ES2292242T5 - THERAPEUTIC USES OF IL-17 HOMOLOGICAL POLYPEPTIDES. - Google Patents

Abstract

The present invention is directed to novel polypeptides having sequence identity with IL-17 and to nucleic acid molecules encoding those polypeptides. Also provided herein are vectors and host cells comprising those nucleic acid sequences, chimeric polypeptides molecules comprising the polypeptides of the present invention fused to heterologous polypeptide sequences, antibodies which bind to the polypeptides of the present invention and to methods for producing the polypeptides of the present invention. Further provided herein are methods for treating degenerative cartilaginous disorders.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN FIELD OF THE INVENTION

[0001] La presente invención se refiere en general a anticuerpos antagonistas para un polipéptido que tiene identidad en la secuencia con la citoquina IL-17 y antígeno 8 asociado con el linfocito T citotóxico (CTLA-8), designado en la presente invención como polipéptido PRO1122, y usos terapéuticos de los mismos. [0001] The present invention generally relates to antagonistic antibodies for a polypeptide having sequence identity with the cytokine IL-17 and antigen 8 associated with the cytotoxic T lymphocyte (CTLA-8), designated herein as a polypeptide PRO1122, and therapeutic uses thereof.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN BACKGROUND OF THE INVENTION

[0002] Se ha descrito que la citoquina interleuquina 17 (IL-17) estimula las células epiteliales, endoteliales y fibroblásticas para secretar, tales como IL-6, IL-8, y el factor estimulador de colonias de granulocitos, así como la prostaglandina E2. Aunque la expresión de IL-17 se limita a las células T activadas, el receptor de IL-17 está expresado ampliamente, una propiedad que concuerda con las actividad pleiotrópicas de IL-17. Además, se ha observado que cuando se cultiva en presencia de IL-17, los fibroblastos podrían mantener la proliferación de maduración preferencial de CD34+ en neutrófilos. Como resultado, IL-17 podía ser un potenciador temprano o incluso un mantenedor de la reacción inflamatoria dependiente de células T y/o un elemento de la red de citoquinas que conecta el sistema inmune a la hematopoyesis. Ver, Yao et al., J. Immunol., 155(12): 5483-5486 (1995); Fossiez et al. J. Exp. Med. 183(6): 2593-2603 (1996); Kennedy et al., J. Interferon Cytokine Res., 16(8): 611-617 (1996). [0003] Más generalmente, todas las proteínas novedosas son de interés. Las proteínas extracelulares juegan un papel importante en la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, la proliferación, migración, diferenciación, o interacción con otras células, está habitualmente dirigido por la información recibida de otras células y/o el medio inmediato. Esta información es transmitida frecuentemente por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que, a su vez, son recibidos e interpretados por diversos receptores celulares o proteínas unidas a membrana. Estos polipéptidos secretados o moléculas se señalización pasan normalmente a través del mecanismo secretor celular para alcanzar su sitio de acción en el medio extracelular. [0004] Las proteínas secretadas tienen diversas aplicaciones industriales, incluyendo productos farmacéuticos, diagnóstico, biosensores y biorreactores. La mayoría de fármacos de proteínas disponibles en la actualidad, tales como agentes trombolíticos, interferones, interleuquinas, eritropoyetinas, factores estimuladores de colonias, y varias otras citoquinas, son proteínas secretoras. Sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen potencial como agentes terapéuticos o diagnóstico. [0005] Se están realizando esfuerzos tanto en la industria como a nivel académico para identificar nuevas proteínas secretadas nativas. Muchos esfuerzos están centrados en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes para proteínas secretadas novedosas. Algunos ejemplos de procedimientos y técnicas se describen en la literatura [véase, por ejemplo, Klein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 7108-7113 (1996); Patente de Estados Unidos No. 5.536.637)]. Los resultados de dichos esfuerzos se presentan en la presente invención. [0006] La interleuquina-17 es una citoquina derivada de célula T descrita recientemente, las funciones biológicas de la cual están sólo empezando a entenderse. Spriggs et al., J. Clin. Immunol. 17: 366 (1997); Broxmeyer, H.E., J. Exp. Med. 183: 2411 (1996). Cuando IL-17 se identificó inicialmente como un clon de ADNc de linfoma de célula T de roedor, se reconoció que tenía una secuencia similar a un marco de lectura abierto de un virus herpes de primate, Herpesvirus saimiri, Rouvier et al., J. Immunol. 150: 5445 (1993), Yao et al., Immunity 3:811 (1995) [Yao-1], Fossiez et al., [0002] It has been described that interleukin cytokine 17 (IL-17) stimulates epithelial, endothelial and fibroblast cells to secrete, such as IL-6, IL-8, and granulocyte colony stimulating factor, as well as prostaglandin E2 Although the expression of IL-17 is limited to activated T cells, the IL-17 receptor is broadly expressed, a property that matches the pleiotropic activity of IL-17. In addition, it has been observed that when cultured in the presence of IL-17, fibroblasts could maintain preferential maturation proliferation of CD34 + in neutrophils. As a result, IL-17 could be an early enhancer or even a maintainer of the T-cell-dependent inflammatory reaction and / or an element of the cytokine network that connects the immune system to hematopoiesis. See, Yao et al., J. Immunol., 155 (12): 5483-5486 (1995); Fossiez et al. J. Exp. Med. 183 (6): 2593-2603 (1996); Kennedy et al., J. Interferon Cytokine Res., 16 (8): 611-617 (1996). [0003] More generally, all novel proteins are of interest. Extracellular proteins play an important role in the formation, differentiation and maintenance of multicellular organisms. The fate of many individual cells, for example, proliferation, migration, differentiation, or interaction with other cells, is usually driven by information received from other cells and / or the immediate environment. This information is frequently transmitted by secreted polypeptides (eg, mitogenic factors, survival factors, cytotoxic factors, differentiation factors, neuropeptides and hormones) which, in turn, are received and interpreted by various cell receptors or membrane-bound proteins. These secreted polypeptides or signaling molecules normally pass through the cellular secretory mechanism to reach their site of action in the extracellular environment. [0004] Secreted proteins have various industrial applications, including pharmaceuticals, diagnostics, biosensors and bioreactors. The majority of currently available protein drugs, such as thrombolytic agents, interferons, interleukins, erythropoietins, colony stimulating factors, and several other cytokines, are secretory proteins. Its receptors, which are membrane proteins, also have potential as therapeutic or diagnostic agents. [0005] Efforts are being made both in industry and academically to identify new native secreted proteins. Many efforts are focused on the screening of recombinant mammalian DNA libraries to identify the coding sequences for novel secreted proteins. Some examples of procedures and techniques are described in the literature [see, for example, Klein et al., Proc. Natl Acad. Sci. 93: 7108-7113 (1996); U.S. Patent No. 5,536,637)]. The results of said efforts are presented in the present invention. [0006] Interleukin-17 is a recently described T cell-derived cytokine, the biological functions of which are only beginning to be understood. Spriggs et al., J. Clin. Immunol 17: 366 (1997); Broxmeyer, H.E., J. Exp. Med. 183: 2411 (1996). When IL-17 was initially identified as a rodent T cell lymphoma cDNA clone, it was recognized that it had a sequence similar to an open reading frame of a primate herpesvirus, Herpesvirus saimiri, Rouvier et al., J. Immunol 150: 5445 (1993), Yao et al., Immunity 3: 811 (1995) [Yao-1], Fossiez et al.,

J. Exp. Med. 183: 2593 (1996). Posteriormente, se ha confirmado que esta proteína viral tiene muchas, si no todas, las actividades inmunoestimuladoras observadas para la IL-17 huésped. Fleckenstein y Desrosiers, “Herpesvirus saimiri and Herpesvirus ateles,” en The Herpesvirus, I.B. Roizman, ed., Plenum Publishing Press, Nueva York, J. Exp. Med. 183: 2593 (1996). Subsequently, it has been confirmed that this viral protein has many, if not all, of the immunostimulatory activities observed for the host IL-17. Fleckenstein and Desrosiers, "Herpesvirus saimiri and Herpesvirus ateles," in The Herpesvirus, I.B. Roizman, ed., Plenum Publishing Press, New York,

p. 253 (1982), Biesinger, B.I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 89: 3116 (1992). [0007] La IL-17 humana es una proteína homodimérica, unida por enlaces disulfuro, de 20-30 kDa, con una glicosilación variable. Yao-1, supra; Fossier at al., supra. Es codificado por un marco de lectura abierto de 155 aminoácidos que incluye una secuencia señal de secreción N-terminal de 19-23 aminoácidos. La secuencia de aminoácidos de IL-17 sólo es similar a la proteína de Herpesvirus descrita anteriormente y no muestra una identidad significativa con las secuencias de otras citoquinas u otras proteínas. Adicionalmente, el ARNm que codifica IL-17 sólo se ha detectado en células T CD4+ memoria activadas y células PBMC estimuladas por PMA/ionomicina. p. 253 (1982), Biesinger, B.I. et al., Proc. Natl Acad. Sci., USA 89: 3116 (1992). [0007] Human IL-17 is a homodimeric protein, linked by disulfide bonds, of 20-30 kDa, with variable glycosylation. Yao-1, supra; Fossier at al., Supra. It is encoded by an open reading frame of 155 amino acids that includes an N-terminal secretion signal sequence of 19-23 amino acids. The amino acid sequence of IL-17 is only similar to the Herpesvirus protein described above and does not show a significant identity with the sequences of other cytokines or other proteins. Additionally, mRNA encoding IL-17 has only been detected in activated memory CD4 + T cells and PBMC cells stimulated by PMA / ionomycin.

[0008] A pesar de su distribución limitada en tejidos, IL-17 muestra actividades biológicas pleiotrópicas en varios tipos de células, tales como fibroblastos, células endoteliales y células epiteliales. Spriggs, M.K., supra; Broxmeyer, H.E., supra. Se ha observado que IL-17 estimula la producción de muchas citoquinas: TNF- e IL-1 de macrófagos [Jovanovic et al., J. Immunol. 160: 3513 (1998)]; IL-6, IL-8 y la molécula de adhesión intracelular (ICAM-1) de fibroblastos humanos. Fossiez et al. supra, Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) [Yao-2]; factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSM) y prostaglandinas (PGE-2) forman sinoviocitos, Fossiez et al., supra. A través de la inducción de una serie de citoquinas, IL-17 es capaz de mediar un amplio rango de respuestas, principalmente proinflamatoria y hematopoyética. Esto ha conducido a sugerir que IL-17 puede jugar un papel crucial en la iniciación o mantenimiento de una respuesta inflamatoria. Jovanovic et al., supra. [0009] En concordancia con el amplio rango de efectos de IL-17, se ha observado que el receptor de la superficie celular para IL-17 está ampliamente expresado en muchos tejidos y tipos de células. Yao et al., Cytokine 9: 794 (1997) [Yao-3]. Aunque la secuencia de aminoácidos del receptor hIL-17 (866 aminoácidos) predice una proteína con un único dominio transmembrana y un dominio intracelular largo de 525 aminoácidos, la secuencia del receptor es única y no es similar a la de cualquiera de los receptores de la familia de receptores de citoquina/factor de crecimiento. Esto acoplado con la falta de similitud del propio IL-17 con otras proteínas conocidas indica que IL-17 y su receptor pueden ser parte de una familia nueva de proteínas y receptores de señalización. [0010] Se ha observado además que IL-17, mediante señalización intracelular, estimula el influjo transitorio de Ca2+ y una reducción en [AMPc]i en macrófagos humanos. Jovanovic et al., supra. Los fibroblastos y los macrófagos tratados con IL-17 inducen la activación de NF-B, Yao-1, supra, Jovanovic et al., supra, mientras que los macrófagos tratados con el mismo activan NF-B y proteínas quinasas activadas por mitógeno. Shalom-Barek et al., J. Biol. Chem. 273: 27467 (1998). [0011] La presente descripción describe la clonación y caracterización de dos proteínas novedosas, denominadas PRO1931 (IL-17B) y PRO1122 (IL-17C) y variantes activas de las mismas, que son similares en las secuencias de aminoácidos a IL-17. La presente invención se refiere al último, PRO1122 (IL-17C). WO 99/61617 que es relevante para la valoración de la novedad también se refiere al mismo polipéptido, designado en la misma como IL-21. [0008] Despite its limited distribution in tissues, IL-17 shows pleiotropic biological activities in various types of cells, such as fibroblasts, endothelial cells and epithelial cells. Spriggs, M.K., supra; Broxmeyer, H.E., supra. It has been observed that IL-17 stimulates the production of many cytokines: TNF- and IL-1 from macrophages [Jovanovic et al., J. Immunol. 160: 3513 (1998)]; IL-6, IL-8 and the intracellular adhesion molecule (ICAM-1) of human fibroblasts. Fossiez et al. supra, Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) [Yao-2]; Colony stimulating factor of granulocytes (G-CSM) and prostaglandins (PGE-2) form synoviocytes, Fossiez et al., supra. Through the induction of a series of cytokines, IL-17 is capable of mediating a wide range of responses, mainly proinflammatory and hematopoietic. This has led to suggest that IL-17 can play a crucial role in the initiation or maintenance of an inflammatory response. Jovanovic et al., Supra. [0009] In accordance with the wide range of effects of IL-17, it has been observed that the cell surface receptor for IL-17 is widely expressed in many tissues and cell types. Yao et al., Cytokine 9: 794 (1997) [Yao-3]. Although the amino acid sequence of the hIL-17 receptor (866 amino acids) predicts a protein with a single transmembrane domain and a long intracellular domain of 525 amino acids, the receptor sequence is unique and not similar to that of any of the receptors in the family of cytokine receptors / growth factor. This coupled with the lack of similarity of IL-17 itself with other known proteins indicates that IL-17 and its receptor may be part of a new family of proteins and signaling receptors. [0010] It has also been observed that IL-17, through intracellular signaling, stimulates the transient influx of Ca2 + and a reduction in [cAMP] and human macrophages. Jovanovic et al., Supra. Fibroblasts and macrophages treated with IL-17 induce the activation of NF-B, Yao-1, supra, Jovanovic et al., Supra, while macrophages treated with it activate NF-B and protein kinases activated by mitogenic Shalom-Barek et al., J. Biol. Chem. 273: 27467 (1998). [0011] The present description describes the cloning and characterization of two novel proteins, designated PRO1931 (IL-17B) and PRO1122 (IL-17C) and active variants thereof, which are similar in the amino acid sequences to IL-17. The present invention relates to the latter, PRO1122 (IL-17C). WO 99/61617 which is relevant for the assessment of novelty also refers to the same polypeptide, designated therein as IL-21.

DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN SUMMARY DESCRIPTION OF THE INVENTION

[0012] Los Solicitantes han identificado un clon de ADNc que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia con IL-17, en el que el polipéptido se designa en la presente solicitud como PRO1122. [0013] En una realización, la presente invención proporciona anticuerpos antagonistas para un polipéptido PRO1122 nativo, tal como se define en las reivindicaciones. [0014] En una realización adicional tal como se define en las reivindicaciones, la presente invención se refiere a una composición que comprende un antagonista del polipéptido PRO1122 tal como se ha definido anteriormente en la presente invención, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. [0015] En una realización adicional tal como se define en las reivindicaciones, la presente invención se refiere a la utilización de un antagonista de PRO1122 tal como se ha descrito anteriormente en la presente invención, para la preparación de un medicamento útil en el tratamiento de un trastorno cartilaginoso degenerativo. [0012] Applicants have identified a cDNA clone encoding a polypeptide having a sequence identity with IL-17, in which the polypeptide is designated in the present application as PRO1122. [0013] In one embodiment, the present invention provides antagonistic antibodies to a native PRO1122 polypeptide, as defined in the claims. [0014] In a further embodiment as defined in the claims, the present invention relates to a composition comprising a PRO1122 polypeptide antagonist as defined above in the present invention, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. [0015] In a further embodiment as defined in the claims, the present invention relates to the use of a PRO1122 antagonist as described above in the present invention, for the preparation of a medicament useful in the treatment of a degenerative cartilaginous disorder.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0016] [0016]

La figura 1 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID No: 1) derivada de los nucleótidos 42-581 de SEC ID NO: 2. También se muestra en la figura 1 el péptido señal, un sitio de N-glicosilación, una región que tiene una identidad en la secuencia con IL-17, el peso molecular, y el pI aproximado. La figura 2 muestra una secuencia de nucleótidos (SEC ID No: 2) que contiene la secuencia de nucleótidos de un ADNc de PRO1931 de secuencia nativa (nucleótidos 42-581 de SEC ID No: 2), en la que la secuencia de nucleótidos (SEC ID No: 2) es un clon designado en la presente invención como "UNQ516" y/o "DNA59294-1381". La figura 3 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID No: 3) derivada de los nucleótidos 50-640 de SEC ID No: 4. También se muestra las localizaciones aproximadas del péptido señal, un patrón de cremallera de leucinas en una región que tiene identidad en la secuencia con IL-17. También se muestran el peso aproximado en daltons, y el pI aproximado. La figura 4 muestra una secuencia de nucleótidos (SEC ID No: 4) que contiene la secuencia de nucleótidos de un ADNc de PRO1122 de secuencia nativa (nucleótidos 50-640 de SEC ID No: 1), en la que la secuencia de nucleótidos (SEC ID No: 4) es un clon designado en la presente invención como “UNQ561" y/o "DNA62377-1381-1". También se muestran la secuencia complementaria y las secuencias de aminoácidos deducidas. La figura 5 muestra DNA47332 (SEC ID No: 5), un fragmento de ADN virtual utilizado en el aislamiento de DNA59294 (SEC ID No: 2). La figura 6 muestra DNA49665 (Incyte EST 1347523) (SEC ID No: 7), un fragmento virtual utilizado en el aislamiento de DNA62377 (SEC ID No: 4). La figura 7A muestra una alineación entre las secuencias de proteínas codificadas por DNA59624 (IL17-B) (SEC ID No: 1), DNA62377 (IL17-C) (SEC ID No: 3) e IL-17 (SEC ID No: 11). Las secuencias de señal putativas están subrayadas, los sitios potenciales de glicosilación unidos a N están doblemente subrayados, y los residuos de triptófano y cisteína conservados están marcados con asteriscos. IL-17, IL-17B e IL17C comparten una identidad de aminoácidos entre sí del 26-28%. La figura 7B muestra una alineación entre sólo la proteína codificada de DNA59624 (SEC ID No: 1) y DNA62377 (SEC ID No: 3). La figura 8 es un análisis de transferencia de ARN de IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1). La transferencia northern representa ARNm de tejidos humanos (Clontech) hibridado a una sonda IL17B humana radiomarcada de forma específica tal como se describe en el Ejemplo 8. Los marcadores de tamaño de ARN se muestran en la izquierda. En la parte inferior se muestra una rehibridación de la misma transferencia con una sonda de ADNc de -actina humana. Las figuras 9A-9B muestran gráficos de barras que representan las actividades biológicas de IL17 (SEC ID No: 11), IL17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL17C (UNQ561) (SEC ID No: 3). La figura 9A muestra células de fibroblastos de prepucio humano (HFF) cultivadas con la proteína de fusión Fc de control, IL-17, IL-17B.Fc (SEC ID No: 12) o IL-17C.Fc (SEC ID No: 13) a 100 ng/ml durante 18 horas y se ensayó el media condicionado para IL-6 (SEC ID No: 14), tal como se describe en el Ejemplo 10. La figura 9B muestra la línea de células leucémicas humanas, THP1, que se trató con las mismas citoquinas (100 ng/ml) que anteriormente bajo las mismas condiciones en las que se ensayaron los sobrenadantes para el nivel de liberación de TNF-. Los resultados se expresan como la media +/- SE de las determinaciones por triplicado de un experimento representativo. La figura 10 es una medición en el tiempo que representa la dependencia de la liberación de TNF- activada por IL17B e IL17C de células THP1. En la figura 10A, las células THP1 se incubaron con 100 ng/ml (2,2 nM) de IL17B.Fc (SEC ID No: 12) o IL17C.Fc (SEC ID No: 13) de 0,5 a 32 horas, se recogió el medio condicionado, y se cuantificó la concentración de TNF- tal como se describe en el Ejemplo 10. En la figura 10B, las células THP1 se trataron con la IL-17B.Fc e IL-17C.Fc a un intervalo de concentración de 0 a 120 nM durante 18 horas y se determinó la liberación de TNF. La figura 11 es una immunoprecipitación de ECD de IL-17R (SEC ID No: 15) con IL17 (SEC ID No: 11), IL17B (SEC ID No: 1) e IL-17C (SEC ID No: 3). El ECD del receptor de IL-17 etiquetado con His se expresó en células 293 y se marcó metabólicamente 35S tal como se describe en el Ejemplo 11. El sobrenadante se recuperó y se utilizaron gránulos de Ni-NTA para precipitar con afinidad ECD de IL17R etiquetado con His (SEC ID No: 15) en el sobrenadante (banda 1). En la figura 11A, IL-17 (SEC ID No: 11), IL-17B.Fc (SEC ID No: 12) e IL-17C.Fc (SEC ID No: 13), o las proteínas de fusión Fc de control se incubaron con el sobrenadante y se añadieron gránulos de proteína-A-agarosa para precipitar las proteínas de fusión Fc. Para la reacción de inmunoprecipitación de IL-17, se incluyeron anticuerpos anti-ILFigure 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID No: 1) derived from nucleotides 42-581 of SEQ ID NO: 2. Also shown in Figure 1 is the signal peptide, an N-glycosylation site, a region that It has an identity in the sequence with IL-17, molecular weight, and approximate pI. Figure 2 shows a nucleotide sequence (SEQ ID No: 2) containing the nucleotide sequence of a native sequence PRO1931 cDNA (nucleotides 42-581 of SEQ ID No: 2), in which the nucleotide sequence ( SEQ ID No: 2) is a clone designated in the present invention as "UNQ516" and / or "DNA59294-1381". Figure 3 shows the amino acid sequence (SEQ ID No: 3) derived from nucleotides 50-640 of SEQ ID No: 4. The approximate locations of the signal peptide, a leucine zipper pattern in a region having sequence identity with IL-17. The approximate weight in daltons, and the approximate pI are also shown. Figure 4 shows a nucleotide sequence (SEQ ID No: 4) containing the nucleotide sequence of a native sequence PRO1122 cDNA (nucleotides 50-640 of SEQ ID No: 1), in which the nucleotide sequence ( SEQ ID No: 4) is a clone designated in the present invention as "UNQ561" and / or "DNA62377-1381-1". The complementary sequence and deduced amino acid sequences are also shown. Figure 5 shows DNA47332 (SEQ ID No: 5), a virtual DNA fragment used in the isolation of DNA59294 (SEQ ID No: 2) Figure 6 shows DNA49665 (Incyte EST 1347523) (SEQ ID No: 7), a virtual fragment used in the isolation of DNA62377 (SEQ ID No: 4) Figure 7A shows an alignment between the protein sequences encoded by DNA59624 (IL17-B) (SEQ ID No: 1), DNA62377 (IL17-C) (SEQ ID No: 3) e IL-17 (SEQ ID No: 11) Putative signal sequences are underlined, potential N-linked glycosylation sites are doubly sub scratches, and conserved tryptophan and cysteine residues are marked with asterisks. IL-17, IL-17B and IL17C share an amino acid identity with each other of 26-28%. Figure 7B shows an alignment between only the encoded protein of DNA59624 (SEQ ID No: 1) and DNA62377 (SEQ ID No: 3). Figure 8 is an RNA transfer analysis of IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1). Northern blotting represents human tissue mRNA (Clontech) hybridized to a specifically radiolabeled human IL17B probe as described in Example 8. RNA size markers are shown on the left. A rehybridization of the same transfer with a human -actin cDNA probe is shown at the bottom. Figures 9A-9B show bar graphs depicting the biological activities of IL17 (SEQ ID No: 11), IL17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3). Figure 9A shows human foreskin fibroblast (HFF) cells cultured with the control Fc fusion protein, IL-17, IL-17B.Fc (SEQ ID No: 12) or IL-17C.Fc (SEQ ID NO: 13) at 100 ng / ml for 18 hours and the conditioned medium for IL-6 (SEQ ID No: 14) was tested, as described in Example 10. Figure 9B shows the human leukemic cell line, THP1, which was treated with the same cytokines (100 ng / ml) as previously under the same conditions under which the supernatants were tested for the TNF-liberación release level. The results are expressed as the mean +/- SE of the triplicate determinations of a representative experiment. Figure 10 is a measurement in time representing the dependence on the release of TNF- activated by IL17B and IL17C from THP1 cells. In Figure 10A, THP1 cells were incubated with 100 ng / ml (2.2 nM) of IL17B.Fc (SEQ ID No: 12) or IL17C.Fc (SEQ ID No: 13) for 0.5 to 32 hours , the conditioned medium was collected, and the TNF- concentration was quantified as described in Example 10. In Figure 10B, THP1 cells were treated with IL-17B.Fc and IL-17C.Fc at a concentration range from 0 to 120 nM for 18 hours and the release of TNF was determined. Figure 11 is an ECD immunoprecipitation of IL-17R (SEQ ID No: 15) with IL17 (SEQ ID No: 11), IL17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID No: 3). His-tagged IL-17 receptor ECD was expressed on 293 cells and 35S metabolically labeled as described in Example 11. The supernatant was recovered and Ni-NTA granules were used to precipitate with ECD affinity for labeled IL17R with His (SEQ ID No: 15) in the supernatant (band 1). In Figure 11A, IL-17 (SEQ ID No: 11), IL-17B.Fc (SEQ ID No: 12) and IL-17C.Fc (SEQ ID No: 13), or control Fc fusion proteins they were incubated with the supernatant and granules of protein-A-agarose were added to precipitate Fc fusion proteins. For the IL-17 immunoprecipitation reaction, anti-IL antibodies were included.

17. La figura 11B muestra los resultados de un experimento de unión competitiva, en el que la immunoprecipitación de ECD de IL-17R (SEC ID No: 22) por IL-17 (SEC ID No: 11) se realizó en presencia de un exceso de cinco veces de IL-17B.his (SEC ID No: 23) y proteínas de control etiquetada con his. Los precipitados en la figura 11A y la figura 11B se analizaron mediante electroforesis en geles NuPAGE (4-12% Bis-Tris). Los marcadores de peso molecular se indican en la izquierda de cada panel. La figura 12 muestra el análisis FACS de la unión de IL-17B.Fc (SEC ID No: 12) e IL17C.Fc (SEC ID No: 13) a células THP-1. Las células THP-1 se incubaron con IL17B.Fc (A) o IL-17C.Fc (B) o proteínas de fusión Fc de control en PBS (5% de suero de caballo) y seguido de la adición de anticuerpos secundarios anti-Fc conjugados con FITC. La figura 13 muestra el efecto de IL-17 (SEC ID No: 11) en el cartílago articular. Se cultivaron explantes de cartílago con la concentración indicada de IL-17 sola (sólido) o en presencia de IL-1 a la concentración indicada (tramada) (SEC ID No: 25) o IL1ra (antagonista del receptor de IL-1, R&D Systems, 1 g/ml) (SEC ID No: 26) durante 72 horas. La liberación de proteoglicanos (PG) en el medio (panel superior) indica la ruptura de la matriz. La síntesis de la matriz se determinó mediante la incorporación de 35S-sulfato en el tejido (panel inferior). La figura 14 muestra el efecto de IL-17 (SEC ID No: 11) en la liberación de óxido nítrico. Los explantes se trataron con IL-17 (10 ng/ml) sola (columnas de la izquierda) o en presencia de IL-1 (10 ng/ml) (SEC ID No: 25) (columnas de la derecha). Después de 48 horas, se ensayó la concentración de nitrito en el medio. La figura 15 muestra el efecto de NO en cambios inducidos por IL-17 en el metabolismo de la matriz. Los explantes se trataron con IL-17 (5 ng/ml) (SEC ID No: 11) sola (+) o con un inhibidor irreversible de óxido nítrico sintasa, NOS (L-NIO, Caymen Chemical, 0,5 mM). Después de 72 horas de tratamiento, se ensayó el medio para (A) nitrito y (B) proteoglicanos (PGs). (C) La síntesis de proteoglicanos se determine mediante la incorporación de 35S-sulfato en el tejido. La figura 16 muestra el efecto de la inhibición de NO en cambios inducidos por IL-1 en el metabolismo de proteoglicanos (PG). Los explantes de cartílago articular se trataron con IL-1 (5 ng/ml) (SEC ID No: 25) sola (+) o con inhibidores de NOS (LNIO o L-NIL) (L-NIL, inhibidor de NOS reversible, Caymen Chemical) o IL-1ra (antagonista del receptor de IL-1, R&D Systems, 1 g/ml) (SEC ID No: 26). Después de 72 horas de tratamiento, se ensayó el medio para (A) concentración de nitrito y (B) cantidad de proteoglicanos. (C) La síntesis de la matriz se determine mediante la incorporación de 35S-sulfato en el tejido. La figura 17 muestra el efecto de UNQ516 (SEC ID No: 1) en el cartílago articular. Los explantes se trataron con UNQ561 al 1% ó 0,1% en ausencia (3 columnas de más ala izquierda) o la presencia (tres columnas de más a la derecha) de IL-1 (SEC ID No: 25) a 10 ng/ml, y la síntesis de proteoglicanos (PG) y la producción de nitritos se determinaron tal como se describe en el Ejemplo 16. La figura 18 muestra el efecto de UNQ561 (SEC ID No: 3) en el cartílago articular. Los explantes se trataron con LTNQ561 al 1% ó 0,1% en ausencia (tres columnas de más a la izquierda) o presencia (tres columnas de más ala derecha) de IL-1 (+) (10 ng/ml) (SEC ID No: 25). La liberación y síntesis de proteoglicanos (PG) se muestran como el control de la cantidad anterior. 17. Figure 11B shows the results of a competitive binding experiment, in which the immunoprecipitation of ECD from IL-17R (SEQ ID No: 22) by IL-17 (SEQ ID No: 11) was performed in the presence of a five-fold excess of IL-17B.his (SEQ ID No: 23) and control proteins labeled with his. The precipitates in Figure 11A and Figure 11B were analyzed by electrophoresis in NuPAGE gels (4-12% Bis-Tris). Molecular weight markers are indicated on the left of each panel. Figure 12 shows the FACS analysis of the binding of IL-17B.Fc (SEQ ID No: 12) and IL17C.Fc (SEQ ID No: 13) to THP-1 cells. THP-1 cells were incubated with IL17B.Fc (A) or IL-17C.Fc (B) or control Fc fusion proteins in PBS (5% horse serum) and followed by the addition of secondary anti-secondary antibodies. Fc conjugated with FITC. Figure 13 shows the effect of IL-17 (SEQ ID No: 11) on articular cartilage. Cartilage explants were cultured with the indicated concentration of IL-17 alone (solid) or in the presence of IL-1 at the indicated concentration (plotted) (SEQ ID No: 25) or IL1ra (IL-1 receptor antagonist, R&D Systems, 1 /g / ml) (SEQ ID No: 26) for 72 hours. The release of proteoglycans (PG) in the middle (upper panel) indicates the rupture of the matrix. Matrix synthesis was determined by incorporating 35S-sulfate in the tissue (lower panel). Figure 14 shows the effect of IL-17 (SEQ ID No: 11) on the release of nitric oxide. The explants were treated with IL-17 (10 ng / ml) alone (left columns) or in the presence of IL-1 (10 ng / ml) (SEQ ID No: 25) (right columns). After 48 hours, the concentration of nitrite in the medium was tested. Figure 15 shows the effect of NO on IL-17 induced changes in matrix metabolism. The explants were treated with IL-17 (5 ng / ml) (SEQ ID No: 11) alone (+) or with an irreversible nitric oxide synthase inhibitor, NOS (L-NIO, Caymen Chemical, 0.5 mM). After 72 hours of treatment, the medium for (A) nitrite and (B) proteoglycans (PGs) was tested. (C) The synthesis of proteoglycans is determined by the incorporation of 35S-sulfate in the tissue. Figure 16 shows the effect of NO inhibition on IL-1 induced changes in proteoglycan metabolism (PG). The articular cartilage explants were treated with IL-1 (5 ng / ml) (SEQ ID No: 25) alone (+) or with NOS inhibitors (LNIO or L-NIL) (L-NIL, reversible NOS inhibitor , Caymen Chemical) or IL-1ra (IL-1 receptor antagonist, R&D Systems, 1 µg / ml) (SEQ ID No: 26). After 72 hours of treatment, the medium was tested for (A) nitrite concentration and (B) amount of proteoglycans. (C) Matrix synthesis is determined by incorporating 35S-sulfate in the tissue. Figure 17 shows the effect of UNQ516 (SEQ ID No: 1) on articular cartilage. The explants were treated with 1% or 0.1% UNQ561 in the absence (3 columns of more left wing) or the presence (three more columns to the right) of IL-1 (SEQ ID No: 25) to 10 ng / ml, and the synthesis of proteoglycans (PG) and nitrite production were determined as described in Example 16. Figure 18 shows the effect of UNQ561 (SEQ ID No: 3) on articular cartilage. The explants were treated with 1% or 0.1% LTNQ561 in the absence (three columns of more to the left) or presence (three columns of more right wing) of IL-1 (+) (10 ng / ml) ( SEQ ID No: 25). The release and synthesis of proteoglycans (PG) are shown as the control of the previous amount.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS

I. Definiciones I. Definitions

[0017] Los términos "polipéptido PRO1122" y “PRO1122” cuando se utilizan en la presente invención engloba a PRO1122 de secuencia nativa y a las variantes polipéptido del mismo (que más adelante también se definen en la presente). El polipéptido PRO1122 puede aislarse a partir de una serie de orígenes, tales como a partir de tipos de tejido humano o de algún otro origen, o prepararse mediante procesos de recombinación o sintéticos. [0018] Un “polipéptido PRO1122 de secuencia nativa” comprende un polipéptido que tiene la misma secuencia de aminoácidos que un polipéptido PRO1122 derivado de la naturaleza. Dichos polipéptidos PRO1122 de secuencia nativa se pueden aislar de la naturaleza o pueden producirse mediante medios recombinantes o sintéticos. El término “polipéptido PRO1122 de secuencia nativa” comprende específicamente formas secretadas o truncadas naturales de un polipéptido PRO1122 (por ejemplo, formas solubles que contienen, por ejemplo, una secuencia de dominio extracelular), formas variantes naturales (por ejemplo, formas de corte y empalme (“spliced”) alternativas) y variantes alélicas naturales de un polipéptido PRO1122. [0019] En la presente descripción, el polipéptido PRO1122 de secuencia nativa que se utiliza es un polipéptido PRO1122 de secuencia nativa madura o de longitud completa que comprende los aminoácidos 1 ó 19 a 197 de la figura 3 (SEC ID No: 3). Además, aunque el polipéptido PRO1122 descrito en la figura 3 (es decir, UNQ561) se observa que empieza con un residuo de metionina designado como posición 1 de los aminoácidos, es concebible y posible que se pueda utilizar otro residuo de metionina situados en dirección 5’ o dirección 3’ desde la posición 1 de los aminoácidos en la figura 3 como residuo de aminoácido de partida. [0020] El término “UNQ561” se refiere a la proteína PRO1122 de secuencia nativa específica descrita en la figura 3. Opcionalmente, el polipéptido PRO1122 se obtiene o es obtenible mediante la expresión del polipéptido codificado por el inserto de ADNc del vector DNA62377-1381-1, bajo el número de depósito de ATCC 203552. [0021] La “variante de PRO1122” significa un polipéptido PRO1122 “activo” tal y como se define a continuación que tiene por lo menos aproximadamente un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con el polipéptido PRO1122 que tiene la secuencia de aminoácidos deducida de residuos 1 o aproximadamente 19 a 197 mostrada en la figura 3 (SEC ID No: 3), para un polipéptido PRO1122 de secuencia nativa de longitud completa o madura. Entre dichas variantes de polipéptido PRO1122 se incluyen, por ejemplo, polipéptidos PRO1122 en los que uno o más residuos de aminoácidos se añaden, se sustituyen o se eliminan, en el extremo N- o C-terminal o en el interior de la secuencia de la figura 3 (SEC ID No: 3). Habitualmente, una variante de polipéptido PRO1122 tendrá por lo menos aproximadamente un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos, preferiblemente por lo menos aproximadamente un 81% de identidad en la secuencia de aminoácidos, más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 82% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 83% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 84% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 85% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 86% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 87% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 88% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 89% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 90% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 91% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 92% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 96% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 97% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 98% de identidad en la secuencia de aminoácidos, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 99% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 3 (SEC ID No: 3), con o sin el péptido señal (por ejemplo, con péptido señal, los residuos de aminoácidos del 1 a 197 de la SEC ID No: 3, sin péptido señal aproximadamente 19 a 197 de la SEC ID No: 3). Las variantes proporcionadas en la presente invención excluyen las secuencias de PRO1122 de secuencia nativa, así como los polipéptidos y ácidos nucleicos descritos en la presente invención con los que los polipéptidos PRO11 22 comparten el 100% de identidad y/o que ya son conocidos en la técnica. [0022] El término “porcentaje (%) de identidad en la secuencia de aasaminoácidos” en relación a las secuencias de aminoácidos de PRO1122 identificadas en el docpresente documento se define como el porcentaje de residuos de aaaminoácido en una secuencia candidata que son idénticos a los residuos de aaaminoácido en una secuencia de polipéptido PRO1122, después de alinear las secuencias y de introducir espacios, si fuera necesario, para conseguir el máximo porcentaje de identidad de secuencia y sin considerar ninguna sustitución conservativa como parte de la identidad de secuencia. El alineamiento, con el objetivo de determinar el porcentaje de identidad en la secuencia de aasaminoácidos, puede conseguirse de varias maneras que se encuentran dentro del conocimiento en la técnica, por ejemplo, utilizando software de ordenador disponible públicamente, tal como software aLIGN, ALIGN-2, Megalin (DNASTAR) [0017] The terms "PRO1122 polypeptide" and "PRO1122" when used in the present invention encompasses native sequence PRO1122 and polypeptide variants thereof (which are also defined hereinafter). The PRO1122 polypeptide can be isolated from a number of origins, such as from human tissue types or some other origin, or prepared by recombination or synthetic processes. [0018] A "native sequence PRO1122 polypeptide" comprises a polypeptide having the same amino acid sequence as a nature-derived PRO1122 polypeptide. Said native sequence PRO1122 polypeptides can be isolated from nature or can be produced by recombinant or synthetic means. The term "native sequence PRO1122 polypeptide" specifically comprises natural secreted or truncated forms of a PRO1122 polypeptide (for example, soluble forms containing, for example, an extracellular domain sequence), natural variant forms (for example, cutting forms and spliced (alternative) and natural allelic variants of a PRO1122 polypeptide. [0019] In the present description, the native sequence PRO1122 polypeptide that is used is a mature or full length native sequence PRO1122 polypeptide comprising amino acids 1 or 19 to 197 of Figure 3 (SEQ ID No: 3). Furthermore, although the PRO1122 polypeptide described in Figure 3 (i.e., UNQ561) is observed to start with a methionine residue designated as position 1 of the amino acids, it is conceivable and possible that another methionine residue located in the 5 direction may be used. 'or direction 3' from position 1 of the amino acids in Figure 3 as the starting amino acid residue. [0020] The term "UNQ561" refers to the specific native sequence PRO1122 protein described in Figure 3. Optionally, the PRO1122 polypeptide is obtained or obtainable by expression of the polypeptide encoded by the cDNA insert of the DNA62377-1381 vector -1, under the deposit number of ATCC 203552. [0021] The "variant of PRO1122" means an "active" PRO1122 polypeptide as defined below that has at least about 80% identity in the sequence of amino acids with the PRO1122 polypeptide having the amino acid sequence deduced from residues 1 or about 19 to 197 shown in Figure 3 (SEQ ID No: 3), for a full-length or mature native sequence PRO1122 polypeptide. Such variants of PRO1122 polypeptide include, for example, PRO1122 polypeptides in which one or more amino acid residues are added, substituted or removed, at the N- or C-terminal end or inside the sequence of the Figure 3 (SEQ ID No: 3). Typically, a PRO1122 polypeptide variant will have at least about 80% identity in the amino acid sequence, preferably at least about 81% identity in the amino acid sequence, more preferably at least about 82% identity. in the amino acid sequence, even more preferably at least about 83% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 84% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 85% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 86% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 87% identity in the amino acid sequence, even more preferably by at least about 88% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 89% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 90% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 91% identity in the sequence of amino acids. amino acids, even more preferably at least about 92% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 96% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 97% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 98% identity in the amino acid sequence, even more preferably at least about 99% identity in the amino acid sequence with the amino acid sequence of Figure 3 (SEQ ID No: 3), with or without the signal peptide (for example, with signal peptide, the residues of am Inoculated from 1 to 197 of SEQ ID No: 3, without signal peptide about 19 to 197 of SEQ ID No: 3). The variants provided in the present invention exclude the sequences of native sequence PRO1122, as well as the polypeptides and nucleic acids described in the present invention with which PRO11 22 polypeptides share 100% identity and / or are already known in the technique. [0022] The term "percentage (%) of identity in the aasamino acid sequence" in relation to the amino acid sequences of PRO1122 identified in the document is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence that are identical to those aaamino acid residues in a PRO1122 polypeptide sequence, after aligning the sequences and entering spaces, if necessary, to achieve the maximum percentage of sequence identity and without considering any conservative substitution as part of the sequence identity. Alignment, in order to determine the percentage of identity in the aasamino acid sequence, can be achieved in several ways that are within the skill in the art, for example, using publicly available computer software, such as aLIGN, ALIGN- software 2, Megalin (DNASTAR)

o BLAST (por ejemplo, Blast, Blast-2, WU-Blast-2)). Los expertos en la materia pueden determinar los parámetros apropiados para medir la alineación, incluyendo cualquier algoritmo necesario para conseguir el máximo de alineamiento sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan. Por ejemplo, los valores de % de identidad utilizados en la presente invención se generan utilizando WU-BLAST2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996). La mayoría de los parámetros de búsqueda de WU-BLAST-2 se ajustan a los valores por defecto. Aquellos que no se ajustan a los valores por defecto, es decir, los parámetros ajustables se fijan a los siguientes valores: espacio de solapamiento (“overlap span”) = 1, fracción de solapamiento (“overlap fraction”) = 0,125, umbral de palabra (“word threshold”) T = 11, y matriz de puntuación (“scoring matrix”) = BLOSUM 62. Para el objetivo de la presente invención, un valor del % de identidad de la secuencia de aminoácidos se determina dividiendo (a) el número de residuos de aminoácidos idénticos que se emparejan entre la secuencia de aminoácidos del polipéptido PRO1122 de interés y la secuencia de aminoácidos de comparación de interés (es decir, la secuencia contra la que se compara el polipéptido PRO1122 de interés) según se determina mediante WUBLAST-2 entre (b) el número total de residuos de aminoácidos del polipéptido PRO1122 de interés. [0023] El término “aislado” cuando se utiliza para describir los diversos polipéptidos descritos en la presente invención, significa polipéptidos que se han identificado y separado y/o recuperado de un componente de su medio natural. Preferiblemente, el polipéptido aislado está libre de la asociación con todos los componentes con los que se asocia de forma natural. Los componentes contaminantes de su medio natural son materiales que habitualmente interferirían con utilizaciones diagnósticas o terapéuticas para el polipéptido, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteináceos o no proteináceos. En realizaciones preferidas, se purificará el polipéptido (1) hasta un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de una secuencia de aminoácidos N-terminal o interna mediante la utilización de un secuenciador de copa giratoria, o (2) hasta una homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones no reductoras or BLAST (for example, Blast, Blast-2, WU-Blast-2)). Those skilled in the art can determine the appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithm necessary to achieve maximum alignment over the full length of the sequences being compared. For example, the% identity values used in the present invention are generated using WU-BLAST2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996). Most of the WU-BLAST- search parameters) 2 are set to the default values Those that do not fit the default values, that is, the adjustable parameters are set to the following values: overlap span (“overlap span”) = 1, overlap fraction (“ overlap fraction ”) = 0.125, word threshold (“ word threshold ”) T = 11, and scoring matrix (“ scoring matrix ”) = BLOSUM 62. For the purpose of the present invention, a value of% identity of the amino acid sequence is determined by dividing (a) the number of identical amino acid residues that match between the amino acid sequence of the PRO1122 polypeptide of interest and the amino acid sequence of comparison of interest (i.e., the sequence against which the cop PRO1122 peptide of interest) as determined by WUBLAST-2 among (b) the total number of amino acid residues of the PRO1122 polypeptide of interest. [0023] The term "isolated" when used to describe the various polypeptides described in the present invention, means polypeptides that have been identified and separated and / or recovered from a component of their natural environment. Preferably, the isolated polypeptide is free from association with all components with which it is naturally associated. The contaminating components of its natural environment are materials that would normally interfere with diagnostic or therapeutic uses for the polypeptide, and may include enzymes, hormones and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. In preferred embodiments, the polypeptide (1) will be purified to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of an N-terminal or internal amino acid sequence by using a rotary cup sequencer, or (2) to homogeneity by SDS-PAGE in non-reducing conditions

o reductoras utilizando azul de Coomassie o, preferiblemente, tinción con plata. El polipéptido aislado incluye el polipéptido in situ en el interior de células recombinantes, ya que por lo menos un componente del medio natural del polipéptido or reducing using Coomassie blue or, preferably, staining with silver. The isolated polypeptide includes the polypeptide in situ inside recombinant cells, since at least one component of the polypeptide's natural environment

PRO1122 no estará presente. Normalmente, sin embargo, el polipéptido aislado se preparará mediante por lo menos una etapa de purificación. [0024] El término “secuencias de control” se refiere a secuencias de ADN necesarias para la expresión de una secuencia codificante unida operativamente en un organismo huésped particular. Las secuencias de control que son adecuadas para procariotas incluyen, por ejemplo, un promotor, opcionalmente una secuencia operadora, y un sitio de unión a ribosomas. Se sabe que las células eucariotas utilizan promotores, señales de poliadenilación y potenciadores. [0025] Un ácido nucleico está “unido operativamente” cuando está situado en una relación funcional con otra secuencia de ácidos nucleicos. Por ejemplo, el ADN para una presecuencia o líder secretor está unido operativamente a ADN para un polipéptido si se expresa como una preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o potenciador está unido operativamente a una secuencia codificante si afecta en la transcripción de la secuencia; o un sitio de unión a ribosomas está unido operativamente a una secuencia codificante si está situado para facilitar la traducción. Generalmente, “unido operativamente” significa que las secuencias de ADN que se unen están contiguas y, en el caso de un líder secretor, contiguas y en fase de lectura. Sin embargo, los potenciadores no tienen que estar contiguos. La unión se realiza mediante la unión en los sitios de restricción convenientes. Si dichos sitios no existen, los adaptadores o enlazadores de oligonucleótidos sintéticos se utilizan según la práctica convencional. [0026] La “astringencia” de las reacciones de hibridación se puede determinar fácilmente por un experto habitual en la materia, y generalmente, es un cálculo empírico dependiente de la longitud de la sonda, la temperatura de lavado, y la concentración de sal. En general, sondas más largas requieren temperaturas más elevadas para una hibridación correcta, mientras que sondas más cortas necesitan temperaturas más bajas. La hibridación depende generalmente de la capacidad del ADN desnaturalizado para rehibridarse cuando las cadenas complementarias están presentes en un medio por debajo de su temperatura de fusión. Cuanto mayor es el grado de homología deseada entre la sonda y la secuencia de hibridación, mayor es la temperatura relativa que se puede utilizar. Como resultado, se deduce que temperaturas relativas superiores tenderían a hacer las condiciones de reacción más astringentes, mientras que temperaturas inferiores no tanto. Para detalles adicionales y explicaciones de la astringencia de las reacciones de hibridación, ver Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995). PRO1122 will not be present. Normally, however, the isolated polypeptide will be prepared by at least one purification step. [0024] The term "control sequences" refers to DNA sequences necessary for the expression of an operably linked coding sequence in a particular host organism. Control sequences that are suitable for prokaryotes include, for example, a promoter, optionally an operator sequence, and a ribosome binding site. It is known that eukaryotic cells use promoters, polyadenylation signals and enhancers. [0025] A nucleic acid is "operably linked" when it is located in a functional relationship with another nucleic acid sequence. For example, the DNA for a presequence or secretory leader is operably linked to DNA for a polypeptide if it is expressed as a preprotein that participates in the secretion of the polypeptide; a promoter or enhancer is operably linked to a coding sequence if it affects the transcription of the sequence; or a ribosome binding site is operatively linked to a coding sequence if it is located to facilitate translation. Generally, "operably linked" means that the DNA sequences that bind are contiguous and, in the case of a secretory leader, contiguous and in reading phase. However, enhancers do not have to be contiguous. Binding is done by binding at convenient restriction sites. If such sites do not exist, synthetic oligonucleotide adapters or linkers are used according to conventional practice. [0026] The "astringency" of the hybridization reactions can easily be determined by a person skilled in the art, and generally, it is an empirical calculation dependent on the length of the probe, the washing temperature, and the salt concentration. In general, longer probes require higher temperatures for proper hybridization, while shorter probes need lower temperatures. Hybridization generally depends on the ability of denatured DNA to be rehybridized when complementary chains are present in a medium below their melting temperature. The higher the degree of homology desired between the probe and the hybridization sequence, the higher the relative temperature that can be used. As a result, it follows that higher relative temperatures would tend to make the reaction conditions more astringent, while lower temperatures not so much. For additional details and explanations of the astringency of hybridization reactions, see Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995).

[0027] “Condiciones astringentes” o “condiciones de astringencia elevada”, tal y como se definen en la presente invención, se pueden identificar por aquéllas que: (1) utilizan una fuerza iónica baja y una temperatura elevada para el lavado, por ejemplo, cloruro sódico 0,015 M/citrato sódico 0,0015 M/dodecil sulfato sódico al 0,1% a 50oC; (2) utilizan durante la hibridación un agente desnaturalizante, tal como formamida, por ejemplo, formamida al 50% (v/v) con albúmina de suero bovino al 0,1%/Ficol al 0,1%/polivinilpirrolidona al 0,1%/tampón de fosfato sódico 50 mM a pH 6,5 con cloruro sódico 750 mM, citrato sódico 75 mM a 42oC; o (3) utilizan formamida al 50%, 5 x SSC (NaCl 0,75 M, citrato sódico 0,075 M), fosfato sódico 50 mM (pH 6,8), pirofosfato sódico al 0,1%, 5 x solución de Denhardt, ADN de esperma de salmón sonicado (50 g/ml), SDS al 0,1% y sulfato de dextrano al 10% a 42oC, con lavados a 42oC en 0,2 x SSC (cloruro sódico/citrato sódico) y formamida al 50% a 55oC, seguido de un lavado de astringencia elevada que consiste en 0,1 x SSC que contiene EDTA a 55oC. [0028] Las “condiciones moderadamente astringentes” se pueden identificar tal y como se describen en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Nueva York: Cold Spring Harbor Press, 1989, e incluye la utilización de una solución de lavado y condiciones de hibridación (por ejemplo, temperatura, fuerza iónica y % de SDS) menos astringentes que las descritas anteriormente. Un ejemplo de condiciones moderadamente astringentes es la incubación durante toda la noche a 37oC en una solución que comprende: formamida al 20%, 5 x SSC (NaCl 150 mM, citrato sódico 15 mM), fosfato sódico 50 mM (pH 7,6), 5 x solución de Denhardt, sulfato de dextrano al 10%, y ADN de esperma de salmón fragmentado desnaturalizado 20 mg/ml, seguido del lavado de los filtros en 1 x SSC a aproximadamente 37-50oC. El experto en la materia sabrá cómo ajustar la temperatura, la fuerza iónica, etc., según sea necesario, para acomodar factores, tales como la longitud de la sonda y similares. [0029] El término “epítopo etiquetado” cuando se utiliza en la presente invención se refiere a un polipéptido quimérico que comprende un polipéptido PRO1122, o secuencia del dominio del mismo, fusionado a un “polipéptido etiqueta”. El polipéptido etiqueta tiene residuos suficientes para proporcionar un epítopo frente al que se puede fabricar un anticuerpo, o que se puede identificar por algún otro agente, aunque es suficientemente corto, de manera que no interfiere en la actividad del polipéptido 1122. El polipéptido etiqueta es también preferiblemente bastante único, de manera que el anticuerpo sustancialmente no reacciona de forma cruzada con otros epítopos. Los polipéptidos etiqueta adecuados tienen generalmente por lo menos seis residuos de aminoácidos y habitualmente entre aproximadamente 8 y 50 residuos de aminoácidos (preferiblemente, entre aproximadamente 10 y aproximadamente 20 residuos). [0030] Tal y como se utiliza en la presente invención, el término “inmunoadhesina” designa moléculas de tipo anticuerpo que combinan la especificidad de unión de una proteína heteróloga (una “adhesina”) con las funciones efectoras de dominios constantes de inmunoglobulina. Estructuralmente, las inmunoadhesinas comprenden una fusión de una secuencia de aminoácidos con la especificidad de unión deseada que es otra a parte del reconocimiento y sitio de unión a antígeno de un anticuerpo (es decir, es “heterólogo”), y una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina. La parte de adhesina de una molécula de inmunoadhesina habitualmente es una secuencia de aminoácidos contigua que comprende por lo menos el sitio de unión de un receptor [0027] "Astringent conditions" or "high astringency conditions", as defined in the present invention, can be identified by those who: (1) use a low ionic strength and an elevated washing temperature, for example 0.015 M sodium chloride / 0.0015 M sodium citrate / 0.1% sodium dodecyl sulfate at 50 ° C; (2) use a denaturing agent during hybridization, such as formamide, for example, 50% formamide (v / v) with 0.1% bovine serum albumin / 0.1% Ficol / 0.1% polyvinylpyrrolidone % / 50 mM sodium phosphate buffer at pH 6.5 with 750 mM sodium chloride, 75 mM sodium citrate at 42oC; or (3) use 50% formamide, 5 x SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M sodium citrate), 50 mM sodium phosphate (pH 6.8), 0.1% sodium pyrophosphate, 5 x Denhardt solution , Sonic salmon sperm DNA (50 /g / ml), 0.1% SDS and 10% dextran sulfate at 42oC, with washes at 42oC in 0.2 x SSC (sodium chloride / sodium citrate) and formamide at 50% at 55oC, followed by a high astringency wash consisting of 0.1 x SSC containing EDTA at 55oC. [0028] "Moderately astringent conditions" can be identified as described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989, and includes the use of a washing solution and conditions of hybridization (eg, temperature, ionic strength and% SDS) less astringent than those described above. An example of moderately astringent conditions is overnight incubation at 37 ° C in a solution comprising: 20% formamide, 5 x SSC (150 mM NaCl, 15 mM sodium citrate), 50 mM sodium phosphate (pH 7.6) , 5 x Denhardt solution, 10% dextran sulfate, and 20 mg / ml denatured fragmented salmon sperm DNA, followed by washing the filters in 1 x SSC at approximately 37-50 ° C. The person skilled in the art will know how to adjust temperature, ionic strength, etc., as necessary, to accommodate factors, such as probe length and the like. [0029] The term "tagged epitope" when used in the present invention refers to a chimeric polypeptide comprising a PRO1122 polypeptide, or domain sequence thereof, fused to a "tag polypeptide". The tag polypeptide has sufficient residues to provide an epitope against which an antibody can be made, or that can be identified by some other agent, although short enough, so that it does not interfere with the activity of the 1122 polypeptide. The tag polypeptide is also preferably quite unique, so that the antibody substantially does not cross-react with other epitopes. Suitable tag polypeptides generally have at least six amino acid residues and usually between about 8 and 50 amino acid residues (preferably, between about 10 and about 20 residues). [0030] As used in the present invention, the term "immunoadhesin" designates antibody-like molecules that combine the binding specificity of a heterologous protein (an "adhesin") with the effector functions of immunoglobulin constant domains. Structurally, immunoadhesins comprise a fusion of an amino acid sequence with the desired binding specificity that is other than the recognition and antigen binding site of an antibody (ie, it is "heterologous"), and a constant domain sequence. of immunoglobulin. The adhesin part of an immunoadhesin molecule is usually a contiguous amino acid sequence that comprises at least the binding site of a receptor

o ligando. La secuencia del dominio constante de inmunoglobulina en la inmunoadhesina se puede obtener a partir de cualquier inmunoglobulina, tal como subtipos IgG-1, IgG-2, IgG-3 o IgG-4, IgA (incluyendo IgA-1 e IgA-2), IgE, IgD o IgM. [0031] El término “anticuerpo” se utiliza en el sentido más amplio y cubre específicamente, por ejemplo, anticuerpos monoclonales anti-polipéptido PRO1122 individuales (incluyendo anticuerpos agonistas, antagonistas, y neutralizantes), composiciones de anticuerpo anti-PRO1122 con especificidad poliepitópica, anticuerpos anti-PRO1122 de cadena única, y fragmentos de anticuerpos antiPRO1122. El término “anticuerpo monoclonal”, tal y como se utiliza en la presente, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos a excepción de posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en pequeñas cantidades. [0032] “Activo” o “actividad” para los objetivos de la presente invención se refiere a una forma o formas de PRO1122 que retiene las actividades biológica y/o inmunológica de polipéptido PRO1122 nativo o natural. Más detalladamente, actividad “biológica” se refiere a una función biológica (inhibidora o estimuladora) provocada por un PRO1122 nativo o natural diferente de la capacidad de inducir la producción de un anticuerpo contra un epítopo antigénico que se encuentra en un PRO1122 nativo o natural y una actividad “inmunológica” se refiere sólo a la capacidad de inducir la producción de un anticuerpo contra un epítopo antigénico que se encuentra en un or ligand. The immunoglobulin constant domain sequence in the immunoadhesin can be obtained from any immunoglobulin, such as IgG-1, IgG-2, IgG-3 or IgG-4, IgA subtypes (including IgA-1 and IgA-2), IgE, IgD or IgM. [0031] The term "antibody" is used in the broadest sense and specifically covers, for example, individual anti-PRO1122 monoclonal antibodies (including agonist, antagonist, and neutralizing antibodies), anti-PRO1122 antibody compositions with polyepitopic specificity, single chain anti-PRO1122 antibodies, and antiPRO1122 antibody fragments. The term "monoclonal antibody", as used herein, refers to an antibody obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, that is, the individual antibodies comprising the population are identical except for possible natural mutations that may Be present in small quantities. [0032] "Active" or "activity" for the purposes of the present invention refers to a form or forms of PRO1122 that retains the biological and / or immunological activities of native or natural PRO1122 polypeptide. In more detail, "biological" activity refers to a biological function (inhibitory or stimulatory) caused by a native or natural PRO1122 different from the ability to induce the production of an antibody against an antigenic epitope found in a native or natural PRO1122 and an "immunological" activity refers only to the ability to induce the production of an antibody against an antigenic epitope found in a

PRO1122 nativo o natural. Una actividad biológica preferida incluye, por ejemplo, la liberación de TNF- de células THP1. [0033] “Trastorno cartilaginoso degenerativo” describe un grupo de trastornos que se caracterizan principalmente por la destrucción de la matriz del cartílago. Algunas patologías adicionales incluyen la producción de óxido nítrico y una irrupción elevada de proteoglicanos. Entre los trastornos de ejemplo que se comprenden en esta definición se incluyen, por ejemplo, artritis (por ejemplo, osteoartritis, artritis reumatoide, artritis psoriática), sepsis, colitis ulcerosa, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, artritis de células gigantes, lupus eritematoso sistémico y síndrome de Sjögren. [0034] El término “antagonista” se utiliza en el sentido más amplio, e incluye cualquier molécula que parcial o totalmente bloquea, inhibe o neutraliza una actividad biológica de un polipéptido PRO1122 nativo descrito en la presente invención, aunque la invención se limita a anticuerpos antagonistas, tal como se define en las reivindicaciones. De forma similar, el término “agonista” se utiliza en el sentido más amplio e incluye cualquier molécula que imita una actividad biológica de un polipéptido PRO1122 nativo descrito en la presente invención. Entre las moléculas agonistas o antagonistas adecuadas se incluyen específicamente anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, fragmentos o variantes de secuencias de aminoácidos de polipéptidos PRO1122 nativos, péptidos, moléculas orgánicas pequeñas, etc. agonistas PRO1122 native or natural. A preferred biological activity includes, for example, the release of TNF-TH from THP1 cells. [0033] "Degenerative cartilaginous disorder" describes a group of disorders that are mainly characterized by the destruction of the cartilage matrix. Some additional pathologies include the production of nitric oxide and a high protein breakdown. Example disorders that are included in this definition include, for example, arthritis (eg, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis), sepsis, ulcerative colitis, psoriasis, multiple sclerosis, type I diabetes, giant cell arthritis, Systemic lupus erythematosus and Sjögren's syndrome. [0034] The term "antagonist" is used in the broadest sense, and includes any molecule that partially or totally blocks, inhibits or neutralizes a biological activity of a native PRO1122 polypeptide described in the present invention, although the invention is limited to antibodies. antagonists, as defined in the claims. Similarly, the term "agonist" is used in the broadest sense and includes any molecule that mimics a biological activity of a native PRO1122 polypeptide described in the present invention. Suitable agonist or antagonist molecules specifically include antibodies or antibody fragments, fragments or amino acid sequence variants of native PRO1122 polypeptides, peptides, small organic molecules, etc. agonists

o antagonistas, etc. Los procedimientos para identificar agonistas o antagonistas de un polipéptido PRO1122 puede comprender poner en contacto un polipéptido PRO1122 con una molécula agonista o antagonista candidata y medir un cambio detectable en una o más actividades biológicas asociadas normalmente con el polipéptido PRO1122. [0035] “Anticuerpos” (Abs) e “inmunoglobulinas” (Igs) son glicoproteínas que tienen las mismas características estructurales. Mientras los anticuerpos muestran especificidad de unión a un antígeno específico, las inmunoglobulinas incluyen tanto anticuerpos como otras moléculas de tipo anticuerpo que carecen de la especificidad de antígeno. Los polipéptidos del último tipo se producen, por ejemplo, a niveles bajos por el sistema linfático y a niveles elevados por mielomas. El término “anticuerpo” se utiliza en el sentido más amplio y cubre específicamente, sin limitación, anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) formados a partir de por lo menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos siempre y cuando muestren la actividad biológica deseada. or antagonists, etc. Methods for identifying agonists or antagonists of a PRO1122 polypeptide may comprise contacting a PRO1122 polypeptide with a candidate agonist or antagonist molecule and measuring a detectable change in one or more biological activities normally associated with the PRO1122 polypeptide. [0035] "Antibodies" (Abs) and "immunoglobulins" (Igs) are glycoproteins that have the same structural characteristics. While antibodies show specificity of binding to a specific antigen, immunoglobulins include both antibodies and other antibody-like molecules that lack antigen specificity. Polypeptides of the latter type are produced, for example, at low levels by the lymphatic system and at elevated levels by myelomas. The term "antibody" is used in the broadest sense and specifically covers, without limitation, intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies) formed from at least two intact antibodies, and antibody fragments. as long as they show the desired biological activity.

[0036] Los términos “tratar”, “tratamiento” y “terapia”, tal y como se utilizan en la presente invención, se refieren a terapia curativa, terapia profiláctica y terapia preventiva. Un ejemplo de “terapia preventiva” es la prevención de la condición o trastorno patológico menos marcado. Entre aquéllos que necesitan el tratamiento se incluyen aquéllos que ya padecen el trastorno así como aquéllos que son propensos a padecer el trastorno o aquéllos a los que se debe prevenir el trastorno. [0037] La administración “crónica” se refiere a la administración del agente o agentes en un modo continuo en oposición a un modo agudo, para mantener el efecto (actividad) terapéutico inicial durante un periodo largo de tiempo. La administración “intermitente” es el tratamiento que no se realiza de forma consecutiva sin interrupción, sino que es bastante cíclico en su naturaleza. [0038] El término “mamífero”, tal y como se utiliza en la presente invención, se refiere a cualquier mamífero, incluyendo humanos, animales domésticos y de granja, y animales de zoológico, de deporte o de compañía, tales como ganado (por ejemplo, vacas), caballos, perros, ovejas, cerdos, conejos, cabras, gatos, etc. En una realización preferida de la presente invención, el mamífero es humano. [0039] La administración “combinada con” uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden. [0040] Una “cantidad terapéuticamente efectiva” es la cantidad mínima de agente activo (por ejemplo, PRO1122, antagonista o agonista del mismo) que es necesaria para proporcionar un beneficio terapéutico a un mamífero. Por ejemplo, una “cantidad terapéuticamente efectiva” para un mamífero que padece o es propenso a padecer o para prevenirlo de padecer un trastorno cartilaginoso degenerativo es la cantidad que induce, mejora o en cualquier caso provoca una mejora de los síntomas patológicos, la progresión de la enfermedad, condiciones fisiológicas asociadas con o resistencia a sucumbir a un trastorno caracterizado principalmente por la destrucción de la matriz del cartílago. [0041] Los “portadores”, tal y como se utiliza en la presente invención, incluyen portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables que son no tóxicos para la célula o el mamífero expuestos a los mismos en las dosis y concentraciones utilizadas. Frecuentemente, el portador fisiológicamente aceptable es una solución acuosa tamponada en el pH. Entre los ejemplos de portadores fisiológicamente aceptables se incluyen tampones, tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico; polipéptidos de peso molecular bajo (inferior a aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina [0036] The terms "treat", "treatment" and "therapy", as used in the present invention, refer to curative therapy, prophylactic therapy and preventive therapy. An example of "preventive therapy" is the prevention of the less marked pathological condition or disorder. Those who need treatment include those who already suffer from the disorder as well as those who are prone to suffer from the disorder or those to whom the disorder should be prevented. [0037] "Chronic" administration refers to the administration of the agent or agents in a continuous mode as opposed to an acute mode, to maintain the initial therapeutic effect (activity) for a long period of time. The "intermittent" administration is the treatment that is not performed consecutively without interruption, but is rather cyclic in nature. [0038] The term "mammal", as used in the present invention, refers to any mammal, including humans, domestic and farm animals, and zoo, sport or companion animals, such as livestock (by example, cows), horses, dogs, sheep, pigs, rabbits, goats, cats, etc. In a preferred embodiment of the present invention, the mammal is human. [0039] Administration "combined with" one or more additional therapeutic agents includes simultaneous (concurrent) and consecutive administration in any order. [0040] A "therapeutically effective amount" is the minimum amount of active agent (eg, PRO1122, antagonist or agonist thereof) that is necessary to provide a therapeutic benefit to a mammal. For example, a "therapeutically effective amount" for a mammal that suffers or is prone to suffer or to prevent it from suffering from a degenerative cartilaginous disorder is the amount that induces, improves or in any case causes an improvement in pathological symptoms, the progression of the disease, physiological conditions associated with or resistance to succumb to a disorder characterized mainly by the destruction of the cartilage matrix. [0041] "Carriers", as used in the present invention, include pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers that are non-toxic to the cell or mammal exposed thereto at the doses and concentrations used. Frequently, the physiologically acceptable carrier is an aqueous pH buffered solution. Examples of physiologically acceptable carriers include buffers, such as phosphate, citrate and other organic acids; antioxidants, including ascorbic acid; low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins, such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers, such as polyvinylpyrrolidone; amino acids, such as glycine, glutamine, asparagine, arginine

o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa, o dextrinas; agentes quelantes, tales como EDTA; alcoholes de azúcares, tales como manitol o sorbitol; contraiones formadores de sales, tales como sodio; y/o tensoactivos no iónicos, tales como TWEENTM, polietilenglicol (PEG) y PLURONICSTM. [0042] Los “fragmentos de anticuerpos” comprenden una parte de un anticuerpo intacto, preferiblemente la región variable o de unión a antígeno del anticuerpo intacto. Entre los ejemplos de fragmentos de anticuerpos se incluyen Fab, Fab’, F(ab’)2 y fragmentos Fv; diabodies; anticuerpos lineales (Zapata et al., Protein Engin. 8(10): 1057-1062 [1995]); moléculas de anticuerpos de cadena única; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. [0043] La digestión con papaína de anticuerpos produce dos fragmentos de unión a antígeno idénticas, llamados fragmentos “Fab”, cada uno con un sitio único de unión a antígeno y un fragmento “Fc” residual, una nomenclatura que refleja la capacidad de cristalizar fácilmente. El tratamiento con pepsina proporciona un fragmento F(ab’)2 que tiene dos sitios de combinación a antígeno y aún es capaz de reticularse con el antígeno. [0044] “Fv” es el fragmento mínimo de anticuerpo que contiene un sitio completo de unión y reconocimiento de antígeno. Esta región consiste en un dímero de un dominio variable de cadena pesada y cadena ligera en asociación estrecha no covalente. Es en esta configuración que las tres CDRs de cada dominio variable interaccionan para definir un sitio de unión a antígeno en la superficie del dímero VH-VL. Colectivamente, las seis CDRs confieren al anticuerpo una especificidad de unión a antígeno. Sin embargo, incluso un único dominio variable (o la mitad de una Fv que comprende sólo tres CDRs específicas de antígeno) tiene la capacidad de reconocer y unirse a antígeno, aunque con una menor afinidad que el sitio de unión completo. [0045] El fragmento Fab también contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab difieren de los fragmentos Fv por la adición de una serie de residuos en el carboxi terminal del dominio CH1 de la cadena pesada que incluye una o más cisteínas de la región bisagra del anticuerpo. Fab’-SH es la denominación en la presente invención para Fab’ en el que el residuo o residuos de cisteína de los dominios constantes llevan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpos F(ab’)2 se produjeron originalmente como parejas de fragmentos de Fab’ que tienen cisteínas bisagras entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos. [0046] Las “cadenas ligeras” de anticuerpos (inmunoglobulinas) de cualquier especie de invertebrado se puede asignar a uno de dos tipos claramente diferentes, llamados kappa y lambda, en base a las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. [0047] Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, las inmunoglobulinas se pueden asignar a diferentes clases. Existen cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG y IgM, y varias de éstas de pueden dividir además en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. [0048] Los fragmentos de anticuerpo “Fv de cadena única” o “sFv” comprenden los dominios VH y VL del anticuerpo, donde estos dominios se presentan en una única cadena de polipéptido. Preferiblemente, el polipéptido Fv comprende además un polipéptido enlazador entre los dominios VH y VL que permite que el sFv forme la estructura deseada para la unión a antígeno. Para una revisión de sFv ver Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg y Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, pp. 269-315 (1994). [0049] El término “diabodies” se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpos con dos sitios de unión a antígeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena de polipéptido (VH – VL). Utilizando un enlazador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a emparejarse con los dominios complementarios de otra cadena y crean dos sitios de unión a antígeno. Los diabodies se describen más detalladamente en, por ejemplo, EP 404.097; WO 93/11161; y Hollinger y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993). [0050] Un anticuerpo “aislado” es el que se ha identificado y separado y/o recuperado a partir de un componente de su medio natural. Los componentes contaminantes de su medio natural son materiales que interferirían con las utilizaciones de diagnóstico y terapéuticas del anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteináceos y no proteináceos. En realizaciones preferidas, el anticuerpo se purificará or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates that include glucose, mannose, or dextrins; chelating agents, such as EDTA; sugar alcohols, such as mannitol or sorbitol; salt-forming counterions, such as sodium; and / or non-ionic surfactants, such as TWEENTM, polyethylene glycol (PEG) and PLURONICSTM. [0042] "Antibody fragments" comprise a portion of an intact antibody, preferably the variable or antigen-binding region of the intact antibody. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ’, F (ab’) 2 and Fv fragments; diabodies; linear antibodies (Zapata et al., Protein Engin. 8 (10): 1057-1062 [1995]); single chain antibody molecules; and multispecific antibodies formed from antibody fragments. [0043] Papain digestion of antibodies produces two identical antigen-binding fragments, called "Fab" fragments, each with a unique antigen-binding site and a residual "Fc" fragment, a nomenclature that reflects the ability to crystallize. easily. Pepsin treatment provides an F (ab ’) 2 fragment that has two antigen combination sites and is still capable of cross-linking with the antigen. [0044] "Fv" is the minimum antibody fragment that contains a complete antigen recognition and binding site. This region consists of a dimer of a heavy chain and light chain variable domain in close non-covalent association. It is in this configuration that the three CDRs of each variable domain interact to define an antigen binding site on the surface of the VH-VL dimer. Collectively, the six CDRs give the antibody an antigen binding specificity. However, even a single variable domain (or half of an Fv comprising only three antigen-specific CDRs) has the ability to recognize and bind antigen, although with a lower affinity than the complete binding site. [0045] The Fab fragment also contains the constant domain of the light chain and the first constant domain (CH1) of the heavy chain. Fab fragments differ from Fv fragments by the addition of a series of residues in the carboxy terminal of the CH1 domain of the heavy chain that includes one or more cysteines of the hinge region of the antibody. Fab’-SH is the designation in the present invention for Fab ’in which the cysteine residue or residues of the constant domains carry a free thiol group. F (ab ’) 2 antibody fragments were originally produced as pairs of Fab’ fragments that have hinge cysteines between them. Other chemical couplings of antibody fragments are also known. [0046] The "light chains" of antibodies (immunoglobulins) of any invertebrate species can be assigned to one of two clearly different types, called kappa and lambda, based on the amino acid sequences of their constant domains. [0047] Depending on the amino acid sequence of the constant domain of their heavy chains, immunoglobulins can be assigned to different classes. There are five main classes of immunoglobulins: IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, and several of these can be further divided into subclasses (isotypes), for example, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA and IgA2. [0048] "Fv single chain" or "sFv" antibody fragments comprise the VH and VL domains of the antibody, where these domains are presented in a single polypeptide chain. Preferably, the Fv polypeptide further comprises a linker polypeptide between the VH and VL domains that allows the sFv to form the desired structure for antigen binding. For a review of sFv see Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994). [0049] The term "diabodies" refers to small antibody fragments with two antigen binding sites, whose fragments comprise a heavy chain variable domain (VH) connected to a light chain variable domain (VL) in the same chain of polypeptide (VH-VL). Using a linker that is too short to allow pairing between the two domains in the same chain, the domains are forced to pair with the complementary domains of another chain and create two antigen binding sites. Diabodies are described in more detail in, for example, EP 404,097; WO 93/11161; and Hollinger et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993). [0050] An "isolated" antibody is one that has been identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. The contaminating components of its natural environment are materials that would interfere with the diagnostic and therapeutic uses of the antibody, and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous and non-proteinaceous solutes. In preferred embodiments, the antibody will be purified.

(1) hasta más de un 95% en peso de anticuerpo según se determina por el método de Lowry, y más preferiblemente más de un 99% en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos N-terminal o interna mediante la utilización de un secuenciador de copa giratoria, o (3) hasta la homogeneidad mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o, preferiblemente, tinción con plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de las células recombinantes, ya que por lo menos un componente del medio natural del anticuerpo no estará presente. Normalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparará mediante por lo menos una etapa de purificación. [0051] La palabra “marcador” cuando se utiliza en la presente invención se refiere a un compuesto o composición detectable que se conjuga directa o indirectamente al anticuerpo para generar un anticuerpo “marcado”. El “marcador” puede ser detectable por sí mismo (por ejemplo, marcadores radioisótopos o marcadores fluorescentes) o, en el caso de un marcador enzimático, puede catalizar la alteración química de un compuesto o composición sustrato que es detectable. [0052] Por “fase sólida” se entiende una matriz no acuosa a la que se puede adherir el anticuerpo de la presente invención. Entre los ejemplos de fases sólidas que se engloban en la presente invención se incluyen las formadas parcial o totalmente de vidrio (por ejemplo, vidrio de poro controlado), polisacáridos (por ejemplo, agarosa), poliacrilamidas, poliestireno, polivinilalcohol y siliconas. En ciertas realizaciones, dependiendo del contexto, la fase sólida puede comprender el pocillo de una placa de ensayo; en otras es una columna de purificación (por ejemplo, una columna de cromatografía de afinidad). Este término también incluye una fase sólida discontinua de partículas discretas, tales como las descritas en la Patente de Estados Unidos No. (1) up to more than 95% by weight of antibody as determined by the Lowry method, and more preferably more than 99% by weight, (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 sequence residues of N-terminal or internal amino acids by using a rotating cup sequencer, or (3) until homogeneous by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or, preferably, silver staining. The isolated antibody includes the antibody in situ within the recombinant cells, since at least one component of the natural environment of the antibody will not be present. Normally, however, the isolated antibody will be prepared by at least one purification step. [0051] The word "label" when used in the present invention refers to a detectable compound or composition that is directly or indirectly conjugated to the antibody to generate a "labeled" antibody. The "label" can be detectable by itself (eg, radioisotope markers or fluorescent markers) or, in the case of an enzymatic label, can catalyze the chemical alteration of a compound or substrate composition that is detectable. [0052] By "solid phase" is meant a non-aqueous matrix to which the antibody of the present invention can adhere. Examples of solid phases that are encompassed in the present invention include those formed partially or totally of glass (e.g., controlled pore glass), polysaccharides (e.g., agarose), polyacrylamides, polystyrene, polyvinyl alcohol and silicones. In certain embodiments, depending on the context, the solid phase may comprise the well of a test plate; in others it is a purification column (for example, an affinity chromatography column). This term also includes a discontinuous solid phase of discrete particles, such as those described in US Pat. No.

4.275.149. Un “liposoma” es una vesícula pequeña compuesta de varios tipos de lípidos, fosfolípidos y/o tensoactivos que es útil para la liberación de un fármaco (tal como un polipéptido PRO1122 o un anticuerpo para el mismo) a un mamífero. Los componentes del liposoma se disponen habitualmente en una formación de bicapa, similar a la disposición de las membranas biológicas. [0053] Una “molécula pequeña” se define en la presente invención como que tiene un peso molecular por debajo de aproximadamente 500 Daltons. [0054] El término “modular” significa afectar (por ejemplo, regular por incremento, regular por disminución o, en cualquier caso, controlar) el nivel del mecanismo de señalización. Entre los procesos celulares bajo el control de la transducción de señal se incluyen, pero no se limitan a, la transcripción de genes específicos, funciones celulares normales, tales como metabolismo, proliferación, diferenciación, adhesión, 4,275,149. A "liposome" is a small vesicle composed of several types of lipids, phospholipids and / or surfactants that is useful for the release of a drug (such as a PRO1122 polypeptide or an antibody thereto) to a mammal. The Liposome components are usually arranged in a bilayer formation, similar to the arrangement of biological membranes. [0053] A "small molecule" is defined in the present invention as having a molecular weight below about 500 Daltons. [0054] The term "modular" means to affect (for example, regulate by increment, regulate by decrease or, in any case, control) the level of the mechanism of signaling. Among the cellular processes under the control of signal transduction are include, but are not limited to, the transcription of specific genes, functions normal cells, such as metabolism, proliferation, differentiation, adhesion,

apoptosis y supervivencia, así como procesos anormales, tales como la transformación, bloqueo de la diferenciación y metástasis. apoptosis and survival, as well as abnormal processes, such as transformation, blocking of differentiation and metastasis.

II. II.

Composiciones y procedimientos de la invención Compositions and methods of the invention

A. TO.

Polipéptido PRO1122 de longitud completa PRO1122 full length polypeptide

[0055] La presente descripción identifica y aísla secuencias de nuecleótidos que codifican polipéptidos a los que se hace referencia en la presente solicitud como PRO1122. En particular, los Solicitantes han identificado y aislado ADNc que codifica los polipéptidos PRO 1031 (por ejemplo, UNQ516, IL-17B. SEC ID No: 1) y PRO1122 (por ejemplo, UNQ561, IL-17C. SEC ID No: 3), tal y como se describe con mayor detalle en los Ejemplos siguientes. Utilizando los programas informáticos de alineación de secuencias BLAST y FastA, los solicitantes hallaron que varias partes de los polipéptidos PRO1031 y PRO1122 que tienen identidad de secuencia con IL-17. Por consiguiente, actualmente se cree que los polipéptidos PRO1031 y PRO1122 descritos en la presente solicitud son miembros de la familia de citoquinas y, de este modo, pueden estar implicados en la inflamación y/o la función del sistema inmune. [0056] Tal y como se ha presentado anteriormente, el término “PRO1122” se refiere a la secuencia nativa y las variantes, mientras que el término “UNQ561” se refiere a la secuencia de aminoácidos específica de la figura 3 (SEC ID No: 3) y/o las proteínas codificadas por el ADNc depositado en la American Type Culture Collection, bajo el número de Depósito 203552. [0057] Tal y como se describe en los siguientes Ejemplos, se ha depositado el clon de ADNc designado en la presente invención como DNA62377-1381-1 con la ATCC. La secuencia de nucleótidos real del clon se puede determinar fácilmente por un experto en la materia mediante la secuenciación del clon depositado utilizando procedimientos de rutina del sector. La secuencia de aminoácidos prevista se puede determinar a partir de la secuencia de aminoácidos utilizando técnicas de rutina. Para el polipéptido PRO1122 y el ácido nucleico codificante descrito en la presente invención, los Solicitantes han identificado lo que se cree que es el marco de lectura mejor identificable con la información de secuencias disponible en ese momento. [0055] The present description identifies and isolates sequences of nuecleotides encoding polypeptides referred to in the present application as PRO1122. In particular, Applicants have identified and isolated cDNA encoding PRO 1031 polypeptides (for example, UNQ516, IL-17B. SEQ ID No: 1) and PRO1122 (for example, UNQ561, IL-17C. SEQ ID No: 3) , as described in greater detail in the following Examples. Using the BLAST and FastA sequence alignment software, applicants found that several parts of the PRO1031 and PRO1122 polypeptides that have sequence identity with IL-17. Therefore, it is currently believed that the PRO1031 and PRO1122 polypeptides described in the present application are members of the cytokine family and, thus, may be involved in inflammation and / or immune system function. [0056] As presented above, the term "PRO1122" refers to the native sequence and variants, while the term "UNQ561" refers to the specific amino acid sequence of Figure 3 (SEQ ID No: 3) and / or the proteins encoded by the cDNA deposited in the American Type Culture Collection, under Deposit number 203552. [0057] As described in the following Examples, the cDNA clone designated herein has been deposited invention as DNA62377-1381-1 with the ATCC. The actual nucleotide sequence of the clone can easily be determined by one skilled in the art by sequencing the deposited clone using routine industry procedures. The predicted amino acid sequence can be determined from the amino acid sequence using routine techniques. For the PRO1122 polypeptide and the coding nucleic acid described in the present invention, Applicants have identified what is believed to be the best identifiable reading frame with the sequence information available at that time.

B. Variantes de PRO1122 [0058] Además del polipéptido PRO1122 de secuencia nativa de longitud completa descrito en la presente invención, se contempla que se pueden preparar variantes de PRO1122. Las variantes de PRO1122 se pueden preparar introduciendo cambios de nucleótidos apropiados en el ADN que codifica PRO1122, o mediante la síntesis del polipéptido PRO1122 deseado. Los expertos en la materia entenderán que los cambios de aminoácidos pueden alterar los procesos post-traduccionales del polipéptido PRO1122, tales como el cambio del número o la posición de los sitios de glicosilación B. Variants of PRO1122 [0058] In addition to the full-length native sequence PRO1122 polypeptide described in the present invention, it is contemplated that PRO1122 variants can be prepared. PRO1122 variants can be prepared by introducing appropriate nucleotide changes into the DNA encoding PRO1122, or by synthesis of the desired PRO1122 polypeptide. Those skilled in the art will understand that amino acid changes may alter the post-translational processes of the PRO1122 polypeptide, such as changing the number or position of glycosylation sites.

o la alteración de las características de anclamiento a la membrana. [0059] Las variaciones en el PRO1122 de secuencia nativa de longitud completa o en varios dominios del polipéptido PRO1122 descritos en la presente invención, se pueden realizar, por ejemplo, utilizando cualquiera de las técnicas y directrices para mutaciones conservativas y no conservativas establecidas, por ejemplo, en la Patente USA 5.364.934. Las variaciones pueden ser una sustitución, una deleción o una inserción de uno o más codones que codifican el polipéptido PRO1122 que dan lugar a un cambio en la secuencia de aminoácidos del polipéptido PRO1122 en comparación con el PRO1122 de secuencia nativa. Opcionalmente, la variación es por sustitución de por lo menos un aminoácido por cualquier otro aminoácido en uno o más de los dominios del polipéptido PRO1122. Al determinar qué residuo de aminoácido se puede insertar, sustituir o eliminar sin afectar de forma adversa la actividad deseada, se puede encontrar una guía mediante la comparación de la secuencia del polipéptido PRO1122 con la de las moléculas de proteínas conocidas homólogas y minimizando el número de cambios en la secuencia de aminoácidos realizadas en regiones con elevada homología. Las sustituciones de aminoácidos pueden ser el resultado de la sustitución de un aminoácido por otro aminoácido que tiene propiedades estructurales y/o químicas similares, tales como la sustitución de una leucina por una serina, es decir, sustituciones de aminoácidos conservativos. Las inserciones o deleciones pueden estar opcionalmente en el intervalo de aproximadamente 1 a 5 aminoácidos. La variación permitida se puede determinar realizando inserciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos en la secuencia de forma sistemática y probando en las variantes resultantes la actividad (tal como en cualquiera de los ensayos in vitro descritos en los siguientes Ejemplos) mostrada por la secuencia nativa de longitud completa o madura. [0060] En la presente invención se proporcionan fragmentos de polipéptido PRO1122. Dichos fragmentos se pueden truncar en el extremo N-terminal o C-terminal, o pueden carecer de residuos internos, por ejemplo, cuando se comparan con una proteína nativa or the alteration of membrane anchoring characteristics. [0059] Variations in the full-length native sequence PRO1122 or in several domains of the PRO1122 polypeptide described in the present invention can be made, for example, using any of the techniques and guidelines for established conservative and non-conservative mutations, by example, in US Patent 5,364,934. The variations may be a substitution, a deletion or an insertion of one or more codons encoding the PRO1122 polypeptide that results in a change in the amino acid sequence of the PRO1122 polypeptide compared to the native sequence PRO1122. Optionally, the variation is by substitution of at least one amino acid with any other amino acid in one or more of the domains of the PRO1122 polypeptide. By determining which amino acid residue can be inserted, replaced or removed without adversely affecting the desired activity, a guide can be found by comparing the sequence of the PRO1122 polypeptide with that of homologous known protein molecules and minimizing the number of amino acid sequence changes made in regions with high homology. Amino acid substitutions may be the result of the substitution of one amino acid for another amino acid that has similar structural and / or chemical properties, such as the substitution of a leucine for a serine, that is, conservative amino acid substitutions. Insertions or deletions may optionally be in the range of about 1 to 5 amino acids. The permitted variation can be determined by systematically inserting, deleting or replacing amino acids in the sequence and testing the resulting variants (as in any of the in vitro assays described in the following Examples) shown by the native sequence of full length or mature. [0060] PRO1122 polypeptide fragments are provided in the present invention. Such fragments can be truncated at the N-terminal or C-terminal end, or they may lack internal residues, for example, when compared to a native protein.

o de longitud completa. Ciertos fragmentos carecen de residuos de aminoácidos que no or full length. Certain fragments lack amino acid residues that do not

son esenciales para una actividad biológica deseada del polipéptido PRO1122. [0061] Los fragmentos de PRO1122 se pueden preparar mediante cualquiera del grupo de técnicas convencionales. Los fragmentos de péptidos deseados se pueden sintetizar químicamente. Un enfoque alternativo implica la generación de fragmentos de they are essential for a desired biological activity of the PRO1122 polypeptide. [0061] PRO1122 fragments can be prepared by any of the group of conventional techniques. The desired peptide fragments can be chemically synthesized. An alternative approach involves generating fragments of

5 PRO1122 mediante digestión enzimática, por ejemplo, tratando la proteína con una enzima conocida para dividir proteínas en los sitios definidos por residuos de aminoácidos particulares o mediante la digestión del ADN con enzimas de restricción adecuadas y el aislamiento del fragmento deseado. Además, otra técnica adecuada implica el aislamiento y la amplificación de un fragmento de ADN que codifica un PRO1122 by enzymatic digestion, for example, by treating the protein with a known enzyme to divide proteins at sites defined by particular amino acid residues or by digesting DNA with suitable restriction enzymes and isolating the desired fragment. In addition, another suitable technique involves the isolation and amplification of a DNA fragment encoding a

10 fragmento de polipéptido deseado, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los oligonucleótidos que definen los extremos deseados del fragmento de ADN se utilizan en los cebadores del extremo 5’ y 3’ en la PCR. Preferiblemente, los fragmentos de polipéptido PRO1122 comparten por lo menos una actividad biológica y/o inmunológica con el polipéptido PRO1122 nativo mostrado en la figura 3 (SEC ID 10 desired polypeptide fragment, by polymerase chain reaction (PCR). The oligonucleotides that define the desired ends of the DNA fragment are used in the 5 'and 3' end primers in the PCR. Preferably, the PRO1122 polypeptide fragments share at least one biological and / or immunological activity with the native PRO1122 polypeptide shown in Figure 3 (SEQ ID

15 No: 3) [0062] En realizaciones particulares, las sustituciones conservativas de interés se muestran en la Tabla bajo el encabezamiento de sustituciones preferidas. Si dichas sustituciones dan lugar a un cambio en la actividad biológica, entonces se introducen más cambios sustanciales, denominados sustituciones de ejemplo en la Tabla 1, o tal y 15 No: 3) [0062] In particular embodiments, conservative substitutions of interest are shown in the Table under the heading of preferred substitutions. If such substitutions result in a change in biological activity, then more substantial changes are introduced, called example substitutions in Table 1, or such and

20 como se describen posteriormente en referencia a las clases de aminoácidos, se introducen y se criban los productos. As described later in reference to the classes of amino acids, the products are introduced and screened.

Tabla 1 Table 1

Residuo Residue

Sustituciones de ejemplo Sustituciones Sample Substitutions Substitutions

original original

preferidas preferred

Ala (A) Wing (A)

Val; leu; ile Val Val; leu; ile Val

Arg (R) Arg (R)

Lys; gln; asn Lys Lys; gln; asn Lys

Asn (N) Asn (N)

Gln; his; lys; arg Gln Gln; his; lys; arg Gln

Asp (D) Asp (D)

Glu Glu Glu Glu

Cys (C) Cys (C)

Ser Ser Be Be

Gln (Q) Gln (Q)

Asn Asn Asn Asn

Glu (E) Glu (E)

Asp Asp Asp Asp

Gly (G) Gly (G)

Pro; ala Ala Pro; to To

His (H) His (H)

Asn; gln; lys; arg Arg Asn; gln; lys; arg Arg

Ile (I) Ile (I)

leu; val; met; ala; phe; norleucina Leu leu; val; met; to; phe; norleucine Leu

Leu (L) Leu (L)

norleucina; ile; val; met; ala; phe Ile norleucine; ile; val; met; to; phe Ile

Lys (K) Lys (K)

Arg; gln; asn Arg Arg; gln; asn Arg

Met (M) Met (M)

Leu; phe; ile Leu Leu; phe; ile Leu

Phe (F) Phe (F)

Leu; val; ile, ala; tyr Leu Leu; val; ile, wing; tyr Leu

Pro (P) Pro (P)

Ala Ala To To

Ser (S) To be

Thr Thr Thr Thr

Thr (T) Thr (T)

Ser Ser Be Be

Trp (W) Trp (W)

tyr; phe Tyr tyr; phe Tyr

Tyr (Y) Tyr (Y)

trp; phe; thr; ser Phe trp; phe; thr; be Phe

Val (V) Val (V)

ile; leu; met; phe; ala; norleucina Leu ile; leu; met; phe; to; norleucine Leu

[0063] Las modificaciones sustanciales en la identidad funcional o inmunológica del polipéptido PRO1122 se llevan a cabo mediante la selección de las sustituciones que difieren significativamente en su efecto de mantener (a) la estructura del esqueleto del [0063] Substantial modifications in the functional or immunological identity of the PRO1122 polypeptide are carried out by selecting substitutions that differ significantly in their effect of maintaining (a) the skeletal structure of the

5 polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, como conformación de lámina o hélice, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana, o (c) el conjunto de la cadena lateral. Los residuos naturales se dividen en grupos en base a las propiedades comunes de la cadena lateral: 5 polypeptide in the substitution area, for example, as a sheet or helix conformation, (b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, or (c) the side chain assembly. Natural waste is divided into groups based on the common properties of the side chain:

(1) hidrofóbica: norleucina, met, ala, val, leu, ile; 10 (2) hidrofílica neutra: cys, ser, thr; (1) hydrophobic: norleucine, met, ala, val, leu, ile; 10 (2) neutral hydrophilic: cys, ser, thr;

(3)(3)

ácida: asp, glu;  acid: asp, glu;

(4)(4)

básica: asn, gln, his, lys, arg;  basic: asn, gln, his, lys, arg;

(5)(5)

residuos que influyen en la orientación de la cadena: gly, pro; y  residues that influence chain orientation: gly, pro; Y

(6)(6)

aromática: trp, tyr, phe.  aromatic: trp, tyr, phe.

15 [0064] Las sustituciones no conservativas comprenderán el intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase. Dichos residuos sustituidos también se pueden introducir en sitios de sustitución conservativa o, más preferiblemente, en los sitios restantes (no conservados). [0065] Las variaciones se pueden realizar utilizando procedimientos conocidos en la [0064] Non-conservative substitutions will comprise exchanging a member of one of these classes for another class. Said substituted residues can also be introduced at conservative substitution sites or, more preferably, at the remaining sites (not conserved). [0065] Variations can be made using procedures known in the

20 técnica tales como la mutagénesis mediada por oligonucleótidos (dirigida de sitio), el rastreo de alanina, y mutágenesis por PCR. Para fabricar el ADN variante que codifica PRO 1031 se puede llevar a cabo sobre el ADN clonado una mutagénesis dirigida de sitio [Carter et al., Nucl. Acids. Res., 13: 4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids. Res., 20 techniques such as oligonucleotide-mediated (site-directed) mutagenesis, alanine tracing, and PCR mutagenesis. To manufacture the variant DNA encoding PRO 1031, site directed mutagenesis can be carried out on the cloned DNA [Carter et al., Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids Beef.,

10: 6487 (1987)], mutagénesis de cassette [Wells et al., Gene, 34 315 (1985)], 25 mutagénesis de selección de restricción [Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London Ser A, 317:415 (1986)] u otras técnicas conocidas. [0066] El análisis de aminoácido por rastreo también se puede realizar para identificar uno o más aminoácidos a lo largo de una secuencia contigua. Entre los aminoácidos de rastreo preferidos están los aminoácidos pequeños y neutros. Entre dichos aminoácidos se incluyen alanina, glicina, serina y cisteína. La alanina es habitualmente un aminoácido de rastreo preferido de este grupo, ya que elimina la cadena lateral más allá del carbono beta y es menos probable que altere la conformación de la cadena principal de la variante. La alanina es también habitualmente preferida ya que es el aminoácido más habitual. Además, se encuentra frecuentemente tanto en posiciones escondidas como expuestas [Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman and Co., N.Y.), Chothia, J. Mol. Biol., 150:1 (1976)]. Si la sustitución de alanina no produce cantidades adecuadas de variante, se puede utilizar un aminoácido isotérico. 10: 6487 (1987)], cassette mutagenesis [Wells et al., Gene, 34 315 (1985)], restriction selection mutagenesis [Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London Ser A, 317: 415 (1986)] or other known techniques. [0066] Trace amino acid analysis can also be performed to identify one or more amino acids along a contiguous sequence. Among the preferred tracking amino acids are small and neutral amino acids. Such amino acids include alanine, glycine, serine and cysteine. Alanine is usually a preferred tracking amino acid in this group, since it eliminates the side chain beyond the beta carbon and is less likely to alter the conformation of the main chain of the variant. Alanine is also usually preferred since it is the most common amino acid. In addition, it is frequently found in both hidden and exposed positions [Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman and Co., N.Y.), Chothia, J. Mol. Biol., 150: 1 (1976)]. If the alanine substitution does not produce adequate amounts of variant, an isoteric amino acid can be used.

C. Modificaciones de PRO1122 C. Modifications of PRO1122

[0067] Las modificaciones covalentes de polipéptidos PRO1122 están incluidas en el alcance de la presente invención tal y como se definen en las reivindicaciones. Un tipo de modificación covalente incluye la reacción de residuos de aminoácidos marcados de un polipéptido PRO1122 con un agente derivatizante orgánico que es capaz de reaccionar con cadenas laterales seleccionadas o los residuos N- o C-terminales de un polipéptido PRO1122. La derivatización con agentes bifuncionales es útil, por ejemplo, para reticular PRO1122 con una matriz o superficie de soporte insoluble en agua para su utilización en el procedimiento para purificar anticuerpos anti-PRO1122, y viceversa. Entre los agentes de reticulación utilizados habitualmente se incluyen, por ejemplo, 1,1-bis(diazoacetil)-2-feniletano, glutaraldehído, ésteres de Nhidroxisuccinimida, por ejemplo, ésteres con ácido 4-azido salicílico, imidoésteres [0067] Covalent modifications of PRO1122 polypeptides are included within the scope of the present invention as defined in the claims. One type of covalent modification includes the reaction of labeled amino acid residues of a PRO1122 polypeptide with an organic derivatizing agent that is capable of reacting with selected side chains or the N- or C-terminal residues of a PRO1122 polypeptide. Derivatization with bifunctional agents is useful, for example, for crosslinking PRO1122 with a water insoluble matrix or support surface for use in the process for purifying anti-PRO1122 antibodies, and vice versa. Commonly used crosslinking agents include, for example, 1,1-bis (diazoacetyl) -2-phenylethane, glutaraldehyde, Nhydroxysuccinimide esters, for example, esters with 4-salicylic acid, imidoesters

homobifuncionales, homobifunctional,

incluyendo ésteres disuccinimidílicos, tales como 3,3’ including esters disuccinimidilics, such how  3.3 ’

ditiobis(succinimidilpropionato), dithiobis (succinimidylpropionate),

maleimidas bifuncionales, tales como bis-N maleimides bifunctional, such  how  bis-N

maleimido-1,8-octano maleimido-1,8-octane

y agentes, tales como metil-3-[(p Y agents, such how methyl-3 - [(p

azidofenil)ditio]propioimidato. azidophenyl) dithio] proprioimidate.

[0068] Otras modificaciones incluyen la desamidación de residuos glutaminilo y asparaginilo a los correspondientes residuos glutamilo y aspartilo, respectivamente, la hidroxilación de prolina y lisina, la fosforilación de grupos hidroxilo de residuos de serilo o treonilo, la metilación de los grupos -amino de las cadenas laterales de lisina, arginina e histidina [T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, páginas 79-86 (1983)], la acetilación de la amina N-terminal, y la amidación de cualquier grupo carboxilo C-terminal. [0069] Otro tipo de modificación covalente del polipéptido PRO1122 incluido en el alcance de la presente invención, tal y como se define en las reivindicaciones, comprende la alteración del patrón de glicosilación nativo del polipéptido. Por “alteración del patrón de glicosilación nativo” para los objetivos de la presente invención se pretende indicar la eliminación de uno o más grupos carbohidratos hallados en el polipéptido PRO1122 de secuencia nativa y/o la adición de uno o más sitios de glicosilación que no están presentes en el polipéptido PRO1122 de secuencia nativa. Adicionalmente, la expresión incluye cambios cualitativos en la glicosilación de las proteínas nativas, implicando un cambio en la naturaleza y proporciones de los diversos grupos de carbohidrato presentes. [0070] La adición de sitios de glicosilación a los polipéptidos PRO1122 se puede realizar alterando la secuencia de aminoácidos de los mismos. La alteración se puede realizar, por ejemplo, mediante la adición de, o la sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina al polipéptido PRO1122 de secuencia nativa (para sitios de glicosilación unidos a O). La secuencia de aminoácidos del polipéptido PRO1122 puede alterarse opcionalmente a través de los cambios a nivel de ADN, particularmente mediante la mutación del ADN que codifica el polipéptido PRO1122 en bases preseleccionadas, de manera que los codones que se generan se traducirán en los aminoácidos deseados. [0071] Otros medios para aumentar el número de grupos carbohidrato en el polipéptido PRO1122 es mediante acoplamiento químico o enzimático de glicósidos al polipéptido. Dichos procedimientos están descritos en la técnica, por ejemplo, en WO 87/05330 publicada el 11 de septiembre de 1987, y en Aplin y Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., 259-306 (1981). [0072] La eliminación de grupos carbohidrato presentes en el polipéptido PRO1122 se puede realizar química o enzimáticamente o mediante sustitución mutacional de codones que codifican los residuos de aminoácidos que actúan como dianas para la glicosilación. Las técnicas de desglicosilación químicas son conocidas en la técnica y están descritas, por ejemplo, por Hakimuddin, et. al. Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987) y por Edge, et al. Anal. Biochem., 118:131 (1981). La división enzimática de grupos carbohidrato del polipéptido se puede conseguir mediante la utilización de un conjunto de endo- y exoglicosidasas tal y como se describe en Thotakura et al. Meth. Enzymol., 138:350 (1987). [0068] Other modifications include the deamidation of glutaminyl and asparaginyl residues to the corresponding glutamyl and aspartyl residues, respectively, the hydroxylation of proline and lysine, the phosphorylation of hydroxyl groups of seryl or threonyl residues, the methylation of the -amino groups of the lysine, arginine and histidine side chains [TE Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pages 79-86 (1983)], the acetylation of the N-terminal amine, and the amidation of any C-terminal carboxyl group. [0069] Another type of covalent modification of the PRO1122 polypeptide included in the scope of the present invention, as defined in the claims, comprises altering the native glycosylation pattern of the polypeptide. By "alteration of the native glycosylation pattern" for the purposes of the present invention it is intended to indicate the elimination of one or more carbohydrate groups found in the native sequence PRO1122 polypeptide and / or the addition of one or more glycosylation sites that are not present in the native sequence PRO1122 polypeptide. Additionally, the expression includes qualitative changes in the glycosylation of native proteins, implying a change in the nature and proportions of the various carbohydrate groups present. [0070] The addition of glycosylation sites to PRO1122 polypeptides can be performed by altering the amino acid sequence thereof. The alteration can be made, for example, by the addition of, or substitution by, one or more serine or threonine residues to the native sequence PRO1122 polypeptide (for O-linked glycosylation sites). The amino acid sequence of the PRO1122 polypeptide can optionally be altered through changes at the DNA level, particularly by mutation of the DNA encoding the PRO1122 polypeptide into preselected bases, so that the codons that are generated will be translated into the desired amino acids. [0071] Other means for increasing the number of carbohydrate groups in the PRO1122 polypeptide is by chemical or enzymatic coupling of glycosides to the polypeptide. Such procedures are described in the art, for example, in WO 87/05330 published on September 11, 1987, and in Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., 259-306 (1981). [0072] The elimination of carbohydrate groups present in the PRO1122 polypeptide can be performed chemically or enzymatically or by mutational replacement of codons that encode amino acid residues that act as targets for glycosylation. Chemical deglycosylation techniques are known in the art and are described, for example, by Hakimuddin, et. to the. Arch. Biochem. Biophys., 259: 52 (1987) and by Edge, et al. Anal. Biochem., 118: 131 (1981). The enzymatic division of carbohydrate groups of the polypeptide can be achieved by using a set of endo- and exoglycosidases as described in Thotakura et al. Meth. Enzymol., 138: 350 (1987).

[0073] Otro tipo de modificación covalente de PRO1122 comprende la unión del polipéptido PRO1122 a uno del conjunto de polímeros no proteináceos, por ejemplo, polietilenglicol, polipropilenglicol o polioxialquilenos, de la forma establecida en las Patentes de Estados Unidos Nos: 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; [0073] Another type of covalent modification of PRO1122 comprises the binding of the PRO1122 polypeptide to one of the set of non-proteinaceous polymers, for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol or polyoxyalkylenes, in the manner established in US Pat. Nos. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417;

4.791.192 ó 4.179.337. [0074] Los polipéptidos PRO1122 también se puede modificar de manera que forman una moléculas quiméricas que comprenden un polipéptido PRO1122, respectivamente, fusionado a otro polipéptido o secuencia de aminoácidos heterólogo. En una realización, dicha molécula quimérica comprende una fusión de un polipéptido PRO1122 con un polipéptido etiqueta que proporciona un epítopo al que se puede unir selectivamente un anticuerpo anti-etiqueta. El epítopo-etiqueta se sitúa generalmente en el extremo terminal amino o carboxilo del polipéptido PRO1122. La presencia de dichas formas epítopo etiquetadas de un polipéptido PRO1122 se pueden detectar utilizando un anticuerpo contra el polipéptido etiqueta. Además, la disposición del epítopo etiqueta permite que el polipéptido PRO1122 se purifique fácilmente mediante purificación de afinidad utilizando un anticuerpo anti-etiqueta u otro tipo de matriz de afinidad que se une al epítopo etiqueta. En la técnica se conocen varios polipéptidos etiqueta y sus respectivos anticuerpos. Entre los ejemplos se incluyen etiquetas polihistidina (poli-his) o poli-histidina-glicina (poli-his-gly); el polipéptido etiqueta de gripe HA y su anticuerpo 12C45 [Field et al., Mol. Cell. Biol., 8: 2159-2165 (1988)]; la etiqueta c-myc y los anticuerpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 y 9E10 para la misma [Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3616 (1985)]; y la etiqueta de gliproteína D (gD) del virus del Herpes Simplex y su anticuerpo [Paborsky et al., Protein Engineering, 3 (6): 547-553 (1990)]. Entre otros polipéptidos etiqueta se incluyen el péptido-Flag [Hopp et al., BioTechnology,6: 1204-1210 (1988)]; el péptido epítopo KT3 [Martin et al., Science, 255: 192-194 (1992)]; un péptido epítopo de rubulina [Skinner et al., J. Biol. Chem., 266: 15163-15166 (1991)]; y el péptido etiqueta de la proteína T7 del gen 10 [Lutz-Freyemuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990)]. [0075] En una realización alternativa, la molécula quimérica puede comprender una fusión de un polipéptido PRO1122 con una inmunoglobulina o una región particular de una inmunoglobulina. Para una forma bivalente de la molécula quimérica, dicha fusión podría ser a una región Fc de una molécula de IgG. Las fusiones de Ig incluyen preferiblemente la sustitución de una forma soluble (dominio transmembrana eliminado o inactivado) de un polipéptido PRO1122 en lugar de por lo menos una región variable de una molécula de Ig. En una realización particularmente preferida, la fusión de inmunoglobulina incluye la bisagra, CH2 y CH3, o la bisagra, regiones CH1, CH2 y CH3 de una molécula de IgG1. Para la producción de fusiones de inmunoglobulinas, véase también la Patente de USA No. 5.428.130 concedida el 27 de junio de 1995. [0076] En otra realización adicional, los polipéptidos PRO1122 también se pueden modificar de manera que forman una molécula quimérica que comprende un polipéptido PRO1122 fusionado a una cremallera de leucinas. En la técnica se han descrito varios polipéptidos de cremalleras de leucinas. Véase, por ejemplo, Landschulz et al., Science 240: 1759 (1988); WO 94/10308; Hoppe et al., FEBS Letters 344: 1991 (1994); Maniatis et al., Nature 341: 24 (1989). Se cree que la utilización de una cremallera de leucinas fusionada a un polipéptido PRO1122 puede ser deseable para ayudar en la dimerización o trimerización de polipéptido PRO1122 soluble en solución. Los expertos en la materia entenderán que la cremallera de leucina se puede fusionar al extremo N- o C-terminal de la molécula PRO1122. 4,791,192 or 4,179,337. [0074] PRO1122 polypeptides can also be modified so that they form a chimeric molecules comprising a PRO1122 polypeptide, respectively, fused to another heterologous polypeptide or amino acid sequence. In one embodiment, said chimeric molecule comprises a fusion of a PRO1122 polypeptide with a tag polypeptide that provides an epitope to which an anti-tag antibody can selectively bind. The epitope-tag is generally located at the amino or carboxyl terminal of the PRO1122 polypeptide. The presence of said epitope tagged forms of a PRO1122 polypeptide can be detected using an antibody against the tag polypeptide. In addition, the provision of the tag epitope allows the PRO1122 polypeptide to be easily purified by affinity purification using an anti-tag antibody or other type of affinity matrix that binds to the tag epitope. Several tag polypeptides and their respective antibodies are known in the art. Examples include polyhistidine (poly-his) or poly-histidine-glycine (poly-his-gly) tags; the HA flu tag polypeptide and its 12C45 antibody [Field et al., Mol. Cell Biol., 8: 2159-2165 (1988)]; the c-myc tag and the 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 and 9E10 antibodies thereto [Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3616 (1985)]; and the gliprotein D (gD) tag of the Herpes Simplex virus and its antibody [Paborsky et al., Protein Engineering, 3 (6): 547-553 (1990)]. Other tag polypeptides include the Flag-peptide [Hopp et al., BioTechnology, 6: 1204-1210 (1988)]; the KT3 epitope peptide [Martin et al., Science, 255: 192-194 (1992)]; a íubulin epitope peptide [Skinner et al., J. Biol. Chem., 266: 15163-15166 (1991)]; and the T7 protein peptide tag of gene 10 [Lutz-Freyemuth et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990)]. [0075] In an alternative embodiment, the chimeric molecule may comprise a fusion of a PRO1122 polypeptide with an immunoglobulin or a particular region of an immunoglobulin. For a bivalent form of the chimeric molecule, said fusion could be to an Fc region of an IgG molecule. Ig fusions preferably include the substitution of a soluble form (deleted or inactivated transmembrane domain) of a PRO1122 polypeptide instead of at least one variable region of an Ig molecule. In a particularly preferred embodiment, the immunoglobulin fusion includes the hinge, CH2 and CH3, or the hinge, CH1, CH2 and CH3 regions of an IgG1 molecule. For the production of immunoglobulin fusions, see also US Patent No. 5,428,130 issued June 27, 1995. [0076] In another additional embodiment, PRO1122 polypeptides can also be modified so that they form a chimeric molecule that It comprises a PRO1122 polypeptide fused to a leucine zipper. Several leucine zippers polypeptides have been described in the art. See, for example, Landschulz et al., Science 240: 1759 (1988); WO 94/10308; Hoppe et al., FEBS Letters 344: 1991 (1994); Maniatis et al., Nature 341: 24 (1989). It is believed that the use of a leucine zipper fused to a PRO1122 polypeptide may be desirable to aid in the dimerization or trimerization of solution soluble PRO1122 polypeptide. Those skilled in the art will understand that the leucine zipper can be fused to the N- or C-terminal end of the PRO1122 molecule.

D. Preparación de PRO1122 D. Preparation of PRO1122

[0077] La siguiente descripción se refiere principalmente a la producción de PRO1122 mediante el cultivo de células transformadas o transfectadas con un vector que contiene ácido nucleico que codifica el polipéptido PRO1122. Naturalmente, se prevé que se pueden utilizar procedimientos alternativos, que se conocen bien en la técnica, para preparar polipéptidos PRO1122. Por ejemplo, la secuencia de PRO1122, o partes de la misma, se pueden producir mediante síntesis directa de péptidos utilizando técnicas de fase sólida [véase, por ejemplo, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149-2154 (1963)]. La síntesis de proteínas in vitro se puede realizar utilizando técnicas manuales o mediante automatización. La síntesis automatizada se puede realizar, por ejemplo, utilizando un Applied Biosystems Peptide Synthesizer (Foster City, CA) utilizando las instrucciones del fabricante. Se pueden sintetizar químicamente varias partes de polipéptidos PRO1122 de forma separada y combinar utilizando procedimientos químicos o enzimáticos para producir un polipéptido PRO1122 de longitud completa. [0077] The following description relates mainly to the production of PRO1122 by culturing cells transformed or transfected with a vector containing nucleic acid encoding the PRO1122 polypeptide. Naturally, it is envisioned that alternative methods, which are well known in the art, can be used to prepare PRO1122 polypeptides. For example, the sequence of PRO1122, or parts thereof, can be produced by direct peptide synthesis using solid phase techniques [see, for example, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149-2154 (1963)]. In vitro protein synthesis can be performed using manual techniques or by automation. Automated synthesis can be performed, for example, using an Applied Biosystems Peptide Synthesizer (Foster City, CA) using the manufacturer's instructions. Several parts of PRO1122 polypeptides can be chemically synthesized separately and combined using chemical or enzymatic methods to produce a full-length PRO1122 polypeptide.

1. Aislamiento de ADN que codifica PRO1122 [0078] El ADN que codifica un polipéptido PRO1122 se puede obtener a partir de una biblioteca de ADNc preparada a partir de tejido que se cree que posee el ARNm de PRO1122 y expresarlo a un nivel detectable. Por consiguiente, el ADN que codifica PRO1122 humano se puede obtener convenientemente a partir de una biblioteca de ADNc preparada a partir de tejido humano, tal como se describe en los Ejemplos. El gen que codifica PRO1122 también se puede obtener a partir de una biblioteca genómica o mediante procedimientos sintéticos conocidos (por ejemplo, procedimientos sintéticos automatizados, síntesis de oligonucleótidos). [0079] Las bibliotecas se pueden cribar con sondas (tales como anticuerpos para un polipéptido PRO1122 u oligonucleótidos de por lo menos aproximadamente 20-80 bases) diseñadas para identificar el gen de interés o la proteína codificada por el mismo. El cribado del ADNc o la biblioteca genómica con la sonda seleccionada se puede realizar utilizando procedimientos estándar, tal como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Un medio alternativo para aislar genes es utilizar la metodología de PCR [Sambrook et al., supra; Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]. [0080] Los siguientes Ejemplos describen técnicas para cribar una librería de ADNc. Las secuencias de oligonucleótidos seleccionadas como sondas deberían ser de longitud suficiente y suficientemente inequívocas para que se minimicen los falsos positivos. El oligonucleótido está preferiblemente marcado de manera que se puede detectar tras la hibridación a ADN en la biblioteca que se criba. Los procedimientos de marcado son bien conocidos en la técnica, e incluyen la utilización de radiomarcadores como ATP marcado con 32P, biotinilación o marcaje enzimático. Las condiciones de hibridación, incluyendo la astringencia moderada y la astringencia elevada, se proporcionan en Sambrook et al., supra. [0081] Las secuencias identificadas en dichos procedimientos de cribado de bibliotecas se pueden comparar y alinear a otras secuencias conocidas depositadas y disponibles en los bases de datos públicas, tales como el Banco de Genes, u otras bases de datos privadas de secuencias. La identidad de secuencia (a nivel de aminoácido o nucleótido) en las regiones definidas de la molécula o a lo largo de la secuencia de longitud completa se puede determinar utilizando procedimientos conocidos en la técnica y tal y como se describen en la presente invención (por ejemplo, a través de la alineación de secuencias utilizando programas informáticos de software, tales como ALIGN, DNAstar, BLAST, BLAST-2, INHERIT y ALIGN-2 que utiliza varios algoritmos para medir la homología). [0082] El ácido nucleico que tiene la secuencia de codificación de la proteína se puede obtener mediante el cribado del ADNc seleccionado o las bibliotecas genómicas utilizando la secuencia de aminoácidos deducida descrita en la presente invención por primera vez, y, si es necesario, utilizando procedimientos convencionales de extensión con cebadores tal y como se describe en Sambrook et al., supra, para detectar precursores y procesar intermedios de ARNm que no se han transcrito de forma inversa en ADNc. 1. Isolation of DNA encoding PRO1122 [0078] DNA encoding a PRO1122 polypeptide can be obtained from a cDNA library prepared from tissue believed to possess the PRO1122 mRNA and expressed at a detectable level. Accordingly, DNA encoding human PRO1122 can be conveniently obtained from a cDNA library prepared from human tissue, as described in the Examples. The gene encoding PRO1122 can also be obtained from a genomic library or by known synthetic procedures (for example, automated synthetic procedures, oligonucleotide synthesis). [0079] Libraries can be screened with probes (such as antibodies to a PRO1122 polypeptide or oligonucleotides of at least about 20-80 bases) designed to identify the gene of interest or the protein encoded by it. The cDNA screening or genomic library with the selected probe can be performed using standard procedures, as described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). An alternative means to isolate genes is to use the PCR methodology [Sambrook et al., Supra; Dieffenbach et al., PCR First: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]. [0080] The following Examples describe techniques for screening a cDNA library. The oligonucleotide sequences selected as probes should be of sufficient length and unambiguous enough to minimize false positives. The oligonucleotide is preferably labeled so that it can be detected after hybridization to DNA in the library being screened. Labeling procedures are well known in the art, and include the use of radiolabels such as 32P-labeled ATP, biotinylation or enzymatic labeling. Hybridization conditions, including moderate astringency and elevated astringency, are provided in Sambrook et al., Supra. [0081] The sequences identified in said library screening procedures can be compared and aligned to other known sequences deposited and available in public databases, such as the Gene Bank, or other private sequence databases. The sequence identity (at the amino acid or nucleotide level) in the defined regions of the molecule or along the full length sequence can be determined using methods known in the art and as described in the present invention (for example , through sequence alignment using software software, such as ALIGN, DNAstar, BLAST, BLAST-2, INHERIT and ALIGN-2 that uses several algorithms to measure homology). [0082] Nucleic acid having the protein coding sequence can be obtained by screening the selected cDNA or genomic libraries using the deduced amino acid sequence described in the present invention for the first time, and, if necessary, using Conventional extension procedures with primers as described in Sambrook et al., supra, to detect precursors and process mRNA intermediates that have not been reverse transcribed into cDNA.

2. Selección y transformación de células huésped 2. Selection and transformation of host cells

[0083] Las células huésped se transfectan o transforman con vectores de expresión o clonación descritos en la presente para la producción de polipéptido PRO1122 y se cultivan en medios nutrientes convencionales modificados para que sean adecuados para inducir promotores, seleccionar transformantes, o amplificar los genes que codifican las secuencias deseadas. Las condiciones de cultivo, tales como el medio, la temperatura, el pH y similares, se pueden seleccionar por un técnico en la materia sin una experimentación excesiva. En general, los principios, protocolos y técnicas prácticas para maximizar la productividad de cultivos celulares se pueden encontrar en Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) y Sambrook et al., supra. [0084] Los procedimientos de transfección son conocidos por el técnico en la materia, por ejemplo, CaPO4 y electroporación. Dependiendo de la célula huésped utilizada, la transformación se realiza utilizando técnicas estándar adecuadas a dichas células. El tratamiento de calcio que utiliza cloruro cálcico, tal y como se describe en Sambrook et al., supra, o la electroporación se utilizan generalmente para procariotas u otras células que contienen barreras de pared celular sustanciales. La infección con Agrobacterium tumefaciens se utiliza para la transformación de ciertas células vegetales, tal y como describe Shaw et al., Gene, 23:315 (1983) y WO 89/05859 publicada el 29 de junio de 1989. Para las células de mamíferos sin dichas paredes celulares, se puede utilizar el procedimiento de precipitación con fosfato cálcico de Graham y van der Eb, Virology, [0083] Host cells are transfected or transformed with expression or cloning vectors described herein for the production of PRO1122 polypeptide and cultured in modified conventional nutrient media to be suitable for inducing promoters, selecting transformants, or amplifying genes that encode the desired sequences. Cultivation conditions, such as medium, temperature, pH and the like, can be selected by a person skilled in the art without undue experimentation. In general, the principles, protocols and practical techniques to maximize cell culture productivity can be found in Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) and Sambrook et al., Supra. [0084] Transfection procedures are known to the person skilled in the art, for example, CaPO4 and electroporation. Depending on the host cell used, the transformation is performed using standard techniques appropriate to said cells. Calcium treatment using calcium chloride, as described in Sambrook et al., Supra, or electroporation is generally used for prokaryotes or other cells that contain substantial cell wall barriers. Infection with Agrobacterium tumefaciens is used for the transformation of certain plant cells, as described by Shaw et al., Gene, 23: 315 (1983) and WO 89/05859 published on June 29, 1989. For mammalian cells Without said cell walls, the calcium phosphate precipitation method of Graham and van der Eb, Virology, can be used.

52: 456-457 (1978). En la Patente de Estados Unidos No. 4.399.216 se han descrito aspectos generales de transformaciones de sistemas de células huésped de mamíferos. Las transformaciones en la levadura se llevan a cabo habitualmente según el procedimiento de Van Solingen et al., J. Bact., 130: 946 (1977) y Hsiao et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 76: 3829 (1979). Sin embargo, también se pueden utilizar otros procedimientos para introducir ADN en células, tales como mediante microinyección nuclear, electroporación, fusión de protoplasto bacteriano con células intactas, o policationes, por ejemplo, polibreno, poliornitina. Para varias técnicas para transformar células de mamífero, ver Keown et al., Methods in enzymology, 185:527537 (1990) y Manssur et al., Nature, 336. 348-352 (1988). [0085] Entre las células huésped adecuadas para la clonación o expresión del ácido nucleico (por ejemplo, ADN) en los vectores de la presente invención se incluyen células procariotas, de levadura, o eucariotas superiores. Entre las procariotas adecuadas se incluyen, pero no se limitan a, eubacterias, tales como organismos Gramnegativo o Gram-positivo, por ejemplo, Enterobacteriaceae, tal como E. coli. Varias cepas de E. coli están disponibles públicamente, tales como la cepa de E. coli Ka12 MM294 (ATCC 31.446); E. coli X1776 (ATCC 31.537); cepa de E. coli W3110 (ATCC 27.325) y K5772 (ATCC 53.635). Entre otras células huésped procariotas adecuadas se incluyen Enterobacteriaceae, tales como Escherichia, por ejemplo, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por ejemplo, Salmonella typhimurium, Serratia, por ejemplo, Serratia marcescans, y Shigella, así como Bacilli, tal como B. subtilis y B. licheniformis (por ejemplo, B. licheniformis 41P descrito en DD 266.710 publicada el 12 de abril de 1989), Pseudomonas, tal como P. aeruginosa, y Streptomyces. Estos ejemplos son más ilustrativos que limitantes. La cepa W3110 es un huésped o huésped parental particularmente preferible ya que es una cepa huésped para fermentaciones de producto de ADN recombinante. Preferiblemente, la célula huésped secreta cantidades mínimas de enzimas proteolíticos. Por ejemplo, la cepa W3110 se puede modificar para realizar una mutación genética en los genes que codifican proteínas endógenas al huésped, con ejemplos de dichos huéspedes incluyendo la cepa de E. coli W3110 1A2, que tiene el genotipo completo tonA; la cepa de E. coli W3110 9E4, que tiene el genotipo completo tonA ptr3; la cepa de E. coli W3110 27C7 (ATCC 55.244), que tiene el genotipo completo tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac) 169 degP ompT kan’; la cepa de E. coli W3110 40B4, que es una cepa 37D6 con una mutación de deleción degP no resistente a kanamicina; y una cepa de E. coli que tiene proteasa periplásmica mutante descrita en la Patente de Estados Unidos No. 4.946.783 concedida el 7 de agosto de 1990. Alternativamente, son adecuados procedimientos de clonación in vivo, por ejemplo, PCR u otras reacciones de ácido nucleico polimerasa. 52: 456-457 (1978). General aspects of transformations of mammalian host cell systems have been described in US Patent No. 4,399,216. Yeast transformations are usually carried out according to the procedure of Van Solingen et al., J. Bact., 130: 946 (1977) and Hsiao et al., Proc. Natl Acad. Sci. (USA), 76: 3829 (1979). However, other methods can also be used to introduce DNA into cells, such as by nuclear microinjection, electroporation, fusion of bacterial protoplast with intact cells, or polycations, for example, polybrene, polynithin. For various techniques for transforming mammalian cells, see Keown et al., Methods in enzymology, 185: 527537 (1990) and Manssur et al., Nature, 336. 348-352 (1988). [0085] Suitable host cells for cloning or expression of nucleic acid (eg, DNA) in the vectors of the present invention include prokaryotic, yeast, or higher eukaryotic cells. Suitable prokaryotes include, but are not limited to, eubacteria, such as Gram-negative or Gram-positive organisms, for example, Enterobacteriaceae, such as E. coli. Several strains of E. coli are publicly available, such as E. coli strain Ka12 MM294 (ATCC 31,446); E. coli X1776 (ATCC 31,537); E. coli strain W3110 (ATCC 27.325) and K5772 (ATCC 53.635). Other suitable prokaryotic host cells include Enterobacteriaceae, such as Escherichia, for example, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, for example, Salmonella typhimurium, Serratia, for example, Serratia marcescans, and Shigella, as well as Bacilli, such as B. subtilis and B. licheniformis (for example, B. licheniformis 41P described in DD 266,710 published on April 12, 1989), Pseudomonas, such as P. aeruginosa, and Streptomyces. These examples are more illustrative than limiting. Strain W3110 is a particularly preferable parental host or host as it is a host strain for fermentations of recombinant DNA product. Preferably, the host cell secretes minimal amounts of proteolytic enzymes. For example, strain W3110 can be modified to perform a genetic mutation in the genes encoding endogenous proteins to the host, with examples of such hosts including E. coli strain W3110 1A2, which has the complete genotype tonA; E. coli strain W3110 9E4, which has the complete genotype tonA ptr3; E. coli strain W3110 27C7 (ATCC 55.244), which has the complete genotype tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac) 169 degP ompT kan ’; E. coli strain W3110 40B4, which is a 37D6 strain with a degP deletion mutation not resistant to kanamycin; and a strain of E. coli having mutant periplasmic protease described in US Patent No. 4,946,783 issued on August 7, 1990. Alternatively, in vivo cloning procedures are suitable, for example, PCR or other reactions of nucleic acid polymerase.

[0086] Además de los procariotas, los microbios eucariotas, tales como hongos o levaduras filamentosos, son huéspedes de clonación o expresión adecuados para vectores que codifican PRO1122. El Saccharomyces cerevisiae es un microorganismo huésped eucariótico inferior utilizado habitualmente. Otros incluyen Schizosaccharomyces pombe (Beach and Nature, Nature, 290: 140 [1981]; EP 139.383 publicada el 2 de mayo de 1985); huéspedes Kluyveromyces (Patente de Estados Unidos No. 4.943.529; Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991)) tal como, por ejemplo, K. lactis (MW98-8C, CBS683, CBS574; Louvencourt et al. J. Bacterial., 154(2):737-742 [1983]), K. fragilis (ATCC 12.424), K. bulgaricus (ATCC 16.045), K. wickeramii (ATCC 24.178), K. waltii (ATCC 56.500), K. drosophilarum (ATCC 36.906; Van den Berg et al., Bio/Technology, 8:135(1990)), K. thermotolerans y K. marxianus; yarrowia (EP 402.226); Pichia pastoris (EP 183.070; Sreekrishna et al., J. Basic. Microbiol. 28:265-278 [1988]); Candid; Trichoderma reesia (EP 244.234); Neurospora crassa (Case et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:5259-5263 [1979]); Schwanniomyces, tales como Schwanniomyces occidentalis (EP 394.538, publicada el 31 de octubre de 1990); y hongos filamentosos, tales como, por ejemplo, Neurospora, Penicillium, Tolypocladium (WO 91/00357 publicada el 10 de enero de 1991), y huéspedes Aspergillus, tales como A. nidulans (Ballance et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 112:284-289 [1983]; Tilbum et al., Gene, 26:205-221 [1983]; Yelton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984]) y A. Niger (Nelly y Hynes, EMBO J., 4:475-479 [1985]). Las levaduras metiltrópicas se seleccionan del género que consiste en Hansenula, Candida, Kloeckera, Pichia, Sacckaromyces, Torulopsis, y Rhodotorula. Una lista de especies específicas que son ejemplos de esta clase de levaduras se puede encontrar en C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982). [0087] Las células huésped adecuadas para la expresión de PRO1122 glicosilado se derivan de organismos multicelulares. Entre los ejemplos de células de invertebrados se incluyen células de insectos, tales como Droshophila S2 y Spodoptera Sf9, Spodoptera high5, así como células vegetales. Entre los ejemplos de líneas celulares huésped de mamíferos útiles se incluyen células de ovario de hámster chino (CHO) y células COS. Algunos ejemplos más específicos incluyen línea CV1 de riñón de mono transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); línea de riñón de embrión humano (células 293 o 293 subclonadas para el crecimiento en cultivo de suspensión, Graham et al., J. Gen Virol., 36:59 (1977)); células de ovario de hámster chino/-DHFR (CHO. Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); células de sertoli de ratón (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); células de pulmón humano (W138, ATCC CCL 75); células de hígado humano (Hep G2, HB 8065); y tumor mamario de ratón (MMT 060562, ATCC CCL51). La selección de la célula huésped apropiada se estima que está dentro de la técnica. [0086] In addition to prokaryotes, eukaryotic microbes, such as fungi or filamentous yeasts, are suitable cloning or expression hosts for vectors encoding PRO1122. Saccharomyces cerevisiae is a commonly used lower eukaryotic host microorganism. Others include Schizosaccharomyces pombe (Beach and Nature, Nature, 290: 140 [1981]; EP 139,383 published May 2, 1985); Kluyveromyces hosts (U.S. Patent No. 4,943,529; Fleer et al., Bio / Technology, 9: 968-975 (1991)) such as, for example, K. lactis (MW98-8C, CBS683, CBS574; Louvencourt et al. J. Bacterial., 154 (2): 737-742 [1983]), K. fragilis (ATCC 12,424), K. bulgaricus (ATCC 16,045), K. wickeramii (ATCC 24,178), K. waltii (ATCC 56,500), K. drosophilarum (ATCC 36,906; Van den Berg et al., Bio / Technology, 8: 135 (1990)), K. thermotolerans and K. marxianus; yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070; Sreekrishna et al., J. Basic. Microbiol. 28: 265-278 [1988]); Candid; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa (Case et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76: 5259-5263 [1979]); Schwanniomyces, such as Schwanniomyces occidentalis (EP 394,538, published October 31, 1990); and filamentous fungi, such as, for example, Neurospora, Penicillium, Tolypocladium (WO 91/00357 published January 10, 1991), and Aspergillus hosts, such as A. nidulans (Ballance et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 112: 284-289 [1983]; Tilbum et al., Gene, 26: 205-221 [1983]; Yelton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984 ]) and A. Niger (Nelly and Hynes, EMBO J., 4: 475-479 [1985]). Methyltropic yeasts are selected from the genus consisting of Hansenula, Candida, Kloeckera, Pichia, Sacckaromyces, Torulopsis, and Rhodotorula. A list of specific species that are examples of this kind of yeast can be found in C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982). [0087] Suitable host cells for the expression of glycosylated PRO1122 are derived from multicellular organisms. Examples of invertebrate cells include insect cells, such as Droshophila S2 and Spodoptera Sf9, Spodoptera high5, as well as plant cells. Examples of useful mammalian host cell lines include Chinese hamster ovary (CHO) cells and COS cells. Some more specific examples include monkey kidney CV1 line transformed by SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); human embryo kidney line (293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture, Graham et al., J. Gen Virol., 36:59 (1977)); Chinese hamster ovarian cells / -DHFR (CHO. Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216 (1980)); mouse sertoli cells (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23: 243-251 (1980)); human lung cells (W138, ATCC CCL 75); human liver cells (Hep G2, HB 8065); and mouse mammary tumor (MMT 060562, ATCC CCL51). The selection of the appropriate host cell is estimated to be within the art.

3. Selección y utilización de un vector replicable 3. Selection and use of a replicable vector

[0088] El ácido nucleico (por ejemplo, ADNc o ADN genómico), que codifica el polipéptido deseado PRO1122 se puede insertar en un vector replicable para la clonación (amplificación del ADN) o para la expresión. Existen varios vectores disponibles públicamente. El vector puede estar, por ejemplo, en forma de plásmido, cósmido, partícula viral, o fago. La secuencia de ácidos nucleicos apropiada se puede insertar en el vector mediante una serie de procedimientos. En general, el ADN se inserta en un sitio o sitios de endonucleasa de restricción apropiados utilizando técnicas conocidas en el sector. Los componentes de los vectores incluyen generalmente, pero no se limitan a, una o más secuencias señal, un origen de replicación, uno o más genes marcadores, un elemento potenciador, un promotor y una secuencia de terminación de la transcripción. La construcción de vectores adecuados que contienen uno o más de estos componentes utiliza técnicas de unión estándar que son conocidas por un experto en la materia. [0089] El polipéptido PRO1122 se puede producir recombinantemente no sólo directamente, sino también como un polipéptido de fusión con un polipéptido heterólogo, que puede ser una secuencia señal u otro polipéptido que tiene un sitio de división específico en el extremo N-terminal de la proteína o polipéptido maduro. En general, la secuencia señal puede ser un componente del vector, o puede ser una parte del ADN que codifica el PRO1122 que se inserta en el vector. La secuencia señal puede ser una secuencia señal procariota seleccionada, por ejemplo, del grupo de las secuencias líderes de fosfatasa alcalina, penicilinasa, Ipp o enterotoxinaII estable térmicamente. Para la secreción en levaduras, la secuencia señal puede ser, por ejemplo, líder de la invertasa de levadura, líder del factor alfa (incluyendo líderes de factor  de Saccharomyces y Kluyveromyces, el último descrito en la Patente de Estados Unidos No. 5.010.182), o líder de fosfatasa ácida, el líder de la C. Albicans glucoamilasa (EP 362.179 publicada el 4 de abril de 1990) o la señal descrita en WO 90/13646, publicada el 15 de noviembre de 1990. En la expresión de células de mamíferos, las secuencias señal de mamíferos se pueden utilizar para dirigir la secreción de la proteína, tales como secuencias señal de polipéptidos secretados de la misma especie o especies relacionadas, así como líderes secretores virales. [0090] Tanto los vectores de expresión como los de clonación contienen una secuencia de ácidos nucleicos que permite la replicación del vector en una o más células huésped seleccionadas. Dichas secuencias son conocidas para un conjunto de bacterias, levaduras, y virus. El origen de la replicación del plásmido pBR322 es adecuado para la mayoría de bacterias gram-negativas, el origen del plásmido 2 es adecuado para la levadura, y orígenes virales varios (SV40, polioma, adenovirus, VSV o BPV) son útiles para vectores de clonación en células de mamíferos. [0091] Los vectores de clonación y expresión contendrán habitualmente un gen de selección, también denominado como marcador seleccionable. Los genes de selección habituales codifican proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicillina, neomicina, metotrexato o tetraciclina, (b) complementan las deficiencias auxotróficas, o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles del medio complejo, por ejemplo, el gen que codifica D-alanina racemasa para Bacilli. [0092] Un ejemplo de marcadores seleccionables adecuados para células de mamíferos son aquéllos que permiten la identificación de células competentes para captar el ácido nucleico que codifica PRO1122, tal como DHFR o timidina quinasa. Una célula huésped apropiada cuando se utiliza DHFR de tipo salvaje es la línea de células CHO deficiente en actividad de DHFR, preparada y propagada tal y como se describe por Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980). Un gen de selección adecuado para su utilización en la levadura es el gen trp1 presente en el plásmido de la levadura YRp7 [Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979); Kingsman et al., Gene, [0088] Nucleic acid (eg, cDNA or genomic DNA), which encodes the desired PRO1122 polypeptide can be inserted into a replicable vector for cloning (DNA amplification) or for expression. There are several publicly available vectors. The vector may be, for example, in the form of plasmid, cosmid, viral particle, or phage. The appropriate nucleic acid sequence can be inserted into the vector by a series of procedures. In general, the DNA is inserted into an appropriate restriction endonuclease site or sites using techniques known in the art. The components of the vectors generally include, but are not limited to, one or more signal sequences, an origin of replication, one or more marker genes, an enhancer element, a promoter and a transcription termination sequence. The construction of suitable vectors containing one or more of these components utilizes standard binding techniques that are known to one skilled in the art. [0089] The PRO1122 polypeptide can be recombinantly produced not only directly, but also as a fusion polypeptide with a heterologous polypeptide, which can be a signal sequence or other polypeptide having a specific cleavage site at the N-terminal end of the mature protein or polypeptide. In general, the signal sequence may be a component of the vector, or it may be a part of the DNA encoding PRO1122 that is inserted into the vector. The signal sequence may be a prokaryotic signal sequence selected, for example, from the group of the alkaline phosphatase, penicillinase, Ipp or thermally stable enterotoxin II leader sequences. For secretion in yeast, the signal sequence may be, for example, leader of the yeast invertase, leader of the alpha factor (including leaders of factor Sac of Saccharomyces and Kluyveromyces, the last described in US Patent No. 5,010. 182), or acid phosphatase leader, the leader of C. albicans glucoamylase (EP 362,179 published on April 4, 1990) or the signal described in WO 90/13646, published on November 15, 1990. In the expression of Mammalian cells, mammalian signal sequences can be used to direct the secretion of the protein, such as signal sequences from secreted polypeptides of the same or related species, as well as viral secretory leaders. [0090] Both the expression and cloning vectors contain a nucleic acid sequence that allows replication of the vector in one or more selected host cells. Such sequences are known for a set of bacteria, yeasts, and viruses. The origin of the replication of plasmid pBR322 is suitable for most gram-negative bacteria, the origin of plasmid 2 is suitable for yeast, and various viral origins (SV40, polyoma, adenovirus, VSV or BPV) are useful for vectors of cloning in mammalian cells. [0091] Cloning and expression vectors will usually contain a selection gene, also referred to as a selectable marker. The usual selection genes encode proteins that (a) confer resistance to antibiotics or other toxins, for example, ampicillin, neomycin, methotrexate or tetracycline, (b) complement auxotrophic deficiencies, or (c) supply critical nutrients not available from the complex medium , for example, the gene encoding D-alanine racemase for Bacilli. [0092] An example of selectable markers suitable for mammalian cells are those that allow the identification of competent cells to capture the nucleic acid encoding PRO1122, such as DHFR or thymidine kinase. An appropriate host cell when wild-type DHFR is used is the CHO cell line deficient in DHFR activity, prepared and propagated as described by Urlaub et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4216 (1980). A suitable selection gene for use in yeast is the trp1 gene present in the YRp7 yeast plasmid [Stinchcomb et al., Nature, 282: 39 (1979); Kingsman et al., Gene,

7:141 (1979); Tschemper et al., Gene, 10:157 (1980)]. El gen trp1 proporciona un marcador de selección para una cepa mutante de levadura que carece de la capacidad de crecer en triptófano, por ejemplo, ATCC No. 44076 o PEP4-1 [Jones, Genetics, 7: 141 (1979); Tschemper et al., Gene, 10: 157 (1980)]. The trp1 gene provides a selection marker for a mutant strain of yeast that lacks the ability to grow in tryptophan, for example, ATCC No. 44076 or PEP4-1 [Jones, Genetics,

85:12 (1977)]. [0093] Los vectores de clonación y expresión contienen habitualmente un promotor unido operativamente a la secuencia de ácidos nucleicos que codifica PRO1122 para dirigir la síntesis de ARNm. Los promotores reconocidos por un conjunto de potenciales células huésped son conocidos. Entre los promotores adecuados para utilizar con huéspedes procariotas se incluyen los sistemas de promotores de lactamasa y lactosa [Chang et al., Nature, 275:615 (1978); Goeddel et al., Nature, 85:12 (1977)]. [0093] Cloning and expression vectors usually contain a promoter operably linked to the nucleic acid sequence encoding PRO1122 to direct mRNA synthesis. Promoters recognized by a set of potential host cells are known. Promoters suitable for use with prokaryotic hosts include lactamase and lactose promoter systems [Chang et al., Nature, 275: 615 (1978); Goeddel et al., Nature,

281:544 (1979)], fosfatasa alcalina, un sistema de promotor de triptófano (trp) [Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36.776], y promotores híbridos, tales como el promotor tac [deBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)]. Los promotores para utilizar en sistemas bacterianos también contendrán una secuencia de Shine-Dalgamo (S.D.) unida operativamente al ADN que codifica el polipéptido PRO1122. [0094] Entre los ejemplos de secuencias promotoras adecuadas para su utilización con huéspedes de levadura se incluyen los promotores para 3-fosfoglicerato quinasa [Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)] u otras enzimas glucolíticas [Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968); holland, Biochemistry, 17:4900 (1978)], tal como enolasa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, hexoquinasa, piruvato descarboxilasa, fosfofructoquinasa, glucosa-6-fosfato isomerasa, 3-fosfoglicerato mutasa, piruvato quinasa, triosafosfato isomerasa, fosfoglucosa isomerasa y glucoquinasa. [0095] Otros promotores de levaduras, que son promotores inducibles que tienen la ventaja adicional de una transcripción controlada por las condiciones de crecimiento, son las regiones promotoras para alcohol deshidrogenasa 2, isocitocromo C, fosfatasa ácida, enzimas degradativas asociadas con el metabolismo del nitrógeno, metalotioneina, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, y enzimas responsables de la utilización de maltosa y galactosa. Los vectores y promotores adecuados para la utilización en la expresión en levaduras se describen adicionalmente en EP 73.657. [0096] La transcripción de PRO1122 desde vectores en células huésped de mamíferos está controlada, por ejemplo, mediante promotores obtenidos de los genomas de virus, tales como virus del polioma, virus de la viruela aviar (Patente UK 2.211.504 publicada el 5 de julio de 1989), adenovirus (tal como el Adenovirus 2), el virus de papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus, un retrovirus, virus de la hepatitis-B y virus de simio 40 (SV40), de promotores de mamíferos heterólogos, por ejemplo, el promotor de actina o un promotor de inmunoglobulina, y de promotores de choque térmico, siempre y cuando dichos promotores sean compatibles con los sistemas de célula huésped. [0097] Se puede incrementar la transcripción de un ADN que codifica un polipéptido PRO1122 por eucariotas superiores mediante la inserción de una secuencia de potenciador en el vector. Los potenciadores son elementos de ADN que actúan en cis, habitualmente aproximadamente de 10 a 300 pb, que actúan en un promotor para aumentar su transcripción. Muchas secuencias de potenciador se conocen actualmente de genes de mamíferos (globina, elastasa, albúmina, -fetoproteína e insulina). 281: 544 (1979)], alkaline phosphatase, a tryptophan (trp) promoter system [Goeddel, Nucleic Acids Res., 8: 4057 (1980); EP 36,776], and hybrid promoters, such as the tac promoter [deBoer et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 80: 21-25 (1983)]. Promoters for use in bacterial systems will also contain a Shine-Dalgamo (S.D.) sequence operatively linked to the DNA encoding the PRO1122 polypeptide. [0094] Examples of promoter sequences suitable for use with yeast hosts include promoters for 3-phosphoglycerate kinase [Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255: 2073 (1980)] or other glycolytic enzymes [Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg., 7: 149 (1968); holland, Biochemistry, 17: 4900 (1978)], such as enolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, hexokinase, pyruvate decarboxylase, phosphofructokinase, glucose-6-phosphate isomerase, 3-phosphoglycerate mutase, pyruvate kinase, triosaphosphate isomerase phosphate isomerase, isomerase and glucokinase. [0095] Other yeast promoters, which are inducible promoters that have the additional advantage of a transcription controlled by growth conditions, are the promoter regions for alcohol dehydrogenase 2, isocytochrome C, acid phosphatase, degradative enzymes associated with nitrogen metabolism , metallothionein, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, and enzymes responsible for the use of maltose and galactose. Vectors and promoters suitable for use in yeast expression are further described in EP 73,657. [0096] Transcription of PRO1122 from vectors in mammalian host cells is controlled, for example, by promoters obtained from virus genomes, such as polyoma virus, avian smallpox virus (UK Patent 2,211,504 published 5 July 1989), adenovirus (such as Adenovirus 2), bovine papillomavirus, avian sarcoma virus, cytomegalovirus, a retrovirus, hepatitis-B virus and simian virus 40 (SV40), from heterologous mammalian promoters , for example, the actin promoter or an immunoglobulin promoter, and heat shock promoters, as long as said promoters are compatible with host cell systems. [0097] The transcription of a DNA encoding a PRO1122 polypeptide by higher eukaryotes can be increased by inserting an enhancer sequence into the vector. Enhancers are elements of DNA that act in cis, usually about 10 to 300 bp, that act in a promoter to increase their transcription. Many enhancer sequences are currently known from mammalian genes (globin, elastase, albumin, -fetoprotein and insulin).

Habitualmente, sin embargo, se utilizará un potenciador de un virus de célula eucariota. Entre los ejemplos se incluyen el potenciador de SV40 en la cara tardía del origen de replicación (pb 100-270), el potenciador de promotor temprano de citomegalovirus, el potenciador de polioma en la cara tardía del origen de replicación, y potenciadores de adenovirus. El potenciador se puede cortar y empalmar (“splice”) en el vector en una posición 5’ ó 3’ con respecto a la secuencia codificante de PRO1122, pero se sitúa preferiblemente en un sitio 5’ del promotor. [0098] Los vectores de expresión utilizados en células huéspedes eucariotas (levadura, hongos, insectos, plantas, animales, humanos, o células nucleadas de otros organismos multicelulares) también contendrán secuencias necesarias para la terminación de la transcripción y para la estabilización del ARNm. Dichas secuencias están disponibles habitualmente desde las regiones no traducidas 5’ y, ocasionalmente 3’, de ADNs o ADNcs eucariotas o virales. Estas regiones contienen segmentos de nucleótidos transcritos como fragmentos poliadenilados en la parte no traducida del ARNm que codifica PRO1122. [0099] En Gething et al., Nature, 293:620-625 (1981); Mantei et al., Nature, 281:40-46 (1979); EP 117.060 y EP 117.058 se describen otros procedimientos, vectores, y células huésped adecuados para la adaptación a la síntesis de polipéptidos PRO1122 en cultivos de células recombinantes de vertebrados. Usually, however, an enhancer of a eukaryotic cell virus will be used. Examples include the SV40 enhancer on the late side of the origin of replication (bp 100-270), the cytomegalovirus early promoter enhancer, the polyoma enhancer on the late side of the origin of replication, and adenovirus enhancers. The enhancer can be cut and spliced ("splice") in the vector at a 5 'or 3' position with respect to the coding sequence of PRO1122, but is preferably located at a 5 'site of the promoter. [0098] Expression vectors used in eukaryotic host cells (yeast, fungi, insects, plants, animals, humans, or nucleated cells of other multicellular organisms) will also contain sequences necessary for termination of transcription and for mRNA stabilization. Such sequences are usually available from the 5 ’and, occasionally 3’, untranslated regions of eukaryotic or viral DNAs or cDNAs. These regions contain nucleotide segments transcribed as polyadenylated fragments in the untranslated part of the mRNA encoding PRO1122. [0099] In Gething et al., Nature, 293: 620-625 (1981); Mantei et al., Nature, 281: 40-46 (1979); EP 117.060 and EP 117.058 describe other methods, vectors, and host cells suitable for adaptation to the synthesis of PRO1122 polypeptides in recombinant vertebrate cell cultures.

4. Detección de la amplificación/expresión de los genes 4. Detection of gene amplification / expression

[0100] La amplificación y/o expresión de los genes se puede medir en una muestra directamente, por ejemplo, mediante transferencia Southern convencional, transferencia Northern convencional para cuantificar la transcripción de ARNm [Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:5201-5205 (1980)], transferencia de puntos (análisis de ADN), o hibridación in situ, utilizando una sonda marcada apropiadamente, basadas en las secuencias proporcionadas en la presente invención. Alternativamente, se pueden utilizar anticuerpos que pueden reconocer cadenas dobles específicas, incluyendo cadenas dobles de ADN, cadenas dobles de ARN, cadenas dobles híbridas de ADN-ARN o cadenas dobles de ADN-proteína. Los anticuerpos a su vez se pueden marcar y el ensayo se puede llevar a cabo cuando la cadena doble está unida a una superficie, de manera que tras la formación de la cadena doble en la superficie, se puede detectar la presencia de anticuerpos unidos a la cadena doble. [0101] Alternativamente, la expresión génica se puede medir mediante procedimientos inmunológicos, tales como tinción inmunohistoquímica de células o secciones de tejido y ensayo de cultivo de células o fluidos corporales, para cuantificar directamente la expresión del producto génico. Los anticuerpos útiles para la tinción inmunohistoquímica y/o ensayo de fluidos de muestra pueden ser monoclonales o policlonales, y se puede preparar en cualquier mamífero. Convenientemente, los anticuerpos se pueden preparar contra un polipéptido PRO1122 de secuencia nativa o contra un péptido sintético basado en las secuencias de ADN proporcionadas en la presente invención o contra una secuencia exógena fusionada a ADN que codifica PRO1122 y que codifica un epítopo de anticuerpo específico. [0100] The amplification and / or expression of genes can be measured in a sample directly, for example, by conventional Southern blotting, conventional Northern blotting to quantify mRNA transcription [Thomas, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 5201-5205 (1980)], point transfer (DNA analysis), or in situ hybridization, using an appropriately labeled probe, based on the sequences provided in the present invention. Alternatively, antibodies that can recognize specific double strands can be used, including double strands of DNA, double strands of RNA, double strands of DNA-RNA or double strands of DNA-protein. The antibodies in turn can be labeled and the assay can be carried out when the double chain is attached to a surface, so that after the formation of the double chain on the surface, the presence of antibodies bound to the surface can be detected. double chain [0101] Alternatively, gene expression can be measured by immunological procedures, such as immunohistochemical staining of cells or tissue sections and cell or body fluid culture assay, to directly quantify the expression of the gene product. Antibodies useful for immunohistochemical staining and / or sample fluid assay can be monoclonal or polyclonal, and can be prepared in any mammal. Conveniently, the antibodies can be prepared against a native sequence PRO1122 polypeptide or against a synthetic peptide based on the DNA sequences provided in the present invention or against an exogenous DNA fused sequence encoding PRO1122 and encoding a specific antibody epitope.

5. Purificación de polipéptido 5. Purification of polypeptide

[0102] Las formas de PRO1122 se pueden recuperar del medio de cultivo o de los lisados de células huésped. Si está unido a membrana, se puede liberar de la membrana utilizando una solución de detergente adecuada (por ejemplo, Triton X-100) o mediante división enzimática. Las células utilizadas en la expresión de polipéptidos PRO1122 se pueden romper mediante diversos medios físicos o químicos, tales como un ciclo congelación-descongelación, sonicación, rotura mecánica, o agentes para lisar células. [0103] Se puede desear purificar PRO1122 a partir de proteínas o polipéptidos de células recombinantes. Los siguientes procedimientos son ejemplos de procedimientos de purificación adecuados: mediante fraccionamiento en una columna de intercambio iónico; precipitación con etanol; HPLC de fase inversa; cromatografía sobre sílice o una resina de intercambio catiónico, tal como DEAE; “cromatofocusing”; SDS-PAGE; precipitación con sulfato amónico; filtración en gel utilizando, por ejemplo, Sephadex G-75; columnas de proteína A sefarosa para eliminar contaminantes, tales como IgG, y columnas quelantes de metales para unir formas etiquetadas con epítopo del polipéptido PRO1122. Se pueden utilizar varios métodos de purificación de proteína y dichos métodos son conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles ad Practice, Springer-Verlag, Nueva York (1982). La etapa o etapas de purificación seleccionadas dependerán, por ejemplo, de la naturaleza del proceso de producción utilizado y el polipéptido PRO1122 concreto producido. [0102] The forms of PRO1122 can be recovered from the culture medium or host cell lysates. If membrane bound, it can be released from the membrane using a suitable detergent solution (for example, Triton X-100) or by enzymatic division. The cells used in the expression of PRO1122 polypeptides can be broken by various physical or chemical means, such as a freeze-thaw cycle, sonication, mechanical breakage, or agents to lyse cells. [0103] It may be desired to purify PRO1122 from recombinant cell proteins or polypeptides. The following procedures are examples of suitable purification procedures: by fractionation in an ion exchange column; ethanol precipitation; Reverse phase HPLC; chromatography on silica or a cation exchange resin, such as DEAE; "Chromatofocusing"; SDS-PAGE; precipitation with ammonium sulfate; gel filtration using, for example, Sephadex G-75; Sepharose protein A columns to remove contaminants, such as IgG, and metal chelating columns to bind epitope tagged forms of the PRO1122 polypeptide. Various protein purification methods can be used and such methods are known in the art and are described, for example, in Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles ad Practice, Springer-Verlag, New York (1982). The stage or stages of purification selected will depend, for example, on the nature of the production process used and the particular PRO1122 polypeptide produced.

E. Utilizaciones para PRO1122 [0104] Las secuencias de nucleótidos (o sus complementarias) que codifican polipéptidos PRO1122 tienen varias aplicaciones en la disciplina de la biología molecular, incluyendo utilizaciones como sondas de hibridación, en el mapeo de cromosomas y genes y en la generación de ARN y ADN antisentido. El ácido nucleico que codifica PRO1122 también será útil para la preparación de polipéptidos PRO1122 mediante las técnicas recombinantes descritas en la presente invención. [0105] La secuencia de nucleótidos DNA62377-1381-1 de longitud completa (SEC ID No: 4) o la secuencia de nucleótidos que codifica PRO1122 de secuencia nativa y longitud completa, o partes de las mismas, se pueden utilizar como sondas de hibridación para una biblioteca de ADNc para aislar el gen de PRO1122 de longitud completa o para aislar incluso otros genes (por ejemplo, aquéllos que codifican variantes naturales de PRO1122 o el mismo de otras especies) que tienen una identidad de secuencia deseada con la secuencia de nucleótidos para PRO1122 descrita en la figura 4 (SEC ID No: 4). Opcionalmente, la longitud de las sondas será de aproximadamente 20 a aproximadamente 50 bases. Las sondas de hibridación se pueden derivar de la secuencia de nucleótidos DNA62377-1381-1 de la SEC ID No: 4 tal como se muestra en la figura 4 o de las secuencias genómicas que incluyen promotores, elementos potenciadores e intrones de ADN que codifica PRO1122 de secuencia nativa. A modo de ejemplo, un procedimiento de cribado comprenderá el aislamiento de la región codificante del gen de PRO1122 utilizando la secuencia de ADN conocida para sintetizar una sonda seleccionada de aproximadamente 40 bases. Las sondas de hibridación se pueden marcar con una serie de marcadores, incluyendo radionucleótidos, tales como 32P o 35S, o marcadores enzimáticos, tales como fosfatasa alcalina acoplada a la sonda a través de los sistemas de acoplamiento avidina/biotina. Las sondas marcadas que tienen una secuencia complementaria a la del gen de PRO1122 de la presente invención se pueden utilizar para cribar bibliotecas de ADNc humano, ADN genómico o ARNm para determinar a qué miembros de dichas bibliotecas se hibrida la sonda. Las técnicas de hibridación se describen con mayor detalle en los siguientes Ejemplos. [0106] Cualquier secuencia EST descrita en la presente solicitud (o fragmento de la misma) se puede utilizar de forma similar como sondas, utilizando los procedimientos descritos en la presente invención. [0107] Entre otros fragmentos útiles de los ácidos nucleicos de PRO1122 se incluyen oligonucleótidos antisentido o sentido que comprenden una secuencia de ácidos nucleicos de cadena única (ARN o ADN) capaz de unirse a secuencias de ARNm de PRO1122 diana (sentido) o ADN de PRO1122 (antisentido). Los oligonucleótidos antisentido o sentido, según la presente invención, comprende un fragmento de la región codificante de ADN de PRO1122. Dicho fragmento comprende generalmente por lo menos aproximadamente 14 nucleótidos, preferiblemente de aproximadamente 14 a 30 nucleótidos. La capacidad de derivar un oligonucleótido antisentido o sentido, basado en una secuencia de ADNc que codifica una proteína determinada se describe en, por ejemplo, Stein y Cohen Cancer Res., 48:2659, 1988 y van der Krol et al., BioTechniques 6:958, 1988. [0108] La unión de oligonucleótidos sentido y antisentido a secuencias de ácidos nucleicos diana da lugar a la formación de cadenas dobles que bloquean la transcripción o la traducción de la secuencia diana mediante uno de los diferentes medios, que incluyen la degradación aumentada de las cadenas dobles, la terminación prematura de la transcripción o la traducción, o mediante cualquier otro medio. De este modo, los oligonucleótidos antisentido se pueden utilizar para bloquear la expresión de proteínas PRO1122. Los oligonucleótidos antisentido o sentido comprenden además oligonucleótidos que tienen esqueletos de azúcar-fosfodiéster modificados (u otras uniones a azúcares, tales como las descritas en WO 91/06629) y en los que dichas uniones a azúcares son resistentes a nucleasas endógenas. Dichos oligonucleótidos con uniones a azúcares resistentes son estables in vivo (es decir, capaces de resistir la degradación enzimática) pero mantienen la especificidad de secuencia para ser capaces de unirse a las secuencias de nucleótidos diana. [0109] Entre otros ejemplos de oligonucleótidos sentido o antisentido se incluyen aquellos nucleótidos que están unidos covalentemente a grupos orgánicos, tales como los descritos en WO 90/10048, y otros grupos que aumentan la afinidad del oligonucleótido por una secuencia de ácidos nucleicos diana, tal como poli-(L-lisina). Además, los agentes intercalantes, tales como elipticina, y agentes alquilantes o complejos metálicos se pueden unir a oligonucleótidos sentido o antisentido para modificar las especificidades de unión del oligonucleótido antisentido o sentido para la secuencia de nucleótidos diana. [0110] Los oligonucleótidos sentido o antisentido se pueden introducir en una célula que contiene la secuencia de ácidos nucleicos diana mediante cualquier procedimiento de transferencia de genes, incluyendo, por ejemplo, transfección de ADN mediada por CaPO4, electroporación, o mediante la utilización de vectores de transferencia de genes, tales como el virus Epstein-Barr. En un procedimiento preferido, un oligonucleótido antisentido o sentido se inserta en un vector retroviral adecuado. Una célula que contiene la secuencia de ácidos nucleicos diana se pone en contacto con el vector retroviral recombinante, in vivo o ex vivo. Entre los vectores retrovirales adecuados se incluyen, pero no se limitan a, los derivados de retrovirus murino M-MuLV, N2 (un retrovirus derivado de M-MuLV) o los vectores de copia doble designados como DCT5A, DCT5B y DCT5C (véase WO 90/13641). [0111] Los oligonucleótidos sentido o antisentido también se pueden introducir en una célula que contiene la secuencia de nucleótidos diana mediante la formación de un conjugado con una molécula de unión ligando, tal y como se describe en WO 91/04753. Entre las moléculas de unión ligando se incluyen, pero no se limitan a, receptores de la superficie de las células, factores de crecimiento, otras citoquinas, u otros ligandos que se unen a receptores de la superficie de las células. Preferiblemente, la conjugación de la molécula de unión ligando no interfiere sustancialmente con la capacidad de la molécula de unión ligando para unirse a su correspondiente molécula o receptor, ni bloquea la entrada del oligonucleótido sentido o antisentido o su versión conjugada en la célula. [0112] Alternativamente, un oligonucleótido sentido o antisentido se puede introducir en una célula que contiene la secuencia de ácidos nucleicos diana mediante la formación de un complejo oligonucleótido-lípido, tal y como se describe en WO 90/10448. El complejo oligonucleótido sentido o antisentido-lípido se disocia preferiblemente en el interior de la célula mediante una lipasa endógena. [0113] Las sondas también se pueden utilizar en técnicas de PCR para generar un grupo de secuencias para la identificación de secuencias de PRO1122 estrechamente relacionadas. [0114] Las secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido PRO1122 también se pueden utilizar para construir sondas de hibridación para mapear el gen que codifica el polipéptido PRO1122 y para el análisis genético de individuos con trastornos genéticos. Las secuencias de nucleótidos proporcionadas en la presente invención se pueden mapear a un cromosoma y regiones específicas de un cromosoma utilizando técnicas conocidas, tales como hibridación in situ, análisis de unión contra marcadores cromosómicos conocidos, y el cribado de hibridación con bibliotecas. [0115] Cuando las secuencias codificantes para PRO1122 codifican una proteína que se une a otra proteína (por ejemplo, cuando el polipéptido PRO1122 funciona como un receptor), el polipéptido PRO1122 se puede utilizar en ensayos para identificar las otras proteínas o moléculas implicadas en la interacción de unión. Mediante dichos procedimientos, se pueden identificar inhibidores de la interacción de unión receptor/ligando. Las proteínas implicadas en dichas interacciones de unión también se pueden utilizar para cribar inhibidores o agonistas de péptidos o moléculas pequeñas de la interacción de unión. Además, el receptor polipéptido PRO1122 se puede utilizar para aislar el ligando o ligando correlativos. Los ensayos de cribado se pueden diseñar para encontrar compuestos candidatos que imitan la actividad biológica de un PRO1122 nativo o un receptor para PRO1122. Dichos ensayos de cribado incluirán ensayos susceptibles de cribar con un alto rendimiento bibliotecas químicas, haciéndolos particularmente adecuados para identificar pequeñas moléculas como fármacos candidatos. Entre las pequeñas moléculas contempladas se incluyen compuestos orgánicos o inorgánicos sintéticos. Los ensayos se pueden realizar en una variedad de formatos, incluyendo ensayos de unión proteína-proteína, ensayos de cribado bioquímico, inmunoensayos y ensayos basados en células, que están bien caracterizados en la técnica. [0116] Los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido PRO1122 o cualquiera de sus formas modificadas también se pueden utilizar para generar animales no humanos transgénicos o animales no humanos “knock out” que, a su vez, son útiles en el desarrollo y cribado de reactivos terapéuticamente útiles. Un animal no humano transgénico (por ejemplo, un ratón o una rata) es un animal que tiene células que contienen un transgén, el cual se introdujo en el animal o en un antecesor del animal en estado prenatal, por ejemplo, una etapa embrionaria. Un transgén es un ADN que está integrado en el genoma de una célula de la que se desarrolla un animal transgénico. En una realización, el ADNc que codifica el polipéptido PRO1122 se puede utilizar para clonar ADN genómico que codifica PRO1122 según las técnicas establecidas y las secuencias genómicas utilizadas para generar animales transgénicos que contienen células que expresan ADN que codifica PRO1122. Los procedimientos para generar animales transgénicos, particularmente animales tales como ratones o ratas, se han convertido en convencionales en la técnica y se describen, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos Nos. 4.736.866 y 4.870.009. Habitualmente, se marcarían células concretas para la incorporación del transgén de PRO1122 con potenciadores específicos de tejido. Se pueden utilizar animales transgénicos que incluyen una copia de un transgén que codifica PRO1122 introducido en la línea germinal del animal en una etapa embrionaria, para examinar el efecto de la expresión aumentada de ADN que codifica PRO1122. Dichos animales se pueden utilizar como animales de prueba para reactivos pensados para conferir protección de, por ejemplo, condiciones patológicas asociadas con su sobreexpresión. Según este aspecto de la invención, el tratamiento de un animal con el reactivo y la reducción de la incidencia de la condición patológica, en comparación con animales no tratados que llevan el transgén, indicaría una intervención terapéutica potencial en la condición patológica. [0117] Alternativamente, se pueden utilizar homólogos no humanos de PRO1122 para construir un animal “knock out” con PRO1122 que tiene un gen defectuoso o alterado que codifica PRO1122 como resultado de la recombinación homóloga entre el gen endógeno que codifica PRO1122 y el ADN genómico alterado que codifica PRO1122 introducido en una célula embrionaria del animal. Por ejemplo, el ADNc que codifica PRO1122 se puede utilizar para clonar ADN genómico que codifica PRO1122 según las técnicas establecidas. Una parte del ADN genómico que codifica PRO1122 se puede eliminar o sustituir por otro gen, tal como un gen que codifica un marcador seleccionable que se puede utilizar para monitorizar la integración. Habitualmente, se incluyen en el vector varias kilobases de ADN flanqueante inalterado (en los extremos 5’ y 3’) [véase, por ejemplo, Thomas y Capecchi, Cell, 51:503 (1987) para una descripción de vectores de recombinación homólogos]. El vector se introduce en una línea de células madres embrionarias (por ejemplo, mediante electroporación) y se seleccionan las células en las que el ADN introducido se ha recombinado de manera homóloga con el ADN endógeno [véase, por ejemplo, Li et al., Cell, 69: 915 (1992)]. A continuación, se inyectan las células seleccionadas en un blastocito de un animal (por ejemplo, un ratón o una rata) para formar quimeras de agregación [véase, por ejemplo, Bradley, en Teratocarcinomas y Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), páginas 113-152]. A continuación, se puede implantar un embrión quimérico en un animal criado hembra pseudoembarazada adecuado y el embrión se lleva a término para crear un animal “knock out”. La progenie que alberga el ADN recombinado de forma homóloga en sus células germinales se puede identificar mediante técnicas estándar y utilizar para criar animales en los que todas las células del animal contienen el ADN recombinado de forma homóloga. Los animales knock out se pueden caracterizar, por ejemplo, por su capacidad de defenderse contra ciertas condiciones patológicas y por su desarrollo de condiciones patológicas debido a la ausencia del polipéptido PRO 1122. [0118] El ácido nucleico que codifica los polipéptidos PRO1122 también se pueden utilizar en terapia génica. En aplicaciones de terapia génica, los genes se introducen en células para conseguir la síntesis in vivo de un producto genético terapéuticamente eficaz, por ejemplo, para la sustitución de un gen defectuoso. La “terapia génica” incluye tanto la terapia génica convencional en la que se consigue un efecto duradero mediante un único tratamiento, como la administración de agentes terapéuticos génicos, que implica la administración de una vez o repetitiva de un ADN o ARNm terapéuticamente eficaz. Se pueden utilizar los ADNs y ARNs antisentido como agentes terapéuticos para bloquear la expresión de ciertos genes in vivo. También se ha observado que los oligonucleótidos antisentido cortos se pueden importar en células en las que actúan como inhibidores, a pesar de sus bajas concentraciones intracelulares causadas por su captación limitada por la membrana celular. (Zamecnik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:4143-4146 [1986]). Los oligonucleótidos se pueden modificar para aumentar su captación, por ejemplo, mediante la sustitución de sus grupos diéster cargados negativamente por grupos no cargados. [0119] Existe una variedad de técnicas disponibles para introducir ácidos nucleicos en células viables. Las técnicas varían dependiendo si el ácido nucleico se transfiere en células cultivadas in vitro, o in vivo en las células del huésped deseado. Las técnicas adecuadas para la transferencia de ácido nucleico en células de mamíferos in vitro incluyen la utilización de liposomas, electroporación, microinyección, fusión celular, DEAE-dextrano, el procedimiento de precipitación con fosfato cálcico, etc. Entre las técnicas de transferencia génica in vivo preferidas actualmente se incluyen la transfección con vectores virales (habitualmente retrovirales) y la transfección mediada por liposoma-proteínas de cubierta viral (Dzau et al., Trends in Biotechnology 11, 205210 [1993]). En algunas situaciones, es deseable proporcionar la fuente de ácidos nucleicos con un agente que marca las células diana, tales como un anticuerpo específico para una proteína de membrana de superficie de la célula o la célula diana, un ligando para un receptor en las células diana, etc. Cuando se utilizan liposomas, se pueden utilizar proteínas que se unen a una proteína de membrana de superficie de la célula asociada con endocitosis para dirigir y/o facilitar la captación, por ejemplo, proteínas de la cápside o fragmentos de las mismas trópicas para un tipo de célula concreta, anticuerpos para proteínas que experimentan internalización en el ciclado, proteínas que dirigen la localización intracelular y el aumento de la vida media intracelular. La técnica de la endocitosis mediada por receptor se describe en, por ejemplo, Wu et al., J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); y Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990). Para una revisión de los protocolos de marcaje génico y terapia génica, véase Anderson et al., Science 256, 808-813 (1992). [0120] Los polipéptidos PRO1122 descritos en la presente invención también se pueden utilizar como marcadores del peso molecular para electroforesis de proteínas. E. Uses for PRO1122 [0104] Nucleotide sequences (or their complementary) encoding PRO1122 polypeptides have several applications in the discipline of molecular biology, including uses such as hybridization probes, chromosome and gene mapping and generation of RNA and antisense DNA. The nucleic acid encoding PRO1122 will also be useful for the preparation of PRO1122 polypeptides by the recombinant techniques described in the present invention. [0105] The DNA62377-1381-1 full length nucleotide sequence (SEQ ID No: 4) or the nucleotide sequence encoding native and full length PRO1122 sequence, or portions thereof, can be used as hybridization probes for a cDNA library to isolate the full-length PRO1122 gene or to isolate even other genes (eg, those encoding natural variants of PRO1122 or the same from other species) that have a desired sequence identity with the nucleotide sequence for PRO1122 described in Figure 4 (SEQ ID No: 4). Optionally, the length of the probes will be from about 20 to about 50 bases. Hybridization probes may be derived from the nucleotide sequence DNA62377-1381-1 of SEQ ID No: 4 as shown in Figure 4 or from genomic sequences that include promoters, enhancer elements and introns of DNA encoding PRO1122 of native sequence. By way of example, a screening method will comprise isolation of the coding region of the PRO1122 gene using the known DNA sequence to synthesize a selected probe of approximately 40 bases. Hybridization probes can be labeled with a series of markers, including radionuclides, such as 32P or 35S, or enzymatic markers, such as alkaline phosphatase coupled to the probe through the avidin / biotin coupling systems. Labeled probes that have a sequence complementary to that of the PRO1122 gene of the present invention can be used to screen libraries of human cDNA, genomic DNA or mRNA to determine to which members of said libraries the probe hybridizes. Hybridization techniques are described in more detail in the following Examples. [0106] Any EST sequence described in the present application (or fragment thereof) can similarly be used as probes, using the procedures described in the present invention. [0107] Other useful fragments of the PRO1122 nucleic acids include antisense or sense oligonucleotides comprising a single chain nucleic acid sequence (RNA or DNA) capable of binding to target (sense) mRNA sequences of PRO1122 or sense DNA. PRO1122 (antisense). The antisense or sense oligonucleotides, according to the present invention, comprise a fragment of the DNA coding region of PRO1122. Said fragment generally comprises at least about 14 nucleotides, preferably from about 14 to 30 nucleotides. The ability to derive an antisense or sense oligonucleotide, based on a cDNA sequence encoding a given protein is described in, for example, Stein and Cohen Cancer Res., 48: 2659, 1988 and van der Krol et al., BioTechniques 6 : 958, 1988. [0108] The binding of sense and antisense oligonucleotides to target nucleic acid sequences results in the formation of double strands that block transcription or translation of the target sequence by one of the different means, which include the increased degradation of double chains, premature termination of transcription or translation, or by any other means. Thus, antisense oligonucleotides can be used to block the expression of PRO1122 proteins. The antisense or sense oligonucleotides further comprise oligonucleotides having modified sugar-phosphodiester skeletons (or other sugar bonds, such as those described in WO 91/06629) and in which said sugar bonds are resistant to endogenous nucleases. Such oligonucleotides with binding to resistant sugars are stable in vivo (ie, capable of resisting enzymatic degradation) but maintain sequence specificity to be able to bind to target nucleotide sequences. [0109] Other examples of sense or antisense oligonucleotides include those nucleotides that are covalently linked to organic groups, such as those described in WO 90/10048, and other groups that increase the affinity of the oligonucleotide for a target nucleic acid sequence, such as poly- (L-lysine). In addition, intercalating agents, such as ellipticin, and alkylating agents or metal complexes can be linked to sense or antisense oligonucleotides to modify the binding specificities of the antisense or sense oligonucleotide for the target nucleotide sequence. [0110] Sense or antisense oligonucleotides may be introduced into a cell containing the target nucleic acid sequence by any gene transfer method, including, for example, CaPO4-mediated DNA transfection, electroporation, or by the use of vectors gene transfer, such as the Epstein-Barr virus. In a preferred method, an antisense or sense oligonucleotide is inserted into a suitable retroviral vector. A cell containing the target nucleic acid sequence is contacted with the recombinant retroviral vector, in vivo or ex vivo. Suitable retroviral vectors include, but are not limited to, murine retrovirus derivatives M-MuLV, N2 (a retrovirus derived from M-MuLV) or double copy vectors designated as DCT5A, DCT5B and DCT5C (see WO 90 / 13641). [0111] Sense or antisense oligonucleotides can also be introduced into a cell that contains the target nucleotide sequence by forming a conjugate with a ligand binding molecule, as described in WO 91/04753. Ligand binding molecules include, but are not limited to, cell surface receptors, growth factors, other cytokines, or other ligands that bind to cell surface receptors. Preferably, the conjugation of the ligand binding molecule does not substantially interfere with the ability of the ligand binding molecule to bind to its corresponding molecule or receptor, nor does it block the entry of the sense or antisense oligonucleotide or its conjugated version into the cell. [0112] Alternatively, a sense or antisense oligonucleotide can be introduced into a cell that contains the target nucleic acid sequence by forming an oligonucleotide-lipid complex, as described in WO 90/10448. The sense or antisense-lipid oligonucleotide complex is preferably dissociated inside the cell by an endogenous lipase. [0113] The probes can also be used in PCR techniques to generate a group of sequences for the identification of closely related sequences of PRO1122. [0114] Nucleotide sequences encoding a PRO1122 polypeptide can also be used to construct hybridization probes to map the gene encoding the PRO1122 polypeptide and for the genetic analysis of individuals with genetic disorders. The nucleotide sequences provided in the present invention can be mapped to a chromosome and specific regions of a chromosome using known techniques, such as in situ hybridization, binding analysis against known chromosomal markers, and hybridization screening with libraries. [0115] When the sequences encoding PRO1122 encode a protein that binds to another protein (for example, when the PRO1122 polypeptide functions as a receptor), the PRO1122 polypeptide can be used in assays to identify the other proteins or molecules involved in the union interaction. By such procedures, inhibitors of receptor / ligand binding interaction can be identified. The proteins involved in such binding interactions can also be used to screen inhibitors or agonists of peptides or small molecules of the binding interaction. In addition, the PRO1122 polypeptide receptor can be used to isolate the correlative ligand or ligand. Screening assays can be designed to find candidate compounds that mimic the biological activity of a native PRO1122 or a receptor for PRO1122. Such screening assays will include assays capable of screening high performance chemical libraries, making them particularly suitable for identifying small molecules as candidate drugs. Small molecules contemplated include synthetic organic or inorganic compounds. The assays can be performed in a variety of formats, including protein-protein binding assays, biochemical screening assays, immunoassays and cell-based assays, which are well characterized in the art. [0116] Nucleic acids encoding the PRO1122 polypeptide or any of its modified forms can also be used to generate transgenic non-human animals or "knock out" non-human animals which, in turn, are useful in the development and screening of reagents therapeutically useful. A transgenic non-human animal (for example, a mouse or a rat) is an animal that has cells that contain a transgene, which was introduced into the animal or an ancestor of the animal in a prenatal state, for example, an embryonic stage. A transgene is a DNA that is integrated into the genome of a cell from which a transgenic animal develops. In one embodiment, the cDNA encoding the PRO1122 polypeptide can be used to clone genomic DNA encoding PRO1122 according to established techniques and genomic sequences used to generate transgenic animals that contain cells that express DNA encoding PRO1122. Methods for generating transgenic animals, particularly animals such as mice or rats, have become conventional in the art and are described, for example, in US Pat. Nos. 4,736,866 and 4,870,009. Typically, specific cells would be labeled for incorporation of the PRO1122 transgene with tissue specific enhancers. Transgenic animals that include a copy of a transgene encoding PRO1122 introduced into the germ line of the animal at an embryonic stage can be used to examine the effect of increased expression of DNA encoding PRO1122. Such animals can be used as test animals for reagents intended to confer protection from, for example, pathological conditions associated with their overexpression. According to this aspect of the invention, the treatment of an animal with the reagent and the reduction of the incidence of the pathological condition, in comparison with untreated animals carrying the transgene, would indicate a potential therapeutic intervention in the pathological condition. [0117] Alternatively, non-human homologues of PRO1122 can be used to construct a knock out animal with PRO1122 that has a defective or altered gene encoding PRO1122 as a result of homologous recombination between the endogenous gene encoding PRO1122 and genomic DNA. altered encoding PRO1122 introduced into an embryonic cell of the animal. For example, cDNA encoding PRO1122 can be used to clone genomic DNA encoding PRO1122 according to established techniques. A part of the genomic DNA encoding PRO1122 can be deleted or replaced by another gene, such as a gene encoding a selectable marker that can be used to monitor integration. Usually, several kilobases of unchanged flanking DNA (at the 5 'and 3' ends) are included in the vector [see, for example, Thomas and Capecchi, Cell, 51: 503 (1987) for a description of homologous recombination vectors] . The vector is introduced into an embryonic stem cell line (for example, by electroporation) and the cells in which the introduced DNA has been homologously recombined with the endogenous DNA are selected [see, for example, Li et al., Cell, 69: 915 (1992)]. Next, the selected cells are injected into an animal's blast (for example, a mouse or a rat) to form aggregation chimeras [see, for example, Bradley, in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, EJ Robertson , ed. (IRL, Oxford, 1987), pages 113-152]. Next, a chimeric embryo can be implanted in a suitable pseudo-pregnant female raised animal and the embryo is completed to create a knock out animal. The progeny that houses homologously recombined DNA in its germ cells can be identified by standard techniques and used to raise animals in which all cells of the animal contain homologously recombined DNA. Knock out animals can be characterized, for example, by their ability to defend against certain pathological conditions and by their development of pathological conditions due to the absence of the PRO 1122 polypeptide. [0118] The nucleic acid encoding PRO1122 polypeptides can also be Use in gene therapy. In gene therapy applications, genes are introduced into cells to achieve in vivo synthesis of a therapeutically effective genetic product, for example, for the replacement of a defective gene. "Gene therapy" includes both conventional gene therapy in which a lasting effect is achieved by a single treatment, such as the administration of gene therapeutic agents, which involves the once or repetitive administration of a therapeutically effective DNA or mRNA. Antisense DNAs and RNAs can be used as therapeutic agents to block the expression of certain genes in vivo. It has also been observed that short antisense oligonucleotides can be imported into cells in which they act as inhibitors, despite their low intracellular concentrations caused by their limited uptake by the cell membrane. (Zamecnik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4143-4146 [1986]). The oligonucleotides can be modified to increase their uptake, for example, by replacing their negatively charged diester groups with uncharged groups. [0119] A variety of techniques are available to introduce nucleic acids into viable cells. The techniques vary depending on whether the nucleic acid is transferred in cells grown in vitro, or in vivo in the cells of the desired host. Suitable techniques for the transfer of nucleic acid in mammalian cells in vitro include the use of liposomes, electroporation, microinjection, cell fusion, DEAE-dextran, the calcium phosphate precipitation procedure, etc. Currently preferred in vivo gene transfer techniques include transfection with viral vectors (usually retroviral) and liposome-mediated transfection of viral envelope proteins (Dzau et al., Trends in Biotechnology 11, 205210 [1993]). In some situations, it is desirable to provide the source of nucleic acids with an agent that targets the target cells, such as an antibody specific for a cell surface membrane protein or the target cell, a ligand for a receptor in the target cells. , etc. When liposomes are used, proteins that bind to a cell surface membrane protein associated with endocytosis can be used to direct and / or facilitate uptake, for example, capsid proteins or fragments of the same tropics for one type. of a specific cell, antibodies to proteins that undergo cyclic internalization, proteins that direct intracellular localization and increased intracellular half-life. The technique of receptor-mediated endocytosis is described in, for example, Wu et al., J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); and Wagner et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990). For a review of the gene labeling and gene therapy protocols, see Anderson et al., Science 256, 808-813 (1992). [0120] The PRO1122 polypeptides described in the present invention can also be used as molecular weight markers for protein electrophoresis.

[0121] Las moléculas de ácidos nucleicos que codifica los polipéptidos PRO1122 o fragmentos de las mismas descritas en las presente invención son útiles para la identificación de cromosomas. En este aspecto, existe una necesidad actual para identificar nuevos marcadores de cromosomas, ya que actualmente hay disponibles relativamente pocos reactivos marcadores de cromosomas, en base a los datos reales de secuencias disponibles. Cada molécula de ácido nucleico de PRO1122 de la presente invención se puede utilizar como marcador de cromosomas. [0122] Los polipéptidos PRO1122 y las moléculas de ácidos nucleicos también se pueden utilizar para la caracterización de tejidos, donde los polipéptidos PRO1122 se pueden expresar diferencialmente en un tejido en comparación con otro. Las moléculas de ácidos nucleicos de PRO1122 se utilizarán para generar sondas para PCR, análisis Northern, análisis Southern y análisis Western. [0123] Los polipéptidos PRO1122 también que poseen actividad biológica en relación con la de IL-17 se pueden utilizar in vivo con fines terapéuticos e in vitro. Los expertos en la materia sabrán cómo utilizar los polipéptidos PRO1122 para dichos objectivos. [0124] PRO1122 se puede utilizar en ensayos con los polipéptidos con los que tiene identidad para determinar las actividades relativas. Por consiguiente, los resultados se pueden aplicar. [0125] La alineación de la secuencia de aminoácidos prevista de IL-17B (por ejemplo, UNQ516) (SEC ID No: 1) y IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) con la secuencia conocida de IL-17 (SEC ID No: 11) muestra que ésta es una familia de secuencias relacionadas con una identidad de aminoácidos del 26-28% entre los tres miembros (figura 7). Los tres polipéptidos contienen una secuencia hidrofóbica en el extremo N-terminal que se espera que funcione como secuencia señal secretora de 18-20 aminoácidos, dando una rango de tamaño previsto para los miembros de esta familia de 155 a 197 aminoácidos (PM maduro de 17 a 20 kDa). La alineación de la figura 7 muestra varios aminoácidos conservados, incluyendo un residuo de triptófano y 5 cisteínas en el extremo C-terminal de la mitad de proteínas. [0126] El ácido nucleico que codifica PRO1122 o fragmentos del mismo también se puede utilizar para localizaciones cromosómicas. Por ejemplo, la localización cromosómica de IL-17B (UNQ516 (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561 (SEC ID No: 3) se determinó utilizando cebadores Taqman y sondas diseñadas en las regiones 3’ no traducidas de la IL-17B e IL-17C, se realizó mediante PCR con un panel Stanford Radiation Hybrid Panel G3. La IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) se mapeó en el cromosoma humano 5q32-34, mientras que IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) se localizó en el cromosoma 16q24. El propio IL-17 humano se halló en el cromosoma 2q31. Rouvier et al, M Immunol. 150: 5445 (1993). [0127] Con el aislamiento y la caracterización de los dos nuevos parientes de IL-17, los Solicitantes han establecido y expandido el papel potencial de esta familia de citoquinas que pueden jugar en las respuestas inmune proinflamatoria y otras respuestas. Los tres miembros de la familia, IL-17 (SEC ID No: 11), IL-17B (SEC ID No: 1) e IL-17C (SEC ID No: 3) están relacionados modestamente en la estructura primaria con aproximadamente un 27% de identidad global de aminoácidos incluyendo 5 residuos de cisteína conservados (figura 7). Los tres miembros de la familia comparten un conjunto de características – tienen una longitud de 150-200 residuos de aminoácidos, se secretan de las células a través de una secuencia señal de secreción hidrofóbica, y se expresan como homodímeros unidos a disulfuro que en algunos casos parecen estar glicosilados. [0128] Aunque los miembros de la misma familia de genes se basan en la similitud de la secuencia de aminoácidos, las tres proteínas se expresan en tejidos diferentes y están dispersadas en el genoma. Se ha observado la expresión de IL-17 (SEC ID NO: 11) sólo en células T activadas, Fossiez et al., J Exp. Med. 183: 2593 (1996), Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) [Yao-3], mientras que en la presente invención se demuestra que IL-17B (DNA59294 (SEC ID No: 2) se expresa en el páncreas, intestino delgado y estómago normales de un humano adulto (figura 8). Sin embargo, el patrón de expresión de IL-17C (DNA62377) (SEC ID No: 4) es mucho más limitado, ya que la expresión confirmada en otros tejidos no se ha descubierto aún. [0129] Las caracterizaciones descritas en la presente invención demuestran que las actividades biológicas de IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) y IL17-C (UNQ561) (SEC ID No: 3) son considerablemente diferentes de las actividades establecidas para IL-17 (SEC ID No: 11). La IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) no consiguen ninguna inducir la producción de IL-6 en fibroblastos de prepucio humano (Ejemplo 10) (Figura 9A). Esto contrasta con la notable inducción conocida para IL-17 (SEC ID No: 11). Yao et al., Immunity 3:811 (1995) [Yao-1]. Yao et al., J. immunol. 155: 5483 (1995) [Yao-3]. En cambio, IL-17B (SEC ID No: 1) e IL-17C (SEC ID NO: 3) inducen cada una la liberación de TNF- de la línea celular monolítica, THP-1, mientras que IL-17 tiene sólo un efecto muy pequeño (figura 9B). La liberación estimulada de TNF- en células THP-1 por IL-17B (SEC ID No: 1) e IL17C (SEC ID No: 3) es dependiente del tiempo y la concentración, (ejemplo 10) (figura 10), siendo IL-17B (SEC ID No: 1) aproximadamente 10 veces más potente que IL-17C (SEC ID No: 3) [EC50 = 2,4 nM para IL-17B frente a 25 nM para IL-17C]. [0130] Los diferentes efectos biológicos de IL-17 (SEC ID No: 11) en comparación con IL-17B o C (SEC ID Nos: 1 y 3) sugiere que pueden actuar a través de un receptor de superficie celular diferente (o algunos componentes del receptor que difieren) del receptor IL-17 conocido. Yao et al., Cytokine 9:794 (1997) [Yao-3]. En un esfuerzo por examinar directamente la cuestión de la especificidad del receptor, los Solicitantes han demostrado que tanto IL-17B (SEC ID No: 1) como IL-17C (SEC ID No: 3) no consiguen unirse al ECD del receptor de IL-17 (SEC ID No: 16) (figura 11A) y tampoco consiguen competir por la unión de IL-17 (SEC ID No: 11) a su ECD del receptor (SEC ID No: 16) (figura 11B). IL-17B (SEC ID No: 1) y IL-17C (SEC ID No: 3) se unen a la superficie de células THP-1 cuando tienen actividad (figura 12). La interacción es específica por lo menos hasta el grado de que una proteína de fusión Fc de control no consigue unirse a estas células. Los resultados sugieren que podría haber un grupo de receptores que se unen y transducen la señal de la familia de citoquinas IL-17, un modelo receptor/ligando que se ha hallado para muchas familias de citoquinas y factores de crecimiento. [0131] Las citoquinas nuevas descritas en la presente invención, PRO1031 (por ejemplo, 516) y PRO1122 (por ejemplo, UNQ561), difieren de IL-17 (SEC ID NO: 11) en sus patrones de expresión y actividades biológicas. La expresión diferencial acoplada con la falta de interacción con el receptor de IL-17 sugiere un papel extenso para la familia IL-17 en la respuesta inmune proinflamatoria. [0121] Nucleic acid molecules encoding PRO1122 polypeptides or fragments thereof described in the present invention are useful for chromosome identification. In this regard, there is a current need to identify new chromosome markers, since relatively few chromosome marker reagents are currently available, based on the actual available sequence data. Each PRO1122 nucleic acid molecule of the present invention can be used as a chromosome marker. [0122] PRO1122 polypeptides and nucleic acid molecules can also be used for tissue characterization, where PRO1122 polypeptides can be differentially expressed in one tissue compared to another. PRO1122 nucleic acid molecules will be used to generate probes for PCR, Northern analysis, Southern analysis and Western analysis. [0123] PRO1122 polypeptides also possessing biological activity in relation to that of IL-17 can be used in vivo for therapeutic purposes and in vitro. Those skilled in the art will know how to use PRO1122 polypeptides for such purposes. [0124] PRO1122 can be used in assays with the polypeptides with which it has identity to determine relative activities. Therefore, the results can be applied. [0125] The alignment of the expected amino acid sequence of IL-17B (for example, UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) with the known sequence of IL-17 (SEQ ID No: 11) shows that this is a family of sequences related to an amino acid identity of 26-28% among the three members (Figure 7). All three polypeptides contain a hydrophobic sequence at the N-terminal end that is expected to function as a secretory signal sequence of 18-20 amino acids, giving a size range intended for members of this family of 155 to 197 amino acids (mature PM of 17 at 20 kDa). The alignment of Figure 7 shows several conserved amino acids, including a tryptophan residue and 5 cysteines at the C-terminal end of half the proteins. [0126] Nucleic acid encoding PRO1122 or fragments thereof can also be used for chromosomal locations. For example, the chromosomal localization of IL-17B (UNQ516 (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561 (SEQ ID No: 3) was determined using Taqman primers and probes designed in the 3 'untranslated regions of the IL -17B and IL-17C, was performed by PCR with a Stanford Radiation Hybrid Panel G3 panel.The IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) was mapped on the human chromosome 5q32-34, while IL-17C ( UNQ561) (SEQ ID No: 3) was located on chromosome 16q24. Human IL-17 itself was found on chromosome 2q31 Rouvier et al, M Immunol. 150: 5445 (1993). [0127] With isolation and The characterization of the two new relatives of IL-17, the Requesters have established and expanded the potential role of this family of cytokines that can play in proinflammatory immune responses and other responses.The three family members, IL-17 (SEC ID No: 11), IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID No: 3) are modestly related in the primary structure with approximately 2 7% global amino acid identity including 5 conserved cysteine residues (Figure 7). The three members of the family share a set of characteristics - they are 150-200 amino acid residues long, are secreted from the cells through a hydrophobic secretion signal sequence, and are expressed as disulfide-bound homodimers that in some cases They seem to be glycosylated. [0128] Although members of the same family of genes are based on the similarity of the amino acid sequence, all three proteins are expressed in different tissues and are dispersed in the genome. The expression of IL-17 (SEQ ID NO: 11) has been observed only in activated T cells, Fossiez et al., J Exp. Med. 183: 2593 (1996), Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) [Yao-3], while the present invention demonstrates that IL-17B (DNA59294 (SEQ ID No: 2) is expressed in the normal pancreas, small intestine and stomach of an adult human (Figure 8) However, the expression pattern of IL-17C (DNA62377) (SEQ ID No: 4) is much more limited, since confirmed expression in other tissues has not yet been discovered. [0129] The characterizations described in The present invention demonstrates that the biological activities of IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL17-C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) are considerably different from the activities established for IL-17 (SEQ ID No: 11) IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) fail to induce the production of IL-6 in human foreskin fibroblasts (Example 10) (Figure 9A) This contrasts with the notable induction known for IL-17 (SEQ ID No: 11) Yao et al., Immunity 3: 811 (1995) [Yao-1]. Yao et al., J immunol. 155: 5483 (1995) [Ya o-3] In contrast, IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID NO: 3) each induce the release of TNF- from the monolithic cell line, THP-1, while IL-17 has only a very small effect (Figure 9B). The stimulated release of TNF- in THP-1 cells by IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL17C (SEQ ID No: 3) is time and concentration dependent (example 10) (Figure 10), being IL-17B (SEQ ID No: 1) approximately 10 times more potent than IL-17C (SEQ ID No: 3) [EC50 = 2.4 nM for IL-17B versus 25 nM for IL-17C]. [0130] The different biological effects of IL-17 (SEQ ID No: 11) compared to IL-17B or C (SEQ ID Nos: 1 and 3) suggests that they may act through a different cell surface receptor (or some components of the receptor that differ) from the known IL-17 receptor. Yao et al., Cytokine 9: 794 (1997) [Yao-3]. In an effort to directly examine the issue of receptor specificity, Applicants have demonstrated that both IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID No: 3) fail to join the ECD of the IL receptor -17 (SEQ ID No: 16) (figure 11A) and also fail to compete for the binding of IL-17 (SEQ ID No: 11) to its receiver ECD (SEQ ID No: 16) (figure 11B). IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID No: 3) bind to the surface of THP-1 cells when they are active (Figure 12). The interaction is specific at least to the extent that a control Fc fusion protein fails to bind to these cells. The results suggest that there could be a group of receptors that bind and transduce the signal from the IL-17 cytokine family, a receptor / ligand model that has been found for many families of cytokines and growth factors. [0131] The new cytokines described in the present invention, PRO1031 (for example, 516) and PRO1122 (for example, UNQ561), differ from IL-17 (SEQ ID NO: 11) in their expression patterns and biological activities. Differential expression coupled with the lack of interaction with the IL-17 receptor suggests an extensive role for the IL-17 family in the proinflammatory immune response.

F. Anticuerpos anti-PRO1122 F. Anti-PRO1122 antibodies

[0132] La presente descripción utiliza anticuerpos anti-polipéptido PRO1122. Entre los anticuerpos de ejemplo se incluyen anticuerpos policlonales, monoclonales, humanizados, biespecíficos y heteroconjugados. [0132] The present description uses PRO1122 anti-polypeptide antibodies. Exemplary antibodies include polyclonal, monoclonal, humanized, bispecific and heteroconjugate antibodies.

1. Anticuerpos policlonales 1. Polyclonal antibodies

[0133] Los anticuerpos anti-PRO1122 utilizados en la presente descripción pueden comprender anticuerpos policlonales. Los procedimientos de preparación de anticuerpos policlonales son conocidos para el experto en la materia. Los anticuerpos policlonales se pueden desarrollar en un mamífero, por ejemplo, mediante una o más inyecciones de un agente inmunizante y, si se desea, un adyuvante. Habitualmente, el agente inmunizante y/o adyuvante se inyectarán en el mamífero mediante inyecciones múltiples subcutáneas o intraperitoneales. El agente inmunizante puede incluir el polipéptido PRO1122 o una proteína de fusión del mismo. Puede ser útil conjugar el agente inmunizante para una proteína que se sabe que es inmunogénica en el mamífero que se inmuniza. Entre los ejemplos de dichas proteínas inmunogénicas se incluyen, pero no se limitan a hemocianina de la lapa californiana, albúmina de suero, tiroglobulina bovina, e inhibidor de tripsina de soja. Entre los ejemplos de adyuvantes se pueden utilizar se incluyen el adyuvante completo de Freund y el adyuvante MPLTDM (monofosforil Lípido A, dicorinomicolato de trehalosa sintético). El protocolo de inmunización se puede seleccionar por un experto en la materia sin una gran experimentación. [0133] The anti-PRO1122 antibodies used in the present description may comprise polyclonal antibodies. Methods of preparing polyclonal antibodies are known to the person skilled in the art. Polyclonal antibodies can be developed in a mammal, for example, by one or more injections of an immunizing agent and, if desired, an adjuvant. Usually, the immunizing agent and / or adjuvant will be injected into the mammal by multiple subcutaneous or intraperitoneal injections. The immunizing agent may include the PRO1122 polypeptide or a fusion protein thereof. It may be useful to conjugate the immunizing agent for a protein known to be immunogenic in the mammal that is immunized. Examples of such immunogenic proteins include, but are not limited to Californian limpet hemocyanin, serum albumin, bovine thyroglobulin, and soy trypsin inhibitor. Examples of adjuvants can be used include Freund's complete adjuvant and MPLTDM adjuvant (monophosphoryl lipid A, synthetic trehalose dichlorinomycolate). The immunization protocol can be selected by a person skilled in the art without extensive experimentation.

2. Anticuerpos monoclonales 2. Monoclonal antibodies

[0134] Los anticuerpos anti-PRO1122 pueden ser, alternativamente, anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar utilizando procedimientos de hibridoma, tales como los descritos por Kohler y Milstein, Nature, [0134] Anti-PRO1122 antibodies may alternatively be monoclonal antibodies. Monoclonal antibodies can be prepared using hybridoma methods, such as those described by Kohler and Milstein, Nature,

256: 495 (1975). En un procedimiento de hibridoma, se inmuniza habitualmente un ratón, un hámster u otro animal huésped apropiado con un agente inmunizante para obtener linfocitos que producen o son capaces de producir anticuerpos que se unirán específicamente al agente inmunizante. Alternativamente, los linfocitos se pueden inmunizar in vitro. [0135] El agente inmunizante incluirá habitualmente el polipéptido PRO1122 o una proteína de fusión del mismo. Generalmente, se utilizan linfocitos de sangre periférica (“PLBs”) si se desean células de origen humano, o células de bazo o se utilizan células de nódulos linfáticos si se desean fuentes de mamíferos no humanos. A continuación, los linfocitos se fusionan con una línea celular inmortalizada utilizando un agente de fusión adecuado, tal como polietilenglicol, para formar una célula de hibridoma [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academia Press, (1986), páginas 59-103]. Las líneas celulares inmortalizadas son habitualmente células de mamífero transformadas, particularmente células de mieloma de origen roedor, bovino y humano. Habitualmente, se utilizan líneas celulares de mieloma de rata o ratón. Las células de hibridoma se pueden cultivar en un medio de cultivo adecuado que preferiblemente contiene una o más sustancias que inhiben el crecimiento o la supervivencia de las células inmortalizadas no fusionadas. Por ejemplo, si las células parentales carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT 256: 495 (1975). In a hybridoma procedure, a mouse, hamster or other appropriate host animal is usually immunized with an immunizing agent to obtain lymphocytes that produce or are capable of producing antibodies that will specifically bind to the immunizing agent. Alternatively, lymphocytes can be immunized in vitro. [0135] The immunizing agent will usually include the PRO1122 polypeptide or a fusion protein thereof. Generally, peripheral blood lymphocytes ("PLBs") are used if cells of human origin, or spleen cells, or lymph node cells are used if sources of non-human mammals are desired. The lymphocytes are then fused with an immortalized cell line using a suitable fusion agent, such as polyethylene glycol, to form a hybridoma cell [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academia Press, (1986), pages 59-103 ]. Immortalized cell lines are usually transformed mammalian cells, particularly myeloma cells of rodent, bovine and human origin. Typically, rat or mouse myeloma cell lines are used. Hybridoma cells can be cultured in a suitable culture medium that preferably contains one or more substances that inhibit the growth or survival of non-fused immortalized cells. For example, if parental cells lack the enzyme hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT

o HPRT), el medio de cultivo para los hibridomas incluirá habitualmente hipoxantina, aminopterina y timidina (“medio HAT”), cuyas sustancias evitan el crecimiento de células deficientes en HGPRT. [0136] Las líneas celulares inmortalizadas preferidas son aquéllas que se fusionan de manera eficaz, soportan un nivel de expresión elevado estable del anticuerpo por las células productoras de anticuerpos seleccionadas, y son sensibles a un medio tal como medio HAT. Las líneas celulares inmortalizadas más preferidas son líneas de mieloma murino, que se pueden obtener, por ejemplo, del Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California y la American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. También se han descrito líneas celulares de mieloma humano y heteromieloma de ratón-humano para la producción de anticuerpos monoclonales humanos [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, (1987) páginas, 51-63]. [0137] A continuación, en el medio de cultivo en el que las células de hibridoma se cultivan se puede ensayar la presencia de anticuerpos monoclonales dirigidos contra un polipéptido PRO1122. Preferiblemente, la especificidad de unión de anticuerpos monoclonales producidos por las células de hibridoma se determina mediante inmunoprecipitación o mediante un ensayo de unión in vitro, tal como radioinmunoensayo (RIA) o ensayo inmunoabsorbente unido a enzima (ELISA). Dichas técnicas y ensayos se conocen en la técnica. La afinidad de unión del anticuerpo monoclonal se puede determinar, por ejemplo, mediante el análisis Scatchard de Munson y Pollard, Anal. Biochem., 107: 220 (1980). [0138] Después de identificar las células de hibridoma deseadas, los clones se pueden subclonar limitando los procedimientos de dilución y se pueden desarrollar mediante procedimientos estándar [Goding, supra]. Entre los medios de cultivo adecuados para este objetivo se incluyen, por ejemplo, medio de Eagle modificado por Dulbecco y medio RPMI-1640. Alternativamente, las células de hibridoma se pueden desarrollar in vivo como ascitis en un mamífero. [0139] Los anticuerpos monoclonales secretados por los subclones se pueden aislar o purificar del medio de cultivo o fluido de ascitis mediante procedimientos de purificación de inmunoglobulina convencionales, tales como, por ejemplo, proteína Asefarosa, cromatografía en hidroxilapatito, eletroforesis en gel, diálisis, o cromatografía de afinidad. or HPRT), the culture medium for hybridomas will usually include hypoxanthine, aminopterin and thymidine ("HAT medium"), whose substances prevent the growth of HGPRT-deficient cells. [0136] Preferred immortalized cell lines are those that efficiently fuse, support a stable high level of antibody expression by the selected antibody producing cells, and are sensitive to a medium such as HAT medium. The most preferred immortalized cell lines are murine myeloma lines, which can be obtained, for example, from the Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California and the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. Human myeloma and mouse-human heteromyeloma cell lines have also been described for the production of human monoclonal antibodies [Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pages, 51-63]. [0137] Next, in the culture medium in which the hybridoma cells are cultured, the presence of monoclonal antibodies directed against a PRO1122 polypeptide can be tested. Preferably, the binding specificity of monoclonal antibodies produced by the hybridoma cells is determined by immunoprecipitation or by an in vitro binding assay, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Such techniques and tests are known in the art. The binding affinity of the monoclonal antibody can be determined, for example, by the Scatchard analysis of Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107: 220 (1980). [0138] After identifying the desired hybridoma cells, the clones can be subcloned by limiting dilution procedures and can be developed by standard procedures [Goding, supra]. Suitable culture media for this purpose include, for example, Eagle medium modified by Dulbecco and RPMI-1640 medium. Alternatively, hybridoma cells can develop in vivo as ascites in a mammal. [0139] The monoclonal antibodies secreted by the subclones can be isolated or purified from the culture medium or ascites fluid by conventional immunoglobulin purification procedures, such as, for example, Asepharose protein, hydroxylapatite chromatography, gel eletrophoresis, dialysis, or affinity chromatography.

[0140] Los anticuerpos monoclonales también se pueden fabricar mediante procedimientos de ADN recombinante, tales como los descritos en la Patente U.S.A. No. 4.816.567. El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales de la presente invención se pueden aislar fácilmente y secuenciar utilizando procedimientos convencionales (por ejemplo, mediante la utilización de sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a genes que codifican las cadenas ligeras y pesadas de anticuerpos murinos). Las células de hibridoma de la presente invención sirven como una fuente preferida de dicho ADN. Una vez aislado, el ADN se puede situar en vectores de expresión, que a continuación se transfectan en células huésped, tales como células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de mieloma que no producen de ningún modo proteína de inmunoglobulina, para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células huésped recombinantes. El ADN también se puede modificar, por ejemplo, sustituyendo la secuencia codificante para los dominios constantes de cadena pesada y ligera humanos en lugar de las secuencias homólogas murinas [Patente de Estados Unidos No. 4.816.567; Morrison et al., supra] o uniendo covalentemente a la secuencia codificante de inmunoglobulina toda o parte de la secuencia codificante para un polipéptido de no inmunoglobulina. Dicho polipéptido de no inmunoglobulina se puede sustituir por los dominios constantes de un anticuerpo de la presente invención, o se pueden sustituir por los dominios variables de un sitio de combinación a antígeno de un anticuerpo de la invención para crear un anticuerpo quimérico bivalente. [0141] Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monovalentes. Los procedimientos para preparar anticuerpos monovalentes son conocidos en la técnica. Por ejemplo, un procedimiento implica la expresión recombinante de la cadena ligera y la cadena pesada modificada de la inmunoglobulina. La cadena pesada se trunca generalmente en cualquier punto en la región Fc para evitar la reticulación de la cadena pesada. Alternativamente, los residuos de cisteína pertinentes se sustituyen por otro residuo de aminoácido o se eliminan para evitar la reticulación. [0142] Los procedimientos in vitro también son adecuados para preparar anticuerpos monovalentes. La digestión de anticuerpos para producir fragmentos de los mismos, particularmente, fragmentos Fab, se puede realizar utilizando técnicas rutinarias conocidas en la técnica. [0140] Monoclonal antibodies can also be manufactured by recombinant DNA methods, such as those described in U.S. Pat. No. 4,816,567. The DNA encoding the monoclonal antibodies of the present invention can be easily isolated and sequenced using conventional methods (for example, by the use of oligonucleotide probes that are capable of specifically binding to genes encoding the light and heavy chains of murine antibodies) . The hybridoma cells of the present invention serve as a preferred source of said DNA. Once isolated, the DNA can be placed in expression vectors, which are then transfected into host cells, such as simian COS cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells or myeloma cells that do not produce protein in any way. of immunoglobulin, to obtain the synthesis of monoclonal antibodies in recombinant host cells. DNA can also be modified, for example, by replacing the coding sequence for human heavy and light chain constant domains instead of murine homologous sequences [US Patent No. 4,816,567; Morrison et al., Supra] or covalently binding to the immunoglobulin coding sequence all or part of the coding sequence for a non-immunoglobulin polypeptide. Said non-immunoglobulin polypeptide may be substituted for the constant domains of an antibody of the present invention, or may be substituted for the variable domains of an antigen combination site of an antibody of the invention to create a bivalent chimeric antibody. [0141] The antibodies may be monovalent antibodies. Procedures for preparing monovalent antibodies are known in the art. For example, one method involves recombinant expression of the light chain and the modified heavy chain of the immunoglobulin. The heavy chain is generally truncated at any point in the Fc region to avoid crosslinking of the heavy chain. Alternatively, the relevant cysteine residues are replaced by another amino acid residue or removed to avoid crosslinking. [0142] In vitro procedures are also suitable for preparing monovalent antibodies. The digestion of antibodies to produce fragments thereof, particularly Fab fragments, can be performed using routine techniques known in the art.

3. Anticuerpos humanizados [0143] Los anticuerpos anti-PRO1122 utilizados en la presente descripción pueden comprender además anticuerpos humanizados o anticuerpos humanos. Las formas humanizadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son inmunoglobulinas quiméricas, cadenas de inmunoglobulinas o fragmentos de las mismas (tales como Fv, Fab, Fab’, F(ab’)2 u otras subsecuencias de unión a antígeno de los anticuerpos) que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. Entre los anticuerpos humanizados se incluyen inmunoglobulinas humanas (anticuerpo destinatario) en las que los residuos de una región determinante de complementariedad (CDR) del destinatario se sustituyen por residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo dador), tal como ratón, rata o conejo que tienen la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos del armazón de Fv de la inmunoglobulina humana se sustituyen por los residuos no humanos correspondientes. Los anticuerpos humanizados también pueden comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo destinatario ni en las secuencias de la CDR o el armazón importados. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos de por lo menos uno, y habitualmente dos, dominios variables, en los que todas o sustancialmente todas las regiones CDR corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones de FR son las de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado de forma óptima también comprenderá por lo menos una parte de una región constante de inmunoglobulina (Fc), habitualmente la de una inmunoglobulina humana [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332 : 323-329 (1988); y Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992)]. [0144] Los procedimientos para humanizar anticuerpos no humanos son conocidos en la técnica. Generalmente, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácidos introducidos en el mismo de un origen no humano. Estos residuos de aminoácidos no humanos se indican frecuentemente como residuos “importados”, que se adquieren de un dominio variable “importado”. La humanización se puede realizar esencialmente siguiendo el procedimiento de Winter y colaboradores [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)], mediante la sustitución de CDRs o secuencias de CDR de roedor por las correspondientes secuencias de un anticuerpo humano. Por consiguiente, dichos anticuerpos “humanizados” son anticuerpos quiméricos (Patente de Estados Unidos No. 4.816.567), en los que sustancialmente menos de un dominio variable intacto humano ha sido sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la práctica, los anticuerpos humanizados son habitualmente anticuerpos humanos en los que algunos residuos de CDR y posiblemente algunos residuos de FR se sustituyen por residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedores. [0145] Los anticuerpos humanos también se pueden producir utilizando varias técnicas conocidas en la técnica, incluyendo las bibliotecas de expresión de fagos [Hoogenboom y Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 3. Humanized antibodies [0143] The anti-PRO1122 antibodies used in the present description may further comprise humanized antibodies or human antibodies. Humanized forms of non-human antibodies (eg, murine) are chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains or fragments thereof (such as Fv, Fab, Fab ', F (ab') 2 or other antigen binding sub-sequences of the antibodies) that contain a minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. Humanized antibodies include human immunoglobulins (recipient antibody) in which residues of a complementarity determining region (CDR) of the recipient are replaced by residues of a CDR of a non-human species (donor antibody), such as mouse, rat or rabbit that have the specificity, affinity and capacity desired. In some cases, the residues of the Fv framework of the human immunoglobulin are replaced by the corresponding non-human residues. Humanized antibodies may also comprise residues that are neither found in the target antibody nor in the sequences of the imported CDR or framework. In general, the humanized antibody will comprise substantially all of at least one, and usually two, variable domains, in which all or substantially all CDR regions correspond to those of a non-human immunoglobulin and all or substantially all regions of FR are those of a consensus sequence of human immunoglobulin. The optimally humanized antibody will also comprise at least a portion of a constant region of immunoglobulin (Fc), usually that of a human immunoglobulin [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992)]. [0144] Methods for humanizing non-human antibodies are known in the art. Generally, a humanized antibody has one or more amino acid residues introduced therein from a non-human origin. These non-human amino acid residues are often indicated as "imported" residues, which are acquired from a "imported" variable domain. Humanization can be performed essentially following the procedure of Winter et al. [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)], by substituting rodent CDRs or CDR sequences for the corresponding sequences of a human antibody. Accordingly, said "humanized" antibodies are chimeric antibodies (US Patent No. 4,816,567), in which substantially less than one intact human variable domain has been replaced by the corresponding sequence of a non-human species. In practice, humanized antibodies are usually human antibodies in which some CDR residues and possibly some FR residues are replaced by residues of similar sites in rodent antibodies. [0145] Human antibodies can also be produced using several techniques known in the art, including phage expression libraries [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.,

222: 581 (1991)]. Las técnicas de Cole et al. y Boerner et al. están también disponibles para la preparación de anticuerpos monoclonales humanos (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, página 77 (1985) y Boerner et al., J. Inmunol., 147(1): 86-95 (1991)]. De forma similar, los anticuerpos humanos se pueden fabricar mediante la introducción de loci de inmunoglobulina humana en animales transgénicos, por ejemplo, ratones en los que los genes de inmunoglobulina endógena han sido parcial o completamente inactivados. Tras la estimulación, se observa la producción de anticuerpos humanos, que se parece estrechamente a los observados en humanos en todos los aspectos, incluyendo el reajuste de genes, el ensamblaje, y el repertorio de anticuerpos. Este enfoque se describe, por ejemplo, en las Patentes 222: 581 (1991)]. The techniques of Cole et al. and Boerner et al. They are also available for the preparation of human monoclonal antibodies (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, page 77 (1985) and Boerner et al., J. Immunol., 147 (1): 86- 95 (1991)] Similarly, human antibodies can be made by introducing human immunoglobulin loci into transgenic animals, for example, mice in which the endogenous immunoglobulin genes have been partially or completely inactivated. , the production of human antibodies is observed, which closely resembles those observed in humans in all aspects, including gene readjustment, assembly, and antibody repertoire.This approach is described, for example, in the Patents

U.S.A. Nos. 5.545.807; 5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; 5.661.016, y en las siguientes publicaciones científicas: Marks et al., BioTechnology 10, 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368, 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51, (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg y Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995). USES. Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, and in the following scientific publications: Marks et al., BioTechnology 10, 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368, 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51, (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995).

4. Terapia de profármacos mediada por enzimas dependientes de anticuerpos (ADEPT) 4. Antibody-dependent enzyme-mediated prodrug therapy (ADEPT)

[0146] Los anticuerpos de la presente descripción también se pueden utilizar en ADEPT mediante la conjugación del anticuerpo con una enzima activadora de profármacos que convierte un profármaco (por ejemplo, un agente peptidil quimioterapéutico. Ver WO 81/01145) en un fármaco anticancerígeno activo. Ver, por ejemplo, WO 88/07378 y Patente de Estados Unidos No. 4.975.278. [0147] El componente enzimático del inmunoconjugado útil para ADEPT incluye cualquier enzima capaz de actuar sobre un profármaco de manera que lo convierte en su forma citotóxica más activa. [0148] Entre las enzimas que son útiles en el procedimiento se incluyen, pero no se limitan a, glicosidasa, glucosa oxidasa, lisozima humana, glucuronidasa humana, alcalina fosfatasa útil para convertir profármacos que contienen fosfato en fármacos libres; arisulfatasa útil para convertir profármacos que contienen sulfato en fármacos libres; citosina desaminasa útil para convertir 5-fluorocitosina no tóxica en el fármaco anticancerígeno 5-fluorouracilo; proteasas, tales como serratia proteasa, termolisina, subtilisina, carboxipeptidasas (por ejemplo, carboxipeptidasa G2 y carboxipeptidasa A) y catepsinas (tales como catepsinas B y L), que son útiles para convertir profármacos que contienen péptidos en fármacos libres: D-atanitcarboxipeptidasas útiles para convertir profármacos que contienen sustituyentes D-aminoácidos; enzimas divisoras de carbohidratos, tales como -galactosidasa y neuraminidasa útil para convertir profármacos glicosilados en fármacos libres; -lactamasa útil para convertir fármacos derivados con -lactamas en fármacos libres; y penicilin amidasas, tales como penicilin Vamidasa o penicilin G amidasa, útil para convertir fármacos derivados derivativos en sus nitrógenos de amina con grupos fenoxiacetilo o fenilacetilo, respectivamente, en fármacos libres. Alternativamente, los anticuerpos con actividad enzimática, también conocidas en la técnica como "abzimas", se pueden utilizar para convertir los profármacos de la presente invención en fármacos activos libres (ver, por ejemplo, Massey. Nature 328: 457-458 (1987)). Los conjugados anticuerpo-abzima se pueden preparar tal como se describen en la presente invención para la liberación de la abzima a una población de células tumorales. [0149] Las encimas se pueden unir covalentemente a los anticuerpos anti-PRO1122 mediante técnicas bien conocidas en el sector, tales como la utilización de agentes de reticulación heterobifuncionales descritos anteriormente. Alternativamente, las proteínas de fusión que comprenden por lo menos la región de unión a antígeno del anticuerpo unido a por lo menos de una parte funcionalmente activa de una enzima se pueden construir utilizando técnicas de ADN recombinante bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Neuberger et al., Nature 312: 604-608 (1984)). [0146] The antibodies of the present disclosure can also be used in ADEPT by conjugation of the antibody with a prodrug activating enzyme that converts a prodrug (eg, a chemotherapeutic peptidyl agent. See WO 81/01145) into an active anticancer drug. . See, for example, WO 88/07378 and U.S. Patent No. 4,975,278. [0147] The enzyme component of the immunoconjugate useful for ADEPT includes any enzyme capable of acting on a prodrug so that it becomes its most active cytotoxic form. [0148] Enzymes that are useful in the process include, but are not limited to, glycosidase, glucose oxidase, human lysozyme, human glucuronidase, alkaline phosphatase useful for converting phosphate-containing prodrugs into free drugs; arisulfatase useful for converting prodrugs containing sulfate into free drugs; cytosine deaminase useful for converting non-toxic 5-fluorocytosine into the anticancer drug 5-fluorouracil; proteases, such as serratia protease, thermolysin, subtilisin, carboxypeptidases (for example, carboxypeptidase G2 and carboxypeptidase A) and cathepsins (such as cathepsins B and L), which are useful for converting prodrugs containing peptides into free drugs: D-atanitcarboxypeptidases to convert prodrugs containing D-amino acid substituents; carbohydrate dividing enzymes, such as -galactosidase and neuraminidase useful for converting glycosylated prodrugs into free drugs; -lactamase useful for converting drugs derived with -lactams into free drugs; and penicillin amidases, such as penicillin Vamidase or penicillin G amidase, useful for converting derivative derivative drugs into their amine nitrogens with phenoxyacetyl or phenylacetyl groups, respectively, into free drugs. Alternatively, antibodies with enzymatic activity, also known in the art as "abzymes", can be used to convert the prodrugs of the present invention into free active drugs (see, for example, Massey. Nature 328: 457-458 (1987) ). The antibody-abzyme conjugates can be prepared as described in the present invention for the release of the abzyme to a population of tumor cells. [0149] Enzymes can be covalently bound to anti-PRO1122 antibodies by techniques well known in the sector, such as the use of heterobifunctional crosslinking agents described above. Alternatively, fusion proteins comprising at least the antigen-binding region of the antibody bound to at least a functionally active part of an enzyme can be constructed using recombinant DNA techniques well known in the art (see, for example , Neuberger et al., Nature 312: 604-608 (1984)).

5. Anticuerpos biespecíficos 5. Bispecific Antibodies

[0150] Los anticuerpos biespecíficos son monoclonales, preferiblemente humanos o humanizados, anticuerpos que tienen especificidades de unión para por lo menos dos antígenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de unión es para un polipéptido PRO1031, el otro es para cualquier otro antígeno, y preferiblemente para una proteína o receptor o subunidad del receptor de la superficie celular. [0150] Bispecific antibodies are monoclonal, preferably human or humanized, antibodies that have binding specificities for at least two different antigens. In the present case, one of the binding specificities is for a PRO1031 polypeptide, the other is for any other antigen, and preferably for a protein or receptor or cell surface receptor subunit.

[0151] Los procedimientos para fabricar anticuerpos biespecíficos son conocidos en la técnica. Habitualmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basa en la coexpresión de dos parejas de cadena pesada/cadena ligera de inmunoglobulina, en las que las dos cadenas pesadas tienen especificidades diferentes [Millstein y Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983)]. Debido a la variedad aleatoria de cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de diez moléculas diferentes de anticuerpos, de las cuales sólo una tiene la estructura biespecífica correcta. La purificación de la molécula correcta se realiza habitualmente mediante etapas de cromatografía de afinidad. En WO 93/08829, publicada el 13 de mayo de 1993, y en Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991) se describen procedimientos similares. [0152] Los dominios variables de anticuerpo con las especificidades de unión deseadas (sitios de combinación anticuerpo-antígeno) se pueden fusionar a secuencias de dominios constantes de inmunoglobulinas. La fusión preferiblemente es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que comprende por lo menos parte de la bisagra, CH2, y regiones CH3. Se prefiere tener la primera región constante de cadena pesada (CH1) que contiene el sitio necesario para la unión a cadena ligera presente en por lo menos una de las fusiones. Los ADNs que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, la cadena ligera de inmunoglobulina, se insertan en vectores de expresión separados, y se cotransfectan en un organismo huésped adecuado. Para mayores detalles sobre la generación de anticuerpos biespecíficos, véase, por ejemplo, Suresh et al., Methods in Enzimology, 121: 210 (1986). [0153] Según otro enfoque descrito en WO 96/27011, la interfase entre una pareja de moléculas de anticuerpos se puede diseñar para maximizar el porcentaje de heterodímeros que se recuperan del cultivo de células recombinantes. La interfase preferida comprende por lo menos una parte de la región de CH3 de un dominio constante de anticuerpo. En este procedimiento, una o más cadenas laterales de aminoácidos pequeños de la interfase de la primera molécula de anticuerpo se sustituyen por cadenas laterales mayores (por ejemplo, tirosina o triptófano). Las “cavidades” compensatorias de tamaño similar o idéntico a la cadena o cadenas laterales grandes se crean en la interfase de la segunda molécula de anticuerpo mediante la sustitución de cadenas laterales de aminoácidos grandes por más pequeños (por ejemplo, alanina o treonina). Esto proporciona un mecanismo para aumentar el rendimiento del heterodímero sobre otros productos finales no deseados, tales como homodímeros. [0154] Los anticuerpos biespecíficos se pueden preparar como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos F(ab’)2). Las técnicas para generar anticuerpos biespecíficos a partir de fragmentos de anticuerpos se han descrito en la literatura. Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos se pueden preparar utilizando uniones químicas. Brennan et al., Science 229:81 (1985) describen un procedimiento en el que los anticuerpos intactos se dividen proteolíticamente para generar fragmentos F(ab’)2. Estos fragmentos se reducen en presencia del agente complejante de ditiol, arsenito sódico, para estabilizar los ditioles vecinales y evitar la formación de disulfuro intermolecular. A continuación, los fragmentos Fab’ generados se convierten en derivados de tionitrobenzoato (TNB). A continuación, uno de los derivados de Fab’-TNB se reconvierten en Fab’-tiol mediante la reducción con mercaptoetilamina y se mezcla con una cantidad equimolar del otro derivado de Fab’-TNB para formar el anticuerpo biespecífico. Los anticuerpos biespecíficos producidos se pueden utilizar como agentes para la inmovilización selectiva de enzimas. [0155] Los fragmentos Fab’ se pueden recuperar directamente de E. coli y acoplar químicamente para formar anticuerpos biespecíficos. Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992) describen la producción de una molécula de un anticuerpo biespecífico totalmente humanizado F(ab’)2. Cada fragmento de Fab’ se secretó de forma separada de E. coli y se sometió a un acoplamiento químico dirigido in vitro para formar el anticuerpo biespecífico. El anticuerpo biespecífico formado de esta manera era capaz de unirse a células que sobreexpresan el receptor ErbB2 y las células T humanas normales, así como desencadenar la actividad lítica de linfocitos citotóxicos humanos contra tumores de mama humana dianas. [0156] Se han descrito también varias técnicas para fabricar y aislar fragmentos de anticuerpos biespecíficos directamente de cultivos de células recombinantes. Por ejemplo, se han producido anticuerpos biespecíficos utilizando cremalleras de leucina. Kostelny et al., J. Immunol. 148(5): 1547-1553 (1992), en los que los péptidos cremallera de leucina de las proteínas Fos y Jun se unieron a las partes de Fab’ de dos anticuerpos diferentes mediante fusión génica. Los homodímeros del anticuerpo se redujeron en la región bisagra para formar monómeros y, a continuación, se reoxidaron para formar los heterodímeros del anticuerpo. Este procedimiento también se puede utilizar para la producción de homodímeros de anticuerpo. La tecnología de “diabody” descrito por Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993) ha proporcionado un mecanismo alternativo para fabricar fragmentos de anticuerpos biespecíficos. Los fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) mediante un enlazador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena. Por consiguiente, los dominios VH y VL de un fragmento se fuerzan a emparejarse con los dominios VL y VH complementarios de otro fragmento, formando así dos sitios de unión a antígeno. También se ha descrito otra estrategia para fabricar fragmentos de anticuerpos biespecíficos mediante la utilización de dímeros de Fv de cadena única (sFv). Ver Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994). [0157] Se consideran los anticuerpos con más de dos valencias. Por ejemplo, se pueden preparar anticuerpos triespecíficos. Tun et al., J. Immunol. 147:60 (1991). [0158] Los anticuerpos biespecíficos de ejemplo se pueden unir a dos epítopos diferentes en una proteína “Pro” determinada de la presente invención. Alternativamente, un brazo de proteína anti-“PRO” se puede combinar con un brazo que se une a una molécula desencadenante en un leucocito, tal como una molécula receptor de células T (por ejemplo, CD2, CD3, CD28, o B7), o receptores Fc para IgG (FcR), tales como FcRI (CD64), FcRII (CD32) y FcRIII (CD16) para centrar los mecanismos de defensa celular en la célula que expresa la proteína “PRO” particular. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden utilizar para localizar agentes citotóxicos a células que expresan un polipéptido “PRO” particular. Estos anticuerpos poseen un brazo de unión a “PRO” y un brazo que se une a un agente citotóxico o un radionúcleo quelante, tal como EOTUBE, DPTA, DOTA o TETA. Otro anticuerpo biespecífico de interés se une al polipéptido “PRO” y además se une al factor tisular (TF). [0151] Methods for making bispecific antibodies are known in the art. Usually, the recombinant production of bispecific antibodies is based on the coexpression of two immunoglobulin heavy chain / light chain partners, in which the two heavy chains have different specificities [Millstein and Neck, Nature, 305: 537-539 (1983) ]. Due to the random variety of heavy and light immunoglobulin chains, these hybridomas (quadromas) produce a potential mixture of ten different antibody molecules, of which only one has the correct bispecific structure. Purification of the correct molecule is usually performed by affinity chromatography steps. Similar procedures are described in WO 93/08829, published May 13, 1993, and in Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991). [0152] Variable antibody domains with the desired binding specificities (antibody-antigen combination sites) can be fused to sequences of immunoglobulin constant domains. The fusion is preferably with a constant immunoglobulin heavy chain domain, comprising at least part of the hinge, CH2, and CH3 regions. It is preferred to have the first heavy chain constant region (CH1) that contains the site necessary for light chain binding present in at least one of the fusions. The DNAs encoding immunoglobulin heavy chain fusions and, if desired, the immunoglobulin light chain, are inserted into separate expression vectors, and co-transfected into a suitable host organism. For more details on the generation of bispecific antibodies, see, for example, Suresh et al., Methods in Enzimology, 121: 210 (1986). [0153] According to another approach described in WO 96/27011, the interface between a pair of antibody molecules can be designed to maximize the percentage of heterodimers that are recovered from recombinant cell culture. The preferred interface comprises at least a part of the CH3 region of a constant antibody domain. In this procedure, one or more small amino acid side chains of the interface of the first antibody molecule are replaced by larger side chains (eg, tyrosine or tryptophan). Compensatory "cavities" of similar or identical size to the large chain or side chains are created at the interface of the second antibody molecule by replacing large amino acid side chains with smaller ones (eg, alanine or threonine). This provides a mechanism to increase the yield of the heterodimer over other unwanted end products, such as homodimers. [0154] Bispecific antibodies can be prepared as full-length antibodies or antibody fragments (for example, bispecific F (ab ’) 2 antibodies). Techniques for generating bispecific antibodies from antibody fragments have been described in the literature. For example, bispecific antibodies can be prepared using chemical bonds. Brennan et al., Science 229: 81 (1985) describe a procedure in which intact antibodies are proteolytically divided to generate F (ab ’) 2 fragments. These fragments are reduced in the presence of the dithiol complexing agent, sodium arsenite, to stabilize the neighborhood dithiols and prevent the formation of intermolecular disulfide. Next, the generated Fab ’fragments are converted into thionitrobenzoate (TNB) derivatives. Next, one of the Fab’-TNB derivatives is converted into Fab’-thiol by reduction with mercaptoethylamine and mixed with an equimolar amount of the other Fab’-TNB derivative to form the bispecific antibody. The bispecific antibodies produced can be used as agents for the selective immobilization of enzymes. [0155] Fab ’fragments can be recovered directly from E. coli and chemically coupled to form bispecific antibodies. Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992) describe the production of a fully humanized bispecific antibody molecule F (ab ’) 2. Each Fab ’fragment was secreted separately from E. coli and subjected to a chemical coupling directed in vitro to form the bispecific antibody. The bispecific antibody formed in this manner was capable of binding to cells that overexpress the ErbB2 receptor and normal human T cells, as well as triggering the lytic activity of human cytotoxic lymphocytes against human breast tumors. [0156] Several techniques for manufacturing and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell cultures have also been described. For example, bispecific antibodies have been produced using leucine zippers. Kostelny et al., J. Immunol. 148 (5): 1547-1553 (1992), in which the leucine zipper peptides of the Fos and Jun proteins bound to the Fab ’portions of two different antibodies by gene fusion. The antibody homodimers were reduced in the hinge region to form monomers and then re-oxidized to form the antibody heterodimers. This procedure can also be used for the production of antibody homodimers. The "diabody" technology described by Hollinger et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) has provided an alternative mechanism for manufacturing bispecific antibody fragments. The fragments comprise a heavy chain variable domain (VH) connected to a light chain variable domain (VL) by a linker that is too short to allow pairing between the two domains in the same chain. Accordingly, the VH and VL domains of one fragment are forced to pair with the complementary VL and VH domains of another fragment, thus forming two antigen binding sites. Another strategy for making bispecific antibody fragments by using single chain Fv dimers (sFv) has also been described. See Gruber et al., J. Immunol. 152: 5368 (1994). [0157] Antibodies with more than two valences are considered. For example, trypecific antibodies can be prepared. Tun et al., J. Immunol. 147: 60 (1991). [0158] Example bispecific antibodies can bind to two different epitopes on a particular "Pro" protein of the present invention. Alternatively, an anti-"PRO" protein arm may be combined with an arm that binds to a leukocyte trigger molecule, such as a T-cell receptor molecule (eg, CD2, CD3, CD28, or B7), or Fc receptors for IgG (FcR), such as FcRI (CD64), FcRII (CD32) and FcRIII (CD16) to center cell defense mechanisms in the cell that expresses the protein "PRO" particular. Bispecific antibodies can also be used to locate cytotoxic agents to cells that express a particular "PRO" polypeptide. These antibodies have a "PRO" binding arm and an arm that binds to a cytotoxic agent or a chelating radionuclide, such as EOTUBE, DPTA, DOTA or TETA. Another bispecific antibody of interest binds to the "PRO" polypeptide and also binds to the tissue factor (TF).

6. Anticuerpos heteroconjugados 6. Heteroconjugate antibodies

[0159] Los anticuerpos heteroconjugados están también dentro del alcance de la presente invención. Los anticuerpos heteroconjugados están compuestos de dos anticuerpos unidos covalentemente. Dichos anticuerpos se han propuesto, por ejemplo, para dirigir células del sistema inmune a células no deseadas [Patente U.S.A. No. 4.676.980] y para el tratamiento de la infección por VIH [WO 91/00360: WO 92/300373; EP 03089]. Se considera que los anticuerpos se pueden preparar in vitro utilizando procedimientos conocidos en la química sintética de proteínas, incluyendo los que implican agentes de reticulación. Por ejemplo, las inmunotoxinas se pueden construir utilizando una reacción de intercambio de disulfuro o mediante la formación de un enlace tioéter. Entre los ejemplos de reactivos adecuados para este objetivo se incluyen el iminotiolato y metil-4-mercaptobutirimidato y los descritos, por ejemplo, en la Patente U.S.A. No. 4.676.980. [0159] Heteroconjugate antibodies are also within the scope of the present invention. Heteroconjugate antibodies are composed of two covalently bound antibodies. Such antibodies have been proposed, for example, to direct cells of the immune system to unwanted cells [U.S. Pat. No. 4,676,980] and for the treatment of HIV infection [WO 91/00360: WO 92/300373; EP 03089]. It is considered that antibodies can be prepared in vitro using methods known in synthetic protein chemistry, including those involving crosslinking agents. For example, immunotoxins can be constructed using a disulfide exchange reaction or by the formation of a thioether bond. Examples of suitable reagents for this purpose include iminothiolate and methyl-4-mercaptobutyrimidate and those described, for example, in U.S. Pat. No. 4,676,980.

7. 7.

Diseño de la función efectora Design of the effector function

[0160] Se puede desear modificar el anticuerpo utilizado en la presente invención con respecto a la función efectora con el fin de aumentar la eficacia del anticuerpo. Por ejemplo, el residuo o residuos de cisteínas se pueden introducir en la región Fc, permitiendo de esta manera la formación de enlaces disulfuro entre cadenas en esta región. El anticuerpo homodimérico generado de esta manera puede mejorar la capacidad de internalización y/o incrementar la citólisis mediada por el complemento y la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC). Véase Caron et al., J. Exp. Med., 176: 1191-1195 (1992) y Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992). Los anticuerpos homodiméricos con una actividad anti-tumoral aumentada también se pueden preparar utilizando reticuladores heterobifuncionales tal y como se describe en Wolf et al. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993). Alternativamente, un anticuerpo se puede diseñar para que tenga regiones Fc duales y, de esta manera, pueda aumentar la lisis complementaria y las capacidades de ADCC. Véase, Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989). [0160] It may be desired to modify the antibody used in the present invention with respect to the effector function in order to increase the efficacy of the antibody. For example, the cysteine residue or residues can be introduced into the Fc region, thus allowing the formation of disulfide bonds between chains in this region. The homodimeric antibody generated in this manner can improve the ability to internalize and / or increase complement-mediated cytolysis and antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). See Caron et al., J. Exp. Med., 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992). Homodimeric antibodies with increased anti-tumor activity can also be prepared using heterobifunctional crosslinkers as described in Wolf et al. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993). Alternatively, an antibody can be designed to have dual Fc regions and, thus, can increase complementary lysis and ADCC capabilities. See, Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989).

8. 8.

Inmunoconjugados Immunoconjugates

[0161] La presente invención también se refiere a inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo conjugado a un agente citotóxico, tal como un agente quimioterapéutico, toxina (por ejemplo, una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal, o fragmentos de la misma, o una toxina de molécula pequeña), o un isótopo radioactivo (es decir, un radioconjugado). [0162] Los agentes quimioterapéuticos útiles para la generación de dichos inmunoconjugados se ha descrito anteriormente. Entre las toxinas de proteínas enzimáticamente activas y fragmentos de las mismas que se pueden utilizar se incluyen la cadena A de difteria, fragmentos activos no enlazantes de toxina de difteria, cadena A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modeccina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAPS), inhibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, saporina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina, y los tricotecenos. Entre las toxinas de moléculas pequeñas se incluyen, por ejemplo, caliqueamicinas, maitansinoides, palitoxina y CC1065. Hay un conjunto de radionúcleos disponibles para la producción de anticuerpos radioconjugados. Algunos ejemplos son 212Bi, 131I, [0161] The present invention also relates to immunoconjugates comprising an antibody conjugated to a cytotoxic agent, such as a chemotherapeutic agent, toxin (for example, an enzymatically active toxin of bacterial, fungal, plant or animal origin, or fragments thereof). itself, or a small molecule toxin), or a radioactive isotope (i.e., a radioconjugate). [0162] The chemotherapeutic agents useful for the generation of said immunoconjugates have been described above. Enzymes of enzymatically active proteins and fragments thereof that can be used include diphtheria A chain, non-binding active diphtheria toxin fragments, exotoxin A chain (from Pseudomonas aeruginosa), ricin A chain, A chain of abrin, modeccin A chain, alpha-sarcin, Aleurites fordii proteins, diantine proteins, Phytolaca americana proteins (PAPI, PAPII, and PAPS), momordica charantia inhibitor, curcin, crotine, sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, Saporin, mitogelin, restrictocin, fenomycin, enomycin, and trichothecenes. Small molecule toxins include, for example, calicheamycins, maitansinoids, palitoxin and CC1065. There is a set of radionules available for the production of radioconjugated antibodies. Some examples are 212Bi, 131I,

131In, 90Y y 186Re. [0163] Los conjugados del anticuerpo y el agente citotóxico se fabrican utilizando un conjunto de agentes bifuncionales acopladores de proteínas, tales como Nsuccinimidil-3-(2-piridiiditiol)propionato (SPDP), iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCl), ésteres activos (tales como disuccinimidil suberato), aldehídos (tales como glutaraldehído), compuestos bis-azido (tales como bis(p-azidobenzoil)hexanodiamina), derivados de bis-diazonio (tales como bis-(p-diazoniobenzoil)-etilendiamina), diisocianatos (tales como toluen 2,6-diisocianato) y compuesto de flúor bis-activos (tales como 1,5difluoro-2,4-dinitrobenceno). Por ejemplo, una inmunotoxina de ricina se puede preparar tal y como se describe en Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987). El ácido 1isotiocianatobencil-3-metildietilen triaminopentaacético (MX-DTPA) marcado con carbono 14 es un ejemplo de agente quelante para la conjugación de radionúcleos al anticuerpo. Ver WO94/11026. [0164] En otra realización, el anticuerpo se puede conjugar a un “receptor” (tal como estreptavidina) para la utilización en el premarcado de tumores en los que el conjugado anticuerpo-receptor se administra al paciente, seguido de la eliminación de conjugado no enlazado de la circulación utilizando un agente clarificador y, a continuación, la administración de un “ligando” (por ejemplo, avidina) que se conjuga a un agente citotóxico (por ejemplo, un radionúcleo). 131In, 90Y and 186Re. [0163] Antibody and cytotoxic agent conjugates are manufactured using a set of bifunctional protein-coupling agents, such as Nsuccinimidyl-3- (2-pyridiidithiol) propionate (SPDP), iminothiolane (IT), bifunctional derivatives of imidoesters (such such as dimethyl adipimidate HCl), active esters (such as disuccinimidyl suberate), aldehydes (such as glutaraldehyde), bis-azido compounds (such as bis (p-azidobenzoyl) hexanediamine), bis-diazonium derivatives (such as bis- (p -diazonium benzoyl) -ethylenediamine), diisocyanates (such as toluene 2,6-diisocyanate) and bis-active fluorine compound (such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene). For example, a ricin immunotoxin can be prepared as described in Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987). Carbon-labeled 1-thiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene triaminopentaacetic acid (MX-DTPA) 14 is an example of a chelating agent for the conjugation of radionucles to the antibody. See WO94 / 11026. [0164] In another embodiment, the antibody can be conjugated to a "receptor" (such as streptavidin) for use in premarking tumors in which the antibody-receptor conjugate is administered to the patient, followed by removal of non-conjugate. linked from the circulation using a clarifying agent and then the administration of a "ligand" (eg, avidin) that is conjugated to a cytotoxic agent (for example, a radionuclide).

9. Inmunoliposomas 9. Immunoliposomes

[0165] Los anticuerpos descritos en la presente invención también se pueden formular como inmunoliposomas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan mediante procedimientos conocidos en la técnica, tales como los descritos en Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 77: 4030 (1980); y las Patentes U.S. Nos. 4.485.045 y 4.544.545. Los liposomas con un mayor tiempo de circulación se describen en la Patente U.S.A. No. 5.013.556. [0165] The antibodies described in the present invention can also be formulated as immunoliposomes. Liposomes containing the antibody are prepared by methods known in the art, such as those described in Epstein et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci USA, 77: 4030 (1980); and U.S. Pat. Nos. 4,485,045 and 4,544,545. Liposomes with a longer circulation time are described in U.S. Pat. No. 5,013,556.

[0166] Se pueden generar liposomas particularmente útiles mediante el procedimiento de evaporación de fase inversa con una composición lipídica que comprende fosfatidilcolina, colesterol, y fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE). Los liposomas se extruyen a través de filtros de tamaño de poro definido para obtener liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab’ del anticuerpo de la presente invención se pueden conjugar a los liposomas tal y como se describen en Martin et al., [0166] Particularly useful liposomes can be generated by the reverse phase evaporation process with a lipid composition comprising phosphatidylcholine, cholesterol, and PEG-derived phosphatidylethanolamine (PEG-PE). Liposomes are extruded through filters of defined pore size to obtain liposomes with the desired diameter. Fab ’fragments of the antibody of the present invention can be conjugated to liposomes as described in Martin et al.,

J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982) mediante la reacción de intercambio de enlaces disulfuro. Opcionalmente, el liposoma contiene un agente quimioterapéutico (tal como Doxorubicina). Véase Gabizon et al., J. Nacional Cancer Inst., 81(19): 1484 (1989). J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982) by the disulfide bond exchange reaction. Optionally, the liposome contains a chemotherapeutic agent (such as Doxorubicin). See Gabizon et al., J. National Cancer Inst., 81 (19): 1484 (1989).

10. Composiciones farmacéuticas de anticuerpos 10. Pharmaceutical antibody compositions

[0167] Los anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido PRO1122 identificado en la presente invención, así como otras moléculas identificadas por los ensayos de cribado descritos anteriormente en la presente invención, se pueden administrar para el tratamiento de varios trastornos en forma de composiciones farmacéuticas. [0168] Si el polipéptido PRO1122 es intracelular y los anticuerpos completos se utilizan como inhibidores, se prefieren anticuerpos de internalización. Sin embargo, las lipofecciones o liposomas se pueden utilizar también para liberar el anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo, en las células. Cuando se utilizan fragmentos de anticuerpos, se prefiere el fragmento inhibidor más pequeño que se une específicamente al dominio de unión de la proteína diana. Por ejemplo, en base a las secuencias de región variable de un anticuerpo, las moléculas de péptidos se pueden diseñar de manera que mantienen la capacidad de unirse a la secuencia de la proteína diana. Dichos péptidos pueden sintetizarse químicamente y/o producirse mediante tecnología de ADN recombinante. Véase, por ejemplo, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993). [0169] La formulación de la presente invención también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la enfermedad particular en tratamiento, preferiblemente aquéllas con actividades complementarias que no afectan de forma adversa entre sí. Alternativamente o adicionalmente, la composición puede comprender un agente que potencia su función, tal como, por ejemplo, un agente citotóxico, citoquinas, un agente quimioterapéutico o un agente inhibidor del crecimiento. Dichas moléculas están presentes de forma adecuada combinadas en cantidades que son eficaces para el objetivo deseado. Los principios activos también se pueden introducir en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización por interfase, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli(metilmetacilato), respectivamente, en sistemas de liberación de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences, supra. [0170] Las formulaciones a utilizar en la administración in vivo deben ser estériles. Esto se realiza fácilmente mediante la filtración a través de membranas de filtración estériles. [0171] Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada. Entre algunos ejemplos de preparaciones de liberación controlada se incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Entre los ejemplos de matrices de liberación controlada se incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato) o poli(vinilalcohol), poliláctidos (Patente U.S.A. No. 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y -etil-L-glutamato, etileno-acetato de vinilo no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables, tales como el LUPRON DEPOTTM (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida), y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. Mientras que polímeros, tales como etileno-acetato de vinilo y ácido láctico-ácido glicólico, permiten la liberación de moléculas durante aproximadamente 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante periodos de tiempo más cortos. Cuando los anticuerpos encapsulados permanecen en el cuerpo durante un periodo largo de tiempo, se pueden desnaturalizar [0167] Antibodies that specifically bind to a PRO1122 polypeptide identified in the present invention, as well as other molecules identified by the screening assays described above in the present invention, can be administered for the treatment of various disorders in the form of pharmaceutical compositions. . [0168] If the PRO1122 polypeptide is intracellular and complete antibodies are used as inhibitors, internalization antibodies are preferred. However, lipofections or liposomes can also be used to release the antibody, or an antibody fragment, in the cells. When antibody fragments are used, the smaller inhibitor fragment that specifically binds to the binding domain of the target protein is preferred. For example, based on the variable region sequences of an antibody, peptide molecules can be designed so as to maintain the ability to bind to the target protein sequence. Such peptides can be chemically synthesized and / or produced by recombinant DNA technology. See, for example, Marasco et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993). [0169] The formulation of the present invention may also contain more than one active compound as necessary for the particular disease being treated, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other. Alternatively or additionally, the composition may comprise an agent that enhances its function, such as, for example, a cytotoxic agent, cytokines, a chemotherapeutic agent or a growth inhibiting agent. Said molecules are suitably present combined in amounts that are effective for the desired purpose. The active ingredients can also be introduced into prepared microcapsules, for example, by coacervation techniques or by interphase polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly (methylmetacylate) microcapsules, respectively, in colloidal drug delivery systems ( for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or in macroemulsions. These techniques are described in Remington’s Pharmaceutical Sciences, supra. [0170] The formulations to be used in in vivo administration must be sterile. This is easily accomplished by filtration through sterile filtration membranes. [0171] Prepared release preparations can be prepared. Some examples of controlled release preparations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, whose matrices are in the form of shaped articles, for example, films or microcapsules. Examples of controlled release matrices include polyesters, hydrogels (e.g., poly (2-hydroxyethyl methacrylate) or polyvinyl alcohol, polylactides (US Patent No. 3,773,919), L-glutamic acid copolymers and  -ethyl-L-glutamate, non-degradable ethylene-vinyl acetate, degradable lactic acid-glycolic acid copolymers, such as LUPRON DEPOTTM (injectable microspheres composed of lactic acid-glycolic acid copolymer and leuprolide acetate), and poly acid -D - (-) - 3-hydroxybutyric While polymers, such as ethylene-vinyl acetate and lactic acid-glycolic acid, allow the release of molecules for approximately 100 days, certain hydrogels release proteins for shorter periods of time. When encapsulated antibodies remain in the body for a long period of time, they can be denatured.

o agregar como resultado de la exposición a humedad a 37oC, dando lugar a una pérdida de actividad biológica y posibles cambios en la inmunogenicidad. Se pueden idear estrategias razonables para la estabilización dependiendo de los mecanismos implicados. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación es la formación de enlaces S-S intermoleculares a través del intercambio tio-disulfuro, la estabilización se puede conseguir mediante la modificación de residuos sulfhidrilo, la liofilización de soluciones ácidas, el control del contenido de humedad, la utilización apropiada de aditivos, y el desarrollo de composiciones de matrices de polímero específicas. or add as a result of exposure to moisture at 37 ° C, resulting in a loss of biological activity and possible changes in immunogenicity. Reasonable strategies for stabilization can be devised depending on the mechanisms involved. For example, if it is discovered that the mechanism of aggregation is the formation of intermolecular SS bonds through thio-disulfide exchange, stabilization can be achieved by modifying sulfhydryl residues, lyophilization of acid solutions, moisture content control. , the appropriate use of additives, and the development of specific polymer matrix compositions.

G. G.

Utilizaciones de anticuerpos anti-PRO1122 Uses of anti-PRO1122 antibodies

[0172] Los anticuerpos anti-PRO1122 de la presente invención tienen varias utilidades. Por ejemplo, los anticuerpos anti-PRO1122 se pueden utilizar en ensayos de diagnóstico para polipéptidos PRO1122, por ejemplo, detectando la expresión en células, tejidos específicos o suero. Se pueden utilizar varias técnicas de ensayo de diagnóstico conocidas en la técnica, tales como ensayos de unión competitiva, ensayos de sándwich directo o indirecto y ensayos de inmunoprecipitación realizados en fases heterogéneas u homogéneas [Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC PRess, Inc. (1987) páginas 147-158]. Los anticuerpos utilizados en los ensayos de diagnóstico se pueden marcar con un grupo detectable. El grupo detectable debería ser capaz de producir, directa o indirectamente, una señal detectable. Por ejemplo, el grupo detectable puede ser un radioisótopo, tal como 3H, 14C, 32P, 35S o 125I, un compuesto fluorescente o quimioluminiscente, tal como isotiocianato de fluoresceína, rodamina, o luciferina, o una enzima, tal como alcalina fosfatasa, beta-galactosidasa o peroxidasa de rábano picante. Se puede utilizar cualquier procedimiento conocido en la técnica para conjugar el anticuerpo al grupo detectable, incluyendo aquellos procedimientos descritos por Hunter et al., Nature, 144: 945 (1962); David et al., Biochemistry, 13: 1014 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth., 40: 219 (1981); y Nygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407 (1982). [0173] Los anticuerpos anti-PRO1122 también son útiles para la purificación por afinidad de polipéptidos PRO1122 de un cultivo de células recombinantes o de origen natural. En este proceso, los anticuerpos contra un polipéptido PRO1122 se inmovilizan sobre un soporte adecuado, tal como una resina Sephadex o papel de filtro, utilizando procedimientos conocidos en la técnica. A continuación, el anticuerpo inmovilizado se pone en contacto con una muestra que contiene el anticuerpo PRO1122 a purificar, y posteriormente se lava el soporte con un disolvente adecuado que eliminará sustancialmente todo el material en la muestra a excepción del polipéptido PRO1122, que está unido al anticuerpo inmovilizado. Finalmente, el soporte se lava con otro disolvente adecuado que liberará el polipéptido PRO1122 del anticuerpo. [0172] The anti-PRO1122 antibodies of the present invention have several utilities. For example, anti-PRO1122 antibodies can be used in diagnostic assays for PRO1122 polypeptides, for example, by detecting expression in cells, specific tissues or serum. Several diagnostic assay techniques known in the art can be used, such as competitive binding assays, direct or indirect sandwich assays and immunoprecipitation assays performed in heterogeneous or homogeneous phases [Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC PRess , Inc. (1987) pages 147-158]. Antibodies used in diagnostic assays can be labeled with a detectable group. The detectable group should be able to produce, directly or indirectly, a detectable signal. For example, the detectable group may be a radioisotope, such as 3H, 14C, 32P, 35S or 125I, a fluorescent or chemiluminescent compound, such as fluorescein isothiocyanate, rhodamine, or luciferin, or an enzyme, such as alkaline phosphatase, beta -galactosidase or horseradish peroxidase. Any method known in the art can be used to conjugate the antibody to the detectable group, including those procedures described by Hunter et al., Nature, 144: 945 (1962); David et al., Biochemistry, 13: 1014 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth., 40: 219 (1981); and Nygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407 (1982). [0173] Anti-PRO1122 antibodies are also useful for affinity purification of PRO1122 polypeptides from a recombinant or naturally occurring cell culture. In this process, antibodies against a PRO1122 polypeptide are immobilized on a suitable support, such as a Sephadex resin or filter paper, using methods known in the art. Then, the immobilized antibody is contacted with a sample containing the PRO1122 antibody to be purified, and then the support is washed with a suitable solvent that will substantially remove all the material in the sample except for the PRO1122 polypeptide, which is bound to the immobilized antibody Finally, the support is washed with another suitable solvent that will release the PRO1122 polypeptide from the antibody.

H. Antagonistas/agonistas de PRO1122 H. PRO1122 antagonists / agonists

[0174] La descripción comprende procedimientos de cribado de compuestos para identificar auqellos que mimetizan el polipéptido PRO1122 (agonistas) o previenen el efecto del polipéptido PRO1122 (antagonistas). Los ensayos de cribado para los fármacos candidatos se diseñan para identificar compuestos que se unen o complejan con los polipéptidos 1122 codificados por los genes identificados en la presente invención, o que en cualquier caso, interfieren con la interacción de los polipéptidos codificados con otras proteínas celulares. Dichos ensayos de cribado incluirán ensayos susceptibles de un cribado de alto rendimiento de bibliotecas químicas, haciéndolos particularmente adecuados para identificar candidatos de fármacos de molécula pequeña. [0175] Los ensayos se pueden realizar en una serie de formatos, incluyendo ensayos de proteína-proteína, ensayos de cribado bioquímico, inmunoensayos, y ensayos basados en células, que están bien caracterizadas en la técnica. Por ejemplo, para cribar antagonistas y/o agonistas de señalización de PRO1122, la mezcla de ensayo se incuba en condiciones mediante las cuales, pero por la presencia del agente farmacológico candidato, PRO1122 induce la liberación TNF- de células THP-1 con una actividad de referencia. Alternativamente, la actividad ensayada puede ser la liberación de óxido nítrico (NO) y proteoglicanos de cartílagos articulares tratados con IL17 y/o IL1. [0176] En los ensayos de unión, la interacción es la unión y el complejo formado se puede aislar o detectar en la mezcla de reacción. En una realización particular, el polipéptido PRO1122 codificado por el gen identificado en la presente invención o el fármaco candidato se inmovilizan en una fase sólida, por ejemplo, en una placa de microtitulación mediante uniones covalentes o no covalentes. La unión no covalente se realiza generalmente mediante el recubrimiento de la superficie sólida con una solución del polipéptido PRO1122 y secado. Alternativamente, se puede utilizar un anticuerpo inmovilizado, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, específico para el polipéptido PRO1122 a inmovilizar, para anclarlo a la superficie sólida. El ensayo se realiza mediante la adición del componente no inmovilizado, que se puede marcar mediante un marcador detectable, al componente inmovilizado, por ejemplo, la superficie recubierta que contiene el componente anclado. Cuando se completa la reacción, se extraen los componentes no reaccionados, por ejemplo, mediante lavado, y se detectan los complejos anclados a la superficie sólida. Cuando el componente originalmente no inmovilizado transporta un marcador detectable, la detección del marcador inmovilizado en la superficie indica que tuvo lugar la formación del complejo. Cuando el componente originalmente no inmovilizado no transporta un marcador, se puede detectar la formación de complejo, por ejemplo, utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al complejo inmovilizado. [0177] Si el compuesto candidato interacciona con, pero no sin unirse, a un polipéptido PRO1122 concreto codificado por un gen identificado en la presente invención, su interacción con esa polipéptido se puede ensayar mediante procedimientos conocidos para detectar interacciones proteína-proteína. Dichos ensayos incluyen enfoques tradicionales, tales como, por ejemplo, reticulación, coinmunoprecipitación y copurificación a través de gradientes o columnas cromatográficas. Además, las interacciones proteína-proteína se pueden monitorizar mediante la utilización de sistemas genéticos basados en levaduras descritos por Fields y colaboradores (Fields y Song, Nature (London), 340:245-246 (1989); Chien et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, [0174] The description comprises methods of screening compounds to identify samples that mimic the PRO1122 polypeptide (agonists) or prevent the effect of the PRO1122 polypeptide (antagonists). Screening assays for candidate drugs are designed to identify compounds that bind or complex with 1122 polypeptides encoded by the genes identified in the present invention, or that in any case interfere with the interaction of encoded polypeptides with other cellular proteins. . Such screening assays will include assays susceptible to high-performance screening of chemical libraries, making them particularly suitable for identifying candidates for small molecule drugs. [0175] The assays can be performed in a number of formats, including protein-protein assays, biochemical screening assays, immunoassays, and cell-based assays, which are well characterized in the art. For example, to screen antagonists and / or signaling agonists of PRO1122, the test mixture is incubated under conditions by which, but by the presence of the candidate pharmacological agent, PRO1122 induces the release of TNF- from THP-1 cells with a reference activity Alternatively, the activity tested may be the release of nitric oxide (NO) and proteoglycans from articular cartilage treated with IL17 and / or IL1. [0176] In the binding assays, the interaction is the binding and the complex formed can be isolated or detected in the reaction mixture. In a particular embodiment, the PRO1122 polypeptide encoded by the gene identified in the present invention or the candidate drug is immobilized in a solid phase, for example, in a microtiter plate by covalent or non-covalent bonds. Non-covalent bonding is generally performed by coating the solid surface with a solution of the PRO1122 polypeptide and drying. Alternatively, an immobilized antibody, for example, a monoclonal antibody, specific for the PRO1122 polypeptide to be immobilized, can be used to anchor it to the solid surface. The test is performed by adding the non-immobilized component, which can be marked by a detectable marker, to the immobilized component, for example, the coated surface containing the anchored component. When the reaction is complete, unreacted components are removed, for example, by washing, and complexes anchored to the solid surface are detected. When the originally non-immobilized component carries a detectable marker, the detection of the immobilized marker on the surface indicates that the formation of the complex took place. When the originally non-immobilized component does not carry a label, complex formation can be detected, for example, using a labeled antibody that specifically binds to the immobilized complex. [0177] If the candidate compound interacts with, but not without binding, a particular PRO1122 polypeptide encoded by a gene identified in the present invention, its interaction with that polypeptide can be assayed by known methods to detect protein-protein interactions. Such tests include traditional approaches, such as, for example, cross-linking, coinmunoprecipitation and copurification through chromatographic gradients or columns. In addition, protein-protein interactions can be monitored using yeast-based genetic systems described by Fields et al. (Fields and Song, Nature (London), 340: 245-246 (1989); Chien et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,

88: 9578-9582 (1991) tal como se describe por Chevray y Nathans, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 5789-5793 (1991). Muchos activadores transcripcionales, tales como GAL4 de levadura, consisten en dos dominios modulares físicamente discretos, uno actuando como el dominio de unión a ADN, mientras que el otro actúa como el dominio de activación de la transcripción. El sistema de expresión en las levaduras descrito en las publicaciones anteriores (referido generalmente como “el sistema de dos híbridos”) saca ventaja de esta propiedad y utiliza dos proteínas híbridas, una en la que la proteína diana se fusiona al dominio de unión a ADN de GAL4, y otra, en la que las proteínas activadoras candidatas se fusionan al dominio de activación. La expresión de un gen informador GAL1-lacZ bajo el control de un promotor activado por GAL4 depende de la reconstitución de la actividad de GAL4 a través de la interacción de proteína-proteína. Las colonias que contienen polipéptidos que interaccionan se detectan con un sustrato cromatogénico para -galactosidasa. En Clontech se encuentra disponible comercialmente un equipo completo (MATCHMAKERTM) para identificar interacciones proteína-proteína entre dos proteínas específicas utilizando la técnica de dos híbridos. Este sistema también se puede extender para mapear dominios de proteínas implicados en las interacciones de proteínas específicas así como para precisar los residuos de aminoácidos que son cruciales para estas interacciones. [0178] Los compuestos que interfieren con la interacción de un gen que codifica un polipéptido PRO1122 identificado en la presente invención y otros componentes intra 88: 9578-9582 (1991) as described by Chevray and Nathans, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 89: 5789-5793 (1991). Many transcriptional activators, such as yeast GAL4, consist of two physically discrete modular domains, one acting as the DNA binding domain, while the other acts as the transcription activation domain. The yeast expression system described in previous publications (generally referred to as "the two hybrid system") takes advantage of this property and uses two hybrid proteins, one in which the target protein is fused to the DNA binding domain of GAL4, and another, in which the candidate activating proteins are fused to the activation domain. The expression of a GAL1-lacZ reporter gene under the control of a GAL4 activated promoter depends on the reconstitution of GAL4 activity through the protein-protein interaction. Colonies that contain polypeptides that interact are detected with a chromatogenic substrate for gala-galactosidase. A complete kit (MATCHMAKERTM) is available commercially at Clontech to identify protein-protein interactions between two specific proteins using the two-hybrid technique. This system can also be extended to map protein domains involved in specific protein interactions as well as to specify amino acid residues that are crucial to these interactions. [0178] Compounds that interfere with the interaction of a gene encoding a PRO1122 polypeptide identified in the present invention and other intra components

o extracelulares, se pueden ensayar de la siguiente manera: se prepara habitualmente una mezcla de reacción que contiene el producto del gen y el componente intra o extracelular en condiciones y durante un tiempo que permite la interacción y unión de los dos productos. Para ensayar la capacidad de un compuesto candidato para inhibir la or extracellular, can be tested as follows: a reaction mixture is usually prepared containing the product of the gene and the intra or extracellular component under conditions and for a time that allows the interaction and union of the two products. To test the ability of a candidate compound to inhibit the

unión, la reacción se realiza en ausencia y presencia del compuesto de prueba. Además, se puede añadir un placebo a una tercera mezcla de reacción, para utilizar como control positivo. La unión (formación de complejo) entre el compuesto de prueba y el componente intra o extracelular presente en la mezcla se monitoriza tal como se ha descrito anteriormente en la presente invención. La formación de un complejo en la reacción o reacciones de control, pero no en la mezcla de reacción que contiene el compuesto de prueba, indica que el compuesto de prueba interfiere con la interacción del compuesto de prueba y su compañero de reacción. [0179] Los antagonistas se pueden detectar mediante la combinación del polipéptido PRO1122 y un antagonista potencial con los receptores de polipéptido PRO1122 unidos a membrana o receptores recombinantes bajo condiciones apropiadas para un ensayo de inhibición competitiva. El polipéptido PRO1122 se puede marcar, por ejemplo, mediante radiactividad, de manera que el número de moléculas de polipéptidos PRO1122 unidas al receptor se puede utilizar para determinar la eficacia del potencial antagonista. El gen que codifica el receptor se puede identificar mediante numerosos procedimientos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, “panning” de ligando y clasificación de FACS. Coligan et al. Current Protocols in Immun., 1(2): Capítulo 5 (1991). Preferiblemente, la clonación de la expresión se utiliza cuando el ARN poliadenilado se prepara a partir de una célula sensible al polipéptido PRO1122 y se divide en grupos una biblioteca de ADNc creada a partir de este ARN y se utiliza para transfectar células COS u otras células que no son sensibles al polipéptido PRO1122. Las células transfectadas que se desarrollan sobre portamuestras de vidrio se exponen a polipéptido PRO1122 marcado. El polipéptido PRO1122 se puede marcar mediante una variedad de medios que incluyen la yodación binding, the reaction is carried out in the absence and presence of the test compound. In addition, a placebo can be added to a third reaction mixture, to be used as a positive control. The binding (complex formation) between the test compound and the intra or extracellular component present in the mixture is monitored as described above in the present invention. The formation of a complex in the reaction or control reactions, but not in the reaction mixture containing the test compound, indicates that the test compound interferes with the interaction of the test compound and its reaction partner. [0179] Antagonists can be detected by combining the PRO1122 polypeptide and a potential antagonist with the membrane-bound PRO1122 polypeptide receptors or recombinant receptors under appropriate conditions for a competitive inhibition assay. The PRO1122 polypeptide can be labeled, for example, by radioactivity, so that the number of PRO1122 polypeptide molecules bound to the receptor can be used to determine the effectiveness of the antagonistic potential. The gene encoding the receptor can be identified by numerous methods known to those skilled in the art, for example, "ligand panning" and FACS classification. Coligan et al. Current Protocols in Immun., 1 (2): Chapter 5 (1991). Preferably, expression cloning is used when the polyadenylated RNA is prepared from a PRO1122 polypeptide sensitive cell and a cDNA library created from this RNA is divided into groups and used to transfect COS cells or other cells that they are not sensitive to the PRO1122 polypeptide. Transfected cells that develop on glass specimens are exposed to labeled PRO1122 polypeptide. PRO1122 polypeptide can be labeled by a variety of means including iodination.

o inclusión de un sitio de reconocimiento para una proteína quinasa específica de sitio. Tras la fijación e incubación, los portamuestras se someten a análisis autoradiográfico. Los grupos positivos se identifican y los sub-grupos se preparan y se retransfectan utilizando un proceso de subagrupación y recribado interactivos, obteniendo finalmente un único clon que codifica el receptor putativo. [0180] Como enfoque alternativo para la identificación del receptor, el polipéptido PRO1122 marcado se puede unir por fotoafinidad con la membrana celular o preparaciones de extractos que expresan la molécula receptora. El material reticulado se resuelve mediante PAGE y se expone a la película de rayos X. El complejo marcado que contiene el receptor se puede escindir, dividir en fragmentos de péptidos, y someter a la microsecuenciación de proteínas. La secuencia de aminoácidos obtenida a or inclusion of a recognition site for a site specific protein kinase. After fixation and incubation, the sample holders are subjected to autoradiographic analysis. The positive groups are identified and the subgroups are prepared and retransfected using an interactive sub-grouping and receiving process, finally obtaining a single clone encoding the putative receptor. [0180] As an alternative approach for the identification of the receptor, the labeled PRO1122 polypeptide can be linked by photoaffinity with the cell membrane or preparations of extracts expressing the receptor molecule. The crosslinked material is resolved by PAGE and exposed to the X-ray film. The labeled complex containing the receptor can be cleaved, divided into peptide fragments, and subjected to protein microsequencing. The amino acid sequence obtained at

partir de la microsecuenciación se utilizaría para diseñar un conjunto de sondas de oligonucleótidos degenerados para cribar una biblioteca de ADNc para identificar el gen que codifica el receptor putativo. [0181] En otro ensayo para antagonistas, las células de mamíferos o una preparación de membrana que expresa el receptor se incubarían con polipéptido PRO1122 marcado en presencia del compuesto candidato. A continuación, se podría eliminar la capacidad del compuesto para aumentar o bloquear esta interacción. [0182] Más ejemplos específicos de antagonistas potenciales incluyen un oligonucleótido que se une a las fusiones de inmunoglobulina con polipéptido PRO1122, y, en particular, anticuerpos que incluyen, sin limitación, anticuerpos policlonales y monoclonales y fragmentos de anticuerpos, anticuerpos de cadena única, anticuerpos anti-idiotípicos y las versiones quiméricas o humanizadas de dichos anticuerpos o fragmentos, así como anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpos. Alternativamente, un antagonista potencial puede ser una proteína estrechamente relacionada, por ejemplo, una forma mutada del polipéptido PRO1122 que reconoce el receptor pero no transmite el efecto, inhibiendo así competitivamente la acción del polipéptido PRO1122. La presente invención se limita a anticuerpos antagonistas tal como se define en las reivindicaciones. [0183] Otro potencial antagonista de polipéptido PRO1122 es una construcción de ADN o ARN antisentido preparada utilizando tecnología antisentido, cuando, por ejemplo, una molécula de ADN o ARN antisentido actúa para bloquear directamente la traducción del ARNm mediante la hibridación a ARNm marcado y evitando la traducción en la proteína. La tecnología antisentido se puede utilizar para controlar la expresión génica a través de la formación de una triple hélice o ADN o ARN antisentido, ambos procedimientos basados en la unión de un polinucleótido a ADN o ARN. Por ejemplo, la parte codificante 5’ de la secuencia del polinucleótido, que codifica los polipéptidos PRO1122 maduros de la presente invención, se utiliza para diseñar un oligonucleótido de ARN antisentido de aproximadamente 10 a 40 pares de bases de longitud. Se diseña un oligonucleótido de ADN para que sea complementario a una región del gen implicada en la transcripción (triple hélice – véase Lee et al., Nucl. Acids Res., 6:3073 (1979); Cooney et al., Science, 241: 456 (1988); Dervan et al., Science, 251: 1360 (1991)), evitando así la transcripción y la producción del polipéptido PRO1122. El oligonucleótido de ARN antisentido se hibrida al ARNm in vivo y bloquea la traducción de la molécula de ARNm en el polipéptido PRO1122 (antisentido – Okano, Neurochem., 56:560 (1991); Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (CRC Press: Boca Raton, FL, 1988). Los oligonucleótidos descritos anteriormente también se pueden liberar a las células, de manera que el ARN o ADN antisentido se pueden expresar in vivo para inhibir la producción del polipéptido PRO1122. Cuando se utiliza ADN antisentido, se prefieren oligodesoxiribonucleótidos derivados del sitio de iniciación de la traducción, por ejemplo, entre aproximadamente las posiciones -10 y +10 de la secuencia de nucleótidos del gen diana. [0184] Entre los antagonistas potenciales se incluyen pequeñas moléculas que se unen al sitio activo, el sitio de unión al receptor, o el factor de crecimiento u otro sitio de unión pertinente del polipéptido PRO1122, bloqueando de esta manera la actividad biológica normal del polipéptido PRO1122. Entre los ejemplos de moléculas pequeñas se incluyen, pero no se limitan a, péptidos pequeños o moléculas similares a péptidos, preferiblemente péptidos solubles y compuestos orgánicos o inorgánicos no peptídicos sintéticos. [0185] Las ribozimas son moléculas de ARN enzimáticas capaces de catalizar la división específica de ARN. Las ribozimas actúan mediante la hibridación específica de secuencia al ARN diana complementario, seguido de la división endonucleolítica. Los sitios de división específica de la ribozima en un ARN potencial diana se pueden identificar mediante técnicas conocidas. Para más detalles, véase, por ejemplo, Rossi, Current Biology, 4:469-471 (1994) y publicación de PCT No. WO 97/33551 (publicada el 18 de septiembre de 1997). [0186] Las moléculas de ácido nucleico en la formación de triple hélice utilizadas para inhibir la transcripción debería ser de cadena única y compuestas de desoxinucleótidos. La composición de las bases de estos oligonucleótidos se diseña de manera que induce la formación de la triple hélice a través de las reglas de emparejamiento de bases Hoogsteen, que generalmente requieren tramos considerables de purinas o pirimidinas en una cadena de una cadena doble. Para más detalles, véase, por ejemplo, la publicación de PCT No. WO 97/33551, supra. From microsequencing it would be used to design a set of degenerate oligonucleotide probes to screen a cDNA library to identify the gene encoding the putative receptor. [0181] In another assay for antagonists, mammalian cells or a membrane preparation expressing the receptor would be incubated with labeled PRO1122 polypeptide in the presence of the candidate compound. Then, the ability of the compound to increase or block this interaction could be eliminated. [0182] More specific examples of potential antagonists include an oligonucleotide that binds to immunoglobulin fusions with PRO1122 polypeptide, and, in particular, antibodies that include, without limitation, polyclonal and monoclonal antibodies and antibody fragments, single chain antibodies, anti-idiotypic antibodies and chimeric or humanized versions of said antibodies or fragments, as well as human antibodies and antibody fragments. Alternatively, a potential antagonist may be a closely related protein, for example, a mutated form of the PRO1122 polypeptide that recognizes the receptor but does not transmit the effect, thereby competitively inhibiting the action of the PRO1122 polypeptide. The present invention is limited to antagonistic antibodies as defined in the claims. [0183] Another potential PRO1122 polypeptide antagonist is an antisense DNA or RNA construct prepared using antisense technology, when, for example, an antisense DNA or RNA molecule acts to directly block mRNA translation by hybridization to labeled mRNA and preventing protein translation. Antisense technology can be used to control gene expression through the formation of a triple helix or antisense DNA or RNA, both procedures based on the binding of a polynucleotide to DNA or RNA. For example, the 5 'coding part of the polynucleotide sequence, which encodes the mature PRO1122 polypeptides of the present invention, is used to design an antisense RNA oligonucleotide of approximately 10 to 40 base pairs in length. A DNA oligonucleotide is designed to be complementary to a region of the gene involved in transcription (triple helix - see Lee et al., Nucl. Acids Res., 6: 3073 (1979); Cooney et al., Science, 241 : 456 (1988); Dervan et al., Science, 251: 1360 (1991)), thus avoiding transcription and production of the PRO1122 polypeptide. The antisense RNA oligonucleotide hybridizes to mRNA in vivo and blocks the translation of the mRNA molecule into the PRO1122 polypeptide (antisense - Okano, Neurochem., 56: 560 (1991); Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (CRC Press: Boca Raton, FL, 1988) The oligonucleotides described above can also be released into cells, so that the antisense RNA or DNA can be expressed in vivo to inhibit the production of the PRO1122 polypeptide.When antisense DNA is used, oligodeoxyribonucleotides are preferred. derivatives of the translation initiation site, for example, between about -10 and +10 positions of the nucleotide sequence of the target gene. [0184] Potential antagonists include small molecules that bind to the active site, the site receptor binding, or the growth factor or other relevant binding site of the PRO1122 polypeptide, thereby blocking activity normal biological of the PRO1122 polypeptide. Examples of small molecules include, but are not limited to, small peptides or peptide-like molecules, preferably soluble peptides, and synthetic non-peptide organic or inorganic compounds. [0185] Ribozymes are enzymatic RNA molecules capable of catalyzing the specific division of RNA. Ribozymes act by sequence specific hybridization to complementary target RNA, followed by endonucleolytic division. Specific ribozyme division sites in a potential target RNA can be identified by known techniques. For more details, see, for example, Rossi, Current Biology, 4: 469-471 (1994) and PCT Publication No. WO 97/33551 (published September 18, 1997). [0186] The nucleic acid molecules in the triple helix formation used to inhibit transcription should be single chain and composed of deoxynucleotides. The base composition of these oligonucleotides is designed so that it induces triple helix formation through the Hoogsteen base pairing rules, which generally require considerable stretches of purines or pyrimidines in a double chain chain. For more details, see, for example, PCT Publication No. WO 97/33551, supra.

I. Utilizaciones diagnósticas I. Diagnostic uses

[0187] Otra utilización de los compuestos descritos de la presente invención (por ejemplo, variantes PRO1122 y anticuerpos anti-PRO1122) descritos en la presente invención es ayudar a diagnosticar si un trastorno está dirigido, en cierto grado, por la señalización modulada por PRO1122. [0187] Another use of the described compounds of the present invention (eg, PRO1122 variants and anti-PRO1122 antibodies) described in the present invention is to help diagnose whether a disorder is directed, to some extent, by signaling modulated by PRO1122 .

[0188] Se puede llevar a cabo un ensayo de diagnóstico para determinar si un trastorno concreto (por ejemplo, trastorno cartilaginoso degenerativo) está dirigido por la señalización de PRO1122, utilizando las siguientes etapas: (1) cultivar células o tejidos de prueba que expresan PRO1122; (2) administrar un compuesto que puede inhibir la señalización modulada por PRO1122; y (3) medir los efectos fenotípicos mediados por PRO1122 en las células de prueba. Las etapas se pueden llevar a cabo utilizando técnicas estándar teniendo en cuenta la presente invención. Por ejemplo, las técnicas estándar se pueden utilizar para aislar células o tejidos y el cultivo in vivo. [0189] Los compuestos de diferente grado de selectividad son útiles para diagnosticar el papel de PRO1122. Por ejemplo, se pueden utilizar compuestos con PRO112, además de otra forma de molécula adaptadora, como compuesto de prueba inicial para determinar si una de las diferentes moléculas adaptadoras dirige el trastorno. A continuación, los compuestos selectivos se pueden utilizar para eliminar adicionalmente el posible papel de otras proteínas adaptadoras en la conducción del trastorno. Los compuestos de prueba deberían ser más potentes en la inhibición de la actividad de señalización intracelular que en la acción de un efecto citotóxico (por ejemplo, una IC50/LD50 superior a uno). La IC50 y LD50 se pueden medir mediante técnicas estándar, tales como un ensayo MTT o mediante la medición de cantidad de LDH liberada. El grado de IC50/LD50 de un compuesto debería tenerse en cuenta en la evaluación del ensayo diagnóstico. Generalmente, cuando mayor es la proporción más relativa es la información. Los controles apropiados que tienen en cuenta el posible efecto citotóxico de un compuesto, tal como el tratamiento de las células no asociadas con un trastorno proliferativo celular (por ejemplo, células de control) con un compuesto de prueba, también se pueden utilizar como parte del ensayo diagnóstico. Los procedimientos de diagnóstico de la presente invención implican el cribado de agentes que modulan los efectos de PRO1122 sobre los trastornos cartilaginosos degenerativos. Entre los ejemplos de técnicas de detección se incluyen el marcado radioactivo y la inmunoprecipitación (U.S.A. 5.385.915). [0190] Por ejemplo, se pueden utilizar anticuerpos, incluyendo fragmentos de anticuerpos, para detectar cualitativa y cuantitativamente la expresión de proteínas codificadas por los genes relacionados con la enfermedad (“productos génicos marcadores”). El anticuerpo preferiblemente está equipado con un marcador detectable, por ejemplo fluorescente, y la unión se puede monitorizar mediante microcopía de luz, citometría de flujo, fluorimetría u otras técnicas conocidas en el sector. [0188] A diagnostic test can be carried out to determine if a particular disorder (for example, degenerative cartilaginous disorder) is directed by signaling PRO1122, using the following steps: (1) culturing test cells or tissues that express PRO1122; (2) administering a compound that can inhibit signaling modulated by PRO1122; and (3) measure the phenotypic effects mediated by PRO1122 in the test cells. The steps can be carried out using standard techniques taking into account the present invention. For example, standard techniques can be used to isolate cells or tissues and culture in vivo. [0189] Compounds of different degree of selectivity are useful for diagnosing the role of PRO1122. For example, compounds with PRO112 can be used, in addition to another form of adapter molecule, as the initial test compound to determine if one of the different adapter molecules addresses the disorder. Then, the selective compounds can be used to further eliminate the possible role of other adapter proteins in the conduction of the disorder. Test compounds should be more potent in inhibiting intracellular signaling activity than in the action of a cytotoxic effect (for example, an IC50 / LD50 greater than one). The IC50 and LD50 can be measured by standard techniques, such as an MTT assay or by measuring the amount of LDH released. The degree of IC50 / LD50 of a compound should be taken into account in the evaluation of the diagnostic test. Generally, the greater the proportion, the more relative is the information. Appropriate controls that take into account the possible cytotoxic effect of a compound, such as the treatment of cells not associated with a cell proliferative disorder (eg, control cells) with a test compound, can also be used as part of the diagnostic test The diagnostic procedures of the present invention involve screening agents that modulate the effects of PRO1122 on degenerative cartilaginous disorders. Examples of detection techniques include radioactive labeling and immunoprecipitation (U.S.A. 5,385,915). [0190] For example, antibodies, including antibody fragments, can be used to qualitatively and quantitatively detect the expression of proteins encoded by disease-related genes ("marker gene products"). The antibody is preferably equipped with a detectable label, for example fluorescent, and the binding can be monitored by light microcopy, flow cytometry, fluorimetry or other techniques known in the art.

[0191] La detección in situ de la unión del anticuerpo a los productos génicos marcadores se puede realizar, por ejemplo, mediante inmunofluorescencia o microscopía inmunoelectrónica. Para este objetivo, se extrae una muestra histológica del paciente y se aplica un anticuerpo marcado a la misma, preferiblemente mediante el recubrimiento con anticuerpo de la muestra biológica. Este procedimiento también permite la determinación de la distribución del producto génico marcador en el tejido examinado. Será evidente para los expertos en la materia que hay disponibles una amplia variedad de procedimientos histológicos fácilmente disponibles para la detección in situ. [0191] In situ detection of antibody binding to marker gene products can be performed, for example, by immunofluorescence or immunoelectronic microscopy. For this purpose, a histological sample is extracted from the patient and a labeled antibody is applied thereto, preferably by antibody coating of the biological sample. This procedure also allows the determination of the distribution of the marker gene product in the examined tissue. It will be apparent to those skilled in the art that a wide variety of histological procedures readily available for in situ detection are available.

J. Composiciones farmacéuticas J. Pharmaceutical compositions

[0192] El PRO1122 o antagonistas del mismo (por ejemplo, anticuerpos), así como otras moléculas identificadas por los ensayos de cribado descritos anteriormente en la presente invención se pueden utilizar como agente terapéuticos. Dichos agentes terapéuticos se formulan según los procedimientos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, mediante los cuales el PRO1122, antagonista [0192] The PRO1122 or antagonists thereof (eg, antibodies), as well as other molecules identified by the screening assays described above in the present invention can be used as therapeutic agents. Said therapeutic agents are formulated according to known procedures to prepare pharmaceutically useful compositions, by which the PRO1122 antagonist

o agonista del mismo se combina en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. [0193] En el caso de anticuerpos antagonistas de PRO1122, si la proteína codificada por el gen amplificado es intracelular y todos los anticuerpos se utilizan como inhibidores, se prefieren anticuerpos internalizantes. Sin embargo, también se pueden utilizar lipofecciones o liposomas para liberar el anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo, en las células. Cuando se utilizan fragmentos de anticuerpos, se prefiere el fragmento inhibidor más pequeño que se une específicamente al dominio de unión de la proteína diana. Por ejemplo, en base a las secuencias de la región variable de un anticuerpo, se pueden diseñar moléculas péptido que mantienen la capacidad de unirse a la secuencia de proteínas diana. Dichos polipéptidos se pueden sintetizar químicamente y/o producir mediante tecnología de ADN recombinante (ver, por ejemplo, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893 [1993]). [0194] Las formulaciones terapéuticas se preparan para su almacenamiento mediante la mezcla del principio activo que tiene el grado deseado de pureza con portadores, excipientes o estabilizantes opcionales farmacéuticamente aceptables (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16a Edición, Osol, A. Ed. (1980)), en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los portadores, excipientes o estabilizantes or agonist thereof is combined in a mixture with a pharmaceutically acceptable carrier. [0193] In the case of PRO1122 antagonist antibodies, if the protein encoded by the amplified gene is intracellular and all antibodies are used as inhibitors, internalizing antibodies are preferred. However, lipofections or liposomes can also be used to release the antibody, or an antibody fragment, in the cells. When antibody fragments are used, the smaller inhibitor fragment that specifically binds to the binding domain of the target protein is preferred. For example, based on the sequences of the variable region of an antibody, peptide molecules can be designed that maintain the ability to bind to the target protein sequence. Such polypeptides can be chemically synthesized and / or produced by recombinant DNA technology (see, for example, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893 [1993]). [0194] Therapeutic formulations are prepared for storage by mixing the active ingredient having the desired degree of purity with pharmaceutically acceptable carriers, excipients or optional stabilizers (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Edition, Osol, A. Ed. (1980)) , in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. The carriers, excipients or stabilizers

aceptables son no tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones utilizadas, e incluyen tampones, tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como, cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquil parabens, tales como metil o propil paraben; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de peso molecular bajo (inferior a aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes, tales como EDTA; azúcares, tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales, tales como sodio; complejos de metales (por ejemplo, complejos de Zn-proteína); y/o tensoactivos no iónicos, tales como TWEENTM, PLURONICSTM Acceptable are non-toxic to the receptors at the doses and concentrations used, and include buffers, such as phosphate, citrate and other organic acids; antioxidants that include ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzetonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens, such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol); low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers, such as polyvinylpyrrolidone; amino acids, such as glycine, glutamine, asparagine, histidine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates that include glucose, mannose or dextrins; chelating agents, such as EDTA; sugars, such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions, such as sodium; metal complexes (for example, Zn-protein complexes); and / or non-ionic surfactants, such as TWEENTM, PLURONICSTM

o polietilenglicol (PEG). [0195] La formulación de la presente invención también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la enfermedad concreta a tratar, preferiblemente aquéllos con actividades complementarias que no se afectan de forma adversa entre sí. Alternativamente, o adicionalmente, la composición puede comprender un agente citotóxico, una citoquina o un agente inhibidor del crecimiento. Dichas moléculas están presentes de forma adecuada combinadas en cantidades que son eficaces para el objetivo deseado. [0196] Los principios activos también pueden estar contenidos en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización entre fases, por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli(metilmetacrilato), respectivamente, en sistemas de liberación de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences 16a Edición, Osol, A. Ed. (1980). [0197] Las formulaciones a utilizar para la administración in vivo deben ser estériles. Esto se consigue fácilmente mediante filtración a través de membranas de filtración estériles. [0198] Las composiciones terapéuticas de la presente invención generalmente se colocan en un recipiente que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o or polyethylene glycol (PEG). [0195] The formulation of the present invention may also contain more than one active compound as necessary for the particular disease to be treated, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other. Alternatively, or additionally, the composition may comprise a cytotoxic agent, a cytokine or a growth inhibiting agent. Said molecules are suitably present combined in amounts that are effective for the desired purpose. [0196] The active substances may also be contained in microcapsules prepared, for example, by coacervation techniques or by phase polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly (methylmethacrylate) microcapsules, respectively, in release systems of colloidal drugs (for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or in macroemulsions. These techniques are described in Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th Edition, Osol, A. Ed. (1980). [0197] The formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This is easily achieved by filtration through sterile filtration membranes. [0198] The therapeutic compositions of the present invention are generally placed in a container having a sterile access port, for example, a bag or

vial de solución intravenosa que tienen un tapón penetrable por una aguja de inyección hipodérmica. [0199] Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada. Entre los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación controlada se incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Entre los ejemplos de matrices de liberación controlada se incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato) o poli(vinilalcohol)), poliláctidos (Patente U.S.A. No. 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y  etil-L-glutamato, copolímeros de etileno-acetato de vinilo no degradables, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables, tales como el LUPRON DEPOTTM (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolide) y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. La microencapsulación de proteínas recombinantes para la liberación controlada se ha realizado satisfactoriamente con la hormona del crecimiento humano (rhGH), interferón- (rhIFN-), interleuquina-2, y MN rgp 120. Jonson et al., Nat. Med., 2:795799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27:1221-1223 (1993); Hora et al., Bio/Technology, 8:755-758 (1990); Cleland, “Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polyactide Polyglycolide Microsphere Systems”, en Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell y Newman, eds, (Plenum Press: Nueva York, 1995), páginas 439-462; WO 97/03692, WO 96/40072, WO 96/07399; y Patente U.S.A. No. 5.654.010. [0200] Las formulaciones de liberación controlada de estas proteínas se pueden desarrollar utilizando polímero de ácido poli-láctico-coglicólico (PLGA) debido a su biocompatibilidad y amplio rango de propiedades biodegradables. Los productos de degradación de PLGA, ácidos láctico y glicólico, se pueden aclarar rápidamente en el interior del cuerpo humano. Además, la degradabilidad de este polímero se puede ajustar de meses a años dependiendo de su peso molecular y la composición. Lewis, “Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer”, en Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: Nueva York, 1990), M. Chasin y R. Langer (Eds), páginas 1-41. [0201] Mientras polímeros, tales como etileno-acetato de vinilo y ácido láctico-ácido glicólico, permiten la liberación de moléculas durante 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante periodos más cortos de tiempo. Cuando los anticuerpos encapsulados permanecen en el cuerpo durante un periodo largo de tiempo, se desnaturalizan o agregan como resultado de la exposición a una humedad de 37oC, dando lugar a una pérdida de actividad biológica y posibles cambios en la inmunogenicidad. Se pueden idear varias estrategias racionales para la estabilización dependiendo del mecanismo implicado. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación es la formación de enlaces S-S intermoleculares a través del intercambio tio-disulfuro, la estabilización se puede conseguir mediante la modificación de residuos sulfhidrilo, la liofilización de soluciones ácidas, el control del contenido de humedad, la utilización de aditivos apropiados, y el desarrollo de composiciones de matrices de polímero específicas. vial of intravenous solution that have a plug penetrable by a hypodermic injection needle. [0199] Controlled release preparations can be prepared. Suitable examples of controlled release preparations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, whose matrices are in the form of shaped articles, for example, films or microcapsules. Examples of controlled release matrices include polyesters, hydrogels (e.g., poly (2-hydroxyethyl methacrylate) or polyvinyl alcohol), polylactides (US Patent No. 3,773,919), L-glutamic acid copolymers and  ethyl-L-glutamate, non-degradable ethylene-vinyl acetate copolymers, degradable lactic acid-glycolic acid copolymers, such as LUPRON DEPOTTM (injectable microspheres composed of lactic acid-glycolic acid copolymer and leuprolide acetate) and acid poly-D - (-) - 3-hydroxybutyric. Microencapsulation of recombinant proteins for controlled release has been successfully performed with human growth hormone (rhGH), interferon- (rhIFN-), interleukin-2, and MN rgp 120. Jonson et al., Nat. Med., 2 : 795799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27: 1221-1223 (1993); Hora et al., Bio / Technology, 8: 755-758 (1990); Cleland, "Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polyactide Polyglycolide Microsphere Systems", in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell and Newman, eds, (Plenum Press: New York, 1995), pages 439-462; WO 97/03692, WO 96/40072, WO 96/07399; and U.S.A. No. 5,654,010. [0200] The controlled release formulations of these proteins can be developed using poly-lactic-coglycolic acid polymer (PLGA) due to their biocompatibility and wide range of biodegradable properties. The degradation products of PLGA, lactic and glycolic acids, can be rapidly cleared inside the human body. In addition, the degradability of this polymer can be adjusted from months to years depending on its molecular weight and composition. Lewis, "Controlled release of bioactive agents from lactide / glycolide polymer", in Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), M. Chasin and R. Langer (Eds), pages 1-41. [0201] While polymers, such as ethylene-vinyl acetate and lactic acid-glycolic acid, allow the release of molecules for 100 days, certain hydrogels release proteins for shorter periods of time. When encapsulated antibodies remain in the body for a long period of time, they are denatured or added as a result of exposure to a humidity of 37oC, resulting in a loss of biological activity and possible changes in immunogenicity. Several rational strategies for stabilization can be devised depending on the mechanism involved. For example, if it is discovered that the mechanism of aggregation is the formation of intermolecular SS bonds through thio-disulfide exchange, stabilization can be achieved by modifying sulfhydryl residues, lyophilization of acid solutions, moisture content control. , the use of appropriate additives, and the development of specific polymer matrix compositions.

K. Procedimientos de tratamiento K. Treatment procedures

[0202] Se considera que los compuestos de la presente invención se pueden utilizar para tratar varias condiciones, incluyendo las caracterizadas por la sobreexpresión y/o activación de los genes asociados a las enfermedades identificados en la presente invención. La presente invención proporciona los usos relacionados para antagonistas de PRO1122, así como antagonistas para su uso en dichos procedimientos, ambos tal y como se definen en las reivindicaciones. Entre los ejemplos de condiciones o trastornos a tratar con dichos anticuerpos se encuentran los trastornos cartilaginosos degenerativos, que incluyen trastornos inflamatorios e inmunogénicos caracterizados por la ruptura de la matriz del cartílago, tales como la artritis (por ejemplo, osteoartritis, artritis psoriática, artritis reumatoide). [0203] Los agentes activos de la presente invención, por ejemplo, anticuerpos, se administran a un mamífero, preferiblemente un humano, según los procedimientos conocidos, tales como administración intravenosa como bolo o mediante infusión continua durante un periodo de tiempo, mediante las rutas intramusuclar, intraperitoneal, intracerebroespinal, subcutánea, intraarticular, intrasinovial, intratecal, intraocular, intralesional, oral, tópica o por inhalación o a través de la liberación controlada. [0204] Otras pautas terapéuticas se pueden combinar con la administración de los anticuerpos antagonistas de la presente invención. [0205] Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosificación de un agente activo (por ejemplo, un anticuerpo) dependerá del tipo de enfermedad a tratar, tal y como se han definido anteriormente, la gravedad y la evolución de la enfermedad, si el agente se administra con objetivos preventivos o terapéuticos, terapia previa, el historial clínico del paciente y la respuesta al agente y la discreción del médico de asistencia. El agente se administra de forma adecuada al paciente en una vez o durante una serie de tratamientos. [0206] Las dosificaciones y concentración deseada del fármaco de las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden variar dependiendo de la utilización particular prevista. La determinación de la dosificación o la ruta de administración apropiadas están dentro del conocimiento de un técnico en la materia. Los experimentos con animales proporcionan unas directrices fiables para la determinación de las dosis eficaces para terapia humana. El escalado entre especies de dosis eficaces se puede llevar a cabo siguiendo los principios establecidos por Mordenti, J. y Chappell, W. “The use of interspecies scaling in toxicokinetics” en Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds., Pergamon Press, Nueva York, 1989, páginas 42-46. [0207] Cuando se utiliza la administración in vivo de un polipéptido PRO1122 o agonista o antagonista del mismo, las cantidades de dosificación normales pueden variar desde aproximadamente 10 ng/kg hasta 100 mg/kg de peso corporal de mamífero o más por día, preferiblemente aproximadamente 1 g/kg/día hasta 100 mg/kg de peso corporal de mamífero o más por día, dependiendo de la ruta de administración. En la literatura se proporciona una guía relacionada con las dosis concretas y los procedimientos de liberación; ver, por ejemplo, las Patentes U.S.A. Nos. 4.657.760; 5.206.344 o 5.225.212. Está dentro del alcance de la presente invención que diferentes formulaciones serán eficaces para diferentes compuestos de tratamiento y diferentes trastornos, que la administración dirigida a un órgano o tejido, por ejemplo, puede necesitar la liberación de una manera diferente a la de otro órgano [0202] It is considered that the compounds of the present invention can be used to treat various conditions, including those characterized by overexpression and / or activation of genes associated with the diseases identified in the present invention. The present invention provides the related uses for PRO1122 antagonists, as well as antagonists for use in said methods, both as defined in the claims. Examples of conditions or disorders to be treated with such antibodies include degenerative cartilaginous disorders, which include inflammatory and immunogenic disorders characterized by rupture of the cartilage matrix, such as arthritis (for example, osteoarthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis ). [0203] The active agents of the present invention, for example, antibodies, are administered to a mammal, preferably a human, according to known methods, such as intravenous administration as a bolus or by continuous infusion over a period of time, via the routes intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinal, subcutaneous, intraarticular, intrasynovial, intrathecal, intraocular, intralesional, oral, topical or by inhalation or through controlled release. [0204] Other therapeutic guidelines may be combined with the administration of antagonistic antibodies of the present invention. [0205] For the prevention or treatment of the disease, the dosage of an active agent (for example, an antibody) will depend on the type of disease to be treated, as defined above, the severity and evolution of the disease. , if the agent is administered with preventive or therapeutic objectives, prior therapy, the patient's medical history and the response to the agent and the discretion of the attending physician. The agent is properly administered to the patient at one time or during a series of treatments. [0206] The dosages and desired drug concentration of the pharmaceutical compositions of the present invention may vary depending on the particular intended use. The determination of the appropriate dosage or route of administration is within the knowledge of a person skilled in the art. Animal experiments provide reliable guidelines for the determination of effective doses for human therapy. Scaling between species of effective doses can be carried out following the principles established by Mordenti, J. and Chappell, W. "The use of interspecies scaling in toxicokinetics" in Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds., Pergamon Press, New York, 1989, pages 42-46. [0207] When the in vivo administration of a PRO1122 polypeptide or agonist or antagonist thereof is used, normal dosage amounts may vary from about 10 ng / kg to 100 mg / kg of mammalian body weight or more per day, preferably approximately 1 /g / kg / day up to 100 mg / kg of mammalian body weight or more per day, depending on the route of administration. The literature provides guidance related to specific doses and release procedures; see, for example, U.S. Pat. Nos. 4,657,760; 5,206,344 or 5,225,212. It is within the scope of the present invention that different formulations will be effective for different treatment compounds and different disorders, that administration directed to one organ or tissue, for example, may require release in a different way from that of another organ.

o tejido. Además, las dosis se pueden administrar mediante una o más administraciones separadas, o mediante infusión continua. Para administraciones repetitivas durante varios días o más largas, dependiendo de la condición, el tratamiento se mantiene hasta que tenga lugar la supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, otras pautas de dosificación pueden ser útiles. El progreso de esta terapia se monitoriza fácilmente mediante técnicas y ensayos convencionales. or tissue In addition, the doses can be administered by one or more separate administrations, or by continuous infusion. For repetitive administrations for several days or longer, depending on the condition, the treatment is maintained until the desired suppression of the symptoms of the disease takes place. However, other dosage guidelines may be useful. The progress of this therapy is easily monitored by conventional techniques and tests.

L. L.

Artículos de fabricación Manufacturing items

[0208] Se puede proporcionar un artículo de fabricación que contiene materiales útiles para el diagnóstico o tratamiento de los trastornos descritos anteriormente. El artículo de fabricación comprende un recipiente y un marcador. Entre los recipientes adecuados se incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas y tubos de ensayo. Los recipientes pueden estar formados de una variedad de materiales, tales como vidrio o plástico. El recipiente contiene una composición que es eficaz para el diagnóstico o el tratamiento de la enfermedad y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa o un vial de solución intravenosa que tiene un tapón penetrable por una aguja de inyección hipodérmica). El agente activo en la composición es habitualmente un polipéptido PRO1122, antagonista o agonista del mismo. El marcador en el recipiente o asociado con el mismo indica que la composición se utiliza para el diagnóstico o el tratamiento de la enfermedad de elección. El artículo de fabricación puede comprender además un segundo recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como una solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Pueden incluir también otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas, jeringas y prospectos con instrucciones para su uso. [0209] Los siguientes ejemplos se ofrecen sólo con objetivos ilustrativos, y no pretenden limitar de ningún modo el alcance de la presente invención. [0208] An article of manufacture containing materials useful for the diagnosis or treatment of the disorders described above may be provided. The article of manufacture comprises a container and a marker. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes and test tubes. The containers may be formed of a variety of materials, such as glass or plastic. The container contains a composition that is effective for the diagnosis or treatment of the disease and may have a sterile access port (for example, the container may be a bag or vial of intravenous solution having a plug penetrable by a needle of hypodermic injection). The active agent in the composition is usually a PRO1122 polypeptide, antagonist or agonist thereof. The marker in the container or associated with it indicates that the composition is used for the diagnosis or treatment of the disease of choice. The article of manufacture may further comprise a second container comprising a pharmaceutically acceptable buffer, such as a phosphate buffered saline solution, Ringer's solution and dextrose solution. They may also include other desirable materials from a commercial and user point of view, including other buffers, diluents, filters, needles, syringes and leaflets with instructions for use. [0209] The following examples are offered for illustrative purposes only, and are not intended to limit the scope of the present invention in any way.

EJEMPLOS EXAMPLES

[0210] Los reactivos disponibles comercialmente a los que se hace referencia en los ejemplos se utilizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante a menos que se indique lo contrario. El origen de las células identificadas en los siguientes ejemplos, y a lo largo del documento, por los números de acceso de la ATCC pertenece a la American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. [0210] Commercially available reagents referred to in the examples were used in accordance with the manufacturer's instructions unless otherwise indicated. The origin of the cells identified in the following examples, and throughout the document, by the ATCC access numbers belongs to the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland.

EJEMPLO 1 base: Aislamiento de clones de ADNc que codifican PRO1031 humano EXAMPLE 1 base: Isolation of cDNA clones encoding human PRO1031

[0211] Se utilizaron secuencias del dominio extracelular (ECD) (incluyendo la señal de secreción, si existe) de aproximadamente 950 proteínas secretadas conocidas de la base de datos de proteínas pública Swiss-Prot para buscar bases de datos de etiquetas de secuencias expresadas (EST). Las bases de datos de EST incluían bases de datos públicas de EST (por ejemplo, Banco de Genes, Merck/Wash U.) y una base de datos de ADN de EST privada (LIFESEQ(R), Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA). La búsqueda se realizó utilizando el programa informático BLAST o BLAST-2 (Altshul et al. Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)) como comparación de las secuencias de proteínas de ECD con una traducción de 6 marcos de la secuencia de EST. Aquellas comparaciones que daban lugar a un resultado BLAST de 70 (o en algunos casos de 90) o superior que no codificaba proteínas conocidas se agruparon y ensamblaron en las secuencias de ADN de consenso con el programa “phrap” (Phil Green, Universidad de Washington, Seattle, Washington). [0212] Un fragmento de secuencia virtual inicial (ensamblaje de consenso) se ensambló en relación a otras secuencias de EST utilizando phrap. La secuencia de ADN de consenso inicial se extendió utilizando ciclos repetidos de BLAST y phrap para extender la secuencia de consenso tanto como sea posible utilizando los orígenes de secuencias EST descritas anteriormente. Los resultados de este ensamblaje se muestran en la figura 5 (SEC ID No: 5), también referido como DNA47332. [0213] Se examinó adicionalmente una secuencia que comprende el ensamablaje de consenso W74558 (clon 344649) (SEC ID No: 6). La secuencia se obtuvo del consorcio IMAGE y se analizó. Lennon et al., Genomics 33:151 (1996). La secuenciación de ADN produjo la secuencia de ADN de longitud completa para PRO1031 [designado en la presente invención como DNA59294-1381] (SEC ID No: 2) y la secuencia de proteínas derivada de PRO1031 (UNQ516) (SEC ID No: 1). [0214] La secuencia de nucleótidos completa de DNA59294-1381 se muestra en la figura 2 (SEC ID No: 2). El clon DNA59294-1381 contiene un único marco de lectura abierto con un sitio de iniciación traduccional aparente en las posiciones de nucleótidos 42-44 y extremo en el codón de finalización en las posiciones de nucleótidos 582-584 (figura 2) (SEC ID No: 2). El precursor del polipéptido predicho tiene 180 aminoácidos de longitud (figura 1) (SEC ID No: 1). La proteína PRO1031 (UNQ5.16) de longitud completa mostrada en la figura 2 (SEC ID No: 1) tiene un peso molecular estimado de aproximadamente 20437 y un pI de aproximadamente 9,58. El clon DNA59294-1381 (SEC ID No: 2) se ha depositado con la ATCC y se le ha asignado el número de depósito 209866. En el caso de cualquier irregularidad o error en la secuenciación con las secuencias proporcionadas en la presente invención, se entiende que los clones depositados contienen la secuencia correcta para DNA59624 (SEC ID No: 2). Además, las secuencias proporcionadas en la presente invención son el resultado de técnicas de secuenciación conocidas. [0215] El análisis de la secuencia de aminoácidos del polipéptido PRO1031 de longitud completa (UNQ516) (SEC ID No: 1) sugiere que es una citoquina nueva. [0211] Extracellular domain (ECD) sequences (including the secretion signal, if any) of approximately 950 known secreted proteins from the Swiss-Prot public protein database were used to search for expressed sequence tag databases ( ITS T). EST databases included public EST databases (for example, Bank of Genes, Merck / Wash U.) and a private EST DNA database (LIFESEQ (R), Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA ). The search was performed using the BLAST or BLAST-2 software (Altshul et al. Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)) as a comparison of ECD protein sequences with a 6-frame translation of the EST sequence . Those comparisons that resulted in a BLAST result of 70 (or in some cases 90) or higher that did not encode known proteins were grouped and assembled in consensus DNA sequences with the "phrap" program (Phil Green, University of Washington , Seattle, Washington). [0212] An initial virtual sequence fragment (consensus assembly) was assembled relative to other EST sequences using phrap. The initial consensus DNA sequence was extended using repeated cycles of BLAST and phrap to extend the consensus sequence as much as possible using the origins of EST sequences described above. The results of this assembly are shown in Figure 5 (SEQ ID No: 5), also referred to as DNA47332. [0213] A sequence comprising consensus assembly W74558 (clone 344649) (SEQ ID No: 6) was further examined. The sequence was obtained from the IMAGE consortium and analyzed. Lennon et al., Genomics 33: 151 (1996). DNA sequencing produced the full length DNA sequence for PRO1031 [designated in the present invention as DNA59294-1381] (SEQ ID No: 2) and the protein sequence derived from PRO1031 (UNQ516) (SEQ ID No: 1) . [0214] The complete nucleotide sequence of DNA59294-1381 is shown in Figure 2 (SEQ ID No: 2). Clone DNA59294-1381 contains a single open reading frame with an apparent translational initiation site at nucleotide positions 42-44 and end at the termination codon at nucleotide positions 582-584 (Figure 2) (SEQ ID No : 2). The predicted polypeptide precursor is 180 amino acids in length (Figure 1) (SEQ ID No: 1). The full-length PRO1031 (UNQ5.16) protein shown in Figure 2 (SEQ ID No: 1) has an estimated molecular weight of approximately 20437 and a pI of approximately 9.58. Clone DNA59294-1381 (SEQ ID No: 2) has been deposited with ATCC and assigned deposit number 209866. In the case of any irregularity or error in sequencing with the sequences provided in the present invention, understands that deposited clones contain the correct sequence for DNA59624 (SEQ ID No: 2). In addition, the sequences provided in the present invention are the result of known sequencing techniques. [0215] Analysis of the amino acid sequence of the full-length PRO1031 polypeptide (UNQ516) (SEQ ID No: 1) suggests that it is a new cytokine.

[0216] El análisis adicional de la secuencia de aminoácidos de SEC ID No: 2 revela que el péptido señal putativo está en aproximadamente los aminoácidos 1-20 de SEC ID No: 2. Un sitio de N-glicosilación están en aproximadamente los aminoácidos 7578 de SEC ID No: 2. Una región que tiene una identidad en la secuencia con IL-17 está en aproximadamente los aminoácidos 96-180. Los correspondientes nucleótidos se pueden determinar de forma rutinaria dadas las secuencias proporcionadas en la presente invención. [0216] Further analysis of the amino acid sequence of SEQ ID No: 2 reveals that the putative signal peptide is at approximately amino acids 1-20 of SEQ ID No: 2. An N-glycosylation site is at approximately amino acids 7578 of SEQ ID No: 2. A region that has an identity in the sequence with IL-17 is at approximately amino acids 96-180. The corresponding nucleotides can be determined routinely given the sequences provided in the present invention.

EJEMPLO 1: Aislamiento de clones de ADNc que codifican PRO1122 humano EXAMPLE 1: Isolation of cDNA clones encoding human PRO1122

[0217] Se buscó una base de datos de ADN de etiquetas de secuencias expresadas (EST) (LIFESEQ®, Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA) y se identificó una EST. La EST fue Incyte 1347533 (SEC ID No: 7), también llamada DNA49665. En base a DNA49665 (SEC ID No: 7), se sintetizaron oligonucleótidos: 1) para identificar mediante PCR una biblioteca de ADNc que contenía la secuencia de interés, y 2) para utilizar como sondas para aislar un clon de la secuencia codificante de longitud completa para el PRO1122 [por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989); Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]. [0218] Los cebadores de PCR directos e inversos varían generalmente de 20 a 30 nucleótidos y se diseñan habitualmente para obtener un producto de PCR de aproximadamente 100-1000 pb de longitud. Las secuencias de las sondas tienen habitualmente de 40-55 pb de longitud. En algunos casos, se sintetizan oligonucleótidos adicionales cuando la secuencia de consenso es mayor que aproximadamente de 1-1,5 kpb. Con el fin de cribar varias bibliotecas para un clon de longitud completa, se cribó el ADN de las bibliotecas mediante amplificación por PCR, como por Ausuble et al. Current Protocols in Molecular Biology, con la pareja de cebadores de PCR. A continuación, se utilizó una biblioteca positiva para aislar clones que codifican el gen de interés utilizando el oligonucleótido de sonda y una de las parejas de cebadores. Se sintetizaron cebadores para PCR (directo, inverso, de hibridación): Cebador directo para PCR: 5’-ATCCACAGAAGCTGGCCTTCGCCG-3’ (SEC ID No: 8) Cebador inverso para PCR: 5’-GGGACGTGGATGAACTCGGTGTGG-3’ (SEC ID [0217] A DNA database of expressed sequence tags (EST) (LIFESEQ®, Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA) was searched and an EST was identified. The EST was Incyte 1347533 (SEQ ID No: 7), also called DNA49665. Based on DNA49665 (SEQ ID No: 7), oligonucleotides were synthesized: 1) to identify by PCR a cDNA library containing the sequence of interest, and 2) to use as probes to isolate a clone from the length coding sequence complete for PRO1122 [eg, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989); Dieffenbach et al., PCR First: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]. [0218] Direct and reverse PCR primers generally range from 20 to 30 nucleotides and are usually designed to obtain a PCR product approximately 100-1000 bp in length. The sequences of the probes are usually 40-55 bp in length. In some cases, additional oligonucleotides are synthesized when the consensus sequence is greater than about 1-1.5 kbp. In order to screen several libraries for a full length clone, the DNA of the libraries was screened by PCR amplification, as by Ausuble et al. Current Protocols in Molecular Biology, with the PCR primer pair. Next, a positive library was used to isolate clones encoding the gene of interest using the probe oligonucleotide and one of the primer pairs. PCR primers (direct, reverse, hybridization) were synthesized: Direct PCR primer: 5’-ATCCACAGAAGCTGGCCTTCGCCG-3 ’(SEQ ID No: 8) Reverse PCR primer: 5’-GGGACGTGGATGAACTCGGTGTGG-3’ (SEQ ID

No: 9) Sonda de hibridación: 5’-TATCCACAGAAGCTGGCCTTCGCCGAGT GCCTGTGCAGAG-3’ (SEC ID No: 10) No: 9) Hybridization probe: 5’-TATCCACAGAAGCTGGCCTTCGCCGAGT GCCTGTGCAGAG-3 ’(SEQ ID No: 10)

[0219] Con el fin de cribar diversas bibliotecas para una fuente de un clon de longitud completa, se cribó ADN de las bibliotecas mediante amplificación por PCR con la pareja de cebadores de PCR identificadas anteriormente. A continuación, se utilizó una biblioteca positiva para aislar clones que codifican el gen de PRO1122 utilizando el oligonucleótido de sonda y una de las parejas de cebadores. [0220] El ARN para la construcción de las bibliotecas de ADNc se aisló de tejido de riñón fetal humano. Se construyeron bibliotecas de ADNc utilizadas para aislar los clones de ADNc utilizando procedimientos estándar que utilizan reactivos comercialmente disponibles, tales como los de Invitrogen, San Diego, CA. El ADNc se cebó con oligo dT que contenía un sitio NotI, se unió con adaptadores de Sall con hemiquinasa romos, se dividió con NotI, se calculó el tamaño mediante electroforesis en gel, y se clonó en una orientación definida en un vector de clonación adecuado (tal como pRKB o pRKD; pRK5B es un precursor de pRK5D que no contiene el sitio Sfil; véase, Colmes et al., Science 235: 1278-1280 (1991)) en los sitios XhoI y Notl únicos. [0221] La secuenciación de ADN de los clones aislados tal y como se ha descrito anteriormente produjo la secuencia de ADN de longitud completa para PRO1122 [designada en la presente invención como DNA62377-1381-1] (SEC ID No: 4) y la secuencia PRO122 de la proteína derivada (UNQ561) (SEC ID No: 3). [0222] La secuencia de nucleótidos completa de DNA62377-1381-1 (SEC ID No: 4) se muestra en las figuras 4A-4B (SEC ID No: 4). El clon DNA62377-1381-1 (SEC ID No: 4) contiene un único marco de lectura abierto con un sitio de iniciación traduccional aparente en las posiciones de nucleótidos 50-52 y extremo en el codón de finalización en las posiciones de nucleótidos 641-643 de SEC ID No: 4 (figuras 4A4B). El precursor del polipéptido predicho tiene 197 aminoácidos de longitud (figura 3) (SEC ID No: 3). La proteína PRO1122 de longitud completa mostrada en la figura 3 (UNQ561) (SEC ID No: 3) tiene un peso molecular estimado de aproximadamente 21765 daltons y un pI de aproximadamente 8,53. El clon DNA62377-1381-1 se ha depositado con la ATCC el 22 de diciembre de 1998 y se le ha asignado el número de depósito 203552. Se entiende que en el caso de cualquier irregularidad o error en la secuenciación con las secuencias proporcionadas en la presente invención, la secuencia [0219] In order to screen various libraries for a clone length source complete, DNA from the libraries was screened by PCR amplification with the pair of PCR primers identified above. Next, a positive library to isolate clones encoding the PRO1122 gene using the probe oligonucleotide and one of the primer pairs. [0220] RNA for the construction of cDNA libraries was isolated from tissue of human fetal kidney. CDNA libraries used to isolate the cDNA clones using standard procedures that use reagents commercially available, such as those from Invitrogen, San Diego, CA. The cDNA is primed with oligo dT that contained a NotI site, joined with Sall adapters with blunt hemikinase, was divided with NotI, size was calculated by electrophoresis gel, and was cloned in a defined orientation in a suitable cloning vector (such as pRKB or pRKD; pRK5B is a precursor of pRK5D that does not contain the Sfil site; see, Colmes et al., Science 235: 1278-1280 (1991)) at the unique XhoI and Notl sites. [0221] DNA sequencing of isolated clones as described previously produced the full length DNA sequence for PRO1122 [designated in the present invention as DNA62377-1381-1] (SEQ ID No: 4) and the PRO122 sequence of the derived protein (UNQ561) (SEQ ID No: 3). [0222] The complete nucleotide sequence of DNA62377-1381-1 (SEQ ID No: 4) It is shown in Figures 4A-4B (SEQ ID No: 4). Clone DNA62377-1381-1 (SEQ ID No: 4) contains a single open reading frame with an initiation site translational apparent in nucleotide positions 50-52 and end in the codon of termination at nucleotide positions 641-643 of SEQ ID No: 4 (Figures 4A4B). The predicted polypeptide precursor is 197 amino acids in length (figure 3) (SEQ ID No: 3). The full-length PRO1122 protein shown in Figure 3 (UNQ561) (SEQ ID No: 3) has an estimated molecular weight of approximately 21765 daltons and a pI of approximately 8.53. Clone DNA62377-1381-1 has been deposited with the ATCC on December 22, 1998 and has been assigned the number of deposit 203552. It is understood that in the case of any irregularity or error in the sequencing with the sequences provided in the present invention, the sequence

correcta es la secuencia depositada. Además, todas las secuencias proporcionadas en la presente invención son el resultado de técnicas de secuenciación conocidas. [0223] El análisis de la secuencia de aminoácidos de PRO1122 de longitud completa aislado (UNQ561) sugiere que posee una similitud con IL-17, indicando de este modo que PRO1122 (UNQ561) puede ser una citoquina nueva. La figura 3 (SEC ID No: 3) también muestra las localizaciones aproximadas del péptido señal, patrón de la cremallera de leucinas, y una región que tiene identidad de secuencia con IL-17. Los nucleótidos correspondientes se pueden determinar de forma rutinaria, por ejemplo, haciendo referencia a las figuras 4A-4B. correct is the deposited sequence. In addition, all sequences provided in the present invention are the result of known sequencing techniques. [0223] Analysis of the isolated full-length PRO1122 amino acid sequence (UNQ561) suggests that it has a similarity to IL-17, thus indicating that PRO1122 (UNQ561) may be a new cytokine. Figure 3 (SEQ ID No: 3) also shows the approximate locations of the signal peptide, leucine zipper pattern, and a region that has sequence identity with IL-17. The corresponding nucleotides can be determined routinely, for example, by reference to Figures 4A-4B.

EJEMPLO 2: Utilización de ADN que codifica PRO1122 como sonda de hibridación EXAMPLE 2: Use of DNA encoding PRO1122 as a hybridization probe

[0224] El siguiente procedimiento describe la utilización de una secuencia de nucleótidos que codifica PRO1122 como sonda de hibridación. [0225] Se utiliza ADN que comprende la secuencia codificante PRO1122 de longitud completa (tal como se muestra en la figura 4, SEC ID No: 4) o un fragmento de la misma como sonda para cribar los ADNs homólogos (tales como aquéllos que codifican variantes naturales de PRO1122 en bibliotecas de ADNc de tejido humano o bibliotecas genómicas de tejido humano). [0226] La hibridación y el lavado de filtros que contienen cualquier ADN de biblioteca se realizan según las siguientes condiciones de astringencia elevada. La hibridación de la sonda radiomarcada derivada del polipéptido PRO1122 a los filtros se realiza en una solución al 50% de formamida, 5x SSC, SDS al 0,1%, pirofosfato de sodio al 0,1%, 50 mM de fosfato de sodio, pH 6,8, 2x de solución de Denhardt, y sulfato de dextrano al 10% a 42ºC durante 20 horas. El lavado de los filtros se realiza en una solución acuosa de 0,1x SSC y SDS al 0,1% a 42ºC. [0227] A continuación, se pueden identificar los ADNs que tienen una identidad en la secuencia deseada con el ADN que codifica el polipéptido PRO1122 de secuencia nativa de longitud completa utilizando las técnicas estándar conocidas en el sector [0224] The following procedure describes the use of a nucleotide sequence encoding PRO1122 as a hybridization probe. [0225] DNA comprising the full-length PRO1122 coding sequence (as shown in Figure 4, SEQ ID No: 4) or a fragment thereof is used as a probe to screen homologous DNAs (such as those encoding natural variants of PRO1122 in human tissue cDNA libraries or human tissue genomic libraries). [0226] Hybridization and washing of filters containing any library DNA are performed according to the following high astringency conditions. Hybridization of the radiolabeled probe derived from the PRO1122 polypeptide to the filters is performed in a 50% solution of formamide, 5x SSC, 0.1% SDS, 0.1% sodium pyrophosphate, 50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 2x Denhardt's solution, and 10% dextran sulfate at 42 ° C for 20 hours. The filters are washed in an aqueous solution of 0.1x SSC and 0.1% SDS at 42 ° C. [0227] Next, DNAs having an identity in the desired sequence can be identified with the DNA encoding the full length native sequence PRO1122 polypeptide using standard techniques known in the art.

EJEMPLO 3: Expresión de polipéptidos PRO1122 en E.coli EXAMPLE 3: Expression of PRO1122 polypeptides in E.coli

[0228] Este ejemplo ilustra la preparación de una forma no glicosilada de polipéptidos PRO1122 mediante la expresión recombinante en E. coli. [0229] La secuencia de ADN que codifica PRO1122 de longitud completa o un fragmento o una variante del mismo se amplifica inicialmente utilizando cebadores de PCR seleccionados. Los cebadores deberían contener sitios para las enzimas de restricción que se correspondan con los sitios para enzimas de restricción del vector de expresión seleccionado. Se puede utilizar una variedad de vectores de expresión. Un ejemplo de un vector adecuado es el pBR322 (derivado del E. coli, véase Bolivar et.al., Gene, 2:95 (1977)) que contiene genes para la resistencia a la ampicilina y la tetraciclina. El vector se digiere con una enzima de restricción y se defosforila. A continuación, las secuencias amplificadas por PCR se unen en el vector. El vector preferiblemente incluirá secuencias que codifican un gen resistente a un antibiótico, un promotor trp, una secuencia líder de polihis (incluyendo los primeros seis codones STII, secuencia polihis, y sitio de división para la enteroquinasa), la región codificante de PRO1122, el finalizador transcripcional lambda, y un gen argU. [0230] A continuación, la mezcla de unión se utiliza para transformar una cepa seleccionada de E. coli utilizando los procedimientos descritos en Sambrook et. al., supra. Los transformantes se identifican por su capacidad para crecer en placas de LB y, a continuación, se seleccionan las colonias resistentes a los antibióticos. El ADN plásmido se puede aislar y confirmar mediante el análisis de restricción y la secuenciación del ADN. [0231] Los clones seleccionados se pueden desarrollar durante toda la noche en un medio de cultivo líquido tal como el caldo LB suplementado con antibióticos. El cultivo de toda la noche se puede utilizar posteriormente para inocular un cultivo a mayor escala. A continuación, las células se desarrollan hasta una densidad óptica deseada, durante la cual el promotor de la expresión se activa. [0232] Después de cultivar las células durante muchas más horas, las células se pueden recoger mediante centrifugación. El residuo de células obtenido mediante la centrifugación se puede solubilizar utilizando diversos agentes conocidos en la técnica, y el polipéptido PRO1122 solubilizado se puede a continuación purificar utilizando una columna quelante de metal en condiciones que permiten la unión fuerte del polipéptido. [0228] This example illustrates the preparation of a non-glycosylated form of PRO1122 polypeptides by recombinant expression in E. coli. [0229] The DNA sequence encoding full-length PRO1122 or a fragment or variant thereof is initially amplified using selected PCR primers. The primers should contain sites for restriction enzymes that correspond to the restriction enzyme sites of the selected expression vector. A variety of expression vectors can be used. An example of a suitable vector is pBR322 (derived from E. coli, see Bolivar et.al., Gene, 2:95 (1977)) which contains genes for ampicillin and tetracycline resistance. The vector is digested with a restriction enzyme and dephosphorylated. Next, the PCR amplified sequences are joined in the vector. The vector will preferably include sequences encoding an antibiotic resistant gene, a trp promoter, a polyhis leader sequence (including the first six STII codons, polyhis sequence, and dividing site for enterokinase), the coding region of PRO1122, the lambda transcriptional terminator, and an argU gene. [0230] Next, the binding mixture is used to transform a selected strain of E. coli using the procedures described in Sambrook et. al., supra. Transformants are identified by their ability to grow on LB plates and then antibiotic resistant colonies are selected. Plasmid DNA can be isolated and confirmed by restriction analysis and DNA sequencing. [0231] Selected clones can be grown overnight in a liquid culture medium such as LB broth supplemented with antibiotics. The overnight culture can be used later to inoculate a larger scale culture. Next, the cells develop to a desired optical density, during which the expression promoter is activated. [0232] After culturing the cells for many more hours, the cells can be collected by centrifugation. The cell residue obtained by centrifugation can be solubilized using various agents known in the art, and the solubilized PRO1122 polypeptide can then be purified using a metal chelating column under conditions that allow strong binding of the polypeptide.

EJEMPLO 4: Expresión de polipéptidos PRO1122 en células de mamíferos EXAMPLE 4: Expression of PRO1122 polypeptides in mammalian cells

[0233] Este ejemplo ilustra la preparación de formas glicosiladas de polipéptidos PRO1122 mediante la expresión recombinante en células de mamíferos. [0233] This example illustrates the preparation of glycosylated forms of PRO1122 polypeptides by recombinant expression in mammalian cells.

[0234] El vector pRK5 (véase EP 307.247, publicada el 15 de marzo de 1989) se utiliza como vector de expresión. Opcionalmente, el ADN que codifica PRO1122 está ligado en el pRK5 con enzimas de restricción seleccionadas para permitir la inserción del ADN que codifica PRO1122 utilizando procedimientos de unión tales como los descritos en Sambrook et. al., supra. El vector resultante se denomina pRK5-PRO1122. [0235] En una realización, las células huésped seleccionadas pueden ser células 293. Las células 293 humanas (ATCC CCL 1573) se desarrollan para unirse en placas de cultivo de tejidos en un medio tal como DMEM suplementado con suero de ternera fetal y opcionalmente, componentes nutricionales y/o antibióticos. Se mezclan aproximadamente 10 μg de ADN de pRK5-PRO1122 se mezcla con 1 μg de ADN que codifica el gen del ARN de VA [Thimmappaya et. al., Cell, 31:543 (1982)] y se disuelve en 500 μl de 1 mM de Tris-HCl, 0,1 mM de EDTA, 0,227 M de CaCl2. A esta mezcla se le añade, gota a gota, 500 μl de 50 mM de HEPES (pH 7,35), 280 mM de NaCl, 1,5 mM de NaPO4, y se deja formar un precipitado durante 10 minutos a 25ºC. El precipitado se suspende y se añade a células 293 y se deja reposar durante aproximadamente cuatro horas a 37ºC. El medio de cultivo se aspira y se añaden 2 ml de glicerol al 20% en PBS durante 30 segundos. A continuación, las células 293 se lavan con medio sin suero, se añade medio nuevo y las células se incuban durante aproximadamente 5 días. [0236] Aproximadamente 24 horas después de las transfecciones, el medio de cultivo se extrae y se reemplaza por medio de cultivo (solo) o medio de cultivo que contiene 200 μCi/ml de 35S-cisteína y 200 μCi/ml 35S- metionina. Tras una incubación de 12 horas, se recoge el medio acondicionado, se concentra en un filtro de giro y se carga en un gel SDS al 15%. El gel procesado puede secarse y exponerse a una película durante un período de tiempo concreto para revelar la presencia del polipéptido PRO1122. Los cultivos que contienen células transfectadas pueden experimentar una incubación adicional (en medio sin suero) y el medio se examina en bioensayos seleccionados. [0237] En una técnica alternativa, se puede introducir ADN que codifica PRO1122 en células 293 transitoriamente utilizando el procedimiento del sulfato de dextrano descrito por Somparyrac et. al., Proc. Natl. Acad. Sci., 12: 7575 (1981). Las células 293 se desarrollan hasta la máxima densidad en un matraz centrifugador y se añaden 700 μg de ADN de pRK5-PRO1122. En primer lugar, las células se concentran en el matraz centrifugador mediante centrifugación y se lavan con PBS. El precipitado de ADN-dextrano es incubado en el residuo de células durante cuatro horas. Las células se tratan con glicerol al 20% durante 90 segundos, se lavan con medio de cultivo de tejido, y se reintroducen en el matraz centrifugador que contiene el medio de cultivo de tejidos, 5 μg/ml de insulina bovina y 0,1 μg/ml de transferrina bovina. Después de aproximadamente cuatro días, el medio acondicionado se centrifuga y se filtra para eliminar las células y los debris. A continuación, la muestra que contiene el polipéptido PRO1122 expresado se puede concentrar y purificar mediante cualquier procedimiento seleccionado, tal como la diálisis y/o cromatografía en columna. [0238] En otra realización, el polipéptido PRO1122 puede expresarse en células CHO. El vector pRK5-PRO1122 puede transfectarse en células CHO utilizando reactivos conocidos, tales como CaPO4 o DEAE-dextrano. Tal y como se ha descrito anteriormente, los cultivos celulares pueden incubarse, y el medio remplazarse por medio de cultivo (solo) o medio que contiene un radiomarcador, tal como la 35Smetionina. Después de determinar la presencia del polipéptido PRO1122, el medio de cultivo puede remplazarse por medio sin suero. Preferiblemente, los cultivos se incuban durante aproximadamente 6 días y, a continuación, se recoge el medio acondicionado. A continuación, el medio que contiene el polipéptido PRO1122 expresado puede concentrarse y purificarse mediante cualquier procedimiento seleccionado. [0239] El polipéptido PRO1122 etiquetado con epítopo puede expresarse también en células CHO huésped. El ADN que codifica PRO1122 puede subclonarse fuera del vector pRK5. La inserción del subclón puede experimentar PCR para fusionarse en el marco con una etiqueta de epítopo concreta, tal como una etiqueta de poli-his en un vector de expresión de Baculovirus. La inserción de ADN que codifica PRO1122 etiquetado con poli-his puede subclonarse a continuación en un vector conductor SV40 que contiene un marcador de selección, tal como DHFR, para seleccionar clones estables. Finalmente, las células CHO pueden transfectarse (tal y como se ha descrito anteriormente) con el vector conductor SV40. El marcaje puede realizarse, tal y como se ha descrito anteriormente, para verificar la expresión. El medio de cultivo que contiene el polipéptido PRO1122 etiquetado con poli-His expresado puede a continuación concentrarse y purificarse mediante cualquier procedimiento seleccionado, tal como mediante cromatografía de afinidad de quelante-Ni2+. [0234] The vector pRK5 (see EP 307,247, published March 15, 1989) is used as an expression vector. Optionally, DNA encoding PRO1122 is ligated into pRK5 with restriction enzymes selected to allow insertion of DNA encoding PRO1122 using binding procedures such as those described in Sambrook et. al., supra. The resulting vector is called pRK5-PRO1122. [0235] In one embodiment, the selected host cells may be 293 cells. Human 293 cells (ATCC CCL 1573) are developed to bind in tissue culture plates in a medium such as DMEM supplemented with fetal calf serum and optionally, Nutritional components and / or antibiotics. Approximately 10 μg of DNA from pRK5-PRO1122 is mixed, mixed with 1 μg of DNA encoding the VA RNA gene [Thimmappaya et. al., Cell, 31: 543 (1982)] and is dissolved in 500 µl of 1 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, 0.227 M CaCl2. To this mixture is added, dropwise, 500 µl of 50 mM HEPES (pH 7.35), 280 mM NaCl, 1.5 mM NaPO4, and a precipitate is allowed to form for 10 minutes at 25 ° C. The precipitate is suspended and added to 293 cells and allowed to stand for approximately four hours at 37 ° C. The culture medium is aspirated and 2 ml of 20% glycerol in PBS is added for 30 seconds. Next, the 293 cells are washed with serum-free medium, fresh medium is added and the cells are incubated for approximately 5 days. [0236] Approximately 24 hours after transfections, the culture medium is removed and replaced by culture medium (alone) or culture medium containing 200 μCi / ml of 35 S-cysteine and 200 μCi / ml 35 S-methionine. After a 12-hour incubation, the conditioned medium is collected, concentrated on a spin filter and loaded on a 15% SDS gel. The processed gel can be dried and exposed to a film for a specific period of time to reveal the presence of the PRO1122 polypeptide. Cultures containing transfected cells may undergo further incubation (in serum free medium) and the medium is examined in selected bioassays. [0237] In an alternative technique, DNA encoding PRO1122 can be introduced into 293 cells transiently using the dextran sulfate method described by Somparyrac et. al., Proc. Natl Acad. Sci., 12: 7575 (1981). 293 cells are grown to maximum density in a centrifuge flask and 700 µg of pRK5-PRO1122 DNA is added. First, the cells are concentrated in the centrifuge flask by centrifugation and washed with PBS. The DNA-dextran precipitate is incubated in the cell residue for four hours. The cells are treated with 20% glycerol for 90 seconds, washed with tissue culture medium, and reintroduced into the centrifuge flask containing the tissue culture medium, 5 μg / ml bovine insulin and 0.1 μg / ml of bovine transferrin. After about four days, the conditioned medium is centrifuged and filtered to remove the cells and debris. Next, the sample containing the expressed PRO1122 polypeptide can be concentrated and purified by any selected procedure, such as dialysis and / or column chromatography. [0238] In another embodiment, the PRO1122 polypeptide can be expressed in CHO cells. The vector pRK5-PRO1122 can be transfected into CHO cells using known reagents, such as CaPO4 or DEAE-dextran. As described above, cell cultures can be incubated, and the medium replaced by culture (alone) or medium containing a radiolabel, such as 35Smethionine. After determining the presence of the PRO1122 polypeptide, the culture medium can be replaced by serum free medium. Preferably, the cultures are incubated for about 6 days and then the conditioned medium is collected. Then, the medium containing the expressed PRO1122 polypeptide can be concentrated and purified by any selected procedure. [0239] PRO1122 epitope-tagged polypeptide can also be expressed in host CHO cells. DNA encoding PRO1122 can be subcloned out of the pRK5 vector. Subclone insertion may undergo PCR to fuse in the frame with a specific epitope tag, such as a poly-his tag in a Baculovirus expression vector. The insertion of DNA encoding PRO1122 labeled with poly-his can then be subcloned into an SV40 conducting vector containing a selection marker, such as DHFR, to select stable clones. Finally, CHO cells can be transfected (as described above) with the SV40 conductive vector. Marking can be done, as described above, to verify the expression. The culture medium containing the expressed poly-His labeled PRO1122 polypeptide can then be concentrated and purified by any selected procedure, such as by chelating affinity chromatography-Ni2 +.

EJEMPLO 5: Expresión de polipéptido PRO1122 en levadura EXAMPLE 5: Expression of PRO1122 polypeptide in yeast

[0240] El siguiente procedimiento describe la expresión recombinante de polipéptidos PRO1122 en levadura. [0240] The following procedure describes the recombinant expression of PRO1122 polypeptides in yeast.

[0241] En primer lugar, los vectores de expresión de levadura se construyen para la producción o secreción intracelular de polipéptido PRO1122 a partir del promotor ADH2/GAPDH. El ADN que codifica el polipéptido PRO1122 de interés, un péptido señal seleccionado y el promotor se insertan en los sitios para enzimas de restricción en el plásmido seleccionado para dirigir la expresión intracelular del polipéptido PRO1122. Para la secreción, el ADN que codifica el polipéptido PRO1122 puede clonarse en el plásmido seleccionado, junto con el ADN que codifica el promotor ADH2/GAPDH, la secuencia señal/líder secretora del factor alfa de levadura, y secuencias enlazadoras (si se necesitan) para la expresión del polipéptido PRO1122. [0242] Las células de levadura, tales como la cepa AB110 de la levadura, pueden a continuación transformarse con los plásmidos de expresión descritos anteriormente y cultivarse en medios de fermentación seleccionados. Los sobrenadantes de levadura transformados pueden analizarse mediante precipitación con ácido tricloroacético al 10% y separación mediante SDS-PAGE, seguido de la tinción de los geles con azul de Coomassie. [0243] El polipéptido PRO1122 recombinante puede aislarse posteriormente y purificarse mediante la extracción de las células de levadura del medio de fermentación mediante la centrifugación y, a continuación, la concentración del medio utilizando filtros de cartucho específicos. El concentrado que contiene el polipéptido PRO1122 puede purificarse adicionalmente utilizando resinas concretas de cromatografía en columna. [0241] First, yeast expression vectors are constructed for intracellular production or secretion of PRO1122 polypeptide from the ADH2 / GAPDH promoter. The DNA encoding the PRO1122 polypeptide of interest, a selected signal peptide and the promoter are inserted into the sites for restriction enzymes in the selected plasmid to direct intracellular expression of the PRO1122 polypeptide. For secretion, the DNA encoding the PRO1122 polypeptide can be cloned into the selected plasmid, together with the DNA encoding the ADH2 / GAPDH promoter, the secretory signal / leader sequence of the yeast alpha factor, and linker sequences (if needed) for the expression of the PRO1122 polypeptide. [0242] Yeast cells, such as yeast strain AB110, can then be transformed with the expression plasmids described above and cultured in selected fermentation media. The transformed yeast supernatants can be analyzed by precipitation with 10% trichloroacetic acid and separation by SDS-PAGE, followed by staining the gels with Coomassie blue. [0243] The recombinant PRO1122 polypeptide can be subsequently isolated and purified by extracting the yeast cells from the fermentation medium by centrifugation and then concentration of the medium using specific cartridge filters. The concentrate containing the PRO1122 polypeptide can be further purified using specific column chromatography resins.

EJEMPLO 6: Expresión de polipéptidos PRO1122 en células de insecto infectadas de Baculovirus EXAMPLE 6: Expression of PRO1122 polypeptides in Baculovirus infected insect cells

[0244] El siguiente procedimiento describe la expresión recombinante de polipéptidos PRO1122 en células de insecto infectadas de Baculovirus. [0245] El ADN que codifica PRO1122 se fusiona en dirección 5’ a un epítopo etiqueta contenido en un vector de expresión de baculovirus. Dichas etiquetas de epítopo incluyen etiquetas de poli-his y etiquetas de inmunoglobulina (como las regiones Fc de IgG). Pueden utilizarse una variedad de plásmidos, incluyendo plásmidos derivados de los plásmidos disponibles comercialmente, tales como pVL1393 (Novagen). Brevemente, el ADN que codifica PRO1122 o la parte deseada del ADN que codifica PRO1122 (tal como la secuencia que codifica el dominio extracelular de una proteína transmembrana) se amplifica mediante PCR con cebadores complementarios a las regiones 5' y 3'. El cebador 5' puede incorporar sitios para enzimas de restricción flanqueantes (seleccionados). El producto se digiere a continuación con aquellas enzimas de restricción seleccionadas y se subclona en el vector de expresión. [0246] El baculovirus recombinante se genera mediante la cotransfección del plásmido anterior y el ADN del virus BaculoGoldTM (Pharmingen) en células de Spodoptera frugiperda ("Sf9") (ATCC CRL 1711) utilizando lipofectina (disponible comercialmente de GIBCO-BRL). Después de 4-5 días de incubación a 28ºC, los virus liberados se recogen y se utilizan para amplificaciones adicionales. La infección viral y la expresión de la proteína se realizan tal y como describe en O'Reilley et. al., Baculovirus expression vectors: A Laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994). [0247] A continuación, el polipéptido PRO1122 etiquetado con poli-His expresado puede purificarse, por ejemplo, mediante cromatografía de afinidad de Ni2+-quelato tal y como se indica a continuación. Los extractos se preparan a partir de las células recombinantes sf9 infectadas del virus tal y como se ha descrito por Rupert et. al., Nature, 362: 175-179 (1993). Brevemente, las células Sf9 se lavan, se resuspenden en el tampón de sonicación (25 ml Hepes, pH 7,9; 12,5 mM de MgCl2; 0,1 mM de EDTA: glicerol al 10%; NP-40 a 0,1%; 0,4 M de KCl), y se sonican dos veces durante 20 segundos en hielo. Los sonicados se aclaran por centrifugación, y el sobrenadante se diluye 50 veces en el tampón de carga (50 mM de fosfato, 300 mM de NaCl, glicerol al 10%, pH 7,8) y se filtra a través de un filtro de 0,45 µm. Se prepara una columna de agarosa Ni2+-NTA (comercialmente disponible de Qiagen) con un volumen de lecho de 5 ml, se lava con 25 ml de agua y se equilibra con 25 ml del tampón de carga. El extracto celular filtrado se carga en la columna a 0,5 mL por minuto. La columna se lava hasta la línea base a A280 con el tampón de carga, en cuyo punto se inicia la recogida de la fracción. A continuación, la columna se lava con un tampón de lavado secundario (50 mM fosfato; 300 mM de NaCl, glicerol al 10%, pH 6,0), que eluye las proteínas unidas no específicamente. Después de alcanzar la línea base a A280 de nuevo, la columna se desarrolla con un gradiente de 0 a 500 mM de imidazol en el tampón de lavado secundario. Se recogen fracciones de un mL y se analizan mediante SDS-PAGE y tinción con plata o transferencia Western con Ni2+-NTA-conjugado a fosfatasa alcalina (Qiagen). Las fracciones que contienen polipéptido PRO1122 etiquetado con His10 eluido se agrupan y se dializan contra el tampón de carga. Alternativamente, la purificación del polipéptido PRO1122 etiquetado con IgG (o con Fc) puede realizarse usando técnicas de cromatografía conocidas, incluyendo, por ejemplo, cromatografía en columna con Proteína A o proteína G. [0244] The following procedure describes the recombinant expression of PRO1122 polypeptides in Baculovirus infected insect cells. [0245] DNA encoding PRO1122 is fused in the 5 ’direction to a tag epitope contained in a baculovirus expression vector. Such epitope tags include poly-his tags and immunoglobulin tags (such as Fc regions of IgG). A variety of plasmids can be used, including plasmids derived from commercially available plasmids, such as pVL1393 (Novagen). Briefly, the DNA encoding PRO1122 or the desired part of the DNA encoding PRO1122 (such as the sequence encoding the extracellular domain of a transmembrane protein) is amplified by PCR with primers complementary to the 5 'and 3' regions. The 5 'primer can incorporate sites for flanking restriction enzymes (selected). The product is then digested with those selected restriction enzymes and subcloned into the expression vector. [0246] Recombinant baculovirus is generated by co-transfection of the previous plasmid and BaculoGoldTM virus (Pharmingen) DNA in Spodoptera frugiperda ("Sf9") (ATCC CRL 1711) cells using lipofectin (commercially available from GIBCO-BRL). After 4-5 days of incubation at 28 ° C, the released viruses are collected and used for further amplifications. Viral infection and protein expression are performed as described in O'Reilley et. al., Baculovirus expression vectors: A Laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994). [0247] Next, the expressed poly-His labeled PRO1122 polypeptide can be purified, for example, by Ni2 + -chelate affinity chromatography as indicated below. The extracts are prepared from the sf9 recombinant cells infected with the virus as described by Rupert et. al., Nature, 362: 175-179 (1993). Briefly, the Sf9 cells are washed, resuspended in the sonication buffer (25 ml Hepes, pH 7.9; 12.5 mM MgCl2; 0.1 mM EDTA: 10% glycerol; NP-40 to 0, 1%; 0.4 M KCl), and sonicate twice for 20 seconds on ice. The sonicates are clarified by centrifugation, and the supernatant is diluted 50 times in the loading buffer (50 mM phosphate, 300 mM NaCl, 10% glycerol, pH 7.8) and filtered through a 0 filter , 45 µm. A Ni2 + -NTA agarose column (commercially available from Qiagen) with a bed volume of 5 ml is prepared, washed with 25 ml of water and equilibrated with 25 ml of the loading buffer. The filtered cell extract is loaded into the column at 0.5 mL per minute. The column is washed to the baseline at A280 with the loading buffer, at which point the fraction collection begins. The column is then washed with a secondary wash buffer (50 mM phosphate; 300 mM NaCl, 10% glycerol, pH 6.0), which elutes non-specifically bound proteins. After reaching the baseline at A280 again, the column develops with a gradient of 0 to 500 mM imidazole in the secondary wash buffer. One mL fractions are collected and analyzed by SDS-PAGE and silver staining or Western blotting with Ni2 + -NTA-conjugated to alkaline phosphatase (Qiagen). Fractions containing PRO1122 polypeptide labeled with eluted His10 are pooled and dialyzed against the loading buffer. Alternatively, purification of the IgG-labeled PRO1122 polypeptide (or with Fc) can be performed using known chromatography techniques, including, for example, column chromatography with Protein A or protein G.

EJEMPLO 7: Preparación de anticuerpos que se unen a polipéptidos PRO1122 EXAMPLE 7: Preparation of antibodies that bind to PRO1122 polypeptides

[0248] Este ejemplo ilustra la preparación de anticuerpos monoclonales que pueden unirse específicamente a polipéptidos PRO1122. [0249] Las técnicas para producir los anticuerpos monoclonales son conocidas en el sector y están descritas, por ejemplo, en Goding, supra. Entre los inmunogenes que se pueden utilizar se incluyen polipéptido PRO1122 purificado, proteínas de fusión que contienen un polipéptido PRO1122, y células que expresan polipéptido PRO1122 recombinante en la superficie celular. La selección del inmunogen puede realizarse según el técnico en la materia sin una gran experimentación. [0250] Los ratones, tal como Balb/c, se inmunizan con el inmunogen de PRO1122 emulsionado en adyuvante completo de Freund y se inyecta subcutáneamente o intraperitonealmente en una cantidad de 1–100 microgramos. Alternativamente, el inmunogen se emulsiona en adyuvante MPL-TDM (Ribi Immunochemical Research, Hamilton, MT) y se inyecta en las bases de las patas traseras del animal. A continuación, los ratones inmunizados se estimulan 10 a 12 días después con inmunogen adicional emulsionado en el adyuvante seleccionado. A continuación, durante varias semanas, los ratones también se pueden estimular con inyecciones de inmunización adicionales. Las muestras de suero se pueden obtener periódicamente de los ratones mediante muestras de sangre retro-orbitales para ser analizadas en ensayos ELISA para detectar anticuerpos anti-polipéptido PRO1122. [0251] Después de detectar un título de anticuerpo adecuado, a los animales “positivos” para anticuerpos se les puede inyectar una inyección intravenosa final de polipéptido PRO1122. De tres a cuatro días más tarde, los ratones se sacrifican y las células del bazo se recogen. A continuación, las células del bazo se fusionan (usando polietilenglicol al 35%) a una línea celular de mieloma murino seleccionado, tal como la P3X63AgU.1, disponible de ATCC, No. CRL 1597. Las fusiones generan células de hibridoma que se pueden colocar a continuación en placas de cultivo de tejido de 96 pocillos que contienen un medio HAT (hipoxantina, aminopterina y timidina) para inhibir la proliferación de células no fusionadas, híbridos de mieloma e híbridos de células de bazo. [0248] This example illustrates the preparation of monoclonal antibodies that can specifically bind to PRO1122 polypeptides. [0249] Techniques for producing monoclonal antibodies are known in the sector and are described, for example, in Goding, supra. Immunogenes that can be used include purified PRO1122 polypeptide, fusion proteins containing a PRO1122 polypeptide, and cells expressing recombinant PRO1122 polypeptide on the cell surface. Immunogen selection can be performed according to the person skilled in the art without much experimentation. [0250] Mice, such as Balb / c, are immunized with the immunogen of PRO1122 emulsified in Freund's complete adjuvant and injected subcutaneously or intraperitoneally in an amount of 1-100 micrograms. Alternatively, the immunogen is emulsified in MPL-TDM adjuvant (Ribi Immunochemical Research, Hamilton, MT) and injected into the bases of the animal's hind legs. The immunized mice are then stimulated 10 to 12 days later with additional immunogen emulsified in the selected adjuvant. Then, for several weeks, mice can also be stimulated with additional immunization injections. Serum samples can be periodically obtained from mice by retro-orbital blood samples to be analyzed in ELISA assays to detect PRO1122 anti-polypeptide antibodies. [0251] After detecting a suitable antibody titer, animals "positive" for antibodies may be injected with a final intravenous injection of PRO1122 polypeptide. Three to four days later, mice are sacrificed and spleen cells are collected. Next, spleen cells are fused (using 35% polyethylene glycol) to a selected murine myeloma cell line, such as P3X63AgU.1, available from ATCC, No. CRL 1597. Fusions generate hybridoma cells that can be then place in 96-well tissue culture plates containing a HAT medium (hypoxanthine, aminopterin and thymidine) to inhibit proliferation of non-fused cells, myeloma hybrids and spleen cell hybrids.

[0252] Las células de hibridomas se cribarán en un ELISA para la reactividad contra polipéptido PRO1122. La determinación de células de hibridomas "positivas" que secretan los anticuerpos monoclonales deseados contra un polipéptido PRO1122 está dentro de la técnica. [0253] Las células de hibridomas positivas se pueden inyectar intraperitonealmente en ratones singeneicos Balb/c para producir ascitis que contienen anticuerpos monoclonales anti-polipéptido PRO1122. Alternativamente, las células de hibridomas pueden desarrollarse en matraces de cultivos de tejidos o en botellas en rodillo. La purificación de los anticuerpos monoclonales producidos en los ascitos se puede realizar usando precipitación con sulfato de amonio, seguido por cromatografía de exclusión en gel. Alternativamente, puede usarse la cromatografía por afinidad basada en la unión del anticuerpo a la proteína A o la proteína G. [0252] Hybridoma cells will be screened in an ELISA for reactivity against PRO1122 polypeptide. The determination of "positive" hybridoma cells that secrete the desired monoclonal antibodies against a PRO1122 polypeptide is within the art. [0253] Positive hybridoma cells can be injected intraperitoneally into Balb / c syngeneic mice to produce ascites containing PRO1122 anti-polypeptide monoclonal antibodies. Alternatively, hybridoma cells can develop in tissue culture flasks or in roller bottles. Purification of monoclonal antibodies produced in the asites can be performed using precipitation with ammonium sulfate, followed by gel exclusion chromatography. Alternatively, affinity chromatography based on the binding of the antibody to protein A or protein G. can be used.

Ejemplo 8: Expresión de ARN Example 8: RNA Expression

[0254] Las manchas multitejido que contienen poliA+ ARN (2 g por banda) de varios tejidos humanos se adquirieron de Clontech (Palo Alto, CA). Se utilizaron regiones de codificación completa de IL-17B humana (LINQ516) (700 pb) (SEc ID No: 17) e IL17C (UNQ561) (1,1 kpb) (SEC ID No: 18) como sondas de hibridación. Las sondas de ADN se marcaron con [-32P]-dCTP mediante gránulos marcadores de ADN de “priming” aleatorio (Pharmacia Biotech). La hibridación se realizó utilizando Expresshyb (Clontech) que contenía las sondas radiomarcadas a 68oC durante 1 hora. A continuación, las manchas se lavaron con 2X SSC/solución de SDS al 0,05% a temperatura ambiente durante 40 minutos, seguido de lavados en 0,1 X SSC/solución de SDS al 0,05% a 55oC durante 40 minutos con un cambio de solución nueva. Las manchas se exponen en un fosforimager y la imagen resultante se indica en la presente invención como la figura 8. [0255] Para IL-17B (SEC ID No: 1), se halló un transcrito de ARNm de 800 pb en el páncreas, intestino delgado y estómago de tejidos de humano adulto: se detectó una banda más débil en los testículos. (figura 8). Se examinó la expresión de IL-17C (SEC ID No: 2) en el mismo grupo de tejidos de humano adulto, pero no se observaron señales detectables. [0254] Multi-woven stains containing polyA + RNA (2 µg per band) from various human tissues were purchased from Clontech (Palo Alto, CA). Full coding regions of human IL-17B (LINQ516) (700 bp) (SEc ID No: 17) and IL17C (UNQ561) (1.1 kbp) (SEQ ID No: 18) were used as hybridization probes. DNA probes were labeled with [-32P] -dCTP by random priming DNA marker granules (Pharmacia Biotech). Hybridization was performed using Expresshyb (Clontech) containing the radiolabelled probes at 68 ° C for 1 hour. The stains were then washed with 2X SSC / 0.05% SDS solution at room temperature for 40 minutes, followed by washing in 0.1 X SSC / 0.05% SDS solution at 55oC for 40 minutes with A new solution change. The spots are exposed in a phosphorimager and the resulting image is indicated in the present invention as Figure 8. [0255] For IL-17B (SEQ ID No: 1), an 800 bp mRNA transcript was found in the pancreas, Small intestine and stomach of adult human tissues: a weaker band was detected in the testicles. (figure 8). The expression of IL-17C (SEQ ID No: 2) in the same group of adult human tissues was examined, but no detectable signals were observed.

Ejemplo 9: Generación de proteínas de fusión Fc/His [0256] Las secuencias codificantes de IL17B (SEC ID No: 17) e IL17C (SEC ID No: 18) se amplificaron por PCR y se subclonaron en los sitios EcoRI y SmaI de pBPH.His.c para generar una etiqueta GHHHHHHHH C-terminal (SEC ID No: 19) o los sitios EcoRI y Stu de pBPH.IgG para generar una fusión C-terminal con la región Fc de IgGI humana. Los vectores pBPH.His.c y pBPH.IgG son derivados del vector de expresión de baculovirus pVL1393 (Pharmingen). Se contruyó una proteína de Fc de control o con etiqueta his de forma similar a la unión C-terminal de la proteína asociada a la pancreatitis (175 aminoácidos) a la parte Fc de la IgGI humana o etiqueta his8. [0257] Las proteínas de fusión se expresaron en células H5 utilizando el procedimiento recomendado por el fabricante (Invitrogen). Bevemente, las construcciones de ADN se cotransfectaron con ADN de Baculovirus BaculoGold (Pharmingen) en una proporción Example 9: Fc / His fusion protein generation [0256] The coding sequences of IL17B (SEQ ID No: 17) and IL17C (SEQ ID No: 18) were amplified by PCR and subcloned into the EcoRI and SmaI sites of pBPH .His.c to generate a C-terminal GHHHHHHHH tag (SEQ ID No: 19) or the EcoRI and Stu sites of pBPH.IgG to generate a C-terminal fusion with the Fc region of human IgGI. The vectors pBPH.His.c and pBPH.IgG are derived from the baculovirus expression vector pVL1393 (Pharmingen). A control Fc protein or his tag was constructed similarly to the C-terminal junction of the pancreatitis-associated protein (175 amino acids) to the Fc part of the human IgGI or his8 tag. [0257] Fusion proteins were expressed in H5 cells using the procedure recommended by the manufacturer (Invitrogen). Briefly, DNA constructs were co-transfected with BaculoGold Baculovirus DNA (Pharmingen) in a proportion

7:1 en células Sf9 adherentes. Las células se incubaron a 28oC durante 4 días y se recogió el sobrenadante. El sobrenadante de transfección se amplificó y se sometió a purificación de afinidad mediante gránulos de proteína A-sefarosa (Pharmacia) para las proteínas de fusión Fc o gránulos de Ni-NTA agarosa (QIAGEN) para proteínas etiquetada con His. [0258] Para examinar la expresión de las proteínas, se realizó un análisis por SDSPAGE sobre las proteínas recombinantes purificadas por afinidad en condiciones reductoras y no reductoras, seguido de tinción de plata. 7: 1 in adherent Sf9 cells. The cells were incubated at 28 ° C for 4 days and the supernatant was collected. The transfection supernatant was amplified and subjected to affinity purification by A-sepharose protein granules (Pharmacia) for Fc fusion proteins or Ni-NTA agarose granules (QIAGEN) for His-tagged proteins. [0258] To examine protein expression, an SDSPAGE analysis was performed on affinity purified recombinant proteins under reducing and non-reducing conditions, followed by silver staining.

Ejemplo 10: Inducción de la liberación de IL-6 y TNF- Example 10: Induction of the release of IL-6 and TNF-

[0259] Utilizando el procedimiento descrito en Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) (Yao-2) para la liberación de IL-6 (SEC ID No: 14), se cultivaron células de fibroblastos de prepucio humano (ATCC CRL-2091) en medio MEM (FBS al 10%) con la citoquina de prueba. Después de la incubación durante 18 horas a 37oC y CO2 al 5%, se ensayaron los medios condicionados para IL-6 utilizando un kit de ELISA (R&D Systems). Para la secreción de TNF-, se cultivaron células THP-1 monocíticas de leucemia humana en medio RPMI (FBS al 10%) con citoquina de prueba. Después de la incubación durante 18 horas a 37oC y CO2 al 5%, se cuantificó el TNF- en los medios condicionados (SEC ID No: 20) utilizando un kit de ensayo ELISA (R&D Systems). [0260] Las células de fibroblasto de prepucio humano (ATCC) se cultivaron por separado en medio MEM (FBS al 10%) en presencia de IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3). Después de la incubación durante 18 horas a 37oC y CO2 al 5%, se ensayaron los medios condicionados para IL-6 (SEC ID No: 14) utilizando un kit de ELISA (R&D Systems). A diferencia del nivel elevado de IL-6 (SEC ID No: 14) inducida por IL-17 (SEC ID No: 11), tanto IL-17B (SEC ID No: 1) como IL17C (SEC ID No: 3) no consiguieron estimular la secreción de IL-6 (SEC ID No: 14) en células de fibroblasto (figura 9A). [0261] Utilizando el procedimiento descrito en Yao et al., Cytokine 9: 794 (1997) (Yao-3) se utilizó una línea de células monocíticas leucémicas humanas, THP-1, para ensayar para la estimulación de la liberación de TNF- (SEC ID No: 20) por IL-17 (SEC ID No: 11), UNQ516 (SEC ID No: 1) y UNQ561 (SEC ID No: 3) mediante el cultivo en medio RPMI (FBS al 10%). Después de la incubación durante 18 horas a 37oC y CO2 al 5%, se cuantificó el TNF- (SEC ID No: 19) en los medios condicionados utilizando un kit de ensayo ELISA (R&D Systems). Aunque IL-17 (SEC ID No: 11) sólo indujo un nivel bajo de TNF- (SEC ID No: 19) en células THP-1, tanto IL-17B como IL-17C (como proteínas de fusión Fc) estimularon la producción de TNF- en células THP-1 (figura 9B). Una proteína de fusión Fc de control no tuvo efectos. [0262] Con el fin de caracterizar adicionalmente la estimulación de la liberación de TNF- por IL-17B e IL-17C, se ensayó la dependencia de la respuesta con el transcurso del tiempo y la concentración en células THP-1. La figura 10 ilsutra que IL17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) estimulan la liberación de TNF- (SEC ID No: 19) de forma dependiente del tiempo y la concentración. La EC50 para la estimulación por IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) es 2,4 nM, mientras que para IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3), 25 nM. [0263] Mientras que las preparaciones de IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) utilizadas en estos experimentos contenían niveles indetectables de endotoxina (menos de 1 EU/ml), se realizaron experimentos de control adicionales para confirmar que la liberación de TNF- (SEC ID No: 19) de células THP-1 era real y no artificial. Las actividades de IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) no quedaron afectadas por el tratamiento con polimixina B y se anularon mediante tratamiento térmico, apoyando adicionalmente la idea de que las propias proteínas eran responsables de las actividades y no cualquier endotoxina contaminante. [0259] Using the procedure described in Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995) (Yao-2) for the release of IL-6 (SEQ ID No: 14), human foreskin fibroblast cells (ATCC CRL-2091) were grown in MEM medium (10% FBS) with The cytokine test. After incubation for 18 hours at 37 ° C and 5% CO2, conditioned media for IL-6 was tested using an ELISA kit (R&D Systems). For TNF-secre secretion, monocytic human leukemia THP-1 cells were cultured in RPMI medium (10% FBS) with test cytokine. After incubation for 18 hours at 37 ° C and 5% CO2, TNF- was quantified in the conditioned media (SEQ ID No: 20) using an ELISA test kit (R&D Systems). [0260] Human foreskin fibroblast (ATCC) cells were cultured separately in MEM medium (10% FBS) in the presence of IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) ( SEQ ID No: 3). After incubation for 18 hours at 37oC and 5% CO2, conditioned media for IL-6 (SEQ ID No: 14) was tested using an ELISA kit (R&D Systems). Unlike the high level of IL-6 (SEQ ID No: 14) induced by IL-17 (SEQ ID No: 11), both IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL17C (SEQ ID No: 3) no they were able to stimulate the secretion of IL-6 (SEQ ID No: 14) in fibroblast cells (Figure 9A). [0261] Using the procedure described in Yao et al., Cytokine 9: 794 (1997) (Yao-3) a human leukemic monocytic cell line, THP-1, was used to assay for stimulation of TNF-release  (SEQ ID No: 20) by IL-17 (SEQ ID No: 11), UNQ516 (SEQ ID No: 1) and UNQ561 (SEQ ID No: 3) by culturing in RPMI medium (10% FBS). After incubation for 18 hours at 37 ° C and 5% CO2, TNF- (SEQ ID No: 19) in the conditioned media was quantified using an ELISA test kit (R&D Systems). Although IL-17 (SEQ ID No: 11) only induced a low level of TNF- (SEQ ID No: 19) in THP-1 cells, both IL-17B and IL-17C (as Fc fusion proteins) stimulated TNF-production in THP-1 cells (Figure 9B). A control Fc fusion protein had no effect. [0262] In order to further characterize the stimulation of the release of TNF- by IL-17B and IL-17C, dependence of the response was tested over time and concentration in THP-1 cells. Figure 10 illustrates that IL17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) stimulate the release of TNF- (SEQ ID No: 19) in a time-dependent manner and concentration. The EC50 for stimulation by IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) is 2.4 nM, while for IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3), 25 nM. [0263] While the IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) preparations used in these experiments contained undetectable levels of endotoxin (less than 1 EU / ml), additional control experiments were performed to confirm that the release of TNF- (SEQ ID No: 19) from THP-1 cells was real and not artificial. The activities of IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) were not affected by treatment with polymyxin B and were canceled by heat treatment, further supporting the idea that the proteins themselves were responsible for the activities and not any contaminating endotoxin.

Ejemplo 11: Unión del receptor de IL-17 Example 11: IL-17 receptor binding

Clonación del ECD del receptor de hIL-17: Cloning of the hIL-17 receptor ECD:

[0264] Con el fin de clonar el ECD del receptor de IL-17 humano, se designaron dos cebadores oligonucleótidos en los extremos 5’ y 3’ de ECD de IL-17R (SEC ID No: 15) en base a la secuencia publicada. Yao et al., supra (Yao-3). Las dos sondas tenían las siguientes secuencias: cebador 1: 5’-CTG TAC CTC GAG GGT GCA GAG-3’ (SEC ID No: 20) cebador 2: 5’-CTC AAG CTT GGG TCA ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG CCA CAG GGG CAT GTA GTC C-3’ (SEC ID No: 21) [0264] In order to clone the ECD of the human IL-17 receptor, two were designated oligonucleotide primers at the 5 ’and 3 ′ ends of ECD of IL-17R (SEQ ID No: 15) based on the published sequence. Yao et al., Supra (Yao-3). The two probes had the following sequences: primer 1: 5’-CTG TAC CTC GAG GGT GCA GAG-3 ’(SEQ ID No: 20) primer 2: 5’-CTC AAG CTT GGG TCA ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG CCA CAG GGG CAT GTA GTC C-3 ’(SEQ ID No: 21)

[0265] Los cebadores anteriores se utilizaron en reacciones de PCR para amplificar el ADNc de longitud completa de una biblioteca de ADNc de testículo humano con ADN polimerasa Pfu Turbo (Promega). Se introdujo una etiqueta his en C-terminal mediante PCR a través de la adición de nucleótidos que codifican ocho histidinas al cebador del extremo 3’. A continuación, se subclonó el producto de la PCR en un vector plásmido de expresión pRK5B. El análisis de la secuencia confirmó que la inserción contiene un fragmento de ADN que codifica el dominio extracelular (1-320 aminoácidos) del receptor hIL-17 publicado (SEC ID No: 15). [0265] The above primers were used in PCR reactions to amplify the Full length cDNA from a human testis cDNA library with DNA Pfu Turbo polymerase (Promega). A his tag was introduced in C-terminal using PCR through the addition of nucleotides encoding eight histidines to the primer of the extreme 3 ’. Next, the PCR product was subcloned into a plasmid vector of expression pRK5B. Sequence analysis confirmed that the insert contains a DNA fragment encoding the extracellular domain (1-320 amino acids) of the published hIL-17 receptor (SEQ ID No: 15).

Inmunoprecipitación del ECD de IL-17R: Immunoprecipitation of the ECD of IL-17R:

[0266] La actividad diferencial de IL-17 cuando se comparó con IL-17B (UNQ516) (SEC ID No:1 ) e IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) sugirió que se podrían unir y activar diferentes receptores de la superficie celular. Con el fin de ensayar si IL-17B (UNQ516) (SEC ID No: 1) o IL-17C (UNQ561) (SEC ID No: 3) se unen directamente al receptor, se transfectó un plásmido de expresión que contenía la IL-17R (etiquetada con his en C-terminal) (SEC ID No: 22) en células 293 utilizando el reactivo de transfección SuperFect (Quiagen). El marcaje metabólico de células 293 se realizó 16 horas después de la transfección utilizando 50 Ci/ml de mezcla [35S]-Cys/Met durante 6 horas. Se recogió el medio condicionado y se concentró (Centricon-10, Amicon). Para examinar la expresión del ECD de IL-17R (SEC ID No: 15), se utilizaron gránulos de Ni-NTA (Quiagen) para precipitar por afinidad el ECD de IL-17R etiquetado con his (SEC ID No: 22) del medio condicionado. [0266] The differential activity of IL-17 when compared to IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) and IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) suggested that different receptors could be bound and activated of the cell surface. In order to test whether IL-17B (UNQ516) (SEQ ID No: 1) or IL-17C (UNQ561) (SEQ ID No: 3) binds directly to the receptor, an expression plasmid containing IL- was transfected 17R (labeled with his in C-terminal) (SEQ ID No: 22) in 293 cells using the SuperFect transfection reagent (Quiagen). Metabolic labeling of 293 cells was performed 16 hours after transfection using 50 Ci / ml of mixture [35S] -Cys / Met for 6 hours. The conditioned medium was collected and concentrated (Centricon-10, Amicon). To examine the expression of the IL-17R ECD (SEQ ID No: 15), granules of Ni-NTA (Quiagen) were used to affinity precipitate the IL-17R ECD labeled with his (SEQ ID No: 22) from the medium conditioned.

[0267] El medio condicionado se diluyó en tampón RIPA (NP40 al 1%, desoxicolato sódico al 0,5%, SDS al 0,1% en PBS), se incubó con IL-17 (SEC ID No: 11) y las proteínas de fusión Fc durante toda la noche a 4oC. Se añadieron gránulos de proteína A-agarosa (Pierce) para precipitar las proteínas de fusión Fc. Los precipitados se lavaron tres veces para precipitar las proteínas de fusión Fc. Los precipitados se lavaron tres veces en tampón RIPA, se desnaturalizaron en tampón de muestra SDS y se realizó la electroforesis sobre geles Bis-Tris Nu-PAGE al 4-12% (Novex). Para la inmunoprecipitación de IL-17 (SEC ID No: 11), se añadió anticuerpo anti-IL17 (R&D Systems). En un experimento de unión competitiva, la inmunoprecipitación del ECD de IL-17R (SEC ID No: 15) por IL-17 (SEC ID No: 11) se realiza en presencia de un exceso molar de 5 veces de IL-17B.his (SEC ID No: 23), IL-17C.his (SEC ID No: 24) y la proteína etiquetada con his de control. [0268] El ECD de IL-17R (SEC ID No: 15) migró como una banda de 60 kD cuando se purificó a través de su etiqueta de histidina (figura 11A, banda 1). Además, el ECD de IL-17R (SEC ID No: 15) también se precipitó combinado con IL-17 (SEC ID No: 11) (carril 3). Sin embargo, tanto IL-17B (SEC ID No: 1) como IL-17C (SEC ID No: 3) no consiguieron competir por la unión de IL-17 (SEC ID No: 11) al ECD del receptor de IL-17 (SEC ID No: 15) (figura 11B, carriles 15 y 16). [0267] The conditioned medium was diluted in RIPA buffer (1% NP40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS in PBS), incubated with IL-17 (SEQ ID No: 11) and Fc fusion proteins overnight at 4oC. Granules of A-agarose protein (Pierce) were added to precipitate Fc fusion proteins. The precipitates were washed three times to precipitate the Fc fusion proteins. The precipitates were washed three times in RIPA buffer, denatured in SDS sample buffer and electrophoresis was performed on 4-12% Bis-Tris Nu-PAGE gels (Novex). For immunoprecipitation of IL-17 (SEQ ID No: 11), anti-IL17 antibody (R&D Systems) was added. In a competitive binding experiment, immunoprecipitation of the ECD of IL-17R (SEQ ID No: 15) by IL-17 (SEQ ID No: 11) is performed in the presence of a 5-fold molar excess of IL-17B.his (SEQ ID No: 23), IL-17C.his (SEQ ID No: 24) and the protein labeled with his control. [0268] The IL-17R ECD (SEQ ID No: 15) migrated as a 60 kD band when purified through its histidine tag (Figure 11A, band 1). In addition, the ECD of IL-17R (SEQ ID No: 15) was also precipitated in combination with IL-17 (SEQ ID No: 11) (lane 3). However, both IL-17B (SEQ ID No: 1) and IL-17C (SEQ ID No: 3) failed to compete for the binding of IL-17 (SEQ ID No: 11) to the ECD of the IL-17 receptor (SEQ ID No: 15) (Figure 11B, lanes 15 and 16).

Ejemplo 12: Análisis de la unión a células THP-1 mediante Clasificador de Células activado por Fluorescencia (FACS) Example 12: Analysis of THP-1 cell binding by Fluorescence Activated Cell Classifier (FACS)

[0269] Se preincubaron células THP-1 (5 x 105) en PBS que contenía un 5% de suero de caballo a 4oC durante 30 minutos para bloquear la unión no específica. Se añadieron IL-17 (SEC ID No: 11), IL-17B.fc (SEC ID No: 12), IL-17C.Fc (SEC ID NO: 13) o Fc de control (1 g de cada una) y se incubaron con las células THP-1 en un volumen de 0,25 ml sobre hielo durante 1 hora. Para el experimento de unión de IL-17, se añadieron secuencialmente anticuerpo primario anti hIL-17 (dilución 1:100) y anticuerpo secundario de cabra anti-ratón conjugado a FITC (Jackson Immunology Lab, dilución 1:100) con una incubación de 30-60 minutos y lavados intensos antes de cada adición. Para las proteínas de fusión Fc, las células se tiñeron con IgG de cabra anti-humano conjugado con FITC (específico de Fc, Jackson Immunology Lab, dilución 1:100). Después de lavados intensos, se analizaron un mínimo de 5000 células utilizando FACscan (Becton Dickinson). [0269] THP-1 cells (5 x 105) were pre-incubated in PBS containing 5% horse serum at 4 ° C for 30 minutes to block non-specific binding. IL-17 (SEQ ID No: 11), IL-17B.fc (SEQ ID No: 12), IL-17C.Fc (SEQ ID NO: 13) or control Fc (1 deg each) were added and incubated with THP-1 cells in a volume of 0.25 ml on ice for 1 hour. For the IL-17 binding experiment, primary anti hIL-17 antibody (1: 100 dilution) and FITC-conjugated goat anti-mouse secondary antibody (Jackson Immunology Lab, 1: 100 dilution) were sequentially added with an incubation of 30-60 minutes and intensive washings before each addition. For Fc fusion proteins, the cells were stained with FITC-conjugated goat anti-human IgG (Fc-specific, Jackson Immunology Lab, 1: 100 dilution). After intensive washing, a minimum of 5000 cells were analyzed using FACscan (Becton Dickinson).

[0270] El resultado del procedimiento anterior fue que las proteínas de fusión Fc de tanto IL-17B (SEC ID No: 12) como IL-17C (SEC ID No: 13) mostraron unión a células THP-1 en comparaciñón con una proteína de fusión Fc de control (figura 13). [0270] The result of the above procedure was that Fc fusion proteins of both IL-17B (SEQ ID No: 12) and IL-17C (SEQ ID No: 13) showed binding to THP-1 cells compared to a protein Fc fusion control (Figure 13).

Ejemplo 13: Purificación de polipéptidos PRO1122 utilizando anticuerpos específicos Example 13: Purification of PRO1122 polypeptides using specific antibodies

[0271] Los polipéptidos PRO1122 nativos o recombinantes se pueden purificar mediante una variedad de técnicas estándar en las técnicas de purificación de proteínas. Por ejemplo, se purifica el polipéptido pro-PRO1122, el polipéptido PRO1122 maduro, o el polipéptido pre-PRO1122 mediante cromatografía de inmunoafinidad usando anticuerpos específicos para el polipéptido PRO1122 de interés. En general, una columna de inmunoafinidad se construye mediante el acoplamiento covalente del anticuerpo anti-PRO122 a una resina de cromatografía activada. [0272] Las inmunoglobulinas policlonales se preparan a partir de sueros inmunes mediante precipitación con sulfato de amonio o mediante purificación en la Proteína A inmovilizada (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, N.J). Asimismo, los anticuerpos monoclonales se preparan a partir de los fluidos de ascitis de ratón mediante la precipitación con sulfato de amonio o cromatografía en Proteína A inmovilizada. La inmunoglobulina parcialmente purificada se une covalentemente a una resina cromatográfica, tal como la SEPHAROSETM activada con CnBr (Pharmacia LKB Biotechnology). El anticuerpo se acopla a la resina, la resina se bloquea y la resina derivada se lava de acuerdo con las instrucciones del fabricante. [0273] Dicha columna de inmunoafinidad se utiliza en la purificación del polipéptido PRO1122 mediante la preparación de una fracción a partir de células que contienen polipéptido PRO1122 en una forma soluble. Esta preparación se deriva por solubilización de toda la célula o de una fracción subcelular obtenida mediante centrifugación diferencial por adición de detergente o mediante otros procedimientos conocidos en la técnica. Alternativamente, el polipéptido PRO1122 soluble que contiene una secuencia señal puede secretarse en una cantidad útil en el medio en el que crecen las células. [0274] Una preparación que contiene polipéptido PRO1122 soluble se pasa por la columna de inmunoafinidad, y la columna se lava en condiciones que permiten la absorbancia preferencial del polipéptido PRO1122 (por ejemplo, tampones de fuerza iónica elevada en presencia de detergente). A continuación, la columna se eluye en condiciones que interrumpen la unión anticuerpo-polipéptido PRO1122 (por ejemplo, un tampón de pH bajo, tal como aproximadamente un pH de 2-3, o una alta concentración de caótropo, tal como urea o ión tiocianato), y se recoge el polipéptido PRO1122. [0271] Native or recombinant PRO1122 polypeptides can be purified by a variety of standard techniques in protein purification techniques. For example, the pro-PRO1122 polypeptide, the mature PRO1122 polypeptide, or the pre-PRO1122 polypeptide is purified by immunoaffinity chromatography using antibodies specific for the PRO1122 polypeptide of interest. In general, an immunoaffinity column is constructed by covalently coupling the anti-PRO122 antibody to an activated chromatography resin. [0272] Polyclonal immunoglobulins are prepared from immune sera by precipitation with ammonium sulfate or by purification in immobilized Protein A (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, N.J). Also, monoclonal antibodies are prepared from mouse ascites fluids by precipitation with ammonium sulfate or immobilized Protein A chromatography. The partially purified immunoglobulin covalently binds to a chromatographic resin, such as CnBr activated SEPHAROSETM (Pharmacia LKB Biotechnology). The antibody is coupled to the resin, the resin is blocked and the derived resin is washed according to the manufacturer's instructions. [0273] Said immunoaffinity column is used in the purification of the PRO1122 polypeptide by preparing a fraction from cells containing PRO1122 polypeptide in a soluble form. This preparation is derived by solubilization of the entire cell or a subcellular fraction obtained by differential centrifugation by the addition of detergent or by other methods known in the art. Alternatively, the soluble PRO1122 polypeptide containing a signal sequence can be secreted in a useful amount in the medium in which the cells grow. [0274] A preparation containing soluble PRO1122 polypeptide is passed through the immunoaffinity column, and the column is washed under conditions that allow preferential absorbance of the PRO1122 polypeptide (eg, high ionic strength buffers in the presence of detergent). Next, the column is eluted under conditions that disrupt the antibody-polypeptide binding PRO1122 (for example, a low pH buffer, such as about a pH of 2-3, or a high concentration of chaotrope, such as urea or thiocyanate ion ), and the PRO1122 polypeptide is collected.

Ejemplo 14: Cribado de fármacos Example 14: Drug Screening

[0275] La presente invención es particularmente útil para cribar compuestos mediante la utilización de polipéptidos PRO1122 o fragmentos de unión de los mismos en cualquier variedad de técnica de cribado de fármacos. El polipéptido fragmento de PRO1122 utilizado en dicha prueba puede estar libre en solución, fijado a un soporte sólido, adsorbido en una superficie celular o situado intracelularmente. Un procedimiento de cribado de fármacos utiliza células huésped eucariotas o procariotas, las cuales se transforman de forma estable con ácidos nucleicos recombinantes que expresan el polipéptido PRO1122 o un fragmento. Los fármacos se criban contra dichas células transformadas en ensayos de unión competitiva. Dichas células, tanto en forma viable como fija, se pueden utilizar para ensayos de unión estándar. Se puede medir, por ejemplo, la formación de complejos entre el polipéptido PRO1122 o un fragmento y el agente que se está probando. Alternativamente, se puede examinar la disminución en la formación del complejo entre el polipéptido PRO1122 y su célula diana o receptores diana causada por el agente que se está probando. [0276] De este modo, la presente invención proporciona procedimientos de cribado para fármacos o cualquier otro agente que puede afectar a una enfermedad o un trastorno asociados al polipéptido PRO1122. Estos procedimientos comprenden el contacto de dicho agente con un polipéptido PRO1122 o fragmento del mismo y el ensayo (I) para la presencia de un complejo entre el agente y el polipéptido PRO1122 o un fragmento, o (II) para la presencia de un complejo entre el polipéptido PRO1122 o un fragmento y la célula, mediante procedimientos bien conocidos en la técnica. En dichos ensayos de unión competitiva, el polipéptido PRO1122 o un fragmento está normalmente marcado. Después de una incubación adecuada, el polipéptido PRO1122 [0275] The present invention is particularly useful for screening compounds by using PRO1122 polypeptides or binding fragments thereof in any variety of drug screening technique. The PRO1122 fragment polypeptide used in said test may be free in solution, fixed to a solid support, adsorbed on a cell surface or located intracellularly. A drug screening method uses eukaryotic or prokaryotic host cells, which are stably transformed with recombinant nucleic acids expressing the PRO1122 polypeptide or a fragment. The drugs are screened against said transformed cells in competitive binding assays. Such cells, both in a viable and fixed form, can be used for standard binding assays. For example, the formation of complexes between the PRO1122 polypeptide or a fragment and the agent being tested can be measured. Alternatively, the decrease in complex formation between the PRO1122 polypeptide and its target cell or target receptors caused by the agent being tested can be examined. [0276] Thus, the present invention provides screening methods for drugs or any other agent that can affect a disease or disorder associated with the PRO1122 polypeptide. These methods comprise contacting said agent with a PRO1122 polypeptide or fragment thereof and assay (I) for the presence of a complex between the agent and the PRO1122 polypeptide or a fragment, or (II) for the presence of a complex between the PRO1122 polypeptide or a fragment and the cell, by methods well known in the art. In such competitive binding assays, the PRO1122 polypeptide or a fragment is normally labeled. After a suitable incubation, the PRO1122 polypeptide

o un fragmento libres se separan de la forma unida, y la cantidad de marca libre o no complejada es una medida de la capacidad del agente concreto para unirse al polipéptido PRO1122 o para interferir en el complejo polipéptido PRO1122/célula. [0277] Otra técnica para el cribado de fármacos proporciona un alto rendimiento cribando compuestos que tienen una afinidad de unión adecuada a un polipéptido y se describe en detalle en WO 84/03564, publicado el 13 de septiembre de 1984. or a free fragment is separated from the bound form, and the amount of free or uncomplexed label is a measure of the ability of the specific agent to bind to the PRO1122 polypeptide or to interfere with the PRO1122 / cell polypeptide complex. [0277] Another technique for drug screening provides high performance by screening compounds that have a suitable binding affinity to a polypeptide and is described in detail in WO 84/03564, published September 13, 1984.

Brevemente, una gran cantidad de compuestos de diferentes péptidos pequeños de prueba se sintetizan en un sustrato sólido, tal como agujas de plástico o alguna otra superficie. Tal y como se aplica a un polipéptido PRO1122, los compuestos de péptidos de prueba se hacen reaccionar con polipéptido PRO1122 y se lavan. Se detecta el PRO1122 unido mediante procedimientos bien conocidos en la técnica. El polipéptido PRO1122 purificado también puede recubrirse directamente en placas para utilizar en las técnicas de cribado de fármacos mencionadas anteriormente. Además, se pueden utilizar anticuerpos no neutralizantes para capturar el péptido e inmovilizarlo en el soporte sólido. [0278] La presente invención también contempla la utilización de ensayos de cribado de fármacos competitivos en los cuales los anticuerpos neutralizantes capaces de unirse a polipéptidos PRO1122 específicamente compiten con un compuesto de prueba para unirse a polipéptido PRO1122 o fragmentos del mismo. De esta manera, pueden utilizarse los anticuerpos para detectar la presencia de cualquier péptido que comparte uno o más determinantes antigénicos con el polipéptido PRO1122. Briefly, a large number of compounds of different small test peptides are synthesized in a solid substrate, such as plastic needles or some other surface. As applied to a PRO1122 polypeptide, the test peptide compounds are reacted with PRO1122 polypeptide and washed. The bound PRO1122 is detected by methods well known in the art. The purified PRO1122 polypeptide can also be coated directly on plates for use in the drug screening techniques mentioned above. In addition, non-neutralizing antibodies can be used to capture the peptide and immobilize it on the solid support. [0278] The present invention also contemplates the use of competitive drug screening assays in which neutralizing antibodies capable of binding PRO1122 polypeptides specifically compete with a test compound to bind PRO1122 polypeptide or fragments thereof. In this way, antibodies can be used to detect the presence of any peptide that shares one or more antigenic determinants with the PRO1122 polypeptide.

Ejemplo 15: Diseño racional de fármacos Example 15: Rational drug design

[0279] El objetivo del diseño racional de fármacos es producir análogos estructurales de polipéptidos biológicamente activos de interés (es decir, un polipéptido PRO1122) [0279] The objective of rational drug design is to produce structural analogs of biologically active polypeptides of interest (ie, a PRO1122 polypeptide)

o de pequeñas moléculas con las cuales interactúan, por ejemplo, agonistas, antagonistas o inhibidores. Cualquiera de estos ejemplos se puede utilizar para fármacos de moda que son formas más activas o estables del polipéptido PRO1122 o que potencian o interfieren con la función del polipéptido PRO1122 in vivo (c.f. Hodgson, Bio/Technology, 9: 19-21 (1991)). [0280] En un enfoque, la estructura tridimensional del polipéptido PRO1122, o de un complejo polipéptido PRO1122-inhibidor, se determina mediante cristalografía de rayos X, mediante modelación por ordenador o, más habitualmente, mediante una combinación de los dos enfoques. Deben comprobarse la forma y las cargas del PRO1122 para elucidar la estructura y para determinar el sitio o sitios activos de la molécula. Con menor frecuencia, podría obtenerse la información útil con respecto a la estructura del PRO1122 mediante la modelación basada en la estructura de proteínas homólogas. En ambos casos, la información estructural pertinente se utiliza para diseñar moléculas análogas de tipo polipéptido PRO1122 o para identificar inhibidores eficaces. Entre los ejemplos útiles de diseño racional de fármacos se pueden incluir moléculas que han mejorado la actividad o la estabilidad, tal como se muestra por Braxton y Wells, Biochemistry, 31: 7796-7801 (1992) o que actúan como inhibidores, agonistas o antagonistas de péptidos nativos tal y como se muestra por Athauda et. al., or of small molecules with which they interact, for example, agonists, antagonists or inhibitors. Any of these examples can be used for fashionable drugs that are more active or stable forms of the PRO1122 polypeptide or that enhance or interfere with the function of the PRO1122 polypeptide in vivo (cf. Hodgson, Bio / Technology, 9: 19-21 (1991) ). [0280] In one approach, the three-dimensional structure of the PRO1122 polypeptide, or of a PRO1122-inhibitor polypeptide complex, is determined by X-ray crystallography, by computer modeling or, more commonly, by a combination of the two approaches. The shape and loads of PRO1122 should be checked to elucidate the structure and to determine the active site or sites of the molecule. Less frequently, useful information regarding the structure of PRO1122 could be obtained through modeling based on the homologous protein structure. In both cases, the relevant structural information is used to design analog molecules of the PRO1122 polypeptide type or to identify effective inhibitors. Useful examples of rational drug design may include molecules that have improved activity or stability, as shown by Braxton and Wells, Biochemistry, 31: 7796-7801 (1992) or that act as inhibitors, agonists or antagonists of native peptides as shown by Athauda et. to the.,

J. Biochem., 113: 742-746 (1993). [0281] También es posible aislar un anticuerpo específico de diana, seleccionado mediante un ensayo funcional, tal y como se ha descrito anteriormente y, a continuación, solucionar su estructura cristalina. Este enfoque, en principio, produce un fármaco inicial en el que puede basarse el diseño de fármacos posterior. Es posible evitar una cristalografía de toda la proteína mediante la generación de anticuerpos antiidiotípicos (anti-ids) para un anticuerpo funcional farmacológicamente activo. Como imagen especular de una imagen especular, el sitio de unión del anti-ids se esperaría que fuera un análogo del receptor original. A continuación, el anti-ids podría utilizarse para identificar y aislar péptidos de bancos de péptidos producidos química o biológicamente. Los péptidos aislados actuarían entonces como el fármaco inicial. [0282] En virtud de la presente invención, se pueden fabricar cantidades suficientes del polipéptido PRO1122 para realizar dichos estudios analíticos, tales como en cristalografía de rayos-X. Además, el conocimiento de la secuencia de aminoácidos del polipéptido PRO1122 proporcionada en la presente invención proporcionará una guía para los usuarios de técnicas de modelación por ordenador en lugar de o adicionalmente a la cristalografía de rayos-X. J. Biochem., 113: 742-746 (1993). [0281] It is also possible to isolate a target specific antibody, selected by a functional assay, as described above and then solve its crystalline structure. This approach, in principle, produces an initial drug on which the subsequent drug design can be based. It is possible to avoid crystallography of the entire protein by generating anti-idiotypic antibodies (anti-ids) for a pharmacologically active functional antibody. As a mirror image of a mirror image, the anti-ids binding site would be expected to be an analog of the original receptor. Next, the anti-ids could be used to identify and isolate peptides from banks of chemically or biologically produced peptides. The isolated peptides would then act as the initial drug. [0282] By virtue of the present invention, sufficient amounts of the PRO1122 polypeptide can be manufactured to perform such analytical studies, such as in X-ray crystallography. In addition, knowledge of the amino acid sequence of the PRO1122 polypeptide provided in the present invention will provide a guide for users of computer modeling techniques rather than or in addition to X-ray crystallography.

Ejemplo 16: Ensayo de explantes de cartílago articular Example 16: Test of articular cartilage explants

Introducción: Introduction:

[0283] Tal y como se ha mencionado anteriormente, es probable que IL-17 tenga un papel en la iniciación o mantenimiento de la respuesta proinflamatoria. IL-17 es una citoquina expresada por células CD4+ Th e induce la secreción de citoquinas proinflamatorias y hematopoyéticas (por ejemplo, IL-1, TNF-, IL-6, IL-8, GM-CSF. Aarvak et al., J. Immunol 162: 1246-1251 (1999); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183: 2593-2603 (1996); Jovanovic et al., J. Immunol. 160: 3513-3521 (1998) en una serie de tipos de células que incluyen sinoviocitos y macrófagos. En presencia de IL-17, los fibroblastos mantienen la proliferación de progenitores hematopoyéticos CD34+ e inducen su maduración preferencial en neutrófilos. Como resultado, IL-17 puede constituir un iniciador temprano de la reacción inflamatoria dependiente de células T y puede ser parte de la red de citoquinas que conecta el sistema inmune con la hematopoyesis. [0284] Se ha observado la expresión de IL-17 en el sinovio de pacientes con artritis reumatoide, artritis psoriática u osteoartritis, pero no en tejidos de articulaciones normales. IL-17 puede ser sinérgico con las citoquinas proinflamatorias derivadas de monocitos IL-1 o TNF- para inducir IL-6 y GM-CSF. Mediante la acción directa sobre los sinoviocitos, IL-17 podía aumentar la secreción de citoquinas proinflamatorias in vivo y, de este modo, exacerbar la inflamación y destrucción de las articulaciones. [0285] Para entender a fondo el posible papel de IL-17, los Solicitantes han ensayado los efectos de IL-17 sobre el metabolismo de la matriz del cartílago. A la vista de los efectos catabólicos conocidos del óxido nítrico (NO) en el cartílago, y la existencia de niveles elevados de NO en las articulaciones artríticas, también se midió la producción de NO. [0283] As mentioned above, IL-17 is likely to have a role in initiating or maintaining the proinflammatory response. IL-17 is a cytokine expressed by CD4 + Th cells and induces the secretion of proinflammatory and hematopoietic cytokines (for example, IL-1, TNF-, IL-6, IL-8, GM-CSF. Aarvak et al., J. Immunol 162: 1246-1251 (1999); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183: 2593-2603 (1996); Jovanovic et al., J. Immunol. 160: 3513-3521 (1998) in a series of cell types that include synoviocytes and macrophages.In the presence of IL-17, fibroblasts maintain the proliferation of CD34 + hematopoietic progenitors and induce their preferential maturation in neutrophils.As a result, IL-17 may constitute an early initiator of the reaction T cell-dependent inflammatory and may be part of the cytokine network that connects the immune system with hematopoiesis. [0284] The expression of IL-17 has been observed in the synovium of patients with rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis or osteoarthritis, but not in normal joint tissues. IL-17 may be synergistic with cit proinflammatory machines derived from monocytes IL-1F or TNF- to induce IL-6 and GM-CSF. By direct action on synoviocytes, IL-17 could increase the secretion of proinflammatory cytokines in vivo and, thus, exacerbate inflammation and destruction of joints. [0285] To fully understand the possible role of IL-17, Applicants have tested the effects of IL-17 on the metabolism of the cartilage matrix. In view of the known catabolic effects of nitric oxide (NO) in cartilage, and the existence of elevated levels of NO in arthritic joints, NO production was also measured.

Procedimientos: Procedures:

[0286] Explantes de cartílago articular: La articculación metacarpofalángico de una cerda de 4-6 meses de vida se diseccionó de manera aséptica, y se extrajo el cartílago articular mediante corte en “frenad” de una forma cuidadosa, de manera que se evita el hueso subyacente. El cartílago se molió y se cultivó en masa durante por lo menos 24 horas en una atmósfera humidificada del 95% en aire y un 5% de CO2 en medio libre de suero (SF) (DME/F12 1:1) con BSA al 0,1% y antibióticos. Después de lavar tres veces, se pusieron alicuotas de aproximadamente 80 mg de cartílago articular en tubos micrónicos y se incubaron durante por lo menos 24 horas en el medio SF anterior. A continuación, se añadieron las proteínas de prueba en un 1% solas o combinadas con IL-1 (10 ng/ml) (SEC ID No: 25). El medio se recogió y se cambió a diferentes puntos de tiempo (0, 24, 48, 72 horas) y se ensayó para el contenido de proteoglicanos utilizando el ensayo colorimétrico con azul de 1,9-dimetilmetileno (DMB) descrito en Famdale y Buttle, Biochem. Biophys. Acta 883: 173-177 (1985). Después del marcaje (durante toda la noche) con azufre-35S, los tubos se pesaron para determinar la cantidad de tejido. Después de una digestión durante toda la noche, se determinan la cantidad de proteoglicanos restante en el tejido, así como la síntesis de proteoglicanos (incorporación de 35S). [0287] Medición de la producción de NO: El ensayo se basa en el principio que el 2,3diaminonaftaleno (DAN) reacciona con nitrito en condiciones ácidas para formar 1(H)-naftotriazol, un producto fluorescente. Dado que el NO es metaboliza rápidamente a nitrito (NO2-1) y nitrato (NO3-1), la detección del nitrito es un medio de detección (aunque por debajo) del NO real producido. Se añaden 10 L de DAN (0,05 mg·mL en 0,62 M de HCl) a 100 L de muestra (sobrenadante del cultivo celular), se mezclan y se incuban a temperatura ambiente durante 10-20 minutos. La reacción se acaba con 5 mL de NaOH 2,8 N. La formación de 2,3-diaminonaftotriazol se midió utilizando un lector en placa fluorescente Cytoflor con una excitación a 360 nm y lectura de emisión a 450 nm. Para una medición óptima de la intensidad fluorescente, se utilizaron placas negras con bases claras. [0286] Explants of articular cartilage: The metacarpophalangeal joint of a sow of 4-6 months of age was dissected aseptically, and the articular cartilage was removed by cutting in a “braking” way, so as to avoid underlying bone The cartilage was ground and mass-grown for at least 24 hours in a humidified atmosphere of 95% in air and 5% CO2 in serum-free medium (SF) (DME / F12 1: 1) with BSA at 0 , 1% and antibiotics. After washing three times, approximately 80 mg aliquots of articular cartilage were placed in micron tubes and incubated for at least 24 hours in the previous SF medium. Next, the test proteins were added in 1% alone or in combination with IL-1 (10 ng / ml) (SEQ ID No: 25). The medium was collected and changed at different time points (0.24, 48, 72 hours) and tested for proteoglycan content using the colorimetric test with 1,9-dimethylmethylene blue (DMB) described in Famdale and Buttle , Biochem. Biophys Minutes 883: 173-177 (1985). After labeling (overnight) with sulfur-35S, the tubes were weighed to determine the amount of tissue. After overnight digestion, the amount of proteoglycans remaining in the tissue is determined, as well as the synthesis of proteoglycans (incorporation of 35S). [0287] Measurement of NO production: The assay is based on the principle that 2,3-diaminonaphthalene (DAN) reacts with nitrite under acidic conditions to form 1 (H) -naphthotriazole, a fluorescent product. Since NO is rapidly metabolized to nitrite (NO2-1) and nitrate (NO3-1), nitrite detection is a means of detection (albeit below) of the actual NO produced. 10 µL of DAN (0.05 mg · mL in 0.62 M HCl) is added to 100 µL of sample (cell culture supernatant), mixed and incubated at room temperature for 10-20 minutes. The reaction is terminated with 5 mL of 2.8 N NaOH. The formation of 2,3-diaminonaphthotriazole was measured using a Cytoflor fluorescent plate reader with an excitation at 360 nm and emission reading at 450 nm. For optimal measurement of fluorescent intensity, black plates with clear bases were used.

Resultados y discusión: Results and Discussion:

[0288] Se observó que IL-17 (SEC ID No: 11) aumentaba la liberación de proteoglicanos y disminuía la síntesis de los mismos (figura 13). Además, este efecto era aditivo al efecto observado a partir de IL-1 (figura 13) (SEC ID No: 25). Los efectos de IL-17 no están mediadas por la producción de óxido nítrico, ni la inhibición de la liberación de óxido nítrico aumenta la ruptura de la matriz. UNQ561 (SEC ID No: 3) aumenta la ruptura de la matriz e inhibe la síntesis de la matriz. De este modo, es probable que la expresión de PRO1122 se asocie a trastornos cartilaginosos degenerativos. Por otro lado, UNQ516 (SEC ID No: 1) aumenta la síntesis de la matriz e inhibe la liberación de óxido nítrico por los explantes de cartílago articular. [0289] En conclusión, IL-17 contribuye probablemente a una pérdida de cartílago articular en las articulaciones artríticas y, de este modo, la inhibición de su actividad podría limitar la inflamación y la destrucción del cartílago. Il-1 e IL-17 tienen actividades similares, aunque distintas, debido a su utilización de diferentes receptores y al solapamiento en cadena abajo de los mecanismos de señalización. [0290] Dados los hallazgos de los potentes efectos catabólicos de IL-17 sobre explantes de cartílago articular y la homología de UNQ516 y UNQ561 con IL-17, los antagonistas para cualquiera o todas estas proteínas puede ser útil para el tratamiento de condiciones inflamatorias y defectos del cartílago, tales como la artritis. Sin embargo, el hallazgo de que UNQ516 inhibe la producción de NO y aumenta la síntesis de la matriz sugiere que esta proteína y los agonistas de las misma podrían tener efectos beneficiosos en la articulación y, de este modo, pueden ser útiles por sí mismos para el tratamiento de los trastornos mencionados anteriormente. [0288] It was observed that IL-17 (SEQ ID No: 11) increased the release of proteoglycans and decreased their synthesis (Figure 13). In addition, this effect was additive to the effect observed from IL-1 (Figure 13) (SEQ ID No: 25). The effects of IL-17 are not mediated by the production of nitric oxide, nor is the inhibition of nitric oxide release increasing matrix rupture. UNQ561 (SEQ ID No: 3) increases matrix rupture and inhibits matrix synthesis. Thus, the expression of PRO1122 is likely to be associated with degenerative cartilaginous disorders. On the other hand, UNQ516 (SEQ ID No: 1) increases matrix synthesis and inhibits the release of nitric oxide by articular cartilage explants. [0289] In conclusion, IL-17 probably contributes to a loss of articular cartilage in arthritic joints and, thus, inhibition of its activity could limit inflammation and destruction of cartilage. Il-1 and IL-17 have similar, although different, activities due to their use of different receivers and the chain overlapping of signaling mechanisms. [0290] Given the findings of the potent catabolic effects of IL-17 on articular cartilage explants and the homology of UNQ516 and UNQ561 with IL-17, antagonists for any or all of these proteins may be useful for the treatment of inflammatory conditions and cartilage defects, such as arthritis. However, the finding that UNQ516 inhibits the production of NO and increases the synthesis of the matrix suggests that this protein and its agonists could have beneficial effects on the joint and, thus, can be useful in themselves for the treatment of the disorders mentioned above.

[0291] Finalmente, se sabe que los factores de crecimiento pueden tener efectos bifásicos y que el tejido enfermo puede responder de forma diferente que el tejido normal a un factor determinado in vivo. Por estas razones, los antagonistas o agonistas (por ejemplo, las propias proteínas) de UNQ561 pueden ser útiles en el tratamiento de [0291] Finally, it is known that growth factors may have biphasic effects and that diseased tissue may respond differently than normal tissue to a given factor in vivo. For these reasons, antagonists or agonists (for example, the proteins themselves) of UNQ561 may be useful in the treatment of

5 condiciones inflamatorias y trastornos de las articulaciones, tales como la artritis. 5 inflammatory conditions and joint disorders, such as arthritis.

Depósito de material Material deposit

[0292] Los siguientes materiales se han depositado con la American Type Culture 10 Collection, 10801 University Boulevard, Manasssas, VA, USA 20110-2209 (ATCC): [0292] The following materials have been deposited with the American Type Culture 10 Collection, 10801 University Boulevard, Manasssas, VA, USA 20110-2209 (ATCC):

Material ATCC Dep. No. Fecha del depósito Material ATCC Dep. No. Deposit date

DNA59294-1381 209866 14 de mayo de 1998 DNA59294-1381 209866 May 14, 1998

DNA62377-1381-1 203552 22 de diciembre de 1998 DNA62377-1381-1 203552 December 22, 1998

[0293] Este depósito se realizó según lo estipulado en el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a los fines del [0293] This deposit was made as stipulated in the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the purpose of

15 Procedimiento en Materia de Patentes y el Reglamento bajo el mismo (Tratado de Budapest). Esto asegura el mantenimiento de un cultivo viable del depósito durante 30 años a partir de la fecha del depósito. El depósito estará disponible mediante la ATCC según los términos del Tratado de Budapest, y están sujetos a un acuerdo entre Genentech, Inc. y ATCC, que asegura la disponibilidad permanente y sin restricción de 15 Patent Procedure and the Regulations under it (Budapest Treaty). This ensures the maintenance of a viable culture of the deposit for 30 years from the date of deposit. The deposit will be available through the ATCC under the terms of the Budapest Treaty, and are subject to an agreement between Genentech, Inc. and ATCC, which ensures the permanent and unrestricted availability of

20 la progenie del cultivo del depósito al uso público tras la publicación de la respectiva patente estadounidense o tras ponerse abierta a la inspección pública de cualquier solicitud de patente estadounidense o extranjera, la que sea primera, y asegura la disponibilidad de la progenie para alguien determinado por el Comisionario de Patentes y Marcas de Estados Unidos para tener el derecho a la misma de acuerdo con 20 the progeny of the deposit culture for public use after the publication of the respective US patent or after being made open to the public inspection of any US or foreign patent application, whichever is first, and ensures the availability of the progeny for a given person by the United States Patent and Trademark Commissioner to have the right to it in accordance with

25 35 USC § 122 y las normas del Comisionario según las mismas (incluyendo 37 CFER § 1.14 con referencia concreta a 886 OG 638). [0294] El cesionario de la presente solicitud ha acordado que si un cultivo de los materiales en el depósito muriera o se perdiera o se destruyera cuando se cultiva en las condiciones adecuadas, los materiales serán inmediatamente reemplazados en una 25 35 USC § 122 and the rules of the Commissioner according to them (including 37 CFER § 1.14 with specific reference to 886 OG 638). [0294] The assignee of the present application has agreed that if a crop of the materials in the deposit died or was lost or destroyed when grown under the proper conditions, the materials will be immediately replaced in a

30 notificación por otros iguales. La disponibilidad del material depositado no se interpreta como una licencia para realizar la invención contraviniendo los derechos concedidos bajo la autoridad de cualquier gobierno de acuerdo con sus leyes de patente. [0295] La memoria escrita anteriormente se considera que es suficiente para permitir a un experto en la materia realizar la invención. La presente invención no se limita en su alcance por la construcción depositada, ya que la realización depositada pretende ser una ilustración individual de ciertos aspectos de la presente invención. El depósito del material de la presente invención no constituye una admisión de que la descripción escrita contenida en la presente invención sea inadecuada para permitir la práctica de cualquier aspecto de la invención, incluyendo el modo óptimo de la misma, ni se interpreta como limitante del alcance de las reivindicaciones a las ilustraciones específicas que representa. 30 notification by other equals. The availability of deposited material is not interpreted as a license to carry out the invention in contravention of the rights granted under the authority of any government in accordance with its patent laws. [0295] The previously written report is considered to be sufficient to allow a person skilled in the art to carry out the invention. The present invention is not limited in scope by the deposited construction, since the deposited embodiment is intended to be an individual illustration of certain aspects of the present invention. The deposit of the material of the present invention does not constitute an admission that the written description contained in the present invention is inadequate to allow the practice of any aspect of the invention, including the optimal mode thereof, nor is it construed as limiting the scope from the claims to the specific illustrations it represents.

Listado de secuencias Sequence listing

[0196] [0196]

<110> Chen, Jian Filvaroff, Ellen Goddard, Audrey Gurney, Austin Li, Hanzhong Wood, William I. <110> Chen, Jian Filvaroff, Ellen Goddard, Audrey Gurney, Austin Li, Hanzhong Wood, William I.

<120> POLIPÉPTIDOS HOMÓLOGOS IL-17 Y UTILIZACIONES TERAPÉUTICAS <120> IL-17 HOMOLOGICAL POLIPEPTIDES AND THERAPEUTIC USES

<130> P1381-R1 <130> P1381-R1

<141> 1999-05-14 <141> 1999-05-14

<150> US 60/085,579 <150> US 60 / 085,579

<151> 1998-05-15 <151> 1998-05-15

<150> US 60/113,621 <150> US 60 / 113,621

<151> 1998-12-23 <151> 1998-12-23

<160> 26 <160> 26

<210> 1 <210> 1

<211> 180 <211> 180

<212><212>

PRT 5 <213> Homo sapiens  PRT 5 <213> Homo sapiens

<400> 1 <400> 1

<210> 2 <210> 2

<211> 687 <211> 687

<212><212>

ADN 5 <213> Homo sapiens  DNA 5 <213> Homo sapiens

imagen1image 1

10 10

15 fifteen

imagen1image 1

<400> 2 <400> 2

imagen2image2

<210> 3 <210> 3

<211> 197 <211> 197

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 3 <210> 4 <400> 3 <210> 4

imagen1image 1

<211> 1047 <211> 1047

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 4 <210> 5 <400> 4 <210> 5

imagen1image 1

<211> 830 <211> 830

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<220> <220>

<221> desconocida <221> unknown

<222> 105-115 <222> 105-115

<223> base desconocida <223> unknown base

<400> 5 <210> 6 <400> 5 <210> 6

imagen1image 1

<211> 397 <211> 397

<212> ADN <212> DNA

<213> Artificial <213> Artificial

<220> <220>

<221> desconocida <221> unknown

<222> 10, 150, 267 <222> 10, 150, 267

<223> base desconocida <223> unknown base

<400> 6 <400> 6

imagen1image 1

<210> 7 <210> 7

<211> 230 <211> 230

<212> ADN <212> DNA

<213> Artificial <213> Artificial

<400> 7 <210> 8 <400> 7 <210> 8

imagen1image 1

<211> 24 <211> 24

<212> ADN <212> DNA

<213> Secuencia Artificial <213> Artificial Sequence

<400> 8 <400> 8

imagen1image 1

<210> 9 <210> 9

<211> 24 <211> 24

<212> ADN <212> DNA

<213> Secuencia Artificial <213> Artificial Sequence

<400> 9 <400> 9

imagen1image 1

<210> 10 <210> 10

<211> 40 <211> 40

<212> ADN <212> DNA

<213> Secuencia Artificial <213> Artificial Sequence

imagen3image3

<210> 11 <210> 11

<211> 155 <211> 155

<212> PRT <212> PRT

<213> Humana <213> Human

<400> 11 <400> 11

5 5

imagen1image 1

10 10

15 fifteen

20 twenty

<210> 12 <210> 12

<211> 408 <211> 408

<212> PRT <212> PRT

<213> Artificial <213> Artificial

25 25

<220> <220>

<223> Secuencia Artificial 1-408 <223> Artificial Sequence 1-408

<400> 12 <400> 12

30 30

imagen1image 1

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imagen4image4

<210> 14 <210> 14

<211> 212 25 <212> PRT <211> 212 25 <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 14 <400> 14

imagen1image 1

<210> 15 <210> 15

<211> 320 <211> 320

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 15 <400> 15

imagen1image 1

imagen1image 1

imagen1image 1

<210> 16 <210> 16

<211> 543 <211> 543

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 16 <400> 16

imagen1image 1

<210> 17 <210> 17

<211> 594 <211> 594

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 17 <400> 17

imagen1image 1

<210> 18 <210> 18

<211> 9 <211> 9

<212> PRT <212> PRT

<213> Artificial <213> Artificial

<220> <220>

<223> Secuencia artificial 1-9 <223> Artificial sequence 1-9

<400> 18 <400> 18

imagen1image 1

<210> 19 <210> 19

<211> 157 <211> 157

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 19 <400> 19

imagen1image 1

<210> 20 <210> 20

<211> 21 <211> 21

<212> ADN <212> DNA

<213> Artificial <213> Artificial

<220> <220>

<223> Secuencia artificial 1-21 <223> Artificial sequence 1-21

imagen5image5

<210> 21 <210> 21

<211> 58 <211> 58

<212> ADN <212> DNA

<213> Artificial <213> Artificial

5 <220> 5 <220>

<223> Secuencia artificial 1-58 <223> Artificial sequence 1-58

<400> 21 <400> 21

imagen6image6

<210> 22 <210> 22

<211><211>

328 15 <212> PRT  328 15 <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 22 <400> 22

<210> 23 <210> 23

<211><211>

175 15 <212> PRT  175 15 <212> PRT

imagen1image 1

imagen7image7

<213> Artificial <213> Artificial

<220> <220>

<223> Secuencia artificial 1-175 <223> Artificial sequence 1-175

<400> 23 <400> 23

imagen1image 1

<210> 24 <210> 24

<211> 206 <211> 206

<212> PRT <212> PRT

<213> Artificial <213> Artificial

<220> <220>

<223> Secuencia artificial 1-206 <223> Artificial sequence 1-206

<400> 24 <210> 25 <400> 24 <210> 25

imagen1image 1

<211> 271 <211> 271

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 25 <400> 25

imagen1image 1

imagen1image 1

<210> 26 <210> 26

<211> 177 <211> 177

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo Sapiens <213> Homo Sapiens

<400> 26 Listado de secuencias <400> 26 Sequence listing

imagen1image 1

[0297] [0297]

<110> Genentech, Inc., et al. <110> Genentech, Inc., et al.

<120> POLIPÉPTIDOS HOMÓLOGOS IL-17 Y UTILIZACIONES TERAPÉUTICAS DE LOS MISMOS <120> IL-17 HOMOLOGICAL POLIPEPTIDES AND THERAPEUTIC USES OF THE SAME

<130> P1381-R1 <130> P1381-R1

<140> PCT/US99/10733 <140> PCT / US99 / 10733

<141> 1999-05-14 <141> 1999-05-14

<150> US 60/085,579 <150> US 60 / 085,579

<151> 1998-05-15 <151> 1998-05-15

<150> US 60/113,621 <150> US 60 / 113,621

<151> 1998-12-23 <151> 1998-12-23

<160> 26 <160> 26

<210> 1 <210> 1

<211> 180 <211> 180

<212> PRT <212> PRT

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 1 <210> 2 <400> 1 <210> 2

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<211> 687 <211> 687

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 2 <400> 2

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<210> 4 <210> 4

<211> 1047 <211> 1047

<212> ADN <212> DNA

<213> Homo sapiens <213> Homo sapiens

<400> 4 <210> 5 <400> 4 <210> 5

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<220> <220>

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<212> ADN <212> DNA

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<221> desconocida <221> unknown

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<223> base desconocida <223> unknown base

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<220> <220>

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<211> 24 <211> 24

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10 <220> 10 <220>

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<210> 10 <210> 10

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<220> <220>

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<213> Artificial <213> Artificial

25 <220> 25 <220>

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<212> PRT <212> PRT

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5 5

<220> <220>

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10 10

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<212> PRT <212> PRT

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<212> PRT <212> PRT

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<220> <220>

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imagen5image5

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<212> PRT <212> PRT

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<400> 26 <400> 26

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REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN REFERENCES CITED IN THE DESCRIPTION

Esta lista de referencias citadas por el solicitante se muestra únicamente para conveniencia del lector. No forma parte del documento de Patente Europea. Aunque se ha tenido una gran precaución a la hora de recopilar las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la Oficina Europea de Patentes declina cualquier responsabilidad al respecto. This list of references cited by the applicant is shown solely for the convenience of the reader. It is not part of the European Patent document. Although great care has been taken when collecting references, errors or omissions cannot be excluded and the European Patent Office declines any responsibility in this regard.

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US 4496689 A [0079] US 4496689 A [0079]

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Documentos que no son patentes citados en la descripción Documents that are not patents cited in the description

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HUNTER et al. Nature, 1962, vol. 144, 945 [0178] HUNTER et al. Nature, 1962, vol. 144, 945 [0178]

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DAVID et al. Biochemistry, 1974, vol. 13, 1014 [0178]  DAVID et al. Biochemistry, 1974, vol. 13, 1014 [0178]

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NYGREN. J. Histochem. and Cytochem., 1982, vol. 30, 407 [0178]  NYGREN J. Histochem. and Cytochem., 1982, vol. 30, 407 [0178]

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FIELDS ; SONG. Nature, 1989, vol. 340, 245-246 [0183]  FIELDS; SONG Nature, 1989, vol. 340, 245-246 [0183]

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CHIEN et al. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 1991, vol. 88, 9578-9582 [0183] CHIEN et al. Proc. Natl Acad Sci. USA, 1991, vol. 88, 9578-9582 [0183]

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CHEVRAY; NATHANS. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, vol. 89, 5789-5791 [0183]  CHEVRAY; NATHANS Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1991, vol. 89, 5789-5791 [0183]

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COLIGAN et al. Current Protocols in Immun., 1991, vol. 1 (2 [0185] COLIGAN et al. Current Protocols in Immun., 1991, vol. 1 (2 [0185]

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OKANO. Neurochem, 1991, vol. 546, 560 [0189]  OKANO Neurochem, 1991, vol. 546, 560 [0189]

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Remington’s Pharmaceutical Sciences. 1980 [0200] [0202] Remington’s Pharmaceutical Sciences. 1980 [0200] [0202]

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JOHNSON et al. Nat. Med., 1996, vol. 2, 795-799 [0205] JOHNSON et al. Nat. Med., 1996, vol. 2, 795-799 [0205]

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YASUDA et al. Biomed. Ther., 1993, vol. 27, 1221-1223 [0205]  YASUDA et al. Biomed Ther., 1993, vol. 27, 1221-1223 [0205]

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HORA et al. Bio/Technology, 1990, vol. 8, 755-758 [0205] TIME et al. Bio / Technology, 1990, vol. 8, 755-758 [0205]

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Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems. CLELAND. Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach. Penum Press, 1995, 439-462 [0205] Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems. CLELAND Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach. Penum Press, 1995, 439-462 [0205]

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Controlled release of bioactive agents from lactide/ glycolide polymer. LEWIS. Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems. Marcel Dekker, 1990, 1-41 [0206] Controlled release of bioactive agents from lactide / glycolide polymer. LEWIS Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems. Marcel Dekker, 1990, 1-41 [0206]

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W.W.

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ALTSHUL et al. Methods in Enzymology, 1996, vol. 266, 460-480 [0217]  ALTSHUL et al. Methods in Enzymology, 1996, vol. 266, 460-480 [0217]

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LENNON et al. Genomics, 1996, vol. 33, 151 [0219] LENNON et al. Genomics, 1996, vol. 33, 151 [0219]

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SAMBROOK et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0223] SAMBROOK et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0223]

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DIEFFENBACH et al. PCR Primer: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995 [0223]  DIEFFENBACH et al. PCR Primer: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995 [0223]

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AUSUBLE et al. Current Protocols in Molecular Biology [0224] AUSUBLE et al. Current Protocols in Molecular Biology [0224]

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HOLMES et al. Science, 1991, vol. 235, 1278-1280 [0226] HOLMES et al. Science, 1991, vol. 235, 1278-1280 [0226]

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BOLIVAR et al. Gene, 1977, vol. 2, 95 [0235] BOLIVAR et al. Gene, 1977, vol. 2, 95 [0235]

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THIMMAPPAYA. Cell, 1982, vol. 31, 543 [0241] THIMMAPPAYA. Cell, 1982, vol. 31, 543 [0241]

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SOMPARYRAC et al. Proc. Natl. Acad. Sci., 1981, vol. 12, 7575 [0243]  SOMPARYRAC et al. Proc. Natl Acad. Sci., 1981, vol. 12, 7575 [0243]

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O’REILLEY et al. Baculovirus Expression vectors: A Laboratory Manual. Oxford  O'REILLEY et al. Baculovirus Expression vectors: A Laboratory Manual. Oxford

University Press, 1994 [0252] 5 • RUPERT et al. Nature, 1993, vol. 362, 175-179 [0253] University Press, 1994 [0252] 5 • RUPERT et al. Nature, 1993, vol. 362, 175-179 [0253]

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YAO et al. J. Immunol, 1995, vol. 155, 5483 [0265] YAO et al. J. Immunol, 1995, vol. 155, 5483 [0265]

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YAO et al. supra [0270] YAO et al. supra [0270]

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HODGSON. Bio/Technology, 1991, vol. 9, 19-21 [0285] HODGSON Bio / Technology, 1991, vol. 9, 19-21 [0285]

• BRAXTON ; WELLS. Biochemistry, 1992, vol. 31, 7796-7801 [0286] 10 • ATHAUDA et al. Biochem., 1993, vol. 113, 742-746 [0286] • BRAXTON; WELLS Biochemistry, 1992, vol. 31, 7796-7801 [0286] 10 • ATHAUDA et al. Biochem., 1993, vol. 113, 742-746 [0286]

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AARVAK et al. . Immunol, 1999, vol. 162, 1246-1251 [0289] AARVAK et al. . Immunol, 1999, vol. 162, 1246-1251 [0289]

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FOSSIEZ et al. J. Exp. Med., 1996, vol. 183, 2593-2603 [0289] FOSSIEZ et al. J. Exp. Med., 1996, vol. 183, 2593-2603 [0289]

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JOVANOVIC et al. J. Immunol., 1998, vol. 160, 3513-3521 [0289]  JOVANOVIC et al. J. Immunol., 1998, vol. 160, 3513-3521 [0289]

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FAMDALE ; BUTTLE. Biochem. Biophys. Acta, 1985, vol. 883, 173-177 [0292]  FAMDALE; BUTTLE Biochem Biophys Acta, 1985, vol. 883, 173-177 [0292]

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Claims (7)

REIVINDICACIONES 1.- Antagonista de un polipéptido PRO1122, en el que dicho antagonista  1.- Antagonist of a PRO1122 polypeptide, in which said antagonist comprende: understands: un anticuerpo anti-PRO1122 que se une específicamente a un polipéptido PRO1122 que consiste en la secuencia de residuos de aminoácidos 1 ó 19 a 197 mostrada en la figura 3 (SEC ID No. 3), an anti-PRO1122 antibody that specifically binds to a PRO1122 polypeptide consisting of the sequence of amino acid residues 1 or 19 to 197 shown in Figure 3 (SEQ ID No. 3), y antagoniza la actividad del polipéptido PRO1122 que consiste en la secuencia de residuos de aminoácidos 1 ó 19 a 197 mostrada en la figura 3 (SEC ID No. 3) para aumentar la ruptura de la matriz e inhibir la síntesis de la matriz en explantes de cartílago articular. and antagonizes the activity of the PRO1122 polypeptide consisting of the sequence of amino acid residues 1 or 19 to 197 shown in Figure 3 (SEQ ID No. 3) to increase matrix breakage and inhibit matrix synthesis in explants of Articular cartilage. 2.- Composición farmacéutica terapéutica que comprende el antagonista de PRO1122 según la reivindicación 1 mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable. 2. Therapeutic pharmaceutical composition comprising the PRO1122 antagonist according to claim 1 mixed with a pharmaceutically acceptable carrier. 3.- Antagonista de un polipéptido PRO1122 para la utilización en un método de tratamiento en el que el anatagonista es tal como se define en la reivindicación 1. 3. Antagonist of a PRO1122 polypeptide for use in a treatment method in which the anatagonist is as defined in claim 1. 4.- Antagonista según la reivindicación 3, en el que el tratamiento es de un trastorno cartilaginoso degenerativo. 4. Antagonist according to claim 3, wherein the treatment is of a degenerative cartilaginous disorder. 5.- Antagonista según la reivindicación 4, en el que el tratamiento es de la artritis.  5. Antagonist according to claim 4, wherein the treatment is arthritis. 6.- Utilización de un antagonista tal como se define en la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno cartilaginoso degenerativo. 6. Use of an antagonist as defined in claim 1 in the manufacture of a medicament for the treatment of a degenerative cartilaginous disorder. 7.- Utilización según la reivindicación 6, en el que el tratamiento es de la artritis.  7. Use according to claim 6, wherein the treatment is arthritis.