ES2926059T3 - Forma física de un modulador SGR - Google Patents

Abstract

Una forma cristalina de 2,2-difluoro-N-[(1R,2S)-3-metil-1-{[1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H -indazol-5-il]oxi}-1-fenilbutan-2-il]propanamida (forma C), composiciones farmacéuticas que la contienen y su uso en terapia. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Forma física de un modulador SGR

La presente invención se refiere a una nueva forma física de 2,2-difluoro-N-[(1R,2S)-3-metil-1-{[1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-il]oxi}-1-fenilbutan-2-il]propanamida, a composiciones farmacéuticas que la contienen y su uso en terapia.

Los glucocorticoides (GC) se han usado durante décadas para tratar afecciones inflamatorias e inmunes agudas y crónicas, incluyendo artritis reumatoide, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica ("EPOC"), osteoartritis, fiebre reumática, rinitis alérgica, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn. enfermedad inflamatoria del intestino y colitis ulcerosa. Los ejemplos de GC incluyen dexametasona, prednisona y prednisolona. Desafortunadamente, los Ge se asocian a menudo con efectos secundarios graves e incluso irreversibles, tales como osteoporosis, hiperglucemia, efectos sobre el metabolismo de la glucosa (diabetes mellitus), adelgazamiento de la piel, hipertensión, glaucoma, atrofia muscular, síndrome de Cushing, homeostasis del líquido y psicosis (depresión). Estos efectos secundarios pueden limitar particularmente el uso de GC en un entorno crónico. Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de terapias alternativas que posean los efectos beneficiosos de los GC, pero con una menor probabilidad de efectos secundarios.

Los GC forman complejos con el receptor de GC (GR) para regular la transcripción génica. El complejo GC-GR se transloca con el núcleo celular, y luego se une a los elementos de respuesta de los GC (GRE) en las regiones promotoras de diversos genes. El complejo GC-GR-GRE resultante, a su vez, activa o inhibe la transcripción de los genes localizados proximalmente. El complejo GC-GR también (o como alternativa) puede regular negativamente la transcripción génica mediante un proceso que no implica la unión al ADN. En este proceso, denominado transrepresión, el complejo GC-GR entra en el núcleo e interactúa directamente (a través de la interacción proteína-proteína) con otros factores de transcripción, reprimiendo su capacidad para inducir la transcripción génica y, por lo tanto, la expresión de proteínas.

Se cree que algunos de los efectos secundarios de los GC son el resultado de la reactividad cruzada con otros receptores de esteroides (por ejemplo, progesterona, andrógenos, mineralocorticoides y receptores de estrógenos), que tienen dominios de unión a ligando algo homólogos; y/o la incapacidad de modular selectivamente la expresión génica y la señalización aguas abajo. En consecuencia, se cree que un modulador selectivo GR eficaz (SGRM), que se une a GR con mayor afinidad en relación con otros receptores de hormonas esteroides, proporcionaría una terapia alternativa para abordar la necesidad insatisfecha de una terapia que posee los efectos beneficiosos de los GC, mientras que, al mismo tiempo, tiene menos efectos secundarios.

Se ha informado que una gama de compuestos tiene actividad SGRM. Véase, por ejemplo, los documentos WO2007/0467747, WO2007/114763, WO2008/006627, WO2008/055709, WO2008/055710, WO2008/052808, WO2008/063116, WO2008/079073, WO2008/098798, WO2009/065503, WO2009/142569, WO2009/142571, WO2010/009814, WO2013/001294, y EP2072509. El documento WO2008/076048 describe una serie de compuestos que tienen actividad de unión al receptor de GC. Aún así, sigue existiendo la necesidad de nuevos SGRM que presenten, por ejemplo, una mejor potencia, eficacia, eficacia en pacientes insensibles a esteroides, selectividad, solubilidad que permita la administración oral, un perfil farmacocinético que permita un régimen de dosificación deseable, una estabilidad en estante (por ejemplo, estabilidad hidrolítica, térmica, química o fotoquímica), cristalinidad, tolerabilidad para una variedad de pacientes, perfil de efectos secundarios y/o perfil de seguridad.

A la hora de formular sustancias farmacológicas, es importante que la sustancia farmacológica (principio activo) esté en una forma en la que se pueda manipular y procesar convenientemente. Esto es importante, no sólo desde el punto de vista de la obtención de un proceso de fabricación comercialmente viable de la sustancia farmacológica en sí, sino también desde el punto de vista de la fabricación posterior de formulaciones farmacéuticas que comprendan el principio activo y los excipientes adecuados. En relación con esto, la estabilidad química y la estabilidad física del principio activo son factores importantes. El compuesto activo, y las formulaciones que lo contienen, deberían poder almacenarse eficazmente durante períodos de tiempo apreciables, sin presentar ningún cambio significativo en las características físico-químicas (por ejemplo, composición química, densidad, higroscopicidad y solubilidad) del compuesto activo.

La estructura de 2,2-difluoro-W-[(1R,2S)-3-metil-1-{[1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-il]oxi}1-fenilbutan-2-il]propanamida

(en lo sucesivo aquí "Compuesto (I)") se muestra a continuación:

Se ha encontrado que el Compuesto I puede existir en varias formas cristalinas. Una forma cristalina de la "Forma C" del Compuesto (I) proporciona un patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente como se muestra en la Figura 1. Un aspecto de la invención proporciona una forma física del Compuesto (I) que presenta los picos de difracción de polvo de rayos X característicos (expresados en grados 29) como se muestra en la Tabla 1 a continuación.

A menos que se indique otra cosa, todos los datos de difracción de polvo de rayos X descritos en el presente documento se obtuvieron usando radiación CuKa como se describe en los Ejemplos.

En una realización de la invención, el compuesto tiene propiedades cristalinas y en un aspecto es al menos un 50% cristalino, en otro aspecto es al menos un 60% cristalino, en otro aspecto es al menos un 70% cristalino, en otro aspecto es al menos un 80 % cristalino y en otro aspecto es un 90% cristalino. La cristalinidad se puede estimar mediante técnicas de difractometría de rayos X convencionales.

En otra realización de la invención, el Compuesto (I) es cristalino del 50%, 60%, 70%, 80% o el 90% al 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%.

Los picos más prominentes de la Forma C del Compuesto (I) se muestran en la Tabla 1.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3,17.6 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3,17.6 y/o 25.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3,17.6 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3,17.6 y/o 25.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 19.4 y 23.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 15.3 y 23.6°

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5 y/o 15.3°

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5 y/o 15.3°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 15.3 y/o 19.0°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.5, 15.3 y/o 19.0°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 12.4, 12.5, 19.4 y 23.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 de aproximadamente = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 14.5, 15.3, 17.6, 19.4, 23.6 y 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 12.5, 19.0 y/o 22.9°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 2 picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5,15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos 3 picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.3, 17.6, 19.0, 22.9 y/o 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 12.5 y 23.6°. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 12.5, 19.4 y 23.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 12.5, 15.3 y 23.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 15.3, 17.6 y 23.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 14.5, 15.3, 17.6, 19.4, 23.6 y 25.6°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con picos específicos en 29 = 7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 14.5, 15.3, 17.6, 19.4, 23.6 y 25.7°.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona la Forma C del Compuesto (I), caracterizada por que dicha Forma C tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente como se muestra en la Figura 1. Cuando se calienta en un Calorímetro Diferencial de Barrido (DSC) (condiciones como se describe en la sección de Ejemplos) la Forma C del Compuesto (I) presenta una fusión con una temperatura de inicio a aproximadamente 160.6°C, y una temperatura máxima a aproximadamente 162.6°C como se ilustra en la Figura 2.

Un experto en la técnica comprende que el valor o intervalo de valores observado en un termograma de DSC de un compuesto particular mostrará variación entre lotes de diferentes purezas. Por tanto, aunque para un compuesto el intervalo puede ser pequeño, para otros el intervalo puede ser bastante grande. Por lo general, el error de medición de un ángulo de difracción en acontecimientos térmicos de DSC es de aproximadamente más o menos 5 °C, y tal grado de error de medición se debe tener en cuanta cuando se consideran los datos de DSC incluidos en el presente documento. Por lo tanto, en una realización, se proporciona una forma cristalina, la forma C del Compuesto (I), que tiene una endotermia de DSC con un inicio de la fusión a aproximadamente 160.6 °C y un pico a aproximadamente 162.6 °C. Por lo tanto, en una realización, se proporciona una forma cristalina, la forma C del Compuesto (I), que tiene una endotermia con un inicio de fusión a 160.6 °C más o menos 5 °C y un pico a 162.6 °C más o menos 5 °C.

En una realización, se proporciona una forma cristalina, la forma C del Compuesto (I), que tiene una endotermia de DSC con un inicio de la fusión a 160.6 °C y un pico a 162.6 °C.

En una realización, se proporciona una forma cristalina, la forma C del Compuesto (I), que tiene un termograma de DSC sustancialmente como se muestra en la Figura 2.

La cristalización de la Forma C en el proceso descrito en el presente documento puede facilitarse por siembra con cristales de la Forma C. Los cristales de siembra se pueden obtener usando uno de los métodos descritos en los Ejemplos. El uso de siembra es particularmente ventajoso en la fabricación a gran escala.

Cuando en el presente documento el compuesto descrito como que tiene "patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un pico específico en 29 de aproximadamente = ....", el XRPD del compuesto puede contener uno o más de los valores 29 enumerados. Por ejemplo, uno o más de los valores 29, 2 o más de los valores 29 o 3 o más de los valores 29 enumerados.

En los párrafos anteriores que definen los picos de difracción de polvo de rayos X para la forma cristalina del Compuesto (I), el término "aproximadamente = " se usa en la expresión "...en 29 de aproximadamente = ..." para indicar la posición precisa de los picos (es decir, los valores del ángulo 2-theta indicados) no debe interpretarse como valores absolutos porque, como apreciarán los expertos en la técnica, la posición precisa de los picos puede variar ligeramente entre un aparato de medición y otro, de una muestra a otra, o como resultado de ligeras variaciones en las condiciones de medición utilizadas. También se indica en los párrafos anteriores que la forma cristalina del Compuesto (I) proporciona patrones de difracción de polvo de rayos X "sustancialmente" iguales a los patrones de difracción de polvo de rayos X mostrados en la Figura 1 tiene sustancialmente los picos más prominentes (valores del ángulo 2-theta) mostrados en la Tabla 1. Debe entenderse que el uso del término "sustancialmente" en este contexto también pretende indicar que los valores del ángulo 2-theta de los patrones de difracción de polvo de rayos X pueden variar ligeramente de un aparato a otro, de una muestra a otra, o como resultado de ligeras variaciones en las condiciones de medición utilizadas, de modo que las posiciones de los picos mostradas en la Figura o citadas en la Tabla tampoco deben interpretarse como valores absolutos.

El experto en el campo de la difracción de polvo de rayos X se dará cuenta de que la intensidad relativa de los picos se puede ver afectada, por ejemplo, por granos con un tamaño superior a aproximadamente 30 micrómetros y proporciones de aspecto no unitario, lo cual puede afectar al análisis de las muestras. Por otra parte, se debe sobreentender que las intensidades pueden fluctuar dependiendo de las condiciones experimentales y la preparación de la muestra, como la orientación preferida de las partículas en la muestra. El uso de rendijas de divergencia automáticas o fijas también influirá en los cálculos de la intensidad relativa. Un experto en la técnica puede tratar dichos efectos cuando compara patrones de difracción.

El experto en la técnica de la difracción de polvo de rayos X también se dará cuenta de que, debido a la diferencia en la altura de las muestras y a errores en la calibración de la posición del detector, podría tener lugar un pequeño desplazamiento en las posiciones de 29 . Generalmente, una diferencia de ± 0.1 ° con respecto al valor dado se considera correcta.

La forma C del Compuesto (I) descrita en el presente documento también puede caracterizarse y/o distinguirse de otras formas físicas usando otras técnicas analíticas adecuadas, por ejemplo, espectroscopía NIR o espectroscopía de resonancia magnética nuclear en estado sólido.

La estructura química de la forma C del Compuesto (I) que se describe en el presente documento puede confirmarse mediante métodos de rutina, por ejemplo, análisis de resonancia magnética nuclear de protones (RMN).

La forma C del Compuesto (I) puede prepararse como se describe en el Ejemplo en lo sucesivo en el presente documento.

Enfermedades y afecciones médicas

La forma C del Compuesto (I) puede ser útil como agente antiinflamatorio, y también puede mostrar acciones antialérgicas, inmunosupresoras y antiproliferativas. Por lo tanto, se contempla que la forma C del compuesto (I) se puede usar como un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una o más de las siguientes afecciones (generalmente un trastorno) en un mamífero:

(i) enfermedades pulmonares, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo enfermedades pulmonares crónicamente obstructivas de cualquier origen (incluyendo asma bronquial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC)), bronquitis de diferentes orígenes, formas respiratorias de adultos de enfermedades pulmonares restructivas (incluyendo alveolitis alérgica), todas las formas de edema pulmonar (incluyendo edema pulmonar tóxico), sarcoidosis y granulomatosis (incluyendo enfermedad de Boeck);

(ii) alergias, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo todas las formas de reacciones alérgicas (incluyendo edema de Quincke; picaduras de insectos; reacciones alérgicas a agentes farmacéuticos, derivados de la sangre, medios de contraste, etc.; choque anafiláctico, urticaria; y enfermedades vasculares alérgicas), vasculitis alérgica y vasculitis inflamatoria;

(iii) enfermedades reumáticas/enfermedades autoinmunes/enfermedades degenerativas de las articulaciones, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo todas las formas de enfermedades reumáticas, incluyendo artritis reumatoide, fiebre reumática aguda, polimialgia reumática, enfermedad de Behget, artritis reactiva, espondiloartritis, incluyendo espondilitis anquilosante y artritis psoriásica, lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso discoide, esclerodermia, polimiositis, dermatomiositis, poliarteritis nodosa, síndrome de Sjogren, enfermedad asociada a IgG4, síndrome de Still, síndrome de Felty, gota, vitíligo y enfermedades inflamatorias de los tejidos blandos de otros orígenes, y síntomas artríticos en enfermedades articulares degenerativas (osteoartritis); y artritis reumáticas;

(iv) inflamaciones vasculares (vasculitis), incluyendo eritema nodoso, poliarteris nodosa, granulomatosis con poliangitis, poliangitis microscópica, granulomatosis eosinófila con poliangitis, arteritis de Takayasu, enfermedad de Kawasaki, arteritis de células gigantes (arteritis temporal), púrpura de Henoch-Schonleins y vasculitis crioglobulinémica.

(v) nefropatías, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo síndrome nefrótico y todas las nefritis (incluyendo glomerulonefritis);

(vi) enfermedades hepáticas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo descomposición aguda de las células hepáticas, hepatitis aguda de diferentes orígenes (incluyendo las inducidas por agentes virales, tóxicos o farmacéuticos), y hepatitis crónicamente agresiva y/o crónicamente intermitente;

(vii) enfermedades gastrointestinales, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo enteritis regional (enfermedad de Crohn), gastritis, esofagitis por reflujo, colitis ulcerosa y gastroenteritis de otros orígenes (incluyendo esprúe nativo);

(viii) enfermedades proctológicas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo eczema anal, fisuras, hemorroides y proctitis idiopática;

(ix) enfermedades oculares, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo queratitis alérgica, uveítis iritis, conjuntivitis, blefaritis, neuritis óptica, corioiditis, y oftalmia simpática;

(x) enfermedades del área oído-nariz-garganta, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo rinitis alérgica, fiebre del heno, otitis externa (causada por dermatitis de contacto, infección, etc.) y otitis media;

(xi) enfermedades neurológicas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo vasculitis cerebral primaria, edema cerebral (incluyendo edema cerebral inducido por tumor), esclerosis múltiple, encefalomielitis aguda, diferentes formas de convulsiones (incluyendo espasmos de cabeceo infantiles), meningitis, lesión de la médula espinal e ictus;

12.(xii)enfermedades de la sangre, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo anemia hemolítica adquirida, trombocitopenia (incluyendo trombocitopenia idiopática), linfomas M. Hodgkin y no Hodgkin, trombocitemias y eritrocitosis;

(xiii) enfermedades tumorales, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo leucemia linfática aguda, linfoma maligno, linfogranulomatosis, linfosarcoma, y metástasis extensas (incluyendo cáncer de mama y de próstata);

(xiv) enfermedades endocrinas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo orbitopatía endocrina, crisis tirotóxica, tiroiditis de Quervain, tiroiditis de Hashimoto, hipertiroidismo, enfermedad de Basedow, tiroiditis granulomatosa, bocio linfadenoide;

(xv) trasplantes, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos;

(xvi) afecciones de shock severas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo shock anafiláctico;

(xvii) terapia de sustitución, que coincide con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo insuficiencia suprarrenal primaria innata (incluyendo síndrome adrenogenital congénito), insuficiencia suprarrenal primaria adquirida (incluyendo enfermedad de Addison, adrenalitis autoinmune, metainfecciones, tumores, metástasis, etc.), insuficiencia suprarrenal secundaria innata (incluyendo, por ejemplo, hipopituitarismo congénito), e insuficiencia suprarrenal secundaria adquirida (incluyendo metainfecciones, tumores, etc.);

(xviii) Emesis, que coincide con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo la combinación con un antagonista de 5-HT3 en el vómito inducido por agente citostático;

(xix) Dolores de origen inflamatorio, incluyendo lumbago; y

20.(xx)Enfermedades dermatológicas, que coinciden con procesos inflamatorios, alérgicos y/o proliferativos, incluyendo dermatitis atópica (incluso en niños), dermatitis exfoliativa, psoriasis, enfermedades eritematosas (desencadenadas por diferentes noxas, incluyendo radiación, productos químicos, quemaduras, etc.), quemaduras de ácido, dermatosis ampollosas (incluyendo pénfigo vulgar y pénfigo autoinmunitario), enfermedades del grupo liquenoide, picazón (incluyendo orígenes alérgicos), todas las formas de eccema (incluyendo eccema atópico o eccema seborreico), rosácea, pénfigo vulgar, eritema exudativo multiforme, eritema nodoso, balanitis, prurito (incluyendo de origen alérgico), manifestación de enfermedades vasculares, vulvitis, pérdida de cabello inflamatoria (incluyendo alopecia areata), linfoma cutáneo de linfocitos T, erupciones de cualquier origen o dermatosis, grupos de psoriasis y parapsoriasis, y pitiriasis rubra pilaris.

Sin perjuicio de lo anterior, se contempla que los compuestos descritos en esta memoria específica se pueden usar para tratar afecciones tales como: diabetes tipo I (diabetes insulinodependiente), síndrome de Guillain-Barré, reestenosis después de angioplastia transluminal percutánea, enfermedad de Alzheimer, dolor agudo y crónico, arteriosclerosis, lesión por reperfusión, lesión térmica, lesión multiorgánica secundaria a trauma, meningitis purulenta aguda, enterocolitis necrosante y síndromes asociados con hemodiálisis, leucoféresis, transfusión de granulocitos, síndrome de Conies, hiperaldosteronismo primario y secundario, aumento de la retención de sodio, aumento de magnesio y excreción de potasio (diuresis), aumento de retención de agua, hipertensión (sistólica aislada y sistólica/diastólica combinada), arritmias, fibrosis miocárdica, infarto de miocardio, síndrome de Bartter, trastornos asociados con niveles de catecolaminas en exceso, insuficiencia cardíaca congestiva diastólica y sistólica (CHF), enfermedad vascular periférica, nefropatía diabética, cirrosis con edema y ascitis, varices esofágicas, debilidad muscular, aumento de pigmentación de melanina de la piel, pérdida de peso, hipotensión, hipoglucemia, poliuria, polidipsia, inflamación, trastornos autoinmunes, rechazo de tejidos asociados con trasplantes de órganos, neoplasias tales como leucemias y linfomas, fiebre reumática, poliarteritis granulomatosa, inhibición de líneas celulares mieloides, proliferación/apoptosis inmunes, supresión y regulación del eje HPA, hipercortisolemia, modulación del equilibrio de citocinas Thl/Th2, enfermedad renal crónica, hipercalcemia, insuficiencia suprarrenal aguda, insuficiencia suprarrenal primaria crónica, insuficiencia suprarrenal secundaria, hiperplasia suprarrenal congénita, síndrome de Little, inflamación sistémica, enfermedad inflamatoria intestinal, granulomatosis de Wegener, artritis de células gigantes, osteoartritis, edema angioneurótico, tendinitis, bursitis, hepatitis crónica activa autoinmune, hepatitis, cirrosis, paniculitis, quistes inflamados, pioderma gangrenoso, fascitis eofisnófilo, policondritis recidivante, sarcoidosis, enfermedad de Sweet, lepra reactiva tipo 1, hemangiomas capilares, liquen plano, acné eritema nudoso, hirsutismo, necrólisis epidérmica tóxica, eritema multiforme, psicosis, trastornos cognitivos (tales como trastornos de la memoria), trastornos del estado de ánimo (tales como depresión y trastorno bipolar), trastornos de ansiedad y trastornos de la personalidad.

Como se usa en el presente documento, el término "insuficiencia cardíaca congestiva" (CHF) o "enfermedad cardíaca congestiva" se refiere a una patología del sistema cardiovascular por el cual el corazón es incapaz de bombear eficientemente un volumen adecuado de sangre para satisfacer los requisitos de los tejidos del cuerpo y los sistemas de órganos. Normalmente, la ICC se caracteriza por insuficiencia ventricular izquierda (disfunción sistólica) y acumulación de líquido en los pulmones, siendo la causa subyacente atribuida a una o más enfermedades cardíacas o cardiovasculares, que incluyen coronariopatía, infarto miocárdico, hipertensión, diabetes, cardiopatía valvular y miocardiopatía. La expresión "insuficiencia cardíaca congestiva diastólica" se refiere a un estadio de ICC caracterizado por la deficiencia en la capacidad del corazón para relajarse adecuadamente y llenarse de sangre. Por el contrario, la expresión "insuficiencia cardíaca congestiva sistólica" se refiere a un estadio de ICC caracterizado por la deficiencia en la capacidad del corazón para contraerse adecuadamente y expulsar la sangre.

Como se darán cuenta los expertos, los trastornos fisiológicos se pueden presentar como una afección "crónica" o un episodio "agudo". El término "crónico/a", según se emplea en la presente, se refiere a una afección de evolución lenta y larga duración. En este sentido, una afección crónica se trata cuando es diagnosticada y el tratamiento continúa durante todo el curso de la enfermedad. Por el contrario, el término "agudo/a" se refiere a un evento o ataque exacerbado, de corta duración, seguido de un período de remisión. Por lo tanto, el tratamiento de los trastornos fisiológicos contempla tanto los eventos agudos como las afecciones crónicas. En un evento agudo, el compuesto se administra cuando aparecen los síntomas y se interrumpe cuando los síntomas desaparecen.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en terapia.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una afección mediada por GR (tal como una afección descrita anteriormente).

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una afección inflamatoria o inmune sensible a un glucocorticoide esteroideo (por ejemplo, dexametasona, prednisona, y/o prednisolona).

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una afección inflamatoria.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una afección respiratoria.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una afección reumática.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la artritis reumatoide.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento del asma.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la exacerbación del asma de moderada a grave.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de EPOC.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la exacerbación de EPOC de moderada a grave.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento del síndrome del intestino irritable.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de un trastorno del colágeno.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en la profilaxis del rechazo de trasplante de riñón.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de sarcoidosis.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Addison.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de la leucemia linfocítica aguda.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento del síndrome de dificultad respiratoria.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento del síndrome nefrótico.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una enfermedad dermatológica.

Algunas realizaciones en esta memoria descriptiva se refieren a la forma C del Compuesto (I) para su uso en el tratamiento de una enfermedad en un mamífero que necesita dicho tratamiento. En algunas realizaciones, el mamífero tratado es un ser humano. En algunas realizaciones, el mamífero tratado es un mamífero distinto de un ser humano. Dichos mamíferos incluyen, por ejemplo, animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos y caballos), animales de ganado (por ejemplo, ganado vacuno y porcino); animales de laboratorio (por ejemplo, ratones y ratas); y animales salvajes, zoológicos y de circo (por ejemplo, osos, leones, tigres, simios y monos).

Composiciones farmacéuticas

Algunas realizaciones de esta memoria descriptiva se refieren a composiciones farmacéuticas (o medicamentos) que comprenden la forma C del Compuesto (I), así como a procesos para fabricar dichas composiciones farmacéuticas. En general, la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto descrito en esta memoria descriptiva pueden variar ampliamente. Aunque se contempla que un compuesto descrito en esta memoria descriptiva podría administrarse por sí mismo (es decir, sin ningún otro principio activo o inactivo), la composición farmacéutica normalmente comprenderá uno o más principios activos adicionales y/o principios inertes. Los principios inertes presentes en las composiciones farmacéuticas de esta memoria descriptiva a veces se denominan colectivamente "excipientes". Procesos convencionales para la selección y preparación de formulaciones farmacéuticas adecuadas se describen, por ejemplo, en "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 2a Ed. 2002.

Se contempla que las composiciones que comprenden la forma C del Compuesto (I) pueden formularse para una diversidad de rutas y medios de administración adecuados, incluyendo administración oral, rectal, nasal, tópica, bucal, sublingual, vaginal, inhalación, insuflación o parenteral. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía oral. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía intravenosa. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía intramuscular. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía subcutánea. Y, en algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía intraperitoneal, intratorácica, epidural, intratecal, intracerebroventricular e inyección en las articulaciones. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía tópica.

Se contempla que las composiciones farmacéuticas de esta memoria descriptiva pueden, por ejemplo, estar en forma de sólidos, soluciones acuosas u oleosas, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, brumas, geles, aerosoles nasales, supositorios, polvos finamente divididos y aerosoles o nebulizadores para inhalación.

En algunas realizaciones, la composición comprende una forma de dosificación líquida que puede administrarse por vía oral.

En algunas realizaciones, la composición comprende una forma de dosificación sólida que puede administrarse por vía oral.

Las composiciones en forma sólida incluyen, por ejemplo, polvos, comprimidos, gránulos dispersables, cápsulas, sellos y supositorios. Un vehículo sólido puede comprender una o más sustancias. Dichas sustancias son generalmente inertes. Un vehículo también puede actuar como, por ejemplo, un diluyente, agente saborizante, solubilizante, lubricante, conservante, estabilizante, agente de suspensión, aglutinante o agente desintegrante. También puede actuar como, por ejemplo, un material encapsulante. Los ejemplos de vehículos que suelen ser adecuados incluyen manitol, lactosa, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, lactosa, azúcar (por ejemplo, glucosa y sacarosa), pectina, dextrina, almidón, tragacanto, celulosa, derivados de la celulosa (por ejemplo, metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica), sacarina sódica, cera de bajo punto de fusión y manteca de cacao de calidad farmacéutica.

En los polvos, el vehículo suele ser un sólido finamente dividido, que está mezclado con el componente activo finamente dividido. En los comprimidos, el componente activo se suele mezclar con el vehículo, que posee las propiedades de aglutinación deseables, en proporciones adecuadas y se compacta con la forma y el tamaño deseados.

Para preparar composiciones en forma de supositorios, primero se funde una cera de bajo punto de fusión (por ejemplo, una mezcla de glicéridos de ácidos grasos y manteca de cacao) y luego se dispersa el principio activo en ella, por ejemplo, agitando. La mezcla homogénea fundida se vierte posteriormente en moldes de tamaño conveniente y se deja enfriar y solidificar. Los ejemplos de excipientes no irritantes que pueden estar presentes en composiciones en forma de supositorios incluyen, por ejemplo, manteca de cacao, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles de diferentes pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol.

Las composiciones líquidas pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo o dispersando el compuesto de esta memoria descriptiva en un vehículo, tal como, por ejemplo, agua, soluciones en agua/propilenglicol, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol o etanol. En algunas realizaciones, las soluciones acuosas para administración oral pueden prepararse disolviendo un compuesto de esta memoria descriptiva en agua con un solubilizante (por ejemplo, un polietilenglicol). También se pueden agregar, por ejemplo, colorantes, agentes saborizantes, estabilizadores y agentes espesantes. En algunas realizaciones, las suspensiones acuosas para su uso oral pueden prepararse dispersando el compuesto de esta memoria descriptiva en una forma finamente dividida en agua, junto con un material viscoso, tal como, por ejemplo, una o más gomas sintéticas naturales, resinas, metilcelulosa, carboximetil celulosa sódica u otros agentes de suspensión. Si se desea, la composición líquida también puede contener otros principios inertes auxiliares no tóxicos, tales como, por ejemplo, agentes humectantes o emulsionantes, agentes tamponantes del pH y similares, por ejemplo, acetato sódico, monolaurato de sorbitán, acetato sódico de trietanolamina, monolaurato de sorbitán, oleato de trietanolamina, etc. Dichas composiciones también pueden contener otros ingredientes, tales como, por ejemplo, uno o más adyuvantes farmacéuticos.

En algunas realizaciones, la concentración de la forma C del Compuesto (I) en la composición farmacéutica es de aproximadamente el 0.05% a aproximadamente el 99% (en peso). En algunas de dichas realizaciones, por ejemplo, la concentración es de aproximadamente el 0.05 a aproximadamente el 80%, de aproximadamente el 0.10 a aproximadamente el 70%, o de aproximadamente el 0.10% a aproximadamente el 50% (en peso).

Cuando se administra un compuesto de esta memoria descriptiva como única terapia para tratar un trastorno, una "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para reducir o aliviar completamente los síntomas u otros efectos perjudiciales de la afección; curar la afección; revertir, detener completamente o ralentizar el avance de la afección; reducir el riesgo de que la afección empeore; o retrasar o reducir el riesgo de aparición de la afección.

En algunas realizaciones de esta memoria descriptiva, la composición farmacéutica es adecuada para administración oral en una forma de dosificación unitaria de, por ejemplo, un comprimido o cápsula que contiene de aproximadamente 0.1 mg y aproximadamente 10 g de la forma C del compuesto (I).

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad de la forma C del Compuesto (I) que es terapéuticamente eficaz para tratar una afección mediada por GR (tal como una afección descrita anteriormente) que se desea tratar.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad de Compuesto (I) que es terapéuticamente eficaz para tratar una afección inflamatoria.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad de la forma C del Compuesto (I) que es terapéuticamente eficaz para tratar una afección reumática.

La dosificación y frecuencia de administración óptimas dependerán de la afección particular que se trate y su gravedad; la especie del paciente; la edad, el sexo, el tamaño y el peso, la dieta y el estado físico general del paciente en particular; la relación de peso cerebro/cuerpo; otro medicamento que el paciente pueda estar tomando; la ruta de administración; la formulación; y diversos otros factores conocidos por los médicos (en el contexto de pacientes humanos), veterinarios (en el contexto de pacientes no humanos), y otros expertos en la técnica.

Se contempla que, en algunas realizaciones, la cantidad óptima de un compuesto de esta memoria descriptiva sea al menos aproximadamente 0.01 mg/kg de peso corporal al día, de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al día, o de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal al día (por ejemplo, 0.5 mg/kg de peso corporal al día) cuando se administra sistémicamente.

Se contempla que las composiciones farmacéuticas puedan estar en una o más formas farmacéuticas unitarias. Por consiguiente, la composición se puede dividir en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma farmacéutica unitaria puede ser, por ejemplo, una cápsula, un sello o un comprimido de por sí, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estas formas envasadas. Como alternativa, la forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada en la que el paquete contiene cantidades discretas de la composición, tal como, por ejemplo, comprimidos, cápsulas o polvos envasados en viales o ampollas. Las formas farmacéuticas unitarias se pueden preparar, por ejemplo, mediante varios métodos de uso común en la práctica farmacéutica.

Se contempla que una dosis se pueda administrar una vez al día o en dosis divididas, como por ejemplo, de 2 a 4 veces al día.

Combinaciones

Esta memoria descriptiva también se refiere a terapias de combinación o composiciones en las que un compuesto (I) que comprende un compuesto (I) se administra simultáneamente (posiblemente en la misma composición) o secuencialmente con uno o más agentes activos para el tratamiento de cualquiera de las anteriores afecciones analizadas.

En algunas realizaciones en las que se usa una terapia de combinación, la cantidad del compuesto de esta memoria descriptiva y la cantidad de los otros agentes farmacéuticamente activos son, cuando se combinan, terapéuticamente eficaces para tratar un trastorno objetivo en el paciente animal. En este contexto, las cantidades combinadas son una "cantidad terapéuticamente eficaz" si, al combinarse, son suficientes para reducir o aliviar completamente los síntomas u otros efectos perjudiciales del trastorno; curar el trastorno; revertir, detener por completo, o ralentizar el avance de la enfermedad; reducir el riesgo de que empeore el trastorno; o retrasar o reducir el riesgo de la aparición del trastorno. Típicamente, dichas cantidades pueden determinarse por un experto en la técnica, por ejemplo, comenzando con el intervalo de dosificación descrito en esta patente para el compuesto de esta memoria descriptiva, y un intervalo o intervalos de dosificación aprobados o publicados de otro modo del otro compuesto o compuestos farmacéuticamente activos.

Cuando se usa en una terapia de combinación, se contempla que el compuesto de esta memoria descriptiva y los demás principios activos se pueden administrar en una composición única, composiciones completamente separadas, o una combinación de las mismas. También se contempla que los principios activos puedan administrarse a la vez, simultánea, secuencialmente o por separado. La composición o composiciones y frecuencia o frecuencias de dosificación particulares de la terapia de combinación dependerán de una diversidad de factores, incluyendo la vía de administración, la afección que se trata, la especie del paciente, cualquier interacción potencial entre los principios activos cuando se combinan en una única composición, cualquier interacción entre los principios activos cuando se administran al paciente animal, y diversos otros factores conocidos por los médicos (en el contexto de pacientes humanos), veterinarios (en el contexto de pacientes no humanos), y otros expertos en la técnica.

Kits

Esta memoria descriptiva también se refiere, en parte, a un kit que comprende la forma C del compuesto (I). En algunas realizaciones, el kit comprende además uno o más componentes adicionales, tales como, por ejemplo: (a) un aparato para administrar la forma C del compuesto (I); (b) instrucciones para administrar la forma C del compuesto (I); (c) un excipiente (por ejemplo, un agente de resuspensión); o (d) un principio activo adicional, que puede estar en la misma y/o diferentes formas de dosificación que la forma C del compuesto (I).

Breve Descripción de las figuras

La Figura 1 muestra un patrón de difracción de polvo de rayos X del Ejemplo 1 (forma C).

La Figura 2 muestra una DSC del Ejemplo 1 (forma C).

Ejemplos

La presente invención se explicará ahora con referencia a los siguientes ejemplos ilustrativos en los que, a menos que se indique otra cosa:

(i) Las temperaturas se dan en grados Celsius (°C); las operaciones se realizan a temperatura ambiente, es decir, a una temperatura en el intervalo de 18-25 °C.

(ii) En general, el transcurso de las reacciones se siguió de HPLC y los tiempos de reacción se dan solo a título ilustrativo.

(iii)Los rendimientos se dan solo a modo de ilustración y no son necesariamente aquellos que se pueden obtener mediante el desarrollo diligente de procesos; las preparaciones se repitieron si se requería más material.

(iv) Los símbolos químicos tienen sus significados habituales; se usan unidades del SI y símbolos.

(v) Las relaciones de disolventes se dan en términos de volumen:volumen (v/v).

(vi) A menos que se indique otra cosa, los materiales de partida estaban disponibles comercialmente.

Ejemplo

Análisis de difracción de polvo de rayos X

El análisis de difracción de rayos X se realizó de acuerdo con métodos estándar, que se pueden encontrar en, por ejemplo, Kitaigorodsky, A.I. (1973), Molecular Crystals and Molecules, editorial Academic, Nueva York; Bunn, C.W. Chemical Crystallography, editorial Clarendon, Londres (1948); o Klug, H. P. & Alexander, L.E. John Wiley & Sons, Nueva York (1974), de Klug, H.P. y Alexander, L.E.

Las muestras se colocaron sobre obleas de silicio monocristalino (SSC) y la difracción de polvo de rayos X se registró con un PANalytical X'Pert PRO (geometría de reflexión, longitud de onda de rayos X 1.5418 A, radiación de Cu filtrada con níquel, voltaje 45 kV, emisión del filamento 40 mA). Se usaron divergencia variable automática y ranuras autodifusoras y las muestras se giraron durante la medición. Se realizó un barrido de las muestras de 2 - 50 °2Theta utilizando una amplitud de pulso de 0.013° y 1415 segundos por pulso utilizando un detector PIXCEL (longitud activa 3.35 °2Theta).

En la técnica, se sabe que se puede obtener un patrón de difracción de polvo de rayos X con uno o más errores de medición dependiendo de las condiciones de medición (tales como el equipo, la preparación de la muestra o el instrumento empleados). En particular, se sabe que generalmente las intensidades en un patrón de difracción de polvo de rayos X pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medición y de la preparación de la muestra. Por ejemplo, los expertos en la técnica de difracción de polvo de rayos X apreciarán que las intensidades relativas de los picos pueden variar de acuerdo con la orientación de la muestra bajo ensayo y con el tipo y configuración del instrumento utilizado. El experto también se percatará de que la posición de las reflexiones se puede ver afectada por la altura exacta a la cual se sitúa la muestra en el difractómetro y la calibración del cero del difractómetro. Puede que también tenga un pequeño efecto la planaridad de la superficie de la muestra. Por lo tanto, un experto en la técnica apreciará que los datos del patrón de difracción presentados en el presente documento no deben considerarse absolutos y cualquier forma cristalina que proporcione un patrón de difracción de potencia sustancialmente idéntico a los descritos en el presente documento está dentro del alcance de la presente divulgación (para más información véase Jenkins, R & Snyder, R.L. "Introduction to X-Ray Powder Diffractometry" John Wiley & Sons, 1996).

Generalmente, un error de medición de un ángulo de difracción en un difractograma de polvo de rayos X puede ser aproximadamente más o menos 0.1 ° 2-theta, y tal grado de error de medición debe tenerse en cuenta cuando se consideran los datos de difracción de polvo de rayos X.

Tabla 1. Diez picos prominentes de la Forma C del Compuesto (1) cuando se mide usando radiación CuKa

°2-theta

7.3

8.7

11.4

12.5

14.5

15.3

17.6

19.4

23.6

25.7

Los picos adicionales que pueden ser útiles para caracterizar la forma C del Compuesto (I) son 17.3, 19.0 y 22.9 °2-theta. Sin embargo, otros picos adicionales que pueden ser útiles para caracterizar la forma C del Compuesto (I) son 12.4 y 25.6 °2-theta.

Métodos generales

Los espectros de RMN se registraron en un espectrómetro Bruker Avance, Avance II o Avance III a una frecuencia de protón de 300, 400, 500 o 600 MHz. Los picos centrales de cloroformo-5 (H 7.26 ppm), o DMSO-cfó (H 2.49 ppm) se usaron como referencias internas.

Los experimentos por LC/MS se realizaron usando un sistema Waters Acquity combinado con un sistema de masas Waters Xevo Q-ToF o un sistema UPLC Shimadzu 2010EV en modo ESI. (ii) La LC se realizó en dos montajes: 1) columna BEH C18 (1.7 |jm 2.1 x 50 mm) junto con un gradiente (2-95% de B en 5 min) de tampón acuoso de carbonato de amonio 46 mM/amoniaco a pH 10 (A) y MeCN (B) a un caudal de 1.0 ml/min o junto con un gradiente (5-95% de B en 2 min) de agua y TFA (0.05%) (A) y CH3CN y TFA (0.05%) a un caudal de 1.0 ml/min (B).

La pureza óptica, indicada como exceso enantiomérico (% de e.e.), se determinó mediante:

Método A: HPLC quiral usando un cromatógrafo de la serie Agilent 1100. Sistema equipado con Chiralpak (IB-3, IA-3 o IC-3) 50 x 4.6 mm; 3 |jm. Como fase móvil se usó hexano (trietilamina al 0.1%)/EtOH (85:15) con un caudal de 1 ml/min. El volumen de inyección fue de 3 jL y la detección de compuestos se llevó a cabo por UV a 254 nm.

Método B: Sistema SFC quiral equipado con Chiralpak (IC o AD-H) 150 x 4.6 mm, 3 jm o Chiracel (OD-H, OJ-3, OD-3) o Lux 5u Celulosa-3. Como gradientes de eluyente de CO2 (100 g/min, 120 bar, 40 °C) (A) y MeOH al 5-40%/dietilamina (0.1%), EtOH/dietilamina (0.1%), alcohol isopropílico al 20% o alcohol isopropílico al 20%/NH3200:1 (B) se aplicaron con un caudal de 4 ml/min. El volumen de inyección fue de 0.7 j l o 10 j l y la detección del compuesto se realizó mediante UV a 254 nm o 220 nm.

La HPLC preparativa se realizó con un sistema Waters FractionLynx con detección MS integrada y equipado con columnas Prep C18 ^o B^d de 5 jm de 19 x 150 mm de X-Bridge o Sunfire. Como alternativa, se usó Gilson GX-281 con detección UV integrada, equipado con Kromasil C810 jm , 20 x 250 de D.I. o 50 x 250 mm de D.I. Se aplicaron como gradientes de eluyente (ácidos) de agua/MeCN/ácido acético (95/5/0.1) o agua/TFA al 0.05% (A) y MeCN/TFA al 0.05% (B) o MeCN (básico) o MeOH (A) y amoniaco al 0.03% en agua o NH4HCO3 al 0.03% (B).

A menos que se indique otra cosa, los materiales de partida usados en los ejemplos a continuación estaban disponibles comercialmente o se describieron previamente en la bibliografía. Todos los disolventes y reactivos comerciales eran de grado de laboratorio y se usaron tal como se recibieron a menos que se indique otra cosa.

Todas las temperaturas están en grados Celsius (°C). En general, a menos que se indique otra cosa, las operaciones analizadas en los ejemplos a continuación se realizaron a temperatura ambiente o ambiente (18-25 °C); el progreso de la reacción se controló mediante HPLC, LC-MS o TLC; se usó material de vidrio de laboratorio estándar secado al horno y se realizaron manipulaciones rutinarias a temperatura ambiente bajo un manto de N2; las evaporaciones se realizaron a presión reducida usando un evaporador rotativo u otro equipo de destilación estándar; y los productos se secaron a presión reducida a una temperatura adecuada.

Los nombres de los compuestos ilustrados en esta patente se generaron usando ChemDraw Ultra 11.0. Este es un programa de generación de nombres químicos que asigna nombres químicos a las estructuras dibujadas con solo presionar un botón.

Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

Utilizando métodos estándar (por ejemplo, los descritos en Hohne, G. W. et al. (1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlín) se investigó la respuesta calorimétrica de una muestra de ensayo al aumento de la temperatura usando un Calorímetro diferencial de barrido (DSC) TA Instruments Q2000. Las mediciones se realizaron entre 15 °C y 190 °C, una velocidad de aumento de 5 °C al minuto. Aproximadamente de 0.5 a 5 mg de muestra de ensayo se colocaron en bandejas de aluminio con tapas (sin engarce) en un flujo de gas nitrógeno (50 ml/min).

Como se ha mencionado anteriormente en la presente, hay constancia de que la temperatura de inicio y de los picos de la CDB puede variar según sea la pureza de la muestra y los parámetros instrumentales, especialmente la velocidad de barrido de temperaturas. Un experto en la materia mediante optimización/calibrado puede fijar los parámetros instrumentales para un calorímetro diferencial de barrido de modo que se puedan registrar datos comparables a los datos presentados aquí.

Abreviaturas

Se han empleado las siguientes abreviaturas.

Ac.: acuoso/a

MeCN: acetonitrilo

MeOH: metanol

DIPEA: diisopropiletilamina

DMF: dimetilformamida

Ejemplo 1

Preparación de 2.2-difluoro-N-r(1ff.2S)-3-metil-1-lH-(1-metil-6-oxo-1.6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-illoxi}-1-fenilbutan-2-illpropanamida (forma C)

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 2 l, purgado y mantenido con una atmósfera de N2, se puso una solución de 5-((terc-but¡ld¡met¡ls¡lil)ox¡]-1H-¡ndazol (805 g, 3.2 mol) en tolueno (8 l), 5-yodo-1-metil-1,2-dihidropiridin-2-ona (800 g, 3.4 mol) y K3PO4 (1.2 kg, 5.8 mol). Se añadió c¡clohexan-1,2-d¡amina (63 g, 0.5 mol) seguido de la adición de Cul (1.3 g, 6.8 mmol) en varios lotes. La solución resultante se agitó durante una noche a 102 °C. La mezcla resultante se concentró al vacío para producir 3.0 kg del compuesto del título en forma de un sólido de color negro en bruto. LC/MS: m/z 356 [M+H]+.

Etapa B. Preparación de 5-(5-hidroxi-1H-mdazoM-M)-1-metNpiridm-2(1H)-ona.

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 2 I se puso en 5-[5-[(ferc-butildimetilsilil)oxi]-1 /-/-indazol-1 -il]-1 -metil-1,2-dihidropiridin-2-ona (3.0 kg, en bruto) y una solución de HCl (2 l, 24 mol, 36%) en agua (2 l) y MeOH (5 l). La solución resultante se agitó durante 1 h a 40 °C y después se evaporó a sequedad. El sólido resultante se lavó con agua (4 x 5 l) y acetato de etilo (2 x 0.5 l) para proporcionar 480 g (61%, dos etapas) del producto del título en forma de un sólido de color pardo. LC/MS: m/z 242 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 53.52 (3H, s),6.61 (1H,m),7.06 (2H,m),7.54 (1H,m), 7.77 (1H,m), 8.19 (2H, m) 9.35 (1H,s).

Etapa C. Preparación de ((1R,2S)-1-hidroxi-3-metiM-fenMbutan-2-M)carbamato de tere-butilo.

Se disolvió 3-metil-1-oxo-1-fen¡lbutan-2-¡lcarbamato de (S)-ferc-butilo (1.0 kg, 3.5 mol) en tolueno (4 I). Posteriormente, se añadió 2-propanol (2 l) seguido de triisopropoxialuminio (0.145 l, 0.73 mol). La mezcla de reacción se calentó a 54-58 °C durante 1 h a presión reducida (300-350 mbar) para comenzar la destilación azeotrópica. Después de la recogida de 0.75 l de condensado, se añadió 2-propanol (2 l), y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a presión reducida para proporcionar 4 l de condensado en total. Se añadió tolueno (3 l) a 20 °C seguido de HCl 2 M (2 l) durante 15 min para mantener la temperatura por debajo de 28 °C. Las capas se separaron (pH de fase acuosa 0-1) y la capa orgánica se lavó sucesivamente con agua (3 l), NaHCO3 al 4% (2 l) y agua (250 ml). El volumen de la capa orgánica se redujo de 6 l a 50 °C y 70 mbar a 2.5 l. La mezcla resultante se calentó a 50 °C y se añadió heptano (6.5 l) a 47-53 °C para mantener el material en solución. La temperatura de la mezcla se disminuyó lentamente a 20 °C, se sembró con los cristales del compuesto del título a 37 °C (los cristales de semilla se prepararon en un lote anterior preparado por el mismo método y después evaporando la mezcla de reacción a sequedad, suspendiendo el residuo en heptano, y aislando los cristales por filtración), y se dejó en reposo durante una noche. El producto se eliminó por filtración, se lavo con heptano (2 x 1 l) y se secó al vacío para proporcionar 806 g (81%) del compuesto del título en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): 50.81 (dd, 6H), 1.16 (s, 8H), 2.19 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 4.32 (d, 1H), 5.26 (s, 1H), 6.30 (d, 1H), 7.13 -7.2 (m, 1H), 7.24 (t, 2H), 7.3 - 7.36 (m, 3H).

Etapa D. Preparación de sal clorhidrato de (1R,2S)-2-ammo-3-metiM-femlbutan-1-ol.

A una solución de HCI en propan-2-ol (5-6 N, 3.1 I, 16 mol) a 20 °C se le añadió en porciones ((1R,2S)-1-hidrox¡-3-met¡l-1-fenilbutan-2-il)carbamato de ferc-butilo (605 g, 2.2 mol) in durante 70 min seguido de la adición de MTBE (2 l) durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió a 5 °C y se agitó durante 18 h. El producto se aisló por filtración y se secó para proporcionar 286 g del compuesto del título en forma de una sal HCl (rendimiento del 61%). Las aguas madre se concentraron para dar 300 ml. Después, se añadió MTBE (300 ml), y la precipitación resultante se aisló por filtración para proporcionar 84 g más del compuesto del título en forma de una sal HCl (rendimiento del 18%). Total 370 g (79%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 50.91 (dd, 6H), 1.61 - 1.81 (m, 1H), 3.11 (s, 1H), 4.99 (s, 1H), 6.08 (d, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.40 (dt, 4H), 7.97 (s, 2H).

Etapa E. Preparación de (2S,3S)-2-isopropil-1-(4-nitrofenilsulfonil)-3-fenilaziridina.

Se mezcló clorhidrato de (1R,2S)-2-amino-3-metil-1-fenilbutan-1-ol (430 g, 2.0 mol) con DCM (5 l) a 20 °C. Después, se añadió cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo (460 g, 2.0 mol) durante 5 min. Posteriormente, la mezcla se enfrió a -27 °C. Se añadió lentamente trietilamina (1.0 kg,10 mol) mientras se mantuvo la temperatura a -18 °C. La mezcla de reacción se enfrió a -30 °C, y se añadió lentamente cloruro de metanosulfonilo (460 g, 4.0 mol) mientras se mantuvo la temperatura a -25 °C. Después, la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 16 h antes de añadir trietilamina (40 ml, 0.3 mol; 20 ml,0.14 mol y 10 ml, 0.074 mol) a 0 °C en porciones durante 4 h. Posteriormente, se añadió agua (5 l) a 20 °C, y las capas resultantes se separaron. La capa orgánica se lavó con agua (5 l) y el volumen se redujo a 1 l al vacío. Se añadió MTBE (1.5 l), y la mezcla se agitó en un evaporador rotatorio a 20 °C durante una noche y se filtró para proporcionar 500 g (70%) del producto del título en forma de un sólido. 1H RMN (400 MHz, CDCla): 5 1.12 (d, 3H), 1.25 (d, 3H), 2.23 (ddt, 1H), 2.89 (dd, 1H), 3.84 (d, 1H), 7.08 - 7.2 (m, 1H), 7.22 - 7.35 (m, 4H), 8.01 - 8.13 (m, 2H), 8.22 - 8.35 (m, 2H).

Etapa F. Preparación de N-((1R,2S)-3-metiM-(1-(1-metM-6-oxo-1,6-dihidropiridm-3-N)-1H-mdazol-5-iloxi)-1-fenilbutan-2-il)-4-nitrobencenosulfonamida.

Se mezcló (2S,3S)-2-isopropil-1-(4-nitrofenilsulfonil)-3-fenilaziridina (490 g, 1.3 mol) con 5-(5-hidroxi-1 H-indazol-1 -il)-1-metilpi ridin-2(1 H)-ona (360 g, 1.4 mol) en acetonitrilo (5 l) a 20 °C. Se añadió en porciones carbonato de cesio (850 g, 2.6 mol) durante 5 min. Después, la mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante una noche. Se añadió agua (5 l) a 20 °C, y la mezcla resultante se extrajo con 2-metiltetrahidrofurano (5 l y 2.5 l). La capa orgánica combinada se lavó sucesivamente con HCl 0.5 M (5 l), agua (3 x 5 l) y salmuera (5 l). La capa orgánica restante se concentró para dar un aceite espeso, y después se añadió MTBE (2 l). El precipitado resultante se filtró para proporcionar 780 g (pureza del 71% p/p) del producto del título en bruto en forma de un sólido de color amarillo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 0.93 (dd, 6H), 2.01 - 2.19 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 5.00 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.95 - 7.15 (m, 4H), 7.23 (d, 2H), 7.49 (d, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.74 (d, 2H), 8.00 (s, 1H), 8.08 (d, 2H), 8.13 (d, 2H).

Etapa G. Preparación de 2,2-d¡fluoro-N-[(1R,2S)-3-met¡l-1-{[1-(1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡dm-3-¡l)-1H-mdazol-5-il]oxi}-1-fenilbutan-2-il]propanamida.

Se mezcló A/((1R,2S)-3-Met¡l-1-(1-(1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-¡ndazol-5-¡lox¡)-1-fen¡lbutan-2-¡l)-4-nitrobencenosulfonamida (780 g, 71% p/p) con DMF (4 l). Después, se añadió DBU (860 g, 5.6 mol) a 20 °C durante 10 min. Se añadió lentamente ácido 2-mercaptoacético (170 g, 1.9 mol) durante 30 min, manteniendo la temperatura a 20 °C. Después de la agitación durante 1 h, tiempo durante el cual se produjo la amina correspondiente, 5-(5-((1R,2S)-2-amino-3-metil-1-fenilbutoxi)-1H-indazol-1-il)-1-metilpiridin-2(1H)-ona, se añadió 2,2-difluoropropanoato de etilo (635 g, 4.60 mol) durante 10 min a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h. Posteriormente, se añadió más cantidad de 2,2-difluoropropanoato de etilo (254 g, 1.8 mol), y la mezcla de reacción se agitó durante 4 h más a 20 °C. Después, se añadió lentamente agua (5 l) durante 40 min, manteniendo la temperatura a 20 °C. La capa de agua se extrajo con acetato de isopropilo (4 l y 2 x 2 l). La capa orgánica combinada se lavó con HCl 0.5 M (4 l) y salmuera (2 l). Después, la capa orgánica se combinó con la capa orgánica de una reacción paralela partiendo de 96 g de N-((1R,2S)-3-metil-1-((1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-il)oxi)-1-fenilbutan-2-il)-4-nitrobencenosulfonamida, y se concentró hasta aproximadamente 1.5 l. La solución de color pardo resultante se filtró. El filtro se lavó dos veces con acetato de isopropilo (2 x 0.5 l). El filtrado se evaporó hasta que se formó un sólido. Después, el sólido se coevaporó con etanol al 99.5% (1 l), proporcionando el compuesto del título de 493 g (77%, dos etapas) en forma de un sólido amorfo.

Etapa H. Preparación de 2,2-d¡fluoro-N-((1R,2S)-3-met¡l-1-{[1-(1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡dm-3-¡l)-1H-mdazol-5-il]oxi}-1-fen¡lbutan-2-¡l]propanam¡da (forma A)

El sólido amorfo de la etapa anterior (464 g, 0.94 mol) se disolvió en 2:1 de etanol/agua (3.7 l) a 50 °C. Después, la mezcla de reacción se sembró con cristales del compuesto del título como la forma A (0.5 g) a 47 °C, y se formó una mezcla opaca ligera. La mezcla se mantuvo a esta temperatura durante 1 h. Posteriormente, la temperatura se disminuyó a 20 °C durante 7 h, y se mantuvo a 20 °C durante 40 h. El sólido se eliminó por filtración, se lavó con etanol/agua fría (5 °C), 1:2 (0.8 l), y se secó al vacío a 37 °C durante una noche para proporcionar 356 g (0.70 mol, 74%, 99.9 % de e.e.) del compuesto del título en forma de un monohidrato (forma A). L^c /M^s : m/z 495 [M+H]+. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 5 0.91 (dd, 6H), 1.38 (t, 3H), 2.42 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 4.21 (m, 1H), 5.29 (d, 1H), 6.53 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 7.13 (dd, 1H), 7.22 (t, 1H), 7.29 (t, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.56 (d, 1H), 7.70 (dd, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.27 (d, 1H).

Los cristales sembrados usados en la etapa anterior se prepararon a partir del compuesto amorfo de acuerdo con el siguiente procedimiento:

Una mezcla de 5-(5-((1R,2S)-2-amino-3-metil-1-fenilbutoxi)-1H-indazol-1-il)-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1.0 equiv. mol.), 2,2-difluoropropanoico (1.2 equiv. mol.), HATU (1.5 equiv. mol.) y DIPEA (3.0 equiv. mol.) en DMF (8 volúmenes) se agitó a temperatura ambiente durante varias horas. Posteriormente, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con DCM (3 x 20 volúmenes), se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó por HPLC preparativa. Este producto (401 mg) se pesó en un vial de vidrio. Se añadió etanol (0.4 ml), y el vial se agitó y se calentó a 40 °C para proporcionar una solución transparente de color ligeramente amarillo. Se añadió etanol/agua (0.4 ml, 50/50% vol/vol). La cristalización comenzó a producirse en 5 min, y, después de 10 min, se formó una suspensión espesa de color blanco. Los cristales se recogieron por filtración para proporcionar el compuesto del título en forma de un monohidrato (forma A).

Etapa I. Preparac¡ón de 2,2-d¡fluoro-N-[(1R,2S)-3-met¡l-1-{[1-(1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡dm-3-¡l)-1H-mdazol-5-¡l]ox¡}-1-fen¡lbutan-2-¡l]propanam¡da (Forma C).

Se disolvió 2,2-difluoro-N-[(1R,2S)-3-metil-1-{[1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-il]oxi}-1-fenilbutan-2-il]propanamida como monohidrato - forma A (100 g) en isopropanol (1.2 l) a 50-55 °C, y la solución resultante se filtró. Después, ésta se destiló a <50 °C a presión reducida a aproximadamente 0.3 l, y el contenido de agua de la solución se comprobó (diana <0.20% p/p). Si el contenido de agua diana no se logró, la solución se secó adicionalmente por la adición repetida de isopropanol (1.2 l) y se destiló de nuevo a aproximadamente 0.3 l hasta que se cumplió el objetivo. Se añadió más cantidad de isopropanol (0.3 l), la mezcla se calentó a 73-77 °C y se calentó a reflujo durante 0.5-2 h. Después, la solución resultante se destiló a 45-80 °C a presión reducida a aproximadamente 0.3 l, se calentó a reflujo durante 0.5-1 h y después se enfrió a 58-62 °C durante aproximadamente 1 h. Los cristales de siembra del compuesto del título (0.1 g) se añadieron, y la mezcla se enfrió a 22-26 °C durante 3.5-4 h. La mezcla se agitó a 22-26 °C durante 3-5 h y después se añadió n-heptano (0.6 l) durante 10-12 h. Después, esto se calentó a 48-52 °C durante aproximadamente 1 h, se enfrió a 22-26 °C durante aproximadamente 1 h, se calentó de nuevo a 48-52 °C durante aproximadamente 1 h y finalmente se enfrió a 2-7 °C durante 5-6 h. La mezcla se agitó durante 6-10 h, se filtró y el sólido resultante se lavó con n-heptano (aproximadamente 0.1 l). El sólido se secó al vacío a 50-55 °C para dar el compuesto del título (forma C) (80-90 g, rendimiento del 80-90%).

Los cristales de siembra usados en la etapa anterior se prepararon usando el siguiente procedimiento: Se disolvió 2,2-difluoro-N[(1R,2S)-3-metil-1-{[1-(1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-indazol-5-il]oxi}-1-fenilbutan-2-il]propanamida (como un monohidrato) (15 g) en isopropanol (180 ml) a aproximadamente 50 °C. Después, la solución resultante se destiló a ~45 ml y se agitó, durante lo cual el sólido se observó cristalizar. La mezcla se enfrió a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente 30 min, se agitó durante aproximadamente 5 h y después se calentó a aproximadamente 35 °C. A esto se le añadió n-heptano (12 ml) durante aproximadamente 4 h y la mezcla se agitó durante aproximadamente 4 h. El sólido resultante se recogió por filtración y se secó al vacío a aproximadamente 50 °C para dar el compuesto del título (forma C).

Actividad biológica

Ensayo de agonista GRE

Se estableció una línea celular indicadora (ChagoK1 18:7:2 s4/GRE) por transfección estable de la línea celular de carcinoma broncogénico humano, ChaGo K1 (ATCC: HTB 168) con una construcción indicadora MMTV-GRE-LacZ. La línea celular generada permite la identificación de compuestos que muestran actividad agonista en el receptor de glucocorticoides (GR) humanos a través de la inducción de la expresión del gen LacZ. El GR activado por ligando se une al elemento de respuesta de glucocorticoides (GRE) en el promotor del gen LacZ y se inicia la transcripción. La actividad beta-galactosidasa resultante se mide a través de una reacción de color (cambio en la absorbancia).

Se suspendieron las células crioconservadas ChagoK1 18:7:2 s4/GRE en medio RPMI con FBS al 10%, NEAA al 1% y piruvato sódico al 1%, y se sembraron como 50000 células/200 ul/pocillo en placas de 96 pocillos y se cultivaron a 37 °C con CO2 al 5% y un 95% de humedad durante 24 horas. Se añadió 1 |jl de compuesto a diferentes concentraciones a las células y se incubó durante 24 horas más. Las células se lavaron una vez en PBS y se lisaron con 50 j l de Triton-X al 0.1% durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 40 |il de la mezcla de reacción (MgCh 2.5 mM, pmercaptoetanol 0.1 M, 1.7 mg/ml de ONPG y fosfato sódico 42.5 mM, pH 7.5) a cada pocillo y se mantuvieron a 37 ° C durante 60 min. La reacción se terminó a continuación mediante la adición de 100 j l de solución de detención (glicina 300 mM, EDTA 15 mM, pH 11.3, ajustada con NaOH). Las placas se midieron a 420 nm para determinar la absorbancia en un lector SpectraMax (dispositivo molecular).

La eficacia relativa (% de efecto) de un compuesto se calcula en base al efecto agonista completo de la dexametasona:

% de efecto = ((Abs. de muestra - abs. mín.) / (abs. máx. - abs. mín.)) x 100

Para calcular la EC50, el máximo, el mínimo y el factor de pendiente para cada compuesto, se ajusta una curva de respuesta de concentración trazando el % de efecto frente a la concentración del compuesto usando la ecuación logística de 4 parámetros:

y = A+(B-A)/(1+((10C)/x)D)

Donde A = mín Y, B = máx Y, C = log EC50 y D = Factor de pendiente

Ensayo de antagonista GRE

Se estableció una línea celular indicadora (ChagoK1 18:7:2 s4/GRE) por transfección estable de la línea celular de carcinoma broncogénico humano, ChaGo K1 (ATCC: HTB 168) con una construcción indicadora MMTV-GRE-LacZ. La línea celular generada permite la identificación de compuestos que muestran actividad antagonista en el receptor de glucocorticoides (GR) humanos a través de la reducción de la expresión del gen LacZ. El GR activado por dexametasona se une al elemento de respuesta de glucocorticoides (GRE) en el promotor del gen LacZ y se inicia la transcripción. Las propiedades antagonistas de los compuestos se evalúan como la reducción de la intensidad de la beta-galactosidasa de la preestimulación con dexametasona a través de una reacción de color (cambio en la absorbancia).

Se suspendieron las células crioconservadas ChagoK1 18:7:2 s4/GRE en medio RPMI con FBS al 10%, NEAA al 1% y piruvato sódico al 1%, y se sembraron como 50000 células/200 ul/pocillo en placas de 96 pocillos y se cultivaron a 37 °C con CO2 al 5% y un 95% de humedad durante 24 h. Las células se preestimularon con 2 j l de dexametasona (concentración final 70 nM) durante 4-5 h, antes de la adición de 1 j l de compuesto a diferentes concentraciones y la incubación durante 24 horas adicionales. Las células se lavaron una vez en PBS y se lisaron con 50 j l de Triton-X al 0.1% durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 40 |il de la mezcla de reacción (MgCh 2.5 mM, pmercaptoetanol 0.1 M, 1.7 mg/ml de ONPG y fosfato sódico 42.5 mM, pH 7.5) a cada pocillo y se mantuvieron a 37 ° C durante 60 min. La reacción se terminó a continuación mediante la adición de 100 j l de solución de detención (glicina 300 mM, EDTA 15 mM, pH 11.3, ajustada con NaOH). Las placas se midieron a 420 nm para determinar la absorbancia en un lector SpectraMax (dispositivo molecular).

La eficacia relativa (% de efecto) de un compuesto se calcula en base al efecto antagonista completo del compuesto de referencia Mifepristona (RU486):

% de efecto = ((Abs. de muestra - abs. mín.) / (abs. máx. - abs. mín.)) x 100

Para calcular la IC50, el máximo, el mínimo y el factor de pendiente para cada compuesto, se ajusta una curva de respuesta de concentración trazando el % de efecto frente a la concentración del compuesto usando la ecuación logística de 4 parámetros:

y = A+(B-A)/(1+((10C)/x)D)

Donde A = mín Y, B = máx Y, C = log IC50 y D = Factor de pendiente

La Tabla 2 muestra los resultados de estos ensayos con el compuesto del Ejemplo 1. "TA" es la transactivación medida en modo agonista en el Ensayo de agonista GRE, y en modo antagonista en el Ensayo de antagonista GRE.

Tabla 2

Resultados de los ensayos biológicos

Sangre entera humana in vitro

La actividad antiinflamatoria de los compuestos y la prednisolona se determinó in vitro por su capacidad para inhibir la liberación de TNFa a partir de sangre entera estimulada con LPS. Se recogió sangre venosa de donantes humanos, se anticoaguló con heparina sódica y se transfirió a una placa de fondo redondo de poliestireno estéril (Corning) a 190 |jl por pocillo.

Los compuestos se prepararon a partir de soluciones madre 10 mM en dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma) diluyendo en serie 1/3 en DMSO para producir una placa maestra con la concentración superior a 3.33 mM y la concentración más baja a 0.1 |^jM. Los compuestos de la placa madre se añadieron a la sangre a una dilución de 1 |jl/pocillo (1/200) para dar concentraciones finales que variaban entre 16.7 j M y 0.5 nM. Los pocillos de control recibieron 1 j l de DMSO solamente y la concentración final de DMSO en todos los pocillos fue del 0.5%. Las muestras se mezclaron suavemente y se colocaron en una incubadora humidificada (95% de aire/5% de CO2) a 37 °C y se incubaron durante 45 minutos.

El LPS (serotipo de E. coli 0127:B8, Sigma) se diluyó en PBS sin CaCh/MgCh (Gibco) para proporcionar una solución de trabajo a 600 jg/ml. Se añadieron 10 j l a cada pocillo para dar una concentración final de LPS de 30 jg/ml. Los controles no estimulados recibieron PBS solo a 10 jl/pocillo. Las muestras se volvieron a mezclar suavemente y las placas se incubaron durante la noche durante 18 h. Después de la incubación, la sangre se centrifugó a 700 x g durante 5 minutos, y el plasma se eliminó y se transfirió para su congelación a -20 °C antes del ensayo para la liberación de TNFa.

Los niveles de proteína TNFa se determinaron usando un kit AlphaLISA hTNFa (Perkin Elmer) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, las muestras se dejaron volver a la temperatura ambiente y se centrifugaron a 1500 x g durante 5 minutos. Las muestras se diluyeron 1/5 (5 j l de muestra en 20 j L de tampón AlphaLISA). Al mismo tiempo, se preparó una curva estándar de TNFa mediante diluciones seriadas 1/3 a partir de una solución madre (5000-2 pg/ml). Se transfirieron 5 j l de muestra/curva patrón a Optiplate™ de 384 pocillos, y a ésta se le añadieron 20 j l de perlas de aceptor TNFa anti-humano/mezcla de anticuerpos biotinilados. La placa se incubó a temperatura ambiente durante 60 minutos. Después de esta incubación, se añadieron 25 j l de perlas donantes de estreptavidina, y la placa se incubó durante 60 min más en la oscuridad a temperatura ambiente. Las muestras se leyeron a 615 nm con excitación a 680 nm usando un lector de placas Envision. El TNFa en las muestras se determinó por extrapolación de la curva patrón y se expresó como pg/ml.

El % de inhibición de TNFa se determinó mediante la ecuación:

% de inhibición = (1-(A-B)/(C-B)) x 100

Aquí, A = TNFa en muestras estimuladas con LPS que contenían compuesto, B = TNFa en muestras no estimuladas, y C = TNFa en muestras estimuladas con LPS sin compuesto. El porcentaje de inhibición se representó gráficamente frente a la concentración, y se hizo un gráfico de la curva usando un ajuste de curva de 4 parámetros (Xlfit 4.1) para determinar la pl C50.

Tabla 3

pICso TNFa para prednisolona y los compuestos del Ejemplo 1

Expresión de ARNm de tirosina aminotransferasa ("TAT") en ensayo in vitro

El impacto de los compuestos de ensayo sobre los eventos hiperglucémicos se evaluó observando los cambios en la expresión de ARNm del gen que codifica la tirosina aminotransferasa (TAT), que está bajo la regulación directa del receptor de glucocorticoides en los hepatocitos humanos.

Esquema experimental

Los hepatocitos primarios crioconservados humanos (BioreclamationIVT, M00995-P lote EPB) se colocaron en placas recubiertas con colágeno I de 24 pocillos (Becton Dickinson, 354408). Las células se dejaron unir durante 4 h antes de exponerse a los compuestos de ensayo durante la noche (18 h). Las células se recogieron y se aisló el ARN total usando el kit RNeasy Plus Mini (Qiagen, 74136) seguido de la síntesis de ADNc usando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems, 4368813). La RT-PCR en tiempo real se realizó en un ciclador de PCR Applied Biosystems 7500, usando cebadores Taqman para TAT (Life technologies, Hs00356930_m1) y el gen de referencia hipoxantina fosforribosiltransferasa 1 (Life technologies, Hs99999909_m1).

Protocolo

Se transfirieron hepatocitos primarios crioconservados humanos en un medio de cultivo en placas previamente calentado (37°C) (BioreclamationIVT, Z990003) y se diluyó a 0.7 x 106 células viables/ml. Se colocaron en placas 500 |jl de la suspensión celular en cada pocillo de una placa de 24 pocillos revestida con colágeno I y las células se dejaron sedimentar y se unieron a 37°C durante 4 h. Después de la incubación, el medio se descartó suavemente y se intercambió por insulina, glucosa, glutamina, medio libre de piruvato (BioReclamationlVT, S00304), que contenía compuestos de interés, prednisolona a 1 |j M, disuelta en DMSO (concentración final de DMSO al 0.01%), o DMSO solo como control. Las placas se incubaron entonces a 37°C durante 18 h más. El medio se descartó, y el aislamiento total de ARN (Qiagen) y la síntesis de ADNc (Applied Biosystems) se realizaron de acuerdo con el protocolo de los fabricantes. La RT-PCR en tiempo real se realizó usando reactivos TaqMan (Life technologies) en el ciclador 7500 PCR, y los valores de Ct para la expresión del gen TAT se normalizaron para el gen de control y se expresaron como un cambio en veces en comparación con el control de DMSO usando el método 2'AACt.

Tabla 4

Cambio en veces de la expresión génica de tirosina aminotransferasa con respecto al control

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Una forma cristalina 2,2-d¡fluoro-N-[(1R,2S)-3-met¡l-1-{[1-(1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-1H-¡ndazol-5-¡l]ox¡}-1-fenilbutan-2-il]propanamida:

7.3,

2. Un compuesto de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, caracter¡zado por que t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X con al menos 3 p¡cos específicos en 29 de aprox¡madamente = 7.3, 8.7, 12.5, 15.3 y/o 19.0° cuando se m¡de usando rad¡ac¡ón CuKa.

3. Un compuesto de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, caracter¡zado por que t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X con p¡cos específicos en 29 de aprox¡madamente = 7.3, 8.7, 12.5, 19.4 y 23.6° cuando se m¡de usando rad¡ac¡ón CuKa.

4. Un compuesto de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, caracter¡zado por que t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X con p¡cos específicos en 29 de aprox¡madamente =7.3, 8.7, 11.4, 12.5, 14.5, 15.3, 17.6, 19.4, 23.6 y 25.7°.

5. Un compuesto de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, caracter¡zado por que t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X sustanc¡almente como se muestra en la F¡gura 1, cuando se m¡de usando rad¡ac¡ón CuKa.

6. Una compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un compuesto según una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 5 junto con un adyuvante, d¡luyente o vehículo farmacéut¡camente aceptable.

7. El compuesto de acuerdo con una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 5 para su uso como med¡camento.

8. El compuesto de acuerdo con una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 5 para su uso en el tratam¡ento del asma.

9. El compuesto de acuerdo con una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 5 para su uso en el tratam¡ento de la artr¡t¡s reumato¡de.

10. El compuesto para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 8 donde el asma es asma bronqu¡al.