FI77941C - REAGENTS FOER BESTAEMNING AV GLUKOS, KOLESTEROL, URINSYRA OCH HEMOGLOBIN. - Google Patents
REAGENTS FOER BESTAEMNING AV GLUKOS, KOLESTEROL, URINSYRA OCH HEMOGLOBIN. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77941C FI77941C FI843428A FI843428A FI77941C FI 77941 C FI77941 C FI 77941C FI 843428 A FI843428 A FI 843428A FI 843428 A FI843428 A FI 843428A FI 77941 C FI77941 C FI 77941C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mmol
- glucose
- reagent
- cholesterol
- hemoglobin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/50—Phenols; Naphthols; Catechols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
Description
7794177941
Reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksiReagent for the determination of glucose, cholesterol, uric acid and hemoglobin
Keksinnön kohteena on uusi reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi, etenkin biologisissa kokeissa.The invention relates to a new reagent for the determination of glucose, cholesterol, uric acid and hemoglobin, in particular in biological experiments.
Glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin osoittamiseksi ja määrittämiseksi kvantitatiivisesti tunnetaan useita menetelmiä. Yksinkertaisen suoritettavuuden ja halpuuden johdosta ja mittausteknisistä syistä käytetään laajimmin kemialliseen värireaktioon perustuvia menetelmiä.Several methods are known for the detection and quantification of glucose, cholesterol, uric acid and hemoglobin. Due to their simple performance and cheapness, and for technical reasons of measurement, methods based on chemical color reaction are the most widely used.
Yllä olevien aineiden mittaamiseksi käytetään yleensä niiden värireaktiota 1-fenyyli-2,3-dimetyyli-3-amino-pyratsolin-5-onin (edelleen: 4-aminofenatsoniksi nimitetty), fenolin, fenoli johdannaisten ja salisyylihappojohdannaisten kanssa. Fenoli-4-aminofenatsonin kanssa tapahtuvaa reaktiota käytti P. Trinder (Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969)) ensimmäisen kerran verensokerin määrittämiseksi. Tämän menetelmän lääketieteellinen tärkeys on niin suuri, että tähän tarkoitukseen on suunniteltu lukuisia samankaltaisia menetelmiä.To measure the above substances, their color reaction with 1-phenyl-2,3-dimethyl-3-aminopyrazolin-5-one (hereinafter: referred to as 4-aminophenazone), phenol, phenol derivatives and salicylic acid derivatives is generally used. The reaction with phenol-4-aminophenazone was first used by P. Trinder (Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969)) to determine blood sugar. The medical importance of this method is so great that numerous similar methods have been designed for this purpose.
Näiden menetelmien yleisenä haittana on se, että mittausomi-naiskäyrä ei ole lineaarinen ja muodostunut väri ei ole riittävän stabiili tai vastaavasti se on valonherkkä (ks. siteeratun artikkelin taulukko 1 ja esillä olevan patentti-.. hakemuksen taulukko 3)·A common disadvantage of these methods is that the measurement characteristic curve is not linear and the color formed is not sufficiently stable or, correspondingly, light-sensitive (see Table 1 of the cited article and Table 3 of the present patent application).
Keksinnön tehtävänä on saada aikaan uusi, tunnettujen menetelmien haitat eliminoiva järjestelmä.The object of the invention is to provide a new system which eliminates the disadvantages of the known methods.
Keksintö perustuu siihen yllättävään tietoon, että mikäli värillisen tuotteen muodostamiseen käytetään 4-aminofenat-sonia ja tymolia tapahtuu optimaalisissa olosuhteissa erinomainen, erittäin hyvin käyttökelpoinen (stabiili, ei-valon-herkkä, lineaarinen ominaiskäyrä) ja erittäin hyvän herkkyyden omaava fotometrinen reaktio.The invention is based on the surprising knowledge that if 4-aminophenate-Son and thymol are used to form a colored product, an optimal, very useful (stable, non-light-sensitive, linear characteristic) and very good sensitivity photometric reaction takes place under optimal conditions.
2 779412 77941
Keksinnön kohteena on reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi, edullisesti biologisissa kokeissa, joka reagenssi sisältää 4-aminofenat-sonia, sinänsä tunnettua puskuriliuosta, stabilointiainetta, detergenttiä ja mahdollisesti entsyymikatalysaattoria, jolle reagenssille on tunnusomaista se, että se sisältää reagens-sina tyraolia (para-isopropyyli-meta-kresolia).The invention relates to a reagent for the determination of glucose, cholesterol, uric acid and hemoglobin, preferably in biological experiments, which reagent contains 4-aminophenat-Son, a buffer solution known per se, a stabilizer, a detergent and optionally an enzyme catalyst characterized in that the reagent is characterized by (para-isopropyl-meta-cresol).
Keksinnön mukaisten reagenssien erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti tymoli liuotetaan alempaan alkoholiin - mieluummin etanoliin; muut kemialliset aineet liuotetaan tislattuun veteen ja alkoholinen ja vesipitoinen liuos sekoitetaan keskenään 1:4-suhteessa. Näin valmistettu reagenssi sisältää tymolia 2,5±0,2 moolia/l:n konsentraatiossa.According to a preferred embodiment of the reagents according to the invention, the thymol is dissolved in a lower alcohol - preferably ethanol; the other chemicals are dissolved in distilled water and the alcoholic and aqueous solutions are mixed together in a 1: 4 ratio. The reagent thus prepared contains thymol at a concentration of 2.5 ± 0.2 mol / l.
Muiden kemiallisten aineiden konsentraatio on reagenssissa seuraava:The concentration of other chemicals in the reagent is as follows:
Fosfaattipuskuria 0,08 ± 0,02 moolia/1 4-aminofenatsonia 0,8 ± 0,2 mmoolia/1Phosphate buffer 0.08 ± 0.02 mol / l 4-aminophenazone 0.8 ± 0.2 mmol / l
Natriumatsidia 9(Ö5 t 0,1 mmoolia/1Sodium azidia 9 (Ö5 t 0,1 mmol / l
Etanolia 330,0 ± 20 mmoolia/1Ethanol 330.0 ± 20 mmol / l
Keksinnön mukaista reagenssia käytetään seuraavasti: tymoli ja 4-aminofenatsoni saatetaan määritettävien aineiden (glukoosi, kolesteroli, virtsahappo) kanssa kosketuksiin sopivissa konsentraatioissa puskuroidussa väliaineessa. Siten muodostuu spesifisten entsymaattisten reaktioiden johdosta vetyperoksidia. Muodostuneesta vetyperoksidista vapautetaan peroksidaasin avulla kehittyvää happea, joka saa aikaan 4-(2'isopropyyli-5'-metyyli-11,4'-bentsokinoni-monoimino)-fenatsonin (so. värillisen tuotteen). Niiden aineiden kohdalla, jotka pystyvät katalysoimaan vetyperoksidin hajaantumista (esim. hemoglobiini), ei tarvita mitään täydentävää entsymaattista reaktiota ja reaktioseokseen lisätään vain vetyperoksidia, värinmuodostavaa 4-aminofenatsonia ja tymolia.The reagent according to the invention is used as follows: thymol and 4-aminophenazone are contacted with the substances to be determined (glucose, cholesterol, uric acid) in appropriate concentrations in a buffered medium. Thus, due to specific enzymatic reactions, hydrogen peroxide is formed. The hydrogen peroxide formed releases oxygen evolved by peroxidase to give 4- (2-isopropyl-5'-methyl-11,4'-benzoquinone monoimino) -phenazone (i.e., a colored product). For substances capable of catalyzing the decomposition of hydrogen peroxide (e.g. hemoglobin), no additional enzymatic reaction is required and only hydrogen peroxide, the color-forming 4-aminophenazone and thymol are added to the reaction mixture.
Keksinnön mukaisella uudella reagenssilla on useita etuja, jotka voidaan esittää seuraavasti tiivistettyinä: 3 77941 a) Värireaktio tapahtuu hyvin määritellyllä pH-alueella (pH = 7,0 - 8,0 - mieluummin 7,5).The novel reagent of the invention has several advantages, which can be summarized as follows: 3,77941 a) The color reaction takes place in a well-defined pH range (pH = 7.0 to 8.0 - preferably 7.5).
b) Muodostuneen värillisen tuotteen valon absorption maksimi on 465 - 480 nm:n aallonpituusalueella; tästä syystä on tarkoituksenmukaista suorittaa fotometriset mittaukset tällä alueella - etenkin 475 nm:ssä.b) The light absorption of the formed colored product has a maximum in the wavelength range of 465 to 480 nm; for this reason, it is appropriate to perform photometric measurements in this range - especially at 475 nm.
c) On erittäin tärkeää, että fotometrisesti osoitettava väri muodostuu suhteellisen nopeasti. Todettiin, että stabiili väri muodostuu huoneenlämpötilassa 25 minuutin kuluessa ja 37°C:ssa 15 minuutin kuluessa.c) It is very important that the photometrically detectable color is formed relatively quickly. A stable color was found to form at room temperature within 25 minutes and at 37 ° C within 15 minutes.
d) Optimaalisen pH-arvon säätämiseksi tulevat kysymykseen erilaiset puskuriaineet (kuten tris-fosfaatti, Na2HP0ij - KHgPOlj, K2HP0jj - KHgPOjj ja natriumboraatti - suolahappo ).d) Various buffering agents (such as tris-phosphate, Na2HP0ij - KHgPOlj, K2HP0jj - KHgPOjj and sodium borate - hydrochloric acid) are suitable for adjusting the optimal pH.
e) On onnistuttu määrittämään suotuisa tymolikonsentraa- . . tio tai vastaavasti sen liuotin. On tarkoituksenmu kaista liuottaa tymoli metanoliin, etanoliin tai isop-ropanoliin - etenkin etanoliin. Tymolikonsentraation optimointi on esitetty taulukossa 1; optimaalinen arvo V on 2,5 mmoolia/1. Mittaukset suoritetaan esitetyt kon- sentraatiot (11,10 ja 27,75 mmoolia) omaavissa glukoosi liuoksessa.(e) A favorable thymol concentration has been successfully determined. . or its solvent, respectively. It is expedient to dissolve the thymol in methanol, ethanol or isopropanol - especially ethanol. Optimization of the thymol concentration is shown in Table 1; the optimal value of V is 2.5 mmol / l. Measurements are performed in glucose solution at the indicated concentrations (11.10 and 27.75 mmol).
* 77941* 77941
Taulukko 1table 1
Tymoli mmoolia/1 1,330 2,000 2,500 3,000 4,000 5,000Thymol mmol / l 1,330 2,000 2,500 3,000 4,000 5,000
Ekstinktio 11.1 mmoolia/1 0,330 0,365 0,370 0,370 0,370 0,370Extinction 11.1 mmol / l 0.330 0.365 0.370 0.370 0.370 0.370
Ekstinktio 27.75 mmoolia/1 0,750 0,860 0,870 0,870 0,870 0,870 Nähdään, että molempien glukoosiliuosten tapauksessa korkein, ei enää kasvava ekstinktio (värinvoimakkuus) saadaan 2,5 mmoolia/l:n tymolikonsentraatiossa.Extinction 27.75 mmol / l 0.750 0.860 0.870 0.870 0.870 0.870 It is seen that for both glucose solutions, the highest, no longer increasing extinction (color intensity) is obtained at a thymol concentration of 2.5 mmol / l.
f) 4-aminofenatsonin konsentraation optimointi on esitetty taulukossa 2. Mittaukset suoritetaan myös tässä tapauksessa glukoosiliuoksella ja tymoliliuoksella, jonka konsentraatio on 2,5 mmoolia/1.f) The optimization of the concentration of 4-aminophenazone is shown in Table 2. In this case, too, the measurements are performed with a glucose solution and a thymol solution with a concentration of 2.5 mmol / l.
Taulukko 2 4-aminofenatsoni mmoolia/1 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000Table 2 4-Aminophenazone mmol / L 0.200 0.400 0.600 0.800 1,000
Ekstinktio 11.1 mmoolia/1 0,350 0,370 0,370 0,370 0,370Extinction 11.1 mmol / l 0.350 0.370 0.370 0.370 0.370
Ekstinktio 27.75 mmoolia/1 0,800 0,860 0,870 0,870 0,871 Tämän taulukon mukaisesti saadaan maksimaalinen, ei enää muuttuva ekstinktio 0,600 mmoolia/l:n konsentraa-tiossa. Varmuuden vuoksi pidetään 0,800 mmoolia/l:n konsentraatiota optimaalisena.Extinction 27.75 mmol / l 0.800 0.860 0.870 0.870 0.871 According to this table, a maximum, no longer variable extinction at a concentration of 0.600 mmol / l is obtained. For safety reasons, a concentration of 0.800 mmol / l is considered optimal.
5 77941 g) Glukoosin, kolesterolin ja virtsahapon mittaamiseksi tarvittava peroksidikonsentraatlo optimoidaan samoin (ks. taulukko 3). Optimaaliseksi konsentraatioksi on osoittautunut 15 E/ml:n konsentraatio. (1 E = 1 kansainvälinen yksikkö; määrä, joka katalysoi 1 mmoolia substraattia 1 minuutin kuluessa). Käytetty peroksi-daasi ei saa sisältää muita entsyymiepäpuhtauksia häiritsevissä konsentraatioissa.5 77941 g) The peroxide concentration required for the measurement of glucose, cholesterol and uric acid is optimized in the same way (see Table 3). A concentration of 15 U / ml has been shown to be the optimal concentration. (1 E = 1 international unit; amount catalyzing 1 mmol of substrate in 1 minute). The peroxidase used must not contain concentrations that interfere with other enzyme impurities.
Taulukko 3Table 3
Peroksidaasi- aktiviteetti 8E/ml 10E/ml 12E/ml UE/ml 15E/ml 17E/mlPeroxidase activity 8E / ml 10E / ml 12E / ml UE / ml 15E / ml 17E / ml
Ekstinktio 27,75 mmoolia/1 0,820 0,850 0,865 0,870 0,870 0,870Extinction 27.75 mmol / l 0.820 0.850 0.865 0.870 0.870 0.870
Yllä olevasta taulukosta nähdään, että optimaalinen glukoosin kanssa muodostuneen värin voimakkuus (ekstinktio) saavutetaan jo 14 E/ml:n entsyymiaktivi-teetissä; varmuuden vuoksi käytetään 15 E/ml:n aktiviteettiä.It can be seen from the table above that the optimal intensity (extinction) of the color formed with glucose is already reached at an enzyme activity of 14 U / ml; for safety, an activity of 15 U / ml is used.
h) Kolesterolin määrityksessä käytetään detergenttiä liu-kenevuuden parantamiseksi. Tätä tarkoitusta varten voidaan käyttää 9-lauryylieetteri-polydekanolia (Sigma, USA), Triton X-100:a (oktyylifenolipolyeteeni-glykolieetteri, LOBA, Itävalta) tai Brij 35:ä (polyok-sietyleenilauryylieetteri, BDH, Englanti).h) In the cholesterol determination, a detergent is used to improve the Liu hardness. For this purpose, 9-lauryl ether polydecanol (Sigma, USA), Triton X-100 (octylphenol polyethylene glycol ether, LOBA, Austria) or Brij 35 (polyoxyethylene lauryl ether, BDH, England) can be used.
Yllä olevien aineiden optimaalinen konsentraatioalue on 0,4 - 1,2$.The optimal concentration range for the above substances is $ 0.4 to $ 1.2.
Keksinnön mukaisten reagenssien käytännön soveltuvuutta havainnollistetaan seuraavilla menetelmillä.The practical applicability of the reagents of the invention is illustrated by the following methods.
6 77941 1. Kalibroinneilla saadut kokemukset6 77941 1. Lessons learned from calibrations
Glukoosin osoitettavuus ja kvantitatiivinen mitattavuus määritetään 2,775 - 33,300 mmoolia/l:n konsentraatioalueella.The detectability and quantitative measurability of glucose are determined over a concentration range of 2.775 to 33.300 mmol / l.
Tiedot on koottu yhteen osittain taulukossa 4 ja osittain kuvassa 1 (matemaattisen tulkinnan mukaan). Yllä olevista tiedoista nähdään, että mittausominaiskäyrä - määrätyllä alueella - on lineaarinen. Värireaktio tapahtuu täydellisesti ja glukoosi voidaan mitata erinomaisesti.The data are summarized partly in Table 4 and partly in Figure 1 (according to a mathematical interpretation). From the above data, it can be seen that the measurement characteristic curve - in a given range - is linear. The color reaction is complete and glucose can be measured excellently.
Taulukko 4Table 4
mmoolia/1 2,775 5,550 8,525 11,100 13,675 16,650 22,200 27,750 33,5Xmmol / l 2,775 5,550 8,525 11,100 13,675 16,650 22,200 27,750 33,5X
n 335 3 3 3333- y 0,0950 0,1833 0,2733 0,3685 0,4616 0,5500 0,7300 0,9135 10210· ϊ 0,0951 0,18600,27690,3679 0,4588 0,5497 0,7316 0,9135 1£953 a% -0,10 -1,45 +0,50 +0,10 +0,61 +0,05 -0,22 -0,02 +2,32 ?R = 246 695, Fl = 1,20746} /P.G.: 6; 16/ ?~ 0,10 ~~n 335 3 3 3333- y 0,0950 0,1833 0,2733 0,3685 0,4616 0,5500 0,7300 0,9135 10210 · ϊ 0,0951 0,18600,27690,3679 0,4588 0,5497 0.7316 0.9135 1 £ 953 a% -0.10 -1.45 +0.50 +0.10 +0.61 +0.05 -0.22 -0.02 +2.32? R = 246,695, F1 = 1.20746} / PG: 6; 16 /? ~ 0.10 ~~
Taulukossa 4 käytetään seuraavia lyhennyksiä: x = punnitun glukoosin konsentraatio n = rinnakkaisten mittausten määrä y = mitattujen ekstinktioiden keskimääräinen arvo 7 = kalibrointisuoran yhtälöstä lasketut ekstinktiot di = mitattujen ja .laskettujen ekstinktioiden välinen pro sentuaalinen erotus (laskettu = 100¾)The following abbreviations are used in Table 4: x = concentration of weighed glucose n = number of parallel measurements y = average value of the extinctions measured 7 = extinctions calculated from the equation of the calibration line di = percentage difference between the measured and calculated extinctions (calculated = 100¾)
Fr s regression koe = lineaarisuuden MF"-koe F.G. = lineaarisuuden vapausaste P = lineaarisuuden todennäköisyys; koska tämä arvo on suurempi kuin 10i, käyrä ei poikkea suorasta merkittävästi.Fr s regression test = linearity MF "test F.G. = degree of linearity freedom P = probability of linearity; since this value is greater than 10i, the curve does not deviate significantly from the line.
7 77941 2. Vertailumenetelmän kanssa suoritetulla vertai lulla saadut kokemukset7 77941 2. Lessons learned from comparisons with the reference method
Vertailumenetelmänä toimii kansainvälisesti tunnustettu Bo-ehringer Hexokinase UV-testi. Sokeripitoisena liuoksena käytetään tässä tapauksessa 45 verikoetta (ihmisiltä, ilman valintaa). Kuvasta 2 nähdään, että näiden kahden menetelmän mukaisesti saatujen tulosten välillä ei ole eroja, koska korrealaatiokerroin (r = +0,9971) tulee aivan lähelle teoreettista arvoa 1,000 ja regressiosuoran jyrkkyys poikkeaa teoreettisesti arvosta 1,000 vain 0,4¾.The internationally recognized Bo-ehringer Hexokinase UV test is used as a reference method. In this case, 45 blood tests (from humans, without selection) are used as the sugar-containing solution. It can be seen from Figure 2 that there are no differences between the results obtained according to the two methods, because the correlation coefficient (r = +0.9971) comes very close to the theoretical value of 1,000 and the steepness of the regression line theoretically deviates from the value of 1,000 by only 0.4¾.
3. Menetelmän herkkyys, toistettavuus ja vääristymä määritetään saatujen mittaustulosten perusteella. Nämä staattiset laskelmat 4vK>ttavat seuraav-at tulokse-t: herkkyys: ± 0,17 mmoolia/1 (glukoosin suhteen) tarkkuus: ± 0,09 mmoolia/1 (glukoosin suhteen) vääristymä: ± 0,35¾ (glukoosin suhteen).3. The sensitivity, repeatability and distortion of the method are determined on the basis of the measurement results obtained. These static calculations 4vK> give the following results: sensitivity: ± 0.17 mmol / l (for glucose) accuracy: ± 0.09 mmol / l (for glucose) distortion: ± 0.35¾ (for glucose).
Keksinnön mukaisella reagenssilla on yllä mainittujen lisäksi myös muita olennaisia etuja: reagenssi sopii toisaalta ihmisten ja eläinten biologisissa kokeissa (esim. veri, virtsa, neste) esiintyvän glukoosin, kolesterolin, virtsaha-pon tai vastaavasti hemoglobiinin (verenpuna) määrittämiseksi kvantitatiivisesti ja toisaalta glukoosipitoisuuden määrittämiseksi ihmisille tarkoitetuissa juomissa (esim. alko-holijuomat, mehut, virkistys juomat) tai vastaavasti muiden, glukoosi-, kolesteroli- tai virtsahappopitoisten liuosten mittaamiseksi.In addition to the above, the reagent according to the invention has other essential advantages: on the one hand, the reagent is suitable for quantifying glucose, cholesterol, uric acid or hemoglobin (blood red) in human and animal biological experiments (e.g. blood, urine, liquid) and glucose (eg alcoholic beverages, juices, recreational beverages) or other solutions containing glucose, cholesterol or uric acid, respectively.
On korostettava, että keksinnön mukainen reagenssi on selvästi parempi kuin tunnetut testit. Lukumääräisestä vertailusta nähdään, että keksinnön mukaisen testimenetelmän mukaisesti väri pysyy 240 minuuttia täysin muuttumattomana, sitä vastoin tunnettujen menetelmien mukaisesti voidaan lyhyen maksimivaiheen jälkeen (45 minuuttia) todeta yhtäjaksoisesti vähenevä värinvoimakkuus (kuvio 3)· 8 77941It should be emphasized that the reagent according to the invention is clearly superior to known tests. From a numerical comparison, it can be seen that according to the test method according to the invention the color remains completely unchanged for 240 minutes, whereas according to known methods a continuously decreasing color intensity can be observed after a short maximum step (45 minutes) · 8 77941
Keksinnön mukainen reagenssi ja sen käyttö esitetään seuraa-vissa esimerkeissä rajoittamatta suojan laajuutta näihin esimerkkeihin.The reagent of the invention and its use are set forth in the following examples without limiting the scope of protection to these examples.
Esimerkki 1Example 1
Glukoosin määritys veren seerumissa A-liuos: 0,1 moolia/l:n fosfaattipuskuri-liuokseen (pH = 7,5; Na2HP0ij*2H20 ja KHgPOjj) liuotetaan seuraavat aineet: glukoosidaasia: 12,5U/ml peroksidaasia: 18 U/ml 4-aminofenatsonia: 1,0 ramoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia 9öt:sessa etanolissa (tislatun veden kanssa).Determination of glucose in blood serum Solution A: The following substances are dissolved in 0.1 mol / l phosphate buffer solution (pH = 7.5; Na2HPO4 * 2H2O and KHgPO2): glucoseidase: 12.5U / ml peroxidase: 18 U / ml 4 -aminophenazone: 1.0 ramol / l sodium azide 12.3 mmol / l B solution: 12.5 mmol / l thymol in 9% ethanol (with distilled water).
Reagenssia valmistetaan niin, että A- ja B-liuos sekoitetaan keskenään 4:1-suhteessa.The reagent is prepared by mixing solutions A and B in a 4: 1 ratio.
Standardisointi suoritetaan 11,1 mmoolia/l:n glukoosiliuok-sella (liuotettuna kylmänä kyllästettyyn bentsoehappoon).The standardization is performed with an 11.1 mmol / l glucose solution (dissolved in cold saturated benzoic acid).
Määritys: Koeputkiin punnitaan kulloinkin 3,0 ml reagenssia, 0,02 ml standardia tai vastaavasti muihin koeputkiin 0,02 ml verenseerumia.Assay: Weigh 3,0 ml of reagent, 0,02 ml of standard or 0,02 ml of blood serum into other test tubes, respectively.
Aineet sekoitetaan ja niiden annetaan seistä (huoneenlämpö-tilassa 30 minuuttia tai 37°C:ssa 15 minuuttia). Viimeksi mainitussa tapauksessa verrataan 10-minuuttisen jäähdytyksen jälkeen muodostunutta väriä sokkokokeen kanssa fotometrises-ti (kyvettipaksuus 1 cm; aallonpituus 475 nm).The substances are mixed and allowed to stand (at room temperature for 30 minutes or at 37 ° C for 15 minutes). In the latter case, the color formed after cooling for 10 minutes is compared photometrically with a blank test (cuvette thickness 1 cm; wavelength 475 nm).
Veren seerumikonsentraatio (glukoosissa mmoolia/1) lasketaan seuraavan yhtälön mukaisesti = kokeen ekstinktio vakio ekstinktio xThe serum blood concentration (in mmol / l glucose) is calculated according to the following equation = experimental extinction constant extinction x
Menetelmä on 0 - 30 mmoolia/l:n alueella lineaarinen.The method is linear in the range of 0 to 30 mmol / l.
9 779419 77941
Esimerkki 2Example 2
Kolesterolin kokonaispitoisuuden määritys veren seerumissa A-liuos: Fosfaattipuskuriin (0,1 moolia/1; pH 7,5) liuotetaan seuraavat aineet: peroksidaasia 18 U/ml kolesteroliesteraasia 12,5 u'/ml kolesterolioksidaasia 6 u/ml 4-aminofenatsonia 1,0 mmoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 9-lauryylieetteriä 5,0 g/1 taiDetermination of total serum cholesterol solution Solution A: The following substances are dissolved in phosphate buffer (0.1 mol / l; pH 7.5): peroxidase 18 U / ml cholesterol esterase 12.5 u '/ ml cholesterol oxidase 6 u / ml 4-aminophenazone 1, 0 mmol / l sodium azide 12.3 mmol / l 9-lauryl ether 5.0 g / l or
Triton X-100:a 5 g/1 taiTriton X-100 5 g / l or
Brij-35:ä 5 g/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia (96t:sessa etanolissa).Brij-35 5 g / l B solution: 12.5 mmol / l thymol (in 96t ethanol).
Reagenssi valmistetaan niin, että liuokset A ja B sekoitetaan keskenään ennen käyttöä 4:1-suhteessa. Standardisointi suoritetaan etanoliin liuotetulla kolesterolistandardilla (5,2 mmoolia/1).The reagent is prepared by mixing solutions A and B together in a 4: 1 ratio before use. Standardization is performed with a cholesterol standard dissolved in ethanol (5.2 mmol / l).
Määritys: Kulloinkin reagenssin 2,0 ml:aa kohden lisätään 0,02 ml standardiliuosta tai vastaavasti seerumia. Seosta sekoitetaan ja sen annetaan seistä huoneenlämpötilassa 30 minuuttia tai 37°C:ssa 15 minuuttia. 10-minuuttisen jäähdytyksen jälkeen muodostunutta väriä verrataan fotometrisesti sokkokokeen kanssa (kyvettipaksuus 1 cm; aallonpituus 575 nm).Assay: In each case, add 0,02 ml of standard solution or serum, respectively, per 2,0 ml of reagent. The mixture is stirred and allowed to stand at room temperature for 30 minutes or at 37 ° C for 15 minutes. After cooling for 10 minutes, the color formed is compared photometrically with a blank test (cuvette thickness 1 cm; wavelength 575 nm).
Laskeminen;: Veren seerumin kolesterolikonsentraatio (mmoo-lia/l)= kokeen ekstinktio vakio ekstinktio X ’Calculation ;: Serum cholesterol concentration (mmol / l) = test extinction constant extinction X ’
Menetelmä on 0 - 13 mmoolia/l:n alueella lineaarinen.The method is linear in the range of 0 to 13 mmol / l.
10 7794110 77941
Esimerkki 3Example 3
Virtsahapon määritys veren seerumissa A-liuos: Fosfaattipuskurissa (0,1 moolia/1; pH 7,5) liuotetaan seuraavat aineet: peroksidaasia 18 U/ml urikaasia 6 U/ml 4-aminofenatsonia 1,0 mmoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia (96t:sessa etanolissa).Determination of uric acid in blood serum Solution A: The following substances are dissolved in phosphate buffer (0.1 mol / l; pH 7.5): peroxidase 18 U / ml uricase 6 U / ml 4-aminophenazone 1.0 mmol / l sodium azide 12.3 mmol / 1 B solution: 12.5 mmol / l thymol (in 96t ethanol).
Reagenssi valmistetaan niin, että liuokset A ja B sekoitetaan keskenään 4:1-suhteessa.The reagent is prepared by mixing solutions A and B in a 4: 1 ratio.
Standardisointi suoritetaan virtsahappostandardilla (595 moolia/1).Standardization is performed with a uric acid standard (595 mol / l).
Määritys: Kulloinkin reagenssin 0,2 ml:aa kohden lisätään 0,2 ml standardia tai vastaavasti seeruminäytettä. Seosta sekoitetaan ja sen annetaan seistä joko 60 minuuttia huoneenlämpötilassa tai 30 minuuttia 37°C:ssa. Muodostunutta väriä verrataan sokkokokeeseen fotometrisesti (kyvettipak-suus 1 cm; aallonpituus 475 nm).Assay: In each case, add 0,2 ml of standard or serum sample per 0,2 ml of reagent. The mixture is stirred and allowed to stand for either 60 minutes at room temperature or 30 minutes at 37 ° C. The color formed is compared with the blank experiment photometrically (cuvette thickness 1 cm; wavelength 475 nm).
Laskeminen: veren seerumin virtsahappokonsentraatio (ymoo-lia/1)= kokeen ekstinktio vakio ekstinktio xCalculation: blood serum uric acid concentration (ymool / l) = test extinction constant extinction x
Menetelmä on 0 - 900 ymoolia/l:n alueella lineaarinen.The method is linear in the range of 0 to 900 ymoles / l.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU305983A HU188953B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide |
| HU305983 | 1983-09-02 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI843428A0 FI843428A0 (en) | 1984-08-31 |
| FI843428A FI843428A (en) | 1985-03-03 |
| FI77941B FI77941B (en) | 1989-01-31 |
| FI77941C true FI77941C (en) | 1989-05-10 |
Family
ID=10962331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI843428A FI77941C (en) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | REAGENTS FOER BESTAEMNING AV GLUKOS, KOLESTEROL, URINSYRA OCH HEMOGLOBIN. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH669673A5 (en) |
| CS (1) | CS254978B2 (en) |
| DD (1) | DD232558A5 (en) |
| DE (1) | DE3432348A1 (en) |
| FI (1) | FI77941C (en) |
| HU (1) | HU188953B (en) |
| IN (1) | IN163164B (en) |
| PL (1) | PL141984B1 (en) |
| SU (1) | SU1505444A3 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0218083A1 (en) * | 1985-09-03 | 1987-04-15 | Abbott Laboratories | Stabilized cholesterol reagent and method for determining total cholesterol using the reagent |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU305983A patent/HU188953B/en not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-31 PL PL24942884A patent/PL141984B1/en unknown
- 1984-08-31 DD DD26685684A patent/DD232558A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 SU SU843786908A patent/SU1505444A3/en active
- 1984-08-31 FI FI843428A patent/FI77941C/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 CS CS846580A patent/CS254978B2/en unknown
- 1984-09-03 DE DE19843432348 patent/DE3432348A1/en not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN134/DEL/85A patent/IN163164B/en unknown
- 1985-05-08 CH CH198385A patent/CH669673A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL141984B1 (en) | 1987-09-30 |
| DE3432348A1 (en) | 1985-03-21 |
| IN163164B (en) | 1988-08-20 |
| PL249428A1 (en) | 1985-05-21 |
| FI843428A (en) | 1985-03-03 |
| CH669673A5 (en) | 1989-03-31 |
| HU188953B (en) | 1986-05-28 |
| CS658084A2 (en) | 1987-07-16 |
| FI843428A0 (en) | 1984-08-31 |
| DD232558A5 (en) | 1986-01-29 |
| FI77941B (en) | 1989-01-31 |
| SU1505444A3 (en) | 1989-08-30 |
| CS254978B2 (en) | 1988-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Martinez-Pérez et al. | A reagent less fluorescent sol–gel biosensor for uric acid detection in biological fluids | |
| US6242207B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| US5776719A (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| CA1157749A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| EP0918881B1 (en) | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound | |
| US8883439B2 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| JPS5948099A (en) | Glucose test composition for ascorbate resistant wide concentration region, test tool and method | |
| George et al. | Improved Ellman procedure for erythrocyte cholinesterase. | |
| CA2559908A1 (en) | Method of stabilizing oxidizable color-assuming reagent | |
| US4291121A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol | |
| Reljic et al. | New chromogen for assay of glucose in serum | |
| Trivedi et al. | New ultraviolet (340 nm) method for assay of uric acid in serum or plasma. | |
| FI77941C (en) | REAGENTS FOER BESTAEMNING AV GLUKOS, KOLESTEROL, URINSYRA OCH HEMOGLOBIN. | |
| US5866352A (en) | Kit for fructosamine determination | |
| US5776780A (en) | Method for quantitatively measuring white blood cells esterase activity in urine | |
| GB2049180A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid | |
| US6379915B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| Kayamori et al. | Enzymatic method for assaying uric acid in serum with a new tetrazolium salt produces water-soluble formazan dye | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| US6030802A (en) | Liquid reagent set for L-lactate determination | |
| JPH0687798B2 (en) | Method for measuring calcium in body fluids | |
| EP0240964B1 (en) | Reagent for the enzymatic determination of primary c1-c4 alcohols and related method | |
| AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| Felton et al. | Design of glucose analysis suitable for incorporation into a microprocessor controlled regulator of blood glucose in the newborn | |
| JPS6339599A (en) | Method for measuring peroxide quantity or activity of related substance exhibiting peroxydase reaction |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: REANAL FINOMVEGYSZERGYAR |