ES2349930T3 - Combinación de [6r]-metilen-tetrahidrofolato con anti-folatos multidiana para reducir su toxicidad mientras que se trata el cáncer. - Google Patents

Abstract

Uso de [6R]-metilen-tetrahidrofolato y al menos un anti-folato multi-diana, para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento contra el cáncer.

Description

Campo Técnico

La presente invención se refiere al uso de [6R]-metilen-tetrahidrofolato y anti-folatos multi-diana para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento contra el cáncer. Antecedentes de la técnica

El control de la toxicidad relacionada con fármacos (por ejemplo mielo-supresión, diarrea, toxicidad mucosa e infección) ha sido una cuestión principal a lo largo de la historia de la quimioterapia contra el cáncer. Las sustancias convencionalmente usadas en la quimioterapia contra el cáncer son por ejemplo anti-folatos, antraciclinas y agentes anti-neoplásicos.

Los anti-folatos o antagonistas de folato, constituyen una clase de anti-metabolitos y son agentes quimioterapéuticos activos para muchos tumores sólidos y neoplasias hematológicas (Thomas Purcell W et al.; “Novel Antifolate Drugs”, Evolving Therapies, pág. 114-125, marzo 2003).

Durante muchos años, el metotrexato (MTX) ha sido el agente anti-metabólico anti-folato principal usado en medicina clínica. La diana celular primaria de MTX es la enzima dihidrofolato reductasa (DHFR) y por tanto, MTX es un anti-folato que se dirige a una única enzima. También hay otros agentes aprobados que sólo atacan dianas enzimáticas únicas, por ejemplo 5-fluorouracilo (5-FU), que inhibe la timidilato sintasa (TS) (Scagliotti, Giorgio V et al.; Phase II Study of Pemetrexed With and Without Folic Acid and Vitamin B12 as Front-Line Therapy in Malignant Pleural Mesothelioma”, Journal of Clinical Oncology, Vol 21, Nº 8, abril 15 2003, pág. 1556-1561).

A pesar de que la respuesta al tratamiento se observa en pacientes, muchos de ellos recaen debido al desarrollo de resistencia. La resistencia a fármacos es a menudo un factor limitante en la quimioterapia exitosa con anti-folatos que se dirigen a enzimas únicas (Banerjee D et al.; “Novel aspects of resistance to drugs targeted to dihydrofolate reductase and thymidylate synthase”, Biochimica et Biophysica Acta 1587 (2002) 164-173).

Se han desarrollado anti-folatos nuevos para mejorar el perfil de toxicidad y eficacia o para disminuir los diversos mecanismos conocidos de resistencia a la terapia con anti-folato. Estos anti-folatos nuevos son anti-folatos multi-diana que han demostrado una actividad anti-tumoral de amplio espectro. Esta nueva generación de anti-folatos inhibe varias enzimas clave que necesitan folato de las vías biosintéticas de purina y timidina, en particular la timidilato sintasa, DHFR y GARFT (glicinamida ribonucleótido formiltransferasa), mediante la competición con folatos reducidos por los sitios de unión. La consecuente inhibición del metabolismo de folato intracelular conduce a la inhibición del crecimiento celular (Niyikiza Clet et al.; “Homocysteine and Methylmalonic Acid: Markers to Predict and Avoid Toxicity from Pemetrexed Therapy”, Molecular Cancer Therapeutics, Vol 1, 545-552, Mayo 2002).

La actividad citotóxica y la posterior eficacia de los anti-folatos puede asociarse con toxicidad sustancial para algunos pacientes. Los anti-folatos, como una clase, se han asociado con mielo-supresión grave esporádica con toxicidad gastrointestinal. Una combinación de dichas toxicidades puede suponer un alto riesgo de mortalidad. La incapacidad de controlar estas toxicidades ha conducido a la interrupción del desarrollo clínico de algunos anti-folatos y complicado el desarrollo clínico de otros (Niyikiza Clet et al.; “Homocysteine and Methylmalonic Acid: Markers to Predict and Avoid Toxicity from Pemetrexed Therapy”, Molecular Cancer Therapeutics, Vol 1, 545-552, Mayo 2002).

El documento US 5 376 658 (Spears et al.) describe el uso de CF2FH4 y su isómero producto de solución FH4, como un modulador de 5-FU en la quimioterapia contra el cáncer. También se describe un método de uso de CH2FH4 o FH4 para reducir la toxicidad de un fármaco anti-folato administrado a un paciente. Los fármacos anti-folato descritos son metotrexato, trimetrexato, óxido nitroso y ácido didesoxitetra-hidrofólico, los cuales pertenecen al grupo de anti-folatos que se dirigen a enzimas únicas.

El tratamiento con inhibidores específicos de TS como 5-FU en combinación con ácido folínico se ha mostrado que reduce los efectos secundarios sin reducir el efecto sobre el tumor. Parece que el déficit de folato puede haber contribuido a la toxicidad en algunos pacientes de cáncer y la complementación nutricional con ácido fólico o folínico ha conducido a una reducción en la toxicidad y las muertes relacionadas con el tratamiento, con mantenimiento de la actividad anticancerosa (Calvert H; “Folate status and the safety profile of antifolates”, Semin Oncol 2002; 29: 3-7).

En un estudio reciente, Niyikiza et al. indicaron que la complementación con ácido fólico puede conducir a un mejor perfil de seguridad en pacientes tratados con pemetrexed y posiblemente a una eficacia mejorada. La toxicidad se podría modular mediante la complementación con ácido fólico y la dosis tolerada máxima se podría aumentar (Niyikiza C et al.; “Homocysteine and methylmalonic acid: markers to predict and avoid toxicity from pemetrexed therapy”, Mol Cancer Ther, 2002; 1: 545-52).

Sin embargo, el metabolismo del ácido fólico es un proceso muy complejo y se necesitan muchos pasos metabólicos para alcanzar las sustancias activas del metabolismo del ácido fólico. El ácido fólico es la forma más oxidada y estable de folato y puede desconjugarse, reducirse y metilarse para ser activo metabólicamente en la célula (Kelly GS, “Folates: supplemental forms and therapeutic applications”; Altern Med Rec 1998; 3: 208-20).

La complementación con ácido fólico para reducir la toxicidad es, por tanto, actualmente bastante ineficaz y puede conducir adicionalmente a intermedios metabólicos no deseados. Hasta ahora, no se había propuesto ninguna forma satisfactoria de reducir la toxicidad de anti-folatos multi-diana. Considerando la acción muy prometedora de los anti-folatos, está muy demandada la posibilidad de reducir de manera eficaz sus efectos secundarios. Existe por tanto la necesidad de una forma de reducir la toxicidad y al mismo tiempo mantener o mejorar la eficacia de los anti-folatos multi-diana, para poder de usarlos de manera eficaz en la clínica. Sumario de la invención

Un objetivo de la presente invención es superar los inconvenientes mencionados anteriormente y proporcionar una forma mejorada de reducir la toxicidad y mantener o mejorar la eficacia, de anti-folatos multi-diana.

Este objetivo se consigue por el uso de [6R]-metilen-tetrahidrofolato ([6R]-metilen-THF) y al menos un anti-folato multi-diana, para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento contra el cáncer.

El uso de [6R]-metilen-THF en combinación con un anti-folato multi-diana de acuerdo con la presente invención reduce drásticamente los efectos secundarios de anti-folatos multi-diana y, consecuentemente, mejora el índice terapéutico. Es posible, por tanto, administrar una dosis mayor al tumor sin aumentar los efectos secundarios, lo que conduce a un mejor efecto clínico.

El [6R]-metilen-THF es un isómero biológicamente activo. Por lo tanto, los efectos sinérgicos de la combinación con anti-folatos multi-diana se optimizan.

Dicho anti-folato multi-diana puede seleccionarse del grupo que consiste en pemetrexed, raltitrexed y lometrexol. Sin embargo, otros anti-folatos multi-diana, así como otras sustancias que poseen las características de los anti-folatos multi-diana se pueden usar.

La composición farmacéutica puede comprender adicionalmente al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos. La reducción de efectos secundarios graves obtenida por la presente invención proporciona mejores posibilidades de combinación.

Dicha antraciclina puede seleccionarse del grupo que consiste en doxorubicina y epirubicina; dicho derivado de platino puede seleccionarse del grupo que consiste en oxaliplatino, cisplatino y carboplatino; dicho inhibidor de topoisomerasa puede seleccionarse del grupo que consiste en irinotecan y CPT11 (un inhibidor de topoisomerasa I); y dicho anti-metabolito se puede seleccionar del grupo que consiste en capecitabina, gemcitabina, UFT y S1. Sin embargo, también se pueden usar otras sustancias que pertenecen a los grupos de sustancias anteriormente mencionados.

El [6R]-metilen-THF y dicho anti-folato multi-diana, se pueden formular en diferentes composiciones farmacéuticas o en una composición farmacéutica común. La formulación en diferentes composiciones proporciona una gran flexibilidad de administración. La formulación en una composición farmacéutica común, por otro lado, proporciona un proceso de fabricación simple, así como un modo de administración simple.

Son ejemplos de cánceres a tratar de acuerdo con la invención cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, cáncer de conducto biliar, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello y cáncer de mesotelioma.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un anti-folato multi-diana y [6R]-metilen-THF.

El [6R]-metilen-THF es un isómero biológicamente activo. La composición farmacéutica puede comprender adicionalmente al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos.

Además, la presente invención se refiere a un kit que comprende la composición farmacéutica que comprende al menos un anti-folato multi-diana y una composición farmacéutica que comprende [6R]metilen-THF.

El [6R]-metilen-THF es un isómero biológicamente activo. Dicho kit puede comprender adicionalmente una composición farmacéutica que comprende un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en, antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y antimetabolitos.

Un método para el tratamiento contra el cáncer, que comprende la administración a un paciente de una cantidad farmacéuticamente activa de al menos un anti-folato multi-diana y una cantidad farmacéuticamente activa de [6R]-metilen-THF.

El [6R]-metilen-THF es un isómero biológicamente activo. El método puede comprender adicionalmente la administración de un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos. Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 muestra las principales vías metabólicas a través de las cuales el folato influye sobre la

síntesis, reparación y metilación de ADN.

La Fig. 2 muestra el aumento de porcentaje de concentración tisular de metilen-tetrahidrofolato

(MTHF) en la metástasis hepática del cáncer colo-rectal en pacientes individuales.

La Fig. 3 muestra el aumento medio de porcentaje de concentración tisular de metilen

tetrahidrofolato (MTHF) en metástasis hepáticas de cáncer colo-rectal en pacientes individuales.

La Fig. 4 muestra los pesos corporales los días 5 y 13 (media  SEM) de los animales en el ejemplo

2. La Fig. 5 muestra los pesos tumorales de los tumores hepáticos (media  SEM) de los animales en el ejemplo 2. La Fig. 6 muestra los pesos del bazo (media  SEM) de los animales en el ejemplo 2. La Fig. 7 muestra los niveles de expresión de TS después de la inyección intravenosa en embolada de un anti-folato multi-diana. La Fig. 8 muestra los niveles medios de expresión génica de TS después de inyección en embolada intravenosa de un anti-folato multi-diana.

Descripción detallada de la invención

En el trabajo de investigación que conduce a la presente invención, los inventores descubrieron sorprendentemente que mediante la co-administración de [6R]-metilen-THF y anti-folatos multi-diana, es posible reducir notablemente los efectos secundarios tóxicos de los anti-folatos multi-diana sin disminuir la acción anti-tumoral de los fármacos.

Los presentes inventores han mostrado (véase ejemplo 2) que mediante la combinación de un anti-folato multi-diana con la forma natural de metilen-THF, la dosis del anti-folato multi-diana puede aumentarse significativamente sin aumentar la toxicidad.

Además, otros agentes quimioterapéuticos, tales como antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos, se pueden administrar adicionalmente, para aumentar adicionalmente la citotoxicidad en el tumor mientras que se mantienen los efectos secundarios a un nivel bajo.

El 5,10-metilen-tetrahidrofolato (en lo sucesivo denominado como metilen-THF o CH2FH4) es un metabolito intracelular normal de ácido fólico, para su uso en la síntesis de timidilato mediante la timidilato sintasa (TS). Lo mismo ocurre con respecto a los poliglutamatos del metilen-THF. El metilen-THF también se usa mediante otras enzimas distintas que incluyen CH2FH4-reductasa, serina hidroximetilasa y CI-tetrahidrofolato sintasa y CH2FH4 deshidrogenasa. Estas inter-conversiones usando metilen-THF son esenciales para la síntesis de purina, síntesis de aminoácidos y metabolismo lipídico. Por tanto, el metilen-THF se sitúa en el punto de ramificación metabólica como un sustrato para al menos cuatro enzimas diferentes (Spears et al.; Patente de Estados Unidos Nº 5.376.658).

Como se indica anteriormente, los estudios anteriores han mostrado que el estado de folato puede modular la toxicidad y eficacia de la quimioterapia contra el cáncer. Los inventores presentes han mostrado que el efecto positivo del ácido fólico se debe al nivel aumentado de [6R]-metilen-THF que se forma a partir del ácido fólico. Los niveles más altos de [6R]-metilen-THF en las células conducen a una inhibición de TS más eficaz, que da como resultado un estado de menos timidina y aumenta la incorporación errónea de uracilo en el ADN.

Puesto que [6R]-metilen-THF es la sustancia activa del metabolismo del ácido fólico, el uso de este folato endógeno para reducir la toxicidad en el tratamiento contra el cáncer es mucho más favorable que el uso de ácido fólico.

Los folatos de la dieta son la mezcla de folatos con poliglutamato que se digieren a formas monoglutamilo por la acción de una enzima anclada a la membrana de borde en cepillo del intestino delgado y expresado por el gen de glutamato carboxipeptidasa II (GCPII) (Devlin AM et al., “Glutamate carboxypeptidase II: a polymorphism associated with lower levels of serum folate and hyperhomocysteinemia”; Hum Mol Gener 2000; 9: 2837-44). Después de la desconjugación en el intestino delgado, el ácido fólico se reduce a tetrahidrofolato en el hígado. Los folatos reducidos se secretan en el intestino delgado con la bilis, donde se reabsorben y distribuyen a otros tejidos.

El transportador de folato reducido, RFC-1, es el principal transportador de folatos reducidos en las células (Sirotnak FM, Tolner B, “Carrier-mediated membrane transport of folates in mammalian cells”; Annu Rev Nutr 1999; 19: 91-122). Intracelularmente, se convierten monoglutamatos de folato reducido a poliglutamatos mediante la enzima folilpoliglutamato sintasa (FPGS) (Shane B, “Folypolyglutamate síntesis and role in the regulation of one-carbon metabolism”; Vitam Horm 1989; 45 263-335). La forma con poliglutamato de tetrahidrofolato se convierte adicionalmente a 5,10-metilentetrahidrofolato (metilen-THF), que se necesita como un donador de metilo en la conversión de dUMP a dTMP (Spears CP et al., “Deoxyuridylate effects on thymidylate synthase-5-fluorodeoxyuridylate- folate ternary complex formation”; Biochem Pharmacol 1989; 38: 2985-93; Spears CP, et al. “Thymidylate syntetase inhibition in malignant tumors and normal liver of patients given intravenous 5-fluorouracil”, Cancer Res 1984; 44: 4144-50). La conversión está catalizada por timidilato sintasa (TS). El metilen-THF también es el precursor del 5-metil-tetrahidrofolato metabólicamente activo (metil-THF), utilizado en la re-metilación de homocisteína. La conversión de metilen-THF a metil-THF depende de la enzima metilen-tetrahidrofolato reductasa (MTHFR).

La enzima -glutamil hidrolasa (GGH) cataliza la degradación de poliglutamatos inter-e intracelulares (Galivan J et al., “Glutamyl hydrolase, pharmacological role and enzymatic characterization”, Pharmacol Ther 2000; 85: 207-15). La Fig. 1 resume las principales vías metabólicas mediante las cuales el folato y la homocisteína influyen sobre la síntesis, reparación y metilación de ADN. La enzima MTHFR equilibra las vías de síntesis de ADN y metilación del ADN para mantener una hemostasis normal. (RFC = transportador de folato reducido; FPGS = folilpoliglutamato sintasa; GGH = -glutamil hidrolasa; TS = timidilato sintasa; THF = tetrahidrofolato; MTHFR = metilen-tetrahidrofolato reductasa; MS = metionina sintasa; SAM = S-adenosil-metionina; DPD = dihidro-pirimidina deshidrogenasa; B2 = riboflavina; B6 = piridoxina; B12 = cobalamina).

Como se muestra, el funcionamiento adecuado de las vías de metilación y síntesis de ADN necesita riboflavina (vitamina B2), piridoxina (vitamina B6) y cobalamina (vitamina B12), además de folatos. Los niveles inadecuados de cualquiera de estos metabolitos darán como resultado niveles de homocisteína elevados. El déficit de piridoxina también deteriorará la capacidad celular de producir glutatión, el principal antioxidante que se necesita para la detoxificación del daño por agente alquilante y radicales libres.

Los folatos orales generalmente están disponibles en dos formas complementarias, ácido fólico y fonílico. La base bioquímica para la modulación de la actividad fluorouracilo (FU) mediante ácido fólico

o ácido folínico (leucovorina) es el aumento del metabolito metilen-THF, que estabiliza el complejo ternario inhibidor formado entre metilen-THF, timidilato sintasa y el metabolito activo de 5-FU. El ácido folínico es un precursor inmediato de metilen-THF, puesto que la administración oral de ácido folínico evita los pasos de desconjugación y reducción necesarios para el ácido fólico. El ácido folínico parece que es una forma más activa metabólicamente de folato que el ácido fólico y, como un folato reducido, puede cruzar directamente la barrera hematoencefálica. Como el ácido fólico, el ácido folínico debe metilarse para ser metabólicamente activo. El paso de metilación del ácido fólico y folínico necesita niveles adecuados de serina y una enzima serina hidroximetil-transferasa funcional (SHMT) (Costi MP, Ferrari S, “Update on antifolate drugs targets”; Curr Durg Targets 2001; 2: 135-66). La complementación con los metilen-THF folatos reducidos y metil-THF tiene la ventaja de evitar este paso de metilación.

La farmacogenética tiene como objetivo la identificación individuos predispuestos a alto riesgo de toxicidad con dosis convencionales de agentes quimioterapéuticos contra el cáncer. La variabilidad inter-individual en la eficacia y toxicidad de la terapia farmacológica está asociada con polimorfismos en genes que codifican enzimas metabolizantes de fármacos, transportadores o dianas farmacológicas.

El metabolito clave metilen-THF está implicado directamente en la biosíntesis de dTMP, en la conversión a 10-formil-THF para la síntesis de purina y en la reducción a metil-THF para la metilación de homocisteína a metionina (Kelly GS. Folates: supplemental forms and therapeutic applications. Altern Med Rev 1998; 3: 208-20). La conversión de metilen-THF a metil-THF necesita la enzima MTHFR.

Pueden producirse aberraciones en la distribución de diferentes folatos por el polimorfismo MTHFR C677T (Guinotte CL et al., “Methylenetetrahydrofolate reductase 677C--T variant modulates folate status response to controlled folate intakes in young women”; J Nutr 2003; 133: 1272-80). La homo- o heterocigosidad para el alelo T da como resultado una enzima MTHFR con actividad subóptima y un aumento en metilen-THF. Una relación entre el polimorfismo MTHFR y la respuesta tumoral a 5-FU se detectó en un estudio reciente por Cohen et al. (Cohen V et al., “Methylenetetrahydrofolate Reductase Polymorphism in Advanced Colorectal Cancer: A Novel Genomic Predictor of Clinical Response to Fluoro-pyrimidine-based Chemotherapy”; Clin Cancer Res 2003; 9: 1611-5). Los pacientes con genotipo CT o TT respondieron mejor a la terapia que los pacientes con el genotipo CC. El genotipo MTHFR C677T también puede ser predictivo de toxicidad clínica frente a raltitrexed (Stevenson JP et al. “Phase I clinical and pharmacogenetic trial of irinotecan and raltitrexed administered every 21 days to patients with cancer”; J Clin Oncol 2001; 19: 4081-7). Los homocigotos con el polimorfismo MTHFR C677T experimentaron menos toxicidad asociada con raltitrexed en comparación con aquellos con genotipos heterocigotos o de tipo silvestre.

La conversión de metilen-THF a metil-THF puede estar deteriorada en individuos que portan una enzima MTHFR con actividad subóptima (Guinotte CL et al. “Methylenetetrahydrofolate reductase 677C-->T variant modulates folates status response to controlled folate intakes in young women”; J Nutr 2003; 133: 1272-80). También, los niveles altos de homocisteína o S-adenosil-homocisteína, como se encuentran en individuos con déficit de folato, se sabe que inhiben la enzima MTHFR (De Cabo SF et al., “Molecular and cytological evidence of S-adenosyl-L-homocysteine as an innocuous undemethylating agent in vivo”; Cytogenet Cell Genet 1995; 71: 187-92). Por tanto, cuando se elige entre metilen-THF y metil-THF puede ser importante tener en cuenta el genotipo de los pacientes y el estado de folato.

La proteína del gen de complementación cruzada de reparación de daños por rayos X (XRCC1) tiene una función importante en la reparación de escisión de bases de ADN. Existen formas polimórficas diferentes de la proteína y el polimorfismo Arg399Gln se ha asociado con alto riesgo de desarrollo de CRC así como con resistencia a quimioterapia con oxaliplatino/5-FU (Stoehl-macher J et al., “A polymorphism of the XRCC1 gene predicts for response to platinum based treatment in advanced colorectal cancer” Anticancer Res 2001; 21: 3075-9). Posiblemente, el gen XRCC1 puede inactivarse también por metilación aberrante o mediante mutaciones provocadas por déficit de folato. La inversión de la resistencia de oxaliplatino puede conseguirse usando folatos como metilen-THF.

Además, la concentración sanguínea o consumo en la dieta de folato bajos están asociados con un riesgo aumentado de neoplasia colo-rectal. De hecho, estudios epidemiológicos han establecido una asociación inversa entre el estado de folato y la neoplasia colo-rectal (Kim et al.; “Colonic mucosal concentrations of folate correlate well with blood measurements of folate status in persons with colorectal polyps”, Am J Clin Nutr 1998; 68: 866-72).

El uso de [6R]-metilen-THF para el tratamiento del déficit de folato en la mucosa colónica es muy ventajoso, puesto que el folato más eficaz se administra así directamente al sitio en el que más se necesita.

Los folatos metilados pueden reducir también diarrea grave inducida por anti-folatos multi-diana mediante la protección de la red neural en la mucosa epitelial.

En relación con la presente invención, puede usarse [6R]-metilen-THF sintético así como natural. Además, los pro-fármacos para [6R]-metilen-THF pueden usarse. THF, metilen-THF y metil-THF pueden existir en varias formas isoméricas, sin embargo, el isómero biológicamente activo de metilen-THF se usa de acuerdo con la presente invención. Como se usa en el presente documento, “isómero biológicamente activo” se refiere a un isómero endógeno de THF, metilen-THF o metil-THF, es decir una forma natural que encaja en los sistemas enzimáticos del cuerpo.

Un isómero natural, biológicamente activo de THF es [6S]-THF, un isómero natural biológicamente activo de metilen-THF es [6R]-metilen-THF y un isómero natural biológicamente activo de metil-THF es [6S]-metilen-THF.

Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que el isómero biológicamente activo de metilen-THF es más adecuado para usarse en combinación con anti-folatos multi-diana.

Se ha mostrado previamente que el isómero natural, es decir la forma biológicamente activa, de metilen-THF (100% de configuración 6R) es un factor de crecimiento mejor que la mezcla racémica (50% de configuración 6R y 50% de configuración 6S). Se esperaría que el isómero natural no sea propicio para combinarlo con un fármaco quimioterapéutico debido al riesgo de un crecimiento excesivo del tumor. Sin embargo, tras la combinación con un anti-folato multi-diana, la propiedad de ser un factor de crecimiento mejor es realmente útil, porque después se estimulan más células cancerosas para entrar en el ciclo celular. Lo que se produce en este caso ventajoso, puesto que los anti-folatos multi-diana principalmente afectan a células durante la división celular.

A mayor porción de peso de un isómero biológicamente activo, mejor resultado se conseguirá.

El [6R]-metilen-THF para su uso de acuerdo con la invención adecuadamente tiene una pureza del 90% o más alta. Una pureza del 97% o más alta se prefiere. Una pureza más alta proporciona una mejor estabilidad de los folatos. A bajas purezas, THF, metilen-THF y metil-THF son muy susceptibles a la oxidación y por tanto inestables.

Las expresiones alternativas para el metilen-THF son 5,10-metilen-THF o 5,10-CH2-FH4 . El metilen-THF puede, por ejemplo, usarse en forma de su sal de Ca o Na2 o en la forma de diversas sales de sulfato. Además, de acuerdo con la presente invención, los ácidos libres pueden usarse, es decir ácido metilen-tetrahidrofólico o ácido 5,10-metilen-tetrahidropteroil-glutámico (5,10-CH2-H4-PteGlu).

Las expresiones alternativas para metil-THF son 5-metil-THF o 5-CH3-H4F. El metil-THF puede por ejemplo usarse en la forma de su sal de Ca o Na2 o en la forma de diversas sales de sulfato. Además, el ácido libre puede usarse, es decir ácido metil-tetrahidrofólico o ácido metil-tetrahidropteroil-glutámico 5-CH3-H4PteGlu).

Las expresiones alternativas para THF son H4F o 5,6,7,8-tetrahidrofolato. THF puede por ejemplo usarse en la forma de su sal de Ca o Na2 o en la forma de varias sales de sulfato. Además, el ácido libre puede usarse, es decir ácido tetrahidrofólico o ácido tetrahidropteroil-glutámico (H4PteGlu).

La expresión “agente quimioterapéutico” como se usa en el presente documento se refiere a un medicamento para el tratamiento contra el cáncer.

La expresión “anti-folato multi-diana” (o anti-folato multi-funcional”) como se usa en el presente documento se refiere a un anti-folato que actúa en dos o más de las enzimas implicadas en la síntesis de folato. La diferencia entre anti-folatos de diana enzimática única y anti-folatos multi-diana se ilustra en “Pemetrexed Disodium: A Novel Antifolate Clinically Active Against Multiple Solid Tumors” por Hanauske A, et al., en el que la actividad inhibitoria de pemetrexed y MTX frente a diferentes enzimas se compara. Pemetrexed demostró actividad inhibitoria significativa para múltiples sistemas enzimáticos, a diferencia de MTX.

Además, la multi-funcionalidad de los anti-folatos multi-diana disminuye el riesgo para el desarrollo de resistencia farmacológica, lo que es una gran diferencia en comparación con anti-folatos de diana enzimática única.

El anti-folato multi-diana puede por ejemplo seleccionarse del grupo que consiste en pemetrexed (nombre comercial: Alimta), raltitrexed (nombre comercial: Tomudex) y lometrexol. (La multifuncionalidad de raltitrexed se muestra en por ejemplo por Jackman AL et al. en “ICI D1694, a quinazoline antifolate thymidylate synthase inhibitor that is a potent inhibitor of L1210 tumor cell growth in vitro and in vivo: a new agent for clinical study”, Cancer Res 1991 oct 15; 51 (20): 5579-86).

Los términos “antraciclina” y “anti-metabolito” y las expresiones “derivado de platino” e “inhibidor de topoisomerasa” como se usan en el presente documento se refieren a estos compuestos como se define en la Biblioteca Nacional de Medicina.

El término “paciente” como se usa en el presente documento se refiere a cualquier ser humano o mamífero no humano que necesita tratarse con los métodos, kits o composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención.

El término “tratamiento” como se usa en el presente documento se refiere a ambos tratamientos para curar o aliviar los síntomas de diferentes tipos de cáncer y para el tratamiento para prevenir el desarrollo de cáncer. En particular, los tumores sólidos son adecuados para tratarse de acuerdo con la invención.

La expresión “cantidad farmacéuticamente activa” como se usa en el presente documento se refiere a una dosis de una sustancia que conducirá al efecto farmacológico y/o terapéutico deseado. El efecto farmacológico y/o terapéutico deseado es, como se indica anteriormente, la cura o el alivio de los síntomas de diferentes tipos de cáncer y la prevención del desarrollo de cáncer.

El [6R]-metilen-THF y el anti-folato multi-diana, se pueden administrar simultáneamente o consecutivamente. Cuando se administran consecutivamente, bien el [6R]-metilen-THF se administra primero y después el anti-folato multi-diana o bien se administra primero el anti-folato multi-diana y después el [6R]-metilen-THF. El intervalo entre las administraciones depende de las características del fármaco y puede por ejemplo variar desde horas a días. Sin embargo, los intervalos más cortos y más largos se pueden usar.

En caso de que otros agentes quimioterapéuticos, es decir antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos, se vayan a administrar también, pueden administrarse simultáneamente con el [6R]-metilen-THF o simultáneamente con el anti-folato multi-diana. Además, todas las sustancias, es decir [6R]-metilen-THF, el anti-folato multi-diana y otras sustancias quimioterapéuticas se pueden administrar simultáneamente. Los otros agentes quimioterapéuticos también se pueden administrar separados del [6R]-metilen-THF y del anti-folato multi-diana.

El orden en el que los fármacos y el folato se administran podría ser de gran importancia para el resultado del tratamiento quimioterapéutico. Como una ilustración, Raghunathan et al., mostraron que el crecimiento tumoral se suprimió aproximadamente el 80% cuando se administró 5-FU a animales con déficit de folato 1 hora después de la administración de ácido folínico, en comparación con aproximadamente el 50% de supresión en ratones control (Raghunathan K et al.“Impact of Schedule on leucovorin potentiation of fluorouracil antitumor activity in dietary folic acid deplete mice”; Biochem Pharmacol 1997; 53: 1197-202). El ácido folínico administrado 12 horas antes de 5-FU dio como resultado la estimulación del crecimiento tumoral lo que fue coherente con la acusada estimulación del crecimiento cuando el ácido folínico se administró sin 5-FU.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden comprender otras sustancias, tales como un vehículo inerte o antioxidantes, ascorbato, ácido ascórbico, conservantes, transportadores, adyuvantes farmacéuticamente aceptables, etc, que conocen bien los expertos en la materia.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden formular mediante métodos de fabricación convencionales, tales como por ejemplo métodos de fabricación similares a aquellos usados para la producción de leucovorina.

Los ejemplos de cánceres a tratar de acuerdo con la invención son cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, cáncer de conducto biliar, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello y cáncer de mesotelioma.

El [6R]-metilen-THF se administra preferiblemente en una dosis de 100 g a 1000 mg, preferiblemente una dosis de 100-200 mg, que corresponde a aproximadamente 1-5 mg/kg de peso corporal. La dosis se ajustará individualmente y puede por tanto variar, por ejemplo dependiendo de la condición del paciente.

La dosis se puede administrar por ejemplo diariamente, semanalmente o mensualmente. Puede, por ejemplo administrarse por vía subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intranasal u oral.

Además, es posible combinar el tratamiento de acuerdo con la invención con otros tratamientos farmacológicos convencionales del cáncer. El [6R]-metilen-THF y el anti-folato multi-diana pueden por tanto administrarse en combinación con otros productos farmacéuticos convencionales usados para tratar el cáncer.

Las composiciones de acuerdo con la invención también pueden co-administrarse con vitamina B12, vitamina B6 y vitamina B2.

Son ejemplos de combinaciones de anti-folatos multi-diana y [6R]-metilen-THF:

 Premetrexed + [6R]-metilen-THF

 Premetrexed + 5-fluorouracilo + [6R]-metilen-THF  Raltitrexed + [6R]-metilen-THF

 Raltitrexed + 5-fluorouracilo + [6R]-metilen-THF Ejemplos

La invención se explicará ahora con más detalles en los siguientes ejemplos. Estos ejemplos sólo pretenden ilustrar la invención y no deberían de ninguna manera considerarse que limitan el alcance de la invención. Ejemplo 1: Administración de metilen-THF frente a la administración de ácido folínico

El nivel de aumento de la concentración tisular de metilen-THF después de la administración de leucovorina y metilen-THF, respectivamente, se ha comparado.

Se dio una dosis de folatos a pacientes operados debido a metástasis hepáticas. Se tomaron biopsias del tumor antes de la inyección i.v. en embolada de leucovorina en metilen-tetrahidrofolato. A los 20 minutos se tomó una nueva biopsia de tumor y la concentración de MTHF se ensayó. La administración de metilen-THF condujo a una mayor concentración tisular de metilen-THF que de leucovorina. Los resultados se muestran en la Fig. 2 y 3. Estos resultados indican que la administración de metilen-THF en lugar de ácido folínico es más eficaz. Ejemplo 2: Terapia Anti-folato Multi-diana (ALIMTA) en Combinación con el Isómero Natural de Metilentetrahidrofolato (R-5,10-CH2FH4) en un Adenocarcinoma Experimental en Ratas Método

El siguiente estudio experimental se aprobó por el comité ético local de la Universidad de Göteborg.

Se inocularon durante la anestesia ocho ratas Wistar hembra endogámicas en el lóbulo hepático medio con 0,1 ml de 1,0 células tumorales viables de un adenocarcinoma experimental durante la anestesia general. El día 5 se realizó de nuevo una laparotomía a los animales durante la anestesia general, el peso corporal se registró y el tamaño del tumor hepático solitario se midió con pies de rey.

Los animales se asignaron aleatoriamente a dos grupos. El grupo 1 recibió inyecciones intravenosas de ALIMTA (pemetrexed) 0,01 mg/kg y el grupo 2 recibió 0,1 mg/kg de ALIMTA. Ambos grupos recibieron 15 mg/kg de R-5,10-CH2FH4 inmediatamente después de las inyecciones de ALIMTA. La terapia se administró a través de inyecciones intravenosas por la vena de la cola los días 6-8 y días 11

12. El día 13 todos los animales se sacrificaron mediante una sobredosis de anestesia.

Los pesos corporales se registraron y el tamaño de los tumores hepáticos se midió. Los pesos húmedos del tumor escindido de hígado y bazo se registraron.

Resultados

Todos los animales sobrevivieron el periodo experimental y no se observaron signos de toxicidad. Los pesos corporales el día 5 y 13 se muestran en la Figura 4. (La Fig. 4 muestra los pesos corporales los días 5 y 13. Grupo 1 (día 5=1 y día 13=2) y grupo 2 (día 5=4 y día 13=5). Media  SEM).

Todos los animales que recibieron 0,01 mg/kg de ALIMTA se encontró que tenían crecimiento tumoral extra-hepático en la cavidad abdominal así como metástasis hacia los pulmones. Los pesos tumorales de los tumores hepáticos en ambos grupos se muestran en la Figura 5. Los pesos tumorales totales de crecimiento tumoral extra-hepático en la cavidad abdominal y metástasis de pulmón no se registraron. Sólo los pesos tumorales hepáticos se muestran en la Figura 5 (la Fig. 5 muestra los pesos tumorales de los tumores hepáticos en el grupo 1 (1) y grupo 2 (2). Media  SEM).

Los pesos húmedos del bazo en los dos grupos se muestran en la Figura 6. (la Fig. 6 muestra los pesos del bazo en el grupo 1 (1) y grupo 2 (2). Media  SEM). Se conoce bien en la técnica que la toxicidad de un fármaco se puede controlar evaluando el peso del bazo como un marcador subrogado. Conclusión

Este experimento es una prueba del principio de que es posible combinar un anti-folato multifuncional con la forma natural de metilen-tetrahidrofolato y que esta combinación puede mejorar el efecto anti-tumoral. En el grupo con la dosis más alta de Alimta, no se registraron metástasis extra-hepáticas y aún así no se podía observar toxicidad general. Ejemplo 3: El efecto de un anti-folato multi-diana

En este experimento, el efecto de un anti-folato multi-diana, es decir Tomudex (raltitrexed), se mostró. La Fig. 7 muestra los niveles de expresión de TS en el tumor después de inyección en embolada intravenosa de Tomudex y la Fig. 8 muestra los niveles de expresión génica de TS después de una inyección en embolada intravenosa de Tomudex.

Se incluyeron en el estudio nueve pacientes con cáncer colo-rectal y los niveles de expresión se midieron en actina, que es una proteína que ejerce de molécula estructural importante para los citoesqueletos de muchas células eucariotas.

Este experimento muestra que usando un anti-folato multi-diana únicamente, la mucosa normal se ve afectada más adversamente que el tumor. Esto también corresponde a los hallazgos clínicos; los efectos tóxicos graves del intestino hicieron imposible continuar el tratamiento.

Por tanto, los efectos obtenidos por la presente invención, es decir la reducción de la toxicidad de anti-folatos multi-funcionales mientras que se mantiene el efecto citotóxico, están muy demandados.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   Uso de [6R]-metilen-tetrahidrofolato y al menos un anti-folato multi-diana, para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento contra el cáncer.

2. 2.

   Uso de acuerdo con la Reivindicación 1, donde dicho anti-folato multi-diana se selecciona del grupo que consiste en pemetrexed, raltitrexed y lometrexol.

3. 3.

   Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicha composición farmacéutica comprende adicionalmente al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos.

4. 4.

   Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho [6R]metilen-tetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en diferentes composiciones farmacéuticas.

5. 5.

   Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde dicho [6R]-metilentetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en una composición farmacéutica común.

6. 6.

   Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, cáncer de conducto biliar, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello y cáncer de mesotelioma.

7. 7.

   Una composición farmacéutica que comprende [6R]-metilen-tetrahidrofolato y al menos un antifolato multi-diana.

8. 8.

   Una composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 7 en la que dicho anti-folato multi-diana se selecciona del grupo que consiste en pemetrexed, raltitrexed y lometrexol.

9. 9.

   Una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 y 8, que comprende adicionalmente al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos.

10. 10.

    Una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en la que dicho [6R]-metilen-tetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en diferentes composiciones farmacéuticas.

11. 11.

    Una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en las que dicho [6R]-metilen-tetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en una composición farmacéutica.

12. 12.

    Un kit que comprende una composición farmacéutica que comprende [6R]-metilentetrahidrofolato y una composición farmacéutica que comprende al menos un anti-folato multi-diana.

13. 13.

    Un kit de acuerdo con la Reivindicación 12, que comprende adicionalmente una composición farmacéutica que comprende al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos.

14. 14.

    Una composición farmacéutica que comprende [6R]-metilen-tetrahidrofolato y al menos un antifolato multi-diana para su uso en el tratamiento contra el cáncer.

15. 15.

    Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la Reivindicación 14, en la que dicho anti-folato multi-diana se selecciona del grupo que consiste en pemetrexed, raltitrexed y lometrexol.

16. 16.

    Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-15, en la que dicha composición farmacéutica comprende adicionalmente al menos un agente quimioterapéutico seleccionado del grupo que consiste en antraciclinas, derivados de platino, inhibidores de topoisomerasa y anti-metabolitos.

17. 17.

    Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-16, en la que dicho [6R]-metilen-tetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en diferentes composiciones farmacéuticas.

18. 18.

    Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-16, en la que dicho [6R]-metilen-tetrahidrofolato y dicho al menos un anti-folato multi-diana, se formulan en una composición farmacéutica común.

19. 19.

    Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-18, en la que dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, cáncer de conducto biliar, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello y cáncer de mesotelioma.