ES2336649T3 - Procedimiento de cribado de agentes susceptibles de tratar la obesidad. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento de cribado in vitro o realizado en un mamífero no humano de agentes susceptibles de reducir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en un sujeto obeso o predispuesto a la obesidad, que comprende las siguientes etapas: - medir las tasas de expresión o la actividad de la proteína SPARC en presencia y eventualmente en ausencia del agente que va a someterse a prueba, - determinar si la expresión o la actividad de la proteína SPARC se reduce en presencia del agente que va a someterse a prueba con respecto a un control, - eventualmente, identificar el agente que reduce la expresión o la actividad de la proteína SPARC.
Description
Procedimiento de cribado de agentes susceptibles
de tratar la obesidad.
La presente invención tiene por objeto un
procedimiento de cribado de agentes susceptibles de tratar, de
manera preventiva o curativa, la obesidad o uno de los trastornos
asociados con la obesidad. También se refiere a un procedimiento de
diagnóstico de la obesidad o de uno de los trastornos asociados con
la obesidad siguiendo la expresión de la proteína SPARC o de su
actividad. Se refiere a una composición que comprende al menos un
agente que modula la expresión o la actividad de la proteína SPARC.
También se refiere al uso de cualquier agente que module la
expresión o la actividad de la proteína SPARC para la preparación de
una composición farmacéutica destinada a tratar, de manera
preventiva o curativa, la obesidad o uno de los trastornos asociados
con la obesidad.
La obesidad resulta de un desequilibrio positivo
de larga duración entre la energía almacenada y la energía gastada.
La obesidad es un trastorno fisiopatológico mayor que puede estar
asociado con numerosas enfermedades, tales como trastornos
cardiovasculares, incluyendo hipertensión y arterosclerosis,
trastornos metabólicos, tales como diabetes, hiperinsulinemia,
resistencia a la insulina y ciertos tipos de cáncer. En los Estados
Unidos, se estima que más del 30% de la población adulta es obesa,
es decir que presenta un peso de más del 20% superior al peso
estimado como normal. Numerosas indicaciones tienden a demostrar que
la obesidad está convirtiéndose en un problema de salud
mundial.
mundial.
Se admite que el peso de un cuerpo está
determinado por múltiples interacciones entre genes y factores
ambientales, tales como el régimen alimenticio, el estado
psicológico y la frecuencia de actividad física. Se reconoce que,
para numerosos casos, un régimen alimenticio y ejercicio físico no
son suficientes para perder peso, esto es tanto más cierto en las
personas predispuestas genéticamente a volverse obesas. Numerosos
genes parecen contribuir en efecto a la patogénesis de la obesidad.
Así, recientemente han podido identificarse genes específicos de la
obesidad en el ser humano. No obstante, las mutaciones identificadas
hasta ahora sólo permiten explicar una proporción mínima de los
síndromes de la obesidad.
Por consiguiente, resulta necesario analizar la
expresión específica de genes en el tejido adiposo que pueden
explicar los mecanismos que contribuyen a esta desregulación en las
personas obesas. Los genes que presentan una expresión alterada
pueden, por tanto, ser una diana particularmente adaptada para el
diagnóstico o el tratamiento, curativo o preventivo, de la
obesidad.
Así, tras diferentes estudios, los autores de
esta invención han descubierto que la proteína SPARC ("Secreteó
Protein Acidic and Rich in Cysteine", "proteína secretada
ácida y rica en cisteína", también conocida con el nombre de
osteonectina y de BM-40) la secreta el adipocito
blanco, que su expresión es más elevada en modelos de ratón
"obeso" que en modelos de ratón "delgado" y que su
expresión puede regularse en función del régimen administrado.
La proteína SPARC es una glicoproteína asociada
con la matriz extracelular ampliamente distribuida en los tejidos
humanos en el transcurso del desarrollo. Se describe que regula la
morfogénesis, la proliferación y la diferenciación celular. Aunque
todavía no queda claro su papel específico, su alto grado de
conservación entre las especies sugiere una presión elevada para
conservarla a lo largo de la evolución. En la solicitud de patente
WO98/20112, se describe que un ratón transgénico carente del gen
SPARC tiene tendencia a la hiperglucemia. También se describe un
procedimiento de tratamiento de trastornos asociados con una
subexpresión de SPARC, tales como especialmente diabetes,
cataratas, osteoporosis y proteinuria, introduciendo en las células
del mamífero que padece este trastorno un polinucleótido que
codifica la proteína SPARC.
La presente invención tiene, por tanto, por
objeto un procedimiento de cribado in vitro o realizado en un
mamífero no humano de agentes susceptibles de reducir la expresión
o la actividad de la proteína SPARC en un sujeto obeso o
predispuesto a la obesidad, mediante la modulación de la tasa de
expresión o de la actividad de la proteína SPARC.
Con respecto a la prevención de la obesidad, en
efecto puede ser interesante tratar con ayuda de agentes así
identificados a sujetos a los que se les ha diagnosticado que están
predispuestos a la obesidad antes de que presenten un peso
demasiado elevado.
Más específicamente, este procedimiento de
cribado comprende las siguientes etapas:
- medir las tasas de expresión o la actividad de
la proteína SPARC en presencia y eventualmente en ausencia del
agente que va a someterse a prueba,
- determinar si la tasa de expresión o la
actividad de la proteína SPARC se reduce en presencia del agente
que va a someterse a prueba con respecto a un control.
- eventualmente, identificar el agente que
reduce la tasa de expresión o la actividad de la proteína SPARC.
O bien se administra directamente el agente que
va a someterse a prueba por vía enteral o parenteral al mamífero,
generalmente no humano, después se realiza entonces la medición en o
a partir de un material biológico de dicho mamífero, tal como una
célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma, un
tejido o un extracto de tejido. O bien se pone en contacto el
agente que va a someterse a prueba con un extracto biológico, tal
como especialmente una célula, un extracto celular, un fluido
corporal, suero, plasma, un tejido, un receptor o un extracto de
tejido y entonces se realiza directamente la medición, habiendo
tenido lugar la extracción de dicho extracto biológico antes de
dicha puesta en contacto.
Esta tasa de expresión o esta actividad puede
medirse a partir de un extracto biológico; tal como especialmente
una célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma,
un tejido, un receptor o un extracto de tejido. Evidentemente, el
extracto o el material usado debe poder expresar o responder a una
actividad de la proteína SPARC. De preferencia, el extracto o el
material usado procede de un tejido adiposo o de un fluido
corporal, tal como suero o plasma. Por ejemplo, en el caso de las
células, se prefiere medir la expresión o la actividad de la
proteína SPARC en adipocitos o células de músculo estriado. Por
tanto esta medición puede requerir que se extraiga previamente el
órgano o una parte del órgano del mamífero que va a someterse a
prueba. De preferencia, el órgano o la parte del órgano extraído
comprende un tejido adiposo. Más particularmente, el tejido adiposo
es tejido adiposo abdominal o músculo esquelético.
Según la etapa siguiente, se determina si se
modula la tasa de expresión o la actividad de SPARC. Así, puede
analizarse si se aumenta o reduce en presencia del agente que va a
someterse a prueba con respecto a la misma prueba en ausencia del
agente que va a someterse a prueba (control). Esta modulación
también puede determinarse en el tiempo. Así, el agente que va a
someterse a prueba puede, por ejemplo, añadirse a las células o
administrarse a un animal y se extraen muestras sucesivamente en el
tiempo para determinar la evolución en el tiempo de la expresión o
de la actividad de la proteína SPARC. En este caso, el control
corresponde a una medición de la tasa de expresión o de la
actividad de la proteína SPARC en presencia del agente, pero
realizada en un momento diferente.
La expresión o la actividad asociada con la
proteína SPARC puede modularse de diferentes maneras. La modulación
de su expresión puede corresponder a la modulación de la tasa de
expresión de la proteína SPARC o de su gen. La actividad de la
proteína SPARC corresponde más particularmente a su actividad
biológica propia o a su señalización, es decir a las consecuencias
biológicas que conlleva su actividad biológica. La modulación de su
señalización puede corresponder a la modulación de un efecto
biológico debido a la proteína SPARC, especialmente bloqueando un
sitio activo de la proteína SPARC o modificando su conformación
modulando así uno de sus efectos biológicos.
Así, los procedimientos de medición que pueden
usarse son numerosos y son los conocidos por el experto en la
técnica. Pueden mencionarse especialmente el procedimiento ELISA
(que mide la tasa de expresión de la proteína), los procedimientos
de análisis de transferencia de tipo Northern o de PCR cuantitativa
(que miden la tasa de expresión de ARNm), los procedimientos de
análisis bioquímicos mediante la medición de la proliferación o de
la diferenciación celular, o mediante análisis microscópico sobre la
morfogénesis del tejido estudiado (en este caso, debe realizarse
previamente una correlación entre la morfogénesis del tejido,
material o extracto biológico, y la tasa de expresión o la
actividad de la proteína SPARC).
De preferencia, se mide la expresión o la
actividad de la proteína SPARC circulante o de tejido adiposo.
Si es necesario, se define la naturaleza del
agente que modula según el procedimiento de la presente invención
la expresión o la actividad de la proteína SPARC.
Los autores de la presente invención han podido,
por tanto, demostrar que la expresión de la proteína SPARC es más
elevada en modelos de ratón "obeso" que en modelos de ratón
"delgado". Teniendo en cuenta esos resultados, resulta posible
establecer una relación entre agentes susceptibles de tratar la
obesidad y su capacidad para reducir la expresión o la actividad de
la proteína SPARC. No obstante, puede considerarse, como en el caso
de la leptina que puede sobreexpresarse en las personas obesas, un
tratamiento que usa la proteína o un agente que aumenta su
expresión como agente terapéutico.
Así, el agente que aumenta o que reduce la tasa
de expresión o la actividad de la proteína SPARC puede usarse para
tratar la obesidad o uno de los trastornos asociados con la
obesidad, presentando la obesidad o uno de los trastornos asociados
con la obesidad una sobreexpresión de la proteína SPARC.
Más particularmente, estos agentes así
identificados son susceptibles de tratar, de manera preventiva o
curativa, la obesidad o uno de los trastornos asociados con la
obesidad, tales como especialmente hipertensión, arteriosclerosis,
diabetes (generalmente diabetes tipo 2), hiperinsulinemia y
resistencia a la insulina, o más globalmente el síndrome metabólico
de resistencia a la insulina (SMRI). De preferencia, estos agentes
son susceptibles de tratar, de manera preventiva o curativa, la
obesidad.
De preferencia, la expresión o la actividad de
la proteína SPARC corresponde a la de la proteína SPARC circulante
o de tejido adiposo. Así, la proteína SPARC se convierte en una
herramienta de diagnóstico.
Este procedimiento puede permitir seguir la
evolución de uno de esos trastornos. En efecto, puede resultar
necesario durante un tratamiento farmacéutico seguir la evolución de
uno de esos trastornos por medio del seguimiento del nivel de
expresión o de actividad de la proteína SPARC.
\newpage
Así, el control puede ser el material que va a
diagnosticarse pero cuya medición de la expresión o de la actividad
de la proteína SPARC se realiza antes o después de la medición de la
expresión o de la actividad de la proteína SPARC del material que
va a diagnosticarse. Entonces se obtiene una evolución en el tiempo
de la expresión o de la actividad de la proteína SPARC. El control
puede ser un ser humano que no presenta uno de esos trastornos.
Entonces se obtiene una comparación directa de las tasas de
expresión o de la actividad de la proteína SPARC de un ser humano
que no presenta uno de esos trastornos y de un ser humano que va a
diagnosticarse. Así, si se observa un aumento de la tasa de
expresión o de actividad de la proteína SPARC en dicho material que
va a diagnosticarse, dicho material procede de un ser humano obeso
o por lo menos predispuesto a serlo o de un ser humano que presenta
uno de los trastornos asociados con la obesidad. A partir de estos
resultados, realizando esta prueba varias veces de manera espaciada
en el tiempo, puede seguirse la evolución en el tiempo de uno de
esos trastornos diagnosticados, especialmente con el objetivo de
realizar un seguimiento de la eficacia o la ineficacia de un
tratamiento seguido por esta persona.
El material que va a diagnosticarse puede ser
uno de los extractos biológicos extraídos, tal como se describieron
anteriormente, de un ser humano. El extracto puede ser, por tanto,
una célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma,
un tejido o un extracto de tejido. Evidentemente, el material o el
extracto usado debe poder expresar o responder a una actividad de
la proteína SPARC.
La medición de la expresión o de la actividad de
la proteína SPARC es tal como se describió anteriormente.
La obesidad y los trastornos relacionados con la
obesidad están más particularmente relacionados con una
sobreexpresión de la proteína SPARC.
Por vía enteral, se entiende más particularmente
la vía oral o rectal. Por vía parenteral, se entiende más
particularmente una inyección o una aplicación tópica sobre la piel,
especialmente por medio de un parche.
De preferencia, el agente modula la expresión o
la actividad de la proteína SPARC circulante o en el tejido
adiposo.
Ahora se presentarán ejemplos concretos pero no
limitativos de la invención.
Para detectar los cambios de expresión de ARNm
en el tejido adiposo blanco del modelo de ratón obeso GTG, se
realizó la clonación mediante hibridación sustractiva y PCR
supresiva usando, según el protocolo del fabricante, el kit de
sustracción de ADNc PCR-select (de la sociedad
Clontech, Palo Alto, CA, EE.UU.).
Se obtuvo el modelo de ratón
"goldthioglucose" (GTG, tioglucosa de oro) mediante
administración en doble inyección de "tioglucosa de oro" en un
ratón macho OF-1 (de la sociedad
Iffa-Credo) de tres semanas de edad, tal como se
describe en la publicación de Marchand-Brustel Y.
et al., (1978) Am. J. Physiol. 234:
E348-358.
Se usan ratones machos OF-1 a
modo de comparación.
Se usan 2 \mug de ARNm de tejido adiposo
blanco epididimario de 4 ratones "obesos" GTG (peso de 60 \pm
3 g) como "material de prueba" y 2 \mug de ARNm de tejido
adiposo blanco epididimario de 8 ratones OF-1
"delgados" (peso de 35 \pm 2 g) como "material de
comparación".
Tras la hibridación, se amplificaron
selectivamente transcritos diferenciales mediante PCR supresiva, tal
como se describe en la publicación de Diatchenko, L. et al.,
(1999). Methods Enzymol. 303: 349-80. Se subclonaron
los productos de PCR en el vector pCR 2.1 usando el kit de
clonación TOPO TA (Invitrogen, Groningen, Países Bajos). Se
seleccionaron al azar clones transformados y se purificaron los
plásmidos usando columnas QIAprep (Qiagen).
Se determinaron secuencias de ADNc parcial y se
compararon con ayuda de las secuencias disponibles en la base de
datos GenBank y bases de datos de EST (expressed sequence tag,
etiqueta de secuencia expresada) de ratón usando el programa de
búsqueda de homología BLAST.
Así, este análisis reveló una secuencia
correspondiente precisamente a la de la región 3' no traducida del
gen SPARC de ratón (véase Mason, I. J. et al., (1986) EMBO J.
5: 1465- 1472).
Se obtuvo la sonda de ADNc de longitud completa
que codifica la proteína SPARC de ratón mediante transcripción
inversa (RT-PCR) a partir de tejido adiposo blanco
usando el kit de RT-PCR en una etapa
Super-Script según las recomendaciones del
fabricante (Life Technologies).
Una hibridación de tipo Northern con una sonda
de ADNc de longitud completa que codifica la proteína SPARC
confirmó la tasa elevada del transcrito principal de SPARC (2,2 kb)
en el tejido adiposo blanco del ratón GTG "obeso", siendo esta
tasa de 5 veces a 6 veces más elevada que en el ratón "delgado"
OF-1.
También se examinó la expresión de ARNm de SPARC
en el hígado y el músculo esquelético, otros dos tejidos que
responden a la insulina y que están implicados en la homeostasis de
la glucosa.
En los dos tipos de ratón, no se observó ninguna
expresión de SPARC en el hígado. Por el contrario, se detectó ARNm
en los músculos pero a un nivel más bajo que en el tejido adiposo.
No obstante, la cantidad expresada de ARNm de SPARC en este tejido
era equivalente en los dos tipos de ratón.
También se examinó la expresión de SPARC en
diferentes tejidos de ratón "delgado". Resulta que el tejido
adiposo marrón expresa ARNm de SPARC y que uno de los tejidos
principales que expresa los transcritos de SPARC en el ratón adulto
es el tejido adiposo blanco.
También se estudió la expresión de ARNm de SPARC
en el ratón ob/ob y su control "delgado"
(respectivamente ratón macho C57BL/6OIaHsd ob/ob y ratón
macho C57BL/6OIaHsd +/?, de 4-10 semanas de edad de
Harlan France).
El ratón ob/ob produce una leptina no
funcional y presenta como consecuencias una hiperfagia, una obesidad
importante, una hiperinsulinemia y una resistencia a la
insulina.
Un análisis de transferencia de tipo Northern,
realizado según protocolos convencionales, del ARN total de tejido
adiposo blanco de ratón "obeso" ob/ob y de ratón
"delgado" hibridado con una sonda de ADNc de longitud completa
que codifica la proteína SPARC reveló dos especies de ARNm de 4 y
2,2 kb, siendo la última el mensajero
principal.
principal.
En el ratón ob/ob, los dos transcritos se
indujeron aproximadamente 4 veces más que en el ratón "delgado"
de control. Esto demuestra que la expresión del gen SPARC es
elevada en el tejido adiposo del ratón ob/ob.
Estos resultados muestran que la modulación del
ARNm de SPARC en el tejido adiposo no está limitada a la forma
adquirida de la obesidad, tal como en el modelo GTG, y que esta
expresión elevada no depende de una señalización intacta de la
leptina.
Junto con los adipocitos, el tejido adiposo
contiene otros tipos celulares diferentes, incluyendo preadipocitos,
células endoteliales, células del músculo liso, fibroblastos,
mastocitos y macrófagos.
Para determinar la fuente de expresión de la
proteína SPARC en el tejido adiposo, se realizaron experimentos de
separación celular.
Para hacer eso, se extrajeron tejidos
epididimarios a partir de ratón ob/ob y de ratón
"delgado" (+/?), después se trataron mediante una colagenasa
(Liberase Blendzyme 3 de Roche Molecular Biochemicals,
Indianápolis), después se sometieron a una centrifugación
diferencial para separar las células adiposas (sobrenadante) de las
células no adiposas (fracción de estroma vascular en el fondo).
Se aisló el ARN total usando TRIzol según las
instrucciones del fabricante (Life Technologies), se cuantificó el
ARN midiendo la absorbancia a 260 nm.
Se determinó la cantidad de ARNm de SPARC
asociada con cada una de esas fracciones celulares mediante
RT-PCR.
Los resultados muestran que la mayor parte del
ARNm de SPARC se encuentra en la fracción de los adipocitos y que
esta expresión es más elevada en los adipocitos de los ratones
"obesos" que en los de los ratones "delgados".
También se detectó el ARNm de SPARC en la
fracción de estroma vascular, pero en menor cantidad. Por tanto, la
expresión de ARNm de SPARC y su aumento en el tejido adiposo de los
ratones "obesos" se encuentran en los adipocitos.
Para mejor comprender la modulación de la
proteína SPARC en la obesidad, se estudió la expresión del gen SPARC
en un modelo de obesidad inducida mediante un régimen
particular.
Se realizó un estudio del desarrollo de la
obesidad con una cepa AKR predispuesta a la obesidad en respuesta a
un régimen con un alto contenido en grasas.
Estos ratones AKR/OIaHsd (West et al.,
(1992). Am. J. Physiol. 262: R1025-R1032) de 5
semanas de edad reciben o bien un régimen que contiene un 12% de
calorías procedentes de grasas, o bien un régimen con un alto
contenido en grasas (Teklad Adjusted Calories TD 97363, Harlan
Teklad, Madison WI) que contiene un 21% en peso de lípidos de leche
anhidra, lo que corresponde a un 42% de calorías procedentes de
grasas.
Durante 10 semanas de régimen con un alto
contenido en grasas, se pesó a estos ratones dos veces por semana.
Tras 3, 6 y 10 semanas de régimen, se sometieron los ratones a
eutanasia y se retiraron inmediatamente las partes grasas
epididimarias, se pesaron y se trataron para extraer el ARN total.
Se aisló el ARN total usando TRIzol según las instrucciones del
fabricante (Life Technologies), se cuantificó el ARN midiendo la
absorbancia a 260 nm.
Con un peso inicial igual, tras 10 semanas, los
ratones que habían seguido un régimen con una tasa elevada de
grasas habían ganado 15,3 \pm 1,5 g, los demás ratones que habían
seguido un régimen normal ganaron 10,5 \pm 1,4 g. Además, el peso
de las partes grasas epididimarias era cuatro veces más elevado en
los ratones que habían seguido un régimen con un alto contenido en
grasas que en los que habían seguido un régimen normal.
Mediante análisis de transferencia de tipo
Northern, tras diez semanas de estos regímenes, la tasa del
transcrito principal de SPARC era tres veces más elevada en los
ratones que habían seguido un régimen con un alto contenido en
grasas que en los que habían seguido un régimen normal.
En paralelo, se estudió la expresión del gen
SPARC en función del tiempo, tras 3, 6 y 10 semanas de régimen con
un alto contenido en grasas. Entre 3 y 6 semanas, la tasa de ARNm de
SPARC aumentó de manera significativa. Tras 10 semanas, la tasa de
ARNm de SPARC tenía tendencia a reducirse, pero seguía siendo más
elevada que la observada tras tres semanas del mismo régimen.
Así, esto demuestra que la tasa de ARNm aumenta
en un modelo de obesidad obtenida mediante un régimen específico y
este aumento llega bastante pronto en el desarrollo de la
obesidad.
El aumento de la expresión del gen SPARC en el
tejido adiposo es característico de la obesidad genética o
adquirida, inducida por hiperfagia o por un régimen con un alto
contenido en grasas.
Mediante análisis de inmunotransferencia, se
constató que la tasa de proteína SPARC en los adipocitos de ratones
"obesos" ob/ob es de 3 veces a 4 veces más elevada que
en el ratón "delgado". Estos resultados demuestran que este
aumento de la proteína está de acuerdo con el aumento de la
expresión de su gen.
SPARC es una molécula secretada, se realizó un
análisis ex vivo de la capacidad de los adipocitos para secretar la
proteína SPARC.
Se midió la concentración de antígeno SPARC en
un medio condicionado durante 16 horas de adipocitos de ratas
recién aislados mediante ELISA específico para SPARC. Se observó una
cantidad aproximadamente siete veces más elevada de proteína SPARC
en el medio condicionado en comparación con el medio de control.
Por tanto, las células adiposas maduras producen
y secretan la proteína SPARC.
Además, se encontró que la insulina inyectada en
ratones aumenta la expresión del mensajero de la proteína SPARC en
el tejido adiposo.
Como la expresión elevada de SPARC en los
adipocitos está asociada probablemente con el aumento de la masa
adiposa en la obesidad, se realizó un estudio sobre la expresión de
SC1, una proteína relacionada con la proteína SPARC, para ver si
esta expresión también estaba modulada en el tejido adiposo de
ratones "obesos".
Las proteínas SPARC y SC1 (también conocida con
el nombre de hevina) proceden de una pequeña familia de proteínas
que están definidas por un dominio N-terminal
variable, seguido por dos dominios conservados, un dominio como la
folistatina y un dominio que se une al calcio. La proteína SC1
presenta una gran similitud con la proteína SPARC (70% de similitud
a nivel de los aminoácidos) y se ha considerado para compensar
funcionalmente el déficit de proteína SPARC en los ratones
transgénicos carentes del gen SPARC.
Por tanto, tras un análisis mediante
RT-PCR, y al contrario que el ARNm de SPARC, la
expresión de ARNm de SC1 en los ratones ob/ob y GTG
"obesos" no aumenta en estos modelos. Esto muestra que la
expresión adipocitaria alterada de SPARC tiene consecuencias
funcionales específicas en la obesidad.
Claims (8)
1. Procedimiento de cribado in vitro o
realizado en un mamífero no humano de agentes susceptibles de
reducir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en un
sujeto obeso o predispuesto a la obesidad, que comprende las
siguientes etapas:
- -
- medir las tasas de expresión o la actividad de la proteína SPARC en presencia y eventualmente en ausencia del agente que va a someterse a prueba,
- -
- determinar si la expresión o la actividad de la proteína SPARC se reduce en presencia del agente que va a someterse a prueba con respecto a un control,
- -
- eventualmente, identificar el agente que reduce la expresión o la actividad de la proteína SPARC.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el agente que va a someterse a prueba se
administra directamente por vía enteral o parenteral al mamífero,
después se realiza la medición en, o a partir de, un material
biológico de dicho mamífero.
3. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el agente que va a someterse a prueba se
pone en contacto con un extracto biológico y entonces se realiza
directamente la medición, habiendo tenido lugar la extracción de
dicho extracto biológico antes de dicha puesta en contacto.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el extracto
o el material usado proceden de un tejido adiposo o de un fluido
corporal, tal como suero o plasma.
5. Procedimiento según la reivindicación
anterior, caracterizado porque el tejido adiposo es tejido
adiposo abdominal o tejido adiposo del músculo esquelético.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la
expresión o la actividad de la proteína SPARC es la expresión de la
proteína SPARC o de su gen.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque se mide la
expresión o la actividad de la proteína SPARC circulante o de
tejido adiposo.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el
procedimiento de medición usado se elige del procedimiento ELISA,
un procedimiento de análisis de transferencia de tipo Northern o de
PCR cuantitativa, un procedimiento de análisis bioquímico mediante
la medición de la proliferación o de la diferenciación celular y
una análisis microscópico sobre la morfogénesis del material o
extracto biológico estudiado.
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