FI121468B - Betuliiniperäiset yhdisteet antimikrobisina aineina - Google Patents

Description

BETULIINIPERÄISET YHDISTEET ANTIMIKROBISINA AINEINA BETULIN HÄRSTAMMANDE FÖRENINGAR SOM ANTIMIKROBISKA FÖRENINGAR

Keksinnön ala

Keksintö liittyy betuliiniperäisiin yhdisteisiin ja niiden käyttöön lääke- ja kosmetiikkateollisuuden sovelluksissa antimikrobisina aineina. Yhdisteet soveltuvat käytettäviksi erityisesti antibakteerisina, virusten vastaisina ja alkueläinten vastaisina aineina sekä UV-valon haitallisten vaikutusten ehkäisemiseen. Lisäksi keksintö liittyy uusiin betuliinijohdannaisiin ja niiden valmistusmenetelmiin joko suoraan betuliinista tai siitä johdetuista välituotteista.

Tekniikan taso

Alla esitetyn rakenteen 1 mukainen betuliini on lupaaneihin kuuluva luonnossa esiintyvä pentasyklinen triterpeenialkoholi, joka tunnetaan myös nimillä betulinoli ja lup-20(29)-eeni-3p,28-dioli. Betuliinia esiintyy eräiden puulajien kuoressa ja erityisesti koivun kuoressa parhaimmillaan jopa 40 % kuoren kuivapainosta. Betu-liinin lisäksi puun kuoresta saadaan pienempiä määriä myös betuliinin johdannaisia. Betuliinin eristämiseen kuoriaineksesta on olemassa tunnettuja, pääasiassa uuttoon perustuvia menetelmiä.

2

Betuliinin niukkaliukoisuus aiheuttaa eräissä sovelluksissa ongelmia käytön ja formuloitavuuden suhteen, joten mm. liukoisuuden parantamiseksi betuliinista onkin valmistettu johdannaisia. Johdannaisten valmistuksessa tyypillisesti hyödynnetään betuliinin funktionaalisten ryhmien eli primäärisen ja sekundäärisen hydroksyyliryhmän sekä kaksoissidoksen reaktiivisuutta. Molemmat hydroksyyli-ryhmät voidaan esteröidä, jolloin saadaan mono- tai diestereitä. Betuliinista saadaan myös tunnetuilla menetelmillä glykosidijohdannaisia ja betuliinille voidaan suorittaa hapetus-, pelkistys- ja toisiintumisreaktioita happokatalyytin läsnä ollessa.

Alla esitetyn reaktiokaavan rakenteen 3 mukaista betuliinihappoa voidaan eristää mm. koivun tuohesta tai korkkitammen korkista uuttamalla ja sitä voidaan valmistaa useilla menetelmillä, jotka perustuvat lähinnä betuliinin tai koivun kuoriainek-sen suorahapetukseen. Reaktiokaaviossa esitetään patentin US 6,280,778 mukainen betuliinin 1 suorahapetus betulonihapoksi 2 Jonesin hapetuksena kro-mi(Vl)oksidikatalyytin läsnä ollessa ja näin saadun betulonihapon 2 selektiivinen pelkistys natriumboorihydridin avulla betuliinihapoksi 3.

A A

J \ Jones hapetus J \

Cr03 NaBH4 I l ΓΟΗ,ΟΗ —— -- i l HCOOH —-

1 Asetoni THF

X

I Γ I T jSsOOH

/ ' 3 3

Patentissa US 5,804,575 kuvataan vaihtoehtoinen betuliinihapon valmistusmenetelmä, jossa hapetusvaiheessa betuliinin 3-beeta-hydroksyyli suojataan asetyloi-malla. Tällöin estetään betuliinin sekundäärisen hydroksyyliryhmän isomeroitu-minen ja hapettuminen.

Betuliinin ja sen johdannaisten soveltuvuus lääketieteellisiin, kosmeettisiin ja te-ollisuuskemikaalisovellutuksiin on jossain määrin tunnettu. Betuliinin ja betuliinihapon käyttö kosmeettisissa sovellutuksissa kuten hiusten kasvun ja tuuheuden edistäjänä sekä komponenttina ihovoiteissa on tunnettua mm. julkaisusta W00003749. Betuliinihapon käyttö aurinkovoiteissa UV-valon haitallisten vaikutusten ennalta ehkäisyyn on esitetty julkaisussa WOO 174327. Betuliinin kasvain-tenvastaista vaikutusta varsinkin melanooman osalta on kuvattu mm. julkaisussa US 5,869,535.

Betuliinin ja sen eräiden johdannaisten käyttöä antifungaalisina ja hiivanvastaisina aineina on kuvattu julkaisussa US 6,642,217.

Julkaisussa US 5,750,587 esitetään betuliinin ja sen johdannaisten virusten vastaista vaikutusta erityisesti Herpes simplex -virukseen. Useiden betuliinijoh-dannaisten vaikutusta HIV-1-virukseen on evaluoitu tehokkaiden vaihtoehtoisten lääkkeiden saamiseksi nykyisille valmisteille niiden toksisuuden, sivuvaikutusten, resistenttien HIV-kantojen ja korkean hinnan takia. I-Chen Sun et ai. J. Med. Chem. 1998, 41, 4648-4657 artikkelin mukaan betuliinin mono- ja dimeripih-kahappo- ja glutaraattiestereillä on havaittu HIV:n vastaista vaikutusta.

Betuliinin ja sen useiden johdannaisten antibakteerisia ominaisuuksia on kuvattu julkaisussa WO026762 (=US 2002/0119935). Erityisesti yhdisteet tehoavat Escherichia coli, Staphylocccus aureus ja Enterococcus faecalis -bakteereihin.

Uusien turvallisten antibakteeristen yhdisteiden tarve maailmalla kasvaa jatkuvasti johtuen pääasiassa ongelmista, joita aiheuttavat uudet resistentit bakteerikannat, 4 joihin yksittäiset lääkkeet eivät enää tehoa. Lisäksi on olemassa ilmeinen tarve tehokkaille ja turvallisille alkueläinten, erityisesti Leishmania donovani, Leishma-nia mexicana ja muiden Leishmania-hjicn vastaisille aineille, joiden sivuvaikutukset ovat vähäiset. Nykyisin edellä mainittujen alkueläinten torjuntaan käytetään tyypillisesti myrkyllisiä antimonisuoloja. On myös esitetty, että erilaisilla prote-iinikinaaseilla olisi merkittävä osuus Leishmania-\a]ien erilaistumisessa. Prote-iinikinaaseilla on tunnetusti merkittävä osuus erilaisissa syövissä, kuten leukemioissa ja glioomissa, astmassa, sydän- ja verenkierto-elimistön sairauksissa sekä autoimmuunitaudeissa.

Edellä esitetyn perusteella voidaankin havaita, että on olemassa ilmeinen tarve uusille turvallisille antimikrobisille aineille, erityisesti antibakteerisille, virusten vastaisille ja alkueläimiin vaikuttaville aineille sekä aineille, joilla on LTV-valon haitallisia vaikutuksia ehkäisevää vaikutusta. Lisäksi on ilmeinen tarve prote-iinikinaaseihin vaikuttaville yhdisteille eli proteiinikinaasien aktivaattoreille ja inhibiittoreille.

Bctuliini ja bctuliinihappo ovat veteen niukkaliukoisia ja vaikeasti cmulgoitavia ja/tai formuloitavia yhdisteitä, joista on ongelmallista valmistaa kosmetiikka- ja lääketeollisuuden valmisteiksi tarkoitettuja tuotteita. Näin ollen onkin lisäksi ilmeinen tarve saada aikaan uusia, ympäristömyötäisiä betuliinijohdannaisia, joilla on parannettu emulgoitavuus ja/tai liukoisuus veteen tai kosmetiikka- ja lääketeollisuuden sovelluksissa tyypillisesti käytettyihin liuottimiin tai väliaineisiin, joista voidaan helposti valmistaa stabiileja valmisteita, joilla lisäksi on toivottu vaikutus.

Betuliiniperäisillä yhdisteillä tarkoitetaan tässä pentasyklisiä triterpenoideja ja erityisesti betulonihappoa sekä betuliinin johdannaisia ja erityisesti johdannaisia, jotka sisältävät substituentteina luonnon yhdisteitä ja/tai tunnetusti toksisuudeltaan vähäisiä yhdisteitä ja varsinkin betuliinin alkoholi-, fenoli- ja/tai karboksyy-lihappo- ja/tai esteri- ja/tai amidi- ja/tai eetterijohdannaisia ja/tai heterosyklisen osarakenteen sisältäviä johdannaisia ja/tai karbamaattijohdannaisia 5

Antimikrobisilla yhdisteillä tarkoitetaan tässä yhdisteitä, joilla on bakteerien, virusten, hiivojen, homeiden, sienten ja/tai alkueläinten vastaista vaikutusta.

Mikrobeihin luetaan bakteerit, virukset, hiivat, sienet, homeet ja alkueläimet.

Keksinnön päämäärä

Keksinnön päämääränä ovat uudet betuliinijohdannaiset antimikrobisina aineina ja erityisesti kosmetiikka- ja lääketieteen sovelluksiin antibakteerisina yhdisteinä, joilla on myös virusten vastaista, alkueläinten vastaista ja proteiinikinaaseihin vaikuttavaa vaikutusta ja UV-valon haitallisia vaikutuksia ehkäisevää vaikutusta.

Keksinnön päämääränä ovat myös uudet betuliinijohdannaiset, joissa substituent-teina on luonnonaineina tunnettuja yhdisteitä ja/tai toksisuudeltaan vähäisiä yhdisteitä.

Keksinnön päämääränä ovat myös uudet betuliinijohdannaiset, joilla on parannettu liukoisuus ja/tai emulgoitavuus veteen ja/tai kosmetiikka- ja lääketeollisuuden sovellutuksissa tyypillisesti käytettyihin liuottimiin tai väliaineisiin kuten rasvoihin, alkoholeihin ja vastaaviin.

Keksinnön päämääränä ovat myös menetelmät uusien betuliinijohdannaisten valmistamiseksi.

Keksinnön päämääränä on myös uusien betuliinijohdannaisten käyttö antimikro-bisina aineina.

Keksinnön päämääränä on myös uusia betuliinijohdannaisia käsittävät koostumukset.

6

Keksinnön mukaisten betuliinijohdannaisten tunnusomaiset piirteet on esitetty patenttivaatimuksessa 1, niiden käytön patenttivaatimuksessa 3 ja koostumusten tunnusomaiset piirteet on esitetty patenttivaatimuksessa 4.

Keksinnön yleinen kuvaus

Esillä oleva keksintö kohdistuu uusien betuliinijohdannaisten käyttöön antimikro-bisina yhdisteinä ja erityisesti antibakteerisina aineina. Yhdisteet ovat erityisen sopivia kosmetiikka- ja lääketeollisuuden sovelluksiin. Lisäksi keksintö kohdistuu uusiin betuliinijohdannaisiin, jotka edullisesti sisältävät substituentteina luonnon yhdisteitä ja/tai tunnetusti toksisuudeltaan vähäisiä yhdisteitä, kuten betuliinin alkoholi-, fenoli-, ja/tai karboksyylihappo-, ja/tai esteri- ja/tai amidi- ja/tai eetteri-johdannaisiin ja/tai heterosyklisiä rakenneosia sisältäviin ja/tai karbamaattijoh-dannaisiin ja erityisesti betuliinin karboksyylihappo- ja esteri- ja amidijohdannai-siin ja/tai heterosyklisen osarakenteen sisältäviin johdannaisiin ja/tai karbamaatti-johdannaisiin. Keksintö kohdistuu myös betuliinijohdannaisten käyttöön vaikuttavina aineina, joilla on parannettu liukoisuus ja/tai emulgoitavuus kosmetiikka- ja lääketeollisuuden käyttämiin liuottimiin tai väliaineisiin, sekä bctuliinijohdannais-ten valmistusmenetelmiin.

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus

Yllättäen havaittiin, että eräillä uusilla betuliinijohdannaisilla on antimikrobista vaikutusta ja erityisesti antibakteerista ja alkueläimiin tehoavaa vaikutusta. Yhdisteillä on myös havaittu vaikutusta proteiinikinaaseihin, joilla todettu olevan osuutta leukemia-, gliooma-, syöpä-, autoimmuuni-, alkueläin-, astma- sekä sydän- ja verenkiertoelimistön sairauksiin. Lisäksi yhdisteillä on ennalta ehkäisevää vaikutusta UV-valon haitallisia vaikutuksia vastaa.

7

Monissa keksinnön mukaisissa yhdisteissä substituentteina on luonnon yhdisteitä ja/tai tunnetusti toksisuudeltaan vähäisiä yhdisteitä komponenttina, joten nämä yhdisteet ovat turvallisia ja ympäristömyötäisiä.

Keksinnön mukaisesti on mahdollista valmistaa uusia, vaikuttavina aineina tehokkaita betuliinijohdannaisia ja erityisesti betuliinin karboksyylihappo- ja esteri- ja amidijohdannaisia ja/tai heterosyklisiä rakenneosia sisältäviä ja/tai karbamaatti-johdannaisia, joilla useilla on parannettu liukoisuus ja/tai emulgoitavuus kosmetiikka- ja lääketeollisuuden käyttämiin liuottimiin tai väliaineisiin.

Yllättäen myös todettiin, että eräät keksinnön mukaiset betuliinijohdannaiset vapauttavat vaikuttavan yhdisteen kontrolloidusti pitkän ajan kuluessa. Tämä mahdollistaa keksinnön mukaisten tuotteiden tehokkaan täsmäannostelun.

Keksinnön mukaiset betuliinijohdannaiset on määritelty patenttivaatimuksessa 1 ja edulliset keksinnönmukaiset yhdisteet on määritelty vaatimuksessa 2.

Vaikuttavina aineina tehokkaita yhdisteitä ovat scuraavat yleisen kaavan I mukaiset betuliinijohdannaiset ja niiden suolat: ^13

X ® X

|i° ! . \

AtAc f Te Vs R2 ia missä

Rl = H, -OR., -0(C=0)Rb, -NRaRz, -CN, -CHO, -(C=0)0Ra, -SR», 8 -0(C=0)NHRa, =0 tai =S, missä Ra, Rb ja Rz ovat toisistaan riippumatta H, Ci-C22 alifaattinen, haaroittumaton tai haaroittunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivetytähde; C3-C8 syklinen- tai heterosyklinen tähde; substituoitu tai substitu-oimaton fenyyli- tai bentsyylitähde; substituoitu tai substituoimaton 1,2,3-triatsoli, 1,2,4-triatsoli, tetratsoli, pyrroli, isoksatsoli, pyratsoli, imidatsoli tai oksatsoli; karboksimetyyli-, karboksimetyyliesteri- tai karboksimetyyli-amidijohdannainen tai niiden suola; R2 = -CH2ORa, -CH20(C=0)Rb, -(C=0)0Rb, -CH2NRaRz, -CH2CN, -CH2CHO, -CH2(C=0)0Ra, -CHzSRa, -CH20(C=0)NHRa, -CH=0 tai -CH=S, missä Ra, Rb ja Rz ovat toisistaan riippumatta H, Ci-C22 alifaattinen, haaroittumaton tai haaroittunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivetytähde; CV Cg syklinen- tai heterosyklinen tähde; substituoitu tai substituoimaton fenyyli- tai bentsyylitähde; substituoitu tai substituoimaton 1,2,3-triatsoli, 1,2,4-triatsoli, tetratsoli, pyrroli, isoksatsoli, pyratsoli, imidatsoli tai oksatsoli; karboksimetyyli-, karboksimetyyli-esteri- tai karboksimetyyliamidijohdannainen tai niiden suola; R3 = isopropcnyyli-, isopropyyli-, isopropyylifcnyyli-, isopropyylihydroksifcnyyli tai isopropyylimeripihkahappojohdannainen tai niiden suola; X10 = Xi 1 = H, C tai N; X12 = X13 = ’’puuttuu”, (C=0)0R, (C=0)NHR, missä R = H tai Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai substituoitu tai substituoimaton fenyyli- tai bentsyylitähde, tai Xi2-Xi3 muodostaa syklisen osarakenteen, joka on muotoa -(Xi2=Xi4)-Xi5-(Xi3=Xi6)-, missä Xi2 = X13 = C, X14 = Xi6 = ’’puuttuu”, O tai S, X]5 = C, O, S tai N-Χπ, missä X17 = H, Cj-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, substituoitu tai substituoimaton fenyyli- tai bentsyylitähde; a, b, c ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; ja 9 e = ’’puuttuu” tai se on kaksois- tai yksöissidos.

Mikäli Xio = Xn = H, X12 = X13 = puuttuu”, a, b, c ja d ovat yksöissidoksia ja e = ’’puuttuu”, niin Rl ja R2:ssa olevat Ra ja Rz ovat toisistaan riippumatta C1-C22 alifaattinen, haaroittumaton tai haaroittunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilive-tytähde, C3-C8 syklinen- tai heterosyklinen tähde, substituoitu tai substituoimaton fenyyli- tai bentsyylitähde, substituoitu tai substituoimaton 1,2,3-triatsoli, 1,2,4-triatsoli, tetratsoli, pyrroli, isoksatsoli, pyratsoli, imidatsoli tai oksatsoli, karbok-simetyyli-, karboksimetyyliesteri- tai karboksimetyyliamidi-johdannainen tai niiden suola ja Rb on C10-C22 alifaattinen, haaroittumaton tai haaroittunut, tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivetytähde, C3-C8 syklinen- tai heterosyklinen tähde, substituoitu tai substituoimaton fenyyli- tai bentsyylitähde, substituoitu tai substituoimaton 1,2,3-triatsoli, 1,2,4-triatsoli, tetratsoli, pyrroli, isoksatsoli, pyratsoli, imidatsoli tai oksatsoli, karboksimetyyli-, karboksi-metyyliesteri- tai karboksime-tyyliam i d ij o h dannainen tai niiden suola.

Betuliinijohdannaisia ovat seuraavassa esitettyjen rakenteiden IA - IQ mukaiset yhdisteet: IA: Rl = OH; R2 = CH20(C=0)Rf, missä Rf = C11-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3 (isopropenyyliryhmä);

Xio = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IB: Rl = OH; 10 R2 = CH20(C=0)(CHRg)CH2C00Y, missä Rg = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, Ci-C4-alkyyliryhmä tai NRh, missä Rh= H tai Ci-C4-alkyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3; X10 = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IC: Rl = OH; R2 = CH2ORi, missä Ri = omitiini-, /V-asetyyliantraniilihappo- tai trimetyyliglysiiniesteri (eli betaiiniesteri); R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” ID: Rl = OH; R2 = CH20(C=0)CHRj(NHZ), missä Rj = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3-indolyylimetyyliryhmä ja Z = H, Rk, (C=0)Rk tai COORk, missä Rk = C1-C22 haaroittunut tai haaroittu-maton alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai fenyyli-, bentsyyli- tai 4-hydroksibentsyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3; Χίο = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IE: Rl = OH; 11 R2 = CH2ORn, niissä Rn = karboksimetoksiverbenolin, -terpineolin, -tymolin, -karvakrolin, -mentolin, -kanelialkoholin, -kurkumiinin, -eugenolin, -bomeolin, -isobomeolin, -krysanteemihapon, -kaneli-hapon tai -retinolihapon esteri; R3 = CH2=CCH3; Χίο = Xu = H; X12 = X13 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IFa: Rl = 0(C=0)Rm, missä Rm = C11-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; R2 = CH20(C O)R0, missä Ro - C11-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, e ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IFb: Rl = 0(C=0)(CHRc)CH2C00Y, missä Rc = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, Ci-C4-alkyyliryhmä tai NR|,. missä Rh = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä; R2 = CH20(C=0)(CHRd)CH2C00Y, missä Ra = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1 -C4-alkyy 1 iryhmä tai NRk, missä Rk= H tai C1 -C4-alkyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3; Χίο = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” 12 IFc: Rl = 0Rr, missä Rr = omitiini-, /V-asetyyliantraniilihappo- tai trime- tyy liglysiiniesteri; R2 = CH2ORp, missä Rp = omitiini-, /V-asctyyliantraniilihappo- tai trimetyyliglysiiniesteri; R3 = CH2=CCH3; X10 = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IFd: Rl = 0(C=0)CHRs(NHZ), missä Rs = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imi- datso 1 yylimetyyl i - tai 3-indolyylimetyyliryhmä, Z = H, Rk, (C=0)Rk tai COORk, missä Rk Ci-C22 haaroittunut tai haaroittumaton alkyy-li- tai alkenyyliryhmä tai fenyyli-, bentsyyli- tai 4-hydroksibentsyyliryhmä; R2 = CH20(C=0)CHRx(NHZ), missä Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3-indolyylimetyyliryhmä, Z = H, Ry, (C=0)Ry tai COORy, missä Ry = Ci-C22 haaroittunut tai haaroit-tumaton alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai fenyyli-, bentsyyli- tai 4-hydroksibentsyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xl 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IFe: Rl = ORv, missä Rv = karboksimetoksiverbenolin, -terpineolin, -tymolin, -karvakrolin, -mentolin, -kanelialkoholin, -kurkumiinin, -eugenolin, -bomeolin, -isobomeolin, -krysanteemihapon, -kaneli-hapon tai -retinolihapon esteri; R2 = CH2ORu, missä Ru = karboksimetoksiverbenolin, -terpineolin, 13 -tymolin, -karvakrolin, -mentolin, -kanelialkoholin, -kurkumiinin, -eugenolin, -bomeolin, -isobomeolin, -krysanteemihapon, -kaneli-hapon tai -retinolihapon esteri; ja R3 = CH2=CCH3; X10 = Xu = H; X12 = Xl3 = ’’puuttuu”; a, b, e ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IG: Rl = OH; R2 = (C=0)NHCHRxC00Y, missä Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRy> missä Ry = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä ja Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3-indolyyli-metyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3; X10 = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IH: Rl = OH; R2 = (C=0)Rw, missä Rw = verbenolin, terpineolin, tymolin, karvakrolin, mentolin, kanelialkoholin, kurkumiinin, eugenolin, bomeolin tai isobomeolin esteri; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, e ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” 14

Ha: Rl = OR, missä R = H, Ci-C4-alkyyli-, bentsyyli-, 4-hydroksi- bentsyyli-, -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli-, 3-indo-lyyli metyyli- tai CH3SCH2-ryhmä, tai karboksimetoksiverbenolin, -terpineolin, -tymolin, -karvakrolin, -mentolin, -kanelialkoholin, -kurkumiinin, -eugenolin, -bomeolin, -isobomeolin, -krysan-teemihapon, -kanelihapon tai -retinolihapon esteri; R2 = (C=0)NHCHRxC00Y, missä Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRy, missä Ry = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä ja Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3-indolyyli-metyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xii=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu”

Ilb: Rl = OR, missä R = H, Ci-C4-alkyyli-, bentsyyli-, 4-hydroksi- bcntsyyli-, -CH2CH2CH2CH2NH2, tai CH3SCH2-ryhmä, tai karboksimetoksiverbenolin, -terpineolin, -tymolin, -karvakrolin, -mentolin, -kanelialkoholin, -kurkumiinin, -eugenolin, -bomeolin, -isobor-neolin, -krysanteemihapon, -kanelihapon tai -retinolihapon esteri; R2 = (C=0)Rw, missä Rw = verbenolin, terpineolin, tymolin, karvakrolin, mentolin, kanelialkoholin, kurkumiinin, eugenolin, bomeolin tai isobomeolin esteri; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” 15 IJa: Rl = okso (=0)-ryhmä; R2 = (C=0)NHCHRxC00Y, missä Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRy, missä Ry = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä ja Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3-indolyyli-metyyliryhmä; R3 = CH2=CCH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IJb: Rl = oksoryhmä; R2 = (C=0)Rw, missä Rw = verbenolin, terpineolin, tymolin, karva-krolin, mentolin, kanelialkoholin, kurkumiinin, eugenolin, bomeolin tai isobomeolin esteri; R3 = CH2=CCH3; Χίο = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IK: Rl = OH tai 0-(C=0)Rb, missä Rb = Ci-C22 alkyyli- tai alkenyy- liryhmä tai fenyyliryhmä; R2 = CH2OH tai CH20-(C=0)Rf, missä Rf = Ci-C22 alkyyli- tai al-kenyyliryhmä tai fenyyliryhmä; R3 = (CH3)2CRz tai CH3CHCH2RZ, missä Rz = C6H5.„(OH)n tai C6H5_n_m(OH)n(OCH3)m ja n = 0-5, m = 0-5, n + m < 5; X10 = X11 = H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, e ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” 16 IL: Rl = OH tai 0-(C=0)Rb, missä Rb = C1-C22 alkyyli- tai alke- nyyliryhmä tai fenyyliryhmä; R2 = CH2OH tai CH20-(C=0)Rf, missä Rf = C1-C22 alkyyli- tai al-kenyyliryhmä tai fenyyliryhmä; ja R3 = H2C=CCH2Rq tai CH3CCH2Rq, missä Rq = meripihka-happoanhydridi, meripihkahappoimidi tai CH(COORo)CH2COORz, missä Ro = H, Na, K, Ca, Mg, tai C1-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä ja Rz = H, Na, K, Ca, Mg tai C1-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu” IM: Rl = H, ORz, 0(C=0)Rb, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, SRZ, =0, =S, missä Rz = H, Ci-Cb lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai alla esitetty aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C10-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, tai Rl on alla esitetyn osarakenteen XX mukainen; R2 = CH2ORz, CH20(C=0)Rb, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH2SRz, CH=0, CH=S , missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C10-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, tai R2 on alla esitetyn osarakenteen YY mukainen; R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3 (isopropyyliryhmä); Χίο = X11 = H; 17

Xi2 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; ja e = ’’puuttuu”; osarakenne XX ja YY, jossa YY = CH2XX, valitaan joukosta:

Rv/ . . VyR’ / \ 1,2,3-triatsolit \\ /[ isoksatsolit /NVN /~n

R I

S' 1,2,4-triatsolit T N"K pyratsolit

R· /=N

R

tetratsolit ^_ / imidatsolit nr _/R R' R" pyrrol it P oksatsolit

R' / N

joissa rakenteissa R, R’ ja R”ovat tosistaan riippumatta H, aromaattinen ryhmä ZZ, C|-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alke-nyyliryhmä; ja aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa: „ys - νΛ R6 R6 18 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, C|-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Ci-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyy-li- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, kar-boksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleeni-dioksidiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli IN: Rl = H, ORz, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRf, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C10-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osarakenteen mukainen ja Rf = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen mukainen; R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRf, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = Cio-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osa-rakenteen mukainen ja Rf = H, Ci-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen mukainen; R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, c ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; e = ’’puuttuu”, ja 19 aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa:

\ ' tai I

R6 R6 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyy-li- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, kar-boksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleeni-dioksiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli; ja osarakenne Rf tai Rb on muotoa R4—

Xr-X2

Xl x4 missä R4 = H tai Ci-C 20 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; X5 = ’’puuttuu”, C, O, N tai S; X1-X2 muodostaa syklisen osarakenteen, joka on muotoa:

Xi-(X3=X6)-X7_(X4~X8)-X2, missä Xi = X2= C tai N; X3 = X4 = C;

Xf, = X3 = O, S tai ’’puuttuu”; X7 = C, O, S tai N-X9, missä X9 = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; ja f = yksöis- tai kaksoissidos 20 IO: Rl = H, ORz, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRf, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, C|-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, C i -CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C10-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osarakenteen mukainen ja Rf = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen mukainen; R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRf, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C10-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osa-rakenteen mukainen ja Rf = H, C|-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen mukainen; R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3;

Xio = Xn=H; X12 = Xi 3 = ’’puuttuu”; a, b, e ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; e = ’’puuttuu”; ja aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa:

r*T

R6 R6 21 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyy-li- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, kar-boksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleeni-dioksiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli; ja osarakenne Rf tai Rb on muotoa: R4— ΧΓ--Χ2 χ! x4 missä R4 = H tai C1-C20 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; X5 = ’’puuttuu”, C, O, N tai S;

Xi = X2 = C tai N; ja X3 = X4 = Rg, (C=0)0Rg tai (C=0)NHRg, missä Rg = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; ja f = yksöis- tai kaksoissidos IP: Rl = H, OR, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRz, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut allcyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = H, C1-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRz, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen 22 ryhmä ZZ ja Rb = H, C1-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3; ja ZZ on muotoa: R7 p/5 R5w^ <ai R6 R6 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, kar-boksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleeni-dioksiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli; kohdassa X10-X11 voi olla syklinen tai heterosyklinen osarakenne, joka voi olla muotoa Xi0-(Xi2=Xi4)-Xi5-(Xi3=Xi6)-Xn missä X10 = Xu = C tai N;

Xi2 = Xi3 = C; X14 = Xi6 = O, S tai ’’puuttuu”; X15 = C, O, S tai N-X17, missä X17 = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; ja a, b, c, d ja e ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia IQ: Rl = H, ORz, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRz, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = H, C1-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; 23 R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRz, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, Ci-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = H, Ci-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3; ja aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa:

LjJ tai R6 R6 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, C i -C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkcnyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, kartioksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleeni-dioksiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli; ja kohdassa Xio-Xn voi olla uusi syklinen tai heterosyklinen osarakenne, jossa Xio = Xi i = C tai N; X12 = X13 = R, (C=0)0R tai (C=0)NHR, missä R = H tai Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; ja a, b, e, d ja e ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia.

Edellä esitettyjen betuliinijohdannaisten sisältämät substituentit ovat useissa yhdisteissä peräisin luonnossa esiintyvistä aineista tai tunnetusti toksisuudeltaan vähäisistä yhdisteistä tai molemmista tai ne ovat tyypillisiä heterosyklisiä farma-koforisia ryhmiä. Monet näistä betuliiniperäisistä yhdisteistä ovat ympäristö 24 myötäisiä yhdisteitä, joiden potentiaaliset haittavaikutukset käyttäjän ja ympäristön kannalta ovat pieniä ja myös paremmin ennustettavissa kuin synteettisten yhdisteiden. Hajotessaan betuliiniperäisistä yhdisteistä muodostuu tyypillisesti betu-liinia tai betuliinin happojohdannaisia ja substituentin komponentteja. Yhdisteiden rakenneosina olevien komponenttien kuten luonnonaineiden hajoamisreitit ja -tuotteeett luonnossa tunnetaan hyvin. Lisäksi betuliinijohdannaisilla on alhainen toksisuus, joka käy ilmi oheisissa esimerkeissä suoritetuista sytotoksisuuskokeis-ta.

Betuliiniperäisistä yhdisteistä erityisen huomattavaa antibakteerista vaikutusta todettiin betulonihapolla (vertailuyhdiste) ja betuliinin 28-/V-asetyyliantraniilihappoesterillä pitoisuudelle 1 pg/ml, kuten voidaan havaita oheisista esimerkeistä.

Keksinnön mukaisia uusia betuliinijohdannaisia ovat mm. betuliinin pitkäketjui-sen hiilivetyosan sisältävät mono- ja diesterit sekä eräät betuliinin, betulonihapon tai betuliinihapon aminohappo-, antraniliinihappo-, krysanteemihappo-, tymoli- ja mcntolijohdannaisct.

Lisäksi keksinnön mukaisia uusia yhdisteitä ovat betuliinin 29-olefiinin jatko-reaktioilla, kuten alkylointi- tai eeni-reaktiolla saatavat tuotteet ja niiden johdannaiset, kuten betuliinisukkinaatin johdannaiset.

Edullisia uusia yhdisteitä ovat betuliinin 28-Ci8-alkyleenimeripihkahappoesteri, betuliinin 3,28-Ci8-alkyleenimeripihkahappodiesteri, betuliinin 28-karboksi-metoksimentoliesteri, betuliinin 28-karboksimetoksitymoliesteri, betuliinin 28-krysantemaattiesteri, betuliinin 28-isostearaattiesteri, betuliinihapon L-histidiiniamidi, betuliinihapon L-lysiiniamidi, betuliinin 28-N-asetyyliantraliinihappoesteri, ja betulonihapon 28-aspartaatti- amididimetyyliesteri.

25

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä tarkoitetaan tässä myös yhdisteiden suoloja ja erityisesti niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja. Farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja saadaan keksinnön mukaisista yhdisteistä tunnetuilla tavoilla emäksien tai happojen avulla.

Keksinnön mukaisesti yhdisteistä voidaan valmistaa koostumuksia annosteltaviksi nisäkkäille, kuten ihmisille tai eläimille, joilla on mikrobin aiheuttama infektio tai häiriö, erityisesti bakteerin tai alkueläimen aiheuttama infektio.

Koostumukset voivat olla suun kautta annosteltavia, paikallisia, ihon alle annosteltavia, lihakseen annosteltavia tai suonensisäisesti annosteltavia valmisteita, jotka käsittävät alalla tunnettuja farmaseuttisesti hyväksyttäviä apuaineita, lisäaineita, liuottimia ja kantajia. Koostumukset sisältävät vaikuttavana aineena yhtä tai useampaa keksinnön mukaista betuliiniperäistä yhdistettä 2-60 p-%.

Keksinnön mukaiset betuliiniperäiset yhdisteet ovat tyypillisesti biohajoavia. Lisäksi bakteerien ei tiedetä kehittäneen resistenssiä betuliinille, joten resistenssin kehittymistä ci myöskään ole odotettavissa bctuliinijohdannaisillc.

Esillä olevat betuliiniperäiset yhdisteet voidaan emulgoida, liuottaa tai sekoittaa veteen tai alalla käytettyihin apuaineisiin ja väliaineisiin tunnettuja sekoitus- ja valmistusmenetelmiä ja apuaineita kuten pinta-aktiivisia aineita, emulgaattoreita, dispergointiaineita ja liuottimia ja valinnaisesti lämpöä hyväksikäyttäen. Sopivia väliaineita ovat esimerkiksi alkoholit, polyolit ja polyoliesterit, erilaiset geelit ja rasvat, kasviöljyt ja kiinteät terveydelle vaarattomat väliaineet kuten tärkkelys ja selluloosa ja niiden johdannaiset, kaoliini, talkki yms. Sopivia kasviöljyjä ovat esimerkiksi rypsi-, rapsi-, mänty-, auringonkukka-, palmu-, soija- ja oliiviöljy.

Erityisesti keksinnön mukaisilla betuliiniperäsillä yhdisteillä, joissa substituent-teina on pitkäketjuisia alkyyliryhmiä, on hyvä emulgoitavuus ja/tai liukoisuus 26 ja/tai sekoitettavuus veteen tai alkoho leihin, polyö leihin tai polyoliestereihin, erilaisiin geeleihin ja rasvoihin tai kasviöljyihin tai niiden rasvahappojohdannaisiin.

Keksinnön mukaisella ratkaisulla on useita etuja. Edellä esitetyt betuliiniperäiset yhdisteet soveltuvat hyvin nisäkkäille tarkoitettuun lääke- ja kosmetiikkakäyttöön, koska ne eivät ole toksisia. Yhdisteet ovat biologisesti hajoavia eivätkä jätä ympäristöön haitallisia jäämiä. Lisäksi yhdisteet vaikuttavat hyvin spesifisti vain koh-deorganismeihin. Riippuen kohdesovelluksesta voidaan betuliinin substituentin avulla säätää aineen selektiivisyyttä ja hajoamisnopeutta. Tarvittaessa voidaan valmistaa yhdiste, joka hajoaa hitaammin ja tuottaa hajotessaan jatkuvasti aktiivista komponenttia, jolloin saadaan aikaan tasainen vaikutus pidemmäksi ajaksi eli ”slow-release” vaikutus.

Edellä kuvattuja betuliinijohdannaisia voidaan valmistaa seuraavassa esitetyillä menetelmillä I - XIV.

Menetelmä I

Edellä kuvattuja tyypin IB tai IFb mukaisia bctuliinicstcrcitä voidaan valmistaa antamalla betuliinin (1 mol) reagoida maleiinihappoanhydridin C4_C22-alkyyli- tai alkenyylijohdannaisen (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) kanssa imidatsolin (1-7 mol, edullisesti 3-5 mol) ja liuottimen läsnä ollessa 0-100 °C:ssa, edullisesti 20-70 °C:ssa, 5-100 h, edullisesti 10-50 h ajan. Edullisesti käytetään Cis-alkenyylimeripihkahappoanhydridiä (ASA). Liuottimena voidaan käyttää N-metyyli-2-pyrrolidonia (NMP), Ν,Ν-dimetyyliformamidia (DMF), dimetyyli-sulfoksidia (DMSO), 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania (THF), asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti NMP:tä. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja tuote erotetaan esimerkiksi siten, että seos kaadetaan veteen, dekantoidaan, liuotetaan liuottimeen, jossa tuote pestään tarvittaessa laimealla suolahappo liuoksella ja vedellä. Liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan toivottua betuliiniesteriä, joka voidaan 27 puhdistaa kiteyttämällä, kromatografisesti tai edullisesti uuttamalla, jolloin liuottimena voidaan käyttää dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,4-dioksaania, 1,2-dimetoksietaania, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä tai edellä mainittujen seoksia. Käytettäessä ylimäärin anhydridiä (1,6-5 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol) muodostuu päätuotteena rakennetta IFb vastaavia estereitä, ja kun anhydridiä käytetään 1-1,2 mol saadaan rakennetta IB vastaavia estereitä.

Menetelmä II

Edellä kuvattuja tyypin IA, IC, ID, IE, IFa, IFc, IFd ja IFe rakenteen mukaisia betuliiniestereitä voidaan valmistaa betuliinista (1 mol) ja karboksyylihapoista (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), MA-dimetyyhaminopyridiinin (DMAP) (0,01 - 1 mol) ja disykloheksyylikarbodi-imidin (DCC) (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), tai .V-(3-dimctyyliaminopropyyli)-7V-etyylikarbodi-imidihydro-kloridin (EDC) (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-60 °C:ssa, edullisesti 20-40 °C:ssa 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Karboksyylihappo valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IA: HO(C=0)Ri, jossa Ri = C11-C22- lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyli-ryhmä; IC: ornitiini-, nikotiini-, /V-asetyyliantraniilihappo tai trimetyyliglysiini; ID: HO(C=0)CRx(NHRy); Rx = alkyyli-, heteroalkyyli- tai aryylialkyyliryhmä; Ry = H tai asyyliryhmä; ja IE: karboksimetoksiverbenoli, -terpineoli, -tymoli, -karvakroli, -mentoli, -kanelialkoholi, -kurkumiini, -eugenoli, -bomeoli tai -isobomeoli tai krysanteemihappo, kanelihappo tai retinolihappo. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliase-taattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos kaadetaan veteen, orgaaninen kerros erotetaan ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan betuliiniesteriä, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Käytettäessä karboksyylihappo-reagenssia 0,8 - 1,5 mol saadaan rakenteiden IA, IC, ID, IE tai IFd mukaisia yhdisteitä, ja käytettäessä ylimäärin karboksyylihapporeagenssia (1,6 - 3 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol), ja disykloheksyylikarbodi-imidia (DCC) (1,6-3 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol), tai /V-(3-dimetyyliaminopropyyli)-7V-etyylikarbodi- 28 imidihydrokloridia (EDC) (1,6-3 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol) muodostuu IFa, IFc, IFd tai IFe rakennetta vastaavia yhdisteitä. Valmistettaessa tyypin IE tai IFe mukaisia yhdisteitä, muodostetaan ensin lähtöaineena käytetystä alkoholista etik-kahappojohdannainen menetelmän V mukaan.

Menetelmä III

Edellä kuvattuja tyypin IA, IC, IE, IFa, IFc ja IFe rakenteen mukaisia betulii-niestereitä voidaan valmistaa betuliinista (1 mol) ja karboksyylihapoista (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), tetraisopropyyliortotitanaatti-, tetrabutyyliortotita-naatti-, /?-tolueenisulfonihappomonohydraatti- tai pyridiini-/?- tolueenisulfonaattikatalyytin (0,01 - 1 mol) tai rikkihapon tai suolahapon (1-6 %, edullisesti 2-4 %) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 80-160 °C:ssa, edullisesti 100-140 °C:ssa, 2-50 h, edullisesti 4-25 h ajan. Karboksyylihappo valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IA: HO(C=0)Ri, jossa Ri = Cn-C22- lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; IC: omitiini-, nikotiini-, V-asctyyliantraniilihappo tai trimetyyliglysiini; IE: karboksimetok- siverbenoli, -terpineoli, -tymoli, -karvakroli, -mentoli, -kaneli-alkoholi, -kurku-miini, -eugenoli, -bomeoli tai -isobomeoli tai krysanteemihappo, kanelihappo tai retinolihappo. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia tai ksyleeniä. Reaktiossa syntynyt vesi erotetaan vedenero-tusputkella tai vakuumilla. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos kaadetaan veteen, orgaaninen kerros erotetaan, pestään tarvittaessa emäksisellä vesiliuoksella, edullisesti NaHCCb tai Na2CC>3 -vesiliuoksella ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan betuliiniesteriä, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Käytettäessä karboksyylihapporeagenssia 0,8 - 1,5 mol, saadaan IA, IC tai IE rakennetta vastaavia yhdisteitä, ja käytettäessä ylimäärin karboksyyli- 29 happoreagenssia (1,6-3 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol) muodostuu IFa, IFc tai IFe rakennetta vastaavia yhdisteitä. Valmistettaessa tyypin IE tai IFe mukaisia yhdisteitä, muodostetaan ensin lähtöaineena käytetystä alkoholista etikkahappojohdan-nainen menetelmän V mukaan.

Menetelmä IV

Edellä kuvattuja tyypin IA, IC, ID, IE, IFa, IFc, IFd ja IFe rakenteen mukaisia estereitä voidaan valmistaa betuliinista (1 mol) ja karboksyylihapoista (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), joiden annetaan ensin reagoida oksalyylikloridin tai tionyylikloridin (1 - 10 mol, edullisesti 1-4 mol), kanssa ilman liuotinta tai liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa, 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Karboksyylihappo valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IA: HO(C=0)Ri, jossa Ri = C11-C22 lineaarinen tai haaroittunut al-kyyli- tai alkenyyliryhmä; IC: ornitiini-, nikotiini-, V-ascty y li an tran i i li h appo tai trimetyyliglysiini; ID: HO(C=0)CRx(NHRy); Rx = alkyyli-, heteroalkyyli- tai aryylial kyy li ryhmä; RY = H tai asyyliryhmä; IE: karboksimetoksiverbenoli, -terpineoli, -tymoli, -karvakroli, -mentoli, -kaneli-alkoholi, -kurkumiini, -eugenoli, -bomeoli tai -isobomeoli tai krysanteemihappo, kanelihapppo tai retinolihappo. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofurania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja haluttu happokloridi puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Saadun happoklo-ridin (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) annetaan reagoida betuliinin (1 mol), emäksen (0,5 - 10 mol, edullisesti 1-5 mol) kuten trictyyliamiinin, tripropyyli-amiinin, di-isopropyylietyyliamiinin, edullisesti trietyyliamiinin kanssa liuottimen läsnä ollessa tai DMAP-katalyytin (0,01 - 1 mol), pyridiinin ja liuottimen läsnä ollessa tai emäksen (0,5 - 10 mol, edullisesti 1-5 mol) kuten trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopro py y lietyy liamiinin, edullisesti trietyyliamiinin ja pyridiinin kanssa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa 2-50 h, edulli- 30 sesti 5-25 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraa-nia, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen betuliiniamidi tai -esterituote puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Käytettäessä happokloridireagenssia 0,8 - 1,5 mol muodostuu rakenteen IA, IC, ID ja IE mukaisia yhdisteitä ja käytettäessä ylimäärin happokloridireagenssia (1,5-3 mol, edullisesti 2 - 2,2 mol) muodostuu IFa, IFc, IFd tai IFe rakennetta vastaavia yhdisteitä. Valmistettaessa tyypin IE tai IFe mukaisia yhdisteitä, muodostetaan ensin lähtöaineena käytetystä alkoholista etikka-happojohdannainen menetelmän V mukaan.

Menetelmä V

Valmistettaessa tyypin IE ja IFe rakenteen mukaisia betuliinijohdannaisia menetelmissä II, III tai IV sekä tyypin Ha ja Hb rakenteen mukaisia betuliinijohdannaisia menetelmässä VI muodostetaan alkoholeista ensin etikkahappojohdannaisia seuraavalla tavalla. Etikkahappojohdannainen valmis-tetaan sekoittamalla vedessä alkoholia (1 mol), ja kloorictikkahappoa (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1 - 1,2 mol) 1-7 h, edullisesti 3-5 h 100-150 °C:ssa, edullisesti 120-130 °C:ssa litiumin, kaliumin, natriumin tai niiden hydridien tai hydroksidien (1,5 - 3 mol, edullisesti 1,8 - 2,2 mol), edullisesti natriumin (Na), natriumhydridin (NaH) tai natriumhydroksidin (NaOH) läsnä ollessa. Alkoholi valitaan verbenolin, terpineolin, tymolin, karva-krolin, mentolin, kanelialkoholin, kurkumiinin, eugenolin, bomeolin ja isobome-olin joukosta. Seos jäähdytetään huoneenlämpöön, tehdään happamaksi väkevällä suolahapolla ja uutetaan liuottimeen. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,4-dioksaania, 1,2-dimetoksietaania, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dietyylieetteriä. Orgaaninen faasi pestään tarvittaessa emäksisellä vesiliuoksella, edullisesti NaHCOs tai Na2C03 -vesiliuoksella. Liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan karboksimetoksivälituotetta, joka voi 31 daan tarvittaessa puhdistaa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla.

Menetelmä VI

Edellä kuvattuja tyypin IG, ΓΗ, II ja IJ johdannaisia voidaan valmistaa betu-lonihaposta (1 mol) ja luonnon alkoholeista (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) tai aminohapoista (0,8 -1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), liuottimen ja DMAP (0.01 -1 mol) sekä DCC (0,8 -1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol), tai EDC (0,8 - 1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) läsnä ollessa sekoittamalla 0-60 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa, 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Alkoholi valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IH: verbenoli, terpineoli, tymoli, karvakroli, mentoli, kanelialkoholi, kurkumiini, eugenoli, bomeoli tai isobomeoli. Aminohappo valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IG: HO(C=0)Rt, jossa Rt = NHCHRxCOOY, jossa Y = H, Na, K, Ca, Mg, Ci-C4-alkyyliryhmä tai NRX, jossa Rx = H, Ci-C4-alkyyli-, bentsyyli-, 4-hydrok-sibentsyyli-, -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli-, 3-indolyylimetyyli- tai CH3SCH2-ryhmä; edullisesti L-aspartaattihapon dimetyyliesterin hydrokloridi, L-histidiinin metyyliesterin hyd-rokloridi, L-glutamiinihapon dimetyyliesterin hydrokloridi tai L-lysiinin metyyliesterin dihydrokloridi. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydro-furaania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen haluttu betu-lonihappoamidi tai -esterituote (tyyppiä IJa tai IJb) puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Saatu betu-lonihappoamidi tai -esteri voidaan haluttaessa pelkistää vastaavaksi betuliinihap-poamidiksi tai -esteriksi (tyyppiä IG tai IH) natriumboorihydridillä patentin US 6,280,778 mukaisesti. Reaktion päättymisen jälkeen betuliinihappoamidi tai -esteri puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Antamalla näin saadun betuliinihappoamidin tai -esterin reagoida menetelmien II, III tai IV mukaan saadaan tyypin Ha ja Hb mukaisia betuliinijohdannaisia.

32

Menetelmä VII

Edellä kuvattuja tyypin IG, IH, II ja IJ rakenteen mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa betulonihaposta (1 mol), jonka annetaan reagoida oksalyylikloridin tai tionyylikloridin (1 - 10 mol, edullisesti 1 - 4 mol) kanssa ilman liuotinta tai liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa, 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydro-furaania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen haluttu hap-pokloridi puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Reaktiosta saadun betulonihappokloridin (1 mol) annetaan reagoida aminohapon (0,8 -1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) tai alkoholin (0,8 -1,5 mol, edullisesti 1-1,2 mol) kanssa emäksen (0,5 - 10 mol, edullisesti 1 - 5 mol) kuten trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopropyy-lietyyliamiinin, py-ridiinin, edullisesti trietyyliamiinin kanssa liuottimen läsnä ollessa tai DMAP-katalyytin (0,01 - 1 mol), pyridiinin ja liuottimen läsnä ollessa tai emäksen (0,5 -10 mol, edullisesti 1 - 5 mol) kuten trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopropyylietyyliamiinin, pyridiinin, edullisesti trietyyli-amiinin ja pyridiinin kanssa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Aminohappo valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IG: HO(C=0)Rt, jossa Rt = NHCHRxCOOY ja Y = H, Na, K, Ca, Mg, Ci-C4-alkyyliryhmä tai NRX, jossa Rx = H, Ci-C4-alkyyli-, bentsyyli-, 4-hydroksibentsyyli-, -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli-, 3-indolyyli-metyyli- tai CE^SCE^-ryhmä, edullisesti L-aspartaattihapon dimetyyliesterin hyd-rokloridi, L-histidiinin metyyliesterin hydrokloridi, L-glutamiinihapon dimetyyliesterin hydrokloridi ja L-lysiinin metyyliesterin dihydrokloridi. Alkoholi valitaan eri yhdisteryhmien tapauksissa seuraavasti: IH: verbenoli, terpineoli, tymoli, karvakroli, mentoli, kanelialkoholi, kurkumiini, eugenoli, bomeoli, isobomeoli tai eugenoli. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, 33 edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään laimealla suolahappoliuoksella ja vedellä. Liuotin haihdutetaan kuiviin ja saatu raakatuote (tyyppiä IJa ja IJb) puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromato-grafisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Saatu betulonihappoamidi tai -esterituote voidaan pelkistää vastaavaksi betuliinihappoamidiksi/esteriksi (tyyppiä IG tai IH) natriumboorihydridillä patentin US 6,280,778 mukaisesti. Reaktion päättymisen jälkeen haluttu betuliinihappoamidi tai -esteri puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Antamalla saadun betuliinihappoamidin tai -esterin reagoida menetelmien II, III tai IV mukaan saadaan tyypin II mukaisia betuliinijohdannaisia.

Menetelmä Vili

Edellä kuvattuja tyypin IK rakenteen mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa betu-liinista (1 mol) ja aromaattisista yhdisteistä, jotka valitaan siten, että joukossa IK fenolitähde Rz = C6H5-n(OH)n tai C6H5-n-m(OH)n(OCH3)m ja n = 0-5, m = 0-5, n + m £ 5 (4-20 mol), polymeerisen happokatalyytin, edullisesti polystyreenin sulfonihappojohdannaisen kanssa (0,1 - 1,5 g edullisesti 0,5 - 1 g, 16-50 mesh) ja liuottimen läsnä ollessa. Rcaktioscosta sekoitetaan inertissä ilmakehässä 20-120 °C:ssa, edullisesti 75-110 °C:ssa, 1-5 h, edullisesti 2-4 h ajan. Reaktiossa syntynyt vesi erotetaan sopivasti vedenerotusputkella tai vakuumilla. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyy li eetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti hiilivety- ja/tai kloorattuja hiilivetyliuottimia tai eetteriä. Reaktion päättymisen jälkeen seoksen annetaan jäähtyä huoneenlämpöön, suodatetaan, suodos pestään vedellä, kuivataan ja liuotin haihdutetaan. Näin saatu betuliinijohdannainen puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla.

Menetelmä IX

Edellä kuvattuja tyypin IL rakenteen mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa menetelmällä II, III tai IV valmistetuista tyypin IA tai IFa rakenteen mukaisista yhdis 34 teistä (1 mol) ja maleiinihappoanhydridistä (0.8 - 10 mol), edullisesti (1-5 mol) ja hydrokinonin (0,05 - 0,5 mol, edullisesti 0,08 - 0,3 mol) ja liuottimen läsnä ollessa tai sulatteena kuumentaen reaktioseosta 150-220 °C:ssa, edullisesti 160-180 °C:ssa, 1-5 h, edullisesti 2-4 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti sulatteena. Reaktion päättymisen jälkeen haluttu tuote puhdistetaan tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla. Näin saatu betuliinin maleiinihappo-anhydridijohdannainen voidaan edelleen muuttaa tyypin IL rakenteen mukaiseksi imidi- tai esteriyhdisteeksi tunnetuilla menetelmillä.

Menetelmä X

Edellä kuvattuja tyypin IM, IN, IO, IP ja IQ rakenteen mukaisia betuliinijohdan-naisia voidaan valmistaa antamalla betuliinin (1 mol) reagoida trifeenyylifosfiinin (0,8 - 8 mol, edullisesti 2-5 mol), 3,3-dimetyyliglutaarimidin (0,8 - 8 mol, edullisesti 2 - 5 mol), dietyyliatsodikarboksylaattiliuoksen (0,8 - 8 mol, edullisesti 2 -5 mol) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-60 °C :ssa, edullisesti 20-40 °C :ssa, 2-50 h, edullisesti 5-25 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydro-furaania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tetrahydrofuraania. Reaktion päätyttyä muodostunut sakka suodatetaan pois. Liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan 3-deoksi-2,3-dihydrobetuliinia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla.

Menetelmä XI

Edellä kuvattuja tyypin IN ja IO rakenteen mukaisia betuliinijohdannaisia voidaan valmistaa antamalla betuliinin (1 mol) reagoida Diels-Alder-adduktin (0,8 -5 mol, edullisesti 1 - 2 mol), difenyylifosforyyliatsidin (DPPA) (0,8 - 5 mol, 35 edullisesti 1-2 mol) ja emäksen, trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopro-pyylietyyliamiinin, edullisesti trietyyliamiinin (TEA) (0,8 - 5 mol, edullisesti 1 -2 mol) kanssa liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-150 °C :ssa, edullisesti 60-120 °C :ssa, 1-48 h, edullisesti 2-24 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa laimealla emäksisellä vesiliuoksella, laimealla happo liuoksella, vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan betuliinin 28-0-Diels-Aldcr-adduktia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä. Käytettäessä ylimäärin Diels-Alder-adduktia, difenyylifosforyyli-atsidia (DPPA) ja trietyyliamiinia (1,5-3 mol, edullisesti 2 - 2,2 mol) muodostuu betuliinin 3,28-O-Diels-Alder-diadduktia.

Diels-Alder-addukteja voidaan valmistaa C5-C22 dieenihaposta (1 mol), joka voi olla lineaarinen, haaroittunut, syklinen tai heterosyklinen, jossa heteroatomina voi olla O, N tai S, edullisesti 2,4-pcntadiccnihapon, sorbiinihapon, 2-furaanihapon tai antraseeni-9-karboksyylihapon reagoidessa dienofiilin kanssa, edullisesti 4-subs-tituoidun triatsoliinidionin, maleiinihappoanhydridin, A-substituoidun maleimidin, dietyyliatsodikarboksylaatin tai dimetyyliasetyleenidikarboksylaatin (0,5 - 5 mol, edullisesti 0,8 - 2 mol) kanssa liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-150 °C:ssa, edullisesti 20-120 °C:ssa, 1-48 h, edullisesti 2-24 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan Diels-Alder-adduktia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

36

Menetelmä XII

Edellä kuvattuja tyypin IN ja IO rakenteen mukaisia betuliinijohdannaisia voidaan valmistaa suojamalla betuliinin (1 mol) C28-hydroksyyliryhmä substituoi-dulla metyylieetterillä, substituoidulla etyyliccttcrillä, substituoidulla fenyylieette-rillä, silyylieetterillä, esterillä, karbonaatilla tai sulfonaatilla tunnetuin menetelmin, edullisesti dihydropyraanilla (DHP) (0,8 - 8 mol, edullisesti 1-2 mol), pyri-dinium-p-lolueenisulfonaatin (PPTS) (0,01 - 2 mol, edullisesti 0,05 - 0.5 mol) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-60 °C :ssa, edullisesti 20-40 °C :ssa, 5-100 h, edullisesti 12-48 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dime-toksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen orgaaninen faasi pestään kylläisellä emäksisellä vesiliuoksella ja vedellä. Liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raakatuotteena saadaan betuliinijohdannaista, jossa C28-hydroksyyliryhmä on suojattu substituoidulla metyylieetterillä, substituoidulla etyyliccttcrillä, substituoidulla fenyylieetterillä, silyylieetterillä, esterillä, karbonaatilla tai sulfonaatilla, edullisesti dihydropyraanilla. Raakatuotc, edullisesti betuliinin 28-tctrahydropyraaniccttcri, voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla.

Betuliinijohdannaisen, jossa C28-hydroksyyliryhmä on suojattu substituoidulla metyylieetterillä, substituoidulla etyylieetterillä, substituoidulla fenyylieetterillä, silyylieetterillä, esterillä, karbonaatilla tai sulfonaatilla, edullisesti dihydropyraanilla (betuliinin 28-tetrahydropyraanieetteri) (1 mol), ja menetelmässä XI esitetyllä tavalla valmistetun Diels-Alder-adduktin (0,8 - 5 mol, edullisesti 1-2 mol), difcnyylifosforyyliatsidin (DPPA) (0,8 - 5 mol, edullisesti 1-2 mol) ja emäksen, trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopropyylietyyliamiinin, edullisesti trietyyliamiinin (TEA) (0,8 - 5 mol, edullisesti 1-2 mol) annetaan reagoida liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-150 °C :ssa, edullisesti 60-120 °C :ssa, 1-48 h, edullisesti 2-24 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, 37 DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivety)äja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa laimealla emäksisellä liuoksella, laimealla happo-liuoksella, vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raaka-tuotteena saadaan betuliinijohdannaista, jossa C28-hydroksyyliryhmä on suojattu substituoidulla metyylieetterillä, substituoidulla etyylieetterillä, substituoidulla fenyylieetterillä, silyylieetterillä, esterillä, karbonaatilla tai sulfonaatilla, edullisesti dihydropyraanilla ja C3-hydroksyyliryhmässä on Diels-Alder-addukti, edullisesti 2,4-pentadieenihapon ja 4-fenyyli-l,2,4-triatsoliini-3,5-dionin Diels-Alder-addukti. Raakatuote, edullisesti betuliinin 28-tctrahydropyraanieetteri-3-0-Diels-Alder-addukti, voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

Betuliinijohdannaisen, jossa C28-hydroksyyliryh mä on suojattu substituoidulla metyylieetterillä, substituoidulla etyylieetterillä, substituoidulla fenyylieetterillä, silyylieetterillä, esterillä, karbonaatilla tai sulfonaatilla, C28-hydroksyylin suoja-ryhmä poistetaan tunnetuilla menetelmillä, edullisesti 28-tctrahydro-pyraanieetteri-3-O-Dicls-Aldcr-adduktin (1 mol) C28-hydroksyylin suojaryhmä, tetrahydropyraani, poistetaan pyridinium-p-tolueenisulfonaatilla (PPTS) (0,02 - 1 mol, edullisesti 0,05 - 0,5 mol), jonka annetaan reagoida liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-40 °C:ssa, 24-240 h, edullisesti 48-120 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, me-tanolia, etanolia, 1-propanolia, 2-propanolia, dietyylieetteriä, tetrahydrofu-raania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti metanolia tai etanolia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos laimennetaan orgaanisella liuottimella, joka pestään tarvittaessa laimealla emäksisellä vesiliuoksella, laimealla happo liuoksella, vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaat-tia, hiilivetyjä ja/tai kloo 38 rattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti etyyliasetaattia. Raa-katuotteena saadaan betuliinin 3-O-Diels-Alder-adduktia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

Menetelmä XIII

Edellä kuvattuja tyypin IP ja IQ mukaisia heterosyklisiä betuliinijohdannaisia voidaan valmistaa antamalla betuliinin (1 mol) reagoida anhydridin (1,6 - 5 mol, edullisesti 2 - 2,5 mol), Λ/,Α-dimetyyliaminopyridiinin (DMAP) (0.01 - 1 mol), emäksen, pyridiinin, trietyyliamiinin, tripropyyliamiinin, di-isopropyylietyy-liamiinin, edullisesti pyridiinin (1 - 100 mol), edullisesti (20 - 50 mol) ja liuottimen läsnä ollessa 0-100 °C:ssa, edullisesti 20-50 °C:ssa, 5-100 h, edullisesti 10-50 h ajan. Edullisesti anhydridi on etikkahappoanhydridi, mutta myös muita kar-boksyylihappoanhydridejä, kuten propionihappoanhydridiä, ftaalihappoanhyd-ridiä tai bentsoehappoanhydridiä, voidaan käyttää. Liuottimena voidaan käyttää yV-metyyli-2-pyrrol idonia (NMP), Α,Α-dimetyyhformamidia (DMF), dimetyyli-sulfoksidia (DMSO), 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania (THF), asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti dikloorimetaania. Reaktion päättymisen jälkeen reak-tioseos pestään tarvittaessa laimealla suolahappo liuoksella, emäksisellä vesiliuoksella ja vedellä. Liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin ja raaka-tuotteena saadaan betuliinin 3,28-diesteriä, edullisesti betuliinin 3,28-diase-taattia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa uuttamalla, kiteyttämällä tai kromatografisesti, edullisesti uuttamalla.

Betuliinin 3,28-diesteri (1 mol), edullisesti betuliinin 3,28-diasetaatti, voidaan isomeroida 3j0,28-diasetoksilup-18-eneeniksi vetykloridihapon tai vetybromidi-hapon, edullisesti vetybromidihapon (5 - 25 %, edullisesti 10-15 %), etikka-hapon (25 - 60 %, edullisesti 35 - 50 %), etikkahappoanhydridin (5 - 30 %, edullisesti 10 - 20 %) ja liuottimen läsnä ollessa 0-60 °C:ssa, edullisesti 20-40 °C:ssa, 4-1200 h, edullisesti 10-24 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, 39 DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dime-toksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa emäksisellä vesiliuoksella ja vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan 3/3,28-diasetoksilup-18-eneeniä, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kro-matografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

3/1,28-Diasetoksilup-18-cnccni (1 mol) voidaan epoksidoida vetyperoksidilla tai perhapolla, edullisesti m-klooriperbentsoehapolla (mCPBA) (0,8 - 3 mol, edullisesti 1-1,5 mol) natriumkarbonaatin, natriumvetykarbonaatin, natriumvety-fosfaatin, kaliumkarbonaatin, kaliumvetykarbonaatin, kaliumvetyfosfaatin, edullisesti natriumkarbonaatin (1 - 15 mol, edullisesti 3-8 mol) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-60 °C:ssa, edullisesti 20-40 °C:ssa, 0,5-10 h, edullisesti 1 -4 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, aseto-nia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti kloroformia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa emäksisellä vesiliuoksella ja vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan 3/1,28-diasctoksilup-18ς,19ξ-epoksilupaania, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromato-grafisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

3/f28-Diasctoksilup-18<^, 19c-cpoksilupaani (1 mol) reagoi 3j0,28-diasctoksi lupa-12,18-dieeniksi ja 3j0,28-diasctoksilupa-18,21 -diecniksi p-tolueenisulfonihapon (0,1 - 3 mol, edullisesti 0,3 - 1 mol) ja etikkahappoanhydridin (0,5 - 5 mol, edullisesti 1-3 mol) ja liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 50-150 °C:ssa, edullisesti 90-130 °C:ssa, 0,5 - 12 h, edullisesti 2 - 5 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja 40 hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa emäksisellä vesiliuoksella ja vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan 3j0,28-diasetoksilupa-12,18-dieeniä ja 3/1,28-diasctoksilupa-18,21 -diccniä, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

3jS,28-Diasetoksilupa-12,18-dieeni ja 3j0,28-diasetoksilupa-18,21-dieeni seoksesta (1 mol) saadaan heterosyklistä Diels-Alder-adduktia antamalla seoksen reagoida dienofiilin kanssa, edullisesti 4-substituidun triatsoliinidionin, maleiinihappo-anhydridin, A-substituoidun maleimidin, dietyyliatsodikarboksylaatin tai dimetyy-liasetyleenidikarboksylaatin (0,5 - 5 mol, edullisesti 0,8 - 2 mol) kanssa liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-150 °C:ssa, edullisesti 20-120 °C:ssa, 1-48 h, edullisesti 2-24 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetok-sietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos pestään tarvittaessa vedellä ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuotteena saadaan betuliinin heterosyklistä Diels-Alder-adduktia, joka voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromato-grafisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

MENETELMÄ XIV

Edellä kuvattuja tyypin IP rakenteen mukaisia aineita voidaan valmistaa lisäämällä etyylihydratsiiniin (1 mol) isosyanaattia (0,5 mol - 5 mol, edullisesti (0,8 - 1,5 mol) liuottimen läsnä ollessa. Isosyanaatti

o^VR

41 valitaan joukosta, missä R = H, Ci-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai al-kenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, joka on muotoa ci - v R6 R6^ missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Cj-CY, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryhmän, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, karboksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleenidioksidiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli. Liuottimina voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieette-riä, tetrahydrofuraania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliase-taattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tolueenia. Reaktio seosta sekoitetaan 0-60 °C:ssa, edullisesti 0-40 °C:ssa, 0,5-12 h, edullisesti 1-5 h ja 40-120 °C:ssa, edullisesti 60-100 °C:ssa 0,5-12 h, edullisesti 1-5 h ajan. Reaktion päättymisen jälkeen muodostunut raakatuote suodatetaan ja kuivataan. Saatu raakatuote 4-substituoitu 1-karbetoksisemi-karbatsidi voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti uuttamalla.

4-Substituoitu 1-karbetoksisemikarbatsidi (1 mol) voidaan syklisoida 4-substituoiduksi uratsoliksi lämmittämällä sitä NaOH- tai KOH-vesiliuoksessa, edullisesti KOH-vesiliuoksessa (1 - 10 M, edullisesti 2-6 M), 40-100 °C:ssa, edullisesti 50-80 °C:ssa, 0,5 - 6 h, edullisesti 1 - 3 h. Reaktioseos suodatetaan ja raakatuote saostetaan väkevällä HCl-liuoksella, suodatetaan ja kuivataan esimerkiksi uunissa tai eksikkaattorissa. Raakatuote 4-substituoitu uratsoli voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

42 4-Substituoitu uratsoli (1 mol) hapetetaan jodibentseenidiasetaatilla (0,5 - 6 mol, edullisesti 0,8 - 1,5 mol) liuottimen läsnä ollessa sekoittamalla 0-80 °C:ssa, edullisesti 20-40 °C:ssa, 0,1-4 h, edullisesti 0,2-1 h ajan. Liuottimena voidaan käyttää NMP:a, DMF:a, DMSO:a, 1,4-dioksaania, dietyylieetteriä, tetrahydro-furaania, 1,2-dimetoksietaania, asetonia, etyyliasetaattia, hiilivetyjä ja/tai kloorattuja hiilivetyjä, tai edellä mainittujen seoksia, edullisesti tetrahydrofuraania tai dikloorime-taania. Reaktioseokseen lisätään menetelmän XIII mukaisesti valmistettua 3/1,28-diasetoksilupa-12,18-dieenin ja 3/1,28-diasetoksilupa-18,21 -dicenin seosta (0,2 - 2 mol, edullisesti 0,8 -1,2 mol) ja reaktioseosta sekoitetaan 0-60 °C:ssa, edullisesti 0-40 °C:ssa, 1-48 h, edullisesti 2-24 h ja liuotin poistetaan esimerkiksi haihduttamalla kuiviin. Raakatuote 4-substituoidun uratsolin Diels-Alder-addukti voidaan puhdistaa tarvittaessa kiteyttämällä, kromatografisesti tai uuttamalla, edullisesti kiteyttämällä.

Keksintöä havainnollistetaan seuraavien esimerkkien avulla, joihin sitä ei kuitenkaan ole tarkoitus rajoittaa.

ESIMERKIT

Esimerkki 1. Betuliinin 28-Ci8-alkyleenimeripihkahappoesterin valmistus Λ, Λ.

0^V° imaami, ί I J Ξ p NMP I I JΞ H0 1 4 5

Imidatsolia (38,8 mmol) ja Cis-alkylccnimeripihkahappoanhydridiä (ASA) 4 (11,6 mmol) sekoitettiin NMP:ssa (25 ml). Lisättiin betuliinia 1 (9,7 mmol) ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 vrk. Orgaaninen faasi kaadettiin veteen, dekan- 43 toitiin, liuotettiin dikloorimetaaniin (DKM) ja pestiin. Liuotin haihdutettiin ja be-tuliinin 28-Ci8-alkyleenimeripihkahappoesteriä 5 muodostui 73 %:n saannolla.

Esimerkki 2. Betuliinin 3,28-Cig-alkyleenimeripihkahappodiesterin valmistus J, Λ.

Imidatsoli 1 + M. -- R o f/TrV o r JL 1 J ' R nmp ho I A λ Λ J " 1 4 o 6

Imidatsolia (54,2 mmol) ja Cig-alkyleenimeripihkahappoanhydridiä (ASA) 4 (32,5 mmol) sekoitettiin NMP:ssa (30 ml). Betuliinia 1 (13,5 mmol) lisättiin ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 vrk. Orgaaninen faasi kaadettiin veteen, dekantoitiin, liuotettiin DKM:iin ja pestiin. Liuotin haihdutettiin ja betuliinin 3,28-Ci8-alkyleenimeripihkahappodiesteriä 6 muodostui 40 %:n saannolla.

Esimerkki 3. Betuliinin 28-karboksimetoksimentoIiesterin valmistus Λ. J, i

rÄoH Λ ssr rrQ^o-O

t •"’•/'•A,- —δ__ Γ-'·4·'··1'>-' o X

" O tolueeni 1 7 "'8

Betuliinia 1 (11,7 mmol) ja mentoksietikkahappoa 7 (11,7 mol) punnittiin kolviin ja lisättiin tolueeni (120 ml). Seosta kuumennettiin 120 °C:een ja lisättiin isopro-pyylititanaatti (1,4 mmol). Reaktioseosta refluksoitiin 3 h, kunnes vesi oli erottunut vedenerotusputkeen. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja muodostunut sakka suodatettiin. Orgaaninen faasi pestiin, liuotin haihdutettiin ja tuotetta betuliinin 28-karboksimetoksimentoliesteriä 8 muodostui 60 %:n saannolla.

Esimerkki 4. Betuliinin 28-karboksimetoksikarvakroliesterin valmistus 44 A.

Λ0” + CI^0H _NaOH_^ Λγ°^ΟΗ + 9 10 11 1

isopropyyli- A. Y

titanaatti '1 \ —--* ί?Τΐ^0ν^οχτ tolueeni | 12

Veteen liuotetut NaOH-pelletit (66,6 mmol) lisättiin karvakrolin 9 (33,3 mol), kloorietikkahapon 10 (33,3 mmol) ja veden (50 ml) seokseen. Seosta refluksoitiin 120 °C:ssa 3 h. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja tehtiin happamaksi suolahapolla. Raakatuote uutettiin dietyylieetteriin ja pestiin vedellä. Liuotin haihdutettiin, jolloin raakatuotteena saatiin karvakrolioksietikkahappoa 11 83 % saannolla. Raakatuote puhdistettiin liuottamalla se dietyylieetteriin, joka uutettiin vedellä ja NaHCCL-liuoksella, jotka yhdistettiin, tehtiin happamiksi suolahapolla ja uutettiin dietyylieetterillä. Eetterifaasi kuivattiin ja liuotin haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin karvakrolietikkahappoa 11 45 % saannolla. Betuliinia 1 (7,2 mmol) ja karvakrolioksietikkahappoa 11 (7,2 mmol) punnittiin kolviin ja lisättiin tolueeni (80 ml). Haude kuumennettiin 160 °C:een ja lisättiin isopropyylititanaatti (1,4 mmol). Reaktioseosta refluksoitiin 6 h, kunnes kaikki vesi oli erottunut vedenerotusput-keen. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja muodostunut sakka suodatettiin pois. Orgaaninen faasi pestiin NaHC03-liuoksella ja liuotin haihdutettiin pois. Raaka-tuote uudelleen kiteytettiin kiehuvasta sykloheksaani-tolueeni-seoksesta. Seoksen jäähdyttyä kiteytynyt sakka suodatettiin pois. Liuotin haihdutettiin kuiviin, jolloin muodostui betuliinin 28-karboksi-metoksikarvakroliesteriä 12 55 %:n saannolla.

Esimerkki 5. Betuliinin 28-kanelialkoholietikkahappoesterin valmistus 45

OH

f°H r°Na (Γ^° f NaH f ^ o MeOH/THF J Γ7^ΓΎ^°Η o —ό +c^'—ό H0£Ö^ 13 14 15 1 tetraisopropyy- Λ.

lititanaatti Τ~\ tolueeni JL J ® 16

Natriumhydridi (8,2 mmol) - tetrahydrofuraaniseokseen lisättiin kanelialkoholi 13 (7,5 mmol) ja sekoitusta jatkettiin 1 h. Metyyliklooriasetaatti (7,5 mmol) lisättiin reaktioastiaan ja sekoitusta jatkettiin 24 tuntia. Reaktion päättymisen jälkeen, re-aktioseos laimennettiin dietyylieetterillä, ja orgaaninen faasi pestiin vedellä ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin kuiviin ja sakka liuotettiin metanoli-tetrahydrofuraaniseokseen. Natriumhydroksidiliuos (10,9 mmol) lisättiin ja reak-tioseosta refluksoitiin 4 tuntia. Liuotin haihdutettiin pois. Kolviin lisättiin vettä, joka tehtiin happamaksi suolahapolla ja uutettiin dietyylieetterillä. Orgaaninen faasi pestiin vedellä ja liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin kanelihappoa 15 23 % saannolla. Betuliinia 1 (0,9 mmol) ja kanelihappoa 15 (0.9 mmol) punnittiin kolviin ja tolueeni (40 ml) lisättiin. Haude kuumennettiin 160 °C:een ja isopro-pyylititanaatti (0,2 mmol) lisättiin. Reaktioseosta reflukso itiin 4,5 h, kunnes kaikki vesi oli erottunut vedenerotusputkeen. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja muodostunut sakka suodatettiin pois. Orgaaninen faasi pestiin NaHC03-liuoksella ja liuotin haihdutettiin pois. Raakatuote uudelleen kiteytettiin kiehuvasta syklo-heksaani-tolueeni-seoksesta. Seoksen jäähdyttyä kiteytynyt sakka suodatettiin pois. Liuotin haihdutettiin kuiviin, jolloin muodostui betuliinin 28-kanelialkoholietikkahappoesteriä 16 14 %:n saannolla.

Esimerkki 6. Betulonihapon 28-eugenoliesterin valmistus 46 Λ. Λ.

I \ OMe ] \ OMe

hoyS ^ ii?rjY0YS

0 + 40„c 0 17 18 19

Betulonihappokloridin 17 (1,4 mmol) (valmistettu esimerkin 12 mukaan), eu-genolin 18 (1,1 mmol), DMAP:n (1,1 mmol) ja pyridiinin seosta lämmitettiin 48 tuntia 40 °C:ssa. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos laimennettiin tolueenil-la, pestiin laimealla suolahappo liuoksella, vedellä ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin betulonihapon 28-eugenoliesteriä 19 81 % saannolla.

Esimerkki 7. Betuliinin 28-karboksimetoksitymoliesterin valmistus + CI^Y°H Na°H> C^X0^^OH + 20 21 22 1 Λλ λ

Isopropyylititanaatti \ T

Δ_^ o

Tolueeni J

H0 23

Veteen liuotetut NaOH-pelletit (66,6 mmol) lisättiin tymolin 20 (33,3 mol), kloo-rietikkahapon 21 (33,3 mmol) ja veden seokseen. Seosta refluksoitiin 120 °C:ssa 3 47 h. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön, tehtiin happamaksi, uutettiin dietyylieette-riin ja pestiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin tymolietikkahappo 22 kiteytyi 29 % saannolla. Betuliinia 1 (7,2 mmol), tymolietikkahappoa 22 (7,2 mmol) ja toluee-nia (80 ml) kuumennettiin 160 °C:een, ja lisättiin isopropyylititanaatti (1,4 mmol). Reaktioseosta refluksoitiin 4,5 h, kunnes kaikki vesi oli erottunut vedenerotusput-keen. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja muodostunut sakka suodatettiin. Orgaaninen faasi pestiin ja liuotin haihdutettiin. Raakatuote kiteytettiin uudelleen sykloheksaani-tolueeni (3,5:l)-seokseen, jolloin muodostui betuliinin 28-karboksi-metoksitymoliesteriä 23 61 %:n saannolla.

Esimerkki 8. Betuliinin 28-krysantemaatin valmistus J, \ O MeOH/THF \ O \ ° MAo^ Δ /V^OH Qksalyylikloridi ^ )=\J^a + 24 25 26 1 A-. ,

Pyridiini li 27

Etyylikrysantemaatti 24 (23,3 mmol) sekoitettiin THF-MeOH (l:2)-seokseen iner-tissä ilmakehässä. Seokseen lisättiin hitaasti 2 M NaOH (93 ml) ja kuumennettiin 80 °C:ssa 4 h, kunnes lähtöainetta ei enää havaittu TLCdlä (6:1 heksaa-nketyyliasetaatti (EtOAc), 5 % etikkahappo). Liuotin haihdutettiin ja raakatuote liuotettiin veteen (400 ml) ja uutettiin dietyylieetterillä. Vesifaasi tehtiin happamaksi suolahapolla ja uutettiin dietyylieetterillä. Eetterifaasi pestiin ja liuotin haihdutettiin vakuumilla, jolloin saatiin krysanteemihappoa 25 90 %:n saannolla.

Krysanteemihappoon 25 (5,9 mmol) kuivassa DKM:ssa (30 ml) lisättiin oksalyy-likloridia (11,8 mmol) huoneenlämpötilassa inertissä ilmakehässä. 6 h jälkeen 48 liuotin haihdutettiin ja haihdutusjäännös liuotettiin kuivaan DKM:iin ja haihdutettiin jälleen. Toimenpide toistettiin kolmesti, jolloin muodostui krysanteemihappo-kloridia 26 81 % saannolla.

Betuliinia 1 (0,9 mmol), krysanteemihappokloridia 26 (1,1 mmol) ja DMAP:ä (0,9 mmol) sekoitettiin pyridiinissä 40 °C:ssa inertissä ilmakehässä 48 h. Lisättiin EtOAc (100 ml), orgaaninen faasi pestiin vedellä, liuotin haihdutettiin ja jäännös uudelleenkiteytettiin sykloheksaanista. Betuliinin 28-krysantemaattia 27 muodostui 63 %:n saannolla.

Esimerkki 9. Betuliinin 28-kanelihappoesterin valmistus (vertailuesimerkki) HO^.O Cl\,0 _//

Tionyylikloridi ^ ^ jL S DMAP

I -~ I + .OH *~

Ar Jk I I I Pyridiini J 40 °C j] 40 °c 28 29 1 1

Kanelihapoa 28 (18,06 mmol) ja tionyylikloridia (180,6 mmol) sekoitettiin argonin alla 40 °C:ssa 24 h. Liuotin haihdutettiin vakuumilla ja haihdutusj äännös liuotettiin kahdesti DKM:iin ja haihdutettiin, jolloin muodostui kanelihappokloridia 29 99 %:n saannolla.

49

Betuliinia 1 (5,4 mmol) ja kanelihappokloridia 29 (5,6 mmol) sekoitettiin kuivassa pyridiinissä (80 ml) DMAP:n (5,6 mmol) läsnä ollessa argonin alla 40 °C:ssa 24 h. Lisättiin tolueenia (100 ml) ja pestiin orgaaninen faasi. Liuotin haihdutettiin ja raakatuote puhdistettiin uudelleenkiteytettämällä syklo heksaanktolueeni (5:1) -seoksesta ja uuttamalla. Betuliinin 28-kanelihappoesteriä 30 muodostui 67 %:n saannolla.

Esimerkki 10. Betuliinin rasvahappoesterien valmistus (öljyhappoesterin valmistus vertailuesimerkki)

Betuliini 1 (5 mmol) ja rasvahappo (5 mmol) punnittiin kolviin, joka on varustettu vedenpoistoputkella. Tolueeni ja katalyyttinen määrä isopropyylititanaattia tai p-tolueenisulfonihappomonohydraattia lisättiin ja reaktioseosta refluksoitiin öljy-hauteella n. 5 tuntia. Reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan, orgaaninen kerros pestiin natriumvetykarbonaattiliuoksella, erotettiin, kuivattiin natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin kuiviin. Saatu raakatuote betuliini-monoesteri puhdistettiin tarvittaessa kromatografisesti. Käytettäessä 2 ekvivalenttia rasvahappoa ja 1 ekvalentti betuliinia saatiin tuotteena myös betuliinidiesteriä taulukon 1 mukaisesti. Taulukossa 1 on esitetty betuliinin ja rasvahappojen este-röintireaktion saannot ja esteröitymisasteet.

Taulukko 1.

Rasvahappo Katalyytti Refluksointi- Kokonais- C3 esteröi- C28 esteröi- aika (tuntia) saanto (%) tymisaste (%) tymisaste(%) isosteariini- isopropyyli- 3 81 0 40 happo titanaatti isosteariini- /?-tolueenisul- 4,5 99 10 95 happo fonihappo öljyhappo1 /?-tolueenisul- 18,5 93 40 100 fonihappo vertailuesimerkki 50

Esimerkki 11. Betuliinin 28-amidijohdannaisten valmistus (L-aspartaatin dimetyyliesterin ja L-glutamiinihapon metyyliesterin valmistus vertailuesi-merkkejä) J... J, ΓΛ O DCC ^ ΧΛ H 9

ΛΑΟοη h m II OMAR

f JL I^X JrT + n^V^OMe -► Ύ°Μβ

0 R 1HCI Ch2C'2 χΧΧ" 0 R

3 31 32

Betuliinihappo 3 valmistettiin hapettamalla betuliinia 1 patentin US 6,280,778 mukaisesti. Betuliinihappo 3 (5 mmol) ja aminohappometyyliesterin hydrokloridi 31 (5 mmol) punnittiin kolviin ja liuotettiin dikloorimetaaniin. Kolvi huuhdeltiin argonilla, DCC (5 mmol) ja DMAP (2,5 mmol) lisättiin ja sekoitusta jatkettiin 20 tuntia. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kuivattiin natri-umsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin kuiviin. Saatu betuliinihappoamidi 32 raaka-tuote voidaan puhdistaa kromatografisesti tarvittaessa. Reaktio-olosuhteet ja tuotteiden raakasaannot on esitetty taulukossa 2.

Taulukko 2

Aminohappo Reaktioaika (h) Kokonaissaanto (%) L-aspartaatin dimctyylicstcri1, HC1 19 >95 L-histidiinin metyyliesteri, HC1 18 >95 L-ghitamiinihapon metyyliesteri1, HC1 19 >95 L-lysiinin metyyliesteri, HC1 19 >95 vertailuesimerkki

Esimerkki 12. Betulonihapon 28-aspartaattiamididimetyyliesterin valmistus 51

Jk Jk_ I \ Λ Γ) h2n___Jk ^

oksalyylikloridi ® TEA

I l rCOOH _„ I 1 I 1 I COCI + L o -- C"2C'2 Γιτ o" 0ΗΆ 2 33 34 X.

35

Betulonihappo 2 (8,8 mmol) liuotettiin dikloorimetaaniin inertissä atmosfäärissä ja oksalyylikloridi (18,6 mmol) lisättiin. Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa 20 tuntia. Reaktion päättymisen jälkeen liuotin haihdutettiin kuiviin, jäännös liuotettiin uudelleen dikloorimetaaniin, joka haihdutettiin toistamiseen kuiviin. Saatu raakatuote pestiin dietyylieetterillä. Saanto oli 7,5 mmol (85 %) betu-lonihappokloridia 33. Betulonihappokloridi 33 (4,2 mmol) ja L-aspartaattihappo dimetyyliesterin hydrokloridi 34 (5,5 mmol) liuotettiin dikloorimetaaniin ja tri-etyyliamiini (11 mmol) lisättiin. Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 20 tuntia. Reaktioseos pestiin laimealla kloorivetyhappoliuoksella, vedellä ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin kuiviin ja raakatuote puhdistettiin tarvittaessa kromatografisesti. Saanto oli 1,8 mmol (43 %) betulonihapon 28-aspartaattiamididimetyyliesteriä 35.

Esimerkki 13. Betuliinin 28-iV-asetyyliantraniilihappoesterin valmistus 52 J.

O O 1— O HN""^ O Γ^Ύΐ^0Η

Il I oksalyylikloridi II I + -¾ — cA0 36 37 1

O

DMAP X O HN^

pyridiini / \ Il I

-^ Γ/ΥΧ° 40 °c [I Ί 38 /Y-asetyyliantraniilihapon 36 (25,0 mmol) ja oksalyylikloridin (250 mmol) seosta sekoitettiin 16 tuntia 40 °C:ssa. Ylimäärä oksalyylikloridia poistettiin haihduttamalla reaktioseos kuiviin. Jäännös liuotettiin kaksi kertaa dikloorimetaaniin, joka haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin /V-asetyyliantraniilihappokloridia 37 kvantitatiivisesti. Betuliinin 1 (11,29 mmol) DMAP:n (11,29 mmol), N- asetyyliantraniilihappokloridin 37 ja pyridiinin (80 ml) seosta sekoitettiin 24 tuntia 40 °C:ssa. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos laimennetun etyyliasetaatilla ja pestiin laimealla suolahappo liuoksella, vedellä ja kuivattiin natriumsulfaa-tilla. Liuotin haihdutettiin pois ja raakatuote puhdistettiin kromatografisesti, jolloin saatiin betuliinin 28-jV-asetyyliantraniilihappoesteriä 38 25 % saannolla.

53

Esimerkki 14. Betuliinin 28-nikotiinihappoesterin valmistus (vertailuesi-merkki)

X

X II / \ DMAP

tionyylikloridi ci/^vri;i^| Pyridiini ^

40 °C " I^nJ + 40 oC

WJ^XX—^ 39 40 ^ " 1 41

Nikotiinihapon 39 (25,0 mmol) ja tionyylikloridin (250 mmol) seosta sekoitettiin 24 tuntia 40 °C:ssa. Ylimäärä tionyylikloridia poistettiin haihduttamalla reak-tioseos kuiviin. Jäännös liuotettiin kaksi kertaa dikloorimetaaniin, joka haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin nikotiinihappokloridia 40. Betuliinin 1 (2,26 mmol), DMAP:n (2,26 mmol), nikotiinihappokloridin (2,71 mmol) 40 ja pyridiinin (10 ml) seosta sekoitettiin 24 tuntia 40 °C:ssa. Reaktion päättymisen jälkeen reak-tioseos laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin laimealla suolahappo liuoksella, vedellä ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois ja raakatuote puhdistettiin uudelleenkiteyttämällä se sykloheksaanista, jolloin saatiin betuliinin 28-nikotiinihappoesteriä 41 88 % saannolla.

Esimerkki 15. Betuliini-3,28-diasetoksi-19,20-eeni-29-meripihkahappo-anhydridin valmistus o j j Xx ΓΛ Ac2° ] \ o^°^o XL o dmap rvXc<Y XJX)

9 ° hydrokinoni I χ Iji 'X

1 1 J UH2OI2 U 1 J J O /Yytk/ n h<xΔ x 1 I I= 1 42 43 54 a) Betuliininl (15,0 g, 33,88mmol), DMAP:n (0,41 g, 3,39 mmol), pyridiinin (25 ml, 309 mmol) ja dikloorimetaanin (150 ml) seokseen lisättiin etikkahappoanhyd-ridi (19,2 ml, 203 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 17 tuntia. Orgaaninen faasi pestiin 10 % suolahappo liuoksella (200 ml), kylläisellä NaHCOs-liuoksella (400 ml), vedellä (100 ml) ja kuivattiin Na2S04:lla. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin 3,28-diasetoksibetuliinia 42 97 % saannolla.

b) 3,28-diasetoksibetuliinin 42 (4,57 g, 8,68 mmol ja hydrokinonin (96 mg, 0,87 mmol) seos kuumennettiin 200 °C ja meripihkahappoanhydridi (2,50 g, 25,02 mmol) lisättiin 2 tunnin kuluessa reaktioastiaan. Reaktion päättymisen jälkeen raakatuotteen betuliini-3,28-diasetoksi-19,20-eeni-29-meripihkahappoanhydridiä 43 saatiin 100 % (5,41 g, 8,65 mmol).

Esimerkki 16. 3-Deoksi-2,3-dihydrobetuliinin valmistus (vertailuesimerkki) \y Π Tn

o'^'N'nD

PP 1 DEAD, PPh3

THF

1 44

Betuliinin 1 (5,00 g, 11,29 mmol), trifenyylifosfiinin (PPh3, 11,85 g, 45,18 mmol) ja 3,3-dimetyyliglutaarimidin (6,38 g, 45,18 mmol) seokseen kuivassa THF:ssa (100 ml) lisättiin tipoittain dietyyliatsodikarboksylaatti liuos (DEAD, 20,71 ml, 45,18 mmol) jäähauteella typpiatmosfäärissä. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitusta jatkettiin 24 tuntia. Muodostunut sakka suodatettiin pois ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin kromato-grafisesti, jolloin saatiin 3-deoksi-2,3-dihydrobetuliinia 44 (1,47 g, 3,45 mmol, 31 %).

Esimerkki 17. Betuliinin 3-0-Diels-Alder-adduktin valmistus 55 J,.

i^sc°h

^ v DHP

HO*'>i''^ \ppts n O-f J- o N_N OH / \ + oJiCo -o^N^o + .Χ|Υ/^°γ0"|

υΗ Y Y heksaam+ JL I I

N=N tolueeni \\\ I I I =

KJ

45 46 47 48

A. J

f^Y^Co O MeOH rVSC°H

DPPA Ο ΛΤΥΥ kJ ** O

-==- rviiV^ rv^o^U

heksaani+ ,N“N, H ' N-N H ' ' “ , 0ΛΝΛ0 Ο^ΝλΟ refluksointi ι 7 ό ό 2,4-Pentadieenihappo 45 (196 mg, 2,0 mmol) ja 4-fenyyli-1,2,4-triatsoliini-3,5-dioni 46 (350 mg, 2,0 mmol) liuotettiin heksaanin ja tolueenin seokseen. Reak-tioseosta sekoitettiin inertissä ilmakehässä huoneenlämpötilassa 3 päivää. Reaktion päätyttyä liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin Diels-Alder-adduktia 47 (493 mg, 1,80 mmol, 90 %).

Betuliiniin 1 (10,0 g, 22,6 mmol) dikloorimetaanissa (330 ml) lisättiin pyridini-um-/?-to 1 uccnisulfonaatti (PPTS) (0,68 g, 2,71 mmol) ja dihydropyraani (DHP) (2,09 g, 24,9 mmol) inertissä ilmakehässä ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 5 päivää. Reaktion päättymisen jälkeen orgaaninen faasi pestiin kylläisellä NaHC03-liuoksella (150 ml) ja vedellä (150 ml) sekä kuivattiin Na2S04:lla. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja saatu raakatuote puhdistettiin 56 kromatografisesti, jolloin saatiin betuliinin 28-tetrahydropyraanieetteriä 48 (3,46 g, 6,55 mmol, 29 %).

Betuliinin 28-tetrahydropyraanieetteri 48 (116 mg, 0,22 mmol) ja Diels-Alder-addukti 47 (60 mg, 0,22 mmol) liuotettiin heksaanin ja tolueenin seokseen. Dife-nyylifosforyyliatsidi (DPPA) ja trietyyliamiini (TEA) lisättiin reaktioseokseen, jota refluksoitiin 24 tuntia. Reaktion päättymisen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi pestiin vedellä, NaHCOs-liuoksella, laimealla suolahappo liuoksella, vedellä ja kuivattiin Na2SC>4:lla. Liuotin haihdutettiin va-kuumissa, jolloin saatiin raakatuotetta (419 mg), joka puhdistettiin kromatografisesti, jolloin saatiin betuliinin 28-tetrahydropyraanieetterin-3-0-Diels-Alder-adduktia 49 n. 50 % saannolla.

Betuliinin 28-tctrahydrofuraanieettcrin-3-0-Diels-Aldcr-adduktin 49 (50 mg, 0,063 mmol), pyridinium-/;-tolueenisulfonaatin (PPTS) (3 mg, 0,013 mmol) ja metanolin (10 ml) seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa inertissä ilmakehässä 2 viikkoa. Reaktion päätyttyä reaktioseokseen lisättiin NaHC03-liuosta (10 ml). Vcsifaasi uutettiin etyyliasetaatilla (40 ml), joka pestiin vedellä (80 ml), kuivattiin Na2S04:11a ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettin kromatografisesti. Näin saatiin n. 50 % saannolla betuliinin 3-O-Diels-Alder-adduktia 50.

Esimerkki 18. Betuliinin 4-metyyliuratsoli-Diels-Alder-adduktin valmistus 57 Λ Λ.

1 \ Ac20 / \ Ac20

DMAP Cir^°Y ACOH

' pyridiini O ^ O tolueeni ' CH2C|2 1 51 —\ mCPBA ''Tyfc—\ p-tolueenisulfoni- ^ Jl ) Na2C03 hi ) happo o /xlAU-J I chci3 ϊ -- ,Α- ^L^LJ " A"' " tolueeni 52 53 O r^j^. o ° 54 55 i A0

Yy« °^νΆ N=N Γ^ΐΊ^°γ" tolueeni ^ 56

Betuliinin 1 (15,0 g, 33,88 mmol), /V,/V-dimetyyliaminopyridiinin (DMAP, 0,41 g, 3,39 mmol), pyridiinin (25 ml, 309 mmol) ja dikloorimetaanin (150 ml) seokseen lisättiin etikkahappoanhydridi (19,2 ml, 203 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 17 tuntia. Orgaaninen faasi pestiin 10 % suolahappo liuoksella (200 ml), kylläisellä NaHC03-liuoksella (400 ml), vedellä (100 ml) ja kuivattiin Na2S04:lla. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin betuliinin 3,28-diasetaattia 51 97 % saannolla.

Vetybromidin (HBr) (47 %, 250 g), etikkahappoanhydridin (100 g) ja etikkahapon (300 g) seokseen lisättiin tolueeniin (200 ml) liuotettu betuliinin 3,28-diasetaatti 51 (17,41 g, 33,05 mmol). Reaktioseoksen annettiin seistä huoneenlämpötilassa 58 kolme viikkoa. Reaktioseos laimennettiin vedellä (400 ml). Vesifaasi erotettiin ja uutettiin tolueenilla (400 ml). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä (300 ml), kylläisellä NaHCCh-liuoksclla (600 ml), kuivattiin Na2S04:lla ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin kromatografisesti, jolloin saatiin 3/3,28-diasetoksilup-18-eneeniä 52 (7,36 g, 13,97 mmol, 42 %).

3 2 8 - Di asctoksi 1 up-18-en ccn in 52 (4,91 g, 9,33 mmol) ja Na2C03:in (4,94 g, 46,65 mmol) seokseen kloroformissa (120 ml) lisättiin m-klooripcrbcntsochappoa (mCPBA, 3,69 g, 14,92 mmol) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kaksi tuntia. Orgaaninen faasi pestiin vedellä (150 ml), kylläisellä NaHS03-liuok-sella (150 ml), kylläisellä NaHC03-liuoksella (150 ml), kuivattiin Na2S04:lla ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote uudelleen kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 3j0,28-diasetoksilup-18^,19^-epoksilupaania 53 (3,31 g, 6,09 mmol, 65 %).

3j0,28-Diasetoksilup-18^,19<^-epoksilupaani 53 (2,00 g, 3,68 mmol) ja p-tolueenisulfonihappo (0,42 g, 2,21 mmol) liuotettiin tolueeniin (80 ml) ja etikka-happoanhydridi (0,56 ml, 5,90 mmol) lisättiin. Reaktioseosta refluksoitiin neljä tuntia. Orgaaninen faasi pestiin kylläisellä NaHC03-liuoksella (150 ml), vedellä (100 ml), kuivattiin Na2S04:lla ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin kromatografisesti ja kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 3/3,28-diasetoksilupa-12,18-dieenin 54 ja 3/3,28-diasetoksilupa- 18,21-diccnin 55 seos (4:1) (1,31 g, 2,50 mmol, 68 %).

3j8,28-Diasetoksilupa-12,18-dieeni 54, 3/1,28-diasetoksi-lupa-18,21 -dieeni 55 (yhteensä 100 mg, 0,19 mmol) ja 4-metyyli-l,2,4-triatsoliini-3,5-dioni (32 mg, 0,29 mmol) liuotettiin tolueeniin (5 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Liuotin haihdutettiin vakuumissa ja raakatuote puhdistettiin kromatografisesti, jolloin saatiin betuliinin 4-metyyliuratsoli-Diels-Alder-adduktia 56 (60 mg, 0,09 mmol, 49 %).

59

Esimerkki 19. Betuliinin /?-Asetyyli-4-fenyyliuratsoli-Diels-Alder-adduktin valmistus Ϊ 4. °^NY^1 (olueeni 9 9 I^V^0 ^οΛν'νη> + ^0ΑΝ-ΝΛΝ^

H [ A H H H

57 58 59 Y J..„

1. aq KOH 2eq FA

——-

2. HCI Λ I „ o Y^-rr^^ O

Vr° aAA^=

N-N u YY

H H

60 / 54 %,

N-Y

Phl(OAc)2^ o=< ^ N—

CH2CI2 + THF

Nz ^ijCDC^v 0 61

Etyylihydratsiiniin 57 (2,64 mmol) tolueenissa (5 ml) lisättiin tipoittain inertissä ilmakehässä 4-asetyylifenyyli-isosyanaatti 58 (2,64 mmol), joka oli liuotettu 5 ml tolueenia. Sekoitusta jatkettiin 2 h huoneenlämpötilassa ja 2 h 80 °C:ssa. Kun muodostunut sakka suodatettiin ja kuivattiin uunissa, saatiin /;-asetyyli-4-fenyy l i-1-karbetoksisemikarbatsidiä 59 90 % saannolla.

p-Asetyyli-4-fcnyyli-1 -karbetoksiscmikarbatsidiä 59 (1,13 mmol) lämmitettiin 70 °C:ssä 4 M KOH:n vesiliuoksessa (2,26 mmol) 1,5 h. Sakka suodatettiin pois ja jäähtynyt suodos tehtiin happamaksi väkevällä HCI-liuoksella. Kun muodostunut sakka suodatettiin ja kuivattiin eksikkaatorissa, saatiin /?-asetyyli-4-fenyyliuratsolia 60 65 % saannolla.

60 /?-Asetyyli-4-fenyyliuratsolin 60 (50 mg, 0,229 mmol) ja jodibentseenidiasetaatin ((PhI(OAc)2, 74 mg, 0,229 mmol) seosta sekoitettiin inertissä ilmakehässä kuivassa THF:CH2Cl2 seoksessa (4 ml, 1:1) 15 minuuttia, jolloin muodostui punainen väri. 3j0,28-Diasetoksilupa-12,18-dieeni 54 (100 mg, 0,191 mmol) liuotettiin THF:CH2C12 seokseen (4 ml, 1:1) ja lisättiin reaktiokolviin ja sekoitusta jatkettiin 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuotin haihdutettiin vakuumissa. Kun raakatuote puhdistettiin kromatografisesti saatiin betuliinin /?-asctyyli-4-fenyyliuratsolin Diels-Alder-adduktia 61 30 % saannolla. Taulukossa 3 on esitetty betuliinin urat-solin Diels-Alder-adduktien saantoprosentit uratsolin eri ryhmillä R:

R

o^Nyo

N-N H H

Taulukko 3.

R Saanto (%) R Saanto (%) CO 53 u

F

H 40 44 ? 74 N°2 60 o ^ -¾ o° C\ 53 I 30 (p 61

Esimerkki 20. Betuliinin 3-asetoksi-28-l’,2’,3’-triatsolien ja betuliinin 3-asetoksi-28-tetratsoIien valmistus J, J, , ιχΓΤιί^'0Η DHP r7isS''cvo'-1 °map ppts T 1 _„ CH2CI2 CH2CI2 1 48 J... Λ.. PBr3 ) \ 1 \ pyridiini ° “ ° xj5^0H ΕΙί0 62 es Λ NaN Λ.

DMF

64 65 CuS04*5H20 aryylinitriilit / 's natriumaskorbaatti / H20/t-butanoli _ R1

—_ R II

N=( ^ 66 " 67

Betuliiniin 1 (10,0 g, 22,6 mmol) dikloorimetaanissa (330 ml) lisättiin pyridini-um-/?-to 1 uccnisulfonaatti (PPTS) (0,68 g, 2,71 mmol) ja dihydropyraani (DHP) (2,09 g, 24,9 mmol) inertissä ilmakehässä ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 5 päivää. Reaktion päättymisen jälkeen orgaaninen faasi pestiin kyl- 62 Iäisellä NaHC03-liuoksella (150 ml) ja vedellä (150 ml) sekä kuivattiin Na2SC>4:lla. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja saatu raakatuote puhdistettiin kromatografisesti, jolloin saatiin betuliinin 28-tetrahydropyraanieetteriä 48 (3,46 g, 6,55 mmol, 29 %).

Betuliinin 28-tetrahydropyraanieetterin 48 (5,00 g, 9,49 mmol), N,N- dimetyyliaminopyridiinin (DMAP, 0,12 g, 0,95 mmol), pyridiinin (10 ml, 124 mmol) ja dikloorimetaanin (50 ml) seokseen lisättiin etikkahappoanhydridi (5,4 ml, 57 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 20 tuntia. Orgaaninen faasi pestiin 10 % suolahappoliuoksella (300 ml), kylläisellä NaHCCL-liuoksella (400 ml), vedellä (100 ml) ja kuivattiin l^SCLdla. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin betuliinin 3-asetoksi-28-tetrahydropyraanieetteriä 62 95 % saannolla.

Betuliinin 3-asetoksi-28-tetrahydropyraanieetterin 62 (3,00 g, 5,27 mmol), pyri-dinium-/;-toluccnisu 1 fonaatin (PPTS) (266 mg, 1,06 mmol) ja metanolin (100 ml) seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa inertissä ilmakehässä 2 viikkoa. Reaktion päätyttyä rcaktioscoksccn lisättiin NaHC03-liuosta (100 ml). Vcsifaasi uutettiin etyyliasetaatilla (400 ml), joka pestiin vedellä (800 ml), kuivattiin Na2S04:lla ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin betuliinin 3-asetaatia 63 94 %.

Betuliinin 3-asetaatin 63 (100 mg, 0,21 mmol) ja dietyylieetterin (10 ml) seokseen lisättiin pyridiini (163 mg, 2,1 mmol) ja fosforitribromidi (PBr3) (280 mg, 1,0 mmol) -5 °C:ssa, inertissä atmosfäärissä. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitusta jatkettiin 24 h. Reaktion päättymisen jälkeen, orgaaninen faasi pestiin vedellä (100 ml), NaHCCL-liuoksella (80 ml), kuivattiin Na2S04:lla. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin betuliinin 3-asetoksi-28-bromidia 64 63 % saannolla.

Betuliinin 3-asetoksi-28-bromidin 64 (200 mg, 0,36 mmol), NaN3:n (230mg, 3,6 mmol) ja DMF:n (20 ml) seosta lämmitettiin 100 °C:ssa inertissä ilmakehässä 24 63 h. Reaktion päättymisen jälkeen liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml). Orgaaninen faasi pestiin vedellä (225 ml), kuivattiin Na2S04:lla ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin raaka-tuotetta 149 mg, josta betuliinin 3-asetoksi-28-atsidia 65 oli 20 %.

Betuliinin 3-asetoksi-28-atsidi 65 voidaan reagoittaa tunnetuin menetelmin aryy-linitriilien kanssa, jolloin saadaan betuliinin 3-asetoksi-28-tetratsoleja 66 tai funktionaalisen alkyynin kanssa, CuSOAAEBO ja n at r i u m as ko rbaattikatalyyttien läsnäollessa butanolin vesiliuoksessa, jolloin saadaan betuliinin 3-asetoksi-28-r,2’,3’-triatsoleja 67.

Esimerkki 23. Betuliiniperäisten yhdisteiden sytotoksisuuden testaus

Caco-2-soluja (ihmisen ohutsuolen soluja mallintava solulinja) istutettiin 96-kuoppalevylle 35 000 (LDH-menetelmä), 45 000 (WST-1-menetelmä) tai 25 000 (ATP-menetelmä) solua/kuoppa. Vuorokauden kasvatuksen jälkeen solut altistettiin 24 tunnin ajaksi tutkittaville yhdisteille lisäämällä yhdisteitä kasvatusliuok-sccn konscntraatiolla 500 μΜ (DMSO-kantaliuoksina). Yhdisteiden vaikutusta solujen elinvoimaisuuteen mitattiin kolmella eri menetelmällä. Vertailuna käytettiin polymyksiini B:tä. Laktaattidehydrogenaasi (LDH) on solunsisäinen entsyymi, jonka lisääntyminen solujen ulkopuolella on seurausta solukalvovaurioista. LDH:n määrä näytteessä altistuksen seurauksena kvantitoitiin entsyymireaktion kautta INT(jodonitrotetrazolium)-värireagenssin avulla mittaamalla muodostuneen värillisen reaktiotuotteen määrä fotometrisesti aallonpituudella 490 nm. WST-1-menetelmällä mitattiin solujen metabolista aktiivisuutta altistuksen jälkeen WST-1-reagenssin avulla. Solun metabolisen aktiivisuuden seurauksena rea-genssista muodostuu värillinen tuote, jonka fotometrisen mittaamisen (abs. 440 nm) kautta arvioitiin solujen elinvoimaisuutta. ATP-menetelmässä mitattiin solun-sisäisen ATP:n määrää, joka laskee nopeasti solujen vahingoittumisen seurauksena. Menetelmässä ATP kvantito itiin luminometrisesti ATP:sta riippuvaisen lusife-raasi-lusiferiinireaktion avulla.

64

Oheisessa kuviossa 4 on esitetty 24 tunnin altistuksen vaikutukset Caco-2- solujen elinvoimaisuuteen (%) mitattuna kolmella solujen elinvoimaisuutta mittaavalla menetelmällä (LDH-, WST-1-ja ATP-menetelmät). Raja-arvon, 80% elinvoimaisuus, ylittävillä yhdisteillä ei katsota olevan merkittävää haitallista vaikutusta ko. solujen elinvoimaisuuteen in vitro. Testaukseen käytettiin taulukon 4 yhdisteitä:

Taulukko 4.

Koodi Yhdiste PM positiivinen vertailu (polymyksiini B sulfaatti)

Sal-5 fr.7-8 betuliinin 3,28-0- isostearyylihapon diesteri

Sal-5 fr. 12-14 betuliinin 28-O-isostearyylihapon esteri

Sal-13 fr.5-6 betuliinin 3,28-O-oleinyylihapon diesteri

Sal-13 fr. 10-12 betuliinin 28-O-oleinyylihapon esteri

Sal-16 fr.6-8 betuliinin 3,28-O-oktanyylihapon diesteri

Sal-16 fr. 11 -13 betuliinin 28-O-oktanyylihapon esteri

Sal-46 betuliinin 3,28-diasetaatti

Sal-II-5 betuliinin 28-asetaatti

Sal-II-9 betuliinin 3-okso-28-asetaatti

Sal-II-11 Betuliinihappo

Sal-II-22 betuliinin 3-dehydroksidi

Sal-II-29 betuliinin 3-dehydroksidi-28-asetaatti

Sal-II-32 Betulonihappo

Sal-0 Betuliini

Asa-XIV-160-DI betuliinin 28-A-asetyyliantraniilihapon esteri

Asa-XIV-181 -D betuliinin 28-nikotiinihapon esteri

Esimerkki 24. Betuliiniperäisten yhdisteiden antimikrobisen tehon määritys

Betuliiniperäisten yhdisteiden antimikrobista tehoa tutkittiin turbidometrisella 96-kuoppalevymenetelmällä Staphylococcus aureusta, Staphylococcus epidemidista, Micrococcus luteusta ja Bacillus subtilista vastaan. Nuorentamisen jälkeen bakteerikannoista valmistettiin suspensio viljelmä Todd-Hewitt-ravintoliemeen. Suspensiota pipetoitiin 96-kuoppalevylle, jonka jälkeen mukaan lisättiin testattava yhdiste (3 rinnakkaista määritystä kustakin). Yhdisteistä valmistettiin ensin DMSO-kantaliuokset, jotka laimennettiin ravintoliemellä käyttö liuokseksi, jonka pitoisuus oli 1 pg/ml. Vertailunäytteenä käytettiin erytromysiiniä. Bakteerin kasvua seurattiin mittaamalla näytteiden absorbanssi aallonpituudella 620 nm ajan 65 kohdissa 0, 1, 2, 3, 4 ja 24 tuntia. Näytelevyä inkuboitiin mittausten väliajat 37 °C lämpötilassa ravistelijassa (250 rpm). Yhdisteiden vaikutus bakteerin kasvuun arvioitiin altistetun ja altistamattoman näytteen kasvua vertaamalla. Tulokset on esitetty kasvunestoprosentteina seuraavassa taulukossa 5

Taulukko 5 S. S. S. epider- S. epider- B. B. M. M.

__aureus aureus midis__midis__subtilis subtilis luteus luteus _

Yhdiste 4 h 24h 4 h 24h 4 h 24h 4 h 24h 1 ~2A TÖ TÖ TÖ To T9 Τδ Ύ.6 "5 ΤΪ6 TÖ ~52J TÖ 102.3 0.0 TTT TÖ "6 TÖ TÖ TÖ TÖ To T7 To 15 "8 Tö Tö Tö Tö Tö TT Tö To 1Ö TÖ TÖ TÖ Ϊ7 To T6 To ~27 Tö Tö Tö Tö Tö Tö Tö To ΪΖ6

Ti Tö Tö Tö Tö Tö T9 To ΪΤΪ 23 T9 ΪΠ ~Τδ TÖ T7 TT To Ti 25 T9 TÖ T2 ΪΖ7 TÖ ΪΤ2 Ϊ6 Ϊ2Λ "29 102.6 103.4 66.6 "2Ö2 100.8 54.6 89.9 60.5

To Tö Tö TT Tö TT ΪΠ Tö Tö ΤΪ 53.6 ΤΪ7 100.0 90.8 95.6 100.0 96.1 1ÖTÖ T2 ΤΤδ ΎΣϊ 100.0 100.0 loo.o mö 100.0 100.0 * = liukoisuussongelmia

Testatut yhdisteet on esitetty seuraavassa: 1 =Betuliinin 3,28 -di-isosteariinihappoesteri 5=Betulonihappo 6=Betuliini-3,28-diasetaatti-18-19-eeni 8=Betulonihappo-28-aspartaattidimetyyliesteriamidi 10=Betuliini-3,28-dioktaanihappoesteri 20=Betuliini-3,28-C 18-dialkenyylimeripihkahappodiesteri 21=Betuliini-28-C18-alkenyylimeripihkahappoesteri 23=Betuliini-28-karvakrolietikkahappoesteri 25=Betuliini-3-asetaatti-28-mesyylaatti 29=Bctuliini-28-.Y-asctyyliantraliinLhappoesteri 30=Betuliini-28-kanelihappoesteri 31= Erytromysiini (0.1 Lig/ml) (vertailu) 32= Erytromysiini (1 pg/ml) (vertailu)

Claims (4)

1. Yleisen kaavan I mukaiset antimikrobisina yhdisteinä vaikuttavat betu-liinijohdannaiset ja niiden suolat: X e y R3 λ12\νίί·*1ΐΝ£Λ | ίο ! . \ AA/ Γ Te Vs R2 ia i R1 missä Rl = OH, R2 = CH20(C=0)CH2(CHRg)C00Y, missä Rg = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRh, missä Rh = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä, ja R3 = CH2=CCH3 X10 = X11 = H, XJ2 = X13 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = OH, R2 = CH2ORi, missä Ri = 2,5-diaminopentanoyyli, 2-(asetyyliamino)bcntsoyyli, N,N,N-trimetyyli-2-oksoetanaminium tai iso-stearyyli, ja R3 = CH2=CCH3i X10 = Xu = H, XJ2 = XJ3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = OH, R2 = CH20Rn, missä R„ = krysantcmoyyli tai rctinoyyli tai (CO)CH2ORn’, missä Rn’ = verbenyyli, terpinyyli, tymyyli, karvakryyli, mentyyli, kinna-myyli, kurkuminyyli, eugenyyli, bomyyli tai isobomyyli, ja R3 = CH2=CCH3i Xio = Xn = H, Χί2 = X13 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = 0(C=0)CH2(CHRc)C00Y, missä Rc = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, Ci- C4-alkyyliryhmä tai NRh, missä Rh = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä, R2 = CH20(C=0)CH2(CHRd)C00Y, missä Rd = C4-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRk, missä R|< - H tai Ci-C4-alkyyliryhmä, ja R3 = CH2=CCH3i Xio = X11 = H, Xi2 = Xi3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = ORr, missä Rr = 2,5-diaminopentanoyyli, 2-(asctyyliamino)bcntsoyyli, N,N,N-trimctyyli-2-oksoctanaminium tai iso-stcaryyli,, R2 = CH2ORp, missä Rp = 2,5-diaminopentanoyyli, 2-(asctyyliamino)bcntsoyyli, N,N,N-trimetyyli-2-oksoetanaminium tai iso-stcaryyli,, ja R3 = CH2=CCH3i Xio = X11 = H, Xi2 = Xi3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = ORv, missä Rv = krysantemoyyli tai retinoyyli tai (CO)CH2ORV’, missä RV’ = verbenyyli, terpinyyli, tymyyli, karvakryyli, mentyyli, kinna-myyli, kurkuminyyli, eugenyyli, bomyyli tai isobomyyli, R2 = CH2ORu, missä Ru = krysantemoyyli tai retinoyyli tai (CO)CH2ORU’, missä RU’ = verbenyyli, terpinyyli, tymyyli, karvakryyli, mentyyli, kinna-myyli, kurkuminyyli, eugenyyli, bomyyli tai isobomyyli, ja R3 = CH2=CCH3, Χίο = Xu = Η, Χί2 = Χ13 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = OH, R2 = (C=0)NHCHRxC00Y, missä Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRy. missä Ry = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä ja Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyyli-mctyyliryhmä, ja R3 = CH2=CCH3, X10 = X11 = H, Xi2 = Xi3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksiaja e puuttuu; tai Rl = oksoryhmä, R2 = (C=0)NHCHRxC00Y, missä Y = H, Na, K, Ca, Mg, C1-C4-alkyyliryhmä tai NRy. missä Ry = H tai Ci-C4-alkyyliryhmä ja Rx = -CH2CH2CH2CH2NH2, 4-imidatsolyylimetyyli- tai 3- indolyylimetyyliryhmä, tai CH2COOZ tai CH2CH2COOZ ryhmä ja Z = Ry. ja R3 = CH2=CCH3, X10 = Xu = H, XJ2 = XJ3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia ja c puuttuu; tai Rl = oksoryhmä, R2 = (C=0)0Rw, missä Rw = verbenyyli, terpinyyli, tymyyli, karvakryyli, mentyyli, sinnamyyli, kurkuminyyli, eugenyyli, bomyyli, isobomyyli, Cs-C22 alifaattinen, haaroittunut tai haaroittumaton, tyydyttynyt tai tyydytty-mätön alkoholin hiivetytähde tai C7-C8, syklisen tai heterosyklisen alkoholin tähde, ja R3 = CH2=CCH3i X10 = X11 = H, XJ2 = XJ3 puuttuu, a, b, c ja d ovat yk-söissidoksia, ja e puuttuu; tai Rl = OH tai 0-(C=0)Rb, missä Rb = Ci-C22 alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai fenyyliryhmä, R2 = CH2OH tai CH20-(C=0)Rf, missä Rf = Ci-C22 alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai fenyyliryhmä, ja R3 = H2C=CCH2Rq tai CHjCChkR^ missä Rq = meripihkahappoanhydri-di, meripihkahappoimidi tai CH(COORo)CH2COORz, missä Ro = H, Na, K, Ca, Mg, tai Ci-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyli-ryhmä ja Rz = H, Na, K, Ca, Mg tai C]-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Xio = Xn = H, Xn = X13 puuttuu, a, b, c ja d ovat yksöissidoksia ja e puuttuu; tai Rl = H, ORz, 0(C=0)Rb, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, SRZ, =0, =S, missä Rz = H, Cj-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai alla esitetty aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = Cio-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, tai Rl on alla esitetyn osarakenteen XX mukainen, R2 = CH2ORz, CH20(C=0)Rb, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0RZ, CH2SRz, CH=0, CH=S, missä Rz = H, Cj-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alky^yli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-CY, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = Cio-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, tai R2 on alla esitetyn osarakenteen YY mukainen ja Rl tai R2 sisältää ryhmän XX, ja R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3 (isopropyyliryhmä); Χϊ0 = Xn = H; X12 = X13 puuttuu; a, b, e ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; ja e puuttuu; ja osarakenne XX ja YY, jossa YY = CH2XX, valitaan joukosta: R__/R' R^,° Ri / \ 1,2,3-triatsolit \\ isoksatsolit /NV-N Λ" 7=NX R / 1,2,4-triatsolit T N^K pyratsolit R- /^N R R==^ tetratsolit A\ / imidatsolit N R /R R' ^N^xZ^~-R" pyrrolit T O oksatsolit R' / N joissa rakenteissa R, R’ ja R”ovat tosistaan riippumatta H, aromaattinen ryhmä ZZ, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä; ja aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa: pj5 νΛ > “ missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alke-nyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryh-män, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, karboksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleenidioksidiryhmän, sulfaatti, syano, hydroksi tai trifluorimetyyli; tai Rl = H, ORz, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRf, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, Ci-Cf, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut ai kyy li- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = C 10-C22 lineaarinen tai haaroittunut ai kyy li- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osarakenteen XY mukainen ja Rf = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen XY mukainen, R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRf, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = Cio-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rb on alla esitetyn osarakenteen XY mukainen ja Rf = H, C1 -C'V, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ tai Rf on alla esitetyn osarakenteen XY mukainen ja Rl tai R2 sisältää ryhmän XY, ja R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3; X10 = Xn = H; Xj2 = X13 puuttuu; a, b, e ja d ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia; e puuttuu, ja aromaattinen ryhmä ZZ on muotoa: R5 R7 Cn tai R5>^A H w R6 R6 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä, Cj-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alke-nyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryh-män, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, karboksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleenidioksiryhmän, sulfaatti, sy-ano, hydroksi tai trifluorimetyyli; ja osarakenne Rf tai Rb on muotoa XY R4— *r><2 A x4 missä R4 = H tai C1-C20 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyli-ryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; X5 = ’’puuttuu”, C, O, N tai S; X]-X2 muodostaa syklisen osarakenteen, joka on muotoa: Xi-(X3=X6)-X7-(X4=Xs)-X2, missä Xi = X2 = C tai N; X3 = X4 = C; X6 = X8 = O, S tai ’’puuttuu”; X7 = C, O, S taiN-Xg, missä X9 = H, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; ja f = yk-söis- tai kaksoissidos; tai Rl = H, ORz, NRaRz, CN, CHO, (C=0)0Rz, 0(C=0)Rb, 0(C=0)NHRz, SRZ, =0 tai =S, missä Rz = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli-tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = H, Ci-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, R2 = CH2ORz, (C=0)0Rb, CH2NRaRz, CH2CN, CH2CHO, CH2(C=0)0Rz, CH20(C=0)Rb, CH20(C=0)NHRz, CH2SRZ, CH=0 tai CH=S, missä Rz = H, C|-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Ra = H, Ci-C6 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ ja Rb = H, Ci-C22 lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ, ja R3 = CH2=C-CH3 tai CH3-CH-CH3; ja ZZ on muotoa: r^T I \ . tai I . ^ R6 R6 missä R5, R6 ja/tai R7 voi olla H, Ci-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyy-li- tai alkenyyliryhmä, Ci-CV, lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alke-nyylieetteri, R5-R6 muodostaa syklisen C2-C6 alkyyli- tai alkenyyliryh-män, halogeeni (fluori, kloori, bromi, jodi), nitro, karboksi, karboksyyli, asetyyli, R5-R6 muodostaa syklisen metyleenidioksiryhmän, sulfaatti, sy-ano, hydroksi tai trifluorimetyyli ja kohdassa X10-X11 on syklinen tai hete-rosyklinen osarakenne, joka on muotoa Xio-(Xi2=Xi4)-Xi5-(Xi3=Xi6)-Xn missä X10 = Xu = C tai N; XJ2 = X13 = C; X]4 = X]6 = O, S tai ’’puuttuu”; X15 = C, O, S tai N-X17, missä X17 = H, Ci-Cö lineaarinen tai haaroittunut alkyyli- tai alkenyyliryhmä tai aromaattinen ryhmä ZZ; ja a, b, c, d ja e ovat toisistaan riippumatta kaksois- tai yksöissidoksia, edellyttäen, että X17 ei ole fenyyli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen betuliinijohdannainen, tunnettu siitä, että johdannainen valitaan betuliinin 28-N-asetyyliantraniilihappoesterin, betuliinin 28-Ci8-alkyleenimeripihkahappoesterin, betuliinin 3,28-Ci8-alkyleenimeripihkahappoesterin, betuliinin 28-karboksimetoksimentolin, betuliinin 28-karboksimctoksitymolin, betuliinin 28-krysantcmaatin, betuliinin 28-isostearaatin, betuliinihappo L-histidiiniamidin, betuliinihappo L-lysiiniamidin j a betuloni-28-aspartaattiamididimetyyliesterin joukosta.

3. Antimikrobinen koostumus, tunnettu siitä, että koostumus käsittää 2 -60 p-% patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaista betuliinijohdannaista ja valinnaisesti yhtä tai useampaa apuaineiden ja väliaineiden joukosta valittua ainetta.

4. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaisen betuliinijohdannaisen käyttö an-timikrobisen farmaseuttisen valmisteen valmistukseen. 1 Patenttivaatimuksen 4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että farmaseuttinen valmiste on antibakteerinen valmiste.