ES2731554B2 - INCLUSION COMPLEX OF NATURAL ORIGIN AND BIODAVAILABLE FOR THE TREATMENT OF DISEASES OF PARASITIC ORIGIN - Google Patents

Description

DESCRIPCIÓNDESCRIPTION

COMPLEJO DE INCLUSIÓN DE ORIGEN NATURAL Y BIODISPONIBLE PARA INCLUSION COMPLEX OF NATURAL ORIGIN AND BIODAVAILABLE FOR

EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES DE ORIGEN PARASITARIOTHE TREATMENT OF DISEASES OF PARASITIC ORIGIN

SECTOR TÉCNICOTECHNICAL SECTOR

La presente invención se encuadra en el ámbito de la química orgánica y halla su aplicación en el sector farmacéutico. De forma más específica, la presente invención proporciona un nuevo complejo, en particular un complejo de inclusión o clatrato, que permite incrementar la solubilidad y biodisponibilidad de los compuestos incluidos en su interior. Como resultado, cuando los compuestos activos presentan actividad antiparasitaria, el complejo de la presente invención permite el tratamiento de enfermedades parasitarias, tal como la malaria, con una actividad mayor que la obtenida de utilizarse los componentes por separado.The present invention falls within the field of organic chemistry and finds its application in the pharmaceutical sector. More specifically, the present invention provides a new complex, in particular an inclusion or clathrate complex, which makes it possible to increase the solubility and bioavailability of the compounds included therein. As a result, when the active compounds have antiparasitic activity, the complex of the present invention allows the treatment of parasitic diseases, such as malaria, with an activity greater than that obtained from using the components separately.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓNBACKGROUND OF THE INVENTION

Los parásitos son seres vivos que viven de otros seres vivos, como del cuerpo humano, para alimentarse y tener un lugar donde vivir. Se pueden contraer por medio de los alimentos o el agua contaminada, la picadura de un insecto o por contacto sexual. Algunas enfermedades parasitarias son más fáciles de tratar que otras.Parasites are living things that live on other living things, such as the human body, to feed themselves and have a place to live. They can be contracted through contaminated food or water, an insect bite, or sexual contact. Some parasitic diseases are easier to treat than others.

Los parásitos varían en tamaño, desde organismos unicelulares llamados protozoarios, hasta gusanos, que pueden observarse a simple vista. El suministro de agua contaminada puede causar infecciones por Giardias. Los gatos pueden transmitir toxoplasmosis, peligrosa para las mujeres embarazadas. Otras enfermedades, como la malaria, son comunes en ciertas partes del mundo. En concreto esta última, denominada también paludismo, está producida por parásitos del género Plasmodium y es la primera en importancia entre las enfermedades debilitantes. Causó aproximadamente 216 millones de casos de paludismo el año 2016 y 445.000 fallecidos, de los cuales más del 85% son niños en zonas endémicas de África. La mayor parte de la carga de morbilidad se registra al sur del Sahara.Parasites range in size from single-celled organisms called protozoa to worms, which can be seen with the naked eye. Contaminated water supply can cause Giardia infections. Cats can transmit toxoplasmosis, dangerous for pregnant women. Other diseases, such as malaria, are common in certain parts of the world. Specifically, the latter, also called malaria, is produced by parasites of the genus Plasmodium and is the first in importance among the debilitating diseases. It caused approximately 216 million cases of malaria in 2016 and 445,000 deaths, of which more than 85% are children in endemic areas of Africa. Most of the disease burden occurs south of the Sahara.

Los síntomas de la malaria son muy variados, incluyendo fiebre, escalofríos, sudoración y dolor de cabeza. Puede presentar náuseas, vómitos, tos, heces con sangre, dolores musculares, ictericia, defectos de la coagulación sanguínea, shock, insuficiencia renal o hepática, trastornos del sistema nervioso central y coma. La fiebre y los escalofríos son síntomas cíclicos, repitiéndose cada dos o tres días.Symptoms of malaria vary widely, including fever, chills, sweating, and headache. You may have nausea, vomiting, cough, bloody stools, muscle aches, jaundice, blood clotting defects, shock, kidney failure, or liver, central nervous system disorders and coma. Fever and chills are cyclical symptoms, repeating every two to three days.

El protozoo Plasmodium falciparum causa la malaria más aguda y grave. Origina el secuestro de hematíes en microcirculación venosa, evita el paso de la sangre por el bazo y, por tanto, provoca su destrucción; presenta alteraciones en el nivel de conciencia, coma, convulsiones, hipoglucemia, hiperinsulinemia en adultos, acidosis metabólica, ictericia o hemorragias que son signos de mal pronóstico que requieren una actuación médica inmediata. La enfermedad es grave en niños y mujeres embarazadas.The protozoan Plasmodium falciparum causes the most acute and severe malaria. It causes the sequestration of red blood cells in venous microcirculation, prevents the passage of blood through the spleen and, therefore, causes its destruction; presents alterations in the level of consciousness, coma, seizures, hypoglycemia, hyperinsulinemia in adults, metabolic acidosis, jaundice or hemorrhages that are signs of poor prognosis that require immediate medical action. The disease is serious in children and pregnant women.

Los medicamentos antipalúdicos varían de país a país, debido a estudios de resistencia a antimaláricos que se realizan de manera periódica y de acuerdo a un protocolo establecido por la agencia local de la OMS. Se han observado resistencias de los parásitos a varios antipalúdicos. Las tasas de resistencia aumentan a medida que el uso de nuevos antipalúdicos también aumenta. Dentro de los medicamentos habitualmente usados destacan los derivados de la artemisinina, ya que presentan acción esquizonticida sanguínea rápida. La artemisinina se encuentra en la planta Artemisia annua. Se trata de una lactona sesquiterpénica que contiene un puente peróxido inusual. Este peróxido parece ser el responsable del mecanismo de acción de la droga. Los derivados de artemisinina forman una familia de fármacos y poseen la acción más rápida de todos los medicamentos comunes contra el paludismo. Adicionalmente, se han descrito otros compuestos terpénicos con características antimaláricas, como es el caso de los denominados Mogrosides.Antimalarial drugs vary from country to country, due to antimalarial resistance studies that are carried out periodically and according to a protocol established by the local WHO agency. Resistance of parasites to several antimalarials has been observed. Resistance rates increase as the use of newer antimalarials also increases. Among the commonly used drugs, artemisinin derivatives stand out, since they have rapid blood schizonticidal action. Artemisinin is found in the Artemisia annua plant. It is a sesquiterpene lactone that contains an unusual peroxide bridge. This peroxide seems to be responsible for the mechanism of action of the drug. The artemisinin derivatives form a family of drugs and have the fastest acting of all common antimalarial drugs. Additionally, other terpene compounds with antimalarial characteristics have been described, such as the so-called Mogrosides.

Debido a la corta vida media de la artemisinina, se debe usar en combinación con otro antimalárico para evitar recrudescencias de la infección. Así, su uso como monoterapia está desaconsejado por la OMS, ya que se ha encontrado que parásitos de malaria han desarrollado resistencia al fármaco. Las terapias que combinan la artemisinina con algún otro fármaco (ACTs), generalmente compuestos organoclorados, son los tratamientos preferidos por su efectividad, aunque presentan problemas de tolerancia por los pacientes. El uso de dicho medicamento se ha incrementado también en tratamientos contra la malaria vivax y es objeto de investigación en estudios de tratamientos del cáncer.Due to the short half-life of artemisinin, it should be used in combination with another antimalarial to avoid recurrence of infection. Thus, its use as monotherapy is discouraged by the WHO, since it has been found that malaria parasites have developed resistance to the drug. Therapies that combine artemisinin with some other drug (ACTs), generally organochlorine compounds, are the preferred treatments due to their effectiveness, although they present tolerance problems for patients. The use of this drug has also increased in vivax malaria treatments and is being investigated in cancer treatment studies.

Por otra parte, es conocido que la curcumina tiene efectos antipalúdicos in vitro, pero su nula biodisponibilidad in vivo dificulta el desarrollo de combinaciones con la artemisinina. De hecho esta también adolece del mismo problema. En el estudio Curcumin-Artemisinin Combination Therapy for Malaria, Govindarajan Padmanaban et al., Antimicrob Agents Chemother. 2006 May, debido al hecho que estas sustancias no son solubles en agua, tienen que disolverlas en DMSO (dimetilsulfóxido), lo que no es practicable para realizar estudios in vivo con humanos. Otro inconveniente detectado en el artículo es que no se aplican simultáneamente por el mismo medio, sino que la artemisinina se inyecta en sangre y la curcumina, previamente disuelta en DMSO, se ha introducido oralmente.On the other hand, it is known that curcumin has antimalarial effects in vitro, but its null bioavailability in vivo makes it difficult to develop combinations with artemisinin. In fact it also suffers from the same problem. In the Curcumin-Artemisinin study Combination Therapy for Malaria, Govindarajan Padmanaban et al., Antimicrob Agents Chemother. 2006 May, due to the fact that these substances are not soluble in water, they have to dissolve them in DMSO (dimethylsulfoxide), which is not practicable for in vivo studies with humans. Another drawback detected in the article is that they are not applied simultaneously by the same means, but that artemisinin is injected into the blood and curcumin, previously dissolved in DMSO, has been introduced orally.

En el estudio Cytotoxic Effect of Curcumin on Malaria Parasite Plasmodium falciparum: Inhibition of Histone Acetylation and Generation of Reactive Oxygen Species, Long Cui, Jun Miao, and Liwang Cui, Antimicrob Agents Chemother. 2007 Feb, donde se utiliza la curcumina como monoterapia, se describe el efecto generado de forma que la actividad prooxidante de la curcumina promueve la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), que finalmente inhiben la actividad de la histona acetiltransferasa (HAT) del parásito, provocando la citotoxicidad necesaria en el mismo.In the study Cytotoxic Effect of Curcumin on Malaria Parasite Plasmodium falciparum: Inhibition of Histone Acetylation and Generation of Reactive Oxygen Species, Long Cui, Jun Miao, and Liwang Cui, Antimicrob Agents Chemother. 2007 Feb, where curcumin is used as monotherapy, the effect generated in such a way that the pro-oxidant activity of curcumin promotes the production of reactive oxygen species (ROS), which finally inhibits the activity of histone acetyltransferase (HAT) of the parasite, causing the necessary cytotoxicity in it.

En el estudio Modulation of cerebral malaria by curcumin as an adjunctive therapy, Kunal Jain, Sumeet Sood, K. Gowthamarajan, The Brazilian Journal of Infectious Diseases, Jul 2013, se describen hasta 9 blancos posibles del parásito sobre los que actúa la curcumina. Por otro lado, en el estudio Ameliorative Effects of Curcumin on Artesunate-Induced Subchronic Toxicity in Testis of Swiss Albino Male Mice, Desai KR, Rajput DK, Patel PB, Highland HN, Dose Response, 2015 Jun, se indica que la curcumina actúa atenuando el daño generado en el tratamiento de la malaria con un derivado de la artemisinina, el artesunato, que se encuentra en la Lista de Medicamentos Esenciales de la Organización Mundial de la Salud.In the study Modulation of cerebral malaria by curcumin as an adjunctive therapy, Kunal Jain, Sumeet Sood, K. Gowthamarajan, The Brazilian Journal of Infectious Diseases, Jul 2013, up to 9 possible targets of the parasite on which curcumin acts are described. On the other hand, in the study Ameliorative Effects of Curcumin on Artesunate-Induced Subchronic Toxicity in Testis of Swiss Albino Male Mice, Desai KR, Rajput DK, Patel PB, Highland HN, Dose Response, 2015 Jun, it is indicated that curcumin acts by attenuating the damage generated in the treatment of malaria with an artemisinin derivative, artesunate, which is found on the World Health Organization List of Essential Medicines.

Por otro lado, en la solicitud de patente WO2012127287 A2 (Febris Bio Tech Ltd et al.) se describe el uso de una composición que comprende glucósidos de esteviol para el tratamiento de la malaria. Adicionalmente, esta composición puede comprender otros agentes antipalúdicos tal como la artemisinina o uno de sus derivados.On the other hand, patent application WO2012127287 A2 (Febris Bio Tech Ltd et al.) Describes the use of a composition comprising steviol glycosides for the treatment of malaria. Additionally, this composition can comprise other antimalarial agents such as artemisinin or one of its derivatives.

Para garantizar que el compuesto activo ingerido tenga un aprovechamiento por parte del cuerpo y sea útil para el fin pretendido, es esencial que éste tenga una adecuada biodisponibilidad. Lamentablemente, la administración de medicamentos por vía oral a menudo sufre de problemas de solubilidad y/o permeabilidad, así como también son frecuentes los problemas de estabilidad que limitan la vida útil del compuesto con actividad terapéutica. El uso de nanocompuestos de inclusión para mejorar la biodisponibilidad de sustancias no solubles en agua es un campo de gran amplitud y en continuo progreso tecnológico, aplicable a las industrias farmacéutica, alimentaria y cosmética. Estas técnicas necesitan evolucionar para satisfacer las nuevas demandas de los consumidores y de la Ciencia de forma general.To ensure that the ingested active compound is used by the body and is useful for its intended purpose, it is essential that it has adequate bioavailability. Unfortunately, oral drug administration often suffers from solubility and / or permeability problems, as well as stability problems that limit the useful life of the active compound. therapy. The use of inclusion nanocomposites to improve the bioavailability of non-water soluble substances is a wide-ranging field in continuous technological progress, applicable to the pharmaceutical, food and cosmetic industries. These techniques need to evolve to meet the new demands of consumers and Science in general.

En el estado de la técnica se han descrito varios intentos de encapsular compuestos con actividad frente a la malaria con objeto de aumentar su solubilidad. En particular, se ha descrito la formación de complejos con ciclodextrinas (US2010179103 A1, WO03075904 A2 y Suvarna Vasanti y col. (Complexation of phytochemicals with cyclodextrin derivatives - An insight. Biomedicine & Pharmacotherapy. Abril 2007. Vol. 88, páginas 1122-1144)); con liposomas (Isacchi Benedetta y col. (Artemisinin and artemisinin plus curcumin liposomal formulations: Enhanced antimalarial efficacy against Plasmodium berghei-infected mice, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, Abril 2012, Vol. 80, N° 3, páginas 528-534)) y con lípidos (Memvanga Patrick B et col. (An oral malaria therapy: Curcumin-loaded lipid-based drug delivery systems combined with beta-arteether, Journal of Controlled Release, Dic 2013, Vol. 172, N° 3, páginas 904-913)).In the state of the art, several attempts have been described to encapsulate compounds with activity against malaria in order to increase their solubility. In particular, complexation with cyclodextrins has been described (US2010179103 A1, WO03075904 A2 and Suvarna Vasanti et al. ( Complexation of phytochemicals with cyclodextrin derivatives - An insight. Biomedicine & Pharmacotherapy. April 2007. Vol. 88, pages 1122-1144 )); with liposomes (Isacchi Benedetta et al. ( Artemisinin and artemisinin plus curcumin liposomal formulations: Enhanced antimalarial efficacy against Plasmodium berghei-infected mice, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, April 2012, Vol. 80, N ° 3, pages 528-534) ) and with lipids (Memvanga Patrick B et al. ( An oral malaria therapy: Curcumin-loaded lipid-based drug delivery systems combined with beta-arteether, Journal of Controlled Release, Dec 2013, Vol. 172, N ° 3, pages 904 -913)).

Por otro lado, en la solicitud de patente WO2009126950 A2 (Univ Louisiana State & Agricultural and Mechanical College) se describe la utilización de glucósidos de diterpenos para aumentar la solubilidad de sustancias insolubles en agua tal como la curcumina o la artemisinina, por separado.On the other hand, patent application WO2009126950 A2 (Univ Louisiana State & Agricultural and Mechanical College) describes the use of diterpene glycosides to increase the solubility of water-insoluble substances such as curcumin or artemisinin, separately.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓNDESCRIPTION OF THE INVENTION

Un primer aspecto de la presente invención se refiere a un complejo, en particular un complejo de inclusión o clatrato, que comprende al menos un compuesto activo, un glucósido de esteviol (GL) y un aminoglucósido (AM).A first aspect of the present invention relates to a complex, in particular an inclusion or clathrate complex, comprising at least one active compound, a steviol glycoside (GL) and an aminoglycoside (AM).

En este documento debe entenderse como "compuesto activo” cualquier compuesto que presente una actividad terapéutica beneficiosa para el ser humano o los animales. En particular, este término hace referencia a un compuesto con actividad antiparasitaria y, preferentemente, con actividad antipalúdica. In this document, "active compound" is to be understood as any compound that has a beneficial therapeutic activity for humans or animals, in particular, this term refers to a compound with antiparasitic activity and, preferably, with antimalarial activity.

El complejo que aquí se describe puede comprender uno o varios glucósidos de esteviol diferentes. Los glucósidos de esteviol más importantes son esteviósido, rebaudiósido A, B, C, D, E y F y dulcósido. Mientras que la molécula de esteviósido es un complejo de tres moléculas de glucosa y una molécula de aglicona llamada esteviol, la molécula de rebaudiósido A contiene un total de cuatro unidades de glucosa, con la glucosa media del triplete conectado a la estructura central de esteviol.The complex described herein may comprise one or more different steviol glycosides. The most important steviol glycosides are stevioside, rebaudioside A, B, C, D, E and F, and dulcoside. While the stevioside molecule is a complex of three glucose molecules and an aglycone molecule called steviol, the rebaudioside A molecule contains a total of four glucose units, with the average glucose of the triplet attached to the steviol core structure.

Esteviósido Rebaudiósido AStevioside Rebaudioside A

Generalmente, el complejo de inclusión que aquí que describe comprende glucósidos de esteviol, por ejemplo procedentes de la estevia, con pesos moleculares comprendidos entre 800 a 1000 g/mol.Generally, the inclusion complex described herein comprises steviol glycosides, for example derived from stevia, with molecular weights ranging from 800 to 1000 g / mol.

Preferentemente, el aminoglucósido (AM) se selecciona entre oligómero de quitosano, glucosamina y una combinación de los anteriores. En realizaciones aún más preferidas, el peso molecular del oligómero de quitosano es de 1000 a 10000 g/mol y, aún más preferentemente, entre 1000 a 3000 g/mol.Preferably, the aminoglycoside (AM) is selected from chitosan oligomer, glucosamine, and a combination of the foregoing. In even more preferred embodiments, the molecular weight of the chitosan oligomer is 1000 to 10000 g / mol, and even more preferably between 1000 to 3000 g / mol.

Un aspecto importante de la presente invención (constatado por DRX, DSC y SEM) es que las interacciones entre los componentes del complejo de inclusión son más débiles que las mostradas con otros complejos como los formados por ciclodextrinas, ya que el tamaño del complejo es superior. En particular, las interacciones entre los glucósidos de esteviol, aminoglucósidos y los compuestos activos en el complejo de la invención, obtenidos mediante sonicación por ultrasonidos tal como se describe más adelante en este documento, tienen lugar mediante puentes de hidrógeno. El enlace de hidrógeno es una fuerza electrostática fuerte cuando muchas moléculas están unidas, ya que proporciona gran estabilidad, pero más débil que el enlace covalente o el enlace iónico. En consecuencia, los compuestos de la presente invención presentan mayor capacidad de liberación de los compuestos activos que la que pudiera obtenerse con ciclodextrinas.An important aspect of the present invention (verified by XRD, DSC and SEM) is that the interactions between the components of the inclusion complex are weaker than the shown with other complexes such as those formed by cyclodextrins, since the size of the complex is greater. In particular, the interactions between steviol glycosides, aminoglycosides and the active compounds in the complex of the invention, obtained by sonication by ultrasound as described later in this document, take place by means of hydrogen bonds. Hydrogen bonding is a strong electrostatic force when many molecules are attached, as it provides great stability, but weaker than covalent bonding or ionic bonding. Consequently, the compounds of the present invention have a greater release capacity for active compounds than that which could be obtained with cyclodextrins.

En la aparición de los enlaces mediante puentes de hidrógeno es esencial la acción de los ultrasonidos que se aplican. De lo contario, estos enlaces no aparecen o lo hacen de forma muy lenta, inviabilizando el proceso que se describe en esta patente.In the appearance of the bonds by means of hydrogen bonds, the action of the ultrasounds that are applied is essential. Otherwise, these links do not appear or they do so very slowly, making the process described in this patent unfeasible.

El complejo de inclusión que se describe en este documento presenta ventajas frente a otros sistemas de vehiculización por permitir incrementar la solubilidad de los compuestos incluidos en su interior, permitir su almacenamiento y su administración, facilitando así su aplicación en el sector farmacéutico. Otra importante ventaja de este complejo radica en el uso exclusivo de polímeros naturales y en la no utilización de surfactantes.The inclusion complex described in this document has advantages over other vehicle systems because it allows increasing the solubility of the compounds included therein, allowing their storage and administration, thus facilitating their application in the pharmaceutical sector. Another important advantage of this complex lies in the exclusive use of natural polymers and in the non-use of surfactants.

Así, la combinación de glucósido de esteviol y aminoglucósido como agentes formadores del complejo de la invención proporciona una elevada solubilidad (que puede llegar a ser 1000 veces superior a la del compuesto activo por separado) y estabilidad en solución. Se ha observado que el complejo de inclusión formado únicamente con glucósido de esteviol como agente encapsulante precipita con el tiempo. La adición del aminoglucósido otorga estabilidad al complejo y, como consecuencia, se mantiene la solubilidad en agua durante un tiempo significativamente superior. De forma general, la contribución del aminoglucósido mejora el complejo de inclusión en dos vertientes diferentes, por una parte aumentando la solubilidad en agua que se había obtenido con el glucósido de esteviol y por otra dando una estabilidad adicional necesaria para que su vida útil sea mayor.Thus, the combination of steviol glycoside and aminoglycoside as complexing agents of the invention provides high solubility (which can be up to 1000 times higher than that of the active compound separately) and stability in solution. The inclusion complex formed solely with steviol glycoside as an encapsulating agent has been observed to precipitate over time. The addition of the aminoglycoside provides stability to the complex and, as a consequence, the solubility in water is maintained for a significantly longer time. In general, the contribution of the aminoglycoside improves the inclusion complex in two different slopes, on the one hand increasing the solubility in water that had been obtained with the steviol glucoside and on the other giving an additional stability necessary for its useful life to be longer .

En realizaciones preferidas de la presente invención, el compuesto activo presente en el interior del complejo de inclusión es un compuesto con actividad frente a la malaria. Preferentemente, este compuesto se selecciona del grupo que consiste en artemisinina, un derivado de artemisinina, curcumina, hidroxitirosol y una combinación de los anteriores. En particular, el derivado de artemisinina puede ser artemeter, artesunato, o dihidroartemisinina (DHA).In preferred embodiments of the present invention, the active compound present within the inclusion complex is a compound with activity against malaria. Preferably, this compound is selected from the group consisting of artemisinin, an artemisinin derivative, curcumin, hydroxytyrosol, and a combination of the foregoing. In In particular, the artemisinin derivative can be artemether, artesunate, or dihydroartemisinin (DHA).

La inclusión de la artemisinina en el complejo de inclusión que se describe en este documento permite estabilizar el grupo peróxido presente en su estructura, lo que resulta beneficioso de cara a utilizar este compuesto activo en el tratamiento de la malaria, ya que se intuye que este grupo funcional es particularmente activo frente a los agentes causantes de la infección, al inducir un proceso oxidativo en las membranas celulares de los mismos, lo que provoca la fagocitosis y posterior lisis.The inclusion of artemisinin in the inclusion complex described in this document enables the peroxide group present in its structure to be stabilized, which is beneficial for the use of this active compound in the treatment of malaria, since it is suspected that this The functional group is particularly active against the agents causing the infection, by inducing an oxidative process in their cell membranes, which causes phagocytosis and subsequent lysis.

Preferentemente, en el interior del complejo formado por glucósido de esteviol y aminoglucósido se sitúan dos agentes antipalúdicos, siendo uno de ellos artemisimina o uno de sus derivados, en particular, artemeter, artesunato, o dihidroartemisinina; mientras que el segundo compuesto activo se selecciona entre curcumina y hidroxitirosol.Preferably, within the complex formed by steviol glucoside and aminoglycoside two antimalarial agents are located, one of them being artemisimin or one of its derivatives, in particular artemether, artesunate, or dihydroartemisinin; while the second active compound is selected from curcumin and hydroxytyrosol.

Una de las ventajas del complejo de inclusión que aquí se describe es que tanto el glucósido de esteviol como el aminoglucósido, agentes encapsulantes del complejo, son compuestos de origen natural que muestran actividad frente a la malaria. Como consecuencia, este complejo resulta particularmente útil para el tratamiento de dicha enfermedad. Así, en el caso de utilizarse una combinación de dos compuestos activos tal como se menciona en el párrafo anterior, la utilización del complejo de la presente invención para el tratamiento de la malaria tiene lugar mediante la aplicación de cuatro compuestos con actividad antimalárica, es decir, la presente invención proporciona una tetraterapia para el tratamiento de la malaria. Es significativo que la presencia de un polifenol como la curcumina en el complejo de la presente invención, evita la recrudescencia, es decir, la aparición de la enfermedad en el futuro.One of the advantages of the inclusion complex described here is that both steviol glycoside and aminoglycoside, encapsulating agents of the complex, are compounds of natural origin that show activity against malaria. As a consequence, this complex is particularly useful for the treatment of said disease. Thus, in the case of using a combination of two active compounds as mentioned in the previous paragraph, the use of the complex of the present invention for the treatment of malaria takes place by applying four compounds with antimalarial activity, that is, , the present invention provides a tetratherapy for the treatment of malaria. It is significant that the presence of a polyphenol such as curcumin in the complex of the present invention prevents recrudescence, that is, the appearance of the disease in the future.

Adicionalmente, la curcumina y el hidroxitirosol son ambos compuestos fenólicos con un comportamiento muy similar. En particular, ambos pueden actuar como hepatoprotectores, lo que resulta particularmente ventajoso en el tratamiento de la malaria, ya que se conoce que durante dicho tratamiento el protozoo se acumula en el hígado.Additionally, curcumin and hydroxytyrosol are both phenolic compounds with very similar behavior. In particular, both can act as hepatoprotectors, which is particularly advantageous in the treatment of malaria, since it is known that during said treatment the protozoa accumulates in the liver.

En realizaciones aún más preferidas, el complejo de inclusión que se describe en esta solicitud de patente comprende:In even more preferred embodiments, the inclusion complex described in this patent application comprises:

i) entre 10 % y 90 % de artemisinina o uno de sus derivados, y i) between 10% and 90% artemisinin or one of its derivatives, and

ii) entre 90% y 10 % de curcumina o hidroxitirosol;ii) between 90% and 10% curcumin or hydroxytyrosol;

cantidades expresadas en peso respecto al peso total de los compuestos activos i) y ii) situados en el interior del complejo de inclusión.Amounts expressed by weight with respect to the total weight of the active compounds i) and ii) located within the inclusion complex.

En particular, se prefiere que el complejo de inclusión comprenda:In particular, it is preferred that the inclusion complex comprises:

i) entre 35 % y 65 % de artemisinina o uno de sus derivados, yi) between 35% and 65% artemisinin or one of its derivatives, and

ii) entre 65% y 35 % de curcumina o hidroxitirosol;ii) between 65% and 35% curcumin or hydroxytyrosol;

cantidades expresadas en peso respecto al peso total de los compuestos activos i) y ii) situados en el interior del complejo de inclusión.Amounts expressed by weight with respect to the total weight of the active compounds i) and ii) located within the inclusion complex.

La solubilidad de los compuestos activos (CBA) se incrementa con la concentración de glucósido de esteviol (GL), siendo preferible que la relación entre CBA y GL sea entre 1:6 y 1:10. Así, se considera preferible que la relación en peso entre los diferentes componentes del complejo sea de 1:6:1 a 1:10:1 entre el CBA: GL: AM, siendo la relación óptima de 1 compuesto activo (CBA): 6 glucósido de esteviol (GL): 1 de aminoglucósido (AM), ya que esta relación permite la formación de estructuras supramoleculares o toroides de clatratos en los que el compuesto activo queda atrapado por interacciones moleculares muy débiles o de corto alcance con la molécula de glucósido de esteviol, por ejemplo, esteviosido (ver figura 1). Si se incrementa la concentración de glucósido de esteviol y/o aminoglucósido se puede incrementar la solubilización del compuesto activo, pero ello también implica un mayor gasto económico al utilizar una cantidad mayor de los agentes formadores del complejo.The solubility of the active compounds (CBA) increases with the concentration of steviol glucoside (GL), it being preferable that the ratio between CBA and GL is between 1: 6 and 1:10. Thus, it is considered preferable that the weight ratio between the different components of the complex is from 1: 6: 1 to 1: 10: 1 between the CBA: GL: AM, the optimal ratio being 1 active compound (CBA): 6 Steviol glycoside (GL): 1 aminoglycoside (AM), since this ratio allows the formation of supramolecular or toroid structures of clathrates in which the active compound is trapped by very weak or short-range molecular interactions with the glucoside molecule steviol, for example stevioside (see figure 1). If the concentration of steviol glucoside and / or aminoglycoside is increased, the solubilization of the active compound can be increased, but this also implies a greater economic expense by using a greater amount of the complexing agents.

Preferentemente, el compuesto activo comprendido en el interior del complejo es una combinación de artemisinina o uno de sus derivados con curcurmina o hidroxitirosol. En particular, se prefiere que el compuesto activo sea la combinación de artemisinina y curcumina (ART/CUR) siendo aún más preferente que estos compuestos se encuentren en una relación 1:1 en peso entre ellos. Tal como se muestra en la figura 1, cuando el compuesto activo es la combinación de artemisinina (ART) y curcumina (CUR) en una relación 1:1 en peso, se puede formar un agregado co-amorfo, tal como ha sido propuesto por Kuthuru Suresh,M. K. Chaitanya Mannava, and Ashwini Nangia*, A Novel Curcumin-Artemisinina Coamorphous Solid: Physical Properties and Pharmacokinetic Profile en RSC Advances (publicación online). Preferably, the active compound comprised within the complex is a combination of artemisinin or one of its derivatives with curcurmin or hydroxytyrosol. In particular, it is preferred that the active compound is the combination of artemisinin and curcumin (ART / CUR) being even more preferred that these compounds are in a 1: 1 ratio by weight to each other. As shown in figure 1, when the active compound is the combination of artemisinin (ART) and curcumin (CUR) in a 1: 1 ratio by weight, a co-amorphous aggregate can be formed, as proposed by Kuthuru Suresh, MK Chaitanya Mannava, and Ashwini Nangia *, A Novel Curcumin-Artemisinin Coamorphous Solid: Physical Properties and Pharmacokinetic Profile in RSC Advances (online publication).

Un segundo aspecto de la presente invención hace referencia a un método para obtener los complejos descritos anteriormente, donde el método comprende las siguientes etapas:A second aspect of the present invention refers to a method for obtaining the complexes described above, where the method comprises the following steps:

a) mezclar mediante sonicación por ultrasonidos al menos un compuesto activo a encapsular (CBA) con un glucósido de esteviol (GL), preferentemente en un medio hidroalcoholico;a) mixing by ultrasound sonication at least one active compound to be encapsulated (CBA) with a steviol glycoside (GL), preferably in a hydroalcoholic medium;

b) añadir un aminoglucósido (AM) a la solución obtenida en la etapa anterior y mezclar mediante sonicación por ultrasonidos; yb) adding an aminoglycoside (AM) to the solution obtained in the previous step and mixing by sonication by ultrasound; Y

c) aislar el complejo CBA-GL-AM formado en la etapa b) en estado sólido, preferentemente mediante liofilización.c) isolating the CBA-GL-AM complex formed in step b) in a solid state, preferably by lyophilization.

Preferentemente, la mezcla por sonicación en las etapas a) y b) tienen lugar entre 10 a 20 kHZ, siendo el valor óptimo de 20 kHz. En realizaciones particulares de la presente invención, estas etapas tienen lugar a una temperatura entre 15 y 50°C, más preferiblemente entre 20 y 40°C. Para controlar que la temperatura de la solución no supere los 50°C, la aplicación de ultrasonidos puede realizarse de forma intermitente, por ejemplo, en periodos de aplicación de 2 minutos cada uno. En la solución hidroalcóholica el alcohol puede ser metanol o etanol, y la relación alcohol: agua puede ser 1:1 (v/v).Preferably, the mixing by sonication in steps a) and b) takes place between 10 to 20 kHz, the optimum value being 20 kHz. In particular embodiments of the present invention, these steps take place at a temperature between 15 and 50 ° C, more preferably between 20 and 40 ° C. To control that the temperature of the solution does not exceed 50 ° C, the application of ultrasound can be carried out intermittently, for example, in application periods of 2 minutes each. In the hydroalcoholic solution the alcohol can be methanol or ethanol, and the alcohol: water ratio can be 1: 1 (v / v).

De forma adicional, el método puede comprender una etapa c1), donde el tamaño de particular del complejo de inclusión CBA: GL: AM obtenido en la etapa c) se reduce a un tamaño de partícula entre 200 nm y 400 nm, preferentemente mediante un proceso de trituración o molienda.Additionally, the method may comprise a step c1), where the particle size of the CBA: GL: AM inclusion complex obtained in step c) is reduced to a particle size between 200 nm and 400 nm, preferably by means of a crushing or grinding process.

El complejo CBA-glucósido de esteviol formado en la etapa a) puede aislarse en estado sólido, por ejemplo, por liofilización de la solución. Este aislamiento puede realizarse directamente, sin necesidad de ajustar el pH. Generalmente, este complejo CBA-GL aislado ya presenta una mayor estabilidad solubilidad al agua que el compuesto activo sin encapsular. Sin embargo, la incorporación de otra esfera de encapsulación formada por aminoglucósidos, en particular oligómero de quitosano, mejora significativamente su solubilidad en agua, a la vez que mejora el control de liberación del CBA y, en consecuencia, su biodisponibilidad y absorción.The CBA-steviol glucoside complex formed in step a) can be isolated in the solid state, for example, by lyophilization of the solution. This isolation can be done directly, without the need to adjust the pH. Generally, this isolated CBA-GL complex already exhibits greater water solubility stability than the unencapsulated active compound. However, the incorporation of another encapsulation sphere formed by aminoglycosides, in particular chitosan oligomer, significantly improves its solubility in water, while improving the release control of CBA and, consequently, its bioavailability and absorption.

En aquellas realizaciones en las que el complejo CBA-glucósido se aísla en estado sólido, el método puede comprender una etapa adicional, donde el tamaño de partícula de este complejo aislado se reduce hasta entre 20 nm y 200 nm, preferentemente mediante un proceso de trituración o molienda.In those embodiments in which the CBA-glucoside complex is isolated in the solid state, the method may comprise an additional step, where the particle size of this Isolated complex is reduced to between 20 and 200 nm, preferably by a grinding or milling process.

Mediante un proceso de sonicación en la etapa a) del método, es decir, la aplicación directa de ultrasonidos sobre la solución que comprende la mezcla de CBA y glucósidos de esteviol, preferentemente en medio hidroalcohólico, las moléculas de glucósido se orientan en torno a compuesto activo a encapsular, con interacciones débiles por formación de enlaces de hidrógeno entre los glucósidos. Posteriormente, el proceso de sonicación en presencia de aminoglucósido de la etapa b) permite formar una esfera de encapsulación adicional, dando lugar al complejo de inclusión CBA-GL-AM mediante aislamiento en estado sólido, preferentemente liofilización. El tamaño de las nanopartículas puede controlarse por microscopía electrónica de transmisión (TEM) y/o microscopía electrónica de barrido (SEM) y la fuerza de los enlaces o interacción entre los grupos funcionales se puede hacer por espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier (FTIR-ATR). La caracterización de la cristalinidad del complejo obtenido se puede seguir por calorimetría de barrido diferencial (DSC) o bien difracción de rayos X (DRX). Los estudios de solubilidad y caracterización de los CBA pueden seguirse con un espectrofotómetro de UV-VIS y/o un cromatógrafo-masas (HPLC- Masas).By means of a sonication process in stage a) of the method, that is, the direct application of ultrasound on the solution comprising the mixture of CBA and steviol glycosides, preferably in a hydroalcoholic medium, the glycoside molecules are oriented around the compound active to encapsulate, with weak interactions due to the formation of hydrogen bonds between the glycosides. Subsequently, the sonication process in the presence of aminoglycoside of step b) makes it possible to form an additional encapsulation sphere, giving rise to the inclusion complex CBA-GL-AM by means of solid state isolation, preferably lyophilization. The size of the nanoparticles can be controlled by transmission electron microscopy (TEM) and / or scanning electron microscopy (SEM) and the strength of the bonds or interaction between the functional groups can be done by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR- ATR). The characterization of the crystallinity of the complex obtained can be followed by differential scanning calorimetry (DSC) or X-ray diffraction (XRD). The solubility and characterization studies of the CBAs can be followed with a UV-VIS spectrophotometer and / or a mass chromatograph (HPLC-Mass).

La solubilidad de los CBA en el complejo de la invención se incrementa con la concentración de glucósidos. Así, en la presente invención se prefiere que la relación CBA: glucósidos de esteviol se encuentre entre 1:6 y 1:10 (peso:peso), siendo aún más preferible que esta relación CBA: glucósidos sea 1:6 (peso:peso), ya que es con la que se consigue una solubilidad adecuada a un menor coste.The solubility of the CBAs in the complex of the invention increases with the concentration of glycosides. Thus, in the present invention it is preferred that the CBA: steviol glycosides ratio is between 1: 6 and 1:10 (weight: weight), it being even more preferable that this CBA: glycosides ratio is 1: 6 (weight: weight ), since it is with which an adequate solubility is achieved at a lower cost.

A modo de explicación teórica, pero sin carácter vinculante, en la figura 1 se representa un complejo formado por artemisinina y curcumina en relación 1:1 como compuesto activo (CBA), una primera esfera formada por glucósido de esteviol en una relación 1:6 (CBA:GL), que se caracteriza por la presencia de débiles interacciones mediante puentes de hidrógeno entre las moléculas que favorece la solubilización y posterior vehiculización de la artemisinina y la curcumina. Aunque no se muestra en la figura 1, el complejo de inclusión de la presente invención comprende sucesivas esferas de la coordinación o el autoensamble con aminoglucósidos, en particular oligómeros de quitosano. Este tipo de interacciones contrastan con las fuertes interacciones que aparecen entre las ciclodextrinas y los CBA (ibuprofeno) que dificultan su vehiculización (S. Pereva, T. Sarafska, S. By way of theoretical explanation, but without binding character, figure 1 represents a complex formed by artemisinin and curcumin in a 1: 1 ratio as active compound (CBA), a first sphere formed by steviol glycoside in a 1: 6 ratio (CBA: GL), which is characterized by the presence of weak interactions through hydrogen bonds between the molecules that favors the solubilization and subsequent transport of artemisinin and curcumin. Although not shown in Figure 1, the inclusion complex of the present invention comprises successive spheres of coordination or self-assembly with aminoglycosides, in particular chitosan oligomers. These types of interactions contrast with the strong interactions that appear between cyclodextrins and CBAs (ibuprofen) that hinder their transport (S. Pereva, T. Sarafska, S.

Bogdanova, T. Spassov, Efficiency of “Cyclodextrin-lbuprofen” inclusión complex formation, Journal of Drug Delivery Science and Technology (2016)) (Figura 2).Bogdanova, T. Spassov, Efficiency of “Cyclodextrin-lbuprofen” inclusion complex formation, Journal of Drug Delivery Science and Technology (2016)) (Figure 2).

En realizaciones preferidas de la presente invención, el método para obtener el complejo de inclusión que aquí se describe comprende mezclar mediante sonicación entre 10 kHZ y 20 kHZ, el complejo CBA: GL con al menos un aminoglucósido, preferiblemente oligómeros de quitosano, en una solución hidroalcólica. Seguidamente, por liofilización de las soluciones hidroalcohólicas (directamente y sin ajustar el pH), se puede aislar el complejo CBA-GL-AM que posteriormente es sometido a molienda, de forma que el complejo resultante presenta un tamaño de las nanopartículas inferior a 400 nm.In preferred embodiments of the present invention, the method for obtaining the inclusion complex described herein comprises mixing by sonication between 10 kHZ and 20 kHZ, the CBA: GL complex with at least one aminoglycoside, preferably chitosan oligomers, in a solution hydroalcolic. Next, by lyophilizing the hydroalcoholic solutions (directly and without adjusting the pH), the CBA-GL-AM complex can be isolated, which is subsequently subjected to grinding, so that the resulting complex has a nanoparticle size of less than 400 nm .

Adicionalmente, la presente invención se refiere al complejo de inclusión obtenible por el método que se describe en este documento.Additionally, the present invention relates to the inclusion complex obtainable by the method described in this document.

La presente invención también se refiere al complejo de inclusión que se describe en esta solicitud de patente para su uso en medicina y, en particular, para el tratamiento de una enfermedad parasitaria tal como la malaria.The present invention also relates to the inclusion complex described in this patent application for use in medicine and, in particular, for the treatment of a parasitic disease such as malaria.

En particular, cuando el complejo comprende una combinación de artemisinina o uno de sus derivados, con curcumina o hidroxitirosol, la presente invención proporciona un complejo de inclusión que puede utilizarse como tetraterapia frente a la malaria, ya que los cuatro ingredientes que comprenden el complejo presentan actividad antipalúdica, dificultando así que se generen resistencias. Adicionalmente, todos los ingredientes del complejo no presentan los problemas de tolerancia asociados a la mayoría de terapias actualmente disponibles frente a la malaria.In particular, when the complex comprises a combination of artemisinin or one of its derivatives, with curcumin or hydroxytyrosol, the present invention provides an inclusion complex that can be used as tetratherapy against malaria, since the four ingredients that comprise the complex have antimalarial activity, thus making it difficult to generate resistance. Additionally, all the ingredients of the complex do not have the tolerance problems associated with most currently available therapies against malaria.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

Figura 1: Modelo teórico no vinculante de la formación de un complejo de inclusión o clatrato entre esteviósido y artemisinina-curcumina (ART-CUR), con estequiometria 6 EST: 1 ART-CUR.Figure 1: Non-binding theoretical model of the formation of an inclusion or clathrate complex between stevioside and artemisinin-curcumin (ART-CUR), with 6 EST: 1 ART-CUR stoichiometry.

Figura 2: Formación de complejos toroide de p-ciclodextrina con ibuprofeno. Figure 2: Formation of toroid complexes of p-cyclodextrin with ibuprofen.

Figura 3. Espectros FTIR-ATR de absorbancia de los productos de partida (ordenados los espectros de arriba hacia abajo): 1° artemisinina (ART); 2° curcumina (CUR); 3° oligómeros de quitosano (OQ); 4° esteviósido (ES).Figure 3. FTIR-ATR absorbance spectra of the starting products (ordered from top to bottom): 1st artemisinin (ART); 2nd curcumin (CUR); Chitosan oligomers (OQ); 4th stevioside (ES).

Figura 4. Espectros FTIR-ATR de absorbancia de los complejos de inclusión obtenidos por liofilización (ordenados los espectros de arriba hacia abajo): 1° artemisinina curcumina (ART/CUR); 2° artemisinina curcumina esteviósido (ART/CUR-ES); 3° artemisinina curcumina esteviósido oligómeros de quitosano (ART/CUR-ES-OQ); 4° complejo encapsulado centrifugado y lavado de oligómeros de quitosano con artemisinina curcumina esteviósido (ART/CUR-ES-OQ).Figure 4. FTIR-ATR absorbance spectra of the inclusion complexes obtained by lyophilization (ordered the spectra from top to bottom): 1st artemisinin curcumin (ART / CUR); 2nd artemisinin curcumin stevioside (ART / CUR-ES); 3rd artemisinin curcumin stevioside chitosan oligomers (ART / CUR-ES-OQ); 4th centrifugal encapsulated complex and washing of chitosan oligomers with artemisinin curcumin stevioside (ART / CUR-ES-OQ).

Figura 5. Fotografía obtenidas por microscopía con 500x de los compuestos triturados en molino de bolas: artemisinina (fig. 5a); artemisinina curcumina 1:1 peso (fig. 5b); artemisinina curcumina esteviósido 0,5:0,5:3 en peso (fig. 5c); artemisinina curcumina esteviósido oligómeros de quitosano 0,5:0,5:3:1 en peso (fig. 5d).Figure 5. Photograph obtained by microscopy with 500x of the compounds ground in a ball mill: artemisinin (fig. 5a); artemisinin curcumin 1: 1 weight (Fig. 5b); artemisinin curcumin stevioside 0.5: 0.5: 3 by weight (Fig. 5c); artemisinin curcumin stevioside chitosan oligomers 0.5: 0.5: 3: 1 by weight (Fig. 5d).

Figura 6: Fotografía obtenidas por microscopía con 500x de los compuestos precipitados y centrifugados de coproductos amorfos: artemisimina curcumina esteviósido oligómeros quitosano 0,5:0,5:6:1 en peso.Figure 6: Photograph obtained by microscopy with 500x of the precipitated and centrifuged compounds of amorphous co-products: artemisimin curcumin stevioside oligomers chitosan 0.5: 0.5: 6: 1 by weight.

Figura 7: Espectros de DRX de artemisinina y curcumina (espectro superior, M8) y más abajo evolución del espectro de DRX de las mezclas de artemisinina y curcumina con esteviósido y oligómeros de quitosano (espectros inferiores, en orden descendente M7, M6 y M5) y por último (M3-1) la formación del complejo de inclusión encapsulado y liofilizado y completamente amorfo y soluble en agua de artemisinina curcumina esteviósido oligómeros quitosano (0,5:0,5:6:1).Figure 7: XRD spectra of artemisinin and curcumin (upper spectrum, M8) and below evolution of the XRD spectrum of mixtures of artemisinin and curcumin with stevioside and chitosan oligomers (lower spectra, in descending order M7, M6 and M5) and finally (M3-1) the formation of the encapsulated and lyophilized and completely amorphous and water-soluble inclusion complex of artemisinin curcumin stevioside oligomers chitosan (0.5: 0.5: 6: 1).

EJEMPLOSEXAMPLES

A. PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓNA. PROCEDURE FOR OBTAINING

Ejemplo 1.- Preparación del complejo (ART/CUR-ES-OQ) que comprende artemisinina y curcumina como compuesto activo (ART/CUR) hidrofóbico con esteviósido (ES) y oligómero de quitosano (OQ) en una relación en peso: 1 ART/CUR: 10 ES: 1 OQ Apartado 1: Se parte de 1 gramo de compuesto activo (artemisinina 0,5 g y curcumina 0,5 g) y se dispersan en 250 ml de etanol absoluto. Por otro lado, se pesan 10 g de esteviósido en 250 mL de agua destilada y desionizada. Se mezclan ambas soluciones y la mezcla resultante se emulsiona introduciendo directamente en la solución el cabezal del sonicador del equipo de ultrasonidos (frecuencia de 20 kHz). La sonicación se lleva a cabo durante periodos de 2 minutos cada uno, y un tiempo de 20 minutos, no dejando que la solución se caliente por encima de 50°C. La solución resultante, protegida de la luz, se filtra y/o centrifuga inmediatamente para retirar precipitados o impurezas y se guarda en frío 4-6 °C una noche. Posteriormente se liofiliza obteniéndose el complejo ART/CUR-ES. No se recomienda alterar el pH de la solución resultante para que no se formen precipitados no deseables. Example 1.- Preparation of the complex (ART / CUR-ES-OQ) comprising artemisinin and curcumin as hydrophobic active compound (ART / CUR) with stevioside (ES) and chitosan oligomer (OQ) in a weight ratio: 1 ART / CUR: 10 ES: 1 OQ Section 1: One starts with 1 gram of active compound (0.5 g artemisinin and 0.5 g curcumin) and disperses in 250 ml of absolute ethanol. On the other hand, 10 g of stevioside are weighed in 250 mL of distilled and deionized water. Both solutions are mixed and the resulting mixture is emulsified by directly introducing the sonicator head of the ultrasound equipment (frequency 20 kHz) into the solution. Sonication is carried out for periods of 2 minutes each, and a time of 20 minutes, not allowing the solution to heat above 50 ° C. The resulting solution, protected from light, is filtered and / or centrifuged immediately to remove precipitates or impurities and is stored cold at 4-6 ° C overnight. Subsequently it is lyophilized obtaining the ART / CUR-ES complex. It is not recommended to alter the pH of the resulting solution so that undesirable precipitates do not form.

Apartado 2: Se disuelven 1 g del complejo ART/CUR-ES obtenido según se describe en el apartado 1 en 100 mL de agua. Esta solución se adiciona sobre una solución de un polielectrolito de oligómeros de quitosano de bajo peso molecular 2000-10000 (100 mg), disperso en una solución de 100 mL de tripolifosfato 0,4% (p/v) y se sonica para obtener el complejo de inclusión ART/CUR-ES-OQ. Posteriormente, se centrifuga este complejo y se lava varias veces con agua destilada y desionizada, dando como resultado nanopartículas de ART/CUR-ES-OQ con un diámetro promedio entre 200 a 400 nm. Section 2: 1 g of the ART / CUR-ES complex obtained as described in section 1 are dissolved in 100 mL of water. This solution is added to a solution of a polyelectrolyte of chitosan oligomers of low molecular weight 2000-10000 (100 mg), dispersed in a solution of 100 mL of tripolyphosphate 0.4% (p / v) and sonicated to obtain the ART / CUR-ES-OQ inclusion complex. Subsequently, this complex is centrifuged and washed several times with distilled and deionized water, resulting in ART / CUR-ES-OQ nanoparticles with an average diameter between 200 to 400 nm.

Ejemplo 2.- Preparación del complejo (ART/HI-ES-OQ) que comprende artemisinina e hidroxitirosol como compuesto activo (ART/HI) hidrofóbico con esteviósido (ES) y oligómero de quitosano (OQ) en una relación en peso: 1 ART/HI: 6 ES: 1 OQExample 2.- Preparation of the complex (ART / HI-ES-OQ) comprising artemisinin and hydroxytyrosol as hydrophobic active compound (ART / HI) with stevioside (ES) and chitosan oligomer (OQ) in a weight ratio: 1 ART / HI: 6 IS: 1 OQ

Apartado 1: Se parte de 1 gramo de compuesto activo (artemisinina 0,5 g e hidroxitirosol 0,5 g) y se dispersan en 250 ml de etanol absoluto. Por otro lado, se pesan 6 g de esteviósido en 250 mL de agua destilada y desionizada. Se mezclan ambas soluciones y la mezcla resultante se emulsiona introduciendo directamente en la solución el cabezal del sonicador del equipo de ultrasonidos (frecuencia de 20 kHz). La sonicación se lleva a cabo durante periodos de 2 minutos cada uno, y un tiempo de 20 minutos, no dejando que la solución se caliente por encima de 50°C. La solución resultante, protegida de la luz, se filtra y/o centrifuga inmediatamente para retirar precipitados o impurezas y se guarda en frío 4-6 °C una noche. Posteriormente se liofiliza obteniéndose el complejo ART/HI-ES. No se recomienda alterar el pH de la solución resultante para que no se formen precipitados no deseables. Section 1: One starts with 1 gram of active compound (0.5 g artemisinin and 0.5 g hydroxytyrosol) and disperses in 250 ml of absolute ethanol. On the other hand, 6 g of stevioside are weighed in 250 mL of distilled and deionized water. Both solutions are mixed and the resulting mixture is emulsified by directly introducing the sonicator head of the ultrasound equipment (frequency 20 kHz) into the solution. Sonication is carried out for periods of 2 minutes each, and a time of 20 minutes, not allowing the solution to heat above 50 ° C. The resulting solution, protected from light, is filtered and / or centrifuged immediately to remove precipitates or impurities and is stored cold at 4-6 ° C overnight. Subsequently, it is lyophilized obtaining the ART / HI-ES complex. It is not recommended to alter the pH of the resulting solution so that undesirable precipitates do not form.

Apartado 2: Se disuelven 1 g del complejo ART/HI-ES obtenido según se describe en el apartado 1 en 100 mL de agua. Esta solución se adiciona sobre una solución de un polielectrolito de oligómeros de quitosano de bajo peso molecular 2000-10000 (100 mg), disperso en una solución de 100 mL de tripolifosfato 0,4% (p/v) y se sonica para obtener el complejo de inclusión ART/HI-ES-OQ. Posteriormente, se centrifuga este complejo y se varias veces con agua destilada y desionizada, dando como resultado nanopartículas de ART/HI-ES-OQ con un diámetro promedio entre 200 a 400 nm. Section 2: 1 g of the ART / HI-ES complex obtained as described in section 1 is dissolved in 100 mL of water. This solution is added to a solution of a polyelectrolyte of chitosan oligomers of low molecular weight 2000-10000 (100 mg), dispersed in a solution of 100 mL of tripolyphosphate 0.4% (p / v) and sonicated to obtain the ART / HI-ES-OQ inclusion complex. Subsequently, this complex is centrifuged and several times with distilled and deionized water, resulting in ART / HI-ES-OQ nanoparticles with an average diameter between 200 to 400 nm.

B. CARACTERIZACIÓN DE LOS COMPLEJOS DE LA INVENCIÓNB. CHARACTERIZATION OF THE COMPLEXES OF THE INVENTION

A continuación se incluye la caracterización de varios complejos estudiados por distintos tipos de espectroscopía y microscopía. En particular, se han caracterizado los siguientes complejos de inclusión:The characterization of various complexes studied by different types of spectroscopy and microscopy is included below. In particular, the following inclusion complexes have been characterized:

i. artemisinina: curcumina 1:1 (en peso),i. artemisinin: curcumin 1: 1 (by weight),

ii. artemisinina: curcumina: esteviosido 0,5:0,5:10 (en peso),ii. artemisinin: curcumin: stevioside 0.5: 0.5: 10 (by weight),

iii. artemisinina: curcumina: esteviosido: oligómeros de quitosano 0,5:0,5:10:1 (en peso),iii. artemisinin: curcumin: stevioside: chitosan oligomers 0.5: 0.5: 10: 1 (by weight),

iv. artemisinina: curcumina: esteviosido: oligómeros de quitosano (0,5:0,5:10:1) en peso, complejo aislado centrifugado.iv. artemisinin: curcumin: stevioside: chitosan oligomers (0.5: 0.5: 10: 1) by weight, isolated complex centrifuged.

1.- Caracterización mediante espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier y Reflectancia Total Atenuada (ATR). 1.- Characterization by infrared spectroscopy with Fourier transform and Attenuated Total Reflectance ( ATR).

Se ha analizado la pureza de los productos de partida mediante FTIR-ATR (figura 3) y, adicionalmente, se han analizado las mezclas binarias-ternarias y cuaternarias de los complejos de inclusión (i) a (iv) (figura 4).The purity of the starting products has been analyzed by FTIR-ATR (figure 3) and, additionally, the binary-ternary and quaternary mixtures of the inclusion complexes (i) to (iv) (figure 4) have been analyzed.

Las mayores diferencias se presentan para la formación de los complejos binarios, y especialmente se manifiesta la pérdida de cristalinidad de los productos de partida (artemisinina) y la formación de sólidos co-amorfos o complejos de inclusión o de autoensamblaje molecular. The greatest differences occur for the formation of the binary complexes, and especially the loss of crystallinity of the starting products (artemisinin) and the formation of co-amorphous solids or inclusion complexes or molecular self-assembly is manifested.

En la figura 4 se muestran los espectros FTIR-ATR de absorbancia de los complejos de inclusión obtenidos por molienda y que se encuentran ordenados los espectros de arriba hacia abajo):Figure 4 shows the FTIR-ATR absorbance spectra of the inclusion complexes obtained by milling and that the spectra are ordered from top to bottom):

1° Artemisinina Curcumina (ART: CUR) (parte superior de la figura 4). Se observa que se mantiene la cristalinidad de la artemisinina y de la curcumina, a pesar de haber sido sometido el material a trituración y/o molienda inferior a 50 micras. Puede observarse como los picos y sus alturas apenas han sufrido alteración en el compuesto binario, en relación con los productos de partida.1st Artemisinin Curcumin (ART: CUR) (upper part of figure 4). It is observed that the crystallinity of artemisinin and curcumin is maintained, despite the material having been subjected to crushing and / or grinding of less than 50 microns. It can be seen how the peaks and their heights have hardly undergone alteration in the binary compound, in relation to the starting products.

2°. Artemisinina Curcumina Esteviósido (ART: CUR: ES) (parte central superior de la figura 4). El espectro FTIR muestra que el esteviósido adicionado en la proporción 0,5:0,5:3 (ART: CUR: ES) en peso ha experimentado una disminución considerable en la intensidad y un incremento del ancho del pico o vibración de tensión C-O-C, lo que implica un aumento considerable del grado de carácter amorfo y la formación de co-productos amorfos.2nd. Artemisinin Curcumin Stevioside (ART: CUR: ES) (upper central part of figure 4). The FTIR spectrum shows that the stevioside added in the proportion 0.5: 0.5: 3 (ART: CUR: ES) by weight has experienced a considerable decrease in intensity and an increase in the width of the peak or vibration of COC tension, which implies a considerable increase in the degree of amorphous character and the formation of amorphous co-products.

3°. Artemisinina Curcumina Esteviósido Oligómeros de Quitosano (ART: CUR: ES: OQ). El espectro FTIR muestra que los productos mezclados en la proporción 0,5:0,5:3:1 (ART: CUR: ES: OQ) experimenta un mayor aumento del carácter amorfo y al tiempo mejora la solubilidad del nuevo complejo.3rd. Artemisinin Curcumin Stevioside Chitosan Oligomers (ART: CUR: ES: OQ). The FTIR spectrum shows that the products mixed in the ratio 0.5: 0.5: 3: 1 (ART: CUR: ES: OQ) experience a greater increase in amorphous character and at the same time improve the solubility of the new complex.

4° Complejo encapsulado de Oligómeros de Quitosano con Artemisinina Curcumina Esteviósido (Art+Cur+Estev). El espectro FTIR del complejo liofilizado muestra un incremento notable del carácter amorfo, y de un grado similar al complejo 3°.4th Encapsulated Complex of Chitosan Oligomers with Artemisinin Curcumin Stevioside (Art + Cur + Estev). The FTIR spectrum of the lyophilized complex shows a notable increase in amorphous character, and of a degree similar to the 3 ° complex.

2.- Caracterización mediante Microscopía de los nuevos complejos2.- Characterization by Microscopy of the new complexes

En las figura 5 se muestran mediante técnicas de microscopía la evolución de los compuestos de partida, especialmente artemisinina (compuesto cristalino, figura 5a) a compuestos binarios como artemisinina curcumina (1:1) peso (figura 5b), ternarios o mezclas trituradas artemisinina curcumina esteviósido (0,5:0,5:6) peso (figura 5c); y cuaternarios o mezclas de artemisinina curcumina esteviósido oligómeros de quitosano (0,5:0,5:6:1) peso (figura 5d) cada vez más amorfos y más solubles en agua. In figure 5 the evolution of the starting compounds, especially artemisinin (crystalline compound, figure 5a) to binary compounds such as artemisinin curcumin (1: 1) weight (figure 5b), ternary or ground mixtures artemisinin curcumin are shown using microscopy techniques stevioside (0.5: 0.5: 6) wt (figure 5c); and quaternaries or mixtures of artemisinin curcumin stevioside chitosan oligomers (0.5: 0.5: 6: 1) by weight (Figure 5d) increasingly amorphous and more soluble in water.

La formación de compuestos de inclusión o de autoensamble facilita e incrementa extraordinariamente la biodisponibilidad de los CBA, debido a las interacciones inter e intramoleculares por enlaces de hidrógeno entre la molécula de esteviósido y el CBA (Artemisinina-Curcumina).The formation of inclusion or self-assembly compounds greatly facilitates and increases the bioavailability of CBAs, due to inter and intramolecular interactions by hydrogen bonds between the stevioside molecule and CBA (Artemisinin-Curcumin).

En las figuras 6a y 6b se pueden observar las imágenes con 500x de los precipitados centrifugados de co-productos amorfos: 5° Artemisinina Curcumina Esteviósido Oligómeros Quitosano (0.5:0.5:6:1) (superior) y 6° Artemisinina Curcumina Esteviósido Oligómeros Quitosano (0.5:0.5:6:1) (inferior).Figures 6a and 6b show the 500x images of the centrifuged precipitates of amorphous co-products: 5 ° Artemisinin Curcumin Stevioside Oligomers Chitosan (0.5: 0.5: 6: 1) (upper) and 6 ° Artemisinin Curcumin Stevioside Oligomers Chitosan (0.5: 0.5: 6: 1) (lower).

En la figura 7 se puede observar los espectros de DRX de artemisinina y curcumina altamente cristalinos e insolubles en agua (espectro superior) y más abajo se observa la evolución del espectro de DRX de las mezclas con esteviósido y oligómeros de quitosano (espectros de la zona media, cada vez más amorfos) y por último la formación del complejo de inclusión encapsulado y liofilizado y completamente amorfo y soluble en agua de Artemisinina Curcumina Esteviósido Oligómeros Quitosano (0.5:0.5:6:1) (espectro de DRX inferior). Figure 7 shows the highly crystalline and water insoluble spectra of artemisinin and curcumin of XRD (upper spectrum) and below the evolution of the XRD spectrum of mixtures with stevioside and chitosan oligomers (spectra of the zone medium, increasingly amorphous) and finally the formation of the encapsulated and lyophilized and completely amorphous and water-soluble inclusion complex of Artemisinin Curcumin Stevioside Oligomers Chitosan (0.5: 0.5: 6: 1) (lower XRD spectrum).

Claims (12)

REIVINDICACIONES 1. - Complejo de inclusión que comprende al menos un compuesto activo, un glucósido de esteviol y un aminoglucósido.1. - Inclusion complex comprising at least one active compound, a steviol glycoside and an aminoglycoside. 2. - Complejo de inclusión según la reivindicación 1, donde el aminoglucósido se selecciona del grupo que consiste en oligómero de quitosano, glucosamina y una combinación cualquiera de los anteriores.2. - Inclusion complex according to claim 1, wherein the aminoglycoside is selected from the group consisting of chitosan oligomer, glucosamine and any combination of the above. 3. - Complejo de inclusión según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde el compuesto activo se selecciona del grupo que consiste en artemisinina, un derivado de artemisinina, curcumina, hidroxitirosol y una combinación de los anteriores.3. - Inclusion complex according to any one of claims 1 to 2, wherein the active compound is selected from the group consisting of artemisinin, a derivative of artemisinin, curcumin, hydroxytyrosol and a combination of the foregoing. 4. - Complejo de inclusión según la reivindicación 3, que comprende una combinación de compuestos activos i) y ii), donde:4. - Inclusion complex according to claim 3, comprising a combination of active compounds i) and ii), where: i) entre 10 % y 90 % de artemisinina o uno de su derivados, yi) between 10% and 90% artemisinin or one of its derivatives, and ii) entre 90% y 10 % de curcumina o hidroxitirosol;ii) between 90% and 10% curcumin or hydroxytyrosol; cantidades expresadas en peso respecto al peso total de compuestos activos i) y ii).amounts expressed by weight with respect to the total weight of active compounds i) and ii). 5. - Complejo de inclusión según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la relación entre el compuesto activo (CBA), el glucósido de esteviol (GL) y el aminoglucósido (AM) en el complejo es de 1:6:1 a 1:10:1 (CBA: GL: AM).5. - Inclusion complex according to any one of claims 1 to 4, where the ratio between the active compound (CBA), the steviol glucoside (GL) and the aminoglycoside (AM) in the complex is 1: 6: 1 at 1: 10: 1 (CBA: GL: AM). 6. - Método para obtener el complejo de inclusión que se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el método comprende:6. - Method to obtain the inclusion complex described in any one of claims 1 to 5, wherein the method comprises: a) mezclar mediante sonicación por ultrasonidos al menos un compuesto activo a encapsular (CBA) con un glucósido de esteviol (GL);a) mixing by sonication by ultrasound at least one active compound to be encapsulated (CBA) with a steviol glycoside (GL); b) añadir un aminoglucósido (AM) a la solución obtenida en la etapa anterior y mezclar mediante sonicación por ultrasonidos; yb) adding an aminoglycoside (AM) to the solution obtained in the previous step and mixing by sonication by ultrasound; Y c) aislar el complejo CBA-GL-AM formado en la etapa b) en estado sólido, preferentemente mediante liofilización.c) isolating the CBA-GL-AM complex formed in step b) in a solid state, preferably by lyophilization. 7. - Método para obtener el complejo de inclusión según la reivindicación 6, donde las etapas a) y b) tienen lugar en un medio hidroalcohólico. 7. - Method to obtain the inclusion complex according to claim 6, where steps a) and b) take place in a hydroalcoholic medium. 8. - Método para obtener el complejo de inclusión según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 7, donde la sonicación tiene lugar entre 10 kHZ y 20 kHZ.8. - Method to obtain the inclusion complex according to any one of claims 6 to 7, where the sonication takes place between 10 kHZ and 20 kHZ. 9. - Método para obtener el complejo de inclusión según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, que comprende una etapa c1) donde el tamaño de partícula del complejo aislado en la etapa c) se reduce hasta entre 200 nm y 400 nm.9. - Method to obtain the inclusion complex according to any one of claims 6 to 8, comprising a step c1) where the particle size of the complex isolated in step c) is reduced to between 200 nm and 400 nm. 10. - Complejo de inclusión obtenido según el método que se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9.10. - Inclusion complex obtained according to the method described in any one of claims 6 to 9. 11. - Complejo de inclusión según una de las reivindicaciones 1 a 5 o 10 para su uso en medicina.11. - Inclusion complex according to one of claims 1 to 5 or 10 for use in medicine. 12. - Complejo de inclusión según una de las reivindicaciones 1 a 5 o 10 para el tratamiento de la malaria. 12. - Inclusion complex according to one of claims 1 to 5 or 10 for the treatment of malaria.