ES2206479T3 - Agentes antitromboticos. - Google Patents

Agentes antitromboticos.

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ES2206479T3
ES2206479T3 ES95301374T ES95301374T ES2206479T3 ES 2206479 T3 ES2206479 T3 ES 2206479T3 ES 95301374 T ES95301374 T ES 95301374T ES 95301374 T ES95301374 T ES 95301374T ES 2206479 T3 ES2206479 T3 ES 2206479T3
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Aaron Leigh Schacht
Robert Theodore Shuman
Gerald Floyd Smith
Michael Robert Wiley
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AstraZeneca AB
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Abstract

ESTA INVENCION SE REFIERE A COMPUESTOS DE INHIBICION DE TROMBINA QUE TIENEN LA FORMULA I X-Y-NH-(CH2)R-G I DONDE X, R, R Y G TIENEN LOS VALORES DEFINIDOS EN LA DESCRIPCION, ASI COMO FORMULACIONES FARMACEUTICAS QUE CONTIENEN ESTOS COMPUESTOS Y METODOS DE SU UTILIZACION COMO AGENTES INHIBIDORES DE TROMBINA, INHIBIDORES DE COAGULACION Y DE ENFERMEDADES TROMBOEMBOLICAS.

Description

Agentes antitrombóticos.
Esta invención se refiere a inhibidores de la trombina que son anticoagulantes útiles en los mamíferos. En particular, la invención se refiere a derivados peptídicos que tienen actividad antitrombótica, actividad anticoagulante, y biodisponibilidad por vía oral altas.
El proceso de la coagulación de la sangre, la trombosis, está desencadenado por una cascada proteolítica compleja que conduce a la formación de trombina. La trombina separa proteolíticamente péptidos de activación de las cadenas A\alpha y B\beta del fibrinógeno, que es soluble en el plasma sanguíneo, iniciando la formación de fibrina insoluble.
La anticoagulación se consigue actualmente por la administración de heparinas y cumarinas.
El control farmacológico parenteral de la coagulación y la trombosis está basado en la inhibición de la trombina por el uso de heparinas. Las heparinas actúan indirectamente sobre la trombina por aceleración de los efectos inhibidores de la antitrombina III endógena (el inhibidor fisiológico principal de la trombina). Dado que los niveles de antitrombina III varían en el plasma y dado que la trombina reunida en la superficie parece ser resistente a este mecanismo indirecto, las heparinas pueden ser un tratamiento ineficaz. Dado que se cree que los ensayos de coagulación están asociados con la eficacia y la seguridad, los niveles de heparina tienen que controlarse con ensayos de coagulación (particularmente el ensayo de tiempo parcial de tromboplastina activada (APTT)). Las cumarinas impiden la generación de trombina por bloquear la gamma-carboxilación posterior a la traducción en la síntesis de la protrombina y otras proteínas de este tipo. Debido a su mecanismo de acción, el efecto de las cumarinas puede desarrollarse sólo lentamente, 6-24 horas después de la administración. Adicionalmente, las cumarinas no son anticoagulantes selectivos. Las cumarinas requieren también observación con ensayos de coagulación (particularmente con el ensayo del tiempo de protrombina (PT)).
Recientemente ha aumentado el interés en péptidos sintéticos pequeños que son reconocidos por enzimas proteolíticas de una manera similar a la de los sustratos naturales. Aldehídos tripeptídicos tales como D-Phe-Pro-Arg-H, Boc-D-Phe-Pro-Arg-H, y D-MePhe-Pro-Arg-H, Bajusz et al., J. Med. Chem., 33, 1729-1735 (1990) demuestran inhibición directa potente de la trombina. Estudios clínicos iniciales que demuestran que el sulfato de D-MePhe-Pro-Arg-H es un anticoagulante en el hombre han sido publicados, véase Simoons et al., Circulation, 90, I-231, Abstr. 1241 (1994). Muchos investigadores han sintetizado compuestos análogos en un esfuerzo para desarrollar agentes farmacéuticos, por ejemplo Shuman et al., J. Med. Chem., 36, 314-319 (1993). La Patente U.S. No. 4.346.078 da a conocer una serie de péptidos anti-coagulantes que contienen un grupo agmatina (1-amino-4-guanidinobutano). Derivados de agmatina y compuestos afines se describen también en la solicitud PCT con Número de Publicación Internacional WO 93/11152, así como en la Solicitud de Patente Europea Número de Publicación 601459, publicada el 15 de junio de 1994. Tales compuestos difieren de la serie anterior en que los compuestos de agmatina carecen de un resto carbonilo encontrado en los compuestos similares que contienen un grupo Arg. Compuestos estructuralmente similares que tienen, por ejemplo, aminometilbenzamidinas en lugar de agmatina se describen en los documentos WO 94/29336, EP-A-669317 y Symposia Biologica Hungarica, 25, 277-298 (1986).
El documento EP-A-479 489 se refiere a derivados de L-prolina-L-arginina-aldehído que tienen actividad antitrombótica; EP-A-542525 se refiere a derivados de inhibidores de la trombina del dipéptido de ácido L-azetidina-2-carboxílico y L-arginina-aldehído, mientras que J. Med. Chem. 1994, 2123-2124 expone inhibidores de retro-fijación del sitio activo del tripéptido de trombina.
Aunque las heparinas y cumarinas son anticoagulantes eficaces, y no se ha presentado todavía ningún fármaco procedente de los aldehídos tripeptídicos conocidos, y a pesar de que está clase de compuestos siguen siendo prometedores, existe necesidad de anticoagulantes que actúen selectivamente sobre la trombina, e independientes de la antitrombina III, que ejerzan acción inhibidora poco tiempo después de su administración, preferiblemente por ruta oral, y no interfieran con la lisis de los coágulos de sangre, requeridos para mantener la hemostasis.
La presente invención está dirigida al descubrimiento de que los compuestos de la presente invención, como se definen más adelante, son inhibidores potentes de la trombina que pueden tener alta biodisponibilidad después de administración oral. Adicionalmente, ciertos compuestos de la presente invención pueden exhibir también inhibición del factor Xa, que está implicado en la cascada de coagulación.
De acuerdo con ello, es un objeto primario de la presente invención proporcionar nuevos derivados peptídicos que son inhibidores potentes de la trombina útiles como coagulantes.
Otros objetos, características y ventajas serán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la descripción y las reivindicaciones siguientes.
La presente invención proporciona un compuesto inhibidor de la trombina que tiene la Fórmula I
\newpage
IX-Y-NH-(CH_{2})_{r}-G
en la cual
X es prolinilo, homoprolinilo,
1
T es C_{3}-C_{8} cicloalquilo, C_{1}-C_{8} alquilo,
2
a es 0 ó 1;
Q es -OH, C_{1}-C_{4} alcoxi, o -NH-A;
A es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, R''SO_{2}-, R''OC(O)-, R''C(O)-, o -(CH_{2})_{g}-COOH,
g es 1, 2 ó 3;
B es hidrógeno C_{1}-C_{4} alquilo;
R' es hidrógeno o C_{1}-C_{4} alquilo;
R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo, -(CH_{2})_{d}-COOH, o arilo insustituido o sustituido, donde arilo es fenilo, naftilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros insustituido o sustituido, que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, o un grupo aromático heterocíclico bicíclico condensado de 9 ó 10 miembros, insustituido o sustituido que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno;
d es 1, 2 ó 3;
m es 0, 1 ó 2;
n es 0, 1 ó 2; y
Z es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, hidroxi, halo, o R_{a}SO_{2}NH-, donde R_{a} es C_{1}-C_{4} alquilo;
3
en cuyas fórmulas
R^{g} es C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
R^{p} es hidrógeno, C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
donde p es 0, 1, 2, 3 ó 4; L es un enlace, -O-, -S-, o -NH-; q es 0, 1, 2 ó 3, y T' es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, 
\hbox{C _{3} -C _{8} }
cicloalquilo, -COOH, -CONH_{2}, o Ar, donde Ar es arilo insustituido o sustituido, donde arilo es fenilo, naftilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros insustituido o sustituido, que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, o un grupo aromático heterocíclico bicíclico condensado de 9 ó 10 miembros insustituido o sustituido que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno;
R^{y} es -CH_{2}-, -O-, -S-, o -NH-; y
R^{z} es un enlace o, cuando se considera junto con R^{y} y los tres átomos de carbono contiguos, forma un anillo carbocíclico saturado de 5-8 átomos, uno de cuyos átomos puede ser -O-, -S-, o -NH-;
r es 1 ó 2; y
G es
4
donde D y E son cada uno CH;
k es 0 ó 1;
y
R es
5
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; o un solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o una sal del mismo;
con la condición de que, cuando:
\newpage
Y representa azetidina-2-carbonilo, prolinilo insustituido (R^{p} es hidrógeno) o 4-hidroxiprolinilo (R^{p} es hidroxi); y G representa 4-amidinofenilo;
entonces:
(a) cuando X representa T-(CH_{2})_{a}-C(R')(Q)-C(O)-;
R' representa H;
Q es -NH-A; y
A representa
H, C_{1}-C_{4} alquilo,
R''SO_{2}- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo o fenilo sustituido con un solo grupo carboxi);
R''OC(O)- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo),
R''C(O)- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo o -(CH_{2})_{d}-COOH, donde d es 1 ó 2), o
-(CH_{2})_{g}-COOH;
entonces el grupo T-(CH_{2})_{a} no representa:
(i) C_{1}-C_{8} alquilo;
(ii) -(CH_{2})_{a}-C_{5}-C_{6} cicloalquilo;
(iii) -(CH_{2})_{a}-fenilo, grupo fenilo que está sustituido opcionalmente con un grupo C_{1}-C_{4} alquilo;
(iv) -(CH_{2})_{a}-fenilo, grupo fenilo que está sustituido con un grupo hidroxi o un grupo C_{1}-C_{4} alcoxi; o
(v) -(CH_{2})_{a}-naftilo; y
(b) X no representa prolinilo, homoprolinilo,
6
donde R' representa H;
y con la condición adicional de que, cuando:
Y representa azetidina-2-carbonilo o prolinilo insustituido (R^{p} es hidrógeno);
r es 1; y
G representa
7
entonces:
cuando X representa T-(CH_{2})_{a}-C(R')(Q)-C(O)-;
T es distinto de fenilo sustituido con R_{a}SO_{2}NH-; y
R' representa H;
entonces Q no representa OH, C_{1}-C_{4} alcoxi o -NH-A en cuya fórmula A representa:
(i) H, C_{1}-C_{4} alquilo;
(ii) R''C(O)- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo o arilo;
(iii) R''OC(O)- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, (CH_{2})_{d}-COOH o arilo; o
(iv) R''SO_{2}- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo, -(CH_{2})_{d}-COOH o arilo;
donde arilo es fenilo, metilfenilo o naftilo, grupo que está sustituido opcionalmente con uno o dos grupos seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi y -(CH_{2})_{j}COOH (en cuya fórmula j representa 0 a 4).
Además de los compuestos de Fórmula I, la presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Esta invención se refiere a nuevos inhibidores de trombina, composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos como ingredientes activos, y el uso de los compuestos como anticoagulantes para profilaxis y tratamiento de enfermedades tromboembólicas tales como trombosis venosa, embolia pulmonar, trombosis arterial, en particular isquemia miocárdica, infarto de miocardio y trombosis cerebral, estados hipercoagulables generales y estados hipercoagulables locales, tales como los consecutivos a operaciones de angioplastia y derivación ("by pass") coronaria, y lesiones tisulares generalizadas como las relacionadas con el proceso inflamatorio.
El término "alquilo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene el número indicado de átomos de carbono, tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo y sec-butilo. El término "perfluoroalquilo", en sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene el número indicado de átomos de carbono en el cual cada átomo de hidrógeno está reemplazado con un átomo de flúor tal como trifluorometilo, perfluoroetilo, perfluoro-n-propilo, perfluoroisopropilo, perfluoro-n-butilo, perfluoro-t-butilo, perfluoro-isobutilo y perfluoro-sec-butilo.
El término "C_{3}-C_{8} cicloalquilo" se refiere a los anillos alicíclicos saturados de 3 a 8 átomos de carbono tales como ciclopropilo, metilciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 4-metilciclohexilo, ciclooctilo y análogos.
El término "alcoxi" significa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene el número indicado de átomos de carbono unido al resto originario por un átomo de oxígeno. El término "halo" significa cloro, fluoro, bromo o yodo. El término "acetilo" significa CH_{3}-C(O)-. El término "t-butiloxicarbonilo" significa (CH_{3})_{3}C-O-C(O)- y se abrevia "Boc". El término "benciloxicarbonilo" significa C_{6}H_{5}CH_{2}-O-C(O)- y se abrevia "Cbz".
El término "anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros" significa cualquier anillo de 5 ó 6 miembros que proporcione una estructura estable con contiene uno o dos átomos de nitrógeno; un átomo de azufre; un átomo de oxígeno; un átomo de nitrógeno y un átomo de azufre; o un átomo de nitrógeno y un átomo de oxígeno. El anillo de 5 miembros tiene uno o dos enlaces dobles y el anillo de 6 miembros tiene dos o tres enlaces dobles. Tales sistemas heterocíclicos incluyen furilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, piranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, oxazinilo y tiazinilo.
El término "anillo heterocíclico de 9 ó 10 miembros" significa cualquier grupo bicíclico condensado en el cual cualquiera de los anillos de 5 ó 6 miembros anteriores está condensado a un anillo de benceno u otro anillo heterocíclico de 6 miembros como se define arriba que proporcione una estructura estable. Estos sistemas heterocíclicos incluyen indolilo, benzotienilo, benzofurilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzopirazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo y benzotiazolilo.
Se apreciará que muchos de los heterocíclicos anteriores pueden existir en formas tautómeras. La totalidad de dichas formas se incluyen dentro del alcance de esta invención.
La totalidad de los grupos aromáticos o heteroaromáticos enumerados por la definición de Ar o R'' están insustituidos o sustituidos independientemente con uno o dos sustituyentes que proporcionan una estructura estable, seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, amino (-NH_{2}), mono(C_{1}-C_{4} alquil)amino, -(CH_{2})_{j}COOH, mercapto, -S(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHS(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHC(O)(C_{1}-C_{4} alquilo), -S(O
\hbox{) _{h} }
NH_{2}, -S(O)_{h}NH(C_{1}-C_{4} alquilo), o -S(O)_{h}N(C_{1}-C_{4} alquilo)_{2}, siendo h 0, 1 ó 2, y siendo j es 0, 1, 2, 3 ó 4. Un valor particularmente preferido de este tipo para el sustituyente R''(C)O- es 1-metilindol-2-oílo. 
\newpage
En la representación de la Fórmula I, la funcionalidad carbonilo del grupo X está unida a la funcionalidad amina del grupo Y. La funcionalidad carbonilo de Y está unida entonces al grupo amino representado en la Fórmula I.
El grupo
8
donde Z y A son ambos hidrógeno, se designa a veces en esta memoria como fenilglicilo y se abrevia como Phg. Los compuestos en los cuales A es, v.g., metilo, se designan como el grupo N^{\alpha}-metil-fenilglicilo y se abrevian MePhg. Se hace referencia a los compuestos sustituidos en los cuales Z es distinto de hidrógeno por el tipo y la posición del grupo sustituyente, v.g., 3'-clorofenilglicilo o Phg(3-Cl).
El grupo
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donde Z y A son ambos hidrógeno, se designa a veces en esta memoria como fenilalanilo y se abrevia Phe. Los compuestos en los cuales A es, v.g. metilo, se designan como el grupo N^{\alpha}-metil-fenilalanilo y se abrevian MePhe. Los compuestos sustituidos en los cuales Z es distinto de hidrógeno se designan por el tipo y la posición de grupo sustituyente, v.g., 3'-clorofenilalanilo o Phe(3-Cl).
Los grupos
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en los cuales R' es hidrógeno, se designan a veces en esta memoria como 1- y 3-tetrahidro-isoquinolinacarbonilo, respectivamente, y se abrevian respectivamente 1-Tiq y 3-Tiq.
Los grupos
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en los cuales R' es hidrógeno, se designan a veces en esta memoria como 1- y 3-perhidro-isoquinolinacarbonilo, respectivamente, y se abrevian respectivamente como 1-Piq y 3-Piq. Como se indica por las líneas curvas, existen diversos isómeros de fusión de anillos de estos sustituyentes - y esta invención contempla cualesquiera isómeros individuales y combinaciones de los mismos.
Los grupos
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se designan como prolinilo y azetidina-2-carbonilo, respectivamente, y se abrevian respectivamente Pro y Azt.
El grupo
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representa un sistema bicíclico saturado del tipo 4,5; 5,5; 6,5; 7,5; o 8,5. La estereoquímica en 3a es cis respecto al carbonilo; el otro enlace de cabeza de puente puede ser cis o trans excepto para los sistemas 4,5 y 5,5, en los cuales tiene que ser cis en la cabeza de puente. Las definiciones de R^{y} y R^{z} disponen que el anillo variable, que incluye los tres átomos de carbono indicados, es un sistema carbocíclico saturado de 4-8 átomos. La totalidad de los átomos del anillo pueden ser carbono, o uno de los átomos del anillo puede ser un heteroátomo seleccionado de -O-, -S-, y -NH-. Esta definición incluye el resto preferido derivado del ácido octahidroindol-2-carboxílico, abreviado "Ohi", que se representa por
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Las diversas formas cis y trans de este resto están contempladas por la presente invención.
Los asteriscos en el radical Y denotan un centro quiral que es (L). El asterisco en el radical X denota un centro quiral que es (D) o (DL); el símbolo # en el radical X denota un centro quiral que es (L).
Adicionalmente, pueden existir diastereoisómeros dependiendo de la ramificación de los sustituyentes alquilo. Los compuestos de la presente invención incluyen mezclas de dos o más diastereoisómeros así como cada isómero individual.
Compuestos preferidos de la presente invención incluyen aquellos compuestos de Fórmula I en la cual X es
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homoprolinilo, 1- o 3-Tiq, o 1- o 3-Piq, e Y es prolinilo, y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables. En particular, se prefieren todos los compuestos en los cuales Q es NHA y A es hidrógeno o una sulfonamida (v.g., A = R''S02-), R' es hidrógeno, Z es hidrógeno, y B es hidrógeno. Asimismo, se prefieren aquellos compuestos en los cuales R es un grupo amidino.
Una combinación particularmente preferida de sustituyentes es aquélla en la cual G es fenilo sustituido en R (es decir, D=E=CH, k=0); se prefiere especialmente el caso en que G es un grupo 4-amidinofenilo.
Otro grupo de compuestos preferidos de la presente invención incluye aquellos compuestos de Fórmula I como se define anteriormente en los cuales X es
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en cuya fórmula T es ciclohexilo, a es 1, R' es hidrógeno y Q es -NH-A. Un subgrupo particular es uno en el cual A es hidrógeno. Un segundo subgrupo particular es uno en el cual A es R''SO_{2}-, especialmente cuando R'' es etilo. Un tercer subgrupo particular es uno en el cual A es -(CH_{2})_{g}-COOH; preferiblemente g es 1.
Valores particulares de Y para un compuesto de Fórmula I en la cual X, r y G se definen como anteriormente incluyen (L)-prolinilo (Pro), (S)-cis-octahidro-1H-indol-2-carbonilo (Ohi) y N-(2-feniletil)glicilo [N(PhCH_{2}CH_{2})Gly].
Para un compuesto de Fórmula I en la cual R es -NH_{2}, se prefiere que los valores de X e Y se seleccionen de los definidos anteriormente y los valores de r y G son
r es 1 y G es
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Un grupo particularmente preferido de compuestos de Fórmula I es uno en el cual Y es (L)-prolinilo, r es 1 y
G tiene el valor
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en cuya fórmula cada uno de D y E es CH, k es 0 y R es amidino, y que puede representarse por la Fórmula Ia
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en la cual X tiene cualquiera de los valores definidos anteriormente.
Un valor preferido de X para un compuesto de fórmula Ia, Ib, o Ic es
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en cuya fórmula R' es hidrógeno, a es 1, T es ciclohexilo o fenilo y Q es -NH-A. Más particularmente, A es hidrógeno, etilsulfonilo o carboximetilo. Un valor particularmente preferido para X es N-carboximetil-D-ciclohexilalanilo. Otro valor preferido para X es N-carboximetil-D-fenilalanilo.
Compuestos específicos de la Fórmula I de la invención se describen en los Ejemplos. Una especie preferida, que se puede emplear como sal o solvato farmacéuticamente aceptable, puede seleccionarse de las descritas como Ejemplos 15, 18, 23, 44, 45, 46, 48, 49, 51, 52, 56, 65, 66, 68, 69, 70, 71, 72, 80, 86, 87, 88 y 92. Una especie más preferida puede seleccionarse de los compuestos descritos por los Ejemplos 45, 46, 48, 51, 65, 70, 71 y 72. Una especie muy preferida basada en sus propiedades inesperadamente superiores es el Ejemplo 48. Otra especie altamente preferida es el Ejemplo 65.
Como se ha mencionado arriba, la invención incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos definidos por la Fórmula I anterior. Un compuesto particular de esta invención puede poseer uno o más grupos funcionales suficientemente básicos, y reaccionar de acuerdo con ello con cualquiera de varios ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Los ácidos empleados comúnmente para formar sales de adición de ácido son ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y análogos, y ácidos orgánicos tales como ácido p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y análogos. Ejemplos de dichas sales farmacéuticamente aceptables son, por consiguiente, las sales sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butin-1,4-dioato, hexin-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, gamma-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato, y análogos. Sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables preferidas son las formadas con ácidos minerales tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico y ácido sulfúrico.
Es sabido que los compuestos de la presente invención forman hidratos y solvatos con disolventes apropiados. Disolventes preferidos para la preparación de formas de solvato incluyen agua, alcoholes, tetrahidrofurano, DMS, y DMSO. Alcoholes preferidos son metanol y etanol. Otros disolventes apropiados pueden seleccionarse basándose en el tamaño de la molécula del disolvente. Se prefieren moléculas pequeñas de disolvente para facilitar la formación de solvato correspondiente. El solvato o hidrato se forma típicamente en el curso de la recristalización o en el curso de la formación de la sal. Una referencia útil concerniente a los solvatos es Sykes, Peter, A Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6ª edición (1986, John Wiley & Sons, Nueva York). Tal como se utiliza en esta memoria, el término "solvato" incluye formas de hidrato, tales como monohidratos y dihidratos.
Los compuestos de Fórmula I se preparan por métodos conocidos de copulación de péptidos. De acuerdo con un método de este tipo, el ácido P-X'-COOH, donde -X'-C(O)- es -X-, tiene el mismo significado que se define para la Fórmula I, y P es un grupo protector de amino, se copula en caso necesario con un compuesto Y protegido en carboxi para formar el dipéptido (a). El grupo éster protector de carboxi del resto Y se elimina luego (se desbloquea o se des-esterifica) y la forma de ácido libre del dipéptido (b) se copula con el reactivo protegido (d). La secuencia de reacción anterior se ilustra por el Esquema 1 siguiente:
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en el cual G' es igual que G excepto que R es -CN, -NHP o
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cada P representa un grupo protector de amino, en caso necesario alk es alquilo inferior o un grupo protector similar de ácido carboxílico, e -Y'- es igual que Y con las funcionalidades amino y carboxi visibles, es decir, -Y- es igual que -N-Y'-C(O)-.
Si está presente, el grupo ciano en G' se trata para dar un valor de R; y los grupos protectores en (c) se eliminan luego por procedimientos conocidos por los expertos en la técnica tales como hidrogenación sobre un catalizador metálico para proporcionar los compuestos de Fórmula I.
La copulación de un compuesto P-X'-COOH con HN-Y'-COO-alk se lleva a cabo protegiendo primeramente el grupo amino del aminoácido, en su caso. Se emplean grupos protectores de amino convencionales utilizados comúnmente para protección o bloqueo temporal del grupo amino.
El grupo protector de amino hace referencia a sustituyentes del grupo amino empleados comúnmente para bloquear o proteger la funcionalidad amino mientras reaccionan otros grupos funcionales del compuesto. Ejemplos de tales grupos protectores de amino incluyen el grupo formilo, el grupo tritilo, el grupo ftalimido, el grupo tricloroacetilo, los grupos cloroacetilo, bromoacetilo y yodoacetilo, grupos bloqueantes de tipo uretano tales como benciloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, 4-fenilbenciloxicarbonilo, 2-metilbenciloxicarbonilo, 4-metoxibenciloxicarbonilo, 4-fluorobenciloxicarbonilo, 4-clorobenciloxicarbonilo, 3-clorobenciloxicarbonilo, 2-clorobenciloxicarbonilo, 2,4-diclorobenciloxicarbonilo, 4-bromobenciloxicarbonilo, 3-bromobenciloxicarbonilo, 4-nitrobenciloxicarbonilo, 4-cianobenciloxicarbonilo, 2-(4-xenil)isopropoxicarbonilo, 1,1-difenilet-1-iloxi-carbonilo, 1,1-difenilprop-1-iloxicarbonilo, 2-fenilprop-2-iloxicarbonilo, 2-(p-toluil)prop-2-iloxicarbonilo, ciclopentaniloxicarbonilo, 1-metilciclopentaniloxicarbonil, ciclohexaniloxicarbonilo, 1-metilciclohexaniloxi-carbonilo, 2-metilciclohexaniloxicarbonilo, 2-(4-toluilsulfonil)etoxicarbonilo, 2-(metilsulfonil)etoxi-carbonilo, 2-(trifenilfosfino)etoxicarbonilo, 9-fluoren-ilmetoxicarbonilo ("FMOC"), 2-(trimetilsilil)etoxi-carbonilo, aliloxicarbonilo, 1-(trimetilsililmetil)prop-I-eniloxicarbonilo, 5-bencisoxalilmetoxicarbonilo, 4-acetoxibenciloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2-etinil-2-propoxicarbonilo, ciclopropilmetoxicarbonilo, 4-(deciloxi)benciloxicarbonilo, isoborniloxicarbonilo, 1-piperidiloxicarbonilo y análogos; el grupo benzoilmetilsulfonilo, el grupo 2-(nitro)fenilsulfenilo, el grupo óxido de difenilfosfina, y grupos protectores de amino análogos. La especie de grupo protector de amino empleada no es crítica con tal que el grupo amino derivatizado sea estable en las condiciones de reacción subsiguientes en otras posiciones de la molécula y pueda eliminarse en el momento apropiado sin alterar el resto de la molécula. Grupos protectores de amino preferidos son los grupos benciloxicarbonilo, aliloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, y tritilo. Grupos protectores de amino análogos utilizados en la técnica de cefalosporinas, penicilinas y péptidos están abarcados también por los términos anteriores. Ejemplos adicionales de grupos a los que se hace referencia por los términos anteriores han sido descritos por J.W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nueva York, N.Y., 1973, capítulo 2, y T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, Nueva York, N.Y., 1981, capítulo 7. El término afín "amino protegido" define un grupo amino sustituido con un grupo protector de amino arriba expuesto.
En la realización de la reacción de copulación, se emplea un grupo protector de éster para HN-Y'-COOH que es eliminable en condiciones en las cuales el grupo protector de amino se mantiene intacto. El grupo protector de amino del ácido de acilación P-X'-COOH permanece así en su lugar para protección del grupo amino durante la copulación subsiguiente con la amina (d) para formar (c).
El grupo éster protector de carboxi tal como se utiliza en la memoria descriptiva hace referencia a uno de los derivados ésteres del grupo ácido carboxílico empleados comúnmente para bloquear o proteger el grupo ácido carboxílico mientras que se llevan a cabo reacciones en otros grupos funcionales del compuesto. Ejemplos de tales grupos protectores de ácido carboxílico incluyen C_{1}-C_{4} alquilo, bencilo, 4-nitrobencilo, 4-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2,4,6-trimetoxibencilo, 2,4,6-trimetilbencilo, pentametilbencilo, 3,4-metilenodioxibencilo, benzhidrilo, 4,4'-dimetoxibenzhidrilo, 2,2',4,4'-tetrametoxibenzhidrilo, t-butilo, t-amilo, tritilo, 4-metoxitritilo, 4,4'-dimetoxitritilo, 4,4',4''-trimetoxitritilo, 2-fenilprop-2-ilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2,2,2-tricloroetilo, \beta-(trimetilsilil)etilo, \beta-(di(n-butil)metilsilil)etilo, p-toluenosulfoniletilo, 4-nitrobencilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, 1-(trimetilsililmetil)-prop-1-en-3-ilo, y restos análogos. La especie de grupo protector de carboxi empleada no es crítica con tal que el ácido carboxílico derivatizado sea estable en las condiciones de la o las reacciones subsiguientes en otras posiciones de la molécula y pueda eliminarse en el momento apropiado sin alterar el resto de la molécula. En particular, es importante que no se someta la molécula protegida en carboxi a bases nucleófilas o condiciones reductoras fuertes que empleen catalizadores metálicos altamente activados tales como níquel Raney. (Tales condiciones de eliminación severas deben evitarse también cuando se eliminan los grupos protectores de amino expuestos más adelante.) Ejemplos adicionales de estos grupos se encuentran en E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, Ed.; Plenum Press, Nueva York, N.Y., 1973, capítulo 5, y T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley & Sons, Nueva York, N.Y., 1981, capítulo 5.
Los compuestos de Fórmula I se pueden preparar también sintetizando en primer lugar el precursor de amida HN-Y'-CONH(CH_{2})_{r}-G' y haciéndolo reaccionar luego con un resto X protegido. De acuerdo con un método de este tipo, se prepara (d) y se copula con PN-Y'-COOH (g) como se muestra más adelante para proporcionar la amida (h).
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donde P representa un grupo protector de amino tal como el grupo benciloxicarbonilo (Cbz), t-butoxicarbonilo (Boc), p-toluenosulfonilo, y análogos. Preferiblemente, el grupo protector de amino utilizado puede eliminarse por hidrogenación o tratamiento con un ácido moderado (v.g. ácido trifluoroacético) o un ácido fuerte (v.g. HCl). Ejemplos de otros grupos protectores de amino adecuados se proporcionan en "Protective Groups in Organic Synthesis" 2ª edición, por T.W. Greene y Peter G.M. Wuts, capítulo 7 página 309-405 (1991), John Wiley & Sons, Inc. editores. El grupo Boc, u otro grupo protector adecuado, se separa del nitrógeno amínico del residuo Y que se acila luego con el grupo acilo del aminoácido deseado para proporcionar el dipéptido que se muestra a continuación.
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El grupo ciano, si está presente en G', se trata y los grupos protectores en (c) se eliminan como se ha descrito anteriormente.
La copulación de un compuesto P-X'-COOH se lleva a cabo protegiendo primeramente el grupo amino del amino-ácido, en su caso. Se emplean grupos protectores de amino convencionales utilizados comúnmente para la protección o bloqueo temporal del grupo amino. Ejemplos de tales grupos protectores se han descrito anteriormente.
Las reacciones de copulación descritas arriba se llevan a cabo en frío, con preferencia a una temperatura comprendida entre aproximadamente -20ºC y aproximadamente 15ºC. Las reacciones de copulación se llevan a cabo en un disolvente orgánico inerte tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, tetrahidrofurano, cloruro de metileno, cloroformo y disolventes comunes análogos o una mezcla de tales disolventes. Generalmente, se utilizan condiciones anhidras cuando, en la reacción de copulación, se utiliza un éster activo del ácido de acilación.
Los compuestos intermedios (d) y (g) se preparan por técnicas estándar de química orgánica que se resumen en los esquemas siguientes:
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donde -K-R es -(CH_{2})_{r}-G.
De acuerdo con las secuencias anteriores, pueden prepararse guanidinas protegidas por protección doble de S-metilisotiourea. Un grupo bloqueante preferido es el grupo t-butoxicarbonilo (Boc) que puede introducirse dejando que la S-metilisotiourea reaccione en presencia de dicarbonato de di-t-butilo. A menudo se emplea una forma de sal ácida de S-metilisotiourea que puede hacerse saltar a la forma de base libre in situ por disolución de la sal en agua y tratamiento con una base acuosa. El dicarbonato de di-t-butilo se introduce luego en la reacción en un disolvente miscible con el agua, tal como t-butanol, para dar la S-metilisotiourea doblemente protegida. Se forma luego la guanidina doblemente protegida deseada por tratamiento con la diamina apropiada H_{2}N-K-NH_{2} en un disolvente no reactivo o una combinación de disolventes. Se emplean eficazmente disolventes típicamente miscibles con el agua tales como dimetilformamida, o agua, o mezclas de los mismos. Dicha reacción se completa por lo general en aproximadamente 3-72 horas. La guanidina protegida resultante puede copularse luego como se ha descrito previamente.
Para los compuestos de Fórmula I en la cual R = -NH_{2}, el compuesto intermedio es una diamina protegida simplemente. En la mayoría de los casos, este compuesto intermedio se puede preparar dejando simplemente que una diamina no protegida reaccione con un equivalente molar del reactivo protector. Otros métodos de introducción de la amina final (R = -NH_{2}) serán evidentes para los expertos en química orgánica. Por ejemplo, la amina se puede obtener a partir de cualquier otra funcionalidad precursora, v.g., un grupo nitro o un grupo ciano. En el caso de un grupo nitro, la transformación en un grupo amino se realiza usualmente sobre aquellos sustratos en los cuales el grupo nitro está unido directamente a un anillo aromático, particularmente un grupo fenilo. En tales casos, el grupo nitrofenilo se reduce a la funcionalidad anilina correspondiente por cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica. Un método particularmente eficaz es el tratamiento del nitrocompuesto con hidrosulfito de sodio en un disolvente no reactivo, tal como etanol, agua, o una mezcla de los mismos. Cuando el nitrocompuesto se calienta a reflujo en una mezcla agua/etanol en presencia de hidrosulfito de sodio, la reducción se completa usualmente en el transcurso de unas horas. Un grupo ciano puede reducirse análogamente, en caso apropiado, en presencia de un agente reductor tal como hidruro de litio y aluminio, borano en un disolvente tal como tetrahidrofurano, o por reducción con borohidruro de sodio promovido con metales.
Las amidinas de esta invención
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pueden tratarse también a partir de un precursor nitrilo. Se conocen en la técnica varios procedimientos para realizar esta transformación. En particular, el uso de sulfuro de hidrógeno en una mezcla de piridina y trietilamina, seguido por tratamiento con acetona y yoduro de metilo, y finalmente acetato de amonio en metanol, es un medio preferido y eficiente para realizar esta conversión. Alternativamente, puede utilizarse también el calentamiento del nitrilo con hidrocloruro de hidroxilamina y un compuesto básico tal como N,N-diisopropiletilamina en un disolvente hidroxilado tal como etanol seguido por hidrogenación catalítica (v.g., hidrogenólisis con paladio sobre carbono) para efectuar esta transformación. Este proceso proporciona la hidroxi-amidina
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como compuesto intermedio que puede aislarse en caso deseado.
Los otros compuestos empleados como materias iniciales en la síntesis de los compuestos de esta invención son bien conocidos y, en caso de que no estén disponibles comercialmente, se sintetizan fácilmente por procedimientos estándar empleados habitualmente por quienes poseen una experiencia ordinaria en la técnica.
Las prolinas sustituidas en posición 4 (R^{P} es C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-N-(CH_{2})_{q}-T') utilizadas para producir los compuestos de esta invención son todas ellas de la configuración cis del sustituyente de la posición 4 con relación al resto carbonilo. Los compuestos intermedios para introducir esta funcionalidad en los compuestos de Fórmula I se preparan por técnicas estándar.
Por ejemplo, los derivados de prolina sustituidos en posición 4 en los cuales el grupo R^{P} contiene un grupo metileno en el punto de unión al anillo de prolina se pueden preparar en la manera siguiente:
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donde R^{4} = R^{3}CH_{2} = un grupo R^{P} que contiene un grupo metileno en el punto de unión al anillo de prolina.
Una 4-hidroxiprolina (están disponibles comercialmente tanto la forma cis como la forma trans) se protege primeramente con un grupo protector de amino - el grupo Cbz es particularmente útil en esta secuencia. El compuesto intermedio resultante se esterifica luego (son especialmente convenientes los ésteres metílicos o especialmente los ésteres etílicos) y se oxida después para dar la cetona correspondiente. Esta oxidación se lleva a cabo en cualquiera de varias condiciones de oxidación tales como oxidación de Jones o clorocromato de piridinio; especialmente útil para esta transformación es el uso de clorocromato de piridinio en un disolvente seco, no reactivo, tal como diclorometano. Cuando se deja transcurrir durante 8-16 horas, esta reacción se completa generalmente cuando se realiza a la temperatura ambiente. Este compuesto intermedio cetónico versátil se deja reaccionar luego con un reactivo de Wittig apropiado para dar la olefina deseada. Típicamente, el haluro de trifenilfosfonio sustituido con R^{P} apropiado se añade a un disolvente inerte seco (v.g., tetrahidrofurano) que contiene una base fuerte (v.g., t-butóxido de potasio). La cetona se introduce y, después de aproximadamente 3 horas a la temperatura ambiente, puede aislarse el compuesto intermedio olefínico deseado. Con objeto de obtener rendimientos satisfactorios de la olefina, es preferible emplear un exceso molar de 0,4-0,6 del reactivo de Wittig con relación a la cetona. La olefina se reduce luego a la prolina sustituida con R^{P} deseada por técnicas de reducción estándar. La hidrogenación catalítica es el método más fácil para realizar esta transformación en el laboratorio. La hidrogenación de la olefina en presencia de un catalizador (v.g. paladio al 5% sobre carbono) en un disolvente inerte tal como etanol será eficaz a la presión atmosférica. En el caso de aquellos compuestos intermedios en los cuales el grupo protector de amino es Cbz, la hidrogenación elimina también del grupo protector que proporciona un compuesto que puede utilizarse para copulación a P-X'-COOH. Como será apreciado por los expertos en esta técnica, este proceso no será eficaz para preparar compuestos en los cuales el grupo R^{P} está unido al anillo de prolina a través de un heteroátomo o que son un anillo aromático. Así, en el esquema anterior, R^{3} será alquilo, aralquilo (v.g., bencilo), (cicloalquil)alquilo, etc.
Un método afín para preparar estos compuestos intermedios se resume en el esquema siguiente:
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El esquema de reacción anterior es una alternativa a la reacción de Wittig descrita anteriormente, y es útil para preparar compuestos para los cuales no pueden prepararse reactivos de Wittig. Así, para preparar compuestos intermedios en los cuales Ra es alquilo, fenilo, y análogos, el compuesto intermedio de pirrolidinona se deja reaccionar con un reactivo de Grignard apropiado. Típicamente se emplea un ligero exceso molar del reactivo de Grignard, usualmente a bajas temperaturas (v.g., -80 a -60ºC) en un disolvente inerte de punto de congelación bajo tal como tetrahidrofurano. Después de la adición de los reactivos, la mezcla de reacción puede dejarse calentar a la temperatura ambiente, transcurrido cuyo tiempo la reacción se completa usualmente al cabo de varias horas. El compuesto intermedio resultante se deshidrata, por ejemplo, por tratamiento con ácido trifluoroacético. El compuesto intermedio deshidrogenado en 3,4 se reduce luego al compuesto intermedio cis deseado utilizando las mismas condiciones de reducción que se han descrito anteriormente para la reducción del compuesto intermedio olefínico.
Los compuestos intermedios en los cuales el heterogrupo "L" es oxígeno y está unido directamente al anillo de prolina (es decir, p = 0) se pueden preparar empleando la reacción de Mitsunobu (Mitsunobu, Synthesis, 1 (1981)):
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En esta reacción, el éster hidroxipirrolidina-carboxílico trans se trata con trifenilfosfina en un disolvente tal como tetrahidrofurano en presencia de Ar-O-H. La mezcla se enfría a aproximadamente 0ºC y se añade azodicarboxilato de dietilo. Después de calentar a la temperatura ambiente, la reacción se hace progresar hasta proporcionar el compuesto intermedio cis deseado. Si bien el esquema anterior representa la reacción para compuestos en los cuales L = -O-, p = q = 0, y T = Ar, esta secuencia es útil para preparar otros compuestos en los cuales p = 0 y L es -O-.
Los compuestos intermedios en los cuales L es azufre y está unido directamente al anillo se pueden preparar convirtiendo primeramente el grupo hidroxi en un tosilato u otro grupo lábil similar y desplazando luego con un anión tiolato (véase, v.g., Krapcho, et al., J. Med. Chem., 31, 1148-1160 (1988); Smith, et al., J. Med. Chem., 31, 875-855 (1988)).
Los compuestos intermedios en los cuales L es nitrógeno y está unido directamente al anillo se pueden preparar convirtiendo primeramente el grupo hidroxi en un tosilato u otro grupo lábil análogo y desplazando luego con azida. La azida se puede reducir utilizando métodos conocidos y puede alquilarse luego para proporcionar la funcionalidad deseada (véase, v.g., Smith, et al., J. Med. Chem., 31, 875-855 (1988)).
Los compuestos de esta invención que contienen una funcionalidad cis-Ohi se obtienen por preparación del éster etílico del ácido (S)-indolina-carboxílico a partir del ácido correspondiente (véase, Vincent, et al., Drug Design and Discovery, vol. 9, pp 11-28 (1992)), y reducción de este compuesto intermedio por hidrogenación sobre 5% Pd/C en etanol para dar el éster del ácido octahidroindol-2-carboxílico, al que se hace referencia generalmente como éster Ohi, como se resume a continuación.
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Los compuestos de esta invención que contienen una funcionalidad trans-Ohi se preparan por el método de Vincent, et al., Drug Design and Discovery, vol. 9, pp 11-28 (1992)). Esto se resume en el esquema que se muestra a continuación:
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El compuesto de esta invención que contiene un sistema bicíclico (con o sin heteroátomo) se puede preparar por el método de Teetz, et al., Tetrahedron Letters, 25, 4479 (1984). En líneas generales:
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donde P es un grupo protector y R^{x} es alquilo.
Los compuestos intermedios para introducción de la funcionalidad glicina sustituida en N (Y) utilizados para la producción de los compuestos de esta invención se preparan por técnicas estándar.
Por ejemplo, un éster haloacetato, tal como bromoacetato de t-butilo, se puede convertir en el compuesto sustituido deseado por tratamiento con la amina primaria apropiada:
BrCH_{2} COO-t-butilo + R^{g} NH_{2} \rightarrow NR^{g} CH_{2} COO-t-butilo
El bromoacetato de t-butilo se deja reaccionar con la amina apropiada, sea en estado puro o preferiblemente en un disolvente no reactivo, tal como un alcohol. Se prefiere utilizar un exceso molar de la amina para forzar la reacción hasta su terminación. Preferiblemente, la mezcla de reacción contiene también un agente eliminador de ácidos no reactivo, tal como al menos un equivalente molar de trietilamina. Si bien las sustancias reaccionantes se enfrían usualmente reunidas (v.g., 0ºC), usualmente se deja que la mezcla de reacción se caliente a la temperatura ambiente, después de lo cual la reacción se completa usualmente en el transcurso de 24 horas. Aunque se prefiere el bromoacetato, pueden emplearse para esta transformación otros haloacetatos, tales como yodoacetatos y cloroacetatos. Pueden emplearse análogamente otros grupos éster. Se prefiere el éster t-butílico debido a que el mismo puede eliminarse más tarde fácilmente por tratamiento con anisol y ácido trifluoroacético.
Un segundo método para preparar estos compuestos intermedios se resume por el esquema siguiente:
R^{o}-CHO + H_{2} NCH_{2} COOEt \rightarrow R^{o}-CH=NCH_{2} COOEt \rightarrow R^{o}-CH_{2}-NHCH_{2} COOEt
donde Rº-CH_{2}- es un grupo R^{g} que tiene un grupo metileno insustituido adyacente al punto de unión con el resto glicina.
En el esquema de reacción anterior, el aldehído apropiado se mezcla con el éster de glicina en un disolvente no reactivo, tal como metanol o etanol. Si se utiliza una forma de sal del éster de glicina, puede añadirse un equivalente molar de una base, tal como hidróxido de potasio, para permitir la generación de la base libre del aminoéster. La reacción del aldehído y el éster de glicina forma la base de Schiff intermedia que puede reducirse luego in situ por tratamiento con un agente reductor tal como cianoborohidruro de sodio. La formación de la base de Schiff tiene lugar usualmente en menos de una hora; la reducción se completa generalmente después de 10-15 horas. Los ésteres metílico o etílico son particularmente útiles, dado que estos grupos pueden eliminarse (desbloquearse) por tratamiento con hidróxido de litio en dioxano acuoso. El empleo de una cetona apropiada en lugar del aldehído Rº-CHO da como resultado la preparación de compuestos intermedios en los cuales el grupo metileno unido a la amina glicina está sustituido.
Alternativamente, y especialmente para aquellos compuestos en los cuales R^{g} es Ar (es decir, sin un grupo alquilo intermedio), es preferible preparar el compuesto intermedio P-X'-CONHAr por técnicas estándar (v.g., reacción de una forma activada de P-X'-COOH con ArNH2) y hacer reaccionar posteriormente este compuesto intermedio con un haloacetato de alquilo como se ha descrito arriba para dar P-X'-CONHAr-CH_{2}-COO-alk, que puede transformarse ulteriormente de la manera usual.
Muchos de los compuestos finales de esta invención o compuestos intermedios para los mismos pueden interconvertirse por técnicas estándar. Por ejemplo, los compuestos arílicos que están sustituidos con nitro pueden reducirse (v.g., en presencia de hidrosulfito de sodio en un disolvente no reactivo, tal como etanol, agua, o una mezcla de los mismos). Cuando el nitrocompuesto se calienta a reflujo en una mezcla agua/etanol en presencia de hidrosulfito de sodio, la reducción es usualmente completa en el transcurso de unas horas. La amina resultante puede estar presente en el producto final; si la amina está presente en un compuesto intermedio, puede ser deseable convertirla en su forma final deseada (v.g., acilación para proporcionar la amina acilada) o protegerse para evitar reacciones secundarias durante los procesos químicos subsiguientes. Si la amina libre es el compuesto deseado, el grupo protector Cbz es particularmente útil a este respecto. Otras transformaciones e intraconversiones de este tipo serán evidentes para los expertos en química orgánica.
Como será apreciado por las personas con experiencia en esta técnica, las transformaciones anteriores pueden efectuarse sobre las materias primas arriba indicadas, o en la mayoría de los casos pueden efectuarse también sobre compuestos intermedios di- o tri-peptídicos que contengan el mismo grupo funcional respectivo. En los últimos casos, puede evitarse la necesidad, o su ausencia, de proteger los diversos grupos; de acuerdo con ello, el orden y tipo de la química implicada dictará la necesidad y el tipo de grupos protectores así como la secuencia de realización de la síntesis. Como será apreciado también por los técnicos expertos, pueden seleccionarse otros grupos protectores con tal que sirvan para el propósito de protección del grupo funcional durante la química subsiguiente, pero pueda eliminarse también en condiciones apropiadas y en un orden apropiado para permitir las transformaciones subsiguientes. Por ejemplo, en el Esquema 1 anterior, G' incluye sustituyentes en los cuales R es -CN; este grupo nitrilo puede transformarse en una amidina o reducirse a la amina que puede tratarse ulteriormente de modo opcional para dar guanidinas.
Los compuestos de la invención se aíslan óptimamente en la forma de sales de adición de ácido. Las sales de los compuestos de Fórmula I formadas con ácidos tales como los mencionados anteriormente son útiles como sales farmacéuticamente aceptables para administración de los agentes antitrombóticos y para preparación de formulaciones de estos agentes. Otras sales de adición de ácido pueden prepararse y utilizarse en el aislamiento y la purificación de los péptidos. Por ejemplo, las sales formadas con los ácidos sulfónicos tales como ácido metanosulfónico, ácido n-butanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y ácido naftalenosulfónico pueden utilizarse de este modo.
Un compuesto de Fórmula I se prepara por:
a) eliminación simultánea o sucesiva del o de los grupos protectores P de un compuesto correspondiente de 
\hbox{fórmula (II)}
(II)(P)X-Y-NH-(CH_{2})_{r}-G(P)
en la cual (P)X representa un radical X que puede llevar uno o más grupos protectores P seleccionados independientemente de un grupo protector de amino P para un compuesto de Fórmula I en la cual X incluye un resto básico NH y un grupo protector de carboxi P para un compuesto de Fórmula I en la cual X incluye un residuo carboxi, y G(P) representa un radical G que puede llevar uno o más grupos P protectores de amino seleccionados 
\hbox{independientemente;
o}
b) para un compuesto de Fórmula T en la cual R es
--- 
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{NH}}
---NH_{2}
por hidrogenólisis de un compuesto correspondiente de Fórmula I en la cual R es
--- 
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{NOH}}
---NH_{2}
y después de ello, cuando se requiere una sal del compuesto de Fórmula I, formación de la sal con un ácido farmacéuticamente aceptable.
Puede preferirse conducir el proceso b) simultáneamente al proceso a). Para un compuesto de Fórmula I en la cual un grupo protector de ácido es el éster t-butílico y/o un grupo protector de amino es t-butiloxicarbonilo, el o los grupos protectores pueden eliminarse por tratamiento con un ácido fuerte, tal como ácido trifluoroacético o cloruro de hidrógeno anhidro en un disolvente inerte, tal como dioxano o diclorometano, en presencia de anisol. Para un compuesto de Fórmula I en la cual un grupo protector de ácido es el éster bencílico y/o un grupo protector de amino es benciloxicarbonilo, el o los grupos protectores se pueden eliminar por hidrogenólisis, realizada convenientemente en cloruro de hidrógeno etanólico con un catalizador de paladio sobre carbono.
El método preferido para la purificación de los compuestos de Fórmula I, al mismo tiempo que se prepara una forma de sal estable deseada, es el descrito en la Patente U.S. 5.250.660. De acuerdo con dicho método, se proporcionan sulfatos o hidrocloruros estables por purificación preparativa por cromatografía en fase inversa sobre C_{18} en la cual el componente acuoso comprende ácido sulfúrico o ácido clorhídrico a un pH de 2,5 y el componente orgánico es acetonitrilo. El pH del eluyente ácido se ajusta a un valor comprendido entre aproximadamente pH 4 y aproximadamente pH 6 con una resina de intercambio de anión en la forma hidroxilo, v.g. Bio-Rad AG-1X8. Después del ajuste del pH, la solución de la sal sulfato o hidrocloruro del tripéptido se liofiliza para proporcionar la sal pura en forma de polvo seco. En un ejemplo del proceso, puede disolverse D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2} bruto en agua, y la solución se carga en una columna Vydac Cl_{8} RP HPLC de 5 cm x 50 cm. Se utiliza un gradiente de 2-10% B (A = 0,01% H_{2}SO_{4}; B = acetonitrilo) durante 10 horas. Se recogen fracciones múltiples y se agrupan aquéllas que contienen el producto como se determina por RP HPLC analítica. El pH de las fracciones agrupadas se ajusta a un valor comprendido entre pH 4,0 y 4,5 con resina AG-1X8 en forma hidroxilo (Bio-Rad, 3300 Ragatta Blvd., Richmond, CA 94804). La solución se filtra y el filtrado se liofiliza para proporcionar la D-, L-diamida pura en la forma de sal sulfato.
Los isómeros ópticamente activos de los diastereoisómeros en el radical X se consideran también como parte de esta invención. Tales isómeros ópticamente activos pueden prepararse a partir de sus precursores ópticamente activos respectivos por los procedimientos arriba descritos, o por resolución de las mezclas racémicas. Esta resolución puede llevarse a cabo por derivatización con un reactivo quiral seguido por cromatografía o por cristalización repetida. La eliminación del compuesto quiral auxiliar por métodos estándar proporciona isómeros sustancialmente ópticamente puros de los compuestos de la presente invención o sus precursores. Detalles adicionales con relación a las resoluciones pueden obtenerse en Jacques, et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons, 1981.
Los compuestos empleados como materias primas iniciales en la síntesis de los compuestos de esta invención son bien conocidos y, en el caso de que no estén disponibles comercialmente, se sintetizan fácilmente por procedimientos estándar empleados comúnmente por quienes poseen una experiencia ordinaria en la técnica.
Los ejemplos siguientes se proporcionan para describir con mayor detalle la invención y proporcionar ejemplos para comparación.
Las abreviaturas utilizadas en esta memoria descriptiva tienen los significados siguientes.
Residuos de aminoácidos: Arg = arginilo, Glu = glutamilo, Gly = glicilo, Pro = prolilo, hPro = homoprolilo, Azt = azetidina-2-carbonilo, Phg = fenilglicilo, Phe = fenilalanilo, hPhe = homofenilalanilo, 1-Tiq = 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-1-carbonilo, 3-Tiq = 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carbonilo, Cha = \beta-ciclohexilalanilo, hCha = \alpha-amino-\gamma-ciclohexilbutirilo; NMI = N-metilindol-2-oílo, Ohi = cis-optahidroindol-2-oílo, 1-Piq = perhidro-isoquinolina-1-carbonilo, 3-Piq = perhidro-isoquinolina-3-carbonilo, Met = metionilo, Met(O_{2}) = S,S-dioxometionilo.
Agm = agmatina
Boc = t-butiloxicarbonilo
Bn = bencilo
Cbz = benciloxicarbonilo
DCC = diciclohexilcarbodiimida
DMS = dimetilformamida
Et = etilo
DMSO = dimetilsulfóxido
EtOAc = acetato de etilo
Et_{2}O = dietil-éter
EtOH = etanol
Fmoc = 9-fluorenilmetoxicarbonilo
FAB-MS = espectro de masas con bombardeo de átomos rápidos
FD-MS = espectro de masas con desorción de campo
IS-MS = espectro de masas con pulverización iónica
HRMS = espectro de masas de alta resolución
HOBT = 1-hidroxibenzotriazol hidratado
IR = espectro infrarrojo
RPHPLC = cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa
Ph = fenilo
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TLC = cromatografía en capa delgada
Se emplearon los parámetros siguientes para RPHPLC:
Disolvente A: ácido clorhídrico acuoso al 0,05% (1,5 ml de ácido clorhídrico concentrado en 3 l de agua); disolvente B: acetonitrilo; gradiente: como se define en cada ejemplo; método 1: columna: Vydac C_{18} - 2,5 cm x 25 cm; caudal: 5 ml/minuto; método 2: columna: Vydac C_{18} - 5 cm x 25 cm; caudal: 10 ml/minuto; método 3: columna: Vydac C_{18} - 2,5 cm x 50 cm; caudal: 10 ml/minuto.
A no ser que se indique otra cosa, los ajustes de pH y el tratamiento de acabado se realizan con soluciones acuosas de ácidos o bases.
En los ejemplos, cuando se indica ^{1}H-NMR, el producto proporcionado por la reacción se caracterizó por NMR del protón para confirmar la obtención del compuesto indicado; IR sin los datos indica análogamente que se obtuvo un espectro infrarrojo satisfactorio. Se utilizó HRMS para confirmar la masa exacta de los compuestos para los cuales no se obtuvo un análisis elemental satisfactorio para el producto del procedimiento descrito; se indica la composición elemental del ion observado (v.g., MH^{+}).
En los casos en que cualesquiera de los compuestos y ejemplos enumerados más adelante, y/o las tablas y figuras relativas a o que incluyan tales compuestos o ejemplos, no estén comprendidos dentro del alcance de las reivindicaciones que se acompañan, debe entenderse que los mismos se exponen para propósitos de comprensión de la invención, y se proporcionan por consiguiente en un sentido ilustrativo.
Ejemplo de Referencia 1
37
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-OBn
A una solución de Boc-D-Phe-OH (89,1 g, 336 mmol), hidrocloruro de Pro-OBn (81,2 g, 336 mmol), HOBT (50 g, 370 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (176 ml, 1,008 mmol) a 0ºC en diclorometano (600 ml), se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (71 g, 370 mmol). Después de agitar durante 18 horas, la mezcla se diluyó con dietil-éter (1 l) y se lavó sucesivamente tres veces con ácido cítrico 1N (250 ml), una sola vez con agua (250 ml), tres veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (250 ml) y una sola vez con cloruro de sodio acuoso saturado (250 ml). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar 140 g (92,5%) de una espuma de color amarillo pálido.
FD-MS, m/e 452 (M^{+})
^{1}H NMR
B) Preparación de D-Phe-Pro-OBn\cdotTFA
A una solución mantenida en agitación de Boc-D-Phe-Pro-OBn (68 g, 150 mmol) en diclorometano (50 ml) a 0ºC, se añadió anisol (20 ml) seguido por ácido trifluoroacético (400 ml). Después de agitar durante 3 horas, se evaporó el disolvente a vacío y el residuo aceitoso espeso se disolvió en dietil-éter (1,5 l) y se refrigeró (72 horas). El precipitado blanco se filtró, se lavó con dietil-éter (300 ml) y se secó para dar 59,4 g (85%) de un polvo blanco.
^{1}H NMR
C) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OBn
A una solución mantenida en agitación de D-Phe-Pro-OBn\cdotTFA (12 g, 25,7 mmol) y trietilamina (7 ml, 50,2 mmol) en diclorometano (200 ml) a -78ºC se añadió gota a gota cloruro de etanosulfonilo (2,65 ml, 28,3 mmol) por medio de un embudo de adición. El recipiente de reacción se calentó a 0ºC y, después de agitar durante 4 horas, se añadió agua (10 ml). La fase orgánica se lavó tres veces con ácido clorhídrico 1N (100 ml), una sola vez con una solución saturada de cloruro de sodio (100 ml) y el disolvente se eliminó luego a vacío. El producto se purificó por cromatografía súbita sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexanos (6:4). Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y se concentraron para dar 6,62 g (58%) de un aceite amarillo que solidificó.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 445 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{28}N_{2}O_{5}S:
Calc: C, 62,14; H, 6,35; N, 6,30;
Enc: C, 61,87; H, 6,37; N, 6,18.
D) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OH
A una solución mantenida en agitación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OBn (4,5 g, 10,1 mmol) en p-dioxano (150 ml) se añadió una solución de hidróxido de litio monohidratado (2,1 g, 50,5 mmol) en agua (75 ml). Después de agitar durante 16 horas, el volumen de la solución se redujo a la mitad a vacío, y se diluyó la solución con agua (300 ml) y NaOH 0,1 N (100 ml). La fase acuosa se lavó luego dos veces con dietil-éter (250 ml), se acidificó con ácido cítrico sólido, y se extrajo luego tres veces con acetato de etilo (150 ml). Los extractos en acetato de etilo reunidos se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (200 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 3,6 g (90%) de un sólido blanco.
FD-MS, m/e 355 (M^{+})
Análisis para C_{16}H_{22}N_{2}O_{5}S:
Calc: C, 54,22; H, 6,26; N, 7,90;
Enc: C, 54,40; H, 6,42; N, 7,85.
E) Preparación de N,N'-di-Boc-S-metilisotiurea
A una solución mantenida en agitación de dicarbonato de di-t-butilo (100 g, 458 mmol) en t-butanol (300 ml) se añadió una solución de sulfato de bis-S-metilisotiurea (32,7 g, 117 mmol) en agua (150 ml), seguido por una solución de hidróxido de sodio (19,2 g, 480 mmol) en agua (150 ml). Después de agitar durante 48 horas, la mezcla se concentró hasta aproximadamente un tercio del volumen original a vacío y se diluyó con dietil-éter (500 ml). La fase orgánica se lavó una sola vez con agua (250 ml), tres veces con ácido cítrico 1N (250 ml) y una vez más con agua (250 ml). La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 42 g (62%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
F) Preparación de N^{g},N^{g'}-di-Boc-agmatina
A una solución mantenida en agitación de 1,4-butanodiamina (23 g, 258 mmol) en 2:1 dimetilformamida:agua (300 ml) se añadió una solución de N,N'-di-Boc-S-metilisotiourea (15 g, 52 mmol) en dimetilformamida (100 ml) por medio de un embudo de adición. Después de agitar durante 2 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se disolvió en ácido cítrico 1N (250 ml), se diluyó con agua (250 ml) y se lavó con acetato de etilo (250 ml). La fase de acetato de etilo se extrajo luego con ácido cítrico 1N (100 ml) y las fases acuosas reunidas se basificaron con carbonato de sodio, se saturaron con cloruro de sodio sólido, y se extrajeron dos veces con acetato de etilo (250 ml). Los extractos en acetato de etilo reunidos se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (200 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 12,5 g (73%) de un jarabe espeso.
^{1}H NMR
G) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-Agm(Boc)_{2}
A una solución mantenida en agitación de N^{g}, N^{g'}-di-Boc-agmatina (2 g, 6 mmol) en diclorometano (30 ml) se añadió EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OH (2,1 g, 6 mmol), HOBT (810 mg, 6 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (1,6 g, 12 mmol), seguido por hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (1,4 g, 73 mmol). Después de agitar durante 20 horas, la solución se diluyó con acetato de etilo (300 ml) y se lavó tres veces con ácido cítrico 1N (150 ml), una sola vez con agua (150 ml), y dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de acetato de etilo:hexanos (1:4) hasta acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto (basadas en TLC) se reunieron y se concentraron para dar 2,4 g (60%) de un aceite espeso.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 668 (MH^{+})
H) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
Una suspensión mantenida en agitación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-Agm(Boc)_{2} (1,6 g, 2,4 mmol) en anisol (1 ml) se disolvió en ácido trifluoroacético (20 ml) y se dejó en agitación durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se eliminó luego el disolvente a vacío y el residuo se repartió entre agua (100 ml) y dietil-éter (50 ml). La fase acuosa se lavó nuevamente con dietil-éter (50 ml) y se concentró luego parcialmente y se liofilizó para dar 1,4 g de sal trifluoroacetato bruta. La mitad de este material se disolvió luego en agua y se purificó por RPHPLC (método 1); 98/2 (A/B): aumento hasta 50/50 (A/B), 60 minutos) para dar 490 mg (81%) de un polvo blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 467 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{34}N_{6}O_{4}S\cdotHCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 48,41; H, 7,16; N, 16,13; Cl, 6,80;
Enc: C, 48,01; H, 6,81; N, 6,15; Cl, 6,97.
Ejemplo de Referencia 2
38
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-Agm\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Cha-Pro-OBn
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se preparó Boc-D-Cha-Pro-OBn a partir de Boc-D-Cha-OH y Pro-OBn\cdotHCl con 91% de rendimiento (109 g).
FD-MS, m/e 458 (M^{+})
B) Preparación de D-Cha-Pro-OBn\cdotTFA
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-B, se preparó D-Cha-Pro-OBn\cdotTFA (116% del rendimiento teórico, 130 g).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 359 (M^{+})
C) Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-OBn
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-C, se preparó EtSO_{2}-D-Cha-Pro-OBn (20% de rendimiento, 2,3 g).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 450 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{34}N_{2}O_{5}S:
Calc: C, 61,31; H, 7,61; N, 6,22;
Enc: C, 61,55; H, 7,59; N, 6,28.
D) Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-OH
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-D, se preparó EtSO_{2}-D-Cha-Pro-OH (48% de rendimiento, 0,78 g).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 361 (M^{+})
E) Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-Agm(Boc)_{2}
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 400 mg (40%) de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-Agm(Boc)_{2} a partir de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-OH y N^{g}-N^{g'}-di-Boc-Agm.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 674 (MH^{+})
F) Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-Agm\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se preparó EtSO_{2}-D-Cha-Pro-Agm\cdotHCl (45% de rendimiento, 100 mg). El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 50/50 (A/B), 60 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 473 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{40}N_{6}O_{4}S\cdot1,2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 47,20; H, 8,15; N, 15,73; Cl, 7,96;
Enc: C, 47,47; H, 7,84; N, 16,10; Cl, 7,80.
\newpage
Ejemplo de Referencia 3
39
EtOCO-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
A) Preparación de EtOCO-D-Phe-Pro-OH
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-C y 1-D utilizando cloroformiato de etilo en lugar de cloruro de etanosulfonilo, se prepararon 6,59 g (92%) de EtOCO-D-Phe-Pro-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 335 (M^{+})
Análisis para C_{17}H_{22}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 61,07; H, 6,63; N, 8,38;
Enc: C, 60,88; H, 6,72; N, 8,14.
B) Preparación de EtOCO-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 2,1 g (54%) de EtOCO-D-Phe-Pro-Agm(Boc)_{2} a partir de EtOCO-D-Phe-Pro-OH y N^{g},N^{g'}-di-Boc-Agm. A continuación, por un método sustancialmente equivalente al descrito en el ejemplo 1-H, se prepararon 390 mg (77%) de EtOCO-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 50/50 (A/B), 60 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 447 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{34}N_{6}O_{4}\cdot0,9HCl\cdot0,2TFA\cdotH_{2}O:
Calc: C, 51,70; H, 7,22; N, 16,15; Cl, 6,13;
Enc: C, 51,73; H, 7,20; N, 16,54; Cl, 6,36.
Ejemplo de Referencia 4
40
NMI-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
(Monohidrocloruro de N-[(1-metil-1H-indol-2-il)carbonil]-D-fenilalanil-N-[4-[(aminoiminometil)amino]butil]-L-prolinamida)
A) Preparación de NMI-D-Phe-Pro-OH
A una solución de ácido N-metil-indol-2-carboxílico (2,6 g, 14,9 mmol) en tetrahidrofurano seco (45 ml) se añadió pentafluorofenol (3 g, 16,5 mmol), seguido por 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (3,2 g, 16,5 mmol). La mezcla se mantuvo en agitación a reflujo durante 3,5 horas y se enfrió luego a la temperatura ambiente. Se añadió a esta mezcla una solución de D-Phe-Pro-OBn\cdotTFA (7 g, 14,9 mmol) y N,N-diisopropiletilamida (4 g, 30 mmol) en tetrahidrofurano (25 ml). Después de agitar durante 2 horas más, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml), se lavó luego tres veces con bisulfato de sodio acuoso 0,1 N (250 ml) y tres veces con carbonato de potasio acuoso 1 N (250 ml). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar 6,5 g de un sólido amorfo (una mezcla del producto deseado, contaminado con pentafluorofenol). Este producto bruto se hidrolizó luego por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-D para proporcionar 3,8 g (62%) de un sólido blanquecino.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 419 (M^{+})
B) Preparación de NMI-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 900 mg (20%) de NMI-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2. A continuación, por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 144 mg (31%) de NMI-D-Phe-Pro-Agm\cdotHCl. El producto bruto se disolvió en ácido acético glacial y se purificó por RPHPLC (método 1, 90/10 (A/B), aumento hasta 40/60 (A/B), 80 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 532 (M^{+})
Análisis para C_{29}H_{37}N_{7}O_{3}\cdot0,9HCl\cdot0,6TFA\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 56,46; H, 6,29; N, 15,27; Cl, 4,97;
Enc: C, 56,77; H, 6,58; N, 15,35; Cl, 5,28.
Ejemplo de Referencia 5
41
D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{6}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-OH
A una solución de Boc-D-Phe-Pro-OBn (145 g, 320 mmol) en p-dioxano (660 ml) se añadió una solución de hidróxido de litio monohidratado (54 g, 1.280 mmol) en agua (330 ml) con agitación enérgica. Después de 4 horas, la solución se concentró a vacío hasta aproximadamente la cuarta parte del volumen original y se diluyó con agua (350 ml) e hidróxido de sodio 0,1 N (100 ml). La fase acuosa se lavó tres veces con dietil-éter (250 ml) y se acidificó luego a pH 3 con ácido cítrico sólido, lo que causó la formación de un precipitado. Se filtró el sólido, se lavó dos veces con agua, y se secó luego a vacío, para dar 91 g (78%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 363 (M^{+})
B) Preparación de N^{g},N^{g'}-di-Boc-6-aminohexilguanidina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-F, se prepararon 4,7 g (66%) de N^{g},N^{g'}-di-Boc-6-aminohexilguanidina a partir de 1,6-hexanodiamina.
C) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{6}NHC(NBoc)NH(Boc)
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,3 g (62%) de Boc-D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{6}NHC(NBoc)NH(Boc) a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y N^{g},N^{g'}-di-Boc-6-aminohexilguanidina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 703 (M^{+})
D) Preparación de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{6}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon aproximadamente 100 mg de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{6}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl.
FD-MS, m/e 389 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{34}N_{6}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot0,9TFA\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 49,97; H, 6,95; N, 15,34;
Enc: C, 49,60; H, 7,13; N, 15,23.
Ejemplo de Referencia 6
42
D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{5}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de N^{g},N^{g'}-di-Boc-5-aminopentilguanidina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-F, se prepararon 1,73 g (72%) de N^{g},N^{g'}-di-Boc-5-aminopentilguanidina a partir de 1,5-pentanodiamina.
FD-MS, m/e 345 (M^{+})
^{1}H NMR
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{5}NHC(NBoc)NH(Boc)
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,9 g (92%) de Boc-D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{5}NHC(NBoc)NH(Boc) a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y N^{g},N^{g'}-di-Boc-5-aminopentilguanidina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 689 (M^{+})
C) Preparación de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{5}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon aproximadamente 100 mg de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{5}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 40/60 (A/B), 40 minutos).
FD-MS, m/e 389 (M^{+})
Análisis para C_{20}H_{32}N_{6}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot0,9TFA\cdot0,7H_{2}O:
Calc: C, 48,71; H, 6,79; N, 15,63;
Enc: C, 48,34; H, 6,68; N, 16,01.
Ejemplo de Referencia 7
43
D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{3}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{3}NHC(NBoc)NH(Boc)
A una solución de 1,3-diaminopropano (2,2 g, 30 mmol) en dimetilformamida (25 ml) se añadió una solución de N,N'-di-Boc-S-metilisotiourea (2,9 g, 10 mmol) en dimetilformamida (25 ml). Después de agitar durante 1 hora, la mezcla se diluyó con diclorometano (400 ml) y se lavó dos veces con una mezcla de bicarbonato de sodio acuoso saturado y cloruro de sodio acuoso saturado (200 ml), y una sola vez con cloruro de sodio acuoso saturado (250 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró parcialmente a vacío hasta un volumen de aproximadamente 200 ml.
Se añadió luego a esta solución Boc-D-Phe-Pro-OH (3,6 g, 10 mmol), HOBT (1,3 g, 10 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (1,3 g, 10 mmol), seguido por 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida\cdotHCl (2,1 g, 11 mmol). Después de agitar durante 16 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo (250 ml). La fase orgánica se lavó tres veces con ácido cítrico 1 N (200 ml), una sola vez con agua (100 ml), dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml) y una sola vez con cloruro de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió luego sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de acetato de etilo/hexanos (1:4) hasta acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se concentraron para dar 2,6 g (40%) de un aceite espeso incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 661 (M^{+})
B) Preparación de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{3}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 460 mg (71%) de D-Phe-Pro-NH(CH_{2})_{3}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 40/60 (A/B), 40 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 361 (M^{+})
Análisis para C_{18}H_{28}N_{6}O_{2}\cdotHCl\cdot1,1TFA\cdot1,1H_{2}O:
Calc: C, 44,66; H, 6,20; N, 15,47;
Enc: C, 44,69; H, 6,10; N, 15,19.
Ejemplo de Referencia 8
44
D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-CH=CHCH_{2}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de N^{g},N^{g'}-di-Boc-4-amino-trans-2-butenilguanidina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-F, se prepararon 2,4 g (42%) de N^{g},N^{g'}-di-Boc-4-amino-trans-2-butenilguanidina a partir de 1,4-diamino-trans-2-buteno.
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-CH=CHCH_{2}NHC(NBoc)NHBoc
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 2,7 g (55%) de Boc-D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-CH=CHCH_{2}NHC(NBoc)NHBoc a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y N^{g},N^{g'}-di-Boc-4-amino-trans-2-butenil-guanidina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 673 (M^{+})
C) Preparación de D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-CH=CHCH_{2}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon aproximadamente 100 mg de D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-CH=CHCH_{2}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 40/60 (A/B), 40 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 373 (M^{+})
Análisis para C_{19}H_{28}N_{6}O_{2}\cdotHCl\cdot0,5TFA\cdot2,5H_{2}O:
Calc: C, 47,01; H, 6,81; N, 16,45;
Enc: C, 47,36; H, 6,53; N, 16,70.
Ejemplo de Referencia 9
45
D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NH)NH_{2}\cdot2TFA
A) Preparación de p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NBoc)NHBoc
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-F, se prepararon 2,3 g (42%) de p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NBoc)NHBoc a partir de p-xilenodiamina.
^{1}H NMR
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NBoc)NHBoc
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 2,8 g (63%) de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NBoc)NHBoc a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NBoc)NHBoc.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 723 (M^{+})
C) Preparación de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHC(NH)NH_{2}\cdot2TFA
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 725 mg (81%) de la sal bis-TFA del título y no se purificó ulteriormente por RPHPLC.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 423 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{30}N_{6}O_{2}\cdot2,1TFA\cdotH_{2}O:
Calc: C, 48,05; H, 5,05; N, 12,36;
Enc: C, 48,06; H, 4,85; N, 12,28.
Ejemplo 10
46
D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de N-Boc-p-(aminometil)bencilamina
A una solución mantenida en agitación de p-xilenodiamina (10 g, 73 mmol) en dimetilformamida/agua (1:1, 100 ml) se añadió dicarbonato de di-t-butilo (8 g, 37 mmol). Después de agitar durante 20 horas, la mezcla se concentró a vacío y el residuo se repartió entre dietil-éter (200 ml) y ácido cítrico 1 N (200 ml). La fase acuosa se lavó de nuevo con dietil-éter (200 ml), y se basificó luego con bicarbonato de sodio sólido y se saturó con cloruro de sodio sólido. La fase acuosa se extrajo luego cuatro veces con acetato de etilo (200 ml). Los extractos en acetato de etilo reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 2,1 g (24%) de un aceite espeso.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 237 (MH^{+})
Análisis para C_{13}H_{20}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 66,07; H, 8,53; N, 11,85;
Enc: C, 66,33; H, 8,44; N, 12,11.
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHBoc
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,1 g (63%) de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHBoc a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y N-Boc-p-(aminometil)bencil-amina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 581 (M^{+})
Análisis para C_{32}H_{44}N_{4}O_{6}:
Calc: C, 66,19; H, 7,64; N, 9,65;
Enc: C, 65,99; H, 7,63; N, 9,42.
C) Preparación de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon aproximadamente 100 mg de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 40/60 (A/B), 40 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 381 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{28}N_{4}O_{2}\cdotHCl\cdot1,1TFA\cdotH_{2}O:
Calc: C, 51,87; H, 5,77; N, 10,00;
Enc: C, 51,78; H, 5,88; N, 10,28.
Ejemplo 11
47
D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de N-Boc-m-(aminometil)bencilamina
Por un procedimiento sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 10-A, se prepararon 2,6 g (30%) de N-Boc-m-(aminometil)bencilamina a partir de m-xilenodiamina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 237 (MH^{+})
Análisis para C_{13}H_{20}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 66,07; H, 8,53; N, 11,85;
Enc: C, 65,81; H, 8,48; N, 11,98.
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHBoc
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,6 g (95%) de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NHBoc a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y N-Boc-m-(aminometil)bencilamina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 581 (M^{+})
C) Preparación de D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon aproximadamente 100 mg de D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 381 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{28}N_{4}O_{2}\cdotHCl\cdotTFA\cdotH_{2}O:
Calc: C, 52,51; H, 5,87; N, 10,21;
Enc: C, 52,13; H, 6,21; N, 10,48.
\newpage
Ejemplo de Referencia 12
48
D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-4-(aminometil)ciclohexano\cdotHCl
A) Preparación de ácido N-Boc-trans-4-(aminometil)ciclohexanocarboxílico
A una solución de ácido trans-4-(aminometil)-ciclohexanocarboxílico (50 g, 318 mmol) en hidróxido de sodio 1 N (334 ml, 334 mmol) y t-butanol (400 ml) se añadió una solución de dicarbonato de di-t-butilo (73 g, 334 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml). Después de agitar durante 20 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y se repartió el residuo entre agua (500 ml) y dietil-éter (250 ml). La fase acuosa se lavó de nuevo con dietil-éter (250 ml) y se acidificó luego con ácido cítrico sólido, lo que dio como resultado la formación de un precipitado blanco. Se filtró el sólido, se lavó dos veces con agua (100 ml) y se secó a vacío para dar 48 g (59%) de un polvo blanco.
^{1}H NMR
B) Preparación de HOCH_{2}-trans-4-(N-Boc-aminometil)ciclohexano
A una solución mantenida en agitación de ácido N-Boc-trans-4-(aminometil)ciclohexanocarboxílico (15 g, 58 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) a 0ºC, se añadió N-metilmorfolina (5,9 g, 58 mmol) seguida por cloroformiato de etilo (6,3 g, 58 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió borohidruro de sodio (6,5 g, 175 mmol), y se añadió luego metanol (300 ml) mediante un embudo de adición durante 5 minutos. La mezcla se mantuvo en agitación durante 1 hora y a continuación se eliminaron los disolventes a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y se lavó dos veces con ácido cítrico 1 N (250 ml), una sola vez con agua (100 ml) dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (250 ml) y una sola vez con cloruro de sodio acuoso saturado (250 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar 13 g (91%) del compuesto del título.
^{1}H NMR
C) Preparación de NH_{2}CH_{2}-trans-4-(N-Boc-amino-metil)ciclohexano
A una solución mantenida en agitación de HOCH_{2}-trans-4-(N-Boc-aminometil)ciclohexano (13 g, 53 mmol) y trifenilfosfina (21 g, 80 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml) se añadió azodicarboxilato de dietilo (13,9 g, 80 mmol), seguido por una solución de difenilfosforil-azida (22 g, 80 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml). Después de agitar durante 16 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de acetato de etilo/hexanos (1:3) hasta acetato de etilo/hexanos (3:1).
Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y se concentraron para dar 17,4 g de producto bruto (contaminado con un compuesto de Rf más alto). La azida bruta se disolvió en metanol (200 ml) y se añadió esta solución a una suspensión mantenida en agitación de Na_{2}S\cdot9H_{2}O finamente molido (51 g, 212 mmol) y trietilamina (1 g, 11 mmol) en metanol (100 ml). La mezcla resultante se calentó a reflujo (16 horas), se enfrió luego a la temperatura ambiente y se eliminaron los disolventes a vacío. El residuo se diluyó con agua (250 ml) y se acidificó con ácido cítrico sólido. La fase acuosa se lavó dos veces con acetato de etilo (250 ml), se basificó con bicarbonato de sodio sólido, y se saturó con cloruro de sodio sólido. La fase acuosa se extrajo luego tres veces con acetato de etilo (200 ml) y los extractos reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 6,4 g (45%) de un aceite espeso.
^{1}H NMR
D) Preparación de N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-4-(N-Boc-aminometil)ciclohexano
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 4,5 g (74%) de N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-4-(N-Boc-aminometil)ciclohexano a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y NH_{2}CH_{2}-trans-4-(N-Boc-aminometil)ciclohexano.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 587 (M^{+})
E) Preparación de D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-4-(aminometil)ciclohexano\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 588 mg (75%) de D-Phe-Pro-NHCH_{2}-trans-4-(aminometil)ciclohexano\cdotHCl. En este caso, la RPHPLC analítica de la sal de TFA intermedia era muy limpia, pero la sal era higroscópica. Por ello la sal se disolvió en HCl 0,1 N (20 ml), se ajustó el pH a 5, y se liofilizó de nuevo la muestra para dar la sal hidrocloruro estable como un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 387 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{34}N_{4}O_{2}\cdotHCl\cdotTFA\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 50,30; H, 7,04; N, 9,78;
Enc: C, 50,44; H, 7,20; N, 9,62.
Ejemplo 13
49
D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 8 g de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NO_{2} a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y p-NO_{2}-bencilamina\cdotHCl. El compuesto intermedio se disolvió en etanol (250 ml) y se calentó a reflujo. A esta solución mantenida en agitación se añadió una solución de Na_{2}S_{2}O_{4} (12,3 g, 70 mmol) en agua (125 ml). Después de agitar a reflujo durante 2 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (250 ml) y agua (250 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (250 ml) y la fase orgánica reunida se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar 2,4 g (21%) de un sólido amarillo claro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 466 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{34}N_{4}O_{4}:
Calc: C, 66,93; H, 7,34; N, 12,01;
Enc: C, 66,69; H, 7,32; N, 12,28.
B) Preparación de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 180 mg (60%) de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B), 60 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 366 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{26}N_{4}O_{2}\cdotHCl\cdot0,6TFA\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 55,51; H, 6,00; N, 11,66;
Enc: C, 55,16; H, 6,14; N, 11,57.
Ejemplo 14
50
D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 13-A, se prepararon 3 g (23%) de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2} a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y p-NO_{2}-fenetilamina\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 480 (M^{+})
Análisis para C_{27}H_{36}N_{4}O_{4}:
Calc: C, 67,48; H, 7,55; N, 11,66;
Enc: C, 67,30; H, 7,54; N, 12,34.
B) Preparación de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 175 mg (58%) de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 1, 98/2 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B), 60 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 380 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{28}N_{4}O_{2}\cdotHCl\cdot0,7TFA\cdot0,7H_{2}O:
Calc: C, 55,18; H, 6,15; N, 11,00;
Enc: C, 55,12; H, 6,18; N, 10,99.
Ejemplo de Referencia 15
51
D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de D-fenilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de N-(aminometil)benzonitrilo\cdotTFA
A una suspensión mantenida en agitación de hidruro de sodio (2,2 g, 56 mmol, dispersión al 60% en aceite) en tetrahidrofurano (100 ml) se añadió 4-(bromometil)benzonitrilo (10 g, 51 mmol). Se añadió lentamente a esta mezcla por medio de un embudo de adición una solución de iminodicarboxilato de di-t-butilo (12,2 g, 56 mmol). Después de agitar durante 16 horas, la mezcla se diluyó con dietil-éter (300 ml) y se lavó dos veces con agua (150 ml). La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró. El residuo resultante se disolvió luego en una cantidad mínima de diclorometano. Se añadió anisol (10 ml), y la solución se enfrió a 0ºC. La solución se diluyó luego con ácido trifluoroacético (200 ml) y se dejó en agitación durante 1 hora. Se eliminó luego el disolvente a vacío y el residuo aceitoso se agitó enérgicamente con dietil-éter (100 ml) y, después de unos cuantos minutos, solidificó el producto. El precipitado se filtró, se lavó con dietil-éter, y se secó a vacío para dar 11,3 g (90%) de un polvo blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 132 (M^{+})
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 7,4 g (78%) de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y p-(aminometil)benzonitrilo\cdotTFA. En este caso, el producto se purificó por recristalización en dietil-éter.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 476 (M^{+})
C) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}
Se borboteó sulfuro de hidrógeno gaseoso a través de una solución de Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN (2 g, 4,2 mmol) en piridina (25 ml) y trietilamina (2,5 ml) durante 30 minutos. El recipiente de reacción se cerró luego herméticamente y se dejó en reposo a la temperatura ambiente durante 2 días. La solución se diluyó luego con agua (100 ml) y se extrajo dos veces con acetato de etilo (200 ml). La fase orgánica reunida se lavó dos veces con cloruro de sodio acuoso saturado, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío.
El residuo se disolvió en acetona (50 ml), se añadió yoduro de metilo (10 ml), y la solución se calentó a reflujo durante 2 horas. Los disolventes se eliminaron a vacío, se disolvió el residuo en metanol (20 ml), se añadió NH_{4}OAc (712 mg, 9,2 mmol), y la solución se calentó a reflujo (12 horas). Se eliminó de nuevo el disolvente a vacío, se disolvió el residuo en ácido cítrico 1 N (100 ml) y la fase acuosa se lavó dos veces con acetato de etilo (200 ml), se basificó luego con bicarbonato de sodio sólido, se saturó con cloruro de sodio sólido, y se extrajo dos veces con acetato de etilo (200 ml). Los extractos en acetato de etilo reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 1,4 g (67%) de un aceite espeso.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 494 (M^{+})
D) Preparación de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-H, se prepararon 7,7 g (57%) de D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 3, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 300 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 394 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{27}N_{5}O_{2}\cdotHCl\cdot1,4TFA\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 49,76; H, 5,12; N, 11,70;
Enc: C, 49,75; H, 5,19; N, 11,58.
Ejemplo 16
52
D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot0,75HCl
A) Preparación de m-(aminometil)benzonitrilo\cdotTFA
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 15-A, se prepararon 10,8 g (86%) de m-(aminometil)-benzonitrilo\cdotTFA a partir de m-(bromometil)benzonitrilo.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 132 (M^{+})
B) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 7,5 g (79%) de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN a partir de Boc-D-Phe-Pro-OH y m-(aminometil)benzonitrilo\cdotTFA. En este caso, el producto se purificó por recristalización en dietil-éter.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 476 (M^{+})
Análisis para C_{27}H_{32}N_{4}O_{4}:
Calc: C, 68,05; H, 6,77; N, 11,76;
Enc: C, 68,27; H, 6,82; N, 11,96.
C) Preparación de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 15-C, se prepararon 1,1 g (53%) de Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}.
FD-MS, m/e 494 (M^{+})
D) Preparación de D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH2\cdot0,75HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 0,65 g (63%) de D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot0,75HCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 75/25 (A/B), 120 minutos).
FD-MS, m/e 394 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{27}N_{5}O_{2}\cdot0,75HCl\cdot1,2TFA\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 51,72; H, 5,33; N, 12,36; Cl, 4,69;
Enc: C, 51,79; H, 4,93; N, 11,96; Cl, 4,82.
Ejemplo 17
53
D-hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de D-homoprolil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida]
A) Preparación de Cbz-D-hPro-OH
Se disolvió D-hPro-OH (5,0 g, 38,7 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) y agua (30 ml). Se ajustó el pH de la solución a 9,5 con hidróxido de sodio 2 N y se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (5,5 ml, 38,7 mmol), manteniéndose el pH a 9,5 con hidróxido de sodio 2 N. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora más a la temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente orgánico a vacío, y se añadieron dietil-éter (100 ml) y agua (50 ml) al residuo. Se separó la capa acuosa, se ajustó el pH de la solución a 2,8 con ácido clorhídrico 3 N y se añadió acetato de etilo (150 ml). Se separó la capa orgánica y se secó (MgSO_{4}); el filtrado se concentró a vacío para dar 9,6 g (95%) de un aceite claro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 264 (MH^{+})
B) Preparación de Cbz-D-hPro-Pro-OH
Se disolvió Cbz-D-hPro-OH (9,5 g, 36 mmol) en acetato de etilo (100 ml) y la solución se enfrió a 0ºC. Se añadieron a la solución 2,4,5-triclorofenol (7,1 g, 36 mmol) y 1,3-diciclohexilcarbodiimida (7,4 g, 36 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a 0ºC y 1 hora a la temperatura ambiente. Se filtró el precipitado y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en piridina (100 ml), y se añadieron Pro-OH (4,2 g, 36 mmol), y trietilamina (5,0 ml, 36 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente (24 horas). Se eliminó el disolvente de reacción a vacío para dar un aceite. El residuo se disolvió en agua (100 ml), se añadió dietil-éter (50 ml) y se ajustó el pH a 9,5 con hidróxido de sodio 2 N. La capa acuosa se extrajo dos veces con dietil-éter. Se separó la capa acuosa, se ajustó el pH a 2,8 con ácido clorhídrico 3 N y se añadió acetato de etilo (150 ml). Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO_{4}), y el filtrado se evaporó a vacío para dar un sólido amorfo (11,4 g, 88%).
FD-MS, m/e 361 (M^{+})
Análisis para C_{19}H_{24}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 63,32; H, 6,71; N, 7,77;
Enc: C, 63,42; H, 6,84; N, 7,96.
C) Preparación de Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 2,2 g (84%) de Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CN a partir de Cbz-D-hPro-Pro-OH y p-NH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}CN\cdotTFA.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 474 (M^{+})
Análisis para C_{27}H_{30}N_{4}O_{4}:
Calc: C, 68,34; H, 6,37; N, 11,81;
Enc: C, 68,36; H, 6,47; N, 11,57.
D) Preparación de D-hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 15-C, se preparó Cbz-hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}
H_{4}C(NH)NH_{2} (28 mmol, teórico). Este material bruto se disolvió luego en ácido acético (350 ml) y se borboteó HBr gaseoso a través de la solución durante 30 minutos. Después de agitar durante 1 hora más, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en agua (200 ml) y se lavó dos veces con acetato de etilo (100 ml). La fase acuosa se ajustó luego a pH 4 con una resina cambiadora de iones (Bio Rad AG1-X8, en forma básica) y se liofilizó para dar un sólido blanco harinoso. El producto se redisolvió luego en agua (25 ml) y se purificó por RPHPLC preparativa (método 3, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 300 minutos) para dar 5 g (41%) de hPro-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot0,9HCl\cdot0,9 HBr\cdot0,5H_{2} O.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 357 (M^{+})
Análisis para C_{19}H_{27}N_{5}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot0,9HBr\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 48,34; H, 6,36; N, 14,83; Cl, 6,76; Br, 15,23;
Enc: C, 48,66; H, 6,36; N, 14,62; Cl, 7,14; Br, 14,90.
Ejemplo 18
54
1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
(Dihidrocloruro de N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida)
A) Preparación de Cbz-D-1-Piq-Pro-OH
Una solución de ácido 1-isoquinolinolinacarboxílico (50 g, 0,288 mmol) en EtOH (150 ml) y 60 ml de HCl 5 N se redujo sobre 5% Rh/Al_{2}O_{3} (14 g) a 52 bares (750 psi) de hidrógeno en un aparato de alta presión a 50ºC durante 17 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas, y el filtrado se concentró a vacío. El sólido se trituró con agua, se filtró y se secó para dar ácido DL-perhidro-1-isoquinolinacarboxílico (DL-1-Piq-OH) (30 g, 48%) FD-MS 184 (MH+).
Se disolvió DL-1-Piq-OH (30,2 g, 137 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) y agua (150 ml). Se ajustó el pH de la solución a 9,8 con NaOH 5 N, y se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (21,6 ml, 151 mmol) y se mantuvo el pH a 9,5 con NaOH 2 N. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas adicionales a la temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente orgánico a vacío, y se añadieron al residuo dietil-éter (150 ml) y agua (50 ml). Se separó la capa acuosa, se ajustó el pH de la solución a 2,5 con HCl 5 N, y se añadió acetato de etilo (200 ml). La capa orgánica se separó y se secó (MgSO_{4}) y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro. Se disolvió el aceite en dietil-éter (150 ml) y la solución se dejó en reposo a la temperatura ambiente (24 horas). El precipitado se filtró y se secó para dar ácido 2-Cbz-DL-perhidro-1-isoquinolinacarboxílico (Cbz-DL-1-Piq-OH) (32 g, 75%) FD MS 318 (MH+).
Se disolvió Cbz-DL-1-Piq-OH (31,8 g, 100 mmol) en DMS (100 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadieron a la mezcla de reacción t-butil-éster de prolina (17,1 g, 100 ml), 1-hidroxibenzotriazol (13,5 g, 100 ml), y DCC (20,6 g, 100 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 0ºC y 24 horas a la temperatura ambiente. El precipitado de la reacción se filtró y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en EtOAc (200 ml) y agua (100 ml). Se separó la capa orgánica, y se lavó sucesivamente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), y el filtrado se evaporó para dar un aceite que se secó para dar t-butil-éster de 2-Cbz-DL-perhidro-1-isoquinolinacarbonil-L-prolilo (Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu) (47,0 g, 100%) FAB-MS (470) (MH+).
Se puso Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu (47,0 g, 100 mmol) en un matraz de fondo redondo que contenía ácido trifluoroacético (100 ml), CH_{2}Cl_{2} (35 ml), anisol (5 ml) y se agitó a la temperatura ambiente (1 hora). Se concentró la mezcla de reacción a vacío sin calentamiento, y se añadieron dietil-éter (100 ml) y agua (100 ml). El pH de la solución se ajustó a 9,8 con NaOH 5 N. Se separó la capa acuosa, se ajustó el pH de la solución a 2,5 con HCl 5 N, y se añadió acetato de etilo (200 ml). Se separó la capa orgánica y se secó (MgSO_{4}) y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro. El aceite se disolvió en dietil-éter (700 ml) y se añadió a la solución (L)-(-)-\alpha-metilbencilamina. La solución se dejó en reposo a la temperatura ambiente durante 5 días. El sólido resultante se filtró y se lavó con dietil-éter. Se lavó el filtrado con ácido cítrico 1,5 N, y agua. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}), y el filtrado se evaporó para dar un aceite. El aceite se disolvió en dietil-éter (400 ml) y se dejó en reposo a la temperatura ambiente (48 horas). El sólido resultante se filtró, se lavó con dietil-éter, y se secó para dar 2-Cbz-D-perhidro-1-isoquinolinacarbonil-L-prolina (Cbz-D-1-Piq-Pro-OH) (5,86 g, 36%) (FAB-MS) 415 (MH+); [\alpha]_{D} = -34,2º (C = 0,5, MeOH).
B) Preparación de N-Boc-p-(aminometil)benzonitrilo
A una suspensión mantenida en agitación de hidruro de sodio (4,6 g, 115 mmol, dispersión al 60% en aceite) en tetrahidrofurano (150 ml) se añadió 4-(bromometil)benzonitrilo (20,5 g, 105 mmol). Se añadió a esta mezcla (lentamente mediante un embudo de adición) una solución de iminodicarboxilato de di-t-butilo (25 g, 115 mmol). Después de agitar durante 16 horas, la mezcla se diluyó con dietil-éter (500 ml) y se lavó dos veces con agua (250 ml). La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar 40,2 g de un sólido bruto.
El sólido resultante (28,3 g, 85 mmol) se disolvió luego en tetrahidrofurano (150 ml) y se añadió una solución de hidróxido de sodio (3,4 g, 85 mmol), en metanol (300 ml). Después de agitar durante una noche, la solución se concentró a aproximadamente la mitad de su volumen y se añadió agua para promover la precipitación del producto. El precipitado se filtró y se secó a vacío para dar 18,5 g (94%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 232 (M^{+})
Análisis para C_{13}H_{16}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 67,22; H, 6,94; N, 12,06;
Enc: C, 67,19; H, 7,16; N, 11,82.
C) Preparación de p-(BocNHCH_{2})C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 15-C, se trató N-Boc-p-(aminometil)-benzonitrilo (32,7 g, 140 mmol) para dar p-(Boc-NHCH_{2})C_{6}H_{4}C(NH)HN_{2}. El residuo de este procedimiento se disolvió en dimetilformamida (700 ml) y se añadió N,N-diisopropiletilamina (72 g, 560 mmol). A esta solución mantenida en agitación se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (48 g, 280 mmol). Después de agitar durante 16 horas, se añadió agua (100 ml) y los disolventes se eliminaron luego a vacío. El residuo se repartió entre agua (250 ml) y acetato de etilo (500 ml). Se separaron las fases y la fase orgánica se lavó tres veces con cloruro de amonio acuoso saturado (250 ml), una sola vez con agua (200 ml), y dos veces con carbonato de sodio acuoso saturado (250 ml). La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró, y el producto se recristalizó en dietil-éter para dar 14 g (26%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 384 (M^{+})
D) Preparación de p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl
A una solución de p-(BocOCNHCH_{2})C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz (11 g, 28,7 mmol) en diclorometano (125 ml) a 0ºC, se añadió anisol (10 ml) seguido por ácido trifluoroacético (125 ml). Después de agitar durante 2 horas, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se disolvió en ácido clorhídrico 1 N (50 ml) y se lavó dos veces con dietil-éter (50 ml). Se ajustó el pH a 3 con resina cambiadora de iones (Bio Rad AG1-X8, en forma básica) y la solución se liofilizó para dar 9,2 g (90%) de un polvo blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 284 (M^{+})
E) Preparación de Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 4,4 g (79%) de Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-1-Piq-Pro-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl. En este caso, la reacción se efectuó en dimetilformamida debido a problemas de solubilidad con p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 681 (MH^{+})
Análisis para C_{39}H_{45}N_{5}O_{6}:
Calc: C, 68,91; H, 6,67; N, 10,30;
Enc: C, 68,71; H, 6,93; N, 10,38.
F) Preparación de 1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
A una solución de Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz (4,2 g, 6,1 mmol) en etanol (200 ml), se añadieron ácido clorhídrico 1 N (18,3 ml, 18,3 mmol) y agua (100 ml). A esta solución, mantenida en agitación, se añadió 5% Pd/C (1 g), y se borboteó hidrógeno gaseoso a través de la solución durante un periodo de 2 horas. La mezcla se arrastró luego por lavado con nitrógeno, y se filtró después a través de un taco de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró luego a vacío, se redisolvió en agua (25 ml) y se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B), 300 minutos), para dar 1,3 g (53%) de 1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 412 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot1,9HCl\cdot2,5H_{2}O:
Calc: C, 52,53; H, 7,65; N, 13,32; Cl, 12,81;
Enc: C, 52,63; H, 7,36; N, 13,47; Cl, 12,95.
Ejemplo 19
55
D-3-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)N_{2}\cdot3HCl
A) Preparación de Cbz-D-3-Piq-Pro-OH
Se hizo reaccionar D-fenilalanina (50 g, 302 mmol) con una solución al 37% de formaldehído (120 ml) y HCl concentrado (380 ml) a reflujo. Después de 30 minutos, se añadieron 50 ml adicionales de formaldehído y la reacción se continuó durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a -10ºC y se filtró el precipitado. El sólido se secó a vacío para dar ácido D-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolinacarboxílico (24,2 g, 45%) FD-MS 178 (MH+).
Una solución de ácido D-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolinacarboxílico (17 g, 96 mmol) en agua (200 ml) y 20 ml de HCl 5 N se hidrogenó sobre 5% Rh/Al_{2}O_{3} (8,5 g) a 138 bares (2000 psi) en un aparato de alta presión a 120ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas y el filtrado se liofilizó para dar ácido D-perhidro-3-isoquinolina-carboxílico (D-3-Piq-OH) (21 g, 100%) FD-MS 184 (MH+).
Se disolvió D-3-Piq-OH (21,0 g, 95,8 mmol) en tetrahidrofurano (75 ml) y agua (50 ml). El pH de la solución se ajustó a 10,0 con NaOH 5 N, y se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (16,4 ml, 115 mmol) y se mantuvo el pH a 9,5 con NaOH 2 N. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora más a la temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente orgánico a vacío, y se añadieron al residuo dietil-éter (100 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó, se ajustó el pH de la solución a 3,0 con HCl 3 N, y se añadió acetato de etilo (250 ml). La capa orgánica se separó y se secó (MgSO_{4}). El filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro de ácido 2-Cbz-D-perhidro-3-isoquinolinacarboxílico (Cbz-D-3-Piq-OH) (25,8 g, 85%) FD-MS 318 (MH+).
Se disolvió Cbz-D-3-Piq-OH (17,2 g, 54 mmol) en DMS (50 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadieron a la mezcla de reacción t-butil-éster de prolina (9,2 g, 54 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (7,3 g, 54 mmol), y DCC (11,1 g, 54 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 0ºC y 24 horas a la temperatura ambiente. El precipitado de la reacción se filtró y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en EtOAc (200 ml) y agua (100 ml). Se separó la capa orgánica, y se lavó sucesivamente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N y agua. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), y el filtrado se evaporó para dar un aceite que se secó para dar 2-Cbz-D-perhidro-3-isoquinolinacarbonil-L-prolina, t-butil-éster (Cbz-D-3-Piq-Pro-O-bu) (23,8 g, 94%) FAB-MS 471 (MH+).
Se puso Cbz-D-3-Piq-Pro-O-t-Bu (31,2 g, 66,3 mmol) en un matraz de fondo redondo que contenía ácido trifluoroacético (100 ml) y anisol (5 ml), y se agitó a la temperatura ambiente (1 hora). La mezcla de reacción se concentró a vacío sin calentamiento, y se añadieron dietil-éter (150 ml), y agua (100 ml). El pH de la solución se ajustó a 9,8 con NaOH 5 N. La capa acuosa se separó, se ajustó el pH de la solución a 2,8 con HCl 3 N, y se añadió acetato de etilo (200 ml). Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO_{4}), y se filtró. El filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro. El aceite se disolvió en dietil-éter (300 ml) y la solución se dejó en reposo a la temperatura ambiente (24 horas). El sólido resultante se filtró, se lavó con dietil-éter, y se secó para dar 2-Cbz-perhidro-3-isoquinolinacarbonil-L-prolina (Cbz-D-3-Piq-Pro-OH) (13,5 g, 49%) FAB-MS 415 (MH+).
Análisis para C_{23}H_{30}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 66,65; H, 7,29; N, 6,76;
Enc: C, 66,90; H, 7,33; N, 6,81.
B) Preparación de Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-E, se prepararon 1,6 g (49%) de Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-D-3-Piq-Pro-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
FD-MS, m/e 680 (M^{+})
C) Preparación de D-3-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot3HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 17-C, se prepararon 150 mg de D-3-Piq-Pro-p-NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot3HCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B), 240 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 412 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot3HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 52,13; H, 7,04; N, 13,22;
Enc: C, 52,35; H, 7,23; N, 12,95.
Ejemplo 20
56
D-h-Pro-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot3HCl
(Trihidrocloruro de (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-octahidro-1-D-homoprolil-1H-indol-2-carboxamida)
A) Preparación de Cbz-D-hPro-Ohi-OH
Se borboteó HCl gaseoso a través de una suspensión mantenida en agitación de ácido (S)-indolina-2-carboxílico (20 g, 110 mmol) en etanol (500 ml). Cuando se hubo disuelto completamente el ácido, la solución se llevó a reflujo. Después de 16 horas, se enfrió la solución y se eliminó el disolvente a vacío. El residuo se trituró con dietil-éter y el sólido blanquecino resultante se recogió por filtración, se lavó con hexanos y se secó durante una noche en una estufa de vacío a 30ºC para dar ácido (S)-indolina-2-carboxílico, etil-éster\cdotHCl (25,7 g, 78%).
El sólido se disolvió en etanol (800 ml), se añadió 5% Pd/C (25 g), y la suspensión resultante se hidrogenó en un aparato de sacudidas de Parr durante 8 horas (4,1 bares, 60 psi). La solución se filtró y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se disolvió, se trituró con dietil-éter y se recogieron 18,8 g (73%) de un sólido blanquecino (cis-Ohi-OEt\cdotHCl) por filtración.
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se prepararon 13,5 g (93%) de Cbz-D-hPro-cis-Ohi-OEt a partir de Cbz-D-hPro-OH y cis-Ohi-OEt\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 442 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{34}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 67,85; H, 7,74; N, 6,33;
Enc: C, 67,59; H, 7,72; N, 6,48.
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-D, se prepararon 12,5 g (102%) de Cbz-D-hPro-cis-Ohi-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 414 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{30}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 66,65; H, 7,29; N, 6,76;
Enc: C, 66,46; H, 7,30; N, 6,86.
B) Preparación de Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-E, se prepararon 3,3 g (67%) de Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-D-hPro-Ohi-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 681 (MH^{+})
C) Preparación de D-hPro-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot3HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-F, se prepararon 2,2 g (66%) de
D-hPro-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot3HCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B), 3000 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 412 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot3HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 52,13; H, 7,04; N, 13,22;
Enc: C, 51,98; H, 7,04; N, 13,35.
Ejemplo 21
57
D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
(Dihidrocloruro de D-homoprolil-N(\alpha)-(2-feniletil)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]glicinamida)
A) Preparación de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-OH
A una solución de fenetilamina (58 ml, 461 mmol) y trietilamina (21 ml, 154 mmol) en etanol (200 ml) a 0ºC se añadió una solución de bromoacetato de t-butilo (30 g, 154 mmol) en etanol (50 ml) durante 1 hora. El baño de enfriamiento se desconectó y la solución se dejó calentar a la temperatura ambiente. Después de agitar durante una noche, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se disolvió en ácido cítrico 1 N. La solución se lavó dos veces con dietil-éter, se basificó con bicarbonato de sodio sólido y se extrajo luego tres veces con acetato de etilo (200 ml). Los extractos en acetato de etilo reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se dejaron en reposo durante 24 horas. El precipitado resultante se filtró, se lavó con dietil-éter, y se secó para dar 10,5 g de un sólido blanco. Se concentraron las aguas madres hasta un volumen de aproximadamente 100 ml y se diluyeron luego con dietil-éter (400 ml). Después de dejar en reposo durante 30 minutos, la solución se filtró para dar 23,5 g adicionales de un sólido blanco para un rendimiento total combinado de 34 g (94%) de N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-O-t-Bu.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 235 (M^{+})
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se prepararon 10,8 g (56%) de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-O-t-Bu a partir de Cbz-D-hPro-OH y N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-O-t-Bu.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 480 (M^{+})
Análisis para C_{28}H_{36}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 69,98; H, 7,55; N, 5,83;
Enc: C, 69,68; H, 7,56; N, 5,77.
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-A, para la desprotección de Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu, se prepararon 9,2 g (100%) de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 425 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{28}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 67,91; H, 6,65; N, 6,60;
Enc: C, 68,19; H, 6,68; N, 6,71.
B) Preparación de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-E, se prepararon 3,2 g (55%) de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-OH y p-H_{2}NCH_{2}
C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 690 (M^{+})
Análisis para C_{40}H_{43}N_{5}O_{6}:
Calc: C, 69,65; H, 6,28; N, 10,15;
Enc: C, 69,80; H, 6,46; N, 10,14.
C) Preparación de D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 19-F, se prepararon 770 mg (54%) de D-hPro-N(PhCH_{2}CH_{2})Gly-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 85/15 (A/B), 120 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 423 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{2}\cdot2HCl:
Calc: C, 58,30; H, 6,73; N, 14,16;
Enc: C, 58,05; H, 6,60; N, 14,28.
Ejemplo 22
58
D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
(Dihidrocloruro de (cis-D-homoprolil-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-4-fenoxi-L-prolinamida
A) Preparación de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-OH
A una solución de Cbz-Pro(4-trans-OH)-Et (58,8 g, 200 mmol), trifenilfosfina (65,6 g, 250 mmol), y fenol (23,5 g, 250 mmol) en tetrahidrofurano (500 ml) a 0ºC, se añadió (gota a gota durante 1 hora) una solución de azodicarboxilato de dietilo (40 ml, 250 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml). Se retiró luego el baño frío y se dejó que la solución se calentara a la temperatura ambiente (16 horas). Se eliminó luego el disolvente a vacío y el jarabe ambarino restante se trituró con dietil-éter. El sólido blanco se eliminó por filtración y se concentró el filtrado. El residuo se cromatografió luego sobre gel de sílice (1 kg), eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 1:1 acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto puro (a juzgar por TLC) se reunieron y concentraron a vacío para dar 36,3 g (50%) de Cbz-Pro(4-cis-fenoxi)-OEt como un jarabe incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 369 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{23}NO_{5}:
Calc: C, 68,28; H, 6,28; N, 3,79;
Enc: C, 68,38; H, 6,30; N, 3,89.
A una solución de Cbz-Pro(4-cis-fenoxi)-OEt (25 g, 67,7 mmol) en etanol (400 ml) se añadió 5% Pd/C (5 g). Después de borbotear hidrógeno a través de la solución durante 3 horas, la solución se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas, se añadieron 3 ml de ácido clorhídrico concentrado, y la solución se concentró a vacío. El residuo se suspendió en dietil-éter con agitación enérgica y luego se filtró y se secó para dar 14,2 g (77%) de Pro(4-cis-fenoxi)-OEt\cdotHCl como un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 235 (M^{+})
Análisis para C_{13}H_{18}NO_{3}Cl:
Calc: C, 57,46; H, 6,68; N, 5,15;
Enc: C, 57,68; H, 6,78; N, 5,18.
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se prepararon 19,4 g (100%) de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-fenoxi)-OEt a partir de Cbz-D-hPro-OH y Pro(4-cis-fenoxi)-OEt\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 480 (M^{+})
Análisis para C_{27}H_{32}N_{2}O_{6}:
Calc: C, 67,48; H, 6,71; N, 5,83;
Enc: C, 67,71; H, 6,79; N, 5,89.
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-D, se prepararon 16 g (100%) de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-fenoxi)-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 452 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{28}N_{2}O_{6}:
Calc: C, 66,36; H, 6,24; N, 6,19;
Enc: C, 66,22; H, 6,18; N, 6,17.
B) Preparación de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-E, se prepararon 4,55 g (75%) de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)-NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 718 (M^{+})
C) Preparación de D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-F, se prepararon 873 mg (40%) de D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 85/15 (A/B, 120 minutos).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 451 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{31}N_{5}O_{3}\cdot2HCl:
Calc: C, 57,47; H, 6,37; N, 13,40;
Enc: C, 57,22; H, 6,29; N, 13,47.
Ejemplo 23
59
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de p-NH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl
Se borboteó HCl gaseoso a través de una solución mantenida en agitación de N-Boc-p-aminometilbenzonitrilo (15 g, 64,6 mmol) en acetato de etilo (400 ml) a 0ºC durante 10 minutos. Se retiró el baño frío y, después de agitar durante 1,5 horas, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se suspendió en dietil-éter, se filtró, se lavó con dietil-éter y se secó para dar 10,1 g (93%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 132 (M^{+})
Análisis para C_{8}H_{9}N_{2}Cl:
Calc: C, 56,98; H, 5,38; N, 16,61; Cl, 21,02;
Enc: C, 56,36; H, 5,46; N, 16,22; Cl, 21,31.
B) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}CN
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,5 g (80%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}CN a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OH y p-NH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 468 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{28}N_{4}O_{4}S:
Calc: C, 61,52; H, 6,02; N, 11,90;
Enc: C, 61,23; H, 6,13; N, 11,80.
C) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl
A una solución de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}CN (1 g, 2,1 mmol) en etanol absoluto (35 ml) se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,47 ml, 2,7 mmol) seguida por hidrocloruro de hidroxilamina (185 mg, 2,7 mmol) y la solución se llevó a reflujo. Después de 16 horas, la solución se enfrió y los disolventes se eliminaron a vacío. Se llevaron 250 mg de este material al paso siguiente y el material remanente se purificó por RPHPLC (método 1, 90/10 (A/B); aumento hasta 60/40 (A/B) durante 200 minutos).
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 501 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{5}S\cdot1,2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 51,17; H, 6,12; N, 12,42; Cl, 7,55;
Enc: C, 51,04; H, 5,81; N, 12,39; Cl, 7,18.
D) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
A una solución de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl (250 mg, 0,52 mmol) en etanol (40 ml) y agua (19 ml) se añadió HCl 1N (1 ml) seguido por 5% Pd sobre carbono (250 mg). La suspensión mantenida en agitación se puso en una atmósfera de hidrógeno durante 18 horas y se filtró luego, se concentró y se purificó por RPHPLC (método 1, 90/10 (A/B), aumento hasta 60/40 (A/B) durante 200 minutos) para dar 140 mg (52%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 486 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{4}S\cdotHCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 52,50; H, 6,42; N, 12,75;
Enc: C, 52,56; H, 6,19; N, 12,59.
Se prepararon 5 g de producto adicionales por los métodos descritos en el Ejemplo 15 y se purificaron por RPHPLC (método 3; 98/2 (A/B), 60 minutos, aumento hasta 60/40 (A/B) 300 minutos).
Ejemplo 24
60
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}
A) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23, se preparó EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2} utilizando m-BrCH_{2}-C_{6}H_{4}CN en lugar de p-BrCH_{2}-C_{6}H_{4}CN. Se retuvieron 140 mg (13%) de este compuesto intermedio cristalino y el resto del material se llevó al paso B.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 502 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{5}S:
Calc: C, 57,47; H, 6,23; N, 13,96;
Enc: C, 57,28; H, 6,21; N, 13,66.
B) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en los Ejemplos 23-C y 23-D, se prepararon 0,27 g (28%, dos pasos) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 486 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{4}S\cdot1,1HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 51,32; H, 6,48; N, 12,47; Cl, 6,94;
Enc: C, 51,33; H, 6,09; N, 12,20; Cl, 6,66.
Ejemplo 25
61
D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23, se prepararon 0,86 g de D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de Cbz-D-1-Piq-Pro-OH y m-NH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 412 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot2,5HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 53,99; H, 7,19; N, 13,69;
Enc: C, 54,19; H, 7,02; N, 13,81.
Ejemplo 26
62
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de p-ciano-trans-cinamato de metilo
A una suspensión mantenida en agitación de NaH (6,1 g de suspensión al 60% en aceite, 153 mmol) y p-cianobenzaldehído (20 g, 153 mmol) en tetrahidrofurano (250 ml) a 0ºC se añadió por medio de un embudo de adición una solución de fosfonoacetato de trimetilo (28 g, 153 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml). Después de mantener en agitación durante 48 horas, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo bruto se disolvió en acetato de etilo (500 ml). La solución en acetato de etilo se lavó una sola vez con agua, tres veces con NaHSO_{3} acuoso saturado y una sola vez con salmuera. La fase orgánica se secó
luego con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar 28 g (98%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 187 (M^{+})
B) Preparación de p-ciano-dihidrocinamato de metilo
A una solución de p-ciano-trans-cinamato de metilo (13,6 g, 73 mmol) en tolueno (485 ml) se añadió 5% Pd/BaSO_{4} (2,7 g). Después de 9 horas bajo hidrógeno gaseoso a 4 bares (60 psi), se filtró la solución, se concentró a vacío y se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 30% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto se reunieron y concentraron para dar 10,6 g (77%) de un aceite incoloro.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 189 (M^{+})
C) Preparación de ácido p-ciano-dihidrocinámico
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-D, utilizando 1,1 equivalentes de LiOH\cdot
H_{2}O, se prepararon 5,1 g (58%) de ácido p-ciano-dihidrocinámico a partir de p-ciano-dihidrocinamato de metilo.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 175 (M^{+})
D) Preparación de Boc-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN
A una solución de ácido p-ciano-dihidrocinámico (6,7 g, 38,2 mmol) y trietilamina (5,9 ml, 42 mmol) en t-butanol (150 ml) se añadió difenilfosforil-azida (11,6 g, 42 mmol) y la solución se llevó a reflujo. Después de agitar durante una noche, se enfrió la solución y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó tres veces con ácido cítrico 1N, una sola vez con salmuera, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado, y se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió luego sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 10%/hexanos hasta 50% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto a juzgar por TLC se reunieron y concentraron para dar 5,4 g (57%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 246 (M^{+})
Análisis para C_{14}H_{18}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 68,27; H, 7,37; N, 11,37;
Enc: C, 68,39; H, 7,50; N, 11,40.
E) Preparación de p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, se prepararon 3,6 g (98%) de p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR.
FD-MS, m/e 147 (MH^{+})
Análisis para C_{9}H_{11}N_{2}Cl:
Calc: C, 59,18, H, 6,07; N, 15,34; Cl, 19,41;
Enc: C, 58,90; H, 6,16; N, 15,20; Cl, 19,30.
F) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-G, se prepararon 1,5 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OH y p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
\newpage
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 482 (M^{+})
G) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl
A una solución mantenida en agitación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}CN (1 g, 2,07 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,45 ml, 2,59 mmol) se añadió hidrocloruro de hidroxilamina (180 mg, 2,59 mmol) y la solución se llevó a reflujo. Después de 18 horas, se enfrió la solución, se eliminó el disolvente a vacío, y el residuo se disolvió en ácido acético (15 ml) y se purificó por RPHPLC (método 2, 90/10 (A/B); aumento hasta 60/40 (A/B) durante 200 minutos). Las fracciones que contenían EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl puro como se determinó por RPHPLC analítica se reunieron y el pH se ajustó como se ha descrito anteriormente y se liofilizó para dar 0,35 g (31%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 516 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{33}N_{5}O_{5}S\cdotHCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 52,67; H, 6,36; N, 12,28; Cl, 6,22;
Enc: C, 52,40; H, 6,10; N, 12,25; Cl, 6,51.
H) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-D, se prepararon 0,098 g (50%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 500 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{33}N_{5}O_{4}S\cdot2,6HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 49,03; H, 6,19; N, 11,44;
Enc: C, 48,87; H, 5,79; N, 11,15.
Ejemplo 27
63
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}
Por un método sustancialmente equivalente al descrito los Ejemplos 26-A a 26-E y 24-A, se prepararon 0,15 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}a partir de m-cianobenzadehído.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 516 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{33}N_{5}O_{5}S:
Calc: C, 58,23; H, 6,45; N, 13,50;
Enc: C, 57,99; H, 6,57; N, 13,28.
B) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 24-B, se prepararon 0,21 g (20%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 500 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{33}N_{5}O_{4}S\cdot2,1HCl\cdot0,7H_{2}O
Calc: C, 51,00; H, 6,25; N, 11,89;
Enc: C, 50,79; H, 5,86; N, 1,54.
Ejemplo 28
64
D-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23, se prepararon 0,85 g de 1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl a partir de Cbz-D-1-Piq-Pro-OH y p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 426 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{2}\cdot2HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 53,93; H, 7,73; N, 13,10;
Enc: C, 53,94; H, 7,60; N, 13,06.
Ejemplo 29
65
D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23, se prepararon 0,8 g de 1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl a partir de Cbz-D-1-Piq-Pro-OH y m-NH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 426 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{2}\cdot2HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 53,93; H, 7,73; N, 13,10;
Enc: C, 53,62; H, 7,57; N, 13,18.
Ejemplo de Referencia 30
66
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de p-HOCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN
A una solución mantenida en agitación de p-cianodihidrocinamato de metilo (10 g, 53 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) se añadió LiBH_{4} (1,15 g, 53 mmol) y la solución se calentó a reflujo. Después de 2 horas, se enfrió la solución, y se añadió gota a gota tampón de fosfato de sodio (pH 7). Después que hubo terminado el desprendimiento de gas, se añadieron acetato de etilo y agua y se separaron las capas. La fase acuosa se extrajo una sola vez con acetato de etilo y las fases de acetato de etilo reunidas se lavaron con salmuera, se secaron luego con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar 8,1 g (95%) de un aceite espeso incoloro.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 161 (M^{+})
B) Preparación de p-BrCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN
A una solución mantenida en agitación de p-HOCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN (8,1 g, 50 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) se añadió trifenilfosfina (14,4 g, 55 mmol) seguida por tetrabromuro de carbono (18,2 g, 55 mmol). Después de agitar durante 18 horas, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 20% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto a juzgar por TLC se reunieron y concentraron para dar 7,3 g (65%) de un aceite espeso incoloro.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 223 (M^{+})
Análisis para C_{10}H_{10}BrN:
Calc: C, 53,60; H, 4,50; N, 6,25;
Enc: C, 53,90; H, 4,67; N, 6,24.
C) Preparación de p-Boc_{2}NCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN
A una suspensión mantenida en agitación de NaH (1,4 g de dispersión en aceite al 60%, 34 mmol) en DMS (100 ml) se añadió gota a gota una solución de iminodicarboxilato de di-t-butilo (7,4 g, 34 mmol) en DMS (20 ml) mediante un embudo de adición. Después que hubo terminado el desprendimiento de gas, se añadió una solución de p-BrCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN (7 g, 31 mmol) en DMS por medio de un embudo de adición y la solución se calentó a 70ºC. Después de agitar durante 12 horas, se enfrió la solución y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se disolvió en dietil-éter y se lavó tres veces con agua. La fase orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró, y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con hexanos hasta 20% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto se reunieron y se concentraron para dar 9,38 g (84%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 361 (M^{+})
Análisis para C_{20}H_{28}N_{2}O_{4}:
Calc: C, 66,64; H, 7,83; N, 7,77;
Enc: C, 66,40; H, 7,81; N, 7,57.
D) Preparación de p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, se prepararon 4,3 g (84%) de p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 160 (M^{+})
E) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-G y 26-G, se prepararon 0,32 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-OH y p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 530 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{35}N_{5}O_{5}S\cdot1,2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 52,88; H, 6,51; N, 11,84;
Enc: C, 52,71; H, 6,26; N, 11,76.
F) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-D, se prepararon 0,13 g (67%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NO
H)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 514 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{35}N_{5}O_{4}S\cdot1,5HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 51,67; H, 6,75; N, 11,59;
Enc: C, 51,36; H, 6,46; N, 11,28.
\newpage
Ejemplo de Referencia 31
67
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-G y 26-G, se prepararon 0,32 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NOH)NH_{2}\cdotHCl a partir de ácido m-cianodihidrocinámico.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 530 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{35}N_{5}O_{5}S\cdotHCl\cdot1,1H_{2}O:
Calc: C, 53,30; H, 6,57; N, 11,95; Cl, 6,05;
Enc: C, 52,97; H, 6,19; N, 11,96; Cl, 6,13.
B) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-D, se prepararon 0,12 g (62%) de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NO
H)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 514 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{35}N_{5}O_{4}S\cdot1,5HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 53,26; H, 6,62; N, 11,94;
Enc: C, 53,19; H, 6,25; N, 12,00.
Ejemplo de Referencia 32
68
1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23, se prepararon 0,66 g (48%) de 1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de 1-Piq-Pro-OH y p-NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 440 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{2}\cdot2,1HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 56,21; H, 7,75; N, 13,11;
Enc: C, 56,36; H, 7,44; N, 12,79.
Ejemplo de Referencia 33
69
1-Pig-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23, se prepararon 0,64 g (46%) de 1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}C(=NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de 1-Piq-Pro-OH y m-NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-C_{6}H_{4}CN\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 440 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{2}\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 56,60; H, 7,79; N, 13,20;
Enc: C, 56,92; H, 7,55; N, 13,26.
Ejemplo de Referencia 34
70
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NO_{2}
A una solución mantenida en agitación de hidrocloruro de 4-nitrobencilamina (15 g, 79 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (14 ml, 79 mmol) en diclorometano (200 ml) se añadió dicarbonato de di-t-butilo (17 g, 79 mmol). Después de 48 horas, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y se lavó dos veces con ácido cítrico 1M, una sola vez con agua, y una sola vez con NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar un sólido blanquecino que se recristalizó en cloroformo/hexanos. Se reunieron tres cosechas, se lavaron con hexanos y se secaron a vacío para dar 11,5 g (58%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 252 (M^{+})
Análisis para C_{12}H_{16}N_{2}O_{4}:
Calc: C, 57,13; H, 6,39; N, 11,10;
Enc: C, 57,27; H, 6,60; N, 11,13.
B) Preparación de p-BocNHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}
A una solución mantenida en agitación de p-BocNHCH_{2}C_{6}H_{4}NO_{2} (7,5 g, 29,7 mmol) y NiCl_{2}\cdot6H_{2}O (17,7 g, 74,3 mmol) en metanol (150 ml) a 0ºC se añadió NaBH_{4} (5,6 g, 149 mmol) en pequeñas porciones durante 30 min. Después de la adición completa de NaBH_{4} y 15 min, se evaporó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en hidróxido de amonio concentrado y se extrajo dos veces con diclorometano. Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para dar 6,4 g (97%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 222 (M^{+})
Análisis para C_{12}H_{18}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 64,84; H, 8,16; N, 12,60;
Enc: C, 65,10; H, 8,42; N, 12,76.
C) Preparación de N,N'-di-Cbz-S-metilisotiourea
A una suspensión mantenida en agitación de sulfato de bis-S-metilisotiourea (20 g, 144 mmol) en diclorometano (200 ml), se añadió hidróxido de sodio 5N (16 ml). La solución se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (41 ml, 288 mmol). Al mismo tiempo, se añadió hidróxido de sodio 2N a un ritmo tal que el pH de la solución se mantuviera a aproximadamente 11. Se retiró luego el baño frío y, después de calentar a la temperatura ambiente, se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (250 ml). Las fases orgánicas reunidas se lavaron luego dos veces con HCl 0,1N (250 ml) y una sola vez con salmuera (250 ml). La fase orgánica se secó luego con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar 41 g (79%) de un jarabe espeso incoloro.
^{1}H NMR
D) Preparación de p-BocNHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NCbz)NHCbz
A una solución mantenida en agitación de p-BocNHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2} (5 g, 22,5 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se añadió N,N'-di-Cbz-S-metilisotiourea (8,9 g, 24,7 mmol). Después de 48 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en cloroformo. Se añadió gel de sílice y el disolvente se eliminó a vacío para dar un polvo blanquecino que se cargó luego en seco en una columna de gel de sílice. La columna se eluyó luego con un gradiente escalonado de 5% acetato de etilo/hexanos hasta 30% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto (determinado por TLC) se reunieron y concentraron a vacío para dar 7,6 g (63%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 532 (M^{+})
Análisis para C_{29}H_{32}N_{4}O_{6}:
Calc: C, 65,40; H, 6,06; N, 10,52;
Enc: C, 65,66; H, 6,35; N, 10,59.
E) Preparación de HCl.p-NH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NCbz)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-A, se prepararon 4,7 g (89%) de HCl.p-NH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NCbz)NHCbz, un sólido blanco, a partir de p-BocNHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NCbz)NHCbz.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 433 (MH^{+})
\newpage
F) Preparación de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC-(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-G y el Ejemplo 18-F, se prepararon 1,1 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de EtSO_{2}-D-Phe-ProOH y HCl\cdotp-NH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NCbz)NHCbz.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 501 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{32}N_{6}O_{4}S\cdotHCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 51,73; H, 6,36; N, 15,14;
Enc: C, 52,32; H, 5,99; N, 14,79.
Ejemplo de Referencia 35
71
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 34, se prepararon 1,8 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}CNH(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de 4-nitrofenetilamina\cdotHCl.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 515 (MH^{+})
HRMS (FAB), m/e, calculado para C_{25}H_{35}N_{6}O_{4}S: 515,2441
Encontrado: 515,2483.
Ejemplo de Referencia 36
72
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 30-C y 34-B hasta 34-F, se prepararon 1,8 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de bromuro de 3-nitrobencilo.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 501 (MH^{+})
HRMS (FAB), m/e, calculado para C_{24}H_{33}N_{6}O_{4}S: 501,2284
Encontrado: 501,2280.
Ejemplo de Referencia 37
73
EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 26-D, 26-B (utilizando 5% Pd/C en lugar de Pd/BaSO_{4} y acetato de etilo en lugar de tolueno), y 34-D a 34-F, se prepararon 0,85 g de EtSO_{2}-D-Phe-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de ácido 3-nitrocinámico.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 515 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{34}N_{6}O_{4}S\cdot2,2HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 49,73; H, 6,21; N, 13,92;
Enc: C, 49,45; H, 5,82; N, 13,55.
Ejemplo de Referencia 38
74
D-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 34, se prepararon 0,94 g de D-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto final se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 427 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{34}N_{6}O_{2}\cdot2HCl:
Calc: C, 55,31; H, 7,26; N, 16,82; Cl, 14,20;
Enc: C, 55,05; H, 7,23; N, 16,55; Cl, 14,24.
Ejemplo de Referencia 39
75
D-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 35, se prepararon 1,03 g de D-1-Piq-Pro-p-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto final se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 441 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{36}N_{6}O_{2}\cdot2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 53,33; H, 7,65; N, 15,55; Cl, 13,12;
Enc: C, 53,41; H, 7,45; N, 15,37; Cl, 13,48.
Ejemplo de Referencia 40
76
D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 36, se prepararon 1,04 g de D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto final se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 427 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{34}N_{6}O_{2}\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 53,38; H, 7,40; N, 16,24; Cl, 13,70;
Enc: C, 53,25; H, 7,50; N, 16,23; Cl, 13,88.
\newpage
Ejemplo de Referencia 41
77
D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 37, se prepararon 0,96 g de D-1-Piq-Pro-m-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NHC(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El producto final se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 70/30 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 441 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{36}N_{6}O_{2}\cdot2,1HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 52,97; H, 7,61; N, 15,44; Cl, 13,68;
Enc: C, 52,80; H, 7,57; N, 15,46; Cl, 13,35.
Ejemplo 42
78
D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
A) Preparación de Cbz-DL-1-Piq-cis-Ohi-OEt
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se prepararon 16,6 g (100%) de Cbz-DL-1-Piq-cis-Ohi-OEt a partir de Cbz-DL-1-Piq-OH y cis-Ohi-OEt\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 496 (M^{+})
Análisis para C_{29}H_{40}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 70,13; H, 8,12; N, 5,64;
Enc: C, 69,96; H, 8,23; N, 5,73.
B) Preparación de Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-D y 18-E, se prepararon Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz y Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Cbz-D,L-1-Piq-Pro-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl. Estos diastereoisómeros se separaron por cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el diastereoisómero que pasaba en primer lugar (Rf = 0,31, acetato de etilo) se agruparon y se concentraron para dar 1,3 g de Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz. Las fracciones que contenían el diastereoisómero que pasaba en último lugar (Rf = 0,19, acetato de etilo) se agruparon y se concentraron para dar 1,5 g de Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz como una espuma blanca.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 735 (MH^{+})
Análisis para C_{43}H_{51}N_{5}O_{6}:
Calc: C, 70,37; H, 7,00; N, 9,54;
Enc: C, 70,20; H, 7,22; N, 9,36.
C) Preparación de D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-F, se prepararon 0,61 g (63%) de D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl a partir de Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz. El gradiente de HPLC utilizado en este caso era un aumento de 98/2 A/B hasta 70/30 A/B durante 120 minutos.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH^{+})
Análisis para C_{27}H_{39}N_{5}O_{2}\cdot2HCl\cdot1H_{2}O:
Calc: C, 58,27; H, 7,79; N, 12,58;
Enc: C, 58,66; H, 7,56; N, 12,78.
Ejemplo 43
79
D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
A) Preparación de D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-A, 1-D, 18-E, y 18-F, se prepararon 1,3 g de 3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El gradiente de HPLC utilizado en este caso era un aumento de 98/2 A/B a 70/30 A/B durante 120 minutos.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 466,4 (MH^{+})
Análisis para C_{27}H_{39}N_{5}O_{2}\cdot2HCl:
Calc: C, 60,22; H, 7,67; N, 13,00;
Enc: C, 59,95; H, 7,73; N, 12,89.
Ejemplo 44
80
EtSO_{2}-Phg-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]-metil]-1-[N-(etilsulfonil)-D-fenilglicil]-1H-indol-2-carboxamida)
A) Preparación de Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-A, se prepararon 14,9 g (58%) de Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt a partir de Boc-D-Phg-OH y monohidrocloruro del éster etílico del ácido (S)-cis-octahidroindol-2-carboxílico.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 430 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{34}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 66,95; H, 7,96; N, 6,51;
Enc: C, 66,69; H, 8,02; N, 6,40.
B) Preparación de D-Phg-cis-Ohi-OEt\cdotHCl
Se borboteó HCl gaseoso durante 10 min a través de una solución fría (0ºC) y mantenida en agitación de Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt en acetato de etilo. Después de agitar durante 2 horas mientras se calentaba a la temperatura ambiente, se eliminó el disolvente a vacío. El sólido resultante se suspendió en dietil-éter y se aisló subsiguientemente por filtración para dar 10,7 g (97%) de D-Phg-cis-Ohi-OEt\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 331 (M^{+})
Análisis para C_{19}H_{27}N_{2}O_{3}Cl:
Calc: C, 62,20; H, 7,41; N, 7,64;
Enc: C, 62,42; H, 7,36; N, 7,85.
C) Preparación de EtSO_{2}-D-Phg-cis-Ohi-OEt
A una solución de D-Phg-cis-Ohi-OEt\cdotHCl (10 g, 27 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (10,7 ml, 61 mmol) en THF (200 ml) a -78ºC, se añadió gota a gota por medio de un embudo de adición una solución de cloruro de etanosulfonilo (3,9 g, 30 mmol) en THF (20 ml). Se desconectó luego el baño de enfriamiento y la solución se calentó lentamente a la temperatura ambiente. Después de aproximadamente 18 h, la solución se concentró a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (200 ml), se lavó dos veces con ácido cítrico 1N (200 ml), dos veces más con NaHCO_{3} acuoso saturado (200 ml), y otras dos veces con salmuera (200 ml). La fase orgánica se secó luego con MgSO_{4}, se filtró, y se concentró a vacío para dar 11,2 g (97%) de una espuma amarilla.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 422 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{30}N_{2}O_{5}S:
Calc: C, 59,69; H, 7,16; N, 6,63;
Enc: C, 59,94; H, 7,08; N, 6,78.
D) Preparación de EtSO_{2}-Phg-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-D, 18-E y 18-F, se obtuvieron 0,62 g de EtSO_{2}-Phg-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl. El gradiente de HPLC utilizado en este caso fue un aumento de 90/10 A/B hasta 60/40 A/B durante 120 minutos.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 526,3 (MH^{+})
Análisis para C_{27}H_{35}N_{5}O_{4}S\cdotHCl:
Calc: C, 57,69; H, 6,45; N, 12,46;
Enc: C, 57,47; H, 6,48; N, 12,20.
Ejemplo 45
81
EtSO_{2}-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-1-[N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil]-1H-indol-2-carboxamida)
A) Preparación de EtSO_{2}-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C-(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 44, se prepararon 1,5 g de EtSO_{2}-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de Boc-D-Phe-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 540,3 (MH^{+})
Análisis para C_{28}H_{37}N_{5}O_{4}S\cdotHCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 56,51; H, 6,94; N, 11,77;
Enc: C, 56,24; H, 6,55; N, 11,72.
Ejemplo 46
82
HOOCCH_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-fenilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn
A una solución de D-Phe-Pro-OBn\cdotHCl (20 g, 51 mmol) en DMS (100 ml) se añadió bromoacetato de t-butilo (9,9 g, 56 mmol) en una sola porción y N,N-diisopropiletilamina (17,4 ml, 101 mmol) gota a gota durante 30 min. Esta mezcla se mantuvo en agitación durante 18 h a la temperatura ambiente. Se añadieron luego dicarbonato de di-t-butilo (16,6 g, 76 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (13,2 ml, 76 mmol) en una sola porción y la mezcla de reacción se mantuvo en agitación durante 24 h adicionales. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (1 l) y ácido cítrico acuoso 1M (500 ml). Se separaron las capas y la fase orgánica se lavó una sola vez con ácido cítrico acuoso 1M, dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado, y una sola vez con salmuera (500 ml de cada uno). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío. El aceite ambarino se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente de acetato de etilo/hexanos (hexanos hasta 30% acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto se reunieron y se concentraron para dar 19,0 g (66%) como un aceite incoloro que cristalizó lentamente al dejarlo en reposo.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 566 (M^{+})
Análisis para C_{32}H_{42}N_{2}O_{7}:
Calc: C, 67,82; H, 7,47; N, 4,94;
Enc: C, 68,06; H, 7,33; N, 15,17.
B) Preparación de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-OH
A una solución de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn (18,5 g, 33 mmol) en acetato de etilo (250 ml) se añadió 5% Pd/C como catalizador (5 g). Esta solución se desgasificó a vacío varias veces y se puso en una atmósfera de hidrógeno durante 2 h con agitación. Se retiró el balón, se añadió tierra de diatomeas y se filtró la suspensión sobre un taco de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a vacío para dar 13,2 g (84%) de una espuma blanca.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 476 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{36}N_{2}O_{7}:
Calc: C, 63,01; H, 7,61; N, 5,88;
Enc: C, 63,23; H, 7,73; N, 5,59.
C) Preparación de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al Ejemplo 18-E, se prepararon 2,7 g (90%) de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de N-(t-BuOOCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-OH y p-H_{2}NCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 743 (MH^{+})
Análisis para C_{41}H_{51}N_{5}O_{8}:
Calc: C, 66,38; H, 6,93; N, 9,44;
Enc: C, 66,08; H, 6,92; N, 9,16.
D) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Se borboteó HCl gaseoso durante 10 minutos a través de una solución enfriada (0ºC) de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz (2,2 g, 3 mmol) en dioxano (100 ml). Después de agitar durante 3 h mientras se calentaba a la temperatura ambiente, se eliminó el dioxano a vacío. El residuo se disolvió en una mezcla de etanol absoluto (150 ml), agua (75 ml) y HCl 1N (6 ml). Se añadió a esto 5% Pd/C (1 g). Después de desgasificar utilizando vacío, se puso esta mezcla en una atmósfera de hidrógeno durante 16 h mientras se agitaba a la temperatura ambiente. Se añadió tierra de diatomeas y la suspensión resultante se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a vacío para dar un residuo, y éste se purificó inmediatamente por HPLC, método 2 (aumento de 98/2 A/B hasta 70/30 A/B durante 2 horas). Las fracciones que contenían el producto puro se reunieron y liofilizaron para dar 1,1 g (72%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 452,3 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{29}N_{5}O_{4}\cdot2HCl:
Calc: C, 54,97; H, 5,96; N, 13,35;
Enc: C, 55,21; H, 6,11; N, 13,39.
Ejemplo 47
83
HOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de t-BuOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-OEt
A una solución de D-Phe-cis-Ohi-OEt\cdotHCl (30 g, 79 mmol) en acetonitrilo (400 ml) se añadieron N,N-diisopropiletilamina (41 ml, 236 mmol) y bromoacetato de t-butilo (14 ml, 87 mmol). Esta solución se calentó a 50ºC y se mantuvo a dicha temperatura durante 3 h. Después de enfriar a la temperatura ambiente, la solución se concentró a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 ml) y esta solución se lavó dos veces con cloruro de amonio acuoso saturado (1200 ml), dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml), y dos veces con salmuera (200 ml). La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar un aceite anaranjado que se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente de hexanos a 1:1 hexanos/acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y concentraron para dar 33,2 g (92%) de un aceite incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 458 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{38}N_{2}O_{5}:
Calc: C, 68,10; H, 8,35; N, 6,11;
Enc: C, 68,37; H, 8,47; N, 5,90.
B) Preparación de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH
A una solución de t-BuOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-OEt (30 g, 65 mmol) en THF (1200 ml) se añadieron N,N-diisopropiletilamina (17 ml, 98 mmol) y dicarbonato de di-t-butilo (15,7 g, 72 mmol). Esta solución se llevó a reflujo suave y se mantuvo durante 16 horas. Se interrumpió el calentamiento y, una vez fría, la solución se concentró a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (400 ml) y se lavó dos veces con ácido cítrico 1,0 M (200 ml), dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml), y dos veces con salmuera (200 ml). La solución orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo. Una porción de este aceite (24,8 g, 44 mmol) se disolvió en 300 ml de dioxano. Se añadió a esto una solución constituida por 2,05 g de LiOH\cdotH_{2}O (49 mmol) en 150 ml de agua. Esta mezcla se dejó en agitación durante 5 h a la temperatura ambiente, transcurrido cuyo tiempo se añadieron 100 ml de cloruro de amonio acuoso saturado. Se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se repartió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado y dietil-éter. Se separaron las capas y la capa acuosa se acidificó a pH 3 con ácido cítrico. La solución acuosa ácida se extrajo tres veces con dietil-éter (200 ml) y los extractos se reunieron, se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 24,3 g de N-(t-BuOOCCH_{2})-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH como una espuma blanca.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 530 (M^{+})
Análisis para C_{29}H_{42}N_{2}O_{7}:
Calc: C, 65,64; H, 7,98; N, 5,28;
Enc: C, 65,39; H, 8,04; N, 5,39.
C) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH2\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 18-E y 46-D, se obtuvieron 1,2 g (67%) de HOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 506,3 (MH^{+})
Análisis para C_{28}H_{35}N_{5}O_{4}\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 57,24; H, 6,52; N, 11,92;
Enc: C, 57,40; H, 6,30; N, 11,69.
Ejemplo de Referencia 48
84
HOOCCH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 46, se prepararon 0,92 g de HOOCCH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 458 (M^{+})
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{4}\cdotHCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 57,30; H, 7,41; N, 13,92;
Enc: C, 57,52; H, 7,29; N, 13,83.
Ejemplo 49
85
HOOCCH_{2}-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil]-1H-indol-2-carboxamida)
A) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-A y 1-D, 18-E, 44-B, 47-A (utilizando bromoacetato de bencilo) y 18-F, se obtuvieron 0,75 g de HOOCCH_{2}-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de Boc-D-Cha y cis-Ohi-OEt\cdotHCl. Se utilizó el método 2 de HPLC en la purificación de este material, utilizando un gradiente de 98/2 A/B hasta 70/30 A/B durante 3 h.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 512,3 (MH^{+})
Análisis para C_{28}H_{41}N_{5}O_{4}\cdotHCl:
Calc: C, 61,36; H, 7,72; N, 12,78;
Enc: C, 61,08; H, 7,47; N, 12,53.
Ejemplo 50
86
HOOCCH_{2}-D-Phe-Pro(4-cis-isoamil)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Cbz-Pro(4-trans-OH)-OEt
A una solución de Cbz-Pro(4-trans-OH)-OH (33 g, 124 mmol) en etanol (500 ml) se añadió ácido p-toluenosulfónico (1 g) y la solución se calentó a reflujo. Después de 16 h, la solución se enfrió a la temperatura ambiente, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (400 ml) y se lavó dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado, y dos veces con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución en acetato de etilo se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar 34,5 g (95%) de un aceite incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 293 (M^{+})
Análisis para C_{15}H_{19}NO_{5}:
Calc: C, 61,42; H, 6,53; N, 4,77;
Enc: C, 61,20; H, 6,65; N, 4,73.
B) Preparación de Cbz-Pro(4-oxo)-OEt
Se disolvió Cbz-Pro(4-trans-OH)-OEt (32,7 g, 111 mmol) en diclorometano (500 ml) a agitación mecánica en un matraz de 1 l con fondo redondo. Se añadieron a esta solución tamices moleculares 3 \ring{A} (100 g) y clorocromato de piridinio (60 g, 278 mmol), en porciones lo bastante pequeñas para mantener agitación eficiente. Después de agitar durante 12 h a la temperatura ambiente, se añadió dietil-éter (200 ml) y la suspensión negra se separó por decantación de un residuo alquitranoso y se arrastró por lavado a través de una columna de gel de sílice (200 g). El residuo se lavó dos veces con diclorometano (200 ml) y los lavados reunidos se pasaron también a través del taco de sílice. El filtrado se arrastró por lavado a través de una columna de gel de sílice con 1:1 acetato de etilo/hexanos (4 l) y se recogieron fracciones de 500 ml. Todas las fracciones que contenían el producto, a juzgar por TLC, se reunieron y se concentraron a vacío para dar 23,8 g (74%) de un aceite incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 291 (M^{+})
Análisis para C_{15}H_{17}NO_{5}:
Calc: C, 61,85; H, 5,88; N, 4,81;
Enc: C, 61,57; H, 5,82; N, 4,71.
C) Preparación de Cbz-Pro(4-isobutilmetilideno)-OEt
Se suspendió t-butóxido de potasio (34 g, 288 mmol) en tetrahidrofurano (800 ml) en un matraz de fondo redondo de 2 l con dos bocas secado a la estufa, equipado con entrada de nitrógeno, varilla de agitación magnética, y embudo de adición. A esta suspensión se añadió, en varias porciones, bromuro de isoamiltrifenilfosfonio (120 g, 288 mmol). Después de agitar durante 30 min, se añadió gota a gota una solución de Cbz-Pro(4-oxo)-OEt (70 g, 240 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) por medio de un embudo de adición durante un periodo de 1 h. Después de agitar durante 2 h adicionales, se añadió NH_{4}Cl acuoso saturado (100 ml). Esta solución se diluyó con acetato de etilo (750 ml) y se separaron las capas. La capa orgánica se lavó dos veces con ácido cítrico 1N, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado, y dos veces con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar un aceite amarillo. Este aceite se purificó por cromatografía súbita sobre gel de sílice, eluyendo con 2:1 hexanos/acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y se concentraron a vacío para dar 37 g (45%) de un aceite incoloro.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 345 (M^{+})
Análisis para C_{20}H_{27}NO_{4}:
Calc: C, 69,54; H, 7,88; N, 4,05;
Enc: C, 69,74; H, 7,85; N, 3,99.
D) Preparación de Pro(4-cis-isoamil)-OEt\cdotHCl
A una solución de Cbz-Pro(4-isobutilmetilideno)-OEt (37 g, 107 mmol) en etanol (500 ml) se añadió 5% Pd/C (5 g). Se borboteó nitrógeno gaseoso a través de esta solución durante 5 min y se borboteó después a través de la misma hidrógeno gaseoso durante 3 h. La solución se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas. Se borboteó luego cloruro de hidrógeno gaseoso a través de la solución hasta saturación, y se concentró después a vacío la solución para dar 26 g (97%) de un aceite ambarino.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 214 (M^{+})
Análisis para C_{12}H_{24}ClNO_{2}:
Calc: C, 57,70; H, 9,68; N, 5,61;
Enc: C, 57,46; H, 9,50; N, 5,82.
E) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Phe-Pro(4-cis-isoamil)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-A y 1-D, 18-E, 44-B, 47-A (utilizando bromoacetato de bencilo) y 18-F, se obtuvieron 0,27 g de HOOCCH_{2}-D-Phe-Pro(4-cis-isoamil)-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C-(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de Boc-D-Cha y Pro(4-cis-isoamil)-OEt\cdotHCl. Se utilizó el método 2 de HPLC en la purificación de este material, utilizando un gradiente de 98/2 A/B hasta 50/50 A/B durante 3 h.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 528,4 (MH^{+})
Análisis para C_{29}H_{45}N_{5}O_{4}\cdot1,9HCl:
Calc: C, 58,34; H, 7,92; N, 11,73; Cl, 11,28;
Enc: C, 58,30; H, 7,85; N, 11,83; Cl, 11,27.
Ejemplo de Referencia 51
87
D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
(Dihidrocloruro de D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-A, 46-E, y 18-E, se prepararon 32,5 g (94%) de Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Boc-D-Cha-Pro-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 634 (M^{+})
Análisis para C_{35}H_{47}N_{5}O_{6}:
Calc: C, 66,33; H, 7,47; N, 11,05;
Enc: C, 66,30; H, 7,47; N, 11,26.
B) Preparación de D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-A, se prepararon 9,6 g (101%) de D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl a partir de Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 534 (M^{+})
Análisis para C_{30}H_{41}N_{5}O_{4}Cl_{2}:
Calc: C, 59,40; H, 6,81; N, 11,54; Cl, 11,69;
Enc: C, 59,54; H, 6,80; N, 11,77; Cl, 11,21.
C) Preparación de D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-F, se prepararon 0,74 g (62%) de D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdot2HCl. Se utilizó el método 2 de HPLC en la purificación de este material, utilizando un gradiente de 98/2 A/B a 75/25 A/B durante 2,5 h.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 400,3 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot2,1HCl:
Calc: C, 55,50; H, 7,43; N, 14,71; Cl, 15,64;
Enc: C, 55,64; H, 7,50; N, 14,65; Cl, 15,81.
Ejemplo de Referencia 52
88
HOOCCH_{2}CH_{2}-D-Cha-Pro-p-HCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(2-carboxietil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de HOOCCH_{2}CH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Se suspendió D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl (2,5 g, 4,1 mmol) en EtOAc (100 ml) con agitación. Se añadió a la suspensión una solución de KHCO_{3} 1M (100 ml) y la mezcla se agitó hasta que se hubo disuelto totalmente el sólido. La mezcla se transfirió a un embudo de separación y se separaron las capas. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 1,24 g de la base libre como un sólido blanco. Este sólido se disolvió en EtOH (100 ml). Se añadió acrilato de bencilo (0,41 g, 2,6 mmol) y la solución se agitó durante 2 días a la temperatura ambiente. A continuación, se añadieron a esta solución agua (50 ml), HCl 1N (4,6 ml) y 5% Pd/C (0,5 g) y la suspensión mantenida en agitación se desgasificó y se puso en atmósfera de hidrógeno. Después de 16 h, se añadió tierra de diatomeas y la suspensión se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas. Se concentró el filtrado a un volumen de 25 ml a vacío y se purificó por RPHPLC preparativa, método 2, utilizando un gradiente de 98/2 A/B hasta 75/25 A/B durante 2,5 h. Las fracciones que contenían producto puro (a juzgar por la HPLC analítica) se agruparon, se concentraron y se liofilizaron para dar 0,27 g (23%) de HOOCCH_{2}CH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 472,4 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{4}\cdot1,9HCl:
Calc: C, 55,50; H, 7,25; N, 12,94; Cl, 12,45;
Enc: C, 55,26; H, 7,26; N, 13,21; Cl, 12,85.
Ejemplo de Referencia 53
89
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-piperidina\cdotHCl
A) Preparación de Boc-4-(aminometil)piridina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 34-A, se prepararon 19 g (87%) de Boc-4-(aminometil)piridina a partir de 4-(aminometil)piridina.
^{1}H NMR
B) Preparación de 4-BocNHCH_{2}-N-Cbz-piperidina
Se disolvió 4-BocNHCH_{2}-piridina (10 g, 48 mmol) en etanol (280 ml) y se añadió 5% Rh/C (10 g). La suspensión se agitó mediante sacudidas en atmósfera de hidrógeno (4,1 bares, 60 psi) a 60ºC durante una noche. El catalizador se separó luego por filtración y la solución se concentró a vacío para dar 9,0 g de un sólido gris. Una porción de 3,2 g del sólido se disolvió en tetrahidrofurano (75 ml) y se añadió una solución acuosa (75 ml) de carbonato de potasio (4,2 g, 30 mmol). A esta solución, mantenida en agitación, se añadió cloroformiato de bencilo (2,3 ml, 16 mmol). Después de 15 min, la solución se concentró a vacío hasta aproximadamente la mitad del volumen original y se diluyó luego con acetato de etilo. La fase orgánica se separó y se lavó con salmuera, después de lo cual se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 4,6 g (76%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 349 (M^{+})
C) Preparación de 4-NH_{2}CH_{2}-N-Cbz-piperidina\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-A, se prepararon 3 g (84%) de 4-NH_{2}CH_{2}-N-Cbz-piperidina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}-N-Cbz-piperidina.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 249 (MH^{+})
D) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
Se disolvió N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Phe-Pro-OH (13 g, 27 mmol) en etanol (750 ml) y se añadió PtO_{2} (13 g). La suspensión se agitó en atmósfera de hidrógeno a 4,1 bares (60 psi) a 40ºC durante 16 h. Se separó luego el catalizador por filtración y el filtrado se concentró a vacío para dar 11,7 g (90%) de una espuma blanca.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 483 (M^{+})
Análisis para C_{25}H_{42}N_{2}O_{7}:
Calc: C, 62,22; H, 8,77; N, 5,80;
Enc: C, 62,99; H, 8,96; N, 5,48.
E) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-G y el Ejemplo 46-D, se prepararon 1,1 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-piperidina\cdotHCl a partir de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH y HCl\cdot4-NH_{2}CH_{2}-N-Cbz-piperidina. El producto se purificó con RPHPLC, método 2, con aumento desde 98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B) durante 2 h.
IR
^{1}H NMR
FD/MS, m/e 423 (M^{+})
Análisis para C_{22}H_{38}N_{4}O_{4}\cdot2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 50,57; H, 8,29; N, 10,72;
Enc: C, 50,31; H, 8,46; N, 10,93.
Ejemplo de Referencia 54
90
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 52, se prepararon 0,59 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl a partir de 4-aminoetilpiridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2, con aumento desde 98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B) durante 2 h.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 437 (M^{+})
Análisis para C_{23}H_{40}N_{4}O_{4}\cdot2,5HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 49,80; H, 8,27; N, 10,10;
Enc: C, 49,95; H, 8,08; N, 10,34.
Ejemplo de Referencia 55
91
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl
A) Preparación de 4-hidroxipropil-N-Cbz-piperidina
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 53-B, se prepararon 28 g (67%) de 4-hidroxipropil-N-Cbz-piperidina a partir de 4-hidroxipropilpiridina.
^{1}H NMR
B) Preparación de 4-(NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2})-N-Cbz-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 30-B, 30-C y 30-D, se prepararon 7,3 g de 4-(NH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2})-N-Cbz-piperidina\cdotHCl a partir de 4-hidroxipropil-N-Cbz-piperidina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 276 (M^{+})
C) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 53-D y 53-E, se prepararon 0,39 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-piperidina\cdotHCl a partir de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH y 4-aminopropil-N-Cbz-piperidina\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2, con aumento desde 98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B) durante 2 h.
IR
^{1}H NMR
IS-MS, m/e 451,4 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{42}N_{4}O_{4}\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 53,23; H, 8,56; N, 10,35;
Enc: C, 53,43; H, 8,63; N, 10,19.
Ejemplo de Referencia 56
92
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidinopiperidina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[1-(aminoiminometil)-hexahidropiridin-4-il]metil]-L-prolinamida)
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidinopiperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 34-D, 23-A, 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH), 18-E, y 1-H, se prepararon 0,35 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidi-
nopiperidina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}piperidina. El producto final se purificó por RPHPLC método 2 (aumento desde 98/2 (A/B) hasta 75/25 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 465 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{40}N_{6}O_{4}\cdot2HCl:
Calc: C, 51,39; H, 7,88; N, 15,63; Cl, 13,19;
Enc: C, 51,66; H, 7,98; N, 15,80; Cl, 13,48.
Ejemplo de Referencia 57
93
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-1-amidinopiperidina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-1-amidinopiperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 34-D, 23-A, 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH), 18-E, y 1-H, se prepararon 0,34 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-1- amidinopiperidina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-piperidina. El producto final se purificó por RPHPLC método 2 (aumento 98/2 (A/B) hasta 75/25 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{42}N_{6}O_{4}\cdot2HCl:
Calc: C, 52,26; H, 8,07; N, 15,24; Cl, 12,86;
Enc: C, 52,56; H, 8,15; N, 15,37; Cl, 13,07.
Ejemplo de Referencia 58
94
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
A) Preparación de yoduro de 4-BocNHCH_{2}-N-metil-piridinio
A una solución mantenida en agitación de 4-BocNHCH_{2}-piridina (20 g, 96 mmol) en acetonitrilo (200 ml) se añadió yodometano (8,9 ml, 144 mmol). Después de 16 h, la solución se concentró a vacío para dar 33,8 g (96%) de un aceite espeso de color amarillo claro.
FD-MS, m/e 223,1 (M^{+}).
B) Preparación de 4-BocNHCH_{2}-N-Fmoc-3,4-deshidro-piperidina
A una solución mantenida en agitación de yoduro de 4-BocNHCH_{2}-N-metil-piridinio (7,7 g, 34 mmol) en 1,2-dicloroetano (100 ml) se añadió 1,8-bis(dimetilamino)naftaleno (1,5 g, 6,8 mmol) seguido por cloroformiato de 2-cloroetilo (5,3 g, 37 ml). La solución se calentó a reflujo y, después de 2 h, se enfrió la solución a la temperatura ambiente y se eliminó el disolvente a vacío, después de lo cual el residuo se arrastró rápidamente por lavado a través de una columna de gel de sílice con 20% acetato de etilo/hexanos. Se separaron a vacío los disolventes orgánicos y el residuo se disolvió en metanol (300 ml) y se calentó a reflujo durante 20 min. Se añadió luego NaHCO_{3} acuoso saturado (100 ml) y se eliminaron los disolventes a vacío. El residuo se disolvió en agua (200 ml) y se lavó dos veces con hexanos, se saturó a continuación con NaCl sólido y se extrajo varias veces con acetato de etilo. Los extractos en acetato de etilo reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar un aceite amarillo claro que se disolvió en diclorometano (75 ml). A esta solución mantenida en agitación se añadió luego N,N-diisopropiletilamina (2,1 ml, 12,2 mmol) seguida por cloroformiato de 9-fluorenilmetilo (3,2 g, 12,2 mmol). Después de 2 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo (250 ml) y se lavó dos veces con ácido cítrico 1N, una sola vez con salmuera, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado y finalmente una sola vez con salmuera. La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío, y el residuo se cromatografió en una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de 5% acetato de etilo/hexanos hasta 50% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y se concentraron para dar 4 g (27%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 435 (M^{+})
C) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-N-Fmoc-3,4-deshidro-piperidina
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 23-A y 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-OH), se prepararon 2,5 g de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-N-Fmoc-3,4- deshidro-piperidina a partir de 4-Boc-NHCH_{2}-N-Fmoc-3,4-deshidro-piperidina.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 799 (M^{+})
D) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,4-deshidro-piperidina
Se disolvió N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-N-Fmoc-3,4-deshidro-piperidina (1,5 g, 1,9 mmol) en morfolina (25 ml) y, después de agitar durante 5 h, se evaporó el disolvente a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se disolvió luego en un pequeño volumen de cloroformo y se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 5% a 10% A/B (A = 9:1 metanol/NH_{4}OH conc.; B = cloroformo). Las fracciones que contenían el producto a juzgar por TLC se reunieron y concentraron a vacío para dar 890 mg (82%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 576 (MH^{+})
E) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Se borboteó HCl gaseoso a través de una solución de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,4-deshidro-piperidina (820 mg, 1,4 mmol) y anisol (1 ml) en dioxano (25 ml) a 0ºC durante 10 min. Después de agitar durante 12 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en agua (50 ml) y se lavó dos veces con dietil-éter. La fase acuosa se concentró luego a un volumen de aproximadamente 20 ml a vacío y se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h). Las fracciones que contenían el producto, a juzgar por la RPHPLC analítica se reunieron, se concentraron parcialmente a vacío y se liofilizaron para dar 442 mg (68%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 423 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{36}N_{4}O_{4}\cdot2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 50,57; H, 8,29; N, 10,72;
Enc: C, 50,31; H, 8,46; N, 10,93.
Ejemplo de Referencia 59
95
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 58, se prepararon 73 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-piridina. El producto final se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
IS-MS, m/e 435,2 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{38}N_{4}O_{4}\cdot2,3HCl\cdot3H_{2}O:
Calc: C, 48,26; H, 8,15; N, 9,79; Cl, 14,24;
Enc: C, 48,31; H, 7,93; N, 9,66; Cl, 14,56.
Ejemplo de Referencia 60
96
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 58, se prepararon 205 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}CH_{2}-piridina.
IR
^{1}H NMR
IS-MS, m/e 449,2 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{40}N_{4}O_{4}\cdot2,3HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 52,37; H, 3,11; N, 10,18;
Enc: C, 51,64; H, 7,72; N, 10,31; Cl, 14,69.
Ejemplo de Referencia 61
97
(1R,4aR,8aR)-1-Piq-Pro-Agm\cdot3HCl
(Trihidrocloruro de N-[4-[(aminoiminometil)amino]butil]-1-[[(4aR,8aR)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-1-prolinamida)
Los valores Rf en este Ejemplo se determinaron por cromatografía en capa delgada con gel de sílice (Kieselgel 60F-254) en los sistemas siguientes (v/v):
(A) cloroformo:metanol:ácido acético 135:15:1
(B) acetato de etilo:ácido acético:etanol absoluto 90/10/10
(C) Acetato de etilo:hexanos (70/30)
(D) Cloroformo
A) N-Metoxicarbonilfenetilamina
A una solución agitada de fenetilamina (75,2 ml, 0,6 mmol) y trietilamina (83 ml, 0,6 mmol) en THF (500 ml) se añadió lentamente cloroformiato de metilo (46,2 ml, 0,6 mmol) disuelto en THF (50 ml). Después de ello se agitó la mezcla de reacción durante 1 hora adicional a la temperatura ambiente, y se añadieron dietil-éter (2 l) y HCl 1N (800 ml). La capa orgánica se lavó con agua, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro del compuesto del título puro (102 g, 95%).
B) Ácido 2-metoxicarbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-1-carboxílico
A una solución de N-metoxicarbonil-fenetilamina (102 g, 0,57 mmol) en ácido trifluoroacético (300 ml) se añadió ácido glioxílico (63 g, 0,68 mmol), y la mezcla se calentó a la temperatura de reflujo. Después de 4 h a reflujo, la reacción se enfrió a la temperatura ambiente, se eliminó el disolvente a vacío, y se añadieron dietil-éter (800 ml)/agua (100 ml) al residuo. El pH de la mezcla de reacción se elevó a 12 con NaOH 5N y se separó la capa acuosa. Se añadió a la capa acuosa dietil-éter (500 ml), y la solución se acidificó a pH 2,5 con HCl 5N. Se separó la capa orgánica, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para proporcionar un aceite del compuesto del título puro (107 g, 80%); FAB-MS 236 (MH^{+}).
C) Ácido 2-metoxicarbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-1-carboxílico, éster t-butílico
A una solución agitada y enfriada (0ºC) de ácido 2-metoxicarbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-1-carboxílico (2)(105 g, 0,45 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se añadieron t-butanol (52 ml, 0,54 mmol) y DCC (92 g, 0,45 mmol). Después de 2 h a 0ºC y 24 h a la temperatura ambiente, se eliminó el disolvente a vacío, y se añadieron al residuo acetato de etilo (800 ml)/NaHCO_{3} 1N (300 ml). Se separó la capa orgánica, se lavó con agua, ácido cítrico 1,5N, y agua. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para proporcionar un aceite del compuesto del título puro (106 g, 81%); FAB-MS 292 (MH^{+}); TLC Rf (A) 0,61; análisis elemental (calculado) C_{16}H_{21}NO_{4}: C, 65,96; H, 7,27; N, 4,81; Enc: C, 66,24; H, 7,28; N, 4,73.
D) Ácido 2-metoxicarbonil-(1RS,4aSR,8aSR)-perhidro-isoquinolina-1-carboxílico, éster t-butílico
Una solución de éster t-butílico del ácido 2-metoxicarbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-1-carboxílico(105 g, 0,36 mmol) en t-butanol (800 ml) se redujo sobre 5% Rh/Al_{2}O_{3} (52,5 g) a 55 bares (800 psi) de hidrógeno en un aparato de alta presión a 50ºC durante 24 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un taco de tierra de diatomeas, y el filtrado se concentró a vacío. El aceite resultante se secó para dar el compuesto del título puro (96,5 g, 90%). FD-MS 298 (MH^{+}); TLC Rf (C) 0,63.
E) Éster etílico del ácido 2-metoxicarbonil-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidroisoquinolina-1-carboxílico
A una solución de éster t-butílico del ácido 2-metoxicarbonil-(1RS,4aSR,8aSR)-perhidroisoquinolina-1-carboxílico (81,2 g, 273 mmol) en EtOH (500 ml) se añadió etóxido de sodio (21% en etanol) (88,4 ml, 273 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo (24 horas). El disolvente orgánico se evaporó a vacío, y se añadieron al residuo acetato de etilo (400 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se separó, se lavó dos veces con agua, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para proporcionar un aceite del compuesto del título puro (70 g, 95%); FAB-MS 270 (MH^{+}); TLC Rf (A) 0,61.
F) Ácido 2-metoxicarbonil-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidro-isoquinolina-1-carboxílico
A una solución del producto del paso E (70 g, 260 mmol) en THF (250 ml) se añadió NaOH 2N (156 ml, 312 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente (30 h). El disolvente orgánico se evaporó a vacío, y se añadieron dietil-éter (400 ml) y agua (100 ml) al residuo. La capa acuosa se separó y se añadió acetato de etilo (400 ml). El pH de la solución se ajustó a 2,0 con HCl 5N. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro. El aceite se cristalizó en hexano (200 ml) para proporcionar el compuesto del título puro (46,4 g, 74%); FAB-MS 242 (MH^{+}); TLC Rf (A) 0,36; análisis elemental (calculado) C_{12}H_{19}NO_{4}: C, 59,74; H, 7,94; N, 5,81; Enc: C, 59,95; H, 7,88; N, 5,54. Las asignaciones de NMR se hicieron por desacoplamiento homonuclear, experimentos COSY, HMQC, y DEPT.
G) Ácido 2-Cbz-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidroisoquinolina-1-carboxílico
A una solución agitada del producto del paso F (46 g, 191 mmol), a la temperatura ambiente, en CH_{3}CN anhidro (200 ml) en atmósfera inerte se añadió una solución de yodotrimetilsilano (62,4 ml, 440 mmol) en CH_{3}CN (60 ml). La mezcla de reacción se agitó a 55ºC durante 30 min y se enfrió a la temperatura ambiente. La reacción se extinguió con agua (100 ml) seguida por metabisulfito de sodio (1 g). El pH de la mezcla de reacción se elevó a 10,0 con NaOH 5N, y se añadió gota a gota cloroformiato de bencilo (27,3 ml, 191 mmol) mientras el pH se mantenía a 10 con NaOH 2N. Después de agitar la mezcla de reacción durante 30 minutos adicionales a la temperatura ambiente, se evaporó el disolvente orgánico a vacío, y se añadió dietil-éter (200 ml). La mezcla de reacción se dejó en reposo a la temperatura ambiente (2 h) y se añadió acetato de etilo (200 ml). La solución acuosa se acidificó a p 2,5 con HCl 5N; se separó la capa orgánica, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para dar el compuesto del título puro como un aceite (39,5 g, 65%); FAB-MS 318 (MH^{+}); análisis elemental (calculado) C_{18}H_{23}NO_{4}: C, 68,12; H, 7,30; N, 4,41; Enc: C, 66,37; H, 7,52; N, 4,37.
H) 2-Cbz-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidroisoquinolina-1-carbonil-Pro-O-t-Bu
A una solución agitada y enfriada (0ºC) del producto del paso G (39 g, 123 mmol) en DMS (200 ml) se añadieron éster t-butílico de prolina (21,1 g, 123 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (16,6 g, 123 mmol), y DCC (25,3 g, 123 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 0ºC y 24 h a la temperatura ambiente. El precipitado de la reacción se filtró y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en EtOAc (200 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO_{3} 1N, agua, ácido cítrico 1,5N, y agua. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se evaporó para dar un sólido amorfo del compuesto del título como una mezcla de diastereoisómeros (52,7 g, 91%) FAB-MS 471 (MH^{+}).
I) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhidroisoquinolina-I(R)-carbonil-Pro-OH
A una solución agitada del producto del paso H (52,4 g, 111 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se añadieron ácido trifluoroacético (70 ml) y anisol (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a vacío sin calentamiento. El residuo se diluyó con dietil-éter (400 ml), y agua (100 ml), y el pH de la solución se ajustó a 10,0 con NaOH 5N. La capa acuosa se separó y se añadió acetato de etilo (300 ml). El pH de la solución se ajustó a 2,5 con HCl 5N; la capa orgánica se separó, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite claro. El aceite se disolvió en dietil-éter (500 ml) y se añadió a la solución L-(-)-alfa-metilbencilamina. La solución se dejó en reposo a la temperatura ambiente (24 h). El sólido resultante se filtró, se lavó con dietil-éter y se secó. El sólido se suspendió en acetato de etilo, se lavó con ácido cítrico 1,5N, y con agua. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y el filtrado se evaporó para dar el compuesto del título como un aceite (20,2 g, 44%); FAB-MS 415 (MH^{+}); [\alpha]_{D} = 3,2º (C = 0,5, MeOH); análisis elemental (calculado) C_{23}H_{30}N_{2}O_{5}: C, 66,65; H, 7,30; N, 6,76. Encontrado: C, 66,38; H, 7,36; N, 6,63.
J) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhidroisoquinolina-1(R)-carbonil-Pro-NH-(CH_{2})_{4}-NH-Boc
En el matraz 1 se disolvió el producto del paso I (1,06 g, 2,55 mmol) en DMS (10 ml), se enfrió a -15ºC y se añadió N-metilmorfolina (0,28 ml, 2,55 mmol),seguida por cloroformiato de isobutilo (0,33 ml, 2,55 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -15ºC durante 2 min.
En el matraz 2 se disolvió N-Boc-1,4-diamino-butano (0,48 g, 2,55 mmol) en DMS (10 ml), se enfrió a 0ºC, y se añadió N-metilmorfolina (0,28 ml, 2,55 mmol) a la solución. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 2 min.
El contenido del matraz 2 se añadió al matraz 1, y la mezcla de reacción se agitó durante 4 h (-15ºC) y 24 h a la temperatura ambiente. Se añadió a la mezcla de reacción NaHCO_{3} 1N (1 ml) y el disolvente de reacción se eliminó a vacío para dar un aceite. El residuo se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó sucesivamente con ácido cítrico 1,5N, agua, NaHCO_{3} 1N (100 ml), y agua. La solución orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a sequedad a vacío para dar el compuesto del título bruto como un sólido (1,47 g, 99%): FAB-MS 585 (MH^{+}); TLC Rf (A) 0,70.
K) (4aR,8aR)-Perhidroisoquinolina-1(R)-carbonil-Pro-Agm\cdot3HCl
A una solución agitada del producto el paso J (1,4 g, 2,4 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) se añadieron ácido trifluoroacético (25 ml) y anisol (2,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 30 min y se concentró a vacío sin calentamiento. La mezcla de reacción se diluyó con dietil-éter (100 ml) y se decantó el sobrenadante. El aceite resultante se trituró dos veces con dietil-éter y se secó. El aceite secado se disolvió en THF (20 ml) y se añadieron a la mezcla trietilamina (0,66 ml, 4,8 mmol), y bis-Cbz-S-metilisotiourea (0,859 g, 2,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 48 h. El disolvente orgánico se evaporó a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó sucesivamente con NaHCO_{3} 1N (100 ml), y agua. La solución orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a sequedad a vacío para dar un sólido bruto (1,5 g, 79%): TLC Rf (D) 0,33. El sólido bruto (1,5 g, 1,93 mmol) disuelto en etanol (50 ml), agua (10 ml), y HCl 1N (5,8 ml, 5,8 mmol) se hidrogenó en presencia de 5% Pd/C como catalizador (2,5 g) a la temperatura y presión del ambiente. El catalizador se eliminó por filtración y el filtrado se concentró a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en ácido trifluoroacético (10 ml), y se añadieron a la mezcla tioanisol (1,0 ml) y ácido trifluorometanosulfónico (1,0 ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 0,5 h y se añadió dietil-éter (100 ml). Se decantó el sobrenadante, y el aceite resultante se trituró dos veces con dietil-éter y se secó a vacío para dar un sólido bruto (1,3 g). El sólido (1,3 g) se disolvió en HCl al 0,05% y se aplicó a una columna de 5 x 25 CN de resina Vydac C_{18}. Se utilizó un gradiente de concentraciones crecientes de CH_{3}CN (2% a 25%) para eluir el péptido de la columna. Se recogieron fracciones y se agruparon sobre la base del perfil de RPHPLC analítica y se liofilizaron para proporcionar el compuesto del título puro (0,139 g, 15%): FAB-MS 393 (MH^{+}); análisis elemental (calculado) C_{20}H_{36}N_{6}O_{2}\cdot5HCl\cdot3H_{2}O: C, 38,28; encontrado, C, 38,34.
Ejemplo 62
98
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2}]-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D, y 58-E, se prepararon 0,17 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl a partir de hidrocloruro de 4-nitrobencilamina. El producto final se purificó por RPHPLC, método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 431,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{34}N_{4}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 51,37; H, 7,35; N, 10,42; Cl, 14,50;
Enc: C, 50,87; H, 6,72; N, 10,41; Cl, 14,18.
Ejemplo 63
99
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 62, se prepararon 0,19 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}NH_{2}\cdotHCl a partir de hidrocloruro de 4-nitrofenetilamina. El producto final se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 445,3 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{36}N_{4}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 54,00; H, 7,40; N, 10,50; Cl, 14,61;
Enc: C, 53,65; H, 7,59; N, 10,24; Cl, 14,33.
Ejemplo de Referencia 64
100
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de 4-Boc_{2}NCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NO_{2}
A una solución mantenida en agitación de 2-fluoro-4-nitrotolueno (5 g, 32 mmol) en tetracloruro de carbono (160 ml) se añadió N-bromosuccinimida (5,7 g, 32 mmol) seguida por peróxido de benzoílo (0,78 g, 3,2 mmol) y la solución se calentó a reflujo. Después de 12 h, se retiró la fuente de calor y se diluyó la mezcla con tetracloruro de carbono (100 ml) y se lavó con agua. La fase orgánica se diluyó luego con acetato de etilo (300 ml), se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en tetrahidrofurano (50 ml) y se añadió a una solución mantenida en agitación de NaH (dispersión al 60% en aceite); 1,3 g, 32 mmol) e iminodicarboxilato de di-t-butilo (6,9 g, 32 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml). Después de agitar durante una noche, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 20% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto (a juzgar por TLC) se reunieron y se concentraron a vacío para dar 3,9 g (33%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 370 (M^{+})
Análisis para C_{17}H_{23}N_{2}O_{6}:
Calc: C, 55,13; H, 6,26; N, 7,56;
Enc: C, 55,27; H, 6,23; N, 7,44.
B) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D y 58-E, se prepararon 0,44 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NH_{2}\cdotHCl. El producto final se purificó utilizando RPHPLC método 2, 98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{4}O_{4}F\cdot1,3HCl:
Calc: C, 55,70; H, 6,97; N, 11,30; Cl, 9,29;
Enc: C, 55,38; H, 6,97; N, 11,05; Cl, 9,31.
Ejemplo de Referencia 65
101
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-amidinotiofeno\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[5-(aminoiminometil)tiofen-2-il]metil]-L-prolinamida
A) Preparación de 2-ciano-5-formiltiofeno
A un matraz de fondo redondo de 1 l con 3 bocas secado a la llama se añadieron diisopropilamina (9 ml, 66 mmol) y THF (150 ml) en atmósfera de nitrógeno. El matraz se enfrió hasta una temperatura interna de -78ºC (hielo seco/acetona). A esta solución mantenida en agitación se añadió n-butil-litio (1,6M en hexanos, 41,3 ml,66,1 mmol) por medio de una jeringuilla y la mezcla se mantuvo en agitación durante 5 min. Se añadió a esta solución una solución de 2-tiofenocarbonitrilo (6,55 g, 60 mmol) en THF (30 ml) durante 10 min. La solución resultante de color rojo brillante se mantuvo en agitación a -78ºC durante 45 min, llegado cuyo momento se añadió dimetil-formamida (23,3 ml, 300 mmol) por medio de una jeringuilla. Esta mezcla se mantuvo en agitación durante 2 h a -78ºC y se añadió luego ácido cítrico sólido (aproximadamente 10 g) seguido por agua (60 l). Los disolventes volátiles se eliminaron a vacío y el residuo se repartió entre dietil-éter y salmuera (200 ml de cada uno). Se separaron las capas y la fase acuosa se lavó una sola vez con dietil-éter. La fase orgánica reunida se lavó una sola vez con salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un sólido amarillo que se purificó por cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo/hexanos (hexanos hasta 50% acetato de etilo/hexanos). Las fracciones que contenían el producto puro se reunieron y se concentraron a vacío para dar 6,9 g (84%) de 2-ciano-5-formil-tiofeno.
^{1}H NMR
B) Preparación de 2-ciano-5-(hidroximetil)tiofeno
A una solución de 2-ciano-5-formil-tiofeno (6,9 g, 50 mmol) en EtOH (100 ml) se añadió borohidruro de sodio (1,9 g, 50 mmol) en porciones. Después de 5 min de agitación, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo y salmuera. Se separaron los capas y la fase orgánica se lavó una sola vez con ácido cítrico 1M y una sola vez con salmuera, después de lo cual se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 6,1 g (88%) de 2-ciano-5-(hidroximetil)tiofeno.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 140 (M^{+})
Análisis para C_{6}H_{5}NOS:
Calc: C, 51,78; H, 3,62; N, 10,06;
Enc: C, 51,54; H, 3,62; N, 9,86.
C) Preparación de 2-ciano-5-(bromometil)tiofeno
A una solución de 2-ciano-5-(hidroximetil)tiofeno (6,0 g, 43 mmol) en THF (50 ml) se añadió trifenilfosfina (15,7 g, 47 mmol) y tetrabromuro de carbono (12,3 g, 47 mmol). Después de agitar durante una noche en atmósfera de nitrógeno a la temperatura ambiente, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en cloroformo, se adsorbió luego sobre gel de sílice y se cargó en una columna de gel de sílice. El producto se eluyó utilizando un gradiente de acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto puro (a juzgar por TLC) se agruparon y concentraron a vacío para dar 6,5 g (75%) de 2-ciano-5-(bromometil)tiofeno.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 203 (M^{+})
Análisis para C_{6}H_{4}NSBr:
Calc: C, 35,66; H, 1,99; N, 6,93;
Enc: C, 35,71; H, 2,03; N, 6,95.
D) Preparación de 2-ciano-5-(aminometil)tiofeno\cdotHCl
A una solución fría (0ºC) de 2-ciano-5-(bromometil)tiofeno (6,0 g, 30 mmol) en THF (50 ml) bajo nitrógeno se añadió NaH (dispersión al 60% en aceite, 1,3 g, 33 mmol) en porciones. A esta suspensión mantenida en agitación se añadió una solución de iminodicarboxilato de di-t-butilo (7,1 g, 33 mmol) en THF (50 ml) durante 30 min. Después de agitar durante 3 h, se añadió cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml). Se eliminaron luego los disolventes volátiles a vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. Se separaron las capas y la fase orgánica se lavó dos veces con salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 10,5 g (100%) de 2-ciano-5-Boc_{2}NCH_{2}-tiofeno, que cristalizó al dejarlo en reposo. Este sólido se disolvió en EtOAc (200 ml) y se enfrió a 0ºC utilizando un baño de hielo/agua. Se borboteó HCl gaseoso anhidro a través de la solución durante 10 min y la mezcla se agitó durante 2 h mientras se calentaba a la temperatura ambiente. Se eliminaron los disolventes a vacío y el sólido resultante se suspendió en dietil-éter y se aisló por filtración. El sólido blanco se secó durante una noche a vacío para dar 5,2 g (100%) de 2-ciano-5-aminometil)tiofeno\cdotHCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 139 (M^{+})
Análisis para C_{6}H_{7}N_{2}SCl:
Calc: C, 41,26; H, 4,04; N, 16,04;
Enc: C, 41,19; H, 4,12; N, 15,82.
E) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-cianotiofeno
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH), se prepararon 4,6 g (93%) de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-cianotiofeno a partir de 2-ciano-5-(aminometil)tiofeno\cdotHCl.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 602 (M^{+})
F) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-C(NH)NHBoc-tiofeno
Se borboteó sulfuro de hidrógeno gaseoso a través de una solución de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-cianotiofeno (1,5 g, 2,5 mmol) y trietilamina (4,5 ml) en piridina (45 ml) durante 5 min y a continuación se cerró herméticamente el recipiente y se dejó en reposo durante una noche. A la mañana siguiente, se borboteó nitrógeno a través de la solución durante 5 min y se eliminó el disolvente a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó una vez con agua y una vez con salmuera, se secó luego (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se disolvió luego en tolueno y se concentró dos veces a vacío.
El residuo se disolvió luego en acetona (100 ml) y se añadió yodometano (5 ml). Después de agitar durante una noche a la temperatura ambiente, se eliminaron los disolventes a vacío. La espuma dorada resultante se disolvió luego en metanol (20 ml), se añadió NH_{4}OAc (0,39 g, 5 mmol), y la solución se calentó a reflujo. Después de 1 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en tetrahidrofurano (10 ml). A esta solución mantenida en agitación se añadió una solución de K_{2}CO_{3} (1,73 g, 12,5 mmol) en agua (10 ml), seguida por dicarbonato de di-t-butilo (2,2 g, 10 mmol). Después de agitar durante 1 h, la suspensión se diluyó con acetato de etilo (400 ml) y se lavó con agua seguida por salmuera. Se concentró luego la fase orgánica a vacío y se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de 10% acetato de etilo/hexanos hasta 75% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto, a juzgar por TLC, se reunieron y se concentraron a vacío para dar 1,1 g (61%) de una espuma blanca.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 720 (M^{+})
Análisis para C_{36}H_{57}N_{5}O_{8}S:
Calc: C, 60,06; H, 7,98; N, 9,73;
Enc: C, 59,76; H, 8,07; N, 9,52.
G) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-amidinotiofeno\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 58-E, se prepararon 500 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-amidinotiofeno\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC, método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 464,2 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{33}N_{5}O_{4}S\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 47,65; H; 6,73; N, 12,63; Cl, 12,79;
Enc: C, 47,53; H, 6,57; N, 12,59; Cl, 12,67.
Ejemplo de Referencia 66
102
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidinopiridina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[5-(aminoiminometil)piridin-2-il]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-cianopiridina
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 64-A, 23-A y 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH), se prepararon 4,4 g de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-cianopiridina a partir de 2-metil-5-cianopiridina.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 597 (M^{+})
B) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidinopiridina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 65-F y 65-G, se prepararon 130 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidinopiridina\cdotHCl a partir de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-cianopiridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 459,3 (MH^{+})HRMS (FAB), m/e calculado para C_{23}H_{35}N_{6}O_{4}: 459,2720
Encontrado: 459,2707
Ejemplo de Referencia 67
103
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidinopiperidina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidino-piperidina\cdotHCl
Se trató N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-cianopiridina (1.2 g, 2 mmol) por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, 23-B, y 1-B. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h). Las fracciones que contenían el producto menor a juzgar por RPHPLC analítica se reunieron, se concentraron parcialmente a vacío y se liofilizaron para dar 93 mg (9%) de un sólido de color verde claro.
IR
^{1}H NMR
IS-MS, m/e 465,5 (MH^{+})
HRMS (FAB), m/e calculado para C_{23}H_{41}N_{6}O_{4}: 465,3189
Encontrado: 465,3191
Ejemplo de Referencia 68
104
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidino-5,6-deshidro-piperidina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[5-(aminoiminometil)-1,2,3,4-tetrahidropiridin-2-il]metil]-L-prolinamida)
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-amidino-5,6-deshidropiperidina\cdotHCl
Se trató N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH_{2}-5-cianopiridina (1,2 g, 2 mmol) por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, 23-B, y 1-B. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h). Las fracciones que contenían el producto principal a juzgar por RPHPLC analítica se reunieron, se concentraron parcialmente y se liofilizaron para dar 422 mg (39%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
IS-MS, m/e 463,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{38}N_{6}O_{4}\cdot2,9HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 45,71; H, 7,49; N, 13,91; Cl, 17,01;
Enc: C, 45,51; H, 6,83; N, 13,66; Cl, 16,83.
Ejemplo de Referencia 69
105
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-3-NHCH_{2}-6-amidino-piridazina\cdot3HCl
(Trihidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[6-(aminoiminometil)piridazin-3-il]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de 3-metil-6-cianopiridazina
A una solución mantenida en agitación de 3-metilpiridazina (11 g, 118 mmol) en diclorometano (200 ml) se añadió AlCl_{3} (0,05 g) seguido por cianuro de trimetilsililo (21 g, 211 mmol). Después de 20 min, se añadió una solución de cloruro de p-toluenosulfonilo (38 g, 201 mmol) en diclorometano (50 ml) mediante un embudo de adición, y la solución se continuó agitando durante una noche. A la mañana siguiente, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se suspendió en etanol con agitación durante 15 min y se filtró luego para dar un sólido blanco. El sólido se disolvió en tetrahidrofurano (200 ml) y a esta solución mantenida en agitación se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (16 ml, 105 mmol). Después de 1 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se repartió entre hexanos y NH_{4}Cl acuoso saturado. Se separaron las fases y la fase acuosa se basificó con Na_{2}CO_{3} sólido, y se extrajo luego tres veces con acetato de etilo. Las fases de acetato de etilo reunidas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar 9 g (64%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 119,1 (M^{+})
B) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-3-NHCH_{2}-6-amidinopiridazina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 66, se prepararon 90 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-3-NHCH_{2}-6-amidinopiridazina\cdotHCl a partir de 3-metil-6-cianopiridazina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 460,3 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{33}N_{7}O_{4}\cdot3HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 43,68; H, 6,66; N, 16,21;
Enc: C, 44,04; H, 6,45; N, 15,57.
Ejemplo de Referencia 70
106
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidino-3,4-deshidropiperidina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[1-(aminoiminometil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de N,N'-Boc_{2}-tiourea
A una suspensión en agitación de NaH (dispersión al 60% en aceite, 9,4 g, 234 mmol) en tetrahidrofurano (500 ml) a 0ºC se añadió tiourea (4,0 g, 52 mmol). Después de 30 min, se retiró el baño de hielo y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 30 min a la temperatura ambiente. Una vez más, se enfrió el recipiente a 0ºC y se añadió una solución de dicarbonato de di-t-butilo (25 g, 115 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) mediante un embudo de adición. Después de agitar durante 30 min a 0ºC y 2 horas más a la temperatura ambiente, se añadió NaHCO_{3} acuoso saturado. La solución se concentró luego a aproximadamente la mitad del volumen original a vacío y se añadió acetato de etilo. La fase orgánica se lavó luego con NaHCO_{3}acuoso saturado, seguido por salmuera, y se secó después con MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar 11,9 g (83%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 276 (M^{+})
Análisis para C_{11}H_{20}N_{2}O_{4}S:
Calc: C, 47,81; H, 7,30; N, 10,14;
Enc: C, 47,69; H, 7,28; N, 10,34.
B) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-(N,N'-Boc_{2}-amidino)-3,4-deshidro-piperidina
A una solución mantenida en agitación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,4-deshidro-piperidina (0,6 g, 1 mmol) y trietilamina (0,35 g, 3,4 mmol) en dimetilformamida (10 ml) se añadió N,N'-Boc_{2}-tiourea (0,28 g, 1 mmol) seguido por HgCl_{2} (0,28 g, 1 mmol). Después de 4 h, el disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó dos veces con salmuera. La fase orgánica se secó luego con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. El producto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 20% acetato de etilo/hexanos hasta 75% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto a juzgar por TLC se reunieron y se concentraron a vacío para dar 800 mg (94%) de una espuma blanca.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 820 (MH^{+})
Análisis para C_{42}H_{70}N_{6}O_{10}:
Calc: C, 61,59; H, 8,61; N, 10,26;
Enc: C, 61,81; H, 8,79; N, 10,45.
C) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidino-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 58-E, se prepararon 0,22 g (55%) de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-amidino-3,4-deshidro-piperidina\cdotHCl a partir de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-1-(N,N'-Boc_{2}-amidino)-3,4-deshidro-piperidina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 463,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{38}N_{6}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot2H_{2}O:
Calc: C, 47,73; H, 7,70; N, 14,52; Cl, 13,47;
Enc: C, 47,49; H, 7,64; N, 14,55; Cl, 13,48.
Ejemplo de Referencia 71
107
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-benzamidina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)-2-fluorofenil]metil]-L-prolinamida)
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-benzamidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 66, se prepararon 0,27 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-benzamidina\cdotHCl a partir de 3-F-4-Me-benzonitrilo. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 2 h).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 476,3 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{34}N_{5}O_{4}F\cdot2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 50,09; H, 6,83; N, 12,17; Cl, 12,32;
Enc: C, 49,89; H, 6,65; N, 12,17; Cl, 12,42.
\newpage
Ejemplo de Referencia 72
108
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,5-F_{2}-benzamidina\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil-2,6-difluorofenil]metil]-L-prolinamida)
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,5-F_{2}-benzamidina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 65, se prepararon 0,28 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3,5-F_{2}-benzamidina\cdotHCl a partir de 3,5-F_{2}-benzonitrilo. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 494,2 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{33}N_{5}O_{4}F_{2}\cdot2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 48,57; H, 6,45; N, 11,80; Cl, 11,95;
Enc: C, 48,26; H, 6,17; N, 11,89; Cl, 11,90.
Ejemplo de Referencia 73
109
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
A) Preparación de 4-metil-2-ftalimidopiridina
A una solución mantenida en agitación de 4-metil-2-aminopiridina (50 g, 460 mmol) en ácido acético (1 l) se añadió anhídrido ftálico (68 g, 460 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Después de 12 h, se añadió anhídrido acético (43 ml, 460 mmol) y la solución se continuó agitando a reflujo durante 48 h adicionales. Se eliminó luego el disolvente a vacío y el residuo sólido se suspendió en tolueno y se concentró dos veces a vacío. El sólido se suspendió luego en acetato de etilo con agitación enérgica y se filtró. Después de repetir este procedimiento de lavado con acetato de etilo, el sólido se secó durante una noche a vacío para dar 46,6 g (42%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 238 (M^{+})
Análisis para C_{14}H_{10}N_{2}O_{2}:
Calc: C, 70,58; H, 4,23; N, 11,76;
Enc: C, 70,42; H, 4,29; N, 11,70.
b) Preparación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-ftalimidopiridina
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 64-A, 23-A y 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH), se prepararon 2,4 g de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-ftalimidopiridina a partir de 4-metil-2-ftalimidopiridina.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 717,7 (M^{+})
C) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
A una solución mantenida en agitación de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-ftalimidopiridina (1,6 g, 2,2 mmol) en etanol (25 ml) se añadió hidrato de hidrazina (0,52 ml, 10,4 mmol). Después de 1 h, se eliminaron los disolventes a vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se concentró dos veces a vacío. El residuo se trató por un procedimiento sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 58-E para dar 380 mg (37%) de un sólido blanco. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{33}N_{5}O_{4}\cdot2,1HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 50,23; H, 7,11; N, 13,31;
Enc: C, 50,05; H, 7,08; N, 13,54.
Ejemplo de Referencia 74
110
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 73, se prepararon 0,88 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}-2-aminopiridina \cdotHCl a partir de 5-metil-2-aminopiridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{33}N_{5}O_{4}\cdot2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 50,58; H, 7,14; N, 13,40;
Enc: C, 50,79; H, 7,20; N, 13,58.
Ejemplo de Referencia 75
111
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
A) Preparación de 5-Me-2-Boc_{2}N-piridina
A una solución mantenida en agitación de 5-metil-2-aminopiridina (10,5 g, 100 mmol), en diclorometano (200 ml) a 0ºC se añadió N,N-diisopropiletilamina (25,8 g, 200 mmol), seguida por dicarbonato de di-t-butilo (55 g, 250 mmol) y finalmente 4-(N,N-dimetilamino)piridina (12,2 g, 100 mmol). Se retiró el baño de enfriamiento y se dejó que la solución continuara en agitación durante una noche. La mezcla de diluyó luego con acetato de etilo (600 ml) y se lavó tres veces con NH_{4}Cl acuoso saturado, una vez con salmuera, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado, y una vez más con salmuera. La fase orgánica se secó luego (MgSO_{4}), se filtró, se concentró a vacío y se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con 10% acetato de etilo/hexanos hasta 75% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto, a juzgar or TLC, se reunieron y concentraron a vacío para dar 12,8 g (42%) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 308 (M^{+})
Análisis para C_{16}H_{24}N_{2}O_{4}:
Calc: C, 62,32; H, 7,84; N, 9,08;
Enc: C, 62,51; H, 8,11; N, 9,37.
B) Preparación de 5-BrCH_{2}-2-Boc_{2}N-piridina
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 64-A, se prepararon aproximadamente 11,6 g de 5-BrCH_{2}-2-Boc_{2}N-piridina (que estaba contaminada con material de partida) a partir de 5-Me-2-Boc_{2}N-piridina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 386,3 (M^{+})
Análisis para C_{16}H_{23}N_{2}O_{4}Br;
Calc: C, 49,62; H, 5,99; N, 7,23;
Enc: C, 49,86; H, 6,00; N, 7,07.
C) Preparación de 5-NCCH_{2}-2-Boc_{2}N-piridina
A una solución mantenida en agitación de 5-BrCH_{2}-2-Boc_{2}-N-piridina ligeramente impura (9,7 g, 25 mmol) en dimetilformamida (150 ml) se añadió 18-corona-6 (1,32 g, 5 mmol) seguido por KCN (1,95 g, 30 mmol). Después de agitar durante 6 h, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 40% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto a juzgar por TLC, se reunieron y concentraron a vacío para dar 2,6 g (31% en dos pasos) de un sólido blanco.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 333,4 (M^{+})
Análisis para C_{17}H_{23}N_{3}O_{4}:
Calc: C, 61,25; H, 6,95; N, 12,60;
Enc: C, 61,09; H, 6,92; N, 12,53.
D) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
A una solución mantenida en agitación de 5-NCCH_{2}-2-Boc_{2}N-piridina (2,5 g, 7,5 mmol) en metanol (150 ml) se añadieron CoCl_{2} (0,97 g, 7,5 mmol) y agua (0,81 g, 45 mmol). Después de 5 min, se añadió NaBH_{4} (2,84 g, 75 mmol) en pequeñas porciones durante 15 min. Después de 15 min adicionales, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se disolvió en NH_{4}OH acuoso concentrado y se extrajo varias veces con acetato de etilo. Los extractos en acetato de etilo reunidos se secaron con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío.
A continuación, por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 1-A y 73-C, se trató el residuo para dar 1,2 g (33%) de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 60/40 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 446,3 (MH^{+})
HMRS (FAB) calc. para C_{23}H_{36}N_{5}O_{4}: 446,2767
Encontrado: 446,2769
Ejemplo de Referencia 76
112
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
A) Preparación de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-2-CN-piridina
A una solución de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-piridina (2,22 g, 10 mmol) en acetona (50 ml) se añadió una solución de ácido m-cloroperbenzoico (5,2 g, 30 mmol) en acetona (50 ml) mediante un embudo de adición durante 10 min. Después de agitar durante una noche, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se repartió entre agua (100 ml) y di-etil-éter (100 ml). La fase orgánica se separó y se extrajo tres veces con agua. La fase acuosa reunida se saturó luego con NaCl sólido y se extrajo tres veces con diclorometano (100 ml). Los extractos de diclorometano reunidos se lavaron una sola vez con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron a un pequeño volumen a vacío y se añadió luego dietil-éter. El precipitado blanco (2,0 g) se filtró y se secó a vacío.
Una mitad del sólido aislado (4,2 mmol) se disolvió en diclorometano (10 ml) y a esta solución mantenida en agitación se añadió cianuro de trimetilsililo (0,84 ml, 6,3 mmol) seguido por cloruro de N,N-dimetilcarbamoílo (0,58 ml, 6,3 mmol). Después de agitar durante una noche, se añadió lentamente KHCO_{3} acuoso 1M (1 ml) y la mezcla se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó luego dos veces con salmuera, se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar 0,6 g (58%) de un aceite ambarino que cristalizó al dejarlo en reposo.
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 247 (M^{+})
Análisis para C_{13}H_{17}N_{3}O_{2}:
Calc: C, 63,31; H, 7,02; N, 16,99;
Enc: C, 63,31; H, 7,02; N, 16,71.
B) Preparación de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-2-CbzNH-piridina
A una solución mantenida en agitación de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-2-CN-piridina (0,5 g, 2 mmol) en metanol (2,4 ml) se añadió NaOH 5N (1,6 ml, 8 mmol) y la solución se calentó a reflujo. Después de 24 h, la solución se enfrió a la temperatura ambiente y se dejó en agitación durante 48 h adicionales. Se ajustó luego el pH a 7 con HCl 1 N y los disolventes se eliminaron a vacío.
El residuo se suspendió en tolueno (50 ml) y se calentó a reflujo. A esta solución se añadieron consecutivamente trietilamina (0,36 ml, 2,6 mmol), alcohol bencílico (0,27 ml, 2,6 mmol) y difenilfosforil-azida (0,72 g, 2,6 mmol). Después de agitar a reflujo durante una noche, la solución se dejó enfriar, se diluyó luego con acetato de etilo (200 ml) y se lavó dos veces con NH_{4}Cl acuoso saturado y dos veces con salmuera. La fase orgánica se secó luego con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió luego sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente escalonado de hexanos hasta 50% acetato de etilo/hexanos. Las fracciones que contenían el producto como se determinó por TLC se reunieron y se concentraron a vacío para dar 0,37 g (50%) de un sólido blanco.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 371,2 (M^{+})
Análisis para C_{20}H_{25}N_{3}O_{4}:
Calc: C, 64,67; H, 6,78; N, 11,31;
Enc: C, 64,90; H, 7,07; N, 11,06.
C) Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 23-A, 1-G (utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D y 58-E, se prepararon 48 mg de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}CH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl a partir de 4-BocNHCH_{2}CH_{2}-2-CbzNH-piridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 446,4 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{35}N_{5}O_{4}\cdot1,5HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 53,30; H, 7,49; N, 13,51;
Enc: C, 53,64; H, 7,27; N, 13,80.
\newpage
Ejemplo de Referencia 77
113
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-F-anilina\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-F-anilina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 64, se prepararon 0,55 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-F-anilina\cdotHCl a partir de 3-F-4-NO_{2}-tolueno. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 60/40 (A/B), 180 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{4}O_{4}F\cdot0,9HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 55,32; H, 7,25; N, 11,22; Cl, 6,39;
Enc: C, 55,49; H, 6,93; N, 11,15; Cl, 6,23.
Ejemplo 78
114
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 10, utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH en lugar de Boc-D-Phe-ProOH, se prepararon 0,53 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdot
HCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
IR
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 445,4 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{36}N_{4}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 54,00; H, 7,40; N, 10,50; Cl, 14,61;
Enc: C, 54,18; H, 7,54; N, 10,31; Cl, 14,86.
Ejemplo de Referencia 79
115
HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{10}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Preparación de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{10}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 12, utilizando N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH en lugar de Boc-D-Phe-ProOH, se prepararon 0,04 g de HO_{2}CCH_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{10}CH_{2}NH_{2}\cdot
HCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (98/2 (A/B) hasta 70/30 (A/B), 150 min).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 451 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{42}N_{4}O_{4}\cdot2,7HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 51,65; H, 8,25; N, 10,04;
Enc: C, 51,47; H, 7,87; N, 9,97.
Ejemplo 80
116
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(etilsulfonil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 18, utilizando EtSO_{2}-D-Cha-ProOH en lugar de Cbz-D-1-Piq-ProOH, se prepararon 3,6 g de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2, (90/10 (A/B) hasta 50/50 (A/B), 180 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 492,3 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{37}N_{5}O_{4}S\cdotHCl:
Calc: C, 54,58; H, 7,25; N, 13,26; Cl, 6,71;
Enc: C, 54,31; H, 7,31; N, 13,37; Cl, 6,71.
Ejemplo 81
117
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-HCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 10, utilizando EtSO_{2}-D-Cha-ProOH en lugar de Boc-D-Phe-ProOH, se preparó EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}C_{6}H_{4}CH_{2}NH_{2}\cdotHCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2, (90/10 (A/B) hasta 50/50 (A/B), 180 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{38}N_{4}O_{4}S\cdotHCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 54,07; H, 7,75; N, 10,51; Cl, 6,65;
Enc: C, 54,13; H, 7,44; N, 10,51; Cl, 6,78.
Ejemplo de Referencia 82
118
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 64, utilizando EtSO_{2}-D-Cha-ProOH en lugar de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH, se prepararon 0,53 g de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-3-F-C_{6}H_{3}NH_{2}\cdot
HCl. El producto se purificó por RPHPLC método 2, (90/10 (A/B) hasta 50/50 (A/B), 180 min).
IR
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 483,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{35}N_{4}O_{4}SF\cdot1,1HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 51,95; H, 7,03; N, 10,54; Cl, 7,33;
Enc: C, 52,09; H, 6,94; N, 10,39; Cl, 7,24.
Ejemplo de Referencia 83
119
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-amino-piridina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 73, utilizando ECSO_{2}-D-Cha-ProOH en lugar de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH, se prepararon 0,22 g de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-4-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdot
HCl a partir de 4-metil-2-aminopiridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (90/10 (A/B) hasta 50/50 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{35}N_{5}O_{4}S\cdot1,1HCl:
Calc: C, 52,25; H, 7,19; N, 13,85; Cl, 7,71;
Enc: C, 52,49; H, 6,96; N, 13,96; Cl, 7,76.
120
EtSO_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdotHCl
Preparación de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}-2-amino-piridina\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 73, utilizando EtSO_{2}-D-Cha-ProOH en lugar de N-(t-BuO_{2}CCH_{2})-N-Boc-D-Cha-ProOH, se prepararon 0,24 g de EtSO_{2}-D-Cha-Pro-5-NHCH_{2}-2-aminopiridina\cdot
HCl a partir de 5-metil-2-aminopiridina. El producto se purificó por RPHPLC método 2 (90/10 (A/B) hasta 50/50 (A/B), 180 min).
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{35}N_{5}O_{4}S\cdot1,15HCl:
Calc: C, 52,06; H, 7,18; N, 13,80; Cl, 8,03;
Enc: C, 52,38; H, 6,97; N, 14,20; Cl, 8,46.
Ejemplo 85
121
HOOCCH_{2}CH_{2}CH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(3-carboxipropil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de Cbz-MeOOCCH=CHCH_{2}-D-Cha-Pro-p-HCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
A una solución de D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl (2,5 g, 4,1 mmol) en DMF (50 ml) se añadieron N,N-diisopropiletilamina (2,2 ml, 12,2 mmol) y 3-bromocrotonato de metilo (0,95 g, 4,5 mmol). Después de agitar durante 48 h, se añadieron Cbz-Cl (0,7 ml, 5 mmol) y una cantidad adicional de N,N-diisopropiletilamina (0,85 ml, 5 mmol). Después de 16 h de agitación adicionales, se eliminaron las materias volátiles a vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (100 ml) y cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml). Se separaron las capas y la fase orgánica se lavó una sola vez con cloruro de amonio acuoso saturado (50 ml), dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y dos veces con salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía súbita (gradiente de acetato de etilo/hexanos) para dar 660 mg (22%) de una espuma blanca.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 766 (M^{+})
Análisis para C_{43}H_{51}N_{5}O_{8}:
Calc: C, 67,43; H, 6,71; N, 9,14;
Enc: C, 67,22; H, 6,57; N, 8,98.
B) Preparación de HOOCCH_{2}CH_{2}CH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A una solución de Cbz-MeOOCCH=CHCH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz (0,5 g, 0,65 mmol) en etanol (5 ml) se añadió hidróxido de sodio 1 N (0,65 ml). Después de agitar durante 5 h a la temperatura ambiente, se añadieron HCl 1 N (3 ml), 10% Pd/C (0,5 g), H_{2}O (15 ml) y etanol (25 ml). La suspensión mantenida en agitación se desgasificó a vacío, y se puso luego en una atmósfera de hidrógeno durante 18 h. Se añadió tierra de diatomeas y se filtró la suspensión. El filtrado se concentró a vacío y se purificó por RPHPLC (método 2, 98/2 (A/B), aumento hasta 75/25 (A/B) durante 150 minutos). Las fracciones que contenían el producto puro se agruparon y liofilizaron para dar 46 mg (13%).
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 486,3 (MH^{+})
Análisis para C_{26}H_{39}N_{5}O_{4}\cdot2,1HCl:
Calc: C, 55,15; H, 7,35; N, 12,19; Cl, 13,24;
Enc: C, 55,55; H, 7,37; N, 12,19; Cl, 13,58.
\newpage
Ejemplo de Referencia 86
122
HOOCCH_{2}-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-ciclohexilglicil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de D-ciclohexilglicina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 53-B, se prepararon 16,1 g (16%) de D-ciclohexilglicina a partir de D-fenilglicina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 117 (M^{+})
Análisis para C_{8}H_{15}NO_{2}:
Calc: C, 61,12; H, 9,62; N, 8,91;
Enc: C, 61,23; H, 9,56; N, 8,73.
B) Preparación de Boc-D-ciclohexilglicina
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 17-A, (utilizando dicarbonato de di-terc-butilo) se prepararon 22 g (90%) de Boc-D-ciclohexilglicina.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 258 (M^{+})
Análisis para C_{13}H_{23}NO_{4}:
Calc: C, 60,68; H, 9,01; N, 5,44;
Enc: C, 60,91; H, 9,18; N, 5,38.
C) Preparación de Boc-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 20,5 g (76%) de Boc-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Boc-Pro-OH y NH_{2}CH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 481 (M^{+})
Análisis para C_{26}H_{32}N_{4}O_{5}:
Calc: C, 64,98; H, 6,71; N, 11,66;
Enc: C, 64,76; H, 6,78; N, 11,62.
D) Preparación de Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-A, se prepararon 18,4 g (100%) de Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 381 (M^{+})
Análisis para C_{21}H_{26}N_{4}O_{3}Cl_{2}:
Calc: C, 55,63; H, 5,78; N, 12,36;
Enc: C, 54,19; H, 6,27; N, 12,15.
E) Preparación de Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 3,6 g (97%) de Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 619 (M^{+})
Análisis para C_{34}H_{45}N_{5}O_{6}:
Calc: C, 65,89; H, 7,32; N, 11,30;
Enc: C, 67,59; H, 8,07; N, 10,99.
F) Preparación de Cbz-t-BuOOCCH_{2}-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 23-A y 85-A (utilizando bromoacetato de t-butilo y cloroformiato de bencilo) se prepararon 1,6 g (45%) de N-Cbz-N-(t-BuOOCCH_{2})-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 769 (M^{+})
Análisis para C_{43}H_{53}N_{5}O_{8}:
Calc: C, 67,26; H, 6,96; N, 9,12;
Enc: C, 67,50; H, 6,97; N, 9,11.
G) Preparación de HOOCCH_{2}-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 23-A (utilizando dioxano como disolvente) y 18-F, se prepararon 411 mg (61%) de HOOCCH_{2}-D-Chg-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 444,3 (MH^{+})
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{4}\cdot2,5HCl:
Calc: C, 51,67; H, 6,69; N, 13,10;
Enc: C, 51,84; H, 6,50; N, 13,15.
\newpage
Ejemplo de Referencia 87
123
HOOCCH_{2}-D-hPhe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-homofenilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de HOOCCH_{2}-D-hPhe-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 86, se prepararon 335 mg de HOOCCH_{2}-D-hPhe-Pro-p-HCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl a partir de Boc-D-hPhe-OH.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 466,3 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{31}N_{5}O_{4}\cdot2,1HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 53,61; H, 6,32; N, 12,50; Cl, 13,29;
Enc: C, 53,58; H, 6,08; N, 12,59; Cl, 13,67.
Ejemplo de Referencia 88
124
HOOCCH_{2}-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(carboximetil)-D-homociclohexilalanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
A) Preparación de Boc-D-hCha-OH
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 53-D, se prepararon 5,1 g (100%) de Boc-D-hCha-OH a partir de Boc-D-hPhe-OH.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 240 (M^{+})
Análisis para C_{15}H_{27}NO_{4}:
Calc: C, 63,13; H, 9,54; N, 4,91;
Enc: C, 63,38; H, 9,39; N, 5,12.
B) Preparación de HOOCCH_{2}-D-hCha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 86, se prepararon 135 mg de HOOCCH_{2}-D-hCha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 472,3 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot0,5H_{2}O:
Calc: C, 53,54; H, 7,22; N, 12,49; Cl, 13,91;
Enc: C, 53,29; H, 7,01; N, 12,46; Cl, 14,30.
Ejemplo de Referencia 89
125
HOOCCH_{2}-Gly-N-C_{6}H_{5}CH_{2}CH_{2}Gly-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de HOOCCH_{2}-Gly-N-C_{6}H_{5}CH_{2}CH_{2}Gly-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-G, 1-D, 1-G, 23-A, 85-A y 18-F, se prepararon 365 mg de N-HOOCCH_{2}-Gly-N-C_{6}H_{5}CH_{2}CH_{2}-Gly-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 426,2 (MH^{+})
Análisis para C_{22}H_{27}N_{5}O_{4}\cdot2,2HCl\cdot1,5H_{2}O:
Calc: C, 49,60; H, 6,09; N, 13,15; Cl, 14,64;
Enc: C, 49,79; H, 5,71; N, 13,31; Cl, 14,49.
Ejemplo de Referencia 90
126
(C_{2}H_{5})_{2}CHCO-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de Boc-(\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 1-G, se prepararon 2,7 g (64%) de Boc-(\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz a partir de Boc-(\gamma-OBn)-Glu-OH y PrO-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot
2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 700 (M^{+})
Análisis para C_{38}H_{45}N_{5}O_{8}:
Calc: C, 65,22; H, 6,48; N, 10,01;
Enc: C, 65,00; H, 6,56; N, 10,06.
B) Preparación de (\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 23-A, se prepararon 2,38 g (98%) de (\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl.
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 600 (M^{+})
Análisis para C_{33}H_{39}N_{5}O_{6}Cl_{2}:
Calc: C, 58,93; H, 5,84; N, 10,41;
Enc: C, 58,64; H, 6,00; N, 10,63.
C) Preparación de (C_{2}H_{5})_{2}CHCO-(\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz
A una mezcla mantenida en agitación de (\gamma-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NHCbz\cdot2HCl (1,3 g, 2 mmol) en THF/H_{2}O (50 ml de cada uno) se añadió K_{2}CO_{3} (1,38 g, 10 mmol) y cloruro de 2-etilbutirilo (0,3 g, 2,2 mmol). Después de agitar durante 10 min, se eliminaron las materias volátiles a vacío. El residuo resultante se repartió entre agua y acetato de etilo (100 ml de cada uno). Se separaron las capas y la fase orgánica se lavó dos veces con cada uno de cloruro de amonio acuoso saturado y salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 1,45 g (100%).
^{1}H NMR
FD-MS, m/e 698 (M^{+})
Análisis para C_{39}H_{47}N_{5}O_{7}:
Calc: C, 67,13; H, 6,79; N, 10,04;
Enc: C, 67,11; H, 6,70; N, 9,74.
D) Preparación de (C_{2}H_{5})_{2}CHCO-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por un método sustancialmente equivalente al descrito en el Ejemplo 18-F, se prepararon 425 mg (47%) de (C_{2}H_{5}
\hbox{) _{2} }
CHCO-Glu-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl. Se utilizó HPLC método 2 (aumento desde 98/2 (A/B) a 75/25 (A/B) durante 150 min) para purificar el producto.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 474,3 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{5}\cdot1,5HCl\cdot1,1H_{2}O:
Calc: C, 51,10; H, 6,91; N, 12,41; Cl, 9,43;
Enc: C, 51,10; H, 6,81; N, 12,41; Cl, 9,62.
\newpage
Ejemplo de Referencia 91
127
(C_{2}H_{5})_{2}CHCO-Met(O_{2})-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
A) Preparación de (C_{2}H_{5})_{2}CHCO-Met(O_{2})-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Ejemplo 90, se prepararon 530 mg de (C_{2}H_{5}
\hbox{) _{2} }
CHCO-Met(O_{2})-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 508,2 (MH^{+})
Análisis para C_{24}H_{37}N_{5}O_{5}S\cdot1,1HCl:
Calc: C, 52,63; H, 7,01; N, 12,79; Cl, 7,12;
Enc: C, 52,42; H, 7,03; N, 12,80; Cl, 6,99.
Ejemplo de Referencia 92
128
MeSO_{2}CH_{2}CO-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
(Hidrocloruro de N-(metilsulfonilacetil-L-ciclohexil-alanil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida)
Preparación de MeSO_{2}CH_{2}CO-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl
Por métodos sustancialmente equivalentes a los descritos en los Ejemplos 1-G y 18-F, se prepararon 550 mg de MeSO_{2}CH_{2}CO-D-Cha-Pro-p-NHCH_{2}C_{6}H_{4}C(NH)NH_{2}\cdotHCl.
^{1}H NMR
FAB-MS, m/e 520,5 (MH^{+})
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{5}S\cdot1,2HCl\cdotH_{2}O:
Calc: C, 51,64; H, 6,97; N, 12,04; Cl, 7,32;
Enc: C, 51,58; H, 6,84; N, 12,18; Cl, 7,61.
\newpage
Se cree que los compuestos de la invención inhiben selectivamente la trombina más que otras proteinasas y proteínas no enzimáticas implicadas en la coagulación de la sangre sin interferencia apreciable con la capacidad natural del cuerpo para lisar los coágulos (los compuestos tienen un efecto inhibidor bajo sobre la fibrinólisis). Adicionalmente, se cree que dicha selectividad permite el uso con agentes trombolíticos sin interferencia sustancial con la trombólisis y la fibrinólisis. Adicionalmente, se cree que los compuestos de la presente invención son activos por vía oral.
En uno de sus aspectos, la invención proporciona el uso de una dosis eficaz (inhibidora de la trombina) de un compuesto de Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la trombina en un mamífero que requiere inhibición de la trombina.
Se espera que los compuestos de la invención sean útiles en animales, con inclusión del hombre, en el tratamiento o la profilaxis de la trombosis y la hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Estados de enfermedad en los cuales los compuestos tienen una utilidad potencial son el tratamiento o la profilaxis de la trombosis e hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Estados de enfermedad en los cuales los compuestos tienen utilidad potencial, en tratamiento y/o profilaxis, incluyen trombosis venosa y embolia pulmonar, trombosis arterial, tal como en isquemia de miocardio, infarto de miocardio, angina inestable, accidente cerebrovascular agudo basado en trombosis y trombosis arterial periférica. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en la profilaxis de enfermedades ateroescleróticas tales como enfermedad arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral y enfermedad arterial periférica. Adicionalmente, se espera que los compuestos sean útiles junto con agentes trombolíticos en el infarto de miocardio. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en el tratamiento o la profilaxis de la reoclusión después de trombólisis, angioplastia transluminal percutánea (PTCA) y operaciones de derivación ("bypass") coronaria. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en la prevención de la retrombosis después de microcirugía. Adicionalmente, se espera que los compuestos sean útiles en tratamiento anticoagulante en relación con órganos artificiales y válvulas cardiacas. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en tratamiento anticoagulante en la hemodiálisis y la coagulación intravascular diseminada. Una utilidad adicional esperada es el lavado de catéteres y dispositivos mecánicos utilizados en pacientes in vivo, y como anticoagulante para la conservación de sangre, plasma y otros productos de sangre in vitro. Aún más, se espera que los compuestos tengan utilidad en otras enfermedades en las cuales la coagulación de la sangre podría ser un proceso que contribuya fundamentalmente o una fuente de patología secundaria, tales como cáncer, con inclusión de metástasis, y enfermedades inflamatorias, con inclusión de artritis y diabetes. El compuesto anti- coagulante se administra por vía oral, o por vía parenteral, v.g., por infusión intravenosa (iv), inyección intramuscular (im) o inyección subcutánea (sc).
La dosis específica de un compuesto administrado de acuerdo con esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o profilácticos vendrá determinada, por supuesto, por las circunstancias particulares que rodean el caso, con inclusión, por ejemplo, del compuesto administrado, la tasa de administración, y la condición que se esté tratando.
Una dosis diaria típica para cada una de las utilidades anteriores está comprendida entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 1000 mg/kg. El régimen de dosificación puede variar, v.g., para uso profiláctico puede administrarse una dosis diaria simple o pueden ser apropiadas dosis múltiples tales como 3 ó 5 veces al día. En situaciones de atención crítica, se administra un compuesto de la invención por infusión iv a un régimen comprendido entre aproximadamente 0,01 mg/kg/h y aproximadamente 20 mg/kg/h, y con preferencia entre aproximadamente 0,1 mg/kg/h y aproximadamente 5 mg/kg/h.
Los compuestos de esta invención pueden utilizarse también en asociación con un agente de lisis de los coágulos, v.g., activador del plasminógeno tisular (t-PA), t-PA modificado, estreptoquinasa o uroquinasa. En los casos en que ha ocurrido formación de coágulos y está bloqueada parcial o totalmente una arteria o una vena, se emplea usualmente un agente de lisis de los coágulos. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con el agente de lisis o posteriormente a su uso aislado y con preferencia se administra adicionalmente junto con aspirina para prevenir la reincidencia de formación de coágulos.
Los compuestos de esta invención se pueden utilizar también en asociación con un antagonista del receptor de las glicoproteínas plaquetarias (IIb/IIIa), que inhibe la agregación de las plaquetas. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con el antagonista IIb/IIIa o subsiguientemente a su uso para prevenir la repetición de la formación de coágulos.
Los compuestos de esta invención se pueden utilizar también en asociación con aspirina. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con aspirina o subsiguientemente a su uso para prevenir la repetición de la formación de coágulos. Como se ha indicado arriba, un compuesto de la presente invención se administra preferiblemente junto con un agente de lisis de los coágulos y aspirina.
Esta invención proporciona también formulaciones farmacéuticas para uso en el método terapéutico descrito anteriormente. Las formulaciones farmacéuticas de la invención comprenden una cantidad eficaz inhibidora de la trombina de un compuesto de Fórmula I en asociación con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Para administración oral, el compuesto antitrombótico se formula en cápsulas de gelatina o tabletas que pueden contener excipientes tales como aglutinantes, lubricantes, agentes de desintegración y análogos. Para administración parenteral, el antitrombótico se formula en un diluyente farmacéuticamente aceptable, v.g., solución salina fisiológica (0,9%), dextrosa al 5%, solución de Ringer, y análogos.
El compuesto de la presente invención puede formularse en formulaciones unitarias de dosificación que comprenden una dosis entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg. Preferiblemente, el compuesto se encuentra en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable tal como por ejemplo la sal sulfato, sal acetato o una sal fosfato. Un ejemplo de una formulación unitaria de dosificación comprende 5 mg de un compuesto de la presente invención como una sal farmacéuticamente aceptable en una ampolla de vidrio estéril de 10 ml. Otro ejemplo de una formulación unitaria de dosificación comprende aproximadamente 10 mg de un compuesto de la presente invención como una sal farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica contenida en una ampolla estéril.
Los compuestos se pueden administrar por una diversidad de vías que incluyen las vías oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Los compuestos de la presente invención se formulan preferiblemente antes de la administración. Por esta razón, otra realización de la presente invención es una formulación farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un vehículo, eluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para el mismo.
El ingrediente activo en tales formulaciones comprende desde 0,1% a 99,9% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente tiene que ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para el receptor de la misma.
Las presentes formulaciones farmacéuticas se preparan por procedimientos conocidos utilizando ingredientes bien conocidos y fácilmente disponibles. En la preparación de las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo se mezclará usualmente con un vehículo, o se diluirá en un vehículo, o se incluirá en un vehículo que puede encontrarse en forma de una cápsula, bolsita, papelillo u otro recipiente. Cuando el vehículo sirve como diluyente, el mismo puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Así, las composiciones pueden encontrarse en la forma de tabletas, píldoras, polvos, pastillas, bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, (como un sólido o en un medio líquido), cápsulas de gelatina blandas y duras, supositorios, soluciones inyectables estériles, polvos compactados estériles, y análogos. Las composiciones de esta invención se pueden formular a fin de proporcionar liberación rápida, prolongada, o retardada del ingrediente activo después de administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en la técnica.
Los ejemplos de formulación siguientes son únicamente ilustrativos. "Ingrediente activo", por supuesto, significa un compuesto de acuerdo con la Fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Formulación 1
Se preparan cápsulas de gelatina dura utilizando los ingredientes siguientes:
Cantidad
(mg/cápsula)
Ingrediente activo 250
Almidón, secado 200
Estearato de magnesio 10
Total \overline{460} mg
Formulación 2
Se prepara una tableta utilizando los ingredientes indicados a continuación:
Cantidad
(mg/cápsula)
Ingrediente activo 250
Celulosa, microcristalina 400
Dióxido de silicio, de combustión 10
Ácido esteárico 5
Total \overline{665} mg
Los componentes se mezclan y se comprimen para formar tabletas, cada una de las cuales tiene un peso de 
\hbox{665 mg.}
\newpage
Formulación 3
Se prepara una solución en aerosol que contiene los componentes siguientes:
Peso
Ingrediente activo 0,25
Etanol 25,75
Propelente 22 (clorodifluorometano) 70,00
Total \overline{100,00}
El compuesto activo se mezcla con etanol y la mezcla se añade a una porción del propelente 22, se enfría a -30ºC y se transfiere a un dispositivo de llenado. La cantidad requerida se alimenta luego a un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el resto del propelente. Las unidades de válvula se adaptan luego al recipiente.
Formulación 4
Se preparan como sigue tabletas, cada una de las cuales contiene 60 mg de ingrediente activo:
Ingrediente activo 60 mg
Almidón 45 mg
Celulosa microcristalina 35 mg
Polivinilpirrolidona (como solución al 10% en agua) 4 mg
Carboximetil-almidón sódico 4,5 mg
Estearato de magnesio 0,5 mg
Talco 1 mg
Total \overline{150 \ mg}
El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se pasan a través de un tamiz U.S. de malla No. 45 y se mezclan concienzudamente. La solución acuosa que contiene polivinilpirrolidona se mezcla con el polvo resultante, y la mezcla se pasa luego a través de un tamiz U.S. de malla No. 14. Los gránulos así producidos se secan a 50ºC y se pasan a través de un tamiz U.S. de malla No. 18. El carboximetil-almidón sódico, el estearato de magnesio y el talco, pasados previamente a través de un tamiz U.S. de malla No. 60, se añaden luego a los gránulos que, después de mezclados, se comprimen en una máquina de tabletas para producir tabletas, cada una de las cuales pesa 150 mg.
Formulación 5
Se preparan como sigue cápsulas, cada una de las cuales contiene 80 mg de ingrediente activo:
Ingrediente activo 80 mg
Almidón 59 mg
Celulosa microcristalina 59 mg
Estearato de magnesio 2 mg
Total \overline{200 \ mg}
El ingrediente activo, la celulosa, el almidón, y el estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. de malla No. 45, y se introducen en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 200 mg.
Formulación 6
Se preparan supositorios, cada uno de los cuales contiene 225 mg de ingrediente activo, como sigue:
Ingrediente activo 225 mg
Glicéridos de ácidos grasos saturados 2.000 mg
Total \overline{2\text{.}225 \ mg}
El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. de malla No. 60 y se suspende en los glicéridos de ácidos grasos saturados fundidos previamente utilizando el calor mínimo necesario. La mezcla se vierte luego en un molde de supositorios de capacidad nominal 2 g y se deja enfriar.
\newpage
Formulación 7
Se preparan como sigue suspensiones, cada una de las cuales contiene 50 mg de ingrediente activo por dosis de 5 ml:
Ingrediente activo 50 mg
Carboximetil-celulosa sódica 50 mg
Jarabe 1,25 ml
Solución de ácido benzoico 0,10 ml
Saborizante a voluntad
Colorante a voluntad
Agua purificada hasta el total 5 ml
El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. de malla No. 45 y se mezcla con la carboximetil-celulosa sódica y el jarabe para formar una pasta uniforme. La solución de ácido benzoico, el saborizante y el colorante se diluyen con una porción del agua y se añaden con agitación. Se añade luego agua suficiente hasta producir el volumen requerido.
Formulación 8
Puede prepararse una formulación intravenosa como sigue:
Ingrediente activo 100 mg
Solución salina isotónica 1.000 ml
La solución de los ingredientes anteriores se administra generalmente por vía intravenosa a un individuo a una tasa de 1 ml por minuto.
Los compuestos proporcionados por la invención (Fórmula I) son activos por vía oral e inhiben selectivamente la acción de la trombina en los mamíferos.
La capacidad de los compuestos de la presente invención para ser un inhibidor de la trombina eficaz y activo por vía oral se evalúa en uno o más de los ensayos siguientes.
La inhibición de la trombina se demuestra por inhibición in vitro de la actividad de amidasa de la trombina como se mide en un ensayo en el cual la trombina hidroliza el sustrato cromógeno N-benzoil-L-fenilalanil-L-valil-L-arginil-p-nitroanilida.
El ensayo se lleva a cabo mezclando 50 \mul de tampón (Tris 0,03 M, NaCl 0,15 M, pH 7,4) con 25 \mul de solución de trombina bovina o trombina humana (0,21 mg/ml de trombina bovina trombostática, Parke-Davis, o trombina humana purificada, Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, a aproximadamente 8 unidades NIH/ml, en el mismo tampón) y 25 \mul de compuesto de ensayo en un disolvente (en metanol acuoso al 50%, v:v). Se añaden los 150 \mul de una solución acuosa del sustrato cromógeno (a 0,25 mg/ml) y se miden las tasas de hidrólisis del sustrato por observación de las reacciones a 405 nm respecto a la liberación de p-nitroanilida. Se construyen curvas estándar representando gráficamente la concentración de trombina libre en función de la tasa de hidrólisis. Las tasas de hidrólisis observadas con los compuestos de ensayo se completan luego en valores de "trombina libre" en los ensayos respectivos por el uso de las curvas estándar. La trombina fijada (unida al compuesto de ensayo) se calcula restando la cantidad de trombina libre observada en cada ensayo de la cantidad conocida inicial de trombina utilizada en el ensayo. La cantidad de inhibidor libre en cada ensayo se calcula restando el número de moles de trombina fijada del número de moles de inhibidor añadido (compuesto de ensayo).
El valor Kass es la constante de equilibrio hipotética para la reacción entre trombina y el compuesto de ensayo (I).
129
Se calcula el valor Kass para una gama de concentraciones de los compuestos de ensayo, y se consigna el valor medio en unidades de litro por mol.
Siguiendo sustancialmente los procedimientos arriba descritos para la trombina humana, y utilizando otras serina-proteasas del sistema de coagulación de la sangre humana y proteasas del sistema fibrinolítico con los sustratos cromógenos apropiados, identificados más adelante, se evalúa la selectividad de los compuestos de la presente invención con respecto a las serina-proteasas de los factores de coagulación y con respecto a las serina-proteasas del sistema fibrinolítico, así como su carencia sustancial de interferencia con las serina-proteasas del sistema fibrinolítico. Los inhibidores de la trombina deberían evitar preferiblemente la fibrinólisis inducida por la uroquinasa, el activador del plasminógeno tisular (t-PA) y la estreptoquinasa. Esto sería importante para el uso terapéutico de dichos agentes como adyuvante para la terapia trombolítica con estreptoquinasa, t-PA o uroquinasa y para el uso de tales agentes como agente antitrombótico endógeno evitador de la fibrinólisis (con respecto a t-PA y uroquinasa). Además de la carencia de interferencia con la actividad de amidasa de las proteasas fibrinolíticas, dicha evitación del sistema fibrinolítico puede estudiarse por el uso de coágulos de plasma humano y su lisis por los activadores respectivos del plasminógeno fibrinolítico.
Los factores humanos X, Xa, IXa, XIa, y XIIa se adquieren de Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana; la uroquinasa humana de Leo Pharmaceuticals, Dinamarca; y la proteína C activada recombinante (aPC) se prepara en Eli Lilly and Co. Sustancialmente de acuerdo con la Patente U.S. 4.981.952. Los sustratos cromógenos: N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida (para el factor Xa); N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilida (para ensayo del factor IXa como el sustrato del factor Xa); piroglutamil-Pro-Arg-p-nitroanilida (para el factor XIa y para aPC); H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida (para el factor XIIa); y piroglutamil-Gly-Arg-p-nitroanilida (para uroquinasa), se adquieren de Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia, o de Midwest Biotech, Fishers, Indiana. La tripsina bovina se adquiere de Worthington Biochemicals, Freehold, New Jersey, y la calicreína del plasma humano de Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia. El sustrato cromógeno H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilida para la calicreína plasmática se adquiere de KabiVitrum, Estocolmo, Suecia. La N-benzoil-Phe-Val-Arg-p-nitroanilida, el sustrato para trombina humana y para tripsina, se sintetiza de acuerdo con procedimientos descritos anteriormente para los compuestos de la presente invención, utilizando métodos conocidos de copulación de péptidos a partir de sustancias reaccionantes disponibles comercialmente o adquiridas de Midwest Biotech, Fishers, Indiana.
La plasmina humana se adquiere de Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana; la nt-PA se adquiere como patrón de actividad monocatenario de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut; el t-PA6 modificado (mt-PA6) se prepara en Eli Lilly and Company por un procedimiento conocido en la técnica (véase, Burck, et al., J. Biol. Chem., 265, 5120-5177 (1990). El sustrato cromógeno de plasmina H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilida y el sustrato del activador del plasminógeno tisular (t-PA) H-D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilida se adquieren de Kabi Vitrum, Estocolmo, Suecia.
En los sustratos cromógenos descritos anteriormente, los símbolos de tres letras Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu y Lys se utilizan para indicar el grupo amino-ácido correspondiente isoleucina, ácido glutámico, glicina, prolina, arginina, fenilalanina, valina, leucina y lisina, respectivamente.
La tabla 1 que sigue enumera los valores Kass obtenidos con el compuesto indicado representado por la Fórmula I.
TABLA 1 Propiedades de Inhibición
130
TABLA 1 (continuación)
131
TABLA 1 (continuación)
132
TABLA 1 (continuación)
133
Debe indicarse que, inesperadamente, los compuestos en los cuales X contiene un resto D-ciclohexilalanilo tienen una potencia mejorada con respecto a la inhibición de trombina y exhiben una potencia incrementada especialmente sorprendente con respecto a la inhibición del factor Xa cuando se comparan, por ejemplo, con los compuestos correspondientes en los cuales X contiene un resto D-fenilalanilo.
Materiales
Se obtiene plasma de perro a partir de perros de caza cruzados conscientes (Hazelton-LRE de ambos sexos, Kalamazoo, Michigan, EE.UU.) por punción venosa en citrato al 3,8 por ciento. Se prepara fibrinógeno a partir de plasma reciente de perro y se prepara fibrinógeno humano a partir de sangre humana ACD dentro de plazo de validez en la fracción I-2 de acuerdo con procedimientos y especificaciones previos. Smith, Biochem. J. 185, 1-11 (1980); y Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano (pureza 98%/exento de plasmina) es de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. La radiomarcación de las preparaciones de fibrinógeno I-2 se realiza como se ha informado previamente. Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). La uroquinasa se adquiere de Leo Pharmaceuticals, Dinamarca, como 2200 unidades Ploug/vial. La estreptoquinasa se adquiere de Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey.
Métodos Efectos sobre la lisis de los coágulos de plasma humano por t-PA
Se forman coágulos de plasma humano en micro-tubos de ensayo por adición de 50 \mul de trombina (73 unidades NIH/ml) a 100 \mul de plasma humano que contiene 0,0229 \muCi de fibrinógeno marcado con yodo 125. Se estudia la lisis de los coágulos cubriendo los coágulos con 50 \mul de uroquinasa o estreptoquinasa (50, 100 ó 1.000 unidades/ml) e incubando durante 20 horas a la temperatura ambiente. Después de la incubación, se centrifugan los tubos en una Microcentrífuga Beckman. Se añaden 25 \mul de sobrenadante en un volumen de 1,0 ml de tampón Tris 0,03 M/NaCl 0,15 M para recuento gamma. Se obtienen controles de recuento de lisis 100 por ciento por omisión de la trombina (y sustitución con tampón). Los inhibidores de la trombina se evalúan respecto a posible interferencia con la fibrinólisis por inclusión de los compuestos en las soluciones de superposición a concentraciones de 1, 5, y 10 \mug/ml. Se estiman aproximaciones de los valores CI_{50} por extrapolaciones lineales a partir de los puntos de datos hasta un valor que representaría el 50 por ciento de lisis para dicha concentración particular de agente fibrinolítico.
Actividad anticoagulante Materiales
Se obtienen plasma de perro y plasma de rata a partir de perros de caza conscientes cruzados (Hazelton-LRE de ambos sexos, Kalamazoo, Michigan, EE.UU.) o de ratas macho Sprague-Dawley anestesiadas (Harlan Sprague-Dwalei, Inc., Indianapolis, Indiana, EE.UU.) por punción venosa en citrato al 3,8 por ciento. El fibrinógeno se prepara a partir de sangre humana ACD dentro de plazo de validez como la fracción I-2 de acuerdo con procedimientos y especificaciones previos. Smith, Biochem. J.. 185, 1-11 (1980); y Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano se adquiere también como producto de pureza 98 por ciento/exento de plasmina de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Los reactivos de coagulación ACTINA, tromboplastina, y plasma humano son de Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida. Para los ensayos de coagulación en plasma se utiliza trombina bovina de Parke-Davis (Ann Detroit, Michigan).
Métodos Determinaciones de anticoagulación
Los procedimientos de ensayo de coagulación son como se ha descrito previamente. Smith, et al., Thrombosis Research, 50, 163-174 (1988). Se utiliza un instrumento de coagulación CoAScreener (American LABor, Inc.) para todas las medidas de los ensayos de coagulación. Se mide el tiempo de protrombina (PT) por adición de 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de reactivo de tromboplastina-C a 0,05 ml de plasma de ensayo. El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se mide por incubación de 0,05 ml de plasma de ensayo con 0,05 ml del reactivo Actina durante 120 segundos seguido por 0,05 ml de CaCl_{2} (0,02 M). El tiempo de trombina (TT) se mide por adición de 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de trombina (10 unidades NIH/ml) a 0,05 ml de plasma de ensayo. Los compuestos de Fórmula I se añaden al plasma humano o animal en una extensa gama de concentraciones para determinar los efectos de prolongación en los ensayos APTT, PT, y TT. Se realizan extrapolaciones lineales para estimar las concentraciones requeridas para duplicar el tiempo de coagulación para cada ensayo.
Animales
Se anestesian Ratas macho Sprague-Dawley (350-425 g, Harlan Sprague-Dawley Inc., Indianapolis, IN) con xilazina (20 mg/kg, s.c.) y quetamina (120 mg/kg, s.c.) y se mantienen sobre una capa de agua caliente (37ºC). Se canula(n) la(s) vena(s) yugular(es) para permitir infusiones.
Modelo de derivación ("shunt") arteriovenosa
Se canulan la vena yugular izquierda y la arteria carótida derecha con longitudes de 20 cm de tubo de polietileno PE 60. una sección central de 6 cm de tubo más ancho (PE 190) con un hilo de algodón (5 cm) en el lumen, se adapta a fricción entre las secciones más largas para completar el circuito de derivación arterio-venosa. Se deja que circule la sangre a través de la derivación durante 15 minutos antes de retirar el hilo cuidadosamente y pesarlo. Se sustrae el peso de un hilo húmedo del peso total del hilo y el trombo (véase J.R. Smith Br. J. Pharmacol., 77, 29 (1982)).
Cuando se comparó el compuesto del Ejemplo 48 con D-MePhe-Pro-Arg-H (expuesto anteriormente en la página 2) en el patrón de derivación arteriovenosa, se encontró que la potencia antitrombótica era 9 veces mayor durante la infusión intravenosa continua. Para reducir el peso del trombo en la misma proporción (hasta aproximadamente 20% del control), el compuesto del Ejemplo 48 prolongaba el tiempo de trombina del plasma aproximadamente tres veces, mientras que el tiempo de trombina del plasma se prolongaba más de 20 veces durante la infusión del compuesto estándar. El tiempo de protrombina y el APTT se prolongaban sólo hasta aproximadamente 120% del control (unos cuantos segundos) durante la infusión del compuesto del Ejemplo 48.
Modelo de lesión arterial con FeCl_{3}
Se aíslan las arterias carótidas por medio de una incisión cervical ventral en la línea media. Se coloca un termopar bajo cada arteria y se registra continuamente la temperatura del vaso en un registrador de gráfico de cinta. Un puño de tubo (0,058 DI x 0,077 DE x 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), cortado longitudinalmente, se dispone alrededor de cada carótida inmediatamente por encima del termopar. Se disuelve FeCl_{3} hexahidratado en agua y se expresa la concentración (20%) en términos del peso real de FeCl_{3} sólo. Para lesionar la arteria e inducir la trombosis, se pipetean 2,85 \mul en el puño a fin de bañar la arteria por encima de la sonda del termopar. La oclusión arterial se indica por un descenso rápido de la temperatura. Se consigna el tiempo hasta la oclusión en minutos y representa el tiempo transcurrido entre la aplicación de FeCl_{3} y el descenso rápido en la temperatura del vaso (véase K.D. Kurz, Thromb. Res., 60, 269 (1990)).
Modelo de trombólisis espontánea
Los datos in vitro sugirieron que los inhibidores peptídicos de la trombina inhiben la trombina y otras serina-proteasas, tales como plasmina y activador del plasminógeno tisular. Para evaluar si los compuestos inhibían la fibrinólisis in vivo, se determina la tasa de trombólisis espontánea por implantación de un coágulo de sangre entera marcado en la circulación pulmonar. Se mezcla rápidamente sangre de rata (1 ml) con trombina bovina (4 IU, Parke Davis) y se aspira inmediatamente fibrogen ^{125}I humano (5 \muCi, ICN), en un tubo de Silastic y se incuba a 37ºC durante 1 hora. El trombo envejecido se expulsa del tubo, se corta en segmentos de 1 cm, se lava tres veces en solución salina normal y se somete cada segmento a recuento en un contador gamma. Un segmento con recuentos conocidos se aspira en un catéter que se implanta subsiguientemente en la vena yugular. La punta del catéter se hace avanzar hasta la proximidad de la aurícula derecha y se expulsa el coágulo de modo que flote en la circulación pulmonar. Una hora después del implante, se recogen el corazón y los pulmones y se someten a recuento por separado. La trombólisis se expresa como porcentaje, donde:
% Trombólisis = \frac{(cpm \ inyectados \ - \ cpm \ del \ pulmón)}{cpm \ inyectados} x 100
La disolución fibrinolítica del coágulo implantado se produce con dependencia del tiempo (véase J.P. Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12, 520 (1988)).
Parámetros de coagulación
El tiempo de trombina plasmático (TT) y el tiempo parcial de tromboplastina activada (APTT) se miden con un fibrómetro. Se toman muestras de sangre a partir de un catéter de la yugular y se recogen en una jeringuilla que contiene citrato de sodio (3,8%, una parte para 9 partes de sangre). Para medir el TT, se mezcla plasma de rata (0,1 ml) con solución salina (0,1 ml) y trombina bovina (0,1 ml, 30 U/ml en tampón TRIS; Parke Davis) a 37ºC. Para el APTT, se incuban plasma (0,1 ml) y solución de APTT (0,1 ml, Organon Teknika) durante 5 minutos (37ºC) y se añade CaCl_{2} (0,01 ml, 0,025 M) para iniciar la coagulación. Los ensayos se realizan por duplicado y se toman los valores medios.
Índice de biodisponibilidad
Una medida de la bioactividad, el tiempo de trombina plasmático (TT), sirvió como sustituto para el ensayo del compuesto originario basándose en la hipótesis de que los incrementos en TT eran resultado de la inhibición de la trombina por el compuesto originario únicamente. La evolución temporal del efecto del inhibidor de trombina sobre el TT se determina después de la administración de un bolus i.v. a ratas anestesiadas y después de tratamiento oral de ratas conscientes en ayunas. Debido a limitaciones de volumen de sangre y del número de puntos requeridos para determinar la evolución temporal desde el momento del tratamiento al momento en que la respuesta volvía a los valores previos al tratamiento, se utilizaron dos poblaciones de ratas. Cada población de muestra representaba momentos sucesivos alternantes. Se utiliza el TT medio a lo largo de la evolución temporal para calcular el área bajo la curva (AUC). El índice de biodisponibilidad se calcula por la fórmula que se muestra a continuación, y se expresa como actividad porcentual relativa.
El área bajo la curva (AUC) de la evolución temporal del TT plasmático se determina y se ajusta a la dosis. Este índice de biodisponibilidad se denomina "% Actividad Relativa" y se calcula como
% Actividad Relativa = \frac{AUC \ po}{AUC \ iv} x \frac{Dosis \ iv}{Dosis \ po} x 100
Compuestos
Se preparan diariamente soluciones recientes de los compuestos en solución salina normal y se inyectan como un bolus o se administran por infusión comenzando 15 minutos antes y continuando durante toda la duración de la perturbación experimental que es de 15 minutos en el patrón de derivación arteriovenosa y 60 minutos en el patrón de lesión arterial con FeCl_{3} y en el patrón de trombosis espontánea. El volumen de la inyección de bolus es 1 ml/kg para i.v., y 5 ml/kg para p.o., y el volumen de infusión es 3 ml/h.
Estadísticas
Los resultados se expresan como valores medios \pm SEM (error estándar del valor medio). Se utiliza el análisis de una sola vía de la varianza para detectar diferencias estadísticamente significativas, y se aplica luego el ensayo de Dunnett para determinar qué valores medios son diferentes. El nivel de significación para el rechazo de la hipótesis nula de valores medios iguales es P < 0,05.
Animales
Perros macho (Beagle; 18 meses - 2 años; 12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, Nueva York 14516) se mantienen en ayunas durante una noche y se les administra luego Dieta de Prescripción Purina Certificada (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240 minutos después de la dosificación. El agua está disponible ad libitum. La temperatura ambiente se mantiene entre 66 y 74ºF (18,9 - 23,3ºC), humedad relativa 45-50%; y con iluminación desde las 6,00 hasta las 18,00 horas.
Modelo farmacocinético
El compuesto de ensayo se formula inmediatamente antes de la dosificación por disolución en solución salina estéril al 0,9% para una preparación de 5 mg/ml. Los perros reciben una sola dosis de 2 mg/kg del compuesto de ensayo por sonda esofágica oral. Se toman muestras de sangre (4,5 ml) de la vena cefálica al cabo de 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de la dosificación. Se recogen las muestras en tubos Vacutainer citrados y se mantienen en hielo antes de la reducción a plasma por centrifugación. Las muestras de plasma se derivatizan con dinitrofenilhidrazina y se analizan por HPLC (columna Zorbax SB-C8) eluyendo con metanol/acetato de sodio 500 mM ajustado a pH 7 con ácido fosfórico (60:40, v/v). Se registra la concentración en plasma del compuesto de ensayo y se utiliza para calcular los parámetros farmacocinéticos: constante de velocidad de eliminación, Ke; aclaramiento total, Clt; volumen de distribución, V_{D}; tiempo de concentración máxima del compuesto de ensayo en plasma, Tmax; concentración máxima del compuesto de ensayo para Tmax, Cmax; semi-vida en plasma, t 0,5; área bajo la curva, A.U.C.; y fracción de compuesto de ensayo adsorbida, F.
Modelo canino de trombosis arterial coronaria
La preparación quirúrgica y la instrumentación de los perros son como se describe en Jackson, et al., Circulation, 82, 930-940 (1990). Perros de caza cruzados (edad 6-7 meses, de ambos sexos, Hazelton-LRE, Kalamazoo, MI, EE.UU.) se anestesian con pentobarbital sódico (30 mg/kg por vía intravenosa, i.v.), se intuban, y se ventilan con aire ambiente. El volumen de ventilación pulmonar y los ritmos respiratorios se ajustan para mantener los valores PO_{2}, PCO_{2}, y el pH de la sangre dentro de límites normales. Se insertan electrodos de aguja subdérmica para el registro de un ECG de derivación II.
La vena yugular izquierda y la arteria carótida común se aíslan por medio de una incisión en el cuello mediolateral izquierda. La presión sanguínea arterial (ABP) se mide continuamente con un transductor Millar precalibrado (patrón MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, EE.UU.) insertado en la arteria carótida. La vena yugular se canula para la toma de muestras de sangre durante el experimento. Adicionalmente, las venas femorales de ambas patas posteriores se canulan para administración del compuesto de ensayo.
Se realiza una toracotomía izquierda en el quinto espacio intercostal, y se suspende el corazón en una cuna pericárdica. Se aísla un segmento de 1 a 2 cm de la arteria coronaria circunfleja izquierda (LCX) proximal a la primera rama principal diagonal del ventrículo. Se inserta un electrodo anódico de alambre de calibre 26 con punta de aguja (revestido con Teflon®, alambre de cobre plateado de calibre 30) de 3-4 mm de longitud en la LCX y se pone en contacto con la superficie de la túnica íntima de la arteria (confirmado al final del experimento).
El circuito de estimulación se completa disponiendo el cátodo en un punto subcutáneo (s.c.). Se coloca un oclusor de plástico ajustable alrededor de la LCX, encima de la región del electrodo. Se coloca una sonda de flujo electromagnético precalibrada (Carolina Medical Electronics, King, NC, EE.UU.) alrededor de la LCX en posición proximal al ánodo para medida del flujo sanguíneo coronario (CBF). Se ajusta el oclusor para producir una inhibición del 40-50% de la respuesta de flujo sanguíneo hiperémica observada después de 10 s de la oclusión mecánica de la LCX. Todas las medidas hemodinámicas y del ECG se registran y se realizan con un sistema de adquisición de datos (patrón M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, EE.UU.).
Formación de trombo y regímenes de administración de los compuestos
La lesión electrolítica de la túnica íntima de la LCX se produce por aplicación de 100 \muA de corriente continua (DC) al ánodo. Se mantiene la corriente durante 60 minutos y se interrumpe luego, con indiferencia de que se haya ocluido o no el vaso. La formación de trombo tiene lugar espontáneamente hasta que la LCX se ocluye totalmente (determinado como cero de CBF y como un aumento en el segmento S-T). Se inicia la administración del compuesto después de dejar envejecer el trombo oclusor durante una hora. Se inicia una infusión de 2 horas de los compuestos de la presente invención a dosis de 0,5 y 1 mg/kg/h simultáneamente con una infusión de agente trombolítico (v.g. activador del plasminógeno tisular, estreptoquinasa, APSAC). La reperfusión se sigue durante 3 horas después de la administración del compuesto de ensayo. La reoclusión de las arterias coronarias después de la trombólisis satisfactoria se define como CBF cero, que persistía durante \geq 30 minutos.
Hematología y determinaciones del tiempo de hemorragia patrón
Se determinan los recuentos de células de sangre entera, hemoglobina, y valores de hematócrito sobre una muestra de 40 \mul de sangre citrada (3,8%) (1 parte de citrato : 9 partes de sangre) con un analizador hematológico (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, Mount View, CA, EE.UU.). Se determinan los tiempos de hemorragia patrón gingivales con un dispositivo de tiempo de hemorragia Simplate II (Organon Teknika Durham, N.C. EE.UU.). El dispositivo se utiliza para realizar dos incisiones horizontales en la encía de la mandíbula izquierda superior o inferior del perro. Cada incisión es de 3 mm de anchura x 2 mm de profundidad. Se practican las incisiones, y se utiliza un cronómetro para determinar la duración de la hemorragia. Se utiliza una torunda de algodón para absorber la sangre a medida que sale de la incisión. El tiempo de hemorragia patrón es el tiempo desde la incisión a la detención de la hemorragia. Los tiempos de hemorragia se toman inmediatamente antes de la administración del compuesto de ensayo (0 minutos), 60 minutos después de la infusión, a la conclusión de la administración del compuesto de ensayo (120 minutos), y al final del experimento.
Todos los datos se analizan por análisis de varianza de una sola vía (ANOVA) seguido por el ensayo t de Student-Neuman-Kuels post hoc para determinar el nivel de significación. Se utilizan medidas ANOVA repetidas para determinar las diferencias significativas entre los distintos momentos durante los experimentos. Se considera que los valores son estadísticamente diferentes al menos al nivel de p < 0,05. Todos los valores son la media aritmética \pm SEM. Todos los estudios se realizan de acuerdo con los principios orientativos de la American Physiological Society. Detalles adicionales concernientes a los procedimientos se describen en Jackson et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 587-599 (1993).
TABLA 2
134
TABLA 2 (continuación)
135
Notas a la Tabla 2
NC^{1} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 20 mg/kg p.o.
NC^{2} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 60 mg/kg p.o.
NC^{3} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 50 mg/kg p.o.
NT indica no ensayado, al igual que una entrada en blanco.
TABLA 2 (continuación)
136
Notas a la Tabla 2
NC^{1} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 20 mg/kg p.o.
NC^{2} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 60 mg/kg p.o.
NC^{3} indica que no se completó la exploración; se observó actividad baja o muy baja a 50 mg/kg p.o.
NT indica no ensayado, al igual que una entrada en blanco.

Claims (17)

1. Un compuesto que tiene la Fórmula I
IX-Y-NH-(CH_{2})_{r}-G
en la cual
X es prolinilo, homoprolinilo,
137
T es C_{3}-C_{8} cicloalquilo, C_{1}-C_{8} alquilo,
138
a es 0 ó 1;
Q es -OH, C_{1}-C_{4} alcoxi, o -NH-A;
A es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, R''SO_{2}-, R''OC(O)-, R''C(O)-, o -(CH_{2})_{g}-COOH,
g es 1, 2 ó 3;
B es hidrógeno C_{1}-C_{4} alquilo;
R' es hidrógeno o C_{1}-C_{4} alquilo;
R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo, -(CH_{2})_{d}-COOH, o arilo insustituido o sustituido, donde arilo es fenilo, naftilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros insustituido o sustituido, que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, o un grupo aromático heterocíclico bicíclico condensado de 9 ó 10 miembros, insustituido o sustituido que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, en el cual los sustituyentes están constituidos por uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, amino (-NH_{2}), mono(C_{1}-C_{4} alquil)amino, (CH_{2})_{j}COOH, mercapto, -S(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHS(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHC(O)(C_{1}-C_{4} alquilo), -S(O)_{h}NH_{2}, -S(O)_{h}NH(C_{1}-C_{4} alquilo), o S(O)_{h}N(C_{1}-C_{4} alquilo)2, h es 0, 1 ó 2, y j es 0, 1, 2, 3 ó 4;
d es 1, 2 ó 3;
m es 0, 1 ó 2;
n es 0, 1 ó 2; y
Z es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, hidroxi, halo, o R_{a}SO_{2}NH-, donde R_{a} es C_{1}-C_{4} alquilo;
Y es
139
140
en cuyas fórmulas
R^{g} es C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
R^{p} es hidrógeno, C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
donde p es 0, 1, 2, 3 ó 4; L es un enlace, -O-, -S-, o -NH-; q es 0, 1, 2 ó 3, y T' es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, -COOH, -CONH_{2}, o Ar, donde Ar es arilo insustituido o sustituido, donde arilo es fenilo, naftilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros insustituido o sustituido, que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, o un grupo aromático heterocíclico bicíclico condensado de 9 ó 10 miembros insustituido o sustituido que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, en el cual los sustituyentes están constituidos por uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, amino (-NH_{2}), mono(C_{1}-C_{4} alquil)amino, (CH_{2})_{j}COOH, mercapto, -S(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHS(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHC(O)(C_{1}-C_{4} alquilo), -S(O)_{h}NH_{2}, -S(O)_{h}NH(C_{1}-C_{4} alquilo), o S(O)_{h}N(C_{1}-C_{4} alquilo)_{2}, h es 0, 1 ó 2, y j es 0, 1, 2, 3 ó 4;
R^{y} es -CH_{2}-, -O-, -S-, o -NH-; y
R^{z} es un enlace o, cuando se considera junto con R^{y} y los tres átomos de carbono contiguos, forma un anillo carbocíclico saturado de 5-8 átomos, uno de cuyos átomos puede ser -O-, -S-, o -NH-;
r es 1 ó 2; y
G es
141
donde D y E son cada uno CH;
k es 0 ó 1;
y
R es -NH_{2}
142
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; o un solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o una sal del mismo;
con la condición de que, cuando:
Y representa azetidina-2-carbonilo, prolinilo insustituido (R^{p} es hidrógeno) o 4-hidroxiprolinilo (R^{p} es hidroxi); y
G representa 4-amidinofenilo;
entonces:
(a) cuando X representa T-(CH_{2})_{a}-C(R')(Q)-C(O)-;
R' representa H;
Q es -NH-A; y
A representa
H, C_{1}-C_{4} alquilo,
R''SO_{2}- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo o fenilo sustituido con un solo grupo carboxi);
R''OC(O)- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo),
R''C(O)- (en cuyo grupo R'' representa C_{1}-C_{4} alquilo o -(CH_{2})_{d}-COOH, donde d es 1 ó 2), o
-(CH_{2})_{g}-COOH;
entonces el grupo T-(CH_{2})_{a} no representa:
(i) C_{1}-C_{8} alquilo;
(ii) -(CH_{2})_{a}-C_{5}-C_{6} cicloalquilo;
(iii) -(CH_{2})_{a}-fenilo, grupo fenilo que está sustituido opcionalmente con un grupo C_{1}-C_{4} alquilo;
(iv) -(CH_{2})_{a}-fenilo, grupo fenilo que está sustituido con un grupo hidroxi o un grupo C_{1}-C_{4} alcoxi; o
(v) -(CH_{2})_{a}-naftilo; y
(b) X no representa prolinilo, homoprolinilo,
143
donde R' representa H;
y con la condición adicional de que, cuando:
Y representa azetidina-2-carbonilo o prolinilo insustituido (RP es hidrógeno);
r es 1; y
G representa
144
entonces:
cuando X representa T-(CH_{2})_{a}-C(R')(Q)-C(O)-;
T es distinto de fenilo sustituido con R_{a}SO_{2}NH-; y
R' representa H;
entonces Q no representa OH, C_{1}-C_{4} alcoxi o -NH-A en cuya fórmula A representa:
(i) H, C_{1}-C_{4} alquilo;
(ii) R''C(O)- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo o arilo;
(iii) R''OC(O)- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, -(CH_{2})_{d}-COOH o arilo; o
(iv) R''SO_{2}- donde R'' es C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} perfluoroalquilo, -(CH_{2})_{d}-COOH o arilo;
donde arilo es fenilo, metilfenilo o naftilo, grupo que está sustituido opcionalmente con uno o dos grupos seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi y -(CH_{2})_{j}COOH (en cuya fórmula j representa 0 a 4).
2. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual
alquilo por sí mismo o como parte de otro sustituyente es metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo o sec-butilo;
perfluoroalquilo en sí mismo o como parte de otro sustituyente es trifluorometilo, perfluoroetilo, perfluoro-n-propilo, perfluoroisopropilo, perfluoro-n-butilo, perfluoro-t-butilo, perfluoro-isobutilo o perfluoro-sec-butilo;
C_{3}-C_{8} cicloalquilo es ciclopropilo, metilciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 4-metilciclohexilo o ciclooctilo;
halo es cloro, fluoro, bromo o yodo;
un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros es furilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, piranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, oxazinilo o tiazinilo;
un anillo heterocíclico de 9 ó 10 miembros es indolilo, benzotienilo, benzofurilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzopirazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo o benzotiazolilo.
3. Un compuesto o sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el cual
X es
145
homoprolinilo, 1- o 3-Tiq, o 1- o 3-Piq; Y es prolinilo; y Q es NHA en cuya fórmula A es hidrógeno o R''SO_{2}-, R' es hidrógeno, Z es hidrógeno, y B es hidrógeno; y R es un grupo amidino.
4. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el cual
G es un grupo 4-amidinofenilo.
5. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el cual
X es
146
en cuya fórmula T es ciclohexilo, a es 1, R' es hidrógeno y Q es -NH-A, en cuya fórmula A es hidrógeno, R''SO_{2}- o -(CH_{2})_{g}-COOH.
6. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, en el cual "A" es R''SO_{2}- y R'' es etilo.
7. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, en el cual A es -(CH_{2})_{g}-COOH y g es 1.
8. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 6 ó 7, en el cual Y es (L)-prolinilo, (S)-cis-octahidro-1H-indol-2-carbonilo,o N-(2-feniletil)glicilo.
9. Un compuesto, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable de acuerdo con la reivindicación 1, compuesto que es
un compuesto de Fórmula Ia
147
y X tiene cualquiera de los valores de acuerdo con las reivindicaciones 1-3 y 5-7.
10. Un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual
X es prolinilo, homoprolinilo,
148
T es C_{3}-C_{8} cicloalquilo, C_{1}-C_{8} alquilo,
149
a es 0 ó 1;
Q es -NH-A;
A es -(CH_{2})_{g}-COOH;
g es 1, 2, ó 3;
B es hidrógeno o C_{1}-C_{4}-alquilo;
R' es hidrógeno o C_{1}-C_{4} alquilo;
d es 1, 2, ó 3;
m es 0, 1, ó 2;
n es 0, 1, ó 2;
Z es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, hidroxi, halo, o R_{a}SO_{2}NH-, donde R_{a} es C_{1}-C_{4} alquilo; Y es
150
en cuyas fórmulas
R^{g} es C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
R^{p} es hidrógeno, C_{1}-C_{6} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, o -(CH_{2})_{p}-L-(CH_{2})_{q}-T';
donde p es 0, 1, 2, 3 ó 4; L es un enlace, -O-, -S-, o -NH-; q es 0, 1, 2 ó 3, y T' es hidrógeno, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{3}-C_{8} cicloalquilo, -COOH, -CONH_{2}, o Ar, donde Ar es arilo insustituido o sustituido, donde arilo es fenilo, naftilo, un anillo heterocíclico aromático de 5 ó 6 miembros insustituido o sustituido, que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno, y nitrógeno, o un grupo heterocíclico aromático bicíclico condensado de 9 ó 10 miembros insustituido o sustituido que tiene uno o dos heteroátomos que son iguales o diferentes y que se seleccionan de azufre, oxígeno y nitrógeno, donde los sustituyentes están constituidos por uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de halo, hidroxilo, C_{1}-C_{4} alquilo, C_{1}-C_{4} alcoxi, amino (-NH_{2}), mono(C_{1}-C_{4} alquil)amino, -(CH_{2})_{j}COOH, mercapto, -S(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHS(O)_{h}(C_{1}-C_{4} alquilo), -NHC(O)(C_{1}-C_{4} alquilo), -S(O)_{h}NH_{2}, -S(O)_{h}NH(C_{1}-C_{4} alquilo), o -S(O)_{h}N(C_{1}-C_{4} alquilo)_{2}, h es 0, 1 ó 2, y j es 0, 1, 2, 3 ó 4;
R^{y} es -CH_{2}-, -O-, -S-, o -NH-; y
R^{z} es un enlace o, cuando se considera con R^{y} y los tres átomos de carbono contiguos, forma un anillo carbocíclico saturado de 5-8 átomos, uno de cuyos átomos puede ser -O-, -S-, o -NH-;
r es 1 ó 2; y
G es
151
donde D y E son cada uno CH;
k es 0 ó 1;
y
R es
--- 
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{NOH}}
--- NH_{2};
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables;
o un solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o sal del mismo.
11. Un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato del mismo como se define en la reivindicación 1, pero sin las reservas, compuesto que se selecciona de
a) N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[[(4aS,-8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida,
b) N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[[4-(amino-iminometil)fenil]metil]-L-prolinamida,
c) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-1-[N-(etilsulfonil)-D-fenilglicil]-octahidro-1H-indol-2-carboxa-
mida,
d) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-1-[N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil]-octahidro-1H-indol-2-carboxamida, y
e) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-1-[N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil]-octahidro-1H-indol-2-
carboxamida.
12. Un compuesto o una sal o solvato del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, compuesto que es
(S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)-fenil]metil]-1-[N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil]-octahidro-1H-indol-2-carboxa-
mida.
\newpage
13. Un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato del mismo como se define en la reivindicación 1, pero sin las reservas, compuesto que se selecciona de
a. D-fenilalanil-N-[4-(aminometil)fenilmetil]-L-prolinamida;
b. D-fenilalanil-N-[3-(aminometil)fenilmetil]-L-prolinamida;
c. D-fenilalanil-N-[4-(amino)fenilmetil]-L-prolinamida;
d. D-fenilalanil-N-[2-[4-(amino)fenil]etil]-L-prolin-amida;
e. D-fenilalanil-N-[[3-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida;
f. D-homoprolil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-L-prolinamida;
g. N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-3-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida;
h. (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-D-homo-propil-octahidro-1H-indol-2-carboxamida;
i. D-homoprolil-N-(á)-(2-feniletil)-N-[[4-(aminoimino-metil)fenil]metil]glicinamida;
j. D-homoprolil-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-4-fenoxi-L-prolinamida;
k. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[4-[amino-(hidroxi-imino)metil]fenilmetil]-L-prolinamida;
l. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[3-[amino-(hidroxi-imino)metil]fenilmetil]-L-prolinamida;
m. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[3-(aminoimino-metil)fenilmetil]-L-prolinamida;
n. N-[[3-[amino(hidroxiimino)metil]fenil]metil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida;
o. N-[[3-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida;
p. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[2-[4-[amino(hidroxiimino)metil]fenil]etil]-L-prolinamida;
q. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[2-[4-(aminoimino-metil)fenil]etil]-L-prolinamida;
r. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[2-[3-[amino-(hidroxiimino)metil]fenil]etil]-L-prolinamida;
s. N-(etilsulfonil)-D-fenilalanil-N-[2-[3-(aminoimino-metil)fenil]etil]-L-prolinamida;
t. N-[2-[4-[amino(hidroxiimino)metil]fenil]etil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolina-
mida;
u. N-[2-[4-(aminoiminometil)fenil]etil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida;
v. N-[2-[3-[amino(hidroxiimino)metil]fenil]etil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida; y
w. N-[2-[3-(aminoiminometil)fenil]etil]-1-[[(4aS,8aS)-decahidro-1(R)-isoquinolinil]carbonil]-L-prolinamida.
14. Un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato del mismo como se define en la reivindicación 1, pero sin las reservas, compuesto que se selecciona de
i) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-D-perhidro-isoquinolina-1-carbonil]-octahidro-1H-indol-2-car-
boxamida;
ii) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-D-perhidro-isoquinolina-3-carbonil]-octahidro-1H-indol-2-carboxamida;
iii) N-(carboximetil)-D-fenilalanil-N-[[4-(aminoimino-metil)fenil]metil]-L-prolinamida;
iv) (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[N-(carboximetil)-D-fenilalanil]-octahidro-1H-indol-2-carboxamida;
v) N-[[4-(aminoiminometil)fenil]metil]-1-[N-(carboxi-metil)-D-fenilalanil]-[4-(cis-isoamil)prolinamida];
vi) N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-amino-fenil]metil]-prolinamida;
vii) N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[2-[4-amino-fenil]metil]-prolinamida;
viii) N-(carboximetil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(amino-metil)fenil]metil]-prolinamida;
ix) N-(etilsulfonil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(amino-iminometil)fenil]metil]-L-prolinamina;
x) N-(etilsulfonil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(amino-metil)fenil]metil]-prolinamida; y
xi) N-(3-carboxipropil)-D-ciclohexilalanil-N-[[4-(amino-iminometil)fenil]metil]-L-prolinamida.
15. Una formulación farmacéutica que comprende, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un compuesto de Fórmula I o Ia, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14.
16. Un proceso para preparar un compuesto que tiene la Fórmula I
IX-Y-NH-(CH_{2})_{r}-G
de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, que comprende
a) eliminar simultánea o sucesivamente el o los grupos protectores P de un compuesto correspondiente de fórmula (II)
(II)(P)X-Y-NH-(CH_{2})_{r}-G(P)
en la cual (P)X representa un radical X que puede llevar uno o más grupos protectores P seleccionados independientemente de un grupo protector de aminoácido P para un compuesto de Fórmula I en la cual X incluye un resto básico NH y un grupo protector de carboxi P para un compuesto de Fórmula I en la cual X incluye un residuo carboxi, y G(P) representa un radical G que puede llevar uno o más grupos P protectores de amino seleccionados independientemente; o
b) para un compuesto de Fórmula I en la cual R es
--- 
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{NH}}
---NH_{2},
por hidrogenólisis de un compuesto correspondiente de Fórmula I en la cual R es
--- 
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{NOH}}
---NH_{2};
y después de ello, cuando se requiere una sal del compuesto de Fórmula I, formar la sal con un ácido farmacéuticamente aceptable.
17. El uso de una dosis eficaz de un compuesto, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la trombina en un mamífero que requiere inhibición de la trombina.
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