ES2387431B2 - Use of p53 inhibitors to reduce intake and to reduce body weight - Google Patents

Abstract

Uso de inhibidores de p53 para reducir la ingesta y para reducir el peso corporal.#La presente invención se refiere al uso de inhibidores de p53 a nivel hipotalámico para reducir la ingesta de alimentos y para la reducción del peso corporal en el tratamiento de la obesidad o de trastornos metabólicos asociados a la obesidad.Use of p53 inhibitors to reduce intake and to reduce body weight. # The present invention relates to the use of p53 inhibitors at the hypothalamic level to reduce food intake and to reduce body weight in the treatment of obesity. or of metabolic disorders associated with obesity.

Description

Uso de inhibidores de p53 para reducir la ingesta y para reducir el peso corporal Use of p53 inhibitors to reduce intake and to reduce body weight

La presente invención se enmarca en el campo de la Biología Molecular, la Biología Celular, la Biotecnología y la Biomedicina. La presente invención se refiere al uso de inhibidores de p53 a nivel hipotalámico para reducir la ingesta de alimentos y para la reducción del peso corporal en el tratamiento de la obesidad o de trastornos metabólicos asociados a la obesidad. The present invention is framed in the field of Molecular Biology, Cell Biology, Biotechnology and Biomedicine. The present invention relates to the use of p53 inhibitors at the hypothalamic level to reduce food intake and to reduce body weight in the treatment of obesity or metabolic disorders associated with obesity.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR STATE OF THE PREVIOUS TECHNIQUE

Los trastornos de la conducta alimentaria se caracterizan por anomalías graves en el comportamiento de la ingesta, y en muchos de ellos la base de dicho comportamiento se encuentra en una alteración psicológica. Algunos ejemplos de trastornos de este tipo son la bulimia nerviosa, la depresión atípica, el abuso de drogas psicoactivas, o el enanismo psicosocial. En general, el tratamiento en este tipo de trastornos requiere un enfoque multidimensional, incluyendo tanto terapia psicológica como la renutrición del paciente, siendo imprescindible para este último aspecto regular o controlar la ingesta de alimentos. Así, las terapias farmacológicas más comunes en este tipo de alteraciones incluyen, entre otros, antidepresivos, antagonistas opioides, y otros compuestos conducentes a evitar conductas impulsivas, con resultados sólo parciales. Eating disorders are characterized by serious abnormalities in the behavior of intake, and in many of them the basis of such behavior is in a psychological disorder. Some examples of disorders of this type are bulimia nervosa, atypical depression, abuse of psychoactive drugs, or psychosocial dwarfism. In general, the treatment in this type of disorders requires a multidimensional approach, including both psychological therapy and patient renutrition, being essential for the latter to regulate or control food intake. Thus, the most common pharmacological therapies in this type of alterations include, among others, antidepressants, opioid antagonists, and other compounds conducive to avoiding impulsive behaviors, with only partial results.

Por otra parte, los desórdenes metabólicos que provocan la obesidad se caracterizan principalmente por alteraciones producidas en los mecanismos reguladores del apetito y del gasto energético. Las alteraciones de este "balance energético" (energía ingerida versus energía gastada) darán lugar a variaciones en la masa corporal. La obesidad se caracteriza por un incremento de la cantidad de grasa que determina un exceso de peso hasta un punto donde está asociado con ciertas condiciones perjudiciales para la salud. Es el trastorno nutricional más importante a nivel mundial, con efectos seriamente adversos para la salud, habiéndose demostrado que la obesidad aumenta el riesgo a sufrir distintos trastornos tales como la resistencia a insulina, la diabetes tipo 2, la osteoartritis, la apnea del sueño, y ciertos tipos de cánceres, asociándose con un aumento en la morbilidad y mortalidad, de tal manera que la pérdida de peso permite disminuir significativamente estos riesgos. De hecho, es fundamental destacar que una pequeña pérdida de peso en los pacientes obesos se acompaña de mejorías significativas en los distintos factores de riesgo como la tensión arterial, la tolerancia a la glucosa y la concentración de lípidos séricos. On the other hand, the metabolic disorders that cause obesity are mainly characterized by alterations produced in the mechanisms regulating appetite and energy expenditure. Alterations of this "energy balance" (energy ingested versus energy expended) will lead to variations in body mass. Obesity is characterized by an increase in the amount of fat that determines excess weight to a point where it is associated with certain conditions harmful to health. It is the most important nutritional disorder worldwide, with serious adverse health effects, and it has been shown that obesity increases the risk of suffering various disorders such as insulin resistance, type 2 diabetes, osteoarthritis, sleep apnea, and certain types of cancers, associated with an increase in morbidity and mortality, such that weight loss allows these risks to be significantly reduced. In fact, it is essential to highlight that a small weight loss in obese patients is accompanied by significant improvements in the different risk factors such as blood pressure, glucose tolerance and serum lipid concentration.

De este modo, se acepta que una reducción de al menos un 5% del peso corporal inicial es suficiente para obtener mejorías clínicamente significativas de los trastornos metabólicos asociados a la obesidad. Esta pérdida de peso en los pacientes obesos se asocia a: reducciones de las concentraciones de colesterol total, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y triglicéridos, y aumentos de las concentraciones de lipoproteínas de alta densidad (HDL) en pacientes con hiperlipemia; aumentos de la sensibilidad a la insulina y disminuciones de las concentraciones de glucosa e insulina en plasma en los pacientes con diabetes mellitus tipo 2; reducciones significativas de la presión arterial en los pacientes con hipertensión; aumento de la longevidad, de la autoestima y de las emociones positivas. Thus, it is accepted that a reduction of at least 5% of the initial body weight is sufficient to obtain clinically significant improvements in the metabolic disorders associated with obesity. This weight loss in obese patients is associated with: reductions in total cholesterol concentrations, low density lipoproteins (LDL) and triglycerides, and increases in concentrations of high density lipoproteins (HDL) in patients with hyperlipemia; increases in insulin sensitivity and decreases in plasma glucose and insulin concentrations in patients with type 2 diabetes mellitus; significant reductions in blood pressure in patients with hypertension; increased longevity, self-esteem and positive emotions.

Aunque sabemos que la obesidad es una enfermedad crónica y multifactorial, y que el enfoque del tratamiento debe en cierto modo comprender terapia dietaria y actividad física, la utilidad de la farmacoterapia para reducir el peso no debe ser subestimada. En este sentido, varios fármacos han llegado a ser utilizados en pacientes obesos (sibutramina, orlistat, rimonabant) disminuyendo el peso de los mismos y mejorando algunos de los factores de riesgo asociados a la obesidad. Sin embargo, distintos estudios han ido señalando que los efectos adversos que producen los fármacos son superiores a los beneficios que aportan. Así, el principio activo sibutramina, comercializado en España con el nombre Reductil® (laboratorios Abbott), estaba indicado -junto a dieta y ejerciciopara promover pérdidas de peso en pacientes obesos. Sin embargo, la Agencia Europea del Medicamento (EMEA en sus siglas en inglés) recomendó su suspensión en 2010 por haberse asociado con un incremento del riesgo de enfermedad cardiovascular. Además, el principio activo orlistat, comercializado en España con el nombre Xenical® (laboratorios Roche), evita que parte de la grasa de los alimentos se absorba y digiera en el intestino. Sin embargo, existen bastantes contraindicaciones para su consumo, ya que debido a que las grasas no son digeridas, éstas pasan íntegras por el conducto digestivo haciendo muy difícil que el paciente pueda contener su flujo. Además, la Agencia Americana del Medicamento (FDA, por sus siglas en inglés) ha informado del registro de 13 casos de daño hepático grave producido por el uso de orlistat. Asimismo, el principio activo rimonabant, comercializado en España con el nombre Acomplia® (laboratorios Sanofi-Aventis), ha sido el último tratamiento contra la obesidad que se ha lanzado al mercado. A finales de 2008, la EMEA concluyó que los beneficios de Acomplia® ya no justificaban los riesgos añadidos, y que éstos implicaban doblar la incidencia de desórdenes psiquiátricos (ansiedad y depresión) en los pacientes obesos o con sobrepeso, comparándolo con los pacientes que recibieron placebo. Although we know that obesity is a chronic and multifactorial disease, and that the treatment approach must somehow include dietary therapy and physical activity, the usefulness of pharmacotherapy to reduce weight should not be underestimated. In this sense, several drugs have been used in obese patients (sibutramine, orlistat, rimonabant), reducing their weight and improving some of the risk factors associated with obesity. However, different studies have indicated that the adverse effects produced by drugs are superior to the benefits they provide. Thus, the active substance sibutramine, marketed in Spain under the name Reductil® (Abbott laboratories), was indicated - together with diet and exercise to promote weight loss in obese patients. However, the European Medicines Agency (EMEA) recommended its suspension in 2010 because it was associated with an increased risk of cardiovascular disease. In addition, the active substance orlistat, marketed in Spain under the name Xenical® (Roche laboratories), prevents part of the fat in food from being absorbed and digested in the intestine. However, there are quite a few contraindications to its consumption, since because the fats are not digested, they pass completely through the digestive tract making it very difficult for the patient to contain their flow. In addition, the American Medicines Agency (FDA) has reported the record of 13 cases of serious liver damage caused by the use of orlistat. Likewise, the active substance rimonabant, marketed in Spain under the name Acomplia® (Sanofi-Aventis laboratories), has been the latest treatment against obesity that has been launched on the market. At the end of 2008, the EMEA concluded that the benefits of Acomplia® no longer justified the added risks, and that these involved doubling the incidence of psychiatric disorders (anxiety and depression) in obese or overweight patients, comparing it with patients who received placebo.

Además de los numerosos efectos secundarios, aunque algunos de estos métodos consiguen una reducción inicial de peso, el mantenimiento a largo plazo de dicha reducción continúa siendo un desafío. La mayoría de personas que consiguen reducir su peso inicialmente, acaban volviendo a recuperarlo más tarde. In addition to the numerous side effects, although some of these methods achieve an initial weight reduction, the long-term maintenance of such reduction remains a challenge. Most people who manage to reduce their weight initially, end up regaining it later.

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Además de estos 3 fármacos que han llegado al mercado, en los últimos años, y mediante el desarrollo de nuevas tecnologías, se está investigando el diseño de nuevos tratamientos biológicos basados en la inhibición de señales estimuladoras del apetito localizadas en el sistema nervioso central, cuya eficacia todavía no ha sido demostrada. In addition to these 3 drugs that have reached the market, in recent years, and through the development of new technologies, the design of new biological treatments based on the inhibition of appetite stimulating signals located in the central nervous system, whose Efficacy has not yet been proven.

La ghrelina es la única hormona sintetizada en nuestro organismo, principalmente en el estómago, que incrementa la ingesta. Para ello, la ghrelina desencadena una serie de procesos moleculares en el hipotálamo que finalmente producen el incremento de los niveles de ciertos neuropéptidos orexigénicos. Para desencadenar estas vías moleculares, la ghrelina necesita activar la proteína kinasa activada por AMP (AMPK) en el hipotálamo. Sin embargo, los mecanismos moleculares iniciados por el receptor de ghrelina y que llevan a la activación de AMPK no se conocen. Ghrelin is the only hormone synthesized in our body, mainly in the stomach, which increases intake. To do this, ghrelin triggers a series of molecular processes in the hypothalamus that ultimately produce the increase in the levels of certain orexigenic neuropeptides. To trigger these molecular pathways, ghrelin needs to activate the AMP-activated protein kinase (AMPK) in the hypothalamus. However, the molecular mechanisms initiated by the ghrelin receptor and that lead to the activation of AMPK are not known.

p53 (tumor protein p53) es una proteína estudiada principalmente como un supresor de tumores en humanos y otros mamíferos. La deleción o mutación de p53 está fuertemente asociada con un aumento de la susceptibilidad al cáncer. Sin embargo, publicaciones recientes están demostrando que p53 no sólo tiene un papel esencial en acciones oncogénicas, sino que también juega un rol importante en la longevidad y el envejecimiento, el metabolismo de la glucosa y el estrés (Jones, R. G. et al., Molecular Cell, 2005, 18 (3): 283-293; Matoba, S. et al., Science, 2006, 312 (5780): 1650-1653; Lee, C. H. et al., The EMBO Journal, 2007, 26 (23): 4812-4823; Zhao, Y. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2008, 283 (52): 36344-36353; Mathupala, S. P., Heese, C., and Pedersen, p53 (tumor protein p53) is a protein primarily studied as a tumor suppressor in humans and other mammals. The deletion or mutation of p53 is strongly associated with an increased susceptibility to cancer. However, recent publications are showing that p53 not only plays an essential role in oncogenic actions, but also plays an important role in longevity and aging, glucose metabolism and stress (Jones, RG et al., Molecular Cell, 2005, 18 (3): 283-293; Matoba, S. et al., Science, 2006, 312 (5780): 1650-1653; Lee, CH et al., The EMBO Journal, 2007, 26 (23 ): 4812-4823; Zhao, Y. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2008, 283 (52): 36344-36353; Mathupala, SP, Heese, C., and Pedersen,

P. L., The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272 (36): 22776-22780). P. L., The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272 (36): 22776-22780).

Recientemente se ha demostrado que la expresión de p53 se induce en los adipocitos de ratones deficientes en leptina, que son obesos y resistentes a insulina (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278: 25395-25400). La sobreexpresión de p53 suprime la actividad del promotor del gen lipogénico SREBP-1c. Por lo tanto, la activación de p53 disminuye la acumulación de grasa en los adipocitos (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278: 25395-25400). It has recently been shown that p53 expression is induced in the adipocytes of leptin-deficient mice, which are obese and insulin resistant (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278: 25395-25400) . Overexpression of p53 suppresses the activity of the promoter of the lipogenic gene SREBP-1c. Therefore, activation of p53 decreases fat accumulation in adipocytes (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278: 25395-25400).

La expresión de p53 en el tejido adiposo es también crucial, participando en el desarrollo de resistencia a la insulina (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087). La inhibición de la actividad de p53 en el tejido adiposo disminuye la expresión de citocinas proinflamatorias y mejora notablemente la resistencia a la insulina en ratones alimentados con una dieta alta en grasa (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087). Por el contrario, la activación de p53 en el tejido adiposo provoca resistencia a la insulina (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087). The expression of p53 in adipose tissue is also crucial, participating in the development of insulin resistance (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087). Inhibition of p53 activity in adipose tissue decreases proinflammatory cytokine expression and markedly improves insulin resistance in mice fed a high-fat diet (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087). In contrast, the activation of p53 in adipose tissue causes insulin resistance (Minamino, T. et al., Nature Medicine, 2009, 15: 1082-1087).

La esteatosis hepática es un desorden metabólico fuertemente asociado a la obesidad. p53 está implicado en los mecanismos moleculares de la lesión hepatocelular asociados con esteatosis. La expresión de p53 es elevada en el hígado de modelos de ratón obesos que presentan un hígado graso (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2004, 279:20571- 20575). Por otra parte, la deficiencia de p53 en los ratones obesos deficientes en leptina (ob/ob) provoca una notable mejora de los niveles plasmáticos de alanina aminotransferasa, demostrando que p53 está involucrada en los mecanismos de lesión hepatocelular (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2004, 279:20571- 20575). Hepatic steatosis is a metabolic disorder strongly associated with obesity. p53 is involved in the molecular mechanisms of hepatocellular injury associated with steatosis. The expression of p53 is high in the liver of obese mouse models that have a fatty liver (Yahagi, N. et al., The Journal of Biological Chemistry, 2004, 279: 20571-20755). On the other hand, p53 deficiency in obese leptin-deficient mice (ob / ob) causes a marked improvement in plasma alanine aminotransferase levels, demonstrating that p53 is involved in hepatocellular injury mechanisms (Yahagi, N. et al. ., The Journal of Biological Chemistry, 2004, 279: 20571-20755).

La sirtuina 1 (SIRT1 o Sirtuin1) es una deacetilasa dependiente de NAD+ que ejerce sus distintas acciones biológicas a través de numerosos factores de transcripción y microARNs, tales como FOXO1, FOXO3, Histones, Ku70, p300, HSF1, PPARy, PGC1a, PPARa, LXRs, SREBP-1c, UCP-2, PTP1B, MyoD, TIP60, NF-kappa� y p53 (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4(12): e8322; Sasaki et al, Endocrinology, 2010, 151(6): 2556–2566; Haigis and Sinclair, Annual Review of Pathology 2010, 5: 253–295). Así, se sabe que en algunas ocasiones SIRT1 actúa sobre supresores de tumores tales como p53, produciendo su deacetilación y por tanto su inactivación, con el efecto final de restaurar la progresión normal del ciclo celular (Kim E.J. et al, Molecular Cell, 2007, 28 (2): 277-290). Sin embargo, la interacción entre SIRT1 y p53 es compleja y específica de cada tejido (Nemoto S. et al., Science, 2004, Sirtuin 1 (SIRT1 or Sirtuin1) is a NAD + dependent deacetylase that exerts its different biological actions through numerous transcription factors and microRNAs, such as FOXO1, FOXO3, Histons, Ku70, p300, HSF1, PPARy, PGC1a, PPARa, LXRs, SREBP-1c, UCP-2, PTP1B, MyoD, TIP60, NF-kappa� and p53 (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4 (12): e8322; Sasaki et al, Endocrinology, 2010, 151 (6): 2556–2566; Haigis and Sinclair, Annual Review of Pathology 2010, 5: 253–295). Thus, it is known that sometimes SIRT1 acts on tumor suppressors such as p53, producing its deacetylation and therefore its inactivation, with the final effect of restoring the normal progression of the cell cycle (Kim EJ et al, Molecular Cell, 2007, 28 (2): 277-290). However, the interaction between SIRT1 and p53 is complex and specific to each tissue (Nemoto S. et al., Science, 2004,

306: 2105-2108). Así, mientras que en procesos tumorales SIRT1 reprime a p53 (Kim E.J. et al, Molecular Cell, 2007, 28 (2): 277-290), en tejidos periféricos (tejido hepático y músculo-esquelético) y bajo condiciones alimentarias normales, es p53 quien reprime a SIRT1, mientras que bajo condiciones de ayuno en estos tejidos p53 participa en la estimulación de la transcripción de SIRT1 (Nemoto S. et al., Science, 2004, 306: 2105-2108). La complejidad en las interrelaciones entre ambas proteínas se ha puesto de manifiesto al estudiar otras funciones biológicas, habiéndose demostrado que algunas de las funciones dependientes de p53, tales como la apoptosis y mecanismos relacionados con el desarrollo, son independientes de regulación por SIRT1 (Kamel C. et al., Aging cell, 2006, 5 (1): 81-88). 306: 2105-2108). Thus, while in tumor processes SIRT1 represses p53 (Kim EJ et al, Molecular Cell, 2007, 28 (2): 277-290), in peripheral tissues (liver and musculoskeletal tissue) and under normal food conditions, it is p53 who represses SIRT1, while under fasting conditions in these tissues p53 participates in the stimulation of SIRT1 transcription (Nemoto S. et al., Science, 2004, 306: 2105-2108). The complexity in the interrelationships between the two proteins has been revealed when studying other biological functions, having shown that some of the functions dependent on p53, such as apoptosis and development-related mechanisms, are independent of regulation by SIRT1 (Kamel C et al., Aging cell, 2006, 5 (1): 81-88).

Recientemente, se ha descrito que SIRT1 actúa sobre la ingesta a nivel hipotalámico, aumentando la respuesta a la ghrelina en condiciones de restricción alimentaria (Satoh A. et al., The Journal of Neuroscience, 2010, 30(30): 10220-10232). También se ha demostrado que la inhibición farmacológica y genética de SIRT1 a nivel hipotalámico es capaz de reducir la ingesta en ratas, contribuyendo a la pérdida de peso (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4(12): e8322). Además, la solicitud de patente WO2010042868 describe un método para tratar la obesidad mediante la administración de inhibidores farmacológicos de SIRT1, entre estos últimos sirtinol y Ex 527. Sin embargo, uno de los problemas de esta última aproximación es que los inhibidores e inductores farmacológicos de SIRT1 no son tan Recently, it has been described that SIRT1 acts on ingestion at the hypothalamic level, increasing the response to ghrelin under conditions of food restriction (Satoh A. et al., The Journal of Neuroscience, 2010, 30 (30): 10220-10232) . It has also been shown that the pharmacological and genetic inhibition of SIRT1 at the hypothalamic level is capable of reducing intake in rats, contributing to weight loss (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4 (12): e8322) . In addition, patent application WO2010042868 describes a method for treating obesity by administering pharmacological inhibitors of SIRT1, between the latter sirtinol and Ex 527. However, one of the problems of this latter approach is that pharmacological inhibitors and inducers of SIRT1 are not so

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específicos como los genéticos; así, por ejemplo, se sospecha que inductores farmacológicos de SIRT1 como el resveratrol, no consiguen activar la ingesta debido, por un lado, a que ejerce efectos opuestos simultáneos sobre SIRT1 y sobre otras dianas tales como AMPK, lo cual contrarresta su efecto sobre SIRT1, y por otro, a que su eficacia para alcanzar a los grupos neuronales específicos donde está SIRT1 es baja (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4(12): e8322). Por ello, se necesitan alternativas capaces de alcanzar a las dianas hipotalámicas que intervienen en la ingesta con mayor eficacia, y que tengan efectos sobre éstas de forma más específica, como pueden ser los inhibidores genéticos. En cuanto a la inhibición genética de SIRT1, el mayor problema que puede plantear el abordar SIRT1 como una diana anti-obesidad, es que al ser una deacetilasa que actua sobre múltiples moléculas que ejercen acciones biológicas muy diversas, es muy probable que la inhibición hipotalámica de SIRT1 provoque otros efectos fisiológicos que todavía desconocemos y, es más que predecible que algunos de esos efectos serían no deseables. specific as the genetic ones; Thus, for example, it is suspected that pharmacological inducers of SIRT1, such as resveratrol, fail to activate the intake due, on the one hand, to exert simultaneous opposite effects on SIRT1 and on other targets such as AMPK, which counteracts its effect on SIRT1 , and on the other, that its effectiveness in reaching specific neuronal groups where SIRT1 is low (Cakir I. et al., PLoS ONE, 2009, 4 (12): e8322). Therefore, alternatives capable of reaching the hypothalamic targets that intervene in the intake more effectively, and that have more specific effects on them, such as genetic inhibitors, are needed. As for the genetic inhibition of SIRT1, the biggest problem that SIRT1 can address as an anti-obesity target is that since it is a deacetylase that acts on multiple molecules that exert very diverse biological actions, it is very likely that hypothalamic inhibition of SIRT1 causes other physiological effects that we still do not know and, it is more than predictable that some of these effects would be undesirable.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN DESCRIPTION OF THE INVENTION

La presente invención se refiere al nuevo uso de inhibidores de p53 a nivel hipotalámico para reducir la ingesta de alimentos (agentes anorexigénicos), y que también pueden ser útiles para reducir el peso corporal, por ejemplo en el tratamiento de aquellos trastornos donde es importante alcanzar una reducción de peso significativa, tales como la obesidad u otros trastornos metabólicos asociados a la obesidad. The present invention relates to the new use of p53 inhibitors at the hypothalamic level to reduce food intake (anorexigenic agents), and which may also be useful for reducing body weight, for example in the treatment of those disorders where it is important to achieve a significant weight reduction, such as obesity or other metabolic disorders associated with obesity.

Los autores de la presente invención han demostrado que la inhibición genética de p53 con un ARN de interferencia para el mismo a nivel hipotalámico: a) disminuye la ingesta de alimentos en ratones, y b) impide la respuesta normal a la ghrelina (hormona que induce el apetito en condiciones normales), de modo que en dichos animales no se produce un aumento en la ingesta de alimentos cuando son estimulados con la administración de esta hormona. Por tanto, los autores de la presente invención han demostrado que la inhibición genética de p53 a nivel hipotalámico es eficaz como terapia anorexigénica y por tanto es eficaz en el tratamiento de trastornos donde es necesario regular o controlar la ingesta de alimentos, es decir, en alteraciones de la conducta alimentaria que pueden conllevar conductas impulsivas de ingesta, tales como la bulimia nerviosa, la depresión atípica, el abuso de drogas psicoactivas, o el enanismo psicosocial, dado que animales a los que se administra un ARN de interferencia para este gen a nivel hipotalámico han demostrado reducir su ingesta. Además, los autores han demostrado que la disminución de la ingesta provocada por el ARN de interferencia para p53 es específica, ya que la secuencia inactiva The authors of the present invention have shown that the genetic inhibition of p53 with an interfering RNA for it at the hypothalamic level: a) decreases food intake in mice, and b) prevents the normal response to ghrelin (hormone that induces appetite under normal conditions), so that in these animals there is no increase in food intake when they are stimulated with the administration of this hormone. Therefore, the authors of the present invention have shown that genetic inhibition of p53 at the hypothalamic level is effective as anorexigenic therapy and is therefore effective in the treatment of disorders where it is necessary to regulate or control food intake, that is, in alterations in eating behavior that can lead to impulsive intake behaviors, such as bulimia nervosa, atypical depression, psychoactive drug abuse, or psychosocial dwarfism, given that animals to which an interference RNA for this gene is administered to Hypothalamic level have been shown to reduce your intake. In addition, the authors have shown that the decrease in intake caused by RNA interference for p53 is specific, since the inactive sequence

o control (que recibe el nombre de sense, y que no interfiere en la expresión del gen p53) no bloqueó el efecto orexigénico (inductor de ingesta) de la ghrelina. Asimismo, la inhibición de p53 a nivel hipotalámico puede ser también eficaz en trastornos donde la reducción de peso corporal es necesaria para obtener una mejora clínica, como por ejemplo la obesidad, y los trastornos metabólicos asociados a la misma, dado que la reducción en la ingesta de alimentos puede ayudar a reducir el peso corporal de forma más eficaz y con menos efectos secundarios que los fármacos que inducen cambios en el metabolismo de las grasas, por ejemplo. or control (which receives the name of sense, and that does not interfere with the expression of the p53 gene) did not block the orexigenic effect (intake inducer) of ghrelin. Likewise, the inhibition of p53 at the hypothalamic level may also be effective in disorders where the reduction of body weight is necessary to obtain a clinical improvement, such as obesity, and the associated metabolic disorders, since the reduction in Food intake can help reduce body weight more effectively and with less side effects than drugs that induce changes in fat metabolism, for example.

Por tanto, la presente invención pretende aportar una solución al tratamiento de la hiperfagia que acompaña a diversas alteraciones de la conducta alimentaria, así como a trastornos en los que es importante obtener una reducción de peso corporal y que en muchos casos conlleva un estadío obeso, aportando con ello al campo de la técnica una herramienta muy útil en la solución de dos problemas todavía sin resolver. Así pues, el uso de los inhibidores genéticos de p53 hipotalámico en este tipo de pacientes supone una mejora de la calidad de vida de los mismos, dado que al ser inhibidores genéticos éstos actúan con una mayor especificidad que los inhibidores farmacológicos descritos para otras dianas en este tipo de trastornos, lo que en general conlleva una mayor efectividad, menores dosis necesarias, menor toxicidad y por tanto menores efectos secundarios para el paciente, aspecto que hasta la fecha no se ha podido lograr de manera satisfactoria. Therefore, the present invention aims to provide a solution to the treatment of hyperphagia that accompanies various alterations in eating behavior, as well as disorders in which it is important to obtain a reduction in body weight and that in many cases entails an obese stage, thus contributing to the field of technology a very useful tool in solving two problems still unsolved. Thus, the use of hypothalamic p53 genetic inhibitors in this type of patients implies an improvement in their quality of life, given that since they are genetic inhibitors, they act with greater specificity than the pharmacological inhibitors described for other targets in This type of disorders, which in general entails greater effectiveness, lower necessary doses, lower toxicity and therefore lower side effects for the patient, an aspect that has not been satisfactorily achieved to date.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica (en adelante composición farmacéutica de la invención) que comprende: In a first aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition (hereinafter pharmaceutical composition of the invention) comprising:

i. al menos un inhibidor específico de la expresión del gen codificante de la proteína p53, donde dicho inhibidor comprende un ácido nucleico (en adelante, “ácido nucleico de la invención”) de secuencia complementaria a cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 1 a 7, y i. at least one specific inhibitor of the expression of the gene encoding the p53 protein, wherein said inhibitor comprises a nucleic acid (hereinafter, "nucleic acid of the invention") of sequence complementary to any of the sequences SEQ ID NO: 1 to 7 , Y

ii. al menos un elemento seleccionado de la lista que comprende: ghrelina, anticuerpo contra péptido relacionado con agoutí (AgRP), anticuerpo contra pro-opiomelanocortina (POMC), anticuerpo contra transcrito regulado por cocaína/anfetaminas (CART), anticuerpo contra péptido similar a glucagón 1 (GLP-1), anticuerpo contra neuropéptido Y (NPY), anticuerpo contra receptor de ghrelina (GHS-R1A) . ii. at least one item selected from the list comprising: ghrelin, antibody against agouti-related peptide (AgRP), antibody against pro-opiomelanocortin (POMC), antibody against transcript regulated by ***e / amphetamines (CART), antibody against peptide similar to glucagon 1 (GLP-1), antibody against neuropeptide Y (NPY), antibody against ghrelin receptor (GHS-R1A).

En una realización preferida de la invención, el inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a la SEQ ID NO: 1. In a preferred embodiment of the invention, the inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to SEQ ID NO: 1.

En la presente invención, la expresión “gen codificante de la proteína p53” y “gen p53” son equivalentes. In the present invention, the expression "gene encoding p53 protein" and "p53 gene" are equivalent.

Las secuencias de diferentes transcritos (o transcipt variants) de ARNm (ARN mensajero) del gen p53 humano son conocidas, por ejemplo las de SEQ ID NO: 1 a 7. La secuencia del transcrito número 1 (transcipt variant 1) de ARNm The sequences of different transcripts (or transcipt variants) of mRNA (messenger RNA) of the human p53 gene are known, for example those of SEQ ID NO: 1 to 7. The sequence of transcript number 1 (transcipt variant 1) of mRNA

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del gen p53 humano corresponde a la SEQ ID NO: 1 y constituye la base para el desarrollo de ácidos nucleicos inhibidores de la expresión del gen p53 en la presente invención. of the human p53 gene corresponds to SEQ ID NO: 1 and forms the basis for the development of nucleic acids that inhibit the expression of the p53 gene in the present invention.

Tal como se utiliza en la presente invención, el término "inhibidor específico de la expresión del gen codificante de la proteína p53" se refiere a una molécula que impide o disminuye la expresión del gen codificante de la proteína p53 humana o “tumor protein p53” (siendo la secuencia de aminoácidos de dicha proteína la SEQ ID NO: 9), es decir, que impide o disminuye la traducción o la maduración del ARN mensajero, con el efecto final de reducir la cantidad, efecto y/o actividad de la proteína p53 correspondiente. Un agente inhibidor puede estar constituido por un ácido nucleico, un oligonucleótido (un ácido nucleico de menos de 50 nucleótidos), o cualquier otro tipo de molécula que disminuya o elimine la cantidad, efecto y/o la actividad de la proteína p53. En la presente invención, el inhibidor comprende un ácido nucleico cuya secuencia es complementaria a una región o “secuencia diana” dentro de las secuencias SEQ ID NO: 1 a 7, que son las secuencias de las distintas versiones de ARN mensajeros del gen p53 humano, lo cual permite que el ácido nucleico reconozca al ARN mensajero, hibridando con éste, e interfiriendo con la expresión de la proteína p53 correspondiente. As used in the present invention, the term "specific inhibitor of the expression of the gene encoding p53 protein" refers to a molecule that prevents or decreases the expression of the gene encoding the human p53 protein or "tumor protein p53" (the amino acid sequence of said protein being SEQ ID NO: 9), that is, that prevents or decreases the translation or maturation of messenger RNA, with the final effect of reducing the amount, effect and / or activity of the protein corresponding p53. An inhibitory agent may be constituted by a nucleic acid, an oligonucleotide (a nucleic acid of less than 50 nucleotides), or any other type of molecule that decreases or eliminates the amount, effect and / or activity of the p53 protein. In the present invention, the inhibitor comprises a nucleic acid whose sequence is complementary to a region or "target sequence" within the sequences SEQ ID NO: 1 to 7, which are the sequences of the different messenger RNA versions of the human p53 gene , which allows the nucleic acid to recognize the messenger RNA, hybridizing with it, and interfering with the expression of the corresponding p53 protein.

El término “hibrida”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere a la unión de cadenas de ADN simple con secuencias complementarias. En Biología Molecular, la complementariedad es una propiedad de los ácidos nucleicos de doble cadena. The term "hybrid", as used herein, refers to the binding of single DNA strands with complementary sequences. In Molecular Biology, complementarity is a property of double stranded nucleic acids.

El término “complementario” se refiere a la existencia de una relación de complementariedad de bases nitrogenadas, empleando el emparejamiento de bases de Watson y Crick, entre ácidos nucleicos, por ejemplo entre el ácido nucleico de la invención y la secuencia complementaria o secuencia diana en el ARN mensajero de p53, que es suficiente para dar lugar a la unión específica entre ambos dentro de una célula. Se entiende por apareamiento de bases de Watson y Crick a la unión entre la adenina y la timina mediante dos puentes de hidrógeno, y a la unión entre la guanina y la citosina mediante tres puentes de hidrógeno. Dado que en el ARN no existe timina, la complementariedad se establece entre adenina y uracilo mediante dos puentes de hidrógeno. Una complementariedad perfecta, (es decir, del 100% de los nucleótidos del ácido nucleico de la invención con su secuencia diana en el ARN mensajero) es preferible, pero no absolutamente necesaria, especialmente cuando se emplean ácidos nucleicos de más de 20 nucleótidos. En el caso de ácidos nucleicos de entre 15 y 30 nucleótidos de largo, una complementariedad de al menos 10 de sus nucleótidos con la secuencia diana puede ser suficiente para el reconocimiento y la hibridación con dicha secuencia. The term "complementary" refers to the existence of a complementary relationship of nitrogenous bases, using the pairing of Watson and Crick bases, between nucleic acids, for example between the nucleic acid of the invention and the complementary sequence or target sequence in the messenger RNA of p53, which is sufficient to give rise to specific binding between both within a cell. Watson and Crick base pairing is understood as the union between adenine and thymine by two hydrogen bonds, and the union between guanine and cytosine by three hydrogen bonds. Since there is no thymine in the RNA, complementarity is established between adenine and uracil by two hydrogen bonds. Perfect complementarity, (i.e., 100% of the nucleotides of the nucleic acid of the invention with its target sequence in messenger RNA) is preferable, but not absolutely necessary, especially when nucleic acids of more than 20 nucleotides are used. In the case of nucleic acids between 15 and 30 nucleotides long, a complementarity of at least 10 of their nucleotides with the target sequence may be sufficient for recognition and hybridization with said sequence.

La identidad de la SEQ ID NO: 1, o transcrito número 1 (transcipt variant 1) de ARNm del gen p53 humano, con las secuencias de los restantes 6 transcritos de ARNm que se han descrito para el gen p53 humano, así como de uno de los transcritos de ARNm para el gen p53 de ratón (Mus musculus), se muestran en la Tabla 1: The identity of SEQ ID NO: 1, or transcript number 1 (transcipt variant 1) of mRNA of the human p53 gene, with the sequences of the remaining 6 mRNA transcripts that have been described for the human p53 gene, as well as one of mRNA transcripts for the mouse p53 gene (Mus musculus), are shown in Table 1:

Especie Species

Transcrito % Identidad SEQ ID NO: Número de acceso en NCBI Transcribed % Identity SEQ ID NO: NCBI access number

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 1 100 1 NM_000546 Transcribed 1 100 one NM_000546

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 2 99.8 2 NM_001126112 Transcribed 2 99.8 2 NM_001126112

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 3 53.9 3 NM_001126114 Transcribed 3 53.9 3 NM_001126114

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 4 53.9 4 NM_001126113 Transcribed 4 53.9 4 NM_001126113

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 5 77.9 5 NM_001126115 Transcribed 5 77.9 5 NM_001126115

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 6 53.9 6 NM_001126116 Transcribed 6 53.9 6 NM_001126116

Homo sapiens Homo sapiens

Transcrito 7 53.9 7 NM_001126117 Transcribed 7 53.9 7 NM_001126117

Mus musculus Mus musculus

Transcrito 2 35.2 8 NM_001127233 Transcribed 2 35.2 8 NM_001127233

Tabla 1: % de identidad de secuencia entre el transcrito número 1 (transcipt variant 1) de ARNm del gen p53 humano con los restantes 6 transcritos de ARNm del gen p53 humano, y con el transcrito 2 de ARNm del gen p53 de ratón (Mus musculus). Se indica también el número de identificación de secuencia en la lista de secuencias de la invención, y el número de acceso en la base de datos del NCBI (National Center for Biotechnology Information) para la secuencia de ADN equivalente (es decir, la secuencia del NCBI es la secuencia del ARNm donde los uracilos (U) se encuentran sustituidos por timinas (T)). Table 1:% sequence identity between transcript number 1 (transcipt variant 1) of mRNA of human p53 gene with the remaining 6 mRNA transcripts of human p53 gene, and with mRNA transcript 2 of mouse p53 gene (Mus musculus). The sequence identification number is also indicated in the sequence list of the invention, and the access number in the NCBI database (National Center for Biotechnology Information) for the equivalent DNA sequence (i.e., the sequence of the NCBI is the mRNA sequence where uracils (U) are replaced by thymine (T)).

La expresión “% de identidad de secuencia” se refiere al porcentaje de nucleótidos de una secuencia candidata que es idéntico a los nucleótidos de la SEQ ID NO: 1, después de alinear las secuencias para lograr el máximo porcentaje de identidad de secuencia. El % de identidad de secuencia se puede determinar por cualquiera de los procedimientos o algoritmos establecidos en la técnica, tales como ALIGN o BLAST. En el presente documento, el % de identidad de secuencia se calcula dividiendo el número de nucleótidos que son idénticos después de alinear SEQ ID NO: 1 y la secuencia candidata, entre el número total de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 y multiplicando el resultado por 100. The expression "% sequence identity" refers to the percentage of nucleotides of a candidate sequence that is identical to the nucleotides of SEQ ID NO: 1, after aligning the sequences to achieve the maximum percentage of sequence identity. The% sequence identity can be determined by any of the procedures or algorithms established in the art, such as ALIGN or BLAST. In this document,% sequence identity is calculated by dividing the number of nucleotides that are identical after aligning SEQ ID NO: 1 and the candidate sequence, by the total number of nucleotides of SEQ ID NO: 1 and multiplying the 100 result.

En la presente invención, el inhibidor va acompañado por al menos un elemento (en adelante “elemento que acompaña al inhibidor de la invención”) seleccionado de la lista que comprende: -ghrelina, In the present invention, the inhibitor is accompanied by at least one element (hereinafter "element that accompanies the inhibitor of the invention ”) selected from the list comprising: -ghrelina,

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un anticuerpo contra alguna de las proteínas: péptido relacionado con agoutí (AgRP o agouti-related peptide), proopiomelanocortina (POMC), transcrito regulado por cocaína/anfetaminas (CART), péptido similar a glucagón 1 (GLP1 o glucagon like peptide), neuropéptido Y (NPY), receptor de ghrelina (GHS-R1A o growth hormone secretagogue receptor type 1 isoform 1a). an antibody against any of the proteins: agouti-related peptide (AgRP or agouti-related peptide), proopiomelanocortin (POMC), ***e / amphetamine-regulated transcript (CART), glucagon-like peptide (GLP1 or glucagon like peptide), neuropeptide Y (NPY), ghrelin receptor (GHS-R1A or growth hormone secretagogue receptor type 1 isoform 1a).

La secuencia de aminoácidos del péptido relacionado con agoutí (AgRP o agouti-related peptide) es la SEQ ID NO: The amino acid sequence of the agouti-related peptide (AgRP or agouti-related peptide) is SEQ ID NO:

16. La secuencia de aminoácidos de la pro-opiomelanocortina (POMC) es la SEQ ID NO: 17. La secuencia de aminoácidos del transcrito regulado por cocaína/anfetaminas (CART) es la SEQ ID NO: 18. La secuencia de aminoácidos del péptido similar a glucagón 1 (GLP-1 o glucagon like peptide) es la SEQ ID NO: 19. La secuencia de aminoácidos del neuropéptido Y (NPY) es la SEQ ID NO: 20. La secuencia de aminoácidos del receptor de ghrelina (GHS-R1A) es la SEQ ID NO: 21. La secuencia de aminoácidos de la ghrelina es la SEQ ID NO: 22. 16. The amino acid sequence of pro-opiomelanocortin (POMC) is SEQ ID NO: 17. The amino acid sequence of the transcript regulated by ***e / amphetamines (CART) is SEQ ID NO: 18. The amino acid sequence of the peptide similar to glucagon 1 (GLP-1 or glucagon like peptide) is SEQ ID NO: 19. The amino acid sequence of neuropeptide Y (NPY) is SEQ ID NO: 20. The amino acid sequence of the ghrelin receptor (GHS- R1A) is SEQ ID NO: 21. The amino acid sequence of ghrelin is SEQ ID NO: 22.

La función del elemento que acompaña al inhibidor de la invención es dirigir al inhibidor a núcleos hipotalámicos específicamente, de modo que el inhibidor sólo actúe sobre la expresión del gen p53 cuando alcanza dichos núcleos. The function of the element that accompanies the inhibitor of the invention is to direct the inhibitor to hypothalamic nuclei specifically, so that the inhibitor only acts on the expression of the p53 gene when it reaches said nuclei.

El hipotálamo es una glándula endocrina que forma parte del diencéfalo, y se sitúa por debajo del tálamo. El hipotálamo está constituido por diferentes núcleos neuronales que entre otras funciones regulan el hambre, el apetito y la saciedad por medio de hormonas y péptidos. El péptido relacionado con agoutí (AgPR), la proopiomelanocortina (POMC), el transcrito regulado por cocaína/anfetaminas (CART), el péptido similar a glucagón 1 (GLP-1 o glucagon like peptide) y el neuropéptido Y (NPY) son neuropéptidos que se localizan principalmente en el núcleo arcuato (o núcleo infundibular) del hipotálamo. El núcleo arcuato del hipotálamo es un núcleo de neuronas que se encuentra en la parte mediobasal del hipotálamo, donde están los receptores de la ghrelina, como por ejemplo el receptor de ghrelina GHS-R1A. El propósito de unir anticuerpos contra cualquiera de los neuropéptidos, o bien anticuerpos contra el receptor de ghrelina, o bien ghrelina, al inhibidor de la invención, es hacer que el inhibidor se dirija específicamente al hipotálamo, preferiblemente al núcleo arcuato del hipotálamo, actuando sobre la expresión del gen p53 tan sólo en esta región del hipotálamo, y no en otras áreas cerebrales, evitando efectos secundarios no deseables. De esta forma, se consigue inhibir la expresión del gen p53 tan sólo en la ruta hipotalámica donde p53 participa en la regulación de la ingesta, logrando un efecto inhibitorio específico. The hypothalamus is an endocrine gland that is part of the diencephalon, and is located below the thalamus. The hypothalamus is constituted by different neuronal nuclei that among other functions regulate hunger, appetite and satiety through hormones and peptides. Agouti-related peptide (AgPR), proopiomelanocortin (POMC), ***e / amphetamine-regulated transcript (CART), glucagon-like peptide 1 (GLP-1 or glucagon like peptide) and neuropeptide Y (NPY) are neuropeptides which are located mainly in the arcuate nucleus (or infundibular nucleus) of the hypothalamus. The arcuate nucleus of the hypothalamus is a nucleus of neurons found in the midbasal part of the hypothalamus, where ghrelin receptors are found, such as the ghrelin receptor GHS-R1A. The purpose of binding antibodies against any of the neuropeptides, or antibodies against the ghrelin receptor, or ghrelin, to the inhibitor of the invention, is to make the inhibitor specifically target the hypothalamus, preferably the arcuate nucleus of the hypothalamus, acting on p53 gene expression only in this region of the hypothalamus, and not in other brain areas, avoiding undesirable side effects. In this way, it is possible to inhibit the expression of the p53 gene only in the hypothalamic pathway where p53 participates in the regulation of intake, achieving a specific inhibitory effect.

Existen casas comerciales que ofrecen anticuerpos contra el péptido relacionado con agoutí (AgPR) (Millipore: AB3402P Anti-Agouti Related Protein; Abcam: AB32882 AGPR Antibody), así como contra pro-opiomelanocortina (POMC) (Abcam: POMC Antibody AB32893; Santa Cruz: POMC (FL-267) SC-20148), contra CART (Santa Cruz: CART Antibody (N-20) SC-18068), contra GLP1 (Abcam: GLP1 Antibody AB22625), contra neuropéptido Y (Abcam: Neuropeptide Y Antibody AB30914), y contra el receptor de ghrelina (GHS-R1A) (Abcam: Ghrelin Receptor Antibody AB85104). There are commercial houses that offer antibodies against the agouti-related peptide (AgPR) (Millipore: AB3402P Anti-Agouti Related Protein; Abcam: AB32882 AGPR Antibody), as well as against pro-opiomelanocortin (POMC) (Abcam: POMC Antibody AB32893; Santa Cruz : POMC (FL-267) SC-20148), against CART (Santa Cruz: CART Antibody (N-20) SC-18068), against GLP1 (Abcam: GLP1 Antibody AB22625), against neuropeptide Y (Abcam: Neuropeptide Y Antibody AB30914 ), and against the ghrelin receptor (GHS-R1A) (Abcam: Ghrelin Antibody Receptor AB85104).

Por tanto, la composición farmacéutica de la invención comprende un inhibidor de la expresión del gen codificante de la proteína p53 y, o bien ghrelina, o bien anticuerpos que van dirigidos contra proteínas o neuropéptidos localizados únicamente en núcleos hipotalámicos, de modo que dicho inhibidor cruza la barrera hematoencefálica y alcanza a sus dianas hipotalámicas, actuando únicamente sobre éstas. Por tanto, en una realización preferida de la invención, el inhibidor va unido a anticuerpos contra proteínas o neuropéptidos localizados únicamente en núcleos hipotalámicos. Una forma de unir los anticuerpos al inhibidor sería a través de la inclusión del inhibidor en vehículos tales como una nanopartícula, un liposoma, un vector o una micela, por ejemplo, a los que se pueden unir los anticuerpos en su superficie para dirigir dichos vehículos a las dianas hipotalámicas. En otra realización preferida de la invención, el inhibidor va unido a ghrelina, o a un agonista del receptor de ghrelina, como por ejemplo BIM-28125 Therefore, the pharmaceutical composition of the invention comprises an inhibitor of the expression of the gene encoding the p53 protein and either ghrelin, or antibodies that are directed against proteins or neuropeptides located only in hypothalamic nuclei, such that said inhibitor crosses the blood-brain barrier and reaches its hypothalamic targets, acting only on them. Therefore, in a preferred embodiment of the invention, the inhibitor is bound to antibodies against proteins or neuropeptides located only in hypothalamic nuclei. One way to bind the antibodies to the inhibitor would be through the inclusion of the inhibitor in vehicles such as a nanoparticle, a liposome, a vector or a micelle, for example, to which the antibodies on their surface can be attached to target said vehicles. to hypothalamic targets. In another preferred embodiment of the invention, the inhibitor is linked to ghrelin, or to a ghrelin receptor agonist, such as BIM-28125

o BIM-28131 (descritos en Strassburg et al., American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism, 2008, or BIM-28131 (described in Strassburg et al., American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism, 2008,

295: 78-84). Una forma de unir la ghrelina o un agonista del receptor de ghrelina al inhibidor de la invención es a través de síntesis química. Una vez alcanzada la diana hipotalámica, el ácido nucleico comprendido en el inhibidor hibrida con su secuencia complementaria en el ARN mensajero del gen codificante de la proteína p53 hipotalámica, inhibiendo la expresión de este gen únicamente a nivel del hipotálamo. 295: 78-84). One way to bind ghrelin or a ghrelin receptor agonist to the inhibitor of the invention is through chemical synthesis. Once the hypothalamic target is reached, the nucleic acid comprised in the hybridized inhibitor with its complementary sequence in the messenger RNA of the gene encoding the hypothalamic p53 protein, inhibiting the expression of this gene only at the level of the hypothalamus.

En una realización preferida, el ácido nucleico es un ARN de interferencia. In a preferred embodiment, the nucleic acid is an interfering RNA.

Se entiende por ARN de interferencia (ARN de silenciamiento, ARNi o RNAi, por sus siglas en inglés), a una molécula de ARN, de cadena simple o doble, que interfiere con un ARN mensajero específico conduciendo así a su degradación y/o disminución de su traducción en proteína. La secuencia del ARN de interferencia (de la única cadena, si es de cadena simple, o de una de ellas, si es de cadena doble) es complementaria a una región de la secuencia de nucleótidos de su ARN mensajero específico o “secuencia diana”, pero no en sentido 5’-3’ (sentido), sino en sentido 3’-5’ (antisentido), ejerciendo un mecanismo de silenciamiento post-transcripcional, interfiriendo con la expresión o traducción de dicho ARN mensajero y por tanto impidiendo la producción de un péptido o proteína, provocando su deficiencia. En la presente descripción, se entiende por “cadena antisentido” a la cadena de la molécula de ARN de interferencia que es complementaria en sentido 3’-5’ a la secuencia del ARN mensajero en cuya expresión interfiere. Es decir, a la única cadena de la molécula de ARN de interferencia si ésta es de cadena simple, y a una de las cadenas si ésta es de cadena doble. Interference RNA (silencing RNA, RNAi or RNAi) is understood as a single or double stranded RNA molecule that interferes with a specific messenger RNA thus leading to its degradation and / or decrease of its protein translation. The interference RNA sequence (of the single strand, if single stranded, or one of them, if double stranded) is complementary to a region of the nucleotide sequence of its specific messenger RNA or "target sequence" , but not in the 5'-3 '(sense) sense, but in the 3'-5' (antisense) sense, exerting a post-transcriptional silencing mechanism, interfering with the expression or translation of said messenger RNA and therefore preventing production of a peptide or protein, causing its deficiency. In the present description, "antisense chain" is understood as the chain of the interfering RNA molecule that is complementary in the 3’-5 ’sense to the messenger RNA sequence in whose expression it interferes. That is, to the single chain of the interfering RNA molecule if it is a single chain, and to one of the chains if it is a double chain.

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Se entiende por molécula de ARN de cadena simple a una molécula de ARN formada por una sola cadena de nucleótidos. Se entiende por molécula de ARN de cadena doble a una molécula de ARN formada por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí por complementariedad de bases. A single stranded RNA molecule is understood as an RNA molecule formed by a single nucleotide chain. A double-stranded RNA molecule is understood as an RNA molecule formed by two nucleotide chains linked together by complementarity of bases.

El término ARN de interferencia fue inicialmente acuñado por Fire y colaboradores (Fire et al., Nature, 1998, 19; 391(6669): 806-11), para describir la observación de que moléculas de ARN de cadena doble eran capaces de bloquear la expresión de distintos genes de forma más efectiva que cada cadena individual por separado, cuando cualquiera de ellas era introducida en el gusano Caenorhabditis elegans. En la actualidad, se sabe que estos ARN son capaces de dirigir el silenciamiento post-transcripcional y específico de distintos genes y en distintos organismos, incluyendo a los vertebrados. El mecanismo a través del cual actúan estos ARN de interferencia implica la activación de una maquinaria ancestral que media la degradación o supresión específica del o los ARN mensajero/s que contiene/n la secuencia complementaria al ARN de interferencia introducido o producido, produciéndose principalmente una degradación del ARN mensajero citoplasmático y una disminución de la traducción del mensaje, aunque algunos de los mecanismos bioquímicos que subyacen a esta degradación se desconocen. The term RNA interference was initially coined by Fire et al. (Fire et al., Nature, 1998, 19; 391 (6669): 806-11), to describe the observation that double stranded RNA molecules were capable of blocking the expression of different genes more effectively than each individual chain separately, when any of them was introduced into the Caenorhabditis elegans worm. At present, it is known that these RNAs are capable of directing post-transcriptional and specific silencing of different genes and in different organisms, including vertebrates. The mechanism through which these interference RNAs act involves the activation of an ancestral machinery that mediates the specific degradation or suppression of the messenger RNA (s) that contains the sequence complementary to the interference RNA introduced or produced, mainly producing a degradation of cytoplasmic messenger RNA and a decrease in message translation, although some of the biochemical mechanisms underlying this degradation are unknown.

En la presente descripción, el término “ARN de interferencia” incluye a los ARN interferentes pequeños (siRNA o small interfering RNA), los ARN antisentido, los micro ARNs y los ARN en horquilla (small hairpin RNA o shRNA). Por tanto, en la presente descripción, la molécula de ARN de interferencia puede ser tanto de cadena simple como de cadena doble, e incluye tanto a moléculas naturales o recombinantes aisladas, como a moléculas sintetizadas químicamente. Una molécula natural de ARN de interferencia es el ARN de interferencia nativo que se encuentra de forma natural dentro de las propias células. Además, las moléculas de ARN de interferencia pueden contener alteraciones con respecto a la secuencia del ARN de interferencia nativo, mediante la adición, deleción, sustitución y/o alteración de uno o más nucleótidos, modificaciones del esqueleto fosfodiéster, modificaciones del azúcar, modificaciones del grupo fosfato, y cualquier combinación de las mismas, con el fin de incrementar su estabilidad in vivo, por ejemplo para resistir la acción de las nucleasas. Algunas modificaciones del esqueleto fosfodiéster que incrementan la estabilidad de los oligonucleótidos incluyen las que dan lugar a oligonucleótidos fosforotioatos (PS) o a oligonucleótidos metil fosfonatos (MP), en los cuales uno de los átomos de oxigeno que no forman enlaces, son sustituidos por un grupo sulfuro o metilo, respectivamente. Algunas de las modificaciones más comunes para moléculas de ARN de interferencia de cadena simple se describen en Dean y Bennett (Dean y Bennett , Oncogene, 2003, 22, 9087–9096). In the present description, the term "interference RNA" includes small interfering RNAs (siRNA or small interfering RNA), antisense RNAs, micro RNAs and hairpin RNAs (small hairpin RNA or shRNA). Therefore, in the present description, the interference RNA molecule can be both single chain and double chain, and includes both isolated natural or recombinant molecules, and chemically synthesized molecules. A natural interference RNA molecule is the native interference RNA that is found naturally within the cells themselves. In addition, the interfering RNA molecules may contain alterations with respect to the native interference RNA sequence, by the addition, deletion, substitution and / or alteration of one or more nucleotides, phosphodiester backbone modifications, sugar modifications, modifications of the phosphate group, and any combination thereof, in order to increase its stability in vivo, for example to resist the action of nucleases. Some modifications of the phosphodiester backbone that increase the stability of the oligonucleotides include those that give rise to phosphorothioate (PS) oligonucleotides or methyl phosphonate (MP) oligonucleotides, in which one of the oxygen atoms that do not form bonds, are substituted by a group sulfide or methyl, respectively. Some of the most common modifications for single stranded RNA interference molecules are described in Dean and Bennett (Dean and Bennett, Oncogene, 2003, 22, 9087-9096).

En una realización preferida de la presente invención, el ARN de interferencia es de cadena simple. In a preferred embodiment of the present invention, the interference RNA is single stranded.

Por tanto, preferiblemente, el ARN de interferencia es una molécula de ARN de cadena simple cuya secuencia es complementaria a una región de la secuencia de nucleótidos de un ARN mensajero específico en cuya expresión interfiere. Thus, preferably, the interference RNA is a single stranded RNA molecule whose sequence is complementary to a region of the nucleotide sequence of a specific messenger RNA in whose expression it interferes.

Conocida la secuencia de un ARN mensajero determinado, existen distintas aproximaciones conocidas en el estado de la técnica para diseñar moléculas de ARN de interferencia capaces de inhibir la traducción de dicho ARN mensajero a proteína. Así, en una aproximación simple, se puede seleccionar aleatoriamente una región concreta dentro de la secuencia de un ARN mensajero específico y diseñar una molécula de ARN de cadena simple cuya secuencia sea complementaria a aquélla pero en sentido 3’-5’ (antisentido). Asimismo, existen diversos algoritmos y procedimientos informáticos en el estado de la técnica que permiten una selección más racional de las regiones de la secuencia del ARN mensajero que serán más óptimas para el diseño de las moléculas de ARN de interferencia, y que tienen en cuenta diversos parámetros tales como la secuencia y la estabilidad interna de la molécula de ARN de interferencia resultante. Once the sequence of a particular messenger RNA is known, there are different approaches known in the state of the art to design interfering RNA molecules capable of inhibiting the translation of said messenger RNA to protein. Thus, in a simple approach, you can randomly select a specific region within the sequence of a specific messenger RNA and design a single-stranded RNA molecule whose sequence is complementary to that but in a 3’-5 ’(antisense) sense. There are also various algorithms and computer procedures in the state of the art that allow a more rational selection of the regions of the messenger RNA sequence that will be more optimal for the design of the interfering RNA molecules, and that take into account various parameters such as the sequence and internal stability of the resulting interfering RNA molecule.

Preferiblemente, la secuencia nucleotídica del ARN de interferencia tiene al menos un 70% de identidad con las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Preferiblemente, la secuencia nucleotídica del ARN de interferencia es cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 12. Preferably, the nucleotide sequence of the interference RNA has at least 70% identity with the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12. Preferably, the nucleotide sequence of the interference RNA is any of the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12.

Las secuencias SEQ ID NO: 10, 11 y 12 corresponden a moléculas de ARN de interferencia de cadena simple específicas para las regiones de la secuencia del ARN mensajero 1 de p53 (SEQ ID NO:1) entre los nucleótidos 544-563, 902-920 y 958-977 respectivamente. Las secuencias SEQ ID NO: 10, 11 y 12 corresponden a la secuencia complementaria antisentido de la secuencia de nucleótidos del ARN mensajero 1 de p53 entre las posiciones 544-563, 902-920 y 958-977 respectivamente, comprendiendo además un dinucleótido TT adicional en el extremo 3’. Sequences SEQ ID NO: 10, 11 and 12 correspond to single chain interference RNA molecules specific for regions of the messenger RNA sequence 1 of p53 (SEQ ID NO: 1) between nucleotides 544-563, 902- 920 and 958-977 respectively. Sequences SEQ ID NO: 10, 11 and 12 correspond to the complementary antisense sequence of the nucleotide sequence of messenger RNA 1 of p53 between positions 544-563, 902-920 and 958-977 respectively, further comprising an additional TT dinucleotide at the 3 'end.

Preferiblemente, la secuencia del ARN de interferencia tiene una longitud de entre 12 y 30 nucleótidos. Más preferiblemente, es de entre 18 y 22 nucleótidos. Aún más preferiblemente, es de 21 nucleótidos. Preferably, the interference RNA sequence is between 12 and 30 nucleotides in length. More preferably, it is between 18 and 22 nucleotides. Even more preferably, it is 21 nucleotides.

En una realización preferida, la secuencia del ARN de interferencia comprende además un dinucleótido TT en el extremo 3’. In a preferred embodiment, the interference RNA sequence further comprises a TT dinucleotide at the 3 ′ end.

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El dinucleótido TT en el extremo 3’ se refiere a la existencia de dos timinas consecutivas en el extremo 3’ de la secuencia de la cadena antisentido de la molécula de ARN de interferencia. La unión de 2 ó 3 nucleótidos, preferiblemente desoxiribonucleótidos, en el extremo 3’ de la cadena antisentido, constituye una práctica habitual en el diseño de las moléculas de ARN de interferencia, ya que la presencia de dichos nucleótidos aumenta la especificidad en el reconocimiento de la secuencia diana en el ARN mensajero en cuya expresión interfiere. The dinucleotide TT at the 3 'end refers to the existence of two consecutive thymines at the 3' end of the sequence of the antisense chain of the interfering RNA molecule. The binding of 2 or 3 nucleotides, preferably deoxyribonucleotides, at the 3 'end of the antisense chain, is a common practice in the design of interfering RNA molecules, since the presence of said nucleotides increases the specificity in the recognition of the target sequence in the messenger RNA in whose expression it interferes.

En otro aspecto, la invención se refiere al uso de un inhibidor específico de la expresión del gen codificante de la proteína p53, donde dicho inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a cualquiera de las secuencias SEQ ID NO 1 a 7, para la preparación de un medicamento para reducir la ingesta de alimentos. In another aspect, the invention relates to the use of a specific inhibitor of the expression of the gene encoding the p53 protein, wherein said inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to any of the sequences SEQ ID NO 1 to 7, for the preparation of a medicine to reduce food intake.

La reducción de la ingesta de alimentos se produce debido a las alteraciones que la composición farmacéutica provoca en algunos de los mecanismos reguladores de la ingesta en el hipotálamo. The reduction of food intake occurs due to the alterations that the pharmaceutical composition causes in some of the mechanisms regulating the intake in the hypothalamus.

La reducción de la ingesta de alimentos es útil en el tratamiento de trastornos de la conducta alimentaria donde es necesario regular o controlar la ingesta de alimentos, y que pueden conllevar conductas impulsivas de ingesta, como por ejemplo la bulimia nerviosa, la depresión atípica, el abuso de drogas psicoactivas, o el enanismo psicosocial. The reduction of food intake is useful in the treatment of eating disorders where it is necessary to regulate or control food intake, and that can lead to impulsive intake behaviors, such as bulimia nervosa, atypical depression, Psychoactive drug abuse, or psychosocial dwarfism.

En una realización preferida, el inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a la secuencia SEQ ID NO: 1. Preferiblemente, el ácido nucleico es un ARN de interferencia. Preferiblemente, el ARN de interferencia es de cadena simple. Preferiblemente, la secuencia del ARN de interferencia tiene al menos un 70% de identidad con las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Aún más preferiblemente, la secuencia del ARN de interferencia es cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: In a preferred embodiment, the inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to the sequence SEQ ID NO: 1. Preferably, the nucleic acid is an interfering RNA. Preferably, the interference RNA is single stranded. Preferably, the interference RNA sequence has at least 70% identity with the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12. Even more preferably, the interference RNA sequence is any of the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO:

12. 12.

En otra realización preferida, la secuencia del ARN de interferencia tiene una longitud de entre 12 y 30 nucleótidos. Más preferiblemente, es de entre 18 y 22 nucleótidos. Aún más preferiblemente, es de 21 nucleótidos. En una realización preferida, la secuencia del ARN de interferencia comprende además un dinucleótido TT en el extremo 3’. In another preferred embodiment, the interference RNA sequence is between 12 and 30 nucleotides in length. More preferably, it is between 18 and 22 nucleotides. Even more preferably, it is 21 nucleotides. In a preferred embodiment, the interference RNA sequence further comprises a TT dinucleotide at the 3 ′ end.

En otro aspecto, la invención se refiere al uso de la composición farmacéutica de la invención para la preparación de un medicamento para reducir el peso corporal en un sujeto. Preferiblemente, el sujeto sufre de obesidad, o de un trastorno metabólico asociado a la obesidad. In another aspect, the invention relates to the use of the pharmaceutical composition of the invention for the preparation of a medicament for reducing body weight in a subject. Preferably, the subject suffers from obesity, or a metabolic disorder associated with obesity.

El término “reducir el peso corporal” se refiere a toda estrategia que pretenda evitar un aumento de peso, reducir una posible ganancia de peso o reducir el peso corporal. Dicha reducción de peso corporal se puede llevar a cabo, porejemplo, sobre un sujeto con sobrepeso. El sobrepeso se puede determinar atendiendo a los Índices de Masa Corporal (IMC, Body Mass Index o BMI) que se emplean de manera rutinaria para estimar si un paciente presenta un peso normal, sobrepeso u obesidad, de acuerdo a distintos parámetros tales como la altura. The term "reduce body weight" refers to any strategy that seeks to prevent weight gain, reduce possible weight gain or reduce body weight. Said body weight reduction can be carried out, for example, on an overweight subject. Overweight can be determined based on Body Mass Indexes (BMI, Body Mass Index or BMI) that are routinely used to estimate whether a patient has a normal weight, overweight or obesity, according to different parameters such as height .

El término “obesidad” se refiere a un incremento de la cantidad de grasa que determina un aumento del peso corporal hasta un punto donde está asociado con ciertas condiciones perjudiciales para la salud. The term "obesity" refers to an increase in the amount of fat that determines an increase in body weight to a point where it is associated with certain conditions harmful to health.

Se acepta que una reducción de peso de al menos un 5% del peso corporal inicial es suficiente para obtener mejorías clínicamente significativas de los trastornos asociados a la obesidad, tales como la resistencia a insulina, la diabetes tipo 2, la osteoartritis, la apnea del sueño, ciertos tipos de cánceres, la hipertensión arterial y la existencia de niveles circulantes elevados de lípidos. It is accepted that a weight reduction of at least 5% of the initial body weight is sufficient to obtain clinically significant improvements in disorders associated with obesity, such as insulin resistance, type 2 diabetes, osteoarthritis, apnea sleep, certain types of cancers, high blood pressure and the existence of high circulating levels of lipids.

Esta pérdida de peso en los pacientes obesos se asocia a: reducciones de las concentraciones de colesterol total, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y triglicéridos y aumentos de las concentraciones de lipoproteínas de alta densidad (HDL) en pacientes con hiperlipemia; aumentos de la sensibilidad a la insulina y disminuciones de las concentraciones de glucosa e insulina en plasma en los pacientes con diabetes mellitus tipo 2; reducciones significativas de la presión arterial en los pacientes con hipertensión; aumento de la longevidad, de la autoestima y de las emociones positivas. This weight loss in obese patients is associated with: reductions in total cholesterol concentrations, low density lipoproteins (LDL) and triglycerides and increases in concentrations of high density lipoproteins (HDL) in patients with hyperlipemia; increases in insulin sensitivity and decreases in plasma glucose and insulin concentrations in patients with type 2 diabetes mellitus; significant reductions in blood pressure in patients with hypertension; increased longevity, self-esteem and positive emotions.

En una realización preferida, el medicamento comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable. Además, el vehículo debe ser farmacológicamente aceptable. Un “vehículo farmacéuticamente aceptable” incluye a aquellas sustancias, o combinación de sustancias, conocidas en el sector farmacéutico y biotecnológico, utilizadas en la elaboración de formas farmacéuticas de administración e incluye, pero sin limitarse, sólidos, líquidos, disolventes, tensoactivos, nanopartículas, vectores, partículas de lípido-ácido nucleico, liposomas, micelas, virosomas y cualquier combinación de los mismos. El vehículo puede ser una sustancia inerte o de acción análoga a cualquiera de los inhibidores de la presente invención. La función del vehículo es facilitar la incorporación y el transporte del inhibidor, así como también de otros compuestos, permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la composición farmacéutica. Cuando la forma de presentación es líquida, el vehículo es el diluyente. El vehículo puede ser un vector, que puede ser apropiado para la terapia génica. Un vector es una molécula de ácido nucleico usada para transferir material genético a una célula. Aparte de dicho material genético, In a preferred embodiment, the medicament further comprises a pharmaceutically acceptable carrier. In addition, the vehicle must be pharmacologically acceptable. A "pharmaceutically acceptable carrier" includes those substances, or combination of substances, known in the pharmaceutical and biotechnological sector, used in the preparation of pharmaceutical forms of administration and includes, but are not limited to, solids, liquids, solvents, surfactants, nanoparticles, vectors, lipid-nucleic acid particles, liposomes, micelles, virosomes and any combination thereof. The vehicle can be an inert substance or action analogous to any of the inhibitors of the present invention. The function of the vehicle is to facilitate the incorporation and transport of the inhibitor, as well as other compounds, to allow a better dosage and administration or to give consistency and form to the pharmaceutical composition. When the presentation form is liquid, the vehicle is the diluent. The vehicle may be a vector, which may be appropriate for gene therapy. A vector is a nucleic acid molecule used to transfer genetic material to a cell. Apart from said genetic material,

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un vector también puede contener diferentes elementos funcionales que incluyen elementos de control de la transcripción, como promotores u operadores, regiones o potenciadores de la unión a factores de transcripción, y elementos de control para iniciar y terminar la traducción. Los vectores incluyen, pero no se limitan a: plásmidos, cósmidos, virus, fagos, casetes de expresión recombinantes y transposones. El vehículo puede ser una nanopartícula de oro, de plata o de cualquier otro elemento químico adecuado para la elaboración de la misma. El uso de nanopartículas como vehículos para el transporte del inhibidor puede permitir la liberación gradual del inhibidor en su región diana. Ejemplos de nanopartículas adecuadas para el transporte de ARN de interferencia se describen en Lee et al., Small, 2011, 7(3): 364-370. A vector may also contain different functional elements that include transcription control elements, such as promoters or operators, regions or enhancers of binding to transcription factors, and control elements to initiate and terminate translation. Vectors include, but are not limited to: plasmids, cosmids, viruses, phages, recombinant expression cassettes and transposons. The vehicle can be a nanoparticle of gold, silver or any other chemical element suitable for the preparation thereof. The use of nanoparticles as vehicles for the transport of the inhibitor may allow the gradual release of the inhibitor in its target region. Examples of suitable nanoparticles for the transport of interfering RNA are described in Lee et al., Small, 2011, 7 (3): 364-370.

Opcionalmente, dicho vehículo puede ir recubierto por anticuerpos dirigidos contra proteínas o neuropéptidos localizados únicamente en núcleos hipotalámicos, tales como el núcleo arcuato, de modo que el ácido nucleico cruzaría la barrera hematoencefálica y alcanzaría a sus dianas hipotalámicas específicamente. Optionally, said vehicle can be coated by antibodies directed against proteins or neuropeptides located only in hypothalamic nuclei, such as the arcuate nucleus, so that the nucleic acid would cross the blood brain barrier and reach its hypothalamic targets specifically.

El término “terapia génica”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere a la transferencia de un material genético de interés (ADN o ARN) a un huésped para tratar o prevenir una enfermedad o afección genética o adquirida. El material genético de interés codifica un producto (un polipéptido o proteína, un péptido o un ARN funcional) cuya producción in vivo se desea. Por ejemplo, el material genético de interés puede consistir en un ARN de interferencia de valor terapéutico. The term "gene therapy", as used herein, refers to the transfer of a genetic material of interest (DNA or RNA) to a host to treat or prevent a genetic or acquired disease or condition. The genetic material of interest encodes a product (a polypeptide or protein, a peptide or a functional RNA) whose in vivo production is desired. For example, the genetic material of interest may consist of an interference RNA of therapeutic value.

En una realización preferida, el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración oral. En otra realización preferida, el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral. Preferiblemente, el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración intravenosa. La administración oral es aquella que se realiza por la boca. La administración parenteral es aquella que se realiza a través de una inyección o infusión. Algunos ejemplos de administración parenteral son la inyección subcutánea, intravenosa, intraarticular o intramuscular. In a preferred embodiment, the medicament is presented in a form adapted to oral administration. In another preferred embodiment, the medicament is presented in a form adapted to parenteral administration. Preferably, the medicament is presented in a form adapted to intravenous administration. Oral administration is one that is done by mouth. Parenteral administration is one that is done through an injection or infusion. Some examples of parenteral administration are subcutaneous, intravenous, intraarticular or intramuscular injection.

En una realización preferida, la composición farmacéutica de la invención se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz. La expresión “cantidad eficaz” se refiere a una cantidad de una sustancia suficiente para lograr el propósito pretendido. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la expresión del gen codificante de la proteína p53 es una cantidad suficiente para reducir la expresión de dicho gen o la traducción de su ARN mensajero correspondiente, que puede ser extrapolada a partir de los datos obtenidos en ensayos en animales. Una “cantidad terapéuticamente eficaz” de un inhibidor para tratar una enfermedad o trastorno es una cantidad del inhibidor suficiente para reducir o eliminar los síntomas de la enfermedad o trastorno. La cantidad eficaz de una sustancia dada variará con factores tales como la naturaleza de la sustancia, la vía de administración, el tamaño y la especie del animal que va a recibir la sustancia y el propósito por el que se da la sustancia. La cantidad eficaz en cada caso individual la puede determinar empíricamente el experto en la materia de acuerdo con los procedimientos establecidos en la técnica. In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition of the invention is administered in a therapeutically effective amount. The term "effective amount" refers to an amount of a substance sufficient to achieve the intended purpose. For example, a therapeutically effective amount of a p53 protein coding gene expression inhibitor is an amount sufficient to reduce the expression of said gene or the translation of its corresponding messenger RNA, which can be extrapolated from the data obtained. in animal trials. A "therapeutically effective amount" of an inhibitor to treat a disease or disorder is an amount of the inhibitor sufficient to reduce or eliminate the symptoms of the disease or disorder. The effective amount of a given substance will vary with factors such as the nature of the substance, the route of administration, the size and species of the animal that will receive the substance and the purpose for which the substance is given. The effective amount in each individual case can be determined empirically by the person skilled in the art according to the procedures established in the art.

En una realización preferida, el medicamento además comprende un excipiente farmacológicamente aceptable. El término “excipiente” hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción del inhibidor, lo estabiliza o ayuda a la preparación del medicamento en el sentido de darle consistencia o aportar sabores que lo hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener la función de mantener los ingredientes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo para aislarlo del aire y/o la humedad, función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo. In a preferred embodiment, the medicament further comprises a pharmacologically acceptable excipient. The term "excipient" refers to a substance that helps the absorption of the inhibitor, stabilizes it or helps the preparation of the drug in the sense of giving it consistency or providing flavors that make it more pleasant. Thus, the excipients could have the function of keeping the ingredients together such as starches, sugars or cellulose, sweetening function, dye function, drug protection function such as to isolate it from air and / or moisture, function filling a tablet, capsule or any other form of presentation such as dibasic calcium phosphate, a disintegrating function to facilitate the dissolution of the components and their absorption in the intestine, without excluding other types of excipients not mentioned in this paragraph.

El término “farmacológicamente aceptable” se refiere a que el compuesto al que se hace referencia está permitido y evaluado de modo que es seguro, no es tóxico y no causa efectos adversos a los organismos a los que se administra. The term "pharmacologically acceptable" refers to the fact that the compound referred to is allowed and evaluated so that it is safe, non-toxic and does not cause adverse effects to the organisms to which it is administered.

En una realización preferida, el medicamento además comprende otra sustancia activa. En una realización preferida, el medicamento se administra como terapia combinada. Una terapia combinada se refiere a que el medicamento se administra junto con otro medicamento. In a preferred embodiment, the medicament further comprises another active substance. In a preferred embodiment, the medicament is administered as a combination therapy. A combination therapy refers to the medication being given along with another medication.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. Throughout the description and the claims the word "comprises" and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. For those skilled in the art, other objects, advantages and features of the invention will be derived partly from the description and partly from the practice of the invention. The following examples and drawings are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS DESCRIPTION OF THE FIGURES

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Figura 1. Efecto de la administración aguda de Ghrelina (5 Ig) intracerebroventricular (i.c.v.) sobre la ingesta acumulada (g) a 2 (A) y 6 (B) horas, en ratones p53 wild type (WT) y knockout (KO) machos. Ocho individuos por grupo, siendo: *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001. Figure 1. Effect of acute intracerebroventricular Ghrelin (5 Ig) administration (icv) on cumulative intake (g) at 2 (A) and 6 (B) hours, in p53 wild type (WT) and knockout (KO) mice males Eight individuals per group, being: * p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001.

Figura 2. Efecto del tratamiento agedo con Ghrelina (5 Ig) intracerebroventricular (i.c.v.), a las 6 horas, sobre los niveles de proteínas involucradas en el metabolismo de lípidos en hipotálamo de ratones macho p53 wild type (WT) y knockout (KO). El análisis de proteínas se realizó a través de Western Blotting, con 8 individuos por grupo, siendo: *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001. Se indican los niveles de proteína hipotalámicos de pAMPKFigure 2. Effect of agedo treatment with intracerebroventricular Ghrelin (5 Ig), at 6 hours, on the levels of proteins involved in lipid metabolism in hypothalamus of male p53 wild type (WT) and knockout (KO) mice . Protein analysis was performed through Western Blotting, with 8 individuals per group, being: * p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001. Hypothalamic protein levels of pAMPK are indicated

aK AMPKa1K AMPKa2K pACCK ACCa y FAS despeés de 6 horas tras la administración de ghrelina. A: gel resultante tras el análisis por Western Blotting. VH: ratones tratados con suero fisiológico (control); GHR: ratones tratados con ghrelina. B: Los valores obtenidos por Western Blotting fueron normalizados con los del control interno beta actina, y los resultados se expresan como unidades arbitrarias (% de cambio respecto al control). La media de los valores se obtuvo de 8 animales por grupo. Los valores se representan como la media ± error medio estándar, *p<0.05, **p<0.01. Las barras en blanco representan los animales tratados con suero fisiológico, y las barras en negro representan los animales tratados con ghrelina. aK AMPKa1K AMPKa2K pACCK ACCa and FAS after 6 hours after administration of ghrelin. A: resulting gel after Western Blotting analysis. VH: mice treated with physiological serum (control); GHR: mice treated with ghrelin. B: The values obtained by Western Blotting were normalized with those of the internal beta actin control, and the results are expressed as arbitrary units (% change with respect to the control). The average of the values was obtained from 8 animals per group. Values are represented as the mean ± standard mean error, * p <0.05, ** p <0.01. Blank bars represent animals treated with physiological serum, and black bars represent animals treated with ghrelin.

Figura 3. Efecto de la administración aguda deI g) y del ARN de interferencia deFigure 3. Effect of acute administration of g) and RNA interference from

Ghrelina (5 p53 intracerebroventricular (i.c.v.) sobre la ingesta acumulada (g) a 2, 4 y 6 horas en ratones machos (8 animales por grupo, n=8, siendo: *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001). VH: suero fisiológico; GHR: ghrelina; sip53: ARN de interferencia para p53K correspondiente a la SEQ 10 NO:11 (10 Ig); NS: secuencia inactiva de ARN (sense).  Ghrelin (5 p53 intracerebroventricular (icv) on cumulative intake (g) at 2, 4 and 6 hours in male mice (8 animals per group, n = 8, being: * p <0.05, ** p <0.01, ** * p <0.001) VH: physiological serum; GHR: ghrelin; sip53: interfering RNA for p53K corresponding to SEQ 10 NO: 11 (10 Ig); NS: inactive RNA sequence (sense).

EJEMPLOS EXAMPLES

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la especificidad y efectividad del uso de inhibidores de p53 hipotalámico como agentes anorexigénicos o supresores del apetito. The invention will now be illustrated by tests carried out by the inventors, which show the specificity and effectiveness of the use of hypothalamic p53 inhibitors as anorexigenic agents or appetite suppressants.

EJEMPLO 1: Efectos de la ghrelina sobre la ingesta en ratones p53 wild type (WT) y knockout (KO) EXAMPLE 1: Effects of ghrelin on intake in p53 wild type (WT) and knockout (KO) mice

MATERIALES Y MÉTODOS Modelos animales En estos experimentos se utilizaron ratones p53 knockout (KO) y wild type (WT), que fueron alojados en habitaciones con condiciones estables de temperatura (22-24ºC) bajo un ciclo de 12:12 horas luz/oscuridad y alimentados con una dieta estándar. Los ratones homocigotos WT y KO fueron originados de aparejamientos entre ratones heterocigotos. Los animales fueron tratados y sacrificados a las 10-12 semanas de edad, antes de cualquier signo de morbilidad debido al desarrollo de tumores. Los experimentos con animales fueron realizados de acuerdo con los estándares aprobados por el Comité de Animales de la Universidad de Santiago de Compostela. Los ratones p53 knockout utilizados son los descritos en Jacks T. et al., Current Biology, 1994, 4 :1-7. MATERIALS AND METHODS Animal models In these experiments p53 knockout (KO) and wild type (WT) mice were used, which were housed in rooms with stable temperature conditions (22-24ºC) under a cycle of 12:12 light / dark hours and fed a standard diet. Homozygous WT and KO mice originated from mating between heterozygous mice. The animals were treated and slaughtered at 10-12 weeks of age, before any sign of morbidity due to the development of tumors. Animal experiments were performed in accordance with the standards approved by the Animal Committee of the University of Santiago de Compostela. The p53 knockout mice used are those described in Jacks T. et al., Current Biology, 1994, 4: 1-7.

Solución anestésica I.-KETAMINA: 42.5 % ketolar, parke-Davius, Morris Plañis N. J. (USA) 50mg/ml II.-XILAZINA 20% Rompun, Bayer Leverkusen, Alemania. 2 mg/ml. III.-solución salina fisiológica 37.5 % Anesthetic solution I.-KETAMINA: 42.5% ketolar, parke-Davius, Morris Plañis N. J. (USA) 50mg / ml II.-XILAZINA 20% Rompun, Bayer Leverkusen, Germany. 2 mg / ml III.-physiological saline solution 37.5%

Canulación intracerebroventricular ( i.c.v.) Esta operación debe realizarse aproximadamente unos 4 días antes del experimento. El objetivo de la implantación de estas cánulas es acceder al ventrículo lateral. Se utilizaron cánulas de polietileno (PE-20, PE-50, Clay Adams, Becton-Dickinson, New Jersey USA) de calibre fino Intracerebroventricular cannulation (i.c.v.) This operation should be performed approximately 4 days before the experiment. The objective of the implementation of these cannulas is to access the lateral ventricle. Fine-gauge polyethylene (PE-20, PE-50, Clay Adams, Becton-Dickinson, New Jersey USA) cannulas were used

(1.09 mm de diámetro externo y 0.38 mm de diámetro interno); en uno de los extremos de la cánula se pone un tope y se corta en bisel a unos ¾ mm de distancia, siendo esta parte la que se introduce al cerebro y la que permite el acceso al ventrículo lateral. El extremo opuesto de la cánula se selló hasta el día del experimento. Una vez anestesiados los animales se realizó un corte en la piel de la cabeza a la altura de la frente y hasta la parte posterior de los ojos, dejando al descubierto el tejido subcutáneo, el cual debe ser retirado con la ayuda de un bisturí hasta dejar a la vista el cráneo. Se localizó el bregma, que separa los huesos frontales de los occipitales y que se utilizó como punto de referencia para realizar un orificio (1.2 mm mediolateral y 1 mm posterior) a través del cual se introduce la cánula. Posteriormente se añadió cianoacrilato para que la cánula quedara perfectamente fija y se selló toda la zona abierta. Para comprobar que la cánula ha quedado en posición correcta se inyectó protamina 2 %, disuelto en agua con acetato sódico, lo cual claramente tiñe el ventrículo lateral, demostrando así que la cánula ha sido colocada correctamente. (1.09 mm external diameter and 0.38 mm internal diameter); at one end of the cannula, a stop is placed and it is cut into a bevel about de mm away, this part being the one that enters the brain and allows access to the lateral ventricle. The opposite end of the cannula was sealed until the day of the experiment. Once the animals were anesthetized, a cut was made in the skin of the head at the forehead and to the back of the eyes, exposing the subcutaneous tissue, which must be removed with the help of a scalpel until leaving in sight the skull. The bregma was located, which separates the frontal bones from the occipital and was used as a reference point to make a hole (1.2 mm mediolateral and 1 mm posterior) through which the cannula is inserted. Subsequently, cyanoacrylate was added so that the cannula was perfectly fixed and the entire open area was sealed. To verify that the cannula has remained in the correct position, 2% protamine was injected, dissolved in water with sodium acetate, which clearly stains the lateral ventricle, demonstrating that the cannula has been correctly placed.

Administración intracerebroventricular (i.c.v.) de ghrelina en ratones normales y deficientes para p53 Se establecieron los siguientes grupos experimentales: Intracerebroventricular (i.c.v.) administration of ghrelin in normal and p53-deficient mice The following experimental groups were established:

••

10 ratones wild type control (3 Il suero fisiologico)  10 wild type control mice (3 Il physiological serum)

••

10 ratones wild type tratados con ghrelina (5Ig/3 Il) (human ghrelin trifuoroacetate; referencia: H4864; Bachem)  10 wild type mice treated with ghrelin (5Ig / 3 Il) (human ghrelin trifuoroacetate; reference: H4864; Bachem)

••

10 ratones p53 knockout control (3 Il suero fisiologico)  10 p53 knockout control mice (3 Il physiological serum)

••

10 ratones p53 knockout tratados con ghrelina (5Ig/3 Il) La ghrelina se administró de manera intracerebroventricular a través de una cánula de polietileno. A los animales se les puso una cantidad de comida pesada y se midió la ingesta a 2 y 6 horas tras la administración de la ghrelina.  10 p53 knockout mice treated with ghrelin (5Ig / 3 Il) Ghrelin was administered intracerebroventricularly through a polyethylene cannula. The animals are They put a heavy amount of food on them and their intake was measured 2 and 6 hours after the administration of ghrelin.

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RESULTADOS En primer lugar, comprobamos que la administración central (intracerebroventricular) de la ghrelina incrementa la ingesta en ratones wild type después de 2 y 6 horas (Figura 1). Sin embargo, en los ratones deficientes para p53, la ghrelina no produjo este incremento de la ingesta (Figura 1). RESULTS First, we found that central (intracerebroventricular) administration of ghrelin increases intake in wild type mice after 2 and 6 hours (Figure 1). However, in mice deficient for p53, ghrelin did not produce this increase in intake (Figure 1).

EJEMPLO 2: Efectos de la ghrelina sobre el metabolismo de ácidos grasos en el hipotálamo de ratones p53 wild type (WT) y knockout (KO) EXAMPLE 2: Effects of ghrelin on fatty acid metabolism in the hypothalamus of p53 wild type (WT) and knockout (KO) mice

MATERIALES Y MÉTODOS Los protocolos de extracción, homogenización de proteínas y Western Blotting se llevaron a cabo tal y como se describe en: Theander-Carrillo C et al., The Journal of Clinical Investigation, 2006, 116:1983-93. MATERIALS AND METHODS The extraction protocols, protein homogenization and Western blotting were carried out as they were described in: Theander-Carrillo C et al., The Journal of Clinical Investigation, 2006, 116: 1983-93.

Se utilizaron 8 individuos por cada grupo experimental. Homogenización y extracción de proteínas para Western Blotting Las muestras permanecieron a -80º C, en el momento que se procesaron las muestras se mantuvieron en hielo. Se les añadió tampón de lisis en proporción al tejido que en este caso son 500 Il de tampón de lisis para hipotálamo de rata y 160 Il para hipotálamo de ratón. Se utilizó el siguiente tampón de lisis: Tris-HCl* pH: 7.5 EGTA 0.2 M* (pH 8) EDTA O.2 M* (pH 8) Tritón-X 100* Sodium Orthovanadate* 0.1 M Sodium Fluoride* Sodium Pyrophosphate* Sacarosa* 0.27 M 8 individuals were used for each experimental group. Homogenization and protein extraction for Western Blotting The samples remained at -80 ° C, at the time the samples were processed they were kept on ice. Be he added lysis buffer in proportion to the tissue which in this case is 500 Il of lysis buffer for hypothalamus of rat and 160 Il for mouse hypothalamus. The following lysis buffer was used: Tris-HCl * pH: 7.5 EGTA 0.2 M * (pH 8) EDTA O.2 M * (pH 8) Triton-X 100 * Sodium Orthovanadate * 0.1 M Sodium Fluoride * Sodium Pyrophosphate * Sucrose * 0.27 M

(*)Sigma Aldrich, St. Louis, USA  (*) Sigma Aldrich, St. Louis, USA

Se utilizó el inhibidor de proteasas “Complete, proteasa inhibitor cocktail tablets” (Roche Diagnostics, Indianapolis, USA), empleando una pastilla por cada 50 Il de tampón de lisis. Se homogenizaron los hipotálamos en el homogenizador “Tissue lyser II” (Qiagen, Retsch, Germany), y se determinó la concentración de proteínas a través del método colorimétrico Bradfor (Protein Assay, Bio-Rad Laboratories, Germany) en el espectrofotómetro Sunrise (Tecan, Austria). Se les añadió el tampón de carga a las muestras y se guardaron a -80ºC hasta ser utilizadas. El búffer de carga (“Sample buffer” 5 x o Tampón de carga) se preparó con los siguientes elementos: Tris-HCl 250 mM pH: 6.8 10% (w/v) SDS (sodium dodecyl sulfate) 50% (v/v) Glicerol 0.0005 % (w/v) Bromophenol Blue 5% (v/v) �-mercaptoetanol Al momento de utilizar las muestras se colocaron en hielo y luego se calentaron a 95ºC durante 10 minutos. The protease inhibitor "Complete, protease inhibitor cocktail tablets" (Roche Diagnostics, Indianapolis, USA), using one tablet for every 50 Il of lysis buffer. The hypothalamus were homogenized in the homogenizer "Tissue lyser II" (Qiagen, Retsch, Germany), and determined the concentration of proteins through the Bradfor colorimetric method (Protein Assay, Bio-Rad Laboratories, Germany) at the Sunrise spectrophotometer (Tecan, Austria). The loading buffer was added to the samples and stored at -80 ° C until used. The load buffer (“Sample buffer” 5 x or Load buffer) was prepared with the following elements: 250 mM Tris-HCl pH: 6.8 10% (w / v) SDS (sodium dodecyl sulfate) 50% (v / v) Glycerol 0.0005% (w / v) Bromophenol Blue 5% (v / v) �-mercaptoethanol At the time of using the samples, they were placed on ice and then heated at 95 ° C for 10 minutes.

Western Blotting, electroforesis y transferencia Se separaron las proteínas por su peso a través de la utilización de geles Tris/glicina SDS-PAGE del 6% y del 10% de poliacrilamida. Estos geles constan de dos fases, “Stacking gel” y” Running gel “(preparados según Molecular cloning, A laboratory manual, Maniatis, 2ª edición), y se cargaron 40 Ig de proteínas en 16 Il en el caso del hipotálamo. La electroforesis se realizó a 130 V durante 50 minutos en caso de geles al 6% de poliacrilamida ó a 100 V durante 100 minutos en caso de geles al 10% de poliacrilamida. Western Blotting, electrophoresis and transfer Proteins were separated by weight through the use of 6% and 10% Tris / glycine SDS-PAGE gels of polyacrylamide. These gels consist of two phases, "Stacking gel" and "Running gel" (prepared according to Molecular cloning, A laboratory manual, Maniatis, 2nd edition), and 40 Ig of proteins were loaded in 16 Il in the case of hypothalamus Electrophoresis was performed at 130 V for 50 minutes in case of 6% polyacrylamide gels or at 100 V during 100 minutes in case of 10% polyacrylamide gels.

Se utilizaron los siguientes tampones: Tampón de electroforesis: 72 g de Glicina, 15 g deTris-base, 5 g de SDS (sodium dodecyl sulfate). Tampón de transferencia: 25 X: 36.5 g de Glicina, 72.5 g de Tris-base, 4.5 g de SDS. A continuación, se hizo la transferencia de los geles a membranas PVDF (fluoruro de polivinilideno, 0.45 Im, Millipore, Massachusetts, USA); las transferencias se realizaron a 0.18 A durante 100 minutos. Las membranas de PVDF se activaron previamente en metanol 5 minutos, en agua 2 minutos y en tampón de transferencia 2 minutos. The following buffers were used: Electrophoresis buffer: 72 g of Glycine, 15 g of Tris-base, 5 g of SDS (sodium dodecyl sulfate). Transfer buffer: 25 X: 36.5 g of Wisteria, 72.5 g of Tris-base, 4.5 g of SDS. Next, the gels were transferred to PVDF membranes (polyvinylidene fluoride, 0.45 Im, Millipore, Massachusetts, USA); transfers were made at 0.18 A for 100 minutes. The PVDF membranes were previously activated in methanol 5 minutes, in water 2 minutes and in buffer of transfer 2 minutes.

ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1

Se bloquearon las membranas con BSA (Bovine albumin, Sigma Aldrich, St. Louis, USA) y con leche desnatada (Nonfat-dried Milk Bovine, Sigma Aldrich, St. Louis, USA) durante una hora a temperatura ambiente, según especificaciones de cada anticuerpo. The membranes were blocked with BSA (Bovine albumin, Sigma Aldrich, St. Louis, USA) and with skim milk (Nonfat-dried Milk Bovine, Sigma Aldrich, St. Louis, USA) for one hour at room temperature, according to specifications of each antibody.

Inmunodetección Se lavaron las membranas en TBS-TWEEN (100 ml-TBS 10 x, 1 ml-TWEEN 20, 900 ml agua destilada) y luego se incubaron las membranas con el anticuerpo primario a las diluciones adecuadas, durante una hora a temperatura ambiente o durante toda la noche a 4º C. Se utilizaron los siguientes anticuerpos primarios (Tabla 2) a una dilución de 1:10000 y se incubaron durante una hora o durante toda la noche: Immunodetection The membranes were washed in TBS-TWEEN (100 ml-TBS 10 x, 1 ml-TWEEN 20, 900 ml distilled water) and then the membranes were incubated with the primary antibody at appropriate dilutions, for one hour at room temperature or overnight at 4 ° C. The following primary antibodies (Table 2) were used at a dilution of 1: 10,000 and incubated for one hour or overnight:

Proteína Protein

Casa comercial Comercial House

ACC (anti-acetyl CoA Carboxylase) pACCa (anti-phospho-acetyl CoA Carboxylase, ser 79) AMPKa1 (AMP-activated protein kinase a1) AMPKa2 (AMP-activated protein kinase a2) ACC (anti-acetyl CoA Carboxylase) pACCa (anti-phospho-acetyl CoA Carboxylase, ser 79) AMPKa1 (AMP-activated protein kinase a1) AMPKa2 (AMP-activated protein kinase a2)

Upstate, Millipore,Temecula, CA, USA Upstate, Millipore, Temecula, CA, USA

pAMPKa-Thr172 (phospho-AMP-activated protein kinase) acetyl –p53 (Lys379) Phospho-CREB (Ser13) pAMPKa-Thr172 (phospho-AMP-activated protein kinase) acetyl –p53 (Lys379) Phospho-CREB (Ser13)

Cell Signaling, Danvers, USA. Cell Signaling, Danvers, USA.

SIRT1 (B-7) , FKHR (C-15) SIRT1 (B-7), FKHR (C-15)

Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Germany Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Germany

{-Actin {-Actin

Sigma Aldrich Sigma Aldrich

Tabla 2: anticuerpos primarios empleados en el Western Blotting. Table 2: Primary antibodies used in Western Blotting.

Se realizaron tres lavados con solución TBS-TWEEN de 5 minutos cada uno y luego se incubaron con el anticuerpo secundario durante una hora a temperatura ambiente. Como anticuerpos secundarios se utilizaron, con una dilución de 1:50000, y con una incubación de una hora: Three washes were performed with TBS-TWEEN solution of 5 minutes each and then incubated with the antibody secondary for one hour at room temperature. As secondary antibodies were used, with a dilution of 1: 50,000, and with an incubation of one hour:

Policlonal Goat Anti-Rabbit immunoglobulins/HRP Polyclonal rabbit Anti-Mouse immunoglobulins/Mouse HRP (Dako, Dinamarca) Polyclonal Goat Anti-Rabbit immunoglobulins / HRP Polyclonal rabbit Anti-Mouse immunoglobulins / Mouse HRP (Dako, Denmark)

Luego se realizaron tres lavados con solución TBS-TWEEN de 5 minutos cada uno y se incubaron las membranas durante 1-2 minutos con el Sustrato de quimioluminiscencia o ECL (Pierce ECL (Enhanced Chemiluminescent Substratre) Western Blotting Substrate, Thermo, scientific, Rockford, USA) en un lugar oscuro y sin agitación. Cuando el anticuerpo secundario se incuba con el sustrato y el ECL, emite una reacción luminosa que permite la visualización, mediante autoradiografia, de la interacción de anticuerpos con la proteína de la muestra. Luego, se colocaron las membranas en un casete de autoradriografias con películas fotográficas (Amershan, hiperfilm M RPN 6 K) y se revelaron las películas en diferentes tiempos de exposición según la señal, en la cámara oscura. RESULTADOS Tras comprobar que la falta de p53 bloquea el efecto orexigénico (inductor de ingesta) de la ghrelina, investigamos los mecanismos moleculares que podrían estar alterados a través de la determinación de los niveles de distintos enzimas que actúan en el metabolismo de ácidos grasos. No se encontraron diferencias significativas en los niveles de expresión de AMPKa1 (AMP-activada proteína kinasa a1)K AMPKa2 (AMP-activada proteína kinasa a2)K FAS (sintetasa de ácidos grasos) o ACCa (acetil Coenzima A carboxilasa) entre ratones wild type y knockout para p53. Sin embargo, nuestros datos indican que 6 horas tras la inyección central en ratones wild type, la ghrelina activa pAMPK en el hipotálamo (incrementa los niveles de AMPK fosforilada) (Figura 2 A y B). Sin embargo, en los ratones deficientes para p53, la ghrelina no activa AMPK (Figura 2 A y B), lo cual indica que p53 es un mediador esencial de las acciones de la ghrelina sobre AMPK. Three washes were then performed with TBS-TWEEN solution of 5 minutes each and the membranes were incubated for 1-2 minutes with the Chemiluminescent Substrate or ECL (Pierce ECL (Enhanced Chemiluminescent Substratre) Western Blotting Substrate, Thermo, scientific, Rockford, USA) in a dark place without agitation. When the secondary antibody is incubated with the substrate and the ECL, it emits a light reaction that allows the visualization, by autoradiography, of the interaction of antibodies with the sample protein. Then, the membranes were placed in an autoradiography cassette with photographic films (Amershan, hyperfilm M RPN 6 K) and the films were revealed at different exposure times according to the signal, in the dark chamber. RESULTS After verifying that the lack of p53 blocks the orexigenic effect (intake inducer) of ghrelin, we investigate the molecular mechanisms that could be altered through the determination of the levels of different enzymes that act in the metabolism of fatty acids. No significant differences were found in the expression levels of AMPKa1 (AMP-activated protein kinase a1) K AMPKa2 (AMP-activated protein kinase a2) K FAS (fatty acid synthetase) or ACCa (acetyl Coenzyme A carboxylase) among wild type mice and knockout for p53. However, our data indicate that 6 hours after central injection in wild type mice, ghrelin activates pAMPK in the hypothalamus (increases phosphorylated AMPK levels) (Figure 2 A and B). However, in mice deficient for p53, ghrelin does not activate AMPK (Figure 2 A and B), which indicates that p53 is an essential mediator of the actions of ghrelin on AMPK.

EJEMPLO 3: Efectos del ARN de interferencia de p53 sobre la ingesta y la acción orexigénica de la ghrelina en ratones normales EXAMPLE 3: Effects of p53 interference RNA on the intake and orexigenic action of ghrelin in normal mice

MATERIALES Y MÉTODOS Administración i.c.v. de ARN de interferencia para p53 y ghrelina Se establecieron los siguientes grupos experimentales: MATERIALS AND METHODS Administration i.c.v. of interfering RNA for p53 and ghrelin The following experimental groups were established:

• •

10 ratones control (3 Il seero fisiologico + 3 Il suero fisiologico) 10 control mice (3 Il seero physiological + 3 Il physiological serum)

• •

10 ratones tratados con suero fisiológico (3 Il) + ghrelina (5Ig/3Il) 10 mice treated with physiological serum (3 Il) + ghrelin (5Ig / 3Il)

• •

10 ratones tratados con ARN de interferencia para p53 (10 Ig/3 Il) + suero fisiologico (3 Il) 10 mice treated with interfering RNA for p53 (10 Ig / 3 Il) + physiological serum (3 Il)

• •

10 ratones tratados con ARN de interferencia para p53 (10 Ig/3 Il) + ghrelina (5Ig/3 Il) 10 mice treated with interfering RNA for p53 (10 Ig / 3 Il) + ghrelin (5Ig / 3 Il)

• •

10 ratones tratados con la secuencia inactiva del ARN de p53 (10 Ig/3 Il) + ghrelina (5Ig/3 Il) 10 mice treated with the inactive p53 RNA sequence (10 Ig / 3 Il) + ghrelin (5Ig / 3 Il)

Las secuencias para los ARN de interferencia para p53 (ARNi) y las secuencias de ARN inactivas de p53 (sense) correspondientes ensayadas fueron las siguientes: The sequences for the interfering RNAs for p53 (RNAi) and the corresponding inactive RNA sequences of p53 (sense) tested were the following:

ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1

ARNi (5’- -3’) RNAi (5’- -3 ’)

SEQ ID NO: Posición en la secuencia de p53 de ratón Posición en la secuencia de p53 de humano SEQ ID NO: Position in mouse p53 sequence Position in the p53 sequence of human

acagacuuggcugucccagTTacagacuuggcugucccagTT

10 495-514 544-563  10 495-514 544-563

ggagcuauuacacauguacTTggagcuauuacacauguacTT

11 853-872 902-920  eleven 853-872 902-920

gagucuuccagugugaugaTTgagucuuccagugugaugaTT

12 909-928 958-977  12 909-928 958-977

ARN inactivas de p53 (sense) Inactive RNA from p53 (sense)

cugggacagccaagucuguTT cugggacagccaagucuguTT

13 495-514 544-563 13 495-514 544-563

guacauguguaauagcuccTTguacauguguaauagcuccTT

14 853-872 902-920  14 853-872 902-920

ucaucacacuggaagacucTTucaucacacuggaagacucTT

15 909-928 958-977  fifteen 909-928 958-977

5 Tabla 3: secuencias de los ARN de interferencia y los ARN inactivos (sense) diseñados para p53. 5 Table 3: sequences of interference RNAs and inactive RNAs (sense) designed for p53.

La posición en la secuencia de p53 corresponde al número de nucleótido en la secuencia del ARNm (transcript variant 1) de p53. La secuencia de p53 de ratón corresponde a la de número de acceso en la NCBI (National Center for Biotechnology Information): NM_001127233 (SEQ ID NO: 8) . La secuencia de p53 de humano corresponde a la The position in the p53 sequence corresponds to the nucleotide number in the mRNA sequence (transcript variant 1) of p53. The mouse p53 sequence corresponds to the access number in the NCBI (National Center for Biotechnology Information): NM_001127233 (SEQ ID NO: 8). The human p53 sequence corresponds to the

10 de número de acceso en la NCBI: NM_000546 (SEQ ID NO:1). 10 of access number in the NCBI: NM_000546 (SEQ ID NO: 1).

Las moléculas de ARN de interferencia, así como las de ARN inactivas, fueron diseñadas por nLife Therapeutics The interfering RNA molecules, as well as inactive RNA molecules, were designed by nLife Therapeutics

S.L. S.L.

15 RESULTADOS Una vez comprobado que la deficiencia global de p53 afecta a la señal orexigénica de la ghrelina, se diseñaron tres ARN de interferencia (ARNi) para bloquear la expresión de p53 específicamente en el sistema nervioso central. Para ello, inyectamos el ARNi de manera intracerebroventricular, y observamos que por sí solo, el ARNi inhibe la ingesta de ratones normales (Figura 3). Además, el ARNi bloquea el efecto orexigénico inducido por la ghrelina (Figura 3). RESULTS Once it was proven that the overall deficiency of p53 affects the orexigenic ghrelin signal, three interference RNAs (RNAi) were designed to block the expression of p53 specifically in the central nervous system. To do this, we inject the RNAi intracerebroventricularly, and observe that alone, RNAi inhibits the intake of normal mice (Figure 3). In addition, RNAi blocks the orexigenic effect induced by ghrelin (Figure 3).

20 Para comprobar que esta disminución de la ingesta provocada por el ARNi no está provocada por un efecto inespecífico, administramos de manera intracerebroventricular, una secuencia inactiva (sense) de p53, que es idéntica a la secuencia de ARNm de p53 en dirección 5´-3´, la cual no debería ejercer efecto alguno. Como se demuestra en la figura 3, la administración de la secuencia sense no bloquea el efecto orexigénico de la ghrelina. Por tanto, nuestros datos indican que el efecto anorexigénico del ARNi contra p53 en el hipotálamo es específico. 20 To verify that this decrease in the intake caused by the RNAi is not caused by a nonspecific effect, we administer in an intracerebroventricular manner, an inactive sequence (sense) of p53, which is identical to the p53 mRNA sequence in the 5'- direction 3 ', which should not have any effect. As shown in Figure 3, administration of the sense sequence does not block the orexigenic effect of ghrelin. Therefore, our data indicate that the anorexigenic effect of RNAi against p53 in the hypothalamus is specific.

ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1

Claims (23)

REIVINDICACIONES 1. Composición farmacéutica que comprende: 1. Pharmaceutical composition comprising: i. al menos un inhibidor específico de la expresión del gen codificante de la proteína p53, donde dicho inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 1 a 7, y i. at least one specific inhibitor of the expression of the gene encoding the p53 protein, wherein said inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to any of the sequences SEQ ID NO: 1 to 7, and ii. al menos un elemento seleccionado de la lista que comprende: ghrelina, anticuerpo contra péptido relacionado con agoutí (AgRP), anticuerpo contra pro-opiomelanocortina (POMC), anticuerpo contra transcrito regulado por cocaína/anfetaminas (CART), anticuerpo contra péptido similar a glucagón 1 (GLP-1), anticuerpo contra neuropéptido Y (NPY), anticuerpo contra receptor de ghrelina (GHS-R1A) . ii. at least one item selected from the list comprising: ghrelin, antibody against agouti-related peptide (AgRP), antibody against pro-opiomelanocortin (POMC), antibody against transcript regulated by ***e / amphetamines (CART), antibody against peptide similar to glucagon 1 (GLP-1), antibody against neuropeptide Y (NPY), antibody against ghrelin receptor (GHS-R1A).

2. 2.

Composición farmacéutica según la reivindicación 1, donde el inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a la SEQ ID NO: 1. Pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to SEQ ID NO: 1.

3. 3.

Composición farmacéutica según la reivindicación 2, donde el ácido nucleico es un ARN de interferencia. Pharmaceutical composition according to claim 2, wherein the nucleic acid is an interfering RNA.

4. Four.

Composición farmacéutica según la reivindicación 3, donde el ARN de interferencia es de cadena simple. Pharmaceutical composition according to claim 3, wherein the interference RNA is single stranded.

5. 5.

Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, donde la secuencia del ARN de interferencia difiere en 1, 2 ó 3 nucleótidos con respecto a las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Pharmaceutical composition according to any of claims 2 to 4, wherein the interference RNA sequence differs by 1, 2 or 3 nucleotides with respect to the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12.

6. 6.

Composición farmacéutica según la reivindicación 5, donde la secuencia del ARN de interferencia es cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Pharmaceutical composition according to claim 5, wherein the interference RNA sequence is any of the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12.

7. 7.

Composición farmacéutica según la reivindicación 3 ó 4, donde la secuencia del ARN de interferencia tiene una longitud de entre 12 y 30 nucleótidos. Pharmaceutical composition according to claim 3 or 4, wherein the interference RNA sequence is between 12 and 30 nucleotides in length.

8. 8.

Composición farmacéutica según la reivindicación 7, donde la secuencia del ARN de interferencia además comprende un dinucleótido TT en el extremo 3’. Pharmaceutical composition according to claim 7, wherein the interference RNA sequence further comprises a TT dinucleotide at the 3 'end.

9. 9.

Uso de un inhibidor específico de la expresión del gen codificante de la proteína p53, donde dicho inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 1 a 7, para la preparación de un medicamento para reducir la ingesta de alimentos. Use of a specific inhibitor of the expression of the gene coding for the p53 protein, wherein said inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to any of the sequences SEQ ID NO: 1 to 7, for the preparation of a medicament for reducing the intake of foods.

10. 10.

Uso según la reivindicación 9, donde el inhibidor comprende un ácido nucleico de secuencia complementaria a la secuencia SEQ ID NO: 1. Use according to claim 9, wherein the inhibitor comprises a nucleic acid of sequence complementary to the sequence SEQ ID NO: 1.

11. eleven.

Uso según la reivindicación 10, donde el ácido nucleico es un ARN de interferencia. Use according to claim 10, wherein the nucleic acid is an interfering RNA.

12. 12.

Uso según la reivindicación 11, donde el ARN de interferencia es de cadena simple. Use according to claim 11, wherein the interference RNA is single stranded.

13. 13.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, donde la secuencia del ARN de interferencia difiere en 1, 2 ó 3 nucleótidos con respecto a las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Use according to any of claims 10 to 12, wherein the interference RNA sequence differs by 1, 2 or 3 nucleotides with respect to the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12.

14. 14.

Uso según la reivindicación 13, donde la secuencia del ARN de interferencia es cualquiera de las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, o SEQ ID NO: 12. Use according to claim 13, wherein the interference RNA sequence is any of the sequences SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, or SEQ ID NO: 12.

15. fifteen.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12, donde la secuencia del ARN de interferencia tiene una longitud de entre 12 y 30 nucleótidos. Use according to any of claims 11 to 12, wherein the interference RNA sequence is between 12 and 30 nucleotides in length.

16. 16.

Uso según la reivindicación 15, donde la secuencia del ARN de interferencia además comprende un dinucleótido TT en el extremo 3’. Use according to claim 15, wherein the interference RNA sequence further comprises a TT dinucleotide at the 3 'end.

17. 17.

Uso de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la preparación de un medicamento para reducir el peso corporal en un sujeto. Use of a pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 8 for the preparation of a medicament for reducing body weight in a subject.

18. 18.

Uso según la reivindicación 17, donde el sujeto sufre de obesidad o de un trastorno metabólico asociado a la obesidad. Use according to claim 17, wherein the subject suffers from obesity or a metabolic disorder associated with obesity.

19. 19.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18, donde el medicamento además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable. Use according to any of claims 9 to 18, wherein the medicament further comprises a pharmaceutically acceptable carrier.

20. twenty.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 19, donde el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración oral o parenteral. Use according to any of claims 9 to 19, wherein the medicament is presented in a form adapted to oral or parenteral administration.

21. twenty-one.

Uso según la reivindicación 20, donde el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración intravenosa. Use according to claim 20, wherein the medicament is presented in a form adapted to intravenous administration.

22. 22

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 21, donde el medicamento además comprende un excipiente farmacológicamente aceptable. Use according to any of claims 9 to 21, wherein the medicament further comprises a pharmacologically acceptable excipient.

ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1 Figura 1 Figure 1 A TO B B Figura 2 Figure 2 A TO ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1 B B ES 2 387 431 A1 ES 2 387 431 A1 Figura 3 Figure 3 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS SPANISH OFFICE OF THE PATENTS AND BRAND N.º solicitud: 201130250 Application no .: 201130250 ESPAÑA SPAIN Fecha de presentación de la solicitud: 25.02.2011 Date of submission of the application: 02.25.2011 Fecha de prioridad: Priority Date: INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA REPORT ON THE STATE OF THE TECHNIQUE 51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional 51 Int. Cl.: See Additional Sheet DOCUMENTOS RELEVANTES RELEVANT DOCUMENTS

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56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas 56 Documents cited Claims Affected

A A A A A A

WO 2006/092782 A2 (YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT CO. LTD.) 08.09.2006, todo el documento. WO 2008/075064 A1 (ASTRAZENECA AB) 26.06.2008, todo el documento. WO 2010/042868 A2 (UNIVERSITY OF WASHINGTON) 15.04.2010, todo el documento. 1-22 1-22 1-22 WO 2006/092782 A2 (YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT CO. LTD.) 08.09.2006, the whole document. WO 2008/075064 A1 (ASTRAZENECA AB) 26.06.2008, the whole document. WO 2010/042868 A2 (UNIVERSITY OF WASHINGTON) 04/15/2010, the whole document. 1-22 1-22 1-22

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application

El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: This report has been prepared • for all claims • for claims no:

Fecha de realización del informe 04.06.2012 Date of realization of the report 04.06.2012

Examinador M. d. García Coca Página 1/4 Examiner M. d. Garcia Coca Page 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA REPORT OF THE STATE OF THE TECHNIQUE Nº de solicitud: 201130250 Application number: 201130250 CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD CLASSIFICATION OBJECT OF THE APPLICATION A61K31/7105 (2006.01) A61K38/22 (2006.01) A61K39/395 (2006.01) A61P3/04 (2006.01)  A61K31 / 7105 (2006.01) A61K38 / 22 (2006.01) A61K39 / 395 (2006.01) A61P3 / 04 (2006.01) Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) Minimum documentation sought (classification system followed by classification symbols) A61K, A61P A61K, A61P Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) Electronic databases consulted during the search (name of the database and, if possible, search terms used) INVENES, EPODOC, WPI, EMBL-EBI INVENES, EPODOC, WPI, EMBL-EBI Informe del Estado de la Técnica Página 2/4 State of the Art Report Page 2/4 OPINIÓN ESCRITA  WRITTEN OPINION Nº de solicitud: 201130250 Application number: 201130250 Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 04.06.2012 Date of Written Opinion: 04.06.2012 Declaración Statement

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Novelty (Art. 6.1 LP 11/1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-22 SI NO Claims Claims 1-22 IF NOT

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Inventive activity (Art. 8.1 LP11 / 1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-22 SI NO Claims Claims 1-22 IF NOT

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986). The application is considered to comply with the industrial application requirement. This requirement was evaluated during the formal and technical examination phase of the application (Article 31.2 Law 11/1986). Base de la Opinión.-  Opinion Base.- La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica. This opinion has been made on the basis of the patent application as published. Informe del Estado de la Técnica Página 3/4 State of the Art Report Page 3/4 OPINIÓN ESCRITA  WRITTEN OPINION Nº de solicitud: 201130250 Application number: 201130250 1. Documentos considerados.-  1. Documents considered.- A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión. The documents belonging to the state of the art taken into consideration for the realization of this opinion are listed below.

Documento Document

Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date

D01 D01

WO 2006/092782 A2 (YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT CO. LTD.) 08.09.2006 WO 2006/092782 A2 (YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT CO. LTD.) 08.09.2006

D02 D02

WO 2008/075064 A1 (ASTRAZENECA AB) 26.06.2008 WO 2008/075064 A1 (ASTRAZENECA AB) 06.26.2008

D03 D03

WO 2010/042868 A2 (UNIVERSITY OF WASHINGTON) 15.04.2010 WO 2010/042868 A2 (UNIVERSITY OF WASHINGTON) 04.15.2010

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración  2. Statement motivated according to articles 29.6 and 29.7 of the Regulations for the execution of Law 11/1986, of March 20, on Patents on novelty and inventive activity; quotes and explanations in support of this statement El objeto de la invención, tal y como se recoge en las reivindicaciones 1-22, es una composición farmacéutica que comprende al menos un inhibidor específico de la expresión del gen que codifica para la proteína p53 (RNAi de cadena simple: SEQ ID Nº: 10-12) y al menos un elemento seleccionado entre: ghrelina, anticuerpo contra AgRP, anticuerpo contra POMC, anticuerpo contra CART, anticuerpo contra GLP-1, anticuerpo contra NRY o anticuerpo contra GHS-R1A (reiv. 1-8). Es también objeto de la invención el uso de un inhibidor específico de la expresión del gen que codifica para la proteína p53 (RNAi de cadena simple: SEQ ID Nº: 10-12) para reducir la ingesta de alimentos (reiv. 9-16), y el uso de la composición farmacéutica para reducir el peso corporal en un sujeto que sufre de obesidad o de un trastorno metabólico asociado a la obesidad (reiv. 17-22). The object of the invention, as set forth in claims 1-22, is a pharmaceutical composition comprising at least one specific inhibitor of the expression of the gene encoding the p53 protein (single chain RNAi: SEQ ID NO: 10-12) and at least one element selected from: ghrelin, antibody against AgRP, antibody against POMC, antibody against CART, antibody against GLP-1, antibody against NRY or antibody against GHS-R1A (reiv. 1-8). It is also the object of the invention to use a specific gene expression inhibitor that encodes the p53 protein (single chain RNAi: SEQ ID NO: 10-12) to reduce food intake (reiv. 9-16) , and the use of the pharmaceutical composition to reduce body weight in a subject suffering from obesity or a metabolic disorder associated with obesity (reiv. 17-22). Novedad y Actividad Inventiva (Art. 6.1 y 8.1 de la Ley 11/1986 de Patentes).  Novelty and Inventive Activity (Art. 6.1 and 8.1 of Law 11/1986 on Patents). El documento D01 divulga métodos y composiciones para regular el peso corporal, o el contenido en grasa de un sujeto, así como métodos para el tratamiento o para prevenir enfermedades relacionadas con el sobrepeso, como la obesidad, mediante la modificación de la actividad o la expresión de la proteína tirosin-fosfatasa épsilon (PTPe). Document D01 discloses methods and compositions to regulate the body weight, or fat content of a subject, as well as methods for treatment or to prevent diseases related to overweight, such as obesity, by modifying activity or expression of the protein tyrosine phosphatase epsilon (PTPe). El documento D02 divulga derivados de la piperidina para el tratamiento de la obesidad y de enfermedades relacionadas con trastornos en la alimentación. Dichos derivados actúan inhibiendo a la acido graso sintasa. Document D02 discloses piperidine derivatives for the treatment of obesity and diseases related to eating disorders. Said derivatives act by inhibiting fatty acid synthase. El documento D03 divulga métodos para reducir el peso corporal de un sujeto y para tratar o prevenir la obesidad de un sujeto, mediante la administración de inhibidores de la proteína deacetilasa sirtuina1 (SirT1). Document D03 discloses methods to reduce the body weight of a subject and to treat or prevent obesity of a subject, by administering inhibitors of the acetylase sirtuin1 protein (SirT1). Ninguno de los documentos citados (D01-D03), tomados solos o en combinación, revelan la invención definida en las reivindicaciones 1-22. Además, en los documentos citados no hay sugerencias que dirijan al experto en la materia hacia la invención definida por dichas reivindicaciones. Por lo tanto, el objeto de la invención según se recoge en las reivindicaciones 1-22, cumple con el requisito de novedad e implica actividad inventiva en el sentido de los artículos 6.1 y 8.1 de la Ley 11/1986 de Patentes. None of the documents cited (D01-D03), taken alone or in combination, reveal the invention defined in claims 1-22. In addition, there are no suggestions in the cited documents that direct the person skilled in the art towards the invention defined by said claims. Therefore, the object of the invention as set forth in claims 1-22, meets the requirement of novelty and implies inventive activity within the meaning of articles 6.1 and 8.1 of Patent Law 11/1986. Informe del Estado de la Técnica Página 4/4 State of the Art Report Page 4/4