ES2234677T3 - Procedimientos para preparar soluciones de componentes de sangre o plasma con concentraciones mejoradas. - Google Patents
Procedimientos para preparar soluciones de componentes de sangre o plasma con concentraciones mejoradas.Info
- Publication number
- ES2234677T3 ES2234677T3 ES00968544T ES00968544T ES2234677T3 ES 2234677 T3 ES2234677 T3 ES 2234677T3 ES 00968544 T ES00968544 T ES 00968544T ES 00968544 T ES00968544 T ES 00968544T ES 2234677 T3 ES2234677 T3 ES 2234677T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- component
- solvent
- polymerized form
- fibrin
- plasma
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/02—Blood transfusion apparatus
- A61M1/0209—Multiple bag systems for separating or storing blood components
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
- A61M1/3693—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits using separation based on different densities of components, e.g. centrifuging
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D21/00—Separation of suspended solid particles from liquids by sedimentation
- B01D21/26—Separation of sediment aided by centrifugal force or centripetal force
- B01D21/262—Separation of sediment aided by centrifugal force or centripetal force by using a centrifuge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M2202/00—Special media to be introduced, removed or treated
- A61M2202/04—Liquids
- A61M2202/0413—Blood
- A61M2202/0415—Plasma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M2202/00—Special media to be introduced, removed or treated
- A61M2202/04—Liquids
- A61M2202/0413—Blood
- A61M2202/0445—Proteins
- A61M2202/0447—Glycoproteins
- A61M2202/0449—Fibrinogen, also called factor 1
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2221/00—Applications of separation devices
- B01D2221/10—Separation devices for use in medical, pharmaceutical or laboratory applications, e.g. separating amalgam from dental treatment residues
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B04—CENTRIFUGAL APPARATUS OR MACHINES FOR CARRYING-OUT PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES
- B04B—CENTRIFUGES
- B04B5/00—Other centrifuges
- B04B5/04—Radial chamber apparatus for separating predominantly liquid mixtures, e.g. butyrometers
- B04B5/0442—Radial chamber apparatus for separating predominantly liquid mixtures, e.g. butyrometers with means for adding or withdrawing liquid substances during the centrifugation, e.g. continuous centrifugation
- B04B2005/0485—Radial chamber apparatus for separating predominantly liquid mixtures, e.g. butyrometers with means for adding or withdrawing liquid substances during the centrifugation, e.g. continuous centrifugation with a displaceable piston in the centrifuge chamber
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Centrifugal Separators (AREA)
Abstract
Un procedimiento para la preparación de fibrina a partir de sangre o plasma, que comprende las etapas de: someter la sangre o el plasma a condiciones para catalizar la formación de una forma polimerizada de dicho componente; recuperar dicha forma polimerizada de dicho componente, que se caracteriza por la centrifugación de dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente en una cámara de un aparato de centrífuga mientras se añade una cantidad inicial de disolvente a dicha cámara que contiene dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente para disolver dicha forma polimerizada de dicho componente, siendo dicha cantidad inicial de disolvente una cantidad inferior a una cantidad total predeterminada de disolvente para disolver toda la forma polimerizada recuperada de dicho componente mientras es suficiente para mantener dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente disuelta en dicha cantidad inicial de disolvente en solución sin que se produzca la precipitación del componente; y añadir disolvente adicional a dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente, añadiéndose dicho disolvente adicional a dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente en una cantidad equivalente a una diferencia entre dicha cantidad total predeterminada de disolvente y dicha cantidad inicial de disolvente añadida para disolver dicha forma polimerizada de dicho componente.
Description
Procedimientos para preparar soluciones de
componentes de sangre o plasma con concentraciones mejoradas.
La invención se refiere a procedimientos para
separar componentes de la sangre o el plasma y, más específicamente,
la invención se refiere a procedimientos con una recuperación
mejorada del componente sanguíneo o plasmático.
El documento WO 96/16714 describe un recipiente
para separar un componente de la sangre o del plasma, por ejemplo
monómero de fibrina, de la sangre o el plasma mediante
centrifugación alrededor de un eje vertical. Este recipiente
comprende una primera cámara anular delimitada por una pared
cilíndrica externa y una pared cilíndrica interna, donde ambas
paredes se extienden coaxialmente alrededor de un eje común, así
como por una pared superior y una pared inferior, donde la pared
inferior está formada por un pistón desplazable dentro de la primera
cámara. El recipiente además comprende una segunda cámara acomodada
por debajo de la primera cámara y que se comunica con la primera
cámara a través de un primer conducto. La segunda cámara está
definida por la pared cilíndrica externa, la pared inferior de la
primera cámara y por una segunda pared inferior. Esta segunda cámara
sirve como cámara de reacción para recibir el plasma y tratar el
plasma para obtener el componente deseado. Por ejemplo, el
tratamiento de fibrinógeno plasmático con trombina o con una enzima
del tipo de la trombina convierte el fibrinógeno en el monómero
fibrina que polimeriza de forma espontánea en un polímero de fibrina
no reticulada.
La introducción de este recipiente en una
centrífuga para la reacción descrita anteriormente produce que el
polímero de fibrina no reticulada se separe del plasma y se deposite
en una pared externa de la cámara de reacción durante la
centrifugación. Cuando a continuación se acciona el pistón se
elimina el plasma restante de la cámara de reacción. Después se
añade un disolvente para disolver el polímero de fibrina no
reticulada depositada de este modo y formar la solución deseada de
monómero de fibrina.
Como se describe con detalle en el documento EP
592242, esta solución de monómero de fibrina es extremadamente útil
en, por ejemplo, los procedimientos de taponamiento de la de
fibrina. Es deseable usar dispositivos como los descritos en la
patente de EE.UU. 5.603.845, el documento WO 96/16713, la patente de
EE.UU. número 5.935.432, el documento WO 96/16714, la patente de
EE.UU. número 5.824.230, el documento WO 96/16715 y la patente de
EE.UU. número 5.733.446, cuyas descripciones se incorporan en la
presente memoria descriptiva como referencia, para preparar
productos sanguíneos tales como componentes taponadores de la
fibrina justo en el momento de la cirugía de forma que se pueda
utilizar sangre autóloga. Desde el punto de vista de un cirujano,
también puede ser deseable usar productos taponadores que sean
relativamente uniformes de un procedimiento a otro. Sin embargo,
esto es casi imposible para los productos de preparación reciente,
ya que la concentración de fibrinógeno en la sangre humana puede
variar en \pm 300% en poblaciones de pacientes humanos y también
cariarán los componentes taponadores recién preparados de fuentes
individuales.
La mayoría de los seres humanos poseen niveles de
fibrinógeno de entre 2 y 6 mg/ml de plasma y algunos seres humanos
pueden tener un nivel tan bajo como 1 mg/ml y algunos un nivel tan
elevado como 10 mg/ml (plasma fibrinógeno).
Como se ha descrito en el documento WO
98/
30887 y el la patente de EE.UU. número 5.955.026, cuyas descripciones se incorporan en la presente memoria descriptiva como referencia, se conocen un procedimiento y un aparato que implican la introducción de sangre o plasma en un recipiente que tenga una pared transmisora de luz y proporcionar una reacción que tenga como resultado una forma polimerizada del componente que se está depositando en la pared. Una lectura óptica de la diferencia en la transmisión de luz a través de la pared sola y de la pared con el polímero en ella se puede relacionar con la cantidad total del componente de la muestra de sangre o de plasma.
30887 y el la patente de EE.UU. número 5.955.026, cuyas descripciones se incorporan en la presente memoria descriptiva como referencia, se conocen un procedimiento y un aparato que implican la introducción de sangre o plasma en un recipiente que tenga una pared transmisora de luz y proporcionar una reacción que tenga como resultado una forma polimerizada del componente que se está depositando en la pared. Una lectura óptica de la diferencia en la transmisión de luz a través de la pared sola y de la pared con el polímero en ella se puede relacionar con la cantidad total del componente de la muestra de sangre o de plasma.
Usados de este modo, el aparato y los
procedimientos descritos en el documento WO/30887 y la patente de
EE.UU. nº 5.955.026 son útiles para determinar la concentración del
componente en la sangre o el plasma. Además, conociendo la cantidad
de disolvente o de tampón que se va a usar para solubilizar el
componente polimerizado para dar la solución de componentes deseada,
la concentración de la solución resultante está disponible con
facilidad. Todavía más, cuando se lleva a cabo la determinación
óptica de la concentración del componente en sangre o plasma (o la
determinación de la cantidad de componente polimerizado), estos
datos se pueden usar para controlar la cantidad de tampón o de
disolvente usada para solubilizar el polímero para preparar
soluciones de las concentraciones deseadas. Todavía más, cuando
también se usa el tampón o el disolvente para que las soluciones
resultantes sean de un valor o un intervalo de valores de pH
específico, se pueden emplear límites de la cantidad mínima y máxima
de tampón o de disolvente. Por ejemplo, cuando una fracción de
plasma reacciona para formar un polímero de fibrina y se usa un
tampón de acetato para pH 4 para solubilizar el polímero para formar
una solución deseada de monómero de fibrina, en el procedimiento y
el aparato se pueden programar cantidades mínimas y máximas de
tampón para mantener el pH resultante dentro de un intervalo
deseado, por ejemplo 4,0-4,5. Los procedimientos
descritos en el documento WO 98/30887 pueden proporcionar soluciones
de monómero de fibrina de aproximadamente 20 mg/ml \pm 25%
mientras se mantiene de forma simultánea el valor de pH entre
4,0-4,5. Esto representa un excepcional incremento
de 10 veces la reproducibilidad de la solución de monómero de
fibrina autóloga o recién preparada. También es importante destacar
que el aparato de detección óptica y los procedimientos descritos en
el documento 98/30887 determinan las cantidades/concentraciones de
componentes en un recipiente que rota a velocidades elevadas, por
ejemplo de hasta 9000-10.000 RPM en lugar de tomar
una medición óptica en una posición fija.
Los aparatos y los procedimientos tales como los
comentados anteriormente, aunque ventajosos pueden no reconocer todo
el polímero de fibrina depositado en la paredes del recipiente. En
consecuencia, sería ventajoso asegurar la eliminación de toda o casi
toda la forma polimerizada del componente depositado en la pared del
recipiente con el fin de maximizar la cantidad de recuperación del
componente.
En consecuencia, un objeto de la invención es
proporcionar un procedimiento en el que el suministro de disolvente
está controlado y, en particular, el disolvente se aplica en varias
etapas para maximizar la recuperación de la forma polimerizada del
componente deseado.
Para alcanzar el anterior objeto y otros objetos
se proporciona un procedimiento para preparar una solución de un
componente de la sangre o del plasma con una recuperación mejorada
del componente de la sangre o el plasma. El procedimiento de acuerdo
con la presente invención incluye la etapa de someter la sangre o el
plasma a las condiciones para catalizar la formación de una forma
polimerizada de dicho componente de dicha sangre o plasma. Después
se recupera la forma polimerizada del componente y a la forma
polimerizada recuperada del componente se añade una cantidad inicial
de una solución de disolvente para disolverla. La cantidad inicial
de disolvente es una cantidad inferior a la cantidad total
predeterminada de solución tampón para disolver toda la forma
polimerizada recuperada del componente. A la forma polimerizada
recuperada del componente se añade disolvente adicional. El
disolvente adicional se añade a la forma polimerizada recuperada del
componente se añade una cantidad equivalente a una diferencia entre
la cantidad total predeterminada de disolvente y la cantidad inicial
de disolvente añadida para disolver la forma polimerizada del
componente.
La invención se describe con más detalle a
continuación haciendo referencia a las figuras adjuntas, en las
que:
Fig. 1 es una vista transversal axial de un
recipiente para separar el monómero de fibrina del plasma
sanguíneo;
La Fig. 2 es una vista esquemática de un aparato
durante la manipulación de un recipiente del tipo que se muestra en
la Fig. 1.
La Fig. 3 es una segunda vista esquemática de un
aparato adicional durante la manipulación de un recipiente del tipo
que se muestra en la Fig. 1; y
La fig. 4 es un gráfico que muestra las
mediciones de un fotómetro frente al tiempo.
La presente invención proporciona procedimientos
para preparar soluciones de un componente de sangre o de plasma de
concentraciones conocidas o controladas y con una recuperación
mejorada del componente. Esto proporciona la capacidad única para
preparar tales soluciones en una unidad de centrífuga automática en
menos de 30 minutos de forma que se puedan utilizar componentes
recién preparados, y preferentemente autólogos. La posible
desventaja de usar soluciones o componentes recién preparados, es
decir, el hecho de que los niveles del componente pueden variar de
un paciente a otro, se supera en la presente invención. La
concentración de una solución del componente, por ejemplo una
solución de monómero de fibrina, se mejora.
A lo largo de esta solicitud se describe la
presente invención en relación con las formas de realización
preferidas, por ejemplo el aparato, los recipientes y los
procedimientos preferidos útiles para preparar soluciones de
monómero de fibrina de sangre entera o de plasma. Sin embargo, los
expertos en la técnica deberán entender con facilidad que con los
procedimientos generales descritos en la presente memoria
descriptiva también se pueden preparar o extraer otros componentes
sanguíneos o plasmáticos.
En cuanto a las figuras en las que números
similares indican elementos similares, en la Fig: 1 se muestra un
recipiente. El recipiente está constituido por partes que permiten
la simetría de la rotación y permiten la colocación del recipiente
en un aparato de centrífuga que se muestra en la Fig. 2 de forma que
se centrifugue alrededor de un eje central 1. A este respecto,
aparatos y procedimientos de separación líquida conocidos adecuados
para usar en la presente invención se describen en las patentes de
EE.UU. números 5.603.845, 5.738.784 y 5.750.657, cuyas descripciones
se incorporan, cada una de ellas, en la presente memoria descriptiva
como referencia.
Preferentemente, el recipiente de la presente
invención es de un material plástico de grado médico y se prefiere
el material de policarbonato. Por las razones que se comentan a
continuación, el material puede transmitir la luz en un cierto
intervalo de longitud de onda. El recipiente comprende una parte
externa del recipiente 2 y una parte interna del recipiente 3 que se
ajustan completamente una en otra y en todas partes están en
estrecho contacto entre sí aparte de la porción donde se proporciona
un conducto intermedio que se extiende axialmente 4. El conducto 4
se proporciona por una muesca formada en la parte interna del
recipiente 3. Las partes 2 y 3 del recipiente incluyen los fondos 5
y 6, respectivamente, donde los fondos definen una apertura central
7 que permite el paso de un cilindro de pistón 8. Alrededor de la
apertura 7, las dos partes del recipiente incluyen las porciones 9 y
10 que se extienden axialmente, respectivamente, que se extienden
cerca de un cilindro de pistón hueco 8 en una dirección distal hacia
el interior de las partes del recipiente. La parte externa del
recipiente 2 linda con el cilindro de pistón 8 a lo largo de un
reborde que se extiende radialmente 11 provisto de un hueco 12 que
recibe un anillo de cierre 13.
Como se ilustra en la Fig. 1, el conducto 4
continúa entre las partes interna y externa del recipiente, desde
las paredes cilíndricas externas de las partes interna y externa del
recipiente a lo largo de los fondos 5 y 6 y las porciones axiales 9
y 10 hasta la apertura justo por debajo del anillo de cierre 13 en
la apertura 7. La porción axial 10 de la parte interna del
recipiente 3 que linda con la apertura 7 tiene unas dimensiones
tales que existe un paso estrecho y libre hacia el interior de las
partes del recipiente 2 y 3 alrededor del cilindro de pistón hueco
8.
La parte externa del recipiente 2 comprende una
porción cilíndrica de un diámetro uniforme. En dirección
descendente, cuando se ve en relación con la Fig. 1, esta porción
continúa en una porción cilíndrica 14 de un diámetro ligeramente
mayor a través de una corta porción de transición 15 que forma una
superficie interna 16 frusto-cónica. La parte
interna del recipiente 3 termina en la localización en la que la
porción de transición 15 de la parte externa del recipiente 2
continúa en la porción cilíndrica 14 de un diámetro mayor. El
extremo inferior de la parte interna del recipiente 3 comprende una
superficie externa 17 de una forma frusto-cónica
que coincide con la forma de la superficie
frusto-cónica 16 del lado interno de la parte
externa del recipiente 2. Justo por debajo del extremo inferior de
la parte interna del recipiente 3, que termina en una superficie
radial 18 se proporciona un disco anular externo y uno interno 19 y
20, respectivamente. Estos discos lindan estrechamente entre sí,
aparte del hecho de que definen entre ellos un conducto 21 que se
extiende en un plano axial de una apertura central 22 y hacia el
lado interno de la parte externa del recipiente 2, donde el conducto
21 se comunica con el conducto 4 entre la parte externa del
recipiente 2 y la parte interna del recipiente 3 a través de una
porción 23 que se extiende axialmente. El conducto 21 y la porción
23 que se extienden axialmente se proporcionan de un modo adecuado
por medio de una muesca en el lado del disco interno 20 hacia el
disco externo 19. Los dos discos 19 y 29 tienen una forma con un
curso oblicuo de forma que comprenden sustancialmente las
superficies frusto-cónicas interna y externa y, por
tanto, se inclinan en dirección descendente hacia la apertura
central 22 en una dirección distal de la apertura 7 del cilindro de
pistón hueco 8 en una parte externa del recipiente 2 y una parte
interna del recipiente 3. El disco interno 20 también incluye una
superficie radial 24 que linda con la superficie radial adyacente 18
sobre la parte interna del recipiente 3. La superficie radial 24 del
disco interno 20 se proporciona con un hueco 25 para recibir un
anillo de cierre 26.
Los dos discos 19 y 20 se mantienen en posición
lindando con la superficie radial 18 de la parte interna del
recipiente 3 por medio de una cubierta 27 que cierra la parte
externa del recipiente en dirección descendente. La cubierta 27
comprende una porción circunferencial con forma de manguito 28
adaptada para lindar estrechamente con la cara interna de la parte
externa del recipiente 2, a la que se asegura de un modo adecuado,
tal como por medio de una unión de disparo entre un cordoncillo
circunferencial 29 en la cara externa del manguito 28 y una
correspondiente muesca circunferencial 30 en la cara interna de la
parte externa del recipiente 2. Se asegura una conexión de hermética
por medio de un anillo hermético 31 en un hueco circunferencial 32
en la periferia externa del disco externo 19. La cubierta 27 también
incluye una pared relativamente fina 32 adaptada para formar el
fondo inferior del recipiente en la posición que se muestra en la
Fig. 1. La pared 32 se extiende sustancialmente a lo largo de un
curso paralelo a los discos externo e interno 19 y 20 de tal modo
que la pared 32 se extiende desde la cara interna del manguito 27 en
una porción adyacente a los discos 19 y 20 y de forma descendente
hacia una porción sustancialmente en un nivel con el borde inferior
33 de la parte externa del recipiente 2. Con el fin de reforzar esta
pared relativamente fina 32 se proporciona un cordoncillo radial de
refuerzo 34 a intervalos regulares, donde sólo uno de los
cordoncillos aparecen en la Fig. 1a. El cordoncillo 34 se configura
en parte con una porción localizada en la pared externa 32 y en
parte con una porción que se localiza en la pared interior 32. Esta
última porción interior se designa con el número de referencia 35 y
está configurado de forma que linda con el fondo del disco externo
19, con el resultado de que contribuye al mantenimiento de los
discos 19 y 20 en una posición fiable.
La separación 36 se localiza entre el disco
externo 19 y la cubierta 27. La separación 36 comprende un tramo de
tubo central 37 que está montado encima de una clavija 38 que se
proyecta axialmente hacia el interior y configurada incorporada con
la pared 32 de la cubierta 37. El tramo de tubo 37 está incorporado
en un disco circunferencial de pared 39 que se extiende hacia el
exterior desde el tramo de tubo 37 de un modo tal que inicialmente
se inclina ligeramente en dirección descendente hacia la pared 32 de
la cubierta 27, desde donde se extiende a lo largo de un curso axial
corto y continua siguiendo un curso que se extiende sustancialmente
paralelo a la pared 32 de la cubierta.. El disco de la pared 39
termina en una corta periferia 40 que se extiende radialmente y
descansa sobre un soporte 41 encima de las porciones de los
cordoncillos 35 de la cubierta 27. Entre la periferia externa 40 del
disco de la pared 39 y el fondo del disco externo 19 se localiza una
unidad anular de filtro 42. La unidad anular de filtro 42 linda con
una superficie configurada sustancialmente en sentido radial 43
sobre la cara externa adyacente del disco externo 19.
Con el fin de asegurar la estabilidad en la
separación 36, entre el tramo del tubo 37 y el disco de la pared 39
se localizan cordoncillos radiales de refuerzo que de designan con
el número de referencia 44.
En el extremo de la cubierta 27 opuesto al tramo
de tubo 27 de la separación 36 se asegura una cápsula designada con
el número de referencia 45. Esta cápsula comprende un tramo de pipa
elongado 46 incorporado en un disco radial 47 y lleva dos discos
adicionales radiales y anulares 48 y 49. Los discos radiales 48 y 49
se aseguran mediante ajuste por rozamiento en su lado respectivo del
disco fijo 47. Los discos sueltos 48 y 49 se colocan a su respectiva
distancia del anillo fijo 47 por medio de soportes circunferenciales
50 y 51 respectivamente en el tramo del tubo 46. Todos los tres
discos 47, 48 y 49 tienen el mismo diámetro externo y llevan a lo
largo de sus periferias respectivas un manguito circunferencial
montado para que de pueda desplazar 52.
Como se ilustra en la Fig. 1, el disco inferior
49 linda con el extremo superior del tramo de tubo 37 de la
separación 36, gracias a lo cual se determina la posición de la
cápsula 45 en dirección axial. Esta posición también se determina de
un modo tal que cuando se desplaza en dirección axial el manguito
desplazable 52 de la cápsula entra en una unión hermética por su
extremo inferior, con el borde más interno 53 del disco externo 19
en la apertura central 22. En esta posición del manguito 52, todavía
existe una comunicación entre el espacio dentro del disco interno 20
que rodea el manguito 52 y la entrada al interior de conducto 21
entre el disco externo 19 y el disco interno 20. La longitud axial
del manguito desplazable 52 está adaptada de tal forma que se encaja
con el disco externo 19 antes de que el extremo superior del
manguito 52 se separe del anillo fijo 47 durante el desplazamiento
descendente axial del manguito 52. El diámetro interno del manguito
52 también se adapta al diámetro externo de la porción que se
extiende en dirección axial del disco de la pared 39 de la
separación 36 de tal modo que el desplazamiento descendente continuo
del manguito 52 hacia la cubierta 27 hace que el manguito 52 se
encaje de forma fija con la separación 36 una vez que se ha separado
del disco externo 19. La longitud de la porción axial de la
separación 36 corresponde también con la longitud axial del manguito
52 de tal modo que la separación 36 soporta casi por completo el
manguito 52 en la posición inferior.
Como se ilustra en la Fig. 1, el cilindro del
pistón hueco 8 comprende un pistón circunferencial 55 dentro de la
parte externa del recipiente 2 y de la parte interna del recipiente
3, donde el pistón 55 encaja de forma hermética en la cara interna
de la parte interna del recipiente 3 a través de un anillo de de
cierre 56.
En el interior del cilindro de pistón hueco 8
existe un Luer de acoplamiento para la jeringuilla convencional 58
con un émbolo que actúa como un pistón 59que actúa sobre el
contenido de la jeringuilla 58. El acoplador 57 tiene una forma casi
igual a la de un tramo de tubo que comunica con una apertura central
61 en un pistón 55 a través de una porción
frusto-cónica 60. El tramo de tubo 57 está provisto
de una red que se proyecta hacia el interior radialmente 62 para
dirigir el fluido que sale de la jeringuilla 58 lejos de una vía
axial, por tanto alrededor del tramo de pipa elongado 46 hacia abajo
al interior dentro de la cápsula 45. El último tramo de tubo 46
tiene tal longitud y tales dimensiones que se puede encajar de forma
hermética en el tramo del tubo 57 dentro del cilindro de pistón
hueco 8 cuando el pistón 55 está en la posición inferior cerca de la
cubierta 27. Con el fin de estimular la conexión hermética anterior,
la cara interna del tramo del tubo 57 se forma con un diámetro en
disminución gradual al final del pistón adyacente 55.
La falda que se proyecta en dirección axial está
formada incorporada con el pistón 55 alrededor de la apertura
central 61 del pistón. La falda 63 está configurada con un diámetro
tal y tal longitud que mediante un desplazamiento adecuado del
pistón 55 puede activar el desplazamiento anterior del manguito
desplazable 52 de la cápsula 45 en las posiciones en las que se
encaja con el borde interno 53 de la apertura central 22 a través de
dos discos 19 y 20, seguido por una unión de la separación 36.
La junta de labios anular, resiliente se asegura
alrededor del cilindro de pistón hueco 8 en la parte superior dentro
de las partes 2 y 3 del recipiente. Esta junta de labios 64 se
adapta para prevenir un paso indeseado de fluido procedente del
interior de las partes 2 y3 del recipiente hacia el conducto 4, pero
permite el paso de fluido cuando se aplica una fuerza a través del
pistón 55.
Como se indica en la parte superior de la Fig. 1
se proporciona una conexión a un tubo flexible 65 a través de una
apertura 66 en las partes externa e interna 2 y 3 del recipiente,
respectivamente. Esta conexión se conoce y, por tanto, no se
muestran con mayor detalle, pero permite una interrupción de la
conexión con el tubo flexible cuando se desee. Además, de un modo
convencional se proporciona una apertura con escape de aire con un
filtro adecuado y, por tanto, ni se muestra ni se describe más
detalladamente.
Se deja un paso 69 desde el área entre la
separación 36 y la cubierta 27 y hacia arriba a través del interior
del tramo de tubo 37 y la separación 36 y a través del interior del
tramo de tubo 46 de la cápsula 45. El paso 69 permite la
transferencia de fluido a la jeringuilla 58 desde esta área cuando
el tramo de tubo 46 se acopla al tramo de tubo 57 en el interior del
cilindro de pistón 8. El paso 38a se proporciona en la porción
inferior de la clavija 38 en la cubierta 27 mediante la
configuración de la clavija 38 con una superficie axial plana, en la
que la clavija tiene una sección transversal sustancialmente
circular. Como resultado se proporciona un espacio entre e+la
clavija y la porción adyacente de la cara interna del tramo de tubo
37. El área 67 se encuentra justo por encima de la clavija 38 donde
la separación 36 presenta un diámetro interno ligeramente reducido.
De este modo es posible colocar un pequeño filtro 68 justo por
encima de esta área, por donde el fluido debe atravesar el filtro
antes de entrar en el tramo de tubo 46 de la cápsula 45.
El recipiente descrito comprende una primera
cámara anular 70 definida hacia dentro por un cilindro de pistón
hueco 8 que forma una pared interna cilíndrica 71 y hacia fuera por
una pared cilíndrica externa 72 formada por la parte externa 2 del
recipiente y la parte interna 3 del recipiente. Cuando se usa en la
posición convencional de la Fig. 1, la cámara anular 70 está
definida en dirección ascendente por la pared superior 73 formada
por los fondos 5 y 6, respectivamente, de la parte externa 2 del
recipiente y la parte interna del recipiente 3. En dirección
descendente, la cámara anular 70 está definida por una pared
inferior 74 formada por un el pistón 55. LA segunda cámara 75 está
definida por debajo del pistón 55, en la que la segunda cámara está
definida hacia fuera por la misma pared externa cilíndrica 72 que la
primera cámara 70. En dirección descendente, la segunda cámara 75
está definida por una segunda pared inferior 76 formada por un disco
externo 19 y un disco interno 20. La cápsula 45 se localiza en el
centro en el interior de la segunda cámara 75. Por debajo de la
segunda pared inferior 76 se localiza una tercera cámara 777 y esta
tercera cámara 77 está definida por la separación 36 y la unidad de
filtro anular 42. Además, la tercera cámara 77 se comunica con la
segunda cámara 75 a través de un paso formado pos la apertura
central 22 en el disco externo 19 y el disco interno 20. Por último,
por debajo de la separación 36 se localiza una cuarta cámara 78,
estando la cuarta cámara 78 definida en dirección descendente por la
pared 32 de la cubierta 27 y también por porciones de manguito 28 de
la cubierta 27 y la cara inferior del disco externo 19.
Como se ha descrito antes, el recipiente en
cuestión es adecuado, principalmente, para la separación de un
componente, tal como monómero de fibrina de la sangre, y, para este
propósito se llena antes la segunda cámara 75, y preferentemente la
cámara superior 80 de la cápsula 46, con una enzima adecuada, que
puede catalizar la escisión de los fibrinopéptidos A y/o B del
fibrinógeno, es decir, convertir el fibrinógeno en fibrina, tal como
batroxobina. Como se entiende del documento EP nº 592.242 y la
patente de EE.UU. nº 5.750.657, cuyas descripciones se incorporan en
la presente memoria descriptiva como referencia, se puede emplear
cualquier enzima similar a la trombina. Entre tales enzimas se
incluyen la propia trombina o cualquier material con una actividad
similar, tal como Ancrod, Acutin, Venyyme, Asperasa, Botropasa,
Crotabase, Flavorxobina, Gabonasa y la preferida, batroxobina. La
batroxobina se puede unir químicamente a la biotina, que es una
sustancia sintética que permite que la captura de la batroxobina de
un modo convencional por medio de la avidina en una composición de
avidina-agarosa. En consecuencia, la
avidina-agarosa se localiza en la cámara más
inferior 81 de la cápsula. Tanto la composición de
biotina-batroxobina como la composición
avidina-agarosa son relativamente fáciles de cargar
en las respectivas cámaras 80 y 81 dentro de la cápsula 45 antes de
que la cápsula se coloque en el interior del dispositivo.
Por último, la jeringuilla 58 se localiza en el
cilindro de pistón 8, donde la jeringuilla 58 contiene un tampón a
pH 4 de un acetato diluido con ácido acético. La jeringuilla 58 se
usa después para recibir la solución deseada de monómero de
fibrina.
También se puede usar otro tampón conocido de la
técnica anterior. El agente tampón de redisolución puede ser
cualquier solución tampón ácida, preferentemente aquéllas con un pH
entre 1 y 5. Entre los ejemplos adecuados se incluyen ácido acético,
ácido succínico, ácido glucurónico, ácido cisteico, ácido crotónico,
ácido itacónico, ácido glutónico, ácido fórmico, ácido aspártico,
ácido adípico y se prefieren las sales de ácido acético, por ejemplo
acetato sódico. Asimismo, la solubilización también se puede llevar
a cabo a un pH neutro por medio de un agente caotrópico. Entre los
agentes adecuados se incluyen urea, bromuro sódico, clorhidrato de
guanidina, KCNS, yoduro potásico y bromuro potásico. Las
concentraciones y los volúmenes de tal tampón ácido o tal agente
caotrópico son como se ha descrito en el documento EP nº
592.242.
Durante o justo después del suministro de sangre,
el cilindro de pistón 8 se empuja tanto en el interior del
recipiente que el manguito desplazable 52 de la cápsula 45 se mueve
hacia abajo hacia una unión hermética a través del paso, a través de
la pared inferior 76 hasta llegar a la segunda cámara 77. Como
resultado, el acceso se abre de forma simultánea a la composición de
biotina-batroxobina dentro de la cámara más
superior 80 de la cápsula.
Cuando el recipiente está listo para usar se
introduce una muestra de sangre en la primera cámara a través de una
aguja que no se muestra y un tubo flexible 65 de un modo
convencional, la muestra de sangre se mezcla, preferentemente, con
un anticoagulante también de un modo convencional. Durante la
introducción de la sangre a través del tubo flexible 65 y la
apertura 66 en el interior de la primera cámara 70 se elimina el
aire de la cámara de un modo convencional. Tras la introducción de
la sangre, se elimina el tubo flexible 65 y la apertura 65 se cierra
de forma hermética. Posteriormente, el recipiente con la sangre se
coloca en un aparato de centrífuga que, entre otras cosas,
contribuye a la compresión hermética de las diversas porciones. El
aparato de centrífuga se describe más adelante y hace que el
recipiente rote alrededor de un eje de rotación 1. Como resultado de
la centrifugación, la sangre se separa en la primera cámara 70 en
una fracción plasmática que se deposita radialmente dentro de las
porciones restantes de la sangre, donde las porciones restantes que
contienen las células sanguíneas rojas y blancas dispuestas en la
porción más externa de la cámara 70. Como se describe en el
documento EP nº 592.242, las plaquetas pueden estar presentes en la
fracción plasmática o la fracción dispuesta en la porción más
externa de la cámara 70, como se desee, mediante la variación de la
velocidad y el tiempo de centrifugación.
Cuando se han estabilizado las interfases entre
el plasma y las porciones restantes de la sangre, es decir cuando la
separación es completa, se inicia una reducción del volumen de la
primera cámara 70 mediante el cilindro de pistón 8 y, en
consecuencia, se retira el pistón 55. Como resultado, primero una
posible capa fina de aire atraviesa los conductos 4 y 21 hacia la
segunda cámara 75 y un posterior movimiento del pistón 55 tiene como
resultado el paso del plasma a la segunda cámara 75. El movimiento
del pistón 55 se para cuando toda la capa de plasma se ha forzado
en la segunda cámara 75, es decir cuando la interfase entre la
fracción plasmática y la porción restante de la sangre dispuesta en
la porción más externa de la cámara 70 alcanza la pared interna 71
de la primera cámara 70.
Como se ha descrito en el documento WO
98/
30887 y la patente de EE.UU. nº 5.955.026, la introducción de la cantidad de tampón a pH 4 y en consecuencia la activación de la jeringuilla 58, puede ser según una cantidad fija predeterminada de tampón que se va a añadir o se puede llevar a cabo como respuesta a la cantidad de polímero de fibrina no reticulada presente en la segunda cámara 75 del recipiente 110. Es decir, la cantidad de polímero de fibrina presente en la segunda cámara 75 se puede medir mediante un fotómetro 130 dispuesto de forma fija en el aparato en frente de la segunda cámara 75. El fotómetro puede comprender un dispositivo emisor de luz y un sensor de luz (no se muestra) dispuestos de forma que se pueda medir la intensidad de la transmisión de luz a través de la pared del recipiente 110. Se puede usar cualquier emisor de luz dependiendo del material de la pared. Los emisores de luz preferidos se encuentran en el intervalo de longitud de onda de 400-1100 nanómetros. Los preferidos son los LED que tienen una longitud de onda de 920 ó 654 mm. El modelo SFH460 de Siemens es adecuado para este propósito. Como se describe en el documento WO 98/30887, el fotómetro 130 mide la cantidad de polímero de fibrina en la pared externa de la segunda cámara 75 mediante la observación de la disminución de la intensidad de luz transmitida a través de la pared de la cámara con el polímero en comparación con una lectura de referencia de la transmisión de la luz a través de la pared sola. Las lecturas de la transmisión se pueden llevar a cabo continuamente al menos durante el periodo que comienza justo antes de la adición del tampón a pH4 y que termina después de la finalización de la adición. Al principio de este periodo se registra el grosor y en consecuencia la cantidad de polímero de fibrina y según ellos se determina la cantidad de tampón a pH4 que se va a añadir. La última determinación de la cantidad de tampón a pH 4 se realiza en la unidad de control 131 que recibe información acerca de los valores medidos del fotómetro a través del conducto 132. Posteriormente, la unidad de control 131 activa el motor 115 a través del conducto 133 para impulsar el huso 116 y, en consecuencia, la barra de activación, que a su vez activa el pistón 59 de la jeringuilla 58.
30887 y la patente de EE.UU. nº 5.955.026, la introducción de la cantidad de tampón a pH 4 y en consecuencia la activación de la jeringuilla 58, puede ser según una cantidad fija predeterminada de tampón que se va a añadir o se puede llevar a cabo como respuesta a la cantidad de polímero de fibrina no reticulada presente en la segunda cámara 75 del recipiente 110. Es decir, la cantidad de polímero de fibrina presente en la segunda cámara 75 se puede medir mediante un fotómetro 130 dispuesto de forma fija en el aparato en frente de la segunda cámara 75. El fotómetro puede comprender un dispositivo emisor de luz y un sensor de luz (no se muestra) dispuestos de forma que se pueda medir la intensidad de la transmisión de luz a través de la pared del recipiente 110. Se puede usar cualquier emisor de luz dependiendo del material de la pared. Los emisores de luz preferidos se encuentran en el intervalo de longitud de onda de 400-1100 nanómetros. Los preferidos son los LED que tienen una longitud de onda de 920 ó 654 mm. El modelo SFH460 de Siemens es adecuado para este propósito. Como se describe en el documento WO 98/30887, el fotómetro 130 mide la cantidad de polímero de fibrina en la pared externa de la segunda cámara 75 mediante la observación de la disminución de la intensidad de luz transmitida a través de la pared de la cámara con el polímero en comparación con una lectura de referencia de la transmisión de la luz a través de la pared sola. Las lecturas de la transmisión se pueden llevar a cabo continuamente al menos durante el periodo que comienza justo antes de la adición del tampón a pH4 y que termina después de la finalización de la adición. Al principio de este periodo se registra el grosor y en consecuencia la cantidad de polímero de fibrina y según ellos se determina la cantidad de tampón a pH4 que se va a añadir. La última determinación de la cantidad de tampón a pH 4 se realiza en la unidad de control 131 que recibe información acerca de los valores medidos del fotómetro a través del conducto 132. Posteriormente, la unidad de control 131 activa el motor 115 a través del conducto 133 para impulsar el huso 116 y, en consecuencia, la barra de activación, que a su vez activa el pistón 59 de la jeringuilla 58.
Como también se ha descrito en el documento WO
98/30887 y en la patente de EE.UU. 5.955.026 y se ha ilustrado en la
Fig. 3 se puede usar un segundo fotómetro 130'. Como se ha descrito
antes, preferentemente la transmisión de la luz del emisor de luz es
continua durante el procedimiento de depositar el componente
polimerizado del plasma/suero líquido en la pared de la cámara de
transmisión de la luz. La Fig. 3 muestra, en sección transversal
parcial, la relación del componente polimerizado, el líquido (plasma
o suero) y el pistón 55 durante la sedimentación por centrifugación
del componente polimerizado en la pared. Dado que el líquido puede
interferir en la exactitud de los datos observados mediante el
primero fotómetro o 130, el segundo fotómetro 130' puede colocarse
en una posición en la que cabe esperar que se transmita la luz a
través de la pared y el líquido, pero no a través del componente
polimerizado. Una comparación de estas lecturas puede eliminar las
posibles interferencias del líquido sobre la exactitud de las
lecturas.
También es útil observar que se pueden modular
uno o más fotómetros, 130 y 130', de forma que la porción detectora
permanezca "encendido", pero el pulso LED "encendido y
apagado". De este modo, la porción detectora de los fotómetros
puede tener en cuenta (y programarse para despreciar) la luz del
entorno que pueda estar en las proximidades del presente aparato.
Preferentemente, la modulación del LED se lleva a cabo a una
frecuencia que no es igual a, o que no es múltiplo de, la velocidad
rotacional de la centrífuga.
La Fig. 3 ilustra un gráfico de las medidas del
fotómetro frente al tiempo. El gráfico muestra las mediciones del
fotómetro desde el comienzo del aparato de centrífuga hasta el final
del suministro del tampón a pH 4 a la segunda cámara 75. La porción
del gráfico de A a B muestra las mediciones tomadas cuando el pistón
55 está en una posición inferior y bloquea el paso para la señal del
fotómetro. En C, el pistón se ha elevado y el fotómetro mide la
transmisión de la luz a través del material plástico solo del que
está hecho el recipiente, mientras que la segunda cámara 75 todavía
está vacía. La medición en C se usa para calibrar el fotómetro de
forma que las mediciones satisfactorias tienen en cuenta la
translucidez del recipiente 110, donde la translucidez varía de un
recipiente a otro. De C a D, el plasma se transfiere a la segunda
cámara 75 junto con algo de aire. De D a E, se elimina el aire del
plasma y la enzima, tal como batroxobina, se libera en la segunda
cámara 75. Alrededor del punto E, las mediciones también
proporcionan información acerca de las características, tales como
la concentración y la claridad de la sangre, que pueden variar de
una porción de la sangre a otra porción de la sangre. De E a F, el
polímero de fibrina no reticulada se libera de la fracción de
plasma. De F a G, la porción restante relativamente fluida de la
fracción de plasma se transfiere a la primera cámara 70 extrayendo
primero el aire de la primera cámara 70 a la segunda cámara 75
mediante la elevación del pistón 55. Después, la fracción plasmática
fluida restante se transfiere a la primera cámara 70 al bajar el
pistón 55. Durante el último periodo, se llevan a cabo más
centrifugaciones y activaciones del pistón con el resultado de que
toda la fracción plasmática fluida se elimina del polímero de
fibrina. En G, la medición muestra el grosor del polímero de fibrina
pura y, por tanto, la cantidad de polímero de fibrina presente en la
segunda cámara 75. Según la última medición se determina la cantidad
de tampón a pH 4 que se va a añadir. De G a H tiene lugar la
disolución del polímero de fibrina por medio del tampón a pH 4
suministrado.
Cuando se ha añadido la cantidad deseada de
tampón a pH 4, se interrumpe la activación del pistón 59 de la
jeringuilla 58. La cantidad de tampón a pH 4 que queda opcionalmente
en la jeringuilla 58 no se expele hasta después en la segunda
cámara, momento en el que se expele inmediatamente antes de que el
tramo de tubo 46 se acople a la jeringuilla 58 para la succión de la
solución de monómero de fibrina desde la cuarta cámara 78. Como se
ha descrito en el documento WO 98/30887, la cantidad de polímero de
fibrina depositada en la pared se puede determinar usando un
fotómetro que comprende una fuente de luz, por ejemplo LED, láser u
otro emisor de luz, y un sensor dispuesto para medir la disminución
de la transmisión de la luz a través de la pared de la cámara a
medida que la fibrina se deposita en la misma. Se puede emplear
cualquier fotómetro conveniente y el intervalo de longitudes de onda
de la fuente de luz se selecciona de modo que sea sensible en la
gama del material que se está depositando y teniendo en cuenta en
material de la pared. En el caso del depósito de polímero de fibrina
en la pared de la cámara se ha encontrado útil un diodo de emisión
de luz (LED) de una longitud de onda de 654 nanómetros. A la
disminución de la transmisión de la luz se llega mediante la toma de
una lectura de referencia (R) de la transmisión de la luz a través
de la pared de la cámara antes de la sedimentación del polímero de
fibrina y después se mide la transmisión final de luz (F) después de
completada la sedimentación de polímero de fibrina. Una correlación
entre el log natural de una comparación de estas intensidades de la
transmisión de la luz y la masa de fibrina se puede expresar
como:
(1)Masa de
fibrina = C Ln
(R/F)
donde C = un coeficiente del
componente, por ejemplo un coeficiente de
fibrina.
El coeficiente de fibrina (C) se puede establecer
de forma experimental mediante la interrupción del procedimiento y
la medición de la masa de fibrina en una serie de procesos para los
valores observados de ln R/F. Mediante la representación gráfica
donde disminuye la masa de fibrina medida experimentalmente frente a
la transmisión de luz observada, es posible definir un coeficiente
de fibrina (la pendiente de la línea representada).
A continuación, las reducciones medidas en la
transmisión de la luz expresadas como ln (R/F), multiplicadas por el
coeficiente de fibrina, son indicativas de la cantidad de polímero
de fibrina formado y el conocimiento de una cantidad predeterminada
de disolvente o de tampón que se debe usar para solubilizar el
polímero de fibrina proporciona la concentración de la solución de
monómero de fibrina resultante. Obviamente, el coeficiente del
componente tendría que volverse a establecer para diferentes
procedimientos y diferentes componentes del plasma o de la sangre.
Esta concentración se puede expresar como:
(2)Conc =
\frac{\text{masa de
fibrina}}{VT}
donde conc es concentración, VT es
volumen total y donde VT = Masa de F + VB, donde VB es el valor del
tampón o el disolvente añadido para solubilizar la
fibrina.
De acuerdo con el procedimiento descrito
anteriormente, también se ha descubierto que algo del suero y otras
proteínas de la sangre o de la fuente de plasma pueden quedar
atrapadas en y alrededor del polímero de fibrina depositado en la
pared. De hecho, la masa de fibrina real puede ser sólo una pequeña
porción de la masa de suero de fibrina depositado. Esto depende del
procedimiento usado, es decir, puede variar según la velocidad (RPM)
y el tiempo de centrifugación durante la sedimentación del polímero
de fibrina en la pared. Por ejemplo, al centrifugar el plasma
(obtenido de 120 ml de sangre) a aproximadamente 9000 RPM durante
alrededor de 5-10 minutos en presencia de cantidades
suficientes de enzima que convierte el fibrinógeno en fibrina, se ha
descubierto que la masa de fibrina real es sólo de aproximadamente
el 5-10% de la masa de fibrina/suero que se deposita
en la pared. En caso de que haya suero presente, la concentración se
puede expresar como
(3)Conc =
\frac{\text{masa de fibrina}}{VS +
VB}
donde VS = volumen de fibrina y de
suero retenido en la
fibrina.
Experimentalmente se ha determinado que el
volumen de fibrina + suero (VS) posee una relación lineal con la
masa de fibrina, que puede expresarse como
\hskip1cmVS = a+b Masa de Fibrina
\hskip1.4cm(4)
\vskip1.000000\baselineskip
donde
a = volumen de sólo suero
b = volumen de fibrina por mg de fibrina +
suero
\vskip1.000000\baselineskip
Tanto (a) como (b) se pueden determinar
experimentalmente mediante la representación gráfica de la masa
medida de fibrina `suero frente a la masa de fibrina, siendo (a) la
ordenada y, y (b) la pendiente de la línea representada.
Esto proporciona la relación
(5)Conc =
\frac{\text{Masa de fibrina}}{VB + a + b \ masa \ de \
fibrina}
Mediante la sustitución de la fórmula (1) por
"Masa de fibrina" en ambos casos en la fórmula (5), se llega a
la siguiente expresión
(6)Conc =
\frac{C. ln(R/F)}{VB + a+b.C \ ln
(R/F)}
Por tanto, para un procedimiento dado donde C, a
y b se han determinado de modo experimental como se ha descrito
antes y donde se conoce el volumen del tampón de solubilización
(VB), la concentración de una solución del componente de la sangre,
por ejemplo una solución de monómero de fibrina, se puede determinar
mediante la observación de la disminución de la transmisión de luz a
través de un polímero depositado a partir del que se prepara la
solución y mediante el uso de la fórmula (6) anterior.
En otras palabras, un aparato accionado con un
microprocesador se puede programar con la fórmula y las constantes
anteriores determinadas experimentalmente para un procedimiento dado
tal que las señales de las lecturas del fotómetro a través de la
pared de la cámara antes y después de que dicho componente
polimerizado se deposite en la misma permitirán que el
microprocesador determine la concentración de la solución del
componente de la sangre que resultará de la solubilización del
componente polimerizado con una cantidad conocida de tampón o
disolvente. Además, se puede proporcionar el suministro medido del
disolvente o el tampón, de forma que se pueden utilizar cantidades
variables de tampón o de disolvente para solubilizar en la solución
deseada el componente de la sangre polimerizado. De este modo, se
puede producir una solución de una concentración deseada del
componente de la sangre con independencia de la concentración
inicial del componente en la sangre mediante la determinación de la
cantidad de polímero de fibrina (y suero) depositado y la
introducción de una cantidad de tampón como respuesta a esta
información, lo que tendrá como resultado la misma concentración de
un proceso a otro. Esto se lleva a cabo volviendo a expresar la
fórmula (6) para resolver la cantidad de tampón (VB) necesaria para
producir una solución de la concentración deseada (Conc), del
siguiente modo
(7)VB = C.ln
(R/F)
((¡/Conc)-b)-a
Por tanto, de acuerdo con lo anterior, se
proporciona un aparato y procedimientos para producir soluciones de
componentes sanguíneos, por ejemplo soluciones de monómero de
fibrina, a concentraciones deseadas constantes incluso cuando se
parte de sangre o de plasma con concentraciones iniciales variables
de fibrinógeno, por ejemplo 1-10 mg/ml, como se
puede encontrar en la población humana.
De acuerdo con la presente invención, a la
segunda cámara 75 se aplica una cantidad inicial de disolvente o de
tampón inferior a la cantidad total de disolvente o de tampón (VB)
para solubilizar el polímero de fibrina no reticulada presente en la
misma. Como se usa en la presente memoria descriptiva, se pretende
que los términos "disolvente" y "tampón" se usen de forma
intercambiable y se definen como materiales que solubilizan el
polímero de fibrina no reticulada de acuerdo con la presente
invención. Además, debe interpretarse que incluyen los agentes
caotrópicos comentados anteriormente.
A continuación, a la segunda cámara 75 se aplica
una cantidad de lavado del tampón para capturar el polímero de
fibrina no reticulada restante en la misma y también el polímero de
fibrina no reticulada atrapada en el filtro 42. Es decir, de acuerdo
con la presente invención, una cantidad denominada "segura" del
disolvente se introduce en la segunda cámara 75, siendo la cantidad
segura de disolvente una cantidad que asegure la solubilización del
polímero de fibrina no reticulada sin o sustancialmente sin la
precipitación del polímero de fibrina. Por ejemplo, para un tampón
de acetato, el límite superior del pH de la solución de fibrina será
un pH de 4,60. Por encima de este pH se puede producir la
precipitación de fibrina. Por tanto, para el tampón acetato se usa
una cantidad que tendrá como resultado un pH de la solución de
fibrina de 3,9 a 4,60, siendo, en general, el pH de la fibrina y del
suero sanguíneo contenido en la misma de 7 o neutro. Después, se
añade la cantidad restante del volumen total del tampón (VB) para
solubilizar o "FLUsH" el polímero de fibrina no reticulada
restante en la segunda cámara 75 y solubilizar o capturar el
polímero de fibrina no reticulada presente en el filtro 42 debido a
las etapas de filtración llevadas a cabo previamente.
La cantidad de la porción del volumen total del
disolvente o tampón (VB) añadido inicialmente de acuerdo con la
presente invención dependerá, como reconocerá un experto en la
técnica, de la "fuerza" de la solución tampón. Es decir, la
cantidad dependerá de la capacidad del disolvente o del tampón para
mantener el pH de la solución de fibrina resultante dentro de un
intervalo de pH que mantenga la fibrina en solución sin, o
sustancialmente sin, precipitación de la fibrina. Por ejemplo, esta
porción puede variar de 20 a 80% en vol del volumen total del
disolvente o del tampón (VB). Un disolvente o tampón que tenga una
capacidad relativamente fuerte para mantener la fibrina en solución
permitirá el uso de una cantidad inferior del volumen total del
disolvente o del tampón (VB) inicialmente, porque cuando tal
disolvente o tampón se mezcla con la fibrina y cualquier suero
sanguíneo que pueda estar presente, resultará una solución de
fibrina con un pH adecuado que evite la precipitación de fibrina.
Por otro lado, una solución de tampón o de disolvente de
"fuerza" baja requerirá el uso de un porcentaje relativamente
mayor del volumen total del disolvente o del tampón (VB)
inicialmente con el fin de conseguir una solución de fibrina que
tenga un pH que evitará la precipitación de la fibrina.
Asimismo, de acuerdo con la presente invención,
el polímero de fibrina no reticulada puede solubilizarse mediante el
uso de una porción inicial del volumen total de la solución de
disolvente o de tampón (VB), como se ha descrito antes, y después la
cantidad restante del volumen total puede añadirse en varias etapas.
Por ejemplo, inicialmente se puede añadir aproximadamente el 60% del
volumen total del disolvente o el tampón (VB), para solubilizar la
fibrina, y después la cantidad restante del volumen total del
disolvente o tampón (VB) se puede añadir en dos o más etapas
distintas. Es decir, el 40% restante del volumen total de disolvente
o tampón (VB) puede añadirse en dos etapas, en las que una etapa
contiene el 20% del volumen total de disolvente o el tampón (VB) y
otra etapa contiene el 20% restante del volumen total de disolvente
o el tampón (VB). De este modo, la adición de la cantidad restante
del volumen total de disolvente o el tampón (VB) tras la adición
inicial se puede dividir en cualquier número adecuado de adiciones
de solución de disolvente o tampón con el fin de recuperar el
polímero de fibrina no reticulada de la segunda cámara 75 y del
filtro 42 a cualquier grado deseado.
En general, el procedimiento de acuerdo con la
presente invención se puede llevar a cabo del siguiente modo. Como
se ha descrito antes, la cantidad del volumen total de disolvente o
el tampón (VB) se calcula según la cantidad de polímero de fibrina
en la pared externa de la segunda cámara 75 medida mediante un
fotómetro 130. A continuación se activa la jeringuilla 58 para
introducir inicialmente una porción, por ejemplo 80% en vol, del
volumen total de disolvente o el tampón (VB) a la segunda cámara 75,
habiéndose determinado previamente la cantidad exacta de esta
porción mediante la consideración adecuada de la fuerza del tampón.
A continuación se lava el polímero de fibrina no reticulado para
preparar una solución de fibrina de un pH adecuado y esta solución
se filtra usando un filtro 42 del modo descrito antes con el fin de
capturar la enzima usada para catalizar la escisión de los
fibrinopéptidos A y/o B del fibrinógeno contenido en la sangre o el
plasma y formar el polímero de fibrina no reticulada. A continuación
se activa de nuevo la jeringuilla 58, momento en el que se introduce
la porción restante del volumen total de disolvente o el tampón (VB)
en una o más etapas a la segunda cámara 75 para solubilizar todo o
casi todo el polímero de fibrina no reticulada restante en las
paredes de la segunda cámara 75. A continuación, esta solución de
fibrina adicional que contiene polímero de fibrina no reticulada
recuperado de la segunda cámara 75 se filtra del modo comentado
anteriormente usando el filtro 42. Esta filtración recupera de forma
ventajosa más polímero de fibrina no reticulada con la solución de
fibrina de la solubilización inicial del polímero de fibrina no
reticulada usando la porción inicial del volumen total de disolvente
o el tampón (VB). Después de eliminar de la jeringuilla 58 cualquier
tampón sin usar, las soluciones de de fibrina combinadas se
suspenden en la jeringuilla 58 del modo descrito anteriormente y son
adecuadas para usar en un taponador de fibrina o para cualquier otro
propósito deseado.
De acuerdo con la presente invención, la cantidad
de fibrina recuperada aumenta de forma ventajosa, lo que tiene como
resultado soluciones de fibrina con concentraciones de fibrina
mayores. Cualquier incremento en la recuperación de fibrina, en
especial los que se pueden conseguir de acuerdo con la presente
invención, es particularmente ventajoso por lo que se ha comentado
anteriormente, la concentración de fibrinógeno en la sangre humana
puede variar en \pm 300% en las poblaciones de pacientes humanos y
los componentes taponadores recién preparados procedentes de fuentes
individuales también variarán. En particular, se pueden obtener
soluciones de fibrina mejoradas de forma significativa para preparar
componentes taponadores recién preparados para seres humanos con
niveles bajos de fibrinógeno.
Claims (11)
1. Un procedimiento para la preparación de
fibrina a partir de sangre o plasma, que comprende las etapas
de:
someter la sangre o el plasma a
condiciones para catalizar la formación de una forma polimerizada de
dicho
componente;
recuperar dicha forma polimerizada
de dicho componente, que se caracteriza por la centrifugación
de dicha forma polimerizada recuperada de dicho componente en una
cámara de un aparato de centrífuga mientras se añade una cantidad
inicial de disolvente a dicha cámara que contiene dicha forma
polimerizada recuperada de dicho componente para disolver dicha
forma polimerizada de dicho componente, siendo dicha cantidad
inicial de disolvente una cantidad inferior a una cantidad total
predeterminada de disolvente para disolver toda la forma
polimerizada recuperada de dicho componente mientras es suficiente
para mantener dicha forma polimerizada recuperada de dicho
componente disuelta en dicha cantidad inicial de disolvente en
solución sin que se produzca la precipitación del componente;
y
añadir disolvente adicional a dicha
forma polimerizada recuperada de dicho componente, añadiéndose dicho
disolvente adicional a dicha forma polimerizada recuperada de dicho
componente en una cantidad equivalente a una diferencia entre dicha
cantidad total predeterminada de disolvente y dicha cantidad inicial
de disolvente añadida para disolver dicha forma polimerizada de
dicho
componente.
2. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque dicho disolvente es una solución de
acetato.
3. El procedimiento según la Reivindicación 2,
que se caracteriza porque dicha solución de acetato tiene un
pH de aproximadamente 4.
4. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque dicha cantidad inicial de
disolvente añadido para disolver dicha forma polimerizada recuperada
de dicho componente es de aproximadamente el 80% vol de dicha
cantidad total predeterminada de disolvente, y dicha cantidad de
disolvente adicional añadido a dicha forma polimerizada recuperada
de dicho componente es de aproximadamente el 20% vol. de dicha
cantidad total de disolvente predeterminada.
5. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque en dicha etapa de adición de dicho
disolvente adicional a dicha forma polimerizada recuperada de dicho
componente comprende las etapas de añadir una primera porción
predeterminada de dicho disolvente adicional hasta dicha forma
polimerizada recuperada de dicho componente y, posteriormente, la
adición de una segunda porción predeterminada de dicho disolvente
adicional a dicha forma polimerizada recuperada de dicho
componente.
6. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque dichas condiciones para catalizar
dicha forma polimerizada de dicho componente de dicha sangre o
plasma comprende poner en contacto dicha sangre o plasma con una
enzima para catalizar la formación de dicha forma polimerizada de
dicho componente.
7. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque dicho componente de la sangre o el
plasma es fibrinógeno.
8. El procedimiento según la Reivindicación 7,
que se caracteriza porque dichas condiciones para catalizar
dicha forma polimerizada de dicho fibrinógeno comprende poner en
contacto dicho fibrinógeno con una enzima para catalizar la escisión
de los fibropéptidos A y/o B de dicho fibrinógeno.
9. El procedimiento según la Reivindicación 8,
que se caracteriza porque dicha enzima es batroxobina.
10. El procedimiento según la Reivindicación 1,
que se caracteriza porque dicha etapa de recuperación de
dicha forma polimerizada de dicho componente comprende las etapas de
depositar en una pared de una cámara de un aparato de centrífuga
dicha forma polimerizada de dicho componente.
11. El procedimiento según la Reivindicación 10,
que se caracteriza porque dicha etapa de depositar dicha
forma polimerizada de dicho componente en dicha pared de dicha
cámara comprende la etapa de centrifugar dicha cámara en dicho
aparato de centrífuga mientras que dicha forma polimerizada de dicho
componente está presente en ella.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US16212299P | 1999-10-29 | 1999-10-29 | |
US162122P | 1999-10-29 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2234677T3 true ES2234677T3 (es) | 2005-07-01 |
Family
ID=22584251
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES00968544T Expired - Lifetime ES2234677T3 (es) | 1999-10-29 | 2000-09-29 | Procedimientos para preparar soluciones de componentes de sangre o plasma con concentraciones mejoradas. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1242157B1 (es) |
JP (1) | JP2003512908A (es) |
AT (1) | ATE286773T1 (es) |
AU (1) | AU775810B2 (es) |
CA (1) | CA2389283A1 (es) |
DE (1) | DE60017463T2 (es) |
ES (1) | ES2234677T3 (es) |
WO (1) | WO2001032289A1 (es) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010020247A1 (en) * | 2008-08-22 | 2010-02-25 | Reapplix Aps | Multilayered blood product |
EP2987515A1 (en) * | 2014-08-19 | 2016-02-24 | Reapplix APS | Centrifuge and method of centrifuging a blood sample |
CA3009911A1 (en) | 2016-01-06 | 2017-07-13 | Reapplix Aps | Procoagulant factors suitable for subsequent autologous use |
GB2555402B (en) | 2016-10-24 | 2019-10-23 | Entia Ltd | A system and method for fluid analysis |
CN117243248A (zh) * | 2023-11-17 | 2023-12-19 | 烟台海洋宝贝生物工程有限公司 | 一种海洋生物脂肪蛋白分离装置 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS4894675A (es) * | 1972-03-15 | 1973-12-05 | ||
JPS5465941U (es) * | 1977-10-19 | 1979-05-10 | ||
CN1091315A (zh) * | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
CN1083284C (zh) * | 1994-12-02 | 2002-04-24 | 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 | 从血浆中分离纤维蛋白的方法和设备 |
US5955026A (en) * | 1997-01-08 | 1999-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Detecting the thickness of fibrin polymer using an optical device |
-
2000
- 2000-09-29 DE DE60017463T patent/DE60017463T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-29 ES ES00968544T patent/ES2234677T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 JP JP2001534488A patent/JP2003512908A/ja active Pending
- 2000-09-29 WO PCT/US2000/027053 patent/WO2001032289A1/en active IP Right Grant
- 2000-09-29 EP EP00968544A patent/EP1242157B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 CA CA002389283A patent/CA2389283A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-29 AU AU78437/00A patent/AU775810B2/en not_active Ceased
- 2000-09-29 AT AT00968544T patent/ATE286773T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2389283A1 (en) | 2001-05-10 |
DE60017463D1 (de) | 2005-02-17 |
EP1242157A1 (en) | 2002-09-25 |
AU775810B2 (en) | 2004-08-19 |
EP1242157B1 (en) | 2005-01-12 |
JP2003512908A (ja) | 2003-04-08 |
DE60017463T2 (de) | 2006-03-02 |
EP1242157A4 (en) | 2002-10-24 |
WO2001032289A1 (en) | 2001-05-10 |
AU7843700A (en) | 2001-05-14 |
WO2001032289A9 (en) | 2002-09-26 |
ATE286773T1 (de) | 2005-01-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3745397B2 (ja) | 分離コンテナ、環状組立体及び液体を2つ以上の構成成分に分離する方法 | |
ES2274565T3 (es) | Aparato de procedimiento para la preparacion de soluciones de un componente de sangre o plasma de concentracion conocida. | |
ES2283747T3 (es) | Sistemas y metodos para preparar cola de fibrina autologa. | |
ES2313722T3 (es) | Procedimiento y dispositivo de separacion del monomero de la fibrina del plasma sanguineo. | |
CZ164697A3 (cs) | Způsob oddělování složky z plazmy a zařízení k provádění tohoto způsobu | |
EP1208856B1 (en) | Platelet collecting apparatus | |
US6153148A (en) | Centrifugal hematology disposable | |
JP2001508869A (ja) | 血液を分離するための遠心分離装置 | |
EP3409203B1 (en) | Implantable medical device with chemical sensor | |
US6099740A (en) | Apparatus and methods for preparing blood or plasma component solutions of known concentration | |
ES2234677T3 (es) | Procedimientos para preparar soluciones de componentes de sangre o plasma con concentraciones mejoradas. | |
JPH09276396A (ja) | 血液処理用遠心分離器ボウル | |
US8066888B2 (en) | Blood processing apparatus with controlled cell capture chamber trigger | |
US20030060695A1 (en) | Implantable artificial organ devices | |
US6495051B1 (en) | Methods for preparing blood or plasma component solutions with improved concentrations | |
JP2002267660A (ja) | 血液検査用容器 | |
MXPA99006281A (es) | Aparato y metodos para la preparacion de soluciones de componentes de plasma y sangre de concentracion conocida | |
WO2021145787A1 (ru) | Способ и устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон виллебранда | |
SU1686355A1 (ru) | Способ определени функционально-активных лейкоцитов | |
JPH07103968A (ja) | 血液分離剤 | |
KR20100057234A (ko) | 혈액 유변 정보 측정을 위한 바이오 디스크 및 측정 시스템및 그 방법 |