ES2413911B1 - Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide. - Google Patents

Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide. Download PDF

Info

Publication number
ES2413911B1
ES2413911B1 ES201132020A ES201132020A ES2413911B1 ES 2413911 B1 ES2413911 B1 ES 2413911B1 ES 201132020 A ES201132020 A ES 201132020A ES 201132020 A ES201132020 A ES 201132020A ES 2413911 B1 ES2413911 B1 ES 2413911B1
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
page
application
use according
date
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES201132020A
Other languages
English (en)
Other versions
ES2413911A1 (es
Inventor
Javier Sancho Sanz
Laura Catalina LÓPEZ RODRÍGUEZ
José Alberto CARRODEGUAS VILLAR
Salvador VENTURA ZAMORA
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universitat Autonoma de Barcelona UAB
Universidad de Zaragoza
Original Assignee
Universitat Autonoma de Barcelona UAB
Universidad de Zaragoza
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universitat Autonoma de Barcelona UAB, Universidad de Zaragoza filed Critical Universitat Autonoma de Barcelona UAB
Priority to ES201132020A priority Critical patent/ES2413911B1/es
Priority to PCT/ES2012/000299 priority patent/WO2013087954A1/es
Publication of ES2413911A1 publication Critical patent/ES2413911A1/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2413911B1 publication Critical patent/ES2413911B1/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/64—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/30—Hetero atoms other than halogen
    • C07D333/34—Sulfur atoms

Abstract

Compuestos inhibidores de la agregación del péptido beta amiloide.#La presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y, en particular se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto y a su uso para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

Description

Compuestos inhibidores de la agregacion del peptido beta amiloide.
La presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) para la elaboración de una composición farmacéutica, más preferiblemente para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Además, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto.
(I)10
ESTADO DE LA TÉCNICA
La enfermedad de Alzheimer (AD) es la causa más común de declive progresivo de la función cognitiva en ancianos.
15 Se caracteriza por la presencia de numerosas placas seniles y ovillos neurofibrilares, y se ve acompañada por pérdida de neuronas colinérgicas. Las placas seniles neurofibrilares están compuestas por péptidos beta amiloides (A1), fragmentos peptídicos de 40–42 residuos de una proteína precursora (APP) codificada en el cromosoma 21. Se ha demostrado que el péptido A1 y fragmentos del mismo son tóxicos in vitro e in vivo , lo que indica un papel importante de A1 en la patogénesis de AD.
20 La naturaleza precisa de la forma tóxica de A1 no ha sido establecida por completo pero, recientemente, la toxicidad se ha relacionado con formas tempranas de agregados peptídicos llamadas ADDLs (ligandos difundibles derivados de A1), protofibrillas u oligómeros solubles (Walsh D.M., Selkoe D.J., Protein Pept Lett, 2004. 11(3): p. 213-28).
25 Las dianas principales para intervención terapéutica en la cascada A1 se clasifican en: (i) Inhibición de la producción de A1, (ii) Inhibición de la agregación de A1 y de la formación de fibras (iii) Inhibición de la respuesta inflamatoria causada por el depósito de A1 (Grundman y Thal., Neurol Clin, 2000. 18(4): p. 807-28). La inhibición de formación de fibras y, mejor aún, de agregación de A1 es de interés terapéutico en el tratamiento de AD (Findeis y Molineaux., Methods Enzymol, 1999. 309: p. 476-88) porque los agregados de bajo peso molecular de A1 son extremadamente
30 tóxicos para neuronas (Pike et al., J Neurosci, 1993. 13(4): p. 1676-87). Aunque se ha hecho mucho esfuerzo para desarrollar agentes terapéuticos tales como inmunoterapia (Thatte., Curr Opin Investig Drugs, 2001. 2(5): p. 663-7) así como compuestos que rompan láminas 1 (Findeis y Molineaux., Methods Enzymol, 1999. 309: p. 476-88), la terapia específica disponible para combatir AD está limitada a la basada en la mejora de la función colinérgica y el efecto clínico no es suficiente (Grundman y Thal., Neurol Clin, 2000. 18(4): p. 807-28).
35 Por tanto, la necesidad de intervención terapéutica es imperiosa. La utilidad de los compuestos que reducen la agregación de A1 o su neurotoxicidad in vitro se ve a menudo comprometida por su toxicidad in vivo . Los tratamientos de los síntomas de AD incluyen el uso de inhibidores de acetilcolinesterasa (AchE). Los disponibles clínicamente para tratar AD suave o moderado son galantamina, donepecil-hidrocloruro y rivastigmina (Matharu et
40 al., J Neurol Sci, 2009. 280(1-2): p. 49-58).
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención proporciona unos compuestos que son útiles para la elaboración de un medicamento y más 45 preferiblemente para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
Un primer aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) para la elaboración de un medicamento (a partir de ahora compuesto de la invención):
ES 2 413 911 A1
donde:
5 X1 y X2 se seleccionan, de manera independiente, de entre S, O ó NH; R1 se selecciona de entre -NRaRb, -ORc y -SRd; donde Ra y Rb se selecciona, de manera independiente, de entre un grupo alquilo (C1-C5) o H o se unen formando un heterocicloalquilo, y Rc y Rd son, de manera independiente, un grupo alquilo (C1-C5); R2 se selecciona entre un halógeno o un hidrógeno; y
10 n tiene un valor de 1, 2 o 3, preferiblemente es 2.
El término “alquilo” se refiere, en la presente invención, a cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 5 átomos de carbono, y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, etc., preferiblemente el grupo alquilo tiene
15 de 1 a 3 átomos de carbono y más preferiblemente es un grupo metilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como arilo, halógeno, (denominándose haloalquilo), hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto o tioalquilo. Preferiblemente el grupo alquilo no esta sustituido.
20 Por “heterocicloalquilo" se refiere a una cadena carbocíclica saturada, que tiene de 3 a 12 átomos de carbono y al menos uno de esos carbonos está sustituido por un nitrógeno y en concreto el que se une al anillo aromático (Ncicloalquilo), pudiendo ser monocíclico o bicíclico, en este último caso los anillos pueden estar separados o condensados. Preferiblemente el heterocicloalquilo es un monocíclico y más preferiblemente tiene de 3 a 6 átomos de carbono. El heterocicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes tales como
25 alquilo, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, acilo, amino o nitro.
Por “halógeno” se entiende en la presente invención a un átomo de bromo, cloro, yodo o flúor. Preferiblemente es cloro.
30 En una realización preferida, X1 es NH.
En otra realización preferida, X2 es S.
En otra realización preferida, R1 es -NRaRb, más preferiblemente Ra y Rb se unen formando un heterocicloalquilo, y 35 aún más preferiblemente el heterocicloalquilo es piperidinila.
En una realización más preferida, el compuesto de la invención es el 2,5-dicloro-N-(4-piperidinofenil)-3tiofenesulfonamida, de fórmula:
Los compuestos de la invención pueden presentarse en forma de sales farmacéuticamente aceptables, solvatos o esteroisómeros.
ES 2 413 911 A1
El término "sales farmacéuticamente aceptables, solvatos o estereoisómeros" se refiere a cualquier sal farmacéutica, éster, solvato o cualquier otro compuesto que, siendo administrado a un receptor, es capaz de proporcionar (directa
o indirectamente) un compuesto descrito en el presente documento. Sin embargo se observará que las sales farmacéuticamente inaceptables están también en el ámbito de la invención ya que estas últimas pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales, estereoisómeros y derivados pueden ser llevadas a cabo por medio de métodos conocidos en la materia.
La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula
(I)
junto con un transportador farmacéutico aceptable, adyuvante o vehículo para la administración a un paciente. Dicha composición se pueden utilizar junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, ser provistos en una forma de una composición separada para su administración simultanea o no, con la composición farmacéutica que comprende un compuesto de de la invención. Por tanto, la composición farmacéutica de la invención puede comprender además otro principio activo.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención, además de al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Los “vehículos farmacéuticamente aceptables” que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas.
Las formas farmacéuticas adecuadas para la administración oral incluyen cualquier composición sólida (tabletas, pastillas, cápsulas, formas granuladas, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, etc.) y pueden contener excipientes convencionales conocidos en la materia.
Los compuestos descritos en esta invención, sus sales farmacéuticamente aceptables, estereoisómeros y/o solvatos, así como las composiciones farmacéuticas que los contienen, pueden ser administrados de forma oral o parenteral. La administración parenteral se puede llevar a cabo por vía de administración intramuscular, intraarterial, intravenosa, intradérmica, subcutánea, intratecal o intraósea pero sin limitarse únicamente a estos tipos de vías de administración parenteral. La administración puede ser también sublingual, nasal, intracatecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.
A lo largo de la presente descripción, el término “tratamiento” se refiere a eliminar, reducir o disminuir la causa o efectos de la enfermedad. Para los propósitos de esta invención, tratamiento incluye, aunque sin quedar limitados a los mismos, aliviar, disminuir o eliminar uno o más síntomas de la enfermedad; reducir el grado de enfermedad, estabilizar (es decir, no empeorar) el estado de la enfermedad, retrasar o ralentizar la progresión de la enfermedad, aliviar o mejorar el estado de la enfermedad y remitir (ya sea total o parcial).
Los autores de la presente invención han demostrado en los ejemplos el compuesto de la invención, en concreto el compuesto 2,5-dicloro-N-(4-piperidinofenil)-3-tiofenesulfonamida (en adelante, “compuesto”) inhibe fuertemente la agregación del péptido A1 humano, por lo que una de sus aplicaciones es el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere al uso del compuesto de fórmula general (I) para la inhibición de la agregación del péptido A1 preferiblemente del péptido A1 humano, y aún más preferiblemente para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
BREVE DESCRIPCION DE LA FIGURAS
Fig. 1. Muestra la fluorescencia de tioflavina asociada a la agregación del péptido en presencia y ausencia del compuesto. u.a. es unidades arbitrarias.
Fig. 2. Representa el incremento de dispersión de luz en solución asociado a agregación del péptido en presencia del compuesto.
Fig. 3. Muestra las imágenes por microscopía electrónica de la formación de fibras amiloides en distintas condiciones: control negativo: en ausencia de péptido A1 control positivo: péptido A1 (17-40) a concentración 50 !M, compuesto: péptido A1 (17-40) a concentración 50 !M + compuesto a una concentración100 !M.
ES 2 413 911 A1
Fig. 4. Muestra la viabilidad celular de células humanas de neuroblastoma y células HeLa mediante un ensayo con XTT. MCC es concentración mínima citotóxica.
Fig. 5. Muestra la supervivencia celular en levadura relacionada con la inhibición de la agregación del péptido A1 (142). Las barras se refieren a ensayos equivalentes realizados en presencia de 10 IM (columna negra) y 20 IM (columna blanca) de MTX (metotrexato), el inhibidor de la enzima dihidrofolato reductasa (DHFR).
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores. En todos los ejemplos se ha utilizado el compuesto 2,5-dicloro-N-(4-piperidinofenil)-3-tiofenesulfonamida (en adelante llamado compuesto), disponible comercialmente (Maybridge, Thermo Fisher Scientific). Como se demuestra en los ejemplos, el compuesto inhibe fuertemente la agregación del péptido A1 humano. Se han realizado tres ensayos secuenciales in vitro que cuantifican el grado de agregación del péptido A1 (fragmento 17-40).
Ejemplo 1
El primer ensayo se llevó a cabo como está descrito en LeVine, Protein Sci, 1993. 2(3): p. 404-10. Este ensayo monitoriza la fluorescencia de tioflavina asociada a la agregación del péptido A1 (fragmento 17-40) y compara la agregación de dicho péptido que tiene lugar en ausencia y en presencia del compuesto (Fig. 1). El compuesto se adquirió liofilizado y fue resuspendido en DMSO 100% a una concentración stock 4 mM y posteriormente diluido en PBS hasta una concentración final 100 !M.
Como muestra la figura 1, el compuesto disminuye la fluorescencia de tioflavina y por tanto la agregación del péptido A1
Ejemplo 2
El segundo ensayo monitoriza el incremento de dispersión de luz en solución asociado a agregación del péptido A1 (fragmento 17-40) en presencia del compuesto (Fig. 2). La presencia del compuesto impide la formación de las fibras amiloides.
El péptido A117-40 se resuspendió en una solución de NH4OH al 0,02% hasta obtener una solución stock 500 !M, posteriormente fue centrifugado a 10.000 r.p.m. durante 30 minutos a 4º C, y diluido en una solución de tampón fosfato (PBS) hasta una concentración final 50 !M. A la solución del péptido A117-40 fue adicionado el compuesto a una concentración final 100 !M, el cual previamente había sido resuspendido en DMSO 100% (concentración stock del compuesto de 20 mM).
El valor de absorbancia a 360 nM, fue analizado cada 30 minutos durante 8 horas y comparado con el control negativo, el cual es una muestra de NH4OH al 0,002%, DMSO 0,5% y PBS, y el control positivo, el cual es una muestra del péptido A117-40 50 !M en PBS y DMSO 0,5%.
El ensayo se llevo a cabo utilizando un espectrofotómetro Varian Cary 100 Bio, y cubetas de cuarzo Hellma 104QS de 10 mm de paso de luz. Este ensayo permite cuantificar y confirmar el efecto inhibidor de la formación de fibras amiloides que presenta el compuesto, ya que en una muestra donde ocurre el proceso de agregación (control positivo), los valores de absorbancia incrementan proporcionalmente a la formación de agregados amiloides en el tiempo.
Ejemplo 3
El tercer ensayo permite visualizar directamente la formación de fibras amiloides (o la ausencia de formación en presencia del compuesto) por microscopía electrónica (Fig. 3). Como muestra la figura 3, el compuesto redujo significativamente la formación de fibras amiloides.
Como control negativo se empleó NH40H al 0,002%, DMSO 0,5% y PBS. Como control positivo se empleó el péptido A1 (17-40) 50 !M, PBS y DMSO 0,5%. El péptido A1 inicialmente se resuspendió en una solución de NH4OH 0,02% a una concentración inicial 500 !M, centrifugado a 10.000 r.p.m. durante 30 minutos a 4º C y posteriormente diluido en solución PBS hasta obtener una concentración 50 !M, el cual fue incubado durante 24 horas a 37º C en presencia del compuesto, el cual estaba a una concentración final 100 !M (y que había sido previamente resuspendido en DMSO 100%, solución stock 20 mM).
Para la observación de las muestras (control positivo, control negativo y péptido A1 incubado con el compuesto), se realizó el siguiente procedimiento: sobre una rejilla de cobre se adicionaron 10 !l de la muestra, que se dejó reposar 5 minutos, se retiró el exceso de muestra con ayuda de una tira de papel Watman, se adicionaron 10 !l del colorante Acetato de Uranilo, el cual se dejó actuar durante 1 minuto. Posteriormente, se retiró el exceso de colorante y las
ES 2 413 911 A1
rejillas se dejaron secando a 37º C para su posterior observación en un microscopio electrónico HITACHI H-7000 a 75 kV.
Ejemplo 4
La toxicidad del compuesto hacia células humanas de neuroblastoma SH-SY5Y y células HeLa se determinó por ensayo con el compuesto XTT. El compuesto muestra una toxicidad razonablemente baja a juzgar por su Concentración Mínima Citotóxica (MCC) (Fig. 4).
Las células se cultivaron en DMEM con rojo fenol, suplementado con 100 U/ml de penicilina, 100 !g /ml de estreptomicina y 10% de suero bovino fetal. El cultivo se mantuvo a 37º C en una atmósfera de 5% de CO2. Las células fueron cultivadas en frascos de cultivo de 25 ml y subcultivadas cada 3 días. Para evaluar la toxicidad del compuesto en células HeLa, las células fueron cultivadas en placas de 96 pocillos. Se sembraron 3 x 104 células por pocillo en 100 !l de medio durante 24 horas. Posteriormente, las células fueron incubadas con el compuesto a diferentes concentraciones, como muestra la figura
4.
A las 24 horas de incubación con el compuesto, la viabilidad celular fue determinada utilizando el compuesto 2,3bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-[(fenil-amino)carbonil]- 2H-hidróxido de tetrazolio (XTT) (Cell Proliferation Kit II, Roche), siguiendo las instrucciones del fabricante. Después del periodo de incubación de 24 horas, el medio de cultivo es remplazado por medio DMEM sin rojo fenol y 50 !l del reactivo XTT se añaden a cada pocillo. Las placas de cultivo se incuban nuevamente durante 4 horas a 37º C a una atmosfera de 5% de CO2. Posteriormente, la densidad óptica fue leída a 450 nm, con una longitud de onda de referencia de 650 nm, usando un lector de placas. Los valores obtenidos con controles no tratados se consideraron como 100% de viabilidad. La concentración mínima citotóxica (MCC) fue calculada por ajuste de los valores de viabilidad a cada concentración del compuesto evaluada, utilizando una función dosis-respuesta con una pendiente variable, utilizando el software Origin Pro ® 8 (Northampton, USA).
Ejemplo 5
La capacidad del compuesto de inhibir la agregación del péptido A1 (1-42) expresado en células de levadura ha sido determinada usando un ensayo que relaciona supervivencia celular con inhibición de la agregación de A1 como se describe en Morell, et al., Mol. BioSyst., 2011, 7, 1121-1128. El compuesto aumenta la supervivencia de las células de levadura Saccharomyces Cerev isiae, de manera dosis dependiente, inhibiendo la agregación intracelular del péptido A1 (1-42) (Fig. 5).
ES 2 413 911 A1

Claims (13)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Uso de un compuesto de fórmula general (I):
    5 (I)
    donde: X1 y X2 se seleccionan, de manera independiente, de entre S, O ó NH; R1 se selecciona de entre -NRaRb, -ORc y -SRd; donde Ra y Rb se selecciona, de manera independiente, de entre un
    10 grupo alquilo (C1-C5) o H o se unen formando un heterocicloalquilo, y Rc y Rd son, de manera independiente, un grupo alquilo (C1-C5); R2 se selecciona entre un halógeno o un hidrógeno; y n tiene un valor de 1, 2 o 3,
    15 para la elaboración de un medicamento.
  2. 2. Uso según la reivindicación 1, donde X1 es NH.
  3. 3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, donde X2 es S. 20
  4. 4.
    Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R1 es -NRaRb.
  5. 5.
    Uso según la reivindicación anterior, donde Ra y Rb se unen formando un heterocicloalquilo.
    25 6. Uso según la reivindicación anterior, donde el heterocicloalquilo es la piperidinila.
  6. 7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde R2 es un halógeno.
  7. 8.
    Uso según la reivindicación anterior, donde el halógeno es Cl. 30
  8. 9.
    Uso según cualquiera de las reivindicaciones 7 u 8, donde n es 2.
  9. 10.
    Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde el compuesto es de fórmula:
  10. 11.
    Uso del compuesto de fórmula general (I) según se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
  11. 12.
    Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula general (I) según se describe en cualquiera 40 de las reivindicaciones 1 a 10.
  12. 13. Composición farmacéutica según la reivindicación anterior que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
    ES 2 413 911 A1
    0 2 4 6 810 12 14 Tiempo (h)
    Fig. 1
    ES 2 413 911 A1
    Fig. 2
    ES 2 413 911 A1
    Control negativo de agregación Control positivo de agregación
    Compuesto
    Fig. 3
    ES 2 413 911 A1
    1E-8 1E-7 1E-6 1E-5 1E-4
    [compuesto] M
    Fig. 4
    ES 2 413 911 A1
    Fig. 5
    OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS
    N.º solicitud: 201132020
    ESPAÑA
    Fecha de presentación de la solicitud: 15.12.2011
    Fecha de prioridad:
    INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA
    51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional
    DOCUMENTOS RELEVANTES
    Categoría
    56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas
    X
    WO 2004080882 A2 (SCHERING AKTIENGESELLSCHAFT) 21.10.2004, reivindicaciones 1-6; página 1, líneas 4-18; página 25, ejemplo 7. 1-5,11-13
    A
    WO 1998/027081 A1 (SMITHKLINE BEECHAM PLC) 25.06.1998, reivindicaciones 1,2,14,15; página 38, líneas 13-15. 1-13
    A
    WO 2002008179 A1 (BIOVITRUM AB) 31.01.2002, reivindicación 11; página 8, línea 7 – página 9, línea 23. 1-13
    A
    PU, J. et al. "Synthesis and structure-activity relationship of a novel series of Heterocyclic sulfonamide y-secretase inhibitors". Bioorganic & Medicinal Chemistry 2009, Volumen 17, páginas 4708-4717. [Disponible en línea el 03.05.2009]. Ver página 4708, resumen; tablas 2 y 4. 1-13
    A
    COLE, D.C. et al. "(S)-N-(5-Chlorothiophene-2-sulfonyl)-1,1-diethylalaninol: a Notch-1-sparing y-secretase inhibitor". Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2009, Volumen 19, páginas 926-929. [Disponible en línea el 06.12.2008]. Ver página 926, resumen; tablas 2-4. 1-13
    A
    BALLISTRERI, A. et al. "The Acid Dissociation of Arenesulphonamides: CHet Constants for Thiaand Oxa-substituents in Five-membered S-Linked Heterocycles and Effects of Substituents in the N-Linked Aromatic Ring". Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions II 1977, Volumen 7, páginas 984-987. Ver página 985, tabla 1. 1-13
    Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
    El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
    Fecha de realización del informe 15.04.2013
    Examinador G. Esteban García Página 1/4
    INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA
    Nº de solicitud: 201132020
    CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD
    C07D207/416 (2006.01) C07D307/64 (2006.01) C07D333/34 (2006.01) A61K31/40 (2006.01) A61K31/34 (2006.01) A61K31/381 (2006.01) A61P25/28 (2006.01)
    Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)
    C07D, A61K, A61P
    Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)
    EPODOC,WPI,REGISTRY,HCAPLUS,MEDLINE,BIOSIS,XPESP,NPL,EMBASE,CHEMSPIDER,PUBMED
    Informe del Estado de la Técnica Página 2/4
    OPINIÓN ESCRITA
    Nº de solicitud: 201132020
    Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 15.04.2013
    Declaración
    Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
    Reivindicaciones Reivindicaciones 6-10 1-5,11-13 SI NO
    Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)
    Reivindicaciones Reivindicaciones 6-10 1-5,11-13 SI NO
    Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).
    Base de la Opinión.-
    La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.
    Informe del Estado de la Técnica Página 3/4
    OPINIÓN ESCRITA
    Nº de solicitud: 201132020
    1. Documentos considerados.-
    A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.
    Documento
    Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
    D01
    WO 2004/080882 A2 (SCHERING AKTIENGESELLSCHAFT) 21.10.2004
  13. 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración
    El objeto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula general (I) para la elaboración de un medicamento y una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto de fórmula general (I).
    El documento D01 divulga una serie de sulfonamidas de fórmula (I) (ver reivindicación 1) que, cuando R1 es tiofeno, R2 y R3 forman un anillo heterocíclico y R4 es H (ver reivindicaciones 1-3), solapa con la fórmula general de la invención (siendo en ésta X1=H, X2=S) y que presentan actividad como catalizadores de la descomposición de peroxinitrito, involucrado en procesos inflamatorios asociados a múltiples enfermedades, como el Alzheimer (ver página 1, líneas 4-18). El documento divulga algunos compuestos concretos, entre los que se encuentra el compuesto 7, que se incluye dentro de la fórmula general (I) de la invención, en el que X1=H, X2=S, R1=4-metilpiperazina, R2=H (ver página 25, ejemplo 7); así como las composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y su aplicación para el tratamiento de diversas enfermedades, como la enfermedad de Alzheimer (ver reivindicaciones 4-6).
    En consecuencia, se considera que el objeto de la reivindicaciones 1-5, 11-13 no presenta novedad según lo divulgado en el documento D01 (Artículo 6.1 de la Ley de Patentes).
    Sin embargo, no se ha encontrado en el estado de la técnica divulgación ni sugerencia alguna que pudiera dirigir al experto en la materia hacia la invención recogida en las reivindicaciones 6-10, que se refieren a compuestos que poseen piperidina y cloro como sustituyentes del anillo bencénico y del tiofeno, respectivamente.
    Por tanto, se considera que el objeto de las reivindicaciones 6-10 reúne los requisitos de novedad y actividad inventiva exigidos en los Artículos 6.1 y 8.1 de la Ley de Patentes.
    Informe del Estado de la Técnica Página 4/4
ES201132020A 2011-12-15 2011-12-15 Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide. Active ES2413911B1 (es)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201132020A ES2413911B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide.
PCT/ES2012/000299 WO2013087954A1 (es) 2011-12-15 2012-11-30 Compuestos inhibidores de la agregacion del peptido beta amiloide

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201132020A ES2413911B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2413911A1 ES2413911A1 (es) 2013-07-17
ES2413911B1 true ES2413911B1 (es) 2014-05-14

Family

ID=48611885

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES201132020A Active ES2413911B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide.

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2413911B1 (es)
WO (1) WO2013087954A1 (es)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DZ2376A1 (fr) * 1996-12-19 2002-12-28 Smithkline Beecham Plc Dérivés de sulfonamides nouveaux procédé pour leurpréparation et compositions pharmaceutiques les c ontenant.
SE0002739D0 (sv) * 2000-07-21 2000-07-21 Pharmacia & Upjohn Ab New use
WO2004080882A1 (en) * 2003-03-07 2004-09-23 Mhe Technologies, Inc. Hoist apparatus rope sensing device

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013087954A1 (es) 2013-06-20
ES2413911A1 (es) 2013-07-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6518270B2 (ja) Ｇｓｋ−３阻害剤としての新規チアジアゾリジンジオン
JP5584627B2 (ja) 置換されたシクロアルキル［ｅ又はｄ］ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−セロトニン５−ＨＴ６受容体のアンタゴニスト、その調製の方法及び使用
BR112019013535A2 (pt) N-4-flúor-5-[[(2s,4s)-2-metil-4-[(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)metóxi]-1-piperidil]metil]tiazol-2-il]acetamida como inibidor da oga
JP5584626B2 (ja) ２−アルキルアミノ−３−（アリールスルホニル）−シクロアルキル［ｅ又はｄ］ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−セロトニン５−ＨＴ６受容体アンタゴニスト、その調製の方法及び使用
CA2925698C (en) Rna polymerase i inhibitors and uses thereof
PT2485736E (pt) Compostos de dióxido de iminotiadiazina inibidores de bace, composições, e sua utilização
WO2011051535A1 (es) Derivados de bis(aralquil)amino y sistemas (hetero)aromáticos de seis miembros y su uso en el tratamiento de patologías neurodegenerativas, incluida la enfermedad de alzheimer
ES2909086T3 (es) Inhibidores bicíclicos de histona desacetilasa
EP3439665B1 (en) Treatment of cognitive and mood symptoms in neurodegenerative and neuropsychiatric disorders with alpha5-containing gabaa receptor agonists
CA2938187C (en) Solid forms of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide, compositions thereof and methods of their use
Nepovimova et al. Tacrine–Benzothiazoles: Novel class of potential multitarget anti-Alzheimeŕs drugs dealing with cholinergic, amyloid and mitochondrial systems
WO2014196328A1 (ja) ヒドロキサム酸誘導体またはその塩
JP5563559B2 (ja) ２−アミノ−３−スルホニル−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピリド−ピリミジン−セロトニン５−ＨＴ６受容体アンタゴニスト、調製のための方法及びその使用
JP5575663B2 (ja) 置換された２−アミノ−３−（スルホニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−セロトニン５−ＨＴ６受容体アンタゴニスト、その調製のための方法及び使用
ES2413911B1 (es) Agente inhibidor de la agregación del peptido beta amiloide.
CA2527906A1 (en) Acylated imidazo[2,1-b]-1,3,4,-thiadiazole-2-sulfonamides and uses thereof
ES2411804B1 (es) Compuestos inhibidores de la agregación del péptido beta amiloide.
JP2015534990A (ja) 誤制御されたｅＩＦ４Ｅに関連する疾患又は障害を治療又は予防するための組成物及び方法
ES2449640B1 (es) Compuestos para su uso en el tratamiento de la enfermedad de alzheimer
ES2360435B1 (es) Derivados de biss (aralquil) amino y sistemas (6+5)-heteroaromaticos y su uso en el tratamiento de patologias neurodegenerativas, incluida la enfermedad de alzheimer
WO2013079745A1 (es) Compuestos inhibidores de la agregación del péptido beta amiloide
RU2675794C1 (ru) Мультифункциональные конъюгаты такрина и его аналогов с производными 1,2,4-тиадиазола, способ их синтеза и применение для лечения нейродегенеративных заболеваний
ES2363975B2 (es) Uso de la yesotoxina. an�?logos y derivados para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades neurodegenerativas relacionadas con tau y beta-amiloide.
WO2024061658A1 (en) Thiazole derivatives as tau aggregation inhibitors
JP6970667B2 (ja) キノリンアミドおよびその使用法

Legal Events

Date Code Title Description
FG2A Definitive protection

Ref document number: 2413911

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: B1

Effective date: 20140514