FI101967B - Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen radionuklidin kanssa komple ksoidun ligandin valmistamiseksi - Google Patents

Description

101967

MENETELMÄ FARMASEUTTISESTI KÄYTTÖKELPOISEN RADIONUKLI-DIN KANSSA KOMPLEKSOIDUN LIGANDIN VALMISTAMISEKSI

Keksintö koskee menetelmää farmaseuttisesti 5 käyttökelpoisen ligandin, joka on kompleksoitu radio-terapiassa käytettävän radionuklidin kanssa, valmistamiseksi .

Parin viime vuoden aikana on osoitettu, että suuri määrä somatostatiinireseptoreita esiintyy suu-10 ressa määrässä ihmisen kasvaimia, esim. aivolisäkkeen kasvaimissa, keskushermoston kasvaimissa, rintakasvai-missa, maha-suolihaimakasvaimissa ja niiden metastaaseissa. Jotkut niistä ovat pieniä tai hidaskasvuisia kasvannaisia, joita on vaikea täsmällisesti paikallis-15 taa tavanomaisin diagnostisin menetelmin.

Somatostatiinireseptoreiden havainnollistaminen in vitro on tehty kasvainkudoksen autoradiografi-alla käyttäen radiojodattua somatostatiinia tai soma-tostatiinianaloge j a, esim. [125I-Tyr11] somatostatiini-20 14 (Taylor, J.E. et. ai., Life Science (1988) 43: 421), tai [125I-Tyr3] SMS 201-995 sanotaan myös [125I] 204-090 (Reubi, J.C. et. ai., Brain Res. (1987) 406: 891; Reubi, J.C. et. ai., J. Clin. Endocr. Metab.

(1987) 65: 1127; Reubi, J.C. et. ai., Cancer Res.

25 (1987) 47: 551; Reubi, J.C. et. ai., Cancer Res.

(1987) 47: 5758) .

Uusia somatostatiinipeptideja, jotka ovat käyttökelpoisia terapeuttisina aineina ja joita voidaan merkitä terapeuttista käyttöä varten, on nyt kek-30 sitty.

: Keksinnön mukaisesti tuodaan esille somatos- tatiinipeptidi, jossa on vähintään yksi osoitettavissa olevan alkuaineen kanssa kelatoiva ryhmä, tämä kela-toiva ryhmä on sidottu mainitun peptidin aminoryhmään, 35 ja tällä aminoryhmällä ei ole merkittävää sitoutumis-affiniteettia somatostatiinireseptoreihin.

101967 2 Näihin yhdisteisiin viitataan tämän jälkeen keksinnön mukaisina ligandeina. Ne omaavat yhden kela-toivan ryhmän, joka voi reagoida osoitettavissa olevan alkuaineen kanssa, esim. radionuklidin kanssa, muodos-5 taakseen kompleksin ja voivat lisäksi sitoutua soma-tostatiinireseptoreihin, jotka ovat esim. kasvaimien tai metastaasien ilmentämiä tai yli-ilmentämiä.

Kelatoiva ryhmä on sidottu kovalentilla sidoksella peptidin aminoryhmään.

10 Kelatoiva ryhmä on edullisesti sidottu soma- tostatiinipeptidin terminaaliseen N-aminoryhmään.

Keksinnön mukaisesti kelatoiva ryhmä voi olla sidottu joko suoraan tai epäsuorasti, esim. tilaa vievän ryhmän avulla, somatostatiinipeptidin aminoryh-15 mään.

Yksi ligandiryhmä on sellainen, jossa kelatoiva ryhmä on sidottu suoraan somatostatiinipeptidin aminoryhmään.

Toinen ligandiryhmä on sellainen, jossa kela-20 toiva ryhmä on sidottu epäsuorasti siltasidoksella tai tilaa vievällä ryhmällä somatostatiinipeptidin aminoryhmään .

Edullisesti kelatoiva ryhmä on sidottu amidi-sidoksella peptidiin.

25 Termi somatostatiinipeptidi tarkoittaa luon nossa esiintyvää somatostatiinia (tetradekapeptidi) ja sen analogeja tai johdannaisia.

Johdannaisilla tai analogeilla, kuten tässä termejä käytetään, tarkoitetaan jokaista suoraketjuis-30 ta tai syklistä polypeptidia, joka on johdettu luonnossa esiintyvästä tetradekapeptidista somatostatii-nista, jossa yksi tai useampi aminohappoyksikkö on poistettu ja/tai korvattu yhdellä tai useammalla toisella aminohapporadikaalilla ja/tai jossa yksi tai 35 useampi funktionaalinen ryhmä on korvattu yhdellä tai useammalla funktionaalisella ryhmällä ja/tai yksi tai useampi ryhmä on korvattu yhdellä tai useammalla muul- 3 101967 la isosteerisellä ryhmällä. Tavallisesti termi kattaa biologisesti aktiivisen peptidin kaikki modifioidut johdannaiset, jotka osoittavat kvalitatiivisesti samanlaisen tehon kun ei-modifioitu somatostatiinipepti-5 di, esim. ne sitoutuvat somatostatiinireseptoreihin ja vähentävät hormonieritystä.

Sykliset, sillotetut sykliset ja suoraketjui-set somatostatiinianalogiset yhdisteet ovat tunnettuja yhdisteitä. Tällaisia yhdisteitä ja niiden valmistusta 10 selostetaan esim. patenttijulkaisuissa EP-A-1295; 29,579; 215,171; 203,031; 214,872; 298,732; 277,419.

Sopivia keksinnön mukaisia ligandeja ovat sellaiset, joita on johdettu seuraavista somatostatii-nianalogeista: 15 A. Kaavan I mukaisia analogeja CHz-S-Yi Y2-S-CH2

I I

20 RCO-N-CH-CO-B-C-Lys-E-NH-CH-G I

jossa RCO- on L- tai D-Phe, -Tyr, -Trp tai -β-Nal 25 • Yx ja Y2 ovat yhdessä suora sidos tai Yx ja Y2 ovat toisistaan riippumatta vety B on Phe, Tyr tai B-naftyyli-Ala, 30 C on (L)-Trp- tai (D)-Trp- E on Thr, Ser tai Vai « G on ryhmä, jolla on kaava -CO-NH-CHiR^JXi 1 jossa R13 on CH2OH, ~(CH2)2-OH, -(CH2)3-OH, CH(CH3)OH, isobutyyli tai butyyli tai 101967 4 on Trp:n tai P~Nal:n α-hiiliatomiin liittynyt substituentti

Xx on -COOH, -CH2OH tai -CONH2 5 jossa tähteet B, Lys ja E ovat L-konfiguraatiossa ja 2- ja 7-asemassa olevat tähteet ovat kukin toisistaan riippumatta (L)- tai (D)-konfiguraatiossa,

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä seuraavat merkitykset ovat edullisia joko kukin erikseen tai 10 jokainen yhdistelmänä tai puoliyhdistelmänä: 1. B on B', jossa B' on Phe tai Tyr.

2. C on C, jossa C on (D)Trp.

3. E on E', jossa E' on Vai tai Thr, erityisesti Thr.

15 4. R13 on edullisesti -CH2OH, -CH(CH3)-OH, isobutyyli tai butyyli tai R13 on -(CH2)2-OH tai -(CH2)3-OH. Erityisesti se on -CH2OH tai -CH(CH3)OH.

Seuraavat yksittäiset yhdisteet kuvaavat kaavan I mukaisia yhdisteitä: 20 ,-1 H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol tunnetaan myös nimellä oktreotidi I-1 (D)Phe-Cys-Thr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 25 I-, (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2

I I

(D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 30 ,-1 (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 1 -1 3- (2-Naftyyli)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 35 |-1 3-(2-Naftyyli)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-β-

Nal-NH2

I I

3-(2-Naftyyli)-(D)Ala-Cys-B-Nal-(D)Trp-Lys-Val-Cys-

ThrNH2 5 101967

I I

5 (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-B-Nal-NH2 B. Kaavan II mukaisia analogeja l l

H-Cys-Phe-Phe-(D)-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-ol II

10 [kts. Vale et. al., Metabolism, 27, Supp, 1, 139, (1978)]

I I

H-Cys-His-His-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH III

15 (kts. EP-A-200,188)

Kaikkien edellä esitettyjen julkaisujen sisältö mukaanlukien, määritellyt yhdisteet sisällytetään tähän viitteenä.

Erityisen edullisia ovat ligandit, joita joh- 20 detaan

I I

H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-olista.

Sopivia kelatoivia ryhmiä ovat fysiologisesti hyväksyttävät kelatoivat ryhmät, jotka voivat muodos-25 taa kompleksin todettavissa olevan alkuaineen kanssa. Edullisesti kelatoivalla ryhmällä on olennaisesti hyd-rofiilinen luonne. Esimerkkejä kelatoivista ryhmistä sisältävät esim. iminodikarboksyylisiä ryhmiä, poly-aminopolykarboksyylisiä ryhmiä, esim. sellaisia, joita 30 on johdettu ei-syklisistä ligandeista esim. etyleeni-diaminitetraetikkahappo (EDTA), dietyleenitriamiini-pentaetikkahappo (DTPA), etyleeniglykoli-O,0'-bis(2-aminoetyyli)-N,N,N1,N'-tetraetikkahappo (EGTA), N, N'-bis(hydroksibentsyyli)etyleenidiamiini-N,N'-dietikka-35 happo (HBED) ja trietyleenitetra-amiiniheksaetikka-happo (TTHA), sellaisia, joita on johdettu substituoi-dusta EDTA tai -DTPA :sta, esim. p-isotiosyanato- 101967 6 bentsyyli-EDTA tai -DTPA sellaisia, joita on johdettu makrosyklisistä ligandeista, esim. 1,4,7,10-tetra-atsasyklododedekani-N,N',N'',N'''-tetraetikkahappo (DOTA) ja 1,4,8,11-tetra-atsasyklotetradekani- 5 N,NNN'''-tetraetikkahappo (TETA), ja sellaisia N-substituoiduista tai C-substituoiduista makrosyklisistä amiineista mukaanlukien syklaamit johdettuja, esim. kuten julkaisuissa EP 304,780 AI ja WO 89/01476-A kuvataan, kaavan IV tai V mukaiset ryhmät 10 O 0 0

Il II II

Ri-C-S-iCHaJn.-C-fTTJi-C- IV

15

O O

Il II

R2-C-S-(CH2)n.-C-NH-CH20 O

20 \ Il

R3-C-S- (CH2) n.-C-NH

Il II

o o 25 jossa kukin Rlf R2 ja R3 toisistaan riippumatta on C1_6alkyyli, C6_8aryyli tai C7.9aryylialkyyli, jokainen valinnaisesti substituoitu substituentilla OH, C1_4alkoksi, COOH tai S03H, 30 n' on 1 tai 2, i on kokonaisluku 2 - 6, ja TT ovat toisistaan riippumatta a tai β aminohappoja sidottuja toisiinsa amidisidoksilla, 1 ryhmiä, joita on johdettu bis-aminotioli-johdannaisista, esim. kaavan VI mukaiset yhdisteet 7 101967 ΗΝ ΝΗ νι 5 R21^r" R^ ''SH US' jossa jokainen R2o/ R21/ R22 ja R23 toisistaan riippumatta on 10 vety tai C1_4alkyyli, X2 on ryhmä, joka pystyy reagoimaan peptidin N-aminoryhmän kanssa, ja m' on 2 - 3, 15 ryhmiä, joita on johdettu ditiasemikarbatsonijohdannaisista, esim. kaavan VII mukaiset yhdisteet 20 X, A\

^N

HN MH

HN^SH HS^NH

25 VII

jossa X2 tarkoittaa samaa kuin edellä, 30 ryhmiä, joita johdetaan propyleniamiinioksiimijohdannaisista, esim. kaavan VIII mukaiset yhdisteet 35 8 " Γ < r r 7 χ2

HN NH

Ά? VIII

5 25^s A,28 324 j1 p ^29

OH OH

j ossa jokainen R24, R25, R26* R27/ R28 ja R29 toisistaan riippu-10 matta ovat vety tai C1.4alkyyli ja X2 ja m' tarkoittavat samaa kuin edellä, ryhmiä, joita on johdettu diamididimerkaptideista, esim. kaavan IX mukaiset yhdisteet 15 axa

°Y "V

yA^s 20 5 | j H,C,C0 COCj-H- 3 0 0 3 jossa X3 on divalentti radikaali, joka on valinnaisesti 25 substituoitu ja jossa on ryhmä, joka voi reagoida peptidin N-aminoryhmän kanssa, esim. C1_4alkyleeni tai fenyleeni, jossa on ryhmä X2, ja Y5 on vety tai CO2R30, jossa R30 on C1.4alkyyli, 30 tai ryhmiä, jotka saadaan johdettua porfyriineista, esim. N-bentsyyli-5,10,15,20-tetrakis-(4-karboksife-nyyli) porf iini tai TPP, jossa on ryhmä X2, joka on määritelty kuten edellä.

Aryyli on edullisesti fenyyli. Aralkyyli on 35 edullisesti bentsyyli.

Esimerkit ryhmistä X2 sisältävät radikaaleja, joilla on kaava -(X4)n..-X5, jossa X4 on C^galkylee ni;- 9 101967 tai C^alkyleeni, joka on valinnaisesti sidottu hiiliatomiin happiatomilla tai -NH-, n'' on O tai 1 ja X5 on -NCS, karboksiryhmä tai tämän funktionaalinen johdannainen, esim. happohalidi, anhydridi tai hydratsi-5 di. On selvää, että X2 on sidottu yhteen hiiliatomiin -[CH2]m·- tai =CH-CH= korvaamalla yksi vetyatomi.

Kelatoiva ryhmä voi olla sitoutunut joko suoraan tai epäsuorasti somatostatiinipeptidin N-amino-ryhmään. Kun se on sidottu epäsuorasti, se on sopivas-10 ti sidottu siltasidoksen kautta tai tilaa vievän ryhmän kautta, esimerkiksi kaavan (ai) mukaisen ryhmän kautta.

Z-R35-CO- (ai) 15 . R35 on C1_11alkyleeni, C2_11alkenyleeni tai - CH(R')-, jossa R' on jäännös, joka on sidottu α-hiileen luonnolliseen tai synteettiseen a-aminohappoon, esim. vety, C1.11alkyyli, bentsyyli, valin-20 naisesti substituoitu bentsyyli, naftyyli- metyyli, pyridyylimetyyli, Z on funktionaalinen ryhmä, joka voi reagoida kovalenttisesti kelatoivan aineen kanssa.

Z voi esimerkiksi olla ryhmä, joka voi muo-25 dostaa kelatoivan ryhmän kanssa eetteri-, esteri- tai amidisidoksen. Z on edullisesti amino.

Kelatoiva ryhmä, kun se sisältää karboksi-, -S03H- ja/tai aminoryhmiä, voi olla vapaassa tai suolan muodossa.

30 Edullisia kelatoivia ryhmiä ovat sellaiset, joita johdetaan polyamino-polykarboksyyliryhmistä, esim. sellaiset, joita johdetaan ryhmistä EDTA, DTPA, DOTA, TETA tai substituoidusta EDTA tai DTPA. Suosituimpia ovat DTPA:sta johdetut kelatoivat ryhmät.

35 Keksinnön mukaisissa ligandeissa kelatoiva ryhmä, kun se on polyfunktionaalinen, voi olla sidottuna joko yhteen somatostatiinipeptidimolekyyliin tai 10 101967 useampaan kuin yhteen somatostatiinipeptidimolekyy-liin, esim. kahteen somatostatiinipeptidimolekyyliin.

Keksinnön mukaiset ligandit voivat olla vapaassa tai suolan muodossa. Suolat tarkoittavat hap-5 poadditiosuoloja, esim. orgaanisten happojen, polymeeristen happojen tai epäorgaanisten happojen kanssa, esim. hydrokloridit ja asetaatit, sekä suolamuotoja, joita saadaan karboksyyli- tai sulfonihapporyhmien kanssa, jotka ovat läsnä kelatoivassa ryhmässä, esim.

10 alkalimetallisuolat, kuten natrium- tai kalium-, tai substituoidut tai substituoimattomat ammoniumsuolat.

Esillä oleva keksintö koskee myös keksinnön mukaisten ligandien valmistusmenetelmää. Niitä voidaan valmistaa analogisesti tunnettujen menetelmien mukaan.

15 Keksinnön mukaisia ligandeja voidaan valmis taa esim. seuraavasti: a) poistamalla ainakin yksi suojaava ryhmä, joka on läsnä somatostatiinipeptidissa, jossa on kelatoiva ryhmä, tai 20 b) sitomalla yhteen amidisidoksella kaksi peptidif-ragmenttia, jotka kumpikin sisältävät ainakin yhden aminohapon tai aminoalkoholin suojatussa tai suojaamattomassa muodossa ja toinen näistä sisältää kelatoi-van ryhmän, jossa amidisidos on sellainen, että toi- 25 vottu aminohapposekvenssi saadaan, ja valinnaisesti toteuttamalla sen jälkeen vaihe a), tai c) sitomalla yhteen kelatoiva aine ja toivottu soma-tostatiinipeptidi suojatussa tai suojaamattomassa muodossa sellaisella tavalla, että kelatoiva ryhmä kiin- 30 nittyy peptidin toivottuun N-aminoryhmään, ja valinnaisesti toteuttamalla sen jälkeen vaihe a), tai d) poistamalla funktionaalinen ryhmä suojaamattomasta tai suojatusta peptidistä, jossa on kelatoiva ryhmä, tai muuntamalla se toiseksi funktionaaliseksi ryh- 35 mäksi niin, että saadaan toinen suojaamaton tai suojattu peptidi, jossa on kelatoiva ryhmä, ja toteuttamalla viimeksi mainitussa tapauksessa vaihe a), tai 11 101967 e) hapettamalla somatostatiinipeptidi, joka on modifioitu kelatoivalla ryhmällä, jossa merkaptoryhmät Cys-radikaaleissa ovat vapaassa muodossa niin, että muodostuu analogi, jossa kaksi Cys-radikaalia liitty-5 vät S-S-sillan kautta, ja regeneroimalla näin saatu ligandi vapaassa muodossa tai suolan muodossa.

Edellä esitetyt reaktiot voidaan tehdä analogisesti tunnettujen menetelmien kanssa, esim. kuten seuraavissa esimerkeissä selostetaan, erityisesti me-10 netelmät a) ja c). Kun kelatoiva ryhmä on sidottu ami-disidoksella, tämä voidaan tehdä analogisesti menetelmillä, joita käytetään amidin valmistukseen. Haluttaessa näissä reaktioissa voidaan käyttää suojaavia ryhmiä, jotka ovat sopivia käytettäväksi peptidien kanssa 15 . tai toivotuissa kelatoivissa ryhmissä funktionaalisina ryhminä, jotka eivät ota osaa reaktioon. Termi suojaa-va ryhmä käsittää myös polymeerihartsin, jossa on funktionaalisia ryhmiä.

Haluttaessa sitoa kelatoiva ryhmä peptidin 20 terminaali N-aminoryhmään tai peptidifragmenttiin, jota käytetään lähtöaineena ja joka sisältää yhden tai useamman aminoryhmän sivuketjussa, nämä sivuketjuami-noryhmät suojataan tavanomaisesti suojaavalla ryhmällä, esim. kuten peptidikemiassa käytetään.

25 Haluttaessa sitoa kelatoiva ryhmä peptidin sivuketjun aminoryhmään tai peptidifragmenttiin, jota käytetään lähtöaineena, ja peptidi sisältää vapaan terminaalisen N-aminoryhmän, viimeksi mainittu suojataan tavallisesti suojaavalla ryhmällä.

30 Peptidifragmentti, jossa on kelatoiva ryhmä ja jota käytetään vaiheessa b) voidaan valmistaa saattamalla peptidifragmentti, joka sisältää ainakin yhden aminohapon tai aminoalkoholin suojatussa tai suojaamattomassa muodossa, reagoimaan kelatoivan aineen 35 kanssa. Reaktio voidaan suorittaa analogisesti vaiheen c) kanssa.

Kaavojen IV tai V mukaiset kelatoivat ryhmät 12 101967 voidaan sitoa peptidiin saattamalla kaavojen IV tai V mukaiset kelatoivat aineet, 0 0 0

Il II II

5 R1-C-S-(CH2)n.-C-(TT)i-C-X IV

o o

Il II

R2-C-S-(CH2)n,-C-NH-CH2 0

10 I

___ CH-C-X V

R3-C-S- (CH2) n,-C-NH

Il II

o o 15 . jossa X on aktivoiva ryhmä, joka voi muodostaa amidi-sidoksen, reagoimaan peptidin N-aminoryhmän kanssa. Reaktio voidaan suorittaa kuten julkaisussa EP 247,866 AI kuvataan.

Vaiheessa c) käytetty kelatoiva aine voi olla 20 ennestään tunnettu tai voidaan valmistaa ennestään tunnettujen menetelmien mukaan. Käytetty yhdiste on sellainen, että se sallii toivotun kelatoivan ryhmän viemisen somatostatiinipeptidiin, esim. polyaminopoly-karboksyylihappo, kuten on selostettu, tämän suola tai 25 anhydridi.

Yllä olevassa menetelmässä, jos aminohapoissa, peptidifragmenteissa tai peptideissä, joita käytetään lähtöaineina, kelatoiva ryhmä on siltasidoksen tai tilaa vievän ryhmän kautta sidottu peptidiin, 30 esim. kaavan (ai) mukainen radikaali, kuten edellä on määritelty, tällaiset aminohapot, peptidifragmentit tai peptidit voidaan valmistaa saattamalla vastaavat aminohapot tai peptidit, joissa ei ole silta- tai tilaa vievää ryhmää, reagoimaan tavanomaisella tavalla 35 vastaavan siltaa muodostavan tai tilaa vievän yhdisteen kanssa, esimerkiksi happo tai reaktiivinen happo-johdannainen sisältäen silta- tai tilaa vievän ryhmän, 13 101967 esim. kaavan Z-R35-COOH mukainen happo tai tämän reaktiivinen happojohdannainen, kuten aktiivinen esteri. Esimerkkejä aktiivisista esteristä tai karboksia aktivoivista ryhmistä ovat esim. 4-nitrofenyyli, pentaklo-5 rifenyyli, pentafluorifenyyli, sukkiinimidyyli tai 1-hydroksi-bentsotriatsolyyli.

Vaihtoehtoisesti kelatoiva aine voidaan ensin saattaa reagoimaan sillan muodostavan tai tilaa vievän ryhmän omaavan aineen kanssa, jotta siihen saadaan 10 sillan muodostava tai tilaa vievä ryhmä, ja tämän jälkeen saattaa reagoimaan tavanomaisella tavalla peptidin, peptidifragmentin tai aminohapon kanssa.

Keksinnön mukaiset ligandit voidaan puhdistaa tavanomaisella tavalla, esim. kromatografisesti. Edul-15 lisesti keksinnön mukaiset ligandit sisältävät vähemmän kuin 5 p-% peptidejä, jotka ovat vapaita kelatoi-vista ryhmistä.

Keksinnön mukaiset ligandit voivat muodostaa kompleksin osoitettavissa olevan alkuaineen kanssa.

20 Täten esillä oleva keksintö tuo myös esille keksinnön mukaiset ligandit, kuten edellä on määritelty, jotka muodostavat komplekseja osoitettavissa olevan alkuaineen kanssa (tämän jälkeen näihin viitataan keksinnön mukaisina kelaatteina), vapaassa muodossa 25 tai suolan muodossa, niiden valmistuksen sekä niiden '· käytön terapeuttisiin tarkoituksiin.

Osoitettavissa olevalla alkuaineella tarkoitetaan jokaista alkuainetta, edullisesti metalli- ionia, joka osoittaa jonkin ominaisuuden, joka on 30 osoitettavissa terapeuttisissa menetelmissä esim. metalli-ioni, joka antaa osoitettavissa olevan säteilyn, tai metalli-ioni, joka pystyy vaikuttamaan NMR-relaksaatio-ominaisuuksiin.

Sopivia osoitettavissa olevia metalli-ioneja 35 ovat esim. raskaat alkuaineet tai harvinaiset maame- talli-ionit, esim. kuten CAT-skannauksessa (Computer axial tomography) käytetään ja radionuklidit, esim. β- 14 101967 säteilevät radionuklidit ja α-säteilevät radionukli-dit.

β-säteilevistä radionuklideista mainittakoon esim. 90Y, 67-Cu, 186Re, 188Re, 169Er, 121Sn, 127Te, 143Pr, 5 198Au, 109Pd, 165Dy, 32P, 142Pr. β-radio-nuklidilla on edullisesti puoliintumisaika 2,3 h - 14,3 pv, sopivasti 2,3 - 100 h. β-säteilevällä radionuklidilla voi olla pidempi puoliintumisaika kuin somatostatiinipep-tidilla kasvaimessa.

10 Sopivia α-säteileviä radionuklideja ovat sel laiset, joita käytetään terapeuttisessa hoidossa, esim. 2UAt, 212Bi.

Lisäksi terapeuttiseen hoitoon sopivia radio-nuklideja ovat Auger-elektoneja emittoivat radionukli-15 . dit.

Keksinnön mukaisia kelaatteja voidaan valmistaa saattamalla ligandi reagoimaan vastaavan osoitettavissa olevan alkuaineen antavan yhdisteen kanssa, esim. metallisuola, edullisesti vesiliukoinen suola.

20 Reaktio voidaan suorittaa analogisesti tunnettujen menetelmien mukaan, esim. kuten on selostettu julkaisuissa: Perrin, Organic Ligang, Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press (1982); Krejcarit ja Tucker, Biophys. Biochem. Res. Corn. 77: 581 (1977) ja Wagner 25 ja Welch, J. Nucl. Med. 20: 428 (1979).

Edullisimmin ligandin kompleksi muodostetaan pH:ssa, jossa keksinnön mukainen ligandi on fysiologisesti stabiili.

Vaihtoehtoisesti osoitettavissa oleva alkuai-30 ne voidaan tuoda liuokseen kompleksoituna toiseen apu-kelatoivaan aineeseen, esim. kelatoiva aine, joka muodostaa kelaattikompleksin, joka tekee alkuaineen liukoiseksi ligandin fysiologisessa pHrssa, mutta on ter-modynaamisesti vähemmän stabiili kuin kelaatti. Esi-35 merkkinä tällaisesta apukelatoivasta aineesta on 4,5-dihydroksi-1,3-bentseeni-disulfonihappo (Tiron). Tällaisessa menetelmässä osoitettavissa oleva alkuaine 15 101967 vaihtaa ligandia.

Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan myös valmistaa liittämällä yhteen kelatoiva aine, kompleksoi-tuna osoitettavissa olevaan alkuaineeseen, ja suoja-5 tussa tai suojaamattomassa muodossa oleva somatosta-tiinipeptidi, ja jos halutaan poistamalla ainakin yksi läsnäoleva suojaava ryhmä. Sama reaktio voidaan toteuttaa, kun kelatoiva aine muodostaa kompleksin ei-osoitettavissa olevan metalli-ionin kanssa, ja tämän 10 jälkeen saatavassa kompleksisessa peptidissä metalli-ioni voidaan korvata toivotulla osoitettavissa olevalla alkuaineella.

Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan myös valmistaa liittämällä yhteen kelatoiva aine, kompleksoi-15 . tuna osoitettavissa olevan alkuaineeseen, ja somatos-tatiinipeptidifragmentti, joka sisältää ainakin yhden aminohapon suojatussa tai suojaamattomassa muodossa, ja sitten jatkamalla peptidisynteesiä vaihe vaiheelta, kunnes lopullinen peptidisekvenssi saadaan, ja jos 20 toivotaan, poistetaan ainakin yksi suojaava läsnäoleva ryhmä. Osoitetavissa olevan alkuaineen sijasta kelatoiva aine voi muodostaa kompleksin ei-osoitettavissa olevan metallin kanssa, ja tämä metalli voidaan korvata osoitettavissa olevaan alkuaineeseen lopullisessa 25 kompleksissa somatostatiinipeptidissa.

; Kun kelatoiva ryhmä on kiinnittynyt somatos- tatiinipeptidiin sillan muodostavan sidoksen tai tilaa vievän ryhmän kautta, esim. kaavan (ai) mukaisen radikaalin kautta, kuten edellä on kuvattu, sillan muodos-30 tava sidos tai tilaa vievä ryhmä voi olla joko somatostatiinipeptidissa tai peptidifragmentissa tai kela-toivassa aineessa.

Edellä mainitut reaktiot voidaan toteuttaa analogisesti tunnettujen menetelmien mukaan. Riippuen 35 läsnäolevasta kelatoivasta ryhmästä, leimauksen teho voi olla lähellä 100 % niin, että puhdistusta ei tarvita. Radionuklideja, kuten teknetium-99m, voidaan 16 101967 käyttää hapetetussa muodossa, esim. Tc-99m pertekne-aatti, joka voidaan kompleksoida pelkistävissä olosuhteissa .

Edellä mainitut reaktiot toteutetaan tavan-5 omaisesti olosuhteissa, joissa vältetään hivenmetalli-kontaminaatiota. Edullisesti tislattua deionisoitua vettä, ultrapuhtaita reagensseja, kelaatioasteradioak-tiivisuus jne. käytetään vähentämään hivenmetallin vaikutuksia.

10 Keksinnön mukaiset kelaatit voivat esim. olla vapaassa tai suolan muodossa. Suolat käsittävät hap-poadditiosuolat esim. orgaanisten happojen, polymeeristen happojen tai epäorgaanisten happojen kanssa, esim. hydrokloridit ja asetaatit, sekä suolamuodot, 15 . joita saadaan molekyylissä läsnäolevista karboksyyli-happoryhmistä, jotka eivät ota osaa kelaatin muodostukseen, esim. alkalimetallisuolat, kuten natrium- tai kalium-, tai substituoidut tai substituoimattomat am-moniumsuolat.

20 Keksinnön mukaiset kelaatit ja niiden farma seuttisesti hyväksyttävät suolat osoittavat farmaseuttista aktiviteettia ja ovat tämän takia käyttökelpoisia radioiarmaseuttisena aineena hoidettaessa in vivo somatostatiinireseptoripositiivisia kasvaimia ja me-25 tastaaseja, muodostamalla komplekseja a- tai β-radio- • nuklidin kanssa, kuten standarditestein on osoitettu.

Erityisesti keksinnön mukaiset kelaatit osoittavat affiniteettia somatostatiinireseptoreihin, jotka ovat kasvainten ja metastaasien ilmentymiä tai 30 yli-ilmentymiä, kuten on osoitettu in vitro sitovissa kokeissa.

Somatostatiinireseptoripositiivinen kasvain, joka on peräisin ihmisen ruuansulatuskanavasta, poistetaan potilaasta ja laitetaan välittömästi jäihin ja 35 jäädytetään maksimaalisen 30 min viiveen sisällä -80°C. Lisäksi autoradiografiaa varten tämä jäätynyt materiaali leikataan kryostaatilla (Leitz 1720) 10 μπ\ 17 101967 viipaleiksi, laitetaan esipuhdistetulle mikroskooppi-lasille ja säilytetään - 20°C ainakin 3 päivää, jotta kudoksen adheesio lasiin paranisi. Viipaleet esi-inkuboidaan Tris-HCl puskurissa (50mM, pH 7,4), sisäl-5 täen CaCl2 (2mM) ja KC1 (5mM), 10 min huoneen lämpötilassa ja pestään tämän jälkeen kahdesti 2 min samalla puskurilla ilman suolojen lisäystä. Viipaleet inkuboi-daan tämän jälkeen keksinnön mukaisella kelaatilla 2 h huoneen lämpötilassa Tris-HCl puskurissa (170 mM, pH 10 7,4), joka sisältää nautaseerumialbumiinia (10 g/1), basitrasiinia (40 mg/1) ja MgCl2 (5 mM) endogeenisen proteaasin estämiseksi. Ei-spesifinen sitoutuminen määritellään lisäämällä vastaavaa leimaamatonta, modi-fioimatonta somatostatiinipeptidia 1 μΜ konsentraati-15 ossa. Inkuboidut viipaleet pestään kahdesti 5 min kyl mällä elatuspuskurilla sisältäen 0,25 g/1 BSA. Lyhyen tislattuun veteen kastamisen jälkeen, ylimääräisten suolojen poistamiseksi, viipaleet kuivataan nopeasti ja tarkistetaan [3H]-LKB filmille. Noin viikon altis-20 tusajan kuluttua röntgensädekaseteissa havaitaan, että keksinnön mukaiset kelaatit, esim. radionuklidikelaat-ti, antavat erittäin hyviä tuloksia leimatessaan kasvainkudoksen ilman, että ympäröivä terve kudos lei-maantuu, kun sitä lisätään konsentraatiossa 10’10 - 10”3 25 M.

: Keksinnön mukaisten kelaattien affiniteetti somatostatiinireseptoreille voidaan myös osoittaa in vivo kokeilla.

Rotille, joilla on transplantoitavia eksok-30 riinipankreaattisia somatostatiinireseptoripositiivi- siä kasvaimia, annetaan intravenöösi-injektio keksinnön mukaista kelaattia. Injektiokohta on penislaskimo. Välittömästi annostuksen jälkeen eläimet asetetaan gammakameran kollimaattorille, ja radiokaktivisuuden 35 jakautumista eläimissä tarkkaillaan eri aikavälein.

Radioaktiivisuuden biojakautuminen voidaan myös määritellä tappamalla sarja tällä tavalla käsi 18 101967 teltyjä rottia ja määrittelemällä elimien radioaktiivisuus .

Keksinnön mukaisen kelaatin, esim. radionu-klidikelaatti, esim. γ-säteilevä kelaattiannostuksen 5 jälkeen, annos 1-5 μς/kg ligandia leimattu 0,1-2 mCi radionuklidilla, kasvaimen sijainti tulee havaittavaksi yhdessä elimien kanssa, joissa eritys oleellisesti tapahtuu.

Täten keksintö tuo esille spesifisissä tai 10 vaihtoehtoisissa suoritusesimerkkeissä myös menetelmät :

Menetelmä in vivo somatostatiinireseptoripo-sitiivisten kasvaimien ja metastaasien hoitamiseksi kohteissa, jotka tarvitsevat tällaista hoitoa, jolloin 15 . keksinnön mukaista kelaattia annetaan kohteelle terapeuttisesti vaikuttava määrä.

Keksinnön mukaiset kelaatit, joita käytetään in vivo-hoitomenetelmässä ovat kelaatteja, jotka muodostavat kompleksin α-, β- tai Auger-elektroneja emit-20 toivan radionuklidin kanssa, kuten edellä on määritelty.

Keksinnön mukaisessa terapeuttisessa menetelmässä annokset vaihtelevat tietysti riippuen esim. siitä, mitä spesifistä tilaa hoidetaan, esim. kasvai-25 men koko, erityinen käytetty kelaatti, esim. kelaatin puoliintumisaika kasvaimessa, ja toivotun terapian mukaan. Tavallisesti annos lasketaan elimiin jakautuneen ja havaitun kohteen vastaanottaman radioaktiivisuuden perusteella. Esim. kelaattia voidaan annostella 30 päivittäisenä annoksena, jossa radioaktiivisuus on alueella 0,1-3 mCi/kg, esim. 1-3 mCi, sopivasti 1 - 1,5 mCi/kg ruumiin paino. Indikoitu päivittäinen annosalue on 1 - 200 μg ligandia leimattu 0,1 - 3 mCi/kg ruumiin paino, esim. 0,1 - 1,5 mCi/kg ruumiin 35 painoa a- tai β-säteilevää radionuklidia, tavanomaisesti annos jaetaan jopa 4 kertaa päivässä annettaviin annoksiin.

19 101967 a- tai β-säteilevät keksinnön mukaiset kelaa-tit voidaan antaa kaikilla tavanomaisilla tavoilla, erityisesti parenteraalisesti, esim. injisoitavina liuoksina tai suspensioina. Niitä voidaan antaa edul-5 lisesti myös infuusioina, esim. 30 - 60 min infuusio-na. Riippuen kasvaimen sijainnista niitä voidaan antaa niin lähelle kasvaimen sijaintia kuin mahdollista, esim. katetrin avulla. Valittu antotapa riippuu käytetyn kelaatin dissosiaationopeudesta ja erityisnopeu-10 desta.

Keksinnön mukaisia kelaatteja voidaan annostaa vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa. Tällaisia suoloja voidaan valmistaa tavanomaisin menetelmin ja osoittavat aktivitee-15 . tin, joka on samaa suuruusluokkaa kuin vapaat yhdisteet .

Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettävät keksinnön mukaiset kelaatit voidaan sopivasti valmistaa juuri ennen antoa kohteelle, so 20 radioleimaus toivotulla osoitettavissa olevalla metalli-ionilla, erityisen toivottuja ovat a- tai β-radionuklidit, voidaan suorittaa juuri ennen annostusta .

Keksinnön mukaiset kelaatit voivat olla sopi-25 via kasvainten hoidossa, kuten aivolisäke-, mahasuoli-haima-, keskushermosto-, rinta-, eturauhas-, munasarja- tai paksusuolikasvaimet, pienisoluinen keuhkosyöpä, paragangliokudoskasvaimet, neuroblastooma, peokro-mosytooma (lisämunuaisytimen kromaffiinikasvain), me-30 dullaari tyroidi karsinoma, myeloma, jne. sekä näiden metastaasit.

»

Keksinnön lisäsovelluksen mukaan muodostetaan: i. farmaseuttinen koostumus'sisältäen keksinnön mukai-35 sen ligandin vapaassa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa yhdessä yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai tämän laimen- 20 101967 nusaineen kanssa; ii. farmaseuttinen koostumus sisältäen keksinnön mukaisen kelaatin vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa yhdessä yhden tai useam-5 man farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai tämän laimennusaineen kanssa.

Tällaiset koostumukset voidaan valmistaa tavanomaisin menetelmin.

Keksinnön mukainen koostumus voidaan myös 10 laittaa erillisiin pakkauksiin yhdessä ohjeiden kanssa, joissa selostetaan, kuinka ligandi sekoitetaan metalli-ionin kanssa ja kuinka tuloksena saatu kelaat-ti annostetaan. Sitä voidaan myös valmistaa kaksois-pakkauksen muodossa, so yksittäispakkauksena, joka 15 sisältää ligandia ja osoitettavissa olevaa metalli-ionia erillisinä yksikköannoksia yhdessä ohjeiden kanssa, niiden sekoittamiseksi ja kelaatin annostami-seksi. Laimennusaine tai kantaja voivat olla läsnä yksikköannosmuodossa.

20 Seuraavissa esimerkeissä, kaikki lämpötilat ovat °C ja [a]D -arvot ovat korjaamattomia. Seuraavia lyhennyksiä on käytetty:

Boc tert.butoksikarbonyyli TFA trifluorietikkahappo 25 DTPA dietyleenitriamini-pentaetikkahappo I-1 ESIMERKKI 1: DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol I-1 30 1,1 g DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(ε-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol vapaassa emäksessä (ImM) liuotetaan 5 1 dioksaani/H20 * 1/1 (v/v) ja saatetaan reagoimaan 5 g NaHC03 kanssa.

520 mg DTPA dianhydridia lisätään hitaasti sekoittaen. Reaktioseosta sekoitetaan vielä 30 minuuttia ja kuiva-35 jäädytetään. Jäännös liuotetaan 250 ml vettä, ja pH säädetään pH 2,5 väkevällä HCl:lla. Saostunut tuote suodatetaan pois, pestään ja kuivataan fosforipentok- 21 101967 sidilla. Silikageelikolonnikromatografian jälkeen, eristetään seuraavat tuotteet:

I I

5 230 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(ε-Boc)-Thr-Cys-Thr- ol ja 500 mg vastaavaa dimeeria DTPA-(DPhe-Cys-Phe-DTrp- -1 10 Lys (eBoc)-Thr-Cys-Thr-ol)2.

3 ml TFA sekoitetaan 200 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-

Lys(ε-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol kanssa. 5 min kuluttua huo-15 neenlämpötilassa seos saostetaan di- isopropyylieetterillä, suodatetaan ja kuivataan. Jäännöksestä poistetaan suola Duolitella ja lyofilisoi-daan, saanto 150 mg otsikkoyhdistettä: [a]D20 = - 26, 6 0 (c = 1 95 % AcOH) .

20 Lähtömateriaali voidaan valmistaa seuraavasti: I | a) H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(Boc)-Thr-Cys-Thr-ol 2,25 g di-tert.-butyylipyrokarbonaattia, liuotettuna 25 30 ml DMF, lisätään hitaasti tiputtaen huoneenlämpöti lassa liuokseen, jossa on I-1 10 g H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol-asetaattia ja 100 ml DMF. 2 h jälkeen huoneenlämpötilassa liuos 30 poistetaan vakuumissa ja 200 ml di-isopropyylieetteria . lisätään jäännökseen. Sakka, joka muodostuu, suodate taan pois, pestään di-isopropyylieetterillä ja kuivataan. Raakatuote puhdistetaan kromatograafisesti sili-kageelilla (eluentti: CH2Cl2/MeOH 9/1) ja eristetään 35 tämän jälkeen valkoisena amorfina jauheena.

[a] D20 = 29,8 0 (c = 1.28 DMF: ssä) .

22 101967

I I

ESIMERKKI 2: DTPA-(DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr- ol) 2 5 Fraktio, joka sisältää välituotteen DTPA-DPhe-Cys-Phe -1 DTrp-Lys(ε-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol) 2, kuten saadaan esimerkissä 1, käsitellään, kuten edellä on selostettu vastaavan monomeerisen tuotteen kohdalla, Boc suojaavat 10 ryhmät poistetaan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste: [a] D20 = - 24,5 ° (c = 0,55 95 % AcOH) .

I- ESIMERKKI 3: H2N- (CH2) 5-CO-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr- 15 . Cys-Thr-ol I-1 a. 0,56 g H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(BOC)-Thr-Cys-Thr-ol, 0,5 mM Fmoc-s-aminokapronihappoa ja 115 mg hydroksi-bentsotriatsolia liuotetaan 10 ml DMF ja jäähdytetään 20 -30°C. Liuokseen lisätään liuos, jossa on 115 mg di- sykloheksyylikarbodi-imidia ja 5 ml DMF (jäähdytetty -10°C). 24 h reaktioajan jälkeen, jonka aikana seos lämpiää huoneenlämpöiseksi, saatava disykloheksyyliu-rea suodatetaan pois ja suodos laimennetaan vedellä 10 25 kertaiseen tilavuuteen. Saostunut reaktiotuote suoda-; tetaan pois, pestään ja kuivataan fosforipentoksidil- la. Raakatuote käytetään ilman lisäpuhdistusta seuraa-vaan vaiheeseen.

b. Fmoc-lohkaisu 30 0,5 g raakatuotetta, joka on saatu liitosreaktiosta . (a), käsitellään 10 min huoneen lämpötilassa 5 ml DMF/piperidiinillä 4/1 v/v (kirkas liuos) ja sekoitetaan tämän jälkeen 100 ml di-isopropyylieetteriin. Reaktiotuote, joka saostuu, suodatetaan pois, pestään 35 ja kuivataan. Raakatuote käytetään seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

c. BOC lohkaisu 23 101967 300 mg saatua raakatuotetta (l.b) käsitellään 5 min huoneen lämpötilassa 5 ml 100 % TFA (täysin liuennut) ja sekoitetaan tämän jälkeen 50 ml di-isopropyy-lieetteriin. 2 ml HCl/dietyylieetterilisäyksen jäl-5 keen saatu sakka suodatetaan, pestään ja kuivataan korkeassa vakuumissa. Lopputuote puhdistetaan kromato-graafisesti silikageelilla (CHCl3/Me0H/H20/Ac0H, 7/3/0,5/0,5), suola poistetaan tämän jälkeen Duolitel- la (gradientti: H20/Ac0H 95/5)---H20/dioksaani/AcOH, 10 45/50/5).

Otsikkoyhdiste saadaan asetaattina (valkoinen lyofili-saatti).

[a]D20 = - 32 0 (c = 0,5 95 % AcOH) .

Saatu yhdiste voidaan käyttää reaktiossa DTPA:n kanssa 15 . esimerkkien 1 ja 2 menetelmien mukaisesti.

ESIMERKKI 4:

Seuraava ligandi voidaan valmistaa seuraamalla menetelmää, jota on selostettu esimerkeissä 1 ja 3: l l 20 DTPA-LAla-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol.

[a] D20 = - 14,8 0 (c = 0, 5 95 % AcOH).

I- ESIMERKKI 5: inIn leimattu DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys- 25 -1

Thr-Cys-Thr-ol I-1 1 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol liuotetaan 5 ml 0,01 M etikkahappoon. Saatava liuos johde-30 taan 0,22 μ Millex-GV suodattimen läpi ja jaetaan 0,1 . ml annoksiin ja säilytetään -20°C. ulInCl3 (Amersham, 1 mCi/100 μΐ) esilaimennetaan yhtä suureen määrään 0,5 M natriumasetaattia, ja leimaus tehdään sekoittamalla ligandi InCl3 liuokseen ja homogenisoimalla varovasti 35 huoneenlämpötilassa.

HEPES puskuri, pH 7,4 lisätään tämän jälkeen liuoksen 10"6 M muodostamiseksi.

I- 24 101967 an

ESIMERKKI 6: SUY leimattu DTPA-Phe-Cys-Phe-DTrp-Lys-I

Thr-Cys-Thr-ol 90 90 90 5 Y saadaan Sr- Y radionuklidikehittimestä. Kehitti- 90 men rakenne, eluutio ja muuttuminen [ Y]EDTA —> ase-taattikompleksi suoritetaan menetelmän mukaisesti, joka on selostettu julkaisussa M. Chinol ja D. J. Hna-towich J. Nucl. Med. 28, 1465 - 1470 (1987).

10 ,-1 1 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol liuotetaan 5 ml 0,01 M etikkahappoon ja annetaan lämmetä huoneenlämpöiseksi, ja 1,0 mCi Y 50 μΐ steriiliä 0,5 M asetaattia lisätään. Seos jätetään tämän jälkeen 15 rauhaan 30 min - 1 h kelaation maksimoimiseksi.

Yksi ryhmä keksinnön mukaisia ligandeja on somatostatiinipeptidit, esim. somatostatiinianalogit, jotka sisältävät vähintään yhdessä aminohappoyksikössä yhden kelatoivan ryhmän, joka on liittynyt mainittuun 20 aminoryhmään amidisidoksella, vapaassa tai suolan muodossa .

Yksi ryhmä keksinnön mukaisia kelaatteja on juuri edellä mainitut ligandit, jotka muodostavat kompleksin osoitettavissa olevan alkuaineen kanssa, 25 esim. metalli-ioni vapaassa tai suolan muodossa.

Claims (5)

101967

1. Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen ligandin, joka on kompleksoitu radioterapiassa käytettävän radionuklidin kanssa, valmistamiseksi, t u n -5 n e t t u siitä, että annetaan ligandin, joka käsittää somatostatiinipeptidin, jolla on kaava I CHz-S-Y! Y2-S-CH2 I I

10 RCO-N-CH-CO-B-C-Lys-E-NH-CH-G I jossa RCO- on L- tai D-Phe, -Tyr, -Trp tai -β-Nal 15 Yi ja Y2 ovat yhdessä suora sidos tai Y3 ja Y2 ovat toisistaan riippumatta vety B on -Phe-, Tyr tai fi-Nal, 20. on (L)-Trp- tai (D)-Trp- E on Thr, Ser tai Vai G on ryhmä, jolla on kaava -CO-NH-CH (R13) X3 25 jossa R13 on CH2OH, -(CH2)2-OH, -(CH2)3-OH, CH(CH3)OH, isobutyyli tai butyyli tai on Trp:n tai β-Nal:n α-hiiliatomiin liittynyt substituentti

30 X3 on -COOH, -CH2OH tai -CONH2 jossa tähteet B, Lys ja E ovat L-konfiguraatiossa ja 2- ja 7-asemassa olevat tähteet ovat kukin toisistaan riippumatta (L)- tai (D)-konfiguraatiossa, 35 101967 somatostatiinilla on ainakin yksi kelatoiva ryhmä liitettynä joko suoraan tai epäsuorasti tilaa vievän ryhmän kautta, jolla ryhmällä on kaava (ai)

5 H2N-R35-CO- jossa R35 on C^nalkyleeni tai -CH-, jossa R' R' on C1_11alkyyli, bentsyyli, naf tyyli-metyyli tai 10 pyridyyli-metyyli, mainitun peptidin N-terminaaliseen aminoryhmään, kelatoiva ryhmä on johdettu etyleenidiamiinitetraetik-kahaposta (EDTA), dietyleenitriamiinipentaetikkahapos- 15. ta (DTPA), etyleeniglykoli-O,O'-bis(2-amino-etyyli)-N,N,N',N'-tetraetikkahaposta (EGTA), N,N'-bis(hydrok-sibentsyyli)etyleenidiamiini-N,N'-dietikka-haposta (HBED), trietyleenitetramiiniheksaetikkahaposta (TTHA), substituoidusta EDTA:sta tai -DTPA 1,4,7,10-20 tetra-atsasyklododekaani-N,N',N'',N'''-tetraetikkahaposta (DOTA), 1,4,8,11-tetra-atsasyklotetra-dekaani- N,N',N'',N'''-tetraetikkahaposta (TETA), reagoida radioterapiassa käytettävän radionuklidin 25 kanssa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ligandi käsittää somatos-tatiinitähteen, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat 30. l (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-oli I I (D)Phe-Cys-Thr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 I I 35 (D) Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 I I (D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 101967 I I (D)Phe-Cys-Phe-{D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 I l 3-(2-naftyyli)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-5 ThrNH2 I-1 3-(2-naftyyli)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2 I I 10 3-(2-naftyyli)-(D)Ala-Cys-fi-Nal-(D)Trp-Lys-Val-Cys- ThrNH2 ja I I (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-fl-Nal-NH2

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että ligandin annetaan reagoida α-, β- tai Auger-elektronia emittoivan radio-nuklidin kanssa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan i i DTPA-DPhe-Cys-Phe-Dtrp-Lys-Thr-Cys-Thr-oli, joka on kopleksoitu α-, β- tai Auger-elektronia emit-25 toivan radionuklidin kanssa.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, 90 tunnettu siitä, että radionuklidi on Y. 101967