FI112660B

FI112660B - Menetelmä matriksin metalloproteaasien inhibiittoreina käyttökelpoisten trisyklisten indolijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI112660B
Application number: FI960482A
Authority: FI
Inventors: Stephen Horne; J Teng Liak; Alexander Krantz; Zhengyo Yuan; L Arlindo Castelhano
Original assignee: Syntex Inc
Priority date: 1993-08-05
Filing date: 1996-02-02
Publication date: 2003-12-31
Also published as: JPH09501430A; PL177661B1; WO1995004735A1; CZ30896A3; HUT74586A; BR9407217A; DE69405572T2; KR100347646B1; NO960447D0; CN1132511A; FI960482A0; AU679109B2; DK0712403T3; CA2168791A1; FI960482A; DE69405572D1; RU2132851C1; EP0712403A1; NO307755B1; UA50707C2

Description

5 λ 1 r λ.: n

MENETELMÄ MATRIKSIN METALLOPROTEAASIEN INHIBIITTOREINA KÄYTTÖKELPOISTEN TRISYKLISTEN INDOLIJOHDANNAISTEN VALMISTAMISEKSI

Keksintö koskee menetelmää trisyklisten indolijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, jotka inhiboivat matriksin metalloprote-aaseja, erityisesti soluväliaineen kollagenaaseja, ja 10 jotka ovat sen vuoksi käyttökelpoisia sellaisten nisäkkäiden hoidossa, joilla on sairaudentiloja, joita sellaisten matriksin metalloproteaasien inhibointi helpottaa.

Matriksin metalloproteaasit ovat ryhmä proteaaseja, jotka 15 vastaavat sidekudosten hajoamisesta ja uudistamisesta. Tämän entsyymiryhmän jäsenillä on monia yhteisiä ominaisuuksia, joihin kuuluu sinkki- ja kalsiumriippuvuus, erittyminen tsymogeeneinä ja 40-50 %:n aminohapposekvenssihomolo-gia.

20

Matriksin metalloproteaasiryhmään kuuluvat fibroblasteis-ta/makrofageista ja neutrofiileistä peräisin olevat soluväliaineen kollagenaasit, jotka katalysoivat natiivien • kollageenityyppien I, II, III ja X aloitus- ja määräävää ' t 25 (rate-limiting) pilkkomista.

: Kollageeni, nisäkkäiden päärakenneproteiini, on monien ku- : : dosten, kuten ruston, luun, jänteen ja ihon, matriksin olennainen aineosa. Soluväliaineen kollagenaasit ovat hy-30 vin spesifisiä matriksin metalloproteaaseja, jotka pilkkovat kollageenia tuottaen kaksi fragmenttia, jotka denaturoituvat spontaanisti fysiologisissa lämpötiloissa ja sen vuoksi altistuvat vähemmän spesifisten entsyymien pilkkomiselle. Koska kollagenaasin suorittama pilkkominen johtaa 35 kohdekudoksen rakenteellisen eheyden häviämiseen, se on pääasiallisesti palautumaton prosessi ja sen vuoksi hyvä kohde terapeuttiselle väliintulolle.

2 11:,:60

Soluväliaineen kollagenaasien lisäksi matriksin metallo-proteaasientsyymiryhmään kuuluu kaksi erillistä, mutta hyvin läheisesti yhteen kuuluvaa gelatinaasia: fibroblas-tien erittämä 72 kDa:n entsyymi ja 92 kDa:n entsyymi, jota 5 mononukleaariset fagosyytit vapauttavat. Nämä gelatinaasit pystyvät hajottamaan gelatiineja (denaturoituja kollageenejä) , natiivin kollageenin tyyppejä IV ja V, fibronektii-niä ja liukenematonta elastiinia.

10 Matriksin metalloproteaasiryhmään kuuluvat myös strome-lysiinit 1 ja 2, jotka pystyvät pilkkomaan monenlaisia matriksin substraatteja, mm. laminiinia, fibronektiiniä, proteoglykaaneja ja niiden ei-kierteisissä domeeneissa esiintyviä kollageenin tyypejä IV ja IX.

15

Matrilysiini (putatiivinen metalloproteaasi eli PUMP) on äskettäin kuvattu matriksin metalloproteaasiryhmän jäsen. Matrilysiini pystyy hajottamaan monenlaisia matriksin substraatteja, mm. proteoglykaaneja, gelatiineja, fib-20 ronektiiniä, elastiinia ja laminiinia. Sen ilmentyminen on dokumentoitu mononukleaarisissä fagosyyteissä, rotan koh-.· tueksplantaateissa ja siellä tällöin kasvaimissa.

Matriksin metalloproteaasien inhibiittoreiden katsotaan 25 tarjoavan hyödyllisiä hoitoja niveltulehdussairauksiin, luun resorptiosairauteen (kuten osteoporoosiin), diabetekseen liittyvään kohonneeseen kollageenin häviämiseen, pe-riodontaalisairauteen, sarveiskalvon haavaumaan, ihon haavaumaan ja kasvaimen etäpesäkkeeseen. Kollagenaasi-inhi-30 biittorien rakennetta ja mahdollista käyttöä kuvataan esi-merkiksi artikkeleissa J. Enzyme Inhibition (1987), voi.

2, s. 1-22, ja Drug News & Prospectives (1990), voi. 3, nro 8, s. 453-458. Matriksin metalloproteaasien inhibiittorit ovat myös eri patenttien ja patenttihakemusten koh-35 teenä, esimerkiksi US-patenttinumerot 5,189,178 (Galardy) ja 5,183,900 (Galardy), EP-patenttihakemusjulkaisu 3 Ί < f ·' ,·-

( U ,,.:DU

O 438 223 (Beecham) ja O 276 436 (F. Hoffmann-La Roche), kansainväliset PCT-hakemukset 92/21360 (Merck), 92/06966 (Beecham) ja 92/09563 (Glycomed).

5 Keksintö koskee menetelmää uusien trisyklisten indolijoh-dannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia matriksin metalloproteaasien, erityisesti soluväliaineen kollagenaasien, inhibiittoreina ja jotka ovat tehokkaita sellaisten sairaudentilojen hoidossa, joille on tunnus-10 omaista matriksin metalloproteaasien liiallinen aktiivisuus.

Niinpä keksintö kohdistuu menetelmään kaavan (I) mukaisten terapeuttisesti käyttökelpoisten trisyklisten indolijoh-15 dannaisten tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi

Q

20 L /N-(CH2)a : 1 I H / 1 / Rl^-C->rVC-N-(CH2)Il

: Il ' H

; . o H o 25 jossa A on -CH2- tai -N(Rn)-; kun n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; tai kun n on 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -N (R11) -, jossa R11 on C1-C4-alkyyli; R1 on a) -CH2-R4, jossa R4 on merkapto, asetyylitio, kar-30 boksi, hydroksiaminokarbonyyli, N-hydroksiformyyliamino, Ci-Ci-alkoksikarbonyyli, fenyyli-C1-C4-alkoksikarbonyyli, bentsyylioksiaminokarbonyyli, morfolino-^-Ci-alkoksikar-bonyyli, tai o

35 II

: ^R6

OH

4 I , ί' I ! I ι w ϋ ο jossa R6 on kinol-2-yyli; b) -CH(R7)-R8, jossa R7 on Cx^-alkyyli, hydroksi, amino, C^-Q-alkoksikarbonyyli, C1-C4-alkyyliamino, aminokarbonyy-li tai karboksi; ja R8 on karboksi, hydroksiaminokarbonyy- 5 li, C^-C^-alkoksikarbonyyli tai bentsyylioksiaminokarbo-nyyli; c) -NH-CH(R9) -R10, jossa R9 on vety tai Ci~C4-alkyyli ja R10 on karboksi, Ci-C^-alkoksikarbonyyli, fenyyli-C1*-C4-alkok-sikarbonyyli tai fosfonyyli; 10 R2 on Ci-^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli; yksittäisenä stereoisomeerinä tai niiden seoksena.

Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan , > 15 käyttää menetelmissä matriksin metalloproteaasiaktiivisuu-den inhiboimiseksi nisäkkäässä, joissa menetelmissä hoidon tarpeessa olevalle nisäkkäälle annetaan terapeuttisesti vaikuttava määrä edellä määriteltyä kaavan (I) mukaista yhdistettä yksittäisenä stereoisomeerinä tai niiden seok-20 sena; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa.

,· Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan sisällyttää farmaseuttiseen koostumukseen, joka on käyttö-kelpoinen matriksin metalloproteaasiaktiivisuuden inhiboi-•t 25 misessa nisäkkäässä, joka koostumus sisältää terapeutti sesti vaikuttavan määrän edellä määriteltyä kaavan (I) ; mukaista yhdistettä yksittäisenä stereoisomeerinä tai niiden seoksena; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa; ja farmaseuttisesti hyväksyttävää täyteainetta.

7 30 Määritelmät / Selityksessä ja liitteenä olevissa patenttivaatimuksissa käytettynä seuraavilla termeillä on, ellei toisin ole 35 erityisesti mainittu, osoitettu merkitys: "BOC" tarkoittaa t-butoksikarbonyyliä.

5 112C-60 "CBZ" tarkoittaa bentsyylioksikarbonyyliä (karbobentsyy-lioksia).

"DMF" tarkoittaa N,N-dimetyyliformamidia.

"EDCI" tarkoittaa N-etyyli-N'-(3-dimetyyliaminopropyyli)-5 karbodi-imidiä.

"HOBT" tarkoittaa 1-hydroksibentsotriatsolia.

"Asetyylitio" tarkoittaa radikaalia -SC(0)CH3.

"Halogeeni" tarkoittaa bromia, klooria tai fluoria. "Alkyyli" tarkoittaa suora- tai haaraketjuista yksivalens-10 sista radikaalia, joka koostuu yksinomaan hiilestä ja vedystä, ei sisällä tyydyttämättömyyttä ja jossa on yhdestä neljään hiiliatomia, esim. metyyli, etyyli, n-propyyli, 2-metyylipropyyli (iso-butyyli), 1-metyylietyyli (iso-pro-pyyli), n-butyyli ja 1,1-dimetyylietyyli (t-butyyli).

15 "Alkoksi" tarkoittaa radikaalia, jolla on kaava -ORa, jossa Ra on edellä määritelty alkyyli, näitä ovat esim. me-toksi, etoksi, n-propoksi, i-propoksi, 1-metyylletoksi, n-butoksi, t-butoksi ja vastaavat.

20 "Alkoksikarbonyyli" tarkoittaa radikaalia, jolla on kaava -C(0)Rb, jossa Rb on edellä määritelty alkoksi, näitä ovat esim. metoksikarbonyyli, etoksikarbonyyli, t-butoksikarbo-nyyli ja vastaavat.

25 "Bentsyylioksiaminokarbonyyli" tarkoittaa radikaalia, jolla on kaava -C(0)NHCH2Rd, jossa Rd on fenyyli.

"Karbamoyyli" tarkoittaa radikaalia -C(0)NH2.

30 "Karboksi" tarkoittaa radikaalia -C(0)0H.

"Hydroksiamino" tarkoittaa radikaalia -NHOH.

: "Hydroksiaminokarbonyyli" tarkoittaa radikaalia -C(O)NHOH.

"Merkapto" tarkoittaa radikaalia -SH.

"Sulfonyyli" tarkoittaa radikaalia =S(0)2.

: 35 "Fosfonyyli" tarkoittaa radikaalia -PO(OH)2.

6

1 u.JoO

"Valinnainen" tai "valinnaisesti" tarkoittaa, että tämän jälkeen kuvattu tapahtuma tai olosuhteet saattavat joko esiintyä tai ei, ja että kuvaukseen sisältyvät tapaukset, joissa mainittu tapahtuma tai olosuhde esiintyy, ja ta-5 paukset, joissa ne eivät esiinny. Esimerkiksi "valinnaisesti substituoitu kinol-2-yyli" tarkoittaa, että kinol-2-yyliradikaali saattaa olla joko substituoitu tai ei, ja että kuvaukseen sisältyvät sekä substituoidut kinol-2-yy-liradikaalit että kinol-2-yyliradikaalit, joissa substi-10 tuutiota ei ole.

"Aminosuojaryhmä" tässä käytettynä tarkoittaa niitä orgaanisia ryhmiä, joiden tarkoituksena on suojata typpiatomei-ta ei-toivotuilta reaktioilta synteesimenettelyjen aikana, 15 ja niihin sisältyvät, mutta näihin rajoittumatta, bentsyy-li, asyyli, asetyyli, bentsyylioksikarbonyyli (karbobent-syylioksi), p-metoksibentsyylioksikarbonyyli, p-nitrobent-syylioksikarbonyyli, t-butoksikarbonyyli ja vastaavat.

20 "Farmaseuttisesti hyväksyttävä suola" sisältää sekä farmaseuttisesti hyväksyttävän hapon että emäksen additio-: suolat.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola" tarkoit-25 taa niitä suoloja, jotka säilyttävät vapaiden emästen biologisen vaikuttavuuden ja ominaisuudet, jotka eivät ole biologisesti tai muutoin ei-toivottuja, ja joita muodostetaan epäorgaanisten happojen, kuten kloorivetyhapon, bro-mivetyhapon, rikkihapon, typpihapon, fosforihapon ja vas-30 taavan, kanssa, ja orgaanisten happojen, kuten etikkaha-pon, propionihapon, glykolihapon, palorypälehapon, oksaalihapon, maleiinihapon, malonihapon, meripihkahapon, fu-maarihapon, viinihapon, sitruunahapon, bentsoehapon, kane-lihapon, mantelihapon, metaanisulfonihapon, etaanisulfoni-; 35 hapon, p-tolueenisulfonihapon, salisyylihapon ja vastaa vien, kanssa.

7 Λ "j ·'. ’ f. Γ'ι I I i... ~ ^ l) "Farmaseuttisesti hyväksyttävä emäsadditiosuola" tarkoittaa niitä suoloja, jotka säilyttävät vapaiden happojen biologisen vaikuttavuuden ja ominaisuudet, jotka eivät ole biologisesti tai muutoin ei-toivottuja. Näitä suoloja val-5 mistetaan epäorgaanisen emäksen tai orgaanisen emäksen ad-ditiolla vapaaseen happoon. Epäorgaanisista emäksistä peräisin oleviin suoloihin kuuluvat, mutta näihin rajoittumatta, natrium-, kalium-, litium-, ammonium-, kalsium-, magnesium-, rauta-, sinkki-, kupari-, mangaani-, alumii-10 nisuolat ja vastaavat. Edullisia epäorgaanisia suoloja ovat ammonium-, natrium-, kalium-, kalsium- ja magnesium-suolat. Orgaanisista emäksistä peräisin oleviin suoloihin kuuluvat, mutta näihin rajoittumatta, primaaristen, sekundaaristen ja tertiaaristen amiinien suolat, substituoitu-15 jen amiinien, mukaan lukien luontaisesti esiintyvät subs-tituoidut amiinit, syklisten amiinien ja emäksisten ionin-vaihtohartsien, kuten esimerkiksi isopropyyliamiinin, tri-metyyliamiinin, dietyyliamiinin, trietyyliamiinin, tripro-pyyliamiinin, etanoliamiinin, 2-dimetyyliaminoetanolin, 2-20 dietyyliaminoetanolin, trimetamiinin, disykloheksyyliamii-nin, lysiinin, arginiinin, histidiinin, kofeiinin, proka-: iinin, hydrabamiinin, koliinin, betaiinin, etyleenidiamii- : nin, glukosamiinin, metyyliglukamiinin, teobromiinin, pu- riinien, piperatsiinin, piperidiinin, N-etyylipiperidii-25 nin, polyamiinihartsien ja vastaavien suolat. Erityisen edullisia orgaanisia emäksiä ovat isopropyyliamiini, die-tyyliamiini, etanoliamiini, trimetamiini, disykloheksyy-liamiini, koliini ja kofeiini.

30 "Nisäkkääseen" sisältyvät ihmiset ja kaikki kesyt ja villit eläimet, mm. nautakarja, hevoset, siat, lampaat, vuohet, koirat, kissat ja vastaavat, näihin rajoittumatta.

"Terapeuttisesti vaikuttava määrä" tarkoittaa sitä kaavan 35 (I) mukaisen yhdisteen määrää, joka sen tarpeessa olevalle nisäkkäälle annettuna riittää aikaansaamaan jäljempänä määritellyn hoidon sairaudentiloihin, joita matriksin 8 Λ "j .- -,.- /-·

I U.UUU

metalloproteaasiaktiivisuuden, erityisesti soluväliaineen kollagenaasiaktiivisuuden, inhibointi helpottaa. Kaavan (I) mukaisen yhdisteen määrä, joka muodostaa "terapeuttisesti vaikuttavan määrän", vaihtelee yhdisteestä, sai-5 raudentilasta ja sen vakavuudesta sekä hoidettavasta nisäkkäästä riippuen, mutta alan asiantuntija voi määrittää sen rutiininomaisesti ottamalla huomioon sekä oman tietämyksensä että tämän esityksen.

10 "Hoitaminen" tai "hoito" tässä käytettynä kattaa sairau-dentilan hoidon nisäkkäässä, erityisesti ihmisessä, jota sairaudentilaa matriksin metalloproteaasiaktiivisuuden, erityisesti soluväliaineen kollagenaasiaktiivisuuden ja vastaavien, inhibointi helpottaa; ja siihen kuuluu 15 (i) sairaudentilan esiintymisen ennalta ehkäisy nisäkkääs sä, erityisesti silloin kun sellainen nisäkäs on altistunut sairaudentilalle, mutta sitä ei ole siinä vielä diagnosoitu; (ii) sairaudentilan inhibointi, so. sen kehittymisen estä-20 minen; tai (iii) sairaudentilan helpottaminen, so. sairaudentilan ; ,; perääntymisen aikaansaaminen.

"Stereoisomeerit" tarkoittavat yhdisteitä, joilla on samat 25 molekyylikaavat ja sitoutumisluonne tai -järjestys, mutta "! jotka eroavat atomeittensa avaruudellisessa järjestäytymi sessä.

Tässä käytetty nimistö on pohjimmiltaan I.U.P.A.C.-nimis-,* 30 tön muunnettu muoto, jossa keksinnön mukaiset yhdisteet nimetään sellaisten fosfiini- tai aikaani- (alkanoic) ; -happojen johdannaisina, joissa on trisykloalkyylisubsti- tuentti. Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä tai niiden far- » maseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on rakenteissaan : 35 vähintään kaksi asymmetristä hiiliatomia; toinen hiili on hiili, johon R2-substituentti on kiinnittynyt, ja toinen hiili on hiili, johon indolyylimetyyliryhmä on kiinnitty- 9 11L-.O0 nyt. Kaavan (I) (mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat voivat sen vuoksi esiintyä yksittäisinä stereoisomeereinä, rasemaatteina ja enantiomee-rien ja diastereoisomeerien seoksina. Kaikkien sellaisten 5 yksittäisten stereoisomeerien, rasemaattien ja niiden seosten tarkoitetaan kuuluvan tämän keksinnön piiriin.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden yksittäisiä stereoisomee-rejä nimettäessä täsmällinen kuvaaja, R tai S, voidaan 10 liittää siinä oleviin kiraalisiin hiiliatomeihin Cahnin, Ingoldin ja Prelogin "Sequence rule" -menettelytavan mukaisesti.

Esimerkiksi seuraava kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa 15 kaavassa n on 2; m on 3; A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on -C(0)NH0H; ja R2 on 2-metyylipropyyli, so. seuraavan kaavan mukainen yhdiste:

IA

15_^\ jj \ \ 1 7 20 14\ / \ xx/18 s i sY" \

I 12L .W L

HO-N-C. /V.. 8 /X r

I - k 7V

: h n 1 n ' «

.25 o H 0 H

nimetään tässä nimellä (3R,10S)-W-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,-13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi.

: 30 Käyttökelpoisuus ja anto Ά. Käyttökelpoisuus

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia nisäk-35 kään matriksin metalloproteaasien, erityisesti nisäkkään soluväliaineen kollagenaasien, inhiboimisessa estäen siten kollageenin hajoamista nisäkkäässä. Yhdisteet ovat sen 10 Λ '' ' " -(:

I I ...... υ U

vuoksi käyttökelpoisia hoidettaessa sellaisia sairaudenti-loja, jotka liittyvät matriksin metalloproteaasien kohonneeseen aktiivisuuteen, erityisesti soluväliaineen kolla-genaasin kohonneeseen aktiivisuuteen, kuten esimerkiksi 5 niveltulehdusta ja nivelrikkoa, kasvaimen etäpesäkkeitä, periodontaalisairautta ja sarveiskalvon haavaumia. Katso, esim. Arthritis and Rheumatism (1993), voi. 36, no. 2, s.

181-189; Arthritis and Rheumatism (1991), voi. 34, no. 9, s. 1073-1075; Seminars in Arthritis and Rheumatism (1990), 10 voi. 19, no. 4, liite 1 (helmikuu), s. 16-20; Drugs of the Future (1990), voi. 15, no. 5, s. 495-508; ja J. Enzyme Inhibition (1987), voi. 2, s. 1-22.

B. Testaus 15

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden kyky inhiboida matriksin metalloproteaasiaktiivisuutta, erityisesti soluväliaineen kollagenaasiaktiivisuutta, voidaan osoittaa alan asiantuntijoiden tuntemilla monilla eri in vitro ja ex vivo -mää-20 rityksillä. Esimerkiksi yksittäisen metalloproteaasin aktiivisuus voidaan osoittaa in vitro -määrityksellä, joka : on kuvattu artikkelissa Anal. Biochem. (1985), voi. 147, : s. 437, tai sen muunnoksilla. Matriksin metalloproteaasien inhiboinnin fysiologiset vaikutukset voidaan osoittaa ex 25 vivo naudan rustoeksplantaattimäärityksellä, joka on kuvattu artikkelissa Methods of Enzymology (1987), voi. 144, s. 412-419, tai sen muunnoksilla; tai ex vivo rotan sikiön pitkän luun määrityksellä (long bone assay), joka on kuvattu artikkelissa Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1988), voi.

* 30 85, s. 8761-8765, tai sen muunnoksilla, tai artikkelissa J. Clin. Invest. (1965), voi. 44, s. 103-116, tai sen : muunnoksilla.

c. Yleinen anto : 35

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen anto puhtaana tai sopivassa 11 IV, ' f*, π I I a. w. L- farmaseuttisessa koostumuksessa voidaan suorittaa millä tahansa hyväksytyllä antotavalla tai vastaavat hyödyt tarjoavilla keinoilla. Anto voi siis olla esimerkiksi oraalista, nasaalista, parenteraalista, topikaalista, trans-5 dermaalista tai rektaalista, kiinteässä muodossa, puoli- kiinteänä, lyofilisoituna jauheena tai nestemäisissä an-nostusmuodoissa, kuten esimerkiksi tabletteina, peräpuikkoina, pillereinä, pehmeinä elastisina ja kovina gelatii-nikapseleina, jauheina, liuoksina, suspensioina tai aero-10 soleina tai vastaavina, edullisesti sellaisissa yksikköan-nosmuodoissa, jotka sopivat täsmällisten annosten yksinkertaiseen antoon. Koostumukset sisältävät tavanomaista farmaseuttista kantajaa tai täyteainetta ja kaavan (I) mukaista yhdistettä aktiivisena aineosana sekä lisäksi ne 15 voivat sisältää muita lääkeaineita, farmaseuttisia aineita, kantajia, apuaineita, jne.

Farmaseuttisesti hyväksyttävät koostumukset sisältävät, tarkoitetusta antotavasta riippuen, tavallisesti noin 1 20 paino-%:sta noin 99 paino-%:iin kaavan (I) mukaista yhdistettä tai yhdisteitä tai niiden farmaseuttisesti hyväksyt-: tävää suolaa, ja 99 paino-%:sta 1 paino-%:iin sopivaa far maseuttista täyteainetta. Edullisesti koostumus on noin 5 paino-%:sta 75 paino-%:iin kaavan (I) mukaista yhdistettä 25 tai yhdisteitä tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, lopun ollessa sopivia farmaseuttisia täyteaineita.

Edullinen antotapa on oraalinen, käyttämällä sopivaa päivittäistä annostusohjelmaa, joka voidaan mukauttaa hoidet-30 tavan sairaudentilan vakavuusasteen mukaisesti. Farmaseuttisesti hyväksyttävä koostumus, joka sisältää yhtä tai useampaa kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, muodostetaan sellaiseen oraaliseen antoon käyttämällä mitä tahansa tavallisesti 35 käytettyä täyteainetta, kuten esimerkiksi farmaseuttisesti sopivaa mannitolia, laktoosia, tärkkelystä, esigelatinoi-tua tärkkelystä, magnesiumstearaattia, natriumsakkariinia, 12 ιι . '.m

I < <..... VJ

talkkia, selluloosaeetterin johdannaisia, glukoosia, gelatiinia, sakkaroosia, sitraattia, propyyligallaattia ja vastaavia. Sellaiset koostumukset ovat liuoksina, suspensioina, tabletteina, pillereinä, kapseleina, jauheina, 5 säädellysti vapauttavina formulaatioina ja vastaavina.

Edullisesti sellaiset koostumukset ovat kapselin, kapletin (caplet) tai tabletin muodossa ja sisältävät sen vuoksi laimennusainetta, kuten laktoosia, sakkaroosia, dikalsium-10 fosfaattia ja vastaavaa; hienonnusainetta, kuten kroskar-melloosinatriumia (croscarmellose sodium) tai sen johdannaisia; voiteluainetta, kuten magnesiumstearaattia ja vastaavaa; sekä sideainetta, kuten tärkkelystä, arabikumia, polyvinyylipyrrolidonia, gelatiinia, selluloosaeetterin 15 johdannaisia ja vastaavia.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat voidaan formuloida myös peräpuikkoon käyttämällä esimerkiksi noin 0,5 %:sta noin 50 %:iin ak-20 tiivistä aineosaa sijoitettuna sellaiseen kantajaan, joka liukenee kehon sisällä hitaasti, kuten esimerkiksi polyok-sieteeniglykoleihin ja polyeteeniglykoleihin (PEG), esim. PEG 1000 (96 %) ja PEG 4000 (4 %).

25 Nestemäisiä farmaseuttisesti annettavia koostumuksia voi-1 daan valmistaa esimerkiksi liuottamalla, dispergoimalla jne. yksi tai useampi kaavan (I) mukainen yhdiste (noin 0,5 %:sta noin 20 %:iin) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola ja valinnaiset farmaseuttiset apuaineet kan-30 tajaan, kuten esimerkiksi veteen, suolaliuokseen, vesipitoiseen dekstroosiin, glyseroliin, etanoliin ja vastaavaan, muodostamalla siten liuos tai suspensio.

Haluttaessa kaavan (I) mukaisia yhdisteitä sisältävä far-35 maseuttinen koostumus voi sisältää myös vähäisiä määriä apuaineita, kuten kostutus- tai emulgointiaineita, pH:ta puskuroivia aineita, antioksidantteja ja vastaavia, kuten

1 γ, V'T

I ( «... ^ v V-» 13 esimerkiksi sitruunahappoa, sorbitanmonolauraattia, trie-tanoliamiinioleaattia, butyloitua hydroksitolueenia jne.

Sellaisten annostusmuotojen varsinaiset valmistusmenetel-5 mät ovat alan asiantuntijoiden tuntemia tai selviävät; katso esimerkiksi Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. painos, (Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1990). Annettava koostumus sisältää joka tapauksessa terapeuttisesti vaikuttavan määrän kaavan (I) mukaista yhdis-10 tettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa sellaisen sairaudentilan hoitamiseen, jota matriksin metallo-proteaasien inhibitio helpottaa tämän keksinnön opetusten mukaisesti.

15 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat annetaan terapeuttisesti vaikuttavana määränä, joka vaihtelee riippuen monista eri tekijöistä, joihin kuuluvat käytetyn spesifisen yhdisteen aktiivisuus, yhdisteen metabolinen stabiilisuus ja vaikutuksen pituus, 20 ikä, kehon paino, yleinen terveys, sukupuoli, ruokavalio, antotapa ja -aika, erittymisnopeus, lääkeyhdistelmä, eri-, i tyisen sairaudentilan vakavuus sekä hoidettavana oleva j isäntä (host).

* · 25 Tavallisesti terapeuttisesti vaikuttava päiväannos kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa on noin 0,14 mg - noin 14,3 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa; edullisesti noin 0,7 mg - noin 10 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa; ja edullisimmin noin 1,4 mg -30 noin 7,2 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa. Esimerkiksi 70 ; kg:n painoiselle henkilölle annettava annosalue kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa olisi noin 10 mg - noin 1,0 g vuorokaudessa, edullisesti noin 50 mg - noin 700 mg vuorokaudessa, ja edulli- 35 simmin noin 100 mg - noin 500 mg vuorokaudessa.

14

1 I 1. J 0 (J

Edulliset suoritustavat

Edullisen ryhmän kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, kuten edellä keksinnön yhteenvedossa kuvattiin, muodostavat ne 5 yhdisteet, joissa n on 2 tai 3; m on 3; A on -CH2-; ja R2 on Ci-C^-alkyyli tai fenyyli-Cx-C^-alkyyli.

Tämän ryhmän yhdisteiden edullisen alaryhmän muodostavat ne yhdisteet, joissa n on 2, ja R2 on 2-metyylipropyyli.

10 Tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muodostavat ne yhdisteet, joissa R1 on -CH2-R4, jossa R4 on karboksi, hydroksiaminokarbonyyli, Ci-Q-alkoksikarbonyyli, fenyyli-Ci-C^-alkoksikarbonyyli tai bentsyylioksiaminokarbonyyli.

15 Tämän luokan yhdisteiden edullisen alaluokan muodostavat ne yhdisteet, joissa R1 on -CH2-C(0)0H tai -ch2-c(0)nhoh.

Erään tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muodos-20 tavat ne yhdisteet, joissa R1 on -CH2-R4, jossa R4 on mer-kapto tai asetyylitio.

f ; Toisen tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muo dostavat ne yhdisteet, joissa R1 on 25 0 : n /-p\ * ·, XR* ; ’ oh jossa R6 on kinol-2-yyli.

30 Erään tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muodos-tavat ne yhdisteet, joissa R1 on -CH(R7)-R8, jossa R7 on (^-C4-alkyyli, Ci-^-alkoksikarbonyyli tai karboksi; ja R8 on karboksi, hydroksiaminokarbonyyli, Ci-^-alkoksikarbonyyli t tai bentsyylioksiaminokarbonyyli.

! 35 Tämän luokan yhdisteiden edullisen alaluokan muodostavat ne yhdisteet, joissa R7 on metoksikarbonyyli.

15

1 i..:. ; ϋ U

Tässä yhdisteiden alaluokassa ovat erityisen edullisia ne yhdisteet, joissa R8 on karboksi tai hydroksiaminokarbo-nyyli.

5 Erään tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muodostavat ne yhdisteet, joissa R1 on -NH-CH(R9) -R10, jossa R9 on vety tai Ci-C^-alkyyli; ja R10 on karboksi, C^-C^-alkoksi-karbonyyli tai fenyyli-C1-C4-alkoksikarbonyyli.

10 Erään ryhmän yhdisteiden edullisen alaryhmän muodostavat ne yhdisteet, joissa n on 2 tai 3; m on 4; A on -N(R11)-, jossa Rn on Ci-C^-alkyyli; ja R2 on C1-C4-alkyyli.

Erään tämän alaryhmän yhdisteiden edullisen luokan muodos-15 tavat ne yhdisteet, joissa n on 2; R2 on 2-metyylipropyy-li; ja R11 on metyyli.

Tämän luokan yhdisteiden edullisen alaluokan muodostavat ne yhdisteet, joissa R1 on -CH2-R4, jossa R4 on karboksi, 20 hydroksiaminokarbonyyli, C^-C^-alkoksikarbonyyli, fenyyli-Ci-Ci-alkoksikarbonyyli tai bentsyylioksiaminokarbonyyli.

Erityisen edullisia tässä alaluokassa ovat ne yhdisteet, ·. joissa R1 on -CH2-C(0)NH0H.

25 ! Tällä hetkellä edullisimmat kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat seuraavat: t (3R,10S)-W-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-lo [ 10.6.1. O13'18] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-30 yylikarbamoyyli)heksanamidi; (3R, 11S) -W-hydroksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyk-: lo(11.6.1.014'19]eikosa-13 (20) ,14(19) , 15,17-tetraen-ll-yyli- karbamoyyli)heksanamidi; (3R,9S)-N-hydroksi-5-metyyli-3-(8-okso-l,7-diatsatrisyk-35 lo[9.6.1.012'17]oktadeka—11 (18) ,12(17), 13,15-tetraen-9-yyli- : karbamoyyli)heksanamidi; 1 r;. w; I I <... .x w <·,· 16 (3R,9S)-5-metyyli-3-(8-okso-l,7-diatsatrisyklo-[9.6.1.012'17] oktadeka-11 (18),12(17),13, l5-tetraen-9-yyli-karbamoyyli)heksaanihappo; (10S)-2-merkaptometyyli-4-metyyli-N-(9-okso-l,8-diatsa-5 trisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)pentanamidi; (10S)-4-metyyli-2-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13 (18) , 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)pentyyli(kinolin-2-yylitiometyyli)fosfiinihap-10 po; (10S) -2-asetyylitiometyyli-4-metyyli-N- (9-okso-l, 8-diatsa-trisyklo [10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19) , 13 (18), 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)pentanamidi; ja (3J?, 10S) -W-hydroksi-5-metyyli-2-metoksikarbonyyli-3- (9-15 okso-1,8-diatsatrisyklo [10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19) ,- 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistus 20 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, yksittäisinä stereoisomee-reinä tai niiden seoksina, ja niiden farmaseuttisesti hy-! väksyttävät suolat ovat peptidijohdannaisia, joita voidaan . valmistaa aineksena olevasta a-aminohappojohdannaisesta.

Yleisiä menetelmiä peptidisidosten muodostamiseksi kuva-25 taan edelleen teoksissa M. Bodanszky et ai., The Practice of Peptide Synthesis (1984), Springer-Verlag; M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis (1984), Springer-Ver-lag; J.P. Greenstein et ai., Chemistry of the Amino Acids (1961), voi. 1-3, John Wiley and Sons Inc.; G.R. Pettit, ·’ 30 Synthetic Peptides (1970), voi. 1-2, Van Nostrand Reinhold

Company.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden muodostamiseen käytetyt amidiliitännät suoritetaan tavallisesti karbodi-imidi- 35 menetelmällä sellaisilla reagensseilla kuin esimerkiksi : disykloheksyylikarbodi-imidi tai N'-etyyli-N'-(3-dimetyy- liaminopropyyli)karbodi-imidi (EDCI) 1-hydroksibentsotri- 17 Ί * r ' ' f', I ί L. ., 1.

atsolin (HOBT) läsnäollessa inertissä liuottimessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa (DMF). Muita menetelmiä amidi- tai peptidisidoksen muodostamiseen ovat, näihin rajoittumatta, synteettiset reaktiotiet happokloridin, asyy-5 liatsidin, seka-anhydridin tai aktivoidun esterin, kuten nitrofenyyliesterin, kautta. Tyypillisesti liuosfaasin amidiliitännät suoritetaan peptidifragmenttien kanssa tai ilman niitä.

10 Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistukseen käytettyjen yhdisteiden terminaalisten amino- tai karboksiryhmien suo-jaryhmien valinta määräytyy osittain erityisistä amidi-tai peptidiliitäntäolosuhteista sekä osittain liitäntään osallistuvista aminohappo- ja/tai peptidikomponenteista.

15 Yleisesti käytettyihin aminosuojaryhmiin kuuluvat alalla hyvin tunnetut, esimerkiksi bentsyylioksikarbonyyli (kar-bobentsyylioksi), p-metoksibentsyylioksikarbonyyli, p-nit-robentsyylioksikarbonyyli, t-butoksikarbonyyli (BOC) ja vastaavat, α-aminoryhmän suojaryhmänä on edullista käyttää 20 joko B0C:tä tai bentsyylioksikarbonyyliä (CBZ), koska nämä on suhteellisen helppo irrottaa heikoilla hapoilla, esim.

| trifluorietikkahapolla (TFA) tai kloorivetyhapolla etyyli- : asetaatissa; tai katalyyttisellä hydrauksella.

< · 25 Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden yksittäiset stereoisomee- *. rit voidaan erottaa toisistaan alan asiantuntijoiden tun- >t ternillä menetelmillä, esim. valikoivalla kiteyttämisellä » tai kromatografiällä, ja/tai tässä esitetyillä menetelmillä.

30

Kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä olevien substituenttien ja/tai muuttujien yhdistelmät ovat sallittuja vain, jos sellaiset yhdistelmät johtavat stabiileihin yhdisteisiin.

35 A. Välituotteiden valmistus: Kaavan (J) mukaiset yhdisteet

Yhdisteitä, joilla on seuraavanlainen kaava (J): 18 1 I ,. o 0 SN-.

) ( Ο 5 /

HpN^^C-N-i CH2 )

'1 H 0 H

jossa p on 5, 6, 7 tai 8; käytetään kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseen ja ne valmistetaan, kuten esi-10 tetään seuraavassa reaktiokaaviossa 1, jossa R3 on ja p on 5, 6, 7 tai 8; BOC on t-butoksikarbonyyli, ja R13 on vety, mesyyli tai tosyyli:

Reaktiokaavio 1 15 o

II

1. H0(CHz)p_,CN -► CH3C-0-{CH2)p_1-C=N

(B) (C) 0 0 2. (C) —► CHgC-0-( CHg )p-KH-C-CHg —*· HO - ( C Hg ) p-NH2 ' H C 1 (D) (E) ; 3. (e) + -* BOC-ITNj-OH BOC-f^'C-K-tCHg) OR13

H 11 H U

: H o "o (F) (G) : .. - B-y — : boc-n'^X'c-h-(ch2)i1 h-n^\C-n-(ch2) i y έ » (a) (J) Λ s. r ‘ r- I i L J U U 19

Kaavojen (B) ja (F) mukaiset yhdisteet ovat kaupallisesti saatavissa, esim. yhtiöltä Karl Industries, Inc. tai vastaavasti Sigmalta, tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä.

5

Tavallisesti kaavan (J) mukaiset yhdisteet valmistetaan esteröimällä ensin kaavan (B) mukainen alkoholi asetanhyd-ridillä emäksen, edullisesti pyridiinin, läsnäollessa, jolloin muodostetaan kaavan (C) mukainen yhdiste, joka 10 sitten pelkistetään asetanhydridin läsnäollessa, jolloin muodostuu kaavan (D) mukainen yhdiste. Kaavan (D) mukainen yhdiste hydrolysoidaan happamissa olosuhteissa, edullisesti kloorivetyhapolla, jolloin muodostuu kaavan (E) mukainen yhdiste, joka sitten liitetään kaavan (F) mukaisen 15 yhdisteen kanssa standardeissa peptidinliitäntäolosuhteis-sa, esim. EDCI:llä HOBTtn läsnäollessa DMF:ssä, jolloin muodostuu kaavan (G) mukainen yhdiste, jossa R13 on hyd-roksi. Tätä yhdistettä voidaan sitten käsitellä joko to-syylikloridilla tai mesyylikloridilla, jolloin muodostuu 20 kaavan (G) mukainen yhdiste, jossa R13 on mesyyli tai to-syyli. Näin muodostettujen tosylaattien syklisointi NaH:n ylimäärällä inertissä liuottimessa, edullisesti THFissä, korkeassa laimennuksessa (high dilution) huoneenlämpöti-lassa antaa kaavan (H) mukaiset yhdisteet. Kaavan (H) mu-25 kaisissa yhdisteissä oleva suojaryhmä poistetaan heikosti happamissa olosuhteissa, edullisesti trifluorietikkahapon läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan (J) mukaiset yhdisteet .

30 B. Kaavojen (Ia), (Ib), (Ie) ja (Id) mukaisten yhdisteiden valmistus

Kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; 35 A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on t-butoksikarbonyyli; ja R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloal-kyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

1-*; * ’ ·” i ....- o 0 20

Kaavan (Ib) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on karboksi; ja R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-5 alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

Kaavan (Ie) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on bentsyylioksiamino-10 karbonyyli; R2 on c1-C4-alkyyli, c3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C^-C^-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

Kaavan (Id) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; 15 A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on hydroksiaminokarbo-nyyli; R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo-alkyyli~C!-C4-alkyyli tai fenyyli-C^-C^-alkyyli.

Kaavojen (Ia), (Ib), (Ie) ja (Id) mukaiset yhdisteet val-20 niistetään, kuten esitetään seuraavassa reaktiokaaviossa 2, jossa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on Cx-C^-alkyyli, C3-C6-syklo-f alkyyli, Cj-Cg-sykloalkyyli-C^-Q-alkyyli tai fenyyli-Ci-Ci- alkyyli; R14 on t-butyyli tai bentsyyli ja R7a on vety tai Ci-Ci-alkoksikarbonyyli; 25 21

Reaktiokaavio 2 A s. t' ’ *" r

5 (fS

C R2 1. + h14oc^X^oh 1 H / s7* 0 \ /T"\ H-N^ ^C-N-(CHj) \ X / h (n X V{ io ° f (J) R140C I J f / .

Y C-N ^C-N-(CH,)„ T7. iii π H7* 0 H 0 W ( 1 o ) 0 R2 15 11 1 j H / H0 ' C\r/\C-)TN; - N- ( C H 2 ) X- y- 'o1

(n>) Q

20 ο » - <·» + ΟΓ0""· —* " "<C,I>' E7 * 0 H 0

;* dO

» . 25 0 Rz 1 11 1 H / HO-N-C. /K ί / ; I ^C-N ^C-N-(CE,)„ 30 H T lit II 2 ?

E7* 0 H Q

; (id) 35 Kaavan (K) mukaiset yhdisteet valmistetaan tässä esitetyillä menetelmillä tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä.

22

1 u. JoO

Tavallisesti kaavojen (Ia), (Ib) ja (IC) mukaiset yhdisteet valmistetaan liittämällä ensin kaavan (J) mukainen yhdiste kaavan (K) mukaisen yhdisteen kanssa standardeissa peptidinliitäntäolosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan 5 (Ia) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (Ia) mukaisessa yhdisteessä oleva suojaryhmä poistetaan heikosti happamissa olosuhteissa, jolloin saadaan kaavan (Ib) mukainen yhdiste.

10 Sen jälkeen kaavan (Ib) mukainen yhdiste liitetään O-bent-syylihydroksyyliamiinin kanssa standardeissa peptidinlii-täntäolosuhteissa, jolloin saadaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (Ie) mukaisessa yhdisteessä oleva bentsyylisuojaryhmä poistetaan katalyyttisessä hydrauk-15 sessa, jolloin saadaan kaavan (Id) mukainen yhdiste.

C. Kaavojen (Ie) ja (If) mukaisten yhdisteiden valmistus

Kaavan (Ie) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) 20 mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on asetyylitio; ja R2 on : C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, Cg-Cg-sykloalkyyli-Ci-^- ; alkyyli tai fenyyli-Cx-C^-alkyyli.

25 Kaavan (If) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on merkapto; R2 on C!-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyy-li tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

: 30

Kaavojen (Ie) ja (If) mukaiset yhdisteet valmistetaan, kuten esitetään seuraavassa reaktiokaaviossa 3, jossa R2 on kuten edellä on määritelty, ja p on 5, 6, 7 tai 8:

Reaktiokaavio 3 I It'.ub 23 5

. r AS

HaCC S'^^X"C-0H + H-N'^'C-lf-tCHj)

" » !J

0 o 10 (M) (J) 15 0 0 f2 H3CC-S^i^ ? / 111 ,c,-N-(CHi)p o 11 o

20 (iO

:; · aK

o H o 3 0 (i f)

Kaavan (M) mukaiset yhdisteet ovat kaupallisesti saatavia tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla 35 menetelmillä.

24 1'.. JiX-

Tavallisesti kaavojen (Ie) ja (If) mukaiset yhdisteet valmistetaan ensin liittämällä kaavan (M) mukainen yhdiste kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa standardeissa pepti-dinliitäntäolosuhteissa, jolloin saadaan kaavan (Ie) mu-5 kainen yhdiste. Kaavan (Ie) mukaisten yhdisteiden käsittely väkevöidyllä NH4OH:lla metanolissa tuottaa vastaavat kaavan (If) mukaiset yhdisteet.

D. Kaavan (K) mukaisten yhdisteiden yksittäisten stereo-10 isomeerien valmistus

Yhdisteitä, joilla on kaava (K): 15 ^VSf°" R7* 0 jossa R1 2 3 4 on t-butyyli tai bentsyyli ja R7a on vety, Cj-Q-alkoksikarbonyyli, hydroksikarbamoyyli, karboksi tai valinnaisesti substituoitu karbamoyyli, käytetään kaavan (I) 20 mukaisten yhdisteiden valmistamiseen. Kaavan (K) mukaisten yhdisteiden yksittäisiä stereoisomeerejä käytetään kaavan • (I) mukaisten yhdisteiden yksittäisten stereoisomeerien ·. valmistamiseen. Erityisesti yhdisteet, joilla on seuraava kaava (Ka): 25 z 0 Rz JL (Ka) 2 (cH3)3c<r 3 R7b o 4 jossa R2 on C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo-: 30 alkyyli-Ci-C^-alkyyli tai fenyyli-Ci-C^-alkyyli; ja R7b on ! vety, ovat kaavan (K) mukaisten yhdisteiden stereoisomee rejä, joilla on R-konfiguraatio sen hiilen ympärillä, johon R2-substituentti on kiinnittynyt. Kaavan (Ka) mukaiset yhdisteet valmistetaan, kuten esitetään seuraavassa 35 reaktiokaaviossa 4, jossa R2 ja R7b ovat, kuten edellä on ; määritelty:

Reaktiokaavio 4 25 11' ' * · I 1 ... ... x.

· V» * 0 //Λ //"Λ oo oo (HJ{) L—(+) — 2.10 — kamferisuttaami (N) 10

0 o R2 Y

15 2. 00 + (CHs)3co^Y^Br -► (CH3)3CoY^Y-C-R^-^^> 0 0 (Q)

20 Y

.: δ! Y

• (ch3)co'/^X^'c-oh and hn^-—l y

R7b o1 \YV

/λ'' : oo 25 (K“) L-( + )-2 , 10- kamferisuKaami t

Vastaavat yksittäiset stereoisomeerit S-konfiguraatiossa valmistetaan samalla tavalla, mutta substituoimalla L-(+)-30 2,10-kamferisultaami D-(-)-2,10-kamferisultaamilla.

Kaavan (HH) mukaiset yhdisteet ovat kaupallisesti saatavia tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä, esimerkiksi jäljempänä esimerkissä li kuva-35 tulla menetelmällä. L-(+)-2,10-kamferisultaami ja D-(-)- 2,10-kamferisultaami ovat kaupallisesti saatavissa esimerkiksi yhtiöltä Aldrich.

26 ΙΙί'ϋΟ

Tavallisesti kaavan (Ka) mukaiset yhdisteet valmistetaan kondensoimalla ensin kaavan (HH) mukainen yhdiste L-(+)- 2,10-kamferisultaamin kanssa, jolloin muodostetaan kaavan (N) mukainen yhdiste. Käyttämällä NaHMDSrää muodostamaan 5 anioni tunnin ajan, reaktio sammutetaan t-butyylibromiase-taatilla, jolloin muodostetaan kaavan (Q) mukainen vastaava esteri. Sitten kamferiryhmä poistetaan emäksisissä olosuhteissa, jolloin saadaan kaavan (Ka) mukaisen yhdisteen yksittäinen stereoisomeeri, jossa se hiili, johon R2-subs-10 tituentti on kiinnittynyt, on (R)-konfiguraatiossa.

Myös yhdisteet, joilla on kaava (Kb): 0 R2 15 Ub> jossa R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo-alkyyli-CL-C^-alkyyli tai fenyyli-C^-C^-alkyyli; ja R7c on 20 alkoksikarbonyyli, ovat kaavan (K) mukaisten yhdisteiden yksittäisiä stereoisomeerejä, ja valmistetaan, kuten esi-tetään seuraavassa reaktiokaaviossa 5, jossa R2 ja R7c ,* ovat, kuten edellä on määritelty: 25 Reakt iokaavio 5 , sAf08 -* »Υ(εΗι)ί o 0 (E) (S) 30 0 0 E2 • Il r7' J-L (CHj) a

; · *>+ ' CT" mT

: in <“> : 35

erÄY

(Kb) 27 11/ j,.ir

Kaavan (R) ja (T) mukaiset yhdisteet ovat kaupallisesti saatavia tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä.

5 Tavallisesti kaavan (Kb) mukaiset yhdisteet valmistetaan käsittelemällä ensin kaavan (R) mukainen yhdiste isobu-teenilla ja katalyyttisellä määrällä väkevää H2S04:ää me-tyleenikloridissä, jota seuraa tislaus, jolloin saadaan kaavan (S) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (S) mukainen 10 yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (T) mukaisen yhdisteen kanssa kalium-t-butoksidin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan (U) mukainen yhdiste. Kaavan (U) mukaisen yhdisteen hydrolyysi happamissa olosuhteissa, edullisesti trifluori-etikkahapolla, huoneenlämpötilassa, tuottaa kaavan (Kb) 15 mukaisen yhdisteen, jossa R7c on alkoksikarbonyyli.

Kaavan (K) mukaiset yhdisteet, joissa R7a on karboksi, voidaan valmistaa kaavan (Kb) mukaisista yhdisteistä, joissa R7c on Cj-1^-alkoksikarbonyyli, alan asiantuntijoi-20 den tuntemilla menetelmillä.

: Edellä kuvattujen kaavan (K) mukaisten yhdisteiden yksit täisten stereoisomeerien valmistusmenetelmien lisäksi voidaan valmistaa kaavan (K) mukaisia yhdisteitä, joissa 25 R7a on Cj-Ci-alkyyli, käsittelemällä kaavan (K) mukaista yhdistettä, jossa R7a on vety, aproottisessa liuottimessa, . esimerkiksi THF:ssä, NaN(TMS)2:n läsnäollessa halogeenial- kaanin, erityisesti jodimetaanin, kanssa, jolloin saadaan kaavan (K) mukaista yhdistettä, jossa R7a on alkyyli.

30 E. Kaavan (Ig) mukaisten yhdisteiden valmistus

Kaavan (Ig) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; 35 A on -CH2-; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on 0

II

/S.

"R6

OH

112660 28 jossa R6 on kinol-2-yyli, ja R2 on Cj-C^-alkyyli. Kaavan (Ig) mukaiset yhdisteet valmistetaan, kuten esitetään seu-raavassa reaktiokaaviossa 6, jossa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 ja R6 ovat, kuten edellä on määritelty, ja R12a on mesyyli 5 tai tosyyli:

Reaktiokaavio 6 T» 1 2 a λ _ OB2 KO o S2 \ ° f2 H^X/OCH2CH3 — V-P^k/0<=HaCH3 0CK2CH3

1‘ 0/CH2CH3 Π OCH2CKj n OCHjCHj |J

(1) <*> <Y> E»-S o E2 R"-S 0 K2 2. (T) + R®-SH - (Z) OCHjjCHj Tl 0B 0 0 0 (AA) (BB) 3- tflB> + Γ / -* V_n II / ’ h w / r h \ ! “N C-H-(C H g ) p HSN C-N-(CH2)p oh II I II p . Q H 0 “ o Π <J> ( 29 112660

Kaavan (W) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä tai ne voidaan valmistaa jäljempänä esimerkissä 19 kuvatun menetelmän mukaisesti. Kaavan (Z) mukaiset yhdisteet ovat kaupallisesti 5 saatavia tai ne voidaan valmistaa alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä.

Tavallisesti kaavan (Ig) mukaiset yhdisteet valmistetaan käsittelemällä ensin kaavan (W) mukaista yhdistettä forma-10 midilla, jolloin muodostetaan kaavan (X) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (X) mukaista yhdistettä käsitellään tosyyli-tai mesyylikloridillä emäksisissä olosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan (Y) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (Y) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (Z) mu-15 kaisen yhdisteen suolan kanssa (edullisesti natriumsuolan, joka on muodostettu kaavan (Z) mukaisen yhdisteen reaktiossa natriumhydridin kanssa), jolloin muodostetaan kaavan (AA) mukainen yhdiste. Sen jälkeen kaavan (AA) mukainen yhdiste hydrolysoidaan emäksisissä olosuhteissa, jol-20 loin saadaan kaavan (BB) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (BB) mukainen yhdiste yhdistetään kaavan (J) mukaisen > . | yhdisteen kanssa standardeissa peptidiolosuhteissa, edul- » : v lisesti l,1'-karbonyylidi-imidatsolilla, jolloin saadaan , kaavan (Ig) mukainen yhdiste.

25 G. Kaavojen (Ik), (II), (Im) ja (In) mukaisten yhdisteiden valmistus

Kaavan (Ik) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) 30 mukaisia yhdisteitä, joissa on allyylisidos, jossa kaavas- » sa n on 2 tai 3; m on 4; A on -NR11-, jossa R11 on vety tai Ci-Ci-alkyyli; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on t-butoksikarbonyy-; li; ja R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo- alkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

Kaavan (II) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa on allyylisidos, jossa kaavas- : 35 112660 30 sa n on 2 tai 3; m on 4; A on -NR11-, jossa R11 on vety tai Cj-C^-alkyyli; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on karboksi; R2 on C C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-al-kyyli tai fenyyli-C^-C^-alkyyli.

5

Kaavan (Im) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa on allyylisidos, jossa kaavassa n on 2 tai 3; m on 4; A on -NR11-, jossa R11 on vety tai Cx-C4-alkyyli; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on bentsyylioksiami-10 nokarbonyyli; R2 on Ci-C^-alkyyli, C3-c6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli.

Kaavan (In) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, jossa kaavassa n on 2 tai 3; m on 4; 15 A on -NR11-, jossa R11 on C^-C^-alkyyli; R1 on -CH2-R4, jossa R4 on hydroksiaminokarbonyyli; R2 on C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-Ci-Q-alkyyli.

20 Kaavojen (Ik), (II), (Im) ja (In) mukaiset yhdisteet valmistetaan, kuten esitetään seuraavassa reaktiokaaviossa 8, : jossa n on 2 tai 3; R2 ja R11 ovat, kuten edellä on määri telty; R14 on t-butyyli;ja R7a on vety; ja BOC on t-butok-sikarbonyyli: : 25 31

Reaktiokaavio 8 112660 O o 1. Γ\-H + NH2(CH2)nNHHM — BOC-A^C-OH BOC-AA:-NH-( CH, ) -RH-R11 '11 ' Il 2 - H O H 0 (F) (DD) 2. (DB) + c ,αα/ (ΪΕ> BOC-H'^^c-NH-fCH,,) -N-*1'

H 11 H O

J

/Λ • H-N-^^c-NH-i CB, )„-N-s’1 '11 2 “ 0 : O R2

3. (ΓΓ) + S14OCllx^jx^,OH

I BTl O

(i) m f (n) • R14 O C IA / '^A^'^AAr-NH-fCH,,) -R-R11 i L II h ii ; b o o

Reaktiokaavio 8 jatkuu 32 Ί12660 5 ΓΛ * ([k) —-- 2

Ml f ) (11) ηο-π i /,, \/ ^C-N /-NH-(CH„) -N-R11 I, II B II 2 n R7* 0 0 10 s. (.1, + [QA°”"‘ 15 h f2 l' (,m> f/T^°' |,"CYJsN:-ir^C-NH - ( CHS ) 0 - N^R11 1 k/ H f || H || 8'° 20 R7* o o ; 25 /T\ 0 R2 \ , , ll| / (in) HO-N-C. JL /,, I // ^C-N /;-NH-(CH,l -N-R11

H || H || 1 ZU

30 B7* 0 0

Kaavan (K) mukaiset yhdisteet valmistetaan alan asiantun-; 35 tijoiden tuntemilla menetelmillä tai tässä kuvatuilla me netelmillä.

112660 33

Tavallisesti kaavojen (Ik), (II), (Im) ja (In) mukaiset yhdisteet valmistetaan saattamalla ensin kaavan (F) mukainen yhdiste reagoimaan diamiinialkaanin tai monoalkyyli-substituoidun diamiinialkaanin kanssa standardeissa pepti-5 dinliitäntäolosuhteissa, esimerkiksi HOBT:llä ja EDCI:llä, inertissä liuottimessa, esimerkiksi DMFrssä, jolloin muodostetaan kaavan (DD) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (DD) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan trans-1,4-dikloori-but-2-eenin kanssa emäksisissä olosuhteissa, jolloin muo-10 dostetaan kaavan (EE) mukainen yhdiste. Kaavan (EE) mukaisen yhdisteen aminosuojaryhmä poistetaan sitten heikosti happamissa olosuhteissa, edullisesti trifluorietikkahapol-la, jolloin muodostetaan kaavan (FF) mukainen yhdiste.

15 Sen jälkeen kaavan (FF) mukainen yhdiste yhdistetään kaavan (K) mukaisen yhdisteen kanssa standardeissa peptidin-liitäntäolosuhteissa, esimerkiksi HOBt:llä ja EDCIillä, jolloin muodostetaan kaavan (Ik) mukainen yhdiste. Kaavan (Ik) mukaisen yhdisteen suojaryhmä poistetaan sitten hei-20 kosti happamissa olosuhteissa, esimerkiksi trifluorietik-kahapolla, jolloin muodostetaan kaavan (II) mukainen yh-: diste. Kaavan (II) mukaista yhdistettä käsitellään sitten ,·* O-bentsyylihydroksyyliamiinilla standardeissa peptidinlii- 1’ täntäolosuhteissa, jolloin saadaan kaavan (Im) mukainen 25 yhdiste. Kaavan (Im) mukaisen yhdisteen suojaryhmä poiste-taan sitten katalyyttisessä hydrauksessa, jolloin saadaan kaavan (In) mukainen yhdiste.

' * H. Kaavojen (Io) ja (lp) mukaisten yhdisteiden valmistus 3o

Kaavan (Io) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; R1 on -NH-CH(R)9-R10, jossa R9 on vety tai Cj-C^-alkyyli ja R10 on fenyyli-C1-C4-alkoksikarbonyyli; R2 on ¢^-35 C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, Ca-Cg-sykloalkyyli-Ci-Cj-al-kyyli tai fenyyli-^-^-alkyyli.

112660 34

Kaavan (Ib) mukaiset yhdisteet ovat sellaisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2~; R1 on -NH-CH(R)9-R10, jossa R9 on vety tai C1-*C4-alkyyli ja R10 on karboksi; R2 on Ci-Q-alkyyli, C3-C6-syk-5 loalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-Ci-C4-alkyyli.

Kaavojen (Io) ja (lp) mukaiset yhdisteet valmistetaan, kuten esitetään seuraavassa reaktiokaaviossa 9, jossa p on 10 5, 6, 7 tai 8; ja R2 ja R9 ovat, kuten edellä on määritel ty: t « < ·

Reaktiokaavio 9 35 112660 of’ ?' ,Α.,°ι I . (| I + H 2 ίΓ - 0 -C(C H 3)3 ( K K)

(JO

.? 1» o—C XC-0-C(CHj)3 (LL)

H

R“ fn O I Jo 0—e^^-fT - OH (MK) 2. (MM) + (J)

Jl h /

H2N

r® r2 ) 0 1 1 0 I H / (l0) ' N""^C - N - ( (/e 2) :;: Q) i & « ·, R® R2 / (>P) /: nj\ /kj V / : ho-c^^it ^c-r ^c-n-{ch2)

’ I I II

H h 0 112660 36

Kaavan (JJ) mukaiset yhdisteet valmistetaan alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä tai menetelmällä, joka kuvataan jäljempänä esimerkissä 36.

5 Tavallisesti kaavojen (II) ja (Im) mukaiset yhdisteet valmistetaan käsittelemällä ensin kaavan (JJ) mukainen yhdiste trifliinianhydridillä (triflic anhydride), jota seuraa käsittely kaavan (KK) mukaisella yhdisteellä emäksisissä olosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan (LL) mukainen 10 yhdiste. Sitten kaavan (LL) mukainen yhdiste hydrolysoidaan heikosti happamissa olosuhteissa, edullisesti tri-fluorietikkahapolla, jolloin muodostetaan kaavan (MM) mukainen yhdiste. Sen jälkeen kaavan (MM) mukainen yhdiste yhdistetään kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa standar-15 deissa peptidinliitäntäolosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan (Io) mukainen yhdiste. Sitten kaavan (Io) mukaisen yhdisteen suojaus poistetaan, jolloin muodostetaan kaavan (lp) mukainen yhdiste.

20 Lisäksi kaikki ne kaavan (I) mukaiset yhdisteet, jotka ovat vapaan emäksen muodossa, voidaan muuttaa farmaseutti-•f sesti hyväksyttäviksi suoloikseen käsittelemällä sopivalla : epäorgaanisella tai orgaanisella hapolla. Kaavan (I) mu kaisten yhdisteiden suolat voidaan myös muuttaa vapaan . 25 emäksen muotoon tai toiseksi suolaksi.

Yhteenvetona kaavojen (Ia), (Ib), (Ie), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ik), (II), (Im), (In), (Io) ja (lp) mukaiset yhdisteet, jotka kaikki ovat kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, 30 valmistetaan: 1. saattamalla reagoimaan kaavan (K) mukainen yhdiste, jossa R2 on Cj-C^alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo-alkyyli-Cj-Ci-alkyyli tai fenyyli-Ci-C^-alkyyli; R7a on vety 35 tai C1-C4-alkoksikarbonyyli; ja R14 on t-butyyli tai bent-syyli; kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa yhdisteessä p on 5, 6, 7 tai 8; jolloin muodostetaan kaavan 112660 37 (Ia) mukainen yhdiste, jossa p, R2, R7a ja R14 ovat, kuten kaavojen (K) ja (J) mukaisille yhdisteille on määritelty; 2. käsittelemällä kaavan (Ia) mukaista yhdistettä, jossa 5 kaavassa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-syk-loalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli; R7a on vety tai C1-C4-alkoksikarbonyyli; ja R14 on t-butyyli tai bentsyyli; jolloin muodostetaan kaavan (Ib) mukainen yhdiste, jossa p, R2, ja R7a ovat, kuten kaavan (Ia) mukaiselle yhdisteel-10 le on määritelty; 3. käsittelemällä kaavan (Ib) mukaista yhdistettä, jossa kaavassa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on Cx-C^-alkyyli, C3-C6-syk-loalkyyli, C^-Cg-sykloalkyyli-C^-C^-alkyyli tai fenyyli-C!- 15 C4-alkyyli; ja R7a on vety tai ^-^-alkoksikarbonyyli; O- bentsyylihydroksyyliamiinilla, jolloin muodostetaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste, jossa p, R2 ja R7a ovat, kuten kaavan (Ib) mukaiselle yhdisteelle on määritelty; 20 4. käsittelemällä kaavan (Ie) mukaista yhdistettä, jossa kaavassa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-syk-loalkyyli, C^-Cg-sykloalkyyli-C^-C^-alkyyli tai fenyyli-Ca-C4-alkyyli; ja R7a on vety tai Ci-C^-alkoksikarbonyyli; jol-loin muodostetaan kaavan (Id) mukainen yhdiste, jossa p, : 25 R2 ja R7a ovat, kuten kaavan (Ie) mukaiselle yhdisteelle on ; määritelty; 5. saattamalla reagoimaan kaavan (M) mukainen yhdiste, jossa R2 on C^-C^-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo- 30 alkyyli-^-^-alkyyli tai fenyyli-C^-C^-alkyyli; kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa p on 5, 6, 7 tai 8; jolloin muodostetaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste, jossa p ja R2 ovat, kuten kaavojen (M) ja (J) mukaisille yhdisteille on määritelty; : 35 6. käsittelemällä kaavan (Ie) mukaista yhdistettä, jossa kaavassa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on Ci-C^-alkyyli, C3-C6-syk- 112660 38 loalkyyli, Cj-Cg-sykloalkyyli-Ci-C^-alkyyli tai fenyyli-Cj-C4-alkyyli/ jolloin muodostetaan kaavan (If) mukainen yhdiste, jossa p ja R2 ovat, kuten kaavan (Ie) mukaiselle yhdisteelle on määritelty; 5 7. saattamalla reagoimaan kaavan (BB) mukainen yhdiste, jossa R2 on C1-C4-alkyyli; ja R6 on kinol-2-yyli, kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa p on 5, 6, 7 tai 8; jolloin muodostetaan kaavan (Ig) mukainen yhdiste, jossa 10 p, R2, ja R6 ovat, kuten kaavojen (BB) ja (J) mukaisille yhdisteille on määritelty; 11. saattamalla reagoimaan kaavan (FF) mukainen yhdiste, jossa n on 2 tai 3; ja R11 on vety tai alkyyli; kaavan (K) 15 mukaisen yhdisteen kanssa, jossa yhdisteessä R2 on C!-C4- alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyy-li tai fenyyli-C^-C^-alkyyli; R7a on vety; ja R14 on t-bu-tyyli; jolloin muodostetaan kaavan (Ik) mukainen yhdiste, jossa n, R2, R7a, R11 ja R14 ovat, kuten kaavojen (FF) ja 20 (K) mukaisille yhdisteille on määritelty; ·: 12. käsittelemällä kaavan (Ik) mukaista yhdistettä, jossa n on 2 tai 3; R2 on C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-: C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-Ci-Q-alkyyli; R7a : 25 on vety; R11 on vety tai C1-C4-alkyyli; ja R14 on t-butyyli, : jolloin muodostetaan kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa n, R2, R7a ja R11 ovat, kuten kaavan (Ik) mukaiselle yhdisteelle on määritelty; 30 13. käsittelemällä kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa n on 2 tai 3; R2 on Ct-C4-alkyyli, C3-c6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C^-C^-alkyyli; R7a » ; on vety; ja Rn on vety tai C^-C^-alkyyli; O-bentsyylihyd- roksyyliamiinilla, jolloin muodostetaan kaavan (Im) mukai-35 nen yhdiste, jossa n, R2, R7a ja Rn ovat, kuten kaavan (II) mukaiselle yhdisteelle on määritelty; 112660 39 14. käsittelemällä kaavan (Im) mukaista yhdistettä, jossa n on 2 tai 3; R2 on Ci-Cj-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-Cg-sykloalkyyli-Ci-Qj-alkyyli tai fenyyli-Ci-C^-alkyyli; R7a on vety; ja R11 on vety tai Ci-Qj-alkyyli; jolloin muodos- 5 tetaan kaavan (In) mukainen yhdiste, jossa n, R2, R7a ja R11 ovat, kuten kaavan (GG) mukaiselle yhdisteelle on määritelty; 15. saattamalla reagoimaan kaavan (MM) mukainen yhdiste, 10 jossa R2 on C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo- alkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-C1-C4-alkyyli; ja R9 on vety tai Ci-C^-alkyyli; kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa p on 5, 6, 7 tai 8; jolloin muodostetaan kaavan (Io) mukainen yhdiste, jossa p, R2, ja R9 ovat, ku-15 ten kaavojen (MM) ja (J) mukaisille yhdisteille on määritelty; ja 16. käsittelemällä kaavan (Io) mukaista yhdistettä, jossa 20 kaavassa p on 5, 6, 7 tai 8; R2 on Ci-C^-alkyyli, C3-C6-syk- loalkyyli, (^-Cg-sykloalkyyli-C^-C^-alkyyli tai fenyyli-Ca-! C4-alkyyli; ja R9 on vety tai Cj-t^-alkyyli, jolloin muo- : dostetaan kaavan (lp) mukainen yhdiste, jossa p, R2, ja R9 ;· ovat, kuten kaavan (Io) mukaiselle yhdisteelle on määri- 25 telty.

Seuraavat yksityiskohtaiset esimerkit annetaan opastuksena helpottamaan keksinnön soveltamisessa, eikä niiden ole tarkoitus rajoittaa keksinnön piiriä.

30

Esimerkki l

Kaavan (E) mukainen yhdiste A. 6-Syaani-l-heksanolia (7,1 g, 55,8 mmol) liuotettiin 30 35 ml:aan asetanhydridiä argonilmakehässä. Tähän ainekseen lisättiin 5,3 ml (65,4 mmol) pyridiiniä tipoittain ja seos jätettiin sekoittumaan 2 tunnin ajaksi. Sitten pullon si- 112660 40 sältö kaadettiin dekantterilasiin, joka sisälsi 50 ml jää-vettä, ja ainesta sekoitettiin 15 minuutin ajan. Seuraa-vaksi seos siirrettiin 250 ml:n erotussuppiloon ja lisättiin eetteriä (100 ml). Ravistelun jälkeen eetterifaasi 5 eristettiin ja vesifaasi pestiin vielä kahdesti eetterillä (2 x 100 ml). Yhdistetty eetterifaasi pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja suodatettiin. Haihduttaminen (kiertohaihdutin ja tyhjöpumppu) tuotti 6-syaani-l-asetoksiheksaania (kaavan (C) mukainen yhdiste), 10 joka käytettiin välittömästi seuraavassa vaiheessa.

B. 6-Syaani-l-asetoksiheksaania (55,8 mmol) liuotettiin noin 100 ml:aan asetanhydridiä Parrin reaktiopullossa (500 ml:n tilavuus). Tähän lisättiin etikkahappoa (0,5 ml), jo-15 ta seurasi platinaoksidi (100 mg). Pullo pantiin PARR-hyd-ratoimislaitteeseen ja täytettiin vetykaasulla (40 psi) . Aineksia ravisteltiin 12 tunnin ajan, suodatettiin selii-tin läpi (katalyytin poistamiseksi), täytettiin tuoreella platinaoksidilla (100 mg) ja vedyllä (40 psi) ja jätettiin 20 ravisteluun vielä 24 tunnin ajaksi. Aines suodatettiin se-liitin läpi ja kaikki haihtuvat aineet poistettiin alen-: netussa paineessa (kiertohaihdutin). Haluttu l-asetoksi-7- asetamidoheptaani oli riittävän puhdasta käytettäväksi ;· seuraavassa vaiheessa (saatiin 11,8 g).

25 . C. l-Asetoksi-7-asetamidoheptaania (11,8 g, 54,3 mmol) liuotettiin 20 ml:aan metanolia 200 ml:n pyöreäpohjäisessä pullossa. Tähän lisättiin 50 ml 40%:ista kloorivetyhapon vesiliuosta, ja seosta kuumennettiin virtauksessa (reflux) 30 60 tunnin ajan. Kaikki haihtuvat aineet poistettiin alen netussa paineessa. Haluttu 7-amino-l-heptanoli saatiin kiteisenä hydrokloridisuolana, sp. 74-81 °C, MS: 131 (MH+) .

112660 41

Esimerkki 2

Kaavan (G) mukaiset yhdisteet A. tf-metyylimorfoliinia (2,2 ml, 19,7 mmol) lisättiin se-5 koittaen tipoittain huoneenlämpötilassa 7-amino-l-heptano-lin hydrokloridisuolaan (3,3 g, 19,7 mmol) 50 ml:ssa kuivaa DMF:ää argonilmakehässä. Viiden minuutin sekoittamisen jälkeen lisättiin seuraavat: W-t-butoksikarbonyyli-L-tryp-tofaani (5 g, 16,45 mmol), 1-hydroksibentsotriatsoli (2,52 10 g, 16,45 mmol) ja EDCI-hydrokloridi (4,73 g, 24,7 mmol). Seosta sekoitettiin kahden tunnin ajan ja sen jälkeen DMF poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen kylmään 2,5%:iseen HCl:ään (100 ml) ja etyyliasetaattiin (3 x 100 ml) ja siirrettiin erotussuppiloon. Orgaani-15 nen faasi eristettiin ja pestiin sen jälkeen kylmällä 2,5%:isella HClrllä (100 ml) ja sitten kyllästetyllä suolaliuoksella (100 ml). Etyyliasetaattifaasi kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin JV-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani-(7-hydroksiheptyyli)-20 amidia; IR (laimentamaton, (neat)): 3300, 2921, 1685, 1645, 1490, : 1356, 1157 cm-1; : αΗ NMR (80 MHz, CDC13) : Ö 0,98-1,62 (m, 10H, -(CH2)5-), 1,45 (S, 9H, t-butyyli) , 2,86-3,32 (m, 4H,CH-CH2, HN-CH2) , : 25 3,68 (t, 2H, J=5,6 Hz, -CH2OH) , 4,22-4,55 (m, 1H, CH) , 5,12-5,32 (leveä d, 1H, NH-CH), 5,65-5,9 (leveä t, 1H, NH-CH2), 6,98-7,92 (m, 5H, ArH), 8,63 (leveä s, indoli NH)· B. iV-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani-(7-hydroksiheptyy-30 li)amidin (8,2 g) liuos 150 ml:ssa vedetöntä pyridiiniä jäähdytettiin 0 °C:seen (jäähaude). Liuokseen lisättiin : para-tolueenisulfonyylikloridia (4,7 g) yhdessä osassa ja jäähdytetty seos jätettiin sekoittumaan 7 tunnin ajaksi. Reaktio sammutettiin lisäämällä 50 ml jäävettä ja poista-35 maila kaikki haihtuvat aineet alennetussa paineessa. Tuote, W-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani-(W'-(7-(4'-metyy-lifen-l-yyli)sulfonyylioksi)heptyyli)amidi, eristettiin 112660 42 pylväskromatografiällä silikageelillä käyttämällä 10 -40%:ista etyyliasetaatti/heksaania eluenttina. Tämä aines kiteytyi seisomassa ollessaan, MS: 572 (MH+) .

5 C. Vaihtoehtoisesti W-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofäänin (5,0 g, 16,45 mmol), 6-amino-l-heksanolin (2,31 g, 19,74 mmol) ja l-hydroksibentsotriatsoli*H20:n (2,52 g, 16,45 mmol) liuokseen kuivassa DMFtssä (50 ml) huoneenlämpötilassa argonilmakehässä lisättiin EDCIrtä (4,73 g, 24,68 10 mmol). Yön yli sekoittamisen jälkeen DMF poistettiin suur-tyhjössä. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin (150 ml) ja 1 N HCl:n (75 ml) kesken. Orgaaninen kerros pestiin vielä 1 N HCl:llä (75 ml), kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (2 x 75 ml) ja lopuksi kyllästetyllä suolaliuoksella 15 (50 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) ja haihdu tettiin kuiviin, jolloin saatiin 6,45 g (97 %) N-t-butok-sikarbonyyli-L-tryptofaani-N'-(6-hydroksiheksyyli)amidia valkeana vaahtona, MS: 404,3 (M+H)+. Tuotteen puhtaus varmistettiin analyyttisellä HPLC:llä.

20 D. Jatkettaessa edemmäs, tf-t-butoksikarbonyyli-L-trypto-faani-M'-(6-hydroksiheksyyli)amidiin (5,5 g, 13,64 mmol) ,: 150 ml:ssa kuivaa pyridiiniä 0 °C:ssa argonissa lisättiin j· 3,9 g (20,46 mmol) p-tolueenisulfonyylikloridia. Homogee- 25 nista liuosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yön yli.

'i Reaktio sammutettiin 25 ml:11a vettä ja ylimäärä pyridii niä poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (120 ml) ja pestiin 1 N HCl:llä (2 x 50 ml), kyllästetyllä NaHC03-liuoksella (50 ml) ja kylläste-30 tyllä suolaliuoksella (50 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin vaaleankeltaisena öljynä N-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani-(N*-(6-(4'-metyylifen-l-yyli)sulfonyylioksi)heksyyli)amidia (5,77 g (76 %), MS: 558,3 (M+H)+.

: 35 E. 5-Hydroksitryptofaaniin (3,5 g, saatavissa Sigmalta) ja trietyyliamiiniin (5,6 ml) vedessä (25 ml) ja tetrahydro- 112660 43 furaanissa (50 ml) lisättiin BOC-ON:ää (2-(t-butoksi-kar-bonyylioksi-imino)-2-fenyyliasetonitriiliä). Tetrahydrofu-raani poistettiin 2,5 tunnin kuluttua, 10%:ista Na2C03 (20 ml) lisättiin ja seos jaettiin eetterillä (50 ml). Vesiosa 5 uutettiin edelleen eetterillä (20 ml) ja tehtiin sitten happamaksi kylmällä 10%:isella HCl:llä kaksifaasisystee-missä, joka sisälsi etyyliasetaattia (100 ml). Etyyliase-taattiosa erotettiin ja pestiin vedellä (30 ml), kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin vedettömän MgS04:n pääl-10 lä ja konsentroitiin, jolloin saatiin siirappia. Siirappi saatettiin reagoimaan 6-amino-l-heksanolin kanssa samalla tavalla kuin edellä esimerkissä 1C kuvattiin, jolloin saatiin N-t-butoksikarbonyyli-L-(5-hydroksi)tryptofaani-ii'-(6-hydroksiheksyyli) amidia. Tästä tuotteesta otettiin 15 puolet 40 ml:aan DMF:ää ja käsiteltiin K2C03:lla (5 g) ja jodimetaanilla (1,2 g) huoneenlämpötilassa yli yön. Sitten reaktioseos jaettiin veden (50 ml) ja etyyliasetaatin (80 ml) kesken, orgaaninen osa pestiin edelleen vedellä (2 x 20 ml), kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin vedettö-20 män MgS04:n päällä ja konsentroitiin öljyksi. Sitten tuote, W-t-butoksikarbonyyli-L-(5-metoksi)tryptofaani-N'-(6-hydroksiheksyyli)amidi, puhdistettiin silikageelikromato-grafialla: :H NMR: δ (CDC13) : 0,9-1,6 (m, CH2, 8H); 1,45 (S, 9H); 2,7-3,3 (m, 5H); 3,6 (t, 2H); 3,85 (s, 3H); 4,35 : 25 (m, 1H); 5,3 (leveä d, 1H); 5,85 (leveä t, 1H); 6,75-8,3 (m, 4H); 8,73 (leveä s, 1H).

F. Samalla tavalla valmistetaan seuraavat yhdisteet: tf-t-butoksikarbonyyli-L-(5-etoksi)tryptofaani-W-(6-hyd- 30 roksiheksyyli)amidi; IV-t-butoksikarbonyyli-L-(5-propoksi)tryptofaani-N'-(6-: hydroksiheksyyli)amidi; N-t-butoksikarbonyyli-L-(5-etyyli)tryptofaani-N'-(6-hyd-roksiheksyyli)amidi; ja 35 tf-t-butoksikarbonyyli-L-(4-metyyli)tryptofaani-N'-(6-hyd-roksiheksyyli)amidi.

44 112660

Esimerkki 3

Kaavan (H) mukaiset yhdisteet A. N-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani- (N'-(4-metyy1ifen-5 1-yyli)sulfonyylioksiheptyyli)amidia (6,78 g) lisättiin annoksittain NaH-liuokseen (60 % öljyssä, 1,9 g) 1,1 litrassa vedetöntä tetrahydrofuraania ja jätettiin sekoittumaan yön yli. Reaktioseos konsentroitiin ja otettiin talteen veteen (150 ml) ja CH2Cl2-liuokseen (150 ml). Vesi-10 faasi tehtiin heikosti happamaksi 2,5%:isella HClrllä (pH= 3-4) ja orgaaninen faasi eristettiin (3 x 150 ml) ja pestiin sen jälkeen kylmällä 2,5%:isella HClrllä (150 ml), 5%:isella NaHC03:lla (150 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (150 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) , suo-15 datettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin vihreänkel- taista puolikiinteää ainetta. Kromatografiapuhdistus sili-kageelillä tuotti (11S) -ll-AM-ibentsyylioksikarbonyyli) -amino-10-okso-l, 9-diatsatrisyklo [11.6.1.014,19] eikosa-13(20),14(19),15,17-tetraeeniä, sp. 208-209 °C, MS: 400 20 (M+H)\ B. Vaihtoehtoisesti W-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani- / (AT* - (6- (4 ' -metyylifen-l-yyli) sulfonyylioksi)heksyyli) ami- diin (5 g, 8,97 mmol) yhdessä litrassa kuivaa THFrää 0 : 25 °C:ssa argonissa lisättiin 4 ekvivalenttia 60%:ista NaHrta * (1,44 g, 36 mmol) pieninä annoksina 10 minuutin aikana. Sitten seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön. Tuloksena saatu keltainen seos haihdutettiin noin 200 ml:aan ja lisättiin 1 litra tislattua vettä. Sen jälkeen 30 seos tehtiin happamaksi 1 N HClrllä sekoittaen voimakkaas- t ti. Keltainen sakka otettiin talteen suodattamalla ja kui-: vattiin P205:n päällä suurtyhjössä yli yön. Kuivalle, puh- ; distamattomalle tuotteelle (8 g) tehtiin kromatografia si- likageeli 60:11a, eluoitiin 30%:isella etyyliasetaatilla ; 35 CH2Cl2:ssa, jolloin saatiin 1,2 g (35 %) (lOS)-lO-N'- (bentsyylioksikarbonyyli)amino-9-okso-l,8-diatsa-trisyklo- 112660 45 [10.6.1.013,18] nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetraeeniä valkeana jauheena, MS: 386 (M+H)+, sp. 222-223 °C.

C. Vaihtoehtoisesti tf-t-butoksikarbonyyli-L-tryptofaani-5 (W-(6-(4'-metyylifen-l-yyli)sulfonyylioksi)heksyyli)ami din liuokseen (1,21 g, 2,17 mmol) 45 ml:ssa reagenssilaa-dun metyleenikloridia lisättiin 15 ml 40%:ista KOH:n vesi-liuosta ja 0,3 ekvivalenttia bentsyylitrietyyliammonium-kloridia (0,65 mmol, 148 mg). Kaksifaasiseosta sekoitet-10 tiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa yli yön. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin 25 ml:11a metyleenikloridia. Yhdistetty orgaaninen kerros pestiin vedellä (25 ml), kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös sekoitettiin 10%:iseen eetteriin petrolieetterissä 15 0 °C:ssa 15 minuutin ajan ja suodatettiin, jolloin saatiin 792 mg (93 %) (105)-10-W'-(bentsyylioksikarbonyyli)amino- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo (10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19) , -13(18),14,16-tetraeeniä valkeana jauheena.

20 Esimerkki 4

Kaavan (J) mukaiset yhdisteet A. (115)-10-W-(bentsyylioksikarbonyyli)amino-(10-okso- l,9-diatsa-trisyklo[11.6.1.014,19]eikosa-13 (20) ,14(19) , - 25 15,17-tetraeeniä (850 mg) liuotettiin 5 ml:aan 10%:ista trifluorietikkahappoa metyleenikloridiliuoksessa ja sekoitettiin 1 tunnin ajan. Haihtuvat aineet poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen CH2Cl2:een (40 ml) ja 1 N NaOH:hon (40 ml) ja siirrettiin erotussuppi-30 loon. Orgaaninen faasi eristettiin ja pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja > konsentroitiin, jolloin saatiin 654 mg (HS)-lO-amino-(lO- okso-1,9-diatsatrisyklo[ll.6.1.014,19]eikosa-13 (20) , 14(19) ,-15,17-tetraeeniä.

: 35 B. Vaihtoehtoisesti (105)-10-W-(bentsyylioksikarbonyyli)-amino-9-okso-l, 8-diatsatrisyklo [10.6.1. o13,18] nonadeka-12- 112660 46 (19),13(18),14,16-tetraeeniä (0,5 nmol, 193 mg) sekoitettiin 20%:iseen TFA/CH2Cl2-seokseen (10 ml) huoneenlämpötilassa 2 tunnin ajan. TFA:n ylimäärä ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaat-5 tiin (30 ml) ja pestiin 1 N HCl:llä (25 ml), kyllästetyllä suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04) . Kuiviin-haihdutus tuotti 140 mg (kvant.) (10S)-10-amino-(9-okso- 1,8-diatsatr isyklo [10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19),13(18),- 14,16-tetraeeniä valkoisena vaahtona, sp. 157-160 °C, MS: 10 286,2 (M+H)\

Esimerkki 5

Kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet 15 A. (11S)-10-amino-(10-okso-l,9-diatsatrisyk- lo[ll. 6.1. O14,19]eikosa-13 (20) ,14(19) , 15,17-tetraeenin (654 mg) ja raseemisen 4-metyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli-valeriaanahapon (800 mg) sekoitettuun liuokseen 30 ml:ssa vedetöntä DMF:ää argonissa lisättiin 1-hydroksibentsotri-20 atsolia (360 mg), jota seurasi EDCI (940 mg). Seos jätettiin sekoittumaan yli yön ja sen jälkeen DMF poistettiin : alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen CH2Cl2:n (100 ml) ja l,5%:isen kylmän HCl:n (100 ml) seokseen ja siirrettiin erotussuppiloon. Orgaaninen faasi eristettiin 25 ja pestiin järjestyksessä l,5%:isella HCl:llä (100 ml), . 5%:isella NaHC03:lla (100 ml) ja kyllästetyllä suolaliuok sella (100 ml). CH2Cl2-faasi kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin puolikiteinen tuote, (llS)-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyk-30 lo[ 11.6.1.014'19]eikosa-13 (20) ,14(19) ,15,17-tetraen-ll-yyli~ karbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteri. Tämän yhdisteen kaksi yksittäistä stereoisomeeriä erotettiin kromatogra-fiällä silikageelillä etyyliasetaatti/heksaani eluenttina. Vähemmän polaarisella stereoisomeerillä oli 154-157 °C:n 35 sulamispiste, [a]D24= -43,9°, c= 23,8 mg/2 ml CHC13, kun taas polaarisemmalla stereoisomeerillä oli 168-171 °C:n sulamispiste, [a]D24= -19,1°, c= 11,86 mg/2 ml CHC13.

112660 47 B. Vaihtoehtoisesti edellä valmistettuun (22?)-4-metyyli-2-(t-butoksikarbonyylimetyyli)valeriaanahapon (2,39 g, 10,4 mmol) , H0Bt*H20:n (2,5 g, l ekv.)/ JMmetyylimorfoliinin (2,3 ml, 2 ekv.) ja (10S)-10-amino-(9-okso-l,8-diatsatri-5 syklo[10.6.1.O13'18] nonadeka-12 (19), 13 (18) , 14,16-tetraeenin (2,96 g, 1 ekv.) liuokseen kuivassa DMF:ssä (200 ml) argonissa lisättiin EDCIrtä (3,96 g, 2,0 ekv.). Tuloksena saatua seosta sekoitettiin yön yli, sitten seuraavana aamuna DMF poistettiin 35 °C:ssa suurtyhjössä. Jäännös erotettiin 10 CH2Cl2:n (150 ml)/veden (75 ml) kesken, sitten orgaaninen kerros pestiin 0,5 N HClrllä (2 x 75 ml), kyllästetyllä NaHC03:lla (2 x 75 ml) ja lopuksi kyllästetyllä suolaliuoksella (1 x 75 ml) . Sen jälkeen, kun CH2Cl2-kerros oli kuivattu Na2S04:n päällä, se suodatettiin ja haihdutettiin 15 kuiviin. Puhdistaminen pylväskromatografiällä (petrolieet-teristä 30%:iseen etyyliasetaatti/petrolieetteriin) tuotti (3R,10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013'18] nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteriä (3,24 g, 62,7 20 %) .

: C. Samalla tavalla valmistettiin seuraavat kaavan (Ia) • mukaiset yhdisteet: (32?, 10S) -4-fenyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo- : 25 [10.6.1.013'18]nonadeka-12(19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)butaänihapon t-butyyliesteri, MS: 532 (M+H)+; ; (32?,10S)-4-sykloheksyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013'18]nonadeka-12(19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)butaanihapon t-butyyliesteri, MS: 538 (M+H)+; * ! 30 (3i?,10S)-6-fenyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1. O13'18]nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yyli- • karbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteri, MS: 560 (M+H)+; ja (3J?, 10S) -3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonade-35 ka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaa nihapon t-butyyliesteri, MS: 484 (M+H)+; ja 112660 48 (3J?, 10S) -2-metoksikarbonyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diat-satrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetra-en-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon bentsyyliesteri, MS: 590 (M+H)\ 5 D. Vaihtoehtoisesti (2R)-4-metyyli-2-(t-butoksikarbonyyli-metyyli)valeriaanahappoon (1 g, 4,34 mmol) kuivassa THF:s-sä (100 ml) -78 °C:ssa argonissa lisättiin NaN(TMS)2:ta (1,0 M THF:ssä, 10,9 ml, 2,5 ekv.) tipoittain, ja seosta 10 sekoitettiin 1 tunnin ajan. Lisättiin jodimetaania (0,33 ml, 1,2 ekv.) ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yli yön -78 °C:sta huoneenlämpötilaan. Seuraavana päivänä reaktio sammutettiin vedellä (100 ml). Eetterillä (3 x 100 ml) uuttamisen jälkeen vesikerros yhdistettiin etyyliase-15 taatin kanssa ja sekoittaen lisättiin 4 N HClrää pH-arvoon 2. Myös natriumkloridia lisättiin kyllästeisyyteen asti ja vesikerros uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 100 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutokset kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (2J?)-4-20 metyyli-2-((1-metyyli-l-t-butoksikarbonyyli)metyyli)vale-riaanahappoa tummanruskeana öljynä (1 g). Tähän puhdista-• mattomaan reaktiotuotteeseen (500 mg) ja (10S)-10-amino- : (9-okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) , - 13(18),14,16-tetraeeniin (399 mg, 0,7 ekv.) kuivassa ; 25 DMF:ssä 0 °C:ssa argonissa lisättiin HOBt-H20:ta (1,1 ekv., 234 mg), ja sen jälkeen EDCI:tä (663 mg, 2,5 ekv.). Tuloksena saatua seosta sekoitettiin yli yön 0 °C:sta huoneenlämpötilaan. Suurin osa DMF:stä poistettiin pumppu-tislauksella 65 °C:ssa. Sitten jäännös jaettiin CH2Cl2:n 30 (150 ml) kesken. Sen jälkeen, kun oli pesty 0,5 N HCl:llä (2 x 75 ml), kyllästetyllä NaHC03:lla (2 x 75 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (1 x 75 ml), orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistamaton aines puhdistettiin nopealla 35 (flash) pylväskromatografiällä silikalla eluoimalla 30%:i-sella etyyliasetaatilla petrolieetterissä, jolloin saatiin kolmen komponentin seos, kaksi (3J?, 10S)-2-metyyli-5-metyy- 112660 49 li-3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6.1.O13,18]nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaaniha-pon t-butyyliesterin ja (3i?, 10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-5 tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin yksittäistä stereoisomeeriä. Lisäpuhdistus tuotti kolmen yhdisteen erottumisen; (3J?,10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteri 10 (13 mg) valkoisena kiinteänä aineena; stereoisomeerien l:l-seos (5 mg) valkoisena kiinteänä aineena; ja (3i?,10S)-2-metyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013'18]nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin vähemmän polaa-15 rinen isomeeri (15 mg); 300 MHz 3H NMR CDCL3:ssa (vähemmän polaarinen diastereoisomeeri): δ (-0,2)-(-0,05) (m, 1H); 0,5-0,7 (m, 1H); 0,9 (dd, J= 4 Hz, J= 6,7 Hz, 6H); 1,15 (d, J= 8,4 Hz, 3H); 1,18-1,4 (m, 3H); 1,41 (s, 9H); 1,45-1,73 (m, 4H); 1,75-1,8 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 3H); 2,89 (dd, 20 J= 10,9 Hz, J= 15 Hz, 1H); 3,34-3,5 (m, 2H); 3,95-4,1 (m, 1H); 4,25-4,4 (m, 1H); 4,72-4,82 (m, 1H); 5,22-5,3 (m, j 1H); 6,52 (d, J=7,5 Hz, 1H); 6,91 (s, 1H); 7,13 (dd, J= : 6,7 Hz, J= 8,4 Hz, 1H); 7,22 (dd, J= 5 Hz, J= 7,1 Hz, 1H) ; 7,34 (d, J= 8,4 Hz, 1H); 7,84 (d, J= 8,4 Hz, 1H).

. 25

Esimerkki 6

Kaavan (Ib) mukaiset yhdisteet A. (11S)-5-metyyli-3-(l0-okso-l,9-diatsatrisyklo-30 [li. 6.1.014,19]eikosa-13 (20), 14 (19), 15,17-tetraen-ll-yyli-’ karbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin vähemmän polaa- | rinen isomeeri (300 mg) peitettiin 5 ml:11a 10%:ista tri- fluorietikkahappo/metyleenikloridiliuosta ja jätettiin sekoittumaan. Kun 2,5 tuntia oli kulunut, TLC osoitti reak-35 tion olleen täydellinen. Kaikki haihtuvat aineet poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen CH2Cl2:een (40 ml) ja siirrettiin erotussuppiloon sekä 112660 50 pestiin järjestyksessä 0,5%:isella HClrllä (40 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (40 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (11S)-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyk-5 lo[ll. 6.1. O14'19]eikosa-13 (20) ,14(19) ,15,17-tetraen-ll-yyli-karbamoyyli)heksaanihapon vähemmän polaarinen stereoiso-meeri.

B. Samalla tavalla, (11S)-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsa-10 trisyklo[ 11.6.1.014,19]eikosa-13 (20) ,14(19) , 15,17-tetraen- 11-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin polaari-sempi stereoisomeeri hydrolysoitiin, jolloin saatiin (11S)-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyklo-[11.6.1.014'19]eikosa-13(20), 14(19), 15,17-tetraen-ll-yyli-15 karbamoyyli)heksaanihapon polaarisempi stereoisomeeri.

C. Vaihtoehtoisesti (3J?, 10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diat-satrisyklo [ 10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetra-en-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteri (3,24 20 g, 6,5 mmol) otettiin talteen 95%:iseen TFArhan (vesiliuos) (30 ml) 0 °C:ssa, ja sekoitettiin sitten 20 minuutin l ajan. Sen jälkeen jäähaude poistettiin ja seosta sekoitet tiin vielä 1 tunnin ajan. Öljyksi konsentroinnin jälkeen jäännös otettiin talteen etyyliasetaattiin (250 ml) ja , 25 pestiin vedellä (7 x 150 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin

Na2S04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin (3R, 105)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsa-trisyklo [10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon yksittäinen stereoisomee-30 ri valkoisena jauheena, 2,83 g (saanto 98,4 %); MS: 442 (M+H)+ (Yhdiste 1).

D. Samalla tavalla, mutta korvaamalla (3i?, 10S)-5-metyyli- 3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo[ 10.6.1.013'18]nonadeka-12 (19) 35 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t- butyyliesteri sopivalla kaavan (Ia) mukaisella yhdisteel- 112660 51 lä, valmistettiin seuraavat, kaavan (Ib) mukaiset yhdisteet: (3.R, 105) -4-f enyyli-3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yyli-5 karbamoyyli)butaanihappo, MS: 474 (M-H)~; (3J?, 10S) -4-sykloheksyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6. l. 013,18]nonadeka-12 (19),13(18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)butaanihappo, MS: 482 (M+H)+; (3R,105)-3-sykloheksyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-10 [10.6.1.013'18] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)propaanihappo, MS: 468 (M+H)+; (3R,105)-6-fenyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013.18] nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)heksaanihappo, MS: 502 (M-H)“; 15 (3R, 105) -3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[ 10.6.1.013,18]nonade- ka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaa-nihappo, MS: 426 (M-H)“; ja (3J?, 105) -2-amino-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-lo [ 10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-20 yylikarbamoyyli)heksaanihappo, MS: 457 (M+H)+; (3R,10S)-2-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-: lo[ 10.6.1.013'18]nonadeka-12 (19) ,13(18) ,14,16-tetraen-10- yylikarbamoyyli)heksaanihappo, MS: 458 (M+H)+; ja (3J?, 95) -5-metyyli-3- (8-okso-l,7-diatsatrisyklo-: 25 [9.6.1.012,17]oktadeka-ll(18) ,12(17) , 13,15-tetraen-9-yyli- karbamoyyli)heksaanihappo.

E. (3J?, 10S) -5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013.18] nonadeka-12(19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-yyli-30 karbamoyyli)heksaanihappo (183 mg) otettiin talteen 40 ml:aan kuivaa CH2cl2:ta, ja 0 °C:ssa lisättiin etanolia (0,5 ml, 5 ekv.), sen jälkeen W,W-dimetyyliaminopyridiiniä (0,1 ekv., 5 mg) ja lopuksi EDCI:tä (209 mg, 5 ekv.). Tuloksena saatua liuosta sekoitettiin 0 °C:sta huoneenlämpö-35 tilaan yli yön. Lisättiin vielä CH2Cl2:ta (100 ml) ja seos pestiin 0,5 N HCl:llä (2 x 50 ml), kyllästetyllä NaHC03:l-la (2 x 50 ml) ja lopuksi kyllästetyllä suolaliuoksella (1 112660 52 x 50 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Uudelleenkiteytys etyyliasetaatista ja petrolieetteristä tuotti (3i?,105)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-5 [10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)heksaanihapon etyyliesteriä valkoisena kiinteänä aineena (saanto: 108 mg, 55 %); MS: 470 (M+H)+.

F. Vaihtoehtoisesti edellä olevassa esimerkissä 5D valmis-10 tettu (3i?,10S)-2-metyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsat- risyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin vähemmän polaarinen stereoisomeeri (15 mg) otettiin talteen CH2Cl2:een (2,4 ml) ja TFA:han (0,6 ml), ja tuloksena saa-15 tua seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 4 tunnin ajan. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 35 °C:ssa. Sen jälkeen lisättiin etyyliasetaattia ja liuos pestiin vedellä (3 x 10 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Uudelleen-20 kiteytys etyyliasetaatti/petrolieetteristä tuotti (3 J?,105)-2-metyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-• [10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)heksaanihappoa valkoisena kiinteänä aineena, (7 mg), MS: 456,3 (M+H)+.

: 25 G. Samalla tavalla (3.R, 105)-2-metyyli-5-metyyli-3-(9-okso- l,8-diatsatrisyklo[l0.6.1.013,18]nonadeka-l2 (19) ,13(18) , - 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesterin stereoisomeerien (valmistettu edellä esimerkissä 30 5D) l:l-seos (5 mg) hydrolysoitiin, jolloin saatiin 3 mg ’ valkoista kiinteää ainetta; ; 300 MHz *H NMR CDCl3:ssa: δ (-0,5)-(-0,3) (m, 1H) ; 0,6-0,8 (m, 1H); 0,8-1,05 (m, 6H); 1,05-1,22 (m, 2H); 1,35 (3H, dd, J= 9 Hz); 1,4-1,7 (m, 3H); 1,7-1,95 (m, 3H); 2,3-2,48 35 (m, 1H); 2,54-2,73 (m, 1H); 2,8-3,0 (m, 2H); 3,38-3,5 (m, 1H); 3,52-3,72 (m, 1H); 3,8-3,98 (m, 1H); 4,34-4,45 (m, 1H) ; 4,7-4,84 (m, 1H) ; 5,0-5,08 (m, 1H) ; 6,8 (d, 1H) ; 112660 53 7,15-7,25 (m, 1H); 7,25-7,32 (m, 1H); 7,35 (d, J= 8,4 Hz, 1H); 7,88 (d, J= 8,4 Hz).

H. Vaihtoehtoisesti (3i?, 10S) -2-metoksikarbonyyli-5-metyy- 5 li-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6. l. o13,18]nonadeka- 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaaniha-pon bentsyyliesteri otettiin talteen etanoliin (35 ml, tarvittiin jonkin verran kuumennusta) ja lisättiin ammoni-umformaattia (1642 mg, 3 ekv.), jota seurasi 10 % Pd:tä 10 aktiivihiilellä (100 mg). Kun oli sekoitettu kolme tuntia argonissa huoneenlämpötilassa, reaktio oli täydellinen. Seos imusuodatettiin l cm:n seliittikerroksen läpi, minkä jälkeen se konsentroitiin, lisättiin MeOHrta ja suodatettiin puuvillatulpan läpi. Konsentroinnin jälkeen jäännök-15 seen lisättiin CH2Cl2:ta ja sitä sekoitettiin voimakkaasti ja suodatettiin sen jälkeen. Suodos konsentroitiin ja uu-delleenkiteytettiin etyyliasetaatti/petrolieetteristä, jolloin saatiin (3J?,10S)-2-metoksikarbonyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12(19),-20 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihappoa valkoisena kiinteänä aineena (saanto: 140 mg), MS: 500,3 l : (M+H)+.

I. (3i?, 10S)-2-metoksikarbonyyli-5-metyyli-3-(9-okso-l,8- ; 25 diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16- ; tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihappo otettiin talteen etanoliin (25 ml) ja sen jälkeen lisättiin tipoittain 1 N LiOH:ta (0,3 ml, 3 ekv.). Tuloksena saatua homogeenistä liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 tunnin ajan.

30 Suurin osa etanolista poistettiin alennetussa paineessa 30 °C:ssa. Sitten lisättiin vettä (5 ml) ja etyyliasetaattia (30 ml) ja sekoittaen lisättiin 4 N HCl:ää, kunnes pH = 2. Etyyliasetaattikerros pestiin sitten kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja 35 haihdutettiin kuiviin. Puhdistettiin käänteisfaasi-HPLC:1-lä, jolloin saatiin 47 mg (3P,10S)-2-karboksi-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka- 112660 54 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaani-happoa valkoisena kiinteänä aineena, MS: 484, 5 (M-H)".

Esimerkki 7 5 Kaavan (Ie) mukaiset yhdisteet A. (11S)-5-metyyli-3-(l0-okso-l,9-diatsatrisyklo-[11.6.1. o14'19] eikosa-13 (20),14(19),15,17-tetraen-ll-yyli-karbamoyyli)heksaanihapon vähemmän polaarisen isomeerin 10 (210 mg) ja 5-hydroksibentsotriatso1imonohydraatin (109 mg) liuos vedettömässä DMF:ssä (20 ml) argonissa jäähdytettiin 0 °C:seen (jäähaude). Tähän seokseen lisättiin EDCI:tä (282 mg) ja sekoittamista jatkettiin 0,5 tunnin ajan. Liuokseen lisättiin O-bentsyylihydroksyyliamiinia 15 (0,27 ml) ja reaktioseos jätettiin lämpenemään huoneenläm- pötilaiseksi yli yön. Kaikki haihtuvat aineet poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen CH2Cl2:een (100 ml) ja 20%:iseen HClrään (100 ml) ja siirrettiin ero-tussuppiloon. Orgaaninen faasi eristettiin ja vesifaasi 20 pestiin (2 x 100 ml) CH2Cl2:lla. Sitten orgaaniset ainekset pestiin peräkkäin 5%:isella NaHC03:lla, kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (11S)-W-bentsyylioksi-5-me-‘ tyyli-3- (10-okso-l, 9-diatsatrisyklo [11.6.1.014'19] eikosa- : 25 13(20),14(19),15,17-tetraen-ll-yylikarbamoyyli)heksanami- j dia kiteisenä tuotteena. Tuote puhdistettiin edelleen pyl- väskromatografiällä silikageelillä, jota seurasi kiteytys kuumasta etyyliasetaatti/CH2Cl2-seoksesta, jolloin saatiin yhdisteen polaarisempi stereoisomeeri, jonka sulamispiste 30 on 232-233 °C:ssa, ja yhdisteen vähemmän polaarinen stereoisomeeri, jonka sulamispiste on 251-253 °C:ssa.

» ; B. Vaihtoehtoisesti (3.R, 10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diat- satrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetra-35 en-10-yylikarbamoyyli)heksaanihapon (2,5 g, 5,82 mmol), HOBtH20:n (0,89 g, 1 ekv.) ja O-bentsyylihydroksyyliamii-nin (2,2 ml, 3 ekv.) liuokseen DMF:ssä (200 ml) 0 °C:ssa 112660 55 lisättiin EDCI:tä (2,77 g, 2,5 ekv.). Sitten tuloksena saatua seosta sekoitettiin yli yön. DMF poistettiin pumppu-tislauksella 65 °C:ssa. Sen jälkeen jäännökseen lisättiin metanolia (14 ml) ja sen jälkeen eetteriä (140 ml). Se-5 koittamalla lisättiin 0 °C:ssa 0,5 N HCl:ää (140 ml), ja sen jälkeen petrolieetteriä (140 ml). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 15 minuutin ajan, sitten valkoinen kiinteä aine imusuodatettiin ja pestiin sen jälkeen vedellä (100 ml), jota seurasi l:l-seos eetteri/petrolieetteriä (100 ml).

10 Kuivaaminen tyhjössä (P205) 3 tunnin ajan tuotti (3i?,10S)-tf-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)heksanamidia valkoisena kiinteänä aineena (2,7 g, 84,9 %).

15 C. Samalla tavalla, mutta korvaamalla (3R, 10S)-5-metyyli- 3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[ 10.6.1.013’18]nonadeka-12 (19), -13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksaanihappo tarkoituksenmukaisesti substituoidulla kaavan (Ib) mukaisella 20 yhdisteellä, valmistettiin seuraavat, kaavan (Ie) mukaiset yhdisteet: ί (3R,10S)-tf-bentsyylioksi-2-metoksikarbonyyli-5-metyyli-3- : (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[ 10.6.1.013'18]nonadeka-12 (19) , - 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: : 25 605,3 (M+H)+; ; (3J?, 10S) -W-bentsyylioksi-6-f enyyli-3- (9-okso-l, 8-diatsa- tr isyklo [10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: 609 (M+H)+; (3J?, 10S) -W-bentsyylioksi-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyk-30 lo [ 10.6.1. O13,18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18) ,14,16-tetraen-10- yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: 533 (M+H)+.

Esimerkki 8

Kaavan (Id) mukaiset yhdisteet : 35 A. (11S)-W-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsat-risyklo[11.6.1.014·19] eikosa-13 (20),14(19),15,17-tetraen-ll- 112660 56 yylikarbamoyyli)heksanamidin polaarisemman stereoisomeerin (90 mg) liuokseen etanoli/tetrahydrofuraanissa (350 ml; 2:1) lisättiin 10 % palladiumia hiilellä (30 mg). Ainesta sekoitettiin jatkuvan vetykaasuvirran kupliessa sen läpi.

5 Kun 3 tuntia oli kulunut, TLC (10 % CH3OH/CH2Cl2) osoitti reaktion olevan täydellinen. Aines suodatettiin seliitti-kerroksen (3X) läpi ja konsentroitiin alennetussa paineessa lähes kuivaksi jäännökseksi. Lisättiin metyleeniklori-dia (15 ml) ja aines konsentroitiin jälleen alennetussa 10 paineessa lähes kuivaksi, ja toistettiin. Jäännökseen lisättiin 3-4 tippaa metanolia, jota seurasi metyleeniklo-ridi (15 ml). Ainesta sekoitettiin jäähdyttäen (jäähaude) ja lisättiin eetteriä (5 ml) ja sen jälkeen heksaania (2 ml). Kiteytynyt aines ilmestyi vähitellen ja se otettiin 15 talteen suodattamalla, jolloin saatiin 50 mg (llS)-N-hyd-roksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyklo- [11.6.1.014.19] eikosa-13 (20) ,14(19) ,15,17-tetraen-ll-yyli-karbamoyyli)heksanamidin polaarisempaa stereoisomeeriä, sp. 197-201 °C, [Ct)D23= -85,1° (3,5 mg/1,0 ml DMSOrta) (Yh- 20 diste 2) .

• B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla (11S)-W-bentsyyliok- : si-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyklo- [11.6.1.014.19] eikosa-13 (20), 14 (19), 15,17-tetraen-ll-yyli- . 25 karbamoyyli)heksanamidin polaarisempi stereoisomeeri vä hemmän polaarisella, valmistettiin (11S)-N-hydroksi-5-me-tyyli-3-( 10-okso-l, 9-diatsatrisyklo[ll. 6.1.014'19]eikosa-13 (20) , 14 (19),15,17-tetraen-ll-yylikarbamoyyli)heksanamidin vähemmän polaarinen stereoisomeeri, sp. 212-216 °C, 30 [CC]d23= -38,5° (4,7 mg/1,0 ml CH3OH:ta) .

C. Vaihtoehtoisesti (3.R, 10S)-tf-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19), -13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi (1,0 35 g, 1,83 mmol) otettiin talteen 20%:iseen TFA-liuokseen etanolissa (500 ml) ja sen jälkeen lisättiin annoksittain Pd:ia aktiivihiilellä (200 mg). Tuloksena saatua suspen- 112660 57 siota sekoitettiin samalla kun H2-kaasu kupli varovaisesti liuoksen läpi. Kun 4 tuntia oli kulunut, reaktioseos imu-suodatettiin seliittikerroksen (1,5 cm) läpi ja suodos konsentroitiin ja otettiin sitten talteen metanoliin (30 5 ml) ja suodatettiin puuvillatupon läpi. Uudelleenkiteytys metanoli/etyyliasetaatti/eetteri/petro1ieetteristä tuotti (3R,10S)-W-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-lo [ 10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidia (768 mg, 92 %), MS: 455 10 (M-H) + .

D. Samalla tavalla, mutta korvaamalla (3J?, 10S)-tf-bentsyy-lioksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013'18] nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-yyli-15 karbamoyyli)heksanamidi sopivalla kaavan (Ie) mukaisella yhdisteellä, valmistettiin seuraavat kaavan (Id) mukaiset yhdisteet: (31?, 10S) -tf-hydroksi-2-metoksikarbonyyli-5-metyyli-3-(9-okso-1,8-diatsatrisyklo [10.6.1. O13,18 ] nonadeka-12 (19) , -20 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: 515 (M+H)+ ; : (3R,10S)-ff-hydroksi-6-fenyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk- : lo[10.6.1. O13,18] nonadeka-12 (19) ,13(18) ,14,16-tetraen-10- yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: 517 (M-H)"; 25 (3R,10S)-N-hydroksi-2-aminokarbonyyli-5-metyyli-3-(9-okso- l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13 (18) ,- 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi, MS: 483 (MH+)-H20; (3J?, 10S) -ii-hydroksi-3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-30 [10.6.1. O13'18]nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)heksanamidi, MS: 443 (MH+) ; ja : (3J?, 9S) -5-metyyli-3- (8-okso-l,7-diatsatrisyklo- : [9.6.1. O12,17] oktadeka-ll (18) ,12(17) ,13,15-tetraen-9-yyli- karbamoyyli)heksanamidi.

; 35 112660 58

Esimerkki 9

Kaavan (Ie) mukaiset yhdisteet A. 4-Metyy1i-2-asetyy1itiometyy1ivaleriaanahapon (612 mg, 5 3 mmol), (10S)-10-amino-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013,18]nonadeka-12(19) ,13(18), 14,16-tetraeenin (427 mg, 1,5 mmol) ja HOBt*H20:n (230 mg, 1,5 mmol) liuokseen kuivassa DMF:ssä (30 ml) argonissa huoneenlämpötilassa lisättiin EDCI:tä (863 mg, 4,5 mmol) yhtenä annoksena. Yön 10 yli sekoittamisen jälkeen DMF poistettiin 30 °C:ssa suur-tyhjössä, jolloin saatiin kellertävää puolikiinteää ainetta. Se liuotettiin etyyliasetaattiin (50 ml), pestiin l N HClrllä (30 ml), 5%:isella NaHC03-liuoksella (30 ml) ja lopuksi kyllästetyllä suolaliuoksella (30 ml). Orgaaninen 15 kerros kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Tuloksena saatu vaaleankeltainen öljy sekoitettiin 50%:iseen eetteri-petrolieetteri-seokseen (40 ml), jolloin saatiin 600 mg (85 %) (10S)-2-asetyylitiometyyli-4-metyyli-W-(9-okso-1,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) , -20 13(18),14,16-tetraen-10-yyli)pentanamidia stereoisomeeri- seoksena 1:1. Stereoisomeeriseos erotettiin nopealla : (flash) pylväskromatografiällä (LPS-2), eluoitiin 20%:i- : sella etyyliasetaatilla petrolieetterissä, jolloin saatiin vähemmän polaarinen stereoisomeeri, sp. 226 °C ja polaari-25 sempi stereoisomeeri, sp. 220 °C.

t

Esimerkki 10

Kaavan (If) mukaiset yhdisteet 30 A. (10S)-2-asetyylitiometyyli-4-metyyli-W-(9-okso-l,8-di-atsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tet-raen-10-yyli)pentanamidin vähemmän polaarisen stereo-isomeerin (50 mg, 0,106 mmol) liuokseen 10 mlrssa metano-lia 0 °C:ssa argonissa lisättiin 0,5 ml väkevää NH4OH:ta.

: 35 Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:sta (jäähaude poistettiin ' NH4OH-lisäyksen jälkeen) huoneenlämpötilaan ja säilytet tiin edelleen huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan. Metanolin 112660 59 > ylimäärä poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin valkoinen, kiinteä jäännös. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin (30 ml) ja 0,1 N HCl:n (15 ml) kesken. Orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella (15 ml), 5 kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Kiinteä jäännös sekoitettiin 50%:iseen eetteri/petrolieetteri-seokseen ja suodatettiin, jolloin saatiin (10S)-2-merkaptometyyli- 4-metyyli-N- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[ 10.6. l. 013,18]nonade-ka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yyli)pentanamidin polaa-10 risempi stereoisomeeri valkoisena jauheena, 41 mg (90 %) sp. 224 °C (Yhdiste 3).

Esimerkki li

Kaavan (HH) mukaiset yhdisteet 15 A. 4-Metyylivaleriaanahappoon (25 g, 0,215 mmol) 25 °C:tta lämpimässä vesihauteessa lisättiin hitaasti tionyyliklori-dia (20,4 ml, 1,3 g). Sitten seosta kuumennettiin 50 °C:s-sa argonissa 3 tunnin ajan (kunnes kaasun kehittyminen oli 20 loppunut). Puhdistamaton reaktioseos tislattiin ilmanpaineessa, jolloin saatiin 4-metyylipentanoyylikloridia (25,3 ; g, 87,3 %), kp. 143 °C.

B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla 4-metyylivaleriaana-25 happo 5-fenyylivaleriaanahapolla (5 g), valmistettiin 5- fenyylipentanoyylikloridia (4,4 g) värittömänä nesteenä, kp. 91-93 °C.

Esimerkki 12 30 Kaavan (N) mukaiset yhdisteet A. 60%risen NaHrn suspensioon (836 g, 1,5 ekv.) tolueenis-. sa (200 ml) huoneenlämpötilassa argonissa lisättiin annok sittain L-(+)-2,10-kamferisultaamia (3,0 g, 3,9 mmol).

35 Seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa yhden tunnin ajan. Sitten liuokseen lisättiin varovaisesti tipoittaan 4-metyylipentanoyylikloridia 0 °C:ssa. Kun reak- 112660 60 tiota oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 3 tunnin ajan, reaktio sammutettiin 10 ml:11a vettä, ja lisättiin 70 ml eetteriä. Reaktioseos pestiin ensin 0,5 N HCl:llä (2 x 50 ml), sitten 5%:isella K2C03:lla (3 x 50 ml) ja lopuksi 5 kyllästetyllä suolaliuoksella (1 x 50 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistus pylväskromatografiällä (etyy-liasetaatti/petrolieetterin l:6-seos eluenttina) tuotti N- 4-metyylipentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaamia (3,39 g, 10 78 %).

B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla 4-metyylipentanoyy-likloridi sopivalla kloridilla, valmistettiin seuraavat kaavan (N) mukaiset yhdisteet: 15 W-3-fenyylipropanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami, MS: 347 (M+) ; N-5-fenyylipentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami, MS: 375 (M") ; N-pentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami, MS: 300 (M+H)+.

20

Esimerkki 13 • Kaavan (Q) mukaiset yhdisteet » :* A. tf-4-metyylipentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaamin : 25 (3,39 g, 10,8 mmol) liuokseen 75 ml:ssa kuivaa THF:ää -78 , °C:ssa argonissa lisättiin tipoittain NaN(TMS) 2-liuosta (1,0 M THF:ssä, 11,34 ml, 1,05 ekv.) viiden minuutin aikana. Kun oli sekoitettu 1 tunnin ajan -78 °C:ssa, seokseen lisättiin heksametyylifosforamidia (5 ml), jota seurasi t-30 butyylibromiasetaatti (5,2 ml, 3 ekv.), sitten lisättiin yhtenä annoksena 400 mg tetra-n-butyyliammoniumjodidia.

; Tuloksena saatua liuosta pidettiin -78 °C:ssa argonissa yön yli. Seuraavana aamuna reaktio sammutettiin vedellä (100 ml), ja uutettiin sen jälkeen eetterillä (3 x 100 35 ml). Yhdistetyt eetterikerrokset pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin sitten Na2S04:n päällä, suodatettiin ja konsentroitiin. Puhdistus pylväskromatografia1- 112660 61 la (eluentti etyyliasetaatti/petrolieetterin 5:95-seokses-ta etyyliasetaatti/petrolieetterin 10:90-seokseen) tuotti tf-(4-metyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli)pentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaamia (4 g, 86,5 %).

5 B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla N-4-metyy1ipentano-yyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami sopivalla kaavan (N) mukaisella yhdisteellä, valmistettiin seuraavat kaavan (Q) mukaiset yhdisteet: 10 N-(3-fenyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli)propanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami, MS: 461 (M+) ; N-(5-fenyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli)pentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaami, MS: 490 (M+H)+; N-(2-t-butoksikarbonyylimetyyli)pentanoyyli-L-(+)-2,10-15 kamferisultaami, MS: 414 (M+H)+.

Esimerkki 14

Kaavan (Ka) mukaiset yhdisteet 20 A. #-(4-metyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli)pentanoyyli-L-(+)-2,10-kamferisultaamin (5,45 g, 12,7 mmol) sekoitet-• tuun liuokseen 50%:isessa THF:n vesiliuoksessa (150 ml) 0 : °C:ssa argonissa lisättiin LiOH* H20-kiteitä (2,14 g, 4 ekv.), jota seurasi 30%:inen H202 (11,5 ml). Sen jälkeen ; 25 jäähaude poistettiin ja tuloksena saatua emulsiota sekoi tettiin 3 tunnin ajan ennen kuin se oli kirkastunut. Suurin osa THF:stä poistettiin alennetussa paineessa 35 eC:s-sa. Sen jälkeen lisättiin CH2Cl2:ta (150 ml) ja sekoittaen lisättiin 4 N HCl:ää pH-arvoon 2. NaCl:n lisäämisen jäi- » ;* 30 keen vesikerros uutettiin edelleen CH2Cl2:lla (3 x 150 ml) . CH2C12 poistettiin alennetussa paineessa 35 °C:ssa ja sen jälkeen jäännös otettiin talteen etyyliasetaattiin (150 ml). Tämä liuos uutettiin sitten 5%:isella K2C03:lla (3 x 50 ml) ja yhdistetyt uutokset pestiin eetterillä (50 35 ml) . Sen jälkeen vesifaasiin lisättiin CH2Cl2:ta ja sekoittamalla NaCl:n kanssa vesikerros uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 70 ml) ja yhdistetyt uutokset kuivattiin Na2S04:n \ 62 112660 päällä, suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin (2 J?) -4-metyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyylivaleriaanahap-poa värittömänä öljynä (2,95 g, kvantitatiivinen saanto).

5 B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla N-(4-metyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyyli)pentanoyyli-L-(+)-2,10-kamfe-risultaami sopivalla kaavan (Q) mukaisella yhdisteellä, valmistettiin seuraavat kaavan (Ka) mukaiset yhdisteet: (2R) -3-fenyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyylipropaanihappo, 10 MS: 265 (M+H)+; (2R)-5-fenyy1 i - 2 - ϋ-butoksikarbonyy1 imetyy1iva1eriaanahap— po, MS: 293 (M+H)+; (2R)-2-t-butoksikarbonyylimetyylivaleriaanahappo, (väritön öljy, 1,09 g).

15 C. (2R)-3-fenyyli-2-t-butoksikarbonyylimetyylipropaanihap-po (55 mg) otettiin talteen jääetikkaan (20 ml) ja etikka-happoon lisättiin Pt02:ta (25 mg). Sen jälkeen dekantteri-lasi pantiin Parrin astiaan (Parr bomb), siitä tyhjennet-20 tiin kaasut ja se täytettiin 100 psi:llä H2:ta. Kun oli sekoitettu 3 päivää, seos imusuodatettiin 1 cm:n seliitti-kerroksen läpi. Öitten suodos konsentroitiin keltaiseksi : öljyksi, joka oli (2R)-3-sykloheksyyli-2-t-butoksikarbo- ’ nyylimetyylipropaanihappoa (56 mg), MS: 269 (M-H)_.

25

Esimerkki 15

Kaavan (R) mukainen yhdiste D-leusiinin (50 g, 0,381 mol) liuokseen 570 ml:ssa 3 N 30 HBr-liuosta (aq.) 0 °C:ssa lisättiin natriumnitriittiä (42 g, 1,6 ekv.) annoksittain 1 tunnin ja 15 minuutin aikana.

: Reaktiota sekoitettiin vielä 3 tunnin ajan 0 °C:ssa, jonka ; jälkeen se uutettiin eetterillä (1000 ml). Kun eetteriker- ros oli pesty vedellä (2 x 500 ml), se kuivattiin MgS04:n 35 päällä ja konsentroitiin. Sitten punainen siirappi haihdutettiin yhdessä kloroformin (3 x 200 ml) kanssa värin poistamiseksi, sen jälkeen se pumpattiin (pump), jolloin 112660 63 saatiin (2R) -2-bromi-4-metyylivaleriaanahappoa värittömänä öljynä, jonka vakiopaino oli 71,3 g.

Esimerkki 16 5 Kaavan (S) mukainen yhdiste

Dikloorimetaaniin (80 ml) kondensoitiin isobuteenia tilavuuden kaksinkertaistamiseksi (-50 °C:ssa CHCl3/hiilihap-pojää) . Tähän liuokseen lisättiin (21?) -2-bromi-4-metyyli-10 valeriaanahappoa (28 g, 143,6 mmol) ja lämpötila pidettiin -40 °C:n ja -50 °C:n välillä sekä tipoittain lisättiin väkevää rikkihappoa (1 ml). Sen jälkeen reaktion annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan 20 tunnin aikana. Sitten liuos konsentroitiin ennen kuin lisättiin vielä metyleeniklori-15 dia (300 ml), joka pestiin myöhemmin kyllästetyllä

NaHC03:lla (2 x 100 ml) ja sen jälkeen vedellä (2 x 100 ml). Kun oli kuivattu Na2S04:n päällä, orgaaninen kerros suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin keltaista öljyä. Aines tislattiin, jolloin saatiin 23 g (2J?)-2-bro-20 mi-4-metyylivaleriaanahapon t-butyyliesteriä kirkkaana, värittömänä öljynä.

Esimerkki 17 • Kaavan (U) mukainen yhdiste : 25 . Bentsyylimetyylimalonaattiin (2,13 ml, 1 ekv.) ja kalium- t-butoksidiin (1,36 g, 1 ekv.) kuivassa DMF:ssä (100 ml) 0 °C:ssa lisättiin tipoittain (2J?)-2-bromi-4-metyylivaleri-aanahapon t-butyyliesteriä (2,89 g, 11,5 mmol) 50 ml:ssa 30 DMF:ää 1 tunnin kuluessa. Sitten tuloksena saatua liuosta sekoitettiin o °C:ssa 3 päivän ajan. Sen jälkeen reaktio-seos jaettiin eetterin (150 ml) ja kyllästetyn ammonium-kloridin (80 ml) kesken. Tuloksena saatu seos imusuodatet-tiin seliitin läpi ja kaksi faasia erotettiin. Sitten : 35 vesikerros uutettiin edelleen eetterillä (3 x 100 ml) ja ‘ yhdistetyt eetteriuutokset pestiin vedellä (6 x 100 ml).

Kun oli kuivattu MgS04:n päällä, orgaaninen kerros suoda- 64 112060 tettiin ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistus nopealla (flash) pylväskromatografiällä (eluoimalla 4:96-seoksella etyyliasetaatti/petrolieetteriä) tuotti (2J?) -2-[ (1-metok-sikarbonyyli-l-bentsyylioksikarbonyyli)metyyli]-4-metyyli-5 valeriaanahapon t-butyyliesteriä (2,55 g) kirkkaana, värittömänä öljynä, MS: 322 (M-asetoni)+.

Esimerkki 18

Kaavan (Kb) mukainen yhdiste 10 (2R)-2—[(1-metoksikarbonyyli-l-bentsyylioksikarbonyyli)metyyli ]-4-metyylivaleriaanahapon t-butyyliesteri otettiin talteen 5 ml:aan 80%:ista TFA:ta (ekv.) huoneenlämpötilassa ja sekoitettiin 1,5 tunnin ajan TLC:llä. Reaktio oli 15 ainoastaan 30%:isesti valmis, joten lisättiin vielä TFA:ta (10 ml). Puolen tunnin sisällä reaktio oli täydellinen.

TFA poistettiin suurtyhjössä 45 °C:ssa ja jäännös otettiin talteen etyyliasetaattiin ja pestiin vedellä (5 x 30 ml). Kun oli kuivattu Na2S04:n päällä, etyyliasetaattikerros 20 suodatettiin, konsentroitiin ja pumpattiin, jolloin saatiin (2R)-2-[(1-metoksikarbonyyli-l-bentsyylioksikarbonyy- • li)metyyli]-4-metyylivaleriaanahappoa kiinteänä aineena : (1,68 g) , MS: 322 (M+) .

♦ 25 Esimerkki 19 »

Kaavan (W) mukainen yhdiste t »

Kiteistä fosfiinihappoa (8,4 g, 0,13 mol) sekoitettiin laimentamattomaan (neat) trietyyliortoformaattiin (22 ml, 30 0,20 mol) 90 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten tä mä siirrettiin johtoputkea (cannula) pitkin etyyli-isobu-tyyliakrylaatin (8 g, 0,036 mol) ja tetrametyyliguanidii-nin (4,5 ml, 0,036 mol) sekoitettuun liuokseen, joka oli jäähdytetty 0 °C:seen 10 minuutin aikana. Jäähaude pois-35 tettiin ja reaktiota sekoitettiin 4 tunnin ajan. Seos laimennettiin 200 ml:11a dietyylieetteriä ja liuos pestiin 1 N HC1:llä (100 ml), vedellä (4 x 100 ml), kyllästetyllä 112660 65 suolaliuoksella (100 ml), ja kuivattiin magnesiumsulfaatin päällä. Haihdutus alennetussa paineessa tuotti 8,15 g 2-(etoksi) -fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahapon etyy-liesteriä kellertävänä öljynä, MS: 349 (M-H20)+.

5

Esimerkki 20

Kaavan (X) mukainen yhdiste

Puhdistamatonta 2-(etoksi)-fosfinoyylimetyyli-4-metyyliva-10 leriaanahapon etyyliesteriä (26 g) liuotettiin 600 ml:aan THF/CH2Cl2-seosta (50/50) ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Sitten liuokseen lisättiin di-isopropyyli-etyyliamiinia (32 ml) ja 90,8 ml bis-(trimetyylisilyyli)asetamidia, ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 20 minuutin ajan, ennen 15 kuin lisättiin paraformaldehydiä (5,5 g). Liuos saatettiin huoneenlämpötilaan ja kuumennettiin 37 °C:ssa 18 tunnin ajan. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja tuloksena saatu öljy liuotettiin 200 ml:aan etyyliasetaattia. Liuos pestiin 50 ml:11a l N HCl:ää (2x), 50 ml:11a kyllästettyä 20 suolaliuosta (2x), kuivattiin MgS04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 19,3 g 2-(etoksi)(hyd-·· roksimetyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahapon etyyliesteriä heikosti keltaisena öljynä, MS: 281 (MH+).

( I

25 Esimerkki 21 ·, Kaavan (Y) mukaiset yhdisteet A. 2-(Etoksi)(hydroksimetyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyy-livaleriaanahapon etyyliesteriä (5 g) liuotettiin 20 » 30 ml:aan CH2Cl2:ta ja jäähdytettiin -20 °C:seen (rinnakkaisena). Liuokseen lisättiin tipoittain metaanisulfonyyli-kloridia (1,5 ml) ja trietyyliamiinia (3,0 ml). Haude poistettiin 15 minuutin kuluttua ja reaktio jätettiin huoneenlämpötilaan 3,5 tunnin ajaksi. Sitten kukin liuos pes-35 tiin 10 ml:lla kylmää 2%:ista HCl:ää, 10 ml:lla NaHC03:ta (kyll.), 10 ml:11a kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 66 112060 12,8 g (yhdistetty saanto) 2-(etoksi)(metaanisulfonyyliok-simetyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahapon etyyliesteriä.

5 B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla metaanisulfonyyli-kloridi p-tolueenisulfonyylikloridilla, valmistettiin 2-(etoksi)(p-tolueenisulfonyylioksimetyyli)fosfinoyylimetyy-1i-4-metyy1ivaleriaanahapon etyy1iesteriä.

10 Esimerkki 22

Kaavan (AA) mukaiset yhdisteet

Natriumhydridiä (1,52 g, (60%:ista)) ja 6 g 2-kinoliini- -1 tiolia sekoitettiin yhdessä 0 °C:ssa 50 ml:ssa DMF:ää. Sen 15 jälkeen, kun alun H2:n kaasun kehitys oli tyyntynyt, seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2,5 tunnin ajan. Sitten seos jäähdytettiin 0 °C:seen ja johtoputkea pitkin lisättiin 2-(etoksi)(metaanisulfonyylioksimetyyli)fosfinoyy-limetyyli-4-metyylivaleriaanahapon etyyliesteriä (12,8 g) 20 10 ml:ssa DMFrää, ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten 18 tunnin ajan lämmittämällä hitaasti huoneenlämpö-; tilaan. DMF poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotet tiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja pestiin 50 ml:lla H20:-:· ta (2x), kyllästetyllä suolaliuoksella (50 ml), kuivattiin : 25 MgS04:llä ja haihdutettiin keltaiseksi puolikiinteäksi ai- \ neeksi. Puhdistus nopealla (flash) kromatografiällä käyt tämällä eluutioon liuosta 10%:isesta etyyliasetaatti/hek-saanista 80%:iseen etyyliasetaatti/heksaaniin tuotti 10 g 2-(etoksi)(kinolin-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-30 metyylivaleriaanahapon etyyliesteriä (Rf 0,35 80%:inen ' asetaatti/heksaani), MS: 424 (MH+) .

B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla 2-kinoliinitioli 1-naftaleenitiolilla, 2-naftaleenitiolilla tai tiofenolilla, 35 valmistettiin seuraavat kaavan (AA) mukaiset yhdisteet: 2-(etoksi)(naft-l-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli^-metyylivaleriaanahapon etyyliesteri; 112660 67 2-(etoksi)(naft-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahapon etyyliesteri; ja 2-(etoksi)(fenyylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyyli-valeriaanahapon etyyliesteri.

5

Esimerkki 23

Kaavan (BB) mukaiset yhdisteet A. 2-(Etoksi)(kinolin-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-10 4-metyylivaleriaanahapon etyyliesteriä (4,5 g) liuotettiin 100 ml:aan THF:ää ja lisättiin 12,5 ml 2 N NaOH:ta yhdessä riittävän metanolimäärän kanssa tekemään liuos homogeeniseksi. THF poistettiin haihduttamalla 18 tunnin kuluttua, jäännös laimennettiin 50 ml:11a H20:ta ja pestiin 50 ml:l-15 la etyyliasetaattia. Sen jälkeen vesifaasi tehtiin happamaksi pH-arvoon 4, ja tuote uutettiin 50 ml:11a etyyliasetaattia (2x). Etyyliasetaatti pestiin 20 ml:11a kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin MgS04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 3,8 g 2-(hydroksi)(kinolin-2-yylitiometyy-20 li)fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahappoa keltaisena öljynä, MS: 368 (MH+) .

« / B. Samalla tavalla valmistettiin seuraavat kaavan (BB) :· mukaiset yhdisteet: 25 2-(hydroksi)(naft-l-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyy1iva1eriaanahappo; 2-(hydroksi)(naft-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyylivaleriaanahappo; ja 2-(hydroksi)(fenyylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli-4-metyy-30 livaleriaanahappo.

Esimerkki 24

Kaavan (BB) mukaisen yhdisteen resoluutio 35 2-(Hydroksi)(kinolin-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli- 4-metyylivaleriaanahappoa (5,3 g) liuotettiin 50 ml:aan lämmintä etanolia (abs.) ja lisättiin 4,2 g (-)-kinkoni- 112660 68 diinia. Kun 30 minuuttia oli kulunut huoneenlämpötilassa, suola alkoi saostua. Pullo peitettiin foliolla ja sen annettiin seistä 2 päivän ajan. Sitten suola poistettiin imusuodatuksella ja suodos haihdutettiin keltaiseksi vaah-5 doksi. Suola ja suodos liuotettiin kumpikin 100 ml:aan etyyliasetaattia ja pestiin peräkkäin l%:isella HCl:llä kinkonidiinin poistamiseksi samalla, kun pH-arvo pidettiin yli 4:ssä. Kumpikin liuos kuivattiin MgS04:n päällä ja haihdutettiin, jolloin saatiin 2,4 g yksittäistä stereo-10 isomeeriä, [a]D24= +10,68° (9,73 mg metanolissa (2 ml)) ja 2,5 g toista yksittäistä stereoisomeeriä, [a]D24= -8,70° (9,88 mg metanolissa (2 ml)).

Esimerkki 25 15 Kaavan (Ig) mukainen yhdiste •f 2-(Hydroksi)(kinolin-2-yylitiometyyli)fosfinoyylimetyyli- 4-metyylivaleriaanahapon yksittäistä stereoisomeeriä (300 mg, 0,81 mmol) ja 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia (174 mg, 20 1,0 mmol) sekoitettiin 0 °C:ssa 6 ml:ssa THF:ää 1,5 tunnin ajan. Liuokseen lisättiin (l0S)-l0-amino-(9-okso-l,8-diat-: satrisyklo(10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetra- *' eeniä (270 mg, 0,95 mmol) ja tuloksena saadun seoksen an nettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin sitten 25 18 tunnin ajan. THF poistettiin haihduttamalla ja jäännös liuotettiin 60 ml:aan etyyliasetaattia. Etyyliasetaatti pestiin 10 ml:11a H20:ta, 10 ml:11a kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin MgS04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin (10S)-[4-metyyli-2-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- 30 [10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) ,14,16-tetraen-10-yyli- karbamoyyli)pentyyli](kinolin-2-yylitiometyyli)fosfii-nihappoa keltaisena öljynä. Puhdistus tehtiin käänteisfaa-si-HPLC:llä käyttämällä eluentteina asetonitriilin gradi-enttia ja 50 mm NH4OAc-puskuria. Polaarisempi stereoiso-35 meeri (30 mg) eristettiin 41%:isessa asetonitriilissä ja vähemmän polaarinen stereoisomeeri (10 mg) 43%:isessa ase- 112660 69 tonitriilissä. Fraktiot lyofilisoitiin ei-valkoisiksi (off-white) jauheiksi, MS: 635 (MH+) (Yhdiste 4).

Esimerkki 26 5 Kaavan (Ih) mukainen yhdiste (3R,10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1. O13'18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18) , 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)heksaanihappoa (200 mg, 0,45 mmol) liuotettiin 10 10 ml:aan jääetikkaa ja hydrattiin 100 psi:n H2-paineessa

Pt20:n (60 mg) läsnäollessa Parrin reaktorissa huoneenlämpötilassa 15 tunnin ajan. Argonkaasua kuplitettiin reak-tioseokseen 15 minuutin ajan ja katalyytti (Pt20) suodatettiin pois (seliittikartion läpi). Kirkas suodos haihdu-15 tettiin kuiviin ja haihdutettiin vielä kahdesti yhdessä tolueenin kanssa, jolloin saatiin kvantitatiivinen saanto (3J?, 10S) -5-metyyli-3- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013’18 ] nonadekan-10-yy likarbamoyyli) heksaanihappoa valkoisena kiinteänä aineena. MS: 448 (M-H)_.

20

Esimerkki 27 * Kaavan (li) mukainen yhdiste (3JR, 10S) -5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-; 25 [10.6.1.013,18]nonadekanyylikarbamoyyli)heksaanihappoon ja O-bentsyylihydroksyyliamiiniin (5 ekv., 2,25 mmol, 277 mg) 10 ml:ssa kuivaa DMF:ää huoneenlämpötilassa lisättiin l-hydroksibentsotriatsoli·H20:ta (2 ekv., 0,9 mmol, 122 mg) ja EDCI:tä (5 ekv., 2,25 mmol, 431 mg). Tuloksena saatua 30 kirkasta reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa ‘ yön yli. Liuotin poistettiin suurtyhjössä huoneenlämpöti-

• lassa ja jäännös jaettiin etyyliasetaatin (15 ml) ja 1 N

HCl:n (15 ml) kesken. Etyyliasetaattikerros uutettiin edelleen 1 N HCl:llä (15 ml). Yhdistetty vesiuutos tehtiin 35 emäksiseksi 4 N NaOH:lla pH-arvoon 10 ja kyllästettiin

NaCl:lla sekä uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 15 ml). Yhdistetty CH2Cl2-uutos kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja haihdutet- 112660 70 tiin kuiviin, jolloin saatiin puolikiinteää ainetta. Puo-likiinteä aine sekoitettiin eetteriin (10 ml) 0 °C:ssa 30 minuutin ajan ja suodatettiin, jolloin saatiin 85 mg (34 %) (3J?, 10S) -N-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l, 8-diatsatri-5 syklo[10.6.1.013,18]nonadekanyylikarbamoyyli)heksanamidia valkoisena jauheena, MS: 555 (M+H)+.

Esimerkki 28

Kaavan (Ij) mukainen yhdiste 10 (3R,10S)-ii-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsa-trisyklo [10.6.1.013'18] nonadekan-10-yylikarbamoyyli) hek-sanamidia (75 mg, 0,135 mmol) hydrattiin 1 atm:n H2-pai-neessa absoluuttisessa etanolissa (5 ml) 10 % Pd-C:tä (35 15 mg) läsnäollessa 2 tunnin ajan. Argonkaasua kuplitettiin reaktioseokseen 10 minuutin ajan ja reaktioseos suodatettiin seliittikartion läpi. Seliitillä oleva katalyytti pestiin edelleen 5 ml:11a etanolia. Yhdistetty suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin kiinteä jäännös.

20 Kiinteä aine sekoitettiin 10 ml:aan 5%:ista MeOH:ta eetterissä 0 °C:ssa 30 minuutin ajan ja suodatettiin, jolloin • saatiin 57 mg (91 %) (3P, 10S) -/i-hydroksi-5-metyyli-3-(9- okso-1,8-diatsatrisyklo[10.6.1.01318]nonadekan-10-yylikar-:· bamoyyli)heksanamidia ei-valkoisena (off-white) jauheena, ·. 25 MS: 465 (M+H)+.

Esimerkki 29

Kaavan (DD) mukainen yhdiste 30 tf-t-butoksikarbonyylitryptofääniin (3 mmol, 914 mg) ja W-metyylietaanidiamiiniin (3,6 mmol, 0,27 g, 0,32 ml) kuivassa DMF:ssä (15 ml) lisättiin 1-hydroksibentsotriatso-li-H20:ta (3 mmol, 459 mg) ja EDCI:tä (4,5 mmol, 863 mg). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön argonissa 35 ja liuottimen (DMF) ylimäärä poistettiin suurtyhjössä 35 °C:ssa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (40 ml) ja addukti uutettiin 1 N HClrään (3 x 25 ml). Yhdistetty ve- 112660 71 siuutos tehtiin emäksiseksi kiinteällä K2C03:lla ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 25 ml) . Yhdistetty orgaaninen uutos pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella (30 ml) ja kuivattiin (MgS04) . Kuiviinhaihdutus tuotti 920 mg (85 %) 5 HPLC-puhdasta tuotetta, -t-butoksikarbonyylitryptofaani-N-((metyyli)aminoetyyli)amidia valkoisena vaahtona.

Esimerkki 30

Kaavan (EE) mukainen yhdiste 10

Voimakkaasti sekoitettuun N‘-t-butoksikarbonyylitryptofääni -N- ((metyyli)aminoetyyli)amidin (2 g, 5,55 mmol) ja trans-1,4-diklooribut-2-eenin (8,32 mmol, 1,04 g, 0,88 ml) liuokseen metyleenikloridissa (75 ml) ja 40%:isessa KOH:s-15 sa (50 ml) lisättiin 0,3 ekvivalenttia bentsyylitrietyyli-ammoniumkloridia (1,66 mmol, 378 mg). Kun oli sekoitettu huoneenlämpötilassa yön yli, kellertävä orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin vielä 30 ml:11a CH2Cl2:ta. Yhdistetty metyleenikloridiuutos pestiin kyl-20 lästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04) . Jäännös liuotettiin 10 ml:aan MeOH:ta ja 0 °C:ssa sekoittaen li-• sättiin 50 ml eetteriä. Tuloksena saatu keltainen kiinteä ; aine suodatettiin eroon. Suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 1,12 g HPLC-puhdasta tuotetta, ll-N'-(t-: 25 butoksikarbonyyli)amino-10-okso-l,6,9-triatsa-6-metyyli- trisyklo[ll. 6.1.014,19]eikosa-3 (4) ,13(20) ,14(19) ,15,17-pen-taeenia, vaaleankeltaisena jauheena, MS: 413 (M+H)+.

Esimerkki 31 30 Kaavan (FF) mukainen yhdiste 11-W'-(t-butoksikarbonyyli)amino-10-okso-l,6,9-triatsa-6- metyylitrisyklo[ll. 6.1.01419]eikosa-3 (4) ,13 (20) ,14(19) , -15,17-pentaeenia (414 mg, 1 mmol) sekoitettiin 40%:iseen 35 TFA:han CH2Cl2:ssa (10 ml) huoneenlämpötilassa 1 tunnin ‘ ajan. TFA:n ylimäärä ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin metyleenikloridiin (30 ml) 112660 72 ja pestiin 5%:isella K2C03-liuoksella (2 x 15 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (15 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 240 mg (76 %) vaaleankeltaista vaahtoa, ll-amino-10-okso-l,6,9-5 triatsa-6-metyylitrisyklo[11.6.1.014'19]eikosa-3(4) ,13(20) , - 14(19),15,17-pentaeenia, MS: 313 (M+H) + .

(*

Esimerkki 32

Kaavan (Ik) mukaiset yhdisteet 10 ll-Amino-10-okso-l,6,9-triatsa-6-metyylitrisyklo-[11.6.1.014'19]eikosa-3 (4) ,13(20) ,14(19) , 15,17-pentaeenia (161 mg, 0,7 mmol) ja (2R)-4-metyyli-2-t-butoksikarbonyy-limetyylivaleriaanahappoa (220 mg, 0,7 mmol) sekoitettiin 15 kuivaan DMF:ään (15 ml) HOBtrn (0,7 mmol), EDCIrn (1,4 mmol, 268 mg) ja N-metyylimorfoliinin (1,4 mmol, 0,15 ml) läsnäollessa argonissa huoneenlämpötilassa yli yön. DMF:n ylimäärä poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin metyleenikloridiin (30 ml) ja pestiin vedellä (30 20 ml). Vesipesu uutettiin CH2Cl2:lla (30 ml). Yhdistetty metyleeniuutos kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, joi-: loin saatiin vaaleanruskeaa öljyä. Vaaleanruskea öljy puh-

/ distettiin käänteisfaasi-HPLC:llä (C18-pylväs; CH3CN-50 MM

NH4OH2-gradientti). Haluttu fraktio lyofilisoitiin, jol-25 loin saatiin 148 mg (40%:ista) (3i?, 11S)-5-metyyli-3-(10- okso-1,6,9-triatsa-6-metyylitrisyklo [11.6.1.014,19] eikosa-3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen-ll-yylikarbamoyyli)hek-saanihapon t-butyyliesteriä vaaleankeltaisena jauheena, MS: 525,2 (M+H)+.

t 30

Esimerkki 33

Kaavan (II) mukainen yhdiste (3R,115)-5-metyyli-3-(10-okso-l,6,9-triatsa-6-metyylitri-35 syklofll. 6. l. 014,19]eikosa-3 (4) ,13(20) ,14(19), 15,17-pentaen-ll-yylikarbamoyyli)heksaanihapon t-butyyliesteriä (0,228 mmol, 120 mg) sekoitettiin 20%:iseen TFA:han CH2Cl2:ssa (5 112660 73 ml) huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan. Liuottimen ylimäärä poistettiin alennetussa paineessa (kiertohaihdutin 30 °C:ssa), jolloin saatiin raakaa happoa, (3R, 11S)-5-metyy-li-3-(10-okso-l,6,9-triatsa-6-metyylitrisyklo-5 [11.6.1.014,19]eikosa-3 (4) ,13(20),14(19),15,17-pentaen-ll- yylikarbamoyyli)heksaanihappoa vaaleanruskeana öljynä. Puhdistus käänteisfaasi-HPLC:llä, joka eluoitiin CH3CN-NH4OAc-puskurilla gradienttiolosuhteissa, tuotti 90 mg (75 %) happoa vaaleankeltaisena jauheena, MS: 469,1 (M+H)+.

10

Esimerkki 34

Kaavan (Im) mukainen yhdiste (3R,11S)-5-metyyli-3-(10-okso-l,6,9-triatsa-6-metyylitri-15 syklo[11.6.i.014,19]eikosa-3 (4) ,13(20) ,14(19) ,15,17-pentaen- 11-yylikarbamoyyli)heksaanihappoa ja O-bentsyylihydroksyy-liamiinia (5 ekv., 2,5 mmol, 308 mg) sekoitettiin kuivaan DMFrään (30 ml) HOBt:n (2 ekv., 1 mmol, 135 mg), EDCI:n (5 ekv., 2,5 mmol, 479 mg) ja N-metyylimorfoliinin (10 ekv., 20 5 mmol, 0,55 ml) läsnäollessa argonissa huoneenlämpötilas sa 15 tunnin ajan. Liuotin poistettiin suurtyhjössä huo-: neenlämpötliassa. Jäännös liuotettiin tislattuun veteen (35 ml) ja uutettiin 10%:isella etyyliasetaatilla petroli-* eetterissä vähemmän polaaristen epäpuhtauksien poistami- 25 seksi. Odotettu tuote uutettiin sitten vesikerroksesta . CH2Cl2:lla (2 x 35 ml). Orgaaninen uutos pestiin kylläste tyllä suolaliuoksella (25 ml), kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin keltaista öljyä (330 mg) . Raaka tuote puhdistettiin käänteisfaasi-HPLC: llä (CH3CN-NH4OAc-30 puskuri; gradientti) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 175 mg (61 %) (3R,11S)-W-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(10-okso-l, 6, 9-triatsa-6-metyylitrisyklo[ll. 6. 1. 014,19]eikosa-3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen-ll-yylikarbamoyyli)hek-sanamidia ei-valkoisena (off-white) jauheena, MS: 572 * 35 (M-H)-.

112660 74

Esimerkki 35

Kaavan (In) mukainen yhdiste (3R,11S)-tf-bentsyylioksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,6,9-triat-5 sa-6-metyylitrisyklo[ll. 6.1.014,19]eikosa-3 (4) ,13(20) ,- 14(19),15,17-pentaen-ll-yylikarbamoyyli)heksanamidin (40 mg, 0,07 mmol) ja 10 %:n Pd-C:n (10 mg) seos sekoitettiin 3%:iseen HCOOH-liuokseen etanolissa (5 ml) huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan. Seos suodatettiin seliittikartion lä-10 pi ja konsentroitiin in vacuo. Kiinteään jäännökseen 1 ml:ssa 50%:ista AcOH/MeOH:ta lisättiin sekoittaen 5 ml eetteriä yhdessä annoksessa. Sen jälkeen ei-valkoinen jauhe otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 26 mg (68 %) (3.R,llS)-?i-hydroksi-5-metyyli-3-(10-okso-l, 6,9-tri-15 atsa-6-metyylitrisyklo[11.6.1.014'19]eikosa-3(4) ,13(20) ,- 14(19),15,17-pentaen-ll-yylikarbamoyyli)heksanamidia, MS: 488,5 (MH+) .

Esimerkki 36 20 Kaavan (JJ) mukaiset yhdisteet | A. (±)-2-Hydroksibutaanihapon natriumsuolan (2,54 g, 20,1 mmol) liuokseen kuivassa DMF:ssä (30 ml) lisättiin bent- • syylibromidia (2,9 ml, 1,2 ekv.) ja vedetöntä KI:tä (330 . 25 mg, 0,1 ekv.). Suspensiota kuumennettiin 100 °C:ssa 24 tunnin ajan ja DMF tislattiin eroon alennetussa paineessa.

' Jäännös otettiin talteen eetteriin, pestiin vedellä ja kyl

lästetyllä Na2S203:lla, kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin. Jäännösöljyn tislaus tuotti 3,7 g (95 %) bentsyyli-30 (±)-2-hydroksibutanoaattia värittömänä öljynä, kp. 95 °C

; (0,45 Torr).

» * B. Vaihtoehtoisesti kylmään (0 °C) NaH:n suspensioon (3,8 g 60 paino-%:ista dispersiota mineraaliöljyssä, 95,0 mmol) 35 THFrssä (50 ml) lisättiin tipoittain johtoputken kautta ‘ glykolihapon liuosta (7,2 g, 95 mmol) THF:ssä (50 ml). Tu loksena saatu liuos lämmitettiin 25 °C:seen ja konsentroi- 112660 75 tiin in vacuo. Tuloksena saatu suola suspendoitiin DMFrään (100 ml) ja käsiteltiin Kiillä (1,57 g, 0,1 ekv.) ja bent-syylibromidilla (12,3 ml, 1,1 ekv.)· Seosta kuumennettiin 100 °C:ssa 23 tunnin ajan argonissa ja DMF haihdutettiin.

5 Jäännös liuotettiin eetteriin ja pestiin vedellä, kyllästetyllä Na2S203:lla ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin HgS04:n päällä. Tislaus tuotti bentsyyliglyko-laattia (8,5 g, 54 %) värittömänä öljynä, kp. 85-87 °C (0,5 Torr).

10

Esimerkki 37

Kaavan (LL) mukaiset yhdisteet A. Kylmään (0 °C) bentsyyli-(±)-2-hydroksibutanoaatin 15 liuokseen (1,75 g, 9,01 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin 2,6-lutidiinia (1,2 ml, 1,1 ekv.), ja sen jälkeen triflii-ni- (triflic) anhydridiä (1,7 ml, 1,1 ekv.) tipoittain.

Kun 10 minuuttia oli kulunut, lisättiin tipoittain L-leu-siini-t-butyyliesterin (1,7 g, 1 ekv.) ja di-isopropyy-20 lietyyliamiinin (1,7 ml, 1,1 ekv.) liuosta CH2Cl2:ssa (30 ml) 0 °C:ssa. Liuo lämmitettiin 25 °C:seen 36 tunnin ajan, • laimennettiin CH2Cl2:lla ja pestiin kyllästetyllä NaHC03:l- la (50 ml) . Kuivaamisen (Na2S04) ja in vacuo -konsentroin-:· nin jälkeen jäännösöljylle tehtiin nopea (flash) kromato- ; 25 grafia (silika, 5%:inen etyyliasetaatti/heksaaneja) dia- stereoisomeerien erottamiseksi. Vähemmän polaarinen dia-stereoisomeeri, (li?)-N-(2-bentsyylioksikarbonyyli)propyy-li-L-leusiinin t-butyyliesteri (Rf 0,22, 5%:inen etyyliasetaatti/heksaaneja) , ja polaarisempi diastereoisomeeri, » 30 (lS)-N-(2-bentsyylioksikarbonyyli)propyyli-L-leusiinin t-butyyliesteri (Rf 0,13), puhdistettiin edelleen erikseen ; HPLC:llä (5%:inen etyyliasetaatti/heksaaneja), jolloin * saatiin 1,1 g polaarisempaa diastereoisomeeriä ja 0,78 g vähemmän polaarista diastereoisomeeriä, MS(FAB): 364 ; 35 (MH+) .

112660 76 B. Samalla tavalla bentsyyliglykolaatista (379 mg, 2,7 mmol), L-leusiini-t-butyyliesteristä (435 mg, 2,7 mmol), 2,6-lutidiinista (0,35 ml, 2,8 mmol), di-isopropyylietyy-liamiinista (0,53 ml, 0,28 mmol) ja trifliini- (triflic) 5 anhydridistä (0,51 ml, 2,8 mmol) saatiin 383 mg (50 %) N-bentsyylioksikarbonyylimetyyli-L-leusiinin t-butyylieste-riä värittömänä ölljynä, MS(FAB): 336 (MH+) .

Esimerkki 38 10 Kaavan (Io) mukaiset yhdisteet A. (IS)-N-(2-bentsyylioksikarbonyyli)propyyli-L-leusiinin t-butyyliesterin (143 mg, 0,393 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (3 ml) 0 °C:ssa lisättiin TFA:ta (0,5 ml). Liuosta sekoi-15 tettiin 25 °C:ssa 4 tunnin ajan ja konsentroitiin sitten in vacuo, jolloin saatiin (IS)-N-^-bentsyylioksikarbonyy-liJpropyyli-L-leusiinin (kaavan (MM) mukainen yhdiste) suolaa, joka liuotettiin sitten DMF:ään (3 ml) (10S)-10-amino-(9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-20 12(19),13(18),14,16-tetraeenin (124 mg, 1,1 ekv.) ja HOBT:n (80 mg, 1,5 ekv.) kanssa. Sen jälkeen, kun oli : jäähdytetty 0 °C:seen, lisättiin Zi-metyylimorfoliinia (60 : ml, 1,5 ekv.) ja EDCI:tä (113 mg, 1,5 ekv.). Kun 18 tuntia oli kulunut 25 °C:ssa, reaktioseos laimennettiin 10 ml:11a 25 etyyliasetaattia, pestiin kyllästetyllä NaHC03:lla (3 x 10 ml) ja vedellä (2 x 10 ml) kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin. Jäännökselle tehtiin nopea (flash) kromatografia (silika, 1 % MeOH/CH2Cl2) ja talteen otettiin fraktiot, joiden Rf oli 0,5 (5 % MeOH/CH2Cl2). Käänteisfaasi-HPLC 30 tuotti (2J?,l'S,10S)-2-[Jff-(l-bentsyylioksikarbonyyli)pro-pyyliamino)-4-metyyli-N-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-; [10.6.1.013,18 ] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yy- li)pentanamidia (46 mg), MS(FAB): 575 (MH+) .

35 B. Samalla tavalla, mutta korvaamalla (IS)-N-(2-bentsyyli-oksikarbonyyli)propyyli-L-leusiinin t-butyyliesteri (li?)-N-(2-bentsyylioksikarbonyyli)propyyli-L-leusiinin t-butyy- 112660 77 liesterillä (270 mg), saatiin (2R, l'i?, 105) -2-[tf-(i-bent-syylioksikarbonyyli)propyyliamino]-4-metyyli-N-(9-okso- 1,8-diatsatrisyklo [10.6.1.013'18] nonadeka-12 (19), -13(18),14,16-tetraen-10-yyli)pentanamidia (175 mg), MS-5 (FAB) : 575 (MH+) .

Esimerkki 39

Kaavan (lp) mukaiset yhdisteet 10 A. (2i?,l,5/105)-2-[W-(l-bentsyylioksikarbonyyli)propyy-liamino]-4-metyyli-N-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1. O13,18]nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16-tetraen-10-yy-lijpentanamidin (46 mg) liuokseen THF/MeOH:ssa (1:1, 2 ml) argonissa lisättiin 1 M bariumhydroksidia (0,3 ml). Kun 24 15 tuntia oli kulunut 25 °C:ssa, C02:ta johdettiin liuoksen päälle ja tuloksena saatu bariumkarbonaattisakka suodatettiin eroon. Liuottimet poistettiin alennetussa paineessa ja vesijäännös säädettiin pH-arvoon 5,5 IM HCl:llä. Veden poistamisen jälkeen käänteisfaasi-HPLC tuotti yhdisteen 20 (2R,1'S,10S)-2-[W'—(1-karboksi)propyyliamino]-4-metyyli-tf- (9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[ 10.6.1.013'18]nonadeka-12 (19),- « 13 (18), 14,16-tetraen—10—yyli)pentanamidi valkoisena kiinteänä aineena, MS(FAB): 483 (M-H‘) (Yhdiste 5).

25 Samalla tavalla valmistettiin: . (2RS,10S)-2-[karboksimetyyliamino]-2-sykloheksyyli-W-(9- okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,-13(18),14,16-tetraen-10-yyli)asetanamidi, 497 (M+H+) .

(2RS,10S)-2-[karboksimetyyliamino]-3-metyyli-tf-(9-okso-30 1,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19), 13 (18),- 14.16- tetraen-10-yyli)pentanamidi, 471 (M+H+) .

(2RS,10S)-2-[fosfonyylimetyyliamino]-4-metyyli-tf-(9-okso- l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18),- 14.16- tetraen-10-yyli)pentanamidi.

: 35 B. Samalla tavalla (2i?,l,J?,10S)-2-[W-(l-bentsyylioksikar-bonyyli)propyyliamino]-4-metyyli-W-(9-okso-l,8-diatsatri- 1 12660 78 syklo [10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19) , 13 (18) , 14,16-tetraen-10-yyli)pentanamidista saatiin (2i?,l'S,10S)-2-[N'-(l-karbok-si)propyyliamino)-4-metyyli-w-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-lo[10.6. l. O13'18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-5 yyli)pentanamidia (16 mg), MS(FAB): 483(M-H)~.

C. Edettäessä samoin kuin edellä kaavan (Io) mukaisen yhdisteen valmistuksessa, N-[(bentsyy1ioksikarbonyy1i)metyyli] -L-leusiinin t-butyyliesteristä (156 mg, 0,465 mmol), 10 HOBT:stä (94 mg, 1,5 ekv.), EDCI:stä (134 mg, 1,5 ekv.), N-metyylimorfoliinista (77 μΐ) ja (10S)-10-amino-(9-okso- 1,8-diatsatr isyklo [10.6.1. o13,18 ] nonadeka-12 (19) ,13(18), - 14,16-tetraeenistä (133 mg, 1 ekv.) saatiin raaka bentsyy-liesteri nopean (flash) kromatografian jälkeen (3%:inen 15 MeOH/CH2Cl2) . Raaka bentsyyliesteri liuotettiin THF/MeOH-liuokseen (1:1, 6 ml) ja hydrolysoitiin 1 M bariumhydroksidilla (0,9 ml) yli yön. Hiilidioksidia johdettiin liuoksen päälle ja tuloksena saatu sakka suodatettiin eroon. Suodos konsentroitiin ja vesijäännös säädettiin pH-arvoon 20 5,5 1 M HClrllä. Käänteisfaasi-HPLC tuotti (2R,10S)-N'- (karboksimetyyli)-amino-4-metyyli-tf-(9-okso-l,8-diatsatri-; syklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13(18) ,14,16-tetraen-10- yyli)pentanamidia (17 mg) valkoisena kiinteänä aineena, MS(FAB): 457 (MH+) .

25

Esimerkki 40 , Kaavan (6) mukaiset yhdisteet 4-Metyy1i-2-metyleeniva1eriaanahappo 30 A. Laimentamattomaan (neat) etyyli-isobutyylimalonaattiin (25 g, 0,13 mol) 0 °C:ssa lisättiin hitaasti jääkylmää di-etyyliamiinia (15,1 ml, 0,15 mol). Kun oli sekoitettu 15 minuutin ajan, lisättiin tipoittain formaliinia (11,1 ml 37%:inen formaldehydiliuos). Seoksen annettiin sekoittua ; 35 25 °C:ssa 3 päivän ajan. Sitten reaktioseosta käsiteltiin liuoksella 20 g K2C03 40 ml:ssa vettä ja uutettiin eetterillä (2 x 100 ml). Eetteriuutokset yhdistettiin, pestiin 112660 79 kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:n päällä ja konsentroitiin alennetussa paineessa 20 °C:ssa.

Raaka tuote, jonkin verran eetteriä sisältävä 4-metyyli-2-5 metyleenipentanoaatti, liuotettiin absoluuttiseen etanoliin (250 ml) ja käsiteltiin asetonitriilillä (250 ml), 1 M LiOH:lla (9,7 g 250 ml:ssa vettä, 0,23 mol). Yön yli sekoittamisen jälkeen orgaaniset liuottimet haihdutettiin alennetussa paineessa ja vesijäännös uutettiin etyyliase-10 taatilla (2 x 150 ml). Yhdistetyt uutokset pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:n päällä ja konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 10,5 g 4-metyyli-2-metyleenivaleriaanahappoa värittömänä öljynä.

15 B. Samalla tavalla valmistettiin seuraavat kaavan (Gd) mukaiset yhdisteet: 4- fenyyli-2-metyleenibutaanihappo; 3-sykloheksyyli-2-metyleenipropaanihappo; 5- fenyyli-2-metyleenivaleriaanahppo; 20 2-metyleenivaleriaanahappo; ja 3,3-dimetyyli-2-metyleenibutaanihappo.

Esimerkki 41

Kaavan (Id) mukainen yhdiste : 25 (Käänteinen (reverse) hydroksamaatti) A. 4-Metyyli-2-metyleenivaleriaanahapon (3,5 g) ja O-bent-syylihydroksyyliamiinin liuosta kuumennettiin 120 °C:ssa 8 tunnin ajan. Sitten reaktioseos jaettiin 50 ml:n 1,0 N 30 NaOH:ta ja 50 ml:n dietyylieetteriä kesken. Vesiosa erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 3 10%:isella HCl:llä , r ja pestiin 50 ml:11a eetteriä. Ioninvaihtokromatografia (Dowex - 50W), joka eluoitiin 20%:isella pyridiini/vesi-seoksella, tuotti 2-(bentsyylioksiaminometyyli)-4-metyyli-35 valeriaanahappoa.

300 MHz Ή NMR CDCl3:ssa: Ö 0,9-1,0 (dd, 6H, CH3) ; 1,25-1,35 (m, 1H, CH); 1,6-1,75 (m, 2H, CH2) ; 2,8-2,9 (m, 1H, 112660 80 C.-H) ; 3,0-3,2 (ABq, 2H, CH2N) ; 4,7-4,75 (ABq, 2H, CH20) ; 7,3-7,4 (m, 5H, Ph).

B. 2- (Bentsyylioksiaminometyyli) -4-metyylivaleriaanahapon 5 formylointi tehtiin dikloorimetaanissa muurahaishappo/ase-tanhydridi-seoksella, jolloin saatiin W-formyyli-2-(bentsyylioksiaminometyyli) -4-metyylivaleriaanahappoa. Liitetään yhteen kaavan (J) mukaisen yhdisteen kanssa: N-for-myyli-2-(bentsyylioksiaminometyyli)-4-metyylivaleriaana-10 happoon (175 mg) ja (J)-yhdisteeseen (230 mg) 5%:isessa pyridiini/dikloorimetaani-seoksessa (30 ml) lisättiin 4-dimetyyliaminopyridiiniä (DMPA:ta) (200 mg) ja l-(3-dime-tyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDCIrtä) huoneenlämpötilassa. Reaktioseosta sekoitettiin 15 8 tunnin ajan ja sitten konsentroitiin, jaettiin 30 ml:n etyyliasetaattia ja 30 ml:n 20%:ista HCl:ää kesken. Orgaaninen osa pestiin vedellä (20 ml), 5%:isella NaHC03:lla (20 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:n päällä ja konsentroitiin. Puhdistus silikageelil-20 lä, joka eluoitiin 50%:isella etyyliasetaatti/heksaani-seoksella, tuotti tuotteen kahden isomeerin seoksena. Hydraus (hydrogenolysis) metanolissa yli 10 %:ssa Pd/C:tä ·’ tuotti (2RS, 10S) -2-[N-formyyli, W-hydroksiaminometyyli]-4- metyyli- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo [10.6.1.013,18] nonadeka-: 25 12(19),13(18),14,6-tetraen-10-yyli)pentanamidia 2 isomee rin seoksena, MS 455 (M-H) + , (Yhdiste 6).

Samalla tavalla valmistettiin: (2RS,10S)-2-[isopropoksikarbonyylimetyyli]-4-metyyli-(9-30 okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12(19),- 13(18),14,l-tetraen-10-yyli)pentanamidi, MS 455 (M+H)+, (2RS,10S)-2-[morfoliinokarbetoksimetyyli]-4-metyyli-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-12(19) ,-13(18),14,6—tetraen—10—yylijpentanamidi, MS 555 (M+H)+.

: 35 112660 81

Esimerkki 42 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkeinä olevien farmaseuttisten koostumusten valmistamisen oraalista antoa varten, jotka 5 koostumukset sisältävät kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim. (3R,10S)-W-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1. O13'18]nonadeka—12 (19) , 13 (18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyy1i)heksanamidia: 10 A. Aineosat paino-*/paino

Kaavan (I) mukainen yhdiste 20,0 %

Laktoosi 79,5 %

Magnesiumstearaatti 0,5 % 15

Edellä mainitut aineosat sekoitetaan ja jaetaan kovakuorisiin gelatiinikapseleihin, jotka kukin sisältävät 100 mg, yksi kapseli olisi lähellä päivittäistä kokonaisannosta.

20 B. Aineosat paino-*/paino

Kaavan (I) mukainen yhdiste 20,0 % • Magnesiumstearaatti 0,9 % : Tärkkelys 8,6 %

Laktoosi 79,6 % : 25 PVP (polyvinyylipyrrolidiini) 0,9 %

Edellä mainitut aineosat yhdistetään magnesiumstearaattia lukuunottamatta ja rakeistetaan käyttämällä vettä rakeis-tusnesteenä. Sitten formulaatio kuivataan, sekoitetaan 30 magnesiumstearaatin kanssa ja muodostetaan tableteiksi sopivalla tabletoimiskoneella.

112660 82 C. Aineosat

Kaavan (I) mukainen yhdiste 0,1 g

Propyleeniglykoli 20,0 g

Polyeteeniglykoli 400 20,0 g 5 Polysorbaatti 80 1/0 g

Vesi q.s. 100 ml

Kaavan (I) mukainen yhdiste liuotetaan propyleeniglyko-liin, polyeteeniglykoli 400:aan ja polysorbaatti 80:aan.

10 Sitten lisätään sekoittaen riittävä määrä vettä, jotta saadaan 100 ml liuosta, joka suodatetaan ja pullotetaan.

D. Aineosat paino-*/paino

Kaavan (I) mukainen yhdiste 20,0 % 15 Maapähkinäöljy 78,0 %

Span 60 2,0 %

Edellä mainitut aineosat sulatetaan, sekoitetaan ja täytetään pehmeisiin elastisiin kapseleihin.

20

Esimerkki 43 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkinä olevan farmaseuttisen formulaation valmistamisen parenteraalista antoa varten, 25 joka formulaatio sisältää kaavan (I) mukaista yhdistettä : tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim.

(3R,11S)-N-hydroksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyk-lo[ 11.6.1. o14'19]eikosa-13 (20) , 14 (19), 15,17-tetraen-ll-yy-likarbamoyyli)heksanamidia: 30

Aineosat

Kaavan (I) mukainen yhdiste 0,02 g

Propyleeniglykoli 20,0 g

Polyeteeniglykoli 400 20,0 g 35 Polysorbaatti 80 1,0 g 0,9%:inen suolaliuos q.s. 100 ml 112660 83

Kaavan (I) mukainen yhdiste liuotetaan propyleeniglyko-liin, polyeteeniglykoli 400:aan ja polysorbaatti 80:aan. Sitten lisätään sekoittaen riittävä määrä 0,9%:ista suolaliuosta, jotta saadaan 100 ml I.V.-liuosta, joka suodate-5 taan 0,2 μχη:η kalvosuodattimen läpi ja pakataan steriileissä olosuhteissa.

Esimerkki 44 10 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkinä olevan farmaseuttisen koostumuksen valmistamisen peräpuikkomuodossa, joka koostumus sisältää kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim. (10S)-2-mer-kaptometyyli-4-metyyli-»- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo-15 [ 10.6.1.013'18]nonadeka—12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-yy- likarbamoyyli)pentanamidia:

Aineosat paino-%/paino

Kaavan (I) mukainen yhdiste 1,0 % 20 Polyeteeniglykoli 1000 74,5 %

Polyeteeniglykoli 4000 24,5 %

Aineosat sulatetaan yhteen ja sekoitetaan höyrykylvyssä ja kaadetaan muotteihin, joissa kussakin on 2,5 g:n kokonais-: 25 paino.

Esimerkki 45 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkinä olevan farmaseuttisen 30 formulaation valmistamisen insufflaatioon, joka formulaa-tio sisältää kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen far-; maseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim. (10S)-4-metyyli- : 2- (9-okso-l, 8-diatsatrisyklo[ 11.6.1.013,18] nonadeka—12 (19) , - 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)pentyyli-(kinolin-35 2-yylitiometyyli)fosfiinihappoa: 84 112060

Aineosat paino-%/paino

Mikronisoitu kaavan (I) mukainen yhdiste 1,0 % Mikronisoitu laktoosi 99,0 % 5 Aineosat jauhetaan, sekoitetaan ja pakataan annostelupum-pulla varustettiin sisäänpuhaltimeen.

Esimerkki 46 10 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkinä olevan farmaseuttisen formulaation valmistamisen sumutteen muodossa, joka formu-laatio sisältää kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim. (3R,10S)-N-hydroksi-5-raetyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-15 [10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19) ,13 (18) , 14,16-tetraen-10-yy- likarbamoyyli)heksanamidia:

A. Aineosat paino-%/painQ

Kaavan (I) mukainen yhdiste 0,005 % 20 Vesi 89,995 %

Etanoli 10,000 %

Kaavan (I) mukainen yhdiste liuotetaan etanoliin ja sekoi-;* tetaan veden kanssa. Sitten formulaatio pakataan annostus- 25 pumpulla varustettuun sumuttimeen.

Esimerkki 47 Tämä esimerkki kuvaa esimerkkinä olevan farmaseuttisen 30 formulaation valmistamisen aerosolimuotoon, joka formulaatio sisältää kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esim. (3R,11S)-N-hyd-; roksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsatrisyklo- [11.6.1.O14,19]eikosa-13 (20) ,14(19) ,15,17-tetraen-ll-yyli-35 karbamoyyli)heksanamidia: 112660 85

Aineosat: paino-t/paino

Kaavan (I) mukainen yhdiste 0,10 %

Ponneaine 11/12 98,90 % Öljyhappo 1,00 % 5

Kaavan (I) mukainen yhdiste dispergoidaan öljyhappoon ja ponneaineisiin. Sitten tuloksena saatu seos kaadetaan an-nostusventtiilillä varustettuun aerosolisäiliöön.

10 Esimerkki 48

In vitro -määritys

Fibroplastin tyyppi I:n kollagenaasi puhdistettiin PMA:lla stimuloitujen GMOOlOA-solujen seerumittomasta elatusai-15 neesta hepariinia ja sinkkiä kelatoivilla sepharose-pyl- väillä, jota seurasi FPLC (MONO S -pylväs). Entsyymi aktivoitiin inkuboimalla trypsiinin kanssa.

Tyyppi IV:n kollagenaasi puhdistettin fibroplasti-20 (GM0010A) -solujen seerumia sisältävästä elatusaineesta sinkkiä kelatoivalla ja gelatiini-sepharosepylväillä, jota '·* seurasi FPLC (MONO S -pylväs) . Entsyymin osoitettiin ole- .· van homogeeninen SDS-PAGElla. Entsyymi aktivoitiin inku- *’ boimalla 1 mmoolin kanssa ΑΡΜΑ:ta 1 tunnin ajan 35-37 : 25 °C:ssa.

\ Kaavan (I) mukaiset yhdisteet liuotettiin DMSOrhon ja li sättiin kyvettiin, joka sisälsi 0,2 nq tyyppi I:n tai 0,03 /xg tyyppi IV:n kollagenaasia 1 ml:ssa TC-puskuria (20 mM 30 Tr is, 5 mM CaCl2, pH 7,5) (lopullinen konsentraatio 2 % DMS0:ta). Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden konsentraatiot : valittiin niin, että jokaiselle 20 %:n aktiivisuuden muu tokselle oli vähintään yksi tietopiste. Entsyymin ja yhdisteiden annettiin esi-inkuboitua 3 minuutin ajan 37 35 °C:ssa. Reaktion aloittamiseksi lisättiin N-(7-dimetyy- liamino-4-metyyli)kumarinyyliä ("DACM") (Sigma) ja tiopep-, tidiä (Ac-Pro-Leu-Gly-S-"Leu"-Leu-Gly-OEt, Bachem Bios- 112660 86 cience Inc.) 20 μΜ:ΐίη (uM) kumpaakin. Fluoresenssi rekisteröitiin virittymis- ja emissioaallonpituuksilla 395 ja vastaavasti 485 nm. Jokainen tietopiste on rinnakkaisko-keiden keskiarvo. Vähintään kuusi tietopistettä, jotka 5 ilmaistiin muutoksena fluoresenssissa minuutissa vs. yhdisteen konsentraatio, analysoitiin käyttämällä IC50-sovi-tusta ohjelmassa Enzfitter.

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä oli kyky inhiboida kol-10 lagenaaseja tässä määrityksessä testattuina.

KL tai IC50 (nM)

HFC HNC HNG Matr SLN

Yhdiste 1 (Esimerkki 6) 25 14 115 850 4500

Yhdiste 2 (Esimerkki 8) 0,1 0,4 0,2 3 9 15 Yhdiste 3 (Esimerkki 10) 2,3 - - 114 >800

Yhdiste 4 (Esimerkki 25) 5 4 14 78 >800

Yhdiste 5 (Esimerkki 39) 20 - 3225 25000

Yhdiste 6 (Esimerkki 41) 0,5 - 1,0 9 7,5 20 Esimerkki 49

In vitro -määritys Tämä määritys määrittää sen, inhiboivatko kaavan (I) mukaiset yhdisteet 35S-leimattujen glykosamiiniglykaanien 25 (GAG:ien) vapautumista rustoeksplantaateista.

Pienet rustoeksplantaatit (3 mm:n läpimitta) valmistettiin juuri lopetettujen nautojen polvinivelistä ja leimattiin 35S04:llä. 35S-leimatut glykosamiiniglykaanit (GAG:t) va-30 pautetaan elatusaineeseen vasteena rhIL-l-alfan lisäämi- * selle, joka indusoi rustosolumatriksin metalloproteaasien : (MMPtien), stromelysiini ja kollagenaasi mukaanlukien, il mentymisen. Leimattujen GAG:ien inhiboimisprosentti korjattiin spontaanin vapautumisen suhteen rhlL-1-alfan puut-35 tuessa. Kunkin ryhmän tulokset edustavat viiden eksplan-taatin keskiarvoa ± keskivirhe (S.E.N.).

112660 87 Tässä analyysissä testattuina kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä oli kyky inhiboida 35S-leimattujen GAG:ien vapautumista rustoekspläntaateista.

5 Yhdiste 2 (Esimerkki 8) IC50 = 40 μΜ

Yhdiste 4 (Esimerkki 25) IC50 = 50 μΜ

Esimerkki 50

In vitro -määritys 10

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden luun resorption vastaisen vaikutuksen tutkimiseen käytettiin in vitro rotan sikiön pitkän luun mallia. Luun resorption indusoimiseen in vitro käytettiin naudan PTHrta. Luun resorptiiviset vaikutukset 15 ilmaistiin 45Ca-esileimatuista rotan sikiön pitkistä luista elatusaineeseen vapautuneen 45Ca:n määrinä. Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden inhibitiovaikutus naudan PTH:n indu-soimaa luun resorptiota vastaan ilmaistiin inhibitiopro-sentin keskiarvona ± keskivirhe (sem).

20 , 45Ca-esileimatut rotan sikiön pitkät luut (kyynärvarsista) leikattiin ja viljeltiin Linbro-maljoissa 37 °C:ssa yli .* yön BGJb-elatusaineessa, johon oli lisätty 1 mg/ml BSA:ta.

Kussakin ryhmässä oli viisi paria luita. Ensin kaavan (I) : 25 mukaiset yhdisteet liuotettiin etanoliin, sitten ne lai mennettiin eri konsentraatioiksi ja lisättiin 1. päivänä : samanaikaisesti naudan PTH:n (1-34) kanssa konsentraationa 1 x 108 M. Yhdisteiden liuoksissa olevat etanolikonsent-raatiot olivat alle 0,05 %, mikä ei vaikuttanut määrityk-30 seen. Määritys lopetettiin 6. päivänä, 3. päivänä oli tehty yksi elatusaineiden vaihdos.

: Jokaisen elatusainevaihdoksen lopussa laskettiin elatusai- neessa olevan 45Ca:n määrä. Jäljelle jäänyt luu sulatet-35 tiin 0,1 N HClrllä ja myös luusulatteessa oleva 45Ca laskettiin. Tulokset ilmaistaan %:na kokonais-45Ca:sta, joka vapautui kustakin luuparista. Naudan PTH konsentraationa 1 112660 88 x ΙΟ-8 M indusoi luun resorption maksimitasolle, joka asetetaan 100 %:ksi, ja tätä konsentraatiota käytettiin standardina. Luun resorption perusviivan taso ainoastaan ela-tusaineen läsnäollessa määritettiin 0 %:ksi. Kaikkia yh-5 disteellä käsiteltyjä ryhmiä verrattiin naudan PTHihon (1-34) konsentraatiossa 1 x 10'8 M. Se konsentraatio, jossa yhdiste inhiboi luun resorptiota 50 %:lla, määritettiin arvoksi IC50.

10 Kaavan (Ia) mukaisilla yhdisteillä oli kyky inhiboida naudan PTH:n indusoimaa luun resorptiota tässä määrityksessä.

Yhdiste 3 (Esimerkki 10) IC50 = 0,1 μΜ

Yhdiste 4 (Esimerkki 25) IC50 = 5 μΜ 15

TOKSIKOLOGIA

Edellä kuvatuissa määrityksissä ei havaittu mitään vakavia toksikologisia vaikutuksia.

20

Claims

112660 89

1. Menetelmä kaavan (I) mukaisten terapeuttisesti käyttökelpoisten trisyklisten indolijohdannaisten tai niiden 5 farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi O “ f ΓΤ / R1^^C->rVC-N-(Cii2)n Il ' li o H o jossa A on -CH2- tai -N(R11) 15 kun n on 1, 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -CH2-; tai kun n on 2 tai 3; m on 3 tai 4; A on -N(R11)-, jossa R11 on Ci-C^-alkyyli; R1 on a) -CH2-R4, jossa R4 on merkapto, asetyylitio, kerhoksi, hydroksiaminokarbonyyli, N-hydroksiformyyliamino, 20 C1-C4-alkoksikarbonyyli/ fenyyli-Cx-Q-alkoksikarbonyyli, bentsyylioksiaminokarbonyyli, morfolino-C:-C4-alkoksikar-: bonyyli, tai : o II : 25 OH jossa R6 on kinol-2-yyli; b) -CH(R7)-R8, jossa R7 on Cx-C4-alkyyli, hydroksi, amino, Cx-C4-alkoksikarbonyyli, C1-C4-alkyyliamino, aminokarbonyy- 30 li tai karboksi; ja R8 on karboksi, hydroksiaminokarbonyyli, Cx-C4-alkoksikarbonyyli tai bentsyylioksiaminokarbonyyli; c) -NH-CH(R9) -R10, jossa R9 on vety tai Cx-C4-alkyyli ja R10 on karboksi, Cx-C4-alkoksikarbonyyli, fenyyli-Cx-C4-alkok- 35 sikarbonyyli tai fosfonyyli; R2 on Cx-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-sykloalkyyli-Cx-C4-alkyyli tai fenyyli-Cx-C4-alkyyli; , 90 112660 yksittäisenä stereoisomeerinä tai niiden seoksena; tunnettu siitä, että a) kaavan (J) mukainen yhdiste ’ 0 Λ 5“ Ν'*” ^C - N-.fCH,) 10. y c-o jossa p on 5, 6, 7 tai 8, saatetaan reagoimaan 15 kaavan (K) mukaisen yhdisteen kanssa '’"\V R 0 20 en : jossa R2 on C1-C4-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo- : alkyyli-C1-C4-alkyyli tai fenyyli-Ci-C^-alkyyli; R7a on vety tai Ci-C^-alkoksikarbonyyli; ja R14 on t-butyyli tai bent- 25 syyli, jolloin muodostetaan kaavan (Ia) mukainen yhdiste : 30 .“.«f ^ i i’* ai a C I a) 35 jossa R2, R7a, R14 ja p ovat kuten kaavojen (J) ja (K) mukaisille yhdisteille on määritelty; tai 112660 91 b) kaavan (Ia) mukaista yhdistettä, jossa R2, R7a, R14 ja p ovat kuten edellä on määritelty, käsitellään heikosti happamissa olosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan (Ib) mukainen yhdiste

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mu kaisen yhdisteen yksittäisen stereoisomeerin valmistamiseksi, jossa n on 2, m on 3 ja R1 on -CH2-C(0)0H tai -CH2-C(O)NHOH, nimittäin (3R,10S)-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diat-satrisyklo[10.6.1.013,18]nonadeka-l2(19) ,13(18), 14,16-tetra-10 en-10-yylikarbamoyyli)heksaanihappo tai (3J?, 10S) -N-hydroksi-5-metyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyk-lo[10.6.1.013,18]nonadeka-12 (19),13(18), 14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)heksanamidi.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mu kaisen yhdisteen yksittäisen stereoisomeerin valmistamiseksi, jossa n on 3, m on 3 ja R1 on -CH2-C(0)NHOH, nimittäin (3R,11S)-N-hydroksi-5-metyyli-3-(10-okso-l,9-diatsat-risyklo[ll.6.l.O14'19]eikosa-13(20), 14(19), 15,17-tetraen-ll-20 yylikarbamoyyli)heksanamidi.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen yksittäisen stereoisomeerin valmistamiseksi, jossa n on 1, m on 3 ja R1 on -CH2-C(0)0H tai -CH2-

25 C(O)NHOH, nimittäin (3Ä,9S)-5-metyyli-3-(8-okso-l,7-diat- satrisyklo[9.6.1;.O12,17]oktadeka-11 (18) ,12(17) , 13,15-tetra-en-9-yylikarbamoyyli)heksaanihappo; tai (3R,9S)-N-hydrok-si-5-metyyli-3-(8-okso-l,7-diatsatrisyklo-[9.6.1.012'17]oktadeka-11 (18) ,12(17) , 13,15-tetraen-9-yyli-30 karbamoyyli)heksanamidi.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa n on 2, m on 3 ja R1 on -CH2—SH tai -CH2-SC(0) CH3, nimittäin (10S)-2-merkap- 35 tometyyli-4-metyyli-N-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo- [10.6.1.013,18]nonadeka-12(19) ,13(18), 14,16-tetraen-10-yyli-karbamoyyli)pentanamidi; tai (10S)-2-asetyylitiometyyli-4- 112660 95 metyyli-W- (9-okso-l, 8-diatsatr isyklo [10.6.1.013'18 ] nonadeka-12 (19),13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)pentanami-di.

5. X f ) H C-H-CCHa3j R7 O tt o Cld) 10 jossa R2, R7a ja p ovat kuten edellä on määritelty; tai e) kaavan (J) mukainen yhdiste 15 vA A xc-n-cch2> h y 20 C-D ’ jossa p on 5, 6, 7 tai 8, saatetaan reagoimaan kaavan (M) mukaisen yhdisteen kanssa 25 s j* >.K-SnAc.O. Il o C>0 30 jossa R2 on Cj-Ci-alkyyli, C3-C6-sykloalkyyli, C3-C6-syklo-alkyyli-Ci-^-alkyyli tai fenyyli-Ci-Ci-alkyyli, jolloin muodostetaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste 35 93 1 12 6 6 0 5 0 Γ .^y-sAL A ? / h'K'CCI!J' O s o C i «O 10 jossa R2 ja p ovat, kuten kaavojen (J) ja (M) mukaisille yhdisteille on määritelty; tai f) kaavan (Ie) mukaista yhdistettä, jossa R2 ja p ovat 15 kuten edellä on määritelty, käsitellään NH4OH:lla, jolloin muodostetaan kaavan (If) mukainen yhdiste {T\ 20 / \ *2 ] ,5\Ac.,a f / ,, " C-M-CCH,) • i y

25 Cif) ; jossa R2 ja p ovat kuten edellä on määritelty; tai g) kaavan (I) mukaisen yhdisteen vapaa emäs saatetaan 30 reagoimaan hapon kanssa, jolloin saadaan farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola; tai h) kaavan (I) mukaisen yhdisteen happoadditiosuola saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, jolloin saadaan vastaava 35 vapaa emäs; tai 112660 94 i) kaavan (I) mukaisen yhdisteen happoadditiosuola muunnetaan toiseksi kaavan (I) mukaiseksi farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi.

5 Q . aS Ml H / H-O-C Λ. I / C-N-CCEj),

10 Ua " H M E.7 O “ O CIO jossa Rz, R7a ja p ovat kuten edellä on määritelty; tai 15 c) kaavan (Ib) mukainen yhdiste, jossa R2, R7a ja p ovat kuten edellä on määritelty, saatetaan reagoimaan O-bent-syylihydroksyyliamiinin kanssa, jolloin muodostetaan kaavan (Ie) mukainen yhdiste 20 : 25 C 30 jossa R2, R7a ja p ovat kuten edellä on määritelty; tai d) kaavan (Ie) mukaista yhdistettä, jossa R2, R7a ja p ovat kuten edellä on määritelty, käsitellään katalyyttisen hydrauksen olosuhteissa, jolloin muodostetaan kaavan (Id) 35 mukainen yhdiste 112660 „ JAn

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mu kaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa n on 2, m on 3 ja R1 on o II A

10. R AU OH jossa R6 on kinol-2-yyli, nimittäin (10S)-[4-metyyli-2-(9-okso-1,8-diatsatr isyklo- [10.6.1.013'18] nonadeka-12 (19), 13(18),14,16-tetraen-10-yylikarbamoyyli)pentyyli](kinolin-15 2-yylitiometyyli)fosfiinihappo.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa n on 2, m on 3 ja R1 on -CH(R7)-R8, jossa R7 on metoksikarbonyyli ja R8 on 20 hydroksiaminokarbonyyli, nimittäin (3R,10S)-N-hydroksi-5-metyyli-2-metoksikarbonyyli-3-(9-okso-l,8-diatsatrisyklo-[10.6.1.013-18]nonadeka-12 (19) ,13(18),14,16-tetraen-10-yyli-’ karbamoyylijheksanamidi. 25 >