ES2532150A1 - Compounds for the treatment of cancer (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) - Google Patents

Abstract

Compounds for the treatment of cancer. The present invention relates to a composition comprising β -criptoxanthin and oxaliplatin and to a kit comprising a composition comprising β -criptoxanthin and a composition comprising oxaliplatin. The invention also relates to the uses of the composition and kit of the invention for the preparation of a medicament for the treatment of cancer and the use of β-cryptoxanthine for the preparation of a medicament for the treatment of cancer in a subject that he has cancer and is being treated with oxaliplatin. The invention also relates to in vitro methods for selecting a therapy for the treatment of cancer and methods for selecting a subject suffering from cancer comprising determining the level of expression of δ np73 in a sample of the subject and comparing the level of expression obtained with a reference value. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

Compuestos para el tratamiento del cáncer   Compounds for cancer treatment

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCiÓN TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION

La presente invención se encuadra, en general, dentro del campo de tratamiento de enfermedades, concretamente cáncer. En particular, la invención se relaciona con una composición que comprende oxaliplatino y j3-criptoxantina, con kits que comprenden, por separado, una composición que comprende oxaliplatino y una composición que The present invention falls, in general, within the field of treatment of diseases, specifically cancer. In particular, the invention relates to a composition comprising oxaliplatin and j3-cryptoxanthin, with kits comprising, separately, a composition comprising oxaliplatin and a composition which

10 comprende j3-criptoxantina, y con sus aplicaciones, así como con el empleo de 13criptoxantina con fines terapéuticos, en concreto, en el tratamiento del cáncer. 10 comprises j3-cryptoxanthin, and with its applications, as well as with the use of 13criptoxanthin for therapeutic purposes, in particular in the treatment of cancer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN BACKGROUND OF THE INVENTION

15 La incidencia global prevista de cáncer para la población española en el año 2.015 es de 222.069 personas (136.961 varones y 85.108 mujeres), siendo el tipo más frecuente el cáncer colorrectal, por delante, en términos globales, del cáncer de pulmón y del cáncer de mama. 15 The expected global incidence of cancer for the Spanish population in the year 2015 is 222,069 people (136,961 men and 85,108 women), the most frequent type being colorectal cancer, ahead, in global terms, of lung cancer and cancer of breast

20 El cáncer de colon o cáncer colorrectal (CCR) constituye un problema sanitario importante en España y en el resto de los paises de la Unión Europea (UE), diagnosticándose cada semana más de 500 nuevos pacientes con esta enfermedad. Aunque el CCR puede presentarse a cualquier edad , más del 90% de los pacientes tienen más de 40 años; a partir de esa edad, el riesgo se duplica cada diez años. 20 Colon cancer or colorectal cancer (CRC) is a major health problem in Spain and in the rest of the countries of the European Union (EU), diagnosing more than 500 new patients with this disease every week. Although RCC may occur at any age, more than 90% of patients are over 40 years old; from that age, the risk doubles every ten years.

25 Además de la edad, existen otros factores de alto riesgo, entre ellos, antecedentes familiares de CCR y pólipos, y antecedentes personales de colitis ulcerosa, pólipos en el colon o cáncer en otros órganos, especialmente cáncer de mama o de útero. 25 In addition to age, there are other high-risk factors, including family history of CRC and polyps, and personal history of ulcerative colitis, colon polyps or cancer in other organs, especially breast or uterine cancer.

En la última década se ha asistido a una mejoría del pronóstico asociado al CCR In the last decade there has been an improvement in the prognosis associated with CCR

30 debido al avance en el conocimiento de los mecanismos que participan en el desarrollo y la progresión del CCR, a la identificación de muchos de los factores genéticos implicados en la caracterización de la historia natural de esta neoplasia, al establecimiento de diversas estrategias preventivas, y a la introducción de nuevas estrategias terapéuticas. 30 due to the advance in the knowledge of the mechanisms involved in the development and progression of the CRC, the identification of many of the genetic factors involved in the characterization of the natural history of this neoplasm, the establishment of various preventive strategies, and the introduction of new therapeutic strategies.

El tratamiento curativo de estos pacientes implica cirugía y/o quimioterapia. Para pacientes con enfermedad avanzada, la quimioterapia paliativa se administra con frecuencia y puede mejorar significativamente la calidad de vida y la supervivencia total de los pacientes. Durante más de cuatro décadas el análogo de pirimidina 5The curative treatment of these patients involves surgery and / or chemotherapy. For patients with advanced disease, palliative chemotherapy is frequently administered and can significantly improve the quality of life and overall survival of patients. For more than four decades the pyrimidine analogue 5

5 fluorouracilo (S-FU) ha sido el método de referencia para el tratamiento del CCR. Sin embargo, sólo alrededor del 20% de los pacientes que sufren CCR se benefician del tratamiento con S-FU , bien como terapia adyuvante o bien como terapia para el tratamiento de la enfermedad avanzada (Moertel CG, et a!., Ann Intem Med 1995; 122: 321-6; Pelrelli N, el al., J Clin Onco11989; 7: 1419-26). 5 fluorouracil (S-FU) has been the reference method for the treatment of CRC. Without However, only about 20% of patients suffering from CRC benefit from treatment with S-FU, either as adjuvant therapy or as therapy for Treatment of advanced disease (Moertel CG, et a!., Ann Intem Med 1995; 122: 321-6; Pelrelli N, al., J Clin Onco11989; 7: 1419-26).

10 Recientemente, se han aprobado agentes quimioterapéuticos adicionales para el tratamiento de estos pacientes y son ahora de uso común. Estos incluyen el inhibidor de la topoisomerasa I irinotecán, el compuesto de platino oxaliplatino y anticuerpos monoclonales contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y contra 10 Recently, additional chemotherapeutic agents have been approved for the treatment of these patients and are now in common use. These include the irinotecan topoisomerase I inhibitor, the oxaliplatin platinum compound and monoclonal antibodies against the epidermal growth factor receptor (EGFR) and against

15 el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Estos nuevos agentes han aumentado el porcentaje de pacientes con enfermedad avanzada con una respuesta objetiva hasta aproximadamente el 50% y una mejora modesta pero significativa en su supervivencia total. 15 vascular endothelial growth factor (VEGF). These new agents have increased the percentage of patients with advanced disease with an objective response to approximately 50% and a modest but significant improvement in their overall survival.

20 El oxaliplatino (la tercera generación de drogas quimioterápicas basadas en el platino) es una droga de primera línea de elección en el tratamiento del CCR. Es un potente inhibidor de la síntesis de ADN que utiliza como ligando portador el 1,2-diaminociclohexano. El uso de este fármaco antitumoral tiene un impacto positivo en el pronóstico de estos pacientes, pero puede inducir diversos efectos secundarios. Uno 20 Oxaliplatin (the third generation of platinum-based chemotherapeutic drugs) is a first-line drug of choice in the treatment of CRC. It is a potent inhibitor of DNA synthesis that uses 1,2-diaminocyclohexane as a carrier ligand. The use of this antitumor drug has a positive impact on the prognosis of these patients, but can induce various side effects. One

25 de los efectos secundarios más limitantes en el uso del oxaliplatino es su acumulación en el sistema nervioso y la consecuente inducción de neurotoxicidad. Dichos efectos secundarios reducen la calidad de vida y hacen necesario reducir la dosis de oxaliplatino, reduciéndose por tanto la eficacia del tratamiento. 25 of the most limiting side effects in the use of oxaliplatin is its accumulation in the nervous system and the consequent induction of neurotoxicity. These side effects reduce the quality of life and make it necessary to reduce the dose of oxaliplatin, thereby reducing the effectiveness of the treatment.

30 Una estrategia para reducir la toxicidad consiste en el uso de infusiones de calcio y magnesio que reducen la neurotoxicidad del oxaliplatino. Sin embargo, diversos estudios han demostrado que esta estrategia no presenta la efectividad deseada (Gamelin L. et aL, Journal of Clinical Oncology, vol. 26, no. 7, pp. 1188-1189, 2008). 30 A strategy to reduce toxicity is the use of calcium and magnesium infusions that reduce the neurotoxicity of oxaliplatin. However, several studies have shown that this strategy does not have the desired effectiveness (Gamelin L. et al., Journal of Clinical Oncology, vol. 26, no. 7, pp. 1188-1189, 2008).

35 Distintos autores apoyan la necesidad de investigar estrategias alternativas que permitan reducir la dosis acumulada de oxaliplatino (Stein y col., Expert Opon. 35 Different authors support the need to investigate alternative strategies to reduce the cumulative dose of oxaliplatin (Stein et al., Expert Opon.

Pharmaeother. (20t2) 13(1):125-137, 2012), por lo que seria conveniente identificar compuestos que actúen de manera sinérgica con oxaliplatino, y, por tanto, que permitieran reducir la dosis de oxaliplatino a administrar. Pharmaeother (20t2) 13 (1): 125-137, 2012), so it would be convenient to identify compounds that act synergistically with oxaliplatin, and, therefore, to reduce the dose of oxaliplatin to be administered.

s s

Aunque el oxaliplatino parece tener actividad aditiva o sinérgica en combinación con muchos agentes antitumorales en modelos preclínicos , algunas combinaciones no han mostrado efectos in vivo o están asociadas en ocasiones con un incremento de toxicidad . Although oxaliplatin appears to have additive or synergistic activity in combination with many antitumor agents in preclinical models, some combinations have shown no effects in vivo or are sometimes associated with increased toxicity.

10 15 10 15

Se han descrito diversos compuestos que actúan de manera sinérgica con oxaliplatino; sin embargo, algunos de esos compuestos no son útiles in vivo, como sucede con la curcumina (Li L. et al., Mol Gancer Ther April 2007 6; 127). En otros casos, tan sólo se ha demostrado un efecto sinérgico in vitro, como, por ejemplo, con los fármacos endostar (Jin F. et al., PLoS One. 2012;7(10):e47161), decitabina (Flis S. et al. , Cancer Gell International 2009, 9:10) o sulindaco (Flis S. et al., Anticancer Research January 2009 vol. 29 no. 1 435-441). Various compounds that act synergistically with oxaliplatin have been described; however, some of these compounds are not useful in vivo, as is the case with curcumin (Li L. et al., Mol Gancer Ther April 2007 6; 127). In other cases, only a synergistic effect has been demonstrated in vitro, such as with endostar drugs (Jin F. et al., PLoS One. 2012; 7 (10): e47161), decitabine (Flis S. et al., Cancer Gell International 2009, 9:10) or sulindaco (Flis S. et al., Anticancer Research January 2009 vol. 29 no. 1 435-441).

20 25 20 25

En otros casos, los ensayos realizados con compuestos que actúan de manera sinérgica con oxaliplatino parecen no ser reproducibles ya que no se observa el efecto sinérgico en algunas de las líneas celulares analizadas; este es el caso de , por ejemplo, el dasatinib, un inhibidor de la familia Src, que actúa de manera sinérgica con el oxaliplatino solo en algunas de las líneas celulares de adenocarcioma de colon (Kopetz S. et al., Caneer Res May 1, 2009 69; 3842) Y del eetuximab que, en combinación con oxaliplatino, tiene un efecto sinérgico en la línea celular de carcinoma de colon HGT-8 pero que no es efectivo en otra línea celular de carcinoma de colon (HCT-116) (Balin-Gauthier D. et al., Proe Amer Assoe Caneer Res, Volume 47, 2006). In other cases, the tests carried out with compounds that act synergistically with oxaliplatin appear not to be reproducible since the synergistic effect is not observed in some of the analyzed cell lines; This is the case, for example, dasatinib, an inhibitor of the Src family, which acts synergistically with oxaliplatin only in some of the colon adenocarcioma cell lines (Kopetz S. et al., Caneer Res May 1 , 2009 69; 3842) And of eetuximab which, in combination with oxaliplatin, has a synergistic effect on the HGT-8 colon carcinoma cell line but is not effective on another colon carcinoma cell line (HCT-116) ( Balin-Gauthier D. et al., Proe Amer Assoe Caneer Res, Volume 47, 2006).

30 30

Por tanto, existe la necesidad de identificar nuevos compuestos capaces de potenciar el efecto antitumoral de oxaliplatino in vivo. COMPENDIO DE LA INVENCiÓN Therefore, there is a need to identify new compounds capable of enhancing the antitumor effect of oxaliplatin in vivo. SUMMARY OF THE INVENTION

35 35

En un aspecto, la invención oxaliplatino y ¡3-criptoxantina. se relaciona con una composición que comprende In one aspect, the invention oxaliplatin and 3-cryptoxanthin. be relate with a composition that understands

En otro aspecto, la invención se relaciona con un kit que comprende, por separado, una composición que comprende oxaliplatino y una composición que comprende [3criptoxantina. En una realización particular, dicho kit permite la administración conjunta In another aspect, the invention relates to a kit comprising, separately, a composition comprising oxaliplatin and a composition comprising [3criptoxanthin. In a particular embodiment, said kit allows joint administration

o separada, simultanea o secuencial, de dichas composiciones. or separate, simultaneous or sequential, from said compositions.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de [3-criptoxantina, o de dicha composición, o de dicho kit, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. In another aspect, the invention relates to the use of [3-cryptoxanthin, or said composition, or said kit, for the preparation of a medicament for the treatment of cancer.

10 En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de [3-criptoxantina para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cancer en un sujeto que padece cáncer y que esta siendo tratado con oxaliplatino. In another aspect, the invention relates to the use of [3-cryptoxanthin for the preparation of a medicament for the treatment of cancer in a subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para seleccionar una 15 terapia para el tratamiento del cancer que padece un sujeto que comprende: i) determinar el nivel de expresión de .6.Np73 en una muestra procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de LlNp73 obtenido en la etapa i) con un valor de referencia, In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a therapy for the treatment of cancer that a subject undergoes: i) determining the level of expression of .6.Np73 in a sample from said subject, and ii) compare the level of expression of LlNp73 obtained in step i) with a reference value,

20 en donde si el nivel de expresión de D ..Np73 está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona una terapia que comprende [3criptoxantina. 20 wherein if the expression level of D ..Np73 is increased with respect to said reference value, then a therapy comprising [3criptoxanthin] is selected.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para seleccionar una 25 terapia para el tratamiento del cancer que padece un sujeto y que está siendo tratado con oxaliplatino que comprende: i) determinar el nivel de expresión de .6.Np73 en una muestra procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de L!.Np73 obtenido en la etapa i) con un valor In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a therapy for the treatment of cancer that a subject suffers and that is being treated with oxaliplatin comprising: i) determining the level of expression of .6.Np73 in a sample from said subject, and ii) compare the level of expression of L! .Np73 obtained in step i) with a value

30 de referencia, en donde si el nivel de expresión de L!.Np73 esta incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona una terapia que comprende [3-criptoxantina para su administración a dicho sujeto que padece un cancer y que esta siendo tratado con oxaliplatino. 30, where if the level of expression of L! .Np73 is increased with respect to said reference value, then a therapy comprising [3-cryptoxanthin is selected for administration to said subject suffering from cancer and that this being treated with oxaliplatin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitre para seleccionar un sujeto que padece cancer para una terapia que comprende ¡3-criptoxantina, In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a subject suffering from cancer for a therapy comprising 3-cryptoxanthin,

comprendiendo dicho método: i) determinar el nivel de expresión de óNp73 en una muestra procedente de dicho 5 sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de óNp73 obtenido en la etapa i) con un valor said method comprising: i) determine the level of expression of oPp73 in a sample from said 5 subject, and ii) compare the level of expression of oPp73 obtained in step i) with a value

de referencia, en donde si el nivel de expresión de 'ó'Np73 está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona dicho paciente para dicha terapia que reference, where if the expression level of 'or' Np73 is increased with respect to said reference value, then said patient is selected for said therapy that

10 comprende ¡3-criptoxantina. 10 comprises 3-cryptoxanthin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitre para seleccionar un sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para una terapia que comprende j3-criptoxantina, comprendiendo dicho método: In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin for a therapy comprising j3-cryptoxanthin, said method comprising:

15 i) determinar el nivel de expresión de 'ó'Np73 en una muestra procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de 'ó'Np73 obtenido en la etapa i) con un valor I) determine the level of expression of 'or' Np73 in a sample from said subject, and ii) compare the level of expression of 'or' Np73 obtained in step i) with a value

de referencia, en donde si el nivel de expresión de 'ó'Np73 esta incrementado con respecto a dicho 20 valor de referencia, entonces se selecciona dicho sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para dicha terapia que comprende j3-criptoxantina. reference, where if the expression level of 'or' Np73 is increased with respect to said reference value, then said subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin for said therapy comprising j3-cryptoxanthin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto en necesidad de tratamiento, que comprende la administración a In another aspect, the invention relates to a method for the treatment of cancer in a subject in need of treatment, which comprises administration to

25 dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente eficiente de j3-criptoxantina, o de una composición que comprende oxaliplatino y ¡3-criptoxantina, o de (i) una composición que comprende oxaliplatino y (ii) una composición que comprende j3-criptoxantina. Said subject of a therapeutically efficient amount of j3-cryptoxanthin, or of a composition comprising oxaliplatin and ¡3-cryptoxanthin, or of (i) a composition comprising oxaliplatin and (ii) a composition comprising j3-cryptoxanthin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método para el tratamiento del In another aspect, the invention relates to a method for the treatment of

30 cáncer en un sujeto sometido a tratamiento con oxaliplatino, en necesidad de tratamiento, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente eficiente de j3-criptoxantina. Cancer in a subject undergoing treatment with oxaliplatin, in need of treatment, comprising administering to said subject a therapeutically efficient amount of j3-cryptoxanthin.

BREVE DESCRIPCiÓN DE LAS FIGURAS BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

Figura 1. La j3-criptoxantina regula la expresión de las isoformas TAp73 y.t..Np73 (DAp73 en la figuras) en líneas celulares de cáncer de colon. A. HCT -116; B. SW480ADH; y C. SW1417. · P <0,05; " p<0,001;'" p<0,0001. Figure 1. J3-cryptoxanthin regulates the expression of TAp73 and.t..Np73 (DAp73 in the figures) isoforms in colon cancer cell lines. A. HCT -116; B. SW480ADH; and C. SW1417. P <0.05; "p <0.001; '" p <0.0001.

5 Figura 2. Aumento de la inducción de muerte celular por el tratamiento combinado de oxaliplatino más j3-criptoxantina vs tratamiento con oxaliplatino de forma aislada. A. HCT-116; B. SW480-ADH: y C. SW1417. 5 Figure 2. Increased induction of cell death by the combined treatment of oxaliplatin plus j3-cryptoxanthin vs treatment with oxaliplatin in isolation. A. HCT-116; B. SW480-ADH: and C. SW1417.

Figura 3. Disminución de la viabilidad celular (medida mediante un ensayo de MTI) Figure 3. Decrease in cell viability (measured by an MTI assay)

10 por el tratamiento combinado de oxaliplatino más j3-criptoxantina vs tratamiento con oxaliplatino de forma aislada. A. HCT-116; B. SW480-ADH: y C. SW1417. 10 for the combined treatment of oxaliplatin plus j3-cryptoxanthin vs treatment with oxaliplatin in isolation. A. HCT-116; B. SW480-ADH: and C. SW1417.

Figura 4. Viabilidad celular tras tratamiento de las células HCT-116 con j3-criptoxantina y oxaliplatino a la mitad de dosis (50 iJM). Comparación con el tratamiento combinado 15 usando oxaliplatino 100 iJM. Figure 4. Cell viability after treatment of HCT-116 cells with j3-cryptoxanthin and oxaliplatin at half dose (50 iJM). Comparison with combined treatment 15 using oxaliplatin 100 iJM.

Figura 5. Efecto antiproliferativo de la j3-criptoxantina a los dias 8 y 10 de tratamiento en la linea celular HCT-116.· p<0,05. Figure 5. Antiproliferative effect of j3-cryptoxanthin on days 8 and 10 of treatment in the HCT-116 cell line. · P <0.05.

20 Figura 6. A. Ensayo de apoplosis (Anexina V-FITC/IP) en las células HCT-116 (Al ) y SW480 (A2). Ensayo de viabilidad MTI en las células HCT-116 (Bl) y SW480 (B2) .• P <0,05. 20 Figure 6. A. Assay of apoplosis (Annexin V-FITC / IP) in HCT-116 (Al) and SW480 (A2) cells. MTI viability test in HCT-116 (Bl) and SW480 (B2) cells • P <0.05.

Figura 7. Ensayo en ratones inmunodeprimidos. Evaluación del crecimiento tumoral Figure 7. Assay in immunosuppressed mice. Tumor Growth Evaluation

25 en cuatro grupos de tratamiento: Grupo 1) vehículo; Grupo 2) j3-criptoxantina 10 iJM; Grupo 3) vehículo junto con oxaliplatino 3 mg/kg ; Grupo 4) j3-criptoxantina 10 iJM junto con oxaliplatino 3 mg/kg. Vehículo y j3-criptoxantina son administrados por vía oral. Oxaliplatino es administrado por vía intraperitoneal. Inicío 1, tamaño tumoral al inicio del primer tratamiento. Final 1, crecimiento tumoral tras el primer ciclo de tratamiento. 25 in four treatment groups: Group 1) vehicle; Group 2) j3-cryptoxanthin 10 iJM; Group 3) vehicle together with oxaliplatin 3 mg / kg; Group 4) j3-cryptoxanthin 10 iJM together with oxaliplatin 3 mg / kg. Vehicle and j3-cryptoxanthin are administered orally. Oxaliplatin is administered intraperitoneally. Start 1, tumor size at the beginning of the first treatment. Final 1, tumor growth after the first treatment cycle.

30 Inicio 2, crecimiento tumoral al finalizar el periodo de descanso. Final 2, crecimiento tumoral tras el segundo ciclo de tratamiento. * Reducción significativa (p<0,05) del crecimiento tumoral del grupo tratado con j3-criptoxantina suministrada de forma aislada respecto al grupo control (tratado con vehículo) a días 6 y 11 .•• Reducción 30 Start 2, tumor growth at the end of the rest period. Final 2, tumor growth after the second treatment cycle. * Significant reduction (p <0.05) of the tumor growth of the group treated with j3-cryptoxanthin given in isolation from the control group (treated with vehicle) on days 6 and 11. •• Reduction

significativa (p<0,05) del crecimiento tumoral del grupo tratado con la combinación de 35 oxaliplatino y j3-criptoxantina respecto al grupo al que se le administra oxaliplatino o 13criptoxantina de manera aislada tanto al final del ciclo 1 como al final del ciclo 2. significant (p <0.05) of the tumor growth of the group treated with the combination of oxaliplatin and j3-cryptoxanthin with respect to the group to which oxaliplatin or 13criptoxanthin is administered in isolation both at the end of cycle 1 and at the end of cycle 2 .

Figura 8. Ensayo en ratones inmunodeprimidos. La ¡3-criptoxantina (10 IJM concentración final en ratón) fue suministrada intraperitonealmente. Tratamiento con 2 ciclos de oxaliplatino 3 mg/kg (vehículo+oxaI3) o tratamiento combinado de ¡3Figure 8. Assay in immunosuppressed mice. The 3-cryptoxanthin (10 IJM final concentration in mouse) was delivered intraperitoneally. Treatment with 2 oxaliplatin cycles 3 mg / kg (vehicle + oxaI3) or combined treatment of ¡3

5 criptoxantina y oxaliplatino (¡310+oxaI3). Entre los 2 ciclos hubo un periodo de 5 días de descanso en el que se continuó administrando ¡3-criptoxantina pero no oxaliplatino. Inicio 1, tamaño tumoral al inicio del primer tratamiento. Final 1, crecimiento tumoral tras el primer ciclo de tratamiento. Inicio 2, crecimiento tumoral al finalizar el periodo de descanso. Final 2, crecimiento tumoral tras el segundo ciclo de tratamiento. 5 cryptoxanthin and oxaliplatin (¡310 + oxaI3). Between the 2 cycles there was a period of 5 days of rest in which the administration of 3-cryptoxanthin but not oxaliplatin was continued. Start 1, tumor size at the start of the first treatment. Final 1, tumor growth after the first treatment cycle. Start 2, tumor growth at the end of the rest period. Final 2, tumor growth after the second treatment cycle.

10 Figura 9. Ensayo en ratones inmunodeprimidos. La ¡3-criptoxantina (10 IJM concentración final en ratón) es suministrada intraperitonealmente. En este experimento la dosis de oxaliplatino suministrada fue de 1,5 mg/kg . Tratamiento con 2 ciclos de oxaliplatino (vehículo+oxaI1 ,5) o tratamiento combinado de ¡3-criptoxantina y 10 Figure 9. Assay in immunosuppressed mice. The 3-cryptoxanthin (10 IJM final concentration in mouse) is supplied intraperitoneally. In this experiment the dose of oxaliplatin delivered was 1.5 mg / kg. Treatment with 2 oxaliplatin cycles (vehicle + oxaI1, 5) or combined treatment of 3-cryptoxanthin and

15 oxaliplatino ((310+oxaI1,5). Entre los 2 ciclos hubo un periodo de 5 días de descanso en el que se continuó administrando (3-criptoxantina pero no oxaliplatino. Inicio 1. tamaño tumoral al inicio del primer tratamiento. Final 1, crecimiento tumoral tras el primer ciclo de tratamiento. Inicio 2, crecimiento tumoral al finalizar el periodo de descanso. Final 2, crecimiento tumoral tras el segundo ciclo de tratamiento.• p <0,05. 15 oxaliplatin ((310 + oxaI1,5). Between the 2 cycles there was a period of 5 days of rest in which continued administration (3-cryptoxanthin but not oxaliplatin. Start 1. tumor size at the beginning of the first treatment. End 1 , tumor growth after the first treatment cycle Start 2, tumor growth at the end of the rest period Final 2, tumor growth after the second treatment cycle • p <0.05.

20 Figura 10. Ensayo en ratones inmunodeprimidos. Comparación de la respuesta al tratamiento combinado de oxaliplatino (1,5 mg/kg ) y l3-criptoxantina intraperitoneal a una concentración final en ratón de 10 IJM (1310+oxaI1 ,5) frente a los tratamientos individuales de oxaliplatino 1,5 mglkg (vehículo+oxaI1,5) y oxaliplatino 3 mg/kg 20 Figure 10. Assay in immunosuppressed mice. Comparison of the response to the combined treatment of oxaliplatin (1.5 mg / kg) and intraperitoneal l3-cryptoxanthin at a final concentration in mice of 10 IJM (1310 + oxaI1, 5) versus individual treatments of oxaliplatin 1.5 mglkg ( vehicle + oxaI1,5) and oxaliplatin 3 mg / kg

25 (vehículo+oxaI3).·· p <0,001 . 25 (vehicle + oxaI3). ·· p <0.001.

Figura 11 . Niveles del ARNm que codifica la isoforma LlNp73 (ARNm de flNp73) en los tumores de los ratones después del tratamiento, observándose que la 13criptoxatina redujo significativamente los niveles de ARNm después del tratamiento. * Figure 11 Levels of the mRNA encoding the LlNp73 isoform (mRNA of flNp73) in the tumors of the mice after treatment, it being observed that 13criptoxatin significantly reduced mRNA levels after treatment. *

30 P <0,05; ··p<O,005. 30 P <0.05; ·· p <O, 005.

Figura 12. A. Peso de los ratones antes y después de los diferentes tratamientos. No se observan diferencias significativas. B. Parámetros bioquímicos después de los diferentes tratamientos. No se observan diferencias significativas. Figure 12. A. Weight of the mice before and after the different treatments. No significant differences are observed. B. Biochemical parameters after the different treatments. No significant differences are observed.

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN Detailed description of the invention

Los autores de la presente invención han identificado tanto en experimentos in vitro como en ensayos en animales, que el tratamiento combinado de oxaliplatino y 13criptoxantina induce un porcentaje significativamente mayor de muerte de células 5 tumorales que el alcanzado mediante la exposición aislada a las mismas concentraciones de oxaliplatino, lo que indica que la ¡3-criptoxantina potencia el efecto antitumoral mediado por el oxaliplatino. Además, la l3-criptoxantina administrada de manera aislada presenta un efecto antiproliferativo similar al observado para el oxaliplatino en experimentos in vivo aunque menos efectivo que el del oxaliplatino in 10 vitro. Adicionalmente, en experimentos in vitro, dosis bajas de oxaliplatino combinadas con l3-criptoxantina producen el mismo porcentaje de muerte de células tumorales que dosis dobles de oxaliplatino administrado de manera aislada. Por tanto, en este caso, el tratamiento combinado de oxaliplatino y l3-criptoxantina podría disminuir los efectos secundarios producidos por la administración individual de oxaliplatino debido a que se The authors of the present invention have identified both in vitro experiments as in animal trials, that the combined treatment of oxaliplatin and 13criptoxanthin induces a significantly higher percentage of cell death 5 tumors than that achieved through isolated exposure to them Oxaliplatin concentrations, indicating that ¡3-cryptoxanthin potentiates the effect Oxaliplatin-mediated antitumor. In addition, l3-cryptoxanthin administered from In an isolated manner, it has an antiproliferative effect similar to that observed for oxaliplatin in in vivo experiments although less effective than that of oxaliplatin in 10 vitro Additionally, in in vitro experiments, low doses of oxaliplatin combined with l-cryptoxanthin produce the same percentage of tumor cell death as double doses of oxaliplatin administered in isolation. Therefore, in this case, the combined treatment of oxaliplatin and l3-cryptoxanthin could reduce the side effects caused by the individual administration of oxaliplatin because

15 podrían utilizar dosis más bajas de oxaliplatino que las convencionalmente utilizadas para alcanzar la misma respuesta antitumoral. El mecanismo que subyace a este efecto de terapia combinada (oxaliplatino + l3-criptoxantina) parece basarse en la regulación negativa de la isoforma LlNp73 por la ~-criptoxantina. 15 could use lower doses of oxaliplatin than those conventionally used to achieve the same antitumor response. The mechanism underlying this combined therapy effect (oxaliplatin + 13-cryptoxanthin) seems to be based on the negative regulation of the LlNp73 isoform by ~ -criptoxanthin.

20 Composiciones de la invención 20 Compositions of the invention

En un aspecto la invención se relaciona con una composición , en adelante "composición de la invención", que comprende oxaliplatino y l3-criptoxantina. In one aspect the invention relates to a composition, hereinafter "composition of the invention", comprising oxaliplatin and l-3-cryptoxanthin.

25 El término "oxaliplatino", tal como aquí se usa , se refiere a un fármaco quimioterapéutico basado en platino y corresponde al compuesto etanedioato;platinum(+4)catión; (2-azanidilciclohexil)azanida, con número CAS 6312100-6, y fórmula química: The term "oxaliplatin", as used herein, refers to a platinum-based chemotherapeutic drug and corresponds to the ethanedioate compound: platinum (+4) cation; (2-azanidylcyclohexyl) azanide, with CAS number 6312100-6, and chemical formula:

El oxaliplatino es el principio activo del medicamento Eloxatin® (Sanofi-Aventis, S.A.). Salvo que se indique lo contrario, el término ~oxaliplatino" incluye sus prodrogas, sales, Oxaliplatin is the active substance of the drug Eloxatin® (Sanofi-Aventis, S.A.). Unless otherwise indicated, the term ~ oxaliplatin "includes its prodrugs, salts,

solvatos o clatratos útiles para su uso en Medicina. solvates or clathrates useful for use in medicine.

El término "B-criptoxantina" o "beta-criptoxantina~, tal como aquí se usa, se refiere al compuesto (3R)-beta,beta-caroten-3-01, con número CAS 472-70-8, y fórmula química: The term "B-cryptoxanthin" or "beta-cryptoxanthin ~, as used herein, refers to compound (3R) -beta, beta-caroten-3-01, with CAS number 472-70-8, and chemical formula :

10 Salvo que se indique lo contrario, el término "j3-criptoxantina" incluye sus prodrogas, sales, solvatos o clatratos útiles para su uso en Medicina. 10 Unless otherwise indicated, the term "j3-cryptoxanthin" includes its prodrugs, salts, solvates or clathrates useful for use in Medicine.

La cantidad de oxaliplatino presente en la composición de la invención puede variar dentro de un amplio intervalo; no obstante, en una realización particular, el porcentaje The amount of oxaliplatin present in the composition of the invention may vary within a wide range; however, in a particular embodiment, the percentage

15 en peso de oxaliplatino con respecto al total de la composición de la invención es de, al menos, un 0,10% 0,50%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o, al menos un 95%. 15 by weight of oxaliplatin with respect to the total composition of the invention is at least 0.10% 0.50%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7 %, 8%, 9%, 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, or at least 95%.

La cantidad de j3-criptoxantina presente en la composición de la invención puede The amount of j3-cryptoxanthin present in the composition of the invention can

20 variar dentro de un amplio intervalo; no obstante, en una realización particular, el porcentaje en peso de j3-criptoxantina con respecto al total de la composición de la invención es de, al menos, un 0,10% 0,50%, 1%,2%,3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o, al menos un 95%. 20 vary within a wide range; however, in a particular embodiment, the weight percentage of j3-cryptoxanthin with respect to the total composition of the invention is at least 0.10% 0.50%, 1%, 2%, 3% , 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% , or, at least 95%.

25 La relación ponderal entre oxaliplatino y j3-criptoxantina presente en la composición de la invención puede variar dentro de un amplio intervalo; no obstante, en general, dicha relación se elegirá teniendo en cuenta factores tales como la enfermedad a tratar, la edad, el sexo, el peso, etc. del sujeto a recibir la composición de la invención. Preferiblemente, dicha relación ponderal entre oxaliplatino y j3-criptoxantina es aquella The weight ratio between oxaliplatin and j3-cryptoxanthin present in the composition of the invention can vary within a wide range; However, in general, this relationship will be chosen taking into account factors such as the disease to be treated, age, sex, weight, etc. of the subject to receive the composition of the invention. Preferably, said weight ratio between oxaliplatin and j3-cryptoxanthin is that

30 que resulta en un efecto ventajoso, en concreto, en un aumento del efecto terapéutico de la composición de la invención en relación con cada uno de sus componentes de forma que sea posible llegar al mismo resultado con dosis menores de cada uno de los componentes , reduciendo así los efectos secundarios sobre el sujeto que recibe la composición de la invención. 30 which results in an advantageous effect, in particular, in an increase in the therapeutic effect of the composition of the invention in relation to each of its components so that it is possible to reach the same result with lower doses of each of the components, thus reducing the side effects on the subject receiving the composition of the invention.

La composición de la invención puede contener, además, un vehiculo para su 5 administración a un sujeto. The composition of the invention may also contain a vehicle for its 5 administration to a subject.

En una realización particular, la composición de la invención se administrará a un sujeto en una forma farmacéutica de administración adecuada; para ello, la composición de la invención incluirá, al menos, vehículo farmacéuticamente aceptable. In a particular embodiment, the composition of the invention will be administered to a subject in a suitable pharmaceutical form of administration; for this, the composition of the invention will include, at least, pharmaceutically acceptable carrier.

10 Por tanto, en una realización particular, la composición de la invención es una composición farmacéutica , en adelante "composición farmacéutica de la invención", que comprende, además de oxaliplatino y j3-criptoxantina como ingredientes activos, al menos un vehículo, preferentemente, un vehículo farmacéuticamente aceptable. Therefore, in a particular embodiment, the composition of the invention is a pharmaceutical composition, hereinafter "pharmaceutical composition of the invention", which comprises, in addition to oxaliplatin and j3-cryptoxanthin as active ingredients, at least one vehicle, preferably, a pharmaceutically acceptable vehicle.

15 El término "vehículo", en el sentido utilizado en esta descripción, incluye, en general, cualquier diluyente o excipiente con el que se administra un ingrediente activo. Preferentemente, dicho vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable para su administración a un sujeto, es decir, es un vehículo (e.g., un excipiente) aprobado por The term "vehicle", in the sense used in this description, includes, in general, any diluent or excipient with which an active ingredient is administered. Preferably, said vehicle is a pharmaceutically acceptable vehicle for administration to a subject, that is, it is a vehicle (e.g., an excipient) approved by

20 una agencia reguladora, por ejemplo, la Agencia Europea del Medicamento (EMA), la "Food & Drug Administration" (FDA) norteamericana, etc., o están incluidos en una farmacopea (e.g., la Farmacopea europea, estadounidense, etc.) reconocida en general para su uso en animales, y, más particularmente, en seres humanos. 20 a regulatory agency, for example, the European Medicines Agency (EMA), the American Food & Drug Administration (FDA), etc., or are included in a pharmacopoeia (eg, the European, American Pharmacopoeia, etc.) generally recognized for use in animals, and, more particularly, in humans.

25 En una realización particular, la composición farmacéutica de la invención se prepara en una forma farmacéutica de administración por vía oral; dicha forma farmacéutica de administración por vía oral puede ser sólida (e.g., cápSUla, comprimido, gragea, polvo, etc.), líquida, etc. In a particular embodiment, the pharmaceutical composition of the invention is prepared in a pharmaceutical form of oral administration; said pharmaceutical form of oral administration can be solid (e.g., capSUla, tablet, dragee, powder, etc.), liquid, etc.

30 En otra realización particular, la composición farmacéutica de la invención se prepara en una forma farmacéutica de administración por una vía diferente a la via oral, por ejemplo, por vía parenteral (e.g., intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, etc.), o mediante absorción a través de la mucosa o epitelio, etc. In another particular embodiment, the pharmaceutical composition of the invention is prepared in a pharmaceutical form of administration by a route other than the oral route, for example, parenterally (eg, intradermally, intramuscularly, intraperitoneally, intravenously, subcutaneously, etc.). ), or by absorption through the mucosa or epithelium, etc.

En general, se elegirán los vehículos farmacéuticamente aceptables en función de la forma farmacéutica de administración elegida para la composición farmacéutica de la invención. A modo ilustrativo, no limitativo, para la administración oral de la composición farmacéutica de la invención en forma de comprimidos o cápsulas, los 5 ingredientes activos (oxaliplatino y ¡3-criptoxantina) se pueden combinar con cualquier vehículo inerte oral no tóxico farmacéuticamente aceptable, tal como lactosa, almidón, sacarosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato de dicalcio, sulfato de calcio, talco, manitol, etc. Además, si se desea, o si se necesita, también se pueden incorporar aglutinantes (e.g., almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas 10 naturales y sintéticas, alginato, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras, etc.), lubricantes (e.g., ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, etc.), disgregantes (e.g., almidón, metilcelulosa, goma guar, etc.), así como edulcorantes, saborizantes y/o conservantes cuando sea apropiado. Las formas farmacéuticas sólidas para administración por vía oral pueden comprender entre In general, pharmaceutically acceptable carriers will be chosen based on the dosage form of administration chosen for the pharmaceutical composition of the invention. By way of illustration, not limitation, for oral administration of the pharmaceutical composition of the invention in the form of tablets or capsules, the active ingredients (oxaliplatin and 3-cryptoxanthin) may be combined with any pharmaceutically acceptable non-toxic oral inert carrier, such as lactose, starch, sucrose, cellulose, magnesium stearate, dicalcium phosphate, calcium sulfate, talc, mannitol, etc. In addition, if desired, or if necessary, binders (eg, starch, gelatin, natural sugars, corn sweeteners, natural and synthetic gums, alginate, carboxymethyl cellulose, polyethylene glycol, waxes, etc.), lubricants (eg eg, boric acid, sodium benzoate, sodium acetate, sodium chloride, etc.), disintegrants (eg, starch, methylcellulose, guar gum, etc.), as well as sweeteners, flavorings and / or preservatives when appropriate. Solid pharmaceutical forms for oral administration may comprise

15 aproximadamente el 5% y aproximadamente el 95% en peso de los ingredientes activos, intervalo que incluye todos los valores y sub-intervalos comprendidos entre los mismos, por ejemplo, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 86 Y 90 % en peso. 15 approximately 5% and approximately 95% by weight of the active ingredients, a range that includes all values and sub-intervals between them, for example, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 , 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 86 and 90% by weight.

20 Asimismo, si se desea, la composición farmacéutica de la invención se puede formular en una forma farmacéutica de liberación sostenida para proporcionar la liberación a velocidad controlada de uno cualquiera, o de ambos, ingredientes activos para optimizar sus efectos terapéutiCOS. Las formas farmacéuticas adecuadas para liberación sostenida incluyen comprimidos estratificados que contienen capas de Likewise, if desired, the pharmaceutical composition of the invention can be formulated in a sustained release pharmaceutical form to provide controlled speed release of any one, or both, of active ingredients to optimize its therapeutic effects. Pharmaceutical forms suitable for sustained release include stratified tablets containing layers of

25 diversas velocidades de disgregación o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con los ingredientes activos y que se configuran en forma de comprimido o cápsulas que contienen dichas matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas. Various disintegration rates or controlled release polymer matrices impregnated with the active ingredients and which are configured in the form of a tablet or capsules containing said impregnated or encapsulated porous polymer matrices.

30 Las preparaciones de la composición farmacéutica de la invención en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Ejemplos ilustrativos, no limitativos ejemplos no limitativos de medios en los que los ingredientes activos se pueden disolver, suspender o con los que se pueden formar emulsiones, incluyen incluyen agua, etanol, mezclas agua-etanol o agua-propilenglicol, etc., aceites, incluyendo Preparations of the pharmaceutical composition of the invention in liquid form include solutions, suspensions and emulsions. Illustrative examples, non-limiting non-limiting examples of means in which the active ingredients can be dissolved, suspended or with which emulsions can be formed, include include water, ethanol, water-ethanol mixtures or water-propylene glycol, etc., oils, including

35 aceites derivados del petróleo, aceites de animales, aceites vegetales o aceites sintéticos, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de 35 petroleum derived oils, animal oils, vegetable oils or synthetic oils, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil,

sésamo, etc. En una realización particular, dichos vehículos farmacéuticamente sesame, etc. In a particular embodiment, said vehicles pharmaceutically

aceptables incluyen , preferiblemente, agua, disoluciones acuosas de solución salina, o Acceptable include, preferably, water, aqueous solutions of saline, or

disoluciones acuosas de dextrosa y glicerol para las disoluciones inyectables. aqueous dextrose and glycerol solutions for injectable solutions.

s s

Asimismo, se incluyen preparaciones en forma sólida de la composición farmacéutica Also, solid form preparations of the pharmaceutical composition are included

de la invención destinadas a convertirse, poco antes de su uso, en preparaciones en of the invention intended to become, shortly before use, preparations in

forma líquida para administración por vía oral o parenteral. Las formas líquidas de este liquid form for oral or parenteral administration. The liquid forms of this

tipo incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Type include solutions, suspensions and emulsions.

10 10

Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de ingredientes A review of the different pharmaceutical forms of ingredient administration

activos, de los vehículos a utilizar, y de sus procedimientos de fabricación puede assets, of the vehicles to be used, and of their manufacturing procedures can

encontrarse, por ejemplo, en el Tratado de Farmacia Galénica, C. Faulí i Trillo, Luzán found, for example, in the Treaty of Galenic Pharmacy, C. Faulí i Trillo, Luzán

5, S.A. de Ediciones, 1993 yen Remington 's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, 5, S.A. of Editions, 1993 and Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro,

Ed.), 20a edición , Williams & Wilkins PA, USA (2000). Ed.), 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000).

15 fifteen

La composición de la invención , así como la composición farmacéutica de la invención , The composition of the invention, as well as the pharmaceutical composition of the invention,

también puede contener, si se desea, un ingrediente activo adicional, diferente al it may also contain, if desired, an additional active ingredient, other than

oxaliplatino y a la ~-criptoxantina, tal como, un agente antitumoral, por ejemplo, un oxaliplatin and ~ -criptoxanthin, such as, an antitumor agent, for example, a

agente antitumoral empleado en quimioterapia o inmunoterapia para el tratamiento del antitumor agent used in chemotherapy or immunotherapy for the treatment of

20 twenty

cáncer, más concretamente, en el tratamiento de un tipo de cáncer cuyas células cancer, more specifically, in the treatment of a type of cancer whose cells

expresan un nivel de D. Np73 superior (incrementado) al de un valor de referencia, tal express a level of D. Np73 higher (increased) than a reference value, such

como, por ejemplo, cáncer colorectal (CCR), cáncer de esófago, cáncer gástrico, such as colorectal cancer (RCC), esophageal cancer, gastric cancer,

cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de médula ósea, cáncer de ovario, cáncer liver cancer, breast cancer, bone marrow cancer, ovarian cancer, cancer

de próstata, cáncer de pulmón , cáncer de tiroide, leucemia, o neuroblastoma . Por of prostate, lung cancer, thyroid cancer, leukemia, or neuroblastoma. By

25 25

tanto, en una realización particular, la composición de la invención, o la composición both, in a particular embodiment, the composition of the invention, or the composition

farmacéutica de la invención , comprende, además de oxaliplatino y ¡3-criptoxantina, Pharmaceutical of the invention, it comprises, in addition to oxaliplatin and 3-cryptoxanthin,

otro agente antitumoral, tal como, por ejemplo, un agente antitumoral empleado en another antitumor agent, such as, for example, an antitumor agent employed in

quimioterapia o inmunoterapia para el tratamiento del cáncer, en particular, para el chemotherapy or immunotherapy for the treatment of cancer, in particular for the

tratamiento de un tipo de cáncer cuyas células expresan un nivel de L!. Np73 superior treatment of a type of cancer whose cells express a level of L !. Np73 top

30 30

(incrementado) al de un valor de referencia, y, opcionalmente, un vehículo, (increased) to that of a reference value, and, optionally, a vehicle,

preferentemente, un veh ículo farmacéuticamente aceptable. En una realización preferably, a pharmaceutically acceptable vehicle. In one embodiment

particular, la composición farmacéutica de la invención comprende, además de in particular, the pharmaceutical composition of the invention comprises, in addition to

oxaliplatino y ¡3-criptoxantina, un agente antitumoral útil para el tratamiento del CCR oxaliplatin and 3-cryptoxanthin, an antitumor agent useful for the treatment of RCC

diferente al oxaliplatino y un vehículo farmacéuticamente aceptable. different from oxaliplatin and a pharmaceutically acceptable carrier.

35 35

En el sentido utilizado en esta descripción, un "agente antitumorar es un compuesto o agente químico, físico o biológico con propiedades antiproliferativas, antioncogénicas y/o carcinostáticas que puede emplearse para inhibir el crecimiento, la proliferación, el desarrollo y/o la metástasis de un tumor. A modo ilustrativo, los agentes antitumorales 5 pueden ser (i) antimetabolitos, tales como antifolatos y análogos de purina; (ii) productos naturales, tales como antibióticos antitumorales e inhibidores mitóticos; (iii) hormonas y antagonistas de las mismas, tales como andrógenos y corticosteroides; y In the sense used in this description, an "anti-tumor agent is a compound or chemical, physical or biological agent with antiproliferative, antioncogenic properties and / or carcinostatic that can be used to inhibit growth, proliferation, development and / or metastasis of a tumor. By way of illustration, antitumor agents 5 may be (i) antimetabolites, such as antifolates and purine analogs; (ii) natural products, such as antitumor antibiotics and mitotic inhibitors; (iii) hormones and antagonists thereof, such as androgens and corticosteroids; Y

(iv) agentes biológicos, tales como vectores virales. A modo ilustrativo, no limitativo, la solicitud de patente W02005/112973 incluye una relación de compuestos que pueden (iv) biological agents, such as viral vectors. By way of illustration, not limitation, patent application W02005 / 112973 includes a list of compounds that can

10 emplearse como agentes antitumorales para la puesta en práctica de la presente invención. 10 be used as antitumor agents for the implementation of the present invention.

El término "inmunoterapia", tal como aquí se usa, se refiere a una colección de estrategias de tratamiento basadas en el concepto de modular el sistema inmune para The term "immunotherapy," as used herein, refers to a collection of treatment strategies based on the concept of modulating the immune system to

15 alcanzar un fin profiláctico y/o terapéutico. En una forma de realización particular, la inmunoterapia implica el uso de anticuerpos anti-VEGF y, más preferiblemente, bevacizumab o anticuerpos monoclonales contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), cetuximab. 15 achieve a prophylactic and / or therapeutic end. In a particular embodiment, immunotherapy involves the use of anti-VEGF antibodies and, more preferably, bevacizumab or monoclonal antibodies against the epidermal growth factor receptor (EGFR), cetuximab.

20 El término "quimioterapia", tal como aquí se usa, se refiere al tratamiento del cáncer usando agentes químicos específicos o fármacos que destruyen células y tejidos malignos. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de agentes quimioterapéuticos (o quimioterápicos) incluyen: 20 The term "chemotherapy," as used herein, refers to the treatment of cancer using specific chemical agents or drugs that destroy cells and malignant tissues. Illustrative, non-limiting examples of chemotherapeutic (or chemotherapeutic) agents include:

25 agentes alguilantes, tales como, por ejemplo, ciclofosfamida, carmustina, daunorubicina, mecloretamina, clorambucilo, nimustina, melfalán y similares; 25 alloying agents, such as, for example, cyclophosphamide, carmustine, daunorubicin, mechlorethamine, chlorambucil, nimustine, melphalan and the like;

antraciclinas, tales como, por ejemplo, daunorubicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina, mitoxantrona, valrubicina y similares; anthracyclines, such as, for example, daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, idarubicin, mitoxantrone, valrubicin and the like;

30 compuestos de taxano, tales como, por ejemplo, paclitaxel, docelaxel y similares; 30 taxane compounds, such as, for example, paclitaxel, docelaxel and the like;

inhibidores de la topoisomerasa, tales como, por ejemplo, etopóxido, 35 tenipóxido, irinotecán, tulipóxido y similares; topoisomerase inhibitors, such as, for example, etopoxide, tenipoxide, irinotecan, tulipoxide and the like;

análogos de nucleótidos, tales como, por ejemplo, azacitidina, azatioprina, nucleotide analogs, such as, for example, azacitidine, azathioprine,

capecitabina, citarabina, doxifluridina, 5-fluorouracilo (5-FU), gemcitabina, capecitabine, cytarabine, doxifluridine, 5-fluorouracil (5-FU), gemcitabine,

mercaptopurina, metotrexato, tioguanina, ftorafur y similares; mercaptopurine, methotrexate, thioguanine, ftorafur and the like;

5 agentes a base de platino, tales como, por ejemplo, carboplatino, cisplatino y similares; 5 platinum-based agents, such as, for example, carboplatin, cisplatin and Similar;

agentes antineoplásicos, tales como, por ejemplo, vincristina, leucovorina, lomustina, procarbazina y similares; antineoplastic agents, such as, for example, vincristine, leucovorin, lomustine, procarbazine and the like;

10 moduladores hormonales, tales como, por ejemplo, tamoxifeno, finasterida, inhibidores de la 5-a.-reductasa y similares; y 10 hormonal modulators, such as, for example, tamoxifen, finasteride, 5-a.-reductase inhibitors and the like; Y

alcaloides de la vinca, tales como, por ejemplo, vinblastina, vincristina, 15 vindesina, vinorelbina y similares. vinca alkaloids, such as, for example, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and the like.

Una relación más amplia de agentes quimioterápicos suscetibles de ser utilizados en la presente invención se describe con más detalle en The Merck Index, 13a Edición. A broader relationship of chemotherapeutic agents susceptible of being used in the present invention is described in more detail in The Merck Index, 13th Edition.

20 En el caso particular del CeR, los agentes antitumorales quimicos que habitualmente se usan en el tratamiento de dicho CCR incluyen, sin limitación, agentes a base de platino, análogos de nucleótidos, tales como fánnacos antimetabolitos de pirimidina, agentes antineoplásicos tales como leucovorina y combinaciones de los mismos. In the particular case of CeR, the chemical antitumor agents that are commonly used in the treatment of said CRC include, without limitation, platinum-based agents, nucleotide analogs, such as pyrimidine antimetabolite drugs, antineoplastic agents such as leucovorin and combinations thereof.

25 Entre los "agentes a base de platino" adecuados para el tratamiento del CCR se encuentran cisplatino cDDP o cis-iaminodicloroplatino (11», carboplatino, y combinaciones de los mismos, además del mencionado oxaliplatino. Entre los equivalentes de oxaliplatino conocidos en el estado de la técnica e incluyen, aunque sin limitarse a, cisplatino, aroplatino, loba platino, nedaplatino y JM-216. Among the "platinum-based agents" suitable for the treatment of RCC are cisplatin cDDP or cis-iaminodichloroplatin (11 », carboplatin, and combinations thereof, in addition to said oxaliplatin. Among the oxaliplatin equivalents known in the state of the technique and include, but are not limited to, cisplatin, aroplatin, platinum wolf, nedaplatin and JM-216.

Entre los "análogos de nucleótidos" se incluye el fluorouracilo (S-FU) que pertenece a la familia de fármacos terapéuticos denominados antimetabolitos basados en pirimidina, y sus equivalentes químicos. El S-FU es un análogo de pirimidina que se transforma en diferentes metabolitos citotóxicos que se incorporan después en el ADN 35 o ARN induciendo de este modo una parada del ciclo celular y apoptosis. El término incluye, además, sus equivalentes químicos, es decir, profármacos, análogos o "Nucleotide analogs" include fluorouracil (S-FU) that belongs to the family of therapeutic drugs called pyrimidine-based antimetabolites, and their chemical equivalents. S-FU is a pyrimidine analogue that is transformed into different cytotoxic metabolites that are then incorporated into DNA 35 or RNA thereby inducing a cell cycle stop and apoptosis. The term also includes its chemical equivalents, that is, prodrugs, analogs or

derivados de 5-FU que producen la interrupción de la replicación del ADN y/o inhiben la progresión del ciclo celular en la fase S produciendo la desorganización del ciclo celular y consecuentemente apoptosis. Entre los equivalentes químicos del 5-FU se incluyen sus profarmacos, analogos y derivados, tales como 5'-desoxi-5-fluorouridina 5 (doxifluroidina), l-tetrahidrofuranil-5-fluorouracilo (ftorafur), capecitabina (Xeloda ), S-I (MBMS-247616, que consiste en tegafur y dos moduladores, una 5-cloro-2,4dihidroxipiridina y oxonato de potasio), ralititrexed (tomudex), nolatrexed (Thymitaq, AG337), L Y231514 Y ZD9331 , tal como se describe por ejemplo, en Papamicheal (1999) The Oncologist 4:478-487. Alternativamente, es posible emplear capecitabina, 5-FU derivatives that cause disruption of DNA replication and / or inhibit the progression of the cell cycle in the S phase causing the disorganization of the cycle cellular and consequently apoptosis. Among the chemical equivalents of 5-FU are include its prodrugs, analogs and derivatives, such as 5'-deoxy-5-fluorouridine 5 (doxifluroidine), l-tetrahydrofuranyl-5-fluorouracil (ftorafur), capecitabine (Xeloda), S-I (MBMS-247616, consisting of tegafur and two modulators, a 5-chloro-2,4-dihydroxypyridine and potassium oxonate), ralititrexed (tomudex), nolatrexed (Thymitaq, AG337), L Y231514 and ZD9331, as described for example, in Papamicheal (1999) The Oncologist 4: 478-487. Alternatively, it is possible to use capecitabine,

10 un profármaco de 5-FU que se convierte en su forma activa por la enzima específica de tumor PyNPasa siguiendo una ruta de 3 pasos enzimaticos y 2 metabolitos intermedios, 5'-desoxi-5-fluorocitidina (5'-DFCR) y 5'-desoxi-5-fluorouridina (5'-DFUR). La capecitabina esta comercializada por Roche bajo el nombre comercial de Xeloda®. 10 a prodrug of 5-FU that is converted into its active form by the tumor specific enzyme PyNPase following a route of 3 enzymatic steps and 2 intermediate metabolites, 5'-deoxy-5-fluorocytidine (5'-DFCR) and 5 ' -deoxy-5-fluorouridine (5'-DFUR). Capecitabine is marketed by Roche under the trade name of Xeloda®.

15 El agente antineoplásico "Ieucovorina" (ácido folínico) [ácido 2-[4[[(2-amino-5-formil]4,5,6, 7 ,8-hexahidro-4-oxo-6-pteridinil)metil]amino]benzoilo]-glutamico, sal de calcio (1:1)] con número CAS 1492-18-8, se usa en combinación sinérgica con 5-FU para 15 The antineoplastic agent "Ieucovorin" (folinic acid) [2- [4 [[(2-amino-5-formyl] 4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxo-6-pteridinyl) methyl] amino] benzoyl] -glutamic, calcium salt (1: 1)] with CAS number 1492-18-8, is used in synergistic combination with 5-FU to

mejorar la eficacia del agente quimioterapéutico. Aunque no se desea estar unido a ninguna teoría, se cree que la adición de leucovorina aumenta la eficacia del 5-FU improve the effectiveness of the chemotherapeutic agent. Although it is not desired to be bound by any theory, it is believed that the addition of leucovorin increases the efficacy of 5-FU

20 inhibiendo la timidilato sintasa. Este compuesto se ha usado como un antídoto para proteger células normales de altas dosis del farmaco antineoplasico metotrexato y para aumentar los efectos antitumorales del 5-FU y del tegafur-uracilo. También se conoce como factor citrovorum y Wellcovorin. 20 inhibiting thymidylate synthase. This compound has been used as an antidote to protect normal cells from high doses of the antineoplastic drug methotrexate and to increase the antitumor effects of 5-FU and tegafur-uracil. It is also known as citrovorum factor and Wellcovorin.

25 En otra realización particular, es posible incluir en la composición de la invención una combinación de agentes antitumorales químicos que se usan habitualmente en el tratamiento del CCR. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de combinaciones de dichos agentes antitumorales incluyen las combinaciones FOLFOX, FOLFIRI, FOLFOXlBV y XELOX/BV. In another particular embodiment, it is possible to include in the composition of the invention a combination of chemical antitumor agents that are commonly used in the treatment of RCC. Illustrative, non-limiting examples of combinations of said antitumor agents include the combinations FOLFOX, FOLFIRI, FOLFOXlBV and XELOX / BV.

"FOLFOX" es una abreviatura para un tipo de terapia de combinación que se usa para tratar el cancer, que incluye S-FU, oxaliplatino y leucovorina. "FOLFOX" is an abbreviation for a type of combination therapy used to treat cancer, which includes S-FU, oxaliplatin and leucovorin.

"FOLFIRr es una abreviatura para un tipo de terapia de combinación que se usa para 35 tratar el cancer que comprende, o, alternativamente que consiste esencialmente en, 5FU, leucovorina e irinotecano. "FOLFIRr is an abbreviation for a type of combination therapy that is used to treat cancer comprising, or, alternatively consisting essentially of, 5FU, leucovorin and irinotecan.

"FOLFOXlBV" es una abreviatura para un tipo de terapia de combinación que se usa "FOLFOXlBV" is an abbreviation for a type of combination therapy that is used

para tratar el cáncer en donde uno o más de los componentes de la composición se sustituye con un equivalente químico del mismo, por ejemplo, un equivalente de 5-FU 5 y/o oxaliplatino. to treat cancer where one or more of the components of the composition is substituted with a chemical equivalent thereof, for example, an equivalent of 5-FU 5 and / or oxaliplatin.

"XELOX/BV" es una abreviatura para un tipo de terapia de combinación que se usa para tratar el CCR que incluye el profármaco de 5-FU conocido como capecitabina (Xeloda) en combinación con oxaliplatino y bevacizumab. Se incluyen, además, "XELOX / BV" is an abbreviation for a type of combination therapy that is used to treat RCC that includes the 5-FU prodrug known as capecitabine (Xeloda) in combination with oxaliplatin and bevacizumab. They also include

10 equivalentes de XELOX/BV en donde uno o más de los componentes de la composición se sustituyen con un equivalente químico del mismo, por ejemplo, un equivalente de bevacizumab y/o oxaliplatino. 10 equivalents of XELOX / BV wherein one or more of the components of the composition are substituted with a chemical equivalent thereof, for example, an equivalent of bevacizumab and / or oxaliplatin.

Kit de la invención Invention kit

En otro aspecto, la invención se relaciona con un kit, en adelante "kit de la invención", In another aspect, the invention relates to a kit, hereinafter "kit of the invention",

que comprende, por separado: a) una composición que comprende oxaliplatino, y b) una composición que comprende ¡3-criptoxantina. which comprises, separately: a) a composition comprising oxaliplatin, and b) a composition comprising 3-cryptoxanthin.

El término "kit", tal como aquí se usa, se refiere a una unidad de empaquetamiento que comprende dichas composiciones a) (composición que comprende oxaliplatino) y b) (composición que comprende ¡3-criptoxantina), o los componentes de dichas composiciones a) y b), y, opcionalmente, instrucciones para su empleo, es decir, para 25 la preparación , administración y/o dosificación de dichas composiciones . Dichas composiciones a) y b) se pueden administrar y/o dosificar de forma independiente, es decir, conjuntamente o por separado, de forma simultánea (al mismo tiempo) o secuencial (separada en el tiempo) a distintos tiempos. A modo ilustrativo, las composiciones a) y b) pueden ser administradas simultánea o secuencialmente, esto The term "kit", as used herein, refers to a packaging unit comprising said compositions a) (composition comprising oxaliplatin) and b) (composition comprising 3-cryptoxanthin), or the components of said compositions a ) and b), and, optionally, instructions for use, that is, for the preparation, administration and / or dosage of said compositions. Said compositions a) and b) can be administered and / or dosed independently, that is, together or separately, simultaneously (at the same time) or sequentially (separated in time) at different times. By way of illustration, compositions a) and b) can be administered simultaneously or sequentially, this

30 es, a tiempos distintos con intervalos constantes o variables, en la misma región o en regiones distintas del cuerpo, por la misma vía de administración o por vías de administración diferentes, y, en cualquier orden, es decir, puede administrarse primero la composición a) y luego la composición b) o viceversa. 30 is, at different times with constant or variable intervals, in the same region or in different regions of the body, by the same route of administration or by different routes of administration, and, in any order, that is, the composition can be administered first a) and then composition b) or vice versa.

35 El kit de la invención permite la administración conjunta o separada, simultánea o secuencial, de dichas composiciones a) y b). The kit of the invention allows the simultaneous or sequential joint or separate administration of said compositions a) and b).

Preferiblemente, los intervalos de administración (en el caso de una administración secuencial) o las vias de administración (en el caso de una administración separada) se eligen de tal forma que el efecto resultante sea igualo superior al de cada una de Preferably, the administration intervals (in the case of a sequential administration) or the administration routes (in the case of a separate administration) are chosen such that the resulting effect is equal to or greater than that of each of

5 las composiciones administradas de forma separada. Preferiblemente, el uso de la composición de la invención y del kit de la invención consigue un efecto sinérgico entre ambos ingredientes activos (oxaliplatino y [3-criptoxantina). 5 compositions administered separately. Preferably, the use of the composition of the invention and of the kit of the invention achieves a synergistic effect between both active ingredients (oxaliplatin and [3-cryptoxanthin).

En una realización particular, una o ambas de dichas composiciones a) y b) In a particular embodiment, one or both of said compositions a) and b)

10 comprende, además del ingrediente activo correspondiente (oxaliplatino o [3criptoxantina), un vehículo; en una realización particular, dicho vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable para su administración a un sujeto, tal como se ha definido previamente en el apartado relativo a la composición de la invención. 10 comprises, in addition to the corresponding active ingredient (oxaliplatin or [3criptoxanthin), a vehicle; In a particular embodiment, said vehicle is a pharmaceutically acceptable vehicle for administration to a subject, as previously defined in the section relating to the composition of the invention.

15 Por tanto, en una realización particular, el kit de la invención se caracteriza porque al menos una de las composiciones a) y b) previamente definidas comprende al menos un vehículo, preferentemente, un vehículo farmacéuticamente aceptable; a modo ilustrativo, la invención contempla la posibilidad de que la composición a) incluya, además de oxaliplatino, un vehículo farmacéuticamente aceptable, o bien la posibilidad Therefore, in a particular embodiment, the kit of the invention is characterized in that at least one of the previously defined compositions a) and b) comprises at least one vehicle, preferably, a pharmaceutically acceptable vehicle; by way of illustration, the invention contemplates the possibility that the composition a) includes, in addition to oxaliplatin, a pharmaceutically acceptable carrier, or the possibility

20 de que la composición b) incluya, además de [3-criptoxantina, un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización particular, el kit de la invención se caracteriza porque ambas composiciones a) y b) previamente definidas comprenden al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. 20 that composition b) includes, in addition to [3-cryptoxanthin, a pharmaceutically acceptable carrier. In another particular embodiment, the kit of the invention is characterized in that both previously defined compositions a) and b) comprise at least one pharmaceutically acceptable carrier.

25 En realizaciones particulares, las composiciones a) y/o b) presentes en el kit de la invención se preparan en formas farmacéuticas de administración por vía oral , que pueden ser, por ejemplo, sólidas o líquidas, o bien en formas farmacéuticas de administración por vías diferentes a la vía oral, por ejemplo, por vía parenteral o mediante absorción a través de la mucosa o epitelio, etc. En general, se elegirán los In particular embodiments, the compositions a) and / or b) present in the kit of the invention are prepared in pharmaceutical forms for oral administration, which may be, for example, solid or liquid, or in pharmaceutical forms of administration by different routes to the oral route, for example, parenterally or by absorption through the mucosa or epithelium, etc. In general, the

30 vehículos farmacéuticamente aceptables en función de las formas farmacéuticas de administración elegidas para las composiciones a) y/o b) del kit de la invención . Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de ingredientes activos, de los vehículos a utilizar, y de sus procedimientos de fabricación puede encontrarse, por ejemplo, en el Tratado de Farmacia Galénica, C. Faulí i Trillo, Luzán 30 pharmaceutically acceptable carriers depending on the dosage forms of administration chosen for compositions a) and / or b) of the kit of the invention. A review of the different pharmaceutical forms of administration of active ingredients, the vehicles to be used, and their manufacturing procedures can be found, for example, in the Galician Pharmacy Treaty, C. Faulí i Trillo, Luzán

35 5, S.A. de Ediciones, 1993 yen Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20' edición , Williams & Wilkins PA, USA (2000). 35 5, S.A. of Ediciones, 1993 yen Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20 'edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000).

Cuando una o ambas composiciones a) y b) presentes en el kit de la invención incorporan un vehículo farmacéuticamente aceptable, la composición o composiciones resultantes constituyen composiciones farmacéuticas en el sentido utilizado en la When one or both compositions a) and b) present in the kit of the invention incorporate a pharmaceutically acceptable carrier, the resulting composition or compositions constitute pharmaceutical compositions in the sense used in the

5 presente descripción. 5 present description.

Las composiciones a) y b) presentes en el kit de la invención pueden presentarse en la misma forma farmacéutica de administración, por ejemplo, ambas compoisiones pueden presentarse independientemente en formas farmacéuticas sólidas de Compositions a) and b) present in the kit of the invention can be presented in the same pharmaceutical form of administration, for example, both compositions can be presented independently in solid pharmaceutical forms of

10 administración oral, o en formas farmacéuticas líquidas de administración oral, o en formas farmacéuticas de administración parenteral (e.g ., intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, etc.), etc. 10 oral administration, or in liquid pharmaceutical forms of oral administration, or in pharmaceutical forms of parenteral administration (e.g., intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, etc.), etc.

Alternativamente, las composiciones a) y b) presentes en el kit de la invención pueden Alternatively, compositions a) and b) present in the kit of the invention may

15 presentarse en distintas formas farmacéuticas de administración; a modo de ejemplo ilustrativo, no limitativo, la composición a) puede presentarse en una forma farmacéutica sólida de administración oral y la composición b) puede presentarse en una forma farmacéutica líquida de administración oral, o viceversa; o bien la composición a) puede presentarse en una forma farmacéutica sólida o líquida de 15 present in different pharmaceutical forms of administration; by way of illustrative, non-limiting example, the composition a) may be presented in a solid pharmaceutical form for oral administration and the composition b) may be presented in a liquid pharmaceutical form for oral administration, or vice versa; or the composition a) may be presented in a solid or liquid pharmaceutical form of

20 administración oral y la composición b) puede presentarse en una forma farmacéutica de administración parenteral, o viceversa; etc. The oral administration and the composition b) may be presented in a pharmaceutical form of parenteral administration, or vice versa; etc.

En una realización particular, al menos una de las composiciones a) o b) presentes en el kit de la invención se presenta en una forma sólida destinada a convertirse, poco In a particular embodiment, at least one of the compositions a) or b) present in the kit of the invention is presented in a solid form intended to be converted, little

25 antes de su uso, en una preparación en forma farmacéutica líquida para su administración por vía oral o parenteral. En otra realización particular, ambas composiciones a) y b) presentes en el kit de la invención se presentan en formas sólidas destinadas a convertirse, poco antes de su uso, en unas preparaciones en formas farmacéuticas líquidas para su administración por vía oral o parenteral. 25 before use, in a liquid pharmaceutical preparation for oral or parenteral administration. In another particular embodiment, both compositions a) and b) present in the kit of the invention are presented in solid forms intended to become, shortly before use, in preparations in liquid pharmaceutical forms for oral or parenteral administration.

El kit de la invención también puede oontener, si se desea, al menos una oomposición que comprende al menos un ingrediente activo adicional, diferente al oxaliplatino y a la j3-criptoxantina, tal oomo, un agente antitumoral, por ejemplo, un agente antitumoral empleado en quimioterapia o inmunoterapia para el tratamiento del cáncer, más 35 concretamente, en el tratamiento de un tipo de cáncer cuyas células expresan un nivel de L!.Np73 superior (incrementado) al de un valor de referencia. Por tanto, en una The kit of the invention may also contain, if desired, at least one composition comprising at least one additional active ingredient, other than oxaliplatin and j3-cryptoxanthin, such as, an antitumor agent, for example, an antitumor agent employed in Chemotherapy or immunotherapy for the treatment of cancer, more specifically, in the treatment of a type of cancer whose cells express a level of L! Np73 higher (increased) than a reference value. Therefore, in a

realización particular, el kit de la invención comprende, además de las composiciones a) y b) previamente mencionadas, al menos una composición que comprende al menos un agente antitumoral diferente al oxaliplatino y a la j3-criptoxantina, tal como, por ejemplo, un agente antitumoral empleado en quimioterapia o inmunoterapia para el 5 tratamiento del cáncer, en particular, para el tratamiento de un tipo de cáncer cuyas células expresan un nivel de L!.Np73 superior (incrementado) al de un valor de referencia, tal como, por ejemplo, CCR, y, opcionalmente, un vehículo, preferentemente, un vehículo farmacéuticamente aceptable. Ejemplos ilustrativos de dicho agente antitumoral empleado en quimioterapia o inmunoterapia para el particular embodiment, the kit of the invention comprises, in addition to the compositions a) and b) previously mentioned, at least one composition comprising the less an antitumor agent other than oxaliplatin and j3-cryptoxanthin, such as, for example, an antitumor agent used in chemotherapy or immunotherapy for the 5 cancer treatment, in particular, for the treatment of a type of cancer whose cells express a level of L! .Np73 higher (increased) than a value of reference, such as, for example, CCR, and, optionally, a vehicle, preferably, a pharmaceutically acceptable vehicle. Illustrative examples of said antitumor agent used in chemotherapy or immunotherapy for the

10 tratamiento del cáncer ya han sido mencionados previamente en relación con la composición de la invención, o con la composición farmacéutica de la invención, y se incorporan aquí por referencia. The treatment of cancer has already been mentioned previously in relation to the composition of the invention, or to the pharmaceutical composition of the invention, and is incorporated herein by reference.

El experto en la materia entenderá que el kit de la invención puede contener, además The person skilled in the art will understand that the kit of the invention may also contain

15 de las composiciones a) y b), tantas composiciones separadas conteniendo cada una de ellas un único agente antitumoral como agentes antitumorales diferentes se deseen incluir, o bien estos agentes antitumorales pueden estar combinados en una o varias composiciones. 15 of the compositions a) and b), as many separate compositions each containing a single antitumor agent as well as different antitumor agents may be included, or these antitumor agents may be combined in one or more compositions.

20 Usos de las composiciones y kits de la invención 20 Uses of the compositions and kits of the invention

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de j3-criptoxantina, o de una composición de la invención, o de un kit de la invención, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer. In another aspect, the invention relates to the use of j3-cryptoxanthin, or a composition of the invention, or a kit of the invention, for the preparation of a medicament for the treatment of cancer.

25 Dentro del contexto de la presente invención, el término "cáncer" incluye cualquier tipo de cáncer o tumor. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de dichos cánceres o tumores incluyen cánceres hematológicos (e.g., leucemias o linfomas), tumores neurológicos Within the context of the present invention, the term "cancer" includes any type of cancer or tumor. Illustrative, non-limiting examples of such cancers or tumors include hematologic cancers (e.g., leukemia or lymphomas), neurological tumors

(e.g., astrocitomas o glioblastomas), melanoma, cáncer de mama, cáncer de pulmón, (e.g., astrocytomas or glioblastomas), melanoma, breast cancer, lung cancer,

30 cáncer de cabeza y cuello, tumores gastrointestinales (e.g., cáncer de estómago, páncreas o colorrectal (CCR», cáncer de hígado (e.g. , carcinoma hepatocelular), cáncer de células renales, tumores genitourinarios (e.g., cáncer de ovario, cáncer vaginal, cáncer de cuello de útero, cáncer de vejiga, cáncer de testículo, cáncer de próstata), tumores óseos, tumores vasculares, etc. En una realización particular, dicho 30 head and neck cancer, gastrointestinal tumors (eg, stomach, pancreatic or colorectal cancer (CRC), liver cancer (eg, hepatocellular carcinoma), renal cell cancer, genitourinary tumors (eg, ovarian cancer, vaginal cancer, cervical cancer, bladder cancer, testicular cancer, prostate cancer), bone tumors, vascular tumors, etc. In a particular embodiment, said

35 cáncer es CCR. 35 cancer is CCR.

El término "cáncer de colon" o "cáncer colorrectal" o "CCR", tal como aquí se usa, incluye cualquier tipo de neoplasia del colon , recto y apéndice y hace referencia tanto a los adenomas tempranos y tardíos como a los carcinomas así como al cáncer hereditario, familiar o esporádico. Dentro del CCR hereditario se encuentran aquellos 5 síndromes que incluyen la presencia de pólipos, tales como los síndromes de poliposis hamartomatosos y el más conocido, la poliposis adenomatosa familiar (PAF) así como los síndromes no poliposos tales como el CCR hereditario no asociado a pólipos (CCHNP) o el síndrome de Lynch 1. Asimismo, la invención contempla el tratamiento del CCR en sus distintos estad íos tales como los estad íos A, B, C 1, C2 y D según la The term "colon cancer" or "colorectal cancer" or "RCC", as used herein, includes any type of neoplasm of the colon, rectum and appendix and refers to both early and late adenomas and carcinomas as well as to hereditary, familial or sporadic cancer. Within the hereditary RCC are those 5 syndromes that include the presence of polyps, such as hamartomatous polyposis syndromes and the best known, familial adenomatous polyposis (FAP) as well as non-polyposal syndromes such as hereditary RCC not associated with polyps (CCHNP) or Lynch syndrome 1. Likewise, the invention contemplates the treatment of CRC in its various stages such as stages A, B, C 1, C2 and D according to the

10 clasificación de Dukes, los estad íos A, B1, B2, B3, C1, C2, C3 y D según la clasificación de Astler-Coller, los estadios TX, TO, Tis, TI, T2, T3, NX, NO, NI, N2, MX, MO y MI según el sistema TNM así como los estad íos 0, 1, 11, III Y IV según la clasificación de la AJCC (American Joint Committee on Cancer). 10 Dukes classification, stages A, B1, B2, B3, C1, C2, C3 and D according to the Astler-Coller classification, stages TX, TO, Tis, TI, T2, T3, NX, NO, NI , N2, MX, MO and MI according to the TNM system as well as stages 0, 1, 11, III and IV according to the AJCC classification (American Joint Committee on Cancer).

15 El término "tratamiento", tal como aquí se utiliza, se refiere a cualquier tipo de terapia, que tenga como objetivo la terminación, mejora o reducción de la susceptibilidad a padecer una condición clínica, como se describe aquí. Así, "tratamiento", "tratar", y sus términos equivalentes se refieren a la obtención de un efecto deseado farmacológica o fisiológicamente, que cubre cualquier tratamiento de una afección patológica o 15 The term "treatment", as used herein, refers to any type of therapy, which aims to terminate, improve or reduce the susceptibility to suffer from a clinical condition, as described here. Thus, "treatment", "treat", and its equivalent terms refer to obtaining a desired effect pharmacologically or physiologically, which covers any treatment of a pathological condition or

20 trastorno en un mamífero, incluyendo el ser humano. El efecto puede ser profiláctico en términos de proporcionar prevención total o parcial de un trastorno y/o efecto adverso atribuible al mismo. Es decir, "tratamiento" incluye (1) inhibir la enfermedad, por ejemplo deteniendo su desarrollo, (2) interrumpir o finalizar el desorden o por lo menos los síntomas asociados al mismo, por lo que el paciente ya no sufriría la 20 disorder in a mammal, including humans. The effect can be prophylactic in terms of providing total or partial prevention of a disorder and / or adverse effect attributable to it. That is, "treatment" includes (1) inhibiting the disease, for example by stopping its development, (2) interrupting or ending the disorder or at least the symptoms associated with it, so the patient would no longer suffer the

25 enfermedad o sus síntomas, por ejemplo provocar la regresión de la enfermedad o sus síntomas mediante la restauración o reparación de una función perdida, ausente o defectuosa, o estimular un proceso ineficiente, o (3), aminorar, aliviar o mejorar la enfermedad, o los síntomas asociados a la misma, donde aminorar se utiliza en un sentido amplio para referirse a, al menos, una reducción en la magnitud de un 25 disease or its symptoms, for example causing the regression of the disease or its symptoms by restoring or repairing a lost, absent or defective function, or stimulating an inefficient process, or (3), reducing, alleviating or improving the disease, or the symptoms associated with it, where reducing is used in a broad sense to refer to at least a reduction in the magnitude of a

30 parámetro, tal como inflamación, dolor, o deficiencia inmune. 30 parameter, such as inflammation, pain, or immune deficiency.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la ¡3-criptoxantina para la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer en un sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino. Para su administración a 35 dicho sujeto la ¡3-criptoxantina se formulará en una composición, tal como una composición farmacéutica que comprende, además de ¡3-criptoxantina, un vehículo In another aspect, the invention relates to the use of 3-cryptoxanthin for the preparation of a medicament for the treatment of cancer in a subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin. For administration to said subject, ¡3-cryptoxanthin will be formulated in a composition, such as a pharmaceutical composition comprising, in addition to ¡3-cryptoxanthin, a vehicle

farmacéuticamente aceptable. El experto en la materia entenderá que todo lo mencionado en relación con las composiciones farmacéuticas elaboradas a partir de la composición de la invención se aplicará mutatis mutandi a estas composiciones farmacéuticas que comprenden ~-criptoxantina y un vehículo farmacéuticamente pharmaceutically acceptable. The person skilled in the art will understand that everything mentioned in relation to the pharmaceutical compositions made from the composition of the invention will apply mutatis mutandi to these pharmaceutical compositions comprising ~ -criptoxanthin and a pharmaceutically carrier

5 aceptable. 5 acceptable.

El término "sujeto" o "paciente", tal como se usa aquí, incluye a cualquier animal clasificado como mamífero e incluye, aunque no está restringido a, animales domésticos y de granja, primates y humanos, por ejemplo, seres humanos, primates The term "subject" or "patient", as used herein, includes any animal classified as a mammal and includes, but is not restricted to, domestic and farm animals, primates and humans, for example, humans, primates

10 no humanos, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, perros, gatos, o roedores. Preferiblemente, el sujeto es un humano hombre o mujer de cualquier edad o raza. 10 non-humans, cows, horses, pigs, sheep, goats, dogs, cats, or rodents. Preferably, the subject is a human male or female of any age or race.

Como se ha mencionado previamente, tanto la composición farmacéutica de la invención, como las composiciones farmacéuticas presentes en el kit de la invención, o As previously mentioned, both the pharmaceutical composition of the invention, and the pharmaceutical compositions present in the kit of the invention, or

15 la composición farmacéutica que comprende ~-criptoxantina, se pueden administrar por cualquier vía de administración adecuada, por ejemplo por vía oral, parenteral (incluyendo por vía intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, etc.), tópica, etc. The pharmaceutical composition comprising ~ -criptoxanthin may be administered by any suitable route of administration, for example orally, parenterally (including intradermally, intramuscularly, intraperitoneally, intravenously, subcutaneously, etc.), topical, etc.

20 En una realización particular, la composición farmacéutica de la invención, o las composiciones farmacéuticas proporcionadas por los kits de la invención, o la composición farmacéutica que comprende j3-criptoxantina, se administran por vía oral. En otra realización particular, la composición farmacéutica de la invención, o las composiciones farmacéuticas proporcionadas por los kits de la invención, o la In a particular embodiment, the pharmaceutical composition of the invention, or the pharmaceutical compositions provided by the kits of the invention, or the pharmaceutical composition comprising j3-cryptoxanthin, are administered orally. In another particular embodiment, the pharmaceutical composition of the invention, or the pharmaceutical compositions provided by the kits of the invention, or the

25 composición farmacéutica que comprende j3-criptoxantina, se administran por vía parenteral, por ejemplo, por vía intravenosa o intraperitoneal. En otra realización particular, la composición farmacéutica de la invención, o las composiciones farmacéuticas proporcionadas por los kits de la invención , o la composición farmacéutica que comprende j3-criptoxantina, se administran en una forma The pharmaceutical composition comprising j3-cryptoxanthin, is administered parenterally, for example, intravenously or intraperitoneally. In another particular embodiment, the pharmaceutical composition of the invention, or the pharmaceutical compositions provided by the kits of the invention, or the pharmaceutical composition comprising j3-cryptoxanthin, are administered in a form.

30 farmacéutica de administración apropiada para su absorción a través de las mucosas 30 appropriate pharmaceutical administration for absorption through the mucous membranes

o el epitelio. or the epithelium

En una realización particular de la invención, la administración simultánea, separada o secuencial de las composiciones farmacéuticas proporcionadas por el kit de la 35 invención puede llevarse a cabo por vías iguales o diferentes; así, por ejemplo, la composición farmacéutica que comprende oxaliplatino puede administrarse por vía In a particular embodiment of the invention, simultaneous, separate or sequential administration of the pharmaceutical compositions provided by the kit of the invention can be carried out by the same or different routes; thus, for example, the pharmaceutical composition comprising oxaliplatin can be administered via

parenteral (e.g., por vía intraperitoneal o intravenosa) y la composición farmacéutica que comprende j3-criptoxantina puede administrarse por vía oral, o viceversa; parenteral (e.g., intraperitoneally or intravenously) and the pharmaceutical composition comprising j3-cryptoxanthin may be administered orally, or vice versa;

alternativamente, la composición farmacéutica que comprende oxaliplatino puede administrarse por vía parenteral (e.g ., por vía intraperitoneal o intravenosa) y la 5 composición farmacéutica que comprende j3-criptoxantina puede administrarse por vía alternatively, the pharmaceutical composition comprising oxaliplatin may administered parenterally (e.g., intraperitoneally or intravenously) and the The pharmaceutical composition comprising j3-cryptoxanthin can be administered via

parenteral, por ejemplo, por vía intraperitoneal. parenteral, for example, intraperitoneally.

Para su aplicación en terapia, las composiciones farmacéuticas proporcionadas por esta invención se encontrarán preferiblemente en forma farmacéutica mente aceptable 10 o sustancialmente pura, es decir, las composiciones de la invención tienen un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los excipientes farmacéutica mente aceptables y sin incluir material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. For application in therapy, the pharmaceutical compositions provided by this invention will preferably be in pharmaceutically acceptable or substantially pure form, that is, the compositions of the invention have a pharmaceutically acceptable level of purity excluding pharmaceutically acceptable excipients and not including Material considered toxic at normal dosage levels.

Los ingredientes activos presentes en las composiciones farmacéuticas 15 proporcionadas por la presente invención pueden ser administrados en dosis de menos de 10 mg por kg de peso corporal, preferiblemente menos de 5, 2, 1, 0,5, 0,1, 0,05, 0,01 , 0,005, 0,001 , 0,0005, 0,0001 , 0,00005 Ó 0,00001 mg por cada kg de peso corporal. En una realización particular, la dosis de administración de oxaliplatino es de 1,5 mg/kg o de 3 mg/kg. La dosis unitaria se puede administrar por ejemplo por 20 inyección. En otra realización preferida la dosis de administración de oxaliplatino es de 1 mg/kg. La dosis de administración de j3-criptoxantina puede ser determinada por The active ingredients present in the pharmaceutical compositions provided by the present invention can be administered in doses of less than 10 mg per kg body weight, preferably less than 5, 2, 1, 0.5, 0.1, 0.05 , 0.01, 0.005, 0.001, 0.0005, 0.0001, 0.00005 or 0.00001 mg per kg of body weight. In a particular embodiment, the dose of oxaliplatin administration is 1.5 mg / kg or 3 mg / kg. The unit dose can be administered for example by injection. In another preferred embodiment the dose of oxaliplatin administration is 1 mg / kg. The administration dose of j3-cryptoxanthin can be determined by

métodos convencionales por los técnicos en la materia. Conventional methods by those skilled in the art.

En general, la dosis a administrar depende de la severidad y respuesta de la condición In general, the dose to be administered depends on the severity and response of the condition

25 a tratar. La duración del tratamiento puede variar entre varios días y varios meses o hasta que se observe que la condición remite. La dosificación óptima se puede determinar realizando mediciones periódicas de las concentraciones de ingrediente o ingredientes activos en el organismo del sujeto o paciente. La dosis óptima se puede determinar a partir de los valores de EC5Q obtenidos mediante ensayos previos in vitro 25 to try. The duration of treatment may vary between several days and several months or until it is observed that the condition remits. The optimal dosage can be determined by periodic measurements of the concentrations of active ingredient or ingredients in the body of the subject or patient. The optimal dose can be determined from the EC5Q values obtained by previous in vitro tests

30 o in vivo en modelos animales. La dosis unitaria se puede administrar una vez al día o menos de una vez al día, preferiblemente, menos de una vez cada 2, 4, 8 ó 30 días. Alternativamente, es posible administrar una dosis inicial seguida de una o varias dosis de mantenimiento, generalmente de menos cantidad que la dosis inicial. El régimen de mantenimiento puede implicar tratar al paciente con dosis que oscilan entre 0,01 I-Ig y 30 or in vivo in animal models. The unit dose may be administered once a day or less than once a day, preferably, less than once every 2, 4, 8 or 30 days. Alternatively, it is possible to administer an initial dose followed by one or several maintenance doses, generally of less quantity than the initial dose. The maintenance regimen may involve treating the patient with doses ranging from 0.01 I-Ig and

35 1,4 mg/kg de peso corporal por dia, por ejemplo 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001, Ó 0,00001 mg por kg de peso corporal por día. Las dosis de mantenimiento se administran, preferiblemente, como mucho una vez cada 5, 10 ó 30 días. El tratamiento se debe continuar durante un periodo de tiempo que variará según el tipo de alteración que sufra el paciente, su severidad y el estado del paciente. Tras el tratamiento, se debe monitorizar la evolución del paciente para determinar si se debe incrementar la dosis 35 1.4 mg / kg body weight per day, for example 10, 1, 0.1, 0.01, 0.001, OR 0.00001 mg per kg body weight per day. Maintenance doses are preferably administered at most once every 5, 10 or 30 days. The treatment should be continued for a period of time that will vary according to the type of alteration suffered by the patient, its severity and the patient's condition. After treatment, the patient's evolution should be monitored to determine if the dose should be increased

5 en caso de que la enfermedad no responda al tratamiento o si se disminuye la dosis si se observa una mejora de la enfermedad o si se observan efectos secundarios indeseados. 5 in case the disease does not respond to treatment or if the dose is decreased if an improvement in the disease is observed or if side effects are observed unwanted

En una realización particular, el sujeto que padece cáncer y que va a ser tratado con la In a particular embodiment, the subject suffering from cancer and who will be treated with the

10 composición, en particular, con la composición farmacéutica de la invención, o con el kit de la invención, presenta unos niveles de .6.Np73 incrementados con respecto a un valor de referencia. The composition, in particular, with the pharmaceutical composition of the invention, or with the kit of the invention, has increased levels of .6.Np73 with respect to a reference value.

El gen p73 (cuyo ADNc corresponde en humanos a la secuencia con número de The p73 gene (whose cDNA corresponds in humans to the sequence with number of

15 acceso Y11416 en la base de datos GenBank a fecha 3 de junio de 2013) se expresa de varias formas, diferenciándose en los extremos amino o carboxilo. Las isoformas completas contienen el dominio de transactivación en el extremo amino, pero la isoforma L!.Np73 (en humanos corresponde a la secuencia con número de acceso Q8WXGO en la base de datos Uniprot el 10 de junio de 2013) carece de dicho dominio Access Y11416 in the GenBank database as of June 3, 2013) is expressed in several ways, differing in the amino or carboxyl ends. The complete isoforms contain the transactivation domain at the amino end, but the L! .Np73 isoform (in humans corresponds to the sequence with accession number Q8WXGO in the Uniprot database on June 10, 2013) lacks such domain

20 al comenzar la transcripción en un promotor localizado en el intrón 3, y, por tanto, no activa la transcripción desde promotores que responden a p53 pero sí inhibe la expresión de la variante completa p73 (TAp73) Yde p53, actuando como un dominante negativo. De esta manera, .6.Np73 tiene funciones pro-tumorales ya que inhibe tanto la función pro-apoptótica como la supresión del crecimiento mediado por p53 y TAp73. 20 at the start of transcription in a promoter located in intron 3, and therefore does not activate transcription from promoters that respond to p53 but does inhibit the expression of the full variant p73 (TAp73) Yde p53, acting as a negative dominant . Thus, .6.Np73 has pro-tumor functions since it inhibits both pro-apoptotic function and growth suppression mediated by p53 and TAp73.

Se conocen distintos tipos de canceres que presentan niveles incrementados de L!.Np73, tales como, por ejemplo, neuroblastoma (Casciano 1. et al, 2002 Cell Death Differ. 9, 246-251), cancer de ovario (Concin, N. et al, 2005 Clin. Cancer Res. 11, 8372-8383), cáncer de mama (Dominguez, G. et al, 2006 J. Clin. Oncol. 24, 805--<315), 30 cáncer de colon (CCR) (Dominguez, G. et al, 2006 J. Clin. Oncol. 24, 805-815), cáncer de próstata (Guan, M et al, 2005 J. Clin. Pathol. 58, 1175-1179), cáncer de tiroide (lto, Y.,et al, 2006 Pathology 38, 205-2099), cáncer de hígado (Müller, M. et al., 2005 Cell Death Differ. 12, 1564-1577), leucemia (Rizzo, M. et aL, 2004, Leukemia 18, 1804-1809), cáncer de pulmón (Uramoto, H. et aL, 2004 Clin. Cancer Res. 10, 690535 6911), cáncer gástrico (Vilgelm, A.E. et al., 2010 Oncogene 29, 5861-5868), cáncer de Different types of cancers are known that have increased levels of L.! Np73, such as, for example, neuroblastoma (Casciano 1. et al, 2002 Cell Death Differ. 9, 246-251), ovarian cancer (Concin, N. et al, 2005 Clin. Cancer Res. 11, 8372-8383), breast cancer (Dominguez, G. et al, 2006 J. Clin. Oncol. 24, 805 - <315), 30 colon cancer (CRC) (Dominguez, G. et al, 2006 J. Clin. Oncol. 24, 805-815), prostate cancer (Guan, M et al, 2005 J. Clin. Pathol. 58, 1175-1179), thyroid cancer ( lto, Y., et al, 2006 Pathology 38, 205-2099), liver cancer (Müller, M. et al., 2005 Cell Death Differ. 12, 1564-1577), leukemia (Rizzo, M. et aL, 2004, Leukemia 18, 1804-1809), lung cancer (Uramoto, H. et al., 2004 Clin. Cancer Res. 10, 690535 6911), gastric cancer (Vilgelm, AE et al., 2010 Oncogene 29, 5861-5868 ), cancer of

esófago (Vilgelm, A.E. et al., 2010 Oncogene 29, 5861-5868) Y cáncer de médula ósea (Zitterbart, K. et al., 2007 Acta Neuropathol.114, 641-<l50), entre otros. esophagus (Vilgelm, A.E. et al., 2010 Oncogene 29, 5861-5868) And bone marrow cancer (Zitterbart, K. et al., 2007 Acta Neuropathol. 114, 641- <150), among others.

En la presente invención, el nivel de expresión de óNp73 se mide en una muestra del 5 sujeto que padece cáncer. In the present invention, the level of expression of oPp73 is measured in a sample of the 5 subject suffering from cancer.

El término "muestra", tal como aquí se usa, se refiera al material biológico aislado de un sujeto. La muestra biológica puede contener cualquier material biológico adecuado para determinar el nivel de expresión de óNp73. La muestra puede aislarse de The term "sample", as used herein, refers to the biological material isolated from a subject. The biological sample may contain any suitable biological material to determine the level of expression of oPp73. The sample can be isolated from

10 cualquier fluido o tejido biológico adecuado, por ejemplo, tejido tumoral, sangre, plasma, suero, orina, etc. 10 any suitable biological fluid or tissue, for example, tumor tissue, blood, plasma, serum, urine, etc.

En una realización particular, la muestra es una muestra de tejido tumoral auna muestra de exosomas. In a particular embodiment, the sample is a sample of tumor tissue to a sample of exosomes.

La expresión "muestra de tejido tumoral", tal como aquí se usa, se refiere a una muestra de tejido procedente del tumor primario del cáncer, por ejemplo, CCR La muestra de tejido tumoral se puede obtener mediante métodos convencionales, por ejemplo, mediante biopsia, utilizando métodos bien conocidos para los expertos en las 20 técnicas médicas relacionadas. Los métodos para obtener una muestra de la biopsia incluyen partición en trozos grandes de un tumor, o microdisección u otros métodos de separación de células conocidos en la técnica. Las células tumorales se pueden obtener de forma adicional mediante citología por aspiración con una aguja fina. Para simplificar la conservación y el manejo de las muestras, estas se pueden fijar en The term "tumor tissue sample", as used herein, refers to a tissue sample from the primary cancer tumor, for example, CCR. The tumor tissue sample can be obtained by conventional methods, for example, by biopsy. , using methods well known to experts in the 20 related medical techniques. Methods for obtaining a biopsy sample include partitioning a large piece of a tumor, or microdissection or other cell separation methods known in the art. Tumor cells can be obtained additionally by aspiration cytology with a fine needle. To simplify the conservation and handling of the samples, these can be set in

25 formalina y embeber en parafina o congelar primero y después embeber en un medio criosolidificable, tal como compuesto OCT, mediante inmersión en un medio altamente criogénico que permite la congelación rápida. Formalin and embed in paraffin or freeze first and then soak in a cryosolidifiable medium, such as OCT compound, by immersion in a highly cryogenic medium that allows rapid freezing.

Los términos "exosomas" o "ectosomas" y "micropartículas", tal como aquí se usan, se 30 refieren a vesículas de aproximadamente 50-90 nm de diámetro de origen endocítico secretadas al medio extra celular por todas las células. The terms "exosomes" or "ectosomes" and "microparticles", as used herein, refer to vesicles approximately 50-90 nm in diameter of endocytic origin secreted into the extra cellular medium by all cells.

La identificación de una vesícula como exosoma requiere cumplir diversos criterios que conoce un experto en la materia. Su tamaño varía de 50 a 90 nm de diámetro y 35 después de una tinción negativa muestra una morfología en forma de copa por microscopía electrónica. El análisis bioquímico y proteómico en exosomas purificados The identification of a gallbladder as an exosome requires several criteria to be met by one skilled in the art. Its size varies from 50 to 90 nm in diameter and 35 after a negative staining shows a cup-shaped morphology by electron microscopy. Biochemical and proteomic analysis in purified exosomes

confirma la presencia de proteínas citosólicas tales como Hsc73 y Hsc90, subunidades de proteínas G triméricas, Tsg101, varias anexinas, Rab guanosina trifosfato, proteínas del citoesqueleto (actina, tubulina) y glóbulos de grasa lactea (MFG)-E8 (o lactoadhesina), proteínas unidas a la membrana como tetraspanin (C09, C063, COS1 , 5 COS2) y moléculas MHC de clase 1. Los exosomas también presentan proteínas celulares específicas de tipo, tales como MHC de clase 11 y moléculas co estimuladoras (COS6) en las células presentadoras de antígeno (APC), factor de von Willebrand o CD41a (GPllb) sobre las plaquetas, TeR en exosomas derivados de células T y perforina o granzima en CTL. La composición de lípidos de los exosomas confirms the presence of cytosolic proteins such as Hsc73 and Hsc90, subunits of trimeric G proteins, Tsg101, various annexes, Rab guanosine triphosphate, cytoskeleton proteins (actin, tubulin) and milk fat globules (MFG) -E8 (or lactoadhesin), membrane-bound proteins such as tetraspanin (C09, C063, COS1, 5 COS2) and MHC class 1 molecules. Exosomes also have proteins type-specific cells, such as MHC class 11 and co molecules stimulators (COS6) in antigen presenting cells (APC), von factor Willebrand or CD41a (GPllb) on platelets, TeR in exosomes derived from T cells and perforin or granzyme in CTL. The lipid composition of exosomes

10 revela un enriquecimiento en colesterol, esfingomielina y gangliósido GM3 niveles. En total, esta composición específica distingue a los exosomas de cuerpos apoptóticos o de otras vesículas. 10 reveals an enrichment in cholesterol, sphingomyelin and ganglioside GM3 levels. In total, this specific composition distinguishes exosomes from apoptotic bodies or other vesicles.

Un experto en la materia conoce diversos métodos que pueden emplearse para A person skilled in the art knows various methods that can be used to

15 obtener exosomas y analizarlos en una muestra. Preferiblemente, los exosomas son aislados de manera no invasiva mediante una extracción rutinaria de sangre periférica. Preferiblemente, es aconsejable adaptar los protocolos de obtención de exosomas conocidos a la densidad característica de la sangre, por ejemplo tal y como los protocolos descritos en Théry C. et al., Current Protocols in Cell Biology Unit 3.22 April 15 obtain exosomes and analyze them in a sample. Preferably, the exosomes are isolated non-invasively by routine extraction of peripheral blood. Preferably, it is advisable to adapt the protocols for obtaining known exosomes to the characteristic density of blood, for example, such as the protocols described in Théry C. et al., Current Protocols in Cell Biology Unit 3.22 April

20 2006. Entre los métodos conocidos que pueden emplearse para el aislamiento de exosomas se encuentra la centrifugación diferencial, mediante un colchón de suerosa (gradiente de sacarosa) al 30 % o mediante inmunoaislamiento. Adicionalmente es posible emplear kits disponibles comercialmente tal y como el kit "Total Exosome Isolation (from serum) de Invitrogen™. 20 2006. Among the known methods that can be used to isolate exosomes is differential centrifugation, by means of a 30% sucrose cushion (sucrose gradient) or by immunoisolation. Additionally it is possible to use commercially available kits such as the "Total Exosome Isolation (from serum) kit from Invitrogen ™.

25 Una vez obtenida la muestra del sujeto es necesario determinar el nivel de expresión de IINp73. 25 Once the sample of the subject is obtained, it is necessary to determine the level of expression of IINp73.

El término "nivel de expresión" de un gen, tal como aquí se usa, se refiere a la The term "expression level" of a gene, as used herein, refers to the

30 cantidad medible de producto del gen en una muestra del sujeto, en el que el producto del gen puede ser un producto de la transcripción o un producto de la traducción de dicho gen. En consecuencia, el nivel de expresión puede corresponder a un ácido nucleico del gen (tal como ARNm o AONc) o un polipéptido codificado por dicho gen. El nivel de expresión se deriva de la muestra de un sujeto y/o de una muestra o A measurable amount of gene product in a sample of the subject, in which the gene product can be a transcription product or a translation product of said gene. Accordingly, the level of expression may correspond to a nucleic acid of the gene (such as mRNA or AONc) or a polypeptide encoded by said gene. The level of expression is derived from the sample of a subject and / or a sample or

35 muestras de referencia, y puede ser detectado de novo o corresponder a una determinación anterior. 35 reference samples, and can be detected de novo or correspond to a previous determination.

En una realización particular, la cuantificación del nivel de expresión de L!.Np73 puede llevarse a cabo mediante la cuantificación del nivel de expresión de la proteína .6.Np73, In a particular embodiment, the quantification of the expression level of L! .Np73 can be carried out by quantifying the expression level of the .6.Np73 protein,

o cualquier variante funcionalmente equivalente de dicha proteína L!.Np73, o bien or any functionally equivalent variant of said L! .Np73 protein, or

5 mediante la determinación de la actividad de la proteína .6.Np73, o una variante funcionalmente equivalente de la misma. 5 by determining the activity of the .6.Np73 protein, or a functionally equivalent variant thereof.

El nivel de expresión de la proteína ó'Np73 puede ser cuantificado mediante cualquier método convencional que permita detectar y cuantificar dicha proteína en una muestra 10 de un sujeto. A modo ilustrativo, no limitativo, los niveles de dicha proteína pueden cuantificarse, por ejemplo, mediante el empleo de anticuerpos con capacidad de unirse ó'Np73 (o a fragmentos de la misma que contengan un determinante antigénico) y la posterior cuantificación de los complejos formados. Los anticuerpos que se emplean en estos ensayos pueden estar marcados o no. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de 15 marcadores que se pueden utilizar incluyen isótopos radiactivos, enzimas, fluoróforos, reactivos quimioluminiscentes, sustratos enzimáticos o cofactores, inhibidores enzimáticos, partículas, colorantes, etc. Existe una amplia variedad de ensayos conocidos que se pueden utilizar en la presente invención, que utilizan anticuerpos no marcados (anticuerpo primario) y anticuerpos marcados (anticuerpo secundario); entre 20 estas técnicas se incluyen, a modo ilustrativo, no limitativo, Western-blot o transferencia Western, ELlSA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima), RIA (radioinmunoensayo), EIA competitivo (inmunoensayo enzimático competitivo), DASELlSA (ELlSA sándwich con doble anticuerpo), técnicas inmunocitoquímicas e inmunohistoquímicas, técnicas basadas en el empleo de biochips o microarrays de 25 proteínas que incluyan anticuerpos específicos o ensayos basados en precipitación coloidal en formatos tales como dipsticks. Otras maneras para detectar y cuantificar dicha proteína ó'Np73, incluyen técnicas de cromatografía de afinidad, ensayos de unión a ligando, etc. Cuando se usa un método inmunológico, se puede usar cualquier anticuerpo o reactivo que se sabe se une a la proteína .6.Np73 con alta afinidad para 30 detectar la cantidad de la misma. Sin embargo, se prefiere el uso de un anticuerpo, por ejemplo, sueros policlonales, sobrenadantes de hibridomas o anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos, Fv, Fab, Fab' y F(ab')2, scFv, diacuerpos, tria cuerpos, tetra cuerpos y anticuerpos humanizados. En el mercado, existen anticuerpos comerciales contra la proteína ó'Np73 que pueden emplearse en el 35 contexto de la presente invención. Son múltiples las casas comerciales que ofrecen The expression level of the'Np73 protein can be quantified by any conventional method that allows detecting and quantifying said protein in a sample 10 of a subject. By way of illustration, not limitation, the levels of said protein can be quantified, for example, by the use of antibodies capable of binding O'Np73 (or fragments thereof containing an antigenic determinant) and the subsequent quantification of the complexes formed. . The antibodies used in these assays may or may not be labeled. Illustrative, non-limiting examples of 15 markers that can be used include radioactive isotopes, enzymes, fluorophores, chemiluminescent reagents, enzyme substrates or cofactors, enzyme inhibitors, particles, dyes, etc. There is a wide variety of known assays that can be used in the present invention, which use unlabeled antibodies (primary antibody) and labeled antibodies (secondary antibody); These techniques include, by way of illustration, non-limiting, Western-blot or Western blotting, ELlSA (enzyme-linked immunosorbent assay), RIA (radioimmunoassay), competitive EIA (competitive enzyme immunoassay), DASELlSA (ELlSA sandwich with double antibody ), immunocytochemical and immunohistochemical techniques, techniques based on the use of biochips or microarrays of 25 proteins that include specific antibodies or tests based on colloidal precipitation in formats such as dipsticks. Other ways to detect and quantify said 73Np73 protein, include affinity chromatography techniques, ligand binding assays, etc. When an immune method is used, any antibody or reagent that is known to bind to the .6.Np73 protein with high affinity can be used to detect the amount thereof. However, the use of an antibody is preferred, for example, polyclonal sera, hybridoma supernatants or monoclonal antibodies, antibody fragments, Fv, Fab, Fab 'and F (ab') 2, scFv, diabody, tria bodies, tetra humanized bodies and antibodies. On the market, there are commercial antibodies against the 'Np73 protein that can be used in the context of the present invention. There are many commercial houses that offer

anticuerpos frente a la proteína L!.Np73 (anticuerpos anti-L!.Np73), tales como Abcam, Gene Tex Acris Antibodies o Genway Biotech Inc., entre otros. antibodies against the L! .Np73 protein (anti-L! .Np73 antibodies), such as Abcam, Gene Tex Acris Antibodies or Genway Biotech Inc., among others.

En una realización particular, la cuantificación de los niveles de proteína D.Np73 se 5 realiza mediante westem blot, ELlSA o mediante un array de proteínas. In a particular embodiment, the quantification of D.Np73 protein levels is 5 performed by westem blot, ELlSA or by an array of proteins.

Alternativamente, es posible detectar cualquier variante funcionalmente equivalente de la proteina LlNp73. Alternatively, it is possible to detect any functionally equivalent variant of the LlNp73 protein.

10 En el contexto de la presente invención, el término Uvariante funcionalmente equivalente de la proteína L!.Np73" incluye (i) variantes de la proteína L!.Np73 en las que uno o más de los residuos de aminoácidos están sustituidos con un residuo de aminoácido conservado o no conservado (preferentemente un residuo de aminoácido conservado), en donde tal residuo de aminoácido sustituido puede ser o puede no ser In the context of the present invention, the term "functionally equivalent Uvariant of the protein L! .Np73" includes (i) variants of the protein L! .Np73 in which one or more of the amino acid residues are substituted with a residue of conserved or unconserved amino acid (preferably a conserved amino acid residue), wherein such a substituted amino acid residue may or may not be

15 uno codificado por el código genético, así como (ii) variantes que comprenden una inserción o una deleción de uno o más aminoácidos y que desempeñan la misma función que la proteína L!.Np73, es decir, ser capaz de inhibir la expresión de p53 y One encoded by the genetic code, as well as (ii) variants that comprise an insertion or a deletion of one or more amino acids and that perform the same function as the L! Protein. Np73, that is, to be able to inhibit the expression of p53 and

TAp73. TAp73.

20 Variantes de la proteína L!.Np73 de acuerdo con la presente invención, pueden identificarse usando métodos conocidos por un experto en la materia basados en analizar el efecto en el crecimiento celular (Ishimoro O. et al., Cancer Research 62, 636-641 , February 1, 2002) o analizando la inhibición de la apoptosis inducida por p73 (Nakagawa T. et al., Mol Cell Biol. 2002 April; 22(8): 2575-2585; Soldevilla B. et al., Variants of the L! .Np73 protein according to the present invention can be identified using methods known to a person skilled in the art based on analyzing the effect on cell growth (Ishimoro O. et al., Cancer Research 62, 636- 641, February 1, 2002) or by analyzing the inhibition of apoptosis induced by p73 (Nakagawa T. et al., Mol Cell Biol. 2002 April; 22 (8): 2575-2585; Soldevilla B. et al.,

25 Clin Cancer Res. 2011 Sept; 17(18): 6029-6039). Adicionalmente es posible identificar variantes de la proteína L!.Np73 mediante el análisis de la represión de p21 ICDKN1A o la modulación de la expresión de diversos genes, por ejemplo, la sobreexpresión de EGR1 y CDC6 o la represión de c-MYC, NFKB1 , tal y como describen Kartasheva y col. (Kartasheva NN. et al., Oneogene. 2003 Nov 13;22(51 ):8246-54). 25 Clin Cancer Res. 2011 Sept; 17 (18): 6029-6039). Additionally it is possible to identify variants of the L! .Np73 protein by analyzing the repression of p21 ICDKN1A or modulating the expression of various genes, for example, overexpression of EGR1 and CDC6 or repression of c-MYC, NFKB1, as described by Kartasheva et al. (Kartasheva NN. Et al., Oneogene. 2003 Nov 13; 22 (51): 8246-54).

Las variantes según la invención tienen preferentemente una identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de L!.Np73 de, al menos, el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 91 %, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 35 97%, al menos el 98% o al menos el 99%. El grado de identidad entre las variantes y las secuencias específicas de proteína L!.Np73 definidas anteriormente se determina The variants according to the invention preferably have a sequence identity with the amino acid sequence of L! Np73 of at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 35 97%, at least 98% or at least 99%. The degree of identity between the variants and the specific L! .Np73 protein sequences defined above is determined

usando algoritmos y procedimientos informáticos que son ampliamente conocidos para los expertos en la materia. La identidad entre dos secuencias de aminoácidos se determina preferentemente usando el algoritmo BLASTP [BLAST Manual, Altschul, S., y coL, NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894, Altschul, S., y coL, J. Mol. BioL 215: 403using algorithms and computer procedures that are widely known to those skilled in the art. The identity between two amino acid sequences is preferably determined using the BLASTP algorithm [BLAST Manual, Altschul, S., and coL, NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894, Altschul, S., and coL, J. Mol. BioL 215: 403

5 410 (1990)]. 5 410 (1990)].

Preferiblemente dichas variantes carecen del dominio de transactivación al igual que la proteína ó'Np73. El dominio de transactivación corresponde a los aminoácidos 1-62 de la proteína p73 que en humanos tiene la secuencia con número de acceso 015350 de Preferably said variants lack the transactivation domain just like the protein'Np73. The transactivation domain corresponds to amino acids 1-62 of the p73 protein that in humans has the sequence with access number 015350 of

10 la base de datos Uniprot a fecha 3 de junio de 2013. 10 the Uniprot database as of June 3, 2013.

En otra realización particular, la cuantificación del nivel de expresión de ó'Np73 se lleva a cabo a partir del ARNm que codifica la isoforma 'ó'Np73 (ARNm de LJNp73), es decir, el ARN resultante de la transcripción del gen p73 que codifica la isoforma ó'Np73, o, 15 alternativamente, a partir del ADN complementario (ADNc) de dicho ARNm. Por simplicidad, en ocasiones, mediante la expresión "LJNp73", se incluye tanto el ARNm que codifica la isoforma 'ó'Np73 como el ADNc correspondiente a dicho ARNm. Por tanto, en una realización particular, la cuantificación del nivel de expresión de ó'Np73 comprende la cuantificación del ARNm que contiene la secuencia que codifica la In another particular embodiment, the quantification of the expression level of o'Np73 is carried out from the mRNA encoding the isoform 'o'Np73 (mRNA of LJNp73), that is, the RNA resulting from the transcription of the p73 gene that encodes the isoform or'Np73, or, alternatively, from the complementary DNA (cDNA) of said mRNA. For simplicity, sometimes, by the expression "LJNp73", both the mRNA encoding the 'or'Np73 isoform and the cDNA corresponding to said mRNA are included. Therefore, in a particular embodiment, the quantification of the level of expression of''pp73 comprises the quantification of the mRNA containing the sequence encoding the

20 isoforma ó'Np73 del gen p73, o un fragmento de dicho ARNm, o la cuantificación del ADNc de dicho ARNm, o un fragmento de dicho ADNc, o sus mezclas. 20'73p isoform of the p73 gene, or a fragment of said mRNA, or the quantification of the cDNA of said mRNA, or a fragment of said cDNA, or mixtures thereof.

Para ello, la muestra biológica puede ser tratada para disgregar de forma física o mecánica la estructura del tejido o la célula, liberando los componentes intracelulares For this, the biological sample can be treated to physically or mechanically disintegrate the tissue or cell structure, releasing the intracellular components.

25 en una solución acuosa u orgánica para preparar los ácidos nucleicos. Los ácidos nucleicos se extraen mediante procedimientos conocidos para el experto en la materia y disponibles comercialmente (Sambroock, J., et aL, "Molecular cloning: a Laboratory Manual", 3rd ed ., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY., Vol. 1-3.) 25 in an aqueous or organic solution to prepare the nucleic acids. Nucleic acids are extracted by procedures known to those skilled in the art and commercially available (Sambroock, J., et al., "Molecular cloning: a Laboratory Manual", 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY., Vol. 1-3.)

30 Prácticamente cualquier método convencional puede ser utilizado dentro del marco de la presente invención para detectar y cuantificar el nivel del ARNm que codifica la isoforma .8.Np73 o de su ADNc correspondiente. A modo ilustrativo, no limitativo, el nivel de ARNm codificado por dicho gen puede ser cuantificado mediante el empleo de métodos convencionales, por ejemplo, métodos que comprenden la amplificación del Virtually any conventional method can be used within the framework of the present invention to detect and quantify the level of the mRNA encoding the .8.Np73 isoform or its corresponding cDNA. By way of illustration, not limitation, the level of mRNA encoded by said gene can be quantified by using conventional methods, for example, methods comprising amplification of the

35 ARNm y la cuantificación del producto de la amplificación de dicho ARNm, tales como electroforesis y tinción, o alternativamente, mediante Southern blot y empleo de MRNA and the quantification of the amplification product of said mRNA, such as electrophoresis and staining, or alternatively, by Southern blot and use of

sondas apropiadas, northem blot y el empleo de sondas específicas del ARNm que codifica la isoforma ó'Np73 o de su ADNc correspondiente, mapeo con la nucleasa 81 , RT-LCR, hibridación, microarrays, etc., preferentemente, mediante PCR cuantitativa a tiempo real usando un marcador apropiado. Análogamente, los niveles del ADNc 5 correspondiente a dicho ARNm que codifica la isoforma ó'Np73 también pueden ser cuantificados mediante el empleo de técnicas convencionales; en este caso, el método de la invención incluye una etapa de síntesis del correspondiente ADNc mediante transcripción inversa (RT) del ARNm correspondiente seguida de amplificación y cuantificación del producto de la amplificación de dicho ADNc. Métodos appropriate probes, northem blot and the use of specific mRNA probes that encodes the 'Np73 isoform or its corresponding cDNA, mapping with nuclease 81, RT-CSF, hybridization, microarrays, etc., preferably, by quantitative PCR at Real time using an appropriate marker. Similarly, cDNA levels 5 corresponding to said mRNA encoding the isoform or'Np73 can also be quantified through the use of conventional techniques; in this case, the method of the invention includes a step of synthesis of the corresponding cDNA by reverse transcription (RT) of the corresponding mRNA followed by amplification and quantification of the amplification product of said cDNA. Methods

10 convencionales de cuantificar los niveles de expresión pueden encontrarse , por ejemplo, en 8ambrook y cols. , 2001 . (citado ad supra). Conventional methods of quantifying expression levels can be found, for example, in 8ambrook et al. , 2001. (cited ad supra).

Estos métodos son conocidos y una persona experta en la materia estará familiarizada con las normalizaciones necesarias para cada técnica. Por ejemplo, las medidas de 15 expresión generadas utilizando la PCR multiplex deben ser normalizadas mediante la comparación de la expresión del gen que se mide con los llamados genes "housekeeping", la expresión de los cuales debe ser constante en todas las muestras, These methods are known and a person skilled in the art will be familiar with the necessary standards for each technique. For example, measures of expression generated using multiplex PCR should be normalized by comparing the expression of the gene that is measured with the so-called "housekeeping" genes, the expression of which must be constant in all samples,

proporcionando así una expresión basal para comparar, o con otros genes control cuya expresión se conoce que es modulada con el cáncer. thus providing a basal expression to compare, or with other control genes whose expression is known to be modulated with cancer.

20 En una realización particular, la cuantificación de los niveles de expresión de b.Np73 se realiza mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa o un array de ADN o ARN o mediante técnicas de hibridación de nucleótidos a partir del ARNm que codifica la isoforma ó'Np73 o de su ADNc correspondiente. In a particular embodiment, the quantification of the expression levels of b.Np73 is performed by a quantitative polymerase chain reaction (PCR) or an array of DNA or RNA or by nucleotide hybridization techniques from the mRNA that encodes the isoform or'Np73 or its corresponding cDNA.

25 Una vez determinados los niveles de b.Np73 en una muestra de un sujeto con cáncer es necesario comparar con un valor de referencia para saber si dichos niveles se encuentran incrementados en dicha muestra. 25 Once the levels of b.Np73 have been determined in a sample of a subject with cancer, it is necessary to compare with a reference value to know if these levels are increased in said sample.

30 El término "valor de referencia", tal como aquí se usa, se refiere a un valor obtenido en el laboratorio y utilizado como referencia para los valores o datos obtenidos mediante exámenes de laboratorio de los pacientes o muestras recogidas de pacientes. El valor de referencia o nivel de referencia puede ser un valor absoluto, un valor relativo, un valor que tiene un límite superior y/o inferior, un intervalo de valores, un valor medio, 30 The term "reference value", as used herein, refers to a value obtained in the laboratory and used as a reference for values or data obtained through laboratory tests of patients or samples collected from patients. The reference value or reference level may be an absolute value, a relative value, a value that has an upper and / or lower limit, a range of values, an average value,

35 un valor de la mediana, un valor medio, o un valor en comparación a un control determinado o valor de referencia. El valor de referencia puede estar basado en un valor de la muestra individual, como por ejemplo, un valor obtenido de una muestra del sujeto que esta siendo probada, pero en un momento anterior. El valor de referencia puede estar basado en un gran número de muestras, como los valores de la población de sujetos del mismo grupo de edad, o puede estar basado en un conjunto de 35 a median value, a mean value, or a value compared to a particular control or reference value. The reference value may be based on a value of the individual sample, such as a value obtained from a sample of the subject being tested, but at an earlier time. The reference value may be based on a large number of samples, such as population values of subjects of the same age group, or it may be based on a set of

5 muestras, incluyendo o excluyendo la muestra a ensayar. 5 samples, including or excluding the sample to be tested.

En una realización, el valor de referencia, tal como aquí se entiende, puede representar cantidades absolutas de .6.Np73. En otra realización, el nivel de expresión se puede determinar directamente en relación con el valor de referencia (por ejemplo, In one embodiment, the reference value, as understood herein, may represent absolute amounts of .6.Np73. In another embodiment, the level of expression can be determined directly in relation to the reference value (for example,

10 en términos de aumento o disminución, o aumento o disminución de número de veces). 10 in terms of increase or decrease, or increase or decrease in number of times).

En una realización preferida, el valor de referencia es el nivel de expresión del ARNm que codifica la isoforma .D..Np73, o de su ADNc, en una muestra controlo muestra de 15 referencia. Dependiendo del tipo de tumor a analizar, la naturaleza exacta del controlo muestra de referencia puede variar. Dicha muestra de referencia se obtiene típicamente combinando cantidades iguales de muestras de una población de sujetos. En general, las muestras de referencia típicas se obtendran de sujetos que estan clínicamente bien documentados. En tales muestras, las concentraciones normales 20 (de referencia) del biomarcador se pueden determinar, por ejemplo proporcionando la concentración media sobre la población de referencia. Al determinar la concentración de referencia del marcador se toman en cuenta varias consideraciones. Entre tales consideraciones estan la edad , peso, sexo, estado físico general del paciente y similares. Por ejemplo, se toman como grupo de referencia cantidades iguales de un In a preferred embodiment, the reference value is the expression level of the mRNA encoding the .D..Np73 isoform, or of its cDNA, in a control sample or reference sample. Depending on the type of tumor to be analyzed, the exact nature of the control reference sample may vary. Said reference sample is typically obtained by combining equal amounts of samples from a population of subjects. In general, typical reference samples will be obtained from subjects that are clinically well documented. In such samples, normal (reference) concentrations of the biomarker can be determined, for example by providing the average concentration over the reference population. When determining the reference concentration of the marker, several considerations are taken into account. Among such considerations are the age, weight, sex, general physical condition of the patient and the like. For example, equal amounts of one

25 grupo de al menos 2, al menos 10, al menos 100 a preferiblemente más de 1000 sujetos, preferiblemente clasificados según las consideraciones anteriores, por ejemplo de varias categorías de edad. La colección de muestras de las que deriva el nivel de referencia estara preferiblemente constituida por sujetos que padecen el mismo tipo de cancer que el paciente objeto de estudio. 25 group of at least 2, at least 10, at least 100 to preferably more than 1000 subjects, preferably classified according to the above considerations, for example of various age categories. The collection of samples from which the reference level derives will preferably consist of subjects suffering from the same type of cancer as the patient under study.

En una forma de realización particular, los valores de referencia para expresión "incrementada" de la expresión de .6.Np73 se determinan calculando los percentiles por medios convencionales que implica ensayar en una o varias muestras aisladas de sujetos en los que la enfermedad se encuentra bien documentada por alguno de los 35 métodos mencionados anteriormente los niveles de expresión de óNp73. Los niveles de expresión "incrementados" de D ..Np73 se pueden entonces asignar, preferiblemente, In a particular embodiment, the reference values for "increased" expression of the expression of .6.Np73 are determined by calculating the percentiles by conventional means that involves testing in one or several isolated samples of subjects in which the disease is found. Well documented by any of the 35 methods mentioned above the levels of expression of oPp73. The "increased" expression levels of D ..Np73 can then be assigned, preferably,

a muestras en donde los niveles de expresión de LlNp73 son iguales a o superan el percentil 50 en la población normal, incluyendo, por ejemplo, niveles de expresión iguales a o en exceso al percentil 60 en la población normal, iguales a o en exceso al percentil 70 en la población normal, iguales a o en exceso al percentil 80 en la to samples where the expression levels of LlNp73 are equal to or exceed the 50th percentile in the normal population, including, for example, expression levels equal to or in excess of the 60th percentile in the normal population, equal to or in excess of the 70th percentile in the normal population, equal to or in excess of the 80th percentile in the

5 población normal, iguales a o en exceso al percentil 90 en la población normal, e iguales a o en exceso al percentil 95 en la población normal. 5 normal population, equal to or in excess of the 90th percentile in the normal population, and equal to or in excess of the 95th percentile in the normal population.

En una realización particular, el sujeto que va a ser tratado según la presente invención presenta niveles de LlNp73 incrementados. In a particular embodiment, the subject to be treated according to the present invention has increased levels of LlNp73.

10 La expresión "nivel de expresión incrementado" en el sentido utilizado en esta descripción, indica que el nivel de expresión de ó Np73 es superior al valor de referencia. En particular, se puede considerar que una muestra presenta un nivel incrementado de expresión de LlNp73 con respecto a un valor de referencia cuando el 10 The expression "increased expression level" in the sense used in this description indicates that the expression level of or Np73 is higher than the reference value. In particular, a sample can be considered to have an increased level of expression of LlNp73 with respect to a reference value when the

15 nivel de expresión en la muestra del sujeto es, al menos, 1,1 veces, 1,5 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces, 100 veces, o incluso más, con respecto al valor de referencia. The level of expression in the subject's sample is at least 1.1 times, 1.5 times, 5 times, 10 times, 20 times, 30 times, 40 times, 50 times, 60 times, 70 times, 80 times , 90 times, 100 times, or even more, with respect to the reference value.

Métodos de la invención Methods of the invention

20 En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para seleccionar una terapia para el tratamiento del cáncer que padece un sujeto, en adelante "primer método de la invención", que comprende i) determinar el nivel de expresión de LlNp73 en una muestra procedente de dicho In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a therapy for the treatment of cancer that a subject suffers, hereinafter "first method of the invention", which comprises i) determining the level of expression of LlNp73 in a sample from said

25 sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de L!.Np73 obtenido en la etapa i) con un valor de referencia, en donde si el nivel de expresión de L!.Np73 está incrementado con respecto a dicho valor de referencia , entonces se selecciona una terapia que comprende [325 subject, and ii) compare the expression level of L! .Np73 obtained in step i) with a reference value, where if the expression level of L! .Np73 is increased with respect to said reference value, a therapy is then selected comprising [3

30 criptoxantina. 30 cryptoxanthin.

En una realización particular del primer método de la invención dicha terapia que comprende j3-criptoxantina comprende únicamente la administración de 13criptoxantina. En otra realización particular del primer método de la invención dicha In a particular embodiment of the first method of the invention said therapy comprising j3-cryptoxanthin comprises only the administration of 13criptoxanthin. In another particular embodiment of the first method of the invention said

35 terapia que comprende j3-criptoxantina comprende la administración de j3-criptoxantina y, además, la administración de un agente antitumoral, tal como un agente antitumoral empelado en quimioterapia o inmunoterapia en el tratamiento del cáncer. Ejemplos ilustrativos de dichos agentes antitumorales se han mencionado previamente en relación con la composición de la invención o con la composición farmacéutica de la invención. En una realización particular, dicho agente antitumoral es un agente a base Therapy comprising j3-cryptoxanthin comprises the administration of j3-cryptoxanthin and, in addition, the administration of an antitumor agent, such as an antitumor agent employed in chemotherapy or immunotherapy in the treatment of cancer. Illustrative examples of said antitumor agents have been mentioned previously in relation to the composition of the invention or the pharmaceutical composition of the invention. In a particular embodiment, said antitumor agent is a base agent.

5 de platino, tal como, por ejemplo, oxaliplatino. Los ensayos realizados por los inventores han puesto de manifiesto que la combinación de j3-criptoxantina y oxaliplatino permite reducir la dosis de oxaliplatino a administrar al sujeto que padece cáncer. 5 platinum, such as, for example, oxaliplatin. The tests carried out by the inventors have shown that the combination of j3-cryptoxanthin and oxaliplatin allows reducing the dose of oxaliplatin to be administered to the subject suffering from cancer.

10 En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para seleccionar una terapia para el tratamiento del cáncer que padece un sujeto y que está siendo tratado con oxaliplatino, en adelante "segundo método de la invención", que comprende: In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a therapy for the treatment of cancer that a subject suffers from and is being treated with oxaliplatin, hereinafter "second method of the invention", which comprises:

i) determinar el nivel de expresión de b.Np73 en una muestra procedente de dicho sujeto, y 15 ii) comparar el nivel de expresión de b.Np73 obtenido en la etapa i) con un valor i) determine the expression level of b.Np73 in a sample from said subject, and ii) compare the expression level of b.Np73 obtained in step i) with a value

de referencia, en donde si el nivel de expresión de L!.Np73 está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona una terapia que comprende j3-criptoxantina para su administración a dicho sujeto que padece un cáncer y que está siendo tratado reference, where if the level of expression of L! .Np73 is increased with respect to said reference value, then a therapy comprising j3-cryptoxanthin is selected for administration to said subject suffering from cancer and being treated

20 con oxaliplatino. 20 with oxaliplatin.

De acuerdo con el segundo método de la invención , se selecciona una terapia a base de j3-criptoxantina para su administración a un sujeto que padece cáncer y que está siendo sometido a tratamiento con oxaliplatino, si presenta un nivel de expresión de In accordance with the second method of the invention, a therapy based on j3-cryptoxanthin is selected for administration to a subject suffering from cancer and being undergoing treatment with oxaliplatin, if it has a level of expression of

25 L!.Np73 incrementado con respecto al valor de referencia; en este caso, la administración de j3-criptoxantina a dicho sujeto potenciaría el efecto antitumoral mediado por el oxaliplatino y/o permite reducir la dosis de oxaliplatino a administrar al sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino, lo que disminuiría los efectos secundarios asociados al empleo de dosis más altas de oxaliplatino. 25 L! .Np73 increased with respect to the reference value; in this case, the administration of j3-cryptoxanthin to said subject would enhance the anti-tumor effect mediated by oxaliplatin and / or reduce the dose of oxaliplatin to be administered to the subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin, which would decrease the effects side effects associated with the use of higher doses of oxaliplatin.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitre para seleccionar un sujeto que padece cáncer para una terapia que comprende j3-criptoxantina, en adelante "tercer método de la invención", que comprende: i) determinar el nivel de expresión de L!.Np73 en una muestra procedente de dicho In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a subject suffering from cancer for a therapy comprising j3-cryptoxanthin, hereinafter "third method of the invention", comprising: i) determining the level of expression of L! .Np73 in a sample from said

35 sujeto, y 35 subject, and

ii) comparar el nivel de expresión de L!.Np73 obtenido en la etapa i) con un valor ii) compare the expression level of L! .Np73 obtained in step i) with a value

de referencia, en donde si el nivel de expresión de .l!.Np73 está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona dicho paciente para dicha terapia que reference, where if the expression level of .l! .Np73 is increased with respect to said reference value, then said patient is selected for said therapy which

5 comprende ¡3-criptoxantina. 5 comprises 3-cryptoxanthin.

En una realización particular del tercer método de la invención dicha terapia que comprende ¡3-criptoxantina comprende únicamente la administración de ¡3criptoxantina. En otra realización particular del tercer método de la invención dicha In a particular embodiment of the third method of the invention said therapy comprising ¡3-cryptoxanthin comprises only the administration of ¡3criptoxanthin. In another particular embodiment of the third method of the invention said

10 terapia que comprende ¡3-criptoxantina comprende la administración de ¡3-criptoxantina y, además, la administración de un agente antitumoral, tal como un agente antitumoral empelado en quimioterapia o inmunoterapia en el tratamiento del cáncer. Ejemplos ilustrativos de dichos agentes antitumorales se han mencionado previamente en relación con la composición de la invención o con la composición farmacéutica de la Therapy comprising 3-cryptoxanthin comprises the administration of 3-cryptoxanthin and, in addition, the administration of an antitumor agent, such as an antitumor agent employed in chemotherapy or immunotherapy in the treatment of cancer. Illustrative examples of said antitumor agents have been mentioned previously in connection with the composition of the invention or with the pharmaceutical composition of the

15 invención. En una realización particular, dicho agente antitumoral es un agente a base de platino, tal como, por ejemplo, oxaliplatino. Los ensayos realizados por los inventores han puesto de manifiesto que la combinación de ¡3-criptoxantina y oxaliplatino permite reducir la dosis de oxaliplatino a administrar al sujeto que padece cáncer. 15 invention. In a particular embodiment, said antitumor agent is a platinum-based agent, such as, for example, oxaliplatin. The tests carried out by the inventors have shown that the combination of 3-cryptoxanthin and oxaliplatin allows reducing the dose of oxaliplatin to be administered to the subject suffering from cancer.

20 En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para seleccionar un sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para una terapia que comprende ¡3-criptoxantina, en adelante Ucuarto método de la invención", que comprende: In another aspect, the invention relates to an in vitro method for selecting a subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin for a therapy comprising 3-cryptoxanthin, hereinafter a fourth method of the invention ", comprising:

25 i) determinar el nivel de expresión de L!.Np73 en una muestra procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de .l!.Np73 obtenido en la etapa i) con un valor de referencia, en donde si el nivel de expresión de L!.Np73 está incrementado con respecto a dicho 30 valor de referencia, entonces se selecciona dicho sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para dicha terapia que comprende ¡3-criptoxantina. I) determine the level of expression of L! .Np73 in a sample from said subject, and ii) compare the level of expression of .l! .Np73 obtained in step i) with a reference value, where if The expression level of L! .Np73 is increased with respect to said reference value, then said subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin is selected for said therapy comprising 3-cryptoxanthin.

De acuerdo con el cuarto método de la invención, se selecciona un sujeto que padece cáncer y que está siendo sometido a tratamiento con oxaliplatino para que reciba una 35 terapia a base de ¡3-criptoxantina, si dicho sujeto presenta un nivel de expresión de L!.Np73 incrementado con respecto al valor de referencia; en este caso, la According to the fourth method of the invention, a subject suffering from cancer is selected and is being treated with oxaliplatin to receive a therapy based on 3-cryptoxanthin, if said subject has an expression level of L ! .Np73 increased with respect to the reference value; in this case, the

administración de ¡3-criptoxantina a dicho sujeto potenciaría el efecto antitumoral mediado por el oxaliplatino y/o permite reducir la dosis de oxaliplatino a administrar al administration of ¡3-cryptoxanthin to said subject would enhance the anti-tumor effect mediated by oxaliplatin and / or reduce the dose of oxaliplatin to be administered to the

sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino, lo que disminuiría los efectos secundarios asociados al empleo de dosis mas altas de oxaliplatino. subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin, which would decrease the side effects associated with the use of higher doses of oxaliplatin.

Los métodos de la invención [primer método de la invención, segundo método de la invención, tercer método de la invención y cuarto método de la invención] comprenden en un primer paso [etapa i)) determinar el nivel de expresión de .ÓoNp73 en una muestra de dicho sujeto. Los términos "nivel de expresión", ".ÓoNp73", "muestra" y "sujeto" ya The methods of the invention [first method of the invention, second method of the invention, third method of the invention and fourth method of the invention] comprise in a first step [step i)) determining the expression level of .ÓoNp73 in a sample of said subject. The terms "expression level", ".ÓoNp73", "sample" and "subject" already

10 han sido definidos previamente en detalle en relación con los usos de las composiciones proporcionadas por la presente invención, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia, y son igualmente aplicables a los métodos de la invención. 10 have been previously defined in detail in relation to the uses of the compositions provided by the present invention, the contents of which are incorporated herein by reference, and are equally applicable to the methods of the invention.

El nivel de expresión de .Óo Np73 en una muestra puede determinarse tal como se ha The expression level of .Óo Np73 in a sample can be determined as it has been

15 mencionado previamente en relac i ón con los usos de las composiciones proporcionadas por la presente invención, cuyo contenido se incorpora aqu í por referencia. 15 mentioned previously in relation to the uses of the compositions provided by the present invention, the content of which is incorporated herein by reference.

En una realización particular, el nivel de expresión de L!.Np73 se determina 20 cuantificando el nivel de la proteína .ÓoNp73, o de una variante funcionalmente equivalente de la misma, tal como se ha indicado previamente en relación con los usos de las composiciones proporcionadas por la presente invención, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. En una realización preferida, el nivel de expresión de .ÓoNp73 se cuantifica por medio de un ensayo inmunológico mediante el empleo de un In a particular embodiment, the expression level of L! .Np73 is determined by quantifying the level of the .Óopp73 protein, or a functionally equivalent variant thereof, as previously indicated in relation to the uses of the compositions. provided by the present invention, the content of which is incorporated herein by reference. In a preferred embodiment, the expression level of .Onp73 is quantified by means of an immunological assay by employing a

25 anticuerpo que reconoce .ÓoNp73, o una variante funcionalmente equivalente de la misma. 25 antibody that recognizes .ÓoNp73, or a functionally equivalent variant thereof.

En otra realización particular, el nivel de expresión de L!.Np73 se determina cuantificando el nivel del ARNm que codifica la isoforma 6.Np73 (ARNm de LlNp73), o In another particular embodiment, the expression level of L! .Np73 is determined by quantifying the level of the mRNA encoding the 6.Np73 isoform (LlNp73 mRNA), or

30 de un fragmento de dicho ARNm, o cuantificando el nivel de ADNc de dicho ARNm, o de un fragmento de dicho ADNc. En una realización preferida, el nivel de expresión de .ÓoNp73 se cuantifica por medio de una PCR cuantitativa o por medio de una matriz de ADN o de ARN o mediante técnicas de hibridación de nucleótidos a partir de dicho ARNm o ADNC correspondiente. 30 of a fragment of said mRNA, or by quantifying the level of cDNA of said mRNA, or of a fragment of said cDNA. In a preferred embodiment, the expression level of .Onp73 is quantified by means of a quantitative PCR or by means of a DNA or RNA matrix or by nucleotide hybridization techniques from said corresponding mRNA or cDNA.

En la etapa ii), los métodos de la invención (primer método de la invención, segundo método de la invención, tercer método de la invención y cuarto método de la invención] In step ii), the methods of the invention (first method of the invention, second method of the invention, third method of the invention and fourth method of the invention]

comprenden comparar el nivel de expresión de .6.Np73 en la muestra del sujeto obtenido en la etapa i) con un valor de referencia y, si el nivel de expresión de .6.Np73 5 en dicha muestra está incrementado con respecto a dicho valor de referencia , entonces: comprise comparing the expression level of .6.Np73 in the subject's sample obtained in step i) with a reference value and, if the expression level of .6.Np73 5 in said sample is increased with respect to said reference value, so:

se selecciona una terapia que comprende j3-criptoxantina para su administración a un sujeto que padece cáncer (primer método de la invención]; a therapy comprising j3-cryptoxanthin is selected for administration to a subject suffering from cancer (first method of the invention);

10 o 10 or

se selecciona una terapia que comprende j3-criptoxantina para su a therapy comprising j3-cryptoxanthin is selected for its

administración a dicho sujeto que padece un cáncer y que está siendo tratado administration to said subject suffering from cancer and being treated

con oxaliplatino; o with oxaliplatin; or

se selecciona dicho sujeto que padece cáncer para una terapia que comprende j3-criptoxantina; o said subject suffering from cancer is selected for a therapy comprising j3-cryptoxanthin; or

se selecciona dicho sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con 20 oxaliplatino para una terapia que comprende j3-criptoxantina. said subject suffering from cancer is selected and is being treated with oxaliplatin for a therapy comprising j3-cryptoxanthin.

El término "valor de referencia" así como el significado de nivel de expresión "incrementado" aplicado a .6.Np73 ya han sido definidos previamente en detalle en relación con los usos de las composiciones proporcionadas por la presente invención, 25 cuyo contenido se incorpora aquí por referencia , y son igualmente aplicables a los métodos de la invención. Asimismo, la manera de comparar el nivel de expresión de L!.Np73 obtenido en la muestra del sujeto con el valor de referencia también ha sido descrito en detalle en relación con los usos de las composiciones proporcionadas por la presente invención, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia, y es aplicable a The term "reference value" as well as the meaning of "increased" expression level applied to .6.Np73 have already been previously defined in detail in relation to the uses of the compositions provided by the present invention, the content of which is incorporated here by reference, and are equally applicable to the methods of the invention. Likewise, the way of comparing the level of expression of L! .Np73 obtained in the subject's sample with the reference value has also been described in detail in relation to the uses of the compositions provided by the present invention, the content of which is incorporated here by reference, and is applicable to

30 los métodos de la invención. The methods of the invention.

En realizaciones particulares de dichos métodos de la invención (primer método de la invención, segundo método de la invención, tercer método de la invención y cuarto método de la invención] dicho cáncer es un tipo de cáncer caracterizado porque sus 35 células muestran un nivel incrementado de .6.Np73 con respecto a un valor de In particular embodiments of said methods of the invention (first method of the invention, second method of the invention, third method of the invention and fourth method of the invention) said cancer is a type of cancer characterized in that its cells show an increased level of .6.Np73 with respect to a value of

referencia. El experto en la materia puede identificar fácilmente si las células de un determinado tipo de cáncer exhiben un nivel de expresión de .6.Np73 incrementado (superior, mayor o más alto que) con respecto a un valor de referencia por métodos convencionales, conocidos por los técnicos en la materia, para cuantificar el nivel de 5 expresión de .6.Np73, tales como los métodos descritos en la presente descripción, basados en la cuantificación del nivel de la proteína .6.Np73 o del ARNm que codifica la isoforma .6.Np73, o del ADNc correspondiente. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de dichos tipos de cáncer cuyas células muestran un nivel incrementado de .6.Np73 con respecto a un valor de referencia incluyen cáncer colorectal (CCR), cáncer de esófago, reference. The person skilled in the art can easily identify if the cells of a certain type of cancer exhibit an increased level of expression of .6.Np73 (higher, higher or higher than) with respect to a reference value by methods conventional, known to those skilled in the art, to quantify the level of 5 expression of .6.Np73, such as the methods described in the present description, based on the quantification of the level of the .6.Np73 protein or of the mRNA encoding the isoform .6.Np73, or the corresponding cDNA. Illustrative, non-limiting examples of said types of cancer whose cells show an increased level of .6.Np73 with regarding a reference value include colorectal cancer (RCC), esophageal cancer,

10 cáncer gástrico, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de médula ósea, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de tiroide, leucemia, o neuroblastoma. En una realización concreta, dicho cáncer es CCR. 10 gastric cancer, liver cancer, breast cancer, bone marrow cancer, ovarian cancer, prostate cancer, lung cancer, thyroid cancer, leukemia, or neuroblastoma. In a specific embodiment, said cancer is CCR.

En una realización particular, la ¡3-criptoxantina se administra por vía oral o parenteral. In a particular embodiment, 3-cryptoxanthin is administered orally or parenterally.

En otra realización particular. el oxaliplatino se administra por vía oral o parenteral. In another particular embodiment. Oxaliplatin is administered orally or parenterally.

En otra realización particular, el oxaliplatino y la ~-criptoxantina se administran conjuntamente. En otra realización particular, el oxaliplatino y la ¡3-criptoxantina se 20 administran separadamente. En otra realización particular, el oxaliplatino y la ¡3criptoxantina se administran simultáneamente. En otra realización particular, el In another particular embodiment, oxaliplatin and ~ -criptoxanthin are co-administered. In another particular embodiment, oxaliplatin and 3-cryptoxanthin are administered separately. In another particular embodiment, oxaliplatin and 3criptoxanthin are administered simultaneously. In another particular embodiment, the

oxaliplatino y la ~-criptoxantina se administran secuencialmente, de forma separada en el tiempo, en cualquier orden . Oxaliplatin and ~ -criptoxanthin are administered sequentially, separately over time, in any order.

25 En otro aspecto , la invención se relaciona con un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto en necesidad de tratamiento, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéutica mente eficiente de ¡3-criptoxantina, o de una composición que comprende oxaliplatino y ¡3-criptoxantina, o de (i) una composición que comprende oxaliplatino y (ii) una composición que comprende j3-criptoxantina. In another aspect, the invention relates to a method for the treatment of cancer in a subject in need of treatment, which comprises the administration to said subject of a therapeutically efficient amount of 3-cryptoxanthin, or of a composition comprising oxaliplatin and ¡3-cryptoxanthin, or (i) a composition comprising oxaliplatin and (ii) a composition comprising j3-cryptoxanthin.

30 En otro aspecto , la in vención se relaciona con un método para el tratamiento del cáncer en un sujeto sometido a tratamiento con oxaliplatino, en necesidad de tratamiento, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente eficiente de ¡3-criptoxantina. In another aspect, the invention relates to a method for the treatment of cancer in a subject undergoing treatment with oxaliplatin, in need of treatment, which comprises administering to said subject a therapeutically efficient amount of 3-cryptoxanthin.

Las características de dichas composiciones así como del cáncer ya han sido mencionadas previamente y se incorporan aquí por referencia. The characteristics of said compositions as well as of cancer have already been mentioned previously and are incorporated herein by reference.

La invención se describe ahora en detalle por medio de los siguientes ejemplos que se 5 deben considerar como meramente ilustrativos y no limitantes del ámbito de la invención. The invention is now described in detail by means of the following examples which are 5 should be considered as merely illustrative and not limiting the scope of the invention.

EJEMPLOS En los Ejemplos se han utilizado los Materiales y Métodos que se describen a 10 continuación. EXAMPLES In the Examples, the Materials and Methods described below have been used.

Materiales y Métodos Materials and methods

Cultivos celulares Cell cultures

Las distintas líneas celulares utilizadas fueron compradas a la American Type Culture Collection (ATCC) y crecidas en monocapa en medio DMEM o RPMI (Lonza Group Ud., Switzerland) suplementado con 10% de suero fetal bovino, L-glutamina 4 mmol/L y antibióticos (100 U/ml penicilina y 100 J.Jg/ml estreptomicina). Las células SW480The different cell lines used were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC) and grown in monolayer in DMEM or RPMI medium (Lonza Group Ud., Switzerland) supplemented with 10% fetal bovine serum, L-glutamine 4 mmol / L and antibiotics (100 U / ml penicillin and 100 J.Jg / ml streptomycin). SW480 cells

20 ADH son una subpoblación derivada de la línea celular SW480 (Aguilera y col. Carcinogenesis 28: 1877-1884, 2007). 20 ADHs are a subpopulation derived from the SW480 cell line (Aguilera et al. Carcinogenesis 28: 1877-1884, 2007).

Preparación de la solución de 8-criptoxantina Preparation of the 8-cryptoxanthin solution

25 Se preparó una solución stock de j3-criptoxantina (5 mmol/L) disolviendo la 13criptoxantina comprada en polvo (Extrasynthese, Lyon, France) en tetrahidrofurano (THF). Esta solución se conserva a -20°C. A stock solution of j3-cryptoxanthin (5 mmol / L) was prepared by dissolving the purchased 13criptoxanthin powder (Extrasynthese, Lyon, France) in tetrahydrofuran (THF). This solution is stored at -20 ° C.

Tratamiento de las células con 8-criptoxantina Treatment of cells with 8-cryptoxanthin

Las soluciones stock de j3-criptoxantina se descongelaron y se añadieron a la concentración final deseada a las placas donde crecían las células. Se tu vo en cuenta que la concentración final de THF en la placa de cultivo fuera de 0,2% vlv, para que no resultara tóxico. Las células en los experimentos controles (donde no se añadía 1335 criptoxantina) recibieron solo THF. Las células se sembraron en placas convencionales de cultivo de 6 pocillos (2x105 células/pocillo) y se comenzó el Stock solutions of j3-cryptoxanthin were thawed and added to the desired final concentration to the plates where the cells grew. Be aware that the final THF concentration in the culture plate was 0.2% vlv, so that it would not be toxic. The cells in the control experiments (where 1335 cryptoxanthin was not added) received only THF. The cells were seeded in conventional 6-well culture plates (2x105 cells / well) and the

tratamiento al día siguiente para permitir que las células se adhirieran a la placa. Posteriormente las células se trataron con medio suplementado con ¡3-criptoxantina o treatment the next day to allow the cells to adhere to the plaque. Subsequently the cells were treated with medium supplemented with 3-cryptoxanthin or

THF. El medio celular fue renovado cada 24 horas. Todo este proceso se llevó a cabo en la oscuridad , ya que la l3-criptoxantina es sensible a la luz. THF. The cellular medium was renewed every 24 hours. This whole process was carried out in the dark, since l3-cryptoxanthin is sensitive to light.

Extracción de B-criptoxantina de las células y análisis de sus niveles por cromatografía líquida de ultra alta resolución (U-HLPCl Extraction of B-cryptoxanthin from cells and analysis of their levels by ultra high resolution liquid chromatography (U-HLPCl

Tras el tratamiento con ¡3-criptoxantina, el medio de cultivo se recogió, las células se After treatment with 3-cryptoxanthin, the culture medium was collected, the cells were

10 tripsinizaron, se lavaron con PBS y se resuspendieron en PBS. 20 IJL de la suspensión se utilizaron para con taje del número total de células (ADAM Cell counter, Digital Bio). La l3-criptoxantina del medio y la ¡3-criptoxantina intracelular se determinaron mediante U-HPLC (Granado y col., Anal Bioanal Chem 397: 1389-1393, 2010). 10 trypsinized, washed with PBS and resuspended in PBS. 20 IJL of the suspension were used for the total number of cells (ADAM Cell counter, Digital Bio). The l3-cryptoxanthin in the medium and the intracellular ¡3-cryptoxanthin were determined by U-HPLC (Granado et al., Anal Bioanal Chem 397: 1389-1393, 2010).

15 Extracción de ARN retro-transcripción y PCR array. Validación por RT-PCR 15 Extraction of retro-transcription RNA and PCR array. RT-PCR validation

El ARN total fue extra ido siguiendo el protocolo del TRlsure reagent (Bioline) y cuantificado mediante el empleo de un espectrofotómetro NanoDrop (NanoDrop, Wilmington, DE). Para la síntesis de la primera hebra de ADNc, 400 ng de ARN fueron Total RNA was extracted following the TRlsure reagent (Bioline) protocol and quantified using a NanoDrop spectrophotometer (NanoDrop, Wilmington, DE). For the synthesis of the first strand of cDNA, 400 ng of RNA were

20 retro-transcritos mediante el kit Gold RNA PCR Core Kit (Applied Biosystems). Se utilizaron hexámeros aleatorios ("random") como cebadores para esta síntesis de ADNc. 20 retro-transcribed using the Gold RNA PCR Core Kit (Applied Biosystems). Random ("random") hexamers were used as primers for this cDNA synthesis.

Para el ensayo de los PCR arrays se utilizaron los PCR arrays "RT2 Profiler DNA PCR arrays were used for the PCR arrays "RT2 Profiler DNA

25 damage signaling pathway PCR array" (PAHS-029, SABiosciences, CA) y "RT2 Profiler p53 signaling pathway PCR array" (PAHS-027, SABiosciences, CA). Los datos se analizaron con el software que proporciona SABiosciences. 25 damage signaling pathway PCR array "(PAHS-029, SABiosciences, CA) and" RT2 Profiler p53 signaling pathway PCR array "(PAHS-027, SABiosciences, CA). The data was analyzed with the software provided by SABiosciences.

Para los ensayos de RT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real) se For the RT-PCR assays (polymerase chain reaction in real time)

30 ha utilizado el kit LightCycler-FastStart DNA Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Cada reacción se llevó a cabo en un volumen final de 20 ¡.JI que contenía 2 IJI de ADNc, 0,5 IJM de cada cebador (primer) y 1x de mezcla incluida en el kit. 30 has used the LightCycler-FastStart DNA Master SYBR Green I Kit (Roche Diagnostics). Each reaction was carried out in a final volume of 20¡JI containing 2 IJI of cDNA, 0.5 IJM of each primer (first) and 1x of mixture included in the kit.

Los cebadores para TAp73 y 6.Np73 Y sus condiciones han sido descritos con 35 anterioridad (Dominguez y col., J Clin Oncol. 24: 805-815, 2006). La expresión del gen SOHA (succinato dehidrogenasa) ha sido utilizada para normalizar los niveles de expresión. The primers for TAp73 and 6.Np73 and their conditions have been described previously (Dominguez et al., J Clin Oncol. 24: 805-815, 2006). The expression of the SOHA (succinate dehydrogenase) gene has been used to normalize expression levels.

Transfecciones Transfections

Para forzar la expresión de ~Np73, las células fueron transfectadas con un plásmido pcDNA que contenia a LlNp73 (Soldevilla et al., Clin Cancer Research 17(18):6029-39, 2011) usando lipofectamina 2000 (lnvitrogen); como control se ha utilizado el vector vacío (Soldevilla et al., Clin Cancer Research 17(18):6029-39, 2011). To force the expression of ~ Np73, cells were transfected with a pcDNA plasmid containing LlNp73 (Soldevilla et al., Clin Cancer Research 17 (18): 6029-39, 2011) using lipofectamine 2000 (lnvitrogen); The empty vector has been used as control (Soldevilla et al., Clin Cancer Research 17 (18): 6029-39, 2011).

Ensayos de apoptosis Apoptosis Assays

Las células se crecieron en placas de 24 pocillos. Tras 24 horas para permitir la adhesión de las células, estas fueron pre-tratadas con j3-criptoxantina durante 12-24 15 horas. Posteriormente, las células se trataron durante 48 horas con oxaliplatino en el caso del tratamiento combinado. En el caso del tratamiento individual con el quimioterápico, las células fueron pretratadas con el vehículo durante 12-24 horas y posteriormente con oxaliplatino durante 48 horas. El medio se renovó cada 24 horas. Finalmente, las células adheridas y las que flotaban en el medio fueron recolectadas y The cells were grown in 24-well plates. After 24 hours to allow cell adhesion, they were pre-treated with j3-cryptoxanthin for 12-24-15 hours. Subsequently, the cells were treated for 48 hours with oxaliplatin in the case of the combined treatment. In the case of individual chemotherapy treatment, the cells were pretreated with the vehicle for 12-24 hours and subsequently with oxaliplatin for 48 hours. The medium was renewed every 24 hours. Finally, the attached cells and those that floated in the middle were collected and

20 evaluadas por citometría de flujo utilizando anexina V-FITC/PI (80 Pharmigen). 20 evaluated by flow cytometry using annexin V-FITC / PI (80 Pharmigen).

Ensayo MIT de viabilidad y proliferación celular MIT viability and cell proliferation assay

Para este ensayo las células se crecieron en placas de 96 pocillos. Tras dejar que se For this test the cells were grown in 96-well plates. After letting it

25 adhirieran, se trataron como se ha descrito en el apartado anterior. Tras los tratamientos, se testó la viabilidad celular mediante un ensayo MIT (Cayman Chemical Company) siguiendo el protocolo suministrado por esta compañía. Para el ensayo de proliferación a las 24 horas, una vez que se adhirieron a la placa, las células se trataron con j3-criptoxantina 10 IJM durante 3, 6, 8 Y 10 días. En los 25 adhere, were treated as described in the previous section. After the treatments, the cell viability was tested by an MIT test (Cayman Chemical Company) following the protocol provided by this company. For the 24-hour proliferation assay, once they adhered to the plaque, the cells were treated with j3-cryptoxanthin 10 IJM for 3, 6, 8 and 10 days. In the

30 experimentos en los que se testó el efecto del oxaliplatino, éste se añadió 48 horas antes de la finalización del experimento. 30 experiments in which the effect of oxaliplatin was tested, it was added 48 hours before the end of the experiment.

Ensayos en animales de experimentación Experiments in experimental animals

35 Todos los experimentos se han llevado a cabo siguiendo las regulaciones del Comité de Bienestar Animal del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda (Madrid , España). Se inyectaron subcutáneamente 1)(106 células HCT-116 (células de carcinoma de colon humano) en 20 % de matrigel a ratones inmunodeprimidos (Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu mice, hembras, 5 semanas de edad, Harlan Laboratories). El tamaño de los tumores formados se midió con un calibre. El volumen 35 All experiments have been carried out following the regulations of the Animal Welfare Committee of the Puerta de Hierro Majadahonda University Hospital (Madrid, Spain). 1) (106 HCT-116 cells (human colon carcinoma cells) in 20% matrigel were injected into immunosuppressed mice (Hsd: Athymic Nude-Foxn1nu mice, females, 5 weeks old, Harlan Laboratories). The tumors formed were measured with a caliber. Volume

5 tumoral se calculó mediante la fórmula [1] 5 tumor was calculated using the formula [1]

V=O .5ab' [1 J V = O. 5ab '[1 J

donde 'a' y 'b' indican el diámetro mayor y menor, respectivamente. where 'a' and 'b' indicate the largest and smallest diameter, respectively.

Cuando los tumores alcanzaron un tamaño comprendido entre 75 mm J y 150 mmJ, fueron asignados arbitrariamente en 4 grupos (7 ratones por grupo). Uno de los grupos fue tratado con vehículo (THF, 0,2% v/v) y un segundo grupo recibió ¡3-criptoxantina (10 iJM) como único tratamiento. El tercer y el cuarto grupo, a los que se administró 15 oralmente vehículo (0,2% v/v) o ¡3-criptoxantina (10 JJM), comenzaron el tratamiento con oxaliplatino (3 mg/kg) cuando el tamaño tumoral alcanzó los 250-300 mmJ. El vehículo (THF, 0,2% v/v) o la j3-criptoxantina (10 iJM) fueron administrados por vía oral When the tumors reached a size between 75 mm J and 150 mmJ, they were arbitrarily assigned in 4 groups (7 mice per group). One of the groups was treated with vehicle (THF, 0.2% v / v) and a second group received 3-cryptoxanthin (10 iJM) as the only treatment. The third and fourth group, which were administered orally with vehicle (0.2% v / v) or ¡3-cryptoxanthin (10 JJM), began treatment with oxaliplatin (3 mg / kg) when the tumor size reached 250-300 mmJ. The vehicle (THF, 0.2% v / v) or j3-cryptoxanthin (10 iJM) were administered orally

diariamente durante todo el tratamiento. El oxaliplatino se administró intraperitonealmente durante 5 días, seguido de 5 días de descanso (el vehiculo o la 20 j3-criptoxantina se siguieron administrando durante el periodo de descanso). Se repitió este ciclo dos veces. daily throughout the treatment. Oxaliplatin was administered intraperitoneally for 5 days, followed by 5 days off (the vehicle or the 20 j3-cryptoxanthin was continued to be administered during the rest period). This cycle was repeated twice.

En un experimento adicional, un grupo de ratones se trató con j3-criptoxantina por vía intraperitoneal junto con una dosis de 1,5 mg/kg (5 ratones) o de 3 mg/kg (5 ratones) In a further experiment, a group of mice was treated with j3-cryptoxanthin intraperitoneally along with a dose of 1.5 mg / kg (5 mice) or 3 mg / kg (5 mice)

25 de oxaliplatino (Lp.) para comprobar el efecto de la j3-criptoxantina por esta vía de administración. El grupo de ratones control fueron tratados con oxaliplatino a ambas dosis y vehículo administrado intraperitonealmente. 25 oxaliplatin (Lp.) To check the effect of j3-cryptoxanthin by this route of administration. The group of control mice were treated with oxaliplatin at both doses and intraperitoneally administered vehicle.

Análisis de toxicidad Toxicity analysis

30 Para determinar la toxicidad de los diferentes tratamientos se realizó un seguimiento del peso de los animales a lo largo del tratamiento y el análisis de diferentes parámetros bioquímicos (creatinina, bilirrubina, albúmina, gamma-glutamintransferasa, aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT» 30 To determine the toxicity of the different treatments, the weight of the animals was monitored throughout the treatment and the analysis of different biochemical parameters (creatinine, bilirubin, albumin, gamma-glutamintransferase, aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase ( ALT »

Análisis estadístico Las diferencias entre condiciones experimentales han sido evaluadas usando el test TStudent. En los estudios con animales, los resultados se representan como la media ± desviación estándar de al menos 3 experimentos independientes. El test de Levene se Statistical analysis Differences between experimental conditions have been evaluated using the TStudent test. In animal studies, the results are represented as the mean ± standard deviation of at least 3 independent experiments. Levene's test is

5 ha utilizado para calcular la igualdad de varianzas. Valores de dos colas de p s 0,05 se han considerado estadísticamente significativas. Los análisis se han llevado a cabo utilizando el paquete estad ístico SPSS version 14.0 (SPSS Inc, Chicago, IL). 5 has been used to calculate the equality of variances. Two-tailed values of p s 0.05 se have considered statistically significant. The analyzes have been carried out using the statistical package SPSS version 14.0 (SPSS Inc, Chicago, IL).

EJEMPLO 1 10 Incorporación de B-criptoxantina y efectos en la expresión génica EXAMPLE 1 10 Incorporation of B-cryptoxanthin and effects on gene expression

Inicialmente, los inventores confirmaron, mediante U-HPLC, que la línea celular de cáncer de colon HCT -116 expuesta a ¡3-criptoxantina incorporaba este caroteno en su interior celular (Tabla 1). Initially, the inventors confirmed, by U-HPLC, that the HCT -116 colon cancer cell line exposed to ¡3-cryptoxanthin incorporated this carotene into its cellular interior (Table 1).

15 Tabla 1 Incorporación neta de p-criptoxantina a las 24, 48 Y 72 horas post-tratamiento en células HCT -116. Cuantificación llevada a cabo por U-HPLC 15 Table 1 Net incorporation of p-cryptoxanthin at 24, 48 and 72 hours post-treatment in HCT -116 cells. Quantification carried out by U-HPLC

n9 p-criptoxantina/10 células n9 p-cryptoxanthin / 10 cells

24 h 24 h

48 h 72 h 48 h 72 h

35,440 " 0,256 35,440 "0.256

118,903,,0,362 175,160" 0,256 118,903,, 0,362 175,160 "0.256

Posteriormente, se ha evaluado si la incorporación de ¡3-criptoxantina en las células Subsequently, it has been evaluated whether the incorporation of ¡3-cryptoxanthin in the cells

HCT-116 modificaba la expresión génica de las mismas y si esto se traducía en HCT-116 modified their gene expression and if this translated into

cambios en sus funciones. Para ello, se realizaron una serie de experimentos Changes in their functions. For this, a series of experiments were carried out

utilizando 2 PCR arrays distintos tal como se ha indicado previamente ["RT2 Profiler 25 p53 signaling pathway PCR array" y "RT2 Profiler DNA damage signaling pathway using 2 different PCR arrays as previously indicated ["RT2 Profiler 25 p53 signaling pathway PCR array" and "RT2 Profiler DNA damage signaling pathway

PCR arra y"] distintos con el fin de evaluar cambios en la expresión génica en estas Arra and "] distinct PCR in order to evaluate changes in gene expression in these

células tras el tratamiento con p-criptoxantina. Uno de los PCR arrays contiene genes cells after treatment with p-cryptoxanthin. One of the PCR arrays contains genes

de la ruta de TP53 y el segundo incluye genes implicados en la señalización en of the TP53 path and the second one includes genes involved in signaling in

respuesta a daño genómico. Ambos PCR arrays mostraron que las células de HCT30 116 aumentaban significativamente los niveles de TP73 después del tratamiento con response to genomic damage. Both PCR arrays showed that HCT30 116 cells significantly increased TP73 levels after treatment with

p-criptoxantina (entre 3 y 10 veces). p-cryptoxanthin (between 3 and 10 times).

Seguidamente, se profundizó en el estudio evaluando en ésta y en otras líneas celulares de cáncer de colon cómo afectaba el tratamiento con ¡3-criptoxantina a las 2 principales variantes de TP73: TAp73 y LlNp73. En la línea HCT-116 el tratamiento con 13-criptoxantina condujo a un aumento entre 2 y 5 veces en los niveles de TAp73, la 5 isoforma con función anti-tumoral; sin embargo, respecto a la variante con función pro Next, the study was deepened by evaluating this and other lines Colon cancer cells how treatment with 3-cryptoxanthin affected 2 Main variants of TP73: TAp73 and LlNp73. In the HCT-116 line, treatment with 13-cryptoxanthin led to a 2 to 5 fold increase in TAp73 levels, the 5 isoform with anti-tumor function; however, regarding the variant with pro function

tumoral, ó'Np73, se observó una disminución en su expresión de entre 3 y 4 veces (Figura 1). Tumor, O'Np73, a decrease in its expression was observed between 3 and 4 times (Figure 1).

Se obtuvieron resultados similares para las células de cáncer de colon SW480-ADH y Similar results were obtained for SW480-ADH colon cancer cells and

10 SW1417. Los niveles de TAp73 se incrementaron, tras ser expuestas las células a 13criptoxantina, entre 2 y 17 veces en la linea SW480-ADH. No se observaron diferencias para la línea SW1417. Por el contrario, en ambas líneas celulares los niveles de LlNp73 disminuyeron tras el tratamiento con 13-criptoxantina entre 2 y 6 veces (Figura 1). 10 SW1417. TAp73 levels increased, after the cells were exposed to 13criptoxanthin, between 2 and 17 times in the SW480-ADH line. No differences were observed for line SW1417. On the contrary, in both cell lines the levels of LlNp73 decreased after treatment with 13-cryptoxanthin between 2 and 6 times (Figure 1).

15 Soldevilla y col. (Soldevilla el al.. Clin Cancer Research 17(18):6029-39. 2011) han descrito que la sobreexpresión de ó'Np73 en esas mismas líneas celulares de cáncer de colon, induce resistencia a oxaliplatino. Así, en esas líneas celulares de cáncer de colon en las que la 13-criptoxantina disminuye los niveles de ó'Np73, se evaluó si eso 15 Soldevilla et al. (Soldevilla the al .. Clin Cancer Research 17 (18): 6029-39. 2011) have described that overexpression of o'Np73 in those same colon cancer cell lines induces resistance to oxaliplatin. Thus, in those colon cancer cell lines in which 13-cryptoxanthin decreases the levels of o'Np73, it was evaluated whether that

20 se traducía en una mayor sensibilidad a la muerte celular inducida por oxaliplatino. En este sentido, los experimentos y resultados que se describen a continuación se centran en evaluar si el tratamiento combinado de oxaliplatino y 13-criptoxantina produce un mayor muerte celular (evaluada como porcentaje de muerte celular inducida y porcentaje de células viables) que el tratamiento con oxaliplatino de forma 20 resulted in increased sensitivity to oxaliplatin-induced cell death. In this sense, the experiments and results described below focus on evaluating whether the combined treatment of oxaliplatin and 13-cryptoxanthin produces a higher cell death (evaluated as a percentage of induced cell death and a percentage of viable cells) than treatment with oxaliplatin form

25 aislada. 25 isolated.

EJEMPLO 2 Aumento de la inducción de muerte celular por el tratamiento combinado oxaliplatino más B-criptoxantina vs el tratamiento con oxaliplatino de forma EXAMPLE 2 Increased induction of cell death by combined treatment oxaliplatin plus B-cryptoxanthin vs oxaliplatin treatment so

30 aislada 30 isolated

El tratamiento de las células HCT-116 con oxaliplatino 100 iJM dio como resultado un porcentaje de muerte celular, mediante apoptosis, del 68,17%. El tratamiento combinado de esa dosis de oxaliplatino junto con 13-criptoxantina a una concentración Treatment of HCT-116 cells with oxaliplatin 100 iJM resulted in a percentage of cell death, by apoptosis, of 68.17%. The combined treatment of that dose of oxaliplatin together with 13-cryptoxanthin at a concentration

35 de 10 iJM incrementó el porcentaje de muerte celular en un 9,44% (p=0,07) (Figura 2). Se obtuvieron resultados similares con las otras 2 líneas celulares de cáncer de colon (SW480-ADH y SW1417). El oxaliplatino produjo la muerte del 31 ,97% en las células SW480-ADH, mientras que el tratamiento combinado con ¡3-criptoxantina aumentó el porcentaje de muerte celular de dichas células en un 24,04% (p=0,0024) (Figura 2). En las células SW1417, la muerte inducida por oxaliplatino fue del 37,07% Y el tratamiento 35 of 10 iJM increased the percentage of cell death by 9.44% (p = 0.07) (Figure 2). Similar results were obtained with the other 2 colon cancer cell lines (SW480-ADH and SW1417). Oxaliplatin resulted in the death of 31.97% in SW480-ADH cells, while combined treatment with 3-cryptoxanthin increased the percentage of cell death of these cells by 24.04% (p = 0.0024) ( Figure 2). In SW1417 cells, oxaliplatin-induced death was 37.07% and the treatment

5 combinado llevó hasta unos porcentajes de muerte celular del 49,08% (p=0,014), un 12% más (Figura 2). 5 combined led to a percentage of cell death of 49.08% (p = 0.014), a 12% more (Figure 2).

EJEMPLO 3 Disminución de la viabilidad celular por el tratamiento combinado oxaliplatino 10 más B-criptoxantina vs el tratamiento con oxaliplatino de forma aislada EXAMPLE 3 Decrease in cell viability by combined oxaliplatin 10 plus B-cryptoxanthin treatment versus oxaliplatin treatment in isolation

La viabilidad celular fue evaluada por una técnica distinta a la utilizada para analizar la muerte celular en el Ejemplo 2; no obstante, con ambas aproximaciones, se obtuvieron resultados similares. En las células HCT-116 la viabilidad celular después del 15 tratamiento con oxaliplatino fue del 42,5%. El tratamiento combinado con 13criptoxantina redujo esta viabilidad al 35,84% (p=0,004). En las células SW480-ADH la exposición a oxaliplatino disminuyó la viabilidad celular a un 77,31%. El tratamiento combinado redujo la viabilidad en un 15% más (p=O ,04). En las células SW1417 el oxaliplatino redujo la viabilidad celular a un 88,1%, mientras que el tratamiento Cell viability was evaluated by a technique other than that used to analyze cell death in Example 2; however, with both approaches, similar results were obtained. In HCT-116 cells, cell viability after oxaliplatin treatment was 42.5%. Combined treatment with 13criptoxanthin reduced this viability to 35.84% (p = 0.004). In SW480-ADH cells, oxaliplatin exposure decreased cell viability to 77.31%. The combined treatment reduced viability by 15% more (p = O, 04). In SW1417 cells oxaliplatin reduced cell viability to 88.1%, while treatment

20 combinado con ¡3-criptoxantina redujo la viabilidad en un 20,83% más (p=0,009) (Figura 3). 20 combined with 3-cryptoxanthin reduced viability by 20.83% more (p = 0.009) (Figure 3).

Para las células HCT-116 se llevó a cabo también el tratamiento utilizando la mitad de la dosis de oxaliplatino (50 ¡..¡M). Esta dosis de oxaliplatino combinada con 1325 criptoxantina 10 ¡..¡M indujo el mismo porcentaje de muerte celular que la dosis de 100 ¡..¡M de oxaliplatino utilizada de manera aislada (Figura 4). For HCT-116 cells, treatment was also carried out using half the dose of oxaliplatin (50 ... M). This dose of oxaliplatin combined with 1325 cryptoxanthin 10 ... M induced the same percentage of cell death as the dose of 100 M of oxaliplatin used in isolation (Figure 4).

Resultados similares se obtuvieron cuando el mismo experimento se llevó a cabo a los 8 y 10 días. Llamativamente, a estos tiempos de exposición, la ¡3-criptoxantina por sí 30 sola presenta efecto antiproliferativo (Figura 5). Similar results were obtained when the same experiment was carried out at 8 and 10 days. Notably, at these exposure times, 3-cryptoxanthin alone has an antiproliferative effect (Figure 5).

EJEMPLO 4 B-criptoxantina coopera con oxaliplatino en la inducción de muerte celular y disminución de viabilidad celular en células de cáncer de colon a través de la EXAMPLE 4 B-cryptoxanthin cooperates with oxaliplatin in the induction of cell death and decreased cell viability in colon cancer cells through the

35 regulación negativa de flNp73 Las células de las líneas celulares HCT-116 y SW480-ADH fueron modificadas para que sobreexpresaran ~Np73. En estas células no se observó que el tratamiento combinado de oxaliplatino junto con j3-criptoxantina aumentara la inducción de muerte celular ni disminuyera la viabilidad celular. Estos datos apoyan que cuando de manera 35 negative regulation of flNp73 Cells in the HCT-116 and SW480-ADH cell lines were modified to overexpress ~ Np73. In these cells it was not observed that the combined treatment of oxaliplatin together with j3-cryptoxanthin would increase the induction of cell death or decrease cell viability. These data support that when so

5 artificial la adición de j3-criptoxantina no puede disminuir los niveles de ~Np73 porque se ha forzado su expresión, no se observa el efecto esperado del tratamiento combinado, lo que indica que el mecanismo de actuación de j3-criptoxantina es, al menos en parte, a través de la disminución de los niveles de ~Np73 (Figura 6). 5 artificially adding j3-cryptoxanthin cannot lower levels of ~ Np73 because its expression has been forced, the expected effect of the treatment is not observed combined, indicating that the mechanism of action of j3-cryptoxanthin is, at less in part, through the decrease of ~ Np73 levels (Figure 6).

10 EJEMPLOS Ensayos en animales de experimentación 10 EXAMPLES Testing in experimental animals

Los datos obtenidos en ensayos en animales apoyan los resultados que se han obtenido en los sistemas celulares in vitro. The data obtained in animal tests support the results that have been obtained in cellular systems in vitro.

15 Se trataron ratones desnudos con oxaliplatino (3 mg/kg ) de manera aislada o combinando esa dosis de oxaliplatino con j3-criptoxantina 10 IJM suministrada por vía oral a los animales (el oxaliplatino se administró siempre por via intraperitoneal). El tratamiento combinado del oxaliplatino con la j3-criptoxantina redujo el crecimiento 15 Naked mice were treated with oxaliplatin (3 mg / kg) in isolation or by combining that dose of oxaliplatin with j3-cryptoxanthin 10 IJM given orally to the animals (oxaliplatin was always administered intraperitoneally). Combined treatment of oxaliplatin with j3-cryptoxanthin reduced growth

20 tumoral más que el tratamiento con oxaliplatino administrado de forma aislada tanto al final del primer ciclo como al final del segundo ciclo (p<O,05). Además, se observó que la j3-criptoxantina administrada de forma aislada reducía el crecimiento tumoral respecto al vehiculo (p<O,05) (Figura 7). 20 tumor more than treatment with oxaliplatin administered in isolation both at the end of the first cycle and at the end of the second cycle (p <O, 05). In addition, it was observed that j3-cryptoxanthin administered alone reduced tumor growth relative to the vehicle (p <O, 05) (Figure 7).

25 Este mismo experimento se ha llevado a cabo suministrando la j3-criptoxantina a los ratones por vía intraperitoneal. En esta aproximación, el tratamiento combinado del oxaliplatino con la j3-criptoxantina redujo el crecimiento tumoral más que el tratamiento con oxaliplatino administrado de forma aislada al final del primer ciclo de tratamiento (Figura 8). Se observaron resultados similares cuando se inyectaban a los ratones 1,5 25 This same experiment has been carried out by supplying the j3-cryptoxanthin to the mice intraperitoneally. In this approach, the combined treatment of oxaliplatin with j3-cryptoxanthin reduced tumor growth more than treatment with oxaliplatin administered alone at the end of the first treatment cycle (Figure 8). Similar results were observed when the mice were injected 1.5

30 mg/kg de oxaliplatino (Figura 9). 30 mg / kg oxaliplatin (Figure 9).

Llamativamente, la inducción de muerte celular tras exposición a 3 mg/kg y 1,5 mg/kg de oxaliplatino fue similar aunque inferior a la muerte celular inducida por el tratamiento combinado de oxaliplatino (1 ,5 mg/kg) junto con j3-criptoxantina (Figura Notably, the induction of cell death after exposure to 3 mg / kg and 1.5 mg / kg of oxaliplatin was similar although lower than the cell death induced by the combined treatment of oxaliplatin (1.5 mg / kg) together with j3- cryptoxanthin (Figure

35 10), lo que apoya el hecho de que dosis más pequeñas de oxaliplatino combinadas con j3-criptoxantina podrían desencadenar la misma parada de crecimiento tumoral 35 10), which supports the fact that smaller doses of oxaliplatin combined with j3-cryptoxanthin could trigger the same tumor growth stop

que dosis más altas (dobles, en este caso) de oxaliplatino utilizadas de manera aislada, con el consecuente beneficio (en cuanto a efectos secundarios se refiere) that higher doses (double, in this case) of oxaliplatin used in isolation, with the consequent benefit (as far as side effects are concerned)

para los pacientes. for the patients

5 Al final del estudio in vivo se analizaron los niveles de ARNm de .8.Np73 en el tumor y se confirmó que la j3-criptoxantina regula negativamente la expresión de .8.Np73 in vivo (Figura 11). 5 At the end of the in vivo study, mRNA levels of .8.Np73 in the tumor were analyzed and it was confirmed that j3-cryptoxanthin negatively regulates the expression of .8.Np73 in vivo (Figure 11).

Para evaluar la toxicidad de los diferentes tratamientos se realizó un seguimiento del To evaluate the toxicity of the different treatments, the

10 peso de los ratones a lo largo del tratamiento y no se observaron diferencias significativas antes ni después de los diferentes tratamientos. Además, al final del tratamiento se realizó un análisis bioquímico de diferentes parámetros: creatinina, bilirrubina, albúmina, gamma-glutamintransferasa, aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (AL T). No se observaron diferencias significativas de estos 10 weight of the mice throughout the treatment and no significant differences were observed before or after the different treatments. In addition, at the end of the treatment a biochemical analysis of different parameters was performed: creatinine, bilirubin, albumin, gamma-glutamintransferase, aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (AL T). No significant differences were observed from these.

15 parámetros entre los diferentes grupos (Figura 12). 15 parameters between the different groups (Figure 12).

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. one.

Una composición que comprende l3-criptoxantina y oxaliplatino. A composition comprising l3-cryptoxanthin and oxaliplatin.

s s

2. Un kit que comprende a) una composición que comprende ~-criptoxantina y b) 2. A kit comprising a) a composition comprising ~ -criptoxanthin and b)

una composición que comprende oxaliplatino. a composition comprising oxaliplatin.

3. 3.

Uso de l3-criptoxantina, o de una composición según la reivindicación 1, o de un Use of l3-cryptoxanthin, or of a composition according to claim 1, or of a

kit según la reivindicación 2, para la elaboración de un medicamento para el kit according to claim 2, for the preparation of a medicament for the

10 10

tratamiento del cáncer en un sujeto. Cancer treatment in a subject.

4. Four.

Uso de l3-criptoxantina para la elaboración de un medicamento para el Use of l3-cryptoxanthin for the preparation of a medicine for

tratamiento del cáncer en un sujeto que padece dicho cáncer y que está siendo cancer treatment in a subject suffering from said cancer and who is being

tratado con oxaliplatino. treated with oxaliplatin.

15 fifteen

5. 5.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 4, en el que dicho sujeto Use according to any of claims 3 or 4, wherein said subject

presenta un nivel de deltaNp73 (óNp73) incrementado respecto a un valor de It has an increased deltaNp73 (ónp73) level with respect to a value of

referencia. reference.

20 twenty

6. Un método in vitro para seleccionar una terapia para el tratamiento del cáncer 6. An in vitro method to select a therapy for cancer treatment

que padece un sujeto que comprende: suffering from a subject that includes:

i) determinar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) en una muestra i) determine the level of expression of deltaNp73 (óNp73) in a sample

procedente de dicho sujeto, y coming from said subject, and

ii ) comparar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) obtenido en la ii) compare the level of expression of deltaNp73 (óNp73) obtained in the

25 25

etapa i) con un valor de referencia, step i) with a reference value,

en donde si el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) está incrementado con where if the expression level of deltaNp73 (óNp73) is increased with

respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona una terapia que with respect to said reference value, then a therapy is selected that

comprende l3-criptoxantina. It comprises l3-cryptoxanthin.

30 30

7. Método in vitro según la reivindicación 6, en el que dicha terapia que 7. In vitro method according to claim 6, wherein said therapy which

comprende l3-criptoxantina comprende adicionalmente la administración de comprises l3-cryptoxanthin further comprises the administration of

oxaliplatino. oxaliplatin

8. Un método in vitro para seleccionar una terapia para el tratamiento del cáncer 8. An in vitro method to select a therapy for cancer treatment que padece un sujeto y que está siendo tratado con oxaliplatino que comprende: i) determinar el nivel de expresión de deltaNp73 (D.Np73) en una muestra that a subject suffers and that is being treated with oxaliplatin which comprises: i) determining the level of expression of deltaNp73 (D.Np73) in a sample 5 procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de deltaNp73 (.ó.Np73) obtenido en la 5 from said subject, and ii) compare the level of expression of deltaNp73 (.ó.Np73) obtained in the etapa i) con un valor de referencia, en donde si el nivel de expresión de deltaNp73 (ó,Np73) está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona una terapia que step i) with a reference value, where if the expression level of deltaNp73 (or, Np73) is increased with respect to said reference value, then a therapy is selected that 10 comprende j3-criptoxantina. 10 comprises j3-cryptoxanthin. 9. Un método in vitre para seleccionar un sujeto que padece cáncer para una terapia que comprende j3-criptoxantina, que comprende: i) determinar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) en una muestra 9. An in vitro method for selecting a subject suffering from cancer for a therapy comprising j3-cryptoxanthin, comprising: i) determining the level of expression of deltaNp73 (np73) in a sample 15 procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) obtenido en la 15 from said subject, and ii) compare the level of expression of deltaNp73 (ónp73) obtained in the etapa i) con un valor de referencia, en donde si el nivel de expresión de deltaNp73 (~Np73) está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona dicho sujeto para step i) with a reference value, where if the expression level of deltaNp73 (~ Np73) is increased with respect to said reference value, then said subject is selected for 20 dicha terapia que comprende j3-criptoxantina. 20 said therapy comprising j3-cryptoxanthin. 10. Método in vitro según la reivindicación 9, en el que el tratamiento que comprende j3-criptoxantina comprende, adicionalmente, la administración de oxaliplatino. 10. In vitro method according to claim 9, wherein the treatment comprising j3-cryptoxanthin further comprises the administration of oxaliplatin. 11. Un método in vitro para seleccionar un sujeto que padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para una terapia que comprende 13criptoxantina, que comprende: i) determinar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) en una muestra 11. An in vitro method for selecting a subject suffering from cancer and being treated with oxaliplatin for a therapy comprising 13criptoxanthin, comprising: i) determining the level of expression of deltaNp73 (orNp73) in a sample 30 procedente de dicho sujeto, y ii) comparar el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) obtenido en la 30 from said subject, and ii) compare the level of expression of deltaNp73 (np73) obtained in the etapa i) con un valor de referencia, en donde si el nivel de expresión de deltaNp73 (óNp73) está incrementado con respecto a dicho valor de referencia, entonces se selecciona dicho sujeto que step i) with a reference value, where if the expression level of deltaNp73 (óNp73) is increased with respect to said reference value, then said subject is selected that 35 padece cáncer y que está siendo tratado con oxaliplatino para dicha terapia que comprende j3-criptoxantina. 35 suffers from cancer and is being treated with oxaliplatin for said therapy comprising j3-cryptoxanthin.

12. Método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11 , en el que la muestra es una muestra de tumor o de exosomas. 12. In vitro method according to any of claims 6 to 11, wherein the sample is a tumor or exosome sample.

S 10 S 10

13. Método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 12, en el que la determinación del nivel de expresión de deltaNp73 (.1.Np73) comprende la cuantificación del ARN mensajero (ARNm) de dicho gen , o de un fragmento de dicho ARNm, o la cuantificación del ADN complementario (ADNc) de dicho gen, o de un fragmento de dicho ADNc. 13. In vitro method according to any of claims 6 to 12, wherein the determination of the level of expression of deltaNp73 (.1.Np73) comprises the quantification of messenger RNA (mRNA) of said gene, or of a fragment of said MRNA, or the quantification of the complementary DNA (cDNA) of said gene, or of a fragment of said cDNA.

15 fifteen

14. Método in vitro según la reivindicación 13, en el que el nivel de expresión de deltaNp73 (llNp73) se cuantifica por medio de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa o por medio de una matriz de ADN o de ARN o mediante técnicas de hibridación de nucleótidos. 14. In vitro method according to claim 13, wherein the level of expression of deltaNp73 (llNp73) is quantified by means of a quantitative polymerase chain reaction (PCR) or by means of a DNA or RNA matrix or by nucleotide hybridization techniques.

20 twenty

15. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, o método según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, en el que dicho cáncer es un tipo de cáncer cuyas células muestran un nivel incrementado de .1.Np73 con respecto a un valor de referencia. 15. Use according to any of claims 3 to 5, or method according to any of claims 6 to 14, wherein said cancer is a type of cancer whose cells show an increased level of .1.Np73 with respect to a value of reference.

25 25

16. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, o método según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, en el que dicho cáncer es un tipo de cáncer seleccionado entre cáncer colorectal (CCR), cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de médula ósea, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de pulmón , cáncer de tiroide, leucemia, y neuroblastoma. 16. Use according to any of claims 3 to 5, or method according to any of claims 6 to 14, wherein said cancer is a type of cancer selected from colorectal cancer (RCC), esophageal cancer, gastric cancer, cancer of liver, breast cancer, bone marrow cancer, ovarian cancer, prostate cancer, lung cancer, thyroid cancer, leukemia, and neuroblastoma.

30 30

17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, o método según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, en el que dicho cáncer es cáncer colorectal (CCR) 17. Use according to any of claims 3 to 5, or method according to any of claims 6 to 14, wherein said cancer is colorectal cancer (RCC)

18. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5 Ó 15 a 17, o método según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 17, en el que la ¡3-criptoxantina es administrada por vía oral o parenteral. 18. Use according to any of claims 3 to 5 or 15 to 17, or method according to any of claims 6 to 17, wherein the 3-cryptoxanthin is administered orally or parenterally.

49 49