ES2228665T3 - Procedimiento para detectar inhibidores de la sintesis de nucleotidos con menos efectos secundarios. - Google Patents
Procedimiento para detectar inhibidores de la sintesis de nucleotidos con menos efectos secundarios.Info
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Abstract
Procedimiento para descubrir inhibidores de la síntesis de nucleótidos que presenten menores efectos secundarios, caracterizado porque a) se aplica el inhibidor de la síntesis de nucleótidos a un mamífero, estando excluido el hombre, en una dosis eficaz, b) se comprueba la concentración del inhibidor de la síntesis de nucleótidos en la sangre del mamífero y c) se determina si el inhibidor de la síntesis de nucleótidos presenta un tiempo de semidesintegración que es más breve que el de la amida del ácido N-(4-tri- fluorometilfenil)-2-cian-3-hidroxi-crotónico.
Description
Procedimiento para detectar inhibidores de la
síntesis de nucleótidos con menos efectos secundarios.
La invención se refiere a un procedimiento para
descubrir inhibidores de la síntesis de nucleótidos que presenten
menores efectos secundarios.
Un problema fundamental de los medicamentos
nuevos consiste en la relación entre tolerancia y eficacia. Cuanto
mayor sea la separación entre una dosis eficaz y una dosis con la
que aparecen efectos secundarios (= ventana terapéutica), tanto más
inofensiva es la aplicación de una sustancia de esta clase y tanto
mejor se tolera la sustancia por los pacientes.
Los citostáticos, entre los que se cuentan los
inhibidores de la síntesis de las purinas y de las pirimidinas,
tienen, según la experiencia adquirida hasta ahora, una ventana
terapéutica relativamente estrecha, ya que, en virtud de su efecto
principal (supresión de la proliferación de células), también
inducen efectos secundarios. Esta propiedad perturba, al usarlos en
indicaciones oncológicas, menos que en la terapia de afecciones
inmunológicamente condicionadas. Por ello se limita notablemente el
empleo de los principios activos de esta clase en el caso de
afecciones inmunológi-
cas.
cas.
Los compuestos que inhiben la síntesis de las
purinas o pirimidinas se designan inhibidores de la síntesis de los
nucleótidos (Burkhardt y Kalden; Rheumat. Int. (1997); 17:
85-90), éstos son compuestos tales como, por
ejemplo,
N-(4-trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida,
amida del ácido
N-(trifluorometilfenil)-2-cian-3-hidroxicrotónico,
(4-cianofenil)-amida del ácido
2-ciano-3-ciclopropil-3-hidroxi-acrílico
o amida del ácido
N-(trifluorometil-fenil)-2-cian-3-hidroxi-hept-2-en-6-in-carboxílico,
brequinar (ácido
6-fluoro-2-(2'-fluoro[1,1'bifenil]-4-il)
-3-metil-4-quinolincarboxílico),
micofenolatmofetil
(E)-6-(1,3-dihidro-4-hidroxi-6-metoxi-7-metil-3-oxoisobenzofuran-5-il)
-4-metil-4-hexenoato),
metotrexato (CAS-nº
59-05-02) o mizoribina
(CAS-nº 50924-49-7).
En la publicación de Tedesco et al. (American J. Medical
Sciences, 1997, 313; páginas 289-301) se propone ya
encubrir análogos activos del A771726 con un tiempo de
semidesintegración más breve por motivos fármacoquinéticos.
Los inhibidores de la síntesis de nucleótidos son
apropiados para el tratamiento de afecciones inmunológicamente
condicionadas, tales como la artritis reumatoide o el pémfigo
vulgar. Son desventajas de los inhibidores conocidos de la síntesis
de nucleótidos sus efectos secundarios sobre el tracto
gastrointestinal, la médula ósea, los cabellos y otros. A menudo se
descubren en estos compuestos pequeños efectos secundarios una vez
que ya es demasiado tarde en el desarrollo clínico de un
medicamento nuevo, lo que a veces conduce a la interrupción del
desarrollo.
La invención se propone hacer uso de la
observación de que pueden reducirse drásticamente los efectos
secundarios de los inhibidores de la síntesis de nucleótidos en el
tratamiento de afecciones inmunológicas si los inhibidores de la
síntesis de nucleótidos alcanzan en el organismo sólo por breve
tiempo sus dianas intracelularmente colocadas y allí, en el
transcurso de breve tiempo, vuelven a reducirse a concentraciones
que ya no inhiben la biosíntesis de nucleótidos. Mediante esta
condición es posible, en el tratamiento de las afecciones
inmunológicas, reducir drásticamente los efectos secundarios de los
inhibidores de la síntesis de los nucleótidos sin tener que
soportar mermas en el efecto deseado sobre el sistema
inmunitario.
Con este conocimiento es posible desarrollar
inhibidores de la síntesis de nucleótidos en el transcurso de breve
tiempo, que presentan una muy buena eficacia, con una proporción
muy baja de efectos secundarios, en el tratamiento de afecciones
inmunológicamente condicionadas.
Es objeto de la invención poder encontrar, ya en
una fase precoz del desarrollo de sustancias en la investigación de
medicamentos, con ayuda de una propiedad de medida técnicamente
fácil, una estimación acerca de la ventana terapéutica de estas
sustancias que puede esperarse en el caso de indicaciones
inmunológicas.
El problema se resuelve determinando el tiempo de
semidesintegración del inhibidor de la síntesis de nucleótidos en
la sangre de un mamífero relevante para las relaciones
farmacoquinéticas en el hombre, o en el hombre en la fase I del
desarrollo clínico y comparándolo con el de un inhibidor conocido de
la síntesis de nucleótidos.
La invención se refiere, pues, a un procedimiento
para descubrir inhibidores de la síntesis de nucleótidos que
presenten menores efectos secundarios, que está caracterizado
porque
- a)
- se aplica el inhibidor de la síntesis de nucleótidos en una dosis eficaz a un mamífero, con excepción del hombre, relevante para la situación humana,
- b)
- se comprueba la concentración del inhibidor de la síntesis de nucleótidos en la sangre del mamífero y
- c)
- se determina si el inhibidor de la síntesis de nucleótidos presenta un tiempo de semidesintegración que es más breve que el de la amida del ácido N-(4-trifluorometilfenil)-2-cian-3-hidroxicrotónico.
Los inhibidores de la síntesis de nucleótidos son
compuestos que inhiben in vivo la síntesis de purinas o
pirimidinas. Por la expresión "tiempo de semidesintegración"
se entiende el tiempo en el que la concentración del inhibidor de
la síntesis de nucleótidos se reduce a la mitad en el plasma
sanguíneo.
Son mamíferos apropiados para la realización de
ensayos farmacoquinéticos de referencia, por ejemplo, ratones,
ratas, conejos, perros, monos o cerdos. Los tiempos de
semidesintegración son muy diferentes según sea el animal empleado y
el inhibidor de la síntesis de nucleótidos. El tiempo de
semidesintegración de la amida del ácido
N-(4-trifluorometilfenil)-2-cian-3-hidroxicrotónico,
por ejemplo, está comprendido en la rata entre aproximadamente 4 y
8 horas y asciende en el hombre hasta 350 horas. Se prefieren los
inhibidores de la síntesis de nucleótidos que presentan en el
plasma sanguíneo del hombre un tiempo de semidesintegración
inferior a las 150 horas, preferentemente inferior a 40 horas.
La ventaja del presente procedimiento es que en
un estadio muy precoz del desarrollo de la sustancia medicamentosa
pude hacerse rápidamente una estimación acerca de la ventana
terapéutica de un inhibidor de la síntesis de nucleótidos que puede
esperarse a través de la medición del período de semidesintegración
en el plasma sanguíneo. Mientras que de lo contrario, sólo se
conoce el intervalo de las dosis de un medicamento clínicamente
utilizables después de amplias investigaciones clínicas con una
duración de la terapia que va de semanas a años. Por lo tanto, es
posible una notable aceleración del desarrollo de la sustancia
medicamentosa.
En los siguientes ejemplos se comprueba que para
el efecto deseado de los inhibidores de la síntesis de nucleótidos
sobre el sistema inmunitario han de preferirse las sustancias con
breve tiempo de semidesintegración frente a las sustancias con un
tiempo de semidesintegración largo:
La relación dosis-efecto del
compuesto 1 se estableció en el modelo de la artritis inducida por
coadyuvante (método de Pearson C. M. y Wood F.D.: Arth. Rheum. 2:
44 (1959) y Taurog J. D., Argentieri D. C. et al., Meth.
Enzymol. 162: 339 (1988)). Se determinó la tumefacción de las
patas, la formación de síntomas generalizados de la artritis
(índice Score), el aumento del peso corporal durante el ensayo y la
supervivencia de los animales.
El compuesto 1 se administró per os en una
solución de carboximetilcelulosa (CMC) al 1% desde el comienzo del
experimento hasta su final en el día 21. Los grupos de control
recibieron las correspondientes cantidades de CMC al 1% sin
principio activo. Se utilizaron en cada grupo de ensayo 6 ratas
Lewis macho con un peso corporal de aproximadamente 210 g.
La Tabla 1 presenta los resultados después de 21
días; los números negativos indican el empeoramiento del
correspondiente parámetro de medida.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
En el modelo de la artritis inducida por
coadyuvante en la rata se observan reacciones de autoinmunización,
que corresponden a las afecciones de autoinmunización del círculo
reumático de formas en el hombre.
En el experimento se demostró que el compuesto 1
presenta, ya a partir de una dosis diaria unitaria de 2,5 mg/kg, un
muy buen efecto terapéutico en la rata. Por debajo de una
dosificación de 2,5 mg/kg disminuye drásticamente el efecto. Con 1
mg/kg/día de compuesto 1 ya no puede comprobarse efecto alguno.
Para la detección del compuesto 1 se empleó un
método selectivo de HPLC-MS/MS. La determinación
cuantitativa del compuesto 1 a partir del plasma sanguíneo se
realizó del modo siguiente:
Al plasma sanguíneo extraído se añadieron:
Solución de un patrón interno, luego solución de
NaOH 0,1 m y 1 ml de éter dietílico. La mezcla se agitó
vigorosamente y se desechó la fase orgánica. A la fase acuosa se
añadió solución de HCl 0,5 N y se extrajo el analito así como el
patrón interno con 1 ml de éter dietílico. Se concentró la fase
orgánica por evaporación y se recogió en una mezcla 1:1 de
acetonitrilo y agua. 10 \mul de esta solución se inyectaron en
una instalación de HPLC. Esta instalación de HPLC contenía una
columna Lichrospher C-18HD. Con un caudal de 1
ml/min se eluyeron el analito y el patrón interno con la
combinación de eluyente acetonitrilo + (solución de acetato amónico
[10 mmol]), 67 + 33 y, a continuación, se detectaron selectivamente
por medio de espectroscopía de masas (análisis por
LC-MS/MS). Durante el proceso de análisis de las
muestras de plasma sanguíneo se arrastraron muestras de
calibración.
Para hallar una situación igual de metabolismo de
sustancia extraña, tal como en los experimentos farmacodinámicos,
se dio el compuesto 1 sólo a animales con artritis coadyuvante. La
artritis se indujo de manera correspondiente al Ejemplo 1. El peso
del animal ascendió a 210 g como media, cada grupo constaba de 6
ratas Lewis macho. Se obtuvo la sangre mediante corte de la punta
del rabo.
Se investigó la modificación del nivel de
compuesto 1 en el plasma sanguíneo mediante colestiramina. Se
empleó el compuesto 1 en la dosificación más baja de 2,5 mg/kg/día,
que todavía presenta efectos farmacodinámicos sobre la artritis
coadyuvante. En la terapia de combinación con colestiramina se
aplicaron 1000 mg/kg de colestiramina 4 horas después de la
administración del compuesto 1. Los animales de control recibieron
CMC al 1% en los momentos correspondientes sin principio activo. Se
investigó la modificación farmacoquinética del compuesto 1 a través
de la colestiramina tanto después de una administración única como
también después de una administración crónica del compuesto 1 con
colestiramina o sin ella. Se obtuvieron muestras de sangre 2, 4, 6,
8, 24 y 48 horas después de la última administración del compuesto
1.
La Tabla 2 a) muestra los parámetros
farmacoquinéticos del compuesto 1 con colestiramina y sin ella
después de una dosis única; la Tabla 2 b) muestra los parámetros
farmacoquinéticos del compuesto 1 con colestiramina y sin ella
después de administración crónica:
\newpage
Por la expresión "área bajo la curva" (ABC)
se entiende la superficie bajo el nivel de concentración de un
medicamento representado en función del tiempo. El ABC refleja la
proporción con la que un organismo está expuesto a una sustancia.
Por la expresión "administración crónica" se entiende una
aplicación del compuesto 1 a lo largo de un intervalo que conduce
al menos a niveles constantes en sangre del compuesto 1. Estos
niveles constantes ("steady state") en sangre se alcanzan
después de toma regular, después de aproximadamente 4 a 5 tiempos de
semi-desintegración.
Se demostró que después de la administración de
compuesto 1, en principio hasta el momento 4 horas se logran
idénticos niveles pico en sangre, con independencia de que se
administrara o no colestiramina después de 4 horas. Sin embargo, por
medio de la dosis de colestiramina se redujeron drásticamente los
niveles en sangre del compuesto 1 en momentos posteriores.
De este experimento puede concluirse que se
pueden reducir claramente los niveles en sangre mediante
administración de colestiramina después de una fase de reabsorción
previa no perturbada. El área bajo la curva (ABC) se reduce
alrededor del 30% en caso de dosis única y alrededor del 40% en el
caso de dosis múltiple.
En el Ejemplo 3 se investigó si el efecto de la
dosificación mínima eficaz del compuesto 1 se reduce por la dosis
de colestiramina en el intervalo de tiempo de 4 horas. Se investigó
esto en el modelo de la artritis inducida por coadyuvante. El
modelo se realizó de manera correspondiente al Ejemplo 1. El
compuesto 1 se aplicó por vía oral diariamente desde el comienzo
hasta el final de las investigaciones en una dosificación de 2,5
mg/kg/día en carboximetilcelulosa al 1%. La colestiramina se
administró 4 horas después de la administración de compuesto 1
igualmente por vía oral en carboximetilcelulosa al 1%. Los
correspondientes grupos de control recibieron en los
correspondientes momentos iguales volúmenes de una solución de
carboximetilcelulosa al 1%.
La Tabla 3 muestra los resultados:
En el Ejemplo 3 se investigó si los niveles
relativamente constantes que se forman en sangre durante largo
tiempo son responsables de los deseados efectos del compuesto 1
sobre el sistema inmunitario, o si los niveles que aparecen en
sangre por breve tiempo (niveles pico en sangre) de compuesto 1
condicionan este efecto.
Para ello se aplicó por vía oral el compuesto 1
una vez al día en la dosificación eficaz más baja de 2,5 mg/kg/día
(véase el Ejemplo 1). En los correspondientes grupos de referencia
se aplicó colestiramina 4 horas después de la dosis del compuesto
1, para reducir aceleradamente los niveles en sangre del compuesto
1 después de efectuada la fase de resorción. Con ello se investigó
el efecto de diversos niveles de compuesto 1 en sangre, que se
formaron por largo tiempo, sobre los procesos patológicos,
inmunológicamente condicionados, en la artritis de la rata inducida
por coadyuvante. No se presentó diferencia alguna en el efecto
deseado del compuesto 1 sobre la artritis inducida por coadyuvante,
con independencia de que se hubiera dado o no colestiramina 4 horas
después de la dosis de compuesto 1.
Puesto que con la dosis eficaz más pequeña del
compuesto 1 la reducción de los niveles en sangre de 4 horas
después de la aplicación no conduce a reducción alguna del efecto
del compuesto 1, puede deducirse que sólo los niveles pico en
sangre del compuesto 1 son responsables del efecto y no los niveles
persistentes en sangre.
Con los Ejemplos 2 y 3 se confirmaron las
observaciones de la clínica en seres humanos (véase el Ejemplo 4),
que para el efecto de la
N-(4-trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida
(Leflunomida) sólo se necesitan niveles pico en sangre, de corto
plazo, y los niveles persistentes en sangre nada aportan a la
eficacia de la Leflunomida.
En el caso de un paciente que padecía de la
afección pémfigo vulgar, condicionada inmunológicamente,
ciertamente habían desaparecido completamente los síntomas de esta
afección autoinmunitaria bajo la terapia con
N-(4-trifluorometil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida
(Leflunomida), pero el paciente padecía de diarrea permanente.
Estas diarreas modificaban negativamente su calidad de vida. En
virtud de los problemas debidos a este efecto secundario, se
intentó dar por terminada la terapia después de una terapia de más
de dos años con una dosis constante de 20 mg de Leflunomida por
día. En este caso se observó que la afección autoinmunitaria
pémfigo vulgar volvió a aparecer masivamente 4 días después de
suspender la Leflunomida. Sin embargo en el transcurso de este
intervalo no desaparecieron los efectos secundarios de la terapia
con Leflunomida.
Esta observación era sorprendente, puesto que el
metabolito activo de Leflunomida, el compuesto 1, posee en el
hombre un tiempo de semidesintegración de aproximadamente 14 días.
Además, se determinaron en este paciente muchas veces los niveles
en sangre del metabolito activo de Leflunomida en un intervalo
relativamente elevado, entre 70 mg/L y 85 mg/L. Las investigaciones
en pacientes que padecen de artritis reumatoide y se trataron con
Leflunomida, presentaban niveles en sangre superiores a 32 mg/L del
compuesto 1. A partir de estas observaciones puede concluirse que
el nivel en sangre de compuesto 1 presente en este paciente, que
cae con relativa lentitud, es ciertamente responsable de los efectos
secundarios, pero no del efecto deseado sobre el sistema
inmunizante. Además, estas observaciones demuestran que los efectos
deseados de Leflunomida sobre el sistema inmunizante se provocan
por la concentración pico local de corta duración, relativamente
pequeña, de Leflunomida y/o del compuesto 1 después de la resorción
y no por los elevados niveles constantes en sangre del compuesto
1.
A partir de estas observaciones puede deducirse
que un inhibidor de la síntesis de nucleótidos de buena tolerancia
debía alcanzar su lugar de actividad sólo durante breve tiempo, a
fin de que pueda ejercitar allí sus deseados efectos sobre el
sistema inmunizante sin conducir a notables efectos secundarios.
Una permanencia más prolongada en el lugar de actividad no
contribuye, de modo sorprendente, a un aumento de la eficacia sobre
el sistema inmunizante, sino sólo a un aumento de los efectos
secundarios no deseados. Ha de alcanzarse este efecto con sustancias
que sean, como Leflunomida y/o el compuesto 1, inhibidores de la
biosíntesis de los nucleótidos, pero que presenten en el organismo
una permanencia más breve en el punto de actividad (tiempo de
semidesintegración).
El Ejemplo 5 muestra la tolerancia de niveles
constantes en sangre del compuesto 1 en relación con niveles en
sangre del compuesto 1 que aparecen en forma de impulsos. Para
lograr niveles constantes en sangre se implantó por vía subcutánea
una bomba de miniinfusión a los animales de ensayo. Las bombas de
miniinfusión contenían 2 ml de una solución etanólica al 15% del
compuesto 1 que se liberaron continuamente durante 28 días. Se
emplearon dosificaciones de 2,5, 5, 10 y 25 mg/kg/día. Como
referencia, animales que recibieron las mismas dosificaciones
diarias del compuesto 1, pero aplicadas por vía oral, recibieron
bombas implantadas de miniinfusión, pero que estaban llenas
únicamente con el vehículo (15% de etanol en agua). A los animales
que recibieron el compuesto 1 a través de bombas de miniinfusión se
aplicó adicionalmente por vía oral una solución al 1% de
carboximetilcelulosa. Como parámetro del transcurso se tomó la
supervivencia de los animales. Adicionalmente se extrajo sangre los
días 5 y 27 para determinar los niveles en sangre del compuesto 1.
A los animales con aplicación oral del compuesto 1 se extrajo
sangre 4 horas después de la aplicación. El tamaño de los grupos
ascendía a 6 animales, se emplearon ratas Lewis macho con un peso
corporal de aproximadamente 210 g. De manera correspondiente a los
ensayos precedentes se indujo a los animales en el 5º día una
artritis por coadyuvante.
La Tabla 4 presenta los resultados
- \text{*}
- en este grupo sobrevivió sólo 1 de los 6 animales, por tanto, aumento de peso corporal determinó sólo en un animal; p. o. Significa per os.
El Ejemplo 5 demuestra que los niveles constantes
en sangre del compuesto 1 son menos tolerables que los niveles
elevados en sangre que aparecen por breve tiempo. Para lograr
niveles constantes en sangre de compuesto 1 se implantó a los
animales por vía subcutánea una bomba de miniinfusión que aporta
continuamente a los animales compuesto 1 durante 28 días. Con ello
se lograron niveles constantes en sangre de compuesto 1 y, por
tanto, se simularon largos tiempos de semidesintegración del
compuesto 1, tal como se observan en el hombre.
Como grupos de referencia sirvieron animales que
se trataron con la idéntica dosis diaria de compuesto 1, pero no
recibieron la sustancia por bomba de miniinfusión, sino por vía
oral. El compuesto 1 aplicado por vía oral presenta en la rata, tal
como se determinó en el Ejemplo 2, un breve tiempo de
semidesintegración de aproximadamente 4 a 8 horas.
En este experimento se comparó la tolerancia del
compuesto 1 con breve tiempo de semidesintegración (compuesto 1
aplicado por vía oral) con la tolerancia del compuesto con largo
tiempo de semidesintegración (compuesto 1 a través de bomba con
tiempo constante, indefinido, de semidesintegración). Como
dosificaciones se emplearon 2,5 mg/kg/día, 5 mg/kg/día, 10 mg/kg/día
y 25 mg/kg/día. Como medida de la tolerancia se recurrió al número
de los animales que sobrevivieron al tratamiento. Se comparó además
la tolerancia con respecto al nivel observado en sangre.
En el caso de los animales que recibieron 25
mg/kg/día de compuesto 1 con la bomba de miniinfusión, falleció
un 93% de los animales. Por el contrario, sobrevivieron todos los
animales a los que se aplicó la dosis de 25 mg/kg/día por vía oral.
Este experimento demuestra que los niveles constantes en sangre del
compuesto 1 en el caso de carga diaria igual de sustancia se
soportan de manera esencialmente peor que los niveles en sangre del
compuesto 1 que aparecen por breve plazo y vuelven a reducirse.
Los niveles en sangre de los animales con bombas
de miniinfusión eran aproximadamente iguales al quinto día después
del comienzo del ensayo y al final del mismo. Los animales con
bomba de infusión presentaban, según fuese la dosificación
establecida, valores del compuesto 1 en plasma sanguíneo de 2,34
\mug/ml, 4,18 \mug/ml y 6,72 \mug/mg. En virtud del mal estado
de los animales del grupo de la dosis de 25 mg/kg/día no pudo
extraerse sangre a los animales. Sin embargo, a partir de los
valores en el caso de dosificaciones inferiores, puede extrapolarse
que en el grupo de la dosis de 25 mg/kg/día que recibieron el
compuesto 1 a través de bomba de miniinfusión, los niveles en
sangre no pueden haber quedado por encima de 15 \mug/ml. Los
animales con administración oral de compuesto 1 presentaron valores
en plasma sanguíneo esencialmente más elevados, de 9,66 \mug/ml,
18,01 \mug/ml, 34,35 \mug/ml y 80,50 \mug/ml. La comparación
de los niveles en sangre demuestra, por tanto, que los animales con
administración oral del compuesto 1 presentan niveles en sangre
esencialmente más elevados (4 a 5 veces más elevados,
aproximadamente) que los animales con la bomba de miniinfusión.
Por lo tanto, el Ejemplo 5 demuestra que los
niveles constantes del compuesto 1 en sangre son tolerables de
manera esencialmente peor que los niveles en sangre que aparecen en
forma de impulsos, incluso cuando éstos son 4 a 5 veces más
elevados que los niveles constantes en sangre. Este resultado está
en coincidencia con la primitiva observación clínica de que los
niveles constantes del compuesto 1 en sangre observados en el
hombre son responsables de sus efectos secundarios. El Ejemplo 5
demuestra que las sustancias que presentan la eficacia del
compuesto 1 pero muestran tiempos más breves de semidesintegración
se toleran de manera esencialmente mejor que las sustancias con un
largo tiempo de semi-desintegración.
Claims (2)
1. Procedimiento para descubrir inhibidores de la
síntesis de nucleótidos que presenten menores efectos secundarios,
caracterizado porque
- a)
- se aplica el inhibidor de la síntesis de nucleótidos a un mamífero, estando excluido el hombre, en una dosis eficaz,
- b)
- se comprueba la concentración del inhibidor de la síntesis de nucleótidos en la sangre del mamífero y
- c)
- se determina si el inhibidor de la síntesis de nucleótidos presenta un tiempo de semidesintegración que es más breve que el de la amida del ácido N-(4-tri-fluorometilfenil)-2-cian-3-hidroxi-crotónico.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque se emplea un mamífero de los del grupo
ratón, rata, conejo, perro, mono o cerdo.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19960443 | 1999-12-15 | ||
| DE19960443A DE19960443C2 (de) | 1999-12-15 | 1999-12-15 | Verfahren zur Auffindung von Nukleotidsyntheseinhibitoren mit weniger Nebenwirkungen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2228665T3 true ES2228665T3 (es) | 2005-04-16 |
Family
ID=7932728
Family Applications (1)
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