ES2324438A1 - Metodo para la obtencion de plaquetas. - Google Patents
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Abstract
Método para la obtención de plaquetas. El método parte de la extracción de sangre periférica de la flexura del brazo con un tubo de extracción sanguínea (1) provisto de un émbolo (2) con su correspondiente vástago (3) que facilita la extracción, de manera que tras dicha extracción se utiliza en mismo tubo para la fase de centrifugación de la sangre previa rotura del vástago (3) y cierre del tubo con su tapón (4). La centrifugación se lleva a cabo con el tubo (1) en situación invertida, es decir con su tapón (4) orientado hacia el fondo de la centrifugadora (5), de manera que los glóbulos rojos se acumulan junto a dicho tapón, lo que permite a término del centrifugado y tras la retirada de dicho tapón, expulsar al exterior dichos glóbulos rojos mediante accionamiento sobre el embolo (2), quedando en el tubo (1) un suero sobrenadante rico en plaquetas, que se somete a una segunda fase de centrifugación para eliminación de los glóbulos rojos residuales, obteniéndose finalmente un concentrado de plaquetas que se decanta en un tubo limpio para su posterior utilización.
Description
Método para la obtención de plaquetas.
La presente invención se refiere a un nuevo
método para la obtención de plaquetas, a partir de sangre, mediante
separación de las mismas en un concentrado rico en ellas.
El objeto de la invención es conseguir una
notable simplificación en el proceso de concentración de las
plaquetas, con un protocolo reproducible en cualquier
centrifugadora, y en un proceso cerrado, en el que la sangre
permanece en el mismo tubo, lo que minimiza el riesgo de
contaminación.
Desde un punto de vista general, cualquier
método para la obtención de plaquetas comienza con la extracción de
sangre periférica de la flexura del brazo, y a partir de aquí
pueden establecerse dos grandes grupos de métodos, unos que
necesitan gran cantidad de sangre, del orden de cincuenta
centímetros cúbicos, y otros que necesitan una cantidad mucho menor
y que, en este aspecto, son los mas deseables.
El inconveniente fundamental de las técnicas
actuales en las que se necesita poca cantidad de sangre consiste en
que se trata de métodos muy difíciles de reproducir, en los que
existe además un considerable riesgo de contaminación de las
muestras, ya que es necesario pipetear en los tubos para hacer la
separación de las diferentes fracciones de sangre. Además los rangos
de velocidad de centrifugación, o lo que es lo mismo la fuerza de la
gravedad o fuerza centrífuga residual a la que se someten, no está
muy acotada y los diferentes métodos tienen un amplio espectro de
velocidades sin llegar a una en común.
Esto supone que el resultado final de muchos de
ellos sea un coagulo de fibrina y no realmente un concentrado de
plaquetas, con lo que los resultados finales de su aplicación
clínica no son uniformes y existe controversia respecto de su
utilidad debido a que no puede asegurarse la cantidad de plaquetas
existente en dicho coágulo.
Parte de esta problemática se resuelve con los
métodos que utilizan gran cantidad de sangre, ya que estos son
métodos cerrados en los que la contaminación es menos posible. Sin
embargo la gran cantidad de sangre que necesitan los invalidan para
procedimientos clínicos con escasa disponibilidad de sangre,
requiriendo además de unos consumibles desechables excesivamente
caros, lo que a su vez los hace inviables en procesos clínicos de
patologías pequeñas o mas sencillas debido a su alto coste.
El método que la invención propone resuelve de
forma plenamente satisfactoria la problemática anteriormente
expuesta, ya que perteneciendo al grupo de los que requieren de
poca cantidad de sangre evita la problemática inherente a estos
últimos a la vez que ofrece las ventajas de los métodos
convencionales con utilización de gran cantidad de sangre.
Para ello y de forma más concreta el método de
la invención parte de la utilización de tubos de extracción
sanguínea citratados, con la particularidad de disponer de un
embolo que facilita la extracción de sangre. Con dichos tubos se
realiza la extracción, y a continuación se procede a la rotura del
vástago para accionamiento del embolo de los mismos, en orden a
utilizar los mismos tubos para la fase de centrifugación de la
sangre, de manera que la obtención y la centrifugación de la misma
se llevará a cabo en el mismo recipiente, lo que supone la
evitación de riesgos de contaminación por trasvase de la misma.
En función del problema clínico planteado en
cada caso, más concretamente en función de la cantidad necesaria de
plaquetas para solucionar dicho problema, será necesario extraer
entre dos y seis tubos de sangre de cinco centímetros cúbicos de
capacidad.
De acuerdo con otra de las características de la
invención los citados tubos, en lugar de situarse en la
centrifugadora con su tapón de apertura orientado hacia arriba, se
disponen en posición inversa, de forma que al terminar la fase de
centrifugación quedan situados en la parte más próxima al tapón de
apertura los elementos de mayor peso, concretamente los glóbulos
rojos, mientras que por encima de ellos queda un suero sobrenadante
en el que se encuentra el concentrado de plaquetas.
Esta fase operativa de centrifugado se lleva a
cabo durante tres minutos, en sangre base de 800 g.
Al terminar la fase de centrifugado se procede a
la eliminación de los glóbulos rojos, que se desechan en un tubo
sucio, eliminación que se lleva a cabo colocando unas palomillas en
el tubo e impulsando el embolo del mismo de manera que pueda verse
como a través de la extremidad correspondiente del tapón van
saliendo los glóbulos rojos, manteniéndose la presión hasta que se
observe que la fase roja solo ocupe el tapón, momento en el que se
interrumpe la presión y se desconectan las palomillas.
El producto restante, es decir el suero
sobrenadante se somete a nueva fase de centrifugado a 500 g durante
ocho minutos, depositándose los posibles restos de glóbulos rojos
en la parte inferior del tubo, es decir junto al tapón y justo por
encima del concentrado de plaquetas.
Los 500 mililitros mas próximos al tapón de
salida serán los que albergan el concentrado de plaquetas y los que
se decantan en un tubo limpio para su posterior utilización o el
recipiente del injerto donde se coagulará con cloruro cálcico como
en el resto de métodos de obtención.
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Para complementar la descripción que se está
realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las
características del invento, de acuerdo con un ejemplo preferente
de realización práctica del mismo, se acompaña como parte
integrante de dicha descripción, un juego de dibujos en donde con
carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo
siguiente:
Figura 1: muestra un detalle en perspectiva de
la fase de extracción de sangre superficial, en la que se observa
la utilización de un tubo provisto de embolo para facilitar la
extracción.
Figura 2: muestra la fase de acoplamiento de los
tubos a la centrifugadora, inmediatamente previa al
centrifugado.
Figura 3: muestra el resultado de dicha fase de
centrifugado, concretamente la estratificación en el seno de los
tubos de los distintos componentes sanguíneos.
Figura 4: muestra el proceso de decantación de
las fases sanguíneas.
Figura 5: muestra, finalmente y mediante una
perspectiva como en el caso de las figuras anteriores, el plasma
rico en plaquetas obtenido por el procedimiento de invención tras
un trasvase a un segundo tubo convencional.
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De acuerdo con las figuras reseñadas, el método
comienza con una fase de extracción de sangre periférica, de la
flexura del brazo, tal como muestra la figura 1, para lo que se
utiliza un tubo de extracción sanguínea citratado (1), como los
comercializados por Sarstedt S-monovette ref.
21.067.001, tubos que tienen la peculiaridad de incorporar un
émbolo (2), con su correspondiente vástago de accionamiento (3), que
facilita la extracción de sangre, estando además dicho tubo
provisto del correspondiente tapón (4).
Tras la extracción de sanguínea se procede a la
rotura del vástago (3), de manera que el tubo pueda ser introducido
en una máquina centrifugadora (5), tal como muestra la figura 2, es
decir que se utiliza el mismo recipiente para la extracción y para
la centrifugación, minimizando el riesgo de contaminación de la
sangre.
Tal como muestra también la figura 2, el tubo o
los tubos (1) se introducen en la centrifugadora (5) con el tapón
de apertura (4) orientado hacia abajo, tras haberles sacado todo el
aire, en contra de lo que es convencional, de manera que los
componentes de mayor peso de la sangre y por efecto de la propia
centrifugación, se sitúan en las proximidades del tapón. Esto trae
consigo que los glóbulos rojos, que son precisamente los de mayor
peso, se sitúen cerca del tapón en situación de fácil eliminación,
mientras que el suero sobrenadante con las plaquetas se sitúa a un
nivel interior a término de dicha fase de centrifugación, que se
realiza en base de 800 g durante un tiempo de tres minutos.
Colocando unas palomillas sobre el tapón del
tubo y manteniendo la posición vertical para evitar que se mezcle
actuando sobre el émbolo (2), por ejemplo colocando unas palomillas
sobre el tubo, van saliendo al exterior los glóbulos rojos, que se
desechan en un tubo sucio (9), manteniendo la presión en el seno
del tubo principal hasta la observación de que sólo quedan glóbulos
rojos en el tapón, momento en el que se interrumpe la presión y se
desconectan las palomillas, ya que el resto del contenido del tubo
es el portador de las plaquetas.
Seguidamente se somete a este suero resultante a
una nueva fase de centrifugado, a 500 g durante un tiempo de ocho
minutos, de manera que los posibles restos de glóbulos rojos se
sitúan en la parte inferior del tubo, justo por encima del
concentrado en plaquetas.
Los 500 mililitros mas próximos al tapón de
salida (4) son los que albergan el concentrado en plaquetas, el
cual debe someterse finalmente a una fase de decantación en un tubo
limpio (6) donde nuevamente se establece una posible sedimentación
de glóbulos rojos residuales (7) en su fondo, y por encima de él,
el concentrado en plaquetas (8), listo para su utilización.
Como se deduce de lo anteriormente expuesto el
protocolo correspondiente al método de la invención resulta
fácilmente reproducible en cualquier centrifugadora (5) no
necesitando elementos específicos y complicados para su puesta en
práctica.
Paralelamente el método de la invención minimiza
el riesgo de contaminación ya que es un proceso cerrado en el que
la sangre permanece en el mismo tuvo desde el momento de la
extracción hasta el momento de la obtención del concentrado de
plaquetas, y solo sale de dicho tubo para ser utilizado.
Finalmente simplifica la obtención del
concentrado de plaquetas ya que no es necesario ni pipetear la
sangre de unos tubos a otros ni utilizar complicados y costosos
sistemas de separación que encarecen el producto.
El protocolo es de fácil, simple y corto
aprendizaje, obteniendo resultados muy fiables y aptos para su
utilización en procesos clínicos.
Claims (4)
1. Método para la obtención de plaquetas, del
tipo de los que parten de una fase inicial de extracción de sangre
periférica, preferentemente de la flexura del brazo,
caracterizado porque dicha fase de extracción de sangre se
lleva a cabo en tubos citratados provistos de un émbolo que
facilita su extracción, habiéndose previsto que tras dicha
extracción se proceda a la rotura del vástago de accionamiento del
citado émbolo del tubo, y la introducción del propio tubo de
extracción en una máquina centrifugadora, con la especial
particularidad de que dicho tubo se introduce en la centrifugadora
en posición invertida, es decir con su tapón de apertura orientado
hacia el fondo de la centrifugadora, de manera que los elementos de
la sangre de mayor peso quedan situados en las proximidades de
dicho tapón, habiéndose previsto que a término de la fase de
centrifugado y tras la retirada temporal del tapón, se proceda al
accionamiento del émbolo del tubo para impulsar al exterior del
mismo los glóbulos rojos acumulados junto a dicho tapón,
manteniéndose la presión sobre el émbolo hasta la observación del
cambio de color producido por la separación entre los glóbulos
rojos y el concentrado de plaquetas, momento en el que se procede
nuevamente al cierre del tubo con el citado tapón, y a una segunda
fase de centrifugado para eliminación de posibles restos de
glóbulos rojos, tras cuya segunda fase de centrifugación y su
siguiente eliminación de los restos de glóbulos rojos, el
concentrado de plaquetas se decanta en un tubo limpio para su
posterior utilización.
2. Método para la obtención de plaquetas, según
reivindicación 1ª, caracterizado porque la primera fase de
centrifugación se lleva a cabo en sangre base 800 g durante un
tiempo de tres minutos.
3. Método para la obtención de plaquetas, según
reivindicaciones anteriores caracterizado porque el suero
sobrenadante de la primera fase de centrifugado se somete a un
segunda fase de centrifugado en 500 g durante
ocho minutos.
ocho minutos.
4. Método para la obtención de plaquetas, según
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque en función
de la capacidad de plaquetas necesaria para la solución de cada
problema clínico específico se utilizan entre dos y seis tubos
citratados de cinco centímetros cúbicos.
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ES2324438B1 (es) | 2010-05-25 |
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