ES2311558T3 - Uso de inhibidores de la il-13 para el tratamiento de tumores. - Google Patents
Uso de inhibidores de la il-13 para el tratamiento de tumores. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2311558T3 ES2311558T3 ES01989341T ES01989341T ES2311558T3 ES 2311558 T3 ES2311558 T3 ES 2311558T3 ES 01989341 T ES01989341 T ES 01989341T ES 01989341 T ES01989341 T ES 01989341T ES 2311558 T3 ES2311558 T3 ES 2311558T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- tumor
- subject
- inhibitor
- cells
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/208—IL-12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K2039/55527—Interleukins
- A61K2039/55538—IL-12
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Uso de un inhibidor de IL-13, en el que dicho inhibidor comprende una región de unión a IL-13 de un receptor de IL-13 o es un anticuerpo que se une a IL-13, para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de un tumor en un sujeto, donde dicho tumor se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de pulmón y linfoma.
Description
Uso de inhibidores de la IL-13
para el tratamiento de tumores.
La invención se refiere de manera general a
composiciones para inhibir el crecimiento de un tumor por inhibición
de la expresión o actividad de IL-13 y/o de la
actividad de células T NK.
La citocina IL-13 se ha
implicado en varias actividades biológicas. Estas actividades
incluyen, por ejemplo, la inducción de la conmutación de IgG_{4}
e IgE, la inducción de la transcripción de la cadena pesada
\varepsilon de IgE en la línea germinal, la expresión de CD23 en
células B humanas normales y la inducción de la proliferación de
células B en presencia de CD40L o mAb anti-CD40.
IL-13 comparte algunas
propiedades funcionales con la citocina IL-4. Aunque
muchas actividades descritas de IL-13 son similares
a las de IL-4, IL-13 no tiene
efectos promotores del crecimiento sobre clones de células T o
células T activadas.
IL-13 presenta ciertas
actividades biológicas por interacción con un receptor de
IL-13 ("IL-13R") en la
superficie de células diana. IL-13R y el receptor de
IL-4 ("IL-4R") comparten un
componente común, que es necesario para la activación de
receptores. Sin embargo, IL-13 no se une a células
transfectadas con el receptor de IL-4.
La invención se basa en parte en el
descubrimiento de que la administración de un inhibidor de
IL-13 a un sujeto o la alteración de la función de
células T NK en un sujeto inhiben la reaparición del tumor. Por
consiguiente, se incluye en la invención un uso de un inhibidor de
IL-13 para la fabricación de un medicamento para
inhibir el crecimiento de un tumor en un sujeto, en el que dicho
tumor se selecciona de cáncer de mama, cáncer de pulmón y
linfoma.
Preferiblemente, el inhibidor de
IL-13 es un inhibidor no tóxico. Por ejemplo,
preferiblemente el inhibidor carece de una porción citotóxica tal
como una exotoxina de Pseudomonas, ricina, abrina y toxina de
Diphtheria.
En algunas realizaciones, el inhibidor es un
ligando para un polipéptido de IL-13. Un ejemplo de
un ligando de IL-13 adecuado es un polipéptido que
incluye una región de unión a IL-13 de un receptor
de IL-13.
Preferiblemente, el polipéptido también incluye
un polipéptido de inmunoglobulina. En algunas realizaciones, el
inhibidor es una proteína de fusión que incluye una porción soluble
del receptor de IL-13 de mamíferos (por ejemplo, de
ratón o humano) y una región de un polipéptido IgG_{1} humano. Un
ligando de IL-13 preferido es
sIL-13R\alpha2.Fc, que se describe en Donaldson
et al., J. Immunol. 161: 2317-24, 1998.
Otro inhibidor adecuado es un antagonista de
IL-13, por ejemplo, un anticuerpo antagonista que se
une a un polipéptido de IL-13. El anticuerpo puede
ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal. Pueden
prepararse anticuerpos contra IL-13 usando
procedimientos conocidos en el estado de la técnica. Por ejemplo,
puede usarse un polipéptido de IL-13 para inmunizar
animales con el fin de obtener anticuerpos policlonales y
monoclonales que reaccionen específicamente con la proteína
IL-13 y que pueden inhibir la unión de
IL-13, o de fragmentos de la misma, con el
receptor. Dichos anticuerpos pueden obtenerse usando la
IL-13 completa como inmunógeno, o mediante el uso
de fragmentos de IL-13, tal como la
IL-13 madura soluble. También pueden usarse
fragmentos más pequeños de IL-13 para inmunizar
animales. Los inmunógenos peptídicos pueden contener además un
residuo de cisteína en el extremo carboxilo terminal, y están
conjugados a un hapteno tal como la hemocianina de lapa
californiana (KLH). Pueden generarse inmunógenos peptídicos
adicionales mediante reemplazo de residuos de tirosina por residuos
de tirosina sulfatados. Se conocen en el estado de la técnica
procedimientos para sintetizar dichos péptidos, por ejemplo, como
se describe en Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85,
2149-2154, 1963.
El crecimiento o la aparición de tumores también
se inhibe mediante el bloqueo de la actividad de una célula T NK
restringida por CD1. Preferiblemente, el inhibidor se une a una
molécula de CD1. Ejemplos de inhibidores que se unen a CD1 incluyen
anticuerpos anti-CD1 u otros ligandos
anti-CD1 solubles. Se conocen en la técnica
anticuerpos anti-CD1 y se describen en, por ejemplo,
Roark et al., J. Imm. 160: 3121-27, 1998.
En otra realizaciones, el inhibidor se une a un
marcador específico de células T NK. Un ejemplo de un marcador
específico de células T NK es un polipéptido V\alpha24. Un ejemplo
de este inhibidor es un anticuerpo contra un polipéptido
V\alpha24. El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o un
anticuerpo policlonal y puede prepararse usando los métodos
descritos anteriormente. Se describen anticuerpos que reconocen el
polipéptido V\alpha24 en, por ejemplo, Prussin et al., J.
Immunol.159, 5862-70, 1997.
El inhibidor puede administrarse para inhibir el
crecimiento de un tumor primario, un tumor metastásico o ambos. De
esta manera, en algunas realizaciones, el inhibidor se administra
antes de la detección de un tumor primario en el sujeto, por
ejemplo, para inhibir el crecimiento de un tumor primario. En otras
realizaciones, el inhibidor se administra después de la detección
de un tumor primario en el sujeto, por ejemplo, para inhibir la
reaparición de un tumor primario o para inhibir la metástasis.
En realizaciones preferidas, el inhibidor se
administra en una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento
de un tumor en el sujeto. Por ejemplo, el inhibidor puede
administrarse en una cantidad terapéuticamente eficaz. Por
"cantidad terapéuticamente eficaz" se entiende la cantidad
total de cada componente activo de la composición o método
farmacéutico que es suficiente para mostrar un beneficio
significativo para el paciente, por ejemplo, mejoría de los
síntomas de, curación de, o una disminución en el tamaño u otra
propiedad de un tumor.
El sujeto puede ser, por ejemplo, un mamífero
tal como un ser humano, perro, gato, caballo, vaca, cerdo o roedor
(por ejemplo, un ratón o rata).
El sujeto puede presentar un riesgo elevado de
desarrollo de un tumor. Por "riesgo aumentado" se entiende que
es más probable que el sujeto desarrolle un tumor que un control de
la misma edad que se diferencie en uno o más factores genéticos o
factores ambientales, o ambos. Por ejemplo, el sujeto puede tener un
alelo de un gen que predisponga al sujeto a un riesgo aumentado de
un tumor. El sujeto puede haber heredado el alelo, es decir, el
sujeto puede tener una historia familiar de riesgo aumentado de
desarrollo de un tumor. Los alelos pueden encontrarse en
protooncogenes o en genes supresores de tumores del sujeto. Ejemplos
de protooncogenes incluyen, por ejemplo, genes ras y genes myc.
Ejemplos de genes supresores de tumores incluyen, por ejemplo, un
gen de retinoblastoma, un gen p53, un gen BRCA, un APC y un gen DCC.
Las condiciones ambientales pueden incluir las que exponen al sujeto
a carcinógenos conocidos o sospechosos.
Preferiblemente, el tumor que se va a tratar es
un tumor recurrente, es decir, un tumor que está sometido a
inmunovigilancia. Ejemplos de tipos de tumor adecuados incluyen
carcinomas, sarcomas o cánceres de las células sanguíneas. Por lo
tanto, el tumor puede ser un tumor de mama, de pulmón y un linfoma
(tal como linfoma de Burkitt).
Si se desea, el inhibidor puede administrarse
junto con un régimen o regímenes de tratamiento adicionales
destinados a inhibir el crecimiento tumoral. Por ejemplo, el régimen
de tratamiento adicional puede incluir la administración de un
segundo agente que inhiba el crecimiento tumoral. Un segundo agente
adecuado es uno que aumente los niveles de interferón gamma en el
sujeto. El segundo agente puede ser el propio interferón gamma.
El inhibidor y el segundo agente (si se desea)
pueden proporcionarse en la forma de una composición farmacéutica.
Puede usarse cualquier vía de administración y programa de
dosificación adecuado para administrar el inhibidor, o una
composición farmacéutica que incluya el inhibidor. Cuando el
inhibidor se administra por vía oral, el inhibidor puede estar en
forma de un comprimido, cápsula, polvo, solución o elixir. Cuando se
administra en forma de comprimido, la composición farmacéutica de
la invención puede contener además un vehículo sólido tal como
gelatina o un adyuvante. El comprimido, cápsula y polvo contienen
aproximadamente del 5 al 95% de inhibidor y, preferiblemente,
aproximadamente del 25 al 90% de inhibidor. Cuando se administra en
forma líquida, puede añadirse un vehículo líquido tal como agua,
vaselina, aceites de origen animal o vegetal tales como aceite de
cacahuete, aceite mineral, aceite de soja o aceite de sésamo, o
aceites sintéticos. La forma líquida de la composición farmacéutica
puede contener además solución salina fisiológica, dextrosa u otra
solución de sacáridos, o glicoles tales como etilenglicol,
propilenglicol o polietilenglicol. Cuando se administra en forma
líquida, la composición farmacéutica contiene aproximadamente del
0,5 al 90% en peso de inhibidor y, preferiblemente, aproximadamente
del 1 al 50% de inhibidor.
Cuando se administra una cantidad
terapéuticamente eficaz de inhibidor por inyección intravenosa,
cutánea o subcutánea, el inhibidor estará en forma de una solución
acuosa parenteralmente aceptable libre de pirógenos. La preparación
de dichas soluciones proteicas parenteralmente aceptables, teniendo
en cuenta el pH, la isotonicidad, la estabilidad y similares, está
dentro del conocimiento del experto en la materia. Una composición
farmacéutica preferida para inyección intravenosa, cutánea o
subcutánea debería contener, además de inhibidor, un vehículo
isotónico tal como Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de
Ringer, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio, Inyección de
Ringer Lactato u otro vehículo conocido en la técnica. La
composición farmacéutica de la presente invención también puede
contener estabilizantes, conservantes, tampones, antioxidantes u
otros aditivos conocidos por los expertos en la materia.
La cantidad del inhibidor en la composición
farmacéutica de la presente invención dependerá de la naturaleza y
gravedad de la afección que se trate, y de la naturaleza de
tratamientos anteriores a los que se haya sometido el paciente. En
última instancia, el médico a cargo decidirá la cantidad de
inhibidor con la que tratar a cada paciente individual.
Inicialmente, el médico a cargo administrará dosis reducidas de
inhibidor y observará la respuesta del paciente. Pueden
administrarse dosis mayores de inhibidor hasta que se obtenga el
efecto terapéutico óptimo para el paciente, y en ese momento
generalmente la dosificación no se aumenta más. Se contempla que
las diversas composiciones farmacéuticas usadas para practicar el
método de la presente invención deberían contener de
aproximadamente 0,1 \mug a aproximadamente 100 mg de inhibidor por
kg de peso corporal. Los intervalos preferidos incluyen
dosificaciones de aproximadamente 100 \mug a 6 mg, y de 20 \mug
a 500 \mug por kg de peso corporal.
La duración de la terapia intravenosa usando la
composición farmacéutica de la presente invención variará
dependiendo de la gravedad de la enfermedad que se trate, de la
condición y la respuesta potencial idiosincrásica de cada paciente
individual.
En última instancia, el médico a cargo decidirá
la duración apropiada de la terapia intravenosa usando la
composición farmacéutica de la presente invención. En algunas
realizaciones, el inhibidor se proporciona en una composición de
liberación retardada. La composición de liberación temporizada puede
incluir una micropartícula.
Se conocen en la técnica micropartículas que
incluyen las descritas en, por ejemplo, la patente US Nº 6.013.258.
El material adecuado a incluir en micropartículas incluye material
polimérico tal como ácido
poli-láctico-co-glicólico
(PLGA).
Si se desea, el inhibidor puede administrarse
junto un segundo agente, o agentes adicionales que potencien una
respuesta inmune. Los agentes adicionales incluyen, por ejemplo,
adyuvantes, citocinas (tales como IL-12) y
GM-CSF.
También pueden usarse otros procedimientos de
administración convencionales, por ejemplo, transferencia
biolística o tratamiento ex vivo. En el tratamiento ex
vivo, por ejemplo, pueden obtenerse células presentadoras de
antígeno (CPA), células dendríticas, células mononucleares de sangre
periférica o células de médula ósea, de un paciente o un donante
apropiado y activarse ex vivo con las composiciones
inmunogénicas, y después devolverse al pacien-
te.
te.
A menos que se defina otra manera, todos los
términos técnicos y científicos usados en la presente memoria
tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente un
experto en la materia a la que pertenece la invención. Aunque
pueden usarse procedimientos y materiales similares o equivalentes a
los descritos en la presente memoria, en la práctica o ensayo de la
presente invención, se describen a continuación procedimientos y
materiales
adecuados.
adecuados.
Otras características y ventajas de la invención
serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y de
las reivindicaciones.
Las Fig. 1A y 1B son gráficos que muestran el
desarrollo de tumores en ratones tratados con
anti-CD4 a diferentes periodos de tiempo.
Las Fig. 2A y 2B son gráficos que muestran el
desarrollo de tumores en ratones IL-4 KO,
IL-4R y STAT6 KO.
Las Fig. 3A-3C son gráficos que
muestran la producción de citocinas de células T de ratones BALB/c a
los que se ha inyectado 5-12RM con estimulación
anti-CD3.
Las Fig. 4A y 4B son gráficos que muestran el
efecto del inhibidor de IL-13 sobre la reaparición
de tumores.
La Fig. 5A es una representación de un
electroforetograma que muestra la expresión de ARNm de
IL-13 e IL-4 en células
CD4^{+}.
Las Fig. 5B y 5C son histogramas que muestran la
producción de IL-13 e IL-4 por
células CD4^{+} NK1.1^{+} y CD4^{+} NK1.1^{-}.
Las Fig. 6A-6C son histogramas
que muestran la producción de citocinas de células T CD4^{+} de
ratones BALB/c de tipo salvaje y ratones KO para CD1 a los que se ha
inyectado 15-12RM con estimulación
anti-CD3.
La Fig. 7 es un gráfico que muestra el
desarrollo de tumores en ratones KO para CD1.
Las Fig. 8A-8C son gráficos que
muestran la actividad de CTL de ratones KO para CD1 a los que se ha
inyectado 15-12RM.
La Fig. 9 es un gráfico que muestra la respuesta
de CTL en células expuestas a una vacuna peptídica de VIH,
GM-CSF y un inhibidor de IL-13 o un
péptido de control.
La invención proporciona composiciones para
inhibir el crecimiento tumoral en un sujeto.
Se descubrió que la administración de una forma
soluble de un receptor de IL-13 inhibía la
reaparición de tumores en un sistema de modelo murino. De una forma
similar, se ha descubierto que la inhibición de la actividad de
células T NK inhibe la reaparición de tumores en el sistema modelo.
Estos resultados sugieren que los ligandos para el polipéptido
IL-13 y células T NK actúan para inhibir respuestas
inmunes, tales como las implicadas en la vigilancia tumoral. Se
potenciaron respuestas inmunes mediante la inhibición de la función
de IL-13 y/o de la función de las células T NK.
\newpage
Las composiciones pueden usarse para inhibir el
crecimiento de tumores primarios o el crecimiento de tumores
secundarios (metástasis) en el sujeto. Por ejemplo, las
composiciones son adecuadas para el uso en un sujeto al que se le ha
diagnosticado un tumor primario para prevenir el crecimiento
adicional del tumor primario. Como alternativa, o adicionalmente,
las composiciones descritas en la presente memoria también pueden
usarse para inhibir el desarrollo de metástasis del tumor
primario.
La invención se ilustrará adicionalmente en los
siguientes ejemplos.
Este ejemplo describe estudios que identifican a
IL-13 como un inhibidor importante de la
inmunovigilancia de tumores. Se presentan por primera vez estudios
que demuestran que el tratamiento de ratones con anticuerpos contra
moléculas CD4 inhibe la vigilancia tumoral mediada por células T
citotóxicas (CTL) si se administran en los 10 días posteriores a la
inyección de células tumorales. A continuación se presentan estudios
que demuestran que la reaparición de tumores se produjo en ratones
KO para IL-4, pero no en ratones KO para
IL-4R o ratones KO para el transductor de señales y
activador de la transcripción (STAT) 6. Estos resultados sugieren
que la IL-13 está implicada en la reaparición de
tumores. Estos resultados se basan en la demostración de que
ratones con niveles reducidos de CD-4 producían
menores niveles de IL-13, así como en los datos que
muestran que la administración de (sIL-13Ra2.Fc),
un inhibidor de IL-13, inhibe la reaparición de
tumores.
Para los estudios descritos en la presente
memoria, se adquirieron ratones BALB/c hembra de Charles River
Breeding Laboratories (Frederick, MD). Se obtuvieron ratones
knock out (KO) para IL-4
(Noben-Trauth et al., Transgenic Res 5:
487-91, 1996) en un fondo genético BALB/c del
Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). La cepa de ratón BALB/c
congénica para el locus C57BL/6 NK1.1 fue proporcionada por los
Dres. Anthony Scalzo y Wayne Yokayama (Scalzo et al,
Immunogenetics 41: 148-51, 1995). Los ratones
C57BL/6, KO para IL-4R (Noben-Trauth
et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 94:
10838-43, 1997), KO para el transductor de señales y
activador de la transcripción (STAT) 6 (Kaplan et al.,
Immunity 4: 313-9, 1996) y KO para CD1 (Smiley et
al., Science 275: 977-9, 1997) que tenían el
fondo genético BALB/c se criaron en condiciones libres de patógenos.
Todos los ratones se mantuvieron en un animalario libre de
patógenos y se usaron a las 6-10 semanas de edad.
Todos los experimentos animales fueron autorizados por el Comité de
Uso y Cuidado de Animales del Instituto Nacional del Cáncer
(NCI).
Se generaron células tumorales
15-12RM por transfección de fibroblastos 3T3 de
BALB/c primero con HIV-1 IIIB gp160 y después con
los genes ras y myc mutantes para hacerlas oncogénicas (Matsui et
al, J. Immunol. 163: 184-193, 1999). Estas
células y células 3T3 de BALB/c de control transfectadas sólo con
Neo (18Neo) (Takahashi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
85: 3105-09, 1988) se mantuvieron en medio completo
de células T (CTM) que consistía en RPMI1640 con FCS al 10%,
L-glutamina, piruvato sódico, aminoácidos no
esenciales, penicilina, estreptomicina y
2-mercaptoetanol 5 x 10^{-5} M que contenía
geneticina (200 \mug/ml) (Sigma, St. Louis, MO).
Se obtuvieron mAb purificados CD4
anti-ratón de rata (GK1.5 (Wilde et al., J.
Immunol. 131: 2178-2183, 1983)) del Frederick
Cancer Research and Development Center, NCI (Frederick, MD). El
inhibidor de IL-13, una proteína de fusión de
IL-13R\alpha2 murino e IgG1 humana
(sIL-13R\alpha2.Fc) se preparó como se ha descrito
anteriormente (Donaldson et al., J Immunol 161:
2317-24, 1998) y se obtuvo del Research Support Team
at Genetics Institute, Cambridge, MA. Se obtuvieron
anti-CD3 (2C11 (Leo et al., Proc. Natl Acad.
Sci. USA 84: 1374-78, 1987)),
anti-CD28 (37.51), anti-CD4
conjugado a FITC (GK1.5) y anti-NK1.1 conjugado a PE
(PK136) de Pharmingen (San Diego, CA). Se adquirieron perlas
magnéticas anti-la, anti-CD11b,
anti-CD11c, anti-DX5,
anti-CD4 y anti-CD8 de Miltenyi
Biotec Inc (Auburn, CA). Se obtuvo IL-2 de ratón
recombinante de Pharmingen. Se adquirió trizol, kit de síntesis de
ADNc SuperScript y SuperMixture para PCR de Life Technologies
(Rockville, MD).
Se inyectaron un millón de células
15-12RM en 200 \mul de PBS por vía subcutánea en
el flanco derecho del ratón. Para reducir el número de células
CD4^{+} in vivo, se inocularon ratones por vía
intraperitoneal con 0,2 ml de PBS que contenía 0,5 mg de
anti-CD4 o IgG de rata de control (Sigma, St. Louis,
MO), como se indica. En algunos experimentos, los ratones se
trataron día sí, día no, durante 8 días con 0,2 mg de inhibidor de
IL-13 (slL-13R\alpha2.Fc) mediante
inyección intraperitoneal en 0,1 ml de PBS.
Para la activación in vitro de células T,
células T CD4^{+} y células T NK CD4^{+}, se recubrieron placas
de 96 pocillos con anti-CD3 (10 \mug/ml) durante
una noche a 4ºC. Las placas se lavaron tres veces con PBS antes del
uso. Se prepararon suspensiones de una sola célula de esplenocitos
de ratones a los que se había inyectado 15-12RM a
diferentes momentos después de la inyección. Se seleccionaron
negativamente células T a partir de esplenocitos mediante el uso de
perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos para Ia, CD11b, CD11c
y DX5. Se obtuvieron células T CD4+ por reducción del número de
células CD8^{+} a partir de células T mediante el uso de perlas
magnéticas anti-CD8. Las células se cultivaron a una
densidad de 1 x 10^{5}/pocillo de una placa de 96 pocillos en 200
\mul de CTM. Dos días después de la estimulación, se recogieron
100 \mul de medio de cultivo de cada pocillo y se almacenaron a
-70ºC hasta la medición de citocinas. En algunos experimentos, se
estimularon células T CD4^{+} (1 x 10^{6}/pocillo) con células L
transfectadas con CD1 (Chen et al., J Immunol 159:
2240-9, 1997) o células L (2 x 10^{4}/pocillo) con
anti-CD28 (10 \mug/ml) e IL-2 (20
unidades/ml). Después de una semana, se recogió el medio de cultivo
y se almacenó a -70ºC hasta la medición de citocinas.
Se aislaron células de bazo de ratones C57BL/6 o
ratones BALB/c congénicos para el locus NK1.1 haciéndolas pasar a
través de una columna de enriquecimiento de CD4 (Cedar Lane,
Westbury, NY) y después se seleccionaron para células T CD4^{+}
NK1.1^{+} o CD4^{+} NK1.1^{-} mediante el uso de FACStar
(Becton Dickinson, Mountain View, CA). Para detectar ARNm de
citocinas, las células se cultivaron a una densidad de 1 x
10^{5}/pocillo de una placa de 96 pocillos en 200 \mul de CTM.
Ochos horas después de la estimulación, se recogieron las células
de cada pocillo y se almacenaron a -70ºC hasta la extracción del
ARN. Para la medición de citocinas, se estimularon 2 x 10^{4}
células purificadas en placas de 96 pocillos recubiertas con 10
\mug/ml de cada uno de los mAb anti-CD3 y
anti-CD28. Se recogieron los sobrenadantes a las 48
horas y se ensayaron para determinar IL-4,
IL-13 e IFN-\gamma.
La concentración de IL-4,
IL-13 (R&D, Minneapolis, MA o Endogen, Woburn,
MA), IFN-\gamma (R&D) en el sobrenadante de
cultivo se determinó mediante un kit de ELISA de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Todas las muestras se ensayaron por
triplicado.
Se midió la actividad citotóxica de células T
CD8^{+} frente a varias células diana mediante un ensayo de
liberación de Cr^{51} durante 4 h. Se purificaron células T
CD8^{+} a partir de esplenocitos por reducción del número de
células B, macrófagos, DC, células NK y células CD4^{+} usando
perlas magnéticas (Milteny Biotec Inc.). Se calculó el porcentaje de
liberación de Cr^{51} específica de la siguiente forma:
100 x
(liberación experimental - liberación espontánea)/(liberación máxima
- liberación
espontánea)
Se determinó la liberación máxima a partir del
sobrenadante de células que se lisaron por adición de Triton
X-100 al 5%. Se determinó la liberación espontánea a
partir de células diana incubadas sin células efectoras
añadidas.
Se extrajo el ARN total de células T NK
CD4^{+} seleccionadas con reactivo Trizol. Se sintetizaron los
ADNc mediante el uso del kit de síntesis de ADNc Superscript, de
acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se realizó una PCR
con Supermixture que contenía 0,2 \muM de cebadores mediante el
sistema de PCR GeneAmp 9700 (Perkin-Elmer, Norwalk,
CT). La PCR se realizó durante 28 ciclos de 94ºC durante 30 s, 55ºC
durante 1 min, 74ºC durante 1 min. Los cebadores para
IL-4 se adquirieron de Promega (Madison, WI). La
secuencia de los cebadores usados era la siguiente:
IL-13 (directo)
5'-GACCCAGAGGATATTGCATG-3' (SEC ID
Nº: 1); IL-13 (inverso)
5'-CCAG
CAAAGTCTGATGTGAG-3' (SEC ID Nº: 2); HPRT (directo) 5'-GTTGGATACAGGCCAGACTTT-GTTG-3' (SEC ID Nº: 3); HPRT (inverso) 5'-TCGGTATCCGGTCGGATGGGAG-3' (SEC ID Nº: 4).
CAAAGTCTGATGTGAG-3' (SEC ID Nº: 2); HPRT (directo) 5'-GTTGGATACAGGCCAGACTTT-GTTG-3' (SEC ID Nº: 3); HPRT (inverso) 5'-TCGGTATCCGGTCGGATGGGAG-3' (SEC ID Nº: 4).
Los datos se analizaron por significación
estadística usando una prueba de rango logarítmico. Los datos se
consideraban significativos a P < 0,05.
\vskip1.000000\baselineskip
Se examinó el efecto del momento del tratamiento
con anti-CD4 con respecto a la reaparición de
tumores en el modelo de ratón 15-12RM.
Se inyectaron células tumorales
15-12RM por vía subcutánea (s. c.) en el flanco
derecho de diferentes grupos de ratones BALB/c el día 0. Se
administró anti-CD4 a los diferentes ratones en los
grupos durante diversos tiempos antes de o después de la
implantación. Se examinó el porcentaje de ratones que desarrollaban
tumores después de la administración de
anti-CD4.
Los resultados se presentan en las Fig. 1A y 1B.
La Fig. 1A muestra el crecimiento de tumores en grupos de ratones
en los que no se administró anti-CD4 (control) y en
los que se administró del día -3 al 50, del día -3 al 30 o del día
-3 al 10. La Fig. 1B muestra el crecimiento de tumores en ratones a
los que se les administró anti-CD4 del día 1 al día
50, del día 10 al día 50 y del día 20 al día 50.
Los ratones de cada grupo se inocularon por vía
intraperitoneal con 0,5 mg de mAb anti-CD4 (GK1.5)
durante los períodos indicados después de la inyección de
15-12RM. El anticuerpo se inoculó diariamente
durante los 3 primeros días y después dos veces por semana. Se
usaron cinco ratones por cada grupo. P < 0,02 mediante prueba de
rango logarítmico entre control y anti-CD4 del día
-3 al día 10, al 20 o del día 1 al 50. Se obtuvieron resultados
similares en otro experimento.
Los tumores eran detectables a los 5 días
(Matsui et al., J. Immunol. 163: 184-193,
1999) (Fig. 1A, grupo de control). Los tumores sufrieron una
regresión y desaparecieron después de 10-15 días.
Sin embargo, se observó reaparición de los tumores entre 20 y 40
días después de la inoculación y los tumores recurrentes no
sufrieron un regresión (Fig. 1A). La reaparición de tumores
observada en ratones de control se producía debido a la eliminación
incompleta de células tumorales por CTL CD8^{+} durante la fase de
regresión tumoral. Por el contrario, en ratones tratados con
anti-CD4, las células tumorales se eliminaron
completamente después del crecimiento inicial y no reaparecieron
(Fig. 1A y Matsui et al., J. Immunol. 163:
184-193, 1999). Estos resultados sugerían que las
células T CD4^{+} regulaban negativamente la inmunovigilancia
frente a células tumorales por CTL.
\newpage
Para examinar cuándo regulan las células T
CD4^{+} CTL específicos para células tumorales, se trataron
ratones con anticuerpo de CD4 durante diferentes intervalos después
de la inyección de 15-12RM (Fig. 1A). Todos los
ratones en los grupos que comenzaron a recibir anticuerpo de CD4 3
días antes de la inyección de 15-12RM y que dejaron
de recibir anticuerpo el día 10 o el día 20 eran resistentes a la
reaparición de tumores de una manera similar a los ratones tratados
desde el día -3 hasta el final del experimento. Aunque el inicio
del tratamiento con anti-CD4 podía retrasarse hasta
el día 1, el comienzo del tratamiento el día 10 era demasiado tarde
para tener cualquier impacto sobre la reaparición tardía (Fig. 1B).
Esto sugiere que la inmunovigilancia de CTL frente a células
tumorales está regulada por células T CD4^{+} en una fase temprana
del crecimiento tumoral. La reducción del número de células T
CD4^{+} durante los primeros 10 días era tanto necesaria como
suficiente para prevenir esta regulación.
Se usaron ratones IL-4 KO e
IL-4R KO para aclarar si IL-4 y su
ruta de señalización están implicadas en la regulación negativa de
la inmunovigilancia por CTL. Estos resultados se muestran en las
Fig. 2A y 2B. La Fig. 2A muestra los resultados obtenidos en
ratones control o ratones tratados con anticuerpo
anti-CD4 o ratones IL-4 KO con
fondo BALB/c, IL-4R KO o hermanos de camada (en
inglés "littermate") heterocigotos a los que se inyectaron por
vía subcutánea 1 x 10^{6} células 15-12RM. Los
ratones en el grupo tratado con anti-CD4 se
trataron con mAb anti-CD4 diariamente desde 3 días
antes de la inyección de 15-12RM hasta el día de la
inyección, y dos veces por semana a partir de entonces. Se usaron
cinco ratones por cada grupo excepto para el grupo
IL-4R+/-, en el que se usaron 7 ratones. P < 0,05
mediante prueba de rango logarítmico entre el grupo de control y el
grupo IL-4R-/-. El resultado que se muestra es
representativo de dos experimentos con resultados similares.
Para los resultados que se muestran en la Fig.
2B, a ratones BALB/c-STAT6 KO o ratones BALB/c de
tipo salvaje sin tratar o tratados con anti-CD4 se
les inyectaron por vía subcutánea 1 x 10^{6} células
15-12RM. Los ratones en el grupo tratado con
anti-CD4 se trataron con mAb
anti-CD4 diariamente desde 3 días antes de la
inyección de 15-12RM y dos veces por semana a partir
de entonces. Se usaron cinco ratones por cada grupo. P < 0,02
mediante prueba de rango logarítmico entre el grupo control y el
grupo STAT6 KO. Se muestra un experimento representativo de
tres.
Se produjo reaparición de tumores en ratones
IL-4 KO; de hecho, el patrón de crecimiento tumoral
no era significativamente diferente del de ratones control (Fig. 2A
y Matsui et al., J. Immunol. 163: 184-193,
1999). Por el contrario, en ratones IL-4R KO, los
tumores no reaparecieron después del crecimiento inicial y la
regresión, aunque en hermanos de camada heterocigotos reaparecieron
como en los ratones de tipo salvaje (Fig. 2A).
Se sabe que la activación de STAT6 es necesaria
para la señalización a través de la ruta de señalización de
IL-4R (Shimoda et al., Nature 380:
630-3 1996; Takeda et al., Nature 380:
627-30,1996; y Kaplan et al., Immunity 4:
313-9, 1996). Por consiguiente, para investigar si
la protección observada en ratones IL-4R KO pero no
en ratones IL-4 KO era dependiente de la ruta de
señalización de IL-4R, se inocularon ratones STAT6
KO con 15-12RM (Fig. 2B). Los ratones STAT6 KO eran
tan resistentes a la reaparición de tumores como los ratones con
niveles de CD4 reducidos. Esto sugería que la inmunovigilancia por
CTL estaba limitada por la ruta de señalización de
IL-4R-STAT6, pero que esta
regulación no requería a IL-4 en sí. Por lo tanto,
es probable que IL-13, la única otra citocina que
se sabe que señaliza a través de la ruta de señalización de
IL-4R-STAT6, desempeñe un papel
significativo en esta limitación.
Debido a que las células T son productores
principales de IL-13 e IL-4, la
producción in vitro de ambas citocinas mediante células T a
partir de ratones a los que se ha inyectado 15-12RM
se midió por ELISA después de la estimulación con
anti-CD3. Los resultados se muestran en la Fig. 3.
Los días 0, 2, 4, 6 y 10 después de la inyección de células
15-12RM se sacrificaron dos ratones por grupo y se
recogieron sus esplenocitos. Se usó una fracción de las células
para purificar células T. Se cultivaron cien mil células T recién
aisladas de ratones a los que se inyectó 15-12RM en
una placa recubierta con anti-CD3 durante 48 h. El
sobrenadante de cultivo se recogió y se determinó la concentración
de cada citocina por ELISA. La figura muestra el valor medio de dos
ratones. Se obtuvieron resultados similares en un experimento
adicional.
Tanto la producción de IL-13
como de IL-4 en células T de ratones de control está
elevada tan pronto como 2 días después de la inyección de
15-12RM. La producción de IL-13 e
IL-4 alcanzó un máximo los días 2 y 4,
respectivamente, y después disminuyó hasta las medidas basales el
día 6 después de la inyección. En las células T de ratones con
niveles de CD4 reducidos, la cantidad absoluta de
IL-13 era el 50-75% menor que la de
las células de ratones control a los que se inyectó
15-12RM, a pesar de que la producción de
IL-13 estaba regulada positivamente el día 2.
Además, la producción de IL-4 no estaba regulada
positivamente ni siquiera después de la inyección de
15-12RM. Por lo tanto, las células T esplénicas de
ratones con niveles de CD4 reducidos, que eran resistentes a la
reaparición de tumores, producían menos IL-13 e
IL-4.
Se midió la producción de
IFN-\gamma, que desempeña un papel protector
frente al crecimiento de tumores en este sistema (Matsui et
al., J. Immunol. 163: 184-193,1999). Al
contrario que la producción de IL-13 e
IL-4, las células T de ratones tratados con
anti-CD4 producían el 25-100% más
IFN-\gamma que las células de ratones control.
Estos resultados sugerían que la eliminación de células T CD4^{+}
suprime la producción de IL-13 e
IL-4 pero permite más producción de
IFN-\gamma, lo cual se había demostrado
anteriormente (Matsui et al., J. Immunol. 163:
184-193, 1999) que era necesario para la
inmunovigilancia.
Los resultados obtenidos anteriormente eran
compatibles con que IL-13 en solitario fuera
necesaria para la regulación negativa de la inmunovigilancia o con
la posibilidad de que IL-4 o IL-13
fueran suficientes y que la eliminación de ambas sería necesaria
para prevenir la reaparición. Para diferenciar entre estas
posibilidades, se ensayó el efecto del inhibidor de
IL-13 (sIL-13R\alpha2.Fc) tanto en
ratones de tipo salvaje como KO para IL-4. Los
resultados se muestran en las Fig. 4A y 4B. A ratones BALB/c
control, ratones tratados con anti-CD4 o inhibidor
de IL-13 (sIL-13R\alpha2.Fc) (Fig.
4A) o ratones BALB/c-IL-4 KO sin
tratar o tratados con inhibidor de IL-13 (Fig. 4B)
se les inyectaron por vía subcutánea 1 x 10^{6} células
15-12RM. El anti-CD4 (0,5 mg) se
inoculó el día 0, 1, 2, 6 y 10 después de 15-12RM.
Los ratones en los grupos tratados con inhibidor de
IL-13 se trataron con
sIL-13R\alpha2.Fc (0,2 mg) día sí, día no, desde
el día 0 hasta el día 8. Se usaron cinco ratones por cada grupo. P
< 0,01 mediante prueba de rango logarítmico entre el grupo
control y el grupo con inhibidor de IL-13. P <
0,02 mediante prueba de rango logarítmico entre el grupo
IL-4 KO y el grupo IL-4KO +
inhibidor de IL-13. Se muestra un experimento
representativo de dos.
El inhibidor de IL-13 se inoculó
día sí, día no, desde el día 0 hasta el día 8 después de la
inyección de 15-12RM, pero no evitó el crecimiento
inicial ni la regresión del tumor. Sin embargo, cuando se trataron
ratones IL-4 KO, que no son resistentes a la
reaparición de tumores, con inhibidor de IL-13,
estos estaban completamente protegidos frente a la reaparición.
Cuando se trataron con el inhibidor de IL-13 ratones
de tipo salvaje, también se comportaron como ratones con niveles de
CD4 reducidos y ratones KO para IL-4 tratados con
inhibidor de IL-13. Estos resultados mostraron que
en este modelo tumoral bifásico, IL-13 es necesaria
para la reaparición de tumores, independientemente de la capacidad
de los ratones para producir IL-4.
Este ejemplo presenta datos que muestran que
IL-13 es producido mediante células T NK y que
ratones KO para CD1, que carecen de células T NK, producen niveles
reducidos de IL-13. También se ilustra en este
ejemplo la inhibición del crecimiento de tumores en ratones KO para
CD1.
El tratamiento durante los primeros 8 días con
inhibidor de IL-13 protegía a los ratones de la
reaparición de tumores (Fig. 4A y 4B). Las células T CD4^{+}
NK1.1^{+} están entre las células más tempranas que producen una
gran cantidad de IL-4 tras la activación de TCR
(Chen et al., J. Immunol 159: 2240-9,
1997).
Por consiguiente, se examinó la capacidad de las
células T NK CD4^{+} para producir IL-13. Puesto
que los ratones BALB/c no expresan el alelo NK1.1 reconocido por los
mAb disponibles, se seleccionaron células T NK CD4^{+} de ratones
C57BL/6 o ratones BALB/c congénicos para el locus NK1.1 mediante la
purificación de células T CD4^{+} y la selección para poblaciones
CD4^{+} NK1.1^{+} y CD4^{+} NK1.1^{-}, y éstas se
estimularon con anticuerpo anti-CD3.
Se midió la producción de ARNm y proteína de
IL-13. Los resultados se muestran en las Fig.
5A-5C. Se estimularon células T NK CD4^{+}
esplénicas recién seleccionadas de ratones C57BL/6 con
anti-CD3 (2C11) unido a placa durante 8 h. Las
células se recogieron y se detectó el ARNm para
IL-13 e IL-4 mediante
RT-PCR. La Fig. 5A muestra la expresión de ARNm de
IL-13 e IL-4 en células T NK
CD4^{+} después de la estimulación con
anti-CD3.
La Fig. 5B demuestra la producción de
IL-13 e IL-4 por células T CD4^{+}
NK1.1^{+} y CD4^{+} NK1.1^{-}. Se estimularon células T
esplénicas recién seleccionadas CD4^{+} NK1.1^{+} y CD4^{+}
NK1.1^{-} de ratones BALB/c congénicos para el locus NK1.1 con
anti-CD3 (2C11) y anti-CD28 (37.51)
unidos a placa durante 48 h. Se recogieron los sobrenadantes a las
48 h y se ensayaron para IL-4 e
IL-13 mediante ELISA.
Se muestra la producción de
IL-13 e IL-4 por células T CD4^{+}
de ratones a los que se inyectó 15-12RM estimulados
con células L transfectadas con CD1 en la Fig. 5C. Se estimularon
células T CD4^{+} purificadas a partir de células de bazo de
ratones BALB/C normales y a los que se inyectó
15-12RM (el día 3 después de la inyección) con
células L transfectadas con CD1 o células L no transfectadas durante
una semana. También se añadieron al cultivo mAb
anti-CD28 (10 \mug/ml) e IL-2 (20
unidades/ml). El sobrenadante de cultivo se recogió y se determinó
la concentración de IL-13 e IL-4 por
ELISA. Los asteriscos indican un nivel por debajo del límite de
detección (<15,6 pg/ml).
La IL-13 estaba claramente
inducida en células T CD4^{+} NK1.1^{+} por estimulación con
anti-CD3, mientras que las células T CD4^{+}
NK1.1^{-} producían poca cantidad (Fig. 5A y 5B). Además, cuando
se estimularon células T CD4^{+} de ratones BABL/c a los que se
inyectó 15-12RM con células L transfectadas con
CD1, producían más IL-13 e IL-4 que
las células de ratones que no llevaban tumores (Fig. 5C), pero no
producían IFN-\gamma detectable (no se muestran
los datos). El menor nivel de IL-4 en la Fig. 5C que
en la Fig. 5B puede deberse al consumo durante el cultivo de 7 días
en el primero, frente a las 48 h en el último. Por el contrario,
debido a que las células T CD4^{+} purificadas no tenían
receptores de IL-13, esa citocina no debería
haberse consumido. Por lo tanto, las células T NK CD4^{+} pueden,
de hecho, generar IL-13, y son una fuente primaria
de esta citocina. Además, esta actividad parece potenciarse en
animales que llevan tumores.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Si las células T NK son una fuente principal de
IL-13, entonces su ausencia en ratones KO para CD1
debería reducir notablemente la producción de IL-13.
Por consiguiente, se examinó la producción in vitro de
IL-13, IL-4 e
IFN-\gamma en células T CD4^{+} de ratones KO
para CD1 a los que se inyectó 15-12RM. Esto ratones
carecen de células T NK restringidas por CD1, incluyendo células T
NK CD4^{+}, pero conservan células T NK CD4^{+} convencionales
restringidas por MHC de clase II.
Los resultados se muestran en la Fig. 6. Se
sacrificaron dos ratones por grupo y sus esplenocitos se recogieron
los días 0, 2, 4, 6 y 10 después de la inyección de células
15-12RM. Se usó una fracción de las células para
purificar células T CD4^{+}. Se cultivaron cien mil células T
recién aisladas de ratones a los que se inyectó
15-12RM en una placa recubierta con
anti-CD3 durante 48 h. El sobrenadante de cultivo se
recogió y se determinó la concentración de citocinas mediante
ELISA. Cada valor muestra la media de dos ratones. Los resultados
son representativos de dos experimentos independientes. Los
asteriscos indican un nivel por debajo del límite de detección
(<7,8 pg/ml).
Las células T CD4^{+} purificadas a partir de
esplenocitos de ratones KO para CD1 producían sólo una pequeña
cantidad de IL-13 e IL-4 después de
la inyección de 15-12RM, mientras que las células T
CD4^{+} de ratones de tipo salvaje regulaban positivamente la
producción de esta citocinas los días 2, 4 y 10 después de la
inoculación del tumor. Esto indica que la mayoría de la producción
de IL-13 era de o dependiente de células T NK. Por
el contrario, el IFN-\gamma producido era aún
mayor en las células de ratones KO para CD1 que en los ratones de
tipo salvaje.
Debido a que las células T NK CD4^{+} pueden
producir IL-13 y, de hecho, son responsables de gran
parte de la producción de IL-13, y estas células
serían reducidas por el tratamiento con anti-CD4
además de células T CD4^{+} convencionales, se estableció la
hipótesis que las células T NK desempeñan un papel crítico en la
regulación negativa de la inmunovigilancia de tumores por CTL. Para
ensayar esta hipótesis, se inocularon ratones KO para CD1 con
15-12RM y se midió el efecto del crecimiento tumoral
con o sin tratamiento con anti-CD4.
Los resultados se muestran en la Fig. 7. A
ratones KO para CD1 en fondo BALB/c y ratones BALB/c de tipo
salvaje sin tratar o tratados con anti-CD4 se les
inyectó por vía subcutánea 1 x 10^{6} células
15-12RM. Los ratones en el grupo tratado con
anti-CD4 se trataron con anti-CD4
(0,5 mg) comenzando 3 días antes de la inyección de
15-12RM y dos veces por semana a partir de entonces.
Se usaron cinco ratones por cada grupo. P < 0,02 mediante prueba
de rango logarítmico entre el grupo control y el grupo KO para CD1.
Se muestra un experimento representativo de cuatro. En los ratones
KO para CD1, los tumores crecieron inicialmente y sufrieron
regresión en el mismo periodo de tiempo que en ratones de tipo
salvaje. Sin embargo, los ratones KO para CD1 eran tan resistentes
a la reaparición de tumores como los ratones de tipo salvaje
tratados con anti-CD4. De este modo, las células T
NK restringidas por CD1 parecían ser necesarias para la regulación
negativa de la inmunovigilancia.
Se evaluó la actividad de células T CD8^{+}
purificadas a partir de esplenocitos de ratones tratados con
anti-CD4 (Fig. 8A), KO para CD1 (Fig. 8B) y control
(Fig. 8C) para determinar la actividad de CTL a los 12 días después
de la inyección de 15-12RM frente a dianas 18Neo
pulsadas con 1 \muM de P18IIIB o sin pulsar, sin ninguna
estimulación in vitro. Se muestra un experimento
representativo de tres en las Fig. 8A -8C, respectivamente.
En ratones con niveles de CD4 reducidos, la
protección contra la reaparición de tumores parecía estar asociada
con una mayor actividad CTL de células T CD8^{+} inmediatamente
ex vivo sin reestimulación, que en ratones de control (Fig.
8A y Matsui et al., J. Immunol. 163:
184-193,1999). Para determinar si esto mismo era
aplicable a ratones KO para CD1, se comparó la actividad CTL de
células T CD8^{+} purificadas a partir de ratones KO para CD1 a
los que se inyectó 15-12RM, con la de las células T
CD8^{+} de ratones control y tratados con
anti-CD4, a los que se les inyectó tumor (Fig. 8B).
Células T CD8^{+} recién aisladas de CD1 KO (Fig. 8B) lisaron
18Neo pulsadas con P18IIIB a un nivel reducido sin estimulación
in vitro, mientras que células T CD8^{+} de ratones que
llevaban tumores intactos no destruyeron 18Neo pulsadas con P18IIIB
sin reestimulación (Fig. 8C). De esta manera, la presencia de
células T NK condujo a una actividad CTL reducida inmediatamente
ex vivo.
En su conjunto, estos resultados demuestran que
la IL-13 producida por células T NK CD4^{+}
restringidas por CD1 o, posiblemente, por otras células
dependientes de células T NK, en una fase de crecimiento temprano
del tumor (dentro de los 10 primeros días), desencadena una
regulación negativa de la inmunovigilancia de CTL, y que esta
regulación negativa está mediada por la ruta de
IL-4\alpha-STAT6.
Se evaluó la capacidad de un inhibidor de
IL-13 para potenciar una respuesta de linfocitos T
citotóxicos (CTL).
Se inmunizaron ratones BALB/c por vía subcutánea
con una vacuna de péptido sintético PCLUS6.1-18IIIB
(20 nmoles) (patente de Estados Unidos Nº. 5.932.218) que se mezcló
con GM-CSF (5 \mug) en una emulsión de adyuvante,
Montanide ISA-51, el día 0. Cada uno de los días 0,
1, 2, 4 y 6 se administraron 200 \mug del inhibidor de
IL-13
IL-13R\alpha2-Fc por vía
intraperitoneal. Los controles recibieron una IgG control en lugar
de inhibidor de IL-13.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Se midió la respuesta de CTL posterior en los
bazos de los ratones de ensayo y control, recogidos 14 días después
y estimulados durante 1 semana en cultivo, se midió y se representó
en el gráfico que se muestra en la Fig. 9. Las células diana se
recubrieron con péptido P18IIIB.
Se observó una lisis mediada por CTL
significativamente mayor cuando se administraba el inhibidor de
IL-13 junto con una vacuna de VIH de péptido
sintético en ratones. Estos resultados demuestran que se aumentaba
la respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL) en presencia del
inhibidor en comparación con la vacuna sin el inhibidor de
IL-13.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el
solicitante únicamente es para comodidad del lector. Dicha lista no
forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido
gran cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden
excluir errores u omisiones y la EPO rechaza toda responsabilidad a
este respecto.
- \bullet US 6013258 A [0023]
- \bullet US 5932218 A [0076]
\bulletDONALDSON et al. J.
Immunol., 1998, vol. 161, 2317-24
[0008]
\bulletMERRIFIELD. J. Amer. Chem.
Soc., 1963, vol. 85, 2149-2154 [0009]
\bulletROARK et al. J. Imm.,
1998, vol. 160, 3121-27 [0010]
\bulletPRUSSIN et al. J.
Immunol., 1997, vol. 159, 5862-70
[0011]
\bulletNOBEN-TRAUTH et al. Transgenic Res, 1996, vol. 5,
487-91 [0034]
\bulletSCALZO et al.
Immunogenetics, 1995, vol. 41, 148-51
[0034]
\bulletNOBEN-TRAUTH et al. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1997, vol. 94,
10838-43 [0034]
\bulletKAPLAN et al. Immunity,
1996, vol. 4, 313-9 [0034] [0054]
\bulletSMILEY et al. Science,
1997, vol. 275, 977-9 [0034]
\bulletMATSUI et al. J.
Immunol., vol. 163, 184-193 [0035] [0057]
\bulletTAKAHASHI et al. Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 1988, vol. 85, 3105-09
[0035]
\bulletWILDE et al. J.
Immunol., 1983, vol. 131, 2178-2183
[0036]
\bulletDONALDSON et al. J.
Immunol., vol. 161, 2317-24 [0036]
\bulletLEO et al. Proc. Natl Acad.
Sci. USA, 1987, vol. 84, 1374-78
[0036]
\bulletCHEN et al. J. Immunol,
1997, vol. 159, 2240-9 [0038] [0061]
\bulletMATSUI et al. J.
Immunol., 1999, vol. 163, 184-193 [0049]
[0049] [0053] [0057] [0073]
\bulletSHIMODA et al. Nature,
1996, vol. 380, 630-3 [0054]
\bulletTAKEDA et al. Nature,
1996, vol. 380, 627-30 [0054]
Claims (16)
1. Uso de un inhibidor de IL-13,
en el que dicho inhibidor comprende una región de unión a
IL-13 de un receptor de IL-13 o es
un anticuerpo que se une a IL-13, para la
preparación de una composición farmacéutica para inhibir el
crecimiento de un tumor en un sujeto, donde dicho tumor se
selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de
pulmón y linfoma.
2. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
inhibidor se administra:
- a)
- en una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento de un tumor en dicho sujeto;
- b)
- antes de la detección de un tumor primario en dicho sujeto;
- c)
- después de la detección de un tumor primario en dicho sujeto;
- d)
- antes del tratamiento de un tumor en dicho sujeto;
- e)
- después del tratamiento de un tumor en dicho sujeto;
- f)
- dentro de las dos semanas anteriores a la resección quirúrgica de un tumor en dicho sujeto;
- g)
- dentro de las dos semanas posteriores a la resección quirúrgica de un tumor en dicho sujeto;
- h)
- por vía sistémica a dicho sujeto;
- i)
- por vía tópica a dicho sujeto;
- j)
- por una vía seleccionada de administración intravenosa, subcutánea e intramuscular; o
- k)
- en una composición de liberación retardada.
3. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
sujeto presenta un riesgo elevado de desarrollar dicho tumor o tiene
un alelo de un gen que aumenta el riesgo de desarrollar dicho tumor
en dicho sujeto.
4. Uso de la reivindicación 3, en el que dicho
gen es un gen supresor de tumores seleccionado del grupo que
consiste en un gen de retinoblastoma, un gen p53, un gen BRCA, un
APC y un gen DCC.
5. Uso de la reivindicación 2, en el que dicho
inhibidor se administra dentro de las dos semanas posteriores a la
resección quirúrgica de un tumor en dicho sujeto y en el que dicho
inhibidor se administra al mismo tiempo que el tratamiento de un
tumor en dicho sujeto.
6. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
tumor comprende además un polipéptido de inmunoglobulina.
7. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
inhibidor es una proteína de fusión que comprende un polipéptido
IL-13R\alpha2 murino y una región Fc de un
polipéptido de IgG_{1}, o una proteína de fusión que comprende un
polipéptido de IL-13R\alpha2 humano y una región
Fc de un polipéptido IgG_{1}.
8. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
anticuerpo es un anticuerpo policlonal o un anticuerpo
monoclonal.
9. Uso de la reivindicación 1, en el que dicho
sujeto es un ser humano.
10. Uso de la reivindicación 1, que comprende
además administrar a dicho sujeto un segundo agente que inhibe el
crecimiento de tumores, en el que dicho segundo agente aumenta los
niveles de interferón gamma en dicho sujeto.
11. Uso de la reivindicación 2, en el que dicha
composición de liberación retardada comprende una
micropartícula.
12. Uso de la reivindicación 11, en el que dicha
micropartícula es ácido
poli-láctico-co-glicólico
(PLGA).
13. Uso de un inhibidor no citotóxico de
IL-13 para la preparación de una composición
farmacéutica para inhibir el crecimiento de un tumor en un sujeto,
en el que dicho inhibidor comprende una región de unión a
IL-13 de un receptor de IL-13 o es
un anticuerpo que se une a IL-13 y dicho tumor se
selecciona del grupo que consiste en un cáncer de mama, cáncer de
pulmón y linfoma.
14. Uso de la reivindicación
IL-13, en el que dicho inhibidor inhibe en dicho
sujeto la expresión del gen de IL-13 o la actividad
de IL-13.
\newpage
15. Uso de la reivindicación 13, en el que dicho
inhibidor comprende una región de unión a IL-13 de
un receptor de IL-13 y comprende además un
polipéptido de inmunoglobulina.
16. Uso de la reivindicación 13, en el que dicho
anticuerpo es un anticuerpo policlonal o un anticuerpo
monoclonal.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US69360000A | 2000-10-20 | 2000-10-20 | |
US693600 | 2000-10-20 | ||
US31818501P | 2001-09-07 | 2001-09-07 | |
US318185P | 2001-09-07 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2311558T3 true ES2311558T3 (es) | 2009-02-16 |
Family
ID=26981351
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES01989341T Expired - Lifetime ES2311558T3 (es) | 2000-10-20 | 2001-10-22 | Uso de inhibidores de la il-13 para el tratamiento de tumores. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP1333850B1 (es) |
JP (2) | JP2004537500A (es) |
AT (1) | ATE405282T1 (es) |
AU (1) | AU2002243443A1 (es) |
DE (1) | DE60135481D1 (es) |
DK (1) | DK1333850T3 (es) |
ES (1) | ES2311558T3 (es) |
WO (1) | WO2002055100A2 (es) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050069546A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-03-31 | Yaron Ilan | Educated NKT cells and their uses in the treatment of immune-related disorders |
PT1703893E (pt) | 2003-12-23 | 2012-06-01 | Genentech Inc | Novos anticorpos anti-il 13 e as respectivas utilizações |
CA2557724A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-10-06 | Centocor, Inc. | Methods and compositions for treating il-13 related pathologies |
US7501121B2 (en) | 2004-06-17 | 2009-03-10 | Wyeth | IL-13 binding agents |
AR049390A1 (es) | 2004-06-09 | 2006-07-26 | Wyeth Corp | Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos |
JP2008520684A (ja) | 2004-11-17 | 2008-06-19 | アブジェニックス・インコーポレーテッド | Il−13に対する完全ヒトモノクローナル抗体 |
CN103169958A (zh) * | 2005-02-04 | 2013-06-26 | 萨瓦克公司 | 存活蛋白肽疫苗 |
AU2007351514B2 (en) | 2006-09-08 | 2013-02-21 | Abbvie Inc. | Interleukin -13 binding proteins |
US20120177668A1 (en) * | 2009-07-06 | 2012-07-12 | The Australian National University | Immunomodulating compositions comprising interleukin 13 inhibitors and uses therefor |
EP3447491A3 (en) | 2010-12-16 | 2019-06-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition |
CN104383541A (zh) | 2011-10-21 | 2015-03-04 | 艾伯维公司 | 用于治疗hcv的包含至少两种直接抗病毒剂和利巴韦林但无干扰素的方法 |
SE1450131A1 (sv) | 2011-10-21 | 2014-05-07 | Abbvie Inc | DAA-kombinationsbehandling (t.ex. med ABT-072 eller ABT-333)för användning vid behandling av HCV |
US8466159B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-06-18 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
US8492386B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-07-23 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
BR112016004437A2 (pt) | 2013-09-13 | 2017-10-17 | Genentech Inc | métodos de imunoteste e de seleção de linhagem de células, anticorpos e kit |
NZ718144A (en) | 2013-09-13 | 2022-05-27 | Genentech Inc | Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides |
EP3338800A1 (en) * | 2014-02-21 | 2018-06-27 | IDAC Theranostics, Inc. | Therapeutic agent for solid cancer |
WO2017189978A1 (en) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | Emory University | Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6294322B1 (en) | 1988-01-26 | 2001-09-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Multideterminant peptides that elicit helper T-lymphocyte cytotoxic T-lymphocyte and neutralizing antibody responses against HIV-1 |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
WO1994004680A1 (en) * | 1992-08-21 | 1994-03-03 | Schering Corporation | Human interleukin-13 |
US20010053371A1 (en) * | 1999-01-07 | 2001-12-20 | Waldemar Debinski | Method for diagnosing, imaging, and treating tumors using restrictive receptor for interleukin 13 |
JPH09150569A (ja) | 1995-11-29 | 1997-06-10 | Riso Kagaku Corp | 色画像形成用シート |
GB9625899D0 (en) * | 1996-12-13 | 1997-01-29 | Glaxo Group Ltd | Substances and their uses |
US6013258A (en) | 1997-10-09 | 2000-01-11 | Zycos Inc. | Immunogenic peptides from the HPV E7 protein |
PT1141286E (pt) * | 1998-12-14 | 2007-01-31 | Genetics Inst Llc | Cadeia de receptores de citocina |
MXPA01008142A (es) * | 1999-02-10 | 2003-07-21 | Welfide Corp | Compuestos de amida, y uso medicinal de los mismos. |
WO2001077332A2 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
-
2001
- 2001-10-22 WO PCT/US2001/051339 patent/WO2002055100A2/en active Application Filing
- 2001-10-22 JP JP2002555834A patent/JP2004537500A/ja active Pending
- 2001-10-22 DK DK01989341T patent/DK1333850T3/da active
- 2001-10-22 EP EP01989341A patent/EP1333850B1/en not_active Revoked
- 2001-10-22 ES ES01989341T patent/ES2311558T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-22 AU AU2002243443A patent/AU2002243443A1/en not_active Abandoned
- 2001-10-22 AT AT01989341T patent/ATE405282T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-10-22 EP EP08105062A patent/EP2027867A1/en not_active Withdrawn
- 2001-10-22 DE DE60135481T patent/DE60135481D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-10-08 JP JP2008262301A patent/JP2009046512A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2002055100A3 (en) | 2003-03-27 |
DK1333850T3 (da) | 2008-12-01 |
WO2002055100A2 (en) | 2002-07-18 |
AU2002243443A1 (en) | 2002-07-24 |
EP1333850B1 (en) | 2008-08-20 |
JP2009046512A (ja) | 2009-03-05 |
DE60135481D1 (de) | 2008-10-02 |
WO2002055100A9 (en) | 2006-05-11 |
JP2004537500A (ja) | 2004-12-16 |
EP2027867A1 (en) | 2009-02-25 |
AU2002243443A8 (en) | 2005-10-13 |
ATE405282T1 (de) | 2008-09-15 |
EP1333850A2 (en) | 2003-08-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2311558T3 (es) | Uso de inhibidores de la il-13 para el tratamiento de tumores. | |
US20210147521A1 (en) | Novel VISTA-Ig constructs and the use of VISTA-Ig for Treatment of Autoimmune, Allergic and Inflammatory Disorders | |
US20220048998A1 (en) | Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer | |
US20210032317A1 (en) | Vista-ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders | |
KR102495601B1 (ko) | 항-gitr 항체 및 그것의 사용 | |
ES2346184T3 (es) | Antagonistas de cd30 o cd30l para usar en el tratamiento de enfermedades antiinflamatorias cronicas y autoinmunes. | |
CN108495927A (zh) | 嵌合抗原受体相关的方法和组合物 | |
US6676927B1 (en) | Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies | |
US20070161559A1 (en) | Method for the treatment of gout or pseudogout | |
WO1999029310A2 (en) | Regulation of t cell-mediated immunity by tryptophan and its analogs | |
PT1897548E (pt) | Regulação de células t | |
EA015706B1 (ru) | Моноклональное антитело или его фрагмент, связывающиеся с полипептидом il-22ra, гуманизированное антитело, полученное из указанного антитела, гибридомы, продуцирующие антитело, и применение указанного антитела | |
ES2309992T3 (es) | Composiciones y procedimientos para incrementar las respuestas inmunes mediadas por celulas presentadoras de antigeno. | |
ES2312782T3 (es) | Subpoblacion de celulas t que regula la inmunidad del intestino. | |
Cervenak et al. | Accelerating antibody discovery using transgenic animals overexpressing the neonatal Fc receptor as a result of augmented humoral immunity | |
US9445582B2 (en) | Soluble protein CD5 or CD6 for the treatment of cancer or tumor or for use as an adjuvant | |
NZ788539A (en) | Anti-gitr antibodies and uses thereof | |
EA039583B1 (ru) | Антитела против gitr и их применения | |
Thuc-vy | B cell clonal abundance and MAdCAM-1 mediate affinity maturation and fate of germinal center B cells |