FI57128C - SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM - Google Patents
SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM Download PDFInfo
- Publication number
- FI57128C FI57128C FI783555A FI783555A FI57128C FI 57128 C FI57128 C FI 57128C FI 783555 A FI783555 A FI 783555A FI 783555 A FI783555 A FI 783555A FI 57128 C FI57128 C FI 57128C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- carbohydrate
- urea
- carbohydrates
- test
- identification
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/34—Internal compartments or partitions
Description
rBl KUULUTUSjULKAISU r Π ή O O jST4 l J () UTLAeGNIN«S$IUUFT 0/lZö fjtfXK· C (45) Patentti r.yanr.etty 10 06 1930 £jKjn Patent meddelatrBl ANNOUNCEMENT r Π ή O O jST4 l J () UTLAeGNIN «S $ IUUFT 0 / lZö fjtfXK · C (45) Patent r.yanr.etty 10 06 1930 £ jKjn Patent meddelat
^ ^ (51) Kv.ik.3/tata.3 C 12 Q 1/0A^ ^ (51) Kv.ik.3 / tata.3 C 12 Q 1 / 0A
SUOM I—Fl N LAN D (21) P**»«hdwmu·—NtmtaMMurini 783555 (22) Hkkwntaptivl—Aiwekninfid·· 21.11.78 (23) AJkupUv·—Glltlfh«tarf<g 21.11.78 (41) Tullut lulktMfcil — Riivit offamllg ntmttu 1· r«ki*t*rlh*llltu· mMM+rnm |. kuuL|ulk*un pvm.-ENGLISH I — Fl N LAN D (21) P ** »« hdwmu · —NtmtaMMurini 783555 (22) Hkkwntaptivl — Aiwekninfid ·· 21.11.78 (23) AJkupUv · —Glltlfh «Tarf <g 21.11.78 (41) Tullut lulktMfcil - Graters offamllg ntmttu 1 · r «ki * t * rlh * llltu · mMM + rnm |. month |
Patent· och ragltteratyralaan ' / Ameicu uttagd oeh uti^kriftM puMiewvd 29.02.80 (32)(33)(31) Pyydetty «tuolkuu» —Rcgird priorltet (71) Qrion-yhtyma, Oy, Nilsiänkatu 10-lU, 00510 Helsinki 51, Suomi-Finland(Fl) (72) Jouko Savolainen, Järvenpää, Suomi-Finland(FI) (7*0 Fermion Oy, patenttiosasto (51+) Tapa tunnistaa mikro-organismeja - Sätt att identifiera mikroorganismerPatent · och ragltteratyralaan '/ Ameicu uttagd oeh uti ^ kriftM puMiewvd 29.02.80 (32) (33) (31) Requested «tuolkuu» —Rcgird priorltet (71) Qrion-Yhtyma, Oy, Nilsiänkatu 10-lU, 00510 Helsinki 51, Suomi-Finland (Fl) (72) Jouko Savolainen, Järvenpää, Suomi-Finland (FI) (7 * 0 Fermion Oy, Patent Department (51+) The way to identify microorganisms - Sätt att identifiera mikroorganismer
Keksinnön tarkoituksena on esittää yksinkertainen tapa suorittaa mikro-organismien kvalitatiivinen tunnistaminen lokeromaljassa hiilihydraatti- ja typpiaineenvaihduntakokeiden, ureakokeen sekä morfologian avulla. Tässä yhteydessä mikro-organismeilla eli mikrobeilla tarkoitetaan lähinnä sädesieniä, hiivoja ja bakteereja.The object of the invention is to present a simple way of performing the qualitative identification of microorganisms in a compartment dish by means of carbohydrate and nitrogen metabolism tests, a urea test and morphology. In this context, microorganisms, i.e. microbes, mainly mean fungi, yeasts and bacteria.
Lääketieteessä, eläinlääketieteessä, elintarvike- ja käymisteollisuudessa mikro-organismien tunnistaminen on tärkeää. Mikrobien tunnistaminen on välttämätöntä valittaessa menetelmää mikro-organismien tuhoamiseksi ja niiden kasvuolosuhteiden säätelemiseksi. Tautia aiheuttavien mikro-organismien identifioiminen on tärkeää niiden patogeenisuuden selville saamiseksi ja oikean hoitomenetelmän valitsemiseksi. Elintarvike-ja käymisteollisuudessa mikro-organismit ovat hyötyorganismeja, mutta ne esiintyvät usein myös saastuttajina. Nämä saastuttajat on tunnistettava, jotta päästäisiin selville niiden , : ,W, ...In medicine, veterinary medicine, the food and fermentation industries, the identification of microorganisms is important. The identification of microbes is essential when choosing a method for destroying microorganisms and regulating their growth conditions. Identification of disease-causing microorganisms is important to determine their pathogenicity and to select the appropriate method of treatment. In the food and fermentation industry, microorganisms are beneficial organisms, but they often also occur as contaminants. These pollutants need to be identified in order to find out their,:, W, ...
, V ·1 2 57128 alkulähteistä ja, jotta voitaisiin valita oikeat menetelmät niiden kasvun ja leviämisen estämiseksi., V · 1 2 57128 primary sources and in order to select the right methods to prevent their growth and spread.
Mikrobien tunnistaminen perustuu fjääasiassa mikrobikasvuston morfologiaan, erilaisten hiilihydraattien ja typpi lähteiden käyttökykyyn, erilaisiin kasvuolosuhdevaatimuksiin sekä eräiden muiden ominaisuuksien hyväksikäyttöön.The identification of microbes is mainly based on the morphology of the microbial growth, the ability to use different carbohydrates and nitrogen sources, different growth conditions and the exploitation of certain other properties.
Hiilihydraattien assimilaatiokokeet sekä typpiaineenvaihduntakokeet voidaan suorittaa periaatteeltaan kolmella eri tavalla. Menetelmät ovat auksanografinen menetelmä, Wickerhamin liemiputkimenetelmä sekä Wickerhamin liemiputkimenetelmästä kehitetty vinopintamenetelmä.Carbohydrate assimilation tests as well as nitrogen metabolism tests can be performed in three different ways. The methods are the auxanographic method, the Wickerham broth tube method, and the oblique surface method developed from the Wickerham broth tube method.
Nämä menetelmät on kuvattu julkaisuissa Manual of Clinical Microbiology 2nd ed. 1974, p. 491-507 ja Journal of Clinical Microbiology 2, No 1, 1975, p. 21-34.These methods are described in Manual of Clinical Microbiology 2nd ed. 1974, pp. 491-507 and Journal of Clinical Microbiology 2, No. 1, 1975, pp. 21-34.
Edellä mainituilla menetelmillä ja useilla niiden sovellutuksilla on tiettyjä haittoja. Menetelmät vaativat paljon materiaalia koeputkina, maljoina, alustoina jne., ovat aikaa- ja tilaavieviä sekä työläitä suorittaa. Samoin haittana on kasvava kontaminaatiovaara materiaalin ja työvaiheiden määrän ollessa suuri.The above methods and several of their applications have certain disadvantages. The methods require a lot of material in the form of test tubes, plates, substrates, etc., are time and space consuming as well as laborious to perform. The disadvantage is also the growing risk of contamination with a large number of materials and work steps.
Näiden haittojen poistamiseksi on kehitetty keksinnön mukainen menetelmä, jossa kaikki tarvittavat testit, käymistestejä lukuunottamatta, tehdään samalla lokeromaljalla, jolloin materiaalin kulutusta, valmistukseen tarvittavaa aikaa ja työtä sekä työvaiheita voidaan ratkaisevati vähentää.In order to eliminate these disadvantages, a method according to the invention has been developed, in which all the necessary tests, with the exception of fermentation tests, are performed on the same tray, whereby material consumption, manufacturing time and work and work steps can be significantly reduced.
Esillä olevan keksinnön olennaisena tarkoituksena on aikaansaada yksinkertainen tapa suorittaa mikro-organismin tunnistaminen lokero-maljassa hiilihydraatti- ja typpiaineenvaihduntakokeiden, ureakokeen sekä morfologian perusteella. Kaikki kokeet suoritetaan samalla lokeromaljalla, jonka lokeroista yksi on varattu morfologista koetta varten. Tämä sisältää menetelmän ainoan täydellisen kiinteän kasvualustan ja lokeromaljan muut lokerot sisältävät hiilihydraatti- ja typpiaineenvaihduntakokeita sekä ureakoetta varten erilaisia kiinteitä agaralustoja, jotka saattavat myös sisältää indikaattoria ja puskuria.The essential object of the present invention is to provide a simple way to perform the identification of a microorganism in a tray dish on the basis of carbohydrate and nitrogen metabolism tests, urea test and morphology. All experiments are performed on the same tray, one of which is reserved for the morphological test. This includes the only complete solid medium in the method and the other wells in the tray plate contain carbohydrate and nitrogen metabolism assays, as well as various solid agar media for the urea assay, which may also include an indicator and buffer.
' i 3 57128'i 3 57128
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että hiilihydraatti- ja typpiaineenvaihduntakokeissa sekä ureakokeessa käytettävät kiinteät agaralustat eivät ennen kokeen alkua sisällä mikro-organismin kasvulle välttämättömiä ravinteita. Nämä lisätään lokeroihin vasta tutkittavan mikro-organismin siirrostamisen jälkeen tablettien muodossa. Tabletit sisältävät farmakologisesti hyväksyttäviä, tavanomaisia täyte- ja sidosaineita sekä kulloinkin mikro-organismin identifioimiseen soveltuvia sinänsä tunnettuja hiilihydraatteja ja typenlähteitä. Lisäksi tabletit sisältävät erilaisia mikro-organismille välttämättömiä ravinteita, jotka sopivasti täydentävät tabletissa olevia hiilihydraatteja ja typen-"" lähteitä. Esimerkiksi hiilenlähteen ollessa kyseessä täydentävä ravinne on typenlähteitä sisältävä ja typenlähteen ollessa kyseessä täydentävä ravinne on hiilenlähteitä sisältävä.The method according to the invention is characterized in that the solid agar media used in the carbohydrate and nitrogen metabolism experiments and in the urea experiment do not contain the nutrients necessary for the growth of the microorganism before the start of the experiment. These are added to the compartments only after inoculation of the test microorganism in the form of tablets. The tablets contain pharmacologically acceptable, conventional excipients and binders as well as carbohydrates and nitrogen sources known per se for the identification of the microorganism. In addition, the tablets contain various nutrients necessary for the microorganism, suitably supplementing the carbohydrates and nitrogen "" sources in the tablet. For example, in the case of a carbon source, the supplemental nutrient is containing nitrogen sources, and in the case of a nitrogen source, the supplementary nutrient is containing carbon sources.
Keksinnössä käytetty laite on steriili neliskulmainen kannellinen malja, joka on jaettu pohjalta nousevien, toisiaan kohtisuoraan leikkaavien, läpäisemättömien väliseinien avulla useampiin neliskulmaisiin lokeroihin. Lokeroiden koot ja lukumäärät voivat vaihdella.The device used in the invention is a sterile rectangular lid with a lid, which is divided into a plurality of rectangular compartments by means of rising, perpendicularly intersecting, impermeable partitions. Tray sizes and numbers may vary.
Lokeroiden pohjalla on jokaista suoritettavaa testiä varten sopiva, kiinteä, lievästi puskuroitu tai puskuroimaton agaralusta, joka voi sisältää tai olla sisältämättä indikaattoria, jolloin indikaattori voidaan valinnaisesti lisätä kasvatuksen jälkeen. Agaralusta siirrostetaan sopivalla määrällä tutkittavan mikro-organismin suspensiota. Siirrostamisen jälkeen agaralustan päälle asetetaan sinänsä tunnetulla maljaan sopivalla annostus laitteella tabletit, jotka sisältävät mikrobien kasvulle välttämättömät ravinteet, testattavat aineet sekä farmakologisesti hyväksyttäviä täyte- ja sidos-aineita.At the bottom of the compartments is a solid, slightly buffered or unbuffered agar medium suitable for each test to be performed, which may or may not contain an indicator, in which case the indicator may optionally be added after growth. The agar medium is inoculated with an appropriate amount of suspension of the microorganism to be tested. After inoculation, tablets containing the nutrients necessary for microbial growth, the test substances and pharmacologically acceptable excipients and binders are placed on the agar medium in a dish suitable for the plate known per se.
Jotta kulloinkin tutkittavana oleva mikro-organismi voitaisiin tunnistaa, voidaan testien lukumäärää ja laatua vapaasti vaihdella. Tämä aikaansaadaan vaihtelemalla keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettyjä alustoja sekä näiden kiinteiden alustojen päälle asetettavia tabletteja.In order to be able to identify the micro-organism under examination in each case, the number and quality of the tests can be freely varied. This is achieved by varying the substrates used in the method of the invention as well as the tablets to be placed on these solid substrates.
V · * .*· 4 57128V · *. * · 4 57128
Esimerkiksi hiivojen morfologista tutkimista varten varatussa lokerossa oleva alusta on yleisesti tunnettu maissiagari, mutta myös muita niukkaravinteisia alustoja voidaan käyttää. Nämä morfologisiin tutkimuksiin tarkoitetut alustat ovat ainoat tunnistusmenetelmässä käytetyt täydelliset alustat ja näihin alustoihin ei lisätä keksinnössä muuten käytettyjä tabletteja. Lokeroon mahtuu juuri sopivasti peitinlasi, joten mikroskopointi eli morfologinen tutkiminen voidaan suorittaa suoraan maljalta ja vältytään erillisten mikroskooppipreparaattien valmistamiselta. Mikroskopoinnin helpottamiseksi alustaan voidaan lisätä tunnettuja väriaineita.For example, the medium in the compartment reserved for the morphological study of yeasts is the well-known corn agar, but other low-nutrient media can also be used. These media for morphological studies are the only complete media used in the identification method, and tablets otherwise used in the invention are not added to these media. The tray fits just well in a coverslip, so microscopy, or morphological examination, can be performed directly on the plate and the preparation of separate microscope slides is avoided. To facilitate microscopy, known dyes can be added to the substrate.
Hiilihydraattikokeita ja kontrollikoetta varten alustat sisältävät agaria ja indikaattoria sekä puskuria. Indikaattoreina voidaan käyttää mitä tahansa pH-indikaattoria, joka osoittaa hapon muodostuksen ja pH:n laskun alle pH 5,5:n, esimerkiksi bromkresolipurppuraa tai bromtymolsinistä. Alustan pH säädetään indikaattorin värinvaihtoalueen puoliväliin ja puskuroidaan lievästi satunnaisia pH:n vaihteluja vastaan esim. 5-10 mM fosfaattipuskurilla .For carbohydrate experiments and control experiment, the plates contain agar and indicator as well as buffer. As indicators, any pH indicator can be used which shows acid formation and a drop in pH below pH 5.5, for example bromocresol purple or bromothymol blue. The pH of the medium is adjusted halfway through the color change range of the indicator and buffered slightly against random pH fluctuations, e.g. with 5-10 mM phosphate buffer.
Typpiaineenvaihdunnan nitraatin ja ammoniumin käyttökyvyn testaamista varten alusta sisältää agaria ja indikaattoria esimerkiksi bromtymolsineä, jonka pH säädetään sinisen ja keltaisen välille esimerkiksi pH 6,4:ään.To test the uptake of nitrate and ammonium for nitrogen metabolism, the medium contains agar and an indicator such as bromothymol blue, the pH of which is adjusted between blue and yellow to, for example, pH 6.4.
Ureaasikoetta varten alusta sisältää agaria ja indikaattoria. Indikaattorina voidaan käyttää esimerkiksi fenolipunaa. Alustan pH säädetään pH 6,9:ään.For the urease assay, the medium contains agar and indicator. For example, phenol red can be used as an indicator. The pH of the medium is adjusted to pH 6.9.
Tunnistusmenetelmässä tarvitaan vain 4 eri alustaa, joista ainoastaan yksi eli morfologia-alusta on täydellinen. Muut alustat eivät sisällä ravinteita, joten niiden koostumus rajoittaa tehokkaasti kontaminanttien kasvua.The identification method requires only 4 different substrates, of which only one, i.e. the morphology substrate, is complete. Other media do not contain nutrients, so their composition effectively limits the growth of contaminants.
Koska tunnistusmenetelmässä tarvitaan vain 4 eri alustaa, työmäärä 5 57128 verrattuna tunnettuihin menetelmiin, joissa jokaista koetta varten on valmistettava oma alusta, pienenee huomattavasti. Samalla menetelmässä käytettyjen alustojen säilyvyys paranee ja työvaiheiden määrä vähenee. Indikaattoria ei välttämättä tarvitse lisätä alustaan, vaan sitä voidaan pipetoida kasvatuksen jälkeen lokerossa olevalle alustalle.Since only 4 different substrates are required in the identification method, the workload of 5 57128 is considerably reduced compared to the known methods, in which a separate substrate has to be prepared for each experiment. At the same time, the durability of the substrates used in the method is improved and the number of work steps is reduced. The indicator does not necessarily need to be added to the medium, but can be pipetted onto the medium in the tray after growth.
Maljan testialustojen muut tarpeelliset aineosaset kuten hiilenläh-de, typenlähde, hivenaineet ja vitamiinit ovat tabletissa, joka maljan alustan kanssa yhdessä muodostaa kasvua ylläpitävän kokonaisuuden. Jokainen tabletti sisältää mikro-organismien kasvulle välttämättömät ravinteet, esimerkiksi Wickerhamin liemiputkimene-- telmän alustojen aineosaset, testattavat aineet sekä tabletin iner- tit täyteaineet. Täyteaineena voidaan käyttää mitä tahansa farmakologiassa käytettävää tabletin täyteainetta, joka luovuttaa kasvulle tärkeät aineosaset alustaan kasvatuksen aikana. Tällaisia täyteaineita ovat esimerkiksi selluloosa johdannaisineen. Tableteissa voidaan käyttää sidosaineita parantamaan tabletin koossapysymistä ja helpottamaan valmistamista. Sidosaineena voidaan käyttää esimerkiksi eräitä farmakologiassa käytettäviä muovivalmisteita.The other necessary ingredients of the plate test trays, such as carbon source, nitrogen source, trace elements, and vitamins, are contained in the tablet, which together with the tray tray forms a growth-sustaining entity. Each tablet contains the nutrients necessary for the growth of the microorganisms, for example the ingredients of the Wickerham broth tube substrates, the test substances and the inert excipients of the tablet. Any tablet excipient used in pharmacology can be used as an excipient, which transfers the growth-critical ingredients to the medium during growth. Such fillers include, for example, cellulose and its derivatives. Binders can be used in the tablets to improve tablet cohesiveness and to facilitate preparation. For example, some plastic products used in pharmacology can be used as binders.
Hiilihydraattitabletin prosentuaalinen koostumus on seuraava: hiilihydraattia 12,7-25,4 %, mikro-organismin kasvulle välttämättömiä ravinteita, esimerkiksi Difcon Yeast Nitrogen Base:ä 4,3 %, täyteainetta 60,6-74,5 % ja sidosainetta 9,5 %.The percentage composition of the carbohydrate tablet is as follows: carbohydrate 12.7-25.4%, nutrients necessary for the growth of the microorganism, for example Difcon Yeast Nitrogen Base 4.3%, excipient 60.6-74.5% and binder 9.5% .
Hiilihydraattitableteissa voidaan käyttää erilaisia kiteytyviä, kiinteitä monosakkarideja, disakkarideja, oligosakkarideja ja polysakkarideja. Myös muita kiinteitä hiilenlähteitä voidaan käyttää tablettien valmistukseen.Various crystalline solid monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides and polysaccharides can be used in carbohydrate tablets. Other solid carbon sources can also be used to make tablets.
Kontrollikoetta varten valmistetaan tabletti, jossa on kaikki muut aineet paitsi hiilihydraatti. Tätä tablettia voidaan myös käyttää, mikäli testattavana on hiilenlähde, joka ei kiteydy, esimerkiksi etanoli tai glyseroli. Tällöin testi lokeroon asetetaan tabletti, jossa ei ole hiilihydraattia ja päälle pipetoidaan mikro-organismin 6 57128 tunnistamista varten sopiva määrä hiilenlähdettä fysiologisesti siedettävänä konsentraationa. Etanolia tai glyserolia voidaan käyttää esimerkiksi 20 %:na liuoksena, jolloin kokeeseen sopiva määrä on 50 /jl/tabletti.For the control test, a tablet is prepared with all the ingredients except the carbohydrate. This tablet can also be used if the test is a non-crystallizing carbon source, for example ethanol or glycerol. In this case, a tablet without carbohydrate is placed in the test tray and a suitable amount of carbon source at a physiologically tolerable concentration is pipetted onto it to identify the microorganism 6 57128. For example, ethanol or glycerol can be used as a 20% solution, with a suitable amount for the experiment being 50 / tablet.
Nitraatti-, ammonium- ja ureatabletin koostumus on vastaavasti: ty-penlähdettä 2,5 %, mikro-organismin kasvulle välttämättömiä ravinteita, esimerkiksi Difcon Yeast Carbon Base:ä 3,0 %, täyteainetta 85,0 % ja sidosainetta 9,5 %.The composition of the nitrate, ammonium and urea tablet is respectively: nitrogen source 2.5%, nutrients necessary for the growth of the microorganism, for example Difcon Yeast Carbon Base 3.0%, excipient 85.0% and binder 9.5%.
Perustablettivalikoima maljaa kohti on seuraava: typenlähteen positiivinen kontrolli eli (NH^l^SO^, nitraatti, hiilihydraattikontro11i (ilman hiilihydraattia), glukoosi, maltoosi, sakkaroosi, inositoli, laktoosi, sellobioosi, raffinoosi, melibioosi, erytritoli, ksyloosi, dulsitoli ja trehaloosi seka urea. Tähän luetteloon voidaan lisätä ja tästä luettelosta voidaan poistaa aineita niin, että testissä käytettävät aineet parhaiten soveltuvat tutkittavana olevan mikro-organismin identifioimiseen.The range of basic tablets per plate is as follows: nitrogen source positive control (NH 4, 1 SO 2, nitrate, carbohydrate control (without carbohydrate), glucose, maltose, sucrose, inositol, lactose, cellobiose, raffinose, melibiose, secoitol, erythritol, xylitol, xylitol Urea may be added to or removed from this list in such a way that the substances used in the test are best suited to identify the micro-organism under investigation.
Tabletit on edullista asettaa paikoilleen laitteella, joka on suunniteltu ja valmistettu juuri tähän maljaan sopivaksi. Laitteeseen on sijoitettu putkilo jokaista tablettia varten, joten yhdellä painalluksella jokainen tabletti tulee oikealle paikalle. Tabletit valmistetaan tietyn painoisiksi puristamalla massa riittävän kovaksi tabletiksi niin ettei se hajoa alustan pinnalle kostut-tuaan.It is preferable to place the tablets in place with a device designed and manufactured to fit exactly this cup. A tube is placed in the device for each tablet, so with one press, each tablet comes in the right place. Tablets are made to a certain weight by compressing the mass into a sufficiently hard tablet so that it does not disintegrate on the surface of the substrate after wetting.
Kuvatulla menetelmällä saavutetaan huomattavia etuja. Materiaalin käyttö ja käsittely pienenee, koska kaikki testit ovat samalla maljalla eikä jokainen testi erikseen koeputkessa. Säilytys-, työskentely- ja kasvatustilaa säästyy ja testien suorittaminen nopeutuu ja on varmempaa. Valmistus on helpompaa ja nopeampaa, koska malja voidaan valaa yhdellä kertaa ja samassa asennossa. Alustoja tarvitaan vain neljä sensijaan että jokaiseen koeputkeen joudutaan annostelemaan erilainen alusta. Tabletin valmistus on yksinkertaista ja nopeaa.The described method achieves considerable advantages. The use and handling of the material is reduced because all tests are on the same plate and not each test is in a separate test tube. Storage, working and rearing space is saved and testing is faster and more secure. Manufacturing is easier and faster because the bowl can be poured at once and in the same position. Only four substrates are needed instead of having to dispense a different medium into each test tube. Tablet making is simple and fast.
\ t; · t , 7 57128\ t; · T, 7 57128
Ei tarvita helposti kontaminoituvia ravintoaineliuoksia, joiden tekeminen ja steriloiminen voi olla hankalaa, kuten esimerkiksi sokeriliuosten steriloiminen suodattamalla. Tabletteja ei välttämättä tarvitse steriloida kunhan ne valmistetaan tarpeellisia aseptisia työskentelytapoja noudattaen. Samalla vältytään suodatinpaperikiek-kojen kuivaamiselta, liuosten pipetoimiselta jne. Kontaminaatiovaara vähenee, koska järjestelmä morfologia-alustaa lukuunottamatta, ei sisällä yhtään täydellistä alustaa. Maljat ja tabletit voidaan säilyttää huoneenlämpötilassa. Lisäksi identifioimi sjärjestelmä on nopea. Tulokset voidaan lukea neljän vuorokauden kuluttua maljan siirrostamisesta.There is no need for easily contaminated nutrient solutions, which can be difficult to prepare and sterilize, such as sterilizing sugar solutions by filtration. The tablets do not necessarily need to be sterilized as long as they are prepared using the necessary aseptic procedures. At the same time, drying the filter paper discs, pipetting solutions, etc. is avoided. The risk of contamination is reduced because the system, with the exception of the morphology medium, does not contain any complete medium. Plates and tablets can be stored at room temperature. In addition, the identification system is fast. The results can be read four days after inoculation of the dish.
Seuraavat hiivoja, sädesieniä ja bakteereja koskevat sovellutusesimerkit kuvaavat keksinnön käyttöä.The following application examples for yeasts, fungi and bacteria illustrate the use of the invention.
Esimerkki 1Example 1
Kliinisestä näytteestä viljeltiin hiiva Sabouraud-agarilla puhdas-viljelmäksi. Suspensio valmistettiin steriloituun tislattuun veteen 1-2 hiivapesäkkeestä. Suspensiosta siirrostettiin neulalla hiiva maissiagarille raapaisemalla pinta rikki laidasta laitaan. Raapaisun toinen puoli peitettiin steriilillä peitinlasilla ja toinen puoli sai olla sellaisenaan. Monilokeromaljan jokaiseen muuhun lokeroon tipautettiin samaa hiivasuspensiota kaksi tippaa Pasteur pipetillä. Hiivasuspensio säilytettiin huoneenlämpötilassa tulevaa tarvetta varten. Tämän jälkeen tabletit, jotka sisältävät hiivojen kasvulle välttämättömät ravinteet, testattavat aineet, täyte- ja sidosaineet, asetettiin omiin lokeroihinsa alustojen pinnoille sitävarten valmis-- tetulla asettime 11a. Hiivojen tunnistamisessa testattiin seuraavia yhdisteitä, glukoosia, maltoosia, sakkaroosia, inositolia, laktoosia, sellobioosia, raffinoosia, melibioosia, erytritolia, ksyloosia, dulsitolia, trehaloosia, ammoniumia, nitraattia ja ureaa. Malja siirrettiin 25°C:een lämpökaappiin kasvatusta varten oikein päin.From a clinical sample, yeast was cultured on Sabouraud agar to a pure culture. The suspension was prepared in sterilized distilled water from 1-2 yeast colonies. The suspension was inoculated with a needle into yeast corn agar by scraping the surface broken from side to side. One side of the scraper was covered with sterile coverslip and the other side was allowed to remain as is. Two drops of the same yeast suspension were dropped into each of the other compartments of the multi-compartment dish with a Pasteur pipette. The yeast suspension was stored at room temperature for future use. The tablets, which contain the nutrients necessary for the growth of the yeasts, the test substances, the fillers and the binders, were then placed in their own compartments on the surfaces of the substrates with a custom-made applicator 11a. The following compounds, glucose, maltose, sucrose, inositol, lactose, cellobiose, raffinose, melibiose, erythritol, xylose, dulsitol, trehalose, ammonium, nitrate and urea were tested for yeast identification. The dish was transferred to a 25 ° C oven for growth in the correct orientation.
Kahden ja kolmen vuorokauden kuluttua mikroskopoitiin maissiagarin kasvusto suoraan maljalta 700 kertaisella suurennoksella kirkkaan kentän valaistuksella. Tulokseksi saatiin, että tutkittava hiiva muodosti hyyfiä,· mutta klamydosporeja ja artrosporeja ei esiintynyt. Muista testeistä saatiin seuraavat tulokset: 3 vrk:n kasvatuksen β 57128 jälkeen typen positiivinen kontrolli oli positiivinen. Hiiva kasvoi alustalla ja alustan väri oli keltainen, kuten sen täytyy aina ollakin. Nitraatti oli negatiivinen eli alustan väri oli keltainen. Hiilihyd-raattikontrolli oli tummanvihreä eli alkuperäisen värinen, kuten sen kuuluu ollakin. Sokereista glukoosi, maltoosi, sakkaroosi, ksyloosi ja trehaloosi olivat positiivia. Muut sokerit ja urea olivat negatiivisia.After two and three days, the corn agar culture was microscopied directly from the plate at 700x magnification under bright field illumination. The result was that the test yeast formed a hyphae, · but chlamydospores and arthrospores were absent. The following results were obtained from the other tests: after 3 days of growth of β 57128, the nitrogen positive control was positive. The yeast grew on the substrate and the color of the substrate was yellow, as it must always be. The nitrate was negative, i.e. the color of the substrate was yellow. The carbohydrate control was dark green, i.e. the original color, as it should be. Of the sugars, glucose, maltose, sucrose, xylose, and trehalose were positive. Other sugars and urea were negative.
Näiden tulosten perusteella hiiva olisi voinut olla Candida neoformans tai Candida parapsilosis. Fermentaatiokokeen avulla varmistettiin, että hiiva oli Candida parapsilosis.Based on these results, the yeast could have been Candida neoformans or Candida parapsilosis. The fermentation experiment confirmed that the yeast was Candida parapsilosis.
Esimerkki 2Example 2
Pitkäaikaista utaretulehdusta sairastavan lehmän maidosta eristettiin ja viljeltiin puhtaaksi hiiva. Hiivan identifioimiseen käytettiin edellä kuvattua menetelmää. Alkutoimenpiteet olivat samat kuin edellisessä esimerkissä.Yeast was isolated from the milk of a cow with long-term mastitis and cultured clean. The method described above was used to identify yeast. The initial steps were the same as in the previous example.
Tulostusvaiheessa kasvusto mikroskopoitiin suoraan maissiagarilta 2 vuorokauden kasvatuksen jälkeen. Hiiva muodosti hyyfiä ja pseudo-hyyfiä sekä artrosporeja, jotka muodostuvat katkeamalla hyyfien kärjistä. Typpi ja hiilihydraattikontrollit antoivat oikean reaktion, mikä osoitti, että malja ja näyte olivat käyttökelpoiset.In the printing step, the culture was microscopied directly from corn agar after 2 days of growth. Yeast formed a hyphae and a pseudo-hyphae, as well as arthrospores, which are formed by breaking the tips of the hyphae. Nitrogen and carbohydrate controls gave the correct reaction, indicating that the plate and sample were useful.
Nitraattitestin tulos oli negatiivinen. Sokereista glukoosi, laktoosi, ksyloosi ja dulsitoli antoivat positiivisen tuloksen. Maltoosi, sakkaroosi, inositoli, sellobioosi, raffinoosi, melibioosi, erytritoli ja trehaloosi olivat heikosti positiivisia. Urea oli positiivinen.The result of the nitrate test was negative. Of the sugars, glucose, lactose, xylose, and dulsitol gave a positive result. Maltose, sucrose, inositol, cellobiose, raffinose, melibiose, erythritol, and trehalose were weakly positive. Urea was positive.
Näiden tulosten perusteella hiiva identifioitiin Trichosporon cuta-neumi ks i.Based on these results, yeast was identified as Trichosporon cuta-neumi see i.
Esimerkki 3Example 3
Pilaantuneesta appelsiinituoremehusta eristettiin ja viljeltiin puhtaaksi hiiva. Hiiva identifioitiin kuvatulla järjestelmällä. Alkutoimenpiteet olivat samat kuin edellisissä esimerkeissä.Yeast was isolated from contaminated fresh orange juice and cultured. Yeast was identified by the system described. The initial steps were the same as in the previous examples.
, ' j·, 'j ·
OO
9 571 289 571 28
Maissiagarilla hiiva muodosti pseudohyyfiä. Muut tulokset olivat 4 vuorokauden jälkeen seuraavat: kontrollit olivat oikein; nitraatti oli positiivinen, sokereista glukoosi, maltoosi, sakkaroosi, sello-bioosi, raffinoosi, erytritoli ja trehaloosi olivat selvästi positiivisia, ksyloosi oli heikosti positiivinen sekä inositoli, laktoosi, melibioosi ja dulsitoli olivat negatiivisia. Urea oli positiivinen.On corn agar, the yeast formed a pseudohyph. Other results after 4 days were as follows: controls were correct; nitrate was positive, of sugars glucose, maltose, sucrose, cello-biose, raffinose, erythritol and trehalose were clearly positive, xylose was weakly positive and inositol, lactose, melibiose and dulcitol were negative. Urea was positive.
Näiden tulosten perusteella hiiva identifioitiin Hansenula anomalaksi.Based on these results, the yeast was identified as Hansenula anomaly.
^ Esimerkki 4^ Example 4
Kuvatulla tunnistamismenetelmällä tutkittiin Escherichia coli-bak-teerien (seroryhmä 0149) hiilihydraattien assimilaatio- ja nitraatin pelkistämiskykyä sekä ureaasin tuottoa.The identification method described examined the ability of Escherichia coli (serogroup 0149) to assimilate carbohydrates and reduce nitrate, as well as urease production.
Escherichia coli kasvatettiin yön yli ravintoliemessä 37°C:ssa, Kasvusto eristettiin alustasta sentrifugoimalla ja suspendoitiin steriiliin tislattuun veteen alkuperäiseen tilavuuteen. Samoin kuin hiivojen identifioinnissa, yksi tippa suspensiota tipautettiin maljan jokaiselle alustalle, minkä jälkeen asetettiin vastaavat tabletit paikoilleen. Maljat kasvatettiin yön yli 37°C:ssa. Tulokset luettiin samoin kuin hiivoja identifioitaessa.Escherichia coli was grown overnight in broth at 37 ° C. The culture was isolated from the medium by centrifugation and suspended in sterile distilled water to the original volume. As in the identification of yeasts, one drop of suspension was dropped on each medium of the dish, after which the corresponding tablets were placed in place. The plates were grown overnight at 37 ° C. The results were read in the same way as for the identification of yeasts.
Escherichia coli (seroryhmä 0149) pelkisti nitraatin nitriitiksi (punainen väri lisättäessä tippa sulfaniliinihappoa ja alfanaftyylaminia), - ei muodostanut ureaasia, assimiloi glukoosia, maltoosia, laktoosia, raffinoosia, melibioosia, ksyloosia ja trehaloosia; ei assimiloinut sakkaroosia, inositolia, sellobioosia, erytritolia eikä dulsitolia. Positiiviset ja negatiiviset reaktiot olivat selviä ja vastasivat kirjallisuudessa annettuja reaktioita.Escherichia coli (serogroup 0149) reduced nitrate to nitrite (red color with the addition of a drop of sulphanilic acid and alpha-naphthylamine), - did not form urease, assimilated glucose, maltose, lactose, raffinose, melibiose, xylose and trehalose; did not assimilate sucrose, inositol, cellobiose, erythritol, or dulsitol. Positive and negative reactions were clear and corresponded to those reported in the literature.
Tunnistusmenetelmä soveltuu Escherichia colin ja etenkin Enterobacteriaceae-heimon lajien identifioinnissa tarvittavien vastaavien ominaisuuksien tutkimiseen.The identification method is suitable for studying the corresponding characteristics required for the identification of species of Escherichia coli and in particular of the family Enterobacteriaceae.
Esimerkki 5Example 5
Edellä kuvattua hiivojen tunnistamismenetelmää käytettiin Strepto-myces-suvun lajien hii1ihydraattien ja nitraatin käyttökyvyn sekä tThe yeast identification method described above was used to determine the usefulness of carbohydrates and nitrate in species of the genus Strepto-myces, as well as
Claims (1)
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI783555A FI57128C (en) | 1978-11-21 | 1978-11-21 | SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM |
| SE7909543A SE7909543L (en) | 1978-11-21 | 1979-11-19 | IDENTIFICATION OF MICROORGANISMS |
| GB7940147A GB2037811B (en) | 1978-11-21 | 1979-11-20 | Identification of microorganisms |
| FR7928589A FR2442268A1 (en) | 1978-11-21 | 1979-11-20 | METHOD FOR IDENTIFYING MICROORGANISMS |
| DE19792946691 DE2946691A1 (en) | 1978-11-21 | 1979-11-20 | METHOD AND DEVICE FOR IDENTIFYING MICROORGANISMS |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI783555 | 1978-11-21 | ||
| FI783555A FI57128C (en) | 1978-11-21 | 1978-11-21 | SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI57128B FI57128B (en) | 1980-02-29 |
| FI57128C true FI57128C (en) | 1980-06-10 |
Family
ID=8512167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI783555A FI57128C (en) | 1978-11-21 | 1978-11-21 | SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE2946691A1 (en) |
| FI (1) | FI57128C (en) |
| FR (1) | FR2442268A1 (en) |
| GB (1) | GB2037811B (en) |
| SE (1) | SE7909543L (en) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2155948A (en) * | 1984-03-07 | 1985-10-02 | Sandoz Ltd | Container |
| CA1274757A (en) * | 1985-05-17 | 1990-10-02 | Barry James Marshall | Compositions and methods for the detection of urease for the diagnosis of campylobacter pyloridis infection |
| US4748113A (en) * | 1985-06-13 | 1988-05-31 | Marshall Barry J | Compositions and methods for the diagnosis of gastrointestinal disorders involving urease |
| FR2587722B1 (en) * | 1985-09-25 | 1988-05-20 | Rhone Poulenc Agrochimie | METHOD FOR DIAGNOSING FUNGAL DISEASES OF PLANTS AND DEVICE FOR CARRYING OUT SAID METHOD |
| SE460472B (en) * | 1986-04-04 | 1989-10-16 | Biodisk Ab | TEST ISSUE AND SET TO CHARACTERIZE BIOLOGICAL MATERIALS |
| AU772760B2 (en) * | 1997-04-10 | 2004-05-06 | Dade Behring Inc. | Universal test systems and methods of use thereof for identifying multiple families of microorganisms |
| US5888760A (en) * | 1997-04-10 | 1999-03-30 | Dade Microscan Inc. | Universal test systems and methods of use thereof for identifying multiple families of microorganisms |
| JP2004511207A (en) * | 2000-04-20 | 2004-04-15 | バイオログ，インコーポレーテッド | Comparative phenotypic analysis to evaluate biologically active compounds such as antimicrobial agents |
| US6998250B2 (en) | 2001-10-15 | 2006-02-14 | Donald J. McMichael | Method for detecting Helicobacter pylori |
| US7008777B2 (en) | 2001-10-15 | 2006-03-07 | Barry J. Marshall | System for the detection of urease and method for using same |
| USD484988S1 (en) | 2001-12-17 | 2004-01-06 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diagnostic test kit with specimen-handling tool |
| US6783976B2 (en) | 2001-12-21 | 2004-08-31 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Carrier and specimen-handling tool for use in diagnostic testing |
| EP1594881A4 (en) * | 2002-12-03 | 2008-02-06 | Read Robert Taintor | Concurrent microorganism identification and susceptibilities from broth |
| US8313938B1 (en) | 2004-04-26 | 2012-11-20 | Hardy Diagnostics | Culture medium for cultivation of microorganisms |
| US8778657B1 (en) | 2004-04-26 | 2014-07-15 | Hardy Diagnostics | Culture medium for cultivation of microorganisms |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3107204A (en) * | 1961-01-23 | 1963-10-15 | Dalde Reagents Inc | Microbiological testing method and structure therefor |
| FR1356317A (en) * | 1963-02-06 | 1964-03-27 | Device and method for identifying isolated bacteria | |
| US3509026A (en) * | 1967-01-19 | 1970-04-28 | Litton Systems Inc | Method of and apparatus for indicating the sensitivity of microorganisms to antibiotics |
| GB1235686A (en) * | 1967-02-16 | 1971-06-16 | Rolf Saxholm | Improvements in diffusion testing and apparatus therefor |
| US3715280A (en) * | 1970-07-14 | 1973-02-06 | Us Health | Mini-test dish |
-
1978
- 1978-11-21 FI FI783555A patent/FI57128C/en not_active IP Right Cessation
-
1979
- 1979-11-19 SE SE7909543A patent/SE7909543L/en not_active Application Discontinuation
- 1979-11-20 DE DE19792946691 patent/DE2946691A1/en not_active Withdrawn
- 1979-11-20 FR FR7928589A patent/FR2442268A1/en not_active Withdrawn
- 1979-11-20 GB GB7940147A patent/GB2037811B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2946691A1 (en) | 1980-05-29 |
| GB2037811A (en) | 1980-07-16 |
| GB2037811B (en) | 1983-03-09 |
| FR2442268A1 (en) | 1980-06-20 |
| FI57128B (en) | 1980-02-29 |
| SE7909543L (en) | 1980-05-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI57128C (en) | SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM | |
| US20050084923A1 (en) | Methods for cultivating and analyzing microbial individual cell cultures | |
| Green et al. | A differential procedure applicable to bacteriological investigation in brewing | |
| FI67725B (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ENHETER AVSEDDA FOER BESTAEMNING AV ANTIBIOTIKA- OCH SULFARESTER I BIOLOGISKA VAETSKOR OCH FRAMSTAELLDA ENHETER | |
| JPH07509120A (en) | Biological substance analysis method and device | |
| CN110023761B (en) | Preparation of viable microorganism samples and microorganisms for subsequent mass spectrometry measurement and evaluation | |
| US20070065894A1 (en) | Method for quantification of biological material in a sample | |
| EP0030964A1 (en) | Negative control media for microbiologic biochemical tests. | |
| EP2895595B1 (en) | Culture medium method and device | |
| Nevalainen et al. | Methods for isolation and cultivation of filamentous fungi | |
| US5279964A (en) | Storable inoculation device containing stabilized microorganisms | |
| EP2875117A1 (en) | Method for isolating microorganisms on a culture medium, and related device | |
| US4766063A (en) | Process and device for detecting the activity of a substance on a micro-organism or on a mixture of micro-organisms | |
| CA2494033A1 (en) | Novel procedure for growth, imaging, and enumeration of microbial colonies for serological or screening assays | |
| US8420384B2 (en) | Apparatus for making a solid nutrient medium and associated method | |
| EP0104001B1 (en) | Triphasic mycoplasmatales culture device and method and competing microorganism inhibiting device for use therein | |
| CN1198774A (en) | Method and apparatus for testing paraffinophilic microorganisms for antimicrobial agent sensitivity | |
| JP2002500020A (en) | A rapid method for assessing the inhibition and killing of anaerobic bacteria by toxic compounds. | |
| US11427849B2 (en) | Culture medium method and device | |
| WO2017126542A1 (en) | Method for measuring oxidoreductase activity | |
| US4721678A (en) | Triphasic mycoplasmatales culture device | |
| CN110261267B (en) | Detection method of photosynthetic bacteria preparation product for fishing | |
| Ceccato-Antonini | Microbiological Techniques and Methods for the Assessment of Microbial Contamination | |
| US20190032001A1 (en) | Culture peel plate | |
| CN1333374A (en) | Quick determination for microbe munity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ORION-YHTYMAE OY |