ES2869881T3 - Inhibidores de la beta-lactamasa - Google Patents

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Abstract

Un compuesto que es un tienolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método para tratar un sujeto que padece o es susceptible de padecer una infección bacteriana, comprendiendo el método inhibir la metalo-beta-lactamasa bacteriana: **(Ver fórmula)** en donde R1 es H o un grupo alquilo C1 a C4; R3 es H, halógeno, alquilo C1 a C4, OH, alcoxi C1 a C4, alquenilo C2 a C4 o -NR4R5; el Anillo A1 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; n es 0 o 1; el Anillo A2 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; y R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de la beta-lactamasa
Campo de la invención
La invención se refiere a compuestos para su uso en la inhibición de metalo-beta-lactamasas bacterianas. Los compuestos son, por lo tanto, útiles para potenciar los efectos de los agentes antibióticos p-lactámicos y pueden usarse en combinación con agentes antibióticos p-lactámicos en la prevención y el tratamiento de una infección bacteriana. También se proporcionan compuestos y combinaciones útiles en estos métodos.
Antecedentes de la invención
Las p-lactamas siguen siendo los antibióticos más usados y, en consecuencia, se encuentran entre los medicamentos más importantes de uso actual. Los antibióticos p-lactámicos inhiben las transpeptidasas (proteínas de unión a penicilina, PBPs) que participan en la biosíntesis de la pared celular al reaccionar con un residuo de serina nucleófilo importante en la catálisis. El uso de las p-lactamas se ve comprometido por los mecanismos de resistencia, incluso por la acción de las p-lactamasas (BLs), que catalizan la hidrólisis de la p-lactama. Se han identificado cuatro clases de BLs sobre la base de la selectividad y la estructura del sustrato. Las Clases A, C y D son BLs de "serina" y están relacionadas evolutiva y mecánicamente con las PBPs. Las BLs de Clase B son hidrolasas dependientes de zinc que son mecánicamente distintas.
Se han desarrollado inhibidores de las enzimas de Clase A ("penicilinasas"), es decir, ácido clavulánico, tazobactam y sulbactam, y han ampliado sustancialmente el espectro de actividad de diferentes penicilinas asociadas susceptibles a las BLs de Clase A. También se están desarrollando inhibidores de las BLs de Clase C ("cefalosporinasas") con uno de ellos, el Avibactam (NXL-104), que se encuentra en la última fase de los ensayos clínicos. Por otra parte, el Avibactam también se dirige a las enzimas de Clase A y a algunas de Clase D, pero no a las MBLs de Clase B. Hasta ahora, sin embargo, todavía no hay informes sobre inhibidores clínicamente útiles de las metalo-BLs (MBLs) de Clase B.
Las MBLs son una preocupación clínica cada vez mayor, ya que catalizan la hidrólisis de casi todos los antibióticos plactámicos. Basándose en el número de iones Zn en su sitio activo y las similitudes secuenciales/estructurales, las MBLs pueden subdividirse en tres subclases (B1, B2 y B3). Las MBLs pertenecientes a la subclase B1 se consideran actualmente las más relevantes desde el punto de vista clínico (p. ej., IMP - Imipenemasa, VIM - MBL codificada por integrón de Verona, y NDM - tipos de MBL de Nueva Delhi), ya que inactivan casi todas las BLs, incluidas las últimas generaciones de cefalosporinas y todos los carbapenems, que suelen considerarse "antibióticos de último recurso". La amenaza potencial de las MBLs se pone de manifiesto con NDM-1, que permite la resistencia en muchas cepas patógenas. Además, se están notificando un número creciente de organismos que contienen tanto BLs de serina (SBLs) como MBLs. Por tanto, es necesario desarrollar no solo inhibidores de MBL, sino compuestos con propiedades de inhibición doble de SBL y MBL para su uso en terapias de combinación.
Los siguientes documentos se mencionan en la Opinión adjunta al Informe de Búsqueda Internacional.
El documento US 5 760 048 A, describe derivados del ácido alfa-mercaptoacrílico que tiene acción inhibidora de calpaína.
El documento EP 0 779 554 A1, describe un líquido corrector para una plancha de impresión litográfica con transferencia de imágenes mediante plata.
N. H. Metwally: "3-Aryl-2-sulfanylpropenoic Acids as Precursors for Some Novel (Z)-5-Substituted-2-alkoxy-2-trichloromethyl-4-thiazolidinones", ARKIVOC, vol. x, 2011, páginas 254-265.
Omar et al.: "The Route Action of Sodium Methoxide on 5-Arylmethylene-2-disubstitued Amino-4-oxo-2-thiazolidinones", Journal of Heterocyclic Chemistry, vol. 18, páginas 1413-1415.
Barreiro et al.: "Synthesis and antimicrobial activities of gold(l) sulfanylcarboxylates", Gold Bulletin, vol. 45, n.° 1,2012, páginas 23-34.
S. Matsui: "Mechanism of Formation of Alpha-Beta-Unsaturated Esters in the Reaction of Ethyl Mercaptoacetate Dianion with Carbonyl Compounds", Bulletin of Chemical Society of Japan, vol. 57, n.° 2, 1984, páginas 426-434. Jensen et al.: "Enethiols X. About 2-Mercapto-Cinnamic Acids", Bulletin de la Société Chimique Beige, vol. 86, n.° 8, 1977, páginas 639-646.
Yahmaguchi et al.: "Crystallographic Investigation of the Inhibition Mode of a VIM-2 Metallo-beta-lactamase from Pseudomonas aeruginosa by a Mercaptocarboxylate Inhibitor", Journal of Medicinal Chemistry, vol. 50, 2007, páginas 6647-6653.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un compuesto que es un tienolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de inhibición de la metalo-beta-lactamasa bacteriana:
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Fórmula(I)
en donde
R1 es H o un grupo alquilo C1 a C4;
R3 es H, halógeno, alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4, alquenilo C2 a C4 o -NR4R5;
el Anillo A1 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; n es 0 o 1;
el Anillo A2 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; y R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.
Los compuestos descritos anteriormente han resultado ser, sorprendentemente, inhibidores de la metalo-betalactamasa (MBL) de amplio espectro. Por lo tanto, son útiles en métodos de inhibición de la MBL.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 proporciona curvas de CI50 para un compuesto y una combinación como se describe en el presente documento para un panel de MBLs.
La figura 2 proporciona los resultados de los ensayos de tratamiento descritos en el Ejemplo 8 como gráficos a, b y c . En el gráfico a, la línea superior representa los resultados del tratamiento con MEM en combinación con ML302F, la segunda línea desde arriba representa los resultados del tratamiento con MEM, la segunda línea desde abajo representa los resultados del tratamiento con PBS, y la línea inferior representa los resultados del tratamiento con ML302F. En los gráficos b y c , la línea superior representa los resultados del tratamiento con MEM en combinación con ML302F, la segunda línea desde arriba representa los resultados del tratamiento con MEM, la segunda línea desde abajo representa los resultados del tratamiento con ML302F, y la línea inferior representa los resultados del tratamiento con PBS.
Descripción detallada de la invención
Como se usa en el presente documento, un grupo alquilo C1 a C4 es un grupo alquilo lineal o ramificado que contiene de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo C1 a C4 incluyen metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, nbutilo, sec-butilo y ferc-butilo. Un grupo alquilo C1 a C4 es normalmente un grupo alquilo C1 a C2, es decir, metilo o etilo, normalmente metilo. Para disipar cualquier duda, cuando están presentes dos grupos alquilo, los grupos alquilo pueden ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, un grupo alquenilo C2 a C4 es un grupo alquenilo lineal o ramificado que contiene de 2 a 4 átomos de carbono y que tiene uno o dos dobles enlaces. Los ejemplos de grupos alquenilo C2 a C4 incluyen etenilo, propenilo y butenilo. Para disipar cualquier duda, cuando están presentes dos grupos alquenilo, los grupos alquenilo pueden ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, un grupo alcoxi C1 a C4 es un dicho grupo alquilo C1 a C4 unido a un átomo de oxígeno. Los ejemplos de grupos alcoxi C1 a C4 incluyen metoxi, etoxi, propoxi y butoxi. Normalmente, un grupo alcoxi C1 a C4 es un grupo alcoxi C1 a C2, es decir, metoxi o etoxi, normalmente metoxi. Para disipar cualquier duda, cuando están presentes dos grupos alcoxi, los grupos alcoxi pueden ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, un grupo alquileno Ci a C4 es una parte de una molécula bidentada obtenida mediante la eliminación de dos átomos de hidrógeno de un grupo alquilo C1 a C4. Los dos átomos de hidrógeno pueden eliminarse del mismo átomo de carbono o de átomos de carbono diferentes. Normalmente, un grupo alquileno C1 a C4 es un grupo alquileno C1 a C2. Los ejemplos de grupos alquileno C1 a C4 incluyen metileno, etileno, n-propileno, isopropileno, n-butileno, sec-butileno y ferc-butileno. Un grupo alquilo C1 a C2 es metileno o etileno, normalmente metileno. Para disipar cualquier duda, cuando están presentes dos grupos alquileno, los grupos alquileno pueden ser iguales o diferentes.
Un grupo alquilo, alquenilo o alcoxi puede estar sustituido o no sustituido. Cuando un grupo alquilo, alquenilo o alcoxi está sustituido, normalmente lleva de uno a tres, p. ej., uno o dos, p. ej., un, sustituyente no sustituido seleccionado entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4, en donde R4 y R5 son iguales o diferentes y representan hidrógeno o alquilo C1 a C4, preferentemente hidrógeno, metilo o etilo, lo más preferentemente hidrógeno. Los sustituyentes preferidos son halógeno, OH, metoxi, etoxi, -NH2, -N(Me)2 y -N(Et)2, en particular halógeno, OH, metoxi o etoxi, lo más preferentemente halógeno. Cuando están presentes dos o más sustituyentes, los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, un halógeno es normalmente cloro, flúor, bromo o yodo. En un aspecto, el halógeno es normalmente cloro, bromo o yodo. En otro aspecto, el halógeno es normalmente cloro o flúor.
Como se usa en el presente documento, un grupo carbocíclico de 5 a 6 miembros es un hidrocarburo cíclico saturado, insaturado o parcialmente insaturado que contiene 5 o 6 átomos de carbono. Normalmente, un grupo carbocíclico es saturado.
Un grupo carbocíclico saturado de 5 a 6 miembros es ciclopentilo o ciclohexilo, normalmente ciclohexilo. Un grupo carbocíclico insaturado de 5 a 6 miembros es normalmente fenilo. Un grupo carbocíclico parcialmente insaturado de 5 a 6 miembros es un hidrocarburo cíclico no aromático que contiene 5 o 6 átomos de carbono y que contiene 1 o 2, p. ej., 1 doble enlace. Los ejemplos de grupos carbocíclicos parcialmente insaturados de 5 a 6 miembros incluyen grupos ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclohexenilo y ciclohexadienilo, preferentemente ciclohexenilo y ciclohexadienilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo heterocíclico de 5 a 10 miembros es normalmente un grupo heterocíclico monocíclico de 5 o 6 miembros o un grupo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros. Como se usa en el presente documento, un grupo heterocíclico monocíclico de 5 o 6 miembros es una parte de una molécula cíclica que contiene 5 o 6, normalmente 6, átomos seleccionados entre C, O, N y S en el anillo, y que contiene al menos un heteroátomo, y normalmente uno o dos heteroátomos. El heteroátomo o heteroátomos se seleccionan normalmente entre O, N y S. Un grupo heterocíclico puede ser saturado y, por tanto, contener 0 dobles enlaces, o puede ser insaturado, es decir, puede contener 1, 2 o 3 dobles enlaces. A menos que se indique lo contrario, un grupo heterocíclico de 5 o 6 miembros, como se usa en el presente documento, puede ser cualquier grupo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado como se define en el presente documento o un grupo heteroarilo de 5 o 6 miembros, como se define en el presente documento.
Los ejemplos de grupos heterocíclicos saturados de 5 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen tiolanilo, tetrahidrofuranoilo y pirrolidinilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos saturados de 5 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, 1,2-dioxolanilo, 1,3-dioxolanilo, 1,2-ditiolanilo y 1,3-ditiolanilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos saturados de 6 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen piperidinilo, oxanilo y tianilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos saturados de 6 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, dioxanilo y ditianilo.
Los ejemplos de grupos heterocíclicos parcialmente insaturados de 5 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen dihidropirrolilo, dihidrofuranoilo y dihidrotiofenilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos parcialmente insaturados de 5 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen dihidroimidazolilo, dihidropirazolilo, dihidrooxazolilo, dihidroisoxazolilo, dihidrotiazolilo y dihidroisotiazolilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos parcialmente insaturados de 6 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen dihidropiridinilo, dihidropiranilo y dihidrotiopiranilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos parcialmente insaturados de 6 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen dihidrodiazinilo, dihidrooxazinilo, dihidrotiazinilo, dihidrodioxinilo y dihidrotiinilo.
Un grupo heterocíclico de 5 o 6 miembros es normalmente un grupo heterocíclico saturado de 5 o 6 miembros. Los ejemplos típicos incluyen tetrahidrofuranoilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo y tiomorfolinilo, p. ej., piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo, en particular piperazinilo.
Los ejemplos de anillos heterocíclicos de 8 a 10 miembros incluyen indolilo, isoindolilo, benzoimidazolilo, indazolilo, benzotiofenilo, dihidrotiofenilo, tetrahidrotiofenilo, benzofuranilo, dihidrobenzofuranilo y tetrahidrobenzofuranilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros es un grupo aromático cíclico que contiene de 5 a 10 átomos seleccionados entre C, O, N y S en el anillo, y que contiene al menos un heteroátomo, y normalmente uno o dos heteroátomos. El heteroátomo o heteroátomos, que pueden ser iguales o diferentes, se seleccionan normalmente entre O, N y S. Un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros es normalmente un grupo heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros o un grupo heteroarilo bicíclico de 8 a 10 miembros. Normalmente, un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros es un grupo heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros, p. ej., un grupo heteroarilo de 6 miembros.
Los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen pirrolilo, furanilo y tiofenilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo de 5 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isoxazolilo e isotiazolilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo de 6 miembros que comprenden un heteroátomo incluyen piridinilo, piranilo y tiopiranilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo de 6 miembros que comprenden dos heteroátomos incluyen diazinilo, oxazinilo, tiazinilo, dioxinilo y ditiinilo. Normalmente, un grupo heteroarilo de 5 o 6 miembros es un grupo pirrolilo, furanilo, tiofenilo o piridinilo, p. ej., un grupo piridinilo.
Los ejemplos de grupos heteroarilo bicíclico de 8 a 10 miembros incluyen benzofuranoilo, isobenzofuranilo, benzotiofenilo, indolilo, indazolilo, purinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, naftiridinilo, benzoimidazolilo, benzoxazolilo, quinolinilo, quinazolinilo e isoquinolinilo. Los ejemplos típicos son benzotiofenilo, indolilo e isoindolilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo arilo C6 a C10 es un grupo aromático monocíclico o policíclico fusionado. Los ejemplos incluyen grupos fenilo (es decir, monocíclicos), naftilo, indenilo e indanilo (es decir, bicíclicos fusionados), normalmente fenilo o naftilo, lo más preferentemente fenilo.
Un grupo arilo, heteroarilo, carbocíclico o heterocíclico, como se usa en el presente documento, puede estar no sustituido o sustituido con 1, 2, 3 o 4, normalmente 1,2 o 3, p. ej., 1 o 2 sustituyentes. Los sustituyentes se seleccionan normalmente entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4. En un aspecto, los sustituyentes se seleccionan entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5, --C(O)OR4 y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4.
Como se usa en el presente documento, una sal farmacéuticamente aceptable es una sal con un ácido o una base farmacéuticamente aceptable. Los ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen tanto ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, difosfórico, bromhídrico o nítrico como ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, fumárico, maleico, málico, ascórbico, succínico, tartárico, benzoico, acético, metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico o p-toluensulfónico. Las bases farmacéuticamente aceptables incluyen hidróxidos de metal alcalino (p. ej., sodio o potasio) y metal alcalinotérreo (p. ej., calcio o magnesio) y bases orgánicas tales como alquilaminas, aralquilaminas y aminas heterocíclicas. Los compuestos descritos en el presente documento pueden comprender un grupo ácido carboxílico y/o un grupo tiol. Las sales farmacéuticamente aceptables típicas de dichos compuestos comprenden una sal del ácido carboxílico y/o de tiol con una base farmacéuticamente aceptable.
En la Fórmula (I), la estereoquímica no está limitada. En particular, los compuestos de fórmula (I) que contienen uno o más centros quirales pueden usarse en forma enantiomérica o diasteoméricamente pura o en forma de una mezcla de isómeros. Además, se contemplan los isómeros cis y trans alrededor del doble enlace del tioenolato, y sus mezclas. Normalmente, el compuesto descrito en el presente documento contiene al menos un 50 %, preferentemente al menos un 60, 75 %, 90 % o 95 % de un compuesto de acuerdo con la Fórmula (I) que es isoméricamente puro. Por tanto, el compuesto es preferentemente un isómero sustancialmente puro.
Además, para disipar cualquier duda, los compuestos de la invención pueden usarse en cualquier forma tautomérica. Por tanto, mientras que los compuestos se representan en la forma del tioenolato, que se cree que es la forma predominante, los compuestos pueden estar en la forma del compuesto mercapto correspondiente:
Figure imgf000005_0001
Normalmente, en los compuestos descritos en el presente documento, R1 es hidrógeno, metilo o etilo, preferentemente hidrógeno.
Normalmente, R3 es hidrógeno, halógeno, metilo, etilo, OH, metoxi o etoxi. Preferentemente, R3 es hidrógeno.
El Anillo A1 es normalmente fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S. Los anillos A1 preferidos son fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo y benzotiofenilo, en particular fenilo.
El anillo de arilo o heteroarilo A1 está normalmente no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes, p. ej., 1, 2 o 3 sustituyentes, además de la presencia opcional del grupo A2. Se prefieren dos o tres sustituyentes en A1. Los sustituyentes son normalmente sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4, en donde R4 y R5 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-C2. Los sustituyentes preferidos son halógeno, p. ej., cloro, bromo o yodo, NO2, metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4 y -S(O)R4 , en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2. Halógeno y metilo, p. ej., halógeno, son los más preferidos. En un aspecto preferido, el anillo A1 lleva al menos dos sustituyentes en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato. Uno o más sustituyentes adicionales están opcionalmente presentes en las posiciones meta y/o para en el anillo. Los sustituyentes en las posiciones orto son normalmente los descritos anteriormente. Se entiende que los compuestos que tienen sustitución diorto tienen una inhibición beneficiosa de la MBL.
n puede representar 0 o 1, preferentemente 0. Cuando n representa 1, el anillo A2 puede estar en la posición orto, meta o para con respecto al grupo tioenolato en A1, preferentemente está en la posición para.
El Anillo A2 es normalmente fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S. Los anillos A2 preferidos son fenilo y piridilo, en particular fenilo.
El anillo de arilo o heteroarilo A2 está normalmente no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes, p. ej., 1, 2 o 3 sustituyentes, normalmente 1 o 2 sustituyentes. Los sustituyentes son normalmente sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4, en donde R4 y R5 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-C2. Los sustituyentes preferidos son halógeno, p. ej., flúor o cloro, OH, -NH2, metilo o metoxi. Normalmente A2 está no sustituido.
Cada R4 y R5 en la fórmula (I) puede ser igual o diferente. Cada uno normalmente representa independiente hidrógeno, metilo o etilo, preferentemente hidrógeno.
En un aspecto de la invención, en los compuestos de fórmula (I):
R1 es hidrógeno, metilo o etilo;
R3 es hidrógeno, halógeno, metilo, etilo, OH, metoxi o etoxi;
El Anillo A1 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A1 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A2 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4; y
R4 y R5 representan cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo.
En un aspecto preferido de la invención, los compuestos descritos en el presente documento son tioenolatos de fórmula (IA) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000006_0001
Fórmula (IA)
en donde
el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o benzotiofenilo, estando A1 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, p. ej., cloro, bromo o yodo, NO2, metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4 , y -S(O)R4, en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o piridilo, estando A2 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, p. ej., flúor o cloro, OH, -NH2, metilo o metoxi, en donde A2 está preferentemente no sustituido.
En un aspecto preferido, en la fórmula (IA), el anillo A1 es un anillo de fenilo.
Preferentemente, en la realización anterior, el anillo A1 lleva al menos dos sustituyentes en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato. Los sustituyentes son preferentemente átomos de halógeno.
Los ejemplos de compuestos de la invención incluyen ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y ésteres del ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico que incluyen (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrilato de metilo y (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrilato de etilo, así como sales farmacéuticamente aceptables de estos ésteres.
Los ejemplos adicionales de los compuestos de la invención incluyen:
ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triiodofenil)acrílico
ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-tris(metilsulfinil)fenil)acrílico;
ácido (Z)-3-([1,1'-bifenil]-4-il)-2-mercaptoacrílico;
ácido (Z)-2-mercapto-3-fenilacrílico;
ácido (Z)-2-mercapto-3-(p-tolil)acrílico;
ácido (Z)-2-mercapto-3-(4-metoxifenil)acrílico;
ácido (Z)-2-mercapto-3-(4-(metoxicarbonil)fenil)acrílico;
ácido (Z)-3-(4-fluorofenil)-2-mercaptoacrílico;
ácido (Z)-3-(4-clorofenil)-2-mercaptoacrílico;
ácido (Z)-3-(4-bromofenil)-2-mercaptoacrílico;
ácido (Z)-3-(furan-2-il)-2-mercaptoacrílico;
ácido (Z)-2-mercapto-3-(1-metil-1H-pirrol-2-il)acrílico; y
ácido (Z)-3-(4-formilfenil)-2-mercaptoacrílico.
Así como ésteres (p. ej., ésteres metílicos o etílicos) de los compuestos anteriores y sales farmacéuticamente aceptables de los ácidos y de los ésteres. Se prefieren los compuestos 2,3,6-sustituidos.
También pueden proporcionarse isómeros (E) de los compuestos anteriores, o mezclas de formas (E) y (Z).
También se proporcionan ciertos compuestos novedosos. Estos compuestos son tioenolatos de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos:
Figure imgf000007_0001
Fórmula(I)
en donde
R1 es H o un grupo alquilo C1 a C4;
R3 es H, halógeno, alquilo C1 a C4, OH, alcoxi C1 a C4, alquenilo C2 a C4 o -NR4R5;
el Anillo A1 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 2, 3 o 4 sustituyentes, en donde dos de los sustituyentes están en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato, y en donde los sustituyentes se seleccionan entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)o R4, -C(O)NR4R5, S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5, CN, NO2, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; y R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.
En realizaciones particulares de los compuestos novedosos anteriores de fórmula (I), el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o benzotiofenilo, estando A1 sustituido con 2 o 3 sustituyentes, en donde dos de los sustituyentes están en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato, y en donde los sustituyentes se seleccionan entre halógeno, NO2, metilo, -CO2R4, -COR4 , y -S(O)R4 , en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2; preferentemente los sustituyentes en el Anillo A1 se seleccionan entre átomos de halógeno.
R1, R3 , R4 , R5 y A1 y A2 de los compuestos novedosos anteriores de fórmula (I) son preferentemente como se describe en el presente documento, con la condición de que los sustituyentes en A1 no son grupos alcoxi.
En una realización específica, un compuesto novedoso de fórmula (I) es ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto, el tioenolato de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede usarse en combinación con una rodanina. La presente invención proporciona, por lo tanto, combinaciones del tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con un compuesto que es una rodanina de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
Figure imgf000008_0001
Fórmula (II)
en donde A1, A2, n y R3 son como se define en el presente documento;
L es un enlazador de fórmula -(Alk1)p-(Het)q-(Alk2)r-, en donde Aik1 y Aik2 representan independientemente alquileno C1 a C4 y Het representa -O-, -S-, -NR4-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NR4-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1;
el Anillo B es un grupo carbocíclico de 5 a 6 miembros o heterocíclico de 5 a 10 miembros, que está no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -C(O)OR4 y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; y
R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.
Normalmente, L es un enlazador de fórmula -(Alk1)p-(Het)q-(Alk2)r-, en donde Aik1 y Aik2 representan independientemente metileno o etileno, Het representa -O-, -S-, -NR4-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NR4-, R4 representa hidrógeno, metilo o etilo, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1. Preferentemente, L es un enlazador de fórmula -(CH2)p-(Het)q-(CH2)r-, en donde Het representa -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NH-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1. Preferentemente q es 1 y p y r son cada uno independientemente 0 o 1. Por ejemplo p puede ser 1, q puede ser 1 y r puede ser 0 o 1, p. ej., 0. Un enlazador particularmente preferido es -CH2-CO-NH-.
Normalmente, el anillo B es un grupo carbocíclico de 5 a 6 miembros, heterocíclico monocíclico de 5 a 6 miembros o heterocíclico bicíclico de 8 a 10 miembros, preferentemente un grupo carbocíclico de 5 a 6 miembros o heterocíclico monocíclico de 5 a 6 miembros. Los ejemplos de anillo B incluyen fenilo, ciclohexilo y grupos heterocíclicos de 5 a 6 miembros, por ejemplo, fenilo, ciclohexilo, piridilo, tetrahidrofuranilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, imidazolilo, oxazolilo e isoxazolilo. Normalmente B es un grupo carbocíclico o heterocíclico saturado de 5 a 6 miembros. Los grupos B preferidos incluyen ciclohexilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo, en particular piperazinilo.
B está no sustituido o sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, por ejemplo, 1 o 2, p. ej., 1, sustituyente. Los sustituyentes se seleccionan normalmente entre sustituyentes no sustituidos entre halógeno, OH, -NR4R5 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4, en donde R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C2. Los sustituyentes preferidos incluyen halógeno, p. ej., flúor y cloro, OH, -NH2, metilo y metoxi, en particular metilo.
En un aspecto de la invención, en la fórmula (II):
R3 es hidrógeno, halógeno, metilo, etilo, OH, metoxi o etoxi;
el Anillo A1 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A1 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo Ci a C4, alcoxi Ci a C4 y alquenilo C2 a C4;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A2 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4;
L es un enlazador de fórmula -(Alk1)p-(Het)q-(Alk2)r-, en donde Aik1 y Aik2 representan independientemente metileno o etileno, Het representa -O-, -S-, -NR4-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NR4-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1;
el Anillo B es fenilo, ciclohexilo o un grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros que está no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4; y R4 y R5 representan cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo.
En un aspecto preferido de la invención, los compuestos de fórmula (II) son compuestos de fórmula (IIA):
Figure imgf000009_0001
Fórmula (IIA)
en donde
el Anillo A i es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o benzotiofenilo, estando A i no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, p. ej., cloro, bromo o yodo, NO2, metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4 , y -S(O)R4, en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2; n es 0 o 1; el Anillo A2 es fenilo o piridilo, estando A2 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, p. ej., flúor o cloro, OH, -NH2, metilo o metoxi, en donde A2 está preferentemente no sustituido;
L es un enlazador de fórmula -(CH2)p-(Het)-(CH2)r-, en donde Het representa -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NH-, y p y r son cada uno independientemente 0 o 1; preferentemente L es -CH2-CO-NH-; y
B es ciclohexilo, piridinilo, pirazinilo y morfolinilo, preferentemente pirazinilo, en donde B está no sustituido o sustituido con 1 o 2 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, p. ej., flúor y cloro, OH, -NH2, metilo y metoxi; o B es ciclohexilo, piperidinilo, piperazinilo o morfolinilo, en donde B está no sustituido o sustituido con 1 o 2 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, p. ej., flúor y cloro, OH, -NH2, metilo y metoxi.
Preferentemente, en la realización anterior, el anillo A1 lleva al menos dos sustituyentes en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato. Los sustituyentes son preferentemente átomos de halógeno.
Los ejemplos preferidos de un compuesto de fórmula (II) son (Z)-N-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(4-oxo-2-tioxo-5-(2,3,6-triclorobencilideno)tiazolidin-3-il)acetamida y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Las rodaninas de fórmula (II) que tienen un enlazador L de fórmula -(Alk)p-(CONH)-(Alk)r- pueden obtenerse de acuerdo con el siguiente Esquema 1, mediante (1) la unión de anillo(s) A1-(A2)n al compuesto precursor de rodanina (III), y (2) la unión de una parte de una molécula -L-B. Cuando el grupo Het es distinto de un grupo amida, correspondiente a las técnicas sintéticas conocidas por el químico experto puede usarse para conectar el grupo -L-B. Las rutas sintéticas también son descritas por Spicer et al en Probe Reports from the NIH Molecular Libraries Program. Beth Seda (MD): National Center for Biotechnology Information (EE. UU.); 2010. Los tioenolatos de fórmula (I) pueden obtenerse por hidrólisis de las rodaninas de fórmula (II), por ejemplo hidrólisis en condiciones básicas.
Figure imgf000010_0001
Esquema 1
En la siguiente descripción, a menos que se indique lo contrario, la referencia a los tioenolatos indica los compuestos que son tioenolatos de fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Además, la referencia a las rodaninas indica los compuestos que son rodaninas de fórmula (II) y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas.
En un aspecto, cuando el tioenolato y la rodanina se usan en combinación, A1, A2, n y R3 son iguales en las fórmulas (I) y (II). El tienolato y la rodanina pueden proporcionarse como una única formulación que contiene ambos principios activos. Como alternativa, pueden proporcionarse en formulaciones separadas. Las formulaciones separadas pueden administrarse simultáneamente o por separado.
En una realización específica, se proporciona una combinación en donde el compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) es ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenil)acrílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el compuesto que es una rodanina de fórmula (II) es (Z)-N-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(4-oxo-2-tioxo-5-(2,3,6-triclorobencilideno)tiazolidin-3-il)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
Los tioenolatos y las combinaciones descritos en el presente documento son terapéuticamente útiles. La presente invención proporciona, por lo tanto, tioenolatos y combinaciones como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal. Se proporciona también una composición farmacéutica que comprende un tioenolato o una combinación como se describe en el presente documento junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Normalmente, la composición contiene hasta un 85 % en peso, p. ej., hasta un 50 % en peso de agente activo, por ejemplo hasta un 85 % en peso, p. ej., hasta un 50 % en peso de un tioenolato. En el caso de una combinación, la combinación de tioenolato y rodanina forma normalmente hasta un 85 % en peso, p. ej., hasta un 50 % en peso de la composición. Las composiciones farmacéuticas preferidas son estériles y libres de pirógenos. Además, las composiciones farmacéuticas proporcionadas por la invención normalmente contienen un tioenolato y/o una rodanina que es un isómero óptico sustancialmente puro.
En un aspecto, la composición de la invención también comprende un agente antibiótico p-lactámico. Por tanto, la composición comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y:
(i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y opcionalmente uno o ambos de
(ii) un compuesto que es una rodanina de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y (iii) un agente antibiótico p-lactámico.
Cuando el agente antibiótico p-lactámico se proporciona en la misma composición, normalmente el peso total combinado de tioenolato, rodanina (si está presente) y agente antibiótico p-lactámico es de hasta un 85 % en peso, normalmente hasta un 50 % en peso.
Usos terapéuticos
Los tioenolatos y las combinaciones descritos en el presente documento son útiles en la inhibición de las MBLs. Muchas bacterias han desarrollado resistencia a los agentes antibióticos p-lactámicos, uno de los mecanismos de resistencia siendo la hidrólisis de la p-lactama por las MBLs. Por lo tanto, la inhibición de las MBLs bacterianas por los compuestos y las combinaciones descritos en el presente documento mejora significativamente la actividad de los agentes antibióticos p-lactámicos. Por tanto, en la administración a un sujeto, los tioenolatos y las combinaciones descritas en el presente documento pueden inhibir la resistencia catalizada por MBLs de las bacterias a los agentes antibióticos p-lactámicos. Los tioenolatos y las combinaciones son, por lo tanto, útiles para potenciar la actividad de los agentes antibióticos p-lactámicos. También son útiles en la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana cuando se usan en combinación con un agente antibiótico p-lactámico. Por consiguiente, la presente invención proporciona (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o (ii) una combinación como se describe en el presente documento, para su uso en un método de inhibición de la metalobeta-lactamasa (MBL) bacteriana. También se proporciona un método de inhibición de la actividad de la metalo-betalactamasa (MBL) bacteriana en un sujeto, cuyo método comprende la administración al sujeto de una cantidad eficaz de (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o (ii) una combinación como se describe en el presente documento. También se proporciona (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o (ii) una combinación como se describe en el presente documento, para su uso en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de inhibición de la metalo-beta-lactamasa (MBL) bacteriana. El método descrito en el presente documento puede ser un método para potenciar la actividad de un agente antibiótico p-lactámico.
También se proporciona (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o (ii) una combinación como se describe en el presente documento, para su uso en combinación con un agente antibiótico p-lactámico en la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana. También se proporciona un método para la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana en un sujeto, cuyo método comprende administrar a dicho sujeto un agente antibiótico p-lactámico y (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o (ii) una combinación como se describe en el presente documento. También se proporciona el uso de (i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o (ii) una combinación como se describe en el presente documento en la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana en combinación con un agente antibiótico p-lactámico.
También se proporciona en el presente documento una combinación antibiótica que comprende el compuesto o la combinación descrito en el presente documento y un agente antibiótico p-lactámico. El agente antibiótico p-lactámico y el tioenolato o la combinación descritos en el presente documento pueden proporcionarse en una única formulación. Como alternativa, el agente antibiótico p-lactámico puede proporcionarse en una formulación separada. Cuando se administra junto con la combinación descrita en el presente documento, el agente antibiótico p-lactámico puede formularse junto con ninguno, uno o ambos agentes activos de la combinación (a saber, el tioenolato y la rodanina).
El agente antibiótico p-lactámico, el tioenolato y, cuando se usa, la rodanina pueden administrarse simultáneamente o por separado. Cuando se usan los tres agentes activos, los tres pueden administrarse simultáneamente, dos pueden administrarse simultáneamente y el tercero por separado (por ejemplo, el tioenolato y la rodanina pueden administrarse simultáneamente y el agente antibiótico por separado) o los tres agentes pueden administrarse por separado.
La presente invención también proporciona un kit que comprende:
(i) un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y uno o ambos de
(ii) un compuesto que es una rodanina de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y/o (iii) un agente antibiótico p-lactámico.
El kit puede comprender además instrucciones para la administración del tioenolato en combinación con uno o ambos de la rodanina y el agente antibiótico p-lactámico.
En la combinación antibiótica de la presente invención y el kit de la presente invención, la relación del agente antibiótico p-lactámico al compuesto de fórmula (I) es normalmente de 20:1 a 1:20, por ejemplo de 10:1 a 1:20, preferentemente de 1:1 a 1:10, más preferentemente de 1:3 a 1:9, p. ej., de aproximadamente 1:4 o aproximadamente 1:8, de 1:3,5 a 1:4,5 o de 1:7,5 a 1:8,5. En algunas realizaciones de la combinación antibiótica de la presente invención y el kit de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) y el agente antibiótico p-lactámico están presentes en una combinación sinérgica.
El agente antibiótico p-lactámico puede ser cualquier agente antibiótico que comprende una p-lactama y es, por lo tanto, susceptible de ser degradado por las p-lactamasas. Los ejemplos incluyen carbapenems (p. ej., meropenem, faropenem, imipenem, ertapenem, doripenem, panipenem/betamipron y biapenem, así como razupenem, tebipenem, lenapenem y tomopenem), ureidopenicilinas (p. ej., piperacilina), carbacefems (p. ej., loracarbef) y cefalosporinas (p.
ej., cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona, ceftobiprol y ceftarolina). Los ejemplos específicos de agentes antibióticos p-lactámicos incluyen temocilina, piperacilina, cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona, meropenem, faropenem, imipenem, loracarbef, ceftobiprol, ceftarolina.
La infección bacteriana puede ser provocada por bacterias Gram-negativas o Gram-positivas. Por ejemplo, la infección bacteriana puede ser provocada por bacterias de una o más de las familias Clostridium, Pseudomonas, Escherichia, Klebsiella, Enterococcus, Enterobacter, Serratia, Morganella, Yersinia, Salmonella, Proteus, Pasteurella, Haemophilus, Citrobacter, Burkholderia, Brucella, Moraxella, Mycobacterium, Streptococcus o Staphylococcus. Los ejemplos particulares incluyen Clostridium, Pseudomonas, Escherichia, Klebsiella, Enterococcus, Enterobacter, Streptococcus y Staphylococcus. La infección bacteriana puede, por ejemplo, ser provocada por una o más bacterias seleccionadas entre Moraxella catarrhalis, Brucella abortus, Burkholderia cepacia, Citrobacter species, Escherichia coli, Haemophilus Pneumonia, Klebsiella Pneumonia, Pasteurella multocida, Proteus mirabilis, Salmonella typhimurium, Clostridium difficile, Yersinia enterocolitica, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Streptococci del grupo B, Streptococcus Pneumonia, y Streptococcus pyogenes p.ej., entre E. coli y K. pneumoniae.
Un compuesto o combinación de la invención puede administrarse al sujeto con el fin de prevenir la aparición de uno o más síntomas de la infección bacteriana. Esto es la profilaxis. En esta realización, el sujeto puede ser asintomático. El sujeto es normalmente uno que ha sido expuesto a la bacteria. Se administra una cantidad profilácticamente eficaz del agente o formulación a dicho sujeto. Una cantidad profilácticamente eficaz es una cantidad que previene la aparición de uno o más síntomas de la infección bacteriana.
Un compuesto o combinación de la invención puede administrarse al sujeto con el fin de tratar uno o más síntomas de la infección bacteriana. En esta realización, el sujeto es normalmente sintomático. Una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o combinación se administra a dicho sujeto. Una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad que es eficaz para mejorar uno o más síntomas del trastorno.
En un aspecto, el sujeto es un mamífero, en particular un ser humano. Sin embargo, el sujeto puede ser un animal no humano, incluyendo, pero sin limitación, primates tales como monos, animales criados en granjas con fines comerciales tales como caballos, vacas, ovejas o cerdos y animales domésticos tales como perros, gatos, cobayas, conejos, hámsters o jerbos. El sujeto puede ser cualquier animal capaz de ser infectado por una bacteria.
El compuesto o combinación de la invención puede administrarse en una variedad de formas de dosificación. Por tanto, puede administrarse por vía oral, por ejemplo, en forma de comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos dispersables o gránulos. El compuesto o combinación de la invención también puede administrarse por vía parenteral, ya sea por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, transdérmica o por técnicas de infusión. El compuesto o combinación también puede administrarse como un supositorio o por administración inhalada (aerosolizada). Resulta preferente la administración oral o parenteral, p. ej., oral.
El compuesto o combinación de la invención se formula normalmente para su administración con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el componente activo, diluyentes, p. ej., lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, p. ej., sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o de calcio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes; p. ej., almidones, gomas arábigas, gelatina, metilcelulosa, carmelosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, p. ej., almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato sódico de almidón; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes, tal como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Dichos preparados farmacéuticos pueden fabricarse de manera conocida, por ejemplo, por medio de mezclado, granulación, formación de comprimidos, procesos de recubrimiento de azúcar o recubrimiento pelicular.
Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser jarabes, emulsiones y suspensiones. Los jarabes pueden contener como vehículos, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol.
Las suspensiones y emulsiones pueden contener como vehículo, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o alcohol polivinílico. La suspensión o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, p. ej., agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, p. ej., propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína.
Las soluciones para inyección o infusión pueden contener como vehículo, por ejemplo, agua estéril o, preferentemente, pueden estar en forma de soluciones salinas isotónicas estériles, acuosas. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración por inyección sin aguja, por ejemplo, por vía transdérmica, también pueden usarse.
Una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz del compuesto o combinación de la invención se administra a un sujeto. La dosis puede determinarse de acuerdo con diversos parámetros, especialmente de acuerdo con el compuesto usado; la edad, el peso y la condición del sujeto que se va a tratar; la vía de administración; y el régimen requerido. De nuevo, un médico será capaz de determinar la vía de administración necesaria y la dosificación para cualquier sujeto particular. Una dosis diaria típica es de aproximadamente 0,01 a 100 mg por kg, preferentemente de aproximadamente 0,1 mg/kg a 50 mg/kg, p. ej., de aproximadamente 1 a 10 mg/kg de peso corporal, dependiendo de la actividad del inhibidor específico, la edad, el peso y las condiciones del sujeto que se va a tratar, el tipo y la gravedad de la enfermedad, y la frecuencia y la vía de administración. Preferentemente, los niveles de dosificación diarios son de 5 mg a 2 g.
Usos diagnósticos
Las combinaciones antibióticas descritas en el presente documento, que comprenden el compuesto o combinación descrito en el presente documento y un agente antibiótico p-lactámico, también pueden usarse en métodos para la detección de las metalo-beto-lactamasas. Por tanto, una muestra que contiene bacterias de las que se sospecha que expresan metalo-beta-lactamasas puede cultivarse (a) en presencia de un agente antibiótico beta-lactámico; y (b) en presencia de la combinación antibiótica de la invención. Si se observa que las bacterias crecen en las condiciones (a), esto sugiere que una beta-lactamasa, capaz de hidrolizar el agente antibiótico, está provocando la resistencia de las bacterias al agente antibiótico. Sin embargo, si las bacterias no crecen en la condición (b), es decir, en presencia de un tienolato de la invención y un agente antibiótico, entonces las beta-lactamasas presentes han sido inhibidas. Este resultado sugiere que las beta-lactamasas son metalo-beta-lactamasas. El método puede usarse para determinar si las bacterias expresan enzimas metalo-beta-lactamasas.
Por tanto, la presente invención proporciona un método que comprende cultivar una muestra (p. ej., una muestra de orina, sangre o plasma de un sujeto, o bacterias aisladas de la orina, sangre o plasma de un sujeto), en particular una muestra que comprende, o se sospecha que comprende bacterias, en presencia de una combinación antibiótica de la invención. El método puede comprender también una etapa de cultivo de una muestra adicional del mismo material en presencia del mismo agente antibiótico, pero en ausencia del compuesto o combinación de la invención.
El método puede usarse para determinar un tratamiento adecuado para un sujeto que se sospecha que tiene una infección bacteriana, y en particular para determinar si el tratamiento de dicho sujeto con un inhibidor de la metalobeta-lactamasa, en combinación con un agente antibiótico beta-lactámico, será beneficioso para el sujeto.
Los métodos pueden llevarse a cabo de acuerdo con las técnicas descritas en el documento US7.807.403. De este modo, por ejemplo, el método puede comprender proporcionar un cultivo de las bacterias mezclado con la combinación antibiótica de la invención y un agente permeabilizante para las bacterias (en una cantidad que no inhiba el crecimiento pero que permita la permeación), para formar un cultivo de ensayo. El cultivo de ensayo puede mantenerse (incubarse) en condiciones de cultivo adecuadas y durante un periodo de tiempo suficiente para permitir que las bacterias interactúen con el agente antibiótico y el tioenolato.
El tioenolato puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 5 a aproximadamente 250 |jg por disco de prueba de interacción estándar y, por lo general, de aproximadamente 5 a aproximadamente 50 jg , o en una cantidad proporcional si se usa un formato de ensayo diferente.
El agente permeabilizante puede estar disuelto o disperso en un vehículo, por ejemplo, una solución tampón acuosa tal como Tris/EDTA (TE). El vehículo puede ser un vehículo sólido, p. ej., un disco de papel, o un vehículo líquido. Se puede proporcionar un medio de crecimiento. Los agentes permeabilizantes adecuados son aquellos que pueden permeabilizar la pared celular de una bacteria y se proporcionan ejemplos en el documento US7.807.403.
Ejemplos
Material y métodos
Los productos químicos proceden de proveedores de uso común y se usaron sin purificación adicional. Los disolventes (incluidos los disolventes secos) para las transformaciones químicas, el proceso de elaboración y la cromatografía eran de Sigma-Aldrich (Dorset, R.U.) de grado HPLC, y se usaron sin destilación adicional. Las placas de cromatografía analítica en capa fina (TLC) de gel de sílice 60 F254 eran de Merck (Darmstadt, Alemania) y se visualizaron bajo luz UV y/o con tinción de permanganato potásico. Las purificaciones cromatográficas se realizaron usando sílice Merck Geduran 60 (40-63 jm ) o columnas SNAP preempaquetadas usando un sistema de purificación Biotage SP1 (Uppsala, Suecia). Las reacciones asistidas por microondas se realizaron usando un sintetizador de microondas Biotage Initiator™ en viales sellados. Los disolventes deuterados se obtuvieron de Chambridge Isotopes y Apollo Scientific Ltd. Todos los espectros de 1H y 13C RMN se registraron usando un espectrómetro Bruker Avance 400 MHz. Todos los desplazamientos químicos se dan en ppm en relación con el pico del disolvente,14 y las constantes de acoplamiento (J) se indican en Hz al 0,5 cerrado. Los datos de espectrometría de masas de alta resolución (HR) (m/z) se obtuvieron de un instrumento Bruker MicroTOF usando una fuente ESI y un analizador de tiempo de vuelo (TOF). Los datos de espectrometría de masas de baja resolución (LR) (m/z) se obtuvieron de un instrumento Waters LCT Premier usando una fuente ESI y un analizador de tiempo de vuelo (TOF). Los puntos de fusión se obtuvieron usando un aparato de punto de fusión automático Stuart SMP-40.
Experimentos de 1H RMN
Las muestras para la hidrólisis de ML302 se prepararon de la siguiente manera: Se disolvió ML3020,2 mM en tampón Tris-di i /HCI 50 mM (90 % de H2O, 10 % de D2O) pH 7,5. Los espectros se registraron en ausencia o presencia de NDM-1 (1 mM).
Los cursos cronológicos de 1H RMN se registraron en el Bruker AVIII 700 con criosonda 1H/13C/15N TCI o en el Bruker AVIII 600 con criosonda BB-F/1H Prodigy N2 con 256 barridos típicos (AVIII 600) o 128 barridos (AVIII 700) y longitudes de pulso de 90° de 12 ps. Los datos se procesaron con 1 Hz (AVIII 600) o 0,3 Hz (AVIII 700) de ensanchamiento de la línea lorentziana usando el software TopSpin 3.1 (Bruker).
Síntesis
(Véase también Spicer T, et al ML302: A Novel Beta-lactamase (BLA) Inhibitor in Probe Reports for the NIH Molecular Libraries Program (National Center for Biotechnology Information (US) (Bethsada (MD), 2010)
Ácido (Z)-2-(4-oxo-2-tioxo-5-(2,3,6-triclorobencilideno)tiazolidin-3-il)acético (1)
Figure imgf000014_0001
Se cargó un vial de microondas de 20 ml con 2,3,6-triclorobenzaldehído (1,05 g, 5,0 mmol) y ácido rodanina-3-acético (955 mg, 5,0 mmol). Se añadió etanol (10 ml) seguido de piperidina (4 gotas). Se selló el vial y se sometió a irradiación de microondas a 120 °C durante 90 min. Se eliminó el disolvente y el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (CH2Ch/MeOH 9:1). El producto deseado se obtuvo como un sólido amarillo claro (1,35 g, 71 %). TLC (CH2CI2/MeOH 9:1) Rf=0,55. 1H RMN (400 MHz CDCI3) 8 = 8,50-7,00 (s a, COOH, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,47-7,52 (m, 1H), 7,36 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,93 (s, 2H) ppm. 13C RMN (101 MHz CDCI3) 8 = 191,9, 170,9, 165,2, 132,6, 132,3, 132,2, 131,8,131,31,131,29,128,7,128,1,44,1 ppm. LRMS m/z calc. para C12H5Cl3NOaS2 [M-H] = 379,88, encontrado [M-H] = 379,8.
Ejemplo 1: N-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(4-oxo-2-tioxo-5-(2,3,6-tridorobencilideno)tiazolidin-3-il)acetamida (mezcla E/Z (1:3)) (ML302)
Figure imgf000014_0002
Una solución de 1 (381 mg, 1,0 mmol) y cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfónico (BOP-CI, 350 mg, 1,2 mmol, 1,2 equiv.) en CH2CI2 (10 ml) se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo/agua bajo una atmósfera inerte. Trietilamina destilada recientemente (Et3N, 168 pl, 1,2 mmol, 1,2 equiv.) se añadió y la solución se dejó agitar a 0 °C durante 30 min. 1-amino-4-metil-piperazina (145 pl, 1,2 mmol, 1,2 equiv.) se añadió y se elevó la temperatura a ta tras lo cual la reacción se agitó durante la noche. El producto en bruto, obtenido por eliminación del diclorometano in vacuo, se purificó mediante cromatografía instantánea (CH2Ch/MeOH 9:1) para dar el compuesto ML302 como una mezcla no separada de isómeros E/Z en una relación 1:3 (373 mg, 78 %) como un sólido amarillo. TLC (CH2Ch/MeOH 9:1) Rf = 0,35. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8 (asignado para el isómero mayor) = 7,72 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 8,5; 0,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,90 (s a, 1H), 5,05 (s, 2H), 2,95-3,20 (m, 2H), 2,65-2,90 (m, 4H), 2,33 (s, 3H) ppm. 13C RMN (101 MHz CDCI3) 8 (asignado para el isómero mayor) = 192,9, 166,9, 166,0, 133,1, 132,5, 132,08, 132,05, 128,9, 127,9, 56,0, 54,2 (4C), 45,4, 44,9 ppm. LRMS m/z calc. para C17H18CI3N4O2S2 [M+H] = 478,99, encontrado [M+H] = 479,0. Pf = 182-185 °C.
Ejemplo 2: Ácido 2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico (mezcla E/Z (1:4) (ML302F)
Figure imgf000015_0001
El compuesto ML302 (240 mg, 0,5 mmol) se disolvió en NaOH 1 M (4 ml) tras lo cual se observó un cambio de color a rojo intenso. La mezcla de reacción clara se calentó a 60 °C, luego se agitó durante 45 min (el color de la reacción cambia de rojo intenso a amarillo) cuando se observó el consumo del material de partida. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y posteriormente se acidificó cuidadosamente con HCI 1 M (5 ml). Se formó un precipitado blanco y se recogió por centrifugación (4000 g/10 min). Tras eliminar la fase líquida, el sólido blanco se resuspendió en H2O (2 ml) y se recogió de nuevo por centrifugación. Este proceso se repitió dos veces. El sólido obtenido se secó al alto vacío durante una noche. El producto se obtuvo como una mezcla inseparable de isómeros EIZ en una relación 1:4 como un sólido blanquecino (40 mg, 28 %). TLC (CH2Ch/MeOH 4:1) Rf = 0,67. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8 (asignado para el isómero mayor) = 7,69 (s, 1H), 7,45 (dd, J = 8,5; 1,0 Hz, 1H), 7,33-7,37 (m, 1H), 3,89 (s a, 1H) ppm. 13C-RMN(200 MHz, CDCI3) 8 = 168,1, 134,7, 132,8, 132,4, 132,1, 132,1, 130,7, 130,6, 128,7 ppm. LRMS m/z calc. para C9H4CI3O2S [M-H] = 280,90, encontrado [M-H] = 280,8.
Figure imgf000015_0002
2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenil)acrilato de sodio (ML302F-Na) se obtuvo disolviendo ML302F (28,2 mg, 0,1 mmol) en NaHCO30,1 M (1 ml). La solución clara resultante se liofilizó posteriormente para generar la sal sódica deseada como un sólido blanquecino (31 mg, cant.). LRMS m/z calc. para C9H4Cb NaO2S [M+Na] = 303,89, encontrado [M-H] = 280,8.
Producción y purificación de proteínas
Formas recombinantes de MBL de NDM-1, NDM-1, M67C, VIM-1, VIM-2, SPM-1, IMP-1 y Bcll se produjeron en Escherichia coli como se describe en J. Med. Chem. 56, 6945-6953 (2013) y Makena et al Chem MechCHem 8, 1923­ 9 (2013). La proteína VIM-2 purificada se dializó en un tampón de cristalización fresco (HEPES 50 mM pH 7,5, NaCI 150 mM y 1 mg de ZnCl2, se concentró a 7,5 mg/ml y se usó para los análisis cristalográficos.
Análisis cinéticos
Los análisis cinéticos y de inhibición y los estudios de UV-VIS16 contra las MBLs bacterianas se realizaron según lo descrito por Van Berkel et al en J. Med. Chem. 56, 6945-6953 (2013) y Makena et al Chem MechCHem 8, 1923-9 (2013).
Ejemplo 3: Ensayo de detección
Los ensayos de detección para determinar los datos cinéticos y los valores de CI50 para ML302F, ML302 y una mezcla de ML302 y ML302F (en el presente documento, ML302M) se llevaron a cabo según lo descrito por van Berkel, S. S. et al en J Med. Chem. 56, 6945-6953 (2013). Los experimentos se llevaron a cabo usando un lector de microplacas NovaStar (usando la corrección de la longitud de la trayectoria) y se realizaron a ta (24-25 °C). Todas las enzimas y sustratos se disolvieron en el tampón de ensayo: Tampón HEPES-NaOH 50 mM (pH 7,2) suplementado con 1 pg/ml de BSA (para minimizar la desnaturalización de la enzima), 1 pM de ZnSO4 y 0,01% de Tritón 100. La detección se llevó a cabo contra un panel de MBLs incluyendo NDM-1, VIM-1, VIM-2, Sp M-1 (MBL-1 de Sao Paulo) e IMP-1 y el modelo MBL no relevante clínicamente Bacillus cereus (Bcll).
Los valores cinéticos determinados fueron las medias de al menos tres mediciones independientes. Se usaron al menos seis concentraciones diferentes del sustrato o del inhibidor para determinar los parámetros cinéticos (Km, kcat y CI50). La determinación de los parámetros cinéticos en estado estacionario para la hidrólisis de diferentes sustratos (Km y kcat) se realizó ajustando los datos de la velocidad inicial a la ecuación de Michaelis-Menten usando el paquete de software Graph Prism 5.01. Los valores CI50 se determinaron a partir del gráfico de la actividad (tasa en estado estacionario) frente a la concentración del inhibidor usando el mismo software.
Los valores CI50 (concentración necesaria para afectar a la inhibición del 50 % de la actividad enzimática) se determinaron mediante la preincubación de la cantidad adecuada de enzima con el compuesto deseado en el tampón de ensayo durante 10 minutos a ta antes de iniciar el ensayo mediante la adición del sustrato. Los compuestos para el estudio de la inhibición se prepararon en soluciones madre de DMSO de 1 a 100 mM. En ensayos adicionales se verificó que la baja concentración de DMSO (0,5 %) presente en la mezcla de reacción no tenía efectos de inhibición.
Los resultados se muestran en la siguiente Tabla 1 y en la Figura 1 que representa las curvas de CI50 para ML302, ML302F y la mezcla de los dos compuestos contra el panel de MBLs.
Tabla 1
CI TUMI
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El valor CI50 de ML302 contra VIM-2 obtenido mediante este ensayo (498±18 nM) coincide con el valor notificado de 548 nM (Spicer, T et al A Novel Beta-lactamase (BLA) Inhibitor in Probe Reports from the NIH Molecular Libraries Program (National Center for Biotechnology Information (EE:UU.), Bethesda (Md ), 2010). Los resultados contra VIM-2 muestran una potencia significativamente mayor para ML302F que para ML302. Además, la mezcla de ML302F y ML302 muestra una mayor potencia que cualquiera de los dos compuestos por separado.
Ejemplo 4: Estudios celulares y de selectividad
Se llevaron a cabo otros estudios para determinar si ML302F/ML302 potencia la actividad antibiótica p-lactámica en cepas derivadas clínicamente que contienen IMP-1, IMP-4, VIM-4 o NDM-1, que son las MBLs más comúnmente observadas en los aislados clínicos. Todas las cepas que producen MBLs se confirmaron como resistentes al meropenem en el valor crítico definido por el Clinical and Laboratory Standards Institute (EE.UU.) de 8 pg/ml para Enterobacteriace (véase la Tabla 2 a continuación). La concentración inhibitoria mínima (CIM) de meropenem contra las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae productoras de MBLs se determinó con y sin concentraciones crecientes de ML302 o ML302F. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2012. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow; 9a ed. Approved standard M07-A9. CLSI, Wayne, PA; y Clinical and Laboratory Standards Institute. 2012. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 22° informational supplement M100-S22. CLSI, Wayne, PA.
Tabla 2
CIM de meropenem (mg/l) en presencia del inhibidor ML302 o ML302F meropenem (mg/l) a la concentración indicada
Cepa
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Figure imgf000016_0003
en ausencia d 25 mg/l 50 mg/l 100 mg/l inhibidor ML302/ML302F ML302/ML302F ML302/ML302F ML302/ML302F E. coli 25722 (ts) < 0,25 < 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 K. pneumoniae < 0,25
< 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 < 0,25/< 0,25 NCTC 5055 (ts)
E. coli MG1655 32 0,5/4 < 0,25/4 < 0,25/2 < 0,25/0,5 (IMP-1) K. 32
pneumoniae
< 0,25/4 < 0,25/0,5 < 0,25/0,5 < 0,25/< 0,25 NCTC 5055
(IMP-1)
K. pneumoniae 16
0,5/2 < 0,25/1 < 0,25/0,5 < 0,25/< 0,25 B19 (IMP-4)
K. pneumoniae 128
32/64 8/32 4/32 4/16 A34 (VIM-4)
E. coli IR60 16
8/16 8/16 4/8 2/8 (NDM-1)
Figure imgf000016_0004
No hubo ningún efecto notable de ninguno de los dos inhibidores a 100 |jg/ml sobre el crecimiento de E. coli/K. pneumoniae, sin meropenem, lo que sugiere que no hay toxicidad directa. Se observó una sinergia entre ML302 y meropenem para todas las cepas productoras de MBLs (véase la Tabla 2) con una sensibilidad clínicamente relevante (CIM < 8 jg/ml)) alcanzada a 5o jg/m l de inhibidor contra los productores de VIM y NDM. En contraste, la concentración más baja de inhibidor analizada (10 jg/m l) confirió sensibilidad al meropenem a los productores de IMP. Con fines de comparación, el inhibidor de SBL Avibactam se usa normalmente a 4 jg/m l para potenciar la ceftazidima (Zhanel et al Drugs, 73 159-177 (2013). Cabe destacar que el inhibidor de MBL de quelante de zinc Aspergillomarasmina A (King A. M. et al Nature 510, 503-506 (2014)) muestra un efecto potenciador similar o mejor contra las cepas productoras de VIM y NDM, pero el ML302 tiene una actividad más amplia que también se dirige a las cepas productoras de IMP. ML302F también mostró sinergia con meropenem. La sensibilidad al meropenem se observó de nuevo para los productores de IMP en la dosis más baja analizada (10 jg/ml), pero las CIM de meropenem observadas en presencia de ML302F fueron hasta 8 veces superiores a la misma concentración de ML302.
En un estudio adicional, se evaluaron in vitro las actividades antimicrobianas de MEM y ML302F individualmente y en combinación contra 31 aislados clínicos productores de VIM. La sinergia entre MEM y ML302F se confirmó por primera vez en ensayos de tablero de ajedrez contra 7/8 aislados analizados (FICI < 0,5). Se comprobó que una relación MEM:ML302F de 1:4 y 1:8 era óptima, lo que daba lugar a una reducción de > 4 veces en la CIM de MEM. Treinta cepas eran resistentes (CIM >8 mg/l) o tenían una susceptibilidad reducida (CIM >4 mg/l) al MEM solo, según los criterios de valor crítico del Comité Europeo sobre Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana (EUCAST). Un aislado de K. pneumoniae que albergaba blaVIM-1 se consideró susceptible (CIM 1 mg/l). Usando una relación fija de 1:8 de MEM:ML302F, la susceptibilidad in vitro a los carbapenems aumentó en 22/31 (70 %) de los aislados, de los cuales 11 resultaron susceptibles (CIM < 2 mg/l)) o intermedios (CIM 4-8 mg/l). Para 9 aislados, la CIM de MEM se mantuvo >8 mg/l. Los resultados se exponen en la Tabla 3 a continuación.
Tabla 3
MBL Aislado MEM CMI (mg/l)
MEM ML302F FICI
VIM-1 K. pneumoniae GR54 128 4 0,09
VIM-1 K. pneumoniae 177 1 1 1,02
VIM-1 P. stuartii 67 8 1 0,14
VIM-1 P. stuartii 70 8 1 0,14
VIM-2 P. aeruginosa 30 64 8 0,25
VIM-2 P. aeruginosa 47 32 1 0,05
VIM-2 P. aeruginosa 50 32 8 0,38
VIM-2 P. aeruginosa GR57 32 4 0,19
VIM-2 P. aeruginosa GR58 32 8 0,38
VIM-2 P. aeruginosa GR62 32 8 0,38
VIM-2 P. aeruginosa GR64 32 4 0,19
VIM-2 P. aeruginosa 3 (13) 64 8 0,25
VIM-2 P. aeruginosa 8 (13) 128 16 0,38
VIM-2 P. aeruginosa 9 (13) 128 16 0,38
VIM-2 P. aeruginosa 11 (13) 32 2 0,09
VIM-2 P. aeruginosa 6 (14) 128 16 0,38
VIM-2 P. aeruginosa 11 (14) 128 32 0,75
VIM-2 P. aeruginosa 12 (14) 128 32 0,75
VIM-2 P. aeruginosa 13 (14) 32 16 0,75
VIM-2 P. aeruginosa 14 (14) 64 2 0,06
VIM-2 P. aeruginosa 15 (14) 64 16 0,5
VIM-2 P. aeruginosa 16 (14) 64 16 0,5
VIM-2 P. aeruginosa 27 (14) 64 16 0,5
VIM-4 E. cloacae 102 32 4 0,19
VIM-4 E. coli 98 16 2 0,16
VIM-4 K. oxytoca 95 32 8 0,38
VIM-4 K. oxytoca 126 32 4 0,19
VIM-4 K. pneumoniae 101 32 2 0,09
VIM-4 K. pneumoniae 120 16 2 0,25
VIM-4 K. pneumoniae 128 4 1 0,27
VIM-4 K. pneumoniae 196 16 1 0,08
Tabla 3: Concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) de meropenem (MEM) con y sin ML302F (1:8) frente a bacterias Gram-negativas resistentes a múltiples fármacos que producen carbapenemasas tipo VIM.
Ejemplo 5: Estudios de selectividad
Para investigar la selectividad de ML302/ML302F para las MBLs bacterianas, se analizó la actividad contra TEM-1 (una SBL de Clase A), PBP-5 (proteína de unión a penicilina 5 o dacA) y PBP-6 (proteína de unión a penicilina 6 o dacC) de E. coli, hHAT (histona acetiltransferasa humana) y ftHDAC (histona desacetilasa humana). TEM-1, PBP-5 y -6 y hHAT son conocidas por ser inhibidas por rodaninas. También se analizó la inhibición selectiva contra hACE-2 (enzima convertidora de angiotensina 2) y hHAGH (hidroxiacilglutatión hidrolasa, glioxilasa humana II).
Estudios de inhibición de las proteínas de unión a penicilina
Los análisis de inhibición se realizaron usando el método descrito anteriormente para PBP-3 (van Berkel, S. S. et al. Binding of (5 S)-penicilloic acid to penicillin binding protein 3.ACS Chem. Biol. 8, 2112-2116 (2013)). En resumen: ML302 y ML302F se examinaron inicialmente a una única concentración (100 j M) por duplicado. La inhibición de la tasa de acilación de la PBP por la p-lactama cromógena Nitrocefina se determinó mediante la preincubación de la cantidad adecuada de enzima (2 j M de dacA y 6,8 j M de dacC, respectivamente) y el inhibidor en el tampón de ensayo (tampón HEPES-NaOH 50 j M (pH 7,2) suplementado con NaCI 200 mM y 0,01 % de Tritón 100) durante 10 min a ta antes de iniciar el ensayo mediante la adición de nitrocefina (100 j M de concentración final). La hidrólisis de la Nitrocefina se supervisó siguiendo la variación de la absorbancia a 492 nm usando placas de fondo plano de 96 pocillos (Microplaca UV-STAR (655801) o Greiner Bio-One). Los experimentos se realizaron usando un lector de microplacas PHERAstar FS - BMG Labtech (usando la corrección de la longitud de la trayectoria) a ta (24-25 °C). Todas las enzimas e inhibidores se prepararon en el tampón de ensayo.
Estudios de inhibición para TEM-1
El análisis de inhibición para TEM-1 se realizó usando el método modificado que se describió previamente para MBLs.21 En resumen: ML302 y ML302F se analizaron a una única concentración (100 j M) por duplicado. La inhibición se analizó mediante la preincubación de la cantidad adecuada de TEM-1 (concentración final de 1 nM) y ML302 o ML302F en el tampón de ensayo (tampón HEPES-NaOH 50 mM (pH 7,2) suplementado con 0,01 % de Tritón 100) durante 10 min a ta antes de iniciar el ensayo mediante la adición de FC5 ((6R,7R)-8-oxo-3-((2-oxo-2H-cromo-7-il)oxi)metil)-7-(2-fenilacetamido)-5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-2-eno-2-carboxílico 5,5-dióxido)21 (10 j M de concentración final). La hidrólisis de FC5 se supervisó siguiendo la variación de la lectura de fluorescencia (380 nm -excitación y 460 nm - emisión) usando placas de fondo plano de 384 pocillos (Greiner Bio-One). Los experimentos se realizaron en un lector de microplacas PHERAstar FS - BMG Labtech a ta (24-25 °C). Todas las enzimas e inhibidores se prepararon en el tampón de ensayo.
Estudios de inhibición para hHAT, HDAC, hACE-2 y hHAGH
Los análisis de inhibición para las histona acetiltransferasas humanas (HAT), HDAC hHDAC (histona desacetilasa humana), hACE-2 (enzima convertidora de angiotensina 2) y hHAGH (hidroxiacilglutatión hidrolasa, glioxilasa humana II) se realizaron usando el kit de ensayo HAT disponible comercialmente (Active Motif, catálogo n.° 56100 (2009)), hHDAC (Active Motif, catálogo n.° 56200 (2013)), hACE-2 (ACE-2 (R&D Systems) y hHAGH (R&D Systems).
Ensayo de hACE-2 (R&D Systems):
Materiales:
Tampón de ensayo: Tris 75 mM, NaCI 1 M, pH 7,5
ACE-2 humana recombinante (rhACE-2) (Catálogo n.° 933-ZN)
Sustrato: MCA-Tyr-Val-Ala-Asp-Ala-Pro-Lys(DNP)-OH (Catálogo n.° ES007), Solución madre 10 mM en DMSO Placa negra F16 Maxisorp (Nunc, Catálogo n.° 475515)
Lector de placas de fluorescencia (Modelo: SpectraMax Gemini EM de Molecular Devices) o equivalente
Ensayo:
1. Diluir rhACE-2 a 0,2 ng/jl en Tampón de ensayo.
2. Diluir el Sustrato a 40 j M en Tampón de ensayo.
3. Cargar en una placa de pocillos negra 50 j l de 0,2 ng/rhACE-2, e iniciar la reacción añadiendo 50 j l de 40 j M de Sustrato. Como control, cargar 50 j l de 40 j M de sustrato con 50 j l de tampón de ensayo.
4. Leer a las longitudes de onda de excitación y emisión de 320 nm y 405 nm (lectura superior), respectivamente en modo cinético durante 5 minutos.
5. Calcular la actividad específica:
Vmáx ajustada* (UFR/min) x Factor de conversión** (pmol/UFR) Actividad específica (pmol/min/jg) = cantidad de enzima (pg)
*Ajustado para el Blanco de sustrato
**Derivado usando el estándar de calibración MCA-Pro-Leu-OH (Bachem, Catálogo n.° M-1975)
Condiciones de ensayo finales
Por pocilio:
• rhACE-2: 0,010 pg
• Sustrato: 20 pM
Ensayo de hAGH (R&D Systems)
Materiales:
Tampón de ensayo: Tris 50 mM, NaCI 250 mM, pH 7,5
Glioxalasa II humana recombinante (rhglioxalasa II) (Catálogo n.° 5944-GO)
Sustrato: S-lactoilglutatión (Sigma, Catálogo n.° L7140), Solución madre 100 mM en agua desionizada
5,5'-ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB) (Sigma, Catálogo n.° D8130), Solución madre 10 mM en DMSO Placa transparente de 96 pocillos (Costar, Catálogo n.° 92592)
Lector de placas (Modelo: SpectraMax Plus de Molecular Devices) o equivalente
Ensayo:
1. Diluir rhglioxalasa II a 0,4 ng/pl en tampón de ensayo.
2. Diluir el Sustrato a 2 pM en tampón de ensayo con 400 pM de DTNB para formar una Mezcla de sustrato. 3. Cargar 50 pl de 0,4 ng/pl de rhglioxalasa II en una placa e iniciar la reacción cargando 50 pl de la Mezcla de sustrato. Incluir un Blanco de sustrato que contiene 50 pl de tampón de ensayo y 50 pl de Mezcla de sustrato. 4. Leer a 405 nm (absorbancia) en modo cinético durante 5 minutos.
5. Calcular la actividad específica:
Actividad específica (pmol/min/pg) = Vmáx ajustada* (DO/min) x volumen de pocilio (1) x 1012pmol/mol coef.ext**(M~1cm~1)x corr.de trayec.***{cm )x cantidad de enzima (pg ) *Ajustado para el Blanco de sustrato
**Usando el coeficiente de extinción 13260 M-1 cm-1
***Usando la corrección de trayectoria 0,320 cm
Nota: la salida de muchos espectrofotómetros está en mOD. Condiciones de ensayo finales
Por pocillo:
• rhglioxalasa II: 0,020 pg
• S-lactoilglutatión: 1 mM
• DTNB: 200 pM
Los resultados de cada ensayo se exponen en la Tabla 4 a continuación.
Tabla 4.
Figure imgf000019_0001
Solo en el caso de hACE-2 se observó una inhibición (~75 % de actividad residual a 100 pM) por ML302 pero no por ML302F. Para todas las demás enzimas analizadas no se observó ninguna inhibición sustancial (Tabla 3). En general, estos resultados sugieren que el ML302F/ML302 o el ML302M son selectivos para la inhibición de MBLs.
Ejemplo 6 - Ensayos de toxicidad
La toxicidad in vivo del ML302F se evaluó en el modelo de larvas de la polilla de la cera Gallería mellonella usando una clasificación simple de vivos y muertos. Se administraron concentraciones dobles de ML302F (de 0 a 80 mg/Kg) en inyecciones de 10 pl directamente en la hemocoel de diez larvas antes de la incubación a 37 °C durante 96 h. Se puntuaron las larvas en cuanto a melonización y movimiento cada 24 h, como vivas o muertas. Las larvas para todos los ensayos de G. mellonella se compraron en Livefood UK Ltd (Somerset, R.U.).
El ML302F no fue tóxico cuando se administró a G. mellonella por inyección en dosis de hasta 80 mg/kg (100 % de supervivencia de todas las larvas a las 96 horas).
Ejemplo 7 - Ensayo de virulencia de G. mellonella
Se determinó el inóculo bacteriano necesario para la muerte escalonada (dosis letal del 50 % [DL50]) de G. mellonella por los aislados productores de VIM durante 96 h, usando 10 larvas inoculadas con cultivos de una noche de E. coli EC98, K. pneumoniae KP120 y P. aeruginosa PA GR57. Se hicieron diluciones seriadas de diez veces de los cultivos lavados, se diluyeron en PBS y se administraron en inyecciones de 10 pl a concentraciones finales de 101-106 UFC/larvas y se incubaron a 37 °C durante 96 h. Las larvas se calificaron como vivas o muertas cada 24 h.
El inóculo requerido para la muerte escalonada de >50 % de las larvas por cepas resistentes a carbapenem durante 96 h varió según la especie. La DL50 fue < 101, 105 y 104 UFC/larvas para P. aeruginosa GR57, E. coli 98 y K. pneumoniae, respectivamente.
Ejemplo 8 - Ensayos de tratamiento con MEM/ML302F
Se evaluó la actividad de MEM y ML302F individualmente y en combinación usando 16 larvas de G. mellonella, tal como describen M. Hornsey y D. W. Wareham (Antimicrob. Agents Chemother., 2011, 55(7), 3534-3537). Las larvas fueron inoculadas con P. aeruginosa GR57, E. coli EC98 y K. pneumoniae KP120. En terapias de combinación, se administró una relación fija (1:8) de MEM:ML302F que contenía 0,6 mg/Kg de MEM8 y 4,8 mg/Kg de ML302F en inyecciones de 10 pl a las larvas infectadas. Se usaron inyecciones de PBS (10 pl) como controles para la terapia no antimicrobiana y la lesión por inoculación. Se calificó la supervivencia de las larvas durante 96 horas y se analizaron las curvas de mortalidad mediante la prueba de rangos logarítmicos para determinar la tendencia. El riesgo relativo (RR) de supervivencia entre los diferentes brazos de tratamiento se calculó mediante la prueba exacta de Fisher con valores P de dos colas de <0,05 considerados estadísticamente significativos.
Los resultados se dan en la Figura 2 y muestran que la supervivencia de las larvas tratadas con ML302F (4,8 mg/kg) fue similar a las que recibieron PBS para el tratamiento de las infecciones por PA GR57, EC 98 y KP 120. La monoterapia con MEM (0,6 mg/kg) fue superior al PBS y al ML302F (P <0,0001), pero el % de supervivencia fue solo del 44 %, 23 % y 69 % frente a las cepas de EC 98, pA GR57 y KP 120, respectivamente. La adición de ML302F a MEM mejoró significativamente la supervivencia de la larva infectada (P <0,0001) en comparación con MEM solo, con tasas de supervivencia del 69 % (e C 98), 81 % (PA GR57) y 98 % (KP 120) a 96 (Fig. 2) y un riesgo relativo para MEM-ML302f frente a MEM de 0,64, 0 ,28 y 0,70 para estos aislados.

Claims (19)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que es un tienolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en
un método para tratar un sujeto que padece o es susceptible de padecer una infección bacteriana, comprendiendo el
método inhibir la metalo-beta-lactamasa bacteriana:
Figure imgf000021_0001
Fórmula(I)
en donde
R1 es H o un grupo alquilo C1 a C4;
R3 es H, halógeno, alquilo C1 a C4, OH, alcoxi C1 a C4, alquenilo C2 a el Anillo A1 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a
4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 , CN, NO2, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 ,
y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, no están sustituidos o están
sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi
C1 a C4;
n es 0 o 1 ;
el Anillo A2 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está no sustituido o sustituido con 1 a
4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 , CN, NO2, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 ,
y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, no están sustituidos o están
sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi
C1 a C4; y
R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.
2. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1,
(a) en donde R1 es hidrógeno, metilo o etilo; y/o
(b) en donde R3 es hidrógeno; y/o
(c) en donde el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o
benzotiofenilo, estando A1 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, NO2,
metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4, y -S(O)R4 , en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2, preferentemente en
donde el anillo A1 lleva al menos dos sustituyentes en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato; y/o
(d) en donde el Anillo A2 es fenilo o piridilo, estando A2 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no
sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NH2, metilo o metoxi.
3. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde
R1 es hidrógeno, metilo o etilo;
R3 es hidrógeno, halógeno, metilo, etilo, OH, metoxi o etoxi;
el Anillo A1 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre
N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A1 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no
sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 ,
alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4;
el Anillo A2 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre
N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A2 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no
sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R5 , -S(O)R4 ,
alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4; y
R4 y R5 representan cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo.
4. El compuesto para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el compuesto
que es un tioenolato de fórmula (IA) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000022_0001
Fórmula (IA)
en donde
el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolMo, benzofuranilo o benzotiofenilo, preferentemente un anillo de fenilo, estando A1 no sustituido o sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, NO2, metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4, y -S(O)R4, en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o piridilo, estando A2 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NH2, metilo o metoxi.
5. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. Una combinación de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un compuesto que es una rodanina de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
Figure imgf000022_0002
Fórmula (II)
en donde A1, A2, n y R3 son como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5;
L es un enlazador de fórmula -(Alk1)p-(Het)q-(Alk2)r-, en donde Aik1 y Aik2 representan independientemente alquileno C1 a C4 y Het representa -O-, -S-, -NR4-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NR4-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1;
el Anillo B es un grupo carbocíclico de 5 a 6 miembros o heterocíclico de 5 a 10 miembros, que está no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5, -C(O)OR4 y entre grupos alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4; y R4 y R5 representan cada uno independientemente H o alquilo C1 a C4.
7. La combinación de acuerdo con la reivindicación 6,
(a) en donde L es un enlazador de fórmula -(CH2)p-(Het)q-(CH2)r-, en donde Het representa -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NH-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1; y/o
(b) en donde q es 1 y p y r son cada uno independientemente 0 o 1; y/o
(c) en donde el Anillo B es fenilo, ciclohexilo o un grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros que está no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -Nr 4R5, alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4; en donde R4 y R5 representan cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo.
8. La combinación de acuerdo con la reivindicación 6, en donde en la fórmula (II):
R3 es hidrógeno, halógeno, metilo, etilo, OH, metoxi o etoxi;
el Anillo A1 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A1 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5, -CF3, -C(O)R4, -C(O)OR4, -C(O)NR4R5, -S(O)R4, alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o un grupo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O y S, en donde el anillo de arilo o heteroarilo A2 está no sustituido o sustituido con 1 a 4 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, NO2, -NR4R5 , -CF3, -C(O)R4 , -C(O)OR4 , -C(O)NR4R3 , -S(O)R4 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4;
L es un enlazador de fórmula -(Alk1)p-(Het)q-(Alk2)r-, en donde Aik1 y Aik2 representan independientemente metileno o etileno, Het representa -O-, -S-, -NR4-, -C(O)-, -C(O)O- o -C(O)NR4-, y p, q y r son cada uno independientemente 0 o 1;
el Anillo B es fenilo, ciclohexilo o un grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros que está no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 , alquilo C1 a C4, alcoxi C1 a C4 y alquenilo C2 a C4; y
R4 y R5 representan cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo.
9. La combinación de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el compuesto de fórmula (II) es una rodanina de fórmula (IIA) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
Figure imgf000023_0001
Fórmula (IIA)
en donde
el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o benzotiofenilo, estando A1 no sustituido o sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes seleccionados entre halógeno, NO2, metilo, metoxi, -CO2R4, -COR4 , y -S(O)R4 , en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2;
n es 0 o 1;
el Anillo A2 es fenilo o piridilo, estando A2 no sustituido o sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NH2, metilo o metoxi, en donde A2 está preferentemente no sustituido; L es un enlazador de fórmula -(CH2)p-(Het)-(CH2)r-, en donde Het representa -O-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O- o -c (o )NH-, y p y r son cada uno independientemente 0 o 1; preferentemente L es -CH2-CO-NH-; y
B es ciclohexilo, piperidinilo, piperazinilo o morfolinilo, en donde B está no sustituido o sustituido con 1 o 2 sustituyentes no sustituidos seleccionados entre halógeno, OH, -NH2, metilo y metoxi.
10. La combinación de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) es ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenil)acrílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el compuesto que es una rodanina de fórmula (II) es (Z)-N-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(4-oxo-2-tioxo-5-(2,3,6-triclorobencilideno)tiazolidin-3-il)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
11. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, para su uso en un método de tratamiento de un sujeto que padece o es susceptible de padecer una infección bacteriana, comprendiendo el método inhibir la metalo-beta-lactamasa bacteriana en dicho sujeto.
12. Un compuesto o combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para su uso en un método de tratamiento de un sujeto que padece o es susceptible de padecer una infección bacteriana, comprendiendo el método potenciar la actividad de un agente antibiótico p-lactámico.
13. Un compuesto o combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para su uso en combinación con un agente antibiótico p-lactámico para la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana, en donde el agente antibiótico p-lactámico se selecciona opcionalmente entre un carbapenem, una ureidopenicilina, un carbacefem y una cefalosporina, preferentemente el agente antibiótico p-lactámico se selecciona entre temocilina, piperacilina, cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona, meropenem, faropenem, imipenem, loracarbef, ceftobiprol y ceftarolina.
14. Una combinación antibiótica que comprende un compuesto o combinación como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y un agente antibiótico p-lactámico, en donde el agente antibiótico p-lactámico se selecciona opcionalmente entre un carbapenem, una ureidopenicilina, un carbacefem y una cefalosporina, preferentemente el agente antibiótico p-lactámico se selecciona entre temocilina, piperacilina, cefpodoxima, ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona, meropenem, faropenem, imipenem, loracarbef, ceftobiprol y ceftarolina.
15. La combinación antibiótica de acuerdo con la reivindicación 14, para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección bacteriana.
16. El compuesto, combinación o combinación antibiótica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, en donde la infección bacteriana está provocada por E. coli o K. Pneumoniae.
17. Un compuesto que es un tioenolato de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000024_0001
Fórmula(I)
en donde R1, R3 , R4 , R5 , n y el Anillo A2 son como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; y el Anillo A1 es un grupo arilo C6 a C10 o heteroarilo de 5 a 10 miembros que está sustituido con 2, 3 o 4 sustituyentes, en donde dos de los sustituyentes están en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato, y en donde los sustituyentes se seleccionan entre halógeno, OH, -NR4R5 , CN, NO2, -C(O)R4 , -C(O)OR 4 -C(O)NR4R 5 , S(O)R4 , y entre grupos alquilo C1 a C4, y alquenilo C2 a C4 que, a su vez, están no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 sustituyentes no sustituidos adicionales seleccionados entre halógeno, OH, -NR4R5 y alcoxi C1 a C4.
18. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el Anillo A1 es fenilo, furanilo, tiofenilo, pirrolilo, piridilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo o benzotiofenilo, estando A1 sustituido con 2 o 3 sustituyentes, en donde dos de los sustituyentes están en las posiciones diorto en relación con el grupo tioenolato, y en donde los sustituyentes se seleccionan entre halógeno, NO2, metilo, -CO2R4, -COR4 , y -S(O)R4 , en donde R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C2; preferentemente los sustituyentes en el Anillo A1 se seleccionan entre átomos de halógeno.
19. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, que es ácido (Z)-2-mercapto-3-(2,3,6-triclorofenilo)acrílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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