ES2867049T3 - Composiciones de vacuna que comprenden un virus de Zika mutante atenuado - Google Patents

Abstract

Un virus de Zika mutante atenuado que comprende una proteína E que consiste en la secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 98 % de identidad con SEQ ID NO:1 en la que el residuo de isoleucina (I) en la posición 152 se sustituye por un residuo de treonina (T), el residuo de treonina (T) en la posición 156 se sustituye por un residuo de isoleucina (I) y el residuo de histidina (H) en la posición 158 se sustituye por un residuo de tirosina (Y).

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de vacuna que comprenden un virus de Zika muíante atenuado

Campo de la invención:

La presente invención se refiere a composiciones de vacuna que comprenden un virus de Zika muíante atenuado.

Antecedentes de la invención:

El virus de Zika es un flavivirus transmitido por mosquitos que se identificó por primera vez en Uganda en 1947 en monos a través de una red que monitorizaba la fiebre amarilla. Posteriormente se identificó en seres humanos en 1952 en Uganda y la República Unida de Tanzania. Se han registrado brotes de la enfermedad por el virus de Zika en África, América, Asia y el Pacífico. Desde los años 60 hasta los 80, se encontraron infecciones en humanos en África y Asia, típicamente acompañadas de una enfermedad leve. El primer gran brote de enfermedad causado por la infección por el virus de Zika se informó en la isla de Yap (Estados Federados de Micronesia) en 2007. En julio de 2015, Brasil informó de una asociación entre la infección por el virus de Zika y el síndrome de Guillain-Barré. En octubre de 2015, Brasil informó de una asociación entre la infección por el virus de Zika y la microcefalia. El virus de Zika se transmite a las personas principalmente a través de la picadura de un mosquito infectado del género Aedes, principalmente Aedes aegypti, en regiones tropicales. Los mosquitos Aedes pican normalmente durante el día, alcanzando su punto máximo durante las primeras horas de la mañana y al final de la tarde/noche. Este es el mismo mosquito que transmite el virus de Zika, la chikungunya y la fiebre amarilla. También es posible la transmisión sexual del virus de Zika. Se están investigando otros modos de transmisión, tales como las transfusiones de sangre. La enfermedad por el virus de Zika es normalmente leve y no requiere un tratamiento específico. Las personas enfermas por el virus de Zika deben descansar mucho, beber suficientes líquidos y tratar el dolor y la fiebre con medicamentos comunes. Si los síntomas empeoran, deben buscar atención y asesoramiento médico. Actualmente no existe ninguna vacuna disponible. Los expertos de la OMS han sugerido que la prioridad debería ser desarrollar vacunas atenuadas y otras vacunas no vivas, que sean seguras de su uso en mujeres embarazadas y en edad fértil.

Sumario de la invención:

La presente invención se refiere a composiciones de vacuna que comprenden un virus de Zika mutante atenuado. En particular, la presente invención se define por las reivindicaciones.

Descripción detallada de la invención:

La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.

La presente invención se refiere a un virus de Zika mutante atenuado que proporciona las ventajas de ser segura, en particular para la vacunación de mujeres embarazadas. En particular, los autores de la invención han introducido mutaciones en posiciones muy específicas que anulan el sitio de N-glucosilación en la proteína E de la cepa epidémica, lo que evitará la generación de autoanticuerpos responsables del síndrome de Guillain-Barré. Además, los autores de la invención han producido mutaciones adicionales del virus que dan como resultado una reducción drástica de los efectos citopáticos sin afectar la capacidad de producir altos valores de virus.

En consecuencia, el primer objetivo de la presente divulgación se refiere a un virus de Zika mutante atenuado que comprende una proteína E de la cepa epidémica en la que al menos un residuo de aminoácido en la posición 152, 156 o 158 está mutado.

Como se usa en el presente documento, el término "atenuado" tiene su significado general en la técnica y, en particular, se refiere a un virus que se vuelve menos virulento. En particular, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención no es no patógeno. Como se usa en el presente documento, el término "no patógeno" se usa en el presente documento para significar no virulento o incapaz de inducir una enfermedad, en particular el síndrome de Guillain-Barré.

Como se usa en el presente documento, el término "virus de Zika" tiene su significado general en la técnica. El virus de Zika es una molécula de ARN monocatenario de sentido positivo de 10794 bases de longitud con dos regiones flanqueantes de regiones no codificantes conocidas como NCR 5' y NCR 3'. El marco de lectura abierto del virus de Zika codifica una poliproteína que posteriormente se escinde en proteínas de cápside (C), membrana precursora (prM), envoltura (E) y no estructurales (NS). La proteína E compone la mayor parte de la superficie del virión y está involucrada en aspectos de la replicación tales como la unión de la célula huésped y la fusión de la membrana. Las proteínas NS1, NS3 y NS5 son proteínas grandes altamente conservadas, mientras que las proteínas NS2A, NS2B, NS4A y NS4B son proteínas hidrófobas más pequeñas. En la NCR 3' se localizan 428 nucleótidos que pueden desempeñar un papel en la traducción, el empaquetamiento de ARN, la ciclación, la estabilización del genoma y el reconocimiento. La NCR 3' forma una estructura de bucle y la NCR 5' permite la traducción por medio de una caperuza nucleotídica metilada o una proteína ligada al genoma.

El término "cepa epidémica" se refiere a la cepa del virus de Zika responsable de las infecciones epidémicas. En particular, la cepa epidémica se caracteriza por tener una proteína E que tiene al menos un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:1. En algunos modos de realización, la cepa epidémica del virus de Zika se refiere a la cepa BeH819015 del virus de Zika (Genbank n.° KU365778).

En consecuencia, en algunos modos de realización, la presente divulgación se refiere a un virus de Zika mutante atenuado que comprende una proteína E que consiste en la secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 98 % de identidad con SEQ ID NO:1 en la que al menos un residuo de aminoácido en la posición 152, 156 o 158 está mutado.

De acuerdo con la invención, una primera secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 98 % de identidad con una segunda secuencia de aminoácidos significa que la primera secuencia tiene un 98, 99 o 100 % de identidad con la segunda secuencia de aminoácidos. La identidad de secuencia se mide con frecuencia en términos de porcentaje de identidad (o similitud u homología); cuanto mayor sea el porcentaje, más similares serán las dos secuencias. Los procedimientos de alineación de secuencias para comparación son bien conocidos en la técnica. Se describen diversos programas y algoritmos de alineación en: Smith y Waterman, Adv. Appl. Math., 2:482, 1981; Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol., 48:443, 1970; Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85:2444, 1988; Higgins y Sharp, Gene, 73:237-244, 1988; Higgins y Sharp, CABIOS, 5:151-153, 1989; Corpet et al., Nuc. Acids Res., 16:10881-10890, 1988; Huang et al., Comp. Appls Biosci., 8:155-165, 1992; y Pearson et al., Meth. Mol. Biol., 24:307-31, 1994). Altschul et al., Nat. Genet., 6:119-129, 1994, presenta una consideración detallada de los procedimientos de alineación de secuencias y cálculos de homología. A modo de ejemplo, las herramientas de alineación ALIGN (Myers y Miller, CABIOS 4:11-17, 1989) o LFASTA (Pearson y Lipman, 1988) se pueden usar para realizar comparaciones de secuencias (Internet Program® 1996, W. R. Pearson y la Universidad de Virginia, fasta20u63 versión 2.0u63, fecha de lanzamiento diciembre de 1996). ALIGN compara secuencias completas entre sí, mientras que LFASTA compara regiones de similitud local. Estas herramientas de alineación y sus respectivos tutoriales están disponibles en Internet en el sitio web de NCSA, por ejemplo. De forma alternativa, para comparaciones de secuencias de aminoácidos de más de aproximadamente 30 aminoácidos, se puede emplear la función de secuencias Blast 2 usando la matriz BLOSUM62 predeterminada establecida para parámetros predeterminados (coste de existencia de hueco de 11 y un coste de hueco por residuo de 1). Al alinear péptidos cortos (menos de alrededor de 30 aminoácidos), la alineación se debe realizar usando la función de secuencias Blast 2, empleando la matriz PAM30 establecida para parámetros predeterminados (penalizaciones de abertura de hueco de 9, de extensión de hueco de 1). El sistema de comparación de secuencias BLAST está disponible, por ejemplo, en el sitio web de NCBI; véase también Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990; Gish y States, Nature Genet., 3:266-272, 1993; Madden et al., Meth. Enzymol., 266:131-141, 1996; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-3402, 1997; y Zhang y Madden, Genome Res., 7:649-656, 1997.

Como se usa en el presente documento, el término "mutación" tiene su significado general en la técnica y se refiere a una sustitución, deleción o inserción. El término "sustitución" significa que se elimina un residuo de aminoácido específico en una posición específica y se inserta otro residuo de aminoácido en la misma posición. El término "deleción" significa que se elimina un residuo de aminoácido específico. El término "inserción" significa que se insertan uno o más residuos de aminoácidos antes o después de un residuo de aminoácido específico, más específicamente, que uno o más, preferentemente uno o varios, residuos de aminoácidos se unen a un grupo alfa-carboxilo o un grupo alfa-amino del residuo de aminoácido específico.

En algunos modos de realización, se sustituye el residuo de aminoácido en la posición 152, 156 o 158. En algunos modos de realización, el residuo de isoleucina (I) en la posición 152 se sustituye por un residuo de treonina (T). En algunos modos de realización, el residuo de treonina (T) en la posición 156 se sustituye por un residuo de isoleucina (I). En algunos modos de realización, el residuo de histidina (H) se sustituye por un residuo de tirosina (Y).

En algunos modos de realización, la proteína E comprende 2 mutaciones. En algunos modos de realización, la proteína comprende una secuencia de aminoácidos en la que el residuo de isoleucina (I) en la posición 152 se sustituye por un residuo de treonina (T) y el residuo de treonina (T) en la posición 156 se sustituye por un residuo de isoleucina (I). En algunos modos de realización, la proteína E comprende 3 mutaciones. En algunos modos de realización, la proteína E comprende una secuencia de aminoácidos en la que el residuo de isoleucina (I) en la posición 152 se sustituye por un residuo de treonina (T), el residuo de treonina (T) en la posición 156 se sustituye por un residuo de isoleucina (I) y el residuo de histidina (H) se sustituye por un residuo de tirosina (Y). En algunos modos de realización, la proteína E consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2.

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas estructurales C y prM de la cepa epidémica.

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas no estructurales de la cepa epidémica.

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas estructurales C y prM de la cepa epidémica y las proteínas no estructurales de la cepa epidémica. En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención se caracteriza por la secuencia genómica que codifica la poliproteína que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:3. En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención se caracteriza por la secuencia genómica representada por SEQ ID NO:4.

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas no estructurales de una cepa endémica. Como se usa en el presente documento, el término "cepa endémica" se refiere a una cepa de Zika originada en África. En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas no estructurales de la cepa MR766-NIID* del virus de Zika (Genbank n.° LC002520).

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención comprende las proteínas estructurales C y prM de la cepa epidémica y las proteínas no estructurales de la cepa MR766-NIID* del virus de Zika (Genbank n.° LC002520). En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención se caracteriza por la secuencia genómica que codifica la poliproteína que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:5. En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención se caracteriza por la secuencia genómica representada por SEQ ID NO:6.

Otro objetivo de la presente invención se refiere a una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el virus de Zika mutante atenuado de la presente invención.

En algunos modos de realización, la molécula de ácido aislada de la presente invención comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína E mutada de la presente invención. En algunos modos de realización, la molécula de ácido aislada de la presente invención comprende una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO:7. En algunos modos de realización, la molécula de ácido aislada de la presente invención comprende una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO:4. En algunos modos de realización, la molécula de ácido aislada de la presente invención comprende una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO:6.

La molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención es en particular adecuada para la producción del virus de Zika mutante atenuado de la presente invención mediante tecnología de ADN recombinante. Típicamente, la molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención se clona en vectores de expresión de proteínas estándar y se usa para infectar células huésped apropiadas. A continuación, las células huésped se cultivan, expresando por tanto el virus deseado, que se puede purificar en la medida deseada y formular en un producto de vacuna adecuado.

En consecuencia, otro objetivo de la presente invención se refiere a una célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico de la presente invención. La célula huésped es típicamente una línea celular adecuada para propagar el virus. Las líneas celulares adecuadas incluyen células de mamíferos, tales como células Vero, células AGMK, células BHK-21, células COS-1 o COS-7, células MDCK, células CV-1, células LLC-MK2, líneas celulares primarias tales como células fetales de pulmón de macaco de la India (FRhL-2), células BSC-1 y células MRC-5, o fibroblastos diploides humanos, así como células aviares, líneas celulares derivadas de embriones de pollo o pato, por ejemplo, células AGE1 y fibroblastos primarios de embriones de pollo, y líneas celulares de mosquitos, tales como C6/36. Los cultivos se alimentan con medio que puede soportar el crecimiento de las células. Las células huésped se mantienen en cultivo durante varios días hasta que se logra el valor de virus deseado. Opcionalmente, las células se mantienen en un sistema de perfusión continua del que se puede obtener virus de forma intermitente o continua durante el transcurso de varios días o más. En condiciones de cultivo no continuo, es deseable lograr un valor de virus de al menos aproximadamente 106 a 107 UFP/ml 3-7 días después de la infección. Para recuperar el virus, el virus se obtiene mediante procedimientos comunes conocidos en la técnica que incluyen centrifugación a baja velocidad o mediante filtración. Los procedimientos para concentrar dicho(s) virus están dentro del alcance de un experto en la técnica e incluyen, por ejemplo, ultrafiltración o precipitación con polietilenglicol (PEG). Los procedimientos para purificar virus son conocidos por un experto en la técnica e incluyen típicamente gradientes de sacarosa continuos o multietapa, purificación por cromatografía en columna usando columnas de exclusión por tamaño, intercambio iónico, adsorción o afinidad, o purificación por reparto en sistemas bifásicos o multifásicos de polímero, y cualquier combinación de los mismos. Los procedimientos para analizar las fracciones con virus incluyen análisis en placas de Petri, prueba de inhibición de la hemaglutinación (HA) y/o ensayos de antígenos tales como inmunoanálisis.

En algunos modos de realización, el virus de Zika mutante atenuado obtenido de la presente invención se vuelve inactivo. Como se usa en el presente documento, el término "inactivo" engloba un virus que se ha replicado, por ejemplo, in vitro, y a continuación se ha destruido usando medios químicos o físicos de modo que ya no se puede replicar. Por ejemplo, el virus vivo atenuado se puede inactivar usando agentes químicos tales como formaldehído, betapropiolactona (BPL) o peróxido de hidrógeno o usando radiación ultravioleta o usando una combinación de dos o más etapas de inactivación (que pueden ser iguales o diferentes, por ejemplo, formaldehído y BPL, formaldehído y radiación UV, BPL y radiación UV, peróxido de hidrógeno y BPL, peróxido de hidrógeno y radiación UV, etc., en cualquier combinación).

Otro objetivo de la presente invención se refiere a una composición de vacuna que comprende el virus de Zika atenuado de la presente invención.

Como se usa en el presente documento, el término "composición de vacuna" es una composición adecuada para su administración a un ser humano que puede desencadenar una respuesta inmunitaria específica contra un patógeno, tal como el virus de Zika.

La composición de vacuna de la presente invención comprende una cantidad de virus de Zika vivo atenuado de la presente invención o una cantidad de virus de Zika atenuado inactivo de la presente invención.

La composición de vacuna de la presente invención también puede incluir uno o más componentes adicionales que pueden desencadenar o potenciar una respuesta inmunitaria, tal como un excipiente, vehículo y/o adyuvante. Un "adyuvante" es un agente que potencia la producción de una respuesta inmunitaria específica de antígeno en comparación con la administración del antígeno en ausencia del agente. Los adyuvantes comunes incluyen adyuvantes que contienen aluminio que incluyen una suspensión de minerales (o sales minerales, tales como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, hidroxifosfato de aluminio) sobre las que se adsorbe el antígeno. En el contexto de la presente divulgación, los adyuvantes son adyuvantes sin aluminio (alumbre), que se formulan en ausencia de cualquiera de dichas sales de aluminio. Los adyuvantes sin alumbre incluyen emulsiones de aceite y agua, tales como agua en aceite y aceite en agua (y variantes de las mismas, incluyendo emulsiones dobles y emulsiones reversibles), liposacáridos, lipopolisacáridos, ácidos nucleicos inmunoestimuladores (tales como oligonucleótidos CpG), liposomas, agonistas de receptores de tipo Toll (en particular, agonistas de TLR2, TLR4, TLR7/8 y TLR9) y diversas combinaciones de dichos componentes. Los vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables son bien conocidos y los expertos en la técnica pueden seleccionarlos. Por ejemplo, el vehículo o excipiente puede incluir favorablemente un tampón. Opcionalmente, el vehículo o excipiente también contiene al menos un componente que estabiliza la solubilidad y/o estabilidad. Los ejemplos de agentes solubilizantes/estabilizantes incluyen detergentes, por ejemplo, lauroilsarcosina y/o monooleato de sorbitán polioxietilenado. Agentes solubilizantes/estabilizantes alternativos incluyen arginina y polioles formadores de cristales (tales como sacarosa, trehalosa y similares). Se conocen en la técnica numerosos vehículos farmacéuticamente aceptables y/o excipientes farmacéuticamente aceptables y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, por E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 5.a edición (1975). En consecuencia, los expertos en la técnica pueden seleccionar excipientes y vehículos adecuados para producir una formulación adecuada para la administración a un sujeto mediante una vía de administración seleccionada. Los excipientes adecuados incluyen, sin limitación: glicerol, polietilenglicol (PEG), sorbitol, trehalosa, sal sódica de N-lauroilsarcosina, L-prolina, sulfobetaína no detergente, clorhidrato de guanidina, urea, óxido de trimetilamina, KCI, sales de Cat2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ y otras sales relacionadas con cationes divalentes, ditiotreitol, ditioeritrol y p-mercaptoetanol. Otros excipientes pueden ser detergentes (incluyendo: monooleato de sorbitán polioxietilenado, Triton X-00, NP-40, Empigen BB, octilglucósido, lauroilmaltósido, Zwittergent 3-08, Zwittergent 3-0, Zwittergent 3-2, Zwittergent 3-4, Zwittergent 3-6, CHAPS, desoxicolato de sodio, dodecilsulfato de sodio, bromuro de cetiltrimetilamonio). La preparación de composiciones de vacuna, incluyendo aquellas para la administración a sujetos humanos, se describe en general en Pharmaceutical Biotechnology, vol. 61 Vaccine Design-the subunit and adjuvant approach, editado por Powell y Newman, Plenum Press, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, editado por Voller et al., University Park Press, Baltimore, Md., EE. UU., 1978. La encapsulación dentro de liposomas se describe, por ejemplo, en Fullerton, patente de EE. UU. n.° 4.235.877. La conjugación de proteínas con macromoléculas se divulga, por ejemplo, por Likhite, patente de EE. UU. n.° 4.372.945 y por Armor et al., patente de EE. UU. n.° 4.474.757. Típicamente, la cantidad de antígeno en cada dosis de la composición de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin efectos secundarios adversos significativos en el sujeto típico. En este contexto, inmunoprotector no significa necesariamente que proteja completamente contra la infección; significa protección contra síntomas o enfermedades, especialmente enfermedades graves asociadas con el virus. La cantidad de antígeno puede variar dependiendo de qué inmunógeno específico se emplee. En general, se espera que cada dosis humana comprenderá 0,05-100 pg de virus inactivado, tal como de aproximadamente 0,1 pg (por ejemplo, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 o 0,5 pg) a aproximadamente 50 pg, por ejemplo, de aproximadamente 0,5 pg a aproximadamente 30 pg, tal como aproximadamente 1 pg, aproximadamente 2 pg, aproximadamente 3 pg, aproximadamente 4 pg, aproximadamente 5 pg, aproximadamente 10 pg, aproximadamente 15 pg, aproximadamente 20 pg o aproximadamente 25 pg, de cada cepa de virus de Zika inactivado. Típicamente, la composición de vacuna se prepara como inyectable, ya sea como solución o suspensión líquida; también se puede preparar una forma sólida adecuada para solución o suspensión en un líquido antes de la inyección.

Otro objetivo de la presente invención se refiere a un procedimiento para desencadenar una respuesta inmunitaria contra el virus de Zika en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición de vacuna de la presente invención.

En algunos modos de realización, la composición de vacuna de la presente invención se administra a un ser humano adulto o lactante. En algunos modos de realización, la composición de vacuna de la presente invención se administra a una mujer embarazada. En algunos modos de realización, la composición de vacuna de la presente invención se administra a una mujer en edad fértil. En algunos modos de realización, el sujeto estuvo expuesto previamente al virus de Zika.

En algunos modos de realización, la composición de vacuna de la presente invención es en particular adecuada para la prevención, mejora o tratamiento de la infección por el virus de Zika y/o la enfermedad inducida por el virus de Zika.

Aunque la composición de vacuna se puede administrar mediante una variedad de vías diferentes, lo más común es que la composición de vacuna se administre mediante una vía de administración intramuscular, subcutánea o intradérmica. En general, la composición de vacuna se puede administrar por vía subcutánea, intradérmica o intramuscular en una dosis eficaz para la producción de anticuerpos neutralizantes y protección. Las vacunas se administran de manera compatible con la formulación de dosificación y en una cantidad tal que sea profiláctica y/o terapéuticamente eficaz. La cantidad que hay que administrar, que en general está en el intervalo de 0,05 a 100 pg de virus por dosis, depende del sujeto que se va a tratar, la capacidad del sistema inmunitario del sujeto para sintetizar anticuerpos y el grado de protección deseado. Las cantidades precisas de la vacuna que se va a administrar pueden depender del criterio del médico y pueden ser peculiares para cada sujeto.

La composición de vacuna se puede administrar en un programa de dosis única, o preferentemente en un programa de dosis múltiple en el que un ciclo primario de vacunación puede ser de 1-10 dosis separadas, seguido de otras dosis administradas a intervalos de tiempo posteriores requeridos para mantener o reforzar la respuesta inmunitaria, por ejemplo, a los 1-4 meses para una segunda dosis, y si es necesario, dosis posterior(es) después de varios meses o años. La pauta posológica también estará determinada, al menos en parte, por la necesidad del sujeto y dependerá del criterio del médico. Los ejemplos de programas de inmunización adecuados incluyen: una primera dosis, seguida de una segunda dosis entre 7 días y 6 meses, y una tercera dosis opcional entre 1 mes y dos años después de la inmunización inicial, u otros programas suficientes para desencadenar la obtención de los valores de anticuerpos neutralizantes de virus esperados para conferir inmunidad protectora. Cabe esperar razonablemente que la generación de inmunidad protectora contra el virus de Zika con la composición de vacuna se alcance después de un ciclo primario de inmunización que consista en 1 a 3 inoculaciones. Estas se podrían complementar con vacunas de refuerzo a intervalos (por ejemplo, cada dos años) diseñados para mantener un nivel satisfactorio de inmunidad protectora.

La invención se ilustrará además por las siguientes figuras y ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos y figuras no se deben interpretar de ninguna manera como limitantes del alcance de la presente invención.

Figuras:

La figura 1 muestra los diferentes clones del virus de Zika.

La figura 2 muestra los detalles del clon ZIKALIVax

La figura 3: Procesamiento de la proteína E en células Vero infectadas con los clones A a F de ZIKV. Ensayo de inmunotransferencia en extractos celulares de células Vero infectadas con ZIKV usando mAb 4G2 antiflavivirus E. (SDS-PAGE al 4-12 % en condiciones no reductoras).

La figura 4: CPE en células Vero infectadas durante 72 h con los clones A a F de ZIKV.

La figura 5: Liberación de LDH de células Vero infectadas con los clones A a F de ZIKV.

La figura 6: Infección por virus de descendencia en células Vero infectadas con los clones A a F de ZIKV. Ejemplo:

Se generaron diferentes clones (A-F) del virus de Zika (figura 1). El clon F se denomina "ZIKALIVax" y se detalla en la figura 2.

Las mutaciones introducidas en las posiciones 152, 156 y 158 anulan el sitio de N-glucosilación en la proteína E (figura 3).

Se sometieron a prueba los efectos citopáticos de los diferentes clones. En resumen, las células Vero se infectaron con los diferentes clones a una MOI de 0,1 UFP por célula y se observaron los efectos citopáticos 72 h después de la infección mediante microscopía óptica. Como se muestra en la figura 4, ZIKALIVax no es citopático al contrario de lo que se observa con las tinciones epidémicas y endémicas del virus. Los resultados se confirmaron en un ensayo de liberación de LDH. En resumen, las células Vero se infectaron con los diferentes clones a una MOI de 0,1 UFP/célula y se determinó la actividad LDH en los sobrenadantes celulares usando un kit de ensayo de cuantificación colorimétrica de LDH. Los resultados se representan en la figura 5.

A continuación, se determinó la producción de los diferentes clones en un ensayo de formación de placas. En resumen, se sembraron células Vero (105/pocillo) en placas de cultivo de 48 pocillos. Se prepararon diluciones en serie 1:10 de muestras de virus por duplicado en medio de cultivo complementado con FBS al 5 % inactivado por calor y se añadieron a las células 0,1 ml de cada dilución. Las placas se incubaron durante 2 h a 37 °C. Se añadieron a cada pocillo 0,1 ml de medio de cultivo complementado con carboximetilcelulosa (CMC) al 0,8 %, seguido de una incubación a 37 °C durante 4 días. Se eliminó la capa de CMC y las células se fijaron primero con PFA al 3,7 % durante 10 min y a continuación se tiñeron con violeta cristal al 0,5 % en etanol al 20 %. Se realizó un recuento de las placas y los valores se expresaron como unidades formadoras de placas por ml (UFP.ml-1). Como se muestra en la tabla 1, la producción de descendencia de ZIKALIVax se incrementa significativamente en comparación con la producción observada con el virus epidémico y endémico. La figura 6 muestra la infección por el virus de descendencia en células Vero infectadas con los clones A a F de ZIKV.

Tabla 1: Producción de descendencia de ZIKV en células Vero (pase 2) (log UFP.ml'1) de los diferentes clones

En conclusión, ZIKALIVax se puede producir a un nivel muy alto sin ser citopático. Además, la ausencia de N-glucosilación evitará la generación de autoanticuerpos responsables del síndrome de Guillain-Barré. Por tanto, este clon representa un muy buen candidato para la producción de una vacuna atenuada.

Secuencias:

SEQ ID NO:1 Glicoproteína E de ZIKV cepa BeH819015 (n.° acceso Genbank KU365778.1)

IRCIGVSNRDFVEGM SGGTW VDVVLEHGGCVTVMAQDKPTVDIELVT

TTVSNM AEVRSYCYEASISDM ASDSRCPTQGEAYLDKQSDTQYVCKRTLVDR GW GNGCGLFGKGSLVTCAKFACSKKMTGKSIQPENLEYRIMLSVHGSQHSG MIVNDTGHETDENRAKVEITPNSPRAEATLGGFGSLGLDCEPRTGLDFSDLYY LTMNNKHWLVHKEWFHDTPLPWHAGADTGTPHWNNKEALVEFKDAHAKRQ TVVVLGSQEGAVHTALAGALEAEM DGAKGRLSSGHLKCRLKMDKLRLKGVS Y SLCT AAFTFTKIP AETLH GTVTVEV Q Y AGTD GPCKVP AQM A VDMQTLT P VG RLITANPVITESTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGVGEKKITHHWHRSGSTIGKAF EATVRG AKRM A VLGD T A W DF GS V GGALN S LGKGTFIQTFG AAFKSLF GGM S W FSQ1LIGTLLMWLGLNTKNGSISLMCLALGGVL1FLSTAVSA

SEQ ID NO:2 Las secuencias E de muíante [E-I152T, E-T156I, E-H158Y] de ZIKVBR15-MC

IRCIGVSNRDFVEGM SGGTW VDVVLEHGGCVTVMAQDKPTVDIELVT

TTVSNM AEVRSYCYEASISDM ASDSRCPTQGEAYLDKQSDTQYVCKRTLVDR GWGNGCGLFGKGSLVTCAKFACSKKMTGKSTQPENLEYRTMLSVHGSQHSG MTVNDJGYETDENRAKVEITPNSPRAEATLGGFGSLGLDCEPRTGLDFSDLYY LTMNNKHW LVHKEW FHDIPLPW HAGADTGTPHW NNKEALVEFKDAHAKRQ TVVVLGSQEGAVHTALAGALEAEM DGAKGRLSSGHLKCRLKMDKLRLKGVS YSLCTAAFTFTKTPAETLHGTVTVEVQYAGTDGPCKVPAQMAVDMQTLTPVG RLITANPVITESTENSKMMLELDPPFGDSYIVIGVGEKKITHHWHRSGSTIGKAF EATVRGAKRMAVLGDTAW DFGSVGGALNSLGKGIHQIFGAAFKSLFGGMSW FSQ1LIGTLLMWLGLNTKNGS1SLMCLALGGVLIFLSTAVSA

SEQ ID NO: 3 Secuencia poliproteínica de mutante ZIKVBR15-MC quimérico [E-I152T, E-T156I, E-H158Y] (3,423 aa)

MKN PKKKS GGF RIVNMLKRGV AR V S PF GGLKRLP AGLLLGHGPIRM V

LAILAFLRFTAIKPSLGLINRWGSVGKKEAMEIIKKFKKDLAAMLRIINARKEK KRRGADTSVGTVGLLLTTAMAAEVTRRGSAYYMYLDRNDAGEAISFPTTLGM NKCYIQIMDLGHMCDATMSYECPMLDEGVEPDDVDCW CNTTSTW VVYGTC HHKKGEARRSRRAVTLPSHSTRKLQTRSQTWLESREYTKHLTRVENWIFRNPG FALAAAAIAW LLGSSTSQRVIYLVM ILLIAPA YSIRCIGVSNRDFVEGMSGGTW VDVVLEHGGCVTVM AQDKPTVDIELVTTTVSNM AEVRSYCYEASISDM ASDS RCPTQGEAYLDKQSDTQYVCKRTLVDRGWGNGCGLFGKGSLVTCAKFACSK KMTGKSIQPENLEYRIMLSVHGSQHSGMTVNDIGYETDENRAKVEITPNSPRA EATLGGFGSLGLDCEPRTGLDFSDLYYLTMNNKHWLVHKEWFHDIPLPWHA GADTGTPHW NNKEALVEFKDAHAKRQTVVVLGSQEGAVHTALAGALEAEM DGAKGRLS SGFILKCRLKMDKLRLKGV S YSLCT AAFTFTKIP AETLHGTVT VE VQYAGTDGPCKVPAQMAVDMQTLTPVGRLITANPVITESTENSKMMLELDPP FGDSYTVIGVGEKKTTHHWHRSGSTTGKAFEATVRGAKRMAVLGDTAWDFGS VGGALNSLGKGIHQIFGAAFKSLFGGMSWFSQILIGTLLMWLGLNTKNGSISL MCLALGGVLIFLSTAVSADVGCSVDFSKKETRCGTGVFVYNDVEAW RDRYK YHPDSPRREAAAVKQAW EDGICGISSVSRMENIMW RSVEGELNAILEENGVQ LTVVVGSVKNPMW RGPQRLPVPVNELPHGW KAW GKSYFVRAAKTNNSFVV DGDTLKECPLKHRAW NSFLVEDHGFGVFHTSVW LKVREDYSLECDPAVIGTA VKGKEAVHSDLGYWIESEKNDTWRLKRAHLIEMKTCEWPKSHTLWTDGIEES DLI1PKSLAGPLSHHNTREGYRTQMKGPWHSEELEIRFEECPGTKVHVEETCGT RGPSLRSTTASGRVIEEWCCRECTMPPLSFRAKDGCWYGMETRPRKEPESNLV RSMVTAGSTDHMDHFSLGVLVILLMVQEGLKKRMTTK11ISTSMAVLVAMILG GFSMSDLAKLAILMGATFAEMNTGGDVAHLALTAAFKVRPALLVSFIFRANW TPRESMLLALASCLLQTAISALEGDLMVLINGFALAW LAIRAMVVPRTDNITL AILAALTPLARGTLLVAWRAGLATCGGFMLLSLKGKGSVKKNLPFVMALGLT AVRL VDPINV V G LLLLTRS G KRS WPP S EVLT AVGLIC AL AG GF AKADIEM AGP MAAVGLLIVSYVVSGKSVDM YIERAGDITW EKDAEVTGNSPREDVALDESGD FSLVEDDGPPMREIILKVVLMTICGMNPIAIPFAAGAW YVYVKTGKRSGALW DVPAPKEVKKGETTDGVYRVMTRRLLGSTQVGVGVMQEGVFHTMWHVTKG SALRSGEGRLDPYW GD VKQD L V S YCGP WKLD AA WDGH SEVQLLAVPPGER ARNIQTLPGIFK.TKDGDIGAVALDYPAGTSGSPILDK.CGRVIGLYGNGVVIKNG SYVSAITQGRREEETPVECFEPSMLKKKQLTVLDLHPGAGKTRRVLPEIVREAI

K.TRLRTVILAPTRVVAAEMEEALRGLPVRYMTTAVNVTHSGTEIVDLMCHAT FTSRLLQPIRVPNYNLYIMDEAHFTDPSSIAARGYISTRVEMGEAAAIFMTATPP GTRDAFPDSNSPIMDTEVEVPERAW SSGFDW VTDHSGKTVW FVPSVRNGNEI AACLT KAG BCRVIQLS RKTFETEF QKT BCHQ E WDF V VTTDISEMG AN FKADRVI DSRRCLKPVTLDGERVILAGPMPVTHASAAQRRGRIGRNPNKPGDEYLYGGGC AETDEDHAHWLEARMLLDNIYLQDGLIASLYRPEADKVAAIEGEFKLRTEQR KTF V ELMKRGD LP V WLA Y Q V AS AGÍTYT DRRW C FD GTTNN TiM ED S VP AE V WTRHGEKRVLKPRW MDARVCSDHAALKSFKEFAAGKRGAAFGVMEALGFL PGHMTERFQEAIDNLAVLMRAETGSRPYKAAAAQLPETLET1MLLGLLGTVSL GIFFVLMRNKGIGKMGFGMVTLGASAWLMWLSEIEPAR1ACVLIVVFLLLVVL IPEPEKQRSPQDNQMAIIIMVAVGLLGLITANELGWLERTKSDLSHLMGRREE GATTGFSMDIDLRPASAWATYAALTTFITPAVQHAVTTSYNNYSLMAMATQA GVLFGMGKGMPFYAWDFGVPLLMTGCYSQLTPLTLIVAIILLVAHYMYLIPGL QAAAARAAQKRFAAGIM KNPVVDGIVVTDIDTM F1DPQVEKKM GQVLLIAV AVSSAILSRTAW GW GEAGALITAATSTLW EGSPNKYW NSSTATSLCNIFRGSY LAGASLIYFVTRNAGLVKRRGGGTGETLGEKW KARLNQMSALEFYSYKKSGI TEVCREEARRALKDGVATGGHAVSRGSAKLRWLVERGYLQPYGKVTDLGCG RGGW SYYAATIRKVQEVKGYTKGGPGHEEPVLVQSYGW NIVRFKSGVDVFH MAAEPCDTLLCDIGESSSSPEVEEARTLRVLSMVGDW LEKRPGAFCIKVLCPY TSTMMETLERLQRR Y GGGL VRVPLSRN STFIEM YW VSG AKSNTIKS V STT S QL LLGRMDGPRRPVKYEEDVNLGSGTRAVVSCAEAPNMKIIGNRIERIRSEHAET W FFDENHPYRTW AYHGSYEAPTQGSASSLTNGVVRLLSKPW DVVTGVTGIAM TDTTPYGQQRVFKEKVDTRVPDPQEGTRQVMSMVSSW FW KELGKHKRPRVC TKEEFINKVRSNAALGAIFEEEKEW KTAVEAVNDPRFW ALVDKEREHHLRGE CQSCVYNMMGKREKKQGEFGKAKGSRAIWYMWLGARFLEFEALGFLNEDH WMGRENSGGGVEGLGLQRLGYVLEEMSRIPGGRMYADDTAGWDTRTSRFDL ENEALTTNQMEKGHRALALAIIKYTYQNKWKVLRPAEKGKTVMDnSRQDQ RGSGQVVTYALNTFTNLVVQF1RNMEAEEVLEMQDLW FLRRSEKVTNW LQS NGW DRLKRMAVSGDDCVVKP1DDRFAHAFRFLNDMGKVRKDFQEW KPSTG W DNWEEVPFCSHHFNKLHLKDGRSIVVPCRHQDELIGRARVSPGAGWS1RET ACLAKSYAQMW QLLYFHRRDLRLMANAICSSVPVDW VPTGRTTW SIHGKGE WMTTEDMLVVWNRVWIEENDHMEDKTPVTKWTDIPYLGKREDLWCGSLIG HRPRTTWAENIKJNTVNMVRRIIGDEEKYMDYLSTQVRYLGEEGSTPGVL*

SEQ ID NO:4 Secuencia genómica de muíante de ZIKVBR15-MC quimérico [E-I152T, E-T156I, E-H158Y] (10,807 nt)

AGTTGTTGATCT GT GT G AGTC AGACT GCG AC AGTT CG AGTCT G AAG

CGAGAGCTAACAACAGTATCAACAGGTTTAATTTGGATTTGGAAACGAGA GTTTCTGGTCATGAAAAACCCAAAAAAGAAATCCGGAGGATTCCGGATTG TCAATATGCTAAAACGCGGAGTAGCCCGTGTGAGCCCCFTTGGGGGCTTGA AGAGGCTGCCAGCCGGACTTCTGCTGGGTCATGGGCCCATCAGGATGGTCT T GGCGATT CTAGCCTTTTT G AGATT CAC GGC AAT CAAGC C AT C AC'TGGGT C TCATCAATAGATGGGGTTCAGTTGGGAAAAAAGAGGCTATGGAAATAATA AAGAAGTTCAAGAAAGATCTGGCTGCCATGCTGAGAATAATCAATGCTAG GAAGGAGAAGAAGAGACGAGGCGCAGATACTAGTGTCGGAATTGTTGGCC TCCTGCTGACCACAGCTATGGCAGCGGAGGTCACTAGACGTGGGAGTGCA TACTATATGTACTTGGACAGAAACGATGCTGGGGAGGCCATATCTTTTCCA ACCACATT GGGGATG AAT AAGT GTT AT ATACA GATCATGGATCTT GGACAC ATGTGTGATGCCACCATGAGCTATGAATGCCCTATGCTGGATGAGGGGGT GGAACCAGATGACGTCGATTGTTGGTGCAACACGACGTCAACTTGGGTTGT GTACGGAACCTGCCATCACAAAAAAGGTGAAGCACGGAGATCTAGAAGA GCTGT GACGCTCCCCT CCCATTCC ACT AGGAAGCT GCAAACGCGGTCGC AA ACCTGGTTGGAATCAAGAGAATACACAAAGCACTTGATTAGAGTCGAAAA TTGGATATTCAGGAACCCTGGCTTCGCGTTAGCAGCAGCTGCCATCGCTTG GCTTTTGGGAAGCTCAACGAGCCAAAAAGTCATATACTTGGTCATGATACT GCT G ATT GCCCCGGCAT AC AGC AT C AGGTGC AT AGGAGTCAGCAAT AGGG ACTTTGT GG AAG GT AT GT C AGGT GGGACTTGGGTT G AT GTTGTCTTG G AAC ATGGAGGTTGTGTCACCGTAATGGCACAGGACAAACCGACTGTCGACATA GAGCTGGTTACAACAACAGTCAGCAACATGGCGGAGGTACGATCGTACTG CTATGAGGCATCAATATCAGACATGGCTTCGGACAGCCGCTGCCCAACAC AAGGTGAAGCCTACCTTGACAAGCAATCAGACACTCAATATGTCTGCAAA AGAACGTTAGTGGACAGAGGCTGGGGAAATGGATGTGGACTTTTTGGCAA AGGGAGCCTGGTGACATGCGCTAAGTTTGCATGCTCCAAGAAAATGACCG GGA AGAGCATCCAGCCAGAGA ATCT GGAGT ACCGGAT A ATGCTGTCAGTT CATGGCTCCCAGCACAGTGGGATGACTGTCAATGATATAGGATATGAAAC TGATGAGAATAGAGCGAAAGTTGAGATAACGCCCAATTCACCAAGAGCCG AAGCCACCCTGGGGGGTTTTGGAAGCCTAGGACTTGATTGTGAACCGAGG ACAGGCCTTG ACTTTT CAG ATTT GT ATT ACTTG ACTAT GAAT AAC AAGCAC TGGTTGGTT CAC AAG GAG TG G TT CC ACG AC ATT C C ATT ACC TT G G C ACG CT GGGGCAG ACACCGG AACT CCAC ACT GG AAC AAC AAAG A AGCACT GGTAG AGTTCAAGGACGCACATGCCAAAAGGCAAACTGTCGTGGTTCTAGGGAGT CAAGAAGGAGC AGTTCACACGGCCCTT GCTGGAGCT CTGG AGGCTGAGAT GGATGGTGCAAAGGGAAGGCTGTCCTCTGGCCACTTGAAATGTCGCCTGA AAAT GG AT AAACTT AGATT G AAGGGCGT GT CAT ACTCCTTGT GTACTGC AG CGTT C ACATT CACC AAG ATCCCGGCT G AAACACTGC ACGGG AC AGT CACA GT GG AGGT AC AGT AC GC AGGG AC AG ATGG ACCTT GC AAGGTTCCAGCTC A GATGGCGGTGGACATGCAAACTCTGACCCCAGTTGGGAGGTTGATAACCG CT AACC CCGT AATC ACT GAAAG CACT GAG AACTC T AAG AT G AT GCT GG AA CTTGATCCACCATTTGGGGACTCTTACATTGTCATAGGAGTCGGGGAGAAG AAG AT C ACCC ACC ACT GGC AC AGGAGT GGC AGC ACC ATT GGAAAAGC ATT TGAGGCCACTGTGAGAGGCGCCAAGAGAATGGCAGTCCTGGGGGACACAG CC'TGGGACTTTGGATCAGTTGGAGGCGCTCTCAACTCATTGGGCAAGGGCA TCCATCAAATTTTTGGAGCAGCTTTCAAATCATTGTTTGGAGGAATGTCCT GGTTCTCACAAATTCTCATTGGAACGTTGCTGATGTGGTTGGGTCTGAACA C AAAG AAT GG ATCT ATTTCC CTT AT GTGCTTGGCCTT AGGGGGGGT GTT GA TCTTCTTATCCACAGCCGTCTCTGCTGATGTGGGGTGCTCGGTGGACTTCTC AAAGAAGGAGACGAGATGCGGTACAGGGGTGTTCGTCTATAACGACGTTG AAGCCTGGAGGGACAGGTACAAGTACCATCCTGACTCCCCCCGTAGATTG GCAGC AGC AGTC AAGC AAGCCT GGG AAGATGGT ATCT GCGGG ATCT CCT C TGTTTCAAGAATGGAAAACATCATGTGGAGATCAGTAGAAGGGGAGCTCA ACGCAATCCTGGAAGAGAATGGAGTTCAACTGACGGTCGTTGTGGGATCT GTAAAAAACCCCATGTGGAGAGGTCCACAGAGATTGCCCGTGCCTGTGAA CGAGCTGCCCCACGGCTGGAAGGCTTGGGGGAAATCGTACTTCGTCAGAG C AGC AAAG ACAAAT AACAGCTTT GT CGTGGAT GGTG AC ACACTG AAGGAA TGCCCACTCAAACATAGAGCAT GGAACAGCTTTCTTGT GGAGGAT CATGG GTTCGGGGTATTTCACACTAGTGTCTGGCTCAAGGTTAGAGAAGATTATTC ATT AG AGT GT G ATCCAGCCGTT ATT GG AAC AGCT GTT AAGGG AAAGGAGG CTGT AC AC AGT G ATCTAG GCT ACT G GATT GAG AGT GAG AAG AAT G ACACA T GG AGGCT G AAGAGGG CC C ATCT G AT CG AG AT GA AAACAT GT G AAT GGCC AAAGTCCCACACATTGTGGACAGATGGAATAGAAGAGAGTGATCTGATCA TACCCAAGTCTTTAGCTGGGCCACT C AGCCATCAC AAT ACCAGAGAGGGCT AC AGG ACCC AAAT GAAAG GGCCATGG CACAGT G AAGAGCTT G AAATT C GG TTT GAGG AAT GCCC AGGC ACT AAGGT C CAC GT GGAGG AAACAT GTGG AAC AAGAGGACCATCTCTGAGATCAACCACTGCAAGCGGAAGGGTGATCGAGG AATGGTGCTGCAGGGAGTGCACAATGCCCCCACTGTCGTTCCGGGCTAAA GATGGCTGTTGGTATGGAATGGAGATAAGGCCCAGGAAAGAACCAGAAA GC AACTT AGT AAGGT C AATG GT G ACTGCAGG AT C AACT G AT C ACAT G GAC CACTTCTCCCTTGGAGTGCTTGTGATCCTGCTCATGGTGCAGGAAGGGCTG AAG AAG AG AAT G ACC AC AAACAT CAT CAT AAGC ACAT C AATGGC AGT GCT GGT AGCT AT G ATCCTGGG AGGATTTT C AAT G AGTG ACCT GGC'T AAGC TTGC AATTTTGAT GGGT GCCACCTTCGCGGAAAT GAACACTGGAGGAGAT GTAG CTCATCTGGCGCTGATAGCGGCATTCAAAGTCAGACCAGCGTTGCTGGTAT CTTTCATCTTCAGAGCTAATTGGACACCCCGTGAAAGCATGCTGCTGGCCT TGGCCTCGTGTCTTTTGCAAACTGCGATCTCCGCCTTGGAAGGCGACCTGA TGGTT CT CAT CAAT GGTTTT GCTTTGGCCTGGTT GGCA ATACGAGCGATGG TTGTTCCACGCACTGATAACATCACCTTGGCAATCCTGGCTGCTCTGACAC CACTGGCCCGGGGCACACTGCTTGTGGCGTGGAGAGCAGGCCTTGCTACTT GCGGGGGGTTTATGCTCCTCTCTCTGAAGGGAAAAGGCAGTGTGAAGAAG AACTTACCATTTGTCATGGCCCTGGGACTAACCGCTGTGAGGCTGGTCGAC CCC AT C AACGT GGT GGGACT GCT GTT ACT C AC AAGGAGTGGGAAGCGGAG CTGGCCCCCTAGCGAAGTACTCACAGCTGTTGGCCTGATATGCGCATTGGC TGGAGGGTTCGCCAAGGCAGATATAGAGATGGCTGGGCCCATGGCCGCGG TCGGTCTGCTAATTGTCAGTTACGTGGTCTCAGGAAAGAGTGTGGACATGT ACATTGAAAGAGCAGGTGACATCACATGGGAAAAAGATGCGGAAGTCACT GGAAACAGTCCCCGGCTCGATGTGGCGCTAGATGAGAGTGGTGATTTCTCC CTGGTGGAGGATGACGGTCCCCCCATGAGAGAGATCATACTCAAGGTGGT CCTGATGACCATCTGTGGCATGAATCCAATAGCCATACCCTTTGCAGCTGG AGCGTGGTACGTATACGTGAAGACTGGAAAAAGGAGTGGTGCTCTATGGG ATGTGCCTGCTCCCAAGGAAGTAAAAAAGGGGGAGACCACAGATGGAGTG TACAGAGTAATGACTCGTAGACTGCTAGGTTCAACACAAGTTGGAGTGGG AGTT AT GCAAG AGGGGGTCTTT C AC ACT AT GTGGCACGT C AC AAAAGG AT CCGCGCTGAGAAGCGGTGAAGGGAGACTTGATCCATACTGGGGAGATGTC AAGCAGGATCTGGTGTCATACTGTGGTCCATGGAAGCTAGATGCCGCCTG GGACGGGCACAGCG AGGT GCAGCTCTT GGCCGTGCCCCCCGGAGAG AGAG CGAGGAACATCCAGACTCTGCCCGGAATATTTAAGACAAAGGATGGGGAC ATTGGAGCGGTTGCGCTGGATTACCCAGCAGGAACTTCAGGATCTCCAATC CTAGACAAGTGTGGGAGAGTGATAGGACTTTATGGCAATGGGGTCGTGAT CAAAAATGGGAGTTATGTTAGTGCCATCACCCAAGGGAGGAGGGAAGAAG AGACTCCTGTT GAGTGCTT CGAGCCCTCGATGCTGAAGAAGAAGC AGCT A ACTGT CTTAGACTT GCATCCTGGAGCT GGGAAA ACCAGGAGAGTTCTTCCT GAAATAGTCCGTGAAGCCATAAAAACAAGACTCCGTACTGTGATCTTAGC TCCAACCAGGGTTGTCGCTGCTGAAATGGAGGAGGCCCTTAGAGGGCTTC C AGTGCGTT ATAT G AC AAC AGC AGT CAAT GTC ACCC ACT CTGG AAC AGAA AT C'GT CGACTTA AT GTGCC ATG CC AC CTT CACTTC ACGT CTACTACAGCCA AT CAG AGT CCCCAACTAT AAT CTGTAT ATTAT G G AT GAGG CCC ACTTC ACA GATCCCTCAAGTATAGCAGCAAGAGGATACATTTCAACAAGGGTTGAGAT GGGCGAGGCGGCTGCCATCTTCATGACCGCCACGCCACCAGGAACCCGTG ACGCATTTCCGGACTCCAACTCACCAATTATGGACACCGAAGTGGAAGTCC CAGAGAGAGCCTGGAGCTCAGGCTTTGATTGGGTGACGGATCATTCTGGA AAAACAGTTTGGTTTGTTCCAAGCGTGAGGAACGGCAATGAGATCGCAGC TTGTCTGACAAAGGCTGGAAAACGGGTCATACAGCTCAGCAGAAAGACTT TTGAGACAGAGTTCCAGAAAACAAAACATCAAGAGTGGGACTTTGTCGTG AC AACT G ACATTT C AGAG ATGGGCGCC AACTTT AAAGCT G ACC GT GT C AT A G ATTCC A GG A G ATGCCT A A A GCCGGTC ATA CTTG ATGGCG A G A G A GTC AT TCTGGCTGGACCCATGCCTGTCACACATGCCAGCGCTGCCCAGAGGAGGG GGCGC AT AGGC AGG AAT CCC AAC AAACCTGGAGAT GAGTATCT GT ATGG A GGTGGGTGCGCAGAGACTGACGAAGACCATGCACACTGGCTTGAAGCAAG AATGCT C CTT G AC AAT ATTT ACCTCC AAG AT GGCCT C AT AGCCTCGCTCTA TCGACCTGAGGCCGACAAAGTAGCAGCCATTGAGGGAGAGTTCAAGCTTA GGACGGAGCAAAGGAAGACCTTTGTGGAACTCATGAAAAGAGGAGATCTT CCTGTTTGGCTGGCCTATCAGGTTGCATCTGCCGGAATAACCTACACAGAT AGAAGATGGTGCTTTGATGGCACGACCAACAACACCATAATGGAAGATAG TGTGCCGGCAGAGGTGTGGACCAGACACGGAGAGAAAAGAGTGCTCAAA CCGAGGTGGATGGACGCCAGAGTTTGTTCAGATCATGCGGCCCTGAAGTC ATTC AAGGAGTTT GCCGCT GGGAAAAG AGG AGCGGCTTTTGGAGT GAT GG AAGCCCTGGGAACACTGCCAGGACACATGACAGAGAGATTCCAGGAAGCC ATTGACAACCTCGCTGTGCTCATGCGGGCAGAGACTGGAAGCAGGCCTTA CAAAGCCGCGGCGGCCCAATTGCCGGAGACCCTAGAGACCATAATGCTTT TGGGGTTGCTGGGAACAGTCTCGCTGGGAATCTTCTTCGTCTTGATGAGGA ACAAGGGCATAGGGAAGATGGGCTTTGGAATGGTGACTCTTGGGGCCAGC GCATGGCTCATGTGGCTCTCGGAAATTGAGCCAGCCAGAATTGCATGTGTC CTCATT GTTGTGTTCCT ATT G CT GGTGGT GCT C AT ACCT G AGCC AG AAAAG CAAAGATCTCCCCAGGACAACCAAATGGCAATCATCATCATGGTAGCAGT AGGTCTTCTGGGCTTGATTACCGCCAATGAACTCGGATGGTTGGAGAGAAC AAAG AGT GACCTAAGCC ATCT AAT GGG AAGGAG AGAGGAGGGGGC AACC ATAGGATTCTCAATGGACATTGACCTGCGGCCAGCCTCAGCTTGGGCCATC TATGCTGCCTTGACAACTTTCATTACCCCAGCCGTCCAACATGCAGTGACC ACTTC'ATAC AAC AACT ACTCCTT AAT GGCG ATGGCC ACGC AAGCT GGAGT G TTGTTTGGTATGGGCAAAGGGATGCCATTCTACGCATGGGACTTTGGAGTC CCGCTGCTAATGATAGGTTGCTACTCACAATTAACACCCCTGACCCTAATA GTGGCCATCATTTTGCTCGTGGCGCACTACATGTACTTGATCCCAGGGCTG CAGGCAGCAGCT GCGCGT GCT GCCCAGAAGAGAACGGCAGCT GGCATCAT GAAGAACCCTGTTGTGGATGGAATAGTGGTGACTGACATTGACACAATGA CAATTGACCCCCAAGTGGAGAAAAAGATGGGACAGGTGCTACTCATAGCA GTAGCCGTCTCCAGCGCCATACTGTCGCGGACCGCCTGGGGGTGGGGGGA GGCTGGGGCCCTGATCACAGCCGCAACTTCCACTTTGTGGGAAGGCTCTCC G AAC AAGT ACTG GAACTCCT CT AC AGCC ACTT CAC TGTGT AACATTTTT AG GGG AAGTT ACTTGGCT GG AGCTT CTCT AATC TAC ACA GT AACAAG AAACG CTGGCTTGGTCAAGAGACGTGGGGGTGGAACAGGAGAGACCCTGGGAGA GAAATGGAAGGCCCGCTTGAACCAGATGTCGGCCCTGGAGTTCTACTCCTA CAAAAAGTCAGGCATCACCGAGGTGTGCAGAGAAGAGGCCCGCCGCGCCC TCAAGGACGGTGTGGCAACGGGAGGCCATGCTGTGTCCCGAGGAAGTGCA AAGCTGAGATGGTTGGTGGAGCGGGGATACCTGCAGCCCTATGGAAAGGT CATTGATCTTGGATGTGGCAGAGGGGGCTGGAGTTACTACGCCGCCACCAT CCGCAAAGTTCAAGAAGTGAAAGGATACACAAAAGGAGGCCCTGGTCATG AAGAACCCGTGTTGGTGCAAAGCTATGGGTGGAACATAGTCCGTCTTAAG AGT GGGGTGGACGTCTTT C ATAT GGCGGCTGAGC'CGTGT G AC AC'GCT GCT G TGTGACATAGGTGAGTCATCATCTAGTCCTGAAGTGGAAGAAGCACGGAC GCTCAGAGTCCTCTCCATGGTGGGGGATTGGCTTGAAAAAAGACCAGGAG CCTTTTGTATAAAAGTGTTGTGCCCATACACCAGCACTATGATGGAAACCC TGGAGCGACTGCAGCGTAGGTATGGGGGAGGACTGGTCAGAGTGCCACTC TCCCGCAACTCTACACATGAGATGTACTGGGTCTCTGGAGCGAAAAGCAA CACCATAAAAAGTGTGTCCACCACGAGCCAGCTCCTCTTGGGGCGCATGG ACGGGCCTAGGAGGCCAGTGAAATATGAGGAGGATGTGAATCTCGGCTCT GGCACGCGGGCTGTGGTAAGCTGCGCTGAAGCTCCCAACATGAAGATCAT T GGTAACCGCATT GAAAGGATCCGC AGT G AGCACGCGGAAACGTGGTTCT TTGACGAGAACCACCCATATAGGACATGGGCTTACCATGGAAGCTATGAG GCCCCCACACAAGGGTCAGCGTCCTCTCTAATAAACGGGGTTGTCAGGCTC CTGTCAAAACCCTGGGATGTGGTGACTGGAGTCACAGGAATAGCCATGAC CGACACCACACCGTATGGTCAGCAAAGAGTTTTCAAGGAAAAAGTGGACA CTAGGGTGCCAGACCCCCAAGAAGGCACTCGTCAGGTTATGAGCATGGTC T CTT CCT GGTT GT GG AAAG AGCT AGGC AAAC AC AAACGGC'C ACG AGT CT G TACCAAAGAAGAGTTCATCAACAAGGTTCGTAGCAATGCAGCATTAGGGG C AAT ATTT GAAG AG G AAAAAG AGT GG AAG ACT GC AGT GG AAGCT GT G AAC GATCCAAGGTTCTGGGCTCTAGTGGACAAGGAAAGAGAGCACCACCTGAG AGGAGAGTGCCAGAGTTGTGTGTATAACATGATGGGAAAAAGAGAAAAG AAACAAGGGGAATTTGGAAAGGCCAAGGGCAGCCGCGCCATCTGGTATAT GTGGCTAGGGGCT AGATTT CT AG AGTTC GAAGC CCTT GG ATT CTT G AACG A GGATCACTGGATGGGGAGAGAGAACTCAGGAGGTGGTGTTGAAGGGCTGG GATTAC AAAGACTCGGAT ATGT CCT AGAAGAGATGAGTCGT AT ACCAGGA GGAAGGATGTATGCAGATGACACTGCTGGCTGGGACACCCGCATTAGCAG GTTT G AT CT GG AG AATG AAGCTC T AAT C ACC AACC AAAT GG AG AAAGGGC ACAGGGCCTTGGCATTGGCCATAATCAAGTACACATACCAAAACAAAGTG GT AAAGGTCCTTAG ACC AGCTG AAAAAGGGAAAAC AGTT ATGGAC ATT AT TT CG AGACAAGACC AAAGGGGG AGCGGAC AAGTT GTCACTT ACGCTCTT A ACACATTTACCAACCTAGTGGTGCAACTCATTCGGAATATGGAGGCTGAG GAAGTTCTAGAGATGCAAGACTTGTGGCTGCTGCGGAGGTCAGAGAAAGT G ACC AACT GGTT GC AG AGCAACGGAT GGGAT AGGC'T C AAACGAAT GGC AG T CAG TGGAGATGATTGCGTT GTG AAGC CA ATT G ATG AT AGGTTT GCAC AT G CCCTCAGGTTCTTGAATGATATGGGAAAAGTTAGAAAGGACACACAAGAG TGGAAACCCTCAACTGGATGGGACAACTGGGAAGAAGTTCCGTTTTGCTCC CACCACTTCAACAAGCTCCATCTCAAGGACGGGAGGTCCATTGTGGTTCCC TGCCGCCACCAAGATGAACTGATTGGCCGGGCCCGCGTCTCTCCAGGGGC GGGATGGAGCATCCGGGAGACTGCTTGCCTAGCAAAATCATATGCGCAGA T GTGGC AGCTCCTTTATTT CC AC AG AAGGGACCTCCG ACT GAT GGCCAlAT G CC ATTT GTTC ATCT GTGCCAGTT G ACT GG GTTCC AACT GGG AG AACT ACCT GGTCAATCCATGGAAAGGGAGAATGGATGACCACTGAAGACATGCTTGTG GT GT GG A ACAGA GTGT GG ATT G AGG AG AACG ACC AC ATGG AAG ACAAG A CCCCAGTTACGAAATGGACAGACATTCCCTATTTGGGAAAAAGGGAAGAC TTGTGGTGTGGATCTCTCATAGGGCACAGACCGCGCACCACCTGGGCTGAG AACATTAAAAACACAGTCAACATGGTGCGCAGGATCATAGGTGATGAAGA AAAGTACATGGACTACCTATCCACCCAAGTTCGCTACTTGGGTGAAGAAG GGTCTACACCTGGAGTGCTGTAAGCACCAATTTTAGTGTTGTCAGGCCTGC TAGTCAGCCACAGTTTGGGGAAAGCTGTGCAGCCTGTAACCCCCCCAGGA GAAGCTGGGAAACCAAGCTCATAGTCAGGCCGAGAACGCCATGGCACGGA AGAAGCCATGCTGCCTGTGAGCCCCTCAGAGGACACTGAGTCAAAAAACC CC ACGC GCTT GGAAGCGC AGG ATGGGAAAAGAAGGT GGCGACCTT CCCC A CCCTTCAATCTGGGGCCTGAACTGGAGACTAGCTGTGAATCTCCAGCAGAG GGACTAGTGGTTAGAGGAGACCCCCCGGAAAACGCAAAACAGCATATTGA CGCTGGGAAAGACCAGAGACTCCATGAGTTTCCACCACGCTGGCCGCCAG GCACAGATCGCCGAACAGCGGCGGCCGGTGTGGGGAAATCCATGGTTTCT SEQ ID NO: 5 Secuencia poliproteínica del virus ZIKALIVax quimérico (10,807 nt; 3,423 aa)

MKNPKKKSGGFRIVNMLKRGVARVSPFGGLKRLPAGLLLGHGPIRMV

LAILAFLRFTAIKPSLGL1NRWGSVGKKEAMEIIKKFKKDLAAMLR11NARKEK KRRG ADT S VGIVGLLLTT AM AAE VTRRG S A Y YM YLDRND AG E AI SFPTTL G M NKCYIQIMDLGHMCDATMSYECPMLDEGVEPDDVDCW CNTTSTW VVYGTC HHKKGEARRSRRAVTLPSHSTRKLQTRSQTWLESREYTKHL1RVENW1FRNPG FALAAAAIAW LLGSSTSQKVIYLVM ILLIAPAYSIRCIGVSNRDFVEGM SGGTW VDVVLEHGGCVTVM AQDKPTVDTELVTTTVSNM AEVRSYCYEASISDM ASDS RCPTQGEAYLDKQSDTQYVCKRTLVDRGW GNGCGLFGKGSLVTCAKFACSK KMTGKSIQPENLEYRIMLSVHGSQHSGMTVNDIGYETDENRAKVEITPNSPRA EATLGGFGSLGLDCEPRTGLDFSDLYYLTMNNKHW LVHKEW FHDIPLPW HA GADT GTPFl W NNKE AL VEFKD AH AKRQTV VVLGS Q E G AVHT ALAG ALEAEM DGAKGRLSSGHLKCRLKMDKLRLKGVSYSLCTAAFTFTKTPAETLHGTVTVE VQYAGTDGPCKVPAQMAVDMQTLTPVGRLTTANPVTTESTENSKMMLELDPP FGDSY1VIGVGEKKITHHW HRSGSTIGKAFEATVRGARRMAVLGDTAW DFGS VGGVFNSLGKGTHQIFGAAFKSLFGGMSWFSQTLIGTLLVWLGLNTKNGSTSLT CLALGGVM IFLSTAVSADVGCSVDFSKKETRCGTGVFIYNDVEAW RDRYKYH PDSPRRLAAAVKQAWEEGTCGISSVSRMENTMWKSVEGELNAILEENGVQLTV VVGSVKNPM W RGPQRLPVPVNELPHGW KAW GKSYFVRAAKTNNSFVVDGD TLKECPLEHRAWN SFLVEDHGF GVFHTSV W LKVRED Y SLECDPAVIGTAVKG REAAHSDLGYWIESEKNDTWRLKRAHLTEMKTCEWPKSHTLWTDGVEESDLT IPKSLAGPLSHHNTREGYRTQVKGPWHSEELEIRFEECPGTKVYVEETCGTRGP SLRSTTASGRVIEEWCCRECTMPPLSFRAKDGCWYGMEIRPRKEPESNLVRSM VTAGSTDHMDHFSLGVLV1LLMVQEGLRKRMTTKJIMSTSMAVLVVMILGGF SMSDLAKLVILM GATFAEM NTGGDVAHLALVAAFKVRPALLVSFIFRANW TP RE SMLLAL AS CLLQT AI S ALEGDLM VLIN GF AL A WL AIRAM AVPRTDNIALPIL AALTPLARGTLLVAWRAGLATCGGIMLLSLRGKGSVKKNLPFVMALGLTAV RVVDPINVVGLLLLTRSGKRSWPPSEVLTAVGLICALAGGFAKADIEMAGPM AAV GLLIV S YYVSGKS VDMYIERAGDIT WEKDAEVT GN SPRLD VALDESGDF SLVEEDGPPMREIILKVVLMAICGMNPIAIPFAAGAWYVYVKTGKRSGALWD VPAPKEVKKGETTDGVYRVMTRRLLGSTQVGVGVMQEGVFHTMWHVTKGA ALRSGEGRLDPYWGDVKQDLVSYCGPWKLDAAWDGLSEVQLLAVPPGERA RNTQTLPGTFKTKDGDIGAVALDYPAGTSGSPTLDKCGRVIGLYGNGVVIKNGS YVSATTQGKREEETPVECFEPSMLKKKQLTVLDLHPGAGKTRRVLPETVREATK KRLRTVILAPTRVVAAEMEEALRGLPVRYMTTAVNVTHSGTETVDLMCHATF TSRLLQPIRVPNYNLYTMDEAHFTDPSSIAARGYTSTRVEMGEAAAIFMTATPP GTRDAFPDSNSPTMDTEVEVPERAWSSGFDWVTDHSGKTVWFVPSVRNGNEI AACLTKAGKRVTQLSRKTFETEFQKTKNQEWDFVTTTDISEMGANFKADRVID SRRCLKPVTLDGERVILAGPMPVTHASAAQRRGRIGRNPNKPGDEYMYGGGC AETDEGHAHWLEARMLLDN1YLQDGLIASLYRPEADKVAA1EGEFKLRTEQR KTFVELMKRGDLPVWLAYQVASAGITYTDRRWCFDGTTNNTIMEDSVPAEV WTKYGEKRVLKPRWMDARVCSDHAALKSFKEFAAGBCRGAALGVMEALGTL PGHMTERFQEAIDNLAVLMRAETGSRPYKAAAAQLPETLETIMLLGLLGTVSL GIFF VLMRNKGT GKMGF GMVTLG AS A WLM WLS EIEP ARIAC VLT V VFL LL VVL IPEPEKQRSPQDNQMAIIIMVAVGLLGLITANELGWLERTKNDIAHLMGRREE GATMGFSMDTDLRPASAWAIYAALTTLITPAVQHAVTTSYNNYSLMAMATQA GVLFGMGKGMPFYAWDLGVPLLMMGCYSQLTPLTLIVATILLVAHYMYLIPG LQAAAARAAQKRTAAGIMKNPVVDGIVVTDIDTMTIDPQVEKKMGQVLLIAV AISSAVLLRTAWGWGEAGALITAATSTLWEGSPNKYWNSSTATSLCNIFRGSY LAGASLIYTVTRNAGLVKRRGGGTGETLGEKWKARLNQMSALEFYSYKKSGI TEVCREEARRALKDGVATGGHAVSRGSAKLRWLVERGYLQPYGRVVDLGC GRGGWSYYAATIRKVQEVRGYTKGGPGHEEPMLVQSYGWNIVRLKSGVDVF HMAAEPCDTLLCDIGESSSSPEVEETRTLRVLSMVGDWLEKRPGAFCIKVLCP YTSTMMETMERLQRRHGGGLVRVPLSRNSTHEMYWVSGAKSNIIKSVSTTSQ LLLGRMDGPRRPVKYEEDVNLGSGTRAVASCAEAPNMKIIGRRIERIRNEHAE TWFLDENHPYRTWAYHGSYEAPTQGSASSLVNGVVRLLSKPWDVVTGVTGI AMTDTTPYGQQRVFKEKVDTRVPDPQEGTRQVMNIVSSWLWKELGKRKRPR VCTKEEFINKVRSNAALGAIFEEEKEWKTAVEAVNDPRFWALVDREREHHLR GECHSCVYNMMGKREKKQGEFGKAKGSRAIWYMWLGARFLEFEALGFLNE DHWMGRENSGGGVEGLGLQRLGYILEEMNRAPGGKMYADDTAGWDTR1SK FDLENE ALITN QMEEGHRT L AL A VIKYTY QNKV VKVLRPAEGGKT VM DIISRQ DQRGSGQVVTYALNTFTNLVVQLIRNMEAEEVLEMQDLW LLRKPEKVTRW L QSNGW DRLKRMAVSGDDCVVKPrDDRFAHALRFLNDMGKVRKDTQEW KPS TGWSNW EEVPFCSHHFNKLYLKDGRSIVVPCRHQDEL1GRARVSPGAGW SIRE TACLAKSYAQMW QLLYFHRRDLRLMANAICSAVPVDW VPTGRTTW SIHGKG EWMTTEDMLMVWNRVWIEENDHMEDKTPVTKWTDIPYLGKREDLWCGSLI GHRPRTTWAENIKDTVNMVRRI1GDEEKYMDYLSTQVRYLGEEGSTPGVL SEQ ID NO:6 Secuencia genómica del virus ZIKALIVax quimérico (10,807 nt; 3,423 aa):

AGTTGTT GATCT GT GT G AGT C AGACT GCG AC AGTT CG AGTCT G AAG

CGAG AGCT AACAACAGTAT CAACAGGTTT AATTT GGATTTGGAAACGAGA GTTT CT GGTC ATG AAAAACCC A A A A A A G AAATC CGGAGG ATT CCGGATT G TCAATATGCTAAAACGCGG AGT AGC CCGTGT G AGCCCCTTTGGGGGCTT GA AGAGGCTGCCAGCCGGACTTCTGCTGGGTCATGGGCCCATCAGGATGGTCT TGGCGATTCTAGCCTTTTTGAGATTCACGGCAATCAAGCCATCACTGGGTC TCATCAATAGATGGGGTTCAGTTGGGAAAAAAGAGGCTATGGAAATAATA AAGAAGTT CAAGAAAGATCTGGCTGCCATGCTGAGAATAATCAAT GCT AG G AAGGAGAAG AAGAG ACGAGGCGC AGAT ACT AGT GTCGG AATT GTTGGCC TCCTGCTGACCACAGCTATGGCAGCGGAGGTCACTAGACGTGGGAGTGCA T ACT AT AT GT ACTT GG AC AG AAACG AT GCTGG GG A GGCC AT ATCTTTTCC A ACC AC ATTGGGGAT GAAT AAGT GTT ATAT ACAGATC AT GG ATCTT GG AC AC ATGTGTGATGCCACCATGAGCTATGAATGCCCTATGCTGGATGAGGGGGT GGAACC AGAT G ACGTCG ATT GTT GGTGC AAC ACGACGTC AACTTGGGTT GT GTACGGAACCTGCCATCACAAAAAAGGTGAAGCACGGAGATCTAGAAGA GCTGTGACGCT CC CCT CCC ATT CC ACT AGG AAGCT GCAA ACGCGGTCGC A A ACCT GGTT GGAAT CAAG AGAAT AC AC AAAGCAC TT G ATT AG AGT CG A A A A TTGGATATTCAGGAACCCTGGCTTCGCGTTAGCAGCAGCTGCCATCGCTTG GCTTTTGGGAAGCTCAACGAGCCAAAAAGTCATATACTTGGTCATGATACT GCTGATTGCCCCGGCATACAGCATCAGGTGCATAGGAGTCAGCAATAGGG ACTTT GT GG AA GGT ATGT C'A GGT GGG ACTT GG GTT G AT GTT GTCTT GG A AC AT G G AG G TTGTGT C ACCGT AAT GGC AC AGG AC AAACCG ACTGTCGAC AT A GAGCTGGTT AC A ACAAC AGTCAGCA ACATGGCGGAGGT ACGATCGT ACT G CTATGAGGCATCAATATCAGACATGGCTTCGGACAGCCGCTGCCCAACAC AAGGTGAAGCCTACCTTGACAAGCAATCAGACACTCAATATGTCTGCAAA AGAACGTTAGTGGACAGAGGCTGGGGAAATGGATGTGGACTTTTTGGCAA AGGGAGCCTGGTGACATGCGCTAAGTTTGCATGCTCCAAGAAAATGACCG GGAAGAGCATCCAGCCAGAGAATCTGGAGTACCGGATAATGCTGTCAGTT CATGGCTCCCAGCACAGTGGGATGACTGTCAATGATATAGGATATGAAAC TGATGAGAATAGAGCGAAAGTTGAGATAACGCCCAATTCACCAAGAGCCG AAGCCACCCTGGGGGGTTTTGGAAGCCTAGGACTTGATTGTGAACCGAGG ACAGGCCTTG ACTTTT CAG ATTTGT ATT ACTTG ACTATG AAT AACAAGCAC TGGTTGGTT C AC AAG G AGTGGTT C CACG AC ATT CC ATT AC CTTG G CAC GCT GGGGCAGACACCGGAACTCCACACTGGAACAACAAAGAAGCACTGGTAG AGTTCAAGGACGCACATGCCAAAAGGCAAACTGTCGTGGTTCTAGGGAGT CAAGAAGGAGCAGTTCACACGGCCCTTGCTGGAGCTCTGGAGGCTGAGAT GG ATGGTGC AAAGGG AAG GCTGT CCTCTGGCC ACTTG AA ATGTC GCCT GA AAATGGATAAACTTAGATTGAAGGGCGTGTCATACTCCTTGTGTACTGCAG CGTTCACATTCACCAAGATCCCGGCTGAAACACTGCACGGGACAGTCACA GT GGAGGT AC AGT AC G CAGGG AC AG ATGG ACCTT GC AAG GTTCCAGCTCA GATGGCGGTGGACATGCAAACTCTGACCCCAGTTGGGAGGTTGATAACCG CTAACCCCGTAATCACTGAAAGCACTGAGAACTCTAAGATGATGCTGGAA CTTGATCCACCATTTGGGGACTCTTACATTGTCATAGGAGTCGGGGAGAAG AAGATCACCCACCACTGGCACAGGAGTGGCAGCACCATTGGAAAAGCATT TGAGGCCACTGTGAGAGGCGCCAAGAGAATGGCAGTCCTGGGGGATACAG CCTGGGACTTCGGATCAGTCGGGGGTGTGTTCAACTCACTGGGTAAGGGC ATTCACCAGATTTTTGGAGCAGCCTTCAAATCACTGTTTGGAGGAATGTCC TGGTT CT C ACAGAT CCTC AT AGGC ACGCTGCT AGTGT GGTT AGGTTTGA AC ACAAAG AATGG AT CT ATCTCCCT CAC AT GCTT GGCCCTGGGGG G AGT G ATG ATCTTCCTCTCCACGGCTGTTTCTGCTGACGTGGGGTGCTCAGTGGACTTCT C AAAAAAGGAAACG AG AT GT GGC ACGGGGGT ATTC ATCTAT AATG ATGTT GAAGCCTGGAGGGACCGGTACAAGTACCATCCTGACTCCCCCCGCAGATT GGCAGCAGCAGTCAAGCAGGCCTGGGAAGAGGGGATCTGTGGGATCTCAT CC GTTTC AAG AAT GG AAAAC AT C AT GT GG AAATC AGT AG A AGG GG AGCT C AATGCTAT CCT 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TGATGGCCATCTGTGGCATGAACCCAATAGCTATACCTTTTGCTGCAGGAG CGTGGTATGTGTATGTGAAGACTGGGAAAAGGAGTGGCGCCCTCTGGGAC GT GCCT GCTCC CAAAG AAGT G AAG A AAGG AG AG AC C AC AG AT GGAGTGTA C AG AGT G AT GACTCGC AG ACT GCT AGGTTC AAC AC AGGTT GG AGT GGG AG T CAT G C AAG AG G GAGT CTTCC AC ACC AT GTGGCACGTT AC AAAAGGAGCC GC ACTG AGG AGC GGTGAGGG AAGACTT G ATCC AT ACT GG G GG GAT GT CAA GCAGGACTTGGTGTCATACTGTGGGCCTTGGAAGTTGGATGCAGCTTGGGA TGGACTCAGCGAGGTACAGCTTTTGGCCGTACCTCCCGGAGAGAGGGCCA G AAACATT C AGACCCT GCCT GG AAT ATTC AAG AC AAAGG AC GGGG AC AT C GGAGCAGTTGCTCTGGACTACCCTGCAGGGACCTCAGGATCTCCGATCCTA GACAAATGTGGAAGAGTGATAGGACTCTATGGCAATGGGGTTGTGATCAA GAATGGAAGCTATGTTAGTGCTATAACCCAGGGAAAGAGGGAGGAGGAG ACTCCGGTTGAATGTTTCGAACCCTCGATGCTGAAGAAGAAGCAGCTAACT GTCTTGGATCTGCATCCAGGAGCCGGAAAAACCAGGAGAGTTCTTCCTGA AATAGTCCGTGAAGCCATAAAAAAGAGACTCCGGACAGTGATCTTGGCAC CAACTAGGGTTGTCGCTGCTGAGATGGAGGAGGCCTTGAGAGGACTTCCG GTGCGTTACATGACAACAGCAGTCAACGTCACCCATTCTGGGACAGAAAT CGTTG ATTT GAT GT G CC AT G CC ACTTT C ACTT C AC G CTT ACT AC AAC CC AT C AGAGTCCCTAATTACAATCTCTACATCATGGATGAAGCCCACTTCACAGAC CCCTCAAGTATAGCTGCAAGAGGATATATATCAACAAGGGTTGAAATGGG CGAGGCGGCTGCCATTTTTATGACTGCCACACCACCAGGAACCCGTGATGC GTTT CCTGACTCT AACT C ACCAATCAT GGACAC AG AAGT GG AAGTCCC AGA G AGAGCCT GG AGCT C AGGCTTT G ATT GGGT GACAGACC ATTCTGGG AAAA CAGTTTGGTTCGTTCCAAGCGTGAGAAACGGAAATGAAATCGCAGCCTGT CTGACAAAGGCTGGAAAGCGGGTCATACAGCTCAGCAGGAAGACTTTTGA GACAGAATTTCAGAAAACAAAAAATCAAGAGTGGGACTTTGTCATAACAA CTGACATCTCAGAGATGGGCGCCAACTTCAAGGCTGACCGGGTCATAGAC TCTAGGAGATGCCTAAAACCAGTCATACTTGATGGTGAGAGAGTCATCTTG GCT GGGCCCAT GCCT GTC ACGC AT GCT AGT GCT GCT CAG AGGAGAGG ACG T AT AGGC AGG AACCCT A AC AAACCT GG AG AT GAGT AC AT GT AT GG AGGT G GGTGTGCAGAGACTGATGAAGGCCATGCACACTGGCTTGAAGCAAGAATG CTTCTTGACAACATCTACCTCCAGGATGGCCTCATAGCCTCGCTCTATCGG CCTGAGGCCGATAAGGTAGCCGCCATTGAGGGAGAGTTTAAGCTGAGGAC AGAGCAAAGGAAGACCTTCGTGGAACTCATGAAGAGAGGAGACCTTCCCG TCTGGCTAGCCTATCAGGTTGCATCTGCCGGAATAACTTACACAGACAGAA GATGGTGCTTTGATGGCACAACCAACAACACCATAATGGAAGACAGCGTA CC'AGCAGAGGTGTGGACAAAGTATGGAGAGAAGAGAGTGCTCAAACCGA GATGGATGGATGCTAGGGTCTGTTCAGACCATGCGGCCCTGAAGTCGTTCA AAGAATTCGCCGCTGGAAAAAGAGGAGCGGCTTTGGGAGTAATGGAGGCC CTGGGAACACTGCCAGGACACATGACAGAGAGGTTTCAGGAAGCCATTGA CAACCTCGCCGTGCTCATGCGAGCAGAGACTGGAAGCAGGCCTTATAAGG CAGCGGCAGCCCAACTGCCGGAGACCCTAGAGACCATTATGCTCTTAGGTT TGCTGGGAACAGTTTCACTGGGGATCTTCTTCGTCTTGATGCGGAATAAGG GCATCGGGAAGATGGGCTTT GGAAT GGTAACCCTTGGGGCCAGT GCATGG CTC AT GTGGCTTT CGG AAATTG AACC AGCCAG AATTGCAT GT GT CCT CATT GTTGTGTTTTTATTACTGGTGGTGCTCATACCCGAGCCAGAGAAGCAAAGA TCTC CC C AAGAT AACC AG AT GGC AATT ATCAT CATGGTGGC A GTG GGCCTT CTAGGTTTGATAACTGCAAACGAACTTGGATGGCTGGAAAGAACAAAAAA T GAC AT AGCT CATCT AATGGGAAGGAG AGA AGAAGGAGC AACC ATGGGAT TCTCAATGGACATTGATCTGCGGCCAGCCTCCGCCTGGGCTATCTATGCCG CATTGACAACTCTCATCACCCCAGCTGTCCAACATGCGGTAACCACTTCAT ACAACAACTACTCCTTAATGGCGATGGCCACACAAGCTGGAGTGCTGTTTG GCATGGGCAAAGGGATGCCATTTTATGCATGGGACCTTGGAGTCCCGCTGC TAATGATGGGTTGCTATTCACAATTAACACCCCTGACTCTGATAGTAGCTA TCATTCTGCTTGTGGCGCACTACATGTACTTGATCCCAGGCCTACAAGCGG CAGCAGCGCGTGCTGCCCAGAAAAGGACAGCAGCTGGCATCATGAAGAAT CCCGTTGTGGATGGAATAGTGGTAACTGACATTGACACAATGACAATAGA CCCCC AGGT GG AG AAGAAG AT GGG AC AAGT GTT ACTC AT AGC AGT AGCC A TCTCCAGTGCTGTGCTGCTGCGGACCGCCTGGGGATGGGGGGAGGCTGGA GCTCTGATCACAGCAGCGACCTCCACCTTGTGGGAAGGCTCTCCAAACAA ATACTGGAACTCCTCTACAGCCACCTCACTGTGCAACATCTTCAGAGGAAG CTATCTGGCAGGAGCTTCCCTTATCTATACAGTGACGAGAAACGCTGGCCT GGTT AAGAG ACGT GGAGGTGGGACGGG AG AG ACT CTGGGAGAG AAGTGG AAAGCTCGTCTGAATCAGATGTCGGCCCTGGAGTTCTACTCTTATAAAAAG TCAGGTATCACTGAAGTGTGTAGAGAGGAGGCTCGCCGTGCCCTCAAGGA T GG AGT GGCC AC AGG AGG AC AT G CC GT ATCCCGGGG AAGT GC AAAGCTC A GATGGTT GGTGGAGAGAGG ATATCTGCAGCCCT ATGGGAAGGTT GTT GAC CTCGGATGTGGCAGAGGGGGCTGGAGCTATTATGCCGCCACCATCCGCAA AGTGCAGGAGGTGAGAGGATACACAAAGGGAGGTCCCGGTCATGAAGAA CCCATGCTGGTGCAAAGCTATGGGTGGAACATAGTTCGTCTCAAGAGTGG AGT GGAC GT CTTC'C AC ATGGC GGCTG AGCCGT GTGAC ACTCTGCT GT GTG A C AT AGGT G AGT C AT CATCTAGTCCT G AAGT GG AAG AG AC ACG AAC ACT C A G AGT GCT CTCT ATGGTGGGGG ACT GG CTT GAAAAAAG ACC AGGGGCC TT C TGT AT AA AGGT GCTGTGCCCAT ACACC AGC ACTAT GAT GGAA ACC ATGGA GCGACTGCAACGTAGGCATGGGGGAGGATTAGTCAGAGTGCCATTGTCTC GCAACTCCACACATGAGATGTACTGGGTCTCTGGGGCAAAGAGCAACATC ATAAAAAGTGTGTCCACCACAAGTCAGCTCCTCCTGGGACGCATGGATGG CCCCAGGAGGCCAGTGAAATATGAGGAGGATGTGAACCTCGGCTCGGGTA CACGAGCTGTGGCAAGCTGTGCTGAGGCTCCTAACATGAAAATCATCGGC AGGC GC ATT G AGAG AAT C CGC A ATGAAC AT GC AG AAAC AT GGTTTCTTGA TGAAAACCACCCATACAGGACATGGGCCTACCATGGGAGCTACGAAGCCC CCACGCAAGGATCAGCGTCTTCCCTCGTGAACGGGGTTGTTAGACTCCTGT CAAAGCCTTGGGACGTGGTGACTGGAGTTACAGGAATAGCCATGACTGAC ACCACACCATACGGCCAACAAAGAGTCTTCAAAGAAAAAGTGGACACCAG GGTGCCAGATCCCCAAGAAGGCACTCGCCAGGTAATGAACATAGTCTCTT CCTGGCTGTGGAAGGAGCTGGGGAAACGCAAGCGGCCACGCGTCTGCACC AAAGAAGAGTTTATCAACAAGGTGCGCAGCAATGCAGCACTGGGAGCAAT ATTT G AAG AG G AA AAAG AATGG AAG ACG G CTGT GG AAG CTGTG AAT G ATC C AAGGTTTTGGGCCCTAGTGG AT AG GG AG AG AGAACACC ACCT G AG AGG A GAGTGTCACAGCTGTGTGTACAACATGATGGGAAAAAGAGAAAAGAAGC AAGGAGAGTTCGGGAAAGCAAAAGGT AGCCGCGCCATCTGGT ACATGTGG TT GGG AGCC AGATTCTT GG AGTTT G AAGCC CTT GG ATT CTT G AAC G AGG AC CATTGGATGGGAAGAGAAAACTCAGGAGGTGGAGTCGAAGGGTTAGGATT GCAAAGACTTGGATACATTCTAGAAGAAATGAATCGGGCACCAGGAGGAA AGATGTACGCAGATGACACTGCTGGCTGGGACACCCGCATTAGTAAGTTT GATCTGGAGAATGAAGCTCTGATTACCAACCAAATGGAGGAAGGGCACAG AACTCT GGCGTTGGCCGTG ATT AA AT AC AC AT ACC AAAAC AAAGTGGT GA AGGTTCTCAGACCAGCTGAAGGAGGAAAAACAGTTATGGACATCATTTCA AGACAAGACCAGAGAGGGAGTGGACAAGTTGTCACTTATGCTCTCAACAC ATTCACCAACTTGGTGGTGCAGCTTATCCGGAACATGGAAGCTGAGGAAG TGTTAGAGATGCAAGACTTATGGTTGTTGAGGAAGCCAGAGAAAGTGACC AG AT GGTT GC AG AGC AAT GG AT GGGAT AG ACT C AAACG AAT GGCGGT C AG T GG AG ATG ACTGCGTT GTG AAGCCAATCG ATG AT AGGTTT G C ACAT GCCCT C AG G TTCTT G AAT G AC AT GGG AAA AGTT AGG AAAG ACACAC AGG AGT GG A AACCCTCGACTGGATGGAGCAATTGGGAAGAAGTCCCGTTCTGCTCCCACC ACTT CAAC AAGCT GTAC CT C AAGGAT GGGAG AT CC ATT GTGGTCCCTTGCC GCCACCAAGATGAACTGATTGGCCGAGCTCGCGTCTCACCAGGGGCAGGA TGGAGCATCCGGGAGACTGCCTGTCTTGCAAAATCATATGCGCAGATGTG GCAGCTCCTTTATTTCCACAGAAGAGACCTTCGACTGATGGCTAATGCCAT TTGCTCGGCTGTGCCAGTTGACTGGGTACCAACTGGGAGAACCACCTGGTC AAT CC ATGGAAAGGG AG AATGG AT G ACC ACT G AGGAC AT GCTC AT GGT GT GGAATAGAGTGTGGATTGAGGAGAACGACCATATGGAGGACAAGACTCCT GTAACAAAATGGACAGACATTCCCTATCTAGGAAAAAGGGAGGACTTATG GTGTGGATCCCTTATAGGGCACAGACCCCGCACCACTTGGGCTGAAAACA TCAAAGAC AC AGT CAACAT GGT GCGC AGG AT CAT AGGT G ATG A AG AAAAG TACATGGACTATCTATCCACCCAAGTCCGCTACTTGGGTGAGGAAGGGTCC ACACCCGGAGTGTTGTAAGCACCAATTTTAGTGTTGTCAGGCCTGCTAGTC AGCCACAGTTTGGGGAAAGCTGTGCAGCCTGTAACCCCCCCAGGAGAAGC TGGGAAACC AAGCT CAT AGT C AGGCCG AGAACGCC ATGGC ACGG AAG AA GCCATGCTGCCTGTGAGCCCCTCAGAGGACACTGAGTCAAAAAACCCCAC GCGCTTGGAAGCGC'AGGATGGGAAAAGAAGGTGGCGACCTTCCCCACCCT TCAATCTGGGGCCTGAACTGGAGACTAGCTGTGAATCTCCAGCAGAGGGA CTAGTGGTTAGAGGAGACCCCCCGGAAAACGCAAAACAGCATATTGACGC TGGGAAAGACCAGAGACTCCATGAGTTTCCACCACGCTGGCCGCCAGGCA CAGATCGCCGAACAGCGGCGGCCGGTGTGGGGAAATCCATGGTTTCT SEQ ID NO:7 Secuencias del gen E del virus ZIKALIVax quimérico (1512 nt; 504 aa)

ATCAGGT GC AT AGGAGTCAGC AATAGGG ACTTT GTGGAAGGT ATGT

CAGGTGGGACTTGGGTTGATGTTGTCTTGGAACATGGAGGTTGTGTCACCG TAATGGCACAGGACAAACCGACTGTCGACATAGAGCTGGTTACAACAACA GTCAGCAACATGGCGGAGGTACGATCGTACTGCTATGAGGCATCAATATC AGACATGGCTTCGGACAGCCGCTGCCCAACACAAGGTGAAGCCTACCTTG ACAAGCAATCAGACACTCAATATGTCTGCAAAAGAACGTTAGTGGACAGA GGCTG GGG A A AT GG AT GT GG ACTTTTT GGC AAAGGGAGCCT GGT G AC ATG CGCTAAGTTTGCATGCTCCAAGAAAATGACCGGGAAGAGCATCCAGCCAG AGAATCTGGAGTACCGGATAATGCTGTCAGTTCATGGCTCCCAGCACAGTG GG AT GACTGT C AAT G ATATAGG AT AT G AAACT G AT G AGAAT AG AGCG A A A

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1. Un virus de Zika muíante atenuado que comprende una proteína E que consiste en la secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 98 % de identidad con SEQ ID NO:1 en la que el residuo de isoleucina (I) en la posición 152 se sustituye por un residuo de treonina (T), el residuo de treonina (T) en la posición 156 se sustituye por un residuo de isoleucina (I) y el residuo de histidina (H) en la posición 158 se sustituye por un residuo de tirosina (Y).

2. El virus de Zika mutante atenuado de la reivindicación 1, en el que la proteína E consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2.

3. El virus de Zika mutante atenuado de la reivindicación 1 que se caracteriza por la secuencia genómica que codifica la poliproteína que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:5.

4. El virus de Zika mutante atenuado de la reivindicación 1, que se caracteriza por la secuencia genómica representada por SEQ ID NO:6.

5. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el virus de Zika mutante atenuado de la reivindicación 1.

6. La molécula de ácido aislada de la reivindicación 5 que comprende una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO:6.

7. Una célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 5.

8. Una composición de vacuna que comprende el virus de Zika atenuado de la reivindicación 1.

9. La composición de vacuna de la reivindicación 8, que comprende una cantidad de virus de Zika vivo atenuado de la reivindicación 1 o una cantidad de virus de Zika atenuado inactivo de la reivindicación 1.

10. Una composición de vacuna que comprende el virus de Zika atenuado de la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento para desencadenar una respuesta inmunitaria contra el virus de Zika en un sujeto.

11. La composición de vacuna para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en la que la composición de vacuna se administra a una mujer embarazada.

12. La composición de vacuna para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en la que la composición de vacuna se administra a una mujer en edad fértil.