ES2729676T3

ES2729676T3 - Agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas

Info

Publication number: ES2729676T3
Application number: ES15168512T
Authority: ES
Inventors: Daniel Potaczek; Holger Garn; Harald Renz
Original assignee: Secarna Pharmaceuticals GmbH and Co KG
Current assignee: Secarna Pharmaceuticals GmbH and Co KG
Priority date: 2015-05-20
Filing date: 2015-05-20
Publication date: 2019-11-05
Anticipated expiration: 2035-05-20
Also published as: PL3095866T3; HUE045242T2; US20180171339A1; EP3095866B1; JP2018521114A; PT3095866T; JP6709279B2; WO2016184810A1; DK3095866T3; EP3095866A1

Abstract

Agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, caracterizado por el hecho de que comprende al menos una ADNzima del tipo 10-23 seleccionada del grupo que consiste en las SEC. ID. N.º 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51, en donde la ADNzima según las SEC. ID. N.º 2-7, 15, 16 (dpp-X1) tiene al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato I y al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato II, la ADNzima según las SEC. ID. N.º 23-29, 34-38 (dpp-X2) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 7 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II y/o la ADNzima según las SEC. ID. N.º 44, 49-51 (dpp-j-9) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 10 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II.

Description

DESCRIPCIÓN

Agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas

[0001] La presente invención se refiere a un agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, especialmente rinovirus.

Picornavirus

[0002] Los picornavirus son un grupo especial de virus ARN que causan infecciones y enfermedades en los seres humanos y otros mamíferos diferentes. El genoma vírico de los picornavirus comprende un ARN monocatenario de polaridad positiva. Entre dos regiones no codificantes en los extremos 3' y 5' hay un marco de lectura abierto único para una poliproteína precursora vírica que se divide en proteínas víricas individuales durante la traducción. En el extremo 3' está la cola poli(A) típica de los virus de hebra positiva. En el extremo 5' hay una región delante del codón de inicio en la que el ARN tiene una estructura secundaria compleja debido a numerosos apareamientos de bases complementarios. Funcionalmente, esta sección corresponde a un IRES (del inglés internal ribosomal entry site) para el inicio de la traducción en los ribosomas.

[0003] Entre los Picornaviridae se encuentran los:

• Coxsackievirus

• Virus ECHO

• Enterovirus

• Poliovirus

• Rinovirus

[0004] Las infecciones con estos virus causan una serie de enfermedades clínicamente relevantes como por ejemplo meningitis aséptica, herpangina (también síndrome de Zahorsky), enfermedad mano-pie-boca, conjuntivitis hemorrágica, enfermedades respiratorias (por ejemplo, gripe estival, faringitis, neumonía) y enfermedades de órganos internos (por ejemplo, pericarditis, miocarditis, pleurodinia).

Diagnosis

[0005] Debido a la variedad de posibles patógenos, la diagnosis fiable en una muestra biológica de un humano o mamífero se sigue realizando mediante la detección directa de patógenos por propagación del virus en cultivo celular, seguido de tipificación (prueba de neutralización) o detección del genoma del virus por métodos moleculares (técnicas de amplificación de ácidos nucleicos como por ejemplo, RT-PCR). Esta detección directa en una muestra biológica como sangre, heces, líquido cefalorraquídeo o agua de lavado faríngeo es muy complicada y cara.

Tratamiento

[0006] Actualmente tampoco es posible un tratamiento farmacológico específico para la infección vírica. El tratamiento es exclusivamente sintomático y depende del sistema orgánico afectado.

Profilaxis

[0007] Existe una serie de medidas de higiene profiláctica para prevenir una infección vírica. La protección más importante contra infecciones y enfermedades es la vacunación. Contra los poliovirus se dispone de esta protección con una vacuna, para los rinovirus y otros virus del grupo Picornaviridae, sin embargo, no se dispone de vacunas o casi no hay vacunas eficaces.

Rinovirus

[0008] El grupo de rinovirus incluye aproximadamente 157 tipos diferentes, que se dividen en tres grupos A, B y C en función de su homología genómica. Los rinovirus del grupo A y B generalmente se unen al receptor celular ICAM-1 o al receptor LDL.

[0009] Las proteínas víricas se producen como una poliproteína y luego se escinden por proteasas. Las proteínas estructurales presentes en el virión se codifican en la región 5' del ARN, las proteínas no estructurales en la región 3'. En el extremo 5' hay una región no traducida (5' UTR) seguida de la región P1, la región P2 y la región P3, que codifican respectivamente a las proteínas de la cápside (VP1 a VP4), proteasa y ARN polimerasa. A esto le sigue otra región no traducida (3' UTR) y una cola poli(A). Las proteínas de la cápside (VP1 a VP4) se utilizan para empaquetar el genoma y también como receptor para la unión a una célula huésped. Las VP1-3 son reconocidas como proteínas de superficie de anticuerpos del organismo huésped.

[0010] Los rinovirus se extienden por todo el mundo y se limitan a los seres humanos. Para su propagación prefieren temperaturas de 3 °C a 33 °C, aunque también se propagan a temperaturas más altas, especialmente si la infección no solo se extiende a la zona de la membrana mucosa sino también a la región de las vías respiratorias y pulmonar.

[0011] La rinitis aguda (resfriado común) es la enfermedad infecciosa humana más común causada por los rinovirus, que produce resfriados, asma o aumento de la sensibilidad de las vías respiratorias. Hasta el 40% de todos los ataques agudos de asma o exacerbaciones de EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica) son infecciones víricas de las vías respiratorias superiores. Los virus dañan la capa epitelial de las vías respiratorias, desencadenan una inflamación y aumentan la sensibilidad nerviosa de las células de las vías respiratorias. En los asmáticos, esto conlleva graves consecuencias, pero también afecta a personas sanas. Por lo tanto, algunas personas sufren de un "resfriado" con una tos persistente.

[0012] Aunque las infecciones por rinovirus por lo general causan un resfriado inofensivo y que desaparece rápidamente en personas sanas, las infecciones en asmáticos y personas que ya tienen sensibilidad en las células de las vías respiratorias pueden volverse muy graves, causando dificultad respiratoria que suponen un riesgo para la vida, opresión en el pecho y dificultad para respirar.

[0013] Científicos británicos han demostrado recientemente que las infecciones con rinovirus en las células epiteliales pulmonares humanas desencadenan una mayor formación de citocinas, especialmente la interleucina (IL-25). Esto produce una cascada de señales como en una reacción alérgica y, en última instancia, una respuesta inflamatoria inusualmente fuerte.

[0014] En este contexto, también se sabe que la infección con rinovirus en niños conduce a una sensibilidad de las células de las vías respiratorias y a una mayor incidencia del desarrollo de asma en la edad adulta.

Profilaxis

[0015] La opinión científica que prevalece es que la profilaxis contra una infección por rinovirus no es posible, y mucho menos un tratamiento causal, por lo que es el sistema inmunitario humano el que debe contrarrestarla. Sin embargo, especialmente en el sistema inmunitario de los recién nacidos, los pacientes con inmunosupresión natural o inducida por medicamentos están extremadamente debilitados, por lo que es deseable la profilaxis contra la infección por picornavirus, especialmente los rinovirus.

Tratamiento

[0016] No hay tratamiento causal, lo que significa inevitablemente que la persona debe pasar por las etapas de la enfermedad. Solo hay medios disponibles para un tratamiento sintomático de los síntomas que acompañan a resfriados y dolores de cabeza. Las medidas sintomáticas bien conocidas son cuidado del cuerpo, inhalaciones, frotaciones con aceites esenciales y nutrición saludable. Además, hay varias formas farmacéuticas nasales con ingredientes activos que están destinadas a descongestionar o limpiar la mucosa nasal. El experto en la técnica conoce los aerosoles nasales con los ingredientes activos tramazolina y xilometazolina, que alivian las vías respiratorias a corto plazo. Los aerosoles nasales que contienen el ingrediente activo oximetazolina tienen un efecto antivírico directo al prevenir la expresión del ICAM-1, el receptor de los rinovirus. Sin embargo, estos solo contrarrestan el fenómeno del resfriado y no las infecciones víricas graves como el asma o la EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica). Además se utilizan comprimidos para chupar contra la carraspera y comprimidos efervescentes, jarabes o gotas con principios activos que facilitan la expectoración de mucosidad viscosa o para aliviar la tos. A veces también se recomienda al paciente analgésicos y antipiréticos durante poco tiempo. En muchos casos, como resultado de una infección vírica, también hay una superinfección bacteriana y, por lo tanto, también neumonía. Estas son tratadas con diversos antibióticos, contra los que se sabe que existe resistencia a sus efectos. En el tratamiento del asma o la EPOC incluso se requiere un cambio del tratamiento oral al sistémico, con lo que se deben usar glucocorticoides y el tratamiento en el hospital es caro y complicado.

Vacunación

[0017] No existe una vacuna específica contra los rinovirus. Se produjeron varias vacunas en la década de 1960, pero solo fueron capaces de producir una vacuna de protección específica contra los rinovirus específicos de la estación o zona.

[0018] Sin embargo, una infección por rinovirus en el cuerpo solo genera inmunidad contra el tipo particular de infección. Un rasgo característico de los virus de ARN en general es su gran velocidad de mutación y la flexibilidad asociada. Así, por ejemplo, las proteínas de la cápside de los rinovirus son muy variables a nivel de la proteína, lo que hace que el desarrollo de una inmunidad general sea muy difícil y también hace que la producción de una vacuna que sea eficaz contra más de un tipo de rinovirus sea hasta ahora imposible. Actualmente no hay medicamentos ni vacunas específicas eficaces a largo plazo. Aunque la técnica anterior menciona el ingrediente activo pleconaril, un bloqueador de la cápside que interactúa con la proteína de la cápside VP1, no se dispone de un preparado comercial ni se ha aprobado.

ADNzimas

[0019] Las ADNzimas son moléculas de ADN de hebra sencilla catalíticamente activas.

[0020] Una familia conocida de ADNzimas son las ADNzimas "10-23" que reconocen específicamente las secuencias diana de las moléculas de ARN, se unen de manera complementaria y se escinden por actividad catalítica, por lo que la actividad de la molécula de ARN escindida se pierde o disminuye. Este es un planteamiento terapéutico prometedor para el tratamiento de enfermedades del cuerpo humano o animal que son causadas por el aumento de la expresión de moléculas de ARN. La condición previa, sin embargo, es que la estructura diana o la secuencia diana para la unión esté suficientemente identificada y accesible y las ADNzimas puedan desarrollar tanto buenas propiedades de enlace como actividad catalítica.

[0021] Las ADNzimas 10-23 tienen un dominio catalítico de 15 nucleótidos flanqueado por dos dominios de unión al sustrato (I y II). La unión al sustrato de ARN se produce mediante el apareamiento de bases según las reglas de Watson-Crick sobre los dominios de unión al sustrato I y II.

Estado de la técnica

[0022] Se conoce el uso de una estrategia antisentido para unir y bloquear las moléculas de ARN patógenas en el cuerpo humano o animal.

[0023] Por el estado de la técnica se conocen ADNzimas "10-23" que reconocen, se unen y escinden estructuras diana de ARN altamente específicas. Por lo tanto, la estructura diana se inactiva, inhibe o bloquea, de modo que ya no puede cumplir su función patógena en el organismo. Las ADNzimas seleccionadas se describen para uso médico como agentes, por ejemplo, para inhibir la replicación del virus. Sin embargo, estas ADNzimas se dirigen muy específicamente contra regiones conservadas de virus de ARN específicos de un tipo y, por lo tanto, no están en situación de cubrir un grupo de varios tipos de virus o tipos de virus muy cambiantes. No tienen una amplia aplicabilidad a varios tipos de virus o a tipos de virus muy cambiantes, como lo son los picornavirus. DE103 22 662A1 también describe ADNzimas modificadas a partir de las ADNzimas "10-23". Estas reconocen y se unen a una secuencia diana IRES de rinovirus del serotipo HRV14.

[0024] La desventaja es que esta secuencia diana está menos conservada y está sujeta a una alta velocidad de mutación. Por lo tanto, la eficacia de las ADMzimas se limita solo a los rinovirus del serotipo HRV14 y, en general, no es efectiva para todos los serotipos de rinovirus o todos los serotipos de picornavirus.

[0025] En US 20110091501 se describen vectores de rinovirus mejorados y sus secuencias y la manera en la que se utilizan y aplican en un tratamiento como vehículo de transporte de inmunogenes, por ejemplo, inmunogenes del virus de la gripe. El vector divulgado se describe con las secuencias de nucleótidos del serotipo HRV14 de rinovirus. Sin embargo, no se utiliza como molécula antisentido para unirse al ARNm de rinovirus.

[0026] En US20130309238 se divulga una posibilidad de inhibir las reacciones inflamatorias asociadas al rinovirus y el asma mediante el bloqueo antisentido de la vía de reacción de la proteína de la línea media-1. Aquí de hecho se menciona un constructo antisentido catalizador, pero ninguna ADNzima concreta contra los rinovirus de serotipos específicos o de todos los posibles.

[0027] Ninguna de las referencias del estado de la técnica divulga ADNzimas específicas que sean útiles contra una variedad de infecciones víricas provocadas por picornavirus, particularmente rinovirus.

Tarea de la invención

[0028] La tarea de la presente invención es eliminar las desventajas del estado de la técnica y proporcionar un agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, especialmente rinovirus, que sea eficaz contra una variedad de serotipos.

Resolución de la tarea

[0029] Esta tarea se cumple según la invención mediante un agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, caracterizado por el hecho de que comprende al menos una ADNzima del tipo 10 23 seleccionada del grupo que consiste en las SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51, en donde la ADNzima según las SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16 (dpp-X1) tiene al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato I y al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato II, la ADNzima según las SEC. ID. N.° 23 29, 34-38 (dpp-X2) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 7 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II y/o la ADNzima según las SEC. ID. N.° 44, 49-51 (dpp-j-9) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 10 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II.

1. Secuencia diana de unión de las ADNzimas según la invención

[0030] Sorprendentemente, se identificó una gran homología o identidad de secuencia en la región 5' UTR del genoma del virus en una alineación de todas las secuencias disponibles del genoma de picornavirus evaluadas por bioinformática. Esta región está muy conservada y tiene una velocidad de mutación baja dentro del virus.

[0031] Evaluaciones más detalladas de todas las secuencias genómicas disponibles de los rinovirus (según Mclntyre et al. J Gen Virol 2012) también muestran una gran homología o identidad de secuencia en esta región 5' UTR.

[0032] Esta región 5' UTR homóloga en la SEC. ID. 1, por lo tanto, proporcionó un buen punto de partida para proporcionar ADNzimas que son complementarias y específicas del ARNm de todos los picornavirus y todos los serotipos de rinovirus posibles. Las ADNzimas según la invención se dirigen contra este ARNm de la región 5' UTR del genoma del virus. La escisión de este ARNm por al menos una de las ADNzimas según la invención inhibe la replicación de muchos picornavirus y muchos serotipos de rinovirus y, por lo tanto, contrarresta la aparición de la enfermedad.

[0033] Las ADNzimas según la invención se dirigen precisamente contra esta secuencia diana. Por lo tanto, representan un agente eficaz para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, especialmente rinovirus. Son eficaces contra una variedad de serotipos.

[0034] En particular, las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) tienen propiedades inesperadamente positivas con respecto a

- la unión a la secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus

- la fuerte actividad de escisión enzimática en la secuencia diana en la región 5' UTR

- la fuerte inactivación del ARN del virus en varios serotipos de rinovirus y otros picornavirus

[0035] La escisión de las ADNzimas según la invención se determina en todas las secuencias genómicas disponibles de picornavirus, en particular en los rinovirus (según Mclntyre et al. J Gen Virol 2012).

[0036] Se determina una homología del 97,4% y, por lo tanto, escisión en todas las cepas de HRV A. Se determina una homología del 100% y, por lo tanto, escisión en todas las cepas de HRV B. Se determina una homología del 98,08% y, por lo tanto, escisión en todas las cepas de HRV C.

2. ADNzimas

Estructura de las ADNzimas según la invención

[0037] Las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) comprenden cada una un dominio central catalítico de 15 ácidos desoxirribonucleicos con la secuencia GGCTAGCTACAACGA, que está flanqueado por dos dominios de unión al sustrato I y II. Ambos dominios de unión al sustrato I y II son importantes para la actividad catalítica de la ADNzima en la escisión de la secuencia diana mediante desesterificación. Reconocen la secuencia diana específica en la región 5' UTR del genoma del virus y se unen muy específicamente a través del apareamiento de bases de Watson-Crick.

[0038] Las ADNzimas según la invención reconocen las regiones de ARN conservadas del genoma de los picornavirus, en particular los rinovirus, se unen a estas regiones de manera complementaria y las escinden. Por lo tanto, el ARN de los picornavirus, en particular de los rinovirus, se inactiva, inhibe o bloquea, de modo que ya no pueden desarrollar su replicación y, por lo tanto, el efecto causante de la enfermedad en el organismo. Las ADNzimas según la invención representan un agente eficaz para uso médico para inhibir la replicación vírica de los picornavirus, en particular los rinovirus. El uso médico para la profilaxis y el tratamiento se aplica en humanos y/o mamíferos.

[0039] En particular, las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) tienen propiedades inesperadamente positivas con respecto a

- la unión a la secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus

[0040] La longitud y la secuencia de los dominios de unión al sustrato I y II son decisivos para la escisión y la actividad catalítica de la ADNzima. Los dominios de unión al sustrato I y II son iguales o diferentes en longitud. Se han realizado numerosas series experimentales para demostrar diferentes longitudes y secuencias de los dominios de unión al sustrato I y II con respecto a sus propiedades de escisión en la secuencia diana para las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51). Los resultados de estos experimentos de escisión se muestran en los ejemplos de realización.

[0041] En una forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II son completamente complementarios a la secuencia diana particular en la región 5' UTR del genoma del virus. Sin embargo, para escindir el ARN en la región 5' UTR del genoma del virus, los dominios de unión al sustrato I y II de las ADNzimas según la invención no tienen que ser totalmente complementarios. Estudios in vitro demuestran que las ADNzimas con un dominio de unión al sustrato I o II que tienen una homología del 80%, 85%, 90% o 95% también se unen y escinden la secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus.

Modificaciones

[0042] Además se descubrió sorprendentemente que las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) se estabilizan por modificaciones frente a ataques nucleofílicos. Esto es especialmente importante para su uso como agente médico.

[0043] La modificación hace que las ADNzimas estabilizadas no tengan una reducción significativa en la actividad catalítica o incluso tengan una actividad catalítica mejorada hacia el sustrato de ARN particular.

[0044] Un nucleótido modificado comprende en particular una modificación química. El experto en la técnica entenderá que el nucleótido modificado por eliminación, adición o sustitución de uno o más átomos o grupos de átomos cambia en comparación con los nucleótidos que se producen naturalmente. La modificación química incluye, por ejemplo, la ribosa (por ejemplo, 2'-O-metilación de ribonucleótidos, el denominado (LNA) "ácido nucleico bloqueado" de ribonucleótidos y la timidina invertida), el enlace fosfodiéster (por ejemplo, fosforotioatos, fosforamidatos, metilfosfonatos y nucleótidos unidos por enlaces peptídicos) y/o la base (por ejemplo, 7-desazaguanosina, 5-metilcitosina e inosina).

[0045] En una forma de realización particularmente preferida, las ADNzimas según la invención pueden modificarse en al menos un nucleótido del dominio de unión al sustrato I y/o II, en particular mediante fosforotioato, timidina invertida, 2'-O-metil-ribosa o ribonucleótidos LNA. En otras ADNzimas preferidas se modifica un nucleótido o varios nucleótidos del dominio catalítico, en particular mediante fosforotioato, timidina invertida, 2'-O-metil-ribosa o ribonucleótidos LNA.

[0046] Una forma de realización preferida es la introducción de una inversión 3'-3' en un extremo de las ADNzimas según la invención. El término inversión 3'-3' se refiere a un enlace fosfato covalente entre los carbonos 3' del nucleótido terminal y el nucleótido adyacente. Este tipo de unión contrasta con el enlace de fosfato normal entre los carbonos 3 'y 5' de nucleótidos consecutivos. Por consiguiente, se prefiere que el nucleótido sea inverso en el extremo 3' del dominio de unión al sustrato adyacente al extremo 3' del dominio catalítico. Además de las inversiones, las ADNzimas pueden contener nucleótidos modificados o compuestos de nucleótidos. Los nucleótidos modificados incluyen, p. ej., compuestos de N3'-P5'-fosforamidato, sustituciones 2'-O-metilo y compuestos de ácido nucleico peptídico. La preparación de todas las modificaciones es familiar para el experto en la materia, que encontrará instrucciones para el procedimiento en el estado de la técnica.

[0047] En una forma de realización, la modificación se localiza en el dominio catalítico. En otra forma de realización, la modificación se localiza en el dominio de unión al sustrato I y/o II. En otra forma de realización, la modificación se localiza en el dominio catalítico y en el dominio de unión al sustrato I y/o II.

Uso como medicamento

[0048] Al menos una de las ADNzimas según la invención seleccionada del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (Sec. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) con o sin modificaciones es un componente de un agente medicinal para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas o provocadas por picornavirus, especialmente por rinovirus.

[0049] El agente según la invención comprende alternativamente un adyuvante, disolvente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

[0050] El agente según la invención se prepara y administra en forma de gotas, aerosoles bucales, aerosoles nasales, píldoras, comprimidos, comprimidos con película, comprimidos recubiertos, supositorios, geles, pomadas, jarabes, polvos para inhalación, granulados, supositorios, emulsiones, dispersiones, microcápsulas, cápsulas, polvos o soluciones inyectables. Esto también incluye formulaciones como comprimidos recubiertos para la liberación controlada y/o continuada, así como microencapsulaciones como una forma de administración especial.

[0051] El agente según la invención comprende encapsulaciones en vesículas como se conoce en dermatología y farmacia para el transporte en la piel, p. ej.: liposomas aniónicos o catiónicos, niosomas, nanopartículas o vesículas multilamelares para la penetración a través de la piel o en las células de la piel o el cabello. El agente según la invención es adecuado, entre otros, para su administración por inhalación o intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, mucocutánea, oral, rectal, transdérmica, tópica, bucal, intradérmica, intragástrica, intracutánea, intranasal, intrabucal, percutánea o sublingual.

[0052] Por ejemplo, se utilizan lactosa, almidón, sorbitol, sacarosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico y similares como excipiente farmacéuticamente aceptable. Los polvos así como los comprimidos pueden estar compuestos por entre un 5% y un 95% de un excipiente de este tipo.

[0053] Además, al agente según la invención también se le pueden añadir disgregantes, colorantes, aromatizantes y/o aglutinantes.

[0054] Las formulaciones líquidas comprenden soluciones, suspensiones, aerosoles y emulsiones, por ejemplo, soluciones inyectables a base de agua o de propilenglicol en agua para inyecciones parenterales.

[0055] Las cápsulas se preparan, por ejemplo, con metilcelulosa, alcoholes polivinílicos o gelatina desnaturalizada o almidón.

[0056] Como disgregante se utiliza almidón, carboximetilalmidón sódico, gomas naturales y sintéticas, por ejemplo de algarroba, karaya, guar, tragacanto y agar, así como derivados de celulosa como la metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, celulosa microcristalina, así como alginatos, arcillas y bentonitas. Estos componentes se utilizarán en cantidades entre un 2% y un 30% en peso.

[0057] Como aglutinantes son conocidos para los expertos azúcar, almidón de grano, arroz o patatas, gomas naturales como goma de acacia, gelatina, tragacanto, ácido algínico, alginato sódico, alginato cálcico amónico, metilcelulosa, ceras, carboximetilcelulosa sódica, hidroxipropil metilcelulosa, polietilenglicol, polivinilpiracolina, así como compuestos inorgánicos como silicatos de magnesio y aluminio; estos se pueden añadir al agente según la invención. Los aglutinantes generalmente se añaden en cantidades de 1 a 30% en peso. Como lubricante, se conocen y utilizan ácido bórico y estearatos tales como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearato de potasio, ácido esteárico, ceras con alto punto de fusión, y también lubricantes solubles en agua como cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicol y aminoácidos como la leucina. Este tipo de lubricantes se usan generalmente en cantidades de 0,05 a 15% en peso.

[0058] La dosis del agente según la invención es determinado por el médico responsable en función de los factores clínicos. Los expertos en la materia saben que la dosis depende de diversos factores, como la altura, el peso, la superficie corporal, la edad, el sexo o la salud general del paciente, pero también del agente específico que administrar, la duración y el tipo de administración y de otros medicamentos que pueden ser administrados en paralelo.

[0059] El agente medicinal es adecuado para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas que son causadas por picornavirus, en particular por rinovirus, en particular también para la profilaxis y el tratamiento de la rinitis, el resfriado, el asma, la EPOC, así como para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas de las vías respiratorias superiores.

[0060] Sorprendentemente se ha observado que, con al menos una de las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51), también se logra una profilaxis general contra la formación y la manifestación del asma y la EPOC.

[0061] La combinación de la al menos una de las ADNzimas según la invención seleccionada del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) con al menos un ingrediente activo, p. ej., analgésicos y antipiréticos, es posible.

[0062] Además, la combinación con al menos un agente antiinflamatorio, inmunomodulador, antiasmático y/o broncodilatador es posible.

[0063] Asimismo, la combinación con al menos un ingrediente activo antiparasitario, antibacteriano, antimicótico y/o antivírico es posible.

[0064] De forma alternativa, la combinación con al menos un ingrediente dermatológico o cosmético es posible.

[0065] El agente se administra preferiblemente en forma de soluciones y/o emulsiones en la nariz de un paciente. Para ello, se puede diseñar como gotas nasales o aerosol nasal. Estos agentes administrables por vía nasal actúan para el tratamiento o la prevención en la nariz en sí o conducen a la inclusión del agente en el torrente sanguíneo, de modo que desplieguen el efecto en otras partes del cuerpo.

[0066] Contienen, como alternativa, adyuvantes para estabilizar el ingrediente activo o para mantener un determinado valor de pH fisiológicamente aceptable en la nariz. Para este propósito, el experto en la materia conoce el tampón de fosfato o de fosfato/citrato o de citrato, así como el tampón de acetato. Otros adyuvantes pueden ser agentes desinfectantes orales y de la garganta o conservantes.

Ejemplos de realización

1. Alineación para identificar la mejor secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus de los picornavirus [0067] Las alineaciones evaluadas por bioinformática de todas las secuencias del genoma disponibles de los picornavirus muestran una gran homología o identidad de secuencia en la región 5' UTR del genoma del virus.

[0068] Las secuencias se originan a partir de fuentes conocidas por el experto en la técnica, por ejemplo Enterovirus A: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-a/ev-a.htm y http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-a/ev-a seqs.htm

Enterovirus B: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-b/ev-b.htm

Enterovirus C: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-c/ev-c.htm

Enterovirus D: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-b/ev-b.htm

Enterovirus E: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-c/ev-c.htm

Enterovirus F: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-b/ev-b.htm

Enterovirus G: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-c/ev-c.htm

Enterovirus H: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-b/ev-b.htm

Enterovirus J: http://www.picornaviridae.com/enterovirus/ev-c/ev-c.htm

[0069] Esta región está muy conservada dentro de los picornavirus y tiene una velocidad de mutación baja. Evaluaciones detalladas de todas las secuencias genómicas disponibles de los rinovirus según Mclntyre et al. J Gen Virol 2012 también muestran una gran homología o identidad de secuencia en esta región 5' UTR. Esta región 5' UTR homóloga, por lo tanto, supuso un buen punto de partida para proporcionar ADNzimas que se unen a esta secuencia diana de la mayoría de los picornavirus y la mayoría de los serotipos de rinovirus y las escinden específicamente.

[0070] Como secuencia diana para unir las ADNzimas según la invención se determina la región 5' UTR con la mayor homología.

[0071] Los nucleótidos de escisión de GT (U) se muestran en negrita y subrayados: SEC. ID. 1 CTAGTTTGGGTGTCCGTGTTTC

Se determinó que las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 SEC. ID. 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51 se unen específicamente a la secuencia diana de los enterovirus humanos (A-D), pero también de los enterovirus de los cerdos (G) y de los enterovirus de los monos (J) y las escinden.

2. Construcción de plásmidos

[0072] El ARN genómico de todos los picomavirus disponibles se aísla mediante un método conocido por el experto en la técnica o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el QIAamp UltraSens Virus Kit, siguiendo las instrucciones del fabricante, y se utiliza para la síntesis de ADNc. La síntesis de ADNc se lleva a cabo mediante un método conocido por el experto en la técnica o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el kit de transcripción inversa Omniscript (Qiagen) junto con un inhibidor de ribonucleasa RNaseOUT (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE. UU.), siguiendo las instrucciones del fabricante. Aquí esto se muestra como ejemplo en el ARN genómico del serotipo de rinovirus HRV1b, 16 y 29.

[0073] El ADNc de cada virus se usa para amplificar la región específica 5' UTR homóloga. Para ello, las reacciones de PCR se llevan a cabo mediante un método conocido por el experto en la técnica o con un kit disponible en el mercado, p. ej., con el HotStarTaq Master Mix Kit (Qiagen) y los cebadores específicos de secuencia. Los productos obtenidos de la PCR se separan mediante electroforesis en gel (2% agarosa y 1x tampón TBE (TRIS-borato-EDTA), y se extraen del gel mediante un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el Qiaquick Gel Extraction Kit (Qiagen) y se almacena a -20 °C. Los productos purificados por PCR se subclonan mediante métodos convencionales en un vector de expresión de ARN, p. ej., pGEM-T Easy Vector System II. El producto ligado se transforma en células competentes, p. ej., células competentes de alta eficiencia JM109. Luego, el cultivo se lleva a cabo en un medio adecuado, p. ej., el medio SOC, y las bacterias transformadas se colocan en placas de agar, p. ej. agar LB estándar, con ampicilina y se cultivan hasta obtener una densidad apropiada.

[0074] Los cultivos positivos se transfieren de las placas a minipreparaciones en el medio LB estándar con ampicilina y se cultivan. El ADN plasmídico se aísla mediante un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el QIAprep Spin Miniprep Kit (Qiagen). La primera verificación de la eficiencia de clonación se realiza con EcoRI (FastDigest EcoRI, Therma Fisher Scientific), electroforesis en gel (1,5% agarosa y 1x tampón TBE (TRIS-borato-EDTA), secuenciación con cebador estándar SP6. Las bacterias que contienen la secuencia deseada se cultivan en maxipreparaciones (medio LB estándar, ampicilina). El aislamiento de ADN plasmídico se realiza mediante un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el HiSpeed Plasmid Maxi Kit (Qiagen). Los plásmidos purificados se almacenan a -20°C. De forma alternativa, se realiza una secuenciación de control con cebador SP6 estándar.

3. Expresión del ARN (síntesis)

[0075] Los plásmidos se linearizan mediante métodos conocidos o con un kit disponible en el mercado que utiliza enzimas de restricción, p. ej., Spel o NcoI. Las muestras se precipitan con etanol, EDTA y acetato de amonio, y se analizan para determinar su eficacia de linearización en la electroforesis en gel (0,8% agarosa y 1x tampón TBE (TRIS-borato-EDTA).

[0076] La transcripción in vitro se realiza con un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el kit de transcripción Ambion MEGAscript T7 o el kit de transcripción Ambion MEGAscript SP6, siguiendo las instrucciones del fabricante. El ARN se purifica mediante un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el RNeasy Mini Kit (Qiagen). Las muestras de ARN se examinan para determinar su concentración mediante un método conocido o con un kit disponible en el mercado, p. ej., el NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific), y se analizan mediante electroforesis en gel (2,5% de agarosa, 1x tampón TBE (TRIS-borato-EDTA). Las moléculas de ARN resultantes corresponden en su secuencia al inserto rodeado por fragmentos de vector entre los sitios de inicio de la transcripción de la polimerasa T7 o SP6 y el extremo 5' (genómico) del inserto, y entre el extremo 3' (genómico) del inserto y los sitios de escisión Spel o NcoI.

[0077] En todos los experimentos se determina la unión de las ADNzimas según la invención (Sec. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) en la región 5' UTR de los siguientes tipos de picornavirus:

A1, A2, A7, A8, A9, A10, A11, A12, A13, A15, A16, A18, A19, A20, A21, A22, A23, A24, A25, A28, A29, A30, A31, A32, A33, A34, A36, A38, A39, A40, A41, A43, A45, A46, A47, A49, A50, A51, A53, A54, A55, A56, A57, A58, A59, A60, A61, A62, A63, A64, A65, A66, A67, A68, A71, A73, A74, A75, A76, A77, A78, A80, A81, A82, A88, A89, A90, A94, A96, A100, A101, A102, A103, A104, A105, A106,

B3, B4, B5, B6, B14, B17, B26, B27, B35, B37, B42, B48, B52, B69, B70, B72, B79, B83, B84, B86, B91, B92, B93, B97, B99, B100, B101, B102, B103, B104, C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, C12, C15, C17, C22, C25, C26, C28, C32, C34, C35, C36, C38 C39, C40, C41, C42, C43, C45, C49, C51.

4. Preparación de las ADNzimas según la invención

[0078] La preparación de las ADNzimas según la invención (Sec. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) se realiza mediante un método de síntesis conocido por el experto en la materia.

5. Ensayos de escisión para la caracterización de las ADNzimas según la invención en la secuencia diana

[0079] Los ensayos de escisión incluyen un análisis cualitativo y cuantitativo de la medida en la que las ADNzimas según la invención (Sec. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) se unen a la secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus de los picornavirus, en particular de los rinovirus, y la escinden.

[0080] La reacción de escisión se lleva a cabo con 1 pl de tampón de reacción (p. ej., TRIS 500 mM, 1 pl de NaCl 1 M, 1 pl de MgCl²10 mM) y cantidades variables de ARN y ADNzimas (entre 50 y 250 ng o entre 10 y 30 pmol) y agua doblemente destilada (hasta 10 pl del volumen total). En experimentos cuantitativos, se añade como control un ARN de referencia (p. ej.: ARNm GATA3) para la formulación de reacción. Las formulaciones de reacción se incuban a 37°C durante 60 minutos, luego se colocan en hielo y se desnaturalizan añadiendo Ambion Gel Loading Puffer II (Thermo Fisher Scientific) para detener la reacción.

[0081] Después de 10 minutos de incubación a 65°C las formulaciones de reacción se separan mediante electroforesis en gel (2,5% agarosa, 1x tampón TAE), y se muestran gráficamente, p. ej., en el sistema Fusion Fx7 (PeqLab). Para la determinación cuantitativa, las imágenes del gel se evalúan posteriormente mediante la medición de la densidad de la banda, p. ej., con el LabImage 1D L340 Bio-Imaging. Para la reducción del fondo se utiliza el "modo de bola rodante".

6. Alargamiento y acortamientos de los dominios de unión al sustrato I y II

[0082] Los inventores, en su propia labor de investigación, han preparado una serie de ADNzimas especiales con dominios de unión al sustrato I y II específicos, y han analizado su eficacia en la secuencia diana especial en la región 5' UTR del genoma del virus en diferentes serotipos de rinovirus y otros picornavirus. La eficacia se demuestra en ensayos de unión y escisión.

[0083] En particular, las ADNzimas seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (Sec. ID 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) tienen propiedades inesperadamente positivas con respecto a

- la unión a la secuencia diana en la región 5' UTR del genoma del virus

[0084] La eficiencia de la escisión de la ADNzima según la invención en la secuencia diana en la región 5'UTR del genoma del virus se demuestra en un ensayo de escisión con ARN de picornavirus disponibles, por ejemplo, los ti os de rinovirus HRV 1b 16 29.

[0085] El dominio catalítico tiene una secuencia de GGCTAGCTACAACGA.

[0086] También se ha descubierto que la sucesión de secuencia GT de las ADNzimas según la invención es muy importante ya que la modificación con una sustitución a GC ya no mostraba ninguna unión a la secuencia diana en la ^{región 5}'^uT^{r del genoma del virus. De las ADNzimas según la invención seleccionadas del grupo dpp-X1, dpp-X2 y dpp-j-9 (SEC. ID. 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51) así como otras ADNzimas de estos grupos (SEC.}

9-43, 45-48 y 52-62) se realizan las variaciones de longitud en los domin ⁱD.^8-14,17-22, 30-33, 3 ios de unión al sustrato I y II, respectivamente, permaneciendo el dominio catalítico sin cambios.

a) La ADNzima dpp-X1 muestra una buena actividad de escisión en el ARN del 97,76% de los picornavirus disponibles, por ejemplo, los tipos de rinovirus HRV 1b, 16 y 29.

[0087] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato I con 10 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato II y el dominio catalítico. Las propiedades de escisión se analizan en el

[0088] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato II con 12 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato I y se prueban sus propiedades de escisión en el ensayo de escisión, Fi ura 3 B:

[0089] La secuencia mínima para las ADNzimas según la invención del grupo dpp-X1 (SEC. ID. 2-7, 15 y 16) es de al menos 8 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 8 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II. Particularmente en el dominio de unión al sustrato I CACGGACA y el dominio de unión al sustrato II CCAAAGTA.

[0090] La longitud de los dominios de unión al sustrato I o II también puede ser más larga que los nucleótidos indicados. En una forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen la misma longitud. En otra forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen diferentes longitudes.

b) La ADNzima dpp-X2 muestra una buena actividad de escisión en el ARN del 97,76% de los picornavirus disponibles, por ejemplo, los tipos de rinovirus HRV 1b, 16 y 29.

[0091] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato I con 11 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato II y se prueban sus propiedades de escisión en el ensayo de escisión, Figura 4 A:

[0092] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato II con 10 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato I y se prueban sus propiedades de escisión en el ensayo de escisión, Figura 4 B:

[0093] La secuencia mínima para las ADNzimas según la invención del grupo dpp-X2 (SEC. ID. 23-29 y 34-38) es de al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 7 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II. Particularmente en el dominio de unión al sustrato I CACGGA y el dominio de unión al sustrato II ACCCAAA. La longitud de los dominios de unión al sustrato I o II también puede ser más larga que los nucleótidos indicados. En una forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen la misma longitud. En otra forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen diferentes longitudes.

c) La ADNzima dpp-j-9 muestra una actividad de escisión en el ARN del 97,76% de los picornavirus disponibles, por ejemplo, los tipos de rinovirus HRV 1b, 16 y 29.

[0094] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato I con 12 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato II y se prueban sus propiedades de escisión en el ensayo de escisión, Figura 5 A:

[0095] Se proporcionan las siguientes variantes de longitud del dominio de unión al sustrato II con 6 nucleótidos constantes en el dominio de unión al sustrato I y se prueban sus propiedades de escisión en el ensayo de escisión, Figura 5 B:

[0096] La secuencia mínima para las ADNzimas según la invención del grupo dpp-j-9 (SEC. ID. 44 y 49-51) es de al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 10 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II.

[0097] Particularmente en el dominio de unión al sustrato I GAAACA y el dominio de unión al sustrato II GGACACCCAA. La longitud de los dominios de unión al sustrato I o II también puede ser más larga que los nucleótidos indicados. En una forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen la misma longitud. En otra forma de realización, los dominios de unión al sustrato I y II tienen diferentes longitudes.

Leyendas de las figuras y lista de números de referencia

[0098]

La Figura 1 muestra los diferentes serotipos asignados al grupo de los rinovirus humanos según la clasificación actual.

La Figura 2 muestra la secuencia diana (SEC. ID. 1) CTAGTTTGGGTGTCCGTGTTTC dentro de la región 5' UTR. Esta región tiene una homología de secuencia muy grande y poca velocidad de mutación en todos los genomas de virus disponibles de picornavirus y rinovirus.

La estructura secundaria se muestra utilizando el ejemplo del virus rinovirus humano 2 con seis estructuras en horquilla (subdominios 1-6) y la sección de polipirimidina (P) entre los subdominios 5 y 6. En los recuadros se muestran las regiones de escisión de las ADNzimas según la invención dpp-X1, dpp-X2, dpp-j-9 (SEC. ID. 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51).

La Figura 3 muestra la actividad de escisión de las variantes de longitud de la ADNzima dpp-X1 (SEC. ID. 2-22) en el ensayo de escisión

A) Variaciones del dominio de unión al sustrato I

B) Variaciones del dominio de unión al sustrato II

La Figura 4 muestra los resultados de las variantes de longitud de la ADNzima dpp-X2 (SEC. ID. 23-43) en el ensayo de escisión

A) Variaciones del dominio de unión al sustrato I

B) Variaciones del dominio de unión al sustrato II

La Figura 5 muestra los resultados de las variantes de longitud de la ADNzima dpp-j-9 (SEC. ID. 44-59) en el ensayo de escisión

Claims

REIVINDICACIONES

1. Agente para la profilaxis y el tratamiento de infecciones víricas causadas por picornavirus, caracterizado por el hecho de que comprende al menos una ADNzima del tipo 10-23 seleccionada del grupo que consiste en las SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51, en donde la ADNzima según las SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16 (dpp-X1) tiene al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato I y al menos 8 nucleótidos para un dominio de unión al sustrato II, la ADNzima según las SEC. ID. N.° 23-29, 34-38 (dpp-X2) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 7 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II y/o la ADNzima según las SEC. ID. N.° 44, 49-51 (dpp-j-9) tiene al menos 6 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato I y al menos 10 nucleótidos para el dominio de unión al sustrato II.

2. Agente para la profilaxis y el tratamiento según la reivindicación 1, caracterizado por que la al menos una ADNzima se selecciona del grupo que consiste en las SEC. ID. N.° 2-7, 15, 16, 23-29, 34-38, 44 y 49-51.

3. Agente para la profilaxis y el tratamiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que una secuencia diana se encuentra en la región 5' UTR de los picornavirus.

4. Agente para la profilaxis y el tratamiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la secuencia diana es la región 5' UTR de los picornavirus según la SEC. ID. 1.

5. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que los dominios de unión al sustrato I y II son de diferentes longitudes.

6. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que los dominios de unión al sustrato I y II son de la misma longitud.

7. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que la al menos una ADNzima se puede combinar con al menos un agente antiinflamatorio, inmunomodulador, antiasmático, analgésico, antipirético y/o broncodilatador.

8. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que la al menos una ADNzima se puede combinar con al menos un ingrediente activo antiparasitario, antibacteriano, antimicótico y/o antivírico.

9. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que es adecuado para la profilaxis de rinitis, resfriado, asma, EPOC e infecciones víricas de las vías respiratorias superiores.

10. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que es adecuado para el tratamiento de rinitis, resfriado, asma, EPOC e infecciones víricas de las vías respiratorias superiores.

11. Agente para la profilaxis y el tratamiento según una de las reivindicaciones anteriores caracterizado por que el agente se administra como parte de una composición farmacéuticamente aceptable por inhalación, como un aerosol, gotas, oralmente o en forma de comprimidos.