ES2971091T3 - Un método para supervisar las respuestas farmacodinámicas mediadas por la administración de glucocorticoides in vivo - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere en general a un método para controlar las respuestas farmacodinámicas mediadas por la administración in vivo de glucocorticoides. Más específicamente, la presente invención se refiere a un método para utilizar un cambio en la firma genética como marcador farmacodinámico de la exposición a glucocorticoides. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Un método para supervisar las respuestas farmacodinámicas mediadas por la administración de glucocorticoidesin vivo
Referencia a solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica el beneficio en virtud de 35 U.S.C. §119(e) de la Solicitud Provisional de EE. UU. N.° de Ser. 62/551839, presentada el 30 de agosto de 2017.
A lo largo de esta solicitud se hace referencia a diversas publicaciones. Las divulgaciones de estas publicaciones describen más en detalle el estado de la materia al que pertenece la presente invención.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un método para determinar la respuesta de una persona a un glucocorticoide y al uso de ese método en el tratamiento de la artritis reumatoide y del lupus eritematoso sistémico mediante el uso de un glucocorticoide.
Antecedentes de la invención
Los glucocorticoides (GC) son fármacos antiinflamatorios eficaces que se utilizan ampliamente para tratar muchas enfermedades humanas, incluyendo la artritis reumatoide (AR), enfermedades inflamatorias intestinales, psoriasis, asma y lupus eritematoso sistémico (LES) (Buttgereit F. Bull NYU Hosp Jt Dis 2012;70 Sup. 1: S26-9). Sin embargo, su utilidad está limitada por las toxicidades de estos medicamentos, que incluyen diabetes, osteoporosis, pérdida muscular, redistribución de grasa y supresión del eje hipotalámico-pituitario-suprarrenal (HPA) (Desmet SJ,et al.,J Clin Invest 2017;127: 1136-45). El riesgo de reacciones adversas nocivos aumenta con dosis más altas y un uso más prolongado (Bijlsma JWJ,et al.Rheumatology 2016;55 Sup. 2:ii3-5; Ruiz-Arruza I,et al.Rheumatology 2014;53:1470-6). A pesar del potencial de reacciones adversas, los glucocorticoides siguen siendo un tratamiento de referencia clave.
Los glucocorticoides median sus efectos biológicos a través de interacciones con un receptor hormonal nuclear, el receptor de glucocorticoides (GR, por sus siglas en inglés) alfa. El receptor de glucocorticoides alfa es un factor de transcripción activado por ligando que induce la transcripción mediante la unión como un homodímero a elementos que responden a glucocorticoides (Weikum ER,et al.Nat Rev Mol Cell Biol 2017;18:159-74). Muchos genes activados por GR tienen actividad antiinflamatoria (Colotta F,et al.Science 1993;261:472-5; Abraham SM,et al.J Exp Med 2006;203:1883-9; Beaulieu E,et al.Nat Rev Rheum 2011;7:340-8). Sin embargo, los genes transactivados también se asocian con reacciones adversas (Cain DW,et al.Nat Rev Immunol 2017;17:233-47). También se ha demostrado que el GR inhibe la actividad de varios factores de transcripción proinflamatorios, incluyendo NF-xB, AP-1, IR3F, CREB, NFAT, STAT, T-Bet y Gata-3, independientemente de la unión al ADN en un proceso denominado transrepresión (Greulich F,et al.Steroids 2016;114:7-15). Se han desarrollado varios glucocorticoides sintéticos con transactivación reducida, pero con actividad de transrepresión intacta en un intento de ampliar la ventana terapéutica (Strehl C,et al.,Exp Opin Invest Drugs 2017;26:187-95).
Además del riesgo de desarrollar efectos perjudiciales, el uso crónico de glucocorticoides también se asocia con<resistencia específica de tejido (Rodríguez>J<m>,et al.<Steroids 2016;115:182-92). Se han descrito varios mecanismos>de resistencia, incluyendo la regulación negativa de la expresión del GR así como la regulación positiva de una isoforma negativa dominante del receptor (Dendoncker K,et al.Cytokine Growth Factor Rev 2017;35:85-96). También<se han descrito polimorfismos del g>R<que modulan la sensibilidad a los agonistas (Straub RH, et al. Rheumatology>2016;55 Sup. 2:ii6-14). Dada la heterogeneidad de las respuestas clínicas a los glucocorticoides, sería extremadamente valioso tener un biomarcador complementario de la actividad biológica de los glucocorticoides.
Sumario de la invención
Los presentes inventores desarrollaron una firma génica basada en genes modulados mediante el tratamiento de células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) de donantes voluntarios sanos normales (VSN) con prednisolona. La sensibilidad de esta firma se confirmó analizando la expresión génica de sangre completa en participantes sanos tras la administración de prednisolona o de un agonista parcial del GR. La expresión de la firma fue mayor en sujetos sanos a los que se les administró prednisolona que en los que recibieron el agonista parcial, en línea con el potencial de transactivación del compuesto. La expresión de la firma en sangre completa de pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) y artritis reumatoide (AR) se correlacionó con efectos farmacodinámicos conocidos mediados por glucocorticoides, incluyendo niveles más altos de neutrófilos en sangre periférica y niveles más bajos de linfocitos en sangre periférica. La expresión de la firma también se alineó con el uso y la dosis notificados de prednisolona en estas cohortes.
La invención comprende un método para determinar la respuesta de una persona a los glucocorticoides que comprende aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona tras la administración del glucocorticoide, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, indica una respuesta al glucocorticoide.
La invención comprende un método para determinar la respuesta de una persona a los glucocorticoides que comprende administrar el glucocorticoide de interés a dicha persona, extraer sangre de la persona a la que se le administró el glucocorticoide de interés, aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona tras la administración del glucocorticoide, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, PHC2, TLR2, TSC22D3, SLA, CRISPLD2, MAN2A2, FAR2, CEBPD, SPTLC2, HSPA6, indica una respuesta al glucocorticoide.
En una realización de la invención, el glucocorticoide de interés es cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona, betametasona budesonida, fluticasona y/o glucocorticoides sintéticos.
En una realización de la invención, la puntuación de la firma génica de control se deriva de sangre extraída de la misma persona previa a la administración de glucocorticoides y/o de sangre extraída de controles sanos normales a los que no se les administró el glucocorticoide.
En una realización de la invención, la muestra de sangre se extrae de la persona a la que se le administra el glucocorticoide de interés 4 horas tras la administración.
En una realización de la invención, la persona que responde al glucocorticoide de interés tiene una puntuación de firma génica al menos 1,5 veces mayor que la del control.
En una realización de la invención, la persona que responde al glucocorticoide de interés tiene una puntuación de firma genética al menos 2 veces mayor que la del control.
La invención comprende un glucocorticoide para usar en un método para tratar a una persona diagnosticada con LES o AR que comprende probar la respuesta de la persona a los glucocorticoides, que comprende:
a. administrar el glucocorticoide de interés a la persona,
b. extraer sangre de la persona de la etapa (a),
c. aislar el ARN de la sangre recogida en la etapa (b),
d. perfilar la expresión génica del ARN aislado en la etapa (c) y
e. comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, e Ch DC3, IL1R2, ZBTB 16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, indica que la persona responderá al glucocorticoide de interés y administrar el glucocorticoide a la persona.
Breve descripción de las figuras
LasFiguras 1A-1Dmuestran los genes regulados por glucocorticoides (GC). Se cultivaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de voluntarios sanos normales (VSN)in vitrodurante 6 horas con prednisolona 1 pM o con vehículo DMSO solo. El ARN se analizó para determinar la expresión génica utilizando el perfilado de Affymetrix. Se muestran los análisis de genes modulados por prednisolona en comparación con el vehículo. Los ejes representan el -log10 del valorpajustado para la FDR frente al factor de cambio. Los genes regulados positivamente(1A)y los regulados negativamente(1B)> 2 veces de prednisolona frente a vehículo se muestran con un valorpajustado para la FDR de < 0,05. Puntuaciones de ssGSEA para los genes regulados positivamente(1C)y los regulados negativamente(1D)para muestras de sangre completa estimuladas con concentraciones crecientes de prednisolonain vitro.**p= 0,005, ***p< 0,001.
LasFiguras 2A-2Emuestran la validación de la firma génica de glucocorticoides utilizando agonistas parciales del GR. Análisis de 2 híbridos de mamíferos del reclutamiento de PGC1(2A)y de TIF2(2B)mediante prednisolona, moduladores del GR BMS-791826 y BMS-776532. Los datos representan el valor medio de los triplicados normalizados respecto a la actividad inducida por dexametasona 200 nM. Se muestra un experimento representativo de 2. Análisis del reclutamiento del GR(2C)y de TIF2(2D)para los promotores deANGPTL4, ALOX5APyLEPREL1mediante prednisolona 1 pM, moduladores del GR BMS-7918261 pM y BMS-7765322 pM, analizados mediante inmunoprecipitación de cromatina seguida de qPCR. Los valores representan la media y las desviaciones típicas de las reacciones por triplicado. Los valores de unión se normalizan respecto a los valores de entrada. ChIP = inmunoprecipitación de cromatina. Los valorespse calcularon mediante la prueba t. *p< 0,01 frente a prednisolona, **p< 0,01 frente a prednisolona, ***p< 0,001 frente a prednisolona, ns = no significativo.
(2E)Puntuaciones de firma génica de GC para muestras de sangre completa cultivadasin vitrocon vehículo de DMSO, prednisolona 5 pM, moduladores del GR BMS-7918265 pM o BMS-776532 10 pM. ***p< 0,001 LasFiguras 3A - 3Bmuestran la validación de la firma génica de GC.(3A)A los VSN se les administró una dosis oral de 150 o 300 mg del modulador GR BMS-791826, 10 mg de prednisolona o de placebo. Se recogió sangre antes de la administración y 4 horas tras la dosificación. Se analizaron los perfiles de expresión en sangre completa para determinar la firma génica de GC. *p= 0,027; ***p< 0,001.(3B)A los VSN se les administraron 5, 10 o 30 mg de prednisolona o placebo (es decir, 0 mg). Se extrajo sangre antes de la administración y en diferentes momentos tras la dosificación (2, 4, 8, 48, 144 y 216 horas). Se analizaron los perfiles de expresión en sangre completa para determinar la firma génica de GC.
LasFiguras 4A-4Bmuestran la relación de la firma génica de GC respecto al uso de GC en cohortes de LES y AR.(4A)Se extrajo sangre completa de VSN y de pacientes con AR y LES. El ARN se aisló y se utilizó para cebar matrices HG-219 de Affymetrix. Las puntuaciones de la firma génica de GC se dividen entre los pacientes que actualmente usan GC (verdadero) frente a los pacientes que reciben otros tratamientos de referencia (falso). Los pacientes sin información sobre el tratamiento figuran en 'ND' (no disponible). **p= 0,003, ***p< 0,001.(4B)Puntuaciones de firma génica de GC para muestras basales de un ensayo en fase II de abatacept de LES. Los pacientes se categorizaron por las dosis de GC (baja, media o alta). ns= no significativo; **p= 0,001.
LasFiguras 5A-5Cmuestran las correlaciones de la firma génica de GC. Los porcentajes de linfocitos T CD4+ de sangre periférica, de linfocitos T CD8+ y de linfocitos B CD19+ de pacientes con LES(5A)y AR(5B)se representan en relación con la puntuación de la firma génica de GC para cada paciente. GB = glóbulos blancos.(5C)Los recuentos de neutrófilos en sangre periférica de las muestras basales del ensayo de abatacept de LES se<representan gráficamente en relación con la puntuación de la firma génica de>G<c para cada paciente. Las>correlaciones se analizaron mediante la prueba de rangos de Spearman.
LasFiguras 6A-6Bmuestran la validación de la firma de GC de 8 genes.(6A)Puntuaciones de la firma génica de GC utilizando una lista abreviada de 8 genes para los participantes de la Prednisolina en la cohorte de hombres sanos 2 a los que se les administró placebo, 150 o 300 mg de modulador del GR BMS-791826 o 10 mg de prednisolona. *p= 0,015; ***p< 0,001.(6B)Puntuaciones de la firma génica de GC utilizando la lista de 8 genes frente a recuentos de neutrófilos en sangre periférica para los participantes en el periodo basal del estudio de abatacept de LES. La correlación se calculó mediante la prueba de rangos de Spearman.
Descripción detallada de la invención
Los glucocorticoides se administran como se describe en la información de prescripción de cada fármaco. En general, la dosis inicial se determina por la gravedad de la entidad patológica específica que se esté tratando. En situaciones de menor gravedad, generalmente serán suficientes dosis más bajas, si bien en pacientes seleccionados pueden necesitarse dosis iniciales más altas. La dosis inicial normalmente se mantiene o se ajusta hasta que se observa una respuesta satisfactoria. Si después de un período de tiempo razonable hay una falta de respuesta clínica satisfactoria, se suspende el glucocorticoide y el paciente recibe otro tratamiento adecuado. Una vez se logra una respuesta favorable, la dosis de mantenimiento adecuada se determina disminuyendo la dosis inicial del fármaco en pequeños incrementos a intervalos de tiempo adecuados hasta alcanzar la dosis más baja que mantendrá una respuesta clínica adecuada. Claramente, poder determinar cómo va a responder un paciente a un glucocorticoide disminuiría el tiempo necesario para optimizar una dosis de mantenimiento del paciente.
Los inventores descubrieron que la expresión de la firma génica de los glucocorticoides es significativamente elevada en los leucocitos de sangre periférica de voluntarios sanos normales (VSN) después de la administración oral del glucocorticoide. La expresión de la firma aumentó de forma dependiente de la dosis, alcanzó su máximo 4 horas tras la administración y volvió al valor basal 48 horas tras la dosis. Se detecta una expresión más baja en VSN a los que se les administra un agonista parcial del receptor de glucocorticoides, coherente con el potencial de transactivación reducido de este compuesto. En cohortes de pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) y artritis reumatoide (AR), la expresión de la firma de glucocorticoides se correlaciona negativamente con los porcentajes de linfocitos en sangre periférica y se correlaciona positivamente con los recuentos de neutrófilos en sangre periférica, coherente con la biología conocida del receptor de glucocorticoides.
Identificación de genes regulados por glucocorticoides
Para supervisar las respuestas dependientes de glucocorticoides en sangre periférica se identificaron genes<modulados por prednisolona en>PBM<c humanas. Se trataron PBMC de 10 donantes voluntarios sanos normales>independientes con control de DMSO o con prednisolona 1 pM durante 6 horas. Los genes con un factor de cambio > 2 y un valorpcorregido por la FDR de < 0,05 se identificaron como genes regulados positiva o negativamente.
Los genes regulados positivamente incluyen ECHDC3, ACSL1, P2RX5, TPST1, TBC1D8, APBA2, SESN1, RNASE1, ABLIM3, RNASE6, BLM, KIF13B, DNMBP, SAP30, SFMBT1, TMEM2, HSPH1, METTL7A, HSPA1B, SLC25A37, VIPR1, FAR2, HSPA6, PHC2, PELI1, POLR1E, SPON2, GFOD1, SPRY1, NDFIP1, MAN2A2, ISG20, RAB31; FKBP5, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, DUSP1, SLCO4A1, TSC33D3, CD163, SLC1A3, ALOX15B, CCND3, RHOB, VSIG4, FLT3, CRISPLD2, ADORA3, RGS1, AMPH, CPM, ANG, CD93, SPTLC2, SERPINE1, ESTS2, TLR2, PER1, DNAJB1, PTK2B, CEBPD, SLA (Figura 1A).
Los genes regulados negativamente incluyen KMO, CCR5, CXCL8, FPR3, PLA2G7, PEA15, TRAF1, CSF2RB, TRDC, OLR1, KIAA0226L, FCGR2B, ATF5, CX3CR1, MYOF, SLAMF7, CD9, IL1RN (Figura 1B).
Muchos de estos genes eran genes conocidos regulados por glucocorticoides (Chinenov Y,et al.,BMC Genomics 2014;15:656). Sin embargo, los genes regulados positivamente ECHDC3, ACSL1, P2RX5, TPST1, TBC1D8, APBA2, SESN1, RNASE1, ABLIM3, RNASE6, BLM, KIF13B, DNMBP, SAP30, SFMBT1, TMEM2, HSPH1, METTL7A, HSPA1B, SLC25A37, VIPR1, FAR2, HSPA6, PHC2, PELI1, POLR1E, SPON2, GFOD1, SPRY1, NDFIP1, MAN2A2, ISG20, RAB31, no se han relacionado previamente con la regulación de glucocorticoides. Varios de los genes regulados positivamente se han asociado previamente con una actividad antiinflamatoria, incluyendo DUSP1 (Abraham SM,et al.,J Exp Med 2006;203:1883-9), TSC22D3 (Beaulieu E,et al.Nat Rev Rheum 2011;7:340-8), IRAK3 (Miyata M,et al.,Nat Commun 2015;6:606) y CD163 (Schaer DJ,et al.,Immunogenetics 2001;53:170-7), si bien que varios de los genes regulados negativamente codificaban quimiocinas, receptores de quimiocinas y otros mediadores proinflamatorios. El análisis de la red de los genes regulados indicó un enriquecimiento de las rutas de respuesta inmunitaria. Se utilizó el algoritmo de análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes de muestra única (ssGSEA) para generar una puntuación compuesta (o firma génica) para el enriquecimiento de estos genes en los transcriptomas de muestras individuales (Barbie DA,et al.Nature 2009;462:108-12). La sangre completa se estimuló con diferentes concentraciones de prednisolonain vitrodurante 5 horas y se calcularon los niveles de expresión de genes regulados positiva y negativamente. La puntuación de ssGSEA para los genes regulados positivamente aumentó de forma dependiente de la dosis (Figura1C). De forma similar, la expresión de los genes regulados negativamente disminuyó de manera dependiente de la dosis (Figura1D). El módulo de genes regulados positivamente tenía un intervalo dinámico mayor y por tanto, este módulo de genes se utilizó para todos los demás análisis.
Para proporcionar más evidencia mecanicista de que este módulo de genes refleja con precisión la actividad del GR, se analizó la actividad de los agonistas parciales del receptor de glucocorticoides (GR). Las actividadesin vitroein vivode dos moduladores selectivos del GR, BMS-776532 y BMS-791826, se han descrito previamente (Weinstein DS,et al.J Med Chem 2011;54:7318-33). Ambos compuestos se unieron al GR y reprimieron a los indicadores dependientes de AP-1 y del factor nuclear kB, pero demostraron una inducción significativamente más débil de un indicador dependiente del GR en comparación con la prednisolona. BMS-791826 fue más potente en ensayos de transrepresión y transactivación en comparación con BMS-776532. El GR modula la transcripción mediante el reclutamiento de correguladores, incluyendo TIF2 (Khan SH,et al.,Biol. Chem. 2012; 287:44546-44560) y PGC1a (Knutti D,et al.,Mol. Cell. Biol. 2000; 20:2411-2422). Se utilizó un sistema de 2 híbridos de mamíferos así como inmunoprecipitaciones de cromatina para caracterizar el potencial de transactivación de estos compuestos. En comparación con la prednisolona, BMS-791826 y BMS-776532 reclutaron significativamente menos PGC1a y TIF2 para el GR, alcanzando un máximo de un 30-75 % del nivel reclutado por la prednisolona (Figura2A, 2B). BMS-791826 reclutó más TIF2 (un 50 % frente a un 30 %), pero cantidades similares de PGC1 a en comparación con BMS-776532. En un ensayo de inmunoprecipitación de cromatina, ambos compuestos reclutaron cantidades significativamente menores del GR (Figura2C), así como de TIF2 (Figura2D) para los promotores de tres genes diana en comparación con la prednisolona, lo que confirma el potencial de transactivación reducido de estos compuestos. Se estimuló sangre completa de dos donantes voluntarios sanos normales e independientesin vitrocon estos compuestos y prednisolona durante 5 horas, seguido del aislamiento de ARN y del perfilado de Affymetrix. Las puntuaciones de la firma génica de glucocorticoides para estas muestras se alinearon bien con el potencial de transactivación de los compuestos: prednisolona > BMS-791826 > BMS-776532 (Figura2E).
La divulgación comprende un método para determinar la respuesta de una persona a los glucocorticoides que comprende estimular la sangre completa extraída de una persona que lo necesita con el glucocorticoide de interés, aislar el ARN de la sangre estimulada, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la puntuación de la firma génica tras la estimulación con una puntuación de la firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes ECHDC3, ACSL1, P2RX5, TPST1, TBC1D8, APBA2, SESN1, RNASE1, ABLIM3, RNASE6, BLM, KIF13B, DNMBP, SAP30, SFMBT1, TMEM2, HSPH1, METTL7A, HSPA1B, SLC25A37, VIPR1, FAR2, HSPA6, PHC2, PELI1, POLR1E, SPON2, GFOD1, SPRY1, NDFIP1, MAN2A2, ISG20, RAB31, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta al glucocorticoide.
La divulgación comprende un método para determinar la respuesta de una persona a los glucocorticoides que comprende estimular la sangre completa extraída de una persona que lo necesita con uno o más glucocorticoides seleccionados del grupo que consiste en cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona, betametasona budesonida, fluticasona y glucocorticoides sintéticos, aislar el ARN de la sangre estimulada, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la puntuación de la firma génica tras la estimulación con una puntuación de la firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes ECHDC3, ACSL1, P2RX5, TPST1, TBC1D8, APBA2, SESN1, RNASE1, ABLIM3, RNASE6, BLM, KIF13B, DNMBP, SAP30, SFMBT1, TMEM2, HSPH1, METTL7A, HSPA1B, SLC25A37, VIPR1, FAR2, HSPA6, PHC2, PELI1, POLR1E, SPON2, GFOD1, SPRY1, NDFIP1, MAN2A2, ISG20, RAB31, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta al glucocorticoide.
Evaluación de la firma génica de glucocorticoides in vivo
Dado que la firma de glucocorticoides (GC) capturó con precisión la actividad agonista del receptor de glucocorticoides (GR)in vitro,se probó el comportamiento de la firma génica de GCin vivo.A voluntarios sanos normales (VSN) se les administró placebo, 10 mg de prednisolona o 150 o 300 mg del modulador del GR BMS-791826. Se extrajo sangre antes y 4 horas tras la dosificación y se analizó el ARN mediante el perfilado de expresión génica de Affymetrix. Las puntuaciones de las firmas de GC para los participantes que recibieron prednisolona fueron significativamente elevadas en el punto temporal de 4 horas en relación con antes de la dosis y el placebo (Figura3A). Las puntuaciones de las firmas para los participantes que recibieron BMS-791826 fueron más altas que los niveles previos a la dosis y para los participantes que recibieron placebo, pero inferiores a los de los participantes del grupo de prednisolona. Para abordar la cinética de la respuesta de la firma génica de GC, se analizaron los perfiles de ARN en sangre completa de VSN a los que se les administraron diferentes dosis de prednisolona. La puntuación de la firma génica de GC aumentó de forma dependiente de la dosis y alcanzó el máximo a las 4 horas tras la dosis (Figura3B). Para todos excepto la dosis más alta de prednisolona, las puntuaciones de la firma génica de GC habían vuelto a los niveles basales 8 horas tras la dosis. La puntuación de la firma estuvo en los niveles basales en todos los grupos 48 horas tras la dosis.
La puntuación de la firma génica de glucocorticoides compuesta es una medida sensible de las respuestasin vivoa la administración de glucocorticoides.
La divulgación comprende un método para determinar la respuesta de una persona a la prednisolona que comprende administrar prednisolona a dicha persona, extraer sangre de la persona a la que se le administró prednisolona 4 horas tras la administración, aislar el<a>R<n>de la sangre extraída, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes ECHDC3, ACSL1, P2RX5, TPST1, TBC1D8, APBA2, SESN1, RNASE1, ABLIM3, RNASE6, BLM, KIF13B, DNMBP, SAP30, SFMBT1, TMEM2, HSPH1, METTL7A, HSPA1B, SLC25A37, VIPR1, FAR2, HSPA6, PHC2, PELI1, POLR1E, SPON2, GFOD1, SPRY1, NDFIP1, MAN2A2, ISG20, RAB31, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta a la prednisolona.
Relación de la firma génica de glucocorticoides con el uso notificado de glucocorticoides
Para determinar si la firma de glucocorticoides podría diferenciar entre pacientes basándose en el estado del tratamiento, se analizó la expresión de la firma en cohortes transversales de pacientes con LES o AR. En relación con los controles sanos normales o con los pacientes tratados con otras medicaciones de tratamientos de referencia, los pacientes con LES o AR a los que se les recetaron glucocorticoides tuvieron puntuaciones de firma elevadas (Figura4A). Si bien las firmas de glucocorticoides fueron elevadas, hubo una variabilidad significativa entre pacientes en las puntuaciones de las firmas. Se analizaron muestras basales de un estudio de fase II de abatacept en LES (Fleishaker DL,et al.,BMC Musculoskelet Disord 2016;17:29) para la expresión de la firma génica de glucocorticoides (Figura4B). Las puntuaciones de la firma génica de glucocorticoides generalmente se alinearon bien con la dosis de prednisona notificada cuando se clasifican en dosis altas (> 30 mg), medias (10-30 mg) y bajas (< 10 mg). Sin embargo, nuevamente hubo una variabilidad significativa entre pacientes en las puntuaciones de la firma génica de glucocorticoides en todos los grupos. Esto podría reflejar resistencia a los esteroides en algunos pacientes o problemas de observancia con algunos pacientes.
Correlación de la firma génica de glucocorticoides con otros criterios de valoración farmacodinámicos
Se sabe que los glucocorticoides causan la redistribución de subconjuntos de leucocitos mediante la desmarginación de neutrófilos de la médula ósea o el secuestro de poblaciones de linfocitos en órganos linfoides (Merayo-Chalico J,et al.,Hum Immunol 2016;77:921-6; Spies CM,et al.,Arthritis Res Ther 2014;16 Sup. 2:S3). Para determinar si la firma de glucocorticoides se correlacionaba con estos criterios de valoración farmacodinámicos, se analizó la sangre periférica de pacientes con LES y AR para detectar linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ y linfocitos B CD19+. La expresión de la firma de glucocorticoides se correlacionó negativamente con los porcentajes de estos subconjuntos en la sangre periférica de pacientes con LES (Figura5A) y de pacientes con AR (Figura5B). En el ensayo de abatacept de LES, las puntuaciones de las firmas de glucocorticoides se correlacionaron positivamente con los recuentos de neutrófilos (Figura5C).
Por tanto, la expresión de la firma génica de glucocorticoides se correlaciona con la biología conocida de los glucocorticoides tanto en pacientes con LES como con AR.
Refinamiento de la firma génica de glucocorticoides
Un mayor refinamiento de la firma génica de 64 miembros facilitaría su implementación en la clínica. La lista de 64 genes regulados positivamente se refinó a los genes regulados positivamente que resultaron inducidos más de 1,5 veces con un valorpajustado para la FDR de < 0,05 comparando pacientes a los que se les administró prednisolona frente a placebo en el ensayo de la Prednisolina en la cohorte de hombres sanos 2. La lista se filtró además para determinar la expresión detectable en el ensayo de abatacept de LES. De los 64 genes iniciales, 18 (FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, PHC2, TLR2, TSC22D3, SLA, CRISPLD2, MAN2A2, FAR2, CEBPD, SPTLC2, HSPA6) cumplieron estos criterios. Los 3 genes principales (FKBP5, ECHDC3 e IL1R2), los 6 genes principales (FKBP5, ECHDC3 IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3) y los 8 genes principales (FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1) de la lista se utilizaron para calcular las puntuaciones de ssGSEA.
El análisis del estudio de la Prednisolina en la cohorte de hombres sanos 2 del agonista parcial del GR con esta firma abreviada capturó completamente el comportamiento de la firma de 64 genes (Figura6A). Similar a la firma generada con los 64 genes regulados positivamente, la firma de 8 genes reflejó con precisión el potencial de transactivación del agonista parcial y de la prednisolona después de la administraciónin vivode estos compuestos. La firma de 8 genes también se correlacionó positivamente con los recuentos de neutrófilos en sangre periférica del ensayo de abatacept de LES, con un valorpsimilar al de la correlación generada con la lista de 64 genes (Figura6B). Los presentes inventores concluyen que un ensayo de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para estos 8 genes sería un biomarcador sensible de la actividad farmacodinámica de los glucocorticoides, que puede implementarse con una simple extracción de sangre completa.
La invención comprende un método para determinar la respuesta de una persona a la prednisolona que comprende aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona 4 horas tras la administración de la prednisolona, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la firma génica tras la administración con una firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta a la prednisolona.
La invención comprende un método para determinar la respuesta de una persona a la prednisolona que comprende aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona 4 horas tras la administración de la prednisolona, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la firma génica tras la administración con una firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, PHC2, TLR2, TSC22D3, SLA, CRISPLD2, MAN2A2, FAR2, CEBPD, SPTLC2, HSPA6, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta a la prednisolona.
La divulgación comprende un método para determinar la respuesta de una persona a la prednisolona que comprende administrar prednisolona a dicha persona, extraer sangre de la persona a la que se le administró prednisolona 4 horas tras la administración, aislar el a Rn de la sangre extraída, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la firma génica tras la administración con una firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes FKBP5, ECHDC3, IL1R2, en donde un aumento en la firma génica indica una respuesta a la prednisolona.
La divulgación comprende un método para determinar la respuesta de una persona a la prednisolona que comprende administrar prednisolona a dicha persona, extraer sangre de la persona a la que se le administró prednisolona 4 horas tras la administración, aislar el ARN de la sangre extraída, perfilar la expresión génica del ARN aislado y comparar la firma génica tras la administración con una firma génica de control, en donde la firma génica comprende los genes FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, en donde un aumento en la puntuación de la firma génica indica una respuesta a la prednisolona.
CONCLUSIÓN
Los glucocorticoides siguen siendo un pilar del tratamiento de muchas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias debido a su potente actividad antiinflamatoria. Sin embargo, el uso crónico se asocia con un mayor riesgo de efectos tóxicos. Dado este riesgo y la importante variabilidad entre pacientes en la respuesta clínica a los glucocorticoides, se necesita una farmacodinámica sensible objetiva que facilitará la selección adecuada de la dosis.
La firma génica de glucocorticoides de la divulgación se desarrolló basándose en experimentos de perfilado de la expresiónin vitroutilizando PBMC derivadas de VSN. Los genes inducidos por el tratamiento de glucocorticoides, en lugar de genes regulados negativamente, se centraron debido a un intervalo dinámico más amplio entre los donantes. Se utilizó el algoritmo ssGSEA para generar una puntuación compuesta que se puede aplicar a muestras o pacientes individuales. Este algoritmo pareció detectar con sensibilidad respuestas transcripcionales dependientes de glucocorticoides basándose en varias observaciones. La puntuación de la firma de glucocorticoides reflejó con precisión el potencial de transactivación de los agonistas parciales del GR sintéticos, a partir tanto de estudiosin vitrode perfiles de sangre completa como de estudiosin vivoque utilizaron muestras obtenidas después de la administración oral de agonistas del GR totales y parciales. Las puntuaciones de las firmas también capturaron la respuesta a la dosis para glucocorticoides tantoin vitrocomoin vivo.
Cuando el método de divulgación se aplicó a muestras de cohortes transversales de pacientes con LES y AR, las puntuaciones de las firmas de glucocorticoides fueron más altas en los pacientes que usaban glucocorticoides en comparación con los que tomaban otras medicaciones de tratamientos de referencia sin glucocorticoides. En las muestras basales de un ensayo de abatacept de LES, las puntuaciones de las firmas de glucocorticoides aumentaron progresivamente a medida que aumentaron las dosis de esteroides.
La firma génica de glucocorticoides de la divulgación tiene utilidad no solo como parte de la práctica clínica, sino también para ayudar a determinar los posibles efectos de confusos de los esteroides en ensayos clínicos. En las muestras basales del ensayo de abatacept de LES, las puntuaciones de las firmas génicas de glucocorticoides generalmente se correlacionaron con las dosis de esteroides notificadas. Sin embargo, se observó una variabilidad significativa entre pacientes dentro de cada grupo de dosis. El método de la invención se puede utilizar para determinar si un paciente tiene resistencia a los glucocorticoides o no cumple con el protocolo del estudio.
Dados los fuertes efectos antiinflamatorios de los glucocorticoides, los ensayos a menudo incluyen el requisito de reducir gradualmente o incluso suspender los glucocorticoides. La firma génica de glucocorticoides de la divulgación proporciona un método objetivo para evaluar el cumplimiento del protocolo. El cálculo de la puntuación de la firma de 8 genes se puede realizar fácilmente con qPCR u otras plataformas utilizando colecciones de sangre completa. Resumiendo, la firma génica de la divulgación tiene una amplia utilidad para supervisar las respuestas a los glucocorticoides en las numerosas indicaciones para las que se prescriben.
Ejemplo 1
Identificación de genes regulados por glucocorticoides
Se aislaron linfocitos de la sangre de 10 donantes independientes mediante centrifugación en gradiente de Ficoll. Las células se cultivaron a 5 millones de linfocitos/pocillo de una placa de bloque de fondo plano de 96 pocillos (Qiagen, Hilden, Alemania) en 500 pl de medio de ensayo (RPMI-1640 con GlutaMAX, suero fetal bovino desprovisto de carbón al 10 %; Gibco Laboratories, Gaithersburg, Maryland, EE. UU.). Las células se cultivaron durante 6 horas con vehículo de dimetilsulfóxido (DMSO) o con prednisolona 1 pM. Después de 6 horas, las células se sedimentaron y se resuspendieron en 1 ml de solución de lisis de purificación de ácido nucleico (Applied Biosystems, Foster City, California, EE. UU.) diluidas 1:2 con solución salina tamponada con fosfato sin calcio y sin magnesio (Invitrogen, Carlsbad, California, EE. UU.). Las células se incubaron en tampón de lisis durante 10 minutos a temperatura ambiente y a continuación, se almacenaron a -80 °C. El ARN se aisló utilizando el kit de aislamiento Qiagen RNeasy de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Para el perfilado de la sangre completa, se cultivó sangre completa que contenía solución anticoagulante citrato dextrosa de 4 voluntarios sanos normales con vehículo de DMSO, prednisolona 200 nM, prednisolona 1 pM, prednisolona 5 pM, moduladores del GR BMS-791826 5 pM o BMS-776532 10 pM durante 5 horas, seguido de transferencia a un tubo PAXgene. Se aisló el ARN total y a continuación, se trató con DNasa I y se limpió usando un kit de limpieza Qiagen RNeasy MinElute. Las concentraciones de ARN se determinaron utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EE. UU.) y la calidad del ARN se evaluó utilizando el sistema de electroforesis Experion (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, EE. UU.). Todos los reactivos de etiquetado objetivo se adquirieron en Affymetrix (West Sacramento, California, EE. UU.).
Se sintetizaron ADNc de doble cadena a partir de 1 pg de ARN total mediante transcripción inversa con un cebador oligo-dT que contenía el promotor de la ARN polimerasa T7 y conversión de doble cadena utilizando el sistema de síntesis de ADNc (Invitrogen, Carlsbad, California, EE. UU.). Se generó ARNc marcado con biotina a partir del ADNc y se usó para cebar una placa de genoma humano HT_HG-U133A (Affymetrix, Sunnyvale, California, EE. UU.), que consiste en 96 matrices individuales HG-U133A en una placa de 96 pocillos. Todos las etapas de preparación objetivo de ADNc y ARNc se procesaron en una estación Caliper GeneChip Array de Affymetrix. La hibridación de la matriz, el lavado y la exploración se realizaron de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
Desarrollo y puntuación de las firmas génicas
Los archivos CEL de Affymetrix Array Station se procesaron y normalizaron utilizando el algoritmo Robust Multi-Array Average (RMA) (Gautier I,et al.,Bioinformatics 2004;20:307-15) utilizando el paquete "Affy" en R (versión 3.2.1; 16) y Bioconductor (Gentleman RC,et al.Genome Biol. 2004, 5 (10):R80) con archivos CDF personalizados de BrainArray (versión 18.0.0; Dai M.,et al.,Nucleic Acids Res 2005;33:e175). Se realizó un análisis de expresión génica diferencial para comparar los niveles de expresión génica en muestras tratadas con prednisolona frente a muestras de control, utilizando una prueba t moderada (Ritchie ME,et al.,Nucleic Acids Res 2015;43:e47) en Array Studio (OmicSoft, Cary, Carolina del Norte, EE. UU.). Los valorespse ajustaron utilizando el método de corrección de pruebas múltiples, que también se denomina tasa de descubrimientos falsos (FDR, por sus siglas en inglés, Benjamini Y,et al.,J. Royal Statistical Soc., Serie B 1995; 57:289). Los genes que estaban regulados positiva o negativamente en al menos 2 veces con un valorpde < 0,05 en todos los experimentos se notificaron como las firmas génicas de GC.
Para puntuar una muestra individual según el nivel de enriquecimiento de las firmas génicas de GC, los presentes inventores adaptaron el algoritmo de análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes de muestra única (ssGSEA) (Barbie DA,et al.,Nature 2009;462:108-12) para generar una puntuación compuesta, que se implementó utilizando el paquete Gene Set Variation Analysis en R (versión 3.4.0, Hanzelmann S,et al.,BMC Bioinformatics 2013;14:7). El algoritmo se modificó para que las puntuaciones de enriquecimiento cayeran entre -1 y 1, representando la clasificación más baja a la más alta posible de genes de GC en el transcriptoma.
Análisis de 2 híbridos de mamíferos
Se clonaron secuencias que codifican el coactivador del receptor y activado por el proliferador de peroxisomas 1 -alfa (PGC1a) humano de longitud completa o mediadores transcripcionales/factor intermediario 2 (TIF2) humanos de longitud completa en fase con el dominio de unión al ADN GAL4 en el vector pM (Clontech, Mountain View, California, EE. UU.). Se clonó el GR humano de longitud completa en fase con el dominio de activación de VP16 en el vector pVP16 (Clontech). Las células de neuroblastoma humano SK-N-MC (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, EE. UU.) se cotransfectaron con estos plásmidos y un indicador de luciferasa dependiente de GAL4 (pGF-luc; Promega, Madison, Wisconsin, EE. UU.). Los transfectantes se estimularon con dexametasona 200 nM o con diferentes concentraciones de prednisolona, moduladores del GR BMS-791826 o BMS-776532. La actividad de luciferasa se midió 48 horas tras la transfección.
Inmunoprecipitación de cromatina
Para las inmunoprecipitaciones de cromatina, se cultivaron células A549 durante 1 hora con DMSO, prednisolona 1 |jM, moduladores del GR BMS-791826 1 jM o BMS-7765322 |<j>M en RPMI con suero de ternera fetal desprovisto de carbón al 10 %. Las células se fijaron con formaldehído y se enviaron a Active Motif (Carlsbad, California, EE. UU.) para el análisis del reclutamiento del GR y de TIF2 en secuencias promotoras específicas mediante la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR).
Cohortes de pacientes
Cohortes transversales de lupus eritematoso sistémico (LES) y de artritis reumatoide (AR)
En 2014 y 2015 se obtuvo sangre periférica de 86 pacientes con LES durante visitas de rutina en Northwell Health (Great Neck, Nueva York, EE. UU.). Los pacientes estaban bajo tratamiento de referencia para LES general o nefritis lúpica que incluía hidroxicloroquina, micofenolato de mofetilo, glucocorticoides y/o belimumab. Las características de los pacientes fueron las siguientes: edad, 45 ± 14 años (media ± DT); mujer, 85 %; puntuación del índice de actividad de la enfermedad LES 2000 (SLEDAI-2K), 3,7 ± 3,2 (media ± DT); historial de nefritis lúpica, 43 %; duración de la enfermedad, 15 ± 13 años (media ± DT).
Para la cohorte de AR, se obtuvo sangre en 2014 y 2015 de 84 pacientes durante visitas de rutina en Brigham and Women's Hospital, Boston, Massachusetts o en Northwell Health, Great Neck, Nueva York. Los pacientes estaban en tratamiento de referencia para la AR que incluía metotrexato, hidroxicloroquina, tofacitinib, abatacept, agentes biológicos anti-factor de necrosis tumoral, tocilizumab, glucocorticoides y/o agentes antiinflamatorios no esteroideos. Las características de los pacientes fueron las siguientes: edad, 57 ± 14 años (media ± DT); mujer, 77 %; criterios del American College of Rheumatology de 2010 para la puntuación de artritis reumatoide, 7,8 ± 1,6 (media ± DT); duración de la enfermedad, 17 ± 10 años (media ± DT). En cada visita se recogió un tubo de sangre PAXgene, así como sangre heparinizada. La sangre se envió durante la noche y se procesó a su llegada para un análisis de clasificación de células activadas por fluorescencia. También se recogieron tubos de sangre PAXgene de voluntarios sanos normales de la misma edad y sexo (Bristol-Myers Squibb, Princeton, Nueva Jersey, EE. UU.). Se aisló ARN de tubos de sangre PAXgene y se utilizó para sondear matrices de genes HG-U219 de Affymetrix utilizando los protocolos descritos anteriormente.
Cohorte clínica de abatacept de LES (NCT00119678)
Las recogidas basales de PAXgene y los hemogramas se obtuvieron de 144 adultos con LES que cumplían con los criterios de una puntuación A o B del British Isles Lupus Assessment Group (BILAG). La población basal estaba compuesta por un 53 % de pacientes con poliartritis, un 35 % con lupus discoide y un 12 % con serositis. En conjunto, un 87 % de los pacientes tomaban prednisona, un 50 % tomaba hidroxicloroquina y un 41 % tomaba inmunosupresores (metotrexato, azatioprina o micofenolato de mofetilo).
Prednisololina en la cohorte de hombres sanos 1 (NCT03196557)
Se asignaron aleatoriamente voluntarios masculinos sanos normales (6 participantes/grupo) para recibir dosis diarias de 5, 10 o 30 mg de prednisolona durante 7 días. Dos participantes recibieron placebo. Los tubos de PAXgene se recogieron antes de la dosificación y 2, 4, 8, 48, 144 y 216 horas tras la dosis.
Prednisololina en la cohorte de hombres sanos 2 (NCT03198013)
Se asignaron aleatoriamente voluntarios masculinos sanos normales para recibir un placebo de solución de polietilenglicol (PEG)-400 (4 participantes); una dosis oral única diaria del modulador del GR BMS-791826 (150 o 300 mg) como una solución de PEG-400 (6 participantes/dosis); o una dosis única diaria de 10 mg de prednisolona (4 participantes) durante 3 días consecutivos. Los tubos de PAXgene se recogieron antes de la dosificación y 4 horas tras la dosis el día 1.
Fenotipado de sangre periférica
La sangre completa heparinizada se tiñó con cócteles premezclados de anticuerpos seguidos de lisis y fijación. Los anticuerpos utilizados para el panel de LES incluyeron CD3-eF450 (clon OKT3; eBioscience, San Diego, California, EE. UU.), CD4-PE-Cy7 (clon OKT4; BioLegend, San Diego, California, EE. UU.), CD8-APC-H7 (clon SK1; BD Biosciences, San José, California, EE. UU.) y CD19-BV421 (clon HIB19; BioLegend).
Los anticuerpos utilizados para el panel de AR incluyeron CD19-BV421, CD3-Ax700 (clon OKT3; BioLegend), CD4-Percp-Cy5.5 (clon RPA-T4; eBioscience) y CD8-Bv785 (clon RPA-T8; BioLegend).
Claims (10)
1. Un método para determinar la respuesta de una persona a un glucocorticoide que comprende:
a) aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona tras la administración del glucocorticoide, b) perfilar la expresión génica del ARN aislado en la etapa (a) y
c) comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control,
en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1 y DUSP1, indica una respuesta al glucocorticoide.
2. Un método para determinar la respuesta de una persona a un glucocorticoide que comprende:
a) aislar el ARN de una muestra de sangre extraída de la persona tras la administración del glucocorticoide, b) perfilar la expresión génica del ARN aislado en la etapa (a) y
c) comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control,
en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1, DUSP1, PHC2, TLR2, TSC22D3, SLA, CRISPLD2, MAN2A2, FAR2, CEBPD, SPTLC2 y HSPA6, indica una respuesta al glucocorticoide.
3. El método de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en donde el glucocorticoide de interés se selecciona del grupo que consiste en cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona, betametasona budesonida, fluticasona y glucocorticoides sintéticos.
4. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la firma génica de control se obtiene de la misma persona antes de la administración de glucocorticoides o de controles sanos normales a los que no se les ha administrado el glucocorticoide.
5. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde un aumento de 1,5 veces en la puntuación de la firma génica en comparación con el control indica una respuesta al glucocorticoide.
6. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde un aumento de 2 veces en la puntuación de la firma génica en comparación con el control indica una respuesta al glucocorticoide.
7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la muestra de sangre se ha recogido de la persona 4 horas tras la administración del glucocorticoide.
8. Un glucocorticoide para usar en un método para tratar a una persona diagnosticada con artritis reumatoide (AR) que comprende probar la respuesta de la persona a los glucocorticoides, que comprende:
a. administrar el glucocorticoide de interés a dicha persona,
b. extraer sangre de la persona de la etapa (a),
c. aislar el ARN de la sangre recogida en la etapa (b),
d. perfilar la expresión génica del ARN aislado en la etapa (c) y
e. comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control,
en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1 y DUSP1, indica que la persona responderá al glucocorticoide; y administrar el glucocorticoide a la persona.
9. Un glucocorticoide para usar en un método para tratar a una persona diagnosticada con lupus eritematoso sistémico (LES) que comprende probar la respuesta de la persona a los glucocorticoides, que comprende:
a. administrar el glucocorticoide de interés a dicha persona,
b. extraer sangre de la persona de la etapa (a),
c. aislar el ARN de la sangre recogida en la etapa (b),
d. perfilar la expresión génica del ARN aislado en la etapa (c) y
e. comparar la puntuación de la firma génica tras la administración con una puntuación de la firma génica de control,
en donde un aumento en la puntuación de la firma génica para FKBP5, ECHDC3, IL1R2, ZBTB16, IRS2, IRAK3, ACSL1 y DUSP1, indica que la persona responderá al glucocorticoide; y administrar el glucocorticoide a la persona.
10. El glucocorticoide para usar de acuerdo con la reivindicación 8 o con la reivindicación 9, en donde la etapa (b) se realiza 4 horas tras la administración del glucocorticoide.
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