ES2344986T3 - Derivados del acido 5-aminolevulinico para el tratamiento del acne. - Google Patents

Abstract

El uso de un fotosensibilizante que es un derivado del ácido 5-aminolevulínico (5-ALA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en la prevención o tratamiento del acné, en el que dicho fotosensibilizante es un compuesto de fórmula general I: (I)R22N-CH2COCH2-CH2CO-OR1 (donde R1 representa un grupo alquilo no sustituido o un grupo alquilo sustituido por un grupo arilo; y cada R2 independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo opcionalmente sustituido).

Description

Derivados del ácido 5-aminolevulínico para el tratamiento del acné.

Esta invención se refiere al tratamiento del acné y, en particular, al uso de los derivados del ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) en un método para el tratamiento del acné, por ejemplo, acné vulgaris. Más concretamente, la invención se refiere al uso de ésteres 5-ALA para el tratamiento en dichas condiciones.

El acné es una de las enfermedades de la piel más comunes en todo el mundo.

Aunque prevalece particularmente durante la pubertad, puede continuar durante muchos años. Afecta aproximadamente al 83-95% de los jóvenes de 16 años de ambos sexos en el Reino Unido y aproximadamente el 20% de los que lo sufren buscan la ayuda de un médico. En algunos casos puede dejar cicatrices permanentes y a menudo es el origen de un sufrimiento emocional importante.

En sus manifestaciones más leves, el acné es una enfermedad superficial que va acompañada de pequeñas irritaciones con granos. Sin embargo, en los tipos de acné más inflamatorios, la invasión bacterial de o alrededor de los folículos pilosebáceos se produce provocando la formación de pústulas, quistes infectados, etc. Estas lesiones pueden extenderse y a veces dejan cicatrices que marcan de forma permanente.

La causa concreta del acné no se conoce totalmente, aunque se cree que el factor principal es la obstrucción del canal pilosebáceo. Esto puede estar provocado por una superproducción de sebo, el aumento de volumen de las células epiteliales y/o la proliferación de bacterias (por ejemplo, Propionibacterium acnes). Se cree, por ejemplo, que la producción excesiva de sebo y el aumento de volumen de las células epiteliales puede provocar la congestión o el bloqueo de los poros de la piel y hacer que se formen comedones (puntos negros) y espinillas. Si junto con estos factores están presentes ciertas bacterias, se pueden producir lesiones inflamatorias tales como espinillas, pústulas y quistes.

Los puntos negros, los puntos blancos, las espinillas, las pústulas y los quistes se denominan vulgarmente "granos". Cada tipo de grano puede estar presente en un grado diferente en la persona que sufre acné y, lo más normal, es que se encuentren una variedad de tipos diferentes. Los granos aparecen generalmente en el rostro y en la espalda, y en especial en zonas de la piel de la cara (por ejemplo, en la barbilla, la nariz y la frente) donde las glándulas sebáceas son más grandes, predominan más y son más activas.

Los tratamientos del acné establecidos están destinados a prevenir la formación de nuevas lesiones y a facilitar la cicatrización de las lesiones existentes. Los tratamientos convencionales incluyen, por ejemplo, la administración sistémica y tópica de antibióticos que pretenden reducir la población bacteriana de los folículos pilosebáceos y la aplicación tópica de peróxidos, por ejemplo, peróxido de benzoílo, siendo ambos antibacterianos y levemente comedolíticos. Los análogos de la vitamina A, como son los retinoides, son comedolíticos y también han sido utilizados con cierto grado de éxito en las composiciones tópicas para el tratamiento del acné.

Existen, no obstante, problemas derivados de dichos tratamientos convencionales.

Por ejemplo, los peróxidos como el peróxido de benzoílo son a menudo inestables y, por tanto, tienen un tiempo de vida limitado. Su eficacia también suele tender a ser menor a lo largo del tiempo. Asimismo, está aumentando la resistencia a los antibióticos del Proprionibacterium acnes y esto reduce severamente su eficacia. Los retinoides (por ejemplo, la isotretinoina), aunque son efectivos, tienen a menudo efectos secundarios y contraindicaciones no deseados y algunas veces severos, que limitan a menudo su aceptabilidad y su uso. Existe, por tanto, la necesidad de desarrollar tratamientos alternativos para el acné.

Un método que se ha propuesto recientemente para el tratamiento del acné es la terapia fotodinámica (TFD) utilizando agentes fotosensibilizantes. La terapia fotodinámica (TFD) es una técnica relativamente nueva que se ha utilizado en el tratamiento de diversas anomalías o enfermedades de la piel o en otras mucosas u órganos epiteliales, especialmente en las lesiones cancerígenas o precancerígenas, así como en determinadas lesiones no malignas como la psoriasis. La TFD implica la administración de agentes fotosensibilizantes seguida por la exposición a una luz fotoactivadora para activar los agentes fotosensibilizantes y convertirlos en citotóxicos que llevan a la destrucción de las células y, en consecuencia, al tratamiento de la enfermedad. Se conocen y se han descrito en la literatura diversos agentes fotosensibilizantes, por ejemplo, algunos psoralenos porfirinas, clorinas, ftalocianinas, así como el ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) y algunos derivados de los mismos, por ejemplo los ésteres 5-ALA.

Aunque la TFD se ha centrado principalmente en el tratamiento del cáncer y de las fases precancerígenas, existen algunos informes relacionados con el uso de la TFD en el tratamiento del acné. Dichos métodos, no obstante, sólo han tenido un éxito limitado. Por ejemplo, Itoh, Y. et al. (Brit. J. Dermatology, 2001, 144, 575-579) y Hongcharau, W. et al. (J. Invest. Dermatology, 2000, 115, 183-192) ambos describen los ensayos en el tratamiento del acné con la TFD utilizando 5-ALA como fotosensiblilizante. Ambos estudios concluyen que la TFD-ALA puede ser efectiva para el tratamiento del acné pero destaca que se han asociado al tratamiento unos efectos adversos significativos. Estos incluyen malestar, quemazón, escozor y picor durante la radiación, eritema edematoso y descamación epidérmica poco después de la TFD, así como una irritación prolongada e hipersensibilidad a la estimulación física durante más de 10 días después del tratamiento. También se informó de pigmentación en algunos casos y la piel de los pacientes tardó más de un mes en volver a la normalidad.

Un problema adicional asociado al uso de 5-ALA en la terapia (por ejemplo, en la TFD) es que es extremadamente inestable y tiene tendencia a sufrir un gran número de reacciones de descomposición. Como resultado de su inestabilidad, el 5-ALA se presenta normalmente como una composición ácida (es más estable con un pH por debajo de 5) pero esto, a su vez, reduce su aceptabilidad como sustancia terapéutica. El 5-ALA tiene, asimismo, una biodisponibilidad relativamente reducida lo que significa que a veces tiene que ser utilizado en dosis elevadas, agravando, por tanto, los problemas asociados a la acidez de muchas composiciones de 5-ALA.

En consecuencia, existe todavía la necesidad de encontrar métodos alternativos para tratar y/o prevenir el acné. A pesar de los diversos problemas que pone de relieve la literatura en relación con el tratamiento del acné utilizando la TFD con 5-ALA, hemos constatado, sorprendentemente, que ciertos derivados de 5-ALA (por ejemplo, los ésteres de 5-ALA, especialmente, sustituyen opcionalmente a los ésteres benzoicos del ALA) pueden ser utilizados de manera efectiva en el tratamiento fotodinámico del acné.

En consecuencia, vista desde ese aspecto, la invención propone el uso de un fotosensibilizante que es un derivado del ácido 5-aminolevulínico (5-ALA), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en la prevención o tratamiento del acné, en el que dicho fotosensibilizante es un compuesto con una fórmula general I:

(I)R^{2}_{2}N-CH_{2}COCH_{2}-CH_{2}CO-OR^{1}

(donde, R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido (preferiblemente alquilo C_{1-8}, por ejemplo alquilo C_{1-6}) o un grupo alquilo (por ejemplo, alquilo C_{1-2}, especialmente alquilo C_{1}) substituido por un grupo arilo; y

cada R^{2} independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo opcionalmente sustituido).

El uso de derivados de 5-ALA (ácido 5-amino-4-oxo-pentanoico, conocido de otra forma como ácido 5-aminolevulínico) en la TFD es muy conocido en la literatura científica y de patentes (véase, por ejemplo, J.C. Kennedy et al., J. Clin. Laser Med. Surg. (1996) 14: 289-304, US-A-5,079,262, US-A-5,211,938, US-A-5,234,940, US-A-5,422,093, US-A-6,034,267, WO91/01727 y WO96/28412, cuyos contenidos quedan incorporados a la presente por referencia). Todos estos derivados de 5-ALA que están englobados en la fórmula general I como aquí se define y sus sales farmacéuticamente aceptables, son adecuados para su uso en los métodos descritos en la presente.

Los derivados de 5-ALA que se utilicen de acuerdo con la invención deberán ser capaces de formar protoporfirina IX (PpIX) o cualquier otro fotosensibilizante (por ejemplo, un derivado de la PpIX) in vivo. Típicamente, dichos derivados serán un precursor del PpIX o de un derivado de la PpIX (por ejemplo, un éster de la PpIX) en el camino biosintético para el hemo y que, por tanto, son capaces de inducir una acumulación de PpIX en el lugar del acné siguiendo una administración in vivo. Los precursores adecuados de l PpIX o de los derivados de la PpIX incluyen profármacos 5-ALA que deberían poder formar 5-ALA in vivo como intermediario en la biosíntesis de la PpIX o que se puede convertir (por ejemplo, enzimáticamente) en porfirinas sin formar 5-ALA como intermediario. Los ésteres del 5-ALA se encuentran entre los compuestos preferidos para su uso en los métodos aquí descritos.

Los ésteres del ácido 5-aminolevulínico y los derivados N-sustituidos de los mismos se utilizan como fotosensibilizantes en la invención. Se escogen particularmente aquellos compuestos en los que el grupo 5-amino no ha sido sustituido (por ejemplo, los ésteres ALA). Dichos compuestos son conocidos en general y están descritos en la literatura (véase, por ejemplo, WO96/28412 y WO02/10120 a PhotoCure ASA, cuyos contenidos quedan incorporados a la presente por referencia).

Los fotosensibilizantes que se utilizan en la invención son compuestos de fórmula general I:

(I)R^{2}_{2}N-CH_{2}COCH_{2}-CH_{2}CO-OR^{1}

(donde R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido o un grupo alquilo sustituido por un grupo arilo; y cada R^{2} independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo opcionalmente sustituido, por ejemplo un grupo R^{1}) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Tal y como aquí se utiliza, el término "alquilo", a menos que se indique lo contrario, incluye cualquier grupo hidrocarburo alifático, saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, cíclico, de cadena corta o larga. Los grupos alquilo no saturados pueden ser mono o poliinsaturados e incluyen los dos grupos alquenilo y alquinilo. A menos que se indique otra cosa, dichos grupos pueden contener hasta 40 átomos. No obstante, se prefieren los grupos alquilo que contienen hasta 30, preferiblemente hasta 10, en particular preferiblemente hasta 8, especialmente preferiblemente hasta 6, por ejemplo hasta 4 átomos de carbono.

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Los grupos alquilo R^{1} y R^{2} sustituidos pueden ser mono o poli sustituidos. Los sustituyentes adecuados pueden ser seleccionados entre los grupos hidroxi, alcoxi, aciloxi, alcoxicarboniloxi, amino, arilo, nitro, oxo, fluoro, -SR_{3}, -NR^{3}_{2} y -PR^{3}_{2}, y cada grupo alquilo puede estar interrumpido opcionalmente por uno o más grupos -O-, -NR_{3}-, -S- o -PR_{3}-, en donde R^{3} es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-6}).

Para su uso en la invención, se prefieren particularmente aquellos compuestos de fórmula I en los que al menos un R^{2} representa un átomo de hidrogeno. En los compuestos especialmente preferidos cada R^{2} representa un átomo de hidrógeno.

También se prefieren los compuestos de fórmula I, en donde R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido (preferiblemente alquilo C_{1-8}, por ejemplo alquilo C_{1-6}) o más preferiblemente un grupo alquilo (por ejemplo, alquilo C_{1-2}, especialmente alquilo C_{1}) substituido por un grupo arilo como fenilo.

Los grupos alquilo no sustituidos que se pueden utilizar en la invención incluyen tanto los grupos hidrocarburo de cadena lineal como ramificada. Se prefieren los compuestos de fórmula I, en donde R^{1} es un C_{4-8,} preferiblemente un C_{5-8,} un grupo alquilo de cadena lineal que está ramificada en uno o varios grupos C_{1-6} (por ejemplo, alquilo C_{1-2}). Los ejemplos representativos de grupos alquilo ramificados adecuados no sustituidos incluyen 2-metilpentilo, 4-metilpentilo, 1-etilbutilo y 3,3-dimetil-1-butilo. Se prefiere en particular el 4-metilpentilo.

Asimismo se prefieren los compuestos de fórmula I en donde R^{1} es un grupo alquilo de cadena lineal C_{1-10}. Como ejemplos representativos de grupos alquilo adecuados no sustituidos se incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo y octilo (por ejemplo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo y n-octilo). El hexilo, especialmente el n-hexilo, es un grupo particularmente preferido. También se prefiere en particular el metilo.

En la invención, se prefiere particularmente el uso de aquellos compuestos de fórmula I en donde R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-2} (preferiblemente un grupo alquilo C_{1}) sustituido opcionalmente por un grupo arilo.

En la invención, se prefiere todavía más el uso de aquellos compuestos de fórmula I en donde R^{1} representa un grupo alquilo (por ejemplo, alquilo C_{1-2}, especialmente alquilo C_{1}) sustituido por un grupo arilo (por ejemplo, fenilo). Los grupos R^{1} alquilo sustituidos preferidos que pueden estar presentes en los compuestos de fórmula I incluyen alquilo C_{1-6}, preferiblemente alquilo C_{1-4}, en particular preferentemente alquilo C_{1} o C_{2} (por ejemplo, alquilo C_{1}) sustituido (preferiblemente terminalmente sustituido) por un grupo arilo opcionalmente sustituido.

Por "grupo arilo" se entiende un grupo que es aromático. Los grupos arilo preferidos comprenden hasta 20 átomos de carbono, más preferiblemente hasta 12 átomos de carbono, por ejemplo, 10 ó 6 átomos de carbono.

Los grupos arilo que pueden estar presentes en los compuestos de la invención pueden ser heteroaromáticos (por ejemplo, heteroaromáticos de 5-7 miembros) pero son preferiblemente no heteroaromáticos. Por "no heteroaromático" se entiende un grupo arilo que tiene un sistema aromático que incluye electrones originados únicamente a partir de átomos de carbono. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo y naftilo, especialmente fenilo. En los compuestos preferidos para su uso en la invención pueden estar presentes uno o dos grupos arilo, preferiblemente uno.

En un aspecto preferido, la invención propone el uso de un fotosensibilizante que es un compuesto de fórmula I en donde R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-4} sustituido por un arilo (preferiblemente C_{1-2}, por ejemplo C_{1}), preferiblemente en donde dicho grupo arilo comprende hasta 20 átomos de carbono (por ejemplo hasta 12 átomos de carbono, especialmente 6 átomos de carbono) y el mismo está opcionalmente sustituido, y cada R^{2} es como se ha definido más arriba (por ejemplo cada R^{2} es hidrógeno), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención o el tratamiento del acné.

Los grupos arilo que pueden estar presentes en los compuestos de la invención pueden ser sustituidos opcionalmente por uno o varios (por ejemplo, de 1 a 5) más preferiblemente uno o dos, grupos (por ejemplo, un grupo). Preferiblemente el grupo arilo se sustituye en la posición meta o para, más preferiblemente en la posición para. Los grupos sustituyentes adecuados pueden incluir haloalquilo (por ejemplo, trifluorometilo), alcoxi (por ejemplo, grupos -OR en donde R es preferiblemente el grupo alquilo C_{1-6}), halo (por ejemplo, yodo, bromo, más especialmente cloro y flúor), nitro y alquilo C_{1-6} (preferiblemente alquilo C_{1-4}). Los grupos alquilo C_{1-6} preferidos incluyen metilo, isopropilo y t-butilo, particularmente metilo. Los grupos sustituyentes particularmente preferidos incluyen cloro y nitro. Todavía más preferiblemente el grupo arilo es no sustituido.

Los compuestos preferidos para su uso en la invención incluyen metiléster de ALA, etiléster de ALA, propiléster de ALA, butiléster de ALA, pentiléster de ALA, hexiléster de ALA, octiléster de ALA, 2-metil pentiléster de ALA, 4-metil pentiléster de ALA, 1-etilbutiléster de ALA, 3,3-dimetil-1-butiléster de ALA, benciléster de ALA, 4-isopropilbenciléster de ALA, 4-metilbenciléster de ALA, 2-metilbenciléster de ALA, 3-metilbenciléster de ALA, 4-[t-butil]benciléster de ALA, 4-[trifluorometil]benciléster de ALA, 4-metoxibenciléster de ALA, 3,4-[di-cloro]benciléster de ALA, 4-clorobenciléster de ALA, 4-fluorobenciléster de ALA, 2-fluorobenciléster de ALA, 3-fluorobenciléster de ALA, 2,3,4,5,6-pentafluorobenciléster de ALA, 3-nitrobenciléster de ALA, 4-nitrobenciléster de ALA, 2-feniletiléster de ALA, 4-fenilbutiléster de ALA, 3-piridinil-metil éster de ALA, 4-difenil-metil éster de ALA y bencil-5-[(1-acetiloxietoxi)-carbonil]amino levulinato.

Los compuestos todavía más preferidos para su uso en la invención incluyen metil éster de ALA, etiléster de ALA, benciléster de ALA, 4-isopropilbenciléster de ALA, 4-metilbenciléster de ALA, 2-metilbenciléster de ALA, 3-metilbenciléster de ALA, 4-[t-butil]benciléster de ALA, 4-[trifluorometil]benciléster de ALA, 4-metoxibenciléster de ALA, 3,4-[di-cloro]benciléster de ALA, 4-clorobenciléster de ALA, 4-fluorobenciléster de ALA, 2-fluorobenciléster de ALA, 3-fluorobenciléster de ALA, 2,3,4,5,6-pentafluorobenciléster de ALA, 3-nitrobenciléster de ALA, 4-nitrobenciléster de ALA, 2-feniletiléster de ALA, 4-fenilbutiléster de ALA, 3-piridinil-metil éster de ALA, 4-difenil-metil éster de ALA y bencil-5-[(1-acetiloxietoxi)-carbonil]amino levulinato.

Los compuestos particularmente preferidos para su uso en la invención incluyen benciléster de ALA, 4-isopropilbenciléster de ALA, 4-metilbenciléster de ALA, 2-metilbenciléster de ALA, 3-metilbenciléster de ALA, 4-[t-butil]benciléster de ALA, 4-[trifluorometil]benciléster de ALA, 4-metoxibenciléster de ALA, 3,4-[di-cloro]benciléster de ALA, 4-clorobenciléster de ALA, 4-fluorobenciléster de ALA, 2-fluorobenciléster de ALA, 3-fluorobenciléster de ALA, 2,3,4,5,6-pentafluorobenciléster de ALA, 3-nitrobenciléster de ALA, 4-nitrobenciléster de ALA, 2-feniletil éster de ALA, 4-fenilbutil éster de ALA, 3-piridinil-metil éster de ALA, 4-difenil-metil éster de ALA y bencil-5-[(1-acetiloxietoxi)-carbonil]amino levulinato.

Los compuestos especialmente preferidos para su uso en los métodos descritos en la presente invención incluyen benciléster de ALA, 4-isopropilbenciléster de ALA y 4-metilbenciléster de ALA, especialmente benciléster de ALA. 4-Nitrobenciléster de ALA, 4-clorobenciléster de ALA y benciléster de ALA son especialmente preferidos.

Los compuestos para su uso en la invención pueden prepararse mediante cualquier procedimiento convencional disponible en el arte (por ejemplo, como se describe en WO02/10120 de PhotoCure ASA). Por ejemplo, los ésteres de 5-ALA se pueden preparar mediante la reacción de 5-ALA con un alcohol adecuado en presencia de una base. Alternativamente los compuestos para su uso en la invención pueden estar disponibles comercialmente (por ejemplo, en PhotoCure ASA, Noruega).

Los compuestos para uso uso de acuerdo con el método de la invención pueden estar en forma de amina libre (por ejemplo, -NH_{2},-NHR^{2} o -NR^{2}R^{2}) o preferiblemente en forma de una sal fisiológicamente aceptable. Dichas sales son preferiblemente sales con adición de un ácido, con ácidos orgánicos o inorgánicos fisiológicamente aceptables. Como ácidos adecuados se incluyen, por ejemplo, el ácido clorhídrico, nítrico, hidrobrómico, fosfórico, sulfúrico, sulfónico y derivados del ácido sulfónico. Las sales particularmente preferidas son sales con adición de un ácido con ácido sulfónico o derivados del ácido sulfónico, como se describe en WO2005/092838 de PhotoCure ASA, cuyo contenido íntegro queda aquí incorporado por referencia. Los procedimientos para formación de la sal son convencionales en la técnica.

En la invención puede utilizarse sólo un único fotosensibilizante (por ejemplo, un derivado del 5-ALA) para el tratamiento o la prevención del acné. Alternativamente, una combinación de dos o más, preferiblemente dos, fotosensibilizantes pueden utilizarse en la misma donde al menos uno de los fotosensibilizantes es un derivado del 5-ALA o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Entre otros fotosensibilizantes que pueden ser formulados con un derivado del 5-ALA (por ejemplo, el éster 5-ALA) o co-administrado de acuerdo con la invención se incluyen:

Derivado de la hematoporfirina (HpD);

Hematoporfirinas tales como Photofrin® (Quadra Logic Technologies Inc., Vancouver, Canadá) y Hematoporfirina IX (HpIX);

Photosan III (Seehof Laboratorium GmbH, Seehof, Wesselburenerkoog, Alemania);

Clorinas tales como tetra(m-hidroxifenil)clorinas (m-THPC) y sus bacterioclorinas (Scotia Pharmaceuticals Ltd, Surrey, RU), mono-L-aspartil clorina e6 (NPe6) (Nippon Petrochemical Co., CA, EE.UU.), clorina e6 (Porphyrin Products Inc.), benzoporfirinas (Quadra Logic Technologies Inc., Vancouver, Canadá) (por ejemplo, anillo A monoácido derivado de la benzoporfirina, BPD-MA) y purpurinas (PDT Pharmaceuticals Inc., CA, EE.UU.) (por ejemplo, tin-etil etiopurpurina, SnET2); ftalocianinas (por ejemplo, zinc- (Quadra Logic Technologies Inc., Vancouver, Canadá), algunas ftalocianinas de aluminio- o silicona, que pueden ser sulfonadas, en particular ftalocianinas sulfonadas tales como disulfonato de ftalocianina de aluminio (A1PcS_{2a}) o tetrasulfonato de ftalocianina de aluminio (A1PcS_{4}));

porficenos;

hypocrelinas;

Protoporfirina IX (PpIX);

Di-éteres de hematoporfirina;

Uroporfirinas;

Coproporfirinas;

Deuteroporfirina;

Polihematoporfirina (PHP), y precursores y derivados de la misma; y antibióticos tales como la tetraciclina (por ejemplo, Topicycline®, Shire).

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Preferiblemente el segundo fotosensibilizante será una Hematoporfirina (por ejemplo, Photofrin®), una clorina (particularmente m-THPC o clorina e6) o una ftalocianina sulfonada (en particular, disulfonato de ftalocianina de aluminio o tetrasulfonato de ftalocianina de aluminio).

En otro aspecto, la invención propone, por tanto, el uso de un primer fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA como se ha definido más arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un segundo fotosensibilizante en la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención o tratamiento del acné.

En otro aspecto más, la invención propone el uso de un primer fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA, como se ha definido más arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un segundo fotosensibilizante en la fabricación de medicamentos para su uso de forma simultánea, separada o secuencial en un método para el tratamiento o prevención del acné.

En otro aspecto más, la invención propone un kit o pack que contiene un primer fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA como se ha definido más arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y separadamente un segundo fotosensibilizante para su uso de forma simultánea, separada o secuencial en un método para el tratamiento o prevención del acné.

Tal y como aquí se utiliza, "prevención" del acné significa un tratamiento profiláctico del acné.

En consecuencia, los compuestos aquí descritos se pueden utilizar de conformidad con la invención para el tratamiento de zonas de la piel que no necesariamente han desarrollado acné en el momento del tratamiento, pero que son propensas al acné. Preferiblemente, los compuestos para su uso de acuerdo con la invención son para el tratamiento del acné una vez aparecido, en particular el tratamiento del acné inflamatorio.

Tal y como aquí se utiliza, el término "acné" incluye tanto las enfermedades inflamatorias como las no inflamatorias de la unidad pilosebácea. Ante todo y sin embargo, los métodos aquí descritos serán utilizados para el tratamiento de los tipos de acné más inflamatorios en los que se ha producido la invasión bacteriana de la unidad pilosebácea o folículos. Como se ha indicado previamente, no se conoce la causa concreta del acné aunque normalmente se asocia con un aumento de la producción de sebo (los lípidos secretados por las glándulas sebáceas andrógeno-sensibles), la proliferación de bacterias tales como Propionibacterium (por ejemplo, P. acnés, P. granulosum y P. avidum), el aumento de volumen de las células epiteliales y/o el desarrollo de una inflamación (por ejemplo, coloración, hinchazón y/o pus). Los compuestos aquí descritos se utilizan preferiblemente para el tratamiento o prevención (preferiblemente para el tratamiento) del acné asociado con Propionibacterium acnes.

El acné se puede manifestar en una gran variedad de formas (véase la Figura 1 adjunta). Las características comunes del acné incluyen puntos negros (comedones) y puntos blancos. Éstos están formados por poros que se obstruyen (por ejemplo, con sebo y/o células muertas). Si el poro se mantiene abierto, se forma un punto negro (Figura 1(i)), mientras que si el poro se cierra y se inflama se forma un punto blanco (Figura 1 (ii)). Se cree que las espinillas, pústulas y quistes se forman si la pared del poro es dañada y las bacterias infectan el poro. En una espinilla, el pus se encuentra bastante cerca de la superficie de la piel (Figura 1 (iii)) mientras que en una pústula, el pus está presente más dentro del poro (Figura 1 (iv)). Los quistes son generalmente más grandes y más profundos que las pústulas y contienen una mayor cantidad de pus. Los compuestos aquí descritos pueden ser utilizados para el tratamiento o prevención de uno o más de los siguientes: puntos negros, puntos blancos, espinillas, pústulas y quistes.

El acné se clasifica en deferentes tipos dependiendo, por ejemplo, de la naturaleza, severidad y/o localización de los puntos negros, puntos blancos, espinillas, pústulas y/o quistes. Los tipos representativos de acné que pueden ser tratados de acuerdo con la invención incluyen el acné vulgar, el acné rosácea, el acné conglobata, el acné papulosa y el acné premenstrual, preferiblemente el acné vulgar que es una enfermedad inflamatoria crónica del aparato pilosebáceo. El acné puede aparecer en la espalda, en el pecho, en la parte superior de los brazos y/o en el rostro; los compuestos aquí descritos se pueden utilizar para tratar cualquiera de estas zonas del cuerpo, especialmente el rostro.

Algunas formas de acné más suaves (por ejemplo, los puntos negros y/o los puntos blancos) no siempre se consideran una "enfermedad" y el tratamiento de los mismos se puede hacer puramente por razones cosméticas. Éste podría ser el caso, por ejemplo, cuando el acné es relativamente poco frecuente y/o no se ha extendido (por ejemplo, hay unos pocos granos).

En consecuencia, vista desde otro aspecto, la invención ofrece un método de tratamiento cosmético del acné (por ejemplo, en el rostro), comprendiendo dicho método la administración (por ejemplo, aplicación a nivel tópico) en una parte afectada de un fotosensibilizante que es un derivado (por ejemplo, un éster) del ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) como se ha definido más arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la fotoactivación de dicho fotosensibilizante en la zona afectada.

Los compuestos para su uso de acuerdo con la invención pueden ser formulados de manera convencional con uno o más excipientes o vehículos fisiológicamente aceptables de acuerdo con las técnicas bien conocidas en el arte.

Las composiciones se pueden administrar sistémicamente (por ejemplo, por vía oral o parenteral) o más preferiblemente localmente (por ejemplo, mediante una inyección o más preferiblemente por vía tópica) en o cerca de la zona afectada. La vía de administración dependerá de la severidad y naturaleza del acné a tratar, la localización del acné y el fotosensibilizante (o la combinación de fotosensibilizantes) utilizados. Generalmente, no obstante, se prefiere la administración local, todavía más preferiblemente la aplicación tópica.

Las formulaciones preferidas incluyen geles, cremas, ungüentos, sprays, lociones, pomadas, barras, jabones, polvos, aerosoles, gotas, soluciones y cualquier otra forma farmacéutica convencional en el arte. Generalmente se prefieren los geles, cremas y ungüentos.

Los ungüentos, geles y cremas pueden ser formulados, por ejemplo, con una base acuosa o untuosa con la adición de agentes gelificantes y/o espesantes adecuados. Las lociones pueden ser formuladas con una base acuosa o untuosa y, en general, contendrán también uno o más agentes emulsionantes, dispersantes, de suspensión, espesantes o colorantes. Los polvos pueden formarse con ayuda de una base de polvo adecuada. Las gotas y soluciones se podrán formular con una base acuosa o no acuosa que comprenda también uno o más agentes dispersantes, solubilizantes o de suspensión. Los sprays en aerosol se distribuyen de forma conveniente en packs presurizados, con el uso de un propelente adecuado.

Las composiciones podrán incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes hidratantes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes de conservación, agentes saborizantes, potenciadores del olor y/o potenciadores de la absorción, por ejemplo, agentes que penetran en la superficie como se mencionan a continuación, y similares. Las composiciones para su uso en el método de la invención se podrán formular de forma que ofrezcan una liberación rápida, sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la administración al paciente utilizando procedimientos bien conocidos en el arte. Se podrán utilizar también agentes solubilizantes y/o estabilizantes, por ejemplo, ciclodextrinas (CD) \alpha, \beta, \gamma y HP-ciclodextrina. Las composiciones podrán presentar cualquier forma de dosificación apropiada, por ejemplo como una emulsión o en liposomas, niosomas, microesferas, nanopartículas o similares. El compuesto para su uso en la invención podrá estar por tanto absorbido, incorporado en o ligado a estas formas.

Típicamente, las composiciones para el tratamiento TFD del acné serán en forma de formulación lista para su uso como puede ser una crema o un kit consistente en un sistema de dos componentes (por ejemplo, conteniendo dos agentes fotosensibilizantes).

El pH de la formulación final estará preferiblemente dentro del rango de 2,5 a 7,4. Un pH ligeramente ácido, por ejemplo un pH 5-7, se prefiere si la formulación es una formulación lista para su uso.

La concentración de los compuestos de 5-ALA aquí descritos, en la formulación final para el tratamiento del acné, variará dependiendo de varios factores incluida la naturaleza química del compuesto, la composición química, la forma de administración y la naturaleza del acné a tratar. Generalmente, no obstante, son adecuados unos rangos de concentración entre el 0,01 y el 30% (p/p). Las concentraciones más preferidas para el tratamiento del acné con administración local están dentro del rango del 0,02 al 25% (p/p), por ejemplo, aproximadamente un 5% (p/p).

Tras la administración de una formulación farmacéutica que contenga fotosensibilizante(s), la zona a tratar se expondrá a la luz para conseguir el efecto fotosensibilizante deseado. El periodo de tiempo después de la administración en el que se produce la exposición a la luz dependerá de la naturaleza de la composición, de las condiciones en que se va a tratar y de la forma de administración. Generalmente, es necesario que el fotosensibilizante alcance una concentración de tejido efectivo en la zona del acné antes de la fotoactivación. Generalmente, esto puede requerir un tiempo de entre 0,5 y 24 horas (por ejemplo, 1 a 3 horas).

En un procedimiento de tratamiento preferido, el (los) fotosensibilizante(s) es/son aplicado(s) en la zona afectada seguido de una irradiación (por ejemplo, después de un período de aproximadamente 3 horas). Si es necesario, este procedimiento se puede repetir, por ejemplo, hasta 3 veces más, a intervalos de hasta 14 días (por ejemplo, 7-14 días). En los casos en los que este procedimiento no conduzca a una reducción satisfactoria, o a la cura completa, del acné, se podrá llevar a cabo un tratamiento adicional unos meses más tarde.

Los métodos de irradiación de las diferentes zonas del cuerpo, por ejemplo mediante lámparas o láser son muy conocidos en el arte (véase, por ejemplo, Van den Bergh, Chemistry in Britain, mayo 1986 p. 430-439). La irradiación se aplicará en general a una dosis de 40 a 200 julios/cm^{2}, por ejemplo a 100 julios/cm^{2}.

La longitud de onda de la luz utilizada para la irradiación se podrá seleccionar para alcanzar un efecto fotosensibilizante más eficaz. La luz más efectiva es la luz con un rango de longitud de onda de 300-800 nm, típicamente de 400-700 nm.

Como se ha descrito más arriba, los compuestos para su uso en la invención se podrán formular y/o administrar con otros agentes fotosensibilizantes, por ejemplo el 5-ALA u otro derivado del 5-ALA, o un derivado de la porfirina como el Photofrin®. Alternativamente, los compuestos para su uso de acuerdo con la invención podrán ser formulados y/o administrados con otros componentes activos que pueden aumentar el efecto fotosensibilizante y en consecuencia mejorar el tratamiento del acné. Por ejemplo, los agentes quelantes pueden ser incluidos y/o co-administrados de forma beneficiosa para potenciar la acumulación de Pp; la quelación de hierro mediante el agente quelante previene su incorporación dentro del Pp para formar hemo mediante la acción de la enzima ferroquelatasa, consiguiendo con ello la producción del Pp. En consecuencia, se mejora el efecto fotosensibilizante.

Los agentes quelantes adecuados incluyen los ácidos aminopolicarboxílicos, incluidos cualquiera de los quelantes descritos en la literatura para detoxificación de metal o para la quelación de iones metálicos paramagnéticos en agentes de contraste para imágenes de resonancia magnética. Debe hacerse una mención especial del EDTA, CDTA (ácido tetracético de ciclohexano diamina), DTPA y DOTA y los derivados/análogos de los mismos bien conocidos. Se prefieren en particular el EDTA y el DTPA. Para conseguir el efecto quelante de hierro, se pueden utilizar también desferrioxamina y otros sideróforos, por ejemplo, junto con los agentes quelantes del ácido aminopolicarboxílico como el EDTA.

Si está presente, el agente quelante se puede utilizar convenientemente en una concentración del 0,05 al 20%, por ejemplo entre un 0,1 y un 10% (p/p).

Los potenciadores de la penetración deben tener también un efecto beneficioso en la mejora del efecto fotosensibilizante de los compuestos para su uso en la invención. Los agentes que ayudan en la penetración en la superficie, especialmente los dialquilsulfóxidos tales como el dimetilsulfóxido (DMSO), se pueden, por tanto, incluir también en las composiciones para su uso en la invención y/o ser co-administrados. El agente que ayuda en la penetración de la superficie puede ser cualquiera de los agentes que ayudan en la penetración de la piel descritos en la literatura farmacéutica, por ejemplo, los quelatos (por ejemplo, EDTA), los surfactantes (por ejemplo, el dodecil sulfato de sodio), los no-surfactantes, las sales biliares (por ejemplo, el deoxicolato de sodio) y los ácidos grasos (por ejemplo, el ácido oleico). Como ejemplos de agentes apropiados que ayudan a la penetración en la superficie se incluyen el isopropanol, HPE-101 (disponible en Hisamitsu), DMSO y otros dialquilsulfóxidos, en particular el n-decilmetil-sulfóxido (NDMS), la dimetilsulfacetamida, la dimetilformamida (DMFA), la dimetilacetamida, los glicoles, varios derivados de la pirrolidona (Woodford et al., J. Toxicol. Cut. & Ocular Toxicology, 1986, 5: 167-177), y Azone® (Stoughton et al., Drug Dpv. Ind. Pharm. 1983, 9: 725-744), o mezclas de los mismos.

El agente de penetración en la superficie puede suministrarse convenientemente en una concentración en un rango de un 0,2 a un 50% (p/p), por ejemplo, aproximadamente un 10% (p/p).

Visto desde otro aspecto más, la invención propone, por tanto, el uso de un fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA como se ha definido más arriba (por ejemplo, un éster 5-ALA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con al menos un agente de ayuda a la penetración y, opcionalmente, uno o más agentes quelantes, en la fabricación de un medicamento o medicamentos para su uso en el tratamiento o prevención del acné.

Los compuestos para su uso en la invención pueden ser utilizados adicionalmente en combinación con otros agentes no fotosensibilizantes que mejoren el tratamiento o prevención del acné. Estos agentes incluyen uno o más agentes convencionales para el tratamiento del acné. Ejemplos representativos de dichos agentes incluyen:

Retinoides tales como acitretino, isotretiniona (por ejemplo, Isotrex®, Steifel y Roaccutane®, Roche), tretiniona (por ejemplo, Retin-A®, Janssen-Cilag) y tazaroteno;

Peróxidos tales como el peróxido de benzoílo (por ejemplo, PanOxyl®, Stiefel);

Antibióticos tales como la tetraciclina (por ejemplo, Topicycline®, Shire), clindamicina (por ejemplo, Dalacin T®, Pharmacia), eritromicina (por ejemplo, Stiemycin®, Stiefel), doxiciclina, oxitetraciclina, minociclina, trimetoprima y metronidazol; Hormonas tales como el co-ciprindiol (acetato de ciproterona con etinilestradiol), por ejemplo, Dianette®, Schering Health;

Ácido azelaico (por ejemplo, Skinoren®, Schering Health) y derivados del mismo tales como se describe en WO03/045893 de Photo Cure ASA;

Adapaleno (por ejemplo, Differin®, Galderma);

Nicotinamida (por ejemplo, Nican®, Dermal); y

Ácido salicíclico (por ejemplo, Acnisal®, DermaPharm).

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Aunque estos agentes para el tratamiento del acné pueden estar presentes como parte de la formulación, típicamente éstos se utilizarán como un tratamiento separado para ser administrado simultáneamente, por separado o secuencialmente. La administración de cualquier agente suplementario debería realizarse en términos de vía, concentración y formulación, de acuerdo con los métodos conocidos para utilizar estos agentes. Estos agentes adicionales pueden ser administrados antes, durante y después de la TFD, dependiendo de su función.

Visto desde otro aspecto más, la invención ofrece, por tanto, un producto o kit para su uso en un método de tratamiento o prevención del acné que comprende:

(a)

un primer contenedor que contiene un fotosensibilizante que es un derivado (por ejemplo, un éster) del 5-ALA como se ha definido anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b)

un segundo contenedor que contiene un agente no fotosensibilizante para el tratamiento del acné.

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También se pueden suministrar componentes adicionales del kit tales como un segundo agente fotosensibilizante, un agente de penetración en la superficie o un agente quelante tal y como se ha descrito en la presente.

Desde otro aspecto más, la invención propone, por tanto, el uso de un fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA como se ha definido más arriba (por ejemplo, un éster 5-ALA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un agente no fotosensibilizante para el tratamiento del acné en la fabricación de un medicamento o medicamentos para su uso en la prevención o tratamiento del acné.

Desde otro aspecto más, la invención propone el uso de un fotosensibilizante que es un derivado del 5-ALA como se ha definido más arriba (por ejemplo, un éster 5-ALA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un agente no fotosensibilizante para el tratamiento del acné en la fabricación de medicamentos para su uso simultáneo, separado o secuencial en un método para el tratamiento o prevención del acné.

Dependiendo de la naturaleza del acné a tratar, y de la naturaleza de cualquier agente o agentes activos adicionales a utilizar en el método de la invención, éste puede ser co-administrado con el derivado del 5-ALA, por ejemplo en una composición sencilla, o podrá ser administrado secuencialmente o por separado. Típicamente, en los casos en los que se utiliza un agente de ayuda a la penetración en la superficie, éste será administrado en una fase separada anterior a la administración de los compuestos para su uso en la invención. Cuando se utilice un agente de ayuda a la penetración en la superficie en el tratamiento previo, éste podrá ser utilizado en concentraciones altas, por ejemplo, por encima del 100% (p/p). Si se utiliza dicha fase de tratamiento previo, el agente fotosensibilizante podrá ser administrado hasta pasadas varias horas después del tratamiento previo, por ejemplo, con un intervalo de 5-60 minutos después del tratamiento previo.

La invención se describirá a continuación de forma más detallada a través de los siguientes ejemplos no limitativos, y con referencia a las figuras adjuntas, en las que:

Figura 1: muestra las diferentes fases del acné;

Figura 2: muestra los resultados de la toxicidad en la oscuridad producida por los metilésteres del ALA, hexilésteres del ALA y bencilésteres del ALA;

Figura 3: muestra los efectos fotodinámicos en la bacteria P. acnes incubada con metilésteres del ALA, hexilésteres del ALA y bencilésteres del ALA;

Figura 4: muestra los efectos fotodinámicos en la bacteria incubada con hexilésteres del ALA y bencilésteres del ALA;

Figura 5: muestra la formación de porfirina en la P. acnes después de la incubación con varias concentraciones de ésteres del ALA;

Figura 6: muestra la toxicidad en la oscuridad del hexiléster del ALA y del benciléster del ALA (la supervivencia viene indicada con relación a un control no tratado, por ejemplo, uno que no fue incubado durante 4 horas en un tampón de incubación);

Figura 7: muestra los efectos fotodinámicos en las bacterias P. granulosum y P. avidum incubadas con hexilésteres del ALA y bencilésteres del ALA;

Figura 8: muestra los efectos fotodinámicos en P. granulosum y P. avidum con lámpara de LED CureLight (comercializada bajo el nombre comercial Aktilite 128 por PhotoCure ASA) tras la incubación con hexilésteres del ALA y bencilésteres del ALA;

Figura 9: muestra la formación de porfirina en P. avidum y P. granulosum tras la incubación con bencilésteres 1 mM, bencilésteres (B), hexilésteres-(H), 3,6-dioxa-1-octilésteres- (3,6-D), 4-metilbencilésteres- (M-B) y 4-isopropilbencilésteres- (I-B) del ALA;

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Figura 10: muestra los efectos fotodinámicos en la bacteria P. acnes incubada con benciléster del ALA, 4-clorobenciléster del ALA, 4-nitrobenciléster del ALA, 2-metilbenciléster del ALA, 4-metilpentil éster del ALA y 2-metoxietil éster del ALA;

Figura 11: muestra la reducción de las lesiones inflamatorias después del tratamiento con Metvix® y TFD o la crema placebo y TFD, a las 6 y 12 semanas después del tratamiento.

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Métodos generales Cultivos de bacterias

Propionibacterium acnes (P. acnes) fue obtenida a partir de la Colección americana de Cultivos tipo (ATCC Nº 6919), y las bacterias fueron cultivadas anaeróbicamente en la oscuridad en placas agar sangre a 37ºC.

Referencias: Skerman VB et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 30: 225-420, 1980; Goodsell ME et al., Curr. Microbiol. 22: 225-230, 1991; Zierdt CH et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 18: 33-47, 1968; Douglas HD y Gunter SE, J. Bacteriol. 52: 15-23, 1946; Johnson JL y Cummins CS, J. Bacteriol. 109: 1047-1066, 1972; Wang RF et al., Appl. Environ. Microbiol. 62: 1242-1 247, 1996.

Propionibacterium granulosum (P. granulosum) fue obtenida a partir de la Colección americana de Cultivos tipo (ATCC Nº 25564).

Referencias: Johnson JL, et al., J. Bacteriol. 109(3): 1047-1066, 1972; Skerman VB, et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 30: 225-420, 1980.

Propionibacterium avidum (P. avidum) fue obtenida a partir de la ATCC (ATCC Nº 25577).

Referencias: Goodsell ME, et al., Curr. Microbiol. 22(4): 225-230, 1991; Skerman VB, et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 30: 225-420, 1980.

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Incubación con ésteres del ALA

El tampón PIPES (ca. 1 ml) se añadió a cada placa de Petri agar sangre y con ayuda de una varilla de cristal estéril y una pipeta Pasteur, la solución bacterial fue transferida a un tubo de ensayo de 20 ml. La suspensión se diluyó a continuación con un tampón PIPES hasta que la densidad óptica (OD) fue de 1,00 \pm 0,01 a 550 nm medida con un espectrofotómetro. A esta OD la densidad de la bacteria es de aproximadamente 5 x 10^{8} células por ml.

Se recogió una muestra de la bacteria (100 Pl de la suspensión conteniendo aprox. 5 x 10^{8} bacterias por ml) y se utilizó como control t = 0. Se mezclaron alícuotas de la suspensión de la bacteria con unos volúmenes adecuados de las soluciones de los ésteres de 5-ALA (conteniendo 100 mM de éster del ALA) para obtener unas concentraciones adecuadas y se incubaron durante 4 horas a 37ºC en la oscuridad. Si no se puso iluminación, la supervivencia se evaluó entonces como se describe a continuación.

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Iluminación

En algunos casos, la iluminación se realizó en las suspensiones de bacterias tratadas con ésteres del ALA. Las condiciones exactas se describen en los ejemplos que aparecen a continuación. Tras la iluminación, la supervivencia se analizó como se describe a continuación.

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Ensayo de supervivencia

Tras el tratamiento con ésteres del ALA (con o sin iluminación), se recogieron las muestras de bacterias tratadas (así como los controles no tratados) y se diluyeron a continuación con un tampón PIPES de 1 x 10^{4} bacterias por ml. A continuación, se transfirieron alícuotas de 20 ml de esta suspensión a placas de Petri Bactoagar (Futsaether et al., Can. J. Microbiol., 39(2): 180-186 1993), y se incubaron durante 3-5 días a 37ºC en la oscuridad. Se procedió al recuento de las colonias formadas en las placas de Petri Bactoagar utilizando un contador de colonias. La supervivencia de la célula después de la incubación con diferentes concentraciones de ésteres del 5-ALA aparece indicada como relativa respecto de las muestras de control (es decir, las muestras recogidas a t = 0 horas y la muestra recogida después de 4 horas de incubación sin éster del 5-ALA) y aparece indicada como porcentaje de supervivencia:

Supervivencia =

[Ctratadas/Ccontrol] x 100%

en donde C =

número de colonias.

Ejemplo 1 Toxicidad en la obscuridad

Para encontrar las condiciones adecuadas para el estudio del efecto fotodinámico en P. acnés después de la incubación con ésteres del ALA, se ha realizado un estudio para analizar la toxicidad de los ésteres. Esto se hizo en la oscuridad para evitar cualquier efecto de la TFD provocado por la luz difusa. Se analizaron las incubaciones y la supervivencia como se describe en la sección general más arriba, y los resultados aparecen en la Figura 2 adjunta.

En la Figura 2 se puede ver que el metiléster fue esencialmente no-tóxico en las concentraciones por encima de
20 mM, mientras que el hexiléster del ALA fue muy tóxico. El benciléster del ALA mostró una toxicidad intermedia.

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Ejemplo 2 TFD con lámpara de banda ancha Curelight

Las suspensiones de bacterias (P. acnes) fueron tratadas con 4 mM de metiléster del ALA, 4 mM de benciléster y 1 mM de hexiléster (debido a los resultados de elevada toxicidad en la oscuridad para este éster) como se describe en la sección general más arriba, diluidas e iluminadas utilizando una lámpara de banda ancha CureLight (disponible en PhotoCure ASA, Noruega, una luz roja de 580-740 nm y una tasa de fluencia de \leq 840 W/m^{2}) bajo unas condiciones controladas de temperatura (por ejemplo, a temperatura ambiente). Durante la iluminación se recogieron alícuotas de 2 x 20 Pl cada segundo minuto durante un total de 10 minutos y se analizó la supervivencia como se describe en la sección general anterior. Se calculó una supervivencia relativa después de la iluminación con relación a la muestra de control sin exposición a la luz roja. Los resultados se muestran en la Figura 3.

En la Figura 3 se puede ver que el benciléster del ALA fue el más efectivo para matar la bacteria, mientras que el metiléster del ALA fue el menos efectivo. Con 4 mM de benciléster del ALA, fue suficiente una dosis pequeña de aprox. 10 J/cm^{2} para aniquilar al 100%. El hexiléster del ALA fue también bastante efectivo, pero este éster se utilizó en una concentración inferior (1 mM) debido a su elevada toxicidad en la oscuridad.

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Ejemplo 3 TFD con lámpara de LED Curelight (vendida bajo el nombre comercial Aktilite por PhotoCure ASA)

Para comparar el hexiléster del ALA y el benciléster del ALA en la misma concentración (1 mM), y también para probar otra fuente de luz, se realizó otro experimento que implicaba el uso de una luz roja de banda estrecha (lámpara de 128 LED CureLight vendida bajo el nombre comercial Aktilite por Photocure ASA, Noruega). Esta lámpara consiste en 128 diodos que luz (LED) y tiene una longitud de onda pico de 634 \pm 3 nm. El espectro de emisión de la lámpara tiene una anchura a media altura (FWHM) de 18 nm. La tasa de fluencia a una distancia de 50 mm es de aprox. 50 mW/cm^{2} (la variación máx. de la tasa de fluencia de la zona objetivo es \pm 10%).

Después de la incubación con los ésteres del ALA, se irradiaron 10 ml de suspensiones bacterianas en una placa de Petri de plástico de 5,5 cm (véase la sección general más arriba). Las placas de Petri se colocaron sobre un soporte apoyado en un gran recipiente de agua a temperatura ambiente, para evitar los efectos de la temperatura. Durante la iluminación se recogieron alícuotas de 2 x 20 Pl cada segundo minuto durante un total de 10 minutos y se transfirieron a placas de Petri Bactoagar. Después de 3-5 días de incubación (a 37ºC en la oscuridad) se determinó la supervivencia como se describe en la sección general y se indicó relativa frente a la muestra de control no iluminada. Los resultados se muestran en la Figura 4.

En la Figura 4 se puede ver que 1 mM de benciléster del ALA produjo un efecto fotodinámico mucho mejor que 1 mM de hexiléster del ALA. De hecho, 26 minutos de iluminación (que corresponden a una fluencia de luz de 78 J/cm^{2}) mataron todas las bacterias incubadas con 1 mM de benciléster del ALA, pero sólo un 40% de las bacterias incubadas con 1 mM de hexiléster del ALA.

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Ejemplo 4 Formación de porfirina intracelular

Para estudiar la formación de porfirina intracelular después de la incubación con ésteres del ALA, se incubaron bacterias (5 x 10^{8} células por ml, 10 ml) con ésteres del ALA a 37ºC en la oscuridad durante cuatro horas. La formación de porfirinas fue seguida por el estudio de espectros de emisión de fluorescencia (las porfirinas muestran unos picos característicos). El procedimiento fue el siguiente:

Para calcular la cantidad de porfirinas retenidas endógenamente, se añadieron 8 ml de bacterias incubadas en el éster 5-ALA a los tubos de ensayo de plástico y se incubaron a 2-3ºC en el refrigerador para frenar la respuesta posterior del éster 5-ALA y/o la formación de porfirina. A continuación se peletizaron las células por centrifugación (5000 g, 5 min., 2-3ºC), se despreció el sobrenadante y se volvieron a suspender las células en un tampón fresco (8 ml) y se mezcló bien. Se transfirieron alícuotas de 2 ml de la suspensión bacteriana a cubetas de plástico desechables estándar, y los espectros de emisión de fluorescencia de las suspensiones de células se determinaron en un espectrómetro de fluorescencia Perkin Elmer LS 50B utilizando los siguientes parámetros:

Longitud de onda de excitación, \lambda_{x}:

405 nm

Longitud de onda de emisión, \lambda_{e}:

550-700 nm

Espectros de excitación y emisión:

5 nm

Velocidad de emisión del monocromador:

300 nm/min.

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La amplia gama de longitudes de onda medidas estuvo motivada por la necesidad de tener un control de la autofluorescencia de la bacteria, que es más fácilmente observable con longitudes de onda más bajas o más altas.

Los resultados se muestran en la Figura 5, de los que se deduce que el hexiléster del ALA fue el menos efectivo en la inducción de la formación de porfirina en el P. acnes, probablemente debido a la alta toxicidad en la oscuridad. El metiléster del ALA presentó unos niveles de porfirina ligeramente más elevados, pero el benciléster del ALA fue con diferencia el inductor más efectivo de la biosíntesis de la porfirina bacteriana.

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Ejemplo 5 Toxicidad en la oscuridad

Para encontrar las condiciones adecuadas para estudiar el efecto fotodinámico en otras dos cepas de "bacterias asociadas al acné", se realizó un estudio para determinar la toxicidad del hexiléster del ALA y del benciléster del ALA en P. granulosum y P. avidum. Esto se hizo como se describe en el Ejemplo 1, y los resultados se muestran en la
Figura 6.

En la Figura 6 se pone de manifiesto que el hexiléster del ALA fue mucho más tóxico que el benciléster del ALA y que el hexiléster a 4 mM mató el 100% de ambas cepas.

También se ha podido observar que la cepa P: granulosum no toleró particularmente bien las condiciones de incubación.

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Ejemplo 6 TFD con lámpara de banda ancha Curelight

Las suspensiones de bacterias (P. granulosum y P. avidum) fueron tratadas con 4 mM de metiléster, 4 mM de benciléster y 1 mM de hexiléster del ALA (debido a los resultados de elevada toxicidad en la oscuridad para este éster) como se describe en la sección general más arriba, diluidas e iluminadas utilizando una lámpara de banda ancha CureLight (disponible en PhotoCure ASA, Noruega - una luz roja de 580-740 nm y una tasa de fluencia de \leq 840 W/m^{2}) bajo unas condiciones controladas de temperatura (por ejemplo, a temperatura ambiente).

Utilizando el método descrito en el Ejemplo 2, se observaron los efectos de la TFD en P. granulosum y P. avidum después de la incubación con el hexiléster del ALA y el benciléster del ALA utilizando la lámpara de banda ancha CureLight (PhotoCure ASA, Noruega - luz roja de 580-740 nm y una gama de fluencia de \leq 840 W/m^{2}) bajo unas condiciones controladas de temperatura (por ejemplo, a temperatura ambiente). Los resultados se muestran en la
Figura 7.

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Ejemplo 7 Efectos de la TFD con lámpara de LED

Los efectos de la TFD en el P. granulosum y el P. avidum después de incubación con el hexiléster del ALA y el benciléster del ALA (1 mM) se observaron utilizando la lámpara de 128 LED CureLight (vendida bajo el nombre comercial Aktilite por Photocure ASA, Noruega) como se describe en el Ejemplo 3. El experimento se realizó como se describe en el Ejemplo 3, y los resultados se muestran en la Figura 8.

Ejemplo 8 Formación de porfirina

Este experimento se realizó en el P. granulosum y el P. avidum y se utilizaron los siguientes ésteres del ALA: Hexil 5-aminolevulinato, bencil 5-aminolevulinato, 3,6-dioxa-1-octil 5-amino-levulinato, 4-isopropilbencil 5-aminolevulinato y 4-metilbencil 5-aminolevulinato.

Se eligió una concentración de 1 mM para este experimento ya que el hexiléster mostró una alta toxicidad en la oscuridad a 4 mM (véase el Ejemplo 5). El experimento se realizó como se describe en el Ejemplo 4, y tanto la cantidad de porfirinas retenidas endógenamente así como la cantidad de porfirinas exógenas fue determinada mediante espectroscopio de fluorescencia.

Los resultados se muestran en la Figura 9 donde para la cuantificación se ha utilizado fluorescencia a 620 nm. Aunque había una diferencia considerable entre las dos cepas de bacterias con respecto a la formación de porfirina, de la Figura se deduce que los bencilésteres tienen la mayor capacidad para inducir la formación de porfirina seguidos del hexiléster y del 3,6-dioxa-1-octiléster.

Ejemplo 9 Toxicidad en la oscuridad

Para encontrar las condiciones adecuadas para el estudio del efecto fotodinámico en el P. acnes después de la incubación con bencil-, 4-clorobencil-, 4-nitrobencil-, 2-metilbencil-, 4-metilpentil- y 2-metoxietil 5-aminolevulinato, se ha realizado un estudio para analizar la toxicidad de los ésteres. Éste se llevó a cabo en la oscuridad, como en el Ejemplo 1, para evitar cualquier efecto de la TFD provocado por la luz difusa. Se analizaron las incubaciones y la supervivencia como se describe en la sección general más arriba, y los resultados aparecen en la Tabla 1 a continuación.

TABLA 1 Resumen de los resultados de los experimentos de toxicidad en la oscuridad. La incubación con los ésteres del ALA enumerados a continuación se produjo en 4 horas en la oscuridad, a 37ºC. La supervivencia de la célula se determinó en base a la capacidad de formar colonias en placas agar. Se presentan medias de unidades formadoras de colonias normalizadas (CFU) basadas en 5-8 experimentos independientes con un error estándar de las medias (SE)

1

Las sustancias mostraron toxicidades bastante diferentes. Los ésteres 4-nitrobencilo y 2-metoxietilo del ALA no mostraron apenas toxicidad en concentraciones de hasta 20 mM, mientras que los ésteres 4-clorobencilo y 2-metilbencilo del ALA mostraron una toxicidad considerable a 4 mM. Se observó una toxicidad baja en todas las sustancias cuando se probaron a 0,4 mM, de ahí que se eligiese esta concentración para los siguientes experimentos de la TFD.

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Ejemplo 10 Efectos de la TFD con lámpara de LED

Se estudió la inactivación fotodinámica del P. acnes después de la incubación con los ésteres de 5-ALA enumerados en el Ejemplo 9 (a una concentración de 0,4 mM) después de la iluminación con una lámpara Aktilite® 128. La lámpara y los detalles experimentales están descritos en el Ejemplo 3, y los resultados se muestran en la Figura 10.

Se puede ver en la Figura 10 que los ésteres 4-clorobencilo y 4-nitrobencilo del ALA fueron los más eficientes. De hecho, sólo se requirieron 10 minutos de iluminación para conseguir matar prácticamente el 100% después de la incubación con 0,4 mM de estos ésteres. En esta concentración, los ésteres bencilo y 2-metilbencilo del ALA mostraron una gran capacidad para matar las bacterias (10 minutos de iluminación consiguieron eliminar aprox. un 50 por ciento). Se obtuvo un efecto más débil de la TFD con los ésteres 4-metilpentilo y 2-metoxietilo del ALA.

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Ejemplo 11 Formulación de geles

Se añade hidroxietil celulosa (HEC) (150 mg, mw 720,000) al agua (10 ml) y la mezcla se remueve y se calienta a 70ºC. El HEC se disuelve y forma un gel. La mezcla se calienta a 50ºC y se añaden al gel removiendo benciléster 5-ALA HCl (300 mg) y alcohol bencílico (150 mg). La mezcla se remueve durante 5 minutos y se pone dentro de un tubo de 10 ml.

El gel contiene un 3% de benciléster 5-ALA HCl y está listo para utilizar.

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Ejemplo 12 Formulación de la crema

Se mezcla el éster isopropilbencil 5-ALA HCl (500 mg) en Ung. Merck (10 g) utilizando un mortero y una mano de mortero. La crema resulta se coloca dentro de un vial.

La crema contiene un 5% de éster isopropilbencil 5-ALA HCl y está lista para utilizar.

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Ejemplo 13 Uso clínico del metiléster del ALA

El objetivo de este estudio clínico era investigar la eficacia y la tolerabilidad de la terapia fotodinámica (TFD) después de la aplicación tópica del metiléster del ALA para el tratamiento del acné facial inflamatorio moderado.

Treinta pacientes con edades comprendidas entre los 15-28 años con acné moderado a severo fueron incluidos en un estudio ciego, prospectivo, aleatorizado, controlado con placebo y multicéntrico. Cada lado del rostro del paciente fue asignado de forma aleatoria para ser tratado con una crema que contenía 160 mg/g de aminolevulinato de metilo clorhidrato (vendido bajo el nombre comercial de Metvix® por PhotoCure ASA, Noruega) o una crema placebo y cubierto con un apósito oclusivo adhesivo (Tegaderm®, 3M u Opsite®, Smith and Nephew). Las lesiones nodulares o quísticas se prepararon utilizando una cánula (1-2 mm) para facilitar la penetración de la crema. Después de 3 horas, se quitó suavemente la crema de ambos lados del rostro inmediatamente antes de la iluminación con una luz roja no coherente utilizando la lámpara Aktilite® CL 128 (PhotoCure ASA, longitud de onda media 635 nm, dosis de luz 37 J/cm^{-2}). A continuación, se repitió la iluminación en el otro lado del rostro: El lado del rostro que no estaba siendo iluminado se cubrió cuando se iluminó el otro lado.

Se procedió a un segundo tratamiento 2 semanas después. En cada ocasión los pacientes evaluaron la intensidad del dolor utilizando una escala visual análoga de 10 cm. Como punto de partida, se contaron las lesiones de acné inflamatorias y no inflamatorias (es decir, antes de empezar el tratamiento) y 4 y 10 semanas después del último tratamiento con la TFD. El investigador evaluó la severidad global (véase la Tabla 2) del acné en un primer momento (siete pacientes tenían un acné severo al menos en un lado del rostro) y en cada visita del estudio utilizando una escala de valoración de 6 puntos. Los datos se analizaron sobre la base de intención de tratar, incluyendo los 30 pacientes.

TABLA 2 Evaluación de la severidad global del investigador

2

Los resultados del estudio se muestran en la Figura 11 en donde los resultados de cada grupo se presentan como la media proporcional (caja) y un percentil (barra) del 50% de todas las observaciones. Esto implica que para cada grupo el 25% de las observaciones están por debajo y el 25% están por encima de la barra.

Se produjo una reducción estadísticamente más significativa en el recuento de lesiones inflamatorias totales con la TFD Metvix® en comparación con la TFD placebo en la semana 12 (reducción media del 54% [95% CI 35% - 64%] frente al 20% [95% CI 8% - 50%], p = 0,0006). La TFD Metvix® estuvo asociada con más dolor que la TFD placebo, aunque su intensidad varió a lo largo de los centros y se redujo cuando se repitió el tratamiento. Los fenómenos adversos locales se correspondían con esta modalidad de tratamiento. Se puede concluir que la TFD Metvix® es efectiva para el tratamiento del acné facial inflamatorio severo.

Claims (21)

1. El uso de un fotosensibilizante que es un derivado del ácido 5-aminolevulínico (5-ALA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en la prevención o tratamiento del acné, en el que dicho fotosensibilizante es un compuesto de fórmula general I:

(I)R^{2}_{2}N-CH_{2}COCH_{2}-CH_{2}CO-OR^{1}

(donde R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido o un grupo alquilo sustituido por un grupo arilo; y cada R^{2} independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo opcionalmente sustituido).

2. El uso según se reivindica en la reivindicación 1, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido C_{1-8}, (por ejemplo, alquilo C_{1-6}) o un grupo alquilo C_{1-2} (especialmente alquilo C_{1}) substituido por un grupo arilo.

3. El uso según se reivindica en la reivindicación 1 o reivindicación 2, donde en la fórmula I cada R^{2} representa un átomo de hidrógeno.

4. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-2} (preferiblemente un grupo alquilo C_{1}) sustituido opcionalmente por un grupo arilo.

5. El uso según se reivindica en la reivindicación 4, donde dicho compuesto es seleccionado entre metiléster del ALA, benciléster del ALA o benciléster del ALA sustituido.

6. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-2} (por ejemplo, alquilo C_{1-2}, especialmente C_{1}) sustituido por un grupo arilo (por ejemplo, fenilo).

7. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-4} sustituido por arilo (preferiblemente alquilo C_{1-2}, por ejemplo C_{1}), preferiblemente donde dicho grupo arilo comprende hasta 20 átomos de carbono (por ejemplo hasta 12 átomos de carbono) y el mismo está opcionalmente sustituido, y cada R^{2} es como se ha definido en la reivindicación 1 (por ejemplo, cada R^{2} es hidrógeno).

8. El uso según se reivindica en la reivindicación 7, donde dicho compuesto es seleccionado entre benciléster del ALA, 4-isopropilbenciléster del ALA, 4-metilbenciléster del ALA, 2-metilbenciléster del ALA, 3-metilbenciléster del ALA, 4-[t-butil]benciléster del ALA, 4-[trifluorometil]benciléster del ALA, 4-metoxibenciléster del ALA, 3,4-[di-cloro]benciléster del ALA, 4-clorobenciléster del ALA, 4-fluorobenciléster del ALA, 2-fluorobenciléster del ALA, 3-fluorobenciléster del ALA, 2,3,4,5,6-pentafluorobenciléster del ALA, 3-nitrobenciléster del ALA, 4-nitrobenciléster del ALA, 2-feniletil éster del ALA, 4-fenilbutil éster del ALA, 3-piridinil-metil éster del ALA, 4-difenil-metil éster del ALA y bencil-5-[(1-acetiloxietoxi)-carbonil]aminolevulinato.

9. El uso según se reivindica en la reivindicación 6 ó 7, donde dicho compuesto es seleccionado entre el benciléster del ALA o el benciléster del ALA sustituido (por ejemplo, 4-nitrobencil éster del ALA o 4-clorobencil éster del ALA).

10. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido (preferiblemente alquilo C_{1-8}, por ejemplo, alquilo C_{1-6}).

11. El uso como se reivindica en la reivindicación 10, donde dicho compuesto es seleccionado entre el metiléster del ALA, etiléster del ALA, propiléster del ALA, butiléster del ALA, pentiléster del ALA, hexiléster del ALA, octiléster del ALA, 2-metil pentiléster del ALA, 4-metil pentiléster del ALA, 1-etilbutiléster del ALA, 3,3-dimetil-1-butiléster del ALA.

12. El uso según se reivindica en la reivindicación 10, donde dicho compuesto es seleccionado entre el metiléster del ALA, hexiléster del ALA y 4-metil pentiléster del ALA (preferiblemente metiléster del ALA).

13. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde dicho acné está asociado con el Propionibacterium acnes, Propionibacterium avidum o Propionibacterium granulosum.

14. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde dicho acné es seleccionado entre el acné vulgar, acné rosácea, acné conglobata, acné papulosa y acné premenstrual, preferiblemente acné vulgaris.

15. El uso de un fotosensibilizante como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un segundo fotosensibilizante en la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención o tratamiento del acné.

16. Un kit o pack que contiene un fotosensibilizante como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y de forma separada un segundo fotosensibilizante para su uso de forma simultánea, separada o secuencial en un método para el tratamiento o prevención del acné.

17. El uso de un fotosensibilizante como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con al menos un agente de ayuda a la penetración en la superficie, y opcionalmente uno o más agentes quelantes, en la fabricación de un medicamento o medicamentos para su uso en el tratamiento o prevención del acné.

18. El uso de un fotosensibilizante tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un agente no fotosensibilizante para el tratamiento del acné en la fabricación de un medicamento o medicamentos para su uso en la prevención o tratamiento del acné.

19. Un producto o kit para su uso en un método de tratamiento o prevención del acné que comprende:

(a)

un primer contenedor que contiene un fotosensibilizante tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b)

un segundo contenedor que contiene un agente no fotosensibilizante para el tratamiento del acné.

20. Un método de tratamiento cosmético del acné (por ejemplo, en el rostro), comprendiendo dicho método la administración en una parte afectada del cuerpo de un fotosensibilizante como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la fotoactivación de dicho fotosensibilizante en la zona afectada.

21. Un fotosensibilizante tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en la prevención o tratamiento del acné.