ES2561086T3 - Agentes cardioprotectores procedentes del kiwi - Google Patents

Abstract

Fracción activa de un extracto de kiwi, siendo el tamaño de las moléculas en la fracción activa inferior a 1000 daltons y en el que dicha fracción inhibe la agregación plaquetaria e inhibe la enzima convertidora de la angiotensina.

Description

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DESCRIPCION

Agentes cardioprotectores procedentes del kiwi Campo de la invencion

La invencion se refiere a fracciones de extractos cardioprotectores preparados a partir del kiwi. Antecedentes de la invencion

Se sabe que un elevado consumo de frutas y vegetales es una importante medida preventiva por la cual se puede disminuir el riesgo de enfermedades vasculares y determinados canceres vinculados a factores de la nutricion incluyendo cancer de estomago, de colon, de mama, y de prostata. Un factor implicado en el inicio y desarrollo de enfermedades vasculares y de canceres es la incidencia de procesos anomalos de estres oxidativo que conducen a la generacion de radicales o compuestos hidroxi y peroxi libres. En parte, el efecto beneficioso de la ingestion de frutas y vegetales se explica por los antioxidantes conocidos por su accion inhibidora, entre los que se incluyen la vitamina C, la vitamina E y los carotenoides tales como los alfa y beta carotenoides, licopeno lutema, etc. Sin embargo, muchos datos recientes tambien indican un papel de las propiedades no antioxidantes de algunos compuestos de las frutas en diferentes enfermedades.

Se han realizado esfuerzos considerables en la identificacion de compuestos bioactivos procedentes de frutas y vegetales que pueden tener un papel en la prevencion de algunas enfermedades. Se ha pensado que las frutas y los vegetales son beneficiosos en las enfermedades cardiovasculares. Los efectos beneficiosos de las frutas y de los vegetales pueden explicarse por los antioxidantes y los componentes bioactivos no antioxidantes contenidos en los anteriores. Estos compuestos pueden funcionar individualmente o de forma concertada para proteger a las lipoprotemas y a las celulas vasculares de la oxidacion, o por otros mecanismos (rutas no antioxidantes) tales como una reduccion en los niveles de lfpidos en plasma (colesterol LDL, trigliceridos), y la respuesta de la agregacion plaquetaria (1,2).

Se necesitan preparaciones adicionales de frutas y vegetales que proporcionen propiedades cardioprotectoras y otras propiedades beneficiosas.

Duttaroy y col. (2004) Platelets (15) N°. 5, pp 287-292 desvelan una preparacion de zumo de kiwi. Se ha mostrado la inhibicion de la agregacion plaquetaria in vitro. Kyung-Ah y col., (2005) Biol. Pharm. Bull. (28) N° 9, pags. 17821785, divulgan una preparacion de un extracto de kiwi en forma de polvo que se conservo a 4 °C. El extracto tema actividades antioxidantes, antihipertensivas, antihipercolesterolemicas, fibrinoltticas y de inhibicion de la enzima convertidora de la angiotensina in vitro.

Takeshi y col. (2008) J. Food Agric. Envir. (6) No. 3-4, pp. 11-14 desvelan la preparacion de zumo de fruta procedente de la vid de plata (Actinidia polygama). El zumo ha mostrado inhibir la enzima convertidora de la angiotensina.

Sumario de la invencion

Se describen agentes cardioprotectores de frutas. En particular, extractos cardioprotectores y sus fracciones preparados a partir de kiwis.

Se describe una composicion que comprende, en todo o en parte, un extracto de fruta procedente de una fruta de la familia Actinidia, caracterizado dicho extracto por ser estable y retener la actividad biologica durante el almacenamiento. Se describe tambien un extracto o fraccion de fruta procedente de una fruta de la familia Actinidia, dicho extracto estabilizado para retener la actividad biologica durante el almacenamiento, y que el extracto o fraccion de fruta se puede estabilizar mediante tratamiento termico, donde el tratamiento termico puede ser suficiente para estabilizar la actividad biologica del extracto. Se describe un tratamiento termico que comprende calentar hasta aproximadamente 70 a 120 grados centfgrados, y mas preferentemente hasta aproximadamente 80 a 100 grados centfgrados. Se describe tambien que el extracto o fraccion de fruta puede estabilizarse mediante la eliminacion de enzimas de la fraccion, por ejemplo, mediante ultrafiltracion.

La invencion se refiere a una fraccion activa procedente de un extracto de kiwi, siendo menor el tamano de las moleculas en la fraccion activa inferior a 1000 daltons y en el que dicha fraccion inhibe la agregacion plaquetaria e inhibe la enzima convertidora de la angiotensina. En algunas realizaciones, dicha fraccion inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria e inhibe la enzima convertidora de la angiotensina en un ensayo in vitro de la enzima convertidora de la angiotensina. En algunas realizaciones, la fraccion tiene mas de un 4 % de actividad inhibidora en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria tras mantenerse a 4 grados centfgrados durante 24 dfas normalizado al dfa 0. En algunas realizaciones, la fraccion puede caracterizarse ademas por retener al menos un 80 % de la actividad biologica de dichas moleculas biologicamente activas cuando se almacena durante 4 dfas, o al menos 18 o 24 dfas, a 4 grados centfgrados en comparacion con una fraccion de extracto reciente, en la que dicha actividad biologica es la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria.

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El extracto o la fraccion descritos se pueden deslipidizar. La fraccion comprende moleculas biologicamente activas con un peso molecular de menos de 1000 daltons. En algunas realizaciones, la fraccion de fruta presenta unos maximos principales a aproximadamente 1,30 a 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa Uquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM con una resolucion rapida de partmulas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo- acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos. La fraccion puede presentar unos maximos principales en el espectro del UV que se observan en la Figura 6. En algunas realizaciones, la fraccion de fruta presenta maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa lfquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de partfculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100% de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos. La fraccion puede presentar unos maximos principales en el cromatograma de corriente de iones que se observan en la Figura 7.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un jarabe o solucion que comprende un extracto o fraccion como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un polvo que comprende el extracto o fraccion como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un vehmulo de administracion oral que comprende el extracto o fraccion, o jarabe, solucion o polvo del mismo como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un alimento o comestible funcional que comprende la composicion, jarabe, solucion o polvo como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, el alimento o comestible funcional se selecciona entre el grupo que consiste en bebidas, productos horneados, pudines, productos de leche fresca, productos de confitena, aperitivos, productos de confitena congelados o innovaciones, alimentos congelados preparados, golosinas, aperitivos, sopas, pastas para untar, salsas, aderezos para ensaladas, productos carnicos preparados, queso, y yogur. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un suplemento nutritivo que comprende la composicion, jarabe, solucion o polvo como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, el suplemento nutritivo se selecciona entre el grupo que consiste en capsulas de gelatina blanda, capsulas de gelatina dura, capsulas masticables, barritas saludables, y polvos para suplemento.

La presente invencion describe procedimientos para prevenir o tratar una patologfa iniciada o caracterizada por la activacion y/o agregacion plaquetaria, mejorar o mantener la salud del corazon, mejorar o mantener la salud cardiovascular, mejorar o mantener la salud circulatoria, o mejorar o mantener el flujo sangumeo en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto un extracto o fraccion de fruta, o jarabe, polvo, vehmulo de administracion oral o producto nutritivo como se ha descrito anteriormente. En alguna opcion, la administracion inhibe la agregacion plaquetaria. En algunas opciones, la administracion da como resultado una actividad antitrombotica. En algunas opciones, la administracion da como resultado una fluidificacion de la sangre. En algunas opciones, la administracion da como resultado una reduccion de la presion sangumea.

En algunas opciones, la presente invencion proporciona el uso del extracto o fraccion, o jarabe, polvo, vehmulo de administracion oral o producto nutritivo como se ha descrito anteriormente para prevenir o tratar una patologfa iniciada o caracterizada por la activacion y/o agregacion plaquetaria, mejorar o mantener la salud del corazon, mejorar o mantener la salud cardiovascular, mejorar o mantener la salud circulatoria, o mejorar o mantener el flujo sangumeo en un sujeto, o mejorar o mantener la presion sangumea en un sujeto. En algunas opciones, la patologfa iniciada o caracterizada por la activacion y/o agregacion plaquetaria se selecciona entre el grupo que consiste en trombosis, arterioesclerosis y/o formacion de placa.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona procesos para producir un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo que comprende producir un extracto de Actinidia y calentar el extracto de Actinidia en condiciones tales que el extracto retenga la actividad biologica durante el almacenamiento. En algunas realizaciones, la etapa de calentamiento comprende calentar dicha fraccion a aproximadamente 70 a aproximadamente 100 grados centfgrados durante mas de aproximadamente cinco minutos. En algunas realizaciones, el extracto de Actinidia se produce haciendo sedimentar un zumo u homogenado de Actinidia bien antes o despues de calentar para proporcionar una fraccion de sedimento y una fraccion de sobrenadante, y retener dicha fraccion de sobrenadante para proporcionar dicho extracto de Actinidia biologicamente activo. En algunas realizaciones, la etapa de sedimentacion comprende la centrifugacion a al menos 3000 g. En algunas realizaciones, el extracto se procesa adicionalmente mediante ultrafiltracion bien antes o despues del calentamiento. La ultrafiltracion tiene un corte de 1000 Daltons.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo producido mediante los anteriores procesos. En algunas realizaciones, el extracto de Actinidia estable y biologicamente activo maximos principales a aproximadamente 1,30 a 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa lfquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM con una resolucion rapida de partmulas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos y maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa lfquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de partmulas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos, y en el que dicho extracto inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo

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in vitro de agregacion plaquetaria. En algunas realizaciones, el extracto de Actinidia estable y biologicamente activo descrito anteriormente se caracteriza por retener mas de un 4 % de actividad biologica de dichas moleculas biologicamente activas cuando se almacena durante al menos 24 d^as a 4 grados cenffgrados en comparacion con una fraccion de extracto reciente, en la que dicha actividad biologica es la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria.

En otras realizaciones, la presente invencion proporciona una fraccion de extracto de fruta, en el que la fraccion comprende moleculas biologicas con un peso molecular inferior a 1000 daltons. En algunas realizaciones, el extracto se deslipidiza. En algunas realizaciones, la fruta es una fruta de la familia Actinidia. En algunas realizaciones, el extracto se estabiliza mediante tratamiento termico. En algunas realizaciones, el tratamiento termico comprende calentar a aproximadamente de 70 a 100 grados cenffgrados. En algunas realizaciones, el extracto de fruta presenta unos maximos principales a aproximadamente 1,30 a 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM con una resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua-acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos. En algunas realizaciones, el extracto presenta unos maximos principales en el espectro del UV que se observan en la Figura 6. En algunas realizaciones, el extracto de fruta presenta maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos. En algunas realizaciones, el extracto presenta unos maximos principales en el cromatograma de corriente de iones totales que se observan en la Figura 7.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona una fraccion de extracto de Actinidia que comprende moleculas biologicamente activas con un peso molecular inferior a 1000 daltons, en el que dicho extracto de fruta presenta unos maximos principales a aproximadamente 1,30 a 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM con una resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos y maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos, y en el que dicho extracto inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona procesos para producir un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo que comprende fraccionar zumo de una fruta de Actinidia para producir una fraccion de extracto y calentar dicha fraccion de extracto hasta de aproximadamente 70 a aproximadamente 100 grados cenffgrados. En algunas realizaciones, el fraccionamiento comprende el fraccionamiento por tamano. En algunas realizaciones, el calentamiento comprende calentar dicha fraccion a los mencionados de aproximadamente 70 a aproximadamente 100 grados cenffgrados durante mas de aproximadamente cinco minutos. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo producido mediante el anterior procedimiento. En algunas realizaciones, el extracto de Actinidia estable y biologicamente activo maximos principales a aproximadamente 1,30 a 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM con una resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo- acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos y maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa ffquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de parffculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm) con una fase movil del 100 % (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a 100 % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos, y en el que dicho extracto inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria.

Descripcion de las figuras

La Figura 1 muestra un esquema de un procedimiento para el fraccionamiento parcial de extractos de kiwi.

La Figura 2 muestra la inhibicion de la agregacion plaquetaria inducida por la actividad de ADP por el extracto.

La Figura 3 muestra la inhibicion de la agregacion plaquetaria inducida por el acido araquidonico.

La Figura 4 muestra los efectos del EK sobre la actividad de ACE en el suero humano.

La Figura 5 muestra el barrido de UV de una fraccion deslipidizada ultrafiltrada purificada de extracto de kiwi.

La Figura 6 proporciona un cromatograma de un barrido a 200-400 nm en el espectro del UV de un extracto de kiwi de la presente invencion.

La Figura 7 proporciona un cromatograma de un barrido de EM a 100-1000 Pm en modo negativo de un extracto de kiwi de la presente invencion.

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Definiciones

Tal como se usa en el presente documento, el termino 'fraccion' se refiere a un extracto parcialmente purificado o compuestos purificados a partir de un extracto.

Las expresiones "purificado" o "para purificar" significan el resultado de cualquier proceso que elimina parte de un contaminante del componente de interes, tal como los componentes responsables de la inhibicion de la agregacion plaquetaria. El porcentaje de un componente purificado aumenta por tanto en la muestra.

Tal como se usa en el presente documento, la expresion "transportador fisiologicamente aceptable" se refiere a cualquier transportador o excipiente comunmente utilizado en composiciones farmaceuticas oleosas. Dichos transportadores o excipientes incluyen, pero sin limitacion, aceites, almidon, sacarosa y lactosa.

Tal como se usa en el presente documento, la expresion "vetnculo de administracion oral" se refiere a cualquier medio de administracion de una composicion farmaceutica por via oral, incluyendo, pero sin limitacion, capsulas, pfldoras, comprimidos y jarabes.

Tal como se usa en el presente documento, la expresion "producto alimenticio" se refiere a cualquier alimento o comestible adecuado para su consumo por seres humanos, animales no rumiantes, o animales rumiantes. El "producto alimenticio" puede ser un alimento preparado y envasado (por ejemplo, mayonesa, aderezo para ensaladas, pan, o un alimento a base de queso) o un alimento animal (por ejemplo, un alimento animal extrudido o granulado o un alimento mixto grueso). "Producto alimenticio preparado" significa cualquier alimento preenvasado homologado para el consumo humano.

Tal como se usa en el presente documento, el termino "comestible" se refiere a cualquier sustancia adecuada para el consumo humano o animal.

Tal como se usa en el presente documento, la expresion "alimento funcional" se refiere a cualquier alimento fresco o alimento procesado reivindicado por tener propiedades promotoras de la salud y o que previenen la enfermedad mas alla de la funcion nutritiva basica de suministrar nutrientes. Los alimentos funcionales se denominan algunas veces nutraceuticos. La categona funcional incluye alimentos procesados preparados a partir de ingredientes alimenticios funcionales, o reforzados con aditivos promotores de la salud, productos de tipo "enriquecidos con vitaminas", y tambien, alimentos frescos (por ejemplo, vegetales) que tienen vinculadas reivindicaciones espedficas. Los alimentos fermentados con cultivos vivos se consideran tambien a menudo como alimentos funcionales con beneficios probioticos.

Tal como se usa en el presente documento, la expresion "suplemento nutritivo" se refiere a un producto alimenticio formulado como un suplemento de la dieta o nutriente que se va a usar como parte de la dieta.

Descripcion detallada de la invencion

La invencion se refiere a agentes cardioprotectores. En particular, la presente invencion se refiere a extractos y fracciones cardioprotectoras de los mismos preparados a partir del kiwi.

El kiwi es el cultivo mejor conocido del genero Actinidia (3). Aunque las ventas de frutas de Actinidia en el mercado internacional esta dominada por un unico cultivar del kiwi Actinidia deliciosa "Hayward," existe un considerable numero de cultivares y selecciones del genero que tienen una forma, tamano, y vellosidad muy diversos. Frecuentemente ofrecen una amplia variacion en los atributos sensoriales tales como el color de la pulpa, el aroma, y el sabor, y en atributos nutritivos tales como el nivel de vitamina C, polifenoles, y contenido de carotenoides (4,5). Estan disponibles pocos tipos de productos alimenticios procesados procedentes del kiwi para los consumidores. Los kiwis se suelen consumir principalmente como frutas enteras. Los pocos ejemplos donde se ha procesado kiwi para obtener productos incluyen postres congelados y mezclas de zumos y, de forma mas reciente, una pocas bebidas naturales de kiwi tales como Kiwi Crush™ (Vital Food Processors Ltd, Manukau City, Auckland, Nueva Zelanda). Los extractos de kiwi que contienen los componentes nutritivos de la fruta son composiciones bioactivas deseables que incluyen polifenoles, acido ascorbico y polisacaridos solubles en agua (polisacaridos pecticos), que pueden ser ventajosos en aplicaciones de alimento funcionales, aumentando la gama de productos del kiwi disponibles para los consumidores (3). Con el creciente interes por la salud, cada vez existe una mayor demanda de los consumidores por alimentos nutritivos aceptables con multiples beneficios para el consumidor que incluyen beneficios para la salud definidos, mayor comodidad y reduccion ene l contenido de aditivos.

Las plaquetas estan implicadas en el desarrollo de la ateroesclerosis, y los acontecimientos tromboticos y, por tanto, la reduccion de la actividad plaquetaria por las medicaciones reduce la incidencia y la gravedad de la enfermedad (1). Los experimentos realizados durante el curso del desarrollo de las realizaciones de la presente invencion evaluaron si el consumo de kiwi modulo la actividad plaquetaria y los lfpidos en plasma en voluntarios humanos sanos en un estudio cruzado aleatorizado. Se ha notificado que el consumo de dos o tres kiwis al dfa durante 28 dfas redujo la respuesta de agregacion plaquetaria al colageno y ADP en un 18 % en comparacion con los controles (6). Ademas, el consumo de kiwis disminuyo los niveles de trigliceridos en sangre en un 15 % en comparacion con el control, aunque no se observaron dichos efectos en el caso de los niveles de colesterol en plasma. Todos estos

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datos indican que el consumo de kiwis es beneficioso en la patologfa cardiovascular. La incubacion de extracto de kiwi (EK expresado como peso de pulpa utilizado para preparar el EK) inhibio la agregacion plaquetaria pero no era una preparacion optima ya que requiere una buena cantidad de pulpa; ademas, la actividad puede perderse en el almacenamiento incluso a 4 grados centigrados debido a reacciones indeseables en el zumo. Ademas, se cree que los taninos y el aceite de las semillas (y en menor extension el pelo) pueden reaccionar con la pulpa muy acida para producir olor y color indeseables. Muchas especies de kiwi tienen un pelo fino que es diffcil de eliminar de un zumo. Se prefieren los procedimientos de ablandamiento de la pulpa y se considera deseable evitar la desintegracion excesiva de celulas y la fragmentacion de los componentes de la fruta tales como la semilla. Las semillas pueden contener sustancias toxicas (por ejemplo, semilla de albaricoque) o contribuyen a aromas desagradables o indeseables en un zumo.

Muchos frutos son acidos y los que tienen un pH de 6 o menos es mas probable que esten afectados. Ampliamente usada y relativamente barata, la sacarosa es alcalina y parece inducir o participar en otras reacciones adicionalmente indeseables cuando se anade a una pulpa acida. La investigacion que ha conducido a las realizaciones de la presente invencion ha indicado que las sustancias que forman parte de un zumo procedente de una fragmentacion de semillas o de un dano excesivo de las celulas contribuyen a factores que afectan de forma adversa a la produccion satisfactoria de zumo de kiwi, tales como los problemas de oscurecimiento y ocultacion. El kiwi es mas acido que la mayona y tiene un pH de aproximadamente 3. Esto puede tambien evitar las posibles reacciones secundarias que contribuyen a la ocultacion, decoloracion, etc. La glucosa y la fructosa se encuentran habitualmente en muchas frutas. Normalmente, esto enmascara algunas de las propiedades indeseables de la fruta tales como el amargor o el exceso de acidez y es debido en parte a la afinidad del ser humano medio por el sabor dulce. En algunas realizaciones, los productos de zumo no se han pasteurizado como es caractenstico en la mayona de otros zumos y procesos. Por tanto, cualquiera de los efectos conservantes a los que contribuya el agente edulcorante ayudaran a prolongar la vida media del producto. Es posible que la alteracion del pH resultante de la combinacion pueda dar lugar a reacciones secundarias indeseables. Adicionalmente, se ha senalado que, durante el almacenamiento, la qmmica de la mayona de los zumos variara. Para el kiwi, el contenido en acido del zumo disminuira. De acuerdo con ello, en algunas realizaciones, la adicion de un tampon adecuado o de un agente de ajuste del pH ayudara a preservar el pH del producto durante un periodo mas largo. Esto aplaza tambien las posibles reacciones a largo plazo indeseables que dan como resultado un oscurecimiento o decoloracion del zumo.

En algunas realizaciones, las fracciones activas de la fruta, y en particular del kiwi, se utilizan en una variedad de formulaciones y se anaden preferentemente a cualquier matriz para el consumo humano que sea conocida en la materia. En algunas realizaciones preferidas, las fracciones activas se caracterizan por tener una elevada eficacia para un uso concreto, tal como la prevencion de la agregacion o la adhesion plaquetaria, por estar sustancialmente exentas de materiales inactivos, por tener una vida media aumentada en comparacion con las fracciones activas sin tratar. En algunas realizaciones, las fracciones se producen mediante un proceso donde se centrifuga se filtra, y se deslipidiza una fraccion de zumo o pulpa para proporcionar inhibidores de plaquetas muy enriquecidos (es decir, mas de 10, 20, o 30 veces y hasta aproximadamente 50 veces o 100 veces en comparacion con el zumo bruto, sin procesar). Este proceso produce una fraccion activa con una vida media aumentada y que es estable al calentamiento. En algunas realizaciones preferidas, la fraccion activa se trata termicamente para aumentar adicionalmente la estabilidad. En realizaciones adicionales, se proporciona un producto reconstituido a partir de una fraccion activa como se ha descrito anteriormente. La presente invencion se ha desarrollado para miembros del genero Actinidia. Los productos de fruta, diferentes de un zumo, estan tambien incluidos en el alcance de las realizaciones de la invencion. Esta fruta tiene generalmente un pH bajo (3,0-3,5), padece oscurecimiento tras la exposicion del zumo al aire y tiene contenido de clorofila. Se preve que, aunque el proceso de la invencion sea adecuado para otras frutas, la mayor ventaja posiblemente se aplique a frutas que tienen problemas y caractensticas en comun con el kiwi, por ejemplo, un pH de menos de 4,5, niveles de cloroplastos significativos, u ocultamiento (por ejemplo, la fruta de Monstera deliciosa). No debe inferirse que el beneficio de la invencion se limita a estos tipos de fruta. La invencion ha identificado varias areas problematicas, especialmente para el kiwi, y resuelve sus necesidades.

Los experimentos realizados durante el desarrollo de las realizaciones de la presente invencion han demostrado que el EK tiene la capacidad de inhibir la agregacion plaquetaria, y reducir in vitro la actividad convertidora de la angiotensina (ACE). Los resultados obtenidos hasta la fecha indican que las composiciones que contienen EK son de utilidad en la prevencion de la patologfa cardiovascular, por ejemplo los infartos de miocardio, y los ictus y en la prevencion de acontecimientos tromboembolicos adicionales en pacientes que han padecido infarto de miocardio, ictus o angina inestable. Ademas, dicha composicion es de utilidad en la prevencion de la restenosis tras angioplastia y procedimientos de derivacion. Ademas, el EK es de utilidad en el tratamiento de la patologfa coronaria resultante de trastornos tromboembolicos tales como IM junto con tratamiento trombolttico. Los resultados obtenidos hasta la fecha indican que los compuestos responsables de la actividad de agregacion antiplaquetaria son compuestos solubles en agua que tienen una estructura muy diferente a la de los compuestos solubles en lfpidos. Existen muchos agentes de agregacion antiplaquetaria conocidos que actuan en diferentes etapas de la produccion y accion plaquetaria. La aspirina (acido acetilsalidlico) es el mas ampliamente usado y estudiado. Se han utilizado tambien el dipiridamol y la ticlopidina. La actividad antiplaquetaria de la aspirina se debe a la inhibicion irreversible de la ciclooxigenasa plaquetaria, impidiendo de esta manera la smtesis de tromboxano A2, un compuesto que produce la agregacion plaquetaria. El ibuprofeno es un inhibidor reversible de la ciclooxigenasa plaquetaria. Algunos

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compuestos son inhibidores directos de la tromboxano A2 sintetasa, por ejemplo pirmagrel, o actuan como antagonistas de los receptores del tromboxano, por ejemplo sulotroban.

La presente invencion no se limita a un mecanismo concreto. De hecho, no es necesaria una comprension del mecanismo para llevar a la practica la presente invencion. No obstante, los resultados descritos en el presente documento indican que los principios activos del extracto de fruta pueden afectar a una o mas etapas de las rutas que conducen a la produccion de tromboxano A2 anteriormente a la aspirina y otros farmacos antiplaquetarios actualmente disponibles. Se sabe bien que los efectos adversos son incidencias comunes con las dosis terapeuticas de la aspirina; siendo los principales efectos perturbaciones gastrointestinales tales como nauseas, dispepsia, y vomitos. Se anticipa por tanto que los compuestos aislados que inhiben la agregacion plaquetaria en el extracto de fruta encuentran uso como una alternativa deseable a la aspirina y otros farmacos antiplaquetarios en la prevencion de acontecimientos tromboembolicos y enfermedad coronaria.

De acuerdo con ello, en algunas realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta, una fraccion activa del mismo, o uno o mas compuestos activos aislables del anterior, para su uso en la profilaxis o tratamiento de una patologfa iniciada o caracterizada por la agregacion plaquetaria.

En realizaciones adicionales, la invencion proporciona un extracto de fruta o fraccion activa del mismo o uno o mas compuestos aislables del mismo para su uso como agente antitrombotico.

En otras realizaciones adicionales, la invencion proporciona un extracto de fruta o fraccion activa del mismo o uno o mas compuestos aislables del mismo como se ha definido aqu anteriormente en la fabricacion de un medicamento para su uso en la profilaxis o tratamiento de una patologfa iniciada o caracterizada por la agregacion plaquetaria; o para su uso como inhibidor de la agregacion plaquetaria o para su uso como agente antitrombotico.

En algunas realizaciones, la invencion proporciona un proceso para la fabricacion de una medicina para su uso (i) en la profilaxis o tratamiento de una patologfa iniciada, mediada o caracterizada por agregacion plaquetaria, o (ii) como inhibidor de la agregacion plaquetaria, o como (iii) agente antitrombotico: proceso que se caracteriza por el uso, como ingrediente esencial del medicamento, de una fruta, o un extracto o fraccion activa de la misma o uno o mas componentes aislables de la misma como se ha definido anteriormente en el presente documento.

En algunas realizaciones, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un componente activo procedente de una fruta o de un extracto o de una fraccion activa o de uno o mas compuestos aislables de los mismos tal como se ha definido anteriormente en el presente documento y un transportador farmaceuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta, una fraccion activa del mismo, o uno o mas compuestos activos aislables del anterior, para su uso en el apoyo de la salud cardiovascular.

En algunas realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta, una fraccion activa del mismo, o uno o mas compuestos activos aislables del anterior, para su uso en el apoyo de la salud del corazon.

En otras realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta o fraccion activa del mismo o uno o mas compuestos aislables del mismo para su uso como inhibidor de la agregacion plaquetaria.

En otras realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta o fraccion activa del mismo o uno o mas compuestos aislables del mismo para su uso en la promocion y el mantenimiento de la salud del corazon y/o la salud circulatoria.

En otras realizaciones, la invencion proporciona un extracto de fruta o fraccion activa del mismo o uno o mas compuestos aislables del mismo para su uso en la mejora, el mantenimiento y la promocion del flujo sangumeo, y en particular del flujo laminar de la sangre.

Se prefiere que el extracto de fruta utilizado de acuerdo con la invencion sea uno de aquellos que no son toxicos a los seres humanos y, normalmente, las frutas que se consideran usualmente son frutas comestibles. De esta manera, las frutas pueden contener o no semillas o huesos, pero tienen una pulpa comestible esencialmente no oleosa.

El kiwi es el cultivo mejor conocido del genero Actinidia. Los extractos de las realizaciones de la invencion pueden prepararse homogeneizando la pulpa de un kiwi pelado y a continuacion eliminando los solidos del anterior, por ejemplo, mediante centrifugacion. De esta manera, el extracto es normalmente un extracto acuoso, que puede consistir o comprender el zumo de la fruta, opcionalmente con la adicion extra de agua anadida durante la etapa de homogeneizacion. Dichos extractos acuosos pueden concentrarse, enriquecerse o condensarse mediante, por ejemplo, tecnicas convencionales, por ejemplo, evaporacion a presion reducida. Los ejemplos de concentrados son aquellos que se han concentrado al menos 2 veces, mas habitualmente, al menos 4 veces, por ejemplo, al menos 8 veces, o al menos 40 veces o al menos 100 veces o al menos 200 veces o al menos 1000 veces.

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El extracto puede fraccionarse para aislar una o mas fracciones activas del anterior mediante, por ejemplo, filtracion de pesos moleculares, o cromatograffa sobre un soporte adecuado tal como gel de sefarosa (para la cromatograffa de exclusion por tamano) o la eliminacion de ffpidos (mediante Lipidex-1000) o mediante tratamientos con disolventes, o columna de intercambio ionico utilizando HPLC sobre sflice o alumina tratadas adecuadamente, por ejemplo, sflice revestida con ODS, o extraccion con disolventes.

Los experimentos llevados a cabo con el extracto de fruta de kiwi han revelado que los principios activos del extracto pasan a traves de una ultrafiltracion que tiene un corte de pesos moleculares de 1000, es incoloro, soluble en agua y no pierde la actividad cuando hierve. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un proceso para producir un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo que comprende fraccionar zumo de una fruta de Actinidia para producir una fraccion de extracto y calentar la fraccion de extracto hasta de aproximadamente 70 a aproximadamente 120 grados cenffgrados, preferentemente de 80 a 100 grados cenffgrados, y lo mas preferente de aproximadamente 95 a 100 grados cenffgrados. En algunas realizaciones, la duracion del calentamiento es de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 minutos, preferentemente aproximadamente 10 a aproximadamente 25 minutos, y lo mas preferente aproximadamente 20 minutos, o mas, en mas de aproximadamente 5, 10, o 15 minutos. La presente invencion proporciona un proceso para producir un extracto de Actinidia estable y biologicamente activo que comprende fraccionar zumo de una fruta de Actinidia para producir una fraccion de extracto y someter la fraccion a ultrafiltracion con un corte de pesos moleculares inferior a 1 kDa. En algunas realizaciones, la fraccion activa estabilizada comprende moleculas biologicamente activas y se caracteriza por retener al menos un 80 % de la actividad biologica de dichas moleculas biologicamente activas cuando se almacena al menos 4 dfas, 18 dfas o 24 dfas hasta aproximadamente 30 o 40 dfas a 4 grados cenffgrados en comparacion con una fraccion de extracto fresco. En algunas realizaciones, la actividad biologica es la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria o la inhibicion de la actividad de la enzima convertidora de la angiotensina.

En algunas realizaciones preferidas, el extracto de Actinidia estable y biologicamente activo producido mediante este procedimiento presenta maximos principales a aproximadamente 1,30 y 1,81 minutos en un cromatograma del espectro UV y maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en un cromatograma de corriente de iones totales y en el que dicho extracto inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria.

De acuerdo con ello, la divulgacion proporciona tambien su uso como agente antitrombotico, o su uso como inhibidor de la agregacion plaquetaria, o para su uso en la profilaxis o tratamiento de una patologfa iniciada o caracterizada por la agregacion plaquetaria, una fraccion activa de un extracto de fruta (por ejemplo, extracto de kiwi), conteniendo la fraccion activa compuestos solubles en agua incoloros o de un color paja claro sustancialmente estables al calor con un peso molecular de menos de 1000 Da. En algunas opciones, la fraccion activa se caracteriza por tener una actividad biologica. En algunas realizaciones, la actividad biologica es una inhibicion o disminucion de la actividad de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) en al menos un 5 %, 10 % o preferentemente 15 % en comparacion con un control o sustancia placebo cuando la fraccion activa se incuba con suero normal durante 10 minutos. En algunas opciones, la actividad biologica es la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria. En algunas opciones, la inhibicion de la agregacion plaquetaria se expresa como porcentaje de inhibicion de la agregacion plaquetaria por un efector conocido de la agregacion plaquetaria, por ejemplo, colageno, ADP, o acido araquidonico. En algunas opciones, la fraccion activa de la presente invencion inhibe la agregacion plaquetaria por uno de estos efectores conocidos en al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 % con un maximo de aproximadamente 50 % o 60 % en comparacion con un control o sustancia placebo.

Se ha encontrado que la fraccion activa esta principalmente asociada con, o se puede extraer, del zumo, de la pulpa que rodea las pepitas y de las pepitas del kiwi. De esta manera, el uso de composiciones preparadas a partir de una fraccion activa que consiste esencialmente o que comprende un homogenado o un extracto del mismo procedente de la pulpa de un kiwi pelado o que consiste esencialmente en, o que comprende, el zumo y/o la pulpa que rodea las pepitas, y/o las pepitas, representa una realizacion preferida de la invencion.

De acuerdo con ello, las realizaciones de la presente invencion proporcionan una fraccion activa de un extracto de kiwi con una o mas de las siguientes caracteffsticas:

a) el tamano de las moleculas en la fraccion activa es inferior a 1000 Da;

b) la fraccion activa es sustancialmente estable al calor;

c) la fraccion activa es sustancialmente incolora;

d) la fraccion activa comprende sustancialmente compuestos solubles en agua;

e) la fraccion activa inhibe la agregacion plaquetaria; y

f) la fraccion activa inhibe la enzima convertidora de la angiotensina.

Las fracciones activas de la presente invencion pueden proporcionarse de diversas formas y en diversas formulaciones. En algunas realizaciones, las fracciones se proporcionan en forma de ffquido, un jarabe, un polvo, una pasta, una emulsion, una composicion aglomerada, una composicion granulada, una composicion encapsulada, una suspension, un concentrado, una solucion, una pastilla para chupar. El polvo puede ser preferiblemente un polvo liofilizado, criocongelado o secado mediante pulverizacion preparado a partir del extracto de kiwi estabilizado con o sin excipiente organolepticamente y/o farmaceuticamente aceptable. El jarabe puede ser preferentemente una

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solucion acuosa viscosa concentrada preparada a partir del extracto de kiwi estabilizado y puede incluir excipientes y/o edulcorantes adecuados. Los jarabes pueden utilizarse para la administracion oral directa o como concentrado para su reconstitucion con agua antes de la administracion.

Las fracciones pueden proporcionarse mediante cualquiera de numerosas vfas, incluyendo, pero sin limitacion, oral, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intratecal, intraventricular, transdermica, bucal, subcutanea, intraperitoneal, intranasal, enteral, topica, sublingual o rectal. Los detalles sobre las tecnicas de formulacion para y la administracion pueden encontrarse en la ultima edicion del Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, Pa.).

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un vehnculo de administracion oral que comprende una fraccion de la presente invencion. Las fracciones pueden formularse preferentemente con transportadores farmaceuticamente aceptables tales como almidon, sacarosa o lactosa en comprimidos, pfldoras, grageas, capsulas, capsulas gelificadas, soluciones, lfquidos, lechadas, suspensiones y emulsiones. Los comprimidos o capsulas de la presente invencion pueden revestirse con un revestimiento enterico que se disuelve a un pH de aproximadamente 6,0 a 7,0. Un revestimiento enterico adecuado que se disuelve en el intestino delgado pero no en el estomago es el acetato ftalato de celulosa. En algunas realizaciones, el vetnculo de administracion oral comprende una cantidad del primer y el segundo componente eficaz para producir un efecto en un sujeto seleccionado entre el grupo que consiste en aumentar la eficacia de trabajo del musculo, disminuir el coste de energfa del trabajo, aumentar el tiempo de trabajo hasta el agotamiento, aumentar la resistencia durante el ejercicio ffsico, aumentar el bienestar, mejorar el dolor muscular tras ejercicios extremos, mejorar las dolencias metabolicas en sujetos con obesidad y/u otro smdrome metabolico, y sus combinaciones. Los ejemplos de mejorar las dolencias metabolicas en sujetos con obesidad y/o smdrome metabolico incluyen, pero sin limitacion, aumento de la captacion de glucosa, disminucion del estres oxidativo, y sus combinaciones. En algunas realizaciones, el vehnculo de administracion oral comprende una cantidad eficaz de las fracciones. En algunas realizaciones, la cantidad eficaz comprende una cantidad de extracto que contiene los ingredientes biologicamente activos que se encuentran entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 kiwis, y preferentemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 kiwis, y lo mas preferente aproximadamente 1 a 5 kiwis. En otras realizaciones, la cantidad eficaz corresponde a aproximadamente 1 a aproximadamente 5000 mg de la fraccion liofilizada o secada mediante pulverizacion, estabilizada, preferentemente entre aproximadamente 1 a aproximadamente 3000 mg de la fraccion liofilizada o secada mediante pulverizacion, estabilizada y lo mas preferente aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg de la fraccion liofilizada o secada mediante pulverizacion, estabilizada. En otras realizaciones, la cantidad eficaz corresponde a aproximadamente 500 a aproximadamente 20000 mg de la fraccion concentrada (por ejemplo, un jarabe), estabilizada, preferentemente entre aproximadamente 500 a aproximadamente 10000 mg de la fraccion concentrada (por ejemplo, un jarabe), estabilizada y lo mas preferente aproximadamente 500 mg a aproximadamente 2500 mg de la fraccion concentrada (por ejemplo, un jarabe), estabilizada.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona suplementos de la dieta que comprenden las fracciones de la presente invencion. Los ingredientes del suplemento de la dieta de la presente invencion estan contenidos preferentemente en excipientes y/o transportadores aceptables para el consumo oral. La forma real del transportador y, de este modo, el propio suplemento de la dieta, no es cntica. El transportador puede ser un lfquido, gel, capsula gelificada, capsula, polvo, comprimido solido (revestido o no revestido), te, o similares. El suplemento de la dieta esta preferentemente en la forma de un comprimido o capsula y lo mas preferente en la forma de una capsula de gelatina blanda. En otras realizaciones, el suplemento se proporciona como un polvo o lfquido adecuado para que el consumidor lo anada a un alimento o bebida. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el suplemento de la dieta puede administrarse a un individuo en la forma de polvo, por ejemplo, para utilizarse mezclado en una bebida, o mediante agitacion en un alimento semisolido tal como un pudin, cobertura, salsa, pure, cereal cocinado, o aderezo para ensalada, por ejemplo, o anadido de otra forma a un alimento. En realizaciones preferidas, los suplementos de la dieta comprenden una cantidad eficaz de los componentes que se han descrito anteriormente.

El suplemento de la dieta puede comprender uno o mas ingredientes inertes, especialmente si es deseable limitar el numero de calonas anadidas a la dieta por el suplemente de la dieta. Por ejemplo, el suplemento de la dieta de la presente invencion puede contener tambien ingredientes opcionales que incluyen, por ejemplo, hierbas, vitaminas, minerales, potenciadores, colorantes, edulcorantes, aromatizantes, ingredientes inertes, y similares. Por ejemplo, el suplemento de la dieta de la presente invencion puede contener uno o mas de los siguientes: ascorbatos (acido ascorbico, sales minerales de ascorbato, escaramujo, acerola, y similares), deshidroepiandrosterona (DHEA), te verde (polifenoles), inositol, quelpo, dulse, bioflavinoides, maltodextrina, ortigas, niacina, niacinamida, romero, selenio, sflice (dioxido de silicio, gel de sflice, cola de caballo, equiseto, y similares), espirulina, cinc, acido docosahexanoico y/o acido eicosapentanoico (proporcionado en cualquier forma tal como acidos grasos libres, trigliceridos o fosfolfpidos) y similares. Dichos ingredientes opcionales pueden tanto producirse naturalmente como en formas concentradas.

En algunas realizaciones, los suplementos de la dieta comprenden ademas vitaminas y minerales que incluyen, pero sin limitacion, fosfato o acetato de calcio, tribasico; fosfato de potasio, dibasico; sulfato u oxido de magnesio; sal (cloruro de sodio); cloruro o acetato de potasio; acido ascorbico; orfosfato ferrico; niacinamida; sulfato u oxido de cinc; pantotenato de calcio; gluconato de cobre; riboflavina; beta-caroteno; clorhidrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; acido folico; biotina; cloruro o picolonato de cromo; yoduro de potasio; selenato de sodio; molibdato de

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sodio; filoquinona; vitamina D3; cianocobalamina; selenito de sodio; sulfato de cobre; vitamina A; vitamina C; inositol; yoduro de potasio. Se pueden obtener dosificaciones adecuadas para vitaminas y minerales, por ejemplo, consultando las directrices de la U.S. RDA.

En realizaciones preferidas, los suplementos de la dieta comprenden una cantidad eficaz de las fracciones que se han descrito anteriormente. Los suplementos de la dieta de la presente invencion se pueden tomar una o mas veces al dfa. Preferentemente, el suplemento de la dieta se administra una o dos veces al dfa por via oral. La frecuencia de administracion dependera, por supuesto, de la dosis por unidad (capsula o comprimido) y del nivel deseado de ingestion. Los niveles/unidad de la dosis se pueden ajustar para proporcionar los niveles recomendados de ingredientes por dfa (por ejemplo, una cantidad eficaz como se ha descrito anteriormente) en un numero razonable de unidades (por ejemplo, dos capsulas o comprimidos tomados dos veces al dfa). En realizaciones preferidas, las dosis se anaden diariamente hasta la ingesta diaria de cada ingrediente. En realizaciones preferidas, los suplementos de la dieta se toman con la comida o antes de las comidas. En otras realizaciones, los suplementos de la dieta no se toman con comidas.

En otras realizaciones, la presente invencion proporciona suplementos nutritivos (por ejemplo, barritas energeticas o barritas sustitutivas de comidas o bebidas) que comprenden las fracciones de la presente invencion. En realizaciones preferidas, los suplementos nutritivos comprenden una cantidad eficaz de los componentes que se han descrito anteriormente. El suplemento nutritivo puede servir como comida o aperitivo de sustitucion y generalmente proporcionan calonas nutrientes. Preferentemente, los suplementos nutritivos proporcionan hidratos de carbono, proternas, y grasas en cantidades equilibradas. El suplemento nutritivo puede comprender ademas hidratos de carbono simples, de longitud de cadena media, o polisacaridos, o una de sus combinaciones. Puede seleccionarse un azucar sencillo para conseguir las propiedades organolepticas deseadas. El almidon de mafz sin cocinar es un ejemplo de un hidrato de carbono complejo. Si se desea que mantenga su estructura de elevado peso molecular, debe incluirse solamente en formulaciones alimenticias o partes de las mismas que no se cocinen o procesen termicamente debido a que el calor descompondra el hidrato de carbono complejo en hidratos de carbono sencillos, en el que los hidratos de carbono sencillos son monosacaridos o disacaridos. Los suplementos nutritivos contienen, en una realizacion, combinaciones de fuentes de hidratos de carbono de tres niveles de longitud de cadena (sencilla, media y compleja; por ejemplo, sacarosa, maltodextrinas, y almidon de mafz sin cocinar).

Las fuentes de proternas que se van a incorporar en el suplemento nutritivo de la invencion pueden ser cualquier protema adecuada utilizada en las formulaciones nutritivas y pueden incluir protema de suero lacteo, concentrado de protema de leche, polvo de suero, huevo, harina de soja, protema de leche de soja, aislado de proternas de soja, caseinato (por ejemplo, caseinato sodico, caseinato sodico calcico, caseinato calcico, caseinato de potasio), protema animal y vegetal y sus mezclas. Cuando se selecciona una fuente de proternas, debe considerarse en primer lugar el valor biologico de la protema, siendo los valores biologicos mas elevados los del caseinato, suero de leche, lactoalbumina, albumina de huevo y proternas de huevo completas. En una realizacion preferida, la protema es una combinacion del concentrado de protema de suero y caseinato de calcio. Estas proternas tienen un alto valor biologico; es decir, tienen una elevada proporcion de aminoacidos esenciales. Vease Modern Nutrition in Health and Disease, octava edicion, Lea & Febiger, editores, 1986, especialmente el Volumen 1, paginas 30-32.

El suplemento nutritivo puede incluir tambien otros ingredientes, tal como una o una combinacion de otras vitaminas, minerales, antioxidantes, fibra y otros suplementos de la dieta (por ejemplo, protema, aminoacidos, colina, lecitina, otros acidos grasos). La seleccion de uno o varios de estos ingredientes es un tema de formulacion, diseno, preferencias del consumidor y del usuario final. El experto en la tecnica puede conocer con facilidad las cantidades de estos ingredientes anadidas a los suplementos de la dieta de la presente invencion. Se puede proporcionar la directriz para dichas cantidades por las dosis indicadas en la U.S. RDA para ninos y adultos. Las vitaminas y minerales adicionales que se pueden anadir incluyen, pero sin limitacion, fosfato o acetato de calcio, tribasico; fosfato de potasio, dibasico; sulfato u oxido de magnesio; sal (cloruro de sodio); cloruro o acetato de potasio; acido ascorbico; orfosfato ferrico; niacinamida; sulfato u oxido de cinc; pantotenato de calcio; gluconato de cobre; riboflavina; beta-caroteno; clorhidrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; acido folico; biotina; cloruro o picolonato de cromo; yoduro de potasio; selenato de sodio; molibdato de sodio; filoquinona; vitamina D3; cianocobalamina; selenito de sodio; sulfato de cobre; vitamina A; vitamina C; inositol; yoduro de potasio.

Se pueden incorporar al producto aromas, agentes colorantes, especias, y frutos secos. Los aromatizantes pueden estar en la forma de extractos aromatizados, aceites volatiles, aromas de chocolate, aroma de mantequilla de cacahuete, migas de galleta, arroz crujiente, vainilla o cualquier aroma comercialmente disponible. Los ejemplos de aromas utiles incluyen, pero sin limitacion, extracto puro de ams, extracto de imitacion a banana, extracto de imitacion a cereza, extracto de chocolate, extracto puro de limon, extracto puro de naranja, extracto puro de menta piperita, extracto de imitacion a pina, extracto de imitacion a ron, extracto de imitacion a fresa, extracto puro de vainilla; o aceites volatiles, tales como aceite de balsamo, aceite de laurel, aceite de bergamota, aceite de madera de cedro, aceite de avellana, aceite de cereza, aceite de canela, aceite de clavo, o aceite de menta piperita; mantequilla de cacahuete, aroma de chocolate, migas de galleta de vainilla, azucar y mantequilla o tofe. En una realizacion, el suplemento de la dieta contiene cacao o chocolate.

Pueden anadirse emulsionantes para estabilizar el producto final. Los ejemplos de emulsionantes adecuados incluyen, pero sin limitacion, lecitina (por ejemplo, de huevo o soja), y/o monogliceridos y digliceridos. Otros

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emulsionantes son facilmente obvios para los expertos en la materia y la seleccion emulsionantes) adecuado(s) dependera, en parte, de la formulacion y del producto final.

Pueden anadirse tambien conservantes al suplemento nutritivo para extender la vida Preferentemente, se usan conservantes tales como sorbato de potasio, sorbato de sodio benzoato de sodio o EDTA de calcio disodio.

Ademas de los hidratos de carbono descritos anteriormente, el suplemento nutritivo puede contener edulcorantes naturales o artificiales (preferentemente de calonas bajas), por ejemplo, sacaridos, ciclamatos, aspartamina, aspartame, acesulfame K, y/o sorbitol. Dichos edulcorantes artificiales pueden ser deseables si se pretende que el suplemento nutritivo se consuma por un individuo con sobrepeso u obeso, o un individuo con diabetes de tipo II que es propenso a hiperglicemia.

El suplemento nutritivo puede proporcionarse en una variedad de formas, y mediante una variedad de procedimientos de produccion. En una realizacion preferida, para fabricar una barrita saludable, se cocinan los ingredientes lfquidos; se anaden los ingredientes secos con los ingredientes lfquidos en un mezclador y se mezclan hasta que se alcanza la fase masa; la masa se coloca en una extrusora, y se extrude; la masa extrudida se corta en longitudes adecuadas; y el producto se enfna. Las barritas pueden contener otros nutrientes y cargas para potenciar el sabor, ademas de los ingredientes espedficamente citados en el presente documento.

En otras realizaciones adicionales, la presente invencion proporciona productos alimenticios, productos alimenticios preparados, o comestibles que comprenden los extractos o fracciones descritos anteriormente (es decir, alimentos funcionales). En realizaciones preferidas, los alimentos comprenden una cantidad eficaz de las fracciones que se han descrito anteriormente. Por ejemplo, en algunas realizaciones, se proporcionan bebidas y alimentos solidos o semisolidos que comprenden los extractos, fracciones o derivados de los mismos. Estas formas pueden incluir, pero sin limitacion, bebidas (por ejemplo, bebidas sin alcohol, leche y otras bebidas lacteas, y bebidas de dieta), productos horneados, pudines, productos de leche fresca, productos de confitena, aperitivos, productos de confitena congelados o innovaciones (por ejemplo, helados, batidos de leche), alimentos congelados preparados, golosinas, productos de aperitivo (por ejemplo, patatas chips), sopas, pastas para untar, salsas, aderezos para ensaladas, productos carnicos preparados, queso, y yogur.

PARTE EXPERIMENTAL

Se proporcionan los siguientes ejemplos para demostrar e ilustrar adicionalmente determinadas realizaciones y aspectos preferidos de la presente invencion y no deben tomarse como limitantes de su alcance.

Ejemplo 1

Preparacion de extracto de kiwi:

Se preparo un extracto consistente en zumo de kiwi al 100 %. Para preparar zumo de fruta al 100 %, las frutas se pelaron y se homogeneizo la pulpa. El homogenado resultante se centrifugo a 9000xg durante 15 min a 4 °C en una centnfuga, tras lo cual se elimino el sobrenadante y se ajusto el pH del zumo a 7,4 con una solucion de hidroxido de sodio 1 M. Se determino inicialmente la actividad antiplaquetaria del extracto de kiwi (EK).

Fraccionamiento parcial del extracto de kiwi:

A continuacion se fraccionaron los extractos de kiwi de acuerdo con el esquema general que se muestra en la Figura

1. Se midio la actividad de inhibicion de la agregacion plaquetaria de las preparaciones en diversas etapas. De esta manera, el zumo de kiwi fresco, preparado a partir de un 100 % de fruta, se centrifugo a 9000xg durante 10 min. Tras la centrifugacion, el sobrenadante se criodeseco y una parte del material seco se disolvio en tampon fosfato y se ajusto el pH a 7,4. Este se sometio a continuacion a ultrafiltracion pasandolo a traves de un filtro con un corte de pesos moleculares de 1000 Dalton. Se recogio el ultrafiltrado, y se criodeseco y se reconstituyo con agua, y se ajusto el pH a 7,4. Se midio la agregacion plaquetaria utilizando el extracto en diferentes etapas del fraccionamiento. En un estudio independiente, se hirvio el extracto durante 10 min, y se centrifugo, y se determino la actividad antiplaquetaria de la muestra hervida.

Para examinar si los compuestos lipfdicos en los extractos fraccionados eran responsables de la actividad antiplaquetaria, los lfpidos del extracto se eliminaron haciendo pasar la solucion a traves de la columna Lipidex-1000 preparada especialmente (volumen de columna 18 ml). Lipidex-1000 adsorbe solamente las sustancias lipfdicas del extracto. A continuacion se eluyo la columna con 5 volumenes de columna de tampon fosfato 15 mM, y la solucion eluda se recogio y se seco. Los compuestos lipfdicos que se encontraban en la resina de la columna se eluyeron posteriormente con solucion metanolica y se secaron para la medida de la actividad antiplaquetaria. Ademas del experimento anterior con Lipidex-1000, los lfpidos tambien se eliminaron con otro procedimiento utilizando cloroformo y metanol de acuerdo con Bligh y Dyer. De esta manera, 2 ml del ultrafiltrado se mezclaron con 2,5 ml de metanol seguido por 1,25 ml de cloroformo para dar una unica fase, y una relacion de cloroformo:metanol:agua de 1.2:0,8. No se formo precipitado. A continuacion se anadieron cloroformo (1,25 ml) y agua (1,25 ml) y, tras agitar suavemente, la mezcla se dejo sedimentar en dos capas. La capa superior (metanol/agua) se elimino y se soplo

del emulsionante (o

media del producto. , benzoato de potasio,

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metanol bajo atmosfera de nitrogeno a 55 °C. A continuacion se completo el volumen a 2 ml tras ajuste a pH 7,4. La actividad antiplaquetaria de esta fase acuosa se comparo con el volumen respectivo de tampon fosfato como un control.

A continuacion se evaporo la fase del cloroformo con nitrogeno, y se volvio s suspender en etanol (50 jl). A continuacion se ensayo una muestra de la fase etanol (10 jl) para la actividad de la agregacion antiplaquetaria frente a 10 jl de etanol del control.

Estudio de agregacion plaquetaria:

Se investigo el efecto de los extractos de fruta sobre las propiedades de agregacion de las plaquetas humanas en voluntarios sanos. Se recogio sangre venosa de voluntarios que no habfan tomado ninguna medicacion durante al menos 14 dfas antes de la donacion. Se extrajo sangre (20 ml) utilizando una aguja de tipo mariposa 19G y se evito la coagulacion mezclando las muestras de sangre con citrato acido, (135 mM) con una relacion de 9 partes por volumen de sangre hasta 1 parte por volumen de citrato acido. Se preparo plasma rico en plaquetas (PRP) procedente de las muestras centrifugando la muestra a 180xg de 15 min. Un zumo de kiwi (10-30 jl), cuyo pH se habfa ajustado a 7,4 con hidroxido de sodio 1 M, se mezclo con el PRP para preparar un volumen de hasta 500 jl, y se incubo a 37 °C durante 15 min, tras lo cual se controlo el efecto del extracto de fruta sobre la agregacion plaquetaria inducida por el ADP con la adicion de ADP hasta una concentracion final de 5 jM. Los controles se analizaron en paralelo utilizando 10-30 jl de tampon fosfato, pH 7,4 en vez del extracto de fruta. Se controlo la agregacion plaquetaria en PRP utilizando una agregacion Chrono-Log (Chrono-Log, EE.UU.) a una velocidad de agitacion constante de 1000 rpm a 37 °C.

Para determinar el efecto del EK sobre la agregacion plaquetaria in vitro, se incubo PRP (450 jl) con diferentes concentraciones del EK (50 jl en volumen durante 15 min a 37 °C antes de la adicion de un agente de agregacion. Se determino la CI50 de diferentes fracciones de EK incubando estas plaquetas con diferentes concentraciones de EK durante 15 min. Se analizaron los controles en paralelo sustituyendo el extracto de fruta con 50 jl de fosfato. La inhibicion de la agregacion plaquetaria se expresa como la disminucion en el area bajo la curva en comparacion con el control.

Inhibicion de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) por el Extracto de Kiwi:

La enzima convertidora de la angiotensina 1 (ACE, EC 3.4.15.1), una exopeptidasa, es una enzima en circulacion que participa en el sistema renina-angiotensina del organismo, que media en el volumen extracelular (por ejemplo, el del plasma sangumeo, el fluido linfatico e intersticial), y la vasoconstriccion arterial. Se secreta por las celulas endoteliales pulmonares y renales y cataliza la conversion del decapeptido angiotensina I al octapeptido angiotensina Il. Los inhibidores de ACE bloquean la conversion de la angiotensina I a angiotensina II. Disminuyen por tanto la resistencia arteriolar y aumentan la capacidad venosa; aumentan el gasto cardiaco y el mdice cardiaco, el trabajo y el volumen del latido, disminuyen la resistencia renovascular, y conducen a un aumento de la natriuresis (excrecion de sodio en la orina). Con el uso de los inhibidores de ACE se evitan los efectos de la angiotensina II, que ocasionan una disminucion de la presion sangumea. Se midio el efecto del EK sobre la actividad de la ACE en suero utilizando el kit de ensayo de la enzima convertidora de la angiotensina de BUHLMANN LABORATORIES AG, Alemania.

Resultados:

Fraccionamiento de extractos de fruta de kiwi y sus efectos sobre la agregacion plaquetaria inducida por ADP mediante ADP.

La Figura 1 muestra la preparacion de extracto de kiwi utilizando diferentes procedimientos de fraccionamiento. El(los) inhibidor(es) de la agregacion plaquetaria en extractos de kiwi estaban presentes en la fraccion soluble en agua y su tamano es menor de 1000 daltons. La ebullicion de esta fraccion no destruye la actividad. La deslipidacion de la muestra mediante Lipidex-1000 ha demostrado que la fraccion activa esta presente en el extracto acuoso.

Estudios de agregacion plaquetaria

La Tabla 1 muestra la respuesta a la dosis del extracto de kiwi sobre la inhibicion de la agregacion plaquetaria por diferentes agentes. Esto demuestra un efecto de respuesta a la dosis con la agregacion inducida por ADP: el aumento del extracto de kiwi condujo a una reduccion mayor en la agregacion plaquetaria. La fraccion aislada de kiwi fue igualmente eficaz frente a tres agentes de agregacion plaquetaria, colageno, ADP, y acido araquidonico.

La Figura 2 muestra el efecto de diferentes volumenes de extracto de kiwi sobre la agregacion plaquetaria o ADP in vitro. Se incubo PRP (450 ml) con diferentes volumenes (0, 10, 20 y 30 ul) de EK durante 15 min a 37° C antes de la adicion de agonistas, acido araquidonico (500 jg/ml), ADP (3 mM, y colageno (1 jg/ml). El EK inhibio la agregacion inducida por ADP de una manera dependiente de la dosis (Tabla 1). ADP indujo la agregacion se inhibio en un 45 % con 10 jl de EK, 65 % con 20 jl de EK, y 95 % con 30 jl de EK, en comparacion con los controles. De manera similar, el EK inhibio la agregacion plaquetaria inducida por colageno; el nivel de inhibicion fue menor con incubaciones de 10 y 20 jl. La inhibicion de la agregacion plaquetaria inducida por acido presento un 38 % de

5

10

15

20

25

30

35

inhibicion al nivel de EK mas elevado ensayado y muy poca inhibicion a concentraciones menores de EK.

Tabla 1:

Volumen del extracto de kiwi (pl)

Inhibicion de la agregacion plaquetaria por tres agonistas diferentes (promedio en %)

Acido araquidonico Colageno ADP

10

12 18 45

20

25 45 65

30

38 90 95

La ebullicion del extracto de kiwi a 100° C durante 10 min no afecta a la agregacion plaquetaria del extracto.

Determinacion del efecto del EK sobre la agregacion plaquetaria inducida por diferentes agonistas. Las Figuras 2 y 3 muestran la inhibicion de la agregacion plaquetaria inducida por acido araquidonico, colageno y aDp, respectivamente. Se describen las condiciones experimentales en la Tabla 1.

Determinacion del efecto del extracto de kiwi fraccionado sobre la agregacion plaquetaria inducida por ADP. La Figura 4 muestra el efecto del extracto de kiwi fraccionado sobre la agregacion plaquetaria inducida por ADP. Se describen las condiciones experimentales en la Tabla 1. El extracto de EK se purifico como se describe en la Fig. 1.

Efectos del EK sobre la actividad de ACE en el suero humano. La incubacion del suero con 20 pl de EK durante 15 min inhibio mas del 15 % de actividad en comparacion con el control.

La Figura 5 muestra el barrido de UV de las fracciones activas deslipidizadas ultrafiltradas purificadas del extracto de kiwi.

Ejemplo 2

Se preparo zumo de kiwi tras la homogeneizacion de las frutas peladas, posteriormente se centrifugo a 9000xg durante 15 min y se mantuvo a 4 °C para el ensayo de antiplaquetas. La otra fraccion del zumo se hizo ebullir a 90 °C durante 20 min y se centrifugo de nuevo, y se ajusto el pH a 7,4 y se mantuvo a 4 °C un maximo de 24 dfas.

Se midio la actividad inhibidora del zumo de kiwi y el extracto en diferentes dfas como se ha indicado en la tabla y se midio su actividad antiplaquetaria incubando el PRP con el zumo (tras ajustar el pH a 7,4) o el extracto durante 15 minutos, y se comparo su inhibicion con la del control (en ausencia de zumo o extracto) utilizando 3 pM de ADP como agente de agregacion.

Dfa

Zumo de kiwi Extracto de kiwi

Actividad inhibidora Actividad

Dfa 0

100 100

Dfa 4

76 100

Dfa 18

29 100

Dfa 24

4 100

Conclusion: El zumo pierde un 24 % de actividad en una semana y un 70 % despues de 18 dfas, mientras que el extracto hervido retiene un 100 % su actividad. El extracto criodesecado retuvo tambien su actividad.

Ejemplo 3

Este ejemplo describe los espectros de UV y EM del extracto de kiwi soluble en agua y estable termicamente muy purificado que contiene actividad antiplaquetaria.

Se preparo el zumo de kiwi y se clarifico el zumo mediante centrifugacion a 9000 g durante 15 min. A continuacion se hizo ebullir el sobrenadante a 90 °C durante 20 min. El extracto enfriado se centrifugo de nuevo a continuacion a 9000xg durante 15 min. A continuacion se paso el sobrenadante incoloro a traves de una columna LIPDEX-1000 para eliminar cualquier lfpido asociado. La muestra deslipidizada eluida se criodeseco a continuacion y se paso a traves de un filtro de corte molecular de 1000 Dalton. El filtrado se analizo en una CL-EM/EM-UV de etapa triple. Barridos de EM de 100-1000 Pm en modo negativo (Figura 7) y espectro de UV a 200-400 nm (Figura 6).

5

10

15

20

25

30

35

40

La columna es una columna C18 Zorbax de 1,8 pM de resolucion rapida de partfculas (4,6 mm x 50 mm, 1,8 pm). La elucion se llevo a cabo comenzando con un 100 % de fase movil (A) agua- acido formico (100:0,1, v/v/v) a l0o % de B acetonitrilo-acido formico (100:0,1, v/v/v) durante 35 minutos.

Ejemplo 4

Se preparo zumo de kiwi tras la homogeneizacion de las frutas peladas, posteriormente se centrifugo a 9000xg durante 15 min y se mantuvo a 4 °C para el ensayo de antiplaquetas. La otra fraccion del zumo se hizo ebullir a 90° C durante 20 min y se centrifugo de nuevo, y se ajusto el pH a 7,4 y se mantuvo a 4 °C y se mantuvo hasta 24 dfas. Se midieron la actividad antiplaquetaria del zumo y el extracto en diferentes dfas, incubando el PRP con el zumo (tras ajustar el pH a 7,4) o el extracto durante 15 minutos, y se comparo su inhibicion con la del control (en ausencia de zumo o extracto) utilizando 3 pM de ADP como agente de agregacion.

Dfa

Actividad inhibidora del zumo de kiwi Actividad del extracto de kiwi

Dfa 0

100 100

Dfa 4

76 100

Dfa 18

29 100

Dfa 24

4 100

Conclusion: El zumo pierde un 24 % de actividad en una semana y un 70 % despues de 18 dfas, mientras que el extracto hervido retiene un 100 % su actividad. El extracto criodesecado retuvo toda su actividad.

Ejemplo 5

Se preparo el extracto de kiwi como se ha descrito anteriormente. El rendimiento de la preparacion final fue de 4-5 g por 100 g de frutas y contema un 45-50 % de azucar. Los datos aqrn presentados utilizaron el extracto preparado en Trondheim. Se mezclaron 20 g de EK con 200 ml de zumo Tine Milk Orange para consumo. Se reclutaron en el estudio seis adultos sanos de ambos sexos. Los sujetos teman edades comprendidas entre 25-60 y no teman antecedentes de enfermedad o trastornos hemostaticos importantes. Se evaluo su adecuacion para la inclusion en el estudio utilizando cuestionarios sobre la dieta y el estilo de vida y mediante cribado medico, durante el cual se evaluo la funcion plaquetaria. Los sujetos se seleccionaron sobre la base de una funcion plaquetaria elevada, determinado mediante la respuesta de agregacion plaquetaria a 3 pmol ADP/l. Se pidio a los sujetos que consuirnan habitualmente suplementos de la dieta (por ejemplo, aceites de pescado) que suspendieran estos suplementos durante un mmimo de 1 mes antes de participar en el estudio. Se pidio a los sujetos que se abstuvieran de tomar farmacos conocidos por afectar la funcion plaquetaria durante un periodo de 10 d antes de su participacion. Se obtuvo el consentimiento informado de todos los sujetos por escrito. Este estudio fue autorizado por la autoridad de Oslo. Se hizo ayunar a los voluntarios durante la noche. Se extrajeron muestras de sangre venosa de ~20 ml en cada punto temporal de muestreo (tiempo 0) y a continuacion se pidio a los voluntarios que bebieran 200 ml de zumo de naranja que contema 20 g de EK. Para las medidas de la funcion plaquetaria se extrajo sangre en jeringuillas de plastico que se transfirio a tubos de extraccion de sangre citrados (concentracion final de citrato de sodio, 13 mmol/l).

Estudios de agregacion plaquetaria ex vivo. Se llevo a cabo la medida de la extension de la agregacion plaquetaria inducida por ADP en PRP en cada punto temporal. La respuesta plaquetaria a concentraciones suboptimas de ADP fue tambien de interes; en estas condiciones, se puede observar una respuesta de agregacion bifasica, que proporciona informacion adicional acerca de la naturaleza de la respuesta plaquetaria. Se uso una concentracion estandarizada r de ADP (3 pmol/l) para todas las medidas. Para los estudios ex vivo, los efectos sobre la agregacion plaquetaria observados tras las intervenciones de tratamiento o control se expresan como porcentaje de variacion del area bajo la curva de agregacion tras el consumo de extracto o placebo, en comparacion con los valores iniciales.

Los resultados se expresan aqrn como % de inhibicion

Voluntarios % de inhibicion tras 2 horas

1

8,1

2

12,6

3

12

4

15

5

8,2

Referencias:

1. Dutta-Roy AK. (2002) Dietary components and human platelet activity. Platelets. 13(2):67-75

2. Dutta-Roy, AK, Crossbi, L, y Gordon, M.J. (2001) Effects of tomato extract on human platelet aggregation in

vitro, Platelets, 12(4):218-27.

3. Nishiyama I. Fruits of the actinidia genus. Adv Food Nutr Res. 2007;52:293-324.

4. Sun-Waterhouse D, Chen J, Chuah C, Wibisono R, Melton LD, Laing W, Ferguson LR, Skinner MA (2009). Kiwifruit-based polyphenols and related antioxidants for functional foods: kiwifruit extract-enhanced gluten-free

5 bread. Int J Food Sci Nutr. 60 Supl. 7:251-64. Publicacion electronica:

5. Daigo Abe, Takeshi Saito, Yasutaka Kubo, Yoshimasa Nakamura, Keizo Sekiya A fraction of unripe kiwi fruit extract regulates adipocyte differentiation and function in 3T3-L1 cells, Biofactor vol.

6. Duttaroy, AK, y Jorgensen A.J. (2004) Effects of kiwi fruit consumption on platelet aggregation and plasma lipids in healthy human volunteers. Platelets 15, 287-292 13(2):67-75

10

Claims (15)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   REIVINDICACIONES

   1. Fraccion activa de un extracto de kiwi, siendo el tamano de las moleculas en la fraccion activa inferior a 1000 daltons y en el que dicha fraccion inhibe la agregacion plaquetaria e inhibe la enzima convertidora de la angiotensina.
2. 2. Fraccion de la reivindicacion 1, en la que dicha fraccion inhibe la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria e inhibe la enzima convertidora de la angiotensina en un ensayo in vitro de la enzima convertidora de la angiotensina.
3. 3. Fraccion de la reivindicacion 1 o 2, en la que dicha fraccion activa se caracteriza por ser estable y retener al menos un 80 % de la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria cuando se almacena durante 4 dfas a 4 °C en comparacion con un extracto de kiwi sin fraccionar.
4. 4. Fraccion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la fraccion activa tiene mas de un 4 % de actividad inhibidora en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria tras mantenerse a 4 °C durante 24 dfas normalizado al dfa 0.
5. 5. Fraccion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicho extracto de fruta presenta maximos principales a aproximadamente 1,30 y 1,81 minutos en un barrido de espectro de UV de una cromatograffa lfquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pm con una resolucion rapida de partmulas de 4,6 mm x 50 mm con un 100 % de fase movil A de agua: acido formico en una relacion volumetrica de 100 : 0,1 a 100 % de B acetonitrilo : acido formico en una relacion volumetrica de 100 : 0,1 durante 35 minutos.
6. 6. Fraccion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que dicho extracto de fruta presenta maximos principales a aproximadamente 1,61, 30,18, y 30,87 en una espectrometna de masas 100-1000 Pm en un barrido en modo negativo de una cromatograffa lfquida de dicho extracto en una columna C18 Zorbax de 1,8 pm de resolucion rapida de partmulas de 4,6 mm x 50 mm con un 100 % de fase movil A de agua: acido formico en una relacion volumetrica de 100 : 0,1 a 100 % de B acetonitrilo : acido formico en una relacion volumetrica de 100 : 0,1 durante 35 minutos.
7. 7. Una composicion que comprende la fraccion de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, siendo dicha composicion preferentemente un jarabe, solucion o polvo.
8. 8. Fraccion de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o composicion de acuerdo con la reivindicacion 7 para su uso en el tratamiento de una patologfa iniciada o caracterizada por la activacion y/o la agregacion plaquetaria o para su uso en la reduccion de la presion sangumea.
9. 9. Fraccion para el uso de acuerdo con la reivindicacion 8, en la que la patologfa iniciada o caracterizada por la activacion y/o la agregacion plaquetaria se selecciona entre el grupo que consiste en trombosis, arterosclerosis y/o formacion de placa.
10. 10. El vehmulo de administracion oral o un suplemento nutritivo o un alimento o comestible funcional que comprende la fraccion, composicion, jarabe, solucion o polvo de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 9, seleccionandose preferentemente dicho alimento o comestible entre el grupo que consiste en bebidas, productos horneados, pudines, productos de leche fresca, productos de confitena, alimentos tipo aperitivo, productos de confitena congelados o innovaciones, alimentos congelados preparados, golosinas, productos tipo aperitivo, sopas, pastas para untar, salsas, aderezos para ensaladas, productos carnicos preparados, queso, y yogur, seleccionandose dicho suplemento nutritivo preferentemente entre el grupo que consiste en capsulas de gelatina blanda, capsulas de gelatina dura, capsulas masticables, barritas saludables y polvos de suplemento.
11. 11. Fraccion, composicion, jarabe, polvo, vehmulo de administracion oral o suplemento nutritivo, alimento o comestible funcional de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 10 para su uso en la prevencion o el tratamiento de una patologfa iniciada o caracterizada por la activacion plaquetaria y/o la agregacion o presion sangumea elevada.
12. 12. Procedimiento para producir una fraccion de extracto de Actinidia estable y biologicamente activa que comprende las etapas de:

    - producir un extracto de Actinidia,

    - calentar el extracto de Actinidia en condiciones tales que el extracto retenga la actividad biologica durante el almacenamiento, y

    - procesar el extracto mediante ultrafiltracion bien antes o despues del calentamiento, en el que la ultrafiltracion tiene un corte de 1000 Daltons, reteniendo dicha fraccion activa al menos un 80 % de la de la inhibicion de la agregacion plaquetaria en un ensayo in vitro de agregacion plaquetaria cuando se almacena durante 4 dfas a 4 °C en comparacion con el extracto de kiwi sin fraccionar.
13. 13. Procedimiento de la reivindicacion 12, en el que dicho calentamiento comprende calentar dicha fraccion de 70 °C a 100 °C durante mas de cinco minutes.
14. 14. Procedimiento de las reivindicaciones 12 o 13, en el que dicho extracto de Actinidia se produce haciendo sedimentar un zumo u homogenado de Actinidia bien antes o despues de calentar para proporcionar una fraccion de

    5 sedimento y una fraccion de sobrenadante, y retener dicha fraccion de sobrenadante para proporcionar dicho extracto de Actinidia biologicamente activo.
15. 15. Procedimiento de la reivindicacion 14, en el que dicha sedimentacion comprende una centrifugacion a al menos 3000 g.