 10 α-epoksidirenkaan ja substituenttina 4-asemassa on asetoksi .
4-desasetyylijohdannaisten kanta-alkaloideja koskevat kirjallisuusviitteet ovat seuraavat: leurosiini - US-patenttijulkaisu 3 370 057; 15 VBL - US-patenttijulkaisu 3 097 137; leurosidiini (vinrosidiini) ja leurokristiini (vinkristil-ni) - molempia käsittelee US-patenttijulkaisu 3 205 220; desmetyyli-VLB - US-patenttijulkaisu 3 354 163; vindesiini ja muut 3-karboksamidit - US-patenttijulkaisu 20 4 203 898; vinblastiinihappo, vinkristiinihappo jne. - US-patenttijulkaisu 4 102 390; 4'-epivinkristiini - US-patenttijulkaisu 4 143 041; leuroformiini, formyylileurosiini - US-patenttijulkaisu 25 4 279 816; ja deoksi-VLB "A" sekä "B" - Tetrahedron Letters 1958, 783. Muita Vinca-alkaloideja kuvataan US-patenttijulkaisuissa 4 166 810 ja RE 30 560.
Esimerkkejä niistä ryhmistä, joita X voi merkitä, 30 ovat metyleeni, etyleeni, propyleeni, butyleeni ja 1,2-dimetyylietyleeni ja vastaavat.
Tuhottavien solujen pinnan antigeeneille spesifiset inununoglobuliinit ja menettelytavat niiden tuottamiseksi immunisoitujen eläinten seerumista tai viljelemällä mono-35 klonaalisia tuotteita erittäviä hybridoomia ovat tunnet- 5 80383 tuja. Tyypiltään edullinen vasta-aine tämän keksinnön mukaisesti käytettäväksi on IgG-ryhmän immunoglobuliini. Joitakin tyypillisiä immunoglobuliineja ovat seuraavat: (i) ihmisen tai eläinten kasvaimiin liittyvien an-5 tigeenien monoklonaaliset tai polyklonaaliset vasta-aineet, (ii) ihmisen B- tai T-soluantigeenien monoklonaaliset tai polyklonaaliset vasta-aineet, (iii) ihmisen la-antigeenien monoklonaaliset tai 10 polyklonaaliset vasta-aineet, (iv) virus-, sieni- ja bakteeriantigeenien monoklonaaliset tai polyklonaaliset vasta-aineet, ja (v) ihmisen tulehdusreaktioihin tai allergisiin reaktioihin liittyvien solujen monoklonaaliset tai poly- 15 klonaaliset vasta-aineet.
Ihmisten tai eläinten kasvaimiin liittyvien antigeenien vasta-aineista voidaan mainita (i) karsinoembryanaalisella antigeenillä immunisoiduista vuohista tai lampaista eristetty Ig, 20 (ii) epäakuuttia varhaisimusoluleukemiaa sairasta van kaniinin seerumista eristetty IG, (iii) erilaisten kädellisten antiseerumista, joka on muodostunut akuuttia varhaisydinsoluleukemiaa, kroonista varhaisimusoluleukemiaa ja kroonista jyvässoluleukemiaa 25 vastaan, eristetty Ig, (iv) keuhkokarsinoomamateriaalilla immunisoiduista vuohista tai lampaista eristetty Ig, (v) ihmisen paksusuolen ja peräsuolen syövän vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva 30 monoklonaalinen Ig, (vi) ihmisen melanooman vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva monoklonaalinen IG, (vii) ihmisen leukemiasolujen kanssa reagoivia vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva 35 monoklonaalinen Ig, 6 80383 (viii) ihmisen varhaishermosolukasvainsolujen kanssa reagoivia vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomis-ta peräisin oleva monoklonaalinen Ig, (ix) ihmisen rintasyöpäantigeenien kanssa reagoivia 5 vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva monoklonaalinen Ig, (x) ihmisen munasarjasyöpäsolujen kanssa reagoivia vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva monoklonaalinen Ig, 10 (xi) ihmisen luusarkoomasolujen kanssa reagoivia vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva monoklonaalinen Ig, ja (xii) keuhkokarsinooman vasta-aineita erittävistä hiiren hybridoomista peräisin oleva monoklonaalinen Ig.
15 Kuten edellä on mainittu, konjugaatti voidaan val mistaa myös käyttäen immunoglobuliinifragmentteja, joista käytetään merkintöjä Fab, Fab' tai F(ab')2, tai IgM-mono-meeria, joita saadaan vasta-aineesta esimerkiksi proteo-lyyttisellä entsyymillä hajottamalla. Kyseiset aineet ja 20 valmistusmenetelmät ovat tunnettuja, ja voidaan mainita, että edullisia proteolyyttisiä entsyymejä ovat pepsiini ja papaiini.
Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja kon-jugaatteja ovat konjugaatit, joilla on edellä esitetty 25 kaava I, jossa R1 on COOMe tai CONH2, R3 on hydroksyyli, R* on etyyli ja R5 on vety; erityisesti konjugaatit, joita saadaan desasetyylivinblastiinista ja vindesiinistä. Ig on edullisesti ihmisen tai eläimen kasvainantigeenin monoklonaalinen vasta-aine.
30 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että saatetaan immunoglobuliini tai immunoglobuliinifrag-mentti regaoimaan puolihappojohdannaisen kanssa, jolla on kaava 7 80383 5' >R3 7 6' /N/ n4
--N 4·Τ* * R
5 1Γ , 8’ 1 3' 1.. . R5 »rrnf Τ li'15 I T^C-0-CHj
I ι II
10 H I O II
* 9 ..
I Ν 10 7 15 K^xtVV /C"3 15 13 5 *..f / OH °-Ho 7/Α i jl CH2 I ocoxcoz
r2 : >0H
20 R ·,
R
jossa X, R1, R2 , R3, R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin kaavassa I edellä ja Z on irtoava ryhmä, joka on atsidi- 25 (-N3)-ryhmä, halogeeniatomi, asyyllokslryhmä, jolla on kaava R7 .C0.0, jossa R7 on alifaattinen tai aromaattinen ryhmä, alkoksi- tai aryylioksiryhmä, metaanisulfonyyliok-si-, tosyloksi- tai bentseenisulfonyylioksiryhmä, imidat-soyyliradikaali tai N-asyylihydroksyyliamiiniryhmä.
30 Irtoava ryhmä Z on siis peptidikemiassa yleisesti käytetty ryhmä kovalenttisen amidisidoksen (-CONH) muodostamiseen konjugaatln ja immunoglobullinimolekyylissä tai -fragmentissa olevan vapaan aminoryhmän välille. Z:n kaltaiset ryhmät ovat tunnettuja tällä alalla, ja niitä käsi- 35 tellään esimerkiksi teoksessa M. Bodanszky, Y. S. Klauser 8 80383 ja M. A. Ondetti, Peptide Synthesis, 2. painos, John Wiley & Sons, 1976, erityisesti sivuilla 85 - 136. Mainittakoon, että X:n merkityksistä halogeenistani voi olla esimerkiksi bromi ja erityisesti kloori, R7 on esimerkiksi C1_3-alkyy-5 li, alkoksiryhmä on edullisesti C3_3-alkoksi, tai Z on esimerkiksi sukkinimidoksi, ftalimidoksi tai bentsotriat-solyylioksi. Edullisia esimerkkejä ovat yhdisteet, joissa Z on N-asyylihydroksyyliamiiniryhmä, esimerkiksi N-hydr-oksisukkinimidiesterit, joita valmistetaan käyttämällä 1-10 sykloheksyyli-3-(2-morfoliinietyyli)karbodi-imidi(meto-p-tolueenisulfonaattia) tai 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä tai seka-anhydridin kautta, kuten isobutyylikloori-formiaattia käytettäessä saatavan seka-anhydridin kautta. Kun Z on imidatsoyyliryhmä, se voidaan muodostaa käyttä-15 mällä karbonyylidi-imidatsolia, ja kun Z on R7C0-0, jossa R7 on .3-alkyyli, erityisesti etyyli tai isobutyyli, se voidaan valmistaa käyttämällä vastaavasti 1-etoksikarbon-yyli-2-etoksi-l,2-dihydrokinoliinia tai isobutyylikloori-formiaattia.
20 Yhdisteitä, joilla on kaava II, valmistetaan anta malla vastaavan, edellä mainitun kaavan II mukaisen vapaan hapon, jossa Z on OH, reagoida sopivan aktivoivan yhdisteen kanssa inertissä liuottimessa, kuten esimerkiksi di-metyyliformamidissa, ja edullisesti -20...+75°C:n lämpöti-25 lassa. Vapaat hapot (Z on OH) valmistetaan seuraavilla menetelmillä.
Ensin valmistetaan soveltuva 4-desasetyyli(indoli-dihydroindoli) esimerkiksi Hargove'n menettelytapaa käyttäen (US-patenttijulkaisu 3 392 173).
30 4-desasetyyliyhdiste asyloidaan sen jälkeen karbok- syylihappoanhydridillä, jonka kaava on 0 Λ
0 X
Y
o 9 80383 jossa X:llä on aikaisemmin ilmoitettu merkitys.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää asyloivaa yhdistettä, jonka kaava on Z1COXCOZ2, jossa Z1 on aktivoiva ryhmä ja Z2 on karboksyyliryhmän suojaryhmä, ja poistaa 5 karboksyyliryhmää suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa Z on OH. Sellaiset yhdisteet muutetaan sitten aktiivisiksi yhdisteiksi reaktiolla sopivan aktivoivan yhdisteen kanssa.
Kun indoli-dihydroindolin on määrä reagoida meri-10 pihkahappoanhydridin tai vastaavan kanssa, jotta saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R1 on COOH, sekä asemassa C-3 että asemassa C-4 oleva esteriryhmä on hydrolysoitava ensin, jolloin saadaan esimerkiksi VLBrstä 4-desase-tyylivinblastiinihappo (US-patenttijulkaisu 4 012 190). 15 Seuraavaksi asemassa C-3 oleva karboksyyliryhmä on suojattava jollakin karboksyyliryhmän suojaryhmällä, joita on mainittu edellä. Tämän johdannaisen, jonka C-3-karboksyy-liryhmä on suojattu ja joka sisältää asemassa C-4 vapaan hydroksyylin, annetaan sitten reagoida edellä esitetyllä 20 tavalla anhydridin kanssa. Syntyvä yhdiste voidaan sen jälkeen käsitellä kemiallisesti siten, että saadaan kaavan II mukaisia yhdisteitä, joissa Z on aktivoiva ryhmä, kunhan reaktio-olosuhteet ovat neutraalit tai emäksiset, jotta C-3-karboksyyliryhmää suoojaavan ryhmän irtoaminen väl-25 tetään. Sen jälkeen kun haluttu pääteryhmä Z on paikallaan, C-3-karboksyyliryhmää suojaava ryhmä poistetaan, jolloin saadaan kaavan II mukaisia yhdisteitä, joissa R1 on COOH.
Immunoglobuliinin tai immunoglobuliinifragmentin 30 reaktio kaavan II mukaisen yhdisteen kanssa toteutetaan edullisesti vettä sisältävässä väliaineessa 5 - 25°C:n lämpötilassa, pH:n ollessa 7,5 - 9,5, edullisesti 8,0- 9,0. Prosessin tuloksena yksi tai useampia Vinca-alkaloi-diryhmiä liittyy kovalenttisella sidoksella immunoglobu-35 liinimolekyylin vapaisiin aminoryhmiin, esimerkiksi lysii- ίο 80 383 nitähteen aminoryhmiin. Sitoutuvien ryhmien lukumäärä määräytyy reagoivien aineiden pitoisuuden ja reaktion keston mukaan, mutta keskimääräinen lukumäärä on tavallisesti esimerkiksi yhdestä tai kolmesta 14:ta tai 20teen.
5 Esimerkiksi, reaktioita toteutettaessa lisätään liuos, joka sisältää kaavan II mukaista yhdistettä sopivassa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa, hitaasti pisaroittain puskuroituun liuokseen, joka sisältää immuno-globuliinia esimerkiksi 0,34 M boraattipuskurissa (pH 10 8,6). Konjugaatti eristetään geelisuodatuksella, ja sitä säilytetään kyllästetyssä ammoniumsulfaattiliuoksessa, josta se saadaan helposti takaisin liuosmuotoon dialysoi-malla käyttäen puskuriliuosta, esimerkiksi fosfaattipus-kuroitua suolaliuosta, jonka pH on 7,4, tai sitä voidaan 15 vaihtoehtoisesti säilyttää jääkaapissa 4°C:ssa tai jäähdytettynä, esimerkiksi -20°C:ssa.
Konjugaatin arviointi voidaan suorittaa tunnettuja menettelytapoja, kuten affiniteettikromatografiaa käyttäen. Konjugaatin tehokkuutta voidaan arvioida laskemalla 20 elävien solujen lukumäärä sen jälkeen, kun kasvainsolusus-pensio on käsitelty konjugaatilla, tai tritium-merkityn uridiinin soluihin ottamista koskevien mittausten perusteella. Proteiini- ja lääkeainepitoisuudet määritetään mittaamalla konjugaattiliuosten optiset tiheydet kahdella 25 aallonpituudella, esimerkiksi aallonpituuksilla 270 ja 280 nm, ja korreloimalla saadut arvot samoja aallonpituuksia käyttäen saatuihin vapaan lääkeaineen ja konjugoimattoman immunoglobuliinin arvoihin.
Uudet keksinnön mukaisesti valmistetut konjugaatit 30 ovat käyttökelpoisia syöpien hoidossa, ja sellaisina niitä valmistetaan edullisesti ruiskeina annettaviksi soveltuvissa valmisteissa käytettäviksi. Farmaseuttinen valmiste, esimerkiksi ruiskeina annettava valmiste sisältää keksinnön mukaista konjugaattia yhdistettynä alalla tunnettuun, 35 farmaseuttisesti hyväksyttävään kantaja- tai laimennusai- 11 80383 neeseen. Se on edullisesti yksikköannosmuodossa, jokaisen annoksen sisältäessä esimerkiksi 0,01 - 2 mg vaikuttavaa aineosaa (joka määrä tarkoittaa Vinca-lääkeaineosien määrää).
5 Uudet konjugaatit ovat tehokkaita suuresti vaihte- levilla annoksilla ja esimerkiksi aikuisia ihmisiä hoidettaessa normaaliannos viikossa on 1 - 10 mg/kg (Vinca-lää-keaineosaa), vielä tavallisemmin 3-9 mg/kg. Tulee kuitenkin ymmärtää, että käytännössä annettavan yhdisteen 10 määrän määrää hoitava lääkäri asiaan vaikuttavien seikkojen, muun muassa hoidettavan potilaan tilan ja käytettävän antotien perusteella.
Keksintöä valaistaan seuraavin valmistusmenetelmin ja esimerkein.
15 Valmistusmenetelmä 1 4-sukkinoyyli(desasetyylivinblastiini) 2 g 4-desasetyylivinblastiinia liuotettiin pyridii-niin ja tähän liuokseen lisättiin 2 g meripihkahappoanhyd-ridiä. Reaktioseosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 20 5 tuntia. (Lämpötila-alue 0 - 50°C on käyttökelpoinen täs sä reaktiossa.) Haihtuvat aineosat poistettiin haihduttamalla alipaineessa ja jäännökseen lisättiin CH2Cl2:a. CH2Cl2-kerros pestiin natriumvetykarbonaatin 5-%:isella vesiliuoksella ja sen jälkeen vedellä. Orgaaninen kerros 25 kuivattiin ja liuotin poistettiin siitä alipaineessa, jolloin saatiin 4-sukkinoyyli(desasetyylivinblastiinia).
Edellä esitettyä menettelytapaa käytettiin seuraa-vien yhdisteiden valmistamiseksi: 4-sukkinoyylivindesiini, 30 4-sukkinoyyli(desasetyylivinkristiini) ja 4-sukkinoyyli-4’-epideoksidesasetyylivinblastiini.
Samankaltaista menettelytapaa käytettiin 4-glutaro-yyli(desasetyylivinblastiinin) valmistamiseksi käyttäen meripihkahappoanhydridin tilalla glutaarihappoanhydridiä.
i2 80 383
Kaikissa edellä mainituissa asylointireaktioissa, mahdollinen sivureaktiona tapahtuva 3-OH-ryhmän asyloitu-minen voidaan kumota käsittelemällä märällä silikageelillä Hargrove'n esittämän menettelyn mukaisesti (US-patentti-5 julkaisu 3 392 173). Vaihtoehtoisesti yhdisteet voidaan puhdistaa mahdollisesta 3-asyylijohdannaisesta tai muista reaktion sivutuotteista kromatografisesti käyttäen tavallisesti adsorbenttina silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaatti -metanoliseosta.
10 Valmistusmenetelmä 2
Aktivoitu 4-sukkinoyyll(desasetyylivlnblastlini) i g 4-sukkinoyylivindesiiniä sekoitettiin 380 mg:aan N-metyylimorfiinia 20 ml:ssa dikloorimetaania ja seokseen lisättiin 390 mg isobutyyliklooriformiaattia. 15 Reaktioseosta sekoitettiin 0°C:ssa typpikaasukehän alla noin 45 minuuttia. Lisättiin 795 mg N-hydroksisukkinimidiä ja reaktioseosta sekoitettiin typen alla ja samalla sekoittaen noin 45 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin ja jäähdytetty seos pestiin deionisoidulla vedellä ja kuivat-20 tiin välittömästi Na2S04:lla. Kuivausaine erotettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin alipaineessa. Esimerkki 1
Vindesiinisukkinoyyli-kaniinin anti-hiiri-IgG-kon-jugaatti 25 Liuokseen, joka sisälsi 4-sukkinoyylivindesiiniä (25 mg) kuivassa dimetyyliformamidissa (DMF; 0,4 ml), lisättiin samalla sekoittaen 0,3 ml liuosta, joka sisälsi N-hydroksisukkinimidiä kuivassa DMF:ssä liuoksen pitoisuuden ollessa 11,4 mg/ml, ja sen jälkeen 0,3 ml liuosta, 30 joka sisälsi l-sykloheksyyli-3-(2-morfoliinietyyli)kar-bodi-imidi(meto-p-tolueenisulfaattia) kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 41,7 mg/ml. Seosta pidettiin pimeässä huoneen lämpötilassa 48 tuntia, jolloin saatiin liuos, joka sisälsi 4-sukkinoyylivindesiinin N-hydroksi-35 sukkinimidiesteriä (25 mg/ml).
i3 80 383 90 μΐ edellä saatua liuosta lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 0,9 ml:aan liuosta, joka sisälsi kaniinin anti-hiiri-IgG:a 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 10,7 mg/ml. Seosta sekoitet-5 tiin huoneen lämpötilassa 5,5 tuntia, ja tuote eristettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko oli 1 x 27 cm (21 ml) ja joka sisälsi Bio-Gel® P-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuippu kerättiin (4,9 ml) ja siitä mää-10 ritettiin proteiini ja vindesiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 380 nm. Näin valmistettu konjugaatti sisälsi 7,9 mol vindesiiniä moolia kohden ig: a.
Esimerkki 2 15 Vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoklonaalinen luu- sarkooman vasta-aine-konjugaatti 300 μΐ liuosta, joka sisälsi 4-sukkinoyylivindesii-nin N-hydroksisukkinimidiesteriä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 28 mg/ml ja joka oli valmistettu esi-20 merkissä 1 kuvatulla tavalla, lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 1,5 ml:aan liuosta, joka sisälsi hiiren mono-klonaalista luusarkooman vasta-ainetta 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 19,8 mg/ml. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia, sen 25 jälkeen se sentrifugoitiin kirkkaaksi, ja tuote eristettiin geelisuodattamalla supernatantti käyttäen pylvästä, jonka koko oli 1,5 x 26,5 cm (46,8 ml) ja joka sisälsi Bio-GeiS> p-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuippu ke-30 rättiin (5,52 ml) ja siitä määritettiin vindesiini ja proteiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu konjugaatti sisälsi 8,7 mol vindesiiniä moolia kohden lg:a.
i4 80 383
Esimerkki 3
Vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoklonaalinen melanooma-antigeenin vasta-aine-konj ugaatti 200 μΐ liuosta, joka sisälsi 4-sukkinoyylivindesii-5 nin N-hydroksisukkinimidiesteriä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 20 mg/ml, ja joka oli valmistettu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 1,0 ml:aan liuosta, joka sisälsi hiiren mono-klonaalista melanooma-antigeenin vasta-ainetta 0,34 M bo-10 raattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 21,1 mg/ml. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia, ja tuote eristettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko oli 1,5 x 26,0 cm (45,9 ml) ja joka sisälsi Bio-GelR P-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan 15 fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuip-pu kerättiin (12,31 ml) ja siitä määritettiin vindesiini ja proteiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu konjugaatti sisälsi 9,1 mol vindesiiniä moolia kohden Ig:a.
20 Esimerkki 4
Vindeslinisukklnoyyll-hiiren monoklonaa!inen kar-sinoembryonaalisen antigeenin vasta-aine-konjugaatti 1,0 ml liuosta, joka sisälsi 4-sukkinoyylivindesii-25 nin N-hydroksisukkinimidiesteriä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 22 mg/ml, ja joka oli valmistettu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 7,0 ml:aan liuosta, joka sisälsi hiiren monoklonaalista karsinoembryonaalisen antigeenin vas-30 ta-ainetta 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 21,4 mg/ml. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia, sen jälkeen se laimennettiin 3,5 ml:11a seosta, joka sisälsi natriumkloridia (0,8 M) ja fosfaattipuskuria (0,05 M; pH 7,4), ja tuote eris-35 tettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko 15 80383 oli 3,2 x 24,4 cm (196 ml) ja joka sisälsi Bio-GeJ® P-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuippu kerättiin (28,24 ml) ja siitä määritettiin vindesiini ja proteiini spekt-5 roskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu konjugaatti sisälsi 5,8 mol vindesiiniä moolia kohden Ig:a.
Esimerkki 5
Desasetyylivinblastiinisukkinoyyli-kaniinin anti-10 hiiri-Ig-konjugaatti
Liuokseen, joka sisälsi 4-sukkinoyyli(desasetyyli-vinblastiinia) (18 mg) kuivassa DMF:ssa (0,4 ml), lisättiin samalla sekoittaen 0,3 ml liuosta, joka sisälsi N-hydroksisukkinimidiä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden 15 ollessa 7,97 mg/ml, ja sen jälkeen 0,3 ml liuosta, joka sisälsi 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 14,4 mg/ml. Seosta pidettiin pimeässä huoneen lämpötilassa 19 tuntia, jolloin saatiin liuos, joka sisälsi 4-sukkinoyyli(desasetyylivinblastii-20 nin) N-hydroksisukkinimidiesteriä (18 mg/ml).
200 μΐ edellä saatua liuosta lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 1,8 ml:aan liuosta, joka sisälsi kaniinin anti-hiiri-lg:a 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 8,02 mg/ml. Seosta sekoitet-25 tiin huoneen lämpötilassa 3,5 tuntia; se sentrifugoitiin kirkkaaksi, ja tuote eristettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko oli 1,5 x 25 cm (44 ml) ja joka sisälsi Bio-Gel® P-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuip-30 pu kerättiin (6,47 ml) ja siitä määritettiin desasetyyli-vinblastiini ja proteiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu konjugaatti sisälsi 9,0 mol desasetyylivinblastiinia moolia kohden lg:a.
i6 80383
Esimerkki 6
Desasetyylivinkristiinisukkinoyyli-hiiren roono- klonaalinen melanooma-antigeenin vasta-alne-kon-jugaatti 5 Liuokseen, joka sisälsi 4-sukkinoyyli(desasetyyli- vinkristiiniä) (10 mg) kuivassa DMF:ssa (0,1 ml), lisättiin 0,2 ml liuosta, joka sisälsi N-hydroksisukkinimidiä kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 6,5 mg/ml, ja sen jälkeen 0,2 ml liuosta, joka sisälsi 1-sykloheksyy-10 li-3-(2-morfoliinietyyli)karbodi-imidi(meto-p-tolueenisul-fonaattia) kuivassa DMF:ssa liuoksen pitoisuuden ollessa 24 mg/ml. Seosta pidettiin pimeässä huoneen lämpötilassa 65 tuntia, jolloin saatiin liuos, joka sisälsi 4-sukkino-yyli(desasetyylivinkristiinin) N-hydroksisukkinimidieste-15 riä (20 mg/ml).
200 μΐ edellä saatua liuosta lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 1,0 ml:aan liuosta, joka sisälsi hiiren monoklonaalista melanooma-antigeenin vasta-ainetta 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoisuuden ollessa 20 22,7 mg/ml. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia ja tuote eristettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko oli 3,2 x 24,5 cm (197 ml) ja joka sisälsi Bio-Gel® P-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pitoisuushuip-25 pu kerättiin (14,16 ml) ja siitä määritettiin desasetyyli-vinkristiini ja proteiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu konjugaat-ti sisälsi 13,3 mol desasetyylivinkristiiniä moolia kohden Ig:a.
30 Esimerkki 7
Desasetyylivinblastiinisukkinoyyli-hiiren monoklo-naalinen keuhkoadenokarsinooman vasta-aine-konju-gaatti 350 μΐ liuosta, joka sisälsi 4-sukkinoyyli(desaset-35 yylivinblastiinin) N-hydroksisukkinimidiesteriä DMF:ssa 17 80383 liuoksen pitoisuuden ollessa 14,7 mg/ml, lisättiin samalla nopeasti sekoittaen 2,0 ml:aan liuosta, joka sisälsi hiiren monoklonaalista pienisoluisen keuhkokarsinooman vasta-ainetta 0,34 M boraattipuskurissa (pH 8,6) liuoksen pitoi-5 suuden ollessa 20,0 mg/ml. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia ja sen jälkeen sen pH säädettiin arvoon 7,4 käyttäen 1 N suolahappoa ja seos sentri-fugoitiin kirkkaaksi. Tuote eristettiin geelisuodatuksella käyttäen pylvästä, jonka koko oli 2,0 x 22,0 cm (67,0 ml) 10 ja joka sisälsi Bio-Gel® p-6:a, joka oli saatettu tasapainotilaan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta käyttäen. Pi-toisuushuippu kerättiin (9,7 ml) ja siitä määritettiin desasetyylivinblastiini ja proteiini spektroskooppisesti käyttäen aallonpituuksia 270 ja 280 nm. Näin valmistettu 15 konjugaatti sisälsi 7,5 mol desasetyylivinblastiinia moolia kohden Ig:a.
Samalla tavalla valmistettiin asianmukaisia eristettyjä N-hydroksisukkimimidiestereitä käyttäen seuraavat konjugaatit: 20 vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoktonaalinen karsino-embryonaalisen antigeenin vasta-aine-konjugaatti, vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoktonaalinen keuhkoadeno-karsinooman vasta-aine-konjugaatti, desasetyylivinblastiiniglutaroyyli-hiiren monoklonaalinen 25 karsinoembryonaalisen antigeenin vasta-aine-konjugaatti Ja 4'-epideoksidesasetyylivinblastiinisukkinoyyli-hiiren mo-noklonaalinen karsinoembryonaalisen antigeenin vasta-aine-konjugaatti.
30 Esimerkki 8
Preparaatti, joka sisälsi viljelmässä kasvavia soluja, jaettiin pieniin putkiin siten, että jokaiseen putkeen tuli 105 solua. Sen jälkeen kun solut oli tiivistet-tuy sentrifugoimalla, lisättiin 0,2 ml konjugaattivalmis-35 teitä, joiden väkevyys vaihteli. Solut suspendoitiin uu- 18 80 383 delleen, inkuboitiin 37°C:ssa 30 minuuttia ja sen jälkeen sentrifugoitiin sekä poistettiin supernatantti. Sen jälkeen solut suspendoitiin kudosviljelyelatusaineeseen ja jaettiin mikroviljelymaljoihin siten, että jokaiseen sy-5 vennykseen tuli 104 solua. 6 vuorokauden viljelyn jälkeen kussakin syvennyksessä olevien solujen lukumäärä määritettiin ja määriä verrattiin pelkällä fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella käsiteltyyn solupreparaattiin.
Yhdessä kokeessa ihmisen melanoomasoluja käsitel-10 tiin joko vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoklonaalinen melanooma-antigeenin vasta-aine-konjugaatilla (esimerkki 3) tai desasetyylivinkristiinisukkinoyyli-hiiren monoklonaalinen melanooma-antigeenin vasta-aine-konjugaatilla (esimerkki 6), ja määritettiin vaikutukset solujen kas-15 vuun. Tulokset olivat seuraavat:
Taulukko
Liittyneen Solujen kasvu %:eina fosfaat-
Liittynyt lääkeaineen tipuskuroidulla suolaliuok- 20 lääkeaine pitoisuus sella käsiteltyjen vertailu- pg/ml solujen kasvusta
Vindesiini 50 16,0 5.0 61,8 25 0,5 84,2
Desasetyyli- vinkristiini 50 21,5 5.0 74,5 0,5 100,0 30 ---
Toisessa kokeessa ihmisen paksusuolen ja peräsuolen syövän soluja käsiteltiin vindesiinisukkinoyyli-hiiren monoklonaalinen karsinoembryonaalisen antigeenin vasta-35 aine-konjugaatilla (esimerkki 4) seuraavin tuloksin: 19 80383
Taulukko
Liittyneen Solujen kasvu %:eina fosfaattipus- lääkeaineen kuroidulla suolaliuoksella käsitel- pitoisuus (pg/ml) tyjen vertailusolujen kasvusta 5 - 120 3,2 60 39,9 30 89,9 15 104,8 10 -
Esimerkki 9
Jotta saataisiin testatuksi in vivo konjugaattien tehokkuus kasvaimia vastaan vaikuttavina aineina, hiiriin, 15 joilta puuttui kateenkorva ja jotka oli jaettu ryhmiin, siirrettiin ihonalaisesti solususpensioita, jotka sisälsivät ihmisen paksusuolen ja peräsuolen syövän soluja, ja hiiriä hoidettiin sen jälkeen 5 viikon ajan kahdesti viikossa annetuin vatsakalvonsisäisin ruiskein. Hiiriin ruis-20 kutettiin joko fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, hiiren monoklonaalista vasta-ainetta (karsinoembryonaalista antigeeniä vastaan) tai tämän vasta-aineen vindesiinikonju-gaattia, joka oli valmistettu esimerkissä 4 kuvatulla tavalla. Kullakin kerralla yhteen hiireen ruiskutettu vasta-25 aineannos oli 3,3 - 3,7 mg. Kullakin kerralla yhteen hiireen ruiskutetun konjugaatin sisältämä vindesiiniannos oli 119 - 128 pg.
61 vrk:n kuluttua kasvaimen istuttamisesta PBS:a tai pelkkää vasta-ainetta saaneisiin ryhmiin kuuluvat hii-30 ret tapettiin ja kasvaimet poistettiin ja punnittiin. Vin-desiini-vasta-aine-konjugaattia saaneet hiiret tapettiin 90 vrk:n kuluttua kasvaimen istuttamisesta. Kasvainten keskimääräiset painot esitetään seuraavassa taulukossa.
80383 20
Taulukko
Kasvaimen keskipaino
Hoitoryhmä Hiirien (mg) ± standardi- lukumäärä poikkeama 5 - PBS 11 1793 ± 1609
Pelkkä vasta-aine 10 527 ± 477
Vindesiini- vasta-aine-konjugaatti 8 22 ± 19 10 -
Claims (6)
- 2i 80383
- 1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen kon-jugaatin valmistamiseksi, joka sisältää Vinca-alkaloidi-5 osan, joka on kovalenttisesti liittynyt immunoglobuliiniin tai immunoglobuliinifragmenttiin, ja jolla on kaava -5' r3 10 7' 6' 4 -* N 4'’ * * ‘ ^ JLJ , .8' 1 3'1.,. R5 i2rir¥ p 15 14^15 I P^C-0-CH3 I II H I o Ϊ i I * 9 20. rro— "Άι /ch3 cvXAiA, A'™2 25 18 1 f^^^OCOXCOIg r2 : >OII R1 30 jossa Ig merkitsee immunoglobuliinia tai immunoglobuliini-fragmenttia, johon on liittynyt yksi tai useampi Vinca-alkaloidiryhmä; ja X on suoraketjuinen Cx. 4-alkyleeni; R1 on COOCj.3-alkyyli tai C0NH2; R2 on CH3 tai CHO; ja käsi-35 teltäessä R4 ja R5 erillisinä R5 on H, R4 on etyyli ja R3 22 80 383 on H tai OH; ja käsiteltäessä R4 ja R5 yhdessä niiden hiiliatomien kanssa, joihin ne ovat sitoutuneet, ne muodostavat oksiraanirenkaan ja R3 on etyyli, tunnettu siitä, että saatetaan immunoglobu-5 liini tai immunoglobuliinifragmentti reagoimaan puolihap-pojohdannaisen kanssa, jolla on kaava 6’ A -N 4Mj* ’ ‘ R 10 .8' 1 A... S? 12' 2' 13’^ Λ 16’ 15’ U'^^Y^C_0_CU
- 15 I , Il 3 H | O II 1 9 I fn-N ^ 10 . 7 20 | kfV¥V /C,,J 16. a ’ch-> CH,0--o i*v 2 I rs^ ocoxcoz 25. i* R1 jossa X, R1 , R2 , R3 , R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin kaavassa I edellä ja Z on irtoava ryhmä, joka on atsidi-30 (-N3)-ryhmä, halogeeniatorni, asyloksiryhmä, jolla on kaava R7.CO.O, jossa R7 on alifaattinen tai aromaattinen ryhmä, alkoksi- tai aryylioksiryhmä, metaanisulfonyylioksi-, tosyloksi- tai bentseenisulfonyylioksiryhmä, imidatsoyyli-radikaali tai N-asyylihydroksyyliamiiniryhmä. 23 8 0 383
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan terapeuttisesti käyttökelpoinen konjugaatti, jolla on kaava 5 T,-r4 11’ 8’ 1 3’1. ..R5 -S, 9’ 12’ <Γ 2' 10 13'L A16'Ä7’l8’> lii! H | O I 15 1 I 9
- 1 P^i Ί /CH3 fT |l3 1 /
- 20 CH^O—^7JL 1 A 3 >L Cl<2 I OCOXCOIg r2 j 0,1 R1 25 jossa Ig on ihmisen kasvaimeen liittyvän antigeenin vastainen monoklonaalinen vasta-aine, johon on liittynyt 3-14 Vinca-alkaloidiryhmää; X on -CH2CH2-; ja R1 on COOCH3 ; 30 R2 on CH3 ; R3 on OH; R4 on etyyli, ja R5 on H. 24 8 0 3 8 3
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8308857 | 1983-03-30 | ||
| GB8308857 | 1983-03-30 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI841260A0 FI841260A0 (fi) | 1984-03-29 |
| FI841260A FI841260A (fi) | 1984-10-01 |
| FI80383B true FI80383B (fi) | 1990-02-28 |
| FI80383C FI80383C (fi) | 1990-06-11 |
Family
ID=10540516
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI841260A FI80383C (fi) | 1983-03-30 | 1984-03-29 | Foerfarande foer framstaellning av ett terapeutiskt anvaendbart immunoglobulinkonjugat. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4845200A (fi) |
| EP (1) | EP0121388B1 (fi) |
| JP (1) | JPS59190924A (fi) |
| KR (1) | KR890002634B1 (fi) |
| AT (1) | ATE53496T1 (fi) |
| AU (1) | AU570963B2 (fi) |
| BG (1) | BG42837A3 (fi) |
| CA (1) | CA1210696A (fi) |
| DE (1) | DE3482444D1 (fi) |
| DK (1) | DK167884A (fi) |
| EG (1) | EG16175A (fi) |
| ES (1) | ES531081A0 (fi) |
| FI (1) | FI80383C (fi) |
| GB (1) | GB2137210B (fi) |
| GR (1) | GR79899B (fi) |
| HU (1) | HU191647B (fi) |
| IE (1) | IE57218B1 (fi) |
| IL (1) | IL71366A (fi) |
| NZ (1) | NZ207675A (fi) |
| PH (1) | PH23222A (fi) |
| PL (1) | PL144887B1 (fi) |
| PT (1) | PT78322B (fi) |
| SU (1) | SU1362404A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA842347B (fi) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU86157A1 (fr) * | 1985-11-12 | 1987-06-26 | Omnichem Sa | Nouveau procede de fabrication de conjugues de la vinblastine et de ses derives |
| US4675400A (en) * | 1985-06-17 | 1987-06-23 | Eli Lilly And Company | Bifunctional derivatives of 4-desacetyl indole-dihydroindole alkaloids |
| US4667030A (en) * | 1985-06-17 | 1987-05-19 | Eli Lilly And Company | Hydrazide succinimide derivatives of antineoplastic indole-dihydroindole alkaloids |
| FI860456A (fi) * | 1985-07-16 | 1987-01-17 | Huhtamaeki Oy Laeaeketehdas Le | Bis-indolalkaloiders proteinkonjugat, bis-indolalkaloider, deras framstaellning och anvaendning. |
| CA1289880C (en) * | 1985-12-06 | 1991-10-01 | Jeffrey L. Winkelhake | Anti-human ovarian cancer immunotoxins and methods of use thereof |
| ATE76583T1 (de) * | 1985-12-06 | 1992-06-15 | Cetus Corp | Anti-immuntoxine gegen menschlichen eierstockkrebs und verfahren zu deren verwendung. |
| EP0232693A3 (fr) * | 1985-12-16 | 1988-04-06 | La Region Wallonne | Conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant |
| US4801688A (en) * | 1986-05-27 | 1989-01-31 | Eli Lilly And Company | Hydrazone immunoglobulin conjugates |
| IL82579A0 (en) * | 1986-05-27 | 1987-11-30 | Lilly Co Eli | Immunoglobulin conjugates |
| US4994558A (en) * | 1986-12-24 | 1991-02-19 | Eli Lilly And Company | Immunoglobulin conjugates |
| US4814438A (en) * | 1986-12-24 | 1989-03-21 | Eli Lilly And Company | Immunoglobulin conjugates of 2',2'-difluronucleosides |
| IL84842A0 (en) * | 1986-12-24 | 1988-06-30 | Lilly Co Eli | Immunoglobulin conjugates |
| ZA89524B (en) * | 1988-01-27 | 1990-09-26 | Lilly Co Eli | Antibody conjugates |
| FR2626882B1 (fr) * | 1988-02-08 | 1991-11-08 | Ire Celltarg Sa | Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3 |
| IT1219874B (it) * | 1988-03-18 | 1990-05-24 | Fidia Farmaceutici | Utilizzazione del fattore di crescita nervoso umano e sue composizioni farmaceutiche |
| US5006652A (en) * | 1988-08-08 | 1991-04-09 | Eli Lilly And Company | Intermediates for antibody-vinca drug conjugates |
| US5094849A (en) * | 1988-08-08 | 1992-03-10 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers |
| US5028697A (en) * | 1988-08-08 | 1991-07-02 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized methotrexate analogs via simple organic linkers |
| US5144012A (en) * | 1988-08-08 | 1992-09-01 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic drug conjugates |
| US5010176A (en) * | 1988-11-10 | 1991-04-23 | Eli Lilly And Company | Antibody-drug conjugates |
| DE4122210C2 (de) * | 1991-07-04 | 1999-04-01 | Deutsches Krebsforsch | Konjugate aus tumoraktiver Verbindung und Serumalbumin sowie Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung |
| US7097839B1 (en) | 1993-10-26 | 2006-08-29 | Thomas Jefferson University | ST receptor binding compounds and methods of using the same |
| US5879656A (en) * | 1993-10-26 | 1999-03-09 | Thomas Jefferson University | Methods of treating metastatic colorectal cancer with ST receptor binding compounds |
| CN110790777B (zh) * | 2019-10-24 | 2021-05-25 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种长春新碱类化合物杂质及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4045420A (en) * | 1973-05-29 | 1977-08-30 | Syva Company | Non-oxo-carbonyl containing benzoyl ecgonine and ***e compounds polypeptide and derivatives thereof |
| US4026879A (en) * | 1976-03-23 | 1977-05-31 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antigen-containing propranolol derivatives |
| US4069105A (en) * | 1977-03-03 | 1978-01-17 | Syva Company | Lidocaine antigens and antibodies |
| US4243654A (en) * | 1978-09-11 | 1981-01-06 | Syva Company | Oxazepam derivatives for immunoassay reagents |
| US4223013A (en) * | 1978-12-29 | 1980-09-16 | Syva Company | Amitriptyline conjugates to antigenic proteins and enzymes |
| US4315851A (en) * | 1978-12-29 | 1982-02-16 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition having antitumor activity |
| FI820020L (fi) * | 1981-01-12 | 1982-07-13 | Lilly Industries Ltd | Immunoglobulinkonjugater |
| FR2516794B1 (fr) * | 1981-11-20 | 1985-10-25 | Sanofi Sa | Nouveaux medicaments anticancereux pour le traitement des leucemies t constitues de la chaine a de la ricine et d'un anticorps monoclonal specifique |
| JPS59116229A (ja) * | 1982-12-24 | 1984-07-05 | Teijin Ltd | 細胞毒性複合体を活性成分とする癌治療用剤およびその製造法 |
| EP0123441B1 (en) * | 1983-03-30 | 1990-10-03 | Lilly Industries Limited | Vincaleukoblastine derivatives |
-
1984
- 1984-03-26 GB GB08407766A patent/GB2137210B/en not_active Expired
- 1984-03-26 DK DK167884A patent/DK167884A/da not_active IP Right Cessation
- 1984-03-26 DE DE8484302004T patent/DE3482444D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-03-26 GR GR74217A patent/GR79899B/el unknown
- 1984-03-26 AT AT84302004T patent/ATE53496T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-26 EP EP84302004A patent/EP0121388B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-27 AU AU26143/84A patent/AU570963B2/en not_active Ceased
- 1984-03-27 IL IL71366A patent/IL71366A/xx unknown
- 1984-03-27 CA CA000450616A patent/CA1210696A/en not_active Expired
- 1984-03-27 PT PT78322A patent/PT78322B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-03-28 PH PH30460A patent/PH23222A/en unknown
- 1984-03-28 NZ NZ207675A patent/NZ207675A/en unknown
- 1984-03-28 EG EG202/84A patent/EG16175A/xx active
- 1984-03-29 SU SU843721031A patent/SU1362404A3/ru active
- 1984-03-29 PL PL1984246931A patent/PL144887B1/pl unknown
- 1984-03-29 ZA ZA842347A patent/ZA842347B/xx unknown
- 1984-03-29 HU HU841259A patent/HU191647B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-03-29 IE IE772/84A patent/IE57218B1/xx unknown
- 1984-03-29 ES ES531081A patent/ES531081A0/es active Granted
- 1984-03-29 FI FI841260A patent/FI80383C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-03-29 BG BG8464893A patent/BG42837A3/xx unknown
- 1984-03-30 JP JP59063140A patent/JPS59190924A/ja active Pending
- 1984-03-30 KR KR1019840001690A patent/KR890002634B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-06-23 US US06/877,598 patent/US4845200A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI80383B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett terapeutiskt anvaendbart immunoglobulinkonjugat. | |
| JP2930965B2 (ja) | Ｃ―３位に脂肪鎖を有するビンカ誘導体の複合体 | |
| US5028697A (en) | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized methotrexate analogs via simple organic linkers | |
| US5094849A (en) | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers | |
| US5006652A (en) | Intermediates for antibody-vinca drug conjugates | |
| US4801688A (en) | Hydrazone immunoglobulin conjugates | |
| KR900006908B1 (ko) | 면역글로불린 결합체 | |
| US5030620A (en) | Vinblastine derivatives, and pharmaceutical compositions containing them | |
| HU193737B (en) | Process for preparing transferrin-indole-dihydroindole alkaloid derivatives | |
| US4675400A (en) | Bifunctional derivatives of 4-desacetyl indole-dihydroindole alkaloids | |
| KR900001165B1 (ko) | 빈카류코블라스틴 유도체의 제조방법 | |
| HU186025B (en) | Process for producing coniugated immunoglobulines | |
| US5144012A (en) | Cytotoxic drug conjugates | |
| US4814438A (en) | Immunoglobulin conjugates of 2',2'-difluronucleosides | |
| US4667030A (en) | Hydrazide succinimide derivatives of antineoplastic indole-dihydroindole alkaloids | |
| US4994558A (en) | Immunoglobulin conjugates | |
| HUT54308A (en) | Process for producing immunoglobulin conjugates and medicaments comprising same | |
| US5043340A (en) | Derivatives of 4-desacetyl VLB C-3 carboxhydrazide | |
| EP0326322A1 (en) | Antibody conjugates | |
| Dosio et al. | Antibody-targeted leucinostatin A |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: LILLY INDUSTRIES LIMITED |