ES2637637T3 - Terapia de combinación para el tratamiento del cáncer de próstata - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende aproximadamente 50 μg de antígeno prostático específico (PSA), aproximadamente 2 μg de CEA, aproximadamente 1000 UI de CA 125, aproximadamente 20.000 unidades de IL-2 y aproximadamente 16,7 μg de GM-CSF, por 100 μl de la composición.

Description

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DESCRIPCION

Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer de prostata Sector de la tecnica

La presente invencion se refiere a metodos y composiciones que comprenden protemas de superficie o excretadas purificadas para el tratamiento del cancer.

Estado de la tecnica

El Instituto Nacional contra el Cancer de los EE.UU. estima que mas de 10 millones de estadounidenses tienen antecedentes de cancer. La Sociedad Estadounidense contra el Cancer ha predicho que se haran mas de 1,4 millones de nuevos diagnosticos de cancer y mas de medio millon de estadounidenses moriran de cancer este ano. El cancer es la segunda causa mas comun de muerte en los Estados Unidos, solo superado por las enfermedades cardiacas.

Dada la prevalencia de diversas formas de cancer en los Estados Unidos, importantes investigaciones se centran en el desarrollo de nuevos metodos de diagnostico y tratamiento. Dependiendo del tipo de cancer y de su fase, las formas actuales de tratamiento normalmente pueden incluir la cirugfa, la radiacion, la quimioterapia y/o tratamientos hormonales.

En los ultimos anos, los esfuerzos de investigacion tambien se han centrado en el desarrollo de vacunas contra el cancer. Dichas vacunas tienen por objeto o bien tratar canceres existentes (es decir, vacunas terapeuticas) o bien prevenir el desarrollo del cancer (es decir, vacunas profilacticas). Se disenan vacunas terapeuticas para tratar canceres mediante la estimulacion del sistema inmunitario para reconocer y atacar las celulas cancerosas sin danar las celulas no cancerosas. Se administran vacunas profilacticas a personas sanas para estimular su sistema inmunitario para atacar a los agentes que provocan cancer tales como los virus que provocan cancer.

En la actualidad, han sido autorizadas dos vacunas por la Administracion de Alimentos y Farmacos de los EE.UU. para prevenir las infecciones virales que pueden conducir al cancer. Una es una vacuna que previene la infeccion por el virus de la hepatitis B, un virus asociado a algunas formas de cancer de fngado; la segunda es una vacuna que previene la infeccion por dos tipos de virus del papiloma humano que en conjunto provocan el 70 por ciento de los casos de cancer de cuello de utero.

El progreso en el desarrollo de vacunas terapeuticas contra el cancer ha llegado mas lentamente. Se han hecho esfuerzos para vacunar a pacientes con cancer con celulas tumorales o antfgenos asociados a tumores. Algunos de estos esfuerzos han tenido un exito limitado. Un ejemplo de una clase de vacunas se publica en la Patente de los EE.UU. N.° 5.478.556, que describe la vacunacion de pacientes con cancer de mama con composiciones que comprenden una combinacion de antfgenos asociados al cancer de mama autologos o alogenos extrafdos (TAA), obtenidos a partir de celulas de cancer, interleucina-2 (IL-2) y factor estimulante de colonias de granulocitos y macrofagos (GM-CSF).

Meidenbauer et al. (Prostate, vol. 43, n.° 2, 1 de mayo de 2000, paginas 88-100) describen la terapia del cancer de prostata mediante la vacunacion con una vacuna que contiene PSA en combinacion con GM-CSF.

El documento WO2006/023598A2 desvela la vacunacion para tratar o prevenir el cancer de prostata mediante protemas de fusion de peptidos inmunogenos derivados de PSA e IL-12 y GM-CSF adicionales.

El documento US2007/128159A1 describe el tratamiento del cancer mediante el refuerzo del sistema inmunitario contra antfgenos asociados a tumores tales como PSA mediante quimiocinas y citocinas adicionales, tales como IL-4 y GM-CSF.

Objeto de la invencion

En un aspecto, se proporcionan composiciones que comprenden (i) una protema de superficie o excretada purificada cualitativamente o cuantitativamente asociada a un tipo de cancer; (ii) al menos una interleucina (IL); y (iii) al menos un factor estimulante de colonias (CSF), en las que la protema se proporciona en una cantidad suficiente para inducir una respuesta inmunitaria en un individuo al que se administra la composicion, tal como se define en las reivindicaciones.

En otro aspecto, se proporcionan metodos para tratar a un individuo que comprenden administrar a un individuo que tiene un tipo de cancer, una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion del aspecto anterior.

En otro aspecto, se proporcionan metodos para inducir una respuesta inmunoterapica en un individuo que comprende administrar a un individuo diagnosticado con un tipo de cancer una cantidad terapeuticamente eficaz de

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una composicion del aspecto anterior (citado anteriormente), en los que la composicion comprende la protema de superficie o excretada purificada en una cantidad suficiente para inducir una respuesta inmunoterapica en el individuo.

Descripcion de las figuras

La Figura 1 es una curva de supervivencia global de Kaplan-Meier con pacientes que murieron de otras causas censuradas para el Ejemplo de Referencia 1.

Descripcion detallada de la invencion

La presente divulgacion proporciona metodos y composiciones utiles para el tratamiento del cancer. De este modo, de acuerdo con la presente divulgacion, a un paciente que padece un tipo de cancer se le administra una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende una protema de superficie o excretada purificada que se asocia cualitativamente o cuantitativamente a ese tipo de cancer en combinacion con adyuvantes que comprenden una interleucina (IL) y un factor estimulante de colonias (CSF), como se define en las reivindicaciones.

La divulgacion se refiere adicionalmente a composiciones de vacunas contra el cancer que comprenden una protema de superficie o excretada purificada asociada cualitativamente o cuantitativamente a tipos particulares de cancer en combinacion con adyuvantes biologicos que comprenden una interleucina y un factor estimulante de colonias.

Sin quedar limitado por ningun mecanismo de accion, se cree que la composicion actua provocando la muerte de las celulas tumorales, inhibiendo el crecimiento o la reaparicion tumoral, promoviendo la regresion del tumor y/o la inhibicion de la metastasis, lo que conduce a un aumento en la tasa de supervivencia sin enfermedad y/o en la tasa de supervivencia global; o cualquier combinacion de los mismos.

La interleucina es la interleucina-2 (IL-2) y el factor estimulante de colonias es el CSF de granulocitos y macrofagos (GM-CSF).

La respuesta inmunitaria de un paciente que recibe la vacuna puede medirse antes de la primera vacunacion y luego puede medirse nuevamente despues de la primera vacunacion y, si se desea, despues de cualquier vacunacion posterior para determinar la extension de la respuesta inmunitaria. El nivel de respuesta inmunitaria puede cuantificarse con el Ensayo de Blastogenesis de Linfocitos (LBA) (vease Elliott, R. et al, Breast Cancer Research and Treatment 30:299-304 (1994); incorporado en el presente documento por referencia). En este ensayo, las celulas mononucleares se cultivan en cultivo tisular durante siete dfas. Las celulas mononucleares se co-cultivan con antfgeno tumoral en concentraciones variables. Se anade 3H-timidina a los cultivos poco antes de la finalizacion. Despues se calcula un mdice de proliferacion dividiendo la cantidad de captacion de 3H-timidina incorporada en las celulas mononucleares estimuladas por antfgeno tumoral en cultivo mediante la captacion de 3H-timidina incorporada en las celulas mononucleares de control, que no se co-cultivaron con antfgeno tumoral.

Como se usa en el presente documento, la frase "cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto o la composicion referenciados que desencadena la respuesta biologica o medicinal que se busca en un tejido, sistema, animal, individuo o ser humano por un investigador, veterinario, doctor en medicina u otro clmico, que incluye uno o mas de los siguientes:

(1) prevenir la enfermedad; por ejemplo, prevenir una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que puede estar predispuesto a la enfermedad, afeccion o trastorno pero que aun no experimenta o presenta la patologfa o la sintomatologfa de la enfermedad;

(2) inhibir la enfermedad; por ejemplo, inhibir una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que experimenta o presenta la patologfa o la sintomatologfa de la enfermedad, afeccion o trastorno; y

(3) mejorar la enfermedad; por ejemplo, mejorar una enfermedad, afeccion o trastorno en un individuo que experimenta o presenta la patologfa o la sintomatologfa de la enfermedad, afeccion o trastorno (es decir, invertir la patologfa y/o la sintomatologfa) tal como disminuyendo la gravedad de la enfermedad.

Por ejemplo, una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto o composicion puede medirse como una cantidad que aumenta la respuesta inmunitaria a antfgenos tumorales en al menos un 50 %; o estabiliza o disminuye las protemas marcadoras de tumores circulantes dando como resultado la inhibicion de la progresion del cancer.

Como se usan en el presente documento, los terminos "tratamiento" y "tratar" significan (i) mejorar, inhibir o prevenir la patologfa referenciada, como se ha descrito anteriormente; o (ii) desencadenar el efecto biologico referenciado (por ejemplo, una reaccion inmunoterapica puede dar como resultado un alivio o detencion de la enfermedad que padece el paciente de interes). Mas espedficamente, el tratamiento puede incluir la inhibicion del crecimiento o la reaparicion tumoral, la regresion de un tumor y/o la inhibicion de la formacion de metastasis.

Como se usa en el presente documento, la referencia a "un" o "una" o "la" protema o antfgeno o adyuvante puede

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referirse a uno o mas de una protema o antfgeno o adyuvante.

Como se usa en el presente documento, una protema de superficie o excretada que "se asocia cualitativamente o cuantitativamente a" un tipo de cancer significa una protema que o bien se encuentra normalmente solamente en la superficie de, o es excretada por, uno o mas tipos particulares de cancer o se encuentra en la superficie de, o es excretada por, celulas cancerosas mas abundantemente que las celulas normales o no cancerosas. Dichas protemas tambien son conocidas como protemas marcadoras de tumores o antigenos asociados a tumores, y estos terminos se usan indistintamente dentro de la solicitud. Estas protemas pueden purificarse a partir de una preparacion de celulas tumorales o pueden sintetizarse mediante metodos conocidos por los expertos en la materia. Adicionalmente, estas protemas pueden prepararse como una mezcla con otras protemas asociadas no tumorales o pueden prepararse en una preparacion en la que son el unico componente protemico.

Los ejemplos de dichas protemas o antigenos, y los tipos de cancer a los que se asocian, incluyen los enumerados en la Tabla 1 a continuacion:

TABLA 1

Cancer

Protemas y antigenos

de prostata

PSA, fosfatasa acida prostatica (PAP), antigeno de membrana espedfico prostatico (PSMA), antigeno carcinoembrionario (CEA), antfgeno de cancer (CA) 125

de mama

CA 15-3, CA 27.29, CEA, CA 125, receptor de estrogeno (ER), receptor de progesterona (PgR), receptor 2 de factor de crecimiento epidermico humano (Her-2/neu), acido sialico asociado a ifpidos en plasma (LASA-P)

gastrointestinal

CEA, CA 19-9, a-feto protema (AFP), CA 72-4, antfgeno de tumor vesical (BTA), antfgeno polipeptfdico tisular (TPA)

de pulmon

CEA, AFP, enolasa espedfica de neuronas (NSE), cromogranina A, TPA, CA 72-4

de Idgado

CEA, CA 19-9, AFP, CA 50

de pancreas

CEA, CA 19-9, AFP

de tiroides

CEA, calcitonina, tiroglobulina

de ovario

CA 125, AFP, LASA-P, CA 50, CA 72-4

melanoma

protemas S-100 (S-100), antfgeno asociado a tumor 90 (TA-90)

testicular

AFP, p gonadotropina corionica humana (p-hCG);

leucemia

p-2 microglobulina, LASA-P

colorrectal

CEA, CA 19-9, LASA-P

de vejiga

BTA, protema de matriz nuclear 22 (NMP 22), TPA

linfoma:

LASA-P

endometrial

ER, PgR

sistema nervioso

calcitonina, cromogranina A, NSE

embrionario

p-hCG

Las composiciones pueden fabricarse a partir de protemas marcadoras de tumores de superficie o excretadas, autologas, alogenicas o recombinantes, aisladas y purificadas, o una combinacion de las mismas. Se ha encontrado que estas composiciones son utiles como vacunas contra el cancer cuando se administran en combinacion con dosis bajas de una interleucina y un CSF.

La composicion de la invencion comprende -IL-2 y GM-CSF.

El uso de antfgenos aislados y purificados para el tipo particular de cancer que se ha de tratar proporciona mas especificidad y elimina la variabilidad presente en las composiciones de vacuna de la tecnica anterior. Ademas, la preparacion de la presente vacuna no requiere tejido del paciente y, por tanto, cada paciente en el cuadro clmico inicial o despues de la cirugfa es un candidato para la vacuna terapeutica. Sin embargo, si se desea, puede usarse tejido de un paciente para fabricar la presente vacuna. El uso de antfgenos aislados y purificados tambien permite que las composiciones de vacuna sean producidas en masa.

Como se usa en el presente documento, el termino "purificado" significa que la entidad referenciada tiene una pureza de mas de aproximadamente el 50 % en peso total. Es decir, en ciertas realizaciones, cada uno de los antfgenos aislados y purificados utilizados en el presente documento, independientemente, tiene una pureza de mas

de aproximadamente el 50 % en peso total; o mas de aproximadamente el 60 % en peso; o aproximadamente el

70 % en peso; o aproximadamente el 80 % en peso; o aproximadamente el 85 % en peso; o aproximadamente el

90 % en peso; o aproximadamente el 95 % en peso; o aproximadamente el 98 % en peso; o aproximadamente el

99 % en peso.

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El termino "aproximadamente" como se usa en el presente documento significa +/- el 10 % del valor de referencia.

Las composiciones pueden administrarse a pacientes que padecen tumores solidos, ascitis maligna o canceres hematopoyeticos para inhibir el crecimiento o la reaparicion tumoral o para inhibir la formacion de metastasis. Las composiciones tambien pueden administrarse a pacientes que padecen leucemia o linfoma.

Las composiciones de vacuna se fabrican usando protemas marcadoras de tumores. Las protemas marcadoras de tumores aisladas y purificadas deseadas estan disponibles en el mercado. Las fuentes de muchos de los antigenos enumerados anteriormente incluyen Fitzgerald Industries International, Concord, MA, y Sigma-Aldrich Co, Dallas, TX. Se conocen y hay disponibles otras fuentes comerciales para los expertos en la materia. Si cualquier antfgeno particular no esta disponible en el mercado, puede sintetizarse en una instalacion de cGMP (buenas practicas de fabricacion actuales, por sus siglas en ingles) de acuerdo con metodos conocidos por los expertos en la materia.

Cada una de las protemas marcadoras de tumores esta presente independientemente en cantidades que vanan normalmente de aproximadamente 1 |jg a aproximadamente 1000 |jg por 100 jl de composicion de vacuna, o de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 250 jg por 100 jl de composicion, o de aproximadamente 25 a aproximadamente 100 jg por 100 jl de composicion, o de aproximadamente 50 jg por 100 jl de composicion, o de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 10 jg por 100 jl, como se define en las reivindicaciones. Si un antfgeno particular no esta disponible facilmente o no esta disponible facilmente a un coste razonable, pueden usarse con buen efecto cantidades mas pequenas dentro de los intervalos anteriores, tal como dentro del intervalo de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 10 jg por 100 jl.

Algunas protemas marcadoras de tumores se comercializan sobre la base de unidades internacionales (UI), en lugar de jg. En un caso de este tipo, el antfgeno se proporciona normalmente en una cantidad dentro del intervalo de 1 UI a aproximadamente 10.000 UI por 100 jl de composicion de vacuna; o de aproximadamente 20 a aproximadamente 5.000 UI, por 100 jl de composicion; o de aproximadamente 500 UI a aproximadamente 1500 Ui por 100 jl de composicion o aproximadamente 1000 UI por 100 jl de composicion.

Por ejemplo, se proporciona PSA a una concentracion de aproximadamente 50 jg por 100 jl de composicion.

La vacuna, tambien comprende CEA; este antfgeno se proporciona a una concentracion de aproximadamente 2 jg por 100 jl de composicion. Se incluye protema CA 125 en la vacuna; normalmente se comercializa en forma de UI y se proporciona a una concentracion de aproximadamente 1000 UI, por 100 jl de composicion.

Pueden incluirse CA 15-3 y/o CA 27.29, cada una a una concentracion de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 250 jg por 100 jl de composicion.

Generalmente, la cantidad de un antfgeno particular utilizado en la vacuna permanece aproximadamente igual si el antfgeno es el unico antfgeno proporcionado en la vacuna o si es uno de varios antfgenos proporcionados en la composicion de vacuna. Por tanto, en el ejemplo de vacuna contra el cancer de prostata proporcionado en el parrafo anterior, si la composicion comprende uno de los antfgenos indicados o una combinacion de dos, tres, cuatro o cinco antfgenos, cada antfgeno se proporciona en una cantidad dentro de las directrices establecidas anteriormente. La presencia de antfgenos adicionales puede aumentar la probabilidad de una respuesta inmunitaria eficaz en el paciente.

De acuerdo con la presente invencion, el antfgeno o antfgenos purificados se combinan ffsicamente con pequenas cantidades de una combinacion de una interleucina y CSF. Tambien se describe una realizacion en la que la solucion de antfgeno y los adyuvantes (por ejemplo, la interleucina y el CSF) se administran por separado, pero los antfgenos y adyuvantes deben administrarse en el mismo sitio, juntos tan cerca en el tiempo como sea posible y con no mas de 2 horas de separacion. Normalmente, cada componente de la vacuna se presento en forma de una solucion fisiologicamente aceptable y despues se combinan cantidades deseadas de cada solucion para fabricar la composicion de vacuna final.

Las interleucinas existentes incluyen IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-12, IL-13, IL-14 e IL-15. De acuerdo con la presente invencion, la interleucina es IL-2.

Los factores estimulantes de colonias existentes incluyen CSF de granulocitos y macrofagos (GM-CSF), CSF de granulocitos (G-CSF) y CSF de macrofagos (M-CSF). De acuerdo con la presente invencion, el factor estimulante de colonias es GM-CSF.

Pueden usarse una unica interleucina y un unico factor estimulante de colonias en las composiciones del presente documento o una combinacion de dos o mas interleucinas y/o factores estimulantes de colonias. Aunque la eficacia de cada tipo de citocina es muy limitada si se administra sola, se ha descubierto que la administracion de ambos una interleucina y un CSF en combinacion con los antfgenos marcadores de tumores tiene un efecto sinergico.

De acuerdo con la presente invencion, una combinacion de citocinas es GM-CSF e IL-2. La IL-2 promueve la

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inmunidad de linfocitos T citotoxicos; el GM-CSF promueve el procesamiento de celulas dendnticas.

La composicion comprende aproximadamente 20.000 U (aproximadamente 1,2 jg) de la interleucina por 100 jl de composicion y aproximadamente 16,7 jg del CSF por 100 jl de composicion.

Normalmente, cada citocina se suministra en forma de un polvo liofilizado y se combina con un vehmulo lfquido fisiologicamente aceptable y se diluye en serie si es necesario para alcanzar la concentracion final deseada en 100 jl. La IL-2, por ejemplo, puede obtenerse con el nombre Proleukin® de Chiron Corporation, Emeryville, CA, en forma de un polvo liofilizado, 22*106 UI (1,3 mg)/vial. Si, por ejemplo, se combina con 1,1 ml de agua esteril y despues se diluye en serie 1:10, 1:10 (1:100 final), su concentracion final es de 20.000 UI (1,18 jg) en 100 jl. De forma similar, el GM-CSF puede obtenerse con el nombre Leukine® de Berlex Laboratories, Montville, NJ, en forma de un polvo liofilizado, 250 jg/vial. Si, por ejemplo, se combina con 1,5 ml de agua esteril, se obtendra una concentracion final de 16,7 jg por 100 jl.

Los vehmulos farmaceuticamente aceptables adecuados para las composiciones en el presente documento se refieren a los vehmulos fluidos que pueden inyectarse en un hospedador sin efectos adversos significativos. Los vehmulos farmaceuticamente aceptables adecuados conocidos en la tecnica incluyen, pero no se limitan a, agua esteril, solucion salina, glucosa y tampones o soluciones acuosos fisiologicamente aceptables, incluyendo solucion salina o solucion salina tamponada con fosfato. Los vehmulos pueden incluir agentes auxiliares que incluyen, pero no se limitan a, diluyentes, estabilizantes (es decir, azucares y aminoacidos), conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes tamponantes del pH, aditivos potenciadores de la viscosidad, colores y similares. Por ejemplo, los vehmulos adecuados para las protemas marcadoras de tumores y los adyuvantes incluyen tampones o soluciones acuosos fisiologicamente aceptables, que incluyen agua esteril, solucion salina, solucion salina tamponada con fosfato o solucion salina tamponada de Hank (HBSS).

Las cantidades apropiadas de los antfgenos o adyuvantes se mezclan con el vehmulo seleccionado. Todos los componentes de la vacuna pueden proporcionarse juntos en un solo vehmulo, pero si se desea, pueden proporcionarse uno o mas componentes en un vehmulo separado y administrarse en combinacion con los otros componentes.

En otro aspecto, la divulgacion proporciona metodos para el tratamiento del cancer que comprenden administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende una protema de superficie o excretada purificada que se asocia cualitativamente o cuantitativamente al tipo de cancer en combinacion con adyuvantes biologicos que comprenden una interleucina (IL) y un factor estimulante de colonias (CSF).

La vacuna puede administrarse mediante inyeccion. En otra realizacion, la vacuna se administra por via subcuticular, pero tambien puede administrarse por via intramuscular, por via subcutanea o por via intraperitoneal. La vacuna normalmente se administra en dosis de aproximadamente 0,3 ml a aproximadamente 1 ml, o de aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 0,7 ml, o de aproximadamente 0,5 ml, por dosis. Aunque una sola dosis de la vacuna puede ser util, muchas veces es deseable administrar de aproximadamente 3 a aproximadamente 12 dosis de la vacuna y o de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 dosis. Si se administra mas de una dosis, las dosis normalmente tienen al menos 7 dfas de separacion. Por ejemplo, las dosis normalmente pueden administrarse con de aproximadamente 7 a aproximadamente 90 dfas de separacion. Por ejemplo, una posologfa util es administrar tres dosis de la vacuna a intervalos semanales, despues administrar otras tres dosis a intervalos de cuatro semanas despues de eso (es decir, la vacuna se administra en las semanas 0, 1, 2, 6, 10 y 14). Si se desea, pueden administrarse vacunas de refuerzo mensuales o bimensuales durante un maximo de aproximadamente un ano despues de la terapia de inmunizacion inicial. Las vacunas de refuerzo pueden alternarse con las vacunas de refuerzo de interleucina, tal como, pero no limitada a, IL-2, para reforzar los linfocitos citolfticos naturales del paciente.

La inmunidad de linfocitos T y B de un paciente que recibe una vacuna de acuerdo con la presente divulgacion puede controlarse usando un ensayo de blastogenesis de linfocitos (vease Elliott, R. et al., Breast Cancer Research and Treatment 30:299-304 (1994); incorporado en el presente documento por referencia) antes de comenzar la administracion de la vacuna y, luego, durante y despues de la posologfa de la vacuna. Un aumento en el mdice de proliferacion demuestra un aumento de la respuesta inmunitaria a los antfgenos celulares y de protemas mediante el proceso de vacunacion. Un paciente que recibe una vacuna de acuerdo con la presente divulgacion tambien puede controlarse con un ensayo que mide protemas marcadoras de tumores circulantes. Una disminucion en las protemas marcadoras de tumores circulantes es un marcador sustituto para un aumento de la respuesta inmunitaria.

Las vacunas del presente documento son utiles para el tratamiento de cualquier tipo de cancer solido, incluyendo los canceres de prostata, de mama, de pulmon, de colon, de recto, de utero (incluyendo de cuello del utero y de endometrio), de ovario, de cavidad oral, de vejiga, de pancreas, de estomago, de hugado, de rinon, de piel, de testmulos y de tejido linfoide. Tambien pueden usarse para tratar la ascitis maligna y tumores hematopoyeticos, incluyendo leucemias y linfomas. Se seleccionan protemas marcadoras de tumores apropiadas y la vacuna se prepara usando las cantidades generales de los componentes de la vacuna como se ha expuesto anteriormente.

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En una realizacion, se proporcionan composiciones que son utiles como una vacuna contra el cancer de prostata que comprenden al menos una protema de superficie o excretada purificada asociada cualitativamente o cuantitativamente al cancer de prostata combinada con una combinacion de adyuvantes biologicos, en las que los adyuvantes consisten esencialmente en una interleucina y un factor estimulante de colonias. En una realizacion, al menos una protema de superficie o excretada purificada comprende PSA purificado, opcionalmente en combinacion con una o mas de otras protemas purificadas asociadas al cancer de prostata. En una realizacion relacionada, se proporciona un metodo para el tratamiento de una persona con cancer de prostata, que comprende inmunizar la persona con una composicion que comprende PSA purificado, opcionalmente en combinacion con una o mas de otras protemas purificadas asociadas al cancer de prostata y adyuvantes biologicos que comprende una interleucina y un factor estimulante de colonias. En una realizacion adicional relacionada, se proporciona un metodo para provocar en un ser humano con cancer de prostata una respuesta inmunoterapica, en el que la respuesta inmunoterapica da como resultado una disminucion del PSA circulante y la destruccion de las celulas tumorales, mediante la inmunizacion de la persona con una composicion que comprende PSA purificado, opcionalmente en combinacion con otras protemas purificadas asociadas al cancer de prostata y adyuvantes biologicos, en el que los adyuvantes consisten esencialmente en una interleucina y un factor estimulante de colonias. Las inmunizaciones pueden realizarse una sola vez o pueden repetirse. La inmunizacion se disena para aumentar la respuesta inmunoterapica a los antfgenos/protemas tumorales en un mmimo de aproximadamente el 50 % por encima de la inmunidad basal, disminuir el pSa circulante, y da como resultado la destruccion de celulas tumorales, el aumento de la supervivencia sin progresion y de la supervivencia global.

Tambien se describen composiciones utiles como una vacuna contra el cancer de mama, que comprenden cantidades terapeuticamente eficaces de protemas de superficie o excretadas purificadas asociadas cualitativamente o cuantitativamente al cancer de mama. Dichas composiciones pueden incluir CA 15-3, CA 125 o CEA, o una combinacion de los mismos, junto con la combinacion anterior de adyuvantes biologicos. En una realizacion relacionada, se proporciona un metodo para tratar a una persona con cancer de mama que comprende la inmunizacion de la persona con una composicion que comprende CA 15-3, CA 125 y CEA purificados, opcionalmente en combinacion con una o mas de otras protemas purificadas asociadas al cancer de mama y adyuvantes biologicos que comprenden una interleucina y un factor estimulante de colonias. Las inmunizaciones pueden realizarse una vez o pueden repetirse. La inmunizacion se disena para aumentar la respuesta inmunoterapica a los antfgenos/protemas tumorales en un mmimo de aproximadamente el 50 % por encima de la inmunidad basal, disminuir los antigenos tumorales circulantes, y da como resultado la destruccion de celulas tumorales, el aumento de la supervivencia sin progresion y de la supervivencia global.

Tambien se describen composiciones que comprenden cantidades terapeuticamente eficaces de protemas purificadas asociadas cualitativamente o cuantitativamente al cancer del sistema gastrointestinal, de pulmon, de hngado, de pancreas, de tiroides, de ovarios, de testmulos, del sistema colorrectal, de endometrio, de vejiga o del sistema nervioso, o melanoma, leucemia o linfoma, y la administracion de estas composiciones a personas que padecen dicho cancer para desencadenar una respuesta inmunitaria al cancer.

La divulgacion se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos, que no pretenden ser limitantes.

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1

Se realizo un estudio retrospectivo para determinar la relacion entre la respuesta inmunitaria y la supervivencia global. La respuesta inmunitaria se midio con el LBA, como se ha analizado anteriormente.

El estudio se realizo en pacientes con cancer de mama en fase temprana con inmunidad deprimida que habfan recibido una vacuna contra el cancer de mama en el contexto adyuvante. Los pacientes se sometieron a ensayo para determinar respuestas inmunitarias contra celulas autologas, celulas alogenicas y antfgenos de protema. Los pacientes con inmunidad deprimida, una relacion de menos de 1,5 (determinada por analisis del punto de corte del conjunto de datos (Head, et al., Ann. NY Acad. Sci, 1993; 690: 340-342) del presente ensayo LBA modificado) en el LBA, se vacunaron con un mmimo de seis vacunas que conteman celulas de cancer de mama autologas, celulas de cancer de mama alogenicas (celulas MCF-7), antfgeno CA 15-3, antfgeno CA 125, antfgeno CEA y adyuvantes biologicos (IL-2 y GM-CSF). Se realizo un segundo LBA de 2 a 4 semanas despues de la 6a vacunacion. El seguimiento se hizo durante hasta 10 anos. La figura 1 es la curva de supervivencia global de Kaplan-Meier en pacientes que murieron de otras causas censuradas. La supervivencia global de Kaplan Meier calculada (es decir, el porcentaje de supervivencia a lo largo de un periodo de tiempo continuo) para los pacientes a los 10 anos es del 59 % en los pacientes deprimidos con tratamiento convencional y una supervivencia del 95 % para los pacientes con inmunidad a sus propios antfgenos asociados a tumores en un LBA en el cuadro clmico inicial con tratamiento convencional (controles historicos para el estudio). Se vacunaron pacientes con inmunidad deprimida que caredan de inmunidad a sus propios antfgenos tumorales en el cuadro clmico inicial como se ha indicado anteriormente, y esto condujo a un aumento en la supervivencia global del 59 % al 79 % a los 10 anos. Los grupos se emparejaron bien por edad, estado menopausico, tamano del tumor, estado ganglionar, estadio de la enfermedad, estado del receptor de estrogeno, estado del receptor de progesterona y terapia antihormonal.

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Este estudio muestra que los pacientes con inmunidad deprimida tienen una supervivencia global mas baja y un mal pronostico a largo plazo cuando se comparan con pacientes con inmunidad normal y, adicionalmente, que la mejora de la respuesta inmunitaria a traves de la vacunacion mejora la supervivencia global.

Ademas, se sabe en general en la tecnica que un aumento de la respuesta inmunitaria se correlaciona con el aumento de la supervivencia global. Por ejemplo, Hsueh et al. (J. Clin. Oncol., 1 de diciembre de 2002; 20(23): 454954), incorporado en el presente documento por referencia, indica que "la supervivencia despues de la inmunoterapia con vacunas se correlaciono significativamente con la respuesta inmunitaria DTH (hipersensibilidad de tipo retardado, por sus siglas en ingles) a la vacuna pero no con un antigeno de control..." (pag. 4553, primer parrafo del analisis). Ademas, Galon et al. (Science, 29 de septiembre de 2006; 313:1960-1964), incorporado en el presente documento por referencia, informo que el "... el tiempo hasta la reaparicion y la supervivencia global se rigen en gran parte por el estado de la respuesta inmunitaria adaptativa local" (pag. 1963, ultimo parrafo).

Por tanto, a la vez se sabe en la tecnica y se demuestra por los datos de la Figura 1, que una respuesta inmunitaria mejorada se correlaciona con la supervivencia global en pacientes con cancer.

Ejemplo 1 Preparacion de la composicion de PSA

Una composicion de acuerdo con la presente divulgacion se fabrico de acuerdo con el siguiente procedimiento:

1. Un mg de PSA (Fitzgerald Industries International, Concord, MA, n.° del catalogo 30-AP15E) se diluyo en 2,0 ml de agua esteril USP. La solucion se esterilizo por filtracion con un filtro de 0,22 micrometros. Se congelaron partes alfcuotas esteriles de 100 pl a -80 °C hasta que se necesitaron.

2. Se diluyeron 500 pg de CEA (Fitzgerald Industries International, Concord, MA, n.° del catalogo 30-AC30) en 25 ml de agua esteril USP y la solucion resultante se esterilizo por filtracion con un filtro de 0,22 micrometros. Se congelaron partes alfcuotas esteriles de 100 pl a -80 °C hasta que se necesitaron.

3. Se diluyeron 20.000 unidades de CA 125 (Fitzgerald Industries International, Concord, MA, n.° del catalogo 30- AC11) en 2,0 ml de agua esteril USP y la solucion resultante se esterilizo por filtracion con un filtro de 0,22 micrometros. Se congelaron partes alfcuotas esteriles de 100 pl a -80 °C hasta que se necesitaron.

4. Se reconstituyeron 22 millones de unidades de IL-2 (Proleukin, Chiron Corporation, Emeryville, CA) en 1,1 ml de agua esteril USP, despues se diluyeron 1:10 con agua esteril USP. La solucion resultante se diluyo 1:10 de nuevo para proporcionar una concentracion final de 20.000 unidades por 100 pl. Se congelaron partes alrouotas esteriles de 100 pl a -80 °C hasta que se necesitaron.

5. Un vial de 250 pg de GM-CSF (Berlex Laboratories, Montville, NJ) se reconstituyo con 1,5 ml de agua esteril USP para proporcionar una concentracion final de 16,7 pg en 100 pl. La solucion se refrigero a 4 °C.

6. Para preparar una dosis de la vacuna, se llevaron a temperatura ambiente partes alrouotas congeladas de los siguientes: 100 pl de cada uno de los tres antfgenos (PSA, CEA y CA 125) y 100 pl de cada uno de los dos adyuvantes (IL-2 y GM-CSF). Despues, se introdujeron 100 pl de cada componente en una jeringuilla de 1 ml con una aguja de calibre 26 de una pulgada. El volumen total final fue de 0,5 ml.

Cada dosis de vacuna contema 50 pg de PSA; 2 pg CEA; 1000 UI de CA 125; 20.000 unidades de IL-2; y 16,7 pg de GM-CSF.

Ejemplo 2

A trece pacientes con cancer de prostata confirmado por biopsia se les administro subcuticularmente a las 0, 1, 2, 6, 10 y 14 semanas un curso inicial de 6 vacunaciones, conteniendo cada dosis PSA, CEA, CA 125, IL-2 y GM-CSF, preparadas como en el Ejemplo 1. Se determino el nivel de PSA serico de cada paciente antes de que se iniciara la primera vacuna. Durante el periodo de vacunacion, los pacientes no recibieron ninguna otra terapia simultanea (es decir, cirugfa, hormonas, radiacion, semillas radiactivas o quimioterapia).

El protocolo de tratamiento se diseno de acuerdo con el esquema contenido en Gehan (vease Gehan, E., J. Chron. Dis. 13(4), 346-353 (1961); incorporado en el presente documento por referencia) para determinar las tasas de respuesta mrnimas para los farmacos oncologicos en ensayos clrnicos de fase I/II de un solo grupo. Brevemente, el metodo de Gehan calculo el tamano mrnimo de muestra requerido sin ninguna respuesta para finalizar el estudio porque no se alcanzara una tasa de respuesta minima predeterminada (normalmente del 15 al 20 %). El nivel de confianza se fijo en el 95 % y, de este modo, el estudio se finalizana antes de tiempo si habfa una confianza del 95 % de que la tasa de respuesta era menor que la tasa de respuesta objetivo del 15 al 20 %. Por tanto, si 14 pacientes para la tasa de respuesta del 20 % o 19 pacientes para la tasa de respuesta del 15 % se tratan sin ninguna respuesta, entonces el farmaco es inactivo. Si un paciente responde, entonces es necesario tratar mas pacientes para determinar una tasa de respuesta precisa.

Los resultados de la administracion de la vacuna contra el cancer de prostata se proporcionan en la Tabla 2 a continuacion:

5

10

15

20

25

30

35

40

Tabla 2

DIAGNOSTICO

PSA ANTES DE LA VACUNA PSA DESPUES DE 6 VACUNAS PSA DESPUES DE 12 VACUNAS ULTIMO PSA (meses)

Cancer de prostata

4,10 2,40 2,50 3,50 (80)

Cancer de prostata

1,40 0,60 0,66 0,90 (92)

Cancer de prostata

6,80 6,40 solo 6 vacunas ---

Cancer de prostata

4,90 2,80 2,40 2,97 (42)

Cancer de prostata

6,20 5,80 1,90 2,20 (65)

Cancer de prostata

4,20 3,50 4,40 3,90 (18)

Cancer de prostata

14,60 5,50 6,50 7,7 (49)

Cancer de prostata

7,6 13,70 solo 4 vacunas —

Cancer de prostata

4,00 4,93 implantes de semillas ---

Cancer de prostata

8,95 10,60 17,19 Zoladex, semillas

Cancer de prostata

7,20 5,41 7,30 6,00 (28)

Cancer de prostata

4,55 7,02 4,17 10,80 (21)

Cancer de prostata

5,40 10,40 Lupron ---

El nivel de PSA del paciente n.° 8 paso de 7,6 a 13,7 despues de la cuarta vacunacion y se retiro del estudio para buscar otra terapia. El nivel de PSA serico de cada uno de los 12 pacientes de cancer de prostata restantes se determino 3-4 semanas despues de la 6a vacunacion. Como se muestra en la Tabla 2, hubo una disminucion en el nivel de PSA serico en 8 de los 12 pacientes despues de la 6a vacunacion.

Un paciente (paciente n.° 3), cuyo PSA habfa cafdo de 6,8 a 6,4 y que previamente habfa recibido radioterapia (el unico paciente tratado anteriormente), eligio retirarse del estudio al final de este periodo de vacunacion inicial y se sometio a una prostatectoirna radical. Dos pacientes con PSA en aumento despues de 6 vacunas eligieron tener una terapia convencional adicional (uno paciente recibio implantes de semillas y el otro Lupron). Nueve de los 13 pacientes originales recibieron 3 dosis adicionales de la vacuna alternadas con dosis de IL-2 (11 millones de unidades) para estimular sus linfocitos citolfticos naturales durante los 6 meses siguientes a las vacunaciones iniciales. Uno de estos pacientes con un PSA en aumento eligio tomar Zoladex e implantes de semillas. Se siguieron ocho pacientes durante 18-92 meses (la variacion en el seguimiento se debe a la fecha de la vacunacion inicial de cada paciente (los pacientes se incluyeron en el ensayo en diferentes momentos) y los pacientes que se pierdan durante el seguimiento). El valor de PSA medio para estos 8 pacientes fue inicialmente de 5,9; disminuyo a 4,1 despues de las 6 vacunas iniciales, disminuyo aun mas a 3,7 despues de las 12 vacunas y fue de 4,7 despues de un tiempo medio de seguimiento de 49 meses (mediana de 45,5 meses).

Un paciente, cuyo PSA disminuyo de 4,1 a un normal 2,4 ng/ml despues de la vacunacion, se volvio a biopsiar despues de 18 y 30 meses sin que se encontrara cancer y permanecio sin enfermedad y estable durante mas de 10 anos. Otros dos pacientes tambien se volvieron a biopsiar posteriormente al proceso de vacunacion: uno no tema ninguna enfermedad en la muestra de biopsia a los 24 meses y el otro tema una disminucion muy significativa en el porcentaje de muestra de biopsia que contema celulas cancerosas (del 55 % al 1 %) a los 16 meses.

La vacuna contra el cancer de prostata, descrita anteriormente, tuvo respuestas inmunitarias (como se demuestra por el PSA serico disminuido en 8 de 12 pacientes (67 %) despues de seis vacunas y 6 de 9 pacientes (67 %) despues de 12 vacunas. De los 13 pacientes originales que se inscribieron en el ensayo, 7 pacientes (54 %) tuvieron niveles de PSA inferiores que en el cuadro clmico inicial despues de una mediana de 45,5 meses (intervalo de 18 a 80 meses) de seguimiento, lo que es indicativo de que no hay ninguna progresion bioqmmica de su enfermedad (ningun aumento de la cantidad de PSA serico). Estas tasas de respuesta, segun se miden por disminuciones de la concentracion serica del marcador tumoral biologico PSA, se estiman en un 50 % o mejor y, por tanto, reflejan una tasa de respuesta muy significativa, de acuerdo con el protocolo de Gehan. Existe un ligero aumento en el PSA de muchos de los pacientes de cancer de prostata con el tiempo, y esto senala la necesidad de vacunas de refuerzo despues de las 12 vacunas iniciales.

Ejemplo 3

Las vacunas proporcionadas en el presente documento tambien se usan para tratar pacientes con otras formas de cancer. Se fabrican composiciones de vacuna usando los siguientes componentes siguiendo el procedimiento general del Ejemplo 1, como se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3.

Cancer

Marcador 1 Marcador 2 Marcador 3 IL CSF

de mama

50 pg de CEA 50 pg de CA 15-3 1000 UI de CA 125 20.000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

gastrointestinal

50 pg de CEA 50 pg de CA 19-9 50 pg de alfa fetoprotema 20.000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

de higado

50 pg de CEA 50 pg de CA 19-9 50 pg de alfa fetoprotema 20.000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

de pancreas

50 pg de CEA 50 pg de CA 19-9 50 pg de alfa fetoprotema 20.000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

de ovario

1000 UI de CA 125 50 pg de alfa fetoprotema 20.000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

colorrectal

50 pg de CEA 50 pg de CA 19-9 20 000 unidades de IL-2 16,7 pg de GM- CSF

Claims (5)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composicion que comprende aproximadamente 50 |jg de antfgeno prostatico espedfico (PSA), aproximadamente 2 jg de CEA, aproximadamente 1000 UI de CA 125, aproximadamente 20.000 unidades de IL-2 y

   5 aproximadamente 16,7 jg de GM-CSF, por 100 jl de la composicion.
2. 2. La composicion de la reivindicacion 1, que comprende adicionalmente un veldculo farmaceuticamente aceptable.
3. 3. La composicion de la reivindicacion 2, en la que el veldculo farmaceuticamente aceptable comprende un tampon o 10 una solucion acuosa fisiologicamente aceptables.
4. 4. La composicion de la reivindicacion 2, en la que el veldculo farmaceuticamente aceptable comprende agua esteril, solucion salina, solucion salina tamponada con fosfato o solucion salina tamponada de Hank (HBSS).

   15 5. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en un metodo para tratar

   el cancer de prostata.
5. 6. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en un metodo para inducir una respuesta inmunoterapica en un individuo que tiene cancer de prostata.

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