ES2365557T5 - Vacunas de combinación de Poliovirus inactivado - Google Patents

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

pueden estar formadas por partículas compuestas, por ejemplo (L*, S), en las que L* es tal como se ha definido anteriormente y S indica la proteína S del AgHBs. De manera ventajosa, dicha partícula se encuentra en la forma en que se expresa en la levadura.

En una realización, el AgHBs es el antígeno usado en EngerixB™ (GlaxoSmithKline Biologicals S.A.), que se describe más en el documento WO93/24148.

En una realización, el AgHBs está presente en una cantidad de 5-20 µg, 8-15 µg, o aproximadamente o exactamente 10 µg por dosis de 0,5 ml.

El antígeno de superficie de la hepatitis B puede ser adsorbido sobre fosfato de aluminio, que se puede realizar antes de mezclarlo con los otros componentes (descrito en el documento WO93/24148). El componente de hepatitis B debe estar sustancialmente libre de tiomersal (el procedimiento de preparación de AgHBs sin tiomersal se ha publicado previamente en el documento EP 1307473).

Antígeno(s) de Haemophilus influenzae b

Las vacunas que comprenden antígenos de Haemophilus influenzae tipo B se han descrito en el documento WO 97/00697. Las vacunas de la invención pueden utilizar cualquier antígeno de Haemophilus influenzae tipo B adecuado. El antígeno puede ser un sacárido capsular (PRP) de Haemophilus influenzae tipo B (Hib) conjugado con una proteína vehículo. El sacárido es un polímero de ribosa, ribitol y fosfato. El antígeno Hib opcionalmente puede ser adsorbido sobre fosfato de aluminio como se describe en el documento WO 97/00697, o puede no estar adsorbido como se describe en el documento WO 02/00249 o puede no someterse a un proceso de adsorción específico.

En el presente documento se entiende por antígeno “no adsorbido en una sal de aluminio adyuvante”, por ejemplo, que en el proceso de formulación de la composición no está incluida una etapa de adsorción expresa o dedicada para el antígeno sobre una sal adyuvante de aluminio recién preparada.

Hib se puede conjugar con cualquier vehículo que pueda proporcionar al menos un epítopo de linfocito T ayudante (ejemplos de los cuales se describen a continuación), y puede ser el toxoide tetánico, toxoide diftérico, CRM-197 (mutante de la toxina diftérica) o la proteína D.

Hib se puede liofilizar y puede reconstituirse de manera extemporánea (por ejemplo, con diluyente, que opcionalmente comprenda otros componentes antigénicos de las vacunas de la invención).

En una realización, el antígeno Hib está presente en una cantidad de 5-20 µg, 8-15 µg, o aproximadamente o exactamente 10 µg de sacárido por dosis de 0,5 ml.

En una realización más, el Hib está presente en una dosis baja (por ejemplo, 1-6 µg, 2-4 µg o alrededor de o exactamente 2,5 µg de sacárido) como se describe en el documento WO 02/00249.

Antígenos de Neisseria meningitidis tipos A, C, W o Y

Las vacunas de la invención pueden comprender además un sacárido capsular de una bacteria seleccionada del grupo que consiste en N. meningitidis tipo A (MenA, opcionalmente conjugado con una proteína vehículo), N. meningitidis tipo C (MenC, opcionalmente conjugado con una proteína transportadora), N. meningitidis tipo W-135 (MenW, opcionalmente conjugado con una proteína vehículo) y N. meningitidis tipo Y (MenY, opcionalmente conjugado con una proteína vehículo).

Las vacunas de la invención puede comprender uno o más antígenos de diferentes cepas de N. meningitidis, que puede utilizarse solos o en cualquier combinación de dos, tres o cuatro componentes como se detalla a continuación:

MenA, MenC, MenW, MenY o MenA + MenC, MenA + MenW, MenA + MenY, MenC + MenW, MenC + MenY, MenW + MenY o MenA + MenC + MenW, MenA + MenC + MenY, MenA + MenW + MenY, MenC + MenW + MenY o MenA + MenC + MenW + MenY.

En una realización, el (los) componente(s) de Neisseria meningitidis pueden ser adsorbidos sobre una sal de aluminio tal como hidróxido de aluminio. En otra realización, el (los) componente(s) de Neisseria meningitidis pueden ser adsorbidos sobre una sal de aluminio, tal como fosfato de aluminio. En una realización más, el (los) componente(s) de Neisseria meningitidis pueden ser adsorbidos sobre una mezcla de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio. En una realización, el (los) componente(s) de Neisseria meningitidis pueden no estar adsorbidos sobre un adyuvante, por ejemplo, una sal de aluminio adyuvante.

7

imagen6

5

15

25

35

45

55

destoxificado) de S. pneumoniae (véase, por ejemplo documento WO 2004/081515 y las referencias que figuran en el mismo), OMPC de N. meningitidis (documento EP 0372501) y proteína D (PD) de H. influenzae (documento EP 594610). Otros vehículos pueden incluir péptidos sintéticos (documentos EP 0378881, EP 0427347), proteínas de choque térmico (documentos WO 93/17712, WO 94/03208), proteínas de pertussis (documentos WO 98/58668, EP 0471177), citocinas (documento WO 91/01146), linfocinas (documento WO 91/01146), hormonas (documento WO 91/01146), factores de crecimiento (documento WO 91/01146), proteínas artificiales que comprende múltiples epítopos de linfocitos T CD4+ humanos de diversos antígenos derivados de agentes patógenos (Falugi y col., 2001, Eur. J. Immunol. 31: 3816), proteína de superficie neumocócica PspA (documento WO 02/091998), proteínas de captación de hierro (documento WO 01/72337), toxina A o B de C. difficile (documento WO 00/61761), PhtD de neumococo (documento WO 00/37105), PhtDE de neumococo (por ejemplo, documentos WO 01/98334 y WO 03/054007), PhtX, etc.

Los sacáridos pueden estar todos en el mismo vehículo, en especial todos los sacáridos de un organismo en particular, por ejemplo, los sacáridos de MenA, MenC, MenW y MenY se pueden conjugar todos con TT, DT o CRM

197. Sin embargo, debido al conocido efecto de supresión del vehículo, puede ser ventajoso que en cada una de las composiciones de la invención los antígenos sacáridos contenidos en la misma (“n” antígenos) se conjuguen con más de un vehículo. Por lo tanto, (n-1) de los sacáridos podrían ser transportados (por separado) en un tipo de vehículo, y 1 en un vehículo diferente, o (n-2) en uno, y dos en dos vehículos diferentes, etc. Por ejemplo, en una vacuna que contiene cuatro conjugados de sacáridos bacterianos, 1, 2 o los cuatro pueden conjugarse con diferentes vehículos). La proteína D, sin embargo, puede utilizarse para diversos (2, 3, 4 o más) sacáridos en una composición sin que se produzca un marcado efecto de supresión del vehículo. Hib puede estar presente como un conjugado con TT, DT o CRM197, y MenA, MenC, MenY y MenW pueden estar como conjugados con TT, DT, CRM197 o PD. Vi puede estar presente como un conjugado con TT, DT o CRM197. La proteína D es un vehículo útil, ya que proporciona un antígeno adicional que puede proporcionar protección frente a H. influenzae. En una realización, todos los sacáridos se conjugan con la misma proteína vehículo.

Vi puede conjugarse con una proteína vehículo, por ejemplo, por un procedimiento que utiliza química de condensación con carbodiimida (por ejemplo, EDAC) (dado que la subunidad de repetición Vi comprende grupos ácido carboxílico). Esto podría lograrse, ya sea por (i) una única reacción de carbodiimida entre el COOH de Vi y el NH2 de la proteína o (ii) una doble reacción de carbodiimida que puede tener lugar ya sea entre el COOH de Vi y el NH2 de una molécula conectora homobifuncional y el COOH de la proteína y el NH2 de la molécula conectora homobifuncional, o entre el COOH de Vi y el NH2 de la molécula conectora heterobifuncional y el NH2 de la proteína y el COOH de la molécula conectora heterobifuncional.

La conjugación puede usarse conjuntamente con la(s) proteína(s) vehículo libre(s). En una realización, cuando está presente una proteína vehículo dada tanto en forma libre como conjugada en una composición de la invención, la forma no conjugada no constituye más del 5 % de la cantidad total de la proteína vehículo en la composición como un todo, o en otra realización está presente en una cantidad inferior al 2 % en peso.

El sacárido puede unirse a la proteína vehículo por cualquier procedimiento conocido (por ejemplo, por Likhite, Patente de EEUU 4.372.945 y por Armor y col., Patente de EEUU 4.474.757), con cualquier conector adecuado cuando sea necesario.

El sacárido normalmente será activado o funcionalizado antes de la conjugación. La activación puede implicar, por ejemplo, agentes de cianilación tales como CDAP (tetrafluoroborato de 1-ciano-dimetilaminopiridinio) (documentos WO 95/08348 y WO 96/29094). La reacción de cianilación puede realizarse bajo condiciones relativamente suaves, que evitan la hidrólisis de los sacáridos sensibles a la alcalinidad. Esta síntesis permite un acoplamiento directo con una proteína vehículo. Otras técnicas adecuadas utilizan carbodiimidas, hidrazidas, ésteres activos, norborano, ácido p-nitrobenzoico, N-hidroxisuccinimida, S-NHS, EDC o TSTU.

Las uniones a través de un grupo conector pueden realizarse por medio de cualquier procedimiento conocido, por ejemplo, los procedimientos descritos en los documentos US 4.882.317 y US 4.695.624. Un tipo de unión implica la aminación reductora del sacárido, el acoplamiento del grupo amino resultante con un extremo de un grupo conector de ácido adípico (documento EP 0477508, Porro y col., 1985, Mol. Immunol. 22: 907, documento EP 0208375), y a continuación el acoplamiento de una proteína al otro extremo del grupo conector de ácido adípico. Otros conectores incluyen B-propionamido (documento WO 00/10599), nitrofenil-etilamina (Gever y col., 1979, Med. Microbiol. Immunol.165: 171), haluros de haloacilo (documento US 4.057.685), enlaces glucosídicos (documentos US 4.673.574; US 4.761.283; US 4.808.700), ácido 6-aminocaproico (documento US 4.459.286), ADH (documento US 4.965.338), restos C4 a C12 (US 4.663.160), etc. Como una alternativa al uso de un conector, puede utilizarse el enlace directo. Los enlaces directos con la proteína puede comprender la oxidación del sacárido seguida por la aminación reductora con la proteína, como se describe, por ejemplo en los documentos US 4.761.283 y US

4.356.170 o una reacción directa con CDAP.

Después de la conjugación, los sacáridos libres y conjugados se pueden separar. Existen muchos procedimientos adecuados para la separación, incluyendo la cromatografía hidrófoba, la ultrafiltración tangencial, la diafiltración, etc. (véase también Lei y col., 2000, Dev Biol (Basilea) 103: 259; documentos WO 00/38711; US 6.146.902). En una realización, si una vacuna comprende un sacárido dado tanto en forma libre como conjugada, la forma no conjugada

9

imagen7

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Aunque la mayor parte de aluminio es proporcionada por los antígenos preadsorbidos antes de la mezcla para formar una vacuna de combinación, algo de aluminio se puede añadir en forma libre durante la formulación de la vacuna de combinación de la invención, por ejemplo, antes de la etapa de ajuste del pH que se describe en el presente documento. Por lo general, el contenido de aluminio libre por dosis de 0,5 ml puede ser de 0 a 300 µg, de 50 a 250 µg, de 75 a 200 µg, de 100 a 154 µg o de alrededor de o exactamente 115 µg de Al3+. El Al3+ libre puede ser todo Al(OH)3 o todo AlPO4, o una mezcla de Al(OH)3 y AlPO4 en la siguiente relación (Al3+ : Al3+ p:p): 1:1 – 1:6, 1:1,1 – 1:5, 1:1,2 -1:4, 1:1,3 -1:3, 1:1,4 -1:2, por ejemplo, 23/92 o 69/46 o 6:1 -1:1, 5:1 – 1,1:1, 4:1 – 1,2:1, 3:1 – 1,3:1, 2:1 -1,4:1, por ejemplo, 46/69 o 92/23.

Como alternativa, ciertos componentes de las vacunas de la invención pueden no ser adsorbidos en forma expresa sobre un adyuvante, en particular, las sales de aluminio.

El IPV puede no estar adsorbida o puede estar absorbida sobre Al(OH)3, o una mezcla de Al(OH)3 y AlPO4. El DT puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AlPO4, el TT puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AlPO4, el Pw puede estar adsorbido sobre o mezclado con AlPO4, la PRN pueden estar adsorbida sobre Al(OH)3, la FHA pueden estar adsorbida sobre Al(OH)3, el PT puede estar adsorbido sobre Al(OH)3, el HB puede estar adsorbido sobre AlPO4, el Hib puede estar adsorbido sobre AIPO4 o puede no estar adsorbido, Men ACWY puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AIPO4 o puede no estar adsorbido, el componente MenB puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AIPO4 o puede no estar adsorbido, el Vi puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AIPO4 o puede no estar adsorbido, el HepA puede estar adsorbido sobre Al(OH)3 o AlPO4.

Los antígenos que están preadsorbidos sobre una sal de aluminio se pueden preadsorber de manera individual antes de la mezcla. En otra realización, puede preadsorberse una combinación de antígenos antes de mezclarlos con otros adyuvantes. En una realización, el IPV pueden ser absorbido por separado o como una mezcla de IPV de tipos 1, 2 y 3, o cuando se mezcla con los componentes de D y T adsorbidos.

El significado de la expresión “antígeno adsorbido” se entiende, por ejemplo, como más del 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % adsorbido.

El significado de las expresiones “fosfato de aluminio” e “hidróxido de aluminio”, como se utilizan en el presente documento, incluye todas las formas de hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio que son adecuadas para actuar como adyuvantes de vacunas. Por ejemplo, el fosfato de aluminio puede ser un precipitado de fosfato de aluminio insoluble (amorfo, semicristalino o cristalino), que puede prepararse opcionalmente, pero no exclusivamente, mezclando sales solubles de aluminio y sales de ácido fosfórico. El “hidróxido de aluminio” puede ser un precipitado de hidróxido de aluminio insoluble (amorfo, semicristalino o cristalino), que puede prepararse opcionalmente, pero no exclusivamente, por neutralización de una disolución de sales de aluminio. Especialmente adecuadas son las diversas formas de geles de hidróxido de aluminio y de fosfato de aluminio disponibles en el mercado, por ejemplo, Alhydrogel (hidróxido de aluminio, suspensión al 3 % en agua) y Adjuphos (fosfato de aluminio, suspensión al 2 % en solución salina) suministrados por Brenntag Biosector (Dinamarca).

Componentes no inmunológicos de las vacunas de la invención

Las vacunas de la invención comprenderán típicamente, además de los componentes antigénicos y adyuvantes que se mencionaron anteriormente, uno o más “vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables”, que incluyen cualquier excipiente que no induzca la producción de anticuerpos dañinos para el individuo que recibe la composición. Los excipientes adecuados son típicamente macromoléculas grandes, que se metabolizan lentamente, tales como proteínas, sacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos, sacarosa (Paoletti y col., 2001, Vaccine, 19: 2118), trehalosa (documento WO 00/56365), agregados de lactosa y lípidos (tales como gotitas de aceite o liposomas). Tales vehículos son muy conocidos por los expertos en la técnica. Las vacunas también pueden contener diluyentes, tales como agua, solución salina, glicerol, etc. Además, pueden estar presentes sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsivos, sustancias tamponadoras del pH, y similares. La solución salina fisiológica tamponada con fosfato, estéril, libre de pirógenos es un vehículo típico. Un análisis completo de los excipientes farmacéuticamente aceptables está disponible en la referencia Gennaro, 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20ª edición, ISBN: 0683306472.

Las composiciones de la invención pueden estar liofilizadas o en forma acuosa, es decir, como soluciones o suspensiones. Las formulaciones líquidas de este tipo permiten administrar las composiciones directamente desde sus formas de presentación, sin la necesidad de reconstitución en un medio acuoso, por lo que son ideales para la inyección. Las composiciones se pueden presentar en viales, o se pueden presentar en jeringas precargadas listas para usar. Las jeringas pueden suministrarse con o sin agujas. Una jeringa incluirá una dosis única de la composición, mientras que un vial puede incluir una sola dosis o varias dosis (por ejemplo, 2 dosis). En una realización, la dosis es para seres humanos. En otra realización, la dosis es para un ser humano adulto, adolescente, niño en edad de empezar a caminar, niño o bebé menor de un año de edad y puede ser administrada por inyección.

Las vacunas líquidas de la invención también son adecuadas para la reconstitución de otras vacunas a partir de una forma liofilizada. En el caso de que una vacuna se vaya a utilizar para reconstitución extemporánea, la invención

11

imagen8

imagen9

imagen10

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

En una realización, las vacunas del primer y del segundo recipiente se administran conjuntamente en sitios diferentes (como se describe a continuación en “administración de las vacunas de la invención”), y en una realización alternativa, los inventores prevén que el contenido del primer y segundo recipiente se puedan mezclar (opcionalmente de manera extemporánea) antes de la administración como una sola vacuna.

Preparación de las vacunas de la invención

La presente invención también proporciona un procedimiento para producir una formulación de vacuna que comprende la etapa de mezclar los componentes de la vacuna junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En una realización de la presente invención se proporciona una vacuna como se describe en el presente documento para su uso en un medicamento para el tratamiento o la prevención de enfermedades causadas por la infección por el poliovirus, Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, y opcionalmente, el virus de la hepatitis B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi o el virus de la hepatitis A.

En otra realización de la invención se proporciona un uso de las vacunas de la invención en la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de enfermedades causadas por la infección por el poliovirus, Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, y opcionalmente, el virus de la hepatitis B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi o el virus de la hepatitis A.

También se da a conocer un procedimiento de inmunización de un huésped humano contra la enfermedad causada por el poliovirus, Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, y opcionalmente, el virus de hepatitis B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi o el virus de la hepatitis A, cuyo procedimiento comprende la administración al huésped de una dosis inmunoprotectora de la vacuna de la invención.

La cantidad de antígeno en cada dosis de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin los efectos secundarios adversos significativos de las vacunas típicas. Tal cantidad variará en función del inmunógeno específico que se utilice y de la manera en que se presente. En una realización, cada dosis comprenderá de 0,1 a 100 µg de sacárido, en otra realización cada dosis comprenderá de 0,1 a 50 µg, en una realización más cada dosis comprenderá de 0,1 a 10 µg, en otra realización más cada dosis comprenderá de 1 a 5 µg de sacárido.

En una realización, el contenido de antígenos proteicos en la vacuna estará en el intervalo de 1 a 100 µg, en otra realización el contenido de antígenos proteicos en las vacunas estará en el intervalo de 5 a 50 µg, en una realización más el contenido de antígenos proteicos en las vacunas estará en el intervalo de 5 a 25 µg.

La preparación de las vacunas está descrita en general en Vaccine Design [“The subunit and adjuvant approach” (eds Powell M. F. & Newman M. J.) (1995) Plenum Press Nueva York]. El encapsulamiento en liposomas está descrito por Fullerton, Patente de EEUU 4.235.877. Se desvela la conjugación de proteínas a macromoléculas, por ejemplo, por Likhite, patente de EEUU 4.372.945 y por Armor y col., patente de EEUU 4.474.757. Se desvela el uso de Quil A por Dalsgaard y col., 1977, Acta Vet Scand. 18: 349. El 3D-MPL se encuentra disponible de Ribi Immunochem, EEUU y se desvela en la Solicitud de Patente Británica Nº 2220211 y en la patente de EEUU

4.912.094. Se desvela el QS21 en la patente de EEUU 5.057.540.

En otra realización de la invención se proporciona una vacuna multivalente que comprende el poliovirus inactivado (IPV) de la invención, células enteras muertas de Bordetella pertussis (Pw), toxoide tetánico (TT), toxoide diftérico (DT), y opcionalmente, un conjugado de una proteína vehículo y el sacárido capsular de H. influenzae tipo B (Hib opcionalmente conjugado con TT, DT o CRM197), en la que la cantidad de conjugado por dosis de 0,5 ml de vacuna a granel es de 1 a 8 µg, y la inmunogenicidad del conjugado es equivalente o mejor que la de las composiciones que comprenden mayores cantidades de conjugado. Opcionalmente, se puede incluir el antígeno de superficie de la hepatitis B.

En una realización, la cantidad de conjugado por dosis de 0,5 ml de vacuna a granel es inferior a 10 µg (de sacárido en el conjugado), en otra realización la cantidad de conjugado es de 1 a 7, en otra realización la cantidad de conjugado es de 2 a 6 µg, o en una realización más es de aproximadamente 2,5, 3, 4 o 5 µg.

Se puede apreciar que ciertos componentes, por ejemplo los componentes de DTPw, se pueden combinar por separado antes de añadir el AgHBs adsorbido u otros componentes.

También se proporciona un procedimiento de fabricación de las vacunas de la invención que comprende la etapa de mezclar IPV tipo 1, IPV tipo 2 y/o IPV tipo 3 con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Un proceso típico para la preparación de la vacuna de la invención a granel con otros antígenos añadirá los componentes de IPV a una mezcla de los componentes D y T, es decir, los componentes DT se mezclan con los componentes de IPV. Este orden de mezcla permite ajustar la fuerza iónica y/o el pH de la composición (por ejemplo, pH <7) antes de la adición

15 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

de los componentes Pa o Pw. Por lo general, el HB preadsorbido en AlPO4 se añade en primer lugar si se incluye en la composición, seguido por la adición de DT preadsorbida en Al(OH)3 o AlPO4, seguido por la adición de TT preadsorbida en Al(OH)3 o AlPO4, seguido por la adición del IPV opcionalmente preadsorbido en Al(OH)3, antes de ajustar el pH a, por ejemplo pH 5,9 -7,2 o pH 6 -7 o pH 6,2 – 6,8 o pH 6,4 – 6,6, y a continuación añadir Pw preadsorbido en AlPO4. Opcionalmente se pueden añadir los antígenos Hib, Vi, MenA, MenC, MenW, MenY, MenB y/o HepA en cualquier punto de este proceso. En una realización, los antígenos Hib, Vi, MenA, MenC, MenW, MenY, MenB y/o HepA se añaden antes de ajustar el pH. En una realización, se adsorbe uno o más antígenos de la invención sobre fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio o una mezcla de ambos. En otra realización, los antígenos de la invención se mezclan con un excipiente y/o adyuvante(s) farmacéuticamente aceptables.

En una realización, la composición de la vacuna de la invención puede prepararse en el siguiente orden: se añade el AgHBs preadsorbido, seguido por el toxoide diftérico preadsorbido, seguido por el toxoide tetánico preadsorbido y el IPV, a continuación se ajusta el pH hasta aproximadamente 6,5 antes de añadir el Pw preadsorbido.

En otra realización, la composición de la vacuna de la invención pueden prepararse en el siguiente orden: se añade el toxoide tetánico preadsorbido, seguido por IPV, seguido por AgHBs preadsorbido, seguido por el toxoide diftérico preadsorbido, a continuación se ajusta el pH hasta aproximadamente 6,5 antes de añadir el Pw preadsorbido.

En general, las composiciones de vacuna combinada según cualquier aspecto de la invención se pueden preparar de la siguiente manera: el IPV, DTPw, HepB, MenA, MenC, MenW, MenY, MenB, Vi, hepatitis A u otros componentes son preadsorbidos sobre un adyuvante adecuado, en especial hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio o una mezcla de ambos. Después de dejar un tiempo para que tenga lugar la adsorción completa y estable de los componentes respectivos, los diferentes componentes se combinan en las condiciones adecuadas. El (los) conjugados de Hib, Vi, MenA, MenC, MenW y/o MenY pueden o no ser adsorbidos sobre sales de aluminio adyuvantes antes de mezclarlos con la vacuna DTPw.

En una realización, las vacunas de la invención se preparan a una temperatura entre 15 ºC y 30 ºC (por ejemplo, entre 19 ºC y 27 ºC, o a 23± 4 ºC).

Administración de las vacunas de la invención

Las vacunas pueden ser administradas de manera profiláctica (es decir, para prevenir la infección). La respuesta inmunitaria es de preferencia de protección y de preferencia incluye anticuerpos. La administración puede generar una respuesta de refuerzo.

Después de la vacunación inicial, los sujetos pueden recibir una o varias inmunizaciones de refuerzo (posteriores) adecuadamente separadas en el tiempo. El tratamiento de dosificación puede ser un programa de dosis única o un programa de múltiples dosis. Pueden utilizarse múltiples dosis en un programa de inmunización primaria y/o en un programa de inmunización de refuerzo. Un programa de dosis principal, que puede ser en el primer año de vida, puede ser seguido por un programa de dosis de refuerzo. El tiempo adecuado entre las dosis de sensibilización (por ejemplo, entre 4-16 semanas), y entre las dosis iniciales y de refuerzo puede determinarse de forma rutinaria.

En una realización, el mamífero es un ser humano. En el caso en que la vacuna es para uso profiláctico, el ser humano es de preferencia un niño (por ejemplo, un niño en edad de empezar a caminar o un bebé) o un adolescente; en el caso en que la vacuna es para uso terapéutico, el ser humano es de preferencia un adulto. Una vacuna destinada a los niños también se puede administrar a los adultos, por ejemplo para evaluar la seguridad, las dosis, la inmunogenicidad, etc.

Las preparaciones de vacuna de la presente invención pueden usarse para proteger o tratar a un mamífero susceptible a la infección, por medio de la administración de dicha vacuna directamente al paciente. La administración directa se puede realizar por medio de administración parenteral (intramuscular, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea, intravenosa o en el espacio intersticial de un tejido): o por medio de administración rectal, oral, vaginal, tópica, transdérmica, intranasal, ocular, ótica, pulmonar o a través de otras mucosas. En una realización, la administración es por inyección intramuscular en el muslo o en el brazo. La inyección puede realizarse por medio de una aguja (por ejemplo, una aguja hipodérmica), pero puede usarse como alternativa la inyección sin agujas. Una dosis típica para la administración por vía intramuscular es de 0,5 ml.

Las infecciones bacterianas afectan a diversas áreas del cuerpo y por lo tanto las composiciones de la invención se pueden preparar de diversas formas. Por ejemplo, las composiciones se pueden preparar como inyectables, ya sea como disoluciones o suspensiones líquidas. La composición se puede preparar para administración pulmonar, por ejemplo como un inhalador, utilizando un polvo fino o un pulverizador. La composición se puede preparar como un supositorio o pesario. La composición se puede preparar para administración por vía nasal, ótica u ocular, por ejemplo, como pulverizador, gotas, gel o polvo (véase por ejemplo, Almeida y Alpar, 1996, J Drug Targeting, 3: 455; Bergquist y col., 1998, APMIS, 106: 800). Se ha comunicado la administración intranasal con éxito de las vacunas DTP (Ryan y col., 1999, Infect Immun, 67: 6270; Nagai y col., 2001, Vaccine, 19: 4824).

En una realización, las vacunas del primer y segundo (y tercer, en caso que corresponda) recipiente se administran de forma conjunta en sitios diferentes, y en una realización alternativa, los inventores prevén que se pueda mezclar

16

imagen11

imagen12

imagen13

imagen14

imagen15

Para el procedimiento de producción de la formulación 1: AgHBs, D y T se adsorbieron por separado en AlPO4, AlPO4 y Al(OH)3, respectivamente. Los tres antígenos se añadieron de forma secuencial a una suspensión que contenía agua, NaCl y AlPO4 libre. La mezcla se agitó durante 60-75 min. A continuación, se ajustó el pH a 6,5 antes de la adición del Pw adsorbido.

5 Para el procedimiento de producción de la formulación 3, los tres antígenos adsorbidos se añadieron de forma secuencial a una suspensión que contenía agua, NaCl y AlPO4 libre. La mezcla se agitó durante 60-75 minutos antes de la adición de IPV. El pH se ajustó a 6,5 antes de la adición de los antígenos Pw.

Para el procedimiento de producción de la formulación 4, el antígeno T se adsorbió en Al(OH)3. El antígeno T preadsorbido se añadió a una suspensión que contenía agua y NaCl, seguido por IPV tipos 1, 2 y 3. La mezcla se

10 agitó durante 60-75 minutos antes de la adición del AlPO4 libre. Se añadió AgHBs preadsorbido, seguido por el antígeno D preadsorbido, y la mezcla se agitó durante otros 60-75 minutos. El pH se ajustó a 6,5 antes de la adición de los antígenos Pw.

El procedimiento de producción 3 se seleccionó eventualmente debido a la facilidad de fabricación ya que este protocolo solo incluyó una etapa de agitación. Durante el proceso de fabricación de la vacuna, no se utiliza tiomersal

15 y no se añade al producto final de la vacuna.

La siguiente tabla presenta la composición de las formulaciones para una dosis de 0,5 ml.

22

imagen16

imagen17

imagen18

imagen19

imagen20

27

imagen21

5

10

15

20

25

30

35

40

La Tabla 9 muestra que la completitud de la adsorción es similar para todas las dosis de IPV. El Tipo 1 y el Tipo 3 son fuertemente desorbidos (17 % -74 %) mientras que el Tipo 2 permanece bien adsorbido. Los tres tipos están bien adsorbidos para la formulación de placebo para todas las dosis de IPV. La adsorción es similar a la de la vacuna de referencia DTPaIPVHB.

Existe una variabilidad de la completitud de IPV por el hecho de que el procedimiento de cuantificación de la completitud no está validado para las formulaciones DTPwHB IPV ni para concentraciones de IPV más bajas (<40/8/32 Unidades de antígeno D/0,5 ml).

Se estudió la potencia relativa in vivo (expresada en comparación con la vacuna de referencia poliorix) de dosis de IPV reducida para ambas formulaciones de los procedimientos de producción 3 y 4, en comparación con las formulaciones de referencia, como se muestra en las Figuras 1 y 2. Se probaron dos lotes para cada formulación para el procedimiento de producción 3.

La Figura 1 muestra que la potencia de IPV de DTPwSF-HB-IPV con IPV al 100 % es ligeramente superior a la potencia de IPV en DTPaHBIPV. Puede verse que la potencia de IPV para DTPwSF-HB-IPV al 50 % de la formulación del procedimiento de producción 3 es similar a la de DTPaHBIPV al 100 %. La potencia de IPV para DTPwSF-HB-IPV al 25 % del procedimiento de producción 3 es ligeramente inferior a la de Poliorix®. También se encontró que el 12,5 % de la dosis de IPV no fue suficiente para obtener una buena potencia de IPV.

La Figura 2 muestra que la potencia de IPV es similar para la formulación del procedimiento de producción 3 y para la formulación del procedimiento de producción 4. También se muestra que existe una tendencia hacia una mejor potencia para el placebo que para DTPwSF-HB-IPV.

Estos datos confirman, por tanto, que una dosis reducida de IPV es suficiente para obtener una buena potencia in vivo.

Ejemplo 2: Viabilidad de la no utilización de tiomersal en las vacunas de la invención

La prueba de eficacia al conservante (PEC) permite la demostración de la actividad antimicrobiana de la vacuna en prueba. La prueba consiste en:

 desafiar la preparación de la vacuna, en su etapa de recipiente final, con un inóculo prescrito de microorganismos adecuados,

 almacenar la preparación inoculada a una temperatura prescrita

 retirar muestras del recipiente a intervalos especificados de tiempo y hacer el recuento de organismos en las muestras recogidas.

El procedimiento de las pruebas PEC se describe en la Farmacopea Europea (5.1.3) y en la USP (<51>). De acuerdo con estas directrices, la actividad antimicrobiana se evalúa mediante la comparación de la reducción del número de microorganismos viables con los criterios mencionados en la siguiente tabla (Tabla 7)

Tabla 7. Criterios de la FE y de la USP

Microorganismos

Tiempo Criterios: reducción log

FE A

FE B FE C USP

Bacterias Staphylococus aureus Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa

6 h d 1 d 7 d 14 d 28 2 3 Nr* 1 3 Na* Na* Na* 3 Na* 1 3 Na*

Levaduras y mohos Candida albicans Aspergillus niger

d 7 d 14 d 28 2 Na* 1 Na* Na* Na* Na* Na* Na*

Nr* : no recuperado Na* : no aumentado

Ejemplo 3: Efecto del componente Hib sobre la potencia de IPV y la estabilidad de IPV a lo largo del tiempo

Se midió la potencia relativa de IPV como se describe en el Ejemplo 1 para determinar los efectos que pueda tener el componente Hib sobre la potencia de IPV y para evaluar la estabilidad de IPV a lo largo del tiempo en diferentes dosis de IPV. Las vacunas investigadas fueron DTPwHBIPV (40-8-32), DTPwHBIPV con Hib reconstituido y almacenado durante 8 meses, DTPwHBIPV (20-4-16), DTPwHBIPV (20-4-16) con Hib reconstituido y almacenado durante 8 meses, DTPwHBIPV (20-4-16) y almacenado durante 8 meses, DTPwHBIPV (10-2-8) y DTPwHBIPV (10

29

imagen22

imagen23

imagen24

diferencia entre los grupos (DTPw-HBV/Hib + IPV menos DTPw-HBV-IPV (26 % de la dosis convencional) / Hib) en términos de tasas de seroprotección para cada uno de los tres tipos de poliovirus es ≤ 10 %.

 Objetivos secundarios:

Inmunogenicidad

5 Evaluar la inmunogenicidad de la vacuna candidata DTPw-HBV-IPV/Hib en términos de respuesta para todos los antígenos de la vacuna en comparación con las vacunas DTPw-HBV/Hib e IPV administradas conjuntamente.

Reactogenicidad

Evaluar la reactogenicidad y la seguridad de las vacunas en estudio, en términos de síntomas inducidos, síntomas no inducidos y acontecimientos adversos graves.

10  Programa de vacunación

Programa de vacunación primaria de tres dosis a las 6, 10 y 14 semanas de edad. Todos los sujetos reciben una dosis de Hepatitis B al nacer.

 País:

Filipinas.

15  Extracción de muestras de sangre: Antes y después de la vacunación 3.  Formulaciones de vacunas: Tabla 16. Formulaciones de vacunas

Vacuna

Formulación/dosis Presentación Volumen

DTPw-HBV-IPV/Hib de GSK Biologicals Componente IPV (dosis convencional) Componente IPV (49 % de la dosis convencional) Componente IPV (26 % de la dosis convencional)

Toxoide diftérico: no menos de 30 UI (7,5 Lf) Toxoide tetánico: no menos de 60 UI (3,25 Lf) Bordetella pertussis, muerta: no menos de 4 UI (20 UO) ADN-r AgHBs: 10 µg Aluminio como sales: 0,66 mg Poliovirus tipo 1 inactivado: 40 unidades de antígeno D Poliovirus tipo 2 inactivado: 8 unidades de antígeno D Poliovirus tipo 3 inactivado: 32 unidades de antígeno D 49 % de la dosis convencional total de IPV (40-8-32) 26 % de la dosis convencional total de IPV (40-8-32) Líquido blancuzco en viales monodosis 0,5 ml de la vacuna reconstituida

33

(continuación)

Vacuna

Formulación/dosis Presentación Volumen

Conjugado de polisacárido capsular de Haemophilus influenzae tipo b: 2,5 µg y toxoide tetánico: 5-10 µg Lactosa: 12,6 mg Aluminio como sales: 30 µg

Microgránulos liofilizados en viales monodosis

DTPw-HBV/Hib (Zilbrix™ Hib) de GSK Biologicals

Toxoide diftérico: no menos de 30 UI (7,5 Lf) Toxoide tetánico: no menos de 60 UI (3,25 Lf) Bordetella pertussis, muerta: no menos de 4 UI (20 UO) ADN-r AgHBs: 10 µg Aluminio como sales: 0,66 mg Tiomersal: 8 µg Líquido blancuzco en viales de dos dosis 1 ml de la vacuna reconstituida

Conjugado de polisacárido capsular de Haemophilus influenzae tipo b: 2,5 µg y toxoide tetánico: 5-10 µg Lactosa: 12,6 mg Aluminio como sales: 30 µg

Microgránulos liofilizados en viales de dos dosis

IPV (Poliorix™) de

Poliovirus tipo 1 inactivado: 40 Líquido blancuzco en 0,5 ml

GSK Biologicals

unidades de antígeno D Poliovirus tipo 2 inactivado: 8 unidades de antígeno D Poliovirus tipo 3 inactivado: 32 unidades de antígeno D 2-fenoxietanol: 2,5 mg máximo Polisorbato: 50 µg máximo Formaldehído: 100 µg máximo Solución salina tamponada con fosfato Contiene aminoácidos para inyección, cantidad necesaria, ad. 0,5 ml viales monodosis

Preadsorción de los antígenos

La formulación DTPw-HBV-IPV combina el toxoide diftérico, el toxoide tetánico, tres cepas de Bordetella pertussis, el

5 antígeno de superficie principal (AgHBs) purificado del virus de la Hepatitis B (VHB) y el virus de la polio inactivado (IPV). Estos antígenos, excepto IPV, se preadsorbieron en primer lugar sobre sales de aluminio antes de mezclarlos con sal de aluminio, tampón cloruro de sodio y agua para inyección.

Adsorción del toxoide diftérico

El concentrado purificado de difteria fue adsorbido sobre fosfato de aluminio en una proporción de 15 Lf de toxoide

10 diftérico / 0,15 mg de Al3+. Los dos componentes se agitaron durante 15 hasta 45 minutos a temperatura ambiente. El pH se ajustó a un pH de 5,1 ± 0,1, seguido por la agitación durante 15 hasta 45 minutos. La mezcla se almacenó durante una semana a 37 ºC. Después de agitar de 15 hasta 45 minutos a temperatura ambiente, el pH se ajustó a un pH de 6,1 ± 0,1. El concentrado adsorbido se almacenó entre +2 ºC y +8 ºC durante al menos 7 días antes de la formulación final de la vacuna DTPw-HB-IPV. La Figura 1 a continuación pone de relieve el proceso de adsorción de

15 la fabricación del toxoide diftérico preadsorbido a granel.

34

imagen25

imagen26

imagen27

imagen28

Claims (1)

1. imagen1