ES2627998T3 - Nanopartículas fluorescentes - Google Patents
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Abstract
Nanopartículas fluorescentes que contienen un núcleo inorgánico, una capa de pasivación que contiene un componente de imidazol y ligandos específicos para una molécula diana, con un diámetro hidrodinámico del núcleo inorgánico con la capa de pasivación de no más de 15 nm, preferiblemente de no más de 10 nm, de modo particular preferiblemente de no más de 5 nm, para el uso como marcación en el diagnóstico de tejidos para discriminar diferentes tipos de tejidos en intervenciones quirúrgicas, endoscópicas o mínimamente invasivas, presentando las nanopartículas una emisión inferior a 700 nm.
Description
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La combinación de diámetro hidrodinámico reducido, el cual conduce a las mencionadas elevadas velocidades de difusión y de perfusión, junto con las ya descritas propiedades y mejoramientos y la elevada intensidad de fluorescencia, sobre todo en el intervalo de luz del rojo visible da a las nanopartículas de acuerdo con la invención un diagnóstico sencillo, de múltiples usos para una discriminación selectiva y exacta de formas de tejido in vivo. Estas posibilidades en combinación con marcadores biológicos específicos para tejidos sirven sobre todo para diferenciar tejidos anormales, (pre)cancerosos de tejidos normales, lo cual durante una intervención operativa soporta una evaluación visual para la disección más precisa de tumores. Las nanopartículas que pueden usarse de acuerdo con la invención sirven con ello como agente de contraste.
De acuerdo con la presente invención, las nanopartículas pueden ser usadas bien sea como diagnóstico, teranóstico y/o terapéutico in vitro o in vivo. Para ello pueden administrarse localmente (por ejemplo intratumoral, intramuscular o en tejidos/órganos disponibles para operaciones) o también de modo sistémico (por ejemplo intravenoso). La administración local/tópica puede ser provista como líquido, solución para atomización, gel, espuma, crema, parche activo. Esto puede ser preferido en particular en el tratamiento/diagnóstico de órganos huecos. También es posible una ingestión oral, por ejemplo como jugo o en forma de comprimidos o cápsulas. Igualmente es posible una inhalación (por ejemplo atomizado). Está provista una aplicación anal mediante supositorios. En una variante, las nanopartículas pueden ser implantadas en forma de depósito.
Las nanopartículas pueden ser usadas como diagnóstico sobre todo en intervenciones quirúrgicas. Así mismo, pueden usarse en procedimientos mínimamente invasivos (por ejemplo endoscopia, laparoscopia). Es sensata una combinación con procedimientos que forman imagen como PET, MRT, CT etc.
Pueden ser objetivo de las investigaciones todos los tejidos/órganos disponibles del paciente, sobre todo la piel, órganos huecos (por ejemplo en el tracto gastrointestinal, -urogenital, -respiratorio) o también zonas disponibles externas de los órganos de los sentidos y también el sistema cardiovascular.
También es posible el uso como diagnóstico in vitro, así por ejemplo la inmunohistoquímica o FACS así como ELISA. Es particularmente ventajosa una combinación de diagnóstico in vivo e in vitro (por ejemplo material de biopsia).
En tanto las nanopartículas pueden usarse para propósitos de terapia de acuerdo con la invención, al menos algunos de los ligandos de nanopartículas pueden portar moléculas efectoras o principios activos, es decir representan efectores. Al respecto, un efector es un ligando con una función elegida. De modo ventajoso, las nanopartículas portan tanto ligandos específicos para la localización focalizada de la nanopartícula en el cuerpo o bien en el tejido, como también un ligando con molécula efectora.
El efector puede permanecer unido a las nanopartículas o puede ser escindible o separable o liberable. Por ejemplo, el efector puede ejecutar su función mediante una activación/desactivación de un receptor, un enmascaramiento de estructuras (superficies), la activación del sistema inmune ("cebado"), la modulación de rutas de señal, la activación o inactivación de una enzima, la terapia de genes (por ejemplo mediante suministro dirigido de plásmidos o siARN ), el suministro dirigido de toxinas/quimioterapéuticos/citoestáticos o el efecto estimulante sobre por ejemplo metabolismo, formación de hormonas, entre otros. También es posible la protección de las células, por ejemplo células B que producen insulina.
Ejemplo de realización:
Experimento in vivo: experimento animal con tumores xenoinjertos HT29 en ratones imberbes con inyección intratumoral de complejos anticuerpo de acuerdo con la invención
En un experimento in vivo en ratones con tumores xenoinjertos se mostró una "diana de tumor" específico de conjugados de anticuerpo de acuerdo con la invención. Para ello en ratones imberbes (sin timo y por ello inmunosuprimidos) se inyectaron de modo subcutáneo células cancerosas de intestino grueso humano de la línea de células HT29, que formaron tumores sólidos después de un periodo de crecimiento de 3 semanas.
Para una marcación selectiva del tumor se preparó un complejo de anticuerpo de acuerdo con la invención, o bien un conjugado de neutravidina de acuerdo con la invención, con un anticuerpo monoclonal biotinilado unido a él. Este anticuerpo monoclonal está dirigido contra el transportador de glucosa 1 (GLUT1) de antígeno asociado con tumor ubicado en la membrana, el cual se expresa en muchas formas de carcinoma colorectal humano.
Después de inyección intratumoral de los complejos, los tumores fueron reconocidos visualmente ya bajo excitación UV fluorescente roja. Después de hasta 48 h luego de inyección pudieron detectarse los complejos de acuerdo con la invención en criocortes producidos de los tumores.
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