ES2831414T3 - Stable compositions containing antibodies - Google Patents
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Abstract
Una composición líquida estable que comprende una proteína que es un anticuerpo, una sal y un tampón; en donde la concentración total de dicha sal y tampón está entre 5 y 100 mM, en donde la concentración de la sal es 50 mM o menor y en donde la concentración del tampón es 50 mM o menor; y que tiene un pH de entre 5,0 y 7,0, tal como 6,0 o 6,5; en donde el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 descrito en el documento WO2010/072691, las secuencias de aminoácidos de las cadenas ligera y pesada de HzTFPI4F3 se proporcionan en las SEQ ID NO: 21 y 24 del documento WO2010/072691, respectivamente.A stable liquid composition comprising a protein that is an antibody, a salt, and a buffer; wherein the total concentration of said salt and buffer is between 5 and 100 mM, wherein the concentration of the salt is 50 mM or less and wherein the concentration of the buffer is 50 mM or less; and having a pH of between 5.0 and 7.0, such as 6.0 or 6.5; wherein the antibody is the monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 antibody described in WO2010 / 072691, the amino acid sequences of the light and heavy chains of HzTFPI4F3 are provided in SEQ ID NO: 21 and 24 of WO2010 / 072691, respectively .
Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Composiciones estables que contienen anticuerposStable compositions containing antibodies
Campo de la invenciónField of the invention
La invención se refiere a composiciones líquidas estables y de baja viscosidad que contienen proteínas, en particular, pero no exclusivamente anticuerpos estables, y al uso de dichas composiciones en la terapia, en particular para el suministro subcutáneo de dicha proteína estable.The invention relates to stable, low-viscosity liquid compositions containing proteins, in particular, but not exclusively, stable antibodies, and to the use of such compositions in therapy, in particular for the subcutaneous delivery of said stable protein.
Antecedentes de la invenciónBackground of the invention
Las inmunoglobulinas, los anticuerpos monoclonales (mAb) y los anticuerpos humanizados se han desarrollado como productos farmacéuticos durante varios años. Existe un claro incentivo para desarrollar formulaciones líquidas de alta concentración de mAb debido al potencial de la administración subcutánea que resulta en una mayor comodidad para el paciente. Sin embargo, existe un consenso general de que el desarrollo de formulaciones de mAb de alta concentración plantea serios desafíos con respecto a la estabilidad física y química del mAb, tal como una mayor formación de agregados solubles e insolubles que potencian la probabilidad de una respuesta inmunogénica así como también dar lugar a una baja bioactividad.Immunoglobulins, monoclonal antibodies (mAbs), and humanized antibodies have been developed as pharmaceuticals for several years. There is a clear incentive to develop high-concentration liquid formulations of mAbs due to the potential for subcutaneous administration resulting in greater patient comfort. However, there is a general consensus that the development of high concentration mAb formulations poses serious challenges with respect to the physical and chemical stability of the mAb, such as increased formation of soluble and insoluble aggregates that enhance the likelihood of an immunogenic response. as well as lead to low bioactivity.
La formación de agregados por un polipéptido durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida puede afectar adversamente la actividad biológica de ese polipéptido, lo que resulta en la pérdida de la eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agregados puede provocar otros problemas tales como el bloqueo de tubos, membranas, o bombas cuando la composición farmacéutica que contiene polipéptidos se administra mediante el uso de un sistema de infusión.The formation of aggregates by a polypeptide during storage of a liquid pharmaceutical composition can adversely affect the biological activity of that polypeptide, resulting in loss of the therapeutic efficacy of the pharmaceutical composition. In addition, the formation of aggregates can cause other problems such as blockage of tubes, membranes, or pumps when the pharmaceutical composition containing polypeptides is administered through the use of an infusion system.
Además, se ha informado que las formulaciones de mAb de alta concentración dan como resultado un aumento de la viscosidad, lo que crea serios desafíos para la capacidad de fabricación y la inyectabilidad.Furthermore, high concentration mAb formulations have been reported to result in increased viscosity, creating serious challenges for manufacturability and injectability.
Controlar la agregación y la viscosidad de las formulaciones líquidas de mAb de alta concentración no es un asunto trivial. El hecho de que solo existan pocos productos de mAb en el mercado como una formulación líquida de alta concentración (> 100 mg/ml) muestra la complejidad. Se han publicado artículos que muestran que el NaCl puede disminuir la viscosidad y también hasta cierto punto controlar la agregación (documento EP 1981824). También se ha demostrado que la sacarosa estabiliza el mAb frente a la formación de agregados mediante un mecanismo de exclusión preferencial. Sin embargo, la identificación de estabilizadores adecuados es todavía una ciencia empírica en este campo.Controlling the aggregation and viscosity of high concentration liquid mAb formulations is not a trivial matter. The fact that there are only few mAb products on the market as a high concentration liquid formulation (> 100 mg / ml) shows the complexity. Articles have been published showing that NaCl can lower viscosity and also control aggregation to some extent (EP 1981824). Sucrose has also been shown to stabilize mAb against aggregate formation via a preferential exclusion mechanism. However, the identification of suitable stabilizers is still an empirical science in this field.
Es bien sabido que se usan cantidades relativamente altas de electrolitos, tales como sal y tampón, para disminuir la viscosidad de las formulaciones de mAb de alta concentración (documento EP 1981824). El documento WO 01/24814 (Chiron Corporation) describe una composición farmacéutica líquida que contiene polipéptidos que comprende una base de aminoácidos como estabilizador. El documento EP 1336410 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describe una formulación farmacéutica inyectable que contiene una proteína fisiológicamente activa y al menos un azúcar como un agente suavizante. El documento EP 1314437 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describe una preparación que contiene un anticuerpo que comprende un tampón de glicina y/o histidina. El documento WO 02/30463 (Genentech, Inc) describe una formulación de proteína concentrada que tiene una viscosidad reducida y una sal y/o tampón en una cantidad de al menos aproximadamente 50 mM. El documento EP 1475100 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describe una solución que contiene un anticuerpo que comprende un ácido orgánico y un tensioactivo como estabilizadores. El documento EP 1475101 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describe una solución que contiene un anticuerpo que comprende un azúcar como estabilizador. El documento WO 2004/001007 (IDEC Pharmaceuticals Corporation) describe una composición de anticuerpo concentrada que consiste esencialmente en tampón de histidina o acetato en el intervalo de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 48 mM. El documento WO 2004/016286 (Abbot Laboratories (Bermuda) Ltd.) describe una formulación de anticuerpos humanos que tiene un pH de entre aproximadamente 4 y 8. El documento WO 2005/123131 (Medimmune Vaccines, Inc) describe una formulación para secar por pulverización un anticuerpo o vacuna. El documento WO 2007/003936 (Insense Limited) describe un sistema acuoso estable que comprende una proteína y uno o más agentes estabilizadores que tienen grupos ionizables. El documento WO 2007/092772 (Medimmune, Inc.) describe una formulación líquida de proteína que comprende una proteína variante Fc y un agente tampón entre 1 mM y 100 mM. El documento US 2004/0022792 (Immunex Corporation) describe un método para estabilizar una proteína a un pH de entre aproximadamente 2,8 y aproximadamente 4,0. El documento US 2003/0180287 (Immunex Corporation) describe una composición farmacéutica acuosa adecuada para el almacenamiento a largo plazo de polipéptidos. El documento WO 2008/071394 (F. Hoffmann-La Roche AG) describe una formulación parenteral farmacéutica estable que contiene un anticuerpo. Los documentos WO 2009/120684 y WO 2008/121615 (MedImmune Inc) ambos describen formulaciones líquidas de alta concentración de anticuerpos o fragmentos de estos que se unen específicamente a un polipéptido de interferón alfa humano. El documento WO 2009/070642 (MedImmune Inc) describe formulaciones liofilizadas estables de anticuerpos biespecíficos o fragmentos de estos. El documento EP 1 977 763 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describe composiciones estabilizadores que contienen anticuerpos que comprenden uno o más aminoácidos. El documento US 2004/0197324 (Genentech, Inc) describe formulaciones de proteínas y anticuerpos altamente concentrados con viscosidad reducida. El documento WO 2008/132439 (Universidad de Strathclyde) describe composiciones estabilizadores de la precipitación que se reivindican para prevenir o reducir la agregación. El documento US 2007/0020255 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) describe un método para estabilizar un anticuerpo en solución que comprende la adición de glicina y ácido cítrico a la solución. El documento US 2007/0184050 (Kirin Beer Kabushiki Kaisha) describe una formulación líquida estable que contiene un anticuerpo en un tampón de glutamato y/o un tampón de citrato. El documento US2009/0280129 (Genentech describe formulaciones de proteínas y anticuerpos de alta concentración. El documento WO 2010/017196 describe anticuerpos monoclonales contra un inhibidor de la vía del factor tisular. Ragni y otros, (2000) Circulation, 102: 113-117 sugiere que el TFPI endógeno está involucrado en el proceso de formación de trombos in vivo, desempeñando un papel activo en la modulación de la trombosis arterial.It is well known that relatively high amounts of electrolytes, such as salt and buffer, are used to lower the viscosity of high concentration mAb formulations (EP 1981824). WO 01/24814 (Chiron Corporation) describes a liquid pharmaceutical composition containing polypeptides comprising an amino acid base as a stabilizer. EP 1336410 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describes an injectable pharmaceutical formulation containing a physiologically active protein and at least one sugar as a softening agent. EP 1314437 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describes a preparation containing an antibody comprising a glycine and / or histidine buffer. WO 02/30463 (Genentech, Inc) describes a concentrated protein formulation having a reduced viscosity and a salt and / or buffer in an amount of at least about 50 mM. EP 1475100 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describes a solution containing an antibody comprising an organic acid and a surfactant as stabilizers. EP 1475101 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describes a solution containing an antibody comprising a sugar as a stabilizer. WO 2004/001007 (IDEC Pharmaceuticals Corporation) describes a concentrated antibody composition consisting essentially of histidine or acetate buffer in the range of about 2 mM to about 48 mM. WO 2004/016286 (Abbot Laboratories (Bermuda) Ltd.) describes a human antibody formulation having a pH between about 4 and 8. WO 2005/123131 (Medimmune Vaccines, Inc) describes a formulation for drying by spraying an antibody or vaccine. WO 2007/003936 (Insense Limited) describes a stable aqueous system comprising a protein and one or more stabilizing agents having ionizable groups. WO 2007/092772 (Medimmune, Inc.) describes a liquid protein formulation comprising a variant Fc protein and a buffer agent between 1 mM and 100 mM. US 2004/0022792 (Immunex Corporation) describes a method for stabilizing a protein at a pH of between about 2.8 and about 4.0. US 2003/0180287 (Immunex Corporation) describes an aqueous pharmaceutical composition suitable for long-term storage of polypeptides. WO 2008/071394 (F. Hoffmann-La Roche AG) describes a stable pharmaceutical parenteral formulation containing an antibody. WO 2009/120684 and WO 2008/121615 (MedImmune Inc) both describe high concentration liquid formulations of antibodies or fragments of antibodies that specifically bind to a human interferon alpha polypeptide. WO 2009/070642 (MedImmune Inc) describes stable lyophilized formulations of bispecific antibodies or fragments thereof. EP 1 977 763 (Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) describes stabilizer compositions containing antibodies comprising one or more amino acids. US 2004/0197324 (Genentech, Inc) describes highly concentrated protein and antibody formulations with reduced viscosity. WO 2008/132439 (University of Strathclyde) describes precipitation stabilizing compositions which are claimed to prevent or reduce aggregation. US 2007/0020255 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) describes a method for stabilizing an antibody in solution which comprises adding glycine and citric acid to the solution. US 2007/0184050 (Kirin Beer Kabushiki Kaisha) describes a stable liquid formulation containing an antibody in a glutamate buffer and / or a citrate buffer. US2009 / 0280129 (Genentech describes high concentration protein and antibody formulations. WO 2010/017196 describes monoclonal antibodies against an inhibitor of the tissue factor pathway. Ragni et al., (2000) Circulation, 102: 113-117 suggests that endogenous TFPI is involved in the thrombus formation process in vivo, playing an active role in modulating arterial thrombosis.
Por lo tanto, existe una gran necesidad de una composición farmacéutica de anticuerpo de alta concentración estable que tenga una viscosidad baja y factible que sea adecuada para la administración subcutánea, tal como en un dispositivo listo para usar. Además, desde el punto de vista del paciente, sería muy conveniente tener productos estables a temperatura ambiente. En este momento, no hay formulaciones de mAb comercializadas donde el almacenamiento a temperatura ambiente sea una posibilidad durante la vida útil del producto farmacéutico. Típicamente, se produce un aumento de la degradación de las proteínas formando un alto nivel inaceptable de agregados e impurezas relacionadas con las proteínas, que pueden dar lugar a reacciones inmunogénicas.Therefore, there is a great need for a stable high concentration antibody pharmaceutical composition having a low and feasible viscosity that is suitable for subcutaneous administration, such as in a ready-to-use device. Furthermore, from the point of view of the patient, it would be very convenient to have stable products at room temperature. At this time, there are no marketed mAb formulations where room temperature storage is a possibility during the shelf life of the pharmaceutical product. Typically, increased protein degradation occurs, forming an unacceptable high level of protein-related aggregates and impurities, which can lead to immunogenic reactions.
Muchos de los productos de mAb comercializados contienen tensioactivos en su formulación. Típicamente, los tensioactivos se añaden para reducir el estrés interfacial que puede inducir la agregación de proteínas y la formación de partículas que conducen a una calidad inaceptable del producto. Los ejemplos de estrés interfacial podrían ser el contacto de la proteína con i) aire ii) material de cierre del contenedor, tal como émbolo de goma, pistón, vidrio, jeringas prellenadas iii) materiales relacionados con la producción, tales como tanques de acero, tubos y bombas iv) hielo, durante la congelación/descongelación, etc. Sin embargo, los tensioactivos como los polisorbatos contienen típicamente un residuo de peróxidos que pueden oxidar la molécula de proteína y comprometer la calidad del producto. Además, desde el punto de vista de la fabricación, la adición de polisorbatos requiere una etapa adicional en la producción, ya que la ultra/diafiltración es difícil de realizar cuando la formulación contiene dichos polisorbatos. La formación de productos oxidados es un tema desafiante, por lo tanto, se requiere un manejo cuidadoso de los polisorbatos para controlar la formación de productos oxidados. Por tanto, sería conveniente diseñar formulaciones sin tensioactivos, tanto desde el punto de vista de la estabilidad como de la fabricación.Many of the marketed mAb products contain surfactants in their formulation. Typically, surfactants are added to reduce interfacial stress that can induce protein aggregation and particle formation leading to unacceptable product quality. Examples of interfacial stress could be the contact of the protein with i) air ii) container closure material, such as rubber plunger, piston, glass, prefilled syringes iii) production related materials, such as steel tanks, tubes and pumps iv) ice, during freezing / thawing, etc. However, surfactants such as polysorbates typically contain a residue of peroxides that can oxidize the protein molecule and compromise product quality. Furthermore, from a manufacturing point of view, the addition of polysorbates requires an additional step in production, since ultra / diafiltration is difficult to perform when the formulation contains such polysorbates. The formation of oxidized products is a challenging subject, therefore careful handling of polysorbates is required to control the formation of oxidized products. Therefore, it would be desirable to design surfactant-free formulations, both from a stability and a manufacturing standpoint.
Resumen de la invenciónSummary of the invention
La presente invención se refiere a una composición líquida estable que comprende una proteína que es un anticuerpo, una sal y un tampón; en donde la concentración total de dicha sal y tampón está entre 5 y 100 mM, en donde la concentración de la sal es 50 mM o menor y en donde la concentración del tampón es 50 mM o menor; y que tiene un pH de entre 5,0 y 7,0, tal como 6,0 o 6,5; en donde el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 descrito en el documento WO2010/072691, las secuencias de aminoácidos de las cadenas ligera y pesada de HzTFPl4F36 se proporcionan en las SEQ ID NO: 21 y 24 del documento WO2010/072691, respectivamente. La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende tal una composición para su uso en el tratamiento de una coagulopatía, tal como la hemofilia A, con o sin inhibidores, o hemofilia B, con o sin inhibidores.The present invention relates to a stable liquid composition comprising a protein which is an antibody, a salt and a buffer; wherein the total concentration of said salt and buffer is between 5 and 100 mM, wherein the concentration of the salt is 50 mM or less and wherein the concentration of the buffer is 50 mM or less; and having a pH of between 5.0 and 7.0, such as 6.0 or 6.5; wherein the antibody is the monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 antibody described in WO2010 / 072691, the amino acid sequences of the light and heavy chains of HzTFPl4F36 are provided in SEQ ID NO: 21 and 24 of WO2010 / 072691, respectively . The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising such a composition for use in the treatment of a coagulopathy, such as hemophilia A, with or without inhibitors, or hemophilia B, with or without inhibitors.
Descripción detallada de la invenciónDetailed description of the invention
En la presente descripción se describe una composición líquida estable que comprende una proteína, una sal y/o un tampón, caracterizada porque la concentración total de dicha sal y tampón es inferior a 100 mM.In the present description a stable liquid composition comprising a protein, a salt and / or a buffer is described, characterized in that the total concentration of said salt and buffer is less than 100 mM.
Sorprendentemente, se ha encontrado que las composiciones estables de proteína con bajas cantidades de sal y tampón tienen una viscosidad baja y factible, tal como una viscosidad de < 50 cP a 25 °C.Surprisingly, stable protein compositions with low amounts of salt and buffer have been found to have a low and workable viscosity, such as a viscosity of <50 cP at 25 ° C.
La baja viscosidad de las formulaciones farmacéuticas es especialmente conveniente para la inyección subcutánea, pero también es conveniente para otras formulaciones líquidas, en las que, por ejemplo, mejora la manipulación de la formulación.The low viscosity of pharmaceutical formulations is especially suitable for subcutaneous injection, but it is also suitable for other liquid formulations, where, for example, it improves handling of the formulation.
El término "composición estable" se refiere a una composición con estabilidad física satisfactoria, estabilidad química satisfactoria o estabilidad física y química satisfactoria.The term "stable composition" refers to a composition with satisfactory physical stability, satisfactory chemical stability, or satisfactory physical and chemical stability.
El término "estabilidad física" de la composición de proteína como se usa en la presente descripción se refiere a la tendencia de la proteína a formar agregados inactivos biológicamente y/o insolubles de la proteína como resultado de la exposición de la proteína a estrés termomecánico y/o interacción con las interfaces y las superficies que son desestabilizantes, tales como las superficies e interfaces hidrófobas. La estabilidad física de las composiciones acuosas de proteínas se evalúa por medio de inspección visual y/o mediciones de la turbidez después de exponer la composición vertida en contenedores adecuados (por ejemplo, cartuchos o viales). Es una cualidad inherente de las formulaciones altamente concentradas de mab exhibir opalescencia debido a la dispersión de Raleigh. Por tanto, una composición no se puede clasificar como físicamente inestable con respecto a la agregación de proteínas, cuando muestra turbidez visual a la luz del día. Sin embargo, cuando hay precipitados o separación de fases visible a la luz del día, la formulación se clasifica como físicamente inestable.The term "physical stability" of the protein composition as used herein refers to the tendency of the protein to form biologically inactive and / or insoluble aggregates of the protein as a result of exposure of the protein to thermomechanical stress and / or interaction with interfaces and surfaces that are destabilizing, such as hydrophobic surfaces and interfaces. Physical stability of aqueous protein compositions is evaluated by visual inspection and / or turbidity measurements after exposure of the protein. composition poured into suitable containers (eg cartridges or vials). It is an inherent quality of highly concentrated mab formulations to exhibit haze due to Raleigh scattering. Therefore, a composition cannot be classified as physically unstable with respect to protein aggregation, when it shows visual haze in daylight. However, when there are precipitates or phase separation visible in daylight, the formulation is classified as physically unstable.
El término "estabilidad química" de la composición de proteína como se usa en la presente descripción se refiere a cambios químicos covalentes en la estructura de la proteína que conducen a la formación de productos de degradación química con una posible menor potencia biológica y/o un aumento potencial de las propiedades inmunogénicas en comparación con la estructura de la proteína natural. Pueden formarse diversos productos de degradación química en dependencia del tipo y la naturaleza de la proteína natural y del entorno al que se expone la proteína. La eliminación de la degradación química muy probablemente puede no evitarse completamente y a menudo se observan cantidades aumentadas de productos de degradación química durante el almacenamiento y el uso de la composición de proteínas es bien conocido por el experto en la técnica. La mayoría de las proteínas son propensas a la desamidación, un proceso en el que se hidroliza el grupo amida de la cadena lateral en residuos glutaminilo o asparaginilo para formar un ácido carboxílico libre. Otras rutas de degradación implican la formación de productos de transformación de alto peso molecular donde dos o más moléculas de proteína se unen covalentemente entre sí mediante transamidación y/o interacciones disulfuro que conducen a la formación de productos de degradación de dímeros, oligómeros y polímeros unidos covalentemente (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenun Press, Nueva York, 1992). La oxidación (de, por ejemplo, residuos de metionina) puede mencionarse como otra variante de la degradación química. La estabilidad química de la composición de proteína puede evaluarse mediante la medición de la cantidad de productos de degradación química en varios puntos de tiempo después de la exposición a diferentes condiciones ambientales (a menudo la formación de productos de degradación puede acelerarse, por ejemplo, mediante el aumento de la temperatura). La cantidad de cada producto de degradación individual a menudo se determina por separación de los productos de degradación en dependencia del tamaño de la molécula y/o la carga mediante el uso de diversas técnicas de cromatografía (por ejemplo, SEC-HPLC y/o RP-HPLC).The term "chemical stability" of the protein composition as used in the present description refers to covalent chemical changes in the structure of the protein that lead to the formation of chemical degradation products with a possible lower biological potency and / or a Potential increase in immunogenic properties compared to natural protein structure. Various chemical degradation products can be formed depending on the type and nature of the natural protein and the environment to which the protein is exposed. Elimination of chemical degradation most likely may not be completely avoided and increased amounts of chemical degradation products are often observed during storage and the use of the protein composition is well known to one of ordinary skill in the art. Most proteins are prone to deamidation, a process in which the amide group on the side chain is hydrolyzed to glutaminyl or asparaginyl residues to form a free carboxylic acid. Other degradation pathways involve the formation of high molecular weight transformation products where two or more protein molecules are covalently linked to each other through transamidation and / or disulfide interactions leading to the formation of linked polymer, oligomer and dimer degradation products. covalently ( Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. TJ & Manning MC, Plenun Press, New York, 1992). Oxidation (of, for example, methionine residues) can be mentioned as another variant of chemical degradation. The chemical stability of the protein composition can be assessed by measuring the amount of chemical degradation products at various time points after exposure to different environmental conditions (often the formation of degradation products can be accelerated, for example, by temperature rise). The amount of each individual degradation product is often determined by separating the degradation products depending on molecule size and / or charge using various chromatography techniques ( e.g. SEC-HPLC and / or RP -HPLC).
SEC-HPLC se usa en particular para la cuantificación de agregados de proteínas. Las muestras se pueden analizar, por ejemplo, mediante el uso de una columna TSK G3000 SWXL, elución isocrática y detección UV subsecuente a 214 nm. Este método se usa para determinar el contenido de IgG monomérico y el % de HMWP que consiste en especies diméricas o más grandes que se separan de acuerdo con el tamaño por la resina de gel. El contenido de monómero y el % de HMWP se determinan en relación con el contenido de proteína total detectado por el método. SEC-HPLC is used in particular for the quantification of protein aggregates. Samples can be analyzed, for example, using a TSK G3000 SWXL column, isocratic elution and subsequent UV detection at 214 nm. This method is used to determine the content of monomeric IgG and the% HMWP consisting of dimeric or larger species that are separated according to size by the gel resin. The monomer content and% HMWP are determined relative to the total protein content detected by the method.
Por tanto, como se ha señalado anteriormente, una composición estable se refiere a una composición con estabilidad física satisfactoria, estabilidad química satisfactoria o estabilidad física y química satisfactoria. Una estabilidad satisfactoria de una formulación puede ser aquella en donde menos del 10 % y preferentemente menos del 5 % de la proteína es un agregado (HMWP) en la formulación. En general, una composición debe ser estable durante el uso y el almacenamiento (de acuerdo con el uso recomendado y las condiciones de almacenamiento) hasta que se alcance la fecha de vencimiento.Thus, as noted above, a stable composition refers to a composition with satisfactory physical stability, satisfactory chemical stability, or satisfactory physical and chemical stability. Satisfactory stability of a formulation can be one where less than 10% and preferably less than 5% of the protein is an aggregate (HMWP) in the formulation. In general, a composition should be stable during use and storage (in accordance with recommended use and storage conditions) until the expiration date is reached.
Viscosidad como se usa en la presente descripción se usa como viscosidad absoluta, también denominada viscosidad dinámica. Las mediciones se realizan mediante la técnica de cono y placa con un elemento Peltier fijado a 25 °C, y donde se aplica un gradiente de esfuerzo cortante bien definido a una muestra y se mide la velocidad de corte resultante. La viscosidad es la relación entre el esfuerzo cortante y la velocidad de corte. La viscosidad absoluta se expresa en unidades de centipoise (cP) a 25 °C.Viscosity as used in the present description is used as absolute viscosity, also called dynamic viscosity. Measurements are made using the cone and plate technique with a Peltier element set at 25 ° C, where a well-defined shear stress gradient is applied to a sample and the resulting shear rate is measured. Viscosity is the ratio of shear stress to shear speed. Absolute viscosity is expressed in centipoise units (cP) at 25 ° C.
El término "temperatura ambiente", como se usa en la presente descripción, significa una temperatura de la habitación y donde no se requiere algún tipo de efecto de enfriamiento. La temperatura ambiente está entre 15 y 30° C, tal como entre 20 y 30 °C, tal como 20 °C, 25 °C o 30 °C.The term "room temperature", as used in the present description, means a room temperature and where some type of cooling effect is not required. The ambient temperature is between 15 and 30 ° C, such as between 20 and 30 ° C, such as 20 ° C, 25 ° C or 30 ° C.
El término “proteína”, “polipéptido” y “péptido”, como se usan en la presente descripción, significan un compuesto formado por al menos cinco aminoácidos constituyentes conectados por enlaces peptídicos. Los aminoácidos constituyentes pueden ser del grupo de los aminoácidos codificados por el código genético y pueden ser aminoácidos naturales que no se codifican por el código genético, así como también aminoácidos sintéticos. Los aminoácidos naturales que no se codifican por el código genético son, por ejemplo, hidroxiprolina, ycarboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, D-alanina y D-glutamina. Los aminoácidos sintéticos comprenden los aminoácidos fabricados mediante síntesis química, es decir, los D-isómeros de los aminoácidos codificados por el código genético tales como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido a-aminoisobutírico), Abu (ácido a-aminobutírico), Tle (terc-butilglicina), p-alanina, ácido 3-aminometil benzoico y ácido antranílico.The terms "protein", "polypeptide" and "peptide", as used in the present description, mean a compound made up of at least five constituent amino acids connected by peptide bonds. The constituent amino acids can be from the group of amino acids encoded by the genetic code and can be natural amino acids that are not encoded by the genetic code, as well as synthetic amino acids. Natural amino acids that are not encoded by the genetic code are, for example, hydroxyproline, and carboxyglutamate, ornithine, phosphoserine, D-alanine, and D-glutamine. Synthetic amino acids comprise the amino acids manufactured by chemical synthesis, that is, the D-isomers of amino acids encoded by the genetic code such as D-alanine and D-leucine, Aib (a-aminoisobutyric acid), Abu (a-aminobutyric acid ), Tle (tert-butylglycine), p-alanine, 3-aminomethyl benzoic acid, and anthranilic acid.
En una modalidad, la concentración total de sal y tampón es 95 mM o menos, tal como cualquiera de 90, 85, 80, 75, 70, 65 o 60 mM o menos. En una modalidad, la concentración total de sal y tampón es inferior a 60 mM, tal como 50 mM o menos, tal como 45, 40, 35, 33, 30, 25, 20 mM o menos. In one embodiment, the total concentration of salt and buffer is 95 mM or less, such as any of 90, 85, 80, 75, 70, 65, or 60 mM or less. In one embodiment, the total concentration of salt and buffer is less than 60 mM, such as 50 mM or less, such as 45, 40, 35, 33, 30, 25, 20 mM or less.
En algunas modalidades, la sal puede tener una capacidad tamponadora al pH relevante y, en algunas modalidades, el tampón puede ser una sal. La característica crítica es que la concentración total de sal y tampón no excede los valores establecidos.In some embodiments, the salt may have a buffering capacity at the relevant pH and, in some embodiments, the buffer may be a salt. The critical characteristic is that the total concentration of salt and buffer does not exceed the established values.
En una modalidad, la sal es una sal inorgánica o una sal orgánica o una combinación de una o más de estas. En una modalidad, la sal se selecciona del grupo que consiste en cloruro de sodio, cloruro de magnesio, tiocianato de sodio, tiocianato de amonio, sulfato de amonio, cloruro de amonio, cloruro de calcio, clorhidrato de arginina, cloruro de zinc, acetato de sodio, aminoácidos o una combinación de estos.In one embodiment, the salt is an inorganic salt or an organic salt or a combination of one or more of these. In one embodiment, the salt is selected from the group consisting of sodium chloride, magnesium chloride, sodium thiocyanate, ammonium thiocyanate, ammonium sulfate, ammonium chloride, calcium chloride, arginine hydrochloride, zinc chloride, acetate. sodium, amino acids, or a combination of these.
En una modalidad, la sal es cloruro de sodio o cloruro de magnesio, opcionalmente en combinación con otras sales. En una modalidad, la sal es clorhidrato de arginina. En una modalidad, la sal es una combinación de una sal inorgánica e clorhidrato de arginina.In one embodiment, the salt is sodium chloride or magnesium chloride, optionally in combination with other salts. In one embodiment, the salt is arginine hydrochloride. In one embodiment, the salt is a combination of an inorganic salt and arginine hydrochloride.
En una modalidad, la sal es un aminoácido. En una modalidad, se usa el estereoisómero L del aminoácido. En una modalidad, la sal se selecciona de arginina, glicina, lisina, ácido aspártico o ácido glutámico, o una combinación de estos. En una modalidad, el aminoácido es arginina o glicina. En una modalidad adicional, el aminoácido es arginina, tal como L-arginina. El aminoácido puede añadirse a la composición en su forma de sal o en su forma libre, según convenga.In one embodiment, the salt is an amino acid. In one embodiment, the L-stereoisomer of the amino acid is used. In one embodiment, the salt is selected from arginine, glycine, lysine, aspartic acid, or glutamic acid, or a combination of these. In one embodiment, the amino acid is arginine or glycine. In a further embodiment, the amino acid is arginine, such as L-arginine. The amino acid can be added to the composition in its salt form or in its free form, as appropriate.
En una modalidad, la sal (o combinación de sales) está presente en una concentración de entre 0 y 100 mM. En una modalidad, la concentración total de sal es 100 mM o menos, tal como 50 mM, 40 mM, 35 mM, 33 mM, 30 mM, 25 mM o menos.In one embodiment, the salt (or combination of salts) is present in a concentration between 0 and 100 mM. In one embodiment, the total salt concentration is 100mM or less, such as 50mM, 40mM, 35mM, 33mM, 30mM, 25mM or less.
Se ha descubierto sorprendentemente que el aminoácido L-arginina actúa como un estabilizador y que la presencia de L-arginina tiene un efecto estabilizador estadísticamente significativo frente a la formación de agregados de HMWP en formulaciones líquidas de proteínas de alta concentración, tal como anticuerpos. En la presente descripción se describe una composición líquida estable que comprende un anticuerpo y arginina a una concentración de entre 5 mM y 100 mM, tal como o menos, tal como 50 mM, 40 mM, 35 mM, 33 mM, 30 mM, 25 mM o menos.It has surprisingly been discovered that the amino acid L-arginine acts as a stabilizer and that the presence of L-arginine has a statistically significant stabilizing effect against the formation of HMWP aggregates in high concentration liquid protein formulations, such as antibodies. In the present description a stable liquid composition is described comprising an antibody and arginine at a concentration of between 5 mM and 100 mM, such as or less, such as 50 mM, 40 mM, 35 mM, 33 mM, 30 mM, 25 mM or less.
En una modalidad, el tampón es un tampón farmacéuticamente aceptable adecuado, que comprende tanto una base farmacéuticamente aceptable como un ácido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el tampón tiene un pKa de entre 4 y 8.In one embodiment, the buffer is a suitable pharmaceutically acceptable buffer, comprising both a pharmaceutically acceptable base and a pharmaceutically acceptable acid. In one embodiment, the buffer has a pKa of between 4 and 8.
Los ejemplos de ácidos y bases farmacéuticamente aceptables pueden incluir ácidos/bases inorgánicos así como también orgánicos no tóxicos tal como es bien conocido en la técnica. Los ejemplos son acetato de disodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, maleato, succinato, dihidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato de disodio, fosfato de sodio y tris(hidroximetil)-amino metano, o mezclas de estos. Cada uno de estos tampones específicos constituye una modalidad alternativa. En una modalidad, el tampón farmacéuticamente aceptable comprende histidina, maleato, succinato, fosfato o tris(hidroximetil)-amino metano. En una modalidad, el tampón tiene un valor de pKa ± 1 unidad de pH del pH objetivo de la composición.Examples of pharmaceutically acceptable acids and bases may include non-toxic inorganic as well as organic acids / bases as is well known in the art. Examples are disodium acetate, sodium carbonate, citrate, glycylglycine, histidine, glycine, lysine, arginine, maleate, succinate, sodium dihydrogen phosphate, disodium hydrogen phosphate, sodium phosphate and tris (hydroxymethyl) amino methane, or mixtures of these. Each of these specific buffers constitutes an alternative modality. In one embodiment, the pharmaceutically acceptable buffer comprises histidine, maleate, succinate, phosphate, or tris (hydroxymethyl) amino methane. In one embodiment, the buffer has a pKa value ± 1 pH unit of the target pH of the composition.
En una modalidad, la composición se tampona a un pH de entre 5 y 7, tal como un pH de 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6 ,6 , 6,7, 6 ,8, 6,9 o 7,0 o a un pH definido por cualquier intervalo entre ellos. En una modalidad, la composición se tampona a un pH de 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 o 7,0. En una modalidad, la composición se tampona a un pH de entre 6,0 y 6,5. En una modalidad, la composición se tampona a un pH de 6,0 o 6,5.In one embodiment, the composition is buffered at a pH of between 5 and 7, such as a pH of 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6, 6, 6.7, 6, 8, 6, 9 or 7.0 or at a pH defined by any interval in between. In one embodiment, the composition is buffered at a pH of 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, or 7.0. In one embodiment, the composition is buffered at a pH between 6.0 and 6.5. In one embodiment, the composition is buffered at a pH of 6.0 or 6.5.
En una modalidad, la composición comprende adicionalmente un tensioactivo. En una modalidad, el tensioactivo se selecciona de un detergente, aceite de ricino etoxilado, glicéridos poliglicolizados, monoglicéridos acetilados, ésteres de sorbitán y ácido graso, polímeros de bloques de polioxipropileno-polioxietileno (por ejemplo, poloxámeros como Pluronic® f68, poloxámero 188 y 407, Triton X-100), ésteres de polioxietileno sorbitán y ácido graso, derivados de polioxietileno y polietileno como derivados alquilados y alcoxilados (polisorbatos, por ejemplo polisorbato 20, polisorbato 40, polisorbato 80 y Brij-35), monoglicéridos o sus derivados etoxilados, diglicéridos o sus derivados de polioxietileno, alcoholes, glicerol, lectinas y fosfolípidos (por ejemplo, fosfatidil serina, fosfatidil colina, fosfatidil etanolamina, fosfatidil inositol, difosfatidil glicerol y esfingomielina), derivados de fosfolípidos (por ejemplo, ácido dipalmitoil fosfatídico) y lisofosfolípidos (por ejemplo, palmitoil lisofosfatidil-L-serina y 1-acil-sn-glicero-3-fosfato ésteres de etanolamina, colina, serina o treonina) y alquil, alcoxil (alquil éster), alcoxi (alquil éter)- derivados de lisofosfatidil y fosfatidilcolinas, por ejemplo lauroil y miristoil derivados de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina, y modificaciones del grupo de la cabeza polar, es decir colinas, etanolaminas, ácido fosfatídico, serinas, treoninas, glicerol, inositol, y DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP cargados positivamente, lisofosfatidilserina y lisofosfatidiltreonina, y glicerofosfolípidos (por ejemplo, cefalinas), gliceroglicolípidos (por ejemplo, galactopiranósido), esfingoglicolípidos (por ejemplo, ceramidas, gangliósidos), dodecilfosfocolina, lisolecitina del huevo de gallina, derivados del ácido fusídico -(por ejemplo tauro-dihidrofusidato de sodio, etcétera), ácidos grasos de cadena larga y sus sales C6-C12 (por ejemplo, ácido oleico y ácido caprílico), acilcarnitinas y derivados, derivados de lisina, arginina o histidina N“-acilados, o derivados de lisina o arginina adiados en la cadena lateral, derivados N“-acilados de dipéptidos que comprenden cualquier combinación de lisina, arginina o histidina y un aminoácido neutro o ácido, derivado N“-acilado de un tripéptido que comprende cualquier combinación de un aminoácido neutro y dos aminoácidos cargados, DSS (docusato de sodio, registro CAS núm. [577-11-7]), docusato de calcio, registro CAS núm. [128-49-4]), docusato de potasio, registro CAS núm. [7491-09-0]), SDS (dodecil sulfato de sodio o laurilsulfato de sodio), caprilato de sodio, ácido cólico o derivados de estos, ácidos biliares y sus sales y conjugados de glicina o taurina, ácido ursodesoxicólico, colato de sodio, desoxicolato de sodio, taurocolato de sodio, glicocolato de sodio, N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amonio-1-propanosulfonato, tensioactivos monovalentes (alquil-arilsulfonatos) aniónicos, tensioactivos zwitteriónicos (por ejemplo N-alquil-N,N-dimetilamonio-1-propanosulfonatos, 3-colamido-1-propildimetilamonio-1-propanosulfonato, tensioactivos catiónicos (bases cuaternarias de amonio) (por ejemplo bromuro de cetil-trimetilamonio, cloruro de cetilpiridinio), tensioactivos no iónicos (por ejemplo, dodecil p-D-glucopiranósido), poloxaminas (por ejemplo, de Tetronic), que son copolímeros de bloque tetrafuncionales derivados de la adición secuencial de óxido de propileno y óxido de etileno a etilendiamina, o el tensioactivo puede seleccionarse del grupo de derivados de imidazolina o sus mezclas. Cada uno de estos tensioactivos específicos constituye una modalidad alternativa. En una modalidad, el tensioactivo es polisorbato 80 (es decir, Tween™80). El uso de un tensioactivo en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20ma edición, 2000.In one embodiment, the composition further comprises a surfactant. In one embodiment, the surfactant is selected from a detergent, ethoxylated castor oil, polyglycolized glycerides, acetylated monoglycerides, sorbitan fatty acid esters, polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymers (eg, poloxamers such as Pluronic® f 68, poloxamer 188 and 407, Triton X-100), polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene and polyethylene derivatives as alkylated and alkoxylated derivatives (polysorbates, for example polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 80 and Brij-35), monoglycerides or their derivatives ethoxylates, diglycerides or their derivatives of polyoxyethylene, alcohols, glycerol, lectins and phospholipids (for example, phosphatidyl serine, phosphatidyl choline, phosphatidyl ethanolamine, phosphatidyl inositol, diphosphatidyl glycerol, and sphingomyelin), phosphatidyl acid derivatives, dipalmyelin, for example phosphatidyl acid derivatives lysophospholipids (for example, palmitoyl lysophosphatidyl-L-serine and 1-acyl-sn-glycero-3-phosphate ethane esters olamine, choline, serine or threonine) and alkyl, alkoxyl (alkyl ester), alkoxy (alkyl ether) - derivatives of lysophosphatidyl and phosphatidylcholines, for example lauroyl and myristoyl derivatives of lysophosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, and modifications of the polar head group say cholines, ethanolamines, phosphatidic acid, serines, threonines, glycerol, inositol, and positively charged DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, lysophosphatidylserine and lysophosphatidyl threonine, and glycerophospholipids (eg, cephalins), galactopyroglycolipids (spherical phospho-glycolipids), e.g. ceramides, gangliosides), dodecylphosphocholine, chicken egg lysolecithin, fusidic acid derivatives - (e.g. sodium tauro-dihydrofusidate, etc.), long chain fatty acids and their C6-C12 salts (e.g. oleic acid and caprylic acid), acylcarnitines and derivatives, derivatives of lysine, arginine or histidine N "-acylated, or derivatives of lysine or arginine added in the side chain, derivatives N" -acylated of dipeptides comprising any combination of lysine, arginine or histidine and a neutral or acidic amino acid, derivative N "- acylated of a tripeptide comprising any combination of a neutral amino acid and two charged amino acids, DSS (docusate sodium, CAS Registry no. [577-11-7]), docusate calcium, CAS registry no. [128-49-4]), docusate potassium, CAS Registry No. [7491-09-0]), SDS (sodium dodecyl sulfate or sodium lauryl sulfate), sodium caprylate, cholic acid or derivatives thereof, bile acids and their salts and conjugates of glycine or taurine, ursodeoxycholic acid, sodium cholate , sodium deoxycholate, sodium taurocholate, sodium glycocholate, N-hexadecyl-N, N-dimethyl-3-ammonium-1-propanesulfonate, anionic monovalent surfactants (alkyl arylsulfonates), zwitterionic surfactants (for example N-alkyl-N , N-dimethylammonium-1-propanesulfonates, 3-cholamido-1-propyldimethylammonium-1-propanesulfonate, cationic surfactants (quaternary ammonium bases) (for example cetyl-trimethylammonium bromide, cetylpyridinium chloride), non-ionic surfactants (for example, dodecyl pD-glucopyranoside), poloxamines (e.g. from Tetronic), which are tetrafunctional block copolymers derived from the sequential addition of propylene oxide and ethylene oxide to ethylenediamine, or the surfactant can be selected from the group of imi derivatives dazolin or its mixtures. Each of these specific surfactants constitutes an alternative embodiment. In one embodiment, the surfactant is polysorbate 80 (ie, Tween ™ 80). The use of a surfactant in pharmaceutical compositions is well known to those of skill. For convenience reference is made to Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2000.
En una modalidad, el tensioactivo está presente dentro de la composición en una cantidad inferior al 0,01 %. En una modalidad, el tensioactivo está presente dentro de la composición en una cantidad inferior a 0,0075 %, es decir, entre 0,001 % y 0,005 %, tal como 0,001 %.In one embodiment, the surfactant is present within the composition in an amount of less than 0.01%. In one embodiment, the surfactant is present within the composition in an amount of less than 0.0075%, that is, between 0.001% and 0.005%, such as 0.001%.
En una modalidad, no hay presente tensioactivo. Sorprendentemente, se ha descubierto que las composiciones de proteína pueden ser estables tanto con cantidades bajas de sal, con una cantidad baja de tampón como con una cantidad baja de sal y tampón y sin ninguna adición de tensioactivo.In one embodiment, no surfactant is present. Surprisingly, it has been discovered that protein compositions can be stable both with low amounts of salt, with a low amount of buffer and with a low amount of salt and buffer and without any addition of surfactant.
En una modalidad, la composición comprende además un agente modificador de la tonicidad. Los ejemplos de agentes modificadores de la tonicidad adecuados incluyen sales (por ejemplo, cloruro de sodio), alcoholes polihídricos (por ejemplo, propilenglicol, glicerol, xilitol, manitol o D-sorbitol), monosacáridos (glucosa o maltosa), disacáridos (por ejemplo, sacarosa), aminoácidos (L-glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina), polietilenglicoles (por ejemplo, PEG 400) o mezclas de estos. En una modalidad, el agente modificador de la tonicidad es sacarosa, manitol o propilenglicol. En una modalidad adicional, el agente modificador de la tonicidad es sacarosa. En algunas modalidades, el tampón y/o sal de la composición (como se describió anteriormente) también actúa como modificador de la tonicidad o el modificador de la tonicidad actuará como un tampón y/o sal (y la concentración del modificador de tonicidad será por lo tanto en tales casos calculado como tal). En una modalidad, el agente modificador de la tonicidad está presente dentro de la composición en una cantidad entre 50 y 250 mM, tal como entre 100 y 200 mM, por ejemplo cualquiera de 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200 o cualquier intervalo entre ellos. En una modalidad, el agente modificador de la tonicidad está presente dentro de la composición en una cantidad de 150 mM.In one embodiment, the composition further comprises a tonicity modifying agent. Examples of suitable tonicity modifying agents include salts (eg sodium chloride), polyhydric alcohols (eg propylene glycol, glycerol, xylitol, mannitol or D-sorbitol), monosaccharides (eg glucose or maltose), disaccharides (eg , sucrose), amino acids (L-glycine, L-histidine, arginine, lysine, isoleucine, aspartic acid, tryptophan, threonine), polyethylene glycols (eg, PEG 400) or mixtures of these. In one embodiment, the tonicity modifying agent is sucrose, mannitol, or propylene glycol. In a further embodiment, the tonicity modifying agent is sucrose. In some embodiments, the buffer and / or salt of the composition (as described above) also acts as a tonicity modifier or the tonicity modifier will act as a buffer and / or salt (and the concentration of the tonicity modifier will be per therefore in such cases calculated as such). In one embodiment, the tonicity modifying agent is present within the composition in an amount between 50 and 250 mM, such as between 100 and 200 mM, for example any of 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160 , 170, 180, 190 or 200 or any interval between them. In one embodiment, the tonicity modifying agent is present within the composition in an amount of 150 mM.
En una modalidad, la composición es isotónica.In one embodiment, the composition is isotonic.
La proteína es el anticuerpo monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 descrito en el documento WO2010/072691.The protein is the monoclonal anti-TFPI antibody HzTFPI4F36 described in WO2010 / 072691.
Se apreciará que las composiciones descritas encuentran una utilidad particular cuando la proteína está presente dentro de la composición en altas concentraciones. Por tanto, en una modalidad, la proteína está presente en una concentración de 50 mg/ml o más, tal como 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300 mg/ml o más. En una modalidad, la proteína está presente dentro de la composición en una cantidad entre 50 mg/ml y 300 mg/ml, por ejemplo, entre 50 mg/ml y 250 mg/ml, tal como entre 50 mg/ml y 200 mg/ml, por ejemplo entre 50 mg/ml y 150 mg/ml. En una modalidad, la proteína está presente en una concentración de entre 75 mg/ml y 300 mg/ml, por ejemplo entre 75 mg/ml y 250 mg/ml, tal como entre 75 mg/ml y 200 mg/ml, para ejemplo entre 75 mg/ml y 150 mg/ml. En una modalidad, la proteína está presente en una concentración de entre 100 mg/ml y 300 mg/ml, por ejemplo, entre 100 mg/ml y 250 mg/ml, tal como entre 100 mg/ml y 200 mg/ml, para ejemplo entre 100 mg/ml y 150 mg/ml.It will be appreciated that the disclosed compositions find particular utility when the protein is present within the composition in high concentrations. Thus, in one embodiment, the protein is present in a concentration of 50 mg / ml or more, such as 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300 mg / ml or more. In one embodiment, the protein is present within the composition in an amount between 50 mg / ml and 300 mg / ml, for example, between 50 mg / ml and 250 mg / ml, such as between 50 mg / ml and 200 mg. / ml, for example between 50 mg / ml and 150 mg / ml. In one embodiment, the protein is present in a concentration of between 75 mg / ml and 300 mg / ml, for example between 75 mg / ml and 250 mg / ml, such as between 75 mg / ml and 200 mg / ml, for example between 75 mg / ml and 150 mg / ml. In one embodiment, the protein is present in a concentration of between 100 mg / ml and 300 mg / ml, for example, between 100 mg / ml and 250 mg / ml, such as between 100 mg / ml and 200 mg / ml, for example between 100 mg / ml and 150 mg / ml.
En una modalidad, las composiciones estables descritas en la presente descripción tienen una viscosidad de 50 cP o menos cuando se miden a 25 °C, tal como cualquiera de menos de 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5 o 1 cP. En particular, las composiciones estables descritas en la presente descripción tienen una viscosidad de 5 cP o menos cuando se miden a 25 °C.In one embodiment, the stable compositions described in the present disclosure have a viscosity of 50 cP or less when measured at 25 ° C, such as any of less than 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5 or 1 cP. In particular, the stable compositions described in the present description have a viscosity of 5 cP or less when measured at 25 ° C.
El empleo de una formulación de alta concentración que contiene, por ejemplo, 100 mg/ml de proteína y menos de 100 mM de la suma de la concentración de sal y tampón produce una formulación relativamente baja de viscosidad (5 cP a 25 °C para un anticuerpo anti-IL20) que es estable a una temperatura de almacenamiento de 2-8 °C. En una modalidad, la formulación también es estable a temperaturas más altas, tal como la temperatura ambiente. La formulación es adecuada para su uso en dispositivos listos para usar con un tamaño de aguja pequeño que confiere una mayor comodidad al paciente en comparación con un producto comercializado listo para usar (por ejemplo, Humira® que emplea una aguja 27G y 50 mg/ml de concentración de anticuerpo).Using a high concentration formulation containing, for example, 100 mg / ml protein and less than 100 mM of the sum of the salt and buffer concentration produces a relatively low viscosity formulation (5 cP at 25 ° C for an anti-IL20 antibody) that is stable at a storage temperature of 2-8 ° C. In one embodiment, the formulation is also stable at higher temperatures, such as room temperature. The formulation is suitable for use in ready-to-use devices with a small needle size that provides greater patient comfort compared to a marketed ready-to-use product (for example, Humira® using a 27G needle and 50 mg / ml antibody concentration).
En una modalidad, una composición de proteínas comprende:In one embodiment, a protein composition comprises:
(a) >50 mg/ml de anticuerpo;(a)> 50 mg / ml antibody;
(b) 30 mM o menos de una sal inorgánica, tal como cloruro de sodio o cloruro de magnesio;(b) 30 mM or less of an inorganic salt, such as sodium chloride or magnesium chloride;
(d) 0-25 mM de un aminoácido, tal como arginina o glicina;(d) 0-25 mM of an amino acid, such as arginine or glycine;
(e) 50 mM o menos de un tampón tal como tampón de histidina;(e) 50 mM or less of a buffer such as histidine buffer;
(e) 0,001-0,005 % de un tensioactivo no iónico;(e) 0.001-0.005% of a nonionic surfactant;
(f) 100-200 mM de un agente modificador de la tonicidad, tal como sacarosa, propilenglicol, glicerol, manitol o D-sorbitol;(f) 100-200 mM of a tonicity modifying agent, such as sucrose, propylene glycol, glycerol, mannitol or D-sorbitol;
tamponada a un pH de entre 5 y 7.buffered to a pH between 5 and 7.
En una modalidad, una composición de proteínas comprende:In one embodiment, a protein composition comprises:
(a) 100 mg/ml de anticuerpo;(a) 100 mg / ml of antibody;
(b) cloruro de sodio 25 mM;(b) 25 mM sodium chloride;
(c) tampón de histidina 33 mM;(c) 33 mM histidine buffer;
(d) arginina 25 mM;(d) 25 mM arginine;
(e) polisorbato 80 al 0,001 %;(e) 0.001% polysorbate 80;
(f) sacarosa 150 mM;(f) 150 mM sucrose;
tamponada a un pH de entre 5 y 7.buffered to a pH between 5 and 7.
En una modalidad, la composición estable de proteínas comprende:In one embodiment, the stable protein composition comprises:
(a) 100 mg/ml de anticuerpo;(a) 100 mg / ml of antibody;
(b) cloruro de sodio 25 mM;(b) 25 mM sodium chloride;
(c) tampón de histidina 33 mM;(c) 33 mM histidine buffer;
(d) arginina 25 mM;(d) 25 mM arginine;
(e) polisorbato 80 al 0,001 %;(e) 0.001% polysorbate 80;
(f) manitol 150 mM;(f) 150 mM mannitol;
tamponada a un pH de entre 5 y 7.buffered to a pH between 5 and 7.
En una modalidad, la composición estable de proteínas comprende:In one embodiment, the stable protein composition comprises:
(a) 100 mg/ml de anticuerpo;(a) 100 mg / ml of antibody;
(b) cloruro de sodio 25 mM;(b) 25 mM sodium chloride;
(c) tampón de histidina 33 mM;(c) 33 mM histidine buffer;
(d) arginina 25 mM;(d) 25 mM arginine;
(e) polisorbato 80 al 0,001 %;(e) 0.001% polysorbate 80;
(f) sacarosa 150 mM; (f) 150 mM sucrose;
tamponada a un pH de 6,0 a 6,5.buffered at a pH of 6.0 to 6.5.
En una modalidad, la composición estable de proteínas comprende:In one embodiment, the stable protein composition comprises:
(a) 100 mg/ml de anticuerpo;(a) 100 mg / ml of antibody;
(b) cloruro de sodio 25 mM;(b) 25 mM sodium chloride;
(c) tampón de histidina 33 mM;(c) 33 mM histidine buffer;
(d) arginina 25 mM;(d) 25 mM arginine;
(e) sacarosa 150 mM;(e) 150 mM sucrose;
tamponada a un pH entre 5 y 7.buffered to a pH between 5 and 7.
Las composiciones descritas en la presente descripción han demostrado sorprendentemente estabilidad frente a la formación de HMWP a temperatura ambiente (aquí medida a 25 °C) durante 12 meses y a 5 °C durante hasta 24 meses donde no hay un aumento detectable del % de HMWP. Además, varias composiciones descritas en la presente descripción muestran típicamente que solo se forma 2-7 % de HMWP durante 3 meses a 40 °C, lo que sugiere una formulación termoestable interesante a pesar de tener una concentración total baja de sal y tampón. Será evidente para los expertos en la técnica de las composiciones farmacéuticas que las composiciones de proteínas estables descritas anteriormente se pueden preparar de acuerdo con procedimientos estándar (Luo R y otros, High-concentration UF/DF of a monoclonal antibody. Strategy for optimization and scale-up, Bioprocess Int. 4, 44-48 (2006)). Por ejemplo, las composiciones de proteína estables pueden prepararse típicamente diafiltrando primero la proteína a una concentración de 50 mg/ml o más mediante el uso de Filtración de Flujo Tangencial (TFF). Subsecuentemente, el producto formulado, excepto por la adición de un tensioactivo (cuando corresponda), se ultrafiltra a 100 mg/ml o concentraciones superiores, después de lo cual se puede añadir el tensioactivo.The compositions described in the present disclosure have surprisingly demonstrated stability against HMWP formation at room temperature (here measured at 25 ° C) for 12 months and at 5 ° C for up to 24 months where there is no detectable increase in% HMWP. Furthermore, various compositions described in the present disclosure typically show that only 2-7% HMWP is formed over 3 months at 40 ° C, suggesting an interesting thermoset formulation despite having a low total salt and buffer concentration. It will be apparent to those skilled in the art of pharmaceutical compositions that the stable protein compositions described above can be prepared according to standard procedures (Luo R et al., High-concentration UF / DF of a monoclonal antibody. Strategy for optimization and scale -up, Bioprocess Int. 4, 44-48 (2006)). For example, stable protein compositions can typically be prepared by first diafiltering the protein at a concentration of 50 mg / ml or more through the use of Tangential Flow Filtration (TFF). Subsequently, the formulated product, except for the addition of a surfactant (where applicable), is ultrafiltered at 100 mg / ml or higher concentrations, after which the surfactant can be added.
Es posible que puedan presentarse otros ingredientes en la composición farmacéutica de la presente invención. Estos ingredientes adicionales pueden incluir cosolventes, agentes humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de masa, agentes quelantes, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, albúmina sérica humana, gelatina o proteínas) y un zwitterión. Tales ingredientes adicionales, por supuesto, no deben afectar adversamente la estabilidad general de la formulación farmacéutica de la presente invención.It is possible that other ingredients may be present in the pharmaceutical composition of the present invention. These additional ingredients can include cosolvents, wetting agents, emulsifiers, antioxidants, bulking agents, chelating agents, metal ions, oil carriers, proteins (eg, human serum albumin, gelatin, or proteins), and a zwitterion. Such additional ingredients, of course, should not adversely affect the overall stability of the pharmaceutical formulation of the present invention.
En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención son estables durante más de 6 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the invention are stable for more than 6 weeks of use and for more than 3 years of storage.
En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención son estables durante más de 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the invention are stable for more than 4 weeks of use and for more than 3 years of storage.
En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención son estables durante más de 4 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento.In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the invention are stable for more than 4 weeks of use and for more than two years of storage.
En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención son estables durante más de 2 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento.In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the invention are stable for more than 2 weeks of use and for more than two years of storage.
En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención son estables durante más de 1 semana de uso y durante más de seis meses de almacenamiento.In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the invention are stable for more than 1 week of use and for more than six months of storage.
De acuerdo con un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición de proteína estable como se define en la presente descripción para su uso en terapia.According to a second aspect of the invention, a stable protein composition as defined in the present description is provided for use in therapy.
El término "tratamiento" y "tratar" como se usa en la presente descripción se refiere al manejo y la atención de un paciente con el propósito de combatir una afección, tal como una enfermedad o un trastorno. El término pretende incluir el espectro completo de tratamientos para una afección determinada de la que padece el paciente, tal como la administración del compuesto activo para aliviar los síntomas o complicaciones, para retrasar la progresión de la enfermedad, trastorno o afección, para aliviar o calmar los síntomas y complicaciones, y/o para curar o eliminar la enfermedad, trastorno o afección así como para prevenir la afección, en donde prevención debe entenderse como el manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir la enfermedad, afección o trastorno e incluye la administración de los compuestos activos para prevenir el inicio de los síntomas o complicaciones. El paciente que va a tratarse es preferentemente un mamífero; en particular un ser humano, pero puede incluir, además, animales, como perros, gatos, vacas, ovejas y cerdos. The term "treatment" and "treat" as used herein refers to the management and care of a patient for the purpose of combating a condition, such as a disease or disorder. The term is intended to include the full spectrum of treatments for a particular condition from which the patient suffers, such as administration of the active compound to alleviate symptoms or complications, to delay the progression of the disease, disorder or condition, to alleviate or calm symptoms and complications, and / or to cure or eliminate the disease, disorder or condition as well as to prevent the condition, where prevention should be understood as the management and care of a patient for the purpose of combating the disease, condition or disorder and includes administration of the active compounds to prevent the onset of symptoms or complications. The patient to be treated is preferably a mammal; in particular a human being, but can also include animals, such as dogs, cats, cows, sheep and pigs.
Por ejemplo, las composiciones de anticuerpos anti-TFPI de la presente invención puede usarse en el tratamiento de una coagulopatía (trastorno hemorrágico), tal como hemofilia A, con o sin inhibidores, y hemofilia B, con o sin inhibidores o de otro modo como se describe en el documento WO2010/072691.For example, the anti-TFPI antibody compositions of the present invention can be used in the treatment of a coagulopathy (bleeding disorder), such as hemophilia A, with or without inhibitors, and hemophilia B, with or without inhibitors or otherwise as is described in WO2010 / 072691.
Por tanto, de acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona un método para tratar una coagulopatía que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de un anticuerpo anti-TFPI de la presente invención.Thus, in accordance with a further aspect, the invention provides a method of treating a coagulopathy which comprises administering to a patient a therapeutically effective amount of an anti-TFPI antibody composition of the present invention.
La invención también proporciona una composición de un anticuerpo anti-TFPI de la presente invención para su uso en el tratamiento de una coagulopatía.The invention also provides an anti-TFPI antibody composition of the present invention for use in treating a coagulopathy.
La invención también proporciona el uso de una composición de un anticuerpo anti-TFPI de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una coagulopatía.The invention also provides the use of an anti-TFPI antibody composition of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment of a coagulopathy.
Debe entenderse que los regímenes terapéuticos y profilácticos (preventivos) representan aspectos separados de la presente invención.It should be understood that therapeutic and prophylactic (preventive) regimens represent separate aspects of the present invention.
Las formulaciones farmacéuticas de la invención son generalmente adecuadas para la administración parenteral. La administración parenteral puede realizarse por inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa similar a una lapicera. Alternativamente, la administración parenteral puede realizarse por medio de una bomba de infusión.The pharmaceutical formulations of the invention are generally suitable for parenteral administration. Parenteral administration can be by subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal or intravenous injection via syringe, optionally a pen-like syringe. Alternatively, parenteral administration can be done by means of an infusion pump.
La invención se describe adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.The invention is further described with reference to the following non-limiting examples.
(Breve descripción de los dibujos)1(Brief description of the drawings) 1
La figura 1 muestra un análisis estadístico del efecto de los factores principales y las interacciones de 2 factores sobre la formación de % de HMWP después de que las formulaciones se hayan almacenado a 40 °C durante 3 meses.Figure 1 shows a statistical analysis of the effect of major factors and 2-factor interactions on% HMWP formation after the formulations have been stored at 40 ° C for 3 months.
La figura 2 muestra el análisis estadístico del efecto de histidina y arginina en la formulación de % de HMWP después de que las formulaciones se hayan almacenado a 40 °C durante 3 meses.Figure 2 shows the statistical analysis of the effect of histidine and arginine in the% HMWP formulation after the formulations have been stored at 40 ° C for 3 months.
La figura 3 muestra el análisis estadístico del efecto de histidina, cloruro de sodio (NaCl) y arginina sobre la viscosidad de la formulación.Figure 3 shows the statistical analysis of the effect of histidine, sodium chloride (NaCl) and arginine on the viscosity of the formulation.
EjemplosExamples
Ejemplo 1Example 1
Se prepararon 18 formulaciones (véase la Tabla 1 a continuación). Las formulaciones se prepararon a partir de una solución madre que contenía aprox. 150 mg/ml del mAb 1 y tampón de histidina 10 mM, pH 6,5. Esta solución madre se preparó mediante UF/DF/u F convencional. Se preparó una solución madre de los excipientes y se mezcló en la proporción correcta mediante el uso de un Biomek® 2000, sistema robot Beckman Coulter. Las formulaciones finales se llenaron en cartuchos de 3 ml de Penfill®, vidrio tipo 1. El pistón del cartucho se ajustó para acomodar 0,6 ml, que también era el volumen de llenado. Las formulaciones se almacenaron a 40 °C durante tres meses y luego se analizaron química, quimicofarmacéutica y biofísicamente. El aumento en la formación de agregados de proteínas (% HMWP) se puede modelar mediante el uso del software SAS JMP 8.0. Los datos muestran que existe un efecto positivo de arginina sobre la estabilidad que disminuyó significativamente la formación de agregados de proteínas. De manera similar, el efecto combinado de histidina y NaCl también disminuye la formación de agregados de proteínas. La sacarosa y el polisorbato 80 (PS 80) aumentan débilmente la formación de agregados de proteínas.18 formulations were prepared (see Table 1 below). The formulations were prepared from a stock solution containing approx. 150 mg / ml of mAb 1 and 10 mM histidine buffer, pH 6.5. This stock solution was prepared by conventional UF / DF / u F. A stock solution of the excipients was prepared and mixed in the correct ratio using a Biomek® 2000, Beckman Coulter robot system. Final formulations were filled into 3 ml Penfill® type 1 glass cartridges. The cartridge piston was adjusted to accommodate 0.6 ml, which was also the fill volume. The formulations were stored at 40 ° C for three months and then analyzed chemically, chemically and biophysically. The increase in protein aggregate formation (% HMWP) can be modeled using SAS JMP 8.0 software. The data show that there is a positive effect of arginine on stability that significantly decreased the formation of protein aggregates. Similarly, the combined effect of histidine and NaCl also decreases the formation of protein aggregates. Sucrose and polysorbate 80 (PS 80) weakly increase the formation of protein aggregates.
Tabla 1 Composición de formulacionesTable 1 Composition of formulations
El efecto estadístico de los factores principales y las interacciones de 2 factores sobre la formación de % de HMWP, después de que la formulación se haya almacenado a 40 °C durante tres meses se muestra en la Figura 1.The statistical effect of the main factors and the interactions of 2 factors on the formation of % HMWP, after the formulation has been stored at 40 ° C for three months is shown in Figure 1.
Ejemplo 2Example 2
Una solución de mAb se prepara por UF/DF/UF hasta una concentración > 100 mg/ml que incluye histidina 10 mM o NaCl 10 mM. Se prepara una solución que contiene los excipientes a investigar y se mezcla con la solución de mAb hasta la concentración deseada. El pH se ajusta al pH deseado. Las formulaciones se llenaron en cartuchos de 3 ml de Penfill®, vidrio tipo 1. El pistón del cartucho se ajustó para acomodar 1,5 ml, que también era el volumen de llenado. Los cartuchos se almacenaron a 5°C y/o 25°C y/o 40°C. La Tabla 2 muestra las diversas formulaciones preparadas y la viscosidad resultante y el aumento de agregados (% de HMWP). De manera similar al Ejemplo 1, se observa que la arginina tiene un efecto estabilizador ya que contrarresta la formación de % de HMWP. También se observa que la histidina contiene un efecto estabilizador similar.A mAb solution is prepared by UF / DF / UF to a concentration> 100 mg / ml that includes 10 mM histidine or 10 mM NaCl. A solution containing the excipients to be investigated is prepared and mixed with the mAb solution to the desired concentration. The pH is adjusted to the desired pH. The formulations were filled into 3 ml cartridges of Penfill®, type 1 glass. The piston of the cartridge was adjusted to accommodate 1.5 ml, which was also the fill volume. Cartridges were stored at 5 ° C and / or 25 ° C and / or 40 ° C. Table 2 shows the various formulations prepared and the resulting viscosity and aggregate build-up (% HMWP). Similar to Example 1, arginine is seen to have a stabilizing effect as it counteracts the formation of% HMWP. Histidine is also found to contain a similar stabilizing effect.
Además, también se observó que la histidina, el cloruro de sodio y la arginina tienen cada uno un efecto reductor de la viscosidad estadísticamente significativo sobre la formulación, teniendo la histidina el efecto más profundo.Furthermore, it was also observed that histidine, sodium chloride and arginine each have a statistically significant viscosity lowering effect on the formulation, with histidine having the most profound effect.
Interesantemente, después de 12 meses a los 25°C el aumento en % de HMWP es virtualmente inexistente, lo que indica fuertemente que existe un potencial para una formulación estable a temperatura ambiente (Tabla 2). mAb1 es el anticuerpo anti-IL20 15D2 como se describe en el documento WO2010/000721. mAb2 es el anticuerpo monoclonal anti-TFPI HzTFPI4F36 como se describe en el documento WO2010/072691. mAb3 es el anticuerpo monoclonal anti-C5aR hAb-Q como se describe en el documento WO2009/103113. mAb4 es el anticuerpo monoclonal anti-NKG2D MS como se describe en el documento 2009/077483. mAb5 es el anticuerpo monoclonal anti-NKG2A humZ270 como se describe en el documento WO2008/009545Interestingly, after 12 months at 25 ° C the% increase in HMWP is virtually non-existent, strongly indicating that there is potential for a stable formulation at room temperature (Table 2). mAb1 is the anti-IL20 antibody 15D2 as described in WO2010 / 000721. mAb2 is the anti-TFPI monoclonal antibody HzTFPI4F36 as described in WO2010 / 072691. mAb3 is the monoclonal anti-C5aR hAb-Q antibody as described in WO2009 / 103113. mAb4 is the anti-NKG2D MS monoclonal antibody as described in 2009/077483. mAb5 is the anti-NKG2A monoclonal antibody humZ270 as described in WO2008 / 009545
Tabla 2 Ejemplos de formulaciones y su correspondiente viscosidad y estabilidad químicaTable 2 Examples of formulations and their corresponding viscosity and chemical stability
Los efectos estadísticos de histidina o arginina sobre la formación de % de HMWP después de que la formulación se haya almacenado a 40°C durante 3 meses, se muestra en la Figura 2.Statistical effects of histidine or arginine on% HMWP formation after the formulation has been stored at 40 ° C for 3 months is shown in Figure 2.
Los efectos estadísticos de la histidina, el cloruro de sodio (NaCl) y la arginina sobre la viscosidad de la formulación se muestran en la Figura 3.The statistical effects of histidine, sodium chloride (NaCl) and arginine on the viscosity of the formulation are shown in Figure 3.
Ejemplo 3 Example 3
Se han preparado formulaciones de mAb como se menciona en el Ejemplo 2 con variación únicamente en la cantidad de tensioactivo. La robustez de las formulaciones se ha evaluado mediante estabilidad en almacenamiento a temperatura acelerada y de almacenamiento (Tabla 3), y además por agitación mecánica y congelación/descongelación (Tabla 4). Todas las formulaciones contienen:MAb formulations have been prepared as mentioned in Example 2 with variation only in the amount of surfactant. The robustness of the formulations has been evaluated by storage stability at accelerated temperature and storage (Table 3), and also by mechanical stirring and freezing / thawing (Table 4). All formulations contain:
mAb 100 mg/ml, histidina 33 mM, arginina 25 mM, NaCl 25 mM, sacarosa 150 mM,100 mg / ml mAb, 33 mM histidine, 25 mM arginine, 25 mM NaCl, 150 mM sucrose,
0-0,1 mg/ml de polisorbato 80. pH de la formulación: 6,5 (mAb 1) y 6,0 (mAb 4)0-0.1 mg / ml of polysorbate 80. pH of the formulation: 6.5 (mAb 1) and 6.0 (mAb 4)
Tabla 3. Estabilidad de almacenamiento en condiciones aceleradas y de temperatura de almacenamiento. Las formulaciones contienen cantidades variables de tensioactivo.Table 3. Storage stability under accelerated conditions and storage temperature. The formulations contain varying amounts of surfactant.
También se ha realizado un análisis de apariencia visual en gabinetes de luz y lámparas de arquitecto para todas las formulaciones para evaluar la posibilidad de formación de partículas. En el tiempo cero, se encontró que todas las muestras eran claras a ligeramente opalescentes sin partículas visibles mediante el uso de ambos métodos analíticos. No se ha observado ninguna diferencia durante el período de estabilidad en almacenamiento de la aparición de todas las formulaciones.A visual appearance analysis has also been performed on light cabinets and architect lamps for all formulations to assess the possibility of particle formation. At time zero, all samples were found to be clear to slightly opalescent with no visible particles using both analytical methods. No difference was observed during the shelf life of the appearance of all formulations.
Tabla 4. Formulaciones de mAb expuestas a i) estrés por congelación-descongelación (10 ciclos de -20°C a temperatura ambiente) ii) agitación mecánica a temperatura ambiente, y iii) rotación combinada y térmico (37°C)Table 4. mAb formulations exposed to i) freeze-thaw stress (10 cycles of -20 ° C to room temperature) ii) mechanical stirring at room temperature, and iii) combined and thermal rotation (37 ° C)
También se ha realizado un análisis de apariencia visual en gabinetes de luz y lámparas de arquitecto para todas las formulaciones para evaluar la posibilidad de formación de partículas. En el tiempo cero, se encontró que todas las muestras eran claras a ligeramente opalescentes sin partículas visibles mediante el uso de ambos métodos analíticos. No se ha observado ninguna diferencia durante las condiciones de estrés anteriores. Además, no se pudo detectar ningún aumento en el % de HMWP durante estas condiciones de estrés.A visual appearance analysis has also been performed on light cabinets and architect lamps for all formulations to assess the possibility of particle formation. At time zero, all samples were found to be clear to slightly opalescent with no visible particles using both analytical methods. No difference has been observed during the above stress conditions. Furthermore, no increase in% HMWP could be detected during these stress conditions.
Ejemplo 4Example 4
Se han producido dos lotes (aprox. 3 l) en las instalaciones de la planta piloto de acuerdo con las condiciones regulares de acabado de llenado. La formulación se llenó en cartuchos de 3 ml de Penfill®, vidrio tipo 1. El pistón del cartucho se ajustó para acomodar 1 ml, que también era el volumen de llenado. La diferencia entre la composición de los lotes es que uno contiene Polisorbato 80 mientras que el otro no. Los dos productos farmacéuticos están expuestos a condiciones de temperatura acelerada y agitación mecánica (Tabla 5).Two batches (approx. 3 l) have been produced at the pilot plant facilities in accordance with regular fill finish conditions. The formulation was filled into 3 ml cartridges of Penfill®, type 1 glass. The piston of the cartridge was adjusted to accommodate 1 ml, which was also the fill volume. The difference between the composition of the batches is that one contains Polysorbate 80 while the other does not. The two pharmaceuticals are exposed to conditions of accelerated temperature and mechanical agitation (Table 5).
Tabla 5. Estabilidad de almacenamiento de dos lotes de producción piloto de mAb 1.Table 5. Storage stability of two mAb 1 pilot production batches.
Ejemplo 5Example 5
Se preparó un lote a escala de laboratorio como en el Ejemplo 2 y se llenó en cartuchos de 3,0 ml de Penfill®, vidrio tipo 1. El pistón del cartucho se ajustó para acomodar 1,5 ml, que también era el volumen de llenado. El efecto del estrés interfacial aire/agua sobre el producto farmacéutico se evaluó al aplicar un volumen variable de aire a la formulación y exponerla a condiciones severas de temperatura y estrés mecánico (Tabla 6)A laboratory scale batch was prepared as in Example 2 and filled into 3.0 ml cartridges of Penfill®, type 1 glass. The piston of the cartridge was adjusted to accommodate 1.5 ml, which was also the volume of fill. The effect of the air / water interfacial stress on the pharmaceutical product was evaluated by applying a variable volume of air to the formulation and exposing it to severe conditions of temperature and mechanical stress (Table 6)
Tabla 6. Influencia sobre la estabilidad de las proteínas del volumen de aire añadido al producto farmacéutico llenado en cartuchos de 3,0 ml de Penfill®*. La estabilidad de las proteínas se evaluó después de estrés rotacional y térmico a 37°C durante 14 días.Table 6. Influence on the stability of the proteins of the volume of air added to the pharmaceutical product filled in 3.0 ml cartridges of Penfill® *. The stability of the proteins was evaluated after rotational and thermal stress at 37 ° C for 14 days.
El uso de los términos "un" y "una" y "el/la" y referentes similares en el contexto de la descripción de la invención cubren tanto el singular como el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente descripción o el contexto lo contradiga claramente. Por ejemplo, la frase "el compuesto" debe entenderse que se refiere a varios "compuestos" de la invención o aspecto descrito particular, a menos que se indique lo contrario.The use of the terms "a" and "an" and "the" and similar referents in the context of the description of the invention covers both the singular and the plural, unless otherwise indicated in the present description. or the context clearly contradicts it. For example, the phrase "the compound" is to be understood to refer to various "compounds" of the particular invention or disclosed aspect, unless otherwise indicated.
A menos que se indique lo contrario, todos los valores exactos proporcionados en la presente descripción son representativos de los valores aproximados correspondientes. Cuando se da un intervalo, el intervalo incluye ambos valores finales, a menos que se indique lo contrario.Unless otherwise indicated, all exact values provided in the present description are representative of the corresponding approximate values. When an interval is given, the interval includes both final values, unless otherwise indicated.
La descripción en la presente de cualquier aspecto o aspecto de la invención mediante el uso de términos tales como "que comprende", "que tiene", "que incluye" o "que contiene" con referencia a un elemento o elementos pretende proporcionar soporte para un aspecto o aspecto similar de la invención que "consiste en", "consiste esencialmente en", o "comprende sustancialmente" ese elemento o elementos particulares, a menos que se indique de cualquier otra manera o que el contexto lo contradiga claramente (por ejemplo, una composición descrita en la presente como que comprende un elemento particular debe entenderse como que también describe una composición que consiste en ese elemento, a menos que se indique de cualquier otra manera o el contexto lo contradiga claramente). The description herein of any aspect or aspect of the invention by using terms such as "comprising", "having", "including" or "containing" with reference to an element or elements is intended to provide support for an aspect or similar aspect of the invention that "consists of", "consists essentially of", or "substantially comprises" that particular element or elements, unless otherwise indicated or clearly contradicted by the context (eg , a composition described herein as comprising a particular element is to be understood as also describing a composition consisting of that element, unless otherwise stated or clearly contradicted by the context).
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