ES2262431B1 - "nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintetica y procedimiento de obtencion". - Google Patents
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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Abstract
Nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintética y procedimiento de obtención. Se reivindica una clase de compuestos de formula general 1, entre los que se encuentra el (-)-2-(3'',4''-dihidroxifenil)tetrahidrofurano-3,4-diol ((-)-2a), y su uso como agentes antioxidantes. Se reivindica un procedimiento de aislamiento de ((-)-2a) a partir de caldos de cultivo del hongo fitopatógeno Colletotrichum gloeosporioides y también un proceso de preparación mediante síntesis química de compuestos de formula general 1, incluyendo al compuesto ((+/-)-2a).
Description
Nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural
y sintética y procedimiento de obtención.
La invención pertenece al campo de los
antioxidantes de origen natural y al campo de la síntesis racémica
de compuestos antioxidantes.
Existen numerosas evidencias derivadas de
estudios epidemiológicos que indican una asociación entre una dieta
rica en frutas y vegetales y un descenso en el riesgo de
enfermedades cardiovasculares y de ciertas formas de cáncer. Se
suele asumir que los principios activos que contribuyen a estos
efectos protectivos son, principalmente, metabolitos secundarios
antioxidantes.
Las investigaciones realizadas en las últimas
décadas han permitido acumular suficientes evidencias sobre el
efecto beneficioso de las sustancias capaces de capturar radicales
libres (antioxidantes) como agentes antimutagénicos,
antiinflamatorios, antiarterioscleróticos, antidiabéticos,
antihepatotóxicos, antienvejecimiento, etc. La búsqueda de nuevos
principios antioxidantes se ha convertido, por tanto, en esencial
para el tratamiento farmacológico de condiciones patológicas
relacionadas, bien con daño oxidativo (radicales libres), bien con
alteraciones en el balance del metabolismo oxidativo, tales como
cataratas, enfermedades reumáticas, arteriosclerosis, enfermedad de
Alzheimer y otras condiciones neurodegenerativas.
En consecuencia, las aproximaciones
farmacológicas se han orientado hacia la búsqueda de fuentes con
nuevos principios antioxidantes. Mientras que las plantas
medicinales han constituido una fuente tradicional de este tipo de
compuestos, mucha menos atención se ha prestado al estudio de los
extractos de cultivos de hongos.
Recientes estudios han puesto de manifiesto la
relación que existe entre la capacidad infectiva de determinados
hongos fitopatógenos y la producción de especies activas de oxígeno
en los procesos de infección. Así mismo es conocido que el
denominado "estrés oxidativo" provoca cambios en el
crecimiento, morfología y metabolismo de los hongos. En
consecuencia, es razonable considerar que estos microorganismos, en
general, deben contar con sistemas, enzimáticos y no enzimáticos,
que les permitan regular su metabolismo oxidativo.
Por tanto, es de interés el estudio de los
caldos de cultivo de hongos fitopatógenos como fuentes de
compuestos antioxidantes.
Las especies de hongos fitopatógenos
pertenecientes al género Colletotrichum son consideradas
como unas de las más perjudiciales en la agricultura debido a la
diversidad de especies vegetales que pueden ser afectadas y la
magnitud de los daños ocasionados sobre las plantas. Diversos
estudios de los metabolitos aislados de especies de este género han
puesto de manifiesto la existencia de compuestos con potencial
actividad antioxidante, como es el caso del ácido colletótrico y
otros polifenoles. Por tanto, el estudio de nuevas cepas de hongos
de este género tiene gran interés en la búsqueda de nuevos agentes
antioxidantes.
La invención comprende compuestos con la formula
general 1, donde R puede ser H ó cadenas ó ciclos que pueden
contener átomos de carbono, hidrógeno u otros heteroátomos (figura
1). Estos incluyen al compuesto
(-)-2-(3',4'-dihidroxifenil)tetrahidrofurano-3,4-diol
((-)-2a) (de ahora en adelante denominado
(-)-DFTD), obtenido desde un cultivo del hongo
fitopatógeno Colletotrichum gloeosporioides (figura 2).
Para aislar el compuesto
(-)-DFTD ((-)2a) se puede emplear un procedimiento
que implique el cultivo en medio líquido del hongo C.
gloeosporioides, la filtración del micelio y posterior
extracción del caldo de cultivo resultante, un inicial
fraccionamiento del extracto crudo resultante mediante
cromatografia en columna, y su posterior análisis y separación
mediante cromatografia en columna y HPLC.
Para llevar a cabo la síntesis racémica de DFTD
((\pm)-2a), y de derivados del mismo con la
fórmula general 1 (figura 1), con R tal y como se ha definido
previamente, se puede emplear un procedimiento de síntesis
secuencial que implique la protección de los grupos hidroxilo del
3,4-dihidroxibenzaldehido (3), la vinilación del
producto resultante, la introducción de un grupo
prop-2-enilo mediante una
O-alilación, una reacción de metátesis de cierre de anillo
sobre la diolefina no conjugada anteriormente preparada, una
dihidroxilación estereoselectiva sobre el sistema de dihidrofurano
anteriormente preparado y reacciones de
desprotección/derivatización para dar (\pm)-DFTD
((\pm)-2a) o derivados como el tetracetato de
(\pm)-DFTD ((\pm)-2b).
Los compuestos de fórmula general 1, pueden
presentar actividad antioxidante, tal y como revela el ensayo de
(\pm)-DFTD ((\pm)-2a) frente al
radical libre
1,1-difenil-2-picrilhidrazil
radical (denominado de ahora en adelante DPPH).
Para la mejor comprensión de lo descrito en esta
memoria, se acompañan una serie de figuras que describen los
compuestos a los que se hace referencia a lo largo del texto.
Figura 1.- Compuestos de fórmula general 1,
donde R puede ser H, cadenas ó ciclos que pueden contener átomos de
carbono, hidrógeno u otros heteroátomos.
Figura 2.-
(-)-2-(3',4'-dihidroxifenil)tetrahidrofurano-3,4-diol
((-)-2a) y su tetracetato
((-)-2b).
Figura 3.- Diagrama del proceso de filtrado y
extracción de los medios de cultivo de la cepa 20122 CECT de
Colletotrichum gloeosporioides.
Figura 4.- Esquema global de síntesis de los
compuestos (\pm)-2a y
(\pm)-2b.
Figura 5.- Preparación del compuesto 4.
Figura 6.- Preparación del compuesto 5.
Figura 7.- Preparación del compuesto 6.
Figura 8.- Preparación del compuesto 7.
Figura 9.- Preparación de los compuestos 8a y
8b.
La cepa del hongo Colletotrichum
gloeosporioides, código de registro 20122 CECT, obtenida de
plantaciones canadienses de Fragaria spp. (fresas y
fresones), previamente subcultivado en medio sólido
Agar-Malta (20 g de malta, 20 g de glucosa, 1 g de
peptona y 20 g de agar en un litro de agua destilada a pH=
6.5-7) a una temperatura de
25-28ºC, es añadido troceado, directamente del medio
sólido, a un cultivo líquido estéril de 65 litros de medio Czapek
Dox (para 1 litro de medio: 50 g de glucosa, 1 g de extracto de
levadura, 5 g de KH_{2}PO_{4}, 2 g de NaNO_{3}, 0.5 g de
MgSO_{4} \cdot 7H_{2}O y 0.01 g de FeSO_{4} \cdot
7H_{2}O en 1 L de agua destilada a pH = 6.5-7),
repartido en botellas de 500 mL. La fermentación se llevó a cabo en
agitación, a 140 rpm, en presencia de luz artificial (tubos
fluorescentes tipo "daylight") y a una temperatura de
25-28ºC durante 7 días. Transcurrido el tiempo de
fermentación, el micelio fue separado del medio de cultivo por
filtración a presión reducida, usando primero un filtro de nylon de
3 mm de poro y después, tras saturación con NaCl, usando CELITA
545. El medio se extrajo con acetato de etilo y el crudo resultante
(9.30 g) tras secar el disolvente (sobre Na_{2}SO_{4} anhidro) y
evaporar el disolvente a presión reducida, fue fraccionado mediante
cromatografia de columna, empleando gel de sílice 60. De la elución
con acetato de etilo se obtuvo una fracción de 2.6 g que, por un
lado fue estudiada directamente mediante cromatografia en columna y
HPLC para dar (-)-DPTD ((-)-2a), que
por acetilación (Ac_{2}O en piridina) dio lugar al tetracetato de
(-)-DPTD ((-)-2b). Alternativamente,
la fracción anteriormente mencionada fue acetilada (Ac_{2}O en
piridina) y metilada (diazometano en Et_{2}O) antes de proceder a
la separación de sus componentes. La posterior separación de esta
fracción derivatizada, mediante HPLC permitió obtener
2-(3',4'-diacetoxifenil)-3,4-diacetoxitetrahidrofurano
((-)-2b) en cantidad suficiente para un estudio
espectroscópico completo.
Aceite transparente.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD): \delta
(ppm) 3.80 (dd, J = 2.4, 8.8 Hz, 1H, H-5b),
3.87 (dd, J = 4.2, 7.6 Hz, 1H, H-3), 4.22
(ddd, J = 2.4, 4.2, 4.6 Hz, 1H, H-4), 4.25
(dd, J= 4.6, 8.8 Hz, 1H, H-5a), 4.51 (d, J= 7.6 Hz,
1H, H-2), 6.70 (2H, H-5',
H-6'), 6.80 (d, J = 2.0 Hz,
H-2').
Aceite viscoso (cera), amarillento.
HPLC: Tiempo de retención rt = 44.66 minutos en
hexano/acetato de etilo
(7:3) con flujo de 1.1 ml/mto. en columna
analítica de gel de sílice.
[\alpha]^{25}_{D} (CHCl_{3}, c = 2
mg/mL) - 34
IR \nu_{max} (cm^{-1}): 2936 (\nu
C=C-H), 2861 (\nu
C-C-H), 1768 (\nu C=O), 1747
(\nu C=O), 1213 (\nu C-O).
EM m/z (intensidad relativa): 381 (0.5)
[M+1]^{+}, 338 (0.6), 337 (0.8), 320 (38), 278 (46), 261
(82), 219 (90), 176 (98), 137 (100).
EMAR: Observado m/z = 320.0895,
C_{16}H_{16}O_{7}
[M-CH_{3}CO_{2}H]^{+} calculado para
m/z = 320.0896
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}): \delta (ppm): 2.09 (3H, s, CH_{3} acetato en
C-4), 2.11 (3H, s, CH_{3} acetato en
C-3), 2.28 (6H, s, 2CH_{3} acetato en
C-3',4'), 3.97 (1H, dd, J = 10.3,5.6 Hz,
H-5e), 4.43 (1H, dd, J = 10.3, 5.6 Hz,
H-5d), 4.94 (1H, d, J = 7.0 Hz,
H-2c), 5.03 (1H, dd, J = 6.8, 5.2 Hz,
H-3b), 5.41 (1H, ddd, J = 5.3, 5.2,4.0 Hz,
H-4a), 7.17 (1H, d, J = 8.4 Hz, H - 5'),
7.23-727 (2H, H-2',
H-6'). La estereoquímica relativa de los centros
C-2, C-3, C-4 y
C-5 se asignó por análisis de los efectos
NOE-DIF.
^{1}H-RMN (400 MHz,
(CD_{3})_{2}CO): \delta (ppm) 2.04 (3H, s,
CH_{3} acetato en C-4), 2.09 (3H, s,
CH_{3} acetato en C-3), 2.26 (3H, s,
CH_{3} acetato en C-4'), 2.27 (3H, s,
CH_{3} acetato en C-3'), 3.95 (1H, dd, J =
10.2, 3.5 Hz, H - 5e), 4.51 (1H, dd, J = 10.2, 5.3 Hz, H - 5d),
4.93 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-2c), 5.07 (1H, dd, J =
7.4,5.3 Hz, H-3b), 5.44 (1H, ddd, J = 5.2,5.2,3.5
Hz, H-4a), 7.23 (1H, d, J = 8.3 Hz,
H-5'), 7.30 (1H, dd, J = 2.1,0.64 Hz, CH - 2'), 7.34
(1H, ddd, J = 8.3, 2.1, 0.64 Hz, H-6').
^{13}C-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}): \delta (ppm) 20.61 (2c, acetatos en
C-3',4'), 20.69 (2c, acetatos en
C-3,4), 71.08 (t, C-5 y d,
C-4), 77.16 (d, C-2), 80.35 (d,
C-3), 120.93 (d, C-5'), 123.58 (d,
C-2'), 123.83 (d, C-6'), 137.47 (s,
C-1'), 141.81 (s, C-4'), 142.18 (s,
C-3'), 168.04 (s, C=O acetato en
C-4'), 168.19 (s, C=O acetato en
C-3'), 169.84 (s, C=O acetato en
C-4), 169.95 (s, C=O acetato en
C-3)
A una disolución del compuesto
3,4-dihidroxibenzaldehído (3) (1000 mg, 7.24 mmol)
e imidazol (1971 mg, 28.96 mmol) en tetrahidrofurano seco (10 mL),
en atmósfera inerte de argón y a 0ºC, se le añade una disolución de
cloruro de t-butildimetilsililo (2250 mg, 14.5 mmol) en
tetrahidrofurano seco (10 mL). Después de 12 horas de reacción, se
añade agua y se lava con Et_{2}O (3 veces). Las fases orgánicas
se reúnen y se lavan con salmuera; a continuación, se secan sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro y se evapora el disolvente a presión
reducida. La posterior purificación por cromatografia en columna
sobre gel de sílice del crudo de reacción, utilizando como eluyente
una mezcla éter de petróleo/acetato de etilo al 5%, permitió obtener
1859 mg del compuesto 4 (70%).
Aceite amarillento.
IR (KBr) \nu_{max} (cm^{-1}): 1698 (\nu
C=O); 1592 (\nu C=C núcleo aromático); 1256 (\delta_{s}
Si-CH_{3}); 841 (\nu
Si-CH_{3}).
RMN de ^{1}H (400 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) 0.12 (s, 6H, H_{3}-5''*,
H_{3}-6''*), 0.13 (s, 6H,
H_{3}-5'''*, H_{3}-6'''*), 0.98
(s, 18H, H_{3}-2'', H_{3}-3'',
H_{3}-4'', H_{3}-2''',
H_{3}-3''', H_{3}-4'''), 6.77
(d, J = 8.2 Hz, 1H, H-5'), 7.11 (dd,
J= 1.6, 8.2 Hz, 1H, H-6'), 7.56 (d, J
= 1.6 Hz, 1H, H-2', 9.66 (s, 1H,
H-1). *Señales intercambiables.
RMN de ^{13}C (100 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) -4.15 (c, C-5''*,
C-6''*), -4.12 (c, C-5'''*,
C-6''*), 18.5 (s, C-1'''*), 18.6 (s,
C-1'''*), 25.9 (c, C-2''*,
C-3''*, C-4''*), 26.0 (c,
C-2'''*, C-3'''*,
C-4'''*), 120.6 (d, C-2'), 121.2 (d,
C-5'), 125.3 (d, C-6'), 131.8 (s,
C-1'), 148.0 (s, C-4'), 153.0 (s,
C-3'), 189.7 (d, C-1). HMBC
(selección de correlaciones): C-1'\rightarrow
H-5'; C-3' \rightarrow*
H-2', H-5'; C-4'
\rightarrow 4 H-2', H-5'. *
Señales intercambiables.
MS (E.I.) m/z (intensidad relativa): 366
[M]^{+}. (0.58); 309 (59); 253 (12); 195 (21); 193 (15);
179 (15); 73 (100).
Se disuelve el compuesto 4 (697 mg, 1.9 mmol) en
tetrahidrofurano seco (5 mL), en atmósfera inerte de argón y a 0ºC.
A continuación se adiciona bromuro de vinilmagnesio (9.5 mL, 9.5
mmol). Transcurridas 2 horas de reacción, se añaden, con cuidado,
20 mL de una disolución saturada de NH_{4}Cl; a continuación se
elimina el disolvente a presión reducida, se diluye con Et_{2}O y
se lava con salmuera. La disolución etérea obtenida tras decantar
se seca sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se evapora el disolvente a
presión reducida. La purificación del crudo de reacción mediante
cromatografia en columna sobre gel de sílice, eluyendo con una
mezcla éter de petróleo/acetato de etilo de polaridad creciente,
desde 100% hexano hasta al 5% de éter de petróleo/acetato de etilo,
permite obtener 340 mg del producto 5 (45%).
\newpage
Aceite amarillento.
IR (KBr) \nu_{max} (cm^{-1}): 3350 (\nu
O-H); 1574 (\nu C=C); 1508 (\nu C=C núcleo
aromático); 1254 (\delta_{s} Si-CH_{3}); 835,
780 (\gamma Si(CH_{3})_{3}).
RMN de ^{1}H (300.03 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) 0.18 (s, 6H, H_{3}-5''*,
H_{3}-6''*), 0.21 (s, 6H,
H_{3}-5'''*, H_{3}-6'''*), 1.03
(s, 9H, H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 1.04 (s, 9H,
H_{3}-2'''^{\dagger},
H_{3}-3'''^{\dagger},
H_{3}-4'''^{\dagger}), 1.46 (s_{a}, 1H,
OH), 4.88 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H,
H-1), 4.97 (ddd, J = 1.6, 1.6, 10.4 Hz, 1H,
H-3b), 5.21 (ddd, J = 1.6, 1.6, 17.1 Hz, 1H,
H-3a), 5.91 (ddd, J = 1.6, 1.6, 4.4 Hz, 1H,
H-2), 6.81 (dd, J = 1.7, 8.1 Hz, 1H,
H-6'), 6.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H,
H-5'), 7.07 (d, J = 1.7 Hz, 1H,
H-2').*^{\dagger}, Señales intercambiables.
RMN de ^{13}C (75.44 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) -4.00 (c, C-5''*,
C-6''*), -3.99 (c, C-5'*,
C-6'''*), 18.62 (s,
C-1''^{\dagger},), 18.64 (s,
C-1'''^{\dagger},), 26.12 (c,
C-2''^{\ddagger},
C-3''^{\ddagger},
C-4''^{\ddagger}), 26.14 (c,
C-2'''^{\ddagger},
C-3'''^{\ddagger},
C-4'''^{\ddagger}), 74.7 (d, C-1),
114.0 (t, C-3), 119.9 (d,
C-2'^{#}), 120.0 (d, C-5'^{#}),
121.3 (d, C-6'), 137.1 (s, C-1'),
141.3 (d, C-2), 146,6 (s, C-3'),
147.3 (s, C-4'). HMBC (selección de correlaciones):
C-1' \rightarrow H-1;
C-3' \rightarrow H-2'.
*^{\dagger}^{\ddagger}^{#} Señales intercambiables.
MS (E.I.) m/z (intensidad relativa): 394
[M]^{+}. (4); 337 (12); 247 (7); 205 (100); 73 (90).
En atmósfera inerte de argón y a 0ºC, se
disuelve el compuesto 5 (3576 mg, 9.1 mmol) en tetrahidrofurano
seco (50 mL). A continuación se añade
bis-(trimetilsilil)-amiduro de litio
((TMS)_{2}NLi) (1 M, 10 mL) y se agita durante 15 minutos,
antes de adicionar bromuro de alilo (1207 mg, 10 mmol). En este
momento el sistema se pone a reflujo. Tras 12 horas de reacción, se
añaden 50 mL de una disolución saturada de cloruro amónico, y se
extrae con AcOEt (2 veces). Los extractos orgánicos se reúnen, se
lavan con salmuera, se secan sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se
elimina el disolvente a presión reducida. La purificación del crudo
de reacción se realiza mediante cromatografia en columna sobre gel
de sílice, utilizando como eluyente éter de petróleo/acetato de
etilo al 3%. Así se obtienen 2500 mg de material de partida y 1158
mg del producto 6 (98%).
Aceite amarillento.
IR (KBr) \nu_{max} (cm^{-1}): 1509 (\nu
C=C núcleo aromático); 1255 (\delta_{s}
Si-CH_{3});840, 781 (\gamma
Si(CH_{3})_{3}).
RMN de ^{1}H (300.03 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) 0.17 (s, 3H, H_{3}-5''*), 0.18 (s,
3H, 0.22 (s, 3H, H_{3}-6''*), 0.21 (s, 3H,
H_{3}-5'''*), 0.22 (s, 3H,
H_{3}-6'*), 1.03 (s, 91-1,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 1.04 (s, 9H,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4'''^{\dagger}), 3.88 (m, 2H,
H-4a, H-4b), 4.64 (m, 1H,
H-1), 5.03 (ddd, J = 1.6, 1.6, 9.6 Hz, 1H,
H-3b), 5.05 (ddt, J = 1.6, 1.6, 9.4 Hz, 1H,
11-6b), 5.25 (ddd, J= 1.6, 1.6, 17.3 Hz, 1H,
H-3a), 5.30 (ddt, J= 1.6, 1.6, 17.2 Hz, 1H,
H-6a), 5.88 (m, 1H, H-5), 5.93 (m,
1H, H-2), 6.86 (dd, J = 1.6, 8.2 Hz, 111,
H-6'), 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H,
H-5'), 7.15 (d, J= 1.6 Hz,1H, H-2').
*^{\dagger} Señales intercambiables.
RMN de ^{13}C (75.44 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) -4.0 (c, C-5'',
C-6'', C-5''', C- 6'''), 18.6 (s,
C-1''*), 18.7 (s, C-1'''*), 26.09
(c, C-2''^{\dagger},
C-3''^{\dagger},
C-4''^{\dagger}), 26.14 (c,
C-2'''^{\dagger},
C-3'''^{\dagger},
C-4'''^{\dagger}), 69.1 (t, C-4),
81.9 (d, C-1), 115.3 (t, C-3), 115.8
(t, C-6), 120.2 (d, C-2'), 120.7 (d,
C-6'), 121.3 (d, C-5'), 135.1 (s, C-
1'), 135.5 (d, C-5), 139.9 (d, C-2),
146.7 (s, C-3'^{\ddagger}), 147.4 (s,
C-4'^{\ddagger}). HMBC (selección de
correlaciones): C-1' \rightarrow
H-6', H-2, H-1.
*^{\dagger}^{\ddagger} Señales intercambiables.
MS (E.L) m/z (intensidad relativa): 434
[M]^{+}. (5); 377 (20); 247 (9); 205 (92); 73 (100).
Se disuelve el compuesto 6 (79 mg, 0.2 mmol) en
5 mL de CH_{2}Cl_{2} seco y desgasificado con argón. A
continuación, en atmósfera de argón, se añade el catalizador de
Grubbs^{1} .(30
mg, 0.04 mmol) y se pone el sistema en agitación y a reflujo.
Transcurridas dos horas de reacción, se evapora el disolvente a
presión reducida e inmediatamente se realiza una cromatografia en
columna de la mezcla de reacción sobre gel de sílice, eluyendo con
una mezcla éter de petróleo/acetato de etilo al 2%; de este modo se
obtienen 76 mg del compuesto 7 (99.8%).
Aceite amarillento.
IR (KBr) \nu_{max} (cm^{-1}): 1509 (\nu
C=C núcleo aromático); 1255 (\delta_{s}
Si-CH_{3}); 840, 781 (\gamma
Si(CH_{3})_{3}).
\newpage
RMN de ^{1}H (300 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) 0.17 (s, 6H, H_{3}-5''*,
H_{3}-6''*), 0.20 (s, 3H,
H_{3}-5'''*), 0.21 (s, 3H,
H_{3}-6'''*), 1.03 (s, 9H,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 1.04 (s, 9H,
H_{3}-2'''^{\dagger},
H_{3}-3'''^{\dagger},
H_{3}-4'''^{\dagger}), 4.53 (dddd, J =
1.6, 2.4, 4.0, 12.8 Hz, 1H, H-4a^{\ddagger}),
4.64 (dddd, J = 1.6, 2.4, 6.0, 12.8 Hz, 1H,
H-4b^{\ddagger}), 5.50 (m, 1H,
H-2), 5.58 (m, 1H, H-3), 5.71 (m,
1H, H-1), 6.79 (dd, J = 2.2, 8.2 Hz, 1H,
H-6'), 6.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H,
H-5'), 7.04 (d, J = 2.2 Hz, 1H,
H-2'). *^{\dagger}^{\ddagger} Señales
intercambiables.
RMN de ^{13}C (75 MHz, C_{6}D_{6}):
\delta (ppm) -4.02 (c, C-5''*,
C-6''*), -3.95 (c, C-5'''*,
C-6'''*), 18.61 (s,
C-1''^{\dagger}), 18.64 (s,
C-1'''^{\dagger}), 26.12 (c,
C-2''^{\ddagger},
C-3''^{\ddagger},
C-4''^{\ddagger}), 26.16 (c,
C-2'''^{\ddagger},
C-3'''^{\ddagger},
C-4'''^{\ddagger}), 75.6 (t, C-5),
87.7 (d, C-2), 119.95 (d, C-2'),
120.03 (d, C-6'), 121.4 (d, C-5'),
126.6 (d, C-3), 130.6 (d, C-4),
136.6 (s, C-1'), 146.7 (s, C-4'),
147.3 (s, C-3'). HMBC (selección de correlaciones):
C-1' \rightarrow H-5',
H-2', H-4a^{\ddagger} o
H-4b^{\ddagger}; C-4'
\rightarrow H-5', H-6';
C-3' \rightarrow H-2'.
*^{\dagger}^{\ddagger} Señales intercambiables.
MS (E.I.) m/z (intensidad relativa): 406
[M]^{+}. (1); 217 (95); 115 (6); 73 (100).
A temperatura ambiente, se disuelve el compuesto
7 (44 mg, 0.11 mmol) en 2 mL de ^{t}BuOH y se añaden
N-óxido de trimetilamina (17 mg, 0.15 mmol), piridina (0.01
mL) y agua (1.5 mL). A continuación se adiciona una disolución de
OsO_{4} 2.5% en ^{t}BuOH (0.13 mL, 0.01 mmol) y el sistema se
pone a reflujo. Tras 24 horas de reacción, se añaden 20 mL de una
disolución de bisulfito sódico (20% w/w) y se agita durante 1 hora.
Después se evapora el ^{t}BuOH a presión reducida, se extrae la
fase acuosa con Et_{2}O (tres veces); se reúnen las fases
orgánicas, se lavan con salmuera, se secan sobre Na_{2}SO_{4}
anhidro y el disolvente se evapora a presión reducida. La
purificación del crudo de reacción se realiza por cromatografia en
columna sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla éter de
petróleo/acetato de etilo al 20%; de este modo se obtienen 23 mg de
una mezcla de dioles, que se purifican posteriormente mediante HPLC
(columna analítica), utilizando como eluyente una mezcla de éter de
petróleo/acetato de etilo al 15%. Finalmente se obtiene:
- \bullet
- (2S(R),3S(R),4S(R))-2-[(3',4'-bis-(tert-butil-dimetil-silaniloxi)-fenil)]tetrahidrof irano-3,4-diol (8a) (2.3 mg, 5%).
- \bullet
- (2R(S),3S(R),4S(R))-2-[(3',4'-bis-(tert-butil-dimetil-silaniloxi)-fenil)]tetrahidrofurano-3,4-diol (8b) (21 mg, rto. 43%).
Aceite transparente.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD): \delta
(ppm) 0.18 (s, 3H, H_{3}-5''*), 0.19 (s, 3H,
H_{3}-6''*), 0.20 (s, 6H,
H_{3}-5'''*, H_{3}-6'''*), 0.98
(s, 9H, H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 0.99 (s, 9H,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 1.28 (s_{a}, 2H, 2 OH),
3.82 (dd, J = 7.0, 8.4 Hz, 1H,
H-5a^{\ddagger}), 3.99 (dd, J = 7.0, 8.4
Hz, 1H, H-5b^{\ddagger}), 4.09 (m, 1H,
H-3), 4.46 (ddd, J = 4.8, 7.0, 7.0 Hz, 1H,
H-4), 4.78 (d, J = 3.6 Hz, 1H,
H-2), 6.81 (2H, H-5',
H-6'), 6.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H,
H-2').*^{\dagger}^{\ddagger} Señales
intercambiables.
Aceite transparente.
IR (KBr) \nu_{max} (cm^{-1}): 3390 (\nu
O-H); 1513 (\nu C=C núcleo aromático); 1255
(\delta_{s} Si-CH_{3}); 840, 781 (\gamma
Si(CH_{3})_{3}).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD): \delta
(ppm) 0.18 (s, 6H, H_{3}-5''*,
H_{3}-6''*), 0.19 (s, 3H,
H_{3}-5'''*), 0.20 (s, 3H,
H_{3}-6'''*), 0.98 (s, 9H,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''^{\dagger}), 0.99 (s, 9H,
H_{3}-2''^{\dagger},
H_{3}-3''^{\dagger},
H_{3}-4''), 3.82 (m, 1H,
H-5a^{\ddagger}), 3.85 (m, 1H,
H-3), 4.21 (m, 1H, H-4), 4.25 (m,
1H, H-5b^{\ddagger}), 4.54 (d, J = 7.6 Hz,
1H, H-2), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H,
H-5'), 6.86 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H,
H-6'), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H,
H-2').*^{\dagger}^{\ddagger} Señales
intercambiables.
RMN de ^{13}C (100 MHz, CD_{3}OD): \delta
(ppm) -3.89 (c, C-5''*, C-6''*),
-3.83 (c, C-5'''*), -3.79 (c,
C-6'''*), 19.3 (s,
C-1''^{\dagger}), 19.4 (s,
C-1'''^{\dagger}), 26.47 (c,
C-2''^{\ddagger},
C-3''^{\ddagger},
C-4''^{\ddagger}), 26.51 (c,
C-2'''^{\ddagger},
C-3'''^{\ddagger},
C-4'''^{\ddagger}), 72.4 (d, C-4),
74.4 (t, C-5), 79.9 (d, C-3), 83.9
(d, C-2), 120.2 (d, C-2'), 120.4 (d,
C-6'), 122.1 (d, C-5'), 135.5 (s,
C-1'), 147.6 (s, C-3'^{#}), 148.0
(s, C-4'^{#}). HMBC (selección de correlaciones):
C-1' \rightarrow H-3,
H-6'. *^{\dagger}^{\ddagger}^{#} Señales
intercambiables.
En atmósfera inerte de argón, se disuelve el
compuesto 8a (9.2 mg, 0.02 mmol) en 2.5 mL de tetrahidrofurano
seco; a continuación se añade fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF)
en THF (1 M, 0.09 mL, 0.09 mmol)) y el sistema se pone en agitación
a temperatura ambiente. Tras 4 horas de reacción, se añade agua y se
extrae con porciones de 50 mL de acetato de etilo (tres veces). Las
fracciones orgánicas se reúnen y se secan sobre Na_{2}SO_{4}
anhidro; finalmente, el disolvente se evapora a presión reducida. La
purificación del crudo de reacción mediante cromatografia en
columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente una mezcla
éter de petróleo/acetona al 50%, permite obtener 2 mg del compuesto
(\pm)-2a (47%).
En un vial de 10 mL se disuelve el compuesto
((\pm)-2a) (16 mg, 0.08 mmol) en piridina seca (1
mL) y a continuación se añaden 24 equivalentes de anhídrido acético
(189 mg, 1.85 mmol), dejando la mezcla en agitación. Tras 24 h de
reacción se añaden 50 mL de AcOEt y la disolución resultante se
lava con 50 mL de HCL 2 N (2 veces) y a continuación con una
disolución diluída de CuSO_{4} (2 veces). Finalmente, se lava con
salmuera, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se evapora el
disolvente a presión reducida. El crudo de reacción se purifica por
cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando como
eluyente una mezcla éter de petróleo/acetato de etilo al 20%. De
este modo obtenemos 1.6 mg del compuesto
((\pm)-2b) (5%); los datos espectroscópicos de
este compuesto concuerdan con los del producto natural acetilado
aislado de la cepa del fitopatógeno Colletotrichum
gloeosporioides 20122.
Se prepara una disolución del radical
2,2-difenil-1-picril
hidrazilo (DPPH) en metanol (3 mg en 100 ml). A continuación, sobre
una placa de cromatografia en capa fina de gel de sílice, se añaden
1 \muL de una disolución de 1 mg de DFTD en 100 \muL de metanol
y un control de 1 \muL de MeOH, y se deja evaporar el disolvente.
Seguidamente, se rocía la placa con la disolución anterior. Se deja
reposar la placa, que adopta una coloración violeta, salvo en la
zona donde se había colocado la alícuota de DFTD, donde se observa
la rápida desaparición del color violeta, hasta que sólo se aprecia
una zona de aproximadamente 1 cm de diámetro, en la que ha
desaparecido por completo el color violeta. Esta pérdida de
coloración es persistente con el tiempo (al menos 12 h).
Claims (5)
1. Compuestos de fórmula general 1 (figura 1),
donde R puede ser H, cadenas ó ciclos que pueden contener átomos de
carbono, hidrógeno u otros heteroátomos.
2. Un compuesto nuevo,
(-)-2-(3',4'-dihidroxifenil)tetrahidrofurano-3,4-diol
((-)-2a), y su tetraacetato
((-)-2b), según reivindicación 1, donde R es
hidrógeno ((-) 2a) ó acetilo ((-) 2b).
3. Uso de compuestos de fórmula 1, según
reivindicación 1, donde R puede ser H, cadenas ó ciclos que pueden
contener átomos de carbono, hidrógeno u otros heteroátomos, como
antioxidantes.
4. Un proceso para el aislamiento de un
compuesto nuevo, denominado
(-)-2-(3',4'-dihidroxifenil)tetrahidrofurano-3,4-diol
((-)-2a) y de su tetracetato
((-)-2b)), a partir del hongo fitopatógeno
Colletotrichum gloeosporioides, que consta de los siguientes
pasos:
- a)
- El cultivo en medio líquido del hongo C. gloeosporioides.
- b)
- La filtración del micelio y posterior extracción del caldo de cultivo resultante del apartado a).
- c)
- Una separación inicial del extracto crudo obtenido del apartado b), mediante fraccionamiento por cromatografia en columna con gel de sílice como fase estacionaria y empleando como eluyentes disolventes de polaridad creciente (éter de petróleo, diclorometano, acetato de etilo y metanol).
- d)
- La derivatización (metilación y acetilación) de las fracciones procedentes del tratamiento con acetato de etilo según el apartado c).
- e)
- El análisis y separación de las fracciones obtenidas según el apartado c) y de las derivatizadas según el apartado d) mediante cromatografia en columna y HPLC.
5. Un procedimiento para preparar compuestos de
formula general 1 (figura 1), según reivindicación 1, incluidos los
compuestos ((+/-)2a) y ((+/-)2b), que implica un procedimiento de
síntesis secuencial que consta de los siguientes pasos:
- a)
- La protección de los grupos hidroxilo del 3,4-dihidroxibenzaldehido (3).
- b)
- La vinilación del producto resultante del apartado a).
- c)
- La introducción de un grupo prop-2-enilo mediante una O-alilación sobre el producto resultante del apartado b).
- d)
- Una reacción de metátesis de cierre de anillo sobre la diolefina no conjugada anteriormente preparada según el apartado c).
- e)
- Una dihidroxilación estereoselectiva sobre el sistema de dihidrofurano anteriormente preparado según el apartado d)
- f)
- Reacciones de desprotección/derivatización para dar compuestos como (\pm)-DFTD ((\pm)-2a) o derivados como el tetracetato de DFTD ((\pm)-2b).
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200501121A ES2262431B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | "nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintetica y procedimiento de obtencion". |
PCT/ES2006/000222 WO2006120266A1 (es) | 2005-05-10 | 2006-05-09 | Nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintética y procedimiento de obtención |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200501121A ES2262431B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | "nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintetica y procedimiento de obtencion". |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2262431A1 ES2262431A1 (es) | 2006-11-16 |
ES2262431B1 true ES2262431B1 (es) | 2007-08-16 |
Family
ID=37396203
Family Applications (1)
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---|---|---|---|
ES200501121A Active ES2262431B1 (es) | 2005-05-10 | 2005-05-10 | "nuevos antioxidantes obtenidos de fuente natural y sintetica y procedimiento de obtencion". |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
ES (1) | ES2262431B1 (es) |
WO (1) | WO2006120266A1 (es) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2193874B1 (es) * | 2002-04-03 | 2005-03-01 | Puleva Biotech, S.A. | Compuestos naturales y derivados de estos para la prevencion y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, hepaticas, renales y cosmeticas. |
-
2005
- 2005-05-10 ES ES200501121A patent/ES2262431B1/es active Active
-
2006
- 2006-05-09 WO PCT/ES2006/000222 patent/WO2006120266A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PICCINELLI, A. L. and col. New lignans from the roots of Valeriana prionophylla with antioxidative and vasorelaxant activities. Journal of Natural Products. 2004, Vol 67, Nº 7, pages 1135-1140, ISSN 0163-3864. Resumen; página 1136, figura 1, compuestos 1-5. \\ A WO 03082798 A1 (PULEVA BIOTECH S.A.) 09.10.2003. Page 2, lines 18-20; page 4, lines 1-7; examples 5-8. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2262431A1 (es) | 2006-11-16 |
WO2006120266A1 (es) | 2006-11-16 |
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