FI79835C - D-AMINOSYRAAMIDFOERENING ANVAENDBAR SAOSOM MELLANPRODUKT VID FRAMSTAELLNING AV L-ASPARTYL-D -AMINOSYRADIPEPTIDAMIDER. - Google Patents

Description

1 79335 D-aminohappoamidiyhdiste, joka on käyttökelpoinen välituotteena valmistettaessa L-aspartyyli-D-aminohappodipep-tidiamideja 5 Jakamalla erotettu patenttihakemuksesta 812268 (patentti 77045)1,79335 A D-amino acid amide compound useful as an intermediate in the preparation of L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amides 5 Separated from patent application 812268 (patent 77045)

Keksinnön kohteena on D-aminohappoamidiyhdiste, joka on käyttökelpoinen välituotteena valmistettaessa 10 L-aspartyyli-D-aminohappodipeptidiamidej a.The invention relates to a D-amino acid amide compound useful as an intermediate in the preparation of 10 L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amides.

Fl-patentti 77045 koskee uusia L-aspartyyli-D-se-riinin ja L-aspartyyli-D-O-metyyliseriinin amideja, jotka ovat erityisen käyttökelpoisia voimakkaitten makeutusomi-naisuuksiensa vuoksi ja niitä sisältävää syötäväksi kel-15 paavaa yhdistelmää.F1 Patent 77045 relates to novel amides of L-aspartyl-D-serine and L-aspartyl-D-O-methylserine, which are particularly useful due to their strong sweetening properties and an edible combination containing them.

US-patentissa 3 492 131 L-aspartyyli-L-fenyyliala-niinin tiettyjen alempialkyyliesterien todettiin olevan jopa 200 kertaa makeampia kuin sakkaroosi ja niiltä puuttui oleellisilta osiltaan katkerat makuvivahteet, jotka 20 olivat aikaisempien keinotekoisten makeutusaineiden kuten sakkariinin heikkouksia. Näiden yhdisteiden stabilisuuden todettiin myöhemmin olevan vain rajoitettua vesiseoksissa johtuen diketopiperatsiinin muodostumisesta erityisesti neutraaleissa - happamissa pH-olosuhteissa, jotka ovat 25 yleisiä useimmissa elintarvikeseoksissa.In U.S. Patent 3,492,131, certain lower alkyl esters of L-aspartyl-L-phenylalanine were found to be up to 200 times sweeter than sucrose and lacked essentially bitter flavors, which were weaknesses of previous artificial sweeteners such as saccharin. The stability of these compounds was later found to be limited only in aqueous mixtures due to the formation of diketopiperazine, especially under the neutral-acidic pH conditions common in most food mixtures.

Mazur ym., J. Med. Chem. 16 (1973) 1284 ovat esittäneet, että L-aspartyyli-D-alaniinin alempialkyyliesterien ja eräiden niiden homologien, erityisesti L-aspartyy-li-D-alaniini-isopropyyliesterin, makeutustehot ovat enin-30 tään 125-kertaiset sakkaroosiin verrattuna.Mazur et al., J. Med. Chem. 16 (1973) 1284 have shown that the lower alkyl esters of L-aspartyl-D-alanine and some of their homologues, in particular L-aspartyl-D-alanine isopropyl ester, have a sweetening effect of up to 125 times that of sucrose.

Sukehiro ym., Seikatsu Kagaku 11 (1977) 8-16; Chem. Abstr. 87 (1977) 168407h ovat esittäneet tiettyjä L-aspartyyli-D-alaniinin amideja, joilla on kaava NH2 ° 35 nhrl C00H ° CH3 2 79835 jossa R1 on metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, sekundäärinen butyyli, sykloheksyyli tai glysiinin, D-alaniinin tai L-alaniinin metyyliesterien hiilitähde. Voimakkaimpia yhdisteitä olivat yhdisteet, 5 joissa R1 on jokin edellä mainituista butyyliryhmistä tai sykloheksyyli, ja joiden makeus on vastaavasti 100-125-ja 100-kertainen sakkaroosiin verrattuna. Koska n-butyyli-amidin todettiin olevan 125 kertaa makeampi kuin sakkaroosi ja isobutyyliamidi ja sekundäärinen butyyliamidi 10 ovat 100 kertaa sakkaroosia makeampia, pääteltiin, että näiden amidien tehokkuuteen vaikuttaa pääasiallisesti al-kyyliryhmässä, R1, olevien hiiliatomien lukumäärä, ja että alkyyliryhmän rakenneisomerismilla on vähäinen vaikutus makeutustehoon.Sukehiro et al., Seikatsu Kagaku 11 (1977) 8-16; Chem. Abstr. 87 (1977) 168407h have disclosed certain amides of L-aspartyl-D-alanine of the formula NH2 ° 35 nhrl C00H ° CH3 2 79835 wherein R1 is methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, secondary butyl , cyclohexyl or a carbon residue of methyl esters of glycine, D-alanine or L-alanine. The strongest compounds were those in which R1 is one of the above-mentioned butyl groups or cyclohexyl, and which have a sweetness of 100 to 125 and 100 times that of sucrose, respectively. Since n-butylamide was found to be 125 times sweeter than sucrose and isobutylamide and secondary butylamide 10 are 100 times sweeter than sucrose, it was concluded that the efficiency of these amides is mainly affected by the number of carbon atoms in the alkyl group, R1, and the sweetening power.

15 Ariyoshi ym., Bull. Chem. Soc. Japan. 47 (1974) 326 ovat todenneet L-aspartyyli-D-seriinin ja L-aspartyyli-D-treoniinin esterien olevan makeampia kuin vastaavat L-as-partyyli-D-alaniinin ja vastaavasti L-aspartyyli-D-2-ami-novoihapon esterit. Voimakkain näistä estereistä, L-aspar-20 tyyli-D-seriini-N-propyyliesteri, oli 320 kertaa makeampi kuin 5 %:n sakkaroosistandardi.15 Ariyoshi et al., Bull. Chem. Soc. Japan. 47 (1974) 326 have found that the esters of L-aspartyl-D-serine and L-aspartyl-D-threonine are sweeter than the corresponding esters of L-aspartyl-D-alanine and L-aspartyl-D-2-amino acid, respectively. . The strongest of these esters, L-aspar-20-style-D-serine-N-propyl ester, was 320 times sweeter than the 5% sucrose standard.

US-patentissa 3 971 822 esitetään L-aspartyyli-D-alaninolin ja karboksyylihappojen estereitä, mukaan luettuina 2-metyylivoihapon, syklopropaanikarboksyylihapon, 25 syklobutaanikarboksyylihapon ja 2-metyylisyklobutaanikar-boksyylihapon estereitä. Nämä syklopropaani- ja syklobu-taanikarboksyylihappojen esterit olivat vastaavasti 200 ja 220 kertaa sakkaroosia makeampia. 2-metyylisyklobutaa-nikarboksyylihapon esteri oli ainoastaan 160 kertaa sakka-30 roosia makeampi. Lisäksi esitetään myös vastaavat L-aspar-tyyli-D-serinoliesterit, joista makein, propionihapon esteri, on 160 kertaa sakkaroosia makeampi.U.S. Patent 3,971,822 discloses esters of L-aspartyl-D-alaninol and carboxylic acids, including esters of 2-methylbutyric acid, cyclopropanecarboxylic acid, cyclobutanecarboxylic acid, and 2-methylcyclobutanecarboxylic acid. These esters of cyclopropane and cyclobutanecarboxylic acids were 200 and 220 times sweeter than sucrose, respectively. The ester of 2-methylcyclobutanecarboxylic acid was only 160 times sweeter than precipitate-30 roses. In addition, the corresponding L-asparyl-D-serinol esters are also disclosed, of which the sweetest, propionic acid ester, is 160 times sweeter than sucrose.

US-patentissa 3 959 245 ja US-patentissa 3 907 766 esitetään, vastaavasti, L-aspartyyliaminomalonihappometyy-35 li-2-metyylisykloheksyyli-diesteri ja vastaava alkyylifen- 3 79335 kyyli-diesteri. Edellisen ilmoitetaan olevan 6600 kertaa sakkaroosia makeamman, jälkimmäisen 4200-33000 kertaa sakkaroosia makeamman. Tähän liittyvässä keksijäin julkaisussa, Chem. Pharm. Bull., 24 (1976) 2112 esitetään sarja 5 L-aspartyyliaminomalonihappo-diestereitä, toisen esteri-ryhmistä ollessa metyyli tai etyyli ja toisen ollessa jokin erilaisista sivuketjuisista alkyyli- ja sykloalkyyli-ryhmistä.U.S. Patent 3,959,245 and U.S. Patent 3,907,766 disclose, respectively, L-aspartylaminomalonic acid methyl 35-1-methylcyclohexyl diester and the corresponding alkylphen-3,793,35 alkyl diester. The former is reported to be 6,600 times sweeter than sucrose, the latter 4,200-33,000 times sweeter than sucrose. In a related inventive publication, Chem. Pharm. Bull., 24 (1976) 2112 discloses a series of 5 L-aspartylaminomalonic acid diesters, one of the ester groups being methyl or ethyl and the other being one of the various side chain alkyl and cycloalkyl groups.

FI-patentissa 77 044 on todettu, että ei ainoastaan 10 amidi-substituentin koolla ole ratkaisevaa merkitystä L-aspartyyli-D-alaniiniamidien korkealle makeusasteelle, vaan, päivastoin, ratkaiseva merkitys on amidi-substituentin, R, täsmällisellä avaruudellisella sijoittumisella. Tietyillä L-aspartyyli-D-alaniini-amideilla, joissa on 15 sivuketju a-hiiliatomin kohdalla (hiiliatomi, jossa on amidityppiatomi) ja sivuketju myös uudelleen toisen tai kummankin β- ja β'-hiiliatomin kohdalla, todettiin olevan merkittäviä etuja.FI patent 77,044 states that not only the size of the 10 amide substituents is crucial for the high degree of sweetness of L-aspartyl-D-alaninamides, but, on the day, the precise spatial arrangement of the amide substituent, R, is crucial. Certain L-aspartyl-D-alanine amides having 15 side chains at the α-carbon atom (a carbon atom having an amide nitrogen atom) and also a side chain again at one or both of the β- and β'-carbon atoms were found to have significant advantages.

FI-patentissa 77 045 esitetyillä uusilla sivuket-20 juilla L-aspartyyli-D-seriini- ja L-aspartyyli-D-O-metyy-liseriini-dipeptidien amideilla on odottamattoman korkea makeutusteho ja niiltä puuttuvat ei toivottavat makuvivahteet tavanomaisin määrin käytettäessä. Niiden stabilisuu-den on myös todettu olevan yllättävän hyvän sekä kiinteäs-25 sä muodossa että vesiseoksissa pH-rajoissa, jotka vallitsevat useimmissa elintarvikeseoksissa normaalia korkeammissakin lämpötiloissa, joita käytetään leivonnassa ja tavanomaisessa elintarvikkeiden jatkokäsittelyssä.The new side chains 20 disclosed in FI patent 77,045, the amides of L-aspartyl-D-serine and L-aspartyl-D-O-methyl-serine dipeptides, have an unexpectedly high sweetening power and lack undesirable flavor nuances when used in conventional amounts. Their stability has also been found to be surprisingly good both in solid form and in aqueous mixtures at the pH ranges prevailing in most food mixtures even at higher than normal temperatures used in baking and conventional food processing.

Mainitut, FI-patentissa 77 045 esitetyt uudet yh-30 disteet ovat L-aspartyyli-D-aminohappo-dipeptidi-amideja, joilla on kaava NEL· I 0 1 NH " ΐ ^NHR (I) 35 I ° 1 2Said novel compounds disclosed in FI patent 77,045 are L-aspartyl-D-amino acid dipeptide amides of the formula NEL · I 0 1 NH "ΐ ^ NHR (I) 35 I ° 1 2

COOH RCOOH R

4 79835 ja niiden fysiologisesti hyväksyttäviä kationi- ja happo-additiosuoloja, jossa kaavassa Ra on CH2OH tai CH2OCH3; ja R on di-isopropyylikarbinyyli, disyklopropyylikarbinyyli 5 tai ryhmä, jolla on kaava (a) tai (b) R3 „ CH3 "c ^ 10 (a) H C^\ lb) R n3u CH^ joissa ryhmät R3 ja R6 merkitsevät alkyyliä, jossa on 1-4 hiiliatomia, ja X on S tai S02, jolloin hiiliatomien summa ryhmissä R3 ja R6 ei ole suurempi kuin 6.4,79835 and physiologically acceptable cationic and acid addition salts thereof, wherein Ra is CH2OH or CH2OCH3; and R is diisopropylcarbinyl, dicyclopropylcarbinyl or a group of formula (a) or (b) R 3 "CH 3" c ^ 10 (a) HCl \ 1b) R n3u CH 2 wherein R 3 and R 6 represent alkyl wherein is 1 to 4 carbon atoms, and X is S or SO 2, wherein the sum of the carbon atoms in R 3 and R 6 is not greater than 6.

15 Keksinnön kohteena olevat uudet D-aminohappoamidi- yhdisteet ovat käyttökelpoisia välituotteina valmistettaessa kaavan (I) mukaisia yhdisteitä. Uusilla D-aminohap-poamidiyhdisteillä on kaava 20 RaCHC0NHR° NH2 jossa Ra on CH20H tai CH20CH3 ja Rc on d-isopropyylikar-binyyli, disyklopropyylikarbinyyli, 2,6-dimetyylisyklohek-25 syyli tai ch3 ch3 \ >ch9) 30 2 P2 : CH3 CH3 jossa kun p2 on nolla, X2 on S tai S02 ja kun p2 on 1, X2 on S.The novel D-amino acid amide compounds of the invention are useful as intermediates in the preparation of compounds of formula (I). The novel D-amino acid pyramide compounds have the formula 20 RaCHCO0NHR ° NH2 wherein Ra is CH2OH or CH2OCH3 and Rc is d-isopropylcarbinyl, dicyclopropylcarbinyl, 2,6-dimethylcyclohexyl or ch3ch3 \> ch9) P2 2 CH3 CH3 wherein when p2 is zero, X2 is S or SO2 and when p2 is 1, X2 is S.

Suffiksi "karbinyyli" tarkoittaa tässä käytettynä 35 ryhmää -CH-, Täten, esimerkiksi, di-isopropyylikarbinyyli 5 7 S 8 3 5 on ryhmä (i-C3H7 )2-CH- ja disyklopropyylikarbinyyliamiini on (A)2CHNH2.The suffix "carbinyl" as used herein means 35 groups -CH-, Thus, for example, diisopropylcarbinyl 5 7 S 8 3 5 is a group (i-C 3 H 7) 2 -CH- and dicyclopropylcarbinylamine is (A) 2 CHNH 2.

Kaavan (I) mukaisia dipeptidiamideja valmistetaan mukavasti menetelmin, jotka soveltuvat aminohappojen kyt-5 kemiseen. Ensisijainen menetelmä kaavan (I) mukaisten di-peptiamidien valmistamiseksi on hahmoteltu alla.The dipeptide amides of formula (I) are conveniently prepared by methods suitable for the coupling of amino acids. The preferred process for the preparation of di-peptides of formula (I) is outlined below.

y ^ (1) kondensointi L- / \ * D-NHjCHCOOR11 ·,2) 0-►y ^ (1) condensation L- / \ * D-NHjCHCOOR11 ·, 2) 0-►

10 COOR10 COOH10 COOR10 COOH

tai karboksyyli-aktivoitu johdannainen 15 <mQ ** /-XNHQ "a COOir0 COHN ^^COOH--—►cooir0 cohn-^\conhr (II) (III) suojauksen poistoor carboxyl-activated derivative 15 <mQ ** / -XNHQ "a COOir0 COHN ^^ COOH --— ►cooir0 Cohn - ^ \ conhr (II) (III) deprotection

20 X20 X

(I)(I)

Edellä esitetyissä L-aspartiinihappo-johdannaisissa Q on jokin hyvin tunnetuista amino-suojaryhmistä, jotka voidaan poistaa selektiivisesti, kuten ryhmistä, joita on 25 selostettu artikkelissa Boissonnas, Advances in OrganicIn the above L-aspartic acid derivatives, Q has one of the well-known amino protecting groups that can be selectively removed, such as those described in Boissonnas, Advances in Organic

Chem., 3 (1963) 159-190. Erityisen ensisijaisia amino-suo-jaryhmiä ovat bentsyylioksikarbonyyli ja tert-butyyliok-sikarbonyyli. R10 on lähinnä alkyyliryhmä, jossa on yksi - neljä hiiliatomia tai bentsyyli. Käytettävä D-seriini 30 tai D-O-metyyliseriini voi olla vapaan aminohapon muodossa, jossa R11 on vety, mutta lähinnä se on karboksyyli-suojattu johdannainen, jossa R11 voi olla esteriryhmän tähde kuten metyyli tai etyyli, mutta on suositeltavammin silyyliryhmä kuten trialkyylisilyyli, jossa on kolme -35 kaksitoista hiiliatomia. Erityisen ensisijainen sellainen ryhmä on trimetyylisilyyli taloudellisuuden ja tehokkuuden vuoksi.Chem., 3 (1963) 159-190. Particularly preferred amino protecting groups are benzyloxycarbonyl and tert-butyloxycarbonyl. R10 is mainly an alkyl group having one to four carbon atoms or benzyl. The D-serine 30 or DO-methylserine used may be in the form of a free amino acid wherein R11 is hydrogen, but is essentially a carboxyl-protected derivative wherein R11 may be an ester group residue such as methyl or ethyl, but is more preferably a silyl group such as trialkylsilyl having three -35 twelve carbon atoms. A particularly preferred such group is trimethylsilyl for economy and efficiency.

6 793356 79335

Edellä esitetyn reaktiosarjan ensimmäisessä vaiheessa disuojattu L-aspartiinihappo kondensoidaan sopivan 5 D-aminohapon tai karboksi-suojatun johdannaisen kanssa, jolloin saadaan kaavan (II) mukaista disuojattua dipepti-diä. Joskin tämä vaihe voidaan suorittaa disuojattua as-partiinihappoa käyttäen kondensointlaineiden, kuten esimerkiksi disykloheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa, suo-10 siteltavampaa on käyttää disuojatun aspartiinihapon a-kar-boksyyli-aktivoitua johdannaista. Ensisijaisia sellaisia karboksyyli-aktivoituja johdannaisia ovat kloridi, bromi-di, anhydridi tai seka-anhydridi. Tehokkuuden kannalta erityisen ensisijaisia ovat edellä mainittujen disuojat-15 tujen L-aspartiinihappojen seka-anhydridit kloorikarbok-syylihapon esterien, erityisesti alkyyliesterien kanssa, joiden mainitussa alkyylissä on yksi - neljä hiiliatomia. Ensisijaisimpia seka-anhydridejä ovat taloudellisista syistä anhydridit, jotka on valmistettu kloorikarboksyyli-20 hapon metyyli- ja etyyliestereistä.In the first step of the above series of reactions, the disubstituted L-aspartic acid is condensed with the appropriate 5-D-amino acid or carboxy-protected derivative to give the disubstituted dipeptide of formula (II). Although this step can be performed using disubstituted aspartic acid in the presence of condensing agents such as dicyclohexylcarbodiimide, it is more preferable to use an α-carboxyl-activated derivative of the disubstituted aspartic acid. Preferred such carboxyl-activated derivatives are chloride, bromide, anhydride or mixed anhydride. Particularly preferred for efficiency are the mixed anhydrides of the aforementioned disprotected L-aspartic acids with chlorocarboxylic acid esters, in particular alkyl esters having one to four carbon atoms in said alkyl. For economic reasons, the most preferred mixed anhydrides are anhydrides prepared from methyl and ethyl esters of chlorocarboxylic acid.

Eräässä ensisijaisessa menetelmässä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi p-bentsyyli-N-bentsyy-lioksikarbonyyli-L-aspartiinihapon annetaan reagoida etyy-likloorikarbonaatin kanssa vastaavan seka-anhydridin muo-25 dostamiseksi alan tunnetuin menetelmin. D-aminohappo, RaCH(NH2)COOH, jota saadaan kaupallisista lähteistä tai hajoittamalla raseeminen aminohappo tunnetuin menetelmin [katso esim. Yamada ym., J. Org. Chem., 38 (1973) 4408], muutetaan erillisessä astiassa trimetyylisilyyliesteriksi 30 saattamalla aminohappo kosketuksiin ekvimoolimäärän kanssa trimetyylisilyylikloridia reaktion suhteen inertin orgaanisen liuottimen läsnäollessa; Ra:n ollessa CH20H, tavallisesti käytetään kaksi mooliekvivalenttia silylointiai-netta. Tähän tarkoitukseen sopivia liuottimia ovat esim.In a preferred process for the preparation of compounds of formula (I), p-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid is reacted with ethyl chlorocarbonate to form the corresponding mixed anhydride by methods known in the art. D-amino acid, RaCH (NH2) COOH, obtained from commercial sources or by resolution of a racemic amino acid by known methods [see, e.g., Yamada et al., J. Org. Chem., 38 (1973) 4408], is converted in a separate vessel to trimethylsilyl ester 30 by contacting the amino acid with an equimolar amount of trimethylsilyl chloride in the presence of a reaction-inert organic solvent; When Ra is CH2OH, two molar equivalents of silylating agent are usually used. Suitable solvents for this purpose are e.g.

35 pyridiini, dimetyyliformamidi tai dimetyyliasetamidi; eri- 7 79835 tyisen ensisijainen on dimetyyliformamidi.Pyridine, dimethylformamide or dimethylacetamide; dimethylformamide is particularly preferred.

Tyypillisessä tämän menetelmän mukaisessa reaktiossa D-aminohappo, esim. D-O-metyyliseriini, liuotetaan di-metyyliformamidiin, ja ekvimoolimäärä trimetyylikloorisi-5 laania lisätään huoneen lämpötilassa. Erillisessä astiassa β-bentsyyli-N-bentsyy1ioksikarbonyy1i-L-asparti inihappo ja mooliylimäärin happoa sitovaa ainetta, lähinnä trietyy-liamiinia liuotetaan seokseen, jossa on dimetyyliformami-dia ja tetrahydrofuraania ja huoneen lämpötilassa tai sitä 10 alemmassa lämpötilassa, lähinnä noin -25 - +25°C:ssa ja erityisesti noin -10 - 0°C:ssa, lisätään ekvimoolimäärä etyylikloorikarbonaattia, jolloin muodostuu seka-anhydri-diä. Tähän lisätään esim. D-O-metyyliseriini-trimetyylisi-lyyliesterin liuos, lämpötilan ollessa lähinnä samoissa 15 rajoissa. Reaktio on tavallisesti päättynyt yhden - kahden tunnin kuluessa, minkä jälkeen reaktioseos kaadetaan veteen tai hapon vesiliuokseen, esimerkiksi suolahappoon, ja kaavan (II) mukainen tuote uutetaan veden kanssa sekoittamattomalla liuottimena, tyypillisesti kloroformil-20 la, metyleenikloridilla tai etyylieetterillä ja eristetään standardin mukaisin menetelmin. Disuojattu dipeptidi (II) on tavallisesti riittävän puhdasta käytettäväksi seuraa-vassa vaiheessa, mutta sitä voidaan haluttaessa puhdistaa edelleen, esim. kromatografoimalla kolonnissa.In a typical reaction of this method, a D-amino acid, e.g., D-O-methylserine, is dissolved in dimethylformamide, and an equimolar amount of trimethylchloroisilane is added at room temperature. In a separate vessel, β-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid and a molar excess of acid scavenger, mainly triethylamine, are dissolved in a mixture of dimethylformamide and tetrahydrofuran and at or below room temperature, preferably about -25 + At ° C, and especially at about -10 to 0 ° C, an equimolar amount of ethyl chlorocarbonate is added to form a mixed anhydride. To this is added, for example, a solution of D-O-methylserine trimethylsilyl ester, the temperature being essentially within the same range. The reaction is usually complete within one to two hours, after which the reaction mixture is poured into water or aqueous acid, for example hydrochloric acid, and the product of formula (II) is extracted with a water-immiscible solvent, typically chloroform-20a, methylene chloride or ethyl ether and isolated by standard methods. The displaced dipeptide (II) is usually sufficiently pure for use in the next step, but may be further purified if desired, e.g. by column chromatography.

25 Tämän menetelmän toisessa vaiheessa disuojatun di- peptidin (II) annetaan reagoida ekvimoolimäärän kanssa primääristä amiinia, jonka kaava on RNH2, jolloin saadaan vastaavaa disuojattua dipeptidiamidi-väliyhdistettä, joka on kaavan (III) mukainen, jossa R“, R, R10 ja Q ovat ai-30 kaisemmin määriteltyjä. Kuten ensimmäisessä vaiheessa rea-genssin (II) karboksyylihappomuotoa voidaan käyttää menestyksellisesti käytettäessä kondensointiaineita, esim. di-sykloheksyylikarbodi-imidiä, jolloin saadaan kaavan (III) mukaisia väliyhdisteitä. Suositeltavaa on kuitenkin muut-35 taa kaavan (II) mukainen yhdiste karboksyyli-aktivoiduksi 8 79835 johdannaiseksi, esim. kloridiksi, bromidiksi tai seka-an-hydridiksi, jälkimmäisen ollessa ensisijainen. Täten seka-anhydridejä valmistetaan käyttämällä erityisen ensisijaista kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa R10 on 5 bentsyyli ja Q on bentsyylioksikarbonyyli. Kuten edellä on mainittu ensisijaisia ovat anhydridit, joita on saatu kloorikarboksyylihapon estereistä ja erityisen ensisijaisia ovat sen metyyli- tai etyyliesterit. Yhdisteen (II) seka-anhydridejä valmistetaan käyttämällä reagensseja ja 10 olosuhteita, joita on selostettu edellä tämän reaktiosar-jan ensimmäisessä vaiheessa. Tyypillisessä reaktiossa kaavan (II) mukaista yhdistettä ja trietyyliamiinia yhdistetään suunnilleen ekvimoolimäärin reaktion suhteen neutraalissa orgaanisessa liuottimessa, esim. tetrahydrofuraanis-15 sa, seos jäähdytetään noin -10°C:seen ja lisätään etyyli-kloorikarbonaattia, jolloin saadaan seka-anhydridiä. Tähän lisätään sitten ekvimoolimäärä kaavan RNH2 mukaista amiinia tai sen liuosta, esim. samassa reaktion suhteen inertissä liuottimessa ja lämpötilan ollessa rajoissa noin 20 -50 - +25°C, ja lähinnä välillä -35 -5°C. Amiinin lisäyk sen päätyttyä reaktioseoksen annetaan lämmetä suunnilleen huoneen lämpötilaan ja sitä pidetään tässä lämpötilassa kunnes reaktio on pääasiallisesti tapahtunut täydellisesti, tavallisesti noin 1-20 tuntia. Haluttu kaavan (II) 25 mukainen väliyhdiste eristetään sen jälkeen ja puhdistetaan, mikäli halutaan, edellä yhdisteen (II) yhteydessä selostetuin menetelmin.In a second step of this process, the disubstituted dipeptide (II) is reacted with an equimolar amount of a primary amine of formula RNH2 to give the corresponding disubstituted dipeptide amide intermediate of formula (III) wherein R 1, R, R 10 and Q are ai-30. As in the first step, the carboxylic acid form of reagent (II) can be used successfully with condensing agents, e.g. dicyclohexylcarbodiimide, to give intermediates of formula (III). However, it is preferred to convert the compound of formula (II) to a carboxyl-activated 8,79835 derivative, e.g. chloride, bromide or mixed anhydride, the latter being preferred. Thus, mixed anhydrides are prepared using a particularly preferred compound of formula (II) wherein R 10 is benzyl and Q is benzyloxycarbonyl. As mentioned above, anhydrides derived from chlorocarboxylic acid esters are preferred, and methyl or ethyl esters thereof are particularly preferred. The mixed anhydrides of compound (II) are prepared using the reagents and conditions described above in the first step of this series of reactions. In a typical reaction, the compound of formula (II) and triethylamine are combined in approximately equimolar amounts in a reaction-neutral organic solvent, e.g. tetrahydrofuran, the mixture is cooled to about -10 ° C and ethyl chlorocarbonate is added to give mixed anhydride. To this is then added an equimolar amount of an amine of formula RNH 2 or a solution thereof, e.g. in the same reaction inert solvent and at a temperature in the range of about 20-50 to + 25 ° C, and most preferably between -35 -5 ° C. Upon completion of the amine addition, the reaction mixture is allowed to warm to approximately room temperature and maintained at this temperature until the reaction is substantially complete, usually about 1 to 20 hours. The desired intermediate of formula (II) is then isolated and, if desired, purified by the methods described above for compound (II).

Tämän menetelmän viimeisessä vaiheessa poistetaan karboksyyli-suojaryhmä, R10 ja amino-suojaryhmä, Q, jol-30 loin saadaan haluttuja kaavan (I) mukaisia makeutusainei-ta.In the last step of this process, the carboxyl protecting group, R 10 and the amino protecting group, Q, are removed to give the desired sweeteners of formula (I).

Suojaryhmien poistamiseksi kaavan (III) mukaisesta dipeptidiamidista valittava menetelmä vaihtelee riippuen joukosta tekijöitä, jotka ovat alan asiantuntijoille il-35 meisiä. Kaksi tärkeätä tekijää tällaisen valinnan suorit- g 79835 tamiseksi ovat suojaryhmien R10 ja Q luonne, ja amidi-substituentin R luonne. Esimerkiksi kun R10 ja Q ovat, vastaavasti, erityisen ensisijaisia bentsyyli- ja bentsyy-lioksikarbonyyli-ryhmiä eikä R:ssä ole rikkiä, ensisijai-5 sena menetelmänä mainittujen suojaryhmien poistamiseksi on, tavallisesti, hydrogenolyysi. Kuitenkin kun R10 on bentsyyli tai edellä määritelty alkyyli ja Q on tert-bu-tyylioksikarbonyyli ja R:llä on mikä tahansa edellä mainituista merkityksistä, tavallisesti on suositeltavaa pois-10 taa suojaryhmät hydrolysoimalla. Hydrolyysin ja hydrogeno-lyysin yhdistelmä on suositeltava tapauksissa, jolloin R10 on alkyyli, Q on bentsyylioksikarbonyyli eikä R:ssä ole rikkiä.The method chosen to remove the protecting groups from the dipeptide amide of formula (III) will vary depending on a number of factors which will be apparent to those skilled in the art. Two important factors in making such a choice are the nature of the protecting groups R10 and Q, and the nature of the amide substituent R. For example, when R 10 and Q are, respectively, particularly preferred benzyl and benzyloxycarbonyl groups and R is free of sulfur, the preferred method for removing said protecting groups is usually hydrogenolysis. However, when R 10 is benzyl or alkyl as defined above and Q is tert-butyloxycarbonyl and R has any of the above meanings, it is usually preferable to remove the protecting groups by hydrolysis. A combination of hydrolysis and hydrogenolysis is preferred in cases where R 10 is alkyl, Q is benzyloxycarbonyl and R is sulfur free.

Kun suojaryhmien poistamiseksi kaavan (III) mukai-15 sesta väliyhdisteestä valitaan hydrogenolyysi, suositeltavaa on, että reaktio suoritetaan katalyyttisen jalome-talli-katalyyttimäärän läsnäollessa, palladiumin ollessa erityisen ensisijainen, ja reaktion suhteen inertin liuottimen läsnäollessa. Esimerkkejä sellaisista liuottimista 20 ovat pienimolekyyliset alkanolit, kuten metanoli, etanoli, isopropanoli ja n-butanoli? eetterit kuten tetrahydrofu-raani, etyylieetteri, 1,2-dimetoksietaani ja dietyleeni-glykoli-dimetyylieetteri; esterit kuten etyyliasetaatti, metyylipropionaatti ja dimetyylisukkinaatti; ja dimetyyli-25 formamidi. Erityisen ensisijaisia sellaisia liuottimia ovat metanoli ja etanoli taloudellisista syistä ja tehokkuudesta johtuen. Joskin hydrogenolyysi voidaan suorittaa menestyksellisesti korkeammissa paineissa ja lämpötiloissa, taloudellisuuden ja mukavuuden kannalta suositeltavaa 30 on käyttää noin 1-10 ilmakehän painetta ja huoneen lämpötilaa. Ensisijaisessa lämpötilassa ja paineessa reaktio on tavallisesti päättynyt noin 30 minuutin - noin kuuden tunnin kuluttua, minkä jälkeen katalyytti poistetaan, tyypillisesti suodattamalla, liuotin haihdutetaan pois ja saatu 35 tuote puhdistetaan, haluttaessa, standardin mukaisin mene- 10 79335 telmin, esimerkiksi kiteyttämällä uudelleen tai kromato-grafoimalla kolonnissa.When hydrogenolysis is selected to remove the protecting groups from the intermediate of formula (III), it is preferred that the reaction be carried out in the presence of a catalytic amount of noble metal catalyst, with palladium being particularly preferred, and in the presence of a reaction-inert solvent. Examples of such solvents are low molecular weight alkanols such as methanol, ethanol, isopropanol and n-butanol. ethers such as tetrahydrofuran, ethyl ether, 1,2-dimethoxyethane and diethylene glycol dimethyl ether; esters such as ethyl acetate, methyl propionate and dimethyl succinate; and dimethyl-formamide. Particularly preferred such solvents are methanol and ethanol for economic reasons and efficiency. Although hydrogenolysis can be performed successfully at higher pressures and temperatures, for economical and comfort reasons, it is recommended to use about 1-10 atmospheric pressure and room temperature. At the preferred temperature and pressure, the reaction is usually complete after about 30 minutes to about six hours, after which the catalyst is removed, typically by filtration, the solvent is evaporated off and the product obtained is purified, if desired, by standard methods, e.g. recrystallization or chromatography. by graphing on a column.

Kun toisen tai kummankin suojaryhmän R10 ja Q poistamiseksi valitaan hydrolyysi, melkoisella menestyksellä 5 voidaan käyttää mitä tahansa hyvin tunnetuista esterien alkalilla tai hapolla suoritettavista hydrolysointimene-telmistä ja näiden kaltaisia menetelmiä. Kuitenkin kun suojaryhmät R10 on poistettava hydrolysoimalla, alkalinen hydrolyysi on ensisijainen, ja erityisen ensisijaisia ovat 10 olosuhteet käytettäessä ainakin yhden ekvivalentin verran vahvaa emästä, esim. natriumhydroksidia tai kaliumhydrok-sidia veden ja pienimolekyylisen alkanolin, erityisesti metanolin tai etanolin läsnäollessa huoneen lämpötilassa tai suunnilleen huoneen lämpötilassa. Näissä ensisijaisis-15 sa olosuhteissa R1 0-ryhmän poistuminen hydrolyyttisesti on tavallisesti tapahtunut täydellisesti muutamassa tunnissa tai lyhyemmässä ajassa.When hydrolysis is chosen to remove one or both of the protecting groups R10 and Q, any of the well-known methods of hydrolyzing esters with alkali or acid and the like can be used with considerable success. However, when the protecting groups R10 must be removed by hydrolysis, alkaline hydrolysis is preferred, and particularly preferred are conditions using at least one equivalent of a strong base, e.g. sodium hydroxide or potassium hydroxide, in the presence of water and a lower alkanol, especially methanol or ethanol at room temperature or about room temperature. . Under these primary conditions, the hydrolytic removal of the R 10 group is usually complete in a few hours or less.

Kun amino-suojaryhmä Q on tert-butyylioksikarbonyy-li, sen poistamiseen on suositeltavaa käyttää hapolla hyd-20 rolysointia. Erityisen suositeltava on laimea kloorivety-hapon vesiliuos metanolin tai etanolin läsnäollessa, ja seoksen lämmittäminen kiehuttaen. Näissä olosuhteissa hydrolyysi on tavallisesti tapahtunut täydellisesti muutamassa tunnissa tai lyhyemmässä ajassa.When the amino protecting group Q is tert-butyloxycarbonyl, it is recommended to use acid hydrolysis to remove it. Particularly preferred is a dilute aqueous solution of hydrochloric acid in the presence of methanol or ethanol, and heating the mixture to boiling. Under these conditions, the hydrolysis is usually complete in a few hours or less.

25 Millä tahansa edellä mainituista hydrolyysimenetel- mistä suoritetun suojaryhmien poistamisen jälkeen kaavan (I) mukaisten tuotteiden eristämiseen käytetään standardin mukaisia alalla tunnettuja menetelmiä. Esimerkiksi hapolla hydrolysoinnin jälkeen reaktioseos haihdutetaan kuiviin 30 liuottimen poistamiseksi, vesipitoinen jäännös pestään veden kanssa sekoittumattomalla polaarittomalla liuottimena, esimerkiksi etyylieetterillä tai kloroformilla, minkä jälkeen vesikerros tehdään alkaliseksi ja tuote uutetaan veden kanssa sekoittamattomalla liuottimella, kuten 35 esim. etyyliasetaatilla, ja tuote saadaan talteen haihduttamalla liuotin. Haluttaessa tuote voidaan puhdistaa edel- 11 79835 leen, esim. kiteyttämällä uudelleen tai kromatografoimalla kolonnissa. Kun suojaryhmän R10 poistamista alkalilla hydrolysoimalla seuraa hydrogenolyysi aminosuojaryhmän Q poistamiseksi, alkalisen hydrolyysin jälkeinen reaktioseos 5 on suositeltavaa neutraloida lisäämällä happoa, esim. suolahappoa, ja neutraloitu reaktioseos hydrogenolysoidaan edellä selostetulla tavalla.After deprotection by any of the above hydrolysis methods, standard methods known in the art are used to isolate products of formula (I). For example, after hydrolysis with acid, the reaction mixture is evaporated to dryness to remove the solvent, the aqueous residue is washed with a water-immiscible non-polar solvent such as ethyl ether or chloroform, the aqueous layer is made alkaline and the product is extracted with a water-immiscible solvent such as ethyl acetate and e.g. . If desired, the product can be further purified, e.g. by recrystallization or column chromatography. When removal of the protecting group R10 by alkali hydrolysis is followed by hydrogenolysis to remove the amino protecting group Q, it is preferable to neutralize the reaction mixture 5 after alkaline hydrolysis by adding an acid, e.g. hydrochloric acid, and hydrogenate the neutralized reaction mixture as described above.

Toinen ensisijainen menetelmä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on esitetty alla.Another preferred method for preparing compounds of formula (I) is set forth below.

10 3. a R · Ra ' ,10 3. a R · Ra ',

D-QNHCHCOOH + RNH, QNHCHCONHRD-QNHCHCOOH + RNH, QNHCHCONHR

---► tai karboksyyli-aktivoitu (IV) 15 johdannainen--- ► or a carboxyl-activated (IV) 15 derivative

NHQNHQ

. , . . R3 COO^^ ^OOH. ,. . R3 COO2 ^ ^ OOH

suojauksen poisto i -► NH2CHCONHR —-►(lii)—►d) (V) 20 jossa Ra, R, R10 ja Q ovat edellä määriteltyjä.deprotection i -► NH2CHCONHR —-► (lii) —►d) (V) 20 wherein Ra, R, R10 and Q are as defined above.

Amino-suojätun D-aminohapon tai sen karboksyyli-aktivoidun johdannaisen annetaan reagoida ekvimoolimäärän kanssa amiinia RNH2 käyttämällä menetelmiä ja olosuhteita, 25 joita on selostettu edellä väliyhdisteiden (II) ja (III) valmistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (IV) mukaista ami-nosuojattua D-aminohappoamidia. Suojaryhmä Q poistetaan hydrogenolysoimalla tai hydrolysoimalla edellä selostetulla tavalla ja saatu vapaa aminoamidi (V) kondensoidaan 30 disuojatun L-aspartiini-happo-johdannaisen tai sen karbok-syyli-aktivoidun johdannaisen kanssa, kuten edellä on selostettu kaavan (II) mukaisten väliyhdisteiden valmistuksen yhteydessä, jolloin saadaan kaavan (III) mukaista di-suojattua dipeptidiamidia, josta haluttua kaavan (I) mu-35 kaista makeutusainetta saadaan aikaisemmin selostetulla tavalla.The amino-protected D-amino acid or its carboxyl-activated derivative is reacted with an equimolar amount of the amine RNH2 using the methods and conditions described above for the preparation of intermediates (II) and (III) to give the amino-protected D-amino compound of formula (IV). amino acid amide. The protecting group Q is removed by hydrogenolysis or hydrolysis as described above, and the resulting free aminoamide (V) is condensed with a disulfated L-aspartic acid derivative or a carboxyl-activated derivative thereof, as described above for the preparation of intermediates of formula (II), a di-protected dipeptide amide of formula (III) is obtained from which the desired sweetener of formula (I) is obtained as previously described.

12 79335 Tämän menetelmän muunnelmassa kaavan (IV) mukainen väliyhdiste, jonka R:ssä on syklinen sulfidi-ryhmä (-S-), voidaan hapettaa vastaavaksi sulfoniksi ennen sen muuttamista väliyhdisteeksi (V) ja myöhempiä edellä selostettuja 5 reaktioita, jolloin saadaan kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa R:ssä on sulfoniryhmä.12 79335 In a variation of this process, an intermediate of formula (IV) having a cyclic sulfide group (-S-) in R may be oxidized to the corresponding sulfone prior to conversion to intermediate (V) and subsequent reactions described above to give a compound of formula (I). ) in which R has a sulfone group.

Kolmannessa ensisijaisessa menetelmässä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi kaavan (V) mukaisen D-aminohappoamidin, selostettu edellä, annetaan reagoida 10 L-aspartiinihappo-N-tiokarboksianhydridin kanssa, jolloin saadaan suoraan kaavan (I) mukaisia yhdisteitä. Tätä menetelmää suoritettaessa sopivassa liuottimessa oleva väliyhdiste (V) saatetaan kosketuksiin ekvimoolimäärän kanssa L-aspartiinihappo-N-tiokarboksianhydridiä pH:n ollessa 15 lievästi alkalinen ja lämpötilan ollessa välillä noin -25 - +10°C, jolloin saadaan kaavan (I) mukaista yhdistettä. Tätä reaktiota varten pH saadaan alkaliseksi vahvan emäksen, esim. natriumhydroksidin tai kaliumkarbonaatin avulla. Tähän reaktioon sopivia liuottimia ovat liuottimet, 20 jotka liuottavat ainakin osan reagensseista käytettävissä reaktio-olosuhteissa reagoimatta kummankaan reagenssin kanssa olennaisessa määrässä ja mahdollistavat reaktiossa muodostuneiden tuotteiden eristämisen suhteellisen helposti. Esimerkkejä tähän reaktioon soveltuvista sellaisista 25 liuottimista ovat vesi, tetrahydrofuraani, 1,2-dimetoksi-etaani, dietyleeniglykoli-dimetyylieetteri, dimetyylisul-foksidi, dimetyyliformamidi ja niiden yhdistelmät; ensisijaisia liuottimia ovat vesi ja sen seokset tetrahydrofu-raanin kanssa. Ensisijainen alkalinen pH-alue tämän reak-30 tion kannalta on noin 8-10, ja erityisen ensisijainen pH on noin 9. Erityisen ensisijainen lämpötila on rajoissa noin -10 - 0eC.In a third preferred process for the preparation of compounds of formula (I), the D-amino acid amide of formula (V) described above is reacted with 10 L-aspartic acid-N-thiocarboxyanhydride to give compounds of formula (I) directly. In carrying out this process, intermediate (V) in a suitable solvent is contacted with an equimolar amount of L-aspartic acid-N-thiocarboxyanhydride at a slightly alkaline pH of about -25 to + 10 ° C to give a compound of formula (I). For this reaction, the pH is made alkaline with a strong base, e.g. sodium hydroxide or potassium carbonate. Suitable solvents for this reaction include solvents which dissolve at least some of the reagents under the reaction conditions used without reacting with either reagent in a substantial amount and allow the products formed in the reaction to be isolated relatively easily. Examples of such solvents suitable for this reaction include water, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, and combinations thereof; the preferred solvents are water and mixtures thereof with tetrahydrofuran. The preferred alkaline pH range for this reaction is about 8-10, and the particularly preferred pH is about 9. The particularly preferred temperature is in the range of about -10 to 0eC.

Edellä mainituissa ensisijaisissa olosuhteissa reaktio on tavallisesti tapahtunut loppuun yhden - kahden 35 tunnin kuluessa. Kaavan (I) mukainen tuote eristetään sitten standardin mukaisin menetelmin, esim., reaktioseoksen 13 79835 pH säädetään tuotteen isoelektriseen pH-arvoon, tavallisesti välille noin 5,0-5,6 kaavan (I) mukaisen tuotteen saostamiseksi, pääosa liuottimesta poistetaan haihduttamalla tai suodattamalla ja raaka aine lietetään orgaani-5 seen liuottimeen, esim. metanoliin, etanoliin, etyylieet-teriin, etyyliasetaattiin tai niiden seoksiin. Kaavan (I) mukainen tuote eristetään sitten, esimerkiksi suodattamalla. Haluttaessa sitä voidaan puhdistaa edelleen, esim. kiteyttämällä uudelleen tai kromatografioimalla kolonnis-10 sa.Under the above-mentioned primary conditions, the reaction is usually complete within one to two hours. The product of formula (I) is then isolated by standard methods, e.g. the pH of the reaction mixture 13 79835 is adjusted to the isoelectric pH of the product, usually between about 5.0-5.6 to precipitate the product of formula (I), most of the solvent is removed by evaporation or filtration and the crude material is slurried in an organic solvent, e.g., methanol, ethanol, ethyl ether, ethyl acetate, or mixtures thereof. The product of formula (I) is then isolated, for example by filtration. If desired, it can be further purified, e.g. by recrystallization or column chromatography.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden makeutusteho määritettiin vertaamalla niiden maun makeutta sakkaroosin makeuteen. Kaavan (I) mukaisen yhdisteen vesiliuoksia, laimennettuina sopiviin konsentraatioalueisiin, vertasi 15 sakkaroosi-standardiin asiantuntijoista koottu makupanee- li. Vertailut suoritettiin yleensä käyttämällä sakkaroosin 7-9-prosenttisia vesiliuoksia, so. liuoksia, joissa oli 7-9 g sakkaroosia/100 ml liuosta. Suuremmilla sakkaroosi-konsentraatioilla on selvä makuvaikutelma suussa, joka voi 20 vaikuttaa tuloksiin ja pienemmät sakkaroosikonsentraatiot eivät viittaa normaaleihin käyttötilanteisiin. Jos esimerkiksi 0,014-prosenttinen kaavan (I) mukaisen yhdisteen liuos arvioidaan yhtä makeaksi kuin 7 %:inen sakkaroosi-liuos, silloin tuon yhdisteen makeutusteho on 7/0,014 = 25 500 x sakkaroosin makeutusteho. Kaikki tässä mainitut ma- keutusteho-arvot, jotka on saatu kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä, määritettiin em. menetelmällä. Kynnyskonsent-raatioiden kohdalla (so. pienin konsentraatio, jolloin makeus ensin havaittiin, joka sakkaroosin osalta on taval-30 lisesti konsentraatioalueessa 2-3 %) makeutusaineen teho on yleensä kaksi kertaa suurempi kuin se, mikä havaitaan verrattaessa sen maun makeutta 7-9 %:isiin sakkaroosi-liuoksiin.The sweetening power of the compounds of formula (I) was determined by comparing their sweetness of taste with that of sucrose. Aqueous solutions of the compound of formula (I), diluted to appropriate concentration ranges, were compared to a sucrose standard by a panel of flavors assembled from experts. Comparisons were generally made using 7-9% aqueous solutions of sucrose, i. solutions of 7-9 g sucrose / 100 ml solution. Higher sucrose concentrations have a clear taste effect in the mouth, which can affect the results, and lower sucrose concentrations do not indicate normal use. For example, if a 0.014% solution of a compound of formula (I) is judged to be as sweet as a 7% sucrose solution, then the sweetening power of that compound is 7 / 0.014 = 25,500 times the sweetening power of sucrose. All the sweetening power values mentioned here, obtained with the compounds of formula (I), were determined by the above method. At threshold concentrations (i.e., the lowest concentration at which sweetness was first observed, which is usually 2-3% for sucrose in the concentration range), the potency of a sweetener is generally twice as high as that observed when comparing its sweetness to 7-9%: sucrose solutions.

Tarvittavat amiinit, jotka ovat kaavan RNH2 mukai-35 siä, jossa R on aikaisemmin määritelty, ovat joko kaupan olevia tai niitä voidaan saada helposti saatavista lähtö- 14 79835 yhdisteistä. Esimerkiksi 2-alkyylisykloheksyyliamiineja ja 2,6-dialkyylisykloheksyyliamiineja voidaan saada hyd-raamalla katalyyttisesti vastaavia alkyyli-substituoituja aniliineja. Monia amiineista saadaan pelkistysaminoimalla 5 vastaavasta ketonista käyttämällä erilaisia alalla tunnettuja olosuhteita. Esimerkiksi voidaan käyttää pelkistys-aminointia hyvin tunnetun Leuckhart-reaktion yhteydessä käyttämällä pelkistysaineina muurahaishappoa ja formami-dia, katso esimerkiksi selostusta Organic Reactions, Wiley 10 and Sons, New York, Vol. 5, s. 301, 1949. Vaihtoehtoisesti sopiva ketoni voidaan pelkistysaminoida käyttämällä nat-riumsyaaniboorihydridiä ja ammoniumasetaattia, katso esim. J. Amer. Chem. Soc. 93, (1971) 2897, tai ammoniakin eta-noliliuoksen avulla hydrauskatalyytin kuten Raney-nikke-15 Iin, platinan tai palladiumin läsnäollessa, katso, esim. Organic Reactions, 4 (1948) 174. Monia kaavan RNH2 mukaisia amiineja saadaan vastaavista ketoneista muodostamalla oksiimi-väliyhdiste, joka muodostetaan antamalla ketonin reagoida hydroksyyliamiinin tai sen suolojen kanssa alalla 20 hyvin tunnetuissa olosuhteissa. Oksiimi-väliyhdiste pelkistetään sitten hydraamalla katalyyttisesti tai natriumin avulla pienimolekyylisen alkanolin läsnäollessa normaalia korkeammassa lämpötilassa. Erityisen ensisijaisessa menetelmässä, joka on erityisen käyttökelpoinen pelkistettäes-25 sä rikkipitoisten ketonien oksiimeja, oksiimi pelkistetään etanolissa ja käyttämällä mooliylimäärin natriumia seoksen kiehumislämpötilassa.The required amines of formula RNH2, wherein R is as previously defined, are either commercially available or can be obtained from readily available starting compounds. For example, 2-alkylcyclohexylamines and 2,6-dialkylcyclohexylamines can be obtained by catalytic hydrogenation of the corresponding alkyl-substituted anilines. Many of the amines are obtained by reduction amination of the corresponding ketone using various conditions known in the art. For example, reduction amination can be used in connection with the well-known Leuckhart reaction using formic acid and formamide as reducing agents, see, for example, Organic Reactions, Wiley 10 and Sons, New York, Vol. 5, p. 301, 1949. Alternatively, a suitable ketone can be reduced using sodium cyanoborohydride and ammonium acetate, see e.g. J. Amer. Chem. Soc. 93, (1971) 2897, or with an ethanolic solution of ammonia in the presence of a hydrogenation catalyst such as Raney-Nikke-15, platinum or palladium, see, e.g., Organic Reactions, 4 (1948) 174. Many amines of formula RNH2 are obtained from the corresponding ketones by formation of the oxime. intermediate formed by reacting a ketone with hydroxylamine or its salts under conditions well known in the art. The oxime intermediate is then reduced by hydrogenation catalytically or with sodium in the presence of a lower alkanol at a higher than normal temperature. In a particularly preferred process, which is particularly useful in the reduction of oximes of sulfur-containing ketones, the oxime is reduced in ethanol and using a molar excess of sodium at the boiling point of the mixture.

Tarvittavat amiinien RNH2 ketoni-lähtöyhdisteet ovat joko kaupan olevia alalla tunnettuja tai niitä val-30 mistetaan tunnetuin menetelmin.The required RNH2 ketone starting compounds for amines are either commercially known in the art or are prepared by known methods.

Kaavan RNH2 mukaisia amiineja, joissa R on aikaisemmin määritelty, saadaan myös hyvin tunnetun Hofmann'in reaktion avulla suorittamalla sopivan karboksiamidin konversio alkalimetallihypohalitin kanssa.Amines of formula RNH2, wherein R is as previously defined, are also obtained by the well-known Hofmann reaction by carrying out the conversion of the appropriate carboxamide with an alkali metal hypohalite.

35 Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä tai niiden amidivä- liyhdisteitä, joissa R on is 79835 ch3 CH3 —\ \ (ch9) V-"" 2 p 5 CH3 ' jossa X on S02, saadaan vastaavista yhdisteistä, joissa X on S hapettamalla ja käyttämällä reagensseja ja olosuhteita, joissa tiedetään sulfideista muodostuvan sulfoneja.Compounds of formula (I) or their amide intermediates in which R is is 79835 ch3 CH3 - \ (ch9) V- "" 2 p 5 CH3 'in which X is SO2 are obtained from the corresponding compounds in which X is S by oxidation and using reagents and conditions known to form sulfones from sulfides.

10 Ensisijaisia reagensseja ja olosuhteita sellaiseen sulfi-dien hapettamiseen ovat vetyperoksidin käyttö liuottimes-sa, esim. etikkahapossa tai asetonissa. Kun reagensseja käytetään ekvimoolimäärin, tuotteena on sulfoksidi, joka on helposti muutettavissa vastaavaksi sulfoniksi lisäämäl-15 lä mooli peroksidia. Muita ensisijaisia hapettimia sulfo-nien valmistamiseksi ovat kaliumpermanganaatti, natrium-metaperjodaatti tai kromihappo, ja m-klooriperbentsoehap-po.Preferred reagents and conditions for such sulfide oxidation are the use of hydrogen peroxide in a solvent such as acetic acid or acetone. When reagents are used in equimolar amounts, the product is a sulfoxide that is readily converted to the corresponding sulfone by the addition of 15 moles of peroxide. Other preferred oxidants for the preparation of sulfones are potassium permanganate, sodium metaperiodate or chromic acid, and m-chloroperbenzoic acid.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden fysiologi-20 sesti hyväksyttävät suolat tarjoavat etuja makeutusaineina suuren tehokkuutensa, fysikaalisen muotonsa ja stabiili-suutensa vuoksi. Ne ovat, tavallisesti, kiteisiä, eivät ole hygroskooppisia, ovat veteen liukenevia kiinteitä aineita. Niiden ainutlaatuisena tyypillisenä ominaisuutena 25 on, että ne ovat makean makuisia, vailla ei toivottavia kitkeriä tai karvaita makuvivahteita tavanomaisin käyttömäärin. Niiden käyttöä syötäväksi kelpaavien aineiden ma-keuttamiseen on kuvattu FI-patentissa 77045.The compounds of formula (I) and their physiologically acceptable salts offer advantages as sweeteners due to their high efficacy, physical form and stability. They are, usually, crystalline, non-hygroscopic, are water-soluble solids. Their unique characteristic feature 25 is that they are sweet-tasting, free of undesirable bitter or bitter taste nuances in conventional amounts. Their use for sweetening edible substances is described in FI patent 77045.

Keksintöä valaistaan edelleen seuraavin esimerkein, 30 joista esimerkit 1C, 2B, 3B, 4B, 6C, 7C, 8C, 9B, 10E, 11B, 12D, 13B ja 14B kuvaavat keksinnönmukaisten D-aminohappo-amidivälituotteiden valmistusta, joilla on kaavaThe invention is further illustrated by the following examples, of which Examples 1C, 2B, 3B, 4B, 6C, 7C, 8C, 9B, 10E, 11B, 12D, 13B and 14B illustrate the preparation of the D-amino acid amide intermediates of the invention having the formula

Ra -CHC0NHRc 35 NH2Ra -CHCONHRc 35 NH2

Esimerkki 1 L-aspartyyli-D-seriini-N-(disyklopropyylikarbi- nyyli)amidi 16 79335 5 I, Ra = CH20H, R =-/ A. d-hoch2chcooh ^ NHCbzExample 1 L-aspartyl-D-serine-N- (dicyclopropylcarbonyl) amide 16 79335 5 L, Ra = CH 2 OH, R = - / A. d-hoch2chcooh

Liuos, jossa oli 4,41 g (0,042 moolia) D-serii-10 niä 21 ml:ssa 2-norm. natriumhydroksidia, jäähdytettiin 5-10°C:seen, pH säädettiin väkevällä suolahapolla välille 10,0-11,5 ja 1,5 tunnin kuluessa lisättiin annoksittain 6,9 ml (0,048 moolia) bentsyyliklooriformi-aattia samanaikaisesti kun lisättiin 2-norm. natrium-15 hydroksidia seoksen pH:n pitämiseksi edellä mainituissa rajoissa. Seosta sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa, pestiin etyylieetterillä ja vesifaasi tehtiin happameksi (pH 2,5-3,0) 6-norm, suolahapolla. Uuttamalla etyyliasetaatilla, pesemällä uutteet suola-20 liuoksella ja kuivaamalla (MgSO^) saatiin 3,14 g tuotetta värittömänä kiinteänä aineena, joka kiteytettiin uudelleen 20 ml:sta etyyliasetaattia, jolloin saatiin 2,64 g tuotetta, R^ 0,43 /öhutkerroskromatografi-ointi (TLC), etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, 25 til.suhde7. /1 B. d-hoch2chconh~/^ NHCbzA solution of 4.41 g (0.042 mol) of D-serine-10 in 21 ml of 2-norm. sodium hydroxide, cooled to 5-10 ° C, the pH was adjusted to 10.0-11.5 with concentrated hydrochloric acid and 6.9 ml (0.048 mol) of benzyl chloroformate were added portionwise over 1.5 hours while 2-norm was added. sodium 15 hydroxide to keep the pH of the mixture within the above limits. The mixture was stirred overnight at room temperature, washed with ethyl ether and the aqueous phase acidified (pH 2.5-3.0) with 6-norm, hydrochloric acid. Extraction with ethyl acetate, washing of the extracts with brine and drying (MgSO 4) gave 3.14 g of product as a colorless solid, which was recrystallized from 20 ml of ethyl acetate to give 2.64 g of product, Rf 0.43 / TLC. (TLC), ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, 25 v / v7. / 1 B. d-hoch2chconh ~ / ^ NHCbz

Lietteeseen, jossa oli 2,4 g (0,01 moolia) osassa A saatua N-Cbz-D-seriiniä 75 ml:ssa kloroformia, 30 lisättiin 1,1 ml (0,01 moolia) N-metyylimorfoliinia. Saatiin liuos, joka jäähdytettiin -12°C:seen. Tähän lisättiin 0,96 ml (0,01 moolia) etyyliklooriformiaattia, seosta sekoitettiin -10°C:ssa viisi minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli 1,11 g ( 0,01 rnoolia) disyklopropyy likar- 17 79335 nyyliamiinia 5 ml:ssa kloroformia ja sekoittamista jatkettiin viisi minuuttia -15°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, pestiin peräkkäin 0,5-norm. suolahapolla, 5 %:isella natriumvety-5 karbonaatti liuoksella ja vedellä, kloroformi haihdutettiin pois vakuumissa. Vesipesunesteet yhdistettiin ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet yhdistettiin jäännöksen kanssa, joka oli saatu haihduttamalla kloroformi pois ja etyyliasetaattiosa kuivat-10 tiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin valkeata kiinteätä ainetta, jota kuivattiin vakuumissa yön ajan, jolloin saatiin 3,2 g haluttua tuotetta, 0,54, jota käytettiin seuraavassa vaiheessa .To a slurry of 2.4 g (0.01 mol) of N-Cbz-D-serine obtained in Part A in 75 ml of chloroform was added 1.1 ml (0.01 mol) of N-methylmorpholine. A solution was obtained which was cooled to -12 ° C. To this was added 0.96 ml (0.01 mol) of ethyl chloroformate, the mixture was stirred at -10 ° C for five minutes, a solution of 1.11 g (0.01 mol) of dicyclopropylcarbamyl 17,79335 amine in 5 ml was added. chloroform and stirring were continued for five minutes at -15 ° C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature, washed successively with 0.5 norm. hydrochloric acid, 5% sodium hydrogen-5 carbonate solution and water, the chloroform was evaporated off in vacuo. The aqueous washings were combined and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extracts were combined with the residue obtained by evaporating the chloroform and the ethyl acetate portion dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give a white solid which was dried in vacuo overnight to give 3.2 g of the desired product, 0.54. which was used in the next step.

15 A15 A

C. D-H0CH_CHC0NH-^ nh2 y 3,2 g (9,6 mmoolia) osassa B saatua N-Cbz-ami- 20 dia liuotettiin 70 ml:aan metanolia, lisättiin 1,0 g 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä ja seosta hydrattiin 60 psi:n 2 paineessa (4,2 kg/cm ) 30 minuuttia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 1,93 g tuotetta saippuamaise-25 na kiinteänä aineena.C. D-HOCH_CHCONH- nnh2 y 3.2 g (9.6 mmol) of the N-Cbz amide obtained in Part B were dissolved in 70 ml of methanol, 1.0 g of 5% Pd / C- the catalyst and mixture were hydrogenated at 60 psi 2 pressure (4.2 kg / cm) for 30 minutes. The catalyst was removed by filtration and the filtrate was evaporated to dryness in vacuo to give 1.93 g of product as a soapy solid.

d. c6h5ch2ococh2chconhch(CH20H)C0NHCH(Δ) NHCbzd. c6h5ch2ococh2chconhch (CH2OH) CONHCH (Δ) NHCbz

Seosta, jossa oli 3,4 g (9,5 mmoolia) /£-bent- syyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaattia, 1,0 ml 30 (9,5 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 0,9 ml (9,5 mmoo lia) etyyliklooriformiaattia, sekoitettiin -15 - -10°C:ssa viisi minuuttia ja -15°C:ssa lisättiin liuos, jossa oli 1,9 g (9,5 mmoolia) osassa C saatua D-seriini-N-di-syklopropyylikarbinyyliamidia 10 ml:ssa kloroformia.A mixture of 3.4 g (9.5 mmol) of N-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartate, 1.0 ml (9.5 mmol) of N-methylmorpholine and 0.9 ml (9 , 5 mmol) of ethyl chloroformate, was stirred at -15 to -10 ° C for five minutes and a solution of 1.9 g (9.5 mmol) of D-serine-N- obtained in Part C was added at -15 ° C. dicyclopropylcarbinylamide in 10 ml of chloroform.

35 Saatua seosta sekoitettiin -10°C:ssa viisi minuuttia, ie 79835 annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin tunnin ajan. Liuottimen poistamiseksi reaktio-seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (250 ml), pestiin vuorollaan 5 1-norm. suolahapolla, 5 %:isella natriumvetykarbonaatti-liuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin hyytelömäistä kiinteätä ainetta. Tämä liuotettiin 75 ml:aan kuumaa etyyliase-10 taattia. Jäähdytettäessä saatiin kiteistä kiinteätä ainetta, joka kuivattiin vakuumissa 40°C:ssa, jolloin saatiin 2,75 g haluttua disuojattua dipeptidiamidia hienojakoisena valkeana kiinteänä aineena, Rf 0,30.The resulting mixture was stirred at -10 ° C for five minutes, ie 79835 was allowed to warm to ambient temperature and stirred for 1 hour. To remove the solvent, the reaction mixture was evaporated to dryness in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (250 ml), washed in turn with 5 L of norm. hydrochloric acid, 5% sodium hydrogencarbonate solution and brine and dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was evaporated in vacuo to give a gelatinous solid. This was dissolved in 75 ml of hot ethyl acetate. On cooling, a crystalline solid was obtained which was dried in vacuo at 40 ° C to give 2.75 g of the desired disubstituted dipeptide amide as a fine white solid, Rf 0.30.

E. Seosta, jossa oli 2,75 g osassa D saatua di- 15 suojattua dipeptidiamidia, 200 ml metanolia ja 1,0 g 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 60 psi:n painees-2 sa (4,2 kg/cm ) tunnin ajan, jolloin tuote saostui. Katalyytti/tuote-seos suodatettiin erilleen, suodatin-kakku lietettiin 100 ml:aan kuumaa vettä ja suodatet-20 tiin uudelleen. Yhdistetyt suodokset haihdutettiin kuiviin, trituroitiin veden kanssa, suodatettiin ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 260 mg tuotetta hienojakoisena valkeana, höytymäisenä kiinteänä aineena, sp. 252-54°C, Rj 0,58 (TLC, n-butanoli/vesi/-25 etikkahappo 4:1:1, ninhydriini-suihke).E. A mixture of 2.75 g of the di-protected dipeptide amide from Part D, 200 mL of methanol, and 1.0 g of 5% Pd / C catalyst was hydrogenated at 60 psi (4.2 g). kg / cm) for one hour when the product precipitated. The catalyst / product mixture was filtered off, the filter cake was slurried in 100 ml of hot water and filtered again. The combined filtrates were evaporated to dryness, triturated with water, filtered and dried in vacuo to give 260 mg of product as a fine white fluffy solid, m.p. 252-54 ° C, Rf 0.58 (TLC, n-butanol / water / -25 acetic acid 4: 1: 1, ninhydrin spray).

Hydrauksessa saatu suodatinkakku lietettiin 50 ml: aan 0,1-norm. suolahappoa, seos suodatettiin piimään läpi (Supercel), suodoksen pH (pH 1,6) säädettiin arvoon pH 5,9 natriumhydroksidiliuoksella, ja saostunut 30 tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin vielä 800 mg tuotetta. Vaiheen kokonaissaanto 68 %.The filter cake obtained in the hydrogenation was slurried in 50 ml of 0.1-norm. hydrochloric acid, the mixture was filtered through diatomaceous earth (Supercel), the pH of the filtrate (pH 1.6) was adjusted to pH 5.9 with sodium hydroxide solution, and the precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give a further 800 mg of product. The overall yield of the phase was 68%.

Massaspektri (m/e) 313 (M+).Mass spectrum (m / e) 313 (M +).

Makeutusteho: 700 x sakkaroosin teho.Sweetening power: 700 x sucrose power.

Esimerkki 2 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,4-dimetyyli-3-pen- tyyli)amidi 19 79835Example 2 L-aspartyl-D-serine-N- (2,4-dimethyl-3-pentyl) amide 19,79835

5 I, Ra = CH-OH, R = -Y5 I, Ra = CH-OH, R = -Y

A. d-hoch2chconh—( NHCbz \- 10 Seka-anhydridiä valmistettiin seuraavasti: 1.0 g (4,3 mmoolia) N-bentsyylioksikarbonyyli-D-seriiniä liuotettiin 50 ml:aan tetrahydrofuraania, jäähdytettiin -10°C:seen typpiatmosfäärin suojamana ja lisättiin 0,47 ml (4,3 mmoolia) N-metyylimorfoliinia 15 ja 0,41 ml (4,3 mmoolia) etyyliklooriformiaattia.A. d-hoch2chconh— (NHCbz \ - 10 Mixed anhydride was prepared as follows: 1.0 g (4.3 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-D-serine was dissolved in 50 ml of tetrahydrofuran, cooled to -10 ° C under a nitrogen atmosphere and added 0.47 ml (4.3 mmol) of N-methylmorpholine 15 and 0.41 ml (4.3 mmol) of ethyl chloroformate.

Seosta sekoitettiin 30 minuuttia -10°C:ssa.The mixture was stirred for 30 minutes at -10 ° C.

Seka-anhydridiliuokseen lisättiin 495 mg (4,3 mmoolia) 2 ,4-dimetyyli-3-aminopentaania liuotettuna pieneen määrään kloroformia, seosta sekoitettiin -10°C:ssa 20 15 minuuttia ja sen annettiin lämmetä huoneen lämpöti laan. Lisättiin etyyliasetaattia (40 ml) ja seos pestiin 1-norm. suolahapolla, natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella ja orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin pois 25 vakuumissa saatiin 1,27 g väritöntä kiinteätä ainetta, jota trituroitiin etyylieetterin kanssa, suodatettiin ja kuivattiin ilmassa, jolloin saatiin 1,0 g väritöntä tuotetta, 0,77 (TLC, etyyliasetaatti/heksaani, til. suhde 7:3, vanilliinisuihke).To the mixed anhydride solution was added 495 mg (4.3 mmol) of 2,4-dimethyl-3-aminopentane dissolved in a small amount of chloroform, the mixture was stirred at -10 ° C for 20 minutes and allowed to warm to room temperature. Ethyl acetate (40 ml) was added and the mixture was washed with 1-norm. hydrochloric acid, sodium hydrogencarbonate solution and brine, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. Evaporation of the solvent in vacuo gave 1.27 g of a colorless solid which was triturated with ethyl ether, filtered and air dried to give 1.0 g of a colorless product, 0.77 (TLC, ethyl acetate / hexane, 7: 3 v / v, v / v). vanilliinisuihke).

30 \- B. D-H0CH-CHC0NH—/ k2 V- 1.0 g edellä saatua tuotetta liuotettiin 50 ml:aan metanolia, lisättiin 0,5 g 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä 2 35 ja seosta hydrattiin 50 psi:n paineessa (3,52 kg/cm ) kunnes vedyn sitoutuminen lakkasi. Suodattamalla ja haihduttamalla suodos saatiin 700 mg haluttua tuotetta.30 .mu.l of D-HOCH-CHCO3H- / k2 V- 1.0 g of the product obtained above was dissolved in 50 ml of methanol, 0.5 g of 5% Pd / C catalyst 2 was added and the mixture was hydrogenated at 50 psi. pressure (3.52 kg / cm) until hydrogen bonding ceased. Filtration and evaporation of the filtrate gave 700 mg of the desired product.

20 79335 C. C,HCCH«OCOCH-CHCONHCH(CHo0H)CONH _/ Ό J 2, ^9 6 \ nh2 V~20 79335 C. C, HCCH «OCOCH-CHCONHCH (CHoHH) CONH _ / Ό J 2, ^ 9 6 \ nh2 V ~

Liuos, jossa oli 1,36 g (3,8 mmoolia) $-bentsyy-li-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaattia 10 ml:ssa tetrahydrofuraania, jäähdytettiin -10°C:seen ja lisättiin 0,42 ml (3,8 mmoolia) N-metyylimorfoliinia. Tähän lisättiin tiputtamalla 0,36 ml (3,8 mmoolia) etyyli-klooriformiaattia ja saatua seosta sekoitettiin -10°C:ssa 5 minuuttia. Sitten lisättiin tiputtamalla 566 mg (2,8 10 mmoolia) D-seriini-N-(2,4-dimetyyli-3-pentyyli)amidia (osasta B edellä) muutamassa millilitrassa tetrahydro-furaania ja sekoittamista jatkettiin 15 minuuttia. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 15 kiinteätä jäännöstä. Tätä sekoitettiin etyyliasetaatin kanssa, pestiin 1-normaalisella suolahapolla ja orgaaninen faasi pestiin 5 %:isella natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin 1,6 g tuo-20 tetta amorfisena kiinteänä aineena, jota käytettiin seu-raavassa vaiheessa.A solution of 1.36 g (3.8 mmol) of N-benzyl N-benzyloxycarbonyl L-aspartate in 10 ml of tetrahydrofuran was cooled to -10 ° C and 0.42 ml (3.8 ml) of mmol) of N-methylmorpholine. To this was added dropwise 0.36 ml (3.8 mmol) of ethyl chloroformate, and the resulting mixture was stirred at -10 ° C for 5 minutes. 566 mg (2.8 mmol) of D-serine-N- (2,4-dimethyl-3-pentyl) amide (from Part B above) in a few milliliters of tetrahydrofuran were then added dropwise and stirring was continued for 15 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and evaporated to dryness in vacuo to give 15 solid residues. This was mixed with ethyl acetate, washed with 1N hydrochloric acid and the organic phase washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate and brine, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated to give 1.6 g of product as an amorphous solid which was used stage.

D. Liuokseen, jossa oli 2,7 g disuojattua dipep- tidiamidia (valmistettu edellä osassa C selostetulla tavalla) metanolissa, lisättiin 1,5 g 5 %:ista Pd/C-ka- 25 talyyttiä ja seosta hydrattiin 50 psi:n paineessa 2 (3,52 kg/cm ) kunnes vedyn sitoutuminen oli lakannut. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin vakuumissa pienitilavuiseksi ja annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa. Saostunut tuote koot-30 tiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 342 mg väritöntä kiinteätä ainetta , sp. 90°C, Rf 0,65 Zohutkerroskromatografia, (n-butano-li:etikkahappo:vesi (tilavuussuhde 4:1:1)J.D. To a solution of 2.7 g of disoptered dipeptide amide (prepared as described in Part C above) in methanol was added 1.5 g of 5% Pd / C catalyst and the mixture was hydrogenated at 50 psi. (3.52 kg / cm) until hydrogen bonding had ceased. The catalyst was removed by filtration and the filtrate was evaporated to low volume in vacuo and allowed to stand at room temperature. The precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give 342 mg of a colorless solid, m.p. 90 ° C, Rf 0.65 TLC, (n-butano-1: acetic acid: water (4: 1: 1 by volume)) J.

Makeus, 180 x sakkaroosin makeus.Sweetness, 180 x sweetness of sucrose.

Esimerkki 3 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- tietan-3-yyli)amidi 2i 79835 CH.. CH., 5 X/ I, Ra = CH_OH, R = _Example 3 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide 2i 79835 CH .. CH., 5 X / l, Ra = CH_OH, R = _

XX

CH3 ch3CH3 ch3

A. D-H0CHoCHC00HA. D-H0CHoCHC00H

10 NHt-Boc10 NHt-Boc

Menetelmänä oli menetelmä, jota ovat selostaneet Moroder ym., Z. Physiol. Chem. 357, 1651 (1976) t-Boc-aminohappojen valmistamiseksi. Liuokseen, jossa oli 10 ml dioksaania ja 10 ml vettä, lisättiin 2,18 g 15 (10 mmoolia) di-t-butyylidikarbonaattia, 1,6 ml (11,5 mmoolia) trietyyliamiinia ja 1,05 g (10 mmoolia) D-seriiniä. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja dioksaani haihdutettiin pois vakuumis-sa. Vesipitoinen jäännös jäähdytettiin jäissä, lisättiin 20 etyyliasetaattia ja seosta sekoitettiin lisättäessä laimeata kaliumvetysulfaattiliuosta kunnes pH oli 2-3. Vesikerros erotettiin, uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla ja yhdistetyt uutteet pestiin vedellä, kuivattiin (^250^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumis-25 sa, jolloin saatiin 1,7 g tuotetta viskoosisena tahna- na* ch3 ch3The method was the method described by Moroder et al., Z. Physiol. Chem. 357, 1651 (1976) for the preparation of t-Boc amino acids. To a solution of 10 mL of dioxane and 10 mL of water were added 2.18 g (10 mmol) of di-t-butyl dicarbonate, 1.6 mL (11.5 mmol) of triethylamine, and 1.05 g (10 mmol) of D- serine. The mixture was stirred for 30 minutes at room temperature and the dioxane was evaporated off in vacuo. The aqueous residue was cooled on ice, ethyl acetate was added, and the mixture was stirred with the addition of dilute potassium hydrogen sulfate solution until the pH was 2-3. The aqueous layer was separated, extracted twice with ethyl acetate and the combined extracts were washed with water, dried (^ 250 ^) and the solvent evaporated in vacuo to give 1.7 g of product as a viscous paste * ch3 ch3

B. D-H0CH-CHC0NH-( XB. D-HOCH-CHCONH- (X

X XX X

30 CH3 CH330 CH3 CH3

Seka-anhydridiä valmistettiin 2,85 g:sta (14 mmoolia) N-t-butoksikarbonyyli-D-seriiniä, 1,55 mlrsta N-me-tyylimorfoliinia, 1,34 ml:sta etyyliklooriformiaat-tia 75 mlrssa metyleenikloridia -12 - -10°C:ssa esimer- 22 79 335 kin 1 osan B menetelmällä. Tähän seokseen lisättiin 2,01 g (14 mmoolia) 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja sekoittamista jatkettiin viisi minuuttia -12°C:ssa.The mixed anhydride was prepared from 2.85 g (14 mmol) of Nt-butoxycarbonyl-D-serine, 1.55 ml of N-methylmorpholine, 1.34 ml of ethyl chloroformate in 75 ml of methylene chloride at -12 to -10 ° In C, for example, by the method of Part 1 B. To this mixture was added 2.01 g (14 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane and stirring was continued for 5 minutes at -12 ° C.

Tuote eristettiin esimerkissä 1 osassa B selostetulla 5 tavalla, jolloin saatiin 4 g viskoosista nestemäistä jäännöstä. Jäännös liuotettiin 40 ml jaan metyleeniklo-ridia, lisättiin 12 ml trifluorietikkahappoa (d = 1,480) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Reaktioseos tehtiin alkaliseksi 40 %:isella nat-10 riumhydroksidiliuoksella, orgaaninen kerros erotettiin vesikerros kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 2,21 g amorfista, harmahtavaa kiinteätä ainet-15 ta. Kiteyttämällä etyylieetteri/heksaani-seoksesta saa tiin 1,92 g tuotetta hienojakoisena, valkeana kiinteänä aineena. (CH^)0The product was isolated as described in Example 1, Part B to give 4 g of a viscous liquid residue. The residue was dissolved in 40 ml of methylene chloride, 12 ml of trifluoroacetic acid (d = 1.480) were added and the mixture was stirred at room temperature for three hours. The reaction mixture was basified with 40% sodium hydroxide solution, the organic layer was separated, the aqueous layer was saturated with sodium chloride and extracted with methylene chloride. The combined extracts were dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give 2.21 g of an amorphous, off-white solid. Crystallization from ethyl ether / hexane gave 1.92 g of product as a fine white solid. (CH) 0

AA

C. t-butyyliOCOCH9CHCONHCHCONH-A S 20 ' CH20H Aj/ NH-t-Boc (CH3)2C. t-butylOCOCH9CHCONHCHCONH-A S 20 'CH 2 OH Aj / NH-t-Boc (CH 3) 2

Seosta, jossa oli 2,3 g (8,0 mmoolia) /^-t-butyy-li-N-t-butoksikarbonyyli-L-asparaattia, 0,88 ml (8,0 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 0,77 ml (8,0 mmoolia) 25 etyyliklooriformiaattia 40 mljssa metyleenikloridia, sekoitettiin -12°C:ssa viisi minuuttia. Lisättiin liuos, jossa oli 1,85 g (8,0 mmoolia) D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylitietan-3-yyli)amidia 5 mljssa samaa liuotinta ja sekoittamista jatkettiin -12 - -10°C:ssa 30 kymmenen minuuttia. Seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, sekoitettiin tunnin ajan tässä lämpötilassa ja liuotin haihdutettiin pois. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin laimealla suolahapolla, natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, kui-35 vattiin (MgS04) ja etyyliasetaatti haihdutettiin pois, jolloin saatiin 3,34 g amorfista kiinteätä ainetta.A mixture of 2.3 g (8.0 mmol) of tert-butyl N-t-butoxycarbonyl L-aspartate, 0.88 ml (8.0 mmol) of N-methylmorpholine and 0.77 ml ( 8.0 mmol) of 25 ethyl chloroformate in 40 mL of methylene chloride, stirred at -12 ° C for five minutes. A solution of 1.85 g (8.0 mmol) of D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide in 5 ml of the same solvent was added and stirring was continued at -12 to -10 °. At C for 30 ten minutes. The mixture was allowed to warm to room temperature, stirred for 1 hour at this temperature and the solvent was evaporated off. The residue was dissolved in ethyl acetate, washed with dilute hydrochloric acid, sodium bicarbonate solution and brine, dried (MgSO 4) and the ethyl acetate evaporated to give 3.34 g of an amorphous solid.

23 7983523 79835

Kiteyttämällä etyylieetteri/hfeksaani-seoksesta saatiin 2,91 g väritöntä kiinteätä tuotetta, 0,70 (etyyli-asetaatti/heksaani-seos, 7:3).Crystallization from ethyl ether / hexane gave 2.91 g of a colorless solid, 0.70 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).

D. Liuokseen, jossa oli 2,4 g (4,78 mmoolia) 5 edellä osassa C saatua tuotetta 60 ml:ssa kloroformia, sijoitettiin kaasun sisäänjohtoputki ja liuoksen läpi johdettiin kuplina kuivaa kloorivetyä. Viiden minuutin kuluttua havaittiin kiinteän aineen saostumista. Kloorivedyn lisäämistä jatkettiin kymmenen minuuttia, sen 10 jälkeen seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa tunnin ajan ja sitten haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin veteen, pestiin kloroformilla, pH säädettiin arvoon 5,6, pestiin uudelleen kloroformilla, ja vesifaasi haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännök-15 seen lisättiin etanolia ja seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin 25 ml:aan kuumaa vettä ja annettiin jäähtyä. Saostunut tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 1,12 g (67 %) tuotetta, sp. 193-196°C.D. To a solution of 2.4 g (4.78 mmol) of the product from Part C above in 60 mL of chloroform was placed a gas inlet tube and dry hydrogen chloride was bubbled through the solution. After 5 minutes, a precipitate of solid was observed. The addition of hydrogen chloride was continued for ten minutes, then the mixture was stirred at ambient temperature for one hour and then evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in water, washed with chloroform, adjusted to pH 5.6, washed again with chloroform, and the aqueous phase was evaporated to dryness in vacuo. Ethanol was added to the residue and the mixture was evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in 25 ml of hot water and allowed to cool. The precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo to give 1.12 g (67%) of product, m.p. 193-196 ° C.

20 0,32 (n-butanoli/vesi/etikkahappo 4:1:1).0.32 (n-butanol / water / acetic acid 4: 1: 1).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^4H25N3®5^: C, 48,39; H, 7,25; N, 12,09; S, 9,23. saatu: C, 46,77; H, 7,48; N, 11,91; S, 8,82.Analysis calculated for C 14 H 25 N 3 O 5 • C, 48.39; H, 7.25; N, 12.09; S, 9.23. Found: C, 46.77; H, 7.48; N, 11.91; S, 8.82.

Makeutusteho, 1200 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power, 1200 x sucrose sweetening power.

25 Esimerkki 4 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-1 ,l-dioksotietan-3-yyli)amidi CHJXH3 I, Ra = CH~0H, R = S0o 30 2 \ / 2 CH3 CH3 A. 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitetaani-l,1-dioksidi Liuosta, jossa oli 14,53 g (0,1 moolia) 3-ami-no-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja 64,17 g (0,3 moolia) 35 natrium-m-perjodaattia 500 ml:ssa vettä sekoitettiin yön 24 7 9 8 3 5 ajan huoneen lämpötilassa. Reaktioseoksen pH säädettiin natriumhydroksidiliuoksella arvoon 13 ja saostunut nat-riumjodaatti poistettiin suodattamalla. Suodos pestiin 100 ml:lla etyylieetteriä, vesifaasia uutettiin jatku-5 vasti 18 tuntia metyleenikloridilla, uute kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa. Jä-lelle jäänyt kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saatiin 8,5 g tuotetta, sp. 104-106,5°C. Saatiin myös toinen erä kiteitä, 2,7 g, 10 sp. 103-106°C. Kokonaissaanto 63 %.Example 4 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide CH 3 XH 3 I, Ra = CH-OH, R = SO 30 2 2 / 2 CH3 CH3 A. 3-Amino-2,2,4,4-tetramethylmethane-1,1-dioxide A solution of 14.53 g (0.1 mol) of 3-amino-2,2,4 , 4-tetramethylethane and 64.17 g (0.3 mol) of 35 sodium m-periodate in 500 ml of water were stirred overnight for 247 9 8 3 5 at room temperature. The pH of the reaction mixture was adjusted to 13 with sodium hydroxide solution, and the precipitated sodium iodate was removed by filtration. The filtrate was washed with 100 ml of ethyl ether, the aqueous phase was extracted continuously for 18 hours with methylene chloride, the extract was dried (MgSO 4) and the solvent was evaporated off in vacuo. The residual solid was recrystallized from ethyl acetate to give 8.5 g of product, m.p. 104 to 106.5 ° C. A second batch of crystals, 2.7 g, 10 m.p. 103-106 ° C. Total yield 63%.

B. D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-l,1-diokso-tietan-3-yyli)amidiB. D-Serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxotetan-3-yl) amide

Esimerkin 1 osan B menetelmällä 1,33 g:sta (6,5 mmoo-lia) N-bentsyylioksikarbonyyli-D-seriiniä, 0,715 ml:sta 15 N-metyylimorfoliinia, 0,62 mlrsta etyyliklooriformiaat-tia ja 1,15 grsta (6,5 mmoolia) 3-amino-2 ,2,4,4-tetra-metyylitietaani-1,1-dioksidia saatiin 2,3 g N-bentsyy-lioksikarbonyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- l,l-dioksotietan-3-yyli)amidia viskoosisena nesteenä, 20 0,37 (etyyliasetaatti/heksaani-seos , 7:3). Tämä neste liuotettiin metanoliin, lisättiin 750 mg 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä ja seosta hydrattiin esimerkin 1 osan C mukaisella menetelmällä. Katalyytin poistamiseksi suoritetun suodatuksen jälkeen metanoli haihdutettiin 25 vakuumissa, jäännös liuotettiin 1-norm. suolahappoon ja uutettiin kloroformilla. Vesikerros tehtiin alkali-seksi natriumkloridilla kyllästetyllä natriumhydroksi-dilla ja uutettiin jatkuvasti yön ajan kloroformilla. Haihduttamalla liuotin pois saatiin 1,54 g tuotetta vis-30 koosisena nesteenä, joka muuttui kiinteäksi ollessa paikoillaan, Rf 0,32 (m-butanoli/vesi/etikkahappo, 4:1:1).By the method of Example 1, Part B, 1.33 g (6.5 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-D-serine, 0.715 ml of N-methylmorpholine, 0.62 ml of ethyl chloroformate and 1.15 g of (6 3.5 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane-1,1-dioxide gave 2.3 g of N-benzyloxycarbonyl-D-serine-N- (2,2,4,4 -tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide as a viscous liquid, 0.37 (ethyl acetate / hexane, 7: 3). This liquid was dissolved in methanol, 750 mg of 5% Pd / C catalyst was added, and the mixture was hydrogenated according to the method of Example 1, Part C. After filtration to remove the catalyst, the methanol was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in 1N norm. hydrochloric acid and extracted with chloroform. The aqueous layer was basified with sodium hydroxide saturated with sodium chloride and extracted continuously with chloroform overnight. Evaporation of the solvent gave 1.54 g of product as a viscous liquid which solidified on standing, Rf 0.32 (m-butanol / water / acetic acid, 4: 1: 1).

25 79835 CH, CH, 3X 3 C. C6H5CH20C0CH2CHC0NHCHC0NH^// ^S02 NHCbz CH20H y/ xch3 5 Edellä esitetyn kaavan mukaista disuojattua dipeptidiamidia valmistettiin 4,7 mmooli-mittakaavassa käyttämällä esimerkin 1 osan D menetelmää ja 1,7 g -bentsyyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-L-aspartaat-tia, 0,51 ml N-metyylimorfolinia, 0,45 ml etyylikloori-10 formaattia ja 1,24 g D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrame-tyyli-1,l-dioksotietan-3-yyli)amidia. Tuote, 2,45 g, saatiin värittömänä amorfisena, kiinteänä aineena. Kaksi grammaa tätä ainetta puhdistettiin kromatograafises-ti 60 g:11a silikageeliä eluoimalla etyyliasetaatilla, 15 jolloin saatiin 1,2 g amorfista kiinteätä tuotetta, 0,30 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).25 79835 CH, CH, 3X 3 C. C 6 H 5 CH 2 OCOCH 2 CHCO ONHCHCO 2 SO 2 NHCbz CH 2 OH / xch3 5 The disulfated dipeptide amide of the above formula was prepared on a 4.7 mmol scale using the method of Example 1 Part D and 1.7 g of benzyl-N benzyloxycarbonyl L-aspartate, 0.51 ml of N-methylmorpholine, 0.45 ml of ethyl chloro-10-formate and 1.24 g of D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1 l-dioksotietan-3-yl) amide. The product, 2.45 g, was obtained as a colorless amorphous solid. Two grams of this material was purified by chromatography on 60 g of silica gel eluting with ethyl acetate to give 1.2 g of an amorphous solid product, 0.30 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).

D. Seosta, jossa oli 1,2 g edellä osassa C saatua pudistettua tuotetta, 75 ml metanolia ja 0,6 g 5 %:istaD. A mixture of 1.2 g of the shaken product obtained in Part C above, 75 ml of methanol and 0.6 g of 5%

Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 80 psi:n paineessa (5,6 kg/ 2 20 cm ). Vedyn sitoutumisen päätyttyä katalyytti poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin väritöntä kiinteätä jäännöstä. Jäännös liuotettiin veteen, pestiin kloroformilla ja vesikerros haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jälelle jäänyt kiin-25 teä aine kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 255 mg haluttua dipeptidiamidia hienojakoisena, valkeana kiinteänä aineena, sp. 170-173°C, R^0,20. Käsittelemällä uudelleen hydrauksessa saatua suodatinkakkua saatiin vielä 180 mg tuotetta.Pd / C catalyst, hydrogenated at 80 psi (5.6 kg / 2 20 cm). After completion of the hydrogen uptake, the catalyst was removed by filtration, and the filtrate was evaporated to dryness to give a colorless solid residue. The residue was dissolved in water, washed with chloroform and the aqueous layer was evaporated to dryness in vacuo. The residual solid was crystallized from ethanol to give 255 mg of the desired dipeptide amide as a fine white solid, m.p. 170-173 ° C, Rf 0.20. Reprocessing the filter cake from hydrogenation gave an additional 180 mg of product.

30 Makeutusteho: 850 x sakkaroosin makeutusteho.30 Sweetening power: 850 x sweetening power of sucrose.

26 7 9 83526 7 9 835

Esimerkki 5 A. N-klooriasetyyli-dl-O-metyyliseriini 125 ml:aan vettä lisättiin 59,55 g (0,5 moolia) dl-O-metyyliseriiniä, seosta sekoitettiin ja lisät-5 tiin 20 g (0,5 moolia) natriumhydroksidia. Saatua liuosta jäähdytettiin jäissä ja kahdesta tiputussuppilosta lisättiin samanaikaisesti tunnin kuluessa liuos, jossa oli 20 g natriumhydroksidia 125 ml:ssa vettä ja 47,8 ml (0,6 moolia) klooriasetyylikloridia. Lisäysmäärät sää-10 dettiin siten, että reaktioseoksen pH saatiin pidetyksi rajoissa 9,0-9,5. Lisäyksen päätyttyä saatua seosta sekoitettiin tunnin ajan pH-arvon ollessa välillä 9,0-9,5. Seos pestiin kahdesti metyleenikloridilla, vesifaasi tehtiin happameksi pH-arvoon 1,5 väkevällä suolahapolla 15 jäillä jäähdyttäen, kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin useaan kertaan kloroformilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuu-missa. Jäännöstä sekoitettiin etyylieetterin kanssa keltaisen kiinteän tuotteen saostamiseksi , joka koottiin 20 talteen suodattamalla ja kuivattiin, 69,38 g (71 %).Example 5 A. N-chloroacetyl-dl-O-methylserine To 125 ml of water was added 59.55 g (0.5 moles) of dl-O-methylserine, the mixture was stirred and 20 g (0.5 moles) were added. sodium hydroxide. The resulting solution was cooled in ice, and a solution of 20 g of sodium hydroxide in 125 ml of water and 47.8 ml (0.6 mol) of chloroacetyl chloride was added simultaneously from two dropping funnels. The addition amounts were adjusted to keep the pH of the reaction mixture in the range of 9.0-9.5. At the end of the addition, the resulting mixture was stirred for one hour at a pH between 9.0 and 9.5. The mixture was washed twice with methylene chloride, the aqueous phase was acidified to pH 1.5 with concentrated hydrochloric acid under ice-cooling, saturated with sodium chloride and extracted several times with chloroform. The combined extracts were dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo. The residue was stirred with ethyl ether to precipitate a yellow solid which was collected by filtration and dried to give 69.38 g (71%).

Sp. 104-107°C, Rf 0,23 (etyyliasetaatti/heksaani/etik-kahappo, 9:9:2, fosforimolybdaattisuihke). Toinen erä saatiin vesifaasista lisäämällä enemmän natriumklori-dia ja uuttamalla kloroformilla. Haihduttamalla kloro-25 formi pois saatiin 3,65 g tuotetta. Kokonaissaanto 75 %.Sp. 104-107 ° C, Rf 0.23 (ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, phosphorus molybdate spray). The second batch was obtained from the aqueous phase by adding more sodium chloride and extracting with chloroform. Evaporation of the chloro-25 form gave 3.65 g of product. Total yield 75%.

B. N-klooriasetyyli-D-O-metyyliseriini 3000 ml:aan vettä, jonka lämpötila oli 35-37°C, lisättiin 73,03 g (0,37 moolia) N-klooriasetyyli-dl-0-metyyliseriiniä ja seoksen pH säädettiin arvoon 7,18 30 lisäämällä väkevää ammoniumhydroksidia. Lisättiin vettä siten, että kokonaistilavuudeksi tuli 3700 ml. Tähän lisättiin 17 mg kaupan olevaa sianmunuais-aminoasylaa-sia, N-asyyliaminohappo-amidohydrolaasia; EC 3.5.1.14 (Acylase I), jossa oli 1845 yksikköä/mg. (1 yksikkö mää-35 ritetään määräksi, joka tarvitaan hydrolysoimaan 1 mik-romooli N-asetyyli-L-metioniinia tuntia kohden pH:n oi- 27 79335 lessa 7,0 ja lämpötilan 25°C). Lisätyn entsyymin määrä oli määrä, jonka laskettiin hydrolysoivan herkän isomeerin kuudessa tunnissa. Saatua liuosta pidettiin 37-38°C:ssa 28 tuntia lisäämällä silloin tällöin ammonium-5 hydroksidia siten, että pH pysyi välillä 7,1 -7,2. 24 tunnin kuluttua lisättiin vielä 5 mg entsyymiä. Hydro-lyysiseos tehtiin happameksi pH-arvoon 4,5 jääetikka-hapolla, suodatettiin 0,6 ^um:n millipore-suotimen (tyyppiä BD) läpi ja suodosta haihdutettiin vakuumis-10 sa 35°C:n alapuolella kokonaistilavuuden pienentämiseksi välille 100-150 ml. Jälelle jäänyt seos tehtiin happameksi pH-arvoon 2,00 suolahapolla ja uutettiin useaan kertaan etyyliasetaatilla ja uutettiin edelleen kloroformilla. Erilliset orgaaniset uutteet pestiin 15 kukin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin keltaista nestemäistä jäännöstä. Kiteytyminen käynnistettiin lisäämällä heksaania ja haihduttamalla vakuumissa. Etyyliase-taattiuutteista saatiin 16,67 g (46 %) N-klooriasetyyli-20 D-O-metyyliseriiniä, sp. 95-96°C, /c^/D - 15,5 (C = 1, 1-norm. NaOH). Kloroformiuutteista saatiin 4,61 g (31 %) samaa tuotetta, sp. 90-94°C (kloorietikkahapon tuoksua). Molemmat tuote-erät antoivat yhden ainoan täplän ohutker-roskromatograafikäsittelyssä silikageelilevyillä, 25 0,35; etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, fosforimolybdaatti-suihke.B. N-chloroacetyl-DO-methylserine To 3000 ml of water at 35-37 ° C was added 73.03 g (0.37 moles) of N-chloroacetyl-dl-O-methylserine and the pH of the mixture was adjusted to 7. , 18 30 by adding concentrated ammonium hydroxide. Water was added to give a total volume of 3700 ml. To this was added 17 mg of commercial porcine kidney aminoacylase, N-acylamino acid amidohydrolase; EC 3.5.1.14 (Acylase I) with 1845 units / mg. (1 unit is defined as the amount required to hydrolyze 1 micromole of N-acetyl-L-methionine per hour at pH 7 79335 7.0 and 25 ° C). The amount of enzyme added was the amount calculated for six hours of hydrolyzing the sensitive isomer. The resulting solution was maintained at 37-38 ° C for 28 hours with the occasional addition of ammonium-5 hydroxide so that the pH remained between 7.1 and 7.2. After 24 hours, an additional 5 mg of enzyme was added. The hydrolysis mixture was acidified to pH 4.5 with glacial acetic acid, filtered through a 0.6 μm Millipore filter (type BD) and the filtrate was evaporated in vacuo below 35 ° C to reduce the total volume to between 100-150. ml. The remaining mixture was acidified to pH 2.00 with hydrochloric acid and extracted several times with ethyl acetate and further extracted with chloroform. The separate organic extracts were washed each with water, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give a yellow liquid residue. Crystallization was initiated by the addition of hexane and evaporation in vacuo. 16.67 g (46%) of N-chloroacetyl-20-D-O-methylserine were obtained from the ethyl acetate extracts, m.p. 95-96 ° C, [α] 25 D (15.5). From the chloroform extracts 4.61 g (31%) of the same product were obtained, m.p. 90-94 ° C (chloroacetic acid odor). Both batches of product gave a single spot by thin layer chromatography on silica gel plates, 0.35; ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2, phosphorus molybdate spray.

C. 16,67 g:aan (0,085 moolia) N-klooriasetyyli-D-O-metyyliseriiniä lisättiin 25 ml 2-norm, suolahappoa ja seosta lämmitettiin kiehuttaen kolme tuntia. Seos 30 konsentroitiin vakuumissa, karkoittamalla jälelle jäänyt kloorietikkahappo lisätyllä vedellä. Kiinteä jäännös pestiin etyylieetterillä ja koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 12,31 g (93 %) D-O-metyyliseriini-hydrokloridia, sp. 188-190°C; -16,7° (C = 0,7, 35 CH30H).C. To 16.67 g (0.085 mol) of N-chloroacetyl-D-O-methylserine was added 25 ml of 2-norm hydrochloric acid and the mixture was heated at reflux for three hours. Mixture 30 was concentrated in vacuo, expelling the remaining chloroacetic acid with added water. The solid residue was washed with ethyl ether and collected by filtration to give 12.31 g (93%) of D-O-methylserine hydrochloride, m.p. 188-190 ° C; -16.7 ° (C = 0.7, 35 CH 3 OH).

28 7983528 79835

Esimerkki 6 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-disyklopropyy- likarbinyyli)amidiExample 6 L-aspartyl-D-O-methylserine-N-dicyclopropylcarbinyl) amide

AA

5 I, R = CH20CH3, R = -< A. D-CH^-0CH,CHC00H NHCbz5 I, R = CH 2 OCH 3, R = - <A. D-CH 2 -OCH, CHCl 3 NHCbz

Liuos, jossa oli 12,31 g (0,079 moolia) D-0-10 metyyliseriiniä 40 ml:ssa vettä, jossa oli 6,32 g (0,158 moolia) natriumhydroksidia, jäähdytettiin 5-10°C:seen ja samanaikaisesti lisättiin, pH:n ollessa 8-9, 11,74 ml (0,0806 moolia) bentsyyliklooriformiaattia ja 4-mol. natriumhydroksidia. Saatua seosta sekoitettiin kunnes 15 pH pysyi arvossa 8 lisäämättä enempää emästä. Metylee-nikloridilla pesemisen jälkeen vesifaasi tehtiin happa-meksi väkevällä suolahapolla, uutettiin neljä kertaa metyleenikloridilla, uutteet kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Viskoosista nestemäistä 20 jäännöstä sekoitettiin heksaanin kanssa ja saostunut kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 18,6 g tuotetta (93 %), D~2,7° (C = 1, 1-norm.A solution of 12.31 g (0.079 moles) of D-0-10 methylserine in 40 ml of water containing 6.32 g (0.158 moles) of sodium hydroxide was cooled to 5-10 ° C and simultaneously added, pH: n is 8-9, 11.74 ml (0.0806 mol) of benzyl chloroformate and 4-mol. sodium hydroxide. The resulting mixture was stirred until the pH remained at 8 without the addition of more base. After washing with methylene chloride, the aqueous phase was acidified with concentrated hydrochloric acid, extracted four times with methylene chloride, the extracts dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo. The viscous liquid residue was mixed with hexane and the precipitated solid was collected by filtration to give 18.6 g of product (93%), D ~ 2.7 ° (C = 1.1-norm.

NaOH), Rf 0,43.NaOH), Rf 0.43.

25 B. D-CH30CH2CHC0NH25 B. D-CH 3 OCH 2 CHCO 3 NH

NHCbzNHCBz

Liuokseen, jossa oli 3,80 g (0,015 moolia) N-bent-syylioksikarbonyyli-D-O-metyyliseriiniä 75 ml:ssa mety-leenikloridia, lisättiin 1,68 ml (0,015 moolia) N-me-30 tyylimorfoliinia ja seos jäähdytettiin -15°C:seen. Tähän lisättiin 1,43 ml (0,015 moolia) etyyliklooriformiaat-tia, seosta sekoitettiin -20 - 15°C:ssa kymmenen minuuttia ja lisättiin 1,68 g (0,015 moolia) disyklopropyyli-karbinyyliamiinia. Seoksen annettiin lämmetä huoneen läm- 29 7 9 8 3 5 pötilaan ja sekoitettiin kaksi tuntia. Saatu seos pestiin kaksi kertaa 1-norm. natriumhydroksidilla, kahdesti 1-norm. suolahapolla ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin pois vakuumissa saatiin 5,1 g 5 (98 %) haluttua tuotetta, 0,59 silikageeli-TLC :n jälkeen, etyyliasetaatti/heksaani-seoksella 1:1; fosfo-rimolybdaatti-suihke.To a solution of 3.80 g (0.015 mol) of N-benzyloxycarbonyl-DO-methylserine in 75 ml of methylene chloride was added 1.68 ml (0.015 mol) of N-methyl-morpholine and the mixture was cooled to -15 °. C. To this was added 1.43 ml (0.015 mol) of ethyl chloroformate, the mixture was stirred at -20 to 15 ° C for ten minutes, and 1.68 g (0.015 mol) of dicyclopropylcarbinylamine was added. The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for two hours. The resulting mixture was washed twice with 1-norm. with sodium hydroxide, twice 1-norm. hydrochloric acid and dried over magnesium sulfate. Evaporation of the solvent in vacuo gave 5.1 g (98%) of the desired product, 0.59 after silica gel TLC, in ethyl acetate / hexane 1: 1; phospho-rimolybdaatti-spray.

Tuotteen struktuuri varmennettiin ^H-NMR-spektros-kooppisesti.The structure of the product was confirmed by 1 H-NMR spectroscopy.

10 /Λ C. D-CH30CH2CH (CH2 ) C0NH-<^ 5,1 g edellä osassa B saatua N-bentsyylioksikarbo-nyyli-D-O-metyyliseriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli)ami-15 dia hydrattiin esimerkin 1 osan C menetelmällä, jolloin saatiin 2,96 g )95 %) D-O-metyyliseriini-N-(disyklopropyylikarbinyyli ) amidia nesteenä, R^ 0,39; & D -23,2 (C = 0,7, 1-norm. HC1). Struktuurin varmensi ^H-NMR-spektroskooppinen määritys.10 D. 2.96 g (95%) of DO-methylserine-N- (dicyclopropylcarbinyl) amide were obtained as a liquid, Rf 0.39; & D -23.2 (C = 0.7, 1N HCl). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectroscopic determination.

20 D. C6H5CH20C0CH2CH(NHCbz)C0NHCH(CH20CH3)C0NHCH(A)220 D. C6H5CH2OCHCH2CH (NHCbz) CONHCH (CH2OCH3) CONHCH (A) 2

Seoksen, jossa oli 4,97 g (13,9 mmoolia) /*-bent-syyli-N-bensyylioksikarbonyyli-L-aspartaattia, 1,55 ml (13,9 mmoolia) N-metyylimorfoliinia ja 1,33 ml (13,9 mmoolia) etyyliklooriformiaattia, annettiin reagoida 25 esimerkissä 1 osassa D selostetulla tavalla, jolloin saatiin 7,43 g (97 %) disuojattua dipeptidiamidia, joka kiteytettiin uudelleen kaksi kertaa etyyliasetaatista, jolloin saatiin 4,25 g väritöntä tuotetta, R^ 0,45 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 7:3). Rakenne varmennet-30 tiin ^H-NMR:n avulla.A mixture of 4.97 g (13.9 mmol) of N-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-aspartate, 1.55 ml (13.9 mmol) of N-methylmorpholine and 1.33 ml (13, 9 mmol) of ethyl chloroformate, was reacted as described in Example 1, Part D to give 7.43 g (97%) of the disulfated dipeptide amide, which was recrystallized twice from ethyl acetate to give 4.25 g of a colorless product, Rf 0.45 ( ethyl acetate / hexane, 7: 3). The structure was verified by 1 H-NMR.

E. Hydrattaessa 4,25 g edellä osassa D saatua puhdistettua disuojattua dipeptidiamidia esimerkin 1 osan E menetelmällä, saatiin 2,4 g (95 %) haluttua dipeptidiamidia, sp. 215-217°C (hajoten) ;/^D + 37,6° 35 (C = 0,8, 1,2-norm. HCl); Rf 0,41.E. Hydrogenation of 4.25 g of the purified disprotected dipeptide amide obtained in Part D above by the method of Example 1, Part E gave 2.4 g (95%) of the desired dipeptide amide, m.p. 215-217 ° C (dec.); + D + 37.6 ° 35 (C = 0.8, 1.2-norm HCl); Rf 0.41.

30 7983530 79835

Makeutusteho, 85 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power, 85 x sucrose sweetening power.

Esimerkki 7 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetra-Example 7 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetra-

metyylitietan-3-yyli)amidi 5 CH-. CHmethylthietan-3-yl) amide 5 CH-. CH

K/ I, Ra = CH20CH3, R = CH^ CH3K / I, Ra = CH 2 OCH 3, R = CH 2 CH 3

10 A. D-CH30CH2CHC00H10 A. D-CH 3 OCH 2 CHCl 3

NHt-BocNHT-Boc

Liuokseen, jossa oli 2,89 g (18,6 mmoolia) D-0-metyyliseriini-hydrokloridia 11 ml:ssa vettä, lisättiin 6,48 ml (46,5 mmoolia) trietyyliamiinia, 5,10 g 15 (20,7 mmoolia) 2-(t-butoksikarbonyylioksi-imino)-2-fe- nyyliasetonitriiliä ("B0C-0N") ja 11 ml tetrahydrofu-raania. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön ajan, laimennettiin 25 ml:11a vettä ja pestiin etyyliasetaatilla. Vesikerros tehtiin happameksi pH-arvoon 1,8 20 1-mol. suolahapolla, uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 75 ml), kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 4,2 g tuotetta viskoosisena nesteenä, Rj 0,65 (etyyliasetaatti/heksaani/etikkahappo, 9:9:2, fosforimolybdaatti-suihke).To a solution of 2.89 g (18.6 mmol) of D-O-methylserine hydrochloride in 11 mL of water was added 6.48 mL (46.5 mmol) of triethylamine, 5.10 g (20.7 mmol) of triethylamine. ) 2- (t-butoxycarbonyloxyimino) -2-phenylacetonitrile ("BOC-O") and 11 ml of tetrahydrofuran. The mixture was stirred at room temperature overnight, diluted with 25 ml of water and washed with ethyl acetate. The aqueous layer was acidified to pH 1.8 with 1 mol. hydrochloric acid, extracted with ethyl acetate (3 x 75 ml), dried (MgSO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give 4.2 g of product as a viscous liquid, Rf 0.65 (ethyl acetate / hexane / acetic acid, 9: 9: 2), phosphorus molybdate. spray).

25 B. N-t-Boc-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetra- metyylitietan-3-yyli)amidi25 B. N-t-Boc-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide

Liuokseen, jossa oli 4,2 g (18,6 mmoolia) N-t-Boc-D-O-metyyliseriiniä 90 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 2,08 ml N-metyylimorfoliinia, seos jäähdytet-30 tiin -15°C:seen ja lisättiin 1,78 ml etyylikloorifor- miaattia. Kun oli sekoitettu 8 minuuttia -20 - -15°C:ssa, samassa lämpötilassa lisättiin 2,70 g (18,6 mmoolia 3-araino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania liuotettuna 10 ml: aan metyleenikloridia ja seoksen annettiin lämmetä huoneen 35 lämpötilaan. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen seos pes- 31 79835 tiin laimealla natriumhydroksidilla ja laimealla suolahapolla, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin 6,04 g (94 %) väritöntä kiinteätä ainetta, R^ 0,35 5 (etyyliasetaatti/heksaani-seos 3:7, fosforimolybdaatti-suihke). Rakenne varmennettiin ^H-NMR:n avulla.To a solution of 4.2 g (18.6 mmol) of Nt-Boc-DO-methylserine in 90 ml of methylene chloride was added 2.08 ml of N-methylmorpholine, the mixture was cooled to -15 ° C and 1 .78 ml of ethyl chloroformate. After stirring for 8 minutes at -20 to -15 ° C, 2.70 g (18.6 mmol of 3-aramino-2,2,4,4-tetramethylethane dissolved in 10 ml of methylene chloride) were added at the same temperature and the mixture was allowed to warm. After stirring for 2 hours, the mixture was washed with dilute sodium hydroxide and dilute hydrochloric acid, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was evaporated in vacuo to give 6.04 g (94%) of a colorless solid, Rf 0.35 5 ( ethyl acetate / hexane 3: 7, phosphorus molybdate spray) The structure was confirmed by 1 H-NMR.

C. D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-tietan-3-yyli)amidiC. D-O-Methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-tetan-3-yl) -amide

Liuokseen, jossa oli 6,04 g (17,4 mmoolia) N-t-10 Boc-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyylietan-3- yyli)amidia 13,4 mlrssa metyleenikloridia, lisättiin 6,7 ml (87 mmoolia) trifluorietikkahappoa (om.p. 1,480) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Sitä lisättiin vielä 1,0 ml 2 ml:ssa 15 metyleenikloridia ja sekoittamista jatkettiin tunnin ajan. Reaktioseos tehtiin alkaliseksi 40 %:isella (pai-no-%) natriumhydroksidiliuoksella, orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin useaan kertaan tuoreella metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet kuivat-20 tiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin 4,29 g raakaa nestemäistä tuotetta.To a solution of 6.04 g (17.4 mmol) of Nt-10 Boc-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethylethan-3-yl) amide in 13.4 mL of methylene chloride was added 6, 7 ml (87 mmol) of trifluoroacetic acid (m.p. 1.480) and the mixture were stirred at room temperature for three hours. An additional 1.0 mL of 2 mL of methylene chloride was added and stirring was continued for 1 hour. The reaction mixture was basified with 40% (w / w) sodium hydroxide solution, the organic layer was separated and the aqueous layer was extracted several times with fresh methylene chloride. The combined extracts were dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 4.29 g of crude liquid product.

Tämä liuotettiin 20 ml:aan 1-norm. suolahappoa, pestiin etyylieetterillä, vesikerros tehtiin alkaliseksi natriumhydroksidilla (40 paino-%), kyllästettiin natrium-25 kloridilla ja uutettiin metyleenikloridilla. Haihduttamalla uutteet kuiviin saatiin 3,21 g (75 %) haluttua tuotetta, Rf 0,41; (o#O - 19,8° (C = 0,8, 1-norm. HCl) . Tämän tuotteen struktuurin osoitti oikeaksi sen 1H-NMR-spektri.This was dissolved in 20 ml of 1-norm. hydrochloric acid, washed with ethyl ether, basified with sodium hydroxide (40% by weight), saturated with sodium chloride and extracted with methylene chloride. Evaporation of the extracts to dryness gave 3.21 g (75%) of the desired product, Rf 0.41; (o # 0 - 19.8 ° (C = 0.8, 1N HCl) The structure of this product was confirmed by its 1 H-NMR spectrum.

32 79835 CH, CH, y/32 79835 CH, CH, y /

D. t-butyyli OCOCH CH CONH CH CONH_/ XSD. t-butyl OCOCH CH CONH CH CONH_ / XS

CHpOCH^ 2 3 s \ 5 NH-t-Boc CH£ CH3 Käyttämällä 3,76 g edellä osan C menetelmällä saatua tuotetta toistettiin esimerkin 3 osan C menetelmä 13 millimoolin mittakaavassa käyttämällä liuottimena 50 ml metyleenikloridia, jolloin saatiin 5,0 g (74 %) 10 haluttua disuojattua dipeptidiamidia hauraana vaahtona, 0,40 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosfori-molybdaatti-suihke). Rakenne osoitettiin oikeaksi tuotteen H-NMR-spektrin avulla.CHpOCH 2 3 s \ 5 NH-t-Boc CH 2 CH 3 Using 3.76 g of the product obtained by the method of Part C above, the procedure of Part 3 of Example 3 was repeated on a scale of 13 mmol using 50 ml of methylene chloride as solvent to give 5.0 g (74% ) 10 desired disubstituted dipeptide amides as a brittle foam, 0.40 (ethyl acetate / hexane, 1: 1; phosphorus molybdate spray). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectrum of the product.

E. Kuivaa bromivetyä johdettiin kuplina liuoksen 15 läpi, jossa oli 5,0 g (9,7 mmoolia) edellä osassa D saatua disuojattua dipeptidiamidia sekoittamalla huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Saatu seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja saatu keltainen kiinteä jäännös liuotettiin veteen. Liuos pestiin kahdesti etyylieette- 20 rillä ja kerran metyleenikloridilla, vesifaasin pH säädettiin arvoon 5,8 natriumhydroksidiliuoksella ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jälelle jäänyt kiinteä aine liuotettiin 10 ml:aan 95 %:ista etanolia ja lisättiin etyylieetteriä otsikon yhdisteen saostamiseksi, kahte-25 na eränä: 1,66 g, (°Q-Q + 13,4° (C = 0,9, 1,2-norm. HCl) , sp. 85-90°C; 1,20 g, (°<JD + 13,9° (C = 0,8, 1,2-norm. HCl).E. Dry hydrogen bromide was bubbled through a solution of 5.0 g (9.7 mmol) of the disubstituted dipeptide amide obtained in Part D above with stirring at room temperature for 1 hour. The resulting mixture was evaporated to dryness in vacuo and the resulting yellow solid residue was dissolved in water. The solution was washed twice with ethyl ether and once with methylene chloride, the pH of the aqueous phase was adjusted to 5.8 with sodium hydroxide solution and evaporated to dryness in vacuo. The remaining solid was dissolved in 10 ml of 95% ethanol and ethyl ether was added to precipitate the title compound, in two portions: 1.66 g, (° QQ + 13.4 ° (C = 0.9, 1.2 HCl), mp 85-90 ° C, 1.20 g, (° JD + 13.9 ° (C = 0.8, 1.2 HCl)).

Kummankin erän TLC:ssä oli täplä kohdalla R^ 0,51 - 30 sekä pieni ainemäärä kohdalla R^ 0,44.TLC of both batches showed a spot at Rf 0.51-30 and a small amount of material at Rf 0.44.

F. Puhdistus p-tolueenisulfonaattisuolana 10 ml:aan vettä lisättiin 1,39 g (3,85 mmoolia) yhdistettyjä edellä saadun tuotteen eriä ja 0,66 g (3,83 mmoolia) p-tolueenisulfonihappoa. Saatua liuosta 35 sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Saostunut 33 79835 kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla ja pestiin pienellä määrällä vettä, jolloin saatiin 0,94 g p-tolu-eenisulfonaatti-suolaa. Suola yhdistettiin 3 ml:n kanssa nestemäistä anioninvaihtajahartsia (Amberlite 5 LA—1®) , 6 ml:n kanssa heksaania, 2 ml:n kanssa vettä ja seosta sekoitettiin kaksi tuntia. Vesifaasi erotettiin, pestiin heksaanilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 0,72 g harmaan valkeata kiinteätä ainetta, fi*)O + 22,43° (C = 0,8, 1,2-norm.F. Purification as p-toluenesulfonate salt To 10 mL of water were added 1.39 g (3.85 mmol) of the combined batches of the product obtained above and 0.66 g (3.83 mmol) of p-toluenesulfonic acid. The resulting solution 35 was stirred at room temperature for two hours. The precipitated 33,79835 solid was collected by filtration and washed with a small amount of water to give 0.94 g of p-toluenesulfonate salt. The salt was combined with 3 ml of liquid anion exchange resin (Amberlite 5 LA-1®), 6 ml of hexane, 2 ml of water and the mixture was stirred for two hours. The aqueous phase was separated, washed with hexane and evaporated to dryness in vacuo to give 0.72 g of an off-white solid, m.p. + 22.43 ° (C = 0.8, 1.2-norm).

10 HC1); Rf 0,48.10 HCl); Rf 0.48.

Makeutusteho: 320 x sakkaroosin makeutusteho. Makean maun arvioitiin olevan epätavallisen puhtaan, vapaan sivumakuvivahteista ja makeutusvaikutuksen nopean .Sweetening power: 320 x sucrose sweetening power. The sweet taste was judged to be unusually clean, free of side-image nuances, and the sweetening effect was rapid.

15 (K) ^Rohm and Haas Co.:n rekisteröity tavaramerkki.15 (K) ^ Registered trademark of Rohm and Haas Co.

Esimerkki 8 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetra-metyyli-1 ,l-dioksotietan-3-yyli)amidi CH, CH-, 20 3 /'S.Example 8 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide CH, CH-, 20 3 / 'S.

A. D-CH30CH2CHC0NH_ / ° NHCbz ch3 ch3 75 ml:aan metyleenikloridia liuotettiin 3,8 g 25 (15 mmoolia) N-bentsyylioksikarbonyyli-D-O-metyylise- riiniä. Lisättiin N-metyylimorfoliinia (1,68 ml), liuos jäähdytettiin -15°C:seen ja lisättiin 1,43 ml etyyli-klooriformiaattia. Saatua seosta sekoitettiin 8 minuuttia -15°C:ssa, sitten lisättiin 2,18 g (15 mmoolia) 30 3-amino-2,2,4,4-tetrametyylitietaania ja seoksen annet tiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Sekoittamista jatkettiin kaksi tuntia huoneen lämpötilassa, reaktioseos pestiin laimealla natriumhydroksidilla, laimealla suolahapolla, kuivattiin (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin 35 vakuumissa, jolloin saatiin 6,11 g nestemäistä tuotetta, R^ 0,58 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosfo- 34 79335 rimolybdaattisuihke).A. D-CH 3 OCH 2 CHCONH_ / ° NHCbz ch 3 ch 3 In 75 mL of methylene chloride was dissolved 3.8 g (15 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-D-O-methylserine. N-methylmorpholine (1.68 ml) was added, the solution was cooled to -15 ° C and 1.43 ml of ethyl chloroformate was added. The resulting mixture was stirred for 8 minutes at -15 ° C, then 2.18 g (15 mmol) of 3-amino-2,2,4,4-tetramethylethane was added and the mixture was allowed to warm to room temperature. Stirring was continued for two hours at room temperature, the reaction mixture was washed with dilute sodium hydroxide, dilute hydrochloric acid, dried (MgSO 4) and the solvent evaporated in vacuo to give 6.11 g of a liquid product, Rf 0.58 (ethyl acetate / hexane, 1: 1). ; phospho-34 79335 rimolybdate spray).

B. Hapetus 1,1-dioksidiksiB. Oxidation to 1,1-dioxide

Edellä osassa A saatu tuote, 6,11 g, liuotettiin 75 ml:aan kloroformia ja jäähdytettiin jäissä 5 lisättäessä annoksittain 7,12 g m-klooriperbentsoehappoa.. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin kolme tuntia. Lisättiin vielä kloroformia (75 ml) ja liuos pestiin kahdesti 5 % :isella (pai-no/til.) natriumkarbonaattiliuoksella, 2 x 0,5-norm.The product obtained in Part A above, 6.11 g, was dissolved in 75 ml of chloroform and cooled on ice with the addition of 7.12 g of m-chloroperbenzoic acid in portions. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for three hours. Additional chloroform (75 mL) was added and the solution was washed twice with 5% (w / v) sodium carbonate solution, 2 x 0.5-norm.

10 natriumsulfaatilla ja 2 x 1-norm. suolahapolla. Orgaanisen faasin kuivaamisen (MgSO^) ja liuottimen haihduttamisen jälkeen saatiin 6,24 g tuotetta viskoosisena nesteenä, R^ 0,22 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 1:1; fosforimolybdaatti-suihke) sekä jälkiä lähtöaineesta ja 15 sulfoksidista . '*'H-NMR-spektri oli halutun sulfonin struktuurin mukainen pienen kloroformimäärän yhteydessä.10 with sodium sulfate and 2 x 1-norm. hydrochloric acid. After drying the organic phase (MgSO 4) and evaporation of the solvent, 6.24 g of product were obtained as a viscous liquid, Rf 0.22 (ethyl acetate / hexane, 1: 1; phosphorus molybdate spray) and traces of starting material and sulfoxide. The 1 H-NMR spectrum was consistent with the desired sulfone structure with a small amount of chloroform.

>CH-, < S02 20 nh2 CH^ CH3> CH-, <SO 2 20 nh 2 CH 2 CH 3

Seosta, jossa oli 6,11 g N-bentsyylioksikarbo- nyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli-l,1- 25 dioksotietan-3-yyli)amidia, 250 ml metanolia ja 3,0 g 3 %:ista palladium/hiili-katalyyttiä, hydrattiin 50 psi:n 2 paineessa (3,52 kg/cm ) kaksi tuntia. Katalyytti pois-tettiin suodattamalla, suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös liuotettiin 35 ml:aan 1-norm.A mixture of 6.11 g of N-benzyloxycarbonyl-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3-yl) amide, 250 ml of methanol and 3, 0 g of 3% palladium / carbon catalyst was hydrogenated at 50 psi 2 (3.52 kg / cm) for two hours. The catalyst was removed by filtration, the filtrate was evaporated to dryness in vacuo and the residue was dissolved in 35 ml of 1N.

30 suolahappoa. Hapan liuos pestiin kolme kertaa kloroformilla, tehtiin alkaliseksi kiinteällä natriumhydroksi-dilla, kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin 3 kertaa 50 ml :11a kloroformia. Yhdistetyt uutteet kuivattiin . (MgSO^) ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jol-35 loin saatiin 3,37 g (80 %) ^-aminoamidi-tuotetta värittömänä nesteenä, Rf 0,29; - 15,7° (C = 0,8, 35 79835 1-norm.HC1). Struktuuri varmennettiin ^H-NMR-spektrosko-pian avulla.30 hydrochloric acid. The acidic solution was washed three times with chloroform, basified with solid sodium hydroxide, saturated with sodium chloride and extracted 3 times with 50 ml of chloroform. The combined extracts were dried. (MgSO 4) and the solvent was evaporated in vacuo to give 3.37 g (80%) of the β-aminoamide product as a colorless liquid, Rf 0.29; - 15.7 ° (C = 0.8, 35 79835 1-norm.HCl). The structure was confirmed by 1 H-NMR spectroscopy.

ch_^CH3 5 D .C6H5C2H2OCOCH2CHCONH£HCONH --S°2 I ci^x:h3 NHCbz CH2OCH3ch_ ^ CH3 5 D .C6H5C2H2OCOCH2CHCONH £ HCONH --S ° 2 I ci ^ x: h3 NHCbz CH2OCH3

10 Käyttämällä 3,37 g (12 mmoolia) edellä osassa C10 Using 3.37 g (12 mmol) above in Part C

saatua tuotetta lähtöaineena esimerkin 1 osan D menetelmässä, haluttua disuojattua dipeptidiamidia saatiin kirkkaana lasimaisena aineena, 6,73 g (91 %), 0,28 (etyyliasetaatti/heksaani-seos, 70:30). ^H-NMR-15 spektri oli tämän yhdisteen struktuurin mukainen.the product obtained as a starting material in the procedure of Example 1, Part D, the desired dis-protected dipeptide amide was obtained as a clear glass, 6.73 g (91%), 0.28 (ethyl acetate / hexane, 70:30). The 1 H-NMR spectrum of 15 was consistent with the structure of this compound.

E. Seosta, jossa oli 6,75 g ji> -bentsyyli-N-Cbz-L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(2,2,4,4-tetrame-tyyli-1,l-dioksotietan-3-yyli)amidia, 250 ml metano-lia ja 2,0 g 5 %:ista Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin 20 edellä esitetyn osan C menetelmällä. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jälelle jäänyttä jäännöstä sekoitettiin yön ajan etyylieetterissä ja kiinteä tuote koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumiuunis-sa, jolloin saatiin 3,3 g (77 %) haluttua dipeptidi-25 amidia, 0,23; sp. 140-150°C (haj.) + 20,3° (C = 1, 1,2-norm. HC1).E. A mixture of 6.75 g of n-benzyl-N-Cbz-L-aspartyl-DO-methylserine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-1,1-dioxothietan-3- yl) amide, 250 ml of methanol and 2.0 g of 5% Pd / C catalyst were hydrogenated by the method of Part C above. After evaporation of the solvent, the remaining residue was stirred overnight in ethyl ether and the solid product was collected by filtration and dried in a vacuum oven to give 3.3 g (77%) of the desired dipeptide-amide, 0.23; mp. 140-150 ° C (dec.) + 20.3 ° (C = 1, 1,2-norm. HCl).

Makeutusteho: 200 x sakkaroosin makeutusteho.Sweetening power: 200 x sucrose sweetening power.

Esimerkki 9 L-aspartyyli-D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-di-30 metyylisykloheksyyli)amidi CH- \ I, Ra = CHjOH, R = —/ 'y 35 CH3 36 79835 A. dl-cis,trans-2,6-dimetyylisykloheksyyliamiiniExample 9 L-aspartyl-D-serine-N- (dl-cis, trans-2,6-di-30-methylcyclohexyl) amide CH-1, Ra = CH 2 OH, R = - / '35 CH 3 36 79835 A. of dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexylamine

Liuos, jossa oli 2,1 g trans-2,6-dimetyylisyklo- heksanonioksiimia 30 ml:ssa kuivaa etanolia, lämmitettiin kiehuvaksi. Tähän lisättiin annoksittain 3,1 g 5 metanolista natriumia. Lisäyksen päätyttyä seosta pidettiin kiehuvana 30 minuuttia ja annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan. Saatu geeli liuotettiin veteen, pH säädettiin arvoon 2,0 suolahapolla ja pestiin etyyli-eetterillä. Vesifaasi tehtiin alkaliseksi natriumhydrok-10 sidilla, uutettiin eetterillä, uutteet kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin haluttua amiinia värittömänä nesteenä.A solution of 2.1 g of trans-2,6-dimethylcyclohexanone oxime in 30 ml of dry ethanol was heated to boiling. To this was added portionwise 3.1 g of 5 sodium sodium. At the end of the addition, the mixture was kept boiling for 30 minutes and allowed to cool to room temperature. The resulting gel was dissolved in water, adjusted to pH 2.0 with hydrochloric acid and washed with ethyl ether. The aqueous phase was basified with sodium hydroxide, extracted with ether, the extracts dried (MgSO 4) and evaporated to dryness to give the desired amine as a colorless liquid.

B. D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-dimetyylisyklo-heksyyli)amidi 15 Käyttämällä 1,47 g (6,17 mmoolia) N-Cbz-D-serii- niä, 775 mg (6,15 mmoolia) dl-cis,trans-2,6-dimetyyli-sykloheksyyliamiinia ja ekvimoolimäärin N-metyylimorfo-liinia ja etyyliklooriformiaattia ja poistamalla sen jälkeen amino-suojaryhmä hydraamalla katalyyttisesti 20 esimerkin 1 osien B ja C menetelmin, saatiin 0,70 g haluttua D-seriini-amidia valkeana kiinteänä aineena,B. D-Serine-N- (dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide Using 1.47 g (6.17 mmol) of N-Cbz-D-serine, 775 mg (6 , 15 mmol) of dl-cis, trans-2,6-dimethyl-cyclohexylamine and an equimolar amount of N-methylmorpholine and ethyl chloroformate, followed by removal of the amino-protecting group by catalytic hydrogenation by the methods of Example 1, Parts B and C, gave 0.70 g of the desired D-serine amide as a white solid,

Rf 0,64 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).Rf 0.64 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).

C. Disuojattu dipeptidiamidi Käyttämällä esimerkin 1 osassa D 600 mg (2,8 mmoo-25 lia) D-seriini-N-(dl-cis,trans-2,6-dimetyylisyklohek-syyli)amidia, vastaavaa Jt -bentsyyli-N-bentsyylioksi-karbonyyli-L-aspartyyli-D-seriiniamidia, 1,2 g, saa-tiin värittömänä kiinteänä aineena. Kiteyttämällä uudelleen isopropyylieetteristä saatiin 1,0 g tuotetta, 30 0,35 (etyyliasetaatti/heksaani, 7:3).C. Disulfated Dipeptide Amide Using Part D of Example 1, 600 mg (2.8 mmol-25) of D-serine-N- (dl-cis, trans-2,6-dimethylcyclohexyl) amide corresponding to N-benzyl-N- benzyloxycarbonyl-L-aspartyl-D-serinamide, 1.2 g, was obtained as a colorless solid. Recrystallization from isopropyl ether gave 1.0 g of product, 0.35 (ethyl acetate / hexane, 7: 3).

D. Hydraamalla katalyyttisesti edellä osassa C saatua disuojattua dipeptidiamidia (1,0 g) metanolissa siten, että läsnä oli 0,6 g 5 %:ista palladium/hiili-katalyyttiä, esimerkin 1 osan E menetelmällä, saatiin 435 35 mg otsikon yhdistettä harmaanvalkeana, kiteisenä kiinteänä aineena, sp. 206-210°C (haj.): R^ 0,67 Zphutkerroskromato-grafia,n-butanoli:etikkahappo:vesi (tilavuussuhde 4.1:10.D. Catalytic hydrogenation of the disubstituted dipeptide amide from Part C above (1.0 g) in methanol in the presence of 0.6 g of 5% palladium / carbon catalyst by the method of Example 1, Part E gave 435 35 mg of the title compound as an off-white solid. as a crystalline solid, m.p. 206-210 ° C (dec.): Rf 0.67 TLC, n-butanol: acetic acid: water (4.1: 10 by volume).

Makeus: 200 x sakkaroosin makeus.Sweetness: 200 x sweetness of sucrose.

Esimerkki 10 L-aspartyyli-D-O-metyyliseriini-N-(3,5-dimetyy- litetrahydrotiopyran-4-yyli) amidi : 37 79835 P3 I, R = -/ s, Ra = CH20CH3Example 10 L-aspartyl-D-O-methylserine-N- (3,5-dimethyltetrahydrothiopyran-4-yl) amide: 37 79835 P3 I, R = - / s, Ra = CH2OCH3

VV

CH3 10 cis/trans- ja trans/trans-isomeerien seos A. 3 ,5-dimetyylitetrahydrotiopyran-4-oni Seos, jossa oli 2 g natriumasetaattia ja 25 ml etanolia kyllästettiin rikkivetykaasulla. Tähän lisättiin 7,0 g (0,063 moolia) di-isopropyyliketonia jääh-15 dyttäen jäähauteessa kunnes reaktio ei enää ollut eksoterminen. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa johdettaessa seoksen läpi neljän tunnin ajan rikkivetyä, minkä jälkeen sen annettiin olla paikoillaan yön ajan. Etanoli ja ylimääräinen H2S haihdutettiin pois vakuu-20 missä ja jäännös liuotettiin etyylieetteriin, pestiin vuorollaan vedellä, kaliumkarbonaattiliuoksella, laimealla suolahapolla ja uudelleen vedellä. Eetteriuut-teet kuivattiin (Na2S0^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 6,8 g öljyä. Tämä tislattiin vakuumis-25 sa 10 cm:n Vigreaux-kolonnin läpi, jolloin saatiin 1,67 g tuotetta, kp. 83-86°C/9 mm, jota käytettiin enempää puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.CH3 A mixture of 10 cis / trans and trans / trans isomers A. 3,5-Dimethyltetrahydrothiopyran-4-one A mixture of 2 g of sodium acetate and 25 ml of ethanol was saturated with hydrogen sulfide gas. To this was added 7.0 g (0.063 mol) of diisopropyl ketone while cooling in an ice bath until the reaction was no longer exothermic. The mixture was stirred at room temperature as hydrogen sulfide was passed through the mixture for four hours, after which it was allowed to stand overnight. The ethanol and excess H 2 S were evaporated off in vacuo and the residue was dissolved in ethyl ether, washed alternately with water, potassium carbonate solution, dilute hydrochloric acid and again with water. The ether extracts were dried (Na 2 SO 4) and evaporated to dryness to give 6.8 g of an oil. This was distilled in vacuo through a 10 cm Vigreaux column to give 1.67 g of product, b.p. 83-86 ° C / 9 mm, which was used without further purification in the next step.

B. 4-oksi-imino-3,5-dimetyylitetrahydrotiopyraani Seosta, jossa oli 1,67 g (0,011 moolia) osassa AB. 4-Oxoimino-3,5-dimethyltetrahydrothiopyran A mixture of 1.67 g (0.011 mol) in Part A

30 saatua syklistä ketonia, 1,6 g (0,023 moolia) hydrok-syyliamiini-hydrokloridia ja 1,9 g (0,023 moolia) natriumasetaattia 30 ml:ssa vettä ja 10 ml:ssa etanolia, lämmitettiin kiehuttaen kolme tuntia, jäähdytettiin ja sakka otettiin talteen suodattamalla. Metanolin ja ve-35 den 1:l-seoksesta uudelleen kiteyttämisen jälkeen saa- 38 79835 tiin 1,5 g oksiimia valkeana kiinteänä aineena, sp. 60-85°C, joka on isomeerien seosta, joka on sopivan puhdasta käytettäväksi seuraavassa vaiheessa.The resulting cyclic ketone, 1.6 g (0.023 mol) of hydroxylamine hydrochloride and 1.9 g (0.023 mol) of sodium acetate in 30 ml of water and 10 ml of ethanol were heated at reflux for three hours, cooled and the precipitate was collected. by filtration. After recrystallization from a 1: 1 mixture of methanol and water, 1.59 g of oxime were obtained as a white solid, m.p. 60-85 ° C, which is a mixture of isomers suitable for use in the next step.

C. trans/trans- ja cis/trans-4-amino-3,5-dime- 5 tyylitetrahydrotiopyraaniC. trans / trans and cis / trans-4-amino-3,5-dimethyltetrahydrothiopyran

Liuokseen, jossa oli 1,45 g (0,009 moolia) osassa B saatua oksiimia 15 ml:ssa etanolia, lisättiin annoksittain 5 g natriumhauleja ja sen jälkeen vielä 25 ml etanolia ja saatua seosta lämmitettiin kiehuttaen noin 30 10 minuuttia. Reaktioseos laimennettiin vedellä, uutettiin etyylieetterillä ja uutteet pestiin vedellä, Eette-rikerros uutettiin laimealla suolahapolla ja vesiker-ros pestiin tuoreella eetterillä. Vesikerros tehtiin alkaaliseksi lisäämällä natriumhydroksidiliuosta ja 15 uutettiin uudelleen eetterillä. Orgaaninen kerros kuivattiin (MgSO^) ja eetteri haihdutettiin pois, jolloin saatiin 1,1 g jälelle jäänyttä väritöntä öljyä. Kaasu-neste-kromatografiointi (0V-1 -kolonni lämpötilaohjel-moinnin ollessa 80-100°C) osoitti tuotteen sisältävän 20 kahta pääkomponenttia suhteessa 60/40 . ^H-NMR (CDCl^) ~ analyysi osoitti tuotteen olevan 4-amino-3-trans-5-trans-dimetyylitetrahydrotiopyraanin ja vastaavan 3-cis-5-trans-isomeerin seosta.To a solution of 1.45 g (0.009 mol) of the oxime obtained in Part B in 15 ml of ethanol was added portionwise 5 g of sodium pellets followed by a further 25 ml of ethanol and the resulting mixture was heated at reflux for about 30 minutes. The reaction mixture was diluted with water, extracted with ethyl ether, and the extracts were washed with water, the ether layer was extracted with dilute hydrochloric acid, and the aqueous layer was washed with fresh ether. The aqueous layer was made alkaline by the addition of sodium hydroxide solution and re-extracted with ether. The organic layer was dried (MgSO 4) and the ether evaporated to give 1.1 g of a residual colorless oil. Gas-liquid chromatography (0V-1 column with temperature programming at 80-100 ° C) showed the product to contain two main components in a ratio of 60/40. 1 H-NMR (CDCl 3) analysis showed the product to be a mixture of 4-amino-3-trans-5-trans-dimethyltetrahydrothiopyran and the corresponding 3-cis-5-trans isomer.

D. N-(3,5-dimetyylitetrahydrotiopyran-4-yyli)-t- 25 butoksikarbonyyli-D-0-metyyliseriini-amidi CH,D. N- (3,5-dimethyltetrahydrothiopyran-4-yl) -t-butoxycarbonyl-D-O-methylserine amide CH,

t-Boc-NH-CHCONH —( St-Boc-NH-CHCONH - (S

CH-OCH-s 7-f 30 CH3CH-OCH-s 7-f 30 CH3

Seokseen, jossa on 1,96 g (8,9 mmoolia) esimerkissä 7 osassa A saatua N-t-Boc-D-O-metyyliseriiniä, 1,98 g (19 mmoolia) trietyyliamiinia ja 40 ml tetrahydro- 39 79835 furaania kuivissa olosuhteissa jäähdytettynä -10°C:seen, lisätään tiputtamalla 0,96 g (8,9 mmoolia) etyylikloo-riformiaattia ja saatua seosta sekoitetaan tässä lämpötilassa 20 minuuttia. Tähän lisätään 1,1 g (7,5 mmoo-5 lia) osassa C saatua 4-amino-3,5-dimetyylitetrahydro-tiopyraani-isomeerien seosta ja saatua seosta sekoitetaan -10°C:ssa 10 minuuttia ja annetaan sitten lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros 10 pestään natriumvetykarbonaattiliuoksella, laimealla suolahapolla, vedellä, suolaliuoksella, sitten kuivataan (Na^O^) ja liuotin haihdutetaan vakuumissa, jolloin saadaan tuotetta.To a mixture of 1.96 g (8.9 mmol) of the Nt-Boc-DO methylserine obtained in Example 7, Part A, 1.98 g (19 mmol) of triethylamine and 40 ml of tetrahydro-39 79835 furan under dry conditions cooled to -10 ° C, 0.96 g (8.9 mmol) of ethyl chloroformate are added dropwise and the resulting mixture is stirred at this temperature for 20 minutes. To this is added 1.1 g (7.5 mmol / 5) of the mixture of 4-amino-3,5-dimethyltetrahydro-thiopyran isomers obtained in Part C, and the resulting mixture is stirred at -10 ° C for 10 minutes and then allowed to warm to room temperature. . The reaction mixture is diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer 10 is washed with sodium bicarbonate solution, dilute hydrochloric acid, water, brine, then dried (Na 2 O 4) and the solvent evaporated in vacuo to give the product.

E. N-(3,5-dimetyylitetrahydrotiopyran-4-yyli)- 15 D-O-metyyliseriini-amidi CH3 NH2CHC0NH _/ s CH20CH3 \_/ 20 ' CH3E. N- (3,5-Dimethyltetrahydrothiopyran-4-yl) -15-O-methylserine amide CH3 NH2CHCO3H / s CH2OCH3 / 20'CH3

Osassa D saatu t-Boc-amidi liuotetaan 15 ml:aan etanolia ja lisätään seos, jossa on 5 ml väkevää suolahappoa ja 10 ml vettä. Saatua seosta lämmitetään kie-25 huttaen 30 minuuttia, jäähdytetään ja etanoli poiste taan haihduttamalla vakuumissa. Vesipitoinen jäännös pestään etyylieetterillä, tehdään alkaaliseksi natrium-hydroksidi liuoksella, uutetaan eetterillä ja uutteet kuivataan (Na2S0^). Haihduttamalla liuotin saadaan ha-30 luttua aminoamidia.The t-Boc amide obtained in Part D is dissolved in 15 ml of ethanol and a mixture of 5 ml of concentrated hydrochloric acid and 10 ml of water is added. The resulting mixture was heated at reflux for 30 minutes, cooled and the ethanol removed by evaporation in vacuo. The aqueous residue is washed with ethyl ether, made alkaline with sodium hydroxide solution, extracted with ether and the extracts dried (Na 2 SO 4). Evaporation of the solvent gives the desired aminoamide.

F. D-O-metyyliseriini-amidin kytkentä L-aspar-t i i ni happo-N-tiokarboks i anhydridi n kans s aF. Coupling of D-O-methylserine Amide with L-Aspartic Acid N-Thiocarboxylic Anhydride

Osassa E saatu D-0-metyyliseriini-amidi, 1,25 g (5,1 mmoolia), liuotetaan 5 ml:aan tetrahydrofuraania 35 ja lisätään 5 ml vettä. Kirkas liuos jäähdytetään jäissä ja lisätään yhtenä eränä 0,89 g (5,1 mmoolia) L-aspar- 40 79335 tiinihappo-N-tiokarboksianhydridiä. Tähän lisätään tarvittava määrä 0,5-molaarista natriumhydroksidia seoksen pH:n pitämiseksi arvossa 9. 30 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos pestään etyylieetterillä, 5 sitten etyyliasetaatilla ja pesunesteet hävitetään. Vesifaasi tehdään happameksi laimealla suolahapolla pH-arvoon 5,6 ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotetaan kuumaan metanoliin (100 ml), suodatetaan ja metanoli haihdutetaan pois. Jäännös liuotetaan 10 uudelleen kuumaan metanoliin, suodatetaan ja suodos tehdään värittömäksi aktiivihiilellä, suodatetaan piimään läpi ja suodos haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan raakatuotetta. Raakatuote liuotetaan kuumaan veteen (11 ml) ja suodatetaan, haihdutetaan typpivir-15 rassa 5 ml:ksi ja jäähdytetään jäissä tuotteen saos- tamiseksi, joka kootaan talteen suodattamalla ja kuivataan .The D-O-methylserine amide obtained in Part E, 1.25 g (5.1 mmol), is dissolved in 5 ml of tetrahydrofuran 35 and 5 ml of water are added. The clear solution is cooled on ice and 0.89 g (5.1 mmol) of L-aspartic acid N-thiocarboxyanhydride are added in one portion. To this is added the required amount of 0.5 molar sodium hydroxide to maintain the pH of the mixture at 9. After stirring for 30 minutes, the reaction mixture is washed with ethyl ether, then with ethyl acetate and the washings are discarded. The aqueous phase is acidified with dilute hydrochloric acid to pH 5.6 and evaporated to dryness in vacuo. The residue is dissolved in hot methanol (100 ml), filtered and the methanol is evaporated off. The residue is redissolved in hot methanol, filtered and the filtrate is decolorized with activated carbon, filtered through diatomaceous earth and the filtrate evaporated to dryness to give the crude product. The crude product is dissolved in hot water (11 ml) and filtered, evaporated under a stream of nitrogen to 5 ml and cooled on ice to precipitate the product, which is collected by filtration and dried.

Esimerkki 11 ^ L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- tetrahydrotiofen-3-yyli)amidi: CH-, CH^ -3 / 3Example 11 N-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-tetrahydrothiophen-3-yl) amide: CH-, CH 2 -3 / 3

I, R = Ra = CH~OHI, R = Ra = CH ~ OH

X J5, 25 CH^ CH3 : 30 CH3xC^3 A. t-Boc-NHCH-C0NH | CH20H CH3^^CH3 35 41 79835X J5, 25 CH3 CH3: 30 CH3xCl3 A. t-Boc-NHCH-CONH | CH2OH CH3 ^ ^ CH3 35 41 79835

Liuokseen, jossa on 2,26 g (11 mmoolia) N-t-bu-toksikarbonyyli-D-seriiniä 75 ml:ssa tetrahydrofuraa-nia lisätään 1,47 ml (10 mmoolia) trietyyliamiinia ja seos jäähdytetään -10°C:seen. Tässä lämpötilassa 5 lisätään 0,96 ml (10 mmoolia) etyyliklooriformiaattia ja sekoittamista jatketaan 15 minuuttia. -20°C:seen jäähdyttämisen jälkeen lisätään 1,6 g (10 mmoolia) dl-3-amino-2,2,4,4-tetrametyyli-tetrahydrotiofeenia ja saadun seoksen annetaan lämmetä huoneen lämpötilaan.To a solution of 2.26 g (11 mmol) of N-t-butoxycarbonyl-D-serine in 75 ml of tetrahydrofuran is added 1.47 ml (10 mmol) of triethylamine and the mixture is cooled to -10 ° C. At this temperature, 0.96 ml (10 mmol) of ethyl chloroformate are added and stirring is continued for 15 minutes. After cooling to -20 ° C, 1.6 g (10 mmol) of dl-3-amino-2,2,4,4-tetramethyl-tetrahydrothiophene are added and the resulting mixture is allowed to warm to room temperature.

10 Lisätään etyyliasetaattia ja seos pestään kahdes ti 50 ml:n erillä 5 %:ista (paino-%) sitruunahapon vesiliuosta, natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (1 x 50 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (1 x 50 ml). Orgaaninen kerros kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan 15 kuiviin vakuumissa, jolloin saadaan N(2,2,4,4-tetra- metyylitetrahydrotiofen-3-yyli)-t-butoksikarbonyyli-D-seriiniamidia. Tätä tuotetta käytetään enempää puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.Ethyl acetate is added and the mixture is washed twice with 50 ml portions of 5% (w / w) aqueous citric acid, aqueous sodium bicarbonate (1 x 50 mL) and brine (1 x 50 mL). The organic layer is dried (Na 2 SO 4) and evaporated to dryness in vacuo to give N- (2,2,4,4-tetramethyltetrahydrothiophen-3-yl) -t-butoxycarbonyl-D-serinamide. This product is used without further purification in the next step.

CH-, CH-CH-, CH-

:· 20 >V: · 20> V

B. H0CH9CH(NH9)C0NH-—S IB. H0CH9CH (NH9) CONH-S I

TVTV

ch3 CH3 25 3 g:aan osassa A saatua tuotetta lisätään 5 ml metanolia ja 30 ml 1-mol. suolahappoa ja seosta lämmitetään vesihöyryhauteella 30 minuuttia. Metanoli poistetaan haihduttamalla ja jäännös uutetaan eetterillä. Eetteri hävitetään ja vesifaasin pH säädetään arvoon 11,0 30 natriumhydroksidiliuoksella, uutetaan etyyliasetaatilla, uutteet kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan D-seriini- N- (2,2,4,4-tetrametyylitetra-hydrotiofen-3-yyli)-amidia.ch3 CH3 25 To 3 g of the product obtained in Part A are added 5 ml of methanol and 30 ml of 1 mol. hydrochloric acid and the mixture is heated on a steam bath for 30 minutes. The methanol is removed by evaporation and the residue is extracted with ether. The ether is discarded and the pH of the aqueous phase is adjusted to 11.0 with sodium hydroxide solution, extracted with ethyl acetate, the extracts dried (Na 2 SO 4) and evaporated to dryness to give D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyltetrahydrothiophen-3-yl) amide.

C. Kytkentä dipeptidiamidin muodostamiseksi 35 Osassa B saatu D-seriiniamidi, 1,03 g, (4,25 mmoo lia) sekoitetaan 10 ml:n kanssa vettä, jäähdytetään 42 79835 jäissä ja seoksen pH säädetään arvoon 9,2 0,5-normaalisella natrjumhydroksidiliuoksella. Tähän lisätään annoksittain sekoittaen 0,8 g (4,25 mmoolia) L-aspartii-nihappo-N-tiokarboksianhydridiä pitämällä seoksen pH 5 arvossa 9 natriumhydroksidiliuoksella (0,5-norm). Lisäyksen päätyttyä saatua seosta sekoitetaan 0°C:ssa 45 minuuttia, pH säädetään suolahapolla arvoon 5,2 ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös lietetään metano-lin kanssa, suodatetaan saostuneiden kiinteiden aineiden 10 poistamiseksi ja metanoli poistetaan suodoksesta haihduttamalla vakuumissa. Saatu raakatuote puhdistetaan kromatografioimalla kolonnissa silikageelillä.C. Coupling to Form Dipeptide Amide 35 The D-serinamide from Part B, 1.03 g, (4.25 mmol) is mixed with 10 mL of water, cooled to 42,79835 on ice, and the pH of the mixture is adjusted to 9.2 with 0.5 N natrjumhydroksidiliuoksella. To this is added portionwise, with stirring, 0.8 g (4.25 mmol) of L-aspartic acid N-thiocarboxylic anhydride, maintaining the mixture at pH 5 with sodium hydroxide solution (0.5-norm). At the end of the addition, the resulting mixture is stirred at 0 [deg.] C. for 45 minutes, the pH is adjusted to 5.2 with hydrochloric acid and evaporated to dryness in vacuo. The residue is slurried with methanol, filtered to remove precipitated solids and the methanol is removed from the filtrate by evaporation in vacuo. The crude product obtained is purified by column chromatography on silica gel.

Esimerkki 12 _ L-aspartyyli-D-seriini-N-(2-metyylitio-2,4-di-15 metyylipentan-3-yyli)amidi A. 2-metyylitio-2,4-dimetyylipentan-3-oniExample 12 - L-Aspartyl-D-serine-N- (2-methylthio-2,4-di-15-methylpentan-3-yl) amide A. 2-Methylthio-2,4-dimethylpentan-3-one

Liuos, jossa oli 200 ml metanolia ja siinä 9,2 g (0,40 moolia) natriummetallia, jäähdytettiin jäähau-teessa ja kyllästettiin metyylimerkaptaanikaasulla. Tähän 20 lisättiin huoneen lämpötilassa 77,2 g (0,40 moolia) 2-bromi-2,4-dimetyylipentan-3-onia ja saatua seosta sekoitettiin kaksi tuntia. Reaktioseos laimennettiin vedellä, uutettiin etyylieetterillä, uutteet pestiin vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä 25 natriumsulfaatilla. Eetteri haihdutettiin pois ja jäännös tislattiin vakuumissa, jolloin saatiin 50,4 g tuotetta, kp. 76° (20 mm).A solution of 200 ml of methanol and 9.2 g (0.40 mol) of sodium metal was cooled in an ice bath and saturated with methyl mercaptan gas. To this was added 77.2 g (0.40 mol) of 2-bromo-2,4-dimethylpentan-3-one at room temperature, and the resulting mixture was stirred for two hours. The reaction mixture was diluted with water, extracted with ethyl ether, the extracts were washed with water, brine and dried over anhydrous sodium sulfate. The ether was evaporated off and the residue was distilled in vacuo to give 50.4 g of product, b.p. 76 ° (20 mm).

B. 2-metyylitio-2,4-dimetyyli-3-aminopentaaniB. 2-Methylthio-2,4-dimethyl-3-aminopentane

Liuosta, jossa oli 6,0 g (0,038 moolia) 2-metyy- 30 litio-2,4-dimetyylipentan-3-onia, 9,9 g formamidia ja 2,1 g 100 %:ista muurahaishappoa, lämmitettiin kiehuttaen poistamalla reaktiossa muodostunut vesi frak-tiointipään avulla. 12 tunnin kuluttua lisättiin vielä 2,5 g muurahaishappoa ja kiehuttamista jatkettiin 35 toiset 24 tuntia samalla tavalla, jona aikana reaktio-seos saavutti 190°C:n lämpötilan. Seos jäähdytettiin, 43 79835 laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet pestiin vedellä ja haihdutettiin kuiviin vakuu-missa, jolloin saatiin 5,3 g jälelle jäänyttä öljyä, öljyä kiehutettiin kuusi tuntia 40 ml:n kanssa 6-norm.A solution of 6.0 g (0.038 mol) of 2-methylthio-2,4-dimethylpentan-3-one, 9.9 g of formamide and 2.1 g of 100% formic acid was heated to reflux to remove the reaction mixture. water by means of a fractionation head. After 12 hours, an additional 2.5 g of formic acid was added and boiling was continued for another 24 hours in the same manner during which time the reaction mixture reached 190 ° C. The mixture was cooled, diluted with water and extracted with ethyl acetate. The extracts were washed with water and evaporated to dryness in vacuo to give 5.3 g of residual oil, the oil was boiled for six hours with 40 ml of 6-norm.

5 suolahappoa, laimennettiin vedellä, pestiin eetterillä ja vesifaasi tehtiin vahvasti alkaliseksi natrium-hydroksidilla. Etyylieetterillä uuttamisen ja uutteen konsentroinnin jälkeen saatiin 3,3 g (56 %) väritöntä amiinia, joka antoi yhden ainoan piikin kaasu-neste-kro-10 matografioitaessa kuuden jalan 0V-1 -kolonnissa 110°C:ssa> retentioaika 412 sekuntia.5 hydrochloric acid, diluted with water, washed with ether and the aqueous phase was made strongly alkaline with sodium hydroxide. After extraction with ethyl ether and concentration of the extract, 3.3 g (56%) of a colorless amine were obtained, which gave a single peak on gas-liquid Kro-10 chromatography on a six-foot 0V-1 column at 110 ° C> retention time 412 seconds.

C. D-seriini-N-(2-metyylitio-2,4-dimetyylipentan- 3-yyli)amidiC. D-Serine-N- (2-methylthio-2,4-dimethylpentan-3-yl) amide

Liuokseen, jossa on 3,47 g (0,017 moolia) N-t-15 butoksikarbonyyli-D-seriiniä ja 2,5 g (0,017 moolia) tri- etyyliamiinia 100 ml:ssa tetrahydrofuraania -15°C:ssa, lisätään 1,63 ml etyyliklooriformiaattia. 15 minuutin sekoittamisen jälkeen lisätään 2,49 g (0,017 moolia) 2-metyylitio-2,4-dimetyyli-3-aminopentaania ja seosta se-20 koitetaan tunnin ajan. Reaktioseos laimennetaan etyyli asetaatilla, pestään vedellä, 5 %:isella sitruunahapon vesiliuoksella (paino/til.) , natriumvetykarbonaattiliuok-sella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan 100 ml:aan metanolia, li-25 sätään 60 ml väkevää suolahappoa ja seosta kiehutetaan tunnin ajan. Metanolin haihduttamisen jälkeen jäännös liuotetaan veteen, pestään eetterillä, vesifaasin pH säädetään arvoon 12 natriumhydroksidilla ja uutetaan etyylieetterillä. Haihduttamalla uutteet kuiviin saa-30 daan haluttua D-seriiniamidia.To a solution of 3.47 g (0.017 mol) of Nt-15 butoxycarbonyl-D-serine and 2.5 g (0.017 mol) of triethylamine in 100 ml of tetrahydrofuran at -15 ° C is added 1.63 ml of ethyl chloroformate. . After stirring for 15 minutes, 2.49 g (0.017 mol) of 2-methylthio-2,4-dimethyl-3-aminopentane are added and the mixture is stirred for 1 hour. The reaction mixture is diluted with ethyl acetate, washed with water, 5% aqueous citric acid (w / v), sodium hydrogen carbonate solution and brine. The organic phase is evaporated to dryness. The residue is dissolved in 100 ml of methanol, 60 ml of concentrated hydrochloric acid are added and the mixture is boiled for one hour. After evaporation of the methanol, the residue is dissolved in water, washed with ether, the pH of the aqueous phase is adjusted to 12 with sodium hydroxide and extracted with ethyl ether. Evaporation of the extracts to dryness gives the desired D-serine amide.

D. Liuoksen, jossa on 3,3 g (0,013 moolia) osassa C saatua D-seriiniamidia 30 ml:ssa asetonia ja 17 ml vettä, pH säädetään natriumhydroksidiliuoksella pH-arvoon 9,9 ja jäähdytetään -2°C:seen. Tähän lisätään 2,78 g 35 (0,013 moolia) L-aspartiini-N-tiokarboksianhydridiä pienin erin 20 minuutin aikana pitämällä pH-arvossa 9,9 44 79835 l-norm. natriumhydroksidilla. Lisäyksen päätyttyä saatua seosta sekoitetaan 30 minuuttia -2°C:ssa, pestään etyyliasetaatilla, tehdään suolahapolla happameksi pH-arvoon 2 ja pestään uudelleen etyyliasetaatilla. Vesi-5 faasin pH säädetään sitten arvoon 5,2 ja haihdutetaan kuiviin. Raakaa dipeptidiamidia saadaan liettämällä jäännös metanoliin, suodattamalla, käsittelemällä suodosta eetterin kanssa ja suodattamalla, jolloin saadaan toinen erä tuotetta.D. A solution of 3.3 g (0.013 mol) of the D-serinamide obtained in Part C in 30 ml of acetone and 17 ml of water is adjusted to pH 9.9 with sodium hydroxide solution and cooled to -2 ° C. To this is added 2.78 g of 35 (0.013 moles) of L-aspartine-N-thiocarboxyanhydride in small portions over 20 minutes, maintaining the pH at 9.9 44 79835 l-norm. sodium hydroxide. At the end of the addition, the resulting mixture is stirred for 30 minutes at -2 ° C, washed with ethyl acetate, acidified to pH 2 with hydrochloric acid and washed again with ethyl acetate. The pH of the aqueous-5 phase is then adjusted to 5.2 and evaporated to dryness. The crude dipeptide amide is obtained by slurrying the residue in methanol, filtering, treating the filtrate with ether and filtering to give a second crop of product.

10 Raakatuote puhdistetaan käyttämällä preparatii- vista kerroskromatografiointia silikageelilevyillä (20 x 20 x 2 mm) eluoimalla seoksella butanoli/vesi/ etikkahappo 4:1:1 (til.suhde). Tuotealue leikattiin irti ja eluoitiin metanolilla, jolloin saatiin puhdis-15 tettua L-aspartyyli-D-seriiniamidia.The crude product is purified using preparative layer chromatography on silica gel plates (20 x 20 x 2 mm) eluting with butanol / water / acetic acid 4: 1: 1 (v / v). The product area was excised and eluted with methanol to give purified L-aspartyl-D-serinamide.

Esimerkki 13 L-aspartyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4-tetrametyyli- 3-hydroksisyklobutyyli)amidi, 20 |Η3»2Example 13 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-3-hydroxycyclobutyl) amide, 20 μl »2

I, Ra = CH OH, R = —( %S\_- OHI, Ra = CH OH, R = - (% S \ _- OH

XX

<CH3>2 25 (CH3)2<CH3> 2 25 (CH3) 2

A. D-H0CH2CHC0NH OHA. D-HOCH2CHCO3H OH

NHCbz ·: (ch3)2 30 : B-bentsyylioksikarbonyyli-D-seriinin (0,1 moolia) annetaan reagoida cis/trans-2 ,2,4,4-tetrametyyli-3-hydroksi-syklobutyyliamiinin kanssa esimerkin 8 osan A menetelmän mukaisesti, jolloin saadaan N-Cbz-serii-35 niamidia.NHCbz ·: (ch3) 2 30: β-Benzyloxycarbonyl-D-serine (0.1 mol) is reacted with cis / trans-2,2,4,4-tetramethyl-3-hydroxy-cyclobutylamine according to the procedure of Example 8, Part A. to give N-Cbz-serine-35 niamide.

B- Hydrattaessa N-Cbz-seriiniamidia esimerkin 8 osan C menetelmällä saadaan vastaavaa 2-amino-yhdistet- 45 79835 tä , D-seriini-N-(2,2 ,4,4-tetrametyyli-3-hydroksisyklo-butyyli)amidia. Jälkimmäinen yhdiste muutetaan otsikon yhdisteeksi esimerkin 8 osien D ja E menetelmin, saadaan samalla tavalla.B-Hydrogenation of N-Cbz-serine amide by the method of Example 8, Part C, affords the corresponding 2-amino compound, 45-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-3-hydroxycyclobutyl) amide. The latter compound is converted to the title compound by the methods of Examples 8, Parts D and E, obtained in the same manner.

5 Esimerkki 14 L-aspartyyli-D-seriini-N~(2,2,4,4-tetrametyyli- 3-oksosyklobutyyli)amidi (CH^)9Example 14 L-aspartyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-3-oxocyclobutyl) amide (CH 2) 9

XX

10 a10 a

I, R = CH-OH, R =—k'' V^OI, R = CH-OH, R = -k '' V ^ O

VV

(CH3»2 <<fH3>2(CH3 »2 <<fH3> 2

= 15 A= 15 A

A. D-H0CH,CHC0NH_< v-f=0 NHCbz (CH3)2 20 N-bentsyylioksikarbonyyli-D-seriini-N-(2,2,4,4- tetrametyyli-3-hydroksisyklobutyyli)amidi, jota on valmistettu esimerkin 13 osassa A, 36,4 g, (0,10 moolia), liuotettuna 1500 ml:aan asetonia, jäähdytetään -10°C:seen kuivan typpiatmosfäärin suojaamana ja lisätään 42 ml 25 (0,11 moolia) 2,67-mol. kromihappoanhydridiä laimeassa rikkihapossa. Kun seosta on sekoitettu 15 minuuttia -10°C: ssa, liuotin haihdutetaan vakuumissa, jäännös kaadetaan jää-vesi-seokseen, neutraloidaan natriumhydroksi-diliuoksella ja uutetaan etyylieetterillä. Eetteriuut- 30 teet kuivataan (MgSO^) ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan raakatuotetta, joka voidaan, haluttaessa, puhdistaa kromatografioimalla kolonnissa silikageelillä.A. D-HOCH, CHCONH_ <vf = 0 NHCbz (CH3) 2 N-benzyloxycarbonyl-D-serine-N- (2,2,4,4-tetramethyl-3-hydroxycyclobutyl) amide prepared in Example 13 Part A, 36.4 g, (0.10 moles), dissolved in 1500 ml of acetone, is cooled to -10 ° C under a dry nitrogen atmosphere and 42 ml (2.11 moles) of 2.67 mol are added. chromic anhydride in dilute sulfuric acid. After stirring for 15 minutes at -10 ° C, the solvent is evaporated off under vacuum, the residue is poured into ice-water, neutralized with sodium hydroxide solution and extracted with ethyl ether. The ether extracts are dried (MgSO 4) and evaporated to dryness to give a crude product which can be purified, if desired, by column chromatography on silica gel.

B. Hydrattaessa edellisen osan A tuotetta esimerkin 8 osan C menetelmällä saadaan D-seriini-N-(2,2 ,- 35 4,4-tetrametyyli-3-oksosyklobutyyli)amidia. Tämä muute taan vuorostaan otsikon yhdisteeksi menetelmin, joita on selostettu esimerkin 8 osissa D ja E.B. Hydrogenation of the product of Part A above by the method of Example 8, Part C, affords D-serine N- (2,2,5-3,4,4-tetramethyl-3-oxocyclobutyl) amide. This in turn is converted to the title compound by the methods described in Example 8, Parts D and E.

Claims (2)

46 79835 Patenttivaatimus D-aminohappoamidiyhdiste, joka on käyttökelpoinen välituotteena valmistettaessa L-aspartyyli-D-aminohappodi-5 peptidiamideja, tunnettu siitä, että D-aminohap-poamidiyhdisteellä on kaava Ra -pHCONHRc NH2 10 jossa R" on CH20H tai CH2 0CH3 ja Rc on di-isopropyylikar-binyyli, disyklopropyylikarbinyyli, 2,6-dimetyylisyklohek-syyli tai 15 ch3A D-amino acid amide compound useful as an intermediate in the preparation of L-aspartyl-D-amino acid di-5 peptide amides, characterized in that the D-amino acid amide compound has the formula Ra-PHCHRHR NH 2 10 wherein R "is CH 2 OH or CH 2 OCH 3 and R c is diisopropylcarbinyl, dicyclopropylcarbinyl, 2,6-dimethylcyclohexyl or 15 ch3 20 CH3 CH3 jossa, kun p2 on nolla, X2 on S tai S02 , ja kun p2 on 1, X2 on S. 47 79835 D-aminosyraamidförening som är användbar som en mellanprodukt vid framställningen av L-aspartyl-D-amino-5 syradipeptidamider, kännetecknad därav, att D-aminosyraamidföreningen har formeln Ra -CHCONHRc nh2 10 väri Ra är CH20H eller CH2OCH3 och Rc är diisopropylkarbi-nyl, dicyklopropylkarbinyl, 2,6-dimetylcyklohexyl eller CH3 CH^ / 15 2 CH \ CH3 20 väri dä p2 är noll, är X2 S eller S02, och dä p2 är 1, är X2 S.CH3 CH3 wherein when p2 is zero, X2 is S or SO2, and when p2 is 1, X2 is S. 47 79835 , Kännetecknad därav, att D-aminosyraamidföreningen har formeln Ra -CHCONHRc nh2 10 color Ra är CH2OH or CH2OCH3 och Rc ärisisopropylcarbinyl, dicyclopropylcarbinyl, 2,6-dimethylcyclohexyl or CH3 CH2 / 15 2 CH zero, is X2 S or S02, and is p2 is 1, is X2 S.