ES2286000T3 - Dosificacion de proteinas tales como inmunoglobulinas de tipo e (ige) en secreciones nasales. - Google Patents

Abstract

Procedimiento de detección o de dosificación de IgE, que comprende: - la puesta en contacto de una secreción nasal con un material que permite la adsorción de las IgE que comprende por lo menos una parte compuesta de un material adsorbente seleccionado de entre un material celulósico, un polímero o un complejo macromolecular, de origen natural o sintético, solos o en combinación, colocando directamente el material en contacto con las mucosas nasales de un sujeto, y - la detección o la dosificación, a partir de dicho material, de la presencia de IgE mediante una reacción inmunológica, comprendiendo dicha etapa de detección o de dosificación la incubación del material adsorbente, o la parte de material adsorbente que ha estado en contacto con las secreciones nasales, en una solución que comprende dos series de anticuerpos dirigidos contra las IgE: unos anticuerpos marcados libres por una parte, y unos anticuerpos en fase sólida por otra parte.

Description

Dosificación de proteínas tales como inmunoglobulinas de tipo E (IgE) en secreciones nasales.

La presente invención se refiere al campo de las técnicas de la medicina, de la biología y de la bioquímica. Sus aplicaciones se refieren a los campos de la salud humana o animal. Más particularmente, la invención describe unos nuevos procedimientos que permiten determinar la presencia y/o de evaluar la cantidad de proteínas o glicoproteínas mediante la dosificación en las secreciones nasales. La invención describe más específicamente unos procedimientos particularmente útiles para dosificar la presencia de inmunoglobulinas, particularmente de inmunoglobulinas de tipo E (IgE) en unas secreciones nasales. La presente invención describe asimismo unos materiales y equipos para la puesta en marcha de estos procedimientos, así como sus aplicaciones, por ejemplo para descifrar o caracterizar el potencial alérgico de los sujetos.

Es conocido que se realiza una dosificación de proteínas o glicoproteínas, como las IgE, a partir de secreciones lacrimales. De este modo, la solicitud de patente francesa nº FR 9015200 describe una dosificación cuantitativa de las proteínas en las lágrimas, mediante una tira sobre la que se adsorben las IgE, seguida de un revelado inmunológico de las IgE presentes. Dicho procedimiento, a pesar de ser eficaz, presenta sin embargo determinadas limitaciones. De hecho, es sabido que el ojo es un órgano relativamente aislado en el plano inmunológico, de modo que las IgE dosificadas en las lágrimas reflejan esencialmente una sensibilidad local (es decir, la presencia eventual de alergias oculares), pero son poco indicativas del estado más general de un sujeto o sobre otras sensibilizaciones alérgicas locales.

Los otros procedimientos disponibles actualmente para dosificar las inmunoglobulinas, como las IgE, se basan esencialmente en la medición de las tasas de IgE en la sangre o el suero. Dichos procedimientos implican por lo tanto una extracción de sangre del sujeto. Por otra parte, en la medida en que la sensibilidad de un sujeto depende no únicamente de las IgE circulantes, sino también unas IgE fijadas en los tejidos y/o en las células, las dosificaciones séricas no siempre permiten informar de forma fiable o completa acerca del estado alérgico de un sujeto. En particular, dichas dosificaciones, por si mismas, no permiten rendir cuentas del conjunto de los fenómenos de desarrollo alérgicos en un sujeto.

Por lo tanto existe una necesidad real en la técnica anterior de unos procedimientos complementarios, sencillos y eficaces, que permitan dosificar unas proteínas como unas IgE.

Hasta el momento, la detección de las IgE en las secreciones nasales ha resultado ser difícil de llevar a cabo debido a unas variaciones espontáneas del flujo de dichas secreciones y de la complejidad de los procedimientos de extracción (aspiración, lavado, frotis y biopsia).

La presente invención presenta una solución a estos problemas. La invención describe, de hecho, nuevos procedimientos y composiciones para la dosificación de proteínas y glicoproteínas. Dichos procedimientos se centran principalmente en el material biológico utilizado para dosificar las proteínas, es decir las secreciones nasales. La presente invención muestra de hecho que es posible detectar, en las secreciones nasales, la presencia de proteínas o glicoproteínas, especialmente de inmunoglobulinas, en particular del tipo E, y que dichas proteínas se pueden dosificar de un modo sencillo y eficaz. La presente invención muestra además que esta dosificación, aplicada a unas IgE, resulta particularmente sensible, y permite marcar de forma fiable (y complementaria a unas técnicas existentes) sobre el estado alérgico de un sujeto. Especialmente, las composiciones y los procedimientos de la invención permiten descifrar ventajosamente los campos alérgicos en un sujeto, ya sean alergias locales (por ejemplo, rinofaríngeas) o generales.

Un primer objetivo de la invención reside en un procedimiento de detección de la IgE que comprende:

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la puesta en contacto de una secreción nasal con un material que permite la adsorción de las IgE, y

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la detección, a partir de dicho material, de la presencia de las Ig E mediante una reacción de tipo inmunológico.

Otro objetivo de la invención reside en un procedimiento de dosificación de IgE que comprende:

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la puesta en contacto de una secreción nasal con un material que permite la adsorción de las IgE, y

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la dosificación de las IgE adsorbidas sobre el material mediante una reacción de tipo inmunológico.

Dicha forma de realización comprende ventajosamente una etapa de evaluación de la cantidad (o concentración) de la proteína o glicoproteína implicada. A este respecto, la etapa de dosificación anterior comprende más preferentemente la determinación de la cantidad de la proteína o glicoproteína implicada que se adsorbe sobre dicho material, la cantidad medida se lleva a una curva patrón establecida de forma paralela o de forma previa. Dicho cálculo permite determinar la concentración real de la proteína o glicoproteína implicada en la secreción nasal. La curva patrón es preferentemente una curva establecida a partir de soluciones de referencia que contienen la proteína o glicoproteína implicadas a unas concentraciones definidas, dosificadas según el mismo protocolo.

La presente invención describe y se refiere de este modo a cualquier procedimiento cualitativo o cuantitativo de detección o de dosificación de moléculas biológicas a partir de secreciones nasales.

En el marco de la presente invención, el término secreción nasal se refiere a cualquier sustancia producida en una ubicación nasal, naso-sinusial (como el moco por ejemplo), en particular cualquier sustancia liberada o secretada por las mucosas nasales o naso-sinusiales. Se puede tratar principalmente de goteos observados en los resfriados, estornudos, estados alérgicos o de tipo alérgico, moco, hidrorrea o cualquier otra sustancia o secreción liberada en estado fisiológico normal o patológico, como nos encontramos en los estados alérgicos. El término secreción nasal se refiere más particularmente al moco.

El estudio de las secreciones nasales ha sido objeto de algunos estudios multidireccionales que se centran o bien en la bioquímica (pH o composición bioquímica del moco) o bien a factores celulares (eosinofilia local) o bien a unos ensayos dinámicos (ensayos de provocación). La invención demuestra actualmente que las sustancias biológicas de tipo inmunológico se pueden detectar o dosificar directamente a partir del moco o de otras secreciones nasales o rino-sinusiales, de forma simple, sensible y reproductible.

Para la puesta en marcha del procedimiento de la invención, la puesta en contacto del material con las secreciones nasales se puede llevar a cabo ya sea colocando directamente el material adsorbente en contacto con las mucosas nasales, o bien recogiendo las secreciones nasales, y realizando el contacto en un dispositivo adecuado (lámina, tubo, caja, hoja, etc..). De forma preferida, la puesta en contacto del material con las secreciones nasales se lleva a cabo colocando directamente el material en contacto con las mucosas nasales del sujeto. Esto se realiza, típicamente, introduciendo manualmente el material adsorbente (o una parte del mismo) en un fosa nasal del sujeto.

El contacto entre la secreción nasal y el material se lleva a cabo preferentemente durante un periodo suficiente para permitir la adsorción de proteínas o glicoproteínas sobre el material. Cuando se lleva a cabo una dosificación de tipo cuantitativo, el contacto se mantiene preferentemente hasta que se alcanza un equilibrio entre la cantidad de proteínas o glicoproteínas adsorbidas sobre el material y su concentración en las secreciones nasales del sujeto. Generalmente, dicho contacto se puede mantener durante un periodo comprendido entre pocos segundos y varios minutos, típicamente entre 1 y 5 minutos, por ejemplo de 1 a 3 minutos. Se entiende que dicho periodo se puede ajustar fácilmente por el manipulador en función de las condiciones generales, locales, del tipo de proteína o glicoproteína investigada y del objetivo buscado (detección, dosificación, etc....).

El material utilizado en el marco de la presente invención para adsorber las proteínas y/o glicoproteínas puede ser cualquier soporte, preferentemente delgado, que se puede poner en contacto con las secreciones nasales, principalmente introducido en la fosa nasal sin agredirla. Dicho material puede tener unas formas diferentes, como por ejemplo puede ser filiforme, en forma de pastilla o de disco, de esponja quirúrgica, de embudo, de bastoncillo, de banda, etc... El material que permite la adsorción comprende preferentemente por lo menos una parte compuesta de un material adsorbente, preferentemente no agresivo o no tóxico para el sujeto, cuando la puesta en contacto se lleva a cabo directamente sobre las mucosas nasales. Se puede tratar principalmente de un material celulósico (por ejemplo de baja densidad), de polímeros, de complejos macromoleculares, de origen natural o sintético, solos o en combinación. Se trata preferentemente de un material celulósico.

En una forma de realización preferida de la invención, y en particular para la evaluación de las IgE, el material adsorbente está constituido de bandas que comprenden por lo menos una parte de papel celulósico de baja densidad, de fibras estiradas o no. A título de ejemplos particulares, se pueden citar principalmente las tiras para el ensayo de Schirmer de los Laboratorios Faure (Annonay, Francia) (papel tipo Whatman, nº 1) o de unas tiras realizadas con el papel de referencia nº 2312 de los Laboratorios Schleicher & Schuell (Dassel, Alemania). Las referencias nº 566 y nº 1573 de la misma procedencia resultan igualmente convenientes. A pesar de presentar una sensibilidad peor, todavía se puede citar, del mismo proveedor, las referencias nº 1577, 1575, 1506, 1507, 903, 589/2, 589/3, 589/5, 589/6, 572 y 512.

Las tiras pueden tener ventajosamente unas dimensiones del orden de 55 mm x 5 mm. En el momento de la extracción, se dejan embeber por ejemplo los 15 primeros milímetros aproximadamente de la tira, algunos minutos son suficientes para esta operación.

Las tiras pueden estar provistas, o no, de una separación en el extremo puesto en contacto con las mucosas del resto de la tira. Pero, de hecho, tras la extracción se puede guardar la tira entera, incluso durante las etapas posteriores. Después se puede conservar la tira, tras la extracción, durante varias semanas antes de la etapa de revelado o de dosificación.

La etapa de detección o de dosificación se puede llevar a cabo mediante cualquier técnica inmunoquímica conocida por el experto en la materia, basada en la utilización de anticuerpos y/o de antígenos específicos, solos o combinados, que se pueden marcar y revelar mediante diferentes estrategias (marcajes colorimétricos, enzimáticos, fluorescentes, radioactivos, de tipo avidina-biotina, etc).

En particular, la etapa inmunológica de detección o de dosificación puede utilizar unos anticuerpos dirigidos contra la proteína/glicoproteína implicada para captarla, y después asegurar la detección, o la determinación cuantitativa, de los complejos antígeno-anticuerpo así formados. Dicho procedimiento es preferentemente un procedimiento "sándwich" del tipo descrito en el artículo de E. BLOCH-MICHEL y L. HELLEBOID, Revue française de Laboratoires nº 207, mayo 1990, páginas 43 a 46. Según dicha forma de realización, el material adsorbente (o la parte de material adsorbente que está en contacto con las secreciones nasales) se coloca en una solución, contenida en un tubo o análogo (placa, caja, frasco, ampolla, etc), que comprende dos series de anticuerpos dirigidos contra la proteína/glicoproteína implicada: unos anticuerpos marcados libres por una parte, y unos anticuerpos en fase sólida (generalmente no marcados) por otra parte. Las proteínas pasan a la solución y se fijan a los anticuerpos marcados. Cada complejo obtenido de este modo está fijado sobre un anticuerpo en fase sólida. La presencia o la cantidad de proteína o glicoproteína implicada se puede determinar entonces por detección o medición de la intensidad del marcaje fijado en el tubo.

Los anticuerpos pueden ser mono-o policlonales. Los anticuerpos en fase sólida pueden ser unos anticuerpos inmovilizados sobre una fase sólida como especialmente un disco de papel, bolas, etc., o inmovilizados directamente sobre la superficie interna del tubo de material plástico (anticuerpos fijados a la pared interior) que sirve como recipiente para el conjunto de la reacción, etc. La fijación de los anticuerpos sobre el soporte sólido se puede realizar mediante cualquier técnica conocida por el experto en la materia (por absorción, fijación covalente, etc.).

El procedimiento inmunoquímico se puede utilizar también, en las condiciones descritas anteriormente para los anticuerpos, las reacciones de antígenos, como los alérgenos, con los anticuerpos, especialmente en una reacción de tipo "sándwich" como la descrita anteriormente, en cuyo caso se utiliza ventajosamente un anticuerpo y un antígeno, uno marcado y libre, el otro inmovilizado en la fase sólida.

Además de estas reacciones de tipo "sándwich", la presente invención puede utilizar asimismo cualquier otro procedimiento de detección o de dosificación cuantitativa de antígenos en una solución. A este respecto, podemos citar especialmente diferentes técnicas inmunoenzimáticas (de tipo ELISA, etc.) o radioinmunológicas (del tipo RIA, etc.).

Preferentemente, durante la etapa de detección o de dosificación, se agitan los tubos (u otros contenedores) de reacción con el fin de aumentar la sensibilidad, es decir permitir la medición de cantidades muy bajas.

Como se ha indicado anteriormente, para una dosificación cuantitativa de las proteínas o glicoproteínas, generalmente se pasan los resultados a una curva patrón, establecida a partir de soluciones de referencia dosificadas según el mismo protocolo. Dichas soluciones de referencia pueden ser unas soluciones preparadas artificialmente, por dilución (o diluciones seriadas) de la proteína o glicoproteína pura. Asimismo, puede tratarse de muestras biológicas, como por ejemplo una muestra de lágrima o de sangre (o de suero). A este respecto, en una forma de realización particular, el procedimiento de la invención comprende una etapa adicional de comparación de las cantidades medidas en las secreciones nasales con las cantidades medidas en otra muestra biológica, como las lágrimas, la sangre o el suero.

Los procedimientos de la invención se pueden utilizar para detectar o dosificar diferentes tipos de proteínas o glicoproteínas. Puede tratarse principalmente de inmunoglobulinas (IgG, IgM, IgE, etc.), de proteínas inflamatorias, o de otras proteínas o glicoproteínas implicadas en unos fenómenos fisiológicos o fisiopatológicas, o de marcadores utilizables para la realización de dosificaciones diagnósticas. Preferentemente, se trata de inmunoglobulinas, incluso más preferentemente de inmunoglobulinas de tipo E (IgE). Los resultados presentados en los ejemplos de hecho muestran que se pueden detectar las IgE en las secreciones nasales, y que las dosificaciones de la invención ofrecen una gran sensibilidad, que permite detectar unas variaciones de cantidad de IgE correlacionadas con un estado alérgico local o general.

A este respecto, un objetivo particular de la invención se centra en un procedimiento de desciframiento, de seguimiento y de caracterización de una alergia en un sujeto, caracterizado porque comprende una etapa de detección y/o de dosificación de las IgE presentes en las secreciones nasales.

Dicha detección o dosificación se realiza ventajosamente en las condiciones descritas anteriormente.

El desciframiento indica que el carácter alérgico del sujeto considerado todavía no se conoce o no se ha revelado, o está en un estadio precoz todavía no confirmado. El procedimiento de la invención también es aplicable al seguimiento y/o a la caracterización de una alergia, es decir al estudio de la evolución del estado alérgico de un sujeto, o a la determinación del tipo de alergia presente, principalmente su carácter local o general.

El procedimiento de la invención se puede utilizar para dosificar simultáneamente varias proteínas o glicoproteínas de interés, o varios tipos de proteínas o glicoproteínas de interés. Se puede tratar principalmente de las IgE totales, o bien de determinadas IgE específicas de antígenos (alérgenos) determinados. Según una aplicación preferida, el procedimiento de la invención comprende una detección o una dosificación de las IgE presentes en las secreciones nasales, sin distinción de especificidad antigénica (IgE totales).

Por lo tanto el procedimiento puede aplicarse no únicamente a la dosificación de las IgE nasales totales, sino también a la dosificación de las IgE específicas, principalmente a unas concentraciones bajas. A fortiori, se puede proceder a una dosificación cuantitativa de las IgE específicas.

Para las IgE específicas, se utilizan ventajosamente unos alérgenos o reactógenos que pueden estar insolubilizados, de la forma descrita para los anticuerpos, o no, marcados o no.

Por otra parte, el procedimiento según la invención puede permitir establecer no únicamente unos diagnósticos en los casos de alergias locales (del tipo rinofaríngeas) sino también en el caso de las alergias generales. En este último caso, la sensibilidad aumentada del procedimiento permite la cuantificación de las IgE exudadas. A este respecto, el procedimiento de la invención se puede utilizar principalmente para descifrar o seguir la evolución de las alergias como el asma, el eczema, rinitis, sinusitis alérgicas, etc.

Como se ha indicado anteriormente, la invención también es aplicable a la dosificación nasal de sustancias que reflejan un estado inflamatorio o patológico y principalmente a unas sustancias susceptibles de encontrarse en las secreciones nasales en unas áreas de concentraciones bajas y preferentemente bastantes poco extensas.

Los materiales y procedimientos de la invención se pueden utilizar para detectar o dosificar unas proteínas o glicoproteínas en las secreciones nasales de cualquier persona, adulto o niño, sano o que presenta una patología. Además, la invención se puede aplicar también a la detección o a la dosificación de proteínas o glicoproteínas en las secreciones nasales de cualquier otro mamífero (particularmente caninos, bovinos, ovinos, equinos, porcinos, etc.).

La presente invención se refiere asimismo a unos equipos para la utilización de los procedimientos descritos anteriormente. Dichos equipos comprenden ventajosamente unas soluciones que permiten la realización de una reacción inmunológica, y particularmente por lo menos un anticuerpo anti-IgE. Dicho anticuerpo puede ser una policlonal o monoclonal, puede estar marcado o no. Los equipos de la invención comprenden más preferentemente un dispositivo para realizar la reacción inmunológica, como por ejemplo un tubo, unos pocillos, una caja o un frasco. Por otra parte, los equipos de la invención pueden además comprender un material adsorbente, utilizable para realizar la extracción.

En una forma de realización particular, los equipos según la invención comprenden un tubo (o análogo) recubierto de anticuerpos anti-IgE y una solución de anticuerpos anti-IgE acoplados a una enzima (por ejemplo la peroxidasa). Más preferentemente, comprenden además un material adsorbente (principalmente una tira) impregnada de IgE patrón y/o una solución de lavado y/o un sustrato cromógeno de la enzima (por ejemplo la OPD). Dichos equipos se pueden utilizar fácilmente para detectar o dosificar las IgE a partir de secreciones nasales, según la presente invención.

Otro objetivo de la invención se centra asimismo en la utilización de un material que permite la adsorción de proteínas o glicoproteínas para la detección o la dosificación de proteínas o glicoproteínas a partir de una secreción nasal de un sujeto, por puesta en contacto directo de dicho material con una mucosa nasal de dicho sujeto. El material es preferentemente como se ha definido anteriormente, y se utiliza para detectar la presencia o para dosificar las inmunoglobulinas.

Otro objetivo de la invención se centra asimismo en la utilización de un material que permite la adsorción de proteínas o glicoproteínas para la fabricación de un producto o equipo para la utilización de un procedimiento de diagnóstico, desciframiento, seguimiento o caracterización de una alergia en un sujeto.

Otros aspectos y ventajas de la presente invención se pondrán de manifiesto a la luz de los ejemplos siguientes, que deben considerarse como ilustrativos y no limitativos. Dichos ejemplos ilustran particularmente el principio de dosificación de las IgE totales mediante una técnica inmunoenzimática en unas secreciones nasales extraídas con la ayuda de una tira de papel.

1. Principio de dosificación

La detección inmunoenzimática se lleva a cabo mediante una técnica de tipo de "sándwich" utilizando dos anticuerpos monoclonales anti-IgE. La reacción se desarrolla en dos etapas:

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una reacción inmunológicas: las IgE a dosificar (o detectar) se incuban 3 h a una temperatura de 18- 25ºC en unos tubos en presencia de dos anticuerpos monoclonales anti-IgE de los que uno está fijado a la pared de los tubos y el otro, en fase líquida, está marcado con peroxidasa. La incubación está seguida de una fase de lavado de los tubos.

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un revelado enzimático: se añade en los tubos un sustrato cromógeno del tipo OPD (ortofenilendiamina). Después de la incubación 30 minutos a 18-25ºC, se añade un agente bloqueante (ácido sulfúrico) y se lee la coloración obtenida en el espectrofotómetro.

A lo largo de la misma serie de dosificación, se efectúa un blanco reactivo (tubo sin IgE), unos patrones (tubos que contienen unas cantidades conocidas de IgE) y un control positivo.

2. Descripción de los reactivos (Equipo de dosificación)

Se utilizan los reactivos siguientes en la realización del procedimiento:

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tiras de papel para efectuar la extracción nasal,

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tubos de poliestireno recubiertos de anticuerpos anti-IgE

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tiras impregnadas de IgE patrón

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tiras impregnadas de control positivo

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soluciones de anticuerpo anti-IgE marcado con peroxidasa

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solución de lavado

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cromógeno (OPD en comprimidos con diluyente)

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Agente bloqueante (ácido sulfúrico).

3. Modo operativo

El procedimiento se realiza como se detalla a continuación.

Para la reacción inmunológica, las tiras puestas en contacto previamente con las secreciones nasales (o las tiras patrón o control) se colocan en los tubos (excepto el tubo en blanco reactivo). Se añaden 300 \mul de anticuerpo conjugado con la peroxidasa y se mantienen los tubos bajo agitación durante 3 horas a temperatura ambiente, a una velocidad de 360 rpm. Se aspira el medio de reacción de todos los tubos, y se reparte la solución de lavado en los tubos (2 ml por tubo) y las tiras se retiran de los tubos. La solución se aspira de nuevo y se repite dos veces la operación de lavado. Después se aspiran las soluciones cuidadosamente.

Para el revelado enzimático, se reparten 300 \mul de solución de revelado en cada tubo. Después de la incubación de 30 minutos a temperatura de ambiente y protegido de la luz, se introduce 1 ml de agente bloqueante en cada tubo. Se agitan los tubos (por ejemplo en un agitador tipo Vortex). Se lee la coloración obtenida a una longitud de onda de 492 nm contra el blanco reactivo.

4. Resultados

Se han realizado diferentes ensayos preliminares en personas, en estado patológico o sano, con el fin de dosificar las IgE presentes en sus secreciones nasales (incluyendo las naso-sinusiales).

Los resultados obtenidos se pueden resumir como sigue:

En una primera serie de experimentos, se ha comparado el ensayo de las IgE nasales de la invención, en cincuenta sujetos, con los ensayos de provocación nasal (térmica y eosinófila). Los resultados obtenidos muestran que el ensayo de las IgE nasales de la invención es más sensible que el ensayo de provocación eosinófila, y más selectivo que el ensayo de provocación térmica.

En una segunda serie de experimentos, se ha comparado el ensayo de las IgE nasales de la invención con la prueba cutánea, en 17 sujetos que han realizado una consulta por unas manifestaciones rinofaríngeas que evocan alergia. En 10 pacientes, cuando la prueba cutánea ha sido negativa, el ensayo de la invención ha permitido poner en evidencia una elevación importante de las IgE en las secreciones nasales. Dichos experimentos parecen indicar que los ensayos de la invención permiten una detección más fiable que las pruebas cutáneas anteriores. Dichos resultados también parecen confirmar la predominancia de la hipersensibilidad local sobre la hipersensibilidad general.

Los resultados obtenidos muestran además que las IgE recogidas en las tiras se pueden dosificar directamente y de forma proporcional a su concentración en el medio a dosificar, sin que sea necesario calcular el peso o la cantidad recogida. Dicho fenómeno se debe al hecho de que se estable muy rápidamente (en pocos minutos) un equilibrio entre las IgE que se adsorben sobre el papel y las que permanecen en la solución. Después, cuando se incuba el papel con la solución de anticuerpos anti-IgE, las IgE abandonan el papel para formar un complejo antígeno-anticuerpo que entonces se puede dosificar.

La dosificación según la invención resulta ventajosa ya que se puede llevar a cabo en una sola etapa, y permite, por agitación de los tubos, la detección de cantidades muy bajas de proteínas (inferiores a 2 kUI/l).

En una tercera serie de experimentos, se ha practicado el ensayo de las igE nasales de la invención en un grupo control que incluye 9 personas (5 mujeres y 4 hombres) de edades comprendidas entre 25 y 55 años y en un grupo de 17 pacientes (7 mujeres y 10 hombres) de 7 a 61 años.

El grupo control está compuesto de personas que no presentan ni síntomas de rinitis ni síntomas de alergia ni presentan ningún antecedente personal o familiar. El segundo grupo está compuesto de personas que han acudido a la consulta con unos síntomas de rinitis crónica que se ha manifestado durante un periodo de tiempo superior a tres meses.

Las tiras se han puesto en contacto con las mucosas de los sujetos durante 60 segundos, después se han enviado al laboratorio (bajo 15 días) para el análisis en las condiciones descritas anteriormente.

Los resultados obtenidos describen una densidad óptica media en las secreciones nasales de los sujetos control de 0,136, y una densidad óptica media en las secreciones nasales de los sujetos sintomáticos de 1,752. El ensayo de las IgE nasales practicado según la invención ha permitido por lo tanto poner en evidencia una diferencia significativa en la secreción local de IgE entre el grupo control y el grupo de pacientes y por lo tanto distinguir claramente los sujetos alérgicos de los sujetos sanos.

Claims (8)

1. Procedimiento de detección o de dosificación de IgE, que comprende:

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la puesta en contacto de una secreción nasal con un material que permite la adsorción de las IgE que comprende por lo menos una parte compuesta de un material adsorbente seleccionado de entre un material celulósico, un polímero o un complejo macromolecular, de origen natural o sintético, solos o en combinación, colocando directamente el material en contacto con las mucosas nasales de un sujeto, y

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la detección o la dosificación, a partir de dicho material, de la presencia de IgE mediante una reacción inmunológica, comprendiendo dicha etapa de detección o de dosificación la incubación del material adsorbente, o la parte de material adsorbente que ha estado en contacto con las secreciones nasales, en una solución que comprende dos series de anticuerpos dirigidos contra las IgE: unos anticuerpos marcados libres por una parte, y unos anticuerpos en fase sólida por otra parte.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de dosificación comprende la determinación de la cantidad de IgE implicada que está adsorbida sobre dicho material, comparándose la cantidad medida con una curva patrón.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el material adsorbente comprende por lo menos una parte compuesta de un material adsorbente celulósico no agresivo o tóxico para el sujeto.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el material adsorbente está constituido por una soporte, filiforme, o en forma de pastilla o de disco, de esponja quirúrgica, de embudo, de bastoncillo o de tira.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque los anticuerpos están marcados mediante un marcaje colorimétrico, enzimático, fluorescente, radioactivo y/o de tipo avidina-biotina.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la etapa de detección o de dosificación se realiza mediante un procedimiento inmunológico ELISA.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque los anticuerpos son unos anticuerpos monoclonales o policlonales.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, para la detección o la dosificación de las IgE totales.