ES2597441T3 - 2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as inhibitors of syk or JAK kinases - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula I:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: D1 es cicloalquilo C3-8, opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, amino, hidroxi, alquilcarbonilo C1-8, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino C1- 8, arilalcoxicarbonilamino C1-8, fenilo y heterociclil-alquileno C1-8; R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-8, amino, aminocarbonilo, hidroxilo, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, oxo, ciano, alcoxicarbonilo C1-8, cicloalquilo C3-8, arilo y heterociclilo; y cada heterociclilo está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, halo, oxo, amino, alcoxi C1-8, alquilcarbonilo C1-8, arilalcoxicarbonilo C1-8, aminocarbonilo, arilalquilenocarbonilo C1-8 y alquilsulfonilo C1-8; Y1 se selecciona entre el grupo que consiste en (a) arilo; opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halógeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8; (b) heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halógeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8; R2 es un heterociclilo o heteroarilo sustituido con al menos un grupo, R3, seleccionado entre el grupo que consiste en aminoalquil C1-8-, alcoxi C1-8-alquil C1-8-, oxo-, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8 y heterociclilsulfonilo; y en la que R2 está opcionalmente sustituido adicionalmente con 1 a 2 sustituyentes, R4c, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, halo, aminocarbonilo, oxo, hidroxilo, aminoalquileno C1-8, alcoxi C1-8-alquileno C1-8, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8, heterociclilsulfonilo, cicloalquilo C3-8, alquilcicloalquileno C1-8, heteroarilo; donde cicloalquilo se refiere a un grupo hidrocarburo mono o policíclico alquilo, alquenilo o alquinilo que puede formar un anillo puenteado o un anillo espiro, y que puede tener uno o más dobles o triples enlaces.A compound having the formula I: ** Formula ** or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein: D1 is C3-8 cycloalkyl, optionally substituted with 1 to 4 substituents independently selected from the group consisting of: C1-alkyl -8, amino, hydroxy, C1-8 alkylcarbonyl, aminocarbonyl, C1-8 alkoxycarbonylamino, C1-8 arylalkoxycarbonylamino, phenyl and heterocyclyl-C1-8alkylene; R1 is selected from the group consisting of H, C1-8alkyl, amino, aminocarbonyl, hydroxyl, C1-8alkoxy, halo C1-8alkyl, C2-8alkenyl, C2-8alkynyl, oxo, cyano, C1-8alkoxycarbonyl , C3-8 cycloalkyl, aryl and heterocyclyl; and each heterocyclyl is optionally substituted with 1 to 4 substituents selected from the group consisting of: C1-8-alkyl, halo, oxo, amino, C1-8-alkoxy, C1-8-alkylcarbonyl, aminocarbonyl, arylalkyl-C1-8-carbonylcarbonyl 8 and C1-8 alkylsulfonyl; Y1 is selected from the group consisting of (a) aryl; optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, C1-8 alkoxy and alkylsulfonyl C1-8; (b) heteroaryl, optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8-alkyl, C1-8-alkoxy-C1-8-alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, alkoxy C1-8 and C1-8 alkylsulfonyl; R2 is a heterocyclyl or heteroaryl substituted with at least one group, R3, selected from the group consisting of aminoalkyl C1-8-, C1-8-alkoxy-C1-8-alkyl, oxo-, C1-8-alkylcarbonyl, C3-cycloalkylcarbonyl 8, heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C1-8 alkylsulfonyl, C3-8 cycloalkylsulfonyl, and heterocyclyl sulphonyl; and wherein R2 is optionally further substituted by 1 to 2 substituents, R4c, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy, halo, aminocarbonyl, oxo, hydroxyl, C1-8 aminoalkylene, C1 alkoxy -8-C1-8 alkylene, C1-8 alkylcarbonyl, C3-8 cycloalkylcarbonyl, heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C1-8 alkylsulfonyl, C3-8 cycloalkylsulfonyl, heterocyclylsulfonyl, C3-8 alkylcycloalkylene C1-8, heteroaryl; where cycloalkyl refers to an alkyl, alkenyl or alkynyl mono or polycyclic hydrocarbon group which can form a bridged ring or a spiro ring, and which can have one or more double or triple bonds.

Description

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

DESCRIPCIONDESCRIPTION

2,6-diamino-pirimidin-5-il-carboxamidas como inhibidores de las syk o JAK quinasas Antecedentes de la invencion Campo de la invencion2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as inhibitors of syk or JAK kinases Background of the invention Field of the invention

La presente invencion se refiere a compuestos de pirimidina-5-carboxamida que actuan como inhibidores de la tirosina quinasa del bazo (syk) y/o las JAK quinasas. Esta invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas que contienen compuestos de pirimidina-5-carboxamida y a los metodos de uso de los compuestos o composiciones para tratar una afeccion caracterizada por trombosis no deseada. La invencion tambien se refiere a metodos para preparar los compuestos descritos en el presente documento.The present invention relates to pyrimidine-5-carboxamide compounds that act as inhibitors of spleen tyrosine kinase (syk) and / or JAK kinases. This invention also relates to pharmaceutical compositions containing pyrimidine-5-carboxamide compounds and methods of using the compounds or compositions to treat a condition characterized by unwanted thrombosis. The invention also relates to methods for preparing the compounds described herein.

Estado de la tecnicaState of the art

Las protelna quinasas constituyen una gran familia de enzimas relacionadas estructuralmente que son responsables del control de una diversidad de procesos de transduccion de senales dentro de las celulas (vease, por ejemplo, Hardie y Hanks, The Protein Kinase Facts Book, I y II, Academic Press, San Diego, Calif., 1995). Se piensa que las protelna quinasas han evolucionado a partir de un gen ancestral comun debido a la conservacion de su estructura y funcion catalltica. Casi todas las quinasas contienen un dominio catalltico similar de 250-300 aminoacidos. Las quinasas se pueden categorizar en familias por los sustratos que fosforilan (por ejemplo, protelna-tirosina, protelna- serina/treonina, llpidos, etc.). Se han identificado motivos de secuencia que en general corresponden con cada una de estas familias (vease, por ejemplo, Hanks y Hunter, (1995), FASEB J. 9: 576-596; Knighton et al., (1991), Science 253: 407-414; Hiles et al., (1992), Cell 70: 419-429; Kunz et al., (1993), Cell 73: 585-596; Garcia-Bustos et al., (1994), EMBO J. 13: 2352-2361).Protelna kinases constitute a large family of structurally related enzymes that are responsible for controlling a variety of signal transduction processes within cells (see, for example, Hardie and Hanks, The Protein Kinase Facts Book, I and II, Academic Press, San Diego, Calif., 1995). It is thought that protelna kinases have evolved from a common ancestral gene due to the conservation of their structure and catalytic function. Almost all kinases contain a similar catalytic domain of 250-300 amino acids. The kinases can be categorized into families by the phosphorylating substrates (for example, prothena-tyrosine, prothenatin / threonine, lipids, etc.). Sequence motifs have been identified that generally correspond to each of these families (see, for example, Hanks and Hunter, (1995), FASEB J. 9: 576-596; Knighton et al., (1991), Science 253 : 407-414; Hiles et al., (1992), Cell 70: 419-429; Kunz et al., (1993), Cell 73: 585-596; Garcia-Bustos et al., (1994), EMBO J 13: 2352-2361).

Muchas enfermedades estan asociadas con respuestas celulares anomalas desencadenadas por sucesos mediados por protelna quinasas. Estas enfermedades incluyen enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias, enfermedades oseas, enfermedades metabolicas, enfermedades neurologicas y neurodegenerativas, cancer, enfermedades cardiovasculares, alergias, asma, enfermedad de Alzheimer y enfermedades relacionadas con las hormonas. En consecuencia, ha habido esfuerzos sustanciales en la qulmica de farmacos para encontrar inhibidores de las protelna quinasas para su uso como agentes terapeuticos.Many diseases are associated with anomalous cellular responses triggered by events mediated by protelna kinases. These diseases include autoimmune diseases, inflammatory diseases, bone diseases, metabolic diseases, neurological and neurodegenerative diseases, cancer, cardiovascular diseases, allergies, asthma, Alzheimer's disease and hormone-related diseases. Consequently, there have been substantial efforts in drug chemistry to find inhibitors of prothena kinases for use as therapeutic agents.

La senalizacion mediada por motivos de activacion de inmunorreceptores por tirosina (ITAM) ha emergido como un suceso principal en las rutas de senalizacion responsables de patologlas humanas. La senalizacion mediada por ITAM es responsable de la retransmision de senales de activacion iniciadas en receptores inmunitarios clasicos tales como los receptores de linfocitos T, receptores de linfocitos B, receptores Fc, en celulas inmunitarias y en GPVI y FcYRIIa en las plaquetas hacia moleculas intracelulares aguas abajo tales como syk y ZAP-70 (Underhill, D.M y Goodridge, H. S., Trends Immunol., 28: 66-73, 2007).Signaling mediated on the grounds of activation of tyrosine immunoreceptors (ITAM) has emerged as a major event in signaling pathways responsible for human pathologies. ITAM-mediated signaling is responsible for the retransmission of activation signals initiated in classical immune receptors such as T-lymphocyte receptors, B-lymphocyte receptors, Fc receptors, in immune cells and in GPVI and FcYRIIa in platelets to intracellular water molecules. below such as syk and ZAP-70 (Underhill, DM and Goodridge, HS, Trends Immunol., 28: 66-73, 2007).

La union de un ligando a un receptor que contiene ITAM desencadena sucesos de senalizacion que permiten la incorporacion de protelnas de una familia de tirosina quinasas no receptoras denominadas la familia Src. Estas quinasas fosforilan restos de tirosina dentro de la secuencia ITAM, una region con la que interactuan los dominios SH2 en tandem en ya sea syk o ZAP-70.The binding of a ligand to an ITAM-containing receptor triggers signaling events that allow the incorporation of proteins from a family of non-receptor tyrosine kinases called the Src family. These kinases phosphorylate tyrosine residues within the ITAM sequence, a region with which the SH2 domains interact in tandem in either syk or ZAP-70.

Syk, junto con Zap-70, es un miembro de la familia syk de protelnas tirosina quinasas. La interaccion de syk o de zAP-70 con secuencias de ITAM difosforiladas induce un cambio de la conformacion en las quinasas que permite la fosforilacion de tirosinas en la propia quinasa. Los miembros de la familia Syk fosforilados activan una multitud de protelnas de la ruta de senalizacion aguas abajo, que incluye la fosfoprotelna especlfica de leucocitos de 76 kDa (SLP-76), el Enlazador de Activacion de linfocitos T (LAT) y la PLC (fosfolipasa C) y2, que contienen el dominio de homologla con Src 2 (SH2).Syk, along with Zap-70, is a member of the syk family of protein tyrosine kinases. The interaction of syk or zAP-70 with diphosphorylated ITAM sequences induces a change in kinase conformation that allows tyrosine phosphorylation in the kinase itself. The members of the phosphorylated Syk family activate a multitude of downstream signal pathway proteins, which includes the specific 76 kDa leukocyte phosphoproteln (SLP-76), the T-lymphocyte Activation Linker (LAT) and the PLC ( phospholipase C) and 2, which contain the homologla domain with Src 2 (SH2).

Las patologlas humanas atribuidas a la senalizacion mediada por ITAM disfuncional incluye enfermedades autoinmunitarias tales como artritis reumatoide, lupus sistemico, esclerosis multiple, anemia hemolltica, purpura trombocitopenica inmunitaria y trombocitopenia inducida por heparina, y arteriosclerosis. Cabe destacar que se piensa que muchas de las enfermedades anteriormente mencionadas se producen a traves del entrecruzamiento de receptores Fc mediante anticuerpos que, a traves de syk, activan una cascada de senalizacion en mastocitos, basofilos y otras celulas inmunitarias, lo que da como resultado la liberacion de mediadores celulares responsables de reacciones inflamatorias. La liberacion de mediadores y la produccion de citocinas en reacciones alergicas e inflamatorias dependientes de la estimulacion por IgE a partir de mastocitos y de basofilos se puede controlar mediante la inhibicion de la actividad tirosina quinasa de syk (Rossi, A.B. et al., J Allergy Clin Immunol., 118: 749755, 2006). En la trombocitopenia inmunitaria, el bazo retira anticuerpos unidos a las plaquetas por un proceso mediado por receptor Fc/ITAM/syk (Crow, A.R. et al., Blood, 106: resumen 2165, 2005). La trombocitopenia inducida por farmacos, provocada por complejos inmunitarios de heparina-factor de plaquetas 4 que activan al FcYRIIa de plaquetas, tambien implica la senalizacion de syk aguas abajo de la interaccion del receptor (Reilly, M.P., Blood, 98:Human pathologies attributed to dysfunctional ITAM-mediated signaling include autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, systemic lupus, multiple sclerosis, hemolytic anemia, immune thrombocytopenic purpura and heparin-induced thrombocytopenia, and arteriosclerosis. It should be noted that many of the aforementioned diseases are thought to occur through the cross-linking of Fc receptors by means of antibodies that, through syk, activate a signaling cascade in mast cells, basophils and other immune cells, which results in release of cell mediators responsible for inflammatory reactions. The release of mediators and the production of cytokines in allergic and inflammatory reactions dependent on IgE stimulation from mast cells and basophils can be controlled by inhibition of syk tyrosine kinase activity (Rossi, AB et al., J Allergy Clin Immunol., 118: 749755, 2006). In immune thrombocytopenia, the spleen removes antibodies bound to platelets by a process mediated by Fc / ITAM / syk receptor (Crow, A.R. et al., Blood, 106: summary 2165, 2005). Drug-induced thrombocytopenia, caused by immune complexes of heparin-platelet factor 4 that activate platelet FcYRIIa, also involves signaling syk downstream of receptor interaction (Reilly, M.P., Blood, 98:

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

2442-2447, 2001).2442-2447, 2001).

Los agonistas de plaquetas inducen la senalizacion de integrinas dentro-fuera dando como resultado la union de fibrinogeno y la agregacion de plaquetas. Esto inicia la senalizacion dentro-fuera que produce estimulacion adicional de las plaquetas. Syk se activa durante ambas fases de la senalizacion de integrinas y la inhibicion de syk se ha demostrado que inhibe la adhesion de plaquetas a protelnas inmovilizadas (Law, D.A. et al., Blood, 93: 2645-2652, 1999). La liberacion de acido araquidonico y de serotonina, y la agregacion de plaquetas inducida por colageno, esta claramente inhibida en plaquetas obtenidas de raton deficiente en syk (Poole, A. et al., EMBO J., 16: 2333-2341, 1997). Por lo tanto, los inhibidores de syk tambien poseen accion de anticoagulacion.Platelet agonists induce signaling of in-out integrins resulting in fibrinogen binding and platelet aggregation. This initiates the in-out signaling that produces additional platelet stimulation. Syk is activated during both phases of integrin signaling and inhibition of syk has been shown to inhibit platelet adhesion to immobilized proteins (Law, D.A. et al., Blood, 93: 2645-2652, 1999). The release of arachidonic acid and serotonin, and the aggregation of platelets induced by collagen, is clearly inhibited in platelets obtained from mice deficient in syk (Poole, A. et al., EMBO J., 16: 2333-2341, 1997) . Therefore, syk inhibitors also possess anticoagulation action.

Debido al papel que desempena syk en las activaciones de plaquetas inducidas por Ig, es probable que sea importante en la arteriosclerosis y la reestenosis. La arteriosclerosis es una clase de enfermedad caracterizada por el engrosamiento y el endurecimiento de las paredes arteriales de los vasos sangulneos. Aunque todos los vasos sangulneos son susceptibles a esta seria afeccion degenerativa, la aorta y las arterias coronarias que sirven al corazon son las mas frecuentemente afectadas. La arteriosclerosis tiene una profunda importancia cllnica puesto que puede aumentar el riesgo de ataques cardiacos, infartos de miocardio, ictus y aneurismas.Because of the role that syk plays in Ig-induced platelet activations, it is likely to be important in atherosclerosis and restenosis. Arteriosclerosis is a class of disease characterized by thickening and hardening of the arterial walls of the blood vessels. Although all blood vessels are susceptible to this serious degenerative condition, the aorta and coronary arteries that serve the heart are the most frequently affected. Arteriosclerosis is of deep clinical importance since it can increase the risk of heart attacks, myocardial infarctions, stroke and aneurysms.

El tratamiento tradicional para la arteriosclerosis incluye procedimientos de recanalizacion vascular para los bloqueos menos graves y derivacion coronaria quirurgica para los bloqueos importantes. Un efecto grave de los procedimientos intravasculares es que, en un numero significativo de individuos tratados, algunos o todos de los vasos tratados vuelven a sufrir reestenosis (es decir, vuelven a estrecharse). Por ejemplo, la reestenosis de una arteria coronaria aterosclerotica despues de la ACTP se produce en el 10-50 % de los pacientes que se someten a este procedimiento y, posteriormente, requiere angioplastia adicional o un injerto de derivacion de arterias coronarias. Ademas, la reestenosis de una arteria coronaria aterosclerotica despues de la colocacion de estents se produce en el 10-20 % de los pacientes que se someten a este procedimiento y posteriormente requiere tratamientos repetidos para mantener la circulacion sangulnea adecuado a traves de la arteria afectada. En general, la reestenosis se produce en un periodo de tiempo relativamente breve, por ejemplo, aproximadamente menor de seis meses, despues del tratamiento.Traditional treatment for arteriosclerosis includes vascular recanalization procedures for less severe blocks and surgical coronary bypass for important blocks. A serious effect of intravascular procedures is that, in a significant number of treated individuals, some or all of the treated vessels again undergo restenosis (that is, they narrow again). For example, restenosis of an atherosclerotic coronary artery after ACTP occurs in 10-50% of patients who undergo this procedure and subsequently require additional angioplasty or a coronary artery bypass graft. In addition, restenosis of an atherosclerotic coronary artery after stent placement occurs in 10-20% of patients who undergo this procedure and subsequently requires repeated treatments to maintain adequate blood circulation through the affected artery. In general, restenosis occurs in a relatively short period of time, for example, approximately less than six months, after treatment.

Aunque no se han determinado los procesos hormonales y celulares exactos que promueven la reestenosis, se piensa que la reestenosis se debe en parte a la lesion mecanica de las paredes de los vasos sangulneos provocada por el cateter con globo u otro dispositivo intravascular. Por ejemplo, el procedimiento de ACTP, ademas de abrir la arteria obstruida tambien lesiona celulas de musculo liso (CML) de las arterias coronarias residentes. En respuesta a esta lesion, las plaquetas adherentes, los macrofagos infiltrantes, los leucocitos o las mismas celulas de musculo liso, liberan factores de crecimiento derivados de celulas tal como el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), con la posterior proliferacion y migration de CML medias a traves de la lamina elastica interna, hacia la zona de la Intima del vaso. La proliferacion adicional y la hiperplasia de las CML de la Intima y, mas significativamente, la production de grandes cantidades de matriz extracelular durante de un periodo de tres a seis meses, da como resultado el llenado y estrechamiento del espacio vascular, suficiente para obstruir de forma significativa la circulacion sangulnea.Although the exact hormonal and cellular processes that promote restenosis have not been determined, it is thought that restenosis is due in part to the mechanical injury of the blood vessel walls caused by the balloon catheter or other intravascular device. For example, the ACTP procedure, in addition to opening the clogged artery, also damages smooth muscle cells (CML) of the resident coronary arteries. In response to this injury, adherent platelets, infiltrating macrophages, leukocytes or the same smooth muscle cells release growth factors derived from cells such as platelet-derived growth factor (PDGF), with subsequent proliferation and migration CML socks through the internal elastic lamina, towards the zone of the Intima of the vessel. The additional proliferation and hyperplasia of the CML of the Intima and, more significantly, the production of large amounts of extracellular matrix over a period of three to six months, results in the filling and narrowing of the vascular space, sufficient to obstruct significant blood circulation.

Ademas del papel que desempena syk en las activaciones de plaquetas inducidas por Ig, syk desempena un papel muy importante en la senalizacion mediada por colageno. La protelna de adhesion principal responsable de la adhesion y activation de plaquetas es el colageno. El colageno es una protelna filamentosa contenida en las obstrucciones fibroticas de los ateromas, que quedan expuestas a la sangre durante la ruptura de la placa. El colageno funciona de forma inicial uniendo el factor de von Willebrand, que amarra a las plaquetas a traves de la union a GPIb de la membrana plaquetaria. El colageno funciona de forma secundaria interaccionando con los dos receptores de colageno en las plaquetas, GPVI y la integrina a2p1.In addition to the role that syk plays in Ig-induced platelet activations, syk plays a very important role in collagen-mediated signaling. The main adhesion protein responsible for the adhesion and activation of platelets is collagen. Collagen is a filamentous protein contained in the fibrotic obstructions of atheromas, which are exposed to blood during plaque rupture. Collagen works initially by joining von Willebrand factor, which binds platelets through the GPIb binding of the platelet membrane. Collagen works secondarily by interacting with the two collagen receptors in platelets, GPVI and integrin a2p1.

GPVI existe en las membranas de las plaquetas como un complejo con FcRy, una interaction necesaria para la expresion de GPVI. La activacion del FcYRNa sobre las plaquetas da como resultado el cambio de la forma de la plaqueta, secretion y trombosis. La senalizacion mediante el complejo GPVI/FcRy se inicia por la fosforilacion de tirosinas del dominio ITAM del FCRy seguido de la incorporation de syk. La activacion de GPVI conduce a la induction de multiples funciones plaquetarias que incluyen: activacion de las integrinas a2p1 para conseguir la firme adhesion plaquetaria y GP IIb-IIIa que media la agregacion plaquetaria y el crecimiento de la trombosis, la secrecion de plaquetas, que permite el suministro de protelnas inflamatorias tales como CD40L, RANTES yTGFp a la pared vascular; y la expresion de P-selectina, que permite la incorporacion de leucocitos. Por lo tanto, se cree que los inhibidores de syk pueden inhibir los sucesos tromboticos mediados por la adhesion, activacion y agregacion plaquetaria.GPVI exists in platelet membranes as a complex with FcRy, a necessary interaction for the expression of GPVI. The activation of FcYRNa on platelets results in a change in platelet shape, secretion and thrombosis. Signaling by the GPVI / FcRy complex is initiated by tyrosine phosphorylation of the ITAM domain of FCRy followed by the incorporation of syk. The activation of GPVI leads to the induction of multiple platelet functions that include: activation of a2p1 integrins to achieve firm platelet adhesion and GP IIb-IIIa that mediates platelet aggregation and thrombosis growth, platelet secretion, which allows the supply of inflammatory proteins such as CD40L, RANTES and TGFp to the vascular wall; and the expression of P-selectin, which allows the incorporation of leukocytes. Therefore, it is believed that syk inhibitors can inhibit thrombotic events mediated by platelet adhesion, activation and aggregation.

Se ha notificado que la fosforilacion de tirosinas de protelnas intracelulares (activacion) inducida por la estimulacion de un receptor de anticuerpos IgG, FcyR, y la fagocitosis mediada por FcyR, esta inhibida de forma considerable en macrofagos obtenidos de raton deficiente en syk (Crowley, M.T. et al., J. Exp. Med., 186: 1027-1039, 1997). Esto sugiere que syk tiene un papel claramente importante en la fagocitosis mediada por FcyR de macrofagos.It has been reported that tyrosine phosphorylation of intracellular proteins (activation) induced by the stimulation of an IgG antibody receptor, FcyR, and FcyR-mediated phagocytosis, is significantly inhibited in macrophages obtained from syk-deficient mice (Crowley, MT et al., J. Exp. Med., 186: 1027-1039, 1997). This suggests that syk has a clearly important role in FcyR-mediated phagocytosis of macrophages.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Tambien se ha notificado que un oligonucleotido antisentido de syk suprime la inhibicion de la apoptosis de eosinofilos inducida por GM-CSF (Yousefi, S. et al., J. E. Med., 183: 1407-1414, 1996), mostrando que syk es esencial para la senal de extension de la vida de los eosinofilos provocada por GM-CSF y similares. Puesto que la extension de la vida de los eosinofilos esta estrechamente relacionada con la transicion de enfermedades a estados cronicos en trastornos alergicos, tales como el asma, los inhibidores de syk tambien pueden servir como agentes terapeuticos para la inflamacion eosinofllica cronica.It has also been reported that a syk antisense oligonucleotide suppresses inhibition of GM-CSF-induced eosinophil apoptosis (Yousefi, S. et al., JE Med., 183: 1407-1414, 1996), showing that syk is essential for the extension signal of the life of eosinophils caused by GM-CSF and the like. Since the extension of eosinophilic life is closely related to the transition of diseases to chronic states in allergic disorders, such as asthma, syk inhibitors can also serve as therapeutic agents for chronic eosinophilic inflammation.

Syk es importante para la activacion de linfocitos B a traves del receptor de antlgeno de linfocitos B y esta implicada en el metabolismo del fosfatidilinositol y en el aumento de la concentracion de calcio intracelular provocada por la estimulacion del receptor de antlgeno (Hutchcroft, J E. et al., J. Biol. Chem., 267: 8613-8619,1992; y Takata, M. et al., EMBO J., 13: 1341-1349, 1994). Por lo tanto, los inhibidores de syk se pueden utilizar para controlar la funcion de los linfocitos B y, por lo tanto, se espera que sirvan como agentes terapeuticos para enfermedades relacionadas con anticuerpos.Syk is important for the activation of B lymphocytes through the B lymphocyte antigen receptor and is involved in the metabolism of phosphatidylinositol and in the increase in intracellular calcium concentration caused by antigen receptor stimulation (Hutchcroft, J E. et al., J. Biol. Chem., 267: 8613-8619, 1992; and Takata, M. et al., EMBO J., 13: 1341-1349, 1994). Therefore, syk inhibitors can be used to control the function of B lymphocytes and, therefore, are expected to serve as therapeutic agents for antibody-related diseases.

Syk se une a un receptor de antlgeno de linfocitos T, rapidamente experimenta fosforilacion de las tirosinas a traves del entrecruzamiento del receptor y actua de forma sinergica sobre las senales intracelulares mediadas por las tirosina quinasas Src tales como Lck (Couture, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 5301-5305,1994; y Couture, C. et al., Mol. Cell. Biol., 14: 5249-5258, 1994). Syk esta presente en poblaciones de linfocitos T maduros, tales como linfocitos T y5 intraepiteliales y linfocitos T ap sin exposition previa, y se ha notificado que tienen la capacidad de fosforilar multiples componentes de la cascada de serialization del TCR (Latour, S. et al., Mol Cell Biol., 17: 44344441, 1997). En consecuencia, los inhibidores de syk pueden servir como agentes para la inhibicion de la inmunidad celular mediada por el receptor de antlgeno de los linfocitos T.Syk binds to a T lymphocyte antigen receptor, rapidly undergoes phosphorylation of tyrosines through receptor cross-linking and acts synergistically on intracellular signals mediated by Src tyrosine kinases such as Lck (Couture, C. et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 5301-5305, 1994; and Couture, C. et al., Mol. Cell. Biol., 14: 5249-5258, 1994). Syk is present in populations of mature T lymphocytes, such as intraepithelial T5 cells and T ap lymphocytes without prior exposure, and it has been reported that they have the ability to phosphorylate multiple components of the TCR serialization cascade (Latour, S. et al. ., Mol Cell Biol., 17: 44344441, 1997). Consequently, syk inhibitors can serve as agents for the inhibition of cellular immunity mediated by the T lymphocyte antigen receptor.

Estudios recientes de hibridacion genomica comparativos han identificado a syk como otro gen importante en la patogenia del Linfoma de Celulas del Manto (LCM) (Chen, R. et al. Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings (Post-Meeting Edition). Vol 25, n.° 18S (suplemento del 20 de junio), 2007: 8056). El LCM representa el 5-10 % de todos los linfomas no Hodgkin y es una forma de linfoma diflcil de tratar. Tiene el peor pronostico entre los linfomas de linfocitos B con una supervivencia media de tres anos. Se ha notificado que Syk esta sobreexpresada en el LCM (Rinaldi, A, et al., Br. J. Haematol., 2006; 132:303-316) y que Syk media en las senales de supervivencia de mTOR (diana de la Rapamicina en mamlfero) en el linfoma folicular, de celulas del manto, de Burkitt y difuso de linfocitos B grandes (Leseux, L., et al., Blood, 2006; 108: 4156-4162).Recent comparative genomic hybridization studies have identified syk as another important gene in the pathogenesis of Mantle Cell Lymphoma (LCM) (Chen, R. et al. Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings (Post-Meeting Edition) Vol 25, No. 18S (June 20 supplement), 2007: 8056). LCM represents 5-10% of all non-Hodgkin lymphomas and is a difficult form of lymphoma to treat. It has the worst prognosis among B-lymphomas with an average survival of three years. Syk has been reported to be overexpressed in the LCM (Rinaldi, A, et al., Br. J. Haematol., 2006; 132: 303-316) and that Syk mediates mTOR survival signals (Rapamycin target in mammals) in follicular lymphoma, mantle cells, Burkitt and diffuse large B lymphocytes (Leseux, L., et al., Blood, 2006; 108: 4156-4162).

Varias llneas de evidencia sugieren que muchos linfomas de linfocitos B dependen de senales de supervivencia mediadas por el receptor de linfocitos B (BCR). La senalizacion del BCR induce la oligomerization del receptor y la fosforilacion de los motivos de activacion de inmunorreceptor Iga y p mediante las quinasas de la familia SRC. La fosforilacion del ITAM da como resultado la incorporation y activacion de syk, que inicia los sucesos aguas abajo y amplifica la senal original del BCR. Dado el papel de la senalizacion del BCR tonica en linfocitos B normales y la supervivencia dependiente de syk de las llneas celulares de linfoma no Hodgkin in vitro (Chen, L., et al., Blood, 2006; 108: 3428-3433), la inhibicion de syk es una diana de tratamiento razonable prometedora para determinados linfomas de linfocitos B y leucemia linfocltica cronica (LLC) (Stefania Gobessi, Luca Laurenti, Pablo Longo, Laura Carsetti, Giuseppe Leone, Dimitar G. Efremov, Constitutive activation of the protein tyrosine kinase Syk in Chronic Lymphocytic Leukemia B-cells, Blood, 2007, 110, Resumen 1123). Datos recientes muestran que la administration de un inhibidor de multiples quinasas que inhibe a syk, puede tener actividad cllnica significativa en pacientes con LLC (Friedberg JW et al., Blood 2008; 112(11), Resumen 3).Several lines of evidence suggest that many B-cell lymphomas depend on survival signals mediated by the B-cell receptor (BCR). BCR signaling induces receptor oligomerization and phosphorylation of the Iga and p immunoreceptor activation motifs by means of the SRC family kinases. The phosphorylation of ITAM results in the incorporation and activation of syk, which initiates the downstream events and amplifies the original BCR signal. Given the role of the signaling of the Tonic BCR in normal B lymphocytes and the syk-dependent survival of non-Hodgkin lymphoma cell lines in vitro (Chen, L., et al., Blood, 2006; 108: 3428-3433), Syk inhibition is a promising reasonable treatment target for certain B-lymphocyte lymphomas and chronic lymphocytic leukemia (LLC) (Stefania Gobessi, Luca Laurenti, Pablo Longo, Laura Carsetti, Giuseppe Leone, Dimitar G. Efremov, Constitutive activation of the protein tyrosine kinase Syk in Chronic Lymphocytic Leukemia B-cells, Blood, 2007, 110, Summary 1123). Recent data show that the administration of a multiple kinase inhibitor that inhibits syk may have significant clinical activity in patients with CLL (Friedberg JW et al., Blood 2008; 112 (11), Summary 3).

El potencial oncogenico de la tirosina quinasa del bazo (Syk) se ha descrito en varios contextos distintos. Cllnicamente, la expresion aumentada de Syk se describe en el Linfoma de Celulas del Manto (Rinaldi, A, et al., Br. J. Haematol., 2006; 132: 303-316) y la protelna de fusion TEL-Syk (Leucemia del ETS Traslocado) que genera una translocation cromosomica (t(9;12)(q22;p12)) conduce a la actividad aumentada de Syk y se asocia con el slndrome mielodisplasico (Kuno, Y., et al., Blood, 2001; 97:1050-1055). Las celulas de medula osea transferidas de forma adoptiva que expresan TEL-Syk humana inducen leucemia en ratones (Wossning, T., JEM, 2006; 203: 28292840). Adicionalmente, en celulas de medula osea primarias de raton, la expresion aumentada de Syk da como resultado el crecimiento en cultivo independiente de lL-7 (Wossning, T., et al., JEM, 2006; 203: 2829-2840).The oncogenic potential of the spleen tyrosine kinase (Syk) has been described in several different contexts. Only, the increased expression of Syk is described in Mantle Cell Lymphoma (Rinaldi, A, et al., Br. J. Haematol., 2006; 132: 303-316) and the TEL-Syk fusion protein (Leukemia of the Translocated ETS) that generates a chromosomal translocation (t (9; 12) (q22; p12)) leads to increased Syk activity and is associated with myelodysplasic syndrome (Kuno, Y., et al., Blood, 2001; 97: 1050-1055). Bone marrow cells adopted adoptively expressing human TEL-Syk induce leukemia in mice (Wossning, T., JEM, 2006; 203: 28292840). Additionally, in mouse primary bone marrow cells, increased expression of Syk results in growth in independent culture of l-7 (Wossning, T., et al., JEM, 2006; 203: 2829-2840).

Cabe destacar que la senalizacion de Syk parece ser necesaria para el desarrollo y la supervivencia de los linfocitos B en el ser humano y el raton. La perdida inducible del receptor de linfocitos B (Lam, K., et al., Cell, 1997; 90: 10731083) o de Iga (Kraus, M., et al., Cell, 2004; 117: 787-800) da como resultado la perdida de linfocitos B perifericos en ratones. La expresion aumentada de la protelna tirosina fosfatasa de PTP-RO, la cual se sabe que regula de forma negativa la actividad de Syk, inhibe la proliferation e induce la apoptosis de llneas celulares obtenidas de linfomas no Hodgkin (Chen, L., et al., Blood, 2006; 108: 3428-3433). Para finalizar, los linfomas de linfocitos B raramente presentan perdida de expresion del BCR y la terapia antidiotipo raramente conduce a resistencia (Kuppers, R. Nat Rev Cancer, 2005; 5:251-262).It should be noted that Syk signaling seems to be necessary for the development and survival of B lymphocytes in humans and the mouse. The inducible loss of the B-cell receptor (Lam, K., et al., Cell, 1997; 90: 10731083) or Iga (Kraus, M., et al., Cell, 2004; 117: 787-800) gives as a result the loss of peripheral B lymphocytes in mice. The increased expression of PTP-RO protein tyrosine phosphatase, which is known to negatively regulate Syk activity, inhibits proliferation and induces apoptosis of cell lines obtained from non-Hodgkin lymphomas (Chen, L., et al. ., Blood, 2006; 108: 3428-3433). Finally, B lymphocyte lymphomas rarely show loss of BCR expression and antidiotype therapy rarely leads to resistance (Kuppers, R. Nat Rev Cancer, 2005; 5: 251-262).

El reconocimiento del receptor especlfico de antlgeno de linfocitos B (BCR) activa multiples rutas de senalizacion que en ultima instancia regulan el estado de activacion de las celulas, promoviendo la supervivencia y la expansion clonal. La senalizacion a traves del BCR se hace posible por su asociacion con otros dos miembros de laThe recognition of the specific B-lymphocyte antigen receptor (BCR) activates multiple signaling pathways that ultimately regulate the activation status of the cells, promoting survival and clonal expansion. Signaling through the BCR is made possible by its association with two other members of the

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

superfamilia de las inmunoglobulinas, Iga e Igp, cada uno portando un inmuno-dominio de activacion basado en tirosina (ITAM) (Jumaa, Hendriks et al. Annu Rev Immunol 23: 415-45 (2005)). En respuesta al reconocimiento del BCR, la quinasas de la familia Src fosforilan de forma directa el dominio ITAM. La tirosina quinasa del bazo (Syk) se acopla con el ITAM y lo fosforila, un proceso que potencia su actividad quinasa, dando como resultado la autofosforilacion de Syk y la fosforilacion de tirosinas de multiples sustratos aguas abajo (Rolli, Gallwitz et al. Mol Cell 10(5): 1057-69 (2002)). Esta ruta de senalizacion esta activa en los linfocitos B al comienzo de la transicion de la fase pro- a pre-linfocito B del desarrollo, cuando se expresa el pre-BCR recientemente formado. De hecho, en ratones genosuprimidos para Syk el desarrollo de los linfocitos B de detiene en la etapa de linfocito pro-B (Cheng, Rowley et al. 1995; Turner, Mee et al. Nature 378(6554): 303-6 (1995)). La perdida inducible del receptor de linfocitos B (Lam, Kuhn et al. Cell 90(6): 1073-83 (1997)) o de Iga (Kraus, Alimzhanov et al. Cell 117(6): 787-800 (2004)) da como resultado la perdida de linfocitos B perifericos en ratones. Los linfocitos B de ser humano tambien parecen necesitar a Syk para la proliferacion y supervivencia. La expresion aumentada de la protelna tirosina fosfatasa PTP-RO, un regulador negativo de la actividad de Syk, inhibe la proliferacion e induce la apoptosis en llneas celulares obtenidas de linfomas no Hodgkin (LNH) (Chen, Juszczynski et al. Blood 108(10): 3428-33 (2006)). La genosupresion de Syk mediante ARNip en la llnea de LNH SUDHL-4 condujo a un bloqueo en la transicion G1/S del ciclo celular (Gururajan, Dasu et al. J Immunol 178(1): 111-21 (2007)). Juntos, estos datos sugieren que la senalizacion de Syk es necesaria para el desarrollo, proliferacion e incluso la supervivencia de linfocitos B de ser humano y de raton.immunoglobulin superfamily, Iga and Igp, each carrying a tyrosine-based immuno-activation domain (ITAM) (Jumaa, Hendriks et al. Annu Rev Immunol 23: 415-45 (2005)). In response to the recognition of the BCR, the Src family kinases directly phosphorylate the ITAM domain. Spleen tyrosine kinase (Syk) is coupled with ITAM and phosphorylates, a process that enhances its kinase activity, resulting in the syk autophosphorylation and tyrosine phosphorylation of multiple substrates downstream (Rolli, Gallwitz et al. Mol Cell 10 (5): 1057-69 (2002)). This signaling pathway is active in B cells at the beginning of the transition from the pro to pre-B cell phase of development, when the newly formed pre-BCR is expressed. In fact, in genosuppressed mice for Syk the development of B lymphocytes stops at the stage of pro-B lymphocyte (Cheng, Rowley et al. 1995; Turner, Mee et al. Nature 378 (6554): 303-6 (1995 )). The inducible loss of the B-cell receptor (Lam, Kuhn et al. Cell 90 (6): 1073-83 (1997)) or Iga (Kraus, Alimzhanov et al. Cell 117 (6): 787-800 (2004) ) results in the loss of peripheral B lymphocytes in mice. Human B lymphocytes also seem to need Syk for proliferation and survival. The increased expression of the protein tyrosine phosphatase PTP-RO, a negative regulator of Syk activity, inhibits proliferation and induces apoptosis in cell lines obtained from non-Hodgkin lymphomas (NHL) (Chen, Juszczynski et al. Blood 108 (10 ): 3428-33 (2006)). Syk genosuppression by siRNA in the LNH SUDHL-4 line led to a block in the G1 / S transition of the cell cycle (Gururajan, Dasu et al. J Immunol 178 (1): 111-21 (2007)). Together, these data suggest that Syk signaling is necessary for the development, proliferation and even survival of human and mouse B lymphocytes.

A la inversa, el potencial oncogenico de Syk se ha descrito en varios contextos distintos. Cllnicamente, la expresion aumentada de Syk se describio en el Linfoma de Celulas del Manto (Rinaldi, Kwee et al. Br J Haematol 132(3): 30316 (2006) y la protelna de fusion TEL-Syk (Leucemia del ETS Traslocado) generada por una translocacion cromosomica (t(9;12)(q22;p12)) conduce a la actividad aumentada de Syk y se asocia con el slndrome mielodisplasico (Kuno, Abe et al. Blood 97(4): 1050-5 (2001). Las celulas de medula osea transferidas de forma adoptiva que expresan TEL-Syk humana inducen leucemia en ratones (Wossning, Herzog et al. J Exp Med 203(13): 2829-40 (2006). Adicionalmente, en celulas de medula osea primarias de raton, la expresion aumentada de Syk da como resultado el crecimiento en cultivo independiente de IL-7 (Wossning, Herzog et al. 2006). Consecuentemente, se ha descrito que Syk media las senales de supervivencia de mTOR (diana de la Rapamicina en mamlferos) en LNH folicular, de celulas del manto, de Burkitt y de linfocitos B grandes difusos (Leseux, Hamdi et al. Blood 108(13): 4156-62 (2006). Ademas, estudios recientes adicionales sugieren que las senales de supervivencia dependientes de Syk pueden desempenar un papel en los canceres de linfocitos B, incluyendo LDCBG, linfoma de celulas del manto y linfoma folicular (Gururajan, Jennings et al. 2006; Irish, Czerwinski et al. J Immunol 176(10): 5715-9 (2006). Dado el papel de la senalizacion tonica del BCR en linfocitos B normales y la supervivencia dependiente de Syk de llneas celulares de LNH in vitro, la inhibition especlfica de Syk podrla resultar prometedora para el tratamiento de determinados linfomas de linfocito B.Conversely, Syk's oncogenic potential has been described in several different contexts. Overall, the increased expression of Syk was described in Mantle Cell Lymphoma (Rinaldi, Kwee et al. Br J Haematol 132 (3): 30316 (2006) and the TEL-Syk fusion protein (Translocated ETS Leukemia) generated by a chromosomal translocation (t (9; 12) (q22; p12)) leads to increased Syk activity and is associated with myelodysplasic syndrome (Kuno, Abe et al. Blood 97 (4): 1050-5 (2001) Adoptively transferred bone marrow cells expressing human TEL-Syk induce leukemia in mice (Wossning, Herzog et al. J Exp Med 203 (13): 2829-40 (2006). Additionally, in primary bone marrow cells of mouse, the increased expression of Syk results in the growth in independent culture of IL-7 (Wossning, Herzog et al. 2006). Consequently, it has been described that Syk mediates the mTOR survival signals (Rapamycin target in mammals) in follicular NHL, mantle cells, Burkitt and diffuse large B cells (Leseux, Hamdi et al. Bloo d 108 (13): 4156-62 (2006). In addition, additional recent studies suggest that Syk-dependent survival signals may play a role in B-cell cancers, including LDCBG, mantle cell lymphoma and follicular lymphoma (Gururajan, Jennings et al. 2006; Irish, Czerwinski et al. J Immunol 176 (10): 5715-9 (2006) Given the role of BCR tonic signaling in normal B lymphocytes and Syk-dependent survival of NHL cell lines in vitro, the specific inhibition of Syk could be promising. for the treatment of certain B lymphocyte lymphomas.

Recientemente, se describio que R406 (Rigel Pharmaceuticals) inhibe la senalizacion del ITAM en respuesta a diversos estlmulos, incluyendo FceR1 y BCR inducido por la activacion de Syk (Braselmann, Taylor et al. J Pharmacol Exp Ther 319(3): 998-1008 (2006). Cabe destacar que este inhibidor de Syk competitivo de AtP tambien fue activo frente a las Flt3, cKit y JAK quinasas, pero no frente a la Src quinasa (Braselmann, Taylor et al. 2006). La activacion de mutaciones de Flt3 esta asociada con la LMA y la inhibicion de esta quinasa esta actualmente bajo desarrollo cllnico (Burnett and Knapper Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2007: 429-34 (2007). El aumento de la activacion de la tirosina quinasa cKit tambien esta asociada con canceres hematologicos y es una diana para la terapia del cancer (Heinrich, Griffith et al. Blood 96(3): 925-32 (2000). De manera similar, la senalizacion de JAK3 esta implicada en leucemias y linfomas, y actualmente se esta explotando como una diana terapeutica potencial (Heinrich, Griffith et al. 2000). Hay que destacar que la actividad inhibidora multiquinasas de R406 atenua la senalizacion del BCR en las llneas celulares de linfoma y en muestras de linfoma humano primario, dando como resultado la apoptosis de estas (Chen, Monti et al. Blood 111(4): 2230-7 (2008). Adicionalmente, un ensayo cllnico de fase II notifico resultados favorables para este compuesto en el LNH refractario y en leucemia linfocltica cronica (Friedberg JW et al., Blood 2008; 112(11), Resumen 3). Aunque el mecanismo preciso de action para R406 no esta claro, los datos sugieren que la inhibicion de las quinasas que median las senales de supervivencia en linfocitos es cllnicamente beneficiosa.Recently, it was described that R406 (Rigel Pharmaceuticals) inhibits ITAM signaling in response to various stimuli, including FceR1 and BCR induced by the activation of Syk (Braselmann, Taylor et al. J Pharmacol Exp Ther 319 (3): 998-1008 (2006) It should be noted that this competitive Atk Syk inhibitor was also active against Flt3, cKit and JAK kinases, but not against Src kinase (Braselmann, Taylor et al. 2006). Activation of Flt3 mutations is associated with AML and inhibition of this kinase is currently under clinical development (Burnett and Knapper Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2007: 429-34 (2007). Increased activation of tyrosine kinase cKit is also associated with cancers Hematologic and is a target for cancer therapy (Heinrich, Griffith et al. Blood 96 (3): 925-32 (2000). Similarly, the signaling of JAK3 is involved in leukemia and lymphomas, and is currently being exploited like a terapeutic target to potential (Heinrich, Griffith et al. 2000). It should be noted that the multi-kinase inhibitory activity of R406 attenuates the signaling of BCR in lymphoma cell lines and in primary human lymphoma samples, resulting in their apoptosis (Chen, Monti et al. Blood 111 (4): 2230 -7 (2008) Additionally, a phase II clinical trial reported favorable results for this compound in refractory NHL and in chronic lymphocytic leukemia (Friedberg JW et al., Blood 2008; 112 (11), Summary 3). The precise mechanism of action for R406 is unclear, the data suggest that the inhibition of kinases that mediate survival signals in lymphocytes is only beneficial.

Ademas, estudios adicionales recientes sugieren que las senales de supervivencia dependientes de syk pueden desempenar un papel en los canceres de linfocitos B, incluyendo el LDCBG, linfoma de celulas del manto y linfoma folicular (vease por ejemplo, S. Linfengshen et al. Blood, Feb. 2008; 111: 2230-2237; J. M. Irish et al. Blood, 2006; 108: 3135-3142; A. Renaldi et al. Brit J. Haematology, 2006; 132: 303-316; M. Guruoajan et al. J. Immunol, 2006; 176: 5715-5719; L. Laseux et al. Blood, 2006; 108: 4156-4162).In addition, recent additional studies suggest that syk-dependent survival signals may play a role in B-cell cancers, including LDCBG, mantle cell lymphoma and follicular lymphoma (see for example, S. Linfengshen et al. Blood, Feb. 2008; 111: 2230-2237; JM Irish et al. Blood, 2006; 108: 3135-3142; A. Renaldi et al. Brit J. Haematology, 2006; 132: 303-316; M. Guruoajan et al. J. Immunol, 2006; 176: 5715-5719; L. Laseux et al. Blood, 2006; 108: 4156-4162).

Las JAK quinasas (Quinasas Janus) son una familia de protelnas tirosina quinasas citoplasmaticas que incluye a JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2. Las JAK desempenan un papel crucial en la senalizacion de citocinas. Cada una de las JAK quinasas es selectiva para los receptores de determinadas citocinas, si bien multiples JAK quinasas pueden estar afectadas por citocinas o rutas de senalizacion particulares. Los estudios sugieren que JAK3 se asocia con la cadena gamma del receptor de citocinas comun (fcY o yc) de diversos receptores de citocinas. JAK3 en particular se une a receptores de forma selectiva y es parte de la ruta de senalizacion de citocinas para, y activada por, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21. JAK1 interactua con, entre otros, los receptores para las citocinas IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 e IL-JAK kinases (Janus kinases) are a family of cytoplasmic tyrosine tyrosine kinases that includes JAK1, JAK2, JAK3 and TYK2. JAKs play a crucial role in cytokine signaling. Each of the JAK kinases is selective for the receptors of certain cytokines, although multiple JAK kinases may be affected by particular cytokines or signaling pathways. Studies suggest that JAK3 is associated with the gamma chain of the common cytokine receptor (fcY or c) of various cytokine receptors. JAK3 in particular binds selectively to receptors and is part of the cytokine signaling pathway for, and activated by, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 and IL-21. JAK1 interacts with, among others, the receptors for cytokines IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 and IL-

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

21, mientras que JAK2 interactua con, entre otros, los receptores para IL-9 y TNF-a. Despues de la union de determinadas citocinas a sus receptores (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21), se produce la oligomerizacion del receptor, dando como resultado que las colas citoplasmaticas de las JAK quinasas asociadas se coloquen de forma proximidad y faciliten la transfosforilacion de los restos de tirosina en la JAK quinasa. Esta transfosforilacion da como resultado la activacion de la JAK quinasa.21, while JAK2 interacts with, among others, the receptors for IL-9 and TNF-a. After the binding of certain cytokines to their receptors (for example, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 and IL-21), oligomerization of the receptor occurs, resulting in The cytoplasmic tails of the associated JAK kinases are placed in close proximity and facilitate the transphosphorylation of the tyrosine residues in the JAK kinase. This transphosphorylation results in the activation of JAK kinase.

Los sustratos aguas abajo de las quinasas de la familia JAK incluyen a las protelnas transductoras de senal y activadoras de la transcripcion (STAT). Las JAK quinasas fosforiladas se unen a diversas protelnas STAT (Transductoras de Senal y Activadoras de la Transcripcion). Las protelnas STAT, que son protelnas de union a ADN activadas mediante la fosforilacion de residuos de tirosina, funcionan como moleculas de senalizacion y factores de transcripcion y en ultima instancia se unen a secuencias de ADN especlficas presentes en los promotores de los genes sensibles a citocinas (Leonard et al., (2000), J. Allergy Clin. Immunol. 105: 877-888).The substrates downstream of the JAK family kinases include the signal transducer and transcription activator (STAT) proteins. JAK phosphorylated kinases bind to various STAT proteins (Signal Transducers and Transcription Activators). STAT proteins, which are DNA binding proteins activated by phosphorylation of tyrosine residues, function as signaling molecules and transcription factors and ultimately bind to specific DNA sequences present in promoters of cytokine-sensitive genes. (Leonard et al., (2000), J. Allergy Clin. Immunol. 105: 877-888).

Se ha implicado a la senalizacion JAK/STAT en la mediacion de muchas respuestas inmunitarias anomalas tales como alergias, asma, enfermedades autoinmunitarias tales como rechazo de trasplante (aloinjerto), artritis reumatoide, esclerosis lateral amiotrofica y esclerosis multiple, as! como en canceres solidos y hematologicos tales como leucemias y linfomas. Para una revision de la intervencion farmaceutica de la ruta JAK/STAT vease Frank, (1999), Mol. Med. 5:432:456 y Seidel et al., (2000), Oncogene 19:2645-2656.JAK / STAT signaling has been implicated in the mediation of many abnormal immune responses such as allergies, asthma, autoimmune diseases such as transplant rejection (allograft), rheumatoid arthritis, amyotrophic lateral sclerosis and multiple sclerosis, as! as in solid and hematological cancers such as leukemia and lymphomas. For a review of the pharmaceutical intervention of the JAK / STAT route see Frank, (1999), Mol. Med. 5: 432: 456 and Seidel et al., (2000), Oncogene 19: 2645-2656.

En particular, se ha implicado a JAK3 en una diversidad de procesos biologicos. Por ejemplo, la proliferacion y supervivencia de mastocitos murinos inducida por IL-4 e iL-9 se ha demostrado que es dependiente de la senalizacion de JAK3 y de la cadena gamma (Suzuki et al., (2000), Blood 96: 2172-2180). JAK3 tambien desempena un papel crucial en las respuestas de degranulacion de mastocitos mediada por el receptor de IgE (Malaviya et al.,In particular, JAK3 has been involved in a variety of biological processes. For example, the proliferation and survival of murine mast cells induced by IL-4 and iL-9 has been shown to be dependent on the signaling of JAK3 and the gamma chain (Suzuki et al., (2000), Blood 96: 2172- 2180). JAK3 also plays a crucial role in mast cell degranulation responses mediated by the IgE receptor (Malaviya et al.,

(1999) , Biochem. Biophys. Res. Commun. 257: 807-813), y la inhibicion de la JAK3 quinasa ha demostrado prevenir las reacciones de la hipersensibilidad de tipo I, incluyendo anafilaxia (Malaviya et al., (1999), J. Biol. Chem. 274: 27028-27038). Tambien se ha demostrado que la inhibicion de JAK3 da como resultado la supresion inmunitaria para el rechazo de aloinjertos (Kirken, (2001), Transpl. Proc. 33: 3268-3270). Tambien se ha implicado a las JAK3 quinasas en el mecanismo implicado en las etapas temprana y tardla de artritis reumatoide (Muller-Ladner et al.,(1999), Biochem. Biophys Res. Commun. 257: 807-813), and the inhibition of JAK3 kinase has been shown to prevent type I hypersensitivity reactions, including anaphylaxis (Malaviya et al., (1999), J. Biol. Chem. 274: 27028-27038) . It has also been shown that inhibition of JAK3 results in immune suppression for allograft rejection (Kirken, (2001), Transpl. Proc. 33: 3268-3270). JAK3 kinases have also been implicated in the mechanism involved in the early and late stages of rheumatoid arthritis (Muller-Ladner et al.,

(2000) , J. Immunal. 164: 3894-3901); la esclerosis lateral amiotrofica familiar (Trieu et al., (2000), Biochem Biophys. Res. Commun. 267: 22-25); la leucemia (Sudbeck et al., (1999), Clin. Cancer Res. 5: 1569-1582); la micosis fungoide, una forma de linfoma de linfocitos T (Nielsen et al., (1997), Prac. Natl. Acad. Sci. USA 94: 6764-6769) y el crecimiento celular anomalo (Yu et al., (1997), J. Immunol. 159: 5206-5210; Catlett-Falcone et al., (1999), Immunity 10: 105-115).(2000), J. Immunal. 164: 3894-3901); familial amyotrophic lateral sclerosis (Trieu et al., (2000), Biochem Biophys. Res. Commun. 267: 22-25); leukemia (Sudbeck et al., (1999), Clin. Cancer Res. 5: 1569-1582); fungoid mycosis, a form of T lymphocyte lymphoma (Nielsen et al., (1997), Prac. Natl. Acad. Sci. USA 94: 6764-6769) and anomalous cell growth (Yu et al., (1997) , J. Immunol. 159: 5206-5210; Catlett-Falcone et al., (1999), Immunity 10: 105-115).

JAK1, JAK2 y TYK2 se expresan de forma ubicua, mientras que JAK3 se expresa de forma predominante en celulas hematopoyeticas. Las JAK quinasas, incluyendo JAK3, se expresan de forma abundante en celulas de leucemia primarias de ninos con leucemia linfoblastica aguda, la forma mas comun de cancer en la infancia, y los estudios han correlacionado la activacion de STAT en determinadas celulas con senales que regulan la apoptosis (Demoulin et al., (1996), Mol. Cell. Biol. 16: 4710-6; Jurlander et al., (1997), Blood. 89: 4146-52; Kaneko et al., (1997), Clin. Exp. Immun. 109: 185-193 y Nakamura et al., (1996), J. Biol. Chem. 271: 19483-8). Ademas se sabe que son importantes para la diferenciacion, funcion y supervivencia de linfocitos. JAK-3 en particular desempena un papel esencial en la funcion de linfocitos, macrofagos y mastocitos. Dada la importancia de esta JAK quinasa, los compuestos que modulan la ruta de JAK, incluyendo los selectivos para JAK3, pueden ser utiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos donde esta implicada la funcion de linfocitos, macrofagos o mastocitos (Kudlacz et al., (2004) Am. J. Transplant 4: 51-57; Changelian (2003) Science 302: 875-878). Los trastornos en los que se contempla que la accion sobre la ruta de JAK o la modulation de las JAK quinasas, en particular de JAK3, sea terapeuticamente util incluyen, leucemia, linfoma, rechazo de trasplante (por ejemplo, rechazo de trasplante de islotes pancreaticos, aplicaciones en trasplantes de medula osea (por ejemplo, enfermedad injerto contra el hospedador), enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, diabetes, artritis reumatoide, lupus, psoriasis) e inflamacion (por ejemplo, asma, reacciones alergicas). Mas adelante se discuten con mas detalle los trastornos que se pueden beneficiar de la inhibicion de JAK3. Se han notificado datos recientes sobre la inhibicion de JAK en pacientes de aloinjerto de rinon tratados con CP-690.550, y muestran que los marcadores de respuesta alogena (interferon gamma) pueden estar reducidos (Van Gurp EA et al. (2009) Transplanatation 87: 79-86).JAK1, JAK2 and TYK2 are expressed ubiquitously, while JAK3 is predominantly expressed in hematopoietic cells. JAK kinases, including JAK3, are abundantly expressed in primary leukemia cells of children with acute lymphoblastic leukemia, the most common form of childhood cancer, and studies have correlated STAT activation in certain cells with signals that regulate apoptosis (Demoulin et al., (1996), Mol. Cell. Biol. 16: 4710-6; Jurlander et al., (1997), Blood. 89: 4146-52; Kaneko et al., (1997), Clin. Exp. Immun. 109: 185-193 and Nakamura et al., (1996), J. Biol. Chem. 271: 19483-8). It is also known that they are important for the differentiation, function and survival of lymphocytes. JAK-3 in particular plays an essential role in the function of lymphocytes, macrophages and mast cells. Given the importance of this JAK kinase, the compounds that modulate the JAK pathway, including the selective ones for JAK3, can be useful for the treatment of diseases or disorders where lymphocyte, macrophage or mast cell function is involved (Kudlacz et al., (2004) Am. J. Transplant 4: 51-57; Changelian (2003) Science 302: 875-878). Disorders in which it is contemplated that the action on the JAK pathway or the modulation of the JAK kinases, in particular JAK3, is therapeutically useful include, leukemia, lymphoma, transplant rejection (eg, pancreatic islet transplant rejection , applications in bone marrow transplants (for example, graft versus host disease), autoimmune diseases (for example, diabetes, rheumatoid arthritis, lupus, psoriasis) and inflammation (for example, asthma, allergic reactions). more detailed disorders that may benefit from the inhibition of JAK.3 Recent data on the inhibition of JAK have been reported in kidney allograft patients treated with CP-690.550, and show that allogeneic response markers (interferon gamma) may be reduced (Van Gurp EA et al. (2009) Transplanatation 87: 79-86).

A la vista de las numerosas afecciones que se contempla que se beneficien del tratamiento que implica la modulacion de la ruta de JAK, es inmediatamente obvio que los compuestos nuevos que modulan las rutas de JAK y los metodos de uso de estos compuestos deberlan proporcionar sustanciales beneficios terapeuticos a una amplia diversidad de pacientes. Se proporcionan en el presente documento compuestos de 2,4-pirimidina diamina nuevos para su uso en el tratamiento de afecciones en las que la accion sobre la ruta de JAK o la inhibicion de las JAK quinasas, en particular de JAK3, sea terapeuticamente util.In view of the many conditions that are contemplated to benefit from the treatment involved in modulating the JAK pathway, it is immediately obvious that the new compounds that modulate the JAK pathways and the methods of use of these compounds should provide substantial benefits. Therapeutics to a wide diversity of patients. New 2,4-pyrimidine diamine compounds are provided herein for use in the treatment of conditions in which the action on the JAK pathway or the inhibition of JAK kinases, in particular JAK3, is therapeutically useful.

Las patentes y solicitudes de patente relacionadas con la modulacion de la ruta de JAK incluyen: las Patentes de Estados Unidos n.° 5.728.536; 6.080.747; 6.080.748; 6.133.305; 6.177.433; 6.210.654; 6.313.130; 6.316.635; 6.433.018; 6.486.185; 6.506.763; 6.528.509; 6.593.357; 6.608.048; 6.610.688; 6.635.651; 6.677.368; 6.683.082; 6.696.448; 6.699.865; 6.777.417; 6.784.195; 6.825.190; 6.506.763; 6.784.195; 6.528.509; 6.608.048; 7.105.529; 6.699.865; 6.825.190; 6.815.439; 6.949.580; 7.056.944; 6.998.391; 7.074.793; 6.969.760; Solicitudes de Patente dePatents and patent applications related to the modulation of the JAK route include: United States Patents No. 5,728,536; 6,080,747; 6,080,748; 6,133,305; 6,177,433; 6,210,654; 6,313,130; 6,316,635; 6,433,018; 6,486,185; 6,506,763; 6,528,509; 6,593,357; 6,608,048; 6,610,688; 6,635,651; 6,677,368; 6,683,082; 6,696,448; 6,699,865; 6,777,417; 6,784,195; 6,825,190; 6,506,763; 6,784,195; 6,528,509; 6,608,048; 7,105,529; 6,699,865; 6,825,190; 6,815,439; 6,949,580; 7,056,944; 6,998,391; 7,074,793; 6,969,760; Patent Applications of

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

Estados Unidos n.° 2001/0007033 A1; 2002/0115173 A1; 2002/0137141 A1; 2003/0236244 A1; 2004/0102455 A1; 2004/0142404 A1; 2004/0147507 A1 y 2004/0214817 A1; y las Solicitudes de Patente Internacional WO 95/03701A1; WO 99/15500A1; WO 00/00202A1; WO 00/10981A1; WO 00/47583A1; WO 00/51587A2; WO 00/55159A2; WO 01/42246A2; WO 01/45641A2; WO 01/52892A2; WO 01/56993A2; WO 01/57022A2; WO 01/72758A1; WO 02/00661A1; WO 02/43735A1; WO 02/48336A2; WO 02/060492A1; WO 02/060927A1; WO 02/096909A1; WO 02/102800A1; WO 03/020698A2; WO 03/048162A1; WO 03/101989A1; WO 2004/016597A2; WO 2004/041789A1; WO 2004/041810A1; WO 2004/041814A1; WO 2004/046112A2; WO 2004/046120A2; WO 2004/047843A1; WO 2004/058749A1; WO 2004/058753A1; WO 2004/085388A2; WO 2004/092154A1; WO 2005/009957A1; WO 2005/016344A1; WO 2005/028475A2 y WO 2005/033107A1.United States No. 2001/0007033 A1; 2002/0115173 A1; 2002/0137141 A1; 2003/0236244 A1; 2004/0102455 A1; 2004/0142404 A1; 2004/0147507 A1 and 2004/0214817 A1; and International Patent Applications WO 95 / 03701A1; WO 99 / 15500A1; WO 00 / 00202A1; WO 00 / 10981A1; WO 00 / 47583A1; WO 00 / 51587A2; WO 00 / 55159A2; WO 01 / 42246A2; WO 01 / 45641A2; WO 01 / 52892A2; WO 01 / 56993A2; WO 01 / 57022A2; WO 01 / 72758A1; WO 02 / 00661A1; WO 02 / 43735A1; WO 02 / 48336A2; WO 02 / 060492A1; WO 02 / 060927A1; WO 02 / 096909A1; WO 02 / 102800A1; WO 03 / 020698A2; WO 03/048162A1; WO 03/101989A1; WO 2004 / 016597A2; WO 2004 / 041789A1; WO 2004 / 041810A1; WO 2004 / 041814A1; WO 2004 / 046112A2; WO 2004 / 046120A2; WO 2004 / 047843A1; WO 2004 / 058749A1; WO 2004 / 058753A1; WO 2004 / 085388A2; WO 2004 / 092154A1; WO 2005 / 009957A1; WO 2005 / 016344A1; WO 2005 / 028475A2 and WO 2005 / 033107A1.

Las patentes y solicitudes de patente que describen compuestos de pirimidina diamina sustituidas incluyen: la solicitud de Estados Unidos n.° de Ser. 10/355.543 presentada el 31 de enero de 2003 (US2004/0029902A1), la solicitud internacional n.° de Serie PCT/US03/03022 presentada el 31 de enero de 2003 (wO 03/063794), la solicitud de Estados Unidos n.° de Ser. 10/631.029 presentada el 29 de junio de 2003, la solicitud internacional n.° de Serie PCT/US03/24087 (WO 04/014382), la solicitud de Estados Unidos n.° de Ser. 10/903.263 presentada el 30 de julio de 2004 y la solicitud internacional n.° de Serie PCT/US2004/24716 (WO 05/016893). Los compuestos de pirimidina diamina sustituidas tambien se describen en las solicitudes de patente internacional numeros de publicacion: WO 02/059110, WO 03/074515, WO 03/106416, WO 03/066601, WO 03/063794, WO 04/046118, WO 05/016894, WO 05/122294, WO 05/066156, WO 03/002542, WO 03/030909, WO 00/39101, WO 05/037800 y la patente de Estados Unidos n.° de publicacion 2003/0149064.Patents and patent applications describing substituted pyrimidine diamine compounds include: U.S. application No. Ser. 10 / 355,543 filed January 31, 2003 (US2004 / 0029902A1), international serial application No. PCT / US03 / 03022 filed on January 31, 2003 (wO 06/033794), United States application No. of Ser. 10 / 631,029 filed on June 29, 2003, international application No. of PCT Series / US03 / 24087 (WO 04/014382), United States application No. of Ser. 10 / 903,263 filed on July 30, 2004 and international application No. of Series PCT / US2004 / 24716 (WO 05 / 016893). Substituted pyrimidine diamine compounds are also described in international patent applications publication numbers: WO 02/059110, WO 03/074515, WO 03/106416, WO 03/066601, WO 03/063794, WO 04/046118, WO 05/016894, WO 05/122294, WO 05/066156, WO 03/002542, WO 03/030909, WO 00/39101, WO 05/037800 and United States Patent Publication No. 2003/0149064.

El documento WO 2008/009458 A1 describe compuestos de pirimidina tales como compuestos de 2,4-di(arilamino)- pirimidina-5-carboxamida que presentan actividades de inhibicion de las JAK-3 y JAK-2 quinasas. El documento EP1518855 A1 describe compuestos de diaminopirimidina carboxamida que se pueden utilizar para la prevencion o el tratamiento de enfermedades respiratorias en las que STAT 6 esta implicado, tales como asma, enfermedad pulmonar obstructiva cronica y similares. El documento US 2004/0029902 A1 describe compuestos de 2,4-pirimidina diamina que inhiben las cascadas de senalizacion de los receptores de IgE y/o IgG, junto con metodos de slntesis de tales compuestos y metodos para el uso de tales compuestos en metodos de tratamiento medico.WO 2008/009458 A1 describes pyrimidine compounds such as 2,4-di (arylamino) -pyrimidine-5-carboxamide compounds that exhibit inhibition activities of JAK-3 and JAK-2 kinases. EP1518855 A1 describes diaminopyrimidine carboxamide compounds that can be used for the prevention or treatment of respiratory diseases in which STAT 6 is involved, such as asthma, chronic obstructive pulmonary disease and the like. US 2004/0029902 A1 describes 2,4-pyrimidine diamine compounds that inhibit the signaling cascades of IgE and / or IgG receptors, together with methods of synthesis of such compounds and methods for the use of such compounds in methods of medical treatment.

Aunque se han hecho progresos en este campo, todavla existe una necesidad en la tecnica de compuestos que inhiban la syk y/o JAK quinasa, as! como de metodos para el tratamiento de afecciones en un paciente, tales como la reestenosis, la trombosis y/o la inflamacion, que puedan beneficiarse de tal inhibicion. Ademas, tambien serla conveniente la disponibilidad de compuestos que inhiban de forma selectiva una de estas quinasas en comparacion con otras quinasas. La presente invencion satisface esta y otras necesidades.Although progress has been made in this field, there is still a need in the art for compounds that inhibit syk and / or JAK kinase, as well! as of methods for the treatment of conditions in a patient, such as restenosis, thrombosis and / or inflammation, which may benefit from such inhibition. In addition, the availability of compounds that selectively inhibit one of these kinases in comparison with other kinases would also be convenient. The present invention satisfies this and other needs.

Breve sumario de la invencionBrief summary of the invention

La presente invencion proporciona compuestos nuevos que tienen actividad como inhibidores de la actividad de syk (tambien denominados en el presente documento como “inhibidores de syk”) y/o de la actividad de la JAK quinasa (tambien denominados en el presente documento como "inhibidores de JAK "), as! como metodos para su preparacion y uso, y composiciones farmaceuticas que contienen los mismos. Tales compuestos tienen la siguiente estructura (I):The present invention provides novel compounds that have activity as inhibitors of syk activity (also referred to herein as "syk inhibitors") and / or JAK kinase activity (also referred to herein as "inhibitors of JAK "), ace! as methods for their preparation and use, and pharmaceutical compositions containing them. Such compounds have the following structure (I):

imagen1image 1

o un tautomero, sal o estereoisomero de los mismo farmaceuticamente aceptable, en la que D1, R1, Y1 y R2 son como se definen mas adelante.or a pharmaceutically acceptable tautomer, salt or stereoisomer thereof, wherein D1, R1, Y1 and R2 are as defined below.

La presente invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un transportador y/o diluyente farmaceuticamente aceptable.The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent.

Los compuestos de la presente invencion tienen utilidad sobre un amplio intervalo de aplicaciones terapeuticas y pueden utilizarse para tratar una diversidad de afecciones, mediadas al menos en parte por la actividad de syk, tanto en hombres como en mujeres, as! como en un mamlfero en general (tambien denominado en el presente documento como un “sujeto”). Por ejemplo, tales trastornos incluyen, pero sin limitacion, los asociados con enfermedad cardiovascular, enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria. En concreto, los compuestos de la presenteThe compounds of the present invention have utility over a wide range of therapeutic applications and can be used to treat a variety of conditions, mediated at least in part by the activity of syk, both in men and women, as well! as in a mammal in general (also referred to herein as a "subject"). For example, such disorders include, but are not limited to, those associated with cardiovascular disease, inflammatory disease or autoimmune disease. Specifically, the compounds of the present

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

invencion tienen utilidad para el tratamiento de afecciones o trastornos que incluyen, pero sin limitacion: reestenosis, trombosis, inflamacion, trombocitopenia inducida por heparina, miocardiopatla dilatada, anemia de celulas falciformes, aterosclerosis, infarto de miocardio, inflamacion vascular, angina inestable, slndromes coronarios agudos, alergia, asma, artritis reumatoide, enfermedades mediadas por linfocitos B tales como linfomas no Hodgkin , slndrome antifosfolipldico, lupus, psoriasis, esclerosis multiple, nefropatla terminal, anemia hemolltica, purpura trombocitopenica inmunitaria y leucemia linfocltica cronica. Por lo tanto, en una realization, la invencion proporciona un compuesto de formula (I), normalmente en la forma de una composition farmaceutica, para su uso en el tratamiento de un sujeto que lo necesite, incluyendo dicho tratamiento la administration de una cantidad eficaz de dicho compuesto.The invention is useful for the treatment of conditions or disorders that include, but are not limited to: restenosis, thrombosis, inflammation, thrombocytopenia induced by heparin, dilated cardiomyopathy, sickle cell anemia, atherosclerosis, myocardial infarction, vascular inflammation, unstable angina, coronary slndromes acute, allergy, asthma, rheumatoid arthritis, B-mediated diseases such as non-Hodgkin lymphomas, antiphospholipldic syndrome, lupus, psoriasis, multiple sclerosis, terminal nephropathy, hemolytic anemia, thrombocytopenic immune purpura and chronic lymphocytic leukemia. Therefore, in one embodiment, the invention provides a compound of formula (I), usually in the form of a pharmaceutical composition, for use in the treatment of a subject in need thereof, including said treatment the administration of an effective amount. of said compound.

Las afecciones asociadas con enfermedad cardiovascular se seleccionan del grupo que consiste en slndrome coronario agudo, infarto de miocardio, angina inestable, angina resistente, trombosis coronaria oclusiva que se presenta despues de la terapia trombolltica o angioplastia poscoronaria, un slndrome cerebrovascular mediado de forma trombotica, ictus embolico, ictus trombotico, crisis isquemicas transitorias, flebotrombosis, flebotrombosis profunda, embolia pulmonar, coagulopatla, coagulation intravascular diseminada, purpura trombocitopenica trombotica, tromboangitis obliterante, enfermedad trombotica asociada con trombocitopenia inducida por heparina, complicaciones tromboticas asociadas con la circulation extracorporea, complicaciones tromboticas asociadas con la instrumentation tales como el cateterismo cardiaco u otros cateterismos cardiovasculares, globo de contrapulsacion aortica, estent coronario o valvula cardiaca, y afecciones que necesitan el ajuste de dispositivos protesicos.The conditions associated with cardiovascular disease are selected from the group consisting of acute coronary syndrome, myocardial infarction, unstable angina, resistant angina, occlusive coronary thrombosis that occurs after thrombolytic therapy or postcoronary angioplasty, a thrombotic-mediated cerebrovascular syndrome, embolic stroke, thrombotic stroke, transient ischemic crisis, phlebotrombosis, deep phlebotrombosis, pulmonary embolism, coagulopatla, disseminated intravascular coagulation, thrombotic thrombocytopenic purpura, obliterating thromboangitis, thrombotic disease associated with heparin, thrombotic complications associated with thrombotic complications associated with thrombotic complications associated with thrombotic complications associated with instrumentation such as cardiac catheterization or other cardiovascular catheterization, balloon aortic counterpulsation, coronary stent or cardiac valve, and conditions that require the adjustment of prosthetic devices s.

Los compuestos de la presente invencion tambien pueden utilizarse en un metodo para la inhibition de la actividad de syk de una muestra sangulnea, que comprende poner en contacto dicha muestra con un compuesto de la presente invencion.The compounds of the present invention can also be used in a method for the inhibition of the syk activity of a blood sample, which comprises contacting said sample with a compound of the present invention.

La presente invencion proporciona adicionalmente compuestos en forma purificada, as! como intermediarios qulmicos.The present invention further provides compounds in purified form, as well! as chemical intermediaries.

Estos y otros aspectos, objetivos, caracterlsticas y ventajas de la invencion seran obvios tras la referencia a la siguiente description detallada y las figuras. Para tal fin, se exponen en el presente documento diversas referencias que describen con mas detalle determinada information anterior, procedimientos, compuestos y/o composiciones.These and other aspects, objectives, characteristics and advantages of the invention will be obvious after reference to the following detailed description and figures. For this purpose, various references are described herein that describe in more detail certain previous information, procedures, compounds and / or compositions.

Breve descripcion de los dibujosBrief description of the drawings

La Figura 1 muestra como Syk sirve como un mediador clave de la serialization mediada por el receptor Fc en la biologla celular y en multiples enfermedades.Figure 1 shows how Syk serves as a key mediator of Fc receptor-mediated serialization in the cell biology and in multiple diseases.

La Figura 2 muestra como la manipulation genetica dirigida de Syk indica que Syk sirve como un mediador clave en la biologla de plaquetas arteriales y una diana selectiva para el tratamiento de la trombosis arterial.Figure 2 shows how Syk's directed genetic manipulation indicates that Syk serves as a key mediator in the arterial platelet biology and a selective target for the treatment of arterial thrombosis.

La Figura 3 muestra una slntesis general de los compuestos de la presente invencion.Figure 3 shows a general synthesis of the compounds of the present invention.

La Figura 5 proporciona la Tabla 2, que ilustra los compuestos de la presente invencion y las CI50 de Syk.Figure 5 provides Table 2, which illustrates the compounds of the present invention and Syk IC50s.

La Figura 8 muestra una serie de compuestos que se identificaron como que inhiben de forma selectiva a Syk en ensayos de quinasa purificada. Figura 8A) Compuestos de la serie especlfica para Syk (P459-72 y P505-15) y de la serie de multiquinasas (ejemplo 100b) se exploraron a 300 nM frente al panel de quinasas purificadas de Millipore (270 quinasas analizadas con ATP 10 pM) para determinar la potencia y la selectividad por Syk. Los datos se representan como un mapa de calor, definido en la parte inferior. Figura 8B) Subconjunto de quinasas purificadas que tuvieron una inhibicion > 80 % para cualquiera de los tres compuestos. P459-72 solamente inhibio a Syk y MLK1. P505-15 a 50 nM (~10x mayor que su CI50 para Syk) solo inhibio a Syk. El ejemplo 100b inhibio a multiples quinasas, incluyendo a Syk, jAK2 y JAK3. La CI50 de la inhibicion de Syk se notifica para cada compuesto a la derecha del mapa de calor. La inhibicion de quinasa porcentual se proporciona en cada panel dentro del mapa de calor.Figure 8 shows a series of compounds that were identified as selectively inhibiting Syk in purified kinase assays. Figure 8A) Compounds of the specific series for Syk (P459-72 and P505-15) and of the multi kinase series (example 100b) were scanned at 300 nM in front of the Millipore purified kinase panel (270 kinases analyzed with 10 pM ATP ) to determine the power and selectivity by Syk. The data is represented as a heat map, defined at the bottom. Figure 8B) Subset of purified kinases that had an inhibition> 80% for any of the three compounds. P459-72 only inhibited Syk and MLK1. P505-15 at 50 nM (~ 10x greater than its IC50 for Syk) only inhibited Syk. Example 100b inhibited multiple kinases, including Syk, jAK2 and JAK3. The IC50 of Syk inhibition is reported for each compound to the right of the heat map. The percent kinase inhibition is provided on each panel within the heat map.

La Figura 9 muestra la inhibicion selectiva de Syk en llneas celulares de linfoma no Hodgkin. Los linfocitos B se estimularon con anticuerpo anti BCR en presencia de las concentraciones indicadas de los inhibidores especlficos de Syk, P459-72 y P505-15 (Figura 9A y Figura 9B) o el inhibidor dual de Syk/JAK, el ejemplo 100b (Figura 9C). Despues, se realizaron analisis por transferencia de Western de lisados de celula completa para evaluar la actividad de la Syk quinasa (pBLNK Y84 y BLNK total; los dos geles de la parte superior) y la actividad de la Src quinasa (pSyk Y352 y Syk total; los dos geles de la parte inferior). Los experimentos se realizaron 2-3 veces cada uno, los graficos de barras representan la media ± D.T. de pBLNK Y84. Las CI50 calculadas para la inhibicion de la Syk quinasa se presentan encima de los graficos.Figure 9 shows the selective inhibition of Syk in non-Hodgkin lymphoma cell lines. B lymphocytes were stimulated with anti BCR antibody in the presence of the indicated concentrations of the specific Syk inhibitors, P459-72 and P505-15 (Figure 9A and Figure 9B) or the dual Syk / JAK inhibitor, example 100b (Figure 9C). Then, Western blot analysis of complete cell lysates was performed to assess the activity of Syk kinase (pBLNK Y84 and total BLNK; the two gels at the top) and the activity of Src kinase (pSyk Y352 and Total Syk ; the two gels from the bottom). The experiments were performed 2-3 times each, the bar graphs represent the mean ± D.T. from pBLNK Y84. The IC50 calculated for the inhibition of Syk kinase are presented above the graphs.

La Figura 10 proporciona una comparacion de la inhibicion especlfica de Syk y dual de Syk/JAK en llneas celulares de lNh. Se estimularon linfocitos B con anti BCR (Figura 10A) o IL-4 (Figura 10B) durante 15 min enFigure 10 provides a comparison of specific Syk and dual Syk / JAK inhibition in NHL cell lines. B lymphocytes were stimulated with anti BCR (Figure 10A) or IL-4 (Figure 10B) for 15 min in

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

presencia de diversas concentraciones de cada inhibidor, segun se indica. Despues, se evaluo en las celulas la inhibicion de las rutas de senalizacion por fosfo-citometrla de flujo. Figura 10A) Los graficos de barras (media ± D.T., n=3) representan la actividad de Src (IFM de pSyk Y352) y la actividad de Syk (IFM de pERK Y204) despues de la estimulacion del BCR en diversas condiciones de tratamiento. Figura 10B) Los graficos de barras representan IFM de pSTAT-6 Y641 (media ± D.T., n=3) despues de la estimulacion con IL-4 en presencia de diversas concentraciones de cada inhibidor, segun se indica.presence of various concentrations of each inhibitor, as indicated. Then, the inhibition of the signaling pathways by phospho-cytometric flow was evaluated in the cells. Figure 10A) Bar graphs (mean ± D.T., n = 3) represent the activity of Src (IFM of pSyk Y352) and the activity of Syk (IFM of pERK Y204) after stimulation of the BCR under various treatment conditions. Figure 10B) Bar graphs represent IFM of pSTAT-6 Y641 (mean ± D.T., n = 3) after stimulation with IL-4 in the presence of various concentrations of each inhibitor, as indicated.

La Figura 11 muestra como los inhibidores especlficos de Syk alteran la proliferation y supervivencia, e inducen la apoptosis, en llneas celulares de LNH. Las llneas celulares de LNH “de tipo BCR” dependientes de Syk y "de tipo no BCR” independiente de Syk se describieron anteriormente (Polo, Juszczynski et al. Proc Natl Acad Sci USA 104(9): 3207-12 (2007). Figura 11A) Las celulas se trataron durante 72 h con el inhibidor P505-15 especlfico de Syk a 1 y 3 pM. La apoptosis se determino mediante analisis de FACS de la caspasa 3 activa; los datos se representan como histogramas. Figura 11B) Se analizo la sensibilidad especlfica de Syk (P459-72 y P505-15) en llneas celulares adicionales frente a la inhibicion dual de Syk/JAK (ejemplo 100b). Los graficos de barras representan la media ± D.T. (n=3) del porcentaje de celulas positivas para caspasa 3 siguiendo cada condition.Figure 11 shows how specific Syk inhibitors alter proliferation and survival, and induce apoptosis, in NHL cell lines. Syk-dependent and "non-BCR-type" NHL-dependent NHL cell lines described above (Polo, Juszczynski et al. Proc Natl Acad Sci USA 104 (9): 3207-12 (2007). Figure 11A) Cells were treated for 72 h with the specific P505-15 inhibitor of Syk at 1 and 3. pM Apoptosis was determined by FACS analysis of active caspase 3, the data is represented as histograms Figure 11B) I analyze the specific sensitivity of Syk (P459-72 and P505-15) in additional cell lines against dual inhibition of Syk / JAK (example 100b). Bar graphs represent the mean ± SD (n = 3) of the percentage of Caspase 3 positive cells following each condition.

Descripcion detallada de la invencionDetailed description of the invention

Como se usa en el presente documento, los terminos a continuation tienen los siguientes significados, a menos que se especifique otra cosa:As used herein, the terms below have the following meanings, unless otherwise specified:

1. Abreviaturas y definiciones1. Abbreviations and definitions

Las abreviaturas usadas en el presente documento son convencionales, a menos que se indique otra cosa. Se usan las siguientes abreviaturas: AcOH = acido acetico, AIBN = azobisisobutironitrilo (tambien azobisisobutilonitrilo), ac. = acuoso, Boc = t-butilcarboxi, Bz - bencilo, BOP = hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio, BPO = peroxido de benzollo, nBuOH = n-butanol, CBr4 = tetrabromometano, mCPBA = acido m-cloroperoxibenzoico, CH2O2 o DCM = diclorometano, Cs2CO3 = carbonato de cesio, CuCl2 = cloruro de cobre; DIBAL = hidruro de diisobutilaluminio, DIEA = base de Hunig o diisopropil etilamina, DME = dimetil eter, DMF = dimetil formamida, DMSO = dimetilsulfoxido, DPPA = difenil fosforil azida, Et3N = trietilamina, EtOAc = acetato de etilo, g = gramo, HATU = hexafluorofosfato de 2-(1H 7-Azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronio, H2 = hidrogeno; H2O = agua; HBr = bromuro de hidrogeno; HCl = cloruro de hidrogeno, VIH = virus de la inmunodeficiencia humana, HPLC = cromatografla llquida de alta presion, h = hora, IgE = inmunoglobulina E, IC50 = La concentration de un inhibidor que se requiere para una inhibicion al 50 % de una enzima in vitro, IPA = alcohol isopropllico, kg = kilogramo, KCN = cianuro potasico, KOH = hidroxido potasico, K2PO4 = fosfato potasico, LDA = diisopropilamina de litio, LiAlH4 = hidruro de litio y aluminio = LiOH: hidroxido de litio; MeCN = acetonitrilo; MS = Espec. de masas, m/z = relation masa-carga, MHz = Megahertzio, MeOH = metanol, pM = micromolar, pl = microlitro, mg = miligramo, mm = millmetro, mM = milimolar, mmol = milimol, ml = mililitro, mOD/min = unidades de densidad milioptica por minuto, min = minuto, M = molar, Na2CO3 = carbonato sodico, ng = nanogramo, NaHCO3 = bicarbonato sodico; NaNO2 = nitrito sodico; NaOH = hidroxido sodico; Na2S2O3 = bisulfato sodico; Na2SO4 = sulfato sodico; NBS = N-bromosuccinamida; NH4Cl = cloruro de amonio; NH4OAc = acetato amonico; NaSMe = metiltiolato sodico, NBS = N-bromosuccinamida, n-BuLi = n-butil litio, nm = nanometro, nM = nanomolar, N = Normal, NMP = N-metilpirrolidina, RMN = resonancia magnetica nuclear, Pd/C = paladio sobre carbono, Pd(PPh3)4 = 7etraquis-(trifenilfosfina)-paladio, pM = picomolar, Pin = pinacolato, PEG = polietilenglicol, PPh3 o Ph3P = trifenil fosfina, RLV = virus de la leucemia Rauscher, Ra-Ni = Nlquel Raney, SOCl2 = cloruro de tionilo, TA = temperatura ambiente, TEA = trietilamina, THF = tetrahidrofurano, TFA = acido trifluoroacetico, TLC = cromatografla de capa fina, TMS = trimetilsililo, Tf = trifluorometilsulfonilo y TSC = citrato trisodico.Abbreviations used herein are conventional, unless otherwise indicated. The following abbreviations are used: AcOH = acetic acid, AIBN = azobisisobutyronitrile (also azobisisobutyl nitrile), ac. = aqueous, Boc = t-butylcarboxy, Bz-benzyl, BOP = benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) -phosphonium hexafluorophosphate, BPO = benzollo peroxide, nBuOH = n-butanol, CBr4 = tetrabromomethane, mCPBA = m-chloro acid , CH2O2 or DCM = dichloromethane, Cs2CO3 = cesium carbonate, CuCl2 = copper chloride; DIBAL = diisobutylaluminum hydride, DIEA = Hunig base or diisopropyl ethylamine, DME = dimethyl ether, DMF = dimethyl formamide, DMSO = dimethylsulfoxide, DPPA = diphenyl phosphoryl azide, Et3N = triethylamine, EtOAc = ethyl acetate, g = gram, HU = 2- (1 H 7-Azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyl uronium hexafluorophosphate, H2 = hydrogen; H2O = water; HBr = hydrogen bromide; HCl = hydrogen chloride, HIV = human immunodeficiency virus, HPLC = high pressure liquid chromatograph, h = hour, IgE = immunoglobulin E, IC50 = The concentration of an inhibitor that is required for a 50% inhibition of an enzyme in vitro, IPA = isopropyl alcohol, kg = kilogram, KCN = potassium cyanide, KOH = potassium hydroxide, K2PO4 = potassium phosphate, LDA = lithium diisopropylamine, LiAlH4 = lithium aluminum hydride = LiOH: lithium hydroxide; MeCN = acetonitrile; MS = Spec. mass, m / z = mass-load ratio, MHz = Megahertz, MeOH = methanol, pM = micromolar, pl = microliter, mg = milligram, mm = millimeter, mM = millimolar, mmol = millimol, ml = milliliter, mOD / min = units of milioptic density per minute, min = minute, M = molar, Na2CO3 = sodium carbonate, ng = nanogram, NaHCO3 = sodium bicarbonate; NaNO2 = sodium nitrite; NaOH = sodium hydroxide; Na2S2O3 = sodium bisulfate; Na2SO4 = sodium sulfate; NBS = N-bromosuccinamide; NH4Cl = ammonium chloride; NH4OAc = ammonium acetate; NaSMe = sodium methylthiolate, NBS = N-bromosuccinamide, n-BuLi = n-butyl lithium, nm = nanometer, nM = nanomolar, N = Normal, NMP = N-methylpyrrolidine, NMR = nuclear magnetic resonance, Pd / C = palladium on carbon, Pd (PPh3) 4 = 7etrachis- (triphenylphosphine) -palladium, pM = picomolar, Pin = pinacolato, PEG = polyethylene glycol, PPh3 or Ph3P = triphenyl phosphine, RLV = Rauscher leukemia virus, Ra-Ni = Nickel Raney, SOCl2 = thionyl chloride, TA = room temperature, TEA = triethylamine, THF = tetrahydrofuran, TFA = trifluoroacetic acid, TLC = thin layer chromatography, TMS = trimethylsilyl, Tf = trifluoromethylsulfonyl and TSC = trisodium citrate.

Se aprecia aqul que, como se usa en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, la formas en singular "un", "una" y "el/la" incluyen la referencia en plural a menos que el contexto indique claramente otra cosa.It is appreciated that, as used herein and the appended claims, the singular forms "a", "a" and "the" include the plural reference unless the context clearly indicates otherwise.

"Alquilo", por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere, a menos que se indique otra cosa, a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, completamente saturado alifatico que tiene el numero de atomos de carbono designado. Por ejemplo, "alquilo C1-8" se refiere a un radical hidrocarburo lineal o ramificado, que contiene de 1 a 8 atomos de carbono que se obtiene por la elimination de un atomo de hidrogeno de un unico atomo de carbono de un alcano precursor. La expresion "alquilo sin sustituir" se refiere a grupos alquilo que no contienen grupos distintos de los radicales hidrocarburo alifaticos completamente saturados. Por lo tanto, la frase incluye grupos alquilo de cadena lineal tales como metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo y similares. La expresion tambien incluye isomeros de cadena ramificada de grupos alquilo de cadena lineal tales como isopropilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, y similares. Los grupos alquilo representativos incluyen grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 atomos de carbono. Los grupos alquilo representativos adicionales incluyen grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 atomos de carbono."Alkyl", by itself or as part of another substituent, refers, unless otherwise indicated, to a linear or branched, fully saturated aliphatic hydrocarbon radical having the designated number of carbon atoms. For example, "C1-8 alkyl" refers to a linear or branched hydrocarbon radical, containing from 1 to 8 carbon atoms that is obtained by the removal of a hydrogen atom from a single carbon atom from a precursor alkane. The term "unsubstituted alkyl" refers to alkyl groups that do not contain groups other than fully saturated aliphatic hydrocarbon radicals. Therefore, the phrase includes straight chain alkyl groups such as methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl and the like. The expression also includes branched chain isomers of straight chain alkyl groups such as isopropyl, t-butyl, isobutyl, sec-butyl, and the like. Representative alkyl groups include straight and branched chain alkyl groups having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12 carbon atoms. Additional representative alkyl groups include straight and branched chain alkyl groups having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

"Alquenilo" por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a una cadena lineal o ramificada, que puede ser mono o poliinsaturada, que tiene el numero de atomos de carbono designado. Por ejemplo, "alquenilo C2-C8" se refiere a un radical alquenilo que tiene de 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 atomos que se obtiene mediante la eliminacion de un atomo de hidrogeno de un unico atomo de carbono de un alcano precursor. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion vinilo, 2-propenilo, es decir-CH=C(H)(CH3), -CH=C(CHa)2, -C(CH3)=C(H)2, -C(CH3)=C(H)(CHa), - C(CH2CH3)=CH2, butadienilo, por ejemplo, 2-(butadienilo), pentadienilo, por ejemplo 2,4-pentadienilo y 3-(1,4- pentadienilo), y hexadienilo, entre otros, y homologos superiores y estereoisomeros de los mismos. Un grupo alquenilo "sustituido" incluye grupos alquenilo en los que un atomo no carbono o no hidrogeno esta unido a un carbono doble unido a otro carbono y aquellos en los que uno de los atomos no carbono o no hidrogeno esta unido a un carbono no implicado en un doble enlace a otro carbono. Cada sitio de insaturacion puede ser de configuracion cis o trans sobre el doble o dobles enlaces."Alkenyl" by itself or as part of another substituent refers to a linear or branched chain, which can be mono or polyunsaturated, having the number of carbon atoms designated. For example, "C2-C8 alkenyl" refers to an alkenyl radical having 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 atoms that is obtained by removing a hydrogen atom from a single carbon atom of a precursor alkane. Examples include, but are not limited to vinyl, 2-propenyl, that is -CH = C (H) (CH3), -CH = C (CHa) 2, -C (CH3) = C (H) 2, -C ( CH3) = C (H) (CHa), - C (CH2CH3) = CH2, butadienyl, for example, 2- (butadienyl), pentadienyl, for example 2,4-pentadienyl and 3- (1,4-pentadienyl), and hexadienyl, among others, and higher homologues and stereoisomers thereof. A "substituted" alkenyl group includes alkenyl groups in which a non-carbon or non-hydrogen atom is attached to a double carbon attached to another carbon and those in which one of the non-carbon or non-hydrogen atoms is attached to an uninvolved carbon. in a double bond to another carbon. Each unsaturation site can be of cis or trans configuration on the double or double bonds.

El termino "alquinilo", por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que puede estar mono o poliinsaturado, que tiene el numero de atomos de carbono designado. Por ejemplo, "alquinilo C2-C8" se refiere a un radical alquinilo que tiene de 2 a 8 atomos de carbono que se obtiene por la eliminacion de un atomo de hidrogeno de un unico atomo de carbono de un alcano precursor. "Alquinilo sin sustituir" se refiere a grupos de cadena lineal y ramificada tales como los descritos con respecto a los grupos alquilo sin sustituir como se ha definido anteriormente, excepto que existe al menos un triple enlace entre dos atomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion, etinilo, por ejemplo, -C°C(H), 1 -propinilo, por ejemplo, - C°C(CH3), -C°C(CH2CH3), -C(H2)C°C(H), -C(H)2C°C(CH3), y -C(H)2C°C(CH2CH3) entre otros, y homologos superiores e isomeros de los mismos. Un grupo alquinilo "sustituido" incluye grupos alquinilo en los que un atomo no carbono o no hidrogeno esta unido a un triple carbono unido a otro carbono y aquellos en los que un atomo no carbono o no hidrogeno esta unido a un carbono no implicado en un triple enlace a otro carbono.The term "alkynyl", by itself or as part of another substituent, refers to a straight or branched chain hydrocarbon radical, which may be mono or polyunsaturated, having the number of carbon atoms designated. For example, "C2-C8 alkynyl" refers to an alkynyl radical having from 2 to 8 carbon atoms that is obtained by removing a hydrogen atom from a single carbon atom from a precursor alkane. "Unsubstituted alkynyl" refers to straight and branched chain groups such as those described with respect to the unsubstituted alkyl groups as defined above, except that there is at least a triple bond between two carbon atoms. Examples include, but are not limited to, ethynyl, for example, -C ° C (H), 1 -propyl, for example, - C ° C (CH3), -C ° C (CH2CH3), -C (H2) C ° C (H), -C (H) 2C ° C (CH3), and -C (H) 2C ° C (CH2CH3) among others, and higher homologs and isomers thereof. A "substituted" alkynyl group includes alkynyl groups in which a non-carbon or non-hydrogen atom is attached to a triple carbon attached to another carbon and those in which a non-carbon or non-hydrogen atom is attached to a carbon not involved in a carbon. triple bond to another carbon.

"Alquileno", por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un radical divalente obtenido a partir de un alcano, como se ilustra por -CH2CH2CH2CH2-. Tlpicamente, un grupo alquileno tendra 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 atomos de carbono, que se obtiene por la eliminacion de un atomo de hidrogeno de un unico atomo de carbono de un alquilo precursor."Alkylene", by itself or as part of another substituent, refers to a divalent radical obtained from an alkane, as illustrated by -CH2CH2CH2CH2-. Typically, an alkylene group will have 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms, which is obtained by removing a hydrogen atom from a single carbon atom from a precursor alkyl.

"Cicloalquilo" o "carbociclo", por si mismos o junto con otros terminos, representan, a menos que se indique otra cosa, versiones clclicas de "alquilo", "alquenilo" y "alquinilo" en las que todos los atomos en el anillo son carbono. "Cicloalquilo" o "carbociclo" se refiere a un grupo mono o policlclico. Cuando se usa junto con sustituyentes cicloalquilo, el termino "policlclico" se refiere en el presente documento a estructuras clclicas alquilo condensadas o no condensadas. "Cicloalquilo" o "carbociclo" puede formar un anillo puenteado o un anillo espiro. El grupo cicloalquilo puede tener uno o mas dobles o triples enlaces. El termino "cicloalquenilo" se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene al menos un sitio de insaturacion alquenilo entre los vertices anulares. El termino "cicloalquinilo" se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene al menos un sitio de insaturacion alquinilo entre los vertices anulares. Cuando "cicloalquilo" se usa junto con "alquilo", como en cicloalquil C3-8-alquileno C3-8-, la porcion cicloalquilo tiene que tener el numero indicado de atomos de carbono (por ejemplo, de tres a ocho atomos de carbono), mientras que la porcion alquileno tiene de uno a ocho atomos de carbono. Los sustituyentes cicloalquilo tlpicos tienen de 3 a 8 atomos en el anillo. Los ejemplos de cicloalquilo incluyen ciclopentilo, ciclohexilo, 1- ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, y similares."Cycloalkyl" or "carbocycle", by themselves or together with other terms, represent, unless otherwise indicated, cyclic versions of "alkyl", "alkenyl" and "alkynyl" in which all atoms in the ring They are carbon. "Cycloalkyl" or "carbocycle" refers to a mono or polycyclic group. When used together with cycloalkyl substituents, the term "polycyclic" refers herein to condensed or non-condensed alkyl cyclic structures. "Cycloalkyl" or "carbocycle" can form a bridged ring or a spiro ring. The cycloalkyl group may have one or more double or triple bonds. The term "cycloalkenyl" refers to a cycloalkyl group having at least one alkenyl unsaturation site between the annular vertices. The term "cycloalkynyl" refers to a cycloalkyl group having at least one alkynyl unsaturation site between the annular vertices. When "cycloalkyl" is used together with "alkyl", as in C3-8 cycloalkyl-C3-8- alkylene, the cycloalkyl moiety has to have the indicated number of carbon atoms (eg, three to eight carbon atoms) , while the alkylene portion has one to eight carbon atoms. Typical cycloalkyl substituents have 3 to 8 ring atoms. Examples of cycloalkyl include cyclopentyl, cyclohexyl, 1- cyclohexenyl, 3-cyclohexenyl, cycloheptyl, and the like.

"Arilo" por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo poliinsaturado, aromatico, que contiene de 6 a 14 atomos de carbono, que puede ser un unico anillo o multiples anillos (hasta tres anillos) que estan condensados entre si o unidos covalentemente. Por lo tanto, la frase incluye, pero sin limitacion, grupos tales como fenilo, bifenilo, antracenilo, naftilo a modo de ejemplo. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo sin sustituir incluyen fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo y 4-bifenilo. "Grupo arilo sustituido" incluye, por ejemplo, -CH2OH (un atomo de carbono y un heteroatomo que reemplaza un atomo de carbono) y -CH2SH. El termino "heteroalquileno", por si mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un radical divalente obtenido a partir de heteroalquilo, como se ilustra por -CH2-CH2-S-CH2CH2- - y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Para los grupos heteroalquileno, los heteroatomos tambien pueden ocupar cualquiera o ambos de los extremos de la cadena (por ejemplo, alquilenooxi, alquilenodioxi, alquilenoamino, alquilenodiamino, y similares). Aun adicionalmente, para los grupos de union de alquileno y heteroalquileno, no esta implicada ninguna orientacion del grupo de union."Aryl" by itself or as part of another substituent refers to a polyunsaturated, aromatic hydrocarbon group, containing from 6 to 14 carbon atoms, which can be a single ring or multiple rings (up to three rings) that are condensed each other or united covalently. Therefore, the phrase includes, but is not limited to, groups such as phenyl, biphenyl, anthracenyl, naphthyl by way of example. Non-limiting examples of unsubstituted aryl groups include phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl and 4-biphenyl. "Substituted aryl group" includes, for example, -CH2OH (a carbon atom and a heteroatom that replaces a carbon atom) and -CH2SH. The term "heteroalkylene", by itself or as part of another substituent, refers to a divalent radical obtained from heteroalkyl, as illustrated by -CH2-CH2-S-CH2CH2- - and -CH2-S-CH2- CH2-NH-CH2-. For heteroalkylene groups, heteroatoms can also occupy either or both ends of the chain (for example, alkyleneoxy, alkylenedioxy, alkyleneamino, alkylenediamine, and the like). Even further, for the alkylene and heteroalkylene binding groups, no orientation of the binding group is involved.

Las expresiones "heterociclo", "heterociclilo" o "heteroclclico" se refiere a un grupo clclico saturado o insaturado no aromatico que contiene al menos un heteroatomo. Como se usa en el presente documento, el termino "heteroatomo" pretende incluir oxlgeno (O), nitrogeno (N), azufre (S) y silicio (Si). Cada heterociclo puede estar unido en cualquier carbono o heteroatomo del anillo disponible. Cada heterociclo puede tener uno o mas anillos. Cuando estan presentes multiples anillos, pueden condensarse entre si o unirse covalentemente. Cada heterociclo contiene tlpicamente 1, 2, 3, 4 o 5, heteroatomos independientemente seleccionados. Preferiblemente, estos grupos contienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 atomos de carbono, 0, 1, 2, 3, 4 o 5 atomos de nitrogeno, 0, 1 o 2 atomos de azufre y 0, 1 o 2 atomos de oxlgeno. Mas preferiblemente, estos grupos contienen 1, 2 o 3 atomos de nitrogeno, 0-1 atomos de azufre y 0-1 atomos de oxlgeno. Los ejemplos no limitantes de grupos heterociclo incluyen morfolin-3- ona, piperazin-2-ona, piperazin-1-oxido, piridin-2-ona, piperidina, morfolina, piperazina, isoxazolina, pirazolina, imidazolina, pirazol-5-ona, pirrolidin-2,5-diona, imidazolidin-2,4-diona, pirrolidina, tetrahidroquinolinilo,The terms "heterocycle", "heterocyclyl" or "heterocyclic" refers to a saturated or unsaturated unsaturated cyclic group containing at least one heteroatom. As used herein, the term "heteroatom" is intended to include oxygen (O), nitrogen (N), sulfur (S) and silicon (Si). Each heterocycle can be attached to any available carbon or heteroatom of the ring. Each heterocycle can have one or more rings. When multiple rings are present, they can condense with each other or covalently join. Each heterocycle typically contains 1, 2, 3, 4 or 5, independently selected heteroatoms. Preferably, these groups contain 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms, 0, 1, 2, 3, 4 or 5 nitrogen atoms, 0, 1 or 2 atoms of sulfur and 0, 1 or 2 oxygen atoms. More preferably, these groups contain 1, 2 or 3 nitrogen atoms, 0-1 sulfur atoms and 0-1 oxygen atoms. Non-limiting examples of heterocycle groups include morpholin-3-one, piperazin-2-one, piperazin-1-oxide, pyridin-2-one, piperidine, morpholine, piperazine, isoxazoline, pyrazoline, imidazoline, pyrazole-5-one, pyrrolidin-2,5-dione, imidazolidin-2,4-dione, pyrrolidine, tetrahydroquinolinyl,

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

decahidroquinolinilo, tetrahidrobenzooxazepinil dihidrodibenzooxepin y similares.decahydroquinolinyl, tetrahydrobenzooxazepinyl dihydrodibenzooxepin and the like.

"Heteroarilo" se refiere a un radical aromatico clclico o policlclico que contiene de uno a cinco heteroatomos seleccionados entre N, O y S, en el que los atomos de nitrogeno y azufre estan opcionalmente oxidados, y el atomo o atomos de nitrogeno estan opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo puede estar unido al resto de la molecula a traves de un heteroatomo o a traves de un atomo de carbono, y puede contener de 5 a 10 atomos de carbono. Los ejemplos no limitantes de grupos heteroarilo incluyen 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 1-pirazolilo, 3- pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5- isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2- pirimidilo y 4-pirimidilo. Si no se indica especlficamente, los sustituyentes para cada uno de los sistemas anulares arilo y heteroarilo indicados anteriormente se seleccionan entre el grupo de sustituyentes aceptables descritos en el presente documento. "Heteroarilo sustituido" se refiere a un grupo heteroarilo sin sustituir como se ha definido anteriormente, en el que uno o mas de los miembros en el anillo estan unidos a un atomo no hidrogeno, tal como se ha descrito anteriormente con respecto a los grupos alquilo sustituidos y los grupos arilo sustituidos. Los sustituyentes representativos incluyen grupos alquilo de cadena lineal y ramificada -CH3, -C2H5, -CH2OH, -OH, - OCH3, -OC2H5, -OCF3, -OC(=O)CH3,-OC(=O)NH2, -OC(=O)N(CH3)2, -CN, -NO2, -C(=O)CHa, -CO2H, -CO2CH3, - CONH2,-NH2,-N(CH3)2, -NHSO2CH3, -NHCOCH3, NHC(=O)OCH3, -NHSO2CH3, -SO2CH3,-SO2NH2 y halo."Heteroaryl" refers to a cyclic or polycyclic aromatic radical containing one to five heteroatoms selected from N, O and S, in which the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, and the nitrogen atom or atoms are optionally quaternized. . A heteroaryl group may be attached to the rest of the molecule through a heteroatom or through a carbon atom, and may contain 5 to 10 carbon atoms. Non-limiting examples of heteroaryl groups include 1-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3-pyrrolyl, 1-pyrazolyl, 3- pyrazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl, pyrazinyl, 2-oxazolyl, 4-oxazolyl, 5-oxazolyl, 3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl, 5- isoxazolyl, 2-thiazolyl, 4-thiazolyl, 5-thiazolyl, 2-furyl, 3-furyl, 2-thienyl, 3-thienyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4- pyridyl, 2-pyrimidyl and 4-pyrimidyl. If not specifically indicated, the substituents for each of the aryl and heteroaryl ring systems indicated above are selected from the group of acceptable substituents described herein. "Substituted heteroaryl" refers to an unsubstituted heteroaryl group as defined above, in which one or more of the members in the ring are attached to a non-hydrogen atom, as described above with respect to alkyl groups. substituted and substituted aryl groups. Representative substituents include straight and branched chain alkyl groups -CH3, -C2H5, -CH2OH, -OH, - OCH3, -OC2H5, -OCF3, -OC (= O) CH3, -OC (= O) NH2, -OC (= O) N (CH3) 2, -CN, -NO2, -C (= O) CHa, -CO2H, -CO2CH3, - CONH2, -NH2, -N (CH3) 2, -NHSO2CH3, -NHCOCH3, NHC (= O) OCH3, -NHSO2CH3, -SO2CH3, -SO2NH2 and halo.

"Heteroarilo biclclico" se refiere a un radical aromatico biclclico que contiene de uno a cinco heteroatomos seleccionados entre N, O y S, en el que los atomos de nitrogeno y azufre estan oxidados opcionalmente, y el atomo o atomos de nitrogeno estan opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo biclclico puede unirse al resto de la molecula a traves de un heteroatomo o a traves de un atomo de carbono, y puede contener de 5 a 10 atomos de carbono. Los ejemplos no limitantes de grupos heteroarilo biclclicos incluyen 5-benzotiazolilo, purinilo, 2- bencimidazolilo, benzopirazolilo, 5-indolilo, azaindol, 1 -isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3- quinolilo y 6-quinolilo. Si no se indica especlficamente, los sustituyentes para cada uno de los sistemas anulares arilo y heteroarilo indicados anteriormente se seleccionan entre el grupo de sustituyentes aceptables descritos en el presente documento."Bicyclic heteroaryl" refers to a bicyclic aromatic radical containing one to five heteroatoms selected from N, O and S, in which the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, and the nitrogen atom or atoms are optionally quaternized. A bicyclic heteroaryl group can be attached to the rest of the molecule through a heteroatom or through a carbon atom, and can contain 5 to 10 carbon atoms. Non-limiting examples of bicyclic heteroaryl groups include 5-benzothiazolyl, purinyl, 2- benzimidazolyl, benzopyrazolyl, 5-indolyl, azaindole, 1-isoquinolyl, 5-isoquinolyl, 2-quinoxalinyl, 5-quinoxalinyl, 3- quinolyl and 6-quinolyl . If not specifically indicated, the substituents for each of the aryl and heteroaryl ring systems indicated above are selected from the group of acceptable substituents described herein.

En cada una de las realizaciones anteriores, la designacion de un numero de atomos, por ejemplo "C1-8" pretende incluir todas las realizaciones posibles que tienen un atomo menos. Los ejemplos no limitantes incluyen C1-7, C2-8, C2-7, C3-8, C3-7 y similares.In each of the previous embodiments, the designation of a number of atoms, for example "C1-8" is intended to include all possible embodiments that have one less atom. Non-limiting examples include C1-7, C2-8, C2-7, C3-8, C3-7 and the like.

Cada de los terminos en el presente documento (por ejemplo, "alquilo", "heteroalquilo", "arilo" y "heteroarilo") pretende incluir tanto formas "sin sustituir" como opcionalmente "sustituidas" del radical indicado, a menos que se indique otra cosa. Tlpicamente, cada radical esta sustituido con 0, 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, a menos que se indique otra cosa. A continuacion se proporcionan ejemplos de sustituyentes para cada tipo de radical.Each of the terms herein (for example, "alkyl", "heteroalkyl", "aryl" and "heteroaryl") is intended to include both "unsubstituted" and optionally "substituted" forms of the indicated radical, unless indicated another thing. Typically, each radical is substituted with 0, 1, 2, 3, 4 or 5 substituents, unless otherwise indicated. Examples of substituents for each type of radical are given below.

"Sustituido" se refiere a un grupo como se define en el presente documento, en el que uno o mas enlaces a uno o mas carbono o uno o mas hidrogeno se reemplazan por un enlace a "sustituyentes" de atomos no hidrogeno y no carbono, tal como, pero sin limitacion, un atomo de halogeno, tal como F, Cl, Br e I; un atomo de oxlgeno en grupos tales como grupos hidroxilo, grupos alcoxi, grupos ariloxi y grupos aciloxi; un atomo de azufre en grupos tales como grupos tiol, grupos sulfuro de alquilo y arilo, grupos sulfona, grupos sulfonilo, y grupos sulfoxido; un atomo de nitrogeno en grupos tales como amino, alquilaminas, dialquilaminas, arilaminas, alquilarilaminas, diarilaminas, alcoxiamino, hidroxiamino, acilamino, sulfonilamino, N-oxidos, imidas y enaminas; y otros heteroatomos en diversos grupos diferentes. Los "sustituyentes" tambien incluyen grupos en los que uno o mas enlaces a un atomo de uno o mas carbono o hidrogeno se reemplazan por un enlace de orden superior (por ejemplo, un enlace doble o triple) a un heteroatomo, tal como oxlgeno en grupos oxo, acilo, amido, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, carboxilo y ester; nitrogeno en grupos tales como iminas, oximas, hidrazonas y nitrilos. Los "sustituyentes" incluyen adicionalmente grupos en los que uno o mas enlaces a uno o mas atomos de carbono o hidrogeno se reemplazan por un enlace a un grupo cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Los "sustituyentes" representativos incluyen, entre otros, grupos en los que uno o mas enlaces a un atomo de carbono o hidrogeno se reemplazan por uno o mas enlaces a un grupo fluor, cloro o bromo. Otro "sustituyente" representativo es el grupo trifluorometilo y otros grupos que contienen el grupo trifluorometilo. Otros "sustituyentes" representativos incluyen aquellos en los que uno o mas enlaces a un atomo de carbono o hidrogeno se reemplazan por un enlace a un atomo de oxlgeno de tal forma que el grupo alquilo sustituido contiene un grupo hidroxilo, alcoxi o ariloxi. Otros "sustituyentes" representativos incluyen grupos alquilo que tienen una amina, o un grupo alquilamina sustituida o sin sustituir, dialquilamina, arilamina, (alquil)(aril)amina, diarilamina, heterociclilamina, diheterociclilamina, (alquil)(heterociclil)amina, o (aril)(heterociclil)amina. Aun otros "sustituyentes" representativos incluyen aquellos en los que uno o mas enlaces a uno o mas atomos de carbono o hidrogeno se reemplazan por un enlace a un grupo alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo."Substituted" refers to a group as defined herein, in which one or more bonds to one or more carbon or one or more hydrogen are replaced by a link to "substituents" of non-hydrogen and non-carbon atoms, such as, but not limited to, a halogen atom, such as F, Cl, Br and I; an oxygen atom in groups such as hydroxyl groups, alkoxy groups, aryloxy groups and acyloxy groups; a sulfur atom in groups such as thiol groups, alkyl and aryl sulfide groups, sulfone groups, sulfonyl groups, and sulfoxide groups; a nitrogen atom in groups such as amino, alkylamines, dialkylamines, arylamines, alkylamines, diarylamines, alkoxyamino, hydroxyamino, acylamino, sulfonylamino, N-oxides, imides and enamines; and other heteroatoms in various different groups. "Substituents" also include groups in which one or more bonds to an atom of one or more carbon or hydrogen are replaced by a higher order bond (eg, a double or triple bond) to a heteroatom, such as oxygen in oxo, acyl, amido, alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, carboxyl and ester groups; nitrogen in groups such as imines, oximes, hydrazones and nitriles. The "substituents" further include groups in which one or more bonds to one or more carbon or hydrogen atoms are replaced by a link to a cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl group. Representative "substituents" include, among others, groups in which one or more bonds to a carbon or hydrogen atom are replaced by one or more bonds to a fluorine, chlorine or bromine group. Another representative "substituent" is the trifluoromethyl group and other groups containing the trifluoromethyl group. Other representative "substituents" include those in which one or more bonds to a carbon or hydrogen atom are replaced by a bond to an oxygen atom such that the substituted alkyl group contains a hydroxyl, alkoxy or aryloxy group. Other representative "substituents" include alkyl groups having an amine, or a substituted or unsubstituted alkylamine group, dialkylamine, arylamine, (alkyl) (aryl) amine, diarylamine, heterocyclylamine, diheterocyclylamine, (alkyl) (heterocyclyl) amine, or ( aryl) (heterocyclyl) amine. Still other representative "substituents" include those in which one or more bonds to one or more carbon or hydrogen atoms are replaced by a bond to an alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl group.

Los grupos definidos en el presente documento pueden incluir prefijos y/o sufijos que se usan comunmente en la tecnica para crear grupos de sustituyentes ya reconocidos adicionales. Como ejemplos, "alquilamino" se refiere a un grupo de la formula -NRaRb. A menos que se indique otra cosa, para los siguientes grupos que contienen Ra, Rb, Rc, Rd y Re: cada uno de Ra, y Rb se selecciona independientemente entre H, alquilo, alcoxi, tioalcoxi, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, o heterociclilo o estan opcionalmente unidos junto con el atomo o atomos a los que estan unidos paraThe groups defined herein may include prefixes and / or suffixes that are commonly used in the art to create groups of additional recognized substituents. As examples, "alkylamino" refers to a group of the formula -NRaRb. Unless otherwise indicated, for the following groups containing Ra, Rb, Rc, Rd and Re: each of Ra, and Rb is independently selected from H, alkyl, alkoxy, thioalkoxy, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, or heterocyclyl or are optionally linked together with the atom or atoms to which they are attached to

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

formar un grupo ciclico. Cuando Ra y Rb estan unidos al mismo atomo de nitrogeno, pueden combinarse con el atomo de nitrogeno para formar un anillo de 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NRaRb pretende incluir 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo.form a cyclic group When Ra and Rb are attached to the same nitrogen atom, they can combine with the nitrogen atom to form a 5, 6 or 7 member ring. For example, -NRaRb is intended to include 1-pyrrolidinyl and 4-morpholinyl.

Cada uno de Rc, Rd, Re y Rf se selecciona independientemente entre alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo o alquilenoarilo como se define en el presente documento.Each of Rc, Rd, Re and Rf is independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl or alkylenearyl as defined herein.

Tlpicamente, un radical particular tendra 0, 1, 2 o 3 sustituyentes, siendo preferidos en la presente invencion aquellos grupos que tienen dos o menos sustituyentes. Mas preferiblemente, un radical estara sin sustituir o monosustituido. Mas preferiblemente, un radical estara sin sustituir.Typically, a particular radical will have 0, 1, 2 or 3 substituents, those groups having two or less substituents being preferred in the present invention. More preferably, a radical will be unsubstituted or monosubstituted. More preferably, a radical will be unsubstituted.

Los "sustituyentes" para los radicales alquilo y heteroalquilo (as! como aquellos grupos denominados como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo) pueden ser una diversidad de grupos seleccionados entre: -ORa, =O, =NRa, =N-ORa, -NRaRb, -SRa, halogeno, -SiRaRbRc, -OC(O)Ra, -C(O)Ra, - CO2Ra, -CONRaRb, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRa-C(O)NRbRc, -NRa-SO2NRbRc, -NRbCO2Ra, -NH-C(NH2)=NH, - NRaC(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NRa, -S(O) Ra, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRbSO2R, -CN y -NO2, en un numero que varla de cero a tres, siendo particularmente preferidos aquellos grupos que tengan cero, uno o dos sustituyentes.The "substituents" for the alkyl and heteroalkyl radicals (as well as those groups referred to as alkylene, alkenyl, heteroalkylene, heteroalkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl) can be a variety of groups selected from: -ORa, = O, = NRa, = N-ORa, -NRaRb, -SRa, halogen, -SiRaRbRc, -OC (O) Ra, -C (O) Ra, - CO2Ra, -CONRaRb, -OC (O) NRaRb, -NRbC (O) Ra, -NRa-C (O) NRbRc, -NRa-SO2NRbRc, -NRbCO2Ra, -NH-C (NH2) = NH, - NRaC (NH2) = NH, -NH-C (NH2) = NRa, -S (O) Ra, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRbSO2R, -CN and -NO2, in a number that varies from zero to three, those groups having zero, one or two substituents being particularly preferred.

En algunas realizaciones, los "sustituyentes" para los radicales alquilo y heteroalquilo se seleccionan entre: -ORa, =O, - NRaRb, -SRa, halogeno, -SiRaRbRc, -OC(O)Ra, -C(O)Ra, -CO2Ra, -CONRaRb, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, - NRbCO2Ra -NRa-SO2NRbRc, -S(O) Ra, -SO2Ra, -SO2NRaR, -NRcSO2R, -CN y -NO2, donde Ra y Rb son como se han definido anteriormente. En algunas realizaciones, los sustituyentes se seleccionan entre: -ORa, =O, - NRaRb, halogeno, -OC(O) Ra, -CO2Ra, -CONRaRb, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbCO2Ra, -NRa-SO2NRbRc, -SO2Ra, -In some embodiments, the "substituents" for the alkyl and heteroalkyl radicals are selected from: -ORa, = O, - NRaRb, -SRa, halogen, -SiRaRbRc, -OC (O) Ra, -C (O) Ra, - CO2Ra, -CONRaRb, -OC (O) NRaRb, -NRbC (O) Ra, - NRbCO2Ra -NRa-SO2NRbRc, -S (O) Ra, -SO2Ra, -SO2NRaR, -NRcSO2R, -CN and -NO2, where Ra and Rb are as defined above. In some embodiments, the substituents are selected from: -ORa, = O, - NRaRb, halogen, -OC (O) Ra, -CO2Ra, -CONRaRb, -OC (O) NRaRb, -NRbC (O) Ra, -NRbCO2Ra , -NRa-SO2NRbRc, -SO2Ra, -

SO2NRaRb, -NR"SO2R, -CN y -NO2.SO2NRaRb, -NR "SO2R, -CN and -NO2.

Los ejemplos de alquilo sustituido son: -(CH2)3NH2, -(CH2)3NH(CH3), -(CH2)3NH(CH3)2, -CH2C(=CH2)CH2NH2, - CH2C(=O)CH2NH2, -CH2S(=O)2CH3,-CH2OCH2NH2, -CO2H. Los ejemplos de sustituyentes de alquilo sustituido son: CH2OH, -OH,-OCH3, -OC2H5, -OCF3, -OC(=O)CH3, -OC(=O)NH2,-OC(=O)N(CH3)2,-CN, NO2,-C(=O)CH3, -CO2H, - CO2CH3, -CONH2, NH2,-N(CH3)2, NHSO2CH3,-NHCOCH3, -NHC(=O)OCH3, -NHSO2CH3, -SO2CH3, -SO2NH2, y halo.Examples of substituted alkyl are: - (CH2) 3NH2, - (CH2) 3NH (CH3), - (CH2) 3NH (CH3) 2, -CH2C (= CH2) CH2NH2, - CH2C (= O) CH2NH2, -CH2S (= O) 2CH3, -CH2OCH2NH2, -CO2H. Examples of substituted alkyl substituents are: CH2OH, -OH, -OCH3, -OC2H5, -OCF3, -OC (= O) CH3, -OC (= O) NH2, -OC (= O) N (CH3) 2 , -CN, NO2, -C (= O) CH3, -CO2H, - CO2CH3, -CONH2, NH2, -N (CH3) 2, NHSO2CH3, -NHCOCH3, -NHC (= O) OCH3, -NHSO2CH3, -SO2CH3 , -SO2NH2, and halo.

De forma analoga, los "sustituyentes" para los grupos arilo y heteroarilo son variados y se seleccionan entre: - halogeno, -ORa, -OC(O) Ra, -NRaRb, -SRa, -Ra, -CN, -NO2, -CO2Ra, -CONRaRb, -C(O) Ra, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Similarly, the "substituents" for the aryl and heteroaryl groups are varied and selected from: - halogen, -ORa, -OC (O) Ra, -NRaRb, -SRa, -Ra, -CN, -NO2, - CO2Ra, -CONRaRb, -C (O) Ra, -OC (O) NRaRb, -NRbC (O)

Ra, -NRbC(O)2,Ra, -NRa-C(O)NRbRc, -NH-C(NH2)=NH, -NRaC(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NRa, -S(O) Ra, -S(O)2Ra, -S(O) 2NRaRb, -N3, -CH(Ph)2, perfluoroalcoxi Ci_8, y perfluoroalquilo Ci_8, en un numero que varla de cero al numero total de valencias abiertas en el sistema anular aromatico; y donde Ra, Rb y Rc se seleccionan independientemente entre hidrogeno, alquilo C1-6 y heteroalquilo, arilo y heteroarilo sin sustituir, (aril sin sustituir)-alquilo C1.8, y (aril sin sustituir)oxi-alquilo C1.8.Ra, -NRbC (O) 2, Ra, -NRa-C (O) NRbRc, -NH-C (NH2) = NH, -NRaC (NH2) = NH, -NH-C (NH2) = NRa, -S (O) Ra, -S (O) 2Ra, -S (O) 2NRaRb, -N3, -CH (Ph) 2, perfluoroalkoxy Ci_8, and perfluoroalkyl Ci_8, in a number that varies from zero to the total number of open valences in the aromatic ring system; and where Ra, Rb and Rc are independently selected from hydrogen, C1-6 alkyl and heteroalkyl, unsubstituted aryl and heteroaryl, (unsubstituted aryl) -C1.8 alkyl, and (unsubstituted aryl) oxy-C1.8 alkyl.

Dos de los "sustituyentes" en atomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente con un sustituyente de la formula -T-C(O)-(CH2)q-U-, en la que T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace sencillo, y q es 0, 1 o 2. Como alternativa, dos de los sustituyentes en los atomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente con un sustituyente de la formula -A-(CH2)r-B-, en la que A y B son independientemente -CH2., -O-, -nH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2., -S(O) 2NRa- o un enlace sencillo, y r es 1, 2 o 3. Uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo formado de este modo puede reemplazarse opcionalmente con un doble enlace. Como alternativa, dos de los sustituyentes en los atomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente con un sustituyente de la formula -(CH2)s-X-(CH2)t- -, donde s y t son independientemente numeros enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NRa-, -S- , -S(O)-, -S(O)2-, o -S(O) 2NRa-. El sustituyente Ra en -NRa- y -S(O)2NRa- se selecciona entre hidrogeno o alquilo C1-6 sin sustituir. De otro modo, R' es como se ha definido anteriormente.Two of the "substituents" in adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may optionally be replaced with a substituent of the formula -TC (O) - (CH2) qU-, in which T and U are independently -NH-, -O- , -CH2- or a single bond, and q is 0, 1 or 2. Alternatively, two of the substituents in the adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may optionally be replaced with a substituent of the formula -A- (CH2) rB- , in which A and B are independently -CH2., -O-, -nH-, -S-, -S (O) -, -S (O) 2., -S (O) 2NRa- or a bond simple, and r is 1, 2 or 3. One of the simple links of the new ring formed in this way can optionally be replaced with a double bond. Alternatively, two of the substituents in the adjacent atoms of the aryl or heteroaryl ring may optionally be replaced with a substituent of the formula - (CH2) sX- (CH2) t- -, where syt are independently integer numbers from 0 to 3, and X is -O-, -NRa-, -S-, -S (O) -, -S (O) 2-, or -S (O) 2NRa-. The substituent Ra in -NRa- and -S (O) 2NRa- is selected from hydrogen or unsubstituted C1-6 alkyl. Otherwise, R 'is as defined above.

A menos que se indique otra cosa, la nomenclatura de los sustituyentes que no se definen expllcitamente en el presente documento se obtiene nombrando la porcion terminal de la funcionalidad seguido de la funcionalidad adyacente hacia el punto de union. Por ejemplo, el sustituyente "arilalquiloxicarbonilo" se refiere al grupo (aril)- (alquil)-O-C(O)-.Unless otherwise indicated, the nomenclature of substituents that are not explicitly defined herein is obtained by naming the terminal portion of the functionality followed by the functionality adjacent to the junction point. For example, the substituent "arylalkyloxycarbonyl" refers to the group (aryl) - (alkyl) -O-C (O) -.

El termino "acilo" se refiere al grupo -C(=O)Rc, donde Rc es alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo. Acilo incluye el grupo "acetilo" -C(=O)CH3.The term "acyl" refers to the group -C (= O) Rc, where Rc is alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl. Acyl includes the group "acetyl" -C (= O) CH3.

"Acilamino-" se refiere al grupo -NRaC(=O)Rc, donde Rc es alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo."Acylamino-" refers to the group -NRaC (= O) Rc, where Rc is alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl.

"Aciloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc, donde Rc es alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo."Acyloxy" refers to -OC (= O) -Rc, where Rc is alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl.

"Alcoxi" se refiere a -ORd, en la que Rd es alquilo como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, f-butoxi, trifluorometoxi, y similares."Alkoxy" refers to -ORd, in which Rd is alkyl as defined herein. Representative examples of alkoxy groups include methoxy, ethoxy, f-butoxy, trifluoromethoxy, and the like.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

"Alcoxicarbonilo" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es alquilo. Los grupos alcoxicarbonilo representativos incluyen, por ejemplo, los mostrados a continuacion."Alkoxycarbonyl" refers to -C (= O) ORd, where Rd is alkyl. Representative alkoxycarbonyl groups include, for example, those shown below.

imagen2image2

Estos grupos alcoxicarbonilo pueden estar sustituidos adicionalmente como sera evidente para los expertos en la tecnica de la qufmica organica y medicinal junto con la divulgacion en el presente documento.These alkoxycarbonyl groups may be further substituted as will be apparent to those skilled in the art of organic and medicinal chemistry together with the disclosure herein.

"Alcoxicarbonilamino" se refiere a -NRaC(=O)ORd, en la que Rd es alquilo."Alkoxycarbonylamino" refers to -NRaC (= O) ORd, in which Rd is alkyl.

"Alcoxisulfonilamino" se refiere al grupo NRaS(=O)2-ORd, donde Rd es alquilo."Alkoxysulfonylamino" refers to the NRaS (= O) 2-ORd group, where Rd is alkyl.

"Alquilcarbonilo" se refiere al grupo -C(=O)Rc, donde Rc es alquilo."Alkylcarbonyl" refers to the group -C (= O) Rc, where Rc is alkyl.

"Alquilcarboniloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc, donde Rc es alquilo."Alkylcarbonyloxy" refers to -OC (= O) -Rc, where Rc is alkyl.

"Alquilcarbonilamino" se refiere a -NRaC(=O)Rc, en la que Rc es alquilo. Los grupos alquilcarbonilamino representativos incluyen, por ejemplo, NHC(=O)CH3, NHC(=O)CH2CH3, -NHC(=O)CH2NH(CH3),"Alkylcarbonylamino" refers to -NRaC (= O) Rc, in which Rc is alkyl. Representative alkylcarbonylamino groups include, for example, NHC (= O) CH3, NHC (= O) CH2CH3, -NHC (= O) CH2NH (CH3),

NHC(=O)CH2N(CH3)2, o -NHC(=O)(CH2)3OH.NHC (= O) CH2N (CH3) 2, or -NHC (= O) (CH2) 3OH.

"Alquilsulfanilo", "alquiltio", o "tioalcoxi" se refiere al grupo S-Rd, donde Rd es alquilo."Alkylsulfanyl", "alkylthio", or "thioalkoxy" refers to the S-Rd group, where Rd is alkyl.

"Alquilsulfonilo" se refiere a -S(=O)2Re, donde Re es alquilo. Los grupos alquilsulfonilo empleados en los compuestos de la presente invencion son tfpicamente los grupos alquilsulfonilo Ci-6."Alkylsulfonyl" refers to -S (= O) 2Re, where Re is alkyl. The alkylsulfonyl groups employed in the compounds of the present invention are typically Ci-6 alkylsulfonyl groups.

"Alquilsulfonilamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re, en la que Re es alquilo."Alkylsulfonylamino" refers to NRaS (= O) 2-Re, in which Re is alkyl.

"Alquiniloxi" se refiere al grupo -O-alquinilo, en el que alquinilo es como se define en el presente documento. Alquiniloxi incluye, a modo de ejemplo, etiniloxi, propiniloxi, y similares."Alkynyloxy" refers to the group -O-alkynyl, in which alkynyl is as defined herein. Alkynyloxy includes, by way of example, ethynyloxy, propynyloxy, and the like.

"Amidino" se refiere al grupo -C(=NRa)NRbRc, en el que Rb y Rc independientemente se seleccionan entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heteroarilo, heterocfclico, y donde Rb y Rc estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heterocfclico o heterocfclico sustituido. Ra se selecciona entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heteroarilo, heterocfclico, heterocfclico sustituido, nitro, nitroso, hidroxi, alcoxi, ciano, -N=N-N-alquilo, -N(alquil)SO2-alquilo,-N=N=N-alquilo, acilo y -SO2-alquilo."Amidino" refers to the group -C (= NRa) NRbRc, in which Rb and Rc are independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heteroaryl, heterocyclic , and where Rb and Rc are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a heterocyclic or substituted heterocyclic group. Ra is selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkynyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heteroaryl, heterocyclic, substituted heterocyclic, nitro, nitrous, hydroxy, alkoxy, cyano, -N = NN-alkyl, - N (alkyl) SO2-alkyl, -N = N = N-alkyl, acyl and -SO2-alkyl.

"Amino" se refiere a un radical monovalente -NRaRb o un radical divalente -NRa-. El termino "alquilamino" se refiere al grupo -NRaRb donde Ra es alquilo y Rb es H o alquilo. El termino "arilamino" se refiere al grupo -NRaRb donde al menos un Ra o Rb es arilo. El termino "(alquil)(aril)amino" se refiere al grupo -NRaRb donde Ra es alquilo y Rb es arilo. Ademas, para los grupos dialquilamino, las porciones alquilo pueden ser las mismas o diferentes y tambien pueden combinarse para formar un anillo de 3-7 miembros con el atomo de nitrogeno al que esta unido cada uno. Por consiguiente, un grupo representado como -NRaRb pretende incluir piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, azetidinilo y similares."Amino" refers to a monovalent radical -NRaRb or a divalent radical -NRa-. The term "alkylamino" refers to the group -NRaRb where Ra is alkyl and Rb is H or alkyl. The term "arylamino" refers to the group -NRaRb where at least one Ra or Rb is aryl. The term "(alkyl) (aryl) amino" refers to the group -NRaRb where Ra is alkyl and Rb is aryl. In addition, for dialkylamino groups, the alkyl portions may be the same or different and may also be combined to form a 3-7 membered ring with the nitrogen atom to which each is attached. Accordingly, a group represented as -NRaRb is intended to include piperidinyl, pyrrolidinyl, morpholinyl, azetidinyl and the like.

"Aminocarbonilo" o "aminoacilo" se refiere a la amida -C(=O)-NR R . El termino "alquilaminocarbonilo" se refiere en el presente documento al grupo -C(=O)-NRaRb donde Ra es alquilo y Rb es H o alquilo. El termino "arilaminocarbonilo" se refiere en el presente documento al grupo -C(=O)-NRaRb donde Ra o Rb es arilo. Los grupos aminocarbonilo representativos incluyen, por ejemplo, los mostrados a continuacion. Este grupo aminocarbonilo puede estar sustituido adicionalmente como sera evidente para los expertos en la tecnica de la qufmica organica y"Aminocarbonyl" or "aminoacyl" refers to the amide -C (= O) -NR R. The term "alkylaminocarbonyl" refers herein to the group -C (= O) -NRaRb where Ra is alkyl and Rb is H or alkyl. The term "arylaminocarbonyl" refers herein to the group -C (= O) -NRaRb where Ra or Rb is aryl. Representative aminocarbonyl groups include, for example, those shown below. This aminocarbonyl group may be further substituted as will be apparent to those skilled in the art of organic chemistry and

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

medicinal junto con la divulgacion en el presente documento.medicinal product together with the disclosure in this document.

"Aminocarbonilamino" se refiere al grupo -NRaC(O)NRaRb, en el que Ra es hidrogeno o alquilo y Ra y Rb independientemente se seleccionan entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heteroarilo, heteroclclico, y donde Ra y Rb estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido."Aminocarbonylamino" refers to the group -NRaC (O) NRaRb, in which Ra is hydrogen or alkyl and Ra and Rb are independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heteroaryl , heterocyclic, and where Ra and Rb are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a heterocyclic or substituted heterocyclic group.

"Aminosulfonilo" se refiere a -S(O)2NRaRb donde R se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico, heteroclclico sustituido, y donde Ra y Rb estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido y alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico y heteroclclico sustituido son como se definen en el presente documento."Aminosulfonyl" refers to -S (O) 2NRaRb where R is independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, aryl, substituted aryl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic, substituted heterocyclic, and where Ra and Rb are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a heterocyclic or heterocyclic substituted group and alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic and substituted heterocyclic are as defined herein.

"Aminosulfoniloxi" se refiere al grupo -O-SO2NRaRb, en el que Ra y Rb independientemente se seleccionan entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heteroarilo y heteroclclico; Ra y Rb estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido."Aminosulfonyloxy" refers to the group -O-SO2NRaRb, in which Ra and Rb are independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heteroaryl and heterocyclic; Ra and Rb are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a substituted heterocyclic or heterocyclic group.

"Aminosulfonilamino" se refiere al grupo -NRa-SO2NRbRc, en el que Ra es hidrogeno o alquilo y Rb y Rc independientemente se seleccionan entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico, y heteroclclico sustituido, y donde Rb y Rc estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido, y en el que alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico y heteroclclico sustituido son como se definen en el presente documento."Aminosulfonylamino" refers to the group -NRa-SO2NRbRc, in which Ra is hydrogen or alkyl and Rb and Rc are independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, aryl, substituted aryl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic, and substituted heterocyclic, and where Rb and Rc are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a heterocyclic or substituted heterocyclic group , and wherein alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic and substituted heterocyclic are as defined in the present document

"Aminotiocarbonilo" se refiere al grupo -C(S)NRaRb, en el que Ra y Rb independientemente se seleccionan entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico, y heteroclclico sustituido, y donde Ra y Rb estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido, y en el que alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroclclico, y heteroclclico sustituido son como se definen en el presente documento."Aminothiocarbonyl" refers to the group -C (S) NRaRb, in which Ra and Rb are independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, aryl, substituted aryl , cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic, and substituted heterocyclic, and where Ra and Rb are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a heterocyclic or substituted heterocyclic group, and in the which alkyl, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, cycloalkenyl, substituted cycloalkenyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, heterocyclic, and substituted heterocyclic are as defined herein.

"Aminotiocarbonilamino" se refiere al grupo --NRaC(S)NRaRb, en el que Ra es hidrogeno o alquilo y Rb y Rc estan unidos opcionalmente junto con el nitrogeno unido a los mismos para formar un grupo heteroclclico o heteroclclico sustituido."Aminothiocarbonylamino" refers to the group --NRaC (S) NRaRb, in which Ra is hydrogen or alkyl and Rb and Rc are optionally linked together with the nitrogen attached thereto to form a substituted heterocyclic or heterocyclic group.

"Arilcarbonilo" se refiere al grupo -C(=O)Rc, donde Rc es arilo."Arylcarbonyl" refers to the group -C (= O) Rc, where Rc is aryl.

"Arilcarbonilamino" se refiere a -NRaC(=O)Rc, en la que Rc es arilo."Arylcarbonylamino" refers to -NRaC (= O) Rc, in which Rc is aryl.

"Arilcarboniloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc, donde Rc es arilo."Arylcarbonyloxy" refers to -OC (= O) -Rc, where Rc is aryl.

"Ariloxi" se refiere a -ORd, donde Rd es arilo. Los ejemplos representativos de grupos ariloxi incluyen fenoxi, naftoxi, y similares."Aryloxy" refers to -ORd, where Rd is aryl. Representative examples of aryloxy groups include phenoxy, naphthoxy, and the like.

"Ariloxicarbonilo" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es arilo."Aryloxycarbonyl" refers to -C (= O) ORd, where Rd is aryl.

"Ariloxicarbonilamino" se refiere a -NRaC(=O)ORd, en la que Rd es arilo."Aryloxycarbonylamino" refers to -NRaC (= O) ORd, where Rd is aryl.

"Arilsulfanilo", "ariltio" o "tioariloxi" se refiere al grupo S-Rd, donde Rd es arilo."Arylsulfanyl", "arylthio" or "thioaryloxy" refers to the S-Rd group, where Rd is aryl.

"Arilsulfonilo" se refiere a -S(=O)2Re, donde Re es arilo."Arylsulfonyl" refers to -S (= O) 2Re, where Re is aryl.

"Arilsulfonilamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re en la que Re es arilo."Arylsulfonylamino" refers to NRaS (= O) 2-Re in which Re is aryl.

"Ariltio" se refiere al grupo -S-arilo, en el que arilo es como se define en el presente documento. En otras realizaciones, el azufre puede oxidarse para dar los restos -S(O)- o -SO2-. El sulfoxido puede existir como uno o mas estereoisomeros."Arylthio" refers to the group -S-aryl, in which aryl is as defined herein. In other embodiments, sulfur can be oxidized to give the residues -S (O) - or -SO2-. Sulfoxide can exist as one or more stereoisomers.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

"Enlace" cuando se usa un elemento en un grupo Markush, significa que el grupo correspondiente no existe, y los grupos de ambos lados estan unidos directamente."Link" when an element is used in a Markush group, means that the corresponding group does not exist, and the groups on both sides are directly linked.

"Carbonilo" se refiere al grupo divalente -C(=O)-."Carbonyl" refers to the divalent group -C (= O) -.

"Carboxi" o "carboxilo" se refiere al grupo -CO2H."Carboxy" or "carboxyl" refers to the group -CO2H.

"Carboxil ester" o "carboxi ester" se refiere a los grupos -C(=O)ORc."Carboxy ester" or "carboxy ester" refers to the groups -C (= O) ORc.

"(Carboxil ester)amino" se refiere a los grupos -NRa-C(O)ORc, donde Ra es alquilo o hidrogeno."(Carboxyl ester) amino" refers to the groups -NRa-C (O) ORc, where Ra is alkyl or hydrogen.

"(Carboxil ester)oxi" o "Carbonato ester" se refiere a los grupos -O-C(=O)ORc."(Carboxyl ester) oxy" or "Carbonate ester" refers to the groups -O-C (= O) ORc.

"Ciano" se refiere a -CN."Cyano" refers to -CN.

"Cicloalcoxi" se refiere a -ORd donde Rd es cicloalquilo."Cycloalkoxy" refers to -ORd where Rd is cycloalkyl.

"Cicloalcoxicarbonilo" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es cicloalquilo."Cycloalkoxycarbonyl" refers to -C (= O) ORd, where Rd is cycloalkyl.

"Cicloalcoxicarbonilamino" se refiere a NRaC(=O)ORd, en la que Rd es cicloalquilo."Cycloalkoxycarbonylamino" refers to NRaC (= O) ORd, where Rd is cycloalkyl.

"Cicloalquilalquileno" se refiere a un radical -RxRy en el que Rx es un grupo alquileno y Ry es un grupo cicloalquilo como se define en el presente documento, por ejemplo, ciclopropilmetilo, ciclohexenilpropilo, 3-ciclohexil-2- metilpropilo, y similares."Cycloalkylalkylene" refers to a radical -RxRy in which Rx is an alkylene group and Ry is a cycloalkyl group as defined herein, for example, cyclopropylmethyl, cyclohexenylpropyl, 3-cyclohexyl-2-methylpropyl, and the like.

"Cicloalquilcarbonilo" se refiere al grupo -C(=O)Rc donde Rc es cicloalquilo."Cycloalkylcarbonyl" refers to the group -C (= O) Rc where Rc is cycloalkyl.

"Cicloalquilcarbonilamino" se refiere a NRaC(=O)Rc en la que Rc es cicloalquilo."Cycloalkylcarbonylamino" refers to NRaC (= O) Rc in which Rc is cycloalkyl.

"Cicloalquilcarboniloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc donde Rc es cicloalquilo."Cycloalkylcarbonyloxy" refers to -OC (= O) -Rc where Rc is cycloalkyl.

"Cicloalquilsulfonilamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re en la que Re es cicloalquilo."Cycloalkylsulfonylamino" refers to NRaS (= O) 2-Re in which Re is cycloalkyl.

"Cicloalquiltio" se refiere a -S-cicloalquilo. En otras realizaciones, el azufre puede oxidarse para dar los restos -S(O)- o -SO2-. El sulfoxido puede existir en forma de uno o mas estereoisomeros."Cycloalkylthio" refers to -S-cycloalkyl. In other embodiments, sulfur can be oxidized to give the residues -S (O) - or -SO2-. Sulfoxide may exist in the form of one or more stereoisomers.

"Cicloalquenilox" se refiere a -O-cicloalquenilo."Cycloalkenyl" refers to -O-cycloalkenyl.

"Cicloalqueniltio" se refiere a -S-cicloalquenilo. En otras realizaciones, el azufre puede oxidarse para dar los restos sulfinilo o sulfonilo. El sulfoxido puede existir en forma de uno o mas estereoisomeros."Cycloalkenylthio" refers to -S-cycloalkenyl. In other embodiments, sulfur can be oxidized to give sulfinyl or sulfonyl moieties. Sulfoxide may exist in the form of one or more stereoisomers.

"Ester" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, o heterociclilo."Ester" refers to -C (= O) ORd, where Rd is alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, or heterocyclyl.

"Guanidino" se refiere al grupo -NHC(=NH)NH2."Guanidino" refers to the group -NHC (= NH) NH2.

"Halo" o "halogeno", por si mismos o como parte de otro sustituyente, se refieren, a menos que se indique otra cosa, a un atomo de fluor, cloro, bromo o yodo. Ademas, los terminos tales como "haloalquilo", pretenden incluir alquilo en el que uno o mas hidrogeno estan sustituidos con atomos de halogeno que pueden ser iguales o diferentes, en un numero que varla de uno hasta el numero maximo de halogenos permitido, por ejemplo, para alquilo, (2m'+1), donde m' es el numero total de atomos de carbono en el grupo alquilo. Por ejemplo, el termino "haloalquilo C1-8" pretende incluir trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo, y similares. El termino "perhaloalquilo" se refiere, a menos que se indique otra cosa, a alquilo sustituido con (2m'+1) atomos de halogeno, donde m' es el numero total de atomos de carbono en el grupo alquilo. Por ejemplo, el termino "perhaloalquilo CW, pretende incluir trifluorometilo, pentacloroetilo, 1,1,1-trifluoro-2-bromo-2-cloroetilo, y similares. Ademas, el termino "haloalcoxi" se refiere a un radical alcoxi sustituido con uno o mas atomos de halogeno."Halo" or "halogen", by themselves or as part of another substituent, refers, unless otherwise indicated, to a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom. In addition, the terms such as "haloalkyl", are intended to include alkyl in which one or more hydrogen are substituted with halogen atoms that may be the same or different, in a number that varies from one to the maximum number of halogens allowed, for example , for alkyl, (2m '+ 1), where m' is the total number of carbon atoms in the alkyl group. For example, the term "C1-8 haloalkyl" is intended to include trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 4-chlorobutyl, 3-bromopropyl, and the like. The term "perhaloalkyl" refers, unless otherwise indicated, to alkyl substituted with (2m '+ 1) halogen atoms, where m' is the total number of carbon atoms in the alkyl group. For example, the term "perhaloalkyl CW, is intended to include trifluoromethyl, pentachloroethyl, 1,1,1-trifluoro-2-bromo-2-chloroethyl, and the like. In addition, the term" haloalkoxy "refers to an alkoxy radical substituted with one or more halogen atoms.

"Heteroalquilo" se refiere a un radical alquilo como se define en el presente documento, con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre ciano, -ORw, -NRxRy, y -S(O)nRz (donde n es un numero entero de 0 a 2 ), con el entendimiento de que el punto de union del radical heteroalquilo es a traves de un atomo de carbono del radical heteroalquilo. Rw es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, araalquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, carboxamido, o mono- o di-alquilcarbamollo. Rx es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo o araalquilo. Ry es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, araalquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, carboxamido, mono- o di-alquilcarbamollo o alquilsulfonilo. Rz es hidrogeno (siempre que n sea 0), alquilo, cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, arilo, araalquilo, amino, mono-alquilamino, di-"Heteroalkyl" refers to an alkyl radical as defined herein, with one, two or three substituents independently selected from cyano, -ORw, -NRxRy, and -S (O) nRz (where n is an integer number of 0 to 2), with the understanding that the point of attachment of the heteroalkyl radical is through a carbon atom of the heteroalkyl radical. Rw is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkyl-alkyl, aryl, araalkyl, alkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, carboxamido, or mono- or di-alkylcarbamollo. Rx is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkyl-alkyl, aryl or araalkyl. Ry is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkyl-alkyl, aryl, araalkyl, alkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, carboxamido, mono- or di-alkylcarbamollo or alkylsulfonyl. Rz is hydrogen (provided that n is 0), alkyl, cycloalkyl, cycloalkyl-alkyl, aryl, araalkyl, amino, mono-alkylamino, di-

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

alquilamino, o hidroxialquilo. Los ejemplos representatives incluyen, por ejemplo, 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxipropilo, 2-metoxietilo, benciloximetilo, 2-cianoetilo y 2-metilsulfonil-etilo. Para cada uno de los anteriores, Rw, Rx ,Ry, y Rz pueden estar sustituidos adicionalmente por amino, fluor, alquilamino, di-alquilamino, OH o alcoxi. Ademas, el prefijo que indica el numero de atomos de carbono (por ejemplo, C1-C10) se refiere al numero total de atomos de carbono en la porcion del grupo heteroalquilo exclusiva de las porciones ciano, -ORw, -NRxRy, o -S(O)nRz.alkylamino, or hydroxyalkyl. Representative examples include, for example, 2-hydroxyethyl, 2,3-dihydroxypropyl, 2-methoxyethyl, benzyloxymethyl, 2-cyanoethyl and 2-methylsulfonyl-ethyl. For each of the above, Rw, Rx, Ry, and Rz may be additionally substituted by amino, fluorine, alkylamino, di-alkylamino, OH or alkoxy. In addition, the prefix indicating the number of carbon atoms (for example, C1-C10) refers to the total number of carbon atoms in the portion of the exclusive heteroalkyl group of the cyano portions, -ORw, -NRxRy, or -S (O) nRz.

"Heteroarilcarbonilo" se refiere al grupo -C(=O)Rc, donde Rc es heteroarilo."Heteroarylcarbonyl" refers to the group -C (= O) Rc, where Rc is heteroaryl.

"Heteroarilcarbonilamino" se refiere a -NRaC(=O)Rc en la que Rc es heteroarilo."Heteroarylcarbonylamino" refers to -NRaC (= O) Rc in which Rc is heteroaryl.

"Heteroarilcarboniloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc donde Rc es heteroarilo."Heteroarylcarbonyloxy" refers to -OC (= O) -Rc where Rc is heteroaryl.

"Heteroariloxi" se refiere a -ORd, donde Rd es heteroarilo."Heteroaryloxy" refers to -ORd, where Rd is heteroaryl.

"Heteroariloxicarbonilo" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es heteroarilo."Heteroaryloxycarbonyl" refers to -C (= O) ORd, where Rd is heteroaryl.

"Heteroariloxicarbonilamino" se refiere a NRaC(=O)ORd, en la que Rd es heteroarilo."Heteroaryloxycarbonylamino" refers to NRaC (= O) ORd, where Rd is heteroaryl.

"Heteroarilsulfonillamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re, en la que Re es heteroarilo."Heteroarylsulfonillamino" refers to NRaS (= O) 2-Re, in which Re is heteroaryl.

"Heteroariltio" se refiere al grupo --S-heteroarilo. En otras realizaciones, el azufre puede oxidarse para dar los restos -S(O)- o -SO2-. El sulfoxido puede existir en forma de uno o mas estereoisomeros."Heteroarylthio" refers to the group --S-heteroaryl. In other embodiments, sulfur can be oxidized to give the residues -S (O) - or -SO2-. Sulfoxide may exist in the form of one or more stereoisomers.

"Heterociclilalquilo" o "Cicloheteroalquil-alquilo" significa un radical -RxRy donde Rx es un grupo alquileno y RY es un grupo heterociclilo como se define en el presente documento, por ejemplo, tetrahidropiran-2-ilmetilo, 4-(4-sustituido- fenil)piperazin-1-ilmetilo, 3-piperidiniletilo, y similares."Heterocyclylalkyl" or "Cycloheteroalkyl-alkyl" means a radical -RxRy where Rx is an alkylene group and RY is a heterocyclyl group as defined herein, for example, tetrahydropyran-2-ylmethyl, 4- (4-substituted-) phenyl) piperazin-1-ylmethyl, 3-piperidinylethyl, and the like.

"Heterocicloxicarbonilamino" se refiere a NRaC(=O)ORd, en la que Rd es heterociclilo."Heterocycloxycarbonylamino" refers to NRaC (= O) ORd, where Rd is heterocyclyl.

"Heterociclilcarbonilo" se refiere a -C(=O)Rc, donde Rc es heterociclilo."Heterocyclylcarbonyl" refers to -C (= O) Rc, where Rc is heterocyclyl.

"Heterociclilcarbonilamino" se refiere a NRaC(=O)Rc en la que Rc es heterociclilo."Heterocyclylcarbonylamino" refers to NRaC (= O) Rc in which Rc is heterocyclyl.

"Heterociclilcarboniloxi" se refiere a -OC(=O)-Rc, donde Rc s heterociclilo."Heterocyclylcarbonyloxy" refers to -OC (= O) -Rc, where Rc s heterocyclyl.

"Heterocicliloxi" se refiere a -ORd, donde Rd es heterociclilo."Heterocyclyloxy" refers to -ORd, where Rd is heterocyclyl.

"Heterocicliloxicarbonilo" se refiere a -C(=O)ORd, en la que Rd es heterociclilo."Heterocyclyloxycarbonyl" refers to -C (= O) ORd, where Rd is heterocyclyl.

"Heterociclilsulfonilo" se refiere a -S(=O)2Re donde Re es heterociclilo."Heterocyclylsulfonyl" refers to -S (= O) 2Re where Re is heterocyclyl.

"Heterociclilsulfonillamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re, en la que Re es heterociclilo."Heterocyclylsulfonillamino" refers to NRaS (= O) 2-Re, in which Re is heterocyclyl.

"Heterocicliltio" se refiere al grupo -S-heterociclilo. En otras realizaciones, el azufre puede oxidarse para dar los restos -S(O)- o -SO2-. El sulfoxido puede existir en forma de uno o mas estereoisomeros."Heterocyclylthio" refers to the group -S-heterocyclyl. In other embodiments, sulfur can be oxidized to give the residues -S (O) - or -SO2-. Sulfoxide may exist in the form of one or more stereoisomers.

"Hidroxi" o "hidroxilo" se refiere al grupo -OH."Hydroxy" or "hydroxyl" refers to the group -OH.

"Hidroxiamino" se refiere al grupo NHOH."Hydroxyamino" refers to the NHOH group.

"Nitro" se refiere a -NO2."Nitro" refers to -NO2.

"Nitroso" se refiere al grupo --NO."Nitrous" refers to the group --NO.

Las expresiones "opcional" u "opcionalmente" como se usan a lo largo de toda la memoria descriptiva significan que el evento o circunstancia descrita posteriormente puede no ocurrir necesariamente, y que la descripcion incluye casos en los que el evento o circunstancia se produce y casos en los que no. Por ejemplo, "grupo heterociclo opcionalmente mono o di-sustituido con un grupo alquilo significa que el alquilo puede no estar presente necesariamente, y la descripcion incluye situaciones en las que el grupo heterociclo esta mono o disustituido con un grupo alquilo y situaciones en las que el grupo heterociclo no esta sustituido con el grupo alquilo.The terms "optional" or "optionally" as used throughout the entire specification mean that the event or circumstance described below may not necessarily occur, and that the description includes cases in which the event or circumstance occurs and cases in those who don't. For example, "heterocycle group optionally mono or di-substituted with an alkyl group means that the alkyl may not necessarily be present, and the description includes situations in which the heterocycle group is mono or disubstituted with an alkyl group and situations in which the heterocycle group is not substituted with the alkyl group.

"Opcionalmente sustituido" significa un anillo que esta opcionalmente sustituido independientemente con sustituyentes. Un sitio de un grupo que esta sin sustituir puede sustituirse con hidrogeno."Optionally substituted" means a ring that is optionally independently substituted with substituents. A site of a group that is unsubstituted can be substituted with hydrogen.

"Oxo" se refiere al grupo divalente =O."Oxo" refers to the divalent group = O.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

"Sulfinilo" se refiere al grupo -S(=O)-Rc donde Re es como se define en el presente documento."Sulfinyl" refers to the group -S (= O) -Rc where Re is as defined herein.

"Acido sulfonico" se refiere al grupo -S(O)2-OH."Sulfonic acid" refers to the group -S (O) 2-OH.

"Sulfonilo" se refiere al grupo -S(O)2-Re donde Re es como se define en el presente documento."Sulfonyl" refers to the group -S (O) 2-Re where Re is as defined herein.

"Sulfonilamino" se refiere a NRaS(=O)2-Re donde Ra se selecciona entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heteroarilo y heterociclilo y Re es como se define en el presente documento."Sulfonylamino" refers to NRaS (= O) 2-Re where Ra is selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heteroaryl and heterocyclyl and Re is as defined herein. document.

"Sulfoniloxi" se refiere al grupo -OSO2-Rc."Sulfonyloxy" refers to the group -OSO2-Rc.

Los compuestos que tienen la misma formula molecular pero que difieren en la naturaleza o secuencia de union de sus atomos o en la disposicion de sus atomos en el espacio se denominan "isomeros". Los isomeros que difieren en la disposicion de sus atomos en el espacio se denominan "estereoisomeros". Los terminos “estereoisomero” y “estereoisomeros” se refieren a compuestos que existen en diferentes formas estereoisomericas si tienen uno o mas centros asimetricos o un doble enlace con sustitucion asimetrica y, por lo tanto, pueden producirse como estereoisomeros individuales o como mezclas. Los estereoisomeros incluyen enantiomeros y diastereomeros. Los estereoisomeros que no son imagenes especulares entre si se denominan “diastereomeros” y aquellos que son imagenes especulares no superponibles entre si se denominan “enantiomeros”. Cuando un compuesto tiene un centro asimetrico, por ejemplo, si esta unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiomeros. Un enantiomero puede caracterizarse por la configuracion absoluta de su centro asimetrico, y se describe de acuerdo con las reglas de secuenciacion de R y S de Cahn y Prelog, o mediante la manera en que la molecula hace rotar el plano de la luz polarizada y se designa como dextrogiro o levogiro (es decir, como isomeros (+) o (-), respectivamente). Un compuesto quiral puede existir ya sea como un enantiomero individual o como una mezcla del mismo. Una mezcla que contiene iguales proporciones de los enantiomeros se denomina "mezcla racemica". A menos que se indique otra cosa, la descripcion tiene por objeto incluir tanto los estereoisomeros individuales, as! como las mezclas. Los metodos para la determinacion de la estereoqulmica y la separacion de los estereoisomeros se conocen bien en la tecnica (vease el analisis en el Capltulo 4 de ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 4a edicion, J. March, John Wiley and Sons, Nueva York, 1992) y difieren en la quiralidad de uno o mas estereocentros.Compounds that have the same molecular formula but differ in the nature or sequence of union of their atoms or in the arrangement of their atoms in space are called "isomers." Isomers that differ in the arrangement of their atoms in space are called "stereoisomers." The terms "stereoisomer" and "stereoisomers" refer to compounds that exist in different stereoisomeric forms if they have one or more asymmetric centers or a double bond with asymmetric substitution and, therefore, can be produced as individual stereoisomers or as mixtures. Stereoisomers include enantiomers and diastereomers. Stereoisomers that are not mirror images of each other are called "diastereomers" and those that are mirror images not superimposable among themselves are called "enantiomers." When a compound has an asymmetric center, for example, if it is linked to four different groups, a pair of enantiomers is possible. An enantiomer can be characterized by the absolute configuration of its asymmetric center, and is described according to the sequencing rules of R and S of Cahn and Prelog, or by the way in which the molecule rotates the plane of polarized light and designates as dextrogiro or levogiro (that is, as isomers (+) or (-), respectively). A chiral compound can exist either as an individual enantiomer or as a mixture thereof. A mixture that contains equal proportions of the enantiomers is called "racemic mixture." Unless otherwise indicated, the description is intended to include both individual stereoisomers as well! Like the mixes The methods for the determination of stereochemistry and the separation of stereoisomers are well known in the art (see the analysis in Chapter 4 of ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 4th edition, J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992) and differ in the chirality of one or more stereocenters.

"Tioacilo" se refiere a los grupos Ra-C(S)-."Thioacyl" refers to the Ra-C (S) - groups.

"Tiol" se refiere al grupo --SH."Thiol" refers to the group --SH.

"Tautomero" se refiere a formas alternativas de una molecula que difieren en la posicion de un proton, tales como los tautomeros enol-ceto e imina-enamina, o las formas tautomericas de grupos heteroarilo que contienen una disposicion de atomos anulares -N=C(H)-NH-, tales como pirazoles, imidazoles, bencimidazoles, triazoles y tetrazoles. Un experto en la tecnica reconocera que son posibles otras disposiciones de atomos anulares tautomericos."Tautomer" refers to alternative forms of a molecule that differ in the position of a proton, such as the enol-keto and imine-enamine tautomers, or the tautomeric forms of heteroaryl groups that contain an arrangement of annular atoms -N = C (H) -NH-, such as pyrazoles, imidazoles, benzimidazoles, triazoles and tetrazoles. One skilled in the art will recognize that other arrangements of tautomeric ring atoms are possible.

Se entendera que en todos los grupos sustituidos que se han definido anteriormente, los pollmeros a los que se llega definiendo sustituyentes con otros sustituyentes a si mismos (por ejemplo, arilo sustituido que tiene un grupo arilo sustituido que a su vez esta sustituido con un grupo arilo sustituido, etc.) no pretenden incluirse en el presente documento. En tales casos, el numero maximo de tales sustituciones es de tres. Por ejemplo, las sustituciones en serie de grupos arilo sustituidos estan limitadas a -arilo sustituido-(arilo sustituido)-arilo sustituido.It will be understood that in all of the substituted groups that have been defined above, the polymers that are reached by defining substituents with other substituents themselves (for example, substituted aryl having a substituted aryl group which in turn is substituted with a group substituted aryl, etc.) are not intended to be included herein. In such cases, the maximum number of such substitutions is three. For example, serial substitutions of substituted aryl groups are limited to-substituted aryl- (substituted aryl)-substituted aryl.

"Grupo protector" se refiere a un grupo de atomos que, cuando estan unidos a un grupo funcional reactivo en una molecula, enmascaran, reducen o impiden la reactividad del grupo funcional. Tlpicamente, un grupo protector puede eliminarse selectivamente segun se desee durante el transcurso de una slntesis. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3a Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY y Harrison y col., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vol. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Los grupos protectores amino representativos incluyen, pero sin limitacion, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo ("CBZ"), terc-butoxicarbonilo ("Boc"), trimetilsililo ("TMS "), 2-trimetilsilil-etanosulfonilo ("TES "), tritilo y grupos tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo ("FMOC"), nitro-veratriloxicarbonilo ("NVOC") y similares. Los grupos protectores hidroxi representativos incluyen, pero sin limitacion, aquellos en los que el grupo hidroxi esta acilado o alquilado, tal como eteres bencllicos y tritllicos, as! como eteres alqullicos, tetrahidropiranil eteres, trialquilsilil eteres (por ejemplo, grupos TMS o TIPPS) y eteres alllicos."Protective group" refers to a group of atoms that, when attached to a reactive functional group in a molecule, mask, reduce or impede the reactivity of the functional group. Typically, a protecting group can be selectively removed as desired during the course of a synthesis. Examples of protective groups can be found in Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vol. 1-8, 1971-1996 , John Wiley & Sons, NY. Representative amino protecting groups include, but are not limited to, formyl, acetyl, trifluoroacetyl, benzyl, benzyloxycarbonyl ("CBZ"), tert-butoxycarbonyl ("Boc"), trimethylsilyl ("TMS"), 2-trimethylsilyl-ethanesulfonyl ("TES "), trityl and substituted trityl groups, allyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (" FMOC "), nitro-veratriloxycarbonyl (" NVOC ") and the like. Representative hydroxy protecting groups include, but are not limited to, those in which the hydroxy group is acylated or alkylated, such as benzyl and trityl ethers, as well! as alkyl ethers, tetrahydropyranyl ethers, trialkylsilyl ethers (eg, TMS or TIPPS groups) and alllic ethers.

La expresion "sales farmaceuticamente aceptables" pretende incluir sales de los compuestos activos que se preparan con acidos o bases relativamente no toxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente invencion contienen funcionalidades relativamente acidas, las sales de adicion de bases se pueden obtener poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, pura o en un disolvente inerteThe term "pharmaceutically acceptable salts" is intended to include salts of the active compounds that are prepared with relatively non-toxic acids or bases, depending on the particular substituents found in the compounds described herein. When the compounds of the present invention contain relatively acidic functionalities, the base addition salts can be obtained by contacting the neutral form of such compounds with a sufficient amount of the desired base, pure or in an inert solvent.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

apropiado. Los ejemplos de sales derivadas de bases inorganicas farmaceuticamente aceptables incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, ferrico, ferroso, litio, magnesio, manganico, manganoso, potasio, sodio, cinc y similares. Las sales derivadas de bases organicas farmaceuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluyendo aminas sustituidas, aminas clclicas, las aminas de origen natural, y similares, tales como arginina, betalna, cafelna, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procalna, purines, teobromo, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Cuando compuestos de la presente invention contienen funcionalidades relativamente basicas, pueden obtenerse sales de adicion de acidos poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del acido deseado, ya sea puro o en un solvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adicion de acidos farmaceuticamente aceptables incluyen aquellas obtenidas a partir de acidos inorganicos como acido clorhldrico, bromhldrico, nltrico, carbonico, monohidrlgenocarbonico, fosforico, monohidrogenofosforico, dihidrogenofosforico, sulfurico, monohidrogenosulfurico, yodhldrico, o fosforoso y similares, as! como las sales obtenidas a partir de acidos organicos relativamente no toxicos como acetico, propionico, isobutlrico, malonico, benzoico, succlnico, suberico, fumarico, mandelico, ftalico, bencenosulfonico, p-tolilsulfonico, cltrico, tartarico, metanosulfonico, y similares. Tambien se incluyen sales de aminoacidos tales como arginato y similares, y sales de acidos organicos como acido glucuronico o galactunorico y similares (vease, por ejemplo, Berge, S.M. y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1-19, 1977). Ciertos compuestos especlficos de la presente invencion contienen funcionalidades tanto basicas como acidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adicion de bases o acidos.appropriate. Examples of salts derived from pharmaceutically acceptable inorganic bases include aluminum, ammonium, calcium, copper, ferric, ferrous, lithium, magnesium, manganic, manganous, potassium, sodium, zinc and the like. Salts derived from pharmaceutically acceptable organic bases include salts of primary, secondary and tertiary amines, including substituted amines, cyclic amines, naturally occurring amines, and the like, such as arginine, betalna, cafelna, choline, N, N'-dibenzylethylenediamine , diethylamine, 2-diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethylmorpholine, N-ethylpiperidine, glucamine, glucosamine, histidine, hydrabamine, isopropylamine, lysine, methylglucamine, morpholine, prorazine, piperinemine, piperidine, purine , theobromo, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine and the like. When compounds of the present invention contain relatively basic functionalities, acid addition salts can be obtained by contacting the neutral form of said compounds with a sufficient amount of the desired acid, either pure or in a suitable inert solvent. Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include those obtained from inorganic acids such as hydrochloric, bromhydric, nitric, carbonic, monohydrogencarbonic, phosphoric, monohydrophosphoric, dihydrogen phosphoric, sulfuric, monohydrogen phosphuric, or phosphorous, or similar, such as salts obtained from relatively non-toxic organic acids such as acetic, propionic, isobutyric, malonic, benzoic, succlonic, suberic, smoking, mandelic, phthalic, benzenesulfonic, p-tolylsulfonic, citric, tartaric, methanesulfonic, and the like. Also included are salts of amino acids such as arginate and the like, and salts of organic acids such as glucuronic or galactunoric acid and the like (see, for example, Berge, SM et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1 -19, 1977). Certain specific compounds of the present invention contain both basic and acid functionalities that allow the compounds to become base or acid addition salts.

Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o acido y aislando el precursor de la manera convencional. La forma precursora del compuesto difiere de las distintas formas de sal en ciertas propiedades flsicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero de otro modo, las sales son equivalentes a la forma precursora del compuesto para los fines de la presente invencion.The neutral forms of the compounds can be regenerated by contacting the salt with a base or acid and isolating the precursor in the conventional manner. The precursor form of the compound differs from the different salt forms in certain physical properties, such as solubility in polar solvents, but otherwise, the salts are equivalent to the precursor form of the compound for the purposes of the present invention.

Ademas de las formas de sal, la presente invencion proporciona compuestos que estan en una forma ester del profarmaco. “Profarmacos” de los compuestos descritos en el presente documento son los compuestos que experimentan facilmente cambios qulmicos en condiciones fisiologicas para proporcionar los compuestos de la presente invencion. De forma adicional, los profarmacos se pueden convertir en los compuestos de la presente invencion mediante metodos qulmicos y bioqulmicos en un entorno ex vivo. Por ejemplo, los profarmacos pueden convertirse de forma lenta en los compuestos de la presente invencion cuando se colocan en un deposito de parche transdermico con una enzima o reactivo qulmico adecuado. Los profarmacos con frecuencia, pero no necesariamente, estan farmacologicamente inactivos hasta convertirse en farmacos activos. Normalmente, los profarmacos se obtienen enmascarando un grupo funcional en el farmaco que se cree que es en parte necesario para la actividad, con un progrupo (definido a continuation), para formar un prorresiduo que experimenta una transformation, tal como una escision, en las condiciones especlficas de uso para liberar al grupo funcional y, por lo tanto, al farmaco activo. La escision de prorresiduo puede desarrollarse de forma espontanea, tal como por medio de una reaction de hidrolisis, o se puede catalizar o inducir mediante otro agente, tal como mediante una enzima, mediante luz, mediante acido o base, o mediante un cambio de, o la exposition a, un parametro flsico o del entorno, tal como un cambio de temperatura. El agente puede ser endogeno para las condiciones de uso, tal como una enzima presente en las celulas a las que se administra el profarmaco o las condiciones acidas del estomago, o puede proporcionarse de forma exogena.In addition to the salt forms, the present invention provides compounds that are in an ester form of the prodrug. "Prodrugs" of the compounds described herein are compounds that readily undergo chemical changes under physiological conditions to provide the compounds of the present invention. Additionally, prodrugs can be converted into the compounds of the present invention by chemical and biochemical methods in an ex vivo environment. For example, prodrugs can slowly convert into the compounds of the present invention when placed in a transdermal patch tank with a suitable enzyme or chemical reagent. Prodrugs are often, but not necessarily, pharmacologically inactive until they become active drugs. Normally, prodrugs are obtained by masking a functional group in the drug that is believed to be partly necessary for the activity, with a progroup (defined below), to form a pro-residue that undergoes a transformation, such as a split, in the specific conditions of use to release the functional group and, therefore, the active drug. The cleavage of pro-residue can develop spontaneously, such as by means of a hydrolysis reaction, or it can be catalyzed or induced by another agent, such as by an enzyme, by light, by acid or base, or by a change of, or exposure to, a physical or environmental parameter, such as a change in temperature. The agent may be endogenous for the conditions of use, such as an enzyme present in the cells to which the prodrug or acidic stomach conditions are administered, or may be provided exogenously.

“Progrupo” se refiere a un tipo de grupo protector que, cuando se utiliza para enmascarar un grupo funcional dentro de un farmaco activo para formar un prorresiduo, convierte al farmaco en un profarmaco. Normalmente, los profarmacos estan unidos al grupo funcional del farmaco a traves de enlaces que pueden escindirse en condiciones de uso especificadas. Por lo tanto, un progrupo es la portion de un prorresiduo que se escinde para liberar al grupo funcional en las condiciones especificadas de uso. Como ejemplo especlfico, un prorresiduo amida de la formula -NH-C(O)CH3 comprende el progrupo -C(O)CH3."Progroup" refers to a type of protecting group that, when used to mask a functional group within an active drug to form a pro-residue, converts the drug into a pro-drug. Normally, the prodrugs are linked to the functional group of the drug through links that can be cleaved under specified conditions of use. Therefore, a progroup is the portion of a pro-waste that is cleaved to release the functional group under the specified conditions of use. As a specific example, a pro-residue amide of the formula -NH-C (O) CH3 comprises the progroup -C (O) CH3.

Son bien conocidos en la tecnica una amplia diversidad de progrupos, as! como los prorresiduos resultantes, adecuados para enmascarar grupos funcionales en los compuestos inhibidores selectivos de syk y/o JAK activos para producir profarmacos. Por ejemplo, un grupo hidroxilo funcional se puede enmascarar como un residuo sulfonato, ester (tal como acetato o maleato) o carbonato, que pueden hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo hidroxilo. Un grupo funcional amino se puede enmascarar como un prorresiduo amida, carbamato, imina, urea, fosfofenilo, fosforilo o sulfenilo, que pueden hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo amino. Un grupo carboxilo puede enmascararse como un prorresiduo ester (que incluye metilo, etilo, pivaloiloximetilo, esteres de sililo y tioesteres), amida o hidracida, que pueden hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo carboxilo. La invencion incluye los esteres y grupos acilo conocidos en la tecnica para modificar la solubilidad o las caracterlsticas de hidrolisis para su uso como formulaciones de liberation sostenida o de profarmaco. Seran obvios para los expertos en la materia otros ejemplos especlficos de progrupos adecuados y sus respectivos prorresiduos.A wide variety of progroups are well known in the art, as! as the resulting pro-residues, suitable for masking functional groups in the active syk and / or JAK selective inhibitor compounds to produce prodrugs. For example, a functional hydroxyl group can be masked as a sulphonate, ester (such as acetate or maleate) or carbonate residue, which can be hydrolyzed in vivo to provide the hydroxyl group. An amino functional group can be masked as a pro-residue amide, carbamate, imine, urea, phosphophenyl, phosphoryl or sulfenyl, which can be hydrolyzed in vivo to provide the amino group. A carboxyl group can be masked as an ester pro-residue (which includes methyl, ethyl, pivaloyloxymethyl, silyl esters and thioesters), amide or hydrazide, which can be hydrolyzed in vivo to provide the carboxyl group. The invention includes esters and acyl groups known in the art for modifying the solubility or hydrolysis characteristics for use as sustained release or prodrug formulations. Other specific examples of suitable groups and their respective residues will be obvious to those skilled in the art.

Determinados compuestos de la presente invencion pueden existir en formas no solvatadas as! como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. “Solvato” se refiere a un complejo formado por la combination deCertain compounds of the present invention may exist in non-solvated forms as well! as in solvated forms, including hydrated forms. "Solvate" refers to a complex formed by the combination of

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

moleculas de disolvente con moleculas o iones del soluto. Un disolvente puede ser un compuesto organico, un compuesto inorganico o una mezcla de ambos. Algunos ejemplos de disolventes incluyen, pero sin limitation, metanol, N,N-dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulfoxido y agua. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se pretende que esten abarcadas dentro del ambito de la presente invention. Determinados compuestos de la presente invention pueden existir en multiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas flsicas son equivalentes para los usos contemplados en la presente invencion y se pretende que esten dentro del ambito de la presente invencion.Solvent molecules with solute molecules or ions. A solvent can be an organic compound, an inorganic compound or a mixture of both. Some examples of solvents include, but are not limited to, methanol, N, N-dimethylformamide, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxide and water. In general, solvated forms are equivalent to non-solvated forms and are intended to be encompassed within the scope of the present invention. Certain compounds of the present invention may exist in multiple crystalline or amorphous forms. In general, all physical forms are equivalent for the uses contemplated in the present invention and are intended to be within the scope of the present invention.

Determinados compuestos de la presente invencion poseen atomos de carbono asimetricos (centros opticos) o enlaces dobles; se pretende que todos los racematos, diastereomeros, isomeros geometricos, regioisomeros e isomeros individuales (por ejemplo, enantiomeros separados) esten abarcados dentro del ambito de la presente invencion. Estos isomeros pueden resolverse o sintetizarse de forma asimetrica utilizando metodos convencionales para dar los isomeros “opticamente puros”, es decir, sustancialmente libres de sus otros isomeros. Si, por ejemplo, se desea un enantiomero particular de un compuesto de la presente invencion, este se puede preparar mediante slntesis asimetrica o mediante derivation con un auxiliar quiral, donde la mezcla diastereomerica resultante se separa y el grupo auxiliar se escinde para proporcionar los enantiomeros puros deseados. Como alternativa, cuando la molecula contiene un grupo funcional basico, tal como amino, o un grupo funcional acido, tal como carboxilo, las sales diastereomericas se forman con un acido o base opticamente activo apropiado, seguido de la resolution de los diastereomeros as! formados por cristalizacion fraccional o por medios cromatograficos bien conocidos en la tecnica, y la posterior recuperation de los enantiomeros puros.Certain compounds of the present invention have asymmetric carbon atoms (optical centers) or double bonds; It is intended that all racemates, diastereomers, geometric isomers, regioisomers and individual isomers (eg, separate enantiomers) be encompassed within the scope of the present invention. These isomers can be resolved or synthesized asymmetrically using conventional methods to give the "optically pure" isomers, that is, substantially free of their other isomers. If, for example, a particular enantiomer of a compound of the present invention is desired, it can be prepared by asymmetric synthesis or by derivation with a chiral auxiliary, where the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group is cleaved to provide the enantiomers. desired cigars. Alternatively, when the molecule contains a basic functional group, such as amino, or an acidic functional group, such as carboxyl, diastereomeric salts are formed with an appropriate optically active acid or base, followed by the resolution of the diastereomers as! formed by fractional crystallization or by chromatographic means well known in the art, and the subsequent recovery of pure enantiomers.

Ademas, los compuestos de la presente invencion pueden contener proporciones no naturales de isotopos atomicos en uno o mas atomos de los atomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isotopos radioactivos, tales como por ejemplo tritio (3H), yodo 125 (125I) o carbono 14 (14C). Todas las variantes isotopicas de los compuestos de la presente invencion, ya sean radioactivas o no, se pretende que esten abarcadas dentro del ambito de la presente invencion.In addition, the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes in one or more atoms of the atoms constituting such compounds. For example, the compounds may be radiolabeled with radioactive isotopes, such as for example tritium (3H), iodine 125 (125I) or carbon 14 (14C). All isotopic variants of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are intended to be encompassed within the scope of the present invention.

El termino “administrar” se refiere a la administration oral, administration como un supositorio, contacto topico, administration intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intranasal o subcutanea, o la implantation de un dispositivo de liberation lenta por ejemplo, una bomba miniosmotica, en un sujeto. La administracion es mediante cualquier via, incluyendo la parenteral y la transmucosa (por ejemplo, bucal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal o transdermica). La administracion parenteral incluye, por ejemplo, la intravenosa, intramuscular, intrarteriola, intradermica, subcutanea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de suministro incluyen, pero sin limitacion, el uso de formulaciones liposomales, infusion intravenosa, parches transdermicos, etc.The term "administer" refers to oral administration, administration as a suppository, topical contact, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intranasal or subcutaneous administration, or the implantation of a slow-release device such as a miniosmotic pump, in a subject. Administration is by any route, including parenteral and transmucosal (for example, buccal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal or transdermal). Parenteral administration includes, for example, intravenous, intramuscular, intrarteriola, intradermal, subcutaneous, intraperitoneal, intraventricular and intracranial. Other modes of delivery include, but are not limited to, the use of liposomal formulations, intravenous infusion, transdermal patches, etc.

Un "agonista" o "activador" se refiere a un agente o molecula que se une a un receptor de la invencion, estimula, aumenta, abre, activa, facilita, potencia la activation o la actividad enzimatica, sensibiliza o regula de forma positiva la actividad de un receptor de la invencion.An "agonist" or "activator" refers to an agent or molecule that binds to a receptor of the invention, stimulates, increases, opens, activates, facilitates, enhances activation or enzymatic activity, sensitizes or regulates positively the activity of a recipient of the invention.

Un “antagonista” o “inhibidor” se refiere a un agente o molecula que inhibe o se une a, bloquea de forma parcial o total la estimulacion o actividad, disminuye, cierra, previene, retrasa la activacion o la actividad enzimatica, inactiva, desensibiliza o regula de forma negativa la actividad de un receptor de la invencion. Como se usa en la presente invencion, “antagonista” tambien incluye un agonista reverso o inverso.An "antagonist" or "inhibitor" refers to an agent or molecule that inhibits or binds to, partially or totally blocks stimulation or activity, decreases, closes, prevents, delays activation or enzymatic, inactive activity, desensitizes or regulates negatively the activity of a recipient of the invention. As used in the present invention, "antagonist" also includes a reverse or inverse agonist.

Como se usa en la presente invencion, la expresion “afeccion o trastorno sensible a la modulation de syk y/o JAK" y los terminos y frases relacionados, se refieren a una afeccion o trastorno asociado con actividad inadecuada, por ejemplo, menor de o mayor de lo normal, de syk y/o JAK y al menos parcialmente sensible a, o afectado por, la modulacion de syk y/o jAk (por ejemplo, los antagonistas o agonistas de syk y/o JAK dan como resultado algo de mejora en el bienestar del paciente en al menos algunos pacientes). La actividad funcional inadecuada de syk y/o JAK podrla aparecer como resultado de la expresion de syk y/o JAK en celulas que normalmente no expresan el receptor, mayor que la production normal de syk y/o JAK, o mas lenta que la inactivation o elimination metabolica normal de syk y/o JAK o de sus metabolitos activos, la expresion de syk y/o JAK o el grado de activacion intracelular (lo que conduce a, por ejemplo, trastornos y afecciones inflamatorios e inmuno-relacionados) aumentados o la expresion disminuida de syk y/o JAK. Una afeccion o trastorno asociado con syk y/o JAK puede incluir una "afeccion o trastorno mediado por syk y/o JAK".As used in the present invention, the expression "condition or disorder sensitive to modulation of syk and / or JAK" and related terms and phrases, refer to a condition or disorder associated with improper activity, for example, less than or greater than normal, of syk and / or JAK and at least partially sensitive to, or affected by, the modulation of syk and / or jAk (for example, antagonists or agonists of syk and / or JAK result in some improvement in the well-being of the patient in at least some patients.) Inadequate functional activity of syk and / or JAK could appear as a result of the expression of syk and / or JAK in cells that normally do not express the receptor, greater than the normal production of syk and / or JAK, or slower than the normal metabolic inactivation or elimination of syk and / or JAK or its active metabolites, the expression of syk and / or JAK or the degree of intracellular activation (which leads to, for example, , inflammatory and immuno-related disorders and conditions) a increased or decreased expression of syk and / or JAK. A condition or disorder associated with syk and / or JAK may include a "condition or disorder mediated by syk and / or JAK".

Como se usa en el presente documento, las frases “una afeccion o trastorno mediado al menos en parte por la actividad syk o JAK quinasa ", y las frases y terminos relacionados, se refieren a una afeccion o trastorno caracterizado por la actividad inadecuada, por ejemplo, mayor de lo normal, de syk y/o JAK. La actividad funcional inadecuada de syk y/o JAK podrla aparecer como resultado de la expresion de syk y/o JAK en celulas que normalmente no expresan syk y/o JAK o de la expresion o grado de activacion intracelular de syk y/o JAK aumentados (lo que conduce a, por ejemplo, trastornos y afecciones inflamatorios e inmuno-relacionados). Una afeccion o trastorno mediado al menos en parte por la actividad de la syk o JAK quinasa puede estar mediado de forma completa o parcial por la actividad funcional inadecuada de syk y/o JAK. Sin embargo, una afeccion o trastorno mediado al menos en parte por la actividad de la syk o JAK quinasa es uno en que la modulacion de syk y/o JAK da como resultado algun efecto sobre la afeccion o trastorno subyacente (por ejemplo, un antagonista deAs used herein, the phrases "a condition or disorder mediated at least in part by the syk or JAK kinase activity", and related phrases and terms, refer to a condition or disorder characterized by inappropriate activity, by example, greater than normal, of syk and / or JAK Inadequate functional activity of syk and / or JAK could appear as a result of the expression of syk and / or JAK in cells that normally do not express syk and / or JAK or the expression or degree of intracellular activation of increased syk and / or JAK (which leads to, for example, inflammatory and immuno-related disorders and conditions) A condition or disorder mediated at least in part by the activity of the syk or JAK kinase may be mediated completely or partially by the inadequate functional activity of syk and / or JAK, however, a condition or disorder mediated at least in part by the activity of syk or JAK kinase is one in which the modulation of syk and / or JAK results any effect on the underlying condition or disorder (for example, an antagonist of

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

syk y/o JAK da como resultado alguna mejora en el bienestar del paciente en al menos algunos pacientes).syk and / or JAK results in some improvement in the patient's well-being in at least some patients).

El termino "inflamacion" como se utiliza en el presente documento se refiere a la infiltracion de globulos blancos (por ejemplo, leucocitos, monocitos, etc.) en la zona tratada por reestenosis.The term "inflammation" as used herein refers to the infiltration of white blood cells (eg, leukocytes, monocytes, etc.) in the area treated by restenosis.

El termino “intervencion” se refiere a una accion que produce un efecto o que se pretende que altere el curso del proceso de la enfermedad. Por ejemplo, “intervencion vascular” se refiere al uso de un procedimiento intravascular tal como una angioplastia o un estent para abrir un vaso sangulneo obstruido.The term "intervention" refers to an action that produces an effect or is intended to alter the course of the disease process. For example, "vascular intervention" refers to the use of an intravascular procedure such as an angioplasty or a stent to open a clogged blood vessel.

La expresion “dispositivo intravascular” se refiere a un dispositivo util para un procedimiento de recanalizacion vascular para restablecer la circulacion sangulnea a traves de un vaso sangulneo obstruido. Los ejemplos de dispositivos intravasculares incluyen, pero sin limitation, estents, cateteres con globo, injertos venosos/arteriales autologos, injertos venosos/arteriales protesicos, cateteres vasculares y desviaciones vasculares.The term "intravascular device" refers to a device useful for a vascular recanalization procedure to restore blood circulation through a clogged blood vessel. Examples of intravascular devices include, but are not limited to, stents, balloon catheters, autologous venous / arterial grafts, prosthetic venous / arterial grafts, vascular catheters and vascular deviations.

Como se usa en el presente documento, el termino "JAK" se refiere a una quinasa Janus (n.° de acceso de RefSeq P-43408) o una variante de la misma que tenga la capacidad de mediar la expresion genica in vitro o in vivo. Las variantes de JAK incluyen protelnas sustancialmente homologas a JAK nativa, es decir, protelnas que tienen una o mas deleciones, inserciones o sustituciones de aminoacidos de origen natural o que no son de origen natural (por ejemplo, derivados, homologos y fragmentos de JAK). La secuencia de aminoacidos de la variante de JAK preferentemente es al menos aproximadamente el 80% identica a una JAK nativa, mas preferentemente al menos aproximadamente el 90 % identica y muy preferentemente al menos aproximadamente el 95% identica.As used herein, the term "JAK" refers to a Janus kinase (access no. Of RefSeq P-43408) or a variant thereof that has the ability to mediate gene expression in vitro or in alive. Variants of JAK include proteins substantially homologous to native JAK, that is, proteins that have one or more deletions, insertions or substitutions of naturally occurring amino acids or that are not naturally occurring (e.g., derivatives, homologs and fragments of JAK) . The amino acid sequence of the JAK variant is preferably at least about 80% identical to a native JAK, more preferably at least about 90% identical and most preferably at least about 95% identical.

El termino “leucocito” se refiere a cualquiera de las diversas celulas sangulneas que tienen un nucleo y un citoplasma, que se separan en una fina capa blanca cuando se centrifuga la sangre completa, y que ayudan a proteger al cuerpo de las infecciones y enfermedades. Los ejemplos de leucocitos incluyen, sin limitacion, neutrofilos, eosinofilos, basofilos, linfocitos y monocitos.The term "leukocyte" refers to any of the various blood cells that have a nucleus and a cytoplasm, which separate into a thin white layer when whole blood is centrifuged, and that help protect the body from infections and diseases. Examples of leukocytes include, without limitation, neutrophils, eosinophils, basophils, lymphocytes and monocytes.

El termino “mamlfero” incluye, pero sin limitacion, seres humanos, animales domesticos (por ejemplo, perros o gatos), animales de granja (vacas, caballos o cerdos), monos, conejos, ratones y animales de laboratorio.The term "mammal" includes, but is not limited to, humans, domestic animals (for example, dogs or cats), farm animals (cows, horses or pigs), monkeys, rabbits, mice and laboratory animals.

El termino “modular”, “modulation” y similares, se refiere a la capacidad de un compuesto para aumentar o disminuir la funcion y/o la expresion de syk y/o JAK, en donde tal funcion puede incluir actividad reguladora de la transcription y/o la union a protelnas. La modulacion puede producirse in vitro o in vivo. La modulacion, como se define en el presente documento, incluye la inhibition, antagonismo, antagonismo parcial, activation, agonismo o agonismo parcial de una funcion o caracterlstica asociada con syk y/o JAK, ya sea de forma directa o indirecta, y/o la regulation por aumento o disminucion de la expresion de syk y/o JAK, ya sea de forma directa o indirecta. En una realization preferente, la modulacion es directa. Los inhibidores o antagonistas son compuestos que, por ejemplo, se unen a, bloquean de forma parcial o total la estimulacion, disminuyen, previenen, inhiben, retrasan la activacion, inactivan, desensibilizan o regulan de forma negativa la transduction de senales. Los activadores o agonistas son compuestos que, por ejemplo, se unen a, estimulan, aumentan, abren, activan, facilitan, potencias la accion, activan, sensibilizan o regulan de forma positiva la transduccion de senales. La capacidad de un compuesto para inhibir la funcion de syk y/o JAK se puede demostrar en un ensayo bioqulmico, por ejemplo, un ensayo de union, o un ensayo basado en celulas, por ejemplo, un ensayo de transfection transitoria.The term "modular", "modulation" and the like refers to the ability of a compound to increase or decrease the function and / or expression of syk and / or JAK, where such function may include transcription regulatory activity and / or the union to protelnas. Modulation can occur in vitro or in vivo. Modulation, as defined herein, includes inhibition, antagonism, partial antagonism, activation, agonism or partial agonism of a function or characteristic associated with syk and / or JAK, either directly or indirectly, and / or regulation by increasing or decreasing the expression of syk and / or JAK, either directly or indirectly. In a preferred embodiment, the modulation is direct. Inhibitors or antagonists are compounds that, for example, bind to, partially or totally block stimulation, decrease, prevent, inhibit, delay activation, inactivate, desensitize or negatively regulate signal transduction. Activators or agonists are compounds that, for example, bind to, stimulate, increase, open, activate, facilitate, potentiate the action, activate, sensitize or regulate positively the signal transduction. The ability of a compound to inhibit the function of syk and / or JAK can be demonstrated in a biochemical assay, for example, a binding assay, or a cell-based assay, for example, a transient transfection assay.

“Moduladores” de actividad se utiliza para referirse a “ligandos”, “antagonistas” y “agonistas” identificados utilizando ensayos in vitro e in vivo para actividad, o sus homologos y mimeticos. Los moduladores incluyen ligandos, antagonistas, agonistas, moleculas y similares, de origen natural y sinteticos. Los ensayos para identificar antagonistas y agonistas incluye, por ejemplo, aplicar a celulas supuestos compuestos moduladores, en presencia o ausencia de un receptor de la invention y, despues, determinar los efectos funcionales sobre un receptor de la actividad de la invencion. Las muestras o ensayos que comprenden un receptor de la invencion, que se tratan con un activador, inhibidor o modulador potencial, se comparan con muestras de control sin el inhibidor, activador o modulador, para examinar el grado del efecto. A las muestras de control (no tratadas con moduladores) se les asigna un valor de actividad relativa del 100 %. La inhibicion se consigue cuando el valor de actividad de un receptor de la invencion con respecto al control es de aproximadamente el 80 %, opcionalmente el 50 % o 25-1 %. La activacion se consigue cuando el valor de actividad de un receptor de la invencion con respecto al control es el 110 %, opcionalmente el 150 %, opcionalmente el 200-500 % o el 1000-3000 % mas elevado."Activity modulators" are used to refer to "ligands", "antagonists" and "agonists" identified using in vitro and in vivo assays for activity, or their counterparts and mimetics. Modulators include ligands, antagonists, agonists, molecules and the like, naturally occurring and synthetic. Assays for identifying antagonists and agonists include, for example, applying to supposed cells modulating compounds, in the presence or absence of a receptor of the invention and then determining the functional effects on a receptor of the activity of the invention. Samples or assays comprising a receptor of the invention, which are treated with a potential activator, inhibitor or modulator, are compared with control samples without the inhibitor, activator or modulator, to examine the extent of the effect. Control samples (not treated with modulators) are assigned a relative activity value of 100%. The inhibition is achieved when the activity value of a receptor of the invention with respect to the control is approximately 80%, optionally 50% or 25-1%. Activation is achieved when the activity value of a receiver of the invention with respect to the control is 110%, optionally 150%, optionally 200-500% or 1000-3000% higher.

“Paciente” se refiere a animales humano o que no humanos, en especial mamlferos. Los ejemplos de pacientes incluyen, pero sin limitacion, seres humanos, vacas, perros, gatos, cabras, ovejas, cerdos y conejos."Patient" refers to human or non-human animals, especially mammals. Examples of patients include, but are not limited to, humans, cows, dogs, cats, goats, sheep, pigs and rabbits.

Respecto a las composiciones de la invencion, la expresion “transportador o excipiente farmaceuticamente aceptable” significa un transportador o excipiente que es util en la preparation de una composition farmaceutica que en general es segura, no toxica y ni biologica ni de otra forma no conveniente, e incluye un transportador o excipiente que es aceptable para el uso veterinario as! como para el uso farmaceutico en el ser humano. Un “transportador o excipiente farmaceuticamente aceptable” como se utiliza en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, incluye uno o mas de uno de tales transportadores o excipientes.With respect to the compositions of the invention, the expression "pharmaceutically acceptable carrier or excipient" means a carrier or excipient that is useful in the preparation of a pharmaceutical composition that is generally safe, non-toxic and neither biological nor otherwise convenient, and includes a carrier or excipient that is acceptable for veterinary use as! as for the pharmaceutical use in the human being. A "pharmaceutically acceptable carrier or excipient" as used in the specification and in the claims, includes one or more of one of such carriers or excipients.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Las expresiones “cantidad farmaceuticamente eficaz”, “cantidad terapeuticamente eficaz” o “dosis terapeuticamente eficaz”, se refieren a la cantidad del compuesto objeto que suscitara la respuesta biologica o medica de un tejido, sistema, animal o ser humano, que busca el investigador, veterinario, doctor en medicina u otro facultativo. La expresion “cantidad terapeuticamente eficaz” incluye la cantidad de un compuesto que, cuando se administra, es suficiente para prevenir el desarrollo de, o aliviar en algun grado, uno o mas de los slntomas de la afeccion o trastorno a tratar. La cantidad terapeuticamente eficaz variara dependiendo del compuesto, el trastorno o afeccion y su gravedad, y la edad, peso, etc. del mamlfero a tratar.The terms "pharmaceutically effective amount", "therapeutically effective amount" or "therapeutically effective dose", refer to the amount of the object compound that elicited the biological or medical response of a tissue, system, animal or human being, which the researcher seeks , veterinarian, medical doctor or other physician. The term "therapeutically effective amount" includes the amount of a compound that, when administered, is sufficient to prevent the development of, or relieve to some degree, one or more of the symptoms of the condition or disorder to be treated. The therapeutically effective amount will vary depending on the compound, the disorder or condition and its severity, and age, weight, etc. of the mammal to be treated.

El termino “plaqueta” se refiere a una celula diminuta, anucleada, discoidal encontrada en el plasma sangulneo de los mamlferos, que funciona para promover la coagulacion sangulnea.The term "platelet" refers to a tiny, anucleated, discoidal cell found in the blood plasma of mammals, which works to promote blood clotting.

Los terminos “prevenir”, “que previene”, “prevencion” y variaciones gramaticales de los mismos como se usan en el presente documento, se refieren a un metodo para retrasar o impedir, de forma parcial o completa, el inicio o recurrencia de un trastorno o afeccion y/o uno o mas de los slntomas que la acompanan, o impedir que un sujeto adquiera o readquiera un trastorno o afeccion, o reducir el riesgo de un sujeto de adquirir o readquirir un trastorno o afeccion o uno o mas de los slntomas que lo acompanan.The terms "prevent", "preventing", "prevention" and grammatical variations thereof as used herein, refer to a method to delay or prevent, partially or completely, the start or recurrence of a disorder or condition and / or one or more of the symptoms that accompany it, or prevent a subject from acquiring or regaining a disorder or condition, or reducing the risk of a subject acquiring or reacquiring a disorder or condition or one or more of the symptoms that accompany it.

El termino “recanalizacion” se refiere a un procedimiento para reestablecer el flujo para, o reunir, un canal interrumpido del cuerpo, tal como un vaso sangulneo.The term "recanalization" refers to a procedure to restore flow to, or gather, an interrupted body canal, such as a blood vessel.

El termino “reestenosis” se refiere a un reestrechamiento o bloqueo de una arteria en el mismo sitio donde se ha realizado el tratamiento, tal como una angioplastia o un procedimiento de estent.The term "restenosis" refers to a restitution or blockage of an artery at the same site where the treatment was performed, such as an angioplasty or a stent procedure.

La frase “de forma selectiva” o “de forma especlfica”, cuando se refieren a la union a un receptor, se refiere a una reaccion de union que es determinante de la presencia del receptor, a menudo en una poblacion heterogenea de receptores u otros productos biologicos. Por lo tanto, en condiciones especlficas, los compuestos se unen a un receptor particular al menos dos veces el fondo y mas normalmente mas de 10 a 100 veces el fondo. La union especlfica de un compuesto en tales condiciones necesita un compuesto que se seleccione por su especificidad por un receptor particular. Por ejemplo, pueden explorarse moleculas organicas pequenas para obtener solo los compuestos que se unen de forma especlfica o selectiva a un receptor seleccionado y no a otros receptores o protelnas. Se puede utilizar para seleccionar compuestos que sean selectivos para un receptor particular una diversidad de formatos de ensayo. Por ejemplo, para seleccionar compuestos que sean selectivos para un receptor particular se utilizan de forma rutinaria ensayos de exploration de alto rendimiento.The phrase "selectively" or "specifically", when referring to the binding to a receptor, refers to a binding reaction that is determinant of the presence of the receptor, often in a heterogeneous population of receptors or others. biological products. Therefore, under specific conditions, the compounds bind to a particular receptor at least twice the background and more normally more than 10 to 100 times the background. The specific binding of a compound under such conditions requires a compound that is selected for its specificity by a particular receptor. For example, small organic molecules can be screened to obtain only compounds that specifically or selectively bind to a selected receptor and not other receptors or proteins. A variety of assay formats can be used to select compounds that are selective for a particular receptor. For example, to select compounds that are selective for a particular receptor, high performance exploration assays are routinely used.

Como se usa en el presente documento, la expresion “anemia falciforme” se refiere a un trastorno hereditario de los globulos rojos en el que ambos alelos de la hemoglobina codifican para la protelna hemoglobina falciforme (S), es decir, el genotipo S/S. La presencia de hemoglobina anomala da como resultado la production de celulas con forma inusual, que no sobreviven el periodo de tiempo usual en la circulation sangulnea. Por lo tanto, resulta en anemia. “Anemia” se refiere a una reduction del numero de globulos rojos y/o de hemoglobina en la sangre.As used herein, the expression "sickle cell anemia" refers to an inherited red blood cell disorder in which both hemoglobin alleles encode the sickle sickle hemoglobin (S), that is, the S / S genotype. . The presence of anomalous hemoglobin results in the production of cells with an unusual shape, which do not survive the usual period of time in the blood circulation. Therefore, it results in anemia. "Anemia" refers to a reduction in the number of red blood cells and / or hemoglobin in the blood.

La expresion “anemia de celulas falciformes” se refiere a un trastorno hereditario de los globulos rojos en el que un alelo de la hemoglobina codifica la protelna hemoglobina falciforme (S), y el otro alelo codifica otra protelna hemoglobina inusual, tal como hemoglobina (S), (C), (D), (E) y (pTha1). Los ejemplos de genotipos de anemia de celulas falciforme incluyen, pero sin limitation, los genotipos s/s, S/C, S/D, S/E y S/pTha1. Los tipos mas comunes de anemia de celulas falciformes incluyen anemia de celulas falciformes, enfermedad de la hemoglobina C, beta talasemia + y beta talasemia 0.The term "sickle cell anemia" refers to an inherited red blood cell disorder in which one hemoglobin allele encodes the sickle hemoglobin protein (S), and the other allele encodes another unusual hemoglobin protein, such as hemoglobin (S ), (C), (D), (E) and (pTha1). Examples of sickle cell anemia genotypes include, but are not limited to, the genotypes s / s, S / C, S / D, S / E and S / pTha1. The most common types of sickle cell anemia include sickle cell anemia, hemoglobin C disease, beta thalassemia + and beta thalassemia 0.

El “sujeto” como se define en el presente documento para incluir animales tales como mamlferos, incluye, pero sin limitacion, primates (por ejemplo, seres humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones y similares. En realizaciones preferentes, el sujeto es un ser humano.The "subject" as defined herein to include animals such as mammals, includes, but is not limited to, primates (eg, humans), cows, sheep, goats, horses, dogs, cats, rabbits, rats, mice and the like In preferred embodiments, the subject is a human being.

Como se usa en el presente documento, el termino "syk" se refiere a una tirosina quinasa del bazo (n.° de Acceso de RefSeq P-043405) o una variante de la misma que tenga la capacidad de mediar una respuesta celular para receptores de linfocitos T in vitro o in vivo. Las variantes de syk incluyen protelnas sustancialmente homologas a syk nativa, es decir, protelnas que tienen una o mas deleciones, inserciones o sustituciones de aminoacidos de origen natural o que no son de origen natural (por ejemplo, derivados, homologos o fragmentos de syk). La secuencia de aminoacidos de la variante de syk preferentemente es al menos aproximadamente el 80 % identica a una syk nativa, mas preferentemente al menos aproximadamente el 90 % identica y muy preferentemente al menos aproximadamente el 95 % identica.As used herein, the term "syk" refers to a spleen tyrosine kinase (Access No. RefSeq P-043405) or a variant thereof that has the ability to mediate a cellular response to receptors. of T lymphocytes in vitro or in vivo. Variants of syk include proteins substantially homologous to native syk, that is, proteins that have one or more deletions, insertions or substitutions of naturally occurring amino acids or that are not naturally occurring (eg, derivatives, homologues or fragments of syk) . The amino acid sequence of the syk variant is preferably at least about 80% identical to a native syk, more preferably at least about 90% identical and most preferably at least about 95% identical.

La expresion “inhibidor de syk” se refiere a cualquier agente que inhibe la actividad catalltica de la tirosina quinasa del bazo.The term "syk inhibitor" refers to any agent that inhibits the catallotic activity of the spleen tyrosine kinase.

El termino “trombosis” se refiere al bloqueo o coagulacion de un vaso sangulneo provocado por una acumulacion de celulas, dando como resultado la obstruction de la circulacion sangulnea. El termino “trombosis” se refiere al coagulo que se forma dentro del vaso sangulneo.The term "thrombosis" refers to the blockage or coagulation of a blood vessel caused by an accumulation of cells, resulting in the obstruction of blood circulation. The term "thrombosis" refers to the clot that forms inside the blood vessel.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

El termino “tratar”, “que trata”, “tratamiento” y las variaciones gramaticales de los mismos como se usan en el presente documento, incluyen el retraso, alivio, mitigacion o reduccion, de forma parcial o total, de la intensidad de uno o mas slntomas acompanantes de un trastorno o afeccion y/o el alivio, mitigacion o impedimento de una o mas de las causas de un trastorno o afeccion. Los tratamientos de acuerdo con la invencion se pueden aplicar de forma preventiva, profilactica, paliativa o curativa.The term "treat", "treating", "treatment" and the grammatical variations thereof as used herein, include the delay, relief, mitigation or reduction, partially or totally, of one's intensity or more symptoms accompanying a disorder or condition and / or the relief, mitigation or impediment of one or more of the causes of a disorder or condition. The treatments according to the invention can be applied preventively, prophylactically, palliatively or curatively.

El termino “vasos” se refiere a cualquier canal para transportar un fluido, tal como una arteria o vena. Por ejemplo, un “vaso sangulneo” se refiere a cualquiera de los vasos a traves de los cuales circula la sangre en el cuerpo. La luz de un vaso sangulneo se refiere al espacio abierto interno o cavidad del vaso sangulneo.The term "vessels" refers to any channel for transporting a fluid, such as an artery or vein. For example, a "blood vessel" refers to any of the vessels through which blood circulates in the body. The light of a blood vessel refers to the internal open space or cavity of the blood vessel.

2. Realizaciones de la invencion2. Embodiments of the invention

a. Compuestosto. Compounds

La presente invencion proporciona en una realization, un compuesto que tiene la formula I:The present invention provides in one embodiment, a compound having the formula I:

imagen3image3

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in which:

D1 esD1 is

(a) cicloalquilo C3-8, opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, amino, hidroxi, alquilcarbonilo C1-8, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino C1-8, arilalcoxicarbonilamino C1-8, fenilo y heterociclil-alquileno C1-8;(a) C3-8 cycloalkyl, optionally substituted with 1 to 4 substituents independently selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, amino, hydroxy, C1-8 alkylcarbonyl, aminocarbonyl, C1-8 alkoxycarbonylamino, C1-8 arylalkoxycarbonylamino, phenyl and C1-8 heterocyclyl-alkylene;

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-8, amino, aminocarbonilo, hidroxilo, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, oxo, ciano, alcoxicarbonilo C1-8, cicloalquilo C3-8, arilo y heterociclilo; y cada heterociclilo esta opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, halo, oxo, amino, alcoxi C1-8, alquilcarbonilo C1-8, arilalcoxicarbonilo C1-8,R 1 is selected from the group consisting of H, C 1-8 alkyl, amino, aminocarbonyl, hydroxy, C 1-8 alkoxy, C 1-8 haloalkyl, C 2-8 alkenyl, C 2-8 alkynyl, oxo, cyano, C 1-8 alkoxycarbonyl , C3-8 cycloalkyl, aryl and heterocyclyl; and each heterocyclyl is optionally substituted with 1 to 4 substituents selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, halo, oxo, amino, C1-8 alkoxy, C1-8 alkylcarbonyl, C1-8 arylalkoxycarbonyl,

aminocarbonilo, arilalquilenocarbonilo C1-8 y alquilsulfonilo C1-8 Y1 se selecciona entre el grupo que consiste enaminocarbonyl, arylalkylenecarbonyl C1-8 and alkylsulfonyl C1-8 Y1 is selected from the group consisting of

(a) arilo; opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(a) aryl; optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, C1-8 alkoxy and alkylsulfonyl C1-8;

(b) heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(b) heteroaryl, optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, alkoxy C1-8 and C1-8 alkylsulfonyl;

R2 es un heterociclilo o heteroarilo, sustituido con al menos un grupo, R3, seleccionado entre el grupo que consiste en aminoalquil C1-8-, alcoxi C1-8-alquil C1-8-, oxo-, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8,R 2 is a heterocyclyl or heteroaryl, substituted with at least one group, R 3, selected from the group consisting of C 1-8 aminoalkyl, C 1-8 alkoxy-C 1-8 alkyl, oxo-, C 1-8 alkylcarbonyl, C3 cycloalkylcarbonyl -8,

heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino,heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino,

alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8 y heterociclilsulfonilo;C 1-8 alkylsulfonyl, C 3-8 cycloalkylsulfonyl and heterocyclylsulfonyl;

y en la que R2 esta opcionalmente sustituido adicionalmente con 1 a 2 sustituyentes, R4c, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, halo, aminocarbonilo, oxo, hidroxilo, aminoalquileno C1-8, alcoxi C1-8-alquileno C1-8, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8,and wherein R2 is optionally further substituted with 1 to 2 substituents, R4c, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy, halo, aminocarbonyl, oxo, hydroxy, C1-8 aminoalkylene, C1 alkoxy -8-C 1-8 alkylene, C 1-8 alkylcarbonyl, C 3-8 cycloalkylcarbonyl, heterocyclylcarbonyl, C 1-8 alkylcarbonylamino, C 3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C 1-8 alkylsulfonyl,

cicloalquilsulfonilo C3-8, heterociclilsulfonilo, cicloalquilo C3-8, alquilcicloalquileno C1-8, heteroarilo; en la que cicloalquilo se refiere a un grupo hidrocarburo mono o policlclico alquilo, alquenilo o alquinilo que puede formar un grupo puenteado o un anillo espiro, y que puede tener uno o mas dobles o triples enlaces.C3-8 cycloalkylsulfonyl, heterocyclylsulfonyl, C3-8 cycloalkyl, C1-8 alkylcycloalkylene, heteroaryl; wherein cycloalkyl refers to a mono or polycyclic alkyl, alkenyl or alkynyl hydrocarbon group which can form a bridged group or a spiro ring, and which can have one or more double or triple bonds.

En un grupo de realizaciones, Y es arilo. En otro grupo de realizaciones, Y es fenilo. En otro grupo de realizaciones, Y1 es heteroarilo. En otro grupo de realizaciones, Y1 es piridinilo.In a group of embodiments, Y is aryl. In another group of embodiments, Y is phenyl. In another group of embodiments, Y1 is heteroaryl. In another group of embodiments, Y1 is pyridinyl.

En un grupo de realizaciones, R2 es heterociclilo. En otro grupo de realizaciones, R2 es heteroarilo.In a group of embodiments, R2 is heterocyclyl. In another group of embodiments, R2 is heteroaryl.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

La presente invencion proporciona en otro grupo de realizaciones, un compuesto en el que un grupo heteroarilo del compuesto de formula I se selecciona entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another group of embodiments, a compound in which a heteroaryl group of the compound of formula I is selected from the group consisting of:

imagen4image4

cada uno de los cuales esta opcionalmente sustituido como se describe en el presente documento.each of which is optionally substituted as described herein.

La presente invencion proporciona en otro grupo de realizaciones, un compuesto en el que un grupo heteroarilo del compuesto de formula I es un grupo heteroarilo policfclico seleccionado entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another group of embodiments, a compound in which a heteroaryl group of the compound of formula I is a polycyclic heteroaryl group selected from the group consisting of:

imagen5image5

imagen6image6

imagen7image7

imagen8image8

yY

imagen9image9

opcionalmente sustituidos como se describe en el presente documento; y la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.optionally substituted as described herein; and the wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule.

La presente invencion proporciona en una realization, un compuesto que tiene la formula I:The present invention provides in one embodiment, a compound having the formula I:

imagen10image10

o un tautomero, sal o estereoisomero farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:or a pharmaceutically acceptable tautomer, salt or stereoisomer thereof, in which:

D1 es cicloalquilo C3-8, opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, amino, hidroxi, alquilcarbonilo C1-8, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino C1- 8, arilalcoxicarbonilamino C1-8, fenilo y heterociclil-alquileno C1-8;D1 is C3-8 cycloalkyl, optionally substituted with 1 to 4 substituents independently selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, amino, hydroxy, C1-8 alkylcarbonyl, aminocarbonyl, C1-8 alkoxycarbonylamino, C1-8 arylalkoxycarbonylamino, phenyl and C1-8 heterocyclyl-alkylene;

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-8, amino, aminocarbonilo, hidroxilo, alcoxi C1-8,R1 is selected from the group consisting of H, C1-8 alkyl, amino, aminocarbonyl, hydroxyl, C1-8 alkoxy,

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

haloalquilo Ci-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, oxo, ciano, alcoxicarbonilo C1-8, cicloalquilo C3-8, arilo y heterociclilo; y cada heterociclilo esta opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, halo, oxo, amino, alcoxi C1-8, alquilcarbonilo C1-8, arilalcoxicarbonilo C1-8, aminocarbonilo, arilalquilenocarbonilo C1-8 y alquilsulfonilo C1-8 Y1 se selecciona entre el grupo que consiste enCi-8 haloalkyl, C2-8 alkenyl, C2-8 alkynyl, oxo, cyano, C1-8 alkoxycarbonyl, C3-8 cycloalkyl, aryl and heterocyclyl; and each heterocyclyl is optionally substituted with 1 to 4 substituents selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, halo, oxo, amino, C1-8 alkoxy, C1-8 alkylcarbonyl, C1-8 arylalkoxycarbonyl, aminocarbonyl, C1- arylalkylenecarbonylcarbonyl 8 and C1-8 alkylsulfonyl Y1 is selected from the group consisting of

(a) arilo; opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(a) aryl; optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, C1-8 alkoxy and alkylsulfonyl C1-8;

(b) heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(b) heteroaryl, optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, alkoxy C1-8 and C1-8 alkylsulfonyl;

R2 es heterociclilo;R2 is heterocyclyl;

en la que R2 esta sustituido con al menos un grupo, R3, seleccionado entre el grupo que consiste en aminoalquil C1- 8-, alcoxi C1-8-alquil C1-8-, oxo-, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8,wherein R 2 is substituted with at least one group, R 3, selected from the group consisting of C 1-8 aminoalkyl, C 1-8 alkoxy-C 1-8 alkyl, oxo-, C 1-8 alkylcarbonyl, C 3-8 cycloalkylcarbonyl , heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C1-8 alkylsulfonyl, C3-8 cycloalkylsulfonyl,

heterociclilsulfonilo; y en la que R2 esta opcionalmente sustituido adicionalmente con 1 a 2 sustituyentes, R4c, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, halo, aminocarbonilo, oxo, hidroxilo, aminoalquileno C1-8, alcoxi C1-8-alquileno C1-8, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8, heterociclilsulfonilo, cicloalquilo C3-8 y alquilcloalquileno C1-8.heterocyclylsulfonyl; and wherein R2 is optionally further substituted with 1 to 2 substituents, R4c, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy, halo, aminocarbonyl, oxo, hydroxy, C1-8 aminoalkylene, C1 alkoxy -8-C1-8 alkylene, C1-8 alkylcarbonyl, C3-8 cycloalkylcarbonyl, heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C1-8 alkylsulfonyl, C3-8 cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, cycloalkyl, C3-8 alkyl C1-8.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que el resto -Y -R se selecciona entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another embodiment, a compound in which the -Y-R moiety is selected from the group consisting of:

imagen11image11

Y2 es N, CH o C;Y2 is N, CH or C;

R4a se selecciona entre el grupo que consiste en H y alquilo C1-8;R4a is selected from the group consisting of H and C1-8 alkyl;

cada R4c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, alcoxi C1-8 y halo;each R4c is independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, C1-8 alkoxy and halo;

cada R4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-8 y heterociclilo; el sublndice p es 0, 1,2 o 3; yeach R4b is independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl and heterocyclyl; the sub index p is 0, 1,2 or 3; Y

la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.The wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto que tiene la formula Id:The present invention provides in another embodiment, a compound having the formula Id:

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

imagen12image12

o una sal, estereoisomero o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer or prodrug thereof.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto que tiene la formula Id1:The present invention provides in another embodiment, a compound having the formula Id1:

imagen13image13

o una sal, estereoisomero o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer or prodrug thereof.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto que tiene la formula Id2:The present invention provides in another embodiment, a compound having the formula Id2:

imagen14image14

o una sal, estereoisomero o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer or prodrug thereof.

La presente invencion proporciona un compuesto en el que: D1 es cicloalquilo C3-8, opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, amino, hidroxi, alquilarbonilo C1-8, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino C1-8, arilo alcoxicarbonilamino C1-8, fenilo y heterociclil- alquileno C1-8.The present invention provides a compound in which: D1 is C3-8 cycloalkyl, optionally substituted with 1 to 4 substituents independently selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, amino, hydroxy, C1-8 alkylaryl, aminocarbonyl, alkoxycarbonylamino C1-8, aryl C1-8 alkoxycarbonylamino, phenyl and C1-8 heterocyclyl-alkylene.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que: D1 es ciclopropilo.The present invention provides in another embodiment, a compound in which: D1 is cyclopropyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que: D es ciclobutilo.The present invention provides in another embodiment, a compound in which: D is cyclobutyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que: D es ciclopentilo. La invencion tambien proporciona un compuesto de formula I en la que D1 es ciclohexilo.The present invention provides in another embodiment, a compound in which: D is cyclopentyl. The invention also provides a compound of formula I in which D1 is cyclohexyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que -Y -R se selecciona entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another embodiment, a compound in which -Y-R is selected from the group consisting of:

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

imagen15image15

Y2 es N o C;Y2 is N or C;

cada R se selecciona entre el grupo que consiste en H y halo; cada R4c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-8; cada R4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-8; yeach R is selected from the group consisting of H and halo; each R4c is independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl; each R4b is independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl; Y

el sublndice p es 0, 1,2 o 3; ythe sub index p is 0, 1,2 or 3; Y

la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.The wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule.

La presente invencion proporciona en otra realization, un compuesto en el que el resto -Y1-R2 se selecciona entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another embodiment, a compound in which the moiety -Y1-R2 is selected from the group consisting of:

imagen16image16

imagen17image17

yY

imagen18image18

imagen19image19

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Y2 es N o C;Y2 is N or C;

cada R4a se selecciona entre el grupo que consiste en H y alquilo Ci-s;each R4a is selected from the group consisting of H and Ci-s alkyl;

cada R4c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci-s, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, alcoxi Ci-s y halo;each R4c is independently selected from the group consisting of Ci-s alkyl, aminocarbonyl-, hydroxy, oxo, Ci-s alkoxy and halo;

cada R4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci-s, y heterociclilo; yeach R4b is independently selected from the group consisting of Ci-s alkyl, and heterocyclyl; Y

el sublndice p es 0, 1,2 o 3; y la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.the sub index p is 0, 1,2 or 3; and the wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule.

La presente invention proporciona en otra realization, un compuesto que tiene la formula:The present invention provides in another embodiment, a compound having the formula:

imagen20image20

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1one

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto en el que R esThe present invention provides in another embodiment a compound in which R is

imagen21image21

opcionalmente sustituido con CONH2 o alquilsulfonilo C1-8; y la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.optionally substituted with CONH2 or C1-8 alkylsulfonyl; and the wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule.

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto en el que R1 es alquilsulfonilo C1-8.The present invention provides in another embodiment a compound in which R 1 is C 1-8 alkylsulfonyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto que tiene la formula:The present invention provides in another embodiment a compound having the formula:

imagen22image22

oor

imagen23image23

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto que tiene la formula:The present invention provides in another embodiment a compound having the formula:

imagen24image24

oor

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

imagen25image25

1one

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que: D es cicloalquilo C3-8.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in which: D is C3-8 cycloalkyl.

1one

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto en el que D es ciclopropilo o ciclobutilo.The present invention provides in another embodiment a compound in which D is cyclopropyl or cyclobutyl.

1one

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto en el que D es ciclopropilo.The present invention provides in another embodiment a compound in which D is cyclopropyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto en el que D es ciclobutilo.The present invention provides in another embodiment a compound in which D is cyclobutyl.

La presente invencion proporciona en otra realizacion un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en :The present invention provides in another embodiment a compound selected from the group consisting of:

imagen26image26

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto en el que el compuesto se encuentra en los Ejemplos. Por ejemplo, la invencion proporciona un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:The present invention provides in another embodiment, a compound in which the compound is found in the Examples. For example, the invention provides a compound selected from the group consisting of:

2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclobutilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclobutylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-clorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-chlorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-propionilpiperazin-1-il)fenilamino)pirirnidine-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4-propionylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyriridine-5-carboxamide;

2-(4-(4-(ciclopropanocarbonil)piperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4- (cyclopropanecarbonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetil-2-oxopiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-2-oxopiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-fluorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-fluorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetil-2-carbamoilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-2-carbamoylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

(R)-2-(4-(4-acetil-3-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;(R) -2- (4- (4-acetyl-3-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

(R)-2-(4-(4-acetil-2-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;(R) -2- (4- (4-acetyl-2-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(6-(4-acetilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (6- (4-acetylpiperazin-1-yl) pyridin-3-ylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (1- (methylsulfonyl) piperidin-4-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (ethylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclobutilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclobutylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(1-acetilpiperidin-4-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (1-Acetylpiperidin-4-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(pirrolidin-1-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;(cyclopropylamino) -2- (4- (4- (pyrrolidin-1-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(morfolin-4-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (morpholin-4-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(ciclopropilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (cyclopropylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetil-1,4-diazepan-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-1,4-diazepan-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

2-(4-(4-acetamidopiperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetamidopiperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-dioxotiomorfolinofenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4-dioxothiomorpholinophenylamino) pyrimidin-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(2-metoxietil)piperazin-1-il)fenilamino)pirirnidine-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (2-methoxyethyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyriridine-5-carboxamide;

4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(N-metilacetamido)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida; y4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (N-methylacetamide) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; Y

2-(4-(4-(aminometil)piperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida.2- (4- (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide.

La presente invencion proporciona en otra realizacion, un compuesto que tiene la estructura observada en las tablas.The present invention provides in another embodiment, a compound having the structure observed in the tables.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugfa o terapia. La presente invencion proporciona una composicion que comprende un compuesto en combinacion con un transportador o diluyente farmaceuticamente aceptable. La presente invencion tambien proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afeccion seleccionada del grupo que consiste en enfermedad cardiovascular, enfermedad inflamatoria, enfermedad autoinmunitaria y trastorno proliferativo celular.The present invention also provides a compound for use in the treatment of the human or animal body by surgery or therapy. The present invention provides a composition comprising a compound in combination with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. The present invention also provides a compound for use in the treatment of a disease or condition selected from the group consisting of cardiovascular disease, inflammatory disease, autoimmune disease and cell proliferative disorder.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de:The present invention also provides a compound for use in the treatment of:

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

una enfermedad cardiovascular seleccionada del grupo que consiste en reestenosis, trombosis, purpura trombocitopenica inmunitaria, trombocitopenia inducida por heparina, cardiomiopatia dilatada, enfermedad de celulas falciformes, aterosclerosis, infarto de miocardio, inflamacion vascular, angina inestable y sindromes coronarios agudos;a cardiovascular disease selected from the group consisting of restenosis, thrombosis, immune thrombocytopenic purpura, heparin-induced thrombocytopenia, dilated cardiomyopathy, sickle cell disease, atherosclerosis, myocardial infarction, vascular inflammation, unstable angina and acute coronary syndromes;

una enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste en alergia, asma, artritis reumatoide, enfermedades mediadas por linfocitos B tales como linfomas no Hodgkin, sindrome antifosfolipidico, lupus, psoriasis, esclerosis multiple, nefropatia terminal y enfermedad de Crohn;an inflammatory disease is selected from the group consisting of allergy, asthma, rheumatoid arthritis, diseases mediated by B lymphocytes such as non-Hodgkin lymphomas, antiphospholipid syndrome, lupus, psoriasis, multiple sclerosis, terminal nephropathy and Crohn's disease;

una enfermedad autoinmunitaria seleccionada del grupo que consiste en anemia hemolitica, purpura trombocitopenica inmunitaria, esclerosis multiple, psoriasis y sindrome de Sjogren; oan autoimmune disease selected from the group consisting of hemolytic anemia, immune thrombocytopenic purpura, multiple sclerosis, psoriasis and Sjogren's syndrome; or

un trastorno proliferativo celular seleccionado del grupo que consiste en leucemia, un linfoma, trastornos mieloproliferativos, canceres hematologicos y mielofibrosis idiopatica cronica.a cell proliferative disorder selected from the group consisting of leukemia, lymphoma, myeloproliferative disorders, hematologic cancers and chronic idiopathic myelofibrosis.

La presente invencion tambien proporciona un kit que comprende un envasado e instrucciones para su uso.The present invention also provides a kit comprising packaging and instructions for use.

Se comprende que en otro grupo de realizaciones, cualquiera de las realizaciones anteriores tambien puede combinarse con otras realizaciones enumeradas en el presente documento, para formar otras realizaciones de la invencion.It is understood that in another group of embodiments, any of the above embodiments may also be combined with other embodiments listed herein, to form other embodiments of the invention.

b. Metodos de sintesisb. Synthesis Methods

Los compuestos de la presente invencion pueden prepararse mediante tecnicas de sintesis organica conocidas, incluyendo los metodos descritos en mas detalle en los Ejemplos. En general, los compuestos de la estructura (I) anterior pueden hacerse mediante la siguiente figura 3, en la que todos los sustituyentes son como se han definido anteriormente a menos que se indique otra cosa.The compounds of the present invention can be prepared by known organic synthesis techniques, including the methods described in more detail in the Examples. In general, the compounds of the above structure (I) can be made by the following figure 3, in which all substituents are as defined above unless otherwise indicated.

Los compuestos que tienen la formula I pueden prepararse de acuerdo con la figura 3. El acido carboxilico 1.1 se convierte en cloruro de acido 1.2 a traves de un procedimiento de una etapa por tratamiento con un agente de cloracion, tal como cloruro de tionilo, y esterificacion con un alcohol, tal como etanol, para formar el compuesto 1.3 usando condiciones similares a las descritas a continuacion. El ester 1.3 se diclora con un agente de cloracion, tal como oxicloruro de fosforo. El desplazamiento selectivo del grupo 4-cloro de la 2,4-dicloropirimidina por una amina apropiada, tal como R1-D1-NH2 (disponible en el mercado o sintetizada usando metodos conocidos por los expertos en la tecnica), en condiciones basicas, tal como con diisopropilamina (DIA), proporciona los compuestos de formula 1.5. La hidrolisis posterior del ester, el desplazamiento del segundo grupo cloro con EDC y el tratamiento con amoniaco proporcionan el compuesto 1.7. Tambien puede prepararse el compuesto benzotriazolil eter 1.7 a traves de una ruta lineal. El desplazamiento del grupo benzotriazolil eter con una amina apropiada, tal como R2-Y1-NH2 (disponible en el mercado o sintetizada usando metodos conocidos por los expertos en la tecnica), da el producto deseado I, en el que R1 y R2 son como se han definido anteriormente.Compounds having the formula I can be prepared according to Figure 3. Carboxylic acid 1.1 is converted to acid chloride 1.2 through a one-step process by treatment with a chlorinating agent, such as thionyl chloride, and esterification with an alcohol, such as ethanol, to form compound 1.3 using conditions similar to those described below. Ester 1.3 is dichlorinated with a chlorinating agent, such as phosphorus oxychloride. The selective displacement of the 4-chloro group of 2,4-dichloropyrimidine by an appropriate amine, such as R1-D1-NH2 (commercially available or synthesized using methods known to those skilled in the art), under basic conditions, such as with diisopropylamine (DIA), it provides the compounds of formula 1.5. Subsequent hydrolysis of the ester, displacement of the second chlorine group with EDC and treatment with ammonia provide compound 1.7. The benzotriazolyl ether 1.7 compound can also be prepared through a linear route. The displacement of the benzotriazolyl ether group with an appropriate amine, such as R2-Y1-NH2 (commercially available or synthesized using methods known to those skilled in the art), gives the desired product I, in which R1 and R2 are as They have been defined above.

Un experto en la tecnica reconocera que en ciertas realizaciones de la estructura (I), cuando R1-D1 o R2-Y1 comprende un heteroatomo terminal, puede ser ventajoso usar una estrategia de grupo protector. El grupo protector puede eliminarse usando metodos conocidos por los expertos en la tecnica para producir los compuestos de la estructura (1).One skilled in the art will recognize that in certain embodiments of structure (I), when R1-D1 or R2-Y1 comprises a terminal heteroatom, it may be advantageous to use a protective group strategy. The protecting group can be removed using methods known to those skilled in the art to produce the compounds of the structure (1).

Los compuestos de la presente invencion pueden utilizarse generalmente en forma de la base libre. Como alternativa, los compuestos de esta invencion pueden usarse en forma de sales de adicion de acidos como se describe a continuacion.The compounds of the present invention can generally be used in the form of the free base. Alternatively, the compounds of this invention can be used in the form of acid addition salts as described below.

c. Inhibicion de las syk y JAK quinasasC. Inhibition of syk and JAK kinases

La actividad de un compuesto especifico como un inhibidor de una JAK quinasa se puede evaluar in vitro o in vivo. En algunas realizaciones, la actividad de un compuesto especifico se puede analizar en un ensayo celular. La selectividad tambien podria establecerse en ensayos bioquimicos con quinasas aisladas.The activity of a specific compound as an inhibitor of a JAK kinase can be evaluated in vitro or in vivo. In some embodiments, the activity of a specific compound can be analyzed in a cell assay. The selectivity could also be established in biochemical assays with isolated kinases.

Para evaluar la actividad inhibidora de la JAK quinasa y para determinar el grado de selectividad del compuesto particular en comparacion con la quinasa syk, pueden utilizarse tipos similares de ensayos. Un medio para evaluar tal inhibicion es la deteccion del efecto de los compuestos de la presente invencion sobre la regulacion positiva de productos genicos aguas abajo. En el ensayo Ramos/IL4, se estimulan linfocitos B con la citocina Interleucina-4 (IL-4) lo que conduce a la activacion de la ruta JAK/Stat a traves de la fosforilacion de la familia de las JAK quinasas, JAK1 y JAK3, que a su vez fosforilan y activan el factor de transcripcion Stat-6. Uno de los genes que Stat-6 regula de forma positiva es el receptor de IgE de baja afinidad, CD23. Para estudiar el efecto de los inhibidores (por ejemplo, los compuestos 2,4-pirimidina diamina sustituidos descritos en el presente documento) sobre las JAK1 y JAK3 quinasas, se estimulan linfocitos B Ramos de ser humano con IL-4. 10' despues de la estimulacion, las celulas se someten a citometna de flujo intracelular para medir el grado de fosforilacion de STAT-6. 20 a 24 horas posestimulacion, las celulas se tinen para la regulacion positiva de CD23 y se analizan usando citometna de flujo. Una reduccion de la cantidad de STAT-6 fosforilada y/o de CD23 presente en la superficie celular en comparacion con las condiciones de control indica que el compuesto de prueba inhibe de forma activa la ruta de la JAK quinasa.To evaluate the inhibitory activity of JAK kinase and to determine the degree of selectivity of the particular compound compared to syk kinase, similar types of assays can be used. A means to evaluate such inhibition is the detection of the effect of the compounds of the present invention on the positive regulation of downstream gene products. In the Ramos / IL4 trial, B lymphocytes are stimulated with the cytokine Interleukin-4 (IL-4) which leads to the activation of the JAK / Stat route through phosphorylation of the JAK kinase, JAK1 and JAK3 family , which in turn phosphorylate and activate the transcription factor Stat-6. One of the genes that Stat-6 regulates positively is the low affinity IgE receptor, CD23. To study the effect of inhibitors (for example, the substituted 2,4-pyrimidine diamine compounds described herein) on JAK1 and JAK3 kinases, human B-cell lymphocytes are stimulated with IL-4. 10 'after stimulation, the cells are subjected to intracellular flow cytometna to measure the degree of phosphorylation of STAT-6. 20 to 24 hours post-stimulation, the cells are stained for positive regulation of CD23 and analyzed using flow cytomethane. A reduction in the amount of phosphorylated STAT-6 and / or CD23 present on the cell surface compared to the control conditions indicates that the test compound actively inhibits the JAK kinase pathway.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

De forma adicional, la estimulacion con IL-6 de los linfocitos B Ramos induce JAK 1, 2 y Tyk2, lo que conduce a la fosforilacion de Stat-3 y Erk. 10' posestimulacion, las celulas se someten a citometrla de flujo intracelular para medir la capacidad del compuesto para inhibir estos acontecimientos de fosforilacion. Para medir de forma especlfica la actividad de JAK2, se utilizara la llnea celular CellSensor irfl-bla HEL que expresa el gen indicador beta lactamasa, controlado por Stat5 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Estas celulas expresan un mutante de JAK2 activo de forma constitutiva (JAK2V617F), encontrado de forma natural en neoplasias mieloproliferativos (Constantinescu, S., et. al, Trends Biochem Sci., 2008; 33:122-31). La reduccion de la cantidad de la expresion del gen indicador beta- lactamasa se utiliza como una medida de la actividad inhibidora de JAK2 de los compuestos.Additionally, stimulation with IL-6 of Ramos B lymphocytes induces JAK 1, 2 and Tyk2, which leads to phosphorylation of Stat-3 and Erk. 10 'post-stimulation, the cells are subjected to intracellular flow cytometry to measure the ability of the compound to inhibit these phosphorylation events. To specifically measure JAK2 activity, the CellSensor irfl-bla HEL cell line that expresses the beta lactamase indicator gene, controlled by Stat5 (Invitrogen, Carlsbad, CA), will be used. These cells express a constitutively active JAK2 mutant (JAK2V617F), found naturally in myeloproliferative neoplasms (Constantinescu, S., et. Al, Trends Biochem Sci., 2008; 33: 122-31). The reduction in the amount of beta-lactamase indicator gene expression is used as a measure of the JAK2 inhibitory activity of the compounds.

La actividad de los compuestos de la invencion puede caracterizarse de forma adicional evaluando el efecto de los compuestos de la presente invencion descritos en el presente documento, sobre las celulas epiteliales de pulmon A549 y las celulas U937. Las celulas epiteliales de pulmon A549 y las celulas U937 regulan de forma positiva la expresion en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una diversidad de estlmulos distintos. Por lo tanto, utilizando la expresion de ICAM-1 como lectura, se pueden evaluar en el mismo tipo celular los efectos del compuesto de prueba sobre distintas rutas de serialization. La estimulacion con IL-1 p a traves del receptor de IL-1 p activa la ruta de TRAF6/NFkB, dando como resultado una regulation positiva de ICAM-1. IFN.gamma induce la regulation positiva de ICAM-1 a traves de la activation de la ruta de JAK1/JAK2. La regulacion positiva de ICAM-1 se puede cuantificar mediante citometrla de flujo a traves de una curva de dosis-respuesta del compuesto y se calculan los valores de la CE50.The activity of the compounds of the invention can be further characterized by evaluating the effect of the compounds of the present invention described herein, on lung epithelial cells A549 and U937 cells. The lung epithelial cells A549 and the U937 cells positively regulate the surface expression of ICAM-1 (CD54) in response to a variety of different stimuli. Therefore, using the expression of ICAM-1 as a reading, the effects of the test compound on different serialization routes can be evaluated in the same cell type. Stimulation with IL-1 p through the IL-1 p receptor activates the TRAF6 / NFkB pathway, resulting in a positive regulation of ICAM-1. IFN.gamma induces the positive regulation of ICAM-1 through the activation of the JAK1 / JAK2 route. The positive regulation of ICAM-1 can be quantified by flow cytometry through a dose-response curve of the compound and the EC50 values are calculated.

La actividad de los compuestos de la invencion puede de forma adicional caracterizarse ensayando sobre las celulas epiteliales de pulmon A549 y las celulas U937 el efecto de los compuestos de la presente invencion descritos en el presente documento. Las celulas epiteliales de pulmon A549 y las celulas u937 regulan de forma positiva la expresion en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una diversidad de estlmulos distintos. Por lo tanto, utilizando la expresion de ICAM-1 como lectura, se pueden evaluar los efectos del compuesto de prueba sobre distintas rutas de senalizacion en el mismo tipo celular. La estimulacion con IL-1 p a traves del receptor de IL-1 p activa la ruta de TRAF6/NFkB dando como resultado la regulacion positiva de ICAM-1. IFN.gamma induce la regulacion positiva de ICAM-1 a traves de la activacion de la ruta de JAK1/JAK2. La regulacion positiva de ICAM-1 se puede cuantificar mediante citometrla de flujo a traves de una curva de dosis-respuesta del compuesto y se calculan los valores de la CE50. En los Ejemplos se describen ensayos ejemplares de este tipo con mayor detalle.The activity of the compounds of the invention can be further characterized by testing on the lung epithelial cells A549 and U937 cells the effect of the compounds of the present invention described herein. The lung epithelial cells A549 and the u937 cells positively regulate the surface expression of ICAM-1 (CD54) in response to a variety of different stimuli. Therefore, using the expression of ICAM-1 as a reading, the effects of the test compound on different signaling pathways in the same cell type can be evaluated. Stimulation with IL-1 p through the IL-1 p receptor activates the TRAF6 / NFkB pathway resulting in the positive regulation of ICAM-1. IFN.gamma induces the positive regulation of ICAM-1 through the activation of the JAK1 / JAK2 route. The positive regulation of ICAM-1 can be quantified by flow cytometry through a dose-response curve of the compound and the EC50 values are calculated. Examples of this type are described in more detail in the Examples.

En general, se describen en el presente documento compuestos activos que inhiben la ruta de la JAK quinasa con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 1 mM o menos, como se mide en los ensayos descritos en el presente documento. Por supuesto, los expertos en la materia apreciaran que los compuestos que presentan menores CI50, (en el orden, por ejemplo, de 100 pM, 75 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 15 pM, 10 pM, 5 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM o incluso menor) pueden ser particularmente utiles en aplicaciones terapeuticas. En los casos en donde se desee una actividad especlfica para un tipo celular particular, se puede ensayar la actividad del compuesto con el tipo celular deseado y contraexplorar para una carencia de actividad frente a otros tipos celulares. El grado deseado de “inactividad” en tales contraexploraciones, o la proportion deseada de actividad frente a inactividad, puede variar para distintas situaciones y se puede seleccionar por el usuario.In general, active compounds that inhibit the JAK kinase pathway with an IC50 in the range of about 1 mM or less are described herein, as measured in the assays described herein. Of course, those skilled in the art will appreciate that compounds having lower IC50, (in the order, for example, of 100 pM, 75 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 15 pM, 10 pM, 5 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM or even less) may be particularly useful in therapeutic applications. In cases where a specific activity is desired for a particular cell type, the activity of the compound with the desired cell type can be tested and counter-explored for a lack of activity against other cell types. The desired degree of "inactivity" in such counter-explorations, or the desired proportion of activity against inactivity, may vary for different situations and can be selected by the user.

Ademas, normalmente los compuestos activos inhiben en linfocitos B la expresion de CD23 estimulada por IL-4, con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 20 pM o menos, normalmente en el intervalo de aproximadamente 10 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM o incluso menos. Un ensayo adecuado que puede utilizarse es el ensayo descrito en los Ejemplos, “Ensayo para la llnea de linfocitos B Ramos estimulada con IL-4". En determinadas realizaciones, los compuestos activos de la presente invencion pueden tener en el ensayo descrito en los Ejemplos una CI50 de menos de o igual a 5 pM, mayor de 5 pM pero menor de 20 pM, mayor de 20 pM, o mayor de 20 pM pero menor de 50 pM.In addition, the active compounds normally inhibit IL-4 stimulated CD23 expression in B lymphocytes, with an IC50 in the range of about 20 pM or less, usually in the range of about 10 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM , 10 nM, 1 nM or even less. A suitable assay that can be used is the assay described in the Examples, "Assay for IL-4 Stimulated B-lymphocyte Line. In certain embodiments, the active compounds of the present invention may have the assay described in the Examples. an IC50 of less than or equal to 5 pM, greater than 5 pM but less than 20 pM, greater than 20 pM, or greater than 20 pM but less than 50 pM.

Ademas, los compuestos activos normalmente inhiben la expresion de la expresion de ICAM1 (CD54) inducida por IFN.gamma en celulas U937 o A549 con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 20 pM o menor, normalmente en el intervalo de aproximadamente 10 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM o incluso mas bajo. La CI50 frente a la expresion de ICAM (CD54) en celulas estimuladas con IFN.gamma se puede determinar con un ensayo celular funcional en la llnea celular A549 o la U937 aislada. Los ensayos adecuados que pueden utilizarse son los ensayos descritos en los Ejemplos, "La llnea epitelial A549 estimulada con IFNy" y "Ensayo de FACS de ICAM1 por IFN.gamma en U937", respectivamente. En determinadas realizaciones, en los ensayos descritos en los Ejemplos los compuestos activos de la presente invencion tienen una CI50 de menos de o igual a 20 pM, mas grande de 20 pM o mas grande de 20 pM pero menor de 50 pM.In addition, the active compounds normally inhibit the expression of the ICAM1 (CD54) expression induced by IFN.gamma in U937 or A549 cells with an IC50 in the range of about 20 pM or less, usually in the range of about 10 pM, 1 pM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM or even lower. The IC50 versus ICAM expression (CD54) in IFN.gamma stimulated cells can be determined with a functional cell assay in the A549 cell line or the isolated U937. Suitable assays that can be used are the assays described in the Examples, "The A549 epithelial line stimulated with IFNy" and "ICAM1 FACS assay by IFN.gamma in U937", respectively. In certain embodiments, in the assays described in the Examples the active compounds of the present invention have an IC50 of less than or equal to 20 pM, larger than 20 pM or larger than 20 pM but less than 50 pM.

d. Composiciones y metodos de administrationd. Compositions and methods of administration

La presente invencion proporciona adicionalmente composiciones que comprenden uno o mas compuestos de formula (I) o una sal, ester o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo, y un transportador o diluyente farmaceuticamente aceptable. Se apreciara que los compuestos de formula (I) en la presente invencion, se pueden derivatizar en grupos funcionales para proporcionar derivados de profarmaco que sean capaces de convertirse de nuevo a los compuestos parentales in vivo. Los ejemplos de tales profarmacos incluyen los derivados esterThe present invention further provides compositions comprising one or more compounds of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt, ester or prodrug thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. It will be appreciated that the compounds of formula (I) in the present invention can be derivatized into functional groups to provide prodrug derivatives that are capable of converting back to the parent compounds in vivo. Examples of such prodrugs include ester derivatives

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

fisiologicamente aceptables y metabolicamente inestables, tales como metoximetil esteres, metiltiometil esteres o pivaloiloximetil esteres obtenidos de un grupo hidroxilo del compuesto o un residuo carbamoilo obtenido de un grupo amino del compuesto. De forma adicional, cualquiera de los equivalentes fisiologicamente aceptable de los compuestos de formula (I) similares a esteres o carbamatos metabolicamente inestables, que tienen la capacidad de producir los compuestos parentales de formula (I) in vivo, estan dentro del ambito de la presente invencion.Physiologically acceptable and metabolically unstable, such as methoxymethyl esters, methylthiomethyl esters or pivaloyloxymethyl esters obtained from a hydroxyl group of the compound or a carbamoyl residue obtained from an amino group of the compound. Additionally, any of the physiologically acceptable equivalents of compounds of formula (I) similar to esters or metabolically unstable carbamates, which have the ability to produce parental compounds of formula (I) in vivo, are within the scope of the present invention.

Como se utiliza en el presente documento, la expresion “sales farmaceuticamente aceptables” se refiere a cualquier sal de adicion de acido o base cuyos contraiones no son toxicos para el paciente en las dosis farmaceuticas de las sales. Los hospedadores de sales farmaceuticamente aceptables son bien conocidos en el campo farmaceutico. Si se utilizan en estas composiciones las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de la presente invencion, las sales preferentemente se obtienen de acidos y bases inorganicos u organicos. Entre tales sales acidas estan incluidas las siguientes: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, sulfonato de benceno, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canfor sulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, lucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromohidrato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, hidroacidos (por ejemplo, clorhidratos y bromohidratos), sulfatos, fosfatos, nitratos, sulfamatos, malonatos, salicilatos, metilen-bis-b-hidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, etanosulfonatos, ciclohexilsulfamatos, quinatos y similares. Las sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitation, las obtenidas de alcali o de bases metalicas alcalinoterreas o bases organicas convencionales, tales como trietilamina, piridina, piperidina, morfolina, N-metilmorfolina, sales de amonio, sales metalicas de alcalinas, tales como sales de sodio y potasio, sales metalicas alcalinoterreas, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases organicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina y sales con aminoacidos tales como arginina, lisina, etcetera.As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salts" refers to any acid or base addition salt whose counterions are not toxic to the patient in the pharmaceutical doses of the salts. Hosts of pharmaceutically acceptable salts are well known in the pharmaceutical field. If the pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention are used in these compositions, the salts are preferably obtained from inorganic or organic acids and bases. Such acid salts include the following: acetate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, benzene sulphonate, bisulfate, butyrate, citrate, canforate, camphor sulphonate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethanesulfonate, fumarate, lucoheptanoate, glycerophosphate, hemispherofosphate heptanoate, hexanoate, hydrochloride, bromohydrate, hydroiodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactate, maleate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, oxalate, pamoate, pectinate, persulfate, 3-phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, succinate, succinate, succinate tosylate, undecanoate, hydro acids (for example, hydrochlorides and bromohydrates), sulfates, phosphates, nitrates, sulfamates, malonates, salicylates, methylene-bis-b-hydroxynaphthoates, gentisates, isethionates, di-p-toluoyltartrates, ethanesulfonates, cyclohexylsulfates and cyclohexylsulfates Similar. Pharmaceutically acceptable base addition salts include, without limitation, those obtained from alkali or alkaline earth metal bases or conventional organic bases, such as triethylamine, pyridine, piperidine, morpholine, N-methylmorpholine, ammonium salts, alkali metal salts, such as sodium and potassium salts, alkaline earth metal salts, such as calcium and magnesium salts, salts with organic bases, such as dicyclohexylamine, N-methyl-D-glucamine salts and salts with amino acids such as arginine, lysine, etc.

Ademas, los grupos que contienen nitrogeno basicos pueden cuaternizarse con agentes del tipo haluros de alquilo inferiores, tales como cloruros de metilo, etilo, propilo y butilo, bromuros y yoduros; dialquilsulfatos, tales como dimetil, dietil, dibutil y diamilsulfatos, haluros de cadena larga, tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. Los productos solubles en agua o aceite o dispersables se obtienen de este modo.In addition, the basic nitrogen-containing groups can be quaternized with lower alkyl halide agents, such as methyl, ethyl, propyl and butyl chlorides, bromides and iodides; dialkyl sulfates, such as dimethyl, diethyl, dibutyl and diamyl sulfates, long chain halides, such as chlorides, bromides and iodides of decyl, lauryl, myristyl and stearyl; aralkyl halides, such as benzyl and phenethyl bromides, and others. Water or oil soluble or dispersible products are obtained in this way.

Los compuestos utilizados en las composiciones y metodos de la presente invencion tambien se pueden modificar adicionando funcionalidades apropiadas para potenciar propiedades biologicas selectivas. Tales modificaciones son conocidas en la tecnica e incluyen las que aumentan la penetration biologica en un dado sistema biologico (por ejemplo, sangre, sistema linfatico, sistema nervioso central, etc.), aumentan la disponibilidad oral, aumentan la solubilidad para permitir la administration mediante inyeccion, alteran el metabolismo y alteran la tasa de excretion.The compounds used in the compositions and methods of the present invention can also be modified by adding appropriate functionalities to enhance selective biological properties. Such modifications are known in the art and include those that increase biological penetration in a given biological system (e.g., blood, lymphatic system, central nervous system, etc.), increase oral availability, increase solubility to allow administration by injection, alter the metabolism and alter the rate of excretion.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion se pueden fabricar por metodos bien conocidos en la tecnica tales como granulation, mezclado, disolucion, encapsulado, liofilizacion o procesos de emulsification convencionales, entre otros. Las composiciones pueden producirse en diversas formas, incluyendo granulos, precipitados o partlculas, polvos, incluyendo polvos liofilizados, secados por rotation o por pulverization, polvos amorfos, comprimidos, capsulas, jarabes, supositorios, inyecciones, emulsiones, elixires, suspensiones o soluciones. Las formulaciones pueden de forma opcional contener estabilizadores, modificadores del pH, tensioactivos, modificadores de la biodisponibilidad y combinaciones de estos.The pharmaceutical compositions of the invention can be manufactured by methods well known in the art such as granulation, mixing, dissolution, encapsulation, lyophilization or conventional emulsification processes, among others. The compositions can be produced in various forms, including granules, precipitates or particles, powders, including lyophilized powders, dried by rotation or pulverization, amorphous powders, tablets, capsules, syrups, suppositories, injections, emulsions, elixirs, suspensions or solutions. The formulations may optionally contain stabilizers, pH modifiers, surfactants, bioavailability modifiers and combinations thereof.

La expresion "forma farmaceutica unitaria" se refiere a unidades flsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamlferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de farmaco, calculada para producir el inicio, tolerabilidad y/o los efectos terapeuticos deseados, en asociacion con un excipiente farmaceutico adecuado (por ejemplo, una ampolla). Ademas, se pueden preparar composiciones mas concentradas, a partir de las cuales despues se pueden producir composiciones farmaceuticas unitarias mas diluidas. Las composiciones mas concentradas contendran as! sustancialmente mas de, por ejemplo, al menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o mas veces la cantidad de uno o mas inhibidores de syk y/o JAK.The term "unit dosage form" refers to physically discrete units suitable as unit dosages for human subjects and other mammals, each unit containing a predetermined amount of drug, calculated to produce the desired onset, tolerability and / or therapeutic effects, in association with a suitable pharmaceutical excipient (for example, a blister). In addition, more concentrated compositions can be prepared, from which later more diluted unit pharmaceutical compositions can be produced. The most concentrated compositions will contain as! substantially more than, for example, at least 1.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more times the amount of one or more syk and / or JAK inhibitors.

Los metodos para preparar tales formas farmaceuticas son conocidos para los expertos en la materia (vease, por ejemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18a ED., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)). Ademas, se pueden preparar las sales farmaceuticamente aceptables de los inhibidores de syk y/o JAK de la presente invencion (por ejemplo, sales de adicion de acido) e incluirlas en las composiciones utilizando procedimientos convencionales conocidos para los expertos en la materia de la qulmica organica sintetica y que se describen, por ejemplo, en J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure, 4a Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992).Methods for preparing such pharmaceutical forms are known to those skilled in the art (see, for example, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th ED., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)). In addition, the pharmaceutically acceptable salts of the syk and / or JAK inhibitors of the present invention (eg acid addition salts) can be prepared and included in the compositions using conventional procedures known to those skilled in the art of chemistry synthetic organism and described, for example, in J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992).

Las composiciones normalmente incluyen un transportador o excipiente farmaceutico convencional y pueden incluir adicionalmente otros agentes curativos, transportadores, adyuvantes, diluyentes, potenciadores de la penetracion tisular, solubilizantes y similares. Preferentemente, la composition contendra aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 90 %, preferentemente aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 75 %, mas preferentemente aproximadamente el 0,1 % al 50 %, todavla mas preferentemente aproximadamente el 0,1 % alThe compositions normally include a conventional pharmaceutical carrier or excipient and may additionally include other curative agents, carriers, adjuvants, diluents, tissue penetration enhancers, solubilizers and the like. Preferably, the composition will contain about 0.01% to about 90%, preferably about 0.1% to about 75%, more preferably about 0.1% to 50%, still more preferably about 0.1 % to

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

10 % en peso de uno o mas inhibidores de syk y/o JAK, con lo restante consistiendo en transportadores y/o excipientes farmaceuticos adecuados. Los excipientes apropiados pueden adaptarse para la composicion particular y la via de administracion por metodos bien conocidos en la tecnica, por ejemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, citado anteriormente.10% by weight of one or more syk and / or JAK inhibitors, with the remainder consisting of suitable pharmaceutical carriers and / or excipients. Appropriate excipients may be adapted for the particular composition and route of administration by methods well known in the art, for example, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, cited above.

Los vehlculos farmaceuticamente aceptables que pueden utilizarse en estas composiciones incluyen intercambiadores ionicos, alumina, estearato de aluminio, lecitina, protelnas de suero, tales como seroalbumina humana, sustancias tamponadoras, tales como fosfatos, glicina, acido sorbico, sorbato de potasio, mezclas de glicerido parciales de acidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrogeno de disodico, fosfato de hidrogeno potasico, cloruro de sodio, sales de cinc, sllice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, pollmeros de bloque polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.Pharmaceutically acceptable carriers that can be used in these compositions include ion exchangers, alumina, aluminum stearate, lecithin, whey proteins, such as human seroalbumine, buffering substances, such as phosphates, glycine, sorbic acid, potassium sorbate, glyceride mixtures. partials of saturated vegetable fatty acids, water, salts or electrolytes, such as protamine sulfate, disodium hydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, sodium chloride, zinc salts, colloidal silica, magnesium trisilicate, polyvinylpyrrolidone, substances based on Cellulose, polyethylene glycol, sodium carboxymethylcellulose, polyacrylates, waxes, polyethylene-polyoxypropylene block polymers, polyethylene glycol and lanolin.

Los ejemplos de excipientes adecuados incluyen, pero sin limitation, lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arabiga, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, solution salina, jarabe, metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y acidos poliacrllicos tales como carbopoles. Las composiciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes de humectacion; agentes emulsionantes; agentes de suspension; agentes conservantes tales como metil-, etil- y propil-hidroxi-benzoatos; agentes para ajustar el pH tales como acidos y bases inorganicos y organicos; agentes edulcorantes y agentes saborizantes.Examples of suitable excipients include, but are not limited to, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starches, arabic gum, calcium phosphate, alginates, tragacanth, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, solution saline, syrup, methylcellulose, ethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose and polyacrylic acids such as carbopoles. The compositions may additionally include lubricating agents such as talc, magnesium stearate and mineral oil; wetting agents; emulsifying agents; suspending agents; preservatives such as methyl-, ethyl- and propyl-hydroxybenzoates; pH adjusting agents such as inorganic and organic acids and bases; sweetening agents and flavoring agents.

La administracion de una composicion que comprende uno o mas inhibidores de syk y/o JAK con uno o mas excipientes farmaceuticos adecuados segun sea ventajoso, se puede llevar a cabo a traves de cualquiera de los modos aceptados de administracion. Por lo tanto, la administracion puede ser, por ejemplo, oral, topica, intravenosa, subcutanea, transcutanea, transdermica, intramuscular, intraarticular, parenteral, intraarteriola, intradermica, intraventricular, intracraneal, intraperitoneal, intralesional, intranasal, rectal, vaginal, mediante inhalation o a traves de un deposito implantado. El termino "parenteral", como se utiliza en el presente documento, incluye inyeccion subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepatica, intralesional e intracraneal o tecnicas de infusion. Preferentemente, las composiciones se administran por via oral o intravenosa. Las formulaciones de la invention se pueden designar como de action corta, de liberation rapida o de action prolongada. Aun mas, los compuestos pueden administrarse por medios locales antes que sistemicos, tales como la administracion (por ejemplo, inyeccion) como una formulation de liberacion sostenida. De acuerdo con una realization representativa, las composiciones de la presente invencion se formulan para la administracion farmaceutica a un mamlfero, preferentemente un ser humano.The administration of a composition comprising one or more inhibitors of syk and / or JAK with one or more suitable pharmaceutical excipients as advantageous, can be carried out through any of the accepted modes of administration. Therefore, the administration can be, for example, oral, topical, intravenous, subcutaneous, transcutaneous, transdermal, intramuscular, intraarticular, parenteral, intraarteriola, intradermal, intraventricular, intracranial, intraperitoneal, intralesional, intranasal, rectal, vaginal, by inhalation or through an implanted deposit. The term "parenteral", as used herein, includes subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraarticular, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intrahepatic, intralesional and intracranial injection or infusion techniques. Preferably, the compositions are administered orally or intravenously. The formulations of the invention can be designated as short-acting, rapid-release or long-acting. Furthermore, the compounds can be administered by local rather than systemic means, such as administration (eg, injection) as a sustained release formulation. According to a representative embodiment, the compositions of the present invention are formulated for pharmaceutical administration to a mammal, preferably a human being.

Las composiciones de la presente invencion que contienen uno o mas inhibidores de syk y/o JAK se pueden administrar de forma repetida, por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o mas veces, o la composicion se puede administrar mediante infusion continua. Los sitios de administracion adecuados incluyen, pero sin limitacion, en la piel, bronquial, gastrointestinal, anal, vaginal, el ojo y el oldo. Las formulaciones pueden tomar forma de polvo solido, semisolido, liofilizado, o formas farmaceuticas llquidas, tales como, por ejemplo, comprimidos, plldoras, capsulas, polvos, soluciones, suspensiones, emulsiones, supositorios, enemas de retention, cremas, pomadas, lociones, geles, aerosoles o similares, preferentemente en formas farmaceuticas unitarias adecuadas para la administracion simple de dosificaciones precisas.The compositions of the present invention containing one or more inhibitors of syk and / or JAK may be administered repeatedly, for example, at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 or more times, or the composition It can be administered by continuous infusion. Suitable administration sites include, but are not limited to, skin, bronchial, gastrointestinal, anal, vaginal, eye and elbow. The formulations may take the form of solid, semi-solid, lyophilized powder, or liquid pharmaceutical forms, such as, for example, tablets, pills, capsules, powders, solutions, suspensions, emulsions, suppositories, retention enemas, creams, ointments, lotions, gels, aerosols or the like, preferably in unit pharmaceutical forms suitable for the simple administration of precise dosages.

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion pueden estar en cualquier forma farmaceutica oralmente aceptable, incluyendo comprimidos, capsulas, obleas, emulsiones, suspensiones, soluciones, jarabes, elixires, pulverizaciones, bolos, pastillas para chupar, polvos, granulos y formulaciones de liberacion sostenida. Los excipientes adecuados para la administracion oral incluyen calidades farmaceuticas de manitol, lactosa, almidon, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, gelatina, sacarosa, carbonato de magnesio y similares. En el caso de comprimidos para el uso oral, los transportadores que se utilizan normalmente incluyen lactosa y almidon de malz. Tambien se anaden normalmente agentes de lubrication, tales como estearato de magnesio. Para una formula en capsula, los diluyentes utiles incluyen lactosa y almidon de malz seco. Cuando se necesitan suspensiones acuosas para el uso oral, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspension. Si se desea, tambien se pueden anadir determinados agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes.The pharmaceutical compositions of the present invention may be in any orally acceptable pharmaceutical form, including tablets, capsules, wafers, emulsions, suspensions, solutions, syrups, elixirs, sprays, boluses, lozenges, powders, granules and sustained release formulations. Suitable excipients for oral administration include pharmaceutical qualities of mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, talc, cellulose, glucose, gelatin, sucrose, magnesium carbonate and the like. In the case of tablets for oral use, the carriers that are normally used include lactose and maize starch. Lubrication agents, such as magnesium stearate, are also normally added. For a capsule formula, useful diluents include lactose and dried maize starch. When aqueous suspensions are needed for oral use, the active substance is combined with emulsifying and suspending agents. If desired, certain sweetening, flavoring or coloring agents can also be added.

En algunas realizaciones, las composiciones toman la forma de una plldora, comprimido o capsula y, por lo tanto, la composicion puede contener, junto con uno o mas inhibidores de syk y/o JAK, un diluyente tal como lactosa, sacarosa, fosfato de dicalcio y similares; un disgregante tal como almidon o derivados del mismo; un lubricante tal como estearato de magnesio y similares; y/o un aglutinante tal como un almidon, goma arabiga, polivinilpirrolidona, gelatina, celulosa y derivados de los mismos. Un comprimido puede prepararse mediante cualquier proceso de compresion o de moldeado conocido para los expertos en la materia. Los comprimidos compactados pueden prepararse compactando en una maquina adecuada los inhibidores de syk y/o JAK en una forma fluida, por ejemplo, un polvo o granulos, mezclados de forma opcional con ingredientes accesorios, por ejemplo, agentes aglutinantes, lubricantes, diluyentes, disgregantes o de dispersion. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una maquina adecuada una mezcla de los inhibidores de syk y/o JAK en polvo con cualquier transportador adecuado.In some embodiments, the compositions take the form of a tablet, tablet or capsule and, therefore, the composition may contain, together with one or more syk and / or JAK inhibitors, a diluent such as lactose, sucrose, phosphate. dicalcium and the like; a disintegrant such as starch or derivatives thereof; a lubricant such as magnesium stearate and the like; and / or a binder such as a starch, gum arabic, polyvinylpyrrolidone, gelatin, cellulose and derivatives thereof. A tablet can be prepared by any compression or molding process known to those skilled in the art. The compacted tablets may be prepared by compacting in a suitable machine the syk and / or JAK inhibitors in a fluid form, for example, a powder or granules, optionally mixed with accessory ingredients, for example, binding agents, lubricants, diluents, disintegrants or dispersion Molded tablets may be prepared by molding in a suitable machine a mixture of the syk and / or JAK powder inhibitors with any suitable carrier.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Como alternativa, las composiciones farmaceuticas de la presente invencion pueden estar en la forma de supositorios para la administracion rectal. Estos pueden prepararse mezclando el agente con un excipiente no irritante adecuado que esta solido a temperatura ambiente pero llquido a la temperatura del recto, y por lo tanto se fundira en el recto para liberar el farmaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja, polietilenglicol (PEG), grasa dura y/o cocoglicerido hidrogenado. Las composiciones adecuadas para la administracion rectal pueden tambien comprender una unidad de enema rectal que contenga uno o mas inhibidores de syk y/o JAK y vehlculos farmaceuticamente aceptables (por ejemplo, etanol acuoso al 50 % o una solucion salina acuosa) que sean fisiologicamente compatibles con el recto y/o el colon. La unidad de enema rectal contiene una punta aplicadora protegida por una cubierta inerte, preferentemente compuesta de polietileno, lubricada con un lubricante tal como vaselina blanca y preferentemente protegida por una valvula de una via para prevenir el reflujo de la formula dispensada. Ademas, la unidad de enema rectal tiene el largo suficiente, preferentemente de 5,8 cm, para insertarla en el colon a traves del ano.Alternatively, the pharmaceutical compositions of the present invention may be in the form of suppositories for rectal administration. These can be prepared by mixing the agent with a suitable non-irritating excipient that is solid at room temperature but liquid at the temperature of the rectum, and therefore will melt in the rectum to release the drug. Such materials include cocoa butter, beeswax, polyethylene glycol (PEG), hard fat and / or hydrogenated cocoglyceride. Compositions suitable for rectal administration may also comprise a rectal enema unit containing one or more syk and / or JAK inhibitors and pharmaceutically acceptable carriers (eg, 50% aqueous ethanol or an aqueous saline solution) that are physiologically compatible. with the rectum and / or colon. The rectal enema unit contains an applicator tip protected by an inert shell, preferably composed of polyethylene, lubricated with a lubricant such as white petroleum jelly and preferably protected by a one-way valve to prevent reflux of the dispensed formula. In addition, the rectal enema unit is long enough, preferably 5.8 cm, to be inserted into the colon through the anus.

Las composiciones llquidas se pueden preparar disolviendo o dispersando uno o mas inhibidores de syk y/o JAK y, opcionalmente, uno o mas adyuvantes farmaceuticamente aceptables en un transportador tal como, por ejemplo, solucion salina acuosa, dextrosa acuosa, glicerol, etanol y similares, para formar una solucion o suspension, por ejemplo, para la administracion oral, topica o intravenosa. Las formulaciones farmaceuticas se pueden preparar como suspensiones o soluciones llquidas utilizando un llquido esteril, tal como aceite, agua, alcohol y combinaciones de los mismos. Se pueden anadir para la administracion oral o parenteral tensioactivos, agentes de suspension o agentes emulsionantes farmaceuticamente adecuados. Las suspensiones pueden incluir aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de sesamo, aceite de semilla de algodon, aceite de malz y aceite de oliva. La preparacion de suspension puede contener tambien esteres de acidos grasos, tales como etiloleato, miristato de isopropilo, gliceridos de acidos grasos y gliceridos de acidos grasos acetilados. Las formulaciones de la suspension pueden incluir alcoholes, tales como etanol, alcohol isopropllico, hexadecil alcohol, glicerol y propilenglicol. Los eteres, tales como poli(etilenglicol), hidrocarburos de petroleo, tales como aceite mineral y vaselina y agua, tambien pueden utilizarse en las formulaciones de suspension.Liquid compositions may be prepared by dissolving or dispersing one or more syk and / or JAK inhibitors and, optionally, one or more pharmaceutically acceptable adjuvants in a carrier such as, for example, aqueous saline solution, aqueous dextrose, glycerol, ethanol and the like. , to form a solution or suspension, for example, for oral, topical or intravenous administration. Pharmaceutical formulations can be prepared as suspensions or liquid solutions using a sterile liquid, such as oil, water, alcohol and combinations thereof. Surfactants, suspending agents or pharmaceutically suitable emulsifying agents may be added for oral or parenteral administration. The suspensions may include oils, such as peanut oil, sesame oil, cottonseed oil, maize oil and olive oil. The suspension preparation may also contain esters of fatty acids, such as ethyl oleate, isopropyl myristate, fatty acid glycerides and acetylated fatty acid glycerides. Suspension formulations may include alcohols, such as ethanol, isopropyl alcohol, hexadecyl alcohol, glycerol and propylene glycol. Ethers, such as poly (ethylene glycol), petroleum hydrocarbons, such as mineral oil and petrolatum and water, can also be used in suspension formulations.

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion tambien pueden estar en una forma topica, especialmente cuando la diana del tratamiento incluye zonas u organos facilmente accesibles mediante la aplicacion topica, incluyendo enfermedades del ojo, la piel o del tracto intestinal inferior. Las formulaciones topicas adecuadas se preparan facilmente para cada una de estas areas u organos. Para la administracion topica, la composicion que contiene uno o mas inhibidores de syk y/o JAK puede estar en la forma de emulsiones, lociones, geles, espumas, cremas, gelatinas, soluciones, suspensiones, pomadas y parches transdermicos.The pharmaceutical compositions of the present invention can also be in a topical form, especially when the treatment target includes areas or organs easily accessible by topical application, including diseases of the eye, skin or lower intestinal tract. The appropriate topical formulations are easily prepared for each of these areas or organs. For topical administration, the composition containing one or more syk and / or JAK inhibitors may be in the form of emulsions, lotions, gels, foams, creams, jellies, solutions, suspensions, ointments and transdermal patches.

La aplicacion topica para el tracto intestinal inferior se puede efectuar en una formulacion de supositorio rectal (vease mas arriba) o en una formulacion de enema adecuada. Ademas pueden utilizarse parches topicos transdermicos. Para aplicaciones topicas, las composiciones farmaceuticas se pueden formular en una pomada adecuada que contenga el principio activo suspendido o disuelto en uno o mas transportadores. Los transportadores para la administracion topica de los compuestos de la presente invencion incluyen, pero sin limitacion, aceite mineral, vaselina llquida, vaselina blanca, propilenglicol, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Como alternativa, las composiciones farmaceuticas se pueden formular en una locion o crema adecuada que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o mas transportadores farmaceuticamente aceptables. Los transportadores adecuados incluyen aceite mineral, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, esteres de cetilo, ceras, alcohol cetllico, 2-octildodecanol, alcohol bencllico y agua.The topical application for the lower intestinal tract can be done in a rectal suppository formulation (see above) or in a suitable enema formulation. In addition, transdermal topical patches can be used. For topical applications, pharmaceutical compositions may be formulated in a suitable ointment containing the active substance suspended or dissolved in one or more transporters. Conveyors for topical administration of the compounds of the present invention include, but are not limited to, mineral oil, liquid petrolatum, white petrolatum, propylene glycol, polyoxyethylene, polyoxypropylene compound, emulsifying wax and water. Alternatively, the pharmaceutical compositions may be formulated in a suitable lotion or cream containing the active components suspended or dissolved in one or more pharmaceutically acceptable carriers. Suitable carriers include mineral oil, sorbitan monostearate, polysorbate 60, cetyl esters, waxes, cetllic alcohol, 2-octyldodecanol, benzyl alcohol and water.

Ademas, las composiciones farmaceuticas de la presente invencion se pueden administrar mediante aerosol o inhalacion nasal. Para el suministro por inhalacion, las composiciones se pueden suministrar como un polvo seco o en forma llquida a traves de un nebulizador. Tales composiciones se preparan de acuerdo con las tecnicas conocidas en la tecnica de formulacion farmaceutica y se pueden preparar como soluciones en solucion salina, empleando alcohol bencllico u otros conservantes adecuados, promotores de la absorcion para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarbonos y/u otros agentes solubilizantes o de dispersion convencionales.In addition, the pharmaceutical compositions of the present invention can be administered by aerosol or nasal inhalation. For inhalation delivery, the compositions can be supplied as a dry powder or in liquid form through a nebulizer. Such compositions are prepared in accordance with the techniques known in the art of pharmaceutical formulation and can be prepared as solutions in saline solution, using benzyl alcohol or other suitable preservatives, absorption promoters to enhance bioavailability, fluorocarbons and / or other solubilizing agents. or conventional dispersion.

Para el uso oftalmico, las composiciones farmaceuticas se pueden formular como suspensiones micronizadas en solucion salina isotonica esteril con pH ajustado o, preferentemente, como soluciones en solucion salina esteril con pH ajustado isotonica, con o sin un conservante, tal como cloruro de benzalconio. Como alternativa, para usos oftalmicos, las composiciones farmaceuticas pueden formularse en una pomada, tal como vaselina.For ophthalmic use, pharmaceutical compositions can be formulated as micronized suspensions in sterile isotonic saline solution with adjusted pH or, preferably, as solutions in sterile saline solution with isotonic adjusted pH, with or without a preservative, such as benzalkonium chloride. Alternatively, for ophthalmic uses, pharmaceutical compositions can be formulated in an ointment, such as petrolatum.

Para la administracion parenteral, las composiciones pueden estar en la forma de soluciones inyectables esteriles y polvos envasados esteriles. Preferentemente, las soluciones inyectables se formulan en un pH de aproximadamente 4,5 a aproximadamente 7,5.For parenteral administration, the compositions may be in the form of sterile injectable solutions and sterile packaged powders. Preferably, the injectable solutions are formulated at a pH of about 4.5 to about 7.5.

Las formas inyectables esteriles de las composiciones de la presente invencion pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden formularse de acuerdo con las tecnicas conocidas en la tecnica, utilizando agentes de dispersion o humectantes y agentes de suspension adecuados. Ademas, la preparacion inyectable esteril puede ser una solucion o suspension inyectable esteril en un diluyente o disolvente no toxico parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solucion en 1,3-butanodiol. Entre los vehlculos y disolventes aceptables queThe sterile injectable forms of the compositions of the present invention may be aqueous or oleaginous suspensions. These suspensions may be formulated in accordance with the techniques known in the art, using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. In addition, the sterile injectable preparation may be a sterile injectable solution or suspension in a non-toxic parenterally acceptable diluent or solvent, for example as a solution in 1,3-butanediol. Among the acceptable vehicles and solvents that

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

pueden emplearse estan el agua, la solucion de Ringer y la solucion de cloruro de sodio isotonica. Ademas, se emplean de forma convencional como un disolvente o medio de suspension aceites no volatiles esteriles. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite no volatil suave incluyendo mono o digliceridos sinteticos. Son utiles en la preparacion de inyectables los acidos grasos, tales como acido oleico y sus derivados de glicerido, como lo son los aceites farmaceuticamente aceptables naturales, tales como el aceite de oliva o el aceite de ricino, en especial en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones en aceite pueden contener tambien un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tal como carboximetil celulosa o agentes de dispersion similares que se utilizan comunmente en la formulacion de formas farmaceuticas farmaceuticamente aceptables, incluyendo emulsiones y suspensiones. Tambien pueden utilizarse para los fines de formulacion otros tensioactivos usados comunmente, tales como Tweens, Spans u otros agentes emulsionantes o potenciadores de la biodisponibilidad que se utilizan comunmente en la fabricacion de formas farmaceuticas solidas, llquidas u otras farmaceuticamente aceptables. Los compuestos pueden formularse para la administracion parenteral mediante inyeccion tal como inyeccion por bolo o infusion continua. Una forma farmaceutica unitaria para inyeccion puede estar en ampollas o en recipientes de multidosis.Water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution can be used. In addition, sterile non-volatile oils are conventionally used as a solvent or suspension medium. For this purpose, any mild non-volatile oil including mono or synthetic diglycerides can be used. Fatty acids, such as oleic acid and its glyceride derivatives, are useful in the preparation of injectables, such as natural pharmaceutically acceptable oils, such as olive oil or castor oil, especially in its polyoxyethylated versions. These oil solutions or suspensions may also contain a long-chain alcohol diluent or dispersant, such as carboxymethyl cellulose or similar dispersing agents that are commonly used in the formulation of pharmaceutically acceptable pharmaceutical forms, including emulsions and suspensions. Other commonly used surfactants, such as Tweens, Spans or other emulsifying agents or bioavailability enhancers that are commonly used in the manufacture of solid, liquid or other pharmaceutically acceptable pharmaceutical forms, can also be used for formulation purposes. The compounds may be formulated for parenteral administration by injection such as bolus injection or continuous infusion. A unit dosage form for injection may be in ampoules or in multi-dose containers.

Las composiciones de la presente invencion tambien pueden proporcionarse en una forma liofilizada. Tales composiciones pueden incluir un tampon, por ejemplo, bicarbonato, para la reconstitucion antes de la administracion, o el tampon puede estar incluido en la composicion liofilizada para la reconstruccion con, por ejemplo, agua. La composicion liofilizada puede adicionalmente comprender un vasoconstrictor adecuado, por ejemplo, epinefrina. La composicion liofilizada puede proporcionarse en una jeringa, de forma opcional envasada en combinacion con el tampon para la reconstitucion, de forma tal que la composicion reconstituida pueda administrarse de forma inmediata a un paciente.The compositions of the present invention can also be provided in a lyophilized form. Such compositions may include a buffer, for example, bicarbonate, for reconstitution before administration, or the buffer may be included in the lyophilized composition for reconstruction with, for example, water. The lyophilized composition may additionally comprise a suitable vasoconstrictor, for example, epinephrine. The lyophilized composition can be provided in a syringe, optionally packaged in combination with the reconstitution buffer, such that the reconstituted composition can be administered immediately to a patient.

Cualquiera de las formas farmaceuticas anteriores que contienen cantidades eficaces, estan dentro de los llmites de la experimentacion habitual y dentro del ambito de la invencion. Una dosis terapeuticamente eficaz puede variar dependiendo de la via de administracion y de la forma farmaceutica. El compuesto o compuestos representativos de la invencion es una formulacion que presenta un alto Indice terapeutico. El Indice terapeutico es la proporcion de dosis entre los efectos toxico y terapeutico, que puede expresarse como la proporcion entre la DL50 y la DE50. La DL50 es la dosis letal para el 50 % de la poblacion y la DE50 es la dosis terapeuticamente eficaz en el 50 % de la poblacion. La DL50 y la DE50 se determinan mediante procedimientos farmaceuticos convencionales en cultivos celulares animales o en animales experimentales.Any of the above pharmaceutical forms containing effective amounts, are within the limits of usual experimentation and within the scope of the invention. A therapeutically effective dose may vary depending on the route of administration and the pharmaceutical form. The compound or compounds representative of the invention is a formulation that has a high therapeutic index. The therapeutic index is the dose ratio between toxic and therapeutic effects, which can be expressed as the ratio between LD50 and ED50. The LD50 is the lethal dose for 50% of the population and the ED50 is the therapeutically effective dose in 50% of the population. The LD50 and the ED50 are determined by conventional pharmaceutical procedures in animal cell cultures or in experimental animals.

Ademas de las formas farmaceuticas representativas descritas anteriormente, los excipientes y transportadores farmaceuticamente aceptables y las formas farmaceuticas son en general conocidas para los expertos en la materia y estan incluidos en la invencion. Deberla entenderse que una dosificacion y regimen de tratamiento especlficos para cualquier paciente particular dependeran de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto especlfico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente, y el tiempo de administracion, tasa de excrecion, combinacion de farmacos, juicio del facultativo responsable y la gravedad de la enfermedad particular a tratar. La cantidad de compuesto activo (o compuestos activos) tambien dependera del compuesto particular y otros agentes terapeuticos en la composicion, si estan presentes.In addition to the representative pharmaceutical forms described above, pharmaceutically acceptable excipients and transporters and pharmaceutical forms are generally known to those skilled in the art and are included in the invention. It should be understood that a specific dosage and treatment regimen for any particular patient will depend on a variety of factors, including the activity of the specific compound employed, the age, body weight, general health, sex and diet of the patient, and the time of administration, Excretion rate, combination of drugs, judgment of the physician responsible and the severity of the particular disease to be treated. The amount of active compound (or active compounds) will also depend on the particular compound and other therapeutic agents in the composition, if present.

e. Metodos de usoand. Methods of use

La invencion proporciona metodos para la inhibicion o disminucion de la actividad de syk y/o JAK, as! como se proporcionan compuestos como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento o la mejora de un estado, slntoma, afeccion, trastorno o enfermedad asociado con syk y/o JAK en un paciente que lo necesite (por ejemplo, humano o no humano). En una realizacion, el estado, slntoma, afeccion, trastorno o enfermedad asociado con syk y/o JAK esta mediado, al menos en parte, por la actividad de syk y/o JAK quinasa. En realizaciones mas especlficas, la presente invencion proporciona compuestos como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento de una afeccion o trastorno mediado, al menos en parte, por la actividad de syk y/o jAk quinasa, tal como una enfermedad cardiovascular, enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria.The invention provides methods for inhibiting or decreasing the activity of syk and / or JAK, as! as compounds are provided as described herein for use in the treatment or improvement of a condition, symptom, condition, disorder or disease associated with syk and / or JAK in a patient in need thereof (eg, human or non-human). In one embodiment, the condition, symptom, condition, disorder or disease associated with syk and / or JAK is mediated, at least in part, by the activity of syk and / or JAK kinase. In more specific embodiments, the present invention provides compounds as described herein for use in the treatment of a condition or disorder mediated, at least in part, by the activity of syk and / or jAk kinase, such as a disease cardiovascular, inflammatory disease or autoimmune disease.

En una realizacion, la invencion proporciona compuestos para su uso en la prevencion o el tratamiento de una afeccion en un mamlfero, caracterizada por trombosis no deseada, que comprende la etapa de administrar al mamlfero una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de la presente invencion. Tales afecciones incluyen, pero sin limitacion, reestenosis, slndrome coronario agudo, infarto de miocardio, angina inestable, angina refractaria, trombosis coronaria oclusiva que se presenta despues de la terapia trombolltica o despues de la angioplastia coronaria, un slndrome cerebrovascular mediado de forma trombotica, ictus embolico, ictus trombotico, ataques isquemicos transitorios, trombosis venosa, trombosis venosa profunda, embolia pulmonar, coagulopatla, coagulacion intravascular diseminada, purpura trombocitopenica trombotica, tromboangitis obliterante, enfermedad trombotica asociada con trombocitopenia inducida por heparina, complicaciones tromboticas asociadas con la circulacion extracorporea, complicaciones tromboticas asociadas con la instrumentacion tal como el cateterismo cardiaco u otro cateterismo intravascular, globo de contrapulsacion aortica, estent coronario o valvula cardiaca, afecciones que necesiten el ajuste de dispositivos protesicos, y similares.In one embodiment, the invention provides compounds for use in the prevention or treatment of a condition in a mammal, characterized by unwanted thrombosis, comprising the step of administering to the mammal a therapeutically effective amount of a compound of the present invention. Such conditions include, but are not limited to, restenosis, acute coronary syndrome, myocardial infarction, unstable angina, refractory angina, occlusive coronary thrombosis that occurs after thrombolytic therapy or after coronary angioplasty, a thrombotic-mediated cerebrovascular syndrome, embolic stroke, thrombotic stroke, transient ischemic attacks, venous thrombosis, deep venous thrombosis, pulmonary embolism, coagulopathy, disseminated intravascular coagulation, thrombotic thrombocytopenic purpura, obliterating thromboangitis, thrombotic disease associated with heparin thrombocytopenia, thrombotic complications associated with extrapopular thrombotic complications thrombotic complications associated with instrumentation such as cardiac catheterization or other intravascular catheterization, aortic counterpulsation balloon, coronary stent or cardiac valve, conditions that need adjustment of prosthetic devices, and the like.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

En una realizacion adicional, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de la trombosis, purpura trombocltica inmunitaria, trombocitopenia inducida por heparina, cardiomiopatla dilatada, enfermedad de celulas falciformes, aterosclerosis, infarto de miocardio, inflamacion vascular, angina inestable o slndromes coronarios agudos.In a further embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment of thrombosis, immune thrombocytic purpura, heparin-induced thrombocytopenia, dilated cardiomyopathy, sickle cell disease, atherosclerosis, myocardial infarction, vascular inflammation, unstable angina or slndromes acute coronaries

En otra realizacion, la presente invencion tambien proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de alergia, asma, artritis reumatoide, enfermedad mediada por linfocitos B tales como linfomas no Hodgkin, slndrome antifosfolipldico, lupus, psoriasis, esclerosis multiple, nefropatla terminal o leucemia linfocltica cronica.In another embodiment, the present invention also provides compounds for use in the treatment of allergy, asthma, rheumatoid arthritis, B-lymphocyte-mediated disease such as non-Hodgkin lymphomas, antiphospholipldic syndrome, lupus, psoriasis, multiple sclerosis, terminal nephropathy or lymphocytic leukemia chronicle.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de la anemia hemolltica o purpura trombocitopenica inmunitaria.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment of hemolytic anemia or immune thrombocytopenic purpura.

Los compuestos descritos en el presente documento son tambien inhibidores potentes y/o selectivos de las JAK quinasas. Como consecuencia de esta actividad, los compuestos pueden utilizarse en una diversidad de contextos in vitro, in vivo y ex vivo, para regular o inhibir la actividad JAK quinasa, las cascadas de serialization en las que las JAK quinasas desempenan un papel y las respuestas biologicas efectuadas por tales cascadas de senalizacion. Por ejemplo, en una realizacion, los compuestos se pueden utilizar para inhibir a la JAK quinasa, ya sea in vitro o in vivo, en practicamente cualquier tipo celular que exprese la JAK quinasa, tal como en celulas hematopoyeticas en las que, por ejemplo, JAK3 se expresa de forma predominante. Tambien pueden utilizarse para regular las cascadas de transduction de senales en las que desempenan un papel las JAK quinasas, en particular JAK3. Tales cascadas de transduction de senales dependientes de JAK incluyen, pero sin limitation, las cascadas de senalizacion de los receptores de citocinas que implican a la cadena gamma comun, tales como, por ejemplo, las cascadas de senalizacion de los receptores de IL-4, IL-7, IL-5, IL-9, IL-15 e IL-21 o IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-l5 e IL-21. Ademas, los compuestos pueden utilizarse in vitro o in vivo para regular, y en particular para inhibir, las respuestas celulares o biologicas afectadas por tales cascadas de transduccion de senales dependientes de JAK. Tales respuestas celulares o biologicas incluyen, pero sin limitacion, la regulation positiva de IL-4/ramos CD23 y la proliferation de linfocitos T mediada por IL-2. Notablemente, los compuestos pueden utilizarse para inhibir las jAk quinasas in vivo, como una estrategia terapeutica orientada el tratamiento o prevention de enfermedades mediadas, ya sea por completo o en parte, por una actividad JAK quinasa (denominada en el presente documento como "enfermedades mediadas por la JAK quinasa"). Los ejemplos no limitativos de enfermedades mediadas por la JAK quinasa que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos incluyen, pero sin limitacion, los siguientes: alergias; asma; enfermedades autoinmunitarias tales como rechazo de trasplantes (por ejemplo, rinon, corazon, pulmon, hlgado, pancreas, piel, intestino delgado, intestino grueso, reaction del hospedador contra el injerto (RHCI) y reaction del injerto contra al hospedador (RICH), artritis reumatoide y esclerosis lateral amiotrofia; enfermedades autoinmunitarias mediadas por linfocitos T tales como esclerosis multiple, psoriasis y slndrome de Sjogren; enfermedades inflamatorias del Tipo II tales como inflamacion vascular (incluyendo vasculitis, arteritis, aterosclerosis y enfermedad arterial coronaria); enfermedades del sistema nervioso central tales como ictus; enfermedades pulmonares tales como bronquitis obliterante e hipertension pulmonar primaria; reacciones de hipersensibilidad del Tipo IV solida retardada; y canceres hematologicos tales como leucemia y linfomas.The compounds described herein are also potent and / or selective inhibitors of JAK kinases. As a consequence of this activity, the compounds can be used in a variety of contexts in vitro, in vivo and ex vivo, to regulate or inhibit JAK kinase activity, serialization cascades in which JAK kinases play a role and biological responses made by such signaling cascades. For example, in one embodiment, the compounds can be used to inhibit JAK kinase, either in vitro or in vivo, in virtually any cell type that expresses JAK kinase, such as in hematopoietic cells in which, for example, JAK3 is expressed predominantly. They can also be used to regulate signal transduction cascades in which JAK kinases, in particular JAK3, play a role. Such JAK-dependent signal transduction cascades include, but are not limited to, the cytokine receptor signaling cascades that involve the common gamma chain, such as, for example, the IL-4 receptor signaling cascades, IL-7, IL-5, IL-9, IL-15 and IL-21 or IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-l5 and IL-21. In addition, the compounds can be used in vitro or in vivo to regulate, and in particular to inhibit, the cellular or biological responses affected by such JAK-dependent signal transduction cascades. Such cellular or biological responses include, but are not limited to, positive regulation of IL-4 / CD23 branches and proliferation of IL-2-mediated T lymphocytes. Notably, the compounds can be used to inhibit jAk kinases in vivo, as a therapeutic strategy aimed at the treatment or prevention of mediated diseases, either in whole or in part, by a JAK kinase activity (referred to herein as "mediated diseases by the JAK kinase "). Non-limiting examples of diseases mediated by JAK kinase that can be treated or prevented with the compounds include, but are not limited to, the following: allergies; asthma; autoimmune diseases such as transplant rejection (for example, kidney, heart, lung, liver, pancreas, skin, small intestine, large intestine, host graft reaction (RHCI) and graft versus host reaction (RICH), arthritis rheumatoid and lateral sclerosis amyotrophy; autoimmune diseases mediated by T lymphocytes such as multiple sclerosis, psoriasis and Sjogren's syndrome; inflammatory diseases of Type II such as vascular inflammation (including vasculitis, arteritis, atherosclerosis and coronary artery disease); diseases of the central nervous system such as stroke; pulmonary diseases such as obliterating bronchitis and primary pulmonary hypertension; delayed solid Type IV hypersensitivity reactions; and hematologic cancers such as leukemia and lymphomas.

Los ejemplos de enfermedades que estan mediadas al menos en parte por JAK quinasas, que pueden tratarse o prevenirse de acuerdo con los metodos incluyen, pero sin limitacion, alergias, asma, enfermedades autoinmunitarias tales como rechazo de trasplante (por ejemplo, rinon, corazon, pulmon, hlgado, pancreas, piel, reaccion del hospedador contra el injerto (RHCI), etc.), artritis reumatoide y esclerosis lateral amiotrofica, esclerosis multiple, psoriasis y slndrome de Sjogren, enfermedad inflamatoria del Tipo II tal como inflamacion vascular (incluyendo vasculitis, arteritis, aterosclerosis y enfermedad arterial coronaria) u otras enfermedades inflamatorias tales como osteoartritis, enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria intestinal idiopatica, slndrome del intestino irritable, colon irritable, mala cicatrization (por ejemplo, esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides, cicatrices posquirurgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares, migrana, lesion por reperfusion y posinfarto de miocardio), complejo o slndrome de las mucosas secas, enfermedades del sistema nervioso central tales como ictus, enfermedades pulmonares tales como bronquitis obliterante y primaria, e hipertension pulmonar primaria, hipersensibilidad del Tipo IV retardada o mediada por celulas y canceres solidos y hematologicos tales como leucemias y linfomas.Examples of diseases that are mediated at least in part by JAK kinases, which can be treated or prevented according to the methods include, but are not limited to, allergies, asthma, autoimmune diseases such as transplant rejection (e.g. kidney, heart, lung, liver, pancreas, skin, host reaction against graft (RHCI), etc.), rheumatoid arthritis and amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis, psoriasis and Sjogren's syndrome, type II inflammatory disease such as vascular inflammation (including vasculitis , arteritis, atherosclerosis and coronary artery disease) or other inflammatory diseases such as osteoarthritis, inflammatory bowel disease, ulcerative colitis, Crohn's disease, idiopathic inflammatory bowel disease, irritable bowel syndrome, irritable bowel disease, poor scarring (for example, scleroderma, fibrosis increased, keloids, postoperative scars, pulmonary fibrosis, spasms goes , migraine, reperfusion injury and post-myocardial infarction), complex or dry mucous syndrome, diseases of the central nervous system such as stroke, lung diseases such as obliterative and primary bronchitis, and primary pulmonary hypertension, delayed Type IV hypersensitivity or mediated by solid and hematological cells and cancers such as leukemia and lymphomas.

Tambien se describe un metodo para la inhibition de una JAK quinasa, que comprende poner en contacto la JAK quinasa con una cantidad de un compuesto eficaz para inhibir una actividad de la jAk quinasa, en donde el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion. El metodo puede llevarse a cabo in vivo.A method for the inhibition of a JAK kinase is also described, which comprises contacting the JAK kinase with an amount of a compound effective to inhibit a jAk kinase activity, wherein the compound is selected from the compounds of the invention. The method can be carried out in vivo.

Tambien se describe un metodo para la inhibicion de una actividad de una JAK quinasa, que comprende poner en contacto in vitro una JAK3 quinasa con una cantidad de un compuesto eficaz para inhibir una actividad de la JAK quinasa, en donde el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion.A method for the inhibition of an activity of a JAK kinase is also described, comprising in vitro contacting a JAK3 kinase with an amount of a compound effective to inhibit an activity of the JAK kinase, wherein the compound is selected from compounds of the invention.

En una realizacion especlfica, los compuestos pueden utilizarse para tratar y/o prevenir el rechazo en receptores de trasplantes de organos y/o tejidos (es decir, tratar y/o prevenir el rechazo de aloinjerto). Los aloinjertos pueden rechazarse a traves de una reaccion inmunitaria mediada por celulas o humoral del receptor frente a antlgenos del trasplante (histocompabilidad) presentes en las membranas de las celulas del donante. Los antlgenos mas fuertesIn a specific embodiment, the compounds can be used to treat and / or prevent rejection in recipients of organ and / or tissue transplants (ie, treat and / or prevent allograft rejection). Allografts can be rejected through a cell-mediated or humoral immune reaction of the recipient against transplant antigens (histocompatibility) present in the donor cell membranes. The strongest antigens

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

estan dirigidos por un complejo de locus geneticos llamados antlgenos leucocitarios humanos del grupo A (HLA). Junto con los antlgenos de los grupos sangulneos ABO, son los principales antlgenos de trasplante detectables en los seres humanos.they are directed by a complex of genetic locus called human leukocyte antigens of group A (HLA). Together with the ABO blood group antigens, they are the main transplant antigens detectable in humans.

El rechazo despues del trasplante en general puede dividirse en tres categorlas: hiperagudo que se produce horas a dlas despues del trasplante; agudo, que se produce dlas a meses despues del trasplante y cronico, que se produce meses a anos despues del trasplante.The rejection after transplantation in general can be divided into three categories: hyperacute that occurs hours after the transplant; acute, which occurs days to months after the transplant and chronic, which occurs months to years after the transplant.

El rechazo hiperagudo esta provocado principalmente por la produccion de anticuerpos del hospedador que atacan al tejido del injerto. En una reaccion de rechazo hiperagudo, se observan anticuerpos en la vasculatura del trasplante muy pronto despues del trasplante. Poco despues, se produce la coagulacion vascular, conduciendo a isquemia, eventual necrosis y muerte. El infarto de injerto no es sensible a terapias inmunosupresoras conocidas. Debido a que los antlgenos del HLA se pueden identificar in vitro, la exploracion pretrasplante se utiliza para reducir de forma significativa el rechazo hiperagudo. Como consecuencia de esta exploracion, el rechazo hiperagudo es relativamente poco comun hoy en dla.Hyper-acute rejection is mainly caused by the production of host antibodies that attack the graft tissue. In a hyperacute rejection reaction, antibodies are seen in the transplant vasculature very soon after the transplant. Shortly after, vascular coagulation occurs, leading to ischemia, eventual necrosis and death. The graft infarction is not sensitive to known immunosuppressive therapies. Because HLA antigens can be identified in vitro, the pre-transplant scan is used to significantly reduce hyperacute rejection. As a result of this exploration, hyperacute rejection is relatively uncommon today.

Se piensa que el rechazo agudo esta mediado por la acumulacion de celulas antigenicas especlficas en el tejido del injerto. La reaccion inmunitaria mediada por linfocitos T frente a estos antlgenos (es decir, RHCI o RICH) es el mecanismo principal del rechazo agudo. La acumulacion de estas celulas conduce al dano del tejido del injerto. Se cree que estan implicados en el proceso tanto los linfocitos T auxiliares CD4+ como los linfocitos T citotoxicos CD8+ y que las celulas dendrlticas del donante y el hospedador presentan el antlgeno. Los linfocitos T auxiliares CD4+ ayudan a incorporar otras celulas efectoras, tales como macrofagos y eosinofilos, al injerto. Tambien esta implicado el acceso a cascadas de transduccion de senales de activacion de linfocitos T (por ejemplo, cascadas de CD28, CD40L y CD2).Acute rejection is thought to be mediated by the accumulation of specific antigenic cells in the graft tissue. The immune reaction mediated by T lymphocytes against these antigens (i.e., RHCI or RICH) is the main mechanism of acute rejection. The accumulation of these cells leads to damage of the graft tissue. It is believed that both CD4 + helper T lymphocytes and CD8 + cytotoxic T lymphocytes are involved in the process and that the donor and host dendritic cells have the antigen. CD4 + helper T lymphocytes help incorporate other effector cells, such as macrophages and eosinophils, into the graft. Also involved is access to transduction cascades of T lymphocyte activation signals (eg, CD28, CD40L and CD2 cascades).

El rechazo agudo mediado por celulas puede revertirse en muchos casos intensificando la inmunoterapia. Despues de la reversion satisfactoria, los elementos gravemente danados del injerto se curan mediante fibrosis y el resto del injerto aparece normal. Despues de la resolucion del rechazo agudo, las dosificaciones de los farmacos inmunosupresores se pueden reducir a niveles muy bajos.Acute cell-mediated rejection can be reversed in many cases by intensifying immunotherapy. After successful reversion, the severely damaged elements of the graft are cured by fibrosis and the rest of the graft appears normal. After resolution of acute rejection, the dosages of immunosuppressive drugs can be reduced to very low levels.

El rechazo cronico, que es un problema particular en trasplantes de rinon, a menudo progresa de forma insidiosa a pesar de la terapia inmunosupresora aumentada. Se piensa que es debido, en gran parte, a la hipersensibilidad de Tipo IV mediada por celulas. El perfil patologico difiere del rechazo agudo. Esta principalmente implicado el endotelio arterial, con extensa proliferacion que puede ocluir de forma graduar la luz del vaso, conduciendo a isquemia, fibrosis, una Intima engrosada y cambios ateroscleroticos. El rechazo cronico principalmente se debe a la obliteration progresiva de la vasculatura del injerto y se asemeja a un proceso vasculltico lento.Chronic rejection, which is a particular problem in kidney transplants, often progresses insidiously despite increased immunosuppressive therapy. It is thought to be due, in large part, to cell-mediated Type IV hypersensitivity. The pathological profile differs from acute rejection. The arterial endothelium is mainly involved, with extensive proliferation that can gradually occlude vessel lumen, leading to ischemia, fibrosis, a thickened intima and atherosclerotic changes. Chronic rejection is mainly due to the progressive obliteration of the graft vasculature and resembles a slow vasculltic process.

En la hipersensibilidad de tipo IV, los linfocitos T citotoxicos CD8 y los linfocitos T auxiliares CD4 reconocen el antlgeno sintetizado intracelular o extracelular cuando esta formando complejo con, respectivamente, moleculas del MHC de Clase I o Clase II. Los macrofagos funcionan como celulas presentadoras de antlgeno y liberan IL-1, lo que promueve la proliferacion de los linfocitos T auxiliares. Los linfocitos T auxiliares liberan interferon gamma e IL-2, que juntos regulan las reacciones de hiperactividad retrasada mediada por la activacion de macrofagos y la inmunidad mediada por linfocitos T. En el caso del trasplante de organos, los linfocitos T citotoxicos destruyen las celulas del injerto en contacto.In type IV hypersensitivity, CD8 cytotoxic T lymphocytes and CD4 helper T lymphocytes recognize the intracellular or extracellular synthesized antigen when it is complexing with, respectively, Class I or Class II MHC molecules. Macrophages function as antigen presenting cells and release IL-1, which promotes the proliferation of helper T lymphocytes. Auxiliary T lymphocytes release interferon gamma and IL-2, which together regulate delayed hyperactivity reactions mediated by macrophage activation and T lymphocyte mediated immunity. In the case of organ transplantation, cytotoxic T lymphocytes destroy the cells of the graft in contact.

Dado que la JAK quinasas desempenan un papel crltico en la activacion de linfocitos T, los compuestos descritos en el presente documento pueden utilizarse para tratar y/o prevenir muchos aspectos del rechazo de trasplantes, y son particularmente utiles en el tratamiento y/o la prevention de las reacciones de rechazo que estan mediadas, al menos en parte, por linfocitos T, tales como RHCI o RICH. Los compuestos tambien pueden utilizarse para tratar y/o prevenir el rechazo cronico en receptores de trasplante y, en particular, en receptores de trasplante de rinon. El compuesto tambien puede administrarse a un tejido o un organo antes del trasplante del tejido u organo en el receptor del trasplante.Since JAK kinases play a critical role in the activation of T lymphocytes, the compounds described herein can be used to treat and / or prevent many aspects of transplant rejection, and are particularly useful in the treatment and / or prevention. of rejection reactions that are mediated, at least in part, by T lymphocytes, such as RHCI or RICH. The compounds can also be used to treat and / or prevent chronic rejection in transplant recipients and, in particular, in kidney transplant recipients. The compound can also be administered to a tissue or an organ before tissue or organ transplantation in the transplant recipient.

En otra realization, la presente invention proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria mediada por linfocitos T, que comprende administrar a un paciente que padece tal enfermedad autoinmunitaria una cantidad de un compuesto eficaz para tratar la enfermedad autoinmunitaria en la que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion. En determinadas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria es esclerosis multiple (EM), psoriasis o slndrome de Sjogran. Tal enfermedad autoinmunitaria incluye, pero sin limitation, las enfermedades autoinmunitarias que se designan con frecuencia como trastornos autoinmunitarios de un unico organo o de unico tipo celular y las enfermedades autoinmunitarias que con frecuencia se designan como que implican trastorno autoinmunitario sistemico. Los ejemplos no limitativos de enfermedades designadas con frecuencia como trastornos autoinmunitarios de un unico organo unico o de un unico tipo celular incluyen; tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolltica autoinmunitaria, gastritis atrofica autoinmunitaria de anemia perniciosa, encefalomielitis autoinmunitaria, orquitis autoinmunitaria, enfermedad de Goodpasture, trombocitopenia autoinmunitaria, oftalmia simpatica, miastenia grave, enfermedad de Grave, cirrosis biliar primaria, hepatitis agresiva cronica, colitis ulcerosa y glomerulopatla membranosa. Los ejemplos no limitativos de enfermedades designadasIn another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment of an autoimmune disease mediated by T lymphocytes, which comprises administering to an patient suffering from such autoimmune disease an amount of an effective compound to treat autoimmune disease in which the compound is selected from the compounds of the invention. In certain embodiments, the autoimmune disease is multiple sclerosis (MS), psoriasis or Sjogran syndrome. Such autoimmune disease includes, but is not limited to, autoimmune diseases that are often referred to as autoimmune disorders of a single organ or cell type and autoimmune diseases that are often designated as involving systemic autoimmune disorder. Non-limiting examples of diseases often referred to as autoimmune disorders of a single organ or a single cell type include; Hashimoto's thyroiditis, autoimmune hemolytic anemia, autoimmune atrophic gastritis of pernicious anemia, autoimmune encephalomyelitis, autoimmune orchitis, Goodpasture's disease, autoimmune thrombocytopenia, sympathetic ophthalmia, myasthenia gravis, Grave's disease, chronic biliary cirrhosis, primary hepatic colitis membranous Non-limiting examples of designated diseases

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

con frecuencia como que implican trastorno autoinmunitario sistemico incluyen: lupus eritematoso sistemico, artritis reumatoide, slndrome Sjogren, slndrome de Reiter, polimiositis-dermatomiositis, esclerosis sistemica, poliarteritis nodular, esclerosis multiple y penfigo vesicular. Las enfermedades autoinmunitarias adicionales, que pueden ser basadas en linfocitos beta (humorales) o basadas en linfocitos T, incluyen slndrome de Cogan, espondilitis anquilosante, granumolatosis de Wegener, alopecia autoinmunitaria, diabetes de Tipo I o de inicio juvenil, y tiroiditis.Frequently as involving systemic autoimmune disorder include: systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, Sjogren syndrome, Reiter's syndrome, polymyositis-dermatomyositis, systemic sclerosis, nodular polyarteritis, multiple sclerosis and vesicular penfigo. Additional autoimmune diseases, which may be based on beta (humoral) lymphocytes or based on T lymphocytes, include Cogan syndrome, ankylosing spondylitis, Wegener's granumolatosis, autoimmune alopecia, Type I or juvenile onset diabetes, and thyroiditis.

Los tipos de enfermedades autoinmunitarias que pueden tratarse o prevenirse con tales profarmacos en general incluyen los trastornos que implican lesion tisular que se produce como resultado de una respuesta humoral y/o mediada por celulas contra inmunogenos o antlgenos de origen endogeno y/o exogeno. Tales enfermedades con frecuencia se denominan como enfermedades que implican reacciones de hipersensibilidad no anafilactica (es decir, de Tipo II, Tipo III y/o Tipo IV).The types of autoimmune diseases that can be treated or prevented with such prodrugs in general include disorders that involve tissue injury that occurs as a result of a humoral and / or cell-mediated response against immunogens or antigens of endogenous and / or exogenous origin. Such diseases are often referred to as diseases that involve non-anaphylactic hypersensitivity reactions (ie, Type II, Type III and / or Type IV).

Las reacciones de hipersensibilidad de Tipo I en general son el resultado de la liberacion de principios farmacologicamente activos, tales como histamina, a partir de mastocitos y/o basofilos despues del contacto con un antlgeno exogeno especlfico. Como se menciono anteriormente, tales reacciones de Tipo I desempenan un papel en numerosas enfermedades, que incluyen asma alergica, rinitis alergica, etc.Type I hypersensitivity reactions in general are the result of the release of pharmacologically active principles, such as histamine, from mast cells and / or basophils after contact with a specific exogenous antigen. As mentioned earlier, such Type I reactions play a role in numerous diseases, including allergic asthma, allergic rhinitis, etc.

Las reacciones de hipersensibilidad de Tipo II (tambien denominadas como reacciones de hipersensibilidad citotoxicas, citollticas dependiente del complemento o estimuladoras de celulas) resultan cuando las inmunoglobulinas reaccionan con componentes antigenicos de celulas o tejidos, o con un antlgeno o hapteno que se ha acoplado de forma Intima con celulas o tejidos. Las enfermedades que estan asociadas comunmente con las reacciones de hipersensibilidad de Tipo II incluyen, pero sin limitacion, anemia hemolltica autoinmunitaria, eritroblastosis fetal y enfermedad de Goodpasture.Type II hypersensitivity reactions (also referred to as cytotoxic, complement-dependent cytolytic hypersensitivity reactions or cell stimulators) result when immunoglobulins react with antigenic components of cells or tissues, or with an antigen or hapten that has been coupled in a manner Intimate with cells or tissues. Diseases that are commonly associated with Type II hypersensitivity reactions include, but are not limited to, autoimmune hemolytic anemia, fetal erythroblastosis and Goodpasture's disease.

Las reacciones de hipersensibilidad de Tipo III (tambien denominadas como reacciones de hipersensibilidad complejas toxicas, complejas solubles o complejas inmunitarias) son el resultado de la deposition en vasos o en tejidos de complejos antlgeno-inmunoglobulina circulantes solubles, acompanado de reacciones inflamatorias agudas en el sitio de deposito de los complejos inmunitarios. Los ejemplos no limitativos de enfermedades de reaction de Tipo III prototlpicas incluyen la reaction de Arthus, artritis reumatoide, enfermedad del suero, lupus eritematoso sistemico, determinados tipos de glomerulonefritis, esclerosis multiple y penfigo vesicular.Type III hypersensitivity reactions (also referred to as complex toxic, complex soluble or immune complex hypersensitivity reactions) are the result of deposition in vessels or tissues of soluble circulating antigen-immunoglobulin complexes, accompanied by acute inflammatory reactions at the site of deposit of immune complexes. Non-limiting examples of prototype Type III reaction diseases include the Arthus reaction, rheumatoid arthritis, serum sickness, systemic lupus erythematosus, certain types of glomerulonephritis, multiple sclerosis and vesicular penfigo.

Las reacciones de hipersensibilidad de Tipo IV (con frecuencia llamadas reacciones de hipersensibilidad celular, mediadas por celula, retrasada o del tipo tuberculina) estan provocadas por linfocitos T sensibilizados que son el resultado del contacto con un antlgeno especlfico. Los ejemplos no limitativos de enfermedades citadas como que implican reacciones de Tipo IV son la dermatitis por contacto y el rechazo de aloinjerto.Type IV hypersensitivity reactions (often called cell-mediated, delayed or tuberculin-type hypersensitivity reactions) are caused by sensitized T lymphocytes that are the result of contact with a specific antigen. Non-limiting examples of diseases cited as involving Type IV reactions are contact dermatitis and allograft rejection.

Las enfermedades autoinmunitarias asociadas con cualquiera de las reacciones de hipersensibilidad no anafilactica pueden tratarse o prevenirse con los profarmacos de acuerdo con la formula estructural (I) y (Ia). En particular, los compuestos descritos en el presente documento pueden utilizarse para tratar o prevenir las enfermedades autoinmunitarias caracterizadas de forma frecuente como trastornos autoinmunitarios de un unico organo o de un unico tipo celular que incluyen, pero sin limitacion: tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolltica autoinmunitaria, gastritis atrofica autoinmunitaria de anemia perniciosa, encefalomielitis autoinmunitaria, orquitis autoinmunitaria, enfermedad de Goodpasture, trombocitopenia autoinmunitaria, oftalmia simpatica, miastenia grave, enfermedad de Graves, cirrosis biliar primaria, hepatitis agresiva cronica, colitis ulcerosa y glomerulopatla membranosa, as! como las enfermedades autoinmunitarias caracterizadas con frecuencia como que implican trastorno inmunitario sistemico, que incluyen, pero sin limitacion: lupus eritematoso sistemico (LES), artritis reumatoide, slndrome Sjogren, slndrome de Reiter, polimiositis-dermatomiositis, esclerosis sistemica, poliarteritis nodular, esclerosis multiple y penfigo vesicular.Autoimmune diseases associated with any of the non-anaphylactic hypersensitivity reactions can be treated or prevented with prodrugs according to structural formula (I) and (Ia). In particular, the compounds described herein can be used to treat or prevent autoimmune diseases frequently characterized as autoimmune disorders of a single organ or a single cell type that include, but are not limited to: Hashimoto's thyroiditis, autoimmune hemolytic anemia. , autoimmune atrophic gastritis of pernicious anemia, autoimmune encephalomyelitis, autoimmune orchitis, Goodpasture's disease, autoimmune thrombocytopenia, sympathetic ophthalmia, myasthenia gravis, Graves' disease, primary biliary cirrhosis, chronic aggressive hepatitis, ulcerative colitis and glomerulopathy! such as autoimmune diseases often characterized as involving systemic immune disorder, including but not limited to: systemic lupus erythematosus (SLE), rheumatoid arthritis, Sjogren syndrome, Reiter's syndrome, polymyositis-dermatomyositis, systemic sclerosis, nodular polyarteritis, multiple sclerosis and vesicular penfigo.

Un experto en la materia apreciara que muchas de las enfermedades autoinmunitarias enumeradas anteriormente estan asociadas con slntomas graves, la mejora de las cuales proporciona un beneficio terapeutico significativo, incluso en los casos en donde la enfermedad autoinmunitaria subyacente podrla no mejorarse.One skilled in the art will appreciate that many of the autoimmune diseases listed above are associated with severe symptoms, the improvement of which provides a significant therapeutic benefit, even in cases where the underlying autoimmune disease may not be improved.

Un compuesto descrito en el presente documento para su uso en terapia puede aplicarse solo, o puede aplicarse en combination con o complementario a otras terapias inmunosupresoras comunes, tales como, por ejemplo, las siguientes: mercaptopurina; corticosteroides tales como prednisona; metilprednisolona y prednisolona; agentes alquilantes tales como ciclofosfamida; inhibidores de la calcineurina tales como ciclosporina, sirolimus y tacrolimus; inhibidores de la inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH) tales como micofenolato, micofenolato de mofetilo y azatioprina; y agentes designados para suprimir la inmunidad celular mientras dejan la respuesta inmunologica humoral del receptor intacta, incluyendo diversos anticuerpos (por ejemplo, globulina antilinfocitos (GAL), globulina antitimocitos (GAT), anticuerpos monoclonales anti linfocitos (OKT3)) e irradiation. Estos diversos agentes pueden utilizarse de acuerdo con sus dosificaciones convencionales o comunes, como se especifica en la information de prescription que acompana las formas de los farmacos disponibles de forma comercial (vease tambien: la informacion de prescripcion en la Edition de 2006 de The Physician's Desk Reference). La azatioprina esta actualmente disponible de Salix Pharmaceuticals, Inc., bajo el nombre comercial AZASAN; la mercaptopurina esta disponible actualmente de Gate Pharmaceuticals, Inc., bajo el nombre comercial PURINETHOL; la prednisona y laA compound described herein for use in therapy may be applied alone, or it may be applied in combination with or complementary to other common immunosuppressive therapies, such as, for example, the following: mercaptopurine; corticosteroids such as prednisone; methylprednisolone and prednisolone; alkylating agents such as cyclophosphamide; calcineurin inhibitors such as cyclosporine, sirolimus and tacrolimus; Inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH) inhibitors such as mycophenolate, mycophenolate mofetil and azathioprine; and agents designated to suppress cellular immunity while leaving the humoral immune response of the receptor intact, including various antibodies (e.g., antilymphocyte globulin (GAL), antithymocyte globulin (GAT), monoclonal anti-lymphocyte antibody (OKT3)) and irradiation. These various agents can be used according to their conventional or common dosages, as specified in the prescription information that accompanies the forms of commercially available drugs (see also: the prescription information in the 2006 Edition of The Physician's Desk Reference). Azathioprine is currently available from Salix Pharmaceuticals, Inc., under the trade name AZASAN; Mercaptopurine is currently available from Gate Pharmaceuticals, Inc., under the trade name PURINETHOL; prednisone and

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

prednisolona estan disponibles actualmente de Roxane Laboratories, Inc.; la metil prednisolona esta disponible actualmente de Pfizer; sirolimus (rapamicina) esta disponible actualmente de Wyeth-Ayerst bajo el nombre comercial RAPAMUNE; tacrolimus esta disponible actualmente de Fujisawa bajo el nombre comercial PROGRAF; la ciclosporina esta disponible actualmente de Novartis bajo el nombre comercial SANDIMMUNE y de Abbott bajo el nombre comercial GENGRAF; los inhibidores de la iMPDH tales como el micofenolato de mofetilo y el acido micofenolico estan disponibles actualmente de Roche bajo el nombre comercial CELLCEPT y de Novartis bajo el nombre comercial MYFORTIC; la azatioprina esta disponible actualmente de Glaxo Smith Kline bajo el nombre comercial IMURAN y los anticuerpos estan disponibles actualmente de Ortho Biotech bajo el nombre comercial ORTHOCLONE, de Novartis, bajo el nombre comercial SIMULECT (basiliximab), y de Roche bajo el nombre comercial ZENAPAX (daclizumab).Prednisolone are currently available from Roxane Laboratories, Inc .; methyl prednisolone is currently available from Pfizer; sirolimus (rapamycin) is currently available from Wyeth-Ayerst under the trade name RAPAMUNE; tacrolimus is currently available from Fujisawa under the trade name PROGRAF; Cyclosporine is currently available from Novartis under the trade name SANDIMMUNE and from Abbott under the trade name GENGRAF; iMPDH inhibitors such as mycophenolate mofetil and mycophenolic acid are currently available from Roche under the trade name CELLCEPT and Novartis under the trade name MYFORTIC; azathioprine is currently available from Glaxo Smith Kline under the trade name IMURAN and the antibodies are currently available from Ortho Biotech under the trade name ORTHOCLONE, from Novartis, under the trade name SIMULECT (basiliximab), and from Roche under the trade name ZENAPAX ( daclizumab).

En otra realizacion, los compuestos podrlan administrarse ya sea en combinacion o de forma complementaria con un inhibidor de una syk quinasa. La syk quinasa es una tirosina quinasa conocida por desempenar un papel crltico en la senalizacion del receptor Fcy, as! como en otras cascadas de senalizacion, tales como las que implican la senalizacion del receptor de linfocitos B (Turner et al., (2000), Immunology Today 21: 148-154) y las integrinas beta (1), beta (2) y beta (3) en neutrofilos (Mocsai et al., (2002), Immunity 16: 547-558). Por ejemplo, la syk quinasa desempena un papel esencial en la senalizacion del receptor de IgE de alta afinidad en mastocitos, que conduce a la activacion y posterior liberation de multiples mediadores qulmicos que desencadenan ataques alergicos. Sin embargo, a diferencia de las JAK quinasas, que ayudan a regular las rutas implicadas en las reacciones de hipersensibilidad de Tipo IV retrasada o mediada por celulas, la syk quinasa ayuda a regular las rutas implicadas en las reacciones de hipersensibilidad inmediata de Tipo I mediada por IgE. Determinados compuestos que afectan la ruta de syk pueden o no afectar las rutas de JAK.In another embodiment, the compounds could be administered either in combination or in a complementary manner with an inhibitor of a syk kinase. Syk kinase is a tyrosine kinase known to play a critical role in signaling the Fcy receptor, as! as in other signaling cascades, such as those involving B-cell receptor signaling (Turner et al., (2000), Immunology Today 21: 148-154) and beta (1), beta (2) and integrins beta (3) in neutrophils (Mocsai et al., (2002), Immunity 16: 547-558). For example, syk kinase plays an essential role in signaling the high affinity IgE receptor in mast cells, which leads to the activation and subsequent release of multiple chemical mediators that trigger allergic attacks. However, unlike JAK kinases, which help regulate the pathways involved in delayed or cell-mediated Type IV hypersensitivity reactions, syk kinase helps regulate the pathways involved in mediated Type I immediate hypersensitivity reactions. by IgE. Certain compounds that affect the syk route may or may not affect the JAK routes.

Los compuestos inhibidores de syk adecuados se describen, por ejemplo, en los documentos n.° de Ser. 10/355.543 presentado el 31 de enero de 2003 (n.° de publication 2004/0029902); WO 03/063794; n.° de Ser. 10/631.029 presentado el 29 de julio de 2003; WO 2004/014382; n.° de Ser. 10/903.263 presentado el 30 de julio de 2004; PCT/LTS2004/24716 presentado el 30 de julio de 2004 (WO005/016893); n.° de Ser. 10/903.870 presentado el 30 de julio de 2004; PCT/LTS2004/24920 presentado el 30 de julio de 2004; n.° de Ser. 60/630.808 presentado el 24 de noviembre de 2004; n.° de Ser. 60/645.424 presentado el 19 de enero de 2005 y n.° de Ser. 60/654.620, presentado el 18 de febrero de 2005.Suitable syk inhibitor compounds are described, for example, in documents Ser. 10 / 355,543 filed on January 31, 2003 (publication No. 2004/0029902); WO 03/063794; No. of Ser. 10 / 631,029 filed on July 29, 2003; WO 2004/014382; No. of Ser. 10 / 903,263 filed on July 30, 2004; PCT / LTS2004 / 24716 filed July 30, 2004 (WO005 / 016893); No. of Ser. 10 / 903,870 filed on July 30, 2004; PCT / LTS2004 / 24920 filed July 30, 2004; No. of Ser. 60 / 630,808 filed on November 24, 2004; No. of Ser. 60 / 645,424 filed on January 19, 2005 and No. of Ser. 60 / 654,620, filed on February 18, 2005.

Los compuestos descritos en el presente documento e inhibidores de syk podrlan utilizarse solos o en combinacion con uno o mas tratamientos del rechazo de trasplante convencionales, como se describe anteriormente.The compounds described herein and syk inhibitors could be used alone or in combination with one or more conventional transplant rejection treatments, as described above.

En una realizacion especlfica, los compuestos pueden utilizarse para tratar o prevenir estas enfermedades en pacientes que de forma inicial sean no sensibles (resistentes), o que se hayan hecho no sensibles, al tratamiento con un compuesto inhibidor de syk o uno de los otros tratamientos actuales para la enfermedad particular. Ademas, los compuestos podrlan utilizarse en combinacion con otros compuestos inhibidores de syk en pacientes que son resistentes o no sensibles a compuestos para syk. Se proporcionan mas adelante los compuestos inhibidores de syk adecuados con los que pueden administrarse los compuestos.In a specific embodiment, the compounds can be used to treat or prevent these diseases in patients who initially are not sensitive (resistant), or who have become non-sensitive, to treatment with a syk inhibitor compound or one of the other treatments Current for the particular disease. In addition, the compounds could be used in combination with other syk inhibitor compounds in patients who are resistant or not sensitive to syk compounds. Suitable syk inhibitor compounds with which the compounds can be administered are provided below.

En otra realizacion, la presente invention proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria mediada por linfocitos T, que comprende administrar a un paciente que padece tal enfermedad autoinmunitaria una cantidad de un compuesto eficaz para tratar la enfermedad inmunitaria, en la que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento, y el compuesto se administra en combinacion con, o de forma complementaria a, un compuesto que inhibe la syk quinasa con una CI50 en el intervalo de al menos 10 pM.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment of an autoimmune disease mediated by T lymphocytes, which comprises administering to a patient suffering from such autoimmune disease an amount of a compound effective to treat immune disease, in which the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein, and the compound is administered in combination with, or in addition to, a compound that inhibits syk kinase with an IC50 in the range of at least 10 pM

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevention del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor del trasplante, que comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir el rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento. En una realizacion adicional, el compuesto se administra a un tejido o un organo antes del trasplante del tejido u organo en el receptor del trasplante.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, which comprises administering to the transplant recipient an amount of an effective compound to treat or prevent rejection, in wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein. In a further embodiment, the compound is administered to a tissue or an organ before tissue or organ transplantation in the transplant recipient.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en el que el rechazo es rechazo agudo, queIn another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the rejection is acute rejection, which

comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir elcomprises administering to the transplant recipient an amount of an effective compound to treat or prevent the

rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion.rejection, in which the compound is selected from the compounds of the invention.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en el que el rechazo es rechazo cronico, queIn another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the rejection is chronic rejection, which

comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir elcomprises administering to the transplant recipient an amount of an effective compound to treat or prevent the

rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion.rejection, in which the compound is selected from the compounds of the invention.

En otra realizacion, la invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en el que el rechazo esta mediado por RHCI o RICH, queIn another embodiment, the invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the rejection is mediated by RHCI or RICH, which

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir el rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento.It comprises administering to the transplant recipient an amount of a compound effective to treat or prevent rejection, wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein.

En otra realizacion, la invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en el que el trasplante de aloinjerto se selecciona de un rinon, un corazon, un hlgado y un pulmon, que comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir el rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the allograft transplant is selected from a kidney, a heart, a liver and a lung, which comprises administering to the transplant recipient an amount of a compound effective to treat or prevent rejection, wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en el que el trasplante de aloinjerto se selecciona de un rinon, un corazon, un hlgado y un pulmon, que comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir el rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento, en que el compuesto se administra en combinacion con, o de forma complementaria a, otro inmunosupresor.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the allograft transplant is selected from a kidney, a heart, a liver and a lung. , which comprises administering to the transplant recipient an amount of a compound effective to treat or prevent rejection, wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein, in which the compound is administered in combination with, or in a complementary way to, another immunosuppressant.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion del rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante, en que el trasplante de aloinjerto se selecciona de un rinon, un corazon, un hlgado y un pulmon, que comprende administrar al receptor del trasplante una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir el rechazo, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento, en que el compuesto se administra en combinacion con, o de forma complementaria a, otro inmunosupresor en que el inmunosupresor se selecciona de ciclosporina, tacrolimus, sirolimus, un inhibidor de la IMPDH, micofenolato, micofenolato de mofetilo, un anticuerpo anti linfocitos T y OKT3.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of allograft transplant rejection in a transplant recipient, in which the allograft transplant is selected from a kidney, a heart, a liver and a lung, which comprises administering to the transplant recipient an amount of a compound effective to treat or prevent rejection, wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein, wherein the compound is administered in combination. with, or in addition to, another immunosuppressant in which the immunosuppressant is selected from cyclosporine, tacrolimus, sirolimus, an inhibitor of IMPDH, mycophenolate, mycophenolate mofetil, an anti-lymphocyte antibody T and OKT3.

Los compuestos descritos en el presente documento son moderadores de citocina de la senalizacion de IL-4. En consecuencia, los compuestos podrlan enlentecer la respuesta de las reacciones de hipersensibilidad de Tipo I. Por lo tanto, en una realizacion especlfica, los compuestos podrlan utilizarse para tratar tales reacciones y, por lo tanto, las enfermedades asociadas con, mediadas por, o provocadas por tales reacciones de hipersensibilidad (por ejemplo, alergias) de forma profilactica. Por ejemplo, una persona que padece alergia podrla tomar uno o mas de los compuestos selectivos para JAK descritos en el presente documento, antes de la exposicion prevista a alergenos, para retrasar el inicio o progreso de, o eliminar del todo, una respuesta alergenica.The compounds described herein are cytokine moderators of the IL-4 signaling. Accordingly, the compounds could slow the response of Type I hypersensitivity reactions. Therefore, in a specific embodiment, the compounds could be used to treat such reactions and, therefore, the diseases associated with, mediated by, or caused by such hypersensitivity reactions (eg allergies) prophylactically. For example, a person suffering from allergy could take one or more of the JAK selective compounds described herein, prior to the planned exposure to allergens, to delay the onset or progress of, or completely eliminate, an allergenic response.

Cuando se utilizan para tratar o prevenir tales enfermedades, los compuestos se pueden administrar individualmente, como mezclas de uno o mas compuestos, o en mezcla o combinacion con otros agentes utiles para tratar tales enfermedades y/o los slntomas asociados con tales enfermedades. Los compuestos tambien pueden administrarse en mezcla o en combinacion con agentes utiles para tratar otros trastornos o dolencias, tales como esteroides, estabilizadores de membrana, inhibidores de la 5-lipoxigenasa (5LO), inhibidores de la slntesis y del receptor de leucotrienos, inhibidores del cambio de isotipo de IgE o de la slntesis de IgE, cambio de isotipo de IgG o slntesis de IgG, beta-agonistas, inhibidores de la triptasa, aspirina, inhibidores de la cicloxigenasa (COX), metotrexato, farmacos anti TNF, anticuerpo anti CD20, inhibidores de PD4, inhibidores de p38, inhibidores de PDE4 y antihistaminas, por nombrar algunos. Los compuestos se pueden administrar per se en forma de profarmacos o como composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto activo o profarmaco.When used to treat or prevent such diseases, the compounds may be administered individually, as mixtures of one or more compounds, or in admixture or combination with other agents useful for treating such diseases and / or the symptoms associated with such diseases. The compounds can also be administered in admixture or in combination with agents useful for treating other disorders or ailments, such as steroids, membrane stabilizers, 5-lipoxygenase (5LO) inhibitors, inhibitors of leukotriene receptor and synthesis, inhibitors of change of IgE isotype or IgE synthesis, change of IgG isotype or IgG synthesis, beta-agonists, tryptase inhibitors, aspirin, cyclooxygenase (COX) inhibitors, methotrexate, anti TNF drugs, anti CD20 antibody , PD4 inhibitors, p38 inhibitors, PDE4 inhibitors and antihistamines, to name a few. The compounds may be administered per se in the form of prodrugs or as pharmaceutical compositions comprising an active compound or prodrug.

En otra realizacion, la invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion de una reaccion de hipersensibilidad de Tipo IV, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir la reaccion de hipersensibilidad, en el que el compuesto se selecciona de compuestos de la presente invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a Type IV hypersensitivity reaction, which comprises administering to a subject an amount of an effective compound to treat or prevent the hypersensitivity reaction, in which the Compound is selected from compounds of the present invention, as described herein.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion de una reaccion de hipersensibilidad de Tipo IV, que se practica de forma profilactica, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir la reaccion de hipersensibilidad, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la presente invencion, como se describe en el presente documento, y se administra antes de la exposicion a un alergeno.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a Type IV hypersensitivity reaction, which is practiced prophylactically, which comprises administering to a subject an amount of an effective compound to treat or prevent the hypersensitivity reaction, in which the compound is selected from the compounds of the present invention, as described herein, and is administered before exposure to an allergen.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en la inhibicion de una cascada de transduccion de senal en que la JAK3 quinasa desempena un papel, que comprende poner en contacto con un compuesto una celula que expresa un receptor implicado en tal cascada de senalizacion, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la presente invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in inhibiting a signal transduction cascade in which JAK3 kinase plays a role, which comprises contacting a compound with a cell expressing a receptor involved in such a cascade of signaling, in which the compound is selected from the compounds of the present invention, as described herein.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad mediada por la JAK quinasa, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por la JAK quinasa, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la presente invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a disease mediated by JAK kinase, which comprises administering to a subject an amount of compound effective to treat or prevent disease mediated by JAK kinase, in wherein the compound is selected from the compounds of the present invention, as described herein.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevention de una enfermedad mediada por la JAK quinasa, en que la enfermedad mediada por JAK es RHCI o RICH, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por la JAK quinasa, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la presente invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a disease mediated by JAK kinase, in which the disease mediated by JAK is RHCI or RICH, which comprises administering to a subject an amount of compound effective for treating or preventing JAK kinase mediated disease, in which the compound is selected from the compounds of the present invention, as described herein.

En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad mediada por la JAK quinasa, en que la enfermedad mediada por JAK es rechazo de aloinjerto agudo, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por la JAK quinasa, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the present invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a disease mediated by JAK kinase, in which the JAK-mediated disease is rejection of acute allograft, which comprises administering to a subject an amount of effective compound. to treat or prevent JAK kinase mediated disease, in which the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein.

En otra realizacion, la invencion proporciona compuestos para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad mediada por la syk y/o jAk quinasa, en que la enfermedad mediada por JAK es rechazo de aloinjerto cronico, que comprende administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por la JAK quinasa, en el que el compuesto se selecciona de los compuestos de la invencion, como se describe en el presente documento.In another embodiment, the invention provides compounds for use in the treatment or prevention of a disease mediated by syk and / or jAk kinase, in which the JAK-mediated disease is rejection of chronic allograft, which comprises administering to a subject a quantity of compound effective to treat or prevent JAK kinase mediated disease, wherein the compound is selected from the compounds of the invention, as described herein.

Los compuestos activos de la invencion normalmente presentan la ruta de syk y/o JAK/Stat. La actividad de un compuesto especificado como un inhibidor de una syk y/o JAK quinasa se puede evaluar in vitro o in vivo. En algunas realizaciones, la actividad de un compuesto especificado se puede analizar en un ensayo celular.The active compounds of the invention normally have the syk and / or JAK / Stat route. The activity of a compound specified as an inhibitor of a syk and / or JAK kinase can be evaluated in vitro or in vivo. In some embodiments, the activity of a specified compound can be analyzed in a cell assay.

"Trastorno proliferativo celular" se refiere a un trastorno caracterizado por la proliferation anomala de celulas. Un trastorno proliferativo no implica ninguna limitation con respecto a la velocidad de crecimiento celular, sino que simplemente indica la perdida de los controles normales que afectan al crecimiento y la division celular. Por lo tanto, en algunas realizaciones, las celulas de un trastorno proliferativo pueden tener las mismas velocidades de division celular que las celulas normales, pero no responden a las senales que limitan tal crecimiento. Dentro del ambito de “trastorno proliferativo celular” esta la neoplasia o tumor, que es un crecimiento anomalo de tejido. Cancer se refiere a cualquiera de las diversas neoplasias malignas caracterizadas por la proliferacion de celulas que tienen la capacidad de invadir el tejido circundante y/o de producir metastasis en nuevos sitios de colonization."Cell proliferative disorder" refers to a disorder characterized by anomalous cell proliferation. A proliferative disorder does not imply any limitation with respect to the speed of cell growth, but simply indicates the loss of normal controls that affect cell growth and division. Therefore, in some embodiments, the cells of a proliferative disorder may have the same cell division rates as normal cells, but do not respond to signals that limit such growth. Within the field of "cell proliferative disorder" is neoplasia or tumor, which is an abnormal growth of tissue. Cancer refers to any of the various malignant neoplasms characterized by the proliferation of cells that have the ability to invade surrounding tissue and / or produce metastases at new colonization sites.

En general, los trastornos proliferativos celulares que son tratables con los compuestos divulgados en el presente documento se relacionan con cualquier trastorno caracterizado por proliferacion celular anormal. Estos incluyen diversos tumores y canceres, benignos o malignos, metastasicos o no metastasicos. Las propiedades especlficas de los canceres, tales como invasividad de tejidos o metastasis, pueden tomarse como objetivo utilizando los compuestos descritos en el presente documento. Los trastornos proliferativos celulares incluyen una diversidad de canceres, que incluyen, entre otros, cancer de ovario, cancer renal, cancer gastrointestinal, cancer de rinon, cancer de vejiga, cancer de pancreas, carcinoma escamoso de pulmon y adenocarcinoma.In general, cell proliferative disorders that are treatable with the compounds disclosed herein are related to any disorder characterized by abnormal cell proliferation. These include various tumors and cancers, benign or malignant, metastatic or non-metastatic. The specific properties of cancers, such as tissue invasiveness or metastasis, can be targeted using the compounds described herein. Proliferative cell disorders include a variety of cancers, which include, among others, ovarian cancer, renal cancer, gastrointestinal cancer, kidney cancer, bladder cancer, pancreatic cancer, squamous lung carcinoma and adenocarcinoma.

En algunas realizaciones, el trastorno proliferativo celular tratado es una neoplasia hematopoyetica, que es el crecimiento anormal de celulas del sistema hematopoyetico. Los canceres hematopoyeticos pueden tener sus orlgenes en celulas madre pluripotentes, celulas progenitoras multipotentes, celulas progenitoras comprometidas oligopotentes, celulas precursoras y celulas diferenciadas de forma terminal implicadas en hematopoyesis. Se cree que algunos canceres hematologicos surgen a partir de celulas madre hematopoyeticas, que tienen la capacidad de autorrenovacion. Por ejemplo, las celulas que tienen la capacidad de desarrollar subtipos especlficos de leucemia mieloide aguda (LMA) (Cynthia K. Hahn, Kenneth N. Ross, Rose M. Kakoza, Steven Karr, Jinyan Du, Shao-E Ong, Todd R. Golub, Kimberly Stegmaier, Syk is a new target for LMA differentiation, Blood, 2007, 110, Resumen 209) despues del trasplante presentan marcadores de superficie celular de celulas madre hematopoyeticas, implicando a las celulas madre hematopoyeticas como la fuente de celulas leucemicas. Los blastocitos que no tienen un marcador celular caracterlstico de celulas madre hematopoyeticas parecen no tener la capacidad de establecer tumores despues del trasplante (Blaire et al., 1997, Blood 89: 3104-3112). El origen en celulas madre de determinados canceres hematologicos tambien encuentra apoyo en la observation de que pueden encontrarse anormalidades cromosomicas especlficas asociadas con tipos particulares de leucemia en celulas normales del linaje hematopoyetico as! como en blastocitos leucemicos. Por ejemplo, la translocation reclproca t(9q34;22q11), asociada con aproximadamente el 95 % de las leucemias mielogenas cronicas, parece estar presente en celulas del linaje mieloide, eritroide y linfoide, lo que sugiere que la anormalidad cromosomica se origina en celulas madre hematopoyeticas. Un subgrupo de celulas en determinados tipos de LMC presenta el fenotipo del marcador celular de las celulas madre hematopoyeticas.In some embodiments, the treated cell proliferative disorder is a hematopoietic neoplasm, which is the abnormal growth of cells of the hematopoietic system. Hematopoietic cancers can have their origins in pluripotent stem cells, multipotent progenitor cells, oligopotent compromised progenitor cells, precursor cells and terminal differentiated cells involved in hematopoiesis. It is believed that some hematological cancers arise from hematopoietic stem cells, which have the capacity for self-renewal. For example, cells that have the ability to develop specific subtypes of acute myeloid leukemia (AML) (Cynthia K. Hahn, Kenneth N. Ross, Rose M. Kakoza, Steven Karr, Jinyan Du, Shao-E Ong, Todd R. Golub, Kimberly Stegmaier, Syk is a new target for LMA differentiation, Blood, 2007, 110, Summary 209) after transplantation they present cell surface markers of hematopoietic stem cells, involving hematopoietic stem cells as the source of leukemic cells. Blasts that do not have a characteristic cell marker of hematopoietic stem cells appear to have no ability to establish tumors after transplantation (Blaire et al., 1997, Blood 89: 3104-3112). The origin in stem cells of certain hematological cancers also finds support in the observation that specific chromosomal abnormalities associated with particular types of leukemia can be found in normal cells of the hematopoietic lineage as! as in leukemic blasts. For example, translocation reclproca t (9q34; 22q11), associated with approximately 95% of chronic myelogenous leukemias, appears to be present in myeloid, erythroid and lymphoid lineage cells, suggesting that chromosomal abnormality originates in stem cells. hematopoietic A subset of cells in certain types of CML presents the phenotype of the cell marker of hematopoietic stem cells.

Aunque las neoplasias hematopoyeticas a menudo se originan a partir de celulas madre, las celulas progenitoras comprometidas o las celulas diferenciadas de forma mas terminal de un linaje del desarrollo tambien pueden ser la fuente de algunas leucemias. Por ejemplo, la expresion forzada de la protelna de fusion Bcr/Abl (asociada con la leucemia mielogena cronica) en celulas progenitoras mieloides o progenitoras de granulocito/macrofago comunes produce una afeccion similar a la leucemia. Ademas, algunas anormalidades cromosomicas asociadas con subtipos de leucemia no se encuentran en la poblacion celular con un fenotipo marcador de celulas madre hematopoyeticas, pero se encuentran en una poblacion celular que presenta marcadores de un estado mas diferenciado de la rutaAlthough hematopoietic neoplasms often originate from stem cells, compromised progenitor cells or more terminal differentiated cells of a developmental lineage can also be the source of some leukemias. For example, the forced expression of the Bcr / Abl fusion protein (associated with chronic myelogenous leukemia) in myeloid progenitor cells or common granulocyte / macrophage progenitor cells causes a condition similar to leukemia. In addition, some chromosomal abnormalities associated with leukemia subtypes are not found in the cell population with a marker phenotype of hematopoietic stem cells, but are found in a cell population that has markers of a more differentiated state of the pathway.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

hematopoyetica (Turhan et al., 1995, Blood 85: 2154-2161). Por lo tanto, aunque las celulas progenitoras comprometidas y otras celulas diferenciadas pueden tener solo un potencial limitado para la division celular, las celulas leucemicas pueden haber adquirido la capacidad de crecer de forma no regulada, en algunos casos mimetizando las caracterlsticas de autorrenovacion de las celulas madres hematopoyeticas (Passegue et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100: 11842-9).hematopoietic (Turhan et al., 1995, Blood 85: 2154-2161). Therefore, although compromised progenitor cells and other differentiated cells may have only limited potential for cell division, leukemic cells may have acquired the ability to grow in an unregulated manner, in some cases mimicking the self-renewal characteristics of the cells. hematopoietic mothers (Passegue et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100: 11842-9).

En algunas realizaciones, la neoplasia hematopoyetica tratada es una neoplasia linfoide, donde las celulas anomalas derivan de, y/o presentan, el fenotipo caracterlstico de celulas del linaje linfoide. Las neoplasias linfoides pueden subdividirse en neoplasias de linfocitos B, neoplasias de linfocitos T y NK, y linfoma de Hodgkin. Las neoplasias de linfocitos B pueden subdividirse adicionalmente en neoplasia de linfocitos B precursores y neoplasia de linfocitos B maduros/perifericos. Las neoplasias de linfocitos B ejemplares son leucemias/linfomas linfoblasticas B precursoras (leucemia linfoblastica aguda de linfocitos B precursores) mientras que las neoplasias de linfocitos B maduros/perifericos ejemplares son la leucemia linfocltica cronicoa/linfoma linfocltico pequeno de linfocitos B, leucemia prolinfocltica de linfocitos B, linfoma linfoplasmacltico, linfoma de linfocitos B de la zona esplenica marginal, tricoleucemia, mieloma/plasmocitoma de celulas plasmaticas, linfoma de linfocitos B de la zona marginal extranodular del tipo MALT, linfoma de linfocitos B de la zona marginal nodular, linfoma folicular, linfoma de celulas del manto, linfoma de linfocitos B grandes difuso, linfoma de linfocitos B grandes del mediastino, linfoma de derrame primario y linfoma de Burkitt/leucemia de celulas Burkitt. Las neoplasias de linfocitos T y linfocitos Nk se subdividen adicionalmente en neoplasia de linfocitos T precursores y neoplasias de linfocitos T maduros (perifericos). Las neoplasias de linfocitos T precursores ejemplares son el linfoma/leucemia de T linfoblasticos precursores (leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T precursores) mientras que las neoplasias de linfocitos T maduros (perifericos) ejemplares son la leucemia prolinfocltica de linfocitos T, leucemia linfocltica granular de linfocitos T, leucemia de linfocitos NK agresiva, linfoma/leucemia de linfocitos T del adulto (HTLV-1), linfoma de linfocitos NK/T extranodular, del tipo nasal, linfoma de linfocitos T del tipo enteropatla, linfoma de linfocitos T gamma-delta hepatosplenico, linfoma de linfocitos T similar a paniculitis subcutanea, micosis fungoide/sindrome de Sezary, linfoma anaplasico de celulas grandes, de celulas T/nulas, del tipo cutaneo primario, linfoma de linfocitos T periferico no caracterizado de otra forma, linfoma de linfocitos T angioinmunoblastico, linfoma anaplasico de celulas grandes, de celulas T/nulas de tipo sistemico primario. El tercer miembro de neoplasias linfoides es el linfoma de Hodgkin, tambien denominado como enfermedad de Hodgkin. El diagnostico ejemplar de esta clase que puede tratarse con los compuestos incluye, entre otros, linfoma de Hodgkin predominante en linfocitos nodular y diversas formas clasicas de la enfermedad de Hodgkin, cuyos miembros ejemplares son el linfoma de Hodgkin con esclerosis nodular (grados 1 y 2), el linfoma de Hodgkin clasico rico en linfocitos, el linfoma de Hodgkin de celularidad mixta y el linfoma de Hodgkin de empobrecimiento de linfocitos. En diversas realizaciones, cualquiera de las neoplasias linfoides que estan asociadas con la actividad anormal de JAK se puede tratar con los compuestos inhibidores de syk y/o JAK.In some embodiments, the hematopoietic neoplasia treated is a lymphoid neoplasia, where the anomalous cells derive from, and / or present, the characteristic phenotype of lymphoid lineage cells. Lymphoid neoplasms can be subdivided into B lymphocyte neoplasms, T and NK lymphocyte neoplasms, and Hodgkin lymphoma. B cell neoplasms can be further subdivided into precursor B cell neoplasia and mature / peripheral B cell neoplasia. Exemplary B lymphocyte neoplasms are precursor B lymphoblastic leukemia / lymphomas (acute lymphoblastic leukemia of precursor B lymphocytes) while exemplary mature / peripheral B lymphocyte neoplasms are chronic lymphocytic leukemia / small B lymphocytic lymphocytic lymphocyte, prolymphocytic lymphocytic leukemia B, lymphoplasmaltic lymphoma, B lymphocyte lymphoma of the marginal splenic zone, tricholeukemia, myeloma / plasma cell plasmacytoma, B-cell lymphoma of the extra-marginal marginal zone of the MALT type, B-cell lymphoma of the nodular marginal zone, follicular lymphoma, mantle cell lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, mediastinum large B-cell lymphoma, primary effusion lymphoma and Burkitt lymphoma / Burkitt cell leukemia. Neoplasms of T lymphocytes and Nk lymphocytes are further subdivided into neoplasms of precursor T lymphocytes and neoplasms of mature (peripheral) T lymphocytes. Exemplary precursor T lymphocyte neoplasms are precursor lymphoblastic T lymphoma / leukemia (acute lymphoblastic leukemia of precursor T lymphocytes) while exemplary mature T (lymphocyte T lymphocyte neoplasms) are T-lymphocytic leukemia, granular lymphocytic leukemia T, aggressive NK lymphocyte leukemia, adult T lymphocyte lymphoma / leukemia (HTLV-1), extraodular NK / T lymphoma, nasal type, enteropathy type T lymphocyte lymphoma, hepatosplenic gamma-delta T lymphoma T-cell lymphoma similar to subcutaneous panniculitis, fungal mycosis / Sezary syndrome, anaplastic large cell lymphoma, T / null cells, primary cutaneous type, peripheral T lymphocyte lymphoma not otherwise characterized, angioimmunoblastic T lymphocyte lymphoma Anaplastic large cell lymphoma, T / null cells of primary systemic type. The third member of lymphoid neoplasms is Hodgkin lymphoma, also referred to as Hodgkin's disease. The exemplary diagnosis of this class that can be treated with the compounds includes, among others, predominant Hodgkin lymphoma in nodular lymphocytes and various classical forms of Hodgkin's disease, whose exemplary members are Hodgkin lymphoma with nodular sclerosis (grades 1 and 2 ), classical lymphocyte-rich Hodgkin lymphoma, mixed-cell Hodgkin lymphoma and lymphocyte depletion Hodgkin lymphoma. In various embodiments, any of the lymphoid neoplasms that are associated with the abnormal activity of JAK can be treated with the syk and / or JAK inhibitor compounds.

En algunas realizaciones, la neoplasia hematopoyetica tratada es una neoplasia mieloide. Este grupo comprende una clase grande de trastornos proliferativos celulares o que presentan el fenotipo caracterlstico de las celulas del linaje mieloide. Las neoplasias mieloides se pueden subdividir en enfermedades mieloproliferativas, enfermedades mielodisplasicas/mieloproliferativas, slndromes mielodisplasicos y leucemias mieloides agudas. Las enfermedades mieloproliferativas ejemplares son la leucemia mielogena cronica (por ejemplo, leucemia neutrofllica cronica con cromosoma Filadelfia positivo (t(9;22)(qq34;q11)), leucemia eosinofllica cronica/slndrome hipereosinofllico, mielofibrosis idiopatica cronica, policitemia verdadera y trombocitemia esencial. Los trastornos mielodisplasicos/mieloproliferativos ejemplares son la leucemia mielomonocltica cronica, leucemia mielogena cronica atlpica y leucemia mielomonocltica juvenil. Los slndromes mielodisplasicos ejemplares son anemia refractaria, con sideroblastos en anillo y sin sideroblastos en anillo, citopenia refractaria (slndrome mielodisplasico) con displasia de multilinaje, anemia refractaria (slndrome mielodisplasico) con blastos en exceso, slndrome 5q y slndrome mielodisplasico. En diversas realizaciones, cualquiera de las neoplasias mieloides que estan asociadas con actividad anormal de syk y/o JAK se puede tratar con los compuestos inhibidores de syk y/o JAK.In some embodiments, the hematopoietic neoplasm treated is a myeloid neoplasm. This group comprises a large class of cell proliferative disorders or that have the characteristic phenotype of myeloid lineage cells. Myeloid neoplasms can be subdivided into myeloproliferative diseases, myelodysplastic / myeloproliferative diseases, myelodysplasmic sndromes and acute myeloid leukemias. Exemplary myeloproliferative diseases are chronic myelogenous leukemia (for example, chronic neutrophilic leukemia with a positive Philadelphia chromosome (t (9; 22) (qq34; q11)), chronic eosinophilic leukemia / hypereosinophilic syndrome, chronic idiopathic myelofibrosis, true polycythemia and essential thromboemia Exemplary myelodysplastic / myeloproliferative disorders are chronic myelomonocytic leukemia, chronic myelogenous athletic leukemia and juvenile myelomonopathic leukemia, exemplary myelodysplasic slndromes are refractory anemia, with ring sideroblasts and no ring sideroblasts, multisystem dysplasia dysplastic cytopenia , refractory anemia (myelodysplasic syndrome) with excess blasts, 5q syndrome and myelodysplasic syndrome.In various embodiments, any of the myeloid neoplasms that are associated with abnormal syk and / or JAK activity can be treated with the syk and / or inhibitory compounds. or JAK.

En algunas realizaciones, los compuestos se pueden utilizar para tratar leucemias mieloides agudas (LMA), que representan una gran clase de neoplasias mieloides que tienen su propia subdivision de trastornos. Estas subdivisiones incluyen, entre otras, las LMA con translocaciones citogeneticas recurrentes, LMA con displasia multilinaje y otras LMA no categorizadas de otra forma. Las LMA ejemplares con translocaciones citogeneticas recurrentes incluyen, entre otras, LMA con t(8;21)(q22;q22), LMA1(cBF-alfa)/ETO, leucemia promielocltica aguda (LMA con t(15;17)(q22;q11-12) y variantes, PML/RAR-alfa), LMA con eosinofilos de la medula osea anormales (inv(16)(p13q22) o t(16;16)(p13;q11), CBFb/MYH11X), y LMA con anormalidades 11q23 (MLL). Las LMA con displasia de multilinaje ejemplares son las que estan asociadas con o sin slndrome mielodisplasico anterior. Otras leucemias mieloides agudas no clasificadas dentro de algun grupo definible incluyen, LMA mlnimamente diferenciada, LMA sin maduracion, LMA con maduracion, leucemia mielomonocltica aguda, leucemia monocltica aguda, leucemia eritroide aguda, leucemia megacariocltica aguda, leucemia basofllica aguda y panmielosis aguda con mielofibrosis.In some embodiments, the compounds may be used to treat acute myeloid leukemias (AML), which represent a large class of myeloid neoplasms that have their own subdivision of disorders. These subdivisions include, among others, AML with recurrent cytogenetic translocations, AML with multilineage dysplasia and other AML not otherwise categorized. Exemplary AML with recurrent cytogenetic translocations include, among others, AML with t (8; 21) (q22; q22), AML1 (cBF-alpha) / ETO, acute promyelocytic leukemia (AML with t (15; 17) (q22; q11-12) and variants, PML / RAR-alpha), LMA with abnormal bone marrow eosinophils (inv (16) (p13q22) ot (16; 16) (p13; q11), CBFb / MYH11X), and LMA with 11q23 abnormalities (MLL). AML with exemplary multilineage dysplasia are those that are associated with or without anterior myelodysplastic syndrome. Other acute myeloid leukemias not classified within any definable group include, minimally differentiated AML, AML without maturation, AML with maturation, acute myelomonocytic leukemia, acute monocytic leukemia, acute erythroid leukemia, acute megakaryocytic leukemia, acute basophilic leukemia, and acute myelofibrosis with acute myelofibrosis.

"Tratar" dentro del contexto de la invencion significa un alivio de los slntomas asociados con un trastorno o enfermedad, o detener la progresion adicional o el empeoramiento de los slntomas, o la prevencion o profilaxis de la enfermedad o trastorno."Treating" within the context of the invention means a relief of the symptoms associated with a disorder or disease, or stop the further progression or worsening of the symptoms, or the prevention or prophylaxis of the disease or disorder.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

El termino "mamifero" incluye organismos que expresan syk y/o JAK. Los ejemplos de mamlferos incluyen ratones, ratas, vacas, ovejas, cerdos, cabras, caballos, osos, monos, perros, gatos y, preferentemente, seres humanos. Tambien se incluyen en esta definicion los organismos transgenicos que expresan syk y/o JAK.The term "mammal" includes organisms that express syk and / or JAK. Examples of mammals include mice, rats, cows, sheep, pigs, goats, horses, bears, monkeys, dogs, cats and, preferably, humans. Transgenic organisms that express syk and / or JAK are also included in this definition.

La invencion proporciona compuestos como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal, comprendiendo dicho uso administrar a un mamifero o animal no humano una cantidad eficaz de un compuesto o composicion descrito en el presente documento. Como se usa en el presente documento, “cantidad eficaz” de un compuesto o composicion de la invencion incluye las cantidades que antagonizan o inhiben syk y/o JAK. Una cantidad que antagoniza o inhibe a syk y/o JAK es detectable, por ejemplo, por cualquier ensayo que tiene la capacidad de determinar la actividad de syk y/o JAK, incluyendo el descrito a continuacion como un metodo de analisis ilustrativo. Las cantidades eficaces tambien pueden incluir las cantidades que alivian los slntomas de un trastorno asociado con syk y/o JAK tratable mediante la inhibicion de syk y/o JAK. Por consiguiente, "antagonistas de syk" o "antagonistas de JAK" incluyen compuestos que interaction con syk o JAK, respectivamente, y modulan, por ejemplo, inhiben o disminuyen, la capacidad de un segundo compuesto, por ejemplo otro ligando de syk o JAK, para interactuar con la syk o JAK, respectivamente. Los compuestos de union a syk o JAK son preferentemente antagonistas de syk o JAK, respectivamente. Las expresiones "compuestos de union a syk " y "compuestos de union a JAK " (por ejemplo, que presenta afinidad de union al receptor) incluyen los compuestos que interaction con syk o JAK dando como resultado la modulacion de la actividad de syk o JAK, respectivamente. Los compuestos de union a syk y/o JAK pueden identificarse utilizando un metodo in vitro (por ejemplo, basado en celulas o no basado en celulas) o in vivo. A continuacion se proporciona una descripcion de los metodos in vitro.The invention provides compounds as described herein for use in the treatment of the human or animal body, said use comprising administering to an mammal or non-human animal an effective amount of a compound or composition described herein. As used herein, "effective amount" of a compound or composition of the invention includes amounts that antagonize or inhibit syk and / or JAK. An amount that antagonizes or inhibits syk and / or JAK is detectable, for example, by any assay that has the ability to determine the activity of syk and / or JAK, including the one described below as an illustrative method of analysis. Effective amounts may also include amounts that relieve symptoms of a disorder associated with syk and / or JAK treatable by inhibiting syk and / or JAK. Accordingly, "syk antagonists" or "JAK antagonists" include compounds that interact with syk or JAK, respectively, and modulate, for example, inhibit or decrease, the ability of a second compound, for example another syk or JAK ligand. , to interact with the syk or JAK, respectively. The syk or JAK binding compounds are preferably syk or JAK antagonists, respectively. The terms "syk binding compounds" and "JAK binding compounds" (for example, which exhibits binding affinity to the receptor) include compounds that interact with syk or JAK resulting in the modulation of the activity of syk or JAK respectively. Syk and / or JAK binding compounds can be identified using an in vitro method (eg, cell based or non cell based) or in vivo. A description of the in vitro methods is given below.

La cantidad de compuesto presente, cuando se utiliza como se describe en el presente documento o en composiciones como se describe en el presente documento, deberla ser suficiente para provocar una disminucion detectable en la gravedad del trastorno, como se mide por cualquiera de los ensayos descritos en los ejemplos. La cantidad del modulador de syk y/o JAK necesaria dependera de la eficacia del modulador para el tipo celular dado y el periodo de tiempo necesario para tratar el trastorno. En determinadas realizaciones, las composiciones de la presente invencion pueden comprender adicionalmente otro agente terapeutico. Cuando se utiliza un segundo agente, el segundo agente puede administrarse ya sea como una forma farmaceutica separada o como parte de una forma farmaceutica unitaria con los compuestos o composiciones de la presente invencion. Aunque uno o mas de los compuestos de la invencion se pueden utilizar en una aplicacion de monoterapia para tratar un trastorno, enfermedad o slntoma, tambien pueden utilizarse en terapia de combinacion, en donde el uso de un compuesto o composicion de la invencion (agente terapeutico) se combina con el uso de uno o mas de otros agentes terapeuticos, para el tratamiento de los mismos y/o de otros tipos de trastornos, slntomas y enfermedades. La terapia de combinacion incluye la administracion de dos o mas agentes terapeuticos de forma simultanea o secuencial. Los agentes se pueden administrar en cualquier orden. Como alternativa, los multiples agentes terapeuticos se pueden combinar en una unica composicion que se puede administrar al paciente. Por ejemplo, una unica composicion farmaceutica podrla comprender el compuesto o la sal, ester o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la formula I, otro agente terapeutico (por ejemplo, metotrexato) o una sal, ester o profarmaco farmaceuticamente aceptable del mismo, y un excipiente o transportador farmaceuticamente aceptable.The amount of compound present, when used as described herein or in compositions as described herein, should be sufficient to cause a detectable decrease in the severity of the disorder, as measured by any of the assays described. In the examples. The amount of the syk and / or JAK modulator needed will depend on the effectiveness of the modulator for the given cell type and the period of time necessary to treat the disorder. In certain embodiments, the compositions of the present invention may further comprise another therapeutic agent. When a second agent is used, the second agent can be administered either as a separate pharmaceutical form or as part of a unit pharmaceutical form with the compounds or compositions of the present invention. Although one or more of the compounds of the invention can be used in a monotherapy application to treat a disorder, disease or symptom, they can also be used in combination therapy, where the use of a compound or composition of the invention (therapeutic agent ) is combined with the use of one or more other therapeutic agents, for the treatment thereof and / or other types of disorders, symptoms and diseases. Combination therapy includes the administration of two or more therapeutic agents simultaneously or sequentially. Agents can be administered in any order. Alternatively, the multiple therapeutic agents can be combined in a single composition that can be administered to the patient. For example, a single pharmaceutical composition could comprise the compound or the pharmaceutically acceptable salt, ester or prodrug thereof according to formula I, another therapeutic agent (for example, methotrexate) or a pharmaceutically acceptable salt, ester or prodrug thereof, and a pharmaceutically acceptable excipient or carrier.

La invencion comprende un compuesto que tiene la formula I. Tambien se describe un metodo para preparar un compuesto de la invencion y un metodo para preparar una composicion farmaceutica de al menos un compuesto de la invencion en al menos un transportador o excipiente farmaceuticamente aceptable. La invencion tambien proporciona un compuesto como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento de una diversidad de trastornos, slntomas y enfermedades (por ejemplo, inflamatoria, autoinmunitaria, neurologica, neurodegenerativa, oncologica y cardiovascular), tal como AR, osteoartritis, enfermedad del intestino irritable EII, asma, enfermedad pulmonar obstructiva cronica EPOC y EM. Los compuestos de la invencion y sus sales y/o composiciones neutras farmaceuticamente aceptables, se pueden formular junto a un excipiente o transportador farmaceuticamente aceptable y la composicion resultante se puede administrar a mamiferos in vivo, tal como hombres, mujeres y animales, para tratar una diversidad de trastornos, sintomas y enfermedades. Ademas, los compuestos de la invencion se pueden utilizar para preparar un medicamento que sea util para el tratamiento de una diversidad de trastornos, sintomas y enfermedades.The invention comprises a compound having the formula I. A method for preparing a compound of the invention and a method for preparing a pharmaceutical composition of at least one compound of the invention in at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient is also described. The invention also provides a compound as described herein for use in the treatment of a variety of disorders, symptoms and diseases (eg, inflammatory, autoimmune, neurological, neurodegenerative, oncological and cardiovascular), such as RA, osteoarthritis , IBD irritable bowel disease, asthma, chronic obstructive pulmonary disease COPD and MS. The compounds of the invention and their pharmaceutically acceptable salts and / or neutral compositions can be formulated together with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient and the resulting composition can be administered to mammals in vivo, such as men, women and animals, to treat a diversity of disorders, symptoms and diseases. In addition, the compounds of the invention can be used to prepare a medicament that is useful for the treatment of a variety of disorders, symptoms and diseases.

Todos los compuestos de la presente invencion son inhibidores potentes de las syk y/o JAK quinasas, presentando las CI50 en el ensayo respectivo en el intervalo de menos de 5 pM, con la mayoria estando en el intervalo de nanomolar, y varios en el de subnanomolar. En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invencion pueden ser inhibidores de syk/JAK “duales” en el aspecto que inhiben en algun grado tanto a syk como a JAK quinasa. En otras realizaciones, los compuestos de la presente invencion pueden inhibir de forma selectiva a la syk quinasa, pero no inhiben de forma apreciable a una o mas JAK quinasas. En otras realizaciones, los compuestos de la presente invencion pueden inhibir de forma selectiva a JAK quinasa, pero no inhiben de forma apreciable una o mas syk quinasas.All compounds of the present invention are potent inhibitors of syk and / or JAK kinases, with IC50s in the respective assay in the range of less than 5 pM, with most being in the nanomolar range, and several in the subnanomolar. In some embodiments, the compounds of the present invention may be "dual" syk / JAK inhibitors in that they inhibit both syk and JAK kinase to some extent. In other embodiments, the compounds of the present invention can selectively inhibit syk kinase, but do not appreciably inhibit one or more JAK kinases. In other embodiments, the compounds of the present invention can selectively inhibit JAK kinase, but do not appreciably inhibit one or more syk kinases.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

f. KitsF. Kits

Todavla otro aspecto de la presente invencion es proporcionar un kit que comprende recipientes separados en un unico envase, en el que los compuestos, composiciones y/o sales de los mismos, farmaceuticos de la invencion, se usan, por lo tanto, en combinacion con transportadores farmaceuticamente aceptables para tratar estados, trastornos, slntomas y enfermedades en donde syk y/o JAK desempenan un papel.Still another aspect of the present invention is to provide a kit comprising separate containers in a single package, in which the pharmaceutical compounds, compositions and / or salts thereof, are therefore used in combination with Pharmaceutically acceptable carriers to treat conditions, disorders, symptoms and diseases where syk and / or JAK play a role.

EjemplosExamples

Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no para limitar, la invencion reivindicada.The following examples are offered to illustrate, but not to limit, the claimed invention.

Los materiales de partida y reactivos usados en la preparation de estos compuestos se encuentran por lo general disponibles a partir de proveedores comerciales, tales como Aldrich Chemical Co., o se preparan mediante metodos conocidos por los expertos en la tecnica siguiendo los procedimientos expuestos en referencias tales como Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: Nueva York, 1967-2004, Volumenes 1-22; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumenes 1-5 y Suplementos; y Organic Reactions, Wiley & Sons: Nueva York, 2005, Volumenes 1-65.The starting materials and reagents used in the preparation of these compounds are generally available from commercial suppliers, such as Aldrich Chemical Co., or are prepared by methods known to those skilled in the art following the procedures set forth in references. such as Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1967-2004, Volumes 1-22; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volume 1-5 and Supplements; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 2005, Volumes 1-65.

Si se desea, los materiales de partida y intermedios de los esquemas de las reacciones de slntesis pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas convencionales que incluyen, pero sin limitation, filtration, destilacion, cristalizacion, cromatografla y similares. Dichos materiales pueden caracterizarse mediante medios convencionales, INCLUYENDO constantes flsicas y datos espectrales.If desired, the starting and intermediate materials of the schemes of the synthesis reactions can be isolated and purified by conventional techniques including, but not limited to, filtration, distillation, crystallization, chromatography and the like. Such materials can be characterized by conventional means, INCLUDING physical constants and spectral data.

A menos que se especifique otra cosa, las reacciones descritas en el presente documento se realizan preferiblemente en una atmosfera inerte a presion atmosferica y a un intervalo de temperaturas de reaction de aproximadamente -78 °C a aproximadamente 150 °C, mas preferiblemente de aproximadamente 0 °C a aproximadamente 125 °C, y mas preferiblemente y convenientemente a temperatura ambiente, por ejemplo, de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 75 °CUnless otherwise specified, the reactions described herein are preferably performed in an inert atmosphere at atmospheric pressure and at a reaction temperature range of about -78 ° C to about 150 ° C, more preferably about 0 ° C at about 125 ° C, and more preferably and conveniently at room temperature, for example, from about 20 ° C to about 75 ° C

Con referencia a los siguientes ejemplos, los compuestos de la presente invencion se sintetizaron usando los metodos descritos el presente documento, u otros metodos, que se conocen bien en la tecnica.With reference to the following examples, the compounds of the present invention were synthesized using the methods described herein, or other methods, which are well known in the art.

Los compuestos y/o intermedios pueden caracterizarse por cromatografla llquida de alto rendimiento (HPLC) usando una sistema de cromatografla Waters Alliance con un modulo de separation 2695 (Milford, Mass.). Las columnas anallticas pueden ser columnas C-18 SpeedROD RP-18E de Merck KGaA (Darmstadt, Alemania). Como alternativa, la caracterizacion puede realizarse usando un sistema Waters Unity (UPLC) con columnas Waters Acquity UPLC BEH C-18 2,1 mm x 15 mm. Puede usarse un gradiente de elucion, tlpicamente partiendo de acetonitrilo al 5 %/agua al 95 % y continuando hasta acetonitrilo al 95 % durante un periodo de 5 minutos para el sistema Alliance y 1 minuto para el sistema Acquity. Todos los disolventes pueden contener acido trifluoroacetico al 0,1 % (TFA). Los compuestos pueden detectarse por absorcion de luz ultravioleta (UV) a 220 nm o 254 nm. Los disolventes de HPLC pueden ser de EMD Chemicals, Inc. (Gibbstown, NJ). En algunos casos, la pureza puede evaluarse por cromatografla de capa fina (TLC) usando placas de vidrio con respaldo de gel de sllice, tales como, por ejemplo, placas EMD de gel de sllice 60 2,5 cm x 7,5 cm. Los resultados por TLC pueden detectarse facilmente de forma visual bajo luz ultravioleta, o empleando tecnicas ya conocidas de vapor de yodo y otras diversas tecnicas de tincion.The compounds and / or intermediates can be characterized by high performance liquid chromatography (HPLC) using a Waters Alliance chromatography system with a 2695 separation module (Milford, Mass.). The analytical columns can be C-18 SpeedROD RP-18E columns from Merck KGaA (Darmstadt, Germany). Alternatively, the characterization can be performed using a Waters Unity (UPLC) system with Waters Acquity UPLC BEH C-18 2.1 mm x 15 mm columns. An elution gradient can be used, typically starting from 5% acetonitrile / 95% water and continuing to 95% acetonitrile for a period of 5 minutes for the Alliance system and 1 minute for the Acquity system. All solvents may contain 0.1% trifluoroacetic acid (TFA). The compounds can be detected by absorption of ultraviolet (UV) light at 220 nm or 254 nm. HPLC solvents may be from EMD Chemicals, Inc. (Gibbstown, NJ). In some cases, purity can be assessed by thin layer chromatography (TLC) using glass plates with silica gel backing, such as, for example, EMD plates of silica gel 60 2.5 cm x 7.5 cm. The results by TLC can be easily detected visually under ultraviolet light, or by using known iodine vapor techniques and various other staining techniques.

Los analisis de espectrometria de masas pueden realizarse en uno de dos instrumentos Agilent 1100 serie LCMS con acetonitrilo/agua como fase movil. Un sistema puede usar TFA como el modificador y medir en modo de ion positivo [indicado como MH+, (M+1) o (M+H)+] y el otro puede usar acido formico o acetato amonico y medir tanto en modo de ion positivo [indicado como MH+, (M+1) o (M+H)+] como negativo [indicado como M-, (M-1) o (M-H)-].Mass spectrometry analyzes can be performed on one of two Agilent 1100 LCMS series instruments with acetonitrile / water as the mobile phase. One system can use TFA as the modifier and measure in positive ion mode [indicated as MH +, (M + 1) or (M + H) +] and the other can use formic acid or ammonium acetate and measure both in ion mode positive [indicated as MH +, (M + 1) or (M + H) +] as negative [indicated as M-, (M-1) or (MH) -].

El analisis de resonancia magnetica nuclear (RMN) puede realizarse en algunos de los compuestos con un Varian 400 MHz RMN (Palo Alto, Calif.). La referencia espectral puede ser TMS o el desplazamiento qulmico conocido del disolvente.Nuclear magnetic resonance (NMR) analysis can be performed on some of the compounds with a Varian 400 MHz NMR (Palo Alto, Calif.). The spectral reference may be TMS or the known chemical shift of the solvent.

La pureza de algunos de los compuestos de la invencion puede evaluarse mediante analisis elementales (Robertson Microlit, Madison, NJ.).The purity of some of the compounds of the invention can be evaluated by elementary analysis (Robertson Microlit, Madison, NJ.).

Los puntos de fusion pueden determinarse en un aparato de Laboratory Devices Mel-Temp (Holliston, Mass.).Melting points can be determined in an apparatus of Laboratory Devices Mel-Temp (Holliston, Mass.).

Las separaciones preparativas pueden realizarse segun sea necesario, usando un sistema de cromatografla Sql6x o Sg100c y columnas de gel de sllice rellenadas previamente, todo adquirido en Teledyne Isco, (Lincoln, NE). Como alternativa, los compuestos e intermedios pueden purificarse por cromatografla en columna ultrarrapida usando material de relleno de gel de sllice (malla 230-400), o por HPLc usando una columna de fase inversa C-18. Los disolventes tlpicos empleados para los sistemas Isco y la cromatografla en columna ultrarrapida pueden ser diclorometano, metanol, acetato de etilo, hexano, acetona, hidroxiamina acuosa y trietil amina. Los disolventes tlpicos empleados para la HPLC de fase inversa pueden ser de concentraciones variables de acetonitrilo y agua conPreparative separations can be performed as necessary, using a Sql6x or Sg100c chromatography system and previously filled silica gel columns, all purchased from Teledyne Isco, (Lincoln, NE). Alternatively, the compounds and intermediates can be purified by flash column chromatography using silica gel filler material (230-400 mesh), or by HPLc using a C-18 reverse phase column. The typical solvents used for Isco systems and flash column chromatography can be dichloromethane, methanol, ethyl acetate, hexane, acetone, aqueous hydroxyamine and triethyl amine. Typical solvents used for reverse phase HPLC can be of varying concentrations of acetonitrile and water with

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

acido trifluoroacetico al 0,1 %. Metodos generales0.1% trifluoroacetic acid. General methods

Los siguientes esquemas de reaccion sinteticos son simplemente ilustrativos de algunos metodos mediante los cuales pueden sintetizarse los compuestos de la presente invencion, y pueden hacerse diversas modificaciones a estos esquemas de reaccion sinteticos y se sugeriran a un experto en la tecnica que haga referencia a la divulgacion contenida en esta solicitud.The following synthetic reaction schemes are simply illustrative of some methods by which the compounds of the present invention can be synthesized, and various modifications can be made to these synthetic reaction schemes and will be suggested to a person skilled in the art who makes reference to the disclosure. contained in this application.

Ejemplo 1. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclobutilamino)pirimidin-5-carboxamida 1Example 1. 2- (4- (4-Acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclobutylamino) pyrimidin-5-carboxamide 1

imagen27image27

Etapa 1: A una solucion en agitacion de acido carboxilico 1.1 (85 g, 540 mmol) en cloruro de tionilo (425 ml) se le anadio lentamente piridina (8,5 ml, 0,11 mmol). La reaccion se agito a 75 °C durante una noche, momento en el que se concentro y se seco al vacfo para dar un polvo de color amarillo claro que se uso inmediatamente en la siguiente etapa.Step 1: To a stirring solution of carboxylic acid 1.1 (85 g, 540 mmol) in thionyl chloride (425 ml), pyridine (8.5 ml, 0.11 mmol) was added slowly. The reaction was stirred at 75 ° C overnight, at which time it was concentrated and dried in vacuo to give a light yellow powder that was used immediately in the next step.

Etapa 2: El solido de color amarillo de la etapa anterior se diluyo lentamente con 750 ml de etanol y se calento a reflujo durante una noche. El dfa siguiente se determino que la reaccion estaba completa por HPLC y despues se enfrio en un bano de hielo, y el solido filtrado y se lavo con eter dietflico proporcionando el ester etflico deseado (1.3) en forma de un polvo blanquecino (91 g, 87 % en dos etapas). MS encontrado para C7H8N2O4 como (M+H)+185,0.Stage 2: The yellow solid from the previous stage was slowly diluted with 750 ml of ethanol and heated under reflux overnight. The next day it was determined that the reaction was complete by HPLC and then cooled in an ice bath, and the filtered solid and washed with diethyl ether providing the desired ethyl ester (1.3) as an off-white powder (91 g, 87% in two stages). MS found for C7H8N2O4 as (M + H) +185.0.

Etapa 3: El ester 1.3 (22 g, 120 mmol) se disolvio en oxicloruro de fosforo (60 ml, 600 mmol) y la mezcla se trato con N,N-dietilanilina (27 ml, 167 mmol) y la mezcla se calento a 105 °C hasta que se determino que la reaccion estaba completa por HPLC. Despues, se enfrio a ta y se anadio lentamente a 1 l de hielo picado dando como resultado la formacion de un precipitado de color beige que se recogio por filtracion y se seco al vacfo proporcionando el dicloruro deseado (1.4) en forma de un polvo de color amarillo claro (22,5 g, 85 %). 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): 5 9,13 (s, 1H), 4,37 (c, 2H), 1,32 (t, 3H).Step 3: The ester 1.3 (22 g, 120 mmol) was dissolved in phosphorus oxychloride (60 ml, 600 mmol) and the mixture was treated with N, N-diethylaniline (27 ml, 167 mmol) and the mixture was heated to 105 ° C until it was determined that the reaction was complete by HPLC. Then, it was cooled to rt and slowly added to 1 l of crushed ice resulting in the formation of a beige precipitate that was collected by filtration and dried in vacuo to provide the desired dichloride (1.4) as a powder of light yellow color (22.5 g, 85%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 5.133 (s, 1H), 4.37 (c, 2H), 1.32 (t, 3H).

Etapa 4: Se disolvio dicloropirimidina 1,4 (5,9 g, 27 mmol) en acetonitrilo (50 ml), se trato secuencialmente con diisopropilamina (5,2 ml, 30 mmol) seguido de ciclobutil amina (1,9 g, 27 mmol) y se agito a ta hasta que todo el material de partida se habfa consumido. Despues, la mezcla de reaccion se diluyo con agua hasta un volumen total de 150 ml y el precipitado se recogio por filtracion proporcionando el producto deseado en forma de un solido de color amarillo claro (6,02 g, 87 %). rH RMN (DMSO-d6, 400 MHz): 5 8,60 (S, 1H), 8,48 (d, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,29 (c, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,73 (m, 2H), 1,30 (t, 3H).Step 4: Dichloropyrimidine 1.4 (5.9 g, 27 mmol) was dissolved in acetonitrile (50 ml), treated sequentially with diisopropylamine (5.2 ml, 30 mmol) followed by cyclobutyl amine (1.9 g, 27 mmol) and stirred at rt until all starting material had been consumed. Then, the reaction mixture was diluted with water to a total volume of 150 ml and the precipitate was collected by filtration to provide the desired product as a light yellow solid (6.02 g, 87%). rH NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 5.8.60 (S, 1H), 8.48 (d, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.29 (c, 2H), 2, 30 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.30 (t, 3H).

Etapa 5: Se diluyo ester etflico 1.5 (6,02 g, 24 mmol) con 1,4-dioxano (26 ml) seguido de hidroxido de litio acuoso (1,0 M, 26 ml, 26 mmol) y se agito a ta hasta que todo el material de partida se habfa convertido para dar el acido carboxilico. Despues, la reaccion se diluyo con agua hasta un volumen total de 100 ml y se acidifico a pH = 2 con HCl 6 M. Despues, la suspension resultante se filtro y se seco por aspiracion dando 3,51 g del acido carboxilico (64 %). 1H RMN (DMSO-da, 400 MHz): 5 8,64 (d, 1H), 8,74 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 2,31 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,72 (m,Step 5: Ethyl ester 1.5 (6.02 g, 24 mmol) was diluted with 1,4-dioxane (26 ml) followed by aqueous lithium hydroxide (1.0 M, 26 ml, 26 mmol) and stirred at rt until all the starting material had been converted to give the carboxylic acid. Then, the reaction was diluted with water to a total volume of 100 ml and acidified to pH = 2 with 6 M HCl. Then, the resulting suspension was filtered and dried by aspiration giving 3.51 g of the carboxylic acid (64% ). 1 H NMR (DMSO-da, 400 MHz): 5. 8.64 (d, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 4.50 (m, 1 H), 2.31 (m, 2 H), 2, 03 (m, 2H), 1.72 (m,

2H).2H).

Etapa 6: Se disolvio acido carboxllico 1.6 (3,15 g, 15 mmol) se disolvio en N,N-dimetilformamida (70 ml) y se tratoStep 6: Carboxolic acid 1.6 (3.15 g, 15 mmol) was dissolved in N, N-dimethylformamide (70 ml) and treated

con HOBt (3,13 g, 23 mmol) y EDC (4,4 g, 23 mmol). Despues de agitar durante aprox. 25 min se anadio amoniacowith HOBt (3.13 g, 23 mmol) and EDC (4.4 g, 23 mmol). After stirring for approx. 25 min ammonia was added

5 (0,5 M en 1,4-dioxano, 72 ml, 36 mmol) y la reaccion se agito durante una noche. A la siguientes manana, la5 (0.5 M in 1,4-dioxane, 72 ml, 36 mmol) and the reaction was stirred overnight. The next morning, the

reaccion se diluyo con agua para dar un volumen total de 500 ml y el producto deseado se recogio por filtracion proporcionando 3,62 g (74 %) de un solido de color beige claro. 1H RMN (DMSO-d6, 400 MHz): 5 9,30 (d, 1H), 8,54The reaction was diluted with water to give a total volume of 500 ml and the desired product was collected by filtration to provide 3.62 g (74%) of a light beige solid. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 5. 9.30 (d, 1 H), 8.54

(s, 1H), 8,15 (d, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,51 (t, 1H), 3,77 (m, 1H), 1,79 (m, 2H), 1,74 (m, 2H),(s, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.64 (m, 2H), 7.51 (t, 1H) , 3.77 (m, 1H), 1.79 (m, 2H), 1.74 (m, 2H),

1,53 (m, 1H), 1,41 (m, 1H).1.53 (m, 1H), 1.41 (m, 1H).

1010

Etapa 7: Se diluyeron benzotriazolil eter 1.7 (50 mg, 0,17 mmol), 1-(4-(4-aminofenil)piperazin-1-il)etanona (preparada de 1-acetilpiperazina y 4-fluoronitrobenzo en dos etapas) (45 mg, 0,20 mmol) y acido p-toluenosulfonico (30 mg, 0,17 mmol) con 1,4-dioxano (5 ml) y se agito a 120 °C hasta que todo el material de partida se habla consumido. La reaccion se enfrio a ta, se diluyo con agua y se purifico directamente por HPLC preparativa proporcionando el 15 producto deseado, 1, despues de la liofilizacion. MS encontrado para C21H27N7O2 como (M+H)+410,2.Stage 7: Benzotriazolyl ether 1.7 (50 mg, 0.17 mmol), 1- (4- (4-aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (prepared from 1-acetylpiperazine and 4-fluoronitrobenzo in two stages) were diluted (2) 45 mg, 0.20 mmol) and p-toluenesulfonic acid (30 mg, 0.17 mmol) with 1,4-dioxane (5 ml) and stirred at 120 ° C until all starting material has been consumed. The reaction was cooled to rt, diluted with water and purified directly by preparative HPLC to provide the desired product, 1, after lyophilization. MS found for C21H27N7O2 as (M + H) +410.2.

El siguiente compuesto se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1 con el reactivo A en lugar de ciclobutilamina en la Etapa 4.The following compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1 with reagent A instead of cyclobutylamine in Step 4.

20twenty

Tabla 6Table 6

Ej. n.°  Ex. #

Estructura Reactivo A PM MS Nombre  Reagent Structure A PM MS Name

3  3

X ^ A "-NH O n-O-nh, H ciclopropilamina 395,4 67 396 2-(4-(4-acetilpiperazin-1- il)fenilamino)-4- (ciclopropilamino)pirimidin-5- carboxamida  X ^ A "-NH O n-O-nh, H cyclopropylamine 395.4 67 396 2- (4- (4-acetylpiperazin-1- yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5- carboxamide

4  4

., .NH 0 ANANJ ! H ciclopentilamina 423,5 21 424 2-(4-(4-acetilpiperazin-1- il)fenilamino)-4-(ciclopentilamino) pirimidin-5-carboxamida  ., .NH 0 ANANJ! H cyclopentylamine 423.5 21 424 2- (4- (4-acetylpiperazin-1- yl) phenylamino) -4- (cyclopentylamino) pyrimidin-5-carboxamide

22  22

_ ^OH ° ay H3C^N^i ^'’'nh 0 AnanJ H trans-2-hidroxi ciclopropilamina racemica 439,5 2 440,5 2-(4-(4-acetilpiperazin-1- il)fenilamino)-4-((1 R)-2- hidroxiciclopentilamino)pirimidin-5- carboxamida  _ ^ OH ° a and H3C ^ N ^ i ^ '' 'nh 0 AnanJ H trans-2-hydroxy cyclopropylamine racemic 439.5 2 440.5 2- (4- (4-acetylpiperazin-1- yl) phenylamino) -4 - ((1 R) -2- hydroxycyclopentylamino) pyrimidin-5- carboxamide

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo de referenda 32. 2,4-bis(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaReference example 32. 2,4-bis (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen28image28

Etapa 1: El Compuesto 1.4 (Ejemplo 1, 1,05 g, 4,8 mmol) se disolvio en 40 ml de acetonitrilo. A este se le anadio tiometoxido sodico (0,74 g, 10,5 mmol). Se agito durante una noche, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con salmuera tres veces, se seco y se concentro al vacio. Despues, se puso en 20 ml de dioxano y 10 ml de agua. A esto se le anadieron 500 mg de LiOH hidrato. La mezcla se agito durante 4 horas. A la mezcla se le anadio HCl 1 N hasta que el pH alcanzo 3. Se concentro y se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las fases organicas se combinaron, se secaron y se concentraron al vacio para proporcionar un solido de color blanco. Despues, este solido se disolvio en 30 ml de DMF seca. A este se le anadieron clorhidrato de EDC (1,10 g, 5,7 mmol) y HOBt (0,77 g, 5,7 mmol). La mezcla se agito durante 30 min, y a esta se le anadio amoniaco (solution 0,5 N comercial en dioxano, 29 ml, 14,5 mmol). La mezcla se agito durante una noche, se concentro al vacio, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con salmuera tres veces, se seco y se concentro al vacio para dar el compuesto en bruto 30,1. MS encontrado para C7H9N3OS2 como (M+H)+ 216,1.Step 1: Compound 1.4 (Example 1, 1.05 g, 4.8 mmol) was dissolved in 40 ml of acetonitrile. To this was added sodium thiomethoxide (0.74 g, 10.5 mmol). It was stirred overnight, diluted with ethyl acetate, washed with brine three times, dried and concentrated in vacuo. Then, it was put in 20 ml of dioxane and 10 ml of water. To this 500 mg of LiOH hydrate was added. The mixture was stirred for 4 hours. 1N HCl was added to the mixture until the pH reached 3. It was concentrated and extracted with ethyl acetate three times. The organic phases were combined, dried and concentrated in vacuo to provide a white solid. Then, this solid was dissolved in 30 ml of dry DMF. To this EDC hydrochloride (1.10 g, 5.7 mmol) and HOBt (0.77 g, 5.7 mmol) were added. The mixture was stirred for 30 min, and ammonia (0.5 N commercial solution in dioxane, 29 ml, 14.5 mmol) was added thereto. The mixture was stirred overnight, concentrated in vacuo, diluted with ethyl acetate, washed with brine three times, dried and concentrated in vacuo to give the crude compound 30.1. MS found for C7H9N3OS2 as (M + H) + 216.1.

Etapa 2: El Compuesto en bruto 30.1 (42 mg, 0,20 mmol) se disolvio en 4 ml de NMP. A este se le anadio MCPBA (133 mg, 0,50 mmol). Se agito a TA durante 1 hora. A este se le anadieron 1-(4-(4-aminofenil)piperazin-1-il)etanona (175 mg, 0,80 mmol) y DIEA (140 pi, 0,80 mmol). Despues, la mezcla se agito en un bano a 120 °C durante 90 min. Despues, la mezcla se sometio a HPLC preparativa de fase inversa para aislar el compuesto del titulo. MS encontrado para C29H35N9O3 como (M+H)+ 558,2.Stage 2: The crude Compound 30.1 (42 mg, 0.20 mmol) was dissolved in 4 ml of NMP. To this was added MCPBA (133 mg, 0.50 mmol). It was stirred at RT for 1 hour. To this were added 1- (4- (4-aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (175 mg, 0.80 mmol) and DIEA (140 pi, 0.80 mmol). Then, the mixture was stirred in a bath at 120 ° C for 90 min. Then, the mixture was subjected to preparative reverse phase HPLC to isolate the title compound. MS found for C29H35N9O3 as (M + H) + 558.2.

Ejemplo de referencia 33. 4-(1H-indazol-6-ilamino)-2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaReference Example 33. 4- (1H-indazol-6-ylamino) -2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen29image29

Etapa 3: Se disolvio dicloropirimidina 1.4 (vease el Ejemplo 1; 1,04 g, 4,7 mmol) en NMP (30 ml) y se agito en un bano de hielo. A esto se le anadieron 6-aminoindazol 31.1 (690 mg, 5,2 mmol) y despues gota a gota etildiisopropilamina (DIEA, 1,64 ml, 9,4 mmol). La mezcla se agito durante 40 minutos, y a esta se le anadio tiometoxido sodico (660 mg, 9,4 mmol). La mezcla se agito durante una noche, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con salmuera tres veces, y se concentro al vacio para dar el compuesto en bruto 31.2 en forma de un solido de color pardo claro con rendimiento cuantitativo. MS encontrado para C15H15N5O2S como (M+H)+330,1.Step 3: Dichloropyrimidine 1.4 (see Example 1; 1.04 g, 4.7 mmol) was dissolved in NMP (30 ml) and stirred in an ice bath. To this was added 6-aminoindazole 31.1 (690 mg, 5.2 mmol) and then dropwise ethyldiisopropylamine (DIEA, 1.64 ml, 9.4 mmol). The mixture was stirred for 40 minutes, and sodium thiomethoxide (660 mg, 9.4 mmol) was added thereto. The mixture was stirred overnight, diluted with ethyl acetate, washed with brine three times, and concentrated in vacuo to give crude compound 31.2 as a light brown solid with quantitative yield. MS found for C15H15N5O2S as (M + H) +330.1.

Etapa 4: Se disolvio ester etilico 31.2 (4,7 mmol) en 60 ml de THF.hidroxido de litio hidrato (236 mg, 5,6 mmol) yStep 4: 31.2 ethyl ester (4.7 mmol) was dissolved in 60 ml of THF. Lithium hydroxide hydrate (236 mg, 5.6 mmol) and

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

20 ml de agua. La mezcla se agito durante una noche y a esta se le anadio cuidadosamente una solucion 1 N HCl hasta que el pH alcanzo 2. La mezcla se concentro al vado para retirar THF. El solido de color blanco se formo y se aislo usando un embudo de Buchner. Se lavo con agua y se seco en un horno de vado para dar el compuesto 3l.3 (1,14 g, 81 %) en forma de un solido de color blanco. MS encontrado para C13H11NsO2S como (M+H)+302,1.20 ml of water The mixture was stirred overnight and a 1 N HCl solution was carefully added thereto until the pH reached 2. The mixture was concentrated in vacuo to remove THF. The white solid was formed and isolated using a Buchner funnel. It was washed with water and dried in a ford oven to give compound 3l.3 (1.14 g, 81%) as a white solid. MS found for C13H11NsO2S as (M + H) +302.1.

Etapa 5: Se disolvio acido carboxflico 31.3 (1,14 g, 3,8 mmol) en 30 ml de DMF. A esto se le anadieron clorhidrato de EDC (1,09 g, 5,7 mmol) y HOBt hidrato (770 mg, 5,7 mmol). La mezcla se agito a TA durante 1 hora. Despues a esta se le anadio amoniaco (solucion 0,5 N comercial en dioxano, 22 ml, 11,4 mmol). La mezcla se agito durante 2 horas. Despues, se concentro al vado y se recogio en agua y acetato de etilo. La fase organica se separo y se lavo con salmuera cuatro veces. Despues, la fase organica se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado para proporcionar el compuesto 31.4 en forma de un solido de color amarillo claro (820 mg, 72 %). MS encontrado para C13H12N6OS como (M+H)+301,1.Step 5: 31.3 carboxylic acid (1.14 g, 3.8 mmol) was dissolved in 30 ml of DMF. EDC hydrochloride (1.09 g, 5.7 mmol) and HOBt hydrate (770 mg, 5.7 mmol) were added to this. The mixture was stirred at RT for 1 hour. Then, ammonia (0.5 N commercial solution in dioxane, 22 ml, 11.4 mmol) was added. The mixture was stirred for 2 hours. Then, it was concentrated in the vacuum and collected in water and ethyl acetate. The organic phase was separated and washed with brine four times. Then, the organic phase was dried over MgSO4 and concentrated in vacuo to provide compound 31.4 as a light yellow solid (820 mg, 72%). MS found for C13H12N6OS as (M + H) +301.1.

Etapa 6: El Compuesto 31.4 (36 mg, 0,12 mmol) se disolvio en 3 ml de NMP. A este se le anadio MCPBA (puro al 65 %, 48 mg, 0,18 mmol). Se agito a TA durante 30 minutos. Despues, a esto se le anadieron 1-(4-(4- aminofenil)piperazin-1-il)etanona (53 mg, 0,24 mmol) y pTSA (21 mg, 0,12 mmol). La mezcla se agito durante 90 minutos en un bano de 120 °C. Despues, esta mezcla se sometio a HPLC preparativa para aislar el compuesto del trtulo 31. MS encontrado para C24H25NgO2 como (M+H)+ 472,2.Step 6: Compound 31.4 (36 mg, 0.12 mmol) was dissolved in 3 ml of NMP. To this was added MCPBA (65% pure, 48 mg, 0.18 mmol). It was stirred at RT for 30 minutes. Then, 1- (4- (4- (aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (53 mg, 0.24 mmol) and pTSA (21 mg, 0.12 mmol) were added. The mixture was stirred for 90 minutes in a 120 ° C bath. Then, this mixture was subjected to preparative HPLC to isolate the title compound 31. MS found for C24H25NgO2 as (M + H) + 472.2.

Ejemplo 34. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-clorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 34. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-chlorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen30image30

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina en la Etapa 4. La smtesis de la cloropiperazinilanilina se realizo por cloracion del intermedio nitropiperazinilo, sintetizado de manera similar a la descrita en el Ejemplo 36, con NCS, seguido de reduccion usando platino sulfurado. MS encontrado para C2qH24N7O2CI como (M+H)+ 430,0. UV: A = 290The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine in Step 4. The synthesis of chloropiperazinilaniline was performed by chlorination of the nitropiperazinyl intermediate, synthesized in a manner similar to that described in Example 36 , with NCS, followed by reduction using sulphide platinum. MS found for C2qH24N7O2CI as (M + H) + 430.0. UV: A = 290

Ejemplo 35. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-clorofenilamino)-4-(ciclobutilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 35. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-chlorophenylamino) -4- (cyclobutylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen31image31

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 32. MS encontrado para C21H26N7O2CI como (M+H)+444,0. UV: A = 211,290The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 32. MS found for C21H26N7O2CI as (M + H) +444.0. UV: A = 211,290

Ejemplo 36. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-propionilpiperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 36. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4-propionylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen32image32

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. La piperazinilanilina se sintetizo a partir de Boc piperazina y 4-fluoronitrobenceno, seguido de desproteccion usando HCl en dioxano y acilacion usando cloruro de propionilo, y finalmente hidrogenacion usando Pd/C. MS encontrado para C2iH27N7O2 como (M+H)+410,3. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 5 8,22 (s, 1H), 7,49 (s ancho, 2H), 7,06 (d, 2H), 3,73 (m, 4H), 3,22 (m, 4H), 2,47 c, 2H), 3,03 (m, 1H), 1,12 (t, 3H), 0,90 (m, 2H), 0,70 (m, 2H).The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. Piperazinilaniline was synthesized from Boc piperazine and 4-fluoronitrobenzene, followed by deprotection using HCl in dioxane and acylation using propionyl chloride, and finally hydrogenation using Pd / C. MS found for C2iH27N7O2 as (M + H) +410.3. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): 5 8.22 (s, 1H), 7.49 (wide s, 2H), 7.06 (d, 2H), 3.73 (m, 4H), 3.22 (m, 4H), 2.47 c, 2H), 3.03 (m, 1H), 1.12 (t, 3H), 0.90 (m, 2H), 0.70 (m, 2H).

Ejemplo 37. 2-(4-(4-(ciclopropanocarbonil)piperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 37. 2- (4- (4- (cyclopropanecarbonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

imagen33image33

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 36 con cloruro de ciclopropilcarbonilo en lugar de cloruro de propionilo. MS encontrado para C22H27N7O2 como (M+H)+422,4. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 5 8,22 (s, 1H), 7,45 (s ancho, 2H), 7,08 (d, 2H), 3,93 (m, 4H), 3,73 (m, 4H), 3,02 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 0,88 (m, 6H), 0,69 (m, 2H). UV: A = 203, 273.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 36 with cyclopropylcarbonyl chloride instead of propionyl chloride. MS found for C22H27N7O2 as (M + H) +422.4. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): 5 8.22 (s, 1H), 7.45 (wide s, 2H), 7.08 (d, 2H), 3.93 (m, 4H), 3.73 (m, 4H), 3.02 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 0.88 (m, 6H), 0.69 (m, 2H). UV: A = 203, 273.

Ejemplo 39. 2-(4-(4-acetil-2-oxopiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 39. 2- (4- (4-acetyl-2-oxopiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen34image34

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina en la Etapa 4. La oxopiperazinil anilina se sintetizo a partir de 4-nitroiodobenceno y 4- Boc-2-oxopiperidina usando condiciones catalizadas con yoduro de cobre/dimetiletilendiamina. Despues, el grupo Boc se elimino usando HCl en dioxano, la amina resultante se acilo usando cloruro de acetilo, y finalmente el grupo nitro se redujo usando hidrogeno y Pd/C. MS encontrado para C20H23N7O3 como (M+H)+410,2. UV: A = 275.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine in Step 4. The oxopiperazinyl aniline was synthesized from 4-nitroiodobenzene and 4- Boc-2-oxopiperidine using iodide catalyzed conditions of copper / dimethylethylenediamine. Then, the Boc group was removed using HCl in dioxane, the resulting amine was acyl using acetyl chloride, and finally the nitro group was reduced using hydrogen and Pd / C. MS found for C20H23N7O3 as (M + H) +410.2. UV: A = 275.

Ejemplo 40. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-fluorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 40. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-fluorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen35image35

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina en la Etapa 4. La anilina se sintetizo a partir de la carboxil azida correspondiente por calentamiento en agua/DMF. La azida se sintetizo ultimamente a partir de acido 3,4-difluorobenzoico. MS encontrado para C20H24N7O2F como (M+H)+414,2. UV: A = 293.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine in Step 4. The aniline was synthesized from the corresponding carboxyl azide by heating in water / DMF. Azide was synthesized lately from 3,4-difluorobenzoic acid. MS found for C20H24N7O2F as (M + H) +414.2. UV: A = 293.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 41. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-((1s,4s)-4-aminociclohexilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 41. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4 - ((1s, 4s) -4-aminocyclohexylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen36image36

A una mezcla de trans-4-aminociclohexanol (2,07 g, 13,6 mmol) y NaHCO3 (3,50 g, 41,7 mmol) en H2O (20 ml) a temperatura ambiente, se le anadio una solucion de cloroformiato de bencilo (1,92 ml, 13,6 mmol) en dioxano (15 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 20 h. El precipitado de color blanco se recogio en forma de (1R,4R)-4-hidroxiciclohexilcarbamato de bencilo (3,37 g).To a mixture of trans-4-aminocyclohexanol (2.07 g, 13.6 mmol) and NaHCO3 (3.50 g, 41.7 mmol) in H2O (20 ml) at room temperature, a solution of chloroformate was added of benzyl (1.92 ml, 13.6 mmol) in dioxane (15 ml). The mixture was stirred at room temperature for 20 h. The white precipitate was collected as benzyl (1R, 4R) -4-hydroxycyclohexylcarbamate (3.37 g).

A una suspension de (1R,4R)-4-hidroxiciclohexilcarbamato de bencilo (1,14 g, 4,58 mmol) y trietilamina (1,30 ml, 9,34 mmol) en CH2O2 (15 ml) a temperatura ambiente, se anadio cloruro de metanosulfonilo (0,425 ml, 5,49 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 20 h. Se anadio mas cantidad de cloruro de metanosulfonilo (0,425 ml, 5,49 mmol) y trietilamina (1,00 ml). La agitacion se continuo durante 48 h. La solucion de reaccion se lavo con NaHCO3 al 5 %, y despues con HCl 1 N. La fase organica se separo, se seco sobre Na2SO4, se concentro al vaclo para dar metanosulfonato de (1R,4R)-4-(benciloxicarbonil)ciclohexilo en forma de un solido (1,13 g).At a suspension of (1R, 4R) -4-benzyl hydroxycyclohexylcarbamate (1.14 g, 4.58 mmol) and triethylamine (1.30 ml, 9.34 mmol) in CH2O2 (15 ml) at room temperature, methanesulfonyl chloride anadium (0.425 ml, 5.49 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 20 h. More methanesulfonyl chloride (0.425 ml, 5.49 mmol) and triethylamine (1.00 ml) were added. Stirring was continued for 48 h. The reaction solution was washed with 5% NaHCO3, and then with 1N HCl. The organic phase was separated, dried over Na2SO4, concentrated in vacuo to give (1R, 4R) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexyl methanesulfonate. in the form of a solid (1.13 g).

Una mezcla de metanosulfonato de (1R,4R)-4-(benciloxicarbonil)ciclohexilo (1,13 g, 3,46 mmol) y NaN3 (0,674 g, 10,4 mmol) en DMF (10 ml) se agito a 100 °C durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con agua, se seco sobre Na2SO4, se concentro al vaclo para dar (1s,4s)-4-azidociclohexilcarbamato de bencilo (0,819 g).A mixture of methanesulfonate of (1R, 4R) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexyl (1.13 g, 3.46 mmol) and NaN3 (0.674 g, 10.4 mmol) in DMF (10 ml) was stirred at 100 ° C for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with water, dried over Na2SO4, concentrated in vacuo to give benzyl (1s, 4s) -4-azidocyclohexylcarbamate (0.819 g).

A una solucion de (1s,4s)-4-azidociclohexilcarbamato de bencilo (0,410 g, 1,50 mmol) en THF (8 ml) y H2O (0,100 ml, 5,56 mmol) a temperatura ambiente, se le anadio Ph3P (0,590 g, 2,25 mmol). La solucion se agito a 70 °C durante 20 h. Se anadieron EtOAc y HCl 1 N. La fase acuosa se separo, se lavo con EtOAc. Despues, se acidifico con NaOH 5 N a pH 12. El producto de amina libre se extrajo con EtOAc. La solucion de EtOAc se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vaclo para dar (1s,4s)-4-aminociclohexilcarbamato de bencilo (0,270 g).To a solution of (1s, 4s) -4-benzyl azidocyclohexylcarbamate (0.410 g, 1.50 mmol) in THF (8 ml) and H2O (0.100 ml, 5.56 mmol) at room temperature, Ph3P ( 0.590 g, 2.25 mmol). The solution was stirred at 70 ° C for 20 h. EtOAc and 1 N HCl were added. The aqueous phase was separated, washed with EtOAc. Then, it was acidified with 5 N NaOH at pH 12. The free amine product was extracted with EtOAc. The EtOAc solution was dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give benzyl (1s, 4s) -4-aminocyclohexylcarbamate (0.270 g).

Una mezcla de 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,241 g, 1,09 mmol), (1s,4s)-4-aminociclohexilcarbamato de bencilo (0,270 g, 1,09 mmol) y trietilamina (0,300 ml, 2,16 mmol) en CH3CN (10 ml) se agito a temperatura ambiente durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4, y se concentro al vaclo para dar 4-((1s,4s)-4- (benciloxicarbonil)ciclohexilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,458 g).A mixture of ethyl 2,4-dichloropyrimidin-5-carboxylate (0.241 g, 1.09 mmol), (1s, 4s) -4-aminocyclohexylcarbamate of benzyl (0.270 g, 1.09 mmol) and triethylamine (0.300 ml, 2.16 mmol) in CH3CN (10 ml) was stirred at room temperature for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4, and concentrated in vacuo to give 4 - ((1s, 4s) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexylamino) -2 -ethyl chloropyrimidin-5-carboxylate (0.458 g).

A una solucion de 4-((1s,4s)-4-(benciloxicarbonil)ciclohexilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,458 g, 1,06 mmol) en THF (5 ml) se le anadio LiOH ac. 1 N (1,16 ml, 1,16 mmol). Despues de agitarse durante 3 h, se le anadio agua (10 ml). La solucion se acidifico con HCl 1 N (2 ml) a pH 1-2. El producto se extrajo con EtOAc. LaTo a solution of ethyl 4 - ((1s, 4s) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylate (0.458 g, 1.06 mmol) in THF (5 ml) was added LiOH aq . 1 N (1.16 ml, 1.16 mmol). After stirring for 3 h, water (10 ml) was added. The solution was acidified with 1 N HCl (2 ml) at pH 1-2. The product was extracted with EtOAc. The

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

solucion de EtOAc se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar acido 4-((1s,4s)-4- (benciloxicarbonil)ciclohexilamino)-2-cloropirimidin-5-carbox[lico en forma de un solido (0,409 g).EtOAc solution was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give acid 4 - ((1s, 4s) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxy [lico as a solid (0.409 g).

A una solucion de acido 4-((1s,4s)-4-(benciloxicarbonil)ciclohexilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxflico (0,409 g, 1,01 mmol) y HOBt (0,232 g, 1,52 mmol) en DMF (5 ml) se le anadio EDC (0,291 g, 1,52 mmol). Despues de agitarse durante 2 h, se anadio NH3 (0,5 M en dioxano, 6,0 ml, 3,00 mmol). La mezcla se agito durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar (1s,4s)-4-(2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4- ilamino)ciclohexilcarbamato de bencilo en forma de un solido (0,440 g).To a solution of acid 4 - ((1s, 4s) -4- (benzyloxycarbonyl) cyclohexylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylic acid (0.409 g, 1.01 mmol) and HOBt (0.232 g, 1.52 mmol) in DMF (5 ml) EDC (0.291 g, 1.52 mmol) was added. After stirring for 2 h, NH3 (0.5 M in dioxane, 6.0 ml, 3.00 mmol) was added. The mixture was stirred for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give (1s, 4s) -4- (2- (1H-benzo [d] [ 1,2,3] triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4- ylamino) benzyl cyclohexylcarbamate in the form of a solid (0.440 g).

Una mezcla de (1s,4s)-4-(2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)ciclohexilcarbamato de bencilo (0,220 g, 0,438 mmol), 1-(4-(4-aminofenil)piperazin-1-il)etanona (0,192 g, 0,877 mmol) y pTsOH monohidrato (0,083 g, 0,437 mmol) en dioxano (4 ml) se agito a 100 °C durante 3 h. Despues, la mezcla se purifico por HPLC para dar (1s,4s)-4-(2-(4-(4-acetilpiperazin-1 -il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)ciclohexilcarbamato de bencilo (0,123 g).A mixture of (1s, 4s) -4- (2- (1H-benzo [d] [1,2,3] triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) benzyl cyclohexylcarbamate (0.220 g, 0.438 mmol), 1- (4- (4-aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (0.192 g, 0.877 mmol) and pTsOH monohydrate (0.083 g, 0.437 mmol) in dioxane (4 ml) was stirred at 100 ° C for 3 h. Then, the mixture was purified by HPLC to give (1s, 4s) -4- (2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) benzyl cyclohexylcarbamate (0.123 g ).

Una mezcla de (1 s,4s)-4-(2-(4-(4-acetilpiperazin-1 -il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)ciclohexilcarbamato de bencilo (0,123 g, 0,21 mmol) y Pd-C (10 %, 40 mg) en MeOH (5 ml, que contenfa tres gotas de HCl 6 N), se hidrogeno en un globo de H2 durante 4 h. La mezcla se filtro a traves de celite, y el filtrado se concentro al vacfo para dar el compuesto del tftulo en forma de un solido. MS 453,45 (M+H).A mixture of (1 s, 4s) -4- (2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) benzyl cyclohexylcarbamate (0.123 g, 0.21 mmol) and Pd-C (10%, 40 mg) in MeOH (5 ml, which contained three drops of 6 N HCl), was hydrogenated in an H2 balloon for 4 h. The mixture was filtered through celite, and the filtrate was concentrated in vacuo to give the title compound as a solid. MS 453.45 (M + H).

Ejemplo de referencia 42. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(piperidin-4-ilmetilamino)pirimidin-5-carboxamidaReference Example 42. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (piperidin-4-ylmethylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen37image37

Una mezcla de 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,221 g, 1,00 mmol), clorhidrato de 1-Boc-4- aminometilpiperidina (0,251 g, 1,00 mmol) y trietilamina (0,556 ml, 4,00 mmol) en CH3CN (10 ml) se agito a temperatura ambiente durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar 4-((1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-4-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,390 g).A mixture of ethyl 2,4-dichloropyrimidin-5-carboxylate (0.221 g, 1.00 mmol), 1-Boc-4- aminomethylpiperidine hydrochloride (0.251 g, 1.00 mmol) and triethylamine (0.556 ml, 4, 00 mmol) in CH3CN (10 ml) was stirred at room temperature for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 4 - ((1- (tert-butoxycarbonyl) piperidin-4-yl) methylamino) Ethyl -2-chloropyrimidin-5-carboxylate (0.390 g).

A una solucion de 4-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,390 g, 0,979 mmol) en THF (5 ml) se le anadio LiOH ac. 1 N (1,10 ml, 1,10 mmol). Despues de agitarse durante 20 h, se anadio agua (10 ml). La solucion se acidifico con HCl 1 N (2 ml) a pH 1-2. El producto se extrajo con EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar acido 4-((1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-4-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxflico en forma de un solido (0,353 g).To a solution of ethyl 4 - ((1- (tert-butoxycarbonyl) piperidin-4-yl) methylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylate (0.390 g, 0.979 mmol) in THF (5 mL) LiOH was added ac. 1 N (1.10 ml, 1.10 mmol). After stirring for 20 h, water (10 ml) was added. The solution was acidified with 1 N HCl (2 ml) at pH 1-2. The product was extracted with EtOAc. The EtOAc solution was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 4 - ((1- (tert-butoxycarbonyl) piperidin-4-yl) methylamino) -2-chloropyrimidine-5-carboxylic acid as of a solid (0.353 g).

A una solucion de acido 4-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxflico (0,353 g, 0,953 mmol) y HOBt (0,219 g, 1,43 mmol) en DMF (5 ml) se le anadio EDC (0,274 g, 1,43 mmol). Despues de agitarse durante 1 h, se anadio NH3 (0,5 M en dioxano, 5,5 ml, 2,75 mmol). La mezcla se agito durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar 4-((2-(1H-benzo [d] [1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4- ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo en forma de un solido (0,410 g).To a solution of 4 - ((1- (tert-butoxycarbonyl) piperidin-4-yl) methylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylic acid (0.353 g, 0.953 mmol) and HOBt (0.219 g, 1.43 mmol) in DMF (5 ml) EDC (0.274 g, 1.43 mmol) was added. After stirring for 1 h, NH3 (0.5 M in dioxane, 5.5 ml, 2.75 mmol) was added. The mixture was stirred for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 4 - ((2- (1H-benzo [d] [1,2,3 ] tert-butyl triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4- ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylate as a solid (0.410 g).

Una mezcla de 4-((2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (0,205 g, 0,438 mmol), 1-(4-(4-aminofenil)piperazin-1-il)etanona (0,192 g, 0,877 mmol) y pTsOHA mixture of tert-butyl 4 - ((2- (1 H -benzo [d] [1,2,3] triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylate ( 0.205 g, 0.438 mmol), 1- (4- (4-aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (0.192 g, 0.877 mmol) and pTsOH

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

monohidrato (0,166 g, 0,874 mmol) en dioxano (4 ml) se agito a 100 °C durante 3 h. Despues, la mezcla se purifico por HPLC para dar 4-((2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (0,105 g).monohydrate (0.166 g, 0.874 mmol) in dioxane (4 ml) was stirred at 100 ° C for 3 h. Then, the mixture was purified by HPLC to give 4 - ((2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (0.105 g).

Una solucion de 4-((2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (0,105 g, 0,190 mmol) en TFA (2 ml) se agito a temperatura ambiente durante 4 h. El TFA se retiro al vacio. El residuo se purifico por HPLC para dar el compuesto del titulo (90 mg). MS 453,41 (M+H).A solution of tert-butyl 4 - ((2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylate (0.105 g, 0.195 mmol) in TFA (2 ml) it was stirred at room temperature for 4 h. The TFA was removed in vacuo. The residue was purified by HPLC to give the title compound (90 mg). MS 453.41 (M + H).

Ejemplo de referencia 48. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(piperidin-3-ilmetilamino)pirimidin-5-carboxamidaReference Example 48. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (piperidin-3-ylmethylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen38image38

Una mezcla de 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,221 g, 1,00 mmol), 3-aminometil-1-N-CBz-piperidina (0,248 g, 1,00 mmol) y trietilamina (0,300 ml, 2,15 mmol) en CH3CN (10 ml) se agito a temperatura ambiente durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacio para dar 4-((1-(benciloxicarbonil)piperidin-3-il)metilamino)-2- cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,382 g).A mixture of ethyl 2,4-dichloropyrimidin-5-carboxylate (0.221 g, 1.00 mmol), 3-aminomethyl-1-N-CBz-piperidine (0.248 g, 1.00 mmol) and triethylamine (0.300 ml, 2.15 mmol) in CH3CN (10 ml) was stirred at room temperature for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 4 - ((1- (benzyloxycarbonyl) piperidin-3-yl) methylamino) -2 - ethyl chloropyrimidin-5-carboxylate (0.382 g).

A una solucion de 4-((1-(benciloxicarbonil)piperidin-3-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (0,382 g, 0,88 mmol) en THF (5 ml) se le anadio LiOH ac. 1 N (1,00 ml, 1,00 mmol). Despues de agitarse durante 20 h, se anadio agua (10 ml). La solucion se acidifico con HCl 1 N (2 ml) a pH 1-2. El producto se extrajo con EtOAc. La solucion de EtOAc se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacio para dar acido 4-((1- (benciloxicarbonil)piperidin-3-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilico (0,350 g).To a solution of ethyl 4 - ((1- (benzyloxycarbonyl) piperidin-3-yl) methylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylate (0.382 g, 0.88 mmol) in THF (5 mL) LiOH was added ac. 1 N (1.00 ml, 1.00 mmol). After stirring for 20 h, water (10 ml) was added. The solution was acidified with 1 N HCl (2 ml) at pH 1-2. The product was extracted with EtOAc. The EtOAc solution was washed with brine, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 4 - ((1- (benzyloxycarbonyl) piperidin-3-yl) methylamino) -2-chloropyrimidine-5-carboxylic acid (0.350 g) .

A una solucion de acido 4-((1-(benciloxicarbonil)piperidin-3-il)metilamino)-2-cloropirimidin-5-carboxilico (0,350 g, 0,87 mmol) y HOBt (0,200 g, 1,31 mmol) en DMF (5 ml) se le anadio EDC (0,250 g, 1,30 mmol). Despues de agitarse durante 1 h, se anadio NH3 (0,5 M en dioxano, 6,0 ml, 3,0 mmol). La mezcla se agito durante 20 h. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacio para dar 3-((2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4- ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de bencilo (0,404 g).To a solution of 4 - ((1- (benzyloxycarbonyl) piperidin-3-yl) methylamino) -2-chloropyrimidin-5-carboxylic acid (0.350 g, 0.87 mmol) and HOBt (0.200 g, 1.31 mmol) in DMF (5 ml) EDC (0.250 g, 1.30 mmol) was added. After stirring for 1 h, NH3 (0.5 M in dioxane, 6.0 ml, 3.0 mmol) was added. The mixture was stirred for 20 h. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 3 - ((2- (1H-benzo [d] [1,2,3 ] triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4- ylamino) methyl) benzyl piperidine-1-carboxylate (0.404 g).

Una mezcla de 3-((2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de bencilo (0,404 g, 0,805 mmol), 1-(4-(4-aminofenil)piperazin-1-il)etanona (0,220 g, 1,00 mmol) y pTsOH monohidrato (0,167 g, 0,879 mmol) en dioxano (8 ml) se agito a 100 °C durante 3 h. Despues, la mezcla se purifico por HPLC para dar 3-((2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de bencilo 45 (0,270 g).A mixture of 3- ((2- (1 H -benzo [d] [1,2,3] triazol-1-yloxy) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) benzyl piperidine-1-carboxylate (0.404 g , 0.805 mmol), 1- (4- (4-aminophenyl) piperazin-1-yl) ethanone (0.220 g, 1.00 mmol) and pTsOH monohydrate (0.167 g, 0.879 mmol) in dioxane (8 ml) was stirred at 100 ° C for 3 h. Then, the mixture was purified by HPLC to give 3- ((2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylic acid benzyl 45 ( 0.270 g).

Una mezcla de 3-((2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-5-carbamoilpirimidin-4-ilamino)metil)piperidin-1-carboxilato de bencilo (90 mg, 0,15 mmol) y Pd-C (10 %, 30 mg) en MeOH (10 ml, que contenia 4 gotas de HCl 6 N) se hidrogeno en un globo de H2 durante 4 h. La mezcla se filtro a traves de celite. El filtrado se concentro al vacio para dar el compuesto del titulo 46 (56 mg). MS 453,45 (M+H).A mixture of 3 - ((2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -5-carbamoylpyrimidin-4-ylamino) methyl) piperidine-1-carboxylate benzyl (90 mg, 0.15 mmol) and Pd-C (10%, 30 mg) in MeOH (10 ml, containing 4 drops of 6 N HCl) is hydrogenating in an H2 balloon for 4 h. The mixture was filtered through celite. The filtrate was concentrated in vacuo to give the title compound 46 (56 mg). MS 453.45 (M + H).

Ejemplo de referencia 51. (S)-2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(1-hidroxipropan-2-ilamino)pirimidin-5- carboxamidaReference example 51. (S) -2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (1-hydroxypropan-2-ylamino) pyrimidin-5- carboxamide

imagen39image39

Etapa 1: La conversion de dicloropirimida 1.4 en tiometilo 49.1 se realizo usando un procedimiento similar al descrito en Synthesis and evaluation of 2-{[2-(4-hydroxyphenyl)-ethyl]amino)pyrimidine-5-carboxamide derivatives como 5 novel STAT6 inhibitors. Nagashima, Shinya; Yokota, Masaki; Nakai, Ei-ichi; Kuromitsu, Sadao; Ohga, Keiko; Takeuchi, Makoto; Tsukamoto, Shin-ichi; Ohta, Mitsuaki. Institute for Drug Discovery Research, Astellas Pharm Inc., Yodogawa-ku, Osaka, Japan. Bioorganic & Medicinal Chemistry (2007), 15(2), 1044-1055.Stage 1: The conversion of dichloropyrimide 1.4 to thiomethyl 49.1 was performed using a procedure similar to that described in Synthesis and evaluation of 2 - {[2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] amino) pyrimidine-5-carboxamide derivatives as 5 novel STAT6 inhibitors Nagashima, Shinya; Yokota, Masaki; Nakai, Ei-ichi; Kuromitsu, Sadao; Ohga, Keiko; Takeuchi, Makoto; Tsukamoto, Shin-ichi; Ohta, Mitsuaki. Institute for Drug Discovery Research, Astellas Pharm Inc., Yodogawa-ku, Osaka, Japan. Bioorganic & Medicinal Chemistry (2007), 15 (2), 1044-1055.

Las Etapas 2 - 4 se realizaron usando procedimientos similares a los descritos en el Ejemplo 1.Stages 2-4 were performed using procedures similar to those described in Example 1.

1010

Etapa 5: El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 25, Etapa 2. MS encontrado para C20H27N7O3 como (M+H)+414,4.Step 5: The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 25, Step 2. MS found for C20H27N7O3 as (M + H) +414.4.

Ejemplo 55 2-(4-(4-acetil-2-carbamoilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida 15Example 55 2- (4- (4-Acetyl-2-carbamoylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen40image40

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1, usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y acido piperazincarboxflico Boc protegido en lugar de acetilpiperazina. 20 MS encontrado para C21H26N8O3 como (M+H)+439,4.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1, using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and protected Boc piperazinecarboxylic acid instead of acetylpiperazine. 20 MS found for C21H26N8O3 as (M + H) +439.4.

Ejemplo 56. (R)-2-(4-(4-acetil-3-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 56. (R) -2- (4- (4-acetyl-3-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen41image41

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 61. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(1-carbamoilciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 61. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (1-carbamoylcyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen42image42

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1. MS encontrado para C21H26N8O3 como (M+H)+439,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1. MS found for C21H26N8O3 as (M + H) +439.3.

Ejemplo 63. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-((1R,2R)-2-carbamoilciclopentilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 63. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4 - ((1R, 2R) -2-carbamoylcyclopentylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen43image43

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 51 usando una amina preparada usando el procedimiento de An Efficient Route to Either Enantiomer of trans-2- Aminocyclopentanecarboxylic Acid. LePlae, P. R.; Umezawa, N.; Lee, H.-S.; Gellman, S. H. J. Org. Chem.; (Note); 2001; 66(16); 5629-5632. MS encontrado para C23H30N8O3 como (M+H)+467,4. UV: A = 202,258.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 51 using an amine prepared using the An Efficient Route to Either Enantiomer of trans-2- Aminocyclopentanecarboxylic Acid procedure. LePlae, P. R .; Umezawa, N .; Lee, H.-S .; Gellman, S. H. J. Org. Chem .; (Note); 2001; 66 (16); 5629-5632. MS found for C23H30N8O3 as (M + H) +467.4. UV: A = 202,258.

Ejemplo 64. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(-2-trans-fenilciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 64. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4 - (- 2-trans-phenylcyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen44image44

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 51. MS encontrado para C26H29N7O2 como (M+H)+ 472,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 51. MS found for C26H29N7O2 as (M + H) + 472.3.

Ejemplo 70. 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-((1R,3R)-3-carbamoilciclopentilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 70. 2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4 - ((1R, 3R) -3-carbamoylcyclopentylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen45image45

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 51 usando un acido (1,R, 3R)-3-aminociclopentanocarboxllico Boc protegido derivado de amina. MS encontrado para C23H30N8O3 como (M+H)+467,4.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 51 using a protected amine-derived Boc (3, R, 3R) -3-aminocyclopentanecarboxylic acid (1, R, 3R). MS found for C23H30N8O3 as (M + H) +467.4.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 74. (R)-2-(4-(4-acetil-2-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 74. (R) -2- (4- (4-acetyl-2-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen46image46

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C21H27N7O2 como (M+H)+ 410,4. UV: A = 209,265.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C21H27N7O2 as (M + H) + 410.4. UV: A = 209,265.

Ejemplo 93. 2-(6-(4-acetilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 93. 2- (6- (4-acetylpiperazin-1-yl) pyridin-3-ylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen47image47

El compuesto anterior se preparo usando un intermedio sintetizado como se ha descrito en el Esquema 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina, y 1-(4-(5-aminopiridin-2-il)piperazin-1-il)etanona (preparada a partir de 1-acetilpiperazina y 2-cloro-5-nitropiridina en dos etapas). MS encontrado para Ci9H24NsO2 como (M+H)+ 397,0. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 5 8,62 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,08 (s ancho, 1H), 7,17 (d, 1H) 3,64 - 3,78 (m, 8H), 2,98 (n, 1H), 2,15 (s, 3H), 0,96 (m, 2H), 0,70 (m, 2H).The above compound was prepared using an intermediate synthesized as described in Scheme 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine, and 1- (4- (5-aminopyridin-2-yl) piperazin-1-yl) ethanone (prepared from of 1-acetylpiperazine and 2-chloro-5-nitropyridine in two stages). MS found for Ci9H24NsO2 as (M + H) + 397.0. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): 5 8.62 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.08 (wide s, 1H), 7.17 (d, 1H) 3.64 - 3.78 (m, 8H), 2.98 (n, 1H), 2.15 (s, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.70 (m, 2H).

Ejemplo 96. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(1-(metilsulfonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)fenilamino)pirimidin-5- carboxamidaExample 96. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (1- (methylsulfonyl) -1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl) phenylamino) pyrimidin-5- carboxamide

imagen48image48

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C20H24N6O3S como (M+H)+ 429,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C20H24N6O3S as (M + H) + 429.3.

Ejemplo 97. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 97. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (1- (methylsulfonyl) piperidin-4-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen49image49

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C20H26N6O3 como (M+H)+ 431,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C20H26N6O3 as (M + H) + 431.3.

Ejemplo 99. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 99. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen50image50

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 100a. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 100a. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (ethylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen51image51

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1, usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C20H27N7O3S como (M+H)+ 446,2. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 5 8,37 (s, 1H), 7,59 (s ancho, 2H), 7,09 (d, 2H), 3,45 (m, 4H), 3,50 (m, 4H), 3,12 (c, 2H), 3,07 (m, 1H), 1,35 (t, 3H), 0,93 (m, 2H), 0,73 (m, 2H). UV: A = 275.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1, using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C20H27N7O3S as (M + H) + 446.2. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): 5 8.37 (s, 1H), 7.59 (wide s, 2H), 7.09 (d, 2H), 3.45 (m, 4H), 3.50 (m, 4H), 3.12 (c, 2H), 3.07 (m, 1H), 1.35 (t, 3H), 0.93 (m, 2H), 0.73 (m, 2H) . UV: A = 275.

Ejemplo 100b. 4-(ciclobutilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 100b 4- (cyclobutylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen52image52

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1. MS encontrado para C20H27N7O3S como (M+H)+446,0.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 1. MS found for C20H27N7O3S as (M + H) +446.0.

Ejemplo 113. 2-(4-(1-acetilpiperidin-4-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 113. 2- (4- (1-acetylpiperidin-4-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen53image53

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C21H26N6O2 como (M+H)+ 395,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C21H26N6O2 as (M + H) + 395.3.

Ejemplo 114. (ciclopropilamino)-2-(4-(4-(pirrolidin-1-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 114. (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (pyrrolidin-1-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen54image54

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y una anilina obtenida a partir de 4-fluoronitrobenceno e isonipecotato de etilo. mS encontrado para C24H30N7O2 como (M+H)+450,3. UV: A = 271.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and an aniline obtained from 4-fluoronitrobenzene and ethyl isonipecotate. mS found for C24H30N7O2 as (M + H) +450.3. UV: A = 271.

Ejemplo 115. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(piperidin-1-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 115. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (piperidin-1-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen55image55

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 116. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(morfolin-4-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 116. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (morpholin-4-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen56image56

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y una anilina obtenida a partir de 4-fluoronitrobenceno e isonipecotato de etilo. mS encontrado para C24H31N7O3 como (M+H)+466,3. UV: A = 201,230, 285.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and an aniline obtained from 4-fluoronitrobenzene and ethyl isonipecotate. mS found for C24H31N7O3 as (M + H) +466.3. UV: A = 201,230, 285.

Ejemplo 117. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(ciclopropilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 117. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (cyclopropylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen57image57

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1. MS encontrado para C21H27N7O3S como (M+H)+458,2. UV: A = 201,231,282.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1. MS found for C21H27N7O3S as (M + H) +458.2. UV: A = 201,231,282.

Ejemplo 118. 2-(4-(4-acetil-1,4-diazepan-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 118. 2- (4- (4-acetyl-1,4-diazepan-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen58image58

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1. MS encontrado para C21H27N7O2 como (M+H)+410,2. UV: A = 234, 258.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1. MS found for C21H27N7O2 as (M + H) +410.2. UV: A = 234, 258.

Ejemplo 119. 2-(4-(4-acetamidopiperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 119. 2- (4- (4-acetamidopiperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen59image59

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando una anilina obtenida a partir de 4-Boc aminopiperidina y 4-fluoronitrobenceno que se convirtio en el acetilo despues de desproteccion Boc, despues el grupo nitro se redujo para dar la anilina usando hidrogenacion. MS encontrado para C21H27N7O2 como (M+H)+ 410,2.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using an aniline obtained from 4-Boc aminopiperidine and 4-fluoronitrobenzene which became acetyl after Boc deprotection, after which the nitro group was reduced to give aniline using hydrogenation. MS found for C21H27N7O2 as (M + H) + 410.2.

Ejemplo 120. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(2-oxopiridin-1(2H)-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 120. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (2-oxopyridin-1 (2H) -yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen60image60

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

Ejemplo 121.4-(ciclopropilamino)-2-(4-dioxotiomorfolinofenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 121.4- (cyclopropylamino) -2- (4-dioxothiomorpholinophenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen61image61

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1. MS encontrado para C18H22N6O2S como (M+H)+ 403,2.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1. MS found for C18H22N6O2S as (M + H) + 403.2.

Ejemplo 122. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(2-metoxietil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 122. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (2-methoxyethyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen62image62

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y una anilina obtenida a partir de 4-fluoronitrobenceno y 1- metoxietilpiperazina en dos etapas. MS encontrado para C21H29N7O2 como (M+H)+ 412,0.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and an aniline obtained from 4-fluoronitrobenzene and 1- methoxyethylpiperazine in two steps. MS found for C21H29N7O2 as (M + H) + 412.0.

Ejemplo 124. 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(N-metilacetamido)piperidin-1 -il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 124. 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (N-methylacetamide) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

HH

HH

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 usando ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y una anilina descrita previamente con la metilacion del grupo N-acetilo (CH3I, Cs2CO3, DMF) realizandose antes de la etapa de reduccion nitro. MS encontrado para C22H29N7O2 como (M+H)+424,2The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 using cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and an aniline previously described with the methylation of the N-acetyl group (CH3I, Cs2CO3, DMF) being performed before the nitro reduction step. MS found for C22H29N7O2 as (M + H) +424.2

Ejemplo 135. 2-(4-(4-(aminometil)piperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 135. 2- (4- (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen63image63

imagen64image64

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C20H27N7O como (M+H)+ 382,5.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C20H27N7O as (M + H) + 382.5.

Ejemplo de referencia 151. 4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)-2-(4-(2-(pirrolidin-1-il)etoxi)fenilamino)pirimidin-5- carboxamidaReference Example 151. 4- (1-methyl-1H-indol-4-ylamino) -2- (4- (2- (pyrrolidin-1-yl) ethoxy) phenylamino) pyrimidin-5- carboxamide

imagen65image65

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

imagen66image66

Etapa 1: A una solution de 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (328 mg, 1,48 mmol) y 1-metil-1H-indol-4-amina (260 mg, 1,78 mmol) en CH3CN (6 ml) a temperatura ambiente, se ale anadio DIEA (0,4 ml, 2,22 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 24 h. Se anadio agua (15 ml) para inducir la precipitation. El precipitado se recogio y se seco al vacfo para dar 2-cloro-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino) pirimidin-5-carboxilato de etilo en forma de un solido.Step 1: To a solution of ethyl 2,4-dichloropyrimidin-5-carboxylate (328 mg, 1.48 mmol) and 1-methyl-1H-indole-4-amine (260 mg, 1.78 mmol) in CH3CN (6 ml) at room temperature, DIEA (0.4 ml, 2.22 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 24 h. Water (15 ml) was added to induce precipitation. The precipitate was collected and dried in vacuo to give ethyl 2-chloro-4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) pyrimidin-5-carboxylate as a solid.

Etapa 2: A una solution de 2-cloro-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino) pirimidin-5-carboxilato de etilo (en bruto de la etapa 1) en THF (4 ml), se le anadio LioH ac. 1 N (2,25 ml, 2,25 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante una noche. Tras la acidification de la mezcla con HCl 1 N, se retiraron por precipitation solidos de color blanco, que se recogieron, y se secaron al vacfo para dar acido 2-cloro-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)pirimidin-5- carboxflico (325 mg). MS 303,3, 305,3 (M+H, patron Cl)Step 2: To a solution of ethyl 2-chloro-4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) pyrimidin-5-carboxylate (crude from step 1) in THF (4 ml), added LioH ac. 1 N (2.25 ml, 2.25 mmol). The mixture was stirred at room temperature overnight. After acidification of the mixture with 1N HCl, white solids were precipitated by precipitation, which were collected, and dried in vacuo to give 2-chloro-4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino acid) ) pyrimidin-5-carboxylic acid (325 mg). MS 303.3, 305.3 (M + H, Cl pattern)

Etapa 3: A una solution de acido 2-cloro-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)pirimidin-5-carboxflico (325 mg, 1,08 mmol) y HOBt (198 mg, 1,29 mmol) en DMF (4 ml) se le anadio EDC (248 mg, 1,29 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1,5 h. Se anadio amoniaco (0,5 M en dioxano, 8,00 ml, 4,00 mmol). Se agito a temperatura ambiente durante una noche. Se anadieron agua y EtOAc. La fase organica se separo, se lavo con HCl 1 N, despues con NaHCO3 al 5 %, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vacfo para dar 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1- iloxi)-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)pirimidin-5-carboxamida (378 mg). MS 401,4 (M+H)Step 3: To a solution of 2-chloro-4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) pyrimidin-5-carboxylic acid (325 mg, 1.08 mmol) and HOBt (198 mg, 1.29 mmol) in DMF (4 ml) EDC (248 mg, 1.29 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 1.5 h. Ammonia (0.5 M in dioxane, 8.00 ml, 4.00 mmol) was added. It was stirred at room temperature overnight. Water and EtOAc were added. The organic phase was separated, washed with 1 N HCl, then with 5% NaHCO3, dried over Na2SO4 and concentrated in vacuo to give 2- (1H-benzo [d] [1,2,3] triazol-1 - yloxy) -4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) pyrimidin-5-carboxamide (378 mg). MS 401.4 (M + H)

Etapa 4: A una solution de 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-iloxi)-4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)pirimidin-5-carboxamida (62 mg, 0,15 mmol) en NMP (1 ml) se le anadieron 4-(2-(pirrolidin-1-il)etoxi)anilina (31 mg, 0,15 mmol) y acido p- toluenosulfonico hidrato (28 mg, 0,15 mmol). Se calento a 100 °C durante 4 h, y se purifico por HPLC preparativa para dar 4-(1-metil-1H-indol-4-ilamino)-2-(4-(2-(pirrolidin-1-il)etoxi)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida (32 mg). MS encontrado para C26H29N7O2 como (M+H)+ 472,4. UV: A = 216,9, 257,0.Step 4: To a solution of 2- (1H-benzo [d] [1,2,3] triazol-1-yloxy) -4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) pyrimidin-5-carboxamide (62 mg, 0.15 mmol) in NMP (1 ml) 4- (2- (pyrrolidin-1-yl) ethoxy) aniline (31 mg, 0.15 mmol) and p-toluenesulfonic acid hydrate (28) were added mg, 0.15 mmol). It was heated at 100 ° C for 4 h, and purified by preparative HPLC to give 4- (1-methyl-1H-indole-4-ylamino) -2- (4- (2- (pyrrolidin-1-yl) ethoxy ) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide (32 mg). MS found for C26H29N7O2 as (M + H) + 472.4. UV: A = 216.9, 257.0.

Ejemplo 189. 2-(4-(1 -acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 189. 2- (4- (1-Acetyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen67image67

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina. MS encontrado para C21H24N6O2 como (M+H)+ 393,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine. MS found for C21H24N6O2 as (M + H) + 393.3.

Ejemplo 190. (R)-4-(ciclopropilamino)-2-(4-(2-(metoximetil)pirrolidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 190. (R) -4- (cyclopropylamino) -2- (4- (2- (methoxymethyl) pyrrolidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

imagen68image68

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y usando una anilina preparada en dos etapas a partir de 4-fluoronitrobenceno y (R)-2- metoximetilpirrolidina. MS encontrado para C20H26N6O2 como (M+H)+383,3.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and using an aniline prepared in two steps from 4-fluoronitrobenzene and (R) -2-methoxymethylpyrrolidine. MS found for C20H26N6O2 as (M + H) +383.3.

Ejemplo 191. (S)-4-(ciclopropilamino)-2-(4-(2-(metoximetil)pirrolidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 191. (S) -4- (cyclopropylamino) -2- (4- (2- (methoxymethyl) pyrrolidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen69image69

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 190 usando (S)-2- metoximetilpirrolidina en lugar del isomero (R). MS encontrado para C20H26N6O2 como (M+H)+383,3. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz): 5 8,21 (s, 1H), 7,38 (s ancho, 2H), 6,78 (d, 2H), 3,89 (m, 1H), 3,49 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,18 (m, 2H), 3,03 (m, 1H), 2,03 (m, 4H), 0,93 (m, 2H), 0,72 (m, 2H).The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Example 190 using (S) -2-methoxymethylpyrrolidine instead of the isomer (R). MS found for C20H26N6O2 as (M + H) +383.3. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): 5 8.21 (s, 1H), 7.38 (wide s, 2H), 6.78 (d, 2H), 3.89 (m, 1H), 3.49 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.18 (m, 2H), 3.03 (m, 1H), 2.03 (m, 4H), 0.93 (m, 2H) , 0.72 (m, 2H).

Ejemplo 196 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)-1,4-diazepan-1 -il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamidaExample 196 4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) -1,4-diazepan-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide

imagen70image70

El compuesto anterior se preparo usando un procedimiento similar al descrito en el Esquema 1 con ciclopropilamina en lugar de ciclobutilamina y una anilina obtenida a partir de homopiperazina Boc protegida y 4-fluoronitrobenceno. MS encontrado para C20H27N7O3S como (M+H)+ 446,2.The above compound was prepared using a procedure similar to that described in Scheme 1 with cyclopropylamine instead of cyclobutylamine and an aniline obtained from protected Boc homopiperazine and 4-fluoronitrobenzene. MS found for C20H27N7O3S as (M + H) + 446.2.

Ejemplo 332Example 332

Este ejemplo ilustra los metodos para la evaluacion de los compuestos de la invencion, junto con los resultados obtenidos para tales ensayos. Las actividades de syk in vitro e in vivo de los compuestos de la invencion se pueden determinar mediante diversos procedimientos conocidos en la tecnica, tales como una prueba para su capacidad de inhibir la actividad de syk en plasma humano. Las potentes afinidades para la inhibition de syk humana mostradas por los compuestos de la invencion, se puede medir mediante un valor de CI50 (en nM). El valor de la CI50 es la concentration (en nM) del compuesto necesaria para proporcionar el 50 % de inhibicion de la actividad proteolftica de syk humana. Cuanto menor es el valor CI50, mas activo (potente) es un compuesto para inhibir la actividad de syk.This example illustrates the methods for the evaluation of the compounds of the invention, together with the results obtained for such tests. The in vitro and in vivo syk activities of the compounds of the invention can be determined by various methods known in the art, such as a test for their ability to inhibit syk activity in human plasma. The potent affinities for the inhibition of human syk shown by the compounds of the invention can be measured by a value of IC50 (in nM). The IC50 value is the concentration (in nM) of the compound necessary to provide 50% inhibition of the human syk proteolytic activity. The lower the IC50 value, the more active (potent) a compound is to inhibit the activity of syk.

Un ensayo in vitro para detectar y medir la actividad de inhibicion frente a syk es como sigue:An in vitro assay to detect and measure inhibition activity against syk is as follows:

Inhibicion de la actividad de fosforilacion de tirosinas de sykInhibition of syk tyrosine phosphorylation activity

La potencia de las moleculas candidatas para inhibir la actividad de fosforilacion de tirosinas de syk se evalua midiendo la capacidad de un compuesto de prueba para inhibir la fosforilacion de tirosinas mediada por syk de un sustrato especffico de syk.The potency of candidate molecules to inhibit syk tyrosine phosphorylation activity is evaluated by measuring the ability of a test compound to inhibit syk-mediated tyrosine phosphorylation of a specific syk substrate.

La actividad de fosforilacion de tirosinas de SYK se mide utilizando la Tecnologfa LANCE™ desarrollada por Perkin Elmer Life and Analytical Sciences (Boston, MA). LANCE™ se refiere a aplicaciones de fluorometrfa homogenea resuelta en el tiempo utilizando tecnicas tales como el ensayo de transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) (para los procedimientos vease en general la Nota de Aplicacion de Perkin Elmer - How to Optimize a Tyrosina Kinase Assay Using Time Resolved Fluorescence-Based LANCEThe tyrosine phosphorylation activity of SYK is measured using LANCE ™ Technology developed by Perkin Elmer Life and Analytical Sciences (Boston, MA). LANCE ™ refers to applications of time-resolved homogeneous fluorometry using techniques such as the time-resolved fluorescence resonance energy transfer assay (TR-FRET) (for procedures see in general the Perkin Elmer Application Note - How to Optimize a Tyrosina Kinase Assay Using Time Resolved Fluorescence-Based LANCE

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Detection, w
www.perkinelmer.com/lifesciences). El principio del ensayo implica la deteccion de un sustrato fosforilado utilizando transferencia de energia de un anticuerpo marcado con europio fosfoespecifico a estreptavidina-aloficocianina como receptor.Detection, w
www.perkinelmer.com/lifesciences). The principle of the assay involves the detection of a phosphorylated substrate using energy transfer of a phospho-specific europium-labeled antibody to streptavidin-allophycocyanin as a receptor.

Para analizar la capacidad de las moleculas candidatas para inhibir la actividad de fosforilacion de tirosinas de SYK, las moleculas se reconstituyen en DMSO al 30 % y se diluyen en serie 1:3 con la dilucion final conteniendo DMSO en ausencia de la molecula candidata. La concentracion final de DMSO en el ensayo es del 3 %. Los ensayos de quinasa se realizan como una reaccion en dos partes. La primera reaccion es una reaccion de quinasa y que comprende una molecula candidata, enzima SYK recombinante activa de longitud completa (Millipore, CA) y sustrato especifico de SYK marcado con biotina, biotina-DEEDYESP-OH. La segunda reaccion implica la finalizacion de la reaccion de quinasa y la adicion simultanea de los reactivos de deteccion- reactivo antifosfotirosina marcado con europio (Eu-W1024-PY100, Perkin Elmer, Boston, MA) y reactivo de deteccion estreptavidina-aloficocianina (SA- APC, Prozyme, CA). La reaccion de quinasa se realiza en una placa de microtitulacion de 96 pocillos de fondo en U negra. El volumen de reaccion final es de 50 pl y contiene una concentracion final de enzima SYK activa 1 nM, sustrato de SYK 550 nM y ATP 100 pM diluido en un tampon que contiene Tris 50 mM pH 7,5, MgCh 5 mM y DTT 1 mM. Se permite que la reaccion transcurra durante 1 hora a temperatura ambiente. El tampon de interrupcion de la reaccion contiene Tris 100 mM pH 7,5, NaCl2 300 mM, EDTA 20 mM, Brij35 al 0,02 % y BsA al 0,5 %. Los reactivos de deteccion se anaden a la mezcla de reaccion a las siguientes diluciones. - 1:500 para Eu-W1024-PY100 y 1:250 para SA-APC. La reaccion de quinasa se termina mediante la adicion de 50 pl de tampon de interrupcion conteniendo los reactivos de deteccion. Se permite que la deteccion transcurra durante 1 h a temperatura ambiente. La deteccion del sustrato fosforilado en ausencia y presencia de inhibidores se mide en el instrumento de TR-FRET, Analyst HT (Molecular Probes, Sunnyvale, CA) y la condicion para las medidas se prepara utilizando CriterionHost Release 2.0 (Molecular Probes, Sunnyvale, CA). Los ajustes utilizados son como sigue: excitacion 360 nm, emision 665 - 7.5 nm, divisor de rayos 350 nm 50/50, destello 100 pulsos, retraso 60 us, integration 400 us, altura 2 mm. La inhibition de la actividad tirosina quinasa de SYK se calcula como la respuesta maxima observada con inhibidor, en comparacion con la de sin inhibidor. Las CI50 se obtienen mediante analisis de regresion no lineal.To analyze the ability of candidate molecules to inhibit the tyrosine phosphorylation activity of SYK, the molecules are reconstituted in 30% DMSO and serially diluted 1: 3 with the final dilution containing DMSO in the absence of the candidate molecule. The final concentration of DMSO in the assay is 3%. Kinase assays are performed as a reaction in two parts. The first reaction is a kinase reaction and comprising a candidate molecule, full-length active recombinant SYK enzyme (Millipore, CA) and biotin-labeled SYK-specific substrate, biotin-DEEDYESP-OH. The second reaction involves the completion of the kinase reaction and the simultaneous addition of the Europium-labeled antiphosphotyrosine reagent-reagent reagents (Eu-W1024-PY100, Perkin Elmer, Boston, MA) and streptavidin-allophycocyanin (SA-) detection reagent APC, Prozyme, CA). The kinase reaction is carried out in a black U-bottom 96 well microtiter plate. The final reaction volume is 50 pl and contains a final concentration of 1 nM active SYK enzyme, 550 nM SYK substrate and 100 pM ATP diluted in a buffer containing 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCh and DTT 1 mM. The reaction is allowed to run for 1 hour at room temperature. The reaction interruption buffer contains 100 mM Tris pH 7.5, 300 mM NaCl2, 20 mM EDTA, 0.02% Brij35 and 0.5% BsA. Detection reagents are added to the reaction mixture at the following dilutions. - 1: 500 for Eu-W1024-PY100 and 1: 250 for SA-APC. The kinase reaction is terminated by the addition of 50 pl of buffer buffer containing the detection reagents. Detection is allowed to run for 1 h at room temperature. The detection of the phosphorylated substrate in the absence and presence of inhibitors is measured in the TR-FRET instrument, Analyst HT (Molecular Probes, Sunnyvale, CA) and the condition for the measurements is prepared using CriterionHost Release 2.0 (Molecular Probes, Sunnyvale, CA ). The settings used are as follows: 360 nm excitation, 665 - 7.5 nm emission, 350 nm 50/50 ray splitter, 100 pulse flash, 60 us delay, 400 us integration, 2 mm height. The inhibition of the tyrosine kinase activity of SYK is calculated as the maximum response observed with inhibitor, compared with that of without inhibitor. IC50s are obtained by nonlinear regression analysis.

Se utilizo fosfo-citometna de flujo intracelular para analizar la inhibicion del compuesto sobre la actividad de Syk en las lineas celulares de linfoma no Hodgkin Ramos y SUDHL-6 intactas. Se alicuotaron 10x106 celulas en fase de crecimiento logaritmico; la Syk quinasa se activa incubando las celulas durante 10 minutos con anticuerpo especifico para receptor de linfocitos B 3 pg/ml. Inmediatamente despues, las celulas se fijan en paraformaldehido al 1 % durante 5 minutos a temperatura ambiente, se lavan en solution salina tamponada con fosfato y despues se permeabilizan mediante la incubation durante 2 horas en metanol enfriado en hielo. Las celulas se lavan otra vez en solucion salina tamponada con fosfato, despues se incuban durante 30 minutos con anticuerpo especifico para Erk (Y204) y BLNK (Y84) fosforiladas, que son indicadores de la actividad Syk quinasa, y Syk (Y352) fosforilada, como una medida de la actividad quinasa de la familia Src. Todos los anticuerpos utilizados se adquieren de BD Pharmingen (San Jose, CA). Despues de la incubacion con los anticuerpos, las celulas se lavan otra vez y se someten a citometna de flujo. En la Tabla 1 se muestran los datos representativos detallando la inhibicion de la serialization del receptor de linfocitos B mediante los compuestos, como intervalos de CI50.Intracellular flow phospho-cytometna was used to analyze the inhibition of the compound on Syk activity in intact non-Hodgkin Ramos and SUDHL-6 lymphoma cell lines. 10x106 cells were aliquoted in the logarithmic growth phase; Syk kinase is activated by incubating the cells for 10 minutes with antibody specific for B 3 pg / ml receptor. Immediately afterwards, the cells are fixed in 1% paraformaldehyde for 5 minutes at room temperature, washed in phosphate buffered saline and then permeabilized by incubation for 2 hours in ice-cold methanol. The cells are washed again in phosphate buffered saline solution, then incubated for 30 minutes with phosphorylated Erk (Y204) and BLNK (Y84) specific antibodies, which are indicators of phosphorylated Syk kinase activity, and Syk (Y352), as a measure of the kinase activity of the Src family. All antibodies used are purchased from BD Pharmingen (San Jose, CA). After incubation with the antibodies, the cells are washed again and subjected to flow cytometna. Table 1 shows the representative data detailing the inhibition of serialization of the B-lymphocyte receptor by the compounds, as IC50 intervals.

Tambien se evaluaron los efectos antiproliferativos de los compuestos sobre las lineas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin SUDHL-4, SUDHL-6 y Toledo. Para el crecimiento y supervivencia SUDHL-4 y SUDHL-6 necesitan la senalizacion del receptor de linfocitos B, aunque la linea celular Toledo (que sirve aqui como control negativo) no. Las celulas se alicuotaron en cada pocillo de la placa de 96 pocillos y se incubaron con concentraciones crecientes de compuesto durante 72 horas, tras lo cual se determino la supervivencia y proliferation celular utilizando el ensayo MTT (Chemicon International, Inc., Temecula, CA) siguiendo los protocolos suministrados por el fabricante. Los datos se detallan en la Tabla 2 como valores de CI50 mas o menos las desviaciones tipicas, a partir de 5 o 6 experimentos independientes.The antiproliferative effects of the compounds on non-Hodgkin lymphoma B lymphocyte lines SUDHL-4, SUDHL-6 and Toledo were also evaluated. For growth and survival SUDHL-4 and SUDHL-6 need B-cell receptor signaling, although the Toledo cell line (which serves here as a negative control) does not. The cells were aliquoted into each well of the 96-well plate and incubated with increasing concentrations of compound for 72 hours, after which survival and cell proliferation were determined using the MTT assay (Chemicon International, Inc., Temecula, CA) following the protocols supplied by the manufacturer. The data are detailed in Table 2 as IC50 values plus or minus the standard deviations, from 5 or 6 independent experiments.

La induction de apoptosis en las lineas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin SUDHL-4, SUDHL-6 y Toledo, se evaluo midiendo el marcador de apoptosis Caspasa 3. Las celulas se incubaron con el compuesto a 1, 3 o 10 pM durante 24, 48 y 72 horas. Al acabar cada punto de tiempo, las celulas se procesaron para analisis de citometna de flujo utilizando el kit de Anticuerpo Monoclonal Anti Caspasa 3 Activa de Conejo y los protocolos relacionados (BD Pharmingen). En las Tablas 3A y 3B se presentan los datos de dos experimentos independientes, que representan el porcentaje de celulas totales que experimentan apoptosis despues de la incubacion con los compuestos en las condiciones indicadas.The induction of apoptosis in the B-lymphocyte lines of non-Hodgkin lymphoma SUDHL-4, SUDHL-6 and Toledo, was evaluated by measuring the apoptosis marker Caspase 3. The cells were incubated with the compound at 1, 3 or 10 pM for 24 , 48 and 72 hours. At the end of each time point, the cells were processed for flow cytometna analysis using the Rabbit Anti Caspase 3 Active Monoclonal Antibody kit and related protocols (BD Pharmingen). Tables 3A and 3B present the data of two independent experiments, which represent the percentage of total cells that undergo apoptosis after incubation with the compounds under the indicated conditions.

La actividad de Syk no solo es necesaria para la senalizacion, proliferacion y supervivencia de los linfocitos T, como se muestra, sino que tambien es critica para la activation celular despues del entrecruzamiento del receptor de linfocitos B. La activacion de linfocitos B conduce a la expresion en la superficie celular aumentada de varias proteinas implicadas en senalizacion celular, presentation antigenica y adhesion. Entre estas, para determinar el estado de activacion de los linfocitos B se miden comunmente CD80, CD86 y CD69. Por lo tanto, se alicuotaron linfocitos B de raton primarios aislados de bazo y se incubaron con concentraciones crecientes del compuesto (0,05 a 2 pM) en presencia de IgD anti raton en cabra (eBiosciences, Inc., San Diego, CA) durante 20 horas para entrecruzar el receptor de linfocitos B. Despues, las celulas se lavaron e incubaron durante 30 minutos en hielo con anticuerpos especificos para los marcadores de activacion celular CD80, CD86 y CD69. Los linfocitos B seSyk activity is not only necessary for the signaling, proliferation and survival of T lymphocytes, as shown, but it is also critical for cell activation after cross-linking of the B-cell receptor. B-cell activation leads to Increased cell surface expression of several proteins involved in cell signaling, antigenic presentation and adhesion. Among these, CD80, CD86 and CD69 are commonly measured to determine the activation status of B lymphocytes. Therefore, primary mouse lymphocytes isolated from spleen were aliquoted and incubated with increasing concentrations of the compound (0.05 to 2 pM) in the presence of goat anti-mouse IgD (eBiosciences, Inc., San Diego, CA) during 20 hours to cross-link the B-cell receptor. Then, the cells were washed and incubated for 30 minutes on ice with antibodies specific for the CD80, CD86 and CD69 cell activation markers. B lymphocytes are

identificaron en la poblacion agrupada tinendo con el marcador de linfocitos B CD45RO. Todos los anticuerpos se adquirieron en BD Pharmingen. La Tabla 4 representa el intervalo de CI5o en que los compuestos inhibieron la activacion inducida del receptor de linfocitos B, de linfocitos B primarios de raton.identified in the population grouped by having the CD45RO B lymphocyte marker. All antibodies were purchased from BD Pharmingen. Table 4 represents the range of IC5o in which the compounds inhibited the induced activation of the B-cell receptor, of primary mouse B-lymphocytes.

5 En la Tabla a continuation, se proporciona la actividad en los ensayos de Syk y/o Jak como sigue: +++++ = CI50 < 0,0010 pM; ++++ = 0,0010 pM < CI50 < 0,010 pM, +++ = 0,010 pM < CI50 < 0,10 pM, ++ = 0,10 pM < CI50 < 1 pM, + = CI50 > 1 pM.5 In the Table below, the activity is provided in the Syk and / or Jak assays as follows: +++++ = IC50 <0.0010 pM; ++++ = 0.0010 pM <IC50 <0.010 pM, +++ = 0.010 pM <IC50 <0.10 pM, ++ = 0.10 pM <IC50 <1 pM, + = IC50> 1 pM.

Tabla 7:Table 7:

Ejemplo  Example

UV PM MH+ CI50 de Syk  UV PM MH + CI50 from Syk

1  one

409,49 410,0 410,2 + + +    409.49 410.0 410.2 + + +

3  3

395,47 396,0 396.3 396.4 + + +    395.47 396.0 396.3 396.4 + + +

ES (+) MS M+H=396  ES (+) MS M + H = 396

4  4

423,52 424 + +    423.52 424 + +

34  3. 4

429,91 430,0, 432,0 + + +    429.91 430.0, 432.0 + + +

35  35

443,94 444,0, 446,0 + + +    443.94 444.0, 446.0 + + +

36  36

256, 249,5 409,49 410.3 420,2 420.4 ES(+) MS [M+1]=410 Ms Turbo Spray [M+1]=410 + + +  256, 249.5 409.49 410.3 420.2 420.4 ES (+) MS [M + 1] = 410 Ms Turbo Spray [M + 1] = 410 + + +

37  37

421,51 422,4 + + +    421.51 422.4 + + +

39  39

409,45 410,2 + +    409.45 410.2 + +

40  40

413,46 414,2 + + +    413.46 414.2 + + +

41  41

452,56 453,45 + + + +    452.56 453.45 + + + +

55  55

438,49 439,4 + + +    438.49 439.4 + + +

56  56

409,49 410,4 + + +    409.49 410.4 + + +

63  63

466,55 467,4 + +    466.55 467.4 + +

64  64

471,57 472,3 + +    471.57 472.3 + +

70  70

466,55 467,4 + + +    466.55 467.4 + + +

93  93

396,46 397 + +    396.46 397 + +

96  96

428,52 429,3 (M+1) + + +    428.52 429.3 (M + 1) + + +

97  97

430,53 431,3 (M+1) + + +    430.53 431.3 (M + 1) + + +

99  99

431,52 432,0 432,2 ES (+) MS [M+1]=432 ES(+) MS [M+H]=432 MS Turbo Spray [M+1]=432 MS Turbo Spray [M+1]=432 + + +    431.52 432.0 432.2 ES (+) MS [M + 1] = 432 ES (+) MS [M + H] = 432 MS Turbo Spray [M + 1] = 432 MS Turbo Spray [M + 1 ] = 432 + + +

100  100

445,55 426(M+H) 446 446,2 446,2(M+H) 446,4 ES(+) MS [M+1]=446 MS Turbo Spray [M+1]=446 + + +    445.55 426 (M + H) 446 446.2 446.2 (M + H) 446.4 ES (+) MS [M + 1] = 446 MS Turbo Spray [M + 1] = 446 + + +

113  113

394,48 395,3 (M+1) + + +    394.48 395.3 (M + 1) + + +

114  114

449,56 450,3 + +    449.56 450.3 + +

115  115

463,59 464,3 + +    463.59 464.3 + +

116  116

465,56 466,3 + +    465.56 466.3 + +

117  117

457,56 458,2 + + +    457.56 458.2 + + +

118  118

409,49 410,2 + + +    409.49 410.2 + + +

119  119

409,49 410,2 + +    409.49 410.2 + +

120  120

362,39 363,2 + +    362.39 363.2 + +

121  121

402,48 403,2 + + +    402.48 403.2 + + +

122  122

411,51 M+1=412 + +    411.51 M + 1 = 412 + +

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

Ejemplo  Example

UV PM MH+ CI50 de Syk  UV PM MH + CI50 from Syk

124  124

423,52 424,2 + + +    423.52 424.2 + + +

135  135

381,48 382,5 (M+1) + + +    381.48 382.5 (M + 1) + + +

189  189

392,46 393,3 (M+1) + + +    392.46 393.3 (M + 1) + + +

191  191

382,47 383,3 + +    382.47 383.3 + +

196  196

445,55 446,2 + + +    445.55 446.2 + + +

Inhibicion de la funcion de plaquetas mediada por GPVI In VitroInhibition of platelet function mediated by GPVI In Vitro

La capacidad de las moleculas candidatas para inhibir las funciones de las plaquetas mediadas por syk, se analizo midiendo la inhibicion de la movilizacion de calcio o la agregacion de plaquetas humanas inducida por el agonista Calvuxina especlfico de GPV. La movilizacion de calcio se evalua en plaquetas humanas lavadas en un formato de microtitulacion de 96 pocillos. La agregacion se evalua en un ensayo de microtitulacion de 96 pocillos (veanse, en general, los procedimientos en Jantzen, H. M. et al. (1999) Thromb. Hemost. 81: 111-117) o en agregometrla de transmitancia luminosa de cubeta convencional, utilizando plasma rico en plaquetas humano (PRP).The ability of candidate molecules to inhibit syk-mediated platelet functions was analyzed by measuring calcium mobilization inhibition or human platelet aggregation induced by GPV-specific Calvuxine agonist. Calcium mobilization is evaluated in washed human platelets in a 96-well microtiter format. The aggregation is evaluated in a 96-well microtiter assay (see, in general, the procedures in Jantzen, HM et al. (1999) Thromb. Hemost. 81: 111-117) or in a luminous transmittance aggregome of conventional cuvette, using human platelet rich plasma (PRP).

Inhibicion de la movilizacion de calcio en plaquetas mediada por Convulxina In VitroInhibition of calcium mobilization in platelets mediated by Convulxin In Vitro

La inhibicion de la movilizacion de calcio inducida por Convulxina se determino en plaquetas humanas lavadas, utilizando el kit de ensayo FLIRP Calcium 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Para la preparacion de plaquetas lavadas, se recogio sangre venosa humana de voluntarios libres de farmaco sanos en ACD (citrato de sodio 85 mM, glucosa 111 mM, acido cltrico 71,4 mM) que contenla PGI2 (1,25 ml de ACD conteniendo PGI2 0,2 |jM final; PGI2 procedla de Sigma, St. Louis, MO). El plasma rico en plaquetas (PRP) se prepara mediante centrifugacion a 160 X g durante 20 minutos a temperatura ambiente. Las plaquetas lavadas se prepararon centrifugando PRP durante 10 minutos a 730 g y resuspendiendo el sedimento de plaquetas en CGS (citrato de sodio 13 mM, glucosa 30 mM, NaCl 120 mM; 2 ml de CGS/10 ml de volumen de sangre original). Tras la incubacion a 37 °C durante 15 minutos, las plaquetas se recogen mediante centrifugacion a 730 g durante 10 minutos y se resuspenden a una concentracion de 3 X 108 plaquetas/ml en tampon de Hepes-Tyrode (Hepes 10 mM, NaCl 138 mM, glucosa 5,5 mM, KCl 2,9 mM, NaHCO3 12 mM, pH 7,4). Esta suspension de plaquetas se mantiene >45 minutos a temperatura ambiente antes de su uso en los ensayos de movilizacion de calcio.The inhibition of calcium mobilization induced by Convulxin was determined in washed human platelets, using the FLIRP Calcium 3 assay kit (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). For the preparation of washed platelets, human venous blood was collected from healthy drug-free volunteers in ACD (85 mM sodium citrate, 111 mM glucose, 71.4 mM citric acid) containing PGI2 (1.25 ml of ACD containing PGI2 0.2 | jM final; PGI2 comes from Sigma, St. Louis, MO). Platelet rich plasma (PRP) is prepared by centrifugation at 160 X g for 20 minutes at room temperature. The washed platelets were prepared by centrifuging PRP for 10 minutes at 730 g and resuspending the platelet sediment in CGS (13 mM sodium citrate, 30 mM glucose, 120 mM NaCl; 2 ml of CGS / 10 ml of original blood volume). After incubation at 37 ° C for 15 minutes, platelets are collected by centrifugation at 730 g for 10 minutes and resuspended at a concentration of 3 x 10 8 platelets / ml in Hepes-Tyrode buffer (10 mM Hepes, 138 mM NaCl , 5.5 mM glucose, 2.9 mM KCl, 12 mM NaHCO3, pH 7.4). This platelet suspension is maintained> 45 minutes at room temperature before use in calcium mobilization assays.

Para los experimentos de movilizacion de calcio en placas de 96 pocillos, se incubaron volumenes equivalentes de 3 X 108 plaquetas lavadas/ml con volumenes equivalentes del Reactivo de Ensayo Calcio-3 A resuspendido en Solucion Salina Balanceada de Hank 1 X, pH 7,4, tampon Hepes 20 mM. El volumen total de reaccion de 0,2 ml/pocillo incluye la mezcla de plaquetas lavadas 1,5 x 108/ml/reactivo de Ensayo Calcio-3 A, Eptifibatida 10 jM (Millennium Pharmaceuticals Inc, Cambridge, MA), diluciones en serie (1:3) de los compuestos de prueba en DMSO al 0,75 %. Se anade solo DMSO a 1 pocillo de cada conjunto de 8 para permitir una lectura de movilizacion de calcio maxima. Tras 20 minutos de preincubacion a temperatura ambiente se carga el lector de microplacas de 96 pocillos en la FlexStation (Molecular Devices, Sunnyvale, Calif). Las condiciones experimentales de FlexStation para medir la movilizacion de calcio se ajustan utilizando SOFTMax Pro. Los parametros utilizados se detallan a continuacion. Modo de los parametros del ensayo de fluorescencia: flex, excitacion 485 nM, 525 nM con un llmite de 515 nM; parametros- sensibilidad de TFS- 6, alto de pipeta 230 jl, tiempo de lectura 2 minutos y 40 segundos, intervalos de lectura 2 segundos, temperatura-23-25 °C. Tras 18 segundos de lectura basal, la movilizacion de calcio se inicia mediante la adicion de Convulxina a una concentracion final de 125 ng/ml. La inhibicion de la movilizacion de calcio se calculo como la respuesta maxima observada con inhibidor, en comparacion con la de sin inhibidor. Las CI50 se obtuvieron mediante analisis de la regresion no lineal.For the calcium mobilization experiments in 96-well plates, equivalent volumes of 3 X 108 washed platelets / ml were incubated with equivalent volumes of the Calcium-3 A Test Reagent resuspended in Hank Balanced Saline Solution 1 X, pH 7.4 , 20 mM Hepes buffer. The total reaction volume of 0.2 ml / well includes the mixture of washed platelets 1.5 x 108 / ml / assay reagent Calcium-3 A, 10 jM Eptifibatide (Millennium Pharmaceuticals Inc, Cambridge, MA), serial dilutions (1: 3) of the test compounds in 0.75% DMSO. Only DMSO is added to 1 well of each set of 8 to allow a maximum calcium mobilization reading. After 20 minutes of pre-incubation at room temperature, the 96-well microplate reader is loaded into the FlexStation (Molecular Devices, Sunnyvale, Calif). The experimental conditions of FlexStation to measure calcium mobilization are adjusted using SOFTMax Pro. The parameters used are detailed below. Parameter mode of the fluorescence assay: flex, excitation 485 nM, 525 nM with a limit of 515 nM; Parameters- sensitivity of TFS-6, pipette height 230 jl, reading time 2 minutes and 40 seconds, reading intervals 2 seconds, temperature-23-25 ° C. After 18 seconds of baseline reading, calcium mobilization is initiated by the addition of Convulxin to a final concentration of 125 ng / ml. The inhibition of calcium mobilization was calculated as the maximum response observed with inhibitor, compared with that of without inhibitor. IC50s were obtained by nonlinear regression analysis.

Inhibicion de la agregacion de plaquetas mediada por Convulxina In VitroInhibition of platelet aggregation mediated by In Vitro Convulxin

Para la preparacion de plasma rico en plaquetas humano para los ensayos de agregacion, se recogio sangre venosa humana de voluntarios libres de farmaco sanos, en citrato de sodio al 0,38 % (0,013 M, pH 7,0 final). Se prepara plasma rico en plaquetas (PRP) mediante centrifugacion de sangre entera a 160 x g durante 20 minutos a temperatura ambiente. La capa de PRP se retira, se transfiere a un tubo nuevo y se ajusta el recuento de plaquetas, si es ventajoso, para conseguir una concentracion de plaquetas de ~3 x 108 plaquetas/ml utilizando plasma pobre en plaquetas (PPP). El PPP se preparar mediante centrifugacion de la muestra de sangre restante (despues de retirar el PRP) durante 20 minutos a 800 x g. Despues, puede utilizarse la preparacion de PRP para los ensayos de agregacion en placas de 96 pocillos o en agregometrla de cubeta convencional.For the preparation of human platelet-rich plasma for aggregation assays, human venous blood was collected from healthy drug-free volunteers in 0.38% sodium citrate (0.013 M, final pH 7.0). Platelet rich plasma (PRP) is prepared by centrifuging whole blood at 160 x g for 20 minutes at room temperature. The PRP layer is removed, transferred to a new tube and the platelet count is adjusted, if advantageous, to achieve a platelet concentration of ~ 3 x 108 platelets / ml using platelet poor plasma (PPP). The PPP is prepared by centrifuging the remaining blood sample (after removing the PRP) for 20 minutes at 800 x g. The PRP preparation can then be used for aggregation tests in 96-well plates or in conventional cuvette aggregometry.

La inhibicion de la agregacion inducida por Convulxina se determina en placas de microtitulacion de fondo plano de 96 pocillos, utilizando un agitador de placas de microtitulacion y un lector de placas, similar al procedimiento descrito en Frantantoni et al., Am. J. Clin. Pathol. 94, 613 (1990). Todas las etapas se realizan a temperatura ambiente. Para la agregacion en placas de 96 pocillos utilizando plasma rico en plaquetas (PRP), el volumen de reaccion total de 0,2 ml/pocillo incluye 190 jl de PRP (~3 x 108 plaquetas/ml, vease anteriormente), y 5 jl de dilucion en serie de los compuestos de prueba en DMSO al 30 % o tampon (para los pocillos de control). Despues de 20 minutos deConvulxin-induced aggregation inhibition is determined in 96-well flat bottom microtiter plates, using a microtiter plate agitator and a plate reader, similar to the procedure described in Frantantoni et al., Am. J. Clin. Pathol 94, 613 (1990). All stages are performed at room temperature. For aggregation in 96-well plates using platelet rich plasma (PRP), the total reaction volume of 0.2 ml / well includes 190 ml of PRP (~ 3 x 108 platelets / ml, see above), and 5 ml serial dilution of test compounds in 30% DMSO or buffer (for control wells). After 20 minutes of

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

preincubacion a temperatura ambiente, se anaden a cada pocillo 5 pi de agonista Convulxina 320 ng/ml para dar una concentracion final de Convulxina 8 ng/ml. Despues, las placas se agitan durante 5 min en un agitador de placas de microtitulacion y se obtiene la lectura de 5 minutos en el lector de placas de microtitulacion (Softmax, Molecular Devices, Menlo Park, Calif.). La agregacion se calcula a partir de la reduccion de la DO a 650 nm a t=5 minutos. Las CI50 se obtienen mediante analisis de regresion no lineal.pre-incubation at room temperature, 5 pi of Convulxin 320 ng / ml agonist are added to each well to give a final concentration of Convulxin 8 ng / ml. Then, the plates are stirred for 5 min in a microtiter plate shaker and the 5 minute reading is obtained in the microtiter plate reader (Softmax, Molecular Devices, Menlo Park, Calif.). Aggregation is calculated from the reduction of OD at 650 nm at t = 5 minutes. IC50s are obtained by nonlinear regression analysis.

La inhibicion de la agregacion inducida por Convulxina tambien se determino para los ensayos de agregacion de transmitancia luminosa en cubeta, se prepararon diluciones en serie (1:2) del compuesto de prueba en DMSO al 30 % en una placa de fondo en V de 96 pocillos (la concentracion de DMSO final en la cubeta fue del 0,3 %). El compuesto de prueba (5 pl de diluciones en serie en DMSO) se preincubo con PRP durante 20 minutos, antes del inicio de las reacciones de agregacion, que se realizan en un agregometro ChronoLog mediante la adicion de agonista (Convulxina 125-250 ng/ml) a 495 pl de PRP, a 37 °C. La reaccion de agregacion se registra durante 4 m, y el grado maximo de agregacion se determina por la diferencia del grado de agregacion basal en comparacion con la agregacion maxima que se produce durante el periodo de 4 minutos del ensayo. La inhibicion de la agregacion se calculo como la agregacion maxima observada con inhibidor, en comparacion con la de sin inhibidor. Las CI50 se obtuvieron mediante analisis de regresion no lineal.Inhibition of Convulxin-induced aggregation was also determined for assays of light transmittance aggregation in cuvette, serial dilutions (1: 2) of the test compound in 30% DMSO were prepared in a V-bottom plate of 96 wells (the final DMSO concentration in the cuvette was 0.3%). The test compound (5 pl of serial dilutions in DMSO) was pre-incubated with PRP for 20 minutes, before the start of the aggregation reactions, which are performed in a ChronoLog aggregometer by agonist addition (Convulxin 125-250 ng / ml) at 495 pl of PRP, at 37 ° C. The aggregation reaction is recorded for 4 m, and the maximum degree of aggregation is determined by the difference in the degree of basal aggregation compared to the maximum aggregation that occurs during the 4 minute period of the test. Aggregation inhibition was calculated as the maximum aggregation observed with inhibitor, compared to that of without inhibitor. IC50s were obtained by nonlinear regression analysis.

En las Tablas 1-5 se proporcionan los ejemplos de compuestos y sus valores de CI50 de syk y PRP.Examples of compounds and their IC50 values of syk and PRP are given in Tables 1-5.

Ensayo de flujo de calcio en celulas Ramos inducido por entrecruzamiento del BCRCalcium flow test in Ramos cells induced by cross-linking of the BCR

3 o 4 dlas antes de los experimentos se subcultivan celulas Ramos (2G6.4C10, linfoma de Burkitt, Numero de Artlculo de la ATCC: CRL-1923) a 5 x 105 celulas/ml en medio recien preparado. Las celulas se recogen y resuspenden en medio fresco a 8 x 106 celulas/ml antes de la carga de colorante. Se anade un volumen equivalente de colorante de carga de Calcio 3 (Molecular Device) y se mezcla en la suspension celular. Las celulas de carga se dispensan en una placa de 96 pocillos y se incuban 30 m. Despues, se anaden los compuestos en las celulas cargadas con colorante y se incuba durante otros 30 m. Se centrifuga a 1000 rpm durante 3 min antes de la medida de fluorescencia en FlexStation. La estimulacion del BCR se efectua mediante la adicion de anticuerpo 5 pg/ml (fragmento F(ab')2 anti IgM humana de burro AffiniPure, Jackson ImmunoResearch Laboratories).3 or 4 days before the experiments, Ramos cells are subcultured (2G6.4C10, Burkitt lymphoma, ATCC Article Number: CRL-1923) at 5 x 105 cells / ml in fresh medium. The cells are collected and resuspended in fresh medium at 8 x 10 6 cells / ml before loading the dye. An equivalent volume of Calcium 3 loading dye (Molecular Device) is added and mixed in the cell suspension. The load cells are dispensed in a 96-well plate and incubated 30 m. Then, the compounds are added to the cells loaded with dye and incubated for another 30 m. It is centrifuged at 1000 rpm for 3 min before the fluorescence measurement in FlexStation. BCR stimulation is carried out by adding 5 pg / ml antibody (F (ab ') 2 anti-human IgM fragment from Donkey AffiniPure, Jackson ImmunoResearch Laboratories).

Ensayo de flujo de calcio en celulas Jurkat inducido por el entrecruzamiento del TCRCalcium flow assay in Jurkat cells induced by TCR crosslinking

El protocolo es muy similar al de flujo de calcio de linfocitos B como se describe en la seccion anterior. Las unicas diferencias son que los linfocitos T (clon E6-1, leucemia de linfocitos T aguda, Numero de Artlculo de la ATCC: Tib-152) y el anti CD3 humano (anti CD3 humano purificado para calidad funcional, clon OKT3, eBioscience, n.° 16-0037) reemplazan a los linfocitos B y al anti IgM humana. La densidad celular se mantiene igual pero el anticuerpo se utiliza a una concentracion de 100 ng/ml.The protocol is very similar to the calcium flow of B lymphocytes as described in the previous section. The only differences are that T lymphocytes (clone E6-1, acute T lymphocyte leukemia, ATCC Article Number: Tib-152) and human anti CD3 (purified human anti CD3 for functional quality, OKT3 clone, eBioscience, No. 16-0037) replace B lymphocytes and anti human IgM. The cell density remains the same but the antibody is used at a concentration of 100 ng / ml.

Secrecion de IL-2 en celulas Jurkat inducida por el entrecruzamiento del TCRIL-2 secretion in Jurkat cells induced by TCR crosslinking

Los procedimientos de propagacion de celulas Jurkat y de incubacion del compuesto son los mismos que los descritos en el ensayo de flujo de calcio de Jurkat en la seccion anterior. El anticuerpo (anti CD3, OKT3) se recubre en una placa nueva (sin celulas) a 100 ng/pocillo. Las celulas se suspenden a 8 x 106 celulas/ml y se incuban con los compuestos durante 30 min en una placa separada. Al final de la incubacion, las celulas se transfieren a la placa recubierta con anticuerpo y se incuban durante 16 horas. Para la medicion de IL-2 despues de la incubacion, se utilizan 100 pl de medio de celulas despues de la incubacion. El nivel de IL-2 se determina utilizando un kit de ELISA de IL-2 (kit de ELISA de IL-2 humana II, BD Bioscience, n.°. 550611).The procedures for propagation of Jurkat cells and incubation of the compound are the same as those described in the Jurkat calcium flow test in the previous section. The antibody (anti CD3, OKT3) is coated on a new plate (without cells) at 100 ng / well. The cells are suspended at 8x106 cells / ml and incubated with the compounds for 30 min in a separate plate. At the end of the incubation, the cells are transferred to the antibody coated plate and incubated for 16 hours. For the measurement of IL-2 after incubation, 100 pl of cell medium is used after incubation. The level of IL-2 is determined using an IL-2 ELISA kit (Human IL-2 ELISA kit II, BD Bioscience, No. 550611).

Ejemplo 333 Exploracion de Upstate KinaseProfiler™ de MilliporeExample 333 Millipore KinaseProfiler ™ Upstate Scan

Este ensayo es una medicion directa del efecto del compuesto sobre la actividad catalltica de JAK3. Se obtuvo de celulas de insecto la secuencia (resto 781 - extremo C) de la JAK3 humana purificada (GenBank AF513860). La hidrolisis catalltica del ATP se mide utilizando un metodo de union de filtro radiometrico. La incubacion de la quinasa con 33[P]ATP y sustrato conduce a la incorporation de 33[P] en el sustrato, que despues puede separarse de los otros componentes de la reaccion mediante filtration. Los ensayos se realizaron utilizando ATP 10 pM y ausencia o presencia de compuesto 1, 0,3 o 0,1 pM. La actividad se expreso como % de inhibicion del control.This test is a direct measurement of the effect of the compound on the catalytic activity of JAK3. The sequence (residue 781-end C) of the purified human JAK3 (GenBank AF513860) was obtained from insect cells. The catalytic hydrolysis of ATP is measured using a radiometric filter bonding method. The incubation of the kinase with 33 [P] ATP and substrate leads to the incorporation of 33 [P] in the substrate, which can then be separated from the other components of the reaction by filtration. The tests were performed using 10 pM ATP and absence or presence of compound 1, 0.3 or 0.1 pM. Activity was expressed as% inhibition of control.

Tabla 8: inhibicion (%) de la actividad catalftica de JAK3 por el compuesto a 1, 0,3 o 0,1 pM, como se determino por ___________________________Millipore utilizando su ensayo KinaseProfiler.___________________________Table 8: Inhibition (%) of the catalytic activity of JAK3 by the compound at 1, 0.3 or 0.1 pM, as determined by ___________________________Millipore using its KinaseProfiler test .___________________________

Compuesto  Compound

Concentracion ( pM)  Concentration (pM)

1 pM  1 pm

0,3 pM 0,1 pM  0.3 pM 0.1 pM

l ^ h3c n^i nh o XW'" H  l ^ h3c n ^ i nh or XW '"H

98 96 97  98 96 97

i° A h3c" Ah o H  i ° A h3c "Ah or H

100 84 ND  100 84 ND

ND: no determinado  ND: not determined

Ejemplo 334 Exploration Ambit KinomeScan 5Example 334 Exploration Ambit KinomeScan 5

Este ensayo es un ensayo de union de competition, dependiente de sitio de ATP, en el que las quinasas humanas de interes se fusionan a una etiqueta patentada (bacteriofago T7). La cantidad de quinasa unida a un ligando dirigido a sitio activo inmovilizado se mide en presencia y ausencia del compuesto de prueba. Los ensayos de JAK de Ambit utilizan dominios de quinasa y no las protefnas de longitud completa. El dominio utilizado para la union de JAK1 es el 10 pseudodominio quinasa mientras que el de la union a JAK3 es el dominio catalftico (Mazen W Karaman, Sanna Herrgard, Daniel K Treiber, et al. A Quantitative analysis of kinase inhibitor selectivity. Nature Biotechnology, 2008, Volumen 26, n.° 1, Pagina 127-132).This assay is an ATP site-dependent competition binding assay, in which the human kinases of interest are fused to a proprietary tag (bacteriophage T7). The amount of kinase bound to an immobilized active site directed ligand is measured in the presence and absence of the test compound. The JAK trials of Ambit use kinase domains and not full-length proteins. The domain used for the union of JAK1 is the pseudo-dominant kinase while that of the union to JAK3 is the catalytic domain (Mazen W Karaman, Sanna Herrgard, Daniel K Treiber, et al. A Quantitative analysis of kinase inhibitor selectivity. Nature Biotechnology , 2008, Volume 26, No. 1, Page 127-132).

Tabla 9a: Valores de KD (nM) para la inhibicion por la union del compuesto de JAK1 y JAK3 a ligando inmovilizado ______________________________en el ensayo KinomeScan de Ambit._____________________________Table 9a: KD (nM) values for inhibition by binding of the compound of JAK1 and JAK3 to immobilized ligand ______________________________ in the KinomeScan test of Ambit ._____________________________

Compuesto  Compound

JAK1 JAK3  JAK1 JAK3

° A h3c"°^A^ NH 0 W' H Referencia  ° A h3c "° ^ A ^ NH 0 W 'H Reference

6,7 2,9  6.7 2.9

O^NHCH3 |A AH 9 n^A^nh2 H Referencia  O ^ NHCH3 | A AH 9 n ^ A ^ nh2 H Reference

11 3  11 3

A H3C" ^NH 0 AxA”"- H  A H3C "^ NH 0 AxA" "- H

4,7 2,7  4.7 2.7

O^NH2 fi Ah ? ^"XXIJ NH2 N N H Referencia  O ^ NH2 fi Ah? ^ "XXIJ NH2 N N H Reference

14 4,1  14 4.1

Tabla 9b Potencia y especificidad de la inhibicion de las quinasas (CI50 en nM)Table 9b Potency and specificity of kinase inhibition (IC50 in nM)

Compuesto  Compound

Syk Jak 1 Jak 2 Jak 3  Syk Jak 1 Jak 2 Jak 3

EJEMPLO 99  EXAMPLE 99

15 6,7 3,2 0,8  15 6.7 3.2 0.8

P420-89  P420-89

31 6,2 2,0 0,6  31 6.2 2.0 0.6

55

Tabla 10: Inhibicion de las cinasas en Kd (nM) (Ambit Panel)Table 10: Inhibition of kinases in Kd (nM) (Ambit Panel)

N N H %o A, H3C' "N'A nh 0 H o^nh2 H  N N H% or A, H3C '"N'A nh 0 H or ^ nh2 H

Referencia Referencia  Reference Reference

JAK1 (Dom. Quin. 1)  JAK1 (Sun. Quin. 1)

6,7 4,7 14  6.7 4.7 14

JAK2 (Dom. Quin. 2)  JAK2 (Dom. Quin. 2)

5,1 5,1 10  5.1 5.1 10

JAK3 (Dom. Quin. 2)  JAK3 (Sun. Quin. 2)

2,9 2,7 4,1  2.9 2.7 4.1

Syk  Syk

98 4,5 9,4  98 4.5 9.4

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Ejemplo 335 ensayo celular de JAK3/STAT6Example 335 JAK3 / STAT6 cell assay

La estimulacion de linfocitos B Ramos por interleucina 4 (IL4) conduce a la senalizacion a traves de JAK1/JAK3, lo que da como resultado la fosforilacion de STAT6 (transductores de senal y activadores de la transcripcion). El efecto de los compuestos sobre la inhibicion de JAK3 y/o JAK1 se puede evaluar midiendo la cantidad de STAT6 fosforilada. Esto se realiza mediante transferencia de Western utilizando un anticuerpo especlfico fosfo-STAT6.The stimulation of Ramos B lymphocytes by interleukin 4 (IL4) leads to signaling through JAK1 / JAK3, which results in the phosphorylation of STAT6 (signal transducers and transcription activators). The effect of the compounds on the inhibition of JAK3 and / or JAK1 can be evaluated by measuring the amount of phosphorylated STAT6. This is done by Western blotting using a phospho-STAT6 specific antibody.

Los linfocitos B Ramos se suspenden en medio RPMI tamponado con Hepes 10 mM (2 x 107 celulas/ml). Las celulas (90 pl) se incubaron con 10 pl de interleucina 4 (R & D Systems Inc, n.° de cat. 204-IL; concentracion final: 0,33 pg/ml) 3,3 pg/ml. Las incubaciones fueron durante 10 min a 37 °C en ausencia o presencia de 2 pl de compuesto diluido en DMSO al 30 %. Las reacciones se finalizaron mediante la adicion de un volumen equivalente de tampon de lisis 2x (TRIS-HCl 100 mM pH 8,0, Triton-X-100 al 2 %, EDTA 5 mM, NaCl 250 mM, glicerol al 20 %, PMSF 1,25 mM, ortovanadato de sodio 5 mM, p-glicerofosfato 5 mM, coctel inhibidor de proteasas de EDTA mini completo (Sigma)).Ramos B lymphocytes are suspended in RPMI medium buffered with 10 mM Hepes (2 x 107 cells / ml). The cells (90 pl) were incubated with 10 pl of interleukin 4 (R&D Systems Inc, Cat. No. 204-IL; final concentration: 0.33 pg / ml) 3.3 pg / ml. The incubations were for 10 min at 37 ° C in the absence or presence of 2 pl of compound diluted in 30% DMSO. The reactions were terminated by the addition of an equivalent volume of 2x lysis buffer (100 mM TRIS-HCl pH 8.0, 2% Triton-X-100, 5 mM EDTA, 250 mM NaCl, 20% glycerol, PMSF 1.25 mM, 5 mM sodium orthovanadate, 5 mM p-glycerophosphate, complete EDTA mini protease inhibitor cocktail (Sigma).

Las muestras se incubaron con 1 pl de la nucleasa benzonasa (Novagen, n.° de cat. 71205-3) durante 1 hora, a temperatura ambiente y despues se anadieron 50 pl de tampon de carga 5x (TRIS 330 mM pH 6,8, SDS al 9,5 %, glicerol al 34 %, azul de bromofenol al 0,01 %, beta-mercaptoetanol al 10 %).The samples were incubated with 1 pl of the benzone nuclease (Novagen, cat. No. 71205-3) for 1 hour, at room temperature and then 50 pl of 5x loading buffer (330 mM TRIS pH 6.8 were added) , 9.5% SDS, 34% glycerol, 0.01% bromophenol blue, 10% beta-mercaptoethanol).

Los lisados celulares (15 pl) se sometieron a SDS-PAGE (geles de TRIS-glicina al 4-12 % Novex, Invitrogen) en condiciones reductoras, seguido de electro-transferencia a membranas de nitrocelulosa. Despues, las membranas se incubaron en tampon de bloqueo Zymed (Invitrogen) durante 1 h a temperatura ambiente (TA), despues una noche a 4 °C con el anticuerpo primario anti fosfotirosina-STAT6 (Cell Signaling Technology, n.° de cat. 9364) 1:500 en tampon de bloqueo Zymed. A continuation de 5 x 10 min lavados con solution salina tamponada con Tris, NP40 al 0.25 % (TBSN), las transferencias se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente en presencia del anticuerpo secundario anti conejo en burro conjugado a HRP (Amersham Biosciences, n.° de cat. NA934V) 1:10.000 en tampon de bloqueo Zymed. Despues de 4 x 10 min lavados con TBSN, las transferencias se visualizaron por ECL (Pierce Western Lightening, Perkin Elmer n.° de cat. NEL101). Para determinar el contenido total de p3, las transferencias se separaron, se lavaron 4 x con TBSN, y se resondearon con anticuerpo C3A 1:2000 en tampon de bloqueo durante una noche a 4 °C. Despues de 4 x 10 min lavados con TBSN, las transferencias se incubaron con el anticuerpo secundario anti raton en cabra 1:10.000 en tampon de bloqueo, se lavaron 4 veces mas con TBSN y se expusieron al reactivo Western Lightening. Los niveles de estimulacion por encima del fondo y el grado de inhibicion del compuesto se determinan por densitometrla.The cell lysates (15 pl) were subjected to SDS-PAGE (4-12% Novex TRIS-glycine gels, Invitrogen) under reducing conditions, followed by electro-transfer to nitrocellulose membranes. Then, the membranes were incubated in Zymed blocking buffer (Invitrogen) for 1 h at room temperature (RT), then overnight at 4 ° C with the primary anti-phosphotyrosine-STAT6 antibody (Cell Signaling Technology, cat. No. 9364 ) 1: 500 in Zymed blocking buffer. After 5 x 10 min washed with Tris buffered saline solution, 0.25% NP40 (TBSN), the transfers were incubated for 1 h at room temperature in the presence of the secondary rabbit anti rabbit antibody conjugated to HRP (Amersham Biosciences, n. Cat. No. NA934V) 1: 10,000 in Zymed blocking buffer. After 4 x 10 min washed with TBSN, the transfers were visualized by ECL (Pierce Western Lightening, Perkin Elmer Cat. No. NEL101). To determine the total content of p3, the transfers were separated, washed 4 x with TBSN, and resupplied with C3A 1: 2000 antibody in blocking buffer overnight at 4 ° C. After 4 x 10 min. Washed with TBSN, the transfers were incubated with the goat anti-mouse secondary antibody 1: 10,000 in blocking buffer, washed 4 more times with TBSN and exposed to the Western Lightening reagent. The levels of stimulation above the background and the degree of inhibition of the compound are determined by densitometry.

Ejemplo 336 Ensayo de inhibicion de la actividad de la JAK quinasa para la llnea de linfocitos B Ramos estimulada con iL-4Example 336 Assay for inhibition of JAK kinase activity for the B lymphocyte line Ramos stimulated with iL-4

Estos ejemplos ilustran los metodos para evaluar las actividades de JAK quinasa humana de los compuestos de la invention in vitro e in vivo, que se pueden determinar mediante diversos procedimientos conocidos en la tecnica, tales como una prueba de su capacidad para inhibir la actividad de la JAK quinasa de plasma humana. Las potentes afinidades para la inhibicion de la JAK quinasa humana presentadas por los compuestos de la invencion se pueden medir mediante un valor CI50 (en nM). El valor CI50 es la concentracion (en nM) del compuesto necesaria para proporcionar el 50 % de inhibicion de la actividad de JAK quinasa humana. Cuanto menor es el valor de CI50, mas activo (potente) es un compuesto para la inhibicion de la actividad de la JAK quinasa.These examples illustrate the methods for evaluating the activities of human JAK kinase of the compounds of the invention in vitro and in vivo, which can be determined by various methods known in the art, such as a test of their ability to inhibit the activity of the JAK human plasma kinase. The potent affinities for the inhibition of human JAK kinase presented by the compounds of the invention can be measured by an IC50 value (in nM). The IC50 value is the concentration (in nM) of the compound necessary to provide 50% inhibition of human JAK kinase activity. The lower the IC50 value, the more active (potent) is a compound for the inhibition of JAK kinase activity.

Un ensayo in vitro para la detection y medicion de la actividad de inhibicion frente a la JAK quinasa es como sigue:An in vitro assay for the detection and measurement of inhibition activity against JAK kinase is as follows:

La actividad de los compuestos para las JAK quinasas se confirma en ensayos celulares disenado para analizar la inhibicion de JAK. Brevemente, la inhibicion de JAK se analiza en linfocitos T Ramos humanos activados con la citocina interleucina-4 (IL-4). Veinte a 24 horas posestimulacion, las celulas se tinen para la regulation positiva de CD23 y se analizan mediante FACS. La estimulacion de los linfocitos B con IL-4 conduce a la activation de la ruta JAK/sTaT a traves de la fosforilacion de la JAK quinasas JAK1 y JAK3, que a su vez fosforilan y activan los factores de transcripcion STAT-5 y STAT-6. STAT-5 activado regula de forma positiva el receptor de IgE (CD23) de baja afinidad.The activity of the compounds for JAK kinases is confirmed in cell assays designed to analyze JAK inhibition. Briefly, JAK inhibition is analyzed in human T lymphocytes activated with cytokine interleukin-4 (IL-4). Twenty to 24 hours post-stimulation, the cells are stained for positive regulation of CD23 and analyzed by FACS. The stimulation of B-lymphocytes with IL-4 leads to the activation of the JAK / sTaT pathway through the phosphorylation of JAK kinases JAK1 and JAK3, which in turn phosphorylate and activate the transcription factors STAT-5 and STAT- 6. Activated STAT-5 positively regulates the low affinity IgE receptor (CD23).

Para el ensayo, se cultivan linfocitos B Ramos humanos (ATCC, n.° de catalogo CRL-1596) en medio RPMI 1640 (Cellgro, n.° de catalogo 10-040-CM) conteniendo suero fetal bovino al 10 % (JRH, n.° de catalogo 12106-500M) de acuerdo con el protocolo de propagation suministrado con las celulas, y se mantienen a una densidad de aproximadamente 3,5 X 105 celulas/ml. El dla antes del ensayo, las celulas se diluyen hasta 3,5 X 105 celulas/ml para asegurar que estan en la fase de crecimiento logarltmico. Las celulas se centrifugan y resuspenden en medio RPMI 1640 (Cellgro, MediaTech, Inc., Herndon, Va., n.° de cat. 10-040-CM) conteniendo suero fetal bovino (SFB) al 5-10 %, inactivado por calor (JRH Biosciences, Inc, Lenexa, Kans., n.° de cat. 12106-500M) de acuerdo con el protocolo de propagacion de la ATCC. Las celulas se mantienen a una densidad de 3,5 X 104-5 celulas/ml. El dla antes del experimento, los linfocitos B Ramos se diluyen hasta 3,5 X 105 celulas/ml para asegurar que estan en una fase de crecimiento logarltmico y se dispensan allcuotas en una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos. Las celulas se incuban con el compuesto de prueba (disuelto en DMSO) o en DMSO (control) durante 1 h a 37 °C yFor the assay, human B-cell lymphocytes (ATCC, catalog No. CRL-1596) are grown in RPMI 1640 medium (Cellgro, catalog No. 10-040-CM) containing 10% fetal bovine serum (JRH, Catalog No. 12106-500M) in accordance with the propagation protocol supplied with the cells, and are maintained at a density of approximately 3.5 X 105 cells / ml. On the day before the test, the cells are diluted to 3.5 X 105 cells / ml to ensure that they are in the logarithmic growth phase. The cells are centrifuged and resuspended in RPMI 1640 medium (Cellgro, MediaTech, Inc., Herndon, Va., Cat. No. 10-040-CM) containing 5-10% bovine fetal serum (SFB), inactivated by heat (JRH Biosciences, Inc, Lenexa, Kans., cat. no. 12106-500M) according to the ATCC propagation protocol. The cells are maintained at a density of 3.5 X 104-5 cells / ml. The day before the experiment, Ramos B lymphocytes are diluted to 3.5 X 105 cells / ml to ensure that they are in a logarithmic growth phase and allcuotas are dispensed in a 96-well tissue culture plate. The cells are incubated with the test compound (dissolved in DMSO) or in DMSO (control) for 1 h at 37 ° C and

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

despues se estimulan con IL-4 (Pepotech, n.° de catalogo 200-04) durante 20-24 horas (la concentration final es 50 unidades/ml).They are then stimulated with IL-4 (Pepotech, catalog No. 200-04) for 20-24 hours (the final concentration is 50 units / ml).

Las celulas se centrifugan y resuspenden en RPMI con suero al 5 %. Se utilizan 5X104 celulas por punto en una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos. Las celulas se preincuban con compuesto o con control de vehlculo de DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., n.° de cat. D2650) durante 1 hora en una incubador a 37 °C. Despues, las celulas se estimulan con IL-4 (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., n.° de cat. 200-04) a una concentracion final de 50 unidades/ml durante 20-24 horas. Despues, las celulas se centrifugan y se tinen con anti CD23-PE (BD Pharmingen, San Diego, Calif., n.° de cat. 555711) y se analizan mediante FACS. La detection se realiza utilizando un citometro de flujo BD LSR I System, adquirido en Becton Dickinson Biosciences de San Jose, Calif.The cells are centrifuged and resuspended in RPMI with 5% serum. 5X104 cells per point are used in a 96-well tissue culture plate. Cells are pre-incubated with compound or with DMSO vehicle control (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., Cat. No. D2650) for 1 hour in a 37 ° C incubator. Then, the cells are stimulated with IL-4 (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., cat. No. 200-04) at a final concentration of 50 units / ml for 20-24 hours. The cells are then centrifuged and stained with anti CD23-PE (BD Pharmingen, San Diego, Calif., Cat. No. 555711) and analyzed by FACS. Detection is performed using a BD LSR I System flow cytometer, purchased from Becton Dickinson Biosciences of San Jose, Calif.

La proliferation se mide utilizando el ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo.RTM. (Promega), que determina el numero de celulas viables en cultivo a base de la cuantificacion del ATP presente, como un indicador de las celulas metabolicamente activas. El sustrato se descongela y se deja que llegue a temperatura ambiente. Despues de mezclar el reactivo Cell Titer-Glo y el diluyente juntos, se anaden 100 pl a cada pocillo. Las placas se mezclan en un agitador orbital durante dos minutos para inducir la lisis, y se incuban a temperatura ambiente durante diez minutos adicionales para permitir que se equilibre la senal. La deteccion se realiza utilizando un contador de multimarca Wallac Victor2 1420 adquirido en Perkin Elmer, Shelton, Conn.Proliferation is measured using the CellTiter-Glo.RTM luminescent cell viability assay. (Promega), which determines the number of viable cells in culture based on the quantification of the ATP present, as an indicator of metabolically active cells. The substrate is thawed and allowed to reach room temperature. After mixing the Cell Titer-Glo reagent and the diluent together, 100 pl are added to each well. The plates are mixed in an orbital shaker for two minutes to induce lysis, and incubated at room temperature for an additional ten minutes to allow the signal to equilibrate. Detection is performed using a Wallac Victor2 1420 multibrand counter purchased at Perkin Elmer, Shelton, Conn.

En el dla dos, las celulas A549 se preincuban con un compuesto de prueba de 2,4-pirimidindiamina o DMSO (control) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., n.° de catalogo D2650) durante 1 hora. Despues, las celulas se estimulan con IFNy (75 ng/ml) (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., n.° de cat. 300-02) y se deja incubando durante 24 horas. El intervalo de dosis de compuesto de prueba final es 30 pM a 14 nM en 200 pl de medio F12K conteniendo SFB al 5 %, DMSO al 0,3 %.In day two, the A549 cells are pre-incubated with a 2,4-pyrimidinediamine or DMSO (control) test compound (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., catalog number D2650) for 1 hour. Then, the cells are stimulated with IFNy (75 ng / ml) (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., cat. No. 300-02) and allowed to incubate for 24 hours. The dose range of final test compound is 30 pM at 14 nM in 200 pl of F12K medium containing 5% SFB, 0.3% DMSO.

En el dla tres, el medio celular se retira y las celulas se lavan con 200 pl de PBS (solution salina tamponada con fosfato). Se trata cada pocillo con tripsina para disociar las celulas, despues se neutraliza mediante la adicion de 200 pl de medio F12K completo. Las celulas se sedimentan y se tinen con un anticuerpo anti ICAM-1 (CD54) humana en raton conjugado a APC (BD Pharmingen, San Diego, Calif., n.° de catalogo 559771) durante 20 minutos a 4 °C. Las celulas se lavan con tampon FACS (PBS + SFB al 2 %) enfriado en hielo y la expresion en superficie de ICAM-1 se analiza mediante citometrla de flujo. La deteccion se realiza utilizando un citometro de flujo BD LSR I System, adquirido en BD Biosciences de San Jose, Calif. Los eventos se seleccionan por la dispersion en vivo y se calcula la media geometrica (programa informatico CellQuest version 3.3 de Becton-Dickinson, Franklin Lakes, N.J.). Las medias geometricas se representan frente a la concentracion de compuesto para generar una curva de dosis-respuesta.On day three, the cell medium is removed and the cells are washed with 200 pl of PBS (phosphate buffered saline). Each well is treated with trypsin to dissociate the cells, then neutralized by adding 200 pl of complete F12K medium. The cells are sedimented and stained with a human anti-ICAM-1 (CD54) antibody in mouse conjugated to APC (BD Pharmingen, San Diego, Calif., Catalog No. 559771) for 20 minutes at 4 ° C. The cells are washed with ice-cold FACS buffer (PBS + 2% SFB) and the surface expression of ICAM-1 is analyzed by flow cytometry. Detection is performed using a BD LSR I System flow cytometer, purchased from BD Biosciences of San Jose, Calif. The events are selected by live dispersion and the geometric mean is calculated (computer program CellQuest version 3.3 from Becton-Dickinson, Franklin Lakes, N.J.). The geometric means are plotted against the compound concentration to generate a dose-response curve.

Ejemplo 337: Inhibition de la transduction de senal mediada por Syk a traves del receptor de linfocitos B en llneas celulares de linfoma no HodgkinExample 337: Inhibition of Syk-mediated signal transduction through the B-cell receptor in non-Hodgkin lymphoma cell lines

Las celulas se pretrataron durante 1 hora con o sin compuesto (0,02 a 2 uM) antes de la estimulacion de la serialization del receptor de linfocitos B mediante la incubation de celulas con anticuerpo anti mu 3 pg/ml durante 10 minutos a 37 °C. El flujo de Ca2+ se midio utilizando el colorante de carga Calcio 3 y la FlexStation (Molecular Device). La senalizacion del receptor de linfocitos B se ensayo mediante fosfo-citometrla de flujo intracelular, siguiendo protocolos suministrados por BD Pharmingen (San Jose, CA). La activation de Syk se midio mediante la induction de la fosforilacion de tirosinas de BLNK en la position de aminoacido 84 (pBLNK Y84) y la induction de la fosforilacion de tirosinas de ERK1/2 en la posicion de aminoacido 204 (pERK Y204). La activacion del miembro de la familia Src Lyn se midio mediante la induccion de la fosforilacion de tirosinas de Syk en la posicion de aminoacido 352 (pSyk y352). Los datos se presentan como las CI50 pM. Cada compuesto inhibio de forma eficaz el flujo de Ca2+ inducido por el receptor de linfocitos B y la activacion de Syk, pero no al miembro de la familia Src Lyn.The cells were pretreated for 1 hour with or without compound (0.02 to 2 µM) before stimulation of the B cell receptor serialization by incubation of cells with anti mu 3 pg / ml antibody for 10 minutes at 37 ° C. The Ca2 + flow was measured using the Calcio 3 loading dye and the FlexStation (Molecular Device). B-cell receptor signaling was assayed by intracellular flow phospho-cytometry, following protocols provided by BD Pharmingen (San Jose, CA). Syk activation was measured by induction of the tyrosine phosphorylation of BLNK at amino acid position 84 (pBLNK Y84) and induction of tyrosine phosphorylation of ERK1 / 2 at amino acid position 204 (pERK Y204). The activation of the Src Lyn family member was measured by inducing the phosphorylation of Syk tyrosines at amino acid position 352 (pSyk and 352). Data are presented as IC50 pM. Each compound effectively inhibited the flow of Ca2 + induced by the B lymphocyte receptor and the activation of Syk, but not to the family member Src Lyn.

Ejemplo 338: la inhibicion de Syk ejerce un efecto antiproliferativo sobre llneas celulares de linfoma no Hodgkin.Example 338: Syk inhibition exerts an antiproliferative effect on non-Hodgkin lymphoma cell lines.

Las celulas se incubaron con concentraciones crecientes de cada compuesto, despues se evaluo a las 72 horas la extension de la proliferacion utilizando el ensayo MTT (empresa, ciudad, pals) siguiendo el protocolo suministrado por el fabricante. Los datos se presentan como valores de CI50 pM, que representan la media mas/menos la desviacion tlpica de 5 o 6 experimentos independientes. Cada compuesto inhibio la proliferacion de las llneas celulares SUDHL-4 y -6, que dependen de Syk para las senales de supervivencia y crecimiento, en el intervalo de pM bajo. Las celulas Toledo, que no necesitan Syk, fueron notablemente menos sensibles a los efectos antiproliferativos de la inhibicion de Syk.Cells were incubated with increasing concentrations of each compound, then the extent of proliferation was evaluated at 72 hours using the MTT assay (company, city, country) following the protocol provided by the manufacturer. The data are presented as IC50 pM values, which represent the mean plus / minus the typical deviation of 5 or 6 independent experiments. Each compound inhibited the proliferation of SUDHL-4 and -6 cell lines, which depend on Syk for survival and growth signals, in the low pM range. Toledo cells, which do not need Syk, were noticeably less sensitive to the antiproliferative effects of Syk inhibition.

Ejemplo 339: la inhibicion de Syk induce apoptosis en llneas celulares de linfoma no Hodgkin.Example 339: Syk inhibition induces apoptosis in non-Hodgkin lymphoma cell lines.

Los datos representan dos experimentos independientes para evaluar el efecto de la inhibicion de Syk y Syk/JAK sobre la supervivencia de llneas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin difuso largas. Las llneas celulares SUDHL-4 y SUDHL-6 dependen para la supervivencia de la senalizacion del receptor de linfocitos B mediada por Syk, mientras que las celulas Toledo no. Las celulas se incubaron con compuestos en la concentracion y tiempos indicados; laThe data represent two independent experiments to assess the effect of Syk and Syk / JAK inhibition on the survival of long diffuse non-Hodgkin lymphoma B lymphocyte lines. The SUDHL-4 and SUDHL-6 cell lines depend on the survival of Syk-mediated B-cell receptor signaling, while Toledo cells do not. The cells were incubated with compounds at the indicated concentration and times; the

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

induction de la apoptosis se midio mediante citometrla de flujo utilizando el kit de detection de Caspasa 3 (Sigma- Aldrich, Saint Luis, MO). Los datos se presentan como el porcentaje de celulas positivas totales para el marcador de apoptosis Caspasa 3. Como se esperaba, la inhibition de Syk dio como resultado la induccion de la apoptosis en las llneas celulares SUDHL-4 y -6, pero no en la llnea celular Toledo.Apoptosis induction was measured by flow cytometry using the Caspasa 3 detection kit (Sigma-Aldrich, Saint Luis, MO). The data is presented as the percentage of total positive cells for the Caspasa 3 apoptosis marker. As expected, the inhibition of Syk resulted in the induction of apoptosis in the SUDHL-4 and -6 cell lines, but not in the Toledo cell line.

Ejemplo 340: Inhibicion de la activation de linfocitos B primarios de raton por los inhibidores de SykExample 340: Inhibition of mouse primary B lymphocyte activation by Syk inhibitors

Se pretrataron esplenocitos primarios de raton durante 1 hora con concentraciones crecientes de cada compuesto (0,05-2 pM) antes de la adicion de control o de suero anti IgD de raton en cabra. La activacion de los linfocitos B inducida por anti IgD se midio 16 horas mas tarde mediante citometrla de flujo, tinendo los marcadores de activacion CD80/86 y CD69.Primary mouse splenocytes were pretreated for 1 hour with increasing concentrations of each compound (0.05-2 pM) before control addition or goat anti mouse IgD serum. The activation of anti-IgD-induced B lymphocytes was measured 16 hours later by flow cytometry, having the activation markers CD80 / 86 and CD69.

Ejemplo 341: Modelo de raton de trombocitopenia inmunomediadaExample 341: Mouse model of immunomediated thrombocytopenia

La trombocitopenia inmunomediada esta provocada por anticuerpos dirigidos frente a glucoprotelnas de superficie de plaquetas, anticuerpos frente a complejos que contienen farmaco sobre la superficie de plaquetas o mediante celulas recubiertas de anticuerpo o inmunocomplejos que interaction con la superficie de las plaquetas. Se evalua la capacidad de los compuestos seleccionados para inhibir la elimination de plaquetas en un modelo de raton de trombocitopenia mediada por anticuerpos. En este modelo, una rapida eliminacion de plaquetas circulantes (aproximadamente el 50 %) resulta de la administration intravenosa de un anticuerpo anti GPIIb de raton en rata (clon MWReg30) (BD Biosciences, Pharmingen). Para evaluar la capacidad de inhibicion de la eliminacion de plaquetas, los compuestos se suspendieron en metilcelulosa al 0,5 % en agua y se administraron a traves de sonda oral (100 ul/raton) en un momento antes de la inyeccion del anticuerpo, cuando el compuesto alcanzarla la maxima concentration en plasma (normalmente 1 - 2 horas a base de experimentos de farmacocinetica distintos para cada compuesto individual). A las 4 y 8 horas despues de la inyeccion del anticuerpo, se obtuvieron muestras de sangre terminales de los grupos de ratones tratados con vehlculo y con el artlculo de prueba (n=5 - 10 ratones/grupo) a traves de puncion cardiaca. La sangre se anticoagulo utilizando citrato trisodico o EDTA. Se midio en un analizador hematologico el recuento de plaquetas en las muestras de sangre entera (Hemavet, Drew Scientific). La sangre restante se proceso para obtener plasma y se midieron las concentraciones de compuesto mediante espectrometrla de masas.Immunomediated thrombocytopenia is caused by antibodies directed against platelet surface glucoprotelns, antibodies against drug-containing complexes on the platelet surface or by antibody-coated cells or immunocomplexes that interact with the platelet surface. The ability of selected compounds to inhibit platelet elimination in a mouse model of antibody-mediated thrombocytopenia is evaluated. In this model, rapid removal of circulating platelets (approximately 50%) results from intravenous administration of a rat anti GPIIb antibody in rat (MWReg30 clone) (BD Biosciences, Pharmingen). To assess the ability to inhibit platelet elimination, the compounds were suspended in 0.5% methylcellulose in water and administered through an oral probe (100 ul / mouse) at a time before antibody injection, when the compound would reach the maximum concentration in plasma (usually 1-2 hours based on different pharmacokinetic experiments for each individual compound). At 4 and 8 hours after the antibody injection, terminal blood samples were obtained from the groups of mice treated with vehicle and with the test article (n = 5-10 mice / group) through cardiac puncture. The blood was anticoagulated using trisodium citrate or EDTA. The platelet count in whole blood samples was measured in a hematological analyzer (Hemavet, Drew Scientific). The remaining blood was processed to obtain plasma and the compound concentrations were measured by mass spectrometry.

La eliminacion de plaquetas se determino midiendo la diferencia en el numero de plaquetas entre el grupo de tratamiento sin anticuerpo promedio y los animales a los que se administro el anticuerpo anti GPIIb de raton en rata. La inhibicion de la eliminacion de plaquetas se determino comparando la diferencia entre la eliminacion de plaquetas de los animales tratados con vehlculo y con el compuesto.Platelet removal was determined by measuring the difference in the number of platelets between the treatment group without average antibody and the animals to which the rat anti GPIIb antibody was administered in rat. The inhibition of platelet removal was determined by comparing the difference between platelet removal from animals treated with vehicle and with the compound.

Ejemplo 342: Modelo de raton de artritis inducida por anticuerpos para colagenoExample 342: Mouse model of antibody-induced arthritis for collagen

La actividad inhibidora de los compuestos seleccionados se investigo en un modelo de raton de artritis inducida por anticuerpos para colageno (AIAC). La artritis inducida por colageno esta mediada por autoanticuerpos contra el colageno de tipo II y el complemento, por lo tanto la artritis se puede inducir mediante la administracion de anticuerpos policlonales o una mezcla de anticuerpos monoclonales contra el colageno de tipo II. El modelo AIAC (Chondrex, Inc., Redmond, WA) utiliza una mezcla de 4 clones que reconoce epltopos individuales agrupados dentro de un fragmento peptldico de 83 aminoacidos del colageno de tipo II. Estos epltopos comparten secuencias de aminoacidos comunes del colageno de tipo II de muchas especies distintas, que incluyen pollo, raton, rata, bovino, porcino, mono y ser humano. El modelo utiliza un coctel de anticuerpos monoclonales seguido de lipopolisacarido bacteriano (LPS) para inducir al cabo de 7 dlas una grave y consistente artritis en ratones. Este modelo se desarrollo a base de la hipotesis de que las toxinas bacterianas absorbidas a traves del tracto gastrointestinal desempenan un papel sinergico y patologico con los autoanticuerpos contra el colageno de tipo II, en el desencadenamiento de artritis en pacientes con Artritis Reumatoide.The inhibitory activity of the selected compounds was investigated in a mouse model of antibody-induced arthritis for collagen (AIAC). Collagen-induced arthritis is mediated by autoantibodies against type II collagen and complement, therefore arthritis can be induced by the administration of polyclonal antibodies or a mixture of monoclonal antibodies against type II collagen. The AIAC model (Chondrex, Inc., Redmond, WA) uses a mixture of 4 clones that recognizes individual epltopos grouped within a peptide fragment of 83 amino acids of type II collagen. These epltopos share common amino acid sequences of type II collagen of many different species, including chicken, mouse, rat, bovine, pig, monkey and human. The model uses a cocktail of monoclonal antibodies followed by bacterial lipopolysaccharide (LPS) to induce severe and consistent arthritis in mice after 7 days. This model was developed based on the hypothesis that the bacterial toxins absorbed through the gastrointestinal tract play a synergistic and pathological role with autoantibodies against type II collagen, in the triggering of arthritis in patients with Rheumatoid Arthritis.

Para estos experimentos, el coctel de anticuerpos monoclonales (n.° de Lote OC-708) se inyecto por via intravenosa a traves de la vena de la cola a una dosis de 4 mg/raton (40 mg/ml) en el dla 0, seguido de inyeccion intraperitoneal de LPS diluida en solution salina normal a una dosis de 25 ug/raton en ratones Balb/C hembra de 8 semanas de edad (Charles River, Inc.). La dosificacion de los artlculos de prueba se inicio justo antes o despues de la inyeccion IV del coctel de anticuerpos. Los compuestos se suspendieron en metilcelulosa al 0,5 % en agua y se administraron a traves de sonda oral (100 ul/raton) de forma diaria durante el estudio de 7-10 dlas. Las puntuaciones de inflamacion cllnica se obtuvieron de forma diaria. Las puntuaciones de la inhibicion de inflamacion cllnica se determinaron al final del experimento a base de la diferencia entre los ratones tratados con vehlculo y con el artlculo de prueba. Las concentraciones en plasma representan la concentracion pico a una hora despues de la ultima dosis en el dla de finalization del estudio.For these experiments, the monoclonal antibody cocktail (Lot No. OC-708) was injected intravenously through the tail vein at a dose of 4 mg / mouse (40 mg / ml) on day 0 , followed by intraperitoneal injection of LPS diluted in normal saline at a dose of 25 ug / mouse in 8-week-old female Balb / C mice (Charles River, Inc.). The dosing of the test items was started just before or after the IV injection of the antibody cocktail. The compounds were suspended in 0.5% methylcellulose in water and administered via oral probe (100 ul / mouse) daily during the 7-10 day study. The clinical inflammation scores were obtained daily. Scores of the inhibition of clinical inflammation were determined at the end of the experiment based on the difference between the mice treated with vehicle and with the test article. Plasma concentrations represent the peak concentration one hour after the last dose on the day of completion of the study.

Ejemplo 343: Inhibicion de la fosforilacion de Stat-6 por JAK1/3 inducida por IL-4 en linfocitos B RamosExample 343: Inhibition of the phosphorylation of Stat-6 by JAK1 / 3 induced by IL-4 in B lymphocytes

Se pretrataron linfocitos B Ramos durante 1 hora con concentraciones crecientes de compuesto, como se indica, antes de la adicion de IL-4. Las celulas se incubaron con IL-4 durante 10 minutos y despues se sometieron aRamos B lymphocytes were pretreated for 1 hour with increasing concentrations of compound, as indicated, before the addition of IL-4. The cells were incubated with IL-4 for 10 minutes and then subjected to

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

citometrla de flujo intracelular para medir el porcentaje de inhibicion de Stat-6 inducido por IL-4.Intracellular flow cytometry to measure the percentage of Stat-6 inhibition induced by IL-4.

Ejemplo 344: Inhibicion de la fosforilacion de Stat-6 por JAK1/3 inducida por IL-4 en linfocitos B RamosExample 344: Inhibition of phosphorylation of Stat-6 by JAK1 / 3 induced by IL-4 in B lymphocytes

Se pretrataron linfocitos B Ramos durante 1 hora con concentraciones crecientes de compuesto, como se indica, antes de la adicion de IL-4. Las celulas se incubaron con IL-4 durante 10 minutos, y despues se sometieron a citometrla de flujo intracelular para medir el porcentaje de inhibicion de Stat-6 inducido por IL-4.Ramos B lymphocytes were pretreated for 1 hour with increasing concentrations of compound, as indicated, before the addition of IL-4. The cells were incubated with IL-4 for 10 minutes, and then subjected to intracellular flow cytometry to measure the percentage of Stat-6 inhibition induced by IL-4.

Ejemplo 345: Ensayo de proliferacion de linfocitos T humanos primarios estimulados con IL-2Example 345: Proliferation assay of primary human T lymphocytes stimulated with IL-2

Los linfocitos T humanos primarios obtenidos de sangre periferica y preactivados a traves de la estimulacion del receptor de linfocitos T y CD28 proliferan in vitro en respuesta a la citocina Interleucina-2 (IL-2). Esta respuesta proliferativa es dependiente de la activacion de las tirosina quinasas JAK-1 y JAK-3, que fosforilan y activan al factor de transcripcion Stat-5.Primary human T lymphocytes obtained from peripheral blood and preactivated through stimulation of the T and CD28 lymphocyte receptor proliferate in vitro in response to Interleukin-2 cytokine (IL-2). This proliferative response is dependent on the activation of the JAK-1 and JAK-3 tyrosine kinases, which phosphorylate and activate the Stat-5 transcription factor.

Los linfocitos T primarios humanos se preparan como sigue. Se obtiene sangre entera de un voluntario sano, se mezcla 1:1 con PBS, deposita sobre Ficoll Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, N.J., n.° de catalogo 17-1440-03) en una proporcion de sangre/PBS:ficoll 2:1 y se centrifuga durante 30 min a 4 °C a 1750 rpm. Se recuperan los linfocitos en la interfase suero:ficoll y se lavan dos veces con 5 volumenes de PBS. Las celulas se resuspenden en medio de Yssel (Gemini Bio-products, Woodland, Calif., n.° de catalogo 400-103) conteniendo IL2 recombinante (R and D Systems, Minneapolis, Minn., n.° de catalogo 202-IL (20 pg)) 40 U/ml y se siembran en un matraz prerrecubierto con anti CD3 (BD Pharmingen, San Diego, Calif., n. de catalogo 555336) 1 pg/ml y anti CD28 (Immunotech, Beckman Coulter of Brea Calif., n.° de catalogo IM1376) 5 pg/ml. Los linfocitos T primarios se estimulan durante 3 a 4 dlas, despues se transfieren a un matraz reciente y se mantienen en RPMI con SFB al 10 % e IL-2 40 U/ml.Primary human T lymphocytes are prepared as follows. Whole blood is obtained from a healthy volunteer, mixed 1: 1 with PBS, deposited on Ficoll Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, catalog number 17-1440-03) in a blood / PBS ratio: ficoll 2: 1 and centrifuged for 30 min at 4 ° C at 1750 rpm. Lymphocytes are recovered at the serum: ficoll interface and washed twice with 5 volumes of PBS. The cells are resuspended in Yssel medium (Gemini Bio-products, Woodland, Calif., Catalog number 400-103) containing recombinant IL2 (R and D Systems, Minneapolis, Minn., Catalog number 202-IL (20 pg)) 40 U / ml and seeded in a pre-coated flask with anti CD3 (BD Pharmingen, San Diego, Calif., Catalog number 555336) 1 pg / ml and anti CD28 (Immunotech, Beckman Coulter of Brea Calif ., catalog number IM1376) 5 pg / ml. Primary T lymphocytes are stimulated for 3 to 4 days, then transferred to a recent flask and maintained in RPMI with 10% SFB and IL-2 40 U / ml.

Los linfocitos T primarios se lavan dos veces con PBS para eliminar la IL-2 y se resuspenden en medio de Yssel a 2X106 celulas/ml. Se anaden 50 pl de suspension de celulas conteniendo IL-2 80 U/ml a cada pocillo de una placa negra de 96 pocillos de fondo plano. Para el control no estimulado, se omite IL-2 en la ultima columna de la placa. Los compuestos se diluyen en serie con dimetilsulfoxido (DMSO puro al 99,7 %, probado en cultivo celular, Sigma- Aldrich, St. Louis, Mo., N.° de catalogo D2650) desde 5 mM en diluciones en serie con factor 3, y despues se diluyen 1:250 en medio de Yssel. Se anaden 50 pl del compuesto 2X por pocillo por duplicado y se permite que las celulas proliferen durante 72 horas a 37 °C.Primary T lymphocytes are washed twice with PBS to remove IL-2 and resuspended in Yssel medium at 2X106 cells / ml. 50 pl of cell suspension containing 80 U / ml IL-2 are added to each well of a flat bottom 96-well black plate. For non-stimulated control, IL-2 is omitted in the last column of the plate. The compounds are serially diluted with dimethylsulfoxide (99.7% pure DMSO, tested in cell culture, Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., Catalog No. D2650) from 5 mM in serial dilutions with factor 3 , and then diluted 1: 250 in the middle of Yssel. 50 pl of the 2X compound are added per well in duplicate and the cells are allowed to proliferate for 72 hours at 37 ° C.

La proliferacion se mide utilizando el ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo.RTM. (Promega), que determina el numero de celulas viables en cultivos a base de la cuantificacion del ATP presente, como un indicador de celulas metabolicamente activas. El sustrato se descongela y se permite que alcance la temperatura ambiente. Despues de mezclar el reactivo de Cell Titer-Glo y el diluyente juntos, se anaden 100 pl a cada pocillo. Las placas se mezclan sobre un agitador orbital durante dos minutos para inducir la lisis y se incuban a temperatura ambiente durante diez minutos adicionales para permitir que se equilibre la senal. La deteccion se realiza utilizando un contador de multimarca Wallac Victor2 1420 adquirido en Perkin Elmer, Shelton, Conn.Proliferation is measured using the CellTiter-Glo.RTM luminescent cell viability assay. (Promega), which determines the number of viable cells in cultures based on the quantification of the ATP present, as an indicator of metabolically active cells. The substrate is thawed and allowed to reach room temperature. After mixing the Cell Titer-Glo reagent and diluent together, 100 pl are added to each well. The plates are mixed on an orbital shaker for two minutes to induce lysis and incubated at room temperature for an additional ten minutes to allow the signal to equilibrate. Detection is performed using a Wallac Victor2 1420 multibrand counter purchased at Perkin Elmer, Shelton, Conn.

Ejemplo 346. Llnea epitelial A549 estimulada con IFNyExample 346. A549 epithelial line stimulated with IFNy

Las celulas epiteliales de pulmon A549 regulan de forma positiva la expresion en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una diversidad de estlmulos distintos. Por lo tanto, utilizando la expresion de ICAM-1 como lectura, se pueden evaluar en el mismo tipo celular los efectos del compuesto sobre distintas rutas de senalizacion. IFNy regula de forma positiva a ICAM-1 a traves de la activacion de la ruta JAK/Stat. En este ejemplo, se evalua la regulacion positiva de ICAM-1 por IFNy.The lung epithelial cells A549 positively regulate the surface expression of ICAM-1 (CD54) in response to a variety of different stimuli. Therefore, using the expression of ICAM-1 as a reading, the effects of the compound on different signaling pathways can be evaluated in the same cell type. IFNy regulates ICAM-1 positively through the activation of the JAK / Stat route. In this example, the positive regulation of ICAM-1 by IFNy is evaluated.

La llnea celular de carcinoma epitelial de pulmon A549 se origina en la Coleccion Americana de Cultivos Tipo. El cultivo de rutina es con medio F12K (Mediatech Inc., Lenexa, Kans., n.° de Cat. 10-025-CV) con suero fetal bovino al 10 %, penicilina 100 U.I. y estreptomicina 100 ng/ml (medio F12k completo). Las celulas se incuban en una atmosfera humidificada de CO2 al 5 % a 37 °C. Antes del uso en el ensayo, las celulas A549 se lavan con PBS y se tratan con tripsina (Mediatech Inc., n.° de Cat. 25-052-CI) para levantar las celulas. La suspension celular con tripsina se neutraliza con medio F12K completo y se centrifuga para sedimentar las celulas. El sedimento celular se resuspende en medio F12K completo a una concentration de 2,0X105/ml. Se siembran 20.000 celulas por pocillo, en un volumen total de 100 pl, en una placa de cultivo de tejidos de fondo plano y se permite que se adhieran durante una noche.The lung epithelial carcinoma cell line A549 originates from the American Type Culture Collection. Routine culture is with F12K medium (Mediatech Inc., Lenexa, Kans., Cat. No. 10-025-CV) with 10% fetal bovine serum, 100 U.I penicillin. and streptomycin 100 ng / ml (complete F12k medium). The cells are incubated in a humidified atmosphere of 5% CO2 at 37 ° C. Before use in the assay, A549 cells are washed with PBS and treated with trypsin (Mediatech Inc., Cat. No. 25-052-CI) to lift the cells. The trypsin cell suspension is neutralized with complete F12K medium and centrifuged to pellet the cells. The cell pellet is resuspended in complete F12K medium at a concentration of 2.0X105 / ml. 20,000 cells are seeded per well, in a total volume of 100 pl, in a flat-bottomed tissue culture plate and allowed to adhere overnight.

Al segundo dla, las celulas A549 se preincuban con un compuesto de prueba de 2,4-pirimidina diamina o DMSO (control) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., n.° de catalogo D2650) durante 1 hora. Despues, las celulas se estimulan con IFNy (75 ng/ml) (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., n.° de Cat. 300-02) y se permite la incubation durante 24 horas. El intervalo de dosis del compuesto de prueba final es 30 pM a 14 nM en 200 pl de medio F12K conteniendo SFB al 5 %, DMSO al 0,3 %.On the second day, the A549 cells are pre-incubated with a 2,4-pyrimidine diamine or DMSO (control) test compound (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo., catalog number D2650) for 1 hour. Then, the cells are stimulated with IFNy (75 ng / ml) (Peprotech Inc., Rocky Hill, N.J., Cat. No. 300-02) and incubation is allowed for 24 hours. The dose range of the final test compound is 30 pM at 14 nM in 200 pl of F12K medium containing 5% SFB, 0.3% DMSO.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

El dla tres, el medio celular se retira y las celulas se lavan con 200 |jl de PBS (solucion salina tamponada con fosfato). Cada pocillo se trata con tripsina para disociar las celulas, despues se neutraliza mediante la adicion de 200 jl de medio F12K completo. Las celulas se sedimentan y se tinen con un anticuerpo anti ICAM-1 (CD54) humano en raton conjugado a APC (BD Pharmingen, San Diego, Calif., n.° de catalogo 559771) durante 20 minutos a 4 °C. Las celulas se lavan con tampon de FACS (PBS + SFB al 2 %) enfriado en hielo y la expresion en superficie de ICAM-1 se analiza mediante citometrla de flujo. La deteccion se realiza utilizando el citometro de flujo bD LSR I System, adquirido en BD Biosciences de San Jose, California. Los sucesos se clasifican por la dispersion en vivo y se calculan las medias geometricas (programa informatico CellQuest version 3.3 de Becton-Dickinson, Franklin Lakes, N.J.). Las medias geometricas se representan frente a la concentracion de compuesto para generar una curva de dosis-respuesta.On day three, the cell medium is removed and the cells are washed with 200 µl of PBS (phosphate buffered saline). Each well is treated with trypsin to dissociate the cells, then neutralized by adding 200 µl of complete F12K medium. The cells are sedimented and stained with a human anti-ICAM-1 (CD54) antibody in mouse conjugated to APC (BD Pharmingen, San Diego, Calif., Catalog No. 559771) for 20 minutes at 4 ° C. The cells are washed with ice cold FACS buffer (PBS + 2% SFB) and the surface expression of ICAM-1 is analyzed by flow cytometry. Detection is performed using the bD LSR I System flow cytometer, acquired at BD Biosciences in San Jose, California. The events are classified by live dispersion and geometric means are calculated (computer program CellQuest version 3.3 from Becton-Dickinson, Franklin Lakes, N.J.). The geometric means are plotted against the compound concentration to generate a dose-response curve.

Ejemplo 347. Ensayo de FACS de ICAM1 por IFNy en U937Example 347. ICAM1 FACS Assay by IFNy at U937

Las celulas monoclticas humanas U937 regulan de forma positiva la expresion en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una diversidad de estlmulos distintos. Por lo tanto, utilizando la expresion de ICAM-1 como lectura, se pueden evaluar en el mismo tipo celular los efectos del compuesto sobre distintas rutas de senalizacion. IFNy regula de forma positiva a ICAM-1 a traves de la activacion de la ruta JAK/Stat. En este ejemplo, se evalua la regulacion positiva de ICAM-1 mediante IFNy.U937 human monoclt cells positively regulate the surface expression of ICAM-1 (CD54) in response to a variety of different stimuli. Therefore, using the expression of ICAM-1 as a reading, the effects of the compound on different signaling pathways can be evaluated in the same cell type. IFNy regulates ICAM-1 positively through the activation of the JAK / Stat route. In this example, the positive regulation of ICAM-1 is evaluated by IFNy.

La llnea de celulas monoclticas humanas U937 se obtiene de la ATCC de Rockville, Md., numero de catalogo CRL-1593.2, y se cultiva en medio RPMI-1640 conteniendo SFT al 10 % (v/v). Las celulas U937 se crecen en RPMI al 10 %. Despues, las celulas se siembran en placa a una concentracion de 100.000 celulas por 160 jl, en placas de fondo plano de 96 pocillos. Despues, se diluyen los compuestos de prueba como sigue: el compuesto de prueba 10 mM se diluye en DMSO 1:5 (3 jl de compuesto de prueba 10 mM en 12 jl de DMSO), seguido de una dilucion en serie 1:3 del compuesto de prueba en DMSO (6 jl del compuesto de prueba diluido en serie en 12 jl de DMSO para dar diluciones con factor 3). Despues, se trasfieren 4 jl del compuesto de prueba a 76 jl de RPMi al 10 % dando como resultado una solucion 10X (compuesto de prueba 100 jM, DMSO al 5 %). Para los pocillos de control, se diluyen 4 jl de DMSO en 76 jl de RPMI al 10 %.The U937 human monoclt cell line is obtained from the ATCC of Rockville, Md., Catalog number CRL-1593.2, and grown in RPMI-1640 medium containing 10% (v / v) SFT. U937 cells are grown in 10% RPMI. Then, the cells are plated at a concentration of 100,000 cells per 160 ml, in 96-well flat bottom plates. Next, the test compounds are diluted as follows: the 10 mM test compound is diluted in 1: 5 DMSO (3 jl of 10 mM test compound in 12 jl of DMSO), followed by a 1: 3 serial dilution of the DMSO test compound (6 ml of the test compound serially diluted in 12 ml of DMSO to give dilutions with factor 3). Then, 4 µl of the test compound is transferred to 76 µl of 10% RPMi resulting in a 10X solution (100 µM test compound, 5% DMSO). For control wells, 4 ml of DMSO is diluted in 76 ml of 10% RPMI.

El ensayo se realiza por duplicado con 8 puntos (8 concentraciones en diluciones con factor 3 desde 10 jl) y con 4 pocillos solo con DMSo (pocillos de control) en condiciones estimuladas y 4 pocillos con solo DMSO en condiciones no estimuladas.The test is performed in duplicate with 8 points (8 concentrations in dilutions with factor 3 from 10 jl) and with 4 wells only with DMSo (control wells) under stimulated conditions and 4 wells with only DMSO under unstimulated conditions.

La placa de compuesto diluida se mezcla 2X utilizando un multimek (Beckman Coulter de Brea, Calif.) y despues se trasfieren 20 jl de los compuestos diluidos a la placa de 96 pocillos conteniendo 160 jl de celulas, que despues se mezclan otra vez dos veces a velocidades bajas. Despues, las celulas y los compuestos se preincuban durante 30 minutos a 37 °C con CO2 al 5 %.The diluted compound plate is mixed 2X using a multimek (Beckman Coulter of Brea, Calif.) And then 20 ml of the diluted compounds are transferred to the 96-well plate containing 160 ml of cells, which are then mixed again twice at low speeds. Then, the cells and compounds are pre-incubated for 30 minutes at 37 ° C with 5% CO2.

La mezcla de estimulacion 10X se prepara preparando una solucion de IFNy humana 100 ng/ml en RPMI al 10 %. Despues, las celulas y el compuesto se estimulan con 20 jl de mezcla de estimulacion de IFNy para dar una concentracion final de IFNy 10 ng/ml, compuesto de prueba 10 jM y DMSO al 0,5 %. Las celulas se mantienen en condiciones para la estimulacion durante 18-24 horas a 37 °C con CO2 al 5 %.The 10X stimulation mixture is prepared by preparing a solution of 100 ng / ml human IFN and 10% RPMI. Then, the cells and the compound are stimulated with 20 ml of IFNy stimulation mixture to give a final concentration of IFN and 10 ng / ml, test compound 10 jM and 0.5% DMSO. The cells are kept in conditions for stimulation for 18-24 hours at 37 ° C with 5% CO2.

Para la tincion las celulas se transfieren a una placa de fondo redondeado de 96 pocillos y despues se mantienen en hielo durante la duracion del procedimiento de tincion. Las celulas se centrifugan a 1000 rpm durante 5 minutos a 4 °C, despues de lo cual el sobrenadante se retira. Despues de retirar del sobrenadante, se anade 1 jl de anticuerpo anti ICAM-1 humano en raton, conjugado a APC por 100 jl de tampon FACS. Despues, las celulas se incuban en hielo en oscuridad durante 30 minutos. Despues de la incubacion, se anaden 150 jl de tampon FACS y las celulas se centrifugan a 1000 rpm durante 5 minutos a 4 °C, despues de lo cual se retira el sobrenadante. Despues de retirar del sobrenadante, se anaden 200 jl de tampon de FACS y las celulas se resuspenden. Despues de la suspension, las celulas se centrifugan a 1000 rpm durante 5 min a 4 °C. Despues, el sobrenadante se retira antes de la resuspension de las celulas en 150 jl de tampon FACS.For staining the cells are transferred to a 96-well rounded bottom plate and then kept on ice for the duration of the staining procedure. The cells are centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes at 4 ° C, after which the supernatant is removed. After removal of the supernatant, 1 µl of human anti ICAM-1 antibody in mouse, conjugated to APC per 100 µl of FACS buffer is added. Then, the cells are incubated on ice in darkness for 30 minutes. After incubation, 150 ml of FACS buffer are added and the cells are centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes at 4 ° C, after which the supernatant is removed. After removing from the supernatant, 200 ml of FACS buffer are added and the cells are resuspended. After the suspension, the cells are centrifuged at 1000 rpm for 5 min at 4 ° C. Then, the supernatant is removed before resuspension of the cells in 150 ml of FACS buffer.

La deteccion se realiza utilizando un citometro de flujo BD LSR I System, adquirido en BD Biosciences de San Jose, California. Las celulas vivas se seleccionan por dispersion en vivo y se mide la media geometrica de ICAM-APC (programa informatico CellQuest version 3.3 de Becton-Dickinson, Franklin Lakes, N.J.). Se analiza el % de celulas vivas y de expresion de ICAM-1. Los ensayos para los compuestos de prueba se llevan a cabo en paralelo con un compuesto de control de actividad conocida. Normalmente la CE50 para el compuesto de control es 40-100 nM.Detection is performed using a BD LSR I System flow cytometer, purchased from BD Biosciences of San Jose, California. The live cells are selected by live dispersion and the geometric mean of ICAM-APC (Becton-Dickinson CellQuest version 3.3 software program, Franklin Lakes, N.J.) is measured. The% of live cells and ICAM-1 expression cells are analyzed. Assays for test compounds are carried out in parallel with a control compound of known activity. Normally the EC50 for the control compound is 40-100 nM.

Ejemplo 348. Analisis de la senalizacion de linfocitos B:Example 348. Analysis of B lymphocyte signaling:

Las llneas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin humanas SUDHL-4 (n.° ACC 495), SUDHL-6 (n.° ACC572) y Karpas-422 (n.° ACC32) se obtuvieron de DSMZ (Braunschweig, Alemania); las Toledo (n.° CRL-2631) y Ramos (n.° CRL-1596) se obtuvieron de la Coleccion Americana de Cultivos Tipo (ATCC; Manassas, VA). Todas las celulas se mantuvieron en medio RPMI (Invitrogen, Carlsbad, CA) complementado con suero de ternera fetal al 10 % (ATCC) y penicilina/estreptomicina (Invitrogen), y se mantuvieron a 37 °C en un incubador de cultivo de tejidosThe human non-Hodgkin lymphoma B-cell lines SUDHL-4 (No. ACC 495), SUDHL-6 (No. ACC572) and Karpas-422 (No. ACC32) were obtained from DSMZ (Braunschweig, Germany); Toledo (No. CRL-2631) and Ramos (No. CRL-1596) were obtained from the American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA). All cells were maintained in RPMI medium (Invitrogen, Carlsbad, CA) supplemented with 10% fetal calf serum (ATCC) and penicillin / streptomycin (Invitrogen), and maintained at 37 ° C in a tissue culture incubator

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

humidificado. Los anticuerpos utilizados en estos estudios incluyen el anticuerpo policlonal de cabra F(ab)'2 anti IgG humana (H+L) y anti IgM humana (BioSource, Camarillo, CA); el anti Syk humana de conejo, el anti fosfo-Syk (Y525/526) humana de conejo, anti fosfo-Syk (Y352) humana en conejo, anti BLNK humana, anti fosfo-BLNK (Y84) humana se obtuvieron de Cell Signaling Technologies, Inc. (Danvers, MA). Para la fosfo citometrla de flujo se obtuvieron los siguientes anticuerpos de Becton Dickinson (San Jose, CA): anti fosfo-STAT6 (Y641) humano de raton conjugado a Alexa fluor 488; anti fosfo-Zap70 (Y319)/Syk(Y352) humano de raton conjugado a ficoeritrina (PE) y anti fosfo-ERK1/2 (T202/Y204) humano de raton conjugado a isotiocianato de fluorescelna (FITC).humidified The antibodies used in these studies include the goat polyclonal antibody F (ab) '2 anti human IgG (H + L) and anti human IgM (BioSource, Camarillo, CA); human rabbit anti Syk, human rabbit anti phospho-Syk (Y525 / 526), human rabbit anti phospho-Syk (Y352), human anti BLNK, human anti phospho-BLNK (Y84) were obtained from Cell Signaling Technologies , Inc. (Danvers, MA). The following antibodies were obtained from Becton Dickinson (San Jose, CA) for the cytometric flow phospho: human anti-phospho-STAT6 (Y641) from mouse conjugated to Alexa fluor 488; Human anti-phospho-Zap70 (Y319) / Syk (Y352) from mice conjugated to phycoerythrin (PE) and anti-human phospho-ERK1 / 2 (T202 / Y204) from mice conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC).

La fosfocitometrla de flujo se realizo esencialmente como se describe en otros sitios (Irish, Czerwinski et al. Blood 108(9): 3135-42 (2006). Se estimularon 0,5x106 celulas en medio de cultivo con anticuerpo anti-p o anti-Y 1 pg/ml durante 10 minutos. La senalizacion inducida se finalizo inmediatamente despues del tiempo indicado, mediante la adicion de paraformaldehldo (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) hasta una concentracion final del 1 %. Las celulas se incubaron con paraformaldehldo durante 5 minutos a temperatura ambiente, se lavaron una vez con solucion salina tamponada con fosfato (PBS), despues se resuspendieron e incubaron durante una noche a 4 °C en metanol preenfrlado (-80 °C) (empresa, direction). Posteriormente las celulas fijadas y permeabilizadas se lavaron una vez en PBS, una segunda vez en PBS que contenla seroalbumina bovina (BSA) al 1 % (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), y despues se tineron con los anticuerpos indicados diluidos 1:20 en PBS + BSA al 1 %. Tras 30 minutos, las celulas se lavaron una vez en PBS y se sometieron a citometrla de flujo utilizando FACS Calibur (Becton Dickinson). Para los analisis de transferencia de Western, se estimularon 106 celulas durante 30 minutos con 2 pg/ml de los anticuerpos especlficos para el BCR indicados. La senalizacion se finalizo resuspendiendo las celulas en tampon de lisis e incubando en hielo durante 1 hora. Los residuos celulares se eliminaron por centrifugation y los lisados de protelna clarificados se resolvieron en SDS-PAGE al 10 % y se sondearon con los anticuerpos indicados siguiendo las recomendaciones hechas por los fabricantes. Cuando se indica, las celulas se pretrataron durante 1 hora a 37 °C con inhibidores de Syk o con control de vehlculo (DMSO al 0,5 %) a varias concentraciones antes de la estimulacion con anticuerpo anti BCR.Flow phosphocytometrla was performed essentially as described elsewhere (Irish, Czerwinski et al. Blood 108 (9): 3135-42 (2006). 0.5x106 cells were stimulated in culture medium with anti-p or anti antibody "And 1 pg / ml for 10 minutes. The induced signaling was terminated immediately after the indicated time, by adding paraformaldehldo (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) to a final concentration of 1%. Cells were incubated with paraformaldehldo for 5 minutes at room temperature, they were washed once with phosphate buffered saline (PBS), then resuspended and incubated overnight at 4 ° C in pre-cooled methanol (-80 ° C) (company, direction). fixed and permeabilized were washed once in PBS, a second time in PBS containing 1% bovine serum albumin (BSA) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), and then stained with the indicated antibodies diluted 1:20 in PBS + 1% BSA. T For 30 minutes, the cells were washed once in PBS and subjected to flow cytometry using FACS Calibur (Becton Dickinson). For Western blot analysis, 106 cells were stimulated for 30 minutes with 2 pg / ml of the indicated BCR-specific antibodies. The signaling was completed by resuspend the cells in lysis buffer and incubating on ice for 1 hour. The cell debris was removed by centrifugation and the clarified protein lysates were resolved in 10% SDS-PAGE and probed with the antibodies indicated following the recommendations made by the manufacturers. When indicated, the cells were pretreated for 1 hour at 37 ° C with Syk inhibitors or with vehicle control (0.5% DMSO) at various concentrations before stimulation with anti BCR antibody.

Ejemplo 349. Inhibition selectiva de la actividad de Syk.Example 349. Selective inhibition of Syk activity.

Se analizo la capacidad de los compuestos para inhibir a Syk purificada. Se encontro que P459-72 y P505-15 (dos compuestos de una serie especlfica para Syk como se muestra en la Tabla 9b) y el ejemplo 100b (de una serie con actividades inhibidoras de Syk y JAK duales) suprimen la actividad de la Syk quinasa con las CI50 de 43 nM, 6 nM y 31 nM, respectivamente. La selectividad de estos compuestos por Syk se determino explorando cada uno frente a un panel de 270 quinasas purificadas independientes a 300 nM (Millipore). Se calculo el porcentaje de inhibicion con respecto al vehlculo de control y los numeros se convirtieron a un mapa de calor; la no inhibicion se representa como verde, la mezcla creciente con rojo indica porcentaje de inhibicion creciente con el amarillo representando el 50 % de inhibicion y el rojo representando el 100 % de inhibicion (Figura 8). Como se representa en la Figura 8A, P459-72 y P505-15 fueron altamente especlficos para Syk (primera y segunda filas, respectivamente) mientras que el ejemplo 100b inhibio a multiples quinasas (tercera fila). El subconjunto de quinasas que se inhibieron en >80 % por cualquiera de los tres compuestos se muestran en la Figura 8B. El ejemplo 100b inhibio a Syk y MLK-1 (primera fila). A 300 nM, P505-15 inhibio 10 quinasas distintas (segunda fila). Cuando se reanalizo a 50 nM (aproximadamente 10x por encima de su valor CI50 de Syk de 6 nM), sin embargo, Syk no fue la unica quinasa que se mantuvo inhibida (tercera fila). P420-89 inhibio Syk, JAK2 y JAK3, junto con varias de otras quinasas (cuarta fila).The ability of the compounds to inhibit purified Syk was analyzed. It was found that P459-72 and P505-15 (two compounds of a specific series for Syk as shown in Table 9b) and example 100b (of a series with dual Syk and JAK inhibitory activities) suppress the activity of the Syk kinase with IC50 of 43 nM, 6 nM and 31 nM, respectively. The selectivity of these compounds by Syk was determined by scanning each against a panel of 270 independent purified kinases at 300 nM (Millipore). The percentage of inhibition with respect to the control vehicle was calculated and the numbers were converted to a heat map; non-inhibition is represented as green, the increasing mixture with red indicates a percentage of increasing inhibition with yellow representing 50% inhibition and red representing 100% inhibition (Figure 8). As depicted in Figure 8A, P459-72 and P505-15 were highly specific for Syk (first and second rows, respectively) while example 100b inhibited multiple kinases (third row). The subset of kinases that were inhibited by> 80% by any of the three compounds are shown in Figure 8B. Example 100b inhibited Syk and MLK-1 (first row). At 300 nM, P505-15 inhibited 10 different kinases (second row). When it was reanalyzed at 50 nM (approximately 10x above its Syk IC50 value of 6 nM), however, Syk was not the only kinase that remained inhibited (third row). P420-89 inhibited Syk, JAK2 and JAK3, along with several other kinases (fourth row).

Empleando el panel Milipore de quinasas purificadas, P505-15 (CI50 = 1 nM) inhibio el 98 % de la actividad de la quinasa Syk purificada a 50 nM. Los valores de CI50 se determinaron para las quinasas que se inhibieron en >80 % a 300 nM en el panel de quinasas de Millipore.Using the Milipore panel of purified kinases, P505-15 (IC50 = 1 nM) inhibited 98% of the activity of the purified Syk kinase at 50 nM. IC50 values were determined for kinases that were inhibited> 80% at 300 nM in the Millipore kinase panel.

Quinasa  Kinase

CI50 (nM)  IC50 (nM)

Syk(h)  Syk (h)

1  one

MLK1  MLK1

60  60

Fgr(h)  Fgr (h)

81  81

Yes(h)  Yes (h)

123  123

Flt3(h)  Flt3 (h)

139  139

PAK5  PAK5

166  166

Lyn(h)  Lyn (h)

199  199

cSRC(h)  cSRC (h)

244  244

Lck(h)  Lck (h)

300  300

En cambio, el inhibidor de multiquinasas P420-89 es mas semejante a R788 de Rigel. A 300 nM, P420-89 inhibio a Syk en el 88 %, junto con > 80 % de inhibicion de 32 quinasas adicionales. Entre estas estaban JAK 2 y 3 (inhibidas el 93 % y el 85 %, respectivamente), Flt-3 (inhibidas el 83-92 %) y cKit (inhibidas el 95-97 %), todas dianas para la manipulation terapeutica de la funcion linfocltica.In contrast, the P420-89 multi kinase inhibitor is more similar to Rigel's R788. At 300 nM, P420-89 inhibited Syk in 88%, along with> 80% inhibition of 32 additional kinases. Among these were JAK 2 and 3 (93% and 85% inhibited, respectively), Flt-3 (83-92% inhibited) and cKit (95-97% inhibited), all targets for therapeutic manipulation of the lymphocytic function

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

6060

6565

Ejemplo 350. Ensayo de flujo de calcio e inhibicion selectiva de Syk en ilneas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin.Example 350. Calcium flow assay and selective inhibition of Syk in non-Hodgkin lymphoma B lymphoma lines.

Las celulas Ramos se cultivaron (manteniendo aproximadamente 0,5 x 106 celulas/ml) en medio de cultivo 3 a 4 dlas antes de los experimentos. Las celulas se recogieron y se resuspendieron en medio recien preparado a 8x106 celulas/ml antes de la carga de colorante. Se anadio a las suspensiones celulares un volumen equivalente de colorante de carga Calcio 3 (Molecular Device, Sunneyvale, CA). Las celulas cargadas se dispensaron en una placa de 96 pocillos y se incubaron durante 20 minutos. Despues, los inhibidores de Syk se anadieron a las celulas cargadas y se incubaron durante otros 30 minutos. Los linfocitos B se estimularon con anticuerpo anti p 5 pg/ml. Los cambios en la concentracion de Ca2+ intracelular se midieron utilizando la FlexSTATion (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).Ramos cells were cultured (maintaining approximately 0.5 x 106 cells / ml) in culture medium 3 to 4 days before the experiments. The cells were collected and resuspended in freshly prepared medium at 8x106 cells / ml before loading the dye. An equivalent volume of Calcium 3 loading dye (Molecular Device, Sunneyvale, CA) was added to the cell suspensions. The charged cells were dispensed in a 96-well plate and incubated for 20 minutes. Then, the Syk inhibitors were added to the charged cells and incubated for another 30 minutes. B lymphocytes were stimulated with anti p 5 pg / ml antibody. Changes in intracellular Ca2 + concentration were measured using FlexSTATion (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).

La selectividad y potencia de la inhibicion de Syk en linfocitos B se investigo inicialmente mediante transferencia de Western, midiendo la induccion de pSyk Y525/526 y pBLNK Y84 mediada por el BCR, ambas medidas de la actividad de la Syk quinasa, y la induccion de pSyk Y352, una medida de la actividad de la Src quinasa. Los linfocitos B SUDHL-6 se estimularon con anticuerpo especlfico anti BCR durante 30 minutos en presencia o ausencia de cada uno de los inhibidores de Syk o de control de vehlculo. El tratamiento con 0,16 o 1 pM de cada compuesto redujo la autofosforilacion de Syk (Y525/526) inducida por BCR en aproximadamente el 40 % y el 60 %, respectivamente, como se estimo mediante densitometrla (datos no mostrados). Se utilizo un intervalo expandido de concentraciones para evaluar adicionalmente el efecto de estos compuestos sobre la actividad de Syk y Src quinasa inducida por el bCr. Como se muestra en la Figura 9, A-C, cada compuesto inhibio la actividad de Syk (pBLNK Y84) con valores de CI50 que varlan desde 0,16 a 1 pM, aunque no se observo efecto sobre la actividad de Scr (pSyk Y352) a tan alto como 2,5 pM.The selectivity and potency of Syk inhibition in B lymphocytes was initially investigated by Western blotting, measuring the induction of pSyk Y525 / 526 and pBLNK Y84 mediated by BCR, both measures of Syk kinase activity, and induction of pSyk Y352, a measure of the activity of Src kinase. SUDHL-6 B lymphocytes were stimulated with anti-BCR specific antibody for 30 minutes in the presence or absence of each of the Syk or vehicle control inhibitors. Treatment with 0.16 or 1 pM of each compound reduced Syk autophosphorylation (Y525 / 526) induced by BCR by approximately 40% and 60%, respectively, as estimated by densitometry (data not shown). An expanded range of concentrations was used to further assess the effect of these compounds on the activity of Syk and Src kinase induced by bCr. As shown in Figure 9, AC, each compound inhibited Syk activity (pBLNK Y84) with IC50 values ranging from 0.16 to 1 pM, although no effect on Scr activity (pSyk Y352) was observed at as high as 2.5 pM.

Tambien se midio la capacidad de cada compuesto para suprimir los sucesos de senalizacion mas distantes del BCR. Las celulas se estimularon otra vez mediante el anticuerpo anti BCR en presencia o ausencia de diversas concentraciones de cada inhibidor de Syk. La induccion de pSyk Y352 se midio como un control de especificidad, mientras que la de pERK1/2 T202/Y204 se utilizo como una medida de la senalizacion dependiente de Syk mas distante (Jiang, Craxton et al. J Exp Med 188(7): 1297-306 (1998)). La Figura 12C muestra las representaciones de FACS representativos que representan el efecto del inhibidor mas especlfico y potente de Syk de los tres, P505-15, sobre la senalizacion del BCR. A 125 nM, la activacion de ERK1/2 se suprimio de forma completa, mientras que las celulas estimuladas todavla se tenlan de forma positiva para Syk Y352. Este experimento se repitio, en donde se determino el efecto de los tres compuestos sobre la actividad de Src y Syk (Figura 10A). Fueron suficientes concentraciones menores de 125 nM para suprimir la senalizacion de Syk inducida por el BCR para ERK1/2. En cambio, se necesitaron concentraciones mucho mas elevadas para provocar una supresion modesta de la actividad de Src; un efecto sobre Src que no se observo mediante transferencia de Western (Figura 9, A-C). Ninguno de estos inhibidores de Syk suprimio la fosforilacion de tirosinas de ERK1/2 inducida por PMA, lo que demuestra que estos compuestos no inhiben sucesos de senalizacion aguas abajo de la PKC.The ability of each compound to suppress the most distant signaling events from the BCR was also measured. The cells were stimulated again by the anti BCR antibody in the presence or absence of various concentrations of each Syk inhibitor. The induction of pSyk Y352 was measured as a specificity control, while that of pERK1 / 2 T202 / Y204 was used as a measure of the more distant Syk-dependent signaling (Jiang, Craxton et al. J Exp Med 188 (7) : 1297-306 (1998)). Figure 12C shows representations of representative FACS representing the effect of the most specific and potent Syk inhibitor of the three, P505-15, on BCR signaling. At 125 nM, the activation of ERK1 / 2 was completely suppressed, while the stimulated cells are still positive for Syk Y352. This experiment was repeated, where the effect of the three compounds on the activity of Src and Syk was determined (Figure 10A). Concentrations below 125 nM were sufficient to suppress BCR-induced Syk signaling for ERK1 / 2. Instead, much higher concentrations were needed to cause a modest suppression of Src activity; an effect on Src that was not observed by Western blotting (Figure 9, A-C). None of these Syk inhibitors suppressed tyrosine phosphorylation of ERK1 / 2 induced by PMA, which demonstrates that these compounds do not inhibit signaling events downstream of PKC.

Mientras que P459-72 y P505-15 inhiben de forma especlfica Syk en ensayos sobre purificada y celular, el ejemplo 100b demostro de forma adicional actividad frente a JAK quinasas purificadas. Se analizo la inhibicion de la senalizacion de IL-4 para STAT-6 a traves de JAK1/3 en linfocitos B para estos compuestos, una ruta de senalizacion que no necesita Syk. Los compuestos especlficos para Syk no suprimieron la senalizacion de IL4 a concentraciones tan altas como 211M. Al contrario, el ejemplo 100b si suprimio la senalizacion de IL4, con una CI50 de alrededor de 125 nM (Figura 10B).While P459-72 and P505-15 specifically inhibit Syk in purified and cellular assays, example 100b further demonstrated activity against purified JAK kinases. The inhibition of IL-4 signaling for STAT-6 through JAK1 / 3 in B lymphocytes for these compounds, a signaling path that does not need Syk, was analyzed. Syk-specific compounds did not suppress IL4 signaling at concentrations as high as 211M. On the contrary, example 100b did suppress the signaling of IL4, with an IC50 of about 125 nM (Figure 10B).

Esto muestra que la inhibicion selectiva de Syk suprimio el flujo de Ca2+ inducido por el BCR en linfocitos B con valores de CI50 de alrededor de 100 nM. Esto sugiere que, mediante la inhibicion de Syk, estos compuestos suprimen la ruta de senalizacion bloqueando la respuesta celular.This shows that the selective inhibition of Syk suppressed the flow of Ca2 + induced by BCR in B lymphocytes with IC50 values of around 100 nM. This suggests that, by inhibiting Syk, these compounds suppress the signaling pathway by blocking the cellular response.

La inhibicion selectiva de Syk es suficiente para suprimir la senalizacion del BCR sin afectar a Src (Figuras 11 y 12) o JAK (Figura 10B). De forma adicional, P505-15 y el ejemplo 100b inducen por igual la apoptosis en estas celulas (Figura 11B). Este dato demuestra que el papel de la senalizacion de Syk en la supervivencia de las llneas celulares de LNH, y demuestra que no se necesita para conseguir este efecto la inhibicion de las quinasas que no son Syk.The selective inhibition of Syk is sufficient to suppress BCR signaling without affecting Src (Figures 11 and 12) or JAK (Figure 10B). Additionally, P505-15 and example 100b induce apoptosis in these cells equally (Figure 11B). This data demonstrates that the role of Syk signaling in the survival of NHL cell lines, and demonstrates that inhibition of non-Syk kinases is not needed to achieve this effect.

Ejemplo 351. Ensayos de Caspasa 3 y de proliferacion: la inhibicion de Syk altera la proliferacion y la supervivencia de las llneas de linfocitos B de linfoma no Hodgkin.Example 351. Caspase 3 and proliferation assays: Syk inhibition alters proliferation and survival of non-Hodgkin lymphoma B lymphocyte lines.

La induccion de la apoptosis se midio utilizando el kit de apoptosis de anticuerpo monoclonal para Caspasa 3 activa conjugado a PE (Becton Dickinson) siguiendo el protocolo suministrado. Las celulas se suspendieron en medio de cultivo (0,5x106 celulas/ml) y se trataron con las concentraciones indicadas de cada inhibidor de Syk o control de vehlculo durante 24, 48 o 72 horas antes del analisis de FACS. El ensayo de MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2- il)-2,5-difeniltetrazolio, un tetrazol) (empresa nombre) se utilizo como una medida de la viabilidad y crecimiento celular, siguiendo los protocolos suministrados por el fabricante. Las celulas se trataron con las concentraciones indicadas de cada inhibidor de Syk o con control de vehlculo durante 72 horas.The induction of apoptosis was measured using the monoclonal antibody apoptosis kit for active Caspase 3 conjugated to PE (Becton Dickinson) following the protocol provided. The cells were suspended in culture medium (0.5x106 cells / ml) and treated with the indicated concentrations of each Syk inhibitor or vehicle control for 24, 48 or 72 hours before the FACS analysis. The MTT test (3- (4,5-dimethylthiazol-2- yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, a tetrazole) (name company) was used as a measure of cell viability and growth, following the protocols provided by the manufacturer. Cells were treated with the indicated concentrations of each Syk inhibitor or with vehicle control for 72 hours.

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

4040

45Four. Five

50fifty

5555

Las celulas SUDHL-4 y SUDHL-6 se clasificaron de forma previa como "de tipo BCR " (Monti, Savage et al. Blood 105(5): 1851-61 (2005); Polo, Juszczynski et al. Proc Natl Acad Sci U S A 104(9): 3207-12 (2007)) y como sensibles a la inhibicion de Syk mediante R406 (Chen, Monti et al. 2008). Las llneas celulares Toledo y Karpas-422, que carecen de la expresion del BCR y de BLNK, respectivamente (Gabay, Ben-Bassat et al. Eur J Haematol 63(3): 18091 (1999); Sprangers, Feldhahn et al. Oncogene 25(36): 5056-62 (2006)), habiendose adaptado, por lo tanto, a la supervivencia independiente de las senales del BCR, fueron insensibles a R406 (Chen, Monti et al. 2008). Se analizo la proliferation de estas llneas celulares cuando se cultivaron en presencia o ausencia de diversas concentraciones de cada inhibidor de Syk durante 72 horas.SUDHL-4 and SUDHL-6 cells were previously classified as "BCR type" (Monti, Savage et al. Blood 105 (5): 1851-61 (2005); Polo, Juszczynski et al. Proc Natl Acad Sci USA 104 (9): 3207-12 (2007)) and as sensitive to the inhibition of Syk by R406 (Chen, Monti et al. 2008). The Toledo and Karpas-422 cell lines, which lack the expression of the BCR and BLNK, respectively (Gabay, Ben-Bassat et al. Eur J Haematol 63 (3): 18091 (1999); Sprangers, Feldhahn et al. Oncogene 25 (36): 5056-62 (2006)), having therefore adapted to independent survival of the BCR signals, were insensitive to R406 (Chen, Monti et al. 2008). The proliferation of these cell lines was analyzed when cultured in the presence or absence of various concentrations of each Syk inhibitor for 72 hours.

La inhibicion selectiva de Syk fue suficiente para inducir la apoptosis en llneas celulares de LNH "de tipo BCR". Las celulas se incubaron con el inhibidor 1 o 3 pM durante 72 h. Como se demuestra en la Figura 11A, las celulas SUDHL-4 y -6 experimentaron cada una apoptosis, mientras que las celulas Toledo y Karpas-422 no (Figura 11A). En experimentos repetidos, la inhibicion especlfica de Syk por P459-72 y P505-15 indujo apoptosis solo en las llneas celulares SUDHL y Ramos. En comparacion, el ejemplo 100b, que inhibe de forma potente a las Syk y JAK quinasas, indujo apoptosis en todas las llneas celulares "de tipo BCR", as! como en Karpas-422 y JJN-3, una llnea celular de mieloma multiple que carece del BCR, y la expresion de BLNK (Sprangers, Feldhahn et al. Oncogene 25(36): 5056-62 (2006)). Las celulas Toledo permanecieron insensibles a los tres compuestos (Figura 11B). En un experimento distinto, se encontro que las celulas SUDHL-6 y Toledo eran sensibles por igual a la induction de la apoptosis mediante el tratamiento de 72 h con PMA 1 pM. Estos datos demuestran la necesidad especlfica de Syk para la supervivencia de ciertas llneas celulares de LNH.Selective Syk inhibition was sufficient to induce apoptosis in "BCR type" NHL cell lines. The cells were incubated with the 1 or 3 pM inhibitor for 72 h. As shown in Figure 11A, SUDHL-4 and -6 cells each underwent apoptosis, while Toledo and Karpas-422 cells did not (Figure 11A). In repeated experiments, the specific inhibition of Syk by P459-72 and P505-15 induced apoptosis only in the SUDHL and Ramos cell lines. In comparison, example 100b, which potently inhibits Syk and JAK kinases, induced apoptosis in all "BCR-like" cell lines, as! as in Karpas-422 and JJN-3, a multiple myeloma cell line that lacks BCR, and the expression of BLNK (Sprangers, Feldhahn et al. Oncogene 25 (36): 5056-62 (2006)). Toledo cells remained insensitive to all three compounds (Figure 11B). In a different experiment, it was found that SUDHL-6 and Toledo cells were equally sensitive to the induction of apoptosis by treating 72 h with 1 pM PMA. These data demonstrate the specific need of Syk for the survival of certain NHL cell lines.

Ejemplo 352. Estudios de xenoinjerto y analisis de la concentration en tumor y plasma.Example 352. Xenograft studies and analysis of tumor and plasma concentration.

La inhibicion de Syk protege frente a la formation de tumores en un modelo de raton de xenoinjerto. Se recibieron los ratones (empresa) y se aclimataron en las instalaciones al menos tres dlas antes del uso. Las celulas Ramos (3x106) se inyectaron por via subcutanea en la zona de flanco trasero de ratones conscientes utilizando una aguja de diametro 27 en un volumen de inyeccion de menos de 0,5 ml. Despues de la inyeccion los ratones se separaron aleatoriamente en grupos de tratamiento (n = 15) y se dosificaron dos veces al dla mediante sonda oral con el vehlculo o 10, 15 o 20 mg/kg del inhibidor. Al menos una vez por semana se obtuvieron pesos corporales y se determinaron dos veces por semana mediciones por calibrador de los tumores, comenzando cuando se formaron tumores palpables, hasta la finalization del estudio. El volumen tumoral se evaluo mediante medicion con calibrador utilizando una formula [longitud maxima x ancho x alto x n6]. La dosificacion dos veces al dla de vehlculo o de inhibidor continuo hasta que el vehlculo o cualquier grupo de tratamiento presento tumores que excedlan los 1,5 gramos de tamano. En el momento de la finalizacion (5 semanas despues de la inoculation de Ramos), los ratones se anestesiaron con un coctel de ketamina. Se obtuvo una muestra de sangre a traves de puncion cardiaca para hemograma y para la determination de la concentracion en plasma, y los ratones se sometieron a eutanasia a traves de dislocation cervical. Despues, los tumores se extirparon y pesaron. Una mitad del tumor se congelo de forma instantanea en nitrogeno llquido para la determinacion de la concentracion del inhibidor en el tejido tumoral y la otra mitad se coloco en formalina tamponada al 10 % para la investigation histologica.The inhibition of Syk protects against the formation of tumors in a mouse model of xenograft. The mice (company) were received and acclimatized at the facility at least three days before use. Ramos cells (3x106) were injected subcutaneously in the back flank area of conscious mice using a 27-diameter needle in an injection volume of less than 0.5 ml. After injection the mice were randomly separated into treatment groups (n = 15) and dosed twice daily by oral probe with the vehicle or 10, 15 or 20 mg / kg of the inhibitor. At least once a week, body weights were obtained and measurements were measured twice a week for tumor calipers, beginning when palpable tumors formed, until the end of the study. Tumor volume was evaluated by measurement with a calibrator using a formula [maximum length x width x height x n6]. Dosing twice a day of vehicle or continuous inhibitor until the vehicle or any treatment group has tumors that exceed 1.5 grams in size. At the time of completion (5 weeks after the inoculation of Ramos), the mice were anesthetized with a ketamine cocktail. A blood sample was obtained through cardiac puncture for hemogram and for the determination of plasma concentration, and the mice were euthanized through cervical dislocation. Then, the tumors were removed and weighed. One half of the tumor was instantly frozen in liquid nitrogen for the determination of the inhibitor concentration in the tumor tissue and the other half was placed in 10% buffered formalin for histological investigation.

Se evaluo el efecto de la inhibicion de Syk sobre la formacion de tumor de Ramos en un modelo de raton de xenoinjerto. Los ratones se dosificaron dos veces al dla con P505-15 10, 15 o 20 mg/kg o control de vehlculo, comenzando el dla de inoculacion de celulas tumorales. Las mediciones con calibrador se iniciaron cuando los tumores comenzaron a formarse, aproximadamente tres semanas despues de la inoculacion del tumor, y se repitieron cada tres dlas hasta la finalizacion del estudio. El estudio se finalizo cuando los pesos tumorales comenzaron a alcanzar aproximadamente 1,5 mg, momento en el que los tumores se extirparon y pesaron. Las muestras de tumor y de plasma se sometieron a analisis farmacocinetico.The effect of Syk inhibition on Ramos tumor formation was evaluated in a xenograft mouse model. Mice were dosed twice a day with P505-15 10, 15 or 20 mg / kg or vehicle control, starting the day of inoculation of tumor cells. Calibrator measurements began when tumors began to form, approximately three weeks after tumor inoculation, and were repeated every three days until the end of the study. The study was completed when tumor weights began to reach approximately 1.5 mg, at which time the tumors were removed and weighed. Tumor and plasma samples were subjected to pharmacokinetic analysis.

Cada muestra de tumor se homogeneizo en 3 ml de solution salina por gramo de tumor utilizando los vastagos y el motor de Kontes® Microtube Pellet Pestle® (Kimble Chase, Vineland, NJ). Se analizo en las muestras de plasma y tumor la concentracion de P505-15 utilizando un espectrometro de masas en tandem con cromatografla llquida (LC/MS/MS). Brevemente, las muestras de plasma y tumor se procesaron en una placa filtro de 96 pocillos Captiva™ (0,2 pM, Varian, Inc., Palo Alto, CA). Se precipitaron allcuotas de las muestras de plasma y de tumor homogeneizado con acetonitrilo conteniendo 200 ng/ml de:Each tumor sample was homogenized in 3 ml of saline solution per gram of tumor using the stems and the Kontes® Microtube Pellet Pestle® engine (Kimble Chase, Vineland, NJ). The concentration of P505-15 was analyzed in plasma and tumor samples using a tandem mass spectrometer with liquid chromatography (LC / MS / MS). Briefly, plasma and tumor samples were processed on a Captiva ™ 96-well filter plate (0.2 pM, Varian, Inc., Palo Alto, CA). Allcuotas were precipitated from plasma and tumor samples homogenized with acetonitrile containing 200 ng / ml of:

imagen71image71

55

1010

15fifteen

20twenty

2525

3030

3535

el patron interno. La mezcla se agito con formation de vortice y se refrigero a 4 °C durante 30 minutos para permitir la precipitation completa de las proteinas. La mezcla se filtro en una placa de recoleccion de 96 pocillos. El filtrado se inyecto en un LC/MS/MS Sciex API3000 equipado con una fuente de spray ionico turbo. P505-15 y el Compuesto A se separaron en una columna HILIC Luna Phenomenex de 5 p (4,6 x 100 mm, 5 mm; Phenomenex, Torrance, CA). Se programo durante de 1,1 minutos un gradiente de fase movil mezcla de la fase movil A al 10 % (acido formico al 0,1 % en agua) y fase movil B al 90 % (acido formico al 0,1 % en acetonitrilo al 90 %, agua al 10 %) hasta fase movil B al 65 %, seguido de un gradiente de fase movil B del 65 % al 90 % durante 0,01 minutos. Las areas pico de la m/z 394/360 del ion producto de P505-15 se midieron frente a las m/z 357/295 del ion producto del Compuesto A (patron interno) en modo de ion positivo. El intervalo analitico fue de 2 a 5000 ng/ml.The internal pattern. The mixture was stirred with vortex formation and refrigerated at 4 ° C for 30 minutes to allow complete precipitation of the proteins. The mixture was filtered on a 96-well collection plate. The filtrate was injected into a Sciex API3000 LC / MS / MS equipped with a turbo ionic spray source. P505-15 and Compound A were separated on a 5 p HILIC Luna Phenomenex column (4.6 x 100 mm, 5 mm; Phenomenex, Torrance, CA). A mixed mobile phase gradient of 10% mobile phase A (0.1% formic acid in water) and 90% mobile phase B (0.1% formic acid in acetonitrile) was programmed for 1.1 minutes. at 90%, water at 10%) to mobile phase B at 65%, followed by a gradient of mobile phase B from 65% to 90% for 0.01 minutes. The peak areas of m / z 394/360 of the product ion of P505-15 were measured against m / z 357/295 of the product ion of Compound A (internal standard) in positive ion mode. The analytical range was 2 to 5000 ng / ml.

El analisis farmacocinetico revelo que en el estado estacionario, las concentraciones tumorales de P505-15 siguieron los perfiles de concentracion-tiempo vistos para plasma en los grupos de dosis 10, 15 y 20 mg/kg. Los aumentos no lineales en la Cmax, el ABC (0-8) y la Cmin tumoral se observaron a medida que se aumento la dosis, pero no se observo un aumento proporcional a la dosis en la Cmin de plasma. La Cmax media y el ABC (0-8) en plasma fue al menos 2 veces mayor que las de en tumor para todas las dosis examinadas; sin embargo, las concentraciones minimas (nadir) medias (Cmin) fueron mas elevadas en tumor que en plasma (Tabla 11A), indicando acumulacion de P505-15 en el compartimento tumoral.The pharmacokinetic analysis revealed that at steady state, tumor concentrations of P505-15 followed the concentration-time profiles seen for plasma in dose groups 10, 15 and 20 mg / kg. Nonlinear increases in Cmax, ABC (0-8) and tumor Cmin were observed as the dose was increased, but no dose proportional increase in plasma Cmin was observed. The mean Cmax and the ABC (0-8) in plasma was at least 2 times higher than in tumor for all the doses examined; however, the minimum (nadir) mean concentrations (Cmin) were higher in tumor than in plasma (Table 11A), indicating accumulation of P505-15 in the tumor compartment.

Tabla 11ATable 11A

Determinado a partir de plasma  Determined from plasma

Regimen de dosificacion  Dosing regimen

Tmax (h) Cmin (ng/ml) Cmax (ng/ml) ABC (0-8) (ng*h/ml)  Tmax (h) Cmin (ng / ml) Cmax (ng / ml) ABC (0-8) (ng * h / ml)

10 mg/kg dos veces al dia  10 mg / kg twice daily

1,50 17,6 179 738  1.50 17.6 179 738

15 mg/kg dos veces al dia  15 mg / kg twice daily

1,50 26,6 343 1671  1.50 26.6 343 1671

20 mg/kg dos veces al dia  20 mg / kg twice daily

4,00 39,5 570 3191  4.00 39.5 570 3191

Determinado a partir de tumor  Determined from tumor

Regimen de dosificacion  Dosing regimen

Tmax (h) Cmin (ng/ml) Cmax (ng/ml) ABC (0-8) (ng*h/ml)  Tmax (h) Cmin (ng / ml) Cmax (ng / ml) ABC (0-8) (ng * h / ml)

10 mg/kg dos veces al dia  10 mg / kg twice daily

8,00 24,5 55,2 353  8.00 24.5 55.2 353

15 mg/kg dos veces al dia*  15 mg / kg twice daily *

4,00 67,8 163 475  4.00 67.8 163 475

20 mg/kg dos veces al dia  20 mg / kg twice daily

4,00 125 252 1453  4.00 125 252 1453

Tabla 11BTable 11B

Regimen de dosificacion  Dosing regimen

Proporcion tumor/plasma  Tumor / plasma ratio

Basado en el ABC  ABC based

Basado en la Cmax Basado en la Cmin  Cmax based Cmin based

10 mg/kg dos veces al dia  10 mg / kg twice daily

0,478 0,308 1,39  0.478 0.308 1.39

*15 mg/kg dos veces al dia  * 15 mg / kg twice daily

0,284 0,475 2,55  0.284 0.475 2.55

20 mg/kg dos veces al dia  20 mg / kg twice daily

0,455 0,442 3,15  0.455 0.442 3.15

Nota: las muestras de nadir (0), 1,5, 4 y 8 h se tomaron en el dia de la recogida tras la dosis de la manana (AM). La segunda dosis no se administro en el dia de la recogida; por lo tanto, los valores farmacocineticos anteriores se determinaron tras una unica dosis por la manana (AM) en el estado estacionario.Note: samples of nadir (0), 1,5, 4 and 8 h were taken on the day of collection after the morning dose (AM). The second dose was not administered on the day of collection; therefore, the previous pharmacokinetic values were determined after a single dose in the morning (AM) at steady state.

*solo una muestra de tumor estuvo disponible para el punto de tiempo de 8 h y puede haber sido un valor atipico (concentraciones tumorales a las 8 h - 608 ng/ml); por lo tanto, los parametros farmacocineticos se determinaron entre 0 y 4 h para el grupo de dosificacion de dos veces al dia de P505-15 15 mg/kg. Como resultado, el ABC (0-8) y la proportion tumor/plasma basada en el ABC para este grupo puede estar subestimada.* Only one tumor sample was available for the 8 h time point and may have been an atypical value (tumor concentrations at 8 h - 608 ng / ml); therefore, pharmacokinetic parameters were determined between 0 and 4 h for the twice daily dosing group of P505-15 15 mg / kg. As a result, the ABC (0-8) and the tumor / plasma ratio based on the ABC for this group may be underestimated.

La diferencia entre la Cmin del plasma y del tumor se hizo mas notable a medida que se aumento la dosis, como se indica por el aumento de las proporciones tumor/plasma determinadas a partir de la Cmin (Tabla 11B). Las proporciones tumor/plasma determinadas a partir de la Cmax y el ABC (0-8) fueron similares a lo largo de diversos grupos de dosis. Las concentraciones de tumor se mantuvieron por encima de 60, 170 y 640 nM a lo largo del intervalo de dosificacion total en la fase estacionaria para P505-15 a 10, 15 y 20 mg/kg, respectivamente.The difference between plasma Cmin and tumor became more noticeable as the dose was increased, as indicated by the increase in tumor / plasma ratios determined from Cmin (Table 11B). The tumor / plasma ratios determined from Cmax and ABC (0-8) were similar across several dose groups. Tumor concentrations were maintained above 60, 170 and 640 nM throughout the total dosage range in the stationary phase for P505-15 at 10, 15 and 20 mg / kg, respectively.

Los ratones dosificados con las tres concentraciones de P505-15 estuvieron protegidos para el crecimiento del tumor Ramos in vivo. Esto fue evidente primero a partir de las mediciones por calibrador (datos no mostrados), lo que revelo una velocidad reducida de crecimiento tumoral en presencia del inhibidor de Syk. Despues de la finalization del estudio, los ratones se sometieron a eutanasia y los tumores se extirparon y pesaron. De forma concordante con las mediciones con calibrador, se consiguio en todos los grupos de dosificacion una reduction estadisticamente significativa del promedio de peso tumoral, en comparacion con el control de vehiculo.Mice dosed with the three concentrations of P505-15 were protected for Ramos tumor growth in vivo. This was evident first from the measurements per calibrator (data not shown), which revealed a reduced rate of tumor growth in the presence of the Syk inhibitor. After the completion of the study, the mice underwent euthanasia and the tumors were removed and weighed. In accordance with the calibrator measurements, a statistically significant reduction in the average tumor weight was achieved in all the dosage groups, compared to the vehicle control.

Ademas, se analizo la actividad del inhibidor especlfico para Syk P505-15 en un modelo de xenoinjerto de raton de tumor Ramos. En todas las concentraciones analizadas, se observaron reducciones estadlsticamente significativas del tamano tumoral en ratones dosificados dos veces al dla con P505-15. La concentracion mas baja analizada fue de 10 mg/kg, consiguiendo concentraciones tumorales variando desde 64 a 140 nM a lo largo del curso del dla. La 5 supresion del crecimiento tumoral a estas concentraciones in vivo concuerda con las concentraciones de < 125 nM que se encuentran que suprimen el flujo de Ca2+ inducido por el BCR y la serialization del BCR distante para pERK Y204 (Figuras 12). La inhibition farmacologica selectiva de Syk da como resultado efectos sobre las proliferaciones y supervivencia de las llneas celulares de LNH. Estos datos sugieren que la action selectiva sobre Syk puede tener, de manera similar, beneficio cllnico en una diversidad de trastornos proliferativos de linfocitos B.In addition, the specific inhibitor activity for Syk P505-15 was analyzed in a Ramos tumor mouse xenograft model. At all concentrations analyzed, statistically significant reductions in tumor size were observed in mice dosed twice daily with P505-15. The lowest concentration analyzed was 10 mg / kg, achieving tumor concentrations ranging from 64 to 140 nM throughout the course of the day. The suppression of tumor growth at these concentrations in vivo is consistent with the concentrations of <125 nM found to suppress the Ca2 + flow induced by the BCR and the serialization of the distant BCR for pERK Y204 (Figures 12). The selective pharmacological inhibition of Syk results in proliferation and survival of NHL cell lines. These data suggest that selective action on Syk may similarly have a cynical benefit in a variety of proliferative B-cell disorders.

1010

Como se detalla en el presente documento, se ha implicado de forma experimental a Syk en el desarrollo, proliferation y supervivencia de los linfocitos B. Ademas, Syk esta implicado como oncogen. La expresion de Syk activa de forma constitutiva en celulas de medula osea transferidas de forma adoptiva induce leucemia en ratones, y la sobreactividad de Syk esta asociada con una diversidad de linfomas en seres humanos. Dado el papel de Syk en 15 la biologla de los linfocitos B, su inhibicion selectiva podrla ser suficiente para proporcionar beneficio cllnico en trastornos proliferativos de linfocitos B, mientras se reducen las toxicidades que puede surgir debido a la supresion de otras quinasas que no son diana.As detailed herein, Syk has been experimentally involved in the development, proliferation and survival of B lymphocytes. In addition, Syk is involved as an oncogene. The expression of Syk constitutively activates in bone marrow cells transferred in an adoptive manner induces leukemia in mice, and Syk's overactivity is associated with a variety of lymphomas in humans. Given the role of Syk in the biology of B lymphocytes, its selective inhibition may be sufficient to provide clinical benefit in proliferative disorders of B lymphocytes, while reducing the toxicities that may arise due to the suppression of other non-target kinases. .

La presente invention proporciona varias realizaciones. Es obvio que los ejemplos pueden alterarse para 20 proporcionar otras realizaciones de la presente invencion. Por lo tanto, se apreciara que las reivindicaciones adjuntas, en lugar de las realizaciones especlficas que se han representado a modo de ejemplo, definiran el ambito de la presente invencion.The present invention provides several embodiments. It is obvious that the examples can be altered to provide other embodiments of the present invention. Therefore, it will be appreciated that the appended claims, instead of the specific embodiments that have been represented by way of example, will define the scope of the present invention.

Claims (14)

55 1010 15fifteen 20twenty 2525 3030 3535 4040 1. Un compuesto que tiene la formula I:1. A compound that has the formula I: imagen1image 1 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in which: D1 es cicloalquilo C3-8, opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, amino, hidroxi, alquilcarbonilo C1-8, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino C1- 8, arilalcoxicarbonilamino C1-8, fenilo y heterociclil-alquileno C1-8;D1 is C3-8 cycloalkyl, optionally substituted with 1 to 4 substituents independently selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, amino, hydroxy, C1-8 alkylcarbonyl, aminocarbonyl, C1-8 alkoxycarbonylamino, C1-8 arylalkoxycarbonylamino, phenyl and C1-8 heterocyclyl-alkylene; R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-8, amino, aminocarbonilo, hidroxilo, alcoxi C1-8, haloalquilo C1-8, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, oxo, ciano, alcoxicarbonilo C1-8, cicloalquilo C3-8, arilo y heterociclilo; y cada heterociclilo esta opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en: alquilo C1-8, halo, oxo, amino, alcoxi C1-8, alquilcarbonilo C1-8, arilalcoxicarbonilo C1-8,R 1 is selected from the group consisting of H, C 1-8 alkyl, amino, aminocarbonyl, hydroxy, C 1-8 alkoxy, C 1-8 haloalkyl, C 2-8 alkenyl, C 2-8 alkynyl, oxo, cyano, C 1-8 alkoxycarbonyl , C3-8 cycloalkyl, aryl and heterocyclyl; and each heterocyclyl is optionally substituted with 1 to 4 substituents selected from the group consisting of: C1-8 alkyl, halo, oxo, amino, C1-8 alkoxy, C1-8 alkylcarbonyl, C1-8 arylalkoxycarbonyl, aminocarbonilo, arilalquilenocarbonilo C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;aminocarbonyl, C 1-8 arylalkylenecarbonyl and C 1-8 alkylsulfonyl; Y1 se selecciona entre el grupo que consiste enY1 is selected from the group consisting of (a) arilo; opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(a) aryl; optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, C1-8 alkoxy and alkylsulfonyl C1-8; (b) heteroarilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, R4a, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8-alquilo C1-8, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, halogeno, hidroxi, alcoxi C1-8 y alquilsulfonilo C1-8;(b) heteroaryl, optionally substituted with 1 to 3 substituents, R4a, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy-C1-8 alkyl, aminocarbonyl-, hydroxyl, oxo, halogen, hydroxy, alkoxy C1-8 and C1-8 alkylsulfonyl; R es un heterociclilo o heteroarilo sustituido con al menos un grupo, R , seleccionado entre el grupo que consiste en aminoalquil C1-8-, alcoxi C1-8-alquil C1-8-, oxo-, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8,R is a heterocyclyl or heteroaryl substituted with at least one group, R, selected from the group consisting of C 1-8 aminoalkyl, C 1-8 alkoxy-C 1-8 alkyl, oxo-, C 1-8 alkylcarbonyl, C3- cycloalkylcarbonyl 8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino,heterocyclylcarbonyl, C1-8 alkylcarbonylamino, C3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, alquilsulfonilo C1-8, cicloalquilsulfonilo C3-8 y heterociclilsulfonilo;C 1-8 alkylsulfonyl, C 3-8 cycloalkylsulfonyl and heterocyclylsulfonyl; y en la que R2 esta opcionalmente sustituido adicionalmente con 1 a 2 sustituyentes, R4c, independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alcoxi C1-8, halo, aminocarbonilo, oxo, hidroxilo, aminoalquileno C1-8, alcoxi C1-8-alquileno C1-8, alquilcarbonilo C1-8, cicloalquilcarbonilo C3-8, heterociclilcarbonilo, alquilcarbonilamino C1-8, cicloalquilcarbonilamino C3-8, heterociclilcarbonilamino, alquilsulfonilo C1-8,and wherein R2 is optionally further substituted with 1 to 2 substituents, R4c, independently selected from the group consisting of C1-8 alkyl, C1-8 alkoxy, halo, aminocarbonyl, oxo, hydroxy, C1-8 aminoalkylene, C1 alkoxy -8-C 1-8 alkylene, C 1-8 alkylcarbonyl, C 3-8 cycloalkylcarbonyl, heterocyclylcarbonyl, C 1-8 alkylcarbonylamino, C 3-8 cycloalkylcarbonylamino, heterocyclylcarbonylamino, C 1-8 alkylsulfonyl, cicloalquilsulfonilo C3-8, heterociclilsulfonilo, cicloalquilo C3-8, alquilcicloalquileno C1-8, heteroarilo; donde cicloalquilo se refiere a un grupo hidrocarburo mono o policlclico alquilo, alquenilo o alquinilo que puede formar un anillo puenteado o un anillo espiro, y que puede tener uno o mas dobles o triples enlaces.C3-8 cycloalkylsulfonyl, heterocyclylsulfonyl, C3-8 cycloalkyl, C1-8 alkylcycloalkylene, heteroaryl; where cycloalkyl refers to a mono or polycyclic alkyl, alkenyl or alkynyl hydrocarbon group that can form a bridged ring or a spiro ring, and which can have one or more double or triple bonds. 2. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que el resto -Y1-R2 se selecciona entre el grupo que consiste en:2. The compound of claim 1, wherein the -Y1-R2 moiety is selected from the group consisting of: imagen2image2 imagen3image3 55 1010 15fifteen 20twenty 2525 3030 3535 imagen4image4 Y2 es N, CH o C;Y2 is N, CH or C; R4a se selecciona entre el grupo que consiste en H y alquilo Ci-s;R4a is selected from the group consisting of H and Ci-s alkyl; cada R4c se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci-s, aminocarbonil-, hidroxilo, oxo, alcoxi Ci-s y halo;each R4c is independently selected from the group consisting of Ci-s alkyl, aminocarbonyl-, hydroxy, oxo, Ci-s alkoxy and halo; cada R4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci-s y heterociclilo; el sublndice p es 0, 1,2 o 3; yeach R4b is independently selected from the group consisting of Ci-s alkyl and heterocyclyl; the sub index p is 0, 1,2 or 3; Y la llnea ondulada indica el punto de union al resto de la molecula.The wavy line indicates the point of attachment to the rest of the molecule. 3. El compuesto de la reivindicacion 2 que tiene la formula Idl:3. The compound of claim 2 having the formula Idl: imagen5image5 o un tautomero, sal o estereoisomero farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable tautomer, salt or stereoisomer thereof. 4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que: D1 es ciclopropilo.4. The compound of any one of claims 1 to 3, wherein: D1 is cyclopropyl. 5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que: D1 es ciclobutilo.5. The compound of any one of claims 1 to 3, wherein: D1 is cyclobutyl. 6. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que: D1 es ciclopentilo.6. The compound of any one of claims 1 to 3, wherein: D1 is cyclopentyl. 7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que: D es ciclohexilo.7. The compound of any one of claims 1 to 3, wherein: D is cyclohexyl. S. El compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la formula:S. The compound of claim 1 having the formula: imagen6image6 oor imagen7image7 o un tautomero, sal o estereoisomero farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable tautomer, salt or stereoisomer thereof. 9. El compuesto de la reivindicacion 1 seleccion entre el grupo que consiste en:9. The compound of claim 1 selected from the group consisting of: 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclobutilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclobutylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-clorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-chlorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-propionilpiperazin-1-il)fenilamino)pirirnidine-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4-propionylpiperazin-1-yl) phenylamino) pyriridine-5-carboxamide; 55 1010 15fifteen 20twenty 2525 3030 3535 4040 45Four. Five 50fifty 2-(4-(4-(ciclopropanocarbonil)piperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4- (cyclopropanecarbonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetil-2-oxopiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-2-oxopiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-3-fluorofenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetylpiperazin-1-yl) -3-fluorophenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetil-2-carbamoilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-2-carbamoylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; (R)-2-(4-(4-acetil-3-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;(R) -2- (4- (4-acetyl-3-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; (R)-2-(4-(4-acetil-2-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;(R) -2- (4- (4-acetyl-2-methylpiperazin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(6-(4-acetilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (6- (4-acetylpiperazin-1-yl) pyridin-3-ylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (1- (methylsulfonyl) piperidin-4-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (ethylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclobutilamino)-2-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclobutylamino) -2- (4- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(1-acetilpiperidin-4-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (1-Acetylpiperidin-4-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; (ciclopropilamino)-2-(4-(4-(pirrolidin-1-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;(cyclopropylamino) -2- (4- (4- (pyrrolidin-1-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(morfolin-4-carbonil)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (morpholin-4-carbonyl) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(ciclopropilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (cyclopropylsulfonyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetil-1,4-diazepan-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-Acetyl-1,4-diazepan-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 2-(4-(4-acetamidopiperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida;2- (4- (4-acetamidopiperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-dioxotiomorfolinofenilamino)pirimidin-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4-dioxothiomorpholinophenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(2-metoxietil)piperazin-1-il)fenilamino)pirirnidine-5-carboxamida;4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (2-methoxyethyl) piperazin-1-yl) phenylamino) pyriridine-5-carboxamide; 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(N-metilacetamido)piperidin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida; y4- (cyclopropylamino) -2- (4- (4- (N-methylacetamide) piperidin-1-yl) phenylamino) pyrimidin-5-carboxamide; Y 2-(4-(4-(aminometil)piperidin-1-il)fenilamino)-4-(ciclopropilamino)pirimidin-5-carboxamida.2- (4- (4- (aminomethyl) piperidin-1-yl) phenylamino) -4- (cyclopropylamino) pyrimidin-5-carboxamide. 10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugla o terapia.10. A compound according to any one of the preceding claims for use in the treatment of the human or animal body by surgery or therapy. 11. Una composicion que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en combination con un transportador o diluyente farmaceuticamente aceptable.11. A composition comprising a compound of any one of claims 1 to 9, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. 12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afeccion seleccionada del grupo que consiste en enfermedad cardiovascular, enfermedad inflamatoria, enfermedad autoinmunitaria y trastorno proliferativo celular.12. A compound according to any one of claims 1 to 9 for use in the treatment of a disease or condition selected from the group consisting of cardiovascular disease, inflammatory disease, autoimmune disease and cell proliferative disorder. 13. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en el tratamiento de:13. A compound according to any one of claims 1 to 9 for use in the treatment of: una enfermedad cardiovascular seleccionada del grupo que consiste en reestenosis, trombosis, purpura trombocitopenica inmunitaria, trombocitopenia inducida por heparina, cardiomiopatla dilatada, enfermedad de celulas falciformes, aterosclerosis, infarto de miocardio, inflamacion vascular, angina inestable y slndromes coronarios agudos;a cardiovascular disease selected from the group consisting of restenosis, thrombosis, immune thrombocytopenic purpura, heparin-induced thrombocytopenia, dilated cardiomyopathy, sickle cell disease, atherosclerosis, myocardial infarction, vascular inflammation, unstable angina and acute coronary slndromes; una enfermedad inflamatoria que se selecciona del grupo que consiste en alergia, asma, artritis reumatoide, enfermedades mediadas por linfocitos B tales como Linfoma no Hodgkin, slndrome antifosfolipldico, lupus, psoriasis, esclerosis multiple, nefropatla terminal y enfermedad de Crohn;an inflammatory disease that is selected from the group consisting of allergy, asthma, rheumatoid arthritis, B-mediated diseases such as non-Hodgkin lymphoma, antiphospholipldic syndrome, lupus, psoriasis, multiple sclerosis, terminal kidney disease and Crohn's disease; una enfermedad autoinmunitaria seleccionada del grupo que consiste en anemia hemolltica, purpura trombocitopenica inmunitaria, esclerosis multiple, psoriasis y slndrome de Sjogren; oan autoimmune disease selected from the group consisting of hemolytic anemia, immune thrombocytopenic purpura, multiple sclerosis, psoriasis and Sjogren's syndrome; or un trastorno proliferativo celular seleccionado del grupo que consiste en leucemia, un linfoma, trastornos mieloproliferativos, canceres hematologicos y mielofibrosis idiopatica cronica.a cell proliferative disorder selected from the group consisting of leukemia, lymphoma, myeloproliferative disorders, hematologic cancers and chronic idiopathic myelofibrosis. 14. Un kit que comprende una composicion de la reivindicacion 11, envasado e instrucciones para su uso.14. A kit comprising a composition of claim 11, packaging and instructions for use. 15. Un Compuesto de la reivindicacion 1, que tiene la estructura:15. A Compound of claim 1, which has the structure: imagen8image8 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.