ES2219187B1 - Inhibidores de calpaina. - Google Patents
Inhibidores de calpaina.Info
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Abstract
Inhibidores de calpaina.
La presente invención se refiere a compuestos que
tienen estructura de híbrido péptido-bifenilo y
compuestos relacionados con actividad como inhibidores de
calpaina. Un compuesto de la presente invención es un bifenilo
2,2'-disustituido, siendo los sustituyentes en las
posiciones 2 y 2' del esqueleto de bifenilo cadenas conteniendo
estructuras relacionados con los aminoácidos, péptidos y amidas, que
pueden ser iguales o distintos. La presente invención también
engloba cualquiera de los isómeros conformacionales (atropisómeros)
de dicho compuesto de fórmula I. Los compuestos de fórmula I tienen
aplicación en el tratamiento preventivo o terapéutico de una
enfermedad degenerativa.
Description
Inhibidores de calpaina.
La presente invención se enmarca en el campo de
los inhibidores de enzimas con actividad terapéutica, más
específicamente de los inhibidores de calpaina.
Las calpainas, o proteasas neutras activadas por
calcio (II) (CANP, E.C. 3.4.22.17) son una familia de proteasas
con cisteina ("cysteine proteases") con un papel metabólico
muy activo. Aunque su sustrato natural no está claramente
determinado, estas enzimas catalizan la hidrólisis de una variedad
de proteínas implicadas en la transducción de señales, en la
reconstrucción del citoesqueleto, en la regulación del ciclo
celular y en la apóptosis (Adv. Pharmacol. 1996,
37, 117). En mamíferos, la familia de calpainas comprende
diversas isoformas específicas de tejido y dos isoenzimas ubicuas:
la \mu-calpaina (o calpaina I) y la
m-calpaina (o calpaina II), que requieren cantidades
micromolares y milimolares, respectivamente, de calcio (II) para su
activación. Estudios estructurales por difracción de rayos X han
mostrado que cada isoforma está compuesta por una subunidad grande
(\sim 80 kDa), que presenta un dominio de proteasa con cisteina
del tipo de la papaina, y una subunidad pequeña (\sim 30 kDa), que
es común a cada isoenzima. Los extremos
C-terminales de cada subunidad tienen dominios
capaces de unirse a Ca (II) (dominio tipo calmodulina)
(FEBSLett. 2001, 501, 111).
La sobreactivación de las calpainas, lo que puede
ocurrir al aumentar la concentración intracelular de calcio (II),
está implicada en numerosas enfermedades, tales como las isquemias
cerebral y cardiaca, Alzheimer, Parkinson, distrofia muscular,
cataratas, enfermedades desmielinizantes (como la esclerosis
múltiple) y otras enfermedades degenerativas
(Pathophysiology 1999, 6, 91; Brain Res.
Rev. 2003, 42, 169).
La principal aplicación de inhibidores selectivos
de calpaina es como agentes neuroprotectores. En el área
terapéutica relacionada con la neuroprotección se han empleado
hasta ahora diversas estrategias. Se han usado agentes que actúan
sobre la despolarización de membrana y la entrada de calcio en las
células, o que evitan la producción de radicales libres
(antioxidantes), o que son antagonistas de la acción de
neurotransmisores (J. Clinical Neurosci. 2002,
9, 4). Recientemente se ha prestado mucha atención a los
fármacos capaces de bloquear los receptores NMDA para el glutamato;
sin embargo, el bloqueo de receptores ionotrópicos de aminoácidos
excitatorios puede no ser un método ideal para impedir la acción
excitotóxica, ya que estos fármacos tienen efectos secundarios
psicotomiméticos (Pharmacol. Ther. 1999, 81,
163; Neurobiol. Disease 2003, 12, 82). Una
alternativa interesante para conseguir neuroprotección es el
bloqueo de fenómenos celulares "post-receptor"
que están silenciados fisiológicamente; es decir, la búsqueda de
bloqueantes selectivos de cascadas catabólicas inducidas por los
agentes excitotóxicos. Es previsible que estos fármacos
potenciales de acción intracelular, al actuar sobre rutas
metabólicas que se activan durante la neurodegeneración, podrían
permitir una acción neuroprotectora más eficaz y selectiva.
La sobreactivación de calpaina requiere un
aumento continuado de las concentraciones intracelulares de Ca
(II), y esta enzima está latente en las células en reposo [es
decir, con niveles de Ca (II) "normales"]. Por ello, la
inhibición de calpaina se presenta como un tratamiento adecuado en
enfermedades neurodegenerativas. En base a sus características, es
previsible que la inhibición de calpaina tenga menos efectos
secundarios en terapéutica humana que el bloqueo de procesos
metabólicos previos a su activación en los procesos patológicos,
como es el caso del antagonismo del receptor NMDA de glutamato y
aspartato, debido a que la calpaina no se activa en condiciones
fisiológicas "normales" y a que la acción de aminoácidos
excitatorios es imprescindible para el funcionamiento normal del
sistema nervioso.
Además, los inhibidores potentes y selectivos de
calpaina son muy útiles como herramientas de trabajo para estudiar
el mecanismo de acción de esta proteasa, así como su papel en
ciertos procesos fisiológicos.
Por otra parte, es bien conocido que los péptidos
y compuestos relacionados (peptidomiméticos, peptoides, etc.)
poseen una amplia variedad de actividades biológicas. En esta
memoria se denominará péptido cualquiera de estos compuestos
(péptidos naturales o artificiales, peptidomiméticos, peptoide, y
cualquier análogo de péptido). Existen numerosos artículos y
patentes describiendo actividades biológicas y farmacológicas de
este tipo de compuestos (Peptides: Synthesis, Structures, and
Applications, Academic Press, San Diego, 1995; Adv.
Drug Res. 1997, 29, 1). Por otro lado, bifenilos
diferentemente sustituidos se han usado como farmacóforos en
compuestos con diversas actividades biológicas (J. Med. Chem.
2000, 43, 3443). Adicionalmente, los derivados de
bifenilo se han usado como fragmentos mesógenos para la preparación
de cristales líquidos (EP-743293).
Se han descrito inhibidores reversibles e
irreversibles de calpaina (Trends Mol. Medicine
2001, 7, 355; US-5541290). Los rasgos
estructurales más frecuentes de estos inhibidores es que son
péptídos o peptidomiméticos con pocos aminoácidos (entre 2 y 6)
hidrófobos y alguna funcionalidad electrófila, entre las que cabe
mencionar \alpha- cetofosfonatos,
\alpha-cetofosfinatos, óxidos de
\alpha-cetofosfinas,
\alpha-cetoésteres,
\alpha-cetoácidos,
\alpha-cetoamidas, trifluorometilcetonas,
aldehidos, sales de metilsulfonio, epóxidos, etc. Aparentemente,
estos compuestos actúan sobre el dominio tipo papaina de la
calpaina, lo que se traduce en una selectividad relativamente baja,
por lo que frecuentemente también son inhibidores de otras
proteasas con cisteina (por ejemplo, papaina) e incluso de
proteasas con serina (serine protease). En parte debido a
estos inconvenientes, aun no se ha encontrado un inhibidor de
calpaina con utilidad terapéutica.
Los compuestos más cercanos estructuralmente a
los compuestos objetos de la presente invención han sido divulgados
en (Acta Chim. Hung. 1984, 173), dónde se ha
descrito un compuesto en el que un fragmento de
2,2'-bifenilcarbonil se usa para unir dos cadenas
peptídicas (con secuencias
H-Pyroglu-Phe-Trp-Ser-Tyr-Lys-Leu-Arg-
Pro- Gly-NH_{2}, dónde la unión de las cadenas
peptídicas se realiza a través del grupo amino de la cadena
lateral de los residuos de lisina); en (Chem. Comm.
1998, 679), dónde se han descrito dos compuestos híbridos
entre el (aS)-ácido
6,6'-dimetil-2,2'-
bifenildicarboxílico y la L-valina y la D-valina,
respectivamente; en (Biorg. Med. Chem. Lett. 2002,
12, 57) se ha descrito el compuesto formado a partir del
ácido 2,2'- bifenildicarboxílico y la L-histidina metil
éster; algunas amidas derivadas del ácido
2,2'-bifenildicarboxílico y aminas aromáticas (J.
Chem. Eng. Data 1963, 8, 233) y de amidas
derivadas de
2,2'-di(amino)-bifenilo y
ácidos aromáticos (Justus Liebigs Ann. Chem. 1952,
577, 1; J. Org. Chem. 1975, 22, 873;
J. Chem. Soc. C 1968, 1017) han sido descritas. Sin
embargo, ninguno de estos compuestos ha sido vinculado con
actividad terapéutica en relación con la calpaina.
Existe la necesidad de encontrar inhibidores de
calpaina con utilidad terapéutica. Un tipo de inhibidores de
calpaina no descritos previamente y que no han sido investigado
anteriormente está constituida por compuestos peptídicos dónde
cadenas de aminoácidos y/o peptídicas, o análogas, están unidas a
las posiciones 2 y 2' del sistema de bifenilo, dando lugar a lo
que denominamos híbridos péptido-bifenilo y
compuestos relacionados, los cuales son el objeto de la
presente invención. Una característica estructural de los
compuestos objeto de la presente invención y que han demostrado
selectividad en la inhibición de calpaina es la presencia de uno o
más anillos aromáticos adicionales en los sustituyentes de las
posiciones 2 y/ó 2' del anillo de bifenilo.
La presente invención se refiere a compuestos de
estructura de híbrido péptido-bifenilo y compuestos
relacionados con actividad como inhibidores de calpaina. Un
compuesto de la presente invención es un bifenilo
2,2'-disustituido, siendo los sustituyentes en las
posiciones 2 y 2' del esqueleto de bifenilo cadenas conteniendo
estructuras relacionados con los aminoácidos, péptidos y amidas, y
pueden ser iguales o distintos.
La presente invención se refiere a compuestos de
estructura de híbrido péptido-bifenilo y compuestos
relacionados con actividad como inhibidores de calpaina. En esta
memoria se denominará péptido cualquiera de estos compuestos
péptidos naturales o artificiales, peptidomiméticos, peptoide, y
cualquier análogo de péptido. La presente invención se refiere a un
compuesto de fórmula I, que tiene estructura de bifenilo
2,2'-disustituido,
en la que los grupos R^{1} y
R^{2} pueden ser iguales o distintos, y pueden estar
independientemente seleccionados entre los
grupos
- NH_{2},
- NHR^{3} en el que R^{3} representa un grupo
alquilo o arilo,
- NR^{4}R^{5} en el que R^{4} y R^{5}
representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o
formando un sistema cíclico,
- CO_{2}H,
- CO_{2}R^{6} en el que R^{6} es un grupo
arilo o alquilo,
- CONH_{2},
- CONR^{7}R^{8} en el que R^{7} y R^{8}
representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o
formando un sistema cíclico,
- un grupo de fórmula II,
en la
que:
- Ar representa un grupo arilo, carbocíclico o
heterocíclico, distinto de imidazol,
- el asterisco (*) representa un centro
estereogénico, de configuración (R) o (S),
indistintamente,
- n tiene un valor entre 0 y 6,
- X, representa un grupo OH, OR^{9} en el que
R^{9} representa un grupo alquilo o arilo, NH_{2}, NHR^{10},
en el que R^{10} representa un grupo alquilo o arilo,
NR^{11}R^{12} en el que R^{11} y R^{12} representan dos
grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un
sistema cíclico,
- aa es un residuo de amino ácido, de
fórmula
dónde el asterisco (*) indica un
centro estereogénico de configuración (R) o (S),
indistintamente, R^{13} se selecciona entre H, alquilo o
arilo;
ó de fórmula
en la que los átomos de nitrógeno y
el carbono en posición \alpha- están formando un anillo entre 4 y
7
eslabones,
los residuos de aminoácido (aa) están unidos a
través de su grupo amino a la cadena representada por
-C(O)NHCH(CH_{2}Ar)CO-;
- un grupo de fórmula III,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
- un grupo de fórmula IV,
en la
que:
- Ar representa un grupo arilo,
- (*), y n tienen el significado descrito
anteriormente,
- aa, tiene el significado descrito
anteriormente, pero ahora el residuo de aminoácido está unido a
través de su grupo carbonilo a la cadena representada por -NH
C(O)CH(CH_{2}Ar)NH-,
- X representa H, alquilo entre 1 y 6 átomos de
carbono, COR^{14} dónde R^{14} es un grupo arilo o alquilo,
CO_{2}R^{15}, dónde R^{15} es un grupo arilo o alquilo;
- un grupo de fórmula V,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
y en la que al menos uno de los grupos R^{1},
R^{2} tiene la estructura indicada por los grupos II, o III, o
IV, o V;
y cualquiera de los isómeros conformacionales
(atropisómeros) de dicho compuesto de fórmula I.
Son compuestos especialmente preferidos:
-
(S,S)-3-Fenil-2-{[2'-(2-fenil-1-metoxicarbonyl-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}
-propionato de metilo (1).
- Ácido
(S,S)-2-{[2'-(1-carboxi-2-fenil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-3-fenil-propiónico
(2).
-
(S,S)-3-(1H-indol-3-il)-2-({2'-[2-(1H-indol-3-il)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-
propionato de metilo (3).
propionato de metilo (3).
-
(S,S,S)-2-(2-{[2'-(1-Carboxi-2-fenil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-3-fenil-propionilamino)-3-metil-butirato
de metilo (4).
-
(S,S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-fenil-1-(2-metil-1-metoxicarbonil-propilcarbamoil)-etilcarbamoil]-bifenil-2-car-
bonil}-amino)-propionilamino]-3-metil-butirato de metilo (4a).
bonil}-amino)-propionilamino]-3-metil-butirato de metilo (4a).
-
(S,S)-(2-Fenil-1-{2'-[3-fenil-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-propionilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-
etil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (5).
etil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (5).
-
Bis-2,2'-[(4-nitro-benzoil)amino]-bifenilo
(6).
-
2'-Amino-2-[2-(naftoil)amino]bifenilo
(7).
-
(S,S,S)-2-[2-({2'-Amino-bifenil-2-ilcarbamoil)-2-fenil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-3-fenil-propionilamino]-3-metil-butirato
de metilo (8).
-
(S,S,S,S)-3-(1H-Indol-3-il)-2-{3-fenil-2-[(2'-{2-fenil-1-[2-(1H-indol-3-il)-1-etoxicarbonil-etilcarbamoil]-etilcarbamoil}
-bifenil-2-carbonil)-amino]propionilamino}-propionato
de metilo (9).
- Ácido
(S)-2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carboxílico
(10).
-
(S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-pro-
pionilamino]-4-metil-pentanoato de metilo (11).
pionilamino]-4-metil-pentanoato de metilo (11).
-
(S,S,S)-2-({2'-[2-fenil-1-(3-metil-1-metilcarbamoil-butilcarbamoil)-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-3-(4-hidroxifenil)-propionato
de metilo (12).
-
(S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-pro-
pionilamino]-4-metilsulfanil-butirato de metilo (13).
pionilamino]-4-metilsulfanil-butirato de metilo (13).
- Ácido
2'-{(S)-[2-fenil-1-(R)-(2-fenil-1-metilcarbamoil-etilcarbamoil)-etilcarbamoil]}
-bifenil-2-carboxílico (14).
-
(S)-2-[(S)-2-({2'-(S)-[2-Fenil-1-(R)-(2-fenil-1-metilcarbamoil-etilcarbamoil)-etilcarbamoil]
-bifenil-2-carbonil}
-amino)-4-metil-pentanoilamino]-4-metilsulfanil-butirato
de metilo (15).
- Ácido
(S)-2'-[2-fenil-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carboxílico
(16).
-
(R)-(3-Fenil-2-
{[2'-(S)-(2-fenil- l
-metoxicarbonil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino})-propionato
de metilo (17).
-
(S,S)-3-(4-Hidroxi-fenil)-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-ami-
no)-propionato de metilo (18).
no)-propionato de metilo (18).
-
(S,S)-N-(1-Ferrocenilmetil)-3-fenil-2-({2'-[2-fenil-1-(1-ferrocenilmetilcarbamoil)]-etilcarbamoil)-bifenil-2-car-
bonil}-amino)-propionamida (19).
bonil}-amino)-propionamida (19).
-
N,N'-Bis-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-bifenil-2,2'-dicarboxamida
(20).
-
(S,S)-2-Amino-N-[2'-(2-amino-3-fenil-propionilamino)-bifenil-2-il]-3-fenil-propionamida
(21).
-
(S,S)-{1-[1-(2'-Amino-bifenil-2-ilcarbamoil)-2-fenil-etilcarbamoil]-3-metil-butil}-carbamato
de 9H-fluoren-9-ilmetilo
(22).
-
2,2'-di-(2-naftoil-amino)-bifenilo
(23).
-
2,2'-di-[(3,5-dinitrobenzoil)amino)-bifenilo
(24).
-
2-(2-Naftoilamino)-2'-[(3,5-dinitrobenzoil)amino]-bifenilo
(25).
-
2-(2-Naftoilamino)-2'-[(4-nitrobenzoil)amino]-bifenilo
(26).
-
(S,S,S,S)-2-(3-Fenil-2-{[2'-(2-Fenil-1-{2'-[2-(9H-Fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-propionilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}
-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-propionilamino)-3-metil-butirato
de metilo (27).
La síntesis de los compuestos de fórmula general
I de la presente invención se ha llevado a cabo por métodos
habituales en síntesis orgánica, los cuales son conocidos por los
expertos en la técnica (Chemical Approaches to the Synthesis of
Peptides and Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997;
Comprehensive Organic Synthesis, vol 6, Pergamon Press,
1991). Debido a que la funcionalidad principal presente en los
sustituyentes R^{1} y R^{2} de los compuestos de tipo I es la
amida, la reacción esencial en la preparación de los compuestos de
tipo I es una reacción de acilación entre un ácido o derivado de
ácido, como electrófilo, y una amina, como nucleófilo. La estrategia
sintética de los compuestos de fórmula I depende de la estructura
de los grupos R^{1} y R^{2}, así como de si estos grupos son
iguales o diferentes.
Los aminoácidos, péptidos, aminas y derivados de
ellos usados en la síntesis de los compuestos de fórmula I son
comerciales o se preparan por métodos habituales en síntesis
orgánica. En algunos casos, especialmente con aminoácidos no
naturales de la serie D-, se han aplicado métodos
biocatalíticos usando la enzima acilasa como biocatalizador
(Tetrahedron: Asymmetry 1998, 9,
1951-1965).
Cuando en la síntesis de los compuestos I se han
usado péptidos como nucleófilos o electrófilos, su síntesis se ha
realizado por métodos habituales en química de aminoácidos y
péptidos. Se han usado los grupos terc-butoxicarbonil (Boc),
benciloxicarbonil (Cbz) y fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc) como
protección de los grupos amino; los grupos carboxilo se han
protegido como ésteres alifáticos (metílico, etílico o bencílico).
La reacción de acoplamiento para la síntesis de estos péptidos
usados como nucleófilos se ha realizado usando metodologías
habituales: o por activación del grupo carbonilo como cloruro de
ácido, o por formación de ésteres activos (por ejemplo de
pentafluorofenilo), o a través del anhídrido mixto, o por la
activación "in situ" del grupo carbonilo (por
tratamiento del ácido con una combinación de carbodiimida y
1-hidroxibenzotriazol o métodos relacionados)
(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and
Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997).
Una característica esencial de los compuestos de
la presente invención es que son inhibidores de calpaina. Existen
diversas isoformas de calpaina, las cuales son muy parecidas
estructuralmente y, por lo que es conocido, comparten el mismo
mecanismo de acción. Las dos más abundantes son la
micro-calpaina (o calpaina I) y la milicalpaina (o
calpaina-II), las cuales se diferencian en ensayos
in vitro, en la concentración de calcio necesaria para su
activación. Como las dos isoformas de enzima son muy similares, se
han encontrado en muchos ejemplos de la bibliografía que los
inhibidores de calpaina lo son de ambas isoenzimas (Adv. Synth.
Catal. 2002, 344, 855). De esta forma, en la
presente invención cuando mencionemos a la calpaina, hacemos
referencia a las dos isoformas (o isoenzimas) que están incluidas en
la definición de calpaína. Por lo tanto, otro objeto de la
presente invención es el uso de un compuesto de fórmula I como
inhibidor de calpaína. La capacidad de inhibición de calpaina se ha
cuantificado por el valor de IC_{50}, que se define como la
concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad
catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de
IC_{50}, más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de
calpaina I (la más relevante desde un punto de vista fisiológico)
de algunos compuestos de la presente invención se indican en la
tabla 1 y en la figura 1. Dado que la calpaina II, también
denominada mili-calpaina, necesita más cantidad de
calcio para la activación, posiblemente no tenga un papel
fisiológico tan relevante; pues dicha concentración de calcio
causaria la muerte celular antes de que se pudiera activar la
mili-calpaina. Por esta razón, los ensayos de
inhibición se han realizado para calpaina I, pero son extrapolables
para calpaina II.
| Compuestos | IC_{50} |
| 1 | 64 nM |
| 2 | 70nM |
| 3 | 37nM |
| 4 | 10nM |
| 5 | 12nM |
| 6 | 187nM |
| 7 | 18nM |
| 8 | 87 pM (= 0'087 nM) |
Se han realizado estudios de la estructura de los
híbridos péptidos-bifenilo de la presente
invención y su actividad biológica, los cuales han mostrado que:
1) Todos los compuestos objeto de la presente
invención, de fórmula genérica I, son inhibidores potentes de
calpaina I. Como ejemplos representativos, aunque no limitantes,
los compuestos 1-8 tienen valores de IC_{50} entre
0'087 y 187 nM.
2) La inhibición de calpaina de los compuestos
1-4 ilustran que la actividad biológica es
prácticamente independiente de la naturaleza de los aminoácidos, de
la longitud de la cadena peptídica y de la sustitución en los
extremos de las cadenas peptídicas.
3) Cuando se cambia la orientación de los
aminoácidos unidos al sistema de bifenilo, también se obtienen
inhibidores potentes de calpaina I. Un ejemplo representativo,
aunque no limitante es el compuesto 5.
4) Compuestos que se pueden considerar como
híbridos péptido-bifenilo con cadenas laterales
truncadas también son buenos inhibidores de calpaina I. Ejemplo
ilustrativos de estos compuestos son 6 y 7.
5) La combinación en una estructura de los rasgos
estructurales de los compuestos 4, 5 y 7 para obtener el híbrido
péptido-bifenilo 8 da como resultado un inhibidor
115 veces más potente que los anteriores, teniendo un valor de
IC_{50} en escala picomolar, que es el inhibidor más potente de
calpaina descrito hasta ahora.
6) También hay que destacar que estos compuestos
han sido ensayados como inhibidores de papaina (otra proteasa con
cisteina) y de tripsina (una proteasa con serina), y se ha
encontrado que estos compuestos son inactivos frente a estas
enzimas; lo que es una indicación de la selectividad de nuestros
compuestos, un objetivo relativamente difícil de alcanzar en el
área de los inhibidores de proteasas.
Los híbridos péptido-bifenilo
mostrados en la figura 1 son los inhibidores de calpaina más
potentes descritos, y marcan un camino para el diseño de compuestos
útiles terapéuticamente. Debido a que se ha encontrado que la
sobreactivación de la calpaina está implicada en numerosas
enfermedades degenerativas (por ejemplo isquemia cardiaca,
cataratas, y una diversidad de enfermedades neurodegenerativas
(Brain Res. Rev 2003, 42, 169)), un objeto
adicional de la presente invención es el uso de un compuesto de
fórmula I para el tratamiento o prevención de enfermedades
degenerativas así como para preparar un medicamento para el
tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad
degenerativa, y en especial cuando la enfermedad degenerativa está
seleccionada entre isquemia cerebral, isquemia cardíaca, Alzheimer,
Parkinson, distrofia muscular, cataratas y enfermedades
desmielinizantes, y en especial si la enfermedad desmielinizante
es la esclerosis múltiple.
La figura 1 muestra resultados del estudio de los
híbridos péptido-bifenilo, híbridos
aminoácido-bifenilo e híbridos
amida-bifenilo objetos de la presente invención y
su actividad biológica como inhibidores de calpaína I.
Como ejemplos ilustrativos, aunque no limitantes,
se indican los procedimientos experimentales, datos
espectroscópicos y analíticos de algunos híbridos
péptido-bifenilo de fórmula I, así como ensayos de
la actividad biológica de los mismos. Además, los ejemplos
recogidos a continuación son ilustrativos de la variedad de métodos
empleados para la síntesis de los compuestos objeto de esta
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Sobre una disolución de dicloruro de ácido
difénico (2'94 g, 10'53 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (100
ml), bajo atmósfera de argón, se añadió Et_{3}N (4'4 ml, 31'6
mmol) y el clorhidrato de L-Phe-OMe (5 g,
23,17 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml). La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 24 horas tras las cuales se trató con
disolución acuosa de HCl al 5%, disolución saturada de NaHCO_{3},
se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La
evaporación del disolvente dio lugar a un residuo que se purificó
mediante cromatografía en columna para dar lugar al producto de
acoplamiento 1 (4,8 g, 81% rto.) en forma de sólido blanco.
P.f._{1} = 67-68ºC, P.f._{2}
=171-172ºC (2 fases).
[\alpha]_{D} =+34 (c = 1,
CHCL_{3}).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3},
30ºC, mezcla de atropisómeros A + a en proporción 1'2:1) \delta:
7'48 (d,1'1H, J = 7'5 Hz, NH, A), 7'40-728 (ni, 6H,
H mom., A+a; 0'9H, NH, a), 7'24 (m, 6H, H arom., A+a), 7'11 (m, 4H,
H amm., A+a), 7'02 (m, 2H, H arom., A+a), 4'76 (m, 2H,
CH_{\alpha}, A+a), 3'61 (s, 2'8H, CO_{2}CH_{3}, a),
3'54 (s, 3'2H, CO_{2}CH_{3}, A), 2'96 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta}), A), 2'77 (m, 2H,
C(H_{\alpha},H_{\beta}), a) ppm
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'76 (d, 2H, J = 7'8Hz,
2-NH), 7'34 (m, 6H, H arom.), 7'19 (m, 6H, H amm.),
7'08 (m, 4H, H arom.), 6'91 (m, 2H, H arom.), 4'39 (m, 2H,
CH_{\alpha}, 3'48(s, 6H, COOCH_{3}), 2'81 (in,
2H, C(H_{\alpha}H_{\beta})Ph), 2'65 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})Ph) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl_{3},
30ºC, mezcla de confórmeros A + a) \delta: 172' 1 (s, A), 171'7
(s, a), 169'3 (s, 2C, A+a),139'0 (s, a), 138'5 (s, A), 136'l (s,
2C, A+ a), 135'7 (s, A), 135'3 (s, a), 130'1 (d, a), 129'7 (d, A),
129'3 (d), 129'2 (d),129'0 (d), 128'5 (d), 127'8 (d), 127'5 (d),
127'2 (d), 126'9 (d), 53'6 (d, 2C, A+a), 52'2 (d, 2C, A + a), 37'9
(t, A), 37'7 (t, a) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 171'0 (s, 2C), 168'8 (s, 2C), 138'6
(s, 2C), 136'8 (s, 2C), 1352 (s, 2C), 129'1(d, 4C), 128'7
(d, 6C),128' 128'4C), 127'2 (d, 28C), 126'4 (d, 2C), 53'7 (d, 2C),
51'7 (c, 2C), 36'5 (t, 2C) ppm.
IR \nu 3435, 3293, 1737, 1641, 1557, 1435,
1335, 1266, 1218, 757, 700 cm^{- 1}.
EM(ES^{+}) m/e = 565
([MH]^{+},100%).
| AE | Calculado para C_{34}H_{32}N_{2}O_{6}: C, 72'32; H, 5'71; N, 4'96. |
| Encontrado: C, 72'37; H, 5'12;N, 4'96. |
Sobre una disolución del diéster 1 (4 g, 7'08
mmol) en una mezcla THF:H_{2}O 1:1 (80 ml), se añadió
LiOH^{-}H_{2}O (654 mg, 15'58 mmol). La mezcla se agitó durante
6 horas, tras las cuales se eliminó el THF a presión reducida. A
continuación se neutralizó con disolución acuosa de HCl al 5% hasta
pH \approx 2-3, se extrajo con AcOEt (3 veces),
se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro
obteniéndose el correspondiente diácido 2 puro (4'2 g,100% rdto.).
Sólido blanco.
P.f.=130-131ºC.
[\alpha]_{D}= +21 (c = 1,
CHCl_{3}).
^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3},
40ºC, mezcla de confómleros, 1'8:1, A + a) \delta: 7'26 (m, 12H,
H arom., 2H, 2-NH, A+a), 7'14-7'0
(m, 6H, H arom., A+a), 4'82 (m, 1'3H, CH_{\alpha}, A), 4'65 (m,
0'7H, CH_{\alpha}, a), 3'13 (m, 1'3H,
C(H_{\alpha}H_{\beta}), A), 2'97 (m, 0'7H,
C(H_{\alpha}H_{\beta}), a; 1'3H,
C(H_{\alpha}H_{\beta}),A), 2'70 (m, 0'7H, C
H_{\alpha}H_{\beta}),a) ppm.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}, 50ºC)\delta: 8'58 (d, 2H, J = 8'OHz,
2-NH), 7'31 (m, 611, H arom.), 7'19 (ni, 6H, H
arom.), 7'07 (dd, 4H, J_{orto} = 7'7Hz, J_{meta} = 1'8 Hz, H
arom.,), 6'92 (d, 2H, J_{orto} = 6'8Hz, H arom.), 4'35 (m, 2H,
CH_{\alpha}), 2'84 (m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta}),
2'73 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz, CDCl_{3},
40ºC, mezcla de confórmeros, 1'8:1, A + a) \delta: 175'9 (s, A),
175'3 (s, a, 170'9 (s, 2C, A+a), 139'1 (s), 136'3 (s), 135'2 (s),
134'9 (s), 130'1 (d), 129'5 (d), 129'2 (d), 128'7 (d),
128'1(d),127'3 (d), 127'2 (d), 54'0 (d, A), 53'9 (d, a), 37'6
(t, A), 37'3 (t, a) ppm.
IR \nu: 3428, 3260, 1724, 1638, 1529, 1218
cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 537
([MH]^{+},100%).
| AE | Calculado para C_{32}H_{28}N_{2}O_{6}: C, 71'63; H, 5'26; N, 5'22. |
| Encontrado: C, 71'32; H, 4'97; N, 4'90. |
Sobre una disolución de ácido difénico (1 g, 4'13
mmol) en 20 ml de DMF anhidra se añadió secuencialmente el
clorhidrato de L-Trp-OMe (2'3 g, 9'08 mmol),
BOP (4'02 g, 9'08 mmol) y Et_{3}N (1'7 ml, 12'38 mmol). La mezcla
de reación se mantuvo agitando a temperatura ambiente durante 14
horas. Transcurrido este tiempo, se eliminó el disolvente a presión
reducida, se disolvió el residuo en AcOEt y se lavó varias veces
con una disolución de HCl al 5%, con disolución saturada de
NaHCO_{3} y con salmuera. La fase orgánica se secó sobre
MgSO_{4} anhidro y se concentró para dar lugar a un residuo cuya
purificación por cromatografía de columna dio lugar al híbrido 3 en
forma de sólido blanco (2'05 g, 77% rto.).
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 10'72 (s,
NH-anillo Trp), 876 (d, 1H, J = 7'5, NH),
7'38-7'29 (m, 10H, H arom.),
7'05-6'91 (m, 8H, H arom.), 4'41 (m, 2H, C
H_{\alpha}-Trp), 3'41 (s, 6H,
CO_{2}CH_{3}), 2'90 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Trp), 2'75 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Trp)
ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'5 (s), 169'0 (s), 139'1 (s),
136'1 (s), 135'2 (s), 129'6 (d,), 127'3 (d), 126'9 (d), 123'5 (d),
121'0 (d), 118'4 (d), 117'9 (d), 111'4 (d), 109'1 (d), 53'4 (d,
C_{\alpha}-Trp), 51'9 (c,
CO_{2}CH_{3}), 26'9 (t,
CH_{2}-Trp) ppm.
IR \nu 3415, 3057, 2952,1737, 1640, 1524, 1458,
1438, 1341, 1222, 1097, 851, 744, 559 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 643 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{38}H_{34}N_{4}O_{6}: C, 71'01; H, 5'33; N, 8'72. |
| Encontrado: C, 70'98; H, 5'31; N, 8'60. |
Sobre una disolución del diácido 2 (1'26 g, 2'348
mmol) en DMF anhidra (40 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente el clorhidrato de L-ValOMe (358 mg, 2'13
mmol), HOBT (288 mg 2'13 mmol), Et_{3}N (0'45 ml, 3'20 mmol), EDC
(409 mg, 2'13 mmol), y DMAP (26 mg, 0'213 mmol). La mezcla se
agitó durante 19 horas tras las cuales se trató con disolución
acuosa de HCl al 5% y se extrajo con AcOEt (3 veces). Los
extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con salmuera y se
secaron sobre MgSO_{4} anhidro. Por evaporación del disolvente
se obtuvo un residuo que se purificó mediante cromatografía en
columna para dar lugar al producto de monoacoplamiento 4 en forma
de sólido blanco (870 mg, 58% rto.) junto con el producto de
diacoplamiento 4a (141 mg, 8% rto.), en forma de sólido blanco.
^{1}H-RMN (400 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'56 (d, 1H, J = 8'3,
NH-Phe_{1}), 8'44 (d, 1H, J = 8'0, NH- Phe_{2}),
8'07 (d, 1H, J = 8'3, NH-Val), 7'96 (d, 1H, J = 8'5,
H arom.), 7'70 (d, 1H, J = 8'3, H arom.), 7'53 (t, 1H, J = 7'6, H
atom.), 7'40 (t, 1H, J = 7'8, H atom.), 7'33-7'09
(m, 12H, H arom.), 6'88 (m, 211, H arom.), 4'59 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Phe_{2}), 4'33 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Phe_{1}), 4'12 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Val), 3'56 (s, 3H,
CO_{2}CH_{3}), 2'85 (m, 211,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-
H_{\beta})-Phe_{1};
C(H_{\alpha}H_{\beta}-Phe_{2}), 2'60
(m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe_{1};
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe_{2}), 1'97
(m, 1H, CH(CH_{3})_{2}-Val), 0'82
(d, 3H, J = 6'5, C(CH_{3})_{2} Val),
0'80 (d, 311, J = 6'5, C(CH_{3})_{2}-Val) ppm.
0'80 (d, 311, J = 6'5, C(CH_{3})_{2}-Val) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta:172'7 (s),171'7 (s),171'3 (s), 168'8
(s),131'7 (s), 168'6 (s), 142'9 (s), 138'5 (s), 137'7 (s), 137'6
(s), 137'4 (s), 135'8 (s),129'5 (d), 129'2 (d), 129'1 (d), 128'9
(d), 1282 (d),128'0 (d), 127'8 (d), 127'4 (d),127'1 (d), 126'4 (d),
126'3 (d), 124'5 (d), 1192 (d),109'6 (d), 57'4 (d,
C{\alpha}-Val), 53'7 (d, 2C,
C_{\alpha}-Phe_{1};
C_{\alpha}-Phe_{2}), 51'7 (c, CO_{2}CH_{3}), 37'3 (t, CH_{2}-Phe), 36'6 (t, CH_{2}-Phe), 29'9 (d, CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'9 (c, CH(QH_{3})_{2}-Val), 18'3 (c, CH(CCH_{3})_{2}-Val).
C_{\alpha}-Phe_{2}), 51'7 (c, CO_{2}CH_{3}), 37'3 (t, CH_{2}-Phe), 36'6 (t, CH_{2}-Phe), 29'9 (d, CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'9 (c, CH(QH_{3})_{2}-Val), 18'3 (c, CH(CCH_{3})_{2}-Val).
IR \nu 3413, 2963, 1740, 1640, 1535, 1438,
1358, 1215, 746, 700 ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 650 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{38}H_{39}N_{3}O_{7}: C, 70'25; H, 6'05; N, 6'47 |
| Encontrado: C, 69'88; H, 6'40; N, 6'04 |
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 8'58 (d, 2H, J = 8'5,
NH-Phe), 822 (d ancho, 2H, NH-Val),
7'42-7'07 (m, 16H, H arom.), 6'88 (m, 2H, H arom.),
4'59 (m, 2H, CH_{\alpha}-Phe), 4'09 (m, 2H,
H_{\alpha}-Val), 3'59 (s, 6H,
CO_{2}CH_{3}), 2'83 (m, 4H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'60 (m, 4H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe),1'97
(m, 2H, CH(CH_{3})_{2}-Val), 0'83
(d, 3H, J = 6'8,
C(CH_{3})_{2}-Val), 0'80 (d, 3H,
J = 6'8, C(CH_{3})_{2} Val) ppm.
^{13}C-RMN (75 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'9 (s), 168'86 (s), 168'84 (s),
138'0 (s), 131'5 (s), 129'7 (s), 129'5 (d),129'3 (d), 128'7 (d),
128'3 (d), 127'4 (d), 127'3 (d), 126'6 (d), 57'8 (d, Ca, Val),
54'1(d, C_{\alpha}-Phe), 52'0 (c,
CO_{2}CH_{3}), 377 (t,
CH_{2}-Phe), 30'3 (d,
CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'2
(c, CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'6 (c,
CH(CH_{3})_{2}-Val) ppm.
IR \nu 3413, 3061, 2963,1743, 1642, 1535, 1437,
1267, 1206, 756, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 763
([MH]^{+},100%).
| AE | Calculado para C_{44}H_{50}N_{4}O_{8}: C, 69'27; H, 6'61; N, 7'34. |
| Encontrado: C, 68'99; H, 6'45; N, 7'12. |
Sobre una disolución a 0ºC de
2,2'-di(amino)-bifenilo (200
mg, 1'08 mmol) en 25 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro, se añadió
Et_{3}N (0'43 ml, 3'07 mmol) y el cloruro de
L-N-Fmoc-fenilalanina (685 mg, 1'68
mmol) en pequeñas porciones. La mezcla de reacción se mantuvo
agitando a temperatura ambiente toda la noche. Transcurrido este
tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida, y se purificó
el residuo resultante por cromatografía de columna para dar lugar
al producto 5 (778 mg, 78% rto.) en forma de sólido blanco.
[\alpha]_{D}= -35 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
^{1}H-RMN(300 MHz,
CDCl_{3}, 30ºC, mezcla de confórmeros A+a, 2:1) \delta: 7'97
(d, 1'33H, J = 7'8, H arom., a), 7'74 (d, 2'66H, J = 73, H arom.,
A), 7'68 (s, 1'33H, NH arom., A), 7'48-7'36 (m,
9H, H arom., A+a; 0'66H, NH arom., a), 7'30-7'09
(m, 25H, H arom., A+a), 5'60 (d, 1'33H, J = 6'8,
NH-Fmoc, A), 5'05 (d ancho, 0'66H,
NH-Fmoc, a), 4'41 (m, 1'33H,
CH_{\alpha}-Phe, A), 4'32 (m, 0'66H,
CH_{\alpha}-Phe, a; 0'66H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Fmoc, a), 4'24 (m,
1'33H, C(H_{\alpha}H_{\beta})-Fmoc, A),
4'04 (m, 2H, CH-Fmoc, A+a; 0'66H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Fmoc,a),
3'93 (m, 1'33H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Fmoc, A),
3'31 (m, 1'33H, C
(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe, A), 3'03 (m,
0'66H, C (H_{\alpha}H_{\beta})-Phe, a),
2'85 (m, 1'33H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe, A;
0'33H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe, a)
ppm.
^{13}C-RMN(75 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros 2:1) 8: 170'1 (s, A), 169'7 (s,
a), 156'3 (s, A), 156'0 (s, a), 143'7 (s), 141'2 (s), 136'6 (s),
136'2 (s), 134'6 (s), 130'6 (d), 130'3 (d), 129'6 (d), 129'2 (d),
129'1 (d), 128'9 (d), 128'7 (d), 127'7 (d), 127'1 (d), 125'9 (d),
125'6 (d), 125'3 (d), 125'1 (d), 125'0 (d), 123'8 (d), 123'3
(d),119'9 (d), 67'3 (t, CH_{2}-Fmoc, A+a),
56'8 (d, C_{\alpha}-Phe, a), 56'7 (d,
C_{\alpha}-Phe, A), 46'9 (d,
CH-Fmoc, A+a), 37'6 (t,
CH_{2}-Phe, a), 37'4 (t,
CH_{2}-Phe, A) ppm.
IR \nu 3410, 3063, 1696, 1585, 1516, 1450,
1246, 1049, 758, 740, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 443
([MH]^{+},100%).
| AE | Calculado para C_{60}H_{50}N_{4}O_{6}: C, 78'07; H, 5'46; N, 6'07. |
| Encontrado: C, 77'85; H, 5'60; N, 6'03. |
Sobre una disolución a 0ºC de
2,2'-di(amino)-bifenilo (100
mg, 0'54 mmol) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro, se añadió
Et_{3}N (0'15 ml, 1'08 mmol) y el cloruro de 4- nitrobenzoilo
(221'5 mg, 1'19 mmol) en pequeñas porciones. La mezcla de reacción
se mantuvo agitando a temperatura ambiente durante toda la noche.
Transcurrido este tiempo se eliminó el disolvente a presión
reducida y el residuo se purifico por cromatografía en columna para
dar lugar al producto de diacoplamiento 6 (261 mg, 77% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 10'04 (s, 2H, NH), 8'25 (d,
4H, J = 8'8, H-10), 7'86 (d, 4H, J = 9'0,
H-9), 7'62 (dd, 2H, J_{1,2} = 7'8, J_{1,3} =
0'7, H-1), 7'43 (dt, 2H,
J_{2-1,3} = 7'6, J_{2,4} =1 /,
H-2), 7'32 (dt, 2H, J_{3- 2,4} = 7'6, J_{3,1} =
7'6, H-3), 7'25 (dd, 2H, J_{4,3} = 7'6, J_{4,2}
=1'5, H-4) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DIVISO-d_{6}) \delta: 164'9 (s), 149'9 (s), 140'5 (s),
135'9 (s), 135'57 (s), 131'1 (d,), 129'4 (d), 129'1 (d), 127'1 (d),
127'0 (s),124'3 (d) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 505
([MNa]^{+},100%).
| AE | Calculado para C_{26}H_{18}N_{4}O_{6}: C, 64'73; H, 3'76;N, 11'61. |
| Encontrado: C, 64'80; H, 3'90;N, 11'74. |
Sobre una disolución a 0ºC de la
2,2'-di(amino)-bifenilo (500
mg, 2'71 mmol) en 50 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro, se añadió
Et_{3}N (0'14 ml, 1'02 mmol) y cloruro de naftoilo (129'3 mg,
0'68 mmol) en pequeñas porciones. La mezcla de reación se mantuvo
agitando a temperatura ambiente durante 13 horas. Transcurrido este
tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida, y se purificó
el residuo resultante por cromatografía de columna para dar lugar
al producto de monoacoplamiento 7 (144 mg, 63% rto.) junto con el
producto de diacoplamiento 23 (38 mg, 11% rto.), ambos en forma de
sólido blanco. Los datos analíticos y espectroscópicos del
compuesto 7 se indican a continuación.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 9'91 (s, 1H, NH), 8'29 (s,
1H, H-9), 7'98 (m, 3H, H-1,
H-10, H-14), 7'91 (d, 1H, J = 8'0, H
-15), 7'81 (dd, 1H, J_{13,12} = 8'5, J_{13,11} = 1'7,
H-13), 7'61 (m, 2H, H-4,
H-12), 7'45 (dt, 1H, J_{11-10,12}
= 7'1, J_{11,13} = 2'2, H-11), 7'34 (m, 2H,
H-2, H-3), 7'13 (dt, 1H,
J_{6-5,7} = 8'0, J_{6,8} = 1'4,
H-6), 7'05 (dd, 1H, J_{8,7} = 7'6, J_{8,6} =
1'4, H-8), 6'94 (dd, 1H, J_{5,6} = 8'0, J_{5,7}
= 0'97, H-5), 6'72 (dt, 1H,
J_{7-6,8} = 7'3, J_{7,5} = 1'2,
H-7) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 165'5 (s), 145'4 (s), 136'3 (s),
134'9 (s), 134'0 (s), 132'8 (s), 132'7 (s), 131'8 (d), 131'6 (d),
129'5 (s), 129'4 (d), 128'9 (d), 128'6 (d), 128'4 (d), 128'3 (d),
128'1 (d), 127'6 (d), 126'2 (d), 125'4 (d), 125'1 (s), 124'4 (d),
118'5 (d), 116'6 (d) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 339 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{23}H_{18}N_{2}O: C, 81'63; H, 5'36; N, 8'28. |
| Encontrado: C, 81'50; H, 5'59; N, 8'41. |
Sobre una disolución de
2,2'-di(amino)-bifenilo (156
mg, 0'846 mmol) en DMF anhidra (20 ml), bajo atmósfera de argón,
se añadió secuencialmente el ácido 4 (500 mg, 0'77 mmol), HOBT
(104 mg, 0'77 mmol), Et_{3}N (0'16 ml, 1'15 mmol), EDC (147 mg,
0'77 mmol), y DMAP (9,5 mg, 0'077 mmol). La mezcla se agitó durante
15 horas tras las cuales se trató con disolución acuosa de HCl al
5% y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 veces). Los extractos
orgánicos se juntaron, se lavaron con salmuera y se secaron sobre
MgSO_{4} anhidro. El disolvente se evaporó para dar lugar a un
residuo que se purificó mediante cromatografía en columna. El
producto de acoplamiento 8 se obtuvo en forma de sólido blanco
(355 mg, 74% rto.) junto con 48 mg de la diamina de partida.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 50ºC) \delta: 8'94 (s ancho, 1H,
NH-Bif.), 8'54 (d ancho, 1H, M Phe_{1}), 8'50
(d, 1H, J = 8'8, NH-Phe_{2}), 8'09 (d, 1H, J =
7'3, NH-Val), 7'56 (d, 1H, J = 7'8, H arom
7'40-7'84 (m, 21H, H arom.), 6'88 (m, 2H, H arum.),
6'77 (d, 1H, J = 7'8, H arom.), 6'65 (t, 1H, J 7'6, H arom..),
4'60 (m, 1H, CH_{\alpha}-Phe_{2}), 4'41
(m, 3H, CH_{\alpha}-Phe_{1};
NH_{2}-Bif.), 4'11 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Val), 3'60 (s, 3H,
CO_{2}CH_{3}), 2'87 (m, 4H,
CH_{\alpha},H_{\beta})-Phe_{1}; C
H_{\alpha},H_{\beta})-Phe_{2}), 2'63
(m, 4H,
C(H_{\alpha},H_{\beta})-Phe_{2}),
1'98 (m, 1H, CH(CH_{3})_{2}-Val),
0'84 (d, 3H, J = 6'8,
C(CH_{3})_{2}-Val), 0'82
(d, 3H, J 6'8,
C(CH_{3})_{2}-Val) ppm.
^{13}C-RMN(75 MHz,
DMSO-d_{6}, 50ºC) \delta: 171'4 (s), 168'6 (s), 168'5
(s), 168'42 (s), 168'40 (s),144 (s), 138'2 (s), 138'1 (s), 137'5
(s), 137'4 (s), 135'0 (s), 130'7 (d), 130'5 (d), 129'3 (d), 129'2
(d), 129'0 (d), 128'8 (d), 128'4 (d), 127'9 (d), 127'8 (d), 127'3
(d), 126'9 (d), 126'8 (d), 126'1 (d), 117'0 (d), 115 (d), 57'4 (d,
C\alpha-Val), 54'8 (d,
C\alpha-Phe_{1}), 53'6 (d,
C\alpha-Phe_{2}), 51'5 (c,
CO_{2},CH_{3}), 37'2 (t,
CH_{2}-Phe), 36'2 (t,
CH_{2}-Phe), 29'8 (d,
CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'7
(c, CH(CCH_{3})_{2}-Val),
18'1(c, CH(CH_{3})_{2}-Val)
ppm.
IR \nu: 3436, 2962, 1742, 1643, 1533, 1442,
1307, 1208, 1155, 754, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 816 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{50}H_{49}N_{5}O_{6}: C, 73'60; H, 6'05; N, 8'58 |
| Encontrado: C, 73'51; H, 6'20; N, 8'39 |
Sobre una disolución del diácido 2 (500 mg, 0'93
mmol) en DMF anhidra (8 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente el clorhidrato de L-Trp-OMe
(523 mg, 2'05 mmol), HOBT (276 mg 2'05 mmol), Et_{3}N (0'5 ml,
3'72 mmol), EDC (392 mg, 2'05 mmol), y DMAP (23 mg, 0'18 mmol). La
mezcla se agitó durante 48 horas tras las cuales se trató con
disolución acuosa de HCl al 5% y se extrajo con AcOEt (3 veces).
Los extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con salmuera y se
secaron sobre MgSO_{4} anhidro. Por evaporación del disolvente se
obtuvo un residuo que se purificó mediante cromatograsa en columna
para dar lugar al producto 9 en forma de sólido blanco (612 mg,
70% rto.).
P.f._{1}=115-116ºC.
^{1}H-RMN(400 MHz,
CDCl_{3}, 30ºC, mezcla de confórmeros A + a, 0.93:1'07) \delta:
8'90 (s ancho, 0'93H, NH-Trp, a), 8'59 (s ancho,
1'07H, NH-Tip, A), 8'50 (d, 0'93H H, J = 7'8 Hz,
NH-Phe, a), 7'65 (d, 1'07H, J = 7'8 Hz,
NH-Phe, A), 7'48 (d, 1'07H, J = 78 Hz, H arom., A),
7'36-6'97 (m, 24H, H arom., A+a; d, 0'93H, H arom.,
a;), 6'96 (d, 0'93H, J = 2'2 Hz, CH-Tip, A), 6'64
(d, 1'07H, J = 2'2 Hz, CH-Trp, a), 6'43 (d, 0'93H
H, J = 7'8 Hz, NH-Trp, A), 6'37 (d, 1'07H, J = 7'3
Hz, NH-Tip, a), 4'75 (m, 0'93H,
CH_{\alpha}-Trp, a), 4'61 (m, 1'07H,
CH_{\alpha}-Trp, a), 4'49 (m, 2H,
CH_{\alpha}-Phe, A+a), 3'57 (s, 3'21H, CO
CH_{3}, A), 3'52 (s, 2'79H, CO_{2}CH_{3}, a),
3'30 (m, 1'07H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta}Trp, A), 3'18 (m,
0'93H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Trp,
a), 3'11-2'91 (m, 2H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Trp, A+a;
2H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe,
A+a; 0'93H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe, a),
2'65 (m, 1'07H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe, A)
ppm.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 10'76 (s ancho, 2H,
NH-anillo Trp), 8'53 (d, 2H, J = 8'3Hz,
NH-Phe), 8'29 (d ancho, 2H, J = 5'8Hz,
NH-Trp), 7'47 (d, 2H, J = 8'OHz, H arom.), 7'34 (d,
2H, J = 8'OHz, H arom.), 7'19-6'97 (m, 22H, H
arom.), 6'88 (m, 2H, H arom.), 4'56 (m, 2H,
CH_{\alpha}-Phe), 4'47 (m, 2H,
CH_{\alpha}-Trp), 3'51 (s, 6H,
CO_{2}CH_{3}), 3'06 (m, 4H,
CH_{2}-Trp), 2'87 (m, 2H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe),
2'61 (m, 2H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
CDCl_{3}, mezcla de confórmeros A + a, 3:2) \delta: 171'7
(s,a), 171'4 (s, A), 171'1 (s, A), 170'5 (s, a), 170'3 (s, a),
170'2 (s, A), 138'9 (s), 138'2 (s), 136'8 (s), 136'4 (s), 136'2
(s), 136'1 (s), 135'0 (s), 130'1 (d), 129'9 (d), 129'8 (d), 129'2
(d), 128'9 (d), 28'6 (d), 128'5 (d), 128'0 (d), 127'45 (d), 127'40
(d), 127'36 (d), 127'3 (d), 126' 7 (d), 126'8 (d), 126'4 (d), 124'6
(d, A), 124'4 (d, a), 121'9 (d, a), 121'7 (d, A), 119'4 (d, a),
119'2 (d, A), 118'4 (d, A), 118'2 (d, a), 111'4 (d, a), 111'3 (d,
A), 108'7 (s, A), 108'1 (s, a), 55'6
(C_{\alpha}-Phe, A), 55'1
(C_{\alpha}-Phe, a), 52'7
(C_{\alpha}-Trp, a), 52'5 (C_{\alpha}Trp, A),
52'3 (CO_{2}CH_{3}, a), 52'2 (CO_{2}CH_{3},
A), 37'5 (CH_{2}-Phe, a), 37' 1
(CH_{2}-Phe, A), 27'4
(CH_{2}-Trp, A+a) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'9 (s, 2C), 171'2 (s, 2C), 168'5
(CO-Biph, 2C), 137'9 (s, 2C),138'0 (s, 2C), 137'5
(s, 2C), 136'15 (s, 2C), 136'16 (d, 2C),136'0 (d, 2C), 129'3 (d,
2C), 129'1 (d, 2C), 128'9 (d, 2C), 127'8 (d, 2C), 127'0 (d, 2C),
126'7 (d, 2C), 126'6 (d, 2C), 126'0 (d, 2C), 123'7 (d, 2C), 120'8
(d, 2C), 118'2 (d, 2C), 117'8 (d, 2C), 112'2 (d, 2C), 108'8 (s,
2C), 53'8 (C_{\alpha},-Phe, 2C), 53'0
(C_{\alpha}-Trp, 2C), 51'6
(CO_{7}7CH_{3}, 2C), 37'2
(CH_{2}-Me, 2C), 26'8
(CH_{2},-Trp, 2C) ppm.
IR \nu: 3435, 1739, 1641, 1533, 1439, 743
cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 937 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{56}H_{52}N_{6}O_{8}: C, 71'78; H, 5'59; N, 8'97. |
| Encontrado: C, 71'58; H, 5.70;N, 8'91. |
Sobre una disolución de anhídrido
2,2'-difénico (1 g, 4'46 mmol) en 12'5 ml de DMF
anhidra se añadió gota a gota, una disolución del clorhidrato de
L-Tyr-OMe (1'13 g, 4'90 mmol) y
2,4,6-colidina (0'65 ml, 4'90 mmol) en 12'5 ml de
DMF. La mezcla de reación se mantuvo agitando a temperatura
ambiente toda la noche. Transcurrido este tiempo, se eliminó el
disolvente a presión reducida, se disolvió el residuo en AcOEt y se
lavó varias veces con una disolución de HCl al 5%. La fase orgánica
se secó sobre MgSO_{4} anhidro y se concentró para dar lugar a
un residuo cuya purificación por cromatografía de columna dio
lugar al ácido 10 en forma de sólido blanco (1'8 g, 99% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 12'71 (s ancho, 1H,
CO_{2}H), 9'15 (s, 1H, OH-Tyr), 8'03 (d, 1H, J =
7'9, NH-Tyr), 7'79 (m, 1H, H arom.), 7'42 (m, 5H, H
arom.), 7'10 (m, 1H, H arom.), 7'04 (m, 1H, H arom.), 6'86 (d, 2H,
J = 8'4, H arom.-Tyr), 6'65(d, 2H, J = 8'6, H arom.-Tyr),
4'35 (m, 1H, CHA Tyr), 3'50 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 2'70
(m, 2H, CH_{2}-Tyr) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'5 (s), 168'8 (s), 168'2 (s),
156'0 (s), 140'7 (s), 139'8 (s), 134'9 (s), 131'4 (s), 130'7 (d),
130'3 (d), 129'8 (d), 129'3 (d), 127'4 (d), 127'3 (d), 127'0 (d),
126'9 (d), 115'1 (d), 54'0 (d, Ca-Tyr), 51'8 (c,
CO_{2}CH_{3}), 35'9 (t, CH_{2}-Tyr)
ppm.
IR \nu: 3420, 3060, 1720, 1640, 1516, 1439,
1226, 759 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 420 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{24}H_{21}NO_{6}: C, 68'73; H, 5'05; N, 3'34. |
| Encontrado: C, 68'44; H, 5'30; N, 3'49. |
Sobre una disolución del ácido 10 (400 mg, 0'95
mmol) en DMF anhidra (6 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente la sal se trifluoracético de
L-Phe-L-Leu-OMe (503'8 mg, 1'24 mmol),
HOBT (167'5 mg, 1'24 mmol), Et_{3}N (0'2 ml, 1'43 mmol), EDC
(237'6 mg, 1'24 mmol) y DMAP (11'6 mg, 0.095 mmol). La mezcla se
agitó durante 22 horas tras las cuales se evaporó el disolvente, se
trató con disolución acuosa de HCl al 5%, disolución saturada de
NaHCO_{3} y se extrajo con ACOEt (3 veces). Los extractos
orgánicos se juntaron, se lavaron con salmuera y se secaron sobre
MgSO_{4} anhidro. El disolvente se evaporó para dar lugar a un
residuo que se purificó mediante cromatografía en columna para dar
lugar al producto de acoplamiento 11 en forma de sólido blanco
(548 mg, 90% rto.) ppm.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 9'14 (s, 1H,
OH-Tyr), 8'66 (d, 1H, J = 7'8,
NH-Tyr), 8'50 (d, 1H, J = 8'3,
NH-Phe), 8'20 (d, 1H, J = 7'8,
NH-Leu), 7'41-7'28 (m, 6H, H
arom.), 7'25-7'18 (m, 7H, H arom.), 6'91 (m, 2H, H
arom.), 6'92 (d, 2H, J = 8'0, H arom.-Tyr), 6'63(d, 2H, J =
8'5, H arom.-Tyr), 4'54 (m, 1H, CH_{\alpha} Phe), 4'27 (m,
2H, CH_{\alpha} Tyr; CH_{\alpha} -Leu), 3'60 (s,
3H, CO_{2}CH_{3}), 3'42(s, 3H,
CO_{2}CH_{3}), 2'89 (m, 1H, C(H_{\alpha}
H_{\beta})-Phe), 2'66 (m, 2H,
C(H_{\alpha} H_{\beta})-Phe;
C(H_{\alpha} H_{\beta})-Tyr), 2'47 (m,
1H, C(H_{\alpha}H_{\beta})-Tyr),
1'60 (m, 1H, CH-Leu), 1'50 (m, 2H, CH_{2} -Leu),
0'86 (d, 3H, J = 6'1, CH_{3}-Leu), 0'82
(d, 3H, J = 6'1, CH_{3}-Leu) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 172'4 (s), 171'1 (s), 170'7 (s),
168'8 (s), 168'3 (s), 155'8 (s), 138'4 (s), 137'4 (s), 135'55 (s),
135'5 (s), 129'6 (d), 129'2 (d), 128'8 (d), 127'8 (d), 127'1 (d),
127'0 (d), 126'8 (d), 126'0 (d), 114'9 (d), 54'1 (d,
C_{\alpha}-Tyr), 53'7 (d, C_{\alpha} Phe), 51'6
(c, CO_{2}CH_{3}),), 51'5 (c, CO_{2}CH_{3}),
50'1 (d, C_{\alpha}-Leu), 40'2 (t,
CH_{2}-Leu), 37'0 (t,
CH_{2}-Phe), 35'9
(t,CH_{2}-Tyr), 24'0 (d,
CH(CH_{3})- Leu), 22'5 (t,
CH_{3}-Leu),), 22'2 (t,
CH_{3}-Leu) ppm.
IR \nu: 3428, 2955, 1743, 1642, 1517, 1438,
1367, 1224, 757, 700, 542 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 694 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{40}H_{43}N_{3}O_{8}: C, 69'25; H, 6'25; N, 6'06. |
| Encontrado: C, 69'32; H, 6'40; N, 6'14. |
Sobre una disolución del ácido 10 (160 mg, 0'38
mmol) en DMF anhidra (3'5 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente la sal se trifluoracético de
L-Phe-L-Leu-NHMe (201 mg, 0'49 mmol),
HOBT (67 mg, 0'49 mmol), Et_{3}N (0'08 ml, 0'57 mmol), EDC (95
mg, 0'49 mmol), y DMAP (4'6 mg, 0.038 mmol). La mezcla se agitó
durante 23 horas tras las cuales se trató con disolución acuosa de
HCl al 5% y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 veces). Los
extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con salmuera y se
secaron sobre MgSO_{4} anhidro. El disolvente se evaporó para dar
lugar a un residuo que se purificó mediante cromatografía en
columna. El producto de acoplamiento 12 se obtuvo en forma de
sólido blanco (234 mg, 89% rto.).
[\alpha]_{D}= -31 (MeOH, c = 0'5).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 9'15 (s ancho, 1H, OH- Tyr),
8'68 (d, 1H, J = 7'7, NH-Tyr), 8'55 (d, 1H, J =
8'0, NH-Phe), 7'85 (d, 1H, J = 8'4,
NH-Leu), 7'51 (c, 1H, J = 47, NH-CH_{3}),
7'41-7'16 (m, 11H, H arom.), 6'93 (m, 2H, H arom.),
6'85 (d, 2H, J = 8'0, H arom.-Tyr), 6'62(d, 2H, J = 8'4, H
arom.-Tyr), 4'47 (m, 1H, CH_{\alpha}-Phe), 4'27
(m, 1H, CH_{\alpha}-Tyr), 4'21 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Leu), 3'43 (s, 3H,
CO_{2}CH_{3}), 2'89 (m, 1H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})- Phe), 2'65 (m,
2H, C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Phe;
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Tyr),
2'54 (d, 3H, J = 4'6, NH-CH_{3}), 2'40
(m, 1H,
C(H_{\alpha}-H_{\beta})-Tyr), 1'50
(m, 1H, CH-Leu), 1'40 (m, 2H,
CH_{2}-Leu), 0'85 (d, 3H, J = 6'4,
CH_{3}-Leu), 0'81 (d, 3H, J = 6'4,
CH_{3}-Leu) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 172'0 (s), 171'2 (s), 170'3 (s),
169'0 (s), 169'0 (s), 168'6 (s), 156'0 (s), 138'6 (s), 137'6 (s),
137'5 (s), 135'5 (s), 135'4 (s), 129'8 (d), 128'4 (d), 129'1 (d),
129'0 (d), 128'0 (d), 127'2 (d), 127'1 (d), 127'0 (d), 126'2 (d),
54'3 (d, C -Phe), 54'3 (d, C_{\alpha} Tyr), 51'7 (c,
CO_{2}CH_{3}), 51'0 (d, C -Leu), 41'1 (t,
CH_{2}-Leu), 37'0 (t,
CH_{2}-Phe), 36'0 (t,
CH_{2}-Tyr), 25'6 (c, NH-CH_{3}),
24'1 (d, CH-Leu), 23'0 (c,
CH_{3}-Leu), 21'6 (c,
CH_{3}-Leu) ppm.
IR \nu: 3411, 2955, 1743, 1644, 1516, 1438,
1229, 756 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 693 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{40}H_{44}N_{4}O_{7}: C, 69'35; H, 6'40; N, 8'09. |
| Encontrado: C, 69'40; H, 6'50; N, 8'31. |
\newpage
Sobre una disolución del ácido 10 (160 mg, 0'38
mmol) en DMF anhidra (3'5 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente la sal se trifluoracético de
L-Phe-L-Met-OMe (210mg, 0'49 mmol),
HOBT (67 mg, 0'49 mmol), Et_{3}N (0'08 ml, 0'57 mmol), EDC (95
mg, 0'49 mmol) y DMAP (4'6 mg, 0.038 mmol). La mezcla se agitó
durante 20 horas tras las cuales se evaporó el disolvente, se trató
con disolución acuosa de HCl al 5% y se extrajo con AcOEt (3
veces). Los extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con
salmuera y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. El disolvente se
evaporó para dar lugar a un residuo que se purificó mediante
cromatografía en columna. El producto de acoplamiento 13 se obtuvo
en forma de sólido blanco (255 mg, 94% rto.)
[\alpha]_{D}= -32 (MeOH, c =
0'47).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 9'15 (s, 1H,
OH-Tyr), 8'66 (d, 1H, J = 7'5,
NH-Tyr), 8'53 (d, 1H, J = 8'4,
NH-Phe), 7'26 (d, 1H, J = 7'7,
NH-Met), 7'39-7'28 (m, 6H, H
arom.),), 7'23-7'17 (m, 5H, H arom.), 6'92 (m, 2H, H
arom.), 6'86 (d, 2H, J = 7'9, H arom.-Tyr), 6'63(d, 2H, J =
8'6, H arom.-Tyr), 4'51 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Phe), 4'35 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Met), 4'27 (m, 1H,
CH_{\alpha}-Tyr), 3'60 (s, 3H,
CO_{2}CH_{3}-Met), 3'43 (s, 3H,
CO_{2}CH_{3}-Tyr), 2'87 (m, 11H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'65 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe;
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Tyr), 2'50 (m,
1H, C(H\alphaH_{\beta})-Tyr), 2'40
(m, 2H, CH_{2}CH_{2}-Met), 2'01 (s, 3H,
SCH_{3}), 1'92 (m, 1H,
CH_{2}C(H_{\alpha}H_{\beta})SCH_{3}),
1'83 (m, 1H,
CH_{2}C(H_{\alpha}H_{\beta})SCH_{3})
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'8 (s), 171'2 (s), 170'9 (s),
170'8 (s), 168'8 (s), 155'9 (s), 138'5(s), 137'5 (s), 135'5
(s), 135'49 (s), 129'7 (d), 129'2 (d), 129'0 (d), 128'9 (d), 127'9
(d), 127'2 (d), 127'1 (d), 126'8 (d), 126'2 (d), 54'1 (d,
C_{\alpha}-Tyr), 53'8 (d,
C_{\alpha}-Phe), 51'8 (c,
CO_{2}CH_{3}-Met), 51'6 (c,
CO_{2}CH_{3}-Tyr), 50'8 (d,
C_{\alpha}-Met), 37'1 (t,
CH_{2}-Phe), 36'0 (t,
CH_{2}-Tyr), 30'5 (t,
CH_{2}CH_{2}CH,SCH_{3}), 29'4 (t,
CH_{2}CH_{2}SCH_{3}), 14'5 (c, SCH_{3}) ppm.
IR \nu: 3414, 3054, 1741, 1642, 1516, 1438,
1224, 757 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 712 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{40}H_{44}N_{4}O_{7}: C, 65'81; H, 5'81; N, 5'90; S, 4'50. |
| Encontrado: C, 66'02; H, 6'10; N, 5'82; S, 4'61. |
Sobre una disolución de anhídrido
2,2'-difénico (200 mg, 0'89 mmol) en 4 ml de DMF
anhidra se añadió gota a gota, una disolución de la sal de
trifluoracético del dipéptido
L-Phe-D-Phe-NH-Me (431
mg, 0'98 mmol) y 2,4,6-colidina (0'13 ml, 0'98
mmol) en 4 ml de DMF. La mezcla de reación se mantuvo agitando a
temperatura ambiente durante toda la noche. Transcurrido este
tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida, se disolvió
el residuo en AcOEt y se lavó varias veces con una disolución de HCl
al 5%. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} anhidro y se
concentró para dar lugar a un residuo cuya purificación por
cromatografía de columna dio lugar al ácido 14 en forma de sólido
blanco (552 mg, 90% rto.).
[\alpha]_{D}= +21 (MeOH, c =
0'51).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'80 (s ancho, 1H, CO_{2}H),
8'12 (d, 2H, J = 8'5, NH-Phe), 7'85 (c, 1H, J =
4'1, NH-CH_{3}), 7'64 (m, 1H, H arom.),),
7'63-7'02 (m, 14H, H arom.), 6'90 (m, 3H, H arom.),
4'33 (m, 2H, CH_{\alpha}-Phe; CH_{\alpha} Phe),
2'94 (m, 21H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe;
C(H_{\alpha},H_{\beta})-Phe), 2'66 (m,
2H, C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe;
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'57
(d, 311, J = 4'4, NH-CH_{3}) ppm.
^{13}C-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 170'9 (s), 168'4 (s), 140'2
(s), 137'8 (s), 137'5 (s), 135'4 (s), 129'5 (d), 128'9 (d), 128'8
(d), 128'7 (d), 128'3 (d), 127'9 (d), 127'8 (d), 127'2 (d), 126'9
(d), 126'8 (d), 126,5 (d), 126'0 (d), 125'9 (d), 54'5 (d,
C_{\alpha}-Phe), 54'0 (d,
C_{\alpha}-Phe), 37'4 (t,
CH_{2}-Phe), 37'0 (t, C112-Phe),
25'6 (c, NH-CH_{3}) ppm.
IR \nu: 3420, 3060, 1743, 1533, 1241, 755, 700
cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 550 ([MH]^{+},
100%).
Sobre una disolución del ácido 14 (350 mg, 0'64
mmol) en DMF anhidra (3'5 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente la sal se trifluoracético de
L-Leu-L-Met-OMe (323mg, 0'83 mmol),
HOBT (112 mg, 0'83 mmol), Et_{3}N (0'13 ml, 0'95 mmol), EDC
(159 mg, 0'83 mmol) y DMAP (8 mg, 0'064 mmol). La mezcla se agitó
durante 20 horas. Transcurrido este tiempo se eliminó el
disolvente, se trató con disolución acuosa de HCl al 5% y se
extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 veces). Los extractos orgánicos se
juntaron, se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO_{4}
anhidro. El disolvente se evaporó para dar lugar a un residuo que
se purificó mediante cromatografía en columna para dar lugar al
producto de acoplamiento 15 en forma de sólido blanco (407 mg, 79%
rto.).
[\alpha]_{D}= -11 (MeOH, c =
0'29).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'68 (d, 3H,
NH-Phe; NH-Leu;
NH-Met), 7'67 (c, 1H, J = 4'7, NH-CH_{3}),
7'38-7'13 (m, 16H, H arom.), 6'98 (m, 2H, H arom.),
4'41 (m, 2H, CH_{\alpha} Phe_{1}; CH_{\alpha} Phe_{2}),
4'30 (m, 1H, CH_{\alpha}-Met), 4'17 (m, 1H,
C(H_{\alpha}--Leu), 3'59 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}),
2'99 (m, 1H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe_{1}), 2'67
(m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe_{1};
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe_{2}), 2'55
(d, 3H, J = 4'6, NH-CH_{3}), 2'40 (m, 3H,
C(H_{\alpha}
H_{\beta})-Phe_{2};
CH_{2}CH_{2}CH,SCH_{3}), 2'03 (s, 3H,
SCH_{3}), 1'86 (m, 2H,
CH_{2}CH_{2}SCH_{3})11'24 (m, 2H,
CH_{2}-Leu), 0'87 (m, 1H, CH-Leu)
ppm.
^{13}C-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 172'1 (s), 172'0 (s), 170'9
(s), 168'4 (s), 138'3 (s), 137'8 (s), 137'7 (s), 136'2 (s), 135'6
(s), 129'5 (d), 129'2 (d), 128'0 (d), 127'1 (d), 126'2 (d), 54'4
(d, C_{\alpha}-Phe), 54'0
(dC_{\alpha}-Phe), 51'8 (c,
CO_{2}CH_{3}), 50'9 (c,
C_{\alpha}-Leu), 50'8 (c,
C_{\alpha}-Met), 43'9
(t,CH_{2}-Leu), 38'3 (t,
CH_{2}-Phe_{1}), 37'8 (t,
CH_{2}-Phe_{2}), 30'4 (t,
CH_{2}CH_{2}-Met), 29'5 (t,
CH_{2}CH_{2}-Met), 25'6 (c,
NH-CH_{3}), 23'0 (d, CH-Leu), 21'4
(c, 2C, CH_{3}-Leu), 14'6 (c,
CH_{3}, Met) ppm.
IR \nu: 3429, 3062, 2956,1743, 1642, 1546,
1438, 755, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 808 ([MH]^{+},
100%).
Sobre una disolución de anhídrido
2,2'-difénico (500 mg, 2'23 mmol) en 5 ml de DMF
anhidra se añadió gota a gota, una disolución del clorhidrato de
L-Phe-OMe (529 mg, 2'45 mmol) y
2,4,6-colidina (0'32 ml, 2'45 mmol) en 5 ml de DMF.
La mezcla de reación se mantuvo agitando a temperatura ambiente
toda la noche. Transcurrido este tiempo, se eliminó el disolvente
a presión reducida, se disolvió el residuo en AcOEt y se lavó
varias veces con una disolución de HCl al 5%. La fase orgánica se
secó sobre MgSO_{4} anhidro y se concentró para dar lugar a un
residuo cuya purificación por cromatografía de columna dio lugar
al ácido 16 en forma de sólido blanco (780 mg, 87% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 8'22 (d, 1H, J = 7'8,
NH-Phe), 7'78 (m, 1H, H arom.), 7'39 (m, 5H,
H arom.), 7'23 (m, 3H, H arom.), 7'10 (m, 3H, H arom.), 7'0 (m, 1H, H arom.), 4'42 (m, 1H, CH_{\alpha}-Phe), 3'50 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 2'87 (m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta}-Phe), 2'78 (m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta}-Phe) ppm.
H arom.), 7'23 (m, 3H, H arom.), 7'10 (m, 3H, H arom.), 7'0 (m, 1H, H arom.), 4'42 (m, 1H, CH_{\alpha}-Phe), 3'50 (s, 3H, CO_{2}CH_{3}), 2'87 (m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta}-Phe), 2'78 (m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta}-Phe) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'4 (s), 168'7 (s), 168'1 (s),
140'7 (s), 139'8 (s), 137'0 (s), 134'8 (s), 131'3 (s), 130'6 (d),
130'3 (d), 129'8 (d), 129'24 (d), 127'19 (d), 128'9 (d), 128'2
(d), 127'3 (d), 127'2 (d), 126'9 (d), 126'5 (d), 53'6 (d,
C_{\alpha}-Phe), 51'8 (c,
CO_{2}CH_{3}), 36'5 (t,
CH_{2}-Phe) ppm
IR \nu: 3430, 3065, 2917, 1747, 1696, 1623,
1574, 1440, 1361, 1260, 1215, 760 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 404 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{24}H_{21}NO_{5}: C, 71'45; H, 5'25; N, 3'47. |
| Encontrado: C, 71'32; H, 5'40; N, 3'41. |
Sobre una disolución del ácido 16 (200 mg, 0'49
mmol) en DMF anhidra (3 ml), bajo atmósfera de argón, se añadió
secuencialmente el clorhidrato de D-Phe-OMe
(139 mg, 0'64 mmol), HOBT (87'1 mg, 0'64 mmol), Et_{3}N (0'1 ml,
0'74 mmol), EDC (95 mg, 0'64 mmol) y DMAP (6 mg, 0'049 mmol). La
mezcla se agitó durante 20 horas. Transcurrido este tiempo se
eliminó el disolvente, se trató con disolución acuosa de HCl al 5%
y disolución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con AcOEt (3
veces). Los extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con
salmuera y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. El disolvente se
evaporó para dar lugar a un residuo que se purificó mediante
cromatografía en columna para dar lugar al producto de acoplamiento
17 en forma de sólido blanco (271 mg, 97% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'76 (d, 2H, J = 8'8,
2-NH), 7'37 (m, 6H, H arom.), 7'23 (m, 6H, H
arom.), 7'1'0 (m, 4H, H arom.), 6'90 (m, 2H, H arom.), 4'42 (m,
2H, CH_{\alpha} Phe), 3'48(s, 6H, CO_{2}CH_{3}),
2'84 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'68 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'2 (s, 2C), 168'9 (s, 2C), 138'7
(s, 2C), 136'9 (s, 2C), 135'2 (s, 2C), 129'3 (d), 129'2 (d), 128'9
(d), 128'2 (d), 127'3 (d), 127'2 (d), 126'5 (d), 53'8 (d, 2C),
51'8 (c, 2C), 36'5 (t, 2C) ppm.
IR \nu 3436, 3061, 1745, 1640, 1544, 1437,
1335, 1217, 757, 701 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 565 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{34}H_{32}N_{2}O_{6}: C, 72'32; H, 5'71; N, 4'96. |
| Encontrado: C, 72'12; H, 5'60; N, 4'85. |
Sobre una disolución de ácido
2,2'-difénico (1 g, 4'13 mmol) en DMF anhidra (20
ml), bajo atmósfera de argón, se añadió secuencialmente el
clorhidrato de L-Tyr-OMe (2'48 g,
10'73mmol), HOBT (1'22 g, 9'08 mmol), Et_{3}N (1'7 ml, 12'4 mmol),
DCC (1'87 g, 9'08 mmol) y DMAP (101 mg, 0'041 mmol). La mezcla se
agitó a temperatura ambiente durante 18 horas tras las cuales se
trató con disolución acuosa de HCl al 5%, disolución saturada de
NaHCO_{3}, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4}
anhidro. La fases orgánicas se juntaron, evaporaron para dar lugar
a un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna
para dar lugar al producto de acoplamiento 18 (2'09 g, 85% rto.)
en forma de sólido blanco.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 8'14 (s,OH), 8'70 (d, 1H, J =
7'6, NH), 7'35 (m, 8H, H arom.), 6'84 (d, 4H, J = 8'0, H
arom.-Tyr), 6'60 (d, 4H, J = 8'5, H arom.-Tyr), 4'28 (m, 2H,
CH_{\alpha}-Tyr), 3'44 (s, 6H,
CO_{2}CH_{3}), 2'67 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Tyr), 2'52 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Tyr)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'3 (s), 168'8 (s), 155'9 (s),
138'7 (s), 135'3 (s), 129'8 (d,), 129'2 (d), 127'3 (d), 127'2 (d),
126'8 (d), 54'1 (d, C_{\alpha}), 51'7 (c,
CO_{2}CH_{3}), 35'8 (t,
CH_{2}-Tyr) ppm.
IR \nu 3421, 3060, 2953,1738, 1639, 1516, 1440,
1362, 1226, 1174, 759 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 597 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{34}H_{32}N_{2}O_{8}: C, 68'45; H, 5'41; N, 4'70. |
| Encontrado: C, 68'35; H, 5'70; N, 4'82. |
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Sobre una disolución del diácido 2 (114 mg, 0'21
mmol) y la ferrocenilmetilamina (118'5 mg, 0'55 mmol) en DMF
anhidra (5 ml) y bajo atmósfera de argón, se añadió secuencialmente
HOBT (74'4 mg, 0'55 mmol), Et_{3}N (0'23 ml, 1'65 mmol), EDC
(105'6 mg, 0'55 mmol) y DMAP (5'2 mg, 0'042 mmol). La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas tras las
cuales se eliminó el disolvente a presión reducida y se disolvió
el residuo en AcOEt. Posteriormente, se trató con disolución
acuosa de HCl al 5%, disolución saturada de NaHCO_{3}, se lavó con
salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación del
disolvente dio lugar a un residuo que se purificó mediante
cromatografía en columna para dar lugar al producto de acoplamiento
19 (112 mg, 57% rto.) en forma de sólido amarillo anaranjado.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 8'78 (d, 2H, J = 8'5,
NH-Phe), 7'79 (t ancho, 2H,
NH-Fe(Cp)_{2}),
7'46-7'21 (m, 16H, H arom.), 6'95 (m, 2H, H arom.),
4'46 (m, 2H, CH_{\alpha}-Phe), 4'08 (m,
18H, H arom.-Fe(Cp)_{2}), 3'90 (m, 4H,
CH_{2}-Fe(Cp)_{2}), 2'84
(m, 2H, C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe),
2'65 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 168'9 (s), 168'5 (s), 138'9 (s),
138'6 (s), 137'9 (s), 129'2 (d), 129'1 (d), 129'0 (d), 128'0 (d),
127'2 (d), 127'1 (d), 126'2 (d), 85'8 (c), 68'3 (d), 677 (d), 67'5
(d), 67'4 (d), 67'1 (d), 67'0 (d), 54'2 (d, C_{\alpha}
-Phe), 37'5 (t, CH_{2}-Phe) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 784 (100%), 931
([MH]^{+}, 48%).
Sobre una disolución de ácido
2,2'-difénico (100 mg, 0'41 mmol) en DMF anhidro (3
ml), bajo atmósfera de argón, se añadió secuencialmente
2-fluoro-5-nitro-anilina
(167'5 mg, 1'07 mmol), HOBT (145 mg 1'07 mmol), Et_{3}N (0'15
ml, 1'24 mmol), EDC (206 mg, 1'07 mmol) y DMAP (10 mg, 0'08 mmol).
La mezcla se agitó durante 20 horas tras las cuales se evaporó el
disolvente a vacío, se trató con disolución acuosa de HCl al 37% y
se extrajo con AcOEt (3 veces). Los extractos orgánicos se juntaron,
se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La
evaporación del disolvente dio lugar a un residuo que se purificó
mediante cromatografía en columna para dar lugar al producto de
diacoplamiento 20 en forma de sólido color tierra (114 mg, 53%
Po.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 7'62 (dd, 2H, J_{6,4} = 2'9,
J_{6,F} = 7'8, H-6), 7'46-7'12 (m,
10H, NH, H arom._{Bif}), 7'37 (ddd, 2H, J_{4,3} = 8'7,
J_{4,F} = 3'9, J_{4,6} = 2'9, H-4), 7'23 (dd,
2H, J_{3,F} = 10'7, J_{3,4} = 8'7, H-3) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 399, 537
([MF]^{+}, 10%).
Sobre una disolución a 0ºC del dicarbamato 5 (725
mg, 0'78 mmol) en 4 ml de DMF anhidra, se añadió gota a gota 1 ml
de piperidina. La mezcla de reación se mantuvo agitando a
temperatura ambiente durante 75 minutos. Transcurrido este tiempo,
se eliminó el disolvente a presión reducida, y se purificó el
residuo resultante por cromatografía de columna para dar lugar a
la diamina 21 (315 mg, 84% rto.) en forma de sólido blanco.
[\alpha]_{D}= -68 (c = 0'5,
CHCl_{3}).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 8'12 (m, 2H, H arom.), 7'39
(m, 2H, H arom.), 7'27-7'09 (m, 12H, H arom.,; 2H,
NH arom.), 7'0 (m, 2H, H arom.), 3'40 (m, 2H,
CH_{\alpha}-Phe), 2'95 (m, 1H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'52 (m,
1H, C(H_{\alpha} H_{\beta})-Phe)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 172'9 (s), 172'7 (s), 138'5
(s), 1381 (s), 138'5 (s), 138'1 (s), 135'7 (s), 135'5 (s), 130'5
(s), 130'4 (s), 129'3 (d), 129'1 (d), 129'0 (d), 128'6 (d), 128'2
(d), 128'1 (d), 126'25 (d), 126'22 (d), 124'3 (d), 124'2 (d), 121'4
(d), 53'5 (d,C_{\alpha}-Phe), 56'2 (d,
C_{\alpha}-Phe), 39'8 (t,
CH_{2}-Phe), 39'7 (t,
CH_{2}-Phe) ppm.
IR \nu 3410, 3063,1696, 1585, 1516, 1450, 1246,
1049, 758, 740, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 479 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{30}H_{30}N_{4}O_{2}: C, 75'29; H, 6'32; N, 11'71. |
| Encontrado: C, 74'99; H, 6'18; N, 11'50. |
Sobre una disolución de
2,2'-di(amino)-bifenilo (715
mg, 3'88 mmol) y Et_{3}N (0'15 ml, 1'06 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (100 ml), se añadió poco el cloruro de
ácido,
N-Fmoc-L-leu-L-Phe-Cl
(1'0 equivalente molar). La mezcla se agitó durante 19 horas tras
las cuales se evaporó el disolvente a vacío. El residuo resultante
se purificó mediante cromatografía en columna para dar lugar al
producto de monoacoplamiento 22 en forma de sólido blanco (129 mg,
20% rto.).
P.f.= 82-84ºC.
[\alpha]_{D}= -22 (MeOH, c = 0'5).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 40ºC) \delta: 9'10 (s, 1H, NH arom.), 7'90
(d, 2H, J = 7'3, H arom.), 7'72 (d, 2H, J = 7'0, H arom.),
7'68-6'60 (m, 19H, H arom.; NH-Leu,
NH-Phe), 4'21 (m, 3H,
CH_{\alpha}-Phe;
CH_{2}-Fmoc; CH-Fmoc), 2'89 (m, 1H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe), 2'65 (m,
2H, C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe),
1'49 (m, 1H, CH-Leu), 1'39 (m, 2H,
CH_{2}-Leu), 0'77 (m, 6H,
CH_{3}-Leu) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 171'0 (s), 169'2 (s), 156'0 (s),
144'0 (s), 143'7 (s), 140'7 (s), 130'7 (s), 130'6 (s), 130'5 (s),
128'5 (d), 127'6 (d), 127'0 (d), 125'3 (d), 120'1 (d), 117'4 (d),
65'6 (t, CH_{2}-Fmoc), 53'9 (d,
C_{\alpha}-Phe), 46'6 (d,
C_{\alpha}-Leu), 41'0
(CH_{2}-Leu), 39'0 (d,
CH_{2}-Phe), 24'2 (d,
CH-Leu), 23'0 (c,
CH_{3}-Leu), 21'3 (c,
CH_{3}-Leu) ppm.
IR \nu: 3325, 2924, 2854, 1719, 1519, 1646,
1377, 1248, 1109, 1046, 757, 740 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 520 (100%).
| AE | Calculado para C_{4}2H_{42}N_{4}O_{4}: C, 75'65; H, 6'35; N, 8'40. |
| Encontrado: C, 75'81; H, 6'60; N, 8'46. |
\newpage
Sobre una disolución a 0ºC de
2,2'-di(amino)-bifenilo (200
mg, 1'08 mmol) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro, se añadió
Et_{3}N (0'6 ml, 4'32 mmol) y cloruro de naftoilo (455'2 mg,
2'38 mmol) en pequeñas porciones. La mezcla de reación se mantuvo
agitando a temperatura ambiente durante toda la noche. Transcurrido
este tiempo, se eliminó el disolvente a presión reducida, y se
purificó el residuo resultante por cromatografía de columna para
dar lugar al producto de diacoplamiento 23 en forma de sólido
blanco (430 mg, 81% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 8'65 (d, 2H, J = 8'3, H arom.), 8'01 (m, 4H,
H arom.), 7'83 (m, 6H, H arom.), 7'64-7'49 (m, 6H,
H arom.), 7'43-7'32 (m, 4H, H arom.) ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
CDCl_{3}) \delta: 165'9 (s), 136'3 (s), 137'1 (s), 132'7 (s),
131'7 (s), 130'7 (d,), 130'1 (d), 129'3 (d), 128'9 (d), 128'8 (s),
128'2 (d), 127'9 (d), 127'8 (d), 127'1 (d), 125'4 (d), 123'4 (d),
122'6 (d) ppm.
IR \nu 3418, 3228, 3058,1735, 1643, 1516, 1496,
1432, 1306, 1237, 777 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 493 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{34}H_{24}N_{2}O_{2}: C, 82'91; H, 4'91; N, 5'69. |
| Encontrado: C, 82'65; H, 5'10;N, 5'64. |
Sobre una disolución a 0ºC de
2,2'-di(amino)-bifenilo (30
mg, 0'16 mmol) en 1 ml de THF, se añadió Et_{3}N (0'04 ml, 0'32
mmol) y el cloruro de 3,5-dinitrobenzoilo (82'6 mg,
0'36 mmol) en pequeñas porciones. La mezcla de reación se mantuvo
agitando a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto
24, que precipita en forma de sólido amarillo en el medio de
reacción, se filtra y se seca (83 mg, 89% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 10'13 (s, 2H, NH), 8'95 (t,
2H, J = 2'2, H-10), 8'83 (d, 4H, J= 2'2,
H-9, H-11),
7'52-7'36 (m, 8H, H-1,
H-2, H-3, H-4,
H-5, H-6, H-7,
H-8) ppm.
^{13}C-RMN(75 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 162'6 (s), 148'6 (s), 137'8 (s),
135'8 (s), 135'5 (s), 131'8 (d,), 128'9 (d), 128'6 (d), 127'6 (d),
127'3 (s), 121'7 (d) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 573([MH]^{+},
100%).
Sobre una disolución a 0ºC de la amina 7 (50 mg,
0'15 mmol) en 6 ml de piridina anhidra, se añadió el cloruro de
2,5-dinitrobenzoilo (37'5 mg, 0'16 mmol) en
pequeñas porciones. La mezcla de reación se mantuvo agitando a
temperatura ambiente durante 14 horas. Transcurrido este tiempo,
se eliminó el disolvente a presión reducida, y se purificó el
residuo resultante por cromatografía de columna para dar lugar la
diamida 25 (71 mg, 91% rto.) en forma de sólido amarillo.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 10'32 (s, 1H, NH), 9'48 (s,
1H, NH), 8'93 (t, 1H, J = 1'9, H-10), 8'83 (d, 2H,
J = 1'9, H-9, H-11), 8'26 (s, 1H,
H-12), 7'94 (m, 3H, H-8,
H-13, H-17),
7'75-7'56 (m, 5H, H-1,
H-5, H-6, H-8,
H-16), 7'48-7'28 (m, 6H,
H-2, H-3, H-6,
H-14, H-15) ppm.
^{13}C-RMN (50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 165'6 (s), 162'1 (s), 148'6 (s),
148'0 (s), 136'9 (s), 1 135'6 (s), 135'3 (s), 135'0 (s), 134'4 (s),
134'2 (s), 131'9 (d), 131'5 (d), 130'9 (d), 130'5 (d), 128'8 (d),
128'4 (d), 128'3 (d), 128'0 (d), 127'8 (d), 127'7 (d), 127'6 (d),
126'9 (d), 126'8 (d), 126'7 (d), 126'1 (d), 125'8 (d), 123'9 (d),
121'1 (d) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 533 ([MH]^{+},
100%).
| AE | Calculado para C_{30}H_{2}ON_{4}O_{6}: C, 67'67; H, 3'79; N, 10'52. |
| Encontrado: C, 67'46; H, 3'60; N, 10'35. |
Sobre una disolución a 0ºC de la amina 7 (50 mg,
0'15 mmol) en 6 ml de piridina anhidra, se añadió el cloruro de
4-nitrobenzoilo (30'1 mg, 0'16 mmol) en pequeñas
porciones. La mezcla de reación se mantuvo agitando a temperatura
ambiente durante 13 horas. Transcurrido este tiempo, se eliminó el
disolvente a presión reducida, y el residuo resultante se purificó
por cromatografía de columna para dar lugar a la diamida 26 (71
mg, 99% rto.) en forma de sólido amarillo pálido.
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 30ºC) \delta: 9'84 (s, 1H, NH), 9'48 (s,
1H, NH), 8'27 (d, 2H, J = 8'8, H-10,
H-10'), 8'22 (s, 1H, H-11), 7'93 (m,
3H, H-1, H-16,
H-17), 7'88 (d, 211, J = 8'8, H -9,
H-9'), 7'75-7'54 (m, 5H,
H-4, 11-5, H-8,
H-12, H-15), 7'45 (m, 2H,
H-13, H-14),
7'37-7'25 (m, 511, H-3,
H-2, H-6, H-7)
ppm.
^{13}C-RMN(50 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta: 165'6 (s), 164'2 (s), 149'1 (s),
139'7 (s), 135'6 (s), 135'2 (s), 135'1 (s), 134'4 (s), 134'1 (s),
131'9 (d), 131'4 (d), 130'3 (d), 130'1 (d), 128'7 (d), 128'5 (d),
128'3 (d), 128'0 (d), 127'7 (d), 127'5 (d), 126'8 (d), 126'5 (d),
126'2 (d), 125'8 (d), 125'6 (d), 123'6 (d), 123'5 (d) ppm.
EM(ES^{+}) m/e = 488 ([MH]^{+},
100%).
Sobre una disolución de la amina 8 (100 mg, 0'12
mmol) a 0ºC en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro, se añadió
Et_{3}N (0'034 ml, 0'24 mmol) y el cloruro de
L-Fmoc-Ala, previamente sintetizado. La
mezcla de reación se mantuvo agitando a temperatura ambiente
durante 22 horas. Transcurrido este tiempo, se eliminó el
disolvente a presión reducida y el residuo se purificó por
cromatografía de columna para dar lugar al producto de acoplamiento
27 en forma de sólido blanco (126 mg, 93% rto.).
^{1}H-RMN(300 MHz,
DMSO-d_{6}, 50ºC, mezcla de confórmeros A + a 2:1)
\delta: 8'83 (s ancho, 0'33H, NH_{1}, a), 8'70 (s ancho, 0'66H,
NH_{1}, A), 8'51 (d, 0'66H, J = 8'4, NH-Phe, A),
8'34 (m, 0'33H, NH-Phe, a; 1H,
NH-Phe, A+a), 8'09 (s ancho, 1H, NH_{2}, A+a),
8'04 (d, 0'33H, J = 8'6, NH-Val, a), 7'98 (d,
0'66H, NH-Val, A), 7'87 (d, 2H, J = 7'7, H
arom.-Fmoc, A+a), 7'66 (m, 211, H arom.-Fmoc, A+a),
7'64-6'76 (m, 30H, H arom., A+a; 111,
NH-Ala, A+a), 4'59 (m, 1'33H,
CH_{\alpha}-Phe, A), 4'38 (m, 0'66H,
CH_{\alpha}-Phe, a), 4'17 (m, 411,
CH_{\alpha}-Val, A+a;
CH_{2}-Fmoc, A+a; CH-Fmoc,
A+a), 4'0 (m, 1H, CH_{\alpha}-Ala, A+a), 3'60 (s,
0'99H, CO_{2}CH_{3}), 3'59 (s, 1'99H,
CO_{2}C_{2}H), 2'84 (m, 2H,
C(H_{\alpha}H_{\beta})-Phe, A+a), 2'61
(m, 2H, C(H H)-Phe, A+a), 1'98 (m, 1H,
CH(CH_{3})_{2}-Val, A+a), 1'06
(m, 3H, CH_{3}-Ala, A+a), 0'82 (m, 6H,
C(CH_{3})_{2}-Val, A+a)
ppm.
^{13}C-RMN(75 MHz,
DMSO-d_{6}, 50ºC) \delta: 171'35 (s), 171'3 (s), 168'6
(s), 168'5 (s), 168'3 (s), 168'4 (s), 138'2 (s), 138'1 (s), 137'5
(s), 137'4 (s), 135'0 (s), 130'7 (d), 130'5 (d), 129'3 (d), 129'2
(d), 129'0 (d), 128'8 (d), 128'4 (d), 127'9 (d), 127'8 (d), 127'3
(d), 126'9 (d), 126'8 (d), 126'1 (d), 117'0 (d), 115'7 (d), 57'4
(d, C_{\alpha}-Val), 54'8 (d,
C_{\alpha}-Phe_{1}), 53'6 (d,
C_{\alpha}-Phe_{2}), 51'5 (c,
CO_{2}CH_{3}), 37'2 (t,
CH_{2}-Phe), 36'2 (t,
CH_{2}-Phe), 29'8 (d,
CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'7
(c, CH(CH_{3})_{2}-Val), 18'1 (c,
CH(CH_{3})_{2}-Val) ppm.
IR \nu 3429, 3062, 2962, 1739, 1643, 1525,
1451, 1307, 1078, 758, 700 cm^{-1}.
EM(ES^{+}) m/e = 763 (100%), 1109
([MH]^{+}, 46%).
La capacidad de inhibición de calpaina se ha
cuantificado por el valor de IC_{50}, que se define como la
concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad
catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de IC_{50},
más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de calpaina
I (la más relevante desde un punto de vista fisiológico) de
algunos compuestos de la presente invención se indican en la tabla
1 y en la figura 1. Dado que la calpaina II, también denominada
mili-calpaina, necesita más cantidad de calcio
para la activación, posiblemente no tenga un papel fisiológico tan
relevante; pues dicha concentración de calcio causaría la muerte
celular antes de que se pudiera activar la
mili-calpaina. Por esta razón, los ensayos de
inhibición se han realizado para calpaina I, pero son
extrapolables para calpaina II.
| Compuestos | IC_{50} |
| 1 | 64nM |
| 2 | 70nM |
| 3 | 37nM |
| 4 | 10nM |
| 5 | 12nM |
| 6 | 187nM |
| 7 | 18nM |
| 8 | 87pM(=0'087nM) |
Se han realizado estudios de la estructura de los
híbridos péptidos-bifenilo de la presente
invención y su actividad biológica, los cuales han mostrado que:
1) Todos los compuestos objeto de la presente
invención, de fórmula genérica I, son inhibidores potentes de
calpaina I. Como ejemplos representativos, aunque no limitantes,
los compuestos 1-8 tienen valores de IC_{50} entre
0'087 y 187 nM.
2) La inhibición de calpaina de los compuestos
1-4 ilustran que la actividad biológica es
prácticamente independiente de la naturaleza de los aminoácidos, de
la longitud de la cadena peptídica y de la sustitución en los
extremos de las cadenas peptídicas.
3) Cuando se cambia la orientación de los
aminoácidos unidos al sistema de bifenilo, también se obtienen
inhibidores potentes de calpaina I. Un ejemplo representativo,
aunque no limitante es el compuesto 5.
4) Compuestos que se pueden considerar como
híbridos péptido-bifenilo con cadenas laterales
truncadas también son buenos inhibidores de calpaina I. Ejemplo
ilustrativos de estos compuestos son 6 y 7.
5) La combinación en una estructura de los rasgos
estructurales de los compuestos 4, 5 y 7 para obtener el híbrido
péptido-bifenilo 8 da como resultado un inhibidor
115 veces más potente que los anteriores, teniendo un valor de
IC_{50} en escala picomolar, que es el inhibidor más potente de
calpaina descrito hasta ahora.
Para realizar el ensayo de inhibición de
calpaínas, utilizamos el kit EnzCheck® Protease Assay Kit
E-338 de Molecular Probes. Este kit contiene caseína
marcada con BODIPY FL®, liofilizada desde tampón fosfato. Además se
utiliza como tampón de digestión Tris-HCl a pH
7.8, conteniendo 2 mM de azida sódica.
La calpaína I de eritrocitos porcinos o calpaína
II de riñón porcino utilizadas son productos comerciales de
CALBIOCHEM®. La disolución stock de enzima contiene 20mM de tampón
imidazol-HCl, PH 6.8, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM
\beta-mercaptoetanol 30% en glicerol.
Los inhibidores sintéticos se disolvieron en 250
\muL de DMSO. Los ensayos se realizaron en microplacas de 96
pocillos en un volumen final de 200 \muL. Para realizar los
ensayos se añadieron alícuotas de solución stock de calpaína
a 150 \muL de solución 10 \mug/\muL en tampón de digestión
para obtener una concentración final 50 ng/mL de enzima. Se
añadieron cantidades mínimas, entre 5 y 20 \muL de solución de
inhibidor en DMSO, previamente diluidas para conseguir la
concentración final de inhibidor deseada, y se añade tampón de
digestión hasta conseguir un volumen final de 190 \muL. El
ensayo se inicia añadiendo 10 \muL de solución de CaCl_{2} 0.05
M. Para cada inhibidor se tomó como blanco medidas separadas
excluyendo, inhibidor, calpaína y disolución de calcio. Todas las
medidas se realizaron por triplicado.
Las medidas de fluorescencia se realizan en un
espectro fluorimetro SPECTRAFLUOR TECAN Corp 93382. Excitando a 485
nm y realizando la lectura a 530 nm. La medida se realizó durante
20 ciclos hasta completar la medida de todos los pocillos. La
agitación es de tipo orbital y tiene lugar entre cada ciclo.
A continuación se indica el significado de las
abreviaturas usadas.
- AE: Análisis elemental.
- Ala: Radical correspondiente al aminoácido
alanina.
- BOP: Hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetylamino)fosfonio.
- CANP: Proteasa neutra activada por calcio.
- DMAP:
4-Dimetilaminopiridina.
- DMF: N,N-Dimetilformamida.
- DMSO: Dimetilsulfóxido.
- Fmoc:
9H-Fluoren-9-ilmetoxicarbonil.
- EDC:
1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida.
- EDTA: Ácido etilendiaminotetraacético.
- EGTA: Ácido
etilen-bis-(oxietilennitrilo)tetraacético.
- EM: Espectro de masas.
- ES: Electro-spray.
- HOBT:
1-Hidroxibenzotriazol.
- IR: Infrarrojo.
- Met: Radical correspondiente al aminoácido
metionina.
- NMDA: N-metil-D-aspartato.
- P.f.: Punto de fusión.
- Phe: Radical correspondiente al aminoácido
fenilalanina.
- Tris:
Tris(hidroxmetil)aminometano.
- Trp: Radical correspondiente al aminoácido
triptófano.
- Tyr: Radical correspondiente al aminoácido
tirosina.
- Val: Radical correspondiente al aminoácido
valina.
- ^{1}H-RMN: Resonancia
magnética nuclear de protón.
- ^{13}C-RMN: Resonancia
magnética nuclear de carbono-13.
Claims (6)
1. Un compuesto
bifenilo-2,2'-disustituido de
fórmula I
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que los grupos R^{1} y
R^{2} pueden ser iguales o distintos, y pueden estar
independientemente seleccionados entre los
grupos
- -
- NH_{2},
- -
- NHR^{3} en el que R^{3} representa un grupo alquilo o arilo,
- -
- NR^{4}R^{5} en el que R^{4} y R^{5} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
- -
- CO_{2}H,
- -
- CO_{2}R^{6} en el que R^{6} es un grupo arilo o alquilo,
- -
- CONH_{2},
- -
- CONR^{7}R^{8} en el que R^{7} y R^{8} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
- -
- un grupo de fórmula II,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
- Ar representa un grupo arilo, carbocíclico o heterocíclico, distinto de imidazol,
- -
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) o (S), indistintamente,
- -
- n tiene un valor entre 0 y 6,
- -
- X, representa un grupo OH, OR^{9} en el que R^{9} representa un grupo alquilo o arilo, NH_{2}, NHR^{10}, en el que R^{10} representa un grupo alquilo o arilo, NR^{11}R^{12} en el que R^{11} y R^{12} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
\newpage
- -
- aa es un residuo de amino ácido,
de fórmula
dónde el asterisco (*) indica un
centro estereogénico de configuración (R) o (S),
indistintamente, R^{13} se selecciona entre H, alquilo o arilo; o
de
fórmula
en la que los átomos de nitrógeno y
el carbono en posición \alpha- están formando un anillo entre 4 y
7 eslabones, los residuos de aminoácido (aa) están unidos a través
de su grupo amino a la cadena representada por
-C(O)NHCH(CH_{2}Ar)CO-;
- un grupo de fórmula III,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
- un grupo de fórmula IV,
en la
que:
- -
- Ar representa un grupo arilo,
- -
- (*), y n tienen el significado descrito anteriormente,
- -
- aa, tiene el significado descrito anteriormente, pero ahora el residuo de aminoácido está unido a través de su grupo carbonilo a la cadena representada por -NHC(O)CH(CH_{2}Ar)NH-,
- -
- X representa H, alquilo entre 1 y 6 átomos de carbono, COR^{14} dónde R^{14} es un grupo arilo o alquilo, CO_{2}R^{15}, dónde R^{15} es un grupo arilo o alquilo;
- -
- un grupo de fórmula V,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
y en la que al menos uno de los grupos R^{1},
R^{2} tiene la estructura indicada por los grupos II,o III,o
IV,o V;
y cualquiera de los isómeros conformacionales
(atropisómeros) de dicho compuesto de fórmula I.
2. Un compuesto
bifenilo-2,2'-disustituido de
fórmula I
en la que los grupos R^{1} y
R^{2} pueden ser iguales o distintos, y pueden estar
independientemente seleccionados entre los
grupos
- -
- NH_{2},
- -
- NHR^{3} en el que R^{3} representa un grupo alquilo o arilo,
- -
- NR^{4}R^{5} en el que R^{4} y R^{5} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
- -
- CO_{2}H,
- -
- CO_{2}R^{6} en el que R^{6} es un grupo arilo o alquilo,
- -
- CONH_{2},
- -
- CONR^{7}R^{8} en el que R^{7} y R^{8} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
- -
- un grupo de fórmula II,
\newpage
en la que:
- -
- Ar representa un grupo arilo, carbocíclico o heterocíclico, distinto de imidazol,
- -
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) o (S), indistintamente,
- -
- n tiene un valor entre 0 y 6,
- -
- X, representa un grupo OH, OR^{9} en el que R^{9} representa un grupo alquilo o arilo, NH_{2}, NHR^{10}, en el que R^{10} representa un grupo alquilo o arilo, NR^{11}R^{12} en el que R^{11} y R^{12} representan dos grupos alquilo o arilo, idénticos o diferentes, o formando un sistema cíclico,
- -
- aa es un residuo de amino ácido, de fórmula
dónde el asterisco (*) indica un
centro estereogénico de configuración (R) o (S),
indistintamente, R^{13} se selecciona entre H, alquilo o
arilo;
o de fórmula
en la que los átomos de nitrógeno y
el carbono en posición \alpha- están formando un anillo entre 4 y
7 eslabones, los residuos de aminoácido (aa) están unidos a través
de su grupo amino a la cadena representada por
-C(O)NHCH(CH_{2}Ar)CO-;
- un grupo de fórmula III,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
- un grupo de fórmula IV,
\newpage
en la que:
- -
- Ar representa un grupo arilo,
- -
- (*), y n tienen el significado descrito anteriormente,
- -
- aa, tiene el significado descrito anteriormente, pero ahora el residuo de aminoácido está unido a través de su grupo carbonilo a la cadena representada por -NHC(O)CH(CH_{2}Ar)NH-,
- -
- X representa H, alquilo entre 1 y 6 átomos de carbono, COR^{14} dónde R^{14} es un grupo arilo o alquilo, CO_{2}R^{15}, dónde R^{15} es un grupo arilo o alquilo;
- -
- un grupo de fórmula V,
en la que Ar representa un grupo
arilo;
y en la que al menos uno de los
grupos R^{1}, R^{2} tiene la estructura indicada por los grupos
II, o III, o IV, o
V;
y cualquiera de los isómeros conformacionales
(atropisómeros) de dicho compuesto de fórmula I;
y caracterizado porque es un inhibidor de
calpaina.
3. Un compuesto según la reivindicación 1
caracterizado porque es de fórmula I y seleccionado
entre
- -
- (S,S)-3-Fenil-2- {[2'-(2-fenil-1-metoxicarbonyl-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-propionato de metilo (1),
- -
- Ácido (S,S)-2- [2'-(1-carboxi-2-fenil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-3-fenil-propiónico (2),
- -
- (S,S)-3-(1H-indol-3-il)-2-({2'-[2-(1H-indol-3-il)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-propionato de metilo (3),
- -
- (S,S,S)-2-(2-{[2'-(1-Carboxi-2-fenil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-3-fenil-propionilamino)-3-metil-butirato de metilo (4),
- -
- (S,S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-fenil-1-(2-metil-1-metoxicarbonil-propilcarbamoil)-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil} -amino)-propionilamino]-3-metil-butirato de metilo (4a),
- -
- (S,S)-(2-Fenil-1-{2'-[3-fenil-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-propionilamino]-bifenil-2-ilcarba-moil}-etil)-carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (5),
- -
- Bis-2,2'-[(4-nitro-benzoil)amino]-bifenilo (6),
- -
- 2'-Amino-2-[2-(naftoil)amino]bifenilo (7),
- -
- (S,S,S)-2-[2-({2'-Amino-bifenil-2-ilcarbamoil)-2-fenil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-3-fenil-propionilamino]-3-metil-butirato de metilo (8),
- -
- (S,S,S,S)-3-(1H-Indol-3-il)-2-{3-fenil-2-[(2'-{2-fenil-1-[2-(1H-indol-3-il)-1-metoxicarbonil-etilcarbamo-il]-etilcarbamoil}-bifenil-2-carbonil)-amino]propionilamino}-propionato de metilo (9),
- -
- Ácido (S)-2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carboxílico (10),
- -
- (S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-propionilamino]-4-metil-pentanoato de metilo (11),
- -
- (S,S,S) -2-({2'-[2-fenil-1-(3-metil-1-metilcarbamoil-butilcarbamoil)-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-3-(4-hidroxifenil)-propionato de metilo (12),
- -
- (S,S,S)-2-[3-Fenil-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-propionilamino]-4-metilsulfanil-butirato de metilo (13),
- -
- Ácido 2'-{(S)-[2-fenil-1-(R)-(2-fenil-1-metilcarbamoil-etilcarbamoil)-etilcarbamoil]}-bifenil-2-carboxílico (14),
- -
- (S)-2-[(S)-2-({2'-(S)-[2-Fenil-1-(R)-(2-fenil-1-metilcarbamoil-etilcarbamoil)-etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil} -amino)-4-metil-entanoilamino]-4-metilsulfanil-butirato de metilo (15),
- -
- Ácido (S)-2'-[2-fenil-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-bifenil-2-carboxílico (16),
- -
- (R)-(3-Fenil-2-{[2'-(S)-(2-fenil-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino})-propionato de metilo (17),
- -
- (S,S)-3-(4-Hidroxi-fenil)-2-({2'-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil- etilcarbamoil]-bifenil-2-carbonil}-amino)-propionato de metilo (18),
- -
- (S,S)-N-(1-Ferrocenilmetil)-3-fenil-2-({2'-[2-fenil-1-(1-ferrocenilmetilcarbamoil)]-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil}-amino)-propionamida (19),
- -
- N,N'-Bis-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-bifenil-2,2'-dicarboxamida (20),
- -
- (S,S)-2-Amino-N-[2'-(2-amino-3-fenil-propionilamino)-bifenil-2-il]-3-fenil-propionamida (21),
- -
- (S,S)-{1-[1-(2'-Amino-bifenil-2-ilcarbamoil)-2-fenil-etilcarbamoil]-3-metil-butil}-carbamato de 9H-fluo-ren-9-ilmetilo (22),
- -
- 2,2'-di-(2-naftoil-amino)-bifenilo (23),
- -
- 2,2'-di-[(3,5-dinitrobenzoil)amino)-bifenilo (24),
- -
- 2-(2-Naftoilamino)-2'-[(3,5-dinitrobenzoil)amino]-bifenilo (25),
- -
- 2-(2-Naftoilamino)-2'-[(4-nitrobenzoil)amino]-bifenilo (26),
y
- -
- (S,S,S,S)-2-(3-Fenil-2-{[2'-(2-Fenil-1-{2'-[2-(9H-Fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-propionilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-etilcarbamoil)-bifenil-2-carbonil]-amino}-propionilamino)-3-metil-butirato de metilo (27),
y porque es un inhibidor de calpaina.
4. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I, definido en la reivindicación 1, para preparar un
medicamento para el tratamiento preventivo o terapéutico de una
enfermedad degenerativa.
5. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I según la reivindicación 4 en el que la enfermedad
degenerativa está seleccionada entre isquemia cerebral, isquemia
cardiaca, Alzheimer, Parkinson, distrofia muscular, cataratas y
enfermedades desmielinizantes.
6. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de
fórmula I según la reivindicación 5 en el que la enfermedad
degenerativa desmielinizante es la esclerosis múltiple.
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|---|---|---|---|
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Applications Claiming Priority (1)
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| ES200301125A Expired - Fee Related ES2219187B1 (es) | 2003-05-14 | 2003-05-14 | Inhibidores de calpaina. |
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- 2004-05-11 WO PCT/ES2004/070034 patent/WO2004101494A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (4)
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|---|
| D.M. COLLINGTON et al. "Internuclear Cyclization. XXIV. Catalyzed Decomposition of Diazonium Fluoroborates from Amino-N-Methylnaphthanilides and N-Naphthylbenzamides", J. Chem. Soc. Section C: Organic, 1968, Vol. 8, páginas 1021-1025, compuesto RN 19263-46-8. * |
| E. MANN et al. "Synthesis and Crystal Structure of Peptide-2-2'-Biphenyl Hybrids", Helv. Chim. Acta, 2002, Vol. 85, Nº 11, páginas 3624-3638, compuestos 6-8. * |
| F. SANCHEZ-SANCHEZ et al. "Efficient Synthesis of Chiral Isoquinoline and Pyrido-[1,2-b]-Isoquinoline Derivatives Via Intramolecular Heck Reactions", Adv. Synth. Catal., 2001, Vol. 343, Nº 4, páginas 360-368, compuestos 6a,6b. * |
| Pharma Library Collection (catálogo de productos), 24.04.2003. BASE DE DATOS CHEMCATS [en línea] [recuperado el 08.07.2004]. Recuperado de: STN International, Columbus, Ohio (EE.UU.), Nº de acceso 2001:18399, compuesto RN 312751-17-0. * |
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