ES2530141B1 - Peptide useful as a pharmacological target for the screening of molecules for the treatment and / or prevention of Alzheimer's disease, antibody against it and use of the antibody for the treatment and / or prevention of said disease. - Google Patents

Abstract

Péptido útil como diana farmacológica para el cribado de moléculas para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de alzheimer, anticuerpo frente al mismo y uso del anticuerpo para el tratamiento y/o prevención de dicha enfermedad.#La presente invención se refiere a un péptido aislado de ocho aminoácidos localizado en el bucle luminal 1 de la primera región luminal de la presenilina, el cual es útil como diana farmacológica para el cribado de moléculas útiles para mejorar el rendimiento cognitivo y/o promover el desarrollo cognitivo, preferiblemente para tratar y/o prevenir la enfermedad de Alzheimer (EA). Asimismo, la invención se refiere a un anticuerpo específico frente a dicho péptido, el cual es útil para el tratamiento y/o prevención de la EA, y a composiciones farmacéuticas que comprenden dicho anticuerpo.Peptide useful as a pharmacological target for the screening of molecules for the treatment and / or prevention of Alzheimer's disease, antibody against it and use of the antibody for the treatment and / or prevention of said disease. # The present invention relates to a isolated eight amino acid peptide located in the luminal loop 1 of the first luminal region of presenilin, which is useful as a pharmacological target for the screening of molecules useful for improving cognitive performance and / or promoting cognitive development, preferably for treating and / or prevent Alzheimer's disease (AD). Also, the invention relates to a specific antibody against said peptide, which is useful for the treatment and / or prevention of AD, and to pharmaceutical compositions comprising said antibody.

Description

PÉPTIDO ÚTIL COMO DIANA FARMACOLÓGICA PARA EL CRIBADO DE MOLÉCULAS PARA EL TRATAMIENTO Y/O PREVENCIÓN DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER, ANTICUERPO FRENTE AL MISMO Y USO DEL ANTICUERPO PARA EL TRATAMIENTO Y/O PREVENCIÓN DE DICHA ENFERMEDAD 5 USEFUL PERMIT AS A PHARMACOLOGICAL DIANA FOR THE SCREENING OF MOLECULES FOR THE TREATMENT AND / OR PREVENTION OF ALZHEIMER'S DISEASE, ANTIBODY AGAINST THE SAME AND USE OF THE ANTIBODY FOR THE TREATMENT AND / OR PREVENTION OF SUCH DISEASE 5 DESCRIPCIÓN DESCRIPTION

La presente invención se encuadra en el campo de la neurología y la medicina, específicamente dentro de los métodos de cribado de moléculas útiles para mejorar 10 el rendimiento cognitivo y promover el desarrollo cognitivo, preferiblemente para el tratamiento y/o prevención de enfermedades o síndromes que producen deterioro cognitivo, como la enfermedad de Alzheimer. The present invention falls within the field of neurology and medicine, specifically within the methods of screening molecules useful for improving cognitive performance and promoting cognitive development, preferably for the treatment and / or prevention of diseases or syndromes that They produce cognitive impairment, such as Alzheimer's disease.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR 15 STATE OF THE PREVIOUS TECHNIQUE 15

Los genes que codifican para las presenilinas 1 y 2 (PSEN1 y PSEN2, respectivamente) y la proteína precursora de amiloide (APP) son las únicas moléculas conocidas hasta el momento implicadas en la enfermedad de Alzheimer (EA) de causa monogénica (Albert Lleò et al., 2002, Archives of Neurology; 59:1759–20 1763). La relación entre estas proteínas y la enfermedad se puede entender como una asociación entre enzima/sustrato en la que la enzima es la presenilina y APP es el sustrato. The genes coding for presenilins 1 and 2 (PSEN1 and PSEN2, respectively) and the amyloid precursor protein (APP) are the only molecules known so far involved in Alzheimer's disease (AD) of monogenic cause (Albert Lleò et al., 2002, Archives of Neurology; 59: 1759–20 1763). The relationship between these proteins and the disease can be understood as an association between enzyme / substrate in which the enzyme is preseniline and APP is the substrate.

La presenilina se encuentra formando parte de un gran complejo enzimático llamado 25 -secretasa, del cual es el núcleo catalítico (Bart De Strooper et al., 2003, Neuron; 38:9–12). En los
vertebrados existen dos genes de presenilina: PSEN1, que contiene la información genética para la presenilina 1 (PS1) y PSEN2, que contiene la información genética para la presenilina 2 (PS2). Ambos genes se encuentran altamente
conservados entre las distintas especies de vertebrados. En la especie 30 humana los genes codificantes para estas dos proteínas presentan una alta homología entre sí (80%). El complejo -secretasa se compone en total de cuatro proteínas que están presentes en igual estequiometría: presenilina, nicastrin, gen asociado al defecto en nasofaringe anterior de drosophila (APH1) y potenciador de presenilina 2 (PEN2). 35 Presenilin is part of a large enzyme complex called 25 secre-secretase, which is the catalytic nucleus (Bart De Strooper et al., 2003, Neuron; 38: 9-12). In the
There are two presenilin genes in vertebrates: PSEN1, which contains the genetic information for presenilin 1 (PS1) and PSEN2, which contains the genetic information for presenilin 2 (PS2). Both genes are highly
conserved among the different vertebrate species. In human species 30 the genes coding for these two proteins have a high homology to each other (80%). The -secretase complex consists of a total of four proteins that are present in the same stoichiometry: presenilin, nicastrin, gene associated with the defect in the anterior nasopharynx of drosophila (APH1) and enhancer of presenilin 2 (PEN2). 35

En primer lugar, en el procesamiento proteolítico secuencial de la proteína APP, tiene lugar una escisión por la - o -secretasa. La secretasa  conduce al fragmento C83 (CTF). La escisión por -secretasa (BACE1) resulta en dos fragmentos potenciales: C99 y C89 (CTFs). Todos estos fragmentos pueden sufrir, posteriormente, una primera escisión proteolítica (escisión ε) por parte del complejo 5 -secretasa. Este proceso libera el dominio intracelular del amiloide (AICD o CTF) hacia el citoplasma (principalmente dos: AICD51 y AICD50); mientras que en el lado opuesto (el extremo N-terminal) deja un remanente peptídico en la zona transmembrana (péptidos amiloides: A48 y A49 respectivamente), unido al complejo -secretasa: 10 First, in the sequential proteolytic processing of the APP protein, a cleavage by - or -secretase takes place. Secretase  leads to fragment C83 (CTF). Excision by -secretase (BACE1) results in two potential fragments: C99 and C89 (CTFs). All these fragments may subsequently undergo a first proteolytic cleavage (ε cleavage) by the 5 -secretase complex. This process releases the intracellular domain of amyloid (AICD or CTF) into the cytoplasm (mainly two: AICD51 and AICD50); while on the opposite side (the N-terminal end) leaves a peptide remnant in the transmembrane zone (amyloid peptides: A48 and A49 respectively), attached to the -secretase complex: 10

1. - ó CTF→ A48 + AICD51 1. - or CTF → A48 + AICD51

2. - ó CTF→ A49 + AICD50 2. - or CTF → A49 + AICD50

Posteriormente, los remanentes transmembrana A48 y A49 pueden sufrir una 15 escisión secuencial progresiva por el complejo -secretasa en el dominio transmembrana (escisión , liberando tres o cuatro residuos en cada paso de la secuencia de escisión, resultando en dos secuencias escisorias distintas en función del péptido de partida: Subsequently, transmembrane remnants A48 and A49 may undergo progressive sequential cleavage by the -secretase complex in the transmembrane domain (cleavage , releasing three or four residues at each step of the cleavage sequence, resulting in two different cleavage sequences depending on the starting peptide:

20  twenty

1. A48→A45→A42→A38. 1. A48 → A45 → A42 → A38.

2. A49→A46→A43→A40→A37. 2. A49 → A46 → A43 → A40 → A37.

La secuencia de escisión (escisión representada por la flecha) se podría interrumpir en cualquier paso del proceso proteolítico, liberando finalmente el sustrato que no se 25 ha escindido. Para la secuencia que comienza en A49 el producto final más probable sería A40 y para la que comienza en A48 el péptido A42. The cleavage sequence (cleavage represented by the arrow) could be interrupted at any step of the proteolytic process, finally releasing the substrate that has not been cleaved. For the sequence that begins in A49 the most likely final product would be A40 and for the one that begins in A48 the peptide A42.

Una droga funcional debería tratar la enfermedad y detener o retrasar el daño celular que conduce al empeoramiento de los síntomas. En este sentido, los esfuerzos de 30 los investigadores se han centrando en buscar nuevas formas de tratamiento de la EA, ya que los medicamentos actuales únicamente ayudan a enmascarar los síntomas de la enfermedad sin llegar a tratarla. A functional drug should treat the disease and stop or delay the cellular damage that leads to worsening of symptoms. In this sense, the efforts of 30 researchers have focused on finding new ways of treating AD, since current medications only help to mask the symptoms of the disease without treating it.

Desde el punto de vista de su actuación, se estudian tres tipos de fármacos en la EA: los que actúan sobre la posible causa de la enfermedad, modulando la producción del péptido A, los que tratan de prevenir las consecuencias de la enfermedad o fármacos neuroprotectores y los que tratan de paliar las consecuencias de la enfermedad actuando sobre los síntomas (Hugo Geerts et al., 2013, Frontiers of 5 Pharmacology; 4:47). From the point of view of its action, three types of drugs in AD are studied: those that act on the possible cause of the disease, modulating the production of the A peptide, those that try to prevent the consequences of the disease or drugs neuroprotectors and those who try to alleviate the consequences of the disease by acting on the symptoms (Hugo Geerts et al., 2013, Frontiers of 5 Pharmacology; 4:47).

La tendencia actual hacia el desarrollo de terapias frente a la EA, que tienen como objetivo reducir los niveles de A en el cerebro, viene respaldada por la evidencia que sustenta la hipótesis de la cascada amiloidea (1. la deposición del péptido A en 10 el parénquima cerebral en forma de placas; 2. el hecho de que los tres genes causales de EA monogénica, APP como sustrato y PSEN1-2 como enzimas, intervengan en la formación de péptido A y apunta al papel crucial del péptido A en la enfermedad. De acuerdo con esta hipótesis, la deposición de Aconstituye el desencadenante patológico inicial de la enfermedad. Por ello, los fármacos 15 diseñados en base a esta hipótesis tratan de modificar los niveles de A desde varios frentes (Martin
Citron, 2010,
Nature Reviews. Drug Discovery; 9(5):387-398): The current trend towards the development of therapies against AD, which aim to reduce A levels in the brain, is supported by the evidence that supports the amyloid cascade hypothesis (1. the deposition of the A peptide in 10 the cerebral parenchyma in the form of plaques; 2. the fact that the three causal genes of monogenic EA, APP as substrate and PSEN1-2 as enzymes, intervene in the formation of peptide A and points to the crucial role of peptide A in the disease.According to this hypothesis, the deposition of A constitutes the initial pathological trigger of the disease.Therefore, drugs 15 designed based on this hypothesis try to modify the levels of A varios from several fronts (Martin
Citron, 2010,
Nature Reviews. Drug Discovery; 9 (5): 387-398):

i. Actuando sobre la producción del péptido A. Son los compuestos llamados “A lowering compounds”: inhibidores y moduladores de -20 secretasa (GSI, GSM) e inhibidores de -secretasa (inhibidores de BACE1). i. Acting on the production of the A peptide. Compounds called "A lowering compounds": inhib-20 secretase inhibitors and modulators (GSI, GSM) and -secretase inhibitors (BACE1 inhibitors).

ii. Aumentando el aclaramiento del péptido A. Se realiza principalmente mediante anticuerpos. ii. Increasing the clearance of the A peptide. It is mainly done by antibodies.

iii. Disminuyendo la agregación del péptido A. 25 iii. Decreasing aggregation of the A peptide. 25

Al margen de los discretos resultados obtenidos en los ensayos clínicos realizados con los fármacos desarrollados a partir de la hipótesis amiloidea, existen dos grandes paradojas respecto a los objetivos que persiguen y el comportamiento de las mutaciones asociadas a la EA de causa monogénica, a saber, a) la mayoría de las 30 mutaciones reducen la cantidad global del péptido A producido y b) todas las mutaciones conllevan un aumento del cociente entre las dos principales formas de péptido A: A42/A40 (Eric Karran, et al., 2011, Nature Reviews Drug Discovery ,10, 698-712). A pesar de que los GSM consiguen invertir este cociente, lo Apart from the discrete results obtained in the clinical trials conducted with the drugs developed from the amyloid hypothesis, there are two major paradoxes regarding the objectives they pursue and the behavior of the mutations associated with the monogenic cause AD, namely, a) most of the 30 mutations reduce the overall amount of peptide A produced and b) all mutations lead to an increase in the ratio between the two main forms of peptide A: A42 / A40 (Eric Karran, et al ., 2011, Nature Reviews Drug Discovery, 10, 698-712). Although GSM manages to reverse this ratio, what

hacen a expensas de un cambio en la producción de A42 por A38 (en la misma línea escisoria), lo que se traduce en un aumento de la toxicidad in vivo (Lucia Chávez-Gutiérrez et al., 2012, EMBO Journal; 31(10):2261-74). Por ello, aunque el mecanismo exacto por el que se produce la EA permanece sin esclarecer, el objetivo de cualquier fármaco diseñado para combatir esta enfermedad debería ser el de 5 disminuir el cociente A42/A40 sin disminuir los niveles del péptido A producido, atacando selectivamente la escisión εlo que condicionaría los productos de la secuencia escisoria posterior (escisión . they are at the expense of a change in the production of A42 by A38 (in the same split line), which translates into an increase in toxicity in vivo (Lucia Chávez-Gutiérrez et al., 2012, EMBO Journal ; 31 (10): 2261-74). Therefore, although the exact mechanism by which AD occurs remains unclear, the objective of any drug designed to combat this disease should be to decrease the A42 / A40 ratio without decreasing levels of peptide A  produced, selectively attacking the excision ε which would condition the products of the subsequent excision sequence (excision .

Por ello, existe la necesidad de desarrollar nuevos abordajes, tales como la creación 10 de modelos de comportamiento cinético del complejo enzimático -secretasa para los diferentes productos de escisión del péptido APP. La correlación entre estos modelos cinéticos y los modelos estructurales tridimensionales establecidos ayudaría a entender la dinámica molecular del procesamiento proteolítico del péptido APP para generar los péptidos A42 y A40 y permitiría la identificación de dianas 15 moleculares, dentro del complejo enzimático -secretasa, cuya inhibición pueda ser interesante desde el punto de vista clínico para el tratamiento y/o prevención de la EA. Therefore, there is a need to develop new approaches, such as the creation of models of kinetic behavior of the -secretase enzyme complex for the different cleavage products of the APP peptide. The correlation between these kinetic models and the established three-dimensional structural models would help to understand the molecular dynamics of the proteolytic processing of the APP peptide to generate the A42 and A40 peptides and would allow the identification of molecular targets within the enzyme complex -secretase, whose inhibition may be clinically interesting for the treatment and / or prevention of AD.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN 20 DESCRIPTION OF THE INVENTION 20

La presente invención proporciona dianas moleculares dentro del complejo enzimático -secretasa, concretamente localizadas en la molécula de presenilina que constituye la subunidad catalítica de dicho complejo, las cuales permiten identificar y/o diseñar moléculas, preferiblemente anticuerpos, cuya unión bloquee 25 selectivamente la entrada del sustrato APP a uno de los dos canales que conducen al sitio activo de la enzima responsable de la producción del péptido A42. Dicho canal se encontraría delimitado por un agujero que comunica el espacio extracelular con el citoplasma (Fig. 1). De este modo, la unión de dichas moléculas a las dianas moleculares aquí descritas conduce a la interrupción de la línea de producción del 30 producto peptídico A42 frente a la línea de producción del producto peptídico A40, provocando así una reducción en el cociente A42/A40, lo cual es deseable desde el punto de vista del tratamiento y/o prevención de la EA. The present invention provides molecular targets within the -secretase enzyme complex, specifically located in the presenilin molecule that constitutes the catalytic subunit of said complex, which allow identifying and / or designing molecules, preferably antibodies, whose binding selectively blocks the entry. of the APP substrate to one of the two channels leading to the active site of the enzyme responsible for the production of the A42 peptide. This channel would be delimited by a hole that connects the extracellular space with the cytoplasm (Fig. 1). Thus, the binding of said molecules to the molecular targets described herein leads to the interruption of the production line of the A42 peptide product against the production line of the A40 peptide product, thus causing a reduction in the A42 / A40 ratio, which is desirable from the point of view of the treatment and / or prevention of AD.

El inventor de la presente invención ha desarrollado un modelo de comportamiento cinético para el complejo enzimático -secretasa que incluye a la presenilina como subunidad catalítica, proponiendo la existencia de dos posibles canales o vías de entrada (Fig. 1), que conducirían hasta el sitio catalítico en la presenilina, para un mismo sustrato amiloideo (APP), el cual es el sustrato más abundante y relevante 5 del complejo en enfermedades que afectan al rendimiento y deterioro cognitivo, como la EA. En el modelo propuesto, dichos canales, denominados canal 40 y canal 42, deberían divergir físicamente hacia el espacio luminal (por condicionamientos estéricos), pero confluirían en el centro activo en sentido hacia el citoplasma, y cada uno de ellos estaría asociado a las respectivas líneas escisorias dado que el sustrato 10 presentaría diferentes condicionamientos estéricos respecto a la escisión ε en función del canal de entrada (el canal 40 y el 42 darían lugar a distintas escisiones ε, las que producen A49 y A48 respectivamente). De modo que el canal 40 daría lugar al péptido A40 y el canal 42 al péptido A42. En resumen, a través de dos vías de acceso o canales de entrada a la presenilina, dentro del complejo 15 enzimático, el modelo permite explicar el mecanismo cinético que da lugar a la formación de estos dos péptidos (A42 y A40) y su distribución cuantitativa. The inventor of the present invention has developed a model of kinetic behavior for the -secretase enzyme complex that includes preseniline as a catalytic subunit, proposing the existence of two possible channels or entry routes (Fig. 1), which would lead to Preseniline catalytic site, for the same amyloid substrate (APP), which is the most abundant and relevant substrate of the complex in diseases that affect performance and cognitive impairment, such as AD. In the proposed model, these channels, called channel 40 and channel 42, should physically diverge towards the luminal space (due to steric conditions), but they would converge in the active center in the direction towards the cytoplasm, and each of them would be associated with the respective cleavage lines given that the substrate 10 would have different steric conditions with respect to the cleavage ε depending on the input channel (channel 40 and 42 would give rise to different cleavages ε, which produce A49 and A48 respectively). So the 40 channel would give rise to the A40 peptide and the 42 channel to the A42 peptide. In summary, through two access routes or presenilin entry channels, within the enzyme complex, the model allows to explain the kinetic mechanism that gives rise to the formation of these two peptides (A42 and A40) and its quantitative distribution.

Por ello, la presente invención propone el bloqueo luminal del canal de entrada al complejo enzimático -secretasa atribuido a la formación del péptido A42, el cual se 20 localiza en la estructura de la presenilina y que en esta invención se ha denominado “canal 42de la presenilina" mediante moléculas que presentan especificidad frente a determinantes antigénicos que bordean la zona de entrada a dicho canal desde el espacio extracelular. De esta forma la subunidad enzimática presenilina, que forma el núcleo catalítico del complejo enzimático -secretasa, resulta parcialmente 25 inaccesible para el sustrato que va a ser escindido, APP, mientras la molécula permanezca unida al canal 42ejerciendo un impedimento estérico sobre el mismo. Esto provoca un bloqueo selectivo del canal 42y consecuentemente, como se muestra en los ejemplos de la presente invención, una reducción del cociente A42/A40, lo cual es deseable desde el punto de vista del tratamiento y/o 30 prevención de patologías asociadas al procesamiento proteolítico del sustrato APP. Por tanto, la presente invención se basa en la utilidad del canal 42de la presenilina como diana molecular y en la funcionalidad terapéutica de cualquier molécula identificada o diseñada a partir de dicha diana que sea capaz de bloquear la zona de Therefore, the present invention proposes the luminal blockade of the entrance channel to the -secretase enzyme complex attributed to the formation of the A42 peptide, which is located in the structure of the presenilin and which in this invention has been termed " 42 channel of presenilin " by molecules that have specificity against antigenic determinants that border the entrance area to said channel from the extracellular space. Thus the presenilin enzyme subunit, which forms the catalytic core of the enzyme complex - secretase, is partially inaccessible to the substrate to be cleaved, APP, as long as the molecule remains attached to the channel 42 exerting a steric hindrance on it.This causes a selective blockage of the channel 42 and consequently, as shown in the examples of the present invention, a reduction in the ratio A42 / A40, which is desirable from the point of view of the treatment and / or prevention of pathologies associated with the proteolytic processing of the APP substrate. Therefore, the present invention is based on the usefulness of the 42 channel of preseniline as a molecular target and on the therapeutic functionality of any molecule identified or designed from said target that is capable of blocking the area of

entrada al canal 42 desde el espacio extracelular impidiendo, parcial o totalmente, la entrada del sustrato a la enzima. entrance to channel 42 from the extracellular space preventing, partially or totally, the entrance of the substrate to the enzyme.

El canal 42 de la presenilina se ha asociado hasta el momento con la entrada de agua e iones, por lo que hasta ahora no se había propuesto como un posible canal 5 de entrada del sustrato amiloideo que posteriormente será escindido para producir el péptido A42. Estructuralmente, el canal 42 se encuentra flanqueado por los dominios transmembrana 2, 3, 5 y 7. Los dominios transmembrana, como su nombre indica, atraviesan la membrana celular y contactan, por un lado, con el lumen y, por el lado opuesto, con el citoplasma, concretamente algunos de los aminoácidos que 10 constituyen estos dominios transmembrana estarán en contacto con el lumen o espacio extracelular (a esta región se llamará en la presente invención “extremo luminal del dominio transmembrana”). Entre dos dominios transmembrana cualesquiera se encuentra un bucle que conecta dos dominios entre sí y que se proyecta hacia el lumen o hacia el citoplasma. La conjunción de la parte luminal de 15 los dominios transmembrana 2, 3, 5 y 7 con los bucles luminales con los que conectan (LL1, LL2, LL3 y LL4 respectivamente; TM-II con LL1, TM-III con LL2, TM-V con LL3 y TM-VII con LL4) configuran el acceso de las moléculas amiloideas al interior del canal 42 de la presenilina 1 (Fig. 2a). Más adelante se hará referencia a estas combinaciones estructurales transmembrana-bucle como “regiones luminales, 20 RL,” de acceso al canal 42. Este patrón estructural es extrapolable a la presenilina 2 (Fig. 2b). The 42 channel of presenilin has so far been associated with the entry of water and ions, so it has not been proposed so far as a possible channel 5 of the amyloid substrate that will subsequently be cleaved to produce the A peptide 42 Structurally, the 42 channel is flanked by the transmembrane domains 2, 3, 5 and 7. The transmembrane domains, as the name implies, cross the cell membrane and contact, on the one hand, with the lumen and, on the opposite side With the cytoplasm, specifically some of the amino acids that constitute these transmembrane domains will be in contact with the lumen or extracellular space (this region will be called in the present invention "luminal end of the transmembrane domain"). Between any two transmembrane domains there is a loop that connects two domains to each other and that projects to the lumen or the cytoplasm. The conjunction of the luminal part of 15 the transmembrane domains 2, 3, 5 and 7 with the luminous loops with which they connect (LL1, LL2, LL3 and LL4 respectively; TM-II with LL1, TM-III with LL2, TM- V with LL3 and TM-VII with LL4) configure the access of amyloid molecules into the 42 channel of presenilin 1 (Fig. 2a). Further on, these transmembrane-loop structural combinations will be referred to as "luminal regions, 20 RL," of access to channel 42. This structural pattern is extrapolable to presenilin 2 (Fig. 2b).

Por ello, un primer aspecto de la invención se refiere al uso del canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa como diana 25 farmacológica para el cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la EA. Therefore, a first aspect of the invention relates to the use of the 42 channel of presenilin that is part of the -secretase enzyme complex as a pharmacological target for the screening of molecules useful for the treatment and / or prevention of AD.

El “complejo enzimático -secretasa” es el complejo compuesto por cuatro proteínas: presenilina, nicastrina, gen asociado al defecto en nasofaringe anterior de drosophila 30 (APH1) y potenciador de presenilina 2 (PEN2). El complejo lleva a cabo el procesamiento proteolítico del sustrato APP dentro de la membrana plasmática para dar lugar a los dos péptidos A40 y A42. La subunidad catalítica del complejo enzimático -secretasa es la presenilina, pudiendo estar presente en el complejo la presenilina 1 o la presenilina 2. Estas presenilinas son proteínas transmembrana 35 The "secre-secretase enzyme complex" is the complex consisting of four proteins: presenilin, nicastrin, gene associated with the defect in the anterior nasopharynx of drosophila 30 (APH1) and presenilin 2 enhancer (PEN2). The complex performs proteolytic processing of the APP substrate within the plasma membrane to give rise to the two peptides A40 and A42. The catalytic subunit of the -secretase enzyme complex is preseniline, with presenilin 1 or presenilin 2 being present in the complex. These presenilins are transmembrane proteins 35

cuyos genes, en humano, presentan una elevada homología entre ellos (80% de identidad a nivel de nucleótidos). En la presente invención se entiende, por tanto, por “presenilina” la presenilina 1 o la presenilina 2. En una realización preferida, la presenilina 1 es la proteína de humano de secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 21. En otra realización preferida, la presenilina 2 es la proteína de humano de secuencia 5 aminoacídica SEQ ID NO: 22. Las secuencias aminoacídicas de las presenilinas pueden contener mutaciones, tales como inserciones, sustituciones, adiciones o deleciones de uno o más residuos aminoacídicos. Por ello, dentro del alcance de la presente invención se incluyen las presenilinas 1 y 2 cuya secuencia de aminoácidos sea idéntica u homologa a las secuencias descritas en SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 10 22, respectivamente. whose genes, in human, have a high homology between them (80% identity at the nucleotide level). In the present invention, "presenilin" is thus understood as presenilin 1 or presenilin 2. In a preferred embodiment, presenilin 1 is the human amino acid sequence protein SEQ ID NO: 21. In another preferred embodiment, the Presenilin 2 is the human amino acid sequence 5 protein SEQ ID NO: 22. The amino acid sequences of the presenilins may contain mutations, such as insertions, substitutions, additions or deletions of one or more amino acid residues. Therefore, within the scope of the present invention, presenilins 1 and 2 are included whose amino acid sequence is identical or homologous to the sequences described in SEQ ID NO: 21 and SEQ ID NO: 10 22, respectively.

El término “diana farmacológica”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere al canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa, preferiblemente a cualquiera de las regiones luminales que delimitan 15 dicho canal descritas posteriormente en la presente invención, las cuales son de utilidad para el estudio del efecto bioquímico de moléculas capaces de unirse a ellas. Las moléculas de interés son aquellas que ejerzan un impedimento estérico que impida la entrada del sustrato amiloideo al complejo enzimático a través de este canal. Estas moléculas, pueden ser sin limitarnos, anticuerpos, aptámeros, RNAs de 20 interferencia o agentes químicos, que se seleccionan mediante un cribado en el cual se analiza la presencia de dicho impedimento estérico y/o la reducción del cociente A42/A40. The term "pharmacological target", as used herein, refers to the 42 channel of the presenilin that is part of the -secretase enzyme complex, preferably to any of the luminal regions that delimit said channel described below. in the present invention, which are useful for the study of the biochemical effect of molecules capable of binding to them. The molecules of interest are those that exert a steric hindrance that prevents the entry of the amyloid substrate into the enzyme complex through this channel. These molecules can be without limitation, antibodies, aptamers, interfering RNAs or chemical agents, which are selected by screening in which the presence of said steric hindrance and / or the reduction of the ratio A42 / A is analyzed. 40

El término “enfermedad de Alzheimer” o “EA”, tal y como se emplea en la presente 25 invención, se refiere a una enfermedad neurodegenerativa que presenta deterioro cognitivo y/o trastornos conductuales. Se caracteriza en su forma típica por una pérdida progresiva de la memoria y de otras capacidades mentales, a medida que las células nerviosas degeneran y/o mueren y diferentes zonas del cerebro se atrofian. 30 The term "Alzheimer's disease" or "AD", as used in the present invention, refers to a neurodegenerative disease that presents cognitive impairment and / or behavioral disorders. It is characterized in its typical form by a progressive loss of memory and other mental abilities, as nerve cells degenerate and / or die and different areas of the brain atrophy. 30

El término “canal 42” tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere al canal mostrado en la Fig. 1, el cual permite la entrada del sustrato amiloideo necesaria para su posterior procesamiento proteolítico para generar el péptido A42, o cualquiera de los péptidos de su misma línea escisoria, tales como A45 ó A38. El 35 The term "channel 42", as used herein, refers to the channel shown in Fig. 1, which allows the entry of the amyloid substrate necessary for subsequent proteolytic processing to generate the A42 peptide, or any of the peptides of the same cleavage line, such as A45 or A38. 35

acceso luminal a dicho canal estará delimitado, preferiblemente, por las regiones luminales (RL) como se indica posteriormente y que se encuentran representadas en la Fig. 2. Luminal access to said channel will preferably be delimited by the luminal regions (RL) as indicated below and which are represented in Fig. 2.

En otra realización preferida, dicho canal 42 está delimitado por: 5 In another preferred embodiment, said channel 42 is delimited by:

a) una primera región luminal (RL1) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II) de la presenilina y el bucle luminal 1 (LL1) de la presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio TM-II, a) a first luminal region (RL1) comprising the luminal end of the transmembrane domain 2 (TM-II) of the presenilin and the luminal loop 1 (LL1) of the presenilin that links with said luminal end of the TM-II domain,

10  10

b) una segunda región luminal (RL2) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina y el bucle luminal 2 (LL2) de la presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio TM-III, b) a second luminal region (RL2) comprising the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III) of the presenilin and the luminal loop 2 (LL2) of the presenilin that links with said luminal end of the TM-III domain,

c) una tercera región luminal (RL3) que comprende el extremo luminal del 15 dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina y el bucle luminal 3 (LL3) de la presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio TM-V, y c) a third luminal region (RL3) comprising the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of the presenilin and the luminal loop 3 (LL3) of the presenilin that links with said luminal end of the TM-V domain, Y

d) una cuarta región luminal (RL4) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la presenilina y el bucle luminal 4 (LL4) 20 de la presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio TM-VII. d) a fourth luminal region (RL4) comprising the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of the presenilin and the luminal loop 4 (LL4) 20 of the presenilin that links with said luminal end of the TM-VII domain.

El término “región luminal” (RL), tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere a una región dispuesta hacia el exterior luminal del canal 42 de las presenilinas 1 y 2 (Fig. 2) y compuesta por los elementos definidos anteriormente en 25 los puntos a), b), c) ó d), donde los dominios TM-II, TM-III, TM-V y TM-VII son dominios transmembrana de la presenilina; y LL1, LL2, LL3 y LL4 son bucles luminales de la presenilina. Las regiones luminales a) a d) descritas anteriormente se encuentran dispuestas de manera que conforman el acceso luminal al canal 42 de la presenilina, que forma parte del complejo enzimático -secretasa. 30 The term "luminal region" (RL), as used in the present description, refers to a luminal outward region of channel 42 of presenilins 1 and 2 (Fig. 2) and composed of the elements defined above in points a), b), c) or d), where the domains TM-II, TM-III, TM-V and TM-VII are transmembrane domains of presenilin; and LL1, LL2, LL3 and LL4 are luminous loops of presenilin. The luminal regions a) to d) described above are arranged so that they form the luminal access to the 42 channel of the presenilin, which is part of the -secretase enzyme complex. 30

Se entiende por “extremo luminal del dominio transmembrana” la región aminoacídica de cualquiera de los dominios transmembrana 2, 3, 5 ó 7 (TM-II, TM-III, TM-V y TM-VII) de las presenilinas 1 ó 2 dispuesta hacia el extremo luminal del canal 42 (Fig. 2), dentro del complejo enzimático -secretasa, los cuales, como se ha 35 "Luminal end of the transmembrane domain" means the amino acid region of any of the transmembrane domains 2, 3, 5 or 7 (TM-II, TM-III, TM-V and TM-VII) of the presenilins 1 or 2 arranged towards the luminal end of the 42 channel (Fig. 2), within the -secretase enzyme complex, which, as it has been

indicado anteriormente, forman parte del canal 42 de la presenilina. Estas regiones aminoacídicas consisten en los últimos 3 a 4 aminoácidos del extremo C- ó N-terminal de cada dominio transmembrana (Fig. 2). indicated above, they are part of the 42 channel of presenilin. These amino acid regions consist of the last 3 to 4 amino acids of the C- or N-terminal end of each transmembrane domain (Fig. 2).

En una realización más preferida, el extremo luminal del dominio transmembrana 2 5 (TM-II) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1, el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, el extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3 y el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la 10 presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica LVG. In a more preferred embodiment, the luminal end of the transmembrane domain 2 5 (TM-II) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 and the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of 10 presenilin 1 consists of the amino acid sequence LVG.

Se entiende por “bucle luminal” (“luminal loop”, LL) aquella región aminoacídica de las presenilinas 1 ó 2 (Fig. 2) dispuesta enteramente hacia el lumen y que presenta estructura de bucle o “loop” debido a que conecta dos dominios transmembrana, 15 contiguos en la secuencia primaria, entre sí. “Luminal loop” (“luminal loop”, LL) means that amino acid region of presenilins 1 or 2 (Fig. 2) arranged entirely towards the lumen and presenting a loop or “loop” structure because it connects two domains transmembrane, 15 contiguous in the primary sequence, with each other.

En una realización más preferida, el bucle luminal 1 (LL1) de la primera región luminal (RL1) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 6, el bucle luminal 2 (LL2) de la segunda región luminal (RL2) de la presenilina 1 20 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 7, el bucle luminal 3 (LL3) de la tercera región luminal (RL3) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 8 y el bucle luminal 4 (LL4) de la cuarta región luminal (RL4) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 9. In a more preferred embodiment, the luminal loop 1 (LL1) of the first luminal region (RL1) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 6, the luminal loop 2 (LL2) of the second luminal region (RL2 ) of presenilin 1 20 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 7, the luminal loop 3 (LL3) of the third luminal region (RL3) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 8 and the luminal loop 4 (LL4) of the fourth luminal region (RL4) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 9.

25  25

En una realización aun más preferida, la primera región luminal (RL1) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 13, la segunda región luminal (RL2) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 14, la tercera región luminal (RL3) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 15 y la cuarta región luminal (RL4) de la 30 presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 16. In an even more preferred embodiment, the first luminal region (RL1) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 13, the second luminal region (RL2) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14 , the third luminal region (RL3) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 15 and the fourth luminal region (RL4) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 16.

En otra realización preferida, el extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 4, el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina 2 consiste en 35 In another preferred embodiment, the luminal end of the transmembrane domain 2 (TM-II) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 4, the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III) of presenilin 2 consists of 35

la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5, el extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3 y el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica LVG. the amino acid sequence SEQ ID NO: 5, the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 and the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of the Presenilin 2 consists of the amino acid sequence LVG.

5  5

En una realización más preferida, el bucle luminal 1 (LL1) de la primera región luminal (RL1) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 10, el bucle luminal 2 (LL2) de la segunda región luminal (RL2) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 11, el bucle luminal 3 (LL3) de la tercera región luminal (RL3) de la presenilina 2 consiste en la secuencia 10 aminoacídica SEQ ID NO: 8 y el bucle luminal 4 (LL4) de la cuarta región luminal (RL4) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12. In a more preferred embodiment, the luminal loop 1 (LL1) of the first luminal region (RL1) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 10, the luminal loop 2 (LL2) of the second luminal region (RL2 ) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 11, the luminal loop 3 (LL3) of the third luminal region (RL3) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence 10 SEQ ID NO: 8 and the luminal loop 4 (LL4) of the fourth luminal region (RL4) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 12.

En una realización aun más preferida, la primera región luminal (RL1) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 17, la segunda 15 región luminal (RL2) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 18, la tercera región luminal (RL3) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 15 y la cuarta región luminal (RL4) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 19. In an even more preferred embodiment, the first luminal region (RL1) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 17, the second luminal region (RL2) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 18, the third luminal region (RL3) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 15 and the fourth luminal region (RL4) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 19.

20  twenty

Las regiones luminales definidas en la presente invención pueden ser utilizadas en su forma aislada como dianas farmacológicas para el cribado de moléculas capaces de ejercer un impedimento estérico sobre el canal 42 de la presenilina que impida la entrada del sustrato a dicho canal. Por ello, en un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una región luminal aislada del canal 42 de la presenilina que 25 forma parte del complejo enzimático -secretasa, de ahora en adelante “región luminal de la invención”, seleccionada de la lista que consiste en: The luminal regions defined in the present invention can be used in their isolated form as pharmacological targets for the screening of molecules capable of exerting a steric hindrance on the 42 channel of the presenilin that prevents the substrate from entering said channel. Therefore, in a second aspect, the present invention relates to a luminal region isolated from the 42 channel of the presenilin which is part of the -secretase enzyme complex, hereafter referred to as the "luminal region of the invention", selected from the list consisting of:

a) región luminal 1 (RL1) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II) de la presenilina y el bucle luminal 1 (LL1) de la 30 presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II), a) luminal region 1 (RL1) comprising the luminal end of the transmembrane domain 2 (TM-II) of the presenilin and the luminal loop 1 (LL1) of the presenilin that links with said luminal end of the transmembrane domain 2 (TM- II),

b) región luminal 2 (RL2) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina y el bucle luminal 2 (LL2) de la 35 b) luminal region 2 (RL2) comprising the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III) of the presenilin and the luminal loop 2 (LL2) of the

presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III), presenilin that binds to said luminal end of the transmembrane 3 (TM-III) domain,

c) región luminal 3 (RL3) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina y el bucle luminal 3 (LL3) de la 5 presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V), y c) luminal region 3 (RL3) comprising the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of the presenilin and the luminal loop 3 (LL3) of the presenilin that links with said luminal end of the transmembrane domain 5 (TM- V), and

d) región luminal 4 (RL4) que comprende el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la presenilina y el bucle luminal 4 (LL4) de la 10 presenilina que enlaza con dicho extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII). d) luminal region 4 (RL4) comprising the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of the presenilin and the luminal loop 4 (LL4) of the presenilin that links with said luminal end of the transmembrane domain 7 (TM- VII).

La utilidad de estas dianas moleculares se basa en su situación estratégica dentro del área que delimita el canal 42 de la presenilina, por lo que su inhibición o bloqueo 15 conduce a un impedimento estérico del canal 42 para la entrada del sustrato APP, lo que finalmente se traduce en una reducción del cociente A42/A40. The usefulness of these molecular targets is based on their strategic situation within the area that delimits the channel 42 of the presenilin, so its inhibition or blockage 15 leads to a steric impediment of the channel 42 for the entrance of the APP substrate , which ultimately translates into a reduction in the A42 / A40 ratio.

La región luminal de la presente invención puede ser sintetizada, por ejemplo, aunque sin limitarnos, in vitro. Por ejemplo, mediante la síntesis de péptidos en fase 20 sólida o mediante aproximaciones de ADN recombinante. La región luminal de la invención puede producirse recombinantemente, no sólo directamente sino como un polipéptido de fusión junto con un polipéptido heterólogo, el cual puede contener, por ejemplo aunque sin limitarnos, una secuencia señal u otro polipéptido que tenga un sitio de corte por una proteasa, por ejemplo, aunque sin limitarnos, en el extremo N-25 terminal de la proteína madura o del polipéptido. La producción recombinante de la región luminal de la invención comprende la amplificación de un polinucleótido que codifica para dicha región, la clonación del polinucleótido amplificado en un vector de expresión, la transformación o transfección de una célula competente con dicho vector, el cultivo de dicha célula en condiciones que promuevan la expresión de la 30 región luminal de la invención y el aislamiento y purificación de la región luminal de la invención producida por la célula. The luminal region of the present invention can be synthesized, for example, but not limited to, in vitro. For example, by solid phase 20 peptide synthesis or by recombinant DNA approaches. The luminal region of the invention can be produced recombinantly, not only directly but as a fusion polypeptide together with a heterologous polypeptide, which may contain, for example, but not limited to, a signal sequence or other polypeptide having a cut-off site by a protease, for example, but not limited to, at the N-25 terminal end of the mature protein or polypeptide. The recombinant production of the luminal region of the invention comprises the amplification of a polynucleotide encoding said region, the cloning of the amplified polynucleotide into an expression vector, the transformation or transfection of a competent cell with said vector, the cultivation of said cell. under conditions that promote the expression of the luminal region of the invention and the isolation and purification of the luminal region of the invention produced by the cell.

La región luminal de la invención puede presentar variantes. Estas variantes se refieren a variaciones limitadas en la secuencia aminoacídica, que permiten el 35 The luminal region of the invention may have variants. These variants refer to limited variations in the amino acid sequence, which allow

mantenimiento de la funcionalidad del péptido. Esto quiere decir que la secuencia de referencia y la secuencia de la variante son similares en conjunto, e idénticas en muchas regiones. Estas variaciones se generan por sustituciones, deleciones o adiciones. Dichas sustituciones son, por ejemplo, aunque sin limitarnos, por aminoácidos conservados. Los aminoácidos conservados son aminoácidos que 5 tienen cadenas laterales y propiedades similares en cuanto a, por ejemplo, hidrofobicidad o aromaticidad. Estas sustituciones incluyen, aunque sin limitarse, sustituciones entre ácido glutámico (Glu) y ácido aspártico (Asp), entre lisina (Lys) y arginina (Arg), entre asparagina (Asn) y glutamina (Gln), entre serina (Ser) y treonina (Thr), y/o entre los aminoácidos que componen el grupo alanina (Ala), leucina (Leu), 10 valina (Val) e isoleucina (Ile). Las variaciones pueden ser variaciones generadas artificialmente como, por ejemplo, mediante mutagénesis o síntesis directa. Por ello, dentro del alcance de la presente invención también se incluyen los péptidos o polipéptidos cuya secuencia de aminoácidos sea idéntica u homologa a las secuencias descritas en la presente invención. 15 maintenance of peptide functionality. This means that the reference sequence and the variant sequence are similar as a whole, and identical in many regions. These variations are generated by substitutions, deletions or additions. Such substitutions are, for example, but not limited to conserved amino acids. The conserved amino acids are amino acids that have similar side chains and properties in terms of, for example, hydrophobicity or aromaticity. These substitutions include, but are not limited to, substitutions between glutamic acid (Glu) and aspartic acid (Asp), between lysine (Lys) and arginine (Arg), between asparagine (Asn) and glutamine (Gln), between serine (Ser) and threonine (Thr), and / or among the amino acids that make up the alanine (Ala), leucine (Leu), valine (Val) and isoleucine (Ile) group. Variations can be artificially generated variations, such as by mutagenesis or direct synthesis. Therefore, peptides or polypeptides whose amino acid sequence is identical or homologous to the sequences described in the present invention are also included within the scope of the present invention. fifteen

En una realización preferida de la región luminal de la invención, el extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1, el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, el 20 extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3 y el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica LVG. In a preferred embodiment of the luminal region of the invention, the luminal end of the transmembrane domain 2 (TM-II) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III ) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 2, the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 and the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence LVG.

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En una realización más preferida, el bucle luminal 1 (LL1) de la región luminal 1 (RL1) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 6, el bucle luminal 2 (LL2) de la región luminal 2 (RL2) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 7, el bucle luminal 3 (LL3) de la región luminal 3 (RL3) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 8 y el 30 bucle luminal 4 (LL4) de la región luminal 4 (RL4) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 9. In a more preferred embodiment, the luminal loop 1 (LL1) of the luminal region 1 (RL1) of the presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 6, the luminal loop 2 (LL2) of the luminal region 2 (RL2 ) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 7, the luminal loop 3 (LL3) of the luminal region 3 (RL3) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 8 and the 30 luminal loop 4 (LL4) of the luminal region 4 (RL4) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 9.

En una realización aun más preferida, la región luminal 1 (RL1) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 13, la región luminal 2 (RL2) de 35 In an even more preferred embodiment, the luminal region 1 (RL1) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 13, the luminal region 2 (RL2) of 35

la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 14, la región luminal 3 (RL3) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 15 y la región luminal 4 (RL4) de la presenilina 1 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 16. Presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 14, the luminal region 3 (RL3) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 15 and the luminal region 4 (RL4) of presenilin 1 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 16.

5  5

En otra realización preferida de la región luminal de la invención, el extremo luminal del dominio transmembrana 2 (TM-II) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 4, el extremo luminal del dominio transmembrana 3 (TM-III) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5, el extremo luminal del dominio transmembrana 5 (TM-V) de la presenilina 2 consiste en 10 la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3 y el extremo luminal del dominio transmembrana 7 (TM-VII) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica LVG. In another preferred embodiment of the luminal region of the invention, the luminal end of the transmembrane domain 2 (TM-II) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 4, the luminal end of the transmembrane domain 3 (TM-III ) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 5, the luminal end of the transmembrane domain 5 (TM-V) of presenilin 2 consists of 10 the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 and the luminal end of the transmembrane domain 7 (TM-VII) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence LVG.

En una realización más preferida, el bucle luminal 1 (LL1) de la región luminal 1 15 (RL1) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 10, el bucle luminal 2 (LL2) de la región luminal 2 (RL2) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 11, el bucle luminal 3 (LL3) de la región luminal 3 (RL3) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 8 y el bucle luminal 4 (LL4) de la región luminal 4 (RL4) de la presenilina 2 consiste en la 20 secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12. In a more preferred embodiment, the luminal loop 1 (LL1) of the luminal region 1 15 (RL1) of the presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 10, the luminal loop 2 (LL2) of the luminal region 2 ( RL2) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 11, the luminal loop 3 (LL3) of the luminal region 3 (RL3) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 8 and the luminal loop 4 (LL4) of the luminal region 4 (RL4) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 12.

En una realización aun más preferida, la región luminal 1 (RL1) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 17, la región luminal 2 (RL2) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 18, la región 25 luminal 3 (RL3) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 15 y la región luminal 4 (RL4) de la presenilina 2 consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 19. In an even more preferred embodiment, the luminal region 1 (RL1) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 17, the luminal region 2 (RL2) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 18 , the luminal region 25 (RL3) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 15 and the luminal region 4 (RL4) of presenilin 2 consists of the amino acid sequence SEQ ID NO: 19.

Un tercer aspecto de la invención se refiere al uso de la región luminal de la 30 invención como diana farmacológica para el cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la EA. A third aspect of the invention relates to the use of the luminal region of the invention as a pharmacological target for the screening of molecules useful for the treatment and / or prevention of AD.

En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un método de cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la EA, de ahora en adelante 35 In a fourth aspect, the present invention relates to a method of screening molecules useful for the treatment and / or prevention of AD, hereafter

“método de la invención”, que comprende: "Method of the invention", comprising:

a. Poner en contacto una molécula a estudiar con el canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa, ex vivo, o con la región luminal de la invención aislada, 5 to. Contacting a molecule to be studied with the 42 channel of the presenilin that is part of the -secretase enzyme complex, ex vivo, or with the luminal region of the isolated invention,

b. Analizar la interacción entre la molécula a estudiar y las regiones luminales de la invención, y b. Analyze the interaction between the molecule to be studied and the luminal regions of the invention, and

c. Seleccionar la molécula del paso (a) para el tratamiento y/o prevención de la EA cuando ésta se ha unido a al menos una de las regiones luminales de la invención. 10 C. Select the molecule from step (a) for the treatment and / or prevention of AD when it has joined at least one of the luminal regions of the invention. 10

Se entiende por “poner en contacto una molécula a estudiar con el canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa, o con la región luminal de la invención aislada”, la incubación de la molécula a estudiar con la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa, o con la región 15 luminal de la invención aislada, bajo condiciones que permiten la unión molécula-diana farmacológica, siendo la diana el canal 42 o la región luminal de la invención aislada. Si la molécula a estudiar es un anticuerpo, la incubación se realiza bajo condiciones que permitan la formación de complejos antígeno-anticuerpo y se mantiene durante un periodo de tiempo adecuado para que tenga lugar una 20 respuesta inmune. It is understood as "contacting a molecule to be studied with the 42 channel of the presenilin that is part of the -secretase enzyme complex, or with the luminal region of the isolated invention", the incubation of the molecule to be studied with presenilin which is part of the -secretase enzyme complex, or with the luminal region of the invention isolated, under conditions that allow pharmacological molecule-target binding, the siendo42 channel or the luminal region of the isolated invention being the target. If the molecule to be studied is an antibody, the incubation is carried out under conditions that allow the formation of antigen-antibody complexes and is maintained for a suitable period of time for an immune response to take place.

El término “analizar la interacción”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere preferiblemente al estudio del cambio operado o respuesta tras la incubación de la molécula a estudiar, objeto del cribado en el paso (a), en la 25 concentración de los sustratos/productos relacionados con la “escisión ” realizada por la presenilina, perteneciente al complejo enzimático -secretasa. Una realización más preferida sería cuando el sustrato/producto se refiera a un sustrato/producto amiloideo o un derivado/análogo de éste. The term "analyze the interaction", as used in the present description, preferably refers to the study of the change operated or response after incubation of the molecule to be studied, object of screening in step (a), in concentration of the substrates / products related to the "cleavage " performed by preseniline, belonging to the enzyme complex -secretase. A more preferred embodiment would be when the substrate / product refers to an amyloid substrate / product or a derivative / analog thereof.

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Si la molécula a estudiar es un anticuerpo, la presencia de una respuesta inmunológica puede determinarse, en una realización preferente, haciendo un seguimiento mediante FRET (“Fluerescent Resonance Energy Transfer”) de la unión del sustrato (previamente marcado con un donador de fluorescencia) a la enzima presenilina, que forma parte del complejo enzimático -secretasa, cuando la enzima 35 If the molecule to be studied is an antibody, the presence of an immunological response can be determined, in a preferred embodiment, by monitoring the substrate binding (previously labeled with a fluorescence donor) by FRET ("Fluerescent Resonance Energy Transfer"). to the enzyme preseniline, which is part of the -secretase enzyme complex, when the enzyme 35

está unida al anticuerpo a estudiar (previamente marcado con un aceptor de fluorescencia). is bound to the antibody to be studied (previously labeled with a fluorescence acceptor).

La presencia de una respuesta también puede determinarse, en otra realización preferente, estudiando los productos (derivados de la “escisión ” realizada por la 5 presenilina, perteneciente al complejo enzimático -secretasa) por métodos convencionales conocidos en el estado de la técnica. Por ello, en una realización preferida, la presencia de respuesta se determina mediante ensayos como Western blot, geles de electroforesis, inmunoprecipitación, arrays de proteína, inmunofluorescencia, inmunohistoquímica, ELISA o cualquier otro método 10 enzimático; mediante la incubación con un ligando específico; mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen; o, por ejemplo, mediante técnicas cromatográficas combinadas con espectrometría de masas. The presence of a response can also be determined, in another preferred embodiment, by studying the products (derived from the "cleavage " performed by the preseniline, belonging to the -secretase enzyme complex) by conventional methods known in the state of the art. Therefore, in a preferred embodiment, the presence of response is determined by assays such as Western blotting, electrophoresis gels, immunoprecipitation, protein arrays, immunofluorescence, immunohistochemistry, ELISA or any other enzymatic method; by incubation with a specific ligand; by NMR or any other imaging technique; or, for example, by chromatographic techniques combined with mass spectrometry.

Los “productos/sustratos relacionados con la “escisión ” realizada por la presenilina” 15 se refieren, preferiblemente, a un sustrato/producto amiloideo o un derivado/análogo de éste, más preferiblemente a los péptidos A48 y A49, como sustratos, y a los péptidos A45, A42, A38, A46, A43, A40 y A37, como productos de la escisión . En una realización aun más preferida, el sustrato es A48 y los productos son A45, A42 y/o A38. 20 The "products / substrates related to the" cleavage  "performed by presenilin" 15 preferably refer to an amyloid substrate / product or a derivative / analog thereof, more preferably peptides A48 and A49, as substrates, and peptides A45, A42, A38, A46, A43, A40 and A37, as cleavage products . In an even more preferred embodiment, the substrate is A48 and the products are A45, A42 and / or A38. twenty

El criterio de selección de moléculas en el paso (c) ha de ser el siguiente: una vez que la molécula se ha unido al canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa (preferiblemente a una o varias de las regiones luminales de la invención), ésta debe ser capaz de disminuir el cociente entre los 25 productos amiloideos A42 y A40 (A42/A40). La medida de este cociente puede realizarse in vitro mediante técnicas bien conocidas por el experto en la materia, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, mediante la incubación con un anticuerpo específico para A42 y otro para A40, en ensayos como Western blot, geles de electroforesis, inmunoprecipitación, arrays de proteína, inmunofluorescencia, 30 inmunohistoquímica, ELISA o cualquier otro método enzimático; mediante la incubación con un ligando específico; mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen; o, por ejemplo, mediante técnicas cromatográficas combinadas con espectrometría de masas. The criteria for selecting molecules in step (c) must be the following: once the molecule has joined the 42 channel of the presenilin that is part of the -secretase enzyme complex (preferably one or more of the luminal regions of the invention), this should be able to decrease the ratio between the amyloid products A42 and A40 (A42 / A40). The measurement of this ratio can be performed in vitro by techniques well known to those skilled in the art, such as, but not limited to, by incubation with an antibody specific for A42 and another for A40, in assays such as Western blot, electrophoresis gels, immunoprecipitation, protein arrays, immunofluorescence, immunohistochemistry, ELISA or any other enzymatic method; by incubation with a specific ligand; by NMR or any other imaging technique; or, for example, by chromatographic techniques combined with mass spectrometry.

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La región luminal de la invención presenta capacidad antigénica, por lo que puede ser empleada para la inmunización de un individuo, preferiblemente mamífero. Una vez producida la inmunización, se extrae el suero del animal inmunizado. La extracción del suero se puede llevar a cabo mediante, por ejemplo aunque sin limitarnos, extracción sanguínea, posterior coagulación de ésta, eliminación del 5 coágulo de fibrina y otros componentes y aislamiento del suero. Para obtener el suero, a la sangre no se aplica anticoagulante, sino que se deja que coagule y se centrifuga. Se entiende por “suero”, “suero sanguíneo” o “suero hemático” el componente de la sangre resultante tras permitir la coagulación de ésta y eliminar el coágulo de fibrina y otros componentes, que contiene numerosos efectores 10 biológicos, como el factor de crecimiento derivado de plaquetas, segregados por los elementos formes al suceder dicha coagulación. Es de un color amarillo, un poco más intenso que el plasma. Posteriormente, se purifican los anticuerpos específicos frente a la región luminal de la invención empleada en la inmunización presentes en el suero obtenido. Son conocidos en el estado de la técnica diversos métodos de 15 purificación de anticuerpos que podrían llevarse a cabo para tal fin, como por ejemplo, aunque sin limitarnos, métodos electroforéticos o cromatográficos. The luminal region of the invention has antigenic capacity, so it can be used for the immunization of an individual, preferably mammal. Once the immunization has occurred, the serum of the immunized animal is extracted. Serum extraction can be carried out by, for example, but not limited to, blood extraction, subsequent coagulation of the blood, removal of the fibrin clot and other components and isolation of the serum. To obtain the serum, anticoagulant is not applied to the blood, but is allowed to clot and centrifuged. By "serum", "blood serum" or "blood serum" is meant the resulting blood component after allowing blood clotting and eliminating the fibrin clot and other components, which contains numerous biological effectors 10, such as the growth factor derived from platelets, segregated by the formal elements when said coagulation occurs. It is a yellow color, a little more intense than plasma. Subsequently, the specific antibodies are purified against the luminal region of the invention used in the immunization present in the serum obtained. Various methods of antibody purification are known in the state of the art that could be carried out for this purpose, such as, but not limited to, electrophoretic or chromatographic methods.

La región luminal también puede ser empleada para la inmunización de un ave. Preferiblemente, una vez producida la inmunización se recogen los huevos del 20 animal inmunizado, se separan las yemas, eliminan los lípidos y precipitan/purifican los anticuerpos mediante diversos métodos conocidos en el estado de la técnica. The luminal region can also be used for the immunization of a bird. Preferably, once the immunization has occurred, the eggs of the immunized animal are collected, the yolks are separated, the lipids are removed and the antibodies precipitated / purified by various methods known in the state of the art.

La “electroforesis” es una técnica analítica de separación basada en el movimiento o la migración de macro-moléculas disueltas en un medio (buffer de electroforesis), 25 mediante una matriz o un apoyo sólido como resultado de la acción de un campo eléctrico. El comportamiento de la molécula depende de su movilidad electroforética y esta movilidad depende de la carga, tamaño y forma. Existen numerosas variaciones de esta técnica basadas en el equipamiento usado, soportes y condiciones para llevar a cabo la separación de las moléculas. La electroforesis se 30 selecciona de la lista que consiste en, pero sin limitarse, electroforesis capilar, electroforesis en papel, electroforesis en gel de agarosa, electroforesis en gel de poliacrilamida, isoelectroenfoque o electroforesis bidimensional. “Electrophoresis” is an analytical separation technique based on the movement or migration of dissolved macro-molecules in a medium (electrophoresis buffer), 25 by means of a matrix or a solid support as a result of the action of an electric field. The behavior of the molecule depends on its electrophoretic mobility and this mobility depends on the charge, size and shape. There are numerous variations of this technique based on the equipment used, supports and conditions for carrying out the separation of the molecules. Electrophoresis is selected from the list consisting of, but not limited to, capillary electrophoresis, paper electrophoresis, agarose gel electrophoresis, polyacrylamide gel electrophoresis, isoelectric focusing or two-dimensional electrophoresis.

Los “métodos cromatográficos” permiten la separación de las moléculas por, aunque sin limitarse, su carga, tamaño, masa molecular, mediante su polaridad o mediante su potencial redox. La técnica de cromatografía se selecciona de entre, pero sin limitarse, cromatografía de partición, filtración, cromatografía de adsorción, cromatografía de exclusión molecular, cromatografía de intercambio iónico, 5 cromatografía hidrofóbica o cromatografía de afinidad, y pueden realizarse tanto en columna, como en papel o en placa. The "chromatographic methods" allow the separation of molecules by, but not limited to, their charge, size, molecular mass, by their polarity or by their redox potential. The chromatography technique is selected from, but not limited to, partition chromatography, filtration, adsorption chromatography, molecular exclusion chromatography, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography or affinity chromatography, and can be performed both in column and in paper or plate.

El péptido de secuencia SEQ ID NO: 20 es un péptido de 8 aminoácidos que corresponde a los residuos 14 a 21 de la secuencia aminoacídica del bucle luminal 1 10 (LL1) de la primera región luminal (RL1) de la presenilina 1 (SEQ ID NO: 6) ó 2 (SEQ ID NO: 10). Como se muestra en los ejemplos de la presente invención, este péptido de SEQ ID NO: 20 presenta capacidad antigénica y, por tanto, puede emplearse como se ha explicado anteriormente para la inmunización de un animal y la consiguiente obtención de anticuerpos. Como muestran los ejemplos, cuando al 15 menos un anticuerpo específico frente a dicho péptido se encuentra unido al mismo en el complejo enzimático -secretasa, dicha interacción ejerce un impedimento estérico que impide la entrada del sustrato APP al canal 42 de la presenilina, provocando así una reducción en el cociente A42/A40. The sequence peptide SEQ ID NO: 20 is an 8 amino acid peptide corresponding to residues 14 to 21 of the amino acid sequence of the luminal loop 1 10 (LL1) of the first luminal region (RL1) of presenilin 1 (SEQ ID NO: 6) or 2 (SEQ ID NO: 10). As shown in the examples of the present invention, this peptide of SEQ ID NO: 20 has antigenic capacity and, therefore, can be used as explained above for the immunization of an animal and the consequent obtaining of antibodies. As the examples show, when at least one specific antibody against said peptide is bound thereto in the -secretase enzyme complex, said interaction exerts a steric hindrance that prevents the entry of the APP substrate into the 42 channel of the preseniline, thus causing a reduction in the A42 / A40 ratio.

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Por ello, otro aspecto de la invención se refiere a un péptido aislado que consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 20, de ahora en adelante “péptido de la invención”. Dicho péptido puede ser sintetizado, por ejemplo, aunque sin limitarnos, in vitro. Por ejemplo, mediante la síntesis de péptidos en fase sólida o mediante aproximaciones de ADN recombinante. El péptido de la invención puede producirse 25 recombinantemente, no sólo directamente sino como un polipéptido de fusión junto con un polipéptido heterólogo, el cual puede contener, por ejemplo aunque sin limitarnos, una secuencia señal u otro polipéptido que tenga un sitio de corte por una proteasa, por ejemplo, aunque sin limitarnos, en el extremo N-terminal de la proteína madura o del polipéptido. La producción recombinante del péptido de la invención 30 comprende la amplificación de un polinucleótido que codifica para dicho péptido, la clonación del polinucleótido amplificado en un vector de expresión, la transformación o transfección de una célula competente con dicho vector, el cultivo de dicha célula en condiciones que promuevan la expresión del péptido de la invención y el aislamiento y purificación del péptido producido por la célula. 35 Therefore, another aspect of the invention relates to an isolated peptide consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 20, hereinafter "peptide of the invention". Said peptide can be synthesized, for example, but not limited to, in vitro. For example, by solid phase peptide synthesis or by recombinant DNA approaches. The peptide of the invention can be produced recombinantly, not only directly but as a fusion polypeptide together with a heterologous polypeptide, which may contain, for example, but not limited to, a signal sequence or other polypeptide having a cleavage site by a protease, for example, but not limited to, at the N-terminal end of the mature protein or polypeptide. The recombinant production of the peptide of the invention comprises the amplification of a polynucleotide encoding said peptide, the cloning of the amplified polynucleotide into an expression vector, the transformation or transfection of a competent cell with said vector, the cultivation of said cell in conditions that promote the expression of the peptide of the invention and the isolation and purification of the peptide produced by the cell. 35

Otro aspecto de la invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica para el péptido de la invención, de ahora en adelante “polinucleótido de la invención”. Otro aspecto de la invención se refiere a una construcción génica, preferiblemente un vector de expresión, que comprende dicho polinucleótido. Otro aspecto de la invención se refiere a una célula que comprende el polinucleótido de la invención o la 5 construcción génica de la invención. Another aspect of the invention relates to an isolated polynucleotide encoding the peptide of the invention, hereinafter "polynucleotide of the invention". Another aspect of the invention relates to a gene construct, preferably an expression vector, comprising said polynucleotide. Another aspect of the invention relates to a cell comprising the polynucleotide of the invention or the gene construct of the invention.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso del péptido de SEQ ID NO: 20 como diana farmacológica para el cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la EA. 10 Another aspect of the invention relates to the use of the peptide of SEQ ID NO: 20 as a pharmacological target for the screening of molecules useful for the treatment and / or prevention of AD. 10

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un anticuerpo específico frente a la región luminal de la invención, de ahora en adelante “anticuerpo de la invención”. En una realización preferida, este anticuerpo de la invención es específico frente al péptido que consiste en la SEQ ID NO: 20. 15 Another aspect of the present invention relates to a specific antibody against the luminal region of the invention, hereafter referred to as "antibody of the invention". In a preferred embodiment, this antibody of the invention is specific against the peptide consisting of SEQ ID NO: 20. 15

El término “anticuerpo” se refiere a moléculas de inmunoglobulinas o a porciones inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulinas, es decir, moléculas que contienen un sitio de fijación de antígeno que se une específicamente (inmunorreacciona) con la región luminal de la invención, preferiblemente con el 20 péptido de SEQ ID NO: 20. Ejemplos de porciones de moléculas de inmunoglobulinas inmunológicamente activas incluyen fragmentos F(ab) y F(ab’)2, los cuales pueden ser generados tratando el anticuerpo con una enzima tal como la pepsina o recombinantemente. The term "antibody" refers to immunoglobulin molecules or immunologically active portions of immunoglobulin molecules, that is, molecules that contain an antigen binding site that specifically binds (immunoreacts) with the luminal region of the invention, preferably with the 20 peptide of SEQ ID NO: 20. Examples of portions of immunologically active immunoglobulin molecules include F (ab) and F (ab ') 2 fragments, which can be generated by treating the antibody with an enzyme such as pepsin or recombinantly.

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El anticuerpo de la invención puede ser policlonal (incluye típicamente anticuerpos distintos dirigidos contra determinantes o epítopos distintos) o monoclonal (dirigido contra un único determinante en el antígeno). La expresión “anticuerpo monoclonal” alude a una población de moléculas de anticuerpos que contienen solamente una especie de un sitio de fijación de antígeno capaz de inmunorreaccionar con un 30 epítopo particular del antígeno. El anticuerpo monoclonal puede ser alterado bioquímicamente, mediante manipulación genética, o puede ser sintético, careciendo, posiblemente, el anticuerpo en su totalidad o en partes, de porciones que no son necesarias para el reconocimiento de la región luminal de la invención, preferiblemente del péptido de SEQ ID NO: 20, y estando sustituidas por otras que 35 The antibody of the invention can be polyclonal (typically includes different antibodies directed against different determinants or epitopes) or monoclonal (directed against a single determinant in the antigen). The term "monoclonal antibody" refers to a population of antibody molecules that contain only one species of an antigen binding site capable of immunoreacting with a particular epitope of the antigen. The monoclonal antibody may be biochemically altered, by genetic manipulation, or it may be synthetic, possibly lacking the antibody in whole or in part, from portions that are not necessary for recognition of the luminal region of the invention, preferably of the peptide of SEQ ID NO: 20, and being replaced by others that 35

comunican al anticuerpo propiedades ventajosas adicionales. En una realización preferida el anticuerpo de la invención es un anticuerpo policlonal. communicate additional advantageous properties to the antibody. In a preferred embodiment the antibody of the invention is a polyclonal antibody.

El anticuerpo de la invención también puede ser recombinante, humanizado, quimérico, sintético o una combinación de cualquiera de los anteriores. Un 5 “anticuerpo recombinante” (rAC) es un anticuerpo que ha sido producido en una célula hospedadora transformada o transfectada con un polinucleótido que codifica para la región luminal de la invención o con el polinucleótido que codifica para el péptido de SEQ ID NO: 20, con un ácido nucleico codificante para el anticuerpo de la invención, o que produce el anticuerpo de la invención o la región luminal de la 10 invención o el péptido de SEQ ID NO: 20 como resultado de la recombinación homóloga. Dicha célula hospedadora incluye una célula en un cultivo celular “in vitro” así como una célula en un animal hospedador. The antibody of the invention can also be recombinant, humanized, chimeric, synthetic or a combination of any of the foregoing. A "recombinant antibody" (rAC) is an antibody that has been produced in a host cell transformed or transfected with a polynucleotide encoding the luminal region of the invention or with the polynucleotide encoding the peptide of SEQ ID NO: 20 , with a nucleic acid encoding the antibody of the invention, or producing the antibody of the invention or the luminal region of the invention or the peptide of SEQ ID NO: 20 as a result of homologous recombination. Said host cell includes a cell in an "in vitro" cell culture as well as a cell in a host animal.

El anticuerpo de la invención también puede ser quimérico. Así, una región de la 15 cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a las secuencias correspondientes en anticuerpos procedentes de una especie determinada o pertenecientes a una clase o subclase de anticuerpos determinados, mientras que la(s) cadena(s) restante(s) es(son) idéntica(s), u homóloga(s), a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otras especies o pertenecientes a otra clase o subclase de 20 anticuerpos, así como a fragmentos de dichos anticuerpos, de manera que exhiban la actividad biológica deseada. The antibody of the invention can also be chimeric. Thus, a region of the heavy and / or light chain is identical or homologous to the corresponding sequences in antibodies from a given species or belonging to a particular class or subclass of antibodies, while the remaining chain (s) (s) is (are) identical, or homologous (s), to the corresponding sequences in antibodies derived from other species or belonging to another class or subclass of 20 antibodies, as well as to fragments of said antibodies, so that exhibit the desired biological activity.

Como se muestra en los ejemplos más adelante, un anticuerpo generado frente a cualquiera de las regiones luminales de la invención, preferiblemente frente al 25 péptido de SEQ ID NO: 20, es capaz de bloquear la entrada del sustrato APP al canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo -secretasa cuando se encuentra unido a su antígeno, lo cual se traduce en una disminución del cociente A42/A40 y así dicho anticuerpo es de utilidad para el tratamiento de enfermedades o condiciones patológicas en las que el procesamiento proteolítico del sustrato APP 30 esté implicado, como por ejemplo, pero sin limitarnos, la EA. Por ello, otro aspecto de la presente invención se refiere al uso del anticuerpo de la invención para la elaboración de un medicamento. O alternativamente, al anticuerpo de la invención para su uso como medicamento. En una realización preferida, el medicamento es para el tratamiento y/o prevención de la EA. 35 As shown in the examples below, an antibody generated against any of the luminal regions of the invention, preferably against the peptide of SEQ ID NO: 20, is capable of blocking the entry of the APP substrate to the 42 channel of the preseniline that is part of the -secretase complex when it is bound to its antigen, which translates into a decrease in the A42 / A40 ratio and thus said antibody is useful for the treatment of diseases or pathological conditions in which the proteolytic processing of the APP 30 substrate is involved, such as, but not limited to, EA. Therefore, another aspect of the present invention relates to the use of the antibody of the invention for the manufacture of a medicament. Or alternatively, to the antibody of the invention for use as a medicament. In a preferred embodiment, the medicament is for the treatment and / or prevention of AD. 35

El término “medicamento”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere a toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora de propiedades para el tratamiento o prevención de enfermedades en los organismos, preferiblemente seres humanos, o que pueda usarse o administrarse a los organismos, preferiblemente seres humanos, con el fin de restaurar, corregir o 5 modificar las funciones fisiológicas ejerciendo una acción farmacológica, inmunológica o metabólica. El medicamento de la invención puede utilizarse tanto solo como en combinación con otros medicamentos o composiciones para mejorar el rendimiento cognitivo y/o promover el desarrollo cognitivo a modo de terapia combinada, pudiendo ser administrados al mismo tiempo o en tiempos diferentes. 10 The term "medicament", as used herein, refers to any substance or combination of substances that is presented as having properties for the treatment or prevention of diseases in organisms, preferably humans, or that may used or administered to organisms, preferably humans, in order to restore, correct or modify physiological functions by exerting a pharmacological, immunological or metabolic action. The medicament of the invention can be used both alone and in combination with other medicaments or compositions to improve cognitive performance and / or promote cognitive development as a combination therapy, and can be administered at the same time or at different times. 10

El término “tratamiento” tal como se entiende en la presente invención se refiere a combatir los efectos causados como consecuencia de la enfermedad o condición patológica de interés en un sujeto (preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano) que incluye: 15 The term "treatment" as understood in the present invention refers to combating the effects caused as a result of the disease or pathological condition of interest in a subject (preferably mammal, and more preferably a human) that includes:

(i) inhibir la enfermedad o condición patológica, es decir, detener su desarrollo; (i) inhibit the disease or pathological condition, that is, stop its development;

(ii) aliviar la enfermedad o la condición patológica, es decir, causar la regresión de la enfermedad o la condición patológica o su sintomatología; (ii) alleviate the disease or the pathological condition, that is, cause the regression of the disease or the pathological condition or its symptomatology;

(iii) estabilizar la enfermedad o la condición patológica. 20 (iii) stabilize the disease or pathological condition. twenty

El término “prevención” tal como se entiende en la presente invención consiste en evitar la aparición de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un sujeto (preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposición 25 por la condición patológica, pero aún no se ha diagnosticado que la tenga. The term "prevention" as understood in the present invention consists in preventing the onset of the disease, that is, preventing the disease or pathological condition from occurring in a subject (preferably mammal, and more preferably a human), in particularly, when said subject has a predisposition 25 for the pathological condition, but has not yet been diagnosed as having it.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de la invención, de ahora en adelante “composición farmacéutica de la invención”. En una realización preferida la composición 30 farmacéutica de la invención además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y/u otro principio activo. In another aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the antibody of the invention, hereinafter "pharmaceutical composition of the invention". In a preferred embodiment the pharmaceutical composition 30 of the invention further comprises a pharmaceutically acceptable carrier and / or other active ingredient.

El “vehículo farmacéuticamente aceptable”, es una sustancia que se emplea en la composición para diluir cualquiera de los componentes comprendidos en ella hasta 35 The "pharmaceutically acceptable carrier" is a substance that is used in the composition to dilute any of the components included therein up to 35

un volumen o peso determinado. El vehículo farmacéuticamente aceptable es una sustancia inerte o de acción análoga a cualquiera de los elementos comprendidos en la composición de la presente invención. La función del vehículo es facilitar la incorporación de otros elementos, permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la composición. 5 a certain volume or weight. The pharmaceutically acceptable carrier is an inert substance or action analogous to any of the elements included in the composition of the present invention. The function of the vehicle is to facilitate the incorporation of other elements, allow a better dosage and administration or give consistency and form to the composition. 5

Además, la composición farmacéutica de la invención puede comprender uno o más adyuvantes y/o excipientes. El término “excipiente” hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción de los elementos de la composición de la invención, estabiliza dichos elementos, activa o ayuda a la preparación de la composición en el 10 sentido de darle consistencia o aportar sabores que la hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener la función de mantener los ingredientes unidos, como por ejemplo es el caso de almidones, azúcares o celulosas, la función de endulzar, la función de colorante, la función de protección de la composición, como por ejemplo, para aislarla del aire y/o la humedad, la función de relleno de una 15 pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación, la función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo. In addition, the pharmaceutical composition of the invention may comprise one or more adjuvants and / or excipients. The term "excipient" refers to a substance that helps the absorption of the elements of the composition of the invention, stabilizes said elements, activates or aids the preparation of the composition in the sense of giving it consistency or providing flavors that the make it more enjoyable Thus, the excipients could have the function of keeping the ingredients together, such as, for example, starches, sugars or cellulose, the sweetening function, the coloring function, the protective function of the composition, for example, to isolate it from air and / or moisture, the filling function of a tablet, capsule or any other form of presentation, the disintegrating function to facilitate the dissolution of the components and their absorption in the intestine, without excluding other types of excipients not mentioned in this paragraph.

Preferiblemente, la composición de la invención comprende el anticuerpo de la 20 invención en una cantidad terapéuticamente efectiva, entendiéndose por "cantidad terapéuticamente efectiva" el nivel, cantidad o concentración de anticuerpo de la invención que produzca el efecto deseado mejorando el rendimiento cognitivo y/o promoviendo el desarrollo cognitivo, preferiblemente, tratando y/o previniendo la EA, sin causar efectos adversos. La dosificación para obtener una cantidad 25 terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como por ejemplo, la edad, peso, sexo o tolerancia del individuo al que le va a ser administrada la composición de la invención. Preferably, the composition of the invention comprises the antibody of the invention in a therapeutically effective amount, "therapeutically effective amount" being understood as the level, amount or concentration of antibody of the invention that produces the desired effect by improving cognitive performance and / or promoting cognitive development, preferably, treating and / or preventing AD, without causing adverse effects. The dosage to obtain a therapeutically effective amount depends on a variety of factors, such as, for example, the age, weight, sex or tolerance of the individual to whom the composition of the invention is to be administered.

La composición de la presente invención puede formularse para su administración en 30 una variedad de formas conocidas en el estado de la técnica. Como ejemplos de preparaciones se incluye cualquier composición sólida (comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones o emulsiones) para administración oral, tópica o parenteral. La composición de la presente invención también puede estar en forma de formulaciones de liberación sostenida de drogas o 35 The composition of the present invention can be formulated for administration in a variety of ways known in the state of the art. Examples of preparations include any solid composition (tablets, pills, capsules, granules, etc.) or liquid (solutions, suspensions or emulsions) for oral, topical or parenteral administration. The composition of the present invention may also be in the form of sustained drug release formulations or

de cualquier otro sistema convencional de liberación, así puede estar contenida, aunque sin limitarnos, en nanopartículas, liposomas o nanosferas, en un material polimérico, en un implante biodegradable o no biodegradable o en micropartículas biodegradables, como por ejemplo, microesferas biodegradables. of any other conventional release system, it may thus be contained, but not limited to, in nanoparticles, liposomes or nanospheres, in a polymeric material, in a biodegradable or non-biodegradable implant or in biodegradable microparticles, such as, for example, biodegradable microspheres.

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Tal composición y/o sus formulaciones pueden administrarse a un animal, y por tanto al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse, intraperitoneal, intravenosa, intradérmica, intraespinal, intraestromal, intraarticular, intrasinovial, intratecal, intralesional, intraarterial, intramuscular, intranasal, intracraneal, subcutánea, intraorbital, intracapsular, tópica, mediante parches transdérmicos, 10 percutánea, espray nasal, implante quirúrgico, pintura quirúrgica interna o bomba de infusión. Such a composition and / or its formulations can be administered to an animal, and therefore to man, in a variety of ways, including, but not limited to, intraperitoneal, intravenous, intradermal, intraspinal, intrastromal, intraarticular, intrasynovial, intrathecal, intralesional, intraarterial. , intramuscular, intranasal, intracranial, subcutaneous, intraorbital, intracapsular, topical, using transdermal patches, 10 percutaneous, nasal spray, surgical implant, internal surgical paint or infusion pump.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o 15 pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. For those skilled in the art, other objects, advantages and features of the invention will be derived partly from the description and partly from the practice of the invention. The following examples and figures are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.

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DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS DESCRIPTION OF THE FIGURES

Figura 1. Representación del complejo -secretasa desde una perspectiva luminal. Los dos canales alojan sendas estructuras cilíndricas que representan al sustrato amiloideo: la blanca se localiza en el canal 42, y la negra en el 40. 25 Figure 1. Representation of the -secretase complex from a luminal perspective. The two channels house cylindrical structures that represent the amyloid substrate: the white one is located in the 42 channel, and the black one in the 40. 25

Figura 2. Esquema representativo de las estructuras que configuran el acceso luminal al canal 42 de la PS1 (Fig. 2a) y PS2 (Fig. 2b). Las distintas regiones luminales se representan recogidas dentro de los rectángulos (RL1, RL2, RL3 y RL4). Los círculos concatenados representan residuos aminoácídicos. Los residuos 30 de los bucles luminales LL1, LL2, LL3 y LL4 se encuentran identificados con la letra del aminoácido correspondiente y sin rellenar. Los residuos de los extremos luminales de los dominios transmembrana TM-II, TM-III, TM-V y TM-VII se encuentran identificados con la letra del aminoácido correspondiente y con relleno. Figure 2. Representative scheme of the structures that configure the luminal access to channel 42 of PS1 (Fig. 2a) and PS2 (Fig. 2b). The different luminous regions are represented collected within the rectangles (RL1, RL2, RL3 and RL4). The concatenated circles represent amino acid residues. Residues 30 of the light loops LL1, LL2, LL3 and LL4 are identified with the corresponding and unfilled amino acid letter. The residues of the luminal ends of the TM-II, TM-III, TM-V and TM-VII transmembrane domains are identified with the corresponding amino acid letter and filled.

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Figura 3. Gráfico que representa el porcentaje de amiloide A42 y A40 y el correspondiente cociente A42/A40 en el sobrenadante recogido en 24 de un cultivo de células de la línea neuronal SHSY5Y-APP695 cultivado en presencia de los anticuerpos policlonales generados frente al péptido de SEQ ID NO: 20, respecto a un cultivo control paralelo cultivado en ausencia de los anticuerpos. 5 Figure 3. Graph representing the percentage of amyloid A42 and A40 and the corresponding ratio A42 / A40 in the supernatant collected in 24 of a cell culture of the SHSY5Y-APP695 neuronal line cultured in the presence of polyclonal antibodies generated against the peptide of SEQ ID NO: 20, relative to a parallel control culture grown in the absence of the antibodies. 5

EJEMPLOS EXAMPLES

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos que demuestran la eficacia del uso del canal 42 de la presenilina, y concretamente del péptido de SEQ 10 ID NO: 20, como diana farmacológica para el cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la EA. Estos ejemplos específicos que se proporcionan sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención y se incluyen solamente con fines ilustrativos, por lo que no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos más adelante 15 muestran la invención sin limitar el campo de aplicación de la misma. The invention will now be illustrated by tests demonstrating the effectiveness of the use of the 42 channel of presenilin, and specifically of the peptide of SEQ 10 ID NO: 20, as a pharmacological target for the screening of molecules useful for treatment and / or AD prevention. These specific examples provided serve to illustrate the nature of the present invention and are included for illustrative purposes only, and therefore should not be construed as limitations on the invention claimed herein. Therefore, the examples described below show the invention without limiting its scope of application.

Ejemplo 1. Producción de anticuerpos policlonales frente al péptido de SEQ ID NO: 20. Example 1. Production of polyclonal antibodies against the peptide of SEQ ID NO: 20.

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El péptido antigénico fue sintetizado mediante técnicas de fase sólida y purificado por HPLC (cromatografía liquida de alta presión) alcanzando una pureza del 97,21%. Se modificó la secuencia peptídica original de la SEQ ID NO: 20, añadiendo un residuo de cisteína al extremo N-terminal del péptido. El péptido se unió covalentemente mediante enlaces disulfuro a BC (“Blue Carrier Immunogenic 25 Protein” de Pierce). Se inmunizaron un total de dos gallinas con el complejo BC-péptido y adyuvante de Freund (de Sigma) y se inyectaron refuerzos con intervalos de 14, 28 y 56 días. Se recogieron los huevos de cada gallina entre los días 40 y 71 posteriores al comienzo de la inmunización. Se separaron las yemas, eliminaron los lípidos y precipitaron/purificaron los anticuerpos con el kit de separación de Pierce 30 (“Pierce Chicken IgY Purification Kit” de Thermo Scientific). Se obtuvieron dos lotes de anticuerpo correspondientes a cada uno de los animales inmunizados: Policlonal1 y Policlonal2. The antigenic peptide was synthesized by solid phase techniques and purified by HPLC (high pressure liquid chromatography) reaching a purity of 97.21%. The original peptide sequence of SEQ ID NO: 20 was modified, adding a cysteine residue to the N-terminal end of the peptide. The peptide was covalently linked by disulfide bonds to BC ("Blue Carrier Immunogenic 25 Protein" by Pierce). A total of two hens were immunized with the BC-peptide complex and Freund's adjuvant (from Sigma) and reinforcements were injected at intervals of 14, 28 and 56 days. Eggs were collected from each chicken between days 40 and 71 after the start of immunization. The yolks were separated, lipids removed and the antibodies precipitated / purified with the Pierce 30 separation kit ("Pierce Chicken IgY Purification Kit" from Thermo Scientific). Two batches of antibody corresponding to each of the immunized animals were obtained: Polyclonal1 and Polyclonal2.

Ejemplo 2. Acción terapéutica asociada al bloqueo del canal 42 con los 35 Example 2. Therapeutic action associated with blocking the canal42 channel with the 35

anticuerpos generados. generated antibodies.

La acción terapéutica asociada al bloqueo del canal 42 no estuvo asociada con una reducción de los niveles de A total, toda vez que el aumento en la producción de A40, a través del canal que no es objeto del bloqueo (40), iba acompañado del 5 aumento en el fragmento intracelular del APP correspondiente (AICD50 ó C50) responsable de un aumento en la expresión del sustrato APP en 8.7 veces su valor (Sébastien
Hébert et al., 2006,
EMBO Reports, 7(7), 739-745). El resultado neto fue un aumento de la cantidad total de A, a expensas de un importante aumento en la cantidad de A40, y aumento inferior de A42 con respecto al incremento de A40, 10 lo que llevó a una disminución del cociente A42/A40. Este resultado, lejos de ser un problema por el paradójico aumento de A42, corrige las características fenotípicas patológicas que presentan la mayoría de las mutaciones de los pacientes con EA de causa monogénica, descritas en el apartado anterior (Eric Karran, et al., 2011, Nature Reviews Drug Discovery, 10, 698-712): 15 The therapeutic action associated with the blockade of the 42 channel was not associated with a reduction in the levels of total A, since the increase in the production of A ,40, through the channel that is not the object of the blockade (40 ), was accompanied by the increase in the intracellular fragment of the corresponding APP (AICD50 or C50) responsible for an increase in the expression of the APP substrate in 8.7 times its value (Sébastien
Hébert et al., 2006,
EMBO Reports, 7 (7), 739-745). The net result was an increase in the total amount of A, at the expense of a significant increase in the amount of A40, and a lower increase of A42 with respect to the increase of A40, 10 which led to a decrease in ratio A42 / A40. This result, far from being a problem due to the paradoxical increase of A42, corrects the pathological phenotypic characteristics that most of the mutations of patients with monogenic cause AD have, described in the previous section (Eric Karran, et al. , 2011, Nature Reviews Drug Discovery, 10, 698-712): 15

1. Descenso de la cantidad global de amiloide producido, A total. 1. Decrease in the total amount of amyloid produced, total A.

2. Aumento del cociente A42/A40. 2. Increase in the ratio A42 / A40.

En este sentido, existen evidencias de que se produce una regulación positiva del 20 cociente A40/ A42 (o de otro modo: regulación negativa del cociente A42/ A40) con aumento de la cantidad total de A, (aumento en la cantidad de A40 y aumento inferior de A42 con respecto al incremento de A40) en estudios de plasticidad sináptica que permiten ampliar el espectro del tratamiento propuesto a pacientes con EA esporádica (Iftach Dolev et al., 2013, Nature Neuroscience, 16(5), 587-595). 25 In this sense, there is evidence that there is a positive regulation of the ratio A40 / A42 (or otherwise: negative regulation of the ratio A42 / A40) with an increase in the total amount of A , (increase in the amount of A40 and lower increase of A42 with respect to the increase of A40) in studies of synaptic plasticity that allow to broaden the spectrum of the proposed treatment to patients with sporadic AD (Iftach Dolev et al. , 2013, Nature Neuroscience, 16 (5), 587-595). 25

Se evaluó el bloqueo del canal 42 de la presenilina que forma parte del complejo enzimático -secretasa mediante los anticuerpos policlonales desarrollados contra el péptido SEQ ID NO: 20 descritos en el ejemplo 1. Se expusieron células de la línea neuronal SHSY5Y-APP695 cultivadas hasta una confluencia del 80-90% en medio 30 DMEM (de Invitrogen) suplementado con 10% de suero fetal bovino (de Invitrogen-Gibco). Las células fueron desprendidas de la placa utilizando sólo medios mecánicos. A continuación fueron sembradas en medio Opti-MEM (de Invitrogen-Gibco) en una concentración aproximada de 3,5 x 104 células/pocillo. Las células Blockade of the 42 channel of the presenilin which is part of the -secretase enzyme complex was evaluated by polyclonal antibodies developed against the peptide SEQ ID NO: 20 described in example 1. Cultured SHSY5Y-APP695 neuronal line cells were exposed up to a confluence of 80-90% in DMEM medium 30 (from Invitrogen) supplemented with 10% fetal bovine serum (from Invitrogen-Gibco). The cells were detached from the plate using only mechanical means. They were then seeded in Opti-MEM medium (from Invitrogen-Gibco) in an approximate concentration of 3.5 x 104 cells / well. The cells

fueron cultivadas durante 24 horas (a 37ºC, 5% CO2) en presencia (concentración final: 6.000 nM) y en ausencia de anticuerpo policlonal (cultivo control). Se midieron los niveles de Aβ40 y Aβ42, tanto de los sobrenadantes a las 24 horas como los del medio de cultivo Opti-MEM (que se consideró como nivel basal, de referencia), utilizando los kits de ELISA “Colorimetric BetaMark™ Beta-Amyloid x-40 ELISA kit” 5 (de Covance) y “Colorimetric BetaMark™ Beta-Amyloid x-42 ELISA kit” (de Covance) respectivamente. they were cultured for 24 hours (at 37 ° C, 5% CO2) in the presence (final concentration: 6,000 nM) and in the absence of polyclonal antibody (control culture). The levels of Aβ40 and Aβ42 were measured, both of the supernatants at 24 hours and those of the Opti-MEM culture medium (which was considered as baseline level, reference), using the ELISA kits “Colorimetric BetaMark ™ Beta-Amyloid x-40 ELISA kit ”5 (from Covance) and“ Colorimetric BetaMark ™ Beta-Amyloid x-42 ELISA kit ”(from Covance) respectively.

Los resultados se muestran gráficamente en la figura 3. Estos resultados logran invertir las características fenotípicas que presentan la mayoría de las mutaciones de 10 los pacientes con EA de causa monogénica, ya comentadas. De este modo, lo que se observó es: The results are shown graphically in Figure 3. These results are able to reverse the phenotypic characteristics presented by the majority of the mutations of 10 patients with monogenic cause AS, already mentioned. Thus, what was observed is:

1. Aumento de la cantidad global de amiloide producido, A total, respecto al control sin exposición al anticuerpo. 15 1. Increase in the overall amount of amyloid produced, total A, with respect to the control without exposure to the antibody. fifteen

2. Descenso del cociente A42/A40, respecto al control sin exposición al anticuerpo. 2. Descent of the ratio A42 / A40, with respect to the control without exposure to the antibody.

Claims (12)

REIVINDICACIONES 1. Péptido aislado que consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 20. 1. Isolated peptide consisting of the amino acid sequence SEQ ID NO: 20. 2. Polinucleótido aislado que codifica para el péptido según la reivindicación 1. 5 2. Isolated polynucleotide encoding the peptide according to claim 1. 5 3. Construcción génica que comprende el polinucleótido según la reivindicación 2. 3. Gene construct comprising the polynucleotide according to claim 2. 4. Construcción génica según la reivindicación 3 que es un vector de expresión. 10 4. Gene construct according to claim 3 which is an expression vector. 10 5. Célula que comprende el polinucleótido según la reivindicación 2 o la construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 3 ó 4. 5. Cell comprising the polynucleotide according to claim 2 or the gene construct according to any of claims 3 or 4. 6. Anticuerpo específico frente al péptido según la reivindicación 1. 15 6. Specific antibody against the peptide according to claim 1. 15 7. Anticuerpo según la reivindicación 6, donde el anticuerpo es policlonal. 7. Antibody according to claim 6, wherein the antibody is polyclonal. 8. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 6 ó 7. 20 8. Pharmaceutical composition comprising the antibody according to any of claims 6 or 7. 20 9. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y/u otro principio activo. 9. Pharmaceutical composition according to claim 8, further comprising a pharmaceutically acceptable carrier and / or other active ingredient. 10. Uso del péptido según la reivindicación 1 como diana farmacológica para el 25 cribado de moléculas útiles para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer (EA). 10. Use of the peptide according to claim 1 as a pharmacological target for the screening of molecules useful for the treatment and / or prevention of Alzheimer's disease (AD). 11. Uso del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 6 ó 7 para la elaboración de un medicamento. 30 11. Use of the antibody according to any of claims 6 or 7 for the preparation of a medicament. 30 12. Uso del anticuerpo según la reivindicación 11, donde el medicamento es para el tratamiento y/o prevención de la EA. 12. Use of the antibody according to claim 11, wherein the medicament is for the treatment and / or prevention of AD.