FI58404C - FOERFARANDE FOER VISUELLT PAOVISANDE AV ANTIKROPPAR I ETT VATTENHALTIGT PROV - Google Patents

Description

— - -·Ι r». KUULUTUSJULKAISU _ . . -, .- - - · Ι r ». ANNOUNCEMENT _. . -,.

V®* [*] P^UTLiCONINCSSKIUFT 58404 C Patentti ay Ennetty 12 01 1931 ^Patent ώo,hie la t —' (S1) Kv.lk3/hlfcC| 3 G 01 Ή 33/54 SUOMI —FINLAND (21) ***ttaMunm-r*tnt*takiitog 7515^2 (22) Hak«nl<pU«l—Anaeicninf^ag 27.05.75 (23) AlkuplM—GIW|h*t»«J«| 27.05.75 (41) Tulkit lulktouksl — Bllvlt affantllg 30.11.75V® * [*] P ^ UTLiCONINCSSKIUFT 58404 C Patent ay Prev 12 01 1931 ^ Patent ώo, hie la t - '(S1) Kv.lk3 / hlfcC | 3 G 01 Ή 33/54 ENGLISH —FINLAND (21) *** ttaMunm-r * tnt * takiitog 7515 ^ 2 (22) Hak «nl <pU« l — Anaeicninf ^ ag 27.05.75 (23) AlkuplM — GIW | h * t »« J «| 27.05.75 (41) Tulkit lulktouksl - Bllvlt affantllg 30.11.75

Patentti· Ja rekisterihallitut (44) NIhtlylWp*»» J. kuuLJullulam p*m.-Patent · And registered (44) NIhtlylWp * »» J. moonLullulam p * m.-

Patent- och registerttyrelsen Antöion uthfd oeh uti.*krHtM puWk*nui 30.09. o0 (32)(33)(31) Pyy4«tty «tuolkws—fefird prior It*t 29.05.7**Patent and registration authorities Antöion uthfd oeh uti. * KrHtM puWk * Nui 30.09. o0 (32) (33) (31) Pyy4 «tty« tuolkws — fefird prior It * t 29.05.7 **

Ruotsi-Sverige(SE) 7**07139~0 (71) Pharmacia Diagnostics AB, Box 17, 751 03 Uppsala 1, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Ulf Ragnar Svante Jonsson, Lund, Ruotsi-Sverige(SE) (7*0 Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä vasta-aineiden visuaaliseksi osoittamiseksi vesipitoisessa näytteessä - Förfarande för visuellt pävisande av antikroppar i ett vattenhaltigt provSweden-Sweden (SE) 7 ** 07139 ~ 0 (71) Pharmacia Diagnostics AB, Box 17, 751 03 Uppsala 1, Sweden-Sweden (SE) (72) Ulf Ragnar Svante Jonsson, Lund, Sweden-Sweden (SE) ( 7 * 0 Berggren Oy Ab (5 * 0 Method for visual detection of antibodies in an aqueous sample - Förfarande för visellt pävisande av antichroppar i ett vattenhaltigt prov

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää vasta-aineiden läsnäolon osoittamiseksi vesipitoisessa näytteessä, jotka vasta-aineet ovat spesifisesti suunnatut antigeeniä vastaan.The present invention relates to a method for detecting the presence of antibodies in an aqueous sample, which antibodies are specifically directed against an antigen.

Tunnetaan jo useita menetelmiä spesifisten vasta-aineiden osoittamiseksi ja kvantitatiiviseksi määrittämiseksi biologisissa näytteissä. Erään tällaisen menetelmän mukaisesti käytetään lasia, polymeeriä, metallia tai sentapaista materiaalia olevia, antigeenillä päällystettyjä pintoja. Sellaisia näytteitä, jotka sisältävät mahdollisesti vasta-aineita, jotka ovat spesifisesti suunnatut pinnalla olevaa antigeeniä vastaan, lisätään tälle pinnalle, jonka jälkeen vasta-aine-antigeeni-kompleksi voidaan osoittaa eri tavoin. Niinpä voidaan radioaktiivisesti merkittyjen vasta-aineiden antaa kilpailla näytteessä olevien vasta-aineiden kanssa ja mitata se radioaktiivisuus, joka on spesifisesti sitoutunut antigeenipinnalle. Haittana tällaisessa radio-aktiivisuutta käyttävässä tekniikassa on mm. suuri ajantarve ja kalliiden ja monimutkaisten laitteiden tarve, sekä ne terveysvaarat, jotka liittyvät radiokatiivisten aineiden käyttöön .Several methods for detecting and quantifying specific antibodies in biological samples are already known. According to one such method, antigen-coated surfaces of glass, polymer, metal or the like are used. Samples optionally containing antibodies specifically directed against a surface antigen are added to that surface, after which the antibody-antigen complex can be detected in various ways. Thus, radiolabeled antibodies can be allowed to compete with the antibodies in the sample and the radioactivity that is specifically bound to the antigen surface can be measured. A disadvantage of such a technique using radioactivity is e.g. the high time required and the need for expensive and complex equipment, as well as the health risks associated with the use of radioactive materials.

2 584042 58404

On myös ehdotettu (Adams ym. Journal of Immunological Methods 3, (1973), s. 227-232) osoittaa vasta-aine-antigeeni-kompleksi 1) toteamalla kostutettavuuden kasvu kohdistamalla pintaan vesihöyryn vaikutus, 2) värjäämällä proteiiniväreillä (kuten "Coomassie Brilliant Blue R"), sekä 3) toteamalla interferenssivärin siirrot määrätyillä heijastetuilla pinnoilla. Yhtenäisenä haittana näissä menetelmissä on mm., että ne aikaansaavat epätarkkoja reaktioita, koska ei voida estää väärää positiivista reaktiota lisättäessä suuren proteiinivä-kevyyden omaavaa näytettä, kuten laimentamatonta seerumia. Sitäpaitsi ei ole mahdollista suorittaa minkäänlaista reagoivien spesifisten vasta-aineiden analyysiä niiden immunoglobuliiniluokan perusteella, mikä olisi erittäin tärkeätä diagnostisoitaessa mm. infektiosairauksia.It has also been suggested (Adams et al., Journal of Immunological Methods 3, (1973), pp. 227-232) to show an antibody-antigen complex 1) by observing an increase in wettability by applying the action of water vapor to the surface, 2) by staining with protein dyes (such as Coomassie Brilliant Blue R "), and 3) by detecting interference dye transfers on certain reflected surfaces. A common disadvantage of these methods is, among other things, that they cause inaccurate reactions, since a false positive reaction cannot be prevented by adding a sample with a high protein concentration, such as undiluted serum. In addition, it is not possible to perform any analysis of reactive specific antibodies based on their immunoglobulin class, which would be very important in diagnosing e.g. infectious diseases.

Nyt on yllättäen osoittautunut, että aikaisemmin käytettyjen toteamismenetelmien haitat voidaan poistaa esillä olevan keksinnön avulla.It has now surprisingly been shown that the disadvantages of the detection methods previously used can be eliminated by the present invention.

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää vasta-aineiden (I) läsnäolon toteamiseksi vesipitoisessa näytteessä, jotka vasta-aineet ovat spesifisesti suunnatut antigeeniä vastaan, jolloin näyte saatetaan kosketuksiin tasaisen, edullisesti tasomaisen tai putkimaisen pinnan kanssa, joka on päällystetty mainitulla antigeenillä vasta-aineiden sitomiseksi pinnalla olevaan antigeeniin, jonka jälkeen täten sidotut, pinnalla olevat vasta-aineet osoitetaan, ja keksinnölle on tunnusomaista se, että vasta-aineiden mainittua osoittamista varten pinta saatetaan kosketuksiin sellaisen suspension kanssa, joka sisältää pieniä, veteen liukenemattomia osasia, joihin biopolymeeri on suoraan sitoutunut, joka biopolymeeri kykenee spesifisesti sitoutumaan vasta-aineisiin jossain ei-antigeenejä sitovassa rakenteessa, edullisesti niiden Fc-osaan, jolloin mainitut osaset kerääntyvät pinnan siihen osaan, johon vasta-aineet ovat spesifisesti sitoutuneet, jolloin muodostuu paljaalla silmällä selvästi todettavissa oleva, osasten muodostama päällyste.The present invention relates to a method for detecting the presence of antibodies (I) in an aqueous sample, which antibodies are specifically directed against an antigen, the sample being contacted with a flat, preferably planar or tubular surface coated with said antigen to bind antibodies to the surface. to the antigen, after which the antibodies thus bound on the surface are detected, and the invention is characterized in that for said detection of antibodies, the surface is contacted with a suspension containing small, water-insoluble particles to which the biopolymer is directly bound, which biopolymer is capable of specifically binding to antibodies in a non-antigen binding construct, preferably an Fc portion thereof, whereby said particles accumulate in the portion of the surface to which the antibodies specifically bind, thereby forming a clearly detectable effect with the naked eye; va, coating of particles.

Antigeenin päällystäminen mainitulle tasaiselle pinnalle voi tapahtua joko käyttäen adsorptiovoimia tai kovalenssisidosta antigeenin (hapteenin) ja pinnan reaktiokykyisten ryhmien välillä mahdollisesti blfunktionaalisten reagenesien vaikutuksesta. Reaktiopintana voidaan käyttää lasia, polymeeriä, metallia tai vastaavaa materiaalia olevaa tasaista pintaa, joka on mahdollisesti peitetty jollain sellaisella aineella, joka helpottaa antigeenin sitoutumista tähän pintaan.The coating of the antigen on said flat surface can take place either by using adsorption forces or by a covalent bond between the reactive groups of the antigen (hapten) and the surface, possibly by functional reagents. As the reaction surface, a flat surface of glass, polymer, metal or similar material may be used, optionally covered with a substance which facilitates the binding of the antigen to this surface.

3 584043 58404

Pinta voidaan ensin peittää sellaisten vasta-aineiden kerroksella, jotka ovat spesifisesti suunnatut antigeeniä vastaan ja antigeeni adsorboidaan tämän jälkeen tälle vasta-ainepinnalle. Pinta voi tällöin olla edullisesti tasainen tai putkimainen, vaihtoehtoisesti muodostettu pieniksi kappaleiksi tai sauvoiksi. Pintamateriaalin voivat myös muodostaa polymeeriä, metallia yms. olevat ohuet foliot, jotka ovat mahdollisesti sovitetut paperia, polymeeriä, lasia ja sentapaista olevalle kantajalle. Ohuiden folioiden muodossa olevien reaktio-pintojen eräs etu on se, että ne mahdollistavat antigeenillä päällystettyjen pintojen yksinkertaisen varastoimisen ja kuljetuksen, jolloin antigeeni voidaan suojata mahdollista denaturoitumista vastaan esim. sopivan nesteen ohuella kalvolla. Pinnalla olevalla "antigeeni-päällysteellä" tarkoitetaan tässä yhteydessä ja patenttivaatimuksissa sitä, että antigeeni on kiinnittynyt pintaan niin, ettei se irtoa tästä pinnasta joutuessaan kosketukseen vesipitoisen näytteen kanssa siinä määrin, että reaktiot häiriintyvät.The surface may first be covered with a layer of antibodies specifically directed against the antigen, and the antigen is then adsorbed on that antibody surface. The surface can then preferably be flat or tubular, alternatively formed into small pieces or rods. The surface material may also be formed by thin foils of polymer, metal, etc., optionally fitted to a support of paper, polymer, glass, and the like. One advantage of the reaction surfaces in the form of thin foils is that they allow simple storage and transport of the antigen-coated surfaces, whereby the antigen can be protected against possible denaturation, e.g. by a thin film of a suitable liquid. By "antigen coating" on a surface is meant in this context and in the claims that the antigen is adhered to the surface so that it does not detach from this surface upon contact with the aqueous sample to such an extent that the reactions are disturbed.

Sellaisina antigeeneinä, jotka voidaan adsorboida tai sitoa kovalent-tisesti lasia, polymeeriä, metallia tai senkaltaista materiaalia oleville pinnoille, voidaan erikoisesti mainita polypeptidiantigeenit, jotka käsittävät proteiinit, glykopropteiinit, lipoproteiinit, kuten seerumialbumiinin, immunoglobuliinit, muut plasmaproteiinit, kuten polypeptidiluonteiset hormonit, bakteeritoksiinit ja muut mikrobiset polypeptidit jne, polysakkaridiantigeenit, kuten dekstraanin, muut kapselipolysakkaridit, lipopolysakkaridit, lipopolysakkaridiproteii-nikompleksit, jotka ovat peräisin bakteereista ja muualta, nukleiinihapot, kuten DNA ja RNA, hapteenit, kuten pienimolekyyliset hormonit, ja lääkeaineet, jotka ovat mahdollisesti liittyneet makromole-kyyleihin paremman adsorboitumisen aikaansaamiseksi pinnalle, virus-antigeenit, kuten Hepatitis B-antigeeni (HBAg, jota aikaisemmin nimitettiin nimellä Australia-antigeeni, Au-ag), osasten muodossa olevat antigeenit, kuten kokonaiset bakteerit ja muut mikrobit yksisoluiset tai useampisoluiset parasiitit, eläinsolut tai sopivat (sub-) solumaiset fragmentit, joista ovat esimerkkeinä kokonaiset Salmonella-, Treponema palladium-(syfilis) ja Chlamydia-bakteerit.As antigens that can be adsorbed or covalently bound to surfaces of glass, polymer, metal, or the like, polypeptide antigens comprising proteins, glycoproteins, lipoproteins such as serum albumin, immunoglobulins, other plasma proteins can be particularly mentioned. microbial polypeptides, etc., polysaccharide antigens such as dextran, other capsular polysaccharides, lipopolysaccharides, lipopolysaccharide protein complexes derived from bacteria and elsewhere, nucleic acids such as DNA and RNA, haptens such as small molecule hormones and viral antigens such as Hepatitis B antigen (HBAg, formerly known as Australia antigen, Au-ag), particulate antigens such as whole bacteria and other microbes. robit unicellular or multicellular parasites, animal cells or suitable (sub-) cellular fragments, exemplified by whole Salmonella, Treponema palladium (syphilis) and Chlamydia bacteria.

Edellä ja patenttivaatimuksissa käytetty sanonta "biopolymeerit", tarkoittaa edullisesti myös polypeptidejä, proteiineja, glykoproteii-neja, polysakkarideja, lipoproteiinipolysaklcaridi-komplekseja, riippumatta siitä, millä molekyylin osalla on affiniteetti immunoglobu-liinin ei-antigeenejä r.i to vaan rakenteeseen.The term "biopolymers" as used above and in the claims preferably also means polypeptides, proteins, glycoproteins, polysaccharides, lipoprotein polysaccharide complexes, regardless of which part of the molecule has an affinity for the structure of immunoglobulin non-antigens.

“ 58404“58404

Biopolymeeri voi olla peräisin mikrobeista, esim. bakteereista, tai sillä voi olla jokin muu biologinen alkuperä, ja biopolymeerin voi muodostaa myös immunoglobuliini (vasta-aineet (II)), joka on suunnattu immunoglobuliinia vastaan (varsinaiset vasta-aineet (I)). Erittäin sopiva esimerkki biopolymeeristä edellä esitetyssä mielessä on ns. proteiini A, joka on saatu Staphylococcus aureuksesta, tai tämän proteiinin osa, joka on luonteeltaan polypeptidi ja kykenee sitomaan itsensä vasta-aineiden ei-antigeenejä sitovaan rakenteeseen. Toinen esimerkki biopolymeereistä, joilla on vastaavat ominaisuudet, on Staphylococcus epidermiksestä peräisin oleva polypeptidi, sekä biopolymeerit, joilla on määrättyjen streptokokkien pintarakenne. Biopolymeeri voi olla sitoutunut sen mikro-organismin pintaan, joka on sen muodostanut. Kun( biopolymeerin muodostaa proteiini A tai sen osa, muodostuvat osaset erittäin edullisesti stafylokokeista, edullisesti tapetuista stafylokokeista. Proteiini A pitoisen stafylokokkien muodostaman reagenssin valmistus voi tapahtua siten kuin S. Jonsson ja G. Kromvall ovat esittäneet (Eur. J. Immunol. 4_, 29-30 (197*0), jolloin saadaan esim. 10 %:nen perussuspensio, joka kestää vähintään yhden vuoden, ja joka IgG-vasta-aineiden osoittamiseksi, jotka ovat sitoutuneet antigeenin pinnalla, on laimennettava ainoastaan noin 1/2 %:seksi suspensioksi fosfaatin avulla puskuroidussa ruokasuolassa lisäämällä samalla sopivaa pinta-aktiivista ainetta.The biopolymer may be derived from microbes, e.g. bacteria, or may have some other biological origin, and the biopolymer may also be formed by an immunoglobulin (antibodies (II)) directed against an immunoglobulin (actual antibodies (I)). A very suitable example of a biopolymer in the above sense is the so-called protein A derived from Staphylococcus aureus, or a portion of this protein that is polypeptide in nature and capable of binding itself to the non-antigen binding structure of antibodies. Another example of biopolymers having similar properties is a polypeptide derived from Staphylococcus epidermis, as well as biopolymers having the surface structure of certain streptococci. The biopolymer may be bound to the surface of the microorganism that formed it. When the biopolymer is formed by protein A or a part thereof, the particles are very preferably formed from staphylococci, preferably killed staphylococci. -30 (197 * 0) to give, for example, a 10% stock suspension lasting at least one year, which must be diluted to only about 1/2% of the suspension in order to detect IgG antibodies bound on the antigen surface. in phosphate-buffered table salt while adding a suitable surfactant.

Keksinnön mukaisesti voi biopolymeeri olla myös sitoutunut polymeerin pieniin osasiin, jotka ovat liukenemattomia veteen. Esimerkkejä tällaisista polymeereistä ovat sellaiset geeliosaset, jotka sisältävät polyhydroksiyhdisteiden ja bifunktionaalisten aineiden kopolymeerejä, esim. dekstraanista ja epikloorihydriinistä saadut kopolymeerit (Sephade^, valmistaa Pharmacia Pine Chemicals, Uppsala), akrylaattia sisältävät geeliosaset jne. Ne polymeerien pienet osaset, jotka eivät liukene veteen, voivat kuitenkin olla vedessä turpoavia. Biopolymeerin sitominen osasiin voi myös tapahtua polymeroimalla biopolymeeri mahdollisesti kopolymeroimalla muiden polymeerien kanssa, esim. tekemällä liukenemattomaksi sellainen seerumi, joka sisältää vasta-aineita, jotka ovat erikoisesti suunnatut määrättyä immunoglobuliini-luokkaa tai määrättyjä luokkia vastaan. Haluttaessa voivat nämä pienet osaset olla värjättyjä. Edullisesti käytetään sellaisia osasia, jotka ovat suuruusluokkaa 0,1-20, esim. 0,2-10 mikrometriä.According to the invention, the biopolymer may also be bound to small particles of the polymer which are insoluble in water. Examples of such polymers are gel particles containing copolymers of polyhydroxy compounds and bifunctional substances, e.g. copolymers derived from dextran and epichlorohydrin (Sephade®, manufactured by Pharmacia Pine Chemicals, Uppsala), gel particles containing acrylate, etc., gel particles containing acrylate, etc. however, be swellable in water. Binding of the biopolymer to the moieties can also occur by polymerizing the biopolymer, optionally by copolymerization with other polymers, e.g., by rendering insoluble a serum containing antibodies specifically directed against a particular immunoglobulin class or classes. If desired, these small particles can be colored. Preferably, particles of the order of 0.1 to 20, e.g. 0.2 to 10 micrometers, are used.

Keksinnön mukaisesti voi biopolymeeri olla sitoutunut pienten osasten pintaan kovalenttisen luonteen omaavilla sidoksilla tai adsorption avulla.According to the invention, the biopolymer may be bound to the surface of small particles by bonds of a covalent nature or by adsorption.

5 584045 58404

Keksinnön mukaisesti voivat bakteerikappaleet pintakerroksessa sisältää biolopolymeerinä niistä peräisin olevaa biopolymeeriä tai muualta peräin olevaa biopolymeeriä, joka on sitoutunut bakteerikap-paleiden pintaan biopolymeerin ja bakteerikappaleiden luonnollisen sitoutumisen johdosta, ja/tai sidoksella, joka on aikaansaatu keinotekoisesti. Bakteerikappaleet niissä olevine biopolymeereineen voivat olla käsitellyt aldehydillä, esim. formaldehydillä ja/tai glutar-aldehydillä. Ne voivat olla myös lämpökäsiteltyjä niiden tappamiseksi ja/tai steriloimiseksi.According to the invention, the bacterial bodies in the surface layer may contain as biolopolymer a biopolymer derived therefrom or a biopolymer derived elsewhere which is bound to the surface of the bacterial bodies due to the natural bonding of the biopolymer and the bacterial bodies and / or by a bond artificially provided. Bacterial bodies with their biopolymers may be treated with an aldehyde, e.g. formaldehyde and / or glutaraldehyde. They may also be heat treated to kill and / or sterilize them.

Proteiinissa A olevien stafylokokkien avulla voidaan erikoisesti osoittaa IgG-luokkaan kuuluvia vasta-aineita.In particular, staphylococci in protein A can be used to detect IgG antibodies.

Jos tämän sijasta halutaan osoittaa sellaisia vasta-aineita, jotka eivät kykene sitoutumaan proteiiniin A, voidaan keksinnön mukaisesti käyttää osasia, joihin on kiinnittynyt muita biopolymeerejä, jotka reagoivat spesifisesti näiden vasta-aineiden kanssa.If, instead, it is desired to detect antibodies which are incapable of binding to protein A, particles to which other biopolymers which specifically react with these antibodies are attached may be used in accordance with the invention.

Keksinnön erään toisen toteuttamismuodon mukaisesti voidaan myös osoittaa sellaisia vasta-aineita, jotka eivät kykene sitoutumaan proteiiniin A, sovittamalla pinnassa oleva vasta-aine-antigoeni-kompleksi proteiiniin A:n reagoivien FgA-vasta-aineiden liuokselle alttiiksi, jotka ovat suunnatut vasta-aineiden jotain tai joitain (ala) luokkia (esim. IgA, IgE ja IgM) vastaan, jotka eivät reagoi proteiinin A kanssa. Tämän jälkeen lisätään proteiini A-pitoinen stafylo-kokkireagenssi ja mahdollista reaktiota tarkkaillaan samalla tavoin kuin edellä on kuvattu.According to another embodiment of the invention, antibodies that are unable to bind to protein A can also be detected by exposing a surface antibody-antigen complex to a solution of FgA antibodies reactive with protein A that are directed to some of the antibodies. or against some (sub) classes (e.g., IgA, IgE, and IgM) that do not react with protein A. Protein A-containing staphylococcal reagent is then added and the possible reaction is monitored in the same manner as described above.

Keksinnön vielä erään toteuttamismuodon mukaisesti voidaan antigeeniin sidottujen vasta-aineiden (I) pinta saattaa kosketuksiin sellaisten bakteerikappaleiden suspension kanssa, joiden pintaan on suoraan sidottu vasta-aineita (II) (niiden Fc-osien välityksellä), jotka ovat suunnatut mainittuja vasta-aineita (I) vastaan vasta-aineilla (I) peitetyn pinnan näkemiseksi.According to another embodiment of the invention, the surface of the antigen-bound antibodies (I) can be contacted with a suspension of bacterial bodies on the surface of which antibodies (II) have been directly bound (via the Fc portions) directed against said antibodies (I). ) to see the surface covered with antibodies (I).

Vasta-aineiden puolikvantitatiiviseksi määrittämiseksi näytteessä voidaan käyttää erilaisia menetelmiä. Voidaan esim. kokeilla sarja näytteen erilaisia laimennuksia ja vertailla tulosta vertailunäytteellä suoritettujen analogisten kokeiden kanssa. Tällöin todetaan näytteen se suurin laimennus, joka aiheuttaa positiivisen reaktion.Various methods can be used to semi-quantitatively determine antibodies in a sample. For example, a series of different dilutions of a sample can be tested and the result compared with analogous experiments performed on a reference sample. In this case, determine the maximum dilution of the sample which causes a positive reaction.

6 584046 58404

Keksinnön erään erittäin edullisen toteuttamismuodon mukaisesti voidaan kvantitatiivisesti osoittaa vasta-aineiden läsnäolo näytteessä lisäämällä se näytepinnalle antigeeneillä peitetyn osan ulkopuolelle ja saattamalla näyte kulkemaan määrätyssä suunnassa vyöhykkeessä, edullisesti kapeassa vyöhykkeessä, antigeeneillä päällystetyn pinnan yli. Näytteen siirtymisen jälkeen, joka voidaan todeta esim. näytteen värjääntymisen yms. avulla, lisätään suspensioon biopolymeeripitoi-sia osasia. Se pinta, joka tällöin tulee näiden osasten peittämäksi, muodostaa näytteessä olevan vasta-ainesisällön mittapuun ja voidaan verrata tunnetun vertailunäytteen vastaavaan pintaan.According to a highly preferred embodiment of the invention, the presence of antibodies in a sample can be quantified by adding it to the sample surface outside the antigen-covered part and causing the sample to pass in a certain direction in a zone, preferably a narrow zone, over the antigen-coated surface. After the transfer of the sample, which can be detected, for example, by coloring the sample, etc., biopolymer-containing particles are added to the suspension. The surface which then becomes covered by these particles forms a measure of the antibody content in the sample and can be compared with the corresponding surface of a known reference sample.

Näytteen kulkemisen aikaansaamiseksi antigeenillä peitetyn pinnan yli voidaan soveltaa menetelmää, jota on käytetty ohutkerrosgeeli-kromatografiatekniikassa, esim. lisäämällä ohut kerros (mahdollisesti monta vierekkäistä kerrosta) kapillaarista väliainetta, esim. osasia, kuten Sephadej^ G-75 Superfine (poikittaissidottu dekstraanigeeli, valmistaa Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala). Nestettä siirtävänä väliaineena voidaan myös käyttää kehrättyjen tai kehtäämättömien kuitujen säikeitä. Ennen tarkastelua käyttäen biopolymeerejä kantavia osasia on luonnollisesti ensin poistettava mainittu väliaine.To effect the passage of the sample over the antigen-coated surface, the method used in the thin layer gel chromatography technique can be applied, e.g., by adding a thin layer (possibly several adjacent layers) of capillary medium, e.g., particles such as Sephade® G-75 Superfine (cross-linked dextran gel). Chemicals, Uppsala). Fibers of spun or non-spun fibers can also be used as the liquid transfer medium. Of course, prior to consideration, using biopolymer-bearing particles, said medium must first be removed.

On myös mahdollista aikaansaada lineaarinen nestevirtaus tai useita rinnakkaisia lineaarisia nestevirtauksia levyn ylitse ilman, että on olemassa minkäänlaista kiinteän materiaalin tukea antigeenien peittämällä pinnalla, mikäli pinta ensin kosteutetaan käyttäen lineaarista linjaa tai rinnakkaisia lineaarisia linjoja ja sovitetaan nesteen sisään ja poisvirtaus hieman kaltevalle levylle ja siitä pois käyttäen sopivaa kapillaarista materiaalia.It is also possible to provide a linear fluid flow or multiple parallel linear fluid flows across the plate without any solid material support on the antigen-covered surface if the surface is first wetted using a linear line or parallel linear lines and the fluid is flushed in and out slightly suitable capillary material.

Näytteessä olevien vasta-aineiden siirtyminen voidaan myös aikaansaada suunnassa antigeenien peittämän pinnan yli käyttäen elektrofo-reettista tekniikkaa.The migration of antibodies in the sample can also be effected in the direction over the surface covered by the antigens using electrophoretic technique.

Esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä voidaan myös määrittää epäsuorasti puolikvantitatiivisesti tai kvantitatiivisesti näytteessä olevan antigeenin väkevyys kokeilemalla antigeenin sisältävien näytteiden seoksia ja standardisoidun määrän vasta-ainetta sisältäviä annoksia tämän antigeenin suhteen ja osoittamalla sitten sen mahdollinen vasta-aineylimäärä, jota näytteessä oleva antigeeni ei ole kyennyt estämään.The method of the present invention can also indirectly semi-quantitatively or quantitatively determine the concentration of antigen in a sample by testing mixtures of antigen-containing samples and doses of a standardized amount of antibody for that antigen and then detecting any excess antibody that the antigen in the sample has failed to inhibit.

Keksinnön mukaisella menetelmällä voidaan määrittää vasta-aineita 7 58404 periaatteessa erilaisten antigeenilajien suhteen. Niinpä pinnalla olevana antigeeninä voidaan käyttää sekä liukoista että liukenematonta (esim. osasten muodossa olevaa) antigeeniä. Tämä on erittäin suuri etu verrattuna aikaisempaan tekniikkaan, että vasta-aineet voidaan osoittaa liukenemattomien (esim. osasten muodossa olevien) antigeenien suhteen yksinkertaisella tavalla ja käyttäen erittäin pientä määrää antigeenimateriaalia.The method according to the invention can be used to determine antibodies 7 58404 in principle for different types of antigens. Thus, both soluble and insoluble (e.g., in particulate form) antigen can be used as the surface antigen. This is a very great advantage over the prior art that antibodies can be detected for insoluble (e.g., particulate) antigens in a simple manner and using a very small amount of antigenic material.

Keksintöä kuvataan seuraavassa lähemmin viittaamalla seuraaviin ei-rajoittaviin toteuttamisesimerkkeihin.The invention is described in more detail below with reference to the following non-limiting embodiments.

Esimerkki 1Example 1

Ns. objektilasin muodossa oleva lasipinta 76 x 26 mm pestään bikro-maattirikkihapolla, huuhdotaan hyvin vedellä sekä kuivapuhalletaan paineilmalla. Noin 5 min tai pidemmän ajan on pinta kosketuksessa sellaisen dektraanin 1 #:sen liuoksen kanssa, jonka keskimääräinen molekyylipaino on 2 x 10^ ("Dextran 2000", valmistaa Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala) fosfaattipuskuroidussa keittosuolaliuoksessa (nimitetään alempana nimellä PBS ja sisältää 0,12-m NaCl, 0,03-m fosfaattia, pH 7j4), jonka jälkeen se huuhdotaan hyvin tislatulla vedellä ja kuivapuhalletaan paineilmalla. Lasi käsiteltiin samalla tavoin tämän jälkeen 1 JS:sella liuoksella koejärjestelmässä inertis-tä proteiinia, esim. siitä lajista peräisin olevaa seerumialbumiinia, josta näyte oli peräisin. Näyte lisätään 3-10 mikrolitran tippoina riveissä, joissa kussakin on aina 8 tippaa, automaattipipetin avulla. Näytteen laimennus oleellisesti yli 1/100 tapahtuu vasta-ainevapaalla seerumilla, joka on peräisin samasta lajista, joka on laimennettu suhteessa 1/100 tai seerumialbumiinin 0,1 %:sessa liuoksessa. 5~10 minuutin jälkeen huuhdotaan tipat pois sellaisella PBS:llä, joka sisältää 0,1 %:sen seerumialbumiiniliuoksen. 5“10 minuutin kuluttua huuhdotaan tipat pois PBS:llä, joka sisältää 0,1 $:sen Tween^ 20 (polyoksietyleenisorbitaanimonolauraatti, valmistaa Atlas Chemie G.m.b.H.) (käytetään seuraavassa lyhennystä T-PBS), jonka jälkeen lasi pannaan vaaka-asentoon ja peitetään 1/2 %:sella suspensiolla formaliinilla käsiteltyjä lämmössä tapettuja proteiini A-pitoisia stafylokokkeja (S. Jonsson, G. Kronvall, Europ, J. Immunol. 4_, s.The glass surface 76 x 26 mm in the form of a so-called slide is washed with bicromate sulfuric acid, rinsed well with water and blown dry with compressed air. For about 5 minutes or more, the surface is in contact with a 1 # solution of a dextran having an average molecular weight of 2 x 10 6 ("Dextran 2000", manufactured by Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala) in phosphate buffered saline (hereinafter referred to as PBS and containing 0, 12-m NaCl, 0.03-m phosphate, pH 7j4), after which it is rinsed with well-distilled water and blown dry with compressed air. The glass was then similarly treated with a 1 JS solution in the test system of an inert protein, e.g., serum albumin from the species from which the sample was derived. The sample is added in drops of 3 to 10 microliters in rows, each containing 8 drops each, using an automatic pipette. Dilution of the sample substantially greater than 1/100 occurs with antibody-free serum from the same species diluted 1/100 or in 0.1% serum albumin. After 5 ~ 10 minutes, the drops are rinsed off with PBS containing 0.1% serum albumin solution. After 5 minutes, the drops are rinsed off with PBS containing $ 0.1 Tween ^ 20 (polyoxyethylene sorbitan monolaurate, manufactured by Atlas Chemie GmbH) (hereinafter abbreviated as T-PBS), after which the glass is placed horizontally and covered with 1 / A 2% suspension of formalin-treated heat-killed protein A-containing staphylococci (S. Jonsson, G. Kronvall, Europ, J. Immunol. 4, p.

29, 1974) T-PBS:ässä. 5-10 minuutin kuluttua saa lasi valua ja se huuhdotaan T-PBS:ällä niin, että stafylokoklcireagenssiylimäärä poistetaan lasipinnalta. Lasi upotetaan tämän jälkeen sellaisiin kyvet-teihin, jotka sisältävät T-PBS:ää. Tulos voidaan joko lukea tällai- 8 58404 silta märiltä laseilta tai jatketun huuhtomisen jälkeen tislatulla vedellä, jolloin mahdollisesti on lisätty Tweeri^ 20 kuivaamisen jälkeen imupaperin ja ilman avulla. Lukeminen tapahtuu parhaiten vinosti lankeavassa valossa tummaa taustaa vasten. Positiivisen reaktion muodostaa keltaisen valkoinen stafylokokkiläiskä alueella, jossa näy-tetippa on sijainnut, ja negatiivisen reaktion tapahtumatta jäänyt stafylokokkien adsorboituminen pinnalle. Tällä menetelmällä saatiin käytettäessä sellaista kaniinin anti-dekstraaniseerumia, joka sisälsi 1,3 mg spesifistä vasta-ainetta ml kohden, positiivinen reaktio jopa 1/10 000 suuruisen laimentamisen jälkeen. Suurin osa ihmis- ja kaniinin seerumeista voidaan lisätä laimentamattomina ja aiheuttavat negatiivisen reaktion.29, 1974) in T-PBS. After 5-10 minutes, the glass is allowed to drain and rinsed with T-PBS to remove excess staphylococcal reagent from the glass surface. The glass is then immersed in cuvettes containing T-PBS. The result can be read either from such wet glasses or after further rinsing with distilled water, possibly with the addition of Tweer after drying with blotting paper and air. Reading is best done in oblique light against a dark background. A positive reaction is formed by a yellow-white staphylococcal spot in the area where the sample drop is located, and a negative reaction is caused by the adsorption of staphylococci on the surface. Using this method, using a rabbit anti-dextran serum containing 1.3 mg of specific antibody per ml, a positive reaction was obtained after dilution up to 1 / 10,000. Most human and rabbit sera can be added undiluted and cause a negative reaction.

Seeruminäytteillä, joista voitiin osoittaaa ainoastaan erittäin herkän radioimmunologisen tekniikan avulla vasta-aineita dekstraanin kanssa, saadaan varsinaisessa kokeessa positiivisia reaktioita silloinkin, kun näytteen laimentaminen on 25-125-kertainen.Serum samples from which only highly sensitive radioimmunological techniques could detect antibodies to dextran give positive reactions in the actual experiment, even when the sample is diluted 25-125 times.

Samalla tavoin on kaniinissa vast, ihmisissä olevia IgG-vasta-ainei-ta osoitettu käyttäen muunlaisen kemiallisen rakenteen omaavia antigeenejä, johon ovat sisältyneet hapteenit ja kompleksiset, osasten muodossa olevat antigeenit. Esimerkkejä tällaisista antigeeneistä (vasta-aine-kombinaatiot), joita on tutkittu hyvin tuloksin, ovat naudan seerumialbumiini, muna-albumiini, kentamysiini (antibiootti esim. hapteenilla), edeltävän kovalenssi-sitomisen jälkeen syaani-bromidilla aktivoituun dekstraaniin 2000, "Hepatitis B"-antigeeni (HBAg, nimitettiin aikaisemmin nimellä Australia-antigeeni, Au-ag), Salmonella-bakteerit, Chlamydiabakteerit kaikissa tapauksissa soveltuvat hyvin aikaisemmin käytettyjen monimutkaisempien tai huomattavasti enemmän aikaa vaativien menetelmien kanssa.Similarly, rabbit or human IgG antibodies have been demonstrated using antigens of a different chemical structure, including haptens and complex particulate antigens. Examples of such antigens (antibody combinations) which have been studied with good results are bovine serum albumin, egg albumin, kentamycin (antibiotic with e.g. hapten), after prior covalent binding to cyanogen bromide-activated dextran 2000, "Hepatitis B" antigen (HBAg, formerly referred to as Australia antigen, Au-ag), Salmonella bacteria, Chlamydia bacteria are in all cases well suited to the more complex or considerably more time-consuming methods used in the past.

Esimerkki 2Example 2

Esimerkin 1 mukainen menetelmä toistetaan käyttäen näytteitä, jotka muodostavat seokset, joissa on määrätty tilavuus sellaisia liuoksia, jotka sisältävät dekstraania punnituissa määrissä, ja määrätyn ti-lavuusmäärän dekstraanin vasta-aineiden laimennusta, joka seos on saanut reagoida huoneen lämpötilassa 5-10 min. Käytetty antidekstraa-nilaimennus 1/2000 sekoittamisen jälkeen antigeeniä sisältävän liuoksen kanssa on valittu niin, että se silloin, kun antigeeniä ei ole näytteessä, aiheuttaa pinnalle selvän stafylokokkipäällysteen sisältämättä voimakasta vasta-aineylimäärää. Näissä olosuhteissa jo pieni 9 58404 minimaalinen antigeenimäärä estää reaktion avulla esiintyvän pienen vasta-ainemäärän kanssa viimemainitun sitoutumisen pinnalla olevaan antigeeniin, jolloin täten jää jäljelle stafylokokkipäällyste osoituksena antigeenin esiintymisestä. Kokeiltaessa liuoksia, jotka sisältävät punnittuja väkevyyksiä dekstraania sekoitettuina yhtä suurten tilavuusmäärien kanssa edellä mainittuja anti-dekstraaniantiseerumi-laimennuksia, aikaansaatiin täydellisen stafylokokkien adsorption estyminen käytettäessä sellaista antidekstraaniliuosta, jonka väkevyys oli 0,1/Ug/ml, ja positiivinen stafylokokkiadsorptio käytettäessä dekstraaniliuosta, jonka väkevyys oli 0,01/Ug/ml. Täten on osoitettu, että tämän tekniikan herkkyys on tasolla, joka saavutetaan radioimmu-lologisten kokeiden avulla.The procedure of Example 1 is repeated using samples forming mixtures of a specified volume of solutions containing dextran in weighed amounts and diluting a specified volume of dextran antibodies which has been allowed to react at room temperature for 5-10 min. The anti-dextran dilution 1/2000 used after mixing with the antigen-containing solution has been chosen so that, in the absence of antigen in the sample, it causes a clear staphylococcal coating on the surface without a strong excess of antibody. Under these conditions, even a small minimum amount of 958404 inhibits the binding of the latter to the surface antigen by reaction with a small amount of antibody, thus leaving a staphylococcal coating as an indication of the presence of the antigen. Experimenting with solutions containing weighed concentrations of dextran mixed with equal volumes of the above anti-dextran antiserum dilutions provided complete inhibition of staphylococcal adsorption using an anti-dextran solution with a concentration of 0.1 / ug / ml and a positive staphylococcal. 0.01 / ug / ml. Thus, it has been shown that the sensitivity of this technique is at a level achieved by radioimmunological experiments.

Esimerkki 3Example 3

Lasilevy 20 x 20 cm, joka on pesty bikromaattirikkihapolla esimerkin 1 mukaisesti, käsitellään 1 %:sella nautaseerumialbumiiniliuoksella PBS:ssä antamalla noin 1 ml:n liuosta levitä kahden yhtä suuren lasilevyn välillä, jotka työnnetään päällekkäin siten, että noin 3 cm:n reunus jätetään antigeenivapaaksi. Huuhtominen ja kuivapuhallus suoritetaan esimerkin 1 mukaisesti pitäen kuitenkin huolta siitä, että neste ja ilma puhalletaan suunnassa poispäin antigeenivapaasta reunuksesta. Koko levylle levitetään ohut kerros geeliä Sephade^ G-75 Superfine (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Ruotsi). Levy sovitetaan sitten laitteeseen, jolla voidaan suorittaa ns. ohutkerrosgeeli-kromatografia, ja saatetaan kosketukseen ylemmän ja alemman astian kanssa, jotka sisältävät PBS:ää suodatinpaperin välityksellä, joiden astioiden välillä neste tulee virtaamaan imulappoperiaatteen mukaisesti. Näyte lisätään 5-10/Ul:n muodossa seerumitippoja tai tämän laimennusta ylöspäin suunnatulle antigeenivapaalle reunukselle. Korkeusero nestekylpyjen välillä säädetään siten, että näyte siirtyy levyn ylitse noin 3 tunnissa. Tämän jälkeen geeli huuhdotaan pois PBS:n avulla, levy huuhdotaan edelleen T-PBS:llä, sitä käsitellään tämän jälkeen noin 5 min tavanomaisella kaniinin seerumilla, joka on laimennettu suhteeseen 1/100, huuhdotaan jälleen T-PB5:llä ja käsitellään lopuksi stafylokokkireagenssilla ja huuhtomisnesteellä esimerkin 1 mukaisesti. Tulos ilmenee parhaiten vinosti läpilankea-vassa valossa tummaa taustaa vasten kolmion muotoisina pintoina pohjan ollessa antigeenipinnan ja raja-alueen rajalinjalla, ja huipun nesteen virtaussuunnassa. Pinta on suoraan verrannollinen näytteessä olevaan vasta-ainemäärään.A 20 x 20 cm glass plate, washed with dichromate sulfuric acid according to Example 1, is treated with a 1% solution of bovine serum albumin in PBS, allowing about 1 ml of the solution to spread between two equal glass plates, which are pushed on top of each other leaving a border of about 3 cm. against the antigen. The rinsing and dry blowing are performed according to Example 1, however, taking care that the liquid and air are blown away from the antigen-free rim. A thin layer of Sephade® G-75 Superfine gel (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sweden) is applied to the entire plate. The disk is then fitted to a device with which the so-called thin layer gel chromatography, and contacting the upper and lower vessels containing PBS via filter paper, between which vessels the liquid will flow according to the suction pad principle. The sample is added in the form of 5-10 μl of serum drops or dilution thereof to the upstream antigen-free rim. The height difference between the liquid baths is adjusted so that the sample moves over the plate in about 3 hours. The gel is then rinsed off with PBS, the plate is further rinsed with T-PBS, then treated for about 5 min with standard rabbit serum diluted 1/100, rinsed again with T-PB5 and finally treated with staphylococcal reagent and with rinsing liquid according to Example 1. The result is best manifested in diagonally transmitted light against a dark background as triangular surfaces with the base at the boundary line between the antigen surface and the boundary region, and in the flow direction of the peak liquid. The surface area is directly proportional to the amount of antibody in the sample.

ίο 58404ίο 58404

Analogisesti edellä esitetylle menetelmälle on nesteen kuljetuksen tukemiseksi kokeiltu kehrättyjen ja kehräämättömien kuitujen (ns. non-woven) säikeitä, jolloin aikaansaadaan kaksi etua: osaksi vältetään näytteen sivuttainen diffuusio siirtämisen aikana, osittain jää pois tarve käsitellä levyä esim. normaalilla kaniinin seerumilla, joka on laimennettu suhteessa 1/100 ennen stafylokokkireagenssia.By analogy with the above method, spun and non-woven fibers have been tried to support fluid transport, providing two advantages: partly avoiding lateral diffusion of the sample during transfer, partially eliminating the need to treat the plate with e.g. normal rabbit serum diluted in a ratio of 1/100 before the staphylococcal reagent.

On myös mahdollista aikaansaada useita rinnakkaisia nestevirtauksia ilman minkäänlaista lasilevyllä olevan kiinteän faasin tukea, jos levy on ensin kosteutettu yhdensuuntaisia linjoja pitkin esim. kostutetuilla säikeillä sekä virtaus järjestetään joukon kautta säikeitä muutamia asteita vinoon sovitetulle levylle sellaisesta astiasta, joka on sovitettu siten, että sen nestepinta on noin 1 cm:n lasilevyn yläreunan yläpuolella. Nesteen poisvirtaus järjestetään sellaisten säikeiden kautta, jotka ulottuvat kylvyn sisään juuri levyn alareunan alapuolella. Viimemainitun menetelmän avulla aikaansaadaan sen pinnan terävämpi määrittely, jonka stafylokokkireagenssi rajoittaa.It is also possible to provide several parallel liquid flows without any solid phase support on the glass sheet if the sheet is first moistened along parallel lines e.g. by moistened filaments and the flow is arranged through a plurality of strands a few degrees obliquely arranged on a vessel about 1 cm above the top of the glass plate. The drainage of the liquid is arranged through strands which extend into the bath just below the lower edge of the plate. The latter method provides a sharper definition of the surface bounded by the staphylococcal reagent.

Esimerkki MExample M

Esimerkin 1 mukaisesti lisättiin kaniini-anti-dekstraani-vasta-ai-neita lasilevylle adsorboituun antigeeniin. Vasta-aineet, jotka olivat spesifisesti sitoutuneet antigeeniin, osoitettiin saattamalla lasilevy sitten kosketuksiin sellaisten reagenssiosien suspension kanssa, jotka saatiin käsittelemällä polymetyylimetakrylaattiosasia, joiden keskimääräinen suuruus oli 1 ^um, marsu-antikaniini-immuno-globuliini-antiseerumilla, joka oli laimennettu suhteessa 1/25, tai tällaisen seerumin immunoglobuliinifraktioilla. Osaset pestiin fosfaatin avulla puskuroidulla fysiologisella ruokasuolaliuoksella ja säädettiin 0,5-1 %:n suspensioksi ennen käyttöä. Tämän reagenssin ja lasipinnan kosketuksen aikana johdettiin suspensio varovasti edestakaisin lasipinnalla, jolloin nopeutetaan reagenssiosasten spesifistä kiinnittymistä niihin vasta-aineisiin, jotka on sidottu lasilevylle adsorboituun antigeeniin. Saadut tulokset osoittautuivat täysin samanarvoisiksi kuin ne, jotka saatiin käytettäessä esimerkin 1 mukaista stafylokokkireagenssia.According to Example 1, rabbit anti-dextran antibodies were added to the antigen adsorbed on a glass plate. Antibodies that were specifically bound to the antigen were detected by then contacting the glass slide with a suspension of reagent portions obtained by treating polymethyl methacrylate moieties having an average size of 1 μm with guinea pig anti-rabbit immunoglobulin antiserum diluted 1/25. , or immunoglobulin fractions of such serum. The particles were washed with phosphate-buffered saline and adjusted to a 0.5-1% suspension before use. During contact between this reagent and the glass surface, the suspension was gently passed back and forth over the glass surface to accelerate the specific attachment of the reagent particles to the antibodies bound to the antigen adsorbed on the glass plate. The results obtained turned out to be completely equivalent to those obtained using the staphylococcal reagent of Example 1.

Claims (9)

1. Pörfarande för visuellt pävisande av närvaron av antikroppar (I) i ett vattenhaltigt prov, vilka antikroppar är specifikt rik-tade mot ett antigen, varvid provet bringas i kontakt med en jämn, företrädesvis pian eller rörformig, yta belagd med nämnda antigen för bindning av antikropparna tili antigener pä ytan, varefter de sälunda bundna antikropparna (I) pä ytan pävisas, känneteck-n a t av att man för visunlisering av antikropparna bringar ytan i kontakt med en suspension av smä i vatten olösliga partiklar, ti]l vilka en biopolymer är direkt bunden, vilken biopolymer har förmä-gan att specifikt binda sig till antikroppars (I) icke-antlgenbin-dande struktur, företrädesvis tili deras Fc-del, varvid nämnda partiklar ansamlas pä den del av ytan där antikroppar specifikt bundit 58404 sig, under bildning av en för blotta ögat tydligt iaktagbar be-läggning av partiklar.A method of visually demonstrating the presence of antibodies (I) in an aqueous sample, which antibodies are specifically directed against an antigen, wherein the sample is contacted with a smooth, preferably peel or tubular surface coated with said antigen for binding. of the antibodies to antigens on the surface, after which the similarly bound antibodies (I) are detected on the surface, characterized in that for contacting the antibodies, the surface contacts a suspension of small in water-insoluble particles, to which a biopolymer is directly bound, which biopolymer has the ability to specifically bind to the non-antigen-binding structure of antibodies (I), preferably to their Fc portion, said particles accumulating on the portion of the surface where antibodies specifically bound 58404 formation of a clearly observable coating of particles to the naked eye. 2. Förfarande enligt patentkravet 1,kännetecknat av att partiklarna utgöres av bakteriekroppar eller andra mikrober eller fragment därav, vilka i sitt ytskikt innehäller nämnda biopolymer eller till vilka nämnda biopolymerer är bundna av adsorp-tiva krafter eller genom kovalenta bindningar.Process according to claim 1, characterized in that the particles are bacterial bodies or other microbes or fragments thereof, which contain in their surface layer said biopolymer or to which said biopolymers are bound by adsorption forces or by covalent bonds. 3. Förfarande enligt patentkravet 1,kännetecknat av att partiklarna utgöres av smä artificiellt framställda partiklar av syntetiskt eller biologiskt material, vilka i sitt ytskikt innehäller nämnda biopolymerer eller till vilka nämnda biopolymerer är bundna av adsorptiva krafter eller med kovalenta bindningar.3. A process according to claim 1, characterized in that the particles are made up of artificially made particles of synthetic or biological material which contain in their surface layer said biopolymers or to which said biopolymers are bound by adsorptive forces or with covalent bonds. 4. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2 för pävisande av an-tikroppar tillhörande IgG-klassen, kännetecknat av att partiklarna utgöres av protein A-bärande, företrädesvis avdödade, stafylokocker.Method according to claim 1 or 2 for the detection of antibodies belonging to the IgG class, characterized in that the particles are protein A-carrying, preferably killed, staphylococci. 5. Förfarande enligt patentkravet 1,kännetecknat av att man bringar ytan med antigenbundna antikroppar (I) i kon-takt med en suspension av bakteriekroppar, till vars ytor antikroppar (II) mot nämnda antikroppar (I) är direkt bundna.Method according to claim 1, characterized in that the surface is contacted with antigen-bound antibodies (I) with a suspension of bacterial bodies, the surfaces of which antibodies (II) against said antibodies (I) are directly bound. 6. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2,kännetecknat av att man bringar ytan med antigenbundna antikroppar (I) i kontakt med antikroppar (II), vilka är riktade mot nämnda antikroppar (I) och vars Fc-delar specifikt binder sig till protein A och därefter tillsätter en suspension av protein A-bärande stafylokocker för visualisering av den med dubbla antikropplager täckta ytan.Method according to Claim 1 or 2, characterized in that the surface of antigen-linked antibodies (I) is contacted with antibodies (II) which are directed to said antibodies (I) and whose Fc parts specifically bind to protein A and then adds a suspension of protein A-bearing staphylococci to visualize the double antibody layer-coated surface. 7. Förfarande enligt ett eller flera av patentkraven 1-6, kännetecknat av att provet bringas att passera i en riktning i en zon, företrädesvis en smal zon, över antigenbelagd yta. 1 Förfarande enligt ett eller flera av patentkraven 1-7, kännetecknat av att man over den antigenbelagda ytan placerarMethod according to one or more of claims 1-6, characterized in that the sample is passed in a direction in a zone, preferably a narrow zone, over antigen-coated surface. Method according to one or more of claims 1-7, characterized in that the antigen-coated surface is placed over the