ES2724728A1

ES2724728A1 - Composition for glucose metabolism regulation (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Info

Publication number: ES2724728A1
Application number: ES201830227A
Authority: ES
Inventors: González Luis Carlos Moro; Rodriguez Alberto Guadarrama; Laguna Victor David Vendrell; García Maria Sevillano; Mª VICTORIA MORENO-ARRIBAS; Sualdea Begoña Bartolomé; Irene Gil-Sánchez
Original assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Bodega Matarromera SL
Current assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Bodega Matarromera SL
Priority date: 2018-03-08
Filing date: 2018-03-08
Publication date: 2019-09-13

Abstract

Composition for the regulation of glucose metabolism. The present invention relates to a composition for regulating glucose metabolism comprising as active ingredients one or more polyphenols at a concentration between 0.5 and 100 mg/g of the composition and dietary fibers, where the dietary fibers comprise one or more more sugars or derivatives thereof at a concentration of 50 to 600 mg/g based on the composition. The sugars especially comprise neutral sugars selected from the group comprising cellulose, glucose, xylose, galactose, arabinose and mannose and any combination thereof. The composition is used to treat or prevent diseases related to glucose metabolism disorders. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

DESCRIPCIÓNDESCRIPTION

Composición para la regulación del metabolismo de la glucosaComposition for glucose metabolism regulation

CAMPO TÉCNICOTECHNICAL FIELD

La presente invención pertenece al sector alimentario y / o farmacéutico, en particular, se refiere a la composición funcional de los ingredientes.The present invention belongs to the food and / or pharmaceutical sector, in particular, it relates to the functional composition of the ingredients.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR A LA INVENCIÓNSTATE OF THE PRIOR ART OF THE INVENTION

Los niveles altos de glucosa en sangre estimulan la secreción de insulina por las células beta pancreáticas. La insulina a su vez estimula la entrada de glucosa en los músculos y las células adiposas, lo que lleva al almacenamiento de glucógeno y triglicéridos y a la síntesis de proteínas. La activación de receptores de insulina en varios tipos de células disminuye los niveles circulantes de glucosa al aumentar la captación y utilización de glucosa, y al reducir la producción de glucosa hepática. Las alteraciones de esta red regulatoria pueden resultar en diabetes y síndromes patológicos asociados que afectan a un porcentaje grande y creciente de la población humana.High blood glucose levels stimulate insulin secretion by pancreatic beta cells. Insulin in turn stimulates the entry of glucose into the muscles and fat cells, which leads to the storage of glycogen and triglycerides and protein synthesis. Activation of insulin receptors in various cell types decreases circulating glucose levels by increasing glucose uptake and utilization, and by reducing liver glucose production. Alterations of this regulatory network can result in diabetes and associated pathological syndromes that affect a large and growing percentage of the human population.

Los pacientes que tienen un trastorno del metabolismo de la glucosa pueden padecer de hiperglucemia, hiperinsulinemia y / o intolerancia a la glucosa. Un ejemplo de un trastorno que con frecuencia se asocia con los niveles aberrantes de glucosa y / o insulina es la resistencia a la insulina, en la que las células hepáticas, grasas y musculares pierden su capacidad de responder a los niveles normales de insulina en la sangre.Patients who have a glucose metabolism disorder may suffer from hyperglycemia, hyperinsulinemia and / or glucose intolerance. An example of a disorder that is often associated with aberrant glucose and / or insulin levels is insulin resistance, in which liver, fat and muscle cells lose their ability to respond to normal insulin levels in the blood.

En vista de la prevalencia y severidad de la diabetes y los trastornos metabólicos y no metabólicos asociados, siguen siendo de interés las modalidades de tratamiento que modulan, por ejemplo, los niveles de glucosa y / o insulina y mejoran la respuesta biológica a los niveles fluctuantes de glucosa en un paciente. También es importante reducir el riesgo de tales enfermedades y trastornos, especialmente la diabetes tipo 2. In view of the prevalence and severity of diabetes and associated metabolic and non-metabolic disorders, treatment modalities that modulate, for example, glucose and / or insulin levels and improve the biological response to fluctuating levels remain of interest. of glucose in a patient. It is also important to reduce the risk of such diseases and disorders, especially type 2 diabetes.

Los polifenoles son compuestos químicos o sustancias que se encuentran en una gran cantidad de alimentos derivados de plantas. El término abarca una amplia variedad de moléculas con una estructura común, caracterizada por tener varios grupos hidroxilo unidos a anillos aromáticos. Sin embargo, los polifenoles también incluyen moléculas con un anillo de fenol, como en el caso de los ácidos fenólicos o los alcoholes fenólicos.Polyphenols are chemical compounds or substances found in a large amount of plant-derived foods. The term encompasses a wide variety of molecules with a common structure, characterized by having several hydroxyl groups attached to aromatic rings. However, polyphenols also include molecules with a phenol ring, as in the case of phenolic acids or phenolic alcohols.

Clasificación de polifenoles Polyphenol Classification

Los polifenoles se clasifican en función del número de anillos de fenol que contienen, así como de los elementos estructurales que unen estos anillos. Como tal, los principales grupos de polifenoles son:Polyphenols are classified according to the number of phenol rings they contain, as well as the structural elements that bind these rings. As such, the main groups of polyphenols are:

Flavonoides: los cuales presentan un esqueleto de carbono de difenilpropano y dos anillos de benceno unidos juntos por una cadena lineal de 3 átomos de carbono. Hasta la fecha, se han identificado más de 6.000 flavonoides en las plantas, y la lista continúa creciendo. Los flavonoides se pueden dividir en 6 subclases, en función del estado de oxidación del anillo de pirano central. Los flavonoides se pueden dividir en Flavonoles, Flavonas, Flavanonas, Lisoflavonas, Antocianinas y Flavanoles.Flavonoids: which have a diphenylpropane carbon skeleton and two benzene rings joined together by a linear chain of 3 carbon atoms. To date, more than 6,000 flavonoids have been identified in plants, and the list continues to grow. Flavonoids can be divided into 6 subclasses, depending on the oxidation state of the central pyranus ring. Flavonoids can be divided into Flavonols, Flavones, Flavanones, Lisoflavones, Anthocyanins and Flavanols.

Flavonoles: que tienen un doble enlace entre los carbonos 2 y 3, con un grupo hidroxilo en C3.Flavonols: which have a double bond between carbons 2 and 3, with a hydroxyl group in C3.

Son los flavonoides más ubicuos en los alimentos, y la quercetina es la más representativa.They are the most ubiquitous flavonoids in food, and quercetin is the most representative.

Flavonas: Presentan un doble enlace entre los carbonos 2 y 3, y son los flavonoides menos comunes. Se encuentran en el perejil y en el apio.Flavones: They have a double bond between carbons 2 and 3, and are the least common flavonoids. They are found in parsley and celery.

Flavanonas: Se caracterizan por tener una cadena saturada de 3 átomos de carbono y un átomo de oxígeno en el carbono 4. Se encuentran solo en altas concentraciones en los cítricos, aunque también están presentes en los tomates y en algunas plantas aromáticas como la menta.Flavanones: They are characterized by having a saturated chain of 3 carbon atoms and an oxygen atom in carbon 4. They are found only in high concentrations in citrus fruits, although they are also present in tomatoes and in some aromatic plants such as mint.

Isoflavonas: que son estructuralmente similares a los estrógenos, y en los pies se pueden unir a sus receptores, por lo que también se conocen como fitoestrógenos. La soja y sus derivados son las principales fuentes de isoflavonas.Isoflavones: which are structurally similar to estrogens, and in the feet can bind to their receptors, so they are also known as phytoestrogens. Soy and its derivatives are the main sources of isoflavones.

Antocianinas: que son los pigmentos responsables de la coloración roja, azul y púrpura de frutas, flores y otros tejidos y productos vegetalesAnthocyanins: which are the pigments responsible for the red, blue and purple coloring of fruits, flowers and other tissues and plant products

Flavanoles: que tienen una cadena saturada de 3 carbonos, con un grupo hidroxilo en C3. Existen tanto como monómeros como polímeros, conocidos como catequinas y proantocianidinas, respectivamente.Flavanols: which have a saturated chain of 3 carbons, with a hydroxyl group in C3. They exist both as monomers and polymers, known as catechins and proanthocyanidins, respectively.

Los principales flavonoides en la fruta son la catequina y la epicatequina, mientras que la galocatequina, la epi-galocatequina y el galato de epigalocatequina se encuentran esencialmente en el té. Las catequinas se encuentran en frutas como los albaricoques y las cerezas y en otros productos como el té, el chocolate y el vino blanco. The main flavonoids in fruit are catechin and epicatechin, while galocatechin, epi-gallocatechin and epigallocatechin gallate are essentially found in tea. Catechins are found in fruits such as apricots and cherries and in other products such as tea, chocolate and white wine.

Ácidos fenólicos: que se dividen en dos grupos, los derivados del ácido benzoico y los derivados del ácido cinámico.Phenolic acids: which are divided into two groups, those derived from benzoic acid and those derived from cinnamic acid.

Ácidos hidrobenzoicos: que se encuentran en muy pocas plantas consumidas por humanos, y por lo tanto no se consideran de particular interés para la nutrición. Entre ellos, destacan el ácido gálico o ácido egálicoHydrobenzoic acids: found in very few plants consumed by humans, and therefore are not considered of particular interest for nutrition. Among them, gallic acid or egic acid stand out

Ácidos hidroxicinámicos: que están representados principalmente por ácido cumarico, ácido cafeico y ácido ferúlico.Hydroxycinnamic acids: which are mainly represented by coumaric acid, caffeic acid and ferulic acid.

Alcoholes fenólicos: tirosol e hidroxitirosol son los principales tipos. Se encuentran principalmente en el aceite de oliva. El tirosol también se encuentra en el vino, tanto blanco como tinto, y en la cerveza; el hidroxitirosol, por otro lado se encuentra en el vino tinto.Phenolic alcohols: tyrosol and hydroxytyrosol are the main types. They are found mainly in olive oil. Tyrosol is also found in wine, both white and red, and in beer; Hydroxytyrosol, on the other hand, is found in red wine.

Estilbenos: el principal estilbeno presente en la dieta de los humanos es el resveratrol, aunque la cantidad de estos compuestos ingeridos en la dieta es pequeña. Los estilbenos son producidos por las plantas como respuesta a patógenos o a ciertas condiciones de estrés. Se han detectado en más de 70 especies de plantas, como uvas, bayas y cacahuetes.Stilbenes: the main stilbene present in the human diet is resveratrol, although the amount of these compounds ingested in the diet is small. Stilbenes are produced by plants in response to pathogens or certain stress conditions. They have been detected in more than 70 species of plants, such as grapes, berries and peanuts.

Lignanos: los lignanos se producen por la dimerización oxidativa de dos unidades de fenilpropano. La principal fuente de estos compuestos es la semilla de lino.Lignans: Lignans are produced by the oxidative dimerization of two phenylpropane units. The main source of these compounds is flax seed.

La fuente principal de polifenoles para alimentos es el orujo de uva (GP). El orujo de uva es un subproducto de la bodega compuesto básicamente por semillas de uva, piel y tallos. Es rico en fibra dietética y polifenoles, incluidas las antocianinas (en tintoGP), flavan-3-oles, flavonoles, ácidos fenólicos y estilbenos (Fontana, Antoniolli y Bottini, 2013), que proporcionan una amplia variedad de posibles actividades biológicas (Yu y Ahmedna, 2013).The main source of food polyphenols is grape marc (GP). Grape pomace is a by-product of the winery consisting basically of grape seeds, skin and stems. It is rich in dietary fiber and polyphenols, including anthocyanins (in tintoGP), flavan-3-oles, flavonols, phenolic acids and stilbenes (Fontana, Antoniolli and Bottini, 2013), which provide a wide variety of possible biological activities (Yu and Ahmedna, 2013).

En los últimos años, ha aumentado el interés en el uso de GP para desarrollar ingredientes funcionales y en otras aplicaciones para la industria alimentaria (Charalampia & Koutelidakis, 2016). Pero la mayoría de la evidencia científica relacionada con los beneficios de GP se deriva de experimentos realizados in vitro y en modelos animales, a menudo usando una concentración mucho más alta que la contenida en fluidos biológicos y en la dieta, respectivamente. Además, en algunos casos, se prueban los compuestos GP originales en lugar de sus metabolitos derivados, que serían los responsables de los efectos beneficiosos in vivo (D'Archivio, Filesi, Vari, Scazzocchio, y Masella, 2010).In recent years, interest in the use of GP to develop functional ingredients and other applications for the food industry has increased (Charalampia & Koutelidakis, 2016). But most of the scientific evidence related to the benefits of GP is derived from experiments performed in vitro and in animal models, often using a much higher concentration than that contained in biological fluids and diet, respectively. In addition, in some cases, the original GP compounds are tested instead of their derived metabolites, that would be responsible for the beneficial effects in vivo (D'Archivio, Filesi, Vari, Scazzocchio, and Masella, 2010).

Se han publicado dos estudios de intervención humana sobre los efectos de la inclusión de GP en la dieta humana. Yubero et al. (2013) evaluaron los efectos de aportar un suplemento con extracto de GP (700 mg / día, 56 días) sobre el riesgo cardiovascular y los indicadores de estrés oxidativo en voluntarios sanos (n = 60). Los resultados de este estudio mostraron que el suplemento con el extracto de GP fue capaz de modular el perfil lipídico, disminuyendo el colesterol total en sangre y los niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL) (Yubero et al., 2013). Por su parte, Urquiaga et al. (2015) investigaron el efecto del aporte de un suplemento con una harina de GP (20 g / día, 16 semanas, aproximadamente 10 g de fibra dietética / día) en pacientes masculinos (n = 38) que presentaban al menos un síntoma de síndrome metabólico. Los resultados de este estudio indicaron una mejora significativa en la presión arterial, los niveles de glucosa en ayunas y el daño proteico después del aporte con harina de GP (Urquiaga et al., 2015).Two human intervention studies have been published on the effects of GP inclusion in the human diet. Yubero et al. (2013) evaluated the effects of providing a supplement with GP extract (700 mg / day, 56 days) on cardiovascular risk and indicators of oxidative stress in healthy volunteers (n = 60). The results of this study showed that the supplement with GP extract was able to modulate the lipid profile, lowering total blood cholesterol and low density lipoprotein (LDL) cholesterol levels (Yubero et al., 2013). On the other hand, Urquiaga et al. (2015) investigated the effect of the contribution of a supplement with a GP flour (20 g / day, 16 weeks, approximately 10 g of dietary fiber / day) in male patients (n = 38) who presented at least one symptom of syndrome metabolic. The results of this study indicated a significant improvement in blood pressure, fasting glucose levels and protein damage after contribution with GP flour (Urquiaga et al., 2015).

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓNDESCRIPTION OF THE INVENTION

El objeto principal de esta invención es una composición para regular el metabolismo de la glucosa que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes: The main object of this invention is a composition for regulating glucose metabolism comprising as active ingredients the following components:

a) una o más concentraciones de polifenoles en una concentración de entre 0,5 y 100 mg / g de la composición;a) one or more concentrations of polyphenols in a concentration between 0.5 and 100 mg / g of the composition;

b) fibras dietéticas, en las que las fibras dietéticas comprenden uno o más azúcares o derivados del mismo a una concentración de 50 a 600 mg / g en base a la composición. b) dietary fibers, in which the dietary fibers comprise one or more sugars or derivatives thereof at a concentration of 50 to 600 mg / g based on the composition.

Preferiblemente, el compuesto o compuestos de polifenol comprenden ácido elágico, flavanoles o flavonoles o cualquier combinación de los mismos, preferiblemente ácido elágico, flavanoles y flavonoles. Preferiblemente, los polifenoles comprenden como flavanoles catequina, epicatequina o proantocianidina o cualquier combinación de los mismos, preferiblemente catequina, epicatequina y proantocianidina. Preferiblemente la composición comprende como flavonoles, miricetina, quercetina o cualquier combinación de los mismos, preferiblemente micetrina, quercetina y kaempferol.Preferably, the polyphenol compound or compounds comprise ellagic acid, flavanols or flavonols or any combination thereof, preferably ellagic acid, flavanols and flavanols. Preferably, the polyphenols comprise as catechin, epicatechin or proanthocyanidin flavanols or any combination thereof, preferably catechin, epicatechin and proanthocyanidin. Preferably the composition comprises as flavonols, myricetin, quercetin or any combination thereof, preferably micelin, quercetin and kaempferol.

Uno o más azúcares o derivados de los mismos son preferiblemente los azúcares medidos por hidrólisis del residuo insoluble en alcohol (RIA) de la composición. One or more sugars or derivatives thereof are preferably sugars measured by hydrolysis of the alcohol insoluble residue (RIA) of the composition.

Preferiblemente los azúcares comprenden azúcares neutros y ácidos urónicos. Preferiblemente, los azúcares neutros seleccionados del grupo que comprende celulosa, glucosa, xilosa, galactosa, arabinosa y manosa y cualquier combinación de las mismas. Preferiblemente, los azúcares neutros se seleccionan del grupo que consiste en celulosa, glucosa, xilosa, galactosa, arabinosa y manosa y cualquier combinación de las mismas. Preferably the sugars comprise neutral sugars and uronic acids. Preferably, the neutral sugars selected from the group comprising cellulose, glucose, xylose, galactose, arabinose and mannose and any combination thereof. Preferably, the neutral sugars are selected from the group consisting of cellulose, glucose, xylose, galactose, arabinose and mannose and any combination thereof.

Preferiblemente, la concentración total de fibras dietéticas en la composición es de 50 a 850 mg / g, más preferiblemente de 300 mg / ga 850 mg / g, incluso más preferiblemente de 550 mg / ga 750 mg / g.Preferably, the total concentration of dietary fibers in the composition is from 50 to 850 mg / g, more preferably from 300 mg / g to 850 mg / g, even more preferably from 550 mg / g to 750 mg / g.

Preferiblemente, la concentración total de uno o más polifenoles está entre 10 y 100 mg / g, más preferiblemente entre 20 y 50 mg / g. La concentración total se mide en mg de ácido gálico / g.Preferably, the total concentration of one or more polyphenols is between 10 and 100 mg / g, more preferably between 20 and 50 mg / g. The total concentration is measured in mg of gallic acid / g.

Preferiblemente, la concentración total de fibras dietéticas es al menos 3 veces mayor que la concentración de polifenoles, más preferiblemente entre 5 y 30 veces mayor.Preferably, the total concentration of dietary fibers is at least 3 times greater than the concentration of polyphenols, more preferably between 5 and 30 times greater.

Preferiblemente, la concentración de azúcares neutros es de 5 a 20 veces mayor que la concentración de los ácidos urónicos.Preferably, the concentration of neutral sugars is 5 to 20 times higher than the concentration of uronic acids.

En una realización preferida de la invención, la composición comprende la siguiente concentración de polifenoles en peso:In a preferred embodiment of the invention, the composition comprises the following concentration of polyphenols by weight:

- ácido elágico: entre 0,5 y 10 mg / g de la composición- ellagic acid: between 0.5 and 10 mg / g of the composition

- flavanoles: entre 0,2 y 20 mg / g de la composición- flavanols: between 0.2 and 20 mg / g of the composition

- flavonoles: entre 0,11 y 12 mg / g de la composición.- flavonols: between 0.11 and 12 mg / g of the composition.

Preferiblemente, los flavanoles comprendidos por la composición son los siguientes:Preferably, the flavanols comprised by the composition are the following:

• catequina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición• catechin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

• epicatequina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición• epicatechin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

• proantocianidina: entre 0,1 y 1O mg / g de la composición.• proanthocyanidin: between 0.1 and 1O mg / g of the composition.

Preferiblemente, los flavonoles comprendidos por la composición son los siguientes:Preferably, the flavonols comprised by the composition are the following:

• miricetina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición• myricetin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

• quercetina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición • quercetin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

• kaempferol: entre 0,01 y 2 mg / g de la composición.• kaempferol: between 0.01 and 2 mg / g of the composition.

Preferiblemente, los azúcares comprendidos por las fibras dietéticas son los siguientes: - azúcares neutros: entre 150 y 550 mg / g de la composiciónPreferably, the sugars included in the dietary fibers are the following: - neutral sugars: between 150 and 550 mg / g of the composition

- Ácidos urónicos: entre 1 y 100 mg / g de la composición- Uronic acids: between 1 and 100 mg / g of the composition

- Lignina Klason: entre 1 y 200 mg / g de la composición.- Lignin Klason: between 1 and 200 mg / g of the composition.

Preferiblemente, los azúcares neutros comprendidos por la composición son los siguientes:Preferably, the neutral sugars comprised by the composition are the following:

• celulosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición• cellulose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition

• glucosa: entre 150 y 400 mg / g de la composición• glucose: between 150 and 400 mg / g of the composition

• xilosa: entre 0,1 y 5 mg / g de la composición• Xylose: between 0.1 and 5 mg / g of the composition

• galactosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición• galactose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition

• arabinosa: entre 0,1 y 1O mg / g de la composición• arabinose: between 0.1 and 1O mg / g of the composition

• manosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición• Mannose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition

- ácido elágico: entre 0,5 y 1O mg / g de la composición- ellagic acid: between 0.5 and 1O mg / g of the composition

- flavonoles: entre 0,11 y 12 mg / g de la composición,- flavonols: between 0.11 and 12 mg / g of the composition,

y en donde, los flavanoles comprendidos por la composición son los siguientes:and where, the flavanols comprised by the composition are the following:

• proantocianidina: entre 0,1 y 1O mg / g de la composición,• proanthocyanidin: between 0.1 and 1O mg / g of the composition,

y en donde, los flavonoles comprendidos por la composición son los siguientes:and where, the flavonols included in the composition are the following:

• miricetina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición • myricetin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

• quercetina: entre 0,05 y 5 mg / g de la composición• quercetin: between 0.05 and 5 mg / g of the composition

En una realización preferida de la invención, la composición de los azúcares comprendidos por las fibras dietéticas es la siguiente:In a preferred embodiment of the invention, the composition of sugars comprised of dietary fibers is as follows:

- azúcares neutros: entre 151,7 y 505 mg / g de la composición- neutral sugars: between 151.7 and 505 mg / g of the composition

- Lignina Klason: entre 1 y 200 mg / g de la composición;- Lignin Klason: between 1 and 200 mg / g of the composition;

en el que los azúcares neutros comprendidos por la composición son los siguientes:wherein the neutral sugars included in the composition are the following:

Todos los azúcares mencionados son preferiblemente las formas naturales de los azúcares, p/ej. RE- Glucosa.All the sugars mentioned are preferably the natural forms of the sugars, e.g. RE- Glucose.

En una realización preferida de la invención, la composición se obtiene a partir de un extracto seco de uva.In a preferred embodiment of the invention, the composition is obtained from a dry grape extract.

Un objeto adicional de esta invención es un suplemento dietario (nutricional) funcional caracterizado porque comprende la composición descrita anteriormente, en cualquiera de sus variantes, como un ingrediente funcional. La composición actúa directamente como un suplemento dietético funcional. El complemento dietético puede estar constituido en su totalidad (100% del total de la composición del suplemento) por la composición.A further object of this invention is a functional (nutritional) dietary supplement characterized in that it comprises the composition described above, in any of its variants, as a functional ingredient. The composition acts directly as a functional dietary supplement. The dietary supplement may consist entirely (100% of the total composition of the supplement) by the composition.

En otra realización preferida, dicho suplemento dietético se caracteriza porque comprende al menos entre 100 mg y 5 g de la composición, preferiblemente entre 500 mg y 2 g. In another preferred embodiment, said dietary supplement is characterized in that it comprises at least between 100 mg and 5 g of the composition, preferably between 500 mg and 2 g.

Preferiblemente, este suplemento dietético se caracteriza porque comprende, además de la composición como ingrediente funcional, al menos una sustancia fisiológicamente aceptable que tiene propiedades seleccionadas del grupo compuesto por: nutritivo, antioxidante, terapéutico, aromatizante, aromático, colorante u otras propiedades similaresPreferably, this dietary supplement is characterized in that it comprises, in addition to the composition as a functional ingredient, at least one physiologically acceptable substance having properties selected from the group consisting of: nutritive, antioxidant, therapeutic, flavoring, aromatic, coloring or other similar properties

También es preferible que la composición dietética comestible contenga adicionalmente al menos una sustancia seleccionada del grupo compuesto por: Vitaminas (Vitamina A, Vitamina B1, Vitamina B2, Vitamina B3, Vitamina B6, Vitamina B9, Vitamina B12, Vitamina C, Vitamina E), elementos dietéticos traza (por ejemplo, zinc, cobre, magnesio, selenio, manganeso), fitoquímicos (por ejemplo, carotenoides, luteína, zeaxantina, astaxantina), colágeno, colágeno tipo II, Sulfato de Condroitina, Ácido Hialurónico, Ácidos Grasos Omega-3, Hidroxitol, Glutatión, Glucosamina, extractos de fito enriquecidos con proantocianidinas y extractos fito de otros productos vegetales (como, opcionalmente, granada, té verde, oliva, Polygonum cuspidatum).It is also preferable that the edible dietary composition additionally contains at least one substance selected from the group consisting of: Vitamins (Vitamin A, Vitamin B1, Vitamin B2, Vitamin B3, Vitamin B6, Vitamin B9, Vitamin B12, Vitamin C, Vitamin E), dietary trace elements (for example, zinc, copper, magnesium, selenium, manganese), phytochemicals (for example, carotenoids, lutein, zeaxanthin, astaxanthin), collagen, type II collagen, Chondroitin Sulfate, Hyaluronic Acid, Omega-3 Fatty Acids , Hydroxitol, Glutathione, Glucosamine, phyto extracts enriched with proanthocyanidins and phyto extracts of other plant products (such as, optionally, pomegranate, green tea, olive, Polygonum cuspidatum).

Tanto la composición descrita en esta especificación como el suplemento dietético que lo comprende (como ingrediente funcional) directamente pueden ser consumidos por los seres humanos. Como tal, el alcance de la presente invención incluye no sólo el uso de la composición como un suplemento dietético, sino también el uso de la composición como ingrediente funcional en alimentos o en una composición dietética.Both the composition described in this specification and the dietary supplement that comprises it (as a functional ingredient) can directly be consumed by humans. As such, the scope of the present invention includes not only the use of the composition as a dietary supplement, but also the use of the composition as a functional ingredient in foods or in a dietary composition.

De esta manera, tanto la composición como el suplemento nutricional o dietético descritos anteriormente, en cualquiera de sus variantes, pueden envasarse a granel o en dosis únicas. En general, la composición y el suplemento dietético pueden envasarse en latas, bidones, cajas de cartón o cualquier otro tipo de envase conocido en el campo. Cuando se envasan en dosis únicas, dicha composición y dicha composición que la comprenden pueden tomar la forma de una tableta, una cápsula o una píldora.In this way, both the composition and the nutritional or dietary supplement described above, in any of its variants, can be packaged in bulk or in single doses. In general, the composition and dietary supplement can be packaged in cans, drums, cardboard boxes or any other type of packaging known in the field. When packaged in single doses, said composition and said composition comprising it can take the form of a tablet, a capsule or a pill.

Se ha demostrado que el efecto de la composición descrita aquí, o de un suplemento dietético que comprende dicha composición, ofrece beneficios para la salud humana, especialmente con enfermedades relacionadas con el metabolismo de la glucosa y la mejora de los parámetros asociados con las enfermedades relacionadas con el metabolismo de la glucosa. Por ejemplo, se ha demostrado cómo uno se beneficia del consumo de esta composición, o del suplemento dietético que lo contiene, por niveles reducidos de azúcar en la sangre y un metabolismo de la glucosa regulado al alza. El efecto ya es significativo incluso en dosis bajas. It has been shown that the effect of the composition described herein, or of a dietary supplement comprising said composition, offers benefits for human health, especially with diseases related to glucose metabolism and the improvement of the parameters associated with related diseases. with glucose metabolism. For example, it has been shown how one benefits from the consumption of this composition, or the dietary supplement that contains it, by reduced blood sugar levels and an upregulated glucose metabolism. The effect is already significant even at low doses.

La "regulación del metabolismo de la glucosa" se entiende como la regulación del procesamiento y / o captación de glucosa. Preferiblemente, la regulación del metabolismo de la glucosa da como resultado un aumento o reducción de al menos uno de los miARN circulantes seleccionados del grupo que comprende miARN-130a-3p, miARN-122-5p, miARN-34a-5p, miARN-191-5p y miARN-342-3p, preferiblemente al menos 2, 3, 4 de estos miARN, incluso más preferiblemente todos estos miARN. Los miARN tienen preferiblemente las secuencias de acuerdo con las SEQ-ID Nos. 1 a 5. Una regulación en el sentido de la invención se entiende como un cambio estadísticamente significativo en el nivel de un miARN circulante como se indica, por ejemplo, por un valor de p de p <0,05 según se analizó mediante la prueba t para muestras individuales."Glucose metabolism regulation" is understood as the regulation of glucose processing and / or uptake. Preferably, regulation of glucose metabolism results in an increase or reduction of at least one of the circulating miRNAs selected from the group comprising miRNA-130a-3p, miRNA-122-5p, miRNA-34a-5p, miRNA-191 -5p and miRNA-342-3p, preferably at least 2, 3, 4 of these miRNAs, even more preferably all of these miRNAs. The miRNAs preferably have the sequences according to SEQ-ID Nos. 1 to 5. A regulation within the meaning of the invention is understood as a statistically significant change in the level of a circulating miRNA as indicated, for example, by a p value of p <0.05 as analyzed by the t-test for individual samples.

En una realización preferida, la regulación da como resultado al menos un cambio significativo en el nivel de miARN-191-5p y más preferiblemente en los niveles de miARN-191-5p y miARN-122-5p.In a preferred embodiment, the regulation results in at least one significant change in the level of miRNA-191-5p and more preferably in the levels of miRNA-191-5p and miRNA-122-5p.

Un "miARN" (también llamado "microARN", "mir-", "miR-" o "micro ARN") es una pequeña molécula de ARN no codificante (que contiene aproximadamente 22 nucleótidos) que se encuentra en plantas, animales y algunos virus, y que funciona en el silenciamiento de ARN y la regulación postranscripcional de la expresión génica. Los miARNs funcionan a través del apareamiento de bases con secuencias complementarias dentro de moléculas de ARNm. Como resultado, estas moléculas de ARNm son silenciadas por uno o más de los siguientes procesos:A "miRNA" (also called "microRNA", "mir-", "miR-" or "micro RNA") is a small non-coding RNA molecule (containing approximately 22 nucleotides) found in plants, animals and some virus, and that works in RNA silencing and posttranscriptional regulation of gene expression. The miRNAs work through base pairing with complementary sequences within mRNA molecules. As a result, these mRNA molecules are silenced by one or more of the following processes:

1) Rotura o escisión de la cadena de ARNm en dos partes, 2) desestabilización del ARNm a través del acortamiento de su cola de poli- Adenina (A) y 3) traducción menos eficiente del ARNm en proteínas en los ribosomas. Los miARN están bien conservados tanto en plantas como en animales, y se cree que son un componente vital y evolutivamente antiguo de la regulación genética. Se entiede por miARN circulante aquel miARN presente en sangre, suero sanguíneo o suero.1) Rupture or cleavage of the mRNA chain in two parts, 2) destabilization of mRNA through shortening of its poly-Adenine tail (A) and 3) less efficient translation of mRNA into proteins in ribosomes. The miRNAs are well conserved in both plants and animals, and are believed to be a vital and evolutionarily ancient component of genetic regulation. It is understood by circulating miRNA that miRNA present in blood, blood serum or serum.

Influir en los niveles de miARN muestra una fuerte influencia de la composición en el metabolismo de la glucosa.Influencing miRNA levels shows a strong influence of the composition on glucose metabolism.

Dependiendo de la proposición metabólica, puede ser necesario determinar si la composición también muestra el efecto descrito en 1, 2, 3, 4 o 5 de los miARN previamente descritos en esta persona. El uso del compuesto puede estar restringido a estas personas. Depending on the metabolic proposition, it may be necessary to determine if the composition also shows the effect described in 1, 2, 3, 4 or 5 of the miRNAs previously described in this person. The use of the compound may be restricted to these people.

El alcance de la presente invención incluye adicionalmente un producto alimenticio caracterizado porque su composición comprende como ingrediente funcional la composición descrita o el suplemento nutricional que se puede obtener del mismo, mezclado con al menos un ingrediente dietético. En una composición preferida del producto alimenticio, comprende como ingrediente dietético uno de los productos seleccionados del grupo formado por productos cárnicos, productos lácteos, derivados lácteos, salsas, pasta alimenticia, productos de panadería y pastelería, y similares, y cualquier combinación de los mismos.The scope of the present invention further includes a food product characterized in that its composition comprises as a functional ingredient the described composition or the nutritional supplement that can be obtained thereof, mixed with at least one dietary ingredient. In a preferred composition of the food product, it comprises as a dietary ingredient one of the products selected from the group consisting of meat products, dairy products, dairy products, sauces, pasta, bakery and pastry products, and the like, and any combination thereof .

En otra realización preferida, el producto alimenticio es una bebida, y la composición o el suplemento nutricional que lo comprende se mezcla con un líquido fisiológicamente aceptable.In another preferred embodiment, the food product is a beverage, and the nutritional composition or supplement comprising it is mixed with a physiologically acceptable liquid.

Otro objeto de la presente invención es el uso de la composición descrita, o cualquiera de sus variantes, para la producción de diferentes productos funcionales. Estos productos incluyen alimentos y suplementos dietéticos para el consumo humano. Dicha composición puede usarse para regular el metabolismo de la glucosa. De esta manera, la composición de la presente invención se puede usar para prevenir o tratar enfermedades relacionadas con trastornos en el metabolismo de la glucosa. El tratamiento o prevención resulta en un aumento del metabolismo de la glucosa. En realizaciones particulares, el trastorno del metabolismo de la glucosa es diabetes mellitus, especialmente diabetes tipo 2.Another object of the present invention is the use of the described composition, or any of its variants, for the production of different functional products. These products include food and dietary supplements for human consumption. Said composition can be used to regulate glucose metabolism. In this way, the composition of the present invention can be used to prevent or treat diseases related to disorders in glucose metabolism. Treatment or prevention results in an increase in glucose metabolism. In particular embodiments, the glucose metabolism disorder is diabetes mellitus, especially type 2 diabetes.

Aunque no se limita a ninguna ruta particular de administración o régimen de dosificación, se prefiere la administración oral.Although it is not limited to any particular route of administration or dosage regimen, oral administration is preferred.

La composición puede usarse en una dosificación de al menos 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1 g o 1,4 g por día.The composition can be used in a dosage of at least 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1 g or 1.4 g per day.

Como límite superior, se prefiere una dosis de 8 g, 7 g, 6 g, 5 g, 4 g, 3 g o 2 g por día. Cada uno de estos límites se puede combinar como límite inferior y superior de una dosificación preferida.As an upper limit, a dose of 8 g, 7 g, 6 g, 5 g, 4 g, 3 g or 2 g per day is preferred. Each of these limits can be combined as the lower and upper limit of a preferred dosage.

Más preferido es una dosificación de 300 mg a 5 g por día, incluso más preferida una dosificación de 1 g a 2 g por día. La presente composición muestra efectos significativos incluso a dosis bajas, que pueden incluirse fácilmente en una dieta diaria.More preferred is a dosage of 300 mg at 5 g per day, even more preferred a dosage of 1 g to 2 g per day. The present composition shows significant effects even at low doses, which can easily be included in a daily diet.

Las dosis corresponden a un hombre o una mujer adulta, preferiblemente de una edad comprendida entre 25 y 65 años, preferiblemente mujeres adultas. The doses correspond to an adult man or woman, preferably between the ages of 25 and 65, preferably adult women.

La persona a tratar es preferiblemente un hombre o una mujer adulta, preferiblemente de entre 25 y 65 años, más preferiblemente una mujer adulta.The person to be treated is preferably an adult man or woman, preferably between 25 and 65 years, more preferably an adult woman.

La duración del tratamiento es preferiblemente de al menos 7 días, más preferiblemente de al menos 14 días, incluso más preferiblemente al menos 21 días.The duration of treatment is preferably at least 7 days, more preferably at least 14 days, even more preferably at least 21 days.

La duración del tratamiento es al menos hasta que se pueda medir la primera regulación de efectos significativos del metabolismo de la glucosa como se mencionó anteriormente. Otro efecto adicional puede ser la mejora de los niveles de glucosa en ayunas. Más preferiblemente, los primeros efectos se miden después de al menos 21 días. Por lo tanto, el tratamiento puede finalizar o suspenderse después de 60 días, preferiblemente después de 40 días.The duration of treatment is at least until the first regulation of significant effects of glucose metabolism can be measured as mentioned above. Another additional effect may be the improvement of fasting glucose levels. More preferably, the first effects are measured after at least 21 days. Therefore, the treatment can be terminated or suspended after 60 days, preferably after 40 days.

El tratamiento puede usarse para reducir el riesgo de las enfermedades antes mencionadas en individuos sanos.The treatment can be used to reduce the risk of the aforementioned diseases in healthy individuals.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS VARIAS VISTAS DE LOS DIBUJOSBRIEF DESCRIPTION OF THE SEVERAL VIEWS OF THE DRAWINGS

Para una comprensión más completa de la presente invención, se establece una referencia a la siguiente descripción realizada en relación con los dibujos adjuntos:For a more complete understanding of the present invention, a reference is made to the following description made in connection with the accompanying drawings:

Fig. 1.2 Cambios en los niveles de expresión de cinco miARN relacionados con el metabolismo de la glucosa en todos los voluntarios después de la ingesta de la composición. Los cambios de magnitud (2-áACq) expresaron las diferencias de miARN antes y después de consumir las cápsulas de composición. Las muestras se analizaron por triplicado. * indica valores significativamente diferentes de cero (p <0,05) según se analizaron mediante t-test para muestras individuales.Fig. 1.2 Changes in the expression levels of five miRNAs related to glucose metabolism in all volunteers after the intake of the composition. Changes in magnitude (2-acq) expressed differences in miRNA before and after consuming the composition capsules. Samples were analyzed in triplicate. * indicates values significantly different from zero (p <0.05) as analyzed by t-test for individual samples.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIONDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Aunque las presentes invenciones se han descrito e ilustrado junto con varias realizaciones específicas, los expertos en la materia apreciarán que pueden realizarse variaciones y modificaciones sin apartarse de los principios de la invención tal como aquí se ilustra, describe y reivindica. Las presentes invenciones pueden incorporarse en otras formas específicas sin apartarse de su espíritu o características esenciales.Although the present inventions have been described and illustrated together with several specific embodiments, those skilled in the art will appreciate that variations and modifications can be made without departing from the principles of the invention as illustrated, described and claimed herein. The present inventions can be incorporated in other specific forms without departing from their spirit or essential characteristics.

Las realizaciones descritas se consideran en todos los aspectos como ilustrativas y no restrictivas. El alcance de la invención, por lo tanto, se indica mediante las reivindicaciones adjuntas, más que por la descripción anterior. Todos los cambios que se encuentren dentro del significado y el rango de equivalencia de las reivindicaciones deben incluirse dentro de su alcance.The described embodiments are considered in all aspects as illustrative and not restrictive. The scope of the invention, therefore, is indicated by the appended claims, rather than by the above description. All the changes that are found within the meaning and the equivalence range of the claims should be included within its scope.

Materiales y métodosMaterials and methods

ComposiciónComposition

La composición contenía altas cantidades de fibra dietética (659,7 mg / g de composición) y una concentración moderada de polifenoles totales (37,44 mg de ácido gálico / g de composición) (Tabla 1). Entre los compuestos fenólicos, se incluyeron diferentes ácidos fenólicos, flavonoles y flavanoles (Tabla 1). Otros parámetros químicos analizados en la composición fueron humedad (4,6%), proteína total (8,7%), grasa (0,8%) y ceniza (20,7%). La composición, dispensada en cápsulas que contienen 700 mg de composición / cápsula. La composición podría obtenerse de uvas rojas utilizadas en el proceso de elaboración del vino, tal como se describe en Gil-Sánchez, l. (2017) para extraer L1. El contenido de azúcares basado en un residuo insoluble en alcohol de la composición se muestra en la tabla 4.The composition contained high amounts of dietary fiber (659.7 mg / g of composition) and a moderate concentration of total polyphenols (37.44 mg of gallic acid / g of composition) (Table 1). Among the phenolic compounds, different phenolic acids, flavonols and flavanols were included (Table 1). Other chemical parameters analyzed in the composition were humidity (4.6%), total protein (8.7%), fat (0.8%) and ash (20.7%). The composition, dispensed in capsules containing 700 mg of composition / capsule. The composition could be obtained from red grapes used in the winemaking process, as described in Gil-Sánchez, l. (2017) to extract L1. The sugar content based on an alcohol insoluble residue of the composition is shown in Table 4.

La materia prima para todos los extractos, fue el GP obtenido después del proceso de vinificación de vinos rosados o tintos. Las uvas rojas utilizadas en la elaboración del vino fueron todas de la variedad Tempranillo, cosechadas en viñedos ubicados en la Denominación de Origen Ribera de Duero. GP fresco se utilizó como materia prima y se sometió a un proceso de destilación para eliminar los compuestos aromáticos y el alcohol. El residuo fue extraído a través del método de extracción tradicional sólidolíquido usando una solución hidroalcohólica (agua-etanol) como disolvente. La extracción de sólido-líquido se realizó mediante técnica de difusión. Una vez que se obtuvo el extracto polifenólico líquido, el producto resultante se centrifugó y se estabilizó para desplazar posibles residuos sólidos. La solución rica en polifenoles se concentró y finalmente se secó mediante un proceso de secado por pulverización (spray). La maltodextrina y el dióxido de silicio se usaron como agentes de encapsulación en el proceso de secado por pulverización. La humedad en el extracto fue de alrededor del 4.6%. También se puede llevar a cabo el proceso como se describe en ES2319032A1.The raw material for all extracts was the GP obtained after the vinification process of rosé or red wines. The red grapes used in winemaking were all of the Tempranillo variety, harvested in vineyards located in the Ribera de Duero Denomination of Origin. Fresh GP was used as raw material and underwent a distillation process to remove aromatic compounds and alcohol. The residue was extracted through the traditional solid-liquid extraction method using a hydroalcoholic solution (water-ethanol) as solvent. Solid-liquid extraction was performed by diffusion technique. Once the liquid polyphenolic extract was obtained, the resulting product was centrifuged and stabilized to displace possible solid residues. The solution rich in polyphenols was concentrated and finally dried by a spray drying process. Maltodextrin and silicon dioxide were used as encapsulation agents in the spray drying process. The humidity in the extract was around 4.6%. The process can also be carried out as described in ES2319032A1.

Análisis de flavanoles, ácidos fenólicos y flavonolesAnalysis of flavanols, phenolic acids and flavonols

La composición (50 mg) se extrajo con acetonitrilo al 50% (1 ml) en un baño ultrasónico durante 30 minutos y se centrifugó adicionalmente a 6700xg durante 5 minutos; el sobrenadante se recogió y el residuo fué sometido al mismo proceso otras tres veces. Los cuatro sobrenadantes se combinaron y se evaporaron a sequedad a presión reducida. El residuo se recuperó en 1 ml de acetonitrilo-agua (25:75, v / v) y se analizó por cromatografía líquida de alta resolución, mediante detección de diodo en serie, ionización por electropulverización / espectrometría de masas HPLC-DAD-ESI / MS) en un cromatógrafo Hewlett-Packard 1100 (Agilent Technologies, Waldbronn, Alemania) equipado con una bomba cuaternaria y un detector de diodos en serie acoplado a una HPChemStation de procesamiento de datos (rev.A.05.04). El sistema HPLC se conectó a través de la salida de células del detector de diodos en serie a un espectrómetro de masas API 3200 Qtrap (Applied Biosystems, Darmstadt, Alemania), que consta de una fuente ESI y un analizador de masas con trampa de iones triple cuadrupolo controlado por Analyst 5.1 software.The composition (50 mg) was extracted with 50% acetonitrile (1 ml) in an ultrasonic bath for 30 minutes and further centrifuged at 6700xg for 5 minutes; the supernatant was collected and the residue was subjected to the same process another three times. The four supernatants were combined and evaporated to dryness under pressure. reduced The residue was recovered in 1 ml of acetonitrile-water (25:75, v / v) and analyzed by high performance liquid chromatography, by means of serial diode detection, electrospray ionization / mass spectrometry HPLC-DAD-ESI / MS) on a Hewlett-Packard 1100 chromatograph (Agilent Technologies, Waldbronn, Germany) equipped with a quaternary pump and a serial diode detector coupled to an HPChemStation data processing (rev.A.05.04). The HPLC system was connected through the serial diode detector cell output to an API 3200 Qtrap mass spectrometer (Applied Biosystems, Darmstadt, Germany), consisting of an ESI source and an ion trap mass analyzer Triple quadrupole controlled by Analyst 5.1 software.

La separación se realizó en una columna Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2,7^m, 150 mm x 4,6 mm) a 35 ° C, usando (A) ácido fórmico al 0,1% y (B) acetonitrilo como disolventes, utilizando diferentes gradientes para el análisis de flavanoles y ácidos fenólicos (0% B a 8% B en 5 min y de 8 a 10% durante 20 min, 10-14,5% B durante 20 min, 14,5-60% B durante 10 min) y flavonoles (isocrático 15% B durante 5 min, 15-20% B durante 5 min, 20-35% B durante 10min, 35-50% B durante 10min, 50-60% B durante 7min), usando en ambos casos un índice de flujo de 0,5 mLmin-1. Doble detección en línea se llevó a cabo por DAD a 280 y 370 nm como longitudes de onda preferidas. Los espectros de masas se registraron entre m / z 100 y m / z 1400 en el modo de ion negativo. El aire de grado cero sirvió como gas nebulizador (40 psi) y como gas turbo (400C°) para secado con disolvente (30 psi). El nitrógeno sirvió como cortina en (10psi) y gas de colisión (medio). The separation was performed on an Agilent Poroshell 120 EC-C18 column (2.7 ^ m, 150 mm x 4.6 mm) at 35 ° C, using (A) 0.1% formic acid and (B) acetonitrile as solvents, using different gradients for the analysis of flavanols and phenolic acids (0% B to 8% B in 5 min and 8 to 10% for 20 min, 10-14.5% B for 20 min, 14.5-60 % B for 10 min) and flavonols (isocratic 15% B for 5 min, 15-20% B for 5 min, 20-35% B for 10min, 35-50% B for 10min, 50-60% B for 7min) , using in both cases a flow rate of 0.5 mLmin-1. Double in-line detection was carried out by DAD at 280 and 370 nm as preferred wavelengths. Mass spectra were recorded between m / z 100 and m / z 1400 in the negative ion mode. The zero grade air served as a nebulizer gas (40 psi) and as a turbo gas (400C °) for solvent drying (30 psi). Nitrogen served as a curtain in (10psi) and collision gas (medium).

Los cuadripolos se ajustaron a la resolución de la unidad y el detector de espectrómetro de masas se programó para realizar una serie de dos análisis consecutivos: un sondeo completo de alta sensibilidad (MS mejorada, EMS) y un análisis de ion de producto mejorado (EPI) para obtener el patrón de fragmentación del ion padre Los parámetros EMS fueron: tensión de pulverización de iones 4500V, desclasamiento potencial (DP) -40V, potencial de entrada (EP) -7V y energía de colisión (CE) -20V; mientras que los ajustes de EPI fueron: DP -40V, EP -10V, CE -25V y CES 0V, para flavanoles y ácidos fenólicos; y: DP -40V, EP -10V, CE -25V y CES 0V, para flavonoles.The quadrupoles were adjusted to the resolution of the unit and the mass spectrometer detector was programmed to perform a series of two consecutive analyzes: a complete high sensitivity survey (enhanced MS, EMS) and an improved product ion analysis (EPI ) to obtain the fragment pattern of the parent ion The EMS parameters were: 4500V ion spray voltage, potential offset (DP) -40V, input potential (EP) -7V and collision energy (CE) -20V; while the EPI settings were: DP -40V, EP -10V, CE -25V and CES 0V, for flavanols and phenolic acids; and: DP -40V, EP -10V, CE -25V and CES 0V, for flavonols.

Los compuestos fenólicos se caracterizaron de acuerdo con su absorción y espectros de masas y tiempos de retención en comparación con una biblioteca de datos, así como con estándares auténticos cuando estuvieron disponibles. Los compuestos se cuantificaron a partir de las áreas de sus picos cromatográficos registrados a 280 nm (ácidos fenólicos y flavanoles) y 370 nm (flavonoles). Para la cuantificación del compuesto, se obtuvieron curvas de calibración para catequina, epicatequina, uercetina, ácido gálico y ácido elágico. Los flavonoles se expresaron como equivalentes de quercetina y los dímeros de procianidina como epicatequina. Todas las muestras se analizaron por triplicado, y los resultados se expresaron en miligramos de compuesto fenólico por gramo de extracto (producto secado por pulverización).Phenolic compounds were characterized according to their absorption and mass spectra and retention times compared to a data library, as well as authentic standards when available. The compounds were quantified from the areas of their chromatographic peaks recorded at 280 nm (phenolic acids and flavanols) and 370 nm (flavonols). For the quantification of the compound, were obtained Calibration curves for catechin, epicatechin, uercetin, gallic acid and ellagic acid. Flavonols were expressed as equivalents of quercetin and procyanidin dimers as epicatechin. All samples were analyzed in triplicate, and the results were expressed in milligrams of phenolic compound per gram of extract (spray dried product).

Análisis de antocianinasAnthocyanin analysis

Se extrajeron muestras (50 mg) usando ácido trifluoroacético al 0,1% (TFA)-acetonitrilo (1:1, v / v) (1 ml) en un baño ultrasónico durante 30 minutos y se centrifugó adicionalmente a 6700xg durante 5 minutos; el sobrenadante se recogió y el residuo se sometió al mismo proceso otras tres veces. Todos los sobrenadantes se combinaron y se evaporaron a sequedad a presión reducida. El residuo se recuperó en 1 ml de TFA al 0,1% -acetonitrilo (75:25, v/v) y se analizó por HPLC-DAD-ESI/MS. Se utilizó una columna AQUA (Phenomenex) C18 (5^m,150mmx4,6mm) a 35°C. Los disolventes fueron (A) 0,1% TFA y (B) acetonitrilo, con el siguiente gradiente de elución establecido: isocrático 10% B durante 5 min, 10-15% B en 15 min, isocrático 15% B durante 5 min, 15-18% B durante 5 minutos, 18-35% de B durante 20 min, 35-60% de B durante 7 min. El índice de flujo fue de 0,5 mLmin-1. DAD se llevó a cabo a 280 y 520nm. Los espectros de masas se registraron entre m/z 100 y m/z 900 en el modo de iones positivos. El aire de grado cero sirvió como nebulizador (50 psi) y gas turbo (600 °C) para secado con solvente (40 psi). El nitrógeno era la cortina (10 psi) y el gas de colisión (alto). EMS y el análisis EPI también se llevaron a cabo. Los parámetros del modo EMS fueron: voltaje de pulverización de iones 5000V, DP 55V, EP 4V y CE 10V; Los parámetros de EPI fueron: DP 5541V, EP 4V y CE 10V y dispersión de energía de colisión (CES) 0V.Samples (50 mg) were extracted using 0.1% trifluoroacetic acid (TFA) -acetonitrile (1: 1, v / v) (1 ml) in an ultrasonic bath for 30 minutes and further centrifuged at 6700xg for 5 minutes; The supernatant was collected and the residue was subjected to the same process another three times. All supernatants were combined and evaporated to dryness under reduced pressure. The residue was recovered in 1 ml of 0.1% TFA-acetonitrile (75:25, v / v) and analyzed by HPLC-DAD-ESI / MS. An AQUA (Phenomenex) C18 column (5 ^ m, 150mmx4.6mm) was used at 35 ° C. The solvents were (A) 0.1% TFA and (B) acetonitrile, with the following elution gradient established: isocratic 10% B for 5 min, 10-15% B in 15 min, isocratic 15% B for 5 min, 15-18% B for 5 minutes, 18-35% B for 20 min, 35-60% B for 7 min. The flow rate was 0.5 mLmin-1. DAD was carried out at 280 and 520nm. Mass spectra were recorded between m / z 100 and m / z 900 in positive ion mode. Zero grade air served as a nebulizer (50 psi) and turbo gas (600 ° C) for solvent drying (40 psi). The nitrogen was the curtain (10 psi) and the collision gas (high). EMS and EPI analysis were also carried out. The parameters of the EMS mode were: ion spray voltage 5000V, DP 55V, EP 4V and CE 10V; The EPI parameters were: DP 5541V, EP 4V and CE 10V and collision energy dispersion (CES) 0V.

Análisis de los componentes de la pared celularAnalysis of cell wall components

De cada extracto, los residuos insolubles en alcohol (RIA) se obtuvieron sumergiendo las muestras en etanol (96%) a 60 °C y homogeneizando con un mezclador durante 5 minutos. Los materiales se filtraron a través de un filtro de vidrio sinterizado (No.3, Scientific Furnishingsltd, Chichester, Reino Unido) y se volvieron a extraer dos veces durante 1 minuto en etanol al 96% a 20 °C y se volvieron a filtrar.From each extract, the alcohol insoluble residues (RIA) were obtained by immersing the samples in ethanol (96%) at 60 ° C and homogenizing with a mixer for 5 minutes. The materials were filtered through a sintered glass filter (No.3, Scientific Furnishingsltd, Chichester, United Kingdom) and reextracted twice for 1 minute in 96% ethanol at 20 ° C and filtered again.

Los residuos se volvieron a suspender en alcohol absoluto (dos veces) y acetona (dos veces), filtrando entre veces, y luego secados al aire, después de lo cual se almacenaron en un recipiente sellado a temperatura ambiente. Los resultados se expresaron en miligramos de RIA por gramo de extracto (producto secado por pulverización). La cantidad de RIA corresponde a la cantidad de fibra dietética del extracto tal como se usa en la presente memoria descriptiva.The residues were resuspended in absolute alcohol (twice) and acetone (twice), filtered between times, and then air dried, after which they were stored in a sealed container at room temperature. The results were expressed in milligrams of RIA per gram of extract (spray dried product). The RIA amount corresponds to the amount of dietary fiber in the extract as used herein.

Los polisacáridos presentes en los RIA se extrajeron y la composición química de cada fracción se determinó. Los RIA se sometieron a un tratamiento de 12molL-1 H2S04 a temperatura ambiente durante 3 h, seguido de dilución a 0,6 molL-1 H2S04 hidrólisis a 100 ° C durante 3 h (columna HF en la tabla 4), y también a 0,6 molL-1 H2S04 hidrólisis en 100 °C durante 3 h (columna HS en tabla 4). Ambos ácidos hidrolizados liberaron diferentes componentes de fibra dietética. Los residuos insolubles obtenidos después de realizar la hidrólisis ácida, utilizando 12 molL-1 H2S04 seguidos por 0,6 molL-1 H2S04, se cuantificaron gravimétricamente como lignina de Klason. Los hidrolizados fueron pasados a través de una columna de resina de intercambio iónico AG4x4 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, EE. UU.) para neutralizarlos. La composición de azúcares neutros de los hidrolizados se determinó por HPLC usando una columna de microguard (Aminex Carbo-P, Bio-Rad) en serie con una columna de análisis de carbohidratos (Aminex HPX-87P heavy metal, 300 mm x 7,8 mm, Bio-Rad) operado con un índice de flujo de 0,5 mLmin-1 usando un detector de índice refractiva. Se calcularon las cantidades de azúcares utilizando el software de la versión System Gold 7.0 después de la calibración con azúcares estándar (Sigma, St Louis, MO, EE. UU.). Antes de la neutralización, se añadió eritritol como estándar interno.The polysaccharides present in the RIAs were extracted and the chemical composition of each fraction was determined. The RIAs were subjected to a 12molL-1 H2S04 treatment at room temperature for 3 h, followed by dilution at 0.6 molL-1 H2S04 hydrolysis at 100 ° C for 3 h (HF column in table 4), and also at 0.6 molL-1 H2S04 hydrolysis at 100 ° C for 3 h (HS column in table 4). Both hydrolyzed acids released different components of dietary fiber. The insoluble residues obtained after performing the acid hydrolysis, using 12 molL-1 H2S04 followed by 0.6 molL-1 H2S04, were gravimetrically quantified as Klason lignin. The hydrolysates were passed through an AG4x4 ion exchange resin column (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, USA) to neutralize them. The neutral sugar composition of the hydrolysates was determined by HPLC using a microguard column (Aminex Carbo-P, Bio-Rad) in series with a carbohydrate analysis column (Aminex HPX-87P heavy metal, 300 mm x 7.8 mm, Bio-Rad) operated with a flow rate of 0.5 mLmin-1 using a refractive index detector. The amounts of sugars were calculated using the System Gold 7.0 software after calibration with standard sugars (Sigma, St Louis, MO, USA). Before neutralization, erythritol was added as an internal standard.

El contenido de ácido urónico se determinó mediante el método colorimétrico de mhidroxidifenilo usando ácido D-galacturónico como estándar.The uronic acid content was determined by the colorimetric method of mhydroxidiphenyl using D-galacturonic acid as standard.

Diseño de estudio de intervención humanaHuman intervention study design

El estudio de intervención se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité de Ética del CSIC (Madrid, España). Todos los voluntarios dieron su consentimiento escrito informado antes de participar. El estudio involucró a 10 mujeres sanas (rango de edad 25-65 años, IMC <25 kg / m2). Los participantes no padecían diabetes, hipertensión, dislipidemia, enfermedad inflamatoria aguda o crónica, enfermedad infecciosa, cáncer o un episódio cardiovascular previo al ingreso al estudio. The intervention study was carried out in accordance with the Declaration of Helsinki and was approved by the Ethics Committee of the CSIC (Madrid, Spain). All volunteers gave their informed written consent before participating. The study involved 10 healthy women (age range 25-65 years, BMI <25 kg / m2). The participants did not suffer from diabetes, hypertension, dyslipidemia, acute or chronic inflammatory disease, infectious disease, cancer or a cardiovascular episode before entering the study.

No habían recibido ninguna terapia con antibióticos, prebióticos, probióticos, simbióticos o suplementos vitamínicos ni ningún otro tratamiento médico que pudiese influir en la microbiota intestinal durante los 6 meses antes del inicio del estudio o durante el estudio (incluido el período de lavado). Los voluntarios siguieron un período inicial de lavado de 10 días (línea de base) durante el cual mantuvieron una dieta baja en polifenoles. They had not received any therapy with antibiotics, prebiotics, probiotics, symbiotics or vitamin supplements or any other medical treatment that could influence the intestinal microbiota during the 6 months before the start of the study or during the study (including the washing period). The volunteers followed an initial 10-day wash period (baseline) during which they maintained a low-polyphenol diet.

Después de este período, los participantes recibieron instrucciones de tomar dos cápsulas por día de la composición (1400 mg de composición / día) en el desayuno durante 21 días. Por lo tanto, el consumo diario promedio de fibra y compuestos fenólicos, en el presente estudio, fue de 923,58 mg y 54,42 mg, respectivamente. Durante el período de intervención, también mantuvieron la restricción de alimentos ricos en polifenoles en la dieta. Los voluntarios completaron un cuestionario sobre sus hábitos dietéticos para verificar la dieta.After this period, participants were instructed to take two capsules per day of the composition (1400 mg of composition / day) at breakfast for 21 days. Therefore, the average daily consumption of fiber and phenolic compounds, in the present study, was 923.58 mg and 54.42 mg, respectively. During the intervention period, they also maintained the restriction of foods rich in polyphenols in the diet. The volunteers completed a questionnaire about their dietary habits to verify the diet.

Expertos profesionales tomaron muestras de sangre de los voluntarios después de ayuno durante la noche, en tres momentos: (a) después del período de lavado inicial; (b) después de 14 días de consumo de la composición; y (c) al final de la intervención de composición (21 días). El suero se separó en alícuotas y se congeló inmediatamente a -80°C.Professional experts took blood samples from the volunteers after fasting overnight, at three times: (a) after the initial wash period; (b) after 14 days of consumption of the composition; and (c) at the end of the composition intervention (21 days). The serum was separated into aliquots and immediately frozen at -80 ° C.

Medición de parámetros bioquímicos e inmunológicos en plasmaMeasurement of biochemical and immunological parameters in plasma

Los parámetros bioquímicos del suero se midieron en plasma usando un autoanalizador bioquímico automatizado en un laboratorio externo acreditado. Las pruebas incluyeron la medición de glucosa, ácido úrico, albúmina, enzimas hepáticas (transaminasa glutámicaoxaloacética (GOT), transaminasa glutámica-pirúvica (GPT) y gamma-glutamil transferasa (y-GT), metabolismo de los lípidos (colesterol total, colesterol de Lipoproteina de alta densidad (HDL), relación colesterol total / colesterol HDL, colesterol LDL, relación colesterol LDL / colesterol HDL y triglicéridos), proteínas (proteína C reactiva), hormonas basales (insulina y suero de leptina) y factor de necrosis tumoral (TNF-a). Los niveles de TNF-a se determinaron usando un kit ELISA ultrasensible de TNF-a humano (Invitrogen, Barcelona, España) siguiendo el protocolo recomendado por el fabricante. Todas las determinaciones se llevaron a cabo al menos por duplicado. Los resultados se muestran en la tabla 3.The serum biochemical parameters were measured in plasma using an automated biochemical autoanalyzer in an accredited external laboratory. Tests included the measurement of glucose, uric acid, albumin, liver enzymes (glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic-pyruvic transaminase (GPT) and gamma-glutamyl transferase (y-GT), lipid metabolism (total cholesterol, cholesterol) High density lipoprotein (HDL), total cholesterol / HDL cholesterol ratio, LDL cholesterol, LDL cholesterol / HDL cholesterol ratio and triglycerides), proteins (C-reactive protein), basal hormones (insulin and leptin serum) and tumor necrosis factor ( TNF-a) TNF-a levels were determined using an ultrasensitive ELISA kit of human TNF-a (Invitrogen, Barcelona, Spain) following the manufacturer's recommended protocol, all determinations were carried out at least in duplicate. The results are shown in table 3.

Análisis de miARNs circulantes en plasma 30Analysis of circulating plasma miRNAs 30

Extracción de ARNRNA extraction

El ARN total (incluido miARN) se extrajo de muestras de plasma correspondientes al tiempo inicial y de finalización (21 días) del período de intervención de la composición, siguiendo las instrucciones del kit de aislamiento de ARN miRCURY™ para Biofluidos (Exiqon, Vedbaek, Dinamarca). Después de la ex tracción, la concentración final de ARN total enriquecido en miARN se cuantificó usando un espectrofotómetro NanoDrop-1000 (Thermo Fisher Scientific Inc., España) y la pureza se evaluaron midiendo las relaciones de 260/280 nm y 260/230 nm. Las muestras se almacenaron a -20oC hasta un análisis posterior. La ausencia de hemólisis en el suero se verificó por amplificación de miR23a y miR454 como controles.Total RNA (including miRNA) was extracted from plasma samples corresponding to the initial and final time (21 days) of the intervention period of the composition, following the instructions of the miRCURY ™ RNA isolation kit for Biofluids (Exiqon, Vedbaek, Denmark). After extraction, the final concentration of total RNA enriched in miRNA was quantified using a NanoDrop-1000 spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific Inc., Spain) and purity were evaluated by measuring the ratios of 260/280 nm and 260/230 nm. Samples were stored at -20oC until further analysis. The absence of serum hemolysis was verified by amplification of miR23a and miR454 as controls.

Cribado de miARN utilizando panelesMiRNA screening using panels

Inicialmente, se analizó la expresión de miARN en plasma de los voluntarios # 8 y # 10. Doscientos ng de ARN total por panel se transcribieron de forma inversa usando el microARN PCR miRCURY LNATM Universal RT y el kit de poliadenilación y síntesis de cADN (Exiqon, Vedbaek, Dinamarca).Initially, plasma miRNA expression of volunteers # 8 and # 10 was analyzed. Two hundred ng of total RNA per panel was reverse transcribed using the miRCURY LNATM Universal RT PCR microRNA and the cDNA polyadenylation and synthesis kit (Exiqon , Vedbaek, Denmark).

Para cada muestra, el cADN se diluyó, y se preparó una mezcla con 45 ^l de cADN, 4455 ^l de agua estéril libre de nucleasa y 4500 ^l de sonda SYBR Green (Exiqon, Vedbaek, Dinamarca) y la mezcla se añadió a los paneles de PCR listos para usar (10DL/pocillo). Los paneles de miARN humanos I y II v4.0 contienen 743 dianas de miARN diferentes y se usaron seis ensayos de genes de referencia (mirBase13) (Exiqon, Vedbaek, Dinamarca) para el examen de miARN. El protocolo de temperatura se realizó de la siguiente manera: activación enzimática a 95°C durante 10 minutos; 45 ciclos de 95 °C durante 15 seg y 60 °C durante 60 seg. Todas las reacciones se llevaron a cabo en un equipo de PCR en tiempo real LightCycler® 480 (Rache, Basilea, Suiza). Las curvas de fusión se analizaron después de la amplificación y los valores de Cq se calcularon usando un método de derivada segunda (LightCycler® 480 Software 1.5, Rache). Todas las reacciones se realizaron por triplicado. UniSp5 y UniSp3 IPC se utilizaron para la normalización de miARNs Panel I y II, respectivamente. Los datos se calcularon como cambio de magnitud, de acuerdo con el método 2-AACq, donde -AACq = (CqmiARN-CqUniSP) miARN después de la ingesta -(CqmiARN-CqUniSP) ctrl miARN antes de la ingesta.For each sample, the cDNA was diluted, and a mixture was prepared with 45 µl of cDNA, 4455 µl of sterile nuclease-free water and 4500 µl of SYBR Green probe (Exiqon, Vedbaek, Denmark) and the mixture was added to ready-to-use PCR panels (10DL / well). The human miRNA panels I and II v4.0 contain 743 different miRNA targets and six reference gene assays (mirBase13) (Exiqon, Vedbaek, Denmark) were used for the miRNA test. The temperature protocol was performed as follows: enzymatic activation at 95 ° C for 10 minutes; 45 cycles of 95 ° C for 15 sec and 60 ° C for 60 sec. All reactions were carried out in a LightCycler® 480 real-time PCR equipment (Rache, Basel, Switzerland). Melting curves were analyzed after amplification and Cq values were calculated using a second derivative method (LightCycler® 480 Software 1.5, Rache). All reactions were performed in triplicate. UniSp5 and UniSp3 IPC were used for standardization of miRNAs Panel I and II, respectively. The data were calculated as a change in magnitude, according to the 2-AACq method, where -AACq = (CqmiRNA-CqUniSP) miRNA after ingestion - (CqmiRNA-CqUniSP) ctrl miRNA before intake.

Los resultados finales expresan la diferencia de magnitud entre valores anteriores y posteriores a la ingesta (varianza).The final results express the difference in magnitude between values before and after intake (variance).

validación de mARNmRNA validation

Después de la selección descrita anteriormente, seleccionamos cinco miARN circulantes humanos modulados (hsa-miR-122-5p, hsa-miR-34a-5p, hsa-miR-342-3p, hsa-miR-130a-3p y hsa-miR- 191-5p) relacionado con el metabolismo de la glucosa, el estado de resistencia a la insulina y biomarcadores de la diabetes tipo 2 (T2D) (Hernández-Alonso, Giardina, Salas-Salvado, Arcelin y Bullo, 2016; Jiao et al., 2015; After the selection described above, we selected five modulated human circulating miRNAs (hsa-miR-122-5p, hsa-miR-34a-5p, hsa-miR-342-3p, hsa-miR-130a-3p and hsa-miR- 191-5p) related to glucose metabolism, insulin resistance status and biomarkers of type 2 diabetes (T2D) (Hernández-Alonso, Giardina, Salas-Salvado, Arcelin and Bullo, 2016; Jiao et al. , 2015;

Tome-Carneiro et al., 2013; Xiao et al., 2014; Ye et al., 2015) (Tabla 2). La detección PCR en tiempo real se realizó utilizando sondas específicas de ácido nucleico bloqueado (LNA™) SYBR (Exiqon, Vedbaek, Dinamarca), siguiendo las instrucciones del fabricante en un instrumento LightCycler® 480 (Roche). El protocolo de temperatura se realizó de la siguiente manera: activación enzimática en 95 oC durante 10 minutos; 45 ciclos de 95 oC durante 15 seg. y 60 oC durante 60 seg. Todas las reacciones se llevaron a cabo por triplicado y los valores de Cq y los cambios de magnitud se calcularon como se indicó anteriormente.Tome-Carneiro et al., 2013; Xiao et al., 2014; Ye et al., 2015) (Table 2). Real-time PCR detection was performed using specific SYBR blocked nucleic acid (LNA ™) probes (Exiqon, Vedbaek, Denmark), following the manufacturer's instructions on a LightCycler® 480 instrument (Roche). The temperature protocol was performed as follows: enzymatic activation at 95 oC for 10 minutes; 45 cycles of 95 oC for 15 sec. and 60 oC for 60 sec. All reactions were carried out in triplicate and Cq values and magnitude changes were calculated as indicated above.

Análisis estadísticoStatistic analysis

Repetidas medidas del análisis de la varianza unidireccional ANOVA se realizaron para comparar los datos obtenidos de los voluntarios en los tres momentos (período de lavado y después de 14 y 21 días consumiendo la composición). Se realizó un análisis de varianza unidireccional entre grupos para estudiar los diferentes perfiles de miARN entre los sujetos. Las diferencias menos significativas en ambos casos se calcularon mediante el test de Tukey (p <0,05). La relación entre la expresión de miARN y los niveles de glucosa en sangre en ayunas se investigó utilizando el coeficiente de correlación de Pearson.Repeated measures of the ANOVA unidirectional variance analysis were performed to compare the data obtained from the volunteers at the three times (washing period and after 14 and 21 days consuming the composition). An analysis of unidirectional variance between groups was performed to study the different miRNA profiles among the subjects. The least significant differences in both cases were calculated using the Tukey test (p <0.05). The relationship between miRNA expression and fasting blood glucose levels was investigated using Pearson's correlation coefficient.

El programa STADISTICA 7.1 se usó para procesar estos datos. Finalmente, se realizó el análisis del componente principal (PCA) para resumir los cambios en los perfiles de miARN de los voluntarios. Estas pruebas se realizaron utilizando IBM SPSS Statistics para Windows, Versión 23.0; Ar monk, NT: IBM Corp.The STADISTICA 7.1 program was used to process this data. Finally, the principal component analysis (PCA) was performed to summarize the changes in the miRNA profiles of the volunteers. These tests were performed using IBM SPSS Statistics for Windows, Version 23.0; Ar monk, NT: IBM Corp.

ResultadosResults

Cumplimiento de la intervenciónCompliance with the intervention

El reclutamiento de voluntarios se llevó a cabo en el Instituto de Investigación en Ciencia de los Alimentos (CIAL), Madrid (España), y el estudio fue aprobado por el Comité de Ética del CSIC. Inicialmente, 11 mujeres sanas dieron su consentimiento informado por escrito, sin embargo, un participante abandonó el estudio después del período de intervención inicial de 14 días debido a razones personales.The recruitment of volunteers was carried out at the Food Science Research Institute (CIAL), Madrid (Spain), and the study was approved by the CSIC Ethics Committee. Initially, 11 healthy women gave their written informed consent, however, one participant dropped out of the study after the initial 14-day intervention period due to personal reasons.

En general, la composición fue bien tolerada por los voluntarios, sin embargo, dos participantes informaron episodios leves de aumento de gases intestinales y dispepsia. Overall, the composition was well tolerated by volunteers, however, two participants reported mild episodes of increased intestinal gas and dyspepsia.

Modulación de miARN por el suministro de la composición Modulation of miRNA by the supply of the composition

Se analizó la regulación de los perfiles de expresión de miARN después del suministro de la composición en las muestras de plasma de los dos voluntarios que mostraron la mayor disminución en los niveles de glucosa (voluntarios # 8 y # 10). El cribado de microARN mostró algunos cambios en la expresión de varios miARN de los diferentes 734 miARN diana. En base a estos resultados preliminares, se seleccionaron cinco miARN relacionados con el metabolismo de la glucosa (miARN-130a-3p, miARN-122-5p, miARN -34a-5p, miARN-191-5p y miARN-342-3p) para análisis cuantitativos posteriores usando sondas LNATM en muestras de todos los participantes en el estudio. La Tabla 2 proporciona la información básica principal sobre los miARN estudiados en el conjunto de muestra.The regulation of miRNA expression profiles after delivery of the composition in the plasma samples of the two volunteers who showed the greatest decrease in glucose levels (volunteers # 8 and # 10) was analyzed. The microRNA screening showed some changes in the expression of several miRNAs from the different 734 target miRNAs. Based on these preliminary results, five miRNAs related to glucose metabolism (miRNA-130a-3p, miRNA-122-5p, miRNA -34a-5p, miRNA-191-5p and miRNA-342-3p) were selected for Subsequent quantitative analyzes using LNATM probes on samples from all study participants. Table 2 provides the main basic information about the miRNAs studied in the sample set.

En general, se observó una gran variabilidad en la expresión de los cinco miARNs (Figuras 1, 2), lo que revela grandes diferencias entre individuos. El miARN-130a-3p disminuyó significativamente después de la administración de suplementos en cinco de cada diez voluntarios ( #6, #7, #8, # 9 y #10), tres de los cuales presentaron la mayor disminución de glucosa plasmática después de la intervención, mientras que fue significativamente aumentado en el caso del voluntario # 4 que mostró el menor efecto hipoglucemiante. El nivel de expresión de miARN-122-5p aumentó en tres voluntarios (#5, #6 y #8) mientras que disminuyó significativamente en otros cuatro (#2, #3, #7 y #10). En el caso de miARN-34a-5p, su expresión se modificó significativamente para el voluntario # 9, el cual sufrió una disminución significativa, y para los voluntarios # 8 y # 10, en quienes se observó un aumento. Se observó claramente una modificación significativa en el patrón de expresión de miARN-191-5p para todos los voluntarios. Específicamente, la tendencia general observada fue una disminución significativa en la expresión de este miARN (7 de cada 10 voluntarios). Sin embargo, la expresión aumentó significativamente en voluntarios # 8 y # 10, junto con el voluntario # 5. Finalmente, en el caso de miARN-342-3p, se observó un efecto antagonista significativo en su expresión en voluntarios # 1 y # 3 en comparación con # 8 y # 10.In general, great variability was observed in the expression of the five miRNAs (Figures 1, 2), which reveals large differences between individuals. The miRNA-130a-3p decreased significantly after supplementation in five out of ten volunteers (# 6, # 7, # 8, # 9 and # 10), three of whom had the greatest decrease in plasma glucose after the intervention, while it was significantly increased in the case of volunteer # 4 who showed the lowest hypoglycemic effect. The expression level of miRNA-122-5p increased in three volunteers (# 5, # 6 and # 8) while it decreased significantly in four others (# 2, # 3, # 7 and # 10). In the case of miRNA-34a-5p, its expression was significantly modified for volunteer # 9, which suffered a significant decrease, and for volunteers # 8 and # 10, in whom an increase was observed. A significant change in the expression pattern of miRNA-191-5p was clearly observed for all volunteers. Specifically, the general trend observed was a significant decrease in the expression of this miRNA (7 out of 10 volunteers). However, the expression increased significantly in volunteers # 8 and # 10, along with volunteer # 5. Finally, in the case of miRNA-342-3p, a significant antagonistic effect was observed in its expression in volunteers # 1 and # 3 compared to # 8 and # 10.

A pesar de las grandes diferencias individuales observadas, los voluntarios # 8 y # 10 (que compartieron una disminución similar en los niveles de glucosa en sangre) mostraron la misma tendencia en el patrón de expresión de miARN para cuatro de los cinco miARNs analizados (miRNA-130a-3p , miARN-34a-5p, miARN-191-5p y miARN-342-3p) (figuras 1,2).Despite the large individual differences observed, volunteers # 8 and # 10 (who shared a similar decrease in blood glucose levels) showed the same trend in the miRNA expression pattern for four of the five miRNAs analyzed (miRNA -130a-3p, miRNA-34a-5p, miRNA-191-5p and miRNA-342-3p) (figures 1,2).

Se realizó un análisis de componentes principales (PCA) para agrupar a los sujetos en relación con su patrón de expresión de miARN y los valores de glucosa. El análisis PCA agrupó a los voluntarios # 8 y # 10, que estaban directamente relacionados con miARN191-5p, este miARN también se correlaciona negativamente con la varianza de la glucosa. Los patrones de voluntario # 2 parecen ser totalmente diferentes al resto de los voluntarios, manteniendo un vínculo directo con miARN-342-3p y miARN-130-3p. Finalmente, el resto de los voluntarios se agruparon muy cerca.A principal component analysis (PCA) was performed to group subjects in relation to their miRNA expression pattern and glucose values. PCA analysis grouped volunteers # 8 and # 10, who were directly related to miRNA191-5p, this miRNA also correlates negatively with glucose variance. Volunteer patterns # 2 appear to be totally different from the rest of the volunteers, maintaining a direct link with miRNA-342-3p and miRNA-130-3p. Finally, the rest of the volunteers grouped very close.

ResultadosResults

Se observó una disminución significativa (p <0.05) en los niveles de glucosa en sangre en ayunas después del suministro de la composición (desde 89,00 /- 1,84 mg / dL a 84,5 /- 2,61 mg / dL). La evidencia acumulada sugiere que los miARNs circulantes son biomarcadores útiles para la regulación del metabolismo de la glucosa o la diabetes tipo 2.A significant decrease (p <0.05) was observed in fasting blood glucose levels after delivery of the composition (from 89.00 / - 1.84 mg / dL to 84.5 / - 2.61 mg / dL ). Accumulated evidence suggests that circulating miRNAs are useful biomarkers for the regulation of glucose metabolism or type 2 diabetes.

La expresión de cinco miARNs específicos basados en la literatura relacionados con el metabolismo de la glucosa (incluyendo miARN-130a-3p, miARN-122-5p, miARN-34a-5p, miARN-191-5p y miARN-342-3p) se analizó en muestras de plasma por PCR en tiempo real. Los cambios significativos (p <0,05) en el perfil de miARN circulante después de la suplementación con la composición sugieren que la composición puede modular la expresión de miARNs, la regulación de la expresión génica a nivel postranscripcional y así participar en el metabolismo de la glucosa. Además, el análisis estadístico confirmó altas diferencias interindividuales (p <0,001). Se ha encontrado previamente una disminución en los niveles de expresión de miARN-342-3p en pacientes con diabetes tipo 1 y tipo 2 (Collares et al., 2013; Fernández-Valverde, Taft y Mattick, 2011; Hezova et al., 2010). De acuerdo con estos estudios, el estudio encontró un aumento en los niveles de miARN-342-3p para los voluntarios # 8 y # 10. De forma similar, la expresión de miARN-191-5p disminuyó en pacientes con diabetes tipo 1 (Zampetaki et al., 2010). Los voluntarios #8 y #1 mostraron una correlación negativa entre miARN-191-5p y niveles de glucosa en plasma (test de Pearson, p = 0,003). Se ha descrito en la literatura un efecto antagonico del miARN-34a-5p sobre el metabolismo de la glucosa, y se ha sugerido el miARN-34a-5p como marcador para diferenciar entre no diabéticos y pacientes con diabetes tipo-2 temprana (Kong et al., 2011; Rokavec, Li, Jiang y Hermeking, 2014). En el estudio se observó un posible efecto protector en el caso del voluntario # 9, para el cual se observó una reducción significativa de miARN-34a- 5p, coincidente con la disminución del nivel de glucosa en sangre en este voluntario después del consumo de la composición. En contraste, los voluntarios # 8 y # 10, cuyos niveles de glucemia disminuyeron más, mostraron un aumento de miARN-34a-5p. Del mismo modo, estos efectos antagónicos y las diferencias interindividuales también fueron detectadas en la expresión del miARN-122-5p (Fong et al., 2015).The expression of five specific miRNAs based on literature related to glucose metabolism (including miRNA-130a-3p, miRNA-122-5p, miRNA-34a-5p, miRNA-191-5p and miRNA-342-3p) are analyzed in plasma samples by real-time PCR. Significant changes (p <0.05) in the profile of circulating miRNA after supplementation with the composition suggest that the composition can modulate the expression of miRNAs, the regulation of gene expression at the post-transcriptional level and thus participate in the metabolism of glucose In addition, the statistical analysis confirmed high interindividual differences (p <0.001). A decrease in miRNA-342-3p expression levels has been previously found in patients with type 1 and type 2 diabetes (Collares et al., 2013; Fernández-Valverde, Taft and Mattick, 2011; Hezova et al., 2010 ). According to these studies, the study found an increase in miRNA-342-3p levels for volunteers # 8 and # 10. Similarly, miRNA-191-5p expression decreased in patients with type 1 diabetes (Zampetaki et al., 2010). Volunteers # 8 and # 1 showed a negative correlation between miRNA-191-5p and plasma glucose levels (Pearson test, p = 0.003). An antagonistic effect of miRNA-34a-5p on glucose metabolism has been described in the literature, and miRNA-34a-5p has been suggested as a marker to differentiate between non-diabetics and patients with early type-2 diabetes (Kong et al., 2011; Rokavec, Li, Jiang and Hermeking, 2014). In the study a possible protective effect was observed in the case of volunteer # 9, for which a significant reduction in miRNA-34a-5p was observed, coinciding with the decrease in blood glucose level in this volunteer after the consumption of composition. In contrast, volunteers # 8 and # 10, whose blood glucose levels decreased the most, showed an increase in miRNA-34a-5p. Similarly, these Antagonistic effects and interindividual differences were also detected in the expression of miRNA-122-5p (Fong et al., 2015).

Las diferencias interindividuales en los perfiles de miARN se han publicado ampliamente en la bibliografía (Flowers, Gadgil, Aouizerat y Kanaya, 2015; Geeleher, Huang, Gamazon, Golden y Seoighe, 2012; Ludwig et al., 2016; Lukiw, 2013) ya que los miARNs son reguladores específicos y precisos de la homeostasis del cuerpo. Sin embargo, las diferencias de miARN descritas anteriormente asociadas con el suministro de la composición podrían indicar que los efectos de la composición están mediados por la modulación de miARN.Interindividual differences in miRNA profiles have been widely published in the literature (Flowers, Gadgil, Aouizerat and Kanaya, 2015; Geeleher, Huang, Gamazon, Golden and Seoighe, 2012; Ludwig et al., 2016; Lukiw, 2013) and that miRNAs are specific and precise regulators of homeostasis of the body. However, the miRNA differences described above associated with the delivery of the composition could indicate that the effects of the composition are mediated by miRNA modulation.

La composición probada en el presente estudio no provocó ninguna disminución significativa en los niveles de colesterol total y colesterol LDL.The composition tested in the present study did not cause any significant decrease in the levels of total cholesterol and LDL cholesterol.

En conclusión, los resultados de la presente invención muestran que el suministro de la composición (1,4 g, 2 cápsulas / día) durante tres semanas condujo a una disminución significativa en los niveles de glucemia en ayunas. La regulación positiva in vivo de los miARNs relacionados con el metabolismo de la glucosa observada seguida al suministro de la composición sugiere un posible efecto beneficioso de la misma en el metabolismo de la glucosa, que contribuye a disminuir el riesgo de diabetes tipo 2. La composición puede considerarse un ingrediente funcional en el mantenimiento de la salud humana. In conclusion, the results of the present invention show that the supply of the composition (1.4 g, 2 capsules / day) for three weeks led to a significant decrease in fasting blood glucose levels. The positive in vivo regulation of the miRNAs related to the observed glucose metabolism followed by the supply of the composition suggests a possible beneficial effect thereof on the glucose metabolism, which contributes to reducing the risk of type 2 diabetes. The composition It can be considered a functional ingredient in the maintenance of human health.

Tabla 1Table 1

Composición COMPOSICION FENOLICA (mg/g extracto) Polifenoles Totales (mg ácido gálico/g) 37,44 Ácidos FenolicosComposition PHENOLIC COMPOSITION (mg / g extract) Total Polyphenols (mg gallic acid / g) 37.44 Phenolic Acids

ácido elágico 5,64±0,65 Flavanolesellagic acid 5.64 ± 0.65 Flavanols

Catequina 0,28±0,07 Epicatequina 1,03±0,25 Proantocianidina 4,62 FlavonolesCatechin 0.28 ± 0.07 Epicatechin 1.03 ± 0.25 Proanthocyanidin 4.62 Flavonols

Miricetina 0,26±0,01 Quercetina 0,34±0,03 Kaempferol 0,16±0,00Myricetin 0.26 ± 0.01 Quercetin 0.34 ± 0.03 Kaempferol 0.16 ± 0.00

COMPOSICION RESIDUO INSOLUBLE ALCOHOLINSOLUBLE ALCOHOL RESIDUE COMPOSITION

(mg/g RIA)(mg / g RIA)

RIA Rdto Total 660 Azúcares Neutros 294,7 Ácidos Urónicos 32,3±1,0 Azúcares Totales 328,2 Lignina Klason 84,3±1,1

RIA Rdto Total 660 Neutral Sugars 294.7 Uronic Acids 32.3 ± 1.0 Total Sugars 328.2 Lignin Klason 84.3 ± 1.1

Tabla 3Table 3

Antes toma Después 14 Después 21 Comp, días toma dias toma comp, comp, Glucosa (mg/dl) 89,00±1,84b 87,10±1,66ab 84,50±2,61a Bioquímica Acido Úrico (mg/dl) 4,48±0,35 4,49±0,30 4,24±0,29Before take After 14 After 21 Comp, days take days take comp, comp, Glucose (mg / dl) 89.00 ± 1.84b 87.10 ± 1.66ab 84.50 ± 2.61a Biochemistry Uric Acid (mg / dl ) 4.48 ± 0.35 4.49 ± 0.30 4.24 ± 0.29

Albumina (mg/dl) 4,46±0,05 4,34±0,04 4,49±0,07 ASAT GOT (Ul/l) 19,10±0,62 20,70±2,55 19,90±1,73 Enzimas ALAT GOT (Ul/l) 17,00±2,21 21,80±6,82 20,30±2,76Albumine (mg / dl) 4.46 ± 0.05 4.34 ± 0.04 4.49 ± 0.07 ASAT GOT (Ul / l) 19.10 ± 0.62 20.70 ± 2.55 19, 90 ± 1.73 ALAT GOT Enzymes (Ul / l) 17.00 ± 2.21 21.80 ± 6.82 20.30 ± 2.76

Gamma-GT (Ul/l) 13,30±1,13 11,10±1,31 11,60±1,56 Colesterol TotalGamma-GT (Ul / l) 13.30 ± 1.13 11.10 ± 1.31 11.60 ± 1.56 Total Cholesterol

_(mg/dl)201,60±7,70 196,90±8,21 198,50±9,00 Trigliceridos (mg/dl) 82,50±18,36 87,2±19,22 91,10±19,93 _{(mg / dl)} 201.60 ± 7.70 196.90 ± 8.21 198.50 ± 9.00 Triglycerides (mg / dl) 82.50 ± 18.36 87.2 ± 19.22 91.10 ± 19.93

Metabolismo HDL Colesterol 59,40±4,30 59,20±3,55 58,60±4,00 Lipídico _(mg/dl) HDL Cholesterol Metabolism 59.40 ± 4.30 59.20 ± 3.55 58.60 ± 4.00 Lipid _{(mg / dl)}

Tot, Col,/HDL Col 3,57±0,34 3,49±0,37 3,56±0,36 LDL ColesterolTot, Col, / HDL Col 3.57 ± 0.34 3.49 ± 0.37 3.56 ± 0.36 LDL Cholesterol

_(mg/dl)125,40±6,19 120,10±6,63 121,60±7,22 LDL Col/HDL Col 2,25±0,24 2,15±0,26 2,20±0,26 _{(mg / dl)} 125.40 ± 6.19 120.10 ± 6.63 121.60 ± 7.22 LDL Col / HDL Col 2.25 ± 0.24 2.15 ± 0.26 2.20 ± 0 , 26

Proteinas ^{Proteina C-reactiva} Proteins ^{C-reactive protein}

_(mg/l)3,82±1,79 2,85±1,55 2,60±1,57 Hormonas Insulina (^UI/ml) 9,44±1,88 10,15±1,93 10,52±2,30 Basales Leptina Sérica(ng/ml) 12,12±2,61 11,05±19,93 11,47±2,27 Marcadores _{(mg / l)} 3.82 ± 1.79 2.85 ± 1.55 2.60 ± 1.57 Hormones Insulin (^ IU / ml) 9.44 ± 1.88 10.15 ± 1.93 10, 52 ± 2.30 Baseline Serum Leptin (ng / ml) 12.12 ± 2.61 11.05 ± 19.93 11.47 ± 2.27 Markers

_InmunoTNF-a (pg/ml) 7,20±0,68 8,01±0,65 7,73±0,33 aSignifica ± error estándar cuando es calculado. bValores seguidos por diferentes códigos de letras son significativamente diferentes (p<0.05) de acuerdo con el test LSD test. La letra ‘a’ se asigna al valor mas bajo. _Immuno TNF-a (pg / ml) 7.20 ± 0.68 8.01 ± 0.65 7.73 ± 0.33 a Means ± standard error when calculated. b Values followed by different letter codes are significantly different (p <0.05) according to the LSD test. The letter 'a' is assigned to the lowest value.

Tabla 4Table 4

ReferenciasReferences

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Composición para regular el metabolismo de la glucosa que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes:1. Composition to regulate glucose metabolism, which comprises the following components as active ingredients:

a) uno o más polifenoles a una concentración de entre 0,5 y 100 mg / g de la composición;a) one or more polyphenols at a concentration of between 0.5 and 100 mg / g of the composition;

b) fibras dietéticas, en donde las fibras dietéticas comprenden uno o más azúcares o derivados de los mismos a una concentración de 50 a 600 mg / g en base a la composición.b) dietary fibers, wherein the dietary fibers comprise one or more sugars or derivatives thereof at a concentration of 50 to 600 mg / g based on the composition.

2. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que uno o más polifenoles comprenden ácido elágico, flavanoles o flavonoles o cualquier combinación de los mismos.2. Composition for use according to claim 1, wherein one or more polyphenols comprise ellagic acid, flavanols or flavonols or any combination thereof.

3. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en la que los azúcares comprenden azúcares neutros y ácidos urónicos.3. Composition for use according to any one of claims 1 or 2, wherein the sugars comprise neutral sugars and uronic acids.

4. Composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que los azúcares neutros se seleccionan del grupo que comprende celulosa, glucosa, xilosa, galactosa, arabinosa y manosa y cualquier combinación de los mismos.4. Composition for use according to any one of claims 1 to 3, wherein the neutral sugars are selected from the group comprising cellulose, glucose, xylose, galactose, arabinose and mannose and any combination thereof.

5. Composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque comprende la siguiente concentración de polifenoles en peso:5. Composition for use according to any one of claims 1 to 4, characterized in that it comprises the following concentration of polyphenols by weight:

6. Composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque los azúcares comprendidos por las fibras dietéticas son los siguientes:6. Composition for use according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the sugars comprised by dietary fibers are as follows:

- azúcares neutros: entre 150 y 550 mg / g de la composición- neutral sugars: between 150 and 550 mg / g of the composition

7. Composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, caracterizada porque los azúcares neutros comprendidos por la composición son los siguientes:7. Composition for use according to any one of claims 3 to 6, characterized in that the neutral sugars comprised by the composition are as follows:

- celulosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición- cellulose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition

- glucosa: entre 150 y 400 mg / g de la composición- glucose: between 150 and 400 mg / g of the composition

- xilosa: entre 0,1 y 5 mg / g de la composición- Xylose: between 0.1 and 5 mg / g of the composition

- galactosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición- galactose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition

- arabinosa: entre 0,1 y 10 mg / g de la composición- arabinose: between 0.1 and 10 mg / g of the composition

- manosa: entre 0,5 y 30 mg / g de la composición.- Mannose: between 0.5 and 30 mg / g of the composition.

8. Composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque la composición se usa en una dosificación de hasta 8 g por día. 8. Composition for use according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the composition is used in a dosage of up to 8 g per day.

9. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la regulación del metabolismo de la glucosa da como resultado un aumento o una disminución de al menos uno de los miARN circulantes seleccionados del grupo que comprende miARN130a. -3p, miARN-122-5p, miARN-34a-5p, miARN-191-5p y miARN-342-3p.9. Composition for use according to any one of claims 1 to 8, characterized in that the regulation of glucose metabolism results in an increase or decrease in at least one of the circulating miRNAs selected from the group comprising miRNA130a. -3p, miRNA-122-5p, miRNA-34a-5p, miRNA-191-5p and miRNA-342-3p.

10. Suplemento dietético que comprende la composición descrita en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 como ingrediente funcional.10. Dietary supplement comprising the composition described in any one of claims 1 to 9 as a functional ingredient.

11. Suplemento dietético según la reivindicación 10, caracterizado porque comprende entre 100 mg y 5 g de la composición.11. Dietary supplement according to claim 10, characterized in that it comprises between 100 mg and 5 g of the composition.

12. Producto alimenticio caracterizado porque su composición comprende como ingrediente funcional la composición descrita en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o el suplemento dietético descrito en una cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11 mezclados junto con al menos un ingrediente dietético.12. Food product characterized in that its composition comprises as a functional ingredient the composition described in any one of claims 1 to 9 or the dietary supplement described in any one of claims 10 or 11 mixed together with at least one dietary ingredient.

13. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para tratar o prevenir el trastorno del metabolismo de la glucosa o enfermedades relacionadas con el mismo. 13. Composition according to any one of claims 1 to 9 for treating or preventing glucose metabolism disorder or related diseases.

14. Uso de la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para la producción de productos funcionales para el consumo humano. 14. Use of the composition of any one of claims 1 to 9, for the production of functional products for human consumption.