ES2683773T3 - Procedimiento y dispositivo de proyección de imágenes para asistir en la preparación manual de muestras-MALDI - Google Patents

Abstract

Ayuda de deposición (2, 2*) para la preparación manual de muestras sobre un soporte de muestras (8) para la ionización con desorción por láser asistida con matriz, que presenta: - una placa de base (4), que contiene un alojamiento (6) para un soporte de muestras (8) con varios sitios de muestras; - un brazo o soporte (12), que se eleva en la altura en un lado de la placa de base (4) y en el que está dispuesto un dispositivo de reproducción (14) del tipo de un proyector de vídeo, en el que el dispositivo de reproducción (14) proyecta una imagen óptica bidimensional (16), o una secuencia de imágenes correspondientes, lateralmente bajo un ángulo determinado sobre el lado delantero que presenta los sitios de muestras de un soporte de muestras (8) dispuesto en el alojamiento (6) y contiene diversas ópticas, que se ocupan de que la imagen (16) o la secuencia de imágenes se representes de forma no distorsionada, y en el que la imagen (16) o la secuencia de imágenes están diseñadas de tal forma que un sitio de muestras seleccionado, o un grupo de sitios de muestras seleccionados son realzados al menos frente a sitios de muestras vecinos no seleccionados de una manera perceptible visualmente para una persona; - una interfaz para la activación de la deposición manual y/o una instalación para la detección automática de un proceso de deposición manual; y - un sistema de guía (10), que selecciona un sitio de muestras o un grupo de sitios de muestras y controla el dispositivo (14) de manera correspondiente.

Description

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DESCRIPCION

Procedimiento y dispositivo de proyeccion de imagenes para asistir en la preparacion manual de muestras-MALDI Campo de aplicacion

La invencion se refiere a un procedimiento para la asistencia en la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz as^ como a una ayuda de deposicion correspondiente.

Estado de la tecnica

En el estado de la tecnica se han conocidos ayudas de deposicion para el uso con placas de micro titulacion.

El modelo de utilidad DE 20 2007 018 535 U1 describe una ayuda de pipetado para palcas de micro titulacion transparente, que son depositadas por medio de un adaptador en una placa de base. La placa de base comprende fuentes de luz, que estan asociadas, respectivamente, a un orificio en el adaptador y a una cavidad de la placa de micro titulacion transparente. Una unidad de conmutacion o de control activa las fuentes de luz de manera independiente entre sf e indica por medio de iluminacion a traves del adaptador y la placa transparente, donde debe pipetarse un lfquido de muestra. El modelo de utilidad DE 20 2005 017 946 U1 se refiere a un objeto similar.

En oposicion a las placas de micro titulacion, los soportes de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida por matriz son, en general, opacos. Esto resulta a traves de su conductividad electrica, que sirve para prevenir cargas estaticas en el soporte de muestras, que se pueden formar durante la desorcion por laser. La conductividad electrica es, en principio, no deseable, por que las cavidades - en oposicion a los sitios planos de muestras, disenados en gran medida alineados con el resto de la superficie, sobre soportes de muestras MALDI - ofrecen una superficie de interaccion mayor con el lfquido llenado de las muestras. Esta superficie de interaccion incrementada puede requerir - en presencia de conductividad y muestras lfquidas - procesos de superficies lfmites no deseados, por ejemplo la deposicion de soportes de carga disueltos en lfquido como sales, o reacciones de superficies lfmites qmmicas.

La publicacion de patente US 4.692.609 A describe de manera similar a los patrones de uso mencionados anteriormente un alojamiento para una placa de micro titulacion transparente, en cuyo fondo estan dispuestas varias fuentes de luz, de manera que pueden iluminar un pocillo de la placa desde abajo para indicar a un usuario donde debe pipetar. De manera alternativa a ello, la iluminacion se puede realizar tambien desde el lado delantero a traves de una fuente de luz dirigible, pero no se publica como debe configurarse una fuente de luz dirigible.

La publicacion WO 2007/038521 A1 muestra una estructura con brazo telescopico, en cuyo extremo esta instalada una fuente de luz. El brazo se puede extender por medio de un actuador, de manera que la fuente de luz se puede posicionar con objeto de la iluminacion perpendicularmente sobre cada pocillo de la placa de micro titulacion. Esta configuracion tiene el inconveniente de que durante el arranque de un pocillo determinado, la fuente de luz propiamente dicha debe moverse junto con el soporte de fijacion, lo que plantea requerimientos elevados en los actuadores mecatronicos.

Otras publicaciones, que se ocupan con la preparacion de muestran sobre placas de micro titulacion son FR 2 649 511, US 2005/0046847 A1, WO 83/00047 A1, WO 2007/071575 A1 y WO 2007/121324 A1.

La publicacion US 2002/0191864 A1 publica la utilizacion de una reproduccion para la identificacion de las areas de muestras ocupadas con una muestra sobre el soporte de muestras y la alineacion del rayo laser sobre estas zonas. En cambio, no se publica un procedimiento para la asistencia en la preparacion manual de un soporte de muestras- MALDI.

La publicacion EP 1 763 061 A2 se refiere, entre otras cosas, a la supervision de procesos de deposicion sobre soportes de muestras-MALDI por medio de una estacion de trabajo de reproduccion.

La publicacion DE 10 2004 020 885 A1 se ocupa con la preparacion de muestras de origen microbiano sobre soportes de muestras-MALDI con el objetivo de automatizar la transmision de material biologico desde placas de Agar sobre sitios de muestras de soportes de muestras-MALDI. A tal fin, se transportan placas de Agar sobre una cinta transportadora hacia un robot y se deposita sobre una mesa-3D. Un procesamiento de la imagen reconoce colonias individuales sobre la placa de Agar y posiciona de manera correspondiente una barra de muestras. Una barra de muestras individual se utiliza en este caso solo para una unica transmision y a continuacion se sustituye. El alojamiento de material biologico con la barra de muestras se realiza por que la barra de muestras se desprende desde un soporte de fijacion y cae desde una altura de algunos milfmetros sobre la colonia. El contacto establecido de esta manera con la colonia debe garantizar que solo permanezca material biologico en la barra de muestras, pero no se transmita Agar sobre el soporte de muestras-MALDI. Si se transmite demasiado Agar sobre el soporte de muestras-MALDI, se reduce la calidad de la identificacion con el espectroscopio de masas, puesto que el Agar suprime las senales de los iones de protemas caractensticos. No esta prevista una instalacion de sensor fina para la regulacion del contacto. Sin embargo, la barra de muestras vibra y se puede humedecer antes de la toma de

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muestras con agua para que permanezca adherida una cantidad suficiente de material biologico desde una colonia en la barra de muestras y se puede transmitir sobre un sitio de muestras de un soporte de muestras-MALDI.

Una ayuda de deposicion, que es adecuada para soportes de muestras planos y opacos MALDI se publica en la solicitud de patente alemana 10 2010 052 976.1 (inventores: Markus Kostrzewa y Ulrich Weller). La solicitud se refiere especialmente al realce de sitios de muestras a ocupar a traves de iluminacion desde el lado delantero o puntero mecanico o bien mascaras perforadas, ver la figura 1 (arriba: rayo de luz dirigible; centro: puntero; abajo: mascara perforada). Sin embargo, las variantes mecanicas ocultan casi siempre el peligro de una contaminacion cruzada de sitios de muestras, cuando una parte de la muestra a aplicar permanece adherida en el puntero o bien en la mascara perforada. En cambio, un rayo de luz concentrado, proyectado sobre el lado delantero puede conducir, debido a la superficie normalmente metalica del soporte de muestras-MALDI, a reflexiones de luz perturbadoras, que deslumbran al usuario, especialmente cuando el angulo de incidencia es desfavorable. El documento US2005102056 muestra un sistemas de imagines para realzar visualmente un alojamiento, en el que se registran automaticamente las etapas del proceso y se controlan automaticamente los sitios de las muestras.

Problema de la invencion

Por lo tanto, existe, ademas, la necesidad de crear una ayuda de deposicion mejorada para la preparacion de muestran sobre soportes de muestras de la desorcion y ionizacion por laser asistidas con matriz.

Descripcion de la invencion

La invencion propone una ayuda de deposicion para la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz. Contiene un alojamiento para un soporte de muestras con varios sitios de muestras, que esta adaptado con preferencia a soportes de muestras normalizados para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz. Ademas, esta previsto un dispositivo, que proyecta una imagen optica bidimensional, o una secuencia de imagenes correspondiente, sobre el lado delantero del soporte de muestras, que presenta los sitios de muestras, cuando el soporte de muestras esta dispuesto en el alojamiento, de manera que la imagen, o la secuencia de imagenes, estan disenadas de tal manera que se resalta un sitio de la muestra seleccionado, o un grupo de sitios de muestras seleccionados, al menos frente a sitios de muestras no seleccionados perceptibles visualmente para una persona. Ademas, estan presentes una interfaz para la confirmacion de la deposicion con la mano o una instalacion para la deteccion automatica de un proceso de deposicion manual. Con un sistema de grna se pueden seleccionar un sitio de la muestra o un grupo de sitios de las muestras y se puede controlar el dispositivo de manera correspondiente.

El concepto de la imagen bidimensional debe entenderse en sentido amplio en el marco de la presente solicitud. Por ejemplo, es posible proyectar dos imagenes bidimensionales en cada caso de manera sucesiva entre sf en secuencia rapida sobre el soporte de muestras, de manera que resulta para un observador, dado el caso empleando un medio auxiliar como unas gafas, una impresion de imagen tridimensional sobre el lado delantero del soporte de muestras. No obstante, una componente de una imagen-“3D” de este tipo podna ser de la misma manera una reproduccion bidimensional.

Con preferencia, el dispositivo presenta un modulador de la luz de la superficie, un proyector de cristal lfquido, o proyector de cristal lfquido-sobre-silicio. De esta manera, se puede generar con procedimientos de proyeccion de Video habituales una imagen muy flexible, o una secuencia de imagenes muy rica en variantes, sobre el soporte de muestras. El lado delantero del soporte de muestras funciona de acuerdo con ello, por decirlo asf, como “pared de lino” de la imagen proyectada. Apenas se plantean lfmites a la configuracion de la imagen con respecto a la seleccion del color de elementos individuales de la imagen (Pixel), claridad y/o secuencia de la imagen.

Se emplean moduladores de la luz de la superficie especialmente en proyectores de video, como se distribuyen, por ejemplo, por Texas Instruments, Inc. (Dallas, Estados Unidos de America), con el nombre Digital Light Processing (DLP). Un modulador de la luz de la superficie de este tipo esta constituido esencialmente por actuadores de micro espejos dispuestos en forma de matriz, es decir, superficies reflectantes basculantes de longitud reducida de los cantos, que se pueden alojar en numero muy grande sobre espacio reducido como un micro chip. El movimiento de los actuadores se provoca a traves de la actuacion de fuerza de campos electrostaticos. Cada micro espejo se puede ajustar individualmente en su angulo y posee, en general, dos estados finales estables, entre los que se puede cambiar con una frecuencia de varios kilohertzios. Por medio de la frecuencia de conmutacion se puede ajustar la claridad de un elemento de la imagen. El numero de los espejos corresponde a la resolucion de la imagen proyectada, pudiendo representar un espejo un elemento de la imagen, o tambien varios elementos de la imagen. Entretanto son posibles resoluciones de hasta 4160 por 2080 elementos de la imagen. Ademas, tambien se pueden generar reproducciones muy ricas en contrastes sobre superficies reducidas.

Si se utiliza una lampara de proyeccion que irradia luz blanca, cuya luz es reflejada por los micro espejos, se puede conectar para la generacion de una imagen en color en la trayectoria de la luz delante del modulador de la luz de la superficie una rueda de colores, sobre la que giran filtros de colores de los colores basicos (en general, rojo, verde y azul, pero en parte tambien todavfa otros). Para conseguir mejores valores de claridad en el blanco, se puede anadir a la rueda de colores tambien todavfa un sector blanco. Con el ajuste del filtro de colores, la electronica cambia la

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imagen parcial, que se refleja por el modulador. En virtud de la velocidad de giro de la rueda de colores y de la inercia del ojo humano se anaden las imagenes parciales a una impresion de la imagen en color. Numeros de revoluciones altos de la rueda de colores o la prevision de varios segmentos de colores garantizan una representacion lisa del color sin transicion en la proyeccion.

En otra variante se puede alcanzar la representacion del color a traves de la descomposicion de la luz blanca de la lampara de proyeccion por medio de espejos dicrofticos en los tres colores basicos rojo, verde y azul y su transmision individual sobre tres moduladores diferentes. La reflexion parcial respectiva se puede anadir entonces en un prisma dicroftico, que contiene dos espejos dicrofticos cruzados, de nuevo a la imagen en color completa. Para esta variante son necesarios conjuntos adicionales de micro espejos. En algunas formas de realizacion, la dispersion del color se puede provocar tambien a traves de un prisma dicroftico.

En otras formas de realizacion, en lugar de una fuente de luz blanca individual se pueden utilizar tambien fuentes de luz en color individuales, por ejemplo LEDs luminosos (rojo, verde, azul).

En diferentes formas de realizacion, el dispositivo puede generar una imagen o una secuencia de imagenes, con lo que resuelta en el sitio seleccionado de la muestra, o en el grupo de sitios de muestras, un contraste de claridad y/o de color al menos con respecto a sitios de muestras vecinos no seleccionados.

Es especialmente preferido que el dispositivo genere una secuencia de imagenes, que realza un sitio de muestra o un grupo de sitios de las muestras de acuerdo con el punto de atraccion de la mirada, por ejemplo, presentando la imagen en el puesto del sitio a resaltar de la muestra, un color de la senal (como rojo, amarillo o tambien verde), que es percibido especialmente bien por el ojo humano, en cambio las otras partes de la imagen o de la secuencia de imagenes contienen colores cubiertos (como gris o marron) que retroceden normalmente detras de los valores de senales. Con secuencias de imagenes se pueden conseguir tambien efectos de intermitencia o efectos de parpadeo, cuando, por ejemplo, una serie de imagenes proyectadas presenta zonas variables de intensidad y/o de color.

El alojamiento de la ayuda de deposicion esta adaptado, con preferencia geometricamente, a soportes de muestras normalizados para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz. La adaptacion se puede realizar tambien con piezas de adaptador, que se insertan en el alojamiento. De esta manera se pueden encajar soportes de muestras de diferentes configuraciones o dimensiones en el alojamiento. De este modo se puede conseguir una disposicion enrasada y/o alineada de los soportes de muestras en el alojamiento. La normalizacion de los soportes de muestras se determina especialmente sobre sus dimensiones geometricas como altura, longitud, anchura o superficie, el numero de los sitios de las muestras y/o su forma y/o su tamano o su disposicion (de la matriz), especialmente en series y columnas. En este caso, hay que tener en cuenta que los soportes de muestras, que encuentran aplicacion en espectrometros de masas de tiempo de vuelo con impulsion axial de iones y procedimientos de desorcion por laser, deben estar realizados con un lado delantero lo mas plano posible para que existan condiciones marginales lo mas sencillas posible para campos electricos extendidos en el espacio delante del lado delantero del soporte de muestras. Esto facilita el control de la region en el espacio de fases (cubierto por coordenadas locales y de impulsos), que es ocupado por iones de interes, que aparecen durante la desorcion por laser. Las cavidades, que estan mecanizadas en placas de micro titulacion, no son adecuadas para ello.

El modo de funcionamiento del dispositivo puede incluir que genere en el sitio de muestras seleccionado un contraste de claridad y/o de color al menos con relacion a sitios de las muestras vecinos no seleccionados. Por ejemplo, se puede irradiar un sitio de muestras seleccionado con luz amarilla o roja intensiva, mientras que el resto de la imagen optica presenta un tono gris de intensidad mas bien debilitada.

El sistema de grna como parte de la ayuda de deposicion se puede proveer con una interfaz para una entrada de datos o emision de datos. Esto es especialmente util cuando un usuario quiere introducir o inscribir un plan de deposicion de un soporte de muestras a procesar en el sistema de grna. La interfaz se puede utilizar tambien por medio de entrada manual para una confirmacion de un proceso de deposicion realizado. De esta manera se puede realizar una secuencia de procesos de deposicion de una manera segura en el proceso. En una ampliacion, la interfaz puede presentar tambien una funcion de telecomunicacion, por ejemplo para la recepcion de datos de origen de las muestras y/o caracteres de identificacion correspondientes, que se pueden registrar entonces con los datos de deposicion y/o caracteres de identificacion correspondientes de los sitios de las muestras ocupados con objeto de la asociacion. La funcion de telecomunicacion puede comprender tambien la emision de datos correspondientes. La funcion de telecomunicacion se puede instalar con medios de telecomunicacion conocidos, como interfaz de radio, de Bluetooth, de infrarrojos o de otra interfaz.

El sistema de grna puede presentar, ademas, una memoria para la asociacion y registro de caracteres de identificacion de muestras y sitios de muestras. Alft se resaltan con seguridad las asociaciones realizadas y se pueden llamar con frecuencia discrecional para evaluacion o verificacion posterior.

La ayuda de deposicion puede ser estacionaria en una variante de realizacion. Entonces esta dispuesta con preferencia en una disposicion de un soporte de placas de cultivo, sobre la que se pueden disponer, por ejemplo, placas de Petri para la toma de muestras, y una estacion de carga de muestras para un espectrometro de masas con una instalacion de desorcion por laser, de tal manera que es posible una transmision lo mas economizadora de

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tiempo posible de las muestras desde una placa de cultivo en el soporte de las placas de cultivo sobre un soporte de muestras en la ayuda de deposicion y desde allf hacia la estacion de carga.

En otra variante, sin embargo, la ayuda de deposicion puede estar disenada tambien portatil. Como aparato manual portatil, por ejemplo, la ayuda de deposicion puede ser llevada por un usuario como una paleta de pintor sobre o bien en la mano. En este caso, la ayuda de deposicion presenta con preferencia una instalacion de retencion como un mango, agujeros adaptados a los dedos de una mano de una persona o una cinta de retencion, con la que se puede fijar en un brazo de un usuario. Pero la portabilidad se puede conseguir tambien por que la ayuda de deposicion esta configurada a modo de una bolsa, que esta provista, por lo tanto, por ejemplo, con al menos una correa de hombros o bien una correa de cuello, de manera que se puede llevar por un usuario delante del abdomen o del pecho. Esta variante tiene la ventaja de que el usuario tiene ambas manos libres. A traves de la portabilidad se flexibiliza la manipulacion de la ayuda de deposicion, en particular no esta limitada localmente.

Junto con la configuracion de la ayuda de deposicion como aparato portatil, en particular aparato manual, se puede prever una estacion adosada, que es con preferencia estacionaria y presenta un alojamiento para la ayuda de deposicion. Un usuario, cuando requiere la libertad necesaria, puede depositar la ayuda de deposicion portatil llevada en el cuerpo o en la mano en un alojamiento y se puede ocupar de otros trabajos, en los que no es necesaria la ayuda de deposicion. En la estacion adosada, la ayuda de deposicion puede transmitir datos de una secuencia de deposicion realizada sobre un ordenador estacionario, que se encuentra en la estacion. De la misma manera sena posible y conveniente establecer una conexion electrica para recargar eventuales acumuladores de la ayuda de deposicion, que suministran la energfa para su funcionamiento.

En el caso de que este presente una instalacion para la deteccion automatica, comprende con preferencia un sensor de luz dispersa. El sensor de luz dispersa esta dispuesto con preferencia sobre el alojamiento y sirve especialmente para reconocer modificaciones del comportamiento de la luz dispersa, que indican un proceso de deposicion manual, en el lado delantero de un soporte de muestras que se encuentra en el alojamiento, en particular con resolucion local. Ademas de la variante de la deteccion de resolucion local se puede buscar tambien de manera selectiva una senal de luz dispersa desde el sitio de muestras previsto (y resaltado) para el siguiente proceso de deposicion. En esta segunda variante, la correlacion temporal o bien la sincronizacion del realce visual con la deteccion de un evento de luz dispersa es una variable caractenstica importante. La luz dispersa puede proceder, en principio, desde la imagen optica y/o desde un rayo de luz generado separado y proyectado sobre el soporte de muestras (dado el caso, sobre el sitio de muestras realzado sobre el soporte de muestras). Para el reconocimiento de resolucion local de una deposicion manual se puede iluminar individualmente antes de la deposicion un sitio de muestras seleccionado y se puede medir la luz dispersa que parte desde allf con un sensor de luz dispersa que mide integralmente. La medicion de la luz dispersa se puede repetir despues de la confirmacion de la deposicion manual a traves del usuario o de forma automatica a intervalos de tiempo. A partir de las diferencias de las intensidades de la luz dispersa o bien su supresion se puede deducir una deposicion correcta o bien erronea del sitio seleccionado de la muestra. Para un grupo de sitios seleccionados de las muestras se puede realizar individualmente la medicion de la luz dispersa de forma sucesiva en cada caso para los diferentes sitios de las muestras del grupo. La luz para la iluminacion de los sitios individuales seleccionados de las muestras se genera con preferencia con el dispositivo, que proyecta la imagen optica bidimensional sobre el soporte de muestras, pero tambien se puede generar por un segundo dispositivo correspondiente, en particular en la zona espectral infrarroja no perceptible visualmente por el usuario. Una secuencia de imagenes puede ser util durante la evaluacion de la senal de la luz dispersa por medio de filtros de frecuencia.

Adicional o alternativamente al sensor de luz dispersa se puede emplear tambien una camara con reconocimiento de imagenes para una deteccion automatica de la deposicion.

Especialmente sobre las superficies que brillan metalicas de un soporte de muestras-MALDI se pueden detectar de una manera muy fiable las modificaciones del comportamiento de la luz dispersa. Si el sensor esta alineado sobre un sitio de muestras a ocupar, a traves de un proceso de deposicion sera previsible en primer lugar una senal de luz dispersa muy variable, cuando el usuario mueve su pipeta o su sello de vacunacion, por ejemplo, a traves del cono de luz de la imagen optica bidimensional o el rayos de luz de la fuente de luz separada. Si se retira el sello de vacunacion, resultan las modificaciones del comportamiento de la luz dispersa en el sitio de muestras recien ocupado a partir de la muestra depositada o precisamente no, en el caso de que la deposicion no se haya realizado con exito o se haya realizado en el sitio falso).

Si se supervisan por el sensor mas que el sitio de las muestras previsto para la deposicion siguiente, se puede reconocer tambien, dado el caso, una deposicion erronea, cuando, en efecto, aparece una modificacion de la luz dispersa en otro sitio que el sitio de la muestra previsto para la deposicion siguiente. De la misma manera, es posible confirmar a traves de modificaciones del comportamiento de la luz dispersa de una parte de la superficie del soporte de muestras una deposicion manual. Asf, por ejemplo, sobre el lado delantero del soporte de muestras se puede registrar de manera alternativa tambien en la zona marginal del alojamiento una zona determinada para la confirmacion de la deposicion, en la que no se encuentran sitios de muestras y que se supervisa con el sensor de luz dispersa. Una vez realizada la deposicion, el usuario puede circular con el sello de vacunacion sobre la zona determinada y de esta manera generar una senal temporal de modificacion de la luz dispersa, que llega a un procesador conectado, para proseguir con el siguiente sitio de deposicion de una secuencia de deposicion. El

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concepto de zona marginal debe entenderse en sentido amplio y no debe describir solo areas de la deposicion propiamente dicha, sino que puede incluir tambien zonas (al menos marginales) del soporte de muestras.

En otras formas de realizacion, la imagen o la secuencia de imagenes pueden estar divididas en una zona que resalta el sitio seleccionado de las muestras, o los sitios seleccionados de las muestras, y en una zona que indica informaciones al usuario. La zona de indicacion puede comprender, por ejemplo, una indicacion de texto con informaciones sobre la muestra a aplicar.

La invencion publica, ademas, un procedimiento para la asistencia en la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras plano para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz. En primer lugar, se prepara un soporte de muestras con varios sitios de muestras. Luego se define un criterio de seleccion o se definen varios criterios de seleccion, de acuerdo con el cual o bien de acuerdo con los cuales debe realizarse una secuencia de deposicion. De acuerdo con el criterio de seleccion o la pluralidad de los criterios de seleccion se selecciona una cantidad de sitios de muestras. Se selecciona una imagen optica bidimensional o una secuencia correspondiente de imagenes, sobre la que se proyecta el lado delantero, que presenta sitios de muestras, del soporte de muestras plano, de manera que la imagen o la secuencia de imagenes estan disenadas de tal forma que se resalta un sitio seleccionado de las muestras, o un grupo de sitios seleccionados de las muestras, al menos frente a sitios de las muestras vecinos no seleccionados de una manera perceptible visualmente para una persona. A continuacion se deposita una muestra o una sustancia para la preparacion de una muestra (por ejemplo, una solucion con una sustancia-MALDI) con la mano sobre el sitio realzado de la muestra. La deposicion realizada es confirmada manualmente y/o es detectada de una manera automatica por un sensor. En el caso de que la cantidad contenga otros sitios de muestras no procesados, o grupos de sitios de muestras, se pueden repetir las etapas del realce y de la deposicion manual con el siguiente sitio de muestra de la cantidad, o del grupo siguiente de sitios de muestras. En otro caso, se terminana provisionalmente la secuencia de deposicion.

Un usuario, que quiere realizar una preparacion manual de un soporte de muestras, es asistido a traves del realce reconocible por el visualmente por medio de la imagen o de la secuencia de imagenes para depositar la muestra tomada en un medio de cultivo - por ejemplo, una placa de Agar, cultivo de Bouillon o cultivo sangumeo - o preparada a partir del mismo en el sitio correcto. El peligro de errores de deposicion, que resulta esencialmente por que, en general, el material de muestra transferido apenas es perceptible visualmente en virtud de su cantidad reducida, se puede reducir de esta manera.

El realce debe ser en este caso especialmente reversible, es decir, que se puede activa y desactivar y debe poder anularse de nuevo, por ejemplo, de manera opcional conectando o desconectando (o tambien sustituyendo) la imagen proyectada. El trabajo de un tecnico debe facilitarse especialmente tambien realizando la seleccion y el realce de una manera (semi) automatica con medios asistidos electronicamente. Se puede conseguir un gasto reducido del procedimiento cuando el realce del sitio seleccionado de la muestra se limita a los sitios de muestras inmediatamente vecinos no seleccionados, por ejemplo ocupando el sitio de la muestra a realzar con un zona de la imagen de color mas claro o de alta intensidad de la luz, en cambio cubriendo los sitios de muestras inmediatamente adyacentes que no deben realzarse por una zona de la imagen con color mas oscuro o de menor intensidad de la luz. El efecto de realce se puede intensificar a traves del incremento de la cantidad de sitios de muestras no seleccionados, en el caso mas exterior de tal manera que se realza el sitio seleccionado de la muestra frente a todos los demas sitios de muestras no seleccionados. En este caso, se proyecta la imagen o la secuencia de imagenes esencialmente sobre todo el lado delantero del soporte de muestras.

A continuacion se indica MALDI como tipo de ionizacion preferido, en el que resultan iones durante la desorcion provocada a traves del laser. No obstante, se entiende que en este caso solo la desorcion por laser es significativa en la fase de gas para la transferencia de las sustancias de analitos - por lo tanto, protemas y cadenas de protemas. El tipo de ionizacion se puede seleccionar libremente segun la aplicacion. La desorcion por laser se puede realizar, por ejemplo, con una ionizacion qmmica (laser desorption chemical ionisation - LDCI). Pero tambien pueden encontrar aplicacion otros tipos de ionizacion. De manera correspondiente amplia debe entenderse el concepto de ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz.

El sitio de las muestras se puede seleccionar segun que este desocupado. El procedimiento ofrece una cierta flexibilidad en diferentes estadios de una secuencia de deposicion. De la misma manera es posible hacer una prevision de seleccion geometrica, por ejemplo del tipo de que solo cada n - por ejemplo cada segundo - sitio de muestras debe ocuparse. Esto puede ser conveniente cuando el peligro de una contaminacion cruzada a traves de desgasificacion de una muestra y la transferencia de las partmulas de muestras desgasificadas a la fase de gas sobre otro sitio de muestras a una distancia espacial reducida de los sitios de muestras ocupados es elevado. En una variante, la seleccion se puede realizar a traves de un sistema de grna tecnico asistido por electronica, por ejemplo ocupando todos los sitios de muestras desocupados - alternativamente tambien a traves de un usuario del procedimiento.

Tambien se pueden seleccionar varios sitios de muestras y se puede realizar el realce de forma repetida en un proceso de deposicion, realzando con cada repeticion otro sitio de muestras seleccionado u otro grupo de sitios de muestras seleccionados. Por lo tanto, el procedimiento es especialmente adecuado para un procesamiento secuencial de diferentes muestras, que proceden de diferentes colonias sobre una placa de cultivo y deben llevarse

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sobre un soporte de muestras. En tal procesamiento secuencial es preferida la utilizacion de un sistema de supervision y de control, que asiste al usuario del procedimiento en la seleccion de las muestras a transmitir.

Ademas, se propone un procedimiento para la preparacion manual de una muestra sobre un soporte de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz, en el que la muestra y los sitios de muestras estan provistos, respectivamente, con caracteres de identificacion, en el que se selecciona y se realza un sitio de muestras de acuerdo con un procedimiento descrito anteriormente, se aplica la muestra sobre el sitio de muestra seleccionado y de asocian los caracteres de identificacion entre sf y se registran. De esta manera, una vez realizada la deposicion del soporte de muestras se puede comprobar y verificar que muestras de que origen han sido transferidas sobre un sitio de muestra determinado. Esto posibilita un control posterior del proceso y puede indicar, por ejemplo, un error cuando una muestra de determinado origen ha sido depositada sobre dos sitios de muestras, aunque estaba previsto solamente un sitio de muestra para cada muestra del origen correspondiente.

La asociacion y registro se pueden realizar en una etapa combinada del procedimiento en comun o por separado. La asociacion se puede realizar, por ejemplo, antes del proceso de deposicion propiamente dicho, el registro se puede realizar al termino del proceso de deposicion. En principio, no es obligatoria una secuencia temporal determinada de la asociacion y del registro durante el procedimiento. No obstante, con preferencia se asocian y se registran los caracteres de identificacion despues del proceso de deposicion, puesto que de esta manera se puede reconocer mas facilmente una asociacion erronea o bien una deposicion erronea.

Como muestras son especialmente adecuadas las de origen microbiano. Con preferencia, por ellas se entienden los microorganismos propiamente dichos en forma no tratada, como han sido cultivados en o sobre un medio nutritivo.

Los caracteres de identificacion de la muestra se pueden derivar de una caracterizacion del recipiente de muestras - por ejemplo de una placa de Petri -, del que procede la muestra. De esta manera se garantiza una alta medida de seguridad en el seguimiento de las muestras. De la misma manera es posible generar o completar un caracter de identificacion, registrando con una camara la fuente de muestras, en particular el medio nutritivo superficial en una placa de Petri y determinando en el registro las coordenadas del sitio de origen de la muestra por medio de evaluacion de la imagen y asignandolas a la muestra. Adicional o alternativamente a una reproduccion optica del medio nutritivo superficial, se puede identificar el sitio de origen de la muestra tambien a traves de una medicion de la modificacion de la capacidad en el medio nutritivo superficial comparando antes de la toma de la muestra con despues de la toma de la muestra.

En una variante, los datos de origen de la muestra y/o los caracteres de identificacion se pueden transmitir a traves de medios de telecomunicacion hacia el instrumental de preparacion de las muestras para que sean registrados allf una vez realizada la deposicion de un sitio de muestras sobre el soporte de muestras junto con las coordenadas de deposicion y/o los caracteres de identificacion del soporte de muestras o bien del sitio de las muestras. De esta manera es posible un seguimiento especialmente detallado de las muestras.

Breve descripcion de las figuras

A continuacion se describe la invencion con la ayuda de ejemplos de realizacion en conexion con el dibujo adjunto. En el dibujo:

La figura 1 muestra tres ayudas de deposicion en representacion esquematica, como se publican en la solicitud de patente alemana 10 2010 052 976.1.

Las figuras 2a-c muestran una estructura esquematica de una ayuda de deposicion de acuerdo con los principios de la invencion.

La figura 3 muestra una representacion (esquematica) mas detallada de un procedimiento de proyeccion.

La figura 4 muestra un ejemplo de una imagen proyectada.

Las figuras 5A-C muestran un ejemplo de una secuencia de imagenes proyectada y

La figura 6 muestra una representacion del diagrama de flujo del procedimiento de acuerdo con los principios de la invencion.

Ejemplos de realizacion preferidos

La figura 2a muestra de forma esquematica la estructura de una ayuda de deposicion 2 de acuerdo con los principios de la invencion. Una placa de base 4 contiene un alojamiento 6, cuyas dimensiones interiores estan adaptadas con preferencia a las dimensiones exteriores normalizadas de un soporte de muestras 8 (en particular, un soporte de muestras-MALDI). En determinados casos, se pueden emplear piezas de adaptadores (no mostrados), que ajustan una configuracion espacial necesaria.

En la figura 2a, un soporte de muestras 8 esta dispuesto en el alojamiento 6. En la zona del fondo y/o de los lados del alojamiento 6 puede estar integrado un sensor (no mostrado), que detecta la presencia de un soporte de

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muestras y transmite una senal de informacion correspondiente a un sistema de grna 10, por ejemplo un microprocesador integrado en la estructura. El sensor puede estar constituido, por ejemplo, por un pulsador sencillo, que se activa cuando se introduce el soporte de muestras 8 en el alojamiento 6. Pero tambien son concebibles otras variantes de sensor sin contacto (sensor de proximidad de ultrasonido, barrera optica, ...).

Pero un alojamiento de la ayuda de deposicion puede estar configurado tambien como bastidor (no se representa). Un bastidor, que fija el soporte de muestras en los lados estrechos, tiene la ventaja de que tanto el lado delantero como tambien en lado trasero del soporte de muestras son accesibles para un instrumental de medicion o bien de investigacion (dado el caso, sensor). Esto facilita la manipulacion de la ayuda de deposicion, especialmente cuando es portatil.

En un lado de la placa de base 4 se eleva un brazo o soporte 12 en la altura, en el que esta dispuesto un dispositivo de reproduccion 14. El dispositivo de reproduccion 14 puede formarse, por ejemplo, a modo de un proyector de video, como se explicara mas en detalle a continuacion. El dispositivo de reproduccion 14 esta dispuesto y alineado de tal manera que puede proyectar una imagen optica bidimensional 16 o una secuencia de imagenes correspondiente, sobre el lado delantero de un soporte de muestras 8 que se encuentra en el alojamiento 6. El dispositivo de reproduccion 14 se comunica con el sistema de grna 10 y es controlado por este, por ejemplo para indicar que imagen debe proyectarse para realzar un sitio de muestras o un grupo de sitios de muestras. El dispositivo de reproduccion 14 contiene con preferencia diversas opticas, que se ocupan de que la imagen o la secuencia de imagenes se representen si distorsion, aunque sean proyectadas lateralmente bajo un angulo determinado sobre el lado delantero del soporte de muestras.

El dispositivo de reproduccion 14 esta dispuesto de tal forma que es posible para un usuario transmitir en gran medida sin impedimentos con un sello de vacunacion 18 u otro aparato de transmision una muestra microbiana, por ejemplo celulas de una colonia microbiana, que ha sido cultivada sobre una placa de Agar, sobre un sitio de la muestra sobre el soporte de muestras 8.

Es posible que el sistema de grna 10 presente una interfaz (no mostrada), por medio de la cual un usuario puede confirmar una deposicion realizada manualmente de un sitio de muestras con la mano. El concepto de activacion con la mano debe entenderse en este caso en sentido amplio y puede comprender tambien la introduccion de datos de identificacion de la siguiente muestra a preparar, por ejemplo por medio de escaneo de un codigo de barras sobre una placa de Agar.

Tampoco se muestra una variante en la que el sistema de grna 10 esta equipado con un sensor para la deteccion automatica de procesos de deposicion, y que de esta manera reconoce de forma automatica la terminacion de una deposicion de un sitio de muestras y se notifica al sistema de grna 10. La deteccion automatica puede comprender naturalmente tambien el reconocimiento de ocupaciones erroneas cuando, por lo tanto, una muestra ha sido depositada sobre un sitio de la muestra distinto al sitio previsto.

Ejemplos de un sensor de este tipo se describen en la solicitud de patente alemana 10 2010 052 975.3 de la solicitante de la patente, que debe incorporarse de esta manera por referencia en la presente publicacion. Por ejemplo, en un sitio de la muestra se pueden sondear la cantidad de muestra o se puede determinar el estado de deposicion con la ayuda de una modificacion de al menos una de las siguientes propiedades ffsico-qmmicas: frecuencia de resonancia de un material piezoelectrico, densidad, dimension geometrica, tiempo de propagacion de ultrasonido u ondas electromagneticas, capacidad electrica, resistencia electrica, inductividad, permisividad, capacidad magnetica, dispersion de la luz, absorcion de la luz, reflexion de la luz o luminiscencia. Pero tambien son concebibles variantes con rayos de barreras opticas que se cruzan sobre los sitios de muestras, con lo que se construye una red de supervision.

El sistema de grna 10 puede detectar determinados datos de configuracion del soporte de muestras 8 a traves de otra conexion de telecomunicaciones con el soporte de datos 8: por ejemplo, numero, disposicion y posicion de los sitios individuales de las muestras. En un ejemplo, se puede leer un microchip instalado en el soporte de datos 8, que contiene los datos de configuracion correspondientes. De manera alternativa a ello, el sistema de grna 10 puede presentar una camara y un sistema optico de reconocimiento de imagenes (no se muestra), o bien se puede comunicar con este, con el que se registra el lado delantero del soporte de muestras 8 y se localizan caractensticas reconocibles de los sitios de muestras para la aplicacion del material de muestras. Estas caractensticas reconocibles pueden estar configuradas como marcas, por ejemplo como enmarques en forma de anillo, en el lado delantero.

La comunicacion con el dispositivo 14 posibilita al sistema de grna 10 en este ejemplo tambien (des)activar un proyector de video para la generacion de una imagen optica sobre el lado delantero del soporte de muestras, cambiar la imagen y, dado el caso, seleccionar diferentes formatos de la imagen. A traves de una interfaz se pueden realizar la deteccion de los datos de configuracion, la seleccion de una imagen (o de una secuencia de imagenes) asf como la (des)activacion del proyector en algunas formas de realizacion tambien con la mano.

Un usuario de la ayuda de deposicion puede introducir o inscribir en una forma de realizacion semiautomatica en el sistema de grna 10 el estado de deposicion del soporte de muestras 8, por ejemplo a traves de una interfaz. En este caso puede predeterminar al mismo tiempo un criterio, segun el cual deben seleccionarse los sitios de las muestras.

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Este puede ser, por ejemplo, un sitio desocupado. El sistema de gma 10 verifica entonces cuales de los sitios de muestras se contemplan para una deposicion, selecciona uno de ellos (dado el caso, tambien un grupo), para realzar el sitio correspondiente de la muestra, selecciona de manera correspondiente la imagen a proyectar o bien la genera, y activa el proyector de video. Entonces se proyecta una imagen o una secuencia de imagenes sobre el lado delantero del soporte de muestras 8, siendo identificado el sitio de la muestra y, dado el caso, la superficie que lo rodea del lado delantero del soporte de muestras de una manera perceptible visualmente para una persona frente a las otras superficies del soporte de datos con sitios de muestras no seleccionados.

El efecto de realce se puede intensificar a traves de un diseno del material del soporte de muestras alineado para la intensificacion de la accion visual, por ejemplo incorporando partfculas en el material del soporte de muestras 8, que provocan durante la iluminacion un efecto de Glitzer o de color. Tambien puede ser util un tipo de fondo claro con partfculas blancas para hacer resaltar mejor las diferencias de color en los diferentes elementos de la imagen.

Asistido por este realce, el usuario puede aplicar su muestra sobre el sitio correcto de la muestra y entonces confirmar, por ejemplo, manualmente a traves de la interfaz la deposicion realizada. Esto puede conducir entonces a la desactivacion del realce, por lo tanto en este ejemplo a la desconexion de la proyeccion, o al cambio de la imagen representada. En otras formas de realizacion, tambien se puede emplear un sensor para la deteccion automatica de procesos de deposicion manuales.

Para no irritar al usuario en el trabajo, el lado delantero del soporte de datos puede estar provisto con un recubrimiento antibrillante. Esto puede prevenir reflejos deslumbrantes de la luz, que podnan aparecer durante la proyeccion de la imagen o de la secuencia de imagenes. No obstante, en principio, en peligro de un deslumbramiento en la utilizacion de un proyector para la generacion de imagenes sobre el soporte de muestras es reducido en oposicion a los rayos de luz concentrados.

El sistema de gma 10 se puede proveer con una memoria (no mostrada) para la asociacion y registro de caracteres de identificacion de muestras y de sitios de muestras. Estas informaciones se pueden introducir o inscribir, dado el caso, a traves de un usuario a traves de la interfaz; de manera alternativa tambien se puede realizar por medio de transmision automatica de datos.

En el soporte 12 puede estar dispuesto, de acuerdo con otra forma de realizacion, tambien un sen sor de luz dispersa 19 (como se indica en la figura 2b), que supervisa con resolucion local el lado delantero del soporte de muestras 8 para poder reconocer modificaciones del comportamiento de la luz dispersa y para poder asociarlas espacialmente a un area sobre el soporte de datos, por ejemplo un sitio de muestras. La resolucion local se puede conseguir, por ejemplo, con un dispositivo acoplado con carga (CCD) y optica anteconectada correspondiente. La luz que se dispersa sobre la superficie del soporte de muestras 8 y entonces se detecta, puede proceder desde el proyector del dispositivo de reproduccion 14 o tambien desde una fuente de luz separada (no mostrada). Pero el sensor de luz dispersa (19) puede medir tambien la luz dispersa integral (no resuelta local), que procede desde un sitio de la muestra cuando este es iluminado individualmente desde la instalacion de reproduccion 14 o la fuente de luz separada.

Sobre el soporte de muestras 8 se puede establecer un area 21 determinada (figura 2c) para la confirmacion de un proceso de deposicion realizado. Despues de la aplicacion de la muestra, el usuario puede frotar con el sello de vacunacion sobre el area 21 y de esta manera provocar un impulso de luz dispersa, que indica el final de un proceso de deposicion y que conduce, por lo tanto, a la continuacion de una secuencia de deposicion. Este es un ejemplo para una interfaz para la confirmacion de una deposicion. Se entiende que el area 21 debena emplazarse sobre un lado del soporte de muestras, desde el que el usuario no accede a los sitios de muestras para evitar senales erroneas innecesarias. En formas de realizacion alternativas, el area puede no estar dispuesta sobre el soporte de muestras propiamente dicho, sino en una zona marginal del alojamiento.

La figura 3 muestra de una manera un poco mas detallada un ejemplo de realizacion de una ayuda de deposicion 2* de acuerdo con los principios de la invencion.

El dispositivo para realzar presenta en este ejemplo de realizacion un modulador de la luz superficial, que esta dispuesto en una carcasa 20. La carcasa 20 esta soportada por un soporte o apoyo (no se muestra aqm para simplificacion de la representacion). Los moduladores de la luz superficial son solo un ejemplo de una tecnica de proyeccion de video. De la misma manera se pueden empelar proyectores de cristal lfquido o proyectores de cristal ifquido sobre silicio. Tales proyectores tienen la ventaja de que pueden generar una imagen muy flexible 16, o una secuencia de imagenes muy rica en variantes, sobre el soporte de muestras 8. Apenas se poner lfmites a la configuracion de la imagen 16 con respecto a la seleccion del color de elementos individuales de la imagen (Pixel), claridad y/o secuencia de imagenes.

De forma esquematica se representa en la carcasa 20 un actuador de micro espejos 22, sobre el que se proyecta luz desde una lampara de proyeccion 24 adecuada a traves de una optica de reproduccion 26A. La imagen llega desde el micro espejo 22 a traves de otra optica de reproduccion 26B sobre el lado delantero de un soporte de muestras 8. Los actuadores de microespejos 22 se pueden alojar en numero muy grande sobre espacio reducido como un microchip. Cada microespejo 22 se puede ajustar individualmente en su angulo y posee, en general, dos estados

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finales estables, entre los que puede cambiar con una frecuencia de varios kilohertzios. Por medio de la frecuencia de conmutacion se puede ajustar la claridad de un elemento de la imagen. El numero de los espejos corresponde a la resolucion de la imagen 16 proyectada, de manera que un espeso puede representar un elemento de la imagen o tambien varios elementos de la imagen. Son posibles resoluciones de hasta 4160 por 2080 elementos de la imagen y, por lo tanto, reproducciones muy ricas en contrastes sobre superficie reducida. Pero para la practica, tambien una resolucion de 480 por 320 elementos de la imagen puede proporcionar resultados satisfactorios. Naturalmente, tambien se pueden seleccionar resoluciones todavfa mas reducidas, cuando lo permite la aplicacion concreta.

Para la generacion de una imagen en color, en este ejemplo de realizacion, en la trayectoria de la luz delante del actuador de microespejos 22 esta conectada una rueda de colores 28 sobre la que se giran filtros de colores de los colores basicos (en general, rojo, verde y azul, pero en parte tambien todavfa otros). Para conseguir mejores valores de claridad en el blanco, se puede anadir a la rueda de colores 28 tambien todavfa un sector blanco. Con el ajuste del filtro de colores, la electronica cambia la imagen parcial, que se refleja por el modulador 22. En virtud de la velocidad de giro de la rueda de colores 28 y de la inercia del ojo humano se anaden las imagenes parciales a una impresion de la imagen en color. Numeros de revoluciones altos de la rueda de colores 28 o la prevision de varios segmentos de colores garantizan una representacion lisa del color sin transicion en la proyeccion. En algunas formas de realizacion, le dispersion del color se puede provocar tambien a traves de un prisma dicroftico.

En otra variante no representada, se puede alcanzar la representacion del color a traves de la descomposicion de la luz de la lampara de proyeccion por medio de espejos dicrofticos en los tres colores basicos rojo, verde y azul y su transmision individual sobre tres moduladores diferentes. La reflexion parcial respectiva se puede anadir entonces en un prisma dicroftico, que contiene dos espejos dicrofticos cruzados, de nuevo a la imagen en color completa. Para esta variante son necesarios conjuntos adicionales de micro espejos. En algunas formas de realizacion, la dispersion del color se puede provocar tambien a traves de un prisma dicroftico.

Evidentemente, tambien es posible utilizar, en lugar de una fuente de luz blanca individual, tambien fuentes de luz en color individuales, por ejemplo LEDs luminosos (rojo, verde, azul).

La figura 4 muestra un ejemplo sencillo de una imagen proyectada, que realza un sitio de muestra sobre un soporte de muestras frente a otros. El soporte de muestras presenta en este ejemplo 9x9 sitios de muestras en la disposicion de matriz (columnas A a I y lrneas 1 a 9). La imagen proyectada cubre en este caso toda la superficie del lado delantero del soporte de muestras. En algunas formas de realizacion, tambien solo superficies parciales del soporte de datos pueden servir como “pared de lino” de la imagen. En otras variantes, la imagen o la secuencia de imagenes se extienden mas alla de los cantos del soporte de datos. En el lado del sitio de las muestras G4, la imagen optica presenta una claridad alta y/o contraste de color alto con respecto a otros sitios de las muestras sobre el soporte de muestras. Un contraste de color se puede conseguir, por ejemplo, con el color amarillo frente a un gris debil (rayado). Un contraste de claridad resultana, por ejemplo, cuando la intensidad de la luz blanca sobre el sitio seleccionado de las muestras G4 es mas alta (en el ejemplo, diez veces mas alta) que en las zonas circundantes. La imagen a proyectar se puede generar evidentemente por un sistema de grna de acuerdo con los datos de configuracion registrados del soporte de muestras. De manera alternativa, se puede predeterminar tambien por un usuario.

Con una codificacion del color del realce se puede indicar a un usuario tambien si un sitio seleccionado de la muestra con una muestra o con que sustancia se puede ocupar un sitio seleccionado de la muestra en una etapa siguiente del procedimiento. De manera alternativa, un color determinado podna hacer referencia tambien al estado de ocupacion del sitio seleccionado de las muestras. Un color blanco podna representar, por ejemplo, un sitio desocupado de la muestra, un color amarillo representa un sitio de la muestra ocupado con una muestra microbiana, un color rojo representa un agente de disgregacion o de extraccion, y un color verde representa una solucion de la matriz. Apenas se ponen ftmites a este respecto a la variedad del presente procedimiento.

Las figuras 5A, 5B y 5C muestran un ejemplo de realizacion, en el que se proyecta una secuencia de imagenes sobre un lado delantero del soporte de muestras, La secuencia de imagenes comprende dos parejas de flechas (que apuntan opuestas entre sf) dispuestas en cada caso perpendiculares entre sf, que apuntan con sus puntas a un sitio seleccionado de la muestra D5. En la secuencia de imagenes, las flechas pueden migrar desde una posicion colocada mas exterior con cada imagen siguiente de la secuencia de imagenes cada vez mas hacia el lugar del sitio de la muestra D5 hasta que las puntas de las flechas contactan de manera visible con los contornos exteriores del sitio de las muestras D5. Se entiende que tambien se puede utilizar una imagen individual como en la figura 5C sin animacion para realzar el sitio de las muestras D5.

La figura 6 muestra en una representacion de diagrama de flujo un ciclo preferido de un procedimiento de acuerdo con la invencion. S acondiciona un soporte de muestras para la ionizacion con una desorcion por laser asistida con matriz con varios sitios de muestras. En este caso, se puede tratar de un soporte de muestras-MALDI, que no tiene que se transparente. En este caso se puede tratar de una placa metalica plana o de una placa de un plastico conductor o de un semiconductor dotado, como silicio. Ademas, se puede preparar una placa de Petri, que contiene un medio nutritivo superficial, sobre el que han crecido colonias de microorganismos. Pero tambien pueden servir granulos obtenidos por medio de una centrifugacion o filtracion como fuentes de muestras. La palca de Petri mencionada aqrn de forma ejemplar puede estar provista con un codigo de barras como caracter de identificacion,

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que se inscribe en una etapa opcional del procedimiento, por ejemplo se explora opticamente. Adicional o alternativamente, tambien sena concebible (aunque con gasto elevado) un chip-RFID como soporte de un caracter de identificacion, que se podna leer por radio. La disposicion de las colonias sobre el medio nutritivo se puede registrar con una camara y se puede evaluar con respecto al posicionamiento exacto de las colonias individuales, por ejemplo sobre las coordenadas-XY de las colonias individuales sobre el medio nutritivo superficial. Con estas informaciones se puede completar el caracter de identificacion del soporte del medio nutritivo, en particular de la placa de Petri, por muestras o bien por colonias y de esta manera se puede especificar con mas detalle.

A continuacion se puede definir un criterio de seleccion - o tambien varios criterios de seleccion - de acuerdo con el cual debe realizarse la secuencia de deposicion. Los criterios para la seleccion pueden ser, por ejemplo: una seleccion numerica (por ejemplo, deposicion de cada n sitios de muestras [desocupados]), seleccion aleatoria, consideracion de una lista de exclusion con sitios de muestras ya preparados. La secuencia, en la que deben cumplirse los criterios y deben ocuparse los sitios de las muestras seleccionados de esta manera, se puede predeterminar, en principio, de manera discrecional, por ejemplo puede seguir una numeracion continua de los sitios de las muestras contemplados sobre el soporte de muestras desde cifras mas pequenas hacia cifras mayores.

Sobre el soporte de muestras se proyecta ahora una imagen optica o una secuencia de imagenes, que estan configuradas de tal manera que el primer sitio seleccionado de la muestra - en una variante tambien varios sitios de las muestras - esta realzado frente a otros sitios de las muestras. Este de puede depositar ahora con la mano por un tecnico. De manera opcional, entre estas etapas se puede inscribir un caracter de identificacion del sitio realzado de la muestra para posibilitar mas tarde una asociacion al sitio de origen de la muestra. Al termino del proceso de ocupacion se puede terminar el realce, en el caso de una proyeccion de video, este se puede desconectar, por ejemplo. De manera alternativa, tambien se puede cambiar la imagen proyectada. Opcionalmente se pueden asociar los caracteres de identificacion entre sf y se pueden depositar sobre un medio de memoria apropiado, en particular una memoria electronica. Cuando mas de un sitio de la muestra cumplen los criterios de selecciona, se pueden procesar ahora de forma iterativa todos los otros sitios de las muestras seleccionados, hasta que no quede ninguno de los sitios seleccionados de las muestras. Se entiende que otro criterio no representado explfcitamente para loa interrupcion de las iteraciones consiste en que no exista ya ninguna muestra mas para la transmision sobre el soporte de muestras.

En resumen, la invencion propone: una ayuda de deposicion mejorada para la preparacion manual de muestras, en particular sobre soportes de muestras-MALDI planos, comprende un alojamiento para un soporte de muestras con varios sitios de muestras, que esta adaptado a soportes de muestras normalizados para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz, un dispositivo, que proyecta una imagen optica bidimensional o una secuencia de imagenes correspondiente, sobre el lado delantero del soporte de muestras que presenta los sitios de las muestras, en el que la imagen, o la secuencia de imagenes estan disenadas de tal forma que se realza un sitio seleccionado de las muestras, o un grupo de sitios seleccionados de las muestras, al menos frente a sitios de las muestras vecinos no seleccionados de una manera perceptible visualmente para una persona, una interfaz para la confirmacion de la deposicion manual y/o una instalacion para la deteccion automatica de un proceso de deposicion manual, y un sistema de grna, que selecciona un sitio de la muestra, o un grupo de sitios de las muestras y controla el dispositivo de manera correspondiente. De la misma manera se publica un procedimiento para la asistencia en la deposicion manual de sitios de muestras.

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   REIVINDICACIONES

   1. - Ayuda de deposicion (2, 2*) para la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras (8) para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz, que presenta:

   - una placa de base (4), que contiene un alojamiento (6) para un soporte de muestras (8) con varios sitios de muestras;

   - un brazo o soporte (12), que se eleva en la altura en un lado de la placa de base (4) y en el que esta dispuesto un dispositivo de reproduccion (14) del tipo de un proyector de video, en el que el dispositivo de reproduccion (14) proyecta una imagen optica bidimensional (16), o una secuencia de imagenes correspondientes, lateralmente bajo un angulo determinado sobre el lado delantero que presenta los sitios de muestras de un soporte de muestras (8) dispuesto en el alojamiento (6) y contiene diversas opticas, que se ocupan de que la imagen (16) o la secuencia de imagenes se representes de forma no distorsionada, y en el que la imagen (16) o la secuencia de imagenes estan disenadas de tal forma que un sitio de muestras seleccionado, o un grupo de sitios de muestras seleccionados son realzados al menos frente a sitios de muestras vecinos no seleccionados de una manera perceptible visualmente para una persona;

   - una interfaz para la activacion de la deposicion manual y/o una instalacion para la deteccion automatica de un proceso de deposicion manual; y

   - un sistema de grna (10), que selecciona un sitio de muestras o un grupo de sitios de muestras y controla el dispositivo (14) de manera correspondiente.
2. 2. - Ayuda de deposicion de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizada por que el dispositivo (14) presenta un modulador de luz superficial, un proyector de cristal lfquido, o un proyector de cristal lfquido sobre silicio.
3. 3. - Ayuda de deposicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, caracterizada por que el dispositivo (14) genera una imagen (16) o una secuencia de imagenes, con lo que resulta en el sitio seleccionado de la muestra, o del grupo de sitios de las muestras, un contraste de claridad y/o de color al menos con respecto a los sitios de las muestras vecinos no seleccionados.
4. 4. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada por que el dispositivo (14) genera una secuencia de imagenes, que realza un sitio de la muestra o un grupo de sitios de las muestras de acuerdo con el punto de atraccion de la mirada.
5. 5. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por que la imagen optica bidimensional (16) o la secuencia de imagenes cubren esencialmente todo el lado delantero del soporte de muestras (8).
6. 6. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por que el sistema de grna (10) presenta una interfaz para una entrada de datos o salida de datos.
7. 7. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada por que el sistema de grna (10) presenta una memoria para la asociacion y registro de caracteres de identificacion de muestras y sitios de las muestras.
8. 8. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada por que estan previstas piezas de adaptacion en el alojamiento (6) para la insercion de soportes de muestras (8) normalizados para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz.
9. 9. - Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada por que la instalacion para la deteccion automatica comprende un sensor de luz dispersa (19), que esta disenado para reconocer modificaciones del comportamiento de la luz dispersa, que indican un proceso de deposicion manual, en el lado delantero de un soporte de muestras (8) que se encuentra en el alojamiento.
10. 10. -- Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada por que la interfaz para la confirmacion de la ocupacion comprende un sensor de luz dispersa (19), que esta alineado sobre un area (21) en la zona del borde de un soporte de muestras (8) dispuesto en el alojamiento y detecta modificaciones provocadas manualmente del comportamiento de la luz dispersa en esta area (21).
11. 11. -Ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada por que la imagen (16), o la secuencia de imagenes, estan divididas en una zona que realza el sitio seleccionado de la muestra, o los sitios seleccionados de las muestras, y en una zona que indica informaciones al usuario.
12. 12. - Procedimiento para la asistencia en la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz utilizando una ayuda de deposicion de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11, en el que

    (a) se acondiciona un soporte de muestras con varios sitios de muestras en el alojamiento,

    (b) se define al menos un criterio de seleccion, de acuerdo con el cual debe realizarse una secuencia de deposicion,

    (c) de acuerdo con el al menos un criterio de seleccion se selecciona una cantidad de sitios de las muestras,

    5 (d) se proyecta una imagen optica bidimensional, o una secuencia de imagenes correspondiente, desde el

    proyector de video sobre el lado delantero del soporte de muestra que presenta los sitios de las muestras, de manera que la imagen, o la secuencia de imagenes, estan disenadas de tal forma que se realza un sitio seleccionado de la muestra, o un grupo de sitios seleccionados de las muestras, al menos frente a sitios de las muestras vecinos no seleccionados de una manera perceptible visualmente para una persona

    10 (e) se deposita una muestra manualmente sobre el sitio realzado de la muestra, se confirma la deposicion

    realizada manualmente y/o se detecta de forma automatica por un sensor y

    (f) en el caso de que la cantidad contenga otros sitios de muestras no procesados, o grupos de sitios de muestras no procesados, se repiten las etapas (d) y (e) con el siguiente sitio de la muestra de la cantidad, o con el siguiente grupo de sitios de muestras.

    15 13.- Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 12, caracterizado por que se selecciona a continuacion el sitio

    de la muestra que esta desocupado.
13. 14. - Procedimiento para la asistencia en la preparacion manual de muestras sobre un soporte de muestras para la ionizacion con desorcion por laser asistida con matriz, en el que la muestra esta provista con un caracter de identificacion, en el que se selecciona un sitio de la muestra provisto de la misma manera con un caracter de

    20 identificacion de acuerdo con un procedimiento segun la reivindicacion 12 6 13 y se realza, se aplica la muestra sobre el sitio seleccionado de la muestra y se asocian los caracteres de identificacion entre sf y se registran.
14. 15. - Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 14, caracterizado por que el caracter de identificacion de la muestra se deriva de una identificacion del recipiente de muestras, desde el que procede la muestra.