ES2910974T3 - Métodos para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9 - Google Patents

Abstract

Método para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9 que comprende i) determinar la cantidad de ADN mitocondrial (ADNmt) en una muestra de sangre obtenida del paciente, ii) comparar la cantidad determinada en la etapa i) con un valor de referencia predeterminado y iii) concluir que el paciente logra una respuesta cuando la cantidad determinada en la etapa i) es menor que el valor de referencia predeterminado.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9.

Antecedentes de la invención

Los inventores participaron inicialmente en la identificación de mutaciones en LPIN1 como causa de episodios masivos de rabdomiólisis en niños, desencadenados por enfermedades febriles1-5. Un tercio de los pacientes muere durante la rabdomiólisis aguda5, a menudo en el plazo de horas desde el ingreso. En la autopsia, los inventores mostraron miocardiopatía en dos niños, con acumulación de lípidos y adipocitos en el corazón5. Sin embargo, las exploraciones cardíacas fueron normales en pacientes vivos.

La lipina-1 se expresa de manera más abundante en los adipocitos y el músculo esquelético y desempeña un doble papel i) como una fosfatídico fosfatasa ácida que contribuye a la biosíntesis de triacilglicerol y fosfolípidos y ii) como un coactivador transcripcional que se asocia con PPARa, SREBP1 y PGC-1a que regula la expresión de genes que codifican para proteínas implicadas en la oxidación de ácidos grasos en respuesta a señales nutricionales y la activación de la ruta de mTOR (10-15).

La observación innovadora de los inventores de que puede detectarse un alto nivel de citocinas proinflamatorias en los sueros de pacientes, especialmente durante las crisis, los ha llevado a someter a prueba si esto puede explicarse o no por una activación preferencial de un receptor de reconocimiento de patrones (PRR), tal como receptores de tipo Toll (TLR). La exposición de mioblastos y células dendríticas con mutación en LPIN1 a diversos agonistas de TLR in vitro reveló una hipersensibilidad de las células de pacientes específicamente a los agonistas de TLR9, un TLR endosomal que requiere una escisión activadora por proteasas endolisosomales. Este intrigante fenotipo se recapituló al inactivar las células de control para LPIN1. Al preguntarse cuáles podrían ser las conexiones entre la pérdida de la actividad enzimática de la enzima lipina-1 y la hiperinflamación restringida a TLR9, los inventores confirmaron en primer lugar que las células deficientes en lipina-1 muestran una actividad de Vps34 PI-3K reducida y, por consiguiente, una disminución en el fosfatidilinositol 3-fosfato (PI3P) específicamente en la membrana de los endosomas tardíos. Por tanto, los inventores han sugerido que los antagonistas de TLR9 serían adecuados para el tratamiento de la rabdomiólisis (documento WO2017085115).

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a métodos para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9. En particular, la presente invención se define mediante las reivindicaciones.

Descripción detallada de la invención

Los inventores trataron en 2016 a dos pacientes (P1, P2) con enfermedad de lipina-1 con sulfato de hidroxicloroquina (Plaquenil®) tras obtener la autorización del CPP de la Universidad París Descartes (Comité para la Protección de las Personas). Demostraron que la acumulación de ADNmt en el plasma de los dos pacientes antes del tratamiento disminuye con el tratamiento con Plaquenil®. Después de dejar de usar Plaquenil®, reapareció la acumulación de ADNmt, luego se normalizó cuando se reanudó el tratamiento.

Por consiguiente, el primer objeto de la presente invención se refiere a un método para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9 que comprende i) determinar la cantidad de ADN mitocondrial (ADNmt) en una muestra de sangre obtenida del paciente ii) comparar la cantidad determinada en la etapa i) con un valor de referencia predeterminado y iii) concluir que el paciente logra una respuesta cuando la cantidad determinada en la etapa i) es menor que el valor de referencia predeterminado. Tal como se usa en el presente documento, el término “rabdomiólisis” tiene su significado general en la técnica y se refiere a rabdomiólisis como la revisada en la Clasificación de la Organización Mundial de la Salud M62.8, T79.5 y T79.6. El término “rabdomiolisis” se refiere a una afección compleja que implica la disolución rápida del músculo esquelético dañado o lesionado. Esta alteración de la integridad del músculo esquelético conduce a la liberación directa de componentes musculares intracelulares, incluyendo mioglobina, creatina cinasa (CK), aldolasa y lactato deshidrogenasa, así como electrolitos, al torrente circulatorio y al espacio extracelular. La rabdomiólisis varía desde una enfermedad asintomática con elevación del nivel de CK hasta un estado potencialmente mortal asociado con elevaciones extremas de CK, desequilibrios electrolíticos, insuficiencia renal aguda (IRA) y coagulación intravascular diseminada. Aunque la rabdomiólisis es provocada con mayor frecuencia por una lesión traumática directa, el estado también puede ser el resultado de fármacos, toxinas, infecciones, isquemia muscular, trastornos electrolíticos y metabólicos, trastornos genéticos como mutaciones de la lipina-1, esfuerzo o reposo prolongado en cama y estados inducidos por la temperatura tales como el síndrome maligno por neurolépticos (SMN) y la hipertermia maligna (MH). La necrosis masiva, que se manifiesta como debilidad de las extremidades, mialgia, hinchazón y, por lo general, pigmenturia macroscópica sin hematuria, es el denominador común tanto de la rabdomiólisis traumática como de la no traumática (Torres et al., 2015; Zimmerman y Shen, 2013; Zutt et al., 2014). El término “rabdomiólisis” también se refiere a las formas juveniles de rabdomiólisis grave y recurrente, que son trastornos hereditarios caracterizados por la presencia de mioglobinuria, niveles altos de creatinina cinasa sérica y lesión renal aguda [1, 2]. El término “rabdomiólisis” también se refiere a la rabdomiólisis relacionada con lipina-1 y las formas juveniles relacionadas con lipina-1 de rabdomiólisis grave y recurrente provocada por mutaciones de LPIN1.

Por tanto, el método es particularmente adecuado para distinguir entre paciente que responde al tratamiento y paciente que no responde al tratamiento. Tal como se usa en el presente documento, el término “paciente que responde al tratamiento” en el contexto de la presente divulgación se refiere a un paciente que logrará una respuesta, es decir un paciente en el que se reduce o mejora la rabdomiólisis. Normalmente, la caracterización del paciente como paciente que responde al tratamiento o paciente que no responde al tratamiento puede realizarse en referencia a un patrón o un conjunto de entrenamiento. El patrón puede ser el perfil de un paciente que se sabe que es un paciente que responde al tratamiento o un paciente que no responde al tratamiento o alternativamente puede ser un valor numérico. Tales patrones predeterminados pueden proporcionarse en cualquier forma adecuada, tal como una lista o un diagrama impresos, programa de software informático u otros medios. Cuando se concluye que el paciente es un paciente que no responde al tratamiento, el médico podría tomar la decisión de modificar la cantidad terapéuticamente eficaz de antagonista de TLR9 (por ejemplo, aumentando la cantidad) o dejar de usar la terapia con el antagonista de TLR9 para evitar cualquier efecto secundario adverso adicional.

La presente invención también es adecuada para monitorizar el cumplimiento terapéutico del paciente con el antagonista de TRL9 en el que cuando se detecta un aumento en el ADNmt, se concluye que el paciente no ha cumplido con el tratamiento prescrito.

Tal como se usa en el presente documento, el término “tratamiento” o “tratar” se refiere a un tratamiento tanto profiláctico como preventivo así como a un tratamiento curativo o que modifica la enfermedad, incluyendo el tratamiento de sujetos en riesgo de contraer la enfermedad o que se sospecha que han contraído la enfermedad así como sujetos que están enfermos o se les ha diagnosticado que padecen una enfermedad o afección, e incluye la supresión de recaída clínica. El tratamiento puede administrarse a un sujeto que tiene un trastorno médico o que en última instancia pueda adquirir el trastorno, para prevenir, curar, retrasar la aparición de, reducir la gravedad de, o mejorar uno o más síntomas de un trastorno o trastorno recurrente, o para prolongar la supervivencia de un sujeto más allá de la esperada en ausencia de tal tratamiento. Por “régimen terapéutico” se entiende el patrón de tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, el patrón de dosificación usado durante la terapia. Un régimen terapéutico puede incluir un régimen de inducción y un régimen de mantenimiento. La expresión “régimen de inducción” o “periodo de inducción” se refiere a un régimen terapéutico (o la parte de un régimen terapéutico) que se usa para el tratamiento inicial de una enfermedad. La finalidad general de un régimen de inducción es proporcionar un alto nivel de fármaco a un sujeto durante el periodo inicial de un régimen de tratamiento. Un régimen de inducción puede emplear (en parte o en su totalidad) un “régimen de carga”, que puede incluir administrar una dosis mayor del fármaco que la que emplearía un médico durante un régimen de mantenimiento, administrar un fármaco de manera más frecuente de lo que un médico administraría el fármaco durante un régimen de mantenimiento, o ambos. La expresión “régimen de mantenimiento” o “periodo de mantenimiento” se refiere a un régimen terapéutico (o la parte de un régimen terapéutico) que se usa para el mantenimiento de un sujeto durante el tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, para mantener al sujeto en remisión durante largos periodos de tiempo (meses o años). Un régimen de mantenimiento puede emplear terapia continua (por ejemplo, administrar un fármaco en intervalos regulares, por ejemplo, semanales, mensuales, anuales, etc.) o terapia intermitente (por ejemplo, tratamiento interrumpido, tratamiento intermitente, tratamiento en recaída, o tratamiento tras lograr un criterio predeterminado particular [por ejemplo, manifestación de la enfermedad, etc.]).

Tal como se usa en el presente documento, el término “TLR9” tiene su significado general en la técnica y se refiere al receptor de tipo Toll 9, un miembro de una familia de receptores inmunitarios innatos, los TLR que detectan “señales de peligro”, activan rutas de señalización e inducen respuestas inflamatorias [37, 38, 39]. Los TLR están presentes en la superficie celular o en los compartimentos endosomales, siendo este último el caso de TLR9 [40]. El término “TLR9” también se refiere a CD289 (grupo de diferenciación 289).

Tal como se usa en el presente documento, el término “antagonista de TLR9” tiene su significado general en la técnica y se refiere a un compuesto que bloquea o inactiva de manera selectiva TLR9. Tal como se usa en el presente documento, el término “bloquea o inactiva de manera selectiva” se refiere a un compuesto que se une de manera preferente a y bloquea o inactiva TLR9 con una mayor afinidad y potencia, respectivamente, que su interacción con los otros subtipos o isoformas de la familia TLR (tal como TLR3, TLR7 y TLR8). Se contemplan compuestos que prefieren TLR9, pero que también pueden bloquear o inactivar otros subtipos de TLR, como antagonistas parciales o totales. El término “antagonista de TLR9” se refiere a cualquier compuesto que puede bloquear directa o indirectamente la cascada de transducción de señales relacionada con el TLR9. El “antagonista de TLR9” también puede consistir en compuestos que inhiben la unión del ligando de TLR9, oligonucleótido CpG (oligonucleótido citidina-fosfato-guanosina), a TLR9 tal como compuestos que tienen la capacidad de unirse al oligonucleótido CpG con alta afinidad y especificidad o compuestos que compiten con el oligonucleótido CpG. El término “antagonista de TLR9” también se refiere a la inhibición de la activación de TLR9 endosomal mediante la inhibición de la acidificación endosomal, previniendo de ese modo la maturación proteolítica de los TLR endosomales, o mediante la intercalación en ligandos de ácidos nucleicos, previniendo de ese modo su unión a los TLR. Normalmente, un antagonista de TLR9 es una molécula orgánica pequeña, un oligonucleótido, un polipéptido, un aptámero o un intra-anticuerpo. Un experto en la técnica conoce bien las pruebas y ensayos para determinar si un compuesto es un antagonista de TLR9 tal como se describe en Hoque et al, 2013; Matin et al., 2015; Jiang et al., 2013; Kader et al., 2013; David et al., 2013; Kandimalla et al., 2013; Li et al., 2011; Wang et al., 2009; Yu et al., 2009; Zhang et al., 2010; Zhu et al., 2013; en los documentos US 7,498,409; WO 2005/007672; WO 2011/009015; WO 2012/022948; WO 2009/023819; WO 2011/041311; WO 2011/159958; y CN101712957. Los antagonistas de TLR9 son bien conocidos en la técnica tal como se ilustra por Hoque et al, 2013; Matin et al., 2015; Jiang et al., 2013; Kader et al., 2013; David et al., 2013; Kandimalla et al., 2013; Li et al., 2011; Wang et al., 2009; Yu et al., 2009; Zhang et al., 2010; Zhu et al., 2013; en los documentos US 7,498,409; WO 2005/007672; WO 2011/009015; WO 2012/022948; WO 2009/023819; WO 2011/041311; WO 2011/159958; y CN101712957. En algunas realizaciones que no forman parte de la invención, el antagonista de TLR9 es un oligonucleótido tal como CpG ODNi (inhibidores del oligonucleótido citidina-fosfatoguanosina) tal como CpG ODN 2088; CpG-ODN c41; IMO3100; IMO8400; IRS954 (DV1079); ALX-746-351; un antagonista del oligodesoxinucleótido fosforotioato monocatenario tal como DV056 y los oligonucleótidos descritos en Matin et al., 2015; Jiang et al., 2013; Kader et al., 2013; David et al., 2013; Kandimalla et al., 2013; Li et al., 2011; Wang et al., 2009; Yu et al., 2009; Zhang et al., 2010; Zhu et al., 2013; en los documentos WO 2012/022948; WO 2009/023819; WO 2011/041311; WO 2011/159958; CN101712957. En algunas realizaciones que no forman parte de la invención, el antagonista de TLR9 es un compuesto, tal como derivados de (+)-morfinano y (-)-morfinanos tales como COV08-0064; COV08-0093; polímeros de unión a ácidos nucleicos y otros agentes de unión a ácidos nucleicos, incluyendo antipalúdicos tales como cloroquina, primaquina e imidazoquinolinas; 4-amino-quinolinas; quinazolinas; CMZ 203-84; CMZ 203-85; CMZ 203-88; CMZ 203-88-1; CMZ 203-89; CMZ 203-91; aminoquinolinas tales como hidroxicloroquina y sulfato de hidroxicloroquina (Plaquenil ®); quinacrina; bafilomicina A; CPG52364 y los compuestos descritos, por ejemplo, en Hoque et al., 2013; documentos WO 2005/007672; WO 2011/009015; WO 2012/022948; WO 2011/041311.

Tal como se usa en el presente documento, el término “muestra de sangre” significa una muestra de sangre completa, suero o plasma obtenida del paciente. Preferiblemente, la muestra de sangre según la invención es una muestra de plasma. Puede obtenerse una muestra de plasma usando métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, puede extraerse sangre del paciente siguiendo un procedimiento convencional de venopunción en tampón citrato de trisodio. Luego puede obtenerse plasma de la muestra de sangre siguiendo procedimientos convencionales que incluyen, pero no se limitan a, centrifugar la muestra de sangre a aproximadamente 1.500*g durante aproximadamente 15-20 minutos (temperatura ambiente), seguido por pipeteo de la capa de plasma. El plasma libre de plaquetas (PFP) se obtendrá después de la centrifugación a unos 13.000*g durante 5 min. Para recoger o desechar las micropartículas, puede centrifugarse la muestra de plasma en un intervalo de desde aproximadamente 15.000 hasta aproximadamente 20.000*g. Preferiblemente, la muestra de plasma se ultracentrifuga a alrededor de 17.570*g a una temperatura de aproximadamente 4°C. Pueden considerarse apropiados diferentes tampones para resuspender los residuos celulares sedimentados que contienen las micropartículas. Tales tampones incluyen agua de calidad de reactivo (destilada o desionizada) y solución salina tamponada con fosfato (PBS) pH 7,4. Preferiblemente, se usa tampón PBS (Sheath fluid). Más preferiblemente, la muestra de sangre obtenida del paciente es una muestra de plasma libre de plaquetas (PFP). El PFP puede separarse de 10 ml de sangre completa citratada extraída del brazo sin fístula 72 horas después de la última diálisis. El PFP puede obtenerse después de la centrifugación de sangre con citrato a 1500*g (15 min), seguido por centrifugación de 13000*g (5 min, temperatura ambiente).

La cuantificación del ADNmt en la muestra de sangre puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica. En algunas realizaciones, la cuantificación se realiza mediante inmunofluorescencia (IF). En algunas realizaciones, la cuantificación implica reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El método de la invención puede incluir ensayos de PCR, tales como PCR o RT-PCR semicuantitativa o cuantitativa, que incluye opcionalmente una amplificación conjunta de una secuencia mitocondrial y una secuencia de referencia, tal como una secuencia nuclear. El método de la invención también puede incluir ensayos de hibridación, por ejemplo, ensayos de hibridación de ARN o ADN, usando muestras de ADN o ARN mitocondrial y nuclear en secuencias mitocondriales y de referencia como sondas. El método de la invención también puede incluir métodos de cuantificación que utilizan anticuerpos dirigidos contra secuencias de ADNmt, tintes u otros marcadores que se intercalan en o se absorben sobre el ANmt ADN. Por ejemplo, se dan a conocer métodos de PCR cuantitativa en los siguientes documentos: patente estadounidense n.° 6.180.349; patente estadounidense n.° 6.033.854; y patente estadounidense n.° 5.972.602; Song, J. et al. (2001) Diabetes Care 24:865-869. Una secuencia de A^dN mitocondrial puede elegirse de cualquier secuencia de nucleótidos específica de mitocondrias incluyendo, pero sin limitarse a, ATP sintasa 6, n.° de registro de GenBank AF368271; ARNt-Leu, n.° de registro de GenBank S49541; subunidad 5 de NADH deshidrogenasa (MTND5), n.° de registro de GenBank AF339085; citocromo b, n.° de registro de GenBank AF254896, o cualquier otra secuencia de nucleótidos específica de mitocondrias adecuada. Las sondas de amplificación pueden diseñarse según métodos conocidos en la técnica y descritos, por ejemplo, en Sambrook, et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001) o Ausubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1994). Alternativamente, pueden emplearse técnicas de hibridación para determinar la presencia o cantidad de ANmt en la muestra. Las técnicas adecuadas que usan oligonucleótidos o polinucleótidos en condiciones rigurosas son conocidas por los expertos en la técnica. Preferiblemente, los oligonucleótidos o polinucleótidos usados como sondas se hibridan específicamente con secuencias de ANmt. La cantidad de ANmt puede determinarse además usando polipéptidos o ligandos de hidratos de carbono que reconocen específicamente ANmt, por ejemplo, ADNmt. Por ejemplo, los anticuerpos que reconocen el ADN hipometilado pueden usarse en ensayos inmunológicos que son conocidos per se, tal como un ELISA. En algunas realizaciones que no forman parte de la invención, puede usarse una enzima que selecciona como diana específicamente el ADN hipometilado. Por ejemplo, la enzima puede cortar específicamente el ADN hipometilado. En tales sitios de “corte” podría unirse un marcador no radiactivo (por ejemplo, biotina) o un marcador radiactivo. Luego puede cuantificarse tal marcador. En algunas realizaciones que no forman parte de la invención, el ANmt puede aislarse primero específicamente de un conjunto de diferentes ácidos nucleicos y contaminantes, por ejemplo, mediante centrifugación en gradiente de densidad. En una segunda etapa, el ANmt puede cuantificarse con cualquier método de cuantificación de ácido nucleico inespecífico.

Normalmente, el valor de referencia predeterminado es un valor umbral o un valor de corte. Normalmente, un “valor de umbral” o “valor de corte” puede determinarse experimental, empírica o teóricamente. También puede seleccionarse de manera arbitraria un valor umbral en base a las condiciones experimentales y/o clínicas existentes, como reconocería un experto en la técnica. Por ejemplo, la medición retrospectiva de la cantidad de ADNmt en muestras históricas de sujetos adecuadamente almacenadas puede usarse para establecer el valor de referencia predeterminado. El valor umbral debe determinarse para obtener la sensibilidad y especificidad óptimas según la función de la prueba y el equilibrio beneficio/riesgo (consecuencias clínicas de falsos positivos y falsos negativos). Normalmente, la sensibilidad y la especificidad óptimas (y, por tanto, el valor umbral) pueden determinarse usando una curva característica operativa del receptor (ROC) basada en datos experimentales. Por ejemplo, después de determinar la cantidad de expresión del ADNmt en un grupo de referencia, puede usarse el análisis algorítmico para el tratamiento estadístico de las cantidades determinadas en las muestras que van a someterse a prueba, y así obtener un patrón de clasificación que tenga significación para la clasificación de la muestra. El nombre completo de la curva ROC es curva característica del operador del receptor, que también se conoce como curva característica operativa del receptor. Se usa principalmente para pruebas diagnósticas bioquímicas clínicas. La curva ROC es un indicador completo que refleja las variables continuas de la tasa de verdaderos positivos (sensibilidad) y la tasa de falsos positivos (1-especificidad). Revela la relación entre sensibilidad y especificidad con el método de composición de imágenes. Una serie de diferentes valores de corte (umbrales o valores críticos, valores límite entre los resultados normales y anómalos de la prueba de diagnóstico) se establecen como variables continuas para calcular una serie de valores de sensibilidad y especificidad. Luego, la sensibilidad se usa como la coordenada vertical y la especificidad se usa como la coordenada horizontal para dibujar una curva. Cuanto mayor sea el área bajo la curva (AUC), mayor será la precisión del diagnóstico. En la curva ROC, el punto más cercano a la parte superior izquierda del diagrama de coordenadas es un punto crítico que tiene valores de alta sensibilidad y alta especificidad. El valor AUC de la curva ROC está entre 1,0 y 0,5. Cuando AUC>0,5, el resultado del diagnóstico mejora cada vez más a medida que AUC se acerca a 1. Cuando AUC está entre 0,5 y 0,7, la precisión es baja. Cuando AUC está entre 0,7 y 0,9, la precisión es moderada. Cuando AUC es superior a 0,9, la precisión es alta. Este método algorítmico se realiza preferiblemente con un ordenador. El software o los sistemas existentes en la técnica pueden usarse para dibujar la curva ROC, tales como: software de estadísticas médicas MedCalc 9.2.0.1, SPSS 9.0, ROCpOw ER.sAs , DESIGNROC.FOR, MULTIREADER POWER.SAS, CREATE-ROC.SAS, GB STAT VI0.0 (Dynamic Microsystems, Inc. Silver Spring, Maryland, EE. UU.), etc.

La invención se ilustrará adicionalmente mediante las siguientes figuras y ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos y figuras no deben interpretarse de ninguna manera como limitativos del alcance de la presente invención.

Figuras

Figura 1. Perfil inflamatorio en suero de pacientes con deficiencia de lipina-1 in vivo. Anteriormente: se midió la secreción de IL-6 en suero mediante ELISA. La concentración de IL-6 disminuye con el tratamiento con Plaquenil®, luego aumenta después de la interrupción del tratamiento, luego disminuye de nuevo cuando se reanuda el tratamiento.

Figura 2. Cantidad de ADN mitocondrial (qPCR) en plasma de dos pacientes. La acumulación de ADNmt antes del tratamiento en plasma disminuye con el tratamiento con Plaquenil®, luego aumenta después de la interrupción del tratamiento, luego disminuye de nuevo cuando se reanuda el tratamiento.

Ejemplo

Se trataron en 2016 a dos pacientes (P1, P2) con enfermedad de lipina-1 con sulfato de hidroxidoroquina (Plaquenil®) y dos pacientes (P3, P4) con dantroleno sódico después de obtener la autorización del CPP de la Universidad París Descartes (Comité para la protección de las personas). Además, el paciente de 16 años (P5) ha sido tratado durante un mes con Plaquenil® debido a su disfunción cardíaca, su fatigabilidad y sus trastornos del sueño. De hecho se piensa que Plaquenil® funciona bien en los dos pacientes tratados (P1, P2) y el estado de P5 se consideró suficientemente grave para proponerlo. Se administró Plaquenil® a una dosis de 6 mg/kg/día en 1 toma (dosis generalmente administrada en la enfermedad lúpica) a P1, P2 y P5.

El perfil inflamatorio sérico de ambos pacientes 1 y 2 tratados in vivo con Plaquenil® se normalizó un mes tras el inicio del tratamiento (figura 1). La secreción de IL-6 aumentó en plasma cuando los dos pacientes suspendieron su tratamiento (figura 1). La acumulación de ADNmt en el plasma de los dos pacientes antes del tratamiento disminuye con el tratamiento con Plaquenil® (figura 2). Después de dejar de usar Plaquenil®, reapareció la acumulación de ADNmt, luego se normalizó cuando se reanudó el tratamiento. Se observó una correlación entre las variaciones de los niveles de acumulación de ADNmt y IL-6, y con el cumplimiento terapéutico del tratamiento. el nivel de creatina cinasa sérica (CK) también disminuyó en ambos pacientes y no tuvieron ningún nuevo episodio de rabdomiólisis durante 6 meses.

El paciente 1 corrigió su fenotipo muscular clínico (tabla 1). Se midieron las capacidades físicas máximas usando la caminata de seis minutos (TC6'), la calidad de vida en forma abreviada usando el cuestionario (SF-36) para evaluar la CDV de los padres y del paciente, y una escala de autoevaluación del dolor (EVA). Para el paciente 2, el dolor desapareció pero la capacidad para caminar no mejoró notablemente. Después de 6 meses de tratamiento, los dos pacientes suspendieron su tratamiento por falta de cumplimiento terapéutico tras la muerte de su abuelo, mientras que su madre tuvo que estar ausente: inmediatamente experimentaron una rabdomiolisis extensa y fueron hospitalizados en cuidados intensivos (CK 160000 U/l y 300000 U/l, respectivamente). Desde entonces han reanudado el tratamiento. Durante el invierno de 2016 - 2017 no tuvieron rabdomiólisis y no tuvieron dolor muscular, mientras que el invierno es habitualmente un momento difícil para ellos.

Tabla 1. Capacidades físicas máximas de los dos pacientes tratados con Plaquenil®.

Bibliografía

A lo largo de esta solicitud, diversas referencias describen el estado de la técnica al que se refiere esta invención.

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Claims (5)

REIVINDICACIONES

1. Método para determinar si un paciente que padece rabdomiólisis logra una respuesta con un antagonista de TLR9 que comprende i) determinar la cantidad de ADN mitocondrial (ADNmt) en una muestra de sangre obtenida del paciente, ii) comparar

la cantidad determinada en la etapa i) con un valor de referencia predeterminado y iii) concluir que el paciente logra una respuesta cuando la cantidad determinada en la etapa i) es menor que el valor de referencia predeterminado.

2. Método según la reivindicación 1 para monitorizar el cumplimiento terapéutico del paciente con el antagonista de TLR9, en el que cuando se detecta un aumento en el ADNmt, se concluye que el paciente no ha cumplido con el tratamiento prescrito.

3. Método según la reivindicación 1, en el que el antagonista de TLR9 es hidroxicloroquina.

4. Método según la reivindicación 1, en el que la muestra de sangre es una muestra de plasma.

5. Método según la reivindicación 1, en el que la cuantificación del ADNmt se realiza mediante inmunofluorescencia o mediante PCR.