ES2972014T3 - Lípidos catiónicos de tioéster - Google Patents

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ES2972014T3 ES20727421T ES20727421T ES2972014T3 ES 2972014 T3 ES2972014 T3 ES 2972014T3 ES 20727421 T ES20727421 T ES 20727421T ES 20727421 T ES20727421 T ES 20727421T ES 2972014 T3 ES2972014 T3 ES 2972014T3
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Yi Zhang
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Abstract

La presente invención proporciona, en parte, compuestos lipídicos catiónicos de tioéster de fórmula A y subfórmulas de los mismos: o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden ser útiles para la administración y expresión de ARNm y proteínas codificadas, por ejemplo, como componente de un vehículo de administración liposomal, y en consecuencia pueden ser útiles para tratar diversas enfermedades, trastornos y afecciones, tales como aquellas asociadas con la deficiencia de uno o más proteínas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Lípidos catiónicos de tioéster
ANTECEDENTES
La administración de ácidos nucleicos se ha explorado ampliamente como una posible opción terapéutica para ciertos estados patológicos. En particular, la terapia con ARN mensajero (ARNm) se ha convertido en una opción cada vez más importante para el tratamiento de diversas enfermedades, incluidas aquellas asociadas con la deficiencia de una o más proteínas.
El documento US 2015/0376144 A1 describe "composiciones que comprenden lípidos enriquecidos estereoquímicamente para administrar ARNm".
SUMARIO
La presente invención proporciona, entre otros, una nueva clase de compuestos lipídicos catiónicos de tioéster para una mejor administraciónin vivode agentes terapéuticos, tales como ácidos nucleicos. Se contempla que los compuestos proporcionados aquí sean capaces de una administraciónin vivoaltamente eficaz al tiempo que mantienen un perfil de toxicidad favorable. La invención se expone en el conjunto de reivindicaciones anexo.
En un aspecto, se proporcionan aquí lípidos catiónicos que tienen una estructura según la Fórmula (A),
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que
cada R1 es independientemente alifático de C6-C30;
L1 es independientemente -(CR2aR2b)a-, -(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c;
cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o alquilo de C1-C6;
cada n es independientemente un número entero de 0-12;
cada a es independientemente un número entero de 1 -12;
cada b es independientemente un número entero de 1-11; y
cada c es independientemente un número entero de 1-11.
En realizaciones, cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o metilo.
En realizaciones, cada L1 es independientemente -(CH2)a-, -(CHCH3)a-,-(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c. En realizaciones, L1 es -(CH2)a-.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
(lll),
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -(CH CH3)a-.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -(CH2CH2S)bCH2CH2-, y b es 1, 2, 3 , 4 , o 5.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -CH2CH2(OCH2CH2)c-, y c es 1, 2 , 3 , 4 , o 5.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura: (vil),
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C24.
En realizaciones, cada R1 es C8H17, C10H21, o C12H25.
En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C24.
En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C24.
En realizaciones, n es 1, 2, 3 o 4.
En realizaciones, un lípido catiónico es uno cualquiera de los Compuestos 1-63.
En otro aspecto, la invención presenta una composición que comprende cualquier liposoma (por ejemplo, un liposoma que encapsula un ARNm que codifica una proteína) descrito aquí. El liposoma de la presente invención comprende un lípido catiónico descrito aquí.
En realizaciones, un ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR).
En realizaciones, un ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
En otro aspecto, la invención presenta una composición que comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma como se describe aquí. El liposoma de la presente invención comprende un lípido catiónico descrito aquí. En realizaciones, una composición comprende además uno o más lípidos seleccionados del grupo que consiste en uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, y uno o más lípidos modificados con PEG.
En realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o proteína.
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar.
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar.
En realizaciones, un ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR).
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática.
En realizaciones, un ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en una vacuna.
En realizaciones, un ARNm codifica un antígeno.
En algunos aspectos, la presente invención proporciona una composición como se describe aquí para uso en métodos para tratar una enfermedad en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto la composición como se describe aquí.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La FIG. 1 representa la producción de proteínasin vivoresultante de la administración de ARNm usando nanopartículas lipídicas que comprenden el Compuesto 30 como se describe aquí. Como se muestra en esta Figura, el uso de este compuesto permite altos niveles de producción de proteínasin vivoincluso 6 horas después de la administración.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE CIERTAS REALIZACIONES
Definiciones
Para que la presente invención se entienda más fácilmente, a continuación se definen primero ciertos términos. A lo largo de la memoria descriptiva se establecen definiciones adicionales para los siguientes términos y otros términos. Las publicaciones y otros materiales de referencia a los que se hace referencia aquí describen los antecedentes de la invención y proporcionan detalles adicionales sobre su práctica.
Aminoácidos:Como se usa aquí, el término "aminoácido", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que pueda incorporarse a una cadena polipeptídica. En algunas realizaciones, un aminoácido tiene la estructura general H2N-C(H)(R)-COOH. En algunas realizaciones, un aminoácido es un aminoácido de origen natural. En algunas realizaciones, un aminoácido es un aminoácido sintético; en algunas realizaciones, un aminoácido es un d-aminoácido; en algunas realizaciones, un aminoácido es un I-aminoácido. "Aminoácido estándar" se refiere a cualquiera de los veinte I-aminoácidos estándar que se encuentran comúnmente en los péptidos de origen natural. "Aminoácido no estándar" se refiere a cualquier aminoácido, distinto de los aminoácidos estándar, independientemente de si se prepara sintéticamente o se obtiene de una fuente natural. Como se usa aquí, "aminoácido sintético" abarca aminoácidos modificados químicamente, incluyendo, pero sin limitarse a, sales, derivados de aminoácidos (tales como amidas), y/o sustituciones. Los aminoácidos, incluyendo los aminoácidos carboxi y/o amino terminales en los péptidos, pueden modificarse mediante metilación, amidación, acetilación, grupos protectores, y/o sustitución con otros grupos químicos que pueden cambiar la vida media circulante del péptido sin afectar negativamente su actividad. Los aminoácidos pueden participar en un enlace de disulfuro. Los aminoácidos pueden comprender una o más modificaciones postraduccionales, tales como asociación con una o más entidades químicas (por ejemplo, grupos metilo, grupos acetato, grupos acetilo, grupos fosfato, restos de formilo, grupos isoprenoides, grupos sulfato, restos de polietilenglicol, restos lipídicos, restos de hidratos de carbono, restos de biotina, etc.). El término "aminoácido" se usa indistintamente con "resto de aminoácido", y puede referirse a un aminoácido libre y/o a un resto de aminoácido de un péptido. Será evidente por el contexto en el que se usa el término si se refiere a un aminoácido libre o a un resto de un péptido.
Animal:Como se usa aquí, el término "animal" se refiere a cualquier miembro del reino animal. En algunas realizaciones, "animal" se refiere a seres humanos, en cualquier etapa de desarrollo. En algunas realizaciones, "animal" se refiere a animales no humanos, en cualquier etapa de desarrollo. En ciertas realizaciones, el animal no humano es un mamífero (por ejemplo, un roedor, un ratón, una rata, un conejo, un mono, un perro, un gato, una oveja, un bóvido, un primate, y/o un cerdo). En algunas realizaciones,
los animales incluyen, pero no se limitan a, mamíferos, aves, reptiles, anfibios, peces, insectos, y/o gusanos. En algunas realizaciones, un animal puede ser un animal transgénico, un animal modificado genéticamente, y/o un clon.Aproximadamente o alrededor de:Como se usa aquí, el término "aproximadamente" o "alrededor de", aplicado a uno o más valores de interés, se refiere a un valor que es similar a un valor de referencia establecido. En ciertas realizaciones, el término "aproximadamente" o "alrededor de" se refiere a un intervalo de valores que caen dentro de 25% , 20% , 19% , 18% , 17% , 16% , 15% , 14% , 13% , 12% , 11% , 10% , 9% , 8% , 7% , 6% , 5% , 4% , 3% , 2% , 1% , o menos en cualquier dirección (mayor o menor que) del valor de referencia establecido, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto (excepto cuando tal número excedería el 100 % de un valor posible).Biológicamente activo:Como se usa aquí, la expresión "biológicamente activo" se refiere a una característica de cualquier agente que tenga actividad en un sistema biológico, y particularmente en un organismo. Por ejemplo, un agente que, cuando se administra a un organismo, tiene un efecto biológico sobre ese organismo, se considera biológicamente activo.
Administración:Como se usa aquí, el término "administración" abarca tanto la administración local como la sistémica. Por ejemplo, la administración de ARNm abarca situaciones en las que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y se retiene dentro del tejido diana (también denominada "distribución local" o "administración local"), y situaciones en en el que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y segrega en el sistema circulatorio del paciente (por ejemplo, suero) y se distribuye y absorbe sistemáticamente por otros tejidos (también denominada "distribución sistémica" o "administración sistémica") .Expresión:Como se usa aquí, "expresión" de una secuencia de ácido nucleico se refiere a la traducción de un ARNm en un polipéptido, ensamblar múltiples polipéptidos en una proteína intacta (por ejemplo, enzima) y/o la modificación postraduccional de un polipéptido o proteína completamente ensamblada (por ejemplo, enzima). En esta solicitud, los términos "expresión" y "producción", y sus equivalentes gramaticales, se usan indistintamente.
Funcional:Como se usa aquí, una molécula biológica "funcional" es una molécula biológica en una forma en la que exhibe una propiedad y/o actividad por la que se caracteriza.
Vida media:Como se usa aquí, la expresión "vida media" es el tiempo necesario para que una cantidad tal como concentración o actividad del ácido nucleico o de la proteína caiga a la mitad de su valor medido al comienzo de un período de tiempo.
Lípido auxiliar:La expresión "lípido auxiliar", como se usa aquí, se refiere a cualquier material lipídico neutro o bipolar, incluyendo el colesterol. Sin desear estar atados a una teoría particular, los lípidos auxiliares pueden añadir estabilidad, rigidez, y/o fluidez dentro de las bicapas/nanopartículas lipídicas.
Mejorar, aumentar, o reducir:Como se usan aquí, los términos "mejorar", "aumentar", o "reducir", o equivalentes gramaticales, indican valores con respecto a una medida inicial, tal como una medida en el mismo individuo antes del inicio del tratamiento descrito aquí, o una medida en un sujeto de control (o múltiples sujetos de control) en ausencia del tratamiento descrito aquí. Un "sujeto de control" es un sujeto que padece la misma forma de enfermedad que el sujeto que está siendo tratado, que tiene aproximadamente la misma edad que el sujeto que está siendo tratado.
In vitro:Como se usa aquí, la expresión”in vitro”se refiere a eventos que ocurren en un entorno artificial, por ejemplo en un tubo de ensayo o vasija de reacción, en un cultivo celular, etc., en lugar de dentro de un organismo multicelular.
In vivo:Como se usa aquí, la expresión”in vivo”se refiere a eventos que ocurren dentro de un organismo multicelular, tal como un ser humano y un animal no humano. En el contexto de los sistemas basados en células, la expresión puede usarse para referirse a eventos que ocurren dentro de una célula viva (a diferencia de, por ejemplo, los sistemasin vitro).
Aislado:Como se usa aquí, el término "aislado" se refiere a una sustancia y/o entidad que se ha (1) separado de al menos algunos de los componentes con los que estaba asociada cuando se produjo inicialmente (ya sea en la naturaleza y/o en un entorno experimental), y/o (2) producido, preparado y/o fabricado por la mano del hombre. Las sustancias y/o entidades aisladas pueden separarse de alrededor del 10 %, alrededor del 20 %, alrededor del 30 %, alrededor del 40 %, alrededor del 50 %, alrededor del 60 %, alrededor del 70 %, alrededor del 80 %, alrededor del 90 %, alrededor del 91 %, alrededor del 92 %, alrededor del 93 %, alrededor del 94 %, alrededor del 95 %, alrededor del 96 %, alrededor del 97 %, alrededor del 98 %, alrededor del 99 %, o más de alrededor del 99 % de los otros componentes con los que estaban asociadas inicialmente. En algunas realizaciones, los agentes aislados son alrededor de 80 %, alrededor de 85 %, alrededor de 90 %, alrededor de 91 %, alrededor de 92 %, alrededor de 93 %, alrededor de 94 %, alrededor de 95 %, alrededor de 96 %, alrededor de 97 %, alrededor de 98 %, alrededor de 99 %, o más de alrededor de 99 % puros. Como se usa aquí, una sustancia es "pura" si está sustancialmente libre de otros componentes. Como se usa aquí, el cálculo del porcentaje de pureza de sustancias y/o entidades aisladas no debe incluir excipientes (por ejemplo, amortiguador, disolvente, agua, etc.).
Liposoma:Como se usa aquí, el término "liposoma" se refiere a cualquier vesícula de nanopartículas laminares, multilaminares, o sólidas. Normalmente, un liposoma como se usa aquí puede formarse mezclando uno o más lípidos, o mezclando uno o más lípidos y polímero o polímeros. En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para la presente invención contiene lípido o lípidos catiónicos y opcionalmente lípido o lípidos no catiónicos, opcionalmente lípido o lípidos a base de colesterol, y/o opcionalmente lípido o lípidos modificados con PEG.
ARN mensajero (ARNm):Como se usa aquí, la expresión "ARN mensajero (ARNm)" o "ARNm" se refiere a un polinucleótido que codifica al menos un polipéptido. El ARNm, como se usa aquí, abarca tanto ARN modificado como no modificado. La expresión "ARNm modificado" se refiere a un ARNm que comprende al menos un nucleótido químicamente modificado; el ARNm puede contener una o más regiones codificantes y no codificantes. El ARNm puede purificarse a partir de fuentes naturales, producirse usando sistemas de expresión recombinantes y opcionalmente purificarse, sintetizarse químicamente, etc. Cuando sea apropiado, por ejemplo en el caso de moléculas sintetizadas químicamente, el ARNm puede comprender análogos de nucleósidos tales como análogos que tienen bases o azúcares modificados químicamente, modificaciones de la cadena principal, etc. Una secuencia de ARNm se presenta en la dirección 5' a 3', a menos que se indique lo contrario. En algunas realizaciones, un ARNm es o comprende nucleósidos naturales (por ejemplo, adenosina, guanosina, citidina, uridina); análogos de nucleósidos (por ejemplo, 2-aminoadenosina, 2-tiotimidina, inosina, pirrolo-pirimidina, 3-metil adenosina, 5-metilcitidina, C-5 propinilcitidina, C-5 propinil-uridina, 2-aminoadenosina, C5 bromuridina, CS-fluorouridina, C5-yodouridina, C5-propinil-uridina, C5-propinil-citidina, C5-metilcitidina, 2-aminoadenosina, 7-desazaadenosina, 7-desazaguanosina, 8-oxoadenosina, 8-oxoguanosina, O(6)-metilguanina y 2-tiocitidina); bases químicamente modificadas; bases biológicamente modificadas (por ejemplo, bases metiladas); bases intercaladas; azúcares modificados (por ejemplo, 2'-fluororibosa, ribosa, 2'-desoxirribosa, arabinosa, y hexosa); y/o grupos fosfato modificados (por ejemplo, fosforotioatos y enlaces de 5'-N-fosforamidito).
Ácido nucleico:Como se usa aquí, la expresión "ácido nucleico", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que está o puede incorporarse a una cadena polinucleotídica. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un compuesto y/o sustancia que se incorpora o se puede incorporar en una cadena polinucleotídica mediante un enlace de fosfodiéster. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a restos de ácido nucleico individuales (por ejemplo, nucleótidos y/o nucleósidos). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a una cadena polinucleotídica que comprende restos de ácido nucleico individuales. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ARN así como ADN y/o ADNc monocatenario y/o bicatenario. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ácidos ribonucleicos (ARN), que incluyen, pero no se limitan a, uno o más ARN de interferencia (ARNi), ARN de interferencia pequeño (ARNip), ARN de horquilla corta (ARNhc), ARN antisentido (ARNa), ARN mensajero (ARNm), ARN mensajero modificado (ARNmm), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ácido nucleico codificante multimérico (MCNA), ácido nucleico codificante polimérico (PCNA), ARN guía (ARNg) y ARN de CRISPR (ARNcr). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ácido desoxirribonucleico (ADN), que incluye, pero no se limita a, uno o más de ADN monocatenario (ADNmc), ADN bicatenario (ADNbc) y ADN complementario (ADNc). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca tanto ARN como ADN. En realizaciones, el ADN puede estar en forma de ADN antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, un producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (por ejemplo, P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), casetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico, o derivados de estos grupos. En realizaciones, el ARN puede estar en forma de ARN mensajero (ARNm), ARN ribosómico (ARNr), ARN de partículas de reconocimiento de señal (ARN 7 SL o ARN SRP), ARN de transferencia (ARNt), ARN mensajero de transferencia (ARNtm), ARN nuclear pequeño (ARNnp), ARN nucleolar pequeño (RNAnop), ARN SmY, ARN pequeño específico del cuerpo de Cajal (ARNpca), ARN guía (ARNg), ribonucleasa P (ARNasa P), ARN Y, componente de ARN de telomerasa (TERC),<a>R<n>líder ayustado (ARN SL), ARN antisentido (ARNa o ARNas), transcrito antisentido natural cis (cis-NAT),<a>R<n>de CRISPR (ARNcr), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ARN que interactúa con piwi (piARN), ARN de interferencia pequeño (ARNip), ARNip de transacción (ARNipta), ARNip asociado a repetición (ARNipar), ARN de 73 K, retrotransposones, un genoma viral, un viroide, ARN satélite, o derivados de estos grupos. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica una proteína, tal como una enzima.
Paciente:Como se usa aquí, el término "paciente" o "sujeto" se refiere a cualquier organismo al que se le puede administrar una composición proporcionada, por ejemplo con fines experimentales, de diagnóstico, profilácticos, cosméticos, y/o terapéuticos. Los pacientes típicos incluyen animales (por ejemplo, mamíferos tales como ratones, ratas, conejos, primates no humanos, y/o seres humanos). En algunas realizaciones, un paciente es un ser humano. Un ser humano incluye formas pre- y posnatales.
Farmacéuticamente aceptable:La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa aquí, se refiere a sustancias que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuadas para uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional con una relación beneficio/riesgo razonable.
Sal farmacéuticamente aceptable:Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, SM Berge et al. describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66:1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Ejemplos de sales de adición de ácidos no tóxicas y farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, y ácido perclórico, o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, o ácido malónico, o usando otros métodos usados en la técnica, tales como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canfosulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato, y similares. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalino-térreos, amonio y N+(alquilo de C1-4K Las sales representativas de metales alcalinos o alcalino-térreos incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y similares. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen, cuando sea apropiado, cationes no tóxicos de amonio, amonio cuaternario y amina formadas usando contraiones tales como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato, y arilsulfonato. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales formadas a partir de la cuaternización de una amina usando un electrófilo apropiado, por ejemplo un haluro de alquilo, para formar una sal de amino alquilada cuaternizada.
Sistémico, distribución o administración:Como se usan aquí, las expresiones "distribución sistémica" o "administración sistémica", o equivalentes gramaticales de las mismas, se refieren a un mecanismo o enfoque de administración o distribución que afecta a todo el cuerpo o a un organismo completo. Normalmente, la distribución o administración sistémica se logra a través del sistema circulatorio del cuerpo, por ejemplo el torrente sanguíneo. En comparación con la definición de "distribución o administración local".
Sujeto: Como se usa aquí, el término "sujeto" se refiere a un ser humano o cualquier animal no humano (por ejemplo, ratón, rata, conejo, perro, gato, ganado vacuno, cerdos, ovejas, caballos o primates). Un ser humano incluye formas pre- y posnatales. En muchas realizaciones, un sujeto es un ser humano. Un sujeto puede ser un paciente, que se refiere a un ser humano que se presenta a un proveedor médico para el diagnóstico o tratamiento de una enfermedad. El término "sujeto" se usa aquí indistintamente con "individuo" o "paciente". Un sujeto puede sufrir o ser susceptible a una enfermedad o trastorno, pero puede mostrar o no síntomas de la enfermedad o trastorno.
Sustancialmente:Como se usa aquí, el término "sustancialmente" se refiere a la condición cualitativa de exhibir una extensión o grado total o casi total de una característica o propiedad de interés. Alguien con conocimientos normales en las técnicas biológicas comprenderá que los fenómenos biológicos y químicos rara vez, o nunca, llegan a su fin y/o transcurren hasta su plenitud o logran o evitan un resultado absoluto. Por lo tanto, el término "sustancialmente" se usa aquí para expresar la posible falta de completitud inherente a muchos fenómenos biológicos y químicos.
Tejidos diana:Como se usa aquí, la expresión "tejidos diana" se refiere a cualquier tejido que esté afectado por una enfermedad a tratar. En algunas realizaciones, los tejidos diana incluyen aquellos tejidos que presentan patología, síntoma o característica asociada a la enfermedad.
Cantidad terapéuticamente eficaz:Como se usa aquí, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" de un agente terapéutico significa una cantidad que es suficiente, cuando se administra a un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección, para tratar, diagnosticar, prevenir, y/o retrasar la aparición del o de los síntomas de la enfermedad, trastorno, y/o afección. Los expertos en la técnica apreciarán que una cantidad terapéuticamente eficaz normalmente se administra mediante un régimen de dosificación que comprende al menos una dosis unitaria.
Tratar:Como se usa aquí, el término "tratar", "tratamiento" o "tratando" se refiere a cualquier método usado para aliviar, mejorar, mitigar, inhibir, prevenir, retrasar la aparición, reducir la gravedad, y/o reducir la incidencia, de forma parcial o completa, de uno o más síntomas o características de una enfermedad, trastorno, y/o afección particular. El tratamiento se puede administrar a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad, y/o que muestra sólo signos tempranos de la enfermedad, con el fin de disminuir el riesgo de desarrollar patología asociada con la enfermedad.
Alifático:Como se usa aquí, el término alifático se refiere a hidrocarburos de C1-C40, e incluye hidrocarburos tanto saturados como insaturados. Un alifático puede ser lineal, ramificado, o cíclico. Por ejemplo, los alifáticos de C1-C20 pueden incluir alquilos de C1-C20 (por ejemplo, alquilos saturados de C1-C20 lineales o ramificados), alquenilo de C2-C20 (por ejemplo, dienilos de C4-C20 lineales o ramificados, trienilo s de C6-C20 lineales o ramificados, y similares), y alquinilos de C2-C20 (por ejemplo, alquinilos de C2-C20 lineales o ramificados). Los alifáticos de C1-C20 pueden incluir alifáticos de C3-C20 cíclicos (por ejemplo, cicloalquilos de C3-C20, cicloalquenilos de C4-C20, o cicloalquinilos de C8-C20). En ciertas realizaciones, el alifático puede comprender uno o más alifáticos cíclicos y/o uno o más heteroátomos, tales como oxígeno, nitrógeno o azufre, y puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo, halo, alcoxilo, hidroxi, amino, arilo, éter, éster o amida. Un grupo alifático no está sustituido o está sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe aquí. Por ejemplo, un alifático puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO2H, - CO2R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO2R', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' o -SO2R', en los que cada aparición de R' es independientemente alifático de C1-C20 (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3). En realizaciones, R' es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C3-C3, no sustituido). En realizaciones, R' es independientemente alquilo de C1-C3 no sustituido. En realizaciones, el alifático no está sustituido. En realizaciones, el alifático no incluye ningún heteroátomo.
Alquilo:Como se usa aquí, el término "alquilo" significa grupos hidrocarbonados acíclicos lineales y ramificados, por ejemplo "alquilo de C1-C30" se refiere a grupos alquilo que tienen 1-30 carbonos. Un grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, terc-pentilhexilo, isohexilo, etc. La expresión "alquilo inferior" significa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificado, que tiene 1 a 6 átomos de carbono. Otros grupos alquilo serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción. Un grupo alquilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe aquí. Por ejemplo, un grupo alquilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO2H, -CO2R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO2R', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' o-SO2R', en los que cada aparición de R' es independientemente alifático de C3-C20 (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3). En realizaciones, R' es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3, no sustituido). En realizaciones, R' es independientemente alquilo de C1-C3 no sustituido. En realizaciones, el alquilo está sustituido (por ejemplo, con 1, 2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe aquí). En realizaciones, un grupo alquilo está sustituido con un grupo -OH, y también puede denominarse aquí como un grupo "hidroxialquilo", en el que el prefijo denota el grupo -OH, y "alquilo" es como se describe aquí.
Colocar el sufijo "-eno" en un grupo indica que el grupo es un resto divalente, por ejemplo arileno es el resto divalente de arilo, y heteroarileno es el resto divalente de heteroarilo.
Alquileno:El término "alquileno", como se usa aquí, representa un grupo hidrocarbonado divalente saturado de cadena lineal o ramificada, y está ejemplificado por metileno, etileno, isopropileno y similares. Asimismo, el término "alquenileno", como se usa aquí, representa un grupo hidrocarbonado divalente insaturado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena, y el término "alquinileno" representa aquí un grupo hidrocarbonado divalente insaturado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena. En ciertas realizaciones, un grupo alquileno, alquenileno, o alquinileno puede comprender uno o más alifáticos cíclicos y/o uno o más heteroátomos, tales como oxígeno, nitrógeno o azufre, y puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo, halo, alcoxilo, hidroxi, amino, arilo, éter, éster o amida. Por ejemplo, un alquileno, alquenileno, o alquinileno puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO2H, -CO2R',
-CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO2R', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' o -SO2R', en los que cada aparición de R' es independientemente alifático de C1-C20 (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3). En realizaciones, R' es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3, no sustituido). En realizaciones, R' es independientemente alquilo de C1-C3 no sustituido. En ciertas realizaciones, un alquileno, alquenileno, o alquinileno no está sustituido. En ciertas realizaciones, un alquileno, alquenileno o alquinileno no incluye ningún heteroátomo.
Alquenilo:Como se usa aquí, "alquenilo" significa cualquier cadena hidrocarbonada, lineal o ramificada, que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena; por ejemplo, "alquenilo de C2-C30" se refiere a un grupo alquenilo que tiene 2-30 carbonos. Por ejemplo, un grupo alquenilo incluye prop-2-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo, 2-metilprop-2-enilo, hex-2-enilo, hex-5-enilo, 2,3-dimetilbutil-2-enilo, y similares. En realizaciones, el alquenilo comprende 1,2 o 3 dobles enlaces carbono-carbono. En realizaciones, el alquenilo comprende un único doble enlace carbono-carbono. En realizaciones, se conjugan múltiples dobles enlaces (por ejemplo, 2 o 3). Un grupo alquenilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe aquí. Por ejemplo, un grupo alquenilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO2H, -CO2R', -CN, -O<h>, -O<r>', -O<c>O<r>', -OCO2R', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' o-SO2R', en los que cada aparición de R' es independientemente alifático de C1-C20 (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3). En realizaciones, R' es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3, no sustituido). En realizaciones, R' es independientemente alquilo de C1-C3 no sustituido. En realizaciones, el alquenilo no está sustituido. En realizaciones, el alquenilo está sustituido (por ejemplo, con 1,2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe aquí). En realizaciones, un grupo alquenilo está sustituido con un grupo -OH, y también puede denominarse aquí como un grupo "hidroxialquenilo", en el que el prefijo indica el grupo -OH, y "alquenilo" es como se describe aquí.
Alquinilo:Como se usa aquí, "alquinilo" significa cualquier cadena hidrocarbonada de configuración lineal o ramificada, que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono que se encuentran en cualquier punto estable a lo largo de la cadena; por ejemplo, "alquinilo de C2-C30" se refiere a un grupo alquinilo que tiene 2-30 carbonos. Ejemplos de un grupo alquinilo incluyen prop-2-inilo, but-2-inilo, but-3-inilo, pent-2-inilo, 3-metilpent-4-inilo, hex-2-inilo, hex-5-inilo, etc. En realizaciones, un alquinilo comprende un triple enlace carbono-carbono. Un grupo alquinilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe aquí. Por ejemplo, un grupo alquinilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO2H, -CO2R', - CN, -OH, -OR', -OCOR',
-OCO2R', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' o -SO2R', en el que cada aparición de R' es independientemente alifático de C1-C20 (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3). En realizaciones, R' es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C1-C15, alquilo de C1-C10, o alquilo de C1-C3, no sustituido). En realizaciones, R' es independientemente alquilo de C1-C3 no sustituido. En realizaciones, el alquinilo no está sustituido. En realizaciones, el alquinilo está sustituido (por ejemplo, con 1, 2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe aquí).
Arilo:El término "arilo", usado solo o como parte de un resto más grande como en "aralquilo", se refiere a un sistema anular carbocíclico monocíclico, bicíclico o tricíclico, que tiene un total de seis a catorce miembros anulares, en el que dicho sistema anular tiene un único punto de unión al resto de la molécula, al menos un anillo en el sistema es aromático, y en el que cada anillo en el sistema contiene 4 a 7 miembros anulares. En realizaciones, un grupo arilo tiene 6 átomos de carbono anulares ("arilo de C6", por ejemplo fenilo). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 10 átomos de carbono anulares ("arilo de C10", por ejemplo naftilo, tal como 1 -naftilo y 2-naftilo). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 14 átomos de carbono anulares ("arilo de C14", por ejemplo antracilo). "Arilo" también incluye sistemas anulares en los que el anillo de arilo, como se define anteriormente, está condensado con uno o más grupos carbociclilo o heterociclilo, en los que el radical o punto de unión está en el anillo de arilo, y en tales casos, el número de átomos de carbono continúa para designar el número de átomos de carbono en el sistema anular de arilo. Los arilos ejemplares incluyen fenilo, naftilo, y antraceno.
Arileno:El término "arileno", como se usa aquí, se refiere a un grupo arilo que es divalente (es decir, que tiene dos puntos de unión a la molécula). Los arilenos ejemplares incluyen fenileno (por ejemplo, fenileno no sustituido o fenileno sustituido).
Halógeno:Como se usa aquí, el término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo, o yodo.
Heteroalquilo:El término "heteroalquilo" significa un grupo alquilo, alquenilo, o alquinilo, ramificado o no ramificado, que tiene de 1 a 14 átomos de carbono, además de 1,2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, O, S y P. Los heteroalquilos incluyen aminas terciarias, aminas secundarias, éteres, tioéteres, amidas, tioamidas, carbamatos, tiocarbamatos, hidrazonas, iminas, fosfodiésteres, fosforamidatos, sulfonamidas, y disulfuros. Un grupo heteroalquilo puede incluir opcionalmente anillos monocíclicos, bicíclicos, o tricíclicos, en el que cada anillo tiene deseablemente tres a seis miembros. Ejemplos de heteroalquilos incluyen poliéteres, tales como metoximetilo y etoxietilo.
Heteroalquileno:El término "heteroalquileno", como se usa aquí, representa una forma divalente de un grupo heteroalquilo como se describe aquí.
Heteroarilo:El término "heteroarilo", como se usa aquí, es un anillo que contiene un heteroátomo, completamente insaturado, en el que al menos un átomo anular es un heteroátomo tal como, pero sin limitarse a, nitrógeno y oxígeno.
Heterocicloalquilo:El término "heterocicloalquilo", como se usa aquí, es un anillo no aromático en el que al menos un átomo es un heteroátomo, tal como, pero sin limitarse a, nitrógeno, oxígeno, azufre, o fósforo, y los átomos restantes son carbono. El grupo heterocicloalquilo puede estar sustituido o no sustituido.
Compuestos de la invención
Los vehículos basados en liposomas se consideran un vehículo atractivo para agentes terapéuticos, y siguen sujetos a esfuerzos de desarrollo continuos. Si bien los vehículos basados en liposomas que comprenden ciertos componentes lipídicos han mostrado resultados prometedores con respecto al encapsulamiento, la estabilidad, y la localización del sitio, sigue existiendo una gran necesidad de mejorar los sistemas de administración basados en liposomas. Por ejemplo, un inconveniente importante de los sistemas de administración liposomales se refiere a la construcción de liposomas que tienen suficiente cultivo celular o estabilidad in vivo para alcanzar las células diana y/o compartimentos intracelulares deseados, y la capacidad de tales sistemas de administración liposomales para liberar eficientemente sus materiales encapsulados a tales células diana.
En particular, sigue existiendo la necesidad de compuestos lipídicos mejorados que demuestren propiedades farmacocinéticas mejoradas y que sean capaces de administrar macromoléculas, tales como ácidos nucleicos, a una amplia variedad de tipos de células y tejidos con mayor eficiencia. De forma importante, también sigue existiendo una necesidad particular de nuevos compuestos lipídicos que se caractericen por tener una toxicidad reducida y sean capaces de administrar eficientemente ácidos nucleicos y polinucleótidos encapsulados a células, tejidos y órganos específicos.
Se describe aquí una nueva clase de compuestos lipídicos catiónicos de tioéster para una mejor administración in vivo de agentes terapéuticos, tales como ácidos nucleicos. En particular, un lípido catiónico de tioéster descrito aquí se puede usar como un lípido catiónico, opcionalmente con otros lípidos, para formular una nanopartícula basada en lípidos (por ejemplo, liposoma) para encapsular agentes terapéuticos, tales como ácidos nucleicos (por ejemplo, ADN, ARNip, ARNm, microARN) para uso terapéutico.
En realizaciones, los compuestos descritos aquí pueden proporcionar una o más características o propiedades deseadas. Es decir, en ciertas realizaciones, los compuestos descritos aquí se pueden caracterizar por tener una o más propiedades que proporcionan a tales compuestos ventajas con respecto a otros lípidos clasificados de manera similar. Por ejemplo, los compuestos descritos aquí pueden permitir el control y la adaptación de las propiedades de las composiciones liposomales (por ejemplo, nanopartículas lipídicas) de las que son un componente. En particular, los compuestos descritos aquí pueden caracterizarse por eficiencias de transfección mejoradas y su capacidad para provocar resultados biológicos específicos. Tales resultados pueden incluir, por ejemplo, una captación celular mejorada, capacidades de alteración endosómica/lisosomal, y/o promoción de la liberación de materiales encapsulados (por ejemplo, polinucleótidos) intracelularmente. Además, los compuestos descritos aquí tienen propiedades farmacocinéticas, biodistribución, y eficiencia ventajosas (por ejemplo, debido a las diferentes tasas de disociación del grupo polimérico usado).
Compuestos de Fórmula (A)
Se proporcionan aquí compuestos que son lípidos catiónicos. Por ejemplo, los lípidos catiónicos de la presente invención incluyen compuestos que tienen una estructura según la Fórmula (A),
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que
cada R1 es independientemente alifático de C6-C30;
L1 es independientemente -(CR2aR2b)a-, -(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c-;
cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o alquilo de C1-C6;
cada n es independientemente un número entero de 0-1,2;
cada a es independientemente un número entero de 1 -12;
cada b es independientemente un número entero de 1-11; y
cada c es independientemente un número entero de 1-11.
En realizaciones, cada n es independientemente un número entero de 0-12, 0-10, 0-6, 0-4, o 0-2. En realizaciones, n es 1, 2, 3, o 4. En realizaciones, cada n es 0. En realizaciones, cada n es 1. En realizaciones, cada n es 2. En realizaciones, cada n es 3. En realizaciones, cada n es 4. En realizaciones, cada n es 5. En realizaciones, cada n es 6. En realizaciones, cada n es 7. En realizaciones, cada n es 8. En realizaciones, cada n es 9. En realizaciones, cada £■ es 10. En realizaciones, cada n es 11. En realizaciones, cada n es 12.
En realizaciones, cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o metilo.
En realizaciones, cada L1 es independientemente -(CH2)a-, -(CHCH3)a-, -(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c-.
En realizaciones, L1 es -(CH2)a-. En realizaciones, cada a es independientemente un número entero de 1-10, 1-8, o 1 6. En realizaciones, cada a es independientemente 1, 2, 3, 4, 5, o 6. En realizaciones, cada a es independientemente 1. En realizaciones, cada a es independientemente 2. En realizaciones, cada a es independientemente 3. En realizaciones, cada a es independientemente 4. En realizaciones, cada a es independientemente 5. En realizaciones, cada a es independientemente 6. En realizaciones, cada a es independientemente 7. En realizaciones, cada a es independientemente 8. En realizaciones, cada a es independientemente 9. En realizaciones, cada a es independientemente 10. En realizaciones, cada a es independientemente 11. En realizaciones, cada a es independientemente 12.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -(CHCH3)a-. En realizaciones, cada a es independientemente un número entero de 1- 10, 1-8, o 1 -6. En realizaciones, cada a es independientemente 1, 2 , 3 , 4 , 5 , o 6. En realizaciones, cada a es 1. En realizaciones, cada a es 2. En realizaciones, cada a es 3. En realizaciones, cada a es 4. En realizaciones, cada a es 5. En realizaciones, cada a es 6. En realizaciones, cada a es 7. En realizaciones, cada a es 8. En realizaciones, cada a es independientemente 9. En realizaciones, cada a es independientemente 10. En realizaciones, cada a es independientemente 11. En realizaciones, cada a es independientemente 12.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -(CH2CH2S)bCH2CH2-. En realizaciones, cada a es independientemente un número entero de 1-10, 1 -8, o 1 -6. En realizaciones, b es 1, 2 , 3 , 4 , o 5. En realizaciones, cada b es 1. En realizaciones, cada b es 2. En realizaciones, cada b es 3. En realizaciones, cada b es 4. En realizaciones, cada b es 5. En realizaciones, cada b es 6. En realizaciones, cada b es 7. En realizaciones, cada b es 8. En realizaciones, cada b es 9. En realizaciones, cada b es 10. En realizaciones, cada b es 11.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, L1 es -CH2CH2(OCH2CH2)c-. En realizaciones, c es un número entero de 1- 10, 1-8 , o 1-6. En realizaciones, c es 1, 2 , 3 , 4, o 5. En realizaciones, c es 1. En realizaciones, c es 2. En realizaciones, c es 3. En realizaciones, c es 4. En realizaciones, c es 5. En realizaciones, c es 6. En realizaciones, c es 7. En realizaciones, c es 8. En realizaciones, c es 9. En realizaciones, c es 10. En realizaciones, c es 11.
Tabla I.
En realizaciones, un lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
(vil),
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C30. En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C30 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C30 sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C24. En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C24 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquilo de C6-C24 sustituido. En realizaciones, un alquilo es un alquilo ramificado. En realizaciones, un alquilo es un alquilo lineal. En realizaciones, cada R1 es C8H17, C10H21, o C12H25.
En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C30. En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C30 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C30 sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C24. En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C24 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquenilo de C6-C24 sustituido.
En realizaciones, un alquenilo es un alquenilo ramificado. En realizaciones, un alquenilo es un alquenilo lineal. En realizaciones, un alquenilo es un monoalquenilo. En realizaciones, un alquenilo es un dienilo. En realizaciones, un alquenilo es un trienilo.
En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C30. En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C30 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C30 sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C24. En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C24 no sustituido. En realizaciones, cada R1 es alquinilo de C6-C24 sustituido.
En realizaciones, un alquenilo es un alquinilo ramificado. En realizaciones, un alquenilo es un alquinilo lineal.
En realizaciones, cada R1 es el mismo.
Compuestos ejemplares
En realizaciones, un lípido catiónico es uno cualquiera de los Compuestos 1-63.
En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 1. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 2. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 3. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 4. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 5. realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 6. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 7. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 8. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 9. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 10. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 11. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 12. E realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 13. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 14. E realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 15. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 16. E realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 17 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 18. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 19 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 20. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 21 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 22. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 23 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 24. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 25 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 26. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 27 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 28. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 29 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 30. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 31 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 32. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 33 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 34. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 35 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 36. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 37 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 38. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 39 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 40. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 41 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 42. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 43 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 44. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 45 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 46. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 47 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 48. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 49 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 50. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 51 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 52. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 53 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 54. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 55 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 56. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 57 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 58. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 59 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 60. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 61 En realizaciones, un ípido catiónico es e Compuesto 62. En realizaciones, un lípido catiónico es el Compuesto 63.
Síntesis de compuestos de la invención
Los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden preparar según métodos conocidos en la técnica, incluidas las síntesis ejemplares de los Ejemplos proporcionadas aquí.
Ácidos nucleicos
Los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden usar para preparar composiciones útiles para la administración de ácidos nucleicos.
Síntesis de ácidos nucleicos
Los ácidos nucleicos que pueden usarse en la presente invención pueden sintetizarse según cualquier método conocido. Por ejemplo, los ARNm que se pueden usar en la presente invención se pueden sintetizar mediante transcripciónin vitro(IVT). Brevemente, la IVT generalmente se realiza con un molde de ADN lineal o circular que contiene un promotor, un conjunto de ribonucleótido trifosfatos, un sistema amortiguador que puede incluir DTT e iones de magnesio, y una ARN polimerasa apropiada (por ejemplo, ARN polimerasa de T3, T7, T7 mutada, o SP6), ADNasa I, pirofosfatasa, y/o inhibidor de ARNasa. Las condiciones exactas variarán según la aplicación específica.
En algunas realizaciones, para la preparación de ARNm que puede usarse en la invención, un molde de ADN se transcribein vitro.Un molde de ADN adecuado normalmente tiene un promotor, por ejemplo un promotor T3, T7, T7 mutado, o SP6, para la transcripciónin vitro,seguido de la secuencia nucleotídica deseada para el ARNm deseado, y una señal de terminación.
La o las secuencias de ARNm deseadas según la invención pueden determinarse e incorporarse en un molde de ADN usando métodos estándar. Por ejemplo, a partir de una secuencia de aminoácidos deseada (por ejemplo, una secuencia enzimática), se lleva a cabo una traducción inversa virtual basada en el código genético degenerado. Después, se pueden usar algoritmos de optimización para la selección de codones adecuados. Normalmente, por un lado, el contenido de G/C se puede optimizar para lograr el contenido de G/C más alto posible, y por otro lado, teniendo en cuenta lo mejor posible la frecuencia de los ARNt según el uso de codones. La secuencia de ARN optimizada puede establecerse y visualizarse, por ejemplo, con la ayuda de un dispositivo de visualización adecuado, y puede compararse con la secuencia original (tipo salvaje). También se puede analizar una estructura secundaria para calcular propiedades o, respectivamente, regiones del ARN estabilizadoras y desestabilizadoras.
Como se describió anteriormente, la expresión "ácido nucleico", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que está o puede incorporarse a una cadena polinucleotídica. El ADN puede estar en forma de ADN antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, un producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (por ejemplo, P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), casetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico, o derivados de estos grupos. El ARN puede estar en forma de ARN mensajero (ARNm), ARN ribosómico (ARNr), ARN de partículas de reconocimiento de señal (ARN 7 SL o ARN SRP), ARN de transferencia (ARNt), ARN mensajero de transferencia (ARNtm), ARN nuclear pequeño (ARNnp), ARN nucleolar pequeño (RNAnop), ARN SmY, ARN pequeño específico del cuerpo de Cajal (ARNpca), ARN guía (ARNg), ribonucleasa P (ARNasa P), Ar N Y, componente de ARN de telomerasa (t Er C), ARN líder ayustado (ARN SL), Ar N antisentido (ARNa o ARNas), transcrito antisentido natural cis (cis-NAT), ARN de CRISPR (ARNcr), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ARN que interactúa con piwi (piARN), ARN de interferencia pequeño (ARNip), ARNip de transacción (ARNipta), ARNip asociado a repetición (ARNipar), ARN de 73 K, retrotransposones, un genoma viral, un viroide, ARN satélite, o derivados de estos grupos. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica una proteína.
Síntesis de ARNm
Los ARNm que se pueden usar en la presente invención se pueden sintetizar según cualquiera de una variedad de métodos conocidos. Por ejemplo, los ARNm que se pueden usar en la presente invención se pueden sintetizar mediante transcripciónin vitro(IVT). Brevemente, la IVT generalmente se realiza con un molde de ADN lineal o circular que contiene un promotor, un conjunto de ribonucleótido trifosfatos, un sistema amortiguador que puede incluir DTT e iones de magnesio, y una ARN polimerasa apropiada (por ejemplo, ARN polimerasa de T3, T7, o SP6), ADNasa I, pirofosfatasa, y/o inhibidor de ARNasa. Las condiciones exactas variarán según la aplicación específica. La presencia de estos reactivos es indeseable en el producto final según varias realizaciones, y por lo tanto pueden denominarse impurezas, y una preparación que contiene una o más de estas impurezas puede denominarse preparación impura. En algunas realizaciones, la transcripciónin vitrose produce en un único lote.
En algunas realizaciones, para la preparación de ARNm que puede usarse en la invención, un molde de ADN se transcribein vitro.Un molde de ADN adecuado normalmente tiene un promotor, por ejemplo un promotor T3, T7, o SP6, para la transcripciónin vitro,seguido de la secuencia nucleotídica deseada para el ARNm deseado, y una señal de terminación.
La o las secuencias de ARNm deseadas que se pueden usar en la invención pueden determinarse e incorporarse en un molde de ADN usando métodos estándar. Por ejemplo, a partir de una secuencia de aminoácidos deseada (por ejemplo, una secuencia enzimática), se lleva a cabo una traducción inversa virtual basada en el código genético degenerado. Después, se pueden usar algoritmos de optimización para la selección de codones adecuados. Normalmente, por un lado, el contenido de G/C se puede optimizar para lograr el contenido de G/C más alto posible, y por otro lado, teniendo en cuenta lo mejor posible la frecuencia de los ARNt según el uso de codones. La secuencia de ARN optimizada puede establecerse y visualizarse, por ejemplo, con la ayuda de un dispositivo de visualización adecuado, y puede compararse con la secuencia original (tipo salvaje). También se puede analizar una estructura secundaria para calcular propiedades o, respectivamente, regiones del ARN estabilizadoras y desestabilizadoras.
ARNm modificado
En algunas realizaciones, el ARNm que se puede usar en la presente invención se puede sintetizar como ARNm modificado o no modificado. El ARNm modificado comprende modificaciones de nucleótidos en el ARN. Por lo tanto, un ARNm modificado que se puede usar en la invención puede incluir modificaciones de nucleótidos que son, por ejemplo, modificaciones de la cadena principal, modificaciones del azúcar o modificaciones de las bases. En algunas realizaciones, los ARNm pueden sintetizarse a partir de nucleótidos y/o análogos de nucleótidos (nucleótidos modificados) de origen natural que incluyen, pero no se limitan a, purinas (adenina (A), guanina (G)) o pirimidinas (timina (T), citosina (C), uracilo (U)), y como análogos de nucleótidos modificados o derivados de purinas y pirimidinas, tales como, por ejemplo, 1-metil-adenina, 2-metil-adenina, 2-metiltio-N-6-isopentenil-adenina, N6-metil-adenina, N6-isopentenil-adenina, 2-tio-citosina, 3-metil-citosina, 4-acetil-citosina, 5-metil-citosina, 2,6-diaminopurina, 1-metilguanina, 2-metil-guanina, 2,2-dimetil-guanina, 7-metil-guanina, inosina, 1-metil-inosina, pseudouracilo (5-uracilo), dihidrouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5- carboximetilaminometil-2-tiouracilo, 5-(carboxihidroximetil)-uracilo, 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-carboximetilaminometil-uracilo, 5-metil-2-tiouracilo, 5-metiluracilo, éster metílico del ácido N-uracil-5-oxiacético, 5-metilaminometil-uracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouracilo, 5'-metoxicarbonilmetil-uracilo, 5-metoxi-uracilo, éster metílico del ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v), 1-metil-pseudouracilo, queuosina, beta-D-manosil-queuosina, wybutoxosina, y fosforamidatos, fosforotioatos, nucleótidos peptídicos, metilfosfonatos, 7-desazaguanosina, 5-metilcitosina, e inosina. La preparación de tales análogos es conocida por un experto en la técnica, por ejemplo desde la patente de EE. UU. n° 4.373.071, la patente de EE. UU. n° 4.401.796, la patente de EE. UU. n° 4.415.732, la patente de EE. UU. n° 4.458.066, la patente de EE. UU. n° 4.500.707, la patente de EE. UU. n° 4.668.777, la patente de EE. UU. n° 4.973.679, la patente de EE. UU. n° 5.047.524, la patente de EE. UU. n25.132.418, la patente de EE. UU. n25.153.319, las patentes de EE. UU. n.25.262.530 y 5.700.642.
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones de la cadena principal del ARN. Normalmente, una modificación de la cadena principal es una modificación en la que los fosfatos de la cadena principal de los nucleótidos contenidos en el ARN se modifican químicamente. Las modificaciones de la cadena principal ejemplares normalmente incluyen, pero no se limitan a, modificaciones del grupo que consiste en metilfosfonatos, metilfosforamidatos, fosforamidatos, fosforotioatos (por ejemplo, citidina 5'-O-(1-tiofosfato)), boranofosfatos, grupos guanidinio cargados positivamente, etc., lo que significa sustituir el enlace de fosfodiéster por otros grupos aniónicos, catiónicos o neutros.
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones del azúcar. Una modificación del azúcar típica es una modificación química del azúcar de los nucleótidos que contiene, incluidas, pero sin limitarse a, modificaciones del azúcar escogidas del grupo que consiste en 4'-tio-ribonucleótido (véase, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. n.° US 2016/0031928), 2'-desoxi-2'-fluoro-oligoribonucleótido (2'-fluoro-2'-desoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-fluoro-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato), 2'-desoxi-2'-desamino-oligorribonucleótido (2'-amino-2'-desoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-amino-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato), 2'-O-alquiloligorribonucleótido, 2'-desoxi-2'-C-alquiloligorribonucleótido (2'-O-metilcitidina 5'-trifosfato, 2'-metiluridina 5'-trifosfato), 2'-C-alquiloligorribonucleótido, y sus isómeros (2'-aracitidina 5'-trifosfato, 2'-arauridina 5'-trifosfato), o azidotrifosfatos (2'-azido-2'-desoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-azido-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato).
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones de las bases de los nucleótidos (modificaciones de las bases). Un nucleótido modificado que contiene una modificación de las bases también se denomina nucleótido modificado en la base. Ejemplos de tales nucleótidos modificados en la base incluyen, pero no se limitan a, 2-amino-6-cloropurina ribósido 5'-trifosfato, 2-aminoadenosina 5'-trifosfato, 2-tiocitidina 5'-trifosfato, 2-tiouridina 5'-trifosfato, 4-tiouridina 5'-trifosfato, 5-aminoalilcitidina 5'-trifosfato, 5-aminoaliluridina 5'-trifosfato, 5-bromocitidina 5'-trifosfato, 5-bromouridina 5'-trifosfato, 5-yodocitidina 5'-trifosfato, 5-yodouridina 5'-trifosfato, 5-metiluridina 5'-trifosfato, 5-metiluridina 5'-trifosfato, 6-azacitidina 5'-trifosfato, 6-azauridina 5'-trifosfato, 6-cloropurina ribósido 5'-trifosfato, 7-deazaadenosina 5'-trifosfato, 7-deazaguanosina 5'-trifosfato, 8-azaadenosina 5'-trifosfato, 8-azidoadenosina 5'-trifosfato, bencimidazol ribósido 5'-trifosfato, N1-metiladenosina 5'-trifosfato, N1-metilguanosina 5'-trifosfato, N6-metiladenosina 5'-trifosfato, O6-metilguanosina 5'-trifosfato, pseudouridina 5'-trifosfato, puromicina 5'-trifosfato, o xantosina 5'-trifosfato.
Normalmente, la síntesis del ARNm incluye la adición de una "caperuza" en el extremo N-terminal (5'), y una "cola" en el extremo C-terminal (3'). La presencia de la caperuza es importante para proporcionar resistencia a las nucleasas que se encuentran en la mayoría de las células eucariotas. La presencia de una "cola" sirve para proteger el ARNm de la degradación por exonucleasas.
Por tanto, en algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de caperuza en 5'. Normalmente se añade una caperuza en 5' de la siguiente manera: primero, una fosfatasa terminal de ARN elimina uno de los grupos fosfato terminales del nucleótido de 5', dejando dos fosfatos terminales; después se añade guanosina trifosfato (GTP) a los fosfatos terminales mediante una guanilil transferasa, produciendo un enlace 5'5'5 trifosfato;
y después el nitrógeno en 7 de la guanina se metila mediante una metiltransferasa. Los ejemplos de estructuras de caperuza incluyen, pero no se limitan a, m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A y G(5')ppp(5')G.
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(A) en 3'. Una cola de poli-A en el extremo 3' del ARNm incluye típicamente alrededor de 10 a 300 nucleótidos de adenosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 200 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de adenosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de adenosina, o alrededor de 20 a 60 nucleótidos de adenosina). En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(C) en 3'. Una cola de poli-C adecuada en el extremo 3' del ARNm incluye típicamente alrededor de 10 a 200 nucleótidos de citosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de citosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 60 nucleótidos de citosina, o alrededor de 10 a 40 nucleótidos de citosina). La cola de poli-C puede añadirse a la cola de poli-A, o puede sustituir la cola de poli-A.
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una región no traducida en 5' y/o 3'. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' incluye uno o más elementos que afectan la estabilidad o traducción de un ARNm, por ejemplo un elemento sensible al hierro. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' puede tener entre alrededor de 50 y 500 nucleótidos de longitud.
En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' incluye una o más de una señal de poliadenilación, un sitio de unión para proteínas que afectan la estabilidad de la ubicación de un ARNm en una célula, o uno o más sitios de unión para los miARN. En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' puede tener una longitud de entre 50 y 500 nucleótidos o más.
Estructura de caperuza
En algunas realizaciones, los ARNm (por ejemplo, ARNm que codifican CFTR) incluyen una estructura de caperuza en 5'. Una caperuza en 5' se añade normalmente de la siguiente manera: primero, una fosfatasa terminal de ARN elimina uno de los grupos fosfato terminales del nucleótido en 5', dejando dos fosfatos terminales; después se añade guanosina trifosfato (GTP) a los fosfatos terminales mediante una guanilil transferasa, produciendo un enlace 5'-5' trifosfato; y después el nitrógeno en 7 de la guanina se metila mediante una metiltransferasa. En algunas realizaciones, el nucleótido que forma la caperuza está además metilado en la posición 3'. En algunas realizaciones, el nucleótido directamente adyacente a la caperuza se metila además en la posición 2'. Los ejemplos de estructuras de caperuza incluyen, pero no se limitan a, m7G(5')ppp(5')(2'OMeG), m7G(5')ppp(5')(2'OMeA), m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG), m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA), m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A y G(5')ppp(5')G. En una realización específica, la estructura de caperuza es m7G(5')ppp(5')(2'OMeG).
Las estructuras de caperuza de origen natural comprenden una 7-metilguanosina que está unida mediante un puente de trifosfato al extremo 5' del primer nucleótido transcrito, lo que da como resultado una caperuza dinucleotídica de m7G(5')ppp(5')N, en la que N es cualquier nucleósido.In vivo,la caperuza se añade enzimáticamente. La caperuza se añade en el núcleo, y es catalizada por la enzima guanilil transferasa. La adición de la caperuza al extremo 5' terminal del ARN se produce inmediatamente después del inicio de la transcripción. El nucleósido terminal es típicamente una guanosina, y está en orientación inversa a todos los demás nucleótidos, es decir, G(5')ppp(5')GpNpNp.
En algunas realizaciones, la caperuza para el ARNm producido mediante transcripciónin vitroes m7G(5')ppp(5')G, que se ha utilizado como caperuza dinucleotídica en la transcripción con ARN polimerasa de T7 o SP6in vitropara obtener los ARN que tienen una estructura de caperuza en sus extremos 5'. El método predominante para la síntesisin vitrode ARNm encaperuzados emplea un dinucleótido preformado de la forma m7G(5')ppp(5')G ("m7GpppG") como iniciador de la transcripción.
En algunas realizaciones, una forma de caperuza dinucleotídica sintética usada en experimentos de traducciónin vitroes el Análogo de Caperuza Anti-Inversa ("ARCA") o el ARCA modificado, que generalmente es un análogo de caperuza modificado en el que el grupo OH de 2' o 3' se reemplaza por -OCH3.
Los análogos de caperuza adicionales incluyen, pero no se limitan a, estructuras químicas seleccionadas del grupo que consiste en m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; análogos de caperuza no metilados (por ejemplo, GpppG); análogo de caperuza dimetilado (por ejemplo, m27 GpppG), análogo de caperuza trimetilado (por ejemplo, m2’27GpppG), análogos de caperuza simétricos dimetilados (por ejemplo, m7Gpppm7G) o análogos de caperuza antiinversos (por ejemplo, ARCA; m7,2'OmeGpppG, m72'dGpppG, m73'OmeGpppG, m73'dGpppG y sus derivados de tetrafosfato) (véase, por ejemplo, Jemielity, J. et al., "Novel 'anti-reverse' cap analogs with superior Translational Properties", RNA , 9: 1108 1122 (2003)).
En algunas realizaciones, una caperuza adecuada es un 7-metil guanilato ("m7G") unido mediante un puente de trifosfato al extremo 5' del primer nucleótido transcrito, lo que da como resultado m7G(5')ppp(5')N, en el que N es cualquier nucleósido. Una realización preferida de una caperuza m7G utilizada en realizaciones de la invención es m7G(5')ppp(5')G.
En algunas realizaciones, la caperuza es una estructura Cap0. Las estructuras Cap0 carecen de un resto 2'-O-metilo de la ribosa unido a las bases 1 y 2. En algunas realizaciones, la caperuza es una estructura Cap1. Las estructuras Cap1 tienen un resto 2'-O-metilo en la base 2. En algunas realizaciones, la caperuza es una estructura Cap2. Las estructuras Cap2 tienen un resto 2'-O-metilo unido a las bases 2 y 3.
En la técnica se conocen diversos análogos de caperuza m7G, muchos de los cuales están disponibles comercialmente. Estos incluyen el m7GpppG descrito anteriormente, así como los análogos de caperuza ARCA 3'-OCH3 y 2'-OCH3 (Jemielity, J. et al., RNA, 9: 1108-1122 (2003)). Los análogos de caperuza adicionales para uso en realizaciones de la invención incluyen análogos de dinucleósido tetrafosfato N7-bencilado (descritos en Grudzien, E. et al., RNA, 10: 1479-1487 (2004)), análogos de caperuza de fosforotioato (descritos en Grudzien-Nogalska, E., et al., RNA, 13: 1745-1755 (2007)), y análogos de caperuza (incluidos análogos de caperuza biotinilados) descritos en las patentes de EE. UU. núms. 8.093.367 y 8.304.529.
También se describen estructuras de caperuza adicionales en la Solicitud de EE. UU. publicada n.° US 2016/0032356 y en la Solicitud Provisional de EE. UU. 62/464.327, presentada el 27 de febrero de 2017.
Estructura de cola
Normalmente, la presencia de una "cola" sirve para proteger el ARNm de la degradación por exonucleasas. Se cree que la cola de poli A estabiliza los mensajeros naturales y el ARN codificante sintético. Por lo tanto, en ciertas realizaciones se puede añadir una cola larga de poli A a una molécula de ARNm, haciendo así que el ARN sea más estable. Las colas de poli A se pueden añadir usando una variedad de técnicas reconocidas en la técnica. Por ejemplo, se pueden añadir colas largas de poli A a ARN sintético o transcritoin vitrousando poli A polimerasa (Yokoe, et al. Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256). Un vector de transcripción también puede codificar colas largas de poli A. Además, se pueden añadir colas de poli A mediante transcripción directamente a partir de productos de PCR. Poli A también puede ligarse al extremo 3' de un ARN codificante con ARN ligasa (véase, por ejemplo, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2a ed., ed. de Sambrook, Fritsch y Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: edición de 1991)).
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(A) en 3'. Normalmente, la longitud de la cola de poli A puede ser de al menos alrededor de 10, 50, 100, 200, 300, 400, y al menos 500 nucleótidos. En algunas realizaciones, una cola de poli-A en el extremo 3' del ARNm incluye típicamente alrededor de 10 a 300 nucleótidos de adenosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 200 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de adenosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de adenosina, o alrededor de 20 a 60 nucleótidos de adenosina). En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(C) en 3'. Una cola de poli-C adecuada en el extremo 3' del ARNm incluye típicamente alrededor de 10 a 200 nucleótidos de citosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de citosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 60 nucleótidos de citosina, o alrededor de 10 a 40 nucleótidos de citosina). La cola de poli-C puede añadirse a la cola de poli-A, o puede sustituir la cola de poli-A.
En algunas realizaciones, la longitud de la cola de poli A o poli C se ajusta para controlar la estabilidad de una molécula de ARNm codificante modificada de la invención, y por tanto la transcripción de la proteína. Por ejemplo, dado que la longitud de la cola de poli A puede influir en la vida media de una molécula de ARNm codificante, la longitud de la cola de poli A puede ajustarse para modificar el nivel de resistencia del ARNm a nucleasas y controlar de ese modo el transcurso del tiempo de la expresión polinucleotídica y/o la producción de polipéptidos en una célula diana.
Región no traducida en 5 'y 3'
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una región no traducida en 5' y/o 3'. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' incluye uno o más elementos que afectan la estabilidad o traducción de un ARNm, por ejemplo un elemento sensible al hierro. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' puede tener entre alrededor de 50 y 500 nucleótidos de longitud.
En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' incluye una o más de una señal de poliadenilación, un sitio de unión para proteínas que afectan la estabilidad de la ubicación de un ARNm en una célula, o uno o más sitios de unión para los miARN. En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' puede tener una longitud de entre 50 y 500 nucleótidos o más.
Se pueden derivar secuencias de 3' y/o 5' UTR ejemplares a partir de moléculas de ARNm que son estables (por ejemplo, globina, actina, GAPDH, tubulina, histona, o enzimas del ciclo del ácido cítrico) para aumentar la estabilidad de la molécula de ARNm codificante. Por ejemplo, una secuencia de 5' UTR puede incluir una secuencia parcial de un gen temprano inmediato 1 (IE1) del CMV, o un fragmento del mismo, para mejorar la resistencia a nucleasas y/o mejorar la vida media del polinucleótido. También se contempla la inclusión de una secuencia que codifica la hormona del crecimiento humano (hGH), o un fragmento de la misma, en el extremo 3' o región no traducida del polinucleótido (por ejemplo, ARNm) para estabilizar aún más el polinucleótido. Generalmente, estas modificaciones mejoran la estabilidad y/o las propiedades farmacocinéticas (por ejemplo, vida media) del polinucleótido con respecto a sus homólogos no modificados, e incluyen, por ejemplo, modificaciones realizadas para mejorar la resistencia de tales polinucleótidos a la digestión con nucleasasin vivo.
Formulaciones farmacéuticas de lípidos catiónicos y ácidos nucleicos
En ciertas realizaciones, los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63), así como composiciones farmacéuticas y liposomales que comprenden tales lípidos, se pueden usar en formulaciones para facilitar la administración de materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos, tal como ARNm) a, y la posterior transfección de una o más células diana. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los lípidos catiónicos descritos aquí (y composiciones tales como composiciones liposomales que comprenden dichos lípidos) se caracterizan por dar como resultado una o más de endocitosis mediada por receptores, endocitosis mediada por clatrina y mediada por caveolas, fagocitosis y macropinocitosis, fusogenicidad, alteración endosómica o lisosomal, y/o propiedades liberables que proporcionan a tales compuestos ventajas con respecto a otros lípidos clasificados de manera similar.
Según la presente invención, un ácido nucleico, por ejemplo, ARNm que codifica una proteína (por ejemplo, una longitud completa, fragmento o porción de una proteína) como se describe aquí puede administrarse a través de un vehículo de administración que comprende un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63).
Como se usan aquí, las expresiones "vehículo de administración", "vehículo de transferencia", "nanopartícula", o equivalentes gramaticales de los mismos, se usan indistintamente.
Por ejemplo, la presente invención proporciona una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) que comprende un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) y uno o más polinucleótidos. Una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) puede comprender además uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol, y/o uno o más lípidos modificados con PEG.
En ciertas realizaciones, una composición muestra una capacidad mejorada (por ejemplo, aumentada) para transfectar una o más células diana. Por consiguiente, también se proporcionan aquí métodos para transfectar una o más células diana. Tales métodos generalmente comprenden la etapa de poner en contacto una o más células diana con los lípidos catiónicos y/o composiciones farmacéuticas descritas aquí (por ejemplo, una formulación liposomal que comprende un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) que encapsula uno o más polinucleótidos) de manera que la una o más células diana se transfectan con los materiales encapsulados en ellas (por ejemplo, uno o más polinucleótidos). Como se usa aquí, los términos "transfectar" o "transfección" se refieren a la introducción intracelular de uno o más materiales encapsulados (por ejemplo, ácidos nucleicos y/o polinucleótidos) en una célula, o preferiblemente en una célula diana. El polinucleótido introducido puede mantenerse estable o transitoriamente en la célula diana. La expresión "eficiencia de la transfección" se refiere a la cantidad relativa de tal material encapsulado (por ejemplo, polinucleótidos) absorbido, introducido y/o expresado por la célula diana que está sujeta a transfección. En la práctica, la eficiencia de la transfección se puede estimar mediante la cantidad de un producto polinucleotídico informador producido por las células diana después de la transfección. En ciertas realizaciones, los compuestos y composiciones farmacéuticas descritos aquí demuestran altas eficiencias de transfección, mejorando así la probabilidad de que se administren dosis apropiadas de los materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos) al sitio de la patología y se expresen subsiguientemente, mientras que al mismo tiempo se minimizan los posibles efectos adversos sistémicos o la toxicidad asociada con el compuesto o sus contenidos encapsulados.
Después de la transfección de una o más células diana mediante, por ejemplo, los polinucleótidos encapsulados en una o más nanopartículas lipídicas que comprenden las composiciones farmacéuticas o liposomales descritas aquí, la producción del producto (por ejemplo, un polipéptido o proteína) codificado por tal polinucleótido puede estimularse preferiblemente, y se potencia la capacidad de tales células diana para expresar el polinucleótido y producir, por ejemplo, un polipéptido o proteína de interés. Por ejemplo, la transfección de una célula diana mediante uno o más compuestos o composiciones farmacéuticas que encapsulan ARNm mejorará (es decir, aumentará) la producción de la proteína o enzima codificada por tal ARNm.
Además, los vehículos de administración descritos aquí (por ejemplo, vehículos de administración liposomales) pueden prepararse para distribuirse preferentemente a otros tejidos, células u órganos diana, tales como el corazón, los pulmones, los riñones y el bazo. En realizaciones, las nanopartículas lipídicas de la presente invención se pueden preparar para lograr una administración mejorada a las células y tejidos diana. Por ejemplo, los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) encapsulados en uno o más de los compuestos o composiciones farmacéuticas y liposomales descritos aquí pueden administrarse a y/o transfectarse en células o tejidos específicos. En algunas realizaciones, los polinucleótidos encapsulados (por ejemplo, ARNm) son capaces de ser expresados, y los productos polipeptídicos funcionales producirse (y en algunos casos excretarse), por la célula diana, confiriendo así una propiedad beneficiosa a, por ejemplo, las células o tejidos diana. Tales polinucleótidos encapsulados (por ejemplo, ARNm) pueden codificar, por ejemplo, una hormona, enzima, receptor, polipéptido, péptido u otra proteína de interés.
Vehículos de administración liposomales
En algunas realizaciones, una composición es un vehículo de administración adecuado. En realizaciones, una composición es un vehículo de administración liposomal, por ejemplo una nanopartícula lipídica.
Las expresiones "vehículo de administración liposomal" y "composición liposomal" se usan indistintamente.
Se puede usar el enriquecimiento de composiciones liposomales con uno o más de los lípidos catiónicos descritos aquí como un medio para mejorar (por ejemplo, reducir) la toxicidad o de otro modo conferir una o más propiedades deseadas a tal composición liposomal enriquecida (por ejemplo, administración mejorada de los polinucleótidos encapsulados a una o más células diana, y/o toxicidad in vivo reducida de una composición liposomal). Por consiguiente, también se contemplan composiciones farmacéuticas, y en particular composiciones liposomales, que comprenden uno o más de los lípidos catiónicos descritos aquí.
Por lo tanto, en ciertas realizaciones, los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden usar como componente de un composición liposomal para facilitar o mejorar la administración y liberación de materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más agentes terapéuticos) a una o más células diana (por ejemplo, permeando o fusionando con las membranas lipídicas de tales células diana).
Como se usan aquí, los vehículos de administración liposomales, por ejemplo nanopartículas lipídicas, generalmente se caracterizan como vesículas microscópicas que tienen un espacio acuático interior secuestrado de un medio externo por una membrana de una o más bicapas. Las membranas bicapa de los liposomas suelen estar formadas por moléculas anfifílicas, tales como lípidos de origen sintético o natural que comprenden dominios hidrófilos e hidrófobos espacialmente separados (Lasic, Trends Biotechnol., 16: 307-321, 1998). Las membranas bicapa de los liposomas también pueden estar formadas por polímeros anfófilos y tensioactivos (por ejemplo, polimerosomas, niosomas, etc.). En el contexto de la presente invención, un vehículo de administración liposomal normalmente sirve para transportar un ARNm deseado a una célula o tejido diana.
En ciertas realizaciones, tales composiciones (por ejemplo, composiciones liposomales) se cargan con materiales o los encapsulan de otro modo, tales como, por ejemplo, uno o más polinucleótidos biológicamente activos (por ejemplo, ARNm).
En realizaciones, una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) comprende un ARNm que codifica una proteína, encapsulado dentro de un liposoma. En realizaciones, un liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol, y uno o más lípidos modificados con PEG, y en en el que al menos un lípido modificado con PEG es un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 63). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica una proteína (por ejemplo, cualquier proteína descrita aquí). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
En realizaciones, una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma, en la que el liposoma comprende cualquier compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) como se describe aquí.
En realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o proteína. En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar (por ejemplo, un ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR)). En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática (por ejemplo, un ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC)). Aún se describen aquí otros ARNm ejemplares.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo, una nanopartícula lipídica) puede tener una carga positiva neta.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo, una nanopartícula lipídica) puede tener una carga negativa neta.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo, una nanopartícula lipídica) puede tener una carga neutra neta.
En realizaciones, una nanopartícula lipídica que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo, ARNm que codifica un péptido o proteína) comprende uno o más compuestos descritos aquí ((por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-( VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63).
Por ejemplo, la cantidad de un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) en una composición se puede describir como un porcentaje ("% en peso") del peso seco combinado de todos los lípidos de una composición (por ejemplo, el peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición liposomal).
En realizaciones de las composiciones farmacéuticas descritas aquí, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 30 % en peso (por ejemplo, alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 20 % en peso) del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 1 peso % a alrededor de 30 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 20 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 15 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 10 % en peso, o alrededor de 5 % en peso a alrededor de 25 % en peso del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición (por ejemplo, una composición liposomal). En realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 5 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 10 % en peso, alrededor de 5 % en peso a alrededor de 20 % en peso, o alrededor de 10 % en peso a alrededor de 20 % en peso de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición, tal como vehículo de administración liposomal.
En realizaciones, la cantidad de un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es al menos alrededor de 5% en peso, alrededor de 10% en peso, alrededor de 15% en peso, alrededor de 20% en peso, alrededor de 25% en peso, alrededor de 30% en peso, alrededor de 35% en peso, alrededor de 40% en peso, alrededor de 45% en peso, alrededor de 50% en peso, alrededor de 55 % en peso, alrededor de 60 % en peso, alrededor de 65 % en peso, alrededor de 70 % en peso, alrededor de 75 % en peso, alrededor de 80 % en peso, alrededor de 85 % en peso, alrededor de 90 % en peso, alrededor de 95 % en peso, alrededor de 96 % en peso, alrededor de 97% en peso, alrededor de 98% en peso, o alrededor de 99% en peso del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un compuesto como se describe aquí ((por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) está presente en una cantidad no mayor que alrededor de 5% en peso, alrededor de 10% en peso, alrededor de 15% en peso, alrededor de 20% en peso, alrededor de 25% en peso, alrededor de 30% en peso, alrededor de 35% en peso, alrededor de 40% en peso, alrededor de 45% en peso, alrededor de 50 % en peso, alrededor de 55 % en peso, alrededor de 60 % en peso, alrededor de 65 % en peso, alrededor de 70 % en peso, alrededor de 75 % en peso, alrededor de 80 % en peso, alrededor de 85 % en peso, alrededor de 90 % en peso, alrededor de 95 % en peso, alrededor de 96% en peso, alrededor de 97% en peso, alrededor de 98% en peso, o alrededor de 99% en peso del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, una composición (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal tal como una nanopartícula lipídica) comprende alrededor de 0,1 % en peso a alrededor de 20 % en peso (por ejemplo, alrededor de 0,1 % en peso a alrededor de 15 % en peso) de un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63). En realizaciones, un vehículo de administración (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal tal como una nanopartícula lipídica) comprende alrededor de 0,5 % en peso, alrededor de 1 % en peso, alrededor de 3 % en peso, alrededor de 5 % en peso, o alrededor de 10 % en peso de un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63). En realizaciones, un vehículo de administración (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal tal como una nanopartícula lipídica) comprende hasta alrededor de 0,5 % en peso, alrededor de 1 % en peso, alrededor de 3 % en peso, alrededor de 5 % en peso, alrededor de 10 % en peso, alrededor de 15 % en peso, o alrededor de 20 % en peso de un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63). En realizaciones, el porcentaje da como resultado un efecto beneficioso mejorado (por ejemplo, administración mejorada a tejidos diana tales como el hígado o el pulmón).
La cantidad de un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) en una composición también se puede describir como un porcentaje ("% en moles") de las cantidades molares combinadas de lípidos totales de una composición (por ejemplo, las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en un vehículo de administración liposomal).
En realizaciones de composiciones farmacéuticas descritas aquí, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 30 % en moles (por ejemplo, alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 20 % en moles) de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición, tal como un vehículo de administración liposomal.
En realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 5 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles, alrededor de 5 % en moles a alrededor de 20 % en moles, o alrededor de 10 % en moles a alrededor de 20 % en moles de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición, tal como vehículo de administración liposomal. En realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad que es alrededor de 1 % en moles a alrededor de 30 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 20 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 15 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles, o alrededor de 5 % en moles a alrededor de 25 % en moles del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición, tal como un vehículo de administración liposomal
En ciertas realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) puede comprender de alrededor de 0,1 % en moles a alrededor de 50 % en moles, o de 0,5 % en moles a alrededor de 50 % en moles, o de alrededor de 1 % en moles a alrededor de 25 % en moles, o de alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles de la cantidad total de lípidos en una composición (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal).
En ciertas realizaciones, un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) puede comprender más de alrededor de 0,1 % en moles, o más de alrededor de 0,5 % en moles, o más de alrededor de 1 % en moles, o más de alrededor de 5 % en moles de la cantidad total de lípidos en la nanopartícula lipídica.
En ciertas realizaciones, un compuesto como se describe (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) puede comprender menos de alrededor de 25 % en moles, o menos de alrededor de 10 % en moles, o menos de alrededor de 5 % en moles, o menos de alrededor de 1 % en moles de la cantidad total de lípidos en una composición (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad
que es al menos alrededor de 5 % en moles, alrededor de 10 % en moles, alrededor de 15 % en moles, alrededor de
20 % en moles, alrededor de 25 % en moles, alrededor de 30 % en moles, alrededor de 35 % en moles, alrededor de 40 % en moles, alrededor de 45 % en moles, alrededor de en moles, alrededor de 55 % en moles, alrededor de 60 % en moles, alrededor de 65 % en moles, alrededor de en moles, alrededor de 75 % en moles, alrededor de 80 % en moles, alrededor de 85 % en moles, alrededor de 90 % en moles, alrededor de 95 % en moles, alrededor de 96 % en moles, alrededor de 97 % en moles, alrededor de 98 % en moles, o alrededor de 99 % en moles del peso
seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un compuesto como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) está presente en una cantidad
que es no mayor que alrededor de 5 % en moles, alrededor de 10 % en moles, alrededor de 15 % en moles, alrededor de 20 % en moles, alrededor de 25 % en moles, alrededor de 30 % en moles, alrededor de 35 % en moles, al de 40 % en moles, alrededor de 45 % en moles, alrededor de 50 % en moles, alrededor de 55 % en moles, al de 60 % en moles, alrededor de 65 % en moles, alrededor de 70 % en moles, alrededor de 75 % en moles, al de 80 % en moles, alrededor de 85 % en moles, alrededor de 90 % en moles, alrededor de 95 % en moles, al de 96 % en moles, alrededor de 97 % en moles, alrededor de 98 % en moles, o alrededor de 99 % en moles del peso
seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, el porcentaje da como resultado un efecto beneficioso mejorado (por ejemplo, administración mejorada a tejidos diana tales como el hígado o el pulmón).
En realizaciones, una composición comprende además uno más lípidos (por ejemplo, uno más lípidos seleccionados
del grupo que consiste en uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol, y uno o más lípidos modificados con PEG).
En ciertas realizaciones, tales composiciones farmacéuticas (por ejemplo, liposomales) comprenden uno o más de un
lípido modificado con PEG, un lípido no catiónico, y un lípido de colesterol. En realizaciones, tales composiciones farmacéuticas (por ejemplo, liposomales) comprenden: uno o más lípidos modificados con PEG; uno o más lípidos no catiónicos; y uno o más lípidos de colesterol. En realizaciones, tales composiciones farmacéuticas (por ejemplo, liposomales) comprenden: uno o más lípidos modificados con PEG y uno o más lípidos de colesterol.
En realizaciones, una composición (por ejemplo, nanopartícula lipídica) que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo,
ARNm que codifica un péptido o proteína) comprende uno o más compuestos como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) y
uno o más lípidos seleccionados del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, y un lípido PEGilado.
En realizaciones, una composición (por ejemplo, nanopartícula lipídica) que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo,
ARNm que codifica un péptido o proteína) comprende uno o más compuestos como se describe aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63);
uno o más lípidos seleccionados del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, y un lípido PEGilado; y comprende además un lípido a base de colesterol.
En realizaciones, una nanopartícula lipídica que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo, ARNm que codifica un
péptido o proteína) comprende uno o más compuestos como se describe aquí ((por ejemplo, un compuesto de Fórmula
(A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63), así como uno o más
lípidos seleccionados del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, un lípido PEGilado, y un
lípido a base de colesterol.
Según diversas realizaciones, la selección de lípidos catiónicos, lípidos no catiónicos y/o lípidos modificados con PEG comprendidos por la nanopartícula lipídica, así como la relación molar relativa de tales lípidos entre sí, se basa en las características del o de los lípidos seleccionados, la naturaleza de las células diana previstas, las características del
ARNm que se va a administrar. Consideraciones adicionales incluyen, por ejemplo, la saturación de la cadena alquílica, así como el tamaño, la carga, el pH, el pKa, la fusogenicidad, y la toxicidad del o de los lípidos seleccionados.
Por tanto, las relaciones molares pueden ajustarse en consecuencia.
Lípidos catiónicos
Además de cualquiera de los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63), una composición puede comprender uno o más lípidos catiónicos adicionales.
En algunas realizaciones, los liposomas pueden comprender uno o más lípidos catiónicos adicionales. Como se usa aquí, la frase "lípido catiónico'' se refiere a cualquiera de varias especies de lípidos que tienen una carga positiva neta a un pH seleccionado, tal como un pH fisiológico. En la bibliografía se han descrito varios lípidos catiónicos, muchos de los cuales están disponibles comercialmente.
Los lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2010/144740. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, 4-(dimetilamino)butanoato de (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo, que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos ionizables como se describe en la Publicación de Patente Internacional w O 2013/149140. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de una de las siguientes fórmulas:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo de C1-C20 opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado, y un acilo de C6-C20 opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; en la que L1 y L2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo de C1-C30 opcionalmente sustituido, un alquenilo de C1-C30 variablemente insaturado opcionalmente sustituido, y un alquinilo de C1-C30 opcionalmente sustituido; en la que m y o se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en cero y cualquier número entero positivo (por ejemplo, en la que m es tres); y en la que n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo, en la que n es uno). En ciertas realizaciones, las
composiciones incluyen el lípido catiónico (15Z, 18Z)-N,N-dimetil-6-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-I-il)tetracosa-15,18-dien-1-amina (" HGT5000"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico (15Z, 18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)tetracosa-4,15,18-trien-I-amina ("HGT5001"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico y (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -il)tetracosa-5,15,18-trien-1 -amina ("HGT5002"), que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos descritos como lipidoides de aminoalcoholes en la Publicación de Patente Internacional WO 2010/053572. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/118725. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/118724. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adecuados para uso en las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la fórmula de 14,25-ditridecil-15,18,21,24-tetraaza-octatriacontano, y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en las Publicaciones de Patente Internacional WO 2013/063468 y WO 2016/205691. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que cada aparición de RL es independientemente alquenilo de C6-C40 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2015/184256
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que cada X es independientemente O o S; cada Y es independientemente O o S; cada m es independientemente 0 a 20; cada n es independientemente 1 a 6; cada Raes independientemente hidrógeno, alquilo de C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo de C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilo de C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo de C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo de C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5-14 miembros opcionalmente sustituido, o halógeno; y cada RB es independientemente hidrógeno, alquilo de C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo de C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilode de C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo de C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo de C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5 a 14 miembros opcionalmente sustituido, o halógeno. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "Target 23", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/004202. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en J. McClellan, M. C. King, Cell 2010, 141,210-217 y en Whitehead et al., Nature Communications (2014) 5:4277. En ciertas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura del compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2015/199952. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/004143.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/075531
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que uno de L1 o L2 es -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, - O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa-, o -NRaC(=O)O-; y el tro de L1 o L2 es -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, ,NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa- o -NRaC(=O)O- o un enlace directo; G1 y G2 son cada uno independientemente alquileno de C1-C12 o alquenileno de C1-C12 no sustituido; G3 es alquileno de C1-C24, alquenileno de C1-C24, cicloalquileno de C3-C8, cicloalquenileno de C3-C8; Ra es H o alquilo de C1-C12; R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo de C6-C24 o alquenilo de C6-C24; R3 es H, OR5, CN, -C(=O)OR4, -OC(=O)R4 o -NR5 C(=O)R4; R4 es alquilo de C1-C12; R5 es H o alquilo de C1-C6; y x es 0, 1 o 2.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/117528. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/049245. En algunas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones y métodos de la presente invención incluyen un compuesto de una de las siguientes fórmulas:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. Para cualquiera de estas cuatro fórmulas, R4 se selecciona independientemente de -(CH2)nQ y -(CH2)nCHQR; Q se selecciona del grupo que consiste en - OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, - N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, - N(H)C(S)N(H)(R), y un heterociclo; R se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo de C1-3, alquenilo de C2-3, y H; y n es 1, 2 o 3.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/173054 y WO 2015/095340.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos a base de colesterol. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen éster de imidazol colesterol o "ICE", que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos escindibles como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2012/170889. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en imidazol, guanidinio, amino, imina, enamina, un alquilamino opcionalmente sustituido (por ejemplo, un alquilamino tal como dimetilamino) y piridilo; en la que R2 se selecciona del grupo que consiste en una de las dos fórmulas siguientes:
C6-C20 opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado, y un acilo de C6-C20 opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; y en as que n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más).
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4001", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4002", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4003", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4004", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4005", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico, cloruro de N-[I-(2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"). Feigner et al. (Proc. Nat'l Acad. Sci. 84, 7413 (1987); patente de EE. UU. n° 4.897.355. DOTMA se puede formular solo, o se puede combinar con un lípido neutro (por ejemplo, dioleoilfosfatidil-etanolamina o "DOPE"), o incluso otros lípidos catiónicos o no catiónicos, en un vehículo de transferencia liposomal o una nanopartícula lipídica, y tales liposomas se pueden usar para mejorar la administración de ácidos nucleicos a células diana. Otros lípidos catiónicos adecuados para las composiciones incluyen, por ejemplo, 5-carboxiespermilglicinadioctadecilamida (“DOGS”); 2,3-dioleiloxi-N-[2(espermina-carboxamido)etil]-N,N-dimetil-I-propanaminio ("DOSPA") (Behr et al. Proc. Nat.'l Acad. Sci. 86, 6982 (1989), patente de EE. UU. n° 5.171.678; patente de EE. UU. n° 5.334.761); I,2-dioleoil-3-dimetilamonio-propano ("DODAP"); I,2-Dioleoil-3-Trimetilamonio-Propano ("DOTAP").
Lípidos catiónicos ejemplares adicionales adecuados para las composiciones también incluyen: I,2-diesteariloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DSDMA"); 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DOD<m>A"); 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLinDMA"); I,2-dilinoleniloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLenDMA"); cloruro de N-dioleil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilaminonio ("DDAB"); bromuro de N-(I,2-dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio ("DMRIE"); 3-dimetilamino-2-(colest-5-en-3-beta-oxibutan-4-oxi)-I-(cis,cis-9,12-octadecadienoxi)propano ("CLinDMA"); 2-[5'-(colest-5-en-3-beta-oxi)-3'-oxapentoxi)-3-dimetilI-I-I-(cis,cis-9',I-2'-octadecadienoxi)propano ("CpLinDMA"); N,N-dimetil-3,4-dioleiloxibencilamina ("DMOBA"); 1,2-N,N'-dioleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DOcarbDAP"); 2,3-Dilinoleoiloxi-N,N-dimetilpropilamina ("DLinDAP"); I,2-N,N'-Dilinoleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLincarbDAP"); I,2-Dilinoleoilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLinCDAP"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[I,3]-dioxolano ("DLin-K-DMA"); 2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]propano-1 -amina ("Octil-CLinDMA"); (2R)-2-((8-[(3beta)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9, 12-dien-1 -iloxi]propan-1 -amina ("Octil-CLinDMA (2R)"); (2S)-2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,fsl-dimetilh3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]propan-1-amina ("Octil-CLinDMA (25)"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[I,3]-dioxolano ("DLin-K-XTC2-DMA"); y 2-(2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,I2-dien-1-il)-I,3-dioxolan-4-il)-N,N-dimetiletanamina ("DLin-KC2-DMA") (véase el documento w O 2010/042877; Semple et al., Nature Biotech. 28: 172-176 (2010)). (Heyes, J., et al., J Controlled Release 107: 276-287 (2005); Morrissey, DV., et al., Nat. Biotechnol. 23(8): 1003-1007 (2005); Publicación de Patente Internacional WO 2005/121348). En algunas realizaciones, uno o más de los lípidos catiónicos comprenden al menos uno de un resto de imidazol, dialquilamino, o guanidinio.
En algunas realizaciones, uno o más lípidos catiónicos adecuados para las composiciones incluyen 2,2-Dilinoleil-1,4-dimetilaminoetil 1-[1,3]-dioxolano ("XTC"); (3aR,5s,6aS)-N,N-dimetil-2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetrahidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-5-amina ("ALNY-100") y/o 4,7,13-tris(3-oxo-3-(undecilamino)propil)-N1 ,N16-diundecil-4,7,10,13-tetraazahexadecano-1,16-diamida ("NC98-5").
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen al menos alrededor de 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, o 70%, medido en peso, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen al menos alrededor de 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, o 70%, medido como % en moles, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen alrededor de 30-70 % (por ejemplo, alrededor de 30-65 %, alrededor de 30-60 %, alrededor de 30-55 %, alrededor de 30-50 %, alrededor de 30-45 %, alrededor de 30-40 %, alrededor de 35-50 %, alrededor de 35-45 %, o alrededor de 35-40 %), medido en peso, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo una nanopartícula lipídica. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen uno o más lípidos catiónicos que constituyen alrededor de 30-70 % (por ejemplo, alrededor de 30-65 %, alrededor de 30-60 %, alrededor de 30-55 %, alrededor de 30-50 %, alrededor de 30-45 %, alrededor de 30-40 %, alrededor de 35-50 %, alrededor de 35-45 %, o alrededor de 35-40 %), medido como % en moles, del contenido total de lípidos en la composición, por ejemplo una nanopartícula lipídica.
Lípidos auxiliares
Las composiciones (por ejemplo, composiciones liposomales) también pueden comprender uno o más lípidos auxiliares. Tales lípidos auxiliares incluyen lípidos no catiónicos. Como se usa aquí, la frase "lípido no catiónico" se refiere a cualquier lípido neutro, bipolar o aniónico. Como se usa aquí, la frase "lípido aniónico" se refiere a cualquiera de varias especies de lípidos que portan una carga negativa neta a un pH seleccionado, tal como un pH fisiológico. Los lípidos no catiónicos incluyen, pero no se limitan a, distearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (Dp p C), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoil-fosfatidiletanolamina (POPE), 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-I-carboxilato de dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE), 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, I-estearoil-2-oleoil-fosfatidiletanolamina (SOPE), o una mezcla de los mismos. En realizaciones, un lípido no catiónico o auxiliar es dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE).
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico es un lípido neutro, es decir, un lípido que no porta una carga neta en las condiciones en las que se formula y/o administra la composición.
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico puede estar presente en una proporción molar (% en moles) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, los lípidos no catiónicos totales pueden estar presentes en una relación molar (% en moles) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5% en moles, mayor que alrededor de 10% en moles, mayor que alrededor de 20% en moles, mayor que alrededor de 30% en moles, o mayor que alrededor de 40% en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5% en moles, mayor que alrededor de 10% en moles, mayor que alrededor de 20% en moles, mayor que alrededor de 30% en moles, o mayor que alrededor de 40% en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma no es mayor que alrededor de 5 % en moles, no mayor que alrededor de 10 % en moles, no mayor que alrededor de 20 % en moles, no mayor que alrededor de 30 % en moles, o no mayor que alrededor de 40% en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser no mayor que alrededor de 5 % en moles, no mayor que alrededor de 10 % en moles, no mayor que alrededor de 20 % en moles, no mayor que alrededor de 30 % en moles, o no mayor que alrededor de 40% en moles.
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico puede estar presente en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, los lípidos no catiónicos totales pueden estar presentes en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. %. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma no es más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40% en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser no más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40% en peso.
Lípidos a base de colesterol
En algunas realizaciones, una composición (por ejemplo, una composición liposomal) comprende uno o más lípidos a base de colesterol. Por ejemplo, los lípidos basados en colesterol adecuados incluyen colesterol y, por ejemplo, DC-CHol (N,N -dimetil-N-etilcarboxamidocolesterol), 1,4-bis(3-N-oleilamino-propil)piperazina (Gao, et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. 179, 280 (1991); Lobo et al. BioTechniques 23, 139 (1997); patente de EE. UU. 5.744.335), o éster de imidazol colesterol (ICE), que tiene la siguiente estructura,
En algunas realizaciones, un lípido a base de colesterol puede estar presente en una relación molar (% en moles) de alrededor de 1 % a alrededor de 30 %, o alrededor de 5 % a alrededor de 20 % de los lípidos totales presentes en un liposoma. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser mayor que alrededor de 5 % en moles, mayor que alrededor de 10 % en moles, mayor que alrededor de 20 % en moles, mayor que alrededor de 30 % en moles, o mayor que alrededor de 40 % en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser no más de alrededor de 5 % en moles, no más de alrededor de 10 % en moles, no más de alrededor de 20 % en moles, no más de alrededor de 30 % en moles, o no más de alrededor de 40% en moles.
En algunas realizaciones, un lípido a base de colesterol puede estar presente en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 1 % a alrededor de 30 %, o alrededor de 5 % a alrededor de 20 % de los lípidos totales presentes en un liposoma. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser no más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40% en peso.
Lípidos pegilados
En algunas realizaciones, una composición (por ejemplo, una composición liposomal) comprende uno o más lípidos PEGilados adicionales.
Por ejemplo, el uso de fosfolípidos modificados con polietilenglicol (PEG) y lípidos derivatizados tales como ceramidas derivatizadas (PEG-CER), incluyendo N-octanoil-esfingosina-1-[succinil(metoxipolietilenglicol)-2000] (C8 PEG-2000 ceramida), también se contempla en la presente invención en combinación con uno o más de los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1- 63) y, en algunas realizaciones, otros lípidos juntos que comprenden el liposoma. En algunas realizaciones, los lípidos intercambiables particularmente útiles son PEG-ceramidas que tienen cadenas de acilo más cortas (por ejemplo, C14 o C18).
Lípidos modificados con PEG adicionales contemplados (también denominados aquí lípido PEGilado, término que es intercambiable con lípido modificado con PEG) incluyen, pero no se limitan a, una cadena de polietilenglicol de hasta 5 kDa de longitud unida covalentemente a un lípido con cadena o cadenas de alquilo de C6-C20 de longitud. En algunas realizaciones, un lípido modificado con PEG o PEGilado es colesterol PEGilado o PEG-2K. La adición de tales componentes puede prevenir la agregación de complejos, y también puede proporcionar un medio para aumentar la vida útil en circulación y aumentar la administración de la composición de lípidos y ácidos nucleicos a la célula diana (Klibanov et al. (1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237), o pueden seleccionarse para intercambiarse rápidamente fuera de la formulación in vivo (véase la patente de EE. UU. n° 5.885.613).
Otros fosfolípidos modificados con PEG y lípidos derivatizados de la presente invención pueden estar presentes en una relación molar (% en moles) de alrededor de 0% a alrededor de 15%, alrededor de 0,5% a alrededor de 15%, alrededor de 1% a alrededor de 15%, alrededor de 4 % a alrededor de 10 %, o alrededor de 2 % del lípido total presente en la composición (por ejemplo, una composición liposomal).
Otros fosfolípidos modificados con PEG y lípidos derivatizados de la presente invención pueden estar presentes en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 0% a alrededor de 15%, alrededor de 0,5% a alrededor de 15%, alrededor de 1% a alrededor de 15%, alrededor de 4 % a alrededor de 10 %, o alrededor de 2 % del lípido total presente en la composición (por ejemplo, una composición liposomal).
Formulaciones farmacéuticas y usos terapéuticos
Los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden usar en la preparación de composiciones (por ejemplo, para construir composiciones liposomales) que facilitan o potencian la administración y liberación de materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos terapéuticos) a una o más células diana (por ejemplo, permeando o fusionando con las membranas lipídicas de tales células diana).
Por ejemplo, cuando una composición liposomal (por ejemplo, una nanopartícula lipídica) comprende o está enriquecida de otro modo con uno o más de los compuestos descritos aquí, la transición de fase en la bicapa lipídica de la una o más células diana puede facilitar la administración de los materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos terapéuticos encapsulados en una nanopartícula lipídica) en la una o más células diana.
De manera similar, en ciertas realizaciones, los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden usar para preparar vehículos liposomales que se caracterizan por su reducida toxicidadin vivo.En ciertas realizaciones, la toxicidad reducida es una función de las altas eficiencias de transfección asociadas con las composiciones descritas aquí, de modo que se puede administrar una cantidad reducida de tal composición al sujeto para lograr una respuesta o resultado terapéutico deseado.
Por tanto, las formulaciones farmacéuticas que comprenden un compuesto descrito (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) y ácidos nucleicos proporcionadas por la presente invención se pueden usar para diversos fines terapéuticos. Para facilitar la administración de ácidos nucleicosin vivo,un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) y ácidos nucleicos se pueden formular en combinación con uno o más vehículos farmacéuticos adicionales, ligandos seleccionadores de dianas, o reactivos estabilizantes. En algunas realizaciones, un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se puede formular mediante una disolución lipídica premezclada. En otras realizaciones, una composición que comprende un compuesto descrito aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se puede formular usando técnicas de post-inserción en la membrana lipídica de las nanopartículas. Las técnicas para la formulación y administración de fármacos se pueden encontrar en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edición.
Las vías de administración adecuadas incluyen, por ejemplo, administración oral, rectal, vaginal, transmucosal, pulmonar incluyendo intratraqueal o inhalada, o intestinal; administración parenteral, incluyendo inyecciones intradérmicas, transdérmicas (tópicas), intramusculares, subcutáneas, intramedulares, así como intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, o intranasales. En realizaciones particulares, la administración intramuscular es a un músculo seleccionado del grupo que consiste en músculo esquelético, músculo liso y músculo cardíaco. En algunas realizaciones, la administración da como resultado el suministro de los ácidos nucleicos a una célula muscular. En algunas realizaciones, la administración da como resultado el suministro de los ácidos nucleicos a un hepatocito (es decir, una célula hepática).
Alternativa o adicionalmente, las formulaciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar de manera local en lugar de sistémica, por ejemplo mediante inyección de la formulación farmacéutica directamente en un tejido diana, preferiblemente en una formulación de liberación sostenida. La administración local puede verse afectada de diversas maneras, dependiendo del tejido al que se dirige. Los tejidos ejemplares en los que se puede administrar y/o expresar ARNm administrado incluyen, pero no se limitan a, hígado, riñón, corazón, bazo, suero, cerebro, músculo esquelético, ganglios linfáticos, piel, y/o líquido cefalorraquídeo. En realizaciones, el tejido al que se dirigirá es el hígado. Por ejemplo, los aerosoles que contienen composiciones de la presente invención se pueden inhalar (para administración nasal, traqueal, o bronquial); las composiciones de la presente invención se pueden inyectar en el sitio de la lesión, manifestación de la enfermedad, o dolor, por ejemplo; las composiciones se pueden proporcionar en forma de pastillas para aplicación oral, traqueal, o esofágica; puede suministrarse en forma líquida, comprimido o cápsula para administración en el estómago o los intestinos, puede suministrarse en forma de supositorio para aplicación rectal o vaginal; o incluso puede administrarse al ojo mediante el uso de cremas, gotas, o incluso inyecciones.
Las composiciones descritas aquí pueden comprender péptidos que codifican ARNm, incluidos los descritos aquí (por ejemplo, un polipéptido tal como una proteína).
En realizaciones, un ARNm codifica un polipéptido.
En realizaciones, un ARNm codifica una proteína.
Se describen aquí péptidos ejemplares codificados por ARNm (por ejemplo, proteínas ejemplares codificadas por ARNm).
La presente invención proporciona una composición que tiene moléculas de ARNm de longitud completa que codifican un péptido o proteína de interés para uso en el tratamiento de un sujeto, por ejemplo un sujeto humano o una célula de un sujeto humano o una célula que se trata y se administra a un sujeto humano, para uso en métodos para administrar dicha composición.
La descripción proporciona los siguientes casos de métodos para producir una composición terapéutica que, aunque no se reivindican, son útiles para comprender cómo preparar composiciones terapéuticas de la presente invención. Las composiciones de la presente invención pueden obtenerse a partir de cualesquiera de los métodos descritos para producir composiciones terapéuticas. Por consiguiente, en ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración o el tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR)
. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro 3 de la subfamilia A del casete de unión a a Tp . En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la cadena 1 intermedia axonemal de dineína. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la cadena 5 pesada axonemal de dineína (DNAH5). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa-1-antitripsina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína P3 de la caja forkhead (FOXP3). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una o más proteínas tensioactivas, por ejemplo una o más de la proteína tensioactiva A, la proteína tensioactiva B, la proteína tensioactiva C, y la proteína tensioactiva D.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática. Dichos péptidos y polipéptidos pueden incluir aquellos asociados con un trastorno del ciclo de la urea, asociados con un trastorno de almacenamiento lisosomal, con un trastorno de almacenamiento de glucógeno, asociados con un trastorno del metabolismo de aminoácidos, asociados con un metabolismo de lípidos o trastorno fibrótico, asociados con acidemia metilmalónica, o asociado con cualquier otro trastorno metabólico para el cual la administración o el tratamiento del hígado o de una célula hepática con ARNm de longitud completa enriquecido proporciona un beneficio terapéutico.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno del ciclo de la urea. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginosuccinato sintetasa 1. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína carbamoil fosfato sintetasa I. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginosuccinato liasa. En ciertos casos la presente descripción
proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginasa.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno de almacenamiento lisosomal. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa galactosidasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucocerebrosidasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína iduronato-2-sulfatasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína iduronidasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína N-acetil-alfa-D-glucosaminidasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína heparán N-sulfatasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína galactosamina-6 sulfatasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína beta-galactosidasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína lipasa lisosomal. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína arilsulfatasa B (N-acetilgalactosamina-4-sulfatasa). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica el factor de transcripción EB (TFEB).
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno de almacenamiento de glucógeno. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa-glucosidasa ácida. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucosa-6-fosfatasa (G6PC). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método
para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucógeno fosforilasa hepática. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína fosfoglicerato mutasa muscular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima desramificante del glucógeno.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con el metabolismo de aminoácidos. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima fenilalanina hidroxilasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima glutaril-CoA deshidrogenasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima propionil-CoA caboxilasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima oxalasa alanina-glioxilato aminotransferasa.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un metabolismo de lípidos o un trastorno fibrótico. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un inhibidor de mTOR. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína ATPasa 8B1 (ATP8B1) transportadora de fosfolípidos. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica uno o más inhibidores de NF-kappa B, tales como uno o más de I-kappa B alfa, regulador 1 de desarrollo relacionado con interferón (IFRD1), y Sirtuina 1 (SIRT1). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína PPAR-gamma o una variante activa.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con la acidemia metilmalónica. Por ejemplo, en ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína metilmalonil CoA mutasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un
método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína metilmalonil CoA epimerasa.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa para la cual la administración al o el tratamiento del hígado puede proporcionar un beneficio terapéutico. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína ATP7B, también conocida como proteína de la enfermedad de Wilson. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la enzima porfobilinógeno desaminasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una o varias enzimas de coagulación, tales como el Factor VIII, el Factor IX, el Factor VII, y el Factor X. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de hemocromatosis humana (HFE).
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento de la vasculatura cardiovascular de un sujeto o una célula cardiovascular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína A del factor de crecimiento endotelial vascular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína relaxina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína 9 morfogenética ósea. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína receptora de proteína 2 morfogenética ósea.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento del músculo de un sujeto o una célula muscular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína distrofina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína frataxina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento del músculo cardíaco de un sujeto o una célula del músculo cardíaco. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una
composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula uno o ambos de un canal de potasio y un canal de sodio en tejido muscular o en una célula muscular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula un canal Kv7.1 en tejido muscular o en una célula muscular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula un canal Nav1.5 en tejido muscular o en una célula muscular.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento del sistema nervioso de un sujeto o una célula del sistema nervioso. Por ejemplo, en ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la neurona motora 1 de supervivencia. Por ejemplo, en ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la neurona motora 2 de supervivencia. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína frataxina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro 1 de la subfamilia D del casete de unión a ATP (ABCD1). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína CLN3.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento de la sangre o la médula ósea de un sujeto o una célula sanguínea o de la médula ósea. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína beta globina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína tirosina cinasa de Bruton. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una o varias enzimas de coagulación, tales como el Factor VIII, Factor IX, Factor VII, y Factor X.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento del riñón de un sujeto o una célula renal. En ciertos casos
la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de cadena alfa 5 de colágeno tipo IV (COL4A5).
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración a o el tratamiento del ojo de un sujeto o una célula ocular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro 4 de la subfamilia A del casete de unión a ATP (ABCA4). En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína retinosquisina. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de 65 kDa (RPE65) específica del epitelio pigmentario retiniano. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína centrosómica de 290 kDa (CEP290).
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o proteína para uso en la administración de o el tratamiento con una vacuna para un sujeto o una célula de un sujeto. Por ejemplo, en ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un agente infeccioso, tal como un virus. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la gripe. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus sincitial respiratorio. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la rabia. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de citomegalovirus. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de rotavirus. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de la hepatitis, tal como el virus de la hepatitis A, el virus de la hepatitis B, o el virus de la hepatitis C. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus del papiloma humano. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un
antígeno de un virus del herpes simple, tal como el virus del herpes simple 1 o el virus del herpes simple 2. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de inmunodeficiencia humana, tal como el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 o el virus de inmunodeficiencia humana tipo 2. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un metaneumovirus humano. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de la parainfluenza humana, tal como el virus de la parainfluenza humana tipo 1, el virus de la parainfluenza humana tipo 2, o el virus de la parainfluenza humana tipo 3. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la malaria. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus zika. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus chikungunya.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno asociado con un cáncer de un sujeto o identificado a partir de una célula cancerosa de un sujeto. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno determinado a partir de la propia célula cancerosa de un sujeto, es decir, para proporcionar una vacuna contra el cáncer personalizada. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno expresado a partir de un gen KRAS mutante.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo. En ciertos casos, el anticuerpo puede ser un anticuerpo biespecífico. En ciertos casos, el anticuerpo puede formar parte de una proteína de fusión. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra OX40. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra VEGF. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra el factor alfa de necrosis tisular. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una
composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra CD3. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra CD19.
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un inmunomodulador. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica interleucina 12. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica interleucina 23. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica interleucina 36 gamma. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una variante constitutivamente activa de una o más proteínas estimuladoras de genes de interferón (STING).
En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una endonucleasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína ADN endonucleasa de guiada por ARN, tal como la proteína Cas 9. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína meganucleasa. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína nucleasa efectora similar a un activador de la transcripción. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína nucleasa de dedos de zinc.
En realizaciones, los usos terapéuticos ejemplares resultan de la administración de ARNm que codifica una proteína segregada. Por consiguiente, en realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína segregada. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una o más proteínas segregadas enumeradas en la Tabla 1; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en la Tabla 1 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí, y las composiciones de la invención son para uso en métodos que pueden comprender preparar y/o administrar una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína enumerada en la Tabla 1 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí.
Tabla 1. Proteínas se re adas
En algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas ejemplares adicionales enumeradas en la Tabla 2; de este modo, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en la Tabla 2 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí, y las composiciones de la invención son para uso en métodos que pueden comprender preparar y/o administrar una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína escogida de las proteínas enumeradas en la Tabla 2 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí.
Tabla 2. Proteínas eemplares adicionales
Los ID de Uniprot expuestos en la Tabla 1 y Tabla 2 se refieren a las versiones humanas de las proteínas enumeradas, y cuyas secuencias están disponibles en la base de datos de Uniprot. Las secuencias de las proteínas enumeradas también están generalmente disponibles para diversos animales, incluidos diversos mamíferos y animales de interés veterinario o industrial. Por consiguiente, en algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas escogidas de homólogos de mamíferos u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de las proteínas segregadas enumeradas en la Tabla 1 y la Tabla 2; de este modo, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína escogida de homólogos de mamíferos u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de una proteína enumerada en la Tabla 1 y la Tabla 2, junto con otros componentes expuestos aquí, y las composiciones de la invención son para uso en métodos que pueden comprender preparar y/o administrar una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína escogida de homólogos de mamíferos u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de una proteína enumerada en la Tabla 1 y la Tabla 2, junto con otros componentes expuestos aquí. En algunas realizaciones, los homólogos de mamíferos se escogen de homólogos de ratón, rata, hámster, jerbo, caballo, cerdo, vaca, llama, alpaca, visón, perro, gato, hurón, oveja, cabra, o camello. En algunas realizaciones, el animal de interés veterinario o industrial se escoge de los mamíferos enumerados anteriormente y/o pollo, pato, pavo, salmón, bagre, o tilapia.
En realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína lisosomal escogida de la Tabla 3. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas lisosomales y/o relacionadas enumeradas en la Tabla 3; de este modo, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en la Tabla 3 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí, y las composiciones de la invención son para uso en métodos que pueden comprender preparar y/o administrar una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína escogida de las proteínas enumeradas en la Tabla 3 (o un homólogo de la misma), junto con otros componentes expuestos aquí.
Tabla 3. Proteínas lisosomales relacionadas
a-glucosidasa
a-lduronidasa
a-manosidasa
a-N-acetilgalactosaminidasa (a-galactosidasa B)
p-galactosidasa
p-glucuronidasa
p-hexosaminidasa
p-manosidasa
3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) liasa
3-metilcrotonil-CoA carboxilasa
3-O-sulfogalactosil cerebrósido sulfatasa (arilsulfatasa A)
acetil-CoA transferasa
alfa-glucosidasa ácida
ceramidasa ácida
lipasa ácida
fosfatasa ácida
esfingomielinasa ácida
alfa-galactosidasa A
arilsulfatasa A
beta-galactosidasa
beta-glucocerebrosidasa
beta-hexosaminidasa
Biotinidasa
catepsina A
catepsina K
CLN3
CLN5
CLN6
CLN8
CLN9
transportador de cistina (cistinosina)
subunidad beta3A de la proteína citosólica del complejo de proteína adaptadora 3, AP3 enzima generadora de formilglicina (FGE)
galactocerebrosidasa
galactosa-1-fosfato uridiltransferasa (GALT)
galactosa 6-sulfato sulfatasa (también conocida como N-acetilgalactosamina-6-sulfatasa) Glucocerebrosidasa
glucuronato sulfatasa
glucuronidasa
enzimas que escinden glicoproteínas
enzimas que escinden glucosaminoglicanos
La información sobre las proteínas lisosomales está disponible en Lubke et al., "Proteomics of the Lysosome", Biochim Biophys Acta. (2009) 1793: 625-635. En algunas realizaciones, la proteína enumerada en la Tabla 3 y codificada por ARNm en las composiciones de la invención es una proteína humana. Las secuencias de las proteínas enumeradas también están disponibles para diversos animales, incluidos diversos mamíferos y animales de interés veterinario o industrial como se describe anteriormente.
En algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína terapéutica (por ejemplo, citosólica, transmembrana, o segregada) tal como las enumeradas en la Tabla 4. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención proporcionan la administración de un ARNm que codifica una proteína terapéutica útil en el tratamiento de una enfermedad o trastorno (es decir, una indicación) enumerada en la Tabla 4; de este modo, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína terapéutica enumerada o no enumerada en la Tabla 4 (o un homólogo de la misma, como se analiza a continuación), junto con otros componentes expuestos aquí, para tratar una enfermedad o trastorno (es decir, una indicación) enumerada en la Tabla 4, y las composiciones de la invención son para uso en métodos que pueden comprender preparar y/o administrar una composición que comprende un ARNm que codifica tal proteína (o un homólogo de la misma, como se analiza a continuación), junto con otros componentes expuestos aquí, para el tratamiento de una enfermedad o trastorno enumerada en la Tabla 4.
Tabla 4. In i i n m l r r ín r l i n
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención se usan para prevenir, tratar y/o curar a un sujeto afectado por una enfermedad o trastorno enumerado o asociado con las proteínas enumeradas en las Tablas 1, 2, 3, o 4. En algunas realizaciones, un ARNm codifica uno o más de regulador de la conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR), argininosuccinato sintetasa (ASS1), Factor IX, neurona motora 1 de supervivencia (SMN1), o fenilalanina hidroxilasa (PAH).
Métodos de administración
La vía de administración usada para las composiciones de la invención permite la autoadministración no invasiva de los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63). En algunas realizaciones, la vía de administración implica la administración intratraqueal o pulmonar mediante aerosolización, nebulización, o instilación de composiciones que comprenden ARNm que codifica una proteína terapéutica en un vehículo de transfección adecuada o portador de lípidos como se describió anteriormente. En algunas realizaciones, la proteína está encapsulada con un liposoma. En algunas realizaciones, el liposoma comprende un lípido, que es un compuesto de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63). Como se usa aquí a continuación, la administración de un compuesto de la invención incluye la administración de una composición que comprende un compuesto de la invención.
Aunque las células y tejidos locales del pulmón representan una diana potencial capaz de funcionar como depósito o reservorio biológico para la producción y secreción de la proteína codificada por el ARNm, los solicitantes han descubierto que la administración de los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) al pulmón mediante aerosolización, nebulización, o instilación da como resultado la distribución incluso de proteínas no segregadas fuera de las células del pulmón. Sin desear estar atados a ninguna teoría particular, se contempla que las composiciones de nanopartículas de la invención pasan, a través de la barrera hematorrespiratoria del pulmón, dando como resultado la traslación de la nanopartícula intacta a células y tejidos no pulmonares, tales como, por ejemplo, el corazón, hígado, bazo, en los que da como resultado la producción de la proteína codificada en estos tejidos no pulmonares. Por lo tanto, la utilidad de los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63) se extiende más allá de la producción de proteína terapéutica en células pulmonares y tejidos del pulmón, y se pueden usar para administrar a células y/o tejidos diana no pulmonares. Son útiles en el manejo y tratamiento de un gran número de enfermedades, y en particular enfermedades periféricas que resultan de enfermedades de deficiencias tanto de proteínas y/o enzimas segregadas como no segregadas (por ejemplo, uno o más trastornos de almacenamiento lisosomal). En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1 -63), para uso en los métodos de la invención, dan como resultado la distribución de las nanopartículas encapsuladas de ARNm y la producción de la proteína codificada en el hígado, el bazo, el corazón, y/u otras células no pulmonares. Por ejemplo, la administración de los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63), mediante aerosolización, nebulización, o instilación al pulmón dará como resultado que la composición en sí y su producto proteico (por ejemplo, la proteína beta galactosidasa funcional)
será detectable tanto en las células y tejidos locales del pulmón, así como también en células, tejidos y órganos diana periféricos como resultado de la translocación del ARNm y del vehículo de administración a células no pulmonares.
En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden usar en métodos para dirigirlos específicamente contra células o tejidos periféricos. Después de la administración pulmonar, se contempla que los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) crucen la barrera hematorrespiratoria pulmonar y se distribuyan a otras células, además de las células pulmonares locales. Por consiguiente, los compuestos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden administrar a un sujeto mediante la vía pulmonar de administración, usando una variedad de enfoques conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, mediante inhalación), y distribuir tanto a las células y tejidos diana locales del pulmón, así como también en células y tejidos periféricos no pulmonares (por ejemplo, células del hígado, bazo, riñones, corazón, músculo esquelético, ganglios linfáticos, cerebro, líquido cefalorraquídeo, y plasma). Como resultado, tanto las células locales del pulmón como las células periféricas no pulmonares pueden servir como reservorios o depósitos biológicos capaces de producir y/o segregar un producto de traducción codificado por uno o más polinucleótidos. Por consiguiente, la presente invención no se limita a composiciones de la presente invención para uso en el tratamiento de enfermedades o afecciones pulmonares, sino que puede usarse como un medio no invasivo para facilitar la administración de polinucleótidos, o la producción de enzimas y proteínas codificadas por ellos, en órganos, tejidos y células periféricos (por ejemplo, hepatocitos) que de otro modo se conseguiría sólo mediante administración sistémica. Las células periféricas no pulmonares ejemplares incluyen, pero no se limitan a, hepatocitos, células epiteliales, células hematopoyéticas, células epiteliales, células endoteliales, células óseas, células madre, células mesenquimatosas, células neuronales, células cardíacas, adipocitos, células del músculo liso vascular, cardiomiocitos, células del músculo esquelético, células beta, células pituitarias, células del revestimiento sinovial, células ováricas, células testiculares, fibroblastos, células B, células T, reticulocitos, leucocitos, granulocitos, y células tumorales.
Después de la administración de la composición al sujeto, el producto proteico codificado por el ARNm (por ejemplo, una proteína o enzima funcional) es detectable en los tejidos diana periféricos durante al menos alrededor de uno a siete días o más después de la administración del compuesto al sujeto. La cantidad de producto proteico necesaria para lograr un efecto terapéutico variará dependiendo de la afección que se esté tratando, la proteína codificada, y el estado del paciente. Por ejemplo, el producto proteico puede ser detectable en los tejidos diana periféricos a una concentración (por ejemplo, una concentración terapéutica) de al menos 0,025-1,5 pg/ml (por ejemplo, al menos 0,050 pg/ml, al menos 0,075 pg/ml, al menos 0,1 pg/ml, al menos 0,2 pg/ml, al menos 0,3 pg/ml, al menos 0,4
pg/ml, al menos 0,5 pg/ml, al menos 0,6 pg/ml, al menos 0,7 pg/ml, al menos 0,8 pg/ml, al menos 0,9 pg/ml, al menos 1,0 pg/ml, al menos 1,1 pg/ml, al menos 1,2 pg/ml, al menos 1,3 pg/ml, al menos 1,4 pg/ml, o al menos 1,5 pg/ml), durante al menos alrededor de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45 días o más después de la administración del compuesto al sujeto.
Se ha demostrado que los ácidos nucleicos se pueden administrar a los pulmones mediante la administración intratraqueal de una suspensión líquida del compuesto y la inhalación de una niebla de aerosol producida por un nebulizador líquido o el uso de un aparato de polvo seco tal como se describe en la patente de EE. UU. 5.780.014.
En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden formular de manera que se puedan aerosolizar o administrar de otro modo como un líquido o sólido en partículas antes o después de la administración al sujeto. Tales compuestos se pueden administrar con la ayuda de uno o más dispositivos adecuados para administrar tales composiciones de partículas sólidas o líquidas (tales como, por ejemplo, una disolución o suspensión acuosa en aerosol) para generar partículas que sean fácilmente respirables o inhalables por el sujeto. En algunas realizaciones, tales dispositivos ( por ejemplo, un inhalador de dosis medida, un nebulizador de chorro, un nebulizador ultrasónico, inhaladores de polvo seco, un inhalador a base de propulsor, o un insuflador) facilitan la administración de una masa, volumen o dosis predeterminada de las composiciones (por ejemplo, alrededor de 0,5 mg/kg de ARNm por dosis) al sujeto. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se administran a un sujeto usando un inhalador de dosis medida que contiene una suspensión o disolución que comprende el compuesto y un propulsor adecuado. En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se pueden formular como un polvo en partículas (por ejemplo, partículas secas respirables) destinados a la inhalación. En ciertas realizaciones, las composiciones de la invención formuladas como partículas respirables tienen un tamaño apropiado de modo que puedan ser respirables por el sujeto o administradas usando un dispositivo adecuado (por ejemplo, un tamaño medio de partículas D50 o D90 menor que alrededor de 500pm, 400pm, 300pm, 250pm, 200pm, 150pm, 100pm, 75pm, 50pm, 25pm, 20pm, 15pm, 12.5pm, 10pm, 5pm, 2,5 pm, o más pequeño). Aún en otras realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se formulan para incluir uno o más tensioactivos pulmonares (por ejemplo, cuerpos laminares). En algunas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se administran a un sujeto de manera que se administra una concentración de al
menos 0,05 mg/kg, al menos 0,1 mg/kg, al menos 0,5 mg/kg, al menos 1,0 mg/kg, al menos 2,0 mg/kg, al menos 3,0 mg/kg, al menos 4,0 mg/kg, al menos 5,0 mg/kg, al menos 6,0 mg/kg, al menos 7,0 mg/kg, al menos 8,0 mg/kg, al menos 9,0 mg/kg, al menos 10 mg/kg, al menos 15 mg/kg, al menos 20 mg/kg, al menos 25 mg/kg, al menos 30 mg/kg, al menos 35 mg/kg, al menos 40 mg/kg, al menos 45 mg/kg, al menos 50 mg/kg, al menos 55 mg/kg, al menos 60 mg/kg, al menos 65 mg/kg, al menos 70 mg/kg, al menos 75 mg/kg, al menos 80 mg/kg, al menos 85 mg/kg, al menos 90 mg/ kg, al menos 95 mg/kg, o al menos 100 mg/kg de peso corporal en una dosis única. En algunas realizaciones, los compuestos de la invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (A), tal como cualquiera de las Fórmulas (I)-(VII) o uno cualquiera de los Compuestos 1-63) se administran a un sujeto de manera que se administra una cantidad total de al menos 0,1 mg, al menos 0,5 mg, al menos 1,0 mg, al menos 2,0 mg, al menos 3,0 mg, al menos 4,0 mg, al menos 5,0 mg, al menos 6,0 mg, al menos 7,0 mg, al menos 8,0 mg, al menos 9,0 mg, al menos 10 mg, al menos 15 mg, al menos 20 mg, al menos 25 mg, al menos 30 mg, al menos 35 mg, al menos 40 mg, al menos 45 mg, al menos 50 mg, al menos 55 mg, al menos 60 mg, al menos 65 mg, al menos 70 mg, al menos 75 mg, al menos 80 mg, al menos 85 mg, al menos 90 mg, al menos 95 mg o al menos 100 mg de ARNm en una o más dosis.
EJEMPLOS
51 bien ciertos compuestos y composiciones de la presente invención se han descrito con especificidad de acuerdo con ciertas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven sólo para ilustrar los compuestos de la invención, y no pretenden limitarlos.
Ejemplo 1: Síntesis de ¡(pidos catiónicos
En realizaciones, un lípido catiónico descrito aquí se puede preparar conjugando un ditiol con un ácido carboxílico en condiciones adecuadas. En la Tabla A se describen ácidos carboxílicos ejemplares, y en la Tabla B se describen ditioles ejemplares. Por consiguiente, los lípidos catiónicos adecuados incluyen los resultantes de cualquier combinación de los precursores descritos en la Tabla A y la Tabla B.
Tabla A. Ácidos carboxílicos
Tabla B. Ditioles
Síntesis de reactivos de ácidos carboxílicos protegidos:
Los ácidos carboxílicos protegidos se pueden preparar como se ilustra en el Esquema A. La conjugación de estos ácidos carboxílicos protegidos con ditioles, y la desprotección posterior, pueden proporcionar los lípidos catiónicos descritos aquí.
En realizaciones, los lípidos catiónicos descritos aquí se pueden usar en la preparación de nanopartículas lipídicas según métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos adecuados incluyen métodos descritos en la Publicación Internacional n° WO 2018/089801.
Ejemplo 3: Expresión in vivo de hEPO tras la inyección IM en ratones BALB/c:
Se administraron por vía intramuscular formulaciones de nanopartículas lipídicas que comprenden ARNm de eritropoyetina humana (hEPO), lípido catiónico, DMG-PEG2000, colesterol y DOPE, para estudiar la administración de ARNm y la expresión de hEPO resultante. A ratones BALB/c machos de 6 a 8 semanas se les administra una única inyección de las formulaciones de LNP en el músculo gastrocnemio a un nivel de dosificación de 0,1 ug. Se recogieron muestras de sangre 6 horas después de la dosis. Los niveles de expresión de la proteína hEPO se midieron en las muestras de suero mediante ELISA, y se presentan en la Figura 1. Estos estudios muestran que los lípidos catiónicos descritos aquí son muy eficaces en la administración de ARNm in vivo, lo que da como resultado una alta expresión de la proteína o polipéptido codificado por el ARNm administrado.
A partir de la descripción anterior, un experto en la técnica puede determinar fácilmente las características esenciales de esta invención, y sin salirse del alcance de la misma, puede realizar diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a diversos usos y condiciones.
Cuando surja alguna inconsistencia con referencias, patentes o solicitudes, estadounidenses o extranjeras, citadas en la solicitud, prevalecerá el material descrito literalmente en este documento.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un lípido catiónico que tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que cada R1 es independientemente alifático de C6-C30; L1 es independientemente -(CR2aR2b)a-, -(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c-; cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o alquilo de C1-C6; cada n es independientemente un número entero de 0-12; cada a es independientemente un número entero de 1 -12; cada b es independientemente un número entero de 1-11; y cada c es independientemente un número entero de 1-11.
  2. 2. El lípido catiónico de la reivindicación 1, en el que (a) cada R2a y R2b es independientemente hidrógeno o metilo; y/o (b) cada L1 es independientemente -(CH2)a-, -(CHCH3)a-, -(CH2CH2S)bCH2CH2-, o -CH2CH2(OCH2CH2)c; y/o (c) L1 es -(CH2)a-; opcionalmente en el que (c)(i) el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (c)(ii) el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (c)(iii) el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  3. 3. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2(a), o 2(b), en el que L1 es -(CHCH3)a-; opcionalmente (i) que tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (ii) que tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  4. 4. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ,2(a) o 2(b), en el que L1 es -(CH2CH2S)bCH2CH2-, y b es 1, 2, 3, 4 o 5; opcionalmente en el que el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  5. 5. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2(a) o 2(b), en el que L1 es -CH2CH2(OCH2CH2)c-, y c es 1,2, 3, 4 o 5; opcionalmente en el que el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  6. 6. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que cada R1 es alquilo de C6-C24; opcionallmente en el que cada R1 es C8H17, C10H21, o C12H25.
  7. 7. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que R1 es alquenilo de C6-C24.
  8. 8. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que R1 es alquinilo de C6-C24.
  9. 9. El lípido catiónico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -8, en el que n es 1,2, 3, o 4.
  10. 10. El lípido catiónico de la reivindicación 1, en el que el lípido catiónico es uno cualquiera de los Compuestos 1 -63:
  11. 11. Una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína, encapsulado dentro de un liposoma, en la que el liposoma comprende un lípido catiónico según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10; que comprende opcionalmente (i) un ARNm que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR); o (ii) un ARNm que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
  12. 12. Una composición que comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma, en la que el liposoma comprende un lípido catiónico según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10.
  13. 13. La composición de la reivindicación 12, en la que el ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o proteína.
  14. 14. La composición de la reivindicación 13, (a) en la que el ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o de una célula pulmonar; opcionalmente en la que el ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR); o (b) en la que el ARNm codifica un péptido o proteína para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o de una célula hepática; opcionalmente en la que el ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
  15. 15. La composición de la reivindicación 11 o 13, en la que el ARNm codifica un péptido o proteína para uso en vacunas; opcionalmente en la que el ARNm codifica un antígeno.
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