ES2354249T3 - Derivados de azafenantridona y su uso como inhibidores de parp. - Google Patents
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Abstract
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Description
Derivados de azafenantridona y su uso como
inhibidores de PARP.
La presente invención se refiere a inhibidores
de la enzima nuclear
poli(adenosin-5'-difosfo-ribosa)
polimerasa ["poli(ADP-ribosa)
polimerasa" o "PARP", que también se denomina ADPRT
(NAD:proteína
(ADP-ribosil-transferasa
(polimerizante)) y PARS (poli(ADP-ribosa)
sintetasa) y proporciona compuestos y composiciones que contienen
los compuestos dados a conocer. Además, la presente invención
proporciona métodos de uso de los inhibidores de PARP dados a
conocer para prevenir y/o tratar el daño tisular que resulta de la
muerte o el daño celular debido a necrosis o apoptosis: daño
tisular neural que resulta de, por ejemplo, lesión por isquemia y
reperfusión, tal como ictus isquémico cerebral, traumatismo craneal
o lesión de la médula espinal; trastornos neurológicos y
enfermedades neurodegenerativas, tales como, por ejemplo,
enfermedades de Alzheimer o Parkinson y esclerosis múltiple; para
prevenir o tratar ictus vascular; para tratar o prevenir trastornos
cardiovasculares, tales como, por ejemplo, infarto de miocardio;
para tratar otros estados y/o trastornos tales como, por ejemplo,
degeneración muscular relacionada con la edad, SIDA y otras
enfermedades de senescencia inmunitaria, inflamación, artritis,
gota, aterosclerosis, caquexia, cáncer, enfermedades degenerativas
del músculo esquelético que implican senescencia replicativa,
diabetes (tal como diabetes mellitus), trastornos inflamatorios del
intestino (tales como colitis y enfermedad de Crohn), pancreatitis
aguda, mucositis, choque hemorrágico, choque por oclusión de la
arteria esplácnica, insuficiencia multiorgánica (tal como la que
implica cualquiera de los sistemas del riñón, hígado, renal,
pulmonar, retiniano, pancreático y/o músculo esquelético),
tiroiditis autoinmunitaria aguda, distrofia muscular, artrosis,
osteoporosis, dolor agudo y crónico (tal como dolor neuropático),
insuficiencia renal, isquemia retiniana, choque septicémico (tal
como choque endotóxico), disfunción celular endotelial local y/o
remota (tales se reconocen mediante respuestas relajantes
dependientes de endotelio y regulación por incremento de moléculas
de adhesión), inflamación y envejecimiento de la piel; para extender
el tiempo de vida y la capacidad proliferativa de las células, tal
como, por ejemplo, como mediadores generales en la generación de
compuestos oxidantes, mediadores proinflamatorios y/o citocinas, y
mediadores generales de la infiltración de leucocitos, sobrecarga
de iones calcio, peroxidación de fosfolípidos, metabolismo de óxido
nítrico alterado y/o producción de ATP reducida; para alterar la
expresión génica de células senescentes; o para radiosensibilizar
células tumorales hipóxicas.
PARP (EC 2.4.2.30), también conocida como PARS
(para poli(ADP-ribosa) sintetasa), o ADPRT
(para NAD:
proteína (ADP-ribosil) transferasa (polimerizante)) es una proteína nuclear principal de 116 kDa. Está presente principalmente en casi todos los eucariotas. La enzima sintetiza poli(ADP-ribosa), un polímero ramificado que puede consistir en más de 200 unidades de ADP-ribosa a partir de NAD. Los aceptores proteicos de poli(ADP-ribosa) están implicados directa o indirectamente en el mantenimiento de la integridad del ADN. Incluyen histonas, topoisomerasas, ADN y ARN polimerasas, ADN ligasas y endonucleasas dependientes de Ca^{2+} y Mg^{2+}. La proteína PARP se expresa a un alto nivel en muchos tejidos, lo más notablemente en el sistema inmunitario, corazón, cerebro y células de la línea germinal. En condiciones fisiológicas normales, existe una actividad PARP mínima. Sin embargo, el daño del ADN provoca una activación inmediata de PARP en hasta 500 veces. Entre las muchas funciones atribuidas a PARP está su papel principal en la facilitación de la reparación del ADN mediante ADP-ribosilación y por tanto la coordinación de varias proteínas para la reparación del ADN. Como resultado de la activación de PARP, los niveles de NAD disminuyen significativamente. Aunque se ha demostrado que muchos agentes endógenos y exógenos dañan el ADN y activan PARP, el peroxinitrito, formado a partir de una combinación de óxido nítrico (NO) y superóxido, parece que es un autor principal responsable de diversos estados patológicos notificados in vivo, por ejemplo, durante choque, ictus e inflamación.
proteína (ADP-ribosil) transferasa (polimerizante)) es una proteína nuclear principal de 116 kDa. Está presente principalmente en casi todos los eucariotas. La enzima sintetiza poli(ADP-ribosa), un polímero ramificado que puede consistir en más de 200 unidades de ADP-ribosa a partir de NAD. Los aceptores proteicos de poli(ADP-ribosa) están implicados directa o indirectamente en el mantenimiento de la integridad del ADN. Incluyen histonas, topoisomerasas, ADN y ARN polimerasas, ADN ligasas y endonucleasas dependientes de Ca^{2+} y Mg^{2+}. La proteína PARP se expresa a un alto nivel en muchos tejidos, lo más notablemente en el sistema inmunitario, corazón, cerebro y células de la línea germinal. En condiciones fisiológicas normales, existe una actividad PARP mínima. Sin embargo, el daño del ADN provoca una activación inmediata de PARP en hasta 500 veces. Entre las muchas funciones atribuidas a PARP está su papel principal en la facilitación de la reparación del ADN mediante ADP-ribosilación y por tanto la coordinación de varias proteínas para la reparación del ADN. Como resultado de la activación de PARP, los niveles de NAD disminuyen significativamente. Aunque se ha demostrado que muchos agentes endógenos y exógenos dañan el ADN y activan PARP, el peroxinitrito, formado a partir de una combinación de óxido nítrico (NO) y superóxido, parece que es un autor principal responsable de diversos estados patológicos notificados in vivo, por ejemplo, durante choque, ictus e inflamación.
La extensa activación de PARP conduce a un grave
agotamiento de NAD en células que padecen daño masivo del ADN. La
corta vida de la poli(ADP-ribosa) (semivida
< 1 min.) da como resultado una tasa de recambio rápida. Una vez
que se forma la poli(ADP-ribosa), se degrada
rápidamente por la poli(ADP-ribosa)
glicohidrolasa (PARG) activa constitutivamente, junto con
fosfodiesterasa y (ADP-ribosa) proteína liasa. PARP
y PARG forman un ciclo que convierte una gran cantidad de NAD en
ADP-ribosa. En menos de una hora, la
sobreestimulación de PARP puede provocar una caída de NAD y ATP
hasta menos del 20% del nivel normal. Un escenario de este tipo es
especialmente perjudicial durante la isquemia cuando la privación
de oxígeno ya ha comprometido drásticamente la producción de
energía celular. Se supone que la posterior producción de radicales
libres durante la reperfusión es una causa principal de daño
tisular. Parte de la caída de ATP, que es típica en muchos órganos
durante la isquemia y reperfusión, puede estar ligada al
agotamiento de NAD debido al recambio de
poli(ADP-ribosa). Por tanto, se espera que
la inhibición de PARP o PARG conserve el nivel de energía celular
para potenciar la supervivencia de tejidos isquémicos tras el
ataque.
La síntesis de
poli(ADP-ribosa) también está implicada en la
expresión inducida de varios genes esenciales para la respuesta
inflamatoria. Los inhibidores de PARP suprimen la producción de
óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) en macrófagos, selectina de
tipo P y molécula de adhesión intercelular-1
(ICAM-1) en células endoteliales. Tal actividad
subyace a los fuertes efectos antiinflamatorios mostrados por los
inhibidores de PARP. La inhibición de PARP puede reducir la
necrosis impidiendo la translocación e infiltración de neutrófilos
en los tejidos lesionados. (Zhang, J. "PARP inhibition: a novel
approach to treat ischaemia/reperfusion and
inflammation-related injuries", capítulo 10 en
Emerging Drugs (1999) 4: 209-221 Ashley Publications
Ltd., y referencias citadas en el mismo).
Los fragmentos de ADN dañado activan la
producción de PARP la cual, una vez activada, cataliza la unión de
hasta 100 unidades de ADP-ribosa a una variedad de
proteínas nucleares, incluyendo histonas y la propia PARP.
Durante tensiones celulares importantes, la
extensa activación de PARP puede conducir rápidamente a muerte o
daño celular a través del agotamiento de las reservas de energía.
Puesto que se consumen cuatro moléculas de ATP por cada molécula de
NAD (la fuente de ADP-ribosa y el sustrato de PARP)
regenerada, se agota el NAD por una activación de PARP masiva y, en
los esfuerzos para volver a sintetizar NAD, también puede agotarse
el
ATP.
ATP.
Se ha notificado que la activación de PARP
desempeña un papel clave en la neurotoxicidad inducida tanto por
NMDA como por NO. Esto se ha demostrado en cultivos corticales y en
cortes de hipocampo en los que la prevención de la toxicidad se
correlaciona directamente con la potencia de la inhibición de PARP
(Zhang et al., "Nitric Oxide Activation of
Poly(ADP-Ribose) Synthetase in
Neurotoxicity", Science, 263: 687-89 (1994) y
Wallis et al. "Neuroprotection Against Nitric Oxide Injury
with Inhibitors of ADP-Ribosylation",
NeuroReport, 5:3, 245-48 (1993)). Por tanto, se ha
reconocido el posible papel de los inhibidores de PARP en el
tratamiento de enfermedades neurodegenerativas y traumatismo
craneal incluso si el mecanismo de acción exacto todavía no se ha
aclarado (Endres et al., "Ischemic Brain Injury is Mediated
by the Activation of
Poly(ADP-Ribose)Polymerase", J.
Cereb. Blood Flow Metabol., 17: 1143-51 (1997) y
Wallis et al., "Traumatic Neuroprotection with Inhibitors
of Nitric Oxide and ADP-Ribosylation", Brain
Res., 710: 169-77 (1996)).
De manera similar, se ha demostrado que
inyecciones únicas de los inhibidores de PARP han reducido el tamaño
de infarto provocado por la isquemia y reperfusión del corazón o
músculo esquelético en conejos. En estos estudios, una única
inyección de 3-amino-benzamida (10
mg/kg), o bien un minuto antes de la oclusión o bien un minuto
antes de la reperfusión, provocó reducciones similares en el tamaño
de infarto en el corazón (32-42%) mientras que
1,5-dihidroxiisoquinolina (1 mg/kg), otro inhibidor
de PARP, redujo el tamaño de infarto en un grado comparable
(38-48%). Thiemermann et al., "Inhibition
of the Activity of Poly(ADP Ribose) Synthetase Reduces
Ischemia-Reperfusion Injury in the Heart and
Skeletal Muscle", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:
679-83 (1997). Estos resultados hacen que sea
razonable sospechar que los inhibidores de PARP podrían rescatar
tejido de músculo esquelético o corazón previamente isquémico.
La activación de PARP también puede usarse como
una medida del daño tras ataques neurotóxicos tras una
sobreexposición a cualquiera de glutamato (por medio de la
estimulación del receptor de NMDA), productos intermedios de oxígeno
reactivos, proteína amiloide \beta,
N-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina
(MPTP) o su metabolito activo
N-metil-4-fenilpiridina
(MPP^{+}), que participan en estados patológicos tales como ictus,
enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Zhang et
al., "Poly(ADP-Ribose) Synthetase
Activation: An Early Indicator of Neurotoxic DNA Damage", J.
Neurochem, 65:3, 1411-14 (1995). Otros estudios han
continuado explorando el papel de la activación de PARP en células
granulares de cerebelo in vitro y en la neurotoxicidad por
MPTP. Cosi et al.,
"Poly(ADP-Ribose) polymerase (PARP)
Revisited. A New Role for an Old Enzyme: PARP Involvement in
Neurodegeneration and PARP Inhibitors as Possible Neuroprotective
Agents". Ann. N. Y. Acad. Sci., 825: 366-79
(1997); y Cosi et al.,
"Poly(ADP-Ribose) Polymerase Inhibitors
Protect Against MPTP-induced Depletions of Striatal
Dopamine and Cortical Noradrenaline in C57B1/6 Mice", Brain Res.,
729: 264-69 (1996). Se produce una exposición
neural excesiva a glutamato, que sirve como neurotransmisor
predominante del sistema nervioso central y actúa sobre los
receptores de
N-metil-D-aspartato
(NMDA) y otros subtipos de receptores, lo más a menudo como
resultado de ictus u otros procesos neurodegenerativos. Las neuronas
privadas de oxígeno liberan glutamato en grandes cantidades durante
un ataque cerebral isquémico tal como durante un ictus o ataque al
corazón. A su vez, este exceso de liberación de glutamato provoca
una sobreestimulación (excitotoxicidad) de receptores de
N-metil-D-aspartato
(NMDA), AMPA, kainato y MGR, que abren canales iónicos y permiten un
flujo de iones no controlado (por ejemplo, Ca^{2+} y Na^{+} al
interior de las células y K^{+} fuera de las células), lo que
conduce a una sobreestimulación de las neuronas. Las neuronas
sobreestimuladas secretan más glutamato, creando un efecto dominó o
bucle de retroalimentación que da como resultado en última instancia
muerte o daño celular por medio de la producción de proteasas,
lipasas y radicales libres. Se ha atribuido una activación excesiva
de receptores de glutamato en diversos estados y enfermedades
neurológicos incluyendo epilepsia, ictus, enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ELA),
enfermedad de Huntington, esquizofrenia, dolor crónico, isquemia y
pérdida neuronal tras hipoxia, isquemia por hipoglicemia,
traumatismo y ataque nervioso. También se ha implicado la
estimulación y la exposición a glutamato como base para trastornos
compulsivos, particularmente drogodependencia. Las pruebas incluyen
hallazgos en muchas especies animales, así como en cultivos de
corteza cerebral tratados con glutamato o NMDA, de que antagonistas
de receptores de glutamato (es decir, compuestos que bloquean que el
glutamato se una a o active su receptor) bloquean el daño neural
tras ictus vascular. Dawson et al., "Protection of the
Brain from Ischemia", Cerebrovascular Disease,
319-25 (H. Hunt Batjer ed., 1997). Los intentos de
prevenir la excitotoxicidad bloqueando los receptores de NMDA,
AMPA, kainato y MGR han demostrado ser difíciles debido a que cada
receptor tiene múltiples sitios a los que puede unirse el glutamato
y por tanto ha sido difícil encontrar una mezcla eficaz de
antagonistas o un antagonista universal que impida la unión del
glutamato a todos los receptores y permita someter a prueba esta
teoría. Además, muchas de las composiciones que son eficaces en el
bloqueo de los receptores también son tóxicas para los animales.
Como tal, actualmente no existe ningún tratamiento eficaz conocido
para las anomalías por glutamato.
La estimulación de receptores de NMDA por
glutamato, por ejemplo, activa la enzima óxido nítrico sintasa
neuronal (nNOS), lo que conduce a la formación de óxido nítrico
(NO), que también media la neurotoxicidad. Puede prevenirse la
neurotoxicidad por NMDA mediante tratamiento con inhibidores de
óxido nítrico sintasa (NOS) o a través de alteración genética
dirigida de nNOS in vitro. Dawson et al., "Nitric
Oxide Mediates Glutamate Neurotoxicity in Primary Cortical
Cultures", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:
6368-71 (1991); y Dawson et al.,
"Mechanisms of Nitric Oxide-mediated Neurotoxicity
in Primary Brain Cultures". J. Neurosci., 13:6,
2651-61 (1993), Dawson et al., "Resistance
to Neurotoxicity in Cortical Cultures from Neuronal Nitric Oxide
Synthase-Deficient Mice", J. Neurosci., 16:8,
2479-87 (1996), Iadecola, "Bright and Dark Sides
of Nitric Oxide in Ischemic Brain Injury", Trends Neurosci.,
20:3, 132-39 (1997), Huang et al. "Effects
of Cerebral Ischemia in Mice Deficient in Neuronal Nitric Oxide
Synthase", Science, 265: 1883-85 (1994), Beckman
et al., "Pathological Implications of Nitric Oxide,
Superoxide and Peroxynitrite Formation", Biochem. Soc. Trans.,
21: 330-34 (1993), y Szabó et al., "DNA
Strand Breakage, Activation of
Poly(ADP-Ribose) Synthetase, and Cellular
Energy Depletion are Involved in the Cytotoxicity in Macrophages and
Smooth Muscle Cells Exposed to Peroxynitrite", Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 93: 1753-58
(1996).
(1996).
También se sabe que los inhibidores de PARP,
tales como 3-aminobenzamida, afectan a la reparación
del ADN generalmente en respuesta, por ejemplo, a peróxido de
hidrógeno o radiación gamma. Cristovao et al., "Effect of
a Poly(ADP-Ribose) Polymerase Inhibitor on
DNA Breakage and Cytotoxicity Induced by Hydrogen Peroxide and
\gamma-Radiation", Terato., Carcino., and Muta,
16: 219-27 (1996). Específicamente, Cristovao et
al. observaron una recuperación dependiente de PARP de las
roturas de hebras de ADN en leucocitos tratados con peróxido de
hidrógeno.
Se ha notificado que los inhibidores de PARP son
eficaces en la radiosensibilización de células tumorales hipóxicas y
eficaces en la prevención de que células tumorales se recuperen del
daño potencialmente letal del ADN tras radioterapia, presumiblemente
por su capacidad para prevenir la reparación del ADN. Patentes
estadounidenses n.^{os} 5.032.617; 5.215.738; y 5.041.653.
También existen pruebas de que los inhibidores
de PARP son útiles para tratar trastornos inflamatorios del
intestino, tales como colitis. Salzman et al., Rote of
Peroxynitrite and
Poly(ADP-Ribose)Synthase Activation
Experimental Colitis", Japanese J. Pharm., 75, supl. 1:15 (1997).
Específicamente, se indujo colitis en ratas mediante administración
intraluminal del hapteno ácido trinitrobencenosulfónico en etanol al
50%. Las ratas tratadas recibieron
3-aminobenzamida, un inhibidor específico de la
actividad de PARP. La inhibición de la actividad de PARP redujo la
respuesta inflamatoria y restauró la morfología y el estado
energético del colon distal. Véanse también, Southan et al.,
"Spontaneous Rearrangement of Aminoalkylithioureas into
Mercaptoalkylguanidines, a Novel Class of Nitric Oxide Synthase
Inhibitors with Selectivity Towards the Inducible Isoform". Br. J.
Pharm., 117: 619-32 (1996); y Szabó et al.,
Mercaptoethylguanidine and Guanidine Inhibitors of Nitric Oxide
Synthase React with Peroxynitrite and Protect Against
Peroxynitrite-induced Oxidative Damage", J. Biol.
Chem, 272: 9030-36 (1997).
También existen pruebas de que los inhibidores
de PARP son útiles para tratar la artritis. Szabó et al,
"Protective Effects of an Inhibitor of
Poly(ADP-Ribose) Synyhetase in
Collagen-Induced Arthritis", Japanese J. Pharm.,
75, supl. I:102 (1997); Szabó et al., "DNA Strand Breakage,
Activation of
Poly(ADP-Ribose)Synthetase, and
Cellular Energy Depletion are Involved in the Cytotoxicity in
Macrophages and Smooth Muscle Cells Exposed to Peroxynitrite".
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 1753-58 (marzo de
1996); y Bauer et al., "Modification of Growth Related
Enzymatic Pathways and Apparent Loss of Tumorigenicity of a
ras-transformed Bovine Endothelial CeU Line by
Treatment with
5-Iodo-6-amino-1,2-benzopyrone
(INH2BP)", Intl. J. Oncol., 8: 239-52 (1996); y
Hughes et al., "Induction of T Helper Cell
Hyporesponsiveness in an Experimental Model of Autoimmunity by Using
Nonmitogenic Anti-CD3 Monoclonal Antibody", J.
Immuno., 153: 3319-25 (1994).
Además, parece que los inhibidores de PARP son
útiles para tratar la diabetes. Heller et al.,
"Inactivation of the
Poly(ADP-Ribose)Polymerase Gene
Affects Oxygen Radical and Nitric Oxide Toxicity in Islet Cells",
J. Biol. Chem., 270:19, 11176-80 (Mayo de 1995).
Heller et al. usaron células de ratones con genes de PARP
inactivados y encontraron que estas células mutantes no mostraban
agotamiento de NAD+ tras la exposición a radicales que dañaban el
ADN. También se encontró que las células mutantes eran más
resistentes a la toxicidad del NO.
Se ha demostrado que los inhibidores de PARP son
útiles para tratar el choque endotóxico o choque septicémico.
Zingarelli et al., "Protective Effects of Nicotinamide
Against Nitric Oxide-Mediated Delayed Vascular
Failure in Endotoxic Shock: Potential Involvement of PolyADP Ribosyl
Synthetase", Shock, 5: 258-64 (1996), sugieren
que la inhibición del ciclo de reparación del ADN desencadenado por
la poli(ADP ribosa) sintetasa tiene efectos protectores
contra la insuficiencia vascular en el choque endotóxico. Zingarelli
et al. encontraron que la nicotinamida protege contra la
insuficiencia vascular mediada por NO retardada en el choque
endotóxico. Zingarelli et al. encontraron también que las
acciones de la nicotinamida pueden estar relacionadas con la
inhibición de la activación mediada por NO del ciclo de reparación
del ADN con consumo de energía, desencadenado por la
poli(ADP ribosa) sintetasa. Cuzzocrea, "Role of
Peroxynitrite and Activation of
Poly(ADP-Ribose) Synthetase in the Vascular
Failure Induced by Zymosan-activated Plasma",
Brit. J. Pharm., 122: 493-503 (1997).
Se han usado inhibidores de PARP para tratar el
cáncer. Suto et al., "Dihydroisoquinolinones: The Design
and Synthesis of a New Series of Potent Inhibitors of
Poly(ADP-Ribose) Polymerase", Anticancer
Drug Des., 7: 107-17 (1991). Además, Suto et
al., patente estadounidense n.º 5.177.075, tratan varias
isoquinolinas usadas para intensificar los efectos letales de la
radiación ionizante o los agentes quimioterápicos sobre células
tumorales. Weltin et al., "Effect of
6(5H)-Phenanthridinone, an Inhibitor of
Poly(ADP-ribose) Polymerase, on Cultured
Tumor Cells", Oncol. Res., 6:9, 399-403 (1994),
tratan la inhibición de la actividad de PARP, la proliferación
reducida de células tumorales y un efecto sinérgico marcado cuando
se tratan conjuntamente células tumorales con un fármaco
alquilante.
alquilante.
\newpage
Aún otro uso para los inhibidores de PARP es el
tratamiento de lesiones de nervios periféricos, y el síndrome de
dolor patológico resultante conocido como dolor neuropático, tal
como el inducido por una lesión por constricción crónica (CCI) del
nervio ciático común y en la que se produce una alteración
trans-sináptica del asta dorsal de la médula
espinal caracterizada por hipercromatosis del citoplasma y
nucleoplasma (denominadas neuronas "oscuras"). Mao et
al., Pain, 72: 355-366 (1997).
También se han usado los inhibidores de PARP
para extender el tiempo de vida y la capacidad proliferativa de las
células incluyendo el tratamiento de enfermedades tales como
envejecimiento de la piel, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis,
artrosis, osteoporosis, distrofia muscular, enfermedades
degenerativas del músculo esquelético que implican senescencia
replicativa, degeneración muscular relacionada con la edad,
senescencia inmunitaria, SIDA y otras enfermedades de senescencia
inmunitaria; y para alterar la expresión génica de células
senescentes. Documento WO 98/27975.
Se ha descrito un gran número de inhibidores de
PARP conocidos en Banasik et al., "Specific Inhibitors of
Poly(ADP-Ribose) Synthetase and
Mono(ADP-Ribosyl)-Transferase".
J. Biol. Chem., 267: 3, 1569-75 (1992), y en
Banasik et al., "Inhibitors and Activators of
ADP-Ribosylation Reactions", Molec. Cell.
Biochem., 138: 185-97 (1994). Sin embargo, el uso
eficaz de estos inhibidores de PARP, de las maneras tratadas
anteriormente, se ha visto limitado por la producción simultánea de
efectos secundarios no deseados (Milam et al., "Inhibitors
of Poly(Adenosine Diphosphate-Ribose)
Synthesis: Effect on Other Metabolic Processes", Science, 223:
589-91 (1984)).
Además de lo anterior, se han dado a conocer
inhibidores de PARP y se han descrito en las siguientes solicitudes
de patente internacional: WO 00/42040; WO 00/39070; WO, 00139104; WO
99/11617; WO 99/11628; WO 99/11622; WO 99/59975; WO 99/11644; WO
99/11945; WO 99/11649; y WO 99/59973.
Li y Zhang han publicado una reciente revisión
exhaustiva del estado de la técnica en IDrugs 2001, 4 (7):
804-812 (PharmaPress Ltd ISSN
1369-7056.
Continúa existiendo una necesidad de inhibidores
de PARP potentes y eficaces que produzcan efectos secundarios
mínimos. La presente invención proporciona compuestos, composiciones
para y métodos de inhibición de la actividad de PARP para tratar
y/o prevenir el daño celular, tisular y/o a órganos que resulta de
la muerte o el daño celular debido a, por ejemplo, necrosis o
apoptosis. Los compuestos y las composiciones de la presente
invención son específicamente útiles en la mejora, el tratamiento
y/o la prevención del daño celular o tisular neural, incluyendo el
que sigue a una lesión por isquemia y reperfusión focal.
Generalmente, la inhibición de la actividad de PARP le evita a la
célula una pérdida de energía, previniendo la despolarización
irreversible de las neuronas y, por tanto, proporciona
neuroprotección. Sin querer restringirse a ninguna teoría
mecanicista, se cree que la inhibición de la actividad de PARP
mediante el uso de los compuestos, las composiciones y los métodos
de la presente invención protege a las células, el tejido y los
órganos mediante su protección contra los efectos nocivos de óxido
nítrico y radicales libres reactivos. Por tanto, la presente
invención también proporciona métodos de tratamiento y/o prevención
de células, tejido y/o órganos de una lesión o un daño inducido por
óxido nítrico y/o radicales libres reactivos.
La presente invención proporciona compuestos
descritos en el presente documento y sus usos para inhibir la
poli(ADP-ribosa) polimerasa ("PARP"),
composiciones que contienen estos compuestos y métodos para preparar
y usar estos inhibidores de PARP para tratar, prevenir y/o mejorar
los efectos de los estados descritos en el presente documento.
En particular, la presente invención proporciona
los compuestos de la reivindicación 1 adjunta y también se refiere
al uso de los mismos y a composiciones farmacéuticas que contienen
los mismos.
La figura 1 muestra la distribución de la zona
de infarto en corte transversal a niveles representativos a lo largo
del eje rostrocaudal, tal como se mide desde la línea interaural en
animales no tratados y en animales tratados con 10 mg/kg de
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)-butoxil]-1(2H)-isoquinolinona.
La figura 2 muestra el efecto de la
administración intraperitoneal de
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)-butoxil]-1(2H)-isoquinolinona
sobre el volumen de infarto.
La presente invención se refiere a compuestos, a
composiciones farmacéuticas que contienen los mismos, a métodos de
uso de los mismos y a un procedimiento de preparación de los mismos,
incluyendo métodos de preparación de medicamentos que contienen los
compuestos descritos en el presente documento para su uso en los
métodos descritos, en los que tales compuestos son útiles como
inhibidores de poli(ADP-ribosa) polimerasa
(PARP). Como tales, tratan o previenen el daño tisular neural que
resulta de la muerte o el daño celular debido a necrosis o
apoptosis, lesión por isquemia y reperfusión cerebral o enfermedades
neurodegenerativas en un animal; extienden el tiempo de vida y la
capacidad proliferativa de las células y por tanto pueden usarse
para tratar o prevenir enfermedades asociadas con las mismas;
alteran la expresión génica de células senescentes; y
radiosensibilizan células tumorales hipóxicas. Preferiblemente, los
compuestos de la invención tratan o previenen el daño tisular que
resulta de la muerte o el daño celular debido a necrosis o
apoptosis, y/o efectúan actividad neuronal, o bien mediada o bien
no mediada por toxicidad por NMDA. Se cree que estos compuestos
interfieren en más que la neurotoxicidad por glutamato y las rutas
biológicas mediadas por NO. Además, los compuestos de la invención
pueden tratar o prevenir otro daño tisular relacionado con la
activación de PARP. La presente invención proporciona compuestos
que inhiben la poli(ADP-ribosa) polimerasa
("PARP"), composiciones que contienen estos compuestos y
métodos para usar estos inhibidores de PARP para tratar, prevenir
y/o mejorar los efectos de los estados descritos en el presente
documento.
Preferiblemente, los compuestos de la invención
presentan una CI_{50} para inhibir PARP in vitro, tal como
se mide mediante los métodos descritos en el presente documento, de
aproximadamente 100 \muM, o menor, preferiblemente menor de
aproximadamente 50 \muM, más preferiblemente menor de
aproximadamente 10 \muM, o menor de 1 \muM, lo más
preferiblemente menor de aproximadamente 0,1 \muM.
Realizaciones específicas de la presente
invención incluyen los compuestos mostrados a continuación en el
ejemplo y la tabla III, y formas neutras y/o de sal de los mismos,
así como mezclas enantioméricas y racémicas de los mismos, cuando
sea apropiado.
En general, los compuestos y las composiciones
de la presente invención pueden usarse para tratar o prevenir la
muerte o el daño celular debido a necrosis o apoptosis, lesión por
isquemia y reperfusión cerebral o enfermedades neurodegenerativas
en un animal, tal como un ser humano. Los compuestos y las
composiciones de la presente invención pueden usarse para extender
el tiempo de vida y la capacidad proliferativa de las células y por
tanto pueden usarse para tratar o prevenir enfermedades asociadas
con las mismas; alteran la expresión génica de células senescentes;
y radiosensibilizan células tumorales hipóxicas. Preferiblemente,
los compuestos y las composiciones de la invención pueden usarse
para tratar o prevenir el daño tisular que resulta de la muerte o
el daño celular debido a necrosis o apoptosis, y/o efectúan
actividad neuronal, o bien mediada o bien no mediada por toxicidad
por NMDA. Los compuestos de la presente invención no se limitan a
ser útiles en el tratamiento de neurotoxicidad mediada por
glutamato y/o rutas biológicas mediadas por NO. Además, los
compuestos de la invención pueden usarse para tratar o prevenir
otro daño tisular relacionado con la activación de PARP, tal como se
describe en el presente documento.
La presente invención proporciona compuestos que
inhiben la actividad polimerasa in vitro y/o in vivo
de la poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP), y
composiciones que contienen los compuestos dados a conocer.
La presente invención proporciona métodos para
inhibir, limitar y/o controlar la actividad polimerasa in
vitro y/o in vivo de la
poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP) en
cualquiera de disoluciones, células, tejidos, órganos o sistemas de
órganos. En una realización, la presente invención proporciona
métodos de limitación o inhibición de la actividad de PARP en un
mamífero, tal como un ser humano, o bien localmente o bien
sistémicamente.
La presente invención proporciona métodos para
tratar y/o prevenir enfermedades, síndromes y/o estados exacerbados
por o que implican la generación aumentada de PARP. Estos métodos
implican la aplicación o administración de los compuestos de la
presente invención a células, tejidos, órganos o sistemas de órganos
de una persona que necesita tal tratamiento o prevención.
En una realización, la presente invención
proporciona métodos para tratar y/o prevenir el daño tisular
cardiovascular que resulta de una lesión por isquemia o reperfusión
cardiaca. Por ejemplo, la lesión por reperfusión se produce al
término de procedimientos de derivación cardiaca o durante un paro
cardiaco cuando el corazón, una vez impedido de recibir sangre,
comienza a reperfundirse y estos métodos implican la administración
de los compuestos y las composiciones de la presente invención
preferiblemente antes de, o inmediatamente tras la reperfusión, de
manera que se prevenga, se trate o se reduzca esa lesión por
reperfusión. La presente invención también proporciona métodos de
prevención y/o tratamiento de ictus vascular, trastornos
cardiovasculares.
En otra realización, la presente invención
proporciona métodos in vitro o in vivo para extender o
aumentar el tiempo de vida y/o la capacidad de proliferación de las
células y por tanto también los métodos tratan y/o previenen
enfermedades asociadas con las mismas e inducidas o exacerbadas por
la senescencia celular incluyendo envejecimiento de la piel,
aterosclerosis, artrosis, osteoporosis, distrofia muscular,
enfermedades degenerativas del músculo esquelético que implican
senescencia replicativa, degeneración muscular relacionada con la
edad, senescencia inmunitaria, SIDA y otras enfermedades de
senescencia inmunitaria, y otras enfermedades asociadas con
senescencia celular y envejecimiento, así como para alterar la
expresión génica de células senescentes.
En una realización adicional, la presente
invención proporciona métodos de tratamiento o prevención o mejora
del efecto del cáncer y/o para radiosensibilizar células tumorales
hipóxicas para hacer que las células tumorales sean más
susceptibles a la radioterapia y para prevenir de ese modo que las
células tumorales se recuperen del daño potencialmente letal del
ADN tras la radioterapia. Un método de esta realización se refiere a
radiosensibilizar específica y preferentemente células tumorales
haciendo que las células tumorales se hagan más susceptibles a la
radioterapia que las células no tumorales.
Todavía en otra realización, la presente
invención proporciona métodos de prevención y/o tratamiento de ictus
vascular, trastornos cardiovasculares; para tratar otros estados
y/o trastornos tales como degeneración muscular relacionada con la
edad, SIDA y otras enfermedades de senescencia inmunitaria,
inflamación, artritis, gota, aterosclerosis, caquexia, cáncer,
enfermedades degenerativas del músculo esquelético que implican
senescencia replicativa, diabetes, traumatismo craneal, lesión de
la médula espinal, senescencia inmunitaria, inflamación por gota,
trastornos inflamatorios del intestino (tales como colitis y
enfermedad de Crohn), pancreatitis aguda, mucositis, choque
hemorrágico, choque por oclusión de la arteria esplácnica,
insuficiencia multiorgánica (tal como la que implica cualquiera de
los sistemas de riñón, hígado, renal, pulmonar, retiniano,
pancreático y/o músculos esqueléticos), tiroiditis autoinmunitaria
aguda, distrofia muscular, artrosis, osteoporosis, dolor agudo y/o
crónico (tal como dolor neuropático), insuficiencia renal, isquemia
retiniana, choque septicémico (tal como choque endotóxico),
disfunción celular endotelial local y/o remota (tales se reconocen
por respuestas relajantes dependientes de endotelio y regulación
por incremento de moléculas de adhesión), inflamación y
envejecimiento de la piel.
Los compuestos de la presente invención pueden
administrarse, por ejemplo, por vía parenteral, a una persona con
diagnóstico de isquemia retiniana aguda o ictus vascular agudo,
mediante administración intravenosa o bien intermitente o bien
continua, mediante o bien una dosis única o bien una serie de dosis
divididas. Los compuestos de la invención pueden usarse en
combinación o secuencialmente. El compuesto de la invención puede
administrarse mediante administración intermitente o continua por
medio de implantación de un sistema de administración de matriz
polimérica biodegradable, biocompatible que contiene un compuesto
según la reivindicación 1 o por medio de una bomba subdural
insertada para administrar el compuesto directamente a la zona de
infarto del cerebro.
En una realización adicional, la presente
invención proporciona métodos para extender el tiempo de vida y la
capacidad proliferativa de las células, tal como, por ejemplo, en el
uso de los compuestos de la invención como mediadores generales en
la generación de compuestos oxidantes, mediadores proinflamatorios
y/o citocinas, y/o mediadores generales de infiltración de
leucocitos, sobrecarga de iones calcio, peroxidación de
fosfolípidos, metabolismo de óxido nítrico alterado y/o producción
de ATP reducida.
Por ejemplo, los compuestos de la invención
pueden tratar o prevenir el daño tisular cardiovascular que resulta
de una lesión por isquemia o reperfusión cardiaca. Por ejemplo, la
lesión por reperfusión se produce al término de procedimientos de
derivación cardiaca o durante un paro cardiaco cuando el corazón,
una vez impedido de recibir sangre, comienza a reperfundirse.
Los compuestos de la presente invención también
puede usarse para extender o aumentar el tiempo de vida o la
proliferación de las células y por tanto para tratar o prevenir
enfermedades asociadas con las mismas e inducidas o exacerbadas por
la senescencia celular incluyendo envejecimiento de la piel,
aterosclerosis, artrosis, osteoporosis, distrofia muscular,
enfermedades degenerativas del músculo esquelético que implican
senescencia replicativa, degeneración muscular relacionada con la
edad, senescencia inmunitaria, SIDA y otras enfermedades de
senescencia inmunitaria, y otras enfermedades asociadas con
senescencia celular y envejecimiento, así como para alterar la
expresión génica de células senescentes. Estos compuestos también
pueden usarse para tratar el cáncer y para radiosensibilizar
células tumorales hipóxicas para hacer que las células tumorales
sean más susceptibles a la radioterapia y para prevenir que las
células tumorales se recuperen del daño potencialmente letal del
ADN tras la radioterapia, presumiblemente por su capacidad para
prevenir la reparación del ADN. Los compuestos de la presente
invención pueden usarse para prevenir o tratar ictus vascular; para
tratar o prevenir trastornos cardiovasculares, para tratar otros
estados y/o trastornos tales como degeneración muscular relacionada
con la edad, SIDA y otras enfermedades de senescencia inmunitaria,
inflamación, artritis, gota, aterosclerosis, caquexia, cáncer,
enfermedades degenerativas del músculo esquelético que implican
senescencia replicativa, diabetes, traumatismo craneal, senescencia
inmunitaria, gota, trastornos inflamatorios del intestino (tales
como colitis y enfermedad de Crohn), distrofia muscular, artrosis,
osteoporosis, dolor agudo y/o crónico (tal como dolor neuropático),
insuficiencia renal, isquemia retiniana, choque septicémico (tal
como choque endotóxico) y envejecimiento de la piel.
Preferiblemente, los compuestos de la invención
actúan como inhibidores de PARP para tratar o prevenir el daño
tisular que resulta del daño o la muerte celular debido a necrosis o
apoptosis; para tratar o prevenir el daño tisular neural que
resulta de una lesión por isquemia y reperfusión cerebral o
enfermedades neurodegenerativas en un animal; para extender y
aumentar el tiempo de vida y la capacidad proliferativa de las
células; para alterar la expresión génica de células senescentes; y
para radiosensibilizar células tumorales.
Otra realización especialmente preferida de la
invención es una composición farmacéutica que comprende (i) una
cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según la
reivindicación 1.
Los compuestos de la presente invención pueden
tener uno o más centro(s) asimétrico(s) y por tanto
pueden producirse como mezclas (racémicas y no racémicas) de
estereoisómeros, o como enantiómeros o diastereómeros individuales.
Los estereoisómeros individuales pueden obtenerse usando un material
de partida ópticamente activo, resolviendo una mezcla racémica o no
racémica de productos intermedios en alguna fase apropiada de la
síntesis, o mediante resolución de un compuesto según la
reivindicación 1. Se entiende que los estereoisómeros individuales
así como las mezclas (racémicas y no racémicas) de estereoisómeros
quedan abarcados por el alcance de la presente invención.
La expresión "enfermedades
neurodegenerativas" incluye la enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington.
La expresión "ataque nervioso" se refiere a
cualquier daño al tejido nervioso y cualquier discapacidad o la
muerte que resulte del mismo. La causa del ataque nervioso puede ser
metabólica, tóxica, neurotóxica, iatrogénica, térmica o química, e
incluye sin limitación, isquemia, hipoxia, accidente
cerebrovascular, traumatismo, cirugía, presión, efecto de masa,
hemorragia, radiación, vasoespasmo, enfermedad neurodegenerativa,
infección, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica
(ELA), proceso de mielinización/desmielinización, epilepsia,
trastorno cognitivo, anomalía por glutamato y efectos secundarios
del mismo.
El término "neuroprotector" se refiere al
efecto de reducción, detención o mejora del ataque nervioso, y
protección, resucitación o reactivación del tejido nervioso que ha
sufrido un ataque nervioso.
La expresión "prevenir la
neurodegeneración" incluye la capacidad de prevenir la
neurodegeneración en pacientes con diagnóstico de enfermedad
neurodegenerativa o que están en riesgo de desarrollar una
enfermedad neurodegenerativa. La expresión también abarca prevenir
la neurodegeneración adicional en pacientes que ya están padeciendo
o que tienen síntomas de una enfermedad neurodegenerativa.
El término "tratar" se refiere a:
- (i)
- prevenir que se produzca una enfermedad, un trastorno o un estado en un animal que puede estar predispuesto a la enfermedad, el trastorno y/o el estado, pero que todavía no se ha diagnosticado que lo tiene;
- (ii)
- inhibir la enfermedad, el trastorno o el estado, es decir, detener su desarrollo; y
- (iii)
- aliviar la enfermedad, el trastorno o el estado, es decir, provocar la regresión de la enfermedad, el trastorno y/o el estado.
\vskip1.000000\baselineskip
La expresión "daño tisular neural que resulta
de una lesión por isquemia y reperfusión y enfermedades
neurodegenerativas" incluye neurotoxicidad, tal como la observada
en el ictus vascular y la isquemia focal y global.
Un rasgo característico de muchas de estas
transformaciones es que los productos metabólicos son más polares
que los fármacos originales, aunque algunas veces un fármaco polar
produce un producto menos polar. Las sustancias con altos
coeficientes de reparto lípido/agua, que atraviesan fácilmente las
membranas, también difunden de nuevo rápidamente desde la orina
tubular a través de las células tubulares renales al plasma. Por
tanto, tales sustancias tienden a tener un bajo aclaramiento renal
y una larga persistencia en el cuerpo. Si un fármaco se metaboliza
para dar un compuesto más polar, uno con un coeficiente de reparto
inferior, su reabsorción tubular se reducirá enormemente. Además,
el mecanismo secretor específico para aniones y cationes en los
túbulos renales proximales y en las células hepáticas parenquimales
funciona para sustancias altamente polares.
Como ejemplo específico, la fenacetina
(acetofenetidina) y acetanilida son ambos agentes antipiréticos y
analgésicos suaves, pero se transforman cada uno dentro del cuerpo
en un metabolito más eficaz y más polar,
p-hidroxiacetanilida (paracetamol), que se usa
ampliamente hoy en día. Cuando se administra una dosis de
acetanilida a una persona, los metabolitos sucesivos alcanzan picos
y disminuyen en el plasma secuencialmente. Durante la primera hora,
la acetanilida es el principal componente plasmático. En la segunda
hora, a medida que cae el nivel de acetanilida, la concentración
del metabolito paracetamol alcanza un pico. Finalmente, tras unas
pocas horas, el principal componente plasmático es un metabolito
adicional que es inerte y puede excretarse del cuerpo. Por tanto,
las concentraciones plasmáticas de uno o más metabolitos, así como
del propio fármaco, pueden ser farmacológicamente importantes.
Las reacciones implicadas en el metabolismo de
fármacos a menudo se clasifican en dos grupos, tal como se muestra
en la tabla II. Las reacciones de fase I (o funcionalización)
consisten generalmente en (1) reacciones de oxidación y reducción
que alteran y crean nuevos grupos funcionales y (2) reacciones
hidrolíticas que escinden ésteres y amidas para liberar grupos
funcionales enmascarados. Estos cambios habitualmente son en la
dirección de un aumento de la polaridad.
Las reacciones de fase II son reacciones de
conjugación en las que el fármaco, o a menudo un metabolito del
fármaco, se acopla a un sustrato endógeno, tal como ácido
glucurónico, ácido acético o ácido sulfúrico.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la presente invención
presentan actividad farmacológica y por tanto, son útiles como
productos farmacéuticos. En particular, los compuestos presentan
actividad en los sistemas vesicular cardiaco y nervioso central.
Se entiende que están incluidas en la invención,
cuando sea posible, formas tautoméricas.
Muchos de los inhibidores de PARP de la presente
invención pueden sintetizarse mediante métodos conocidos a partir de
materiales de partida que se conocen.
Normalmente, los inhibidores de PARP usados en
la composición de la invención tendrán una CI_{50} para inhibir
poli(ADP-ribosa) polimerasa in vitro
de aproximadamente 20 \muM o menor, preferiblemente menor de
aproximadamente 10 \muM, más preferiblemente menor de
aproximadamente 1 \muM, o preferiblemente menor de aproximadamente
0,1 \muM, lo más preferiblemente menor de aproximadamente 0,01
\muM.
Por ejemplo, Suto et al., citados
anteriormente, han notificado que el inhibidor de PARP
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)butoxil]-1(2H)-isoquinolinona
inhibe PARP con una CI_{50} de 40 nM.
Los compuestos de la presente invención pueden
prepararse tal como sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Pueden sintetizarse compuestos de la siguiente
fórmula general II-5, por ejemplo, mediante los
siguientes métodos.
Esquema
1-5
Esquema general para la síntesis
de azafenantridonas
4a-c
Procedimiento general para la síntesis de
aminas 3a-c. Se añadió el ácido borónico 1 (2,0
g, 8,0 mmoles) preparado según Brimble, M. A; Chan, S. H. Aust. J.
Chem. 1998, 51, 235-242 a una disolución de
carbonato de potasio (2,2 g en 8 ml de H_{2}O) y
2-cloro-3-amino-piridina
(0,94 g, 7,3 mmoles) en 100 ml de tolueno/EtOH (8:1). Se desoxigenó
esta mezcla a vacío y se rellenó con nitrógeno. Tras agitar la
mezcla bajo nitrógeno durante 30 min., se añadió
tetrakistrifenilfosfina de paladio (250 mg) a la mezcla. Se calentó
la disolución hasta 80ºC hasta conversión completa según CCF
(hexanos/EtOAc 50/50). Entonces se extrajo la reacción con agua y se
secó la capa de tolueno y se concentró produciendo un sólido bruto
que se trituró con dietil éter (10-20 ml)
produciendo 1,84 g (85%) de la amina deseada 3a.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 8,05 (d, 1H), 7,45
(m, 3H), 7,28 (d, 1H), 7,06 (m, 1H), 7,00 (d, 1H), 4,01 (s, 2H),
3,78 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 1,48 (d, 3H), 1,13 (d, 3H), 1,01 (d,
3H), 0,84 (d, 3H).
R =
5-cloro-amina 3b. Se sintetizó
la amida 3b a partir de
3-amino-2,5-dicloro-piridina
2b (X = Cl, R = 5-Cl) tal como se mencionó
anteriormente con la excepción de la purificación mediante
cromatografía ultrarrápida en la mínima cantidad de gel de sílice
(EtOAc al 10%/hexanos \rightarrow EtOAc al 50%/hexanos). El
rendimiento en seco fue 1,40 g (70%). ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}) \delta 7,98 (s, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,00
(d, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 1,48 (d, 3H), 1,19 (d, 3H),
1,04 (d, 3H), 0,91 (d, 3H).
R =
6-metoxi-amina 3c. Se sintetizó
la amida 3c a partir de
3-amino-2-bromo-6-metoxipiridina
2c y ácido borónico 1 tal como se mencionó anteriormente. El
rendimiento en seco fue del 74%. ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}) \delta 7,43 (m, 3H), 7,27 (m, 1H), 7,08 (d, 1H), 6,61
(d, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 1,49 (d, 3H),
1,13 (d, 3H), 0,99 (d, 3H), 0,75 (d, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Azafenantridona 4a. (Comparativo). Se
disolvió la amida 3a (1,74 g, 5,8 mmoles) en tetrahidrofurano seco
(25 ml) y se enfrió hasta -78ºC bajo nitrógeno. Se añadió
diisopropilamida de litio (2,0 M, 7,6 ml) gota a gota a la
disolución y se agitó esta mezcla durante varias horas y se calentó
hasta temperatura ambiente durante la noche. Se extinguió la
reacción con agua (50 ml) y se extrajo con MeOH al 10%/DCM. Se
secaron las fases orgánicas combinadas y se concentraron produciendo
el sólido bruto que se trituró con dietil éter en ebullición
produciendo el material puro 4a, 0,95 g (89%). P.f. =
300-320ºC (desc.); ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO) \delta 11,78 (s, 1H), 8,77 (d, 1H),
8,55 (d, 1H), 8,32 (d, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,74 (m, 2H), 7,54 (m,
1H). Análisis calculado para C_{12}H_{8}N_{2}O: C, 73,46; H,
4,11; N, 14,28. Hallado: C, 72,80; H, 4,19; N, 14,06.
\vskip1.000000\baselineskip
Cloroazafenantridona 4b. Se preparó el
cloruro 4b de manera análoga al compuesto 4a. Rendimiento = 74%;
P.f. = 295-300ºC; ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO) \delta 11,80 (sa, 1H), 8,69 (d,
1H), 8,56 (s, 1H), 8,31 (d, 1H), 7,94 (t, 1H), 7,78 (m, 2H).
Análisis calculado para C_{12}H_{7}ClN_{2}O: C, 62,49; H,
3,06; N, 12,15. Hallado: C, 61,53; H, 3,21; N, 11,87.
\vskip1.000000\baselineskip
Metoxiazafenantridona 4c. Se preparó el
compuesto 4c a partir de la amida 3c de manera similar a 4a.
Rendimiento del 99%; P.f. = 290-300ºC;
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO) \delta
11,67 (sa, 1H), 8,69 (d, 1H), 8,30 (d, 1H), 7,93 (t, 1H), 7,72 (m,
2H), 7,03 (d, 1H), 4,01 (s, 3H). Análisis calculado para
C_{13}H_{10}N_{2}O_{2}: C, 69,02; H, 4,46; N, 12,38.
Hallado: C, 67,89; H, 4,49; N, 12,08.
\vskip1.000000\baselineskip
Hidroxiazafenantridona 4d. Se disolvió el
metil éter 4c (50 mg, 2,2 mmoles) en 10 ml de HBr (al 48% en HOAC)
en un tubo sellado. Se calentó la reacción hasta 100ºC durante 10 h.
Tras enfriar, se filtró la reacción y se lavó con ácido acético (3 x
10 ml) y se secó a vacío. El peso seco de la sal bromhidrato 4d fue
de 424 mg (90%). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO) \delta 11,61 (sa, 1H), 10,50 (sa,
1H), 8,62 (d, 1H), 8,30 (d, 1H), 7,89 (t, 1H), 7,71 (t, 1H), 7,65
(d, 1H), 6,81 (d, 1H). Análisis calculado para
C_{12}H_{9}BrN_{2}O_{2}: C, 49,17; H, 3,09; N, 9,56.
Hallado: C, 48,73; H, 3,15; N, 9,36.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Benciloxiazafenantridona 4e.
(Comparativo) Se disolvió la sal bromhidrato 4d (100 mg, 0,34
mmoles) en 3 ml de DMF. Se añadieron carbonato de potasio (100 mg) y
bromuro de bencilo (60 \mul, 0,50 mmoles) a la disolución y se
calentó la mezcla hasta 60ºC durante 14 h. Se eliminó el disolvente
a vacío y se lavó el residuo con agua (5 ml) y MeOH en ebullición
(10 ml) y se filtró. El sólido 4e (47 mg, 46%) era puro mientras que
el filtrado contenía una mezcla de isómeros. P.f. =
271-276ºC ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO) \delta 11,68 (sa, 1H), 8,71 (d,
1H), 8,30 (d, 1H), 7,93 (t, 1H), 7,74 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,40
(t, 2H), 7,32 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 5,54 (s, 2H). Análisis
calculado para C_{19}H_{14}N_{2}O_{2} (H_{2}O): C, 71,24;
H, 5,03; N, 8,74. Hallado: C, 71,28; H, 4,83; N, 8,38.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2
Síntesis de aminoazafenantridona
4f
Dinitroamida 3f. Se logró el acoplamiento
de
2-cloro-3,5-dinitropiridina
2f con ácido bórico 1 tal como se explicó resumidamente en el
procedimiento para 3a-c. ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}) \delta 9,55 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 7,41 (m, 2H), 7,39
(t, 1H), 7,28 (d, 1H), 3,99 (m, 1H) 3,40 (m, 1H), 1,58 (da, 3H),
1,50 (da, 3H), 1,33 (da, 3H), 1,20 (da, 3H).
Aminoazafenantridona 4f. Se disolvió la
dinitroamida 3f (700 mg, 1,88 mmoles) en 25 ml de MeOH y se añadió a
un matraz Parr bajo nitrógeno con 100 mg de paladio sobre carbono.
Se redujo esta mezcla bajo una atmósfera de 30 psi de hidrógeno
durante 2 h. Se eliminó por filtración el paladio a través de un
tapón de celite y se concentró el filtrado a vacío y se usó la
diamina en bruto (550 mg, 94%) en la ciclación sin ninguna
purificación adicional. Se redisolvió la diamina en tetrahidrofurano
seco y se cicló con LDA (3 eq.) de manera similar a las amidas
3a-c. Se aisló el compuesto 4f con un rendimiento
del 56% (227 mg), p.f. = >300ºC (desc.);
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO) \delta
11,46 (sa, 1H), 8,49 (d, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,77 (t,
1H), 7,51 (t, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,92 (d, 2H). Análisis calculado
para C_{12}H_{9}N_{3}O_{2}: C, 62,87; H, 4,84; N, 18,33.
Hallado: C, 62,18; H, 4,74; N, 18,17.
\newpage
Esquema
3-5
Síntesis de
cloroazafenantridonas
4g
Cloroazafenantridona 4g. (Comparativo) Se
preparó la amida 5 a partir de reactivos comerciales, cloruro de
benzoílo y
3-amino-2,6-dicloropiridina
en DCM en alto rendimiento. Se preparó el producto deseado 4g
disolviendo la amida 5 (4,45 g 16,7 mmoles) en DMA (35 ml) y
añadiendo carbonato de sodio (1,8 g, 16,7 mmoles) y acetato de
paladio (400 mg, cantidad catalítica). Se calentó la mezcla de
reacción hasta 125ºC durante varias horas hasta que el material de
partida ya no estaba presente mediante CCF. Entonces se enfrió la
reacción hasta temperatura ambiente y se concentró a vacío y se
suspendió el residuo bruto en EtOAc en ebullición (100 ml) y se
filtró a través de un tapón de celite. Se concentró el filtrado y se
eliminó por filtración el sólido que precipitó y se determinó que
era el compuesto 4g (520 mg, rendimiento del 13%). P.f. =
285-295 (desc.) ºC; ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO) \delta 11,92 (sa, 1H), 8,62 (d,
1H), 8,32 (d, 1H), 7,95 (t, 1H), 7,77 (m, 2H), 7,62 (d, 1H).
Análisis calculado para C_{12}H_{7}ClN_{2}O: C, 62,49; H,
3,06; N, 12,15. Hallado: C, 61,40; H, 3,19; N, 11,77.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
4
Esquema general para la síntesis
de aminas de azafenantridona
4h-x
Procedimiento general para la síntesis del
nitro-compuesto 3g. Se añadió el ácido borónico
1 (2,0, 9,0 mmoles) preparado según la bibliografía a una disolución
de carbonato de potasio (2,2 g en 8 ml de H_{2}O) y
2,5-dicloro-3-nitro-piridina
2g (1,4 g 7,3 mmoles) en 100 ml de tolueno/EtOH (8:1). Se desoxigenó
esta mezcla a vacío y se rellenó con nitrógeno. Tras agitar la
mezcla bajo nitrógeno durante 30 min., se añadió
tetrakistrifenilfosfina de paladio (250 mg) a la mezcla. Se calentó
la disolución hasta 80ºC hasta conversión completa (sin material de
partida) según CCF (hexanos/EtOAc 50/50). Entonces se extrajo la
reacción con agua y se secó la capa de tolueno y se concentró
produciendo un aceite bruto que se colocó en una columna de gel de
sílice proporcionando el isómero deseado 3g con un rendimiento del
45% (1,20 g). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 8,26
(d, 1H), 7,45 (m, 3H), 7,34 (m, 2H), 3,99 (m, 1H), 3,41 (m, 1H),
1,38 (sa, 9H), 1,21 (d, 3H).
Procedimiento general para la síntesis de
aminas 6a-x. Se disolvió el cloruro 3g (300 mg,
0,83 mmoles) en THF (5 ml) seguido por la adición de
diisopropiletilamina (160 \mul, 0,91 mmoles) y
2-(4-aminoetil)morfolina (220 \mul, 1,66
mmoles). Se calentó la reacción hasta 65ºC durante la noche y el
análisis por CCF indicó una mancha de bajo recorrido en el nivel
inicial (EtOAc). Se añadió agua (5 ml) a la mezcla seguido por
extracción con DCM (3 x 10 ml). Se secaron las fases orgánicas
combinadas y se concentraron produciendo una espuma en bruto que
solidificó tras secado a vacío. Se trituró el sólido con hexanos y
se filtró produciendo 320 mg (85%) de la amina deseada 6a.
\newpage
NR_{2} = aminoetilmorfolina (6a).
Rendimiento = 85%; ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 8,21 (m, 1H), 7,40 (m, 5H),
6,36 (d, 1H), 3,97 (m, 1H), 3,70 (m, 6H), 3,47 (m, 2H), 3,31 (m,
1H), 2,45 (m, 6H), 1,48 (sa, 3H), 1,24 (sa, 3H), 1,06 (sa, 3H), 0,87
(sa, 3H).
NR_{2} = N-metilpiperazina
(6b). Rendimiento = 72%; EM (ES+) = 426,21.
NR_{2} =
N-boc-[2.2.1]-diazabicicloheptano
(6c). Rendimiento = 72%, EM (ES+) = 486,43.
NR_{2} =
N-boc-piperazina (6d).
Rendimiento = 72%, EM (ES+) = 473,23.
NR_{2} = amino (6e). Rendimiento = 72%,
EM (ES+) = 343,31.
Procedimiento general para la síntesis de
anilinas 7a-x. Se disolvió el
nitro-compuesto 6a (300 mg, 0,66 mmoles) en MeOH (20
ml) con Pd/C (100 mg) y se hidrogenó a 30 psi durante 2 h. La CCF
indicó conversión completa del nitro-compuesto (MeOH
al 10%/EtOAc). Se filtró la mezcla de reacción a través de un tapón
de celite y se concentró el filtrado y se secó. Se usó la espuma en
bruto en la etapa de ciclación sin purificación adicional. El
rendimiento en seco de la anilina 7a fue de 275 mg (99%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,41 (m, 3H), 6,98
(d, 1H), 6,31 (d, 1H), 4,75 (sa, 2H), 3,78 (m, 1H), 3,70 (m, 4H),
3,28 (m, 3H), 2,56 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 1,50 (d, 3H), 1,19 (d,
3H), 1,00 (d, 3H), 0,83 (d, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento general para la ciclación de
anilinas 7a-x. Se disolvió la anilina en bruto
7a (270 mg, 0,64 mmoles) en THF (20 ml) y se enfrió hasta -78ºC. Se
añadió una disolución 2,0 M de LDA (1 ml) a la anilina y se calentó
lentamente la reacción hasta temperatura ambiente durante la noche.
Se extinguió la mezcla con agua (10 ml) y se extrajo varias veces
con EtOAc (3 x 15 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas y
se concentraron y se trituró el sólido resultante con EtOAc (3 ml) y
se filtró produciendo 125 mg (58%) de la amina deseada 4b.
^{1}H-RMN (DMSO d_{6}) \delta 11,46 (s, 1H),
8,70 (d, 1H), 8,32 (d, 1H), 7,92 (t, 1H), 7,71 (t, 1H), 7,49 (d,
1H), 6,82 (d, 1H), 6,63 (t, 1H), 3,66 (m, 4H), 3,58 (m, 2H), 2,60
(m, 4H), EM (ES+ = 324,97). P.f. = 250-255ºC.
Análisis calculado para C_{18}H_{20}N_{4}O_{2} (0,5
H_{2}O) C, 64,85; H, 6,35; N, 16,81. Hallado C, 65,44; H, 6,27; N,
16,71.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} = N-metilpiperazina
(4i). Rendimiento = 46%; P.f. = 285-288ºC;
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 11,50 (s, 1H),
8,65 (d, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,88 (t, 1H), 7,69 (t, 1H), 7,56 (d,
1H), 7,14 (d, 1H), 3,56 (t, 4H), 2,46 (t, 4H), 2,24 (s, 3H).
Análisis calculado para C_{17}H_{18}N_{4}O: C, 69,37: H, 6,16:
N, 19,03; Hallado: C, 69,38: H, 6,15: N, 18,84.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
(S,S)-N-Boc-[2.2.1]diazabicicloheptano
(4j). Rendimiento = 36%; P.f. = 259-26ºC,
^{1}H-RMN (DMSOO-d_{6}) \delta
11,44 (s, 1H), 8,65 (d, 1H), 8,26 (d, 1H), 7,67 (t, 1H), 7,45 (d,
1H), 6,85 (t, 1H), 4,92 (dd, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,30 (s, 1H), 3,23
(m, 1H), 1,96 (d, 2H), 1,60 (s, 9H). Análisis calculado para
C_{22}H_{24}N_{4}O_{3}: C, 67,33; H, 6,16; N, 14,28.
Hallado: C, 67,30; H, 6,19; N, 1421.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
[2.2.1]-diazabicicloheptano (4k). Se preparó
este compuesto mediante la desprotección del grupo boc por TFA al
10%/DCM (16 h). Rendimiento = 98%; P.f. = 160-163ºC;
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
11,54 (s, 1H), 8,68 (d, 1H), 8,59 (d, 1H), 7,90 (t, 1H), 7,72 (t,
1H), 7,61 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,33 (s, 1H), 3,68
(m, 2H), 3,29 (m, 2H), 2,19 (d, 1H), 2,00 (d, 1H). Análisis
calculado para C_{17}H_{16}N_{4}O (1,1
C_{2}HF_{3}O_{2})(0,4 H_{2}O): C, 54,41; H, 4,00; N, 13,22.
Hallado: C, 54,12; H, 4,26; N, 12,98.
\vskip1.000000\baselineskip
NB_{2} = Boc-piperazina
(4l). Rendimiento = 48%; P.f. = 231-235ºC,
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
11,52 (s, 1H), 8,67 (d, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,89 (t, 2H), 7,70 (t,
2H), 7,58 (d, 1H), 3,50 (dd, 8H), 1,44 (s, 9H) Análisis calculado
para C_{21}H_{24}N_{4}O_{3}(0,5 H_{2}O): C, 64,77;
H, 6,47; N, 14,39. Hallado: C, 64,83; H, 6,39; N, 14,23.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NB_{2} = piperazina (4m). Se preparó
este compuesto mediante la desprotección del grupo boc con TFA al
10%/DCM (16 h). Rendimiento = 99%; P.f. = 250-252ºC;
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
11,56 (s, 1H), 8,93 (sa, 1H), 8,65 (d, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,87 (t,
1H), 7,70 (t, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,21 (d, 1H), 3,61 (t, 4H), 3,26
(sa, 4H). Análisis calculado para C_{16}H_{16}N_{4}O (0,5
H_{2}O) (1,9 TFA): C, 47,18; H, 3,40; N, 11,11. Hallado: C, 47,39;
H, 3,64; N, 11,18.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} = amino (4n). Rendimiento = 50%;
P.f. = 310-315ºC; ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 11,42 (s, 1H), 8,30 (d, 1H),
8,26 (d, 1H), 7,85 (t, 1H), 7,66 (t, 1H), 7,44 (d, 1H), 6,70 (d,
1H), 6,02 (d, 2H). Análisis calculado para C_{12}H_{9}N_{3}O
(0,11 EtOAc): C, 67,64; H, 4,31; N, 19,02. Hallado: C, 67,98: H,
4,57; N, 18,67.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N,N-dietil-aminopropil (4o)
(Comparativo) Rendimiento = 45%; P.f. = 114-116ºC;
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) 8 300 MHz
0,96 (t, 6H, J = 7,07, 7,73), 1,72 (m, 2H), 2,49 (m, 6H), 3,39 (m,
2H), 6,70 (d, 1H, J = 8,84), 7,41 (d, 1H, J = 8,84), 7,65 (t, 1H, J
= 8,08, 8,09), 7,84 (t, 1H J = 8,09, 8,34), 8,24 (d, 1H, J = 7,83),
8,83 (d, 1H, J = 7,83), 11,4 (s, 1H).
NR_{2} =
N-isopropil-piperazina (4p).
P.f. = 260-264ºC. ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 300 MHz 11,48 (s, 1H), 8,63
(d, J = 7,44 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,86 (t, J = 8,2,
8,39 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 8,20, 6,87 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 9,15 Hz,
1H), 7,10 (d, J = 9,16 Hz, 1H), 3,55 (t, J = 4,96, 4,58 Hz, 4H),
2,68 (m, 1H), 2,56 (t, J = 4,77, 4,77 Hz, 4H), 1,00 (d, J = 6,48 Hz,
6H). Análisis calculado para C_{19}H_{24}N_{4}O: C, 70,8; H,
6,9; N, 17,2. Hallado: C, 70,9; H 6,9; N, 17,2.
NR_{2} = pirrolilpiperidina (4q). P.f.
= 170-175ºC; ^{1}H-RMN (D2O)
\delta 300 MHz 7,89 (d, J = 7,63 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 7,82 Hz,
1H), 7,34 (t, J = 7,06, 7,63 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 6,48, 7,44 Hz,
1H), 6,94 (d, J = 8,21 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 4,08 (d,
J = 12,21 Hz, 2H), 3,63 (t, J = 9,72, 8,01 Hz, 2H), 3,31 (m, 1H),
3,13 (m, 2H), 2,70 (t, J = 9,92, 12,02 Hz, 2H),
2,11-2,2 (m, 4H), 1,94 (q, 2H), 1,63 (q, 2H).
Análisis calculado para C_{21}H_{24}N_{4}O (1 H_{2}O) (1,4
HCl): C, 58,4; H, 6,4; N, 13,0; Cl, 11,5. Hallado: C, 58,7; H, 6,8;
N, 12,8. Cl, 11,1.
NR_{2} =
N-ciclopentilpiperazina (4r). P.f. =
29-1-290ºC;
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) 8 300 MHz
11,50 (s, 1H), 8,65 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 8-28 (d, J
= 8,01 Hz, 1H), 7,88 (t, J = 7,06, 6,86 Hz, 1H), 7,70 (t, J = 7,06,
7,06 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,96 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 9,16 Hz, 1H),
3,58 (t, J = 4,96, 4,20 Hz, 4H), 2,57 (t, J = 4,38, 4,57 Hz, 4H),
1,83 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,57 (m, 1H), 1,50 (m, 2H), 1,37 (m,
2H). Análisis calculado para C_{21}H_{24}N_{4}O (0,2
H_{2}O): C, 71,7; H, 7,0; N, 15,9. Hallado: C, 71,6; H, 7,0; N,
15,7.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-oxo-N-metilpiperazina
(4s). (Comparativo) La síntesis de este compuesto y 4t se
realizó mediante la oxidación de 4i con un exceso de mCPBA.
^{1}H-RMN (D_{2}O) \delta 300 MHz 7,62 (d, J =
6 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,33 (m, 2H), 6,59 (d, J = 9 Hz,
1H), 6,14 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,73 (m, 4H), 3,62 (t, 2H), 3,55 (s,
3H), 3,08 (t, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-oxo-metilpiperidina-N-óxido
(4t). P.f. = 230-235ºC;
^{1}H-RMN (D_{2}O) \delta 300 MHz 7,97 (m,
2H), 7,51 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,36 (t, J = 9
Hz, 1H), 7,27 (t, J = 9 Hz, 1H), 4,88 (ta, 2H), 4,56 (ta, 2H), 3,96
(da, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,64 (da, 2H). Análisis calculado para
C_{17}H_{18}N_{4}O_{3} (1,25 H_{2}O): C, 50,1; H, 5,1; N,
13,8. Hallado: C, 50,7; H, 5,2; N, 13,8.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-metilfuranilpiperazina (4u). P.f. =
270-275ºC; ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) 300 MHz 11,49 (s, 1H), 6,63 (d, J =
8,01 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 7,86 (t, J = 8,20, 8,21 Hz,
1H), 7,67 (t, J = 7,06, 7,06 Hz), 1H), 7,53 (d, J = 8,96, 1H), 7,11
(d, J = 8,96 Hz, 1H), 3,96 (m, 1H), 3,73 (q, 1H), 3,39 (q, 1H), 3,55
(t, J = 4,96, 3,44 Hz, 4H), 2,61 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,41 (m,
2H), 1,86-1,98 (m, 1H), 1,75-1,82
(m, 2H), 1,43-1,47 (m, 1H). Análisis calculado para
C_{23}H_{24}N_{4}O_{2} (0,3 H_{6}O): C, 68,2; H, 6,7; N,
15,2. Hallado: C, 68,2; H, 6,7; N, 15,0.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-ciclopropilmetilpiperazina (4v). (Comparativo)
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) 300 MHz
11,38 (sa, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,76 (t, 1H), 7,58 (t,
1H), 7,46 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 3,49 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,12
(m, 2H), 0,77 (m, 1H), 0,39 (m, 2H), 0,00 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-metil-[2.2.1]-diazabicicloheptano
(4w). (Comparativo) ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) 300 MHz 11,43 (sa, 1H). 8,66 (d, 1H),
8,27 (d, 1H), 7,84 (t, 1H), 7,70 (t, 1H), 7,53 (d, 1H), 6,81 (d,
1H), 4,73 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,34
(m, 1H), 2,87 (d, 1H), 2,28 (s, 3H), 1,86 (dd, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} =
N-ciclopropilmetil-[2.2.1]-diazabicicloheptano
(4x). (Comparativo) EM (ES+) = 347,28.
\newpage
Esquema
5
Síntesis de las aminas
8a-r
(Comparativo)
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento general para la alquilación de
amina 4k. Se colocaron la amina 4k (10 mg), un exceso de
K_{2}CO_{3} y el correspondiente cloruro de bencilo en tubos de
ensayo en 1 ml de CH_{3}CN. Se calentaron esas mezclas hasta 60ºC
en bloque de calor durante la noche. Se añadieron EtOAc y HCl al
10%. Se eliminó la fase orgánica y se basificó la fase acuosa con
NaOH al 10%. Se extrajo con EtOAc y entonces se evaporó a presión
reducida. Se prepararon los compuestos 8a-r de esta
manera.
R = CH_{2}CN (8a). EM (ES+) =
332,41.
R = CH_{2}COOEt (8b). EM (ES+) =
378,45.
R =
CH_{2}-(2,5-dimetilfenilo) (8c). EM (ES+) =
311,51.
R = CH_{2}-(4-fluorofenilo)
(8d). EM (ES+) = 401,45.
R = CH_{2}-(4-metoxifenilo)
(8e). EM (ES+) = 413,49.
R =
CH_{2}-(3,4-dimetilfenilo) (8f). EM (ES+) =
411,23.
R =
CH_{2}-(3,4-diclorofenilo) (8g). EM (ES+) =
451,36.
R = CH_{2}-(2-fluorofenilo)
(8h). EM (ES+) = 401,42.
R = CH_{2}-(3-metilfenilo)
(8i). EM (ES+) = 397,49.
R = CH_{2}-(3-clorofenilo)
(8j). EM (ES+) = 417,83.
R = CH_{2}-(2-metilfenilo)
(8k). EM (ES+) = 397,41.
R = CH_{2}-(2-clorofenilo)
(8l). EM (ES+) = 417,73.
R =
CH_{2}-(4-carboxifenilo) (8m). EM (ES+) =
427,43.
R =
CH_{2}-(3-carboxifenilo) (8n). EM (ES+) =
427,41.
R = CH_{2}-(4-metilfenilo)
(8o). EM (ES+) = 397,42.
R =
CH_{2}-(4-benciloxifenilo) (8p). EM (ES+) =
489,44.
R = CH_{2}-(3-fluorofenilo)
(8q). EM (ES+) = 400,42.
R = CH_{2}-(3-metilfenilo)
(8r). EM (ES+) = 412,43.
\newpage
Esquema
6-5
Síntesis de aminas
9a-c
(Comparativo)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimientos generales para la síntesis en
paralelo de aminas 9a-c. (Comparativo) A una
mezcla de la amina 4m, un exceso de K_{2}CO_{3} y las
correspondientes bromometilpiridinas se le añadió 1 ml de
CH_{3}CN. Se calentaron las mezclas de reacción hasta 90ºC durante
4 h. Se añadió la resina
tris(2-aminoetil)amina y se calentó
hasta 70ºC durante 1 h para eliminar el exceso de
bromometilpiridinas. Se filtraron las mezclas y se añadieron a agua
(2 ml). Se extrajeron con EtOAc. Se secaron las fases orgánicas
sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron a presión reducida.
R = CH_{2}-(o-piridina)
(9a). EM (ES+) = 372,41.
R = CH_{2}-(m-piridina)
(9b). EM (ES+) = 372,40.
R = CH_{2}-(o-piridina)
(9c). EM (ES+) = 372,41.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
7
Síntesis de aminas
11a-x
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento para sintetizar el derivado de
cloracetilo (10). Se disolvió la amina 4n en
N,N'-dimetilacetamida y se enfrió hasta 0ºC en un
baño de hielo. Se añadieron trietilamina (1,1 eq.) y cloruro de
cloroacetilo (0,44 ml, 5,5 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente bajo nitrógeno durante la noche. Se evaporó el
disolvente a presión reducida y al residuo marrón resultante se le
añadió agua y NaHCO_{3} al 10%. Se recogió el sólido mediante
filtración produciendo 1,03 g (rendimiento del 84%). P.f. =
287-290ºC; ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 300 MHz 11,81 (s, 1H), 10,94
(s, 1H), 8,66 (d, J = 8,39, 1H), 8,31 (d, J = 7,63, 1H), 8,20 (d, J
= 8,01, 1H), 7,96 (t, J = 7,82, 7,44, 1H), 7,77 (m, 2H), 4,42 (s,
2H). Análisis calculado para C_{14}H_{10}ClN_{3}O_{2}: C,
58,5; H, 3,5; N, 14,6; Cl, 14,6. Hallado: C, 58,5; H, 3,6; N, 14,6;
Cl, 14,6.
Procedimiento general para la aminación del
cloruro 10. Se llevó a cabo la aminación de manera similar a
8a-r. NR_{2} = dimetilaminocetilo (11a)
(Comparativo) P.f. = 195-198ºC;
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
300 MHz 7,87 (d, J = 7,44 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 7,56
(t, J = 1,24, 7,25 Hz, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,06 (d, J = 8,96 Hz, 1H),
4,15 (s, 2H), 3,00 (s, 6H). Análisis calculado para
C_{16}H_{16}N_{4}O_{2} (1,7 H_{2}O) (1,2 HCl): C, 50,8; H,
5,5; N, 14,8; Cl, 11,3. Hallado: C, 50,8; H, 5,5; N, 14,7; Cl,
11,2.
NR_{2} = piperidinilacetilo (11b). P.f.
= 175-180ºC; ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) 8 400 MHz 8,03 (da, J = 8,33 Hz, 1H),
7,90 (d, J = 8,09 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,33, 7,32 Hz, 1H), 7,59 (d,
J = 7,83 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 7,58, 7,33 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,59
Hz, 1H), 4,12 (s, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,13 (s, 2H), 1,86 (m, 6H).
Análisis calculado para C_{19}H_{20}N_{4}O_{2} (2 H_{2}O)
(HCl): C, 54,4; H, 6,3; N, 13,4; Cl, 8,4. Hallado: C, 54,2; H, 6,0;
N, 13,1; Cl, 8,6.
NR_{2} = pirrolidilpiperidinilacetilo
(11c). (Comparativo) 300 MHz 7,61 (m, 2H), 7,47 (t, J = 9 Hz,
1H), 7,38 (m, 2H), 6,90 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,50 (s,
2H), 3,33 (m, 4H), 2,68 (m, 2H), 2,39 (m, 3H),
1,87-2,12 (m, 6H). Análisis calculado para
C_{23}H_{27}N_{5}O_{2} (2 H_{2}O) (HCl): C, 57,8; H, 6,8
N, 14,7. Hallado: C, 57,8; H, 6,7 N, 14,6.
NR_{2} =
2,3-tetrahidropiridina (11d). EM (ES-) = 333.
(comparativo)
NR_{2} = isoindol (11e). EM (ES-) =
369. (Comparativo)
NR_{2} = difenilamina (11f). EM (ES-) =
407. (Comparativo)
NR_{2} = N-metilanisol
(11g). EM (ES-) = 387. (Comparativo)
NR_{2} = N-metilbencilamina
(11h). EM (ES-) = 371. (Comparativo)
NR_{2} =
N-bencil-N-fenetilamina
(11i). EM (ES-) = 461. (Comparativo)
NR_{2} =
N-hidroxietilpiperazina (11j). MS(ES-) =
381. (Comparativo)
NR_{2} = N,N-dipropilamina
(11k). EM (ES-) = 331. (Comparativo)
NR_{2} = 4-oxopiperidina
(11l). EM (ES-) = 349. (Comparativo)
NR_{2} = N,N-dibutilamina
(11m). EM (ES-) = 379. (Comparativo)
NR_{2} = morfolina (11n). EM (ES-) =
337. (Comparativo)
NR_{2} = imidazol (11o). EM (ES-) = 3
18.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
8
Derivados de amida de anilina
4f
\vskip1.000000\baselineskip
Cloruro 12. Se sintetizó el cloruro 12 de
manera idéntica al cloruro 10. ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 300 MHz): 11,81 (sa, 1H), 10,94 (s,
1H), 8,66 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 7,94 (t, 1H), 7,77
(m, 2H), 4,44 (s, 2H).
Procedimiento general para la aminación del
cloruro 12. Se llevó a cabo la aminación de manera similar a la
aminación del cloruro 10 mencionado anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} = clorhidrato de dimetilamina
(13a). (Comparativo) ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300
MHz): 7,82 (d, J = 7,44 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 7,63 Hz, 1H), 7,70 (d,
J = 2,10 Hz), 7,63 (t, J = 7,05, 7,63 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 7,06,
7,82 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,29 Hz, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,03 (s,
6H).
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} = clorhidrato de piperidina
(13b). ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz): 400 MHz
8,03 (da,J = 8,33 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8,09 Hz, 1H), 7,66 (t, J =
7,33, 7,32 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 7,58,
7,33 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,59 Hz, 1H), 4,12 (s, 2H), 3,63 (s, 2H),
3,13 (s, 2H), 1,86 (m, 6H).
\vskip1.000000\baselineskip
NR_{2} = pirrolilpiperidina (13c).
(Comparativo) ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz)
\delta 7,48 (d,J = 9 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,29 (m,
2H), 7,17 (t, J = 9 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 3,58 (s, 2H),
3,43-3,31 (m, 5H), 3,22 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,74
(m, 2H), 2,48 (s, 6H), 2,14 (m, 2H), 1,89-1,65 (m,
6H). Análisis calculado para C_{23}H_{27}N_{5}O_{2} (2
H_{2}O) (2 MsOH): C, 50,2; H, 5,9; N, 11,7. Hallado: C, 50,2; H,
6,0; N, 11,6.
NR_{2} =
N-isopropilpiperidina (13d). (Comparativo)
^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) 8 300 MHz 7,78 (d, J
= 9 Hz, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,50 (t, J = 9 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H),
3,74 (m, 3H), 3,47 (s, 2H), 3,40 (m, 4H), 2,90 (m, 2H), 1,55 (d, J =
6 Hz, 6H). Análisis calculado para C_{21}H_{25}N_{5}O_{2}
(2,25 H_{2}O) (1 HCl): C, 55,4; H 6,5; N, 15,4. Hallado: C, 55,4;
H, 6,6; N, 15,4.
NR_{2} = aminoetilpirrolidina (13e). EM
(ES+) = 366,35. (Comparativo)
NR_{2} =
2-aminopropil-N-metilpirrolidina
(13f). EM (ES+) = 394,41. (Comparativo)
NR_{2} =
o-aminoetilpiridina (13g). EM (ES+) = 374,30.
(Comparativo)
NR_{2} =
m-aminoetilpiridina (13h). EM (ES+) = 374,25.
(Comparativo)
NR_{2} = N-bencilpiperazina
(13i). EM (ES+) = 428,42. (Comparativo)
NR_{2} = aminoetilmorfolina (13j). EM
(ES+) = 382,32. (Comparativo)
NR_{2} =
N,N-dietiletilendiamina (13k). EM (ES+) =
368,31. (Comparativo)
NR_{2} =
N,N-dimetiletilendiamina (13l). EM = (ES+) =
340,21. (Comparativo)
NR_{2} = N,N''dietilpropilendiamina,
(13m). EM (ES+) = 382,41. (Comparativo)
NR_{2} =
N,N,N-trimetilpropilendiamina (13n). EM (ES+) =
368,32. (Comparativo)
NR_{2} = homopiperazina (13o). EM (ES+)
= 352,23. (Comparativo)
NR_{2} = N-metilpiperazina
(13p). EM (ES+) = 352,32. (Comparativo)
NR_{2} = piperonilpiperazina (13q). EM
(ES+) = 472,44. (Comparativo)
NR_{2} =
aminoetilpirrolidin-2-ona (13r).
EM (ES+) = 394,40. (Comparativo)
NR_{2} = aminoetilpiperidina (13s). EM
(ES+) = 380,32. (Comparativo)
\newpage
Esquema
9
Síntesis alternativa de aminas
4a-x
Síntesis alternativa general de aminas
4a-x (ejemplo 4i). La síntesis propuesta a
continuación sería más susceptible de ampliarse a escala. El éster
borónico 14 puede prepararse a gran escala (20 g) según la
referencia bibliográfica (Kristensen, J. et al. Org. Lett.
2001, 3(10), 1435-1437). Esta síntesis
elimina una etapa, la ciclación de LDA dado que la
reducción/ciclación debe hacerse en la misma etapa.
Síntesis de nitro-cloruro
15. Se disolvieron el éster borónico 14 (16,0 g, 61,0 mmoles),
dinitro-cloruro 2g (11,7 g, 61 mmoles) y carbonato
de potasio (21 g, 152 mmoles) en tolueno/EtOH (20: 1, 300 ml). Se
evacuó esta mezcla y se rellenó varias veces con nitrógeno.
Entonces, se añadió tetrakistrifenilfosfina de paladio (\sim2 g)
seguido por calentamiento de la mezcla hasta 80ºC durante la noche.
Entonces se concentró la reacción a vacío y se repartió entre EtOAc
(200 ml) y H_{2}O (200 ml). Se secó la fase orgánica con sulfato
de sodio y se concentró a vacío. Se sometió a cromatografía el
residuo bruto usando un sistema en gradiente (EtOAc al
5%/hexanos\rightarrowEtOAc al 20%/hexanos). Se aisló el producto
final (R_{f} = 0,3, EtOAc al 10%/hexanos) como un sólido/espuma de
bajo punto de fusión (7,12 g, 38%). Se aislaron otros 1,3 g (7,0%)
de una mezcla de isómeros (otro isómero R_{f} = 0,25, EtOAc al
10%/hexanos) a partir de la columna. ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,40 (d, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,65 (t,
1H), 7,55 (m,2H), 7,32 (d, 1H), 4,16 (q, 2H), 1,19 (t, 3H).
Síntesis de diamina 16. Se disolvió el
cloruro 14 (7,12 g 23,2 mmoles) en DCM (250 ml). Se añadió
diisopropiletilamina (3,3 g, 25,5 mmoles) a esta disolución seguida
por N-metilpiperazina (4,6 g, 46,4 mmoles). Se agitó
esta mezcla durante la noche hasta que la conversión completa del
cloruro era evidente mediante CCF (R_{f} de diamina 0,1, EtOAc).
Se sometió a tratamiento final la reacción mediante extracción con
agua (2 x 100 ml). Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio y
se concentró a vacío produciendo la diamina en bruto 16 (6,56 g,
77%). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta
8,32 (d, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,58 (t, 1H), 7,48 (1,1H), 7,26 (d, 1H),
6,60 (d, 1H), 4,13 (q, 2H), 3,73 (t, 4H), 2,46 (t, 4H), 2,33 (s,
3H), 1,13 (t, 3H).
Reducción/ciclación para formar (4i). Se
disolvió la diamina en bruto 16 en MeOH (300 ml). Se añadió níquel
Raney húmedo (500 mg, cantidad catlítica) seguido por adición gota a
gota de hidrato de hidrazina (4,1 g, 82 mmoles). Se calentó la
mezcla hasta reflujo y se monitorizó mediante CCF hasta su
terminación (aproximadamente 3 h). El valor R_{f} del producto fue
0,1 en MeOH al 10%/EtOAc. Entonces se eliminó por filtración el
níquel Raney y se concentró el filtrado y se suspendió en HCl 1
N/EtOAc (150 ml/100 ml) y se eliminó por filtración el sólido que
resultó y se trituró con 50 ml de CH_{3}CN y se filtró. Se secó el
sólido amarillo claro resultante a alto vacío durante 2 h
produciendo 4,1 g (rendimiento del 84%) de GPI 16539.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz)
\delta 11,50 (sa, 1H), 8,67 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 7,88 (t, 1H),
7,69 (t, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,15 (d,1H), 3,58 (t, 4H), 2,46 (t, 4H),
2,24 (s, 3H).
Formación de la sal mesilato (4i'). A una
disolución de la diamina 4i (2,85 g, 9,7 mmoles) en 500 ml de THF
seco se le añadió ácido metanosulfónico (0,65 ml, 10 mmoles). Se
agitó la mezcla de reacción bajo N_{2} a temperatura ambiente
durante la noche. Se recogió un sólido de color hueso mediante
filtración y se lavó con éter. Se secó a vacío el sólido produciendo
3,2 g (rendimiento del 85%).
Los compuestos de esta invención contienen uno o
más átomos de carbono asimétricos. Por tanto, la invención incluye
los estereoisómeros individuales y mezclas de los mismos así como
los compuestos racémicos. Los isómeros individuales pueden
prepararse o aislarse mediante métodos conocidos en la técnica.
Los compuestos de la invención presentan
actividad farmacológica y, por tanto, son útiles como productos
farmacéuticos. En particular los compuestos presentan actividad en
los sistemas vesicular cardiaco y nervioso central.
Otras variaciones y modificaciones de esta
invención usando las rutas sintéticas descritas anteriormente
resultarán obvias para los expertos habituales en la técnica.
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Los compuestos de la presente invención pueden
tratar o prevenir el daño tisular que resulta de la muerte o el
daño celular debido a necrosis o apoptosis; pueden mejorar el daño
tisular cardiovascular o neural, incluyendo el que sigue a isquemia
focal, infarto de miocardio y lesión por reperfusión; pueden tratar
diversas enfermedades y estados provocados o exacerbados por la
actividad de PARP; pueden extender o aumentar el tiempo de vida o
la capacidad proliferativa de las células; pueden alterar la
expresión génica de células senescentes; y pueden radiosensibilizar
células. Generalmente, la inhibición de la actividad de PARP le
evita a la célula una pérdida de energía, previniendo, en el caso
de células neurales, la despolarización irreversible de las
neuronas y, por tanto, proporciona neuroprotección. Sin querer
restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la activación
de PARP puede desempeñar un papel común en todavía otros mecanismos
excitotóxicos, tal vez aún no descubiertos, además de la producción
de radicales libres y NO.
Por los motivos anteriores, la presente
invención se refiere además a un método de administración de una
cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos anteriormente
identificados en una cantidad suficiente para inhibir la actividad
de PARP, para tratar o prevenir el daño tisular que resulta de la
muerte o el daño celular debido a necrosis o apoptosis, para
efectuar una actividad neuronal no mediada por toxicidad por NMDA,
para efectuar una actividad neuronal mediada por toxicidad por
NMDA, para tratar el daño tisular neural que resulta de una lesión
por isquemia y reperfusión, trastornos neurológicos y enfermedades
neurodegenerativas; para prevenir o tratar ictus vascular; para
tratar o prevenir trastornos cardiovasculares; para tratar otros
estados y/o trastornos tales como degeneración muscular relacionada
con la edad, SIDA y otras enfermedades de senescencia inmunitaria,
inflamación, gota, artritis, aterosclerosis, caquexia, cáncer,
enfermedades degenerativas del músculo esquelético que implican
senescencia replicativa, diabetes, traumatismo craneal, senescencia
inmunitaria, inflamación, gota, trastornos inflamatorios del
intestino (tales como colitis y enfermedad de Crohn), distrofia
muscular, artrosis, osteoporosis, dolor agudo y/o crónico (tal como
dolor neuropático), insuficiencia renal, isquemia retiniana, choque
septicémico (tal como choque endotóxico), y envejecimiento de la
piel; para extender el tiempo de vida y la capacidad proliferativa
de las células; para alterar la expresión génica de células
senescentes; o para radiosensibilizar células tumorales hipóxicas.
La presente invención también se refiere al tratamiento de
enfermedades y estados en un animal que comprende administrar a
dicho animal una cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos
anteriormente identificados.
En particular, la presente invención se refiere
a un método de tratamiento, prevención o inhibición de un trastorno
neurológico en un animal, que comprende administrar a dicho animal
una cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos
anteriormente identificados. En una realización particularmente
preferida, el trastorno neurológico se selecciona del grupo que
consiste en neuropatía periférica provocada por un estado patológico
o una lesión física, lesión cerebral traumática, daño físico a la
médula espinal, ictus asociado con daño cerebral, isquemia focal,
isquemia global, lesión por reperfusión, enfermedad desmielinizante
y trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración. Otra
realización preferida es cuando la lesión por reperfusión es un
ictus vascular. Aún otra realización preferida es cuando la
neuropatía periférica está provocada por el síndrome de
Guillain-Barre. Todavía otra realización preferida
es cuando la enfermedad desmielinizante y el trastorno neurológico
se refieren a neurodegeneración. Otra realización preferida es
cuando la lesión por reperfusión es un ictus vascular. Todavía otra
realización preferida es cuando la enfermedad desmielinizante es
esclerosis múltiple. Otra realización preferida es cuando el
trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración se
selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson y esclerosis lateral amiotrófica.
Aún otra realización preferida es un método de
tratamiento, prevención o inhibición de una enfermedad
cardiovascular en un animal, tal como angina de pecho, infarto de
miocardio, isquemia cardiovascular y daño tisular cardiovascular
relacionado con la activación de PARP, administrando a dicho animal
una cantidad eficaz de los compuestos de la presente invención.
La presente invención también contempla el uso
de compuestos según la reivindicación 1 para inhibir la actividad de
PARP, para tratar, prevenir o inhibir el daño tisular que resulta de
la muerte o el daño celular debido a necrosis o apoptosis, para
tratar, prevenir o inhibir un trastorno neurológico en un
animal.
En una realización particularmente preferida, el
trastorno neurológico se selecciona del grupo que consiste en
neuropatía periférica provocada por un estado patológico o una
lesión física, lesión cerebral traumática, daño físico a la médula
espinal, ictus asociado con daño cerebral, isquemia focal, isquemia
global, lesión por reperfusión, enfermedad desmielinizante y
trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración.
Otra realización preferida es cuando la lesión
por reperfusión es un ictus vascular. Aún otra realización
preferida es cuando la neuropatía periférica está provocada por el
síndrome de Guillain-Barre. Todavía otra
realización preferida es cuando la enfermedad desmielinizante es
esclerosis múltiple. Otra realización preferida es cuando el
trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración se
selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson y esclerosis lateral amiotrófica.
La presente invención también contempla el uso
de compuestos según la reivindicación 1 en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y
los trastornos en un animal descrito en el presente documento.
En una realización particular, la enfermedad o
el trastorno es un trastorno neurológico.
En una realización particularmente preferida, el
trastorno neurológico se selecciona del grupo que consiste en
neuropatía periférica provocada por un estado patológico o una
lesión física, lesión cerebral traumática, daño físico a la médula
espinal, ictus asociado con daño cerebral, isquemia focal, isquemia
global, lesión por reperfusión, enfermedad desmielinizante y
trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración. Otra
realización preferida es cuando la lesión por reperfusión es un
ictus vascular. Aún otra realización preferida es cuando la
neuropatía periférica está provocada por el síndrome de
Guillain-Barre.
Todavía otra realización preferida es cuando la
enfermedad desmielinizante es esclerosis múltiple. Otra realización
preferida es cuando el trastorno neurológico relacionado con
neurodegeneración se selecciona del grupo que consiste en enfermedad
de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y esclerosis lateral
amiotrófica.
La expresión "prevenir la
neurodegeneración" incluye la capacidad para prevenir la
neurodegeneración en pacientes con diagnóstico reciente de
enfermedad neurodegenerativa, o en riesgo de desarrollar una nueva
enfermedad degenerativa, y para prevenir la neurodegeneración
adicional en pacientes que ya están padeciendo o tienen síntomas de
una enfermedad neurodegenerativa.
El término "tratamiento" tal como se usa en
el presente documento cubre cualquier tratamiento de una enfermedad
y/o un estado en un animal, particularmente un ser humano, e
incluye:
- (i)
- prevenir que se produzca una enfermedad y/o un estado en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad y/o al estado pero que todavía no se ha diagnosticado que lo tiene;
- (ii)
- inhibir la enfermedad y/o el estado, es decir, detener su desarrollo; o
- (iii)
- aliviar la enfermedad y/o el estado, es decir, provocar la regresión de la enfermedad y/o el estado.
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Tal como se usa en el presente documento, el
término "daño tisular neural que resulta de una lesión por
isquemia y reperfusión" incluye neurotoxicidad, tal como la
observada en el ictus vascular y la isquemia focal y global. Tal
como se usa en el presente documento, la expresión "enfermedades
neurodegenerativas" incluye enfermedad de Alzheimer, enfermedad
de Parkinson y enfermedad de Huntington.
El término "isquemia" se refiere a la
anemia de tejido localizado debido a la obstrucción del flujo de
entrada de sangre arterial. La isquemia global se produce en
condiciones en las que el flujo sanguíneo a todo el cerebro cesa
durante un periodo de tiempo, de tal manera que puede dar como
resultado un paro cardiaco. La isquemia focal se produce en
condiciones en las que una parte del cerebro se ve privada de su
suministro de sangre normal, de manera que puede dar como resultado
oclusión tromboembolítica de un vaso cerebral, traumatismo
craneoencefálico, edema y tumores cerebrales.
La expresión "enfermedad cardiovascular" se
refiere a infarto de miocardio, angina de pecho, isquemia miocárdica
o vascular y estados relacionados tal como conocerían los expertos
en la técnica que implican disfunción de o daño tisular al corazón o
la vasculatura y, especialmente, pero sin limitarse a, daño tisular
relacionado con la activación de PARP.
El término "radiosensibilizador", tal como
se usa en el presente documento, se define como un una molécula,
preferiblemente una molécula de bajo peso molecular, administrada a
animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la
sensibilidad de las células que van a radiosensibilizarse a la
radiación electromagnética y/o para promover el tratamiento de
enfermedades que pueden tratarse con radiación electromagnética. Las
enfermedades que pueden tratarse con radiación electromagnética
incluyen enfermedades neoplásicas, tumores benignos y malignos y
células cancerosas. El tratamiento con radiación electromagnética de
otras enfermedades no enumeradas en el presente documento también
se contempla por la presente invención. Los términos "radiación
electromagnética" y "radiación" tal como se usan en el
presente documento incluyen, pero sin limitarse a, la radiación que
tiene la longitud de onda de 10^{-20} a 10^{0} metros.
Realizaciones preferidas de la presente invención emplean la
radiación electromagnética de: radiación gamma (de 10^{-20} a
10^{-13} m), radiación de rayos X (de 10^{-11} a 10^{-9} m),
luz ultravioleta (de 10 nm a 400 nm), luz visible (de 400 nm a 700
nm), radiación infrarroja (de 700 nm a 1,0 mm), o radiación de
microondas (de 1 mm a 30 cm).
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Preferiblemente, los compuestos de la invención
inhiben la actividad de PARP y, por tanto, se cree que son útiles
para tratar el daño tisular neural, particularmente el daño que
resulta de una lesión por isquemia y reperfusión cerebral o
enfermedades neurodegenerativas en animales. La expresión "tejido
nervioso" se refiere a los diversos componentes que constituyen
el sistema nervioso incluyendo, sin limitación, neuronas, células
de soporte neuronal, glía, células de Schwann, vasculatura contenida
dentro de y que suministra a estas estructuras, el sistema nervioso
central, el cerebro, el tronco encefálico, la médula espinal, la
unión del sistema nervioso central con el sistema nervioso
periférico, el sistema nervioso periférico y estructuras
relacionadas.
Además, según la invención, una cantidad
terapéutica eficaz de los compuestos y las composiciones descritas
anteriormente se administran a animales para efectuar una actividad
neuronal, particularmente una que no está mediada por
neurotoxicidad por NMDA. Tal actividad neuronal puede consistir en
la estimulación de neuronas dañadas, la promoción de la
regeneración neuronal, la prevención de la neurodegeneración y el
tratamiento de un trastorno neurológico. Por consiguiente, la
presente invención se refiere además a un método para efectuar una
actividad neuronal en un animal, que comprende administrar una
cantidad eficaz de un compuesto según la reivindicación 1 a dicho
animal.
Ejemplos de trastornos neurológicos que pueden
tratarse mediante el método de usar la presente invención incluyen,
sin limitación, neuralgia del trigémino; neuralgia glosofaríngea;
parálisis de Bell; miastenia grave; distrofia muscular; esclerosis
lateral amiotrófica; atrofia muscular progresiva; atrofia muscular
hereditaria bulbar progresiva; síndromes de disco invertebrado
prolapsado o roto, herniado; espondilosis cervical; trastornos del
plexo; síndromes de destrucción de la salida toráxica; neuropatías
periféricas tales como las provocadas por plomo, dapsona,
garrapatas, porfiria o síndrome de Guillain-Barré;
enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Huntington y enfermedad de
Parkinson.
El método de la presente invención es
particularmente útil para tratar un trastorno neurológico
seleccionado del grupo que consiste en neuropatía periférica
provocada por un estado patológico o una lesión física; traumatismo
craneal, tal como lesión cerebral traumática; daño físico a la
médula espinal; ictus asociado con daño cerebral, tal como ictus
vascular asociado con hipoxia y daño cerebral, isquemia cerebral
focal, isquemia cerebral global y lesión cerebral por reperfusión;
enfermedades desmielinizantes, tales como esclerosis múltiple; y
trastornos neurológicos relacionado con neurodegeneración, tales
como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de
Huntington y esclerosis lateral amiotrófica (ALS).
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Los compuestos, las composiciones y los métodos
de la presente invención son particularmente útiles para tratar o
prevenir el daño tisular que resulta del daño o la muerte celular
debido a necrosis o apoptosis.
Los compuestos, las composiciones y los métodos
de la invención también pueden usarse para tratar un trastorno
cardiovascular en un animal, administrando una cantidad eficaz de un
compuesto según la reivindicación 1 al animal. Tal como se usa en
el presente documento, la expresión "trastornos
cardiovasculares" se refiere a aquellos trastornos que pueden o
bien provocar isquemia o bien están provocados por reperfusión del
corazón. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, arteriopatía
coronaria, angina de pecho, infarto de miocardio, daño tisular
cardiovascular provocado por paro cardiaco, daño tisular
cardiovascular provocado por derivación cardiaca, choque
cadiogénico y estados relacionados que conocerán los expertos
habituales en la técnica o que implican disfunción de o daño
tisular al corazón o la vasculatura, especialmente, pero sin
limitarse a, el daño tisular relacionado con la activación de
PARP.
Por ejemplo, se cree que los métodos de la
invención son útiles para tratar el daño tisular cardiaco,
particularmente el daño que resulta de la isquemia cardiaca o
provocado por lesión por reperfusión en animales. Los métodos de la
invención son particularmente útiles para tratar trastornos
cardiovasculares seleccionados del grupo que consiste en:
arteriopatía coronaria, tal como aterosclerosis; angina de pecho;
infarto de miocardio; isquemia miocárdica y paro cardiaco;
derivación cardiaca; y choque cadiogénico. Los métodos de la
invención son particularmente útiles en el tratamiento de las
formas agudas de los trastornos cardiovasculares anteriores.
Además, los métodos de la invención pueden
usarse para tratar el daño tisular que resulta de la muerte o el
daño celular debido a necrosis o apoptosis, el daño tisular neural
que resulta de una lesión por isquemia y reperfusión, los
trastornos neurológicos y las enfermedades neurodegenerativas; para
prevenir o tratar ictus vascular; para tratar o prevenir trastornos
cardiovasculares; para tratar otros estados y/o trastornos tales
como degeneración muscular relacionada con la edad, SIDA y otras
enfermedades de senescencia inmunitaria, inflamación, gota,
artritis, aterosclerosis, caquexia, cáncer, enfermedades
degenerativas del músculo esquelético que implican senescencia
replicativa, diabetes, traumatismo craneal, senescencia inmunitaria,
trastornos inflamatorios del intestino (tales como colitis y
enfermedad de Crohn), distrofia muscular, artrosis, osteoporosis,
dolor agudo y/o crónico (tal como dolor neuropático), insuficiencia
renal, isquemia retiniana, choque septicémico (tal como choque
endotóxico) y envejecimiento de la piel; para extender el tiempo de
vida y la capacidad proliferativa de las células; para alterar la
expresión génica de células senescentes; o para radiosensibilizar
células tumorales.
\newpage
Todavía adicionalmente, los métodos de la
invención pueden usarse para tratar el cáncer y para
radiosensibilizar células tumorales. El término "cáncer" se
interpreta en líneas generales. Los compuestos de la presente
invención pueden ser un "agente anticancerígeno", término que
también abarca "agentes contra el crecimiento de células
tumorales" y "agentes antineoplásicos". Por ejemplo, los
métodos de la invención son útiles para tratar cánceres y
radiosensibilizar células tumorales en cánceres tales como tumores
productores de ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia no
linfocítica aguda, cáncer de la corteza suprarrenal, cáncer de
vejiga, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer cervical,
leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, cáncer
colorrectal, linfoma cutáneo de células T, cáncer endometrial,
cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, cáncer de vesícula biliar,
leucemia de células pilosas, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de
Hodgkin, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, cáncer de hígado,
cáncer de pulmón (de células pequeñas y/o no pequeñas), derrame
peritoneal neoplásico, derrame pleural neoplásico, melanoma,
mesotelioma, mieloma múltiple, neuroblastoma, linfoma de no Hodgkin,
osteosarcoma, cáncer ovárico, cáncer de ovario (célula germinal),
cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer de pene,
retinoblastoma, cáncer de piel, sarcoma de tejidos blandos,
carcinomas de células escamosas, cáncer de estómago, cáncer
testicular, cáncer de tiroides, neoplasmas trofoblásticos, cáncer
uterino, cáncer vaginal, cáncer de la vulva y tumor de Wilm.
El término "radiosensibilizador", tal como
se usa en el presente documento, se define como una molécula,
preferiblemente una molécula de bajo peso molecular, administrada a
animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la
sensibilidad de las células que van a radiosensibilizarse a la
radiación electromagnética y/o para promover el tratamiento de
enfermedades que pueden tratarse con radiación electromagnética. Las
enfermedades que pueden tratarse con radiación electromagnética
incluyen enfermedades neoplásicas, tumores benignos y malignos, y
células cancerosas. Tratamiento con radiación electromagnética de
otras enfermedades no enumeradas en el presente documento también
se contempla por la presente invención. Los términos "radiación
electromagnética" y "radiación" tal como se usan en el
presente documento incluyen, pero no se limitan a, radiación que
tiene la longitud de onda de 10^{-20} a 10^{0} metros.
Realizaciones preferidas de la presente invención emplean la
radiación electromagnética de radiación gamma (de 10^{-20} a
10^{-13} m), radiación de rayos X (de 10^{-11} a 10^{-9} m),
luz ultravioleta (de 10 nm a 400 nm), luz visible (de 400 nm a 700
nm), radiación infrarroja (de 700 mm a 1,0 mm), y radiación de
microondas (de 1 mm a 30 cm).
Se sabe que los radiosensibilizadores aumentan
la sensibilidad de células cancerosas a los efectos tóxicos de la
radiación electromagnética. Se han sugerido en la bibliografía
varios mecanismos para el modo de acción de los
radiosensibilizadores incluyendo: los radiosensibilizadores de
células hipóxicas (por ejemplo, compuestos de
2-nitroimidazol, y compuestos de dióxido de
benzotriazina) promueven la reoxigenación del tejido hipóxico y/o
catalizan la generación de radicales de oxígeno perjudiciales; los
radiosensibilizadores de células no hipóxicas (por ejemplo,
pirimidinas halogenadas) pueden ser análogos de bases de ADN y se
incorporan preferentemente en el ADN de células cancerosas y de ese
modo promueven la rotura inducida por radiación de moléculas de ADN
y/o impiden los mecanismos de reparación del ADN normales; y se han
supuesto otros diversos mecanismos de acción posibles para
radiosensibilizadores en el tratamiento de la enfermedad.
Muchos protocolos de tratamiento del cáncer
emplean actualmente radiosensibilizadores activados por la radiación
electromagnética de rayos X. Los ejemplos de radiosensibilizadores
activados por rayos X incluyen, pero no se limitan a, los
siguientes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol,
pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR
4233, EO9, RB 6145, nicotinamida,
5-bromodesoxiuridina (BUdR),
5-yododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina,
fluorodesoxiuridina (fudR), hidroxiurea, cisplatino y análogos
terapéuticamente eficaces y derivados de los mismos.
La terapia fotodinámica (PDT) de cánceres emplea
luz visible como activador de radiación del agente de
sensibilización. Los ejemplos de radiosensibilizadores
fotodinámicos incluyen los siguientes, pero no se limitan a:
derivados de hematoporfirina, Photofrin, derivados de
benzoporfirina, NPe6, etioporfirina de estaño SnET2,
feoforbida-a, bacterioclorofila-a,
naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de cinc y análogos
terapéuticamente eficaces y derivados de los mismos.
Los radiosensibilizadores pueden administrarse
conjuntamente con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o
varios otros compuestos, incluyendo pero sin limitarse a: compuestos
que promueven la incorporación de radiosensibilizadores a las
células diana; compuestos que controlan el flujo de agentes
terapéuticos, nutrientes, y/u oxígeno a las células diana; agentes
quimioterápicos que actúan sobre el tumor con o sin radiación
adicional; u otros compuestos terapéuticamente eficaces para tratar
el cáncer u otra enfermedad. Los ejemplos de agentes terapéuticos
adicionales que pueden usarse conjuntamente con
radiosensibilizadores incluyen, pero no se limitan a:
5-fluorouracilo, leucovorina,
5'-amino-5'-desoxitimidina,
oxígeno, carbógeno, transfusiones de glóbulos rojos,
perfluorocarbonos (por ejemplo, Fluosol-DA),
2,3-DPG, BW12C, bloqueantes de canales de calcio,
pentoxifilina, compuestos antiangiogénesis, hidralazina y LBSO. Los
ejemplos de agentes quimioterápicos que pueden usarse conjuntamente
con radiosensibilizadores incluyen, pero no se limitan a:
adriamicina, camptotecina, carboplatino, cisplatino, daunorubicina,
docetaxel, doxorubicina, interferón (alfa, beta, gamma),
interleuquina 2, irinotecan, paclitaxel, topotecan y análogos
terapéuticamente eficaces y derivados de los mismos.
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La presente invención también se refiere a una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
eficaz de un compuesto según la reivindicación 1 y (ii) un portador
farmacéuticamente aceptable.
La discusión anterior referente a la utilidad de
las realizaciones preferidas y a la administración de los compuestos
de la presente invención también se aplica a la composición
farmacéutica de la presente invención.
La expresión "portador farmacéuticamente
aceptable" tal como se usa en el presente documento se refiere a
cualquier portador, diluyente, excipiente, agente de suspensión,
agente lubricante, adyuvante, vehículo, sistema de administración,
emulsionante, disgregante, absorbente, conservante, tensioactivo,
colorante, aromatizante o edulcorante.
Para estos fines, la composición de la invención
puede administrarse por vía oral, por vía parenteral, por aerosol
para inhalación, adsorción, absorción, por vía tópica, por vía
rectal, por vía nasal, por vía bucal, por vía vaginal, por vía
intraventricular, por medio de un depósito implantado en
formulaciones farmacéuticas que contienen portadores
farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales o por
cualquier otra forma farmacéutica conveniente. El término
parenteral tal como se usa en el presente documento incluye técnicas
de infusión o inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular,
intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intraesternal e
intracraneal.
Cuando se administra por vía parenteral, la
composición estará normalmente en una forma farmacéutica unitaria,
inyectable estéril (disolución, suspensiones o emulsión) que es
preferiblemente isotónica con la sangre del receptor con un
portador farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de tales formas
inyectables estériles son suspensiones oleaginosas o acuosas
inyectables estériles. Estas suspensiones pueden formularse según
técnicas conocidas en la técnica usando agentes de suspensión y
agentes humectantes o de dispersión adecuados. Las formas
inyectables estériles también pueden ser suspensiones o
disoluciones inyectables estériles en disolventes o diluyentes
parenteralmente aceptables no tóxicos, por ejemplo, como
disoluciones en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos
y disolventes aceptables que pueden emplearse están agua, solución
salina, solución de Ringer, disolución de dextrosa, disolución
isotónica de cloruro de sodio y solución de Hank. Además, se emplean
convencionalmente aceites fijos, estériles como disolventes o
medios de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier
aceite fijo blando incluyendo mono- o di-glicéridos
sintéticos, aceite de maíz, semilla de algodón, cacahuete y sésamo.
Ácidos grasos tales como oleato de etilo, miristato de isopropilo y
ácido oleico y sus derivados de glicérido, incluyendo aceite de
oliva y aceite de ricino, especialmente en sus versiones
polioxietiladas, son útiles en la preparación de inyectables. Estas
suspensiones o disoluciones de aceite también pueden contener
dispersantes o diluyentes de alcohol de cadena larga.
La solución salina estéril es un portador
preferido y los compuestos son a menudo suficientemente solubles en
agua como para constituirse como una disolución para todas las
necesidades previsibles. El portador puede contener cantidades
minoritarias de aditivos, tales como sustancias que potencian la
solubilidad, isotonicidad y capacidad química, por ejemplo,
compuestos antioxidantes, tampones y conservantes.
Formulaciones adecuadas para administración
bucal o nasal (tales como formulaciones de dispensación de polvo
autopropelentes) pueden comprender aproximadamente del 0,1% a
aproximadamente el 5% p/p, por ejemplo el 1% p/p de principio
activo. Las formulaciones para uso médico humano de la presente
invención comprenden un principio activo en asociación con un
portador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otro(s)
principio(s) terapéutico(s).
Cuando se administra por vía oral, la
composición se formulará habitualmente en formas farmacéuticas
unitarias tales como comprimidos, cápsulas con forma de sello,
polvo, gránulos, perlas, pastillas masticables, cápsulas, líquidos,
disolución o suspensiones acuosas, o formas farmacéuticas similares,
usando equipo y técnicas convencionales conocidos en la técnica.
Tales formulaciones normalmente incluyen un portador líquido,
semisólido o sólido. Los portadores a modo de ejemplo incluyen
lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma
arábiga, fosfato de calcio, aceite mineral, manteca de cacao, aceite
de teobroma, alginatos, tragacanto, gelatina, almíbar,
metilcelulosa, monoburato de polioxietilensorbitano, hidroxibenzoato
de metilo, hidroxibenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio
y similares.
La composición de la invención se administra
preferiblemente como una cápsula o un comprimido que contiene una
dosis divida o única del inhibidor. Preferiblemente, la composición
se administra como una disolución, suspensión o emulsión estéril, en
una dosis divida o única. Los comprimidos pueden contener portadores
tales como lactosa y almidón de maíz, y/o agentes lubricantes tales
como estearato de magnesio. Las cápsulas pueden contener diluyentes
incluyendo lactosa y almidón de maíz secado.
Puede prepararse un comprimido comprimiendo o
moldeando el principio activo opcionalmente con uno o más
componentes adicionales. Pueden prepararse comprimidos fabricados
por compresión comprimiendo, en una máquina adecuada, el principio
activo en una forma de flujo libre tal como en polvo o gránulos,
opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente
inerte, tensioactivo o agente de dispersión. Pueden prepararse
comprimidos moldeados moldeando en una máquina adecuada una mezcla
del principio activo en polvo y un portador adecuado humedecido con
un diluyente líquido inerte.
Los compuestos de esta invención también pueden
administrarse por vía rectal en forma de supositorios. Estas
composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un
excipiente no iniciador adecuado que es sólido a temperatura
ambiente pero líquido a la temperatura del recto y, por tanto, se
fundirá en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales
incluyen manteca de cacao, cera de abejas y polietilenglicoles.
Las composiciones y los métodos de la invención
también pueden utilizar tecnología de liberación controlada. Por
tanto, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden
incorporarse en una matriz de polímero hidrófobo para su liberación
controlada a lo largo de un periodo de días. La composición de la
invención puede moldearse entonces para dar un implante sólido o un
parche aplicado externamente, adecuado para proporcionar
concentraciones eficaces de los inhibidores de PARP a lo largo de
un periodo de tiempo prolongado sin la necesidad de redosificación
frecuente. Tales películas de liberación controlada se conocen bien
en la técnica. Se prefieren particularmente sistemas de
administración transdérmica. Otros ejemplos de polímeros comúnmente
empleados para este fin que pueden usarse en la presente invención
incluyen copolímero de etileno-acetato de vinilo no
degradable y copolímeros de ácido láctico-glicólico
degradables que pueden usarse externa o internamente. Ciertos
hidrogeles tales como poli(metacrilato de hidroxietilo) o
poli(alcohol vinílico) también pueden ser útiles, pero para
ciclos de liberación más cortos que los otros sistemas de liberación
poliméricos, tales como los mencionados anteriormente.
En una realización preferida, el portador es un
polímero biodegradable sólido o una mezcla de polímeros
biodegradables con cinética de liberación y características de
liberación temporal apropiadas. Entonces, la composición de la
invención puede moldearse para dar un implante sólido adecuado para
proporcionar concentraciones eficaces de los compuestos de la
invención a lo largo de un periodo de tiempo prolongado sin la
necesidad de redosificación frecuente. La composición de la
presente invención puede incorporarse en el polímero biodegradable o
mezcla de polímeros de cualquier manera adecuada conocida para un
experto habitual en la técnica y puede formar una matriz homogénea
con el polímero biodegradable, o puede encapsularse de alguna manera
dentro del polímero, o puede moldearse para dar un implante
sólido.
En una realización, el polímero biodegradable o
la mezcla de polímeros se usa para formar un "depósito" blando
que contiene la composición farmacéutica de la presente invención
que puede administrarse como un líquido que puede fluir, por
ejemplo, mediante inyección, pero que permanece suficientemente
viscoso como para mantener la composición farmacéutica dentro de la
zona localizada alrededor del sitio de inyección. El tiempo de
degradación del depósito así formado puede variar desde varios días
hasta algunos años, dependiendo del polímero seleccionado y su peso
molecular. Usando una composición de polímero en forma inyectable,
puede eliminarse incluso la necesidad de realizar una incisión. En
cualquier caso, un "depósito" de administración que puede fluir
o flexible se ajustará a la forma del espacio que ocupa dentro del
cuerpo con un traumatismo mínimo a los tejidos circundantes. La
composición farmacéutica de la presente invención se usa en
cantidades que son terapéuticamente eficaces, y pueden depender del
perfil de liberación deseada, la concentración de la composición
farmacéutica requerida para el efecto sensibilizante y la duración
del tiempo durante el que la composición farmacéutica tiene que
liberarse para el tratamiento.
Los inhibidores de PARP se usan en la
composición en cantidades que son terapéuticamente eficaces. Las
composiciones pueden estar esterilizadas y/o contener adyuvantes,
tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o
emulsificantes, promotores de la disolución, sales para regular la
presión osmótica y/o tampones. Además, también pueden contener
otras sustancias terapéuticamente valiosas. Las composiciones se
preparan según métodos convencionales de mezclado, granulado o
recubrimiento, y contienen de aproximadamente el 0,1 al 75% en peso,
preferiblemente de aproximadamente el 1 al 50% en peso del principio
activo.
Para ser terapéuticamente eficaces como dianas
del sistema nervioso central, los compuestos de la presente
invención deben penetrar fácilmente en la barrera hematoencefálica
cuando se administran de manera periférica. Pueden administrarse
eficazmente compuestos que no pueden penetrar en la barrera
hematoencefálica mediante una vía intraventricular u otro sistema
de administración apropiado adecuado para su administración al
cerebro.
Las dosis de los compuestos incluyen
preferiblemente unidades de dosificación farmacéutica que comprenden
una cantidad eficaz del compuesto activo. Por una cantidad eficaz
quiere decirse una cantidad suficiente para inhibir PARP y derivar
sus efectos beneficiosos a través de la administración de uno o más
de las unidades de dosificación farmacéutica. Preferiblemente, la
dosis es suficiente para prevenir o reducir los efectos del ictus
vascular u otras enfermedades neurodegenerativas.
Para uso médico, la cantidad requerida del
principio activo para lograr un efecto terapéutico variará con el
compuesto particular, la vía de administración, el mamífero en
tratamiento y el trastorno o enfermedad particular que está
tratándose. Una dosis sistemática adecuada de un compuesto de la
presente invención o una sal farmacológicamente aceptable del mismo
para un mamífero que padece, o probablemente padece, cualquier
estado tal como se describió anteriormente en el presente documento
está en el intervalo de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente
100 mg/kg del
compuesto principio activo, siendo la dosificación más preferida de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg.
compuesto principio activo, siendo la dosificación más preferida de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg.
Sin embargo, se entiende que un nivel de dosis
especifico para cualquier paciente particular dependerá de una
variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto
específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el
sexo, la dieta, el tiempo de administración, la tasa de excreción,
la combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular
que está tratándose y la forma de administración.
Se entiende que el médico o veterinario
habitualmente experto determinará y prescribirá fácilmente la
cantidad eficaz del compuesto para el tratamiento profiláctico o
terapéutico del estado para el que se administra el tratamiento. Al
hacer esto, el médico o veterinario podría emplear un bolo
intravenoso seguido por una infusión intravenosa y administraciones
repetidas, por vía parenteral o por vía oral, según se considere
apropiado. Aunque es posible que un principio activo se administre
solo, es preferible presentarlo como una formulación.
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Al preparar la forma farmacéutica que incorpora
las composiciones de la invención, los compuestos también pueden
combinarse con excipientes convencionales tales como aglutinantes,
incluyendo gelatina, almidón pregelatinizado y similares;
lubricantes, tales como aceite vegetal hidrogenado, ácido esteárico
y similares; diluyentes, tales como lactosa, manosa y sacarosa;
disgregantes, tales como carboximetilcelulosa y glicolato sódico de
almidón; agentes de suspensión, tales como povidona,
poli(alcohol vinílico) y similares; absorbentes, tales como
dióxido de silicio; conservantes, tales como metilparabeno,
propilparabeno y benzoato de sodio; tensioactivos, tales como
laurilsulfato de sodio, polisorbato 80 y similares; colorantes tales
como colorantes F.D.& C. y similares; aromatizantes; y
edulcorantes.
La presente invención se refiere al uso de un
compuesto según la reivindicación 1 en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de cualquier enfermedad o trastorno
en un animal descrito en el presente documento.
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Un método conveniente para determinar la
CI_{50} de un compuesto inhibidor de PARP es un ensayo de PARP
usando PARP humana recombinante purificada de Trevigan
(Gaithersburg, MD), tal como sigue: el ensayo de enzima PARP se
establece sobre hielo en un volumen de 100 microlitros que consiste
en Tris-HCl 100 mM (pH 8,0), MgCl_{2} 1 mM, KCl
28 mM, NaCl 28 mM, 3,0 mg/ml de ADN de esperma de arenque activado
con ADNasa I (Sigma, MO), [3H]nicotinamida adenina
dinucleótido 30 micromolar (62,5 mci/mmoles), enzima PARP 15
microgramos/ml y diversas concentraciones de los compuestos que van
a someterse a prueba. Se inicia la reacción añadiendo la enzima e
incubando la mezcla a 25ºC. Tras 2 minutos de incubación, se
finaliza la reacción añadiendo 500 microlitros de ácido
tricloroacético al 30% (p/v) enfriado con hielo. Se transfiere el
precipitado formado sobre un filtro de fibra de vidrio (Packard
Unifilter-GF/C) y se lava varias veces con etanol al
70%. Tras secarse el filtro, se determina la radiactividad mediante
recuento de centelleo. Se encontró que los compuestos de esta
invención tenían una potente actividad enzimática en el intervalo
de algunos nM a 20 mM en CI_{50} en este ensayo de inhibición.
Usando el ensayo de PARP descrito anteriormente,
se obtuvieron los valores de CI_{50} (mM) aproximados tal como se
muestra en la siguiente tabla III, que también incluye realizaciones
específicas de los compuestos de la presente invención:
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Los compuestos adicionales, que son
realizaciones a modo de ejemplo de la presente invención, incluyen
los siguientes:
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El siguiente ensayo de isquemia cerebral local
es útil para determinar los efectos de inhibición de PARP de los
compuestos de la presente invención. Los siguientes ejemplos
demuestran que los relacionados con los de la presente invención son
eficaces en la inhibición de la actividad PARP.
La isquemia cerebral focal se produce por
cauterización de la ACM (arteria cerebral media) distal derecha con
oclusión de arteria carótida común temporal bilateral en ratas
Long-Evans macho durante 90 minutos. Todos los
procedimientos realizados en los animales se aprobaron por el
University Institutional Animal Care and Use Committee de la
Universidad de Pennsylvania. Se usaron un total de 42 ratas (pesos:
230-340 g) obtenidas de Charles River en este
estudio. Los animales ayunaron durante la noche con libre acceso al
agua antes del procedimiento quirúrgico.
Dos horas antes de la oclusión de la ACM, se
disolvieron cantidades variables (control, n = 14; 5 mg/kg, n = 7;
10 mg/kg, n = 7; 20 mg/kg, n = 7; y 40 mg/kg n = 7) del compuesto
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)-butoxi]-1(2H)-isoquinolinona
("DPQ") en dimetilsulfóxido (DMSO) usando un sonicador. Se
inyectó un volumen de 1,28 ml/kg de la disolución resultante por vía
intraperitoneal en catorce ratas.
Entonces se anestesiaron las ratas con halotano
(el 4% para la inducción y el 0,8%-1,2% para el procedimiento
quirúrgico) en una mezcla del 70% de óxido nitroso y 30% de oxígeno.
Se monitorizó la temperatura corporal mediante una sonda rectal y
se mantuvo a 37,5 \pm 0,5ºC con una manta de calentamiento
regulada por una unidad de control de manta homeotérmica (Harvard
Apparatus Limited, Kent, R.U.). Se colocó un catéter
(PE-50) en la arteria de la cola, y se monitorizó y
registró de manera continua la tensión arterial en un registrador
poligráfico Grass (modelo 7D, Grass Instruments, Quincy,
Massachusetts). También se tomaron muestras para el análisis de
gases de la sangre (pH arterial, PaO_{2} y PaCO_{2}) del catéter
de la arteria de la cola y se midió con un analizador de gases de
la sangre (ABL 30, Radiometer, Copenhague, Dinamarca). Se obtuvieron
muestras de sangre arterial 30 minutos tras la oclusión de la
ACM.
Se colocó la cabeza del animal en un marco
estereotáxico y se hizo una incisión parietal derecha entre el
canto lateral derecho y el meato auditivo externo. Usando una fresa
dental enfriada constantemente con solución salina, se preparó un
orificio de trépano de 3 mm sobre la corteza suministrada por la ACM
derecha, 4 mm lateral con respecto a la sutura sagital y 5 mm
caudal con respecto a la sutura coronal. Se mantuvieron la duramadre
y una capa delgada de hueso interno, teniendo cuidado de colocar la
sonda sobre una zona de tejido carente de vasos sanguíneos grandes.
La sonda de flujo (diámetro de la punta de 1 mm, separación de la
fibra de 0,25 mm) se hizo descender hasta la parte inferior del
orificio de trépano craneal usando un micromanipulador. Se sujetó
la sonda de manera estacionaria mediante un soporte de sonda sujeto
al cráneo con cemento dental. Se monitorizó de manera continua el
flujo sanguíneo microvascular en la corteza parietal derecha con un
medidor de flujo doppler láser (FloLab, Moor, Devon, R.U., y
Periflux 4001, Perimed, Estocolmo, Suecia).
Se produjo la isquemia cerebral focal por la
cauterización de la parte distal de la ACM derecha con oclusión de
la arteria carótida común (ACC) temporal bilateral mediante el
procedimiento de Chen et al., "A Model of Focal Ischemic
Stroke in the Rat: Reproducible Extensive Cortical Infarction".
Ictus 17:735-43 (1986) y/o Liu et al.,
"Polyethylene Glycol-conjugated Superoxide
Dismutase and Catalase Reduce Ischemic Brain Injury". Am. J.
Physiol. 256:H589-93 (1989), ambos de los cuales se
incorporan al presente documento como referencia.
Específicamente, se aislaron las ACC bilaterales
y se pasaron cuidadosamente lazos hechos de catéter de polietileno
(PE-10) alrededor de las ACC para la posterior
oclusión remota. Se extendió la incisión realizada anteriormente
para la colocación de la sonda de láser para permitir la observación
del extremo rostral del arco cigomático en el punto de fusión
usando una fresa dental, y se cortó la duramadre que recubría la
ACM. Se levantó la ACM distal con respecto a su cruce con la vena
cerebral inferior mediante un gancho de acero inoxidable fino
acoplado a un micromanipulador y, tras la oclusión de la ACC
bilateral, se cauterizó la ACM con un electrocoagulador. Se
recubrió el orificio de trépano con un pequeño trozo de Gelform y se
suturó la herida para mantener la temperatura del cerebro dentro del
intervalo normal o casi normal.
Tras 90 minutos de oclusión, se liberaron los
lazos carótideos, se retiró el catéter de la arteria de la cola y se
suturaron todas las heridas. Se aplicó por vía tópica sulfato de
gentamicina (10 mg/ml) a las heridas para prevenir la infección. Se
suspendió el anestésico y el animal se devolvió a su jaula después
de que se despertara. Se permitieron agua y alimento a voluntad.
Dos horas tras la oclusión de la ACM, se
administraron a los animales las mismas dosis del inhibidor de PARP
que en el tratamiento previo. Veinticuatro horas tras la oclusión de
la ACM, se sacrificaron las ratas con una inyección intraperitoneal
de pentobarbital sódico (150 mg/kg). Se extrajo cuidadosamente el
cerebro del cráneo y se enfrió en CSF artificial enfriado con hielo
durante cinco minutos. Entonces se seccionó el cerebro enfriado en
el plano coronal a intervalos de 2 mm usando a matriz de cerebro de
roedor (RBM-4000C, ASI Instruments, Warren,
Michigan). Se incubaron los cortes de cerebro en solución salina
tamponada con fosfato que contenía cloruro de
2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) al 2% a 37ºC durante
diez minutos. Se tomaron fotografías en color de la superficie
posterior de los cortes teñidos y se usaron para determinar el área
dañada en cada nivel de sección transversal usando un analizador de
imágenes informatizado (NIH Image 1.59). Para evitar artefactos
debidos a edema, se calculó el área dañada restando el área del
tejido normal en el hemisferio ipsilateral con respecto al ictus
del área del hemisferio contralateral con respecto al ictus,
mediante el método de Swanson et al., "A Semiautomated
Method for Measuring Brain Infarct Volume", J. Cereb. Blood Flow
Metabol. 10:290-93 (1990), cuya descripción se
incorpora por el presente documento como referencia. Se calculó el
volumen total de infarto mediante la suma del volumen dañado de los
cortes
de cerebro.
de cerebro.
La cauterización de la parte distal de la ACM
derecha con oclusión de la ACC temporal bilateral produjo
consecuentemente un infarto cortical bien reconocido en el
territorio de la ACM derecha de cada animal de prueba. Hubo una
aparente uniformidad en la distribución del área dañada tal como se
midió mediante tinción de ITC en cada grupo, tal como se muestra en
la figura 1.
En la figura 1, se midió la distribución de la
zona de infarto en corte transversal a niveles representativos a lo
largo del eje rostrocaudal desde la línea interaural en animales no
tratados y en animales tratados con 10 mg/kg de
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)-butoxi]-1(2H)-isoquinolinona.
Se expresó el área de daño como media \pm desviación estándar. Se
indicaron las diferencias significativas entre el grupo tratado con
10 mg y el grupo control (*p<0,02, **p<0,01, **p<0,001).
Las curvas de 5 mg/kg y de 20 mg/kg cayeron aproximadamente a medio
camino entre las curvas control y la de 10 mg/kg, mientras que la
curva de 40 mg/kg estaba cerca del control. Se omitieron las curvas
de 5, 20 y 40 mg/kg por claridad.
La inhibición de PARP condujo a una disminución
significativa en el volumen dañado en el grupo tratado con 5 mg/kg
(106,7 \pm 23,2 mm^{3}, p<0,001), el grupo tratado con 10
mg/kg (76,4 \pm 16,8 mm^{3}, p<0,001) y el grupo tratado con
20 mg/kg (110,2 \pm 42,0 mm^{3}, p<0,01), en comparación con
el grupo control (165,2 \pm 34,0 mm^{3}). Se expresaron los
datos como media \pm desviación estándar. Se determinó la
significación de las diferencias entre los grupos usando un análisis
de la varianza (ANOVA) seguido por la prueba de la t de Student para
comparaciones individuales.
No hubo ninguna diferencia significativa entre
el control y el grupo tratado con 40 mg/kg (135,6 \pm 44,8
mm^{3}). Sin embargo, hubo diferencias significativas entre el
grupo tratado con 5 mg/kg y el grupo tratado con 10 mg/kg
(p<0,02), y entre el grupo tratado con 10 mg/kg y el grupo
tratado con 40 mg/kg (p<0,01), tal como se muestra en la figura
2.
En la figura 2, se representó gráficamente el
efecto de la administración intraperitoneal de
3,4-dihidro-5-[4-(1-piperidinil)-butoxi]-1(2H)-isoquinolinona
sobre el volumen de infarto. Se expresaron los volúmenes de infarto
como media \pm desviación estándar. Se indicaron las diferencias
significativas entre los grupos tratados y el grupo control
(p<0,01, **p<0,001). No está claro por qué una alta dosis (40
mg/kg del inhibidor de PARP,
3,4-dihidro-5-(4-(1-piperidinil)-butoxi]-1(2H)-isoquinolinona),
era menos neuroprotector. La curva de
dosis-respuesta en forma de U puede sugerir dobles
efectos del compuesto.
Sin embargo, globalmente, la administración
in vivo del inhibidor condujo a una reducción sustancial en
el volumen de infarto en el modelo de isquemia cerebral focal en la
rata. Este resultado indicó que la activación de PARP desempeña un
importante papel en la patogénesis del daño cerebral en la isquemia
cerebral.
Los valores de gases de la sangre arterial
(PaO_{2}, PaCO_{2} y pH) estaban dentro del intervalo
fisiológico en los grupos control y tratado sin ninguna diferencia
significativa en estos parámetros entre los cinco grupos, tal como
se muestra a continuación en la tabla IV. Se tomo la TAM "en
estado estacionario" tras la finalización de la preparación
quirúrgica, justo antes de la oclusión; se tomó una TAM de
"isquemia" como TAM promedio durante la oclusión.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
No hubo diferencias significativas en ningún
parámetro fisiológico, incluyendo la tensión arterial media (TAM),
antes de la oclusión de la ACM y la ACC entre los cinco grupos.
Aunque se elevó significativamente la TAM tras la oclusión en los
cinco grupos, no hubo diferencias significativas en la TAM durante
el periodo de oclusión entre los grupos.
Dado que los valores de flujo sanguíneo
obtenidos a partir del láser doppler estaban en unidades
arbitrarias, solamente se notificaron los cambios en porcentaje
desde el nivel inicial (antes de la oclusión). La oclusión de la
ACM derecha y la ACC bilateral produjo una disminución significativa
en el flujo sanguíneo relativo en la corteza parietal derecha hasta
el 20,8 \pm 7,7% del nivel inicial en el grupo control (n = 5), el
18,7 \pm 7,4% en el grupo tratado con 5 mg/kg (n = 7), el 21,4
\pm 7,7% en el grupo tratado con 10 mg/kg (n = 7) y el 19,3 \pm
11,2% en el grupo tratado con 40 mg/kg (n = 7). No hubo diferencias
significativas en la respuesta del flujo sanguíneo a la oclusión
entre los cuatro grupos. Además, el flujo sanguíneo no mostró
ningún cambio significativo durante todo el periodo de oclusión en
cualquier grupo.
Tras la liberación de las oclusiones carotídeas,
se observó una buena recuperación del flujo sanguíneo (algunas
veces hiperemia) en el territorio de la ACM derecha de todos los
animales. La reperfusión del tejido isquémico dio como resultado la
formación de NO y peroxinitrito, además de radicales libres
derivados del oxígeno. Se ha demostrado que todos estos radicales
provocan roturas de la cadena de ADN y activan PARP.
Este ejemplo proporcionó pruebas de que los
compuestos relacionados de la presente invención son eficaces en la
inhibición de la actividad de PARP.
Pueden someterse a prueba compuestos a modo de
ejemplo de la presente invención para determinar su capacidad para
reducir la isquemia cerebral focal en el siguiente procedimiento
simplificado. Se deja que las ratas tengan libre acceso a agua y
comida para ratas (Wayne, Chicago, IL) hasta la cirugía. El
alojamiento y la anestesia coinciden con directrices establecidas
por el Institutional Animal Studies Committee y están de acuerdo
con la guía PHS para el cuidado y uso de animales de laboratorio,
normativas USDA y el panel de la AVMA sobre directrices de
eutanasia.
Se anestesiaron los animales con isofluorano
(inducción, 3%, mantenimiento, 1,25% en mezcla de 30% de O_{2} y
70% de NO_{2} a través de una máscara facial. Se mantiene la
temperatura rectal a 37ºC con un manta homeotérmica (Harvard
Apparatus, South Natick. MA). En primer lugar, se inserta un catéter
i.v. en la vena femoral izquierda y la línea discurre hasta la nuca
del cuello para su conexión con una placa giratoria anclada (Instech
Laboratories, Plymouth Meeting, PA) y una bomba de infusión remota
(Stoelting Inc. Wood Dale, IL). En algunos casos, la arteria
femoral derecha está canulada para monitorizar la tensión arterial y
la frecuencia cardiaca y para obtener muestras de sangre para
determinar el gas de sangre arterial.
Entonces se expone la arteria cerebral media
derecha (ACM) haciendo una incisión vertical en la piel a medio
camino entre el oído y el ojo derecho y se extirpa el cráneo
circundante con una fresa dental (Chen et al, 1986). Tras la
incisión de la duramadre, se coagula la arteria al nivel de la vena
cerebral inferior con una unidad de cauterio bipolar (Valleylab
NS2000, Boulder, CO), y se corta para prevenir la reperfusión
espontánea (Takahashi et al., 1997). Ambas arterias
carótidas comunes (ACC) que se habían aislado y liberado previamente
de nervios y tejidos blandos se ligaron entonces usando pinzas de
aneurisma no traumático. Tras cerrar las heridas con pinzas
quirúrgicas, se deja que los animales se recuperen de la anestesia y
se devolvieron a su jaula que se calienta hasta 27ºC con un
empapador de agua calentada y una carpa caliente humidificada.
El inhibidor de PARP que va a someterse a prueba
se administra en primer lugar 30 min. tras la MCAO como un bolo
i.v., 10 infundidos lejos a lo largo de 5 min., seguido por 12
mediante una infusión continua de 2 mg/kg/h (0,3 ml/h). Noventa
minutos tras la MCAO, se liberan los animales de la atadura para
infusión, vuelven a anestesiarse brevemente con isofluorano y se
retiran las pinzas de la carótida. Se devuelve el animal a su jaula
caliente y vuelve a conectarse a la bomba de infusión i.v. durante
la duración del experimento.
A las 24 h tras la MCAO permanente, se sedan los
animales con ketamina y se extirpan las cabezas con guillotina. Se
extraen los cerebros, se enfrían en solución salina enfriada con
hielo y se cortan en secciones coronales de 2 mm usando una matriz
de cerebro de rata (Harvard Bioscience, South Natick, MA). Se
incuban los cortes de cerebro en solución salina tamponada con
fosfato (pH 7,4) que contiene TTC al 2% a 37ºC durante 10 min. y
entonces se almacenan en formalina tamponada neutra al 10%. Se
determina el área de sección trasversal de la región no teñida con
TTC para cada corte de cerebro usando un analizador de imágenes
(MetaMorph, Universal Imaging Corp., West Chester, PA). Se calcula
el volumen total de infarto en el hemisferio derecho mediante la
suma de las mediciones directas (negativo para TTC) e indirectas de
la zonas de infarto en los cortes de cerebro componentes. Se
someten a prueba los volúmenes de infarto en los grupos tratados con
fármaco y con vehículo (n = 8) para determinar la diferencia
estadísticamente significativa usando una prueba de la t de Student
para datos independientes.
Pueden someterse a prueba diversas dosis de los
compuestos de la invención en este modelo. Los compuestos se
administran o bien en una única dosis o bien en una serie de
múltiples dosis, i.v. o i.v. a diferentes tiempos, ambas antes o
después de la aparición de la isquemia. Se espera que los compuestos
de la invención proporcionen protección frente a la isquemia en el
intervalo de aproximadamente el 0 al 80%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizan los experimentos del modelo de
isquemia del corazón/lesión por reperfusión usando ratas
Sprague-Dawley hembra que pesan
250-300 g que se anestesian con pentobarbital sódico
a una dosis de 65 mg/kg por vía intraperitoneal. Se mantiene la
temperatura rectal a 37ºC usando un sistema de manta homeotérmica
(Harvard Apparatus, South Natick, MA). Se canula la tráquea y se
ventila la rata con aire ambiente usando un ventilador de roedores
Harvard (Harvard Apparatus, South Natick. MA). La vena yugular
izquierda se canula con un tubo de PE-50 para la
administración de fármacos. La arteria carótida derecha se canula
para la medición de la TA. Se expone el corazón abriendo el pecho
en el 4º espacio intercostal izquierdo. Se obstruye una rama
izquierda principal de la arteria coronaria (LAD) mediante una
ligadura de seda 4-0 durante 30 min. de isquemia y
se libera durante 90 min. de reperfusión. Durante el experimento,
se monitorizan la TA y el EKG mediante un sistema cardiovascular
Micro-Med (Louisville, KY).
Al final de la reperfusión, vuelve a obstruirse
la arteria coronaria LAD y se inyectan aproximadamente 2 ml de
colorante azul de Evans al 5% a través de la línea i.v. para
distinguir el área isquémica del área no isquémica del corazón.
Entonces se extrae inmediatamente el corazón y se congela en el
congelador. Tras al menos 30 min. de congelación, se corta el
corazón en cinco secciones con 2 mm de espesor y se tiñen en
disolución de TIC al 1% durante 30 min. a 37ºC. Se recorta el
ventrículo derecho. Se miden el área de infarto, el área de riesgo
y el área ventricular izquierda total en cada cara de la sección
usando un sistema de análisis de imágenes (BIOQUANT, Nashville,
TN). Se calcula el tamaño de infarto como el volumen de infarto
total en porcentaje respecto al volumen en riesgo total.
\newpage
Para el grupo tratado con fármaco, se
administran compuestos según los siguientes tres protocolos: 1. Se
administra una única dosis de compuesto 60 min. antes de la
aparición de la isquemia a través de inyección i. p. 2. Se
administra el compuesto a través de bolo i.v. 1 min. antes de la
aparición de la isquemia seguido por infusión i.v. hasta el final
de la reperfusión. 3. Se administra el compuesto a través de bolo
i.v. 1 min. antes de la aparición de la reperfusión seguido por
infusión i.v. hasta el final de la reperfusión. Para cada grupo
tratado con fármaco, existe un grupo tratado con vehículo
correspondiente con n= 6 o n= 8. Se compara la diferencia entre los
grupos tratados con fármaco y con vehículo usando la prueba de la t
para datos independientes con p<0,05. Se someten a prueba
diversas dosis de compuestos en este modelo. Los compuestos se
administran en dosis o bien únicas o bien múltiples, i.p. o i.v., a
diferentes tiempos antes o después de la aparición de la isquemia.
Se espera que los compuestos de esta invención tengan protección
frente a la lesión por isquemia/reperfusión en el intervalo del 10
al 40% en este ensayo.
Como resultado de la actividad de inhibición de
PARP, se espera que los compuestos de esta invención protejan
contra la degeneración inducida por isquemia de neuronal corticales
de rata in vitro y por tanto que puedan ser útiles en
trastornos que surgen de isquemia cerebral tales como ictus, choque
septicémico o trastornos degenerativos del SNC. También pueden ser
útiles en la protección de la médula espinal tras traumatismo. Como
resultado experimental de la lesión por isquemia/reperfusión en
ratas, la presente invención además se refiere a un método de
tratamiento profiláctico o terapéutico del ataque al corazón, el
paro cardiaco, la derivación cardiaca, la diabetes, o el riesgo de
daño que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto
de la presente invención para la inhibición de PARP en forma
farmacéutica unitaria.
\vskip1.000000\baselineskip
Puede medirse la radiosensibilización in
vitro con el uso de una línea celular de cáncer de próstata
humano, PC-3s, que se siembra en placa en placas de
6 pocillos y se hace crecer en cultivos monocapa en RPMI1640
complementado con FCS al 10%. Se mantienen las células a 37ºC en 5%
de CO_{2} y 95% de aire. Se exponen las células a una respuesta a
la dosis (de 0,1 mM a 0,1 \muM) de 3 inhibidores de PARP
diferentes antes de la irradiación a un nivel de dosis subletal.
Para todos los grupos de tratamiento, se exponen las placas de seis
pocillos a temperatura ambiente en un irradiador Seifert de
230kV/15mA con una Cu/l mm de 0,5 mm . Se examina la viabilidad
celular mediante exclusión de azul tripano al 0,4%. Se evalúa
visualmente la exclusión del colorante mediante microscopia y se
calculó el número de células viables restando el número de células
del número de células viables y dividiendo por el número total de
células. Se calculan las tasas de proliferación celular mediante la
cantidad de incorporación de ^{3}H-timidina tras
la irradiación. Se esperan que los inhibidores de PARP
radiosensibilizen las células.
\vskip1.000000\baselineskip
Puede medirse la alteración de la expresión
génica con células BJ de fibroblastos humanos que, a una duplicación
de la población (DPL) de 94, se siembran en placa en medio de
crecimiento regular y entonces se cambian a un medio bajo en suero
para reflejar condiciones fisiológicas tal como se describe en
Linskens, et al., Nucleic Acids Res.
23:16:3244-3231 (1993). Se usa un medio de DMEM/199
complementado con suero de ternero bovino al 0,5%. Se tratan
diariamente las células durante 13 días. Se tratan las células
control con y sin el disolvente usado para administrar el inhibidor
de PARP. Se someten a prueba las células control jóvenes y viejas
no tratadas para su comparación. Se prepara ARN a partir de las
células control y tratadas según las técnicas descritas en la
publicación PCT n.º 96/13610 y se realiza transferencia de tipo
Northern. Se analizan sondas específicas para genes relacionados
con senescencia y se comparan las células control y tratadas. Al
analizar los resultados, el nivel más bajo de expresión génica se
fija arbitrariamente en 1 para proporcionar una base para la
comparación. Tres genes particularmente relevantes para cambios
relacionados con la edad en la piel son colágeno, colagenasa y
elastina. West, Arch Derm. 130:97-95 (1994). Se
espera que la expresión de elastina de las células tratadas con el
inhibidor de PARP aumente significativamente en comparación con las
células control. La expresión de elastina debe ser
significativamente superior en células jóvenes en comparación con
células senescentes, y por tanto el tratamiento con el inhibidor de
PARP debe provocar que los niveles de expresión de elastina en
células senescentes cambien a niveles similares encontrados en
células mucho más jóvenes. De manera similar, debe observarse un
efecto beneficioso en la expresión de colagenasa y colágeno con el
tratamiento con los inhibidores de PARP.
\vskip1.000000\baselineskip
Se anestesian ratas
Sprague-Dawley macho adultas, de
300-350 g, con pentobarbital sódico 50 mg/kg
intraperitoneal. Se realiza la ligación de nervios exponiendo un
lado de los nervios ciáticos de ratas y diseccionando un segmento
de nervio de 5-7 mm de longitud y cerrando con
cuatro ligaduras flojas a
1,0-1,5-mm, seguido por la
implantación de un catéter intratecal y la inserción de un tubo de
polietileno (PE-10) lavado con sulfato de
gentamicina en el espacio subaracnoideo a través de una incisión en
la cisterna magna. Se introduce cuidadosamente el extremo caudal
del catéter en la intumescencia lumbosacra y se sujeta el extremo
rostral con cemento dental a un tornillo incrustado en el cráneo y
se cierra la herida de la piel con pinzas para heridas.
Se evalúa la hiperalgesia térmica al calor
radiante usando una prueba de retirada de la pata. Se coloca la
rata en un cilindro de plástico sobre una placa de vidrio de 3 mm de
espesor con una fuente de calor radiante de una bombilla de
proyección colocada directamente bajo la superficie plantar de la
pata trasera de la rata. Se define la latencia de retirada de la
pata como el tiempo que pasa desde la aparición de la estimulación
con calor radiante hasta la retirada de la pata trasera de la
rata.
Se evalúa la hiperalgesia mecánica colocando la
rata en una jaula con una parte inferior hecha de lámina metálica
perforada con muchos agujeros cuadrados pequeños. Se registra la
duración de la retirada de la pata tras pinchar la superficie
plantar media de la pata trasera de la rata con la punta de un
alfiler insertado a través de la parte inferior de la jaula.
Se evalúa la alodinia mecánica colocando una
rata en una jaula similar a la prueba anterior y aplicando
filamentos de von Frey en orden ascendente de fuerza de doblado que
oscila desde 0,07 hasta 76 g a la superficie plantar media de la
pata trasera de la rata. Se aplica un filamento de von Freyper
perpendicular a la piel y se aprieta lentamente hasta que se dobla.
Se define una fuerza umbral de respuesta como el primer filamento en
la serie que provoca al menos una clara retirada de la pata de cinco
aplicaciones.
Se observan neuronas oscuras bilateralmente
dentro del asta dorsal de la médula espinal, particularmente en la
lámina I-II, de las ratas 8 días tras la ligación
del nervio ciático unilateral en comparación con ratas operadas de
manera simulada. Se someten a prueba diversas dosis de inhibidores
de PARP en este modelo y se muestra que reducen tanto la incidencia
de neuronas oscuras como el comportamiento de dolor neuropático en
ratas CCl.
\vskip1.000000\baselineskip
La deposición de cristales de urato monosódico
(cristales de MSU) en el espacio articular particular es la causa
etiológica de patologías inflamatorias tales como gota y pseudogota.
Clínicamente, estas enfermedades inflamatorias están asociadas con
edema y eritema de las articulaciones con dolor intenso por
consiguiente. Una fuerte infiltración de leucocitos en el espacio
periarticular e intraarticular que conduce a: 1) inflamación
pariarticular y articular episódica, aguda y 2) cambios articulares
crónicos, es también característica de esta patología. Ha estado
claro durante mucho tiempo que los neutrófilos son el tipo celular
predominante recuperado a partir de estas articulaciones
inflamatorias (Dieppe et al., (1979). Synovial fluid
crystals. Q. J. Med. XLVIII: 533-553; Terkletaub,
(1991). El factor quimiotáctico de neutrófilos derivado de
monocitos/interleucina-8 es un mediador potencial
de la inflamación inducida por cristales Arth. Rheum. 34:
894-903.). Un mejor entendimiento de los procesos
inflamatorios provocados por cristales de MSU y el hecho que haya
una clara relación entre estos cristales y la artritis gotosa, ha
dado lugar a la caracterización de modelos experimentales de
inflamación inducida por cristales. Ejemplos de modelos en los que
la exposición a cristales ha conducido al reclutamiento de células
en cavidades específicas, son articulaciones caninas (Phelps &
McCarty, 1966, Ann Int. Med 9: 115-125), pleuresía
de rata (Deporter et al., 1979, Br. J. Pharmacol 65: 165;
Sedgwick et al., 1985, Agents Actions 17:
209-213), y la utilización de una almohadilla de
aire para ratas preformada (Brookes et al., 1987). El último
sistema experimental ha mostrado que la acumulación de neutrófilos
estaba relacionada con la generación de quimioatrayentes tales como
LTB4, que se inhibió posteriormente por colchicina (Brooks et
al., 1987, Br. J. Pharmacol. 90: 413-419).
Se ha demostrado que los neutrófilos se activan
mediante cristales de MSU, liberando una serie de mediadores que
pueden ser responsables, en parte, de las manifestaciones
inflamatorias sistemáticas y locales encontradas en trastornos
articulares inducidos por cristales. Los cristales interaccionan con
neutrófilos conduciendo a la liberación de la enzima lisomal
(Hoffstein et al., 1975, Arth. Rheum 18:
153-165), liberación de radicales libres derivados
de oxígeno (Simchowitz et al., 1982, Arth. Rheum 25:
181-188; Abramson et al., 1982, Arthr Rheum.
25: 174-180), inducción de fosfolipasa
A_{2}(PLA_{2}) en leucocitos (Bomalaski et al.,
1990, J. Immunol. 145: 3391-3397), y activación de
síntesis de productos de 5-lipoxigenasa (Poubelle
et al., 1987, Biochem. Biophys. Res. Commun.
149: 649-657).
149: 649-657).
In vitro, se ha demostrado que los
cristales de MSU liberan la citocina
interleucina-1\beta (IL-1\beta)
a partir de neutrófilos humanos, añadiendo este estímulo a una lista
de otros que también liberan esta citocina, tales como zimosan LPS,
ésteres de forbol, hormona estimulante de colonias de granulocitos y
macrófagos (GM-CSF) y TNF-alfa.
Además, también se ha demostrado que los monocitos y sinoviocitos
humanos pueden sintetizar y liberar diversas citocinas tales como
IL-6 y IL-8 (Guerne et al.,
1989, Arth Rheum 32: 1443-1452; Terkeltaub et
al., 1991, Arth. Rheum 34: 894-903). Además, la
colchicina inhibe selectivamente la liberación de
IL-I\beta inducida por cristales de MSU y
TNF-\beta (Roberge et al., 1994, J.
Immunol. 152: 5485-5494).
En modelos experimentales de gota, también se ha
observado la síntesis de una quimiocina CXC selectiva para
neutrófilos, tal como IL-8, pero no la de una
quimiocina CC proteína quimiotáctica de monocitos-1
(MCP-1) (Hachicha et al., 1995, J. Exp. Med.
182: 2019-2025). Estos resultados sugieren que la
producción de IL-8 y la abolición de la liberación
de MCP-1 conducirán a un caso en el que teóricamente
existirá un reclutamiento de neutrófilos pero no de células
mononucleares. Esta hipótesis está de acuerdo con el estado
patológico de la gota y pseudogota, en el que la célula
inflamatoria predominante es el neutrófilo (Hachicha et al.,
1995). Además, la activación por cristales de MSU de fagocitos
mononucleares, que se encuentran normalmente en el espacio
articular, también induce la secreción de IL-8
Terkeltaub et al., 1991). Se ha mostrado la importancia de
IL-8 en esta patología en líquidos sinoviales de
pacientes con artritis gotosa aguda en la que se produce en
cantidades elevadas (Terkeltaub et al., 1991; di Giovine
et al., 1991, J. Clin. Invest. 87:
1375-1381). Se ha mostrado que el uso de un
anticuerpo neutralizante contra IL-8 atenúa
significativamente la hinchazón de las articulaciones inducida por
cristales a las 12 h y la infiltración de neutrófilos en
articulaciones artríticas a las 12 y 24 h en un modelo de conejo
(Nishimura et al., 1997, J. Leukoc. Biol. 62:
444-449).
444-449).
Estos estudios demuestran la importancia tanto
de la migración de neutrófilos como de la quimiocina
IL-8, así como la liberación de esta y otras
citocinas a partir de células residentes tales como los
sinoviocitos, macrófagos y mastocitos en el tratamiento de la gota.
Dado que los neutrófilos no están presentes o son extremadamente
raros en el líquido sinovial normal, es necesario un aumento de la
adhesión endotelial de neutrófilos para que se produzca la gota
(Terkeltaub, 1996, In. Koopman, W.J. editor. Arthritis and allied
conditions: a textbook of rheumatology. Baltimore: Williams y
Wilkins: págs. 2085-2102, y Terkeltaub, 1992. En
Inflammation. Basic Principles and Clinical Correlates, ed. by J.I.
Gallin, I.M. Goldstein y R. Snyderman, págs.
977-981, Raven Press, Nueva York). La
IL-16 y el TNF-alfa pueden ser
críticos en la medicación de la rápida regulación por incremento
del principal ligando endotelial para neutrófilos. Por ejemplo, se
ha demostrado la expresión rápida y prolongada de
E-selectina en respuesta a la inyección de cristales
de urato en piel de cerdo (Chapman et al., 1996. Br. J.
Rheumatol. 35: 323-334). La liberación de citocinas,
quimiocinas y productos del sistema de la cascada del ácido
araquidónico conducen al reclutamiento de neutrófilos en esta
patología, y la inhibición de estos conduce a una atenuación de la
patología.
Pueden usarse el siguiente modelo de gota para
someter a prueba un inhibidor de PARP según la presente
invención.
Se adquirieron ratones albinos suizos no
consanguíneos macho (peso corporal 20-22 g) de
Banton y Kingsman (cepa T.O.; Hull, Humberside) y se mantuvieron
con una dieta de comida en bolas convencional con agua corriente a
voluntad y un ciclo luz/oscuridad de 12:00 h. Se alojaron todos los
animales durante 1 semana antes de la experimentación para permitir
que el peso corporal alcanzase 28-30 g.
Se disolvió
1,11b-dihidrobenzopirano[4,3,2-de]isoquinolin-1-ona,
como ejemplo de inhibidor de PARP, en DMSO al 100% a temperatura
ambiente a una concentración de 45 mg en 2 ml. Entonces se inyectó
el compuesto en la cavidad peritoneal, de modo que cada ratón
recibió una única dosis correspondiente a 45 mg/2 ml/kg (por
ejemplo, 60 \mul para un ratón de 30 g). Los ratones control
recibieron DMSO a 2 ml/kg i.p. Un tercer grupo de ratones que se
dejaron sin tratar se añadieron al control para determinar posibles
efectos del vehículo. El estudio implicó por tanto los siguientes
tres grupos: grupo A, ratones sin tratar, n = 6, grupo B, ratones
tratados con DMSO, n = 8, y grupo C, ratones tratados con
1,11b-dihidrobenzopirano[4,3,2-de]isoquinolin-1-ona,
n = 8.
Se sometió a prueba el reclutamiento de
neutrófilos inducido por cristales de MSU tal como sigue. En todos
los casos, se trataron los ratones 1 h tras el tratamiento
anteriormente indicado con cristales de MSU. Se obtuvo una
suspensión homogénea de cristales de MSU mediante una rotación de 30
min. Se indujo la peritonitis mediante inyección de 3 mg de
cristales de MSU en 0,5 ml de PBS (0,1 M, pH 7,4) y se evaluó el
reclutamiento de neutrófilos en la cavidad en el punto de tiempo de
6 h (Getting et al., 1997. J. Pharmacol. Exp. Ther. 283:
123-130). Entonces se sometieron a eutanasia los
animales mediante exposición a CO_{2} y se lavó la cavidad
peritoneal con 3 ml de PHS complementado con EDTA 3 mM y heparina 25
U/ml.
Entonces se diluyó 1:10 una alícuota (100
\mul) del fluido de lavado en disolución de Turk (cristal violeta
al 0,01% en ácido acético al 3%). Entonces se agitaron con vórtex
las muestras y se colocaron 10 \mul de la disolución celular
teñida en un hematocitómetro Neubauer y se contaron los números de
neutrófilos usando un microscopio óptico (Olympus B061). Se han
preparado sobrenadantes libres de células mediante centrifugación y
se han almacenado para un posible análisis futuro.
Se muestran los datos para ratones individuales,
y también se muestran como media \pm D.E. de (n) ratones por
grupo. Se determinaron las diferencias estadísticas mediante ANOVA,
más la prueba de Bonferroni. Se tomó como significativo a un valor
de P<0,05.
La tabla V notifica el número de neutrófilos tal
como se mide 6 h tras la inyección de cristales de MSU en los tres
grupos experimentales.
\vskip1.000000\baselineskip
La tabla VI ilustra estos datos como media \pm
D.E. Puede observarse que el DMSO produjo un aumento no
significativo modesto en la migración celular (+7%). Por el
contrario, el compuesto a modo de ejemplo de la presente invención,
a la dosis de 45 mg/kg, redujo significativamente el flujo de
entrada de células, con un 55% calculado de inhibición frente al
grupo de vehículo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados demuestran que los compuestos y
las composiciones de la presente invención pueden ser útiles en el
tratamiento de y/o la prevención de la gota, tal como reduciendo o
eliminando el reclutamiento de neutrófilos inducido por cristales de
urato.
Claims (12)
1. Compuesto seleccionado del grupo que consiste
en:
\vskip1.000000\baselineskip
2. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para la preparación de un medicamento para inhibir la actividad de
PARP en un mamífero.
3. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para la preparación de un medicamento para el tratamiento de
enfermedades o estados seleccionados del grupo que consiste en daño
tisular que resulta de la muerte o el daño celular debido a necrosis
o apoptosis, enfermedades o daño tisular mediados neuronalmente,
daño tisular neural que resulta de lesión por isquemia y
reperfusión, degeneración macular relacionada con la edad, SIDA y
otras enfermedades de senescencia inmunitaria, artritis, gota,
caquexia, cáncer, enfermedades degenerativas del músculo esquelético
que implican senescencia replicativa, diabetes, senescencia
inmunitaria, distrofia muscular, artrosis, osteoporosis, dolor
neuropático, ataque nervioso, lesión de nervio periférico,
insuficiencia renal, isquemia retiniana, choque septicémico y
envejecimiento de la piel, enfermedades o trastornos que se
relacionan con el tiempo de vida o la capacidad proliferativa de las
células, y enfermedades o estados patológicos inducidos o
exacerbados por la senescencia celular.
4. Composición farmacéutica que comprende un
portador farmacéuticamente aceptable y al menos un compuesto según
la reivindicación 1.
5. Uso de un compuesto según la reivindicación 1
para la preparación de un medicamento para tratar al menos uno de
tejido neural de un mamífero dañado como resultado de una lesión por
isquemia o reperfusión, o trastornos neurológicos o enfermedades
neurodegenerativas; tratar ictus vascular; tratar trastornos
cardiovasculares; tratar al menos un estado seleccionado de
degeneración muscular relacionada con la edad, SIDA, una enfermedad
de senescencia inmunitaria, inflamación, gota, artritis,
aterosclerosis, caquexia, cáncer o enfermedad degenerativa del
músculo esquelético que implica senescencia replicativa, diabetes,
traumatismo craneal, senescencia inmunitaria, inflamación, gota,
trastornos inflamatorios del intestino (tales como colitis y
enfermedad de Crohn), distrofia muscular, artrosis, osteoporosis,
dolor agudo y/o crónico (tal como dolor neuropático), insuficiencia
renal, isquemia retiniana, choque septicémico (tal como choque
endotóxico) o envejecimiento de la piel; extender el tiempo de vida
y/o la capacidad proliferativa de las células; alterar la expresión
génica de células senescentes; radiosensibilizar células tumorales
hipóxicas, o tratar una enfermedad cardiovascular en un animal, tal
como angina de pecho, infarto de miocardio, isquemia cardiovascular
o daño tisular cardiovascular relacionado con la activación de
PARP.
6. Uso según la reivindicación 5, en el que
dicho trastorno neurológico se selecciona del grupo que consiste en
neuropatía periférica provocada por un estado patológico o una
lesión física, tal como síndrome de Guillain-Barre,
lesión cerebral traumática, daño físico a la médula espinal, ictus
asociado con daño cerebral, isquemia focal, isquemia global, lesión
por reperfusión, enfermedad desmielinizante, tal como esclerosis
múltiple, y trastorno neurológico relacionado con neurodegeneración,
tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y
esclerosis lateral amiotrófica; siendo dicha lesión por reperfusión
un ictus vascular.
7. Uso según la reivindicación 3, en el que
dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en tumores
productores de ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia no
linfocítica aguda, cáncer de la corteza suprarrenal, cáncer de
vejiga, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer cervical, leucemia
linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, cáncer
colorrectal, linfoma cutáneo de células T, cáncer endometrial,
cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, cáncer de vesícula biliar,
leucemia de células pilosas, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de
Hodgkin, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, cáncer de hígado,
cáncer de pulmón (de células pequeñas y/o no pequeñas), derrame
peritoneal neoplásico, derrame pleural neoplásico, melanoma,
mesotelioma, mieloma múltiple, neuroblastoma, linfoma de no Hodgkin,
osteosarcoma, cáncer ovárico, cáncer de ovario (célula germinal),
cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer de pene,
retinoblastoma, cáncer de piel, sarcoma de tejidos blandos,
carcinomas de células escamosas, cáncer de estómago, cáncer
testicular, cáncer de tiroides, neoplasmas trofoblásticos, cáncer
uterino, cáncer vaginal, cáncer de la vulva y tumor de Wilm.
8. Uso según la reivindicación 7, en el que
dichos cánceres se seleccionan del grupo que consiste en cáncer
ovárico, cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer testicular y
cáncer de tiroides.
9. Uso según la reivindicación 7, que comprende
además irradiar dicho cáncer con una dosis terapéuticamente eficaz
de radiación.
10. Uso según la reivindicación 9, en el que
dicha radiación comprende rayos X, y que comprende además
administrar a dicho cáncer un radiosensibilizador activado por rayos
X seleccionado del grupo que consiste en metronidazol, misonidazol,
desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina
C, RSU 1069, SR4233, E09, RB 6145, nicotinamida,
5-bromodesoxiuridina (BUdR),
5-yododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina,
fluorodesoxiuridina (FudR), hidroxiurea, cisplatino y mezclas de los
mismos.
11. Uso según la reivindicación 9, en el que
dicha radiación comprende luz visible, y que comprende además
administrar a dicho cáncer un radiosensibilizador activado por luz
visible seleccionado del grupo que consiste en derivados de
hematoporfirina, Photofrin, derivados de benzoporfirina, NPe6,
etioporfirina de estaño SnET2, feoforbida-a,
bacterioclorofila-a, naftalocianinas, ftalocianinas,
ftalocianina de cinc y mezclas de los mismos.
12. Uso según la reivindicación 9, que comprende
además administrar a dicho cáncer un agente terapéutico adicional
seleccionado del grupo que consiste en
5-fluorouracilo, leucovorina,
5'-amino-5'desoxitimidina, oxígeno,
carbógeno, transfusiones de glóbulos rojos, perfluorocarbonos (por
ejemplo, Fluosol-DA), 2,3-DPG,
BW12C, bloqueantes de canales de calcio, pentoxifilina, compuestos
antiangiogénesis, hidralazina, LBSO y mezclas de los mismos.
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