ES2390085T3 - Therapeutic uses of RTP801 inhibitors - Google Patents

Abstract

Un compuesto ARNip que tiene la estructura de hebra doble:5' (N)x -Z 3' (cadena antisentido)3' Z'-(N')y 5' (cadena sentido),donde cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y cadauno de (N)x y (N')y es un oligómero en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlacecovalente;en donde cada uno de x y y es un entero entre 19 y 40; en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente oausente, pero si está presente es dTdT y está covelentemente unido al terminal 3' de la hebra en la cual estápresente;y en donde la secuencia de (N)x comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos que tiene una cualquiera delas siguientes secuencias:AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.:66);UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. con núm. de ident.:74);UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. con núm. de ident.:75);AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. con núm. de ident.:77);UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. con núm. de ident.:79); yAACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. con núm. de ident.:91),y la secuencia de (N')y comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos,y en donde la estructura de hebra doble se genera por pareamiento de bases entre el primer tramo y el segundotramo.An siRNA compound having the double strand structure: 5 '(N) x -Z 3' (antisense chain) 3 'Z' - (N ') and 5' (sense chain), where each N and N 'is a Ribonucleotide that may be modified or unmodified in its sugar residue and each of (N) xy (N ') and is an oligomer in which each consecutive N or N' binds to the next N or N 'by a covalent bond; where each of xyy is an integer between 19 and 40; where each of Z and Z 'may be present or absent, but if present it is dTdT and is connected to the terminal 3' of the strand in which it is present; and where the sequence of (N) x comprises a first section of adjacent nucleotides having any one of the following sequences: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. with ID No.:66);UUCUAGAUGGAAGACCCAG (Sec. with ID No.:74);UUGAACAUCAAGUGUAUUC (Sec. with ID No. 75); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. With ID No.:77);UACUUGAACAUCAAGUGUA (Sec. With ID No.:79); yAACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. with identification number: 91), and the sequence of (N ') and comprises a second section of the adjacent nucleotides, and where the double strand structure is generated by base pairing between the first section and the second segment.

Description

Usos terapéuticos de los inhibidores de RTP801 Therapeutic uses of RTP801 inhibitors

Esta solicitud reivindica prioridad de la solicitud de patente europea núm. EP 04019405.2, presentada el 16 de agosto de 2004; las solicitudes provisionales de Estados Unidos núms. 60/601,983, presentada el 17 de agosto de 2004; 60/604,668, presentada el 25 de agosto de 2004; 60/609,786, presentada el 14 de septiembre de 2004; 60/638,659, presentada el 22 de diciembre de 2004; 60/664,236, presentada el 22 de marzo de 2005 y 60/688,943, presentada el 8 de junio de 2005. This application claims priority of European patent application no. EP 04019405.2, filed on August 16, 2004; United States provisional applications Nos. 60 / 601,983, filed on August 17, 2004; 60 / 604,668, filed on August 25, 2004; 60 / 609,786, filed September 14, 2004; 60 / 638,659, filed December 22, 2004; 60 / 664,236, filed on March 22, 2005 and 60 / 688,943, filed on June 8, 2005.

CAMPO DE LA INVENCIÓN FIELD OF THE INVENTION

La presente invención se relaciona con nuevas moléculas de ARNip que inhiben el gen RTP801 y con el uso de tales moléculas para tratar trastornos respiratorios de todo tipo (incluyendo trastornos pulmonares), afecciones y enfermedades oculares, trastornos microvasculares, afecciones relacionadas con la angiogénesis y la apoptosis. The present invention relates to new siRNA molecules that inhibit the RTP801 gene and to the use of such molecules to treat respiratory disorders of all types (including pulmonary disorders), eye conditions and diseases, microvascular disorders, conditions related to angiogenesis and apoptosis

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN BACKGROUND OF THE INVENTION

Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD)

La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), afecta más de 16 millones de americanos y es la cuarta causa más alta de muerte en los Estados Unidos. La fuma de cigarrillos causa la mayoría de las apariciones de la enfermedad debilitante pero otros factores ambientales no pueden excluirse (Petty TL. 2003. Definition, epidemiology, course, and prognosis of COPD. Clin. Cornerstone, 5-10). Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) affects more than 16 million Americans and is the fourth highest cause of death in the United States. Cigarette smoking causes the majority of the occurrences of the debilitating disease but other environmental factors cannot be excluded (Petty TL. 2003. Definition, epidemiology, course, and prognosis of COPD. Clin. Cornerstone, 5-10).

El enfisema pulmonar es una manifestación importante de la COPD. La destrucción permanente de los espacios de aire periférico, bronquiolos distal a terminal, es el sello distintivo del enfisema (Tuder RM, y otros. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003.). El enfisema se caracteriza además por acumulación de células inflamatorias tales como macrófagos y neutrófilos en las estructuras bronquial y alveolar (Petty, 2003). Pulmonary emphysema is an important manifestation of COPD. Permanent destruction of peripheral air spaces, distal to terminal bronchioles, is the hallmark of emphysema (Tuder RM, et al. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor block. Am J Respir Cell Mol Biol , 29: 88-97; 2003.). Emphysema is further characterized by accumulation of inflammatory cells such as macrophages and neutrophils in the bronchial and alveolar structures (Petty, 2003).

La patogénesis del enfisema es compleja y multifactorial. En humanos, se ha demostrado que una deficiencia de inhibidores de proteasas producida por las células inflamatorias, tales como alfa1-antitripsina, contribuye al desbalance proteasa/antiproteasa, favoreciendo así la destrucción de la matriz extracelular alveolar en el enfisema inducido por el humo del cigarrillo (CS) (Eriksson, S. 1964. Pulmonary Emphysema and Alpha1-Antitrypsin Deficiency. Acta Med Scand 175:197-205. Joos, L., Pare, P.D., and Sandford, A.J. 2002. Genetic risk factors of chronic obstructive pulmonary disease. Swiss Med Wkly 132:27-37). Las metaloproteinasas de la matriz (MMP) desempeñan una función central en el enfisema experimental, como se documentó por la resistencia de los ratones carentes de metaloelastasa macrofágica contra el enfisema causado por inhalación crónica de CS (Hautamaki, y otros: Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice. Science 277:2002-2004). Además, la sobreexpresión pulmonar de la interleucina-13 en ratones transgénicos resulta en enfisema dependiente de MMP y catepsina (Zheng, T., y otros 2000. Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase-and cathepsin-dependent emphysema. J Clin Invest 106:1081-1093). Trabajos recientes describen la implicación de la apoptosis de la célula septal en la destrucción del tejido pulmonar lo que conduce al enfisema (Rangasami T, y otros . Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-iduced emphysema in mice. Submitted to Journal of Clinical Investigation.; Tuder RM y otros. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003; Yokohori N, Aoshiba K, Nagai A, Increased levels of cell death and proliferation in alveolar wall cells in pacientes with pulmonary emphysema. Chest. 2004 feb;125(2): 626-32.; Aoshiba K, Yokohori N, Nagai A., Alveolar wall apoptosis causes lung destruction and emphysematous changes. Am J Respir Cell Mol Biol. 2003 mayo;28(5):555-62.). The pathogenesis of emphysema is complex and multifactorial. In humans, it has been shown that a deficiency of protease inhibitors produced by inflammatory cells, such as alpha1-antitrypsin, contributes to protease / antiprotease imbalance, thus favoring the destruction of the alveolar extracellular matrix in cigarette smoke-induced emphysema (CS) (Eriksson, S. 1964. Pulmonary Emphysema and Alpha1-Antitrypsin Deficiency. Acta Med Scand 175: 197-205. Joos, L., Pare, PD, and Sandford, AJ 2002. Genetic risk factors of chronic obstructive pulmonary disease Swiss Med Wkly 132: 27-37). Matrix metalloproteinases (MMP) play a central role in experimental emphysema, as documented by the resistance of mice lacking macrophage metalloelastase against emphysema caused by chronic inhalation of CS (Hautamaki, and others: Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice. Science 277: 2002-2004). In addition, pulmonary overexpression of interleukin-13 in transgenic mice results in MMP-dependent emphysema and cathepsin (Zheng, T., and other 2000. Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase-and cathepsin-dependent emphysema J Clin Invest 106: 1081-1093). Recent work describes the implication of septal cell apoptosis in the destruction of lung tissue which leads to emphysema (Rangasami T, et al. Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-iduced emphysema in mice. Submitted to Journal of Clinical Investigation .; Tuder RM et al. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29: 88-97; 2003; Yokohori N, Aoshiba K, Nagai A, Increased levels of cell death and proliferation in alveolar wall cells in patients with pulmonary emphysema. Chest. 2004 Feb; 125 (2): 626-32 .; Aoshiba K, Yokohori N, Nagai A., Alveolar wall apoptosis causes lung destruction and emphysematous changes. Am J Respir Cell Mol Biol. May 2003; 28 (5): 555-62.).

Entre los mecanismos que soportan ambas rutas de destrucción del pulmón en el enfisema, la formación excesiva de especies de oxígeno reactivas (ROS) debe ser la primera de todas las mencionadas. Está bien establecido que el desbalance prooxidante/antioxidante existe en la sangre y en el tejido pulmonar de los fumadores (Hulea SA, y otros: Cigarette smoking causes biochemical changes in blood that are suggestive of oxidative stress: a case-control study. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 1995;14(3-4):173-80.; Rahman I, MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease. Am J Physiol. 1999 dic;277(6 Pt 1):L1067-88; MacNee W. Oxidants/antioxidants and COPD. Chest. 2000 mayo;117(5 Suppl 1):303S-17S.; Marwick JA, Kirkham P, Gilmour PS, Donaldson K, MacNEE W, Rahman I. Cigarette smoke-induced oxidative stress and TGF-beta1 increase p21waf1/cip1 expression in alveolar epithelial cells. Ann N YAcad Sci. 2002 nov;973:278-83.; Aoshiba K, Koinuma M, Yokohori N, Nagai A. Immunohistochemical evaluation of oxidative stress in murine lungs after cigarette smoke exposure. Inhal Toxicol. 2003 sep;15(10):1029-38.; Dekhuijzen PN. Antioxidant properties of N-acetylcysteine: their relevance in relation to chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 2004 abr;23(4):629-36.; Tuder RM, Zhen L, Cho CY, Taraseviciene-Stewart L, Kasahara Y, Salvemini D, Voelkel NF, and Flores SC. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003.). Among the mechanisms that support both lung destruction pathways in emphysema, excessive formation of reactive oxygen species (ROS) should be the first of all those mentioned. It is well established that the prooxidant / antioxidant imbalance exists in the blood and lung tissue of smokers (Hulea SA, and others: Cigarette smoking causes biochemical changes in blood that are suggestive of oxidative stress: a case-control study. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 1995; 14 (3-4): 173-80 .; Rahman I, MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease. Am J Physiol. 1999 Dec; 277 (6 Pt 1): L1067-88; MacNee W. Oxidants / antioxidants and COPD. Chest. 2000 May; 117 (5 Suppl 1): 303S-17S .; Marwick JA, Kirkham P, Gilmour PS, Donaldson K, MacNEE W, Rahman I Cigarette smoke-induced oxidative stress and TGF-beta1 increase p21waf1 / cip1 expression in alveolar epithelial cells. Ann N YAcad Sci. 2002 Nov; 973: 278-83 .; Aoshiba K, Koinuma M, Yokohori N, Nagai A. Immunohistochemical evaluation of oxidative stress in murine lungs after cigarette smoke exposure. Inhal Toxicol. 2003 Sep; 15 (10): 1029-38 .; Dekhuijzen PN. Antioxidant pr operties of N-acetylcysteine: their relevance in relation to chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 2004 Apr; 23 (4): 629-36 .; Tuder RM, Zhen L, Cho CY, Taraseviciene-Stewart L, Kasahara Y, Salvemini D, Voelkel NF, and Flores SC. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29: 88-97; 2003.).

Después de una hora de exposición de los ratones a CS, existe un aumento dramático de 8-hidroxi-2'-deoxiguanosina (8-OHdG) en las células del epitelio alveolar, particularmente de tipo II (ver Inhal Toxicol. 2003 sep;15(10):1029-38. anteriormente). After one hour of exposure of mice to CS, there is a dramatic increase in 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG) in alveolar epithelial cells, particularly type II (see Inhal Toxicol. 2003 Sep; 15 (10): 1029-38. Above).

Las especies de oxígeno reactivas superproducidas se conocen por su actividad citotóxica, las que provienen de un efecto directo que daña el ADN y de la activación de las rutas de transducción de la señal apoptótica (Takahashi A, Masuda A, Sun M, Centonze VE, Herman B. La apoptosis inducida por el estrés oxidativo se asocia con alteraciones en la actividad caspasa mitocondrial y las alteraciones dependientes de Bcl-2 en el pH mitocondrial (pHm). Brain Res Bull. 2004 feb 15;62(6):497-504.; Taniyama Y, Griendling KK. Reactive oxygen species in the vasculature: molecular and cellular mecanismos. Hypertension. 2003 dic;42(6):1075-81. Epub 2003 oct 27.; Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress. Biochem Pharmacol. 2003 oct 15;66(8):1527-35.; Punj V, Chakrabarty AM. Redox proteins in mammalian cell death: an evolutionarily conserved function in mitochondria and prokaryotes. Cell Microbiol. 2003 abr;5(4):225-31.; Ueda S, Masutani H, Nakamura H, Tanaka T, Ueno M, Yodoi J. Redox control of cell death. Antioxid Redox Signal. 2002 jun;4(3):405-14.). Overproduced reactive oxygen species are known for their cytotoxic activity, which come from a direct effect that damages DNA and the activation of the apoptotic signal transduction pathways (Takahashi A, Masuda A, Sun M, Centonze VE, Herman B. Oxidative stress-induced apoptosis is associated with alterations in mitochondrial caspase activity and Bcl-2-dependent alterations in mitochondrial pH (pHm). Brain Res Bull. 2004 Feb 15; 62 (6): 497- 504 .; Taniyama Y, Griendling KK. Reactive oxygen species in the vasculature: molecular and cellular mechanisms. Hypertension. 2003 Dec; 42 (6): 1075-81. Epub 2003 Oct 27 .; Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress Biochem Pharmacol. 2003 Oct 15; 66 (8): 1527-35 .; Punj V, Chakrabarty AM. Redox proteins in mammalian cell death: an evolutionarily conserved function in mitochondria and prokaryotes. Cell Microbiol. 2003 Apr ; 5 (4): 225-31 .; Ueda S, Masutani H , Nakamura H, Tanaka T, Ueno M, Yodoi J. Redox control of cell death. Antioxid Redox Signal. June 2002; 4 (3): 405-14.).

Las ROS no solo son citotóxicas per se sino que son además estímulos proinflamatorios, y son prominentes activadores de los factores de transcripción sensibles al redox NFkB y AP-1 (revisado en Rahman I. Oxidative stress and gene transcription in asthma and chronic obstructive pulmonary disease: antioxidant therapeutic targets. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2002 sep;1(3):291-315.). Ambos factores de transcripción están, a su vez, fuertemente implicados en estimular la transcripción de las citocinas proinflamatorias (revisado en Renard P, Raes M. The proinflammatory transcription factor NFkappaB: a potential target for novel therapeutical strategies. Cell Biol Toxicol. 1999;15(6):341-4.; Lentsch AB, Ward PA. The NFkappaBb/IkappaB system in acute inflammation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2000;48(2):59-63) y las proteinasas degradantes de la matriz (Andela VB, Gordon AH, Zotalis G, Rosier RN, Goater JJ, Lewis GD, Schwarz EM, Puzas JE, O'Keefe RJ. NFkappaB: a pivotal transcription factor in prostate cancer metastasis to bone. Clin Orthop. 2003 oct;(415 Suppl):S75-85.; Fleenor DL, Pang IH, Clark AF. Involvement of AP-1 in interleukin1alpha-stimulated MMP-3 expression in human trabecular meshwork cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003 ago;44(8):3494-501.; Ruhul Amin AR, Senga T, Oo ML, Thant AA, Hamaguchi M. Secretion of matrix metalloproteinase9 by the proinflammatory cytokine, IL-1beta: a role for the dual signalling pathways, Akt and Erk. Genes Cells. 2003 jun;8(6):515-23.). Las citocinas proinflamatorias, a su vez, sirven como atrayentes de las células inflamatorias que además segregan las enzimas degradantes de la matriz, citocinas y especies de oxígeno reactivas. Así, parece que el factor patogénico, como, por ejemplo, CS, desencadena una red patológica donde las especies de oxígeno reactivas actúan como principal mediador de la destrucción del pulmón. ROS are not only cytotoxic per se but they are also proinflammatory stimuli, and are prominent activators of redox-sensitive transcription factors NFkB and AP-1 (reviewed in Rahman I. Oxidative stress and gene transcription in asthma and chronic obstructive pulmonary disease : antioxidant therapeutic targets Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2002 Sep; 1 (3): 291-315.). Both transcription factors are, in turn, strongly involved in stimulating transcription of proinflammatory cytokines (reviewed in Renard P, Raes M. The proinflammatory transcription factor NFkappaB: a potential target for novel therapeutical strategies. Cell Biol Toxicol. 1999; 15 (6): 341-4 .; Lentsch AB, Ward PA. The NFkappaBb / IkappaB system in acute inflammation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2000; 48 (2): 59-63) and matrix degrading proteinases (Andela VB, Gordon AH, Zotalis G, Rosier RN, Goater JJ, Lewis GD, Schwarz EM, Puzas JE, O'Keefe RJ. NFkappaB: a pivotal transcription factor in prostate cancer metastasis to bone. Clin Orthop. 2003 Oct; ( 415 Suppl): S75-85 .; Fleenor DL, Pang IH, Clark AF. Involvement of AP-1 in interleukin1alpha-stimulated MMP-3 expression in human trabecular meshwork cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003 Aug; 44 (8): 3494-501 .; Ruhul Amin AR, Senga T, Oo ML, Thant AA, Hamaguchi M. Secretion of matrix metalloproteinase9 by the proinflam matory cytokine, IL-1beta: a role for the dual signalling pathways, Akt and Erk. Genes Cells. June 2003; 8 (6): 515-23.). Proinflammatory cytokines, in turn, serve as attractants for inflammatory cells that also secrete degrading enzymes from the matrix, cytokines and reactive oxygen species. Thus, it seems that the pathogenic factor, such as CS, triggers a pathological network where reactive oxygen species act as the main mediator of lung destruction.

Las especies de oxígeno reactivas (ROS) del humo de cigarrillo inhalado y aquellas formadas endógenamente por las células inflamatorias contribuyen a una carga aumentada de oxidante intrapulmonar. Reactive oxygen species (ROS) of inhaled cigarette smoke and those formed endogenously by inflammatory cells contribute to an increased load of intrapulmonary oxidant.

Un factor patogénico adicional con respecto a la patogénesis de la COPD es la expresión de VEGF y VEGFRII disminuida observada en los pulmones de los pacientes con enfisema (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, and Norbert F. Voelkel. Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163. pp 737-744, 2001). Además, la inhibición de la señalización de VEGF usando inhibidor químico de VEGFR conduce al endotelio del septo alveolar y después a la apoptosis de la célula epitelial, probablemente debido a la disrupción de la conexión intima estructural/funcional de los dos tipos de células dentro de los alveolos (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, and Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106:1311-1319 (2000).; Voelkel NF, Cool CD. Pulmonary vascular involvement in chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J Suppl. 2003 nov; 46:28s-32s). An additional pathogenic factor with respect to the pathogenesis of COPD is the expression of decreased VEGF and VEGFRII observed in the lungs of patients with emphysema (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C Flores, and Norbert F. Voelkel, Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema, Am J Respir Crit Care Med Vol 163. pp 737-744, 2001). In addition, inhibition of VEGF signaling using VEGFR chemical inhibitor leads to the endothelium of the alveolar septum and then to epithelial cell apoptosis, probably due to disruption of the structural / functional intimate connection of the two types of cells within the alveoli (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, and Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106: 1311-1319 (2000) .; Voelkel NF, Cool CD. Pulmonary vascular involvement in chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J Suppl. 2003 Nov; 46: 28s-32s).

Degeneración macular Macular degeneration

La causa más común de la disminución de la visión mejor corregida en los individuos mayores de 65 años en los Estados Unidos es el trastorno de la retina conocido como degeneración macular relacionada con la edad (AMD). Cuando la AMD progresa, la enfermedad se caracteriza por pérdida de la visión central, aguda. El área del ojo afectado por la AMD es la mácula -una área pequeña en el centro de la retina, compuesta fundamentalmente de células fotoreceptoras. La llamada AMD "seca", representa aproximadamente 85% -90% de los pacientes con AMD, involucra alteraciones en la distribución de pigmentos en los ojos, pérdida de los fotoreceptores y disminuye la función de la retina debido a la atrofia general de las células. La llamada AMD "húmeda" involucra la proliferación de vasos coroideos anormales lo que conduce a coágulos o cicatrices en el espacio sub-retinal. Así, la aparición de la AMD húmeda ocurre debido a la formación de una red neovascular coroidea anormal (neovascularización coroidea, CNV) debajo de la retina neural. Los vasos sanguíneos formados nuevamente son excesivamente débiles. Esto conduce a la acumulación de fluido subretinal y sangre conduciendo a la pérdida de la agudeza visual. Eventualmente, hay pérdida total de la retina funcional en la región involucrada, ya que se forma una gran cicatriz disciforme que involucra la coroide y la retina. Mientras que los pacientes con AMD seca pueden mantener una visión de calidad decreciente, la AMD húmeda frecuentemente resulta en la ceguera. (Hamdi & Age-related Macular degeneration -a new viewpoint, Frontiers in Bioscience, e305-314, mayo 2003). La CNV ocurre no solamente en la AMD húmeda sino también en otras patologías The most common cause of the best corrected vision decline in individuals over 65 in the United States is the retina disorder known as age-related macular degeneration (AMD). When AMD progresses, the disease is characterized by loss of central, acute vision. The area of the eye affected by AMD is the macula - a small area in the center of the retina, composed primarily of photoreceptor cells. The so-called "dry" AMD, represents approximately 85% -90% of patients with AMD, involves alterations in the distribution of pigments in the eyes, loss of photoreceptors and decreases the function of the retina due to the general atrophy of the cells . The so-called "wet" AMD involves the proliferation of abnormal choroidal vessels which leads to clots or scars in the sub-retinal space. Thus, the onset of wet AMD occurs due to the formation of an abnormal choroidal neovascular network (choroidal neovascularization, CNV) under the neural retina. The newly formed blood vessels are excessively weak. This leads to the accumulation of subretinal fluid and blood leading to the loss of visual acuity. Eventually, there is total loss of the functional retina in the region involved, since a large disciform scar is formed that involves the choroid and the retina. While patients with dry AMD can maintain a vision of diminishing quality, wet AMD often results in blindness. (Hamdi & Age-related Macular degeneration -a new viewpoint, Frontiers in Bioscience, e305-314, May 2003). CNV occurs not only in wet AMD but also in other pathologies

oculares tales como el síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, rupturas en la membrana de Bruch, degeneración miope, tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas de la retina. Ocular such as ocular histoplasmosis syndrome, angioid stretch marks, Bruch membrane ruptures, myopic degeneration, ocular tumors and some degenerative diseases of the retina.

Varios estudios conducidos han determinado los factores de riesgo severo para la AMD, tales como fumar, el envejecimiento, la historia familiar (Milton, Am J Ophthalmol 88, 269 (1979); Mitchell y otros, Ophthalmology 102, 14501460 (1995); Smith y otros, Ophthalmology 108, 697-704 (2001)) el sexo (7 veces de probabilidad más alta en mujeres: Klein y otros, Ophthalmology 99, 933-943 (1992) y la raza (los blancos son más susceptibles). Los factores de riesgo adicionales pueden incluir las características del ojo tales como hipermetropía (hyperopia) y ojos de color claro, así como la enfermedad cardiovascular y la hipertensión. También se ha documentado evidencia de la implicación genética en el inicio del progreso de la enfermedad (ver Hamdi & Kenney anteriormente). Several studies conducted have determined severe risk factors for AMD, such as smoking, aging, family history (Milton, Am J Ophthalmol 88, 269 (1979); Mitchell et al., Ophthalmology 102, 14501460 (1995); Smith and others, Ophthalmology 108, 697-704 (2001)) sex (7 times higher probability in women: Klein et al., Ophthalmology 99, 933-943 (1992) and race (whites are more susceptible). Additional risk factors may include the characteristics of the eye such as farsightedness (hyperopia) and light-colored eyes, as well as cardiovascular disease and hypertension, and evidence of genetic involvement at the onset of disease progression has also been documented (see Hamdi & Kenney previously).

Dos compañias, Acuity Pharmaceuticals y ARNip Therapeutics, presentaron recientemente un IND para moléculas de ARNip inhibidoras de VEGF y VEGF-R1 (Flt-1), respectivamente, para el tratamiento de la AMD. Esas moléculas se llaman inhibidor Cand5 e inhibidor 027 respectivamente. Two companies, Acuity Pharmaceuticals and ARNip Therapeutics, recently presented an IND for VEGF and VEGF-R1 inhibitor siRNA molecules (Flt-1), respectively, for the treatment of AMD. These molecules are called Cand5 inhibitor and 027 inhibitor respectively.

Trastornos microvasculares Microvascular disorders

Los trastornos microvasculares se componen de un amplio grupo de afecciones que afectan principalmente los capilares microscópicos y linfáticos y están, por lo tanto, fuera del alcance de la intervención quirúrgica directa. La enfermedad microvascular puede agruparse ampliamente en la vasoespástica, la vasculitis y oclusiva linfática. Además, muchas de las afecciones vasculares conocidas tienen un elemento microvascular en ellas. Microvascular disorders are made up of a broad group of conditions that primarily affect the microscopic and lymphatic capillaries and are, therefore, beyond the scope of direct surgical intervention. Microvascular disease can be broadly grouped into vasospastic, vasculitis and lymphatic occlusive. In addition, many of the known vascular conditions have a microvascular element in them.

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Enfermedad vasoespástica-Las enfermedades vasoespásticas son un grupo de afecciones relativamente comunes donde, por razones desconocidas, los reflejos vasoconstrictivos periféricos son hipersensibles.Esto resulta en una vasoconstricción inapropiada e isquemia del tejido, aún al punto de la pérdida del tejido. Los síntomas vasoespásticos se relacionan generalmente con la temperatura o el uso de maquinaria vibradora pero puede ser secundario a otras afecciones. Vasospastic disease - Vasospastic diseases are a group of relatively common conditions where, for unknown reasons, peripheral vasoconstrictive reflexes are hypersensitive. This results in inappropriate vasoconstriction and tissue ischemia, even to the point of tissue loss. Vasospastic symptoms are usually related to temperature or the use of vibrating machinery but may be secondary to other conditions.

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Enfermedad vasculítica -Las enfermedades vasculíticas son aquellas que involucran un primario proceso inflamatorio en la microcircución. La vasculitis es generalmente un componente de un trastorno autoinmune o del tejido conectivo y generalmente no es susceptible de tratamiento quirúrgico pero requiere tratamiento inmunosupresivo si los síntomas son severos. Vasculitic disease -Vasculitic diseases are those that involve a primary inflammatory process in microcircution. Vasculitis is usually a component of an autoimmune or connective tissue disorder and is generally not susceptible to surgical treatment but requires immunosuppressive treatment if the symptoms are severe.

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Enfermedad oclusiva linfática -El hinchamiento crónico de los miembros inferior o superior (linfoedema) es el resulado de la oclusión linfática periférica. Esto es una afección relativamente rara que tiene un gran número de causas, algunas heredadas, algunas adquiridas. El pilar principal del tratamiento son las prendas de compresión correctamente ajustadas y el uso de dispositivos de compresión intermitentes. Lymphatic occlusive disease - Chronic swelling of the lower or upper limbs (lymphoedema) is the result of peripheral lymphatic occlusion. This is a relatively rare condition that has a large number of causes, some inherited, some acquired. The main pillar of the treatment are properly adjusted compression garments and the use of intermittent compression devices.

Patologías microvasculares asociadas con la diabetes Microvascular pathologies associated with diabetes

La diabetes es la causa principal de la ceguera, la causa número uno de amputaciones e impotencia, y una de las enfermedades crónicas de la niñez que más frecuentemente ocurre. La diabetes es además la causa principal de la enfermedad renal en etapa final en los Estados Unidos, con una tasa de prevalencia de 31 % comparado con otras enfermedades renales. La diabetes es además la indicación más frecuente para trasplante de riñón, llegando al 22% de todas las operaciones de transplante. Diabetes is the leading cause of blindness, the number one cause of amputations and impotence, and one of the most frequent chronic childhood diseases. Diabetes is also the leading cause of end-stage renal disease in the United States, with a prevalence rate of 31% compared to other kidney diseases. Diabetes is also the most frequent indication for kidney transplantation, reaching 22% of all transplant operations.

En general, las complicaciones diabéticas pueden clasificarse ampliamente como enfermedad microvascular o macrovascular. Las complicaciones microvasculares incluyen neuropatía (daño de los nervios), nefropatía (enfermedad del riñón) y trastornos de la visión (por ejemplo, retinopatía, glaucoma, cataratas y trastornos de la córnea). En la retina, los glomérulos, y los vasos sanguíneos que nutren los nervios, rasgos patofisiológicos similares caracterizan la enfermedad microvascular específica de la diabetes. In general, diabetic complications can be broadly classified as microvascular or macrovascular disease. Microvascular complications include neuropathy (nerve damage), kidney disease (kidney disease) and vision disorders (eg, retinopathy, glaucoma, cataracts and corneal disorders). In the retina, glomeruli, and blood vessels that nourish the nerves, similar pathophysiological features characterize diabetes-specific microvascular disease.

Las patologías microvasculares asociadas con la diabetes se definen como una enfermedad de los vasos sanguíneos más pequeños (capilares) que puede ocurrir, por ejemplo, en personas que han tenido diabetes por mucho tiempo. Las paredes de los vasos se hacen anormalmente gruesas pero débiles. Ellas, por lo tanto, sangran, pierden proteína y reducen el flujo de sangre a través del cuerpo. The microvascular pathologies associated with diabetes are defined as a disease of the smallest blood vessels (capillaries) that can occur, for example, in people who have had diabetes for a long time. The walls of the vessels become abnormally thick but weak. They, therefore, bleed, lose protein and reduce blood flow through the body.

Los datos del modelo clínico y animal indican que la hiperglicemia crónica es el factor de iniciación central de todos los tipos de enfermedad microvascular diabética. La duración y magnitud de la hiperglicemia están fuertemente correlacionados con la extensión y velocidad de progreso de la enfermedad microvascular diabética. Aunque todas las células diabéticas se exponen a niveles elevados de glucosa en plasma, el daño hiperglicémico se limita a aquellos tipos de células (por ejemplo, células endoteliales) que desarrollan hiperglicemia intracelular. Las células endoteliales desarrollan hiperglicemia intracelular debido, a diferencia de otras muchas células, a que ellas no pueden regular descendentemente el transporte de glucosa cuando se exponen a hiperglicemia extracelular. Que la hiperglicemia intracelular es necesaria y suficiente para el desarrollo de la patología diabética se demuestra además por el hecho de que la sobrexpresión del transportador de glucosa GLUT1 en las células mesangiales cultivadas en un medio de glucosa normal imita el fenotipo diabético, induciendo a que aumente la expresión génica de fibronectina, colágeno tipo IV, y colágeno tipo I como la hiperglicemia diabética. The clinical and animal model data indicate that chronic hyperglycemia is the central initiation factor of all types of diabetic microvascular disease. The duration and magnitude of hyperglycemia are strongly correlated with the extent and speed of progress of diabetic microvascular disease. Although all diabetic cells are exposed to elevated plasma glucose levels, hyperglycemic damage is limited to those types of cells (for example, endothelial cells) that develop intracellular hyperglycemia. Endothelial cells develop intracellular hyperglycemia due, unlike many other cells, because they cannot downregulate glucose transport when exposed to extracellular hyperglycemia. That intracellular hyperglycemia is necessary and sufficient for the development of diabetic pathology is further demonstrated by the fact that the overexpression of the GLUT1 glucose transporter in mesangial cells grown in a normal glucose medium mimics the diabetic phenotype, inducing it to increase Gene expression of fibronectin, type IV collagen, and type I collagen such as diabetic hyperglycemia.

Función de la célula endotelial anormal: Temprano en el curso de la diabetes mellitus, antes que los cambios estructurales sean evidentes, la hiperglicemia causa anormalidades en el flujo sanguíneo y la permeabilidad vascular en la retina, glomérulo, y vasos sanguíneos del nervio periférico. Se piensa que el aumento del flujo sanguíneo y la presión intracapilar refleja la producción disminuida de óxido nítrico (NO) inducida por la hiperglicemia en lado eferente de los lechos capilares, y posiblemente una sensibilidad aumentada de la angiotensina II. Como consecuencia del aumento de la presión intracapilar y la disfunción de la célula endotelial, los capilares de la retina exhiben una fuga aumentada de fluoresceína y los capilares glomerulares tienen una tasa de excreción de albúmina (AER) elevada. Cambios comparables ocurren en los vasos sanguíneos del nervio periférico. Temprano en el curso de la diabetes, la permeabilidad incrementada es reversible; cuando el tiempo pasa, sin embargo, se hace irreversible. Abnormal endothelial cell function: Early in the course of diabetes mellitus, before structural changes are evident, hyperglycemia causes abnormalities in blood flow and vascular permeability in the retina, glomerulus, and blood vessels of the peripheral nerve. It is thought that increased blood flow and intracapillary pressure reflects decreased nitric oxide (NO) production induced by hyperglycemia on the efferent side of the capillary beds, and possibly an increased sensitivity of angiotensin II. As a result of increased intracapillary pressure and endothelial cell dysfunction, retinal capillaries exhibit increased fluorescein leakage and glomerular capillaries have a high albumin excretion rate (AER). Comparable changes occur in the blood vessels of the peripheral nerve. Early in the course of diabetes, the increased permeability is reversible; When time passes, however, it becomes irreversible.

Acumulación aumentada de proteínas en la pared del vaso Increased accumulation of proteins in the vessel wall

El rasgo patofisiológico común de la enfermedad microvascular diabética es el estrechamiento progresivo y la eventual oclusión de la luz vascular, lo que resulta en una perfusión y función inadecuada del tejido afectado. La hipertensión microvascular temprana inducida por hiperglicemia y el aumento de la permeabilidad vascular contribuyen a la oclusión irreversible de los microvasos por tres procesos: The common pathophysiological feature of diabetic microvascular disease is progressive narrowing and eventual occlusion of vascular lumen, resulting in perfusion and inadequate function of the affected tissue. Early microvascular hypertension induced by hyperglycemia and increased vascular permeability contribute to irreversible occlusion of the microvessels by three processes:

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El primero es una fuga anormal de acido periódico-Schiff (PAS)-positiva, proteínas plasmáticas que contienen carbohidrato, que se depositan en la pared capilar y que pueden estimular las células perivasculares tales como los pericitos y células mesangiales para elaborar los factores de crecimiento y la matriz extracelular. The first is an abnormal leakage of periodic acid-Schiff (PAS) -positive, carbohydrate-containing plasma proteins, which are deposited in the capillary wall and that can stimulate perivascular cells such as pericytes and mesangial cells to develop growth factors and the extracellular matrix.

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El segundo es la extravasacion de los factores de crecimiento, tales como factor de crecimiento transformante �1 (TGF-�1), que estimula directamente la sobreproducciThe second is the extravasation of growth factors, such as transforming growth factor �1 (TGF-�1), which directly stimulates overproduction.

ón de componentes de la matriz extracelular, y puede inducir apoptosis en ciertos tipos de células relevantes a complicaciones. ón of components of the extracellular matrix, and can induce apoptosis in certain types of cells relevant to complications.

• El tercero es la estimulacion inducida por la hipertension de la expresion genica patologica por celulas endoteliales y • The third is the hypertension-induced stimulation of pathological genetic expression by endothelial cells and

células de soporte, que incluyen transportadores de glucosa glut-1, factores de crecimiento, receptores del factor de crecimiento, componentes de la matriz extracelular, y moléculas de adhesión que pueden activar los leucocitos circulantes. La observación que la reducción unilateral en la gravedad de la enfermedad microvascular diabética ocurre en el lado con estenosis arterial oftálmica o renal es consistente con este concepto. support cells, which include glucose glut-1 transporters, growth factors, growth factor receptors, extracellular matrix components, and adhesion molecules that can activate circulating leukocytes. The observation that the unilateral reduction in the severity of diabetic microvascular disease occurs on the side with ophthalmic or renal arterial stenosis is consistent with this concept.

Pérdida de células microvasculares y oclusión del vaso Microvascular cell loss and vessel occlusion

El estrechamiento progresivo y la oclusión de la luz microvascular diabética se acompañan además de la pérdida de células microvasculares. En la retina, la diabetes mellitus induce la muerte celular programada de las células de Müller y las células ganglionares, pericitos, y células endoteliales. En el glomérulo, el declive de la función renal se asocia con la oclusión capilar generalizada y la pérdida de podocito, pero los mecanismos que subyacen a la pérdida de células glomerulares no se conocen todavía. En los vasos sanguíneos que nutren los nervios ocurre la degeneración del pericito y la célula endotelial, y estos cambios microvasculares parecen anteceder el desarrollo de la neuropatía periférica diabética. La distribución multifocal de la degeneración axonal en diabetes soporta una función causal para la oclusión microvascular, pero las disminuciones en las neurotrofinas inducidas por la hiperglicemia pueden contribuir preveniendo la reparación axonal normal y la regeneración. Progressive narrowing and occlusion of diabetic microvascular light are accompanied in addition to the loss of microvascular cells. In the retina, diabetes mellitus induces programmed cell death of Müller cells and ganglion cells, pericytes, and endothelial cells. In the glomerulus, the decline in renal function is associated with generalized capillary occlusion and loss of podocyte, but the mechanisms underlying the loss of glomerular cells are not yet known. In the blood vessels that nourish the nerves, degeneration of the pericyte and the endothelial cell occurs, and these microvascular changes appear to precede the development of diabetic peripheral neuropathy. The multifocal distribution of axonal degeneration in diabetes supports a causal function for microvascular occlusion, but decreases in neurotrophins induced by hyperglycemia can contribute to preventing normal axonal repair and regeneration.

Otra característica común de la enfermedad microvascular diabética se conoce como memoria hiperglicémica, o la persistencia o progresión de alteraciones microvasculares inducidas por la hiperglicemia durante períodos posteriores de la homeostasis glucosal normal. El ejemplo más notable de este fenómeno es el desarrollo de retinopatía severa en ojos histológicamente normales de perros diabéticos que ocurrió completamente durante un período de 2,5 años de glucosa sanguínea normalizada que siguió 2,5 años de hiperglicemia. El aumento inducido por la hiperglicemia en la transcripción del gen de la matriz seleccionado persiste además por semanas después del restablecimiento de la normoglicemia in vivo, y una prolongación menos pronunciada, pero cualitativamente similar, de aumento inducido por hiperglicemia en la transcripción del gen de la matriz seleccionado ocurre en células endoteliales cultivadas. Another common feature of diabetic microvascular disease is known as hyperglycemic memory, or the persistence or progression of microvascular disorders induced by hyperglycemia during subsequent periods of normal glucosal homeostasis. The most notable example of this phenomenon is the development of severe retinopathy in histologically normal eyes of diabetic dogs that occurred completely during a period of 2.5 years of normalized blood glucose that followed 2.5 years of hyperglycemia. The hyperglycemia-induced increase in transcription of the selected matrix gene persists further for weeks after the restoration of normoglycemia in vivo, and a less pronounced but qualitatively similar prolongation of hyperglycemia-induced increase in the transcription of the gene of the Selected matrix occurs in cultured endothelial cells.

Para más información, ver "Shared pathophysiologic features of microvascular complications of diabetes" (Larsen: Williams Textbook of Endocrinology, 10ma ed., Copyright © 2003 Elsevier). For more information, see "Shared pathophysiologic features of microvascular complications of diabetes" (Larsen: Williams Textbook of Endocrinology, 10th ed., Copyright © 2003 Elsevier).

Las complicaciones microvasculares ocurren no solamente en diabetes declarada sino también debido a la tolerancia deficiente a la glucosa (IGT). Las complicaciones microvasculares de IGT: neuropatía, retinopatía, y microproteinuria renal. Microvascular complications occur not only in declared diabetes but also due to poor glucose tolerance (IGT). Microvascular complications of IGT: neuropathy, retinopathy, and renal microproteinuria.

Neuropatía diabética Diabetic neuropathy

Las neuropatías diabéticas son trastornos neuropáticos (daño de los nervios periféricos) que se asocian con la diabetes mellitus. Estas condiciones usualmente resultan de lesión microvascular diabética que involucra vasos sanguíneos pequeños que suministran a los nervios (vasa nervorum). Las afecciones relativamente comunes que pueden asociarse con la neuropatía diabética incluyen parálisis del tercer nervio; mononeuropatía; mononeuropatía múltiple; amiotrofia diabética; una polineuropatía dolorosa; neuropatía autonómica; y neuropatía toracoabdominal y la forma más común, la neuropatía periférica, que afecta principalmente los pies y piernas. Existen cuatro factores involucrados en el desarrollo de la neuropatía diabética: la enfermedad microvascular, los productos finales de la glucosilación avanzada, la proteína quinasa C, y la ruta del poliol. Diabetic neuropathies are neuropathic disorders (damage of peripheral nerves) that are associated with diabetes mellitus. These conditions usually result from diabetic microvascular injury that involves small blood vessels that supply the nerves (vasa nervorum). Relatively common conditions that may be associated with diabetic neuropathy include third nerve paralysis; mononeuropathy; multiple mononeuropathy; diabetic amyotrophy; a painful polyneuropathy; autonomic neuropathy; and thoracoabdominal neuropathy and the most common form, peripheral neuropathy, which mainly affects the feet and legs. There are four factors involved in the development of diabetic neuropathy: microvascular disease, the end products of advanced glycosylation, protein kinase C, and the polyol pathway.

Enfermedad microvascular en la neuropatía diabética Microvascular disease in diabetic neuropathy

Las enfermedades vasculares y neurales se relacionan estrechamente y se entrelazan. Los vasos sanguíneos dependen de la función normal de los nervios, y los nervios dependen del flujo sanguíneo adecuado. El primer cambio patológico en la microvasculatura es la vasoconstricción. Cuando la enfermedad progresa, la disfunción neuronal se correlaciona estrechamente con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como engrosamiento de la membrana del basamento capilar e hiperplasia endotelial, que contribuye a hipoxia y tensión de oxígeno disminuida. La isquemia neuronal es una característica de la neuropatía diabética bien establecida. Los agentes vasodilatoadores (por ejemplo, inhibidores de la enzima de conversión de la angiotensina, antagonistas alfa 1) pueden conducir a mejoras sustanciales en el flujo sanguíneo neuronal, con mejoras correspondientes en las velocidades de conducción nerviosa. Así, la disfunción microvascular ocurre temprano en la diabetes, paralela al progreso de la disfunción neural, y puede ser suficiente para soportar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales, y clínicos observados en la neuropatía diabética. La neuropatía periférica (piernas), la neuropatía sensorimotora es un componente significativo en la patogénesis de la úlcera de las piernas en la diabetes. Vascular and neural diseases are closely related and intertwined. Blood vessels depend on the normal function of the nerves, and the nerves depend on proper blood flow. The first pathological change in the microvasculature is vasoconstriction. When the disease progresses, neuronal dysfunction correlates closely with the development of vascular abnormalities, such as thickening of the capillary basement membrane and endothelial hyperplasia, which contributes to hypoxia and decreased oxygen tension. Neural ischemia is a characteristic of well-established diabetic neuropathy. Vasodilator agents (for example, angiotensin-converting enzyme inhibitors, alpha 1 antagonists) can lead to substantial improvements in neuronal blood flow, with corresponding improvements in nerve conduction velocities. Thus, microvascular dysfunction occurs early in diabetes, parallel to the progress of neural dysfunction, and may be sufficient to support the severity of the structural, functional, and clinical changes observed in diabetic neuropathy. Peripheral neuropathy (legs), sensorimotor neuropathy is a significant component in the pathogenesis of leg ulcer in diabetes.

La neuropatía es una complicación común de la diabetes que ocurre en el tiempo en más de la mitad de los pacientes con diabetes tipo 2. Los estudios de conducción nerviosa demuestran que la neuropatía está presente ya en 10-18% de los pacientes al momento del diagnóstico de la diabetes, lo que sugiere que lesión del nervio periférico ocurre en estadios tempranos de la enfermedad y con desregulación glicémica más leve. El concepto de que la neuropatía es un signo clínico temprano de la diabetes fue propuesto hace > 40 años, y estudios más recientes reportan una asociación entre IGT y la neuropatía. La mayoría de los pacientes con IGT y neuropatía asociada tienen una polineuropatía sensorial distal simétrica con dolor neuropático prominente. La neuropatía IGT (Microvascular complications of impaired glucose tolerance -Perspectives in Diabetes, J. Robinson Singleton, en Diabetes Diciembre 1, 2003) es fenotípicamente similar a la neuropatía diabética temprana, que causa además síntomas sensoriales, que incluyen dolor, y disfunción autonómica. En un reconocimiento de 669 pacientes con neuropatía diabética temprana, los síntomas sensoriales se presentan en > 60%, impotencia en casi 40%, y otras implicaciones autonómicas en 33%, pero la evidencia de implicación motora en solamente 12%. Estos hallazgos clínicos sugieren la implicación temprana prominente de las fibras nerviosas amielínicas pequeñas que portan el dolor, la temperatura, y las señales autonómicas. La cuantificación directa de las fibras nerviosas intraepidérmicas amielínicas de las biopsias de piel muestra pérdida de fibra y morfología alterada similar en pacientes con neuropatía asociada a IGT y diabetes temprana . Neuropathy is a common complication of diabetes that occurs over time in more than half of patients with type 2 diabetes. Nerve conduction studies show that neuropathy is already present in 10-18% of patients at the time of diagnosis of diabetes, which suggests that peripheral nerve injury occurs in the early stages of the disease and with milder glycemic dysregulation. The concept that neuropathy is an early clinical sign of diabetes was proposed> 40 years ago, and more recent studies report an association between IGT and neuropathy. Most patients with IGT and associated neuropathy have symmetric distal sensory polyneuropathy with prominent neuropathic pain. IGT neuropathy (Microvascular complications of impaired glucose tolerance - Perspectives in Diabetes, J. Robinson Singleton, in Diabetes December 1, 2003) is phenotypically similar to early diabetic neuropathy, which also causes sensory symptoms, including pain, and autonomic dysfunction. In a survey of 669 patients with early diabetic neuropathy, sensory symptoms occur in> 60%, impotence in almost 40%, and other autonomic implications in 33%, but evidence of motor involvement in only 12%. These clinical findings suggest the prominent early involvement of the small unmyelinated nerve fibers that carry pain, temperature, and autonomic signals. Direct quantification of unmyelinated intraepidermal nerve fibers from skin biopsies shows fiber loss and similar altered morphology in patients with IGT-associated neuropathy and early diabetes.

La disfunción autonómica, particularmente la disfunción eréctil y la respuesta vagal cardíaca alterada, son rasgos comunes tempranos de la lesión neuropática en la diabetes. El trabajo con los pacientes IGT sugiere además la disautonomia vagal prevalente: estudios separados han encontrado una recuperación del ritmo cardiaco anormal después del ejercicio, variabilidad del intervalo R-R romo para una respiración profunda, y expiración reducida para una relación de inspiración (todas las mediciones de la disautonomía vagal) en una fracción mayor de pacientes IGT que los sujetos control normoglicémicos que coinciden en edad. Autonomic dysfunction, particularly erectile dysfunction and altered cardiac vagal response, are early common features of neuropathic injury in diabetes. Working with IGT patients also suggests prevalent vagal dysautonomia: separate studies have found a recovery of abnormal heart rhythm after exercise, variability of the blunt RR interval for deep breathing, and reduced expiration for an inspiration ratio (all measurements of vagal dysautonomy) in a larger fraction of IGT patients than normoglycemic control subjects that coincide in age.

El daño de los nervios en diabetes afecta las fibras motoras, sensoriales, y autonómicas. La neuropatía motora causa debilidad muscular, atrofia, y paresis. La neuropatía sensorial conduce a la pérdida de las sensaciones protectoras del dolor, presión, y calor. La ausencia de dolor conduce a muchos problemas en el pie insensible, que incluyen ulceración, trauma desapercibido, y neuroartropatía de Charcot. El paciente puede no buscar tratamiento hasta después que la herida ha avanzado. Una combinación de la disfunción sensorial y motora puede causar que el paciente coloque tensiones anormales en el pie, resultando en trauma, que puede llevar a la infección. La neuropatía simpática autonómica causa vasodilatación y sudoración disminuida, que resulta en pies demasiado secos, calientes que son particularmente propensos a roturas de la piel, así como alteraciones funcionales en el flujo microvascular. La disfunción autonómica (y denervación de las estructuras dérmicas) resulta además en la pérdida de la integridad de la piel, lo que proporciona un sitio ideal para la invasión de microbios. El pie neuropático no se ulcera espontáneamente; sino que es la combinación de alguna forma de trauma acompañado de neuropatía. Nerve damage in diabetes affects motor, sensory, and autonomic fibers. Motor neuropathy causes muscle weakness, atrophy, and paresis. Sensory neuropathy leads to the loss of protective sensations of pain, pressure, and heat. The absence of pain leads to many problems in the callous foot, which include ulceration, unnoticed trauma, and Charcot's neuroarthropathy. The patient may not seek treatment until after the wound has advanced. A combination of sensory and motor dysfunction can cause the patient to place abnormal tensions on the foot, resulting in trauma, which can lead to infection. Autonomic sympathetic neuropathy causes vasodilation and decreased sweating, resulting in too dry, hot feet that are particularly prone to skin breakage, as well as functional alterations in microvascular flow. Autonomic dysfunction (and denervation of dermal structures) also results in the loss of skin integrity, which provides an ideal site for invasion of microbes. The neuropathic foot does not ulcerate spontaneously; It is the combination of some form of trauma accompanied by neuropathy.

La disfunción microvascular ocurre temprano en la diabetes, paralelo al progreso de la disfunción neural, y puede ser suficiente para soportar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales y clínicos observados en la neuropatía diabética. Microvascular dysfunction occurs early in diabetes, parallel to the progress of neural dysfunction, and may be sufficient to support the severity of the structural, functional and clinical changes observed in diabetic neuropathy.

Los productos finales de la glucosilación avanzada -Niveles intracelulares elevados de glucosa causan un enlace covalente no enzimático con las proteínas, lo que altera su estructura y destruye su función. Algunas de estas proteínas glicosiladas están implicadas en la patología de la neuropatía diabética y otras complicaciones a largo plazo de la diabetes. The final products of advanced glycosylation - elevated intracellular glucose levels cause a non-enzymatic covalent bond with proteins, which alters their structure and destroys their function. Some of these glycosylated proteins are involved in the pathology of diabetic neuropathy and other long-term complications of diabetes.

La proteína quinasa C (PKC) - PKC está implicada en la patología de la neuropatía diabética. Los niveles aumentados de glucosa causan un incremento en el diacilglicerol intracelular, que activa la PKC. Los inhibidores de PKC en modelos animales aumentará la velocidad de conducción nerviosa mediante el aumento del flujo sanguíneo neuronal. Protein kinase C (PKC) - PKC is involved in the pathology of diabetic neuropathy. Increased glucose levels cause an increase in intracellular diacylglycerol, which activates PKC. PKC inhibitors in animal models will increase nerve conduction velocity by increasing neuronal blood flow.

Polineuropatía sensorimotora Sensorimotor polyneuropathy

Las fibras nerviosas más largas se afectan en un mayor grado que las más cortas, debido a que la velocidad de conducción nerviosa es más lenta en proporción a la longitud del nervio. En este síndrome, la sensación disminuida y la pérdida de reflejos ocurre primero en los dedos bilateralmente, y después se extiende ascendentemente. Se describe generalmente como una distribución guante-calcetín de adormecimiento, pérdida sensorial, disestesia y dolor nocturno. El dolor puede sentirse como una quemadura, sensación de pinchazo, doloroso o punzante. La sensación de alfileres y agujas es común. La pérdida de la propiocepción, o sea, el sentido de donde está un miembro en el espacio, se afecta tempranamente. Estos pacientes no pueden sentir cuando pisan un cuerpo extraño, como una astilla, o cuando están desarrollando un callo por un zapato que no le queda bien. En consecuencia, están en riesgo de desarrollar úlceras e infecciones en los pies y piernas, que puede llevar a la amputación. De manera similar, estos pacientes pueden tener múltiples fracturas de la rodilla, tobillo o pies, y desarrollan una articulación de Charcot. La pérdida de la función motora resulta en contracturas de la dorsiflexión de los dedos, llamada dedos en martillo. Estas contracturas no solamente ocurren en los pies sino también en las manos. Longer nerve fibers are affected to a greater degree than shorter ones, because the nerve conduction velocity is slower in proportion to the length of the nerve. In this syndrome, diminished sensation and loss of reflexes occurs first in the fingers bilaterally, and then extends ascendingly. It is generally described as a glove-sock distribution of numbness, sensory loss, dysesthesia and night pain. The pain may feel like a burn, prick, painful or stabbing sensation. The feeling of pins and needles is common. The loss of proprioception, that is, the sense of where a member is in space, is affected early. These patients cannot feel when they step on a foreign body, such as a splinter, or when they are developing a callus on a shoe that does not fit. Consequently, they are at risk of developing ulcers and infections in the feet and legs, which can lead to amputation. Similarly, these patients may have multiple fractures of the knee, ankle or feet, and develop a Charcot joint. Loss of motor function results in contractures of finger dorsiflexion, called hammer fingers. These contractures not only occur in the feet but also in the hands.

Neuropatía autonómica Autonomic neuropathy

El sistema nervioso autonómico se compone de nervios que sirven al corazón, tracto GI y sistema urinario. La neuropatía autonómica puede afectar cualquiera de estos sistemas de órganos. La disfución autonómica más comúnmente reconocida en los diabéticos es la hipotensión ortoestática, o la incómoda sensación de desvanecimiento cuando un paciente se levanta. En el caso de neuropatía autonómica diabética, se debe al fallo del corazón y las arterias para ajustar apropiadamente los latidos del corazón y el tono vascular para mantener la sangre fluyendo continua y completamente al cerebro. Este síntoma se acompaña generalmente por una pérdida de la variación del seno respiratorio, o sea, el cambio usual de los latidos del corazón observada con la respiración normal. Cuando estos dos descubrimientos están presentes, la neuropatía autonómica cardiaca está presente. The autonomic nervous system is made up of nerves that serve the heart, GI tract and urinary system. Autonomic neuropathy can affect any of these organ systems. The most commonly recognized autonomic dysfunction in diabetics is orthostatic hypotension, or the uncomfortable feeling of fainting when a patient gets up. In the case of diabetic autonomic neuropathy, it is due to the failure of the heart and arteries to properly adjust the heartbeat and vascular tone to keep the blood flowing continuously and completely to the brain. This symptom is usually accompanied by a loss of the variation of the respiratory sinus, that is, the usual change of heartbeats observed with normal breathing. When these two discoveries are present, cardiac autonomic neuropathy is present.

Las manifestaciones del tracto GI incluyen vaciamiento gástrico retardado, gastroparesis, náusea, sangramiento, y diarrea. Ya que muchos diabéticos toman medicación oral para su diabetes, la absorción de estas medicinas se afecta mucho por el vaciamiento gástrico retardado. Esto puede llevar a la hipoglicemia cuando un agente diabético oral se toma antes de una comida y no se absorbe hasta horas, o algunos días después, cuando existe ya azúcar en sangre normal o baja. El movimiento lento del intestino delgado puede causar un crecimiento bacteriano excesivo, que se empeora por la presencia de la hiperglicemia. Esto lleva al sangramiento, gas y diarrea. GI tract manifestations include delayed gastric emptying, gastroparesis, nausea, bleeding, and diarrhea. Since many diabetics take oral medication for their diabetes, the absorption of these medicines is greatly affected by delayed gastric emptying. This can lead to hypoglycemia when an oral diabetic agent is taken before a meal and is not absorbed until hours, or a few days later, when there is already normal or low blood sugar. The slow movement of the small intestine can cause excessive bacterial growth, which is worsened by the presence of hyperglycemia. This leads to bleeding, gas and diarrhea.

Los síntomas urinarios incluyen frecuencia urinaria, urgencia, incontinencia y retención. Otra vez, debido a la retención de la orina dulce, las infecciones del tracto urinario son frecuentes. La retención urinaria puede llevar a divertículo en la vejiga, piedras, nefropatía por reflujo. Urinary symptoms include urinary frequency, urgency, incontinence and retention. Again, due to the retention of sweet urine, urinary tract infections are frequent. Urinary retention can lead to diverticulum in the bladder, stones, reflux nephropathy.

Neuropatía craneal Cranial neuropathy

Cuando los nervios del cráneo se afectan, son más comunes las neuropatías del 3er nervio oculomotor. El nervio oculomotor controla todos los músculos que mueven los ojos con excepción de los músculos oblicuo superior y recto lateral. Además sirve para encoger la pupila y abrir el párpado. La aparición de una parálisis diabética del tercer nervio es usualmente abrupta, comenzando con dolor frontal o periorbital y después diplopia. Todos los músculos oculomotor que se inervan por el tercer nervio pueden afectarse, excepto por aquellos que controlan el tamaño de la pupila. El sexto nervio, el nervio abducens, que inerva el músculo recto lateral de los ojos (mueve el ojo lateralmente), se afectá además comúnmente pero la implicación del cuarto nervio, el nervio troclear, (inerva el músculo oblicuo superior, que mueve el ojo hacia abajo) es unusual. Las mononeuropatías de los nervios torácico o los nervios espinales lumbares puede ocurrir y conduce a síndromes dolorosos que simulan el infarto del miocardio, colecistitis o apendicitis. Los diabéticos tienen una incidencia mayor de neuropatías por compresión, tales como síndrome del túnel carpiano. When the nerves of the skull are affected, neuropathies of the 3rd oculomotor nerve are more common. The oculomotor nerve controls all the muscles that move the eyes with the exception of the superior oblique and lateral rectus muscles. It also serves to shrink the pupil and open the eyelid. The appearance of a diabetic paralysis of the third nerve is usually abrupt, beginning with frontal or periorbital pain and then diplopia. All oculomotor muscles that are innervated by the third nerve can be affected, except for those that control the size of the pupil. The sixth nerve, the abducens nerve, which innervates the lateral rectus muscle of the eyes (moves the eye laterally), is also commonly affected but the involvement of the fourth nerve, the trochlear nerve, (innervates the superior oblique muscle, which moves the eye down) is unusual. Mononeuropathies of the thoracic nerves or lumbar spinal nerves can occur and lead to painful syndromes that simulate myocardial infarction, cholecystitis or appendicitis. Diabetics have a higher incidence of compression neuropathies, such as carpal tunnel syndrome.

Isquemia del miembro diabético y úlceras del pie diabético Diabetic limb ischemia and diabetic foot ulcers

La diabetes y la presión pueden afectar la circulación microvascular y conducir a cambios en la piel en las extremidades inferiores, lo que a su vez, puede conducir a la formación de úlceras e infección posterior. Los cambios microvasculares conducen a microangiopatía muscular de los miembros, así como a predisposición para desarrollar isquemia periférica y una respuesta compensatoria a la angiogénesis reducida a eventos isquémicos. La patología microvascular exacerba la enfermedad vascular periférica (PVD) (o enfermedad arterial periférica (PAD) o enfermedad arterial de las extremidades inferiores (LEAD)-una complicación MACROvascular -estrechando las arterias en las piernas debido a la aterosclerosis. La PVD ocurre temprano en los diabéticos, es más severa y diseminada, y frecuentemente involucra problemas microcirculatorios intercurrentes que afectan las piernas, ojos, y riñones. Diabetes and pressure can affect microvascular circulation and lead to changes in the skin in the lower extremities, which in turn can lead to ulcer formation and subsequent infection. Microvascular changes lead to limb muscle microangiopathy, as well as a predisposition to develop peripheral ischemia and a compensatory response to reduced angiogenesis to ischemic events. Microvascular pathology exacerbates peripheral vascular disease (PVD) (or peripheral arterial disease (PAD) or lower limb arterial disease (LEAD) - a MACROvascular complication - narrowing the arteries in the legs due to atherosclerosis. PVD occurs early in diabetics, is more severe and disseminated, and frequently involves intercurrent microcirculatory problems that affect the legs, eyes, and kidneys.

Las úlceras del pie y gangrena son afecciones comorbidas frecuentes de la PAD. La neuropatía periférica concurrente con sensación disminuida hace el pie susceptible a traumas, ulceración, e infección. El progreso de la PAD en la diabetes se compone de tal comorbilidad como neuropatía periférica e insensibilidad del pie y las extremidades inferiores al dolor y trauma. Con la circulación disminuida y la sensación disminuida, ocurre la ulceración y la infección El progreso a la osteomielitis y la gangrena puede necesitar amputación. Foot ulcers and gangrene are frequent comorbid conditions of PAD. Concurrent peripheral neuropathy with diminished sensation makes the foot susceptible to trauma, ulceration, and infection. The progress of PAD in diabetes is composed of such comorbidity as peripheral neuropathy and insensitivity of the foot and lower limbs to pain and trauma. With decreased circulation and decreased sensation, ulceration and infection occur Progress to osteomyelitis and gangrene may need amputation.

Las personas con diabetes tienen hasta 25 veces más probabilidad que las personas no diabéticas de sufrir una amputación de los miembros inferiores, enfatizando la necesidad de prevenir las úlceras del pie y la pérdida posterior del miembro. People with diabetes are up to 25 times more likely than non-diabetic people to suffer an amputation of the lower limbs, emphasizing the need to prevent foot ulcers and subsequent limb loss.

Las úlceras del pie diabético pueden ocurrir no solamente en conjunto con la PAD sino que pueden asociarse además con la neuropatía, insuficiencia venosa (venas varicosas), trauma, e infección. La PAD contribuye a esas otras afecciones produciendo o precipitando úlceras del pie. Las úlceras del pie no necesariamente representan el progreso de la PAD, ya que ellas pueden ocurrir en presencia de una perfusión arterial periférica clínica adecuada. Los estudios basados en el paciente indican un riesgo aumentado de ulceración del pie en pacientes diabéticos que tienen neuropatía periférica y una alta presión del pie plantar. La prevalencia de una historia de úlceras o llagas en el pie o los tobillos fue 15% de todos los pacientes diabéticos en el estudio basado en la población en Wisconsin del sur. La prevalencia fue superior para los individuos diabéticos diagnosticados a la edad de <30 años, fue ligeramente mayor en hombres (16%) que en mujeres (13%), y fue mayor en pacientes diabéticos tratados con insulina (17%) que en pacientes que no se administran insulina (10%). La prevalencia aumentó con la edad, especialmente en pacientes diabéticos diagnosticados a la edad de <30 años. En los estudios de paciente de Europa, la prevalencia df úlceras del pie en pacientes diabéticos fue 3% en aquellos de <50 años de edad, 7% en aquellos de <60 años, y 14% en aquellos de <80 años. La prevalencia fue mayor en hombres que en mujeres a la edad de 70 años. Diabetic foot ulcers can occur not only in conjunction with PAD but can also be associated with neuropathy, venous insufficiency (varicose veins), trauma, and infection. PAD contributes to these other conditions by producing or precipitating foot ulcers. Foot ulcers do not necessarily represent the progress of PAD, since they can occur in the presence of adequate clinical peripheral arterial perfusion. Patient-based studies indicate an increased risk of foot ulceration in diabetic patients who have peripheral neuropathy and high plantar foot pressure. The prevalence of a history of ulcers or sores on the foot or ankles was 15% of all diabetic patients in the population-based study in southern Wisconsin. The prevalence was higher for diabetic individuals diagnosed at the age of <30 years, was slightly higher in men (16%) than in women (13%), and was higher in diabetic patients treated with insulin (17%) than in patients that insulin is not administered (10%). The prevalence increased with age, especially in diabetic patients diagnosed at the age of <30 years. In patient studies in Europe, the prevalence of foot ulcers in diabetic patients was 3% in those <50 years of age, 7% in those <60 years, and 14% in those <80 years. The prevalence was higher in men than in women at the age of 70.

En pacientes diabéticos, la isquemia del pie y la infección son acontecimientos serios e incluso amenazantes para la vida; sin embrago, la neuropatía es la afección más difícil de tratar. La literatura médica y quirúrgica concerniente a todos los aspectos de las manifestaciones clínicas y patológicas del pie diabético es abrumadora. La neuropatía, angiopatía, retinopatía, y nefropatía, sola o en conjunto y en grados variables de severidad, pueden influenciar el tratamiento del pie diabético. In diabetic patients, foot ischemia and infection are serious and even life-threatening events; However, neuropathy is the most difficult condition to treat. The medical and surgical literature concerning all aspects of the clinical and pathological manifestations of the diabetic foot is overwhelming. Neuropathy, angiopathy, retinopathy, and nephropathy, alone or together and in varying degrees of severity, can influence the treatment of diabetic foot.

Cada año, 82,000 amputaciones de miembros se realizan en pacientes con diabetes mellitus. La mayoría de esas amputaciones se realizan en la población anciana. Las amputaciones resultantes de la diabetes pueden surgir a partir de múltiples etiologías, que incluyen úlceras del pie, isquemia, úlceras de piernas venosas (es decir, aquellas secundarias al reflujo venoso), y úlceras del talón (es decir, las que resultan de úlceras por presión no tratadas en el talón). La mayoría de estas amputaciones se originan de las úlceras. La prevalencia de úlceras del pie entre los pacientes con diabetes es 12%. Adicionalmente, la incidencia acumulativa de 20 años de úlceras de las extremidades inferiores en pacientes con diabetes tipo 1 es 9,9%. La amputación de los miembros inducida por la diabetes resulta en una tasa de mortalidad en 5 años de 39% a 68% y se asocian con un riesgo aumentado de amputaciones adicionales. La duración de la estancia hospitalaria es aproximadamente 60% mayor entre los pacientes con úlceras del pie diabético, comparado con aquellos sin úlceras. Each year, 82,000 limb amputations are performed in patients with diabetes mellitus. Most of these amputations are performed in the elderly population. Amputations resulting from diabetes can arise from multiple etiologies, including foot ulcers, ischemia, venous leg ulcers (i.e., those secondary to venous reflux), and heel ulcers (i.e., those resulting from ulcers by untreated pressure on the heel). Most of these amputations originate from ulcers. The prevalence of foot ulcers among patients with diabetes is 12%. Additionally, the 20-year cumulative incidence of lower limb ulcers in patients with type 1 diabetes is 9.9%. Diabetes-induced limb amputation results in a 5-year mortality rate of 39% to 68% and is associated with an increased risk of additional amputations. The length of hospital stay is approximately 60% longer among patients with diabetic foot ulcers, compared to those without ulcers.

La neuropatía diabética afecta el reflejo del nervio axón que depende de la función saludable del nociceptor de fibra C y causa vasodilatación local en respuesta a los estímulos dolorosos. Esta afección compromete además la respuesta presente en condiciones de tensión, tales como lesión o inflamación, en el pie neuropático diabético. Esta deficiencia puede explicar parcialmente por qué algunas úlceras en el pie neuropático diabético son lentas para cicatrizarse o no se curan para nada, a pesar de una revascularización exitosa de la extremidad inferior. Diabetic neuropathy affects the axon nerve reflex that depends on the healthy function of the fiber C nociceptor and causes local vasodilation in response to painful stimuli. This condition also compromises the response present in conditions of tension, such as injury or inflammation, in the diabetic neuropathic foot. This deficiency may partially explain why some diabetic neuropathic foot ulcers are slow to heal or do not heal at all, despite a successful revascularization of the lower limb.

La ruta causal más común para la ulceración del pie diabético puede identificarse así como la combinación de neuropatía (pérdida sensorial), deformidad (por ejemplo, prominente cabezas metatarsales), y trauma (por ejemplo, calzado mal ajustado). The most common causal route for diabetic foot ulceration can be identified as well as the combination of neuropathy (sensory loss), deformity (for example, prominent metatarsal heads), and trauma (for example, poorly fitted footwear).

La mayoría de los cirujanos prefiere realizar la derivación de la arteria poplítea o tibial debido a tasas inferiores de rescate y permeabilidad los miembros comparado con más procedimientos proximales. Si la derivación de la arteria poplítea o tibial es incapaz de restaurar un pulso palpable en el pie, se reportó que la derivación podal proporciona un procedimiento de rescate de los miembros más efectivo y duradero para pacientes con heridas del pie isquémico y diabetes] . Incluso, la enfermedad oclusiva multisegmento extensiva en pacientes con diabetes no presenta un impedimento para el rescate del pie. Aunque las complicaciones de una herida seria pueden tener resultados desastrosos, estas no son comunes después del injerto de derivación podal. El control adecuado de una infección del pie preexistente y la canalización con injerto cuidadoso han demostrado ser efectivas para evitar complicaciones adicionales. La angioplastia en la extremidad inferior progresivamente se utiliza más. Sin embargo, se debe enfatizar que para que la angioplastia sea efectiva, debe hacerse patente un vaso distal o vaso de alimentación si se realiza la angioplastia más proximal. The majority of surgeons prefer to perform the bypass of the popliteal or tibial artery due to lower rescue rates and permeability of the limbs compared to more proximal procedures. If the bypass of the popliteal or tibial artery is unable to restore a palpable pulse in the foot, it is reported that the foot bypass provides a more effective and lasting limb rescue procedure for patients with ischemic foot injuries and diabetes]. Even, extensive multi-segment occlusive disease in patients with diabetes does not present an impediment to foot rescue. Although the complications of a serious injury can have disastrous results, these are not common after graft bypass grafting. Proper control of a pre-existing foot infection and careful graft canalization have proven effective in preventing further complications. Angioplasty in the lower limb is progressively used more. However, it should be emphasized that in order for angioplasty to be effective, a distal vessel or feeding vessel must be apparent if more proximal angioplasty is performed.

Aunque las úlceras diabéticas / patologías de los miembros puede manejarse en algunos pacientes (por desbridamiento, tratamiento antibiótico, uso de preparaciones para estimular el tejido de granulación (nuevo colágeno y angiogénesis) y reducción de la carga bacteriana en la herida), sería beneficioso tener una composición farmacéutica que pudiera tratar mejor estas afecciones y/o aliviar los síntomas. Although diabetic ulcers / pathologies of the limbs can be managed in some patients (by debridement, antibiotic treatment, use of preparations to stimulate granulation tissue (new collagen and angiogenesis) and reduction of bacterial load in the wound), it would be beneficial to have a pharmaceutical composition that could better treat these conditions and / or relieve symptoms.

Para más información, ver American Journal of Surgery, volumen 187 • Número 5 Suppl 1 • mayo 1, 2004, Copyright© 2004 Elsevier. For more information, see American Journal of Surgery, volume 187 • Issue 5 Suppl 1 • May 1, 2004, Copyright © 2004 Elsevier.

Disfunción microvascular coronaria en la diabetes Coronary microvascular dysfunction in diabetes

La correlación entre la histopatología y disfunción de la microcirculación en la diabetes es bien conocida a partir de antiguos estudios experimentales y de la autopsia, donde el engrosamiento de la membrana basal, la fibrosis perivascular, el enrarecimiento vascular, y la hemorragia capilar se encuentran frecuentemente. Es difícil confirmar estos datos in vivo, aunque un estudio reciente demostró una correlación entre la patología y la disfunción microvascular ocular ( (Am J Physiol 2003;285). Una gran cantidad de estudios clínicos, sin embargo, indican que no sólo la diabetes manifiesta sino también el deterioro del control metabólico pueden afectar la microcirculación coronaria (Hypert Res 2002;25:893). Werner aludió al importante estudio de Sambuceti y otros, (Circulation 2001; 104:1129) que muestra la persistencia de la disfunción microvascular en los pacientes después de una exitosa reapertura de la arteria relacionada con el infarto, y que puede explicar el aumento de la morbilidad y la mortalidad cardiovascular en estos pacientes. Existe evidencia creciente a partir de grandes estudios de reperfusión aguda de que la morbilidad y la mortalidad no están relacionadas con la reapertura de la arteria relacionada con el infarto, sino que dependen mucho más del flujo TIMI flow +/-enrojecimiento miocardial (Stone 2002; Feldmann, Circulación 2003). Herrmann indicó, entre otros, que la integridad de la microcirculación coronaria es probablemente el factor clínico y pronóstico más importante en este contexto (Circulation 2001). El efecto neutro de los dispositivos de protección (ningún cambio relevante para el flujo TIMI, para la resolución de ST, o para MACE) puede indicar que un deterioro funcional de la microcirculación es el determinante principal del pronóstico. También existe evidencia creciente de que la disfunción microvascular coronaria desempeña un papel importante en la CAD no obstructiva. La disfunción endotelial coronaria es un factor de predicción de pronóstico fuerte en estos pacientes. The correlation between histopathology and microcirculation dysfunction in diabetes is well known from old experimental and autopsy studies, where thickening of the basement membrane, perivascular fibrosis, vascular thinning, and capillary hemorrhage are frequently found. . It is difficult to confirm these data in vivo, although a recent study showed a correlation between pathology and ocular microvascular dysfunction ((Am J Physiol 2003; 285). A large number of clinical studies, however, indicate that not only does diabetes manifest but also the deterioration of metabolic control can affect coronary microcirculation (Hypert Res 2002; 25: 893). Werner referred to the important study by Sambuceti et al. (Circulation 2001; 104: 1129) that shows the persistence of microvascular dysfunction in the patients after a successful reopening of the artery related to the infarction, and which may explain the increase in cardiovascular morbidity and mortality in these patients.There is increasing evidence from large studies of acute reperfusion that morbidity and mortality do not are related to the reopening of the artery related to the infarction, but depend much more on the flow TIMI flow +/- red myocardial growth (Stone 2002; Feldmann, Circulation 2003). Herrmann indicated, among others, that the integrity of coronary microcirculation is probably the most important clinical factor and prognosis in this context (Circulation 2001). The neutral effect of the protection devices (no relevant change for the TIMI flow, for the resolution of ST, or for MACE) may indicate that a functional deterioration of the microcirculation is the main determinant of the forecast. There is also growing evidence that coronary microvascular dysfunction plays an important role in non-obstructive CAD. Coronary endothelial dysfunction is a strong prognostic prediction factor in these patients.

Nefropatía diabética (disfunción renal en pacientes con diabetes) Diabetic nephropathy (renal dysfunction in patients with diabetes)

La nefropatía diabética abarca la microalbuminuria (un efecto de la enfermedad microvascular), la proteinuria y la enfermedad renal terminal. La diabetes es la causa más común de insuficiencia renal, responsable de más del 40 por ciento de los nuevos casos. Incluso cuando los medicamentos y la dieta pueden controlar la diabetes, la enfermedad puede conducir a nefropatía e insuficiencia renal. La mayoría de las personas con diabetes no desarrollan una nefropatía suficientemente grave para causar insuficiencia renal. Aproximadamente 16 millones de personas en los Estados Unidos tienen diabetes, y cerca de 100.000 personas tienen insuficiencia renal como resultado de la diabetes. Diabetic nephropathy encompasses microalbuminuria (an effect of microvascular disease), proteinuria and end-stage renal disease. Diabetes is the most common cause of kidney failure, responsible for more than 40 percent of new cases. Even when medications and diet can control diabetes, the disease can lead to kidney disease and kidney failure. Most people with diabetes do not develop a severe enough nephropathy to cause kidney failure. Approximately 16 million people in the United States have diabetes, and about 100,000 people have kidney failure as a result of diabetes.

Retinopatía diabética Diabetic retinopathy

En el estado diabético, la hiperglucemia conduce a una disminución del flujo sanguíneo retiniano, la hiper-permeabilidad retiniana, retrasos en la conducción del nervio foto-receptor, y la muerte celular de la neurona retiniana. En la diabetes de corta duración, la muerte celular neuronal se identificó dentro de la capa nuclear interna de la retina. Específicamente, la apoptosis se localizó en las células gliales tales como las células de Mueller y los astrocitos y se demostró que se produce en un 1 mes de la diabetes en el modelo de diabetes en rata inducida por STZ. La causa de estos eventos es multi-factorial lo que incluye la activación de la vía de diacilglicerol/PKC, el estrés oxidativo y la glucosilación no enzimática. La combinación de estos eventos deja la retina hipóxica y en última instancia, conduce al desarrollo de la retinopatía diabética. Una posible conexión entre la isquemia de la retina y los cambios tempranos en la retina diabética es la producción de factores de crecimiento como el VEGF inducidos por la hipoxia. El regulador maestro de la respuesta hipóxica se identificó como el factor-1 inducible por hipoxia (HIF-1), el cual controla los genes que regulan la proliferación celular y la angiogénesis. Estudios anteriores demostraron que la inhibición de la ubiquitinación de HIF-1 conduce a la unión con elementos de respuesta a la hipoxia (HRE) y la producción del ARNm de VEGF. In the diabetic state, hyperglycemia leads to a decrease in retinal blood flow, retinal hyper-permeability, delays in the conduction of the photo-receptor nerve, and cell death of the retinal neuron. In short-term diabetes, neuronal cell death was identified within the inner nuclear layer of the retina. Specifically, apoptosis was located in glial cells such as Mueller cells and astrocytes and was shown to occur within 1 month of diabetes in the STZ-induced rat diabetes model. The cause of these events is multi-factorial which includes the activation of the diacylglycerol / PKC pathway, oxidative stress and non-enzymatic glycosylation. The combination of these events leaves the hypoxic retina and ultimately leads to the development of diabetic retinopathy. A possible connection between retinal ischemia and early changes in the diabetic retina is the production of growth factors such as hypoxia-induced VEGF. The master regulator of the hypoxic response was identified as hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1), which controls the genes that regulate cell proliferation and angiogenesis. Previous studies have shown that inhibition of ubiquitination of HIF-1 leads to binding with hypoxia response elements (HRE) and the production of VEGF mRNA.

La retinopatía diabética se define como la disfunción progresiva de la vasculatura de la retina causada por la hiperglucemia crónica. Las principales características de la retinopatía diabética incluyen los microaneurismas, las hemorragias retinianas, los exudados de lípidos retinianos, las manchas algodonosas, la no perfusión capilar, el edema macular y la neovascularización. Las características asociadas incluyen la hemorragia vítrea, el desprendimiento de la retina, el glaucoma neovascular, las cataratas prematuras y la parálisis de los nervios craneales. Diabetic retinopathy is defined as the progressive dysfunction of the retinal vasculature caused by chronic hyperglycemia. The main features of diabetic retinopathy include microaneurysms, retinal hemorrhages, exudates of retinal lipids, cotton spots, non-perfusion capillary, macular edema and neovascularization. Associated features include vitreous hemorrhage, retinal detachment, neovascular glaucoma, premature cataracts and cranial nerve palsy.

Hay 16 millones de personas en los Estados Unidos con diabetes Tipo 1 y diabetes Tipo 2. En 15 años, el 80% de los pacientes de Tipo 1 desarrollan retinopatía diabética mientras que el 84% de los pacientes diabéticos de Tipo 2 desarrollan retinopatía en 19 años. Estas cifras constituyen un mercado significativo para los agentes terapéuticos dirigidos a las enfermedades oculares de la neovascularización. El desarrollo de la retinopatía diabética es dependiente del tiempo. A pesar del control óptimo del azúcar en la sangre, se puede esperar que los pacientes con enfermedad de larga duración eventualmente desarrollen alguna forma de retinopatía. La National Society to Prevent Blindness, estimó que de 4 a 6 millones de diabéticos en los Estados Unidos tienen retinopatía diabética. La incidencia anual estimada de nuevos casos de retinopatía diabética proliferativa y de edema macular diabético son 65.000 y 75.000, respectivamente, con una prevalencia de 700.000 y 500.000, respectivamente. La retinopatía diabética causa entre 12.000 y 24.000 nuevos casos de ceguera en los Estados Unidos cada año. La retinopatía se trata por métodos quirúrgicos, eficaces en la reducción de la pérdida grave de la visión, pero las porciones de la retina tratadas con láser se destruyen irreversiblemente. No existen tratamientos farmacológicos disponibles. There are 16 million people in the United States with Type 1 diabetes and Type 2 diabetes. In 15 years, 80% of Type 1 patients develop diabetic retinopathy while 84% of Type 2 diabetic patients develop retinopathy in 19 years. These figures constitute a significant market for therapeutic agents targeting ocular diseases of neovascularization. The development of diabetic retinopathy is time dependent. Despite optimal blood sugar control, patients with long-term illness can be expected to eventually develop some form of retinopathy. The National Society to Prevent Blindness, estimated that 4 to 6 million diabetics in the United States have diabetic retinopathy. The estimated annual incidence of new cases of proliferative diabetic retinopathy and diabetic macular edema are 65,000 and 75,000, respectively, with a prevalence of 700,000 and 500,000, respectively. Diabetic retinopathy causes between 12,000 and 24,000 new cases of blindness in the United States each year. Retinopathy is treated by surgical methods, effective in reducing severe vision loss, but laser-treated portions of the retina are irreversibly destroyed. There are no pharmacological treatments available.

Una enfermedad microvascular que afecta principalmente a los capilares, la diabetes mellitus afecta el ojo por la A microvascular disease that mainly affects the capillaries, diabetes mellitus affects the eye by

destrucción de la vasculatura en la conjuntiva, la retina y el sistema nervioso central. Los pacientes pueden presentarse con antecedentes de conjuntiva bulbar inyectada por mucho tiempo junto con quejas sistemáticas de pérdida de peso a pesar de un apetito mayor de lo normal (polifasia), sed anormal (polidipsia) y orina anormalmente frecuente (poliuria). destruction of the vasculature in the conjunctiva, the retina and the central nervous system. Patients may present with a history of bulbar conjunctiva injected for a long time along with systematic complaints of weight loss despite a greater than normal appetite (polyphagia), abnormal thirst (polydipsia) and abnormally frequent urine (polyuria).

La agudeza visual fluctuante secundaria al azúcar en sangre inestable es un signo ocular común. La inflamación en los lentes del cristalino resulta en grandes cambios repentinos en la refracción, así como en la formación prematura de cataratas. Los cambios en la agudeza visual dependerán de la gravedad y etapa de la enfermedad. Fluctuating visual acuity secondary to unstable blood sugar is a common eye sign. Inflammation in the lens of the lens results in large sudden changes in refraction, as well as in premature cataract formation. Changes in visual acuity will depend on the severity and stage of the disease.

En la retina, el debilitamiento de las arteriolas y capilares puede resultar en la apariencia característica de hemorragias intrarretiniana en forma de puntos y manchas, exudados, anomalías microvasculares intrarretinianas (IRMA), microaneurismas, edema e infartos algodonosos. La retinopatía diabética proliferativa es el resultado de un compromiso vascular severo y es visible como la neovascularización del disco (NVD), la neovascularización en otra parte (NVE) y la neovascularización del iris (NVI, o la rubeosis del iris). Las complicaciones neurológicas incluyen parálisis de los nervios craneales tercero, cuarto y sexto, así como la papilitis diabética y la parálisis del nervio facial. In the retina, weakening of the arterioles and capillaries can result in the characteristic appearance of intraretinal hemorrhages in the form of spots and spots, exudates, intraretinal microvascular abnormalities (IRMA), microaneurysms, edema and cottony infarctions. Proliferative diabetic retinopathy is the result of severe vascular involvement and is visible as disk neovascularization (NVD), neovascularization elsewhere (NVE) and iris neovascularization (NIV, or iris rubeosis). Neurological complications include third, fourth and sixth cranial nerve palsies, as well as diabetic papillitis and facial nerve paralysis.

La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades influenciadas genéticamente que comparten la intolerancia a la glucosa. Se caracteriza como un trastorno de la regulación metabólica como resultado de la deficiencia o el mal funcionamiento de la insulina o de la deficiencia o el mal funcionamiento de los receptores celulares de la insulina. Diabetes mellitus is a group of genetically influenced diseases that share glucose intolerance. It is characterized as a disorder of metabolic regulation as a result of insulin deficiency or malfunction or deficiency or malfunction of insulin cell receptors.

La bioquímica que implica la formación del sorbitol juega un papel en la destrucción de los pericitos, los cuales son células que soportan el endotelio vascular. A medida que los pericitos de apoyo perecen, el endotelio capilar se pone en peligro, lo que resulta en la fuga vascular de sangre, proteínas y lípidos. Esto, en combinación con la sangre espesada, cargada de glucosa, produce insuficiencia vascular, no perfusión capilar, hipoxia retiniana, estructura alterada y disminución de la función. La formación y liberación de factores vasoproliferativos que desempeñan un papel en la génesis de la neovascularización de la retina son poco conocidos. The biochemistry that involves the formation of sorbitol plays a role in the destruction of pericytes, which are cells that support the vascular endothelium. As the support pericytes perish, the capillary endothelium is endangered, resulting in vascular leakage of blood, proteins and lipids. This, in combination with thickened blood, loaded with glucose, produces vascular insufficiency, non-capillary perfusion, retinal hypoxia, altered structure and decreased function. The formation and release of vasoproliferative factors that play a role in the genesis of retinal neovascularization are poorly understood.

La mayoría de las secuelas de la diabetes que no amenazan la visión se resuelven espontáneamente en el transcurso de semanas o meses después de un control médico. En los casos en los que hay grandes cambios en la refracción, los pacientes pueden requerir una receta de lentes temporales hasta que la refracción se estabilice. Cuando la retinopatía amenaza la mácula o cuando nuevos vasos sanguíneos proliferan, el paciente se puede remitir para una fotocoagulación con láser. El estudio de la retinopatía diabética (DRS) demostró concluyentemente que la fotocoagulación panrretiniana tuvo éxito en la reducción del riesgo de pérdida severa de la visión en pacientes de alto riesgo. Se definen las características de alto riesgo como: (1) la neovascularización del disco óptico (NVD) de un cuarto a un tercio del diámetro de un disco en tamaño y (2) la neovascularización en otra parte (NVE) con cualquier hemorragia vítrea. Most sequelae of diabetes that do not threaten vision resolve spontaneously within weeks or months after medical supervision. In cases where there are major changes in refraction, patients may require a prescription for temporary lenses until the refraction stabilizes. When retinopathy threatens the macula or when new blood vessels proliferate, the patient can be referred for laser photocoagulation. The study of diabetic retinopathy (DRS) conclusively demonstrated that panretinal photocoagulation was successful in reducing the risk of severe vision loss in high-risk patients. High-risk characteristics are defined as: (1) neovascularization of the optic disc (NVD) from a quarter to a third of the diameter of a disc in size and (2) neovascularization elsewhere (NVE) with any vitreous hemorrhage.

Edema macular diabético (DME) Diabetic Macular Edema (DME)

El DME es una complicación de la retinopatía diabética, una enfermedad que afecta a los vasos sanguíneos de la retina. La retinopatía diabética produce múltiples anomalías en la retina, lo que incluye engrosamiento de la retina y edema, hemorragias, flujo de sangre obstaculizado, fuga excesiva de líquido de los vasos sanguíneos y, en las últimas etapas, el crecimiento anormal de los vasos sanguíneos. Este crecimiento de los vasos sanguíneos puede causar grandes hemorragias y daño severo de la retina. Cuando la fuga de los vasos sanguíneos de la retinopatía diabética causa hinchazón de la mácula, se conoce como DME. El síntoma principal del DME es una pérdida de la visión central. Los factores de riesgo asociados con el DME incluyen niveles de glucosa en sangre mal controlados, presión arterial alta, función renal anormal que causa la retención de líquidos, niveles altos de colesterol y otros factores sistémicos generales. DME is a complication of diabetic retinopathy, a disease that affects the blood vessels of the retina. Diabetic retinopathy causes multiple abnormalities in the retina, which includes thickening of the retina and edema, hemorrhages, obstructed blood flow, excessive leakage of fluid from the blood vessels and, in the later stages, abnormal growth of blood vessels. This growth of blood vessels can cause major bleeding and severe damage to the retina. When the leakage of blood vessels from diabetic retinopathy causes swelling of the macula, it is known as DME. The main symptom of DME is a loss of central vision. The risk factors associated with DME include poorly controlled blood glucose levels, high blood pressure, abnormal renal function that causes fluid retention, high cholesterol levels and other general systemic factors.

Según la Organización Mundial de la Salud, la retinopatía diabética es la principal causa de ceguera en adultos en edad laboral y la principal causa de pérdida de visión en los diabéticos. La American Diabetes Association informa que hay aproximadamente 18 millones de diabéticos en los Estados Unidos y aproximadamente 1,3 millones de casos nuevos diagnosticados de diabetes en los Estados Unidos cada año. La Prevent Blindness America y el National Eye Institute estiman que en los Estados Unidos hay más de 5,3 millones de personas mayores de 18 años con retinopatía diabética, lo que incluye aproximadamente 500.000 con DME. El CDC estima que hay aproximadamente 75.000 nuevos casos de DME en los Estados Unidos cada año. According to the World Health Organization, diabetic retinopathy is the leading cause of blindness in working-age adults and the leading cause of vision loss in diabetics. The American Diabetes Association reports that there are approximately 18 million diabetics in the United States and approximately 1.3 million new cases of diabetes diagnosed in the United States each year. The Prevent Blindness America and the National Eye Institute estimate that in the United States there are more than 5.3 million people over 18 with diabetic retinopathy, which includes approximately 500,000 with DME. The CDC estimates that there are approximately 75,000 new cases of DME in the United States each year.

Neuropatías adicionales Additional neuropathies

Además de la diabetes, las causas comunes de la neuropatía son la infección por herpes zoster, trauma crónico o agudo (lo que incluye la cirugía) y varias neurotoxinas. El dolor neuropático es común en el cáncer como resultado directo del cáncer en los nervios periféricos (por ejemplo, la compresión por un tumor) y como un efecto secundario de muchos fármacos quimioterapéuticos. In addition to diabetes, common causes of neuropathy are herpes zoster infection, chronic or acute trauma (which includes surgery) and several neurotoxins. Neuropathic pain is common in cancer as a direct result of cancer in the peripheral nerves (for example, compression by a tumor) and as a side effect of many chemotherapeutic drugs.

Enfermedad microvascular -Las enfermedades vasculares y neurales están estrechamente relacionadas y entrelazadas. Los vasos sanguíneos dependen de la función normal de los nervios, y los nervios dependen del flujo sanguíneo adecuado.El primer cambio patológico en la microvasculatura es la vasoconstricción.Cuando la enfermedad Microvascular disease - Vascular and neural diseases are closely related and intertwined. Blood vessels depend on the normal function of the nerves, and the nerves depend on proper blood flow. The first pathological change in the microvasculature is vasoconstriction. When the disease

progresa, la disfunción neuronal se correlaciona estrechamente con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como engrosamiento de la membrana del basamento capilar e hiperplasia endotelial, que contribuye a hipoxia y tensión de oxígeno disminuida.Los agentes vasodilatadores (por ejemplo, los inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina, a1-antagonistas) pueden conducir a mejoras sustanciales en el flujo sanguíneo neuronal, con las correspondientes mejoras en las velocidades de conducción nerviosa. progresses, neuronal dysfunction is closely correlated with the development of vascular abnormalities, such as thickening of the capillary basement membrane and endothelial hyperplasia, which contributes to hypoxia and decreased oxygen tension. Vasodilatory agents (for example, enzyme inhibitors Angiotensin-converting agent, a1-antagonists) can lead to substantial improvements in neuronal blood flow, with corresponding improvements in nerve conduction velocities.

Manifestaciones clínicas Clinical manifestations

La neuropatía afecta a todos los nervios periféricos: fibras de dolor, neuronas motoras, nervios autonómicos. Por lo tanto, necesariamente puede afectar a todos los órganos y sistemas ya que todos están inervados. Hay varios síndromes distintos en dependencia de los sistemas de órganos y miembros afectados, pero estos no son de ninguna manera exclusivos. Un paciente puede tener una neuropatía sensomotora y autonómica o cualquier otra combinación. Neuropathy affects all peripheral nerves: pain fibers, motor neurons, autonomic nerves. Therefore, it can necessarily affect all organs and systems since all are innervated. There are several different syndromes depending on the affected organ and member systems, but these are by no means exclusive. A patient may have a sensomotor and autonomic neuropathy or any other combination.

A pesar de los avances en la comprensión de las causas metabólicas de la neuropatía, los tratamientos destinados a interrumpir estos procesos patológicos se limitan por los efectos secundarios y la falta de eficacia. Por lo tanto, los tratamientos son sintomáticos y no abordan los problemas subyacentes. Los agentes para el dolor que causa la neuropatía sensomotora incluyen antidepresivos tricíclicos (TCA), inhibidores de la recaptación de la serotonina (SSRI) y fármacos antiepilépticos (AED). Ninguno de estos agentes revoca los procesos patológicos que conducen a la neuropatía diabética y no alteran el curso incesante de la enfermedad. Por lo tanto, sería útil tener una composición farmacéutica que pudiera tratar mejor estas condiciones y/o aliviar los síntomas. Despite advances in the understanding of the metabolic causes of neuropathy, treatments aimed at interrupting these pathological processes are limited by side effects and lack of efficacy. Therefore, treatments are symptomatic and do not address the underlying problems. Agents for pain caused by sensomotor neuropathy include tricyclic antidepressants (TCA), serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) and antiepileptic drugs (AED). None of these agents revokes the pathological processes that lead to diabetic neuropathy and do not alter the incessant course of the disease. Therefore, it would be useful to have a pharmaceutical composition that could better treat these conditions and / or relieve symptoms.

Retinopatías adicionales Additional retinopathies

Microvasculopatía retiniana (retinopatía del SIDA) Retinal microvasculopathy (AIDS retinopathy)

La microvasculopatía retiniana se ve en el 100% de los pacientes con SIDA. Se caracteriza por hemorragias intrarretinianas, microaneurismas, manchas de Roth, manchas algodonosas (microinfartos de la capa de las fibras nerviosas) y revestimiento perivascular. La etiología de la retinopatía se desconoce aunque se piensa que se debe a inmuno-complejos circulantes, la liberación local de sustancias citotóxicas, hemorreología anormal, y la infección por VIH de las células endoteliales. La retinopatía del SIDA es ahora tan común que las manchas algodonosas en un paciente sin diabetes o hipertensión, pero en riesgo de contraer el VIH debe inducir al médico a considerar la prueba viral. No existe un tratamiento específico para la retinopatía del SIDA pero su presencia continua puede inducir a un médico a re-examinar la eficacia de la terapia contra el VIH y el cumplimiento del paciente. Retinal microvasculopathy is seen in 100% of patients with AIDS. It is characterized by intraretinal hemorrhages, microaneurysms, Roth spots, cotton spots (micro-infarcts of the nerve fiber layer) and perivascular lining. The etiology of retinopathy is unknown although it is thought to be due to circulating immuno-complexes, local release of cytotoxic substances, abnormal hemorrhage, and HIV infection of endothelial cells. AIDS retinopathy is now so common that cotton spots on a patient without diabetes or hypertension, but at risk of contracting HIV should induce the doctor to consider the viral test. There is no specific treatment for AIDS retinopathy but its continued presence can induce a doctor to re-examine the efficacy of HIV therapy and patient compliance.

Retinopatía por transplante de médula ósea (BMT) Bone marrow transplant retinopathy (BMT)

La retinopatía por transplante de médula ósea se reportó por primera vez en 1983. Típicamente ocurre en seis meses, pero puede ocurrir tan tarde como 62 meses después del BMT. Los factores de riesgo como la diabetes y la hipertensión pueden facilitar el desarrollo de la retinopatía por BMT por realzar la microvasculopatía isquémica. No hay predilección conocida de edad, género o raza para el desarrollo de la retinopatía por BMT. Los pacientes presentan disminución de la agudeza visual y/o déficit en el campo visual. Los resultados del segmento posterior son típicamente bilaterales y simétricos. Las manifestaciones clínicas incluyen múltiples manchas algodonosas, telangiectasias, microaneurismas, edema macular, exudados duros y hemorragias retinianas. La angiografía con fluoresceína demuestra la no perfusión capilar y el goteo, anormalidades microvasculares intrarretinianas, microaneurismas y edema macular. Aunque la etiología exacta de la retinopatía por BMT no se ha elucidado, parece afectarse por varios factores: toxicidad de la ciclosporina, irradiación corporal total (TBI), y agentes quimioterapéuticos. La ciclosporina es un potente agente inmunomodulador que suprime la respuesta inmune injerto-contra-hospedero. Puede conducir a daño celular endotelial y efectos neurológicos secundarios, y como resultado, se ha sugerido como la causa de la retinopatía por BMT. Sin embargo, la retinopatía por BMT se puede desarrollar en ausencia del uso de la ciclosporina, y no se demostró que la ciclosporina cause la retinopatía por BMT en los receptores de médula ósea autólogos o singénicos. La ciclosporina, por lo tanto, no parece ser la única causa de la retinopatía por BMT. La irradiación corporal total (TBI) también se implicó como causa de la retinopatía por BMT. La radiación daña la microvasculatura retiniana y conduce a la vasculopatía isquémica. Variables tales como la dosis total de radiación y el intervalo de tiempo entre la radiación y la ablación de la médula ósea parecen ser importantes. Sin embargo, la retinopatía por BMT puede ocurrir en pacientes que no recibieron TBI, y la retinopatía por BMT no se observa en los receptores de trasplantes de órganos sólidos que recibieron dosis similares de radiación. Por lo tanto, la TBI no es la única causa, pero es otro factor que contribuye al desarrollo de la retinopatía por BMT. Los agentes quimioterapéuticos se sugirieron como un factor potencial que contribuye a la retinopatía por BMT. Medicamentos tales como el cisplatino, la carmustina y la ciclofosfamida pueden causar efectos secundarios oculares, lo que incluye edema de la papila, neuritis óptica, déficit en el campo visual y la ceguera cortical. Se sugirió que estos fármacos quimioterapéuticos pueden predisponer a los pacientes a los daños retinianos inducidos por la radiación y aumentar el efecto nocivo de la radiación. En general, los pacientes con retinopatía por BMT tienen un buen pronóstico. La retinopatía por lo general se resuelve en dos a cuatro meses después de suspender o disminuir la dosis de ciclosporina. En un informe, el 69 por ciento de los pacientes experimentaron una resolución completa de los resultados de la retina, y el 46 por ciento de los pacientes recuperó completamente su agudeza visual basal. Debido al pronóstico favorable y la naturaleza relativamente no progresiva de la retinopatía por BMT, una intervención agresiva no suele ser necesaria. Bone marrow transplant retinopathy was first reported in 1983. It typically occurs in six months, but it can occur as late as 62 months after BMT. Risk factors such as diabetes and hypertension can facilitate the development of BMT retinopathy by enhancing ischemic microvasculopathy. There is no known predilection of age, gender or race for the development of BMT retinopathy. Patients have decreased visual acuity and / or deficit in the visual field. The results of the posterior segment are typically bilateral and symmetrical. Clinical manifestations include multiple cotton spots, telangiectasias, microaneurysms, macular edema, hard exudates and retinal hemorrhages. Fluorescein angiography demonstrates capillary non-perfusion and drip, intraretinal microvascular abnormalities, microaneurysms and macular edema. Although the exact etiology of BMT retinopathy has not been elucidated, it appears to be affected by several factors: cyclosporine toxicity, total body irradiation (TBI), and chemotherapeutic agents. Cyclosporine is a potent immunomodulatory agent that suppresses the graft-versus-host immune response. It can lead to endothelial cell damage and side neurological effects, and as a result, it has been suggested as the cause of BMT retinopathy. However, BMT retinopathy can develop in the absence of cyclosporine use, and cyclosporine was not shown to cause BMT retinopathy in autologous or syngeneic bone marrow receptors. Cyclosporine, therefore, does not appear to be the sole cause of BMT retinopathy. Total body irradiation (TBI) was also implicated as a cause of BMT retinopathy. Radiation damages retinal microvasculature and leads to ischemic vasculopathy. Variables such as the total radiation dose and the time interval between radiation and bone marrow ablation appear to be important. However, BMT retinopathy can occur in patients who did not receive TBI, and BMT retinopathy is not observed in solid organ transplant recipients who received similar doses of radiation. Therefore, BIT is not the only cause, but it is another contributing factor to the development of BMT retinopathy. Chemotherapeutic agents were suggested as a potential factor that contributes to BMT retinopathy. Medications such as cisplatin, carmustine and cyclophosphamide can cause ocular side effects, including papillaedema, optic neuritis, visual field deficits and cortical blindness. It was suggested that these chemotherapeutic drugs may predispose patients to radiation-induced retinal damage and increase the harmful effect of radiation. In general, patients with BMT retinopathy have a good prognosis. Retinopathy usually resolves within two to four months after stopping or decreasing the dose of cyclosporine. In one report, 69 percent of patients experienced complete resolution of retinal outcomes, and 46 percent of patients completely regained their baseline visual acuity. Due to the favorable prognosis and the relatively non-progressive nature of BMT retinopathy, aggressive intervention is usually not necessary.

Afecciones isquémicas Ischemic conditions

La isquemia se puede dividir en dos categorías: la primera implica la aterosclerosis acelerada que ocurre comúnmente en pacientes con diabetes, es decir, en las arterias femoral, poplítea y tibial posterior. Estos vasos, a menudo solamente 1 o 2 cm de diámetro, pueden desarrollar la placa aterosclerótica, que disminuye seriamente el flujo de sangre. Después de que los grandes vasos se ocluyen completamente, pueden ocurrir, accidente cerebro vascular, infarto de miocardio, isquemia, y úlceras del pie diabético que no cicatrizan. Esta forma de isquemia es esencialmente una enfermedad de grandes vasos. Ischemia can be divided into two categories: the first involves the accelerated atherosclerosis that commonly occurs in patients with diabetes, that is, in the femoral, popliteal and posterior tibial arteries. These vessels, often only 1 or 2 cm in diameter, can develop atherosclerotic plaque, which seriously decreases blood flow. After the great vessels are completely occluded, they can occur, stroke, myocardial infarction, ischemia, and diabetic foot ulcers that do not heal. This form of ischemia is essentially a disease of large vessels.

Demencia post-accidente cerebro vascular Post-accident vascular brain dementia

El 25% de las personas tienen demencia después de un accidente cerebro vascular, con muchos otros que desarrollan demencia en los siguientes 5 a 10 años. Además, muchos individuos experimentan deterioros más sutiles de sus funciones superiores del cerebro (por ejemplo las habilidades de planificación y la velocidad de procesamiento de la información) y tienen un riesgo muy alto de desarrollar posteriormente demencia. Accidentes cerebro vascular muy pequeños en las partes profundas del cerebro en este proceso (que se llama enfermedad microvascular) parecen ser esenciales en el proceso que conduce a un patrón identificado de atrofia cerebral específico para la demencia postaccidente cerebro vascular. 25% of people have dementia after a stroke, with many others who develop dementia in the next 5 to 10 years. In addition, many individuals experience more subtle impairments of their superior brain functions (for example, planning skills and information processing speed) and have a very high risk of developing dementia later. Very small cerebrovascular accidents in the deep parts of the brain in this process (called microvascular disease) appear to be essential in the process that leads to an identified pattern of specific cerebral atrophy for post-incident vascular brain dementia.

Síndrome isquémico ocular Ischemic eye syndrome

Los pacientes que sufren de síndrome de isquemia ocular (OIS) son generalmente mayores, con edades en el intervalo entre los 50 a los 80. Los varones se afectan dos veces más frecuentemente que las mujeres. El paciente es sólo raramente asintomático. La disminución de la visión se produce en la presentación en el 90 por ciento de los casos, y el 40 por ciento de los pacientes tiene dolor concomitante en los ojos. También puede haber una historia concomitante o antecedente de ataques isquémicos transitorios o amaurosis fugaz. Los pacientes también tienen enfermedad sistémica significativa conocida o desconocida en el momento de la presentación. Las enfermedades sistémicas que se encuentran más comúnmente son la hipertensión, la diabetes, la enfermedad cardiaca isquémica, el accidente cerebro vascular, y la enfermedad vascular periférica. En menor medida, los pacientes manifiestan OIS como resultado de la arteritis de células gigantes (GCA). Patients suffering from ocular ischemia syndrome (OIS) are generally older, with ages ranging from 50 to 80. Men are affected twice as often as women. The patient is only rarely asymptomatic. The decrease in vision occurs in presentation in 90 percent of cases, and 40 percent of patients have concomitant eye pain. There may also be a concomitant or antecedent history of transient ischemic attacks or fleeting amaurosis. Patients also have significant systemic disease known or unknown at the time of presentation. The most common systemic diseases are hypertension, diabetes, ischemic heart disease, stroke, and peripheral vascular disease. To a lesser extent, patients manifest OIS as a result of giant cell arteritis (GCA).

Los hallazgos unilaterales se presentan en el 80 por ciento de los casos. Hallazgos comunes pueden incluir catarata unilateral avanzada, inflamación del segmento anterior, reacción asintomática de la cámara anterior, edema macular, venas retinianas dilatadas pero no tortuosas, hemorragias media-periféricas en forma de puntos y manchas, manchas algodonosas, exudados, y neovascularización del disco y de la retina. También puede haber pulsación arterial espontánea, presión intraocular elevada, y la neovascularización del iris y el ángulo con glaucoma neovascular (NVG). Mientras que el paciente puede presentar neovascularización del segmento anterior, la hipotonía ocular puede ocurrir debido a la baja perfusión arterial al cuerpo ciliar. Ocasionalmente, hay embolia retiniana visible (placas Hollenhorst). Unilateral findings occur in 80 percent of cases. Common findings may include advanced unilateral cataract, inflammation of the anterior segment, asymptomatic reaction of the anterior chamber, macular edema, dilated but non-tortuous retinal veins, medium-peripheral hemorrhages in the form of spots and spots, cotton spots, exudates, and neovascularization of the disc and of the retina. There may also be spontaneous arterial pulsation, elevated intraocular pressure, and neovascularization of the iris and angle with neovascular glaucoma (NVG). While the patient may have neovascularization of the anterior segment, ocular hypotonia may occur due to low arterial perfusion to the ciliary body. Occasionally, there is visible retinal embolism (Hollenhorst plaques).

Los hallazgos en el OIS son causados por la ulceración ateromatosa de la arteria carótida interna y la estenosis en la bifurcación de la arteria carótida común. El cinco por ciento de los pacientes con intervalo de estenosis de la arteria desarrollan el OIS. Sin embargo, el OIS sólo se produce si el grado de estenosis supera el 90 por ciento. La estenosis de la arteria carótida reduce la presión de perfusión en el ojo, lo que resulta en los fenómenos isquémicos antes mencionados. Una vez que la estenosis alcanza el 90 por ciento, la presión de perfusión en la arteria central de la retina (CRA) sólo desciende al 50 por ciento. A menudo, la presión arterial reducida se manifiesta como una pulsación espontánea del CRA. Los hallazgos son variables y pueden incluir cualquiera o todos los hallazgos anteriores. The findings in the OIS are caused by atheromatous ulceration of the internal carotid artery and stenosis at the bifurcation of the common carotid artery. Five percent of patients with an artery stenosis interval develop OIS. However, OIS only occurs if the degree of stenosis exceeds 90 percent. Carotid artery stenosis reduces perfusion pressure in the eye, resulting in the aforementioned ischemic phenomena. Once the stenosis reaches 90 percent, the perfusion pressure in the central artery of the retina (ARC) only drops to 50 percent. Often, reduced blood pressure manifests as a spontaneous pulsation of the ARC. The findings are variable and can include any or all of the previous findings.

Los pacientes con OIS tienen una enfermedad sistémica significativa que se debe evaluar. La muerte cardíaca es la causa principal de mortalidad en pacientes con OIS-la tasa de mortalidad a los cinco años es del 40 por ciento. Por esta razón, los pacientes con OIS deben remitirse a un cardiólogo para una serología completa, EKG, ECG y evaluación de la carótida. Patients with OIS have a significant systemic disease that should be evaluated. Cardiac death is the leading cause of mortality in patients with OIS - the five-year mortality rate is 40 percent. For this reason, patients with OIS should be referred to a cardiologist for a complete serology, EKG, ECG and carotid evaluation.

Enfermedades microvasculares de los riñones Microvascular diseases of the kidneys

El riñón está implicado en un número de afecciones clínico-patológicas discretas que afectan la microvasculatura sistémica y renal. Algunas de estas afecciones se caracterizan por lesiones primarias a las células endoteliales, tales como: The kidney is involved in a number of discrete clinical-pathological conditions that affect the systemic and renal microvasculature. Some of these conditions are characterized by primary lesions to endothelial cells, such as:

• Síndrome urémico hemolítico (HUS) y púrpura trombocitopénica trombótica (TTP). HUS y TTP son enfermedades estrechamente relacionadas que se caracterizan por la anemia hemolítica microangiopática y el deterioro de órganos variables. Tradicionalmente, el diagnóstico de HUS se hace cuando la insuficiencia renal es una característica predominante del síndrome, como es común en los niños. En los adultos, el deterioro neurológico predomina frecuentemente y el síndrome entonces se conoce como TTP. La microangiopatía trombótica es la lesión patológica subyacente en ambos síndromes, y los hallazgos clínicos y de laboratorio en pacientes con HUS o TTP se superponen en gran medida. Esto llevó a algunos investigadores a considerar a los dos síndromes como un continuo de una sola enfermedad. Patogenia: Los datos experimentales sugieren fuertemente que la lesión celular endotelial es el evento • Hemolytic uremic syndrome (HUS) and thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP). HUS and TTP are closely related diseases that are characterized by microangiopathic hemolytic anemia and variable organ deterioration. Traditionally, the diagnosis of HUS is made when renal failure is a predominant feature of the syndrome, as is common in children. In adults, neurological impairment predominates frequently and the syndrome is then known as TTP. Thrombotic microangiopathy is the underlying pathological lesion in both syndromes, and clinical and laboratory findings in patients with HUS or TTP overlap greatly. This led some researchers to consider the two syndromes as a continuum of a single disease. Pathogenesis: Experimental data strongly suggests that endothelial cell injury is the event

primario en la patogénesis de HUS/TTP. El daño endotelial dispara una cascada de eventos que incluyen la coagulación intravascular local, la deposición de fibrina y la activación y agregación de plaquetas. El resultado final es el hallazgo histopatológico de microangiopatía trombótica común a las diferentes formas del síndrome de HUS/TTP. Si HUS/TTP se dejan sin tratamiento, la tasa de mortalidad se acerca al 90%. La terapia de apoyo-que incluye la diálisis, medicamentos antihipertensivos, transfusiones de sangre, y el manejo de las complicaciones neurológicas-contribuye a la mejora de la supervivencia de los pacientes con HUS/TTP. El equilibrio adecuado de líquidos y reposo intestinal son importantes en el tratamiento del HUS típico asociado con la diarrea. primary in the pathogenesis of HUS / TTP. Endothelial damage triggers a cascade of events that include local intravascular coagulation, fibrin deposition and platelet activation and aggregation. The end result is the histopathological finding of thrombotic microangiopathy common to the different forms of HUS / TTP syndrome. If HUS / TTP is left untreated, the mortality rate is close to 90%. Supportive therapy - which includes dialysis, antihypertensive medications, blood transfusions, and the management of neurological complications - contributes to the improved survival of patients with HUS / TTP. Proper fluid balance and bowel rest are important in the treatment of typical HUS associated with diarrhea.

• Nefritis por radiación -Las consecuencias a largo plazo de la irradiación renal que excede los 2500 rad se pueden dividir en cinco síndromes clínicos: • Radiation nephritis - The long-term consequences of renal irradiation exceeding 2500 rad can be divided into five clinical syndromes:

(i)(i)

La nefritis aguda por radiación ocurre en aproximadamente el 40% de los pacientes después de un período de latencia de 6 a 13 meses. Se caracteriza clínicamente por la aparición súbita de hipertensión, proteinuria, edema y falla renal progresiva que en la mayoría de los casos conducen a riñones en etapa terminal.  Acute radiation nephritis occurs in approximately 40% of patients after a latency period of 6 to 13 months. It is characterized clinically by the sudden onset of hypertension, proteinuria, edema and progressive renal failure that in most cases lead to end-stage kidneys.

(ii)(ii)

La nefritis crónica por radiación, por el contrario, tiene un período de latencia que varía entre los 18 meses y los 14 años después de la lesión inicial. Es insidiosa en el inicio y se caracteriza por hipertensión, proteinuria, y la pérdida gradual de la función renal.  Chronic radiation nephritis, on the other hand, has a latency period that varies between 18 months and 14 years after the initial injury. It is insidious at the beginning and is characterized by hypertension, proteinuria, and gradual loss of renal function.

(iii) El tercer síndrome se manifiesta 5 a 19 años después de la exposición a la radiación como proteinuria benigna con función renal normal (iii) The third syndrome manifests itself 5 to 19 years after radiation exposure as benign proteinuria with normal renal function

(iv) (iv)

Un cuarto grupo de pacientes exhibe sólo la hipertensión benigna 2-5 años más tarde y pueden tener proteinuria variable. La hipertensión maligna tardía surge 18 meses a 11 años después de la irradiación en pacientes ya sea con nefritis crónica por radiación o hipertensión benigna. La eliminación del riñón afectado revocó la hipertensión. Se informó el daño a las arterias renales inducido por radiación con la subsecuente hipertensión renovascular. A fourth group of patients show only benign hypertension 2-5 years later and may have variable proteinuria. Late malignant hypertension arises 18 months to 11 years after irradiation in patients with either chronic radiation nephritis or benign hypertension. The removal of the affected kidney revoked hypertension. Radiation-induced renal artery damage was reported with subsequent renovascular hypertension.

(v) (v)

Un síndrome de insuficiencia renal análoga a la nefritis aguda por radiación se observó en los pacientes con transplante de médula ósea (BMT) que se trataron con irradiación corporal total (TBI). A syndrome of renal failure analogous to acute radiation nephritis was observed in patients with bone marrow transplantation (BMT) who were treated with total body irradiation (TBI).

Se informó que la irradiación causa la disfunción endotelial, pero no afecta a las células vasculares del músculo liso en la fase temprana después de la radiación. La radiación directa podría dañar el ADN, lo que da lugar a disminución de la regeneración de estas células y la degradación de la membrana basal en los capilares glomerulares y túbulos. No está claro cómo esta lesión inicial, eventualmente conduce a la glomérulo-esclerosis, atrofia tubular y fibrosis intersticial. Se postula que la degeneración de la capa de células endoteliales puede provocar trombosis intravascular en los capilares y las arteriolas más pequeñas. Esta angiopatía intrarrenal entonces explicaría la fibrosis renal progresiva y la hipertensión que caracterizan la nefritis por radiación. Un estudio reciente de riñones de ratón irradiados mostró un aumento dependiente de la dosis en los leucocitos en la corteza renal, lo que sugiere un papel para los procesos inflamatorios en la nefritis inducida por radiación. Irradiation was reported to cause endothelial dysfunction, but it does not affect vascular smooth muscle cells in the early phase after radiation. Direct radiation could damage the DNA, which results in decreased regeneration of these cells and degradation of the basement membrane in the glomerular capillaries and tubules. It is not clear how this initial lesion eventually leads to glomerulus-sclerosis, tubular atrophy and interstitial fibrosis. It is postulated that degeneration of the endothelial cell layer can cause intravascular thrombosis in the capillaries and smaller arterioles. This intrarenal angiopathy would then explain the progressive renal fibrosis and hypertension that characterize radiation nephritis. A recent study of irradiated mouse kidneys showed a dose-dependent increase in leukocytes in the renal cortex, suggesting a role for inflammatory processes in radiation-induced nephritis.

En otras enfermedades renales, la microvasculatura del riñón está involucrada en trastornos autoinmunes, como la esclerosis sistémica (esclerodermia). La afectación renal en la esclerosis sistémica se manifiesta como una enfermedad renal crónica de lenta progresión o como una crisis de esclerodermia renal (SRC), la cual se caracteriza por hipertensión maligna y azotemia aguda. Se postula que la SRC se produce por un fenómeno de tipo Raynaud en el riñón. El vasoespasmo severo conduce a la isquemia cortical y una mayor producción de renina y angiotensina II, la cual a su vez perpetúa la vasoconstricción renal. Los cambios hormonales (embarazo), el estrés físico y emocional, o la temperatura fría pueden desencadenar el vasoespasmo arterial de tipo Raynaud. El papel del sistema renina-angiotensina en la perpetuación de la isquemia renal se subraya por el importante beneficio de los inhibidores de ACE en el tratamiento del SRC. En los pacientes con SRC que progresan a insuficiencia renal severa a pesar del tratamiento antihipertensivo, la diálisis se convierte en una necesidad. Tanto la diálisis peritoneal como la hemodiálisis se han empleado. El informe de la End-Stage Renal Disease (ESRD) Network en 311 pacientes con ESRD inducida por esclerosis sistémica dializados entre 1983 y 1985 reveló una tasa de supervivencia del 33% a los 3 años. In other kidney diseases, kidney microvasculature is involved in autoimmune disorders, such as systemic sclerosis (scleroderma). Renal involvement in systemic sclerosis manifests itself as a chronic chronic disease of slow progression or as a renal scleroderma crisis (CRS), which is characterized by malignant hypertension and acute azotemia. It is postulated that CRS is caused by a Raynaud-like phenomenon in the kidney. Severe vasospasm leads to cortical ischemia and increased production of renin and angiotensin II, which in turn perpetuates renal vasoconstriction. Hormonal changes (pregnancy), physical and emotional stress, or cold temperature can trigger Raynaud-type arterial vasospasm. The role of the renin-angiotensin system in the perpetuation of renal ischemia is underlined by the important benefit of ACE inhibitors in the treatment of CRS. In patients with CRS who progress to severe renal failure despite antihypertensive treatment, dialysis becomes a necessity. Both peritoneal dialysis and hemodialysis have been used. The report of the End-Stage Renal Disease (ESRD) Network in 311 patients with ESRD induced by dialysed systemic sclerosis between 1983 and 1985 revealed a 33% survival rate at 3 years.

La microcirculación renal también puede afectarse en la enfermedad de células falciformes, a la que el riñón es particularmente susceptible a causa de la baja tensión de oxígeno que se alcanza en los vasos profundos de la médula renal como resultado de la transferencia de oxígeno en contracorriente a lo largo de los vasos rectos. Las arterias renales más pequeñas y las arteriolas también pueden ser el sitio de la lesión tromboembólica a partir de material que contiene colesterol que se desplaza de las paredes de los grandes vasos. Renal microcirculation can also be affected in sickle cell disease, to which the kidney is particularly susceptible because of the low oxygen tension that is reached in the deep vessels of the renal medulla as a result of oxygen transfer in countercurrent to along the straight vessels. Smaller renal arteries and arterioles can also be the site of thromboembolic lesion from cholesterol-containing material that travels from the walls of the great vessels.

Al considerarlos como un grupo, las enfermedades que causan oclusión transitoria o permanente de la microvasculatura renal resultan uniformemente en la interrupción de la perfusión glomerular, y por lo tanto de la tasa de filtración glomerular, por lo que constituyen una seria amenaza para la homeostasis sistémica. When considered as a group, the diseases that cause transient or permanent occlusion of the renal microvasculature result uniformly in the interruption of glomerular perfusion, and therefore of the glomerular filtration rate, so they constitute a serious threat to systemic homeostasis. .

Insuficiencia renal aguda (ARF) Acute renal failure (ARF)

La ARF puede ser causada por la enfermedad microvascular o macrovascular (oclusión importante de la arteria renal o enfermedad severa de la aorta abdominal). Las enfermedades microvasculares clásicas a menudo se presentan con hemólisis microangiopática e insuficiencia renal aguda que ocurre a causa de trombosis u oclusión de los capilares glomerulares, frecuentemente con trombocitopenia adjunta. Ejemplos típicos de estas enfermedades incluyen: ARF can be caused by microvascular or macrovascular disease (major occlusion of the renal artery or severe abdominal aortic disease). Classic microvascular diseases often present with microangiopathic hemolysis and acute renal failure that occurs due to thrombosis or occlusion of the glomerular capillaries, often with attached thrombocytopenia. Typical examples of these diseases include:

a) Púrpura trombocitopénica trombótica – La péntada clásica en la púrpura trombocitopénica trombótica incluye fiebre, alteraciones neurológicos, insuficiencia renal, anemia hemolítica microangiopática y trombocitopenia. b) El síndrome urémico hemolítico-El síndrome urémico hemolítico es similar a la púrpura trombótica trombocitopénica, pero no se presenta con alteraciones neurológicas. c) El síndrome HELLP (hemólisis, enzimas hepáticas elevadas y plaquetas bajas). El síndrome HELLP es un tipo de síndrome urémico hemolítico que se produce en las mujeres embarazadas con la adición de las elevaciones de transaminasas. a) Thrombotic thrombocytopenic purpura - Classic pentacle in thrombotic thrombocytopenic purpura includes fever, neurological abnormalities, renal failure, microangiopathic hemolytic anemia and thrombocytopenia. b) Hemolytic uremic syndrome - Hemolytic uremic syndrome is similar to thrombocytopenic thrombotic purpura, but does not present with neurological abnormalities. c) HELLP syndrome (hemolysis, elevated liver enzymes and low platelets). HELLP syndrome is a type of hemolytic uremic syndrome that occurs in pregnant women with the addition of transaminase elevations.

La insuficiencia renal aguda se puede presentar en todos los entornos médicos, pero se adquiere predominantemente en los hospitales. Esta afección se desarrolla en el 5 por ciento de los pacientes hospitalizados, y aproximadamente el Acute renal failure can occur in all medical settings, but is predominantly acquired in hospitals. This condition develops in 5 percent of hospitalized patients, and approximately

0.5 por ciento de los pacientes hospitalizados requiere diálisis. Durante los últimos 40 años la tasa de supervivencia de la insuficiencia renal aguda no mejoró, sobre todo porque los pacientes afectados son ahora mayores y tienen más condiciones comórbidas. Las infecciones producen el 75 por ciento de las muertes en pacientes con insuficiencia renal aguda y las complicaciones cardio-respiratorias son la segunda causa más común de muerte. En dependencia de la severidad de la insuficiencia renal, la tasa de mortalidad puede variar desde el 7 por ciento hasta tan alta como el 80 por ciento. La insuficiencia renal aguda se puede dividir en tres categorías: ARF prerrenal, intrínseca y postrenal. La ARF intrínseca se subdivide en cuatro categorías: enfermedad tubular, enfermedad glomerular, enfermedad vascular (incluye microvascular) y enfermedad intersticial. 0.5 percent of hospitalized patients require dialysis. During the last 40 years the survival rate of acute renal failure did not improve, especially since the affected patients are now older and have more comorbid conditions. Infections produce 75 percent of deaths in patients with acute renal failure and cardio-respiratory complications are the second most common cause of death. Depending on the severity of renal failure, the mortality rate can vary from 7 percent to as high as 80 percent. Acute renal failure can be divided into three categories: prerenal, intrinsic and postrenal ARF. Intrinsic ARF is subdivided into four categories: tubular disease, glomerular disease, vascular disease (includes microvascular) and interstitial disease.

Enfermedad renal progresiva Progressive kidney disease

Hay evidencia de que la enfermedad renal progresiva se caracteriza por una pérdida progresiva de la microvasculatura. La pérdida de la microvasculatura se correlaciona directamente con el desarrollo de cicatrices glomerulares y tubulointersticiales. El mecanismo es mediado, en parte, por una reducción en la respuesta proliferativa endotelial, y esta discapacidad en la reparación capilar es mediada por la alteración en la expresión local tanto de factores angiogénicos (factor de crecimiento endotelial vascular) como anti-angiogénicos (trombospondina 1) en el riñón. La alteración en el equilibrio de los factores de crecimiento angiogénicos es mediada tanto por las citoquinas asociadas a macrófagos (interleucina-1ß) como por mediadores vasoactivos. Finalmente, existe evidencia intrigante de que la estimulación de la angiogénesis y / o la reparación capilar puede estabilizar la función renal y enlentecer la progresión y que este beneficio se produce independientemente de los efectos sobre la BP o la proteinuria. There is evidence that progressive kidney disease is characterized by a progressive loss of microvasculature. The loss of the microvasculature correlates directly with the development of glomerular and tubulointerstitial scars. The mechanism is mediated, in part, by a reduction in the endothelial proliferative response, and this disability in capillary repair is mediated by the alteration in local expression of both angiogenic factors (vascular endothelial growth factor) and anti-angiogenic factors (thrombospondin 1) in the kidney. The alteration in the balance of the angiogenic growth factors is mediated both by the cytokines associated with macrophages (interleukin-1β) and by vasoactive mediators. Finally, there is intriguing evidence that stimulation of angiogenesis and / or hair repair can stabilize renal function and slow progression and that this benefit occurs regardless of the effects on BP or proteinuria.

Para más información ver Brenner & Rector's The Kidney, 7ma ed., Copyright-© 2004 Elsevier: Capítulo 33 -Microvascular diseases of the kidney y también Tiwari y Vikrant Journal of Indian Academy of Clinical Medicine Vol.5, núm.1 Review Article-Sepsis and the Kidney. For more information see Brenner & Rector's The Kidney, 7th ed., Copyright- © 2004 Elsevier: Chapter 33 -Microvascular diseases of the kidney and also Tiwari and Vikrant Journal of Indian Academy of Clinical Medicine Vol.5, No. 1 Review Article- Sepsis and the Kidney.

En conclusión, los modos actuales de terapia para la prevención y/o tratamiento de las COPD, la degeneración macular y las enfermedades microvasculares son insatisfactorios y existe por lo tanto una necesidad, de desarrollar nuevos compuestos para este fin. Todas las enfermedades y las indicaciones que se describen anteriormente en la presente, así como otras enfermedades y afecciones que se describen en la presente tales como MI también se pueden tratar con los nuevos compuestos de esta invención. In conclusion, the current modes of therapy for the prevention and / or treatment of COPD, macular degeneration and microvascular diseases are unsatisfactory and there is therefore a need, to develop new compounds for this purpose. All diseases and indications described hereinbefore, as well as other diseases and conditions described herein such as MI can also be treated with the new compounds of this invention.

RTP801 RTP801

El gen RTP801, se reportó primero por el cesionario de la presente solicitud. Las patentes de Estados Unidos núms. 6455674, 6555667, y 6740738, todas asignadas al cesionario de la presente solicitud, describen y reivindican per se el polinucleótido y polipéptido RTP801, y los anticuerpos dirigidos hacia el polipéptido. RTP801 representa un único objetivo génico para el factor 1 inducible por hipoxia (HIF-1) que puede regular la patogénesis inducida por hipoxia independiente de los factores de crecimiento tal como VEGF. The RTP801 gene was first reported by the assignee of the present application. United States Patents Nos. 6455674, 6555667, and 6740738, all assigned to the assignee of the present application, describe and claim per se the polynucleotide and RTP801 polypeptide, and the antibodies directed towards the polypeptide. RTP801 represents a single gene target for hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) that can regulate hypoxia-induced pathogenesis independent of growth factors such as VEGF.

El inventor de la presente invención ha hecho descubrimientos que conducen al nuevo concepto de inhibir el gen RTP801 con el propósito de mejorar varios trastornos respiratorios. The inventor of the present invention has made discoveries that lead to the new concept of inhibiting the RTP801 gene in order to improve various respiratory disorders.

Las siguientes solicitudes de patente y publicaciones proporcionan aspectos de información de soporte. The following patent applications and publications provide support information aspects.

WO 2001070979 se refiere a marcadores de ácido nucleico que son sobreexpresados en células de cáncer ovárico. WO 2001070979 refers to nucleic acid markers that are overexpressed in ovarian cancer cells.

US 6673549 describe una combinación que comprende ADNc que se expresan diferencialmente en respuesta al tratamiento con esteroides. US 6673549 describes a combination comprising cDNAs that are differentially expressed in response to steroid treatment.

La solicitud de Estados Unidos 2003165864 se refiere a los ADNc que se expresan diferencialmente en las células tratadas con un agente desmetilante del ADN. US application 2003165864 refers to cDNAs that are differentially expressed in cells treated with a DNA demethylating agent.

La solicitud de Estados Unidos 2003108871 se refiere a una composición que comprende varios ADNc que se expresan diferencialmente en cultivos de células de hígado C3A humano tratados, supuestamente útil para el tratamiento de trastornos hepáticos. The US application 2003108871 refers to a composition comprising several cDNAs that are differentially expressed in treated human C3A liver cell cultures, supposedly useful for the treatment of liver disorders.

La solicitud de Estados Unidos 2002119463 describe una nueva composición, útil para el tratamiento y diagnóstico del cáncer de próstata, dicha composición comprende ADNc humanos que se expresan diferencialmente en el cáncer de próstata. US application 2002119463 describes a new composition, useful for the treatment and diagnosis of prostate cancer, said composition comprises human cDNAs that are differentially expressed in prostate cancer.

WO 2004018999 describe un método para evaluar, caracterizar, monitorear, prevenir y tratar el cáncer cervical. WO 2004018999 describes a method to evaluate, characterize, monitor, prevent and treat cervical cancer.

EP 1394274 se refiere a un método de prueba para el asma bronquial o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica mediante la comparación del nivel de expresión de un gen marcador en una muestra biológica de un sujeto con el nivel de expresión del gen en una muestra de un sujeto saludable. EP 1394274 refers to a test method for bronchial asthma or chronic obstructive pulmonary disease by comparing the level of expression of a marker gene in a biological sample of a subject with the level of expression of the gene in a sample of a subject healthy.

WO 2002101075 se refiere a una molécula de ácido nucleico aislada útil para detectar, caracterizar, prevenir y tratar los cánceres cervicales humanos. WO 2002101075 refers to an isolated nucleic acid molecule useful for detecting, characterizing, preventing and treating human cervical cancers.

WO 2003010205 se refiere a inhibir la angiogénesis para tratar la curación de heridas, retinopatía, isquemia, inflamación, microvasculopatía, cura de huesos e inflamación de la piel. WO 2003010205 refers to inhibiting angiogenesis to treat wound healing, retinopathy, ischemia, inflammation, microvasculopathy, bone healing and skin inflammation.

WO 2002046465 se refiere a la identificación de un gen involvucrado en la enfermedad para tratar las afecciones reguladas por la hipoxia. WO 2002046465 refers to the identification of a gene involved in the disease to treat hypoxia-regulated conditions.

WO 2002031111 se refiere a supuestamente nuevos polipéptidos y sus proteínas codificantes, y se proporcionan muchos usos de estos. WO 2002031111 refers to supposedly new polypeptides and their coding proteins, and many uses of these are provided.

WO 2001012659 se refiere a ácidos nucleicos útiles en metodologías de ADN recombinante. WO 2001012659 refers to nucleic acids useful in recombinant DNA methodologies.

WO 2001077289 describe seiscientos veintitrés polinucleótidos derivados de una variedad de fuentes de tejido humano. WO 2001077289 describes six hundred twenty-three polynucleotides derived from a variety of human tissue sources.

WO 2003101283 se refiere a una combinación que comprende muchos ADNc y proteínas que supuestamente se expresan diferencialmente en los trastornos respiratorios. WO 2003101283 refers to a combination comprising many cDNAs and proteins that are supposedly differentially expressed in respiratory disorders.

JP 2003259877 se refiere a muchos marcadores de la enfermedad de fibrosis hepática. JP 2003259877 refers to many markers of liver fibrosis disease.

WO2004/035615 describe la identificación de PRF1 (RTP801) como un factor metastásico involucrado en la ruta de la cinasa PI -3. Los inhibidores se describen, e incluyen los ARNip. WO2004 / 035615 describes the identification of PRF1 (RTP801) as a metastatic factor involved in the PI-3 kinase pathway. Inhibitors are described, and include siRNAs.

Tzipora Shoshani, y otros. Identification of a Novel Hypoxia-Inducible Factor 1-sensible Gene, RTP801, Involved in Apoptosis. MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, abr. 2002, p. 2283-2293; este documento, que es de la co-autoría del inventor de la presente invención, detalla el descubrimiento del gen RTP801 (un nuevo gen dependiente de HIF-1). Tzipora Shoshani, and others. Identification of a Novel Hypoxia-Inducible Factor 1-Sensitive Gene, RTP801, Involved in Apoptosis. MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Apr. 2002, p. 2283-2293; This document, which is co-authored by the inventor of the present invention, details the discovery of the RTP801 gene (a new HIF-1 dependent gene).

Anat Brafman, y otros. Inhibition of Oxygen-Induced Retinopathy in RTP801-Deficient Mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004 oct; 45 (10): 3796-805; también de la co-autoría del inventor de la presente invención, este documento demuestra que en ratones knock out RTP801, la hiperoxia no causa degeneración de la red capilar de la retina. Anat Brafman, and others. Inhibition of Oxygen-Induced Retinopathy in RTP801-Deficient Mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004 Oct; 45 (10): 3796-805; Also from the co-authorship of the inventor of the present invention, this document demonstrates that in RTP801 knock out mice, hyperoxia does not cause degeneration of the retinal capillary network.

Leif W. Ellisen, y otros REDD1, a Developmentally Regulated Transcriptional Target of p63 and p53, Links p63 to Regulation of Reactive Oxygen Species. Molecular Cell, Vol. 10, 995-1005, noviembre, 2002;este documento demuestra que la sobrexpresión de RTP801 (referida en la misma como REDD1) conduce a un aumento de la producción de especies de oxígeno reactivas. Leif W. Ellisen, and others REDD1, a Developmentally Regulated Transcriptional Target of p63 and p53, Links p63 to Regulation of Reactive Oxygen Species. Molecular Cell, Vol. 10, 995-1005, November, 2002; this document demonstrates that the overexpression of RTP801 (referred to therein as REDD1) leads to an increase in the production of reactive oxygen species.

Richard DR, Berra E, y Pouyssegur J. Non-hypoxic pathway mediates the induction of hypoxia-inducible factor 1 alpha in vascular smooth muscle cells. J Biol. Chem. 2000, sep1; 275(35): 26765-71 este documento demuestra que la transcripción dependiente de HIF-1 puede ser inducida por la producción excesiva de especies de oxígeno reactivas. Richard DR, Berra E, and Pouyssegur J. Non-hypoxic pathway mediates the induction of hypoxia-inducible factor 1 alpha in vascular smooth muscle cells. J Biol. Chem. 2000, sep1; 275 (35): 26765-71 This document demonstrates that HIF-1-dependent transcription can be induced by excessive production of reactive oxygen species.

Rangasami T, y otros, Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Presentado en el Diario de Investigación Clínica. Este trabajo se refiere a ratones con una defensa antioxidante comprometida (debido a la inactivación de la línea germinal de RTP801, en la misma denominado Nrf2). Rangasami T, and others, Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Presented in the Journal of Clinical Research. This work refers to mice with a compromised antioxidant defense (due to the inactivation of the RTP801 germ line, in the same called Nrf2).

SUMARIO DE LA INVENCIÓN SUMMARY OF THE INVENTION

La presente invención proporciona nuevos métodos y composiciones para tratar trastornos microvasculares, degeneración macular, trastornos respiratorios, y lesión o enfermedad de la médula espinal. The present invention provides new methods and compositions for treating microvascular disorders, macular degeneration, respiratory disorders, and spinal cord injury or disease.

En una modalidad, se proporcionan nuevas moléculas que inhiben RTP801 y que pueden usarse para tratar varias enfermedades e indicaciones. In one embodiment, new molecules that inhibit RTP801 and that can be used to treat various diseases and indications are provided.

La presente descripción describe un método para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, degeneración macular o un trastorno respiratorio, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801. The present description describes a method for treating a patient suffering from a microvascular disorder, macular degeneration or a respiratory disorder, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising an RTP801 inhibitor.

Otro aspecto de la presente descripción concierne un método para tratar un paciente que padece de COPD, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801. En un aspecto, el inhibidor es una molécula ARNip, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima. Another aspect of the present description concerns a method of treating a patient suffering from COPD, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an RTP801 inhibitor. In one aspect, the inhibitor is an siRNA molecule, an antisense molecule, an antibody (such as a neutralizing antibody), a dominant negative peptide or a ribozyme.

Otro aspecto de la presente descripción concierne un método para tratar un paciente que padece de degeneración macular, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801. En un aspecto, el inhibidor es una molécula ARNip, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima. Another aspect of the present description concerns a method for treating a patient suffering from macular degeneration, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an RTP801 inhibitor. In one aspect, the inhibitor is an siRNA molecule, an antisense molecule, an antibody (such as a neutralizing antibody), a dominant negative peptide or a ribozyme.

La invención se dirige a los compuestos ARNip que tienen la estructura de hebra doble: The invention is directed to siRNA compounds that have the double strand structure:

5' (N)x -Z 3' (cadena antisentido) 5 '(N) x -Z 3' (antisense chain)

3' Z'-(N')y 5' (cadena sentido), 3 'Z' - (N ') and 5' (sense chain),

donde cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y cada uno de (N)x y (N')y es un oligómero en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente; en donde cada uno de x y y es un entero entre 19 y 40; en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está covalentemente unido al terminal 3' de la hebra en la cual está presente; y en donde la secuencia de (N)x comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos que tiene una cualquiera de las siguientes secuencias: where each N and N 'is a ribonucleotide that can be modified or unmodified in its sugar residue and each of (N) xy (N') and is an oligomer in which each consecutive N or N 'binds to the next N or N 'by a covalent bond; where each of x and y is an integer between 19 and 40; wherein each of Z and Z 'may be present or absent, but if present it is dTdT and is covalently linked to the 3' terminal of the strand in which it is present; and wherein the sequence of (N) x comprises a first stretch of contiguous nucleotides having any one of the following sequences:

AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.:66); AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. With identification number: 66);

UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. con núm. de ident.:74); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. With identification number: 74);

UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. con núm. de ident.:75); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. With identification number: 75);

AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. con núm. de ident.:77); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. With identification number: 77);

UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. con núm. de ident.:79); y UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. With identification number: 79); Y

AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. con núm. de ident.:91), AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. With ID No.:91),

y la secuencia de (N')y comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, y en donde la estructura de hebra doble se genera por pareamiento de bases entre el primer tramo y el segundo tramo. and the sequence of (N ') and comprises a second segment of the adjacent nucleotides, and wherein the double strand structure is generated by base pairing between the first section and the second section.

Otro aspecto de la presente descripción concierne un método para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, que comprende que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801. En un aspecto, el inhibidor es una molécula ARNip, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima. Another aspect of the present description concerns a method of treating a patient suffering from a microvascular disorder, which comprises comprising administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an RTP801 inhibitor. In one aspect, the inhibitor is an siRNA molecule, an antisense molecule, an antibody (such as a neutralizing antibody), a dominant negative peptide or a ribozyme.

Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de un trastorno respiratorio. En una modalidad, el trastorno respiratorio es COPD. El inhibidor es un ARNip de la invención. A further embodiment of the present invention provides the use of a therapeutically effective amount of an RTP801 inhibitor for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from a respiratory disorder. In one embodiment, the respiratory disorder is COPD. The inhibitor is an siRNA of the invention.

Una modalidad adicional de la presente invención proporciona proporciona el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de degeneración macular. En una modalidad, la degeneración macular es AMD. El inhibidor es un ARNip de la invención. A further embodiment of the present invention provides the use of a therapeutically effective dose of an RTP801 inhibitor for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from macular degeneration. In one embodiment, macular degeneration is AMD. The inhibitor is an siRNA of the invention.

Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de un trastorno microvascular. En una modalidad, el trastorno microvascular es la retinopatía diabética. El inhibidor es un ARNip de la invención. A further embodiment of the present invention provides the use of a therapeutically effective amount of an RTP801 inhibitor for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from a microvascular disorder. In one embodiment, the microvascular disorder is diabetic retinopathy. The inhibitor is an siRNA of the invention.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

La presente invención, en algunas de sus modalidades, concierne la inhibición del gen RTP801 o polipéptido para el tratamiento de las enfermedades oculares, trastornos respiratorios y trastornos microvasculares, entre otros. Como se describe en la presente descripción los inhibidores a usarse con la presente invención son moléculas biológicas. The present invention, in some of its embodiments, concerns the inhibition of the RTP801 gene or polypeptide for the treatment of eye diseases, respiratory disorders and microvascular disorders, among others. As described herein, the inhibitors to be used with the present invention are biological molecules.

Sin estar atados a una teoría, los inventores de la presente invención encontraron que RTP801 está involucrado en varios estados de enfermedad que incluyen trastornos microvasculares, enfermedades oculares, trastornos respiratorios, y lesión y enfermedad de la médula espinal, y sería beneficioso inhibir RTP801 para tratar cualquiera de dichas enfermedades o trastornos. Los métodos, moléculas y composiciones que inhiben RTP801 se discuten en la presente descripción con detalle, y cualquiera de dichas moléculas y/o composiciones pueden emplearse beneficiosamente en el tratamiento de un paciente que padece de cualquiera de dichas afecciones. Without being bound by a theory, the inventors of the present invention found that RTP801 is involved in various disease states that include microvascular disorders, eye diseases, respiratory disorders, and spinal cord injury and disease, and it would be beneficial to inhibit RTP801 to treat any of said diseases or disorders. The methods, molecules and compositions that inhibit RTP801 are discussed in the present description in detail, and any of said molecules and / or compositions may be beneficially employed in the treatment of a patient suffering from any of said conditions.

La invención se dirige a los compuestos ARNip que tienen la estructura de hebra doble: The invention is directed to siRNA compounds that have the double strand structure:

5' (N)x -Z 3' (cadena antisentido) 5 '(N) x -Z 3' (antisense chain)

3' Z'-(N')y 5' (cadena sentido), 3 'Z' - (N ') and 5' (sense chain),

en donde cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y cada uno de (N)x y (N')y es un oligómero en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente; en donde cada uno de x y y es un entero entre 19 y 40; en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está covalentemente unido al terminal 3' de la hebra en la cual está presente; y en donde la secuencia de (N)x comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos que tiene una cualquiera de las siguientes secuencias: wherein each N and N 'is a ribonucleotide that can be modified or unmodified in its sugar residue and each of (N) xy (N') and is an oligomer in which each consecutive N or N 'binds to the next N or N 'by a covalent bond; where each of x and y is an integer between 19 and 40; wherein each of Z and Z 'may be present or absent, but if present it is dTdT and is covalently linked to the 3' terminal of the strand in which it is present; and wherein the sequence of (N) x comprises a first stretch of contiguous nucleotides having any one of the following sequences:

AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.:66); AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. With identification number: 66);

UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. con núm. de ident.:74); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. With identification number: 74);

UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. con núm. de ident.:75); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. With identification number: 75);

AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. con núm. de ident.:77); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. With identification number: 77);

UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. con núm. de ident.:79); and UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. With identification number: 79); and

AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. con núm. de ident.:91), AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. With ID No.:91),

y la secuencia de (N')y comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, y en donde la estructura de hebra doble se genera por pareamiento de bases entre el primer tramo y el segundo tramo. and the sequence of (N ') and comprises a second segment of the adjacent nucleotides, and wherein the double strand structure is generated by base pairing between the first section and the second section.

La presente descripción describe métodos y composiciones para inhibir la expresión del gen RTP801 in vivo. Generalmente, el método incluye administrar oligoribonucleótidos, tal como el los ARN interferentes pequeños (es decir, ARNip) que se dirigen a un ARNm particular e hibridan para este, o material de ácido nucleico que puede producir ARNip en una célula, en una cantidad suficiente para regular descendentemente la expresión de un gen objetivo por un mecanismo de interferencia del ARN. Particularmente, los ARNip sujetos pueden usarse para inhibir la expresión del gen RTP801 para el tratamiento de trastornos respiratorios, trastornos microvasculares o enfermedades oculares. The present description describes methods and compositions for inhibiting the expression of the RTP801 gene in vivo. Generally, the method includes administering oligoribonucleotides, such as small interfering RNAs (i.e., siRNA) that target a particular mRNA and hybridize to it, or nucleic acid material that can produce siRNA in a cell, in a sufficient amount. to downwardly regulate the expression of a target gene by an RNA interference mechanism. Particularly, subject siRNAs can be used to inhibit the expression of the RTP801 gene for the treatment of respiratory disorders, microvascular disorders or eye diseases.

Así, en una modalidad la presente invención proporciona un ARNip sujeto para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular o un trastorno respiratorio, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 en una cantidad terapéuticamente efectiva para de ese modo tratar al paciente. La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un ARNip sujeto para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular o trastorno respiratorio, para administrar al paciente, en una dosificación y durante un período de tiempo suficiente para promover la recuperación. La enfermedad ocular puede ser degeneración macular tal como degeneración macular relacionada con la edad (AMD), entre otros. El trastorno microvascular puede ser retinopatía diabética o Insuficiencia renal aguda, entre otros. El trastorno respiratorio puede ser enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, entre otros. Thus, in one embodiment the present invention provides a subject siRNA for treating a patient suffering from a microvascular disorder, an eye disease or a respiratory disorder, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising an RTP801 inhibitor in a therapeutically effective amount. to thereby treat the patient. The invention further provides a pharmaceutical composition comprising a subject siRNA for treating a patient suffering from a microvascular disorder, an eye disease or respiratory disorder, for administration to the patient, in a dosage and for a period of time sufficient to promote recovery. The eye disease can be macular degeneration such as age-related macular degeneration (AMD), among others. The microvascular disorder can be diabetic retinopathy or acute renal failure, among others. The respiratory disorder can be chronic obstructive pulmonary disease (COPD), emphysema, chronic bronchitis, asthma and lung cancer, among others.

La presente descripción describe además un método para tratar un paciente que padece de degeneración macular, COPD o retinopatía diabética, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 que comprende un polinucleótido que que hibrida específicamente para el ARNm transcrito del gen RTP801 y / o regula descendentemente la expresión del gen RTP801 para de ese modo tratar al paciente. El polinucleótido puede ser un ARNip que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias que se exponen en las Tablas A-C (sec. con núms. de ident.:3-344) y particularmente, ARNip núms: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41, 42, 49 y 50 de la Tabla A. The present description further describes a method for treating a patient suffering from macular degeneration, COPD or diabetic retinopathy, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective dose of an RTP801 inhibitor comprising a polynucleotide that specifically hybridizes to the mRNA transcribed from the RTP801 gene and / or downwardly regulates the expression of the RTP801 gene to thereby treat the patient. The polynucleotide may be an siRNA comprising consecutive nucleotides having an identical sequence to any one of the sequences set forth in Tables AC (sec. With ID Nos .: 3-344) and particularly, siRNA Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41, 42, 49 and 50 of Table A.

Más aún, un aspecto adicional de la presente descripción describe un método para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, un trastorno respiratorio o una enfermedad ocular, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 que comprende una molécula ARNip, opcionalmente una molécula ARNip detallada en cualquiera de las Tablas A-C, en una dosificación y durante un período de tiempo para de ese modo tratar al paciente. Moreover, a further aspect of the present description describes a method for treating a patient suffering from a microvascular disorder, a respiratory disorder or an eye disease, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective dose of a drug inhibitor. RTP801 comprising an siRNA molecule, optionally a detailed siRNA molecule in any of the AC Tables, in a dosage and for a period of time to thereby treat the patient.

Para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, un trastorno respiratorio o una enfermedad ocular se To treat a patient suffering from a microvascular disorder, a respiratory disorder or an eye disease,

proporciona una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un ARNip sujeto, particularmente ARNip núms: 14, 22, 23, 25, 27 o 39 de la Tabla A, a administrar al paciente en una dosificación y durante un período de tiempo para de ese modo tratar al paciente. provides a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective dose of a subject siRNA, particularly siRNA Nos: 14, 22, 23, 25, 27 or 39 of Table A, to be administered to the patient in a dosage and for a period of time for That way treat the patient.

La presente descripción describe además un método para tratar un paciente que padece de un trastorno respiratorio, un trastorno microvascular o una enfermedad ocular o cualquiera de las afecciones descritas en la presente descripción, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de una molécula ARNip que dirige el gen RTP801 del ARNm, opcionalmente una molécula ARNip detallada en las Tablas A-C, en una dosificación y durante un período de tiempo para de ese modo tratar al paciente. Más aun, la enfermedad ocular puede ser degeneración macular tal como degeneración macular relacionada con la edad (AMD); el trastorno microvascular puede ser retinopatía diabética o Insuficiencia renal aguda; el trastorno respiratorio puede ser COPD y los aspectos de COPD a ser tratados pueden comprender, pero sin limitarse a, enfisema, bronquitis crónica, o ambos. The present description further describes a method for treating a patient suffering from a respiratory disorder, a microvascular disorder or an eye disease or any of the conditions described in the present description, which comprises administering to the patient a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective dose. of an siRNA molecule that directs the RTP801 gene of the mRNA, optionally an siRNA molecule detailed in Tables AC, in a dosage and for a period of time to thereby treat the patient. Moreover, the eye disease can be macular degeneration such as age-related macular degeneration (AMD); the microvascular disorder may be diabetic retinopathy or acute renal failure; The respiratory disorder may be COPD and the aspects of COPD to be treated may include, but are not limited to, emphysema, chronic bronchitis, or both.

"Tratar una enfermedad" se refiere a administrar una sustancia terapéutica efectiva para mejorar los síntomas asociados con una enfermedad, para disminuir la severidad o curar la enfermedad, o para prevenir que ocurra la enfermedad. "Treating a disease" refers to administering an effective therapeutic substance to improve the symptoms associated with a disease, to decrease severity or cure the disease, or to prevent the disease from occurring.

Una "dosis terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un compuesto o composición farmacéutica que es efectiva para alcanzar una mejora en un paciente o su sistema fisiológico que incluyen, pero sin limitarse a, mejora de la tasa de supervivencia, recuperación más rápida, o mejora o eliminación de los síntomas, y otros indicadores seleccionados como medidas de determinación adecuadas por aquellos con experiencia en la materia. A "therapeutically effective dose" refers to an amount of a pharmaceutical compound or composition that is effective in achieving an improvement in a patient or his physiological system that includes, but is not limited to, improved survival rate, faster recovery, or improvement or elimination of symptoms, and other indicators selected as appropriate determination measures by those with experience in the field.

Los métodos para tratar las enfermedades descritas en la presente descripción pueden incluir administrar un inhibidor de RTP801 en conjunto con un inhibidor de RTP801 adicional, una sustancia que mejora las propiedades farmacológicas del ingrediente activo como se detalla más abajo, o un compuesto adicional conocido por ser efectivo en el tratamiento de la enfermedad a tratar, tales como degeneración macular, COPD, ARF, DR, entre otros. Por "en conjunto con" se entiende antes de, simultáneamente o posteriormente a. Otros detalles de las terapias conjuntas ilustrativas se dan más abajo. Methods for treating the diseases described in the present description may include administering an RTP801 inhibitor in conjunction with an additional RTP801 inhibitor, a substance that improves the pharmacological properties of the active ingredient as detailed below, or an additional compound known to be effective in the treatment of the disease to be treated, such as macular degeneration, COPD, ARF, DR, among others. By "in conjunction with" is understood before, simultaneously or subsequently a. Other details of illustrative joint therapies are given below.

En otra modalidad, la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de degeneración macular, COPD, ARF, DR, o cualquier otra enfermedad ocular, afección microvascular o respiratoria como se detalla anteriormente, y el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un ARNip sujeto para la preparación de un medicamento para tratar dichas enfermedades y afecciones. En esta modalidad, el inhibidor de RTP801 comprende un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia que comprende una secuencia antisentido para la secuencia que se expone en la Figura 1 (sec. con núm. de ident.: 1). Además, el inhibidor de RTP801 puede ser un vector de expresión que comprende un polinucleótido que tiene una secuencia que es una secuencia antisentido para la secuencia que se expone en la Figura 1 (sec. con núm. de ident.:1). Además, el inhibidor de RTP801 es un ARNip, opcionalmente, ARNip núms: 14, 22, 23, 25, 27; 39, de la Tabla A. In another embodiment, the present invention provides the use of a therapeutically effective dose of an RTP801 inhibitor for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from macular degeneration, COPD, ARF, DR, or any other eye disease. , microvascular or respiratory condition as detailed above, and the use of a therapeutically effective dose of a subject siRNA for the preparation of a medicament for treating such diseases and conditions. In this embodiment, the RTP801 inhibitor comprises a polynucleotide comprising consecutive nucleotides having a sequence comprising an antisense sequence for the sequence set forth in Figure 1 (section with identification number: 1). In addition, the RTP801 inhibitor may be an expression vector comprising a polynucleotide having a sequence that is an antisense sequence for the sequence set forth in Figure 1 (sec. With ID no .: 1). In addition, the RTP801 inhibitor is an siRNA, optionally, siRNA numbers: 14, 22, 23, 25, 27; 39, from Table A.

Así, de acuerdo con la información descrita en la presente descripción, el inhibidor de RTP801 a usarse con cualquiera de los métodos descritos en la presente, en cualquiera de los usos descritos en la presente y en cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente, pueden seleccionarse del grupo que consiste en una molécula ARNip, un vector que comprende una molécula ARNip, un vector que puede expresar una molécula ARNip y cualquier molécula que se procese endógenamente en una molécula ARNip. Como se detalla en la presente, dicha molécula ARNip es preferentemente un ARNip que comprende nucleótidos consecutivos con una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias sec. con núm. de ident.: 66, 74, 75, 77, 79 y 91 que se exponen en la Tabla A y particularmente, los ARNip núms:14, 22, 23, 25, 27, 39, de la Tabla A. Thus, in accordance with the information described in the present description, the RTP801 inhibitor to be used with any of the methods described herein, in any of the uses described herein and in any of the pharmaceutical compositions described herein, they can be selected from the group consisting of an siRNA molecule, a vector comprising an siRNA molecule, a vector that can express an siRNA molecule and any molecule that is endogenously processed into an siRNA molecule. As detailed herein, said siRNA molecule is preferably an siRNA comprising consecutive nucleotides with an identical sequence to any one of the sec sequences. with no. ID: 66, 74, 75, 77, 79 and 91, which are set out in Table A and particularly, the siRNA numbers: 14, 22, 23, 25, 27, 39, of Table A.

"Trastorno respiratorio" se refiere a las afecciones, enfermedades o síndromes del sistema respiratorio que incluyen pero sin limitarse a trastornos pulmonares de todo tipo incluyendo la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, entre otros. El enfisema y la bronquitis crónica pueden ocurrir como parte de la COPD o independientemente. "Respiratory disorder" refers to conditions, diseases or syndromes of the respiratory system that include but are not limited to pulmonary disorders of all types including chronic obstructive pulmonary disease (COPD), emphysema, chronic bronchitis, asthma and lung cancer, among others. . Emphysema and chronic bronchitis can occur as part of COPD or independently.

"Trastorno microvascular" se refiere a cualquier afección que afecte los capilares microscópicos y linfáticos, particularmente las enfermedades vasoespásticas, enfermedades vasculíticas y enfermedades oclusivas linfáticas. Los ejemplos de trastornos microvasculares incluyen, entre otros: enfermedades oculares tales como Amaurosis Fugax (embólicas o secundarias a SLE), síndrome apla, deficiencia de Prot CS y ATIII, patologías microvasculares causadas por el uso del fármaco IV, disproteinemia, arteritis temporal, neuropatía óptica isquémica anterior, neuritis óptica (primaria o secundaria a enfermedades autoinmunes), glaucoma, síndrome de von hippel lindau, trastornos de la córnea, rechazo al trasplante de córnea, cataratas, enfermedad de Eales, angiits en rama escarchada, operación de cerclaje, uveitis que incluye pars planitis, melanoma coroideo, hemangioma coroideo, aplasia del nervio óptico; afecciones de la retina tales como oclusión de la arteria de la retina, oclusión de la vena de la retina, retinopatía del prematuro, retinopatía por HIV, retinopatía de Purtscher, retinopatía de vasculitis sistémica y enfermedades autoinmunes, retinopatía diabética, retinopatía hipertensiva, retinopatía por radiación, oclusión de la vena o arteria retinal ramal, vasculitis retinal idiopática, aneurismas, neuroretinitis, embolización retinal, necrosis retinal aguda, "Microvascular disorder" refers to any condition that affects microscopic and lymphatic capillaries, particularly vasospastic diseases, vasculitic diseases and lymphatic occlusive diseases. Examples of microvascular disorders include, but are not limited to: eye diseases such as Amaurosis Fugax (embolic or secondary to SLE), apla syndrome, Prot CS and ATIII deficiency, microvascular diseases caused by the use of the IV drug, dysproteinemia, temporal arteritis, neuropathy anterior ischemic optics, optic neuritis (primary or secondary to autoimmune diseases), glaucoma, von hippel lindau syndrome, corneal disorders, cornea transplant rejection, cataracts, Eales disease, frosty branch angiits, cerclage operation, uveitis which includes pars planitis, choroidal melanoma, choroidal hemangioma, optic nerve aplasia; Retinal conditions such as retinal artery occlusion, retinal vein occlusion, retinopathy of prematurity, HIV retinopathy, Purtscher retinopathy, retinopathy of systemic vasculitis and autoimmune diseases, diabetic retinopathy, hypertensive retinopathy, retinopathy radiation, vein occlusion or branch retinal artery, idiopathic retinal vasculitis, aneurysms, neuroretinitis, retinal embolization, acute retinal necrosis,

retinocoroidopatía de Birdshot, desprendimiento de la retina de larga duración; afecciones sistémicas tales como Diabetes mellitus, retinopatía diabética (DR), patologías microvasculares relacionadas con la diabetes (como se detalla en la presente), síndromes de hiperviscosidad, síndromes del arco aórtico y síndromes isquémicos oculares, fístula carótido-cavernosa, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, arteriolitis con autoanticuerpo SS-A, vasculitis hemorrágica multifocal aguda, vasculitis resulante de la infección, vasculitis resultante de la enfermedad de Behçet, sarcoidosis, coagulopatías, neuropatías, nefropatías, enfermedades microvasculares del riñón, y afecciones microvasculares isquémicas, entre otras Birdshot retinocoroidopathy, long-term retinal detachment; systemic conditions such as diabetes mellitus, diabetic retinopathy (DR), diabetes-related microvascular diseases (as detailed herein), hyperviscosity syndromes, aortic arch syndromes and ocular ischemic syndromes, carotid-cavernous fistula, multiple sclerosis, lupus systemic erythematosus, arteriolitis with SS-A autoantibody, acute multifocal haemorrhagic vasculitis, vasculitis resulting from infection, vasculitis resulting from Behçet's disease, sarcoidosis, coagulopathies, neuropathies, nephropathies, microvascular diseases of the kidney, and other ischemic microvascular diseases, among others

Los trastornos microvasculares pueden comprender un elemento neovascular. El término "trastorno neovascular" se refiere a aquellas afecciones donde la formación de los vasos sanguíneos (neovascularización) es nociva para el paciente. Los ejemplos de neovascularización ocular incluyen: enfermedades de la retina (retinopatía diabética, edema macular diabético, glaucoma crónico, desprendimiento de la retina, y retinopatía de células falciformes); rubeosis iridis; vitreo-retinopatía proliferativa; enfermedades inflamatorias; uveitis crónica; neoplasmos (retinoblastoma, pseudoglioma y melanoma); iridociclitis heterocrómica de Fuchs; glaucoma neovascular; neovascularización de la cornea (hipoplasia inflamatoria, de transplante y de desarrollo del iris); neovascularización después de una vitrectomía y lensectomía combinada; enfermedades vasculares (isquemia de la retina, insuficiencia coroideo vascular, trombosis coroidea y isquemia de la arteria carótida); neovascularización del nervio óptico; y neovascularización debido a la penetración del ojo o lesión ocular contundente. Todas estas afecciones neovasculares pueden tratarse usando los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención. Microvascular disorders may comprise a neovascular element. The term "neovascular disorder" refers to those conditions where blood vessel formation (neovascularization) is harmful to the patient. Examples of ocular neovascularization include: retinal diseases (diabetic retinopathy, diabetic macular edema, chronic glaucoma, retinal detachment, and sickle cell retinopathy); iridis rubeosis; proliferative vitreo-retinopathy; inflammatory diseases; chronic uveitis; neoplasms (retinoblastoma, pseudoglioma and melanoma); Fuchs heterochromic iridocyclitis; neovascular glaucoma; neovascularization of the cornea (inflammatory hypoplasia, transplantation and iris development); neovascularization after vitrectomy and combined lensectomy; vascular diseases (retinal ischemia, choroidal vascular insufficiency, choroidal thrombosis and carotid artery ischemia); neovascularization of the optic nerve; and neovascularization due to penetration of the eye or blunt eye injury. All of these neovascular conditions can be treated using the compounds and pharmaceutical compositions of the present invention.

"Enfermedad ocular" se refiere a las afecciones, enfermedades o síndromes de los ojos que incluyen pero sin limitarse a cualquier afección que involucre la neovascularización coroidea (CNV), AMD húmeda y seca, síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, rupturas en la membrana de Bruch, degeneración miope, tumores oculares, enfermedades degenerativas de la retina y oclusión de la vena de la retina (RVO). Algunas afecciones descritas en la presente, tal como DR, que pueden tratarse con los compuestos ARNip de la presente invención se han considerado como un trastorno microvascular y una enfermedad ocular, o ambos,bajo las definiciones presentadas en la presente. "Eye disease" refers to conditions, diseases or syndromes of the eyes that include but are not limited to any condition that involves choroidal neovascularization (CNV), wet and dry AMD, ocular histoplasmosis syndrome, angioid striae, membrane ruptures Bruch, myopic degeneration, eye tumors, degenerative diseases of the retina and occlusion of the retina vein (RVO). Some conditions described herein, such as DR, that can be treated with the siRNA compounds of the present invention have been considered as a microvascular disorder and an eye disease, or both, under the definitions presented herein.

"Gen RTP801" se refiere al marco de lectura abierto de la secuencia que codifica RTP801, como se muestra en la Figura 1 (sec. con núm. de ident.:1), o cualquier secuencia homóloga de esta preferentemente con al menos 70% de identidad, mas preferentemente 80% de identidad, aún con mayor preferencia 90% o 95% de identidad. Esto abarca cualquier secuencia derivada de la sec. con núm. de ident.:1 la que se sometió a mutaciones, alteraciones o modificaciones como se describe en la presente. Así, en una modalidad preferida el RTP801 es codificado por una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 1. Está además dentro de la presente invención que los ácido nucleicos de acuerdo con la presente invención son sólo complementarios e idénticos, respectivamente, a una parte del ácido nucleico que codifica para RTP801 cuando, preferentemente, el primer tramo y la primera hebra es típicamente más corta que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Debe conocerse además que basado en la secuencia de aminoácido de RTP801 cualquier secuencia de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácido puede ser percibida por una persona con experiencia en la técnica basado en el código genético. Sin embargo, debido al modo de acción asumido de los ácido nucleicos de acuerdo con la presente invención, es más preferido que el ácido nucleico que codifica para RTP801, preferentemente el ARNm de este, es uno presente en el organismo, tejido y/o célula, respectivamente, donde la expresión de RTP801 se va a reducir. "RTP801 gene" refers to the open reading frame of the sequence encoding RTP801, as shown in Figure 1 (sec. With identification number: 1), or any homologous sequence thereof preferably with at least 70% of identity, more preferably 80% identity, even more preferably 90% or 95% identity. This encompasses any sequence derived from sec. with no. of ident.:1 which underwent mutations, alterations or modifications as described herein. Thus, in a preferred embodiment, RTP801 is encoded by a nucleic acid sequence according to sec. with no. of ident .: 1. It is further within the present invention that the nucleic acids according to the present invention are only complementary and identical, respectively, to a part of the nucleic acid encoding RTP801 when, preferably, the first section and the First strand is typically shorter than the nucleic acid according to the present invention. It should also be known that based on the RTP801 amino acid sequence any nucleic acid sequence encoding the amino acid sequence can be perceived by a person skilled in the art based on the genetic code. However, due to the assumed mode of action of the nucleic acids according to the present invention, it is more preferred that the nucleic acid encoding RTP801, preferably the mRNA thereof, is one present in the organism, tissue and / or cell , respectively, where the expression of RTP801 is to be reduced.

"Polipéptido RTP801" se refiere al polipéptido del gen RTP801, y se entiende que incluye, para los propósitos de la presente invención, los términos "RTP779", "REDD1", "Ddit4", "FLJ20500", "Dig2", y "PRF1", derivados de cualquier organismo, opcionalmente el hombre, variantes y fragmentos de empalme de estos que mantienen una actividad biológica, y homólogos de estos, preferentemente con al menos 70%, con mayor preferencia al menos 80%, aún con mayor preferencia al menos 90% o 95% de homología a estos. Adicionalmente, se entiende que este término abarca los polipéptidos resultantes de alteraciones menores en la secuencia codificante de RTP801, tales como, entre otros, mutuaciones puntuales, sustituciones, deleciones e inserciones que pueden causar una dfferencia en unos pocos aminoácidos entre el polipéptido resultante y el RTP801 de de origen natural. Los polipéptidos codificados por las secuencias de ácido nucleico que se unen a la secuencia codificante o secuencia genómica de RTP801 bajo condiciones de hibridación muy rigurosas, que se conocen bien en la materia (por ejemplo, Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988), actualizado en 1995 y 1998), son abarcadas también por este término. El RTP801 químicamente modificado o los fragmentos de RTP801 químicamente modificados se incluyen además en el término, siempre que la actividad biológica se mantenga. El RTP801 tiene o comprende preferentemente una secuencia de aminoácido de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 2. Se conoce que pueden haber diferencias en la secuencia de aminoácidos entre varios tejidos de un organismo y entre diferentes organismos de una especie o entre diferentes especies a las cuales el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede aplicarse en varias modalidades de la presente invención. Sin embargo, basado en la enseñanza técnica proporcionada en la presente, la secuencia respectiva puede tomarse en consideración correspondientemente cuando se diseña cualquiera de los ácido nucleicos de acuerdo con la presente invención. Los fragmentos particulares de RTP801 incluyen los aminoácidos 1-50, 51-100,101-150, 151-200 y 201-232 de la secuencia mostrada en la Figura "RTP801 polypeptide" refers to the RTP801 gene polypeptide, and is understood to include, for the purposes of the present invention, the terms "RTP779", "REDD1", "Ddit4", "FLJ20500", "Dig2", and " PRF1 ", derived from any organism, optionally man, variants and splicing fragments thereof that maintain a biological activity, and homologs thereof, preferably with at least 70%, more preferably at least 80%, even more preferably at minus 90% or 95% homology to these. Additionally, it is understood that this term encompasses the polypeptides resulting from minor alterations in the RTP801 coding sequence, such as, inter alia, point mutulations, substitutions, deletions and insertions that may cause a difference in a few amino acids between the resulting polypeptide and the RTP801 of natural origin. Polypeptides encoded by nucleic acid sequences that bind the coding sequence or genomic sequence of RTP801 under very stringent hybridization conditions, which are well known in the art (e.g., Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988), updated in 1995 and 1998), are also covered by this term. Chemically modified RTP801 or chemically modified RTP801 fragments are further included in the term, provided that the biological activity is maintained. RTP801 preferably has or comprises an amino acid sequence according to sec. with no. of ident .: 2. It is known that there may be differences in the amino acid sequence between various tissues of an organism and between different organisms of a species or between different species to which the nucleic acid according to the present invention can be applied in several modalities of the present invention. However, based on the technical teaching provided herein, the respective sequence can be correspondingly considered when designing any of the nucleic acids in accordance with the present invention. Particular fragments of RTP801 include amino acids 1-50, 51-100,101-150, 151-200 and 201-232 of the sequence shown in Figure

2. Otros fragmentos particulares de RTP801 incluyen los aminoácidos 25-74, 75-124, 125-174, 175-224 y 225-232 de la secuencia mostrada en la Figura 2. 2. Other particular fragments of RTP801 include amino acids 25-74, 75-124, 125-174, 175-224 and 225-232 of the sequence shown in Figure 2.

RTP801 como se usa en la presente es una proteína descrita, entre otros, en WO 99/09046. RTP801 la cual se refiere además como RTP801, ha sido descrita como un objetivo transcriptional de HIF-1a por Shoshani T y otros (Shoshani y otros, 2002, Mol Cell Biol, 22, 2283-93). Además, el estudio de Ellisen y otros (Ellisen y otros, Mol Cell, 10, 995-1005) identificó a RTP801 como un gen de respuesta al daño del ADN dependiente de p53 y como un gen dependiente de p63 involucrado en la diferenciación epitelial. Además, el RTP801 imita el patrón específico de tejido del miembro p63 de la familia p53, es efectivo similar a o adicionalmente a TP 63, es un inhibidor para la diferenciación in vitro, y está involucrado en la regulación de especies de oxígeno reactivas. Además de eso, RTP801 es sensible al factor inducible por hipoxia 1 (HIF-1) del factor de transcripción sensible a la hipoxia y típicamente se regula ascendentemente durante la hipoxia in vitro e in vivo en un modelo animal de accidente cerebro vascular isquémico. El RTP801 parece funcionar en la regulación de especies de oxígeno reactivas (ROS) y los niveles de ROS y la sensibilidad reducida al estrés oxidativo aumentan después de la expresión ectópica de RTP801 (Ellisen y otros 2002, supra; Soshani y otros 2002, supra). Preferentemente, RTP801 es una proteína RTP801 biológicamente activa que exhibe preferentemente al menos una de esas características, preferiblemente dos o más y con la máxima preferencia todas y cada una de esas características. Un gen relacionado con RTP801 es RT801L, referido además como "REDD2", fue descubierto por los inventores de la presente invención. El RTP801L es homólogo a RTP801, y reacciona de manera similar al estrés oxidativo; y así, RTP801L posee probablemente algunas funciones similares a RTP801. RTP801 as used herein is a protein described, among others, in WO 99/09046. RTP801, which is also referred to as RTP801, has been described as a transcriptional objective of HIF-1a by Shoshani T et al. (Shoshani et al., 2002, Mol Cell Biol, 22, 2283-93). In addition, the study by Ellisen et al. (Ellisen et al., Mol Cell, 10, 995-1005) identified RTP801 as a p53-dependent DNA damage response gene and as a p63-dependent gene involved in epithelial differentiation. In addition, RTP801 mimics the specific tissue pattern of the p63 member of the p53 family, is effective similar to or additionally to TP 63, is an inhibitor for in vitro differentiation, and is involved in the regulation of reactive oxygen species. In addition to that, RTP801 is sensitive to hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) of hypoxia-sensitive transcription factor and is typically upregulated during hypoxia in vitro and in vivo in an animal model of ischemic stroke. RTP801 appears to work in the regulation of reactive oxygen species (ROS) and ROS levels and reduced sensitivity to oxidative stress increase after ectopic expression of RTP801 (Ellisen and others 2002, supra; Soshani and others 2002, supra) . Preferably, RTP801 is a biologically active RTP801 protein that preferably exhibits at least one of those characteristics, preferably two or more, and most preferably each and every one of those characteristics. A gene related to RTP801 is RT801L, further referred to as "REDD2", was discovered by the inventors of the present invention. RTP801L is homologous to RTP801, and reacts similarly to oxidative stress; and so, RTP801L probably has some functions similar to RTP801.

Sin estar atados a una teoría, RTP801 es una proteína inducible por estrés (que responde a la hipoxia, estrés oxidativo, estrés térmico, estrés ER) es un factor que actúa en sintonía con la respuesta de la célula al desbalance de energía. Como tal, es un objetivo adecuado para el tratamiento de cualquier enfermedad donde las células deben rescatarse de la apoptosis debido a las condiciones estresantes (por ejemplo, enfermedades acompañadas por la muerte de células normales) o donde las células, que se adaptan a las condiciones estresantes debido a los cambios en la expresión de RTP801 (por ejemplo, células de cáncer), deben eliminarse. En el último caso, RTP801 puede ser observado como un factor de supervivencia para las células de cáncer y sus inhibidores pueden tratar el cáncer como una monoterapia o como fármacos sensibles en combinación con quimioterapia o radioterapia. Without being tied to a theory, RTP801 is a stress-inducible protein (which responds to hypoxia, oxidative stress, thermal stress, ER stress) is a factor that acts in tune with the cell's response to energy imbalance. As such, it is a suitable target for the treatment of any disease where cells must be rescued from apoptosis due to stressful conditions (for example, diseases accompanied by the death of normal cells) or where cells, which adapt to conditions stressors due to changes in the expression of RTP801 (for example, cancer cells), must be removed. In the latter case, RTP801 can be observed as a survival factor for cancer cells and their inhibitors can treat cancer as a monotherapy or as sensitive drugs in combination with chemotherapy or radiotherapy.

El término "polinucleótido" se refiere a cualquier molécula compuesta por nucleótidos de ADN, nucleótidos de ARN o una combinación de los dos tipos, es decir, que comprende dos o más bases guanidina, citosina, timidina, adenina, uracilo o inosina, entre otros. Un polinucleótido puede incluir nucleótidos naturales, nucleótidos químicamente modificados y nucleótidos sintéticos, o análogos químicos de estos. El término incluye los "oligonucleótidos" y abarca los "ácido nucleicos". The term "polynucleotide" refers to any molecule composed of DNA nucleotides, RNA nucleotides or a combination of the two types, that is, comprising two or more guanidine bases, cytosine, thymidine, adenine, uracil or inosine, among others . A polynucleotide may include natural nucleotides, chemically modified nucleotides and synthetic nucleotides, or chemical analogs thereof. The term includes "oligonucleotides" and encompasses "nucleic acids."

El término "aminoácido" se refiere a una molécula que consiste en uno cualquiera de los 20 aminoácidos de de origen natural, aminoácidos que han sido químicamente modificados (ver más abajo), o aminoácidos sintéticos. The term "amino acid" refers to a molecule consisting of any one of the 20 naturally occurring amino acids, amino acids that have been chemically modified (see below), or synthetic amino acids.

El término "polipéptido" se refiere a una molécula compuesta por dos o más residuos de aminoácidos. El término incluye péptidos, polipéptidos, proteínas y peptidomiméticos. The term "polypeptide" refers to a molecule composed of two or more amino acid residues. The term includes peptides, polypeptides, proteins and peptidomimetics.

Un "peptidomimético" es un compuesto que contiene elementos estructurales no peptídicos que es capaz de imitar las acciones biológicas de un péptido parental natural. Algunas características del péptido clásico tales como enlaces peptídicos enzimáticamente escindible no están presentes normalmente en un peptidomimético. A "peptidomimetic" is a compound that contains non-peptide structural elements that is capable of mimicking the biological actions of a natural parental peptide. Some characteristics of the classic peptide such as enzymatically cleavable peptide bonds are not normally present in a peptidomimetic.

Por el término "péptido negativo dominante" se entiende un polipéptido codificado por un fragmento de ADNc que codifica para una parte de una proteína (ver Herskowitz I.: Functional inactivation of genes by dominant negative mutations. Nature. 1987 sep 17-23;329(6136):219-22. Review; Roninson IB y otros, Genetic suppressor elements: new tools for molecular oncology--thirteenth Cornelius P. Rhoads Memorial Award Lecture. Cancer Res. 1995 sep 15;55(18):4023). Este péptido puede tener una función diferente de la proteína de la que se deriva. Este puede interactuar con la proteína completa e inhibe su actividad o puede interactuar con otras proteínas e inhibir su actividad en respuesta a la proteína de longitud completa (parental). Dominante negativo significa que el péptido es capaz de superar la proteína natural parental e inhibir su actividad para dar a la célula una característica diferente, tal como resistencia o sensibilización a la muerte o cualquier fenotipo celular de interés. Por intervención terapéutica el péptido en sí mismo puede suministrarse como el ingrediente activo de una composición farmacéutica, o el ADNc se puede suministrar a la célula utilizando métodos conocidos. By the term "dominant negative peptide" is meant a polypeptide encoded by a cDNA fragment encoding a part of a protein (see Herskowitz I .: Functional inactivation of genes by dominant negative mutations. Nature. 1987 Sep 17-23; 329 (6136): 219-22 Review; Roninson IB et al., Genetic suppressor elements: new tools for molecular oncology - thirteenth Cornelius P. Rhoads Memorial Award Lecture. Cancer Res. 1995 Sep 15; 55 (18): 4023). This peptide may have a different function from the protein from which it is derived. This may interact with the complete protein and inhibit its activity or may interact with other proteins and inhibit its activity in response to the full-length (parental) protein. Negative dominant means that the peptide is capable of overcoming the natural parental protein and inhibiting its activity to give the cell a different characteristic, such as resistance or sensitization to death or any cellular phenotype of interest. By therapeutic intervention the peptide itself can be supplied as the active ingredient of a pharmaceutical composition, or the cDNA can be delivered to the cell using known methods.

Preparación de péptidos y polipéptidos Preparation of peptides and polypeptides

Los polipéptidos se pueden producir mediante varios métodos, por ejemplo: Polypeptides can be produced by several methods, for example:

1) Sintéticamente: 1) Synthetically:

Los polipéptidos sintéticos se pueden preparar por medio del uso de una máquina comercialmente disponible, por medio del uso de la secuencia conocida de RTP801 o una porción de la misma. Synthetic polypeptides can be prepared by using a commercially available machine, by using the known sequence of RTP801 or a portion thereof.

2) Métodos recombinantes: 2) Recombinant methods:

Un método preferido de fabricación de los polipéptidos RTP801 de fragmentos de los mismos es clonar un polinucleótido que comprende el ADNc del gen de RTP801 en un vector de expresión y cultivar la célula que alberga el vector de manera que exprese el polipéptido codificado, y después purificar el polipéptido resultante, todo lo cual se lleva a cabo usando métodos conocidos en la materia como se describe en, por ejemplo, Marshak y otros, "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manual." CSHL Press (1996). Además, ver Bibl Haematol. 1965;23:1165-74 Appl Microbiol. 1967 jul;15(4):851-6; Can J Biochem. 1968 may; 46(5): 441-4; Biochemistry. 1968 jul; 7(7):2574-80; Arch Biochem Biophys. 1968 sep 10;126(3): 746-72; Biochem Biophys Res Commun. 1970 feb 20; 38(4): 825-30).). A preferred method of manufacturing the RTP801 polypeptides from fragments thereof is to clone a polynucleotide comprising the RTP801 gene cDNA into an expression vector and culturing the cell that houses the vector so that it expresses the encoded polypeptide, and then purify the resulting polypeptide, all of which is carried out using methods known in the art as described in, for example, Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manual." CSHL Press (1996). Also, see Bibl Haematol. 1965; 23: 1165-74 Appl Microbiol. 1967 Jul; 15 (4): 851-6; Can J Biochem. 1968 may; 46 (5): 441-4; Biochemistry 1968 jul; 7 (7): 2574-80; Arch Biochem Biophys. 1968 Sep 10; 126 (3): 746-72; Biochem Biophys Res Commun. 1970 Feb 20; 38 (4): 825-30).).

El vector de expresión puede incluir un promotor para controlar la transcripción del material heterólogo y puede ser un promotor constitutivo o inducible para permitir la transcripción selectiva. Se pueden incluir opcionalmente potenciadores que pueden requerirse para obtener los niveles de transcripción necesarios. El vehículo de expresión también puede incluir un gen de selección. Los vectores se pueden introducir en células o tejidos por cualquiera de una variedad de métodos que se conocen dentro de la materia. Tales métodos se pueden encontrar generalmente descritos en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992), en Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley y Sons, Baltimore, Maryland (1989), Vega y otros, Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor, MI (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston MA (1988) y Gilboa y otros. (1986). The expression vector may include a promoter to control transcription of the heterologous material and may be a constitutive or inducible promoter to allow selective transcription. Enhancers that may be required to obtain the necessary transcription levels may optionally be included. The expression vehicle can also include a selection gene. Vectors can be introduced into cells or tissues by any of a variety of methods that are known within the field. Such methods can be found generally described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992), in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989), Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor, MI (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston MA (1988) and Gilboa et al. (1986).

3) Purificación a partir de fuentes naturales: 3) Purification from natural sources:

El polipéptido RTP801, o fragmentos de este de origen natural, se pueden purificar a partir de fuentes naturales (tales como tejidos) por medio del uso de muchos métodos conocidos por alguien con experiencia ordinaria en la materia, tales como por ejemplo: inmuno-precipitación con un anticuerpo anti-RTP801, o cromatografía de afinidad con cualquier molécula que se conoce se une a RTP801 unida a una matriz. The RTP801 polypeptide, or fragments thereof of natural origin, can be purified from natural sources (such as tissues) through the use of many methods known to someone with ordinary experience in the field, such as, for example: immuno-precipitation with an anti-RTP801 antibody, or affinity chromatography with any known molecule binds to RTP801 bound to a matrix.

La purificación de proteínas se practica como se conoce en la materia como se describe en, por ejemplo, Marshak y otros, "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manual."" CSHL Press (1996). Protein purification is practiced as is known in the art as described in, for example, Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manual." "CSHL Press (1996).

Por "efecto biológico de RTP801" o "actividad biológica de RTP801" se entiende el efecto de RTP801 en los trastornos de las vías respiratorias, que puede ser directo o indirecto, e incluye, sin limitarse por la teoría, el efecto de RTP801 sobre la apoptosis de las células alveolares que se induce por condiciones de hipoxia o hiperoxia. El efecto indirecto incluye, pero no se limita a, RTP801 que se une a o tiene un efecto sobre una de varias moléculas, las cuales se involucran en una cascada de transducción de la señal que resulta en la apoptosis. "Biological effect of RTP801" or "biological activity of RTP801" means the effect of RTP801 on respiratory disorders, which may be direct or indirect, and includes, without being limited by theory, the effect of RTP801 on Alveolar cell apoptosis that is induced by hypoxia or hyperoxia conditions. The indirect effect includes, but is not limited to, RTP801 that binds to or has an effect on one of several molecules, which are involved in a signal transduction cascade that results in apoptosis.

"Apoptosis" se refiere a un tipo fisiológico de muerte celular que resulta de la activación de algunos mecanismos celulares, es decir, la muerte es controlada por la maquinaria de la célula. La apoptosis puede ser, por ejemplo, el resultado de la activación de la maquinaria de la célula por un desencadenante externo, por ejemplo, una citoquina o un anticuerpo anti-FAS, lo que conduce a la muerte celular o por una señal interna. El término "muerte celular programada" también se puede usar de manera intercambiable con "apoptosis". "Apoptosis" refers to a physiological type of cell death that results from the activation of some cellular mechanisms, that is, death is controlled by the cell's machinery. Apoptosis can be, for example, the result of the activation of the machinery of the cell by an external trigger, for example, a cytokine or an anti-FAS antibody, which leads to cell death or by an internal signal. The term "programmed cell death" can also be used interchangeably with "apoptosis."

"Enfermedad relacionada con la apoptosis" se refiere a una enfermedad cuya etiología está relacionada, ya sea total o parcialmente con el proceso de la apoptosis. La enfermedad puede causarse por un mal funcionamiento del proceso de apoptosis (tal como en el cáncer o una enfermedad autoinmune) o por la sobreactividad del proceso de apoptosis (tal como en ciertas enfermedades neurodegenerativas). Muchas enfermedades que implican el RTP801 son enfermedades relacionadas con la apoptosis. Por ejemplo, la apoptosis es un mecanismo importante en la AMD seca, en la cual tiene lugar la atrofia lenta de las células fotorreceptoras y del epitelio de pigmento, principalmente en la región central de la retina (macular). La apoptosis neurorretiniana es también un mecanismo importante en la retinopatía diabética. "Disease related to apoptosis" refers to a disease whose etiology is related, either totally or partially, to the process of apoptosis. The disease can be caused by a malfunction of the apoptosis process (such as in cancer or an autoimmune disease) or by the overactivity of the apoptosis process (such as in certain neurodegenerative diseases). Many diseases that involve RTP801 are diseases related to apoptosis. For example, apoptosis is an important mechanism in dry AMD, in which slow atrophy of photoreceptor cells and pigment epithelium occurs, mainly in the central region of the retina (macular). Neuroretinal apoptosis is also an important mechanism in diabetic retinopathy.

Un "inhibidor" es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad de un gen o del producto de dicho gen en un grado suficiente para conseguir un efecto biológico o fisiológico deseado. Un "inhibidor de RTP801" es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad del gen RTP801 o del producto génico RTP801, particularmente del gen RVP801 o del producto génico humano. Tales inhibidores incluyen sustancias que afectan la transcripción o traducción del gen, así como sustancias que afectan la actividad del producto génico. Un inhibidor de RTP801 también puede ser un inhibidor del promotor RTP801. Los ejemplos de tales inhibidores pueden incluir, entre otros: polinucleótidos tales como fragmentos AS, ARNip o vectores que los contienen; polipéptidos tales como los negativos dominantes, anticuerpos y enzimas; ARN catalíticos, tales como ribozimas, y moléculas químicas con un bajo peso molecular por ejemplo un peso molecular inferior a 2000 daltons. Los inhibidores específicos de RTP801 se dan más abajo. An "inhibitor" is a compound that is capable of inhibiting the activity of a gene or the product of said gene to a degree sufficient to achieve a desired biological or physiological effect. An "RTP801 inhibitor" is a compound that is capable of inhibiting the activity of the RTP801 gene or the RTP801 gene product, particularly the RVP801 gene or the human gene product. Such inhibitors include substances that affect the transcription or translation of the gene, as well as substances that affect the activity of the gene product. An inhibitor of RTP801 can also be an inhibitor of the RTP801 promoter. Examples of such inhibitors may include, among others: polynucleotides such as AS fragments, siRNA or vectors containing them; polypeptides such as dominant negatives, antibodies and enzymes; Catalytic RNAs, such as ribozymes, and chemical molecules with a low molecular weight, for example a molecular weight less than 2000 daltons. Specific inhibitors of RTP801 are given below.

"Vector de expresión" se refiere a un vector que tiene la capacidad de incorporar y expresar fragmentos de ADN heterólogos en una célula ajena. Muchos vectores de expresión en procariotas y eucariotas se conocen y/o están comercialmente disponibles. La selección de vectores de expresión apropiados está dentro del conocimiento de los que tienen experiencia en la materia. "Expression vector" refers to a vector that has the ability to incorporate and express heterologous DNA fragments in a foreign cell. Many expression vectors in prokaryotes and eukaryotes are known and / or commercially available. The selection of appropriate expression vectors is within the knowledge of those who have experience in the field.

Los términos "compuesto químico", "molécula pequeña", "molécula química", "molécula química pequeña" y "compuesto The terms "chemical compound", "small molecule", "chemical molecule", "small chemical molecule" and "compound

químico pequeño" se usan indistintamente en la presente y se entiende que se refieren a porciones químicas de cualquier tipo particular que pueden producirse sintéticamente u obtenerse a partir de fuentes naturales y usualmente tienen un peso molecular de menos de 2000 daltons, menos de 1000 daltons o incluso menos de 600 daltons. Small chemical "are used interchangeably herein and it is understood that they refer to chemical portions of any particular type that can be produced synthetically or obtained from natural sources and usually have a molecular weight of less than 2000 daltons, less than 1000 daltons or even less than 600 daltons.

La presente invención también se refiere a ácidos nucleicos funcionales que comprenden una estructura de hebra doble, su uso para la fabricación de un medicamento, una composición farmacéutica que comprende tales ácidos nucleicos funcionales y un método para el tratamiento de un paciente. La hipoxia se reconoce como un elemento clave en el mecanismo patogénico de un buen número de enfermedades tales como el accidente cerebro vascular, el enfisema y el infarto las cuales se asocian con disponibilidad de oxígeno sub-óptima y respuestas a las condiciones de hipoxia que dañan los tejidos. En los tejidos de crecimiento rápido, que incluyen el tumor, una disponibilidad de oxígeno sub-óptima se compensa por una neo-angiogénesis indeseada. Por lo tanto, al menos en caso de enfermedades de cáncer, el crecimiento de la vasculatura no es deseado. The present invention also relates to functional nucleic acids comprising a double strand structure, its use for the manufacture of a medicament, a pharmaceutical composition comprising such functional nucleic acids and a method for treating a patient. Hypoxia is recognized as a key element in the pathogenic mechanism of a good number of diseases such as stroke, emphysema and heart attack which are associated with sub-optimal oxygen availability and responses to damaging hypoxia conditions. the tissues. In fast-growing tissues, which include the tumor, a sub-optimal oxygen availability is compensated by an unwanted neo-angiogenesis. Therefore, at least in the case of cancer diseases, vasculature growth is not desired.

En vista de esto, la inhibición de la angiogénesis y el crecimiento vascular, respectivamente, se somete a intensa investigación. Ya hoy algunos compuestos están disponibles los cuales inhiben la angiogénesis y el crecimiento vascular indeseados. Algunos de los compuestos más destacados son los que inhibiten el VEGF y el receptor del VEGF. En ambos casos, el efecto de VEGF se evita por el bloqueo del VEGF como tal, por ejemplo, usando un anticuerpo dirigido contra el VEGF tal como el buscado por Genentech's AVASTIN (AB monoclonal específico para VEGF) (Ferrara N.; Endocr Rev. 2004 ago;25(4):581-611), o bloqueando el receptor correspondiente, es decir, el receptor VEGF (Traxler P; Cancer Res. 2004 jul 15;64(14):4931-41; o Stadler WM y otros, Clin Cancer Res. 2004 may 15;10(10):3365-70). In view of this, the inhibition of angiogenesis and vascular growth, respectively, is subject to intense investigation. Already today some compounds are available which inhibit unwanted angiogenesis and vascular growth. Some of the most prominent compounds are those that inhibit VEGF and the VEGF receptor. In both cases, the effect of VEGF is avoided by blocking VEGF as such, for example, using an antibody directed against VEGF such as that sought by Genentech's AVASTIN (AB monoclonal specific for VEGF) (Ferrara N .; Endocr Rev. Aug 2004; 25 (4): 581-611), or blocking the corresponding receptor, that is, the VEGF receptor (Traxler P; Cancer Res. 2004 Jul 15; 64 (14): 4931-41; or Stadler WM et al. , Clin Cancer Res. 2004 May 15; 10 (10): 3365-70).

Sin embargo, como la angiogénesis y el crecimiento de la vasculatura es un proceso muy básico y vital en cualquier animal y ser humano, el efecto de este tipo de compuesto tiene que enfocarse al sitio particular donde la angiogénesis y el crecimiento vascular no se desea realmente lo que hace adecuado dirigir o suministrar un asunto crítico en relación con este tipo de aproximación terapéutica. However, since angiogenesis and vasculature growth is a very basic and vital process in any animal and human being, the effect of this type of compound has to focus on the particular site where angiogenesis and vascular growth is not really desired. which makes it appropriate to direct or provide a critical issue in relation to this type of therapeutic approach.

Es así un objectivo de la presente invención proporcionar otros medios para el tratamiento de enfermedades que involucran el crecimiento indeseado de la vasculatura y la angiogénesis, respectivamente. It is thus an object of the present invention to provide other means for the treatment of diseases that involve the unwanted growth of the vasculature and angiogenesis, respectively.

Por "ARN interferente pequeño " (ARNip) se entiende una molécula de ARN que disminuye o silencia (previene) la expresión de un gen/ ARNm de su contraparte celular endógena. El término se entiende que abarca el "ARN de interferencia" (ARNi). El ARN de interferencia (ARNi) se refiere al proceso de silenciamiento génico post transcripcional específico de secuencia en mamíferos mediado por los ARN interferentes pequeños (ARNip) (Fire y otros, 1998, Nature 391, 806). El proceso correspondiente en plantas se refiere comúnmente como silenciamiento génico post transcripcional específico o silenciamiento de ARN y serefiere además como extinción en hongos. La respuesta del ARN de interferencia puede caracterizar un complejo de endonucleasa que contiene un ARNip, comúnmente referido como un complejo silenciador inducido por ARN (RISC), que media la escisión del ARN de cadena sencilla que tiene la secuencia complementaria a la cadena antisentido del ARNip bicatenario. La escisión del ARN objetivo puede tener lugar en el medio de la región complementaria a la cadena antisentido del ARNip bicatenario. (Elbashir y otros 2001, Genes Dev., 15, 188). Para información reciente de estos términos y mecanismos propuestos, ver Bernstein E., Denli AM., Hannon GJ: The rest is silence. RNA. 2001 nov;7(11):1509-21; y Nishikura K.: A short primer on RNAi: RNAdirected RNA polymerase acts as a key catalyst. Cell. 2001 nov 16;107(4):415-8. Los ejemplos de moléculas de ARNip se dan en las Tablas A-C. By "small interfering RNA" (siRNA) is meant an RNA molecule that decreases or silences (prevents) the expression of a gene / mRNA from its endogenous cellular counterpart. The term is understood to encompass the "interference RNA" (RNAi). Interference RNA (RNAi) refers to the process of sequence-specific transcriptional gene silencing in mammals mediated by small interfering RNAs (siRNA) (Fire et al., 1998, Nature 391, 806). The corresponding process in plants is commonly referred to as specific post-transcriptional gene silencing or RNA silencing and is also referred to as fungal extinction. The interference RNA response can characterize an endonuclease complex that contains an siRNA, commonly referred to as an RNA-induced silencing complex (RISC), which mediates the cleavage of the single-stranded RNA that has the sequence complementary to the antisense strand of the siRNA. double-stranded The cleavage of the target RNA can take place in the middle of the region complementary to the antisense chain of the double stranded siRNA. (Elbashir and others 2001, Genes Dev., 15, 188). For recent information on these proposed terms and mechanisms, see Bernstein E., Denli AM., Hannon GJ: The rest is silence. RNA 2001 Nov; 7 (11): 1509-21; and Nishikura K .: A short primer on RNAi: RNAdirected RNA polymerase acts as a key catalyst. Cell 2001 Nov 16; 107 (4): 415-8. Examples of siRNA molecules are given in Tables A-C.

Durante los años recientes, el ARNi emergió como uno de los métodos más eficientes para la inactivación de genes (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Nature, 2002, v.418,p.244-51). Como un método, se basa en la capacidad de las especies de ARNbc de entrar a un complejo de proteína específico, donde este se dirige después al ARN celular complementario y lo degrada específicamente. Con más detalle, los ARNbc se digieren en ARN inhibidores (ARNip) cortos (17-29 bp) por las ARNsas de tipo III (DICER, Drosha, etc) (Nature, 2001, v.409, p.363-6; Nature, 2003, 425, p.415-9). Estos fragmentos y ARNm complementario son reconocidos por el complejo de proteína RISC específico. El proceso completo culmina por la escisión de la endonucleasa del ARNm objetivo (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Curr Opin Mol Ther. 2003 jun;S(3):217-24). During recent years, RNAi emerged as one of the most efficient methods for gene inactivation (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Nature, 2002, v.418, p.244-51) . As a method, it is based on the ability of the rRNA species to enter a specific protein complex, where it is then directed to the complementary cellular RNA and specifically degrades it. In more detail, rRNAs are digested into short RNA inhibitors (siRNAs) (17-29 bp) by type III RNAs (DICER, Drosha, etc.) (Nature, 2001, v.409, p.363-6; Nature , 2003, 425, p.415-9). These fragments and complementary mRNA are recognized by the specific RISC protein complex. The entire process culminates in the endonuclease cleavage of the target mRNA (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Curr Opin Mol Ther. 2003 June; S (3): 217-24).

Para la descripción de cómo diseñar y preparar ARNip para genes conocidos ver, por ejemplo, Chalk AM, Wahlestedt C, Sonnhammer EL. Improved and automated prediction of effective siRNA Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004 jun 18;319(1):264-74; Sioud M, Leirdal M., Potential design rules and enzymatic synthesis of siRNAs, Methods Mol Biol.2004;252:457-69; Levenkova N, Gu Q, Rux JJ.: Gene specific ARNip selector Bioinformatics. 2004 feb 12;20(3):430-2. y Ui-Tei K, Naito Y, Takahashi F, Haraguchi T, Ohki-Hamazaki H, Juni A, Ueda R, Saigo K., Guidelines for the selection of highly effective siRNA sequences for mammalian and chick RNA interference Nucleic Acids Res. 2004 feb 9;32(3):936-48. Ver además Liu Y, Braasch DA, Nulf CJ, Corey DR. Efficient and isoform-selective inhibition of cellular gene expression by peptide nucleic acids Biochemistry, 2004 feb 24;43(7):1921-7. Ver además las publicaciones PCT WO 2004/015107 (Atugen) y WO 02/44321 (Tuschl y otros), y además Chiu YL, Rana TM. siRNA function in RNAi: a chemical modification analysis, RNA 2003 sep;9(9):1034-48 y las patentes de Estados Unidos núms.5898031 y 6107094 (Crooke) para la producción de ARNip modificados/ más estables. For the description of how to design and prepare siRNA for known genes see, for example, Chalk AM, Wahlestedt C, Sonnhammer EL. Improved and automated prediction of effective siRNA Biochem. Biophys Res. Commun. 2004 Jun 18; 319 (1): 264-74; Sioud M, Leirdal M., Potential design rules and enzymatic synthesis of siRNAs, Methods Mol Biol. 2004; 252: 457-69; Levenkova N, Gu Q, Rux JJ .: Gene specific ARNip selector Bioinformatics. 2004 Feb 12; 20 (3): 430-2. and Ui-Tei K, Naito Y, Takahashi F, Haraguchi T, Ohki-Hamazaki H, Juni A, Ueda R, Saigo K., Guidelines for the selection of highly effective siRNA sequences for mammalian and chick RNA interference Nucleic Acids Res. 2004 Feb 9; 32 (3): 936-48. See also Liu Y, Braasch DA, Nulf CJ, Corey DR. Efficient and isoform-selective inhibition of cellular gene expression by peptide nucleic acids Biochemistry, 2004 Feb 24; 43 (7): 1921-7. See also PCT publications WO 2004/015107 (Atugen) and WO 02/44321 (Tuschl and others), and also Chiu YL, Rana TM. siRNA function in RNAi: a chemical modification analysis, RNA 2003 Sep; 9 (9): 1034-48 and U.S. Patents Nos. 5898031 and 6107094 (Crooke) for the production of modified / more stable siRNAs.

Se han desarrollado vectores basados en el ADN capaces de generar un ARNip dentro de las células. El método generalmente involucra la transcripción de ARN de horquilla corta que son eficientemente procesados para formar el ARNip dentro de las células. Paddison y otros PNAS 2002, 99:1443-1448; Paddison y otros Genes & Dev 2002, 16:948958; Sui y otros PNAS 2002, 8:5515-5520; y Brummelkamp y otros Science 2002, 296:550-553. Estos reportes describen métodos para generar los ARNip capaces de dirigir específicamente numerosos genes expresados endógena y exógenamente. DNA-based vectors capable of generating an siRNA within cells have been developed. The method generally involves transcription of short hairpin RNAs that are efficiently processed to form the siRNA inside the cells. Paddison and other PNAS 2002, 99: 1443-1448; Paddison et al. Genes & Dev 2002, 16: 948958; Sui and other PNAS 2002, 8: 5515-5520; and Brummelkamp et al. Science 2002, 296: 550-553. These reports describe methods to generate siRNAs capable of specifically targeting numerous genes expressed endogenously and exogenously.

Para suministrar ARNip, ver, por ejemplo, Shen y otros (FEBS letters 539: 111-114 (2003)), Xia y otros, Nature Biotechnology 20: 1006-1010 (2002), Reich y otros, Molecular Vision 9: 210-216 (2003), Sorensen y otros (J.Mol.Biol. To supply siRNA, see, for example, Shen et al. (FEBS letters 539: 111-114 (2003)), Xia et al., Nature Biotechnology 20: 1006-1010 (2002), Reich et al., Molecular Vision 9: 210- 216 (2003), Sorensen and others (J.Mol.Biol.

327: 761-766 (2003), Lewis y otros, Nature Genetics 32: 107-108 (2002) y Simeoni y otros, Nucleic Acids Research 31, 327: 761-766 (2003), Lewis et al., Nature Genetics 32: 107-108 (2002) and Simeoni et al., Nucleic Acids Research 31,

11: 2717-2724 (2003). Recientemente el ARNip se usó exitosamente para la inhibición en primates; para más detalles ver Tolentino y otros, Retina 24(1) febrero 2004 pp 132-138. 11: 2717-2724 (2003). Recently, siRNA was used successfully for inhibition in primates; For more details see Tolentino and others, Retina 24 (1) February 2004 pp 132-138.

ARNip de la presente invención SiRNA of the present invention

Especificaciones generales de los ARNip de la presente invención General specifications of the siRNAs of the present invention

Generalmente, los ARNip que se usan en la presente invención comprenden un ácido ribonucleico que comprende una estructura de hebra doble, donde la estructura de hebra doble comprende una primera hebra y una segunda hebra, donde la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en el que dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico objetivo, y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos y donde dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico a un ácido nucleico objetivo, por lo cual dicha primera hebra y / o dicha segunda hebra comprenden un pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2' por lo cual dentro de la hebra cada grupo de nucleótidos modificados está flanqueado en uno o ambos lados por un grupo de nucleótidos flanqueadores en el cual los nucleótidos flanqueadores que forman el grupo de nucleótidos flanqueadores es o bien un nucleótidos sin modificar o un nucleótido que tiene una modificación distinta de la modificación de los nucleótidos modificados. Además, dicha primera hebra y/o dicha segunda hebra puede comprender dicha pluralidad de nucleótidos modificados y puede comprender dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. Generally, the siRNAs used in the present invention comprise a ribonucleic acid comprising a double strand structure, where the double strand structure comprises a first strand and a second strand, where the first strand comprises a first stretch of contiguous nucleotides and wherein said first stretch is at least partially complementary to an objective nucleic acid, and the second strand comprises a second stretch of contiguous nucleotides and wherein said second stretch is at least partially identical to an objective nucleic acid, whereby said first strand and / or said second strand comprise a plurality of modified nucleotide groups that have a 2 'position modification whereby within each strand each group of modified nucleotides is flanked on one or both sides by a group of flanking nucleotides in the which the flanking nucleotides that form the group of flanking nucleotides is either a nucleotide unmodified tidos or a nucleotide that has a modification other than the modification of the modified nucleotides. Furthermore, said first strand and / or said second strand may comprise said plurality of modified nucleotides and may comprise said plurality of modified nucleotide groups.

El grupo de nucleótidos modificados y/o el grupo de nucleótidos flanqueadores puede comprender un número de nucleótidos donde el número se selecciona del grupo que comprende un nucleótido a 10 nucleótidos. En relación con cualquier intervalo especificado en la presente se entiende que cada intervalo describe cualquier número entero individual entre las cifras respectivas que se usan para definir el intervalo lo que incluye dichas dos cifras que definen dicho intervalo. En el presente caso, el grupo comprende por tanto un nucleótido, dos nucleótidos, tres nucleótidos, cuatro nucleótidos, cinco nucleótidos, seis nucleótidos, siete nucleótidos, ocho nucleótidos, nueve nucleótidos y diez nucleótidos. The group of modified nucleotides and / or the group of flanking nucleotides may comprise a number of nucleotides where the number is selected from the group comprising a nucleotide at 10 nucleotides. In relation to any interval specified herein, it is understood that each interval describes any individual integer between the respective figures that are used to define the interval which includes said two figures that define said interval. In the present case, the group thus comprises a nucleotide, two nucleotides, three nucleotides, four nucleotides, five nucleotides, six nucleotides, seven nucleotides, eight nucleotides, nine nucleotides and ten nucleotides.

El patrón de nucleótidos modificados de dicha primera hebra puede ser el mismo que el patrón de nucleótidos modificados de dicha segunda hebra, y puede alinearse con el patrón de dicha segunda hebra. Adicionalmente, el patrón de dicha primera hebra se puede cambiar por uno o más nucleótidos en relación con el patrón de la segunda hebra. The modified nucleotide pattern of said first strand may be the same as the modified nucleotide pattern of said second strand, and may be aligned with the pattern of said second strand. Additionally, the pattern of said first strand can be changed to one or more nucleotides in relation to the pattern of the second strand.

Las modificaciones que se discuten anteriormente se pueden seleccionar del grupo que comprende amino, flúor, metoxi, alcoxi y alquilo. The modifications discussed above may be selected from the group comprising amino, fluorine, methoxy, alkoxy and alkyl.

La estructura de hebra doble de los ARNip puede ser de extremos romos, en uno o ambos lados. Más específicamente, la estructura de hebra doble puede ser de extremos romos en el lado de la estructura de hebra doble, la cual se define por el extremo 5´ de la primera hebra y el extremo 3' de la segunda hebra, o la estructura de hebra doble puede ser de extremos romos en el lado de la estructura de hebra doble, que se define por el extremo 3' de la primera hebra y el extremo 5' de la segunda hebra. The double strand structure of the siRNAs can be blunt ends, on one or both sides. More specifically, the double strand structure may be blunt ends on the side of the double strand structure, which is defined by the 5 'end of the first strand and the 3' end of the second strand, or the structure of Double strand may be blunt ends on the side of the double strand structure, which is defined by the 3 'end of the first strand and the 5' end of the second strand.

Adicionalmente, al menos una de las dos hebras puede tener un saliente de al menos un nucleótido en el extremo 5'; el saliente puede consistir en al menos un desoxirribonucleótido. Al menos una de las hebras también puede opcionalmente tener un saliente de al menos un nucleótido en el extremo 3'. Additionally, at least one of the two strands may have a projection of at least one nucleotide at the 5 'end; The projection can consist of at least one deoxyribonucleotide. At least one of the strands may also optionally have a projection of at least one nucleotide at the 3 'end.

La longitud de la estructura de hebra doble del ARNip es típicamente de aproximadamente 17 a 21 y con mayor preferencia de 18 o 19 bases. Además, la longitud de dicha primera hebra y/o la longitud de dicha segunda hebra pueden independientemente una de la otra seleccionarse del grupo que comprende los intervalos de desde aproximadamente 15 a aproximadamente 23 bases, bases 17 a 21 y 18 o 19 bases. The length of the double strand structure of the siRNA is typically about 17 to 21 and more preferably 18 or 19 bases. In addition, the length of said first strand and / or the length of said second strand can independently be selected from one another from the group comprising the ranges from about 15 to about 23 bases, bases 17 to 21 and 18 or 19 bases.

Adicionalmente, la complementariedad entre dicha primera hebra y el ácido nucleico objetivo puede ser perfecta, o el dúplex que se forma entre la primera hebra y el ácido nucleico objetivo puede comprender al menos 15 nucleótidos donde hay una falta de coincidencia o dos faltas de coincidencia entre dicha primera hebra y el ácido nucleico objetivo que forma dicha estructura de hebra doble. Additionally, the complementarity between said first strand and the target nucleic acid may be perfect, or the duplex formed between the first strand and the target nucleic acid may comprise at least 15 nucleotides where there is a mismatch or two mismatches between said first strand and the target nucleic acid that forms said double stranded structure.

En algunos casos, tanto la primera hebra como la segunda hebra comprenden cada una al menos un grupo de nucleótidos modificados y al menos un grupo de nucleótidos flanqueadores, en el que cada grupo de nucleótidos modificados comprende al menos un nucleótido y en el que cada grupo de nucleótidos flanqueadores comprende al menos un nucleótido con cada grupo de nucleótidos modificados de la primera hebra que se alinean con un grupo de nucleótidos flanqueadores en la segunda hebra, por lo cual la mayoría de los nucleótidos 5´ terminales de la primera hebra es un nucleótido del grupo de nucleótidos modificados, y la mayoría de los nucleótidos 3´ terminales de la segunda hebra es un nucleótido del grupo de nucleótidos flanqueadores. Cada grupo de nucleótidos modificados puede consistir en un solo nucleótido y/o cada grupo flanqueador de nucleótidos puede consistir en un solo nucleótido. In some cases, both the first and second strands each comprise at least one group of modified nucleotides and at least one group of flanking nucleotides, in which each group of modified nucleotides comprises at least one nucleotide and in which each group of flanking nucleotides comprises at least one nucleotide with each group of modified nucleotides of the first strand that align with a group of flanking nucleotides in the second strand, whereby the majority of the 5 'terminal nucleotides of the first strand is a nucleotide of the group of modified nucleotides, and the majority of the 3 'terminal nucleotides of the second strand is a nucleotide of the group of flanking nucleotides. Each group of modified nucleotides may consist of a single nucleotide and / or each flanking group of nucleotides may consist of a single nucleotide.

Adicionalmente, es posible que en la primera hebra el nucleótido que forma el grupo flanqueador de nucleótidos es un nucleótido no modificado que está dispuesto en dirección 3´ con respecto al nucleótido que forma el grupo de nucleótidos modificados, y en la segunda hebra el nucleótido que forma el grupo de nucleótidos modificados es un nucleótido modificado que está dispuesto en dirección 5' con respecto al nucleótido que forma el grupo de nucleótidos flanqueadores. Additionally, it is possible that in the first strand the nucleotide that forms the flanking group of nucleotides is an unmodified nucleotide that is arranged in the 3 'direction with respect to the nucleotide that forms the group of modified nucleotides, and in the second strand the nucleotide that The modified nucleotide group is a modified nucleotide that is arranged in the 5 'direction with respect to the nucleotide that forms the group of flanking nucleotides.

Además la primera hebra del ARNip puede comprender ocho a doce, preferentemente de nueve a once, grupos de nucleótidos modificados, y la segunda hebra puede comprender de siete a once, preferentemente ocho a diez, grupos de nucleótidos modificados. In addition, the first strand of the siRNA may comprise eight to twelve, preferably nine to eleven, modified nucleotide groups, and the second strand may comprise seven to eleven, preferably eight to ten, modified nucleotide groups.

La primera hebra y la segunda hebra pueden estar unidas por una estructura de bucle, que puede estar compuesta por un polímero de ácido no-nucleico, tales como, entre otros, polietilenglicol. Alternativamente, la estructura de bucle puede estar compuesta por un ácido nucleico. The first strand and the second strand may be joined by a loop structure, which may be composed of a non-nucleic acid polymer, such as, among others, polyethylene glycol. Alternatively, the loop structure may be composed of a nucleic acid.

Además, el extremo 5' de la primera hebra del ARNip puede estar unido con el extremo 3' de la segunda hebra, o el extremo 3' de la primera hebra puede estar unido con el extremo 5' de la segunda hebra, donde dicho enlace es a través de un conector de ácido nucleico que tiene típicamente una longitud de entre 10-2000 nucleobases. In addition, the 5 'end of the first strand of the siRNA may be attached to the 3' end of the second strand, or the 3 'end of the first strand may be attached to the 5' end of the second strand, where said bond It is through a nucleic acid connector that typically has a length of between 10-2000 nucleobases.

Especificaciones particulares de los ARNip de la presente invención Particular specifications of the siRNAs of the present invention

La invención proporciona un compuesto que tiene la estructura de hebra doble (estructura A): The invention provides a compound having the double strand structure (structure A):

5' (N)x - Z 3' (cadena antisentido) 5 '(N) x - Z 3' (antisense chain)

3' Z'-(N')y5' (cadena sentido) 3 'Z' - (N ') and 5' (sense chain)

donde cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y (N)x y (N')y es un oligómero en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente; en donde cada uno de x e y es un entero entre 19 y 40; where each N and N 'is a ribonucleotide that can be modified or unmodified in its sugar residue y (N) x y (N') and it is an oligomer in which each consecutive N or N 'binds to the next N or N' by a covalent bond; where each of x and y is an integer between 19 and 40;

en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está covalentemente unido al where each of Z and Z 'may be present or absent, but if present it is dTdT and is covalently bound to the

terminal 3' de la hebra en la cual está presente; 3 'terminal of the strand in which it is present;

y en donde la secuencia de (N)x comprende un primer tramo de los nucleótidos contiguos que tienen una de las siguientes secuencias: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.:66); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. con núm. de ident.:74); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. con núm. de ident.:75); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. con núm. de ident.:77); UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. con núm. de ident.:79); y AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. con núm. de ident.:91), y la secuencia de (N')y comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, y en donde la estructura de hebra doble se genera por pareamiento de bases entre el primer tramo y el segundo tramo. and wherein the sequence of (N) x comprises a first stretch of contiguous nucleotides having one of the following sequences: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. with identification number: 66); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. With identification number: 74); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. With identification number: 75); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. With identification number: 77); UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. With identification number: 79); and AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. with identification number: 91), and the sequence of (N ') and comprises a second section of the adjacent nucleotides, and where the double strand structure is generated by base pairing between the first section and the second section.

Particularmente, la invención proporciona el compuesto anterior en donde el enlace covalente es un enlace fosfodiéster, en donde x = y, preferentemente en donde x = y = 19 , en donde Z y Z' están ausentes, en donde al menos un ribonucleótido se modifica en su residuo azúcar en la posición 2', en donde la porción en la posición 2' es metoxi (2'-0metilo) en donde ribonucleótidos alternos se modifican en la cadena antisentido y sentido en donde los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena antisentido se modifican en sus residuos azúcar, y los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena sentido no se modifican en sus residuos azúcar. Particularly, the invention provides the above compound wherein the covalent bond is a phosphodiester bond, where x = y, preferably where x = y = 19, where Z and Z 'are absent, where at least one ribonucleotide is modified in its residue sugar in the 2 'position, wherein the portion in the 2' position is methoxy (2'-0 methyl) where alternate ribonucleotides are modified in the antisense chain and sense where the ribonucleotides in the 5 'and 3 terminals 'of the antisense chain are modified in their sugar residues, and the ribonucleotides in the 5' and 3 'terminals of the sense chain are not modified in their sugar residues.

Más aún, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura (A) anterior (que tiene cualquiera de los específicos mencionados anteriormente) en una cantidad terapéuticamente efectiva, para tratar un paciente que padece de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular, o una lesión o enfermedad de la médula espinal. Además, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de la estructura (A) anterior (que tiene cualquiera de los específicos mencionados anteriormente) para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular o lesión o enfermedad de la médula espinal. Moreover, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound of the above structure (A) (having any of the specific ones mentioned above) in a therapeutically effective amount, to treat a patient suffering from a respiratory disorder, a disease eye, a microvascular disorder, or a spinal cord injury or disease. In addition, the invention provides the use of a therapeutically effective amount of the above structure (A) (which has any of the specific ones mentioned above) for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from a respiratory disorder, a eye disease, a microvascular disorder or spinal cord injury or disease.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura (A) anterior para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y afecciones mencionadas en la presente. A further aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound of the above structure (A) for the treatment of any of the diseases and conditions mentioned herein.

Más aún, este aspecto proporciona una composición farmacéutica que comprende dos o más compuestos de la estructura (A) anterior para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y afecciones mencionadas en la presente, con lo cual dichos compuestos pueden mezclarse físicamente en la composición farmacéutica en cantidades que generan una actividad igual o de cualquier otra forma beneficiosa, o pueden estar covalentemente o no-covalentemente enlazados, o unidos juntos por un enlazador de ácido nucleico de una longitud en el intervalo de 2-100, preferentemente 2-50 o 2-30 nucleótidos. Tales moléculas de ARNip están por lo tanto compuestas de una estructura de ácido nucleico de hebra doble como se describió en la presente, con lo cual dos secuencias de ARNip seleccionadas de la Tabla A, ID núms: 14, 22, 23, 25, 27, 39, están covalentemente o no-covalentemente enlazadas o unidos por un enlazador para formar una molécula ARNip en tándem. Tales moléculas ARNip en tándem que comprende dos secuencias de ARNip pudieran ser típicamente de 38-150 nucleótidos de longitud, con mayor preferencia 38 o 40-60 nucleótidos de longitud, y mayores en consecuencia si más de dos secuencias ARNip se incluyen en la molécula en tándem. Una molécula en tándem más larga compuesta por dos o más secuencias más largas que codifican el ARNip producido por vía del procesamiento celular interno, por ejemplo, ARNbc largo, también está considerada, ya que es una molécula en tándem que codifica dos o más ARNhc. Tales moléculas en tándem se consideran además una parte de la presente invención, y más información concerniente a ellas se da más abajo. Moreover, this aspect provides a pharmaceutical composition comprising two or more compounds of the above structure (A) for the treatment of any of the diseases and conditions mentioned herein, whereby said compounds can be physically mixed in the pharmaceutical composition in amounts that generate an equal or any other beneficial activity, or they may be covalently or non-covalently linked, or joined together by a nucleic acid linker of a length in the range of 2-100, preferably 2-50 or 2- 30 nucleotides Such siRNA molecules are therefore composed of a double stranded nucleic acid structure as described herein, whereby two siRNA sequences selected from Table A, ID Nos: 14, 22, 23, 25, 27 , 39, are covalently or non-covalently linked or linked by a linker to form a tandem siRNA molecule. Such tandem siRNA molecules comprising two siRNA sequences could typically be 38-150 nucleotides in length, more preferably 38 or 40-60 nucleotides in length, and greater accordingly if more than two siRNA sequences are included in the molecule in tandem. A longer tandem molecule composed of two or more longer sequences encoding the siRNA produced via the internal cellular processing, for example, long rRNA, is also considered, since it is a tandem molecule encoding two or more hRNA. Such tandem molecules are further considered a part of the present invention, and more information concerning them is given below.

Dichas estructuras combinadas o en tándem tienen la ventaja de que la toxicidad y/o los efectos fuera de cada ARNip se minimizan, mientras que la eficacia aumenta Such combined or tandem structures have the advantage that toxicity and / or effects outside each siRNA are minimized, while efficacy increases

Particularmente el ARNip usado en los Ejemplos se modificó de manera que un grupo 2' O-Me estaba presente en el primer, tercer, quinto, séptimo, noveno, onceno, decimotercer, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno nucleótidos de la cadena antisentido, con lo cual una modificación muy similar, es decir, un grupo 2'-O-Me estaba presente en el segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, duodécimo, decimocuarto, decimosexto y decimooctavo nucleótidos de la cadena sentido. Además, debe notarse que en el caso de estos ácidos nucleicos particulares de acuerdo con la presente invención el primer tramo es idéntico a la primera hebra y el segundo tramo es idéntico a la segunda hebra y estos ácidos nucleicos son además de extremos romos. El ARNip se fosforiló pero se consideró que una versión no fosforilada puede ser más simple para preparar a gran escala y se encontró que dicho REDD14 no fosforilado, llamado REDD-14NP es tan biológicamente activo como REDD-14 en un modelo CNV (ver el Ejemplo 6). La secuencia de este ARNip usado en los experimentos en los Ejemplos 6-8 es la de REDD14, es decir, la secuencia que tiene la referencia interno núm. 14 (ver la Tabla A). Particularly the siRNA used in the Examples was modified so that a 2'O-Me group was present in the first, third, fifth, seventh, ninth, eleventh, thirteenth, fifteenth, seventeenth and nineteenth nucleotides of the antisense chain, thereby which a very similar modification, that is, a 2'-O-Me group was present in the second, fourth, sixth, eighth, tenth, twelfth, fourteenth, sixteenth and eighteenth nucleotides of the sense chain. In addition, it should be noted that in the case of these particular nucleic acids according to the present invention the first section is identical to the first strand and the second section is identical to the second strand and these nucleic acids are in addition to blunt ends. The siRNA was phosphorylated but it was considered that a non-phosphorylated version may be simpler to prepare on a large scale and it was found that said non-phosphorylated REDD14, called REDD-14NP is as biologically active as REDD-14 in a CNV model (see Example 6). The sequence of this siRNA used in the experiments in Examples 6-8 is that of REDD14, that is, the sequence having internal reference no. 14 (see Table A).

La región terminal de los oligonucleótidos se refiere a las bases 1-4 y/o 16-19 en las secuencias 19-mer (Tablas A y B más abajo) y a las bases 1-4 y/o 18-21 en las secuencias 21-mer (Tabla C más abajo). The oligonucleotide terminal region refers to bases 1-4 and / or 16-19 in sequences 19-mer (Tables A and B below) and bases 1-4 and / or 18-21 in sequences 21 -mer (Table C below).

Además, los ARNip usados en la presente invención son oligoribonucleótidos en donde una hebra comprende nucleótidos consecutivos que tiene de 5' a 3', la secuencia que se expone en las sec. con núms. de ident.: 66, 74, 75, 77, 79 y 91 (cadenas antisentido) o un homólogo de esta en donde hasta en 2 de los nucleótidos en cada región terminal se altera una base. Así, en aspectos particulares el oligonucleótido comprende una estructura de hebra doble, con lo cual dicha estructura de hebra doble comprende una primera hebra y una segunda hebra, en donde la primera hebra comprende un primer tramo de los nucleótidos contiguos y la segunda hebra comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, con lo que el primer tramo es complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica para el gen RTP801 y en donde el segundo tramo es idéntico o complementario a una secuencia ácido nucleico que codifica para RTP801. Dicho primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, preferentemente al menos 18 nucleótidos y aún con mayor preferencia 19 nucleótidos o aun al menos 21 nucleótidos. En una modalidad el primer tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 18 a 30 nucleótidos, con mayor preferencia de aproximadamente 19 a 27 nucleótidos y con la máxima preferencia de aproximadamente 19 a 23 nucleótidos. En una modalidad el segundo tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 18 a 30 nucleótidos, con mayor preferencia de aproximadamente 19 a 27 nucleótidos y con la máxima preferencia de aproximadamente 19 a 23 nucleótidos o aun aproximadamente 19 a 21 nucleótidos. En una modalidad el primer nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801, en donde el último nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. En una modalidad el primer tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de un oligonucleótido, donde tal oligonucleótido se selecciona del grupo que comprende los oligoribonucleótidos que tiene la secuencia de cualquiera de los números de serie 14, 22, 23, 25, 27, 39, en la Tabla A. Las especificaciones adicionales de las moléculas de ARNip usadas en la presente invención pueden proporcionar un oligoribonucleótido en donde el dinucleótido dTdT está covalentemente unido al terminal 3', y/o en al menos un nucleótido un residuo azúcar se modifica, posiblemente con una modificación que comprende una modificación 2'-O-metilo. Más aún, el grupo 2' OH puede reemplazarse por un grupo o porción selecionada del grupo que comprende -H, -OCH3,-OCH2CH3,-OCH2CH2 CH3,-NH2, y F. Más aún, los compuestos preferibles de la presente invención como los descritos anteriormente pueden ser fosforilados o no fosforilados. In addition, the siRNAs used in the present invention are oligoribonucleotides wherein a strand comprises consecutive nucleotides having 5 'to 3', the sequence set forth in sec. with no. of ident .: 66, 74, 75, 77, 79 and 91 (antisense chains) or a homologue of this where in up to 2 of the nucleotides in each terminal region a base is altered. Thus, in particular aspects the oligonucleotide comprises a double strand structure, whereby said double strand structure comprises a first strand and a second strand, wherein the first strand comprises a first stretch of the adjacent nucleotides and the second strand comprises a second stretch of contiguous nucleotides, whereby the first stretch is complementary or identical to a nucleic acid sequence encoding the RTP801 gene and wherein the second stretch is identical or complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801. Said first section comprises at least 14 nucleotides, preferably at least 18 nucleotides and even more preferably 19 nucleotides or even at least 21 nucleotides. In one embodiment, the first section comprises about 14 to 40 nucleotides, preferably about 18 to 30 nucleotides, more preferably about 19 to 27 nucleotides and most preferably about 19 to 23 nucleotides. In one embodiment the second section comprises about 14 to 40 nucleotides, preferably about 18 to 30 nucleotides, more preferably about 19 to 27 nucleotides and most preferably about 19 to 23 nucleotides or even about 19 to 21 nucleotides. In one embodiment, the first nucleotide of the first stretch corresponds to a nucleotide of the nucleic acid sequence encoding RTP801, wherein the last nucleotide of the first stretch corresponds to a nucleotide of the nucleic acid sequence encoding RTP801. In one embodiment, the first section comprises a sequence of at least 14 contiguous nucleotides of an oligonucleotide, wherein said oligonucleotide is selected from the group comprising the oligoribonucleotides having the sequence of any of the serial numbers 14, 22, 23, 25, 27 , 39, in Table A. Additional specifications of the siRNA molecules used in the present invention can provide an oligoribonucleotide wherein the dTdT dinucleotide is covalently bound to the 3 'terminal, and / or in at least one nucleotide a sugar residue is modifies, possibly with a modification comprising a 2'-O-methyl modification. Moreover, the 2'OH group may be replaced by a selected group or portion of the group comprising -H, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2 CH3, -NH2, and F. Moreover, the preferable compounds of the present invention as those described above can be phosphorylated or nonphosphorylated.

Además, el ARNip usado en la presente invención puede ser un oligoribonucleótido donde en los nucleótidos alternos los azúcares modificados se localizan en las dos hebras. Particularmente, el oligoribonucleótido puede comprender una de las cadenas sentido en donde el azúcar no está modificado en los nucleótidos del terminal 5' y 3', o una de las cadenas antisentido en donde el azúcar está modificado en los nucleótidos del terminal 5' y 3'. In addition, the siRNA used in the present invention can be an oligoribonucleotide where in the alternate nucleotides The modified sugars are located in the two strands. Particularly, the oligoribonucleotide may comprise a of the sense chains in which the sugar is not modified in the 5 'and 3' terminal nucleotides, or one of the antisense chains where sugar is modified in the 5 'and 3' terminal nucleotides.

Además, otros ácidos nucleicos a usarse en la presente invención comprenden al menos 14 nucleótidos contiguos de cualquiera de las sec. con nums. de ident.: 66, 74, 75, 77, 79, y 91 y con mayor preferencia 14 pares de base de nucleótidos contiguos en cualquier extremo de la estructura de hebra doble comprendida del primer tramo y el segundo tramo como se describió anteriormente. Una persona con experiencia en la técnica entenderá que dada la longitud potencial del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y particularmente de los tramos individuales que forman tal ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, algunos cambios con relación a la secuencia codificante del gen RTP801 como se detalla en la sec. con núm. de ident.:1 a cada lado es posible, donde tales cambios pueden ser hasta 1, 2, 3, 4, 5 y 6 nucleótidos en ambas direcciones, y por el que las moléculas de ácido nucleico así generadas de hebra doble estarán además dentro de la presente invención. In addition, other nucleic acids to be used in the present invention comprise at least 14 contiguous nucleotides of any of the sec. with nums. Ident .: 66, 74, 75, 77, 79, and 91 and more preferably 14 base pairs of contiguous nucleotides at any end of the double strand structure comprised of the first and second stretch stretch as described above. A person with experience in the technique will understand that given the length potential of the nucleic acid according to the present invention and particularly of the individual sections that form such nucleic acid according to the present invention, some changes in relation to the coding sequence of the RTP801 gene as detailed in sec. with no. of ident.:1 on each side is possible, where such changes can be up to 1, 2, 3, 4, 5 and 6 nucleotides in both directions, and whereby the nucleic acid molecules thus generated Double strand will also be within the present invention.

Un aspecto adicional de la presente descripción concierne un ácido nucleico funcional que comprende una estructura de hebra doble, donde tal estructura de hebra doble comprende A further aspect of the present description concerns a functional nucleic acid comprising a structure of double strand, where such double strand structure comprises

una primera hebra y una segunda hebra, en donde a first strand and a second strand, where

la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda hebra comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, en donde the first strand comprises a first stretch of contiguous nucleotides and the second strand comprises a second stretch of contiguous nucleotides, where

el primer tramo es complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 y en donde el segundo tramo es idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. the first section is complementary or identical to a nucleic acid sequence encoding RTP801 and where the second section is identical or complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801.

En un aspecto, el ácido nucleico es RTP801 de regulación descendente, por lo que la regulación descendente de RTP801 se selecciona del grupo que comprende la regulación descendente de la función de RTP801, regulación descendente de la proteína RTP801 y regulación descendente de la expresión del ARNm RTP801. In one aspect, the nucleic acid is RTP801 down-regulation, so the down-regulation of RTP801 is selected from the group comprising the downstream regulation of the RTP801 function, regulation RTP801 protein descending and descending regulation of RTP801 mRNA expression.

En un aspecto, el primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, preferentemente al menos 18 nucleótidos y aún con mayor preferencia 19 nucleótidos. In one aspect, the first section comprises at least 14 nucleotides, preferably at least 18 nucleotides and still more preferably 19 nucleotides.

En un aspecto, el primer tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 18 a 30 nucleótidos, con mayor preferencia de aproximadamente 19 a 27 nucleótidos y con la máxima preferencia de aproximadamente 19 a 23 nucleótidos. In one aspect, the first section comprises about 14 to 40 nucleotides, preferably about 18 to 30 nucleotides, more preferably about 19 to 27 nucleotides and with the highest preference of approximately 19 to 23 nucleotides.

En un aspecto, el segundo tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 18 a 30 nucleótidos, con mayor preferencia de aproximadamente 19 a 27 nucleótidos y con la máxima preferencia de aproximadamente 19 a 23 nucleótidos. In one aspect, the second section comprises about 14 to 40 nucleotides, preferably about 18 to 30 nucleotides, more preferably about 19 to 27 nucleotides and with the highest preference of approximately 19 to 23 nucleotides.

En un aspecto, el primer nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801, en donde el último nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. In one aspect, the first nucleotide of the first stretch corresponds to a nucleotide of the nucleic acid sequence. encoding RTP801, where the last nucleotide of the first section corresponds to a nucleotide of the sequence of nucleic acid encoding RTP801.

En un aspecto, un tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, en donde tal secuencia de ácido nucleico se selecciona de las secuencias descritas en las Tablas A-C, preferentemente del grupo que comprende la sec. con núms. de identi.: 53, 66, 67, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 91, 92, 93, 94, 96, 101 y 102, con mayor preferencia seleccionados del grupo que comprende la sec. con. núms. de identi.: 66, 75, 79, 91, 94, 101 y 102, y con la máxima preferencia seleccionados del grupo que comprende la sec. con núms. de ident.: 66, 74, 75 y 79. In one aspect, a stretch comprises a sequence of at least 14 contiguous nucleotides of an acid sequence nucleic, wherein such a nucleic acid sequence is selected from the sequences described in Tables A-C, preferably from the group comprising sec. with no. ID: 53, 66, 67, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 91, 92, 93, 94, 96, 101 and 102, more preferably selected from the group comprising sec. with. no. ID: 66, 75, 79, 91, 94, 101 and 102, and most preferably selected from the group comprising sec. with no. of ident .: 66, 74, 75 and 79.

En un aspecto, el otro tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, en donde tal secuencia de ácido nucleico se selecciona de las secuencias descritas en las Tablas A-C, preferentemente del grupo que comprende la sec. con. núms. de identi.: 3, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 51 y 52, con mayor preferencia seleccionados del grupo que comprende la sec. con. núms. de ident.:16, 24, 25, 29, 41, 44, 51, y 52, y con la máxima preferencia seleccionados del grupo que comprende la sec. con. núms. de ident.: 16, 24, 25 y 29. En un aspecto In one aspect, the other section comprises a sequence of at least 14 contiguous nucleotides of a sequence of nucleic acid, wherein such a nucleic acid sequence is selected from the sequences described in Tables A-C, preferably from the group comprising sec. with. no. ID: 3, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 51 and 52, more preferably selected from the group comprising sec. with. no. ID: 16, 24, 25, 29, 41, 44, 51, and 52, and most preferably selected from the group comprising sec. with. no. of ident .: 16, 24, 25 and 29. In one aspect

el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 53 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 3; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 66 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.:16; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 53 and the second section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 3; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 66 and the second section has a sequence according to sec. with no. from ident.:16;

el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 67 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 17; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 72 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 22; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con num. de ident.: 73 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 23; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 74 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 24; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 75 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 25; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 76 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 26; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 77 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 27; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 79 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 29; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 91 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 41; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 92 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.:42; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 93 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 43; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 94 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 44; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con num. de ident.:95 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 45; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 96 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.:46; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 101 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 51; y el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 102 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la sec. con. núm. de ident.: 52. The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 67 and the second section has a sequence according to sec. with no. Ident .: 17; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 72 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 22; The first section has a sequence according to sec. with num. of ident .: 73 and the second section has a sequence according to sec. with. no. of ident .: 23; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 74 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 24; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 75 and the second section has a sequence according to sec. with. no. of ident .: 25; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 76 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 26; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 77 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 27; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 79 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 29; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 91 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 41; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 92 and the second section has a sequence according to sec. with. no. from ident.:42; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 93 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 43; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 94 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 44; The first section has a sequence according to sec. with num. of ident.:95 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 45; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 96 and the second section has a sequence according to sec. with. no. from ident.:46; The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 101 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 51; Y The first section has a sequence according to sec. with no. of ident .: 102 and the second section has a sequence according to sec. with. no. Ident .: 52.

En un aspecto, el primer tramo tiene una secuencia de ácido nucleico que se selecciona del grupo que comprende la sec. con núm. de ident.: 53, 66, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 101 y 102. In one aspect, the first section has a nucleic acid sequence that is selected from the group comprising the sec. with no. Ident .: 53, 66, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 101 and 102.

Se entenderá que aunque los términos "primer" y "segundo" tramo se usan en relación con los ácidos nucleicos de la presente invención, ellos se usan por razones de conveniencia solamente, y cualquier molécula de ácido nucleico de la invención que se describe con un primer tramo con la secuencia X y un segundo tramo con la secuencia Y, pudiera igualmente ser descrito también teniendo un primer tramo con la secuencia Y y un segundo tramo con la secuencia X, siempre que se entienda que un tramo está comprendido en la cadena antisentido, el cual debe ser antisentido para una porción de la secuencia codificante del gen RTP801, y el otro tramo está comprendido en la cadena sentido, que debe ser complementaria (aunque no 100% complementaria) a la cadena antisentido, todo de acuerdo a las definiciones y especificaciones presentadas en la presente. It will be understood that although the terms "first" and "second" section are used in relation to the nucleic acids of the present invention, they are used for convenience reasons only, and any nucleic acid molecule of the invention that is described with a first section with the sequence X and a second section with the sequence Y, could also be described also having a first section with the sequence Y and a second section with the sequence X, provided that it is understood that a section is included in the antisense chain, which must be antisense for a portion of the coding sequence of the RTP801 gene, and the other stretch is comprised in the sense chain, which must be complementary (although not 100% complementary) to the antisense chain, all according to the definitions and specifications presented herein.

En un aspecto, la primera y/o la segunda hebra comprenden al menos un nucleótido saliente en el extremo 3' que es complementario o idéntico al nucleótido correspondiente de una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. In one aspect, the first and / or second strand comprise at least one protruding nucleotide at the 3 'end which is complementary or identical to the corresponding nucleotide of a nucleic acid sequence encoding RTP801.

En un aspecto, la primera y/o la segunda hebra comprenden de 1 a 15 nucleótidos salientes en el extremo 3', preferentemente la primera y/o la segunda hebra comprende de 1 a 10 nucleótidos salientes en el extremo 3', con mayor preferencia la primera y/o la segunda hebra comprende de 1 a 5 nucleótidos salientes en el extremo 3', y con la máxima preferencia la primera y/o la segunda hebra comprende de 1 a 2 nucleótidos salientes en el extremo 3'. In one aspect, the first and / or second strand comprise 1 to 15 protruding nucleotides at the 3 'end, preferably the first and / or second strand comprises 1 to 10 protruding nucleotides at the 3 'end, with more preferably the first and / or second strand comprises 1 to 5 protruding nucleotides at the 3 'end, and with the most preferably the first and / or second strand comprises 1 to 2 protruding nucleotides at the 3 'end.

En un aspecto, la primera y/o la segunda hebra comprenden al menos un nucleótido saliente que es diferente de los nucleótidos correspondientes de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. En un aspecto, la primera hebra comprende dos nucleótidos salientes que son diferentes de los nucleótidos correspondientes de una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. In one aspect, the first and / or second strand comprise at least one protruding nucleotide that is different from those Corresponding nucleotides of the nucleic acid sequence encoding RTP801. In one aspect, the first strand comprises two protruding nucleotides that are different from nucleotides. corresponding from a nucleic acid sequence encoding RTP801.

En un aspecto, la primera hebra consiste en el primer tramo solamente. In one aspect, the first thread consists of the first section only.

En un aspecto, la segunda hebra consiste en el segundo tramo solamente. In one aspect, the second thread consists of the second section only.

En un aspecto, el primer tramo y/o la primera hebra comprende(n) ribonucleótidos. In one aspect, the first stretch and / or the first strand comprises (n) ribonucleotides.

En un aspecto, el segundo tramo y/o la segunda hebra comprende(n) ribonucleótidos. In one aspect, the second section and / or the second strand comprises (n) ribonucleotides.

En un aspecto, el primer tramo y/o la segunda hebra consiste(n) en ribonucleótidos. In one aspect, the first section and / or the second strand consists of ribonucleotides.

En un aspecto algunos o todos los nucleótidos se modifican. In one aspect some or all nucleotides are modified.

En un aspecto preferido tal modificación se relaciona con la porción de nucleobase de los nucleótidos, con la porción azúcar de los nucleótidos y/o con la porción fosfato de los nucleótidos. In a preferred aspect such modification relates to the nucleotide portion of the nucleotides, the sugar portion of the nucleotides and / or the phosphate portion of the nucleotides.

En un aspecto más preferido la modificación es una modificación de una porción azúcar y la modificación es una modificación en la posición 2', donde el grupo 2' OH se reemplaza con un grupo o porción seleccionado del grupo que comprende -H-OCH3,-OCH2CH3,-OCH2CH2 CH3,-NH2, y -F. In a more preferred aspect the modification is a modification of a sugar portion and the modification is a modification in the 2 'position, where the 2' OH group is replaced with a group or portion selected from the group comprising -H-OCH3, - OCH2CH3, -OCH2CH2 CH3, -NH2, and -F.

En un aspecto, la modificación es una modificación de la porción de nucleobase y la modificación o la nucleobase modificada se selecciona del grupo que comprende inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo, 2-propilo y otros alquiladeninas, 5-halo uracilo, 5-halocitosina, 5-halo citosina, 6-azacitosina, 6-aza timina, pseudo-uracilo, 4tiouracilo, 8-halo adenina, 8-aminoadenina, 8-tiol adenina, 8-tioalquil adeninas, 8-hidroxil adenina y otras adeninas 8sustituidas, 8-halo guaninas, 8-amino guanina, 8-tiol guanina, 8-tioalquil guanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otros aza-y deaza adeninas, otros aza-y deaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5-trifluoro citosina. In one aspect, the modification is a modification of the nucleobase portion and the modification or the modified nucleobase is selected from the group comprising inosine, xanthine, hypoxanthine, 2-aminoadenine, 6-methyl, 2-propyl and other alkyladenines, 5- halo uracil, 5-halocytosine, 5-halo cytosine, 6-azacytosine, 6-aza thymine, pseudo-uracil, 4tiouracil, 8-halo adenine, 8-aminoadenine, 8-thiol adenine, 8-thioalkyl adenines, 8-hydroxyl adenine and other 8-substituted adenines, 8-halo guanines, 8-amino guanine, 8-thiol guanine, 8-thioalkyl guanine, 8-hydroxylguanine and other substituted guanines, other aza-and deaza adenines, other aza-and deaza guanines, 5-trifluoromethyl uracil and 5-trifluoro cytosine.

En un aspecto, la modificación es una modificación de la porción fosfato, en donde la porción fosfato modificada se selecciona del grupo que comprende fosfotioato. In one aspect, the modification is a modification of the phosphate portion, wherein the modified phosphate portion is selected from the group comprising phosphothioate.

En un aspecto, el primer tramo y/o el segundo tramo comprende una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2', donde dentro del tramo cada grupo de nucleótidos modificados es flanqueado en uno o ambos lados por un grupo de flanqueo de nucleótidos, donde los nucleótidos flanqueadores que forman el grupo de flanqueo de los nucleótidos son nucleótidos no modificados o un nucleótido que tiene una modificación diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. In one aspect, the first section and / or the second section comprises a plurality of groups of modified nucleotides having a modification in the 2 'position, where within the section each group of modified nucleotides is flanked on one or both sides by a group flanking nucleotides, where the flanking nucleotides that form the flanking group of the nucleotides are unmodified nucleotides or a nucleotide that has a different modification from the modification of the modified nucleotides.

En un aspecto preferido, el primer tramo y/o el segundo tramo consisten en ribonucleótidos. In a preferred aspect, the first section and / or the second section consist of ribonucleotides.

En un aspecto más preferido, el primer y el segundo tramo comprenden una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. In a more preferred aspect, the first and second sections comprise a plurality of modified nucleotide groups.

[En un aspecto, el primer tramo comprende dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. [In one aspect, the first section comprises said plurality of modified nucleotide groups.

En un aspecto, el segundo tramo comprende dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. In one aspect, the second section comprises said plurality of modified nucleotide groups.

En un aspecto cada grupo de nucleótidos modificados y/o cada grupo de nucleótidos flanqueadores comprende un número de nucleótidos, donde el número se selecciona del grupo que comprende un nucleótido a diez nucleótidos. In one aspect each group of modified nucleotides and / or each group of flanking nucleotides comprises a number of nucleotides, where the number is selected from the group comprising a ten nucleotide nucleotide.

En un aspecto, el primer tramo comprende un primer patrón de nucleótidos modificados y el segundo tramo comprende un segundo patrón de nucleótidos modificados. In one aspect, the first section comprises a first modified nucleotide pattern and the second section comprises a second modified nucleotide pattern.

En un aspecto, el primer patrón es el mismo patrón que el segundo patrón. In one aspect, the first pattern is the same pattern as the second pattern.

En otro aspecto, el primer patrón se alinea con el segundo patrón. In another aspect, the first pattern aligns with the second pattern.

En un aspecto preferido, el primer patrón cambia en uno o más nucleótidos con relación al segundo patrón. In a preferred aspect, the first pattern changes in one or more nucleotides relative to the second pattern.

En un aspecto, cada uno de los grupos de nucleótidos modificados consiste en un nucleótido modificado y cada uno de los grupos de nucleótidos flanqueadores consiste en un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. En un aspecto preferido, el nucleótido modificado tiene un grupo -OMe en la posición 2'. In one aspect, each of the modified nucleotide groups consists of a modified nucleotide and each of flanking nucleotide groups consist of an unmodified nucleotide or a nucleotide that has a modification that is different from the modification of the modified nucleotides. In a preferred aspect, the modified nucleotide has a -OMe group at the 2 'position.

En un aspecto preferido, el nucleótido flanqueador es un ribonucleótido que tiene un grupo 2' OH. In a preferred aspect, the flanking nucleotide is a ribonucleotide having a 2'OH group.

En un aspecto, el primer tramo comienza con un nucleótido modificado en el extremo 5' y cada nucleótido del tramo es además un nucleótido modificado, mientras que un segundo nucleótido comienza desde el extremo 5' y cada nucleótido es un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación del(de los) nucleótido(s) modificados(s). In one aspect, the first section begins with a modified nucleotide at the 5 'end and each nucleotide in the section is also a modified nucleotide, while a second nucleotide begins from the 5' end and each nucleotide is an unmodified nucleotide or a nucleotide. which has a modification that is different from the modification of the modified nucleotide (s).

En un aspecto, el primer tramo es en orientación antisentido a la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. In one aspect, the first section is in antisense orientation to the nucleic acid sequence encoding RTP801.

Un aspecto adicional de la presente invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención y/o un vector de acuerdo con el segundo aspecto de A further aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a nucleic acid according to the first aspect of the present invention and / or a vector according to the second aspect of

la presente invención y preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable; dicha composición opcionalmente es para la administración sistémica o local. the present invention and preferably a pharmaceutically acceptable carrier; said composition is optionally for systemic or local administration.

En una modalidad, la composición es para el tratamiento de una enfermedad, donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende enfermedades tumorales. In one embodiment, the composition is for the treatment of a disease, where the disease is selected from the group comprising tumor diseases.

En un aspecto adicional, el problema esencial de la presente invención se resuelve mediante el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o el vector de acuerdo con la presente invención y/o una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención para usar en la prevención y/o tratamiento de un paciente con necesidad de tal prevención y/o tratamiento. In a further aspect, the essential problem of the present invention is solved by the nucleic acid according to the present invention and / or the vector according to the present invention and / or a pharmaceutical composition according to the present invention for use in the prevention and / or treatment of a patient in need of such prevention and / or treatment.

En una modalidad adicional, un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o un vector de acuerdo con la presente invención se usan para la fabricación de un medicamento. El medicamento puede ser para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad, donde tal enfermedad se selecciona del grupo que comprende enfermedades tumorales. La enfermedad tumoral puede seleccionarse del grupo que comprende tumores sólidos, tumores metastásicos que incluyen tumores PTEN negativos, tumores que son resistentes a los fármacos y tumores donde se puede usar la inhibición de RTP801 para la sensibilización. Más aun, la enfermedad tumoral puede ser una enfermedad tumoral en etapa terminal, o puede involucrar células que son supresores tumorales negativos; dicho supresor tumoral puede ser PTEN. In a further embodiment, a nucleic acid according to the present invention and / or a vector according to the present invention is used for the manufacture of a medicament. The medication may be for the prevention and / or treatment of a disease, where such disease is selected from the group comprising tumor diseases. Tumor disease can be selected from the group comprising solid tumors, metastatic tumors that include negative PTEN tumors, tumors that are drug resistant and tumors where RTP801 inhibition can be used for sensitization. Moreover, the tumor disease may be a terminal stage tumor disease, or it may involve cells that are negative tumor suppressors; said tumor suppressor may be PTEN.

Un aspecto adicional de la presente descripción es un método para diseñar o seleccionar un ácido nucleico que es adecuado para la regulación descendente de RTP801, que comprende las siguientes etapas: A further aspect of the present description is a method for designing or selecting a nucleic acid that is suitable for the down-regulation of RTP801, which comprises the following steps:

a) diseñar o seleccionar un ácido nucleico que es adecuado para la regulación descendente de RTP801; b) evaluar el efecto de un ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de los aspectos anteriores de la presente invención; y c) comparar el efecto del ácido nucleico de la etapa a) con el efecto del ácido nucleico de la etapa b). a) design or select a nucleic acid that is suitable for down-regulation of RTP801; b) evaluate the effect of a nucleic acid according to any of the above aspects of this invention; Y c) compare the effect of the nucleic acid of step a) with the effect of the nucleic acid of step b).

En un aspecto, el efecto es la regulación descendente de RTP801. In one aspect, the effect is the down regulation of RTP801.

Un aspecto adicional de la presente descripción es el uso de un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención como un sensibilizador, en particular como un sensibilizador en el tratamiento de una enfermedad, por lo que dicha enfermedad se selecciona preferentemente del grupo que comprende tumores y más particularmente los tumores que son resistentes a un tratamiento con agentes quimioterapéuticos y/o radioterapéuticos. Se describen en la presente otras enfermedades para las cuales un ácido nucleico de la presente invención puede servir como sensibilizador. A further aspect of the present description is the use of a nucleic acid according to the present invention as a sensitizer, in particular as a sensitizer in the treatment of a disease, whereby said disease is preferably selected from the group comprising tumors and more particularly tumors that are resistant to a treatment with chemotherapeutic and / or radiotherapeutic agents. Other diseases for which a nucleic acid of the present invention can serve as a sensitizer are described herein.

Esta solicitud describe que un ácido nucleico que comprende una estructura de hebra doble la cual es específica para RTP801 es un medio adecuado de inhibir la angiogénesis/crecimiento de la vasculatura y la fuga vascular, (ambos de la vasculatura existente y de la vasculatura en crecimiento). Adicionalmente, esta solicitud describe (sin estar atados por la teoría) que RTP801 que es una proteína inducible por el estrés (inducida por hipoxia, estrés oxidativo, estrés térmico, estrés ER), es un factor que actúa en el ajuste fino de la respuesta celular al desbalance de la energía. Así, la inhibición de RTP801 por dicha hebra doble de ácido nucleico es adecuada para el tratamiento de cualquier enfermedad donde las células se deben rescatar de la apoptosis debido a condiciones de estrés (por ejemplo, las enfermedades acompañadas por la muerte de las células normales) o donde las células adaptadas a condiciones de estrés debido a los cambios en la expresión de RTP801, se deben matar (por ejemplo, las células tumorales). En este último caso, tras la inhibición de RTP801 a través de dicho ácido nucleico de hebra doble, este factor de supervivencia con función antiapoptótica en las células hipóxicas, más particularmente en las células cancerosas hipóxicas, se hace ineficaz lo que permite de este modo, conducir a la apoptosis a las células que carecen de la protección mediada por RTP801. Esto adicionalmente se puede producir cuando otros factores promotores de la apoptosis están presentes. Tales otros factores promotores de la apoptosis incluyen, entre otros, la quimioterapia y la radioterapia. En otras palabras, el ácido nucleico de hebra doble de acuerdo con la presente invención puede ser eficaz solo (monoterapia) en el tratamiento del cáncer y también como una terapia complementaria. This application describes that a nucleic acid comprising a double strand structure which is specific for RTP801 is a suitable means of inhibiting the angiogenesis / growth of the vasculature and vascular leakage (both of the existing vasculature and the growing vasculature ). Additionally, this application describes (without being bound by theory) that RTP801 which is a stress-inducible protein (induced by hypoxia, oxidative stress, thermal stress, ER stress), is a factor that acts in fine-tuning the response cell to the imbalance of energy. Thus, the inhibition of RTP801 by said double strand of nucleic acid is suitable for the treatment of any disease where cells must be rescued from apoptosis due to stress conditions (for example, diseases accompanied by the death of normal cells) or where cells adapted to stress conditions due to changes in the expression of RTP801, must be killed (for example, tumor cells). In the latter case, after the inhibition of RTP801 through said double-stranded nucleic acid, this survival factor with antiapoptotic function in hypoxic cells, more particularly in hypoxic cancer cells, becomes ineffective thus allowing, lead to apoptosis to cells that lack protection mediated by RTP801. This can additionally occur when other apoptosis promoting factors are present. Such other factors promoting apoptosis include, among others, chemotherapy and radiotherapy. In other words, the double stranded nucleic acid according to the present invention can be effective only (monotherapy) in the treatment of cancer and also as a complementary therapy.

Tal estructura de hebra doble comprende una primera hebra y una segunda hebra, por lo que la primera hebra comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda hebra comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, por lo que el primer tramo es o bien idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 y por lo cual el segundo tramo es o bien idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. Por medio del uso particular de RTP801 como un objetivo para dicho tipo de ácido nucleico de hebra doble, es por tanto posible dirigir inmediatamente un objetivo en la cascada implicada en el crecimiento y el desarrollo de la vasculatura y la angiogénesis, respectivamente, y de este modo, de una manera diferente comparada a la vía usada por los inhibidores de VEGF, tales como los anticuerpos VEGF. Sin desear estar atados por ninguna teoría, los presentes inventores asumen que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede ejercer su función en aquellas células que proporcionan un fondo que está implicado o se observa en relación con que se produzca cualquier enfermedad indeseada, particularmente la angiogénesis inducida por hipoxia y/o el crecimiento o desarrollo de la vasculatura. Esta interpretación se apoya en el hallazgo de que los ratones knock-out para Such a double strand structure comprises a first strand and a second strand, whereby the first strand comprises a first stretch of contiguous nucleotides and the second strand comprises a second stretch of contiguous nucleotides, whereby the first stretch is either identical or complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801 and whereby the second segment is either identical or complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801. Through the particular use of RTP801 as a target for said type of double stranded nucleic acid, it is therefore possible to immediately target a target in the cascade involved in the growth and development of vasculature and angiogenesis, respectively, and of this mode, in a different way compared to the route used by VEGF inhibitors, such as VEGF antibodies. Without wishing to be bound by any theory, the present inventors assume that the nucleic acid according to the present invention can exert its function in those cells that provide a background that is involved or is observed in relation to any unwanted disease, particularly hypoxia-induced angiogenesis and / or the growth or development of the vasculature. This interpretation is supported by the finding that knock-out mice for

RTP801 no presentan ningún fenotipo distinto del de los ratones de tipo salvaje bajo condiciones no hipóxicas. Sólo tras de la inducción de la hipoxia como se observa en un estado de enfermedad tal como, por ejemplo, el crecimiento del tumor, el knock-out relacionado con RTP801 resulta en una patología similar a la observada en los humanos que sufren de este tipo de enfermedad. RTP801 do not present any phenotype other than wild-type mice under non-hypoxic conditions. Only after the induction of hypoxia as seen in a disease state such as, for example, tumor growth, the knockout related to RTP801 results in a pathology similar to that observed in humans suffering from this type of disease

Se entenderá que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención es preferentemente un ácido nucleico funcional. Tal como se usa en la presente, el término ácido nucleico funcional significa preferentemente un ácido nucleico cuya función es diferente de ser activo en la célula como un molde para la transcripción de cualquier ARNhc, ARNm, o cualquier otro producto de la transcripción, por lo que o bien dicho ARNhc, ARNm o cualquier otro producto de la transcripción, respectivamente, o el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención está sujeto a un proceso de traducción, preferentemente un proceso de traducción celular, que resulta en una proteína RTP801 biológicamente activa. Es necesario reconocer que un ácido nucleico funcional tal como se usa preferentemente en la presente es capaz de reducir la expresión de un ácido nucleico objetivo. Con mayor preferencia, dicha reducción se basa en un proceso post-transcripcional de silenciamiento génico del ácido nucleico objetivo. Aún con mayor preferencia, dicha reducción se basa en la interferencia de ARN. Con la máxima preferencia, una forma del ácido nucleico funcional es una molécula de ARNip o cualquier otra molécula que tiene el mismo efecto que una molécula de ARNip. Tal molécula adicional se selecciona del grupo que comprende los ARNip, los ARNip sintéticos, los ARNhc y los ARNhc sintéticos. Como se usa en la presente los ARNip pueden comprender adicionalmente los vectores de expresión derivados de ARNip, por lo que el vector de expresión es en una modalidad preferida, un virus tal como el adenovirus, los virus adeno-asociados, el virus del herpes y los lentivirus. Como se usa en la presente, ARNhc significa preferentemente ARN de horquilla corta. Tal ARNhc se puede fabricar sintéticamente o se puede generar usando los sistemas de vectores de expresión codificados, preferentemente usando los promotores de la ARN polimerasa III. En relación con esto, es necesario reconocer que la funcionalidad del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención está dirigida a RTP801 al cual también preferentemente se hace referencia en la presente como el objetivo y el ácido nucleico que codifica para dicho objetivo como el ácido nucleico objetivo. It will be understood that the nucleic acid according to the present invention is preferably a functional nucleic acid. As used herein, the term "functional nucleic acid" preferably means a nucleic acid whose function is different from being active in the cell as a template for the transcription of any mRNA, mRNA, or any other transcription product, so that either said mRNA, mRNA or any other transcription product, respectively, or the nucleic acid according to the present invention is subject to a translation process, preferably a cellular translation process, resulting in a biologically active RTP801 protein . It is necessary to recognize that a functional nucleic acid as preferably used herein is capable of reducing the expression of a target nucleic acid. More preferably, said reduction is based on a post-transcriptional process of gene silencing of the target nucleic acid. Even more preferably, said reduction is based on RNA interference. Most preferably, one form of the functional nucleic acid is an siRNA molecule or any other molecule that has the same effect as an siRNA molecule. Such an additional molecule is selected from the group comprising siRNAs, synthetic siRNAs, hRNAs and synthetic hRNAs. As used herein, siRNAs may additionally comprise expression vectors derived from siRNAs, whereby the expression vector is in a preferred embodiment, a virus such as adenovirus, adeno-associated viruses, herpes virus and The lentiviruses. As used herein, hRNA preferably means short hairpin RNA. Such hRNA can be manufactured synthetically or can be generated using coded expression vector systems, preferably using RNA polymerase III promoters. In this connection, it is necessary to recognize that the functionality of the nucleic acid according to the present invention is directed to RTP801 which is also preferably referred to herein as the objective and the nucleic acid encoding said objective as the nucleic acid objective.

Como se usa preferentemente en la presente, la estructura de hebra doble del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención comprende cualquier estructura de hebra doble, por lo que dicha estructura de hebra doble se genera preferentemente por el primer tramo y el segundo tramo lo proporciona el ácido nucleico que tiene el diseño básico. La estructura de hebra doble puede comprender uno o varios desajustes. Dicha estructura de hebra doble está formada por el pareamiento de bases Watson-Crick y/o el pareamiento de bases Hoogsteen y/o mecanismos similares de pareamiento de bases. En base al diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, se prefiere que un tramo se encuentre en orientación antisentido con respecto a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este, mientras que el otro tramo está en la orientación sentido con una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este. Debido a esto, un tramo es complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este, y el otro tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este. En relación con esto, es preciso reconocer que el término idéntico, por supuesto, significa también parcialmente idénticos, por lo que la identidad, expresada como homología, es al menos 80%, preferentemente 90%, con mayor preferencia 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%. Similar a la definición de identidad, la complementariedad se puede definir en términos de homología, por lo que dicha homología está en el mismo intervalo que la identidad si la hebra complementaria se tradujera en la hebra idéntica de acuerdo con las reglas de pareamiento de bases Watson-Crick. En una modalidad alternativa, un tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este y el otro tramo es complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 o una parte de este. As preferably used herein, the double stranded structure of the nucleic acid according to the present invention comprises any double stranded structure, whereby said double stranded structure is preferably generated by the first section and the second section provides it. the nucleic acid that has the basic design. The double strand structure may comprise one or more mismatches. Said double strand structure is formed by Watson-Crick base pairing and / or Hoogsteen base pairing and / or similar base pairing mechanisms. Based on the basic design of the nucleic acid according to the present invention, it is preferred that a section is in antisense orientation with respect to a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof, while the other section is in the sense orientation with a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof. Because of this, one section is complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof, and the other section is identical to a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof. In relation to this, it is necessary to recognize that the identical term, of course, also means partially identical, so that the identity, expressed as homology, is at least 80%, preferably 90%, more preferably 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100%. Similar to the definition of identity, complementarity can be defined in terms of homology, so that homology is in the same range as identity if the complementary strand were translated into the identical strand according to the Watson base pairing rules -Crick. In an alternative embodiment, one section is identical to a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof and the other section is complementary to a nucleic acid sequence encoding RTP801 or a part thereof.

En una modalidad preferida, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención regula de forma descendente la función de RTP801. La regulación descendente de la función de RTP801 preferentemente sucede por la reducción en el nivel de expresión a nivel de proteínas y/o el nivel de ARNm, con lo cual un menor nivel de expresión, preferentemente a nivel de proteínas, puede ser tan pequeño como 5% y ser tan alto como 100%, con referencia a una expresión bajo condiciones en donde el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención no se administra o no es funcionalmente activo. Tales condiciones son, preferentemente, las condiciones de o como presente en un sistema de expresión, preferentemente un sistema de expresión para RTP801. Tal sistema de expresión es preferentemente un sistema de traducción que puede ser un sistema de traducción in vitro, con mayor preferencia una célula, órgano y/u organismo. Con mayor preferencia el organismo es un organismo multicelular, con mayor preferencia un mamífero, en el que dicho mamífero se selecciona preferentemente del grupo que comprende el hombre, mono, ratón, rata, conejillo de indias, conejo, gato, perro, oveja, vaca, caballo, ganado vacuno y porcino. En relación con la regulación descendente, es preciso reconocer que dicha regulación descendente puede ser una función del tiempo, es decir, el efecto de regulación descendente no se observa necesariamente inmediatamente después de la administración o la activación funcional de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención, pero puede estar diferida en el tiempo, así como en el espacio, es decir, en diversas células, tejidos y/u órganos. Dicho aplazamiento puede variar de 5% -100%, preferentemente de 10 a 50%. Será reconocido por aquellos con experiencia en la materia que una reducción del 5% para un período de tiempo más largo podría ser tan eficaz como una reducción del 100% en un período de tiempo más corto. Aquellos con experiencia en la materia también reconocerán que dicho aplazamiento depende fuertemente de la funcionalidad del ácido nucleico particular que se use realmente, así como en la población de células objetivo y, por tanto, en última instancia, de la enfermedad a tratar y/o prevenir de acuerdo a la enseñanza técnica de la presente solicitud. En tanto, una reducción de 5% en un período de tiempo más largo podría ser tan eficaz como el 100% de In a preferred embodiment, the nucleic acid according to the present invention downregulates the function of RTP801. The down-regulation of the function of RTP801 preferably occurs by the reduction in the level of expression at the level of proteins and / or the level of mRNA, whereby a lower level of expression, preferably at the level of proteins, can be as small as 5% and be as high as 100%, with reference to an expression under conditions where the nucleic acid according to the present invention is not administered or is not functionally active. Such conditions are preferably the conditions of or as present in an expression system, preferably an expression system for RTP801. Such an expression system is preferably a translation system that can be an in vitro translation system, more preferably a cell, organ and / or organism. More preferably, the organism is a multicellular organism, more preferably a mammal, in which said mammal is preferably selected from the group comprising man, monkey, mouse, rat, guinea pig, rabbit, cat, dog, sheep, cow , horse, cattle and pigs. In relation to down-regulation, it is necessary to recognize that said down-regulation may be a function of time, that is, the effect of down-regulation is not necessarily observed immediately after the administration or functional activation of nucleic acids according to the present invention, but may be deferred in time, as well as in space, that is, in various cells, tissues and / or organs. Said postponement may vary from 5% -100%, preferably from 10 to 50%. It will be recognized by those with experience in the field that a 5% reduction for a longer period of time could be as effective as a 100% reduction in a shorter period of time. Those with experience in the field will also recognize that such postponement depends strongly on the functionality of the particular nucleic acid that is actually used, as well as on the population of target cells and, therefore, ultimately, on the disease to be treated and / or prevent according to the technical teaching of this application. Meanwhile, a 5% reduction over a longer period of time could be as effective as 100% of

reducción durante un período de tiempo más corto. También aquellos con experiencia en la materia reconocerán que el aplazamiento puede ocurrir a cualquier nivel como se describió anteriormente, es decir, un aplazamiento en función, por lo que dicha función es cualquier función exhibida por RTP801, un aplazamiento en la expresión de proteína o un aplazamiento en el nivel de expresión del ARNm. reduction for a shorter period of time. Also those with experience in the field will recognize that the postponement can occur at any level as described above, that is, a postponement in function, so that said function is any function exhibited by RTP801, a postponement in the expression of protein or a postponement in mRNA expression level.

El primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos contiguos. Aquellos con experiencia en la materia reconocerán que el primer tramo debe tener una longitud que sea adecuada para permitir direccionar específicamente a una secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 y más específicamente el ácido nucleico que codifica para RTP801 presente en el sistema de traducción, cuando la expresión de RTP801 se va a reducir. Nuevamente, sin querer limitarse por ninguna teoría o cualquier modo de acción del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, parece que hay una interacción entre el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801, preferentemente a nivel de la transcripción, es decir, tras la generación de un ARNm a partir de la correspondiente secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. Debido a la probabilidad de que cualquier secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sea idéntica o complementaria a una secuencia contenida en el genoma o transcriptoma del sistema de traducción, la longitud del primer tramo por lo tanto debe ser tan largo como para asegurarse que, bajo el supuesto de que algún tipo de pareamiento de bases entre el ácido nucleico que codifica para RTP801 y una de las hebras del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se produce realmente, sólo la secuencia que codifica para RTP801 pero no otra secuencia de codificación, preferentemente ningún otra secuencia de codificación esencial, del genoma o el transcriptoma está dirigida para o por dicho pareamiento de bases. Mediante esta longitud, la aparición de efectos fuera del objetivo puede reducirse y preferentemente eliminarse. Para aumentar la rigurosidad de este modo de direccionar específicamente RTP801 y la secuencia de ácido nucleico que codifica éste, el primer tramo tiene preferentemente una longitud de al menos 18 o 19 nucleótidos. El límite superior para la longitud del primer tramo es preferentemente menor que 50 nucleótidos, sin embargo, la longitud puede ser significativamente más larga y puede comprender 100, 200 o incluso 500 nucleótidos o cualquier longitud entre estas. Aparte de esto, alguien con experiencia en la materia prefiere tener un primer tramo más bien corto, tan corto como sea la secuencia, particularmente en el caso de que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se sintetiza químicamente, menos tiempo y material de consumo de la síntesis de éste y menor será la velocidad a la que los nucleótidos incorrectos se insertan en la secuencia respectiva. Otro factor que se debe tener en cuenta en relación con la fijación de la longitud del primer tramo es el hecho de que, típicamente a una longitud más allá de 50 o más nucleótidos, se puede observar una respuesta inespecífica al interferón. Depende de la afección particular a tratar si este tipo de respuesta inespecífica al interferón se puede tolerar o no. Por ejemplo, una respuesta al interferón se podría tolerar si la respuesta al interferón y/o la expresión de los genes del interferón se pueden limitar a las células patogénicas. The first section comprises at least 14 contiguous nucleotides. Those skilled in the art will recognize that the first section must have a length that is suitable to allow specifically targeting a nucleic acid sequence encoding RTP801 and more specifically the nucleic acid encoding RTP801 present in the translation system, when RTP801 expression is going to reduce. Again, without wishing to be limited by any theory or any mode of action of the nucleic acid according to the present invention, it seems that there is an interaction between the nucleic acid according to the present invention and the nucleic acid sequence encoding RTP801, preferably at the level of transcription, that is, after the generation of an mRNA from the corresponding nucleic acid sequence encoding RTP801. Due to the probability that any nucleic acid sequence according to the present invention is identical or complementary to a sequence contained in the genome or transcriptome of the translation system, the length of the first segment must therefore be so long as to ensure whereas, under the assumption that some type of base pairing between the nucleic acid encoding RTP801 and one of the strands of the nucleic acid according to the present invention actually occurs, only the sequence encoding RTP801 but not another sequence of coding, preferably no other essential coding sequence, of the genome or transcriptome is directed to or by said base pairing. Through this length, the appearance of effects outside the target can be reduced and preferably eliminated. To increase the rigor of this way of specifically targeting RTP801 and the nucleic acid sequence encoding it, the first section preferably has a length of at least 18 or 19 nucleotides. The upper limit for the length of the first section is preferably less than 50 nucleotides, however, the length may be significantly longer and may comprise 100, 200 or even 500 nucleotides or any length between them. Apart from this, someone with experience in the field prefers to have a rather short first section, as short as the sequence is, particularly in the case that the nucleic acid according to the present invention is chemically synthesized, less time and material. Synthesis consumption of this and lower will be the rate at which the incorrect nucleotides are inserted into the respective sequence. Another factor that must be taken into account in relation to the fixation of the length of the first section is the fact that, typically at a length beyond 50 or more nucleotides, a nonspecific response to interferon can be observed. It depends on the particular condition to be treated if this type of nonspecific response to interferon can be tolerated or not. For example, an interferon response could be tolerated if the interferon response and / or interferon gene expression can be limited to pathogenic cells.

En vista de esto, las longitudes más preferidas del primer tramo son de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, 18 a 30 nucleótidos, 19 a 27 nucleótidos, 21 a 25 nucleótidos y 19 a 23 nucleótidos. In view of this, the most preferred lengths of the first section are from about 14 to 40 nucleotides, 18 to 30 nucleotides, 19 to 27 nucleotides, 21 to 25 nucleotides and 19 to 23 nucleotides.

Las mismas consideraciones mencionadas anteriormente para el primer tramo son aplicables al segundo tramo, el cual puede comprender por tanto cualquier longitud como se describe en la presente en relación con el primer tramo. Está también dentro de la presente invención que la longitud del primer tramo es diferente de la longitud del segundo tramo, sin embargo, se prefiere que ambos tramos tengan la misma longitud. The same considerations mentioned above for the first tranche are applicable to the second tranche, which can therefore comprise any length as described herein in relation to the first tranche. It is also within the present invention that the length of the first section is different from the length of the second section, however, it is preferred that both sections have the same length.

De acuerdo con el diseño básico del ácido nucleico, el primer tramo y el segundo tramo son partes de la primera hebra y la segunda hebra, respectivamente, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Se reconocerá que en cualquier extremo, es decir, en el extremo 5', así como el extremo 3' la primera hebra y/o la segunda hebra pueden comprender uno o varios nucleótidos, preferentemente nucleótidos adicionales, en cualquier combinación. According to the basic design of the nucleic acid, the first section and the second section are parts of the first strand and the second strand, respectively, of the nucleic acid according to the present invention. It will be recognized that at any end, that is, at the 5 'end, as well as the 3' end the first strand and / or the second strand may comprise one or more nucleotides, preferably additional nucleotides, in any combination.

En relación con lo mismo, es necesario reconocer que los nucleótidos de la hebra individual que van más allá del(de los) extremo(s) del tramo correspondiente a la hebra respectiva se pueden usar para contribuir adicionalmente a la complementariedad e identidad, respectivamente, del tramo y, por tanto el direccionamiento específico de la secuencia del ácido nucleico que codifica para RTP801. In relation to the same, it is necessary to recognize that the nucleotides of the individual strand that go beyond the end (s) of the section corresponding to the respective strand can be used to further contribute to the complementarity and identity, respectively, of the section and, therefore, the specific addressing of the nucleic acid sequence encoding RTP801.

Se reconocerá que, básicamente, sobre la base de la enseñanza técnica que se proporciona en la presente, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede dirigirse a cualquier parte de la secuencia del ácido nucleico que codifica para RTP801, preferentemente codifica para RTP801 en el sistema de traducción, cuando la expresión de RTP801 se va a reducir. En tanto, la presente invención comprende cualquier ácido nucleico que tiene las características como las definidas en la presente, por lo cual las hebras y tramos complementarios e idénticos del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, básicamente, pueden comenzar desde cualquier nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. Por consiguiente, bajo la condición de que el primer tramo de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención es complementario a la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801, es decir, es la cadena antisentido de esta, o está en la misma orientación antisentido, el primer nucleótido de dicho tramo, es decir, el nucleótido más al terminal 5' corresponde, es decir, se alinea con el último nucleótido de la secuencia que codifica para RTP801 en el extremo 3’. En una modalidad adicional dicho nucleótido más al terminal 5' corresponde al penúltimo nucleótido del ácido nucleico que codifica para RTP801 y así sucesivamente hasta que se alcanza la última posición la cual, dada la longitud del tramo antisentido, aún permite que la cadena antisentido del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sea complementaria a la secuencia de ácido nucleico que codifica para It will be recognized that, basically, based on the technical teaching provided herein, the nucleic acid according to the present invention can be directed to any part of the nucleic acid sequence encoding RTP801, preferably encoding RTP801 in the translation system, when the expression of RTP801 is going to be reduced. Meanwhile, the present invention comprises any nucleic acid having the characteristics as defined herein, whereby the complementary and identical strands and stretches of the nucleic acid according to the present invention can basically start from any nucleotide of the nucleic acid sequence encoding RTP801. Therefore, under the condition that the first stretch of nucleic acid according to the present invention is complementary to the nucleic acid sequence encoding RTP801, that is, it is the antisense chain thereof, or is in the same antisense orientation. , the first nucleotide of said section, that is, the nucleotide plus the 5 'terminal corresponds, that is, it aligns with the last nucleotide of the sequence encoding RTP801 at the 3' end. In a further embodiment said nucleotide plus the 5 'terminal corresponds to the penultimate nucleotide of the nucleic acid encoding RTP801 and so on until the last position is reached which, given the length of the antisense section, still allows the antisense chain of the acid nucleic according to the present invention is complementary to the nucleic acid sequence encoding for

RTP801. En tanto, cualquier ácido nucleico de acuerdo con la presente invención está dentro de la presente invención que se podría generar mediante el escaneo de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 a partir del nucleótido más al terminal 5' de éste y, por encima del diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y la realización de las características de dicho ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Las mismas consideraciones se aplican a las modalidades descritas en la presente donde la complementariedad y la identidad del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se proporciona no sólo por el primer tramo y el segundo tramo, respectivamente, pero tal complementariedad e identidad también implican uno o más nucleótidos más allá del primer tramo y del segundo tramo, respectivamente, luego, son parte de la primera hebra y la segunda hebra, respectivamente. RTP801. Meanwhile, any nucleic acid according to the present invention is within the present invention that could be generated by scanning the nucleic acid sequence encoding RTP801 from the nucleotide plus to the 5 'terminal thereof and, above of the basic design of the nucleic acid according to the present invention and the realization of the characteristics of said nucleic acid according to the present invention. The same considerations apply to the modalities described herein where the complementarity and identity of the nucleic acid according to the present invention is provided not only by the first section and the second section, respectively, but such complementarity and identity also imply one or more nucleotides beyond the first stretch and the second stretch, respectively, then, are part of the first strand and the second strand, respectively.

De los diferentes ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención como se describe en la presente, se prefieren particularmente aquellos con números de referencia interna 14, 22, 23, 25, 27, 39, (ver la Tabla A). En relación con la misma, es de señalar que los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención que se pueden usar en humanos y un modelo animal tal como rata y/o ratón son particularmente útiles. La ventaja sorprendente de estos ácidos nucleicos particulares de acuerdo con la presente invención reside en el hecho de que son eficaces tanto en humanos y en un modelo animal lo cual significa que los resultados obtenidos de las pruebas en el modelo animal se pueden transferir inmediatamente a partir del modelo animal al ser humano y más particularmente sin la necesidad de realizar ningún cambio en la secuencia humana lo cual sería de otro modo necesario en caso de que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se diseñara de tal manera que comprende (una) secuencia (s) que difiere(n) entre las especies, más particularmente de las especies que se usan para las de prueba en modelos animales y el hombre como los organismos preferidos finales o el paciente. Se prefiere adicionalmente que estos ácidos nucleicos tengan un patrón de modificación tal como también se describe en los ejemplos. Of the different nucleic acids according to the present invention as described herein, those with internal reference numbers 14, 22, 23, 25, 27, 39, are particularly preferred (see Table A). In connection therewith, it should be noted that the nucleic acids according to the present invention that can be used in humans and an animal model such as rat and / or mouse are particularly useful. The surprising advantage of these particular nucleic acids according to the present invention lies in the fact that they are effective both in humans and in an animal model which means that the results obtained from tests in the animal model can be transferred immediately from from the animal model to the human being and more particularly without the need to make any change in the human sequence which would be otherwise necessary in case the nucleic acid according to the present invention was designed in such a way that it comprises (one) sequence (s) that differ (n) between the species, more particularly of the species that are used for the test in animal models and man as the final preferred organisms or the patient. It is further preferred that these nucleic acids have a modification pattern as also described in the examples.

Sin embargo, también está dentro de la presente descripción que cualquiera de las secuencias de acuerdo con las sec. con núms. de ident. 3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91-96 y 101-102 y las combinaciones respectivas que resulten en las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la presente descripción que tienen números de referencia internos 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41, 42, 49 y 50, que están sólo parcialmente contenidas en un ácido nucleico adicional de acuerdo con la presente descripción. Preferentemente, los ácidos nucleicos adicionales de acuerdo con la presente descripción comprenden al menos 14 nucleótidos contiguos de las sec. con núms. de ident.3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91-96 y 101-102, y más preferentemente 14 pares de bases de nucleótidos contiguos en cualquier extremo de la estructura de hebra doble que comprende el primer tramo y el segundo tramo como se indica en la tabla anterior. Aquellos con experiencia en la materia entenderán que, dada la longitud potencial del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y particularmente de los tramos individuales que forman dicho ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, algunos cambios a cada lado respecto a la secuencia que codifica RTP801 es posible, por lo que tales cambios pueden ser de hasta 1, 2, 3, 4, 5 y 6 nucleótidos en ambas direcciones, y mediante el cual las moléculas de ácido nucleico de hebra doble que se generan así, también deberán estar dentro de la presente invención. However, it is also within the present description that any of the sequences according to sec. with no. of ident. 3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91-96 and 101-102 and the respective combinations resulting in the nucleic acid molecules of according to the present description which have internal reference numbers 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41, 42, 49 and 50, which are only partially contained in an additional nucleic acid according to the present description. Preferably, the additional nucleic acids according to the present description comprise at least 14 contiguous nucleotides of sec. with no. of ident. 3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91-96 and 101-102, and more preferably 14 base pairs of nucleotides contiguous at any end of the double strand structure comprising the first section and the second section as indicated in the previous table. Those skilled in the art will understand that, given the potential length of the nucleic acid according to the present invention and particularly of the individual sections that form said nucleic acid according to the present invention, some changes on each side with respect to the sequence that encoding RTP801 is possible, so such changes can be up to 1, 2, 3, 4, 5 and 6 nucleotides in both directions, and by which the double-stranded nucleic acid molecules that are generated in this way, should also be within the present invention.

En una modalidad preferida de la presente invención, el primer tramo y la primera hebra tienen la misma longitud. Del mismo modo, se prefiere que la segunda hebra tenga la misma longitud que el segundo tramo, por lo que es incluso más preferido que el primer tramo y el segundo tramo tengan la misma longitud. En una modalidad aún más preferida, la primera hebra sólo comprende el primer tramo y la segunda hebra comprende sólo el segundo tramo. En una modalidad incluso más preferida ni el primer tramo, y por lo tanto la primera hebra, ni el segundo tramo, y por lo tanto la segunda hebra, comprenden un saliente. En otras palabras, está también dentro de la presente invención que los ácidos nucleicos de hebra doble de acuerdo con la presente invención sean de extremos romos, preferentemente en cada extremo de la estructura de hebra doble de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención. Tal estructura de extremos romos se puede realizar en relación con cualquier otra modalidad de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención, particularmente aquellas modalidades en la que los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención tienen un patrón de modificación, con mayor preferencia un patrón de modificación como se describe en la presente. In a preferred embodiment of the present invention, the first section and the first strand have the same length. In the same way, it is preferred that the second thread has the same length as the second section, so it is even more preferred that the first section and the second section have the same length. In an even more preferred embodiment, the first strand only comprises the first stretch and the second strand comprises only the second stretch. In an even more preferred embodiment neither the first section, and therefore the first thread, nor the second section, and therefore the second thread, comprise a projection. In other words, it is also within the present invention that the double stranded nucleic acids according to the present invention are blunt ends, preferably at each end of the double stranded structure of the nucleic acids according to the present invention. Such blunt end structure can be realized in relation to any other modality of nucleic acids according to the present invention, particularly those modalities in which nucleic acids according to the present invention have a modification pattern, more preferably a modification pattern as described herein.

En un aspecto adicional, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención tiene por lo tanto un diseño básico, que proporciona extremos romos en ambos extremos de la estructura del ácido nucleico de hebra doble de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, también está dentro de la presente invención que existe un saliente, es decir, un tramo de uno o más nucleótidos que sobresalen de la estructura de hebra doble. El saliente puede ser, en principio, en el extremo 5' de la cadena antisentido, en el extremo 3' de la cadena antisentido, en el extremo 5' de la cadena sentido y/o el extremo 3' de la cadena sentido. Es de señalar que la realización de cualquiera de dichas opciones sola, así como cualquier combinación de estas, está dentro de la presente invención. Es más preferida una combinación, donde el saliente está situado en el extremo 3' de la cadena antisentido y en el extremo 3' de la cadena sentido. Está también dentro de la presente invención que el saliente está en el extremo 5' de la cadena antisentido y en el extremo 5' de la cadena sentido. Adicionalmente, está dentro de la presente invención que el saliente está situado solamente en la cadena antisentido de la estructura de hebra doble, con mayor preferencia en el extremo 3' de la cadena antisentido de la estructura de hebra doble. In a further aspect, the nucleic acid according to the present invention therefore has a basic design, which provides blunt ends at both ends of the double stranded nucleic acid structure according to the present invention. However, it is also within the present invention that there is a projection, that is, a section of one or more nucleotides protruding from the double stranded structure. The projection may, in principle, be at the 5 'end of the antisense chain, at the 3' end of the antisense chain, at the 5 'end of the felt chain and / or the 3' end of the felt chain. It should be noted that the realization of any of said options alone, as well as any combination of these, is within the present invention. A combination is more preferred, where the projection is located at the 3 'end of the antisense chain and at the 3' end of the felt chain. It is also within the present invention that the projection is at the 5 'end of the antisense chain and at the 5' end of the felt chain. Additionally, it is within the present invention that the projection is located only in the antisense chain of the double strand structure, more preferably at the 3 'end of the antisense chain of the double strand structure.

En relación con los salientes, es de señalar que el saliente más el tramo forman preferentemente la hebra y las longitudes previstas para los tramos en la presente se aplican también a estas modalidades. El saliente individual In relation to the projections, it should be noted that the projection plus the section preferably form the strand and the lengths provided for the sections herein also apply to these modalities. Individual outgoing

puede, independiente de su ubicación, consistir en al menos un nucleótido. Sin embargo, el saliente individual puede comprender tanto como 10 y es preferentemente dos nucleótidos de largo. Está dentro de la presente invención que el respectivo nucleótido(s) que forma el saliente(s) es/son también complementario a la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 en el caso de que la primera hebra es complementaria a dicha secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801, y el saliente está en el extremo 3' o 5' de la cadena antisentido, o que el saliente(s) es/son idénticos a la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 en caso de que la primera hebra es idéntica a la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801 . Lo mismo se aplica a cualquier saliente situado en el segundo tramo del diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, por lo que es preciso reconocer que el diseño del saliente en el segundo tramo puede ser independiente del diseño del saliente del primer tramo. It can, regardless of its location, consist of at least one nucleotide. However, the individual protrusion may comprise as much as 10 and is preferably two nucleotides long. It is within the present invention that the respective nucleotide (s) forming the projection (s) is / are also complementary to the nucleic acid sequence encoding RTP801 in the event that the first strand is complementary to said acid sequence nucleic coding for RTP801, and the projection is at the 3 'or 5' end of the antisense chain, or that the projection (s) is / are identical to the nucleic acid sequence encoding RTP801 in case the first strand is identical to the nucleic acid sequence encoding RTP801. The same applies to any projection located in the second section of the basic design of the nucleic acid according to the present invention, so it is necessary to recognize that the design of the projection in the second section can be independent of the design of the projection of the first section .

Está también dentro de la presente invención que los nucleótidos que forman el saliente no son ni complementarios ni idénticos a los nucleótidos correspondientes de la secuencia de ácido nucleico que codifica para RTP801. Como se usa en la presente, y preferentemente en esta modalidad, "correspondiente" se refiere a los nucleótidos respectivos que siguen en el extremo 5' y/o el extremo 3' del tramo que tiene un nucleótido homólogo en el ácido nucleico que codifica para RTP801. It is also within the present invention that the nucleotides that form the projection are neither complementary nor identical to the corresponding nucleotides of the nucleic acid sequence encoding RTP801. As used herein, and preferably in this embodiment, "corresponding" refers to the respective nucleotides that follow at the 5 'end and / or the 3' end of the stretch having a homologous nucleotide in the nucleic acid encoding for RTP801.

Preferentemente, la primera hebra comprende en su extremo 3' dos nucleótidos, preferentemente desoxinucleótidos y con mayor preferencia dos TT y/o este tipo de nucleótidos también en el extremo 3' de la segunda hebra, por lo cual con mayor preferencia, la longitud del primer tramo y el segundo tramo es de 19 nucleótidos. De este modo las hebras comprenden el tramo y el saliente. En esta modalidad, la estructura de hebra doble consiste de 19 pares de bases y un saliente de dos nucleótidos en cada extremo del extremo 3' del tramo individual. Preferably, the first strand comprises at its 3 'end two nucleotides, preferably deoxynucleotides and more preferably two TT and / or this type of nucleotides also at the 3' end of the second strand, therefore more preferably, the length of the first section and the second section is 19 nucleotides. In this way the strands comprise the section and the projection. In this embodiment, the double stranded structure consists of 19 base pairs and a protrusion of two nucleotides at each end of the 3 'end of the individual segment.

En una modalidad preferida, el primer tramo y/o la primera hebra comprenden ribonucleótidos, por lo que se prefiere particularmente que el primer tramo consista en su totalidad de ribonucleótidos. Lo mismo se aplica para el segundo tramo y la segunda hebra, respectivamente. En relación con la misma, sin embargo, cada uno y cualquiera de los nucleótidos del primer tramo y segundo tramo, respectivamente, se modifican en una modalidad preferida. Lo mismo se aplica a la primera hebra y la segunda hebra, respectivamente. Particularmente los nucleótidos terminales, tanto si se trata de ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos, pueden tener un grupo OH que como tal se puede modificar. Tal grupo OH puede provenir de cualquier porción de azúcar del nucleótido, con mayor preferencia de la posición 5' en el caso del grupo 5' OH y/o de la posición 3' en el caso del grupo 3' OH o a partir de un grupo fosfato unido al porción de azúcar del nucleótido terminal respectivo. El grupo fosfato puede, en principio, estar unido a cualquier grupo OH del porción de azúcar del nucleótido. Preferentemente, el grupo fosfato está unido al grupo 5' OH del porción de azúcar en el caso del grupo 5' OH libre y/o con el grupo 3' OH del porción de azúcar en el caso del grupo 3' OH libre que todavía proporciona lo que se denomina en la presente como grupo 5' o 3' OH libre. In a preferred embodiment, the first stretch and / or the first strand comprise ribonucleotides, so it is particularly preferred that the first stretch consists entirely of ribonucleotides. The same applies to the second tranche and the second strand, respectively. In relation thereto, however, each and any of the nucleotides of the first and second tranches, respectively, are modified in a preferred embodiment. The same applies to the first strand and the second strand, respectively. Particularly the terminal nucleotides, whether they are ribonucleotides or deoxyribonucleotides, can have an OH group that as such can be modified. Such an OH group may come from any sugar portion of the nucleotide, more preferably from the 5 'position in the case of the 5' OH group and / or from the 3 'position in the case of the 3' OH group or from a group phosphate bound to the sugar portion of the respective terminal nucleotide. The phosphate group may, in principle, be linked to any OH group of the sugar portion of the nucleotide. Preferably, the phosphate group is attached to the 5'OH group of the sugar portion in the case of the free 5'OH group and / or with the 3'OH group of the sugar portion in the case of the free 3'OH group that still provides what is referred to herein as a free 5 'or 3' OH group.

Como se usa en la presente con cualquier estrategia para el diseño del ARNi o cualquier modalidad de ARNi descrita en la presente, el término modificación del extremo significa una entidad química añadida nucleótido más 5' o 3' de la primera y/o segunda hebra. Los ejemplos de tales modificaciones del extremo incluyen, pero sin limitarse a, fosfato 3' o 5', abásicos (deoxi) invertidos, amino, fluoro, cloro, bromo, CN, CF, metoxi, imidazol, caboxilato, tioato, alquilo inferior de C1 a C10, alquilo inferior sustituido, alcarilo o aralquilo, OCF3, OCN, O-, S-, o N-alquilo; O-, S-, o N-alquenilo; SOCH3; SO2CH3; ONO2; NO2, N3; heterocicloalquilo; heterocicloalcarilo aminoalquilamino; polialquilamino o sililo sustituido, entre otros, como se describe en las patentes Europeas EP 0 586 520 B1o EP 0 618 925 B1. As used herein with any strategy for the design of the RNAi or any modality of RNAi described herein, the term "end modification" means a chemical entity added nucleotide plus 5 'or 3' of the first and / or second strand. Examples of such modifications of the end include, but are not limited to, 3 'or 5' phosphate, inverted (deoxy) abasics, amino, fluoro, chloro, bromo, CN, CF, methoxy, imidazole, carboxylate, thioate, lower alkyl of C1 to C10, substituted lower alkyl, alkaryl or aralkyl, OCF3, OCN, O-, S-, or N-alkyl; O-, S-, or N-alkenyl; SOCH3; SO2CH3; ONO2; NO2, N3; heterocycloalkyl; heterocycloalkyl aminoalkylamino; substituted polyalkylamino or silyl, among others, as described in European patents EP 0 586 520 B1 or EP 0 618 925 B1.

Como se usa en la presente, alquilo o cualquier término que comprende "alquilo" preferentemente significa cualquier cadena de átomos de carbono que comprende 1 a 12, preferentemente 1 a 6 y más, preferentemente 1 a 2 átomos de As used herein, alkyl or any term comprising "alkyl" preferably means any chain of carbon atoms comprising 1 to 12, preferably 1 to 6 and more, preferably 1 to 2 atoms of

C. C.

Una modificación del extremo adicional es un grupo biotina. Tal grupo biotina puede preferentemente estar unido al nucleótido más 5' o al más 3' de la primera y/o segunda hebra o a ambos extremos. En una modalidad más preferida el grupo biotina se acopla a un polipéptido o una proteína. Está además dentro del alcance de la presente invención que el polipéptido o proteína esté unida a través de cualquiera de otras modificaciones del extremo antes mencionadas. El polipéptido o proteína puede conferir otras características a las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Entre otros el polipéptido o proteína puede actuar como un ligando para otra molécula. Si dicha otra molécula es un receptor, la función y la actividad del receptor pueden activarse por el ligando de unión. El receptor puede mostrar una actividad de internalización que permite una transfección efectiva de las moléculas de ácido nucleico unidas al ligando de acuerdo con la presente invención. Un ejemplo de ligando que se acopla a la molécula de ácido nucleico inventiva es VEGF y el receptor correspondiente es el receptor VEGF. A modification of the additional end is a biotin group. Such a biotin group may preferably be linked to the nucleotide plus 5 'or to the most 3' of the first and / or second strand or both ends. In a more preferred embodiment the biotin group is coupled to a polypeptide or a protein. It is also within the scope of the present invention that the polypeptide or protein is linked through any of the other end modifications mentioned above. The polypeptide or protein may confer other characteristics to the nucleic acid molecules according to the present invention. Among others, the polypeptide or protein can act as a ligand for another molecule. If said other molecule is a receptor, the function and activity of the receptor can be activated by the binding ligand. The receptor can show an internalization activity that allows effective transfection of the nucleic acid molecules bound to the ligand according to the present invention. An example of a ligand that is coupled to the inventive nucleic acid molecule is VEGF and the corresponding receptor is the VEGF receptor.

Varias posibles modalidades del ARNi de la presente invención con diferentes tipos de modificación(es) del extremo se presentan en la siguiente tabla 1. Several possible modalities of the RNAi of the present invention with different types of end modification (s) are presented in the following table 1.

TABLA 1: VARIAS MODALIDADES DEL ÁCIDO RIBONUCLEICO INTERFERENTE DE ACUERDO CON LA PRESENTE INVENCIÓN TABLE 1: VARIOUS MODALITIES OF INTERFERENT RIBONUCLEIC ACID IN ACCORDANCE WITH THE PRESENT INVENTION

1ra hebra./1er tramo 1st strand / 1st tranche

2dahebra/2do tramo 2nd thread / 2nd tranche

1ra hebra./1er tramo 1st strand / 1st tranche

2dahebra/2do tramo 2nd thread / 2nd tranche

1.) extremo 5' I 1.) 5'I end

OH libre OH libre OH free OH free

extremo 3' 3 'end

OH libre OH libre OH free OH free

2.) extremo 5' 2.) 5 'end

OH libre OH libre OH free OH free

extremo 3' 3 'end

modificación del extremo modificación del extremo end modification end modification

3.) extremo 5' 3.) 5 'end

OH libre OH libre OH free OH free

extremo 3' 3 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

4.) extremo 5' 4.) 5 'end

OH libre OH libre OH free OH free

extremo 3' 3 'end

modificación del extremo OH libre end modification OH free

5.) extremo 5' 5.) 5 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

extremo 3' 3 'end

OH libre OH libre OH free OH free

6.) extremo 5' 6.) 5 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

extremo 3' 3 'end

modificación del extremo OH libre end modification OH free

7.) extremo 5' 7.) 5 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

extremo 3' 3 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

8.) extremo 5' 8.) 5 'end

OH libre modificación del extremo OH free end modification

extremo 3' 3 'end

modificación del extremo modificación del extremo end modification end modification

Las distintas modificaciones del extremo como se describen en la presente se localizan preferentemente en la porción de ribosa de un nucleótido del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Más particularmente, la modificación del extremo puede estar unida a o reemplazar cualquier grupo OH de la porción de ribosa, que incluyen pero sin limitarse a la posición 2'OH, 3'OH y 5'OH, siempre que el nucleótido así modificado sea un nucleótido terminal. Los abásicos invertidos son nucleótidos, tanto desoxiribonucleótidos o ribonucleótidos que no tienen una porción de nucleobase. Este tipo de compuesto se describe, entre otros, en Sternberger, M., Schmiedeknecht, A., Kretschmer, A., Gebhardt, F., Leenders, F., Czauderna, F., Von Carlowitz, I., Engle, M., Giese, K., Beigelman, L. & Klippel, A. (2002). Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 12, 131-43 Cualquiera de las modificaciones del extremo anteriores puede usarse en relación con las distintas modalidades de ARNi representadas en la Tabla 1; cabe destacar que las modificaciones del extremo 5' mencionadas anteriormente están presentes generalmente sólo en la cadena sentido de la molécula ARNip. The various modifications of the end as described herein are preferably located in the ribose portion of a nucleotide of the nucleic acid according to the present invention. More particularly, the modification of the end may be attached to or replace any OH group of the ribose portion, including but not limited to the 2'OH, 3'OH and 5'OH position, provided that the nucleotide so modified is a nucleotide terminal. Inverted abbasics are nucleotides, both deoxyribonucleotides or ribonucleotides that do not have a nucleobase portion. This type of compound is described, among others, in Sternberger, M., Schmiedeknecht, A., Kretschmer, A., Gebhardt, F., Leenders, F., Czauderna, F., Von Carlowitz, I., Engle, M ., Giese, K., Beigelman, L. & Klippel, A. (2002). Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 12, 131-43 Any of the foregoing modifications may be used in relation to the different RNAi modalities depicted in Table 1; It should be noted that the modifications of the 5 'end mentioned above are generally present only in the sense chain of the siRNA molecule.

Otras modificaciones pueden relacionarse con la porción de nucleobase, la porción azúcar o la porción fosfato del nucleótido individual. Other modifications may be related to the nucleobase portion, the sugar portion or the phosphate portion of the individual nucleotide.

Dicha modificación de la porción de nucleobase puede ser tal que los derivados de adenina, guanina, citosina y timidina y uracilo, respectivamente, se modifican. Las nucleobases modificadas particularmente preferidas se seleccionan del grupo que comprende inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo, 2-propilo y otras alquiladeninas, 5-halo uracilo, 5-halocitosina, 5-halo citosina, 6-azacitosina, 6-aza timina, pseudo-uracilo, 4-tiouracilo, 8-halo adenina, 8aminoadenina, 8-tiol adenina, 8-tioalquil adeninas, 8-hidroxil adenina y otras adeninas 8-sustituidas, 8-halo guaninas, 8amino guanina, 8-tiol guanina, 8-tioalquil guanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otros aza-y deaza adeninas, otros aza-y deaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5-trifluoro citosina. Said modification of the nucleobase portion may be such that the derivatives of adenine, guanine, cytosine and thymidine and uracil, respectively, are modified. Particularly preferred modified nucleobases are selected from the group comprising inosine, xanthine, hypoxanthine, 2-aminoadenine, 6-methyl, 2-propyl and other alkyladenines, 5-halo uracil, 5-halocytosine, 5-halo cytosine, 6-azacytosine, 6-aza thymine, pseudo-uracil, 4-thiouracil, 8-halo adenine, 8-aminoadenine, 8-thiol adenine, 8-thioalkyl adenines, 8-hydroxyl adenine and other 8-substituted adenines, 8-halo guanines, 8amino guanine, 8 -thiol guanine, 8-thioalkyl guanine, 8-hydroxyguanine and other substituted guanines, other aza-and deaza adenines, other aza-and deaza guanines, 5-trifluoromethyl uracil and 5-trifluoro cytosine.

En otra modalidad preferida, la porción azúcar del nucleótido está modificada, en donde dicha modificación es preferentemente en la posición 2' de la porción de ribosa y desoxiribosa, respectivamente, del nucleótido. Con mayor preferencia, el grupo 2' OH se reemplaza con un grupo o porción seleccionada del grupo que comprende amino, fluoro, alcoxi y alquilo. Preferentemente, el alcoxi es metoxi o etoxi. Además preferentemente alquilo significa metilo, etil, propilo, isobutilo, butilo e isobutilo. Es aún más preferido que, no obstante el tipo de modificación, el nucleótido sea preferentemente un ribonucleótido. In another preferred embodiment, the sugar portion of the nucleotide is modified, wherein said modification is preferably in the 2 'position of the ribose and deoxyribose portion, respectively, of the nucleotide. More preferably, the 2'OH group is replaced with a group or portion selected from the group comprising amino, fluoro, alkoxy and alkyl. Preferably, the alkoxy is methoxy or ethoxy. Further preferably alkyl means methyl, ethyl, propyl, isobutyl, butyl and isobutyl. It is even more preferred that, notwithstanding the type of modification, the nucleotide is preferably a ribonucleotide.

La modificación de la porción fosfato es preferentemente seleccionada del grupo que comprende fosfotioatos. The modification of the phosphate portion is preferably selected from the group comprising phosphothioates.

Será de conocimiento de una persona con experiencia en la técnica que el ácido nucleico de la presente invención que consiste en una multitud de nucleótidos pueda formarse así por los nucleótidos que están enlazados a través de un enlace fosfodiéster o a través de un enlace fosfotioato, o una combinación de ambos a lo largo de la longitud de la secuencia de nucleótidos de la hebra individual y estiramiento, respectivamente. It will be known to a person skilled in the art that the nucleic acid of the present invention consisting of a multitude of nucleotides can thus be formed by nucleotides that are linked through a phosphodiester bond or through a phosphothioate bond, or a combination of both along the length of the nucleotide sequence of the individual strand and stretch, respectively.

Una forma adicional de los nucleótidos usados puede ser realmente ARNip que se describe, entre otros, en la solicitud de patente internacional WO 03/070918. An additional form of the nucleotides used may actually be siRNA which is described, among others, in the international patent application WO 03/070918.

Los nucleótidos que forman el primer tramo y la primera hebra, respectivamente, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención pueden comprender uno o más nucleótidos modificados, por lo cual el nucleótido individual modificado tiene una modificación que es preferentemente una modificación como se describe en la presente. Además de la modificación en particular, la modificación puede ser o comprender algún tipo de etiqueta, por lo que la etiqueta se selecciona del grupo de las etiquetas quimioluminiscentes, las etiquetas fluorescentes y las radioetiquetas. Aquellos con experiencia en la materia conocen este tipo de etiquetas y, por ejemplo, se describen en Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley y Sons, Baltimore, Maryland, 1998. El ácido nucleico marcado de este modo, también se puede usar de acuerdo con la presente invención para propósitos de diagnóstico o para controlar el sitio de acción, así como para organizar cualquier tratamiento, preferentemente en relación con cualquiera de las enfermedades descritas en la presente. The nucleotides that form the first stretch and the first strand, respectively, of the nucleic acid according to the present invention may comprise one or more modified nucleotides, whereby the modified individual nucleotide has a modification that is preferably a modification as described in the present. In addition to the particular modification, the modification may be or comprise some type of label, whereby the label is selected from the group of chemiluminescent labels, fluorescent labels and radiolabels. Those skilled in the art are aware of these types of labels and, for example, are described in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland, 1998. Nucleic acid labeled in this way is also described. It can be used in accordance with the present invention for diagnostic purposes or to control the site of action, as well as to organize any treatment, preferably in relation to any of the diseases described herein.

En una modalidad preferida, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se modifica de modo que los nucleótidos de pirimidina en el tramo o cadena sentido son nucleótidos 2' O-metil pirimidina y, ya sea adicionalmente o alternativamente, los nucleótidos de purina en el tramo o cadena sentido son nucleótidos 2'-desoxi purina. En una modalidad adicional, los nucleótidos de pirimidina presentes en el tramo sentido o cadena sentido son nucleótidos 2'desoxi-2'-fluoro pirimidina. In a preferred embodiment, the nucleic acid according to the present invention is modified so that the pyrimidine nucleotides in the sense stretch or chain are 2'O-methyl pyrimidine nucleotides and, either additionally or alternatively, the purine nucleotides in the stretch or sense chain are nucleotides 2'-deoxy purine. In a further embodiment, the pyrimidine nucleotides present in the sense or sense chain stretch are 2'-deoxy-2'-fluoro pyrimidine nucleotides.

En una modalidad alternativa, la modificación no se basa en la química de los nucleótidos, es decir, la modificación depende de si el nucleótido a modificarse es o bien un nucleótido de purina o un nucleótido de pirimidina, pero predominantemente se basa en la disposición espacial del nucleótido individual en el conjunto de la estructura de hebra doble del diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. In an alternative embodiment, the modification is not based on the chemistry of the nucleotides, that is, the modification depends on whether the nucleotide to be modified is either a purine nucleotide or a pyrimidine nucleotide, but predominantly based on the spatial arrangement of the individual nucleotide in the whole double strand structure of the basic nucleic acid design according to the present invention.

Más particularmente, ya sea la primera hebra y el primer tramo, respectivamente, o la segunda hebra y el segundo tramo, respectivamente, muestran un patrón espacial de modificación de los nucleótidos que forman dichos tramos y las hebras, respectivamente. More particularly, either the first strand and the first stretch, respectively, or the second strand and the second stretch, respectively, show a spatial pattern of modification of the nucleotides that form said stretches and the strands, respectively.

Centrándose en el primer tramo primero, hay un patrón de grupos de nucleótidos modificados y grupos de nucleótidos no modificados. Estos grupos de nucleótidos no modificados también se refieren en la presente como grupos de nucleótidos flanqueadores. Con mayor preferencia, el patrón consiste de grupos de nucleótidos modificados y nucleótidos no modificados. Aún con mayor preferencia, el patrón es un patrón regular y aún con mayor preferencia un patrón alternante a lo largo de la longitud del primer tramo del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. El grupo de nucleótidos modificados o bien puede consistir de uno o de varios nucleótidos los cuales se modifican y son, preferentemente, los nucleótidos que están modificados en la posición 2', es decir tienen una modificación en el porción de azúcar. Con mayor preferencia, esta modificación es una modificación 2'-O-Me. Focusing on the first stretch first, there is a pattern of modified nucleotide groups and unmodified nucleotide groups. These groups of unmodified nucleotides are also referred to herein as flanking nucleotide groups. More preferably, the pattern consists of groups of modified nucleotides and unmodified nucleotides. Even more preferably, the pattern is a regular pattern and even more preferably an alternating pattern along the length of the first stretch of the nucleic acid according to the present invention. The group of modified nucleotides may either consist of one or more nucleotides which are modified and are preferably nucleotides that are modified in the 2 'position, that is to say they have a modification in the sugar portion. More preferably, this modification is a 2'-O-Me modification.

El grupo de nucleótidos no modificados puede consistir en uno o de varios nucleótidos, los cuales son no modificados, con lo que los nucleótidos no modificados son preferentemente ribonucleótidos, o los nucleótidos no modificados son nucleótidos que tienen una modificación, en donde dicha modificación es diferente de la modificación mostrada por los nucleótidos que forman el grupo de nucleótidos modificados. Aún con mayor preferencia, los nucleótidos no modificados son ribonucleótidos. Es de señalar que el término no modificado y nucleótido no modificado se usan de manera intercambiable si no se indica lo contrario. El primer tramo del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede comenzar con un grupo de nucleótidos modificados o comenzar con un grupo de nucleótidos no modificados tal como se define en la presente. Sin embargo, se prefiere que el primer tramo comience con un grupo de nucleótidos modificados. Con la máxima preferencia, el grupo de nucleótidos modificados consiste de un solo nucleótido. En relación con esta modalidad, el primer tramo está preferentemente en orientación antisentido al ácido nucleico que codifica para RTP801. Está también dentro de la presente invención que la modificación según la que presentan los nucleótidos que forman el grupo de nucleótidos modificados es la misma para todos los grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo. Sin embargo, también está dentro de la presente invención que algunos grupos de nucleótidos modificados tengan una modificación diferente de uno o varios grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo. The group of unmodified nucleotides may consist of one or several nucleotides, which are unmodified, whereby the unmodified nucleotides are preferably ribonucleotides, or the unmodified nucleotides are nucleotides that have a modification, wherein said modification is different. of the modification shown by the nucleotides that form the modified nucleotide group. Even more preferably, the unmodified nucleotides are ribonucleotides. It should be noted that the term unmodified and unmodified nucleotide are used interchangeably unless otherwise indicated. The first stretch of the nucleic acid according to the present invention can start with a group of modified nucleotides or start with a group of unmodified nucleotides as defined herein. However, it is preferred that the first section begins with a group of modified nucleotides. Most preferably, the group of modified nucleotides consists of a single nucleotide. In relation to this embodiment, the first section is preferably in antisense orientation to the nucleic acid encoding RTP801. It is also within the present invention that the modification according to which the nucleotides that form the modified nucleotide group are presented is the same for all the modified nucleotide groups present in the first stretch. However, it is also within the present invention that some modified nucleotide groups have a different modification of one or more modified nucleotide groups present in the first stretch.

En la segunda hebra del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, un patrón como se describe para el primer tramo se puede realizar también. Las mismas características que las descritas en relación con el primer tramo se pueden realizar en una modalidad en el segundo tramo también, por lo que se prefiere que, bajo la condición de que el segundo tramo está en orientación sentido con relación a la secuencia del ácido nucleico que codifica para RTP801, la segunda hebra del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención comienza con un grupo de nucleótidos no modificados. In the second strand of the nucleic acid according to the present invention, a pattern as described for the first stretch can also be made. The same characteristics as those described in relation to the first section can be performed in a modality in the second section as well, so it is preferred that, under the condition that the second section is in a sense orientation in relation to the acid sequence nucleic coding for RTP801, the second strand of the nucleic acid according to the present invention begins with a group of unmodified nucleotides.

El ácido nucleico de acuerdo con la presente invención que comprende una estructura de hebra doble puede comprender un primer tramo que tiene el patrón de modificación como se describe en la presente. Alternativamente, el ácido nucleico de hebra doble de acuerdo con la presente invención puede comprender un segundo tramo que tiene el patrón de modificación como se describió anteriormente. Es, sin embargo, lo máximo preferido que el ácido nucleico de The nucleic acid according to the present invention comprising a double strand structure may comprise a first stretch having the modification pattern as described herein. Alternatively, the double stranded nucleic acid according to the present invention may comprise a second segment having the modification pattern as described above. It is, however, the most preferred that the nucleic acid of

hebra doble de acuerdo con la presente invención consista de un primer tramo y un segundo tramo, en el que tanto el primer tramo y el segundo tramo tienen un patrón de modificación espacial, como se describe en la presente. Double strand according to the present invention consists of a first section and a second section, in which both the first section and the second section have a pattern of spatial modification, as described herein.

Está dentro de la presente invención que las características del patrón de modificación espacial es el mismo en ambos tramos en términos de tamaño de los grupos de nucleótidos modificados y grupos de nucleótidos no modificados y el tipo de modificaciones que realmente se usan. Preferentemente, el patrón espacial de modificación en el primer tramo se cambia de tal manera que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo y viceversa. Sin embargo, está también en la presente invención que los patrones están alineados exactamente, es decir, que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo y un grupo de nucleótidos no modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo. Está todavía dentro de la presente invención que el patrón espacial de modificación en el primer tramo y el segundo tramo se cambia respecto al otro de modo que sólo una primera parte de un grupo de nucleótidos modificados en un único tramo se opone a una parte de un grupo de nucleótidos no modificados en el otro tramo, mientras que la segunda parte del grupo de nucleótidos modificados se opone a otro grupo de nucleótidos modificados. Está dentro de la presente invención que la descripción que se proporciona en la presente sobre el patrón de modificación espacial del(de los) tramo(s) de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se aplica también a la(s) hebra(s) de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, se prefiere que los tramos de ácido nucleico comprendan el patrón de modificación espacial y las hebras comprendan tales tramos y uno o más salientes como se describe en la presente. Se prefiere particularmente que el saliente sea un grupo fosfato en el extremo 3' de cualquier cadena antisentido, o la cadena sentido o ambas hebras, con lo cual es más preferido que el grupo fosfato esté en el extremo 3' tanto de la cadena antisentido y la cadena sentido. En una modalidad aún más preferida, el grupo fosfato es un grupo fosfato como se define en la presente. It is within the present invention that the characteristics of the spatial modification pattern is the same in both sections in terms of the size of the modified nucleotide groups and unmodified nucleotide groups and the type of modifications actually used. Preferably, the spatial pattern of modification in the first section is changed such that a group of modified nucleotides in the first section opposes a group of unmodified nucleotides in the second section and vice versa. However, it is also in the present invention that the patterns are aligned exactly, that is, that a group of modified nucleotides in the first section opposes a group of unmodified nucleotides in the second section and a group of unmodified nucleotides in The first section opposes a group of unmodified nucleotides in the second section. It is still within the present invention that the spatial pattern of modification in the first section and the second section is changed relative to the other so that only a first part of a group of modified nucleotides in a single section opposes a part of a group of unmodified nucleotides in the other stretch, while the second part of the modified nucleotide group opposes another group of modified nucleotides. It is within the present invention that the description provided herein on the pattern of spatial modification of the nucleic acid segment (s) according to the present invention also applies to the strand (s) ) of nucleic acid according to the present invention. However, it is preferred that the nucleic acid stretches comprise the spatial modification pattern and the strands comprise such stretches and one or more protrusions as described herein. It is particularly preferred that the projection is a phosphate group at the 3 'end of any antisense chain, or the sense chain or both strands, whereby it is more preferred that the phosphate group is at the 3' end of both the antisense and chain The chain felt. In an even more preferred embodiment, the phosphate group is a phosphate group as defined herein.

Está también dentro de la presente invención que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede presentar un enlazador que conecta la primera y la segunda hebra. Tal enlazador es preferentemente un polímero. El polímero puede ser cualquier polímero sintético o natural. Los posibles enlazadores sintéticos son, entre otros, PEG o un polinucleótido. Tal enlazador se diseña preferentemente de tal manera que permita el repliegue parcial o completo del primer tramo sobre el segundo tramo, y viceversa. It is also within the present invention that the nucleic acid according to the present invention may have a linker that connects the first and second strands. Such linker is preferably a polymer. The polymer can be any synthetic or natural polymer. The possible synthetic linkers are, among others, PEG or a polynucleotide. Such linker is preferably designed in such a way as to allow partial or complete withdrawal of the first section over the second section, and vice versa.

Por último, está dentro de la presente invención que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención es sintético, uno sintetizado químicamente, uno aislado, o uno derivado de las fuentes naturales tales como, por ejemplo, preparado por medio de la tecnología recombinante. En relación con la preparación de cualquier ácido nucleico de acuerdo con la presente invención cualquier modificación como se describe en la presente se puede introducir ya sea antes, durante o después de la preparación del ácido nucleico respectivo de acuerdo con la presente invención como conocen aquellos con experiencia en la materia. Finally, it is within the present invention that the nucleic acid according to the present invention is synthetic, one chemically synthesized, one isolated, or one derived from natural sources such as, for example, prepared by means of recombinant technology. In relation to the preparation of any nucleic acid according to the present invention any modification as described herein can be introduced either before, during or after the preparation of the respective nucleic acid according to the present invention as those with subject matter experience

El vector de acuerdo con la presente invención comprende un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Adicionalmente, el vector puede incluir elementos para controlar la orientación, la expresión y la transcripción de dicho ácido nucleico en una célula de manera selectiva, como se conoce en la materia. El plásmido puede incluir un promotor para controlar la transcripción del material heterólogo, es decir, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, y puede ser tanto un promotor constitutivo o inducible para permitir la transcripción selectiva. Se pueden incluir opcionalmente los potenciadores que puedan ser necesarios para obtener los niveles de transcripción necesarios. Los potenciadores son generalmente cualquier secuencia de ADN no traducida que trabaja contiguamente con la secuencia de codificación, por lo tanto en cis, para cambiar el nivel de la transcripción basal dictada por el promotor. Aquellos con experiencia en la materia conocen la expresión de tales construcciones y pueden hacerlo, por ejemplo, mediante el suministro de una respectiva construcción en tándem o al tener diferentes promotores para la transcripción de la primera y segunda hebra y el primer y segundo tramo, respectivamente, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. The vector according to the present invention comprises a nucleic acid according to the present invention. Additionally, the vector may include elements to control the orientation, expression and transcription of said nucleic acid in a cell selectively, as is known in the art. The plasmid can include a promoter to control the transcription of the heterologous material, that is, the nucleic acid according to the present invention, and can be both a constitutive or inducible promoter to allow selective transcription. Optionally, enhancers that may be necessary to obtain the necessary transcription levels can be included. Enhancers are generally any non-translated DNA sequence that works contiguously with the coding sequence, therefore in cis, to change the level of basal transcription dictated by the promoter. Those with experience in the field know the expression of such constructions and can do so, for example, by providing a respective tandem construction or by having different promoters for the transcription of the first and second strands and the first and second tranches, respectively. , of the nucleic acid according to the present invention.

Cuando el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se fabrica o se expresa, preferentemente se expresa in vivo,con mayor preferencia en un paciente con necesidad del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, dicha fabricación o expresión usa preferentemente un vector de expresión, preferentemente un vector de expresión de mamífero. Los vectores de expresión se conocen en la materia y comprenden preferentemente los plásmidos, los cósmidos, los sistemas de expresión viral. Los sistemas de expresión viral preferidos incluyen, pero sin limitarse a, adenovirus, retrovirus y lentivirus. When the nucleic acid according to the present invention is manufactured or expressed, it is preferably expressed in vivo, more preferably in a patient in need of the nucleic acid according to the present invention, said manufacture or expression preferably uses an expression vector , preferably a mammalian expression vector. Expression vectors are known in the art and preferably comprise plasmids, cosmids, viral expression systems. Preferred viral expression systems include, but are not limited to, adenovirus, retrovirus and lentivirus.

En la materia se conocen los métodos para introducir los vectores en las células o tejidos. Tales métodos se pueden encontrar generalmente descritos en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbour Laboratory, Nueva York (1983, 1992), o en Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley y Sons., Baltimore, Maryland, 1998. Methods for introducing vectors into cells or tissues are known in the art. Such methods can be found generally described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1983, 1992), or in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons., Baltimore, Maryland, 1998.

Los métodos adecuados incluyen, entre otros, la transfección, la lipofección, la electroporación y la infección con vectores virales recombinantes. En relación con la presente invención, una característica adicional del vector en una modalidad es una característica limitante de la expresión tal como un promotor y un elemento regulador, respectivamente, que son específicos para el tipo celular deseado de modo que permiten la expresión de la secuencia Suitable methods include, among others, transfection, lipofection, electroporation and infection with recombinant viral vectors. In relation to the present invention, an additional feature of the vector in one embodiment is a limiting feature of the expression such as a promoter and a regulatory element, respectively, that are specific to the desired cell type so as to allow sequence expression

del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sólo en cuanto se proporcione el fondo que permite la expresión deseada. of the nucleic acid according to the present invention only as long as the background that allows the desired expression is provided.

En un aspecto adicional, la presente invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o un vector de acuerdo con la presente invención y, opcionalmente, un portador, diluyente o adyuvantes u otro(s) vehículo(s) farmacéuticamente aceptables. Preferentemente, dicho portador, diluyentes, adyuvantes y vehículos son inertes, y no tóxicos. La composición farmacéutica en sus diversas modalidades está adaptada para la administración de varias maneras. Tal administración comprende la administración sistémica y local, así como la oral, la subcutánea, la parenteral, la intravenosa, la intraarterial, la intramuscular, la intraperitoneal, la intranasal, y la intrategral. In a further aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a nucleic acid according to the present invention and / or a vector according to the present invention and, optionally, a carrier, diluent or adjuvants or other (s). ) pharmaceutically acceptable vehicle (s). Preferably, said carrier, diluents, adjuvants and vehicles are inert, and non-toxic. The pharmaceutical composition in its various modalities is adapted for administration in several ways. Such administration includes systemic and local administration, as well as oral, subcutaneous, parenteral, intravenous, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, and intratheral administration.

Aquellos con experiencia en la materia conocerán que la cantidad de la composición farmacéutica y del ácido nucleico respectivo y del vector, respectivamente, depende de la condición clínica del paciente individual, el sitio y el método de administración, el esquema de administración, la edad, el sexo, el peso corporal y otros factores del paciente conocidos por los médicos. La cantidad farmacéuticamente efectiva para los fines de prevención y/o tratamiento está determinada por tales consideraciones como las que se conocen en la materia médica. Preferentemente, la cantidad es eficaz para conseguir una mejora que incluye pero no se limita a mejorar el estado de la enfermedad o para proporcionar una recuperación más rápida, mejoría o eliminación de los síntomas y otros indicadores que se seleccionan como medidas apropiadas por aquellos con experiencia en la materia médica. Those skilled in the art will know that the amount of the pharmaceutical composition and the respective nucleic acid and vector, respectively, depends on the clinical condition of the individual patient, the site and the method of administration, the scheme of administration, the age, sex, body weight and other factors of the patient known to doctors. The pharmaceutically effective amount for the purposes of prevention and / or treatment is determined by such considerations as those known in the medical field. Preferably, the amount is effective to achieve an improvement that includes but is not limited to improving the disease status or to provide faster recovery, improvement or elimination of symptoms and other indicators that are selected as appropriate measures by those with experience. in medical matters.

En una modalidad preferida, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención puede comprender otros compuestos farmacéuticamente activos. Preferentemente, tales compuestos farmacéuticamente activos se seleccionan del grupo que comprende compuestos que permiten la entrega a las células para la captación intracelular, los compuestos que permiten la liberación endosomal, los compuestos que permiten mayor tiempo de circulación y los compuestos que permiten la orientación a las células endoteliales o células patogénicas. Los compuestos preferidos para la liberación endosomal son la cloroquina, y los inhibidores de las bombas de H+ dependientes de ATP. In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition according to the present invention may comprise other pharmaceutically active compounds. Preferably, such pharmaceutically active compounds are selected from the group comprising compounds that allow delivery to cells for intracellular uptake, compounds that allow endosomal release, compounds that allow longer circulation time, and compounds that allow orientation to the cells. endothelial cells or pathogenic cells. Preferred compounds for endosomal release are chloroquine, and inhibitors of ATP-dependent H + pumps.

La composición farmacéutica se formula preferentemente para proporcionar una administración de dosis única o una administración de múltiples dosis. Se reconoció que la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención se puede usar para cualquier enfermedad que implica el desarrollo o crecimiento no deseado de la vasculatura que incluye la angiogénesis, así como cualquiera de las enfermedades y las afecciones descritas en la presente. Preferentemente, este tipo de enfermedades son enfermedades tumorales. Entre las enfermedades tumorales, los siguientes tumores son los más preferidos: el cáncer de endometrio, los carcinomas colorrectales, los gliomas, el cáncer de endometrio, los adenocarcinomas, las hiperplasias endometriales, el síndrome de Cowden, el carcinoma colorrectal no poliposo hereditario, el síndrome de Li-Fraumene, el cáncer de mama, de ovario, el cáncer de próstata ( Ali, I.U, Journal of the National Cancer Institute, Vol. 92, núm. 11, 07 de junio del 2000, página 861 -863), el síndrome Bannayan-Zonana, el LDD (síndrome de Lhermitte-Duklos') (Macleod, K., supra) las enfermedades macrocefalia-hamartoma que incluye la enfermedad de las vacas (CD) y el síndrome Bannayan-Ruvalcaba-Rily (BRR), las lesiones mucocutáneas (por ejemplo trichilemmonmas), la macrocefalia, el retraso mental, el harmatomas gastrointestinal, los lipomas, los adenomas tiroideos, la enfermedad fibroquística de la mama, el gangliocitoma displásico cerebeloso y las neoplasias malignas de mama y tiroides (Vazquez, F., Sellers, W.R, supra). The pharmaceutical composition is preferably formulated to provide a single dose administration or a multiple dose administration. It was recognized that the pharmaceutical composition according to the present invention can be used for any disease that involves the unwanted development or growth of the vasculature that includes angiogenesis, as well as any of the diseases and conditions described herein. Preferably, these types of diseases are tumor diseases. Among the tumor diseases, the following tumors are the most preferred: endometrial cancer, colorectal carcinomas, gliomas, endometrial cancer, adenocarcinomas, endometrial hyperplasias, Cowden syndrome, hereditary nonpolyposal colorectal carcinoma, Li-Fraumene syndrome, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer (Ali, IU, Journal of the National Cancer Institute, Vol. 92, No. 11, June 7, 2000, page 861-863), Bannayan-Zonana syndrome, LDD (Lhermitte-Duklos' syndrome) (Macleod, K., supra) macrocephaly-hamartoma diseases that includes cow disease (CD) and Bannayan-Ruvalcaba-Rily syndrome (BRR) , mucocutaneous lesions (for example trichilemmonmas), macrocephaly, mental retardation, gastrointestinal harmatomas, lipomas, thyroid adenomas, fibrocystic breast disease, cerebellar dysplastic gangliocytoma and malignant neoplasms of the breast and thyroid (Vazquez, F., Sellers, W.R, supra).

Es preciso reconocer que cualquiera de las enfermedades tumorales a tratar con la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención es preferentemente una enfermedad tumoral en la etapa tardía. En otra modalidad, la enfermedad tumoral implica a las células que son supresores negativos del tumor, con lo que más preferentemente el supresor de tumores es PTEN. It should be recognized that any of the tumor diseases to be treated with the pharmaceutical composition according to the present invention is preferably a late stage tumor disease. In another embodiment, the tumor disease involves the cells that are tumor suppressors, so more preferably the tumor suppressor is PTEN.

La composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención también se puede usar en un método para prevenir y/o tratar una enfermedad como se describe en la presente, donde el método comprende la administración de un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, un vector de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéutica o medicamento de acuerdo con la presente invención para cualquiera de las enfermedades descritas en la presente. The pharmaceutical composition according to the present invention can also be used in a method to prevent and / or treat a disease as described herein, where the method comprises the administration of a nucleic acid according to the present invention, a vector in accordance with the present invention or a pharmaceutical composition or medicament according to the present invention for any of the diseases described herein.

En un aspecto adicional, la presente descripción se refiere a un método para el diseño o detección de un ácido nucleico que es adecuado para la regulación descendente de RTP801, más particularmente para la regulación descendente de la función de RTP801. Este método comprende el uso de una secuencia de ácido nucleico como se describe en la presente y la evaluación de dicho ácido nucleico en un ensayo adecuado. Tal ensayo se conoce en la materia y, por ejemplo, se describe en la parte de ejemplo, de esta solicitud. En una etapa adicional, se diseña un ácido nucleico de hebra doble, preferentemente de acuerdo con los principios de diseño tal como se establece en la presente, lo cual es adecuado para la regulación descendente de RTP801, preferentemente en relación con un mecanismo de silenciamiento génico post-transcripcional, tal como el ARN de interferencia. También el que se obtiene de este modo, es decir, el ácido nucleico diseñado o detectado, se evalúa en el ensayo respectivo y el resultado se compara, es decir, el efecto tanto del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, así como del ácido nucleico recién diseñado o detectado en tal ensayo. Preferentemente, el ácido nucleico que se diseña o se detecta es más adecuado en caso de que o bien es más estable o más eficaz, preferentemente ambos. Se reconoce que el método será particularmente In a further aspect, the present description relates to a method for the design or detection of a nucleic acid that is suitable for the down-regulation of RTP801, more particularly for the down-regulation of the function of RTP801. This method comprises the use of a nucleic acid sequence as described herein and the evaluation of said nucleic acid in a suitable assay. Such an essay is known in the art and, for example, is described in the example part of this application. In a further step, a double-stranded nucleic acid is designed, preferably in accordance with the design principles as set forth herein, which is suitable for the down-regulation of RTP801, preferably in relation to a gene silencing mechanism. post-transcriptional, such as interference RNA. Also the one obtained in this way, that is, the designed or detected nucleic acid, is evaluated in the respective test and the result is compared, that is, the effect of both the nucleic acid according to the present invention, as well as the newly designed or detected nucleic acid in such an assay. Preferably, the nucleic acid that is designed or detected is more suitable if it is either more stable or more effective, preferably both. It is recognized that the method will be particularly

eficaz si cualquiera de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención se usa como punto de partida. Por lo tanto, está dentro de la presente descripción que las nuevas moléculas de ácido nucleico se diseñarán en base a los principios descritos en la presente, en el que la secuencia objetivo en el ARNm de RTP801 se cambia ligeramente con respecto a la secuencia objetivo en el ARNm de RTP801 para el ácido nucleico correspondiente según la presente invención. Preferentemente, el ácido nucleico nuevo se cambiará al menos en uno o más nucleótidos en relación con el tramo en el ARNm objetivo, ya sea en la dirección 5' o 3' del ARNm que codifica para RTP801. Sin embargo, está dentro de la presente descripción que el cambio se produce en ambas direcciones simultáneamente lo que significa que el nuevo ácido nucleico incorpora el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención que se usa como punto de partida. Está también dentro de la presente descripción que el alargamiento del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y que se usa como punto de partida se desvía ya sea al extremo 3' o el extremo 5'. En el caso de esta tendencia, ya sea el extremo 3 'o el extremo 5' del nuevo ácido nucleico es más largo, es decir, más extendido que el otro extremo. Cuando la nueva molécula de ácido nucleico que se genera mediante la extensión ya sea del extremo 3' effective if any of the nucleic acids according to the present invention is used as a starting point. Therefore, it is within the present description that the new nucleic acid molecules will be designed based on the principles described herein, in which the target sequence in the RTP801 mRNA is changed slightly with respect to the target sequence in RTP801 mRNA for the corresponding nucleic acid according to the present invention. Preferably, the new nucleic acid will be changed in at least one or more nucleotides in relation to the stretch in the target mRNA, either in the 5 'or 3' direction of the mRNA encoding RTP801. However, it is within the present description that the change occurs in both directions simultaneously which means that the new nucleic acid incorporates the nucleic acid according to the present invention that is used as a starting point. It is also within the present description that the elongation of the nucleic acid according to the present invention and that it is used as a starting point is diverted to either the 3 'end or the 5' end. In the case of this trend, either the 3 'end or the 5' end of the new nucleic acid is longer, that is, more extended than the other end. When the new nucleic acid molecule that is generated by extension either from the 3 'end

o del extremo 5' de la cadena antisentido y/o la cadena sentido, la secuencia de etapas siguiente se aplica típicamente. Si el cambio es al extremo 5' del ARNm de RTP801, el extremo 3' de la cadena antisentido tiene que extenderse por el número de los nucleótidos por el cual se cambia el extremo 5' del ARNm de RTP801. El(los) nucleótido(s) para añadir de este modo al extremo 3' de la cadena antisentido del nuevo ácido nucleico es/son complementarios a los siguientes nucleótidos en el extremo 5' de la secuencia objetivo en el ARNm de RTP801 que se usa para la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención que se usa como punto de partida. Lo mismo tiene que hacérsele a la cadena sentido. Sin embargo, los nucleótidos que se añaden a la cadena sentido tienen que corresponder, es decir, ser complementarios a los nucleótidos recién añadidos al extremo 3' de la cadena antisentido lo cual significa que se tienen que añadir al extremo 5' de la cadena sentido. La última etapa en la cadena sentido, sin embargo se tiene que hacer sólo en la medida en que, separado de la cadena antisentido también la cadena sentido se cambia, que es el caso en los aspectos preferidos de la presente descripción. Aunque este cambio se puede realizar hasta un cierto punto definido por aquellos con experiencia en la materia, con mayor preferencia el cambio se realiza de tal manera que también el ácido nucleico nuevo todavía contiene un tramo de al menos 14 nucleótidos, preferentemente 14 nucleótidos contiguos como se presenta en cualquiera de las moléculas de ácido nucleico descritas en la presente. La síntesis de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en la presente está dentro del conocimiento de la persona con experiencia en la materia. Tal síntesis, se describe, entre otros, en Beaucage SL y Iyer RP, Tetrahedron 1992, 48: 2223-2311, Beaucage SL y Iyer RP, Tetrahedron 1993, 49: 6123-6194 y Caruthers MH y otros, Methods Enzymol. 1987; or from the 5 'end of the antisense chain and / or the sense chain, the following sequence of steps is typically applied. If the change is to the 5 'end of the RTP801 mRNA, the 3' end of the antisense chain has to be extended by the number of nucleotides by which the 5 'end of the RTP801 mRNA is changed. The nucleotide (s) to thereby add to the 3 'end of the antisense chain of the new nucleic acid is / are complementary to the following nucleotides at the 5' end of the target sequence in the RTP801 mRNA that is used for the nucleic acid molecule according to the present invention that is used as a starting point. The same has to be done to the chain sense. However, the nucleotides that are added to the sense chain must correspond, that is, to be complementary to the nucleotides just added to the 3 'end of the antisense chain which means that they have to be added to the 5' end of the sense chain. . The last stage in the sense chain, however, has to be done only to the extent that, apart from the antisense chain, the sense chain is also changed, which is the case in the preferred aspects of the present description. Although this change can be made up to a certain point defined by those skilled in the art, more preferably the change is made in such a way that the new nucleic acid still contains a stretch of at least 14 nucleotides, preferably 14 contiguous nucleotides such as It occurs in any of the nucleic acid molecules described herein. The synthesis of any of the nucleic acids described herein is within the knowledge of the person skilled in the art. Such synthesis is described, among others, in Beaucage SL and Iyer RP, Tetrahedron 1992, 48: 2223-2311, Beaucage SL and Iyer RP, Tetrahedron 1993, 49: 6123-6194 and Caruthers MH et al., Methods Enzymol. 1987;

154: 287-313, la síntesis de los tioatos, se describe, entre otros, en Eckstein F., Annu. Rev. Biochem. 1985; 54: 367402, la síntesis de las moléculas de ARN se describe en Sproat B., en Humana Press 2005 Editado por Herdewijn P.; Kap. 2: 17-31 y los procesos posteriores respectivos se describen, entre otros, en Pingoud A. y otros, en la IRL Press 1989 Editado por Oliver RWA, Kap. 7: 183-208 y Sproat B., en Humana Press 2005 Editado por Herdewijn P.; Kap. 2: 17-31 (supra). 154: 287-313, the synthesis of thioates, is described, among others, in Eckstein F., Annu. Rev. Biochem. 1985; 54: 367402, the synthesis of RNA molecules is described in Sproat B., in Humana Press 2005 Edited by Herdewijn P .; Kap 2: 17-31 and the respective subsequent processes are described, among others, in Pingoud A. and others, in the IRL Press 1989 Edited by Oliver RWA, Kap. 7: 183-208 and Sproat B., in Humana Press 2005 Edited by Herdewijn P .; Kap 2: 17-31 (supra).

El ARNip para RTP801 se puede hacer usando los métodos conocidos en la materia como se describió anteriormente, en base a la secuencia conocida de RTP801 (sec. con núm. de ident.: 1), y se puede hacer estable por diversas modificaciones como se describió anteriormente. Para información adicional, ver el Ejemplo 9. The siRNA for RTP801 can be made using methods known in the art as described above, based on the known sequence of RTP801 (sec. With ID no .: 1), and can be made stable by various modifications as described above. For additional information, see Example 9.

Adicionalmente, en relación con los métodos descritos en la presente, se pueden usar con dichos métodos moléculas de ARN adicionales, por ejemplo, moléculas de ARN inhibidoras incluyen los oligorribonucleótidos de hebra simple preferentemente que comprenden tramos de al menos 7-10 nucleótidos consecutivos presentes en las secuencias detalladas en las Tablas A-C, dichos oligorribonucleótidos son capaces de formar [y/o comprender] regiones de hebra doble, en particular conformaciones que reconocen los complejos intracelulares, que conducen a la degradación de dichos oligorribonucleótidos en pequeñas moléculas de ARN que son capaces de ejercer la inhibición de sus correspondientes genes endógenos, y las moléculas de ADN que codifican tales moléculas de ARN. El gen endógeno correspondiente es preferentemente el gen 801 y, adicionalmente, puede ser el gen de VEGF y/o el gen de VEGF-R1. La descripción también proporciona una composición que comprende el anterior oligorribonucleótido de hebra simple en un portador, preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable. Additionally, in relation to the methods described herein, additional RNA molecules can be used with such methods, for example, inhibitory RNA molecules include single stranded oligoribonucleotides preferably comprising stretches of at least 7-10 consecutive nucleotides present in the sequences detailed in Tables AC, said oligoribonucleotides are capable of forming [and / or comprising] double stranded regions, in particular conformations that recognize intracellular complexes, which lead to the degradation of said oligoribonucleotides into small RNA molecules that are capable of exerting the inhibition of their corresponding endogenous genes, and the DNA molecules that encode such RNA molecules. The corresponding endogenous gene is preferably the 801 gene and, additionally, it can be the VEGF gene and / or the VEGF-R1 gene. The description also provides a composition comprising the above single stranded oligoribonucleotide in a carrier, preferably a pharmaceutically acceptable carrier.

Además, la presente invención proporciona la terapia combinada para todas las condiciones descritas en la presente y en condiciones particulares que impliquen la neovascularización coroidea. En dicha terapia combinada, tanto el gen de RTP801 y de VEGFR se inhiben con el fin de mejorar los síntomas de la enfermedad a tratar. Estos genes se pueden inhibir con una combinación de ARNip o anticuerpos (se incluyen los anticuerpos de aptámeros) o ambos. La presente invención por lo tanto proporciona también una nueva composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 y un inhibidor de VEGF o el VEGFR-1, el inhibidor de RTP801 es un ARNip, con mayor preferencia los ARNip núms.: 14, 22, 23, 25, 27, 39, de la Tabla A, y el inhibidor de VEGF/VEGFR-1 opcionalmente es un anticuerpo o un aptámero. El uso combinado de dichos compuestos (es decir, RTP801 ARNip y los anticuerpos VEGF o cualquier otro ejemplo combinado descrito en la presente) en la preparación de un medicamento es también parte de la presente invención. In addition, the present invention provides combined therapy for all conditions described herein and under particular conditions that involve choroidal neovascularization. In such combined therapy, both the RTP801 and VEGFR gene are inhibited in order to improve the symptoms of the disease to be treated. These genes can be inhibited with a combination of siRNA or antibodies (aptamer antibodies are included) or both. The present invention therefore also provides a new pharmaceutical composition comprising an RTP801 inhibitor and a VEGF inhibitor or VEGFR-1, the RTP801 inhibitor is an siRNA, more preferably the siRNA Nos .: 14, 22, 23 , 25, 27, 39, of Table A, and the VEGF / VEGFR-1 inhibitor is optionally an antibody or an aptamer. The combined use of said compounds (ie, RTP801 siRNA and VEGF antibodies or any other combined example described herein) in the preparation of a medicament is also part of the present invention.

Así, los ARNip de RTP801 tales como los ARNip núms.: 14, 22, 23, 25, 27, 39, de la Tabla A se pueden administrar en combinación con los agentes que se dirigen al VEGF o los receptores de VEGF 1 (VEGFR1). Dichos agentes actualmente existen en el mercado o en las distintas etapas de aprobación y trabajo a través de diferentes mecanismos. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos tales como el ranibizumab (Lucentis, Genentech) se pegan al VEGF liberado para inhibir la unión de VEGF a los receptores activos. Un aptámero que puede actuar como un Thus, RTP801 siRNAs such as siRNA numbers: 14, 22, 23, 25, 27, 39, of Table A can be administered in combination with agents that target VEGF or VEGF 1 receptors (VEGFR1 ). These agents currently exist in the market or in the different stages of approval and work through different mechanisms. Antibodies and antibody fragments such as ranibizumab (Lucentis, Genentech) stick to the released VEGF to inhibit VEGF binding to active receptors. An aptamer that can act as a

ligando/anticuerpo (Macugen, Eyetech/Pfizer, aprobado recientemente por la FDA para la AMD húmeda) es también una posibilidad. Macugen une al VEGF extracelular para bloquear su actividad. Estos fármacos se administran localmente mediante inyección intravítrea. Los compuestos a base del ARNip de anti-VEGF (como el Cand5 de Acuity inhibidor de VEGF o el ARNip 027 inhibidor de VEGFR-1) están también disponibles. Además, la Escualamina, pequeña molécula de aminosterol (Genaera), que se administra sistémicamente, según se informa, interfiere en múltiples facetas del proceso angiogénico, que incluyen la inhibición de VEGF y otro factor de crecimiento de señalización en las células endoteliales. ligand / antibody (Macugen, Eyetech / Pfizer, recently approved by the FDA for wet AMD) is also a possibility. Macugen joins the extracellular VEGF to block its activity. These drugs are administered locally by intravitreal injection. Compounds based on anti-VEGF siRNA (such as Acuity Cand5 VEGF inhibitor or VEGFR-1 inhibitor siRNA 027) are also available. In addition, Squalamine, a small molecule of aminosterol (Genaera), which is administered systemically, reportedly interferes with multiple facets of the angiogenic process, including inhibition of VEGF and other signaling growth factor in endothelial cells.

La administración conjunta de un inhibidor de RTP801, preferentemente un ARNip, y cualquiera de los anteriores agentes inhibidores de VEGF/VEGFR-1 pueden tener un efecto sinérgico con lo que dicho tratamiento combinado es más eficaz que el tratamiento de cualquiera de estas composiciones individuales, independientemente de la dosis en la opción de tratamiento único. Este efecto sinérgico también está respaldado por los resultados preliminares obtenidos por el cesionario, tal como se detalla en el Ejemplo 6. The co-administration of an RTP801 inhibitor, preferably an siRNA, and any of the above VEGF / VEGFR-1 inhibiting agents may have a synergistic effect whereby such combined treatment is more effective than the treatment of any of these individual compositions, regardless of the dose in the single treatment option. This synergistic effect is also supported by the preliminary results obtained by the assignee, as detailed in Example 6.

El RTP801i tiene un mecanismo de acción diferente y es potencialmente sinérgico con los inhibidores de VEGF-VEGFR. Un estudio en ratones KO para RTP801 indica que el fenotipo de protección en los ratones KO persiste a pesar del hecho de que la expresión de ARNm de VEGF en el ojo es tan alta como en los ratones WT. Nuestros datos preliminares adicionales indican que la inhibición de RTP801 puede ser sinérgica con la inhibición de VEGF-VEGFR del eje regulador en el tratamiento de la patología retinal. Los inventores de la presente invención encontraron en experimentos adecuados que la administración de ARNip contra RTP801 en el modelo de AMD (ver el Ejemplo 6 más abajo) no sólo conduce a la regulación negativa del mismo RTP801, sino también, como consecuencia, a la regulación ascendente del PEDF factor antiangiogénico y neuroprotector, así como la regulación descendente de la expresión de MCP1, una proteína quimiotáctica de macrófagos. Así, la inhibición de RTP801 simultáneamente confiere efectos antiangiogénicos, neuroprotectores y anti-inflamatorios. RTP801i has a different mechanism of action and is potentially synergistic with VEGF-VEGFR inhibitors. A study in KO mice for RTP801 indicates that the protection phenotype in KO mice persists despite the fact that the expression of VEGF mRNA in the eye is as high as in WT mice. Our additional preliminary data indicate that RTP801 inhibition may be synergistic with VEGF-VEGFR inhibition of the regulatory axis in the treatment of retinal pathology. The inventors of the present invention found in suitable experiments that the administration of siRNA against RTP801 in the AMD model (see Example 6 below) not only leads to the negative regulation of the same RTP801, but also, as a consequence, to the regulation ascending of the PEDF antiangiogenic and neuroprotective factor, as well as descending regulation of the expression of MCP1, a macrophage chemotactic protein. Thus, the inhibition of RTP801 simultaneously confers anti-angiogenic, neuroprotective and anti-inflammatory effects.

Se ha de entender que, en el contexto de la presente invención, cualquiera de las moléculas de ARNip que se describe en la presente, o cualquiera de las grandes moléculas de ARN de hebra doble (típicamente de 25-500 nucleótidos de longitud) que procesan los complejos celulares endógenos (tales como DICER -ver anteriormente) para formar las moléculas de ARNip descritas en la presente, o las moléculas que comprenden las moléculas de ARNip descritas en la presente, se pueden emplear en el tratamiento de las enfermedades o trastornos descritos en la presente. It is to be understood that, in the context of the present invention, any of the siRNA molecules described herein, or any of the large double stranded RNA molecules (typically 25-500 nucleotides in length) that process Endogenous cellular complexes (such as DICER-see above) to form the siRNA molecules described herein, or the molecules comprising the siRNA molecules described herein, can be employed in the treatment of the diseases or disorders described in the present.

Los trastornos adicionales que se pueden tratar con las moléculas y las composiciones de la presente invención incluyen todos los tipos de neovascularización coroidea (NVC), que se producen no sólo en la AMD húmeda, sino también en otras patologías oculares tales como el síndrome de histoplasmosis ocular, las estrías angiodes, las rupturas en la membrana de Bruch, la degeneración miópica, los tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas de la retina. Additional disorders that can be treated with the molecules and compositions of the present invention include all types of choroidal neovascularization (NVC), which occur not only in wet AMD, but also in other ocular pathologies such as histoplasmosis syndrome. ocular, angiodes stretch marks, Bruch's membrane ruptures, myopic degeneration, eye tumors and some degenerative diseases of the retina.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona los ARNip en cuestión para tratar una enfermedad relacionada con la apoptosis. Su uso para la terapia de enfermedades o trastornos asociados con el crecimiento celular patológico, incontrolado, por ejemplo, el cáncer, la psoriasis, las enfermedades autoinmunes, entre otras, y se proporcionan los métodos para la terapia de las enfermedades asociadas con la isquemia y la falta de flujo sanguíneo apropiado, por ejemplo, el infarto de miocardio (MI) y el accidente cerebrovascular. "Cáncer" o "tumor" se refiere a una masa creciente incontrolada de células anormales. Estos términos incluyen tanto los tumores primarios, que pueden ser benignos o malignos, así como los tumores secundarios o las metástasis, las cuales se extienden a otros sitios en el cuerpo. Los ejemplos de enfermedades de tipo cáncer incluyen, entre otras: carcinoma (por ejemplo: de mama, colon y pulmón), leucemia, tal como la leucemia de células B, linfoma, tal como el linfoma de células B, blastoma, tal como el neuroblastoma y melanoma. A further aspect of the present invention provides the siRNAs in question for treating a disease related to apoptosis. Its use for the therapy of diseases or disorders associated with pathological, uncontrolled cell growth, for example, cancer, psoriasis, autoimmune diseases, among others, and methods for the therapy of diseases associated with ischemia and lack of proper blood flow, for example, myocardial infarction (MI) and stroke. "Cancer" or "tumor" refers to an uncontrolled growing mass of abnormal cells. These terms include both primary tumors, which can be benign or malignant, as well as secondary tumors or metastases, which spread to other sites in the body. Examples of cancer-like diseases include, but are not limited to: carcinoma (eg, breast, colon and lung), leukemia, such as B-cell leukemia, lymphoma, such as B-cell lymphoma, blastoma, such as neuroblastoma and melanoma.

La invención también proporciona una composición que comprende uno o más de los compuestos de la invención en un portador, preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable. Esta composición puede comprender una mezcla de dos o más ARNip de genes diferentes o diferentes ARNip del mismo gen. Está prevista una composición que comprende ARNip para el gen RTP801 y ARNip para el gen de VEGF y/o el gen de VEGF-R1. The invention also provides a composition comprising one or more of the compounds of the invention in a carrier, preferably a pharmaceutically acceptable carrier. This composition may comprise a mixture of two or more siRNAs of different genes or different siRNAs of the same gene. A composition comprising siRNA for the RTP801 gene and siRNA for the VEGF gene and / or the VEGF-R1 gene is envisioned.

Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido covalentemente o no covalentemente a uno o más compuestos de la invención (estructura A). Este compuesto se puede suministrar en un portador, preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable, y los complejos celulares endógenos lo pueden procesar intracelularmente para producir uno o más ARNip de la invención. Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido covalentemente o no covalentemente a un ARNip para otro gen, especialmente el gen de VEGF y/o el gen de VEGF-R1. Another compound of the invention comprises the above compound of the invention (structure A) covalently or non-covalently bound to one or more compounds of the invention (structure A). This compound can be supplied in a carrier, preferably a pharmaceutically acceptable carrier, and endogenous cell complexes can be processed intracellularly to produce one or more siRNA of the invention. Another compound of the invention comprises the above compound of the invention (structure A) covalently or non-covalently linked to an siRNA for another gene, especially the VEGF gene and / or the VEGF-R1 gene.

Esta descripción también describe una entidad química nueva que es un inhibidor de RTP801, preferentemente un ARNip, químicamente unido, covalentemente o no covalentemente, a cualquiera de los anteriores agentes inhibidores de VEGF/VEGFR-1. Una entidad química particular prevista es un ARNip inhibidor de RTP801 unido covalentemente a un anticuerpo contra el VEGF o los receptores de VEGF-1. Aquellos con experiencia en la materia conocen los métodos de producción de tales entidades químicas nuevas. This description also describes a new chemical entity that is an inhibitor of RTP801, preferably an siRNA, chemically bonded, covalently or non-covalently, to any of the above VEGF / VEGFR-1 inhibitors. A particular chemical entity envisioned is an RTP801 inhibitor siRNA covalently bound to an antibody against VEGF or VEGF-1 receptors. Those with experience in the field know the production methods of such new chemical entities.

Esta invención también comprende una estructura de hebra doble en tándem que comprende dos o más secuencias de ARNip, que se procesan intracelularmente para formar dos o más ARNip diferentes, uno que inhibe el 801 y un segundo que inhibe el VEGF/VEGFR-1. En un aspecto relacionado, esta invención también comprende una estructura de hebra doble en tándem que comprende dos o más secuencias de ARNip, que se degradan intracelularmente para formar dos This invention also comprises a tandem double strand structure comprising two or more siRNA sequences, which are processed intracellularly to form two or more different siRNAs, one that inhibits 801 and a second that inhibits VEGF / VEGFR-1. In a related aspect, this invention also comprises a tandem double strand structure comprising two or more siRNA sequences, which are degraded intracellularly to form two

o más diferentes ARNip, ambos inhiben el 801. or more different siRNAs, both inhibit 801.

En particular, se prevé que un oligonucleótido largo (típicamente aproximadamente 80 a 500 nucleótidos de longitud) comprende uno o más tallos y estructuras de lazo, donde las regiones del tallo que comprenden las secuencias de los oligonucleótidos de la invención, se pueden administrar en un portador, preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable, y los complejos celulares endógenos lo pueden procesar intracelularmente (por ejemplo, por Drosha y Dicer como se describió anteriormente) para producir uno o más pequeños oligonucleótidos de hebra doble (ARNip) que son oligonucleótidos de la invención. Este oligonucleótido se puede denominar una construcción de ARNhc en tándem. Se prevé que este oligonucleótido largo es un oligonucleótido de hebra simple que comprende uno o más estructuras de tallos y lazos, donde cada región del tallo comprende una secuencia de ARNip sentido y la correspondiente antisentido de un gen 801. En particular, se prevé que este oligonucleótido comprende las secuencias de ARNip sentido y antisentido como se representa en cualquiera de las Tablas A a C. Alternativamente, la construcción de ARNhc en tándem puede comprender la secuencia de ARNip sentido y la correspondiente antisentido de un gen 801 y, adicionalmente, la secuencia de ARNip sentido y la correspondiente antisentido de un gen diferente, tal como el VEGF o el VEGF-R1. Como se mencionó en la presente, el ARNip contra RTP801 puede ser el principal componente activo en una composición farmacéutica, o puede ser un componente activo de una composición farmacéutica que contiene dos o más ARNip (o moléculas que codifican o endógenamente producen dos o más ARNip, ya sea una mezcla de moléculas o una o más moléculas en tándem que codifican dos o más ARNip), dicha composición farmacéutica adicionalmente comprende una o más moléculas de ARNip adicionales que se dirigen a uno o más genes adicionales. La inhibición simultánea de RTP801 y dicho gen adicional(s) probablemente tendrá un efecto aditivo o sinérgico para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente, de acuerdo a lo siguiente: In particular, it is envisioned that a long oligonucleotide (typically approximately 80 to 500 nucleotides in length) comprises one or more stems and loop structures, where the stem regions comprising the sequences of the oligonucleotides of the invention can be administered in a carrier, preferably a pharmaceutically acceptable carrier, and endogenous cell complexes can process it intracellularly (for example, by Drosha and Dicer as described above) to produce one or more small double stranded oligonucleotides (siRNAs) that are oligonucleotides of the invention. This oligonucleotide can be called a tandem mRNA construct. It is envisioned that this long oligonucleotide is a single stranded oligonucleotide comprising one or more stem and loop structures, where each region of the stem comprises a sense siRNA sequence and the corresponding antisense of an 801 gene. In particular, it is anticipated that this oligonucleotide comprises the sense and antisense siRNA sequences as depicted in any of Tables A to C. Alternatively, the tandem mRNA construct may comprise the sense siRNA sequence and the corresponding antisense of an 801 gene and, additionally, the sequence of siRNA sense and the corresponding antisense of a different gene, such as VEGF or VEGF-R1. As mentioned herein, the siRNA against RTP801 may be the main active component in a pharmaceutical composition, or it may be an active component of a pharmaceutical composition that contains two or more siRNAs (or molecules that encode or endogenously produce two or more siRNAs). , either a mixture of molecules or one or more molecules in tandem encoding two or more siRNAs), said pharmaceutical composition additionally comprises one or more additional siRNA molecules that target one or more additional genes. The simultaneous inhibition of RTP801 and said additional gene (s) will likely have an additive or synergistic effect for the treatment of the diseases described herein, according to the following:

Insuficiencia renal aguda (ARF) y otros trastornos microvasculares: la composición farmacéutica para el tratamiento de la ARF puede comprender las combinaciones de los compuestos siguientes: 1) ARNip de RTP801 y dímeros de ARNip de p53; 2) dímeros de ARNip de RTP801 y Fas; 3) dímeros de ARNip de RTP801 y Bax; 4) dímeros de ARNip de p53 y Fas, 5) dímeros de ARNip de Bax y RTP801; 6) dímeros de ARNip de RTP801 y Noxa; 7) dímeros de ARNip de RTP801 y Puma; 8) dímeros de ARNip de RTP801 (REDD1) y RTP801L (REDD2); 9) ARNip de RTP801, ARNip de Fas y cualquiera de ARNip de RTP801L, ARNip de p53, ARNip de Bax, ARNip de Noxa, o ARNip de Puma para formar trímeros o polímeros (por ejemplo, las moléculas en tándem que codifican tres ARNip). Acute renal failure (ARF) and other microvascular disorders: the pharmaceutical composition for the treatment of ARF may comprise combinations of the following compounds: 1) RTP801 siRNA and p53 siRNA dimer; 2) RTP801 and Fas siRNA dimers; 3) siRNA dimers of RTP801 and Bax; 4) p53 and Fas siRNA dimers, 5) Bax and RTP801 siRNA dimers; 6) siRNA dimers of RTP801 and Noxa; 7) siRNA dimers of RTP801 and Puma; 8) siRNA dimers of RTP801 (REDD1) and RTP801L (REDD2); 9) RTP801 siRNA, Fas siRNA and any of RTP801L siRNA, p53 siRNA, Bax siRNA, Noxa siRNA, or Puma siRNA to form trimers or polymers (eg, tandem molecules encoding three siRNAs) .

Degeneración macular (MD), retinopatía diabética (DR), lesión de la médula espinal: las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la MD, la DR y la lesión de la médula espinal pueden comprender las combinaciones de compuestos siguientes: 1) ARNip de RTP801 combinado con cualquiera de ARNip de VEGF, ARNip de VEGF-R1, ARNip de VEGF R2, ARNip de PKCbeta, ARNip de MCP1, ARNip de eNOS, ARNip de KLF2, ARNip de RTP801L (ya sea mezclado físicamente o en una molécula en tándem); 2) ARNip de RTP801 en combinación con dos o más ARNip de la lista anterior (mezclado físicamente o en una molécula en tándem que codifica tres ARNip, o una combinación de éstos). Macular degeneration (MD), diabetic retinopathy (DR), spinal cord injury: pharmaceutical compositions for the treatment of MD, DR and spinal cord injury can comprise the following compound combinations: 1) RTP801 siRNA combined with either VEGF siRNA, VEGF-R1 siRNA, VEGF R2 siRNA, PKCbeta siRNA, MCP1 siRNA, eNOS siRNA, KLF2 siRNA, RTP801L siRNA (either physically mixed or in a tandem molecule) ; 2) RTP801 siRNA in combination with two or more siRNAs from the above list (physically mixed or in a tandem molecule encoding three siRNAs, or a combination thereof).

COPD y trastornos respiratorios: la composición farmacéutica para el tratamiento de los trastornos respiratorios puede comprender las combinaciones de los compuestos siguientes: ARNip de RTP801 combinado con ARNip contra uno o más de los siguientes genes: elastasas, metaloproteasas de matriz, fosfolipasas, caspasas, esfingomielinasa y ceramida sintasa. COPD and respiratory disorders: the pharmaceutical composition for the treatment of respiratory disorders may comprise combinations of the following compounds: RTP801 siRNA combined with siRNA against one or more of the following genes: elastases, matrix metalloproteases, phospholipases, caspases, sphingomyelinase and ceramide synthase.

Adicionalmente, el ARNip de RTP801 o cualquier molécula de ácido nucleico que comprende o codifica el ARNip de RTP801 se puede unir (covalentemente o no covalentemente) a los anticuerpos, con el fin de lograr una mayor orientación para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente, de acuerdo a lo siguiente: Additionally, the RTP801 siRNA or any nucleic acid molecule that comprises or encodes the RTP801 siRNA can bind (covalently or non-covalently) to the antibodies, in order to achieve greater orientation for the treatment of the diseases described in the present, according to the following:

ARF: anticuerpo anti-Fas (preferentemente anticuerpos neutralizantes). Degeneración macular, retinopatía diabética, lesión de la médula espinal: anticuerpo anti-Fas, anticuerpo anti-MCP1, anticuerpo anti-VEGFR1 y anti-VEGFR2. Los anticuerpos deben ser preferentemente anticuerpos neutralizantes. ARF: anti-Fas antibody (preferably neutralizing antibodies). Macular degeneration, diabetic retinopathy, spinal cord injury: anti-Fas antibody, anti-MCP1 antibody, anti-VEGFR1 and anti-VEGFR2 antibody. The antibodies should preferably be neutralizing antibodies.

Son particularmente deseables moléculas tales como, por ejemplo, las moléculas de ADN antisentido que comprenden las secuencias de ARNip descritas en la presente (con las modificaciones apropiadas de los ácidos nucleicos) y se pueden usar en la misma capacidad que los correspondientes ARNip para todos los usos y métodos descritos en la presente. Particularly desirable are molecules such as, for example, antisense DNA molecules comprising the siRNA sequences described herein (with appropriate modifications of the nucleic acids) and can be used in the same capacity as the corresponding siRNAs for all uses and methods described herein.

La descripción también describe un método de tratamiento de un paciente que sufre de un trastorno tal como los trastornos descritos en la presente, que comprende administrar al paciente la composición anterior o el compuesto en una dosis terapéuticamente eficaz para de ese modo tratar al paciente. The description also describes a method of treating a patient suffering from a disorder such as the disorders described herein, which comprises administering to the patient the above composition or the compound in a therapeutically effective dose to thereby treat the patient.

Se notará que todos los polinucleótidos que se usan en la presente invención pueden sufrir modificaciones con el fin de poseer propiedades terapéuticas mejoradas. Las modificaciones o los análogos de los nucleótidos se pueden introducir para mejorar las propiedades terapéuticas de los polinucleótidos. Las propiedades mejoradas incluyen un aumento de la resistencia a las nucleasas y/o aumento de la capacidad para penetrar las membranas celulares. La resistencia a las nucleasas, cuando sea necesario, se proporciona por cualquier método conocido en la materia que no interfiera con la actividad biológica de la AS polinucleótido, el ARNip, el ADNc y/o las ribozimas tan necesarias para el método de uso y entrega (lyer y otros, 1990; Eckstein, 1985; Spitzer y Eckstein, 1988; Woolf y otros, 1990; Shaw y otros, 1991). Las modificaciones que se pueden hacer a los oligonucleótidos con el fin de aumentar la resistencia a las nucleasas incluyen modificar el heteroátomo de fósforo o de oxígeno en el esqueleto de fosfato. Estas incluyen preparar los metil fosfonatos, los fosforotioatos, los fosforoditioatos y los oligómeros de morfolino. En una modalidad, se proporciona por tener enlaces fosforotioato que enlazan las cuatro a seis bases del extremo 3' de los nucleótidos. Alternativamente, los enlaces fosforotioato enlazan todas las bases de los nucleótidos. Otras modificaciones conocidas en la materia se pueden usar donde se conserve la actividad biológica, pero la estabilidad a las nucleasas aumente sustancialmente. It will be noted that all polynucleotides used in the present invention may undergo modifications in order to possess improved therapeutic properties. Modifications or analogs of nucleotides can be introduced to improve the therapeutic properties of polynucleotides. Enhanced properties include increased resistance to nucleases and / or increased ability to penetrate cell membranes. Nuclease resistance, when necessary, is provided by any method known in the art that does not interfere with the biological activity of polynucleotide AS, siRNA, cDNA and / or ribozymes so necessary for the method of use and delivery. (lyer et al., 1990; Eckstein, 1985; Spitzer and Eckstein, 1988; Woolf et al., 1990; Shaw et al., 1991). Modifications that can be made to oligonucleotides in order to increase resistance to nucleases include modifying the phosphorus or oxygen heteroatom in the phosphate backbone. These include preparing methyl phosphonates, phosphorothioates, phosphorodithioates and morpholino oligomers. In one embodiment, it is provided by having phosphorothioate bonds that link the four to six bases of the 3 'end of the nucleotides. Alternatively, phosphorothioate bonds bind all nucleotide bases. Other modifications known in the art can be used where biological activity is conserved, but nuclease stability increases substantially.

Todos los análogos de, o modificación a, un polinucleótido se puede emplear con la presente invención, siempre que dicho análogo o modificación no afecte sustancialmente la función del polinucleótido. Los nucleótidos se pueden seleccionar de bases modificadas de origen natural o sintético. Las bases de origen natural incluyen adenina, guanina, citosina, timina y uracilo. Las bases modificadas de nucleótidos incluyen inosina xantina, hipoxantina, 2 -aminoadenina, 6-metilo, 2-propilo y otras adeninas de alquilo, 5-halo uracilo, 5-halo citosina, citosina 6-aza y timina 6-aza, pseudo uracilo, 4 -tiuracilo, 8-halo adenina, 8-aminoadenina, 8-tiol adenina, 8-tiolalquilo adeninas, 8-hidroxilo adenina y otras adeninas 8-sustituidas, 8-halo guaninas, 8-amino guanina, 8-tiol guanina, 8 -tioalquilo guaninas, 8 -hidroxilo guanina y otras guaninas sustituidas, otras aza y deaza adeninas, otras aza y deaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5 -trifluoro citosina. All analogs of, or modification to, a polynucleotide can be employed with the present invention, provided that said analog or modification does not substantially affect the function of the polynucleotide. Nucleotides can be selected from modified bases of natural or synthetic origin. Bases of natural origin include adenine, guanine, cytosine, thymine and uracil. Modified nucleotide bases include inosine xanthine, hypoxanthine, 2-aminoadenine, 6-methyl, 2-propyl and other alkyl adenines, 5-halo uracil, 5-halo cytosine, 6-aza cytosine and 6-aza thymine, pseudo uracil , 4-thiuracil, 8-halo adenine, 8-aminoadenine, 8-thiol adenine, 8-thiolalkyl adenines, 8-hydroxyl adenine and other 8-substituted adenines, 8-halo guanines, 8-amino guanine, 8-thiol guanine, 8-thioalkyl guanines, 8-hydroxy guanine and other substituted guanines, other aza and deaza adenines, other aza and deaza guanines, 5-trifluoromethyl uracil and 5-trifluoro cytosine.

Además, los análogos de los polinucleótidos se pueden preparar donde que la estructura del nucleótido se altera fundamentalmente y se adaptan mejor como reactivos terapéuticos o experimentales. Un ejemplo de un análogo de nucleótido es un ácido nucleico peptídico (PNA) en el que la desoxirribosa (o ribosa) del esqueleto de fosfato en el ADN (o ARN se sustituye con un esqueleto de poliamida el cual es similar al encontrado en los péptidos. Se demostró que los análogos de PNA son resistentes a la degradación por enzimas y tienen vidas extendidas in vivo e in vitro. Adicionalmente, se demostró que los PNA se unen más fuerte a una secuencia de ADN complementaria que a una molécula de ADN. Esta observación se atribuye a la falta de repulsión de carga entre la hebra de PNA y la hebra de ADN. Otras modificaciones que se pueden hacer a los oligonucleótidos incluyen esqueletos de polímeros, esqueletos cíclicos, o esqueletos acíclicos. In addition, polynucleotide analogs can be prepared where the nucleotide structure is fundamentally altered and best adapted as therapeutic or experimental reagents. An example of a nucleotide analog is a peptide nucleic acid (PNA) in which the deoxyribose (or ribose) of the phosphate skeleton in the DNA (or RNA is replaced with a polyamide skeleton which is similar to that found in the peptides PNA analogs were shown to be resistant to degradation by enzymes and have extended lives in vivo and in vitro Additionally, it was shown that PNAs bind more strongly to a complementary DNA sequence than to a DNA molecule. Observation is attributed to the lack of charge repulsion between the PNA strand and the DNA strand Other modifications that can be made to oligonucleotides include polymer skeletons, cyclic skeletons, or acyclic skeletons.

Los polipéptidos empleados en la presente invención también se pueden modificar, opcionalmente modificar químicamente, con el fin de mejorar su actividad terapéutica. "Químicamente modificados" -cuando se hace referencia a los polipéptidos, significa un polipéptido, donde al menos uno de sus residuos de aminoácidos se modifica ya sea por procesos naturales, tales como procesamiento u otras modificaciones postraduccionales, o mediante técnicas de modificación química que se conocen bien en la materia. Entre las numerosas modificaciones típicas conocidas, los ejemplos no exclusivos incluyen: acetilación, acilación, amidación, ribosilación de ADP, glicosilación, formación de anclaje GPI, unión covalente de un lípido o derivado de lípido, metilación, miristilación, pegilación, prenilación, fosforilación, ubiquitinación, o cualquier otro proceso similar. The polypeptides used in the present invention can also be modified, optionally chemically modified, in order to improve their therapeutic activity. "Chemically modified" - when referring to polypeptides, it means a polypeptide, where at least one of its amino acid residues is modified either by natural processes, such as processing or other post-translational modifications, or by chemical modification techniques that are They know well in the matter. Among the numerous typical modifications known, non-exclusive examples include: acetylation, acylation, amidation, ADP ribosylation, glycosylation, GPI anchor formation, covalent binding of a lipid or lipid derivative, methylation, myristylation, pegylation, preylation, phosphorylation, ubiquitination, or any other similar process.

Las posibles modificaciones de polipéptidos adicionales (tales como las que resultan de la alteración de la secuencia del ácido nucleico) incluyen los siguientes: Possible modifications of additional polypeptides (such as those resulting from the alteration of the nucleic acid sequence) include the following:

"Sustitución conservadora" -se refiere a la sustitución de un aminoácido en una clase por un aminoácido de la misma clase, donde una clase se define por las propiedades fisicoquímicas comunes de la cadena lateral del aminoácido y las altas frecuencias de sustitución en polipéptidos homólogos encontrados en la naturaleza, como se determinó, por ejemplo, mediante un patrón de la matriz Dayhoff de frecuencia de intercambio o matriz BLOSUM. Seis clases generales de cadenas laterales de aminoácidos se han clasificado e incluyen: la clase I (Cys); la clase II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); la clase III (Asn, Asp, Gln, Glu); la clase IV ( His, Arg, Lys); la clase V (Ile, Leu, Val, Met) y la clase VI (Phe, Tyr, Trp). Por ejemplo, la sustitución de un Asp por otro residuo de la clase III tal como Asn, Gln o Glu, es una sustitución conservadora. "Sustitución no conservadora" -se refiere a la sustitución de un aminoácido en una clase con un aminoácido de otra clase, por ejemplo, la sustitución de una Ala, un residuo de la clase II, con un residuo de la clase III tal como Asp, Asn, Glu o Gln. "Supresión" -es un cambio en cualquiera de las secuencias de nucleótidos o aminoácidos en la que uno o más nucleótidos o residuos de aminoácidos, respectivamente, están ausentes. "Inserción" o "adición" -es ese cambio en una secuencia de nucleótidos o aminoácidos que ha resultado en la adición de uno o más nucleótidos o residuos de aminoácidos, respectivamente, en comparación con la secuencia de origen natural. "Sustitución" - reposición de uno o más nucleótidos o aminoácidos por diferentes nucleótidos o aminoácidos, respectivamente. En cuanto a las secuencias de aminoácidos la sustitución puede ser conservadora o no conservadora. "Conservative substitution" - refers to the substitution of an amino acid in a class for an amino acid of the same class, where a class is defined by the common physicochemical properties of the amino acid side chain and the high substitution frequencies in homologous polypeptides found in nature, as determined, for example, by a pattern of the Dayhoff matrix of exchange frequency or BLOSUM matrix. Six general classes of amino acid side chains have been classified and include: class I (Cys); class II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); class III (Asn, Asp, Gln, Glu); class IV (His, Arg, Lys); class V (Ile, Leu, Val, Met) and class VI (Phe, Tyr, Trp). For example, the substitution of an Asp with another class III residue such as Asn, Gln or Glu, is a conservative substitution. "Non-conservative substitution" - refers to the substitution of an amino acid in one class with an amino acid of another class, for example, the substitution of a Ala, a class II residue, with a class III residue such as Asp , Asn, Glu or Gln. "Suppression" - is a change in any of the nucleotide or amino acid sequences in which one or more nucleotides or amino acid residues, respectively, are absent. "Insertion" or "addition" - is that change in a nucleotide or amino acid sequence that has resulted in the addition of one or more nucleotides or amino acid residues, respectively, compared to the naturally occurring sequence. "Substitution" - replacement of one or more nucleotides or amino acids by different nucleotides or amino acids, respectively. As for the amino acid sequences, the substitution may be conservative or non-conservative.

En un aspecto adicional de la presente descripción, el polipéptido o polinucleótido RTP801 se puede usar para diagnosticar o detectar la degeneración macular en un sujeto. Un método de detección comprendería típicamente el ensayo del ARNm de RTP801 o el polipéptido RTP801 en una muestra derivada de un sujeto. In a further aspect of the present description, the RTP801 polypeptide or polynucleotide can be used to diagnose or detect macular degeneration in a subject. A detection method would typically comprise the assay of RTP801 mRNA or RTP801 polypeptide in a sample derived from a subject.

"Detección" -se refiere a un método de detección de una enfermedad. Este término se puede referir a la detección de una predisposición a una enfermedad, o a la detección de la gravedad de la enfermedad. "Detection" - refers to a method of detecting a disease. This term can refer to the detection of a predisposition to a disease, or to the detection of the severity of the disease.

Por "homólogo/homología", tal como se usa en la presente invención, se entiende al menos aproximadamente 70%, preferentemente al menos aproximadamente 75% de homología, ventajosamente al menos aproximadamente 80% de homología, con mayor ventaja al menos aproximadamente 90% de homología, incluso con mayor ventaja al menos aproximadamente 95%, por ejemplo, al menos aproximadamente 97%, aproximadamente 98%, aproximadamente el 99% o incluso aproximadamente 100% de homología. La invención también comprende que estos polinucleótidos y polipéptidos se pueden usar de la misma manera que los polinucleótidos y polipéptidos en la presente o antes mencionados. By "homologue / homology", as used in the present invention, at least about 70%, preferably at least about 75% homology, advantageously at least about 80% homology, with greater advantage at least about 90% of homology, even with greater advantage at least about 95%, for example, at least about 97%, about 98%, about 99% or even about 100% homology. The invention also comprises that these polynucleotides and polypeptides can be used in the same manner as the polynucleotides and polypeptides herein or mentioned above.

Alternativa o adicionalmente, "homología", con respecto a las secuencias, se puede referir al número de posiciones con nucleótidos o residuos de aminoácidos idénticos, dividido por el número de nucleótidos o residuos de aminoácidos en la más corta de las dos secuencias, donde la alineación de la dos secuencias se puede determinar de acuerdo con el algoritmo de Wilbur y Lipman ((1983) Proc Natl Acad Sci., Estados Unidos, 80:726); por ejemplo, usando una ventana de tamaño de 20 nucleótidos, una longitud de palabra de 4 nucleótidos, y una penalización por hueco de 4, el análisis asistido por computadora y la interpretación de los datos de secuencia, que incluyen la alineación, se pueden realizar convenientemente usando los programas disponibles comercialmente (por ejemplo, Intelligenetics ™ Suite, Intelligenetics Inc., CA). Cuando las secuencias de ARN se dice que son similares, o que tienen un grado de identidad o de homología de secuencia con secuencias de ADN, la timidina (T) en la secuencia de ADN se considera igual a uracilo Alternatively or additionally, "homology", with respect to the sequences, may refer to the number of positions with nucleotides or identical amino acid residues, divided by the number of nucleotides or amino acid residues in the shortest of the two sequences, where the alignment of the two sequences can be determined according to the algorithm of Wilbur and Lipman ((1983) Proc Natl Acad Sci., United States, 80: 726); for example, using a 20 nucleotide size window, a word length of 4 nucleotides, and a gap penalty of 4, computer-assisted analysis and interpretation of sequence data, which includes alignment, can be performed conveniently using commercially available programs (for example, Intelligenetics ™ Suite, Intelligenetics Inc., CA). When RNA sequences are said to be similar, or have a degree of sequence identity or homology with DNA sequences, thymidine (T) in the DNA sequence is considered equal to uracil

(U) en la secuencia de ARN. Las secuencias de ARN dentro del alcance de la invención se pueden derivar de secuencias de ADN o sus complementos, mediante la sustitución de timidina (T) en la secuencia de ADN con uracilo (U). (U) in the RNA sequence. RNA sequences within the scope of the invention can be derived from DNA sequences or their complements, by replacing thymidine (T) in the DNA sequence with uracil (U).

Adicionalmente o alternativamente, la similitud u homología de la secuencia de aminoácido puede determinarse, por ejemplo, usando el programa BlastP (Altschul y otros, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402) y disponible en el NCBI. Las siguientes referencias proporcionan algoritmos para comparar la identidad u homología relativa de los residuos de aminoácido de dos polipéptidos, y adicionalmente o alternativamente, con respecto a lo anterior, las enseñanzas en estas referencias pueden usarse para determinar el porcentaje de homología: Smith y otros, (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489; Smith y otros, (1983) Nucl. Acids Res. 11:2205-2220; Devereux y otros, (1984) Nucl. Acids Res. 12:387-395; Feng y otros, (1987) J. Molec. Evol. 25:351-360; Higgins y otros, (1989) CABIOS 5:151-153; and Thompson y otros, (1994) Nucl. Acids Res. 22:4673-4680. Additionally or alternatively, the similarity or homology of the amino acid sequence can be determined, for example, using the BlastP program (Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402) and available at the NCBI. The following references provide algorithms for comparing the identity or relative homology of the amino acid residues of two polypeptides, and additionally or alternatively, with respect to the foregoing, the teachings in these references can be used to determine the percentage of homology: Smith and others, (1981) Adv. Appl. Math 2: 482-489; Smith and others, (1983) Nucl. Acids Res. 11: 2205-2220; Devereux et al., (1984) Nucl. Acids Res. 12: 387-395; Feng et al., (1987) J. Molec. Evol 25: 351-360; Higgins et al., (1989) CABIOS 5: 151-153; and Thompson et al., (1994) Nucl. Acids Res. 22: 4673-4680.

"Que tiene al menos X% de homología" -con respecto a dos secuencias de aminoácido o nucleótidos, se refiere al porcentaje de residuos que son idénticos en las dos secuencias cuando las secuencias se alinean óptimamente. Así, 90% identidad de secuencia de aminoácidos significa que 90% de los aminoácidos en dos o más secuencias de polipéptidos óptimamente alineadas son idénticas. "Which has at least X% homology" - with respect to two amino acid or nucleotide sequences, refers to the percentage of residues that are identical in the two sequences when the sequences are optimally aligned. Thus, 90% amino acid sequence identity means that 90% of the amino acids in two or more optimally aligned polypeptide sequences are identical.

Una modalidad adicional de la presente invención concierne una composición farmacéutica que comprende un inhibidor RTP801 en una cantidad terapéuticamente efectiva como un ingrediente activo y un portador farmacéuticamente aceptable. El inhibidor es un ARNip sujeto como se describió anteriormente, y puede ser en particular, ARNip núms: 22, 23, 25, 27, 39, de la Tabla A). A further embodiment of the present invention concerns a pharmaceutical composition comprising an RTP801 inhibitor in a therapeutically effective amount as an active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier. The inhibitor is a subject siRNA as described above, and may in particular be siRNA numbers: 22, 23, 25, 27, 39, from Table A).

Los ingredientes activos de la composición farmacéutica pueden incluir oligonucleótidos que son resistentes a la nucleasa necesarios para la práctica de la invención o un fragmento de estos que muestran tener el mismo efecto dirigido contra la(s) secuencia(s) adecuada(s) y/o ribozimas. Las combinaciones de ingredientes activos que se describen en la presente invención pueden usarse, e incluyen combinaciones de secuencias antisentido. The active ingredients of the pharmaceutical composition may include oligonucleotides that are resistant to the nuclease necessary for the practice of the invention or a fragment thereof that are shown to have the same effect directed against the appropriate sequence (s) and / or ribozymes. The active ingredient combinations described in the present invention can be used, and include combinations of antisense sequences.

Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de enfermedad o lesión de la médula espinal. A further embodiment of the present invention provides the use of a therapeutically effective dose of an RTP801 inhibitor for the preparation of a medicament for promoting recovery in a patient suffering from spinal cord disease or injury.

El inhibidor de RTP801 es un ARNip sujeto como se describió anteriormente. The RTP801 inhibitor is a subject siRNA as described above.

La invento se ha descrito de manera ilustrativa, y se entenderá que la terminología usada pretende ser de la naturaleza de las palabras de la descripción y no una limitación. The invention has been described illustratively, and it will be understood that the terminology used is intended to be of the nature of the words in the description and not a limitation.

Obviamente, son posibles muchas modificaciones y variaciones de la presente invención a la luz de las enseñanzas anteriores. Se entiende, por lo tanto, que dentro del alcance de las reivindicaciones anexas, la invención puede practicarse de cualquier otra forma que como la específicamente descrita. Obviously, many modifications and variations of the present invention are possible in light of the above teachings. It is understood, therefore, that within the scope of the appended claims, the invention can be practiced in any other way than as specifically described.

A través de toda esta solicitud, se citan referencias de varias publicaciones, que incluyen patentes de Estados Unidos por autores, por año y por número de patente. La divulgación de estas publicaciones y patentes y solicitudes de patente en su totalidad se citan por este medio en esta aplicación para describir más completamente el estado de la técnica a la que pertenece esta invención. Throughout this application, references from several publications are cited, including United States patents by authors, by year and by patent number. The disclosure of these publications and patents and patent applications in full are cited herein in this application to more fully describe the state of the art to which this invention pertains.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

La Fig. 1 detalla la secuencia codificante del gen RTP801 (sec. con núm. de ident.:1); Fig. 1 details the coding sequence of the RTP801 gene (sec. With identification number: 1);

La Fig. 2 detalla la secuencia de aminoácido del polipéptido RTP801 (sec. con núm. de ident.:2); La Fig.3 es un diagrama que representa los exones, CDS, SNP humanos y la posición de varias moléculas de ácido nucleico que son humano específicas o específicas para humanos, ratón y rata en paralelo; Fig. 2 details the amino acid sequence of the RTP801 polypeptide (sec. With identification number: 2); Fig. 3 is a diagram depicting the exons, human CDS, SNPs and the position of several nucleic acid molecules that are human specific or specific to humans, mouse and rat in parallel;

La Fig. 4A-H representa un panel de los resultados del análisis de membrana de Western obtenidos con la aplicación de varios ácidos nucleicos de hebra doble ejemplos y ejemplos comparativos de de acuerdo con la presente invención y ejemplos comparativos de una primera línea celular humana, donde el experimento se realizó dos veces, referidos como experimento 1 y experimento 2, y en donde el nivel de expresión de p110a y p85 se representa como controles de carga y la intensidad (densidad) de la banda RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de hebra doble particular aplicado; Fig. 4A-H represents a panel of Western membrane analysis results obtained with the application of several double stranded nucleic acids examples and comparative examples according to the present invention and comparative examples of a first human cell line, where the experiment was conducted twice, referred to as experiment 1 and experiment 2, and where the expression level of p110a and p85 is represented as charge controls and the intensity (density) of the RTP801 band is a measure of inhibitory activity of the particular double stranded nucleic acid applied;

La Fig. 5A-F representa un panel de los resultados del análisis de membrana de Western obtenidos con la aplicación de varios ácidos nucleicos de hebra doble de acuerdo con la presente invención y los ejemplos comparativos para una segunda línea celular humana, donde el experimento se realizó dos veces, referidos como experimento 1 y experimento 2, y en donde el nivel de expresión de p110a y p85 se representa como controles de carga y la densidad de la banda RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de hebra doble particular aplicado; Fig. 5A-F depicts a panel of Western membrane analysis results obtained with the application of several double stranded nucleic acids according to the present invention and comparative examples for a second human cell line, where the experiment is performed twice, referred to as experiment 1 and experiment 2, and wherein the expression level of p110a and p85 is represented as loading controls and the density of the RTP801 band is a measure of the inhibitory activity of the particular double stranded nucleic acid applied;

La Fig. 6A-C representa un panel de los resultados del análisis de membrana de Western obtenidos con la aplicación de varios ácidos nucleicos de hebra doble de acuerdo con la presente invención y ejemplos comparativos para la primera línea celular humana a diferentes concentraciones, específicamente 10 nM (5A), 5 nM (5B) y 1 nM (5C), donde el experimento se realizó dos veces, referidos como experimento 1 y experimento 2, y en donde el nivel de expresión de p110a y p85 se representa como controles de carga y la densidad de la banda RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de hebra doble particular aplicado; Fig. 6A-C represents a panel of Western membrane analysis results obtained with the application of several double stranded nucleic acids according to the present invention and comparative examples for the first human cell line at different concentrations, specifically nM (5A), 5 nM (5B) and 1 nM (5C), where the experiment was conducted twice, referred to as experiment 1 and experiment 2, and where the expression level of p110a and p85 is represented as load controls and the density of the RTP801 band is a measure of the inhibitory activity of the particular double stranded nucleic acid applied;

La Fig.7 representa un panel de los resultados del análisis de membrana de Western obtenidos con la aplicación de varios ácidos nucleicos de hebra doble de acuerdo con la presente invención y ejemplos comparativos para una línea celular de ratón, donde el experimento se realizó dos veces, referidos como experimento 1 y experimento 2, y en donde el nivel de expresión de p110a y p85 se representa como controles de carga y la densidad de la banda RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de hebra doble particular aplicado; Fig. 7 depicts a panel of Western membrane analysis results obtained with the application of several double stranded nucleic acids according to the present invention and comparative examples for a mouse cell line, where the experiment was conducted twice. , referred to as experiment 1 and experiment 2, and wherein the expression level of p110a and p85 is represented as loading controls and the density of the RTP801 band is a measure of the inhibitory activity of the particular double stranded nucleic acid applied;

La Fig. 8 muestra los resultados de experimentos en un sistema de modelo AMD de ratón; Fig. 8 shows the results of experiments in a mouse AMD model system;

La Fig. 9 muestra los resultados de experimentos adicionales en un sistema de modelo AMD de ratón; Fig. 9 shows the results of additional experiments in a mouse AMD model system;

La Fig. 10 muestra los resultados de experimentos en un sistema de modelo AMD de primate no humano; Fig. 10 shows the results of experiments in an AMD model system of non-human primate;

La Fig. 11A-B muestra los resultados de experimentos adicionales en un sistema de modelo AMD de primate no humano; Fig. 11A-B shows the results of additional experiments in a non-human primate AMD model system;

La Fig. 12A-B muestra los resultados de otros experimentos adicionales en un sistema de modelo AMD de primate no humano; Fig. 12A-B shows the results of other additional experiments in a non-human primate AMD model system;

La Fig. 13A-B representa un análisis de los resultados experimentales alcanzados en un modelo AMD de primate no humano; Fig. 13A-B represents an analysis of the experimental results achieved in an AMD model of non-human primate;

La Fig. 14 representa un análisis adicional de los resultados experimentales alcanzados en un modelo AMD de primate no humano. Fig. 14 represents a further analysis of the experimental results achieved in an AMD model of non-human primate.

La Fig. 15 A-C muestra los resultados de un experimento que involucra la instilación intratraqueal de un plásmido que expresa RTP801 en ratones; Fig. 15 A-C shows the results of an experiment involving intratracheal instillation of a plasmid expressing RTP801 in mice;

La Fig. 16 A-C muestra los resultados de un modelo de humo de cigarrillo a corto plazo (7 días) en ratones KO y WT RTP801; Fig. 16 A-C shows the results of a short-term (7 days) cigarette smoke model in KO and WT RTP801 mice;

La Fig. 17 A-C muestra los resultados de un modelo de humo de cigarrillo a corto plazo en ratones WT instilados con anti-RTP801 activo (REDD14) y ARNip control (REDD8). Fig. 17 A-C shows the results of a short-term cigarette smoke model in WT mice instilled with active anti-RTP801 (REDD14) and control siRNA (REDD8).

La Fig 18 muestra los resultados de experimentos con ratones KO RTP801 en un modelo CS a largo plazo; Fig 18 shows the results of experiments with KO RTP801 mice in a long-term CS model;

La Fig. 19 muestra los resultados de experimentos en un sistema de modelo ARF de ratón; Fig. 19 shows the results of experiments in a mouse ARF model system;

La Fig. 20 muestra los resultados de experimentos en un sistema de modelo retinopaía diabética de ratón; Fig. 20 shows the results of experiments in a mouse diabetic retinopathy model system;

La Fig. 21 muestra los resultados de experimentos adicionales en un sistema de modelo retinopaía diabética de ratón; Fig. 21 shows the results of additional experiments in a mouse diabetic retinopathy model system;

La Fig. 22 muestra los resultados de otros experimentos adicionales en un sistema de modelo retinopaía diabética de ratón; Fig. 22 shows the results of other additional experiments in a mouse diabetic retinopathy model system;

La Fig. 23 muestra los resultados de experimentos de inhibición RTP801 / VEGF combinados en un sistema de modelo CNV de ratón; Fig. 23 shows the results of RTP801 / VEGF inhibition experiments combined in a mouse CNV model system;

La Fig. 24 muestra los resultados de experimentos de inhibición RTP801 / VEGF combinados adicionales en un sistema de modelo CNV de ratón; Fig. 24 shows the results of additional combined RTP801 / VEGF inhibition experiments in a mouse CNV model system;

La Fig. 25 muestra los resultados de experimentos que estudian el efecto del ARNip RTP801 en la expresión génica en la retina neural y RPE; Fig. 25 shows the results of experiments studying the effect of RTP801 siRNA on gene expression in the neural retina and RPE;

La Fig. 26 A-B muestran los resultados adicionales de experimentos que estudian el efecto del ARNip RTP801 en la expresión génica en la retina neural y RPE; y Fig. 26 A-B show the additional results of experiments studying the effect of RTP801 siRNA on gene expression in the neural retina and RPE; Y

La Fig. 27 muestra los resultados de experimentos que demuestran que RT801NP es tan activo como RTP801. Fig. 27 shows the results of experiments demonstrating that RT801NP is as active as RTP801.

EJEMPLOS EXAMPLES

Se cree que una persona con experiencia en la técnica puede, sin experimentación adicional y usando la descripción anterior, utilizar la presente invención en toda su extensión. Las siguientes modalidades preferidas específicas son, por lo tanto, construidas meramente como ilustrativas, y de ninguna manera limitativas de la invención reivindicada. It is believed that a person skilled in the art can, without further experimentation and using the above description, use the present invention to its fullest extent. The following specific preferred embodiments are, therefore, merely constructed as illustrative, and in no way limiting the claimed invention.

Los protocolos estándar de biología molecular conocidos en la técnica no descritos específicamente en la presente generalmente se siguen prácticamente como en Sambrook y otros, Molecular cloning: A laboratory manual, Cold Springs Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992), y en Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988). The standard molecular biology protocols known in the art not specifically described herein are generally followed practically as in Sambrook et al., Molecular cloning: A laboratory manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992), and in Ausubel and others, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988).

Los protocolos estándar de síntesis orgánica conocidos en la técnica no descritos específicamente en la presente generalmente se siguen prácticamente como en Organic syntheses: Vol.1-79, editors vary, J. Wiley, Nueva York, (1941 -2003); Gewert y otros, Organic synthesis workbook, Wiley-VCH, Weinheim (2000); Smith & March, Advanced Organic Chemistry, Wiley-Interscience; 5ta edición (2001). Standard protocols for organic synthesis known in the art not specifically described herein are generally practically followed as in Organic syntheses: Vol. 1-79, editors vary, J. Wiley, New York, (1941-2003); Gewert et al., Organic synthesis workbook, Wiley-VCH, Weinheim (2000); Smith & March, Advanced Organic Chemistry, Wiley-Interscience; 5th edition (2001).

Los métodos estándar de química medicinal conocidos en la técnica no descritos específicamente en la presente generalmente se siguen prácticamente como en las series "Comprehensive Medicinal Chemistry", de varios autores y editores, publicadas por Pergamon Press. The standard methods of medicinal chemistry known in the art not specifically described herein are generally followed as in the "Comprehensive Medicinal Chemistry" series of several authors and editors, published by Pergamon Press.

Las características de la presente invención descritas en la descripción, las reivindicaciones y/o los dibujos pueden, separaamente o en cualquier combinación de estas ser material para realizar la invención en varias formas. The features of the present invention described in the description, the claims and / or the drawings may, separately or in any combination thereof, be material for carrying out the invention in various forms.

Ejemplo 1 Example 1

Materiales y métodos generales General materials and methods

Si no se indica lo contrario, los siguientes materiales y métodos se usaron en los Ejemplos 1-5: If not stated otherwise, the following materials and methods were used in Examples 1-5:

Cultivo de células Cell culture

La primera línea celular humana, concretamente, las células HeLa (Colección Americana de Cultivos Tipo) se cultivaron tal como sigue: las células HeLa (Colección Americana de Cultivos Tipo) se cultivaron como se describe en Czaudema F y otros (Czauderna, F., Fechtner, M., Aygun, H., Arnold, W., Klippel, A., Giese, K. & Kaufmann, J. (2003). Nucleic Acids Res, 31, 670-82). The first human cell line, namely, HeLa cells (American Type Culture Collection) were cultured as follows: HeLa cells (American Type Culture Collection) were cultured as described in Czaudema F et al. (Czauderna, F., Fechtner, M., Aygun, H., Arnold, W., Klippel, A., Giese, K. & Kaufmann, J. (2003). Nucleic Acids Res, 31, 670-82).

La segunda línea celular humana fue una línea celular humana de queratinocitos la cual se cultivó de la siguiente manera: Los queratinocitos humanos se cultivaron a 37 °C en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) que contenía 10% de FCS. La línea celular de ratón fue la B16V (Colección Americana de Cultivos Tipo) que se cultivó a 37 °C en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) que contenía 10% de FCS. Las condiciones de cultivo fueron las descritas en Methods Find Exp Clin Pharmacol. 1997 mayo; 19(4):231-9: The second human cell line was a human keratinocyte cell line which was cultured as follows: Human keratinocytes were cultured at 37 ° C in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) containing 10% FCS. The mouse cell line was the B16V (American Type Culture Collection) which was grown at 37 ° C in modified Dulbecco Eagle medium (DMEM) containing 10% FCS. The culture conditions were those described in Methods Find Exp Clin Pharmacol. May 1997; 19 (4): 231-9:

En cada caso, las células se sometieron a los experimentos como se describe en la presente a una densidad de aproximadamente 50.000 células por pocillo y el ácido nucleico de hebra doble de acuerdo con la presente invención o se añadió un ácido nucleico de hebra doble comparativo a 20 nM, por lo que el ácido nucleico de hebra doble se acomplejó usando 1 µg/ml de un lípido registrado. In each case, the cells were subjected to the experiments as described herein at a density of approximately 50,000 cells per well and the double stranded nucleic acid according to the present invention or a comparative double stranded nucleic acid was added to 20 nM, so the double stranded nucleic acid was complexed using 1 µg / ml of a registered lipid.

Inducción de una condición similar a la hipoxia Induction of a hypoxia-like condition

Las células se trataron con CoCl2 para inducir una condición similar a la hipoxia de la siguiente manera: las transfecciones de ARNip se llevaron a cabo en placas de 10-cm (30-50% de confluencia) como se describe por (Czaudema y otros, 2003; Kretschmer y otros, 2003). E resumen, los ARNip se transfectaron mediante la adición de un complejo preformado concentrado 10x de GB y lípidos en medio libre de suero a las células en medio completo. El volumen total de la transfección fue de 10 ml. La concentración lipídica final fue de 1,0 µg/ml, la concentración final de ARNip fue 20 nM a menos que se indique lo contrario. La inducción de las respuestas hipóxicas se llevó a cabo mediante la adición de CoCl2 (100µM) directamente al medio de cultivo de tejidos 24 h antes de la lisis. Cells were treated with CoCl2 to induce a hypoxia-like condition as follows: siRNA transfections were carried out in 10-cm plates (30-50% confluence) as described by (Czaudema and others, 2003; Kretschmer et al., 2003). In summary, the siRNAs were transfected by the addition of a concentrated preformed complex 10x GB and lipids in serum free medium to the cells in complete medium. The total volume of the transfection was 10 ml. The final lipid concentration was 1.0 µg / ml, the final concentration of siRNA was 20 nM unless otherwise indicated. Induction of the hypoxic responses was carried out by adding CoCl2 (100 µM) directly to the tissue culture medium 24 h before lysis.

Preparación de extractos celulares e inmunotransferencia Preparation of cell extracts and immunoblot

La preparación de los extractos celulares y el análisis de inmunotransferencia se realizaron prácticamente como es descrito por Klippel y otros (Klippel, A., Escobedo, M.A., Wachowicz, M.S., Apell, G., Brown, T.W., Giedlin, M.A., Kavanaugh, W.M. & Williams, L.T. (1998). Mol Cell Biol, 18,5699-711; Klippel, A., Reinhard, C., Kavanaugh, W.M., Apell, G., Escobedo, M.A. & Williams, L.T. (1996). Mol Cell Biol, 16, 4117-27). Los anticuerpos policlonales contra el RTP801 de longitud completa se generaron por medio de la inmunización de conejos con la proteína recombinante RTP801 producida en bacterias a partir del vector de expresión pET19-b (Merck Biosciences GmbH, Schwalbach, Alemania). Los anticuerpos monoclonales murinos anti-P110a y anti-p85 se describieron por Klippel y otros (supra). Preparation of cell extracts and immunoblot analysis were performed practically as described by Klippel et al. (Klippel, A., Escobedo, MA, Wachowicz, MS, Apell, G., Brown, TW, Giedlin, MA, Kavanaugh, WM & Williams, LT (1998) Mol Cell Biol, 18,5699-711; Klippel, A., Reinhard, C., Kavanaugh, WM, Apell, G., Escobedo, MA & Williams, LT (1996). Cell Biol, 16, 4117-27). Polyclonal antibodies against full-length RTP801 were generated by immunizing rabbits with the recombinant protein RTP801 produced in bacteria from the expression vector pET19-b (Merck Biosciences GmbH, Schwalbach, Germany). Murine anti-P110a and anti-p85 monoclonal antibodies were described by Klippel et al. (Supra).

Ejemplo 2 Example 2

Reducción de la expresión de RTP801 en una primera línea celular humana Reduction of RTP801 expression in a first human cell line

Se prepararon varios ácidos nucleicos de hebra doble. Su ubicación en relación con el ARNm y CDS, así como SNPs humano en el ácido nucleico que codifica para RTP801 humano (núm. de acceso en el banco de datos NM_019058) se representa en la Figura 3. La primera línea celular humana se puso en contacto con dichos ácidos nucleicos de hebra doble como se describió en el Ejemplo 1. Tras la inducción de una condición similar a la hipoxia y el tratamiento con dichos ácidos nucleicos de hebra doble las células se lisaron y los lisados celulares se sometieron a inmunotransferencia. La p110a, que es una unidad catalítica de la quinasa PI3, y la p85 se usaron como controles de carga. La intensidad de la banda RTP801 como se visualizó usando anticuerpos policlonales RTP801 es una medida de la actividad de los ácidos nucleicos de hebra doble individuales en términos de reducir el nivel de expresión de RTP801. Several double stranded nucleic acids were prepared. Its location in relation to mRNA and CDS, as well as human SNPs in the nucleic acid encoding human RTP801 (accession number in database NM_019058) is depicted in Figure 3. The first human cell line was placed in contact with said double stranded nucleic acids as described in Example 1. After induction of a hypoxia-like condition and treatment with said double stranded nucleic acids the cells were lysed and the cell lysates were immunoblotted. P110a, which is a catalytic unit of PI3 kinase, and p85 were used as charge controls. The intensity of the RTP801 band as visualized using RTP801 polyclonal antibodies is a measure of the activity of individual double stranded nucleic acids in terms of reducing the level of RTP801 expression.

Todos y cada uno de los ácidos nucleicos de hebra doble se modificaron de tal manera que un grupo 2 'O-Me estaba presente en los nucleótidos primero, tercero, quinto, séptimo, noveno, undécimo, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno de la cadena antisentido, por lo que la misma modificación, es decir, un grupo 2'-O-Me estaba presente en los nucleótidos segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, duodécimo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo de la cadena sentido. Además, es de señalar que en el caso de estos ácidos nucleicos particulares de acuerdo con la presente invención, el primer tramo es idéntico a la primera hebra y el segundo tramo es idéntico a la segunda hebra y estos ácidos nucleicos son también de extremos romos.. Each and every one of the double stranded nucleic acids was modified such that a 2'O-Me group was present in the first, third, fifth, seventh, ninth, eleventh, thirteenth, fifteenth, seventeenth and nineteenth nucleotides of the antisense chain, so the same modification, that is, a 2'-O-Me group was present in the second, fourth, sixth, eighth, tenth, twelfth, fourteenth, sixteenth and eighteenth nucleotides of the sense chain. Furthermore, it should be noted that in the case of these particular nucleic acids according to the present invention, the first section is identical to the first strand and the second section is identical to the second strand and these nucleic acids are also blunt ends. .

Los experimentos se llevaron a cabo dos veces y los resultados individuales se muestran en las Figuras. 4A a H, en donde se designaron como Experimento 1 y Experimento 2, respectivamente. The experiments were carried out twice and the individual results are shown in the Figures. 4A to H, where they were designated as Experiment 1 and Experiment 2, respectively.

Las representaciones h, hr y hmr en las Figuras. 4A a H indican que el respectivo ácido nucleico de hebra doble se diseñó tal como para dirigirse a una sección del ARNm de RTP801 el cual es específico para el ARNm de RTP801 humano (h), para dirigirse a una sección del ARNm de RTP801 el cual es específico para el ARNm de RTP801 de humanos y ratas (hr) y para dirigirse a una sección del ARNm de RTP801 el cual es específico para el ARNm de RTP801 de humanos, ratón y rata (hmr). El ácido nucleico de hebra doble referido como el núm. 40.1 se usó como control positivo y las células sin tratar (UT +) se usaron como control negativo. The representations h, hr and hmr in the Figures. 4A to H indicate that the respective double stranded nucleic acid was designed such as to target a section of the RTP801 mRNA which is specific for the human RTP801 mRNA (h), to target a section of the RTP801 mRNA which It is specific for human and rat RTP801 mRNA (hr) and for targeting a section of RTP801 mRNA which is specific for human, mouse and rat RTP801 mRNA. The double stranded nucleic acid referred to as No. 40.1 was used as a positive control and untreated cells (UT +) were used as a negative control.

De acuerdo con los resultados, los siguientes ácidos nucleicos de hebra doble se arreglaron para ser particularmente According to the results, the following double stranded nucleic acids were arranged to be particularly

útiles en la regulación descendente de la expresión de RTP801: núm. 14, núm. 15, núm. 20, núm. 21, núm. 22, núm. 23, núm. 24, núm. 25, núm. 27, núm. 39, núm. 40, núm. 41, núm. 42, núm. 43, núm. 44, núm. 49 y núm. 50 (ver la Tabla A). useful in the down regulation of the expression of RTP801: no. 14, no. 15, no. 20, no. 21, no. 22, no. 23, no. 24, no. 25, no. 27, no. 39, no. 40, no. 41, no. 42, no. 43, no. 44, no. 49 and no. 50 (see Table A).

Ejemplo 3 Example 3

Reducción de la expresión de RTP801 en una segunda línea celular humana Reduction of RTP801 expression in a second human cell line

Los experimentos tal como se describieron en relación con el Ejemplo 2 se repitieron usando la segunda línea celular humana tal como se especificó en el Ejemplo 1 y los resultados se muestran en las Figuras. 5A a F. Experiments as described in connection with Example 2 were repeated using the second human cell line as specified in Example 1 and the results are shown in the Figures. 5A to F.

Como se puede deducir de estas figuras, los resultados tal como se obtuvieron en relación con los experimentos descritos en el Ejemplo 2, se confirmaron usando esta segunda línea celular humana. As can be deduced from these figures, the results as obtained in relation to the experiments described in Example 2, were confirmed using this second human cell line.

Ejemplo 4 Example 4

Efecto de la dosis de los ácidos nucleicos de hebra doble específicos de RTP801 Dose effect of RTP801 specific double stranded nucleic acids

En este experimento, se investigó el efecto de la dosificación de los ácidos nucleicos de hebra doble específicos de RTP801. In this experiment, the effect of dosing the RTP801 specific double stranded nucleic acids was investigated.

Para ello, las células HeLa se trataron como en relación con los Ejemplos 2 y 3, por lo que la concentración del ácido nucleico de hebra doble en el caldo de cultivo fue de 10 nM, 5 nM y 1 nM. Como control positivo se usó el ácido nucleico de hebra doble núm. 40.1, como control negativo, las células sin tratar (UT +). La lectura fue la misma que se describió en relación con los Ejemplos 2 y 3. Los ácidos nucleicos de hebra doble particulares que se usaron fueron aquellos con números de referencia interna 14, 22, 23 y 27 los cuales están dirigidos a tramos en el ARNm de RTP801, los cuales comparten los humanos, ratones y ratas, y los ácidos nucleicos de hebra doble con los números de referencia interna 39 y 42 los cuales están dirigidos a tramos del ARNm de RTP801 específicos para RTP801 humano. For this, HeLa cells were treated as in relation to Examples 2 and 3, whereby the concentration of the double stranded nucleic acid in the culture broth was 10 nM, 5 nM and 1 nM. As a positive control double stranded nucleic acid no. 40.1, as a negative control, untreated cells (UT +). The reading was the same as described in relation to Examples 2 and 3. The particular double stranded nucleic acids that were used were those with internal reference numbers 14, 22, 23 and 27 which are directed to stretches in the mRNA of RTP801, which are shared by humans, mice and rats, and double stranded nucleic acids with internal reference numbers 39 and 42 which are directed to specific RTP801 mRNA sections for human RTP801.

Los resultados se muestran en la Figura. 6A a C. A partir de dichas figuras se puede considerar que existe una clara dependencia de la concentración del efecto de los ácidos nucleicos de hebra doble específicos para RTP801, por lo cual fueron particularmente eficaces las moléculas de ácido nucleico que tenían los números de referencia interna 1, 15, 20, 21, 24, 40, 41, 43, 44, 22, 23, 27, 39, 42, 40.1, 44.1, y 14, preferentemente 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 y 44.1 y con mayor preferencia 14, 23 y 27 y preferentemente cada una de dichas moléculas de ácido nucleico tiene el patrón de modificación particular como se describió para ellas en la parte de ejemplo de la presente. The results are shown in Figure. 6A to C. From these figures it can be considered that there is a clear dependence on the concentration of the effect of the double stranded nucleic acids specific for RTP801, whereby the nucleic acid molecules having the reference numbers were particularly effective internal 1, 15, 20, 21, 24, 40, 41, 43, 44, 22, 23, 27, 39, 42, 40.1, 44.1, and 14, preferably 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 and 44.1 and more preferably 14, 23 and 27 and preferably each of said nucleic acid molecules has the particular modification pattern as described for them in the example part of the present.

Ejemplo 5 Example 5

Especificidad de especies del ácido nucleico de hebra doble específico de RTP801 Specificity of RTP801 specific double stranded nucleic acid species

Los ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención se diseñaron contra los tramos del ARNm de RTP801, que son el mismo o diferente en diversas especies. Para probar si había una especificidad de especie de un ácido nucleico de hebra doble específico de RTP801, los ácidos nucleicos de hebra doble con los números de referencia interna 14, 22, 23 y 27 que se dirigían a un tramo del ARNm de RTP801 que era conservado entre el ARNm de RTP801 de humano, ratón y rata, y los ácidos nucleicos de hebra doble con los números de referencia interna 39 y 42 y el ácido nucleico de hebra doble comparativo el cual estaba dirigido a un tramo del ARNm de RTP801 que era específico para el ARNm de RTP801 humano, es decir, el ácido nucleico de hebra doble y el comparativo dirigidos a un tramo que, como tal, no estaba presente en el ratón o rata, se compararon en términos de regulación descendente de RTP801 usandol mismo enfoque y lectura tal como se especificó en los Ejemplos 1 y 2. The double stranded nucleic acids according to the present invention were designed against the mRNA sections of RTP801, which are the same or different in various species. To test whether there was a species specificity of a RTP801 specific double stranded nucleic acid, double stranded nucleic acids with internal reference numbers 14, 22, 23 and 27 that were directed to a stretch of RTP801 mRNA that was conserved between human, mouse and rat RTP801 mRNA and double stranded nucleic acids with internal reference numbers 39 and 42 and comparative double stranded nucleic acid which was directed to a stretch of RTP801 mRNA that was specific for human RTP801 mRNA, that is, the double-stranded and comparative nucleic acid targeting a stretch that, as such, was not present in the mouse or rat, were compared in terms of downstream regulation of RTP801 using the same approach and reading as specified in Examples 1 and 2.

Aunque todos los ácidos nucleicos de hebra doble usados eran en principio activos contra el ARNm humano y, como se mostró en los ejemplos anteriores, también eran adecuados para regular de forma descendente la expresión de RTP801, al hacer uso de una línea celular de ratón, solamente aquellos ácidos nucleicos de hebra doble que también eran específicos para el ARNm de RTP801 de ratón, redujeron efectivamente la expresión de RTP801, concretamente, los ácidos nucleicos de hebra doble núms. 14, 22, 23 y 27. Although all the double stranded nucleic acids used were in principle active against human mRNA and, as shown in the previous examples, they were also suitable for downwardly regulating the expression of RTP801, when making use of a mouse cell line, only those double stranded nucleic acids that were also specific for the mouse RTP801 mRNA effectively reduced the expression of RTP801, specifically, double stranded nucleic acids no. 14, 22, 23 and 27.

A partir de este resultado se pudo concluir que era posible diseñar ácidos nucleicos de hebra doble dirigidos a RTP801, los cuales fueran específicos para una o varias especies. Esto permite el uso de la misma molécula en modelos animales así como en el hombre. From this result it was concluded that it was possible to design double stranded nucleic acids targeting RTP801, which were specific for one or more species. This allows the use of the same molecule in animal models as well as in man.

Ejemplo 6 Example 6

Modelos experimentales, métodos y resultados relacionados con la degeneración macular Experimental models, methods and results related to macular degeneration

Los compuestos de la presente invención se probaron en los siguientes, un modelo animal de neovascularización coroidea (CNV). Esta característica de la AMD húmeda se indujo en los modelos animales por tratamiento con láser. The compounds of the present invention were tested in the following, an animal model of choroidal neovascularization (CNV). This characteristic of wet AMD was induced in animal models by laser treatment.

A) MODELO DE RATÓN A) MOUSE MODEL

Inducción de neovascularización coroidea (CNV) Induction of choroidal neovascularization (CNV)

La neovascularización coroidea (CNV), una característica de la AMD húmeda, se desencadenó mediante la fotocoagulación con láser (532 nm, 200 mW, 100 ms, 75 µm) (OcuLight GL, Iridex, Mountain View, CA) que se llevó a cabo en ambos ojos de cada ratón el día 0 por un solo individuo al que se le ocultó la asignación del grupo de fármacos. Los puntos de láser se aplicaron de una manera estandarizada alrededor del nervio óptico, usando un sistema de administración de lámpara de hendidura y un cubreobjetos como una lente de contacto. Choroidal neovascularization (CNV), a characteristic of wet AMD, was triggered by laser photocoagulation (532 nm, 200 mW, 100 ms, 75 µm) (OcuLight GL, Iridex, Mountain View, CA) that was performed in both eyes of each mouse on day 0 by a single individual whose drug group assignment was hidden. The laser points were applied in a standardized manner around the optic nerve, using a slit lamp delivery system and a coverslip as a contact lens.

Grupos de tratamiento Treatment groups

La CNV se indujo en los siguientes grupos de ratones (machos 6-8 semanas de edad): CNV was induced in the following groups of mice (males 6-8 weeks of age):

(1)(one)

12 ratones WT;  12 WT mice;

(2)(2)

12 ratones knock-out para RTP801;  12 knock-out mice for RTP801;

(3)(3)

12 ratones WT inyectados con 0,25 µg de ARNip anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNip anti-RTP801 inactivo (REDD8 -control negativo) en el ojo contralateral, en los días 0 y 7;  12 WT mice injected with 0.25 µg of synthetic stabilized active anti-RTP801 siRNA (REDD14) in one eye and inactive anti-RTP801 siRNA (REDD8 -negative control) in the contralateral eye, on days 0 and 7;

(4)(4)

12 ratones WT inyectados con 0,25 µg de ARNip anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNip anti-GFP inactivo (control negativo) en el ojo contralateral en los días 0 y 7;  12 WT mice injected with 0.25 µg of synthetic stabilized active anti-RTP801 siRNA (REDD14) in one eye and inactive anti-GFP siRNA (negative control) in the contralateral eye on days 0 and 7;

(5)(5)

12 ratones WT inyectados con 0,1 µg de ARNip anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y PBS (control negativo) en el ojo contralateral en los días 0 y 7;  12 WT mice injected with 0.1 µg of synthetic stabilized active anti-RTP801 siRNA (REDD14) in one eye and PBS (negative control) in the contralateral eye on days 0 and 7;

(6)(6)

12 ratones WT inyectados con 0,05 µg de ARNip anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y PBS (control negativo) en el ojo contralateral en los días 0 y 7.  12 WT mice injected with 0.05 µg of synthetic stabilized active anti-RTP801 siRNA (REDD14) in one eye and PBS (negative control) in the contralateral eye on days 0 and 7.

Ambos ojos de cada ratón se trataron con láser. El volumen que se inyectó fue de 2 µl. Both eyes of each mouse were treated with laser. The volume that was injected was 2 µl.

Evaluación Evaluation

1.one.

El experimento se terminó en el día 14. Para la evaluación, los ojos se enuclearon y se fijaron con 4% de paraformaldehído durante 30 min a 4°C. La retina neurosensorial se separó y se cortó del nervio óptico. El restante complejo RPE-coroides-esclera se montó en la superficie plana en el Immu-Mount (medio de montaje Vectashield, Vector) y el cubreobjetos. Los montajes planos se examinaron con un microscopio confocal de barrido láser (TCS SP, Leica, Alemania). Los vasos se visualizaron mediante la excitación con láser de argón azul. Las secciones ópticas horizontales (paso de 1 µm) se obtuvieron de la superficie del complejo RPE-coroides-esclera. El plano focal más profundo en el cual el entorno de la red vascular coroidea se conectaba a la lesión, que se pudo identificar, se consideró que era el piso de la lesión. Cualquier vaso en el área tratada con láser y superficial a este plano de referencia se consideró como CNV. Las imágenes de cada sección se almacenaron digitalmente. El área de la fluorescencia relacionada con CNV se midió por análisis computerizado de imagen usandol software Leica TCS SP. La suma de toda la zona de fluorescencia en cada sección horizontal se usó como un índice para el volumen de CNV.  The experiment was completed on day 14. For evaluation, the eyes were enucleated and fixed with 4% paraformaldehyde for 30 min at 4 ° C. The sensorineural retina was separated and cut from the optic nerve. The remaining RPE-choroid-sclera complex was mounted on the flat surface on the Immu-Mount (Vectashield, Vector mounting medium) and the coverslip. Flat assemblies were examined with a confocal laser scanning microscope (TCS SP, Leica, Germany). The vessels were visualized by blue argon laser excitation. Horizontal optical sections (1 µm pitch) were obtained from the surface of the RPE-choroid-sclera complex. The deepest focal plane in which the environment of the choroidal vascular network was connected to the lesion, which could be identified, was considered to be the floor of the lesion. Any vessel in the area treated with laser and superficial to this reference plane was considered as CNV. The images of each section were stored digitally. The area of CNV-related fluorescence was measured by computerized image analysis using Leica TCS SP software. The sum of the entire fluorescence zone in each horizontal section was used as an index for the volume of CNV.

2.2.

Los ratones WT separados (5 ojos por grupo) se usaron para evaluar la expresión de ARNm de RTP801 en CNV (así como la expresión de otros genes relevantes a AMD) (no tratados y tratados con siARN) usando la PCR en tiempo real sobre el ARN extraído de RPE/coroides, o de la retina neural.  Separated WT mice (5 eyes per group) were used to evaluate the expression of RTP801 mRNA in CNV (as well as the expression of other genes relevant to AMD) (untreated and treated with siRNA) using real-time PCR on the RNA extracted from RPE / choroid, or from the neural retina.

Resultados Results

1.one.

Los ratones KO para RTP801 mostraron 30% menos de fuga de los vasos sanguíneos en comparación con los ratones WT después de la inducción de CNV; ver la Figura 8.  KO mice for RTP801 showed 30% less blood vessel leakage compared to WT mice after CNV induction; See Figure 8.

2.2.

El ARNip sintético estabilizado contra RTP801, REDD14, produjo una reducción dependiente de la dosis del volumen de CNV. Un máximo de inhibición de ~ 70% en comparación con los ojos inyectados con PBS se logró a una dosis de 0,25 µg de REDD14 por ojo (secuencia núm. 14 en la Tabla 1, sec. con núm. de ident.: 16 (sentido) y 66 (antisentido)). A la misma dosis, ambos ARNip de control negativo, REDD8 y ARNip anti-GFP, mostraron sólo 27% y 33% de reducción de volumen de CNV respectivamente, lo que apoyaba tanto la eficacia superior de REDD14 y también la especificidad de su efecto.  The synthetic siRNA stabilized against RTP801, REDD14, produced a dose-dependent reduction in the volume of CNV. A maximum inhibition of ~ 70% compared to the eyes injected with PBS was achieved at a dose of 0.25 µg of REDD14 per eye (sequence No. 14 in Table 1, section with ID No. 16 (sense) and 66 (antisense)). At the same dose, both negative control siRNAs, REDD8 and anti-GFP siRNA, showed only 27% and 33% reduction in CNV volume respectively, which supported both the superior efficacy of REDD14 and also the specificity of its effect.

B) MODELO PRIMATE NO HUMANO B) NON-HUMAN PRIMATE MODEL

Inducción de CNV CNV induction

Ocho monos cynomoglus machos (Macaca fascicularis) 2-6 años de edad se usaron para el estudio. La neovascularización coroidea (CNV) se indujo por el tratamiento con láser perimacular de ambos ojos antes de la administración de la dosis. Se localizaron nueve lesiones en la mácula con un láser [foto coagulador láser OcuLight GL (532 nm) con un adaptador de lámpara portátil de hendidura IRIS Medical®], y los puntos de láser en el ojo derecho fueron el reflejo de la colocación en el ojo izquierdo. Los parámetros aproximados del láser fueron los siguientes: tamaño de punto: 50-100 µm de diámetro; potencia del láser: 300-700 milivatios; tiempo de exposición: 0,1 segundos. Eight male cynomoglus monkeys (Macaca fascicularis) 2-6 years old were used for the study. Choroidal neovascularization (CNV) was induced by perimacular laser treatment of both eyes before dose administration. Nine lesions in the macula were located with a laser [OcuLight GL laser coagulator photo (532 nm) with an IRIS Medical® portable slit lamp adapter], and the laser points in the right eye were the reflection of the placement in the left eye. The approximate parameters of the laser were the following: spot size: 50-100 µm in diameter; laser power: 300-700 milliwatts; exposure time: 0.1 seconds.

Tratamiento Treatment

Inmediatamente después del tratamiento con láser, ambos ojos de todos los animales se sometieron a una única Immediately after laser treatment, both eyes of all animals underwent a single

5 inyección intravítrea. El ojo izquierdo se dosificó con 350 ug de ARNip sintético estabilizado contra RTP801 (el mismo utilizado en el estudio de ratón) en el volumen final de 50 ul, mientras que el ojo contralateral recibió 50 ul de PBS (vehículo). 5 intravitreal injection. The left eye was dosed with 350 ug of synthetic siRNA stabilized against RTP801 (the same one used in the mouse study) in the final volume of 50 ul, while the contralateral eye received 50 ul of PBS (vehicle).

Evaluación Evaluation

1. one.

Todos los animales se sometieron a examen diario de mediciones del consumo de alimentos y de peso corporal. All animals underwent daily examination of food consumption and body weight measurements.

2.2.

Se sacrificaron 2 monos en el día 6 después de la inducción de CNV. Sus ojos se enuclearon y el polo posterior se aplanó. Después la región fóvea se extirpó y se separó en coroides y neurorretina las cuales se congelaron en  Two monkeys were sacrificed on day 6 after CNV induction. His eyes were enucleated and the posterior pole flattened. Then the fovea region was removed and separated into choroids and neuroretin which were frozen in

15 nitrógeno líquido por separado (para cada animal) para su uso posterior para la extracción de ARN y la evaluación de la expresión de RTP801 por la PCR en tiempo real.. 15 liquid nitrogen separately (for each animal) for later use for RNA extraction and evaluation of RTP801 expression by real-time PCR.

3. Los angiogramas de fluoresceína se llevaron a cabo antes del estudio, y al final de las semanas 1, 2 y 3 después de la inducción de CNV. Las fotografías se tomaron, usando de una cámara de fondo de ojo (TRC-50EX Retina Camera). 20 Las imágenes se capturaron usandol sistema Topcon IMAGEnet™. El colorante de fluoresceína (10% fluoresceína sódica, aproximadamente 0,1 ml/kg) se inyectó a través de puertos de acceso vascular. Las fotografías se tomaron en diferentes puntos de tiempo después de la inyección del tinte, para incluir la fase arterial, la fase arteriovenosa temprana y varias fases arteriovenosas tardías con el fin de evaluar la neovascularización y para controlar la fuga de la fluoresceína asociada con las lesiones de CNV. La interpretación y el análisis de los angiogramas de fluoresceína se 3. Fluorescein angiograms were performed before the study, and at the end of weeks 1, 2, and 3 after CNV induction. The photographs were taken, using an eye fundus camera (TRC-50EX Retina Camera). 20 The images were captured using the Topcon IMAGEnet ™ system. The fluorescein dye (10% sodium fluorescein, approximately 0.1 ml / kg) was injected through vascular access ports. Photographs were taken at different time points after dye injection, to include the arterial phase, early arteriovenous phase and several late arteriovenous phases in order to assess neovascularization and to control the leakage of fluorescein associated with lesions. of CNV. The interpretation and analysis of fluorescein angiograms are

25 llevaron a cabo de forma independiente por dos oftalmólogos. 25 carried out independently by two ophthalmologists.

La neovascularización (NV) se evaluó en los angiogramas tempranos y cada punto se clasificó de acuerdo con el siguiente esquema: Neovascularization (NV) was evaluated in the early angiograms and each point was classified according to the following scheme:

0 0

-sin signos de NV -No signs of NV

0,5 0.5

-punto sospechoso - suspect point

1 one

-punto "caliente" -hotspot"

2 2

-NV en la quemadura con láser -NV in the laser burn

3 3

-NV evidente -NV evident

30 Las fugas se evaluaron de acuerdo con el siguiente esquema: 30 Leaks were evaluated according to the following scheme:

0 0

-ninguna fuga -no leakage

0,5 0.5

-punto sospechoso - suspect point

1 one

-fuga evidente de pequeño punto - obvious small point leak

2 2

-fuga creciente con el tiempo - increasing leakage over time

3 3

-fuga mayor que las límites anteriores (evidentemente) -fugue greater than the previous limits (obviously)

Además, el tamaño de cada punto se comparó entre los angiogramas tempranos y tardíos usando las mediciones morfométricas, y se calculó el aumento en el tamaño del punto resultante de la fuga. In addition, the size of each point was compared between early and late angiograms using morphometric measurements, and the increase in the size of the point resulting from the leak was calculated.

4. Los electrorretinogramas (ERG) se registraron usando un electrorretinógrafo Epic 2000 según los SOP de Sierra y el 4. The electroretinograms (ERG) were recorded using an Epic 2000 electroretinograph according to the SOPs of Sierra and the

35 estudio específico de SOP, que incluyó el uso del aparato Ganzfield, en el pre-estudio y al final de la semana 3. Un oftalmólogo veterinario evaluó los datos de ERG tabulados. 35 specific study of PCOS, which included the use of the Ganzfield apparatus, in the pre-study and at the end of week 3. A veterinary ophthalmologist assessed tabulated ERG data.

El estudio se terminó en el día 21 después de la inducción de CNV. La necropsia y el examen histológico se realizaron en los órganos y tejidos, se incluyeron los ojos. The study was terminated on day 21 after CNV induction. Necropsy and histological examination were performed on organs and tissues, eyes were included.

Resultados Results

1.one.

El ARNip contra RTP801 redujo la expresión de RTP801 en el RPE/coroides de los animales tratados con láser, según se midió el día 6 después de la inducción de CNV por la PCR en tiempo real (ver Figura 10)..  The siRNA against RTP801 reduced the expression of RTP801 in the RPE / choroids of laser treated animals, as measured on day 6 after CNV induction by real-time PCR (see Figure 10).

2.2.

La comparación de la clasificación de los puntos para las fugas y la neovascularización entre los ojos contralaterales en cada mono individual reveló que ambas de estas características patológicas estaban disminuidas en los ojos inyectados con el ARNip de RTP801 en comparación con el control (para los resultados de fuga, ver la Figura 11; para los resultados de neovascularización, ver la Figura 12).  Comparison of the classification of points for leaks and neovascularization between contralateral eyes in each individual monkey revealed that both of these pathological features were diminished in the eyes injected with the RTP801 siRNA compared to the control (for the results of leak, see Figure 11; for neovascularization results, see Figure 12).

3.3.

El cálculo del número total de puntos con los grados mayores de fuga o neovascularización clínicamente relevantes (2 y 3) en todos los ojos inyectados con ARNip en comparación con todos los ojos inyectados con PBS de nuevo reveló que los ojos inyectados con el ARNip eran menos afectados (ver la Figura 13, a+b).  The calculation of the total number of points with the highest degrees of clinically relevant leakage or neovascularization (2 and 3) in all eyes injected with siRNA compared to all eyes injected with PBS again revealed that eyes injected with siRNA were less affected (see Figure 13, a + b).

5 4. Los datos de la clasificación general para las fugas de los puntos y la neovascularización se sometió a una evaluación estadística. La existencia de diferencias entre los tratamientos de control y de ARNip se analizaron mediante el cálculo de la delta entre los intervalos de punto medio del ojo de la derecha de control (R) y el ojo izquierdo (L) inyectado con ARNip (delta=R-L). La significación de la diferencia se calculó usando un método estadístico no paramétrico, la prueba de rango de signo de Wilcoxon -una prueba de una cola. Diferentes fases de 5 4. The general classification data for point leakage and neovascularization was subjected to a statistical evaluation. The existence of differences between the control and siRNA treatments were analyzed by calculating the delta between the midpoint intervals of the right control eye (R) and the left eye (L) injected with siRNA (delta = RL ). The significance of the difference was calculated using a non-parametric statistical method, the Wilcoxon sign rank test - a tail test. Different phases of

10 los angiogramas (arterial temprana, arterio-venosa y venosa tardía) se analizaron por separado para cada semana (1, 2, y 3). 10 angiograms (early arterial, arteriovenous and late venous) were analyzed separately for each week (1, 2, and 3).

La Tabla 1 muestra el significado (una prueba de una cola) de la diferencia de rango de fugas desde 0 para cada grupo (los valores de p <0.05 están subrayados). Una reducción significativa del rango de fugas se encontró en los 15 ojos izquierdos (tratadas con ARNip) con respecto al derecho (tratado con placebo) en la semana 2 y 3 en los angiogramas tardíos. Table 1 shows the meaning (a tail test) of the leakage range difference from 0 for each group (the values of p <0.05 are underlined). A significant reduction in the range of leaks was found in the 15 left eyes (treated with siRNA) with respect to the right (treated with placebo) in week 2 and 3 in late angiograms.

Nótese que los angiogramas tardíos se usaron normalmente para la evaluación de los parámetros de fuga. La Tabla 2 muestra el significado (la prueba de una cola) de la diferencia de rango de neovascularización (NV) desde 0 para cada grupo (los valores de p <0.05 están subrayados)). Note that late angiograms were normally used for the evaluation of leakage parameters. Table 2 shows the meaning (the test of a tail) of the neovascularization range difference (NV) from 0 for each group (the values of p <0.05 are underlined)).

Una reducción significativa en el rango de NV se encontró en el ojo izquierdo con respecto al derecho en la semana 2 y 3 en el período temprano y en el período arteriovenoso en la semana 2. A significant reduction in the range of NV was found in the left eye with respect to the right in week 2 and 3 in the early period and in the arteriovenous period in week 2.

Nótese que los angiogramas iniciales se usaron normalmente para la evaluación de los parámetros de neovascularización. Note that the initial angiograms were normally used for the evaluation of neovascularization parameters.

5. La evaluación morfométrica cuantitativa del aumento en el área de los puntos que se produjeron entre los angiogramas tempranos (fase arterial) y tardíos (fase venosa) debido a la fuga, reveló que este parámetro se redujo significativamente en los puntos de láser dentro de los ojos inyectados con ARNip (ojos izquierdos, OS) en comparación con el control (ojos derechos, OD). Dos ejemplos se mostraron en la Figura 14. Los gráficos demostraron el aumento relativo (en %) en el área de cada punto en el ojo izquierdo y derecho de los animales # 3315 y 3300. 5. Quantitative morphometric evaluation of the increase in the area of the points that occurred between the early (arterial phase) and late angiograms (venous phase) due to leakage, revealed that this parameter was significantly reduced at the laser points within the eyes injected with siRNA (left eyes, OS) compared to the control (right eyes, OD). Two examples were shown in Figure 14. The graphs showed the relative increase (in%) in the area of each point in the left and right eye of animals # 3315 and 3300.

Adicionalmente, se observó a lo largo de todos los estudios anteriores que el ARNip de anti RTP-801 no tuvo efectos adversos sobre los electrorretinogramas (ERG), sobre la histología del ojo o sobre la estructura y función de otros órganos y sistemas. Additionally, it was observed throughout all previous studies that the anti RTP-801 siRNA did not have adverse effects on electroretinograms (ERG), on the histology of the eye or on the structure and function of other organs and systems.

Para resumir los experimentos y resultados anteriores: To summarize the experiments and previous results:

1.one.

La inhibición del ARNip de la expresión de RTP801 tanto genética (RTP801-/-) y terapéutica en la CNV inducida por láser en el modelo de degeneración macular húmeda relacionada con la edad (AMD húmeda) resultó en la reducción significativa del volumen de CNV.  Inhibition of the siRNA of the expression of RTP801 both genetic (RTP801 - / -) and therapeutic in laser-induced CNV in the age-related wet macular degeneration model (wet AMD) resulted in a significant reduction in the volume of CNV.

2.2.

Se obtuvieron resultados positivos en el modelo de ratón y de primate no humano.  Positive results were obtained in the mouse and non-human primate model.

3.3.

El examen anatomopatológico y ERG en mono no reveló ninguna toxicidad mediada por siARN, ya sea en los ojos o en otros órganos o sistemas.  The anatomopathological examination and ERG in mono revealed no toxicity mediated by siRNA, either in the eyes or in other organs or systems.

C) EFICACIA DE LA TERAPIA DE COMBINACIÓN DE ARNip DE RTP801 (REDD14) Y EL ANTICUERPO ANTI-VEGF C) EFFECTIVENESS OF RTP801 siRNA COMBINATION THERAPY (REDD14) AND ANTI-VEGF ANTIBODY

La eficacia de la terapia de combinación de ARNip de RTP801 (REDD14) y el anticuerpo anti-VEGF en el tratamiento de enfermedades en las que se produce la CNV se probó en el anterior modelo de CNV de ratón. The efficacy of the combination therapy of RTP801 siRNA (REDD14) and the anti-VEGF antibody in the treatment of diseases in which CNV occurs was tested in the previous mouse CNV model.

A) Estudios del volumen de CNV A) CNV volume studies

TEl volumen de la neovascularización coroidea (CNV) 3 semanas después de la lesión con láser se calculó por microscopía de fluorescencia confocal como se describió previamente (Sakurai y otros IOVS 2003;44: 3578-85 & Sakurai y otros IOVS 2003; 44: 2743-2749). The volume of choroidal neovascularization (CNV) 3 weeks after laser injury was calculated by confocal fluorescence microscopy as previously described (Sakurai and other IOVS 2003; 44: 3578-85 & Sakurai and other IOVS 2003; 44: 2743 -2749).

En estudios previos se encontró que el anticuerpo (Ac) anti-VEGF-A redujo el volumen de CNV de una manera dependiente de la dosis. Una dosis de 1 ng del Ac. VEGF-A se eligió para los estudios de combinación de REDD14 + Ac VEGF-A porque esta dosis tuvo un efecto inhibidor intermedio: El Ac. VEGF-A (1 ng) redujo el tamaño de la CNV en un 26±6%. In previous studies it was found that the anti-VEGF-A (Ac) antibody reduced the volume of CNV in a dose-dependent manner. A dose of 1 ng of Ac. VEGF-A was chosen for the combination studies of REDD14 + Ac VEGF-A because this dose had an intermediate inhibitory effect: Ac. VEGF-A (1 ng) reduced the size of the CNV by 26 ± 6%.

Las principales conclusiones del estudio de REDD14 + anticuerpos (Ac) VEGF-A son: The main conclusions of the study of REDD14 + (Ac) VEGF-A antibodies are:

. La adición de REDD14 a la dosis más baja 0,05 µg redujo el tamaño de CNV en un 27±4% en comparación con el Ac. VEGF-A solo. . La adición de REDD14 a la dosis más alta de 0,25 µg redujo el tamaño de CNV en un 55 ± 3% en comparación . The addition of REDD14 at the lowest dose 0.05 µg reduced the CNV size by 27 ± 4% compared to Ac. VEGF-A alone. . The addition of REDD14 to the higher dose of 0.25 µg reduced the CNV size by 55 ± 3% compared

con el Ac. VEGF-A solo. with the Ac. VEGF-A alone.

B) Estudios de fuga de CNV B) CNV leak studies

Experimento 1 Experiment 1

Este experimento se diseñó con el fin de identificar un potencial efecto terapéutico aditivo o sinérgico de inhibición de VEGF y RTP801 en el modelo de neovascularización coroidea inducida por láser en ratones This experiment was designed in order to identify a potential additive or synergistic therapeutic effect of inhibition of VEGF and RTP801 in the laser-induced choroidal neovascularization model in mice

Materiales: Materials:

• •

REDD14 (RTP801 ARNip.) REDD14 (RTP801 ARNip.)

• •

REDD8 (control negativo) REDD8 (negative control)

• •

Anticuerpos anti-VEGF Anti-VEGF antibodies

• •

IgG no específica (control negativo) Non-specific IgG (negative control)

La CNV se indujo en el día cero como se describió anteriormente, el material de ensayo se inyectó a los sujetos en el día cero y el día 7. CNV was induced on day zero as described above, test material was injected into subjects on day zero and day 7.

Los resultados se evaluaron por angiografía con fluoresceína en las semanas 1, 2, 3, y por medición del volumen de CNV en 3 semanas. Cada grupo de prueba se componía de 10 ojos. The results were evaluated by fluorescein angiography at weeks 1, 2, 3, and by measuring the volume of CNV in 3 weeks. Each test group consisted of 10 eyes.

Grupos experimentales: Experimental groups:

••

Ac. VEGF 0.5 ng/ojo  Ac. VEGF 0.5 ng / eye

••

Ac. VEGF 1 ng/ojo  Ac. VEGF 1 ng / eye

••

Ac. VEGF 2 ng/ eye  Ac. VEGF 2 ng / eye

••

Ac. VEGF 4 ng/ojo  Ac. VEGF 4 ng / eye

• •

REDD14 0,05 ug/ojo REDD14 0,05 ug / eye

• •

REDD 14 0,1 ug/ojo REDD 14 0.1 ug / eye

••

REDD14 0,25 ug/ojo  REDD14 0.25 ug / eye

••

REDD14 0,05 ug/ojo + Ac. VEGF 1 ng/ojo  REDD14 0.05 ug / eye + Ac. VEGF 1 ng / eye

••

REDD 14 0,1 ug/ojo + Ac. VEGF 1 ng/ojo  REDD 14 0.1 ug / eye + Ac. VEGF 1 ng / eye

••

REDD14 0,25 ug/ojo + Ac. VEGF 1 ng/ojo  REDD14 0.25 ug / eye + Ac. VEGF 1 ng / eye

Grupos controles Control groups

••

PBS  PBS

• •

IgG no especifico 2 ng/ojo Non-specific IgG 2 ng / eye

••

REDD8 0,1 ug/ojo  REDD8 0.1 ug / eye

••

REDD8 0,1 ug/ojo + Ac. VEGF 1 ng/ojo  REDD8 0.1 ug / eye + Ac. VEGF 1 ng / eye

Resultados Results

Los resultados del experimento anterior se presentaron en las Figuras 23-24. Estos resultados mostraron que la administración simultánea intravítrea del Ac. VEGF y REDD14 condujo al aumento de la inhibición, dependiente de la dosis, de la neovascularización coroidea y las fugas de los vasos sanguíneos coroides, tal como se expresó en una menor incidencia de puntos grado 4 y una mayor incidencia de puntos grado 1. Los angiogramas se clasificaron usando una modificación de un régimen de clasificación semicuantitativa (1-4) previamente publicada (Sakurai y otros IOVS 2003; 44: 2743-2749). Las lesiones grado 1 se consideraron como que no se formaron, es decir, equivalente a la prevención completa. Las lesiones de grado 4 se consideraron patológicamente significativas, es decir, el equivalente a las lesiones que se tratarían en los pacientes. El Ac VEGF-A (1 ng) redujo la incidencia de lesiones de grado 4 por ojo en un 38±8% y el aumentó la incidencia de las lesiones de grado 1 por ojo en un 66±43%. The results of the previous experiment were presented in Figures 23-24. These results showed that the simultaneous intravitreal administration of Ac. VEGF and REDD14 led to increased inhibition, dependent on the dose of choroidal neovascularization and leakage of choroidal blood vessels, as expressed in a lower incidence of grade 4 points and a higher incidence of grade 1 points. Angiograms were classified using a modification of a semi-quantitative classification regime (1-4) previously published (Sakurai and other IOVS 2003; 44: 2743-2749). Grade 1 lesions were considered as not forming, that is, equivalent to the complete prevention Grade 4 lesions were considered pathologically significant, that is, the equivalent of the lesions that would be treated in patients. Ac VEGF-A (1 ng) reduced the incidence of grade 4 lesions per eye by 38 ± 8% and he increased the incidence of grade 1 lesions per eye by 66 ± 43%.

Las principales conclusiones del estudio de fugas de la combinación REDD14 + Ac. VEGF-A son: The main conclusions of the leak study of the REDD14 + Ac combination. VEGF-A are:

. La adición de REDD14 a la dosis más baja 0,05 µg redujo la incidencia de las lesiones de grado 4 en un 66±12% en comparación con el Ac. VEGF-A solo. . La adición de REDD14 a la dosis más alta 0,25 µg redujo la incidencia de lesiones de grado 4 en un 60±12% . The addition of REDD14 at the lowest dose 0.05 µg reduced the incidence of grade 4 lesions in one 66 ± 12% compared to Ac. VEGF-A alone. . The addition of REDD14 to the highest dose 0.25 µg reduced the incidence of grade 4 lesions by 60 ± 12%

en comparación con el Ac. VEGF-A solo. . La adición de REDD14 a la dosis más alta 0,25 µg duplicó (100±34%), la incidencia de lesiones de grado 1 en comparación con el Ac. VEGF-A solo. compared to Ac. VEGF-A alone. . The addition of REDD14 to the highest dose 0.25 µg doubled (100 ± 34%), the incidence of grade 1 lesions in comparison with Ac. VEGF-A alone.

Experimento 2 Experiment 2

Este experimento se diseñó con el fin de estudiar el efecto de REDD14 sobre la expresión génica en la retina neural y RPE. This experiment was designed in order to study the effect of REDD14 on gene expression in the neural retina and RPE.

Diseño experimental Experimental design

Grupos: Groups:

••

PBS  PBS

• •

REDD14 0,25 mg REDD14 0.25 mg

El tamaño del grupo fue de 5 ojos. Se indujo CNV por tratamiento con láser como se describió anteriormente en el día cero; el material de ensayo se inyectó también en el día cero, y el efecto se evaluó por análisis mediante la qPCR de la expresión génica en la retina neural y RPE en los días cero y 5. The group size was 5 eyes. CNV was induced by laser treatment as described above on day zero; The test material was also injected on day zero, and the effect was assessed by qPCR analysis of gene expression in the neural retina and RPE on days zero and 5.

Resultados Results

Los resultados del experimento anterior se presentan en la Figura 25. Estos resultados muestran que la administración de REDD14 causa: The results of the previous experiment are presented in Figure 25. These results show that the administration of REDD14 causes:

• -40% de regulacion descendente de la expresion de RTP801 por debajo de la linea de base, tanto en EPR y en la • -40% down regulation of the expression of RTP801 below the baseline, both in EPR and in the

retina neural (ver también la Figura 26); • -70% de regulacion ascendente de la expresion de PEDF sobre la linea de base en la retina neural (nota: en los ojos inyectados con PBS la expresión de PEDF se reguló descendente en un 40% por debajo de la línea de base) •-40% de regulacion descendente de la expresion VEGF164 por debajode lalineadebase en RPE (nota: en los ojos inyectados con PBS la expresión de VEGF164 se reguló descendente en un 20%) neural retina (see also Figure 26); • -70% upstream regulation of PEDF expression on the baseline in the neural retina (note: in the eyes injected with PBS PEDF expression was regulated down 40% below baseline) • -40% down regulation of the VEGF164 expression below the baseline in RPE (note: in the eyes injected with PBS the expression of VEGF164 was regulated downwards by 20%)

• -50% de reduccion de la expresion de MCP1 en RPE/coroides (Figura 26) • -50% reduction in the expression of MCP1 in RPE / choroid (Figure 26)

Conclusiones generales de los dos experimentos: General conclusions of the two experiments:

• •

La inhibicion simultanea de RTP801 y VEGF aumento el efecto inhibidor sobre la neovascularización coroidea y la fuga neovascular. Simultaneous inhibition of RTP801 and VEGF increased the inhibitory effect on choroidal neovascularization and neovascular leakage.

• •

La inhibicion de la expresion de RTP801 por REDD14 no solo previno la regulacion descendente de PEDF en el The inhibition of the expression of RTP801 by REDD14 not only prevented the downward regulation of PEDF in the

modelo de CNV sino aumentó su expresión en comparación con la línea base. CNV model but increased its expression compared to the baseline.

• •

La inhibicion de la expresión de RTP801 condujo a la concomitante regulación descendente de MCP1 el cual debería tener un efecto anti-inflamatorio: The inhibition of the expression of RTP801 led to the concomitant down-regulation of MCP1 which should have an anti-inflammatory effect:

• •

Sin estar limitado por la teoria, el aumento de la expresion de PEDF por REDD14 puede ser la base del efecto Without being limited by theory, the increase in PEDF expression by REDD14 may be the basis of the effect

cooperativo de inhibición simultánea de VEGF y RTP801 observado (Nota: El PEDF es un factor antiangiogénico y neuroprotector conocido.) Cooperative simultaneous inhibition of VEGF and RTP801 observed (Note: PEDF is a known anti-angiogenic and neuroprotective factor.)

• Sin estar limitado por la teoria, la reduccion de la expresion de MCP1por REDD14 tambien puede ser la base del • Without being limited by theory, reducing the expression of MCP1 by REDD14 can also be the basis of

efecto cooperativo de inhibición simultánea de VEGF y RTP801 observado (Nota: El MCP1 es una quimiocina pro-inflamatoria conocida involucrada en la patogénesis de AMD.) Cooperative effect of simultaneous inhibition of VEGF and RTP801 observed (Note: MCP1 is a known pro-inflammatory chemokine involved in the pathogenesis of AMD.)

Otros modelos de AMD que se pueden usar para probar los métodos de la presente invención: Other AMD models that can be used to test the methods of the present invention:

• Animales deficientes en Ccl-2 o Ccr-2 -la deficiencia en cualquiera de estas proteínas causa el desarrollo de algunas de las principales características de AMD. Los animales deficientes en estas proteínas se pueden usar para probar los métodos de la presente invención. • Animals deficient in Ccl-2 or Ccr-2 - deficiency in any of these proteins causes the development of some of the main features of AMD. Animals deficient in these proteins can be used to test the methods of the present invention.

Para más información sobre modelos animales de AMD, ver: Chader, Vision research 42 (2002) 393-399; Ambati y otros, Nature Medicine 9(11) (2003) 1390-1397; Tolentino y otros, Retina 24 (2004) 132-138. For more information on animal models of AMD, see: Chader, Vision research 42 (2002) 393-399; Ambati et al., Nature Medicine 9 (11) (2003) 1390-1397; Tolentino and others, Retina 24 (2004) 132-138.

D) Comparación de la actividad del ARNip anti RTP801, REDD14 que posee un grupo fosfato 3' en cada hebra con la misma molécula que carece de fosfatos 3 '(REDD14NP) en el modelo de CNV inducida por láser. D) Comparison of the activity of the anti RTP801, REDD14 siRNA that has a 3 'phosphate group in each strand with the same molecule that lacks 3' phosphate (REDD14NP) in the laser-induced CNV model.

El experimento en general se realizó y se evaluó como se describió anteriormente. Un ojo de cada ratón (12 por grupo) se inyectaron con 0.25 ug de ARNip REDD14, mientras que en el otro ojo se inyectó ARNip REDD14NP. The overall experiment was performed and evaluated as described above. One eye of each mouse (12 per group) was injected with 0.25 ug of REDD14 siRNA, while in the other eye REDD14NP siRNA was injected.

Resultados Results

Ambos ARNip igualmente redujeron eficazmente el volumen de CNV (Figura 27). Both siRNAs also effectively reduced the volume of CNV (Figure 27).

Ejemplo 7 Modelos y resultados relacionados con la EPOC y el enfisema Example 7 Models and results related to COPD and emphysema

Los compuestos de la presente invención se probaron en los siguientes modelos animales: The compounds of the present invention were tested in the following animal models:

**

El modelo de enfisema inducido por el humo del cigarrillo: la exposición crónica al humo del cigarrillo provoca enfisema en varios animales, tales como, entre otros, ratón, conejillo de indias.  The cigarette smoke-induced emphysema model: chronic exposure to cigarette smoke causes emphysema in several animals, such as, among others, mouse, guinea pig.

**

La actividad de la proteasa de pulmón como un desencadenante de enfisema.  Lung protease activity as an emphysema trigger.

**

El modelo de inhibición de VEGFR del enfisema.  The VEGFR inhibition model of emphysema.

**

Instilación bronquial con neutrófilos humanos/elastasa pancreática en roedores.  Bronchial instillation with human neutrophils / pancreatic elastase in rodents.

**

enfisema inducido por la MMP (metaloproteasa de matriz).  MMP-induced emphysema (matrix metalloprotease).

**

El enfisema inducido por inflamación.  Inflammation induced by inflammation.

Además, los modelos de enfisema se pueden generar a través de medios genéticos (por ejemplo, ratones que portan la mutación TSK), y animales enfisematosos se pueden generar por modificadores de la susceptibilidad a enfisema conocidos tales como, entre otros, lesión pulmonar, hipoplasia alveolar, hiperoxia, tratamiento con glucocorticoides y nutrición. In addition, emphysema models can be generated through genetic means (for example, mice that carry the TSK mutation), and emphysematous animals can be generated by known emphysema susceptibility modifiers such as, among others, lung injury, hypoplasia alveolar, hyperoxia, glucocorticoid treatment and nutrition.

A. Evaluación de la influencia de la falta de RTP801 en el desarrollo de la enfermedad en modelos de enfisema en ratón (usando ratones knockout para RTP801) A. Evaluation of the influence of the lack of RTP801 on the development of the disease in mouse emphysema models (using knockout mice for RTP801)

(1) El humo de cigarrillos (CS) inducida por la apoptosis y la inflamación se inició en 5 ratones machos de 4 meses RTP801 KO y 5 de control tipo salvaje. Los ratones se sometieron a un CS intenso (como se describe en Rangasamy y otros, ver anteriormente) por 7 días. Los ratones no tratados KO y WT, del experimento de inhibición de VEGFR anterior también pueden servir como grupos de control no tratados, para este experimento. Posteriormente, los pulmones se inflaron con agarosa, se fijaron y embebieron en parafina, y el desarrollo del estrés oxidativo en los ratones KO se evaluó mediante: (1) Cigarette smoke (CS) induced by apoptosis and inflammation was initiated in 5 male mice of 4 months RTP801 KO and 5 wild-type control. The mice underwent an intense CS (as described in Rangasamy et al., See above) for 7 days. The untreated mice KO and WT of the previous VEGFR inhibition experiment can also serve as untreated control groups for this experiment. Subsequently, the lungs were inflated with agarose, fixed and embedded in paraffin, and the development of oxidative stress in KO mice was assessed by:

a) localización inmunohistoquímica y la cuantificación de 8-oxo-dG en las secciones de pulmón; a) immunohistochemical localization and quantification of 8-oxo-dG in the lung sections;

b) localización inmunohistoquímica y la cuantificación de la caspasa 3 activa en las secciones de pulmón por medio del uso de anticuerpos específicos, o la evaluación cuantitativa del número de células TUNELpositivas; c) medición de la concentración de ceramida en los extractos de pulmón; d) medición de la actividad caspasa en los extractos de pulmón. b) immunohistochemical localization and quantification of active caspase 3 in the lung sections through the use of specific antibodies, or the quantitative evaluation of the number of TUNEL positive cells; c) measurement of ceramide concentration in lung extracts; d) measurement of caspase activity in lung extracts.

(2) Consumo de cigarrillos a largo plazo en los ratones KO. (2) Long-term cigarette consumption in KO mice.

6 ratones hembras KO y 6 WT pareados por edad se sometieron al consumo intenso de cigarrillos (5 horas al día) durante un período de 6 meses. Los ratones se sacrificaron a continuación, y el diámetro medio interseptal (un parámetro del enfisema) se evaluó por medio del uso de un enfoque morfométrico. 6 female KO and 6 WT mice matched by age were subjected to intense cigarette consumption (5 hours a day) for a period of 6 months. The mice were then sacrificed, and the mean interseptal diameter (a parameter of emphysema) was evaluated through the use of a morphometric approach.

B. Evaluación de la influencia de la falta de RTP801 en la progresión de la enfermedad en modelos de enfisema en ratón mediante la inhibición de RTP801 endógeno mediante el empleo de la administración intra pulmonar del ARNip de inactivación de RTP801 B. Evaluation of the influence of the lack of RTP801 on disease progression in mouse emphysema models by inhibiting endogenous RTP801 through the use of intra pulmonary administration of RTP801 inactivation siRNA

La inflamación inducida por el CS se indujo por el consumo de 7 días en 2 grupos de ratones C57BL6, 10 ratones por grupo. Grupo 1: CS + administración de ARNip control (REDD8) ARNip; Grupo 2: CS + ARNip de RTP801 (REDD14). Los grupos de ratones de control se instilaron con cualquier tipo de ARNip pero se mantuvieron en condiciones de habitación con aire. TLos animales se evaluaron como en el experimento anterior con los ratones knockout. CS-induced inflammation was induced by the consumption of 7 days in 2 groups of C57BL6 mice, 10 mice per group. Group 1: CS + administration of ARNip control (REDD8) ARNip; Group 2: CS + RTP801 siRNA (REDD14). Groups of control mice were instilled with any type of siRNA but kept in room conditions with air. The animals were evaluated as in the previous experiment with knockout mice.

Métodos Methods

Exposición al consumo de cigarrillos (CS) Exposure to cigarette smoking (CS)

La exposición se llevó a cabo (7 h/día, 7 días/semana por la combustión de los cigarrillos 2R4F de referencia (2,45 mg nicotina por cigarrillo; que se adquirieron del Tobacco Research Institute, University of Kentucky, Lexington, KY, Estados Unidos) usando una máquina de humo (Modelo TE-10, Teague Enterprises, Davis, CA, Estados Unidos). Cada cigarrillo encendido se aspiró durante 2 s, una vez cada minuto para un total de ocho bocanadas, a un régimen de flujo de 1,05 l/min, para proporcionar una aspiración estándar de 35 cm3. La máquina de humo se ajustó para producir una mezcla de humo de corriente secundaria (89%) y humo de corriente principal (11%) por la combustión de cinco cigarrillos al mismo tiempo. La atmósfera de la cámara se controló para el total de partículas en suspensión y el monóxido de carbono, con concentraciones de 90 mg/m3 y 350 ppm, respectivamente. The exposure was carried out (7 h / day, 7 days / week by the combustion of the reference 2R4F cigarettes (2.45 mg nicotine per cigarette; which were purchased from the Tobacco Research Institute, University of Kentucky, Lexington, KY, United States) using a smoke machine (Model TE-10, Teague Enterprises, Davis, CA, United States) Each lit cigarette was aspirated for 2 s, once every minute for a total of eight puffs, at a flow rate 1.05 l / min, to provide a standard aspiration of 35 cm3 The smoke machine was adjusted to produce a mixture of secondary current smoke (89%) and mainstream smoke (11%) by combustion of five cigarettes at the same time The chamber's atmosphere was controlled for total suspended particles and carbon monoxide, with concentrations of 90 mg / m3 and 350 ppm, respectively.

Análisis morfológicos y morfométricos Morphological and morphometric analyzes

Después de la exposición de los ratones al CS o la instilación del plásmido que expresaba RTP801, los ratones se anestesiaron con halotano y los pulmones se inflaron con 0,5% de agarosa de bajo punto de fusión a una presión constante de 25 cm como se describió anteriormente6. Los pulmones inflados se fijaron en 10% de formalina tamponada y se embebieron en parafina. Las secciones (5 µm) se tiñeron con hematoxilina y eosina. El diámetro medio alveolar, la longitud alveolar, y las intercepciones lineales media se determinaron por morfometría asistida por computadora con el software Image Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, Estados Unidos). Las secciones de pulmón en cada grupo se codificaron y las imágenes representativas (15 por sección del pulmón) se obtuvieron, por un investigador al que se le ocultó la identidad de los portaobjetos, con un microscopio Nikon E800, lente 20X. After exposure of the mice to CS or instillation of the plasmid expressing RTP801, the mice were anesthetized with halothane and the lungs were inflated with 0.5% low melting point agarose at a constant pressure of 25 cm as described above6. The inflated lungs were fixed in 10% buffered formalin and embedded in paraffin. Sections (5 µm) were stained with hematoxylin and eosin. Alveolar mean diameter, alveolar length, and mean linear interceptions were determined by computer-assisted morphometry with Image Pro Plus software (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, United States). The lung sections in each group were coded and representative images (15 per lung section) were obtained, by a researcher whose identity was hidden from the slides, with a Nikon E800 microscope, 20X lens.

Lavado broncoalveolar (BAL) y fenotipaje Bronchoalveolar lavage (BAL) and phenotyping

Tras la exposición al CS o la instilación del plásmido de expresión de RTP801, los ratones se anestesiaron con pentobarbital sódico. El fluido BAL recogido de los pulmones de los ratones, se centrifuga (500 'g a 4°C), y el sedimento celular se resuspende en solución salina tamponada con fosfato. Se determinó el número total de células en el líquido de lavado, y 2 x 104 células se citocentrifugaron (Shandon Southern Products, Pittsburgh, PA, Estados Unidos) en portaobjetos de vidrio y se tiñeron con Wright-Giemsa. El conteo diferencial de células se realizó en 300 células, de acuerdo con técnicas citológicas estándar. After exposure to CS or instillation of the RTP801 expression plasmid, the mice were anesthetized with sodium pentobarbital. The BAL fluid collected from the lungs of the mice is centrifuged (500 'g at 4 ° C), and the cell pellet is resuspended in phosphate buffered saline. The total number of cells in the washing liquid was determined, and 2 x 104 cells were cytocentrifuged (Shandon Southern Products, Pittsburgh, PA, United States) on glass slides and stained with Wright-Giemsa. The differential cell count was performed in 300 cells, according to standard cytological techniques.

Identificación de poblaciones de células apoptóticas alveolares en los pulmones. Identification of alveolar apoptotic cell populations in the lungs.

Para identificar los diferentes tipos de células alveolares que experimentaban apoptosis en los pulmones, se realizó una tinción inmunohistoquímica de caspasa 3 en las secciones de pulmón de la habitación con aire (RA), así como de los ratones expuestos al CS. Para identificar las células epiteliales apoptóticas de tipo II en los pulmones, después del etiquetado con la caspasa 3 activa, las secciones de pulmón se incubaron primero con el anticuerpo anti-proteína C tensioactiva (SPC) de ratón y luego con un anticuerpo anti-conejo con rojo Texas. Las células endoteliales apoptóticas se identificaron mediante la incubación de las secciones primero con el anticuerpo anti-CD 31 de ratón y luego con el anticuerpo secundario de conejo biotinilado anti-ratón. Las secciones de pulmón se lavaron en PBS y después se incubaron con el complejo estreptavidina conjugada con rojo Texas. Los macrófagos apoptóticos en los pulmones se identificaron mediante la incubación de las secciones primero con el anticuerpo de rata anti-Mac-3 de ratón y luego con To identify the different types of alveolar cells that underwent apoptosis in the lungs, immunohistochemical staining of caspase 3 was performed in the lung sections of the room with air (RA), as well as of the mice exposed to CS. To identify type II apoptotic epithelial cells in the lungs, after labeling with active caspase 3, the lung sections were first incubated with the mouse anti-surfactant protein C (SPC) antibody and then with an anti-rabbit antibody with red Texas. Apoptotic endothelial cells were identified by incubating the sections first with the mouse anti-CD 31 antibody and then with the biotinylated rabbit anti-mouse secondary antibody. The lung sections were washed in PBS and then incubated with the streptavidin complex conjugated with Texas red. Apoptotic macrophages in the lungs were identified by incubating the sections first with the mouse anti-Mac-3 rat antibody and then with

el anticuerpo anti-rata con rojo Texas. Finalmente, se aplicó DAPI a todas las secciones del pulmón, se incubaron durante 5 minutos, se lavaron y se montaron con el medio de montaje Vectashield HardSet. La fluoresceína y DAPI se visualizaron a 330-380 nm y 465-495 nm, respectivamente.. Las imágenes de las secciones de pulmón se obtuvieron con el microscopio Nikon E800, lente de 40X. the anti-rat antibody with Texas red. Finally, DAPI was applied to all sections of the lung, incubated for 5 minutes, washed and mounted with Vectashield HardSet mounting medium. Fluorescein and DAPI were visualized at 330-380 nm and 465-495 nm, respectively. Images of the lung sections were obtained with the Nikon E800 microscope, 40X lens.

Localización inmunohistoquímica de la caspasa-3 Immunohistochemical location of caspase-3

El ensayo de tinción inmunohistoquímica de caspasa-3 se realizó por medio del uso de los anticuerpos anti-caspasa-3 activa y las células positivas a la caspasa-3- activa se contaron con un macro, por medio del uso del programa Image Pro Plus. Los conteos se normalizaron por la suma de los perfiles alveolares, denominadas en la presente como longitud alveolar y expresada en µm. La longitud alveolar se correlacionó inversamente con la intercepción lineal media, es decir, como los septos alveolares se destruyeron, los interceptos lineales medios aumentaron como la longitud total alveolar, es decir, longitud total septal alveolar disminuyó. The immunohistochemical staining assay of caspase-3 was performed through the use of active anti-caspase-3 antibodies and cells active in active caspase-3 were counted with a macro, through the use of the Image Pro Plus program . The counts were normalized by the sum of the alveolar profiles, referred to herein as alveolar length and expressed in µm. The alveolar length was inversely correlated with the mean linear interception, that is, as the alveolar septa were destroyed, the mean linear intercepts increased as the total alveolar length, that is, the total alveolar septal length decreased.

Ensayo de actividad de la caspasa 3 Caspase 3 activity test

La actividad de la caspasa-3/7 se midió en extractos de tejido de pulmón por medio del uso de un ensayo fluorométrico de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El tejido pulmonar congelado inmediatamente (n = 3 por grupo) se homogeneizó con el tampón de ensayo, seguido de sonicación y centrifugación a 800 x g. Después de la eliminación de los núcleos y los restos celulares, el sobrenadante (300 g de proteína) luego se incubó con el sustrato profluorescente a temperatura ambiente durante 1 h y la intensidad de fluorescencia se midió por medio del uso de un Typhoon phosphoimager (Amersham Biosciences, Inc., Piscataway, NJ, Estados Unidos). Los resultados se expresaron como la velocidad de escisión específica del sustrato de la caspasa-3, expresada en unidades de actividad enzimática de caspasa 3, normalizada por la concentración de proteína total. La caspasa 3 activa recombinante se usó como patrón para el ensayo (0-4 U). Los tejidos lisados sin sustrato, solo tampón de ensayo y los lisados con el inhibidor de la caspasa 3 se usaron como controles negativos. Caspase-3/7 activity was measured in lung tissue extracts through the use of a fluorometric assay according to the manufacturer's instructions. Immediately frozen lung tissue (n = 3 per group) was homogenized with the assay buffer, followed by sonication and centrifugation at 800 x g. After removal of nuclei and cell debris, the supernatant (300 g of protein) was then incubated with the profluorescent substrate at room temperature for 1 h and the fluorescence intensity was measured by using a Typhoon phosphoimager (Amersham Biosciences , Inc., Piscataway, NJ, United States). The results were expressed as the specific cleavage rate of the caspase-3 substrate, expressed in units of caspase 3 enzymatic activity, normalized by the total protein concentration. Recombinant active caspase 3 was used as a standard for the assay (0-4 U). Lysates without substrate, only assay buffer and lysates with caspase 3 inhibitor were used as negative controls.

Localización inmunohistoquímica de 8-oxo-dG Immunohistochemical location of 8-oxo-dG

Para la localización inmunohistoquímica y cuantificación de 8-oxo-dG, las secciones de pulmón de los ratones expuestos al CS o instilados con el plásmido que expresa RTP801 se incubaron con el anticuerpo anti-8-oxo-dG y se tiñeron por medio del uso del kit InnoGenexTM Iso-IHC DAB por medio del uso de anticuerpos de ratón. Las células 8oxo-dG-positivas se contaron con una macro (por medio del uso de Image Pro Plus), y los conteos se normalizaron por la longitud alveolar tal como se describió. For immunohistochemical localization and quantification of 8-oxo-dG, the lung sections of mice exposed to CS or instilled with the plasmid expressing RTP801 were incubated with the anti-8-oxo-dG antibody and stained by use. of the InnoGenexTM Iso-IHC DAB kit through the use of mouse antibodies. The 8oxo-dG-positive cells were counted with a macro (through the use of Image Pro Plus), and the counts were normalized by the alveolar length as described.

Instilación del plásmido de ADN en los pulmones de ratón Plasmid DNA instillation in mouse lungs

El ADN de los plásmidos de los vectores de expresión de RTP801 y el control se prepararon con el kit de aislamiento de ADN libre de endotoxina. Para la instilación intratraqueal, 50 ug de ADN de plásmido se suministró en 80 ul de perfluorocarbono estéril. Las propiedades de transporte de oxígeno del perfluorocarbono lo hicieron bien tolerable en estos volúmenes, mientras que sus propiedades físico-químicas permitieron la administración pulmonar distal extremadamente eficiente cuando se instiló por vía intratraqueal. Los ratones se anestesiaron mediante una breve exposición a la inhalación de halotano, la lengua se tiró suavemente hacia adelante con los fórceps y la tráquea se instiló con solución de perfluorocarbono aplicada en la base de la lengua a través de un angiocatéter romo. Plasmid DNA from the RTP801 expression vectors and control were prepared with the endotoxin-free DNA isolation kit. For intratracheal instillation, 50 ug of plasmid DNA was supplied in 80 ul of sterile perfluorocarbon. The oxygen transport properties of perfluorocarbon made it well tolerable in these volumes, while its physicochemical properties allowed extremely efficient distal pulmonary administration when instilled intratracheally. The mice were anesthetized by brief exposure to halothane inhalation, the tongue was gently pulled forward with the forceps and the trachea was instilled with perfluorocarbon solution applied at the base of the tongue through a blunt angiocatheter.

Instilación de ARNip en los pulmones del ratón. Instilation of siRNA in the lungs of the mouse.

Los ratones se anestesiaron con una inyección intra-peritoneal de ketamina/xilacina (115/22 mg/kg). Se instilaron 50 µg de ARNip por vía intranasal en el volumen de 50ante la administración de cinco porciones The mice were anesthetized with an intra-peritoneal injection of ketamine / xylazine (115/22 mg / kg). 50 µg of siRNA was instilled intranasally in the volume of 50 before administration of five portions

�l de NaCl al 0,9% medi consecutivas de 10 µl. Al final de la instilación intranasal, la cabeza del ratón se mantuvo hacia arriba por 1 minuto para asegurar que toda la solución instilada drenase al interior. 0.9% NaCl of 10 µl consecutive consecutive. At the end of the intranasal instillation, the mouse head was held up for 1 minute to ensure that all the instilled solution drained into the interior.

Para más información, ver: Rangasamy T, Cho CY, Thimmulappa, RK, Zhen L, Srisuma SS, Kensler TW, Yamamoto M, Petrache I, Tuder RM, Biswal S. Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-iduced enfisema in mice. Submitted to Journal of Clinincal Investigation; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, and Norbert F. Voelkel. Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163. pp 737-744, 2001; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, and Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106:1311-1319 (2000); y una revisión del tema: Robin M. Tuder, Sharon McGrath and Enid Neptune, The patológico mecanismos of enfisema models: what do they have in common?, Pulmonary Pharmacology & Therpaeutics 2002. For more information, see: Rangasamy T, Cho CY, Thimmulappa, RK, Zhen L, Srisuma SS, Kensler TW, Yamamoto M, Petrache I, Tuder RM, Biswal S. Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-iduced emphysema in mice Submitted to Journal of Clinincal Investigation; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, and Norbert F. Voelkel. Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163. pp 737-744, 2001; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, and Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106: 1311-1319 (2000); and a review of the topic: Robin M. Tuder, Sharon McGrath and Enid Neptune, The pathological mechanisms of emphysema models: what do they have in common ?, Pulmonary Pharmacology & Therpaeutics 2002.

Resultados Results

1.one.

La instilación de un plásmido de expresión de RTP801 resulta en un fenotipo similar al enfisema en los pulmones del ratón lo cual es evidente por (1) el aumento en los conteos de células del lavado broncoalveolar (Fig. 15a); (2) la apoptosis de las células pulmonares del septo (Figura 15b) y el aumento del diámetro alveolar (Fig. 15c).  The instillation of an expression plasmid of RTP801 results in a phenotype similar to emphysema in the lungs of the mouse which is evident by (1) the increase in cell counts of bronchoalveolar lavage (Fig. 15a); (2) the apoptosis of the septum lung cells (Figure 15b) and the increase in alveolar diameter (Fig. 15c).

2.2.

La instilación del ARNip de RTP801 (REDD14) resulta en la reducción de la expresión de RTP801 en los pulmones (Fig. 17b).  The instillation of the RTP801 siRNA (REDD14) results in reduced expression of RTP801 in the lungs (Fig. 17b).

3.3.

Los ratones KO para RTP801 estaban protegidos de desarrollo de enfisema tras 6 meses de consumo de cigarrillos como se evidenció por la falta de ampliación del diámetro alveolar. (Fig. 18 ).  The KO mice for RTP801 were protected from development of emphysema after 6 months of cigarette consumption as evidenced by the lack of enlargement of the alveolar diameter. (Fig. 18).

4.Four.

Los ratones KO para RTP801 estaban protegidos de la inflamación inducida por el hábito de fumar cigarrillos, como se evidenció por la reducción del número de células inflamatorias broncoalveolares después de 1 semana de consumo de cigarrillos (Figura 16, a-b).  KO mice for RTP801 were protected from inflammation induced by cigarette smoking, as evidenced by the reduction in the number of bronchoalveolar inflammatory cells after 1 week of cigarette smoking (Figure 16, a-b).

5.5.

Los ratones KO para RTP801 estaban protegidos de la apoptosis de las células pulmonares septales inducida por el consumo de cigarrillos como se evidenció por la tinción de la sección de pulmón para la caspasa activada (Fig. 16c).  KO mice for RTP801 were protected from septal lung cell apoptosis induced by cigarette smoking as evidenced by staining the lung section for activated caspase (Fig. 16c).

6.6.

Los ratones instilados con REDD14 estaban parcialmente protegidos de la inflamación inducida por el hábito de fumar cigarrillos, como se evidenció por la reducción del número de células inflamatorias broncoalveolares después de 1 semana de consumo de cigarrillos (Figura 17a).  Mice instilled with REDD14 were partially protected from inflammation induced by cigarette smoking, as evidenced by the reduction in the number of bronchoalveolar inflammatory cells after 1 week of cigarette smoking (Figure 17a).

7.7.

Los ratones instilados con REDD14 estaban parcialmente protegidos de la apoptosis de las células del septales del pulmón inducida por el consumo de cigarrillos como se evidenció por la tinción de la sección de pulmón para la caspasa activa y mediante la inmunotransferencia de extractos de pulmón con anticuerpos anti-caspasa 3 activa ((Fig. 17c)  Mice instilled with REDD14 were partially protected from apoptosis of the septal lung cells induced by cigarette smoking as evidenced by staining the lung section for active caspase and by immunoblotting lung extracts with anti-antibody - active case 3 ((Fig. 17c)

Ejemplo 8. Example 8

Modelos y resultados relacionados con los trastornos microvasculares Models and results related to microvascular disorders

Los compuestos de la presente invención se probaron en modelos animales de una variedad de trastornos microvasculares como se describe más abajo. The compounds of the present invention were tested in animal models of a variety of microvascular disorders as described below.

1. Retinopatía diabética 1. Diabetic retinopathy

El RTP801 promueve la apoptosis de las células neuronales y la generación de especies reactivas de oxígeno in vitro. El inventor de la presente invención también encontró que en ratones knockout (KO) para RTP801 sometidos al modelo de retinopatía del prematuro (ROP), la neovascularización patológica NV se redujo bajo condiciones de hipoxia, a pesar de las elevaciones de VEGF, mientras que la ausencia de este gen no influyó en la NV fisiológica retinal neonatal. Además, en este modelo, la falta de RTP801 fue también protectora contra la apoptosis neuronal hipóxica y la vasoobliteración hiperóxica. RTP801 promotes apoptosis of neuronal cells and the generation of reactive oxygen species in vitro. The inventor of the present invention also found that in knockout (KO) mice for RTP801 subjected to the premature retinopathy (ROP) model, NV pathological neovascularization was reduced under hypoxic conditions, despite VEGF elevations, while the absence of this gene did not influence the neonatal retinal physiological NV. In addition, in this model, the lack of RTP801 was also protective against hypoxic neuronal apoptosis and hyperxic vasoobliteration.

Experimento 1 Experiment 1

La diabetes se indujo en ratones de la misma camada de 8 semanas KO para RTP801 y C57/129sv tipo salvaje (WT) por inyección intraperitoneal de STZ. Después de 4 semanas, el ERG (único destello blanco, 1.4x10^4 ftc, 5 ms) se obtuvo del ojo izquierdo después de 1 hora de adaptación a la oscuridad. El RVP se evaluó de ambos ojos por medio del uso de la técnica de la permeabilidad a la albúmina con azul de Evans. Diabetes was induced in mice of the same 8-week litter KO for RTP801 and C57 / 129sv wild type (WT) by intraperitoneal injection of STZ. After 4 weeks, the ERG (single white flash, 1.4x10 ^ 4 ftc, 5 ms) was obtained from the left eye after 1 hour of dark adaptation. The RVP was evaluated from both eyes by the use of the albumin permeability technique with Evans blue.

Resultados Results

La glucosa en sangre no fue diferente entre los diabéticos (DM) WT y los DM KO (495±109 contra 513±76 mg/dl), los no diabéticos (NDM) WT y los KO (130±10 contra a 135±31 mg/dl, respectivamente). . Se incrementó RVP en el grupo DM WT un 138% (51,2±37,9 µl/g/h, n = 8) en comparación con NDM WT (21,5±18,8 µl/g/h, n=9, p=0,055). En contraste, RVP se redujo en un 80% en DM KO (9,5±8,5 µl/g/h, n=6, p= 0,023) en comparación con los ratones DM WT, que resultó en una disminución del 140% del RVP inducido por diabetes. En ratones DM WT, hubo una prolongación (p<0.05) de los tiempos implícitos de los potenciales oscilatorios para OP2 (11%), OP3 (12%), & OP4 (14%) y para la onda B (23%) comparado con NDM WT. La onda A no cambió significativamente. Estos cambios se normalizaron ~100% en los ratones DM KO para OP3 & OP4 y 65% para la onda B comparado con NDM KO. Conclusión: El knockout de RTP801 atenuó RVP inducido por diabetes y las anormalidades del ERG en ratones, lo que sugirió que este gen inducible por hipoxia puede desempeñar un importante papel en la patogénesis de la enfermedad temprana de la retina diabética. Blood glucose was not different between diabetics (DM) WT and DM KO (495 ± 109 against 513 ± 76 mg / dl), non-diabetics (NDM) WT and KO (130 ± 10 against 135 ± 31 mg / dl, respectively). . RVP in the DM WT group was increased by 138% (51.2 ± 37.9 µl / g / h, n = 8) compared to NDM WT (21.5 ± 18.8 µl / g / h, n = 9, p = 0.055). In contrast, RVP was reduced by 80% in DM KO (9.5 ± 8.5 µl / g / h, n = 6, p = 0.023) compared to DM WT mice, which resulted in a decrease of 140 % of RVP induced by diabetes. In DM WT mice, there was a prolongation (p <0.05) of the implicit times of oscillatory potentials for OP2 (11%), OP3 (12%), & OP4 (14%) and for B wave (23%) compared with NDM WT. Wave A did not change significantly. These changes were normalized ~ 100% in DM KO mice for OP3 & OP4 and 65% for B wave compared to NDM KO. Conclusion: RTP801 knockout attenuated diabetes-induced RVP and ERG abnormalities in mice, which suggested that this hypoxia-inducible gene may play an important role in the pathogenesis of early diabetic retinal disease.

Experimento 2 Experiment 2

Se indujo la diabetes en ratones knockout para RTP801 y en el control de tipo salvaje con el fondo genético emparejado. Además, se indujo en ratones C57B16, que se usaron posteriormente para la inyección intravítrea de los ARNip anti-RTP801 y control. Para la inducción de diabetes, los ratones se inyectaron con estreptozotocina (STZ 90 mg/kg/d durante 2 días después de ayuno durante la noche). La fisiología del animal se controló durante todo el estudio para los cambios en la glucosa en sangre, el peso corporal, y el hematocrito. Los ratones inyectados con el vehículo sirvieron como controles. Los animales adecuados se trataron mediante inyecciones intravítreas de 1 ug del ARNip de Diabetes was induced in knockout mice for RTP801 and in the wild-type control with the genetic background matched. In addition, it was induced in C57B16 mice, which were subsequently used for intravitreal injection of anti-RTP801 and control siRNAs. For the induction of diabetes, the mice were injected with streptozotocin (STZ 90 mg / kg / d for 2 days after fasting overnight). The physiology of the animal was monitored throughout the study for changes in blood glucose, body weight, and hematocrit. Mice injected with the vehicle served as controls. Suitable animals were treated by intravitreal injections of 1 ug of the siRNA of

anti-RTP801 REDD14 o 1 ug de ARNip anti-GFP control. El ARNip se inyectó dos veces en el curso del estudio -en el día 0, cuando la primera inyección de STZ se llevó a cabo, y en el día 14 después de la inyección de STZ. anti-RTP801 REDD14 or 1 ug of siRNA anti-GFP control. The siRNA was injected twice in the course of the study - on day 0, when the first STZ injection was carried out, and on day 14 after the STZ injection.

La fuga vascular de la retina se midió por medio el uso de la técnica de tinción con azul de Evans-(EB) en los animales después de 4 semanas de duración de la diabetes. Los ratones tenían un catéter implantado en la vena yugular derecha 24 horas antes de las mediciones de azul de Evans (EB). Las mediciones de la permeabilidad de la retina en ambos ojos de cada animal, siguió un protocolo estándar de azul de Evans. Vascular leakage of the retina was measured by using the Evans- (EB) blue staining technique in animals after 4 weeks of diabetes duration. The mice had a catheter implanted in the right jugular vein 24 hours before Evans blue (EB) measurements. Measurements of retinal permeability in both eyes of each animal, followed a standard Evans blue protocol.

Resultados Results

1.one.

La fuga de los vasos sanguíneos de la retina se redujo en 70% en los ratones diabéticos KO para RTP801 en comparación con los ratones diabéticos de tipo salvaje (ver Figura 20).  Leakage of retinal blood vessels was reduced by 70% in KO diabetic mice for RTP801 compared to wild-type diabetic mice (see Figure 20).

2.2.

El knockout para RTP801 normalizó las anomalías del ERG en ratones: En los ratones DM WT, hubo una prolongación (p<0,05) de los tiempos implícitos de los potenciales oscilatorios para OP2 (11%), OP3 (12%), & OP4 (14%) y para la onda B (23%) en comparación con NDM WT. Una onda A no cambió significativamente. Estos cambios se normalizaron al 100% en los ratones DM KO para RTP801 para OP3 & OP4 y 65% 65% para la onda B en comparación con los NDM KO para RTP801 (ver Figura 21).  The knockout for RTP801 normalized ERG abnormalities in mice: In DM WT mice, there was a prolongation (p <0.05) of the implicit times of oscillatory potentials for OP2 (11%), OP3 (12%), & OP4 (14%) and for wave B (23%) compared to NDM WT. A wave A did not change significantly. These changes were 100% normalized in DM KO mice for RTP801 for OP3 & OP4 and 65% 65% for B wave compared to KO NDMs for RTP801 (see Figure 21).

3.3.

De manera similar a los resultados en los ratones KO, la fuga de los vasos sanguíneos de la retina se redujo en un 50% en ratones diabéticos que se inyectaron por vía intravítrea con el ARNip contra RTP801 REDD14 en comparación con los ratones diabéticos que se inyectaron por vía intravítrea con el control de ARNip contra GFP (ver la Figura 22).  Similar to the results in KO mice, the leakage of retinal blood vessels was reduced by 50% in diabetic mice that were injected intravitreally with the siRNA against RTP801 REDD14 compared to diabetic mice that were injected intravitreally with the control of siRNA against GFP (see Figure 22).

2. Retinopatía del prematuro 2. Retinopathy of prematurity

La retinopatía del prematuro se indujo por la exposición de los animales de prueba a condiciones de hipoxia e hiperoxia, y, posteriormente, se probaron los efectos sobre la retina. Los resultados mostraron que los ratones KO para RTP801 estaban protegidos de la retinopatía del prematuro, lo que validó de este modo el efecto protector de la inhibición de RTP801. Retinopathy of prematurity was induced by exposure of test animals to conditions of hypoxia and hyperoxia, and subsequently the effects on the retina were tested. The results showed that KO mice for RTP801 were protected from retinopathy of prematurity, thereby validating the protective effect of RTP801 inhibition.

3. Infarto de miocardio 3. Myocardial infarction

La ligadura de la arteria descendente anterior izquierda indujo el infarto de miocardio en ratones, tanto a corto como a largo plazo. Resultados: reducción de los niveles en la sangre de la fracción TnT y CPK-MB a 24 horas después del infarto y mejor ecocardiograma (volumen de la fracción de eyección) a los 28 días después del infarto en ratones KO para RTP801. Ligation of the left anterior descending artery induced myocardial infarction in mice, both short and long term. Results: reduction in blood levels of the TnT and CPK-MB fraction 24 hours after infarction and better echocardiogram (ejection fraction volume) at 28 days after infarction in KO mice for RTP801.

4. Afecciones de isquemia microvascular 4. Conditions of microvascular ischemia

Los modelos animales para la evaluación de las condiciones de isquemia son: Animal models for the evaluation of ischemia conditions are:

1.one.

Lesión cerrada en la cabeza (CHI) – La TBI experimental produjo una serie de eventos que contribuyeron a las cascadas neurológicas y neurometabólicas, que estaban relacionadas con el grado y el alcance de los déficits de comportamiento. La CHI se indujo bajo anestesia, mientras que se permitió la caída libre de un peso desde una altura prefijada (Chen y otros, J. Neurotrauma 13, 557, 1996) sobre el cráneo expuesto que abarcaba el hemisferio izquierdo en el plano midcoronal.  Closed head injury (CHI) - Experimental TBI produced a series of events that contributed to neurological and neurometabolic cascades, which were related to the extent and extent of behavioral deficits. CHI was induced under anesthesia, while the free fall of a weight from a preset height (Chen et al., J. Neurotrauma 13, 557, 1996) was allowed on the exposed skull that encompassed the left hemisphere in the midcoronal plane.

2.2.

Oclusión transitoria de la arteria cerebral media (MCAO) -una isquemia focal transitoria de 90 a 120 minutos se llevó a cabo en ratas macho Sprague Dawley, adultas, de 300-370 g. El método que se empleó fue el de la sutura intraluminal MCAO (Longa y otros, Stroke, 30, 84, 1989, y Dogan y otros, J. Neurochem. 72, 765, 1999). En resumen, bajo anestesia con halotano, un material de sutura de nailon 3-0 recubierto con poli-L-lisina se insertó en la arteria carótida interna derecha (ICA) a través de un agujero en la arteria carótida externa. El hilo de nailon se introdujo en la ICA hacia el origen MCA de la derecha (20-23 mm). El hilo se retiró, 90-120 minutos más tarde, el animal se cerró y se dejó recuperar.  Transient occlusion of the middle cerebral artery (MCAO) - a transient focal ischemia of 90 to 120 minutes was carried out in adult male Sprague Dawley rats, 300-370 g. The method used was that of the MCAO intraluminal suture (Longa et al., Stroke, 30, 84, 1989, and Dogan et al., J. Neurochem. 72, 765, 1999). In summary, under anesthesia with halothane, a 3-0 nylon suture material coated with poly-L-lysine was inserted into the right internal carotid artery (ICA) through a hole in the external carotid artery. Nylon thread was introduced into the ICA towards the right MCA origin (20-23 mm). The thread was removed, 90-120 minutes later, the animal was closed and allowed to recover.

3.3.

Oclusión permanente de la arteria cerebral media (MCAO) -la oclusión fue permanente, unilateral, se indujo por electrocoagulación de MCA. Ambos métodos condujeron a la isquemia cerebral focal del lado ipsilateral de la corteza del cerebro y dejaron el lado contralateral intacto (control). La MCA izquierda se expuso a través de una craniectomía temporal, como se describió para ratas por Tamura A. y otros, J Cereb Blood Flow Metab. 1981;1:53 Permanent occlusion of the middle cerebral artery (MCAO) - occlusion was permanent, unilateral, was induced by electrocoagulation of MCA. Both methods led to focal cerebral ischemia of the ipsilateral side of the cerebral cortex and left the contralateral side intact (control). The left MCA was exposed through a temporary craniectomy, as described for rats by Tamura A. and others, J Cereb Blood Flow Metab. 1981; 1: 53

60. La MCA y su rama lenticulostriada se ocluyó proximal al borde medial del tracto olfativo con la coagulación microbipolar. La herida se suturó y los animales regresaron a su jaula de alojamiento en una habitación de 26 ° C a 28° C. La temperatura de los animales se mantuvo todo el tiempo con un termostato automático. 60. MCA and its lenticulostrial branch were occluded proximal to the medial border of the olfactory tract with microbipolar coagulation. The wound was sutured and the animals returned to their housing cage in a room from 26 ° C to 28 ° C. The temperature of the animals was maintained all the time with an automatic thermostat.

5. Insuficiencia renal aguda (ARF) 5. Acute renal failure (ARF)

La prueba del ARNip activo para el tratamiento de la ARF se puede hacer usando la ARF inducida por sepsis o la ARF inducida por isquemia-reperfusión. The active siRNA test for the treatment of ARF can be done using sepsis-induced ARF or ischemia-reperfusion-induced ARF.

1. ARF inducida por sepsis 1. ARF induced by sepsis

Dos modelos animales predictivos de ARF inducida por sepsis se describieron por Miyaji T, Hu X, Yuen PS, Muramatsu Y, Iyer S, Hewitt SM, Star RA, 2003, Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice, Kidney Int. Nov;64(5):1620-31. Estos dos modelos fueron la administración de lipopolisacárido y la ligadura y punción cecal en ratones, preferentemente en ratones envejecidos. Two animal models predictive of sepsis-induced ARF were described by Miyaji T, Hu X, Yuen PS, Muramatsu Y, Iyer S, Hewitt SM, Star RA, 2003, Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice, Kidney Int. Nov; 64 (5): 1620-31. These two models were the administration of lipopolysaccharide and ligation and cecal puncture in mice, preferably in aged mice.

2. ARF inducida por isquemia-reperfusión 2. ARF induced by ischemia reperfusion

Este modelo animal predictivo es descrito por Kelly KJ, Plotkin Z, Vulgamott SL, Dagher PC, 2003 enero. La p53 media la respuesta apoptótica a la depleción de GTP después de la isquemia-reperfusión renal: el papel protector de un inhibidor de p53, J Am Soc Nephrol.;14(1):128-38. This predictive animal model is described by Kelly KJ, Plotkin Z, Vulgamott SL, Dagher PC, January 2003. P53 mediates the apoptotic response to GTP depletion after renal ischemia-reperfusion: the protective role of a p53 inhibitor, J Am Soc Nephrol .; 14 (1): 128-38.

La isquemia-reperfusión se indujo en ratas después de 45 minutos de restringir la arteria renal bilateral y la liberación subsiguiente de la pinza para permitir 24 horas de reperfusión. Se inyectaron 250 µg de ARNip REDD14 o GFP (control negativo) en la vena yugular 2 horas antes y 30 minutos después de la restricción. Se les administró 250 g adicionales de ARNip a través de la vena de la cola a las 4 y 8 horas después de la restricción. El ARNip contra GFP sirvió como un control negativo. La progresión de la ARF se supervisó por la medición de los niveles de creatinina en suero antes y 24 h después de la cirugía. Al final del experimento, las ratas se perfundieron a través de una línea permanente femoral con PBS caliente seguido de paraformaldehído al 4%. Los riñones izquierdos se retiraron y se almacenaron en 4% de paraformaldehído para el análisis histológico posterior. La insuficiencia renal aguda se define frecuentemente como un aumento agudo de los niveles de creatinina en suero a partir de la línea base. Un aumento de al menos 0,5 mg por dl o 44,2 µmol por l de creatinina en suero se considera como una indicación para la insuficiencia renal aguda. La creatinina en suero se midió a tiempo cero antes de la cirugía y a las 24 horas después de la cirugía de la ARF. Para estudiar la distribución del ARNip en el riñón de rata, moléculas de ARNip marcado con Cy3 19-mer de extremo romo (2 mg/kg) que tenían la modificación O-metil alterna en los residuos de azúcar se administraron iv durante 3-5 minutos, después de lo cual se realizaron imágenes in vivo por medio del uso de la microscopía confocal de dos fotones. El análisis por microscopía confocal reveló que la mayoría de los ARNip en los riñones estaba concentrado en el compartimiento endosomal de las células tubulares proximales. Tanto la fluorescencia del ARNip endosomal y citoplasmática se mantuvieron relativamente estables durante las primeras 2 horas después de la administración y desaparecieron a las 24 h. Ischemia reperfusion was induced in rats after 45 minutes of restricting the bilateral renal artery and subsequent release of the clamp to allow 24 hours of reperfusion. 250 µg of siRNA REDD14 or GFP (negative control) was injected into the jugular vein 2 hours before and 30 minutes after the restriction. An additional 250 g of siRNA was administered through the tail vein at 4 and 8 hours after the restriction. The siRNA against GFP served as a negative control. The progression of the ARF was monitored by measuring serum creatinine levels before and 24 h after surgery. At the end of the experiment, the rats were perfused through a permanent femoral line with hot PBS followed by 4% paraformaldehyde. The left kidneys were removed and stored in 4% paraformaldehyde for subsequent histological analysis. Acute renal failure is often defined as an acute increase in serum creatinine levels from the baseline. An increase of at least 0.5 mg per dl or 44.2 µmol per l of serum creatinine is considered as an indication for acute renal failure. Serum creatinine was measured at zero time before surgery and at 24 hours after ARF surgery. To study the distribution of siRNA in the rat kidney, blunt end Cy3 19-mer labeled siRNA molecules (2 mg / kg) that had the alternate O-methyl modification in sugar residues were administered iv for 3-5 minutes, after which images were taken in vivo through the use of two photon confocal microscopy. Confocal microscopy analysis revealed that the majority of the siRNAs in the kidneys were concentrated in the endosomal compartment of the proximal tubular cells. Both fluorescence of the endosomal and cytoplasmic siRNA remained relatively stable during the first 2 hours after administration and disappeared at 24 h.

Como es evidente de la Figura 19, se produjo un incremento de diez veces en el nivel de creatinina en suero después de un tratamiento de 45-min de restricción de la arteria renal bilateral (tratamiento de PBS). Cuatro inyecciones de ARNip 801 (REDD14, sec. con núms. de ident.: 16 y 66) (2 horas antes de la restricción y 30min, 4h y 8h después de la restricción) redujeron significativamente el nivel de creatinina en suero en un 40% (P < 0,02). Estos resultados sugirieron que el ARNip 801 podía proteger el tejido renal de los efectos de la lesión por isquemia-reperfusión y de este modo reducir la gravedad de la ARF. As is evident from Figure 19, there was a tenfold increase in serum creatinine level after a 45-min treatment of bilateral renal artery restriction (PBS treatment). Four injections of siRNA 801 (REDD14, sec. With ID no .: 16 and 66) (2 hours before the restriction and 30min, 4h and 8h after the restriction) significantly reduced the serum creatinine level by 40 % (P <0.02). These results suggested that siRNA 801 could protect renal tissue from the effects of ischemia reperfusion injury and thereby reduce the severity of ARF.

Ejemplo 9 Example 9

Preparación de los ARNip Preparation of siRNAs

Por medio del uso de algoritmos registrados y la secuencia conocida del gen RTP801 (sec. con núm. de ident.: 1), se generaron las secuencias de muchos siARNs potenciales. Las moléculas de ARNip de acuerdo con las especificaciones anteriores se prepararon esencialmente como se describe en la presente. Through the use of registered algorithms and the known sequence of the RTP801 gene (sec. With identification number: 1), the sequences of many potential siRNAs were generated. SiRNA molecules according to the above specifications were prepared essentially as described herein.

Los ARNip de la presente invención se pueden sintetizar por cualquiera de los métodos bien conocidos en la materia para la síntesis de oligonucleótidos ribonucleicos (o desoxirribonucleico). Por ejemplo, se puede usar una máquina disponible en el mercado (disponible , entre otros, por Applied Biosystems); los oligonucleótidos se preparan de acuerdo con las secuencias descritas en la presente. Los pares superpuestos de los fragmentos sintetizados químicamente se pueden ligar por medio del uso de métodos que se conocen bien en la materia (por ejemplo, ver la patente de Estados Unidos núm. 6,121,426). Las hebras se sintetizan separadamente y luego se hibridan entre sí en el tubo. Después, los ARNip de doble cadena se separan por HPLC de los oligonucleótidos de hebra simple que no hibridan (por ejemplo debido al exceso de uno de ellos) por HPLC. En relación con los ARNip o los fragmentos de ARNip de la presente invención, dos o más de tales secuencias se pueden sintetizar y unir entre sí para su uso en la presente invención. The siRNAs of the present invention can be synthesized by any of the methods well known in the art for the synthesis of ribonucleic (or deoxyribonucleic) oligonucleotides. For example, a commercially available machine (available, among others, by Applied Biosystems) can be used; oligonucleotides are prepared according to the sequences described herein. Overlapping pairs of chemically synthesized fragments can be ligated through the use of methods that are well known in the art (for example, see U.S. Patent No. 6,121,426). The strands are synthesized separately and then hybridize with each other in the tube. Then, double stranded siRNAs are separated by HPLC from single stranded oligonucleotides that do not hybridize (eg due to excess of one of them) by HPLC. In relation to the siRNAs or siRNA fragments of the present invention, two or more such sequences can be synthesized and linked together for use in the present invention.

Las moléculas de ARNip de la invención se pueden sintetizar mediante los procedimientos que se conocen en la materia, por ejemplo los procedimientos descritos en Usman y otros, 1987, J. Am. Chem. Soc., 109, 7845; Scaringe y otros, 1990, Nucleic Acids Res., 18, 5433; Wincott y otros, 1995, Nucleic Acids Res. 23, 2677-2684; y Wincott y otros, 1997, Methods Mol. Bio., 74, 59, pueden hacer uso de grupos comunes de protección y acoplamiento de ácidos nucleicos, tales como dimetoxitritilo en el extremo 5', y fosforamiditas en el extremo 3'. Los nucleótidos modificados (por ejemplo 2'-O-metilado) y nucleótidos no modificados se incorporan según se desee. The siRNA molecules of the invention can be synthesized by methods known in the art, for example the procedures described in Usman et al., 1987, J. Am. Chem. Soc., 109, 7845; Scaringe et al., 1990, Nucleic Acids Res., 18, 5433; Wincott et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23, 2677-2684; and Wincott et al., 1997, Methods Mol. Bio., 74, 59, can make use of common protection and coupling groups of nucleic acids, such as dimethoxytrityl at the 5 'end, and phosphoramidites at the 3' end. Modified nucleotides (for example 2'-O-methylated) and unmodified nucleotides are incorporated as desired.

Alternativamente, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención se pueden sintetizar por separado y unir entre sí después de la síntesis, por ejemplo, mediante ligación (Moore y otros, 1992, Science 256, 9923; Draper y otros, Publicación Internacional PCTnúm. WO93/23569; Shabarova y otros, 1991, Nucleic Acids Research 19, 4247; Bellon y Alternatively, the nucleic acid molecules of the present invention can be synthesized separately and linked together after synthesis, for example, by ligation (Moore et al., 1992, Science 256, 9923; Draper et al., PCTnum International Publication. WO93 / 23569; Shabarova et al., 1991, Nucleic Acids Research 19, 4247; Bellon and

otros, 1997, Nucleosides & Nucleotides, 16, 951; Bellon y otros, 1997, Bioconjugate Chem. 8, 204), o por hibridación después de la síntesis y/o desprotección. others, 1997, Nucleosides & Nucleotides, 16, 951; Bellon et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8, 204), or by hybridization after synthesis and / or deprotection.

Las moléculas de ARNip de la invention invención también se pueden sintetizar a través de una metodología de síntesis en tándem, tal como se describe en la publicación de la solicitud de patente de Estados Unidos núm. US2004/0019001 (McSwiggen) en donde ambas hebras de ARNip se sintetizan como un fragmento o hebra de oligonucleótido contiguo simple separadas por un enlazador escindible que se escinde posteriormente para proporcionar fragmentos o hebras separadas de ARNip que se hibridan y permiten la purificación del dúplex de ARNip. El enlazador puede ser un enlazador polinucleótido o un enlazador no nucleotídico. The siRNA molecules of the invention can also be synthesized through a tandem synthesis methodology, as described in the publication of US Patent Application No. US2004 / 0019001 (McSwiggen) wherein both strands of siRNA are synthesized as a single contiguous oligonucleotide fragment or strand separated by a cleavable linker that is subsequently cleaved to provide separate fragments or strands of siRNA that hybridize and allow purification of the duplex duplex SiRNA The linker can be a polynucleotide linker or a non-nucleotide linker.

Para más información, ver la publicación PCT núm. WO 2004/015107 (ATUGEN). For more information, see PCT publication no. WO 2004/015107 (ATUGEN).

Como se describió anteriormente, los ARNip de la Tabla A (más abajo) se construyeron de tal manera que los azúcares alternos tenían modificación de nucleótidos 2'-O-metilo es decir nucleótidos alternos se modificaron de este modo. En estas modalidades preferidas, en una hebra del ARNip los nucleótidos modificados fueron los números 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 y 19 y en la cadena opuesta de los nucleótidos modificados fueron los números 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 y 18. Así, estos ARNip fueron moléculas de ARN de 19-mer de extremos romos con modificaciones alternas 2-0'-metilo como se describió anteriormente. Los ARNip de las Tablas 2 y 3 (más abajo) también se construyeron de esta manera, los ARNip de la Tabla B son moléculas de ARN de 19-mer de extremos romos con modificaciones alternas 2-0'-metilo; los ARNip de la Tabla C son moléculas de ARN de 21-mer de extremos romos con modificaciones alternas 2-0'-metilo. En la Tabla A se detallan diversas moléculas de ARNip nuevas que se generaron y posteriormente se sintetizaron para el gen RTP801. Las dos columnas finales indican los resultados de dos experimentos realizados para examinar la actividad de las moléculas nuevas. En resumen, las células HeLa o HaCaT se transfectaron con un el ARNip nuevo específico de prueba. La expresión del polipéptido RTP801 se determinó luego mediante la transferencia de tipo Western por medio del uso de un anticuerpo contra el polipéptido RTP801. En referencia a las dos columnas de la derecha de la Tabla A, "-" significa una molécula inactiva o de baja actividad-(que no inhibió sustancialmente la expresión del gen RTP801); "+" significa una molécula de ARNip con alguna actividad inhibidora (de expresión génica de RTP801), "+ +" significa una molécula con una mayor actividad inhibidora, y así sucesivamente. As described above, the siRNAs of Table A (below) were constructed such that the alternate sugars had 2'-O-methyl nucleotide modification, ie alternate nucleotides were modified in this way. In these preferred embodiments, in a strand of the siRNA the modified nucleotides were numbers 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 and 19 and in the opposite chain of the modified nucleotides were numbers 2, 4 , 6, 8, 10, 12, 14, 16 and 18. Thus, these siRNAs were 19-mer blunt-end RNA molecules with alternate 2-0'-methyl modifications as described above. The siRNAs of Tables 2 and 3 (below) were also constructed in this manner, the siRNAs of Table B are blunt-ended 19-mer RNA molecules with alternate 2-0'-methyl modifications; the siRNAs of Table C are blunt-end 21-mer RNA molecules with alternate 2-0'-methyl modifications. Table A details various new siRNA molecules that were generated and subsequently synthesized for the RTP801 gene. The final two columns indicate the results of two experiments performed to examine the activity of the new molecules. In summary, HeLa or HaCaT cells were transfected with a new specific siRNA test. The expression of the RTP801 polypeptide was then determined by Western blotting through the use of an antibody against the RTP801 polypeptide. Referring to the two columns on the right of Table A, "-" means an inactive or low-activity molecule (which did not substantially inhibit the expression of the RTP801 gene); "+" means an siRNA molecule with some inhibitory activity (of RTP801 gene expression), "+ +" means a molecule with a higher inhibitory activity, and so on.

TABLA A TABLE A

Núm. No.

Nombre ID ORG Ubicación POS CA (5’ _ CS (5’ _ HeLaB,20 nM HaCaT,20 nM ID Name ORG Location POS CA (5 ’_ CS (5 ’_ HeLaB, 20 nM HaCaT, 20 nM

1 one

REDD1 h 5’UTR 128 UAGAAGCCGCAGCUAGCGC GCGCUAGCUGCGGCUUCUA + + REDD1  h 5’UTR 128 UAGAAGCCGCAGCUAGCGC GCGCUAGCUGCGGCUUCUA + +

2 2

REDD2 hmr CDS 337 UCCGAGCUCUCCAGGCUCG CGAGCCUGGAGAGCUCGGA - - REDD2 hmr CDS 337 UCCGAGCUCUCCAGGCUCG CGAGCCUGGAGAGCUCGGA - -

3 3

REDD3 hmr CDS 360 UGCUGCUGUCCAGGGACUC GAGUCCCUGGACAGCAGCA - - REDD3 hmr CDS 360 UGCUGCUGUCCAGGGACUC GAGUCCCUGGACAGCAGCA - -

4 4

REDD4 hmr CDS 478 AGCAGCUGCAUCAGGUUGG CCAACCUGAUGCAGCUGCU - - REDD4 hmr CDS 478 AGCAGCUGCAUCAGGUUGG CCAACCUGAUGCAGCUGCU  - -

5 5

REDD5 h CDS 728 UGAGUCCAGGCGCAGCACG CGUGCUGCGCCUGGACUCA - - REDD5  h CDS 728 UGAGUCCAGGCGCAGCACG CGUGCUGCGCCUGGACUCA - -

6 6

Redd6 hmr 5’UTR 119 CAGCUAGCGCGGUCAGCGA UCGCUGACCGCGCUAGCUG - - Redd6 hmr 5’UTR 119 CAGCUAGCGCGGUCAGCGA UCGCUGACCGCGCUAGCUG - -

7 7

Redd7 hmr 5’UTR 122 CCGCAGCUAGCGCGGUCAG CUGACCGCGCUAGCUGCGG - - Redd7 hmr 5’UTR 122 CCGCAGCUAGCGCGGUCAG CUGACCGCGCUAGCUGCGG - -

8 8

Redd8 hmr 5’UTR 125 AAGCCGCAGCUAGCGCGGU ACCGCGCUAGCUGCGGCUU - - Redd8 hmr 5’UTR 125 AAGCCGCAGCUAGCGCGGU ACCGCGCUAGCUGCGGCUU - -

3 3

Redd9 hmr CDS 339 AGUCCGAGCUCUCCAGGCU AGCCUGGAGAGCUCGGACU - - Redd9 hmr CDS 339 AGUCCGAGCUCUCCAGGCU AGCCUGGAGAGCUCGGACU - -

10 10

Redd10 hmr CDS 341 GCAGUCCGAGCUCUCCAGG CCUGGAGAGCUCGGACUGC - - Redd10 hmr CDS 341 GCAGUCCGAGCUCUCCAGG CCUGGAGAGCUCGGACUGC - -

11 eleven

Redd11 hmr CDS 363 UGUUGCUGCUGUCCAGGGA UCCCUGGACAGCAGCAACA - - Redd11 hmr CDS 363 UGUUGCUGCUGUCCAGGGA UCCCUGGACAGCAGCAACA - -

12 12

Redd12 hmr CDS 369 AGCCACUGUUGCUGCUGUC GACAGCAGCAACAGUGGCU - - Redd12 hmr CDS 369 AGCCACUGUUGCUGCUGUC GACAGCAGCAACAGUGGCU - -

13 13

Redd13 hmr CDS 370 AAGCCACUGUUGCUGCUGU ACAGCAGCAACAGUGGCUU - - Redd13 hmr CDS 370 AAGCCACUGUUGCUGCUGU ACAGCAGCAACAGUGGCUU - -

14 14

Redd14 hmr CDS 475 AGCUGCAUCAGGUUGGCAC GUGCCAACCUGAUGCAGCU +++ +++ Redd14 hmr CDS 475 AGCUGCAUCAGGUUGGCAC GUGCCAACCUGAUGCAGCU +++ +++

15 fifteen

Redd15 hmr CDS 481 UGCAGCAGCUGCAUCAGGU ACCUGAUGCAGCUGCUGCA + + Redd15 hmr CDS 481 UGCAGCAGCUGCAUCAGGU ACCUGAUGCAGCUGCUGCA  + +

16 16

Redd16 hmr CDS 486 UCUCCUGCAGCAGCUGCAU AUGCAGCUGCUGCAGGAGA - - Redd16 hmr CDS 486 UCUCCUGCAGCAGCUGCAU AUGCAGCUGCUGCAGGAGA - -

17 17

Redd17 hmr CDS 610 CCCCGCAGGCCGCACGGCU AGCCGUGCGGCCUGCGGGG - - Redd17 hmr CDS 610 CCCCGCAGGCCGCACGGCU AGCCGUGCGGCCUGCGGGG - -

Núm. No.

Nombre ID ORG Ubicación POS CA (5’ _ CS (5’ _ HeLaB,20 nM HaCaT,20 nM ID Name ORG Location POS CA (5 ’_ CS (5 ’_ HeLaB, 20 nM HaCaT, 20 nM

18 18

Redd18 hmr CDS 750 CCUGGAUCUUGGGCCAGAG CUCUGGCCCAAGAUCCAGG - - Redd18 hmr CDS 750 CCUGGAUCUUGGGCCAGAG CUCUGGCCCAAGAUCCAGG - -

19 19

Redd19 hmr CDS 809 CAGCGUCAGGGACUGGCUG CAGCCAGUCCCUGACGCUG - - Redd19 hmr CDS 809 CAGCGUCAGGGACUGGCUG CAGCCAGUCCCUGACGCUG - -

20 twenty

Redd20 hmr 3’UTR 1097 AUGCUACAGUACUGAGGGG CCCCUCAGUACUGUAGCAU + + Redd20 hmr 3’UTR 1097 AUGCUACAGUACUGAGGGG CCCCUCAGUACUGUAGCAU  + +

21 twenty-one

Redd21 hmr 3’UTR 1419 GUCUGUAAGAUAGCUGCCU AGGCAGCUAUCUUACAGAC + + Redd21 hmr 3’UTR 1419 GUCUGUAAGAUAGCUGCCU AGGCAGCUAUCUUACAGAC + +

22 22

Redd22 hmr 3’UTR 1617 UUCUAGAUGGAAGACCCAG CUGGGUCUUCCAUCUAGAA ++ ++ Redd22 hmr 3’UTR 1617 UUCUAGAUGGAAGACCCAG CUGGGUCUUCCAUCUAGAA ++ ++

232. 3

Redd23 hmr 3’UTR 1670 UUGAACAUCAAGUGUAUUC GAAUACACUUGAUGUUCAA ++ ++  Redd23 hmr 3’UTR 1670 UUGAACAUCAAGUGUAUUC GAAUACACUUGAUGUUCAA ++ ++

24 24

Redd24 hmr 3’UTR 1693 AAAUAUUGCAUAGGUCUUA UAAGACCUAUGCAAUAUUU + + Redd24 hmr 3’UTR 1693 AAAUAUUGCAUAGGUCUUA UAAGACCUAUGCAAUAUUU  + +

25 25

Redd25 hmr 3’UTR 1695 AAAAAUAUUGCAUAGGUCU AGACCUAUGCAAUAUUUUU ++ ++ Redd25 hmr 3’UTR 1695  AAAAAUAUUGCAUAGGUCU AGACCUAUGCAAUAUUUUU ++ ++

26 26

Redd26 hmr CDS 349 AGGGACUCGCAGUCCGAGC GCUCGGACUGCGAGUCCCU - - Redd26 hmr CDS 349 AGGGACUCGCAGUCCGAGC GCUCGGACUGCGAGUCCCU - -

27 27

Redd27 hmr 3’UTR 1673 UACUUGAACAUCAAGUGUA UACACUUGAUGUUCAAGUA ++ ++ Redd27 hmr 3’UTR 1673 UACUUGAACAUCAAGUGUA UACACUUGAUGUUCAAGUA ++ ++

28 28

Redd28 hmr 3’UTR 1717 AAACAUGUUUAUUAGAAAA UUUUCUAAUAAACAUGUUU - - Redd28 hmr 3’UTR 1717  AAACAUGUUUAUUAGAAAA UUUUCUAAUAAACAUGUUU - -

29 29

Redd29 h 5’UTR 99 AACUGCUAAGACAAGUGCG CGCACUUGUCUUAGCAGUU - - Redd29  h 5’UTR 99 AACUGCUAAGACAAGUGCG CGCACUUGUCUUAGCAGUU  - -

30 30

Redd30 h CDS 213 ACGACGACGAGAAGCGGUC GACCGCUUCUCGUCGUCGU - - Redd30  h CDS 213 ACGACGACGAGAAGCGGUC GACCGCUUCUCGUCGUCGU - -

31 31

Redd31 h CDS 393 AAGCCGUGUCUUCCUCCGG CCGGAGGAAGACACGGCUU - - Redd31  h CDS 393 AAGCCGUGUCUUCCUCCGG CCGGAGGAAGACACGGCUU - -

32 32

Redd32 h CDS 453 AGUGUUCAUCCUCAGGGUC GACCCUGAGGAUGAACACU - - Redd32 h CDS 453 AGUGUUCAUCCUCAGGGUC GACCCUGAGGAUGAACACU - -

33 33

Redd33 h CDS 521 AGGGCGUCGAGAGCCCAGC GCUGGGCUCUCGACGCCCU - - Redd33 h CDS 521 AGGGCGUCGAGAGCCCAGC GCUGGGCUCUCGACGCCCU - -

34 3. 4

Redd34 hr CDS 535 AUCAGCAGGCGCGCAGGGC GCCCUGCGCGCCUGCUGAU - - Redd34 hr CDS 535  AUCAGCAGGCGCGCAGGGC GCCCUGCGCGCCUGCUGAU - -

35 35

Redd35 h CDS 571 AGUUCUUUGCCCACCUGGC GCCAGGUGGGCAAAGAACU - - Redd35  h CDS 571 AGUUCUUUGCCCACCUGGC GCCAGGUGGGCAAAGAACU - -

Núm. No.

Nombre ID ORG Ubicación POS CA (5’ _ CS (5’ _ HeLaB,20 nM HaCaT,20 nM ID Name ORG Location POS CA (5 ’_ CS (5 ’_ HeLaB, 20 nM HaCaT, 20 nM

36 36

Redd36 h CDS 597 ACGGCUCGCUGUAGGCCAG CUGGCCUACAGCGAGCCGU - - Redd36  h CDS 597 ACGGCUCGCUGUAGGCCAG CUGGCCUACAGCGAGCCGU - -

37 37

Redd37 h CDS 625 ACGUCCAGCAGCGCCCCCC GGGGGGCGCUGCUGGACGU - - Redd37 h CDS 625 ACGUCCAGCAGCGCCCCCC GGGGGGCGCUGCUGGACGU - -

38 38

Redd38 h CDS 829 AUGACUCGGAAGCCAGUGC GCACUGGCUUCCGAGUCAU - - Redd38  h CDS 829 AUGACUCGGAAGCCAGUGC GCACUGGCUUCCGAGUCAU - -

39 39

Redd39 h 3’UTR 1046 AACUCAAUGAGCUUCCUGG CCAGGAACCUCAUUGAGUU ++ ++ Redd39  h 3’UTR 1046 AACUCAAUGAGCUUCCUGG CCAGGAACCUCAUUGAGUU ++ ++

40 40

REDD40 h 3’UTR 1539 CUCAACUCUGCAGUACACG CGUGUACUGCAGAGUUGAG + + REDD40  h 3’UTR 1539 CUCAACUCUGCAGUACACG CGUGUACUGCAGAGUUGAG + +

41 41

Redd41 h 3’UTR 1317 AGAUACACAAACCACCUCC GGAGGUGGUUUGUGUAUCU + + Redd41  h 3’UTR 1317 AGAUACACAAACCACCUCC GGAGGUGGUUUGUGUAUCU + +

42 42

Redd42 h 3’UTR 1350 ACAACAAACACACUUGGUC GACCAAGUGUGUUUGUUGU ++ ++ Redd42  h 3’UTR 1350 ACAACAAACACACUUGGUC GACCAAGUGUGUUUGUUGU ++ ++

43 43

Redd43 hmr CDS 473 CUGCAUCAGGUUGGCACAC GUGUGCCAACCUGAUGCAG + + Redd43 hmr CDS 473 CUGCAUCAGGUUGGCACAC GUGUGCCAACCUGAUGCAG  + +

44 44

REDD44 h 3’UTR 955 UCCUGCCUCUAGUCUCCAC GUGGAGACUAGAGGCAGGA + + REDD44  h 3’UTR 955 UCCUGCCUCUAGUCUCCAC GUGGAGACUAGAGGCAGGA + +

45 Four. Five

Redd45 hmr CDS 476 CAGCUGCAUCAGGUUGGCA UGCCAACCUGAUGCAGCUG - - Redd45 hmr CDS 476 CAGCUGCAUCAGGUUGGCA UGCCAACCUGAUGCAGCUG - -

46 46

Redd46 hmr CDS 479 CAGCAGCUGCAUCAGGUUG CAACCUGAUGCAGCUGCUG - - Redd46 hmr CDS 479 CAGCAGCUGCAUCAGGUUG CAACCUGAUGCAGCUGCUG - -

47 47

Redd47 hmr CDS 483 CCUGCAGCAGCUGCAUCAG CUGAUGCAGCUGCUGCAGG - - Redd47 hmr CDS 483 CCUGCAGCAGCUGCAUCAG CUGAUGCAGCUGCUGCAGG  - -

48 48

Redd48 hmr CDS 485 CUCCUGCAGCAGCUGCAUC GAUGCAGCUGCUGCAGGAG - - Redd48 hmr CDS 485 CUCCUGCAGCAGCUGCAUC GAUGCAGCUGCUGCAGGAG - -

49 49

REDD40.1 h 3’UTR 1536 AACUCUGCAGUACACGAUG CAUCGUGUACUGCAGAGUU ++ ++ REDD40.1  h 3’UTR 1536 AACUCUGCAGUACACGAUG CAUCGUGUACUGCAGAGUU ++ ++

50 fifty

REDD44.1 h 3’UTR 954 CCUGCCUCUAGUCUCCACC GGUGGAGACUAGAGGCAGG ++ ++ REDD44.1  h 3’UTR 954 CCUGCCUCUAGUCUCCACC GGUGGAGACUAGAGGCAGG ++ ++

Nótese que en la Tabla A anterior, las cadenas sentido de ARNip 1-50 tienen sec. con núms.de ident.: 352, respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 1-50 tienen sec. con núms.de ident.: 53-102, respectivamente. La molécula designada REDD 14 tiene la sec. con núm. de ident.: 16 (cadena sentido) y 66 (cadena antisentido). Note that in Table A above, the sense chains of siRNA 1-50 have sec. with ID no .: 352, respectively, and the antisense chains of siRNA 1-50 have sec. with identification numbers: 53-102, respectively. The molecule designated REDD 14 has sec. with no. Ident .: 16 (sense chain) and 66 (antisense chain).

TABLA B TABLE B

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

51 51

Humano 19 CUAGCCAGUUGGUAAGCCA DGGCUUACCAACUGGCUAG [556-574] - - - Human 19 CUAGCCAGUUGGUAAGCCA DGGCUUACCAACUGGCUAG [556-574]  - - -

52 52

Humano 19 UGAUUCCAGUGGUUGGAAA UUUCCAACCACUGGAAUCA [984-1002] - - - Human 19 UGAUUCCAGUGGUUGGAAA UUUCCAACCACUGGAAUCA [984-1002]  - - -

53 53

Humano 19 CCAGUGGUUGGAAAACUGA UCAGUUUUCCAACCACUGG [989-1007] - - - Human 19 CCAGUGGUUGGAAAACUGA UCAGUUUUCCAACCACUGG [989-1007]  - - -

54 54

Humano 19 GCUUCCGAGUCAUCAAGAA UUCUUGAUGACUCGGAAGC [835-853] [763-781] - - Human 19 GCUUCCGAGUCAUCAAGAA UUCUUGAUGACUCGGAAGC [835-853] [763-781]  - -

55 55

Humano 19 GGAAGCUCAUUGAGUUGUG CACAACUCAAUGAGCUUCC [1049-1067] - - Human 19 GGAAGCUCAUUGAGUUGUG CACAACUCAAUGAGCUUCC [1049-1067] - -

56 56

Humano,cynomoglus 19 CCAUCUGGGUCUUCCAUCU AGAUGGAAGACCCAGAUGG [1613-1631] [1569-1583] [1610-1624] + Human Cynomoglus 19 CCAUCUGGGUCUUCCAUCU  AGAUGGAAGACCCAGAUGG [1613-1631] [1569-1583] [1610-1624] +

57 57

Humano,cynomoglus 19 GGAUGUGUGUGUAGCAUGU ACAUGCUACACACACAUCC [1152-1170] - - - Human Cynomoglus 19 GGAUGUGUGUGUAGCAUGU ACAUGCUACACACACAUCC [1152-1170]  - - -

58 58

Humano,cynomoglus 19 ACACAUACCCCUCAGUACU AGOACOGAGGGGOAOGOGU [1090-1108] [1081-1098] - Human Cynomoglus 19 ACACAUACCCCUCAGUACU AGOACOGAGGGGOAOGOGU [1090-1108] [1081-1098] -

59 59

Humano,cynomoglus 19 ACAUACCCCUCAGUACUGO ACAGUACUGAGGGGUAUGU [1092-1110] [1082-1100] - Human Cynomoglus 19 ACAUACCCCUCAGUACUGO ACAGUACUGAGGGGUAUGU [1092-1110] [1082-1100] -

60 60

Humano,cynomoglus 19 CACUGUUCAUGAAUACACU AGUGUAUUCAUGAACAGUG [1660-1678] [1612-1626] [1652-1666] + Human Cynomoglus 19 CACUGUUCAUGAAUACACU AGUGUAUUCAUGAACAGUG [1660-1678] [1612-1626] [1652-1666]  +

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

61 61

Humano,cynomoglus 19 CCAGCUGGAUGUGUGUGUA UACACACACAUCCAGCUGG [1146-1164] [1099-1114] [1139-1154] - Human Cynomoglus 19 CCAGCUGGAUGUGUGUGUA UACACACACAUCCAGCUGG [1146-1164] [1099-1114] [1139-1154]  -

62 62

Humano,cynomoglus 19 CGGAACAGCUGCUCAUUGA UCAAUGAGCAGCUGUUCCG [868-886] [801-814] [854-867] - Human Cynomoglus 19 CGGAACAGCUGCUCAUUGA UCAAUGAGCAGCUGUUCCG [868-886] [801-814] [854-867]  -

63 63

Humano,cynomoglus 19 GAAGCUCAUUGAGUUGUGU ACACAACUCAAUGAGCUUC [1050-1068] - - - Human Cynomoglus 19 GAAGCUCAUUGAGUUGUGU ACACAACUCAAUGAGCUUC [1050-1068] - - -

64 64

Humano,cynomoglus 19 GGACACAUACCCCUCAGUA UACUGAGGGGUAUGUGUCC [1088-1106] - - - Human Cynomoglus 19 GGACACAUACCCCUCAGUA UACUGAGGGGUAUGUGUCC [1088-1106]  - - -

65 65

Humano,cynomoglus 19 GGAUCUUUGACACUUGAAA UUUCAAGUGUCAAAGAUCC [1483-1501] [1424-1442] - - Human Cynomoglus 19 GGAUCUUUGACACUUGAAA UUUCAAGUGUCAAAGAUCC [1483-1501] [1424-1442]  - -

66 66

Humano,cynomoglus 19 GUAGCAUGUACCUUAUUAU AUAAUAAGGUACAUGCUAC [1162-1180] [1112-1128] - - Human Cynomoglus 19 GUAGCAUGUACCUUAUUAU AUAAUAAGGUACAUGCUAC [1162-1180] [1112-1128]  - -

67 67

Humano,cynomoglus 19 UCAGUACUGUAGCAUGGAA UUCCAUGCUACAGUACUGA [1101-1119] [1091-1106] - Human Cynomoglus 19 UCAGUACUGUAGCAUGGAA UUCCAUGCUACAGUACUGA [1101-1119] [1091-1106] -

68 68

Humano,cynomoglus 19 UGUGUAGCAUGUACCUUAU AUAAGGUACAUGCUACACA [1159-1177] [1111-1127] [1151-1167] - Human Cynomoglus 19 UGUGUAGCAUGUACCUUAU AUAAGGUACAUGCUACACA [1159-1177] [1111-1127] [1151-1167]  -

69 69

Humano,cynomoglus 19 CUGGAUGUGUGUGUAGCAU AUGCUACACACACAUCCAG [1150-1168] - - - Human Cynomoglus 19 CUGGAUGUGUGUGUAGCAU AUGCUACACACACAUCCAG [1150-1168]  - - -

70 70

Humano,cynomoglus,ratón 19 ACACUUGAUGUUCAAGUAU AUACUUGAACAUCAAGUGU [1674-1692] [1622-1640] + Human cynomoglus mouse 19 ACACUUGAUGUUCAAGUAU AUACUUGAACAUCAAGUGU [1674-1692] [1622-1640] +

71 71

Humano,cynomoglus,ratón 19 GCAUGAAUGUAAGAGUAGG CCUACUCUUACAUUCAUGC [1438-1456] [1379-1397] - Human cynomoglus mouse 19  GCAUGAAUGUAAGAGUAGG CCUACUCUUACAUUCAUGC [1438-1456] [1379-1397] -

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

72 72

Humano,cynomoglus,ratón 19 AGCAGCAACAGUGGCUUCG CGAAGCCACUGUUGCUGCU [372-390] [300-318] - Human cynomoglus mouse 19 AGCAGCAACAGUGGCUUCG CGAAGCCACUGUUGCUGCU [372-390] [300-318] -

73 73

Humano,cynomoglus,ratón 19 AUGAAUGUAAGAGUAGGAA UUCCUACUCUUACAUUCAU [1440-1458] [1381-1399] - Human cynomoglus mouse 19  AUGAAUGUAAGAGUAGGAA UUCCUACUCUUACAUUCAU [1440-1458] [1381-1399] -

74 74

Humano,cynomoglus,ratón 19 CAGCAGCAACAGUGGCUUC GAAGCACUGUUGCUGCUG [371-389] [299-317] - Human cynomoglus mouse 19 CAGCAGCAACAGUGGCUUC GAAGCACUGUUGCUGCUG [371-389] [299-317] -

75 75

Humano,cynomoglus,ratón 19 CAUGAAUGUAAGAGUAGGA UCCUACUCUUACAUUCAUG [1439-1457] [1380-1398] - Human cynomoglus mouse 19  CAUGAAUGUAAGAGUAGGA UCCUACUCUUACAUUCAUG [1439-1457] [1380-1398] -

76 76

Humano,cynomoglus,ratón 19 GAUGUUCAAGUAUUAAGAC GUCUUAAUACUUGAACAUC [1680-1698] [1628-1646] + Human cynomoglus mouse 19 GAUGUUCAAGUAUUAAGAC GUCUUAAUACUUGAACAUC [1680-1698] [1628-1646] +

77 77

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UGAUGCAGCUGCUGCAGGA UCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-502] [412-430] [465-483] - Human cynomoglus mouse rat 19 UGAUGCAGCUGCUGCAGGA UCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-502] [412-430] [465-483]  -

78 78

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 GAAUACACUUGAUGUUCAA UUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1688] [1618-1636] + Human cynomoglus mouse rat 19 GAAUACACUUGAUGUUCAA UUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1688] [1618-1636] +

79 79

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UGAAUACACUUGAUGUUCA UGAACAUCAAGUGUAUUCA [1669-1687] [1617-1635] [1657-1675] + Human cynomoglus mouse rat 19 UGAAUACACUUGAUGUUCA UGAACAUCAAGUGUAUUCA [1669-1687] [1617-1635] [1657-1675]  +

80 80

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 AUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAU [1672-1690] [1620-1638] [1660-1678] + Human cynomoglus mouse rat 19 AUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAU [1672-1690] [1620-1638] [1660-1678]  +

81 81

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 CAUGAAUACACUUGAUGUU AACAUCAAGUGUAUUCAUG [1667-1685] [1615-1633] [1655-1673] + Human cynomoglus mouse rat 19 CAUGAAUACACUUGAUGUU AACAUCAAGUGUAUUCAUG [1667-1685] [1615-1633] [1655-1673]  +

82 82

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 CUGGACAGCAGCAACAGUG CACUGUUGCUGCUGUCCAG [366-384] [294-312] [347-365] - Human cynomoglus mouse rat 19 CUGGACAGCAGCAACAGUG CACUGUUGCUGCUGUCCAG [366-384] [294-312] [347-365]  -

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

83 83

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 GUUCAUGAAUACACUUGAU AUCAAGUGUAUUCAUGAAC [1664-1682] [1612-1630] [1652-1670] + Human cynomoglus mouse rat 19 GUUCAUGAAUACACUUGAU AUCAAGUGUAUUCAUGAAC [1664-1682] [1612-1630] [1652-1670]  +

84 84

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UCAUGAAUACACUUGAUGU ACAUCAAGUGUAUUCAUGA [1666-1684] [1614-1632] [1654-1672] + Human cynomoglus mouse rat 19 UCAUGAAUACACUUGAUGU ACAUCAAGUGUAUUCAUGA [1666-1684] [1614-1632] [1654-1672]  +

85 85

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UGGACAGCAGCAACAGUGG CCACUGUUGCUGCUGUCCA [367-385] [295-313] [348-366] - Human cynomoglus mouse rat 19 UGGACAGCAGCAACAGUGG CCACUGUUGCUGCUGUCCA [367-385] [295-313] [348-366]  -

86 86

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UGUGUGCCAACCUGAUGCA UGCAUCAGGUUGGCACACA [472-490] [400-418] [453-471] - Human cynomoglus mouse rat 19 UGUGUGCCAACCUGAUGCA UGCAUCAGGUUGGCACACA [472-490] [400-418] [453-471] -

87 87

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UUCAUGAAUACACUUGAUG CAUCAAGUGUAUUCAUGAA [1665-1683] [1613-1631] [1653-1671] + Human cynomoglus mouse rat 19 UUCAUGAAUACACUUGAUG CAUCAAGUGUAUUCAUGAA [1665-1683] [1613-1631] [1653-1671]  +

88 88

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 AACCUGAUGCAGCUGCUGC GCAGCAGCUGCAUCAGGUU [480-498] [408-426] [461-479] - Human cynomoglus mouse rat 19 AACCUGAUGCAGCUGCUGC GCAGCAGCUGCAUCAGGUU [480-498] [408-426] [461-479]  -

89 89

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 AGUCCCUGGACAGCAGCAA UUGCUGCUGUCCAGGGACU [361-379] [289-307] [342-360] - Human cynomoglus mouse rat 19 AGUCCCUGGACAGCAGCAA UUGCUGCUGUCCAGGGACU [361-379] [289-307] [342-360]  -

90 90

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 CCCUCAGUACUGUAGCAUG CAUGCUACAGUACUGAGGG [1098-1116] [1048-1066] [1088-1106] - Human cynomoglus mouse rat 19 CCCUCAGUACUGUAGCAUG CAUGCUACAGUACUGAGGG [1098-1116] [1048-1066] [1088-1106]  -

91 91

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 CCUGGACAGCAGCAACAGU ACUGUUGCUGCUGUCCAGG [365-383] [293-311] [346-364] - Human cynomoglus mouse rat 19 CCUGGACAGCAGCAACAGU ACUGUUGCUGCUGUCCAGG [365-383] [293-311] [346-364]  -

92 92

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 UGUGCCAACCUGAUGCAGC GCUGCAUCAGGUUGGCACA [474-492] [402-420] [455-473] - Human cynomoglus mouse rat 19 UGUGCCAACCUGAUGCAGC GCUGCAUCAGGUUGGCACA [474-492] [402-420] [455-473]  -

93 93

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 AAUACACUUGAUGUUCAAG CUUGAACAUCAAGUGUAUU [1671-1689] [1619-1637] [1659-1677] + Human cynomoglus mouse rat 19 AAUACACUUGAUGUUCAAG CUUGAACAUCAAGUGUAUU  [1671-1689] [1619-1637] [1659-1677] +

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

94 94

Humano,cynomoglus,ratón, rata 19 AUGAAUACACUUGAUGUUC GAACAUCAAGUGUAUUCAU [1668-1686] [1616-1634] [1656-1674] - Human cynomoglus mouse rat 19 AUGAAUACACUUGAUGUUC GAACAUCAAGUGUAUUCAU [1668-1686] [1616-1634] [1656-1674]  -

95 95

Humano,cynomoglus,rata 19 UGAUGCAGCUGCUGCAGGA UCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-502] [465-483] + Human cynomoglus rat 19 UGAUGCAGCUGCUGCAGGA UCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-502] [465-483]  +

96 96

Humano,cynomoglus,rata 19 AGAACUGUUUACAUGAAGA UCUUCAUGUAAACAGUUCU [1632-1650] [1625-1643] + Human cynomoglus rat 19  AGAACUGUUUACAUGAAGA UCUUCAUGUAAACAGUUCU [1632-1650] [1625-1643] +

97 97

Humano cynomoglus,rata 19 AUCUAGAACUGUUUACAUG CAUGUAAACAGUUCUAGAU [1628-1646] [1621-1639] + Human cynomoglus, rat 19 AUCUAGAACUGUUUACAUG CAUGUAAACAGUUCUAGAU [1628-1646] [1621-1639] +

98 98

Humano,cynomoglus,rata 19 CCAUGCCUAGCCUUUGGGA UCCCAAAGGCUAGGCAUGG [196-214] [186-204] - Human cynomoglus rat 19 CCAUGCCUAGCCUUUGGGA UCCCAAAGGCUAGGCAUGG [196-214] [186-204]  -

99 99

Humano,cynomoglus,rata 19 CUAGAACUGUUUACAUGAA UUCAUGUAAACAGUUCUAG [1630-1648] [1623-1641] + Human cynomoglus rat 19 CUAGAACUGUUUACAUGAA UUCAUGUAAACAGUUCUAG [1630-1648] [1623-1641] +

100 100

Humano,cynomoglus,rata 19 GAACUGUUUACAUGAAGAU AUCUUCAUGUAAACAGUUC [1633-1651] [1626-1644] + Human cynomoglus rat 19  GAACUGUUUACAUGAAGAU AUCUUCAUGUAAACAGUUC [1633-1651] [1626-1644] +

101 101

Humano,cynomoglus,rata 19 GGUCUUCCAUCUAGAACUG CAGUUCUAGAUGGAAGACC [1620-1638] [1613-1631] + Human cynomoglus rat 19 GGUCUUCCAUCUAGAACUG CAGUUCUAGAUGGAAGACC [1620-1638] [1613-1631] +

102 102

Humano,cynomoglus,rata 19 CCAUCUAGAACUGUUUACA UGUAAACAGUUCUAGAUGG [1626-1644] [1619-1637] + Human cynomoglus rat 19 CCAUCUAGAACUGUUUACA UGUAAACAGUUCUAGAUGG [1626-1644] [1619-1637] +

103 103

Humano,cynomoglus,rata 19 CUUCCAUCUAGAACUGUUU AAACAGUUCUAGAUGGAAG [1623-1641] [1616-1634] + Human cynomoglus rat 19 CUUCCAUCUAGAACUGUUU AAACAGUUCUAGAUGGAAG [1623-1641] [1616-1634] +

104 104

Humano,cynomoglus,rata 19 DAGAACUGUUUACAUGAAG CUUCAUGUAAACAGUUCUA [1631-1649] [1624-1642] + Human cynomoglus rat 19 DAGAACUGUUUACAUGAAG CUUCAUGUAAACAGUUCUA [1631-1649] [1624-1642] +

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

105 105

Humano,cynomoglus,rata 19 UCUUCCAUCUAGAACUGUU AACAGUUCUAGAUGGAAGA [1622-1640] [1615-1633] + Human cynomoglus rat 19 UCUUCCAUCUAGAACUGUU  AACAGUUCUAGAUGGAAGA [1622-1640] [1615-1633] +

106 106

Humano,cynomoglus,rata 19 CAUCUAGAACUGUUUACAU AUGUAAACAGUUCUAGAUG [1627-1645] [1620-1638] + Human cynomoglus rat 19 CAUCUAGAACUGUUUACAU AUGUAAACAGUUCUAGAUG [1627-1645] [1620-1638] +

107 107

Humano,cynomoglus,rata 19 GGGUCUUCCAUCUAGAACU AGUUCUAGAUGGAAGACCC [1619-1637] [1612-1630] + Human cynomoglus rat 19 GGGUCUUCCAUCUAGAACU AGUUCUAGAUGGAAGACCC [1619-1637] [1612-1630] +

108 108

Humano,cynomoglus,rata 19 UCCAUCUAGAACUGUUUAC GUAAACAGUUCUAGAUGGA [1625-1643] [1618-1636] + Human cynomoglus rat 19 UCCAUCUAGAACUGUUUAC GUAAACAGUUCUAGAUGGA [1625-1643] [1618-1636] +

105 105

Humano,cynomoglus,rat 19 UCUAGAACUGUUUACAUGA UCAUGUAAACAGUUCUAGA [1629-1647] [1622-1640] + Human cynomoglus rat 19 UCUAGAACUGUUUACAUGA UCAUGUAAACAGUUCUAGA [1629-1647] [1622-1640] +

110 110

Humano,cynomoglus,rata 19 UUCCAUCUAGAACUGUUUA UAAACAGUUCUAGAUGGAA [1624-1642] [1617-1635] + Human cynomoglus rat 19 UUCCAUCUAGAACUGUUUA UAAACAGUUCUAGAUGGAA [1624-1642] [1617-1635] +

111 111

Humano,cynomoglus,rata 19 GUCUUCCAUCUAGAACUGU ACAGUUCUAGAUGGAAGAC [1621-1639] [1614-1632] + Human cynomoglus rat 19 GUCUUCCAUCUAGAACUGU ACAGUUCUAGAUGGAAGAC [1621-1639] [1614-1632] +

112 112

Humano,ratón 19 CAAGUAUUAAGACCUAUGC GCAUAGGUCUUAAUACUUG [1686-1704] [1634-1652] + Human mouse 19 CAAGUAUUAAGACCUAUGC GCAUAGGUCUUAAUACUUG [1686-1704] [1634-1652] +

113 113

Humano,ratón 19 GUAUUAAGACCUAUGCAAU AUUGCAUAGGUCUUAAUAC [1689-1707] [1637-1655] + Human mouse 19 GUAUUAAGACCUAUGCAAU AUUGCAUAGGUCUUAAUAC [1689-1707] [1637-1655] +

114 114

Humano ,ratón 19 AGUAUUAAGACCUAUGCAA UUGCAUAGGUCUUAAUACU [1688-1706] [1636-1654] + Human mouse 19  AGUAUUAAGACCUAUGCAA UUGCAUAGGUCUUAAUACU [1688-1706] [1636-1654] +

115 115

Humano,ratón 19 AUGUUCAAGUAUUAAGACC GGUCUUAAUACUUGAACAU [1681-1699] [1629-1647] + Human mouse 19 AUGUUCAAGUAUUAAGACC GGUCUUAAUACUUGAACAU [1681-1699] [1629-1647] +

Núm. No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1(Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1(Ratón) gi18376838refNM_080906.1(Rata) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Mouse) gi18376838refNM_080906.1 (Rat) Superimposed with pet1 (antisense) *

116 116

Humano,ratón 19 CACUUGAUGUUCAAGUAUU AAUACUUGAACAUCAAGUG [1675-1693] [1623-1641] + Human mouse 19 CACUUGAUGUUCAAGUAUU AAUACUUGAACAUCAAGUG [1675-1693] [1623-1641] +

117 117

Humano,ratón 19 CCAAGAUCCAGGGGCUGUU AACAGCCCCUGGAUCUUGG [757-775] [685-703] - Human mouse 19 CCAAGAUCCAGGGGCUGUU AACAGCCCCUGGAUCUUGG [757-775] [685-703] -

118 118

Humano,ratón 19 GUUCAAGUAUUAAGACCUA CAUAGGUCUUAAUACUUGAAC [1683-1701] [1631-1649] + Human mouse 19 GUUCAAGUAUUAAGACCUA CAUAGGUCUUAAUACUUGAAC [1683-1701] [1631-1649] +

119 119

Humano,ratón 19 UCAAGUAUUAAGACCUAUG CAUAGGUCUUAAUACUUGA [1685-1703] [1633-1651] Human mouse 19 UCAAGUAUUAAGACCUAUG CAUAGGUCUUAAUACUUGA [1685-1703] [1633-1651]

120 120

Humano,ratón 19 AAGUAUUAAGACCUAUGCA UGCAUAGGUCUUAAUACUU [1687-1705] [1635-1653] + Human mouse 19 AAGUAUUAAGACCUAUGCA UGCAUAGGUCUUAAUACUU [1687-1705] [1635-1653] +

121 121

Humano,ratón 19 UGUUCAAGUAAGACCU AGGUCUUAAUACUUGAACA [1682-1700] [1630-1648] + Human mouse 19 UGUUCAAGUAAGACCU AGGUCUUAAUACUUGAACA [1682-1700] [1630-1648] +

122 122

Humano,ratón, rata 19 UGGGUCUUCCAUCUAGAAC GUUCUAGAUGGAAGACCCA [1618-1636] [1570-1588] [1611-1629] + Human mouse rat 19 UGGGUCUUCCAUCUAGAAC GUUCUAGAUGGAAGACCCA [1618-1636] [1570-1588] [1611-1629]  +

Nótese que en la anterior Tabla B, las cadenas sentido de ARNip 51-122 tienen sec. con núms.de ident.: 103-174, respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 51-122 tienen sec. con núms.de ident.: 175-246, respectivamente. Note that in the previous Table B, the sense chains of siRNA 51-122 have sec. with ID no .: 103-174, respectively, and the antisense chains of siRNA 51-122 have sec. with identification numbers: 175-246, respectively.

TABLA C TABLE C

Núm No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1(Rattusnorvegicus) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1 (Rattusnorvegicus) Superimposed with pet1 (antisense) *

123 123

Humano 21 CCAGGAAGCUCAUUGAGUUGU ACAACUCAAUGAGCUUCCUGG [1046-1066] - - - Human twenty-one CCAGGAAGCUCAUUGAGUUGU ACAACUCAAUGAGCUUCCUGG [1046-1066]  - - -

124 124

Humano 21 CCAUCUGGGUCUUCCAUCUAG CUAGAUGGAAGACCCAGAUGG [1613-1633] [1569-1585] [1610-1626] + Human twenty-one CCAUCUGGGUCUUCCAUCUAG CUAGAUGGAAGACCCAGAUGG [1613-1633] [1569-1585] [1610-1626]  +

125 125

Humano 21 GGAUGUGUGUGUAGCAUGUAC GUACAUGCUACACACACAUCC [1152-1172] [1102-1122] [1142-1161] - Human twenty-one GGAUGUGUGUGUAGCAUGUAC GUACAUGCUACACACACAUCC [1152-1172] [1102-1122] [1142-1161]  -

126 126

Humano 21 CAAGUGUGUUUGUUGUUUGUU AACAAACAACAAACACACUUG [1353-1373] - - - Human twenty-one CAAGUGUGUUUGUUGUUUGUU AACAAACAACAAACACACUUG [1353-1373] - - -

127 127

Humano 21 CCUCAGUACUGUAGCAUGGAA UUCCAUGCUACAGUACUGAGG [1099-1119] [1049-1066] [1089-1106] - Human twenty-one CCUCAGUACUGUAGCAUGGAA UUCCAUGCUACAGUACUGAGG [1099-1119] [1049-1066] [1089-1106]  -

128 128

Humano 21 GACCAAGUGUGUUUGUUGUUU AAACAACAAACACACUUGGUC [1350-1370] - - - Human twenty-one GACCAAGUGUGUUUGUUGUUU AAACAACAAACACACUUGGUC [1350-1370]  - - -

129 129

Humano 21 GCUUCCGAGUCAUCAAGAAGA UCUUCUUGAUGACUCGGAAGC [835-855] [763-783] - - Human twenty-one GCUUCCGAGUCAUCAAGAAGA UCUUCUUGAUGACUCGGAAGC [835-855] [763-783]  - -

130 130

Humano 21 GGAGGUGGGGGAAUAGUGUUU AAACACUAUUCCCCCACCUCC [1024-1044] [976-986] - - Human twenty-one GGAGGUGGGGGAAUAGUGUUU AAACACUAUUCCCCCACCUCC [1024-1044] [976-986]  - -

131 131

Humano 21 CAGUACUGUAGCAUGGAACAA UUGUUCCAUGCUACAGUACUG [1102-1122] [1052-1072] - Human twenty-one CAGUACUGUAGCAUGGAACAA UUGUUCCAUGCUACAGUACUG [1102-1122] [1052-1072] -

132 132

Humano,cynomoglus 21 GAAUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1690] [1618-1638] [1658-1678] + Human Cynomoglus twenty-one GAAUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1690] [1618-1638] [1658-1678]  +

Núm No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1(Rattusnorvegicus) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1 (Rattusnorvegicus) Superimposed with pet1 (antisense) *

133 133

Humano,cynomoglus 21 CAAGUAUUAAGACCUAUGCAA UUGCAUAGGUCUUAAUACUUG [1686-1706] [1634-1654] [1674-1694] + Human Cynomoglus twenty-one CAAGUAUUAAGACCUAUGCAA UUGCAUAGGUCUUAAUACUUG [1686-1706] [1634-1654] [1674-1694]  +

134 134

Humano,cynomoglus 21 GAACUUUUGGGGUGGAGACUA UAGUCUCCACCCCAAAAGUUC [944-964] - - - Human Cynomoglus twenty-one GAACUUUUGGGGUGGAGACUA UAGUCUCCACCCCAAAAGUUC [944-964]  - - -

135 135

Humano,cynomoglus 21 GGACACAUACCCCUCAGUACU AGUACUGAGGGGUAUGUGUCC [1088-1108] [1047-1058] [1081-1098] - Human Cynomoglus twenty-one GGACACAUACCCCUCAGUACU AGUACUGAGGGGUAUGUGUCC [1088-1108] [1047-1058] [1081-1098]  -

136 136

Humano,cynomoglus 21 GGAGGUGGUUUGUGUAUCUUA UAAGAUACACAAACCACCUCC [1317-1337] [1256-1268] - - Human Cynomoglus twenty-one GGAGGUGGUUUGUGUAUCUUA UAAGAUACACAAACCACCUCC [1317-1337] [1256-1268]  - -

137 137

Humano,cynomoglus 21 GGAUCUUUGACACUUGAAAAA UUUUUCAAGUGUCAAAGAUCC [1483-1503] [1424-1442] - - Human Cynomoglus twenty-one GGAUCUUUGACACUUGAAAAA UUUUUCAAGUGUCAAAGAUCC [1483-1503] [1424-1442]  - -

138 138

Humano,cynomoglus 21 GGUCUUCCAUCUAGAACUGUU AACAGUUCUAGAUGGAAGACC [1620-1640] [1572-1588] [1613-1633] + Human Cynomoglus twenty-one GGUCUUCCAUCUAGAACUGUU AACAGUUCUAGAUGGAAGACC [1620-1640] [1572-1588] [1613-1633] +

139 139

Humano,cynomoglus 21 DGUGUAGCAUGUACCUUAUUA UAAUAAGGUACAUGCUACACA [1159-1179] [1111-1128] [1151-1169] - Human Cynomoglus twenty-one  DGUGUAGCAUGUACCUUAUUA UAAUAAGGUACAUGCUACACA [1159-1179] [1111-1128] [1151-1169]  -

140 140

Humano,cynomoglus 21 CAACAAGGCUUCCAGCUGGAU AUCCAGCUGGAAGCCUUGUUG [1135-1155] - - Human Cynomoglus twenty-one CAACAAGGCUUCCAGCUGGAU AUCCAGCUGGAAGCCUUGUUG [1135-1155]  - -

141 141

Humano,cynomoglus 21 CACUUGGGAUCUUUGACACUU AAGUGUCAAAGAUCCCAAGUG [1477-1497] - - - Human Cynomoglus twenty-one CACUUGGGAUCUUUGACACUU AAGUGUCAAAGAUCCCAAGUG [1477-1497]  - - -

142 142

Humano,cynomoglus 21 CAUCACUACUGACCUGUUGUA UACAACAGGUCAGUAGUGAUG [1399-1419] [1341-1356] [1383-1398] - Human Cynomoglus twenty-one CAUCACUACUGACCUGUUGUA UACAACAGGUCAGUAGUGAUG [1399-1419] [1341-1356] [1383-1398]  -

143 143

Humano,cynomoglus 21 GUGUGUGUAGCAUGUACCUUA UAAGGUACAUGCUACACACAC [1156-1176] [1106-1126] [1146-1166] - Human Cynomoglus twenty-one GUGUGUGUAGCAUGUACCUUA UAAGGUACAUGCUACACACACAC [1156-1176] [1106-1126] [1146-1166]  -

Núm No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1(Rattusnorvegicus) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1 (Rattusnorvegicus) Superimposed with pet1 (antisense) *

144 144

Humano,cynomoglus,ratón 21 GCAUGAAUGUAAGAGUAGGAA UUCCUACUCUUACAUUCAUGC [1438-1458] [1379-1399] - Human cynomoglus mouse twenty-one GCAUGAAUGUAAGAGUAGGAA UUCCUACUCUUACAUUCAUGC [1438-1458] [1379-1399] -

145 145

Humano,cynomoglus,ratón 21 GACAGCAGCAACAGUGGCUUC GAAGCCACUGUUGCUGCUGUC [369-389] [297-317] - Human cynomoglus mouse twenty-one GACAGCAGCAACAGUGGCUUC GAAGCCACUGUUGCUGCUGUC [369-389] [297-317] -

146 146

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 UGAUGCAGCUGCUGCAGGAGA UCUCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-504] [412-432] [465-485] - Human cynomoglus mouse rat twenty-one UGAUGCAGCUGCUGCAGGAGA UCUCCUGCAGCAGCUGCAUCA [484-504] [412-432] [465-485]  -

147 147

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 UGAAUACACUUGAUGUUCAAG CUUGAACAUCAAGUGUAUUCA [1669-1689] [1617-1637] [1657-1677] + Human cynomoglus mouse rat twenty-one UGAAUACACUUGAUGUUCAAG CUUGAACAUCAAGUGUAUUCA [1669-1689] [1617-1637] [1657-1677]  +

148 148

Humano,cynomoglus,ratón, rat 21 CAUGAAUACACUUGAUGUUCA UGAACAUCAAGUGUAUUCAUG [1667-1687] [1615-1635] [1655-1675] + Human cynomoglus mouse rat twenty-one CAUGAAUACACUUGAUGUUCA UGAACAUCAAGUGUAUUCAUG [1667-1687] [1615-1635] [1655-1675]  +

149 149

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 GGACAGCAGCAACAGUGGCUU AAGCCACUGUUGCUGCUGUCC [368-388] [296-316] [349-369] - Human cynomoglus mouse rat twenty-one GGACAGCAGCAACAGUGGCUU AAGCCACUGUUGCUGCUGUCC [368-388] [296-316] [349-369]  -

150 150

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 GUUCAUGAAUACACUUGAUGU ACAUCAAGUGUAUUCAUGAAC [1664-1684] [1612-1632] [1652-1672] + Human cynomoglus mouse rat twenty-one GUUCAUGAAUACACUUGAUGU ACAUCAAGUGUAUUCAUGAAC [1664-1684] [1612-1632] [1652-1672]  +

151 151

Humano,cynomoglus,ratón, rat 21 UCAUGAAUACACUUGAUGUUC GAACAUCAAGUGUAUUCAUGA [1666-1686] [1614-1634] [1654-1674] + Human cynomoglus mouse rat twenty-one UCAUGAAUACACUUGAUGUUC GAACAUCAAGUGUAUUCAUGA [1666-1686] [1614-1634] [1654-1674]  +

152 152

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 UCCCUGGACAGCAGCAACAGU ACUGUUGCUGCUGUCCAGGGA [363-383] [291-311] [344-364] - Human cynomoglus mouse rat twenty-one UCCCUGGACAGCAGCAACAGU ACUGUUGCUGCUGUCCAGGGA [363-383] [291-311] [344-364]  -

153 153

Humano,cynomoglus,ratón, rata 21 AGUCCCUGGACAGCAGCAACA UGUUGCUGCUGUCCAGGGACU [361-381] [289-309] [342-362] - Human cynomoglus mouse rat twenty-one AGUCCCUGGACAGCAGCAACA UGUUGCUGCUGUCCAGGGACU [361-381] [289-309] [342-362]  -

154 154

Humano,cynomoglus,rata 21 GAAUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1690] [1658-1678] + Human cynomoglus rat twenty-one GAAUACACUUGAUGUUCAAGU ACUUGAACAUCAAGUGUAUUC [1670-1690] [1658-1678] +

Núm No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1(Rattusnorvegicus) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1 (Rattusnorvegicus) Superimposed with pet1 (antisense) *

155 155

Humano,cynomoglus,rata 21 CUAGAACUGUUUACAUGAAGA UCUUCAUGUAAACAGUUCUAG [1630-1650] [1623-1643] + Human cynomoglus rat twenty-one CUAGAACUGUUUACAUGAAGA UCUUCAUGUAAACAGUUCUAG [1630-1650] [1623-1643] +

156 156

Humano,cynomoglus,rata 21 CCAUCUAGAACUGUUUACAUG CAUGUAAACAGUUCUAGAUGG [1626-1646] [1619-1639] + Human cynomoglus rat twenty-one CCAUCUAGAACUGUUUACAUG CAUGUAAACAGUUCUAGAUGG [1626-1646] [1619-1639] +

157 157

Humano,cynomoglus,rata 21 CUUCCAUCUAGAACUGUUUAC GUAAACAGUUCUAGAUGGAAG [1623-1643] [1616-1636] + Human cynomoglus rat twenty-one CUUCCAUCUAGAACUGUUUAC GUAAACAGUUCUAGAUGGAAG [1623-1643] [1616-1636] +

158 158

Humano,cynomoglus,rata 21 UCUUCCAUCUAGAACUGUUUA UAAACAGUUCUAGAUGGAAGA [1622-1642] [1615-1635] + Human cynomoglus rat twenty-one UCUUCCAUCUAGAACUGUUUA  UAAACAGUUCUAGAUGGAAGA [1622-1642] [1615-1635] +

159 159

Humano,cynomoglus,rata 21 CAUCUAGAACUGUUUACAUGA UCAUGUAAACAGUUCUAGAUG [1627-1647] [1620-1640] + Human cynomoglus rat twenty-one CAUCUAGAACUGUUUACAUGA UCAUGUAAACAGUUCUAGAUG [1627-1647] [1620-1640] +

160 160

Humano,cynomoglus,rata 21 GGGUCUUCCAUCUAGAACUGU ACAGUUCUAGAUGGAAGACCC [1619-1639] [1612-1632] + Human cynomoglus rat twenty-one GGGUCUUCCAUCUAGAACUGU ACAGUUCUAGAUGGAAGACCC [1619-1639] [1612-1632] +

161 161

Humano,cynomoglus,rata 21 UCCAUCUAGAACUGUUUACAU AUGUAAACAGUUCUAGAUGGA [1625-1645] [1618-1638] + Human cynomoglus rat twenty-one UCCAUCUAGAACUGUUUACAU AUGUAAACAGUUCUAGAUGGA [1625-1645] [1618-1638] +

162 162

Humano,cynomoglus,rat 21 UCUAGAACUGUUUACAUGAAG CUUCAUGUAAACAGUUCUAGA [1629-1649] [1622-1642] + Human cynomoglus rat twenty-one UCUAGAACUGUUUACAUGAAG CUUCAUGUAAACAGUUCUAGA [1629-1649] [1622-1642] +

163 163

Humano,cynomoglus,rata 21 UUCCAUCUAGAACUGUUUACA UGUAAACAGUUCUAGAUGGAA [1624-1644] [1617-1637] + Human cynomoglus rat twenty-one UUCCAUCUAGAACUGUUUACA UGUAAACAGUUCUAGAUGGAA [1624-1644] [1617-1637] +

164 164

Humano,cynomoglus,rata 21 GUCUUCCAUCUAGAACUGUUU AAACAGUUCUAGAUGGAAGAC [1621-1641] [1614-1634] + Human cynomoglus rat twenty-one GUCUUCCAUCUAGAACUGUUU AAACAGUUCUAGAUGGAAGAC [1621-1641] [1614-1634] +

165 165

Humano,ratón 21 UGAUGUUCAAGUAUUAAGACC GGUCUUAAUACUUGAACAUCA [1679-1699] [1621-1647] + Human mouse twenty-one UGAUGUUCAAGUAUUAAGACC GGUCUUAAUACUUGAACAUCA [1679-1699] [1621-1647] +

Núm No.

Fuente Longituddel Oligo ARNip sentido ARNip antisentido gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1(Rattusnorvegicus) Superpuestacon pet1(antisentido)* Source Oligo Length SiRNA sense Antisense siRNA gi9506686refNM_019058.1 (Homosapiens) gi21312867refNM_029083.1 (Musmusculus) gi18376838refNM_080906.1 (Rattusnorvegicus) Superimposed with pet1 (antisense) *

166 166

Humano,ratón 21 GUUCAAGUAUUAAGACCUAUG CAUAGGUCUUAAUACUUGAAC [1683-1703] [1631-1651] + Human mouse twenty-one GUUCAAGUAUUAAGACCUAUG CAUAGGUCUUAAUACUUGAAC [1683-1703] [1631-1651] +

167 167

Humano,ratón 21 UCAAGUAUUAAGACCUAUGCA UGCAUAGGUCUUAAUACUUGA [1685-1705] [1633-1653] + Human mouse twenty-one UCAAGUAUUAAGACCUAUGCA UGCAUAGGUCUUAAUACUUGA [1685-1705] [1633-1653] +

168 168

Humano,ratón 21 GAUGUUCAAGUAUUAAGACCU AGGUCUUAAUACUUGAACAUC [1680-1700] [1628-1648] + Human mouse twenty-one GAUGUUCAAGUAUUAAGACCU AGGUCUUAAUACUUGAACAUC [1680-1700] [1628-1648] +

169 169

Humano,ratón 21 UUCAAGUAUUAAGACCUAUGC GCAUAGGUCUUAAUACUUGAA [1684-1704] [1632-1652] + Human mouse twenty-one UUCAAGUAUUAAGACCUAUGC GCAUAGGUCUUAAUACUUGAA [1684-1704] [1632-1652] +

170 170

Humano, rata 21 CUGGGUCUUCCAUCUAGAACU AGUUCUAGAUGGAAGACCCAG [1617-1637] [1610-1630] + Human rat twenty-one CUGGGUCUUCCAUCUAGAACU AGUUCUAGAUGGAAGACCCAG [1617-1637] [1610-1630] +

171 171

Humano, rata 21 UGGGUCUUCCAUCUAGAACUG CAGUUCUAGAUGGAAGACCCA [1618-1638] [1611-1631] + Human rat twenty-one UGGGUCUUCCAUCUAGAACUG CAGUUCUAGAUGGAAGACCCA [1618-1638] [1611-1631] +

Nótese que en la anterior Tabla C, las cadenas sentido de ARNip 123-171 tienen sec. con núms.de ident.: 247-295, respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 123-171 tienen sec. con núms. de ident.: 296-344, respectivamente. Note that in the previous Table C, the sense chains of siRNA 123-171 have sec. with identification numbers: 247-295, respectively, and the antisense chains of siRNA 123-171 have sec. with no. Ident .: 296-344, respectively.

Ejemplo 10 Example 10

Farmacología y administración de fármacos Pharmacology and drug administration

Las secuencias de nucleótidos de la presente invención pueden administrarse bien directamente o con vectores virales The nucleotide sequences of the present invention can be administered either directly or with viral vectors.

o no virales. Cuando se administran directamente las secuencias generalmente se hacen resistentes a las nucleasas. Alternativamente, las secuencias se pueden incorporar en casetes de expresión o construcciones tales que la secuencia se expresa en la célula como se discute en la presente más abajo. Generalmente, la construcción contiene la adecuada secuencia reguladora o el promotor para permitir que la secuencia se exprese en la célula objetivo. or not viral. When directly administered, the sequences generally become resistant to nucleases. Alternatively, the sequences can be incorporated into expression cassettes or constructs such that the sequence is expressed in the cell as discussed herein below. Generally, the construct contains the appropriate regulatory sequence or promoter to allow the sequence to be expressed in the target cell.

Los compuestos o composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran y se dosifican de acuerdo con la buena práctica médica, que tiene en cuenta el estado clínico del paciente individual, la enfermedad a tratar, el lugar y el método de administración, el esquema de administración, la edad del paciente, el sexo, el peso corporal y otros factores conocidos por los médicos. The compounds or pharmaceutical compositions of the present invention are administered and dosed in accordance with good medical practice, which takes into account the clinical status of the individual patient, the disease to be treated, the place and method of administration, the scheme of administration. , the patient's age, sex, body weight and other factors known to doctors.

La "cantidad eficaz" farmacéuticamente para los propósitos en la presente está determinada por consideraciones tales como las conocidas en la materia. La cantidad debe ser eficaz para conseguir una mejora que incluye, pero no se limita a la tasa de supervivencia mejorada o la recuperación más rápida, o la mejora o eliminación de los síntomas y otros indicadores que se seleccionan como medidas apropiadas por aquellos con experiencia en la materia.. The "pharmaceutically effective amount" for the purposes herein is determined by considerations such as those known in the art. The amount must be effective to achieve an improvement that includes, but is not limited to, the improved survival rate or faster recovery, or the improvement or elimination of symptoms and other indicators that are selected as appropriate measures by those with experience in The matter..

El tratamiento generalmente tiene una longitud proporcional a la longitud del proceso de la enfermedad y la eficacia del fármaco y la especie de paciente que se trata. Cabe señalar que los humanos se tratan generalmente más tiempo que los ratones u otros animales experimentales ejemplificados en la presente. The treatment generally has a length proportional to the length of the disease process and the efficacy of the drug and the species of patient being treated. It should be noted that humans are generally treated longer than mice or other experimental animals exemplified herein.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por cualquiera de las vías convencionales de administración. Cabe señalar que el compuesto se puede administrar como compuesto o como la sal farmacéuticamente aceptable y puede administrarse solo o como ingrediente activo en combinación con portadores, disolventes, diluyentes, excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos pueden administrarse por vía oral, subcutánea o parenteral se incluye la administración intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, y administración intranasal, así como las técnicas intratecal y de infusión. Los implantes de los compuestos son también útiles. Las formas líquidas se pueden preparar para inyección, el término incluye subcutánea, transdérmica, intravenosa, intramuscular, intratecal, y otras rutas de administración parental. Las composiciones líquidas incluyen las soluciones acuosas, con y sin co-disolventes orgánicos, o las suspensiones acuosas o de aceite, las emulsiones con aceites comestibles, así como los vehículos farmacéuticos similares. Adicionalmente, bajo ciertas circunstancias, las composiciones para uso en los tratamientos nuevos de la presente invención se pueden formar como aerosoles, para la administración intranasal y similares. El paciente a tratar es un animal de sangre caliente y, en particular los mamíferos, se incluye el hombre. Los portadores farmacéuticamente aceptables, disolventes, diluyentes, excipientes, adyuvantes y vehículos, así como portadores de implante se refieren generalmente a rellenos sólidos o líquidos no tóxicos, inertes, diluyentes o material de encapsulación que no reaccionan con los ingredientes activos de la invención. The compounds of the present invention can be administered by any of the conventional routes of administration. It should be noted that the compound can be administered as a compound or as the pharmaceutically acceptable salt and can be administered alone or as an active ingredient in combination with carriers, solvents, diluents, excipients, adjuvants and pharmaceutically acceptable carriers. The compounds can be administered orally, subcutaneously or parenterally, including intravenous, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, and intranasal administration, as well as intrathecal and infusion techniques. The implants of the compounds are also useful. Liquid forms can be prepared for injection, the term includes subcutaneous, transdermal, intravenous, intramuscular, intrathecal, and other routes of parental administration. Liquid compositions include aqueous solutions, with and without organic co-solvents, or aqueous or oil suspensions, emulsions with edible oils, as well as similar pharmaceutical carriers. Additionally, under certain circumstances, compositions for use in the new treatments of the present invention may be formed as aerosols, for intranasal administration and the like. The patient to be treated is a warm-blooded animal and, particularly mammals, man is included. Pharmaceutically acceptable carriers, solvents, diluents, excipients, adjuvants and vehicles, as well as implant carriers generally refer to solid or liquid non-toxic, inert, diluent or encapsulation material fillers that do not react with the active ingredients of the invention.

Cuando se administra el compuesto de la presente invención parenteralmente, se formula generalmente en una unidad de dosificación inyectable (solución, suspensión, emulsión). Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para inyección incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones y polvos estériles para reconstitución en soluciones inyectables estériles o dispersiones. El portador puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, y similares), las mezclas adecuadas de éstos, y aceites vegetales. When the compound of the present invention is administered parenterally, it is generally formulated in an injectable dosage unit (solution, suspension, emulsion). Pharmaceutical formulations suitable for injection include sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders for reconstitution into sterile injectable solutions or dispersions. The carrier may be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, polyol (for example, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, and the like), suitable mixtures thereof, and vegetable oils.

La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, por el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de surfactantes. Los vehículos no acuosos tales como un aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de maíz, aceite de girasol, o aceite de cacahuete y ésteres, tales como miristato de isopropilo, también se pueden usar como sistemas solventes para las composiciones de compuesto. Adicionalmente, se pueden añadir varios aditivos que mejoran la estabilidad, esterilidad, e isotonicidad de las composiciones, incluyen conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y tampones. La prevención de la acción de microorganismos se puede asegurar mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, y similares. En muchos casos, es deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio, y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable se puede provocar por el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. De acuerdo con la presente invención, however, cualquier vehículo, diluyente, o aditivo usado tiene que se compatible con los compuestos. The proper fluidity can be maintained, for example, by the use of a coating such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of dispersion and by the use of surfactants. Non-aqueous vehicles such as a cottonseed oil, sesame oil, olive oil, soybean oil, corn oil, sunflower oil, or peanut oil and esters, such as isopropyl myristate, can also be used. as solvent systems for compound compositions. Additionally, various additives that improve the stability, sterility, and isotonicity of the compositions can be added, including antimicrobial preservatives, antioxidants, chelating agents and buffers. The prevention of the action of microorganisms can be ensured by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and the like. In many cases, it is desirable to include isotonic agents, for example, sugars, sodium chloride, and the like. Prolonged absorption of the injectable pharmaceutical form may be caused by the use of agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin. In accordance with the present invention, however, any vehicle, diluent, or additive used has to be compatible with the compounds.

Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar por la incorporación de los compuestos utilizados en la práctica Sterile injectable solutions can be prepared by incorporating the compounds used in practice

de la presente invención en la cantidad requerida del disolvente apropiado con varios de los otros ingredientes, según se desee. of the present invention in the required amount of the appropriate solvent with several of the other ingredients, as desired.

Una formulación farmacológica de la presente invención se puede administrar al paciente en una formulación inyectable que contiene cualquier portador compatible, tal como diversos vehículos, adyuvantes, aditivos, y diluyentes; o los compuestos utilizados en la presente invención pueden administrarse por vía parenteral al paciente en forma de implantes subcutáneos de liberación lenta, o sistemas de administración dirigidos tales como los anticuerpos monoclonales, administración por vectores, matrices iontoforéticas, matrices poliméricas, liposomas y microesferas. Los ejemplos de sistemas de suministro útiles en la presente invención incluyen las patentes de Estados Unidos núms. 5,225,182; 5,169,383; 5,167,616; 4,959,217; 4,925,678; 4,487,603; 4,486,194; 4,447,233; 4,447,224; 4,439,196; y 4,475,196. Muchos otros implantes de este tipo, sistemas de suministro, y módulos son bien conocidos por aquellos con experiencia en la materia. A pharmacological formulation of the present invention can be administered to the patient in an injectable formulation containing any compatible carrier, such as various carriers, adjuvants, additives, and diluents; or the compounds used in the present invention can be administered parenterally to the patient in the form of slow-release subcutaneous implants, or directed delivery systems such as monoclonal antibodies, vector administration, iontophoretic matrices, polymeric matrices, liposomes and microspheres. Examples of delivery systems useful in the present invention include U.S. Patent Nos. 5,225,182; 5,169,383; 5,167,616; 4,959,217; 4,925,678; 4,487,603; 4,486,194; 4,447,233; 4,447,224; 4,439,196; and 4,475,196. Many other implants of this type, delivery systems, and modules are well known to those with experience in the field.

Una formulación farmacológica del compuesto utilizado en la presente invención se puede administrar oralmente al paciente. Los métodos convencionales tales como la administración del compuesto en tabletas, suspensiones, soluciones, emulsiones, cápsulas, polvos, jarabes y similares se pueden usar. Se prefieren las técnicas conocidas de administración por vía oral o intravenosa que conservan la actividad biológica. En una modalidad, el compuesto de la presente invento se puede administrar inicialmente por inyección intravenosapara llevar los niveles en sangre a un nivel adecuado. Después se mantienen los niveles del paciente por una forma de dosificación oral, aunque se pueden usar otras formas de administración en dependencia de la condición del paciente y como se indicó anteriormente. A pharmacological formulation of the compound used in the present invention can be administered orally to the patient. Conventional methods such as administration of the compound in tablets, suspensions, solutions, emulsions, capsules, powders, syrups and the like can be used. Known techniques of oral or intravenous administration that conserve biological activity are preferred. In one embodiment, the compound of the present invention may initially be administered by intravenous injection to bring blood levels to a suitable level. The patient's levels are then maintained by an oral dosage form, although other forms of administration may be used depending on the patient's condition and as indicated above.

En general, la dosis activa del compuesto para humanos está en el intervalo de 1ng/kg a aproximadamente 20-100 mg/kg peso corporal por día, preferentemente aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 2-10 mg/kg peso corporal por día, en un régimen de una dosis por día o dos o tres o más veces por día por un periodo de 1-2 semanas o más, preferentemente por 24 a 48 h o por infusión continua durante un periodo de 1-2 semanas o más. In general, the active dose of the compound for humans is in the range of 1ng / kg to about 20-100 mg / kg body weight per day, preferably about 0.01 mg to about 2-10 mg / kg body weight per day, in a regimen of one dose per day or two or three or more times per day for a period of 1-2 weeks or more, preferably for 24 to 48 hours per continuous infusion over a period of 1-2 weeks or more.

Administración de compuestos de la presente invención a los ojos Administration of compounds of the present invention to the eyes

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse al ojo por vía tópica o en forma de una inyección, tal como una inyección intravítrea, una inyección sub-retiniana o una inyección bilateral. Más información sobre la administración de los compuestos de la presente invención se puede encontrar en Tolentino y otros, Retina 24 (2004) 132-138; Reich y otros, Molecular vision 9 (2003) 210-216. The compounds of the present invention can be administered to the eye topically or in the form of an injection, such as an intravitreal injection, a sub-retinal injection or a bilateral injection. More information on the administration of the compounds of the present invention can be found in Tolentino et al., Retina 24 (2004) 132-138; Reich et al., Molecular vision 9 (2003) 210-216.

Administración pulmonar de compuestos de la presente invención Pulmonary administration of compounds of the present invention

Las composiciones terapéuticas de la presente invención se administran preferentemente en el pulmón mediante la inhalación de un aerosol que contiene estas composiciones/compuestos, o por la instilación intranasal o intratraqueal de dichas composiciones. La formulación de las composiciones en liposomas puede beneficiar la absorción. Adicionalmente, las composiciones pueden incluir un líquido PFC tal como el perflubron, y las composiciones se pueden formular como un complejo de los compuestos de la invención con polietilenimina (PEI). The therapeutic compositions of the present invention are preferably administered in the lung by inhalation of an aerosol containing these compositions / compounds, or by intranasal or intratracheal instillation of said compositions. The formulation of the liposome compositions may benefit absorption. Additionally, the compositions may include a PFC liquid such as perflubron, and the compositions may be formulated as a complex of the compounds of the invention with polyethyleneimine (PEI).

Para más información sobre la administarción pulmonar de las composiciones farmacéuticas ver Weiss y otros, Human gene therapy 10:2287-2293 (1999); Densmore y otros, Molecular therapy 1:180-188 (1999); Gautam y otros, Molecular therapy 3:551-556 (2001); y Shahiwala & Misra, AAPS PharmSciTech 5 (2004). Formulaciones respiratorias adicionales para el ARNip se describen en la solicitud de patente de Estados Unidos núm. 2004/0063654 de Davis y otros. For more information on the pulmonary administration of pharmaceutical compositions see Weiss et al., Human gene therapy 10: 2287-2293 (1999); Densmore et al., Molecular therapy 1: 180-188 (1999); Gautam et al., Molecular therapy 3: 551-556 (2001); and Shahiwala & Misra, AAPS PharmSciTech 5 (2004). Additional respiratory formulations for siRNA are described in U.S. Patent Application No. 2004/0063654 by Davis et al.

Las formulaciones adicionales para la administración mejorada de los compuestos de la presente invención pueden incluir compuestos no formulados, compuestos unidos covalentemente al colesterol, y compuestos unidos a anticuerpos dirigidos (Song y otros, Antibody mediated in vivo delivery of small interfering RNAs via cell-surface receptors, Nat Biotechnol. 2005 jun;23(6):709-17). Additional formulations for improved administration of the compounds of the present invention may include non-formulated compounds, compounds covalently bound to cholesterol, and compounds bound to targeted antibodies (Song et al., Antibody mediated in vivo delivery of small interfering RNAs via cell-surface receptors, Nat Biotechnol. 2005 Jun; 23 (6): 709-17).

LISTA DE SECUENCIAS SEQUENCE LIST

<110> Quark Biotech, Inc. Atugen AG <110> Quark Biotech, Inc. Atugen AG

<120> USOS TERAPÉUTICOS DE LOS INHIBIDORES DE RTP801 <120> THERAPEUTIC USES OF RTP801 INHIBITORS

<130> B7132 -CA/CS <130> B7132 -CA / CS

<140> EP05786796.2 <140> EP05786796.2

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gaauacacuu gauguucaa gaauacacuu gauguucaa

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aucuagaacu guuuacaug aucuagaacu guuuacaug

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<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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ccaugccuag ccuuuggga ccaugccuag ccuuuggga

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cuagaacugu uuacaugaa cuagaacugu uuacaugaa

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<212> ARN <212> RNA

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gaacuguuua caugaagau gaacuguuua caugaagau

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ggucuuccau cuagaacug ggucuuccau cuagaacug

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ccaucuagaa cuguuuaca ccaucuagaa cuguuuaca

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cuuccaucua gaacuguuu cuuccaucua gaacuguuu

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ucuuccaucu agaacuguu ucuuccaucu agaacuguu

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caucuagaac uguuuacau caucuagaac uguuuacau

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uccaucuaga acuguuuac uccaucuaga acuguuuac

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uuccaucuag aacuguuua uuccaucuag aacuguuua

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gucuuccauc uagaacugu gucuuccauc uagaacugu

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caaguauuaa gaccuaugc caaguauuaa gaccuaugc

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guauuaagac cuaugcaau guauuaagac cuaugcaau

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cacuugaugu ucaaguauu cacuugaugu ucaaguauu

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guucaaguau uaagaccua guucaaguau uaagaccua

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aaguauuaag accuaugca aaguauuaag accuaugca

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uguucaagua uuaagaccu uguucaagua uuaagaccu

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aguguauuca ugaacagug aguguauuca ugaacagug

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acacaacuca augagcuuc acacaacuca augagcuuc

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uuucaagugu caaagaucc uuucaagugu caaagaucc

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auaagguaca ugcuacaca auaagguaca ugcuacaca

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ccuacucuua cauucaugc ccuacucuua cauucaugc

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uuccuacucu uacauucau uuccuacucu uacauucau

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uccuacucuu acauucaug uccuacucuu acauucaug

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gucuuaauac uugaacauc gucuuaauac uugaacauc

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uccugcagca gcugcauca uccugcagca gcugcauca

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uugaacauca aguguauuc uugaacauca aguguauuc

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ugaacaucaa guguauuca ugaacaucaa guguauuca

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acuugaacau caaguguau aquugaacau caaguguau

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aacaucaagu guauucaug aacaucaagu guauucaug

19 19

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cacuguugcu gcuguccag cacuguugcu gcuguccag

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aucaagugua uucaugaac aucaagugua uucaugaac

19 19

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acaucaagug uauucauga acaucaagug uauucauga

19 19

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ccacuguugc ugcugucca ccacuguugc ugcugucca

19 19

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ugcaucaggu uggcacaca ugcaucaggu uggcacaca

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caucaagugu auucaugaa caucaagugu auucaugaa

19 19

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gcagcagcug caucagguu gcagcagcug caucagguu

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uugcugcugu ccagggacu uugcugcugu ccagggacu

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caugcuacag uacugaggg caugcuacag uacugaggg

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gcugcaucag guuggcaca gcugcaucag guuggcaca

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cuugaacauc aaguguauu cuugaacauc aaguguauu

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gaacaucaag uguauucau gaacaucaag uguauucau

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uccugcagca gcugcauca uccugcagca gcugcauca

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ucuucaugua aacaguucu ucuucaugua aacaguucu

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cauguaaaca guucuagau cauguaaaca guucuagau

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ucccaaaggc uaggcaugg ucccaaaggc uaggcaugg

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<212> ARN <212> RNA

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uucauguaaa caguucuag uucauguaaa caguucuag

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aucuucaugu aaacaguuc aucuucaugu aaacaguuc

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<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 225 <400> 225

caguucuaga uggaagacc caguucuaga uggaagacc

<210> 226 <210> 226

<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 226 <400> 226

uguaaacagu ucuagaugg uguaaacagu ucuagaugg

<210> 227 <210> 227

<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 227 <400> 227

aaacaguucu agauggaag aaacaguucu agauggaag

<210> 228 <210> 228

<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 228 <400> 228

cuucauguaa acaguucua cuucauguaa acaguucua

<210> 229 <210> 229

<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

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<400> 229 <400> 229

aacaguucua gauggaaga aacaguucua gauggaaga

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<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 230 <400> 230

auguaaacag uucuagaug auguaaacag uucuagaug

<210> 231 <210> 231

<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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aguucuagau ggaagaccc aguucuagau ggaagaccc

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<211> 19 <211> 19

<212> ARN <212> RNA

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guaaacaguu cuagaugga guaaacaguu cuagaugga

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<212> ARN <212> RNA

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ucauguaaac aguucuaga ucauguaaac aguucuaga

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<212> ARN <212> RNA

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uaaacaguuc uagauggaa uaaacaguuc uagauggaa

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acaguucuag auggaagac acaguucuag auggaagac

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<212> ARN <212> RNA

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gcauaggucu uaauacuug gcauaggucu uaauacuug

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auugcauagg ucuuaauac auugcauagg ucuuaauac

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ggucuuaaua cuugaacau ggucuuaaua cuugaacau

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aauacuugaa caucaagug aauacuugaa caucaagug

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aacagccccu ggaucuugg aacagccccu ggaucuugg

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uaggucuuaa uacuugaac uaggucuuaa uacuugaac

19 19

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cauaggucuu aauacuuga cauaggucuu aauacuuga

19 19

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ugcauagguc uuaauacuu ugcauagguc uuaauacuu

19 19

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aggucuuaau acuugaaca aggucuuaau aquugaaca

19 19

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guucuagaug gaagaccca guucuagaug gaagaccca

19 19

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ccaggaagcu cauugaguug u ccaggaagcu cauugaguug u

21 twenty-one

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ccaucugggu cuuccaucua g ccaucugggu cuuccaucua g

21 twenty-one

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ggaugugugu guagcaugua c ggaugugugu guagcaugua c

21 twenty-one

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caaguguguu uguuguuugu u caaguguguu uguuguuugu u

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<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

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ccucaguacu guagcaugga a ccucaguacu guagcaugga to

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<212> ARN <212> RNA

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gaccaagugu guuuguuguu u gaccaagugu guuuguuguu u

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gcuuccgagu caucaagaag a gcuuccgagu caucaagaag a

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ggaggugggg gaauaguguu u ggaggugggg gaauaguguu u

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caguacugua gcauggaaca a caguacugua gcauggaaca a

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<211> 21 <211> 21

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gaauacacuu gauguucaag u gaauacacuu gauguucaag u

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<212> ARN <212> RNA

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ggacacauac cccucaguac u ggacacauac cccucaguac u

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ggaggugguu ugugusucuu a ggaggugguu ugugusucuu a

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ggaucuuuga cacuugaaaa a ggaucuuuga cacuugaaaa a

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uguguagcau guaccuuauu a uguguagcau guaccuuauu to

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caacaaggcu uccagcugga u caacaaggcu uccagcugga u

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cacuugggau cuuugacacu u cacuugggau cuuugacacu u

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<212> ARN <212> RNA

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caucacuacu gaccuguugu a caucacuacu gaccuguugu a

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<212> ARN <212> RNA

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guguguguag cauguaccuu a guguguguag cauguaccuu a

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gcaugaaugu aagaguagga a gcaugaaugu aagaguagga a

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gacagcagca acaguggcuu c gacagcagca acaguggcuu c

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ugaugcagcu gcugcaggag a ugaugcagcu gcugcaggag a

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ugaauacacu ugauguucaa g ugaauacacu ugauguucaa g

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<212> ARN <212> RNA

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caugaauaca cuugauguuc a caugaauaca cuugauguuc a

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ggacagcagc aacaguggcu u ggacagcagc aacaguggcu u

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<212> ARN <212> RNA

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guucaugaau acacuugaug u guucaugaau acacuugaug u

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ucaugaauac acuugauguu c ucaugaauac acuugauguu c

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ucccuggaca gcagcaacag u ucccuggaca gcagcaacag u

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<212> ARN <212> RNA

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agucccugga cagcagcaac a agucccugga cagcagcaac a

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<212> ARN <212> RNA

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gaauacacuu gauguucaag u gaauacacuu gauguucaag u

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cuagaacugu uuacaugaag a cuagaacugu uuacaugaag a

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ccaucuagaa cuguuuacau g ccaucuagaa cuguuuacau g

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cuuccaucua gaacuguuua c cuuccaucua gaacuguuua c

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<212> ARN <212> RNA

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ucuuccaucu agaacuguuu a ucuuccaucu agaacuguuu a

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<400> 283 <400> 283

caucuagaac uguuuacaug a caucuagaac uguuuacaug a

<210> 284 <210> 284

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

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gggucuucca ucuagaacug u gggucuucca ucuagaacug u

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<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

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uccaucuaga acuguuuaca u uccaucuaga acuguuuaca u

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<212> ARN <212> RNA

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ucuagaacug uuuacaugaa g ucuagaacug uuuacaugaa g

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<212> ARN <212> RNA

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uuccaucuag aacuguuuac a uuccaucuag aacuguuuac a

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<212> ARN <212> RNA

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gucuuccauc uagaacuguu u gucuuccauc uagaacuguu u

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<212> ARN <212> RNA

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ugauguucaa guauuaagac c ugauguucaa guauuaagac c

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<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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guucaaguau uaagaccuau g guucaaguau uaagaccuau g

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<212> ARN <212> RNA

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ucaaguauua agaccuaugc a ucaaguauua agaccuaugc a

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<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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gauguucaag uauuaagacc u gauguucaag uauuaagacc u

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<212> ARN <212> RNA

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uucaaguauu aagaccuaug c uucaaguauu aagaccuaug c

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<212> ARN <212> RNA

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cugggucuuc caucuagaac u cugggucuuc caucuagaac u

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<212> ARN <212> RNA

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ugggucuucc aucuagaacu g ugggucuucc aucuagaacu g

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<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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acaacucaau gagcuuccug g acaacucaau gagcuuccug g

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<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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cuagauggaa gacccagaug g Cuagauggaa Gacccagaug G

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<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

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guacaugcua cacacacauc c guacaugcua cacacacauc c

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<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 299 <400> 299

aacaaacaac aaacacacuu g aacaaacaac aaacacacuu g

<210> 300 <210> 300

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 300 <400> 300

uuccaugcua casuacugag g uuccaugcua casuacugag g

<210> 301 <210> 301

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 301 <400> 301

aaacaacaaa cacacuuggu c aaacaacaaa cacacuuggu c

<210> 302 <210> 302

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 302 <400> 302

ucuucuugau gacucggaag c ucuucuugau gacucggaag c

<210> 303 <210> 303

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 303 <400> 303

aaacacuauu cccccaccuc c aaacacuauu cccccaccuc c

<210> 304 <210> 304

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 304 <400> 304

uuguuccaug cuacaguacu g uuguuccaug cuacaguacu g

<210> 305 <210> 305

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 305 <400> 305

acuugaacau caaguguauu c aquugaacau caaguguauu c

<210> 306 <210> 306

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 306 <400> 306

uugcauaggu cuuaauacuu g uugcauaggu cuuaauacuu g

<210> 307 <210> 307

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 307 <400> 307

uagucuccac cccaaaaguu c uagucuccac cccaaaaguu c

<210> 308 <210> 308

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 308 <400> 308

aguacugagg gguauguguc c aguacugagg gguauguguc c

<210> 309 <210> 309

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 309 <400> 309

uaagauacac aaaccaccuc c uaagauacac aaaccaccuc c

21 twenty-one

<210> 310 <210> 310

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 310 <400> 310

uuuuucaagu gucaaagauc c uuuuucaagu gucaaagauc c

21 twenty-one

<210> 311 <210> 311

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 311 <400> 311

aacaguucua gauggaagac c aacaguucua gauggaagac c

21 twenty-one

<210> 312 <210> 312

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 312 <400> 312

uaauaaggua caugcuacac a uaauaaggua caugcuacac a

21 twenty-one

<210> 313 <210> 313

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 313 <400> 313

auccagcugg aagccuuguu g auccagcugg aagccuuguu g

21 twenty-one

<210> 314 <210> 314

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 314 <400> 314

aagugucaaa gaucccaagu g aagugucaaa gaucccaagu g

21 twenty-one

<210> 315 <210> 315

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 315 <400> 315

uacaacaggu caguagugau g uacaacaggu caguagugau g

21 twenty-one

<210> 316 <210> 316

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 316 <400> 316

uaagguacau gcuacacaca c uaagguacau gcuacacaca c

<210> 317 <210> 317

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 317 <400> 317

uuccuacucu uacauucaug c uuccuacucu uacauucaug c

<210> 318 <210> 318

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 318 <400> 318

gaagccacug uugcugcugu c gaagccacug uugcugcugu c

<210> 319 <210> 319

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 319 <400> 319

ucuccugcag cagcugcauc a ucuccugcag cagcugcauc a

<210> 320 <210> 320

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 320 <400> 320

cuugaacauc aaguguauuc a cuugaacauc aaguguauuc a

<210> 321 <210> 321

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 321 <400> 321

ugaacaucaa guguauucau g ugaacaucaa guguauucau g

<210> 322 <210> 322

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 322 <400> 322

aagccacugu ugcugcuguc c aagccacugu ugcugcuguc c

<210> 323 <210> 323

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 323 <400> 323

acaucaagug uauucaugaa c acaucaagug uauucaugaa c

<210> 324 <210> 324

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 324 <400> 324

gaacaucaag uguauucaug a gaacaucaag uguauucaug a

<210> 325 <210> 325

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 325 <400> 325

acuguugcug cuguccaggg a acuguugcug cuguccaggg a

<210> 326 <210> 326

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 326 <400> 326

uguugcugcu guccagggac u uguugcugcu guccagggac u

<210> 327 <210> 327

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 327 <400> 327

acuugaacau caaguguauu c aquugaacau caaguguauu c

<210> 328 <210> 328

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 328 <400> 328

ucuucaugua aacaguucua g ucuucaugua aacaguucua g

<210> 329 <210> 329

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 329 <400> 329

cauguaaaca guucuagaug g cauguaaaca guucuagaug g

<210> 330 <210> 330

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 330 <400> 330

guaaacaguu cuagauggaa g guaaacaguu cuagauggaa g

<210> 331 <210> 331

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 331 <400> 331

uaaacaguuc uagauggaag a uaaacaguuc uagauggaag a

<210> 332 <210> 332

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 332 <400> 332

ucauguaaac aguucuagau g ucauguaaac aguucuagau g

<210> 333 <210> 333

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 333 <400> 333

acaguucuag auggaagacc c acaguucuag auggaagacc c

<210> 334 <210> 334

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 334 <400> 334

auguaaacag uucuagaugg a auguaaacag uucuagaugg a

<210> 335 <210> 335

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 335 <400> 335

cuucauguaa acaguucuag a cuucauguaa acaguucuag a

<210> 336 <210> 336

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 336 <400> 336

uguaaacagu ucuagaugga a uguaaacagu ucuagaugga a

<210> 337 <210> 337

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 337 <400> 337

aaacaguucu agauggaaga c aaacaguucu agauggaaga c

<210> 338 <210> 338

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 338 <400> 338

ggucuuaaua cuugaacauc a ggucuuaaua cuugaacauc a

<210> 339 <210> 339

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 339 <400> 339

cauaggucuu aauacuugaa c cauaggucuu aauacuugaa c

21 twenty-one

<210> 340 <210> 340

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 340 <400> 340

ugcauagguc uuaauacuug a ugcauagguc uuaauacuug a

21 twenty-one

<210> 341 <210> 341

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 341 <400> 341

aggucuuaau acuugaacau c aggucuuaau acuugaacau c

21 twenty-one

<210> 342 <210> 342

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 342 <400> 342

gcauaggucu uaauacuuga a gcauaggucu uaauacuuga a

21 twenty-one

<210> 343 <210> 343

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 343 <400> 343

aguucuagau ggaagaccca g aguucuagau ggaagaccca g

21 twenty-one

<210> 344 <210> 344

<211> 21 <211> 21

<212> ARN <212> RNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 344 <400> 344

caguucuaga uggaagaccc a caguucuaga uggaagaccc a

21 twenty-one

Claims (30)

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto ARNip que tiene la estructura de hebra doble: 1. An siRNA compound that has the double strand structure: 5' (N)x -Z 3' (cadena antisentido) 5 '(N) x -Z 3' (antisense chain) 3' Z'-(N')y 5' (cadena sentido), 3 'Z' - (N ') and 5' (sense chain), donde cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y cada uno de (N)x y (N')y es un oligómero en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente; en donde cada uno de x y y es un entero entre 19 y 40; en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está covelentemente unido al terminal 3' de la hebra en la cual está presente; y en donde la secuencia de (N)x comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos que tiene una cualquiera de las siguientes secuencias: where each N and N 'is a ribonucleotide that can be modified or unmodified in its sugar residue and each of (N) xy (N') and is an oligomer in which each consecutive N or N 'binds to the next N or N 'by a covalent bond; where each of x and y is an integer between 19 and 40; wherein each of Z and Z 'may be present or absent, but if present it is dTdT and is connected to the terminal 3' of the strand in which it is present; and wherein the sequence of (N) x comprises a first stretch of contiguous nucleotides having any one of the following sequences: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.:66); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. con núm. de ident.:74); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. con núm. de ident.:75); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. con núm. de ident.:77); UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. con núm. de ident.:79); y AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. con núm. de ident.:91), AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. With identification number: 66); UUCUAGAUGGAAGACCCAG (sec. With identification number: 74); UUGAACAUCAAGUGUAUUC (sec. With identification number: 75); AAAAAUAUUGCAUAGGUCU (sec. With identification number: 77); UACUUGAACAUCAAGUGUA (sec. With identification number: 79); Y AACUCAAUGAGCUUCCUGG (sec. With ID No.:91), y la secuencia de (N')y comprende un segundo tramo de los nucleótidos contiguos, y en donde la estructura de hebra doble se genera por pareamiento de bases entre el primer tramo y el segundo tramo. and the sequence of (N ') and comprises a second segment of the adjacent nucleotides, and wherein the double strand structure is generated by base pairing between the first section and the second section.

2. 2.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde se modifica un residuo azúcar en al menos un ribonucleótido. A compound according to claim 1, wherein a sugar residue is modified in at least one ribonucleotide.

3. 3.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el residuo azúcar se modifica reemplazando un -OH en la posición 2' con -H, -OCH3,-OCH2CH3,-OCH2CH2CH3,-NH2, o -F. A compound according to claim 2, wherein the sugar residue is modified by replacing a -OH in the 2 'position with -H, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3, -NH2, or -F.

4. Four.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el -OH se remplaza con -OCH3. A compound according to claim 3, wherein the -OH is replaced with -OCH3.

5. 5.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el enlace covalente es un enlace fosfodiéster.; x = y, preferentemente x = y = 19; Z y Z' están ausentes; los ribonucleótidos alternos en cada una de las cadenas antisentido y sentido comprenden una modificación 2' -OCH3 en sus residuos azúcar; y los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena antisentido están modificados y los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena sentido no están modificados. A compound according to claim 4, wherein the covalent bond is a phosphodiester bond .; x = y, preferably x = y = 19; Z and Z 'are absent; alternate ribonucleotides in each of the antisense and sense chains comprise a 2'-OCH3 modification in their sugar residues; and the ribonucleotides at the 5 'and 3' terminals of the antisense chain are modified and the ribonucleotides at the 5 'and 3' terminals of the sense chain are not modified.

6. 6.

Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde x = y = 19. A compound according to claim 1, wherein x = y = 19.

7. 7.

Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el compuesto es fosforilado o no fosforilado. A compound according to any one of claims 1-6, wherein the compound is phosphorylated or non-phosphorylated.

8. 8.

Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6 y 7, en donde el dinucleótido dTdT está covalentemente unido al terminal 3' de la cadena antisentido o la cadena sentido. A compound according to any of claims 1-4, 6 and 7, wherein the dTdT dinucleotide is covalently linked to the 3 'terminal of the antisense chain or the sense chain.

9. 9.

Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la secuencia de (N)x comprende la siguiente secuencia: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. con núm. de ident.: 66). A compound according to any of claims 1-8, wherein the sequence of (N) x comprises the following sequence: AGCUGCAUCAGGUUGGCAC (sec. With identification number: 66).

10. 10.

Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y 9 con la estructura: A compound according to any of claims 1-7 and 9 with the structure:

en donde en los ribonucleótidos alternos en las cadenas antisentido y sentido está presente una modificación 2'-OCH3 en el residuo azúcar de los ribonucleótidos; los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena antisentido comprender la modificación 2'-OCH3; los ribonucleótidos en los terminales 5' y 3' de la cadena sentido no están modificados; el ribonucleótido en cada uno del terminal 5' y el terminal 3' de la cadena antisentido y la cadena sentido es independientemente fosforilado o no fosforilado; y cada línea vertical representa el pareamiento de bases. wherein in the alternate ribonucleotides in the antisense and sense chains a 2'-OCH3 modification is present in the sugar residue of the ribonucleotides; the ribonucleotides at the 5 'and 3' terminals of the antisense chain comprise the 2'-OCH3 modification; the ribonucleotides at the 5 'and 3' terminals of the sense chain are not modified; the ribonucleotide in each of the 5 'terminal and the 3' terminal of the antisense chain and the sense chain is independently phosphorylated or non-phosphorylated; and each vertical line represents the base pairing.

11. eleven.

Un compuesto de la reivindicación 10, en donde las cadenas sentido y antisentido no están fosforiladas en el terminal 3'. A compound of claim 10, wherein the sense and antisense chains are not phosphorylated at the 3 'terminal.

12. 12.

Un compuesto de la reivindicación 10, en donde las cadenas sentido y antisentido no están fosforiladas en los terminales 3' y 5'. A compound of claim 10, wherein the sense and antisense chains are not phosphorylated at the 3 'and 5' terminals.

13. 13.

Un compuesto de la reivindicación 10, en donde las cadenas sentido y antisentido están fosforiladas en los terminales 3' y 5'. A compound of claim 10, wherein the sense and antisense chains are phosphorylated at terminals 3 'and 5'.

14. 14.

Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 y un excipiente farmacéuticamente aceptable. A pharmaceutical composition comprising the compound of any of claims 1-13 and a pharmaceutically acceptable excipient.

15. fifteen.

El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para usar en el tratamiento de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, una trastorno microvascular o una enfermedad o lesión de la médula espinal. The compound of any one of claims 1-13 for use in the treatment of a respiratory disorder, an eye disease, a microvascular disorder or a spinal cord disease or injury.

16. 16.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 15, en el tratamiento de una enfermedad ocular. The compound for use according to claim 15, in the treatment of an eye disease.

17. 17.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la enfermedad ocular es el glaucoma. The compound for use according to claim 16, wherein the eye disease is glaucoma.

18. 18.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la enfermedad ocular es la degeneración macular. The compound for use according to claim 16, wherein the eye disease is macular degeneration.

19. 19.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 18, en donde la enfermedad ocular es la degeneración macular relacionada con la edad (AMD). The compound for use according to claim 18, wherein the eye disease is age-related macular degeneration (AMD).

20. twenty.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 19, en donde la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) es AMD húmeda. The compound for use according to claim 19, wherein the age-related macular degeneration (AMD) is wet AMD.

21. twenty-one.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la enfermedad ocular es secundaria a la diabetes. The compound for use according to claim 16, wherein the eye disease is secondary to diabetes.

22. 22

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la enfermedad ocular es retinopatía diabética. The compound for use according to claim 21, wherein the eye disease is diabetic retinopathy.

23. 2. 3.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la enfermedad ocular es edema macular diabético (DME). The compound for use according to claim 21, wherein the eye disease is diabetic macular edema (DME).

24. 24.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 15, en el tratamiento de un trastorno microvascular. The compound for use according to claim 15, in the treatment of a microvascular disorder.

25. 25.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 24, en donde el trastorno microvascular es la insuficiencia renal aguda (ARF). The compound for use according to claim 24, wherein the microvascular disorder is acute renal failure (ARF).

26. 26.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 15, en el tratamiento de un trastorno respiratorio. The compound for use according to claim 15, in the treatment of a respiratory disorder.

27. 27.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el trastorno respiratorio es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD). The compound for use according to claim 26, wherein the respiratory disorder is chronic obstructive pulmonary disease (COPD).

28. 28.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el trastorno respiratorio es asma. The compound for use according to claim 26, wherein the respiratory disorder is asthma.

29. 29.

El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el trastorno respiratorio es el enfisema. The compound for use according to claim 26, wherein the respiratory disorder is emphysema.

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El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el trastorno respiratorio es la bronquitis crónica. The compound for use according to claim 26, wherein the respiratory disorder is chronic bronchitis.