ES2258793T5 - Moduladores de la regeneracion tisular. - Google Patents

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Abstract

SE EXPONEN PROTEINAS REGULADAS HACIA ARRIBA EN TEJIDOS LESIONADOS O EN REGENERACION, ASI COMO EL DNA QUE LAS CODIFICA, AL MISMO TIEMPO QUE COMPOSICIONES TERAPEUTICAS Y PROCEDIMIENTOS DE TRATAMIENTO QUE INCLUYEN ESTOS COMPUESTOS.

Description

Moduladores de la regeneración tisular.
Campo de la invención
La presente invención describe las proteínas que son sobrereguladas en lesiones o en regeneración de tejidos, y el ADN que codifica estas proteínas. Adicionalmente, la invención describe composiciones terapéuticas y métodos del tratamiento incluyendo estas proteínas.
Antecedentes de la invención
Una remodelación dinámica de la arquitectura del tejido se presenta durante el desarrollo y durante la reparación del tejido después de una lesión. Para estudiar este proceso, hemos fijado la atención en un modelo de lesión renal causada por una lesión isquémica en la perfusión.
El riñón es capaz de reparar una lesión al epitelio del túbulo proximal a través de una serie compleja de eventos que involucran muerte celular, proliferación de células túbulo epiteliales proximales supervivientes, formación de epitelio regenerativo escasamente diferenciado sobre la membrana basal desnuda, y la diferenciación del epitelio regenerativo para formar células túbulo epiteliales proximales completamente funcionales (Wallin et al., Lab. Invest. 66: 474-484, 1992; Witzgall et al., Mol. Cell. Biol. 13: 1933-1942, 1994; Ichimura et al., Am. J. Physiol. 269: F653-662, 1995; Thadhani et al., N. Engl. J. Med. 334: 1448-1460, 1996). Factores de crecimiento tales como IGF, EGF y HGF han sido implicados en éste proceso de reparación, así como la molécula de adhesión de la célula endotelial ICAM- 1. Sin embargo, los mecanismos mediante los cuales las células epiteliales tubulares se restauran no se conocen todavía.
Para identificar las moléculas implicadas en el proceso de lesión y reparación del epitelio tubular, analizamos la diferencia en las poblaciones de mARN entre lesión/regeneración y riñones normales empleando un análisis de diferencia representacional (RDA). RDA es un método PCR-basado en la sustracción la cual produce un tejido objetivo o fragmentos de cADN de células específicas mediante sustracción repetitiva y amplificación (Hubank and Schutz, Nucl. Acids Res. 22: 5640-5648, 1994).
WO 96/04376 revela una proteína receptora del virus de Hepatitis A aislada del mono verde africano. En 1996, sus inventores publicaron un abstract donde se relacionaba la caracterización de una proteína humana conocida como un homólogo humano de esta proteína de mono verde africano, ver Sociedad Americana de Virología, 15ta Reunión Anual (1996), Programa Científico y Abstract, página 178, abstract P16-8.
Resumen de la invención
La invención generalmente suministra moléculas renales relacionadas con la lesión (cada una de las cuales se llamará de ahora en adelante un "KIM") las cuales son sobrerreguladas en tejido renal después de una lesión renal. Las proteínas KIM y los péptidos de la invención, y también sus agonistas y antagonistas, y sus correspondientes son útiles en una variedad de intervenciones terapéuticas.
La invención suministra una molécula de ADN purificada y aislada que tiene una secuencia nucleótida publicada en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6. Estas moléculas de ADN pueden ser recombinantes, y pueden ser ligadas operativamente a una secuencia de control de expresión.
La invención además suministra un vector que comprende una molécula de ADN purificada y aislada que tiene una secuencia de nucleótidos expresada en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6, o una de las otras moléculas de ADN definidas arriba. Este vector puede ser un plásmido biológicamente funcional o un vector de ADN viral. Una realización de la invención suministra una célula huésped procariótica o eucariótica transformada o transfectada mediante un vector que comprende una molécula de ADN de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6. En otra realización de la invención, se provee un proceso para la producción de un producto polipéptido KIM codificado mediante una molécula de ADN como se describe arriba; el proceso involucra el cultivo, bajo condiciones adecuadas de cultivo, de las células huésped procarióticas o eucarióticas transformadas o transfectadas con la molécula de ADN de manera que permite la expresión de la molécula de ADN, y la recuperación del producto polipéptido de dicha expresión.
Una proteína KIM humana purificada y aislada sustancialmente libre de otras proteínas humanas está específicamente dentro de la invención, como es un proceso para la producción de un producto de polipéptidos que tiene parte de o toda la conformación estructural primaria y la actividad biológica de una proteína KIM. Las proteínas KIM de la invención pueden tener una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, o SEQ ID NO: 7, o una proteína purificada y aislada codificada mediante el ADN de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6. Estas proteínas pueden suministrarse sustancialmente libres de otras proteínas humanas. La invención además incluye variantes solubles de estas proteínas o proteínas de fusión. Las proteínas de fusión KIM de la invención pueden comprender una inmunoglobulina, una toxina, un compuesto analizable por imágenes o un radionucleido.
La invención también suministra un anticuerpo monoclonal específico para las proteínas KIM descritas arriba. El anticuerpo anti-KIM puede estar asociado con una toxina, un compuesto analizable por imágenes o radionucleido. Además enseña una línea celular hibridoma la cual produce un anticuerpo específico.
Las composiciones farmacéuticas también están dentro del alcance de la invención. Una composición farmacéutica de la invención puede comprender una cantidad efectiva terapéuticamente de una proteína KIM o un anticuerpo anti-KIM de la invención, junto con un vehículo aceptable farmacológica mente.
Las posiciones diagnósticas están dentro de la invención, tales como composiciones adecuadas para valorar la presencia o la resolución de lesiones renales mediante la medida de la concentración de KIM en la orina, suero, o sedimentos de orina de pacientes que padecen o están en riesgo de desarrollar enfermedades renales.
Las composiciones de la invención incluyen composiciones apropiadas para el tratamiento de pacientes, que contienen cantidades de KIM terapéuticamente efectivas, variantes de KIM, análogos de KIM, proteínas de fusión de KIM, agonistas de KIM, y anticuerpos para KIM o para ligandos KIM. Otros compuestos terapéuticos de la invención incluyen ligandos KIM, anticuerpos anti-KIM, y proteínas de fusión de ligandos KIM. Estos compuestos pueden ser útiles en métodos terapéuticos ya sean respuestas celulares estimuladas o inhibidas que dependen de la función KIM.
Adicionalmente los métodos de la invención inhiben el crecimiento de células tumorales con expresión de KIM por el contacto de las células con una proteína de fusión de un ligando KIM y ya sea una toxina o radionucleido, o con un anticuerpo anti-KIM conjugado a una toxina o a un radionucleido. Asímismo, el crecimiento de células tumorales que expresan un ligando KIM puede ser inhibido mediante el contacto de las células con una proteína de fusión de un KIM y ya sea una toxina o radionucleido, o con un anticuerpo ligando anti-KIM conjugado a una toxina o a un radionucleido.
La invención también abarca composiciones adecuadas para terapia génicas. Estas incluyen composiciones apropiadas para el tratamiento de un sujeto con un trastorno renal, para promover el crecimiento de nuevo tejido en un sujeto y para promover la supervivencia de tejido dañado en un sujeto, que comprende un vector el cual incluye ADN que comprende la secuencia del nucleótido de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6.
Los compuestos de la invención también son útiles para tejidos similares, tanto in vitro como in vivo. Un método semejante involucra un compuesto analizable por imágenes que apunta a una célula que expresa una proteína de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 o SEQ ID NO: 7, que comprende el contacto de la célula con ya sea un anticuerpo monoclonal de la invención o una proteína de fusión que comprende una proteína como se describió anteriormente, fusionada a un compuesto analizable por imágenes. Para métodos in vivo, la célula está dentro de un sujeto, y la proteína o el anticuerpo monoclonal es administrada al sujeto.
La invención también incluye composiciones apropiadas para métodos de diagnóstico, tales como un método de identificación de lesiones o regeneración de células renales en un sujeto, que comprende la comparación del nivel de expresión de ya sea SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6 en células renales del sujeto para un control del nivel de expresión de la secuencia en células renales control. Otro método de la invención incluye la identificación de sobrerregulación de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6 en células que comprenden el contacto de las células con una sonda antisentido y midiendo la hibridización del ARN dentro de la célula.
Otra realización de los métodos de diagnóstico de la invención incluye la valoración de la presencia o concentración de una molécula de la invención ya sea en orina, suero, u otros fluidos del cuerpo, o en sedimentos de orina o muestras de tejido. La medida de la molécula lesionada-relacionada puede ser correlacionada con la presencia, extensión o curso de un proceso patológico. Esta correlación también puede ser empleada para asegurar la eficiencia de un régimen terapéutico.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1 es la secuencia de nucleótido de cADN 3-2 del clon de rata, con un marco de lectura de proteína supuesto de 615 a 1535.
Figura 2 es una lista de la secuencia de cADN 1-7 del clon de rata, con un marco de lectura de proteína supuesto de 145. a 1065.
Figura 3 es una lista de la secuencia de cADN 4-7 del clon de rata, con un marco de lectura de proteína supuesto de 107 a 1822.
Figura 4 es una lista del cADN y de secuencias de aminoácidos deducida de clones humanos HI3-10-85, con un marco de lectura de proteína supuesto de 1 a 1002. La línea superior de la lista es la secuencia de cADN (SEQ ID NO: 6), y la línea inferior es la secuencia de aminoácidos deducidas (SEQ ID NO: 7).
Figura 5 es una comparación del mejor ajuste de la secuencia nucleótida del clon humano HI3-10-85 con el clon de rata 3-2.
Descripción detallada de la invención
Nosotros identificamos los genes KIM por el análisis de las diferencias en la expresión del mARN entre riñones regenerados y riñones normales empleando el análisis diferencial representativo (RDA). El RDA es un método basado en PCR por sustracción que produce un tejido objetivo o fragmentos de cADN célula-específica mediante sustracción repetitiva y amplificación. La representación del cADN a partir del ARN del riñón postisquémico de rata adulta después de 48 horas, se sustrae con la muestra del riñón normal de rata adulta (operada en falso). En este procedimiento, las secuencias que son comunes a las dos muestras de riñón postisquémico y normal se extraen, dejando aquellas secuencias que se expresan significativamente tan sólo en tejido de riñón lesionado. Tales genes codifican proteínas que pueden ser benéficas terapéuticamente para trastornos renales o implicarse en los procesos de lesiones. Varios clones han sido obtenidos, secuenciados y caracterizados. Luego los clones son investigados por su prototipo de expresión durante la restauración del riñón, desarrollo y distribución del tejido mediante un análisis Northern e hibridización de ARN in situ.
Números de Identificación de la Secuencia
A las secuencias de nucleótido y aminoácido referidas en la especificación se les dio los siguientes números de identificación de secuencia:
SEQ ID NO: 1 - secuencia de nucleótido del inserto de cADN 3-2 de rata
SEQ ID NO: 2 - secuencia de nucleótido del inserto de cADN 1-7 de rata
SEQ ID NO: 3 - secuencia de aminoácido de KIM- 1 de rata, codificado por cADN 3-2 y 1-7 de rata
SEQ ID NO: 4 - secuencia de nucleótido del inserto de cADN 4-7 de rata
SEQ ID NO: 5 - secuencia de aminoácido codificado por inserto cADN 4-7
SEQ ID NO: 6 - secuencia de nucleótido de cADN humano clon H13-10-85
SEQ ID NO: 7 - secuencia de aminoácido codificado por cADN humano clon H13-10-85
Definiciones de términos
Una "proteína KIM", en la presente utilizada como sinónimo de "KIM", es una proteína codificada por mARN que es selectivamente sobrerregulada que le sigue a la lesión de un riñón. Un grupo de proteínas KIM de interés incluyen aquellas codificadas por mARN que es selectivamente sobrerreguladas a cualquier tiempo dentro de una semana siguiendo cualquier agresión la cual resulta en lesión del tejido renal. Ejemplos del tiempo al cual tal sobrerregulación podría ser identificada, incluyen 10 horas, 24 horas, 48 horas o 96 horas tras una agresión. Ejemplos de tipos de agresiones incluyen aquellos que resultan en isquemia, tóxica u otros tipos de lesiones.
Un "agonista KIM" es una molécula que puede provocar específicamente una respuesta celular normalmente provocada por la interacción de KIM con un ligando KIM. Un agonista KIM puede ser una variante KIM, o un anticuerpo específico a KIM, o una forma soluble del ligando KIM.
Un "antagonista KIM" es una molécula que puede asociarse específicamente con un ligando KIM o KIM, por consiguiente bloqueando o de otra manera inhibiendo el enlace KIM al ligando KIM. El antagonista que une los bloques o inhibe la respuesta celular que de otra manera podría ser provocada por la unión del ligando KIM con el KIM o con un agonista KIM. Ejemplos de antagonistas KIM incluyen ciertas variantes KIM, proteínas de fusión KIM y anticuerpos específicos a un ligando KIM o un KIM.
Un "ligando KIM" es cualquier molécula que se une específica y no-covalentemente a una proteína KIM. Tal ligando puede ser una proteína, un péptido, un esteroide, un anticuerpo, un derivado de aminoácido, u otro tipo de molécula, en cualquier forma, incluyendo una que se produce naturalmente, la producida recombinantemente, o una sintética. Un ligando KIM puede ser de cualquier forma, incluyendo soluble, unido a una membrana, o parte de un constructo de fusión con inmunoglobulina, ácido graso, u otras fracciones. El ligando KIM puede ser una integrina. Un ligando KIM unido a una membrana puede actuar como receptor el cual, cuando se une o se asocia con un KIM, desencadena una respuesta celular. En algunas interacciones, KIM puede asociarse con más de un ligando KIM individual, o puede asociarse con un ligando KIM como parte de un complejo con una o más moléculas o cofactores. En una situación en donde los dos, el KIM y el ligando KIM están unidos a las membranas celulares, el KIM puede asociarse y reaccionar con el ligando KIM el cual está unido a la misma célula que el KIM, o ésta puede asociarse y reaccionar con el ligando KIM al estar unida con una segunda célula. Donde la unión de KIM se da entre moléculas unidas a diferentes células, las dos células pueden ser iguales o diferentes con respecto al tipo celular o el origen, el fenotipo o la condición metabólica, o el tipo o grado de la respuesta celular (por ejemplo, crecimiento, diferenciación o apoptosis) a determinados estímulos. "Unión KIM" se refiere al contacto y unión del KIM con el ligando
KIM.
Por "alineación de secuencias" se entiende la posición de una secuencia, ya sea nucleótido o aminoácido, con la de otra, para permitir una comparación de la secuencia o porción relevante de uno con relación al otro. Un ejemplo de un método de este procedimiento está dado en Needleman et al. (J. Mol. Biol. 48: 443-453, 1970). El método puede ser implementado convenientemente por programas computarizados como el programa Align (ADNstar, Inc.). Como podría ser entendido por especialistas en el arte, secuencias homólogas o funcionalmente equivalentes incluyen disposiciones funcionalmente equivalentes de los residuos de cisteina dentro de los esqueletos conservados de cisteina, incluyendo inserciones de aminoácidos o supresiones que alteran la disposición lineal de estas cisteínas, pero no alteran sus relaciones en el plegado estructural de la proteína. Por consiguiente, fisuras internas e inserciones de aminoácidos en la secuencia escogida son ignoradas con el fin de calcular el nivel de identidad de la secuencia de aminoácidos entre la secuencia aspirante y la secuencia de referencia. Una característica frecuentemente empleada para establecer la homologación de proteínas es la similitud del número y la localización de los residuos de cisteina entre una proteína y otra.
"ADN antisentido" se refiere a la secuencia del ADN cromosómico que es transcrita.
Una "sonda antisentido" es una sonda que comprende al menos una parte del ADN antisentido para una parte de interés de ácido nucleico.
Por "donación" se entiende el uso de técnicas de recombinación in vitro para insertar un gen particular u otra secuencia de ADN dentro de una molécula vector. Con el fin de clonar exitosamente un gen deseado, es necesario emplear métodos para la generación de fragmentos de ADN, para acoplar los fragmentos a las moléculas vector, para introducir la molécula ADN mezclada dentro de una célula huésped en la cual se puede replicar, y para seleccionar el clon que tiene el gen diana entre las células huésped receptoras.
Por "cADN" se entiende ADN complementario o ADN copia producido a partir de un patrón de ARN por la acción de la polimerasa ADN (transcriptaza reversa) ARN-dependiente. De esa manera un "clon cADN" significa una secuencia doble de ADN complementario a una molécula de ARN de interés, trasportada en un vector donado.
Por "biblioteca de cADN" se entiende una colección de moléculas de ADN recombinante que contienen insertos de cADN que comprenden juntos una representación de las moléculas mARN presentes en un organismo entero o tejido, dependiendo de la fuente de los patrones de ARN. Una biblioteca semejante de cADN puede ser preparada por métodos conocidos por expertos, y descritos, por ejemplo, en Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, supra. Generalmente, el ARN primero es aislado de las células de un organismo de cuyo genoma se desea clonar un gen particular. Para los propósitos de la presente invención se prefieren las líneas celulares de mamíferos, particularmente humanos. Alternativamente, el ARN puede ser aislado de una célula tumoral, derivada de un tumor animal, y preferiblemente de un tumor humano. Así, una biblioteca puede ser preparada, por ejemplo, a partir de un tumor adrenal humano, pero cualquier tumor puede ser empleado.
Tal y como es usado en el presente documento, el término "polimorfismo de ADN" se refiere a la condición en la cual dos o más secuencias de nucleótidos pueden existir en un punto particular en el ADN.
"Vector de Expresión" incluye vectores que son capaces de expresar secuencias de ADN contenidas en ellos, es decir, las secuencias de codificación están ligadas operativamente a otras secuencias capaces de efectuar su expresión. Se sobreentiende, aunque no siempre se indica explícitamente, que esos vectores de expresión podrían ser replicables en organismos huéspedes ya sea como episomas o como una parte integral del ADN del cromosoma. Un elemento útil, pero no necesario, de un vector de expresión efectivo es una secuencia de codificación marcadora, la cual es una secuencia que codifica una proteína que resulta en una propiedad fenotípica de las células (tal como resistencia a la tetraciclina) que contienen la proteína que permite que dichas células sean fácilmente identificadas. En suma, el "vector de expresión" recibe una definición funcional, y cualquier secuencia de ADN que es capaz de efectuar la expresión de un contenido específico del código de ADN se incluye en este término, como se aplica a la secuencia específica. Como en la actualidad, tales vectores están frecuentemente en la forma de plásmidos, así "plásmido" y "vector de expresión" son generalmente usados intercambiablemente. Sin embargo, en la invención se intentó incluir otras formas tales de vectores de expresión que prestan funciones equivalentes y que pueden, de vez en cuando hacerse conocidas en el arte.
Por "derivado funcional" se entienden los "fragmentos", "variantes", "análogos", o "derivados químicos" de una molécula. Un "fragmento" de una molécula, tal como cualquiera de los antígenos de la presente invención se utiliza para referirse a cualquier subconjunto de polipéptidos de la molécula. Una "variante" de tales moléculas se utiliza para referirse a una molécula presente sustancialmente similar a ya sea la molécula completa, o a un fragmento de ésta. Un "análogo" de una molécula se utiliza para referirse a una molécula no-natural sustancialmente similar ya sea a la molécula completa o a un fragmento de ésta.
El término "gen" significa una secuencia de polinucleótido que codifica un péptido.
Por "homogéneo" se entiende, al hacer referencia a un péptido o a una secuencia de ADN, que la estructura molecular primaria (es decir, la secuencia de aminoácidos o nucleótidos) de sustancialmente todas las moléculas presentes en la composición bajo consideración es idéntica.
"Aislada" se refiere a una proteína de la presente invención, o cualquier gen que codifica a cualquier proteína, la cual esencialmente libre de otras proteínas o genes, respectivamente, o de otros contaminantes con los que podrían encontrarse normalmente en la naturaleza, y como tales existen en una forma no encontrada en la naturaleza.
El término "marcador" se refiere a una fracción molecular capaz de detectar incluyendo, a modo de ejemplo, sin limitación, isótopos radioactivos, enzimas, agentes luminescentes y colorantes.
El término "sonda" se refiere a un ligando de cualidades conocidas capaces de unir selectivamente a un antiligando diana. Como se aplica a ácidos nucleicos, el término "sonda" se refiere a una hebra de ácido nucleico que tiene una secuencia base complementaria a una hebra diana.
"Células huésped recombinantes" se refiere a células que han sido transformadas con vectores construidos empleando técnicas de ADN recombinante. Como se define en la presente, el anticuerpo o su modificación que se produce mediante una célula huésped recombinante ocurre en virtud de su transformación, y no en cantidades tan pequeñas, o más comúnmente, en cantidades menos que detectables, como serían producidas por el huésped no transformado.
Por "sustancialmente puro" se entiende cualquier proteína de la presente invención, o cualquier gen codificado de cualquier proteína, la cual es esencialmente libre de otras proteínas o genes, respectivamente, o de otros contaminantes con los cuales podría normalmente encontrase en la naturaleza, y como tales existen en una forma que no se encuentra en la naturaleza.
Se dice que una molécula es"sustancialmente similar" a otra molécula si la secuencia de aminoácidos en ambas moléculas es sustancialmente la misma, y si ambas moléculas poseen una actividad biológica similar. De esa manera, siempre que dos moléculas posean una actividad similar, se consideran variantes en cuanto a tal término es empleado en la presente aún si una de las moléculas contiene residuos adicionales de aminoácidos no encontrados en la otra, o si la secuencia de residuos de aminoácidos no es idéntica. Como es empleada en la presente, una molécula es un "derivado químico" de otra molécula si contiene fracciones químicas adicionales que normalmente no son parte de la molécula. Tales fracciones pueden mejorar la solubilidad de la molécula, absorción, vida media biológica, etc. Alternativamente, las fracciones pueden alternativamente aminorar a la toxicidad de la molécula, eliminar o atenuar cualquier efecto secundario indeseable de la molécula, etc. Fracciones capaces de mediar tales efectos son revelados, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Mack Publishing Co., Easton, Penn. (1980).
Por "vector" se entiende una molécula de ADN, derivada de un plásmido o un bacteriófago, dentro del cual los fragmentos de ADN pueden ser insertados o donados. Un vector contendrá uno o más puntos de restricción únicos, y pueden ser capaces de replicación autónoma en un huésped u organismo vehículo definido de modo tal que la secuencia donada sea reproducible.
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Compuestos de la invención
La invención incluye el cADN de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6, y también secuencias que incluyen la secuencia de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 6, y derivados de estas secuencias. La invención también incluye vectores, liposomas y otros vehículos que contienen esta secuencia o derivados de ellas. La invención además incluye proteínas transcritas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 6, es decir, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 7, y sus derivados y variantes que codifican SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 7.
Una realización de la invención incluye variantes solubles de una proteína KIM que es usualmente sintetizada como una proteína de membrana asociada, y la cual es sobre-regulada después de una lesión. Las variantes solubles carecen de al menos una porción de la sección de transmembrana o intra-membrana de una proteína KIM nativa. En algunos ejemplos, la variante soluble carece de la sección de transmembrana o intra-membrana completa de una proteína KIM nativa. Las variantes solubles incluyen proteínas de fusión que comprenden derivados de proteínas KIM que carecen de al menos una porción de la sección de transmembrana o intra-membrana de una proteína KIM nativa. Se incluyen todos los tipos de proteínas de fusión KIM, particularmente aquellos que incorporan las formas de la molécula his-tag, Ig-tag, y myc-tag. Estas proteínas de fusión KIM pueden tener características que son ventajosas terapéuticamente, tales como el incremento de vida-media conferido por el Ig-tag. También se incluyen proteínas de fusión que incorporan porciones de dominios seleccionados de la proteína KIM.
Del mismo modo en que es posible reemplazar sustituyentes de la estructura, también es posible sustituir grupos funcionales unidos a la estructura con grupos con características similares. Estas sustituciones inicialmente conservadoras, es decir, el grupo de reemplazo tendrá aproximadamente el mismo tamaño, forma, hidrofobicidad y carga que el grupo original. Las modificaciones sin secuencia pueden incluir, por ejemplo, derivatización química in vivo o in vitro de partes de proteína KIM que ocurren naturalmente, así como cambios en la acetilación, metilación, fosforilación, carboxilación o glicosilación.
También se incluyen dentro de la invención agentes que se encuentran específicamente unidos a la proteína, o un fragmenteo de la proteína (SEQ ID NO:3, 5 o 7). Estos agentes incluyen ligandos y anticuerpos (incluyendo monoclonales, de cadena simple, de cadena doble, fragmentos Fab, y otros, ya sean nativos, humanos, humanizados, primatizados o quiméricos). Descripciones adicionales de estas categorías de agentes se encuentran en la solicitud de PCT 95/16709.
Procedimientos experimentales 1. Generación de ARN a partir de riñones isquémicos y normales de rata adulta
Los riñones de rata lesionados por isquemia son generados, como se encuentra descrito por Witzgall et al. (J. Clin Invest. 93: 2175-2188, 1994). Brevemente, la arteria renal y la vena de un riñón de una rata adulta Sprague-Dawley son sujetadas fuertemente durante 40 minutos y luego se permite la perfusión. Los riñones lesionados son extraídos de las ratas a 24 horas y a 48 horas después de la perfusión. Riñones de ratas adultas Sprague-Dawley normales operadas en falso también son extraídos.
El ARN total es preparado de los órganos basados en el protocolo de Glisin et al. (Biochemistry 13: 2633, 1974). Brevemente, los órganos extraidos son colocados inmediatamente dentro de la solución estandarizada GNC (Tiocianato de guanidina 4 M, SDS 0,5%, citrato de sodio 25 Mm, anti espuma Sigma 0,1%) y se desestabilizaron sobre hielo con un politrón. Los desechos de células se retiran con un giro a baja velocidad en una centrífuga clínica y el fluido sobrenadante se coloca sobre un cojín de CsCl 5,7 M, acetato de sodio 25 mM, EDTA 1 mM. El ARN es granulado dentro del cojín en un rotor SW40Ti a 22 K durante 15 horas. El ARN se resuspende en agua estéril tratada con DEPC, se precipitó dos veces con volúmenes 1/10 de acetato de sodio 3 M y 2,5 volúmenes de EtOH. Se aisló el Poli A+ ARN empleando un kit de purificación de mARN (Pharmacia, catálogo No. 27-9258-02).
2. Método de Análisis Diferencial Representativo (RDA) para aislar los fragmentos de RDA 1-7, 3-2 y 4-7
El cADN bicatenario se sintetizó a partir de falsa operación y a partir de riñón post-isquémico poli A+ ARN después de 48 horas empleando Gibco BRL "Superscript Choice^{TM} System cADN Synthesis Kit", catálogo No. 18090. La primera cadena se sintetiza por imprimación con oligo dT y empleando transcriptaza reversa Superscript II^{TM}. La segunda cadena se produce empleando polimerasa I ADN E. coli y ARNse H seguido por polimerasa ADN T4 empleando las condiciones recomendadas por BRL.
El análisis de RDA es llevado a cabo esencialmente como se describe por Hubank y Schatz (Nucleic Acid Research 22: 5640-48, 1994). Brevemente, cADN de riñón post-isquémico después de 48 horas se digiere con la enzima de restricción Dpn II, y se liga a oligonucleótidos R-Bgl-12/24 (ver la referencia para la secuencia exacta). La amplificación PCR (realizada con un polimerasa Taq Perkin-Elmer y su correspondiente solución reguladora PCR) del conector cADN ligado es empleado para generar la representación inicial. Este producto PCR es designado "probador amplicón". El mismo procedimiento es empleado para generar "conductor amplicon" del cADN de riñón de rata falsamente operada.
La hibridización del probador y el conductor de amplicones seguido por la amplificación selectiva son realizadas tres veces para generar el Producto Diferencial Uno (PD1), Dos (PD2) y Tres (PD3). La generación del producto PD1 es llevada a cabo como se describe por Hubank y Schatz (Nucleic Acid Research 22: 5640-48, 1994). Los productos PD2 y PD3 también son generados como describe Hubank y Schatz (id.), salvo que las relaciones conductor: probador se cambian a 5333: 1 para PD2 y a 40000: 1 ó 4000: 1 para PD3.
Tres productos RDA se clonaron a partir de PD3 dentro del producto pUC 18: RDA vector clonado 1-7 (252bp) cuando el PD3 se generó empleando una relación de 40,000: 1, y el producto RDA 3-2 (445bp) y el 4-7 (483bp) cuando el PD3 se generó empleando una relación de 4,000: 1. Los fragmentos de ADN se subclonaron empleando el kit Pharmacia Sureclone^{TM} (catálogo No. 27-9300-01) para reparar los finales de los fragmentos PCR con enzima Klenow y para facilitar la unión final directa de los fragmentos dentro del vector pUC18.
3. Análisis Northern
Poli A+ ARN (2,5 \mug) a partir de riñón de rata normal adulta (falsamente operada), a partir de riñón adulto después de 48 horas de lesión post-isquémica, y de riñón embrionario de 18 días se analizó por electroforésis y transferencia Northern (Cate, Cell 45: 685, 1986) en una membrana (Dupont) GeneScreen^{TM}. La hibridización en solución reguladora PSB (Tris 7,5 50 mM, NaCl 1M, pirofosfato de sodio 0,1%, PVP 0,2%, Ficoll 0,2%, BSA 0,2%, SDS 1%), que contiene el 10% de sulfato de dextran y 100 \mug/ml de tARN, se realiza a 65ºC empleando tres sondas diferentes: producto RDA 1 -7, producto RDA 3-2 y producto RDA 4-7. Todas son radiomarcadas empleando el kit de marcación de iniciador al azar Pharmacia's "Ready to Go^{TM}" (catálogo No. 27-9251-01). Los productos RDA 1-7, 3-2 y 4-7 hibridizan a un mARNs presente en todas las tres muestras, pero más intensamente en mARNs en las muestras de ARN en el riñón post-isquémico después de 48 horas.
Un análisis de transferencia Northern de tejido de rata adulta indica que el gen 1-7 se expresa a muy bajos niveles en un riñón, testículo, bazo y pulmón adultos normales. El gen 3-2 se expresa en hígado, riñón, bazo y cerebro, El gen 4-7 se expresa en bazo, riñón, pulmón, testículo, corazón, cerebro, hígado y músculo esquelético. La presencia de diferentes tamaños de mARNs en algunos tejidos en la o transferencia 1-7 y 3-2 indica que el primer producto de transcripción del gen 1-7 y del gen 3-2 puede sufrir empalme y/o poliadenilación alternas.
4. Aislamiento de clones de cADN 3-2 4-7
Una biblioteca de cADN se genera a partir de 4 \mug de poliA+ ARN a partir de un riñón post-isquémico después de 48 horas, empleando reactivos de BRL Superscript Choice^{TM} System para síntesis de cADN, y el kit de clonación Stratagene^{TM} Lambda ZapII (catálogo No. 236201), de acuerdo con protocolos recomendados por los fabricantes.
Los clones 10^{5} son cribados con el producto RDA 3-2 como una sonda (de marcación iniciada al azar como se describe anteriormente). Ocho clones positivos son seleccionados y cuatro son escogidos al azar para un análisis secundario para obtener placas fago. Posterior a la criba terciaria, cuatro clones fago puros son aislados. Los insertos clonados del fago son aislados por un procedimiento de escisión in vivo de acuerdo con el kit Stratagene^{TM} Lambda Zap II. El inserto más grande, de aproximadamente 2,6 kb (conocidos como cADN clon 3-2), es sujeto a la secuencia de ADN. La secuencia del inserto (SEQ ID NO: 1) se muestra en la Figura 1. El clon 3-2 de cADN (E. coli K-12, SOLR/p3-2#5-1) ha sido depositado como ATCC No. 98061. La secuencia del clon 3-2 de cADN es idéntica a la del clon 1-7 de cADN (SEQ ID NO: 2), excepto que los nucleótidos 136-605 de la SEQ ID NO: 1 representan una inserción. De esa manera, la SEQ ID NO: 2 representa una variante empalme a partir de la SEQ ID NO: 1. El clon para 1-7 (E. coli K- 12, SOLR/p1-7#3-1) ha sido depositado como ATCC No. 98060.
Los clones 10^{5} son cribados con el producto RDA 1-7 como una sonda (radiomarcada cebada al azar como se describió anteriormente). Ocho clones positivos son seleccionados y cuatro son escogidos al azar para análisis secundarios para obtener placas fago puras. Posterior a la criba terciaria, cuatro clones fago puros son aislados. Los insertos clonados a partir del fago son aislados por el procedimiento de escisión in vivo de acuerdo con el kit Stratagene^{TM} Lambda Zap II. El inserto más grande de aproximadamente 2,0 kb (refiriéndose a cADN clon 1-7) es sujeto a la secuencia de ADN; la secuencia del inserto (SEQ ID NO: 2) se muestra en la Figura 2.
Los clones 10^{5} son cribados con el producto RDA 4-7 como una sonda (marcada cebada al azar como se describió anteriormente e hibridizada en PSB a 65ºC). Ocho clones positivos son seleccionados y cuatro son escogidos al azar para análisis secundarios para obtener placas fago puras. Posterior a la segunda criba, dos clones fago puros son aislados. Los insertos clonados a partir de fago son aislados por el procedimiento de escisión in vivo de acuerdo con el kit StratageneTM Lambda Zap II. El inserto más grande, aproximadamente 2,4 kb (refiriéndose a cADN clon 4-7), está sujeto a la secuencia de ADN. La secuencia del inserto, SEQ ID NO: 4, se muestra en la Figura 3. El clon 4-7 cADN (E. coli K-12, SOLR/p4-7# 1-1) ha sido depositado como ATCC No. 98062.
5. Caracterización de los clones cADN 1-7, 3-2 y 4-7 A.) ADN y secuencias de proteínas
La secuencia de cADN 3-2 (Figura 1; SEQ ID NO: 1) contiene un marco de inscripción abierta de 307 aminoácidos (Figura 1; SEQ ID NO:3). Una secuencia simple de 21 aminoácidos es deducida a partir del análisis de Von Heijne (Von Heijne et al., Nucl. Acid Res. 14: 14683 (1986)), y una región de transmembrana que abarca aproximadamente aa 235-257 indica que el producto 3-2 es una proteína de la superficie celular.
La secuencia de cADN 1-7 (Figura 2; SEQ ID NO: 2) contiene un armazón de lectura abierta de 307 aminoácidos, la cual es idéntica al armazón de lectura abierta contenido en la secuencia de cADN 3-2 (SEQ ID NO: 3). La secuencia de cADN 4-7 (Figura 3; SEQ ID NO: 4) contiene un armazón de lectura abierta de 572 aminoácidos (SEQ ID NO: 5). Una región de transmembrana se localiza aproximadamente en los aminoácidos 501-521.
B.) Análisis In situ de mARNs 1-7, 3-2 y 4-7 en riñones post-isquémicos y sus contralaterales de rata adulta
La hibridización in situ se lleva a cabo de acuerdo con el método descrito por Finch et al., Dev. Dynamics 203: 223-240, 1995. Brevemente, los dos riñones isquémicos y contralaterales se fijan por perfusión con paraformaldehido en PBS al 4%. Los riñones además se fijan durante la noche a 4ºC y se procesan. Las secciones de parafina se desparafinizan y se rehidratan, fijándose con paraformaldehido en PBS al 4%, se digieren con proteinasa K, se refijan, luego se acetilan con anhídrido acético en solución estandarizada de trietanolamina. Las secciones luego se deshidratan e hibridizan con ribosondas ^{32}P-marcadas a 55ºC durante la noche, con ribosondas ^{33}P-marcadas generados a partir de los productos RDA 3-2 o RDA 1-7 subclonados dentro del lado BamH1 de pGEM-11Z. Después de la hibridización, las secciones se lavaron bajo condiciones de severidad alta (2 X SSC, formamida 50% a 65ºC). Las secciones se deshidratan finalmente, la emulsión (NBT-2) es revestida por autorradriografia, y se expone por lo menos una semana.
Granos de plata son desarrollados y las secciones se contratiñeronn con azul de toluidina y se microfotografiaron.
Los análisis de la expresión mARN 1-7 y 3-2 por hibridización in situ indican que estos genes son enormemente sobrerregulados en células de riñón dañadas en comparación con su expresión en secciones de riñón normal. La expresión vista se encuentra en células regenerativas de la corteza y médula exterior, la mayoría de las cuales parecen ser células de túbulo proximal.
El análisis del patrón de expresión de ARN 4-7 in situ también revela abundante expresión de este gen en el riñón isquémico lesionado comparado con el riñón adulto normal. El sitio de la expresión aparece para ser células infiltradas.
6. Aislamiento de un clon cADN humano que hibridiza en cruz a el cADN 3-2 de rata
Una sonda de ADN ^{32}P-marcado que comprende los nucleótidos 546-969 del inserto del clon 3-2 mostrado en la Figura 1 se genera y emplea para cribar una biblioteca de cADN gt10 lambda de hígado embrionario humano (Clontech Catálogo #HL5003a). Las placas 1X10^{6} se criban en duplicado empleando condiciones estándares como se describe anteriormente, pero la temperatura de criba fue de 55ºC. Para el lavado con severidad alta, el filtrado se lavó en 2X SSC a 55ºC. Se identificaron cincuenta fago positivas y la placa se purificó, y se preparó el ADN. Los ADNs de fago se someten a un análisis Southern empleando la misma sonda como la descrita anteriormente. El filtro de transferencia Southern se somete a un lavado final con 0.5X SSC a 55ºC. Dos clones son identificados como positivos. El inserto del clon H13-10-85 es secuenciado y se encontró una región que codifica una proteína con un nivel alto de identidad a la proteína 3-2 que se muestra en la Figura 3.
La secuencia del nucleótido (SEQ ID NO: 6) y la secuencia del aminoácido pronosticada (SEQ ID NO: 7) de la proteína relacionada 3-2 de humano se muestran en la Figura 4. Como se muestra por el análisis más adecuado bosquejado en la Figura 5, la proteína relacionada 3-2 humana es el 43,8% idéntica y el 59,1% similar a la proteína de rata 3-2. Ambas contienen IgG, mucina, transmembrana, y dominantes citoplasmáticos. Las seis cisteinas son conservadas dentro del dominante IgG de ambas proteínas.
7. Producción de proteína de fusión Ig KIM- 1
Una proteína de fusión del dominio extracelular de KIM y la región Fc de la inmunoglobulina (Ig) es una herramienta útil para el estudio de la biología molecular y celular de los riñones lesionados/regenerados y como una molécula terapéutica. Para producir la proteína de fusión Ig KIM con el dominio extracelular de humano y la proteína KIM- 1 de rata, un fragmento del dominio extracelular de cADN KIM- 1 se amplificó por PCR y se clonó en el vector de expresión Biogen, pCAl25, para expresión transitoria en las células COS. El vector de expresión pCAl25 produce una proteína de fusión que tiene una estructura a partir de gen clonado en N-terminal y una región Fc Ig humana en el C-terminal. Las células COS fueron tansfectadas con los plásmidos SJR 103 o 104; Estos plásmidos expresan una proteína de fusión que contiene las secuencias KIM humanas 263-1147 (SEQ ID NO: 6; SJR 103) o secuencias KIM de ratas 599-1319 (SEQ ID NO: 1; SJR 104) del dominante extracelular combinado a la región Fc Ig humana. Las células se cultivaron en FBS al 10% en DMEM en la fábrica de células (Nunc, Naperville, II). Dos a tres días después de la post-transfección, el medio se extrajo, se concentró empleando un concentrador Amicón, y la proteína de fusión se purificó empleando una columna Sepharose Protein-A. Después de la purificación, la pureza de la proteína de fusión se evaluó por SDS-PAGE.
Usos Diagnósticos de los Compuestos de la Invención
Los anticuerpos anti-KIM de la invención, que específicamente se unen a la proteína de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 7 o un fragmento de ésta, son útiles en muchos métodos de diagnóstico. Estos agentes pueden ser marcados con marcadores detectables, tales como fluoroscópicamente o mediante sustancias radiográficamente opacas, y administrados al sujeto para permitir imágenes de tejidos que expresan la proteína KIM. Los agentes también pueden ser ligados a sustancias, tales como peroxidasa de rábano picante, que puede ser empleada como tintura inmunocitoquímica para permitir la visualización de áreas de células positivas de proteína KIM sobre secciones histológicas. Un anticuerpo específico podría ser empleado únicamente de ésta manera, y los sitios donde éste es ligado pueden ser visualizados en un ensayo tipo sándwich empleando un anticuerpo anti-inmunoglobulina que es por sí mismo ligado a un marcador detectable.
Anticuerpos específicos para la proteína KIM también son útiles en inmunoensayos para medir la presencia o concentración de KIM en muestras de tejidos del cuerpo y fluidos. Tales concentraciones pueden ser correlacionadas con diferentes estados de la enfermedad. Como una realización de particular interés, la invención incluye composiciones apropiadas para emplear en un método de diagnóstico de lesión renal, o de monitorear un proceso de reparación renal, mediante la medida de la concentración de KIM o de los fragmentos de KIM en orina, plasma o suero de un paciente. De manera análoga, KIM puede ser medido en sedimento de orina, en particular en desechos celulares en sedimentos de orina. Moldes de células del túbulo renal, las cuales pueden estar presentes en sedimentos de orina de pacientes con enfermedad renal en curso, pueden contener elevados niveles de proteína KIM y mARN.
Anticuerpos específicos para la proteína KIM pueden ser ligados a soportes sólidos, tales como perlas o placas, y empleados para retirar los ligandos de una solución, ya sea para la medición, o para la purificación y caracterización de la proteína o sus atributos (tal como modificaciones postraslacionales). Tal caracterización de una proteína KIM de pacientes podría ser útil en la identificación de mutantes nocivos o procedimiento de defectos que interfieren con la función KIM y son asociados con fenotipos de paciente anormal. Cada una de estas técnicas es rutinaria para aquellos expertos en inmunología.
Métodos de imagen adicional utilizan KIM o fragmentos de KIM, combinado con fracciones analizables por imágenes, para el diagnóstico de imágenes de tejidos que expresan ligandos KIM, particularmente tumores.
Además las técnicas de diagnóstico se basan en la demostración de mARN KIM sobrereguladas, como una indicación de procesos relacionados con lesiones. Esta técnica ha sido probada y encontrada factible en un modelo de lesión isquémica en ratas, como se explicará más adelante.
Para determinar si la cantidad de proteína KIM-1 se incrementa después de la lesión, examinamos riñones homogenizados de riñones postisquémicos y contralaterales después de 24 y 48 horas después de 40 minutos de pinzamiento de la arteria renal y la vena de un solo riñón para cada rata. El riñón homogenizado se evaluó para la presencia de la proteína KIM-1. Análisis de transferencia Western identifica tres proteínas detectadas por dos diferentes anticuerpos después de la lesión isquémica, las cuales no son detectables en homogeneizados a partir de los riñones contralaterales que no fueron expuestos a lesión isquémica. Los aparentes pesos moleculares de las bandas son de aproximadamente 40 kDa, 50 kDa y 70-80 kDa. Las tres especies de proteínas detectadas por transferencia western podrían representar formas glicosiladas de la misma proteína dando la presencia de sitios potenciales de glicosilación enlazados N y O. El hecho de que cada una de estas proteínas reaccione con dos diferentes baterías de anticuerpos policlonales sustente la idea de que ellos son relacionados con KIM-1 y no son bandas de reactividad cruzada. La confirmación de ésta predicción llega de los resultados de división de CNBr parcial de las tres proteínas que revelan que ellas comparten fragmentos de división de CNBr comunes. Dado que no está previsto que el dominio citoplasmático de la proteína KIM 1 contenga ninguna modificación postranslacional importante, los dos productos más pequeños de la lisis (4,7 kDa y 7,4 kDa) detectados con anticuerpos directos contra el dominio citoplasmático de KIM-1 debería ser del mismo tamaño para las tres diferentes bandas de proteínas KIM-1 si ellas se originan de la misma proteína. Observamos que las proteínas KIM-1 de 40 kDa y de 70-80 kDa producen fragmentos de migración en el tamaño pronosticado. La lisis de la banda de la proteína de 50 kDa también da la misma firma C-terminal de la banda del péptido.
La secuencia KIM-1 presenta dos sitios putativos para N-glicosilación y un dominio de mucina donde la O-glicosilación podría cubrir la cadena polipeptídica. Las tres bandas KIM- 1 detectadas en el riñón postisquémico podrían corresponder a las variantes de glicosilación del mismo núcleo de la proteína. De-N-glicosilación con PNGase F resultó en un cambio de las tres bandas a un peso molecular inferior, correspondiendo a una pérdida de aproximadamente 3 kDa, indicando que las tres proteínas son N-glicosiladas. Las diferencias en O-glicosilación podrían explicar las diferencias en tamaños de éstas tres bandas.
Usos Terapéuticos de los Compuestos de la Invención
Los métodos terapéuticos de la invención involucran selectivamente promoción o inhibición de respuestas celulares que dependen de la unión KIM. Donde el KIM o el ligando KIM son los dos de membrana unida, y expresadas por diferentes células, la señal de transducción puede aparecer en la célula con expresión KIM, en la célula con expresión ligando KIM, o en ambas.
Una respuesta de unión desencadenada KIM en una célula con expresión ligando KIM puede ser generada por contacto de la célula con con expresión ligando KIM exógeno, las proteínas de fusión KIM o los anticuerpos activados contra el ligando KIM, ya sea in vitro o in vivo. Además, las respuestas de la célula con expresión ligando KIM que podrían de otra manera ser desencadenadas por un KIM endógeno serían bloqueadas por contacto de la célula con expresión ligando KIM con un antagonista ligando KIM (por ejemplo, un anticuerpo antagonista que se une a un ligando KIM), o por contacto del KIM endógeno con un anticuerpo anti-KIM u otra molécula que enlaza KIM que previene la unión efectiva de un KIM con un ligando KIM.
Del mismo modo, las respuestas desencadenadas por la unión de KIM en la célula con expresión KIM pueden ser promocionadas o inhibidas con compuestos exógenos. Por ejemplo, la respuesta de la unión desencadenada por unión con KIM en una célula con expresión KIM puede ser generada por contacto de la célula con un ligando KIM soluble, o ciertos anticuerpos activados anti-KIM. Además, las respuestas de la célula con expresión KIM que de otra manera serían desencadenadas por interacción con un ligando KIM endógeno serían bloqueadas por contacto de la célula KIM-expresión con un antagonista a KIM (por ejemplo, un anticuerpo bloqueado que une a un KIM de una manera eficaz que previene, la unión del KIM que genera una señal), o por contacto del ligando KIM endógeno con un anticuerpo ligando anti-KIM u otra molécula que se une a un ligando KIM que previene el enlace efectivo de un KIM con el ligando KIM.
Cuales de las intervenciones descritas arriba son útiles para usos terapéuticos particulares depende del mecanismo etiológico relevante ya sea del proceso patológico para ser inhibidos o del proceso deseado médicamente a ser promovido, como pueden apreciar los expertos en el campo médico. Por ejemplo, donde la unión KIM produce un crecimiento celular deseable, con mantenimiento de fenotipo diferenciado, resistencia a apoptosis inducida por varias injurias, u otras respuestas ventajosas médicamente, una de las intervenciones antes descritas que impulsan la respuesta activada por la unión puede ser empleada. En la alternativa, una de las intervenciones inhibitorias puede ser útil donde la unión KIM invoca consecuencias no deseadas, tales como crecimiento neoplásico, pérdida nociva de la función celular, susceptibilidad a apoptosis, o promoción de eventos de inflamación.
Los siguientes son ejemplos de los métodos terapéuticos de la invención, descritos previamente. Un uso terapéutico de los compuestos de la invención relacionados con KIM es la preparación de una composición para el tratamiento de un sujeto con enfermedad renal, estimulando el crecimiento de nuevo tejido en un sujeto, o estimulando la supervivencia del tejido dañado en un sujeto, e incluye la preparación de una composición que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de una proteína KIM de la invención, o de una composición farmacéutica que incluye una proteína de la invención. La proteína empleada en éstos métodos puede ser un fragmento de una proteína KIM longitud-completa, una proteína de ligando KIM soluble o un fragmento de fusión, o un agonista KIM. Estos métodos también pueden ser experimentados mediante la preparación de una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo agonista de la invención, o una composición farmacéutica que incluye un anticuerpo agonista de la invención. Una proteína KIM puede ser incluida al mismo tiempo con una cantidad terapéuticamente efectiva de un segundo compuesto que ejerce un efecto asociado deseable médicamente. Mientras los tejidos de interés para estos métodos pueden incluir cualquier tejido, tejidos preferidos incluyen tejido renal, hígado, tejido neural, corazón, estómago, intestino delgado, médula espinal, o pulmón. Las condiciones renales particulares las cuales pueden ser tratadas provechosamente con los compuestos de la invención incluyen falla renal aguda, nefritis aguda, falla renal crónica, síndrome nefrítico, defectos del túbulo renal, transplantes de riñón, lesión tóxica, lesión hipóxica, y trauma. Los defectos del o túbulo renal incluyen aquellos ya sean hereditarios o adquiridos naturalmente, tales como enfermedad renal policística, enfermedad cística medular, y espogiosis medular renal. Esta lista no es limitada, y puede incluir muchos otros trastornos renales (ver, por ejemplo, Harrison's Principies of Internal Medicine, 13th ed., 1994, el cual está incorporado en la presente como referencia). El sujeto de los métodos puede ser humano.
Una intervención terapéutica para inhibir el crecimiento no deseado del tejido con expresión de ligando KIM en un sujeto incluye la etapa de administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de KIM (por ejemplo, un anticuerpo antagonista que une un ligando KIM), o por administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un anticuerpo anti-KIM u otra molécula que enlace a KIM la cual bloquea un enlace KIM al tejido con expresión de ligando KIM. En una realización de interés, el antagonista KIM o el anticuerpo anti-KIM puede ser empleado para preparar una composición que puede inhibir o bloquear el crecimiento de tumores que dependen de la proteína KIM para el crecimiento.
Otros métodos de la invención incluyen la muerte de células tumorales con expresión de ligando KIM, o la inhibición de su crecimiento, por el contacto de células con una proteína de fusión de un KIM y una toxina o radionucleido, o un anticuerpo ligando anti-KIM conjugado a una toxina o radionucleido. La célula puede estar dentro de un sujeto, y la proteína o el anticuerpo conjugado se administran al sujeto.
También se abarca dentro de la invención, una composición para apuntar una toxina o radionucleido a una célula de expresión de un KIM, que comprende una proteína de fusión que contiene un ligando KIM y una toxina o radionucleido, o un anticuerpo anti-KIM conjugado a una toxina o radionucleido. Otra realización incluye una composición apropiada para la supresión del crecimiento de una célula tumoral que expresa un KIM, que comprende una proteína de fusión de un ligando KIM y una toxina o radionucleido o un anticuerpo anti-KIM conjugado a una toxina o radionucleido; la célula puede estar dentro de un sujeto, y la proteína administrada al sujeto.
El término "sujeto" empleado en el presente documento significa cualquier mamífero al cual se le puede administrar KIM. Los sujetos específicamente indicados para el tratamiento con el método de la invención incluyen humanos, además de primates no humanos, ovejas, caballos, ganado, cabras, cerdos, perros, gatos, conejos, cobayas, hámsters, jerbos, ratas y ratones, así como también, los órganos, tumores y células, derivados u originarios de estos huéspedes.
Uso de los compuestos de la invención en terapia génica
Los genes KIM de la invención pueden ser empleados para preparar composiciones que son insertadas dentro del tejido dañado, o dentro del tejido donde la estimulación del crecimiento es deseada. Tal terapia génica estimula la producción de proteína KIM de las células transfectadas, promoción del crecimiento celular y/o supervivencia de células que expresan a la proteína KIM.
En una realización específica de un método de terapia génica, el gen que codifica una proteína KIM puede ser empleado para preparar composiciones que son introducidas dentro de un tejido diana renal. La proteína KIM se expresaría establemente y estimularía el crecimiento del tejido, la división, o la diferenciación, o podría potenciar la supervivencia celular. Adicionalmente, un gen KIM puede ser empleado para preparar composiciones que son introducidas dentro de una célula diana empleando una variedad de métodos conocidos que emplean ya sean estrategias basadas virales o no-virales.
Métodos no-virales incluyen electroporación, fusión de membrana con liposomas, bombardeo de alta velocidad con microproyectiles de ADN-recubierto, incubación con precipitado de calcio-fosfato-ADN, transfección mediada de DEAE-dextran, y micro-inyección directa dentro de células individuales. Por ejemplo, un gen KIM puede ser insertado dentro de una célula mediante coprecipitación con fosfato de calcio (Pillicer et al., Science, 209: 1414-1422 (1980); microinyección mecánica y/o aceleración de partículas (Anderson et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 77: 5399-5403 (1980); transferencia de ADN con base en liposomas (por ejemplo, LIPOFECTIN- mediated transfection- Fefgner et al., Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 84: 471-477,1987; Gao y Huang, Biochim. Biophys. Res. Comm., 179: 280-285,1991); transfección mediada con DEAE Dextran; electroporación (U.S. Patent 4,956,288); o métodos de polilisina-basados en los que el ADN se conjuga para entregar ADN preferencialmente a hepatocitos de hígado (Wolff et al., Science, 247: 465-468,1990; Curiel et al., Human Gene Therapy 3: 147-154,1992).
Las células objetivo pueden ser transfectadas con los genes de la invención por transferencia directa de genes. Ver, por ejemplo, Wolff et al., "Direct Gene Transfer Into Moose Muscle In Vivo", Science 247:1465-68, 1990. En muchos casos, será deseable la transfección del vector-mediado. Cualquiera de los métodos conocidos en el oficio, puede ser empleado, para la inserción de secuencias de poli nucleótidos dentro del vector. (Ver, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1989; y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, J. Wiley & Sons, NY, 1992.). La activación promotora puede ser específica en tejido o inducible mediante un producto metabólico o una sustancia administrada. Semejantes promotores/potenciadores incluyen, pero no están limitados á, un promotor de la proteína ligando c-ret nativa, el promotor/potenciador citomegalovirus inmediato-temprano (Karasuyama et al., J. Exp. Med., 169: 13,1989); el promotor humano beta-actina (Gunning et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 84: 4831,1987); el promotor glucocorticoide-inducible presente en el virus repetido terminal de largo tiempo del tumor mamario de ratón (MMTV LTR) (Klessig et al., Mol. Cell. Biol., 4: 1354, 1984); las secuencias repetidas terminales de largo tiempo de virus de leucemia de ratón Moloney (MuLV LTR) (Weiss et al., ARN Tumor Viruses, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1985); el promotor de región temprana SV40 (Bemoist y Chambon, Nature, 290: 304,1981); el promotor del virus del sarcoma de Rous (RSV) (Yamamoto et al., Cell, 22: 787,1980); el promotor de kinasa de timidina del virus de herpes simple (HSV) (Wagner et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 78: 1441,1981); el promotor adenovirus (Yamada et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 82: 3567,1985).
Los genes KIM también pueden ser insertados mediante vectores específicos virales para su uso en sistemas de transferencia de genes, utilización que se encuentra muy establecida actualmente. Ver por ejemplo: Madzak et al., J. Gen. Virol., 73: 1533-36, 1992 (papovavirus SV40); Berkner et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 39-61, 1992 (adenovirus); Hofinann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 10099-10103, 1995 (baculovirus); Moss et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 25-38,1992 (virus vaccinia); Muzyczka, Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 97-123,1992 (virus adenoasociado); Margulskee, Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 67-93,1992 (virus de herpes simple (HSV) y virus Epstein-Barr (HBV)); Miller, Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 1-24,1992 (retrovirus); Brandyopadhyay et al., Mol. Cell. Biol., 4: 749-754,1984 (retrovirus); Miller et al., Nature, 357: 455-450,1992 (retrovirus); Anderson, Science, 256: 808-813,1992 (retrovirus), Current Protocols in Molecular Biology: Sections 9.10-9.14 (Ausubel et al., Eds.), Greene Publishing Associcates, 1989.
Los vectores preferidos son virus de ADN que incluyen adenovirus (preferiblemente vectores basados en Ad- 2 o Ad- 5), baculovirus, virus del herpes (preferiblemente virus del herpes simple de vectores basados), y parvovirus (preferiblemente parvovirus "defectuosos" o no-autónomos de vectores basados, más preferiblemente virus adenoasociados de vectores basados, más preferiblemente vectores basados AAV- 2). Ver, por ejemplo, Ali et al., Gene Therapy 1: 367-384,1994; Patente U.S. 4,797,368 y 5,399,346 y la discusión a continuación.
El cambio de un sistema de vector particular para transferir, por ejemplo, una secuencia KIM dependerá de una variedad de factores. Un factor importante es la naturaleza de la población celular diana. Aunque los vectores retrovirales han sido estudiados extensamente y empleados en un número de aplicaciones de terapia génica, generalmente ellos son impropios para células contagiadas que no están divididas, pero pueden ser útiles en terapia de cáncer puesto que ellos únicamente integran y expresan sus genes en la replicación celular. Son útiles para metodologías ex vivo y atractivos en este respecto debido a su integración estable dentro del genoma de la célula diana.
Los adenovirus son virus de ADN eucariótico que pueden ser modificados para entregar eficientemente una terapéutica o un transgen informador a una variedad de tipos de células. En general los adenovirus tipos 2 y 5 (Ad2 y Ad5, respectivamente), los cuales causan enfermedades respiratorias en humanos, actualmente se desarrollan para terapia génica de Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) y Fibrosis Cística (FC). Ambos Ad2 y Ad5 pertenecen a una subclase de adenovirus que no son asociados con malignidad en humanos. Los vectores adenovirus son capaces de suministrar niveles sumamente altos de gen informador a virtualmente todo tipo de células, independientemente del estado mitótico. Los títulos altos (placa moldeada de 10^{13} unidades/ml) de virus recombinante pueden ser fácilmente de generados en 293 células (una línea celular de riñón embrionario de complementación de adenovirus-transformado: ATCC CRL1573) y crio-almacenadas durante períodos extensos sin pérdidas considerables. La eficacia de este sistema en la distribución de un transgen terapéutico in vivo que complementa un desequilibrio genético ha sido demostrada en modelos de animal de varios trastornos. Ver Watanabe, Atherosclerosis, 36: 261-268, 1986; Tanzawa et al., FEBS Letters 118 (1): 81-84, 1980; Golasten et al., New Engl.J. Med. 309: 288-296, 1983; Ishibashi et al., J. Clin. Invest. 92: 883-893, 1993; y Ishibashi et al., J. Clin. Invest. 93: 1889-1893, 1994, todos de los cuales están incorporados en la presente por referencia. Ciertamente, la replicación de recombinantes defectuosos de adenovirus codificando un cADN para el regulador de transmembrana de fibrosis cística (CFTR) ha sido aprobado para emplear en al menos dos pruebas clínicas de FC humanas. Ver, por ejemplo, Wilson, Nature 365: 691-692, 1993. Adicionalmente un soporte de la seguridad de adenovirus recombinante para terapia génica es la experiencia extensa de vacunas de adenovirus vivos en poblaciones humanas.
El recombinante de primera-generación, adenovirus replicación-deficiente que ha sido desarrollado para terapia génica de DMD y otros trastornos heredados contiene supresiones del Ela entero y parte de las regiones E1b. Este virus de replicación-defectiva es cultivado en 293 células que contienen un adenovirus funcional del gen E la que suministra una tramitación de una proteína E1a. Los virus E1-suprimidos son capaces de la replicación y producción de virus infeccioso en las 293 células, que suministra productos de genes en la región E1a y E1b trans. El virus resultante es capaz de infectar muchos tipos de células y pueden expresar el gen introducido (siempre y cuando tenga su propio promotor), pero no puede replicar en una célula que no lleva la región El del ADN a menos que la célula se infecte con una muy alta multiplicidad de infecciones. Los adenovirus tienen la ventaja de tener un rango de huésped amplio, pueden infectar células diferenciales inactivas o terminales tales como neuronas, y parecen esencialmente no-oncogénicos. Los adenovirus no parecen integrar dentro del genoma del huésped. Dado que existen fuera de los cromosomas, el riesgo de mutagénesis insercional se reduce enormemente. Ali et al., supra., at 373. Los adenovirus recombinantes (rAdV) producen títulos muy altos, las partículas virales son moderadamente estables, los niveles de expresión son altos, y un amplio rango de células pueden ser infectadas. Sus células huésped naturales tienen epitelio de las vías respiratorias, y por ello son útiles para la terapia de cánceres de pulmón.
La transferencia mediada por baculovirus tiene muchas ventajas. La transferencia del gen baculoviral puede presentarse en la replicación y la no-replicación de células, y puede presentarse en células renales, hepatocitos, células neurales, bazo, piel y músculo. El baculovirus es no-replicado y no-patogénico en células de mamífero. Los humanos carecen de anticuerpos pre-existentes para recombinar baculovirus los cuales podrían bloquear la infección. Además, el baculovirus es capaz de incorporar y transducir insertos de ADN muy grandes.
Los virus adeno-asociados (AAV) también han sido ocupados como vectores para terapia génica somática. El AAV es un pequeño, virus de ADN de una cadena simple con una organización genómica simple (4-7 kb) que lo hace un sustrato ideal para la ingeniería genética. Dos armazones de lectura abierta codifican una serie de polipéptidos rep y cap. Los polipéptidos rep (rep78, rep68, rep 62 y rep 40) son implicados en la replicación, rescate e integración del genoma AAV. Las proteínas cap (VP1, VP2 y VP3) a partir de la cápsida del virion. El flanqueo de los armazones de lectura abierta rep y cap en los finales 5' y 3' son 145 bp repeticiones terminales invertidas (ITR), el primero de 125 bp de los cuales son capaces de formar estructuras dobles con forma de Y o T. De importancia para el desarrollo de vectores AAV, los dominios rep y cap completos pueden ser extirpados y remplazados con un transgen terapéutico o informador. Ver B.J. Carter, in Handbook of Parvoviruses, ed., P. Tijsser, CRC Press, pp. 155-168 (1990). Se ha mostrado que el ITR representa la secuencia mínima requerida para la replicación, rescate, empaquetado, e integración del genoma AAV.
Los virus adeno-asociados (AAV) tienen potencial significado en la terapia génica. Las partículas virales son muy estables y recombinantes AAVs (rAAV), tienen características similares a los medicamentos ya que los rAAV pueden ser purificados por granulación o por agrupación en gradiente de bandas CsCl. Son estables al calor y pueden ser liofilizados a un polvo y rehidratados para una actividad total. Su ADN estable se integra dentro de los cromosomas huésped y de esta manera la expresión es de largo-término. Su rango de huésped es amplio y AAV no causa enfermedades conocidas de manera que los vectores recombinantes no son tóxicos.
Una vez insertados dentro de una célula diana, las secuencias de interés pueden ser identificadas por métodos convencionales tales como sondas de hibridización de ácidos nucleicos que comprenden secuencias que son homólogas/complementarias a las secuencias de gen insertado del vector. En otra aproximación, la(s) secuencia(s) puede(n) ser identificada(s) por la presencia o ausencia de una función del gen "marcador" (por ejemplo, actividad de la kinasa timidina, resistencia al antibiótico y parecidos) causada por la inserción del vector de expresión dentro de la célula diana.
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Formulaciones y administración
Los compuestos de la invención son formulados de acuerdo con la práctica estándar, tal como preparado en un vehículo, El término "vehículo aceptable farmacéuticamente" significa uno o más ingredientes orgánicos o inorgánicos, naturales o sintéticos, con los cuales el mutante proto-oncógeno o el mutante oncoproteína es combinado para facilitar su aplicación. Un vehículo apropiado incluye solución salina estéril aunque otras soluciones isotónicas acuosas y no- acuosas y suspensiones estériles conocidas por ser farmacéuticamente aceptables por aquellos de ordinaria habilidad en el oficio. En esta consideración, el término "vehículo" abarca liposomas y la proteína tat HIV-1 (Ver Chen et al., Anal. Biochem. 227: 168- 75, 1995) y también cualquier plásmido y vectores de expresión viral.
Cualquiera de los polipéptidos novedosos de esta invención puede ser empleado en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Apropiados ácidos y bases que son capaces de formar sales con los polipéptidos de la presente invención son conocidos por expertos en el arte, e incluyen ácidos y bases orgánicos e inorgánicos.
Un compuesto de la invención es administrado a un sujeto en una cantidad terapéuticamente efectiva, lo que significa una cantidad del compuesto que produce un resultado deseado médicamente o ejerce una influencia sobre una condición que está siendo tratada. Una cantidad efectiva de un compuesto de la invención es capaz de mejorar o retrasar la progresión de la enfermedad, condición degenerativa o lesión. La cantidad efectiva puede ser determinada sobre una base individual y se basará, en parte, sobre consideraciones de los atributos físicos del sujeto, de los síntomas a ser tratados y los resultados buscados. Una cantidad efectiva puede ser determinada por un experto en la materia, empleando tales factores y usando no más de una rutina de experimentación.
Un sistema de entrega de liposomas para un compuesto de la invención puede ser cualquiera de una variedad de vesículas unilamelares, vesículas multilamelares, o vesículas plurilamelares estables, y pueden ser preparados y administrados de acuerdo con métodos conocidos por expertos en el arte, por ejemplo de acuerdo con los enseñados en la patente de los Estados Unidos 5169637, 4762915, 5000958 ó 5185154. Además, esto puede ser deseado para expresar los polipéptidos novedosos de esta invención, y también otros polipéptidos, como lipoproteínas, con el fin de realzar su enlace a los liposomas. Como un ejemplo, el tratamiento de fallo renal agudo en humanos con proteínas KIM encapsuladas en liposomas, puede ser llevado a cabo in vivo mediante la inserción de una proteína KIM dentro de células con necesidad de semejante tratamiento utilizando liposomas. Los liposomas pueden ser entregados mediante un catéter a la arteria renal. La proteína KIM recombinante se purifica, por ejemplo, a partir de células CHO por cromatografia de inmunoafinidad o cualquier otro método conveniente, luego se mezcla con liposomas y se incorporan dentro de ellos a alta eficiencia. La proteína encapsulada puede ser probada in vitro para cualquier efecto sobre la estimulación del crecimiento celular.
Los compuestos de la invención pueden ser administrados de cualquier manera que sea aceptable médicamente. Ésta puede incluir inyecciones, por rutas parenterales tales como intravenosa, intravascular, intraarterial, subcutánea, intramuscular, intratumoral, intraperitoneal, intraventricular, intraepidural, u otras también como, oral, nasal, oftálmica, rectal, o tópica. La administración con liberación sostenida también es específicamente incluida en la invención, por tales medios como inyecciones depósito o implantes erosionables. Entregas localizadas se contemplan particularmente, por medios tales como entrega mediante catéter a una o más arterias, tales como la arteria renal o un recipiente suministrado a un tumor localizado.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
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(i)
SOLICITANTE: Michele Sanicola-Nadel
\hskip4cmJoseph V. Bonventre
\hskip4cmCatherine A. Hession
\hskip4cmTakaharu Ichimura
\hskip4cmHenry Wei
\hskip4cmRichard L. Cate
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(ii)
TITULO DE LA INVENCIÓN: MODULADORES DE REGENERACIÓN TISULAR
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(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 7
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(iv)
DIRECCIÓN POSTAL:
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(A)
DESTINATARIO: Biogen, Inc.
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(B)
CALLE: 14 Cambridge Center
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Cambridge
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(D)
ESTADO: MA
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(E)
PAÍS: USA
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(F)
CÓDIGO POSTAL: 02142
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(v)
FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
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(A)
TIPO DE MEDIO: disquete
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: compatible con PC IBM
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(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: Patente en lanzamiento #1.0, Versión #1.30
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(vi)
DATOS DE SOLICITUD ACTUALES:
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(A)
NÚMERO DE SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
FECHA DE PRESENTACIÓN: 23-MAYO-1997
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(C)
CLASIFICACIÓN:
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(vii)
DATOS DE SOLICITUD PRECEDENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NÚMERO DE SOLICITUD: US 60/018,228
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
FECHA DE PRESENTACIÓN: 24-MAYO-1996
\vskip0.800000\baselineskip
(viii)
PROCURADOR/AGENTE DE INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Levine, Leslie M.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
NÚMERO DE INSCRIPCIÓN: 35,245
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
REFERENCIA/NÚMERO DE ETIQUETA: A010 PCT CIP
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:
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(A)
TELÉFONO: (617) 679-2810
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TELEFAX: (617) 679-2838
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(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:1:
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(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 2566 pares de base
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(B)
TIPO: ácido nucleico
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(C)
CADENA: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGIA: linear
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(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/LLAVE: CDS
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(B)
POSICIÓN: 615..1535
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(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:1:
1
2
3 
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\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:2:
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(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 2084 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CADENA: simple
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/LLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
POSICIÓN: 145..1065
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:2:
\vskip1.000000\baselineskip
4
5
6
7 
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\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3:
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(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 307 aminoácidos
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(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
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(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
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(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
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\vskip1.000000\baselineskip
8
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 2303 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CADENA: simple
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/LLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
POSICIÓN: 107..1822
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
10
11
12
13 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 572 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
14
15
16 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 1795 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CADENA: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/LLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
POSICIÓN: 278..1279
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
17
18
19 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 334 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
20
21

Claims (22)

1. Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 7.
2. El polipéptido de la reivindicación 1, en donde el polipéptido consiste en la SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 7.
3. Un polipéptido que comprende una variante soluble del polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2.
4. Una proteína de fusión que comprende el dominio extracelular del polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2 y una región Fc de una inmunoglobulina.
5. Un ácido nucleico que codifica el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
6. Un ácido nucleico que codifica la proteína de fusión de la reivindicación 4.
7. El ácido nucleico de la reivindicación 5, en donde el ácido nucleico comprende una secuencia SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 6.
8. Un vector que comprende el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7.
9. Una célula huésped que comprende el vector de la reivindicación 8.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Un método de producción de un polipéptido, en donde el método comprende:
\quad
el cultivo de la célula huésped de la reivindicación 9 en un medio de cultivo celular; y
\quad
la recuperación del polipéptido expresado a partir del vector dentro de la célula huésped.
\vskip1.000000\baselineskip
11. Un anticuerpo que se une al polipéptido de la reivindicación 2.
12. El anticuerpo de la reivindicación 11, en donde el anticuerpo es conjugado a una toxina o radionucleido.
13. El anticuerpo de la reivindicación 11, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
14. El anticuerpo de la reivindicación 11, en donde el anticuerpo es un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo de cadena simple, un fragmento Fab o un fragmento quimérico.
15. Un hibridoma que produce el anticuerpo de la reivindicación 11.
16. Una composición farmacéutica que comprende (i) el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, la proteína de fusión de la reivindicación 4, o el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, y (ii) un vehículo farmacológicamente aceptable.
17. El uso del polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, la proteína de fusión de la reivindicación 4 o el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14 para la preparación de una composición para el tratamiento de lesión o enfermedad renal en un sujeto que padece una lesión o enfermedad renal.
18. El uso del polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, de la proteína de fusión de la reivindicación 4, o del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14 para la preparación de una composición diagnóstico para evaluar la presencia o el curso de una lesión o enfermedad renal en un sujeto que padece una lesión o enfermedad renal.
19. El uso de las reivindicaciones 17 ó 18, en donde el sujeto es humano.
20. El uso del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14 para la preparación de una composición diagnóstico para la imagen de células o tejidos con expresión del polipéptido de la reivindicación 2.
21. El uso del anticuerpo de la reivindicación 12 para la preparación de una composición farmacéutica para focalizar una toxina o radionucleido para células con expresión del polipéptido de la reivindicación 2.
22. El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, la proteína de fusión de la reivindicación 4, o el anticuerpo de las reivindicaciones 11 a 14 para un uso en terapia o en diagnóstico.
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Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT907735E (pt) * 1996-05-24 2006-06-30 Biogen Idec Inc Moduladores da regeneracao de tecidos
JP2002516572A (ja) * 1997-05-23 2002-06-04 バイオジェン，インコーポレイテッド 組織の再生の調節
EP1555317B1 (en) 1998-03-20 2011-09-28 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Synthetic genes and genetic constructs comprising the same
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
EP1160321A1 (en) * 2000-05-31 2001-12-05 Sanofi-Synthelabo Kidney Injury Novel Gene-1: Isolation and therapeutic applications
US7179901B2 (en) 2000-06-16 2007-02-20 Biogen Idec Ma Inc. Renal regulatory elements and methods of use thereof
US6812002B2 (en) * 2000-08-30 2004-11-02 Pfizer Inc. Osteoactivin protein and nucleic acids encoding the same, compositions and methods of stimulating bone differentiation
WO2002098920A1 (en) 2001-06-01 2002-12-12 Biogen, Inc. Molecules and methods for inhibiting shedding of kim-1
US8709412B2 (en) 2001-06-29 2014-04-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulation of TIM receptor activity in combination with cytoreductive therapy
EP1406653A4 (en) 2001-06-29 2005-05-04 Univ Leland Stanford Junior T-LYMPHOCYTE REGULATORY GENES AND METHODS OF USE
US20050014687A1 (en) * 2002-03-19 2005-01-20 Anderson David W. Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
CN1835769B (zh) 2002-12-30 2011-06-29 比奥根艾迪克Ma公司 Kim-1拮抗剂及其在免疫***调节中的应用
WO2004084823A2 (en) * 2003-03-19 2004-10-07 Abgenix, Inc. Antibodies against t cell immunoglobulin domain and mucin domain 1 (tim-1) antigen and uses thereof
JP5392980B2 (ja) * 2003-03-27 2014-01-22 チルドレンズ ホスピタル メディカル センター 早発型の腎尿細管細胞障害を検出するための方法およびキット
US20050272101A1 (en) * 2004-06-07 2005-12-08 Prasad Devarajan Method for the early detection of renal injury
EP2661963B1 (en) 2004-05-06 2015-09-16 The Trustees of Columbia University in the City of New York Method for diagnosing acute renal failure or chronic renal failure
RU2283666C9 (ru) * 2004-05-14 2007-03-10 Бизяев Алексей Вячеславович Средство для активации восстановления структуры и функции поврежденных тканей и органов
US20060003345A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-05 Pfizer Inc RNA bioassay
EP2128625B1 (en) * 2004-12-20 2017-01-25 Antibodyshop A/S Determination of neutrophil gelatinase-associated lipocalin (ngal) as a diagnostic marker for renal disorders
EP2251037B1 (en) 2005-03-02 2015-01-14 Biogen Idec MA Inc. KIM-1 antibodies for treatment of TH1/TH2-mediated conditions
US20070037232A1 (en) * 2005-03-31 2007-02-15 Barasch Jonathan M Detection of NGAL in chronic renal disease
US20080090304A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Barasch Jonathan Matthew Diagnosis and monitoring of chronic renal disease using ngal
EP2548583A3 (en) 2005-11-10 2013-02-27 Curagen Corporation Method of treating ovarian and renal cancer using antibodies against t cell immunoglobulin domain and mucin domain 1 (tim-1) antigen
US20090197280A1 (en) 2006-05-30 2009-08-06 Kristian Bangert Methods and Devices for Rapid Assessment of Severity of Injury
JP2010500535A (ja) * 2006-08-07 2010-01-07 アンチボディショップ・アクティーゼルスカブ 重大な腎損傷を除外するための診断検査
US8313919B2 (en) * 2007-03-21 2012-11-20 Bioporto Diagnostics A/S Diagnostic test for renal injury
US8846036B2 (en) 2007-10-19 2014-09-30 Abbott Laboratories Antibodies that bind to mammalian NGAL and uses thereof
US20090297479A1 (en) * 2008-03-28 2009-12-03 Kiyoshi Ariizumi Dc-hil conjugates for treatment of t-cell disorders
AU2009285550B2 (en) * 2008-08-28 2015-06-18 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
CA2735590A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
US20110207161A1 (en) * 2008-10-21 2011-08-25 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
CN102246035B (zh) * 2008-10-21 2014-10-22 阿斯图特医药公司 用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物
EP2361018B1 (en) 2008-11-10 2015-04-01 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
CA2743253A1 (en) * 2008-11-22 2010-05-27 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
BRPI1007483B1 (pt) * 2009-01-28 2021-11-30 Bio Preventive Medicine Corporation Método de diagnóstico de nefropatia in vitro, método in vitro para o monitoramento de progresso de nefropatia, método in vitro para o monitoramento da eficácia de um tratamento de nefropatia, método in vitro de avaliação de toxicidade renal de um agente e kit para diagnóstico de nefropatia
US9229010B2 (en) 2009-02-06 2016-01-05 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
EP2462446B1 (en) * 2009-08-07 2017-09-27 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
BR112012002711A2 (pt) 2009-08-07 2016-11-01 Astute Medical Inc metodo para avaliar o estado renal em um individuo, e, medicao de proteina
JP2013510322A (ja) 2009-11-07 2013-03-21 アスチュート メディカル，インコーポレイテッド 腎損傷および腎不全の診断および予後診断のための方法ならびに組成物
KR20120123056A (ko) 2009-12-20 2012-11-07 아스튜트 메디컬 인코포레이티드 신손상 및 신부전을 진단 및 예측하는 방법 및 조성물
HUE029304T2 (en) 2010-02-05 2017-02-28 Astute Medical Inc Procedures and Preparations for Diagnosing and Predicting Kidney Damage and Kidney Failure
EP3070474A3 (en) 2010-02-26 2016-12-07 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
JP2013529907A (ja) 2010-05-24 2013-07-25 ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニヴァーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク Ｎｇａｌタンパク質変異体及びその使用
EP3339860A1 (en) 2010-06-23 2018-06-27 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
IN2012MN02812A (es) 2010-06-23 2015-05-22 Astute Medical Inc
JP5905032B2 (ja) * 2011-02-09 2016-04-20 ラヴィヴォ・アーベー 腸管内微生物叢の回復および再構成のためのシンバイオティクス組成物
US10935548B2 (en) 2011-12-08 2021-03-02 Astute Medical, Inc. Methods for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure using insulin-like growth factor-binding protein 7 and metalloproteinase inhibitor 2
WO2014081980A2 (en) 2012-11-21 2014-05-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Mutant ngal proteins and uses thereof
CN105074466B (zh) 2013-01-17 2018-01-09 阿斯图特医药公司 用于肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法和组合物
US10420337B2 (en) * 2013-03-15 2019-09-24 Lifeline Scientific, Inc. Transporter with a glucose sensor for determining viability of an organ or tissue
WO2015134671A1 (en) 2014-03-04 2015-09-11 Targeson, Inc. Molecular imaging contrast agents and uses thereof
AU2017277305A1 (en) 2016-06-06 2018-12-20 Astute Medical, Inc. Management of acute kidney injury using insulin-like growth factor-binding protein 7 and tissue inhibitor of metalloproteinase 2

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003A (en) * 1841-03-12 Improvement in horizontal windivhlls
US5019368A (en) * 1989-02-23 1991-05-28 Cancer Biologics, Inc. Detection of necrotic malignant tissue and associated therapy
GB9122820D0 (en) * 1991-10-28 1991-12-11 Wellcome Found Stabilised antibodies
CA2118508A1 (en) * 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
WO1995021922A2 (en) * 1994-02-14 1995-08-17 Abbott Laboratories Non-a, non-b, non-c, non-d, non-e hepatitis reagents and methods for their use
US5622861A (en) * 1994-08-05 1997-04-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA encoding hepatitis A virus receptor
AU700913B2 (en) * 1994-08-18 1999-01-14 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Unique associated kaposi's sarcoma virus sequences and uses thereof
US6069230A (en) * 1994-11-10 2000-05-30 Promega Corporation High level expression and facile purification of proteins, peptides and conjugates for immunization, purification and detection applications
US6066322A (en) * 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
PT907735E (pt) * 1996-05-24 2006-06-30 Biogen Idec Inc Moduladores da regeneracao de tecidos
US7179901B2 (en) * 2000-06-16 2007-02-20 Biogen Idec Ma Inc. Renal regulatory elements and methods of use thereof
WO2002098920A1 (en) * 2001-06-01 2002-12-12 Biogen, Inc. Molecules and methods for inhibiting shedding of kim-1
EP1406653A4 (en) * 2001-06-29 2005-05-04 Univ Leland Stanford Junior T-LYMPHOCYTE REGULATORY GENES AND METHODS OF USE
US7838220B2 (en) * 2001-06-29 2010-11-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes associated with immune disease
US7215871B2 (en) * 2001-07-27 2007-05-08 Thomson Licensing Changing a playback speed for video presentation recorded in a field structure format
US7687454B2 (en) * 2001-12-03 2010-03-30 The University Of British Columbia Effectors of innate immunity determination
JP4694128B2 (ja) * 2002-01-30 2011-06-08 ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド ＴＩＭ−３、Ｔｈ１特異的細胞表面分子に関連した組成物および方法
US20050014687A1 (en) * 2002-03-19 2005-01-20 Anderson David W. Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
CN1835769B (zh) * 2002-12-30 2011-06-29 比奥根艾迪克Ma公司 Kim-1拮抗剂及其在免疫***调节中的应用
TW200539890A (en) * 2004-03-12 2005-12-16 Brigham & Womens Hospital Methods of modulating immune responses by modulating tim-1, tim-2 and tim-4 function
EP1740224A4 (en) * 2004-03-24 2008-07-02 Telos Pharmaceuticals Llc ADJUVANT COMPOSITIONS ENHANCING IMMUNE RESPONSE TO VACCINES AND METHODS OF USE

Also Published As

Publication number Publication date
EP1655367A1 (en) 2006-05-10
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US20050089868A1 (en) 2005-04-28
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US20070141590A1 (en) 2007-06-21
IL127162A0 (en) 1999-09-22
JP2008067701A (ja) 2008-03-27
US6664385B1 (en) 2003-12-16
CN1147584C (zh) 2004-04-28
CZ295936B6 (cs) 2005-12-14
NO985427L (no) 1999-01-25
EA004402B1 (ru) 2004-04-29
HU226205B1 (en) 2008-06-30
EP0907735B2 (en) 2009-10-07
CZ381398A3 (cs) 1999-05-12
DE69735364T3 (de) 2010-05-06
EP0907735B9 (en) 2010-05-19
DE69735364T2 (de) 2006-11-30
JP4602482B2 (ja) 2010-12-22
IL127162A (en) 2007-07-24
IS4902A (is) 1998-11-20
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HUP9902770A3 (en) 2001-09-28
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EA199801044A1 (ru) 1999-04-29
US20060286031A1 (en) 2006-12-21
AU712289B2 (en) 1999-11-04
NZ336467A (en) 2000-10-27
AU3567697A (en) 1997-12-09
BG64678B1 (bg) 2005-11-30
EE9800409A (et) 1999-06-15
DK0907735T5 (da) 2010-06-14
EP0907735A1 (en) 1999-04-14
NO20090945L (no) 1999-01-25
JP4316640B2 (ja) 2009-08-19
HUP9902770A2 (hu) 1999-12-28
CA2257851C (en) 2011-11-15
WO1997044460A1 (en) 1997-11-27
DK0907735T4 (da) 2009-12-21
TR199802421T2 (xx) 1999-02-22
BG102967A (bg) 2000-05-31
NO327597B1 (no) 2009-08-31
ES2258793T3 (es) 2006-09-01
EP0907735B1 (en) 2006-03-01
CA2257851A1 (en) 1997-11-27
BR9709115A (pt) 1999-08-03
PL330313A1 (en) 1999-05-10
NO985427D0 (no) 1998-11-20
DE69735364D1 (de) 2006-04-27
HK1021746A1 (en) 2000-06-30

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