ES2968255T3

ES2968255T3 - Anticuerpos anti-péptidos beta amiloides N3-beta-glu y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2968255T3
Application number: ES17703491T
Authority: ES
Inventors: Ronald Bradley Demattos; Jirong Lu; Ying Tang
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2016-01-15
Filing date: 2017-01-10
Publication date: 2024-05-08
Anticipated expiration: 2037-01-10
Also published as: TWI634126B; CN108473566A; MX2018008557A; IL259748B; KR102141969B1; IL259748B2; EP3402817B1; CN114891100A; BR112018011308A2; EP3402817A1; EA037784B1; JP6634158B2; EA201891286A1; KR20180086268A; US9944696B2; ZA201901207B; CN108473566B; JOP20170004B1; AU2017207250B2; WO2017123517A1

Abstract

Anticuerpos contra N3pGlu Aβ humano, composiciones que comprenden dichos anticuerpos N3pGlu Aβ y métodos para usar dichos anticuerpos N3pGlu Aβ para el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de Aβ que incluye enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, síndrome de Down y enfermedad clínica o preclínica. Angiopatía amiloide cerebral. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Anticuerpos anti-péptidos beta amiloides N3-beta-glu y usos de los mismos

La presente invención se refiere a anticuerpos que se unen al péptido beta amiloide N3pGlu y su uso en el tratamiento de enfermedades relacionadas con el péptido beta amiloide (en lo sucesivo denominado Ap o Abeta). La invención, definida por las reivindicaciones y cualesquiera otros aspectos, configuraciones o realizaciones expuestos en el presente documento pero que no entran en el alcance de las reivindicaciones, son meramente informativos.

Cualquier referencia en la descripción a procedimientos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

La escisión de la proteína precursora amiloide da lugar a péptidos Ap cuyo tamaño oscila entre 38 y 43 aminoácidos. La conversión de Ap de formas solubles a insolubles con alto contenido en láminas p y la deposición de estas formas insolubles en forma de placas neuríticas y cerebrovasculares en el cerebro se han asociado a diversas afecciones y enfermedades, como la enfermedad de Alzheimer (EA), el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral (AAC).

Los depósitos que se encuentran en las placas están comprendidos de una mezcla heterogénea de péptidos Ap. El<N3pGlu Ap, también denominado N3pE, pE3-42 o App>3-42<, es una forma truncada del péptido Ap y se encuentra>únicamente en las placas. El N3pGlu Ap carece de los dos primeros residuos de aminoácidos en el N-terminal de Ap humano y tiene un piroglutamato que se derivó del ácido glutámico en la tercera posición de aminoácidos. Aunque el péptido N3pGlu Ap es un componente menor del Ap depositado en el cerebro, los estudios han demostrado que el péptido N3pGlu Ap tiene propiedades de agregación agresivas y se acumula en una fase temprana de la cascada de deposición.

Los anticuerpos contra N3pGlu Ap son conocidos en la técnica. Por ejemplo, Patente US número 8.679.498 o el documento WO2012/021475, divulga anticuerpos Ap N3pGlu humanos (por ejemplo, B12L) y procedimientos de tratamiento de enfermedades, como la enfermedad de Alzheimer, con dichos anticuerpos. Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de anticuerpos N3pGlu Ap con mayor afinidad, mejor termoestabilidad, menor unión inespecífica y menores niveles de inmunogenicidad. Tales anticuerpos N3pGlu Ap proporcionarían un perfil de seguridad mejorado para un potencial terapéutico humano con farmacocinética para un mejor esquema de dosificación.

Los anticuerpos dentro del ámbito de la presente invención poseen estas características deseables. La presente invención proporciona un anticuerpo que se une a N3pGlu Ap humano, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, y una región variable de cadena pesada (HCVR) con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un anticuerpo que se une a N3pGlu Ap humano, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera (<l c>V<r>) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, y una región variable de cadena pesada (HCVR) con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8.

En una realización, la presente invención proporciona un anticuerpo que se une a N3pGlu Ap humano, que comprende una cadena ligera (LC) y una cadena pesada (HC), en la que la secuencia de aminoácidos de la LC es la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12, y la secuencia de aminoácidos de la HC es la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un anticuerpo que se une al N3pGlu Ap humano, que comprende una cadena ligera (LC) y una cadena pesada (HC), en la que la secuencia de aminoácidos de la LC es la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:13, y la secuencia de aminoácidos de la HC es la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:11. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un anticuerpo que comprende dos LC y dos HC, en el que la secuencia de aminoácidos de cada LC es SEQ ID NO:12 o 13, y la secuencia de aminoácidos de cada HC es SEQ ID NO:11. En una realización más particular, la presente invención proporciona un anticuerpo que comprende dos LC y dos HC, en el que la secuencia de aminoácidos de cada LC es la SEQ ID NO:12, y la secuencia de aminoácidos de cada HC es la SEQ ID NO:11. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un anticuerpo que comprende dos LC y dos HC, en el que la secuencia de aminoácidos de cada LC es SEQ ID NO:13, y la secuencia de aminoácidos de cada HC es SEQ ID NO:11.

El anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo N3pGlu Ap que comprende una LCVR y una HCVR, en el que dicha LCVR comprende LCDR1, LCDR2 y LCDR3, y en el que dicha HCVR comprende HCDR1, HCDR2 y HCDr 3, y en el que las secuencias de aminoácidos de dichas CDR son SEQ ID NO:4 para LCDR1, SEQ ID NO:6 para LCDR2, SEQ ID NO:7 para LCDR3, SEQ ID NO:1 para HCDR1, SEQ ID NO:2 para HCDR2 y SEQ ID NO:3 para HCDR3

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo de la presente invención y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Además, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar una enfermedad caracterizada por la deposición de Ap, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una composición farmacéutica de la presente invención. En particular, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar o prevenir la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la AAC clínica o preclínica que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de un anticuerpo de la presente invención. Más particularmente, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar o prevenir una afección seleccionada entre EA prodrómica (a veces también denominada deterioro cognitivo leve relacionado con Ap, o DCL), EA leve, EA moderada y EA grave, que comprende administrar a un paciente que la necesita una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado de enfermedad de Alzheimer preclínica o enfermedad de Alzheimer clínica, que comprende la administración de una composición farmacéutica de la presente invención. Más particularmente, la presente invención proporciona además un procedimiento para ralentizar el deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave, que comprende administrar una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el declive funcional en un paciente diagnosticado con enfermedad de Alzheimer preclínica o enfermedad de Alzheimer clínica, que comprende la administración de una composición farmacéutica de la presente invención. Más particularmente, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el deterioro funcional en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave, que comprende la administración de una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para reducir la carga de la placa amiloide Ap cerebral en un paciente diagnosticado de enfermedad de Alzheimer preclínica o clínica, que comprende administrar una composición farmacéutica de la presente invención. Más particularmente, la presente invención proporciona un procedimiento para reducir la carga de la placa amiloide Ap cerebral en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave, que comprende administrar una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir la pérdida de memoria o el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos con niveles bajos de Ap1-42 en el líquido cefalorraquídeo (CSF) o placas de Ap en el cerebro que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de tratamiento de pacientes asintomáticos que se sabe que tienen una mutación genética causante de la enfermedad de Alzheimer, que comprende la administración a dicho paciente de una composición farmacéutica de la presente invención. En una realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar pacientes asintomáticos que se sabe que tienen una mutación genética Ps En I E280A causante de la enfermedad de Alzheimer (mutación Paisa), que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención. En otra realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar pacientes asintomáticos con una mutación genética que cause la enfermedad de Alzheimer autosómica dominante, que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir la pérdida de memoria o el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos que se sabe que tienen una mutación genética causante de la enfermedad de Alzheimer, que comprende la administración a dicho paciente de una composición farmacéutica de la presente invención. En una realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir la pérdida de memoria o el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos que se sabe que tienen una mutación genética PSEN1 E280A causante de la enfermedad de Alzheimer (mutación Paisa), que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención. En otra realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para prevenir la pérdida de memoria o el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos con una mutación genética que causa la enfermedad de Alzheimer autosómica dominante, que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el deterioro cognitivo en un paciente asintomático que se sabe que tiene una mutación genética causante de la enfermedad de Alzheimer, que comprende la administración a dicho paciente de una composición farmacéutica de la presente invención. En una realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos que se sabe que tienen una mutación genética PSENl E280A causante de la enfermedad de Alzheimer (mutación Paisa), que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención. En otra realización particular, la presente invención proporciona un procedimiento para ralentizar el deterioro cognitivo en pacientes asintomáticos con una mutación genética que causa la enfermedad de Alzheimer autosómica dominante, que comprende administrar a dicho paciente una composición farmacéutica de la presente invención.

La presente invención también proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en terapia. En una realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de Ap. En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica. En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en el tratamiento de una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave. En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en la ralentización del deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica. En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo de la presente invención para su uso en la ralentización del deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una enfermedad seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la presente invención para su uso en terapia. En una realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo para su uso en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de Ap.

La presente invención también proporciona el uso de un anticuerpo de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de Ap. En una realización, la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica. En una realización, la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de EA prodrómica, EA leve, EA moderada o EA grave. En otra realización, la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo de la presente invención en la fabricación de un medicamento para ralentizar el deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica. En otra realización, la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo de la presente invención en la fabricación de un medicamento para ralentizar el deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave.

También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia<polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:>8<. También se>divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de s Eq ID NO:10.

En una realización, la presente invención proporciona una molécula de ADN que comprende una secuencia<polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:>8<, y que comprende>una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia<polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:>8<, y que>comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:10.

También se da a conocer, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13. En otra realización, la presente invención proporciona una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:11, y que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:12. En otra realización, la presente invención proporciona una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, y que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13. En otra realización, la presente invención proporciona una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO:11, y una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:12. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, y una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13. En una divulgación particular, la secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 es SEQ ID NO:14 y la secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12 es SEQ ID NO:15. En otra divulgación particular, la secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 es SEQ ID NO:14 y la secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13 es SEQ ID NO:16.

Además, la presente divulgación proporciona una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 y una molécula de ADN que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID<n>O:11 y un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:12. También se divulga, pero no forma parte de la invención, una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 y una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13. También se divulga una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 y un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13. La línea celular de mamífero es una línea celular de ovario de hámster chino (CHO) o de riñón embrionario de hámster (HEK).

También se divulga, pero no forma parte de la invención, una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos<de SEQ ID n O>:8<y/o una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido>que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:9, en la que la célula es capaz de expresar un anticuerpo<que comprende una HCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO>:8<y una LCVR que tiene la>secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:9. Preferentemente, la célula de mamífero comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos<SEQ ID NO>:8<y un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ iD NO:9. También se divulga, pero no>forma parte de la invención, una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una<secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO>:8<y/o una>molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, en el que la célula es capaz de expresar un anticuerpo que comprende una HCVR<que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO>:8<y una LCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ>ID NO: 10. También se divulga una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende una<secuencia polinucleotídica que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO>:8<y un>polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:10. La línea celular de mamífero es una línea celular CHO o HEK.

Se divulga un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una LCVR que tiene una secuencia de<aminoácidos de SEQ ID NO:9 y una HCVR que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:>8<, en el que el>procedimiento comprende cultivar una célula de mamífero que comprende un ADN que codifica una LCVR que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9 y/o un<a>D<n>que codifica una HCVR que tiene una secuencia de<aminoácidos de SEQ ID NO>:8<en condiciones tales que se expresa el anticuerpo, y recuperar el anticuerpo expresado.>La divulgación incluye un anticuerpo obtenible mediante el procedimiento de la invención descrito anteriormente. También se divulga, pero no forma parte de la invención, un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una LCVR que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:10 y una HCVR que tiene una secuencia de<aminoácidos de SEQ ID NO:>8<, en el que el procedimiento comprende cultivar una célula de mamífero que comprende>un ADN que codifica una LCVR que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:10 y/o una HCVR que tiene<una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO>:8<en condiciones tales que se expresa el anticuerpo, y recuperar el>anticuerpo expresado. La divulgación incluye un anticuerpo obtenible mediante el procedimiento de la invención descrito anteriormente.

Se divulga un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una LC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12 y una HC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, en el que el procedimiento comprende cultivar una célula de mamífero que comprende un ADN que codifica una LC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12 y/o una HC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 en condiciones tales que se expresa el anticuerpo, y recuperar el anticuerpo expresado. El anticuerpo se puede obtener por el procedimiento También se divulga, pero no forma parte de la invención, un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una LC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13 y una HC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11, en el que el procedimiento comprende cultivar una célula de mamífero que comprende un ADN que codifica una LC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:13 y/o una HC que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11 en condiciones tales que se expresa el anticuerpo, y recuperar el anticuerpo expresado. El anticuerpo se obtiene mediante el procedimiento descrito anteriormente.

Se divulga un procedimiento para producir un anticuerpo, que comprende dos HC y dos LC, en el que la secuencia aminoácida de cada una de las dos HC es SEQ ID NO:11, y la secuencia aminoácida de cada una de las dos LC es SEQ ID NO:12, y que comprende: a) cultivar una célula de mamífero de la invención, como se ha descrito anteriormente, en condiciones tales que se exprese el anticuerpo, y b) recuperar el anticuerpo expresado. La invención incluye un anticuerpo obtenible mediante el procedimiento de la invención descrito anteriormente. La presente invención también incluye un procedimiento para producir un anticuerpo, cuyo anticuerpo comprende dos HC y dos LC, en el que la secuencia aminoacídica de cada una de las dos HC es SEQ ID NO:11 y la secuencia aminoacídica de cada una de las dos LC es SEQ ID NO:13, y cuyo procedimiento comprende: a) cultivar una célula de mamífero de la invención, como se ha descrito anteriormente, en condiciones tales que se exprese el anticuerpo, y b) recuperar el anticuerpo expresado. Se obtiene mediante el procedimiento de la invención descrito anteriormente.

Los anticuerpos de la presente invención se unen a N3pGlu Ap. La secuencia de N3pGlu Ap es la secuencia de aminoácidos de SEQ iD NO:17.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un "anticuerpo" es una molécula de inmunoglobulina que comprende dos cadenas pesadas (HC) y dos cadenas ligeras (LC) interconectadas por enlaces disulfuro. La porción aminoterminal de cada LC y HC incluye una región variable responsable del reconocimiento del antígeno a través de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que contiene. Las CDR están intercaladas con regiones más conservadas, denominadas regiones marco. La asignación de aminoácidos a dominios CDR dentro de las regiones LCVR y HCVR de los anticuerpos de la presente invención se basa en la conocida convención de numeración de Kabat (Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)), y la convención de numeración de North (North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011)). Siguiendo el procedimiento anterior, se determinaron las CDR de la presente invención (Tabla 1).

Los anticuerpos de la presente invención incluyen LC kappa y HC IgG. En una realización particular, los anticuerpos de la presente invención son IgG1.

Los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos monoclonales ("mAbs"). Los anticuerpos monoclonales pueden producirse, por ejemplo, mediante tecnologías de hibridoma, tecnologías recombinantes, tecnologías de visualización de fagos, tecnologías sintéticas, por ejemplo, injerto de CDR, o combinaciones de tales tecnologías u otras conocidas en la técnica. En otra realización de la presente invención, el anticuerpo, o el ácido nucleico que lo codifica, se proporciona en forma aislada. Tal y como se utiliza en la presente memoria, el término "aislado" se refiere a una proteína, péptido o ácido nucleico que no se encuentra en la naturaleza y que está libre o sustancialmente libre de otras especies macromoleculares que se encuentran en un entorno celular. "Sustancialmente libre", como se utiliza en la presente memoria, significa que la proteína, péptido o ácido nucleico de interés comprende más del 80% (en base molar) de las especies macromoleculares presentes, preferiblemente más del 90% y más preferiblemente más del 95%.

Tras la expresión y secreción del anticuerpo, el medio se clarifica para eliminar las células y el medio clarificado se purifica utilizando cualquiera de las muchas técnicas de uso común. El anticuerpo purificado puede formularse en composiciones farmacéuticas según procedimientos bien conocidos de formulación de proteínas y anticuerpos para administración parenteral, en particular para administración subcutánea, intratecal o intravenosa. El anticuerpo puede liofilizarse, junto con excipientes farmacéuticamente aceptables apropiados, y reconstituirse posteriormente con un diluyente de base acuosa antes de su uso. Alternativamente, el anticuerpo puede formularse en una solución acuosa y almacenarse hasta 1 - 3 años antes de su uso. En cualquier caso, la forma almacenada y la forma inyectada de las composiciones farmacéuticas del anticuerpo contendrán un excipiente o excipientes farmacéuticamente aceptables, que son ingredientes distintos del anticuerpo. Que un ingrediente sea farmacéuticamente aceptable depende de su efecto sobre la seguridad y eficacia o sobre la seguridad, pureza y potencia de la composición farmacéutica. Si se considera que un ingrediente tiene un efecto lo suficientemente desfavorable sobre la seguridad o la eficacia (o sobre la seguridad, pureza o potencia) como para justificar que no se utilice en una composición para administración a seres humanos, entonces no es farmacéuticamente aceptable para su uso en una composición farmacéutica del anticuerpo.

Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la presente invención puede administrarse a un paciente en riesgo de, o que presente, enfermedades o trastornos como los descritos en el presente documento por vías parenterales (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular). Se prefieren las vías subcutánea e intravenosa. Una composición farmacéutica de la presente invención contiene una cantidad "eficaz" de un anticuerpo de la presente invención. Una cantidad eficaz se refiere a una cantidad necesaria (a dosis y durante periodos de tiempo y por el medio de administración) para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad eficaz del anticuerpo puede variar en función de factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad eficaz puede ser determinada fácilmente por el médico o el profesional sanitario, como experto en la materia, utilizando técnicas conocidas y observando los resultados. La frecuencia de dosificación depende de la farmacocinética y farmacodinámica reales en humanos. La duración del tratamiento variará en función de muchos factores y la determinará el profesional sanitario que diagnostique o trate al paciente, basándose en su experiencia y habilidad en la materia. La frecuencia y la duración del tratamiento pueden variar según la indicación. Los términos "tratamiento", "tratar" o "tratado" y similares incluyen frenar, ralentizar o detener la progresión o gravedad de un síntoma, afección, enfermedad o trastorno existente en un paciente. El término "paciente" se refiere a un ser humano.

El término "prevención" se refiere a la administración profiláctica del anticuerpo de la presente invención a un paciente asintomático o a un paciente con enfermedad de Alzheimer preclínica para prevenir la progresión de la enfermedad.

El término "enfermedad caracterizada por la deposición de Ap," es una enfermedad que se caracteriza patológicamente por depósitos de Ap en el cerebro o en la vasculatura cerebral. Esto incluye enfermedades como la enfermedad de Alzheimer, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral. El diagnóstico clínico, el estadio o la progresión de la enfermedad de Alzheimer pueden ser determinados fácilmente por el médico o el profesional sanitario, como experto en la materia, mediante el uso de técnicas conocidas y la observación de los resultados. Esto incluye generalmente algún tipo de imagen de la placa cerebral, evaluación mental o cognitiva (por ejemplo, Clasifificación Clinica de la Demencia -Resumen de Cajas (CDR-SB), Examen de Estado Minimental (MMSE) o Escala-Cognitiva de Evaluación de Enfermendad de Alzheimer (ADAS-Cog)) o evaluación funcional (por ejemplo, Estudio Cooperativo de la Enfermedad de Alzheimer-Actividades de la Vida Diaria (ADCS-ADL). "Enfermedad de Alzheimer clínica", tal como se utiliza en el presente documento, es un estadio diagnosticado de la enfermedad de Alzheimer. Incluye afecciones diagnosticadas como enfermedad de Alzheimer prodrómica, enfermedad de Alzheimer leve, enfermedad de Alzheimer moderada y enfermedad de Alzheimer grave. El término "enfermedad de Alzheimer preclínica" es una etapa que precede a la enfermedad de Alzheimer clínica, en la que los cambios medibles en los biomarcadores (como los niveles de Ap42 en la LCR o la placa cerebral depositada mediante PET amiloide) indican los primeros signos de un paciente con patología de Alzheimer, que progresa hacia la enfermedad de Alzheimer clínica. Esto suele ocurrir antes de que se manifiesten síntomas como la pérdida de memoria y la confusión.

Los siguientes Ejemplos y ensayos demuestran que los anticuerpos de la presente invención son útiles para tratar una enfermedad caracterizada por la deposición de Ap, como la enfermedad de Alzheimer, el síndrome de Down y la AAC. Debe entenderse, sin embargo, que los siguientes Ejemplos se exponen a título ilustrativo y no limitativo, y que pueden realizarse diversas modificaciones por un experto en la materia.

Ejemplos

Expresión y purificación de anticuerpos Ap N3pGlu de ingeniería

Los anticuerpos N3pGlu Ap de la presente invención pueden expresarse y purificarse esencialmente como sigue. Un vector de expresión de glutamina sintetasa (GS) que contiene la secuencia de ADN que codifica la secuencia de aminoácidos LC de SEQ ID NO: 12 ó 13, y la secuencia de ADN que codifica la secuencia de aminoácidos HC de SEQ ID NO: 11 se utiliza para transfectar una línea celular de ovario de hámster chino (CHO) mediante electroporación. El vector de expresión codifica un promotor SV Early (Virus Simio 40E) y el gen de la GS. Tras la transfección, las células se someten a una selección masiva con 0-50 pM de L-metionina sulfoximina (MSX). A continuación, las células a granel seleccionadas o los pocillos maestros se escalan en cultivos en suspensión sin suero que se utilizarán para la producción.

El medio clarificado, en el que se ha secretado el anticuerpo, se aplica a una columna de afinidad de proteína A que se ha equilibrado con un tampón compatible, como la solución salina tamponada con fosfato (pH 7,4). La columna se lava con NaCl 1M para eliminar los componentes de unión inespecíficos. El anticuerpo N3pGlu Ap unido se eluye, por ejemplo, con citrato de sodio a pH (aprox.) 3,5 y las fracciones se neutralizan con tampón Tris 1M. Las fracciones del anticuerpo N3pGlu Ap se detectan, como por SDS-PAGE o por exclusión analítica por tamaño, y luego se agrupan. El anticuerpo N3pGlu Ap de la presente invención se concentra en tampón PBS a pH 7,4 o en tampón NaCitrato 10 mM,<NaCl 150 nM a pH en torno a>6<. El material final puede filtrarse estérilmente mediante técnicas comunes. La pureza>del anticuerpo N3pGlu Ap es superior al 95%. El anticuerpo N3pGlu Ap de la presente invención puede congelarse inmediatamente a -70°C o almacenarse a 4°C durante varios meses. A continuación se muestran los aminoácidos SEQ ID NOs para anticuerpos ejemplificados de la presente invención.

Tabla 1. Secuencias de aminoácidos de anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados.

Afinidad de unión y cinética

La afinidad y cinética de unión del anticuerpo N3pGlu Ap al péptido pE3-42 Ap o al péptido Ap 1-40 se mide mediante resonancia de plasmón superficial utilizando Biacore® 3000 (GE Healthcare). La afinidad de unión se mide capturando el anticuerpo N3pGlu Ap mediante proteína A inmovilizada en un chip Biacore® CM5, y haciendo fluir el péptido pE3-42 Ap o el péptido Ap 1-40, a partir de 100 nM en dilución seriada 2 veces hasta 3,125 nM. Los experimentos se realizan a 25 °C en tampón HBS-EP (GE Healthcare BR100669; HEPES 10 nM, NaCl 150 nM, EDTA 3 nM, 0,05% tensioactivo P20, pH 7,4).

Para cada ciclo, el anticuerpo se captura con una inyección de 5 pl de solución de anticuerpo a una concentración de 10 pg/mL con una velocidad de flujo de 10 pl/min, El péptido se une con una inyección de 250 pl a 50 pl/min, y luego se disocia durante 10 minutos. La superficie del chip se regenera con una inyección de 5 pl de tampón de glicina a pH 1,5 a un caudal de 10 pl/mL. Los datos se ajustan a un modelo de unión Langmiur 1:1 para derivar kon, koffy calcular K<d>. Siguiendo esencialmente los procedimientos descritos anteriormente, se observaron los siguientes parámetros (que figuran en la Tabla 2).

Tabla 2. Afinidad de unión y cinética.

No se detectó una unión apreciable a Ap 1-40, lo que indica que el anticuerpo I y el anticuerpo II se unieron específicamente al péptido Ap pE3-42 en comparación con Ap 1-40.

Termoestabilidad

Para determinar la estabilidad del anticuerpo en condiciones de estrés (es decir, temperatura elevada y pH bajo), el medio clarificado que contiene el anticuerpo de la presente invención se ajusta a pH 7,4 o pH 5,0 con PBS o citrato sódico 100 mM, respectivamente. Las muestras se sellan y se incuban a 65 °C durante 60 minutos y luego se enfrían en hielo. Los agregados de proteínas en las muestras se precipitan por centrifugación, y los sobrenadantes claros se transfieren a una nueva placa y se neutralizan a pH 7,4 mediante una dilución 50 veces mayor en tampón PBS. Se mide la actividad de unión al antígeno (pE3-42) y se calcula con respecto a una muestra no estresada para determinar el porcentaje de actividad restante.

Siguiendo procedimientos esencialmente como los descritos anteriormente, se obtuvieron los siguientes datos.

Tabla 3. Porcentaje de actividad de unión al antígeno tras el estrés.

Como se demuestra en la Tabla 3, el anticuerpo I y el anticuerpo II tienen una mayor termoestabilidad en comparación con B 12L.

Uniónex vivocon diana

Para determinar la unión con dianaex vivoen secciones cerebrales de un cerebro PDAPP fijado, se realiza un análisis inmunohistoquímico con anticuerpos N3pGlu Ap de la presente invención añadidos exógenamente. Secciones coronales seriadas criostáticas de ratones PDAPP envejecidos (25 meses de edad) se incuban con 20 pg/mL de un anticuerpo N3pGlu Ap ejemplificado de la presente invención (Anticuerpo I o Anticuerpo II). Se emplean reactivos secundarios HRP específicos para IgG humana y las placas depositadas se visualizan con DAB-Plus (DAKO). Como control positivo se utiliza el anticuerpo murino 3D6 biotinilado seguido de un secundario Step-HRP. El anticuerpo de control positivo (3D6 biotinilado) marcó cantidades significativas de Ap depositado en el hipocampo PDAPP, y los anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados de la presente invención marcaron un subconjunto de depósitos. Estos estudios histológicos demostraron que los anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados de la presente invención engancharon diana Ap depositadaex vivo.

Fagocitosisex vivo

Se realiza un ensayo de fagocitosisex vivopara investigar si los anticuerpos N3pGlu Ap de la presente invención (anticuerpo I o anticuerpo II) pueden facilitar la fagocitosis microglial de la placa. Secciones congeladas de cerebro de Alzheimer humano (20 pm) se preincuban con 10 pg/mL de anticuerpo N3pGlu Ap ejemplificado de la presente invención o controles durante una hora a 37°C en placas de 24 pocillos. Hay cuatro pocillos por tratamiento. A continuación, se añaden células primarias de microglía murina (8*105; C57BL6) y se incuban durante 24 horas. El<tejido de cada pocillo se desnaturaliza en tampón de guanidina 5,2 M y el contenido de Api>-42<se evalúa mediante>ELISA. Dado que el contenido de Ap puede variar a lo largo de múltiples secciones, se implementa un control de sección hermana para cada pocillo de prueba y el contenido del pocillo de prueba se normaliza con el de la sección hermana.

En comparación con las muestras de control positivo, los anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados de la presente<invención habían reducido significativamente Api->42<. Las muestras de control negativo presentaron un aclaramiento insignificante del Api->42<depositado. Por lo tanto, los análisis de fagocitosis ex vivo muestran que los anticuerpos>N3pGlu Ap ejemplificados de la presente invención pueden limpiar la placaex vivopor fagocitosis.

Uniónin vivocon diana

Se mide la capacidad de los anticuerpos N3pG de la presente invención para atravesar la barrera hematoencefálica y unirse a la placa depositadain v ivo. Ratones transgénicos PDAPP de 18 meses de edad reciben inyecciones intraperitoneales con anticuerpo N3pGlu Ap (anticuerpo I o anticuerpo II) o IgG de control negativo. Seis ratones por grupo reciben una inyección de 40 mg/kg de anticuerpo el día 1 y el día 3.Launiónin vivocon diana se determina el día 6, cuando se sacrifican los ratones y se recogen los cerebros para realizar análisis histoquímicos.

El grado de unión invivocon diana se cuantifica como el porcentaje de área positiva para la uniónin vivodel anticuerpo N3pGlu Ap normalizado con respecto al área total de la placa según se define por inmunotinción exógena 3D6 en secciones hermanas (TE Ratio). La relación TE se genera midiendo el porcentaje de área unida por el anticuerpo y normalizando el valor frente al porcentaje total de área de posible diana (Ap total depositado visualizado mediante inmunohistoquímica exógena con un anticuerpo de control positivo (3D6) en una sección hermana).

Siguiendo procedimientos esencialmente como los descritos anteriormente, los anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados de la presente invención demostraron la unión con dianain vivodentro del hipocampo y en una medida limitada en la corteza, mientras que los animales inyectados con IgG de control no muestran tinción específica de placa. Las relaciones TE fueron del 1,95% (anticuerpo I) y del 3,65% (anticuerpo II).

Se realiza un estudio similar con el anticuerpo II en ratones PDAPP a una media de 24 a 26 meses de edad. El anticuerpo II tuvo una relación TE de 9,41%.

Estos resultados demostraron que el anticuerpo I y el anticuerpo II, cuando se administran periféricamente, pueden atravesar la barrera hematoencefálica y comprometer el Ap depositado.

Aclaramiento de placasin vivo

Se realizan estudios con anticuerpos sustitutos quimera con LCVR y HCVR del anticuerpo II fusionados a la región kappa constante murina y Fc IgG2a para evaluar el aclaramiento de placain vivoen ratones PDAPP envejecidos. Ratones PDAPP envejecidos (22 a 24 meses de edad, n = 23 por grupo) se inyectan por vía subcutánea una vez a la semana durante 7 semanas con 12,5 mg/kg de anticuerpo quimera II o IgG de control. Los ratones PDAPP de control envejecidos (sacrificados al inicio del estudio) se utilizan para evaluar los niveles de deposición preexistentes antes del tratamiento terapéutico.

<Al finalizar el estudio, se miden los niveles finales del fármaco en plasma y se evalúan los niveles de Ap>1-42<en los>cerebros mediante ELISA. Los ratones PDAPP de edad avanzada se encuentran en el techo de la placa, como lo<demuestra una acumulación adicional no significativa de Api>-42<durante el período de tratamiento de 7 semanas con la IgG de control. El grupo del anticuerpo quimera II muestra una reducción significativa de A p i>-42<(23%, p = 0,0174)>en comparación con el control. El nivel de exposición al anticuerpo se midió al final del periodo de dosificación de 7 semanas, y el anticuerpo II tenía un nivel de 31 pg/mL. Este estudio demostró que los anticuerpos quimera N3pGlu<Ap ejemplificados son capaces de disminuir la placa (Api>-42<) in vivo.>

Ensayo EpiScreen de proliferación de células Tex vivo

Se utiliza un ensayo de células T humanasexvivoEpiScreen™ para medir la activación (proliferación, secreción de citoquinas) de células T CD4+ humanas en respuesta a anticuerpos N3pGlu Ap ejemplificados de la presente invención (anticuerpo I y anticuerpo II). EpiScreen™ utiliza muestras de 50 donantes sanos que mejor representan el número y la frecuencia de los alotipos HLA-DR y DQ expresados en la población europea/norteamericana y mundial. Se incluyen dos controles positivos en el ensayo: A33 humanizado, un anticuerpo clínico de referencia que muestra altos niveles de inmunogenicidad en la clínica (73%) e induce rutinariamente una respuesta de células T del 20-30% en el ensayo EpiScreen, y KLH (hemocianina de lapa californiana), una proteína mitógena que contiene neoantígenos. También se incluye en el ensayo un control negativo con tampón emparejado.

El porcentaje de proliferación de células T se calcula a partir de la media de todas las respuestas positivas del donante observadas durante el curso temporal (días 5-8). El porcentaje de proliferación de células T fue del 20% y del 98%<para los controles positivos A33 y KLH, respectivamente. El porcentaje de proliferación de células T fue del 14%,>6<% y>8<% para B12L, anticuerpo I y anticuerpo II, respectivamente. Estos datos demuestran que los anticuerpos N3pGlu>Ap ejemplificados de la presente invención tienen una tasa de respuesta de células T reducida en comparación con los controles positivos y B12L.

Unión no específica

Los anticuerpos N3pGlu Ap de la presente invención se estudian para la unión no específica a células CHO vivas mediante análisis de clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) y la unión no específica a albúmina sérica humana, fibronectina y LDL humana mediante ensayos que utilizan la tecnología Meso Scale Discovery (MSD) que proporciona resultados altamente sensibles, precisos y exactos en un amplio rango dinámico.

Para detectar la unión no específica a células CHO vivas, se realiza un análisis FACS. Los anticuerpos N3pGlu Ap (Anticuerpo I, Anticuerpo II, o B12L), se diluyen a 200 pg/mL en tampón FACS 0,1% BSA. El anticuerpo secundario F(ab')2 anti-IgG humana de burro marcado con RPE (H+L) se diluye a 20 pg/mL en tampón FACS 0,1% BSA. Las células CHO se centrifugan a 1.000 rpm durante 5 minutos y, a continuación, se lavan con tampón FACS 0,1% de BSA. Las células se resuspenden a 4 ><106 células/mL en tampón FACS 0,1% de BSA y se añaden 55 pl de suspensión celular en pocillos de una placa de 96 pocillos. El anticuerpo secundario se mezcla con el anticuerpo N3pGlu Ap en igual volumen y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añade la mezcla de anticuerpos (55 pl) a la suspensión celular y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente. Cada muestra se analiza por duplicado. Se centrifugan las placas, se desecha el sobrenadante y se resuspenden las células en 75 pl de tampón FACS 0,1% de BSA. Las placas se centrifugan de nuevo y las células se resuspenden en 110 pl de tampón FACS 0,1% de BSA. Se añade colorante de viabilidad (Sytox Blue; 1,1 pl) a cada pocillo y se mezcla antes del análisis FACS. La actividad de unión celular se mide mediante análisis FACS utilizando una máquina LSRFortessa™ FACS (BD Biosciences).

Para detectar la unión no específica a la albúmina sérica humana, la fibronectina y las LDL humanas, se utiliza un ensayo MSD. Placas (MSD Multiarray placa de 96 pocillos: MSD Cat. #L15XA-3) se recubren con 30 pl/pocillo de proteína de recubrimiento (20 pg/mL en PBS) durante la noche a 4°C. Las proteínas de recubrimiento pueden ser solución de LDL (lipoproteína de baja densidad procedente de plasma humano, Sigma Cat. #L7914), Fibronectina de plasma bovino (Sigma Cat. #F1141), o HSA (5mg/mL, Sigma Cat. #A8763). Las placas se lavan 3 veces con PBS 0,1% de Tween-20, se bloquean durante 1 hora en PBS 0,5% de BSA y, a continuación, se lavan. Se añade a los pocillos anticuerpo I o anticuerpo II (50 pg/mL; diluido en PBS 0,5%<b>S<a>). Cada pocillo se ejecuta por duplicado. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se lavan. El anticuerpo antihumano MSD SUl Fo -TAG (MSD; número de catálogo R32AJ-5) se diluye a 1 pg/ml con PBS 0,5% BSA y se añaden 50 pl a cada pocillo. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se lavan. El tampón de lectura MSD (MSD; número de catálogo R92TC-3) se diluye en agua 1:4 para obtener una solución de trabajo 1x, y se añaden 150 pl a cada pocillo. Se leen las placas y se calcula la señal media.

Tabla 4. Perfil de unión no específica

Los datos de la Tabla 4 demuestran que el anticuerpo I y el anticuerpo II tienen una unión no específica reducida a células vivas CHO, albúmina sérica humana, fibronectina y LDL humana en comparación con B12L.

Secuencias

Anticuerpo I y Anticuerpo II HCDR1 (SEQ ID NO: 1)KASGYTFTDYYIN

Anticuerpo I y Anticuerpo II HCDR2 (SEQ ID NO: 2)WINPGSGNTKYNEKFKG

Anticuerpo I y Anticuerpo II HCDR3 (SEQ ID NO: 3)TREGETVY

Anticuerpo I y Anticuerpo II LCDR1 (SEQ ID NO: 4)KSSQSLLYSRGKTYLN

Anticuerpo II LCDR2 (SEQ ID NO: 5)YAVSKLDS

Anticuerpo I LCDR2 (SEQ ID NO: 6)YDVSKLDS

Anticuerpo I y Anticuerpo II LCDR3 (SEQ ID NO: 7)VQGTHYPFT

Anticuerpo I y Anticuerpo II HCVR (SEQ ID NO: 8)

Q YQL VQ S GAE VKKPGS S VK V S CK AS GYTF TD Y YINW VRQ APGQGLE W M GW INP GS GNTK YNEKFKGRVTIT ADE S T S T A YM EL S SLRSEDT A V Y Y C TREGET V Y W GQ GTLVTVSS

Anticuerpo I LCVR (SEQ ID NO: 9)

D VVM TQ SPL SLP VTLGQP ASISCK S SQ SLL Y SRGKTYLNW FQQRPGQ SPRRLIYD V SKLD S GVPDRF S GS GS GTDF TLKISRVE AED V GV Y Y C VQGTHYPF TF GQGTKLE IK

Anticuerpo II LCVR (SEQ ID NO: 10)

DIQM TQSPSTLSASYGDRYTITCKSSQSLLYSRGKTYLNW LQQKPGKAPKLLIYA VSK LDSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEI K

Anticuerpo I y Anticuerpo II Cadena Pesada (SEQ ID NO: 11)

Q VQL VQ SGAEVKKPGS S VK VSCK ASG YTFTD YYINW VRQ APGQGLEW M GW INP GS GNTK YNEKFKGRVTIT A D E S T S T A YM EL S SLRSEDT A V Y Y CTREGET V Y W GQ GTL VT V S S A STKGP S VFPL AP S SK S T S GGT A ALGCL V K D YFPEP VT V S W N S GALT SGVHTFP AVLQS SGL YSLS S VVTVPS S SLGT QT YICNVNHKP SNTK VDK K VEPK S CDKTHT CPPCP APELLGGP S VFLFPPKPKDTLM ISRTPE VTC V V V D V SHEDPEVKF NW YVDG V EV H N A K TK PREEQ Y N STY RV V S VLT VLHQ DW LNGKEYKCKV SNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ES NGQPENNYKTTPP VLD SDGSFFL Y SKLTVDKSRW QQGNVFSC S VM HEALHNHY TQKSLSLSPG

Anticuerpo I Cadena Ligera (SEQ ID NO: 12)

D VVM TQ SPL SLP VTLGQP ASISCK S SQ SLL Y SRGKT YLNW F QQRPGQ SPRRLIYD VSK LDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQG THYPFTFGQG TKLE IK RTVAAPSVFIFPPSDEQ LK SG TASVVCLLNNFYPREAK VQ W K VDNALQ SG NSQ E S VTEQD SKD ST Y SL S S TLTL SK A D YEKHK V Y ACE VTHQGL S SP VTK SFNRGEC

Anticuerpo II Cadena Ligera (SEQ ID NO: 13)

DIQM TQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLYSRGKTYLNW LQQKPGKAPKLLIYA VSKLDSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAK VQ W KVDNALQ SGNSQ E S VTEQD SKD ST Y SL S S TLTL SK AD YEKHK V Y ACE VTHQGL S SP VTK SFNRGEC

ADN ejemplar para expresar la cadena pesada de anticuerpos de SEQ ID NO: 11 (SEQ ID NO: 14)C AGGT GC AGC T GGT GC AGT C T GGGGC T G AGGT G A A G A AGC C T GGGT C C TC GG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGACTATTATATCAAC T GGGT GC GAC AGGCCC CTGGAC A AGGGC TT GAGT GG AT GGG AT GG AT C A ACC C T GGC AGT GGT A AT ACA A AGT AC A AT G AG A AGTT C A AGGGC AGAGT C ACGAT TACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGA TCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACAAGAGAAGGCGAGACGGTCTACT GGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATC GGTCTTCCCGCTAGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCC TGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAA CTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCT CAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGC ACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGG ACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTG TGACAAAACTCACACATGCCCACCGTG CCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAC CCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGT

GGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGC GT GGAGGT GC AT A AT GC C A AGAC A A AGC CGC GGGAGGAGC AGT AC A AC AGC ACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAG AAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGG CAGCCCCG AG AACCACAGGTGTACACCC TGCCCCCATCCCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCT GGT C AAAGGCTTCT ATCCC AGCGAC ATCGCCGT GGAGTGGGAGAGC A AT GGG CAGCCG GAGAACAACTACAAGACCACGCCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGCT CCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGG GAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT

ADN ejemplar para expresar la cadena ligera de anticuerpos de SEQ ID NO: 12 (SEQ ID NO: 15)GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCC GGCCTCCATCTCCTGCAAGTCTAGTCAAAGCCTCCTGTACAGTCGCGGAAAAA CCTACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATT TATGATGTTTCTAAACTGGACTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGG GT C AGGC ACTG ATTTC AC AC T G A A A AT C AGC AGGGT GGAGGC T GAGGAT GTT GGGGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACACTACCCTTTCACTTTTGGCCAAGG GACCAAGCTGGAGATCAAACGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCC CGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTG AATAACTTCTATCCCAG AG AG GCCAAAGTACAGTGG AAGG TGG ATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAG GAGAGTG TCACAGAGCAGGACAGCAAGG ACA GCACCTACAGCCTCAGCAG CACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAA ACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTC ACAAAGAGCTTCAACAG GGGAGAGTGC

ADN ejemplar para expresar la cadena ligera de anticuerpos de SEQ ID NO: 13 (SEQ ID NO: 16) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAG AGTCACCATCACTTGCAAGTCCAGTCAG AG TCTCCTGTACAGTCG CG GAAAA ACCTATTTGAACTGGCTCCAG CAGAAACCAGG GAAAGCCCCTAAG CTCCTGA TCTATGCTGTCTCCAAACTGGACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGT

GGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTT TGCAACTTATTACTGCGTGCAGGGTACACATTATCCTTTCACTTTTGGCCAGG GGACCAAGCTGGAGATCAAACGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTC CCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCT GAAT AACTTCT ATCCC AGAGAGGCC AAAG T AC AGT GGAAGGT GGAT AACGCC CTCCAATCG GGTAACTCCCAGG AG AG TGTCACAGAGCAGGACAG CAAGGACA GCACCTACAGCCTCAGCAG CACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAA ACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTC ACAAAGAGCTTCAACAG GGGAGAGTGC

N3pGlu Ap (SEQ ID NO: 17)

[pE]FRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGWIA

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo que se une a N3pGlu Ap humano, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9, y una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene la<secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:>8<.>

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende una cadena ligera (LC) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:12, y una cadena pesada (HC) que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:11.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende dos LC y dos HC, en el que la secuencia de aminoácidos de cada LC es la SEQ ID NO:12, y la secuencia de aminoácidos de cada HC es la SEQ ID NO:11.

4. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y uno<o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.>

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en terapia.

6<. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en el tratamiento de una afección>seleccionada entre la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica.

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en el tratamiento de una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave.

8<. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en la ralentización del deterioro cognitivo>en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, el síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral clínica o preclínica.

9. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en la ralentización del deterioro cognitivo en un paciente diagnosticado con una afección seleccionada entre EA prodrómica, EA leve, EA moderada y EA grave.