ES2308251T3 - Compuestos de quinolina y sus usos. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de acuerdo con la fórmula estructural (I): (Ver fórmula) y sales, hidratos, solvatos y N-óxidos de la misma, en la que: R 1 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 2 , R 3 , R 5 , R 6 , R 7 y R 8 se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR d , -SR d , haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR c -arilo, -NR c -heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF3, -CH2CF3, -CF2CF3, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 , arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R 10 y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 9 se selecciona del grupo constituido por haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF3, -CH2CF3, -CF2CF3, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 10 se selecciona del grupo constituido por R a , R b , R a sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R a o R b , -OR a sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R a o R b , -(CH2)m-R b , -(CHR a )m-R b , -O-(CH2)m-R b , -S-(CH 2) m-R b , -O-(CHR a ) m-R b ; cada R a se selecciona de forma independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo (C5-C10), fenilo, arilalquilo (C6-C16), bencilo; cada R b es un grupo adecuado seleccionado de forma independiente del grupo constituido por -OR d , haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF3; cada R c es de forma independiente un grupo protector, R a o R a sustituido opcionalmente con uno o más de los mismos o diferentes grupos R a o R b adecuados; cada R d es de forma independiente un grupo protector, R a o R a opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R a o R b adecuados; cada m es de forma independiente un número entero de 1 a 3; A es O, NH o CO; y B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean ambos O y que A y B no sean O y NH; y a condición de que: el compuesto no sea 6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.
Description
Compuestos de quinolina y sus usos.
Esta solicitud reivindica el beneficio según 35
U.S.C \NAK 119(e) de la solicitud de Nº de Serie
60/502.605, presentada el 12 de septiembre de 2003 y titulada
"Quinoline Compounds and Their Uses" (Número de expediente del
mandatario 33502/US).
La presente invención se refiere en general a
compuestos de quinolina, composiciones farmacéuticas que comprenden
los compuestos, intermedios y usos de dichos compuestos y
composiciones para la preparación de medicamentos para, entre otras
cosas, inhibir la desgranulación de mastocitos y/o basófilos en una
diversidad de contextos.
El entrecruzamiento de un alergeno con una IgE
unida a receptor activa una cascada de señalización en mastocitos y
basófilos que da como resultado la liberación de mediadores químicos
responsables de numerosos acontecimientos adversos. Por ejemplo,
dicho entrecruzamiento conduce a la liberación de mediadores
preformados de reacciones de hipersensibilidad anafilácticas de
Tipo I (inmediatas), tales como histamina, desde los sitios de
almacenamiento en gránulos mediante desgranulación. También conduce
a la síntesis y liberación de otros mediadores, incluyendo
leucotrienos, prostaglandinas y factores activadores de plaquetas
(PAF), que desempeñan papeles importantes en las reacciones
inflamatorias. Otros mediadores que se sintetizan y se liberan tras
el entrecruzamiento de un alergeno incluyen citocinas y óxido
nítrico.
Puesto que todos estos mediadores son
responsables de, o desempeñan papeles importantes en la
manifestación de numerosos acontecimientos adversos, sería muy
deseable la disponibilidad de compuestos capaces de inhibir la
cascada o cascadas de señalización responsables de su liberación y/o
síntesis.
En un aspecto, la presente invención proporciona
nuevos compuestos de quinolina que, entre otras cosas, inhiben la
desgranulación de mastocitos y/o basófilos. Los compuestos
comprenden generalmente un "núcleo" de quinolina, que tiene la
siguiente estructura y numeración convencional:
Los compuestos de la invención están sustituidos
en el carbono C4 con un grupo de enlace "A-B".
La porción quinolina puede estar sustituida además en una o más
posiciones (C2, C3, C5, C6, C7 y/o C8). El grupo de enlace une la
porción quinolina del compuesto a un isoxazol. El isoxazol también
puede estar sustituido, preferiblemente con un metilo en el carbono
C5 y, preferiblemente, con un sustituyente en el carbono C2 del
isoxazol. Los sustituyentes en C2 y/o C5 de la cadena lateral del
isoxazol, así como los sustituyentes opcionales en las otras
posiciones del anillo de quinolina, pueden variar mucho en carácter
y propiedades físico-químicas. Por ejemplo, el
sustituyente o sustituyentes pueden ser un alquilo ramificado, de
cadena lineal o cíclico, un heteroalquilo ramificado, de cadena
lineal o cíclico, un arilo monocíclico o policíclico o un
heteroarilo monocíclico o policíclico. Estos grupos sustituyentes
pueden estar adicionalmente sustituidos, como se describirá en más
detalle a continuación.
En otro aspecto, la presente invención
proporciona profármacos de los compuestos de quinolina. Dichos
profármacos pueden ser activos en su forma de profármaco, o pueden
ser inactivos hasta que se convierten en condiciones fisiológicas u
otras condiciones de uso en una forma farmacológica activa. En los
profármacos de la invención se incluyen uno o más grupos
funcionales de los compuestos de quinolina en
pro-restos que se escinden de la molécula en las
condiciones de uso, típicamente a modo de hidrólisis, escisión
enzimática o algún otro mecanismo de escisión, para dar los grupos
funcionales. Por ejemplo, pueden incluirse grupos amino primarios o
secundarios en un pro-resto de amida que se escinde
en condiciones de uso para generar el grupo amino primario o
secundario. Por lo tanto, los profármacos de la invención incluyen
tipos especiales de grupos protectores, denominados
"progrupos", que enmascaran uno o más grupos funcionales de los
compuestos de quinolina que se escinden en las condiciones de uso
para dar un compuesto farmacológico activo de quinolina. Los grupos
funcionales dentro de los compuestos de quinolina que pueden
enmascararse con progrupos para la inclusión en un
pro-resto incluyen, pero sin limitación, aminas
(primarias y secundarias), hidroxilos, sulfanilos (tioles),
carboxilos, carbonilos, fenoles, catecoles, dioles, alquinas,
fosfatos, etc. Se conocen en la técnica multitud de progrupos
adecuados para enmascarar dichos grupos funcionales para dar
pro-restos que pueden escindirse en las condiciones
deseadas de uso. Todos estos progrupos, solos en combinaciones,
pueden incluirse en los profármacos de la invención. Los ejemplos
específicos de pro-restos que dan grupos amina
primaria o secundaria que pueden incluirse en los profármacos de la
invención incluyen, pero sin limitación, amidas, carbamatos, iminas,
ureas, fosfenilos, fosforilos y sulfenilos. Los ejemplos
específicos de pro-restos que dan grupos sulfanilo
que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen,
pero sin limitación, tioéteres, por ejemplo, derivados de
S-metilo (monotio, ditio, aminotio acetales), silil
tioéteres, tioésteres, tiocarbonatos, tiocarbamatos, disulfuros
asimétricos, etc. Los ejemplos específicos de
pro-restos que se escinden para dar grupos hidroxilo
que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen,
pero sin limitación, sulfonatos, ésteres y carbonatos. Los ejemplos
específicos de pro-restos que dan grupos carboxilo
que pueden incluirse en los profármacos de la invención
incluyen,
pero sin limitación, ésteres (incluyendo silil ésteres, ésteres de ácido oxámico y tioésteres), amidas e hidrazidas.
pero sin limitación, ésteres (incluyendo silil ésteres, ésteres de ácido oxámico y tioésteres), amidas e hidrazidas.
En una realización ilustrativa, los profármacos
de la invención son compuestos de acuerdo con la fórmula estructural
(I), en la que el grupo protector de R^{c} y R^{d} es un
progrupo.
Los compuestos de quinolina de la invención son
potentes inhibidores de la desgranulación de mastocitos y/o
basófilos. Por lo tanto, en otro aspecto más, la presente invención
proporciona usos de compuestos de quinolina para la preparación de
medicamentos para regular y, en particular, inhibir, la
desgranulación de mastocitos y/o basófilos. El compuesto o
profármaco de quinolina de la invención puede estar en la forma de
una sal, hidrato, solvato, N-óxido y/o composición de los mismos
aceptable, eficaz para regular o inhibir la desgranulación de la
célula. El método puede realizarse en contextos in vitro o en
contextos in vivo como un enfoque terapéutico para el
tratamiento o la prevención de enfermedades caracterizadas por,
causadas por o asociadas con la desgranulación de mastocitos y/o
basófilos.
Aunque, sin intención de ceñirse a teoría alguna
de funcionamiento, se piensa que los compuestos de quinolina de la
invención ejercen su efecto inhibidor bloqueando la cascada de
señalización del receptor de IgE iniciada cuando la IgE unida a
receptor de IgE se entrecruza con un antígeno. Por lo tanto, la
presente invención también proporciona usos de compuestos de
quinolina para la preparación de medicamentos para regular y, en
particular, inhibir la cascada de señalización del receptor de IgE
(también conocido como Fc\varepsilonR1) que conduce a la
desgranulación de mastocitos y/o basófilos (desgranulación mediada
por receptor de IgE). Los medicamentos se usan en la regulación de
y, en particular, en la inhibición de procesos corriente abajo que
resultan como una consecuencia de la activación de la cascada de
señalización del receptor de IgE. Dichos procesos corriente abajo
incluyen, pero sin limitación, desgranulación inducida por IgE,
producción y/o liberación de citocinas y/o la producción y/o
liberación de mediadores lipídicos tales como leucotrienos y
prostaglandinas. Se usa una cantidad eficaz de un compuesto o
profármaco de quinolina de la invención, o una sal, hidrato,
disolvente, N-óxido y/o composición de los mismos aceptable para
preparar un medicamento adecuado para contactar con un mastocito
y/o basófilo para regular o inhibir la cascada de señalización del
receptor de IgE y/o un proceso corriente abajo efectuado por la
activación de esta cascada de señalización. El medicamento puede
usarse en contextos in vitro o en contextos in vivo
como un enfoque terapéutico para el tratamiento o la prevención de
enfermedades caracterizadas por, causadas por o asociadas con la
cascada de señalización del receptor de IgE, tal como enfermedades
producidas por la liberación de mediadores químicos específicos de
gránulos tras la desgranulación, la liberación y/o la síntesis de
citocinas y/o la liberación y/o la síntesis de mediadores lipídicos
tales como leucotrienos y prostaglandinas.
En otro aspecto más, la presente invención
proporciona composiciones para usar en la preparación de
medicamentos para tratar y/o prevenir enfermedades caracterizadas
por, causadas por o asociadas con la liberación de mediadores
químicos como una consecuencia de la activación de la cascada de
señalización del receptor de IgE. Las composiciones pueden usarse
para preparar medicamentos para usar en animales en contextos
veterinarios o en seres humanos. Las composiciones son en general
adecuadas para la administración a un sujeto animal o ser humano y
comprenden una cantidad de un compuesto o profármaco de quinolina
de la invención, o una sal, hidrato, solvato, N-óxido y/o
composición de los mismos aceptable, eficaz para tratar o prevenir
la enfermedad. Como se ha analizado anteriormente, la activación de
la cascada de señalización del receptor de IgE conduce a la
liberación y/o síntesis de una diversidad de sustancias químicas
que son mediadores farmacológicos de una gran diversidad de
enfermedades.
Por ejemplo, en mastocitos y basófilos, la
activación de la cascada de señalización del receptor de IgE conduce
a la liberación inmediata (es decir, en 1-3 min
desde la activación del receptor de IgE) de mediadores preformados
de reacciones de hipersensibilidad atópicas y/o de Tipo I (por
ejemplo, histamina, proteasas, tales como triptasa, etc.) a través
del proceso de desgranulación. Dichas reacciones de
hipersensibilidad atópicas o de Tipo I incluyen, pero sin
limitación, reacciones anafilácticas contra alergenos ambientales y
otros (por ejemplo pólenes, venenos de insectos y/o animales,
alimentos, fármacos, etc.), fiebre del heno, conjuntivitis alérgica,
rinitis alérgica, asma alérgica, dermatitis atópica, eczema,
urticaria y ciertos trastornos gastrointestinales.
La liberación inmediata de los mediadores
preformados mediante la desgranulación se sigue de la liberación
y/o síntesis de una diversidad de otros mediadores químicos,
incluyendo, entre otras cosas, factor activador de plaquetas (PAF),
prostaglandinas y leucotrienos (por ejemplo, LTC4) y la síntesis
de novo y liberación de citocinas tales como TNF\alpha,
IL-4, IL-5, IL-6,
IL-13, etc. El primero de estos dos procesos se
produce aproximadamente a los 3-30 min después de
la activación del receptor de IgE; el último, aproximadamente de 30
min a 7 h después de la activación del receptor. Se piensa que estos
mediadores de "fase tardía" son responsables en parte de los
síntomas crónicos de las reacciones de hipersensibilidad atópicas y
de Tipo I enumeradas anteriormente y, además, son mediadores
químicos de la artritis reumatoide, inflamación y enfermedades
inflamatorias (por ejemplo, enfermedad inflamatoria del intestino,
colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria
del intestino idiopática, intestino irritable, colon irritable,
etc.), cicatrización de mala calidad (por ejemplo, esclerodermia,
fibrosis aumentada, queloides, cicatrices postquirúrgicas, fibrosis
pulmonar, espasmos vasculares, migraña, lesión por reperfusión y
post-infarto de miocardio), ciertas enfermedades
autoinmunes (por ejemplo, lupus, diabetes insulinodependiente,
artritis reumatoide, esclerosis múltiple, etc.) y complejo o
síndrome seco. Todas estas enfermedades pueden tratarse o prevenirse
usando medicamentos preparados usando el compuesto de quinolina de
la invención.
Las enfermedades adicionales que pueden tratarse
o prevenirse usando medicamentos preparados usando los compuestos
de quinolina de la invención incluyen enfermedades asociadas con una
patología de basófilos y/o mastocitos. Los ejemplos de dichas
enfermedades incluyen, pero sin limitación, enfermedades de la piel
tales como esclerodermia, enfermedades cardiacas tales como
post-infarto de miocardio, enfermedades pulmonares
tales como cambios o remodelación de la musculatura pulmonar y
enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfermedades del
intestino tales como el síndrome inflamatorio del intestino (colon
irritable).
La Figura 1 proporciona una viñeta que ilustra
la producción de IgE inducida por un alergeno y la liberación
consiguiente de mediadores preformados y otros mediadores químicos
de mastocitos;
La Figura 2 proporciona una viñeta que ilustra
la cascada de transducción de señales de FC\varepsilonR1 (receptor
de IgE) que conduce a la desgranulación de mastocitos y/o
basófilos;
La Figura 3 proporciona una viñeta que ilustra
los supuestos lugares de acción de compuestos que inhiben
selectivamente corriente arriba la desgranulación mediada por
receptor de IgE (inducida por IgE) y de compuestos que inhiben tanto
la desgranulación inducida por IgE como la inducida por ionomicina;
y
La Figura 4 representa una síntesis ejemplar de
compuestos de la invención.
Como se usan en la presente memoria, se pretende
que los siguientes términos tengan los siguientes significados:
El término "alquilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un radical hidrocarburo
monovalente saturado o insaturado, ramificado, de cadena lineal o
cíclico que tiene el número indicado de átomos de carbono (es
decir, C1-C6 significa de uno a seis átomos de
carbono) que se obtiene por la eliminación de un átomo de hidrógeno
de un solo átomo de carbono de un alcano, alqueno o alquino
precursor. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero sin
limitación, metilo; etilos tales como etanilo, etenilo, etinilo;
propilos tales como propan-1-ilo,
propan-2-ilo,
ciclopropan-1-ilo,
prop-1-en-1-ilo,
prop-1-en-2-ilo,
prop-2-en-1-ilo,
cicloprop-1-en-1-ilo;
cicloprop-2-en-1-ilo,
prop-1-in-1-ilo,
prop-2-in-1-ilo,
etc.; butilos tales como
butan-1-ilo,
butan-2-ilo,
2-metil-propan-1-ilo,
2-metil-propan-2-ilo,
ciclobutan-1-ilo,
but-1-en-1-ilo,
but-1-en-2-ilo,
2-metil-prop-1-en-1-ilo,
but-2-en-1-ilo,
but-2-en-2-ilo,
buta-1,3-dien-1-ilo,
buta-1,3-dien-2-ilo,
ciclobut-1-en-1-ilo,
ciclobut-1-en-3-ilo,
ciclobuta-1,3-dien-1-ilo,
but-1-in-1-ilo,
but-1-in-3-ilo,
but-3-in-1-ilo,
etc.; y similares. Cuando se desean niveles específicos de
saturación se usa la nomenclatura "alcanilo", "alquenilo"
y/o "alquinilo", como se define a continuación. En
realizaciones preferidas, los grupos alquilo son alquilo
(C1-C6).
El término "alcanilo", solo o como
parte de otros sustituyentes, se refiere a un alquilo saturado
ramificado, de cadena lineal o cíclico obtenido por la eliminación
de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alcano
precursor. Los grupos alcanilo típicos incluyen, pero sin
limitación, metanilo; etanilo; propanilos tales como
propan-1-ilo,
propan-2-il (isopropilo),
ciclopropan-1-ilo, etc.; butanilos
tales como butan-1-ilo,
butan-2-ilo (sec-butilo),
2-metil-propan-1-ilo
(isobutilo),
2-metil-propan-2-ilo
(t-butilo), ciclobutan-1-ilo,
etc.; y similares. En realizaciones preferidas, los grupos alcanilo
son alcanilo (C1-C6).
El término "alquenilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un alquilo insaturado
ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un doble
enlace carbono-carbono obtenido por la eliminación
de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alqueno
precursor. El grupo puede estar en la conformación cis o
trans con respecto al doble o a los dobles enlaces. Los
grupos alquenilo típicos incluyen, pero sin limitación, etenilo;
propenilos tales como
prop-1-en-1-ilo,
prop-1-en-2-ilo,
prop-2-en-1-ilo,
prop-2-en-2-ilo,
cicloprop-1-en-1-ilo;
cicloprop-2-en-1-ilo;
butenilos tales como
but-1-en-1-ilo,
but-1-en-2-ilo,
2-metil-prop-1-en-1-ilo,
but-2-en-1-ilo,
but-2-en-2-ilo,
buta-1,3-dien-1-ilo,
buta-1,3-dien-2-ilo,
ciclobut-1-en-1-ilo,
ciclobut-1-en-3-ilo,
ciclobuta-1,3-dien-1-ilo,
etc.; y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquenilo
es alquenilo (C2-C6).
El término "alquinilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un alquilo insaturado
ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un triple
enlace carbono-carbono obtenido por la eliminación
de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alquino
precursor. Los grupos alquinilo típicos incluyen, pero sin
limitación, etinilo; propinilos tales como
prop-1-in-1-ilo,
prop-2-in-1-ilo,
etc.; butinilos tales como
but-1-in-1-ilo,
but-1-in-3-ilo,
but-3-in-1-ilo,
etc.; y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquinilo
es alquinilo (C2-C6).
El término "alquildiilo", solo o
como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo
divalente saturado o insaturado, ramificado, de cadena lineal o
cíclico, que tiene el número indicado de átomos de carbono (es
decir, C1-C6 significa de uno a seis átomos de
carbono) obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de
cada uno de dos átomos de carbono diferentes de un alcano, alqueno o
alquino precursor o por la eliminación de dos átomos de hidrógeno
de un solo átomo de carbono de un alcano, alqueno o alquino
precursor. Los dos centros radicales monovalentes o cada valencia
del centro radical divalente pueden formar enlaces con los mismos o
con diferentes átomos. Los grupos alquildiilo típicos incluyen, pero
sin limitación metandiilo; etildiilos tales como
etan-1,1-diilo,
etan-1,2-diilo,
eten-1,1-diilo,
eten-1,2-diilo; propildiilos tales
como propan-1,1-diilo,
propan-1,2-diilo,
propan-2,2-diilo,
propan-1,3-diilo,
ciclopropan-1,1-diilo,
ciclopropan-1,2-diilo,
prop-1-en-1,1-diilo,
prop-1-en-1,2-diilo,
prop-2-en-1,2-diilo,
prop-1-en-1,3-diilo,
cicloprop-1-en-1,2-diilo,
cicloprop-2-en-1,2-diilo,
cicloprop-2-en-1,1-diilo,
prop-1-in-1,3-diilo,
etc.; butildiilos tales como
butan-1,1-diilo,
butan-1,2-diilo,
butan-1,3-diilo,
butan-1,4-diilo,
butan-2,2-diilo,
2-metil-propan-1,1-diilo,
2-metil-propan-1,2-diilo,
ciclobutan-1,1-diilo;
ciclobutan-1,2-diilo,
ciclobutan-1,3-diilo,
but-1-en-1,1-diilo,
but-1-en-1,2-diilo,
but-1-en-1,3-diilo,
but-1-en-1,4-diilo,
2-metil-prop-1-en-1,1-diilo,
2-metanilideno-propan-1,1-diilo,
buta-1,3-dien-1,1-diilo,
buta-1,3-dien-1,2-diilo,
buta-1,3-dien-1,3-diilo,
buta-1,3-dien-1,4-diilo,
ciclobut-1-en-1,2-diilo,
ciclobut-1-en-1,3-diilo,
ciclobut-2-en-1,2-diilo,
ciclobuta-1,3-dien-1,2-diilo,
ciclobuta-1,3-dien-1,3-diilo,
but-1-in-1,3-diilo,
but-1-in-1,4-diilo,
buta-1,3-diin-1,4-diilo,
etc.; y similares. Cuando se desean niveles específicos de
saturación se usa la nomenclatura alcanildiilo, alquenildiilo y/o
alquinildiilo. Cuando se desea específicamente que las dos valencias
estén en el mismo átomo de carbono, se usa la nomenclatura
"alquilideno". En realizaciones preferidas, el grupo
alquildiilo es alquildiilo (C1-C6). También se
prefieren grupos alcanildiilo acíclicos saturados en los que los
centros radicales están en los carbonos terminales, por ejemplo,
metandiilo (metano);
etan-1-2-diilo
(etano); propan-1,3-diilo (propano);
butan-1,4-diilo (butano); y
similares (también denominados como alquilenos, definidos
posteriormente).
El término "alquileno", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquildiilo
saturado o insaturado de cadena lineal que tiene dos centros
radicales monovalentes terminales obtenido por la eliminación de un
átomo de hidrógeno de cada uno de los dos átomos de carbono
terminales de un alcano, alqueno o alquino precursor de cadena
lineal. La localización de un doble enlace o triple enlace, si está
presente, en un alquileno particular se indica entre corchetes. Los
grupos alquileno típicos incluyen, pero sin limitación, metano;
etilenos tales como etano, eteno, etino; propilenos tales como
propano, prop[1]eno, propa[1,2]dieno,
prop[1]ino, etc.; butilenos tales como butano,
but[1]eno, but[2]eno,
buta[1,3]dieno, but[1]ino,
but[2]ino, buta[1,3]diino, etc.; y
similares. Cuando se desean niveles específicos de saturación se usa
la nomenclatura alcano, alqueno y/o alquino. En realizaciones
preferidas, el grupo alquileno es alquileno (C1-C6)
o (C1-C3). También se prefieren grupos alcano
saturados de cadena lineal, por ejemplo, metano, etano, propano,
butano y similares.
Los términos "heteroalquilo",
"heteroalcanilo", "heteroalquenilo",
"heteroalquinilo", "heteroalquildiilo" y
"heteroalquileno", solos o como parte de otro
sustituyente, se refieren a grupos alquilo, alcanilo, alquenilo,
alquinilo, alquildiilo y alquileno, respectivamente, en los que uno
o más de los átomos de carbono se reemplazan de forma independiente
con el mismo o con diferentes heteroátomos o grupos heteroatómicos.
Los heteroátomos y/o grupos heteroatómicos típicos que pueden
reemplazar los átomos de carbono incluyen, pero sin limitación,
-O-, -S- -S-O-, -NR'-, -PH-, -S(O)-,
-S(O)_{2}-, -S(O) NR'-,
-S(O)_{2}NR'-, y similares, incluyendo combinaciones
de los mismos, en los que cada R' es de forma independiente un
hidrógeno o alquilo (C1-C6).
Los términos "cicloalquilo" y
"heterocicloalquilo", solos o como parte de otro
sustituyente, se refieren a versiones cíclicas de grupos
"alquilo" y "heteroalquilo", respectivamente. Para grupos
heteroalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición que está
unida al resto de la molécula. Los grupos cicloalquilo típicos
incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo; ciclobutilos tales
como ciclobutanilo y ciclobutenilo; ciclopentilos tales como
ciclopentanilo y ciclopentenilo; ciclohexilos tales como
ciclohexanilo y ciclohexenilo; y similares. Los grupos
heterocicloalquilo típicos incluyen, pero sin limitación,
tetrahidrofuranilo (por ejemplo,
tetrahidrofuran-2-ilo,
tetrahidrofuran-3-ilo, etc.),
piperidinilo (por ejemplo,
piperidin-1-ilo,
piperidin-2-ilo, etc.), morfolinilo
(por ejemplo, morfolin-3-ilo,
morfolin-4-ilo, etc.), piperazinilo
(por ejemplo, piperazin-1-ilo,
piperazin-2-ilo, etc.) y
similares.
La expresión "puente heteroatómico
acíclico" se refiere a un puente divalente en el que los
átomos de la cadena principal son exclusivamente heteroátomos y/o
grupos heteroatómicos. Los puentes heteroatómicos acíclicos típicos
incluyen, pero sin limitación, -O-, -S- -S-O-,
-NR'-, -PH-, -S(O)-, -S(O)_{2}-,
-S(O)NR'-, -S(O)_{2}NR'- y similares,
incluyendo combinaciones de los mismos, en los que R' es de forma
independiente un hidrógeno o alquilo (C1-C6).
La expresión "sistema de anillo aromático
precursor" se refiere a un sistema de anillo cíclico o
policíclico insaturado que tiene un sistema de electrones \pi
conjugados. Se incluyen específicamente dentro de la definición de
"sistema de anillo aromático precursor" sistemas de anillos
fusionados en los que uno o más de los anillos son aromáticos y uno
o más de los anillos son saturados o insaturados, tales como, por
ejemplo, fluoreno, indano, indeno, fenaleno, tetrahidronaftaleno,
etc. Los sistemas de anillos aromáticos precursores típicos
incluyen, pero sin limitación, aceantrileno, acenaftileno,
acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno,
fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, indaceno,
s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno,
octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno,
pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno,
piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno,
tetrahidronaftaleno, trifenileno, trinaftaleno y similares, así
como los diversos hidro isómeros de los mismos.
El término "arilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo
aromático monovalente que tiene el número indicado de átomos de
carbono (es decir, C5-C15 significa de 5 a 15 átomos
de carbono) obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de
un solo átomo de carbono de un sistema de anillo aromático
precursor. Los grupos arilo típicos incluyen, pero sin limitación,
grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno,
antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno,
fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno,
s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno,
octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno,
pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno,
piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno,
trinaftaleno y similares, así como los diversos hidro isómeros de
los mismos. En realizaciones preferidas, el grupo arilo es arilo
(C5-C15), prefiriéndose aún más
(C5-C10). Son arilos particularmente preferidos
ciclopentadienilo, fenilo y naftilo.
El término "arilarilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo
monovalente obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de
un solo átomo de carbono de un sistema de anillo en el que dos o
más sistemas de anillos aromáticos precursores idénticos o no
idénticos se unen directamente entre sí por un enlace sencillo, en
el que el número de dichas uniones directas de anillos es uno menos
que el número de sistemas de anillos aromáticos precursores
implicados. Los grupos arilarilo típicos incluyen, pero sin
limitación, bifenilo, trifenilo, fenil-naftilo,
binaftilo, bifenil-naftilo y similares. Cuando se
especifica el número de átomos de carbono en un grupo arilarilo, el
número se refiere a los átomos de carbono que comprenden cada
anillo aromático precursor. Por ejemplo, un arilarilo
(C5-C15) es un grupo arilarilo en el que cada
anillo aromático comprende de 5 a 15 carbonos, por ejemplo,
bifenilo, trifenilo, binaftilo, fenilnaftilo, etc. Preferiblemente,
cada sistema de anillo aromático precursor de un grupo arilarilo es
de forma independiente un aromático (C5-C15), más
preferiblemente, un aromático (C5-C10). También se
prefieren grupos arilarilo en los que todos los sistemas de anillos
aromáticos precursores son idénticos, por ejemplo, bifenilo,
trifenilo, binaftilo, trinaftilo, etc.
El término "biarilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo arilarilo que
tiene dos sistemas aromáticos precursores idénticos unidos
directamente entre sí por un enlace sencillo. Los grupos biarilo
típicos incluyen, pero sin limitación, bifenilo, binaftilo,
biantracilo y similares. Preferiblemente, los sistemas de anillos
aromáticos son anillos aromáticos (C5-C15), más
preferiblemente, anillos aromáticos (C5-C10). Un
grupo biarilo particularmente preferido es bifenilo.
El término "arilalquilo", solo o
como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo
acíclico en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un átomo
de carbono, típicamente un átomo de carbono terminal o
sp^{3}, se reemplaza con un grupo arilo. Los grupos
arilalquilo típicos incluyen, pero sin limitación, bencilo,
2-feniletan-1-ilo,
2-fenileten-1-ilo,
naftilmetilo,
2-naftiletan-1-ilo,
2-naftileten-1-ilo,
naftobencilo,
2-naftofeniletan-1-ilo
y similares. Cuando se desean restos alquilo específicos, se usa la
nomenclatura arilalcanilo, arilalquenilo y/o arilalquinilo. En
realizaciones preferidas, el grupo arilalquilo es arilalquilo
(C6-C21), por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo
o alquinilo del grupo arilalquilo es (C1-C6) y el
resto arilo es (C5-C15). En realizaciones
particularmente preferidas, el grupo arilalquilo es
(C6-C13), por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo
o alquinilo del grupo arilalquilo es (C1-C3) y el
resto arilo es (C5-C10).
La expresión "sistema de anillo
heteroaromático precursor" se refiere a un sistema de anillo
aromático precursor en el que uno o más átomos de carbono se
reemplazan de forma independiente con los mismos o con diferentes
heteroátomos o grupos heteroatómicos. Los heteroátomos o grupos
heteroatómicos típicos para reemplazar los átomos de carbono
incluyen, pero sin limitación, N, NH, P, O, S, S(O),
S(O)_{2}, Si, etc. Se incluyen específicamente
dentro de la definición de "sistemas de anillos heteroaromáticos
precursores" sistemas de anillos fusionados en los que uno o más
de los anillos son aromáticos y uno o más de los anillos son
saturados o insaturados, tales como, por ejemplo, benzodioxano,
benzofurano, cromano, cromeno, indol, indolina, xanteno, etc.
También se incluyen en la definición de "sistema de anillo
heteroaromático precursor" los anillos reconocidos que incluyen
sustituyentes tales como benzopirona. Los sistemas de anillos
heteroaromáticos precursores típicos incluyen, pero sin limitación,
acridina, benzimidazol, benzisoxazol, benzodioxano, benzodioxol,
benzofurano, benzopirona, benzotiadiazol, benzotiazol,
benzotriazol, benzoxaxina, benzoxazol, benzoxazolina, carbazol,
\beta-carbolina, cromano, cromeno, cinnolina,
furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina,
isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina,
isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina,
fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina,
pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina,
pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina,
quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno
y similares.
El término "heteroarilo", solo o
como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo heteroatómico
monovalente que tiene el número indicado de átomos del anillo (por
ejemplo, "de 5-14 miembros" significa de 5 a 14
átomos del anillo) obtenido por la eliminación de un átomo de
hidrógeno de un solo átomo de un sistema de anillo heteroaromático
precursor. Los grupos heteroarilo típicos incluyen, pero sin
limitación, grupos derivados de acridina, benzimidazol,
benzisoxazol, benzodioxano, benzodiaxol, benzofurano, benzopirona,
benzotiadiazol, benzotiazol, benzotriazol, benzoxazina, benzoxazol,
benzoxazolina, carbazol, \beta-carbolina, cromano,
cromeno, cinnolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina,
indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina,
isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol,
perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina,
pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina,
pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina,
quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno,
triazol, xanteno y similares, así como los diversos hidro isómeros
de los mismos. En realizaciones preferidas, el grupo heteroarilo es
un heteroarilo de 5-14 miembros, siendo
particularmente preferido un heteroarilo de 5-10
miembros.
El término
"heteroarilo-heteroarilo", solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo heteroatómico
monovalente obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de
un solo átomo de un sistema de anillo en el que dos o más sistemas
de anillos heteroaromáticos precursores idénticos o no idénticos se
unen directamente entre sí por un enlace sencillo, en el que el
número de dichas uniones directas de anillos es uno menos que el
número de sistemas de anillos heteroaromáticos precursores
implicados. Los grupos heteroarilo-heteroarilo
típicos incluyen, pero sin limitación, bipiridilo, tripiridilo,
piridilpurinilo, bipurinilo, etc. Cuando se especifica el número de
átomos, el número se refiere al número de átomos que comprende cada
sistema de anillo heteroaromático precursor. Por ejemplo, un
heteroarilo-heteroarilo de 5-15
miembros es un grupo heteroarilo-heteroarilo en el
que cada sistema de anillo heteroaromático precursor comprende de 5
a 15 átomos, por ejemplo, bipiridilo, tripuridilo, etc.
Preferiblemente, cada sistema de anillo heteroaromático precursor es
de forma independiente un heteroaromático de 5-15
miembros, más preferiblemente, un heteroaromático de
5-10 miembros. También se prefieren grupos
heteroarilo-heteroarilo en los que todos los
sistemas de anillos heteroaromáticos precursores son idénticos.
El término "biheteroarilo", solo o
como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo
heteroarilo-heteroarilo que tiene dos sistemas de
anillos heteroaromáticos precursores idénticos unidos directamente
entre sí por un enlace sencillo. Los grupos biheteroarilo típicos
incluyen, pero sin limitación, bipiridilo, bipurinilo,
biquinolinilo y similares. Preferiblemente, los sistemas de anillos
heteroaromáticos son anillos heteroaromáticos de
5-15 miembros, más preferiblemente, anillos
heteroaromáticos de 5-10 miembros.
El término "heteroarilalquilo", solo
o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo
acíclico en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un átomo
de carbono, típicamente un átomo de carbono terminal o
sp^{3}, se reemplaza con un grupo heteroarilo. Cuando se
desean restos alquilo específicos, se usa la nomenclatura
heteroarilalcanilo, heteroarilalquenilo y/o heteroarilalquinilo. En
realizaciones preferidas, el grupo heteroarilalquilo es un
heteroarilalquilo de 6-21 miembros, por ejemplo, el
resto alcanilo, alquenilo o alquinilo del heteroarilalquilo es un
alquilo (C1-C6) y el resto heteroarilo es un
heteroarilo de 5-15 miembros. En realizaciones
particularmente preferidas, el heteroarilalquilo es un
heteroarilalquilo de 6-13 miembros, por ejemplo, el
resto alcanilo, alquenilo o alquinilo es un alquilo
(C1-C3) y el resto heteroarilo es un heteroarilo de
5-10 miembros.
Los términos "halógeno" o
"halo", solos o como parte de otro sustituyente, a menos
que se indique otra cosa se refieren a fluoro, cloro, bromo y
yodo.
El término "haloalquilo", solo o
como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo en el
que uno o más de los átomos de hidrógeno se reemplaza con un
halógeno. Por lo tanto, el término "haloalquilo" pretende
incluir monohaloalquilos, dihaloalquilos, trihaloalquilos, etc.
hasta perhaloalquilos. Por ejemplo, la expresión "haloalquilo
(C1-C2)" incluye 1-fluorometilo,
difluorometilo, trifluorometilo, 1-fluoroetilo,
1,1-difluoroetilo,
1,2-difluoroetilo,
1,1,1-trifluoroetilo, perfluoroetilo, etc.
Los grupos definidos anteriormente pueden
incluir prefijos y/o sufijos que se usan comúnmente en la técnica
para generar grupos sustituyentes adicionales bien conocidos. Como
ejemplos, los términos "alquiloxi" o "alcoxi" se refieren
a un grupo de la fórmula -OR'', "alquilamina" se refiere a un
grupo de la fórmula -NHR'' y "dialquilamina" se refiere a un
grupo de la fórmula -NR''R'', en las que cada R'' es de forma
independiente un alquilo. Como otro ejemplo, los términos
"haloalcoxi" o "haloalquiloxi" se refieren a un grupo de
la fórmula -OR''', en la que R''' es un haloalquilo.
La expresión "grupo protector" se
refiere a un grupo de átomos que, cuando están unidos a un grupo
funcional reactivo en una molécula, enmascaran, reducen o previenen
la reactividad del grupo funcional. Típicamente, un grupo protector
puede eliminarse de forma selectiva según se desee durante el curso
de una síntesis. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores
en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3ª
Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY y Harrison et al.,
Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols.
1-8, 1971-1996, John Wiley &
Sons, NY. Los grupos protectores amino representativos incluyen,
pero sin limitación, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo,
benciloxicarbonilo ("CBZ"), terc-butoxicarbonilo
("Boc"), trimetilsililo ("TMS"),
2-trimetilsilil-etanosulfonilo
("SES"), grupos tritilo y tritilo sustituidos,
aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo
("FMOC"), nitroveratriloxicarbonilo ("NVOC") y similares.
Los grupos protectores hidroxilo representativos incluyen, pero sin
limitación, aquellos en los que el grupo hidroxilo está acilado
(por ejemplo, ésteres de metilo y etilo, grupos acetato o propionato
o ésteres de glicol) o alquilado, tales como éteres de bencilo y
tritilo, así como éteres de alquilo, éteres de tetrahidropiranilo,
éteres de trialquilsililo (por ejemplo, grupos TMS o TIPPS) y
éteres de alilo.
El término "profármaco" se refiere a
un derivado de un compuesto activo de quinolina (fármaco) que
requiere una transformación en las condiciones de uso, tal como en
el interior del cuerpo, para liberar el fármaco activo de
quinolina. Los profármacos son frecuentemente, pero no
necesariamente, farmacológicamente inactivos hasta que se
convierten en el fármaco activo. Los profármacos se obtienen
típicamente por enmascaramiento de un grupo funcional en el fármaco
de quinolina que se piensa que es necesario en parte para la
actividad con un progrupo (definido a continuación) para formar un
pro-resto que experimenta una transformación, tal
como una escisión, en las condiciones especificadas de uso para
liberar el grupo funcional y, por lo tanto, el fármaco activo de
quinolina. La escisión del pro-resto puede tener
lugar espontáneamente, tal como a modo de una reacción de
hidrólisis, o puede estar catalizada o inducida por otro agente, tal
como por una enzima, por luz, por ácido o por un cambio de o una
exposición a un parámetro físico o ambiental, tal como un cambio de
temperatura. El agente puede ser endógeno en las condiciones de uso,
tal como una enzima presente en las células a las que se administra
el profármaco o las condiciones ácidas del estómago, o puede
suministrarse exógenamente.
Se conocen bien en la técnica una gran
diversidad de progrupos, así como los pro-restos
resultantes, adecuados para enmascarar grupos funcionales en los
compuestos activos de quinolinas para dar profármacos. Por ejemplo,
un grupo funcional hidroxilo puede enmascararse como un
pro-resto de sulfonato, éster o carbonato, que puede
hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo hidroxilo.
Un grupo funcional amino puede enmascararse como un
pro-resto de amida, carbamato, imina, urea,
fosfenilo, fosforilo o sulfenilo, que puede hidrolizarse in
vivo para proporcionar el grupo amino. Un grupo carboxilo puede
enmascararse como un pro-resto de éster (incluyendo
ésteres de sililo y tioésteres), amida o hidrazida, que puede
hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo carboxilo.
Otros ejemplos específicos de progrupos adecuados y sus respectivos
pro-restos serán evidentes para los especialistas en
la técnica.
El término "progrupo" se refiere a
un tipo de grupo protector que, cuando se usa para enmascarar un
grupo funcional dentro de un fármaco activo de quinolina para
formar un pro-resto, convierte el fármaco en un
profármaco. Los profármacos están típicamente unidos al grupo
funcional del fármaco mediante enlaces que pueden escindirse en
condiciones especificadas de uso. Por lo tanto, un progrupo es esa
porción de un pro-resto que se escinde para liberar
el grupo funcional en las condiciones especificadas de uso. Como un
ejemplo específico, un pro-resto amida de la
fórmula -NH-C(O)CH_{3} comprende el
progrupo -C(O)CH_{3}.
Las expresiones "Fc\varepsilonR1"
o "receptor de IgE" se refieren al receptor de alta
afinidad por la región Fc de la IgE que se encuentra en mastocitos
y basófilos (así como en otras células) que ancla la IgE monomérica
a la superficie celular. El Fc\varepsilonR1 o receptor de IgE
comprende una cadena alfa, una beta y dos gamma.
Las expresiones "desgranulación inducida
por IgE" o "desgranulación mediada por el receptor de
IgE" se refieren a la desgranulación que se desarrolla a
través de la cascada de transducción de señales del receptor de IgE
iniciada por el entrecruzamiento de IgE unida a Fc\varepsilonR1.
El entrecruzamiento puede inducirse por un alergeno específico de
IgE u otro agente de unión multivalente, tal como un anticuerpo
anti-IgE. Con respecto a la Figura 2, la cascada de
señalización del receptor de IgE que conduce a la desgranulación
puede dividirse en dos fases: corriente arriba y corriente abajo.
La fase corriente arriba incluye todos los procesos que tienen
lugar antes de la movilización de ión calcio (ilustrado como
"Ca^{2+}" en la Figura 2). La fase corriente abajo incluye
la movilización de ión calcio y todos los procesos corriente abajo
de la misma. Los compuestos que inhiben la desgranulación inducida
por IgE pueden actuar en cualquier punto de la cascada de
transducción de señales del receptor de IgE. Los compuestos que
inhiben selectivamente la desgranulación inducida por IgE corriente
arriba actúan para inhibir esa porción de la cascada de señalización
del receptor de IgE corriente arriba del punto en el que se induce
la movilización de ión calcio. En ensayos basados en células, los
compuestos que inhiben selectivamente la desgranulación inducida
por IgE corriente arriba inhiben la desgranulación de mastocitos o
basófilos que se activan o estimulan con un alergeno específico de
IgE o un agente de unión (tal como un anticuerpo
anti-IgE) pero no inhiben de forma apreciable la
desgranulación de mastocitos o basófilos que se activan o estimulan
con agentes de la desgranulación que evitan la ruta de señalización
del receptor de IgE, tales como, por ejemplo, los ionóforos de
calcio ionomicina y A23187.
Las expresiones "desgranulación inducida
por ionóforos" o "desgranulación mediada por
ionóforos" se refiere a la desgranulación de un mastocito o
basófilo que se produce tras la exposición a un ionóforo de calcio,
tal como, por ejemplo, ionomicina o A23187.
6.3 Los compuestos de la invención
son generalmente compuestos de quinolina de acuerdo con la fórmula
estructural
(I):
y sales, hidratos, solvatos y
N-óxidos de la misma, en la
que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos
R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6},
R^{7} y R^{8} se seleccionan del grupo constituido por
hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR^{d}, -SR^{d},
haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi
(C1-C3), -NR^{c}-arilo,
-NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo
(C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3),
-CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo
(C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de
los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo
(C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los
mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de
5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por
haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo
(C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3},
-CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}
y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o
más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{10} se selecciona del grupo constituido por
R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o
diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de
los mismos o diferentes R^{a} o R^{b},
-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-(CHR^{a})_{m}-R^{b},
-O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma
independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo
(C1-C6), cicloalquilo (C3-C8),
ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo
(C5-C10), fenilo, arilalquilo
(C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado
de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d},
haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un
número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean
ambos O y que A y B no sean O y NH;
a condición de que:
el compuesto no sea
6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.
En una realización, R^{1} es un grupo
metilo.
En otra realización, R^{1} es un grupo metilo
y R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido. Los
sustituyentes adecuados en el grupo fenilo incluyen, por ejemplo,
átomos de halógeno tales como fluoro, cloro y combinaciones de los
mismos.
En otra realización más, R^{2} se selecciona
de un átomo de hidrógeno, grupos fenilo, metilo, -CO_{2}Et,
-CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}, 3
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización, R^{6} es un átomo de
hidrógeno, F, -OCF_{3} o Br.
En otra realización más, R^{7} es un átomo de
hidrógeno, Cl o CF_{3}.
En otro aspecto de la invención, R^{1} es un
grupo metilo, R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido,
R^{2} es un átomo de hidrógeno, un grupo fenilo, metilo,
-CO_{3}Et, -CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}, o 4
400 o 5 R^{6} es un átomo de
hidrógeno, F, -OCF_{3} o Br; y R^{7} es un átomo de hidrógeno,
Cl o -CF_{3}.
\vskip1.000000\baselineskip
En otro aspecto, los compuestos de fórmula
estructural (I) incluyen cualquier compuesto seleccionado de la
Tabla 1 que inhiba la desgranulación de mastocitos y/o basófilos
medida en un ensayo in vitro, opcionalmente sujeto a la
condición de que el compuesto no sea un compuesto excluido por la
definición descrita anteriormente. En una realización específica,
dichos compuestos tienen una CI_{50} de aproximadamente 20 \muM
o menos, medida en un ensayo de desgranulación in vitro, tal
como uno de los ensayos de desgranulación descritos en la sección de
Ejemplos.
En otra realización más, los compuestos de
fórmulas estructurales (I) incluyen cualquier compuesto seleccionado
de la Tabla 1 que inhiba la cascada del receptor de IgE con una
CI_{50} de aproximadamente 20 \muM o menos, medida en un ensayo
in vitro, tal como uno de los ensayos in vitro
proporcionado en la sección de Ejemplos, opcionalmente sujeto a la
condición de que el compuesto no sea un compuesto excluido por la
definición descrita anteriormente.
Los especialistas en la técnica entenderán que
los compuestos de quinolina descritos en la presente memoria pueden
incluir grupos funcionales que pueden enmascararse con progrupos
para generar profármacos. Dichos profármacos son habitualmente,
pero no es necesario que sean, farmacológicamente inactivos hasta
que se convierten en su forma farmacológica activa. De hecho,
muchos de los compuestos activos de quinolina descritos en la Tabla
1, posteriormente, incluyen pro-restos que pueden
hidrolizarse o escindirse de otro modo en condiciones de uso. Por
ejemplo, los grupos éster comúnmente experimentan una hidrólisis
catalizada por ácidos para dar el ácido carboxílico precursor
cuando se exponen a las condiciones ácidas del estómago. Por lo
tanto, cuando se administran a un sujeto por vía oral, las
quinolinas que incluyen restos éster pueden considerarse profármacos
de su correspondiente ácido carboxílico, independientemente de que
la forma éster sea farmacológicamente activa. Con respecto a la
Tabla 1, numerosas quinolinas de la invención que contienen éster
son activas en su forma éster de "profármaco".
En los profármacos de la invención, cualquier
resto funcional disponible pueden enmascararse con un progrupo para
dar un profármaco. Los grupos funcionales dentro de los compuestos
de quinolina que pueden enmascararse con progrupos para la
inclusión en un pro-resto incluyen, pero sin
limitación, aminas (primarias y secundarias), hidroxilos,
sulfanilos (tioles), carboxilos, etc. Se conocen en la técnica
múltiples progrupos adecuados para enmascarar dichos grupos
funcionales para dar pro-restos que pueden
escindirse en las condiciones deseadas de uso. Todos estos
progrupos, solos o en combinaciones, pueden incluirse en los
profármacos de la invención.
En una realización ilustrativa, los profármacos
de la invención son compuestos de acuerdo con la fórmula estructural
(I) en la que R^{c} y R^{d} pueden ser, además de las
alternativas definidas anteriormente, un progrupo.
Los especialistas en la técnica entenderán que
muchos de los compuestos y profármacos de la invención, así como
las diversas especies de compuestos descritas y/o ilustradas
específicamente en la presente memoria, pueden presentar el
fenómeno del tautomerismo, isomerismo conformacional, isomerismo
geométrico y/o isomerismo óptico. Por ejemplo, los compuestos y
profármacos de la invención pueden incluir uno o más centros
quirales y/o dobles enlaces y, como consecuencia, pueden existir
como estereoisómeros, tales como isómeros de doble enlace (es
decir, isómeros geométricos), enantiómeros y diastereómeros y
mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas. Como otro
ejemplo, los compuestos y profármacos de la invención pueden existir
en diversas formas tautoméricas, incluyendo la forma enol, la forma
ceto y mezclas de las mismas. Como los diversos nombres de
compuestos, fórmulas y dibujos de compuestos dentro de la memoria
descriptiva y de las reivindicaciones pueden representar sólo una
de las formas tautoméricas, isoméricas conformacionales, isoméricas
ópticas o isoméricas geométricas posibles, se entenderá que la
invención incluye cualquier forma tautomérica, isomérica
conformacional, isomérica óptica y/o isomérica geométrica de los
compuestos o profármacos que tenga una o más de las utilidades
descritas en la presente memoria, así como mezclas de estas diversas
formas isoméricas diferentes.
Además, los especialistas entenderán que cuando
las listas de sustituyentes alternativos incluyen miembros que,
debido a requerimientos de valencia u otras razones no pueden usarse
para sustituir un grupo en particular, se pretende que la lista se
lea en el contexto para incluir los miembros de la lista que sean
adecuados para sustituir el grupo en particular. Por ejemplo, los
especialistas entenderán que aunque pueden usarse todas las
alternativas enumeradas para R^{b} para sustituir un grupo
alquilo, algunas de las alternativas, tal como =O, no pueden usarse
para sustituir un grupo fenilo. Se entenderá que sólo se tienen por
objeto las combinaciones de parejas
grupo-sustituyente posibles.
Los compuestos y/o profármacos de la invención
pueden identificarse por su estructura química o por su nombre
químico. Cuando la estructura química y el nombre químico estén en
conflicto, la estructura química es determinante de la identidad del
compuesto específico.
Dependiendo de la naturaleza de los diversos
sustituyentes, los compuestos y profármacos de quinolina de la
invención pueden estar en la forma de sales. Dichas sales incluyen
sales adecuadas para usos farmacéuticos ("sales farmacéuticamente
aceptables"), sales adecuadas para usos veterinarios, etc. Dichas
sales pueden obtenerse a partir de ácidos o bases, como es bien
conocido en la técnica.
En una realización, la sal es una sal
farmacéuticamente aceptable. Generalmente, son sales
farmacéuticamente aceptables las sales que conservan
sustancialmente una o más de las actividades farmacológicas deseadas
del compuesto precursor y que son adecuadas para la administración
a seres humanos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen
sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos o ácidos
orgánicos. Los ácidos inorgánicos adecuados para formar sales de
adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, a modo de
ejemplo y sin limitación, ácidos hidrácidos (por ejemplo, ácido
clorhídrico, ácido bromhídrico, etc.), ácido sulfúrico, ácido
nítrico, ácido fosfórico y similares. Los ácidos orgánicos adecuados
para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables
incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, ácido acético, ácido
trifluoroacético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido
ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido
pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido
málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido
cítrico, ácido benzoico, ácido
3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido
cinámico, ácido mandélico, ácidos alquilsulfónicos (por ejemplo,
ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido
1,2-etano-disulfónico, ácido
2-hidroxietanosulfónico, etc.), ácidos
arilsulfónicos (por ejemplo, ácido bencenosulfónico, ácido
4-clorobencenosulfónico, ácido
2-naftalenosulfónico, ácido
4-toluenosulfónico, ácido canforsulfónico, etc.),
ácido
4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico,
ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico,
ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético,
ácido lauril sulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido
hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico y
similares.
Las sales farmacéuticamente aceptables también
incluyen sales formadas cuando un protón ácido presente en el
compuesto precursor se reemplaza por un ión metálico (por ejemplo,
un ión de metal alcalino, un ión de metal alcalinotérreo o un ión
de aluminio) o se coordina con una base orgánica (por ejemplo,
etanolamina, dietanolamina, trietanolamina,
N-metilglucamina, morfolina, piperidina,
dimetilamina, dietilamina, etc.).
Los compuestos de quinolina y de la invención,
así como las sales de los mismos, también pueden estar en la forma
de hidratos, solvatos y N-óxidos, como es bien conocido en la
técnica.
Los compuestos y profármacos de la invención
pueden sintetizarse a través de una diversidad de rutas sintéticas
diferentes usando materiales de partida disponibles en el mercado
y/o materiales de partida preparados por métodos sintéticos
convencionales. Se encuentran métodos ejemplares adecuados que
pueden adaptarse de forma rutinaria para sintetizar los compuestos
y profármacos de quinolina de la invención en el documento WO
94/24095, cuya descripción se incorpora en la presente memoria como
referencia. Se proporcionan ejemplos específicos que describen la
síntesis de numerosos compuestos y profármacos de la invención, así
como intermedios para los mismos, en la sección de Ejemplos. Todos
los compuestos de fórmulas estructurales (I) pueden prepararse
mediante una adaptación de rutina de estos métodos.
Se describen una diversidad de rutas sintéticas
ejemplares que pueden usarse para sintetizar los compuestos de
quinolina de la invención en la Figura 4 y en los Esquemas 1 a 6, a
continuación. Estos métodos pueden adaptarse de forma rutinaria
para sintetizar los compuestos de quinolina de acuerdo con la
fórmula (I).
Los compuestos activos de quinolina de la
invención inhiben la cascada de señalización de IgE que conduce,
entre otras cosas, a la desgranulación de mastocitos y/o basófilos.
Tanto los mastocitos como los basófilos desempeñan un papel central
en los trastornos inducidos por alergenos, incluyendo, por ejemplo,
rinitis alérgica y asma. Con respecto a la Figura 1, tras la
exposición a alergenos, que pueden ser, entre otras cosas, polen o
parásitos, se sintetizan anticuerpos de IgE específicos de alergeno
por células B activadas por IL-4 (o
IL-13) y otros mensajeros para cambiar a síntesis de
anticuerpos específicos de clase IgE. Estas IgE específicas de
alergeno se unen al receptor Fc\varepsilon de alta afinidad
(Fc\varepsilonR1 o receptor de IgE) presente en mastocitos y/o
basófilos. Tras la unión del antígeno, las IgE unidas a
Fc\varepsilonR1 se entrecruzan y se activa la ruta de
transducción de señales del receptor de IgE que conduce la
desgranulación de las células y a la consiguiente liberación y/o
síntesis de un hospedador de mediadores químicos, incluyendo
histamina, proteasas (por ejemplo, triptasa y quimasa), mediadores
lipídicos tales como leucotrienos (por ejemplo, LTC4), factor
activador de plaquetas (PAF) y prostaglandinas (por ejemplo, PGD2) y
una serie de citocinas, incluyendo TNF-\alpha,
IL-4, IL-13, IL-5,
IL-6, IL-8, GMCSF, VEGF y
TGF-\beta. La liberación y/o síntesis de estos
mediadores de mastocitos y/o basófilos es responsable de las
respuestas de fase temprana y tardía inducidas por alergenos y está
directamente ligada a acontecimientos corriente abajo que conducen a
un estado inflamatorio mantenido.
Los acontecimientos moleculares en la ruta de
transducción de señales del receptor de IgE que conduce a la
liberación de mediadores preformados a través de la desgranulación y
a la liberación y/o síntesis de otros mediadores químicos son bien
conocidos y se ilustran en la Figura 2. Con respecto a la Figura 2,
el receptor de IgE (Fc\varepsilonR1) es un receptor
heterotetramérico compuesto por una subunidad alfa de unión a IgE,
una subunidad beta y dos subunidades gamma. El entrecruzamiento del
receptor de IgE unido a IgE por agentes de unión multivalentes
(incluyendo, por ejemplo, alergenos específicos de IgE o anticuerpos
anti-IgE) induce la rápida asociación y activación
de la quinasa relacionada con Src Lyn. Lyn fosforila motivos de
activación basados en tirosina de inmunorreceptores (ITAMS) en las
subunidades beta y gamma intracelulares, que conduce al
reclutamiento de Lyn adicional hacia la subunidad beta y de quinasa
Syk hacia las subunidades gamma. Estas quinasas asociadas a
receptor que se activan por fosforilación intra e intermolecular
fosforilan otros componentes de la ruta, tales como la quinasa Btk,
LAT y la fosfolipasa C-gamma. La
PLC-gamma activada inicia rutas que conducen a la
activación de proteína quinasa C y a la movilización de Ca^{2+},
requiriéndose ambas para la desgranulación. El entrecruzamiento de
Fc\varepsilonR1 también activa las tres clases principales de
proteína quinasas activadas por mitógeno (MAP), es decir, ERK1/2,
JNK1/2 y p38. La activación de estas rutas es importante en la
regulación transcripcional de mediadores proinflamatorios tales como
TNF-\alpha e IL-6, así como del
mediador lipídico leucotrieno CA (LTC4).
\newpage
La capacidad de los compuestos de quinolina de
la invención para inhibir la cascada de señalización del receptor
de IgE puede determinarse o confirmarse de una forma sencilla en
ensayos in vitro. Se proporcionan ensayos adecuados en la
sección de Ejemplos. En un ensayo típico, se cultivan primero
mastocitos o basófilos en presencia de IL-4, factor
de células madre (SCF), IL-6 e IgE para aumentar la
expresión del receptor de IgE, se exponen a un compuesto de ensayo
de quinolina de la invención y se estimulan con anticuerpos
anti-IgE (o, como alternativa, un alergeno
específico de IgE). Después de la incubación puede cuantificarse la
cantidad de un mediador químico u otro agente químico liberado y/o
sintetizado como consecuencia de la activación de la cascada de
señalización del receptor de IgE usando técnicas convencionales y
compararse con la cantidad del mediador o agente liberado de
células de control (es decir, células que se estimulan pero que no
exponen al compuesto de ensayo). La concentración de compuesto de
ensayo que produce una reducción del 50% en la cantidad del mediador
o agente medido en comparación con las células de control es la
CI_{50} del compuesto de ensayo. El origen de los mastocitos o
basófilos usados en el ensayo dependerá, en parte, del uso deseado
para los compuestos, y será evidente para los especialistas en la
técnica. Por ejemplo, si los compuestos se usarán para preparar
medicamentos para tratar o prevenir una enfermedad particular en
seres humanos, una fuente conveniente de mastocitos o basófilos es
un ser humano u otro animal que constituya un modelo clínico
aprobado o conocido para la enfermedad en particular. Por lo tanto,
dependiendo de la aplicación particular, los mastocitos o basófilos
pueden obtenerse a partir de una gran diversidad de fuentes
animales que varían desde, por ejemplo, mamíferos inferiores tales
como ratones y ratas hasta perros, ovejas y otros mamíferos
comúnmente empleados en ensayos clínicos, hasta mamíferos
superiores tales como monos, chimpancés y simios, hasta seres
humanos. Los ejemplos específicos de células adecuadas para llevar
a cabo los ensayos in vitro incluyen, pero sin limitación,
basófilos de roedores o humanos, líneas celulares de leucemia de
basófilos de rata, mastocitos primarios de ratón (tales como
mastocitos de ratón obtenidos de la médula ósea "BMMC") y
mastocitos primarios humanos aislados de cordón umbilical
("CHMC") u otros tejidos tales como pulmón. Se conocen bien
métodos para el aislamiento y cultivo de estos tipos celulares o se
proporcionan en la sección de Ejemplos (véase, por ejemplo, Demo
et al., 1999, Cytometry 36 (4): 340-348 y la
solicitud en trámite junto con la presente de número de serie
10/053.355, presentada el 8 de noviembre de 2001, cuyas
descripciones se incorporan en la presente memoria como
referencia).
Como entenderán los especialistas, el mediador o
agente cuantificado no es crítico. El único requerimiento es que
sea un mediador o agente liberado y/o sintetizado como consecuencia
del inicio o de la activación de la cascada de señalización del
receptor de IgE. Con respecto a la Figura 1, la activación de de
esta cascada de señalización conduce a numerosos acontecimientos
corriente abajo. Por ejemplo, la activación de la cascada de
señalización del receptor de IgE conduce a la liberación inmediata
(es decir, en 1-3 minutos después de la activación
del receptor) de una diversidad de mediadores químicos y agentes
preformados mediante la desgranulación. Por lo tanto, en una
realización, el mediador o agente cuantificado puede ser específico
de gránulos (es decir, presente en gránulos pero no en el
citoplasma celular en general). Los ejemplos de mediadores o agentes
específicos de gránulos que pueden cuantificarse para determinar
y/o confirmar la actividad de un compuesto de quinolina de la
invención incluyen, pero sin limitación, enzimas específicas de
gránulos, tales como hexosaminidasa y triptasa y componentes
específicos de gránulos, tales como histamina y serotonina. Se
conocen bien ensayos para cuantificar dichos factores y, en muchos
casos, están disponibles en el mercado. Por ejemplo, la liberación
de triptasa y/o hexosaminidasa pueden cuantificarse por incubación
de las células con sustratos escindibles que emiten fluorescencia
tras la escisión y cuantificación de la cantidad de fluorescencia
producida usando técnicas convencionales. Dichos sustratos
fluorogénicos escindibles están disponibles en el mercado. Por
ejemplo, los sustratos fluorogénicos
Z-Gly-Pro-Arg-AMC
(Z = benciloxicarbonilo; AMC =
7-amino-4-metilcumarina;
BIOMOL Research Laboratories, Inc., Plymouth Meeting, PA 19462, Nº
de catálogo P-142) y
Z-Ala-Lys-Arg-AMC
(Enzyme Systems Products, una división de ICN Biomedicals, Inc.,
Livermore, CA 94550, Nº de catálogo AMC-246) pueden
usarse para cuantificar la cantidad de triptasa liberada. El
sustrato fluorogénico
4-metilumbeliferil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida
(Sigma, St. Louis, MO, Nº de catálogo 69585) puede usarse para
cuantificar la cantidad de hexosaminidasa liberada. La liberación
de histamina puede cuantificarse usando un ensayo inmunoabsorbente
ligado a enzimas (ELISA) disponible en el mercado, tal como el
ensayo de ELISA de histamina de Immunotech Nº IM2015
(Beckman-Coulter, Inc.). Se proporcionan métodos
específicos de cuantificación de la liberación de triptasa,
hexosaminidasa e histamina en la sección de Ejemplos. Cualquiera de
estos ensayos puede usarse para determinar o confirmar la actividad
de los compuestos de quinolina de la invención.
De nuevo, con respecto a la Figura 1, la
desgranulación es sólo una de diversas respuestas iniciadas por la
cascada de señalización del receptor de IgE. Además, la activación
de esta ruta de señalización conduce a la síntesis de novo y
a la liberación de citocinas y quimiocinas tales como
IL-4, IL-5, IL-6,
TNF-\alpha, IL-13 y
MIP1-\alpha) y a la liberación de mediadores
lipídicos tales como leucotrienos (por ejemplo, LTC4), factor
activador de plaquetas (PAF) y prostaglandinas. Por consiguiente,
los compuestos de quinolina de la invención también pueden
evaluarse para determinar la actividad por cuantificación de la
cantidad de uno o más de estos mediadores liberados y/o
sintetizados por células activadas.
A diferencia de los componentes específicos de
gránulos analizados anteriormente, estos mediadores de "fase
tardía" no se liberan inmediatamente después de la activación de
la cascada de señalización del receptor de IgE. Por consiguiente,
cuando se cuantifican estos mediadores de fase tardía, debe tenerse
cuidado para asegurar que el cultivo celular activado se incuba
durante un tiempo suficiente para dar como resultado la síntesis
(si es necesaria) y la liberación del mediador que se cuantifica.
Generalmente, el PAF y mediadores lipídicos tales como leucotrieno
C4 se liberan a los 3-30 min después de la
activación del receptor de IgE. Las citocinas y otros mediadores de
fase tardía se liberan aproximadamente a las 4-8
horas después de la activación del receptor de IgE. Serán evidentes
para los especialistas en la técnica tiempos de incubación adecuados
para un mediador específico. Se proporciona una orientación y
ensayos específicos en la sección de Ejemplos.
La cantidad de un mediador de fase tardía en
particular liberado puede cuantificarse usando cualquier técnica
convencional. En una realización, la cantidad o cantidades pueden
cuantificarse usando ensayos de ELISA. Están disponibles kit de
ensayo de ELISA adecuados para cuantificar la cantidad de
TNF\alpha, IL-4, IL-5,
IL-6 y/o IL-13 liberados de, por
ejemplo, Biosource International, Inc., Camarillo, CA 93012 (véanse,
por ejemplo, los Nº de catálogo KHC3011, KHC0042, KHC0052, KHC0061
y KHC0132). Están disponibles kits de ensayo de ELISA adecuados
para cuantificar la cantidad de leucotrieno C4 (LTC4) liberado de
las células de Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI 48108 (véase, por
ejemplo, el Nº de catálogo 520211).
Típicamente, los compuestos activos de quinolina
de la invención presentarán CI_{50} con respecto a la
desgranulación inducida por IgE o mediada por receptor de IgE y/o
la liberación o síntesis de mediadores de aproximadamente 20 \muM
o inferiores, medidas en un ensayo in vitro, tal como uno de
los ensayos in vitro descritos anteriormente o en la sección
de Ejemplos. Por supuesto, los especialistas entenderán que son
particularmente útiles compuestos que presentan CI_{50}
inferiores, por ejemplo, del orden de 10 \muM, 1 \muM, 100 nM,
10 nM, 1 nM o incluso inferiores. Los especialistas entenderán que
diversos mediadores analizados anteriormente pueden inducir
diferentes efectos adversos o presentar diferentes potencias con
respecto al mismo efecto adverso. Por ejemplo, el mediador lipídico
LCT4 es un potente vasoconstrictor -es aproximadamente 1000 veces
más potente en la inducción de vasoconstricción que la histamina.
Como otro ejemplo, además de mediar reacciones de hipersensibilidad
atópicas o de Tipo I, las citocinas también pueden provocar
remodelación tisular y proliferación celular. Por lo tanto, aunque
los compuestos que inhiben la liberación y/o síntesis de uno
cualquiera de los mediadores químicos analizados anteriormente son
útiles, los especialistas entenderán que los compuestos que inhiben
la liberación y/o síntesis de multitud, o incluso de todos los
mediadores descritos anteriormente encuentran un uso particular,
puesto que dichos compuestos son útiles para mejorar o evitar por
completo multitud, o incluso todos los efectos adversos inducidos
por los mediadores particulares. Por ejemplo, los compuestos que
inhiben la liberación de los tres tipos de mediadores -específicos
de gránulos, lipídicos y citocinas- son útiles para tratar o
prevenir reacciones de hipersensibilidad de Tipo I inmediatas, así
como los síntomas crónicos asociados con las mismas.
Pueden identificarse compuestos de la invención
capaces de inhibir la liberación de más de un tipo de mediador (por
ejemplo, específicos de gránulos o de fase tardía) por determinación
de la CI_{50} con respecto a un mediador representativo de cada
clase usando los diversos ensayos in vitro descritos
anteriormente (u otros ensayos in vitro equivalentes). Los
compuestos de la invención que son capaces de inhibir la liberación
de más de un tipo de mediador presentarán típicamente una CI_{50}
para cada tipo de mediador ensayado de menos de aproximadamente 20
\muM. Por ejemplo, un compuesto que presenta una CI_{50} de 1
\muM con respecto a la liberación de histamina
(CI_{50}^{histamina}) y una CI_{50} de 1 nM con respecto a la
síntesis y/o liberación de leucotrieno LTC4 (CI_{50}^{LTC4})
inhibe tanto la liberación de mediadores inmediatos (específicos de
gránulos) como de fase tardía. Como otro ejemplo específico, un
compuesto que presenta una CI_{50}^{triptasa} de 10 \muM, una
CI_{50}^{LTC4} de 1 \muM y una
CI_{50}^{IL-4} de 1 \muM inhibe la liberación
de mediadores inmediatos (específicos de gránulos), lipídicos y
citocinas. Aunque los ejemplos específicos anteriores utilizan las
CI_{50} de un mediador representativo de cada clase, los
especialistas entenderán que pueden obtenerse las CI_{50} de
multitud, o incluso de todos los mediadores que comprenden una o
más de las clases. La cantidad o cantidades y la identidad o
identidades de mediadores para los que pueden determinarse los
datos de CI_{50} para un compuesto y una aplicación en particular
serán evidentes para los especialistas en la técnica.
Una clase particularmente útil de compuestos
incluyen los compuestos de quinolina que inhiben la liberación de
mediadores inmediatos específicos de gránulos y mediadores de fase
tardía con CI_{50} aproximadamente equivalentes. Por
aproximadamente equivalentes se entiende que las CI_{50} para cada
tipo de mediador están dentro de aproximadamente un intervalo de 10
veces uno de otro. Otra clase particularmente útil de compuestos
incluye los compuestos de quinolina que inhiben la liberación de
mediadores específicos de gránulos, mediadores lipídicos y
mediadores de citocinas con CI_{50} aproximadamente equivalentes.
En una realización específica, dichos compuestos inhiben la
liberación de los siguientes mediadores con CI_{50}
aproximadamente equivalentes: histamina, triptasa, hexosaminidasa,
IL-4, IL-5, IL-6,
IL-13, TNF\alpha y LTC4. Dichos compuestos son
particularmente útiles para, entre otras cosas, mejorar o evitar
por completo tanto las respuestas de fase temprana como tardía
asociadas con reacciones de hipersensibilidad de Tipo I atópicas o
inmediatas.
De una forma ideal, la capacidad para inhibir la
liberación de todos los tipos deseados de mediadores residirá en un
solo compuesto. Sin embargo, también pueden identificarse mezclas de
compuestos que logren el mismo resultado. Por ejemplo, puede usarse
un primer compuesto que inhiba la liberación de mediadores
específicos de gránulos en combinación con un segundo compuesto que
inhiba la liberación y/o síntesis de mediadores de citocinas.
Además de la ruta de la desgranulación inducida
por IgE (o mediada por receptor de IgE) analizada anteriormente, la
desgranulación de mastocitos y/o basófilos puede inducirse por otros
agentes. Por ejemplo, la ionomicina, un ionóforo de calcio que
evita la maquinaria temprana de transducción de señales del receptor
de IgE de la célula induce directamente un flujo de calcio que
desencadena la desgranulación. De nuevo, con respecto a la Figura
2, la PLC\gamma activada inicia rutas que conducen a, entre otras
cosas, la movilización de ión calcio y la posterior desgranulación.
Como se ilustra, esta movilización de Ca^{2+} se desencadena tarde
en la ruta de transducción de señales del receptor de IgE. Como se
ha mencionado anteriormente, como se ilustra en la Figura 3, la
ionomicina induce directamente la movilización de Ca^{2+} y un
flujo de Ca^{2+} que conduce la desgranulación. Otros ionóforos
que inducen la desgranulación de esta forma incluyen A23187. La
capacidad de ionóforos inductores de la granulación, tales como
ionomicina, de evitar las fases tempranas de la cascada de
señalización del receptor de IgE puede usarse como una
contraselección para identificar compuestos activos de la invención
que ejerzan específicamente su actividad inhibidora de la
desgranulación por bloqueo o inhibición de la cascada temprana de
señalización del receptor de IgE que se inicia cuando el receptor de
IgE se entrecruza con antígeno. Los compuestos que inhiben
específicamente dicha desgranulación temprana mediada por receptor
de IgE no sólo inhiben la desgranulación y posterior liberación
rápida de histamina, triptasa y otros contenidos de gránulos, sino
que también inhiben las rutas de activación proinflamatorias que
provocan la liberación de TNF\alpha, IL-4,
IL-13 y los mediadores lipídicos tales como LTC4.
Por lo tanto, los compuestos que inhiben específicamente dicha
desgranulación temprana mediada por receptor de IgE bloquean o
inhiben no sólo las reacciones de hipersensibilidad atópicas o de
Tipo I agudas, sino también las respuestas tardías que implican
múltiples mediadores inflamatorios.
Son compuestos de la invención que inhiben
específicamente la desgranulación temprana de mastocitos y/o
basófilos mediada por receptor de IgE los compuestos que inhiben la
desgranulación inducida por IgE (por ejemplo, que tienen una
CI_{50} de menos de aproximadamente 20 \muM con respecto a la
liberación de un mediador o componente específico de gránulos,
medida en un ensayo in vitro con células estimuladas con un
agente de unión a IgE), pero que no inhiben de forma apreciable la
desgranulación inducida por ionóforos. En una realización, se
considera que los compuestos no inhiben de forma apreciable la
desgranulación inducida por ionóforos si presentan una CI_{50} de
la desgranulación inducida por ionóforos de más de aproximadamente
20 \muM, medida en un ensayo in vitro. Por supuesto, son
particularmente útiles compuestos activos que presentan CI_{50}
incluso superiores de desgranulación inducida por ionóforos o que no
inhiben en absoluto la desgranulación inducida por ionóforos. En
otra realización, se considera que los compuestos no inhiben de
forma apreciable la desgranulación inducida por ionóforos si
presentan una diferencia mayor de 10 veces en sus CI_{50} de la
desgranulación mediada por receptor de IgE y desgranulación inducida
por ionóforos, medidas en un ensayo in vitro. Los ensayos
adecuados para determinar la CI_{50} de la desgranulación inducida
por ionóforos incluyen cualquiera de los ensayos de desgranulación
descritos anteriormente, con la modificación de que las células se
estimulan o se activan con un ionóforo de calcio inductor de la
desgranulación, tal como ionomicina o A23187 (A. G. Scientific, San
Diego, CA) en lugar de con anticuerpos anti-IgE o un
alergeno específico de IgE. Se proporcionan ensayos específicos
para evaluar la capacidad de un compuesto de quinolina de la
invención en particular para inhibir la desgranulación inducida por
ionóforos en la sección de Ejemplos.
Como entenderán los especialistas, los
compuestos que presentan un alto grado de selectividad de
desgranulación inducida por IgE encuentran un uso particular, tal
como compuestos que se dirigen selectivamente hacia la cascada del
receptor de IgE y no interfieren con otros mecanismos de
desgranulación. Los compuestos que presentan un alto grado de
selectividad son generalmente 10 veces o más selectivos para la
desgranulación inducida por IgE sobre la desgranulación inducida por
ionóforos, tal como la desgranulación inducida por ionomicina.
Como se ha analizado anteriormente, los
compuestos activos de la invención inhiben la cascada de
señalización del receptor de IgE que conduce a la liberación y/o
síntesis de mediadores químicos de mastocitos y/o basófilos, a
través de la desgranulación o de otros procesos. Como también se
analiza, muchos de los compuestos activos ejercen su actividad
inhibidora actuando tempranamente en la ruta de transducción de
señales del receptor de IgE. Como consecuencia de estas
actividades, los compuestos activos de la invención pueden usarse en
una diversidad de contextos in vitro, in vivo y ex
vivo para regular o inhibir la liberación de mediadores
químicos de mastocitos y/o basófilos. Por ejemplo, en una
realización, los compuestos pueden usarse para preparar agentes
para usar como controles o patrones en ensayos de selección in
vitro o in vivo para identificar otros compuestos
capaces de inhibir la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. En
otra realización, los compuestos activos pueden usarse para
preparar medicamentos para regular o inhibir la cascada de
señalización del receptor de IgE y/o la desgranulación de
mastocitos y/o basófilos inducida por IgE, como un enfoque
terapéutico para el tratamiento o la prevención de enfermedades
caracterizadas por, causadas por y/o asociadas con la liberación o
síntesis de mediadores químicos o con la desgranulación de
mastocitos y/o basófilos inducida por IgE. Dichos tratamientos
pueden administrarse a animales en contextos veterinarios o a seres
humanos. Las enfermedades que se caracterizan por, están causadas
por o se asocian con dicha liberación, síntesis o desgranulación de
mediadores y que, por lo tanto, pueden tratarse o prevenirse con
medicamentos preparados usando los compuestos activos incluyen, a
modo de ejemplo y sin limitación, atopias o reacciones alérgicas o
de hipersensibilidad anafilácticas, alergias (por ejemplo,
conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, asma atópica, dermatitis
atópica y alergias alimentarias), cicatrización de mala calidad,
(por ejemplo, esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides,
cicatrices postquirúrgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares,
migrañas, lesiones de reperfusión y post-infarto de
miocardio), enfermedades asociadas con destrucción tisular (por
ejemplo, EPOC, cardiobronquitis y post-infarto de
miocardio), enfermedades asociadas con inflamación tisular (por
ejemplo, intestino irritable, colon irritable y enfermedad
inflamatoria del colon), inflamación, ciertas enfermedades
autoinmunes (por ejemplo, lupus, artritis reumatoide, esclerosis
múltiple, etc.) y cicatrización.
Cuando se usan para tratar o prevenir dichas
enfermedades, los compuestos activos pueden administrarse en
solitario, como mezclas de uno o más compuestos activos o en mezcla
o en combinación con otros agentes útiles para tratar dichas
enfermedades y/o los síntomas asociados con dichas enfermedades. Los
compuestos activos también pueden administrarse en mezcla o
combinación con agentes útiles para tratar otras enfermedades o
males, tales como esteroides, estabilizantes de membrana,
inhibidores de 5LO, inhibidores de la síntesis y de receptores de
leucotrienos, inhibidores del cambio de isotipo de IgE o de la
síntesis de IgE, \beta-agonistas, inhibidores de
la triptasa y antihistamínicos, por nombrar algunos. Los compuestos
activos pueden administrarse como tales en la forma de profármacos
o como composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto
activo o profármaco.
Pueden fabricarse composiciones farmacéuticas
que comprenden los compuestos activos de la invención (o profármacos
de los mismos) por medio de procesos de mezcla, disolución,
granulación, levigación para fabricación de grageas, emulsión,
encapsulación, inmovilización o liofilización convencionales. Las
composiciones pueden formularse de una forma convencional usando
uno más vehículos, diluyentes, excipientes o coadyuvantes
fisiológicamente aceptables que facilitan el procesamiento de los
compuestos activos en preparaciones que pueden usarse
farmacéuticamente.
El compuesto activo o profármaco puede
formularse en las composiciones farmacéuticas como tal o en la forma
de un hidrato, solvato, N-óxido o sal farmacéuticamente aceptable,
como se ha descrito anteriormente. Típicamente, dichas sales son
más solubles en soluciones acuosas que los ácidos y bases libres
correspondientes, pero también pueden formarse sales que tengan una
solubilidad inferior que los ácidos y bases libres
correspondientes.
Las composiciones farmacéuticas de la invención
pueden adoptar una forma adecuada para prácticamente cualquier modo
de administración, incluyendo, por ejemplo, la administración por
vía tópica, ocular, oral, bucal, sistémica, nasal, por inyección,
transdérmica, rectal, vaginal, etc., o una forma adecuada para la
administración por inhalación o insuflación.
Para la administración por vía tópica, el
compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden
formularse como soluciones, geles, pomadas, cremas, suspensiones,
etc., como se conocen bien en la técnica.
Las formulaciones sistémicas incluyen las
diseñadas para la administración por inyección, por ejemplo, por
inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intratecal o
intraperitoneal, así como las diseñadas para la administración por
vía transdérmica, oral transmucosa o pulmonar.
Las preparaciones inyectables útiles incluyen
suspensiones, soluciones o emulsiones estériles del compuesto o
compuestos activos en vehículos acuosos u oleosos. Las composiciones
también pueden contener agentes de formulación tales como agentes
de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones
para inyección pueden presentarse en forma de dosificación
unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes multidosis y
pueden contener conservantes añadidos.
Como alternativa, la formulación inyectable
puede proporcionarse en forma de polvo para su reconstitución con
un vehículo adecuado, incluyendo, pero sin limitación, agua estéril
sin pirógenos, tampón, solución de dextrosa, etc., antes del uso.
Con este fin, el compuesto o los compuestos activos pueden secarse
por cualquier procedimiento conocido en la técnica, tal como
liofilización, y reconstituirse antes del uso.
Para la administración por vía transmucosa se
usan en la formulación penetrantes apropiados para la barrera que se
va a permear. Dichos penetrantes se conocen en la técnica.
Para la administración por vía oral, las
composiciones farmacéuticas pueden adaptar la forma de, por ejemplo,
pastillas, comprimidos o cápsulas preparadas por medios
convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales
como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz
pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa);
cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrógeno
fosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de
magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de
patata o almidón glicolato sódico); agentes humectantes (por
ejemplo, lauril sulfato sódico). Los comprimidos pueden recubrirse
por métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, azúcares o
recubrimientos entéricos.
Las preparaciones líquidas para la
administración por vía oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo,
elixires, soluciones, jarabes o suspensiones o pueden presentarse
como un producto seco para su reconstitución con agua u otro
vehículo adecuado antes del uso. Dichas preparaciones líquidas
pueden prepararse por medios convencionales con aditivos
farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por
ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas
comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo,
lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite
de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales
fraccionados); y conservantes (por ejemplo, metil o
propil-p-hidroxibenzoatos o ácido
sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales
tamponadas, conservantes, aromatizantes, colorantes y agentes
edulcorantes según sea apropiado.
Las preparaciones para la administración por vía
oral pueden formularse convenientemente para proporcionar una
liberación controlada del compuesto activo o profármaco, como es
bien conocido.
Para la administración por vía bucal, las
composiciones pueden adoptar la forma de comprimidos o pastillas
formuladas de una forma convencional.
Para las vías de administración rectal y
vaginal, el compuesto o compuestos activos pueden formularse como
soluciones (para enemas de retención), supositorios o pomadas que
contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de
cacao u otros glicéridos.
Para la administración por vía nasal o la
administración por inhalación o insuflación, el compuesto o
compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden
administrarse convenientemente en la forma de una pulverización en
aerosol a partir de envases presurizados o de un nebulizador con el
uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano,
triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, fluorocarburos,
dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol
presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse
proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida.
Las cápsulas y cartuchos para usar en un inhalador o insuflador
(por ejemplo, cápsulas y cartuchos compuestos por gelatina) pueden
formularse para que contengan una mezcla en polvo del compuesto y
una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Un ejemplo específico de una formulación de
suspensión acuosa adecuada para la administración por vía nasal
usando dispositivos de pulverización nasal disponibles en el mercado
incluye los siguientes ingredientes: compuesto activo o profármaco
(0,5-20 mg/ml); cloruro de benzalconio
(0,1-0,2 mg/ml); polisorbato 80 (TWEEN® 80;
0,5-5 mg/ml), carboximetilcelulosa sódica o celulosa
microcristalina (1-15 mg/ml); feniletanol
(1-4 mg/ml); y dextrosa (20-50
mg/ml). El pH de la suspensión final puede ajustarse a un intervalo
de aproximadamente pH 5 a pH 7, siendo típico un pH aproximadamente
pH 5,5.
Para la administración por vía ocular, el
compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden
formularse como una solución, emulsión, suspensión, etc., adecuada
para la administración en el ojo. Se conocen en la técnica una
diversidad de vehículos adecuados para administrar compuestos en el
ojo. Se describen ejemplos específicos no limitantes en la Patente
de Estados Unidos Nº 6.261.547; Patente de Estados Unidos Nº
6.197.934; Patente de Estados Unidos Nº 6.056.950; Patente de
Estados Unidos Nº 5.800.807; Patente de Estados Unidos Nº
5.776.445; Patente de Estados Unidos Nº 5.698.219; Patente de
Estados Unidos Nº 5.521.222; Patente de Estados Unidos Nº
5.403.841; Patente de Estados Unidos Nº 5.077.033; Patente de
Estados Unidos Nº 4.882.150; y Patente de Estados Unidos Nº
4.738.851.
Para una administración prolongada, el compuesto
o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden
formularse como una preparación de liberación prolongada para la
administración por implantación o inyección intramuscular. El
ingrediente activo puede formularse con materiales poliméricos o
hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite
aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco
solubles, por ejemplo, una sal poco soluble. Como alternativa,
pueden usarse los sistemas de administración transdérmica
fabricados como un disco adhesivo o parche con la liberación
lentamente del compuesto o compuestos activos para su absorción
percutánea. Con este fin, pueden usarse potenciadores de la
permeación para facilitar la penetración transdérmica del compuesto
o compuestos activos. Se describen parches transdérmicos adecuados
en, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.407.713; Patente
de Estados Unidos Nº 5.352.456; Patente de Estados Unidos Nº
5.332.213; Patente de Estados Unidos Nº 5.336.168; Patente de
Estados Unidos Nº 5.290.561; Patente de Estados Unidos Nº
5.254.346; Patente de Estados Unidos Nº 5.164.189, Patente de
Estados Unidos Nº 5,163.899; Patente de Estados Unidos Nº
5.088.977; Patente de Estados Unidos Nº 5.087.240; Patente de
Estados Unidos Nº 5.008.110; y Patente de Estados Unidos Nº
4.921.475.
Como alternativa, pueden emplearse otros
sistemas de administración farmacéuticos. Liposomas y emulsiones
son ejemplos bien conocidos de vehículos de administración que
pueden usarse para administrar el compuesto o compuestos activos o
el profármaco o profármacos. También pueden emplearse ciertos
disolventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido (DMSO), aunque
habitualmente a costa de una mayor toxicidad.
Las composiciones farmacéuticas pueden
presentarse, si se desea, en un envase o dispositivo dispensador que
puede contener una o más formas de dosificación unitaria que
contienen el compuesto o compuestos activos. El envase puede
comprender, por ejemplo, una lámina metálica o de plástico tal como
un envase tipo blíster. El envase o dispositivo dispensador puede
acompañarse de instrucciones para la administración.
El compuesto o compuestos activos o el
profármaco o profármacos de la invención, o composiciones de los
mismos, se usarán en general para preparar un medicamento en una
cantidad eficaz para conseguir el resultado deseado, por ejemplo,
en una cantidad eficaz para tratar o prevenir enfermedad en
particular que se trate. El compuesto o compuestos pueden usarse
para preparar un medicamento que se va a administrar
terapéuticamente para conseguir un beneficio terapéutico o
profilácticamente para conseguir un beneficio profiláctico. Por
beneficio terapéutico se entiende la erradicación o mejoría del
trastorno subyacente que se trate y/o la erradicación o mejoría de
uno o más de los síntomas asociados con el trastorno subyacente, de
tal modo que el paciente describa una mejora en su sensación o
estado, a pesar de que el paciente todavía puede estar afectado por
el trastorno subyacente. Por ejemplo, la administración de un
compuesto a un paciente que padece una alergia proporciona un
beneficio terapéutico no sólo cuando la respuesta alérgica
subyacente se erradica o mejora, sino también cuando el paciente
describe una disminución en la gravedad o en la duración de los
síntomas asociados con la alergia después de la exposición al
alergeno. Como otro ejemplo, el beneficio terapéutico en el contexto
del asma incluye una mejora en la respiración después del comienzo
de un ataque asmático o una reducción en la frecuencia o gravedad
de los episodios asmáticos. El beneficio terapéutico también incluye
la detención o ralentización de la evolución de la enfermedad,
independientemente de que se realice o no una mejora.
Para la administración profiláctica, el
compuesto puede usarse para preparar un medicamento que se va a
administrar a un paciente con riesgo de desarrollar una de las
enfermedades descritas anteriormente. Por ejemplo, si se desconoce
si un paciente es alérgico a un fármaco en particular, el compuesto
puede administrarse antes de la administración del fármaco para
evitar o mejorar una respuesta alérgica al fármaco. Como
alternativa, puede aplicarse una administración profiláctica para
evitar el comienzo de los síntomas en un paciente diagnosticado con
el trastorno subyacente. Por ejemplo, puede administrarse un
compuesto a un paciente alérgico antes de la exposición esperada al
alergeno. También pueden administrarse profilácticamente compuestos
a individuos sanos que se exponen de forma repetida a agentes
conocidos de una de las enfermedades descritas anteriormente, para
prevenir el comienzo del trastorno. Por ejemplo, puede administrarse
un compuesto a un individuo sano que se expone de forma repetida a
un alergeno que se sabe que induce alergias, tal como látex, en un
esfuerzo por prevenir que el individuo desarrolle una alergia. Como
alternativa, puede administrarse un compuesto a un paciente que
padezca asma antes de que tome parte en actividades que desencadenen
ataques de asma para disminuir la gravedad de, o evitar por
completo un episodio asmático.
La cantidad de compuesto administrada dependerá
de una diversidad de factores, incluyendo, por ejemplo, la
indicación particular que se trate, el modo de administración, si el
beneficio deseado es profiláctico o terapéutico, la gravedad de la
indicación que se trate y la edad y el peso del paciente, la
biodisponibilidad del compuesto activo en particular, etc. La
determinación de una dosificación eficaz está bien dentro de las
capacidades de los especialistas en la técnica.
Inicialmente pueden estimarse dosificaciones
eficaces a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, puede
formularse una dosificación inicial para el uso en animales para
conseguir una concentración de compuesto activo en sangre
circulante o en suero que esté a o por encima de una CI_{50} del
compuesto particular, medida en un ensayo in vitro, tal como
el CHMC o BMMC in vitro y otros ensayos in vitro
descritos en la sección de Ejemplos. El cálculo de las
dosificaciones para conseguir dichas concentraciones en sangre
circulante o suero teniendo en cuenta la biodisponibilidad del
compuesto particular está bien dentro de las capacidades de los
especialistas. Como orientación, se remite al lector a Fingl y
Woodbury, "General Principles", en: Goodman and Gilman's
The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Capítulo 1, págs.
1-46, última edición, Pagamonon Press, y a la
bibliografía citada en la presente memoria.
También pueden estimarse dosificaciones
iniciales a partir de datos in vivo, tales como modelos
animales. Se conocen bien en la técnica modelos animales útiles
para ensayar la eficacia de compuestos para tratar o prevenir las
diversas enfermedades descritas anteriormente. Se describen modelos
animales adecuados de reacciones de hipersensibilidad o alérgicas
en Foster, 1995, Allergy 50 (Supl. 21): 6-9,
discusión 34-38 y Tumas et al., 2001, J:
Allergy Clin. Immunol. 107 (6): 1025-1033. Se
describen modelos animales adecuados de rinitis alérgica en
Szelenyi et al., 2000, Arzneimittelforschung 50 (11):
1037-42; Kawaguchi et al., 1994, Clin. Exp.
Allergy 24 (3): 238-244 y Sugimoto et al.,
2000, Immunopharmacology 48 (1): 1-7. Se describen
modelos animales adecuados de conjuntivitis alérgica en Carreras
et al., 1993, Br. J. Ophthalmol. 77 (8):
509-514; Saiga et al., 1992, Ophthalmic Res.
24 (1): 45-50; y Kunert et al., 2001, Invest.
Ophthalmol. Vis. Sci. 42 (11): 2483-2489. Se
describen modelos animales adecuados de mastocitosis sistémica en
O'Keefe et al., 1987, J. Vet. Intern. Med. 1 (2):
75-80 y Bean-Knudsen et al.,
1989, Vet. Pathol. 26 (1): 90-92. Se describen
modelos animales adecuados del síndrome de hiper-IgE
en Claman et al., 1990, Clin. Immunol. Immunopathol. 56 (1):
46-53. Se describen modelos animales adecuados de
linfoma de células B en Hough et al., 1998, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 95: 13853-13858 y Hakim et
al., 1996, J. Immunol. 157 (12): 5503-5511. Se
describen modelos animales adecuados de trastornos atópicos tales
como dermatitis atópica, eccema atópico y asma atópica en Chan
et. al., 2001, J. lnvest. Dermatol. 117 (4):
977-983 y Suto et al., 1999, Int. Arch.
Allergy Immunol. 120 (Supl. 1): 70-75. Los
especialistas pueden adaptar de forma rutinaria dicha información
para determinar las dosificaciones adecuadas para la administración
en seres humanos. Se describen modelos animales adecuados
adicionales en la sección de Ejemplos.
Las cantidades de dosificación estarán
típicamente en el intervalo de aproximadamente 0,0001 ó 0,001 ó 0,01
mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día, pero pueden ser
superiores e inferiores dependiendo de, entre otros factores, la
actividad del compuesto, su biodisponibilidad, el modo de
administración y diversos factores analizados anteriormente. La
cantidad y el intervalo de dosificación pueden ajustarse
individualmente para proporcionar niveles plasmáticos del compuesto
o compuestos que sean suficientes para mantener un efecto
terapéutico o profiláctico. En los casos de administración local o
de captación selectiva, tal como una administración local tópica,
la concentración local eficaz de compuesto o compuestos activos
puede no estar relacionada con la concentración plasmática. Los
especialistas serán capaces de optimizar las dosificaciones locales
eficaces sin una experimentación excesiva.
Los medicamentos preparados usando el compuesto
o compuestos pueden administrarse una vez al día, unas pocas o
varias veces al día o incluso múltiples veces al día dependiendo de,
entre otras cosas, la indicación que se trate y el juicio del médico
que los prescriba.
Preferiblemente, los medicamentos preparados
usando el compuesto o compuestos proporcionarán un beneficio
terapéutico o profiláctico sin causar una toxicidad importante. La
toxicidad del compuesto o compuestos puede determinarse usando
procedimientos farmacéuticos convencionales. La relación de dosis
entre el efecto tóxico y el terapéutico (o profiláctico) es el
índice terapéutico. Se prefiere un compuesto o compuestos que
presenten índices terapéuticos elevados.
Habiéndose descrito la invención, se presentan
los siguientes ejemplos a modo de ilustración y sin limitación.
Los Esquemas 1 a 3 proporcionan métodos para
sintetizar intermedios útiles para la preparación de los compuestos
de quinolina de la presente invención. Los Esquemas 1 a 3 son
ejemplos representativos de cómo pueden prepararse dichos
compuestos. Un especialista en la técnica puede preparar compuestos
que tengan diversos sustituyentes colgantes en la porción de
quinolina de la molécula, así como en la porción de isoxazol de la
molécula, en la que los sustituyentes son como se han definido
anteriormente.
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Esquema
1
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Se prepararon cloruros de acilo de isoxazol a
partir de ácidos carboxílicos de isoxazol y PCl_{5}, como se
muestra en el Esquema 1.
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Esquema
2
\vskip1.000000\baselineskip
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Se prepararon cloruros de acilo de quinolina a
partir de ácidos carboxílicos de quinolina y PCl_{5} como se
muestra en el Esquema 2.
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Esquema
3
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Pueden convertirse
4-hidroxiquinolinas en
4-aminoquinolinas usando un procedimiento de dos
etapas. El tratamiento de 4-hidroxiquinolinas con
POCl_{3} dio 4-cloroquinolinas, y el tratamiento
posterior con cloruro de amonio produjo las
4-aminoquinolinas deseadas, como se muestra en el
Esquema 3.
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Esquema
4
\vskip1.000000\baselineskip
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Se acoplaron cloruros de acilo de isoxazol y
4-hidroxiquinolinas en condiciones convencionales
para dar compuestos ligados a éster, como se muestra en el Esquema
4.
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Esquema
5
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\vskip1.000000\baselineskip
En condiciones similares a las usadas para
preparar compuestos de la invención ligados a éster, se acoplaron
cloruros de acilo de isoxazol y 4-aminoquinolinas
para producir compuestos ligados a amidas, como se muestra en el
Esquema 5.
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Esquema
6
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En condiciones similares a las usadas para
preparar compuestos de la invención ligados a amida o ligados a
éster, se acoplaron aminas de isoxazol y
4-acilquinolinas para producir compuestos ligados a
amida inversa, como se muestra en el Esquema 6.
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Esquema
7
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Pueden convertirse compuestos de
2-cloroquinolina en análogos 2-amino
sustituidos usando aminas, anilinas e indoles, como se muestra en el
Esquema 7.
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7.6.1 Ejemplo 9. Éster
2-metil-4-quinolinilo
del ácido
5-metil-3-fenil-4-isoxazolcarboxílico
(Compuesto 9)
\vskip1.000000\baselineskip
Se calentó a reflujo una solución de ácido
5-metil-3-fenilisoxazol-4-carboxílico
(1 g) y PCl_{5} (1 g) en diclorometano (20 ml) durante una hora.
Después, se eliminaron el diclorometano y el POCl_{3} a presión
reducida para dar cloruro de
5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo.
Se disolvieron cloruro de
5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo
(100 mg) y
4-hidroxi-2-metilquinolina
(250 mg) en diclorometano (10 ml) y piridina (0,2 ml). La solución
de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó
con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua
(60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en
columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/2) para dar el éster
2-metil-4-quinolinilo
del ácido
5-metil-3-fenil-4-isoxazolcarboxílico
(100 mg). ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,74 (s, 3H), 2,91 (s,
3H), 7,29 (s, 1H), 7,33-7,46 (m, 5H),
7,64-7,71 (m, 3H), 8,01 (td, J = 0,9 y 8,4 Hz, 1H);
EMCL: tiempo de retención: 23,10 min; pureza: 100%; EM (m/e): 345,02
(MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
7.6.2 Ejemplo 35.
5-metil-3-fenil-N-(7-trifluorometil-4-quinolinil)-4-isoxazolcarboxamida
(Compuesto 35)
\vskip1.000000\baselineskip
Se calentó a reflujo una solución de
4-hidroxi-7-trifluorometilquinolina
(1 g) en diclorometano (10 ml) y POCl_{3} (1 ml) durante media
hora. Después, la reacción se interrumpió con agua (80 ml) y
bicarbonato sódico a pH 7. La solución acuosa se extrajo con
diclorometano (2 x 60 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se
secaron y se evaporaron para dar
4-cloro-7-trifluorometilquinolina.
EMCL: tiempo de retención: 31,51 min; pureza: 100%; EM (m/e): 232
(MH^{+}).
Se calentó una solución de
4-cloro-7-trifluorometilquinolina
(1 g) y cloruro de amonio (1 g) en metanol (10 ml) a 70ºC durante
una noche. Después, el sólido se eliminó por filtración y se lavó
con metanol. El filtrado se evaporó para dar
4-amino-7-trifluorometilquinolina.
EMCL: tiempo de retención: 14,81 min; pureza: 82,25%; EM (m/e):
228,11 (M+16).
Se disolvieron cloruro de
5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo
(100 mg) y
4-amino-7-trifluorometilquinolina
(250 mg) en diclorometano (5 ml) y piridina (0,3 ml). La solución
de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó
con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua
(60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en
columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/6) para dar
5-metil-3-fenil-N-(7-trifluorometil-4-quinolinil)-4-isoxazolcarboxamida
(100 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta
2,91 (s, 3H), 7,33-7,69 (m, 9H), 8,39 (s, 1H, NH),
8,99 (d, J = 5,1 Hz, 1H); ^{19}F RMN (282 MHz, CDCl_{3}):
\delta- 63,26; EMCL: tiempo de retención: 34,04 min; pureza:
98,90%; EM (m/e): 398,77 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
7.6.3 Ejemplo 47.
6-fluoro-2-metil-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(Compuesto 47)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se calentó a reflujo una solución de ácido
6-fluoro-2-metilquinolina-4-carboxílico
(500 mg) y PCl_{5} (500 mg) en diclorometano (10 ml) durante
media hora. Después se eliminó el diclorometano y el POCl_{3} a
presión reducida para dar cloruro de
6-fluoro-2-metilquinolina-4-carbonilo.
Se disolvieron cloruro de
6-fluoro-2-metilquinolina-4-carbonilo
(100 mg) y
4-amino-5-metil-3-fenilisoxazol
(200 mg) en diclorometano (10 ml) y piridina (0,3 ml). La solución
de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó
con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua
(60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en
columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/1) para dar
6-fluoro-2-metil-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(100 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta
2,58 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 7,14 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,49 (m,
4H), 7,67 (m, 2H), 7,82 (dd, J = 2,7 y 9,9 Hz, 1H), 8,07 (dd, J =
5,7 y 9,3 Hz, 1H); ^{19}F RMN (282 MHz, CDCl_{3}): \delta -
111,63; EMCL: tiempo de retención: 21,32 min; pureza: 99,44%; EM
(m/e): 362,06 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
7.6.4 Ejemplo 71.
6-bromo-2-(3-hidroxifenil)amino-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(Compuesto 71)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron cloruro de
6-bromo-2-cloroquinolina-4-carbonilo
(500 mg) y
4-amino-5-metil-3-fenilisoxazol
(400 mg) y diclorometano (15 ml) y piridina (1 ml). La solución de
reacción se calentó a 70ºC durante una noche. Se recogió el
precipitado blanco por filtración, se lavó con acetato de etilo y se
secó para dar
6-bromo-2-cloro-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(520 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN
(DMSO-d_{6}): \delta 2,52 (s, 3H), 7,52 (m, 3H),
7,72 (m, 2H), 8,02 (m, 4H), 10,58 (s, 1H); EMCL: tiempo de
retención: 32,23 min; pureza: 100%; EM (m/e): 441,82 (MH^{+}).
La solución de
6-bromo-2-cloro-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(50 mg) y 3-aminofenol (50 mg) en etanol (2 ml) y
trietilamina (0,1 ml) se calentó en microondas a 170ºC durante una
hora. La mezcla de reacción se diluyó después con acetato de etilo
(60 ml). La solución orgánica se lavó con agua (60 ml), solución
acuosa de HCl 1 N (2 x 60 ml), se separó, se secó, se evaporó y se
recristalizó con acetato de etilo y hexanos para dar
6-bromo-2-cloro-(3-hidroxifenil)amino-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida
(50 mg) como un sólido amarillo. ^{1}H RMN
(acetona-d_{6}): \delta 2,53 (s, 3H), 6,72 (d, J
= 6,9 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 7,8 Hz, 1H),
7,51 (m, 4H), 7,60 (s, 1H), 7,78 (m, 3H), 7,87 (d, J = 9,0 Hz, 1H),
8,15 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,70 (a, 1H), 9,77 (a, 1H); EMCL: tiempo
de retención: 25,49 min; pureza: 100%; EM (m/e): 514,91
(M^{+}).
Los compuestos que se enumeran en la Tabla 1 se
prepararon mediante los métodos descritos anteriormente. Los
compuestos se caracterizaron por sus propiedades físicas, enumeradas
de la forma siguiente:
Compuesto 1: EMCL: tiempo de retención: 26,57
min; pureza: 95,33%; EM (m/e): 343,99 (M+H+).
Compuesto 3: EMCL: tiempo de retención: 21,13
min; pureza: 100%; EM (m/e): 344,07 (M+H+).
Compuesto 5: EMCL: tiempo de retención: 23,74
min; pureza: 100%; EM (m/e): 330,97 (M+H+).
Compuesto 7: EMCL: tiempo de retención: 32,14
min; pureza: 98,20%; EM (m/e): 364,78 (M+H+).
Compuesto 9: EMCL: tiempo de retención: 23,10
min; pureza: 100%; EM (m/e): 345,02 (M+H+).
Compuesto 11: EMCL: tiempo de retención: 25,31
min; pureza: 95,61%; EM (m/e): 362,96 (M+H+).
Compuesto 13: EMCL: tiempo de retención: 35,11
min; pureza: 99,43%; EM (m/e): 398,93 (M+H+).
Compuesto 15: EMCL: tiempo de retención: 35,07
min; pureza: 95,72%; EM (m/e): 399,29 (M+H+).
Compuesto 17: EMCL: tiempo de retención: 37,50
min; pureza: 100%.
Compuesto 19: EMCL: tiempo de retención: 32,61
min; pureza: 98,35%; EM (m/e): 402,97 (M+H+).
Compuesto 21: EMCL: tiempo de retención: 19,66
min; pureza: 100%; EM (m/e): 301,06 (M+H+).
Compuesto 23: EMCL: tiempo de retención: 26,70
min; pureza: 100%; EM (m/e): 414,95 (M+H+).
Compuesto 25: EMCL: tiempo de retención: 26,23
min; pureza: 95,76%; EM (m/e): 396,90 (M+H+).
Compuesto 27: EMCL: tiempo de retención: 21,45
min; pureza: 81,35%; EM (m/e): 482,76 (M+H+).
Compuesto 29: EMCL: tiempo de retención: 20,65
min; pureza: 89,06%; EM (m/e): 420,31 (M+H+).
Compuesto 31: EMCL: tiempo de retención: 21,63
min; pureza: 84,95%; EM (m/e): 534,82 (M+H+).
Compuesto 33: EMCL: tiempo de retención: 21,81
min; pureza: 73,31%; EM (m/e): 516,62 (M+H+).
Compuesto 35: EMCL: tiempo de retención: 34,04
min; pureza: 98,90%; EM (m/e): 398,69 (M+H+).
Compuesto 37: EMCL: tiempo de retención: 30,73
min; pureza: 100%; EM (m/e): 336,92 (M+H+).
Compuesto 39: EMCL: tiempo de retención: 35,51
min; pureza: 99,91%; EM (m/e): 450,66 (M+H+).
Compuesto 41: EMCL: tiempo de retención: 35,15
min; pureza: 96,21%; EM (m/e): 432,84 (M+H+).
Compuesto 43: EMCL: tiempo de retención: 32,23
min; pureza: 100%; EM (m/e): 441,82 (M+H+).
Compuesto 45: EMCL: tiempo de retención: 27,89
min; pureza: 96,80%; EM (m/e): 381,79 (M+H+).
Compuesto 47: EMCL: tiempo de retención: 21,32
min; pureza: 99,44%; EM (m/e): 362,06 (M+H+).
Compuesto 49: EMCL: tiempo de retención: 15,36
min; pureza: 93,52%; EM (m/e): 300,10 (M+H+).
Compuesto 51: EMCL: tiempo de retención: 32,68
min; pureza: 96,80%; EM (m/e): 414,98 (M+H+).
Compuesto 53: EMCL: tiempo de retención: 34,06
min; pureza: 100%; EM (m/e): 449,26 (M+H+).
Compuesto 57: EMCL: tiempo de retención: 34,39
min; pureza: 98,83%; EM (m/e): 466,83 (M+H+).
Compuesto 61: EMCL: tiempo de retención: 31,35
min; pureza: 100%; EM (m/e): 406,04 (M+H+).
Compuesto 63: EMCL: tiempo de retención: 20,11
min; pureza: 100%; EM (m/e): 330,04 (M+H+).
Compuesto 65: EMCL: tiempo de retención: 25,41
min; pureza: 100%; EM (m/e): 537,86 (M+H+).
Compuesto 67: EMCL: tiempo de retención: 21,22
min; pureza: 96,94%; EM (m/e): 436,84 (M+H+).
Compuesto 69: EMCL: tiempo de retención: 21,57
min; pureza: 100%; EM (m/e): 493,85 (M+H+).
Compuesto 71: EMCL: tiempo de retención: 25,49
min; pureza: 100%; EM (m/e): 514,91 (M+H+).
Compuesto 73: EMCL: tiempo de retención: 27,10
min; pureza: 100%; EM (m/e): 556,91 (M+H+).
\vskip1.000000\baselineskip
La capacidad de los compuestos de quinolina de
la invención para inhibir la desgranulación inducida por IgE se
demostró en una diversidad de ensayos celulares con mastocitos
humanos cultivados (CHMC) y puede medirse mediante células
obtenidas de médula ósea de ratón (BMMC). Se midió la inhibición de
la desgranulación tanto a baja como a alta densidad celular
mediante la cuantificación de la liberación de los factores
específicos de gránulos triptasa, histamina y hexosaminidasa. La
inhibición de la liberación y/o síntesis de mediadores lipídicos se
evaluó por medición de la liberación de leucotrieno LTC4 y la
inhibición de la liberación y/o síntesis de citocinas se controló
mediante la cuantificación de TNF-\alpha,
IL-6 e IL-13. Se cuantificó la
triptasa y la hexosamidasa usando sustratos fluorogénicos, como se
describe en sus ejemplos respectivos. Se cuantificó la histamina,
TNF-\alpha, IL-6,
IL-13 y LTC4 usando los siguientes kits de ELISA
comerciales: histamina (Immunotech nº 2015, Beckman Coulter),
TNF\alpha (Biosource nº KHC3011), IL-6 (Biosource
nº KMC0061), IL-13 (Biosource nº KHC0132) y LTC4
(Cayman Chemical nº 520211). Los protocolos de los diversos ensayos
se proporcionan a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron mastocitos y basófilos humanos a
partir de células progenitoras CD34 negativas como se describe a
continuación (véanse también los métodos descritos en la solicitud
de Estados Unidos en trámite junto con la presente de Nº de Serie
10/053.355, presentada el 8 de noviembre de 2001, cuya descripción
se incorpora en la presente memoria como referencia).
\vskip1.000000\baselineskip
Para preparar medio completo
STEMPRO-34 ("CM"), se añadieron 250 ml de medio
sin suero STEMPRO-34^{TM} ("SFM"; GibcoBRL,
Nº de catálogo 10640) a un matraz de filtración. Para esto se
añadieron 13 ml de suplemento de nutrientes
STEMPRO-34 ("NS"; GibcoBRL, Nº de catálogo
10641) (preparado como se describe en más detalle a continuación).
El recipiente de NS se aclaró con aproximadamente 10 ml de SFM y el
aclarado se añadió al matraz de filtración. Después de la adición
de 5 ml de L-glutamina (200 mM; Mediatech, Nº de
catálogo MT 25-005-CI) y 5 ml de
penicilina/estreptomicina 100X ("pen-strep";
HyClone, Nº de catálogo SV30010), el volumen se llevó a 500 ml con
SFM y se filtró la solución.
El aspecto más variable de la preparación del CM
es el método por el que se descongela y se mezcla el NS antes de la
adición al SFM. El NS debería descongelarse en un baño de agua a
37ºC y removerse, ni agitarse vorticialmente ni agitarse, hasta que
esté completamente en solución. Mientras se remueve, obsérvese si
todavía hay lípidos que no estén en solución. Si existen lípidos y
el NS no es de aspecto uniforme, devuélvalo al baño de agua y
repita el proceso de removido hasta que tenga un aspecto uniforme. A
veces este componente se solubiliza inmediatamente, a veces después
de unos cuantos ciclos de remover y a veces no se solubiliza. Si
después de unas cuantas horas el NS todavía no está en solución, se
desecha y se descongela una unidad fresca. No debe usarse un NS que
no tenga un aspecto uniforme después de la descongelación.
\vskip1.000000\baselineskip
Se expandió una población de partida de células
CD34 positivas (CD34+) de un número relativamente pequeño
(1-5 x 10^{6} células) hasta un número
relativamente grande de células progenitoras CD34 negativas
(aproximadamente 2-4 x 10^{9} células) usando los
medios de cultivo y los métodos descritos a continuación. Las
células CD34+ (a partir de un único donante) se obtuvieron de
Allcells (Berkeley, CA). Debido a que existen un grado de variación
en la calidad y el número de células CD34+ que típicamente
suministra Allcells, las células recién adquiridas se transfirieron
a un tubo cónico de 15 ml y se llevaron a 10 ml en CM antes del
uso.
El día 0 se realizó un recuento celular de las
células viables (fase brillante) y las células se centrifugaron a
1200 rpm para sedimentarlas. Las células se resuspendieron a una
densidad de 275.000 células/ml con CM que contenía factor de
células madre humano recombinante 200 ng/ml ("SCF"; Peprotech,
Nº de catálogo 300-07) y ligando
flt-3 humano 20 ng/ml (Peprotech, Nº de catálogo
300-19) ("medio CM/SCF/flt-3").
Aproximadamente el día 4 ó 5, se comprobó la densidad del cultivo
por realización de un recuento celular y el cultivo se diluyó hasta
una densidad de 275.000 células/ml con medio
CM/SCF/flt-3 recién preparado. Aproximadamente el
día 7, el cultivo se transfirió a un tubo estéril y se realizó un
recuento celular. Las células se centrifugaron a 1200 rpm y se
resuspendieron hasta una densidad de 275.000 células/ml con medio
CM/SCF/flt-3 recién preparado.
Este ciclo se repitió, comenzando desde el día
0, un total de 3-5 veces durante el periodo de
expansión.
Cuando el cultivo sea grande y se esté
manteniendo en múltiples matraces y vaya a resuspenderse, el
contenido de todos los matraces se combina en un único recipiente
antes de realizar un recuento celular. Esto asegura que se consigue
un recuento celular preciso y proporciona un grado de uniformidad de
tratamiento para la población completa. Cada matraz se examina por
separado para detectar contaminación bajo el microscopio antes de
combinarlos, para evitar la contaminación de la población
completa.
Entre los días 17-24, el cultivo
puede comenzar a envejecer (es decir, mueren aproximadamente el
5-10% del número total de células) y dejar de
expandirse tan rápidamente como antes. Entonces, las células se
controlan diariamente durante este tiempo, ya que el malogro
completo del cultivo puede tener lugar en un tiempo tan corto como
de 24 horas. Una vez que ha comenzado el envejecimiento, las células
se cuentan, se precipitan por centrifugación a 850 rpm durante 15
minutos y se resuspenden a una densidad de 350.000 células/ml en
medio CM/SCF/flt-3 para inducir una o dos
divisiones más del cultivo. Las células se controlan diariamente
para evitar el malogro del cultivo.
Cuando es evidente una muerte celular superior
al 15% en el cultivo de células progenitoras y algunos residuos
están presentes en el cultivo, las células progenitoras CD34
negativas están listas para diferenciarse.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realiza una segunda fase para convertir las
células progenitoras CD34 negativas expandidas en mastocitos
diferenciados de la mucosa. Estos mastocitos de la mucosa humanos
cultivados ("CHMC") proceden de células CD34+ aisladas de la
sangre de cordón umbilical y tratadas para formar una población
proliferada de células progenitoras CD34 negativas, como se ha
descrito anteriormente. Para producir las células progenitoras CD34
negativas, el ciclo de resuspensión para el cultivo era el mismo que
se ha descrito anteriormente, excepto por que el cultivo se sembró
a una densidad de 425.000 células/ml y se añadió un 15% de medio
adicional aproximadamente el día cuatro o cinco sin realizar un
recuento celular. Además, la composición de citocinas del medio se
modificó de tal modo que contenía SCF (200 ng/ml) e
IL-6 humana recombinante (200 ng/ml; Peprotech, Nº
de catálogo 200-06 reconstituida hasta 100 \mug/ml
en ácido acético estéril 10 mM) ("medio
CM/SCF/IL-6").
Las Fases I y II en conjunto abarcan
aproximadamente 5 semanas. Cierta muerte y residuos son evidentes en
el cultivo durante las semanas 1-3 y existe un
periodo durante las semanas 2-5 durante el que un
pequeño porcentaje del cultivo deja de estar en suspensión, sino
que en su lugar se une a la superficie del recipiente de
cultivo.
Como durante la Fase I, cuando el cultivo se va
a resuspender el día siete de cada ciclo, el contenido de todos los
matraces se combina en un solo recipiente antes de realizar un
recuento celular para asegurar una uniformidad de la población
completa. Cada matraz se examina por separado para detectar
contaminación bajo el microscopio antes de combinarlos, para evitar
la contaminación de la población completa.
Cuando los matraces se combinan, aproximadamente
el 75% del volumen se transfiere al recipiente común, dejando
aproximadamente 10 ml más o menos en el matraz. El matraz que
contiene el volumen restante se golpeó bruscamente lateralmente
para desprender las células unidas. Se repitieron los golpes en un
ángulo recto con respecto a los primeros golpes para desprender
completamente las células.
El matraz se inclinó a un ángulo de 45 grados
durante varios minutos antes de transferir el volumen restante al
recipiente de recuento. Las células se centrifugaron a 950 rpm
durante 15 min antes de sembrarlas en 35-50 ml por
matraz (a una densidad de 425.000 células/ml).
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó como anteriormente una población
proliferada de células progenitoras CD34 negativas y se trató para
formar un fenotipo positivo para triptasa/quimasa (tejido
conectivo). Los métodos se realizaron como se ha descrito
anteriormente para mastocitos de la mucosa, pero con la sustitución
de IL-6 por IL-4 en el medio de
cultivo. Las células obtenidas son típicas de mastocitos de tejido
conectivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó una población proliferada de células
progenitoras CD34 negativas, como se describe en la Sección
7.7.1.3, anteriormente, y se usaron para formar una población
proliferada de basófilos. Las células CD34 negativas se trataron
como se ha descrito para mastocitos de la mucosa pero sin la
sustitución de de IL-6 por IL-3 (a
20-50 ng/ml) en el medio de cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Para duplicar placas de fondo en U de 96
pocillos (Costar 3799) se añaden 65 \mul de diluciones de
compuesto o muestras de control que se han preparado en MT [NaCl
137 mM, KCl 2,7 mM, CaCl_{2} 1,8 mM, MgCl_{2} 1,0 mM, glucosa
5,6 mM, Hepes 20 mM (pH 7,4), albúmina de suero bovino al 0,1%,
(Sigma A4503)] que contenía MeOH al 2% y DMSO al 1%. Las células
CHMC se sedimentan (980 rpm, 10 min) y se resuspenden en MT
precalentado. Se añaden 65 \mul de células a cada placa de 96
pocillos. Dependiendo de la actividad de desgranulación para cada
donante de CHMC en particular se cargan 1000-1500
células/pocillo. Se mezcla cuatro veces seguidas de una incubación
de 1 hora a 37ºC. Durante la 1 h de incubación se prepara una
solución de anti-IgE 6X [anti-IgE
humana de conejo (1 mg/ml, Bethyl Laboratories
A80-109A) diluido 1:167 en tampón MT]. Las células
se estimulan añadiendo 25 \mul de solución de
anti-IgE 6X a las placas apropiadas. Se añaden 25
\mul de MT a pocillos de control no estimulados. Se mezcla dos
veces después de la adición de la anti-IgE. Se
incuban a 37ºC durante 30 minutos. Durante los 30 minutos de
incubación, se diluye la solución madre de sustrato de triptasa 20
mM
[(Z-Ala-Lys-Arg-AMC2TFA;
Enzyme Systems Products, Nº AMC-246)] 1:2000 en
tampón de ensayo de triptasa [Hepes 0,1 M (pH 7,5), glicerol al 10%
p/v, heparina 10 \muM (Sigma H-4898), NaN_{3} al
0,01%]. Las placas se centrifugan a 1000 rpm durante 10 min para
sedimentar las células. Se transfieren 25 \mul de sobrenadante a
una placa de fondo oscuro 96 pocillos y se añaden 100 \mul de
solución de sustrato de triptasa recién diluida a cada pocillo. Las
placas se incuban a temperatura ambiente durante 30 min. Se lee la
densidad óptica de las placas a 355 nm/460 nm en un lector de
placas espectrofotométrico.
También se cuantifica el leucotrieno C4 (LTC4)
usando un kit de ELISA en muestras de sobrenadante apropiadamente
diluidas (determinado empíricamente para cada población celular
donante de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de la
curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sensibilizan mastocitos humanos cultivados
(CHMC) durante 5 días con IL-4 (20 ng/ml), SCF (200
ng/ml), IL-6 (200 ng/ml) e IgE humana (CP 1035K de
Cortx Biochem, 100-500 ng/ml dependiendo de la
generación) en medio CM. Después de la sensibilización, las células
se cuentan, se sedimentan (1000 rpm, 5-10 minutos) y
se resuspenden a 1-2 x 10^{6} células/ml en
tampón MT. Se añaden 100 \mul de suspensión celular a cada pocillo
y 100 \mul de diluciones de compuesto. La concentración final de
vehículo es de DMSO al 0,5%. Se incuban a 37ºC (CO_{2} al 5%)
durante 1 hora. Después de 1 hora de tratamiento con compuesto, las
células se estimulan con anti-IgE 6X. Se mezclan
los pocillos con las células y las placas se dejan incubar a 37ºC
(CO_{2} al 5%) durante una hora. Después de 1 hora de incubación
las células se sedimentan (10 minutos, 1000 rpm) y se recogen 200
\mul por pocillo del sobrenadante, teniendo cuidado de no agitar
el sedimento. La placa de sobrenadante se coloca en hielo. Durante
la etapa de 7 horas (véase a continuación) se realiza el ensayo de
triptasa sobre el sobrenadante que se ha diluido 1:500. El
sedimento celular se resuspende en 240 \mul de medio CM que
contiene DMSO al 0,5% y una concentración correspondiente de
compuesto. Las células CHMC se incuban durante 7 horas a 37ºC
(CO_{2} al 5%). Después de la incubación, las células se
sedimentan (1000 RPM, 10 minutos) y se recogen 225 \mul por
pocillo y se colocan a -80ºC hasta que los ELISAS estén listos para
realizarse. Los ELISAS se realizan en muestras apropiadamente
diluidas (determinado empíricamente para cada población celular
donante, de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de la
curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtuvo medio acondicionado con WEHI por
cultivo de células WEHI-3B mielomonocíticas murinas
(Colección Americana Cultivos Tipo, Rockville, MD) en medio de
Eagle modificado por Iscove (Mediatech, Hernandon, VA) suplementado
con suero bovino fetal inactivado por calor al 10% (FBS; JRH
Biosciences, Kansas City, MO), 2-mercaptoetanol 50
\muM (Sigma, St. Louis, MO) y
penicilina-estreptomicina 100 IU/ml (Mediatech) en
un incubador humidificado de CO_{2} al 5%/aire al 95% a 37ºC. Se
sembró una suspensión celular inicial a 200.000 células/ml y después
se dividió 1:4 cada 3-4 días durante un periodo de
dos semanas. Se recogieron los sobrenadantes sin células, se
dividieron alícuotas y se guardaron a -80ºC hasta que fueron
necesarios.
\vskip1.000000\baselineskip
El medio BMMC consiste en medio acondicionado
con WEHI al 20%, FBS inactivado por calor al 10% (JHR Biosciences),
HEPES 25 mM a pH 7,4 (Sigma), L-glutamina 2 mM
(Mediatech), aminoácidos no esenciales 0,1 mM (Mediatech), piruvato
sódico 1 mM (Mediatech) 2-mercaptoetanol 50 \muM
(Sigma) y penicilina-estreptomicina 100 IU/ml
(Mediatech) en medio RPMI 1640 (Mediatech). Para preparar los medios
BMMC, todos los componentes se añadieron a una unidad de filtración
de 1 l estéril y se filtraron a través de un filtro de 0,2 \mum
antes del uso.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sensibilizan durante una noche mastocitos
obtenidos de médula ósea (BMMC) con SCF murino (20 ng/ml) y
anti-DNP monoclonal (10 ng/ml, Clon
SPE-7, Sigma Nº D-8406) en medios
BMMC a una densidad celular de 666 x 10^{3} células/ml. Después
de la sensibilización, las células se cuentan, se sedimentan (1000
rpm, 5-10 minutos) y se resuspenden a
1-3 x 10^{6} células/ml en tampón MT. Se añaden
100 \mul de suspensión celular a cada pocillo y 100 \mul de
diluciones de compuesto. La concentración final de vehículo es de
DMSO al 0,5%. Se incuba a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante 1 hora.
Después de 1 hora de tratamiento con compuesto, las células se
estimulan con estímulo 6X (60 ng/ml de DNP-BSA). Los
pocillos se mezclan con las células y las placas se dejan incubar a
37ºC (CO_{2} al 5%) durante una hora. Después de una incubación de
1 hora, se sedimentan las células (10 minutos, 1000 RPM) y se
recogen 200 \mul por pocillo del sobrenadante, teniendo cuidado
de no agitar el sedimento, y se transfieren a un tubo limpio o placa
de 96 pocillos. La placa de sobrenadante se coloca en hielo.
Durante la etapa de 4-5 horas (véase a continuación)
se realiza el ensayo de hexosiminidasa. El sedimento celular se
resuspende en 240 \mul de medio condicionado con WEI que contiene
DMSO al 0,5% y la concentración de compuesto correspondiente. Las
células BMMC se incuban durante 4-5 horas a 37ºC
(CO_{2} al 5%). Después de la incubación, las células se
sedimentan (1000 RPM, 10 minutos) y se recogen 225 \mul por
pocillo y se colocan a -80ºC hasta que los ELISAS están listos para
realizarse. Pueden realizarse ELISAS en muestras apropiadamente
diluidas (determinado empíricamente para cada población celular
donante, de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de
la curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
Ensayo de hexosaminidasa: en una placa de ensayo
de 96 pocillos negro oscuro se añaden 50 \mul de sustrato de
hexosaminidasa
(4-metilumbeliferil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida;
2 mM) en cada pocillo. Se añaden 50 \mul de sobrenadante de
células BMMC (véase anteriormente) al sustrato de hexosaminidasa, se
colocan a 37ºC durante 30 minutos y se lee la placa a los 5, 10, 15
y 30 minutos en un espectrofotómetro.
\vskip1.000000\baselineskip
El ensayo de activación de basófilos se llevó a
cabo usando sangre completa periférica humana de donantes alérgicos
a ácaros del polvo eliminando la mayoría de los glóbulos rojos (RBC)
por sedimentación con dextrano. Se mezcló sangre periférica humana
1:1 con dextrano al 3% en T500 y se dejó que se sedimentaran los RBC
durante 20-25 min. La fracción superior se diluyó
con 3 volúmenes de D-PBS y las células se
precipitaron por centrifugación durante 10 min a 1500 rpm a
temperatura ambiente. El sobrenadante se retiró por aspiración y las
células se lavaron en un volumen equivalente de tampón MT. Por
último, las células se resuspendieron en tampón MT que contenía
DMSO al 0,5% en el volumen sanguíneo original. Se mezclaron 80
\mul de células con 20 \mul de compuesto en presencia de DMSO
al 0,5% por triplicado en una placa de cultivo tisular de 96
pocillos de fondo en V. Puede ensayarse un intervalo de dosis de 8
concentraciones de compuesto dando como resultado una curva de
respuesta a la dosis de 10 puntos incluyendo una respuesta máxima
(estimuladas) y mínima (no estimuladas). Las células se incubaron
con compuesto durante 1 hora a 37ºC, CO_{2} al 5%, después de lo
que se añadieron 20 \mul de estímulo 6x [anti-IgE
1 \mug/ml (Bethyl Laboratories), ácaro del polvo doméstico 667
ua/ml (Antigen Laboratories)]. Las células se estimularon durante
30 minutos a 37ºC, CO_{2} al 5%. La placa se centrifugó durante
10 min a 1500 rpm a temperatura ambiente y se recogieron 80 \mul
de sobrenadante para el análisis del contenido de histamina usando
el kit de ELISA de histamina suministrado por Inmunotech. El ELISA
puede realizarse de acuerdo con las instrucciones del proveedor.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados de los ensayos de CHMC a baja
densidad (Sección 7.7.2) y de iono en CHMC (Sección 7.8.1) se
proporcionan en la Tabla 1. En la Tabla 1, un valor de "+"
indica una CI_{50} de 10 \muM o menos en el ensayo
especificado; Un valor de "-" indica una CI_{50} de más de 10
\muM en el ensayo especificado. La mayoría de los compuestos
ensayados tenían CI_{50} de menos de 10 \muM, presentando muchos
CI_{50} en el intervalo submicromolar.
Para confirmar que muchos de los compuestos de
quinolina de la invención ejercen su actividad inhibidora bloqueando
o inhibiendo la cascada temprana de transducción de señales deL
receptor de IgE, muchos de los compuestos se evaluaron en ensayos
celulares para desgranulación inducida por ionomicina, como se
describe a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Se llevaron a cabo ensayos para la
desgranulación de mastocitos inducida por ionomicina como se
describe para los ensayos de activación de IgE a baja densidad de
CHMC (Sección 7.7.2., anteriormente) con la excepción de que
durante la incubación de 1 hora, se preparó una solución de
ionomicina 6x [ionomicina 5 mM (Sigma I-0634) en
MeOH (solución madre) diluida 1:416,7 en tampón MT (2 \muM final)]
y las células se estimularon añadiendo 25 \mul de la solución de
ionomicina 6X a las placas apropiadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Se llevaron a cabo ensayos para la
desgranulación de basófilos inducida por ionomicina como se describe
para el ensayo de activación de basófilos por IgE o ácaros de polvo
(Sección 7.7.5, anteriormente), con la excepción de que después de
la incubación con compuesto, la célula se estimularon con 20 \mul
de ionomicina 2 \muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados de los ensayos de desgranulación
inducida por ionomicina, expuestos como valores de CI_{50} (en
\muM), se proporcionan en la Tabla 1, anteriormente. De los
compuestos activos ensayados (es decir, los que inhiben la
desgranulación inducida por IgE), la gran mayoría inhiben la
desgranulación inducida por ionomicina, confirmando que estos
compuestos activos inhiben selectivamente la cascada tardía (o
corriente abajo) de transducción de señales del receptor de IgE.
Estos resultados se confirmaron para
determinados compuestos por medición del flujo de ión calcio
inducido por anti-IgE e inducido por ionomicina en
células CHMC.
\vskip1.000000\baselineskip
Para evaluar la inmediatez de su efecto
inhibidor, ciertas quinolinas de la invención pueden añadirse
simultáneamente con activador de anticuerpo
anti-IgE en los ensayos celulares descritos
anteriormente. Todos los compuestos pueden ensayarse para
determinar si bloquean la desgranulación inducida por IgE de células
CHMC en el mismo grado que cuando los compuestos se preincuban con
células CHMC durante 10 ó 30 min antes del entrecruzamiento del
receptor.
\vskip1.000000\baselineskip
Pueden ensayarse compuestos de la invención en
experimentos de eliminación. En los experimentos, pueden activarse
inmediatamente células CHMC con anticuerpo anti-IgE
en presencia de compuesto 1,25 \muM (tiempo cero) o el compuesto
puede eliminarse seguido de la activación con anticuerpo
anti-IgE a los 30, 60 ó 120 minutos.
\vskip1.000000\baselineskip
La capacidad de los compuestos de la invención
para ejercer su actividad inhibidora sin ser tóxicos para las
células del sistema inmune puede demostrarse en ensayos celulares
con células B y T. Los protocolos para los ensayos se proporcionan a
continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Se diluyen células Jurkat hasta 2 x 10^{5}
células/ml en medio RPMI completo (con suero bovino fetal inactivado
por calor al 10%) y se incuban a 37ºC, CO_{2} al 5%, durante 18
horas. Se añaden 65 \mul de células a 7,7 x 10^{5} células/ml
en una placa de fondo en V de 96 pocillos (tratada con TC, Costar)
que contiene 65 \mul de compuesto 2X (la concentración final de
vehículo es DMSO al 0,5%, MeOH al 1,5%). Se mezcla, las placas se
incuban durante 18-24 h a 37ºC, CO_{2} al 5%. La
toxicidad puede evaluarse mediante análisis citométrico de flujo de
la dispersión de luz celular.
\vskip1.000000\baselineskip
La línea de células B BJAB se cultivó en fase
logarítmica en RPMI1640 + suero bovino fetal inactivado por calor
al 10%, L-glutamina 1x, penicilina 1x,
estreptavidina 1x y beta-mercaptoetanol 1x a 37ºC,
CO_{2} al 5%. Primero, se recogieron BJAB, se centrifugaron y se
resuspendieron en medio cultivo hasta una concentración de 7,7 x
10^{5} células/ml. Pueden mezclarse 65 \mul de células con 65
\mul de compuesto, por duplicado y en presencia de DMSO al 0,1%
en una placa de cultivo tisular de 96 pocillos con fondo en V. Las
células pueden incubarse con compuesto a diversas diluciones a
37ºC, CO_{2} al 5%. La toxicidad puede evaluarse mediante análisis
citométrico de flujo de la dispersión de luz celular.
\vskip1.000000\baselineskip
Se siembran 50 \mul de células (1 x
10^{6}/ml) en cada pocillo que contiene 50 \mul de compuesto. La
concentración final de vehículo debería ser de DMSO al 0,5%, MeOH
al 1,5%. Las placas se agitan durante 1 minuto para mezclar las
células y el compuesto. Las placas se incuban a 37ºC (CO_{2} al
5%) durante 18 horas. Al día siguiente, se recogen 50 \mul de
células de cada pocillo, se añaden a 50 \mul de reactivo Glo de
titulación de células (Invitrogen). Las placas se agitan durante 1
minuto. Se leen en un luminómetro.
\vskip1.000000\baselineskip
La eficacia in vivo de los compuestos de
quinolina de la invención y para las alergias puede evaluarse en el
modelo de ratón de anafilaxis cutánea pasiva (PCA). Este modelo
proporciona una medición directa de la desgranulación inducida por
IgE de mastocitos tisulares. En este modelo, animales sensibilizados
con IgE se exponen a una exposición con alergeno y el cambio en la
permeabilidad de la vasculatura dérmica que resulta de la
liberación de histamina de mastocitos se mide por el cambio en la
cantidad de filtración de colorante en el tejido circundante. La
inhibición de la liberación de mediador por compuestos que modulen
la desgranulación de mastocitos se mide fácilmente por extracción
del colorante a partir del tejido.
\vskip1.000000\baselineskip
En el ensayo de PCA se sensibilizan de forma
pasiva ratones mediante una inyección intradérmica con anticuerpos
de IgE anti-dinitrofenol (DNP) (día -1). A tiempos
predeterminados (de 5 a 60 minutos antes de la exposición) los
animales se tratan con el agente de ensayo (día 0). El efecto
modulador del agente sobre la desgranulación de mastocitos cutáneos
se mide después de la inyección intravenosa de DNP conjugado con
albúmina de suero humano (HSA-DNP) junto con
colorante azul de Evans. El entrecruzamiento resultante del receptor
de IgE y el posterior aumento inducido por la desgranulación de
mastocitos en la permeabilidad vascular se determinan por medición
de la cantidad de extravasación de colorante en el tejido. El
colorante se extrae del tejido mediante formamida y la absorbancia
de este extracto se lee a 620 nm. El efecto inhibidor del
tratamiento farmacológico se expone como el porcentaje de
inhibición en comparación con el tratamiento con vehículo, es decir,
el porcentaje de reducción en la A_{620}.
Se han ensayado dos compuestos como controles
positivos: el antagonista de histamina difenhidramina y el
antagonista de serotonina ciproheptadina. Ambos mediadores (de
histamina y serotonina) se liberan tras la desgranulación mediada
por IgE de los mastocitos de ratón. Esto es al contrario que en
mastocitos humanos, que no contienen serotonina. La curva de
respuesta a la dosis con difenhidramina muestra una inhibición de la
respuesta de PCA de hasta el 86% con la dosis mayor (50 mg/kg, i.p.
tiempo de pretratamiento de 30 minutos). Sin embargo, esta elevada
dosis no se toleró bien por los animales. Por esta razón se usó
ciproheptadina como control positivo. La ciproheptadina inhibía la
respuesta de PCA en el 61% +/- 4% (8 mg/kg, i.p., tiempo de
pretratamiento de 30 minutos, n = 23
experimentos).
experimentos).
\vskip1.000000\baselineskip
En el modelo de oveja de asma alérgica, pueden
administrarse aerosoles de artículos de ensayo a ovejas a través de
un tubo endotraqueal, seguido de una exposición a un aerosol con
antígeno extraído del nematodo Ascaris suum, al que las
ovejas son alérgicas de forma natural. La exposición al alergeno
conduce a una broncoconstricción directa [respuesta asmática
temprana (EAR) y respuesta asmática tardía (LAR)] y a una
hipersensibilidad persistente inespecífica de las vías aéreas
(AHR). Estas tres características son similares a las observadas en
humanos asmáticos alérgicos. La actividad del agente de ensayo
puede determinarse por los cambios en la resistencia pulmonar
(R_{L}), que se calculan a partir de mediciones de la presión
transpulmonar, el flujo y el volumen respiratorio. Los datos de
control históricos obtenidos a partir de la misma oveja después de
un tratamiento con solución salina y exposición a alergeno muestran
un marcado aumento de la R_{L} durante la EAR que persiste
durante aproximadamente 2-3 horas después de la
exposición al antígeno. La LAR es un aumento menos pronunciado en
la R_{L} que comienza desde las 5-6 horas después
de la exposición al antígeno y se resuelve a las 8 horas
post-exposición. Veinticuatro horas después de la
exposición se mide la respuesta a una dosis de carbacol para
determinar la AHR, que se expresa como la dosis de carbacol
necesaria para aumentar la R_{L} en un 400% sobre las medidas
basales. Esta medición se denomina como la concentración de
provocación de carbacol que produce un aumento del 400% en la
R_{L} sobre las medidas basales (PC_{400}). Los datos pueden
compararse con los datos de control históricos para el mismo
individuo cuando se administra un aerosol de control con solución
salina y se expone a Ascaris suum.
\vskip1.000000\baselineskip
La no toxicidad de las quinolinas puede
demostrarse usando modelos animales convencionales, como se describe
a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
En este estudio, pueden tratarse ratones hembra
BALB/c® mediante administración subcutánea con vehículo o
formulación de artículo de ensayo una vez al día durante 7 días,
para determinar la tolerancia a la administración subcutánea de un
compuesto en particular. El estudio consiste en cuatro grupos
toxicológicos, de la forma siguiente: a ratones en dos grupos
separados tratados con fármaco (de nueve ratones cada uno) se les
puede administrar 30 mg/ml de un compuesto en una suspensión de CMC
(tampón fosfato 50 mM a pH 7 con carboxilmetilcelulosa al 0,1%
(p/v)) o una solución de PEG 400 al 67% (PEG 400 al 67%/citrato 50
mM al 33%) a dosis de 200 mg/kg/día y ratones en dos grupos
separados de control con vehículo (de seis ratones cada uno) reciben
cloruro sódico al 0,9% o solución de PEG 400 al 67%. El volumen de
dosis administrado debería ser de 6,7 ml/kg/día para los cuatro
grupos de ratones. Seis ratones en cada uno de los grupos tratados
con fármaco sirven como animales satélite de toxicocinética (3 por
grupo por punto de tiempo) para la evaluación toxicocinética de los
niveles de precursores y metabolitos principales (MM) a las 24
horas después de la primera y de la séptima dosis. Puede recogerse
piel del lugar de aplicación de la dosis y evaluarse para determinar
cambios microscópicos.
\vskip1.000000\baselineskip
En este estudio de toxicología y toxicocinética
de dosis variable pueden tratarse mediante una sonda oral ratones
BALB/c con vehículo sólo o con una formulación de artículo de ensayo
una vez al día durante 14 días. El estudio consiste en cuatro
grupos de toxicología de cinco ratones por sexo y cuatro grupos
satélite de toxicocinética que reciben el mismo régimen de
tratamiento en paralelo. Los ratones de control con vehículo
reciben 6,7 mg/kg/día o 16,7 ml/kg/día de una formulación de PEG 400
al 67% y citrato 50 mM al 33% (v/v). Los animales que pueden
tratarse con un artículo de ensayo reciben una dosis baja de 200
mg/kg/día (6,7 ml/kg/día) o una dosis alta de 500 mg/kg/día (16,7
ml/kg/día) del compuesto de ensayo, usando una solución de 30
mg/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
En este estudio de toxicología y toxicocinética
de dosis variable, pueden tratarse ratas Sprague Dawley mediante
una sonda oral con vehículo sólo o con una formulación de artículo
de ensayo una vez al día durante 14 días. El estudio consiste en
cuatro grupos de toxicología de cinco ratas por sexo y dos grupos de
satélite de toxicocinética. Cinco ratas por sexo recibieron 6,7
mg/kg/día (control de bajo volumen) o 16,7 ml/kg/día (control de
alto volumen) de una formulación de vehículo de PEG 400 al 67% y
citrato 50 mM al 33% (v/v). Cinco ratas macho pueden recibir la
dosis baja de 200 mg/kg/día de compuesto de ensayo (6,7 ml/kg/) y
cinco ratas por sexo pueden recibir la dosis elevada de 500
mg/kg/día de compuesto de ensayo (16,7 ml/kg/día) usando una
solución de 30 mg/ml.
Aunque la invención anterior se ha descrito con
bastantes detalles para facilitar su entendimiento, será evidente
que pueden realizarse determinados cambios y modificaciones dentro
del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Por consiguiente, las
realizaciones descritas deben considerarse como ilustrativas y no
restrictivas y la invención no está limitada a los detalles que se
proporcionan en la presente memoria, sino que puede modificarse
dentro del alcance y de los equivalentes de las reivindicaciones
adjuntas.
Claims (27)
1. Un compuesto de acuerdo con la fórmula
estructural (I):
y sales, hidratos, solvatos y
N-óxidos de la misma, en la
que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos
R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y
R^{8} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo
electronegativo, -OR^{d},
-SR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
-SR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por
haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo
(C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3},
-CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}
y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o
más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{10} se selecciona del grupo constituido por
R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o
diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de
los mismos o diferentes R^{a} o R^{b},
-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-(CHR^{a})_{m}-R^{b},
-O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma
independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo
(C1-C6), cicloalquilo (C3-C8),
ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo
(C5-C10), fenilo, arilalquilo
(C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado
de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d},
haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un
número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO; y
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean
ambos O y que A y B no sean O y NH; y
a condición de que:
el compuesto no sea
6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que R^{1} es un grupo metilo.
3. El compuesto de la reivindicación 1 o de la
reivindicación 2, en el que R^{9} es un grupo fenilo sustituido o
no sustituido.
4. El compuesto de la reivindicación 3, en el
que R^{9} es un grupo fenilo sustituido.
5. El compuesto de la reivindicación 4, en el
que el R^{9} se selecciona del grupo constituido por
2-clorofenilo y
2-cloro-6-fluorofenilo.
6. El compuesto de acuerdo con cualquier
reivindicación anterior, en el que R^{2} se selecciona del grupo
constituido por hidrógeno, fenilo, metilo, -CO_{2}Et, -CF_{3},
Cl, -NHCH_{3}, 26 260
7. El compuesto de acuerdo con cualquier
reivindicación anterior, en el que R^{6} se selecciona del grupo
constituido por hidrógeno, F, -OCF_{3} y Br.
8. El compuesto de acuerdo con cualquier
reivindicación anterior, en el que R^{7} se selecciona del grupo
constituido por hidrógeno, Cl y -CF_{3}.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que R^{1} es un grupo metilo, R^{9} es un grupo fenilo
sustituido o no sustituido, R^{2} se selecciona del grupo
constituido por hidrógeno, fenilo, metilo, -CO_{2}Et, -CF_{3},
Cl, -NHCH_{3}
27 R^{6} se selecciona de
hidrógeno, F, -OCF_{3} y Br; y R^{7} se selecciona del grupo
constituido por hidrógeno, Cl y -CF_{3}.
10. El compuesto de la reivindicación 1, que se
selecciona de cualquiera de los compuestos de 1 a 73 siguientes, en
los que R^{1} es metilo y A, B, R^{2}, R^{3}, R^{5},
R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9} se seleccionan de las siguientes
combinaciones de sustituyentes:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
11. Una composición farmacéutica que comprende
un compuesto de acuerdo con la fórmula estructural II y un vehículo,
diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y sales, hidratos, solvatos y
N-óxidos de la misma, en la
que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos
R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y
R^{8} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo
electronegativo, -OR^{d}-,
-SR^{d}-, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con una o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
-SR^{d}-, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con una o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por
haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo
(C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3},
-CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente
sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}
y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o
más de los mismos o diferentes grupos R^{10},
R^{10} se selecciona del grupo constituido por
R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o
diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de
los mismos o diferentes R^{a} o R^{b},
-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-(CHR^{a})_{m}-R^{b},
-O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma
independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo
(C1-C6), cicloalquilo (C3-C8),
ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo
(C5-C10), fenilo, arilalquilo
(C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado
de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d},
haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo
protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más
de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un
número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO; y
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean
ambos O y que A y B no sean O y NH;
\vskip1.000000\baselineskip
12. La composición farmacéutica de la
reivindicación 11, en la que el compuesto es un compuesto de acuerdo
con una cualquiera de las reivindicaciones 2-10.
13. La composición farmacéutica de la
reivindicación 11, en la que el compuesto está en la forma de una
sal farmacéuticamente aceptable.
14. La composición farmacéutica de la
reivindicación 13, en la que la sal es una sal clorhidrato, una sal
de sulfato de hidrógeno, una sal sulfato o una sal fosfato.
15. Un compuesto o composición de acuerdo con
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para el uso como un
medicamento.
16. Un uso de un compuesto o composición de
acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la
preparación de un medicamento que inhiba la desgranulación de
mastocitos o basófilos, según se mide en un ensayo in
vitro.
17. Un uso de acuerdo con la reivindicación 16,
en el que el compuesto tiene una CI_{50} de aproximadamente 20
\muM o menos.
18. Un uso de un compuesto como se define en
cualquiera de las reivindicaciones 1-10, con un
vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para la
preparación de una composición farmacéutica que inhiba la
desgranulación de mastocitos o basófilos, según se mide en un ensayo
in vitro.
19. Un uso de un compuesto o composición de
acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
1-14 para la preparación de un medicamento para la
inhibición de la desgranulación de mastocitos o basófilos.
20. Un uso de acuerdo con la reivindicación 19,
en el que el mastocito o basófilo es un mastocito o basófilo
humano.
21. Un uso de un compuesto o composición de
acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
1-14 para la preparación de un medicamento para
tratar una enfermedad en un animal caracterizada por, causada
por o asociada con la desgranulación de mastocitos o basófilos.
22. Un uso de acuerdo con la reivindicación 21,
en el que el animal es un ser humano.
23. Un uso de acuerdo con la reivindicación 21 o
la reivindicación 22, en el que la enfermedad se selecciona del
grupo constituido por enfermedades alérgicas, cicatrización de mala
calidad, enfermedades asociadas con destrucción tisular,
enfermedades asociadas con inflamación tisular, inflamación y
cicatrización.
24. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23,
en el que la enfermedad alérgica se selecciona del grupo constituido
por conjuntivitis, rinitis, asma, dermatitis atópica y alergias
alimentarias.
25. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23,
en el que la cicatrización de mala calidad se selecciona de grupo
constituido por esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides,
cicatrices postquirúrgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares,
migraña, lesión por reperfusión y post-infarto de
miocardio.
26. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23,
en el que la enfermedad asociada con destrucción tisular se
selecciona del grupo constituido por EPOC, cardiobronquitis y
post-infarto de miocardio.
27. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23,
en el que la enfermedad asociada con inflamación tisular se
selecciona del grupo constituido por intestino irritable, colon
irritable y enfermedad inflamatoria del colon.
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