ES2282148T3 - Metodos y moleculas inmunoterapeuticos. - Google Patents
Metodos y moleculas inmunoterapeuticos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2282148T3 ES2282148T3 ES00978987T ES00978987T ES2282148T3 ES 2282148 T3 ES2282148 T3 ES 2282148T3 ES 00978987 T ES00978987 T ES 00978987T ES 00978987 T ES00978987 T ES 00978987T ES 2282148 T3 ES2282148 T3 ES 2282148T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cell
- peptide
- hla
- ctl
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 56
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 title description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 192
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 197
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 133
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 68
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 62
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 53
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 42
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 42
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 25
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 claims description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 18
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 16
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 claims description 15
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 14
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 claims description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 12
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 11
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 11
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 11
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 claims description 8
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 4
- 108010060175 trypsinogen activation peptide Proteins 0.000 claims description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 3
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 3
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 claims 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 28
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 14
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 12
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 12
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 10
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 9
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 5
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- -1 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) group Chemical group 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 2
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010083708 leucyl-aspartyl-valine Proteins 0.000 description 2
- 108010087810 leucyl-seryl-glutamyl-leucine Proteins 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O.C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical class CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)phenoxy]acetic acid Chemical class OCC1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNPOQXWAMXPTA-UHFFFAOYSA-N 3-methylbut-2-enamide Chemical compound CC(C)=CC(N)=O WHNPOQXWAMXPTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IETUUAHKCHOQHP-KZVJFYERSA-N Ala-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)[C@@H](C)O)C(O)=O IETUUAHKCHOQHP-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- JEPNYDRDYNSFIU-QXEWZRGKSA-N Asn-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(O)=O JEPNYDRDYNSFIU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AYZAWXAPBAYCHO-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N AYZAWXAPBAYCHO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- NVMMUAUTQCWYHD-ABHRYQDASA-N Asp-Val-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 NVMMUAUTQCWYHD-ABHRYQDASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000032800 BCR-ABL1 positive blast phase chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000710073 Bean yellow mosaic virus Species 0.000 description 1
- 208000004860 Blast Crisis Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100494773 Caenorhabditis elegans ctl-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 101100112369 Fasciola hepatica Cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- UQKVUFGUSVYJMQ-IRIUXVKKSA-N Gln-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O UQKVUFGUSVYJMQ-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000012153 HLA-B27 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010061486 HLA-B27 Antigen Proteins 0.000 description 1
- QQQHYJFKDLDUNK-CIUDSAMLSA-N His-Asp-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N QQQHYJFKDLDUNK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CHIAUHSHDARFBD-ULQDDVLXSA-N His-Pro-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 CHIAUHSHDARFBD-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- HYLIOBDWPQNLKI-HVTMNAMFSA-N Ile-His-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N HYLIOBDWPQNLKI-HVTMNAMFSA-N 0.000 description 1
- PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- PWUMCBLVWPCKNO-MGHWNKPDSA-N Ile-Leu-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PWUMCBLVWPCKNO-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N Leu-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N Leu-Asp-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N Leu-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- 108010013709 Leukocyte Common Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000017095 Leukocyte Common Antigens Human genes 0.000 description 1
- XIZQPFCRXLUNMK-BZSNNMDCSA-N Lys-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N XIZQPFCRXLUNMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N Lys-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- PPHLBTXVBJNKOB-FDARSICLSA-N Met-Ile-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O PPHLBTXVBJNKOB-FDARSICLSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100005271 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- KAGCQPSEVAETCA-JYJNAYRXSA-N Phe-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N KAGCQPSEVAETCA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- YHUBAXGAAYULJY-ULQDDVLXSA-N Pro-Tyr-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YHUBAXGAAYULJY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- DKDHTRVDOUZZTP-IFFSRLJSSA-N Thr-Gln-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DKDHTRVDOUZZTP-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- FLPZMPOZGYPBEN-PPCPHDFISA-N Thr-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FLPZMPOZGYPBEN-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FJKXUIJOMUWCDD-FHWLQOOXSA-N Tyr-Gln-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N)O FJKXUIJOMUWCDD-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- HVPPEXXUDXAPOM-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HVPPEXXUDXAPOM-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LNYOXPDEIZJDEI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000010293 colony formation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001036 exonucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000367 exoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000968 medical method and process Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCQGVFNHUATAJY-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[methyl(prop-2-enoyl)amino]acetate Chemical compound COC(=O)CN(C)C(=O)C=C ZCQGVFNHUATAJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 108010082406 peptide permease Proteins 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037048 polymerization activity Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70589—CD45
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4612—B-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464454—Enzymes
- A61K39/464463—Phosphatases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un péptido compuesto por de 9 a 12 aminoácidos y que incluye la secuencia de aminoácidos FLYDVIAST o una variante de esta secuencia, cuya variante tiene una o dos substituciones del aminoácido en cualquiera o en ambas posiciones 2 y 9 de esta secuencia de aminoácido, y que es capaz de enlazarse al HLA-A0201.
Description
Métodos y moléculas inmunoterapéuticos.
La presente invención se refiere a métodos
inmunoterapéuticos, y a moléculas y células para ser utilizadas en
métodos inmunoterapéuticos. Específicamente, la presente invención
se refiere a la inmunoterapia de la leucemia.
Existe evidencia de que los linfocitos T
citotóxicos (CTL) anti-tumor desempeñan un papel
importante in vivo. El CTL reactivo al tumor ha demostrado
servir como mediador para la regresión del tumor en modelos animales
(Kast y otros (1989) Cell 59,
603-614) y en el hombre (Kawakami y otros (1994)
Proc. Natl. Acad. USA 91, 6458-6462).
Como ocurre con todos los tipos de terapia
anti-tumor, un problema a resolver consiste en que
la terapia debe destruir o hacer inactivas a las células tumorales
diana en una medida útil, pero la terapia no debe destruir o hacer
inactivas las células no tumorales en una medida destructiva. En
otras palabras, se desea que la terapia sea selectiva para las
células tumorales en una medida beneficiosa.
Gran parte del actual trabajo sobre la
inmunoterapia del cáncer utiliza el hecho de que ciertos tumores
expresan polipéptidos que no se expresan en el tejido tumoral o el
equivalente, o utilizan el hecho de que el tumor expresa una forma
mutante de un polipéptido que no se expresó en el tejido no tumoral.
Sin embargo, no siempre es posible identificar los polipéptidos en
un tumor que está dentro de esa categoría, y de esta forma se han
identificado otros polipéptidos dianas que pueden formar la base de
un enfoque inmunoterapéutico.
El trabajo en pacientes con melanoma ha
demostrado que los epítopes del péptido reconocidos por el CTL
reactivo al melanoma se derivan con frecuencia de los antígenos de
diferenciación de específicos del tejido. El reconocimiento de los
antígenos de diferenciación expresados en tejidos normales parece
violar las reglas de la tolerancia inmunológica; sin embargo, el
reconocimiento del CTL de los antígenos de diferenciación asociados
al melanoma podría explicarse por el hecho de que normalmente están
expresados solo en melanocitos que existen en números relativamente
pequeños en sitios inmunológicamente privilegiados, no pudiendo así
establecer la tolerancia. Existe también evidencia de que los
antígenos de diferenciación específicos de la próstata pueden servir
como dianas para el CTL contra los tumores de la próstata.
La WO 00/26249 muestra que WT-1
y gata-1 pueden servir como dianas para el CTL
contra leucemia.
La patente US No. 6.060.054 de Staerz describe
productos para la inmuno-supresión del linfocito
T.
Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de
desarrollar nuevas dianas, y nuevos métodos de inmunoterapia.
Amrolia y otros (2000, Blood 96, 11, 1, página
551a, Resumen 2365) divulga que las células T citotóxicas
alo-restringidas específicas para el CD45 humano
muestran una potente actividad antileucémica.
El CD45 es un antígeno hematopoyético de
diferenciación que se expresa en la superficie de la mayoría de las
células hematopoyéticas. El CD45 es una proteína superficial
abundante, altamente glicosilada y diferentes isoformas de la
proteína son generadas por empalme alternativo del gen de CD45.
Todas las malignidades hematopoyéticas expresan el CD45 a niveles
similares a los de las células normales. Por tanto, el CD45 es una
diana inadecuada para la inmunoterapia convencional en el ambiente
autólogo. Sin embargo, ahora mostramos que es una diana atractiva
para la inmunoterapia de malignidades hematológicas después del
trasplante de la célula madre de donantes incompatibles con el HLA.
De acuerdo con la invención, CTL alo-restringida
específico de los epítopes de CD45 presentados por las moléculas de
HLA receptoras eliminará selectivamente las células hematopoyéticas
receptoras (células malignas y normales) pero no las células
hematopoyéticas del donante. Alternativamente, pero sin limitarse a
ninguna teoría, es concebible que las células hematopoyéticas
malignas receptoras sean más susceptibles a la eliminación por el
CTL que las células hematopoyéticas normales. En este caso, el CTL
puede eliminar preferentemente las células hematopoyéticas malignas
aunque expresen los niveles similares de CD45 a los de las células
hematopoyéticas
normales.
normales.
Al utilizar el enfoque de CTL
alo-MHC-restringido, hemos
identificado epítopes péptidos en el CD45 que pueden ser
presentados por moléculas HLA-A0201 Clase I y
mostrados en la superficie de las células de la leucemia que
expresan estas proteínas endógenamente. Se utilizaron individuos con
respuesta negativa al HLA-A0201 como una fuente de
CTL específico de los péptidos presentados por la molécula
HLA-A0201 Clase I, y este enfoque permite la
identificación de los péptidos presentados HLA-A0201
independientemente de la posible tolerancia de los CTL
autólogos.
HLA-A0201 es el más común de los
haplotipos HLA-A.
Para evitar dudas, los términos HLA y MHC son
utilizados indistintamente en esta especificación.
Hasta donde conoce el inventor, el CD45 no ha
sido considerado previamente para la inmunoterapia. En cualquier
caso, el inventor está demostrando ahora que, asombrosamente, el
enfoque alo-restringido es aplicable a pesar de que
el CD45 se exprese a niveles similares en las células normales y en
las células con la malignidades hematopoyéticas.
Un primer aspecto de la invención proporciona un
péptido que comprende un péptido de enlace al HLA de polipéptido de
CD45 humano o una variante de dicho péptido, donde dicho péptido es
como se define en la Reivindicación 1.
Preferentemente, la variante es una que enlaza a
una molécula de HLA.
Por péptido de "enlace al HLA" entendemos
un péptido que enlaza a una o más moléculas de HLA. Usualmente, un
péptido mostrará el enlace al HLA en un ensayo de enlace T2 cuando
está presente en un rango de concentración de 10 \muM a 1 nM. Si
un péptido de CD45 humano es o no un péptido de enlace al HLA puede
determinarse empleando métodos conocidos en la técnica. Estos
métodos incluyen el ensayo T2 de estabilización de HLA descrito en
la Figura 1, y el método descrito por Elvin y otros (1993) J.
Immunol. Methods 158, 161-171.
Por "péptido del polipéptido de CD45
humano" entendemos un péptido que tiene una secuencia de
aminoácidos contigua del polipéptido de CD45. El péptido puede ser
derivado del polipéptido de CD45 humano por fragmentación química o
enzimática, pero se prefiere que el péptido sea obtenido por
síntesis química o por expresión utilizando la tecnología de ADN
recombinante como se describe a continuación.
La secuencia de CD45 es presentada en The
Leukocyte Antigen Fact Book, 2da edición, página 244, Academic
Press, Harcourt, Brace y Co (editores), 1997.
El péptido de la presente invención está
compuesto por 9 a 12 aminoácidos e incluye la secuencia de
aminoácidos FLYDVIAST, o una variante de esta secuencia, cuya
variante tiene una o dos substituciones de aminoácido en una o dos
substituciones de aminoácido en una o ambas posiciones 2 y 9 de esta
secuencia de aminoácido, y que es capaz de enlazarse al
HLA-A0201.
En una realización, el peptido esta compuesto
por la secuencia de aminoácidos FLYDVIAST.
Por "péptido" incluimos no solo las
moléculas en las cuales los residuos de aminoácidos están unidos por
enlaces péptidos (-CO-NH-) sino también las
moléculas en las cuales se invierte el enlace del péptido. Tales
peptidomiméticas retro-inversas se pueden hacer
usando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo los descritos en
Méziére y otros (1997) J. Immunol. 159,
3230-3237. Este enfoque implica hacer pseudopéptidos
que contengan los cambios concernientes al segmento principal, y no
a la orientación de las cadenas laterales. Méziére y otros
(1997) muestran que estos pseudopéptidos son útiles, al menos
para el NHC clase II y las respuestas de la célula T auxiliar. Los
péptidos retro-inversos, que contienen enlaces
NH-CO en lugar de enlaces péptidos
CO-NH, son mucho más resistentes a la
proteólisis.
Se apreciará que el péptido puede ser bloqueado
convenientemente en su término N o C para ayudar a reducir la
susceptibilidad a la digestión exoproteolítica.
En una realización, el péptido está compuesto
por la secuencia de aminoácidos FLYDVIAST.
Por una "variante" de la secuencia de
aminoácidos dada entendemos que las cadenas laterales de uno o dos
de los residuos de aminoácido son alteradas (por ejemplo al
substituirlas por la cadena lateral de otro residuo de aminoácido
que ocurre de modo natural o por alguna otra cadena lateral) de modo
que el péptido aún siga estando en condiciones de enlazar a una
molécula de HLA substancialmente de la misma manera que un péptido
compuesto por la secuencia de aminoácidos dada. Por ejemplo, un
péptido puede ser modificado de modo que al menos mantenga, si no
mejora, la capacidad de interactuar con y enlazar una molécula
adecuada de MHC, tal como HLA-A020, y de modo que
al menos mantenga, si no mejora, la capacidad de generar CTL
activado que pueda reconocer y matar las células que expresan un
polipéptido que contenga una secuencia de aminoácidos como se
define en el primer aspecto de la invención (por ejemplo, CD45). Las
posiciones 2 y 9 de un nonámero de
enlace-HLA-A2 son usualmente
residuos de anclaje. Las modificaciones de estos residuos implicados
en el enlace HLA-A2 pueden reforzar el enlace sin
alterar el reconocimiento del CTL (por ejemplo, vea Tourdot y otros
(1997) J. Immunol. 159,
2391-2398).
De esta forma, los péptidos de la invención son
unos que, usualmente, de forma selectiva y reversible enlazan a una
o más moléculas de HLA; más usualmente pueden enlazar
HLA-A0201.
De lo que aparece a continuación se apreciará
que en algunas aplicaciones los péptidos de la invención pueden
emplearse directamente (es decir no son producidos por la expresión
de un polinucleótido en la célula madre o en una célula dada a un
paciente); en tales aplicaciones el péptido tiene 12 u 11 ó 10 ó 9
residuos.
Se prefiere que los péptidos de la invención
puedan enlazarse al HLA-A0201; sin embargo, los
péptidos pueden enlazarse también a otros tipos de HLA así como al
HLA-A0201. Se prefiere particularmente que los
péptidos se enlacen selectivamente al HLA-A0201.
Se prefiere además que los péptidos de la
invención sean unos que puedan ser utilizados para generar el CTL
específico del péptido que muestra la eliminación específica de las
células T2 diana al presentar el péptido (vea los Ejemplos).
Los péptidos de la invención son particularmente
útiles en la inmunoterapia, para apuntar y matar células que
expresan el polipéptido de CD45.
Debido a que estos péptidos específicos
compuestos por secuencias de aminoácido dadas se enlazan al
HLA-A0201 se prefiere que los péptidos de la
invención sean unos que enlazan al HLA-A0201 y al
estar enlazados de esta forma al complejo
HLA-A0201-péptido, al presentarse en
la superficie de una célula que presenta al antígeno adecuada, es
capaz de iniciar la producción de un CTL que reconoce a una célula
que exprese un polipéptido compuesto por la secuencia de aminoácidos
dado, tal como el polipéptido de CD45.
Es bien conocido que una longitud óptima para
que un péptido se enlace a una molécula de HLA es de alrededor de 8
a 12 aminoácidos, preferentemente 9 aminoácidos.
Un péptido de la invención particularmente
preferido está compuesto por la secuencia de aminoácidos
FLYDVIAST.
Los péptidos (al menos los que contienen los
enlaces péptidos entre los residuos del aminoácido) se pueden
sintetizar mediante el modo Fmoc-poliamida de la
síntesis péptida de fase sólida como es descrito por Lu y otros
(1981) J. Org. Chem. 46, 3433 y las referencias
contenidas en este documento. La protección del grupo
N-amino temporal es facilitada por el grupo
9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc). La respectiva
segmentación de este grupo de protección de base altamente
inestable se efectúa empleando 20% de piperidina en
N,N-dimetilformamida. Las funcionalidades de la
cadena lateral se pueden proteger como sus éteres butílicos (en el
caso de la treonina serina y la tirosina), ésteres butílicos (en el
caso del ácido glutámico y del ácido aspártico), derivado de
butiloxicarbonilo (en el caso de la lisina y la histidina), derivado
de tritilo (en el caso de la cisteina) y derivado de
4-metoxi-2,3,6-trimetilbenzenesulfonilo
(en el caso de la arginina). En los casos en que la glutamina o la
asparragina son residuos terminal C, se utiliza el grupo
4,4'-dimetoxibenzhidrilo para la protección de las
funcionalidades amido de la cadena lateral. EL soporte de la fase
sólida se basa en un polímero del polidimetilacrilamida constituido
a partir de los tres monómeros dimetilacrilamida (monómero del
segmento principal), diamina de bisacriloiletileno (enlazador
cruzado) y éster metílico de acriloilsarcosina (agente
funcionalizador). El agente enlazado a la segmentación de péptido a
resina usado es el derivado del ácido
4-hidroximetil-fenoxiacético
inestable al ácido. Todos los derivados aminoácidos se añaden como
sus derivados anhídricos simétricos preformados con excepción de la
aspargina y la glutamina, que se añaden usando un procedimiento de
acoplamiento mediado
N,N-diciclohexil-carbodiimida/1-hidroxibenzotriasol
invertido. Todas las reacciones de acoplamiento y protección se
supervisan usando procedimientos de prueba de ninhidrina, ácido
sulfónico de trinitrobenzeno o isotina. Una vez completada la
síntesis, los péptidos son segmentados del soporte de la resina con
eliminación del concomitante de los grupos de protección de la
cadena lateral mediante el tratamiento con ácido trifluoroacético
al 95% que contiene una mezcla depuradora al 50%. Los depuradores
usados comúnmente son etanotiol, fenol, anisol y agua, la selección
exacta depende de los aminoácidos constitutivos del péptido a
sintetizar. El ácido trifluoroacético se retira por evaporación al
vacío, con trituración subsecuente con éter dietílico que produce
el péptido crudo. Cualquier depurador presente se retira por un
procedimiento de extracción simple que en liofilización de la fase
acuosa produzca el péptido crudo libre de depuradores. Los
reactivos para la síntesis del péptido generalmente están
disponibles en Calbiochem-Novabiochem (UK) Ltd,
Nottingham NG7 2QJ. La purificación puede efectuarse mediante
cualquier, o una combinación de técnicas tales como cromatografía
de exclusión por tamaño, cromatografía de intercambio iónico y
(principalmente) cromatografía líquida de alto rendimiento de fase
invertida. El análisis de péptidos se puede realizar usando
cromatografía de estrato fino, cromatografía líquida de alto
rendimiento de fase invertida, análisis de
aminoácido después de la hidrólisis ácida y análisis espectrométrico de masa de bombardeo rápido de átomo (FAB).
aminoácido después de la hidrólisis ácida y análisis espectrométrico de masa de bombardeo rápido de átomo (FAB).
La invención también incluye una biblioteca de
péptidos que enlazan al HLA de polipéptidos de CD45 humano como se
define en el primer aspecto de la invención donde para cada miembro
de la biblioteca se registra el tipo de molécula HLA al que se
enlaza. Los péptidos pueden ser almacenados de cualquier forma
adecuada en la biblioteca (por ejemplo, congelados en solución o
liofilizados) y la información referente al tipo de molécula de HLA
enlazada por el péptido registrado en cualquier forma adecuada, por
ejemplo una tabla de consulta o registros de computadora.
Un segundo aspecto de la invención proporciona
un polinucleótido que codifica un péptido como se define en el
primer aspecto de la invención. El polinucleótido puede ser ADN o
ARN y pueden o no contener intrones siempre codifique al péptido.
Por supuesto, se trata solo de péptidos que contienen residuos de
aminoácido que ocurren de forma natural unidos por enlaces del
péptido que ocurren de forma natural que son codificables por un
polinucleótido.
Un polinucleótido preferido de la invención es
uno que codifica una cadena pesada de HLA unida por un enlazador
flexible a un péptido de la invención de forma tal que cuando la
molécula de fusión se expresa en una célula adecuada el péptido
enlaza el surco de enlace del péptido de HLA.
Un tercer aspecto de la invención proporciona un
vector de expresión capaz de expresar un polipéptido de acuerdo con
el primer o el segundo aspecto de la invención.
Se ha desarrollado una variedad de métodos para
enlazar de forma operable los polinucleótidos, especialmente ADN, a
los vectores por ejemplo a través de los términos cohesivos
complementarios. Por ejemplo, los tractos de homopolímero
complementarios se pueden añadir al segmento de ADN que se insertará
al vector ADN. Luego el vector y el segmento de ADN son unidos por
el enlace de hidrógeno entre las colas homopoliméricas
complementarias para formar moléculas de ADN recombinante.
Los enlazadores sintéticos que contienen uno o
más sitios de restricción proporcionan un método alternativo de
unión del segmento de ADN a los vectores. El segmento de ADN,
generado por digestión de la restricción de endonucleasa como se
describió anteriormente, se trata con polimerasa ADN de T4
bacteriófago o polimerasa I de ADN de E. coli, enzimas que
eliminan el término trenzado simple 3' con sus actividades
exonucleolíticas 3'-5', y llenado en los extremos
3' diferidos con sus actividades de polimerización.
Por consiguiente, la combinación de estas
actividades genera segmentos de ADN terminados romo. Los segmentos
terminados romo son incubados entonces con un gran exceso molar de
las moléculas enlazadoras en presencia de una enzima que pueda
catalizar la ligadura de las moléculas de ADN terminadas romo, tales
como ligasa de ADN del bacteriófago T4. De esta forma, los
productos de la reacción son segmentos de ADN que portan en sus
extremos secuencias de enlazadores poliméricos. Luego estos
segmentos de ADN son segmentados con la enzima de restricción
apropiada y ligados a un vector de expresión que ha sido segmentado
con una enzima que produce términos compatibles con los del segmento
de ADN.
Enlazadores sintéticos que contienen una
variedad de sitios de endonucleasa de restricción están
comercialmente disponibles a partir de un número de fuentes que
incluyen International Biotechnologies Inc, New Haven, CN, Estados
Unidos.
Una forma deseable de modificar el ADN que
codifica el polipéptido de la invención es usar la reacción de la
cadena de polimerasa como lo describieron Saiki y otros (1988)
Science 239, 487-491. Este método se
puede usar para introducir el ADN en un vector adecuado, por
ejemplo por ingeniería en sitios de restricción adecuados, o puede
utilizarse para modificar el ADN en otras maneras útiles como se
conoce en la técnica.
En este método el ADN a ser amplificado de forma
enzimática es flanqueado por dos cebadores específicos que se
incorporarán ellos mismos al ADN amplificado. Dichos cebadores
específicos pueden contener sitios de reconocimiento de
endonucleasa de restricción que se pueden utilizar para la clonación
en vectores de expresión que usan métodos conocidos en la
técnica.
El ADN (o en el caso de vectores retrovirales,
ARN) se expresa entonces en un hospedero adecuado para producir un
polipéptido que comprende el compuesto de la invención (por ejemplo,
péptido de acuerdo con el primer aspecto o molécula de fusión de
acuerdo con el cuarto aspecto). Así, el ADN que codifica al
polipéptido que constituye el compuesto de la invención se puede
utilizar de acuerdo con las técnicas conocidas, modificadas
apropiadamente con vista a las enseñanzas que contiene el adjunto,
para construir un vector de expresión, que entonces se utiliza para
transformar una célula hospedera apropiada para la expresión y la
producción del polipéptido de la invención.
El ADN (o en el caso de vectores retrovirales,
ARN) que codifica al polipéptido que constituye el compuesto de la
invención se puede unir a una amplia variedad de otras secuencias de
ADN para la introducción en un hospedero apropiado. El ADN
acompañante dependerá de la naturaleza del hospedero, de la manera
de introducir el ADN dentro del hospedero, y de si se desea el
mantenimiento o la integración episomal.
Generalmente, el ADN es insertado dentro de un
vector de expresión, tal como un plásmido, en la orientación
apropiada y en el marco de lectura correcto para la expresión. Si es
necesario, el ADN se puede enlazar a las secuencias nucleótidas de
control regulatorio transcripcional y translacional apropiadas
reconocidas por el hospedero deseado, aunque tales controles
generalmente están disponibles en el vector de expresión. Luego el
vector se introduce dentro del hospedero con técnicas estándares.
Generalmente, no todos los hospederos serán transformados por el
vector. Por lo tanto, será necesario seleccionar las células
hospederas transformadas. Una técnica de selección incluye
incorporar dentro del vector de expresión una secuencia de ADN, con
cualesquiera elementos de control necesarios, que codifican un
rasgo seleccionable en la célula transformada, tal como la
resistencia antibiótica. Alternativamente, el gen para tal rasgo
seleccionable puede estar en otro vector, que se utiliza para
co-transformar la célula hospedera deseada.
Las células hospederas que han sido
transformadas por el ADN recombinante de la invención se cultivan
entonces durante un tiempo suficiente y en condiciones apropiadas
conocidas por los expertos en la técnica en vistas de las
enseñanzas presentadas en este documento para permitir la expresión
del polipéptido, que luego puede ser recuperado.
Se conocen muchos sistemas de expresión, que
incluyen bacterias (por ejemplo E. coli y Bacillus
subtilis), levaduras (por ejemplo Saccharomyces
cerevisiae), hongos filamentosos (por ejemplo
Aspergillus), células de plantas, células animales y células
de insectos.
Los vectores incluyen usualmente un replicón
procariota, tal como el ColE1 ori, para la propagación en un
procariota, incluso si el vector se va a usar para la expresión en
otros tipos de célula no procariotas. Los vectores también pueden
incluir un promotor apropiado tal como un promotor procariota capaz
de dirigir la expresión (transcripción y translación) de los genes
en una célula hospedera bacteriana, tal como E. coli,
transformada con los mismos. Los vectores adecuados son bien
conocidos en la técnica.
La presente invención también se relaciona con
una célula hospedera transformada con una estructura de vector
polinucleótido de la presente invención. La célula hospedera puede
ser procariota o eucariota. Las células bacterianas pueden ser
células hospederas procariotas preferidas en algunas circunstancias
y usualmente son una cepa de E. coli como por ejemplo, las
cepas de E. coli DH5, disponibles en Bethesda Research
Laboratories Inc., Bethesda, MD, Estados Unidos, y RR1 disponible
en American Type Culture Collection (ATCC) de Rockville, MD,
Estados Unidos (No ATCC 31343). Las células hospederas eucariotas
preferidas incluyen células de levadura, de insecto y de mamíferos,
preferentemente las células de vertebrados tales como las de ratón,
rata, mono o las líneas celulares humanas fibroblásticas y del
riñón. Las células hospederas de levadura incluyen YPH499, YPH500 y
YPH501 que generalmente están disponibles en Stratagene Cloning
Systems, La Jolla, CA 92037, Estados Unidos. Las células hospederas
de mamíferos preferidas incluyen células de ovario de hámster chino
(CHO) disponibles en ATCC como CCL61, células embrionarias de ratón
NIH Swiss NIH/3T3 disponibles en ATCC como CRL 1658, células
COS-1 derivadas del riñón de mono disponibles en
ATCC como células CRL 1650 y 293 que son células de riñón
embrionario humanas. Las células de insecto preferidas son las
células Sf9 que pueden ser transfectadas con vectores de expresión
del baculovirus. La transformación de las células hospederas con ADN
y vectores de la invención se puede lograr usando métodos conocidos
en la técnica.
Se apreciara que ciertas células hospederas de
la invención son útiles en la preparación de los péptidos o de las
moléculas de fusión de la invención, por ejemplo células
bacterianas, de levadura y de insecto.
Un cuarto aspecto de la invención proporciona un
método de producción de un péptido del primer aspecto de la
invención, el método comprende cultivar células hospederas que
contienen un polinucleótido o vector de expresión que codifica el
péptido y obtener el péptido a partir de la célula hospedera o el
medio de cultivo.
Los péptidos de la invención se utilizan en la
producción del CTL específico para los péptidos de CD45 y que son
presentados por moléculas de HLA particulares, tales como
HLA-A0201.
Así, otros aspectos de la invención proporcionan
composiciones que comprenden un péptido de acuerdo con un primer
aspecto de la invención cuyas composiciones son adecuadas para
originar CTL específico para los péptidos al ser presentadas por
una molécula de HLA particular. Tales composiciones son usualmente
estériles y están libres de pirógeno. Usualmente, para la
generación de CTL los péptidos se utilizan en el rango de 200 \muM
a 1 nM.
Usualmente, la composición es una composición
acuosa. En algunos casos puede ser deseable incluir en la
composición a un agente de solubilización del péptido tal como
DMSO.
Aún otro aspecto de la invención incluye un
conjunto de partes que comprende un péptido de acuerdo con el
primer aspecto de la invención y una célula que presenta al
antígeno. A continuación se describen las células preferidas que
presentan los antígenos. El conjunto de partes es útil en la
preparación de CTL activado como se describe a continuación. Aún
otro aspecto más de la invención incluye una célula que presenta el
antígeno en la que sus moléculas de MHC Clase I se cargan con un
péptido como se define en el primer aspecto de la invención. Estas
células están contenidas adecuadamente en una biblioteca de células
en la que cada célula miembro de la biblioteca se carga con un
péptido diferente de la invención. Como se describe más
detalladamente a continuación, es conveniente que para cada péptido
(y cada célula dentro de la biblioteca) se de una indicación con
respecto al tipo de molécula de MHC Clase I a la que se enlaza el
péptido.
Un aspecto más de la invención proporciona un
método para producir linfocitos T citotóxicos (CTL) activados in
vitro, el método que comprende contactar in vitro CTL con
moléculas de MHC Clase I humanas cargadas con antígeno expresadas
en la superficie de una célula que presenta al antígeno adecuada
durante un período de tiempo suficiente para activar, de forma
específica del antígeno, dicho CTL donde el antígeno es un péptido
de acuerdo con el primer aspecto de la invención.
Adecuadamente, los CTL son células CD8^{+}
pero pueden ser células CD4^{+}. Las moléculas de MHC Clase I
pueden expresarse en la superficie de cualquier célula adecuada y se
prefiere que la célula sea una que no exprese naturalmente las
moléculas de MHC Clase I (en cuyo caso la célula es transfectada
para expresar tal molécula) o, en caso de que la exprese, que tenga
defecto en la trayectos de procesamiento del antígeno o de
presentación del antígeno. De esta manera, es posible que la célula
que expresa la molécula de MHC Clase I sea cargará substancialmente
de manera completa con un antígeno del péptido seleccionado antes de
activar el CTL.
La célula que presenta al antígeno (o célula
estimuladora) usualmente tiene una molécula de MHC Clase I en su
superficie y preferentemente es substancialmente incapaz de cargar
por misma dicha molécula de MHC Clase I con el antígeno
seleccionado. Como se describe más detalladamente a continuación, la
molécula de MHC Clase I se puede cargar fácilmente con el antígeno
seleccionado in vitro.
Convenientemente, dicha célula que presenta al
antígeno es una célula de mamíferos defectuosa en la expresión de
un transportador del péptido de manera que, cuando al menos una
parte de dicha molécula seleccionada es un péptido, esta no es
cargada en dicha molécula de MHC Clase I.
Preferentemente la célula de mamíferos carece o
tiene un nivel reducido o una función reducida de transportador del
péptido TAP. Las células adecuadas que carecen del transportador del
péptido TAP incluyen las células T2, RMA-S y
Drosophila. El TAP es el Transportador Asociado al
Procesamiento del antígeno.
De esa forma, la célula es convenientemente una
célula de insecto tal como una célula Drosophila.
El péptido humano que carga la línea celular T2
deficiente está disponible en American Type Culture Collection,
12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, Estados Unidos con
el No. de catálogo CRL 1992; la línea celular de Drosophila
Schneider línea 2 está disponible en ATCC con el No. de Catálogo CRL
19863; la línea celular RMA-S de ratón se describe
en Karre y Ljunggren (1985) J. Exp. Med. 162,
1745.
En una realización preferida la célula
estimuladora es un célula T2 o una célula RMA-S o
una célula Drosophila trasfectada con una molécula de ácido
nucleico capaz de expresar dicha molécula de MHC Clase I. Aunque las
células T2 y RMA-S expresan moléculas de HLA Clase
I antes de la transfección, no están cargadas con un péptido.
Las células de mamíferos pueden ser
transfectadas por métodos bien conocidos en la técnica. Las células
de Drosophila pueden ser transfectadas, como se describe en
Jackson y otros (1992) Proc Natl. Acad. Sci. USA 89,
12117.
Convenientemente dicha célula hospedera antes de
la transfección no expresa substancialmente ninguna molécula de MHC
Clase I.
También se prefiere que la célula estimuladora
exprese una molécula importante para la
co-estimulación de la célula T tal como cualquiera
de B7.1, B7.2, ICAM-1 y LFA 3.
Las secuencias del ácido nucleico de las
numerosas moléculas de MHC Clase I y de las moléculas
coestimuladoras, están disponibles al público en las bases de datos
GenBank y EMBL.
Se prefiere particularmente que substancialmente
todas dichas moléculas de MHC Clase I expresadas en la superficie de
dicha célula estimuladora sean del mismo tipo.
Las HLA Clase I en seres humanos, y sistemas
equivalentes en otros animales, son genéticamente muy complejas.
Por ejemplo, existen más de 110 alelos del locus de
HLA-B y más de 90 alelos del locus
HLA-A. Aunque cualquier molécula de HLA Clase I (o
equivalente) es útil en este aspecto de la invención, se prefiere
que la célula estimuladora presente al menos parte de la molécula
seleccionada en una molécula de HLA Clase I que ocurre con una
frecuencia razonablemente elevada en la población humana. Es bien
conocido que la frecuencia de los alelos de HLA Clase I varía entre
los diferentes grupos étnicos tales como caucásicos, africanos,
chinos, etc. Al menos en lo concerniente a la población caucásica
se prefiere que la molécula de HLA Clase I sea codificada por un
alelo HLA-A2, o un alelo HLA-A1 o un
alelo HLA-A3 o un alelo HLA-B27.
Particularmente se prefiere HLA-A0201.
En otra realización, también se pueden utilizar
combinaciones de moléculas de HLA. Por ejemplo, una combinación de
HLA-A2 y HLA-A3 cubre el 74% de la
población caucásica.
Para el uso terapéutico del CTL en los métodos
de la invención, se utilizan células alogénicas en la preparación
del CTL y este método se describe detalladamente en la WO 97/26328.
Por ejemplo, además de células Drosophila y células T2,
pueden utilizarse otras células para presentar antígenos tales como
células de CHO, las células de insecto infectado con baculovirus,
bacterias, levadura, células diana infectadas con vaccinia. Además
se pueden utilizar virus de plantas (véase, por ejemplo, Porta y
otros (1994) Virology 202, 449-955 que
describe el desarrollo del virus del mosaico de guisante como
sistema de alto rendimiento para la presentación de péptidos
ajenos.
Cuando se utilizan células alogénicas en la
preparación de CTL, los CTL son
alo-MHC-restringidos con respecto a
los péptidos de la invención. Por tanto, usualmente, los CTL son de
un individuo que es negativo para un HLA particular y el péptido es
presentado por esa molécula particular de HLA mediante la célula que
presenta al antígeno. Se prefiere particularmente que los CTL sean
de un individuo que responde negativo al HLA-A0201
y que el péptido sea presentado por una molécula de
HLA-A0201 Clase I mediante la célula que presenta al
antígeno.
Los péptidos aplicados exógenamente se pueden
enlazar a un péptido tat VIH para dirigirlos hacia el trayecto de
MHC Clase I para ser presentados por los CTL (véase, por ejemplo,
Kim y otros (1997) J. Inmunol. 159,
1666-1668).
Los CTL activados que son dirigidos contra los
péptidos de la invención son útiles en la terapia. De esta forma,
otro aspecto de la invención proporciona CTL activados obtenibles
por los métodos precedentes de la invención.
Aún otro aspecto de la invención proporciona CTL
activados que reconocen selectivamente una célula que expresa un
polipéptido como se define en el primer aspecto de la invención.
Usualmente, la célula es una célula que expresa CD45.
Preferentemente, el CTL reconoce dicha célula al enlazarla al
péptido como se define en el primer aspecto de la invención. De esa
forma, usualmente, el CTL activado reconoce las moléculas de MHC
Clase I humanas expresadas en la superficie de una célula que
presenta al antígeno y cargada con un péptido de acuerdo con el
primer aspecto de la invención.
El CTL activado de la invención puede ser
empaquetado y presentado para ser utilizado en la medicina. En
particular se pueden indicar el haplotipo HLA y el epítope de la
célula T de CD45 reconocidos por el CTL. La invención también
incluye una preparación farmacéutica que comprende un CTL activado
de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
Usualmente, el portador es estéril y libre de pirógeno.
El polipéptido de CD45 se expresa en leucemias,
tal como leucemias linfoide y mieloide, y en otras malignidades
hematológicas. La molécula de CD45 también se expresa en células
normales del sistema hematopoyético. De esa forma, como se analiza
más detalladamente a continuación, la inmunoterapia basada en CD45
se combinará con el trasplante de células madres alogénicas. Por
ejemplo, el marcado de los epítopes del péptido de CD45 presentados
por el HLA-A0201 se proporciona para los pacientes
sometidos a trasplante de la célula madre de donantes negativos al
HLA-A0201. En este caso, las células del donante
repueblan el sistema hematopoyético del paciente. Estas células
repobladoras son resistentes al CTL específico de los epítopes del
péptido presentado al HLA-A0201. Por tanto, dicho
CTL mata selectivamente las células hematopoyéticas malignas y
normales del paciente, pero no las células hematopoyéticas normales
del donante de la célula madre. El enfoque
alo-restringido por tanto se utiliza para generar
CTL específico de los péptidos de CD45 presentados por el
HLA-A0201. Como se analiza más detalladamente a
continuación, el TCR de dicho CTL alo-restringido se
puede utilizar para la terapia genética de pacientes que pudieran
beneficiarse del CTL HLA-restringido específico del
CD45.
Por tanto, los CTL son adecuados para matar
células diana en un paciente cuyas células diana expresan un
polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se
define en el primer aspecto de la invención (por ejemplo, CD45)
donde se administra al paciente un número eficaz de CTL activado.
Usualmente, el paciente ha sido sometido a trasplante de la célula
madre a partir de un donante incompatible con el HLA y se le
administra un número eficaz de CTL activado derivado del mismo
donante que el del trasplante de la célula madre o de otro donante
incompatible con el HLA.
Las células diana que son destruidas por el CTL
activado son células malignas y hematopoyéticas que expresan un
polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos presentada en
el primer aspecto de la invención. Usualmente, las células malignas
y normales a ser matadas en el paciente son células hematopoyéticas
que expresan el CD45.
Por consiguiente, los CTL no son del paciente
sino de otro individuo. Por supuesto, se prefiere que el individuo
sea un individuo sano. Por "individuo sano" entendemos que el
individuo goza generalmente de buena salud, tiene preferentemente
un sistema inmune competente y, más preferentemente, no sufre de
ninguna enfermedad que pueda ser probada y detectada fácilmente. En
esta realización, los CTL se derivan de un individuo cuyas
moléculas de HLA Clase I son incompatibles con las del paciente. Por
tanto, se prefiere que los CTL sean
alo-restringidos. El tratamiento con CTL
alo-restringido se describe en la WO 97/26328.
Para seleccionar rápidamente el CTL adecuado
para tratar a un individuo particular, el CTL puede ser mantenido
en una biblioteca. De esa forma, otro aspecto de la invención
proporciona una biblioteca de CTL activados en la que cada miembro
de la biblioteca (1) reconoce un péptido de CD45 cuando es
presentado por un HLA registrado particular y (2) tiene su haplotipo
de HLA registrado.
El CTL activado se puede almacenar en cualquier
manera adecuada, por ejemplo mediante
crio-preservación en un medio que contiene suero y
DMSO como es bien conocido en la técnica.
La información referente al péptido de CD45
reconocido, y al haplotipo de HLA se puede registrar en cualquier
forma adecuada, por ejemplo, en una tabla de consulta o en la
computadora. Preferentemente, cada CTL es selectivo para un péptido
de CD45.
Aunque no deseamos limitarnos a ninguna teoría,
creemos que el uso del CTL alo-restringido dirigido
contra el CD45 humano se basa en el principio de que la tolerancia
de la célula T contra los epítopes de las proteínas normalmente
expresadas es en sí misma restringida al HLA. De esta forma, por
ejemplo, un donante negativo al HLA-A2 puede
reconocer epítopes presentados por el HLA-A2, a los
cuales un hospedero positivo al HLA-A2 es
tolerante. CD45 abundante se expresa tanto en las células malignas
como en las normales de ascendencia hematopoyética. Puesto que se
expresa en una manera específica hematopoyética, creemos que el CTL
que reconoce el CD45 no causaría una toxicidad en otros tejidos
finos del hospedero (enfermedad del injerto contra hospedero):
Creemos que, en virtud de su alo-restricción, dicho
CTL no mataría las células hematopoyéticas del donante, que son
negativas al
HLA-A2.
HLA-A2.
Es particularmente preferido que el CTL
alo-restringido dirigido contra el CD45 humano se
administre a un paciente que ha sido sometido previamente a un
trasplante haplo-idéntico a la leucemia (véase a
Ana NY Acad. Sci., 1999, 30 de Abril, Vol. 872 páginas
351-361). Avances recientes han hecho posible el
trasplante haplo-idéntico de la leucemia. El
enfoque del CTL alo-restringido analizado
anteriormente está dirigido a mejorar el efecto injerto contra
leucemia.
Los CTL de la invención son adecuados para la
inmunoterapia adoptiva.
Los CTL activados contienen un receptor de la
célula T (TCR) que está involucrado en el reconocimiento de las
células que expresan el polipéptido. Es útil que el ADN
complementario que codifica al TCR sea clonado a partir del CTL
activado y se transfiera a otro CTL para la expresión.
Se clonan los TCR de los clones de CTL de la
invención específicos de los péptidos del primer aspecto de la
invención. El uso de TCR en los clones de CTL se determina usando
(i) anticuerpos monoclonales específicos de región variable de TCR
y (ii) RT-PCR con cebadores específicos de las
familias de genes V\propto y V\beta. Una biblioteca de ADN
complementario se prepara a partir del ARN mensajero
poli-A extraído de los clones de CTL. Se utilizan
cebadores específicos de la parte Terminal C de las cadenas
\propto y \beta del TCR y de la parte Terminal N de los
segmentos V\propto y \beta identificados. El ADN complementario
completo de la cadena \propto y \beta del TCR se amplifica con
una polimerasa de ADN de alta fidelidad y se clonan los productos
amplificados en un vector de clonación conveniente. Los genes de la
cadena \propto y \beta clonados pueden ser ensamblados en una
sola cadena TCR mediante el método descrito por Chungkin y otros
(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 12654-12658.
En esta estructura de una sola cadena el segmento V\propto J está
seguido por el segmento V\betaDJ, seguido por el segmento
C\beta seguido por el segmento transmembrana y citoplasmático de
la cadena CD3 \zeta. Este TCR de una sola cadena se inserta
entonces en un vector de expresión retroviral (se puede utilizar un
panel de vectores basado en su capacidad de infectar a los
linfocitos T CD8^{+} humanos maduros y de mediar la expresión del
gen: el sistema del vector retroviral Kat es una posibilidad
preferida (véase Finer y otros (1994) Blood 83, 43). Se usan
retrovirus anfotróficos de alta graduación para infectar los
linfocitos T CD8^{+} purificados aislados de la sangre periférica
de los pacientes con tumor siguiendo un protocolo publicado por
Roberts y otros Blood 84, 2878-2889 (1994). Se
utilizan anticuerpos Anti-CD3 para activar la
proliferación de células T CD8^{+} purificadas, lo que facilita la
integración retroviral y la expresión estable de TCR de una sola
cadena. La eficacia de la transducción retroviral se determina
manchando las células T CD8^{+} con anticuerpos específicos del
TCR de una sola cadena. El análisis in vitro de células T
CD8^{+} transducidas establece que estas exhiben la misma
eliminación específica del tumor apreciada con el clon de CTL
alo-restringido a partir del cual se clonaron
originalmente las cadenas de TCR. Las poblaciones de células T
CD8^{+} transducidas con la especificidad prevista pueden ser
utilizadas para la inmunoterapia adoptiva de los pacientes con
tumor. Los pacientes pueden ser tratados con CTL transducidos,
análogos entre 10^{8} y 10^{11} (más probablemente
10^{9}-10^{10}).
Otros sistemas adecuados para introducir genes
en CTL se describen en Moritz y otros (1994) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 91, 4318-4322. Eshhar y otros
(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90,
720-724 y Hwu y otros (1993) J. Exp. Med.
178, 361-366 también describen la
transfección de CTL.
Por tanto, otro aspecto de la invención
proporciona un TCR que reconoce una célula que expresa un
polipéptido como se describe en el primer aspecto de la invención,
el TCR es obtenible a partir del CTL activado. Así, usualmente, el
TCR reconoce una célula de ascendencia hematopoyética que expresa el
CD45.
Al igual que el TCR, se incluyen en la invención
las moléculas funcionalmente equivalentes al TCR. Las mismas
incluyen cualquier molécula que sea funcionalmente equivalente a un
TCR que pueda realizar la misma función que un TCR. En particular,
tales moléculas incluyen TCR de una sola cadena de tres dominios
desarrollados genéticamente elaborados mediante el método descrito
por Chungkin y otros (1 994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA
91, 12654-12658, y mencionado
anteriormente.
Usualmente, el TCR o una molécula funcionalmente
equivalente al TCR, reconoció las moléculas de MHC Clase I humano
expresadas en la superficie de una célula que presenta al antígeno y
cargada con un péptido según el primer aspecto de la invención.
De la invención también incluye un
polinucleótido que codifica al TCR o a la molécula funcionalmente
equivalente, y un vector de expresión que codifica al TCR o a la
molécula funcionalmente equivalente del mismo. Los vectores de
expresión adecuados para expresar el TCR de la invención incluyen
vectores virales tales como vectores retrovirales, vectores
lentivirales, vectores adenovirales, vectores de vaccinia
(incluyendo la cepa de MVA con replicación deficiente). Sin
embargo, se prefiere que los vectores de expresión sean aquellos que
pueden expresar el TCR en un CTL después de la transfección.
Otro aspecto de la invención proporciona el uso
de CTL en la fabricación de un medicamento para matar células diana
en un paciente, cuyas células diana expresan un polipéptido que
comprende una secuencia de aminoácidos presentado en el primer
aspecto de la invención, donde los CTL son producidos mediante un
método que comprende los pasos de (1) obtener CTL del paciente; (2)
introducir en dichas células un polinucleótido que codifica a un
TCR, o una molécula funcionalmente equivalente, como se define
anteriormente. Usualmente, las células diana son células
hematopoyéticas malignas que expresan el CD45.
Se apreciará que, con respecto a los métodos de
matar células diana en un paciente, se prefiere particularmente que
las células diana sean células de leucemia u otras células
hematopoyéticas malignas que expresen el CD45.
El polipéptido de CD45 comprende las secuencias
de aminoácido FLYDVIAST y ALLAFLAFL y KLFTAKLNV y MIWEQKATV y
NLSELHPYL y VNLSELHPYL y LLAFGFAFL y YLYNKETKL y TLILDVPPGV e
ILYNNHKFT e ILPYDYNRV y YILIHQALV y KLLAFGFAFL y YQYQYTNWSV.
Se prefiere particularmente que los pacientes
que son tratados con los métodos de la invención tengan el haplotipo
HLA-A0201. Por tanto, en una realización preferida
el haplotipo HLA del paciente se determina antes del tratamiento.
La haploclasificación del HLA se puede realizar usando cualquier
método adecuado; tales métodos son bien conocidos en el arte.
Como se analizó en detalles anteriormente, se
utilizan CTL alo-restringidos. Por tanto, es
conveniente determinar el haplotipo del HLA del donante y utilizar
las células del donante incompatibles con el HLA (al menos
incompatibles con la Clase de HLA que presenta al antígeno). Así,
por ejemplo, si el paciente es clasificado positivo al
HLA-A0201, se prefiere que el donante para el CTL
sea negativo al HLA-A0201 de modo que los CTL sean
alo-restringidos.
Métodos relacionados, que como métodos médicos
no son parte de la invención, incluyen un método de tratamiento a
un paciente con una malignidad hematopoyética, el método comprende
(1) determinar para un péptido dado que enlaza al HLA de CD45
humano qué tipo de molécula de MHC Clase I enlaza al péptido en el
paciente, o determinar para una molécula de MHC Clase I en el
paciente qué péptido (o péptidos) de CD45 humano enlazan la molécula
de MHC Clase I en el paciente, o ambos, (2) proporcionar un CTL
activado que es alogénico (alo-restringido) con
respecto a la molécula de MHC Clase I que enlaza al péptido en el
paciente y cuyo CTL es específico del péptido, (3) realizar un
trasplante de la célula madre del paciente a partir de un donante
que es negativo para el tipo de molécula de MHC Clase I que, en el
paciente, enlaza al péptido, y (4) administrar el CTL activado del
paso (2) al paciente.
La invención proporciona el uso de CTL activado
en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente con
una malignidad hematopoyética, como se define en la reivindicación
32.
Preferiblemente, el péptido de CD45 que enlaza
la molécula de MHC Clase I es uno que puede ser producido siguiendo
el procesamiento natural del antígeno CD45.
Usualmente, la malignidad hematopoyética es
leucemia.
La determinación de qué tipo de molécula de MHC
Clase I se enlaza a un péptido que enlaza al HLA de CD45 particular
se puede determinar empíricamente para el paciente en cuestión
usando métodos bien conocidos. Alternativamente, se puede generar
rápidamente una tabla de consulta de cuáles moléculas de HLA se
enlazan a cuáles péptidos de CD45 particulares, por ejemplo, el
Ejemplo 1 muestra una lista de péptidos que enlazan al
HLA-A0201. En ese caso, el tipo de molécula de MHC
Clase I a la cual se enlaza el péptido particular se puede
determinar de manera simple determinando si el paciente tiene el
tipo de molécula de MHC Clase I a la cual se conoce que el péptido
particular se enlaza. La determinación del tipo de molécula de Clase
I puede ser mediante el análisis de ADN como es bien conocido en el
arte. A modo de ejemplo, el péptido FLYDVIAST se enlaza al
HLA-A0201 y para este péptido si se muestra que un
paciente tiene un alelo de HLA- A0201 se espera que el paciente
enlace este péptido con esta molécula de MHC.
Los CTL activados alogénicos
(alo-restringidos) se pueden producir usando el
método descrito anteriormente. Los CTL activados pueden ser
convenientemente unos que se conoce son específicos del péptido y
para los cuáles se ha determinado el genotipo de HLA. Así, los CTL
se pueden seleccionar de una biblioteca de CTL clasificados con
respecto a su especificidad del péptido y al genotipo de HLA.
Se cree que los CTL activados pueden destruir
cualquier célula hematopoyética maligna residual (y también
cualquiera de las células hematopoyéticas normales originales del
paciente) pero no las células trasplantadas.
La invención incluye en particular el uso de los
péptidos de la invención (o los polinucleótidos que los codifican)
y activar CTL de donantes sanos (MHC incompatibles) in vitro
seguidos por terapia adoptiva. A continuación se describirá la
invención más detalladamente haciendo referencias a las siguientes
figuras y ejemplos en los cuales:
La Figura 1 muestra el resultado de un ensayo
para medir el enlace HLA-A0201 de los péptidos. El
enlace del péptido se midió usando el ensayo T2 que se basa en la
capacidad de los péptidos de estabilizar la expresión de
HLA-A0201 en las células T2 deficientes de TAP. El
péptido 1218 (FLYDVIAST) era uno de los mejores enlazadores y fue
utilizado para estimular las respuestas de CTL (véase la Figura
2).
La Figura 2 muestra la especificidad de 3 líneas
de CTL generadas contra el péptido 1218 derivado de CD45. El CTL
específico del péptido fue aislado de los donantes negativos al
HLA-A0201 usando el método descrito en la WO
97/26328. Se establecieron tres líneas específicas del péptido y
demostraron la eliminación específica de células T2 diana que
presentan el péptido 1218 pero no dianas que presentan péptidos de
control que enlazan el HLA-A0201
(HBV(18-27)). Las células NK diana KS62 no
fueron matadas por estos CTL.
La Figura 3 muestra la sensibilidad de 3 líneas
de CTL generadas contra el péptido 1218 derivado de CD45. La
sensibilidad de las tres líneas de CTL se probó usando células T2
diana cubiertas con las dosis decrecientes del péptido 1218. La
línea 2 de CTL fue la línea más sensible y fue utilizada en
experimentos subsecuentes.
La Figura 4 muestra la eliminación de células
mononucleares de sangre periférica fresca (PBMC) de pacientes con
CML (leucemia mieloide crónica) por parte del CTL específico del
péptido 1218. La línea 2 de CTL fue utilizada para probar la
actividad eliminadora contra PBMC fresca de pacientes con CML
positivos al HLA-A0201. Los CTL también fueron
probados contra PBMC de individuos negativos al
HLA-A0201. La proporción de ejecutora con respecto a
la diana fue 30:1 y 5:1.
La Figura. 5 muestra la eliminación de células
clonogénicas del progenitor por parte del CTL específico del péptido
1218. La línea 2 de CTL fue probada en ensayos de formación de
colonias. El CTL mató a la mayoría de los progenitores formadores de
colonias de pacientes con CML positivos al HLA-A0201
pero no de individuos normales o pacientes con CML negativos al
HLA-A0201. Las células purificadas del progenitor
CD34 fueron expuestas a CTL durante 4 horas seguidas por cultivo
sobre placas de las células tratadas y de control para medir los
números CFU-GM. Se muestra el número de colonias en
las células de CD34 tratadas con respecto al número de colonias en
las células CD34 no tratadas. El tratamiento eliminó la mayoría de
las colonias en las células CD34 de los pacientes con CML positivos
al HLA-A0201.
Se seleccionaron dieciséis péptidos de la
molécula de CD45 y probamos 14 de ellos en los ensayos de enlace
HLA-A0201 como se describe en la leyenda de la
Figura 1. Doce de los péptidos mostraron actividad de enlace (véase
la Figura 1).
Péptidos de
CD45
- huCD45/1218
- FLYDVIAST
- huCD45/576
- ALIAFLAFL *
- huCD45/244
- KLFTAKLNV *
- huCD45/737
- MIWEQKATV *
- huCD45/919
- NLSELHPIL *
- huCD45/918
- VNLSELHPIL *
- huCD45/7
- LLAFGFAFL *
- huCD45/237
- YLYNKETKL *
- \underline{huCD45/293}
- LILDVPPGV *
- huCD45/292
- TLILDVPPGV *
- huCD45/369
- ILYNNHKFT *
- huCD45/684
- ILPYDYNRV *
- huCD45/900
- YILIHQALV *
- \underline{huCD45/304}
- FQLHDCTQV *
- huCD45/6
- KLLAFGFAFL *
- huCD45/1116
- YQYQYTNWSV *
\vskip1.000000\baselineskip
Los péptidos subrayados (huCD45/293 y
huCD45/304) no fueron probados en cuanto a la actividad de enlace.
Esos péptidos son citados solo con fines ilustrativos.
El péptido 1218 fue uno de los mejores
enlazadores y se utilizó para estimular las respuestas del CTL. CTL
específicos del péptido fueron aislados de los donantes negativos al
HLA-A0201 utilizando el método descrito en la WO
97/26328. Se establecieron y se encontraron tres líneas específicas
del péptido para mostrar la eliminación específica de las células
T2 diana que presentaban el péptido 1218 pero no las diana que
presentaban los péptidos de control. Las células NK diana K562 no
fueron matadas por estos CTL (Figura 2).
Se probó la sensibilidad de las tres líneas de
CTL usando las células T2 diana cubiertas con dosis decrecientes del
péptido 1218. La línea 2 de CTL fue la línea más sensible (Figura
3).
Se utilizó la línea 2 de CTL para probar la
actividad eliminadora contra células leucémicas frescas de pacientes
con CML positivos al HLA-A0201. El CTL mostró la
eliminación de estas células de CML pero no de las células normales
de donantes negativos al HLA-A0201 (Figura 4).
\global\parskip0.900000\baselineskip
Finalmente, se probó la línea 2 de CTL en
ensayos de formación de colonias. El CTL mató a la mayoría de los
progenitores formadores de colonia de pacientes con CML positivos al
HLA-A0201 pero no de los individuos negativos al
HLA-A0201 (Figura 5).
Estos datos demuestran que el CD45 tiene al
menos 12 péptidos que pueden enlazarse al HLA-A0201.
El péptido 1218 puede inducir el CTL específico del péptido de
donantes negativos al HLA-A0201. Los CTL que
muestran la especificidad del péptido 1218 usando las células T2
diana también matan a las células CML positivas de
HLA-A0201.
Hemos seleccionado 14 péptidos candidatos del
CD45 a ser enlazados al HLA-A201 en análisis de
enlace de T2. Usando uno de los mejores péptidos de enlace (p1218),
podemos generar rápidamente CTL alo-restringidos,
específicos del péptido. Tres líneas de CTL específicas del p1218
muestran una fuerte citotoxicidad contra las líneas hematopoyéticas
de la célula positiva al HLA-A2 (C1RA2) pero no
contra la negativa al A2 (WS29 ó K562), aunque se observó cierta
reactividad contra las dianas positivas al A2, no hematopoyéticas.
La línea 2 del p1218, que tenía la mayor voracidad en los ensayos
de clasificación del péptido, mostró una significativa citotoxicidad
contra PGMN en 4/5 pacientes positivos al HLA A2 con CML,
incluyendo 1 en crisis blasto mieloide, pero 0/4 controles normales
positivos al HLA A2. El tratamiento de PBMN/BMMN positivo al CD34
con CTL específico del p1218 inhibió la formación de la colonia
CFU-GM en >90% en 4/5 pacientes con CML positivos
al HLA A2 sin inhibición significativa en 5/5 controles normales
positivos al HLA A2, demostrando que el CTL específico del p1218
tiene una potente actividad contra los progenitores leucémicos.
Estos datos sugieren que la inmunoterapia adoptiva con CTL
alo-restringido dirigida contra los epítopes de CD45
puede ser útil en la restauración del efecto injerto contra leucemia
posterior al trasplante haplo-idéntico.
Los linfocitos T citotóxicos (CTL) activados se
producen usando moléculas HLA-A2 Clase I y el
péptido nonámero del CD45: FLYDVIAST.
El método descrito en la solicitud de patente
PCT WO 93/17095 se utiliza para hacer los CTL. Células con un
defecto endógeno en la carga del péptido de las moléculas de HLA
Clase I son utilizadas como células estimuladoras. Por ejemplo,
células T2 humanas, células murina RMA-S/A2 o
células de Drosophila transfectadas con
HLA-A0201 humano, B7.1 e ICAM-1.
Las moléculas HLAA0201 expresadas en estas células se pueden cargar
convenientemente con los péptidos suministrados exógenamente.
El péptido se sintetiza en un sintetizador
Applied Biosystems, ABI 431A (Foster City, CA, Estados Unidos) y es
purificado posteriormente por HPLC.
Como se describe en detalles en la WO 93/17095,
con el objetivo de optimizar las condiciones in vitro para
la generación de células T citotóxicas específicas, el cultivo de
células estimuladoras se mantiene en un medio apropiado. Las
células estimuladoras son células T2 o RMA-S/A2 o
Drosophila como se describe en la WO 93/17095.
Antes de la incubación de las células
estimuladoras con las células a ser activadas, por ejemplo, células
CD8 precursoras, una cantidad de péptido antigénico se agrega al
cultivo de la célula estimuladora, en una cantidad suficiente para
ser cargado en las moléculas humanas de la Clase I a ser expresadas
en la superficie de las células estimuladoras. Una cantidad
suficiente de péptido es una cantidad que permitirá que alrededor
de 200, y preferiblemente 200 ó más, moléculas de MHC Clase I
humanas cargadas con el péptido se expresen en la superficie de
cada célula estimuladora. Usualmente, las células estimuladoras se
incuban con >1 µg/ml de péptido.
Las células CD8 restantes o precursoras son
incubadas entonces en cultivo con las células estimuladoras
apropiadas durante un período suficiente para activar las células
CD8. Las células CD8 se activarán así de una manera específica del
antígeno. La proporción de células CD8 (ejecutoras) restantes o
precursoras con respecto a las células estimuladoras puede variar
de un individuo a otro y además puede depender de variables tales
como la docilidad de los linfocitos de un individuo a las
condiciones de cultivo. La proporción de célula
estimuladora:linfocito (célula de Drosophila) está
usualmente en el rango de alrededor de 2:1 a 100:1. Por ejemplo, 3 x
10^{7} células PBL humanas y 3 x 10^{6} células vivas de
Drosophila se mezclan y se mantienen en 20 ml de medio de
cultivo de RPMI 1640.
El cultivo de ejecutora/estimuladora se mantiene
durante tanto tiempo como sea necesario para estimular un número
terapéutico usable o eficaz de células CD8. Ello requiere
generalmente varias rondas de estímulo en bruto seguidas de
cultivos de dilución limitante para aislar líneas de CTL específicas
del péptido.
Las cantidades citotóxicas efectivas de células
CD8 activadas pueden variar entre usos in vitro e in
vivo, así como con la cantidad y el tipo de células que serán
la diana final de estas células asesinas entre alrededor de 1 x
10^{6} y 1 x 10^{12} CTL activados se utilizan para los seres
humanos adultos.
Se utilizan métodos de reintroducción de los
componentes celulares tales como por ejemplo los ejemplificados en
la patente US No. 4.844.893 de Honsik y otros y la patente US No.
4.690.915 de Rosenberg. Por ejemplo, es apropiada la administración
de células CD8 activadas vía infusión intravenosa.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Innovaciones de Imperial College
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Métodos y moléculas
Inmunoterapéuticos
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> ICOW/P23777PC
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val}
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr
Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Leu Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly
Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ile Leu Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe
Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn Trp Ser
Val}
Claims (37)
1. Un péptido compuesto por de 9 a 12
aminoácidos y que incluye la secuencia de aminoácidos FLYDVIAST o
una variante de esta secuencia, cuya variante tiene una o dos
substituciones del aminoácido en cualquiera o en ambas posiciones 2
y 9 de esta secuencia de aminoácido, y que es capaz de enlazarse al
HLA-A0201.
2. Un péptido según la reivindicación 1 en el
que al ser enlazado al HLA-A0201 el
HLA-A0201 enlazado al péptido es capaz de provocar
la producción de un linfocito T citotóxico (CTL) que reconozca una
célula que exprese un polipéptido que comprende la secuencia de
aminoácidos dada.
3. Un péptido según las reivindicaciones 1 ó 2
en el que el péptido incluye enlaces no péptidos.
4. Un péptido según la reivindicación 1
compuesto por la secuencia de aminoácidos FLYDVIAST.
5. Un polinucleótido que codifica a un péptido
según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 4.
6. Un polinucleótido según la reivindicación 5
que es ADN.
7. Un vector de expresión capaz de expresar un
péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 4.
8. Una célula hospedera que comprende un
polinucleótido según la reivindicación 5 ó 6 ó un vector de
expresión según la reivindicación 7.
9. Un método de producción de un péptido según
una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 4 el método que
comprende cultivar la célula hospedera según la reivindicación 8 y
obtener el péptido de la célula hospedera o su medio de cultivo.
10. Un conjunto de partes que comprende un
péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y una
célula que presenta al antígeno.
11. Un conjunto de partes según la
reivindicación 10 en el que la célula que representa al antígeno es
una célula con defecto en, o que carece de, la expresión del
transportador del péptido TAP.
12. Un conjunto de partes según la
reivindicación 11 en el que la célula es una célula cualquiera de
una célula T2, una célula RMA-S o una célula
Drosophila.
13. Una célula que presenta al antígeno en la
que sus moléculas de MHC Clase I están cargadas con un péptido según
de las reivindicaciones 1 a 4.
14. Una célula según la reivindicación 13 la
cual tiene defecto en, o carece de, la expresión del transportador
del péptido TAP.
15. Una célula según la reivindicación 14 la
cual es cualquiera de una célula T2, una célula
RMA-S o una célula Drosophila.
16. Un método para producir los linfocitos T
citotóxicos (CTL) activados in vitro, el método comprendiendo
poner en contacto CTL in vitro con las moléculas de MHC
humanas Clase I cargadas con el antígeno expresadas en la superficie
de una célula que presenta al antígeno adecuada durante un período
de tiempo suficiente para activar, de una manera específica del
antígeno, dicho CTL en el que el antígeno es un péptido según de las
reivindicaciones
1 a 4.
1 a 4.
17. Un método según la reivindicación 16 en el
que el CTL y la célula que presenta al antígeno son alogénicos con
respecto a la molécula de MHC Clase I que está presentando el
péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
18. Un método según la reivindicación 16 ó 17 en
el que el antígeno es cargado sobre moléculas de MHC Clase I
expresadas en la superficie de una célula que presenta al antígeno
adecuada poniendo en contacto una cantidad suficiente del antígeno
con una célula que presenta al antígeno en el que antes del contacto
las moléculas de MHC Clase I de la célula que presenta al antígeno
están substancialmente vacías y después del contacto la moléculas de
MHC Clase I están substancialmente ocupadas completamente.
19. Un método según la reivindicación 16 ó 17 en
el que la célula que presenta al antígeno comprende un vector de
expresión que expresa un péptido según la reivindicación 7.
20. Un método según una cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 18 en el que la molécula de MHC Clase I es
HLA-A0201.
21. Linfocitos T citotóxicos (CTL) activados
obtenibles mediante el método según una cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 20, que reconocen selectivamente una célula
que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de
aminoácidos presentada en la reivindicación 1.
22. Linfocitos T citotóxicos (CTL) activados
según la reivindicación 21 que reconocen selectivamente una célula
maligna que expresa el CD45.
23. Un receptor de la célula T (TCR) que
reconoce una célula que expresa un polipéptido que comprende una
secuencia de aminoácidos presentada en la reivindicación 1, el TCR
es obtenible del linfocito T citotóxico (CTL) de la reivindicación
21 ó 22, o una molécula funcionalmente equivalente al TCR.
24. Un receptor de la célula T (TCR) según la
célula de la reivindicación 23 que reconoce una célula
hematopoyética maligna que expresa el CD45.
25. Un polinucleótido que codifica un receptor
de la célula T (TCR) como se define en la reivindicación 23 ó
24.
26. Un vector de expresión capaz de expresar un
receptor de la célula T (TCR) como se define en la reivindicación 23
ó 24.
27. El uso de linfocitos T citotóxicos como se
define en la reivindicación 21 ó 22 en la fabricación de un
medicamento para matar células diana en un paciente cuyas células
diana expresan un polipéptido que comprende una secuencia de
aminoácidos presentada en la reivindicación 1.
28. El uso de linfocitos T citotóxicos en la
fabricación de un medicamento para matar células diana en un
paciente cuyas células diana expresan un polipéptido que comprende
una secuencia de aminoácidos presentada en la reivindicación 1, en
el que los linfocitos T citotóxicos son producidos mediante un
método que comprende los pasos de (1) obtener los linfocitos T
citotóxicos (CTL) del paciente; y (2) introducir en dichas células
un polinucleótido que codifica un receptor de la célula T (TCR), o
una molécula funcionalmente equivalente, como se define en las
reivindicaciones 23 ó 24.
29. Un uso según la reivindicación 27 en el que
el paciente ha sido sometido a un trasplante de la célula madre
alogénica.
30. Un uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 27 a 29 en el que las células diana son células
cancerígenas.
31. Un uso según la reivindicación 30 en el que
el cáncer es una leucemia que expresa el polipéptido de CD45.
32. Uso de un CTL activado en la fabricación de
un medicamento para tratar a un paciente con un malignidad
hematopoyética, en el que el CTL activado es específico de un
péptido que enlaza al HLA de CD45 humano como se define en la
reivindicación 1 cuyo péptido está limitado por una molécula
HLA-A0201 en el paciente, y cuyo CTL activado es
alogénico (alo-restringido) con respecto al
HLA-A0201, y en el que el paciente recibe un
trasplante de la célula madre de un donante que es negativo al
HLA-A0201, en el que la célula madre no es una
célula embrionaria humana.
33. Uso de células madres de un donante que es
Negativo al HLA-A0201 en la fabricación de un
medicamento para tratar a un paciente con una malignidad
hematopoyética, en el que se administra al paciente un CTL activado
que es específico de un péptido que enlaza al HLA de CD45 humano
como se define en la reivindicación 1, cuyo péptido es limitado por
una molécula HLA-A0201 en el paciente, y en el que
el CTL activado es alogénico (alo-restringido) con
respecto al HLA-A0201, y en el que la célula madre
no es una célula embrionaria humana.
34. Un uso según la reivindicación 32 ó 33 en el
que los CTL activados son producidos por el método de la
reivindicación 16 en el que los CTL son alogénicos
(alo-restringidos) con respecto al
HLA-A0201.
35. Un uso según la reivindicación 32 ó 33 en el
que los CTL activados se seleccionan de una biblioteca de CTL.
36. Una biblioteca CTL activados en la que cada
miembro de la biblioteca (1) reconoce un péptido como se define en
la reivindicación 1 al ser presentado por un HLA registrado
particular y (2) tiene su haplotipo de HLA registrado.
37. Una biblioteca de péptidos según se describe
en la reivindicación 1 en la que para cada miembro de la biblioteca
se registra el tipo de molécula de HLA a la que se enlaza.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/GB2000/004566 WO2002044207A1 (en) | 2000-11-30 | 2000-11-30 | Immunotherapeutic methods and molecules |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2282148T3 true ES2282148T3 (es) | 2007-10-16 |
Family
ID=9886462
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES00978987T Expired - Lifetime ES2282148T3 (es) | 2000-11-30 | 2000-11-30 | Metodos y moleculas inmunoterapeuticos. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20030103946A1 (es) |
| EP (1) | EP1339745B1 (es) |
| AU (1) | AU2001216472A1 (es) |
| CA (1) | CA2436903A1 (es) |
| DE (1) | DE60032949T2 (es) |
| ES (1) | ES2282148T3 (es) |
| WO (1) | WO2002044207A1 (es) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8404454B2 (en) * | 2007-12-03 | 2013-03-26 | Isis Innovation Limited | Method for identifying a T-cell receptor protective against a disease |
| GB0917094D0 (en) | 2009-09-29 | 2009-11-11 | Ucl Biomedica Plc | T-cell receptor |
| EP3917313A4 (en) * | 2019-02-01 | 2023-02-08 | Actinium Pharmaceuticals, Inc. | ANTI-CD45 MOLECULES AND DERIVATIVES THEREOF |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4690915A (en) * | 1985-08-08 | 1987-09-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans |
| US4844893A (en) * | 1986-10-07 | 1989-07-04 | Scripps Clinic And Research Foundation | EX vivo effector cell activation for target cell killing |
| WO1992013887A1 (en) * | 1991-02-07 | 1992-08-20 | The Victoria University Of Manchester | New cell adhesion peptides |
| US6060054A (en) * | 1996-04-10 | 2000-05-09 | National Jewish Medical And Research Center | Product for T lymphocyte immunosuppression |
| DE69939742D1 (de) * | 1998-07-10 | 2008-11-27 | Fuso Pharmaceutical Ind | Antikörper gegen intrazelluläre domänen der protein tyrosin phosphatase |
| US7063854B1 (en) * | 1998-09-30 | 2006-06-20 | Corixa Corporation | Composition and methods for WTI specific immunotherapy |
| US6602510B1 (en) * | 2000-04-05 | 2003-08-05 | Epimmune Inc. | HLA class I A2 tumor associated antigen peptides and vaccine compositions |
-
2000
- 2000-11-30 ES ES00978987T patent/ES2282148T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-30 WO PCT/GB2000/004566 patent/WO2002044207A1/en active IP Right Grant
- 2000-11-30 DE DE60032949T patent/DE60032949T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-30 EP EP00978987A patent/EP1339745B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-30 CA CA002436903A patent/CA2436903A1/en not_active Abandoned
- 2000-11-30 AU AU2001216472A patent/AU2001216472A1/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-10-31 US US10/003,983 patent/US20030103946A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2436903A1 (en) | 2002-06-06 |
| US20030103946A1 (en) | 2003-06-05 |
| DE60032949T2 (de) | 2007-10-25 |
| WO2002044207A1 (en) | 2002-06-06 |
| DE60032949D1 (de) | 2007-02-22 |
| EP1339745B1 (en) | 2007-01-10 |
| EP1339745A1 (en) | 2003-09-03 |
| AU2001216472A1 (en) | 2002-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2328945T3 (es) | Epitopos inmunogenos de linfocitos t colaboradores de antigenos tumorales humanos y metodos inmunoterapeuticos utilizando dichos epitopos. | |
| ES2373907T3 (es) | Péptidos asociados a tumores unidos promiscuamente a moléculas del antígeno de leucocito humano (hla) de clase ii. | |
| US6805861B2 (en) | Immunotherapy using cytotoxic T lymphocytes (CTL) | |
| Grant et al. | The unconventional role of HLA-E: The road less traveled | |
| JP2020517308A (ja) | Ｔｃｒ及びペプチド | |
| BRPI0610841A2 (pt) | identificação de epìtopos de célula t apresentados por hla-a2, derivados da proteìna receptora de laminina imatura do antigênio oncofetal e utilizações das mesmas | |
| US10206989B2 (en) | CDCA1 epitope peptides for Th1 cells and vaccines containing the same | |
| RU2473557C2 (ru) | Вакцины на основе пептида foxp3 | |
| US20220119477A1 (en) | Tcr and peptides | |
| TW201000115A (en) | IQGAP3 epitope peptides and vaccines containing the same | |
| RU2532105C2 (ru) | Эпитопные пептиды rab6kifl/kif20a и содержащие их вакцины | |
| ES2282148T3 (es) | Metodos y moleculas inmunoterapeuticos. | |
| US20240024477A1 (en) | T cell receptors and uses thereof | |
| JP5189593B2 (ja) | 無差別ＨＥＲ−２／ＮｅｕＣＤ４Ｔ細胞エピトープ | |
| WO2023010436A1 (zh) | Tcr表达构建体以及其制备方法和用途 | |
| EP4328239A1 (en) | Immunotherapeutics based on magea1-derived epitopes | |
| JP2022542448A (ja) | Ｍｈｃクラスｉｉ分子及びその使用方法 | |
| AU767173B2 (en) | Immunotherapy using cytotoxic T lymphocytes (CTL) | |
| JPWO2005075646A1 (ja) | ストレス誘導抗アポトーシス分子（ｉｅｘ−１）由来ペプチド | |
| Barbaro et al. | A New Strategy of Tumor Vaccination Based on Mammary Adenocarcinoma Cells Transduced with the MHC Class II Transactivator CIITA. L. Mortara1, P. Castellani2, R. Meazza3, G. Tosi1, A. De | |
| Gene et al. | Immediate Early Response Gene X-1, a Stress-Inducible |