ES2415581B2 - POTENTIATING COMPOUNDS OF LEARNING. - Google Patents
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Abstract
Compuestos potenciadores del aprendizaje.#La presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) como potenciador del aprendizaje y/o la memoria, como nootrópico, así como a su uso para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del déficit de memoria, preferiblemente mediante una administración intermitente del compuesto.Learning Enhancement Compounds. # The present invention relates to the use of a compound of formula (I) as a learning and / or memory enhancer, as a nootropic, as well as its use for the manufacture of a medicament for the treatment of deficit. memory, preferably by intermittent administration of the compound.
Description
La presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) como potenciador del aprendizaje. Por tanto, la invención se podría encuadrar en 5 el campo de la farmacología y la medicina. The present invention relates to the use of a compound of formula (I) as a learning enhancer. Therefore, the invention could be framed in the field of pharmacology and medicine.
ERK (del inglés "extracellular-signal-regulated kinase") está implicada en la ERK (from the English "extracellular-signal-regulated kinase") is involved in the
10 plasticidad neural y el la potenciación a largo plazo (LTP) (English y Sweatt 1996 Journal of Biological Chemistry, 271, 24329–24332; Martin et al. 1997 Neuron, 18, 899–912; Kanterewicz et al. 2000 J. Neurosci. 20: 3057–3066; Wu et al. 2001 Nat. Neurosci. 4: 151–158). MAPK/ERK kinasa, también llamada MEK o MAP2K (del inglés "Mitogen-activated protein kinase kinase") 10 neural plasticity and long-term potentiation (LTP) (English and Sweatt 1996 Journal of Biological Chemistry, 271, 24329–24332; Martin et al. 1997 Neuron, 18, 899–912; Kanterewicz et al. 2000 J. Neurosci 20: 3057-3066; Wu et al. 2001 Nat. Neurosci. 4: 151-158). MAPK / ERK kinase, also called MEK or MAP2K ("Mitogen-activated protein kinase kinase")
15 es una enzima con actividad kinasa que fosforila la MAPK (del inglés "mitogen-activated protein kinase"). Distintos trabajos de investigación han evaluado el efecto de la administración in vivo de un inhibidor de MEK en varias pruebas de aprendizaje y memoria dependientes de la función hipocampal. En general, la inhibición de MEK tiene un efecto negativo sobre 15 is an enzyme with kinase activity that phosphorylates MAPK ("mitogen-activated protein kinase"). Different research papers have evaluated the effect of in vivo administration of an MEK inhibitor in several learning and memory tests dependent on hippocampal function. In general, MEK inhibition has a negative effect on
20 distintos ensayos de aprendizaje y memoria. Así, en la prueba de evitación inhibitoria (del inglés “inhibitory avoidance” una prueba dependiente del hipocampo (Izquierdo et al 1992 Behav. Neural Biol. 58, 16; Lorenzini et al 1996 Brain Res. 730, 32), During y colaboradores comprobaron que la administración intracerebroventricular de 5 �g del inhibidor de MEK 20 different essays of learning and memory. Thus, in the inhibitory avoidance test (from the English “inhibitory avoidance” a hippocampus-dependent test (Izquierdo et al 1992 Behav. Neural Biol. 58, 16; Lorenzini et al 1996 Brain Res. 730, 32), During and collaborators checked that intracerebroventricular administration of 5 g of the MEK inhibitor
25 PD098059 bloquea el efecto potenciador de la memoria de evitación producido por la administración de HSEGTFTSD, un péptido homólogo al GLP-1 (del inglés "Glucagon-like peptide 1") (During et al. 2003 Nature Medicine 9; 9: 1173-1179). PD098059 blocks the potentiating effect of avoidance memory produced by the administration of HSEGTFTSD, a peptide homologous to GLP-1 (from "Glucagon-like peptide 1") (During et al. 2003 Nature Medicine 9; 9: 1173- 1179).
30 En otro estudio, Walz y colaboradores observaron que la administración intrahipocampal de distintas dosis de un inhibidor de MEK (PD098059 0,5 �M, 5 �M o 50 �M) justo después del entrenamiento de los animales en laprueba de evitación inhibitoria, producía el bloqueo de la memoria a corto plazo, mientras que la administración del inhibidor de MEK 180 minutos después del entrenamiento producía un bloqueo de la memoria a largo plazo (evaluada 24 horas después del entrenamiento). Cuando se inyectó el 30 In another study, Walz and colleagues observed that intra-hippocampal administration of different doses of an MEK inhibitor (PD098059 0.5 �M, 5 �M or 50 �M) just after training the animals in the inhibitory avoidance test, produced short-term memory blockage, while administration of the MEK inhibitor 180 minutes after training resulted in long-term memory blockage (assessed 24 hours after training). When he injected the
5 inhibidor de MEK 30, 90, 120 o 180 minutos después del entrenamiento, no produjo ningún efecto en la memoria (Walz et al. 1999 Behav Pharmacol. 10(8):723-30). 5 MEK inhibitor 30, 90, 120 or 180 minutes after training, had no effect on memory (Walz et al. 1999 Behav Pharmacol. 10 (8): 723-30).
En la prueba de aprendizaje espacial en el laberinto acuático de Morris, una In the space learning test in Morris's water maze, a
10 prueba dependiente del hipocampo (Morris et al 1982 Nature 297: 681–683), se ha visto que la administración hipocampal de 2 g del inhibidor de MEK PD098059 antes del entrenamiento en el laberinto acuático de Morris no altera el aprendizaje espacial, pero bloquea la memoria espacial (Blum et al. 1999 J. Neurosci. 19: 3535–3544). Además, en la misma prueba de 10 hippocampus-dependent test (Morris et al 1982 Nature 297: 681–683), it has been found that the 2 g hippocampal administration of the MEK inhibitor PD098059 before training in the Morris water maze does not alter spatial learning, but blocks spatial memory (Blum et al. 1999 J. Neurosci. 19: 3535–3544). In addition, in the same test of
15 aprendizaje espacial se ha visto que la inyección intrahipocampal de un inhibidor de MEK impide la memoria espacial (Nagai et al 2006 Neuroreport. 18;17(13):1453-7). En el mismo sentido, se ha descrito que la administración de un inhibidor de MEK en la corteza entorrinal (0,4 g/rata) justo después del entrenamiento, bloquea la memoria espacial a largo plazo (Hebert y 15 Space learning has shown that intra-hippocampal injection of an MEK inhibitor prevents spatial memory (Nagai et al 2006 Neuroreport. 18; 17 (13): 1453-7). In the same vein, it has been described that the administration of an MEK inhibitor in the entorhinal cortex (0.4 g / rat) just after training blocks long-term spatial memory (Hebert and
20 Dash 2002 Learning and Memory 9:156–166). 20 Dash 2002 Learning and Memory 9: 156–166).
En el condicionamiento aversivo al sabor (una prueba dependiente del núcleo central de la amígdala, pero independiente del hipocampo), se ha observado que la administración intracerebroventricular de 10 picomoles de In taste aversive conditioning (a test dependent on the central nucleus of the amygdala, but independent of the hippocampus), it has been observed that intracerebroventricular administration of 10 picomoles of
25 un inhibidor de MEK justo antes del entrenamiento, bloquea la adquisición del condicionamiento (Swank 2000 Physiology and Behavior 69: 499–503). 25 an MEK inhibitor just before training blocks the acquisition of conditioning (Swank 2000 Physiology and Behavior 69: 499–503).
Las sustancias nootrópicas o nootrópicos se han llamado "drogas inteligentes", estimulantes de la memoria o potenciadores cognitivos. Se 30 trata de sustancias que mejoran las funciones mentales tales como la cognición, memoria, inteligencia, motivación, atención y concentración. Algunos nootrópicos se emplean en el tratamiento de personas con Nootropic or nootropic substances have been called "smart drugs", memory stimulants or cognitive enhancers. These are substances that improve mental functions such as cognition, memory, intelligence, motivation, attention and concentration. Some nootropics are used in the treatment of people with
dificultades cognitivas, como enfermos de Alzheimer o Parkinson, por ejemplo. El uso de sustancias que potencian el aprendizaje es de gran utilidad tanto para sujetos normales como para pacientes de enfermedades que cursan con deterioro cognitivo. cognitive difficulties, such as Alzheimer's or Parkinson's, for example. The use of substances that enhance learning is very useful for both normal subjects and for patients with diseases that are cognitively impaired.
La presente invención se refiere, en un primer aspecto, al uso de al menos un inhibidor de MEK para potenciar el aprendizaje y la memoria bien de 10 sujetos sanos o de sujetos con déficit de memoria donde la administración es intermitente. Preferiblemente, la administración ocurre en días alternos. Preferiblemente, el inhibidor de MEK es un compuesto de fórmula (I) y más preferiblemente el compuesto PD098059. Por tanto, la presente invención se refiere al uso de al menos un inhibidor de MEK bien como nootrópico o bien The present invention relates, in a first aspect, to the use of at least one MEK inhibitor to enhance learning and memory of either 10 healthy subjects or subjects with memory deficits where administration is intermittent. Preferably, administration occurs on alternate days. Preferably, the MEK inhibitor is a compound of formula (I) and more preferably the compound PD098059. Therefore, the present invention relates to the use of at least one MEK inhibitor either as a nootropic or
15 como medicamento para el tratamiento del déficit de memoria. 15 as a medication for the treatment of memory deficit.
La presente invención se refiere al uso de inhibidores de MEK que, The present invention relates to the use of MEK inhibitors that,
20 administrados de manera intermitente, son útiles para potenciar el aprendizaje y la memoria. Los autores de la presente invención han demostrado que la inhibición de MEK de manera intermitente mejora el aprendizaje de sujetos sanos y jóvenes. En la presente memoria se muestran resultados experimentales donde los sujetos tratados 20 managed intermittently, they are useful to enhance learning and memory. The authors of the present invention have shown that inhibition of MEK intermittently improves the learning of healthy and young subjects. Experimental results are shown herein where the subjects treated
25 intermitentemente con un inhibidor de MEK llevan a cabo el test de memoria espacial del laberinto acuático de Morris (del inglés "Morris water maze") mejor que los sujetos tratados con vehículo. Los sujetos tratados intermitentemente con un inhibidor de MEK son capaces de aprender mejor dónde se encuentra la plataforma oculta en el laberinto acuático de Morris, y Intermittently with an MEK inhibitor, they perform the Morris water maze spatial memory test ("Morris water maze") better than vehicle-treated subjects. Subjects treated intermittently with an MEK inhibitor are able to learn better where the hidden platform is located in the Morris water maze, and
30 recuerdan mejor la posición de la plataforma cuando esta es retirada, en comparación con sujetos control tratados con vehículo. Como muestras los ejemplos de la presente memoria, así como las figuras, los sujetos tratados intermitentemente con un inhibidor de MEK recorren una distancia menor hasta encontrar la plataforma oculta y, cuando la plataforma está ausente, recuerdan mejor su localización y pasan más tiempo nadando en el cuadrante en que dicha plataforma se localizaba durante el aprendizaje. 30 better remember the position of the platform when it is removed, compared to control subjects treated with a vehicle. As shown in the examples herein, as well as the figures, subjects treated intermittently with a MEK inhibitor travel a shorter distance until the hidden platform is found and, when the platform is absent, remember their location better and spend more time swimming in the quadrant in which said platform was located during learning.
5 Por tanto, en un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso de al menos un inhibidor de MEK (del inglés "mitogen-activated/extracellularsignal-regulated kinase") para la fabricación de una composición para potenciar el aprendizaje y la memoria. 5 Thus, in a first aspect, the present invention relates to the use of at least one MEK inhibitor (from the "mitogen-activated / extracellularsignal-regulated kinase") for the manufacture of a composition to enhance learning and memory .
10 Dicha composición puede ser un medicamento para el tratamiento del déficit de memoria o un alimento funcional o un complemento alimentario o un nutracéutico. En una realización preferida de la invención, la composición es un fármaco nootrópico. En otra realización preferida, la composición es un 10 Said composition may be a medicament for the treatment of memory deficit or a functional food or a food supplement or a nutraceutical. In a preferred embodiment of the invention, the composition is a nootropic drug. In another preferred embodiment, the composition is a
15 alimento funcional o complemento alimentario que es útil como nootrópico. 15 functional food or food supplement that is useful as a nootropic.
En una realización preferida de la invención, la composición es un medicamento para el tratamiento del déficit de memoria. Por tanto, la presente invención se refiere al uso de al menos un inhibidor para la In a preferred embodiment of the invention, the composition is a medicament for the treatment of memory deficit. Therefore, the present invention relates to the use of at least one inhibitor for the
20 fabricación de una composición para potenciar el aprendizaje, donde dicha composición se administra de manera intermitente. Preferiblemente, la administración se realiza en días alternos. En una realización preferida, el inhibidor de MEK es un compuesto con fórmula (I). 20 manufacturing a composition to enhance learning, where said composition is administered intermittently. Preferably, the administration is performed on alternate days. In a preferred embodiment, the MEK inhibitor is a compound with formula (I).
Preferiblemente, el inhibidor de MEK es el compuesto Preferably, the MEK inhibitor is the compound
en adelante llamado compuesto 1. hereinafter called compound 1.
5 Preferiblemente, se usa una cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de MEK. La expresión “cantidad terapéuticamente efectiva” se refiere a una cantidad que, administrada en dosis y durante el período de tiempo necesario, es efectiva a la hora de conseguir el resultado profiláctico o terapéutico deseado, es decir, potenciar el aprendizaje y/o la memoria. Una 5 Preferably, a therapeutically effective amount of the MEK inhibitor is used. The term "therapeutically effective amount" refers to an amount that, administered in doses and for the necessary period of time, is effective in achieving the desired prophylactic or therapeutic result, that is, enhancing learning and / or memory. . A
10 “cantidad terapéuticamente efectiva” del inhibidor de MEK o de la composición que lo comprende, puede variar la edad, el sexo y el peso del individuo, así como con el estadio de la enfermedad, y se refiere a una cantidad que no presenta efectos adversos ni toxicidad y es capaz de alcanzar el efecto profiláctico o terapéutico deseado. 10 "therapeutically effective amount" of the MEK inhibitor or the composition comprising it, may vary the age, sex and weight of the individual, as well as the stage of the disease, and refers to an amount that has no effect adverse or toxicity and is able to achieve the desired prophylactic or therapeutic effect.
15 Un inhibidor de MEK puede caracterizarse mediante cualquiera de los ensayos conocidos en el estado de la técnica para ensayar la actividad de MEK. Por ejemplo, un ensayo puede consistir en medir la actividad de MEK mediante la detección y/o cuantificación de la fosforilación de ERK, ya que A MEK inhibitor can be characterized by any of the assays known in the state of the art to test MEK activity. For example, an assay may consist of measuring the activity of MEK by detecting and / or quantifying the phosphorylation of ERK, since
20 ERK es fosforilada por MEK. Por ejemplo, se puede analizar la actividad de MEK sobre su sustrato no activado ERK2. La detección de la actividad kinasa de MEK se realiza por inmunoblot, usando un anticuerpo que reconoce específicamente y únicamente la forma doblemente fosforilada de la MAPK (Thr183 y Tyr185 en ERK2). Existen kits comerciales para la detección y/o cuantificación de la actividad de MEK, como por ejemplo el kit de Sigma-Aldrich denominado MEK Activity Assay Kit. 20 ERK is phosphorylated by MEK. For example, the activity of MEK on its non-activated ERK2 substrate can be analyzed. MEK kinase activity is detected by immunoblotting, using an antibody that specifically recognizes and only doubly phosphorylated form of MAPK (Thr183 and Tyr185 in ERK2). There are commercial kits for the detection and / or quantification of MEK activity, such as the Sigma-Aldrich kit called MEK Activity Assay Kit.
Hasta la fecha se conocen multitud de compuestos inhibidores de MEK, To date, a multitude of MEK inhibitor compounds are known,
5 como son por ejemplo, pero sin limitarse, AZD6244, PD0325901, CI-1040, U0126, BIX 02189, PD098059, AS703026, GSK1120212 (JTP-74057), TAK733, AZD8330, PD318088, BIX 02188, RDEA119 (BAY 869766), SL327, y ARRY-162. Por tanto, una realización preferida de la presente invención es el uso de un inhibidor de MEK que se selecciona de la lista que comprende: 5 such as, but not limited to, AZD6244, PD0325901, CI-1040, U0126, BIX 02189, PD098059, AS703026, GSK1120212 (JTP-74057), TAK733, AZD8330, PD318088, BIX 02188, RDEA119 (BAY 869766) , and ARRY-162. Therefore, a preferred embodiment of the present invention is the use of a MEK inhibitor that is selected from the list comprising:
10 AZD6244, PD0325901, CI-1040, U0126, BIX 02189, PD098059, AS703026, GSK1120212 (JTP-74057), TAK-733, AZD8330, PD318088, BIX 02188, RDEA119 (BAY 869766), SL327, y ARRY-162, para potenciar el aprendizaje y/o la memoria. En una realización preferida, el inhibidor de MEK es PD098059. 10 AZD6244, PD0325901, CI-1040, U0126, BIX 02189, PD098059, AS703026, GSK1120212 (JTP-74057), TAK-733, AZD8330, PD318088, BIX 02188, RDEA119 (BAY 869766), SL327, and ARRY-16232, and ARRY-162 enhance learning and / or memory. In a preferred embodiment, the MEK inhibitor is PD098059.
15 AZD6244 (Selumetinib), también conocido como ARRY142886, es un inhibidor de MEK 1/2 con valores de GI50 de entre 14 y 50 nM. AZD6244 (Selumetinib), also known as ARRY142886, is a MEK 1/2 inhibitor with GI50 values between 14 and 50 nM.
PD0325901 es un inhibidor de MEK no competitivo con ATP (adenosín PD0325901 is a non-competitive MEK inhibitor with ATP (adenosine
20 trifosfato) con una Ki aproximadamente de 1 nM contra MEK1 y MEK2 activadas. 20 triphosphate) with a Ki of approximately 1 nM against activated MEK1 and MEK2.
CI-1040 (PD184352) es un inhibidor de MEK 1/2 con una Ki de 300 nM. CI-1040 (PD184352) is a MEK 1/2 inhibitor with a Ki of 300 nM.
25 U0126 es un inhibidor de MEK 1 y MEK2 con una IC50 de 72 nM y 58 nM respectivamente. U0126 is an inhibitor of MEK 1 and MEK2 with an IC50 of 72 nM and 58 nM respectively.
BIX 02189 es un inhibidor selectivo de MEK5/ERK5 con una IC50 de 59 nM. BIX 02189 is a selective MEK5 / ERK5 inhibitor with an IC50 of 59 nM.
30 PD098059 es un inhibidor de MEK1 y MEK2 con una IC50 de entre 4 M y 50 M. El PD098059 bloquea la vía de activación de la MAP kinasa mediante la inhibición de la fosforilación de las isoformas de MAP kinasa ERK1 y ERK2 por las tirosina-treonina kinasa MEK (MAP/ERK Kinasa) (Alessi et al. 1995 J. Biol. Chem. 270: 27489–27494; Dudey et al 1995 Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92: 7686–9). PD098059 is an inhibitor of MEK1 and MEK2 with an IC50 of between 4 M and 50 M. PD098059 blocks the pathway of MAP kinase activation by inhibiting phosphorylation of MAP kinase ERK1 and ERK2 isoforms by tyrosine. MEK threonine kinase (MAP / ERK Kinase) (Alessi et al. 1995 J. Biol. Chem. 270: 27489-27494; Dudey et al 1995 Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92: 7686-9).
5 AS703026 es un inhibidor selectivo biodisponible oralmente con una IC50 de entre 0,005 a 2 M. AS703026 is an orally bioavailable selective inhibitor with an IC50 of between 0.005 to 2 M.
GSK1120212 (JTP-74057) es un inhibidor reversible, selectivo, alostérico de MEK1/2 con una IC50 de 0,7 nM y 0,9 nM, respectivamente. GSK1120212 (JTP-74057) is a reversible, selective, allosteric inhibitor of MEK1 / 2 with an IC50 of 0.7 nM and 0.9 nM, respectively.
10 TAK-733 es un inhibidor alostérico de MEK1/2 potente y selectivo con una IC50 de 3,2 nM. TAK-733 is a potent and selective allosteric MEK1 / 2 inhibitor with an IC50 of 3.2 nM.
AZD8330 es un inhibidor selectivo y oralmente activo de MEK con una IC50 15 de 7 nM. AZD8330 is a selective and orally active MEK inhibitor with an IC50 15 of 7 nM.
PD318088 es un inhibidor alostérico de MEK1/2 no competitivo con ATP. PD318088 is an allosteric inhibitor of MEK1 / 2 not competitive with ATP.
BIX02188 es un inhibidor selectivo de MEK5 con una IC50 de 0,8 ± 1,0 M. 20 RDEA119 (BAY 869766) es un inhibidor de MEK con IC50 de 73 nM. BIX02188 is a selective MEK5 inhibitor with an IC50 of 0.8 ± 1.0 M. 20 RDEA119 (BAY 869766) is a MEK inhibitor with IC50 of 73 nM.
SL327 es un potente inhibidor selectivo de MEK1 y MEK2 con una IC50 de 0,18 y 0,22 M, respectivamente. SL327 is a potent selective MEK1 and MEK2 inhibitor with an IC50 of 0.18 and 0.22 M, respectively.
25 ARRY-162 es un inhibidor de MEK1 y MEK2 con una IC50 de 12 nM, para el que actualmente se está realizando un ensayo clínico de cáncer, en fase 1. ARRY-162 is a MEK1 and MEK2 inhibitor with an IC50 of 12 nM, for which a phase 1 cancer clinical trial is currently under way.
Por tanto, un segundo aspecto de la presente invención se refiere al uso de 30 un compuesto de fórmula (I) para la fabricación de una composición para potenciar el aprendizaje y/o la memoria, Therefore, a second aspect of the present invention relates to the use of a compound of formula (I) for the manufacture of a composition to enhance learning and / or memory,
Fórmula I Formula I
donde: where:
X se selecciona de la lista que comprende: O, NH y S; X is selected from the list comprising: O, NH and S;
5 R1 se selecciona de la lista que comprende: =O, OH, alcoxilo, =S, SRa, NRbRc, donde Ra, Rb, y Rc se seleccionan independientemente de la lista que comprende: un grupo alquilo (C1-C6) y un hidrógeno; R2 y R3, se seleccionan independientemente de la lista que comprende: un grupo alquilo (C1-C6) y un hidrógeno; R1 is selected from the list comprising: = O, OH, alkoxy, = S, SRa, NRbRc, where Ra, Rb, and Rc are independently selected from the list comprising: a (C1-C6) alkyl group and a hydrogen; R2 and R3 are independently selected from the list comprising: a (C1-C6) alkyl group and a hydrogen;
10 R4 se selecciona de la lista que comprende: OH, alcoxilo, SR'a y NR'bR'c, donde R'a, R'b, y R'c se seleccionan independientemente de la lista que comprende: un grupo alquilo (C1-C6) y un hidrógeno; y n tiene un valor de entre 1 a 4. R4 is selected from the list comprising: OH, alkoxy, SR'a and NR'bR'c, where R'a, R'b, and R'c are independently selected from the list comprising: an alkyl group ( C1-C6) and a hydrogen; and n has a value between 1 to 4.
15 El compuesto de la invención además comprende cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables y sus derivados. El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a cualquier sal farmacéutica o cualquier otro compuesto que, siendo administrado a un sujeto, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto descrito en el presente The compound of the invention further comprises any of its pharmaceutically acceptable salts and its derivatives. The term "pharmaceutically acceptable salts" refers to any pharmaceutical salt or any other compound that, being administered to a subject, is capable of providing (directly or indirectly) a compound described herein.
20 documento. Sin embargo se observará que las sales farmacéuticamente inaceptables están también en el ámbito de la invención ya que estas últimas pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales y derivados pueden ser llevadas a cabo por medio de métodos conocidos en la materia. 20 document. However, it will be noted that pharmaceutically unacceptable salts are also within the scope of the invention since the latter may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable salts. The preparation of salts and derivatives can be carried out by means of methods known in the art.
El término “alquilo”, tal y como se emplea en la presente memoria, se refiere a cadenas hidrocarbonadas saturadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, nThe term "alkyl", as used herein, refers to saturated, linear or branched hydrocarbon chains having 1 to 6 carbon atoms, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i- propyl n
5 butilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, etc. Preferiblemente el grupo alquilo tiene entre 1 y 4 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquinilo, alquenilo, halo, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro o mercapto. 5 butyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc. Preferably the alkyl group has between 1 and 4 carbon atoms. The alkyl groups may be optionally substituted by one or more substituents such as alkynyl, alkenyl, halo, hydroxy, alkoxy, carboxyl, cyano, carbonyl, acyl, alkoxycarbonyl, amino, nitro or mercapto.
10 El término "alcoxilo”, tal y como se emplea en la presente memoria, se refiere a un grupo -OR', donde R' es un grupo alquilo tal y como se ha definido anteriormente. Por ejemplo, el alcoxilo puede ser un metoxilo, etoxilo, propanoxilo, etc. Preferiblemente, el acoxilo es un metoxilo. The term "alkoxy", as used herein, refers to a group -OR ', where R' is an alkyl group as defined above. For example, the alkoxy can be a methoxy , ethoxy, propanoxy, etc. Preferably, the acoxyl is a methoxy.
15 En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, X es O. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, X is O.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, R1 es =O. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, R1 is = O.
20 En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, R4 es alcoxilo. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, R4 is alkoxy.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, R4 es metoxilo y más preferiblemente el valor de n es 1, R4 puede estar en In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, R4 is methoxy and more preferably the value of n is 1, R4 may be in
25 cualquier posición y preferiblemente está en posición orto con respecto al grupo -NR2R3. 25 any position and preferably is in ortho position with respect to the group -NR2R3.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, R2 es H. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, R2 is H.
30 En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, R3 es H. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, R3 is H.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, el compuesto es In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, the compound is
5 En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, la composición es un nootrópico. Como se demuestra en los ejemplos, sujetos sanos y jóvenes tratados intermitentemente con un compuesto de fórmula (I) presentan un incremento de la memoria espacial en el laberinto acuático de Morris. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, the composition is a nootropic. As demonstrated in the examples, healthy and young subjects treated intermittently with a compound of formula (I) exhibit an increase in spatial memory in the Morris water maze.
10 El término “sujeto” en la presente memoria se refiere a un vertebrado. Preferiblemente, el vertebrado es un mamífero. Más preferiblemente, el mamífero es un humano. Entre los mamíferos se incluyen, pero sin limitarse, los animales de granja (como las vacas), animales que participan en 10 The term "subject" herein refers to a vertebrate. Preferably, the vertebrate is a mammal. More preferably, the mammal is a human. Mammals include, but are not limited to, farm animals (such as cows), animals that participate in
15 deportes, mascotas (como gatos, perros y caballos), primates, ratones y ratas. 15 sports, pets (such as cats, dogs and horses), primates, mice and rats.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, la composición es un medicamento para el tratamiento del déficit de memoria o 20 un alimento funcional o un complemento alimentario o un nutracéutico. In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, the composition is a medicament for the treatment of memory deficit or a functional food or a food supplement or a nutraceutical.
En la presente invención se entiende como “alimento funcional” un alimento In the present invention "functional food" is understood as a food
o complemento alimentario incluidos los llamados “nutracéuticos”, que posee un efecto beneficioso sobre la salud. or food supplement including the so-called "nutraceuticals", which has a beneficial effect on health.
El término “complemento alimentario” se refiere a una composición no alimenticia, es decir, que sin ser un alimento, aporta a la dieta un efecto beneficio sobre la salud. Estas composiciones pueden ser administradas de la misma forma que lo descrito para las composiciones farmacéuticas. The term "food supplement" refers to a non-food composition, that is, without being a food, it gives the diet a beneficial effect on health. These compositions can be administered in the same manner as described for pharmaceutical compositions.
5 Preferiblemente, su administración es oral. 5 Preferably, its administration is oral.
En una realización preferida del segundo aspecto de la invención, la composición es un medicamento para el tratamiento del déficit de memoria. Preferiblemente, el déficit de memoria se asocia a la enfermedad de In a preferred embodiment of the second aspect of the invention, the composition is a medicament for the treatment of memory deficit. Preferably, the memory deficit is associated with the disease of
10 Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la demencia con cuerpos de Lewy, la demencia fronto-temporal, la demencia vascular, el deterioro cognitivo ligero, el síndrome de Down, la depresión mayor, la esquizofrenia, el trastorno por déficit de atención o la hiperactividad. 10 Alzheimer's, Parkinson's disease, Lewy body dementia, fronto-temporal dementia, vascular dementia, mild cognitive impairment, Down syndrome, major depression, schizophrenia, attention deficit disorder or hyperactivity
15 En una realización preferida de la invención, la administración de la composición es intermitente. Preferiblemente, la administración de la composición es en días alternos. In a preferred embodiment of the invention, the administration of the composition is intermittent. Preferably, the administration of the composition is on alternate days.
En una realización preferida de la invención, la composición, además del 20 compuesto de fórmula (I), comprende un excipiente. In a preferred embodiment of the invention, the composition, in addition to the compound of formula (I), comprises an excipient.
El término “excipiente“ en la presente memoria se refiere a un componente de una composición farmacéutica que no es un compuesto activo sino un diluyente, un vehículo o un relleno, entre otros, que se considera 25 “farmacéuticamente aceptable” cuando es seguro, no es tóxico y no presenta efectos adversos. El término “excipiente” hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción del compuesto, lo estabiliza o ayuda a la preparación del medicamento en el sentido de darle consistencia o aportar sabores que lo hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían 30 tener la función de mantener los ingredientes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo para aislarlo del aire y/o la humedad, función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados 5 en este párrafo. El término excipiente “farmacológicamente aceptable” hace referencia a que el excipiente esté permitido y evaluado de modo que no cause daño a los organismos a los que se administra. Además, el excipiente debe ser farmacéuticamente adecuado, es decir, debe permitir la actividad de los compuestos de la composición farmacéutica, es decir, debe ser The term "excipient" herein refers to a component of a pharmaceutical composition that is not an active compound but a diluent, a vehicle or a filler, among others, which is considered "pharmaceutically acceptable" when it is safe, not It is toxic and has no adverse effects. The term "excipient" refers to a substance that helps the absorption of the compound, stabilizes it or helps the preparation of the drug in the sense of giving consistency or providing flavors that make it more pleasant. Thus, the excipients could have the function of keeping the ingredients together such as starches, sugars or cellulose, sweetening function, coloring function, protection function of the medicine such as for example isolating it from air and / or moisture, filling function of a tablet, capsule or any other form of presentation such as dibasic calcium phosphate, disintegrating function to facilitate the dissolution of the components and their absorption in the intestine, without excluding other types of excipients not mentioned 5 in this paragraph. The term "pharmacologically acceptable" excipient refers to the excipient being allowed and evaluated so as not to cause damage to the organisms to which it is administered. In addition, the excipient must be pharmaceutically suitable, that is, it must allow the activity of the compounds of the pharmaceutical composition, that is, it must be
10 compatible con dichos componentes 10 compatible with said components
En una realización preferida de la invención, la composición, además del compuesto de fórmula (I), comprende otro principio activo. Además del requerimiento de la eficacia terapéutica, que puede necesitar el uso de otros 15 agentes terapéuticos, pueden existir razones fundamentales adicionales que obligan o recomiendan en gran medida el uso de una combinación de un compuesto de la invención y otro agente terapéutico. El término “principio activo” es toda materia, cualquiera que sea su origen humano, animal, vegetal, químico o de otro tipo a la que se atribuye una actividad apropiada In a preferred embodiment of the invention, the composition, in addition to the compound of formula (I), comprises another active ingredient. In addition to the requirement of therapeutic efficacy, which may require the use of other therapeutic agents, there may be additional fundamental reasons that compel or strongly recommend the use of a combination of a compound of the invention and another therapeutic agent. The term "active ingredient" is any matter, whatever its human, animal, plant, chemical or other origin to which an appropriate activity is attributed
20 para constituir un medicamento. 20 to constitute a medicine.
En cada caso la forma de presentación del medicamento se adaptará al tipo de administración utilizada, por ello, la composición de la presente invención se puede presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma de In each case the form of presentation of the drug will be adapted to the type of administration used, therefore, the composition of the present invention can be presented in the form of solutions or any other form of
25 administración clínicamente permitida y en una cantidad terapéuticamente efectiva. La composición de la invención se puede formular en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimido, cápsula, polvo, gránulo, ungüento, solución, supositorio, inyección, inhalante, gel, microesfera o aerosol. 25 administration clinically allowed and in a therapeutically effective amount. The composition of the invention can be formulated in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as tablet, capsule, powder, granule, ointment, solution, suppository, injection, inhalant, gel, microsphere or aerosol.
30 La forma adaptada a la administración oral se refiere a un estado físico que pueda permitir su administración oral. Dicha forma adaptada a la administración oral se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, gotas, jarabe, tisana, elixir, suspensión, suspensión extemporánea, vial bebible, comprimido, cápsula, granulado, sello, píldora, tableta, pastilla, trocisco o liofilizado. 30 The form adapted to oral administration refers to a physical state that can allow oral administration. Said form adapted to oral administration is selected from the list comprising, but not limited to, drops, syrup, tea, elixir, suspension, extemporaneous suspension, drinkable vial, tablet, capsule, granulate, seal, pill, tablet, tablet, tablet, troccus or lyophilized.
5 La forma adaptada a la administración parenteral se refiere a un estado físico que pueda permitir su administración inyectable, es decir, preferiblemente en estado líquido. La administración parenteral se puede llevar a cabo por vía de administración intramuscular, intraarterial, 5 The form adapted to parenteral administration refers to a physical state that can allow its injectable administration, that is, preferably in a liquid state. Parenteral administration can be carried out via intramuscular, intraarterial,
10 intravenosa, intradérmica, subcutánea, intraósea o intraespinal, pero sin limitarse únicamente a estos tipos de vías de administración parenteral. 10 intravenous, intradermal, subcutaneous, intraosseous or intraspinal, but not limited to these types of parenteral administration routes.
Otra posibilidad es que la composición farmacéutica se presente en una forma adaptada a la administración sublingual, nasal, bronquial, linfática, 15 rectal, transdérmica o inhalada. Another possibility is that the pharmaceutical composition is presented in a form adapted to sublingual, nasal, bronchial, lymphatic, rectal, transdermal or inhaled administration.
En una realización preferida de la invención, la administración es oral o parenteral. Preferiblemente, la administración es parenteral. Más preferiblemente, la administración es intraespinal. In a preferred embodiment of the invention, the administration is oral or parenteral. Preferably, the administration is parenteral. More preferably, the administration is intraspinal.
20 A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. For those skilled in the art, other objects, advantages and features of the invention will be partly derived from the
25 descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. Description and in part of the practice of the invention. The following examples and figures are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.
compuesto 1. En el eje de abscisas se representa el número del ensayo y en el eje de ordenadas se representa la distancia recorrida hasta la plataforma oculta, en centímetros. Los ensayos 1 a 4 se realizaron en el primer día y los ensayos 5 a 8, en el segundo día. Los círculos vacíos 5 corresponden a los animales tratados con vehículo (n=8) y los círculos negros corresponden a los animales tratados con el compuesto 1 (n=5). En el primer día, los animales tratados con el compuesto 1 aprenden mejor que los controles, ya que recorren una distancia significativamente menor que los controles (tratados con vehículo), F(1,44)= 4,63; p<0,037 ANOVA de medidas compound 1. On the abscissa axis the test number is represented and on the ordinate axis the distance traveled to the hidden platform is represented, in centimeters. Trials 1 to 4 were performed on the first day and trials 5 to 8, on the second day. The empty circles 5 correspond to the animals treated with vehicle (n = 8) and the black circles correspond to the animals treated with the compound 1 (n = 5). On the first day, animals treated with compound 1 learn better than controls, since they travel a significantly shorter distance than controls (treated with vehicle), F (1.44) = 4.63; p <0.037 ANOVA of measurements
10 repetidas. El aprendizaje tras los 8 ensayos es significativamente mayor en los animales tratados intermitentemente con el compuesto 1, F(1,88)= 7,32; P<0,008 ANOVA de medidas repetidas. En el ensayo 8, los animales tratados con el compuesto 1 recorren una distancia significativamente menor que los tratados con vehículo, * indica p<0,035 (prueba t de Student). 10 repeated. The learning after the 8 trials is significantly higher in animals treated intermittently with compound 1, F (1.88) = 7.32; P <0.008 ANOVA of repeated measures. In test 8, animals treated with compound 1 travel a significantly shorter distance than those treated with vehicle, * indicates p <0.035 (Student's t-test).
15 FIG. 2. Muestra el resultado del test de memoria espacial del laberinto acuático de Morris un días después del entrenamiento, para animales tratados con vehículo (animales control) o con el compuesto 1. En el eje de ordenadas se representa el porcentaje del tiempo que el animal pasa 15 FIG. 2. It shows the result of the memory test of the Morris water maze a few days after training, for animals treated with vehicle (control animals) or with compound 1. The percentage of time the animal is represented on the ordinate axis pass
20 nadando en el cuadrante diana, buscando la plataforma. Los animales tratados intermitentemente con el compuesto 1 (n=5) recuerdan mejor en qué cuadrante estaba la plataforma, y por tanto pasan más tiempo en dicho cuadrante que los animales control, tratados con vehículo (n=8). Este efecto es estadísticamente significativo: * indica p<0,05 en el test de Student. 20 swimming in the target quadrant, looking for the platform. Animals treated intermittently with compound 1 (n = 5) remember better in which quadrant the platform was, and therefore spend more time in that quadrant than control animals, treated with vehicle (n = 8). This effect is statistically significant: * indicates p <0.05 in the Student test.
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la eficacia del compuesto 1 como The invention will now be illustrated by tests carried out by the inventors, which demonstrates the efficacy of compound 1 as
30 potenciador del aprendizaje. 30 learning enhancer.
Como muestra la figura 1, los animales tratados con el compuesto 1 (n=5) presentan un mejor resultado en el test de memoria espacial Morris Water As Figure 1 shows, animals treated with compound 1 (n = 5) have a better result in the Morris Water space memory test
5 Maze (laberinto acuático de Morris), que los animales tratados con vehículo (n=8). Los animales tratados con el compuesto 1 recorren menores distancias hasta llegar a la plataforma oculta, lo que demuestra que han aprendido mejor y recuerdan mejor que los animales normales, la localización de la plataforma. 5 Maze (Morris water maze), which animals treated with vehicle (n = 8). Animals treated with compound 1 travel shorter distances to reach the hidden platform, demonstrating that they have learned better and remember better than normal animals, the location of the platform.
10 El análisis de varianza (ANOVA) de medidas repetidas indicó que, sorprendentemente, las ratas que recibieron las 3 inyecciones intermitentes de compuesto 1 mostraron un mejor aprendizaje espacial en el laberinto acuático de Morris, dado que nadaron distancias mas cortas para encontrar 10 The analysis of variance (ANOVA) of repeated measures indicated that, surprisingly, the rats that received the 3 intermittent injections of compound 1 showed a better spatial learning in the Morris water maze, since they swam shorter distances to find
15 la plataforma sumergida, en comparación con las ratas controles que recibieron las inyecciones de vehículo (F(1,88)= 7,32; P<0,008) Ver figura 1. 15 the submerged platform, compared to the control rats that received the vehicle injections (F (1.88) = 7.32; P <0.008) See Figure 1.
Un día después del aprendizaje, los animales se sometieron a un test de memoria en el laberinto acuático de Morris en el que la plataforma se había 20 retirado. Como muestra la figura 2, el análisis estadístico del porcentaje de tiempo que los animales buscaron la plataforma en el cuadrante diana (en donde estaba anteriormente la plataforma) indicó que los animales tratados con el compuesto 1 antes del aprendizaje espacial, mostraban una mejor memoria espacial en comparación con los animales inyectados con vehículo One day after learning, the animals underwent a memory test in the Morris water maze in which the platform had been removed. As Figure 2 shows, the statistical analysis of the percentage of time that the animals looked for the platform in the target quadrant (where the platform was previously) indicated that the animals treated with compound 1 before space learning, showed a better spatial memory compared to animals injected with vehicle
25 (t de Student de 1 cola, p=0,044). Ver figura 2. 25 (Student's 1-tail t, p = 0.044). See figure 2.
Ratas macho de la cepa Wistar fueron estabuladas en jaulas de tres en tres, bajo condiciones de luz (ciclo 12 horas luz/oscuridad; luz encendida a las 8 Male rats of the Wistar strain were housed in cages three by three, under light conditions (12 hours light / dark cycle; light on at 8
30 de la mañana) y condiciones de temperatura (22 ± 2°C) con comida y bebida ad libitum. Todos los procedimientos que implicaron el uso de animales se realizaron de acuerdo a la normativa Europea (86/609/EEC). 30 in the morning) and temperature conditions (22 ± 2 ° C) with food and drink ad libitum. All procedures that involved the use of animals were performed according to European regulations (86/609 / EEC).
Aproximadamente 3 semanas después de recibir los animales, estos fueron canulados intracerebroventricularmente. Para ello, las ratas fueron 5 anestesiadas con isofluorano. A continuación se colocó a las ratas en un estereotáxico, y se implantó una cánula guía doble (modelo C313G, Plastic One, Roanoke, VA) con un obturador insertado en los ventrículos laterales. Las coordenadas utilizadas fueron 1,3 mm antero-posterior, 1,6 mm lateral, y 3,5 mm profundidad, usando la coordenada Bregma como referencia. La Approximately 3 weeks after receiving the animals, they were cannulated intracerebroventricularly. For this, the rats were 5 anesthetized with isofluoran. The rats were then placed in a stereotaxic, and a double guide cannula (model C313G, Plastic One, Roanoke, VA) was implanted with a plug inserted into the lateral ventricles. The coordinates used were 1.3 mm antero-posterior, 1.6 mm lateral, and 3.5 mm deep, using the Bregma coordinate as a reference. The
10 cánula guía fue fijada con dos tornillos y cemento dental (Duralay 2244, Reliance). Los animales se recuperaron de la operación al menos durante 12 días antes de ser entrenados en el laberinto acuático de Morris. Una vez operados, los animales se estabularon de dos en dos y se pesaron cada semana. 10 guide cannula was fixed with two screws and dental cement (Duralay 2244, Reliance). The animals recovered from the operation for at least 12 days before being trained in the Morris water maze. Once operated, the animals were housed two by two and weighed every week.
Preparación del compuesto 1 y administración Preparation of compound 1 and administration
El compuesto 1 se preparó en líquido cerebroespinal artificial que contenía (1% DMSO y 20% ciclodextrano). El compuesto fue administrado intracerebroventricularmente 5, 3 y 1 día antes de entrenar a los animales en 20 el laberinto acuático de Morris. Para ello, cada día de administración se retiró el obturador de la cánula doble y se insertó una cánula de inyección (modelo C313I, Plastic One, Roanoke, VA) conectada a un tubo flexible de poliuretano (0,12 mm de diámetro CMA, Microdialysis AB, Estocolmo, Suecia) que a su vez estaba conectado a una jeringa Hamilton de 2,5 ml. El 25 animal estaba despierto y libre de movimiento. Una bomba de microinyección (Harvard Apparatus, Cambridge, MA) controlaba la administración de los 5 μl de la solución con el compuesto 1, a través de las cánulas, a un flujo de 1,25 μl/min. La cánula de inyección se dejó en su lugar durante 3 minutos más para permitir la difusión del compuesto antes de Compound 1 was prepared in artificial cerebrospinal fluid containing (1% DMSO and 20% cyclodextran). The compound was administered intracerebroventricularly 5, 3 and 1 day before training the animals in the Morris water maze. To do this, each day of administration, the double cannula obturator was removed and an injection cannula (model C313I, Plastic One, Roanoke, VA) connected to a flexible polyurethane tube (0.12 mm diameter CMA, Microdialysis) was inserted AB, Stockholm, Sweden) which in turn was connected to a 2.5 ml Hamilton syringe. The animal was awake and free of movement. A microinjection pump (Harvard Apparatus, Cambridge, MA) controlled the administration of 5 μl of the solution with compound 1, through the cannulas, at a flow of 1.25 μl / min. The injection cannula was left in place for 3 more minutes to allow diffusion of the compound before
30 retirar la cánula y volver a poner el obturador. Todos los animales se habituaron a este protocolo de inyección (sin inyectar ninguna solución) durante 2 minutos, en los dos días previos a la primera inyección. 30 remove the cannula and replace the obturator. All animals became accustomed to this injection protocol (without injecting any solution) for 2 minutes, in the two days prior to the first injection.
Aprendizaje espacial: el laberinto acuático consiste en una piscina circular construida en PVC negro, de 2 metros de diámetro y 45 centímetros de alto. 5 Esta piscina se mantenía durante las sesiones llena de agua (32 centímetros de profundidad), a una temperatura de 25 ± 1°C. Para realizar los análisis correspondientes, dividimos virtualmente la piscina en cuatro cuadrantes de igual medida y se diferenció una zona central de 160 cm de diámetro y un pasillo periférico de 20 cm. La plataforma circular de escape se colocaba en 10 la mitad de uno de los cuadrantes virtuales. Esta plataforma permanecía sumergida 2 centímetros por debajo de la superficie del agua, por tanto resultaba invisible para los animales que nadaban durante la prueba. La plataforma, de 11 centímetros de diámetro, es de acero inoxidable y está pintada de negro. Además, para facilitar que los animales pudieran subir a 15 ella sin resbalar, la parte superior consistía en una rejilla metálica también de color negro. El centro de esta plataforma se colocaba equidistante a la pared y al centro de la piscina. La piscina estaba rodeada por cortinas de distinto color que contenían numerosas claves espaciales, externas al laberinto, que permanecían en la misma posición durante todos los ensayos. El Spatial learning: the aquatic labyrinth consists of a circular pool built in black PVC, 2 meters in diameter and 45 centimeters high. 5 This pool was kept during sessions full of water (32 centimeters deep), at a temperature of 25 ± 1 ° C. To perform the corresponding analyzes, we virtually divided the pool into four quadrants of equal measure and a central area of 160 cm in diameter and a peripheral corridor of 20 cm were differentiated. The circular escape platform was placed in 10 half of one of the virtual quadrants. This platform remained submerged 2 centimeters below the surface of the water, therefore it was invisible to animals that swam during the test. The platform, 11 centimeters in diameter, is made of stainless steel and painted black. In addition, to facilitate that the animals could climb to 15 without slipping, the upper part consisted of a metallic grid also of black color. The center of this platform was placed equidistant from the wall and the center of the pool. The pool was surrounded by different colored curtains that contained numerous spatial keys, external to the labyrinth, that remained in the same position during all the tests. He
20 comportamiento del animal fue monitorizado por una cámara de vídeo colocada en el techo, justo encima del centro de la piscina, y un sistema computerizado (EthoVision 1.9, Noldus IT, Wageningen, Holanda). The animal's behavior was monitored by a video camera placed on the roof, just above the center of the pool, and a computerized system (EthoVision 1.9, Noldus IT, Wageningen, Holland).
Se determinaron cuatro posiciones de comienzo alrededor del perímetro de Four starting positions were determined around the perimeter of
25 la piscina. En cada sesión, se utilizaron las cuatro posiciones de comienzo de una manera aleatoria. El ensayo empezaba al situar a la rata dentro del agua, con el cuerpo orientado hacia la pared de la piscina, en una de las posiciones de comienzo. El tiempo máximo de cada ensayo era de 120 segundos, y en caso de que la rata no encontrara la plataforma, se la guiaba 25 the pool. In each session, the four starting positions were used in a random manner. The test began by placing the rat in the water, with the body facing the wall of the pool, in one of the starting positions. The maximum time of each trial was 120 seconds, and in case the rat did not find the platform, it was guided
30 con la mano hasta la misma. Una vez allí, el animal permanecía sobre la plataforma durante 30 segundos. Transcurrido este periodo de tiempo, se lo recogía colocándolo encima de una toalla y se lo llevaba al exterior de las cortinas que rodeaban la piscina, donde permanecía otros 30 segundos, antes de comenzar un nuevo ensayo. Si se trataba del último ensayo de la sesión correspondiente, se llevaba a la rata a la habitación adyacente, que se mantenía a una temperatura de 30º C, donde se procedía a su secado en 30 by hand to it. Once there, the animal remained on the platform for 30 seconds. After this period of time, he picked it up by placing it on top of a towel and taking it outside the curtains that surrounded the pool, where it remained another 30 seconds, before starting a new trial. If it was the last trial of the corresponding session, the rat was taken to the adjacent room, which was kept at a temperature of 30 ° C, where it was dried in
5 una jaula de características similares a la suya propia. Una vez la rata estaba seca se la devolvía al estabulario. 5 a cage with characteristics similar to your own. Once the rat was dry it was returned to the stable.
Un día después del entrenamiento, la memoria espacial de los animales fue ensayada en el laberinto acuático de Morris, en el cual la plataforma One day after training, the animals' spatial memory was rehearsed in the Morris water maze, in which the platform
10 sumergida fue retirada. Los animales nadaron durante 60 segundos tratando de encontrar la plataforma sumergida en la posición en donde había estado durante los ensayos del entrenamiento espacial. 10 submerged was removed. The animals swam for 60 seconds trying to find the submerged platform in the position where it had been during the space training rehearsals.
Claims (12)
- Categoría Category
- 56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas 56 Documents cited Claims Affected
- A TO
- HEBERT A E et al. Extracellular signal-regulated kinase activity in the entorhinalcortex is necessary for long-term spatial memory. Learning and Memory. 07.2002 VOL: 9 No: 4 Pags: 156-166 ISSN 1072-0502 (print) Doi: doi:10.1101/lm.48502, páginas 157,158. 1-17 HEBERT A E et al. Extracellular signal-regulated kinase activity in the entorhinalcortex is necessary for long-term spatial memory. Learning and Memory 07.2002 VOL: 9 No: 4 Pags: 156-166 ISSN 1072-0502 (print) Doi: doi: 10.1101 / lm.48502, pages 157,158. 1-17
- A TO
- US 2005214325 A1 (DAVID NATHANIEL E) 29.09.2005, párrafos 68,69; resumen; reivindicaciones. 1-17 US 2005214325 A1 (DAVID NATHANIEL E) 29.09.2005, paragraphs 68.69; summary; claims. 1-17
- A TO
- WO 0134201 A2 (ADVANCED RES & TECH INST et al.) 17.05.2001, reivindicaciones. 1-17 WO 0134201 A2 (ADVANCED RES & TECH INST et al.) 17.05.2001, claims. 1-17
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: This report has been prepared • for all claims • for claims no:
- Fecha de realización del informe 09.04.2013 Date of realization of the report 09.04.2013
- Examinador H. Aylagas Cancio Página 1/4 Examiner H. Aylagas Cancio Page 1/4
- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Novelty (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones 1-17 Reivindicaciones SI NO Claims 1-17 Claims IF NOT
- Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Inventive activity (Art. 8.1 LP11 / 1986)
- Reivindicaciones 1-17 Reivindicaciones SI NO Claims 1-17 Claims IF NOT
- Documento Document
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date
- D01 D01
- HEBERT A E et al. Extracellular signal-regulated kinase activity in the entorhinalcortex is necessary for long-term spatial memory. Learning and Memory. 07.2002 VOL: 9 No: 4 Pags: 156-166 ISSN 1072-0502 (print) Doi: doi:10.1101/lm.48502, páginas 157,158. 30.06.2002 HEBERT A E et al. Extracellular signal-regulated kinase activity in the entorhinalcortex is necessary for long-term spatial memory. Learning and Memory 07.2002 VOL: 9 No: 4 Pags: 156-166 ISSN 1072-0502 (print) Doi: doi: 10.1101 / lm.48502, pages 157,158. 06.30.2002
- D02 D02
- US 2005214325 A1 (DAVID NATHANIEL E) 29.09.2005 US 2005214325 A1 (DAVID NATHANIEL E) 29.09.2005
- D03 D03
- WO 0134201 A2 (ADVANCED RES & TECH INST et al.) 17.05.2001 WO 0134201 A2 (ADVANCED RES & TECH INST et al.) 05/17001
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