FI79119C - Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt anvaendbar hjaertfoermakpeptid. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt anvaendbar hjaertfoermakpeptid. Download PDFInfo
- Publication number
- FI79119C FI79119C FI850744A FI850744A FI79119C FI 79119 C FI79119 C FI 79119C FI 850744 A FI850744 A FI 850744A FI 850744 A FI850744 A FI 850744A FI 79119 C FI79119 C FI 79119C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- leu
- ser
- arg
- gly
- ala
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 4
- YQAXFVHNHSPUPO-RNJOBUHISA-N 2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s,4r)-1-[(2s)-1-(2-aminoacetyl)pyrrolidine-2-carbonyl]-4-hydroxypyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]propanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1C[C@@H](O)CN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)CN)CCC1 YQAXFVHNHSPUPO-RNJOBUHISA-N 0.000 title abstract description 3
- 108010082685 antiarrhythmic peptide Proteins 0.000 title abstract description 3
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 title description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 54
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 33
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 210000002837 heart atrium Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 abstract description 20
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 abstract description 18
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 description 9
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 101710187800 Natriuretic peptides A Proteins 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 5
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AYCBRUDZNRVKGK-GWLSAQFNSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(4R,10S,16S,19S,22S,28S,31S,34S,37S,40S,49S,52R)-52-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-19-(3-amino-3-oxopropyl)-49-benzyl-28,37-bis[(2S)-butan-2-yl]-31,40-bis(3-carbamimidamidopropyl)-34-(carboxymethyl)-16-(hydroxymethyl)-22-methyl-10-(2-methylpropyl)-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51-hexadecaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-hexadecazacyclotripentacontane-4-carbonyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 AYCBRUDZNRVKGK-GWLSAQFNSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400001276 Atriopeptin-3 Human genes 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 206010049816 Muscle tightness Diseases 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108010034646 atrial natriuretic factor prohormone (103-126) Proteins 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 210000002254 renal artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000008327 renal blood flow Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400001287 Atriopeptin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102400001275 Atriopeptin-2 Human genes 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010033590 atrial natriuretic factor prohormone (103-123) Proteins 0.000 description 2
- 108010034703 atrial natriuretic factor prohormone (103-125) Proteins 0.000 description 2
- XXPVSJGWOXCVLF-VSJANKAZSA-N atriopeptin ii Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 XXPVSJGWOXCVLF-VSJANKAZSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical class S=C1NC(=O)CN1C1=CC=CC=C1 PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101000757797 Geobacillus stearothermophilus Aminopeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000733766 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Aminopeptidase 2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 239000000959 ampholyte mixture Substances 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004397 blinking Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229950008486 carperitide Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000005474 detonation Methods 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000674 effect on sodium Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002833 natriuretic agent Substances 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000012495 positive regulation of renal sodium excretion Effects 0.000 description 1
- 230000025627 positive regulation of urine volume Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 229940124550 renal vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002048 spasmolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
1 79119
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen sydäneteispep- tidin valmistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti 5 käyttökelpoisen peptidin, jolla on seuraava aminohappo-sekvenssi : 5 10 15
Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- 10 20 25 30
Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- 35 40 45
Gly-Ala-Ala-Leu-Ser-Ser-Leu-Ser-Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- 15 50 55 60
Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu-Gly-Arg-Gly- 65 70 75
Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- 80 85 90
Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- 25 95 100 105
Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly- 110
Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-COOH
30 tai sen fragmentin, joka sisältää em. peptidin aminohap pojen 19 - 111 sekvenssin, valmistamiseksi.
79119 2
Peptidi on sydäneteispeptidi, jolla on hyödyllinen natriureettinen, diureettinen ja verisuonia laajentava vaikutus.
On tunnettua, että eteissydänlihaksen solut nisäk-5 käissä sisältävät lukuisia membraanisidottuja varastojyvä-siä. Nämä luonteenomaiset eritysjyväset, joita on havaittu rotan, koiran, kissan ja ihmisen sydäneteisissä, muistuttavat niitä, joita on peptidiä hormonaalisesti tuottavissa soluissa [DeBold et ai., J. Histochem. Cytochem. 26 (1978), 10 ss. 1094 - 1102]. On selostettu, että eteissydänlihaksen raa'at kudosuutteet, kun niitä injektoitiin laskimonsisäisesti ei-diureettisiin rottiin, tuottivat nopean ja voimakkaan natriureettisen vasteen [DeBold et ai., Life Sciences 28 (1981), ss. 89 - 94]. Rotan sydäneteis-homogenaattien 15 osittaisen puhdistuksen lyhyellä keittovaiheella ja frak-tioinnilla Sephadeii^:llä suorittivat Trippodo et ai. [Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 170 (1982), ss. 502 - 508]. Natri-ureettista vaikutusta nämä tutkijat löysivät kokonaismole-kyylipainoalueella 3 600 - 44 000 daltonia ja peptidija-20 keissa suurempien molekyylipainojen alueella 36 000-44 000 daltonia ja pienempien molekyylipainojen aluella 3 600 - 5 500 daltonia.
Rotan sydäneteisuutteita on myös fraktioitu pieni-molekyylipainoisiksi jakeiksi (alle 10 000 daltonia) ja 25 suurimolekyylipainoisiksi jakeiksi (20 000 - 30 000 daltonia), joista molemmat laukaisivat sileän lihaksen jännityksen in vitro ja olivat voimakkaita natriureettisia aineita, kun niitä annettiin laskimonsisäisesti rotille [Currie et ai., Science 221 (1983), ss. 71 - 73].
30 Muissa viimeaikaisissa julkaisuissa joukko tiedemie hiä on esittänyt erilaisia molekyylipainoltaan pieniä ja keskisuuria natriureettisia sydäneteispeptidejä, joissa on aminohapposekvenssejä alueelta n. 19 - 59 aminohappoa. Siten DeBold et ai., Fed. Proc. 42 (3), Abstract 1870 35 (1983), s. 611, esittävät natriureettisen sydäneteispep- 3 79119 tidin, jonka molekyylipaino on 5 150 daltonia ja sekvenssi 47 aminohappoa, ja jolle tutkijat antoivat nimeksi "Car-dionatrin I", puhdistamisen. Kolme lisähuippua natriureet-tiselle aktiivisuudelle saatiin suurtehonestekromatogra- 5 fia(HPLC)-menetelmillä.
Eräässä myöhemmässä julkaisussa Grammer et ai. [Biochem. Biophys. Res. Commun. 116 (2), Lokakuun 31. 1983, ss. 696 - 703] esittävät rotan sydäneteisnatriureettisen tekijän, jonka molekyylipaino on n. 3 800 ja joka sisältää 10 36 aminohappotähdettä, osittaisen puhdistamisen.
Vielä tuoreemmissa julkaisuissa esittävät Flynn et ai. [Biochem. Biophys. Res. Commun. 117 (3), Joulukuun 28. 1983, ss. 859 - 865] ja Kangawa ja Matsuo, Ibid. 118 (1), Tammikuun 13. 1984, ss. 131 - 139] rotan ja vastaavas-15 ti ihmisen natriureettisia sydäneteispeptidejä, joilla on 28 aminohapon sekvenssit.
Thibault et ai. [FEBS Letters 167 (1984), ss. 353-356] esittävät keskimolekyylipainoisen natriureettisen sydäneteispeptidin, jossa on 73 aminohappoa, puhdistamisen; 20 ja Kangawa et ai. [Biochem. Biophys. Res. Commun. 119 (3) (1984), ss. 933 - 940] esittävät keskimolekyylipainoisen beeta-rotan natriureettisen sydäneteispeptidin, jossa on 48 aminohappoa, puhdistamisen.
Hakijan US-patenteissa 4 496 544 ja 4 557 864 esite-25 tään sydäneteispeptidejä, joilla on pieni molekyylipaino ja joissa on n. 19 - n. 24 aminohappoa. Monia näistä peptideistä on edelleen esittänyt tutkimusryhmä, jota johti tämän keksinnön keksijä [Currie et ai., Science (1984), ss. 67 - 69].
4 79119
Keksinnön mukaisesti valmistetun peptidin rakenne-kaavassa aminohappokomponentit merkitään tavanomaisin lyhentein seuraavasti:
Aminohappo Lyhenne 5 L-alaniini Ala L-arginiini Arg L-asparagiinihappo Asp L-asparagiini Asn L-kysteiini Cys 10 L-glutamiinihappo Glu L-glutamiini Gin
Glysiini Gly L-histidiini His L-isoleusiini Ile 15 L-leusiini Leu L-lysiini Lys L-metioniini Met L-fenyylialaniini Phe L-proliini Pro 20 L-seriini Ser L-treoniini Thr L-tryptofaani Trp L-tyrosiini Tyr L-valiini Vai 25
Kyseinen peptidiaines on eristetty osittain puhdistetussa muodossa, jota ei esiintynyt rotan sydänlihaksessa, josta se aluksi saatiin; ts. se on valmistettu muotoon, joka on pääasiallisesti vapaa pienimolekyylipainoisista 30 peptideistä ja muista solukomponenteista ja kudosainekses-ta. Tällä uudella sydäneteispeptidillä on fysiologisia ominaisuuksia, jotka johdattavat mieleen, että se on tärkeä lääketieteelle sydäneteisten umpierityssysteemin tutkimuksessa nesteaineiden suhteen solunulkoisen tilavuuden, 35 natriumin ja verisuonivastuksen moduloimiseksi.
5 79119
Erityisesti tämän keksinnön mukaisesti valmistetulla peptidillä on terapeuttista käyttöä diureettisena, natri-ureettisena, munuaisverisuonia laajentavana ja sileän lihaksen jännitystä laukaisevana aineena; ts. sillä on 5 vaikutus natriumiin, virtsan tilavuuteen, munuaisverisuo-nien laajentumiseen ja sileän lihaksen jänteyteen.
Lyhyesti esitettynä tämä uusi peptidi on saatu fraktioimalla rotan sydäneteisuutteita geelisuodatuskroma-tografiällä antamaan suuri- ja pienimolekyylipainoinen 10 jae, joista kummallakin on hyödyllinen natriureettinen vaikutus.
Pienimolekyylipainoinen jae erotettiin ja puhdistettiin useaksi pienimolekyylipainoiseksi natriureettiseksi sydäneteispeptidiksi, kuten tämän keksinnön keksijän edellä 15 mainituissa US-patenteissa on selostettu.
Suurimolekyylipainoinen jae (atriopeptigeeni-APG), joka saatiin edellä mainitulla rotan sydäneteisuutteiden geelisuodatuskromatografiällä, fraktioitiin tämän keksinnön mukaisesti isoelektrisellä fokusoinnilla ja käänteisfaasi-20 HPLC:lla osittain puhdistetun APG:n saamiseksi. Osittain puhdistetun suurimolekyylipainoisen jakeen syaanibromidi-uutteiden puhdistamisesta oli tuloksena yksinkertaisen biologisesti aktiivisen syaanibromidipilkkoutumispeptidin eristäminen, jossa peptidissä on 93 aminohappoa, jotka 25 ovat aminohapot 19 - 111 edellä mainitusta APG:stä. Näiden peptidien sekvenssianalyysit yhdessä viimeaikaisten selostusten kanssa keskimolekyylipainoisten sydäneteispeptidien sekvenssianalyyseistä [Thibault et ai., FEBS Letters 167 (1984), ss. 352 - 356; ja Kangawa et ai., Biochem. Biophys. 30 Res. Commun. 119 (1984), ss. 933 - 940] antavat edellä mainitun 111 tähteen APG:n täydellisen primäärisen rakenteen.
6 79119 Tässä seuraa keksinnön edullisten suoritusmuotojen kuvaus yksityiskohtaisesti.
Geelisuodatuskromatografiällä on rotan sydäneteis-uutteiden natriureettista ja diureettista aktiivisuutta 5 havaittu suurimolekyylipainoisissa (20 000 - 30 000) ja pienimolekyylipainoisissa (alle 10 000) jakeissa, joilla on myös sileän lihaksen jännitystä laukaiseva vaikutus in vitro (1). Trypsiinin osittaisproteolyysin vaikutuksen perusteella pääteltiin, että suurimolekyylipainoinen jae 10 on pienimolekyylipainoisen jakeen prekursori. Suurimolekyy-lipainoisen jakeen trypsiinikäsittely lisäsi merkittävästi spasmolyyttistä vaikutusta. Aktiiviset tuotteet, jotka kulkevat yhdessä pienimolekyylipainoisen jakeen kanssa geelisuodatuksessa (2), ovat atriopeptiinejä I, II ja III 15 (3) käänteisfaasi-HPLC:n mukaan. Siten suurimolekyylipai- noisen jakeen aktiiviset komponentit on nimetty atriopep-tigeeneiksi (APG), atriopeptiinien prekursoreiksi (AP), pienimolekyylipainoisiksi bioaktiivisiksi sydäneteispep-tideiksi. Nämä atriopeptiinit käsittävät seuraavat osasek-20 venssit täydestä 111 aminohapon atriopeptigeenistä, kuten on selostettu keksijän edellä mainituissa US-patenteissa: AP 1 = aminohapot 88 - 108, AP II aminohapot 88 - 119, ja 25 AP III = aminohapot 88 - 111
Suurimolekyylipainoisten sydäneteispeptidien ja niiden johdannaisten puhdistuksessa suoritettiin jokaisen jakeen sileälihasbioanalyysi aktivoimisen jälkeen osit-30 täisellä trypsiiniproteolyysillä (1, 2). Aktiiviset jakeet sisältävät pienimolekyylipainoisten atriopeptiinien sekvenssin (3). Ensimmäisenä vaiheena suurimolekyylipainoisen jakeen (saatu G-75 Sephade^-kromatograf iällä) puhdistuksessa oli isoelektrinen fokusointi, joka osoitti jakeen 35 olevan bioaktiivisten lajien seos (näennäiset isoelektriset 7 79119 pisteet pH-arvoissa 4,91, 5,01, 5,17, 5,34 ja 6,03). Bioaktiivisten lajien pääosa (pH välillä 4,6 - 5,4) saatettiin, amfolyyttien ja sakkaroosin poistamisen jälkeen, käänteisfaasi-HPLCraan. Tyypillinen kromatogrammi osoitti 5 kasautuneiden bioaktiivisten peptidien moniaineista seosta 31 ja 34 % asetonitriilillä. Näistä yksi vallitseva komponentti oli riittävän puhdas geelianalyysin mukaan (näennäinen molekyylipaino 17 000) ja se valittiin atriopep-tigeeniksi lisäpuhdistamista ja luonnehdintaa varten.
10 Ottaen huomioon atriopeptigeenien monimutkaisuus verrattuna niistä johdettujen antriopeptiinien ainoaan sekvenssiin, pääteltiin, että atriopeptigeenit voivat vuorostaan olla jonkun suuremman peptidin johdannaisia. Näin ollen tutkittiin kemiallisen pilkkoutumisen vaikutuk-15 set. Valittiin syaanibromidipilkkoutuminen, mikä johtuu metiotiinin puuttumisesta pienimolekyylipainoisen atrio-peptiinin sekvenssistä (5). Syaanibromidipilkkoutuminen tapahtuu atriopeptigeenin täyden 111 aminohapon sekvenssin asemassa 18 olevan metioniinin kohdalla, jolloin saadaan 20 suurimolekyylipainoinen 93 aminohappoa käsittävä peptidi- fragmentti. Aloitusvaihe suurimolekyylipainoisen kokonais-jakeen syaanibromidiuutteen fraktioinnissa antoi bioaktiivisen aineksen (löytyi 30 - 31 % asetonitriilillä), joka puhdistettiin käänteisfaasi-HPLC:llä antamaan HPLCrn mukai-25 sesti yksi ainoa komponentti, jonka näennäinen molekyyli-paino oli 9 500 geelielektroforeesilla.
Sekvenssitiedot kummallekin peptidille esitetään seuraavassa. Näiden peptidien sekvenssien limittäminen Thibault'in et ai., FEBS Letters 167 (1984), ss. 352- 30 356 ja Kangawa'n et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun.
119 (1984), ss. 933 - 940 sekvenssien kanssa antaa 111 tähteen atriopeptigeenin primäärisen rakenteen. C-pääteana-lyysien tulokset ovat yhtäpitäviä tämän kanssa. APG:n karboksipeptidaasikäsittely poisti nopeasti Phe:n vapaut-35 tamatta havaittavaa Tyr:a tai Arg:a. Toisaalta syaanibro- 8 79119 midipilkkoutumispeptidin samanlainen käsittely vapautti nopeasti Tyr:n, Arg:n ja Phe:n (taulukko I), osoittaen siten, että tämä valmiste koostuu kolmesta peptidistä, joilla on samat sekvenssit, jotka päättyvät Tyrissä, 5 Argissa ja Pheissä.
Tämä 111 aminohappotähteen sekvenssi yhdistää C-päätteellään pienimolekyylipainoiset peptidit, jotka on äskettäin selostettu (alleviivattuina seuraavassa sekvenssissä) yhdessä parin emäksisen aminohappotähteen kanssa 10 (tässä tapauksessa Arg-Arg), jotka tyypillisesti muodostavat pilkkoutumiskohdan erittyneiden peptidien ja proteiinien erilaisissa prekursoreissa.
9 79119 5 10 15
Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- A
20 20 30
Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp~Glu-Ala- A
Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- B
35 40 45
Gly-Ala-Ala-Leu A
Gly-Ala-Ala-Leu-Ser-Ser-Leu-Ser-Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- B
Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- C
50 55
Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu- B
Glu-Va1-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu-Gly-Arg-Gly- C
65 70 75
Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- C
Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- D
80 85 90
Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- C
... Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- D
95 100
Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp C
Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Glv- D
HO
Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-COOH D
10 791 1 9
Edellisessä 111 aminohapon atriopeptigeenin täydellinen primäärinen rakenne johdettiin: A:sta, atriopeptigeenin 34 ensimmäisen tähteen aminohapposekvenssistä, 5 B:stä, syaanibromidipilkkoutumispeptidin 39 ensimmäisen tähteen aminohapposekvenssistä, C:stä, "natriureettisen sydäneteistekijän välituote Mr -muodon" aminohapposekvenssistä (11), ja D:stä, "beeta-rotan natriureettisen sydäneteispolypeptidin" 10 täydellisestä aminohapposekvenssistä (12).
Taulukko I
Syaanibromidipilkkoutumispeptidin karboksyylipääte-15 sekvenssin analyysi
Aminohappo- pmoolia tuotetta tähde 20 s 2 min 10 min 60 min 20 Tyr 10 18 45 62
Arg 23 26 55 74
Phe 26 27 65 89 25 Seuraava esimerkki kuvaa suurimolekyylipainoisen (20 000 - 30 000) jakeen edellä esitetyn komponentin (111 aminohappoa) ja tästä jakeesta johdetun syaanibromidipep-tidifragmentin (93 aminohappoa) puhdistamista ja osittais-luonnehdintaa ja lisäksi kuvataan natriureettista, diureet-30 tista ja verisuonia laajentavaa vaikutusta.
Esimerkki
Atriopeptigeenin valmistus
Valmistettiin uute 1200 rotan sydäneteisistä ja kromatografoitiin G-75 Sephadei^:llä yleisellä menetelmäl-35 lä, kuten edellä selostettiin (3).
n 79119
Suurimolekyylipainoinen jae lyofilisoitiin, liuotettiin pH:ltaan 4-6 Ampholind^-kantaja-amfolyytteihin (LBK Instruments Inc., Rockville, Maryland) ja elektrofokusoi-tiin 110 ml:n sakkaroositiheysgradienttipylväässä (LBK) 5 1000 V:lla 40 tuntia (4). Pylväs tyhjennettiin sitten nopeudella 48 ml/h ja kerättiin 2 ml:n jakeita. pH-määri-tyksen jälkeen py1väsjakeiden tasaosien (50μ1) pH säädettiin arvoon 8 lisäämällä 450 μΐ 0,1 M tris-puskuria (pH 8,4) ja inkuboitiin trypsiinin kanssa (Sigma Chemical Co., 10 St. Louis, Missouri; 1 yksikkö/ml) 1 tunti 22°C:ssa. Nämä preparaatit analysoitiin kananpojan peräsuolen jännityksen laukaisuaktiivisuuden suhteen yleisellä menetelmällä, kuten aikaisemmin on selostettu (1, 2). Yhdistetyt pylväsjakeet (pH 4,5 - 5,4), jotka sisältävät bioaktiivisuuden pääosan 15 (n. 30 ml), kromatografoitiin G-50 Sephadea^:llä (80 x 2,7 cm) 0,5 M etikkahapossa amfolyyttien ja sakkaroosin poistamiseksi. Pakkaskuivaamisen jälkeen tämä aines saatettiin käänteisfaasi-HPLC:aan käyttäen Brownlee RP-300 Aquapordt-pylvästä ja aikaisemmin selostettua liuotinsys-20 teemiä (3). Gradientti käsitti (a) 0 - 24 % A 8,8 minuuttia, (b) 24 - 28 % A 25 minuuttia, (c) 28 - 36 % A 100 minuuttia. HPLC-pylväsjakeiden tasaosia (50μ1) kuivattiin tyhjössä, koottiin 500 pl:aan 0,1 M tris, pH 8, trypsinoi-tiin ja bioanalysoitiin kuten edellä.
25 Syaanibromidipeptidin valmistus suurimolekyylipai- noisesta jakeesta
Lyofilisoitu suurimolekyylipainoinen jae, joka oli saatu kromatografiällä G-75 Sephadeji® : 11a 600 rotan sydämen eteisten (1, 3) uutteesta liuotettuna 10 ml:aan 70-%:ista 30 muurahaishappoa, lisättiin 500 mg:aan syaanibromidia (Eastman Organic Chemicals, Rochester, N.Y.) lasitulppaputkesse (5). 16 tunnin kuluttua 22°C:ssa lisättiin 90 ml vettä ja liuos lyofilisoitiin. Jäännös saatettiin käänteisfaasi-HPLC:aan käyttäen edellä selostettua systeemiä, käyttäen 35 (a) 0 - 27,2 % A 10 minuuttia, mitä seurasi (b) 27,2 - 32 % i2 791 1 9 A 60 minuuttia. Bioaktiiviset jakeet, jotka saatiin 29,6- 31,2 %:lla A, haihdutettiin tyhjössä kuiviin ja puhdistettiin toisen pöytäkirjan mukaisesti käyttäen liuottimen A' (0,l-%:inen trifluorietikkahappo propanoli-l:ssä) ja liuot-5 timen B (0,l-%:inen trifluorietikkahappo vedessä) seosta nopeudella 0,67 ml/min, käsittäen a) 0 - 15 % A’ 5 minuuttia, mitä seurasi b) 15 - 24 % A' 90 minuuttia. Bioaktiiviset jakeet 22 - 22,5 %:lla A') haihdutettiin tyhjössä kuiviin ja saatettiin sitten kolmannen pöytäkirjan mukai-10 seen prosessiin käyttäen liuottimia A" (0,085-%:ista fos-forihappoa propanoli-1:ssä) ja B" (0,085-%:ista fosforihap-poa vedessä) nopeudella 0,67 ml/min, käsittäen 0 - 50 % A", 50 minuuttia. Bioaktiivinen tuote (saatu 32,1 %:lla A") vietiin sitten HPLC:n läpi uudelleen kahdesti käyttäen 15 toista edellisistä pöytäkirjoista, jolloin lopuksi saatiin 110 pg (proteiinia) yhtä ainoata bioaktiivista komponenttia (havaittu 215 nm:ssä) 22,1 %:lla A’.
Peptidien analyysi
Aminohappoanalyysi suoritettiin hydrolysoimalla 1 20 nmooli peptidiä 6-n HCl:ssä 22 tunnin aikana 110°C:ssa. Hydrolysaatti lyofilisoitiin ja saatettiin Waters-aminohap-po-analyysisysteemiin käyttäen o-ftaalialdehydi-esikolonni-derivitisaatiota (6), mitä seurasi käänteisfaasi-HPLC.
Peptidisekvenssointi - N-päätesekvenssointi suori-25 tettiin 2-4 moolilla peptidiä peräkkäisellä Edman-degra-: daatiolla käyttäen Applied Biosystems model 470A-kaasufaa-
sisekvenssoijaa (7) havaiten fenyylitiohydantoiinijohdannaiset HPLC:llä (8). Keskimääräiset toistuvat saannot ylittivät 93 %. C-päätesekvenssointi suoritettiin lisäämäl-30 lä karboksipeptidaasi Y:tä (2pg, 20 μΐ, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, USA) 1-2 nmooliin peptidiä liuotettuna 280 pl:aan 50 nM natriumasetaattipuskuria, pH
5,5. Väliajoin lisättiin 50 μ1:η tasaosia 25 pl:aan l-%:ista trifluorietikkahappoa (9) ja vapautuneet aminoha-35 pot määritettiin aminohappoanalyysillä (kuten edellä).
i3 791 1 9
Geelianalyysi - Peptidien (1 - 2 pg) elektroforeesi suoritettiin 15-%:isella polyakryyliamidigeelillä (0,4 % bis-akryyliamidia) Laemmli'n mukaisesti (10). Geeliä värjättiin 0,8-%:isella hopeanitraatilla 20 minuuttia, pestiin 5 ja kehitettiin liuoksella, jossa oli 0,005 % sitruunahappoa ja 0,2 % formaldehydiä.
Yhdisteiden terapeuttinen vaikutus
Syaanibromidi-suurimolekyylipainoista rotan sydän-eteispeptidiä, joka oli puhdistettu kuten edellä esimerkis-10 sä selostettiin, testattiin natriureettisen aktiivisuuden suhteen koirissa.
Suurimolekyylipainoista peptidiä annettiin ruiskeena joko yksinään tai trypsiinikäsittelyn jälkeen. Trypsiini-inkubointi (1 yksikkö/ml) suoritettiin 60 minuutissa huo-15 neen lämpötilassa 100 pg:n kanssa puhdistettua syaanibro-midi-suurimolekyylipainoista peptidiä. Atriopeptiini I.*tä ja II:ta saatiin firmasta Peninsula Labs., San Carlos, Kalifornia, USA. Atriopeptiini III:a ja Ser-Leu-Arg-Arg-Atriopeptiinin III:a (Flynn et ai.-peptidi, Viite 13) 20 syntetisoitiin automaattisella peptidisynteesillä.
Sekarotuisia koiria (kumpaakin sukupuolta) nukutettiin laskimonsisäisesti pentobarbitaalinatriumilla (30 mg/kg). Suoritettiin kyljen avaus oikean munuaisen vat-sakalvontakaista paljastusta varten. Virtsanjohdin kanyloi-25 tiin PE160 (Clay Adams)-putkella, joka oli yhdistetty jakeen kerääjään virtsan talteenottamiseksi. Sähkömagneettinen virtausanturi (läpimitta 8 mm; Carolina Instruments) pantiin oikean munuaisvaltimon ympärille munuaisverivir-tauksen mittaamiseksi. 22 kaliiperin neula (liitetty PE50-30 putkeen ja ruiskuun) pantiin väliin munuaisvaltimoon virtausanturin yläpuolelle. Koira sai tiputuksena jatkuvasti suolaliuosta (0,9 % NaCl) nopeudella 1,3 ml/min. Virtsanäytteitä kerättiin 5 minuutin välein ja analysoitiin tilavuuden, natriumin, kaliumin ja osmoottisuuden suhteen.
i4 791 1 9
Peptidejä annettiin ruiskeena (valtimonsisäisesti munuaisvaltimoon) 30 minuutin välein.
Tulokset
Suurimolekyylipainoinen (syaanibromidi)peptidi 5 aiheutti väkevyydestä riippuvan diureesin, joka ei merkitsevästi muuttunut trypsinoinnilla. Kynnysvaste (50 %:n lisäys virtsan tilavuudessa) saavutettiin 0,3 nmoolilla, kun taas 450 %:n lisäys virtsavirtauksessa saavutettiin 3 nmoolilla. Vertailu peptidimäärään, joka tarvittiin aikaan-10 saamaan 200 %:n lisäys virtsan tilavuuteen, osoittaa, että Ser-Leu-Arg-Arg-APIII vaatii 0,3 nmoolia, suurimolekyylipainoinen + trypsiini vaatii 0,5 nmoolia, suurimolekyylipainoinen yksinään 0,7 nmoolia, atriopeptiini II ja III vaativat 10 nmoolia; ja 30 nmoolia antiopeptiiniä I lisäsi 15 virtsatilavuutta ainoastaan 50 %:lla. Tehokkuuden arvojärjestys laajentamiselle vertaamalla annosta, joka tarvitaan aikaansaamaan 20 ml/min lisäys munuaisverivirtaukseen, on seuraava: Ser-Leu-Arg-Arg-APIII vaatii yhden nmoolin, syaanibromidi-suurimolekyylipainoinen peptidi (trypsiini-20 esikäsittelyllä tai ilman sitä) vaatii 2 nmolia, atriopeptiini III vaatii 8 nmoolia, atriopeptiini II vaatii 17 nmoolia; kun taas 30 nmoolia atriopeptiini l:tä aikaansai vain 6 ml/min muutoksen munuaisverivirrassa. Jokaista peptidiä testattiin 3-5 eri koirassa.
25 Yhteenvetona suurimolekyylipainoisen atriopeptigee- nin puhdistetun syaanibromidifragmentin suora injektointi aikaansai voimakkaan diureetin, joka on erotettavissa tehokkaimmilla pienimolekyylipainoisilla peptideillä aikaansaadusta. Tämä heijastaa peptidin silmänräpäyksellistä 30 muuttumista munuaisissa tai munuaisten suoraa ehyen peptidin tunnistamista. Erilaisuus peptidien tehokkuuden arvojärjestyksessä munuaisverisuonien laajentumisena natri-ureesia vastaan johdattaa mieleen, että nämä vasteet ovat erillisten reseptorien välittämiä. Pääasiallisesti saman-35 lainen diureesi saatiin, kun osittain puhdistettua 111 1R 79119 ίο aminohapon atriopeptigeeniä (ennen syaanibromidipilkkoutu-mista) testattiin koirissa.
Seuraavat kirjallisuusviitteet, jotka on mainittu edellä esitetyssä keksinnön yksityiskohtaisessa selityk-5 sessä julkaistujen menetelmien esittämiseksi, esitetään tässä vertailua varten.
Kirjallisuusviitteet 1) Currie et ai., Science 221 (1983), ss. 71 -73 2) Currie et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. 81 (1984), ss.
10 1230 - 1233 3) Currie et ai., Science 223 (1984), ss. 67 - 69 4) Geller et ai., Biochem. J. 127 (1972), ss. 865 - 874 5) Gross and Witkop, J. Biol. Chem. 237 (1962), ss. 1856-1860 15 6) Hill et ai., Anal. Chem. 51 (1979), ss. 1338 - 1341 (?) 7) Hunkapiller et ai., Methods Enzymol. 91 (1983), ss.
399 - 413 8) Hunkapiller and Hood, Ibid., ss. 486 - 493 9) Hayashi, Methods Enzymol. 47 (1977), ss. 84 - 93 20 10) Laemmli, Nature 227 (1970), ss. 680 - 685 11) Thibault et ai., FEBS Letters 167 (1984), ss. 352 - 356 12) Kangawa et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun, 119 (1984), ss. 933 - 940 13) Flynn et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun 117 (1983), 25 ss. 859 - 865.
Claims (3)
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen peptidin, jolla on seuraava aminohapposekvenssi: 5 5 10 15 Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- 20 25 30 Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- 10 35 40 45 Gly-Ala-Ala-Leu-Ser-Ser-Leu-Ser-Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- 50 55 60 Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Lcu-Gly-Arg-Glv- 15 65 70 75 Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- 80 85 90 20 Arg-Ala-Leu-Leu-ALa-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- 95 100 105 Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly- 25 110 Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-COOH tai sen fragmentin, joka sisältää em. peptidin aminohappojen 19 - 111 sekvenssin, valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että 30 a) nisäkkään sydäneteisuutteita fraktioidaan an tamaan suuren molekyylipainon ja pienen molekyylipainon omaavat fraktiot, b) suuren molekyylipainon omaava fraktio fraktioidaan atriopeptigeenin, jolla on edellä esitetty 11 amino-35 hapon sekvenssi, saamiseksi, ja haluttaessa 17 791 1 9 c) atriopeptigeeni hajotetaan syaanibromidilla ja syaanibromidiuutteesta eristetään atriopeptigeenin fragmentti, joka sisältää aminohappojen 19 - 111 sekvenssin,
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että kohdan a) fraktiointi suoritetaan geelisuodatuksen avulla.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kohdan b) fraktiointi suoritetaan isoelektrisen fokusoinnin ja käänteisfaasi-HPLC:n 10 avulla. 18 791 1 9
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/607,064 US4508712A (en) | 1984-01-10 | 1984-05-04 | Atrial peptide |
US60706484 | 1984-05-04 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI850744A0 FI850744A0 (fi) | 1985-02-22 |
FI850744L FI850744L (fi) | 1985-11-05 |
FI79119B FI79119B (fi) | 1989-07-31 |
FI79119C true FI79119C (fi) | 1989-11-10 |
Family
ID=24430657
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI850744A FI79119C (fi) | 1984-05-04 | 1985-02-22 | Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt anvaendbar hjaertfoermakpeptid. |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4508712A (fi) |
EP (1) | EP0162032B1 (fi) |
JP (1) | JPH0615559B2 (fi) |
AT (1) | ATE68503T1 (fi) |
AU (1) | AU569776B2 (fi) |
CA (1) | CA1244407A (fi) |
DE (1) | DE3584388D1 (fi) |
DK (1) | DK163930C (fi) |
FI (1) | FI79119C (fi) |
GR (1) | GR850474B (fi) |
IE (1) | IE57880B1 (fi) |
IL (1) | IL74426A (fi) |
NO (1) | NO167295C (fi) |
ZA (1) | ZA851376B (fi) |
Families Citing this family (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4761469A (en) * | 1982-02-22 | 1988-08-02 | Queen's University At Kingston | Isolation, purification and sequence determination of cardionatrins |
CA1241646A (en) * | 1982-02-22 | 1988-09-06 | Adolfo J. De Bold | Atrial natriuretic factor |
AU572173B2 (en) * | 1983-08-29 | 1988-05-05 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal | Natriuretic factors |
JPS60136596A (ja) * | 1983-12-26 | 1985-07-20 | Suntory Ltd | ペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
US4952561A (en) * | 1984-02-07 | 1990-08-28 | Merck & Co., Inc. | Cardiac atrial peptides |
JPH0794473B2 (ja) * | 1984-03-02 | 1995-10-11 | サントリー株式会社 | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
US4618600A (en) * | 1984-04-19 | 1986-10-21 | Biotechnology Research Associates, J.V. | Novel polypeptide diuretic/vasodilators |
WO1985004872A1 (en) * | 1984-04-24 | 1985-11-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Atrial peptide analogs |
NZ212291A (en) * | 1984-06-08 | 1991-10-25 | Suntory Ltd | Peptide from human atrium cordis having diuretic action, dna coding therefor and pharmaceutical compositions thereof |
US4670540A (en) * | 1984-08-29 | 1987-06-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Novel peptide |
US4757048A (en) * | 1985-11-05 | 1988-07-12 | Biotechnology Research Associates J.V. | Synthetic analogs of atrial natriuretic peptides |
EP0223143A3 (en) * | 1985-11-05 | 1989-04-12 | California Biotechnology, Inc. | Analogs of atrial natriuretic peptides |
US4716147A (en) * | 1986-03-27 | 1987-12-29 | Monsanto Company | Synthetic airial peptides |
US4721704A (en) * | 1986-05-09 | 1988-01-26 | Peninsula Laboratories, Inc. | Potent synthetic atrial peptide analogs |
US5159061A (en) * | 1986-09-29 | 1992-10-27 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Atrial natriuretic peptide derivative |
US4804650A (en) * | 1986-10-28 | 1989-02-14 | Biotechnology Research Associates, J.V. | Analogs of atrial natriuretic peptides |
US5500230A (en) * | 1987-01-23 | 1996-03-19 | The General Hospital Corporation | Method for treatment of glaucoma with nitrogen containing guanylate cyclase activators |
CA1319099C (en) * | 1987-01-23 | 1993-06-15 | James A. Nathanson | Atriopeptins, guanylate cyclase activators, and phosphodiesterase inhibitors as treatment for glaucoma, hydrocephalus and cerebral edema (cranial fluid volume dysfunction) |
CA1337400C (en) * | 1987-06-08 | 1995-10-24 | Norma G. Delaney | Inhibitors of neutral endopeptidase |
DE3737917A1 (de) * | 1987-11-07 | 1989-05-18 | Bissendorf Peptide Gmbh | Phosphorylierte derivate von cardiodilatin/anf-peptiden |
US5461142A (en) * | 1987-11-07 | 1995-10-24 | Pharma Bissendorf Peptide Gmbh | Phosphorylated derivatives of cardiodilatin/ANF peptides |
US5047397A (en) * | 1988-08-26 | 1991-09-10 | California Biotechnology Inc. | Linear analogs of atrial natriuretic peptides |
US5114923A (en) * | 1988-05-31 | 1992-05-19 | California Biotechnology Inc. | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
CA1339210C (en) | 1988-05-31 | 1997-08-05 | John Lewicki | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
CA2642537C (en) | 2006-02-14 | 2013-04-09 | Calpis Co., Ltd. | Vasodilator |
TWI418359B (zh) * | 2006-02-14 | 2013-12-11 | Calpis Co Ltd | 動脈硬化預防劑,血管內膜增厚抑制劑,血管內皮功能改善劑及功能性食品 |
US20120277155A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-11-01 | Medtronic, Inc. | Therapy for kidney disease and/or heart failure |
US20130244937A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-09-19 | Nile Therapeutics, Inc. | Chimeric natriuretic peptide compositions and methods of preparation |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1985004872A1 (en) * | 1984-04-24 | 1985-11-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Atrial peptide analogs |
NZ212291A (en) * | 1984-06-08 | 1991-10-25 | Suntory Ltd | Peptide from human atrium cordis having diuretic action, dna coding therefor and pharmaceutical compositions thereof |
-
1984
- 1984-05-04 US US06/607,064 patent/US4508712A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-02-22 AU AU39073/85A patent/AU569776B2/en not_active Ceased
- 1985-02-22 DE DE8585870029T patent/DE3584388D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-22 CA CA000475001A patent/CA1244407A/en not_active Expired
- 1985-02-22 GR GR850474A patent/GR850474B/el unknown
- 1985-02-22 ZA ZA851376A patent/ZA851376B/xx unknown
- 1985-02-22 NO NO850709A patent/NO167295C/no unknown
- 1985-02-22 AT AT85870029T patent/ATE68503T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 FI FI850744A patent/FI79119C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 JP JP60034281A patent/JPH0615559B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-22 IL IL74426A patent/IL74426A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 IE IE436/85A patent/IE57880B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 EP EP85870029A patent/EP0162032B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-22 DK DK081685A patent/DK163930C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI79119B (fi) | 1989-07-31 |
US4508712A (en) | 1985-04-02 |
EP0162032A2 (en) | 1985-11-21 |
AU569776B2 (en) | 1988-02-18 |
IE57880B1 (en) | 1993-05-05 |
NO850709L (no) | 1985-11-05 |
IL74426A0 (en) | 1985-05-31 |
EP0162032B1 (en) | 1991-10-16 |
DK81685A (da) | 1985-11-05 |
IL74426A (en) | 1989-09-10 |
JPS6127924A (ja) | 1986-02-07 |
DK81685D0 (da) | 1985-02-22 |
DK163930B (da) | 1992-04-21 |
ATE68503T1 (de) | 1991-11-15 |
NO167295C (no) | 1991-10-23 |
DE3584388D1 (de) | 1991-11-21 |
EP0162032A3 (en) | 1988-03-30 |
AU3907385A (en) | 1985-11-07 |
FI850744A0 (fi) | 1985-02-22 |
DK163930C (da) | 1992-09-14 |
ZA851376B (en) | 1986-09-24 |
GR850474B (fi) | 1985-05-10 |
IE850436L (en) | 1985-11-04 |
CA1244407A (en) | 1988-11-08 |
FI850744L (fi) | 1985-11-05 |
JPH0615559B2 (ja) | 1994-03-02 |
NO167295B (no) | 1991-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI79119C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt anvaendbar hjaertfoermakpeptid. | |
US4496544A (en) | Atrial Peptides | |
JP2809533B2 (ja) | Cnp類似体ペプチド | |
FI79854B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett laekemedelspreparat som innehaoller ett insulinderivat. | |
DE69615838T2 (de) | Cyclische wirkstoff-vorläufer verbindungen von peptiden und peptid-nukleicsäuren mit verbesserter metabolischer stabilität und zellmembran permeabilität | |
KR100658961B1 (ko) | 공유적으로 가교결합된 인슐린 이량체, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 진단 키트, 및 이의 제조방법 | |
WO1990001940A1 (en) | Atrial natriuretic peptide clearance inhibitors | |
Hetru et al. | Isolation and structural characterization of an insulin‐related molecule, a predominant neuropeptide from Locusta migratoria | |
CA1301650C (en) | Method of enhancing the bioactivity of atrial peptides | |
Gelher et al. | The sequence of an atriopeptigen: a precursor of the bioactive atrial peptides | |
US4557864A (en) | Atrial peptides | |
CH637111A5 (fr) | Composes polypeptidiques a activite thymique ou antagoniste et leurs procedes de synthese. | |
AU661003B2 (en) | Hexapeptide | |
CA2072253A1 (en) | Anti-inflammatory peptides and treatment to inhibit vascular leakage in injured tissues | |
US5095004A (en) | Fluorine containing atrial natriuretic peptides | |
JPH07316195A (ja) | 新規なPTHrP関連ペプチド及びその用途 | |
RU2078769C1 (ru) | Пептидный фрагмент, обладающий биологической активностью инсулина | |
US5376635A (en) | Fluorine containing atrial natriuretic peptides | |
Weitzel et al. | Structure and activity of insulin, XIII. Specificity of the arginine-guanidino group in biologically active tetrapeptides of the insulin sequence B 22-25 (Arg-Gly-Phe-Phe) | |
RU2110275C1 (ru) | Способ получения пептида, обладающего анаболической активностью, стимулирующего увеличение массы тела, развитие эпидермального слоя и роста волосяного покрова | |
FI68245C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva polypeptidderivat eller syraadditionssalter daerav | |
JPH0374400A (ja) | 新規なペプチドならびにこれを有効成分とする利尿剤および降圧剤 | |
JPH04321699A (ja) | 新規な利尿ペプチド | |
JPH04128299A (ja) | 新規なペプチド | |
JPH07278191A (ja) | 新規ペプチドもしくは蛋白質及びそれを探索する方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: WASHINGTON UNIVERSITY |