EP2598131A1 - Composes pour le traitement/la prevention des maladies inflammatoires oculaires - Google Patents

Composes pour le traitement/la prevention des maladies inflammatoires oculaires

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EP2598131A1
EP2598131A1 EP11741650.3A EP11741650A EP2598131A1 EP 2598131 A1 EP2598131 A1 EP 2598131A1 EP 11741650 A EP11741650 A EP 11741650A EP 2598131 A1 EP2598131 A1 EP 2598131A1
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EP
European Patent Office
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amino
pharmaceutically acceptable
compound
acceptable salt
treatment
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP11741650.3A
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German (de)
English (en)
Inventor
Jocelyne Annat
Hélène-Céline HUGUET
Olivier Lacombe
Luc Lebreton
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Laboratories Fournier SAS
Original Assignee
Laboratories Fournier SAS
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Filing date
Publication date
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    • C07C279/12—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups

Definitions

  • the present invention relates to a new therapeutic use of the compounds of formula (I) as defined below.
  • the present invention relates to the use of these compounds and their pharmaceutically acceptable salts for the treatment and / or prevention of ocular inflammatory diseases, and more particularly of uveitis, of severe conjunctivitis (vernal keratoconjunctivitis). , dry eye syndrome (keratoconjunctivitis sicca) and diabetic retinopathy.
  • Inflammatory eye diseases are the leading cause of impaired vision in the world.
  • uveitis refers to inflammation of the uvea, the middle vascular layer of the eye consisting of the iris, ciliary body, and choroid. Inflammation in uveitis results from a wide variety of traumatic and immune-mediated aggression.
  • Conjunctivitis includes diseases characterized by swelling, itching or burning, or redness of the conjunctiva, a membrane covering the whiteness of the eye.
  • the etiology of conjunctivitis includes infectious and noninfectious conjunctivitis.
  • Conjunctivitis is typically acute in the case of bacterial or viral infections and chronic in the case of allergy.
  • Dry eye syndrome is one of the most common eye diseases. It is also called keratoconjunctivitis sicca (KCS). It is characterized by symptoms of eye irritation and may cause a disturbed vision, which increases the risk of infection and corneal ulceration. The pathogenesis of dry eye is not fully understood, although it is widely accepted that dry eye is associated with inflammation of the ocular surface.
  • KCS keratoconjunctivitis sicca
  • Diabetic retinopathy is a consequence of chronic hyperglycemia, resulting in capillary lesions with functional changes such as edema and ischemia.
  • Laser photocoagulation is still the treatment of reference, and vitrectomy is used in case of detachment of the retina.
  • Lucentis® (Ranibizumab) is used to treat macular edema.
  • corticosteroids administered locally or systemically. Nevertheless, corticosteroids have serious side effects both systemically and locally, such as corticosonic cataract, corticosonic glaucoma, superinfection and delayed healing.
  • Non-steroidal anti-inflammatory agents such as Diclofenac or Flurbiprofen.
  • Diclofenac or Flurbiprofen.
  • many subjects do not react or become refractory to steroidal or nonsteroidal therapy.
  • antimetabolite drugs such as Azathioprine and Methotrexate with hematologic and hepatic toxicities primarily used to treat recurrent and very severe uveitis
  • immunosuppressants such as orally administered Cyclosporine A and Tacrolimus, which also have many side effects, such as risk of impaired renal function, increased risk of lymphoproliferative disorders and malignant skin tumors.
  • these immunosuppressants can be used topically but, given their macrocyclic structures, these compounds are not soluble in aqueous media. They are formulated especially in oily vehicles with the disadvantage of being irritating, painful and cause a disturbance of vision. In the end these compounds are poorly tolerated by the subjects.
  • the present invention overcomes the disadvantages of the state of the art by providing a new use of one or more compounds of formula (I) and their pharmaceutically acceptable salts and, in particular, their use in the treatment and / or prevention ocular inflammatory diseases such as uveitis, severe conjunctivitis, dry eye syndrome or diabetic retinopathy.
  • the present invention provides aqueous pharmaceutical compositions containing the compounds of formula (I), which allow to reach the posterior chamber of the eye, which represents a considerable advance for the treatment of inflammatory ocular diseases.
  • the compounds of the present invention have little or no effect on the systemic immune response, thereby significantly limiting the potential side effects associated with the administration of said compounds.
  • the present invention is based on the unexpected results demonstrating that the compounds of formula (I) (hereinafter referred to as "compounds of the invention”) and their pharmaceutically acceptable salts are capable, when administered locally, to improve the clinical signs in the uveitis models, with in particular protection of the ocular and ocular barriers of the anterior and posterior chamber without modification of the systemic immune response. Similarly, the compounds of the invention are also useful for the treatment of severe conjunctivitis, dry eye syndrome and diabetic retinopathy.
  • the compounds of the invention and their pharmaceutically acceptable salts, with their linear structure, are soluble and stable in aqueous media, so that they can be administered locally in aqueous formulations that are perfectly biocompatible and do not cause irritation or impaired vision.
  • the present invention thus relates to the use of the compounds of the invention and their pharmaceutically acceptable salts, in particular Tresperimus and Anisperimus, for the preparation of a medicament useful for the treatment and / or prevention of inflammatory eye diseases, in uveitis, severe conjunctivitis, dry eye syndrome or diabetic retinopathy.
  • the present invention provides a method for treating and / or preventing eye inflammatory diseases, including uveitis, severe conjunctivitis, dry eye syndrome or diabetic retinopathy, comprising: administering to a subject in need thereof one or more compounds of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the compound of the invention or its pharmaceutically acceptable salt is Tresperimus or Anisperimus.
  • the compound (s) of the invention may be administered locally.
  • the compound (s) of the invention are administered in the form of eye drops or in the form of an injectable solution intraocularly or periocularly, or of an implantable system.
  • the compounds of the invention and their pharmaceutically acceptable salts are particularly useful for the treatment and / or prevention of uveitis, dry eye syndrome or diabetic retinopathy. .
  • the present invention relates to suitable formulations of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising as sole active ingredient a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof for topical administration to subjects having inflammatory eye diseases.
  • a pharmaceutically acceptable aqueous formulation for local administration.
  • the compounds of the invention in particular Tresperimus and Anisperimus, or their pharmaceutically acceptable salts, may be administered in combination with an anti-VEGF, an anti-TNF, a corticosteroid, a nonsteroidal anti-inflammatory agent, an antibiotic or an immunosuppressant.
  • Figure 1 shows the effect of a Tresperimus injection on clinical autoimmune uveoretinitis (UAE) in rats.
  • Figure 2 shows the effect of an intravitreal injection (IT) of Tresperimus on the histopathological scores of UAE (A) and the histopathological changes of UAE in rats treated with Tresperimus (C) compared with rats subjected to saline injection (B).
  • I intravitreal injection
  • A histopathological scores of UAE
  • C histopathological changes of UAE in rats treated with Tresperimus
  • B saline injection
  • FIG. 3 shows the effect of Tresperimus in the S-specific delayed-type hypersensitivity (HTR) in rats treated with intravitreal injection.
  • Figure 4 shows the ocular distribution of Tresperimus after instillation of eye drops of a 1% solution twice daily for 4 days in male New Zealand rabbit.
  • Figure 5 shows the effect of Tresperimus after treatment with instillations on the clinical signs of LPS-induced uveitis (lipopolysaccharide).
  • Figure 6 shows the effect of Tresperimus after instillation treatment on the number of infiltrating inflammatory cells in LPS-induced uveitis.
  • Figure 7 shows the effect of Tresperimus on the tear volume measured by the phenol red test.
  • Figure 8 shows the effect of Tresperimus on the stability of the tear film as measured by tear film rupture time.
  • Figure 9 shows the effect of Tresperimus on the production of MCP-1 and IL-6 in vitreous.
  • Figure 10 shows the effect of Tresperimus on the amplitude of pseudo-oscillations at different frequencies.
  • the "subject” is preferably a mammal, more preferably a human.
  • Prevention and / or treatment method shall be understood as covering those processes in which a compound or derivative or salt thereof is administered for the treatment and / or prevention of the specified disease.
  • Inflammatory eye diseases is a general term for inflammation affecting any part of the eye or surrounding tissue. Inflammation involving the eye can range from familiar allergic conjunctivitis of hay fever to rare conditions potentially leading to blindness such as severe conjunctivitis (vernal keratoconjunctivitis), uveitis, scleritis, episcleritis, neuritis keratitis, retrobulbar pseudotumor, Eales syndrome, dry eye syndrome, diabetic retinopathy, age-related macular degeneration (AMD), an ocular manifestation of a systemic ocular tissues, that is to say the retina, which can ultimately lead to blindness.
  • the localization of inflammation governs the diagnostic designation of inflammatory ocular disease. Inflammatory eye diseases can result from several causes.
  • uveitis is non-infectious and comes from traumatic, drug-induced causes, immune-mediated causes, malignant causes, or causes following ophthalmic surgery.
  • compositions of the present invention may also be used after ophthalmic surgery causing ocular inflammation such as corneal transplantation.
  • Uveitis refers to the inflammation of the uvea, the middle vascular layer of the eye consisting of the iris, ciliary body and choroid. It is classified according to its location, its clinical evolution and its laterality. "Anterior” refers to the involvement of the iris, cornea, pupil, aqueous humor or ciliary body. For example, we can mention as anterior uveitis Kawasaki disease.
  • Intermediate refers to the vitreous, the posterior zone of the ciliary body, the peripheral retina and the sclera.
  • Noninfectious posterior uveitis includes Behcet's disease, Vogt-Koyanagi-Harada's disease, inflammation of the posterior zone of the ciliary body, sarcoidosis, idiopathic retinal vasculitis and multifocal inflammation of the retina. and the choroid.
  • Pantuheite is used when two or more segments are affected.
  • the conjunctivitis is non-infectious and comes mainly from severe ocular allergies since it sometimes leads to ulcerations that always involve a risk of significant and permanent visual losses.
  • Allergic conjunctivitis is an inflammatory reaction of the conjunctiva (a thin membrane that covers the eye and the inside of the eyelid).
  • the eyes can become red, tingling, burning, scratching, itching and watering.
  • the light is difficult to bear (photophobia).
  • the eyelids are often red and swollen, and sometimes the swelling of the conjunctiva (chemosis), or even a darker marking of the contours of the eyes or important secretions of mucus. It affects little the cornea. It is the most common and probably the least serious form of ocular allergy. This type I reaction is often the result of pollen abundance in spring and summer (tree and grass pollen).
  • the term allergic keratoconjunctivitis is used when the damage also affects the cornea and not just the conjunctiva.
  • vernal conjunctivitis is a serious form of ocular allergy since it sometimes leads to ulcerations that always involve a risk of significant and permanent visual loss. These ulcerations are often located in the upper part of the cornea and papillae form on the conjunctiva, especially on the upper eyelid.
  • Dry eye or kerato-conjunctivitis dry eye syndrome refers to all eye conditions resulting from secretion by the lacrimal glands of tears in an inadequate quantity or quality.
  • dry eye syndrome also relates to all tear-deficient forms (including autoimmune dry eye Sjogren's syndrome and non-Sjogren's tear deficiency) and evaporative forms. Dry eyes are also recognized as the disruption of the lacrimal functional unit, an integrated system comprising the lacrimal glands, the ocular surface (cornea, conjunctiva and meibomian glands) and the eyelids, as well as the sensory nerves that connect them.
  • Diabetic retinopathy refers to damage to the retinal and choroid microcirculation (affected organs are the retina, choroid, papilla and iris) due to chronic hyperglycemia. There are two forms: simple (or non-proliferative) and proliferative.
  • retinal and usually macular edema there is an appearance of retinal and usually macular edema.
  • occlusions of the retinal capillaries occur causing retinal ischemia.
  • these two major characteristics can be associated and lead to ischemia in the retinal periphery and macular exudates.
  • the compounds of the invention are also useful in the treatment of age-related macular degeneration (AMD).
  • AMD age-related macular degeneration
  • n is equal to 6 or 8
  • A is a bond, a CH 2 group, a CH (OH) group, a CHF group, a CH (OCH 3 ) group, a CH 2 NH group or a CH 2 O group;
  • - R is a hydrogen atom or a CH 3 .
  • salts of the compounds of the invention can be obtained by chemical reaction between an inorganic or organic acid and the compounds of formula (I) mentioned below.
  • the preferred inorganic acids for the formation of salts are: hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid.
  • the preferred organic acids for the formation of salts are: fumaric acid, maleic acid, oxalic acid, citric acid, trifluoroacetic acid, tartaric acid and sulphonic acids (methanesulphonic acid). with dodecane sulphonic acid).
  • the compounds of formula (I) are advantageously chosen from: 2 - [[6- [(aminoiminomethyl) amino] hexyl] amino N- [4 - [(3-aminopropyl) amino] butyl] -carbamate -2- oxoethyl;
  • the compounds of formula (I) which are particularly preferred are 2- [[6 - [(aminoiminomethyl) amino] hexyl] amino N- [4 - [(3-aminopropyl) amino] butylcarbamate] - 2-oxoethyl, and 2 - [[6- [(aminoiminomethyl) amino] hexyl] amino] -2-oxoethyl N- [4 - [(3-aminobutyl) amino] butylcarbamate tetrachloride.
  • compositions of the invention typically comprise a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as the only active substance, as well as one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • “Pharmaceutical vectors” refers to an excipient or a mixture of a plurality of pharmaceutically acceptable excipients which allow the administration of active substances. They allow and can facilitate or improve the preparation of the composition and can stabilize the composition. In addition, the pharmaceutically acceptable vectors can increase the effectiveness of the composition, improve the ocular tolerability of the active substance and / or modify its release profile.
  • Such vectors may take a wide variety of forms depending on the form of preparation desired for administration, for example local administration.
  • “Local administration” should be understood as defining all ocular pathways, ie topical, injectable administrations or administrations using implantable systems.
  • Topical administration can be in form, for example and without limitation, eye drops or eye drops or instillations eyepieces, sprays, creams, ointments, gels, hydrogels, oieogels, hydrophilic lenses, inserts and implants.
  • the galenic forms may be, for example and without limitation, solutions, suspensions, colloidal systems (for example liposomes, emulsions, microemulsions, nanoemulsions, microparticles, nanoparticles, microspheres, niosomes, dendrimers), micelles, mixed micelles, complexing systems, for example cyclodextrin solutions, and also non-implantable inserts in the form, for example and without limitation of disks, films or lamellae.
  • colloidal systems for example liposomes, emulsions, microemulsions, nanoemulsions, microparticles, nanoparticles, microspheres, niosomes, dendrimers
  • micelles mixed micelles,
  • Intravitreal administration may be non-restrictively in intraocular (intravitreal, IVT), periocular including subconjunctival administration, under the Tenon capsule, retrobulbar and intrasclerotic.
  • “Intravitreal administration” can be performed as injectable or implantable systems.
  • the galenic forms may be in a nonlimiting manner solutions, suspensions, colloidal systems (for example liposomes, emulsions, microemulsions, nanoemulsions, microparticles, nanoparticles, microspheres, niosomes, dendrimers), micelles, mixed micelles, and also implants biodegradable or non-biodegradable form, for example and without limitation rods, nails, pellets.
  • most of the dosage forms mentioned above can potentially increase the residence time of the active ingredient on the surface of the eye or in the vitreous, allow slow and prolonged release of encapsulated compounds and / or avoid toxicity and increase ocular tolerability.
  • the compounds of the invention or their pharmaceutically acceptable salts can be administered via a pharmaceutically acceptable, aqueous composition and formulation adapted to a particular topical administration, preferably by instillation, or injectable administration, preferentially intravitreal.
  • the excipient (s) For topical or injectable administration, the excipient (s) must be pharmaceutically acceptable and suitable for this type of ocular administration.
  • the aqueous media used in the present invention consist of water containing no physiologically and ophthalmologically harmful agents.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is in the form of an aqueous pH formulation that is physiologically compatible for the ocular route.
  • physiologically compatible pH for the ocular route means a pH in the range of about 5.5 to about 8, preferably about 6.0 to about 7.5.
  • the pH of the preparations is adjusted with an acid such as, for example, acetic acid, boric acid, lactic acid and hydrochloric acid; a base such as, for example, sodium hydroxide, sodium borate, sodium citrate, sodium acetate; or a pharmaceutically acceptable buffered solution, such as, for example, sodium phosphate buffer, potassium phosphate buffer, sodium citrate buffer.
  • the aqueous preparations according to the invention are isotonic and physiologically suitable for topical and intraocular ocular administrations.
  • the osmotic pressure of the preparations is close to the physiological pressure and is generally between about 200 mOsm and about 400 mOsm, preferably between about 260 and about 340 mOsm.
  • the osmotic pressure can be adjusted using appropriate amounts of physiologically and ophthalmologically acceptable excipients.
  • Sodium chloride is generally used as a tonicity agent at a concentration (expressed in m / V) not exceeding 0.9%.
  • Equivalent amounts of one or more salts composed of a cation and an anion may also be employed.
  • the osmotic pressure can be corrected by adding sugars or polyols, alone or in combination.
  • the preparations of the present invention have a variable viscosity of from 0 to about 2000 Centipoises, preferably less than about 100 Centipoises, and more preferably less than about 30 Centipoises.
  • composition of the present invention may contain viscosity increasing agents to prolong the premorneal residence time of the active ingredient after instillation.
  • these viscosifying agents may have mucoadhesive properties.
  • Mucoadhesive polymers capable of creating non-covalent bonds with the glycoproteins present in particular at the conjunctival level can be used in the present invention to restrict the formulation locally to the eye, in order to optimize the residence time of the formulation locally and potentially to increase the bioavailability of the active principle at the ocular level, reduce the frequency of administration and thus improve the therapeutic compliance. These polymers are generally macromolecular hydrocolloids.
  • cellulose derivatives such as methylcelluloses, sodium carboxymethylcelluloses, hydroxyethylcelluloses, hydroxypropylcelluloses, hydroxypropylmethylcelluloses, acrylic derivatives such as, for example, polyacrylic acid salts and its functionalized (or polycarbophilic) derivatives, carbomers, products of natural origin such as, for example, alginates, chitosans, pectins, hyaluronic acid and its derivatives, polysaccharide derivatives such as, for example, gellan gum and its derivatives, xanthine gum, carrageenans, co-polymers such as for example poloxamers.
  • cellulose derivatives such as methylcelluloses, sodium carboxymethylcelluloses, hydroxyethylcelluloses, hydroxypropylcelluloses, hydroxypropylmethylcelluloses
  • acrylic derivatives such as, for example, polyacrylic acid salts and its functionalized (or polycarbophilic) derivatives
  • carbomers products of natural origin such as, for example,
  • Polymers having in situ gelling ability may be included in the preparation of the pharmaceutical composition of the invention.
  • phase transition systems are liquid and result in the formation of gels compatible with ocular functions by ionic activation, as a function of pH or temperature.
  • examples that may be mentioned include polymers such as polyacrylic acid derivatives, carbomers, cellulose derivatives, methylcelluloses, copolymers and poloxamers.
  • composition of the present invention may also contain, for example, surfactants, cosolvents, penetrating agents, gelling agents, emulsifiers, antioxidants, preservatives, polymers for sustained release, excipients which are well known in the art. skilled person.
  • the pharmaceutical composition may also be in the form of an insert or a solid implant allowing ocular administration and prolonged release of the active ingredient.
  • the insert preparation can be performed using a water-soluble solid polymer.
  • Biocompatible polymers for the ocular route, inert, used for the preparation of an insert adapted to the ocular route are synthetic, semi-synthetic or of natural origin.
  • composition of the solid implants may also be constituted by synthetic, semi-synthetic or naturally occurring polymers, preferably by biodegradable polymers such as, for example, polyvinyl alcohols, polylactic-co-glycolic acids, poly-epsilon-caprolactones. hyaluronic acid esters.
  • biodegradable polymers such as, for example, polyvinyl alcohols, polylactic-co-glycolic acids, poly-epsilon-caprolactones. hyaluronic acid esters.
  • biodegradable polymers can also be used for the encapsulation of the active ingredient in microspheres, nanospheres, microcapsules, nanocapsules dispersed in aqueous solution for sustained and targeted release of the active ingredient.
  • matrices such as water-soluble lenses impregnated or containing the active ingredient may make it possible to increase the residence time of the active ingredient on the surface of the eye.
  • the pharmaceutical composition in the form of eye drops or injectable solution comprises an effective dose of a compound of the invention such as, for example Tresperimus, dissolved in a physiological aqueous solution as the main vector.
  • a compound of the invention such as, for example Tresperimus
  • This solution ideally comprises an aqueous solution of sodium chloride at a concentration preferably not exceeding 0.9% (w / v), or an aqueous glycerol solution at a concentration not exceeding preferably 2.5% ( m / V) and this in order to obtain a tonicity of the pharmaceutical composition of between about 260 and about 340 mOsm.
  • This solution is adjusted to a pH of about 6.5 using, for example, sodium hydroxide.
  • a bioadhesive polymer such as preferentially hyaluronic acid or a derivative thereof is added.
  • This galenic form is sterilized preferably by gamma ray treatment.
  • This galenic manufacture can be packaged in a single dose form.
  • the injectable solution for administration in the form of a biodegradable implant comprises an effective dose of at least one compound of the invention encapsulated preferably in micro- or nanoparticles consisting of poly-epsilon-caprolactones. .
  • a major advantage of the present invention is that all ocular tissues (anterior or posterior chambers) are exposed to the compounds of the invention, for example by administering a pharmaceutically acceptable aqueous composition.
  • Figure 4 In an ocular distribution study in male New Zealand rabbit ( Figure 4) with Tresperimus after instillation of eye drops of a 1% solution twice daily for 4 days, it was observed that the retina / choroid (posterior chamber) and the ciliary body / iris (anterior chamber) were exposed to Tresperimus levels of 0.5 to 0.7 ⁇ and 0.3 to 0.7 ⁇ for 24 h after repeated instillation of eye drops twice daily in the form of a simple 1% aqueous solution.
  • the topical administration of the compounds of the invention may allow a much better control of the concentrations of active substance. in ocular tissues.
  • plasma levels were found to be low ( ⁇ 50 ng / mL from 5 min to 2 h after instillation) and for a short time below the lower limit of quantification (Blq) (2 ng / mL 4 hours after the dose) after instillation of eye drops. This makes it possible to avoid the undesired effects of immunosuppression at the systemic level.
  • the concentration of the therapeutically active substance in the formulations intended for the intravitreal route may vary from 0.1 ⁇ to 100 m, preferably from 1 ⁇ to 10 m, and more preferably from 10 ⁇ to 0.1 mM.
  • the concentration of the therapeutically active substance in the formulations for ocular topical instillation can vary from 0.001% to 5% (expressed in m / V), and preferably from 0.001% to 1.5%, more preferably from 0.01% to 1%. , 5%. These concentrations can be applied for other local routes of administration ocular and may vary depending on the therapeutic indication, it is left to the discretion of the practitioner mode of administration and dosage according to the subject, its symptoms and the degree of severity of his pathology.
  • compositions are prepared by any galenic manufacturing process well known in the field of pharmaceutical techniques.
  • the compound (s) of the present invention may be combined with or used in combination with other therapeutic agents.
  • a subject may be treated with one or more compounds of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, particularly Tresperimus and / or Anisperimus, together with other conventional drugs for the treatment of inflammatory eye diseases.
  • the administration of the different active substances can be simultaneous, sequential or spaced apart over time.
  • the compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof will not be administered together with an inhibitor of the Lck enzyme.
  • the present invention therefore relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as active substances, at least one compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with one or more drugs used in the treatment of uveitis, chosen from corticosteroids such as, for example, dexamethasone, prednisolone and triamcinolone; immunosuppressants having a mechanism of action different from the compounds of the invention such as, for example, cyclophosphamide, methotrexate, azathioprine, cyclosporin A, tacrolimus, sirolimus, mycophenolate mofetil; anti-TNF such as, for example, Rituximab, Daclizumab, Infliximab, Adalimumab and Etanercept.
  • corticosteroids such as, for example, dexamethasone, prednisolone and triamcinolone
  • immunosuppressants having a mechanism of action different from the compounds of
  • the present invention therefore relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as active substances, at least one compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with one or more drugs used in the treatment of severe conjunctivitis, chosen from corticosteroids such as for example Dexamethasone, Prednisolone; nonsteroidal anti-inflammatory drugs such as Nedocromil, Iodoxamide, Olopatadine; antibiotics, antifungals and anti-bacterials such as Tobramycin, Natamycin, Moxifloxacin; immunosuppressants having a mechanism of action different from the compounds of the invention such as, for example, Cyclosporin A, Tacrolimus, Sirolimus;
  • corticosteroids such as for example Dexamethasone, Prednisolone
  • nonsteroidal anti-inflammatory drugs such as Nedocromil, Iodoxamide, Olopatadine
  • antibiotics, antifungals and anti-bacterials such as Tobramycin, Natamycin, Mo
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as active substances, at least one compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with one or more drugs used in the treatment.
  • dry eye syndrome chosen from immunosuppressants having a mechanism of action different from the compounds of the invention such as, for example, Cyclosporin A and Mycophenolate mofetil; corticosteroids such as, for example, Loteprednol, Rimoxelone and Fluorometholone; and the Tetracyclines. They can also be used in combination with artificial tears and secretagogues.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as active substances, at least one compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with one or more drugs used in the treatment.
  • diabetic retinopathy selected from anti-VEGF such as for example Ranibizumab, Pegatapnib, Bevacizumab; anti-TNF agents such as, for example, Rituximab, Daclizumab, Infliximab, Adalimumab and Etanercept; corticosteroids such as, for example, Dexamethasone, Prednisolone and Triamcinolone; and immunosuppressants having a mechanism of action different from the compounds of the invention such as, for example, Cyclosporin A, Tacrolimus, Everolimus and Sirolimus. They can also be used in combination with laser therapy (photocoagulation).
  • anti-VEGF such as for example Ranibizumab, Pegatapnib, Bevacizumab
  • the eye is a site of immunological privilege nevertheless diseases of the eye coming from an imbalance of the immune system develop and are responsible for impairments of vision that can go as far as blindness.
  • Animal models mainly experimental autoimmune uveitis (UAE) and endotoxin-induced uveitis (UIE), are considered clinically relevant models of ocular diseases and are valuable tools for the study of immunological mechanisms for regulation. diseases in humans:
  • the rat-induced KRA by immunization with purified antigens of the retina mainly the S antigen (Ag-S) is considered as a clinically relevant model for the study of the mechanisms of posterior uveitis in humans and the development of new therapeutic strategies for uveitis
  • UIE is a model of acute inflammatory uveitis, spontaneously resolving, involving components of the innate immune system. It is a useful model for the study of local aspects of ocular inflammation and is considered a relevant model of anterior uveitis in humans.
  • the UAE models help to understand the physiopathological mechanisms and in particular the involvement of CD4 + lymphocytes (cluster of differentiation 4), macrophages and proinflammatory cytokines in the mechanisms of destruction of the retina.
  • the UAE is a model of inflammatory disease that shares many clinical and histopathological features with human uveitis such as sympathetic ophthalmia, birdshot retinochoroidopathy, Vogt-Koyanagi-Harada syndrome, Behcet's disease, and sarcoidosis. It is a clinically relevant model for human eye inflammation.
  • the UAE is induced by immunization with purified retinal autoantigen, S antigen (S-Ag) which is also recognized by subjects with uveitis.
  • S-Ag S antigen
  • the UAE is dependent on Th1 effector cells (interferon-gamma producing cells) and Th17 (interleukin-17 producing cells) CD4 +, each effector phenotype can induce a pathological reaction.
  • IL-17 interleukin-17 plays a preponderant role in the UAE induced by the IRBP protein (interphotoreceptor retinoid-binding protein, in French retinol-binding protein inter-photoreceptors).
  • the neutralization of ITL-17 prevents or reverses the disease.
  • the Thl7 effector cells induce a UAE in the absence of interferon (IFN) -gamma.
  • IFN interferon
  • Macrophages cross the blood-retinal barrier and infiltrate the retina, where the release of mediators such as NO (nitric oxide) and TNF (tumor necrosis factor) can cause severe retinal damage and, consequently, vision loss in patients. topics.
  • Tresperimus was performed by intravitreous (IVT) injections (5 ⁇ L) in both eyes on days 6, 9 and 12 after immunization with S-Ag.
  • IVT intravitreous
  • the rats were anesthetized by intraperitoneal injection of pentobarbital (Sanofi-Aventis, France) prior to blood collection by intracardiac puncture.
  • pentobarbital Sanofi-Aventis, France
  • a group of rats received a sterile, substantially isoosmolar and physiological saline solution at 9 mM Tresperimus to obtain a final solution at 1 mM in the vitreous
  • a control group of rats received a vehicle (saline) and a control group of rats was not treated.
  • the animals were clinically examined with a slit lamp from day 9 after immunization with S-Ag until the time of euthanasia. Histopathology of the eyes was performed and immunostaining was done on cryostat sections. The inguinal lymph nodes were removed for cytokine analysis by RT-PC.
  • Tresperimus In a second experiment, one group of rats received three injections of Tresperimus in vitreous and the control rats were injected with saline. Rats were observed clinically and subjected to delayed-type hypersensitivity (HTR) analysis. Levels of Tresperimus in plasma and ocular tissues were measured 1, 3 and 8 days after the third injection.
  • HTR delayed-type hypersensitivity
  • the animals were examined with a slit lamp on day 7, and then daily from day 11 until the time of euthanasia to assess the onset of the disease and the severity of the disease.
  • the intensity of clinical ocular inflammation was scored on a scale of 0 to 7 for each eye as previously described (Kozak, Eur. J. Imm. 2004). 2. Histopathology
  • the eyes of enucleated rats were fixed, treated, paraffin sections were made and stained with hematoxylin-eosin-saffron for histological evaluation.
  • the sections were examined and scored according to the severity of the KAU on a semi-quantitative scale of 0 to 7 as follows; (0) no tissue destruction, (1-2) destruction of external segments of rods and cones, (3-4) destruction of the outer nuclear layer, (5-6) destruction of the inner nuclear layer, and (7) ) destruction of the ganglion cell layer.
  • a primary antibody against NOS-2 (Beckton Dickinson Biosciences, Transduction Laboratories, San Jose, USA), a primary antibody against NF-KBp65, and a secondary antibody conjugated to Alexa Fluor® 488 (Molecular Probes, Eugene, OR) was used.
  • a macrosialin anti-CD68 primary antibody (EDI clone) (Serotec, Oxford, UK) followed by a Alexa 564 conjugated secondary antibody (red).
  • the sections were observed by fluorescence photomicroscopy (FXA, Microphot, Nikon, Melville, NY) and digitized micrographs were obtained with a digital camera (Spot, BFI Optilas, Evry, France).
  • HTR was estimated by an atrial test measuring the specific anti-S-Ag response 18 days after immunization. Rats were sensitized with 10 ⁇ g S-Ag in the right ear and saline in the left ear. Specific atrial swelling was measured at 24 and 48 h after sensitization and the difference in thickness (mm) between the two ears was calculated.
  • Tresperimus After intravitreal injection of Tresperimus, the plasma levels of the tested sample were quantified only at the first time point 1 h after the injection, with low mean concentrations close to 0.1 ⁇ (approximately 40 ng / mL). Eye tissues have were highly exposed to Tresperimus, with significant levels (> 10 ⁇ ) in the retina / choroid 8 days after injection,
  • Tresperimus led to a significant reduction in the clinical severity of UAE from day 13 after immunization, compared with rats that received saline injections (day 13; * p ⁇ 0). , 02, days 14-19, *** p ⁇ 0.0006), or compared with rats that received no intraocular treatment Court 12; * p ⁇ 0.02; day 19: *** p ⁇ 0.0006) ( Figure 1).
  • the severity of the disease was significantly reduced by treatment until 19 days after immunization, indicating that intraocular therapy is very effective.
  • Tresperimus protects the retina against destruction and modulates the activity of macrophages
  • NF-kappaBp65 nuclear and cytoplasmic expression of NF-kappaBp65, mainly in the vitreous body where many infiltrations by inflammatory cells occur. are visible.
  • rats treated with Tresperimus low infiltration by inflammatory cells is visible in ocular tissues, with a reduced number of infiltrating cells in the tissues and ocular media and showing only cytoplasmic expression of NF-kappaBp65.
  • T-PC Cytokines in the inguinal lymph nodes
  • Tresperimus In conclusion, the injection of Tresperimus into the posterior pole of the rat eye at the level of the posterior zone of the body allowed it to diffuse into the anterior and posterior segments of the eye, as demonstrated by its efficacy on anterior and posterior ocular inflammation in UAE. In addition, low levels ( ⁇ 90 ng / mL) of Tresperimus were found in the plasma with no effect on response. systemic immune system. In fact, the effect of Tresperimus was limited to the eye, confirming that no effective diffusion into the general circulation occurred.
  • Tresperimus performed after immunization with S-Ag during the afferent phase of the disease (days 6, 9, 12) are effective in reducing clinical ocular inflammation and retinal retinal photoreceptors.
  • HTR delayed-type hypersensitivity
  • ocular treatment has no effect on the systemic immune response. Indeed, in the inguinal lymph nodes draining the immunization site, the level of inflammatory cytokines like TNF-alpha, and cytokines produced by T lymphocytes like IL-2, IFN-gamma (interferon-gamma), IL-17 was not modified by treatment with Tresperimus.
  • the endotoxin-induced uveitis model is a model of acute eye inflammation in rats or mice, induced by systemic or local injection of lipopolysaccharide (LPS) gram-negative bacteria. It is a model for acute human anterior uveitis that is often associated with systemic disorders, such as Crohn's disease, ankylosing spondylathitis, and Blau's syndrome.
  • LPS lipopolysaccharide
  • UIE is characterized by rupture of the blood-eye barrier, intraocular infiltration by inflammatory cells into the anterior and posterior segments of the eye, and by the production of inflammatory cells, NO, cytokines and inflammatory chemokines. infiltrated mainly macrophages, polymorphonuclear leukocytes (PMNs) and ocular cells of the vascular endothelium, retinal pigment epithelium, microglia and Miiller cells. Although this inflammatory uveitis is spontaneously resolving in a few days involving the innate immune system, it is responsible for significant lesions of ocular tissues.
  • PMNs polymorphonuclear leukocytes
  • mice Female eight week old Lewis rats (R. Janvier, Le Genest Saint Isie, France) weighing about 250 g were used in this study and received an injection, in the pad of one of their paws, of 200 ⁇ g of Salmonella LPS. typhimurium (Sigma) in 0.1 ml of sterile water.
  • Tresperimus was administered by drops instillation of 5% (w / w) and 0.5% (w / w) in a 0.1% (w / w) aqueous solution of sodium hyaluronate, twice daily. in each eye and for 4 days.
  • the 3rd day LPS was administered in the bearing of a leg and 24 hours later the Tres Cyprusmus was administered one last time. The animals were then examined with a slit lamp, their blood was collected and then sacrificed. The eyes were then taken for analysis.
  • Tresperimus was evaluated in the UIE model in rats. Acute and bilateral ocular inflammation induced by LPS injection is characterized by infiltration of inflammatory cells 4 hours after injection. It is maximum between 18 and 24 hours and disappears after 4 days.
  • Tresperimus was instilled twice daily for 4 days at 5% (w / w) and 0.5% (w / w) in a 0.1% aqueous solution of sodium hyaluronate.
  • the results are expressed in clinical scores ⁇ SEM for each eye.
  • Glarative tears are essentially palliative and aim to replace or preserve the tears of a subject by the frequent application of artificial tears. Severe dry eye disease, characterized by severe corneal injury with increased risk of secondary infections, may be treated occasionally with anti-inflammatory therapy.
  • Tresperimus was studied in a dry eye mouse model using pharmacological inhibition of tear production that induces epithelial changes in the ocular surface resembling human KCS, and which are exacerbated by desiccating environmental stress. .
  • Eye dryness is induced in mice by the combination of Scopolamine, which blocks muscarinic cholinergic receptors of the lacrimal glands and by placing mice in a blower hood that reduces moisture and increases airflow.
  • Scopolamine which blocks muscarinic cholinergic receptors of the lacrimal glands and by placing mice in a blower hood that reduces moisture and increases airflow.
  • the production and volume of watery tears, the clearance of tears and the function of the corneal barrier are evaluated before treatment and twice weekly after treatment. The results are compared between groups of untreated control mice and groups of mice placed in the blower hood and treated with the anticholinergic agent Scopolamine treated or not treated with Tresperimus.
  • mice Male 129SV / CD-1 mice were used in this study and received three subcutaneous injections of 200 ⁇ scopolamine 2.5 mg / ml in saline for 21 days. The mice were placed in a blower hood (humidity ⁇ 50%) for the duration of the experiment.
  • the Lacrimal Film Stability Test (TBUT) is used to evaluate the degree of dry eye by measuring the time elapsed between a complete blink of the eye and the development of a first sign of dry stain on the tear film.
  • the volume of tears was measured for three weeks in C57B16 mice using the phenol red test.
  • the results reported in FIG. 7 are expressed as the mean volume of tears (in millimeters) ⁇ the standard deviation of the mean (SEM). They show that the volume of tears decreased dramatically two days after the start of subcutaneous injections of Scopolamine.
  • Figure 8 shows that Scopolamine treatment and dry air exposure led to a decrease in tear film stability as measured by the tear film tear time test with a significant decrease over the first 3 days then a gradual decrease until 21 days.
  • Dexamethasone only showed a modest effect which did not continue on day 21.
  • Corticosteroids show a regression of macular edema and neovascularization.
  • adverse effects are common (ocular hypertension, cataracts, endophthalmitis) and, in addition, the long-term efficacy in diabetic macular edema has not been proven compared to laser treatment.
  • Tresperimus was evaluated in rats on a commonly described model of diabetic retinopathy, the Streptozotocin-induced Type I Diabetes Model.
  • This rat model mimics human disease by inducing hyperglycemia related to the destruction of pancreatic beta cells, cells that normally regulate blood glucose by producing a hormone, insulin.
  • pancreatic beta cells cells that normally regulate blood glucose by producing a hormone, insulin.
  • vasculopathy does not progress to neovascularization as seen in humans.
  • Streptozotocin is administered by intravenous injection to fasting rats. Hyperglycemia develops rapidly within five days of treatment with streptozotocin. Three weeks after induction of diabetes, VEGF levels and biomarkers of inflammation are measured in the vitreous. The electroretinogram (ERG) measurements of the a and b waves and oscillatory potentials are analyzed to control the photoreceptor lesions. The results are compared between control group of non-diabetic rats and group of diabetic rats treated with Tresperimus or a vehicle.
  • ERP electroretinogram
  • Diabetes was induced in Sprague Dawley rats (SD) rats (200 g) after overnight fasting with a single intravenous injection of 60 mg / kg streptozotocin (Sigma) in sodium citrate buffer, pH 4.5.
  • Non-diabetic control animals received citrate buffer only. Five days later, animals with a blood glucose level above 5 g / 1 were considered diabetic.
  • Electroretinography ECG
  • the diabetic rats were acclimated to darkness overnight before the ERG examination using an LKC electroretinograph. A series of responses based on dark intensity was recorded using a series of field flash (Ganzfeld) to obtain a retinal response via the rods. The amplitude and latency of the individual ripple components of the ERG (waves a and b, pseudo-oscillations), as well as the oscillatory potentials were measured in a conventional manner.
  • Tresperimus The effect of Tresperimus was evaluated in the experimental model of streptozotocin-induced diabetic retinopathy in SD rats. Streptozotocin destroyed beta cells in the pancreas and induced hyperglycemia, mimicking type 1 diabetes. The retina of diabetic animals showed biochemical and electrophysiological abnormalities correlated with inflammation.
  • FIG. 10 shows that after two weeks of treatment with twice-daily administrations of 0.2% Tepherimus ocular instillation, Tresperimus significantly improved the amplitude of the pseudo-oscillations compared to the control group (treated diabetic rats). by the vehicle) and also improved the amplitudes of the waves a and b and oscillatory potentials, suggesting a neuroprotective effect of retinal functions and in particular cones and rods in diabetic rats.

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Abstract

La présente invention concerne l'utilisation de composés de formule (I) et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires, en particulier pour le traitement et/ou la prévention de l'uvéite, de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique.

Description

i
COMPOSES POUR LE TRAITEMENT/ LA PREVENTION DES
MALADIES INFLAMMATOIRES OCULAIRES
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne une nouvelle utilisation thérapeutique des composés de formule (I) tels que définis ci-après.
Plus spécifiquement, la présente invention concerne l'utilisation de ces composés et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour le traitement et/ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires, et plus particulièrement de l'uvéite, de la conjonctivite sévère (kérato- conjonctivite vernale), du syndrome de l'œil sec (kérato-conjonctivite sèche) et de la rétinopathie diabétique.
ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION
Les maladies inflammatoires oculaires sont la principale cause d'altération de la vision dans le monde.
Plus précisément, l'uvéite désigne l'inflammation de l'uvée, la couche moyenne vasculaire de l'œil constituée de l'iris, du corps ciliaire et de la choroïde. L'inflammation dans l'uvéite résulte d'une grande variété d'agressions traumatiques et à médiation immunitaire.
La conjonctivite regroupe les maladies se caractérisant par un gonflement, un sentiment de démangeaison ou de brûlure ou une rougeur de la conjonctive, membrane couvrant le blanc de l'œil. L'étiologie de la conjonctivite inclut les conjonctivites infectieuses et non infectieuses. Les conjonctivites sont typiquement aiguës dans le cas d'infections bactériennes ou virales et chroniques dans le cas d'allergie.
Le syndrome de l'œil sec est l'une des maladies oculaires les plus courantes. Elle est aussi appelée kérato-conjonctivite sèche (KCS). Elle est caractérisée par des symptômes d'irritation des yeux et peut provoquer un trouble de la vision, ces symptômes augmentant le risque d'infection et d'ulcération de la cornée. La pathogenèse de la sécheresse oculaire n'est pas totalement comprise, bien qu'il soit largement admis que la sécheresse oculaire est associée à une inflammation de la surface oculaire.
La rétinopathie diabétique est une conséquence de l'hyperglycémie chronique, entraînant des lésions capillaires avec des altérations fonctionnelles du type œdème et ischémie. La photocoagulation au laser est toujours le traitement de référence, et la vitrectomie est utilisée en cas de décollement de la rétine. Le Lucentis® (Ranibizumab) est utilisé pour traiter l'œdème maculaire.
Le choix thérapeutique principal pour les sujets atteints d'uvéite, de conjonctivite sévère et du syndrome de l'œil sec est constitué par les corticostéroïdes administrés localement ou de manière systémique. Néanmoins, les corticostéroïdes présentent de graves effets secondaires par voie systémique mais aussi par voie locale tels que la cataracte corticosonique, le glaucome corticosonique, la surinfection et le retard de cicatrisation.
Il existe aussi des agents anti-inflammatoires non stéroïdiens comme le Diclofénac ou le Flurbiprofen. Toutefois, de nombreux sujets ne réagissent pas ou deviennent réfracta ires à la thérapie stéroïdienne ou non stéroïdienne.
Il existe aussi des médicaments antimétabolite comme l'Azathioprine et le Méthotrexate présentant des toxicités hématologiques et hépatiques utilisés essentiellement pour traiter les uvéites récalcitrantes et très sévères, et les immunosuppresseurs comme la Cyclosporine A et le Tacrolimus administrés par voie orale, qui présentent également de nombreux effets secondaires, comme des risques d'altérations de la fonction rénale, une augmentation du risque de syndromes lymphoprolifératifs et de tumeurs cutanées malignes. Afin de limiter ces effets secondaires, ces immunosuppresseurs peuvent être utilisés par voie topique mais étant donné leurs structures macrocycliques, ces composés ne sont pas solubles dans les milieux aqueux. Ils sont formulés notamment dans des véhicules huileux présentant l'inconvénient d'être irritants, douloureux et de provoquer un trouble de la vision. Au final ces composés sont mal tolérés par les sujets.
La présente invention surmonte les inconvénients de l'état de la technique en fournissant une nouvelle utilisation d'un ou plusieurs composés de formule (I) et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables et, en particulier, leur utilisation dans le traitement et/ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires comme l'uvéite, la conjonctivite sévère, le syndrome de l'œil sec ou la rétinopathie diabétique.
Par ailleurs, la présente invention fournit des compositions pharmaceutiques aqueuses, contenant les composés de formule (I), qui permettent d'atteindre la chambre postérieure de l'œil, ce qui représente une avancée considérable pour le traitement des maladies inflammatoires oculaires.
De plus, les composés de la présente invention n'ont que peu ou pas d'effet sur la réponse immunitaire systémique, ce qui limite par conséquent de manière significative les effets secondaires potentiels associés à l'administration desdits composés.
RESUME DE L'INVENTION
La présente invention est basée sur les résultats inattendus démontrant que les composés de formule (I) (que l'on nommera ci-après « composés de l'invention ») et leurs sels pharmaceutiquement acceptables sont capables, lorsqu'ils sont administrés localement, d'améliorer les signes cliniques dans les modèles d'uvéite, avec en particulier une protection des barrières hémato-oculaires et des tissus oculaires de la chambre antérieure et postérieure sans modification de la réponse immunitaire systémique. De façon similaire, les composés de l'invention sont également utiles pour le traitement de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec et de la rétinopathie diabétique.
Les effets bénéfiques des composés de l'invention et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, en particulier du Trespérimus et de l'Anispérimus obtenus dans différents modèles pharmacologiques suggèrent que ces composés sont capables d'induire une régulation de l'activation des macrophages et de la réponse à médiation lymphocytaire T dans l'œil.
Les composés de l'invention et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, avec leur structure linéaire, sont solubles et stables dans les milieux aqueux, de sorte qu'ils peuvent être administrés localement dans des formulations aqueuses parfaitement biocompatibles et n'entraînant pas d'irritation ou d'altération de la vision.
Selon un premier aspect, la présente invention concerne donc l'utilisation des composés de l'invention et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, en particulier le Trespérimus et l'Anispérimus, pour la préparation d'un médicament utile pour le traitement et/ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires, en particulier de l'uvéite, de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique.
Selon un second aspect, la présente invention fournit une méthode de traitement et/ou de prévention des maladies inflammatoires oculaires, notamment de l'uvéite, de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique, comprenant l'administration à un sujet qui en a besoin d'un ou plusieurs composés de l'invention ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de ces composés. Dans un mode de réalisation, le composé de l'invention ou son sel pharmaceutiquement acceptable est le Trespérimus ou l'Anispérimus. Le ou les composés de l'invention peuvent être administrés de manière locale. De préférence, le ou les composés de l'invention sont administrés sous la forme de gouttes oculaires ou sous la forme d'une solution injectable par voie intraoculaire ou périoculaire, ou de système implantable.
Les composés de l'invention et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, en particulier le Trespérimus et l'Anispérimus, sont en particulier utiles pour le traitement et/ou la prévention de l'uvéite, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique.
Selon un troisième aspect, la présente invention concerne des formulations appropriées d'une composition pharmaceutique comprenant comme seule substance active un composé de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci pour réaliser une administration locale à des sujets ayant des maladies inflammatoires oculaires, et plus précisément une formulation aqueuse pharmaceutiquement acceptable pour une administration locale.
Selon un quatrième aspect de l'invention, les composés de l'invention, en particulier le Trespérimus et l'Anispérimus, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, peuvent être administrés en association avec un anti-VEGF, un anti-TNF, un corticostéroïde, un agent anti- inflammatoire non stéroïdien, un antibiotique ou un immunosuppresseur.
On peut acquérir une meilleure compréhension de la nature et des avantages de la présente invention en se référant aux parties restantes de la description et aux revendications. DESCRIPTION DES DESSINS
La Figure 1 montre l'effet d'une injection de Trespérimus sur l'uvéorétinite auto-immune expérimentale (UAE) clinique chez le rat.
La Figure 2 montre l'effet d'une injection intravitréenne (I T) de Trespérimus sur les scores histopathologiques de l'UAE (A) et les changements histopathologiques de l'UAE chez des rats traités avec le Trespérimus (C) par comparaison avec des rats soumis à une injection de solution salée (B). a, b, d, e = couches de photorécepteurs ; c, f = papilles optiques.
La Figure 3 montre l'effet du Trespérimus dans l'hypersensibilité de type retardé (HTR) spécifique à l'antigène S chez des rats traités par injection intravitréenne.
La Figure 4 montre la distribution oculaire du Trespérimus après instillation de gouttes oculaires d'une solution à 1 % deux fois par jour pendant 4 jours chez le lapin New Zealand mâle.
La Figure 5 montre l'effet du Trespérimus après traitement par instillations sur les signes cliniques de l'uvéite induite par le LPS (lipopolysaccharide).
La Figure 6 montre l'effet du Trespérimus après traitement par instillations sur le nombre de cellules inflammatoires infiltrantes dans l'uvéite induite par le LPS.
La Figure 7 montre l'effet du Trespérimus sur le volume lacrymal mesuré par le test du rouge de phénol.
La Figure 8 montre l'effet du Trespérimus sur la stabilité du film lacrymal mesuré par le temps de rupture du film lacrymal.
La Figure 9 montre l'effet du Trespérimus sur la production de MCP- 1 et d'IL-6 dans le vitré.
La Figure 10 montre l'effet du Trespérimus sur l'amplitude des pseudo-oscillations à différentes fréquences.
DESCRIPTION DETAILLEE
Sauf indication contraire, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle comprise communément par l'homme du métier concerné par cette invention. De plus, les définitions suivantes sont fournies pour aider le lecteur dans la pratique de l'invention. Le "sujet" est de préférence un mammifère, de préférence encore un humain.
Le terme "destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention", tel qu'il est utilisé ici, doit être compris comme couvrant l'utilisation directe du composé ou de son sel pour le traitement et/ou la prévention de la maladie spécifiée.
"Méthode de prévention et/ou de traitement" doit être compris comme couvrant les procédés dans lesquels un composé ou dérivé ou sel de celui-ci est administré pour le traitement et/ou la prévention de la maladie spécifiée.
"Maladies inflammatoires oculaires" : est un terme général pour l'inflammation affectant toute partie de l'œil ou du tissu environnant. L'inflammation impliquant l'œil peut aller de la conjonctivite allergique familière du rhume des foins à des affections rares entraînant potentiellement une cécité comme la conjonctivite sévère (kérato- conjonctivite vernale), l'uvéite, la sclérite, l'épisclérite, la névrite optique, la kératite, la pseudotumeur rétrobulbaire, le syndrome d'Eales, le syndrome de l'œil sec, la rétinopathie diabétique, la dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA), une manifestation oculaire d'une lésion par maladie systémique des tissus oculaires, c'est-à-dire de la rétine, pouvant finalement conduire à la cécité. La localisation de l'inflammation gouverne la dénomination diagnostique de la maladie inflammatoire oculaire. Les maladies inflammatoires oculaires peuvent résulter de plusieurs causes.
Selon la présente invention, l'uvéite est non infectieuse et provient de causes traumatiques, induites par des médicaments, de causes à médiation immunitaire, de causes malignes, ou de causes consécutives à une chirurgie ophtalmique.
Les compositions pharmaceutiques de la présente invention peuvent aussi être utilisées après une chirurgie ophtalmique provoquant une inflammation oculaire comme une greffe de cornée.
"L'uvéite" désigne l'inflammation de l'uvée, la couche moyenne vasculaire de l'œil composée de l'iris, du corps ciliaire et de la choroïde. Elle est classée selon sa localisation, son évolution clinique et sa latéralité. "Antérieur" désigne l'implication de l'iris, de la cornée, de la pupille, de l'humeur aqueuse ou du corps ciliaire. Par exemple, nous pouvons citer comme uvéîte antérieure la maladie de Kawasaki.
"Intermédiaire" désigne le vitré, la zone postérieure du corps ciliaire, la rétine périphérique et la sclère.
"Postérieur" désigne la choroïde ou la rétine par extension, la fovéa et le nerf optique. Parmi les uvéites postérieures non infectieuses, on peut citer la maladie de Behcet, la maladie de Vogt-Koyanagi-Harada, l'inflammation de la zone postérieure du corps ciliaire, la sarcoïdose, la vascularite rétinienne idiopathique et l'inflammation multifocale de la rétine et de la choroïde.
"Panuvéite" est employé quand deux ou plusieurs segments sont affectés.
Selon la présente invention, la conjonctivite est non infectieuse et provient principalement d'allergies graves oculaires puisqu'elle conduit parfois à des ulcérations qui comportent toujours un risque de pertes visuelles importantes et définitives.
La conjonctivite allergique est une réaction inflammatoire de la conjonctive (fine membrane qui recouvre l'œil et l'intérieur de la paupière). Les yeux peuvent alors devenir rouges, picoter, brûler, gratter, démanger et larmoyer. La lumière est difficile à supporter (photophobie). Les paupières sont souvent rouges et gonflées, et l'on remarque quelquefois le gonflement de la conjonctive (chemosis), voire un marquage plus foncé des contours des yeux ou des sécrétions de mucus importantes. Elle affecte peu la cornée. C'est la forme la plus fréquente et sans doute la moins grave d'allergie oculaire. Cette réaction de type I est souvent la conséquence de l'abondance des pollens au printemps et en été (pollens d'arbres et graminées). On utilise le terme kérato- conjonctivite allergique lorsque l'atteinte concerne également la cornée et pas seulement la conjonctive.
Il existe d'autres types d'allergies plus rares, plus spécifiques et surtout plus graves qui combinent parfois un type de sensibilité de type I avec le type IV. Par exemple, la conjonctivite vernale est une forme grave d'allergie oculaire puisqu'elle conduit parfois à des ulcérations qui comportent toujours un risque de pertes visuelles importantes et définitives. Ces ulcérations se situent souvent dans la partie supérieure de la cornée et des papilles se forment sur la conjonctive notamment sur la paupière supérieure.
De façon analogue à l'uvéite, les conjonctivites sévères sont traitées par des corticostéroïdes, des anti-inflammatoires non stéroïdiens ou des immunosuppresseurs.
Le « syndrome de l'œil sec ou kérato-conjonctivite sèche ou sécheresse oculaire » désigne toutes les pathologies de l'œil résultant de la sécrétion par les glandes lacrymales de larmes en quantité ou en qualité inadéquates. Dans la présente demande, le syndrome de l'œil sec concerne également toutes les formes déficientes en larmes (incluant le syndrome de Sjôgren de l'œil sec auto-immun et 1e déficit en larmes non Sjôgren) et les formes évaporatives. Les yeux secs sont également reconnus comme la perturbation de l'unité fonctionnelle lacrymale, un système intégré comprenant les glandes lacrymales, la surface oculaire (cornée, conjonctive et glandes meibomiennes) et les paupières, ainsi que les nerfs sensoriels qui les connectent.
La « rétinopathie diabétique » désigne une atteinte de la microcirculation rétinienne et choroïdienne (les organes atteints sont la rétine, choroïde, papille et iris) due à l'hyperglycémie chronique. Il en existe deux formes : simple (ou non proliférative) et proliférative.
Dans certain cas, il y a une apparition d'un œdème rétinien et généralement maculaire. Dans d'autres cas, des occlusions des capillaires rétiniens surviennent provoquant ainsi une ischémie rétinienne. De plus, ces deux grandes caractéristiques peuvent s'associer et conduire ainsi à des ischémies en périphérie rétinienne et des exsudais maculaires.
Les composés de l'invention sont aussi utiles dans le traitement de la dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA).
Les composés de l'invention répondent à la formule (I) :
dans laquelle : - n est égal à 6 ou 8,
- A est une liaison, un groupe CH2, un groupe CH(OH), un groupe CHF, un groupe CH(OCH3), un groupe CH2NH ou un groupe CH20,
- R est un atome d'hydrogène ou un CH3.
Les "sels" des composés de l'invention peuvent être obtenus par réaction chimique entre un acide inorganique ou organique et les composés de formule (I) mentionnés ci-dessous.
Les acides inorganiques préférés pour la formation de sels sont : l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique.
Les acides organiques préférés pour la formation de sels sont : l'acide fumarique, l'acide maléique, l'acide oxalique, l'acide citrique, l'acide trifluoroacétique, l'acide tartrique et les acides sulfoniques (de l'acide méthanesulfonique à l'acide dodécanesulfonique).
Les composés de formule (I) sont choisis avantageusement parmi : le N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle ;
le N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-2-hydroxy-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-2-fIuoro-propanediamide ;
le N-[6-[(amino'iminométhyl)amino]hexyl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-2-méthoxy-propanediamide ;
le N-[6-[(aminoiminométhyl)amino]hexyl]-2-[[[[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]amino]carbonyl]amino]-acétamide ;
le N-[6-[(aminoiminométhyl)amino]hexyl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-éthanediamide ;
le N-[8-[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-éthanediamide ;
le N-[8-[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-propanediamide ;
le N-[8-[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-2-hydroxy-propanediamide ; le N-[8-[(aminoiminométhyl)amino]octYl]-N'-[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]-2-fluoro-propanediamide ;
|e N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-2-méthoxy-N'-[8-[(aminoimino- méthyi)amino]octyl]-propanediamide ;
le N-[8-[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-2-[[[[4-[(3-aminopropyl)amino]- butyl]amino]carbonyl]amino]-acétamide ;
le N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[8-
[(aminoîminométhyl)amino]octyl]amino]-2-oxoéthyle ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6-
[(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-éthanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]bufyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-propanediamide ;
le 2-[[[[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]amino]carbonyl]amino]-N-[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]-acétamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]but7l]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-2-hydroxy-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutYl)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-2-f1uoro-propanediamide;
le N-[4-[(3-aminobut7l)amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminométhyl)amino]- hexyl]-2-méthoxy-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N'-[8-[(aminoiminométhyl)amino]- ortyl]-éthanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N,-[8-
[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[8-
[(aminoiminométhyl)amino]ortyl]amino]-2-oxoéthyle ;
le 2-[[[[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]amino]carbonyl]amino]-N-[8-
[(aminoiminométhyl)amino]ortyl]-acétamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N'-[8-
[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-2-hydroxy-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N'-[8-
[(aminoiminométhyl)amino]octyl]-2-fluoro-propanediamide ;
le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-N'-[8-
[(aminoiminométhyl)amino]oc yl]-2-méthoxy-propanediamide ; et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Les composés de formule (I) préférés sont choisis parmi :
ie N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle (Trespérimus) ou le N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle (Anispérimus) et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Les composés de formule (I) particulièrement préférés sont le tris-chlorhydrate de N-[4-[(3-aminopropyl)-amino]butyl-carbamate de 2- [[6-[(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle, et le tétra- chlorhydrate de N-[4-[(3-aminobutyl)-amino]butyl-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle.
Les compositions pharmaceutiques de l'invention comprennent typiquement un composé de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci comme seule substance active, ainsi qu'un ou plusieurs vecteurs ou excipients pharmaceutiquement acceptables.
Les « vecteurs pharmaceutiques» se réfèrent à un excipient ou à un mélange de plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables qui permettent l'administration de substances actives. Ils permettent et peuvent faciliter ou améliorer la préparation de la composition et peuvent stabiliser la composition. En outre, les vecteurs pharmaceutiquement acceptables peuvent augmenter l'efficacité de la composition, améliorer la tolérabilité oculaire de la substance active et/ou modifier son profil de libération.
Ils doivent aussi être pharmaceutiquement et physiologiquement acceptables en ce sens qu'ils doivent être compatibles avec les autres ingrédients de la composition et qu'ils doivent être biocompatibles et dénués de toxicité. De tels vecteurs peuvent revêtir une grande variété de formes selon la forme de préparation souhaitée pour l'administration, par exemple l'administration locale.
"L'administration locale" doit être comprise comme définissant toutes les voies oculaires, c'est-à-dire les administrations topiques, injectables ou les administrations à l'aide de systèmes implantables.
"L'administration topique" peut être sous forme par exemple et de manière non limitative de gouttes oculaires ou collyres ou instillations oculaires, de sprays, de crèmes, de pommades, de gels, d'hydrogels, d'oiéogels, de lentilles hydrophiles, d'inserts et d'implants. Les formes galénîques peuvent être par exemple et de manière non limitative des solutions, des suspensions, des systèmes colloïdaux (par exemple liposomes, émulsions, microémulsions, nanoémulsions, microparticules, nanoparticules, microsphères, niosomes, dendrimères), des micelles, des micelles mixtes, des systèmes complexants, par exemple des solutions de cyclodextrines, et également des inserts non implantables sous forme, par exemple et de façon non limitative de disques, de films ou de lamelles.
"L'administration injectable" peut être de façon non limitative sous forme intraoculaire (intravitréenne, IVT), péri-oculaire incluant l'administration sous-conjonctivale, sous la capsule de Ténon, rétrobulbaire et intrasclérotique.
"L'administration intravitréenne" peut être réalisée sous forme de systèmes injectables ou implantables. Les formes galéniques peuvent être de façon non limitative des solutions, des suspensions, des systèmes colloïdaux (par exemple liposomes, émulsions, microémulsions, nanoémulsions, microparticules, nanoparticules, microsphères, niosomes, dendrimères), des micelles, des micelles mixtes, également des implants biodégradables ou non biodégradables sous forme, par exemple et de façon non limitative de bâtonnets, de clous, de pellets.
Dans la présente demande, lorsqu'une concentration est exprimée en m/V il est considéré que la densité de la solution est égale à 1.
Pour les deux voies d'administration (topique et injectable), selon le composé qui doit être délivré, la plupart des formes galéniques citées ci- dessus peuvent potentiellement augmenter le temps de séjour du principe actif à la surface de l' il ou dans le vitré, permettre une libération lente et prolongée des composés encapsulés et/ou éviter la toxicité et augmenter la tolérabilité oculaire.
Selon la présente invention, pour le traitement et/ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires, et en particulier de l'uvéite, de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique, les composés de l'invention ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être administrés via une composition ou formulation pharmaceutiquement acceptable, aqueuse et adaptée à une administration topique, préférentiellement par instillation, ou à une administration injectable, préférentiellement intravitréenne.
Pour l'administration topique ou injectable, le ou les excipients doivent être pharmaceutiquement acceptables et appropriés pour ce type d'administration oculaire.
Les milieux aqueux utilisés dans la présente invention sont constitués d'eau ne contenant pas d'agents néfastes physiologiquement et ophtalmologiquement. La composition pharmaceutique selon l'invention se présente sous forme d'une formulation aqueuse de pH physiologiquement compatible pour la voie oculaire. On entend par «pH physiologiquement compatible pour la voie oculaire » un pH compris dans la gamme d'environ 5,5 à environ 8, de préférence d'environ 6,0 à environ 7,5. Le pH des préparations est ajusté avec un acide comme par exemple l'acide acétique, l'acide borique, l'acide lactique, l'acide hydrochlorhydrique ; une base comme par exemple l'hydroxyde de sodium, le borate de sodium, le citrate de sodium, l'acétate de sodium ; ou une solution tamponnée acceptables pharmaceutiquement, comme par exemple le tampon phosphate sodique, le tampon phosphate potassique, le tampon citrate sodique. Les préparations aqueuses selon l'invention sont isotoniques, physiologiquement adaptées à des administrations oculaires topiques et intraoculaires. La pression osmotique des préparations est proche de la pression physiologique et est généralement comprise entre environ 200 mOsm et environ 400 mOsm, préférentiellement entre environ 260 et environ 340 mOsm. Si nécessaire, la pression osmotique peut être ajustée en utilisant des quantités appropriées d'excipients physiologiquement et ophtalmologiquement acceptables. Le chlorure de sodium est généralement utilisé comme agent de tonicité à une concentration (exprimée en m/V) n'excédant pas 0,9%. Egalement, des quantités équivalentes d'un ou de plusieurs sels composés d'un cation et d'un anion peuvent être employées. Eventuellement et selon l'indication thérapeutique de la présente invention, la pression osmotique peut être corrigée en ajoutant des sucres ou des polyols, seuls ou associés en mélange. Les préparations de la présente invention ont une viscosité variable de 0 à environ 2000 Centipoises, préférentiellement inférieure à environ 100 Centipoises, et plus préférentiellement inférieure à environ 30 Centipoises. La composition de la présente invention peut contenir des agents augmentant la viscosité permettant de prolonger le temps de résidence précornéenne du principe actif après instillation. Egalement, ces agents viscosifiants peuvent avoir des propriétés mucoadhésives. Des polymères mucoadhésifs capables de créer des liaisons non covalentes avec les glycoprotéines présentes notamment au niveau conjonctival, peuvent être utilisés dans la présente invention pour restreindre la formulation localement à l'œil, pour optimiser le temps de résidence de la formulation localement et potentiellement augmenter la biodisponibilité du principe actif au niveau oculaire, réduire la fréquence d'administration et ainsi améliorer l'observance thérapeutique. Ces polymères sont généralement des hydrocolloïdes macromoléculaires. Ils peuvent être utilisés seuls ou en association dans la présence invention et sont par exemple des dérivés cellulosiques comme les méthylcelluloses, les carboxyméthylcelluloses sodiques, les hydroxyéthylcelluloses, les hydroxypropylcelluloses, les hydroxypropylméthylcelluloses, des dérivés acryliques tels que par exemple les sels d'acide polyacrylique et ses dérivés fonctionnalisés (ou polycarbophiles), les carbomères, des produits d'origine naturelle tels que par exemple les alginates, les chitosans, les pectines, l'acide hyaluronique et ses dérivés, les dérivés polysaccharidiques tels que par exemple la gomme gellane et ses dérivés, la gomme xanthique, les carraghénanes, les co-polymères tels que par exemple les poloxamers. Des polymères doués d'une capacité de gélification in situ peuvent être incorporés dans la préparation de la composition pharmaceutique de l'invention. Les systèmes dits à transition de phase sont liquides et aboutissent à la formation de gels compatibles avec les fonctions oculaires par activation ionique, en fonction du pH ou de la température. On peut citer par exemple des polymères tels que des dérivés de l'acide polyacrylique, les carbomères, des dérivés cellulosiques, les méthylcelluloses, des copolymères, les poloxamers.
La composition de la présente invention peut également contenir par exemple des surfactants, des co-solvants, des agents de pénétration, des agents de gélification, des émulsionnants, des antioxydants, des conservateurs, des polymères pour libération prolongée, excipients bien connus de l'homme du métier. La composition pharmaceutique peut être également sous forme d'un insert ou d'un implant solide permettant une administration oculaire et une libération prolongée du principe actif. Par exemple, la préparation d'insert peut être réalisée à l'aide d'un polymère solide hydrosoluble. Des polymères biocompatibles pour la voie oculaire, inertes, utilisés pour la préparation d'un insert adapté à la voie oculaire sont synthétiques, semi synthétiques ou d'origine naturelle. La composition des implants solides peut également être constituée par des polymères synthétiques, semi synthétiques ou d'origine naturelle, de préférence par des polymères biodégradables tels que par exemple les alcools polyvinyliques, les acides polylactique-co-glycoliques, tes poly-epsilon-caprolactones, les esters d'acide hyaluronique. Ces polymères biodégradables peuvent également être utilisés pour l'encapsulation du principe actif dans des microsphères, des nanosphères, des microcapsules, des nanocapsules dispersées en solution aqueuse en vue d'une libération prolongée et ciblée du principe actif.
D'autres matrices telles que les lentilles hydrosolubles imprégnées ou contenant le principe actif peuvent permettre d'augmenter le temps de résidence du principe actif à la surface de l'œil.
Les principes de fabrication et de stérilisation de ces formulations sont classiquement bien connus dans le domaine des techniques de formulation galénique.
Selon un premier mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique sous forme de gouttes oculaires ou de solution injectable comprend une dose efficace d'un composé de l'invention tel que par exemple le Trespérimus, dissous dans une solution aqueuse physiologique comme vecteur principal. Cette solution comprend idéalement une solution aqueuse de chlorure de sodium à une concentration n'excédant pas de préférence 0,9% (m/V), ou une solution aqueuse de glycérol à une concentration n'excédant pas de préférence 2,5% (m/V) et ceci afin d'obtenir une tonicité de la composition pharmaceutique comprise entre environ 260 et environ 340 mOsm. Cette solution est ajustée à un pH voisin de 6,5 à l'aide par exemple d'hydroxyde de sodium. Un polymère bioadhésif tel que préférentiellement l'acide hyaluronique ou un de ses dérivés est ajouté. Cette forme galénique est stérilisée de préférence par traitement aux rayons gamma. Cette fabrication galéntque peut être conditionnée sous forme unidose.
Selon un autre mode de réalisation préféré, la solution injectable pour administration sous forme d'implant biodégradable comprend une dose efficace d'au moins un composé de l'invention encapsulé de préférence dans des micro- ou des nanoparticules constituées de poly- epsilon-caprolactones.
Un avantage majeur de la présente invention est que tous les tissus oculaires (chambres antérieure ou postérieure) sont exposés aux composés de l'invention, par exemple par administration d'une composition aqueuse pharmaceutiquement acceptable. Lors d'une étude de distribution oculaire chez le lapin New Zealand mâle (figure 4) avec le Trespérimus après instillation de gouttes oculaires d'une solution à 1 % deux fois par jour pendant 4 jours, il a été observé que la rétine/choroïde (chambre postérieure) et le corps ciliaire/iris (chambre antérieure) étaient exposés à des niveaux de Trespérimus de 0,5 à 0,7 μΜ et de 0,3 à 0,7 μΜ pendant les 24 h suivant l'instillation répétée de gouttes oculaires deux fois par jour sous forme d'une simple solution aqueuse à 1 %. De ce fait, par comparaison avec une autre administration locale comme l'injection intraoculaire ou les implants, et en plus d'une meilleure observance, l'administration topique des composés de l'invention peut permettre une bien meilleure maîtrise des concentrations de substance active dans les tissus oculaires. De plus, on a observé que les niveaux plasmatiques étaient bas (< 50 ng/mL de 5 min à 2 h après l'instillation) et pendant une courte durée, inférieure à la limite inférieure de quantification (Blq) (2 ng/mL 4 h après la dose) après instillation de gouttes oculaires. Ceci permet d'éviter les effets non souhaités d'immunosuppression au niveau systémique.
La concentration de la substance thérapeutiquement active dans les formulations destinées à la voie intravitréenne peut varier de 0,1 μ à 100 m , préférentiellement de 1 μΜ à 10 m , et plus préférentiellement de 10 μΜ à 0,1 mM. La concentration de la substance thérapeutiquement active dans les formulations pour instillation topique oculaire peut varier de 0,001 % à 5% (exprimée en m/V), et préférentiellement de 0,001% à 1,5%, plus préférentiellement de 0,01% à 1,5%. Ces concentrations peuvent être appliquées pour d'autres voies d'administration locale oculaire et peuvent varier selon l'indication thérapeutique, 11 est laissé à la discrétion du praticien le mode d'administration et de dosage selon le sujet, ses symptômes et le degré de sévérité de sa pathologie.
Ces compositions sont préparées par tout procédé de fabrication galénique bien connu dans le domaine des techniques pharmaceutiques.
Selon un autre aspect, le ou les composés de la présente invention peu(ven)t être combiné(s) avec ou utilisé(s) en association avec d'autres agents thérapeutiques. Par exemple, un sujet peut être traité avec un ou plusieurs composés de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ceux-ci, en particulier le Trespérimus et/ou l'Anispérimus, en même temps qu'avec d'autres médicaments conventionnels pour le traitement des maladies oculaires inflammatoires. L'administration des différentes substances actives peut être simultanée, séquentielle ou espacée dans le temps. De préférence, le composé de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci ne sera pas administré conjointement avec un inhibiteur de l'enzyme Lck.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne donc une composition pharmaceutique comprenant, en tant que substances actives, au moins un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci en association avec un ou plusieurs médicaments utilisés dans le traitement de l'uvéite, choisis parmi les corticoïdes tels que par exemple la Dexaméthasone, la Prednisolone et la Triamcinolone ; les immunosuppresseurs ayant un mécanisme d'action différent des composés de l'invention tels que par exemple le Cyclophosphamide, le Méthotrexate, l'Azathioprine, la Cyclosporine A, le Tacrolimus, le Sirolimus, le Mycophénolate mofétil ; les anti-TNF tels que par exemple le Rituximab, le Daclizumab, l'Infliximab, l'Adalimumab et l'Etanercept.
Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne donc une composition pharmaceutique comprenant, en tant que substances actives, au moins un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci en association avec un ou plusieurs médicaments utilisés dans le traitement de la conjonctivite sévère, choisis parmi les corticoïdes tels que par exemple la Dexaméthasone, la Prednisolone; les anti-inflammatoires non stéroïdiens tel que le Nédocromil, l'Iodoxamide, l'Olopatadine ; les antibiotiques, les antifongiques et anti-bactériens tels que la Tobramycine, la Natamycine, la Moxifloxacine; les immunosuppresseurs ayant un mécanisme d'action différent des composés de l'invention tels que par exemple la Cyclosporine A, le Tacrolimus, le Sirolimus ;
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, en tant que substances actives, au moins un composé de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci en association avec un ou plusieurs médicaments utilisés dans le traitement du syndrome de l'œil sec, choisis parmi les immunosuppresseurs ayant un mécanisme d'action différent des composés de l'invention tels que par exemple la Cyclosporine A et le Mycophénolate mofétil ; les corticostéroïdes tels que par exemple le Lotéprednol, le Rimoxelone et la Fluorométholone ; et les Tétracyclines. Ils pourront également être utilisés en association avec les larmes artificielles et les sécrétagogues.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, en tant que substances actives, au moins un composé de l'invention ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci en association avec un ou plusieurs médicaments utilisés dans le traitement de la rétinopathie diabétique, choisis parmi les anti-VEGF tels que par exemple le Ranibizumab, le Pegatapnib, le Bevacizumab ; les anti-TNF tels que par exemple le Rituximab, le Daclizumab, l'Infliximab, l'Adalimumab et l'Etanercept ; les corticostéroïdes tels que par exemple la Dexaméthasone, la Prednisolone et la Triamcinolone ; et les immunosuppresseurs ayant un mécanisme d'action différent des composés de l'invention tels que par exemple la Cyclosporine A, le Tacrolimus, l'Everolimus et le Sirolimus. Ils pourront également être utilisés en association avec la thérapie au laser (photocoagulation).
L'invention va être illustrée de manière plus détaillée dans les exemples ci-après en se référant au Trespérimus, mais l'homme du métier comprendra que la présente invention n'est pas limitée à ce composé de formule (I).
Il est entendu que les exemples et les modes de réalisation décrits ici le sont à des fins illustratives seulement et que différentes modifications ou différents changements à la lumière de ceux-ci seront suggérés à l'homme du métier et doivent être inclus dans l'esprit et la portée de cette demande et des revendications annexées. Bien que des méthodes et matériels similaires ou équivalents à ceux décrits ici puissent être utilisés dans la pratique ou les tests de la présente invention, les méthodes et matériels préférés sont décrits.
Exemple 1 : L'uvéite
L'œil est un site de privilège immunologique néanmoins des maladies de l'œil provenant d'un déséquilibre du système immunitaire se développent et sont responsables d'altérations de la vision pouvant aller jusqu'à la cécité. Les modèles animaux, principalement l'uvéite auto- immune expérimentale (UAE) et l'uvéite induite par endotoxine (UIE) sont considérés comme des modèles cliniquement pertinents de maladies oculaires et sont des outils précieux pour l'étude des mécanismes immunologiques permettant la régulation des maladies chez l'homme :
- l'UAE induite chez le rat par immunisation avec des antigènes purifiés de la rétine, principalement l'antigène S (Ag-S) est considéré comme un modèle cliniquement pertinent pour l'étude des mécanismes de l'uvéite postérieure chez l'homme et le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques des uvéites
- l'UIE est un modèle d'uvéite inflammatoire aiguë, spontanément résolutive, mettant en jeu les composants du système immunitaire inné. C'est un modèle utile pour l'étude des aspects locaux de l'inflammation oculaire et est considéré comme un modèle pertinent de l'uvéite antérieure chez l'homme.
Dans la présente invention, nous avons démontré pour la première fois que l'administration oculaire locale de composés de formule (I) et de leurs sels pharmaceutiques est très bénéfique dans ces deux modèles expérimentaux considérés comme des modèles cliniquement pertinents des uvéites chez l'homme.
Le modèle d'UAE
Les modèles de l'UAE contribuent à comprendre les mécanismes physiopathologiques et en particulier l'implication des lymphocytes CD4+ (cluster de différenciation 4), des macrophages et des cytokines proinflammatoires dans les mécanismes de destruction de la rétine. L'UAE est un modèle de maladie inflammatoire qui a en commun de nombreuses caractéristiques cliniques et histopathologiques avec l'uvéite humaine comme l'ophtalmie sympathique, la rétinochoroïdopathie de type birdshot, le syndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, la maladie de Behcet et la sarcoïdose. C'est un modèle cliniquement pertinent pour l'inflammation oculaire humaine.
L'UAE est induite par immunisation avec l'auto-antigène rétinien purifié, l'antigène S (S-Ag) qui est reconnu aussi par tes sujets ayant une uvéite. L'UAE est dépendante des cellules effectrices Thl (cellules produisant l'interféron-gamma) et Thl7 (cellules produisant l'interleukine- 17) CD4+, chaque phénotype d'effecteur peut induire une réaction pathologique.
Cependant, l'IL-17 (interleukine-17) joue un rôle prépondérant dans l'UAE induite par la protéine IRBP (de l'anglais « interphotoreceptor retinoid-binding protein », en français protéine inter-photorécepteurs se liant au rétinol). La neutralisation de ITL-17 prévient ou fait régresser la maladie. Par ailleurs les cellules effectrices Thl7 induisent une UAE en l'absence d'interféron (IFN)-gamma.
Puis, localement, les macrophages et les cellules microgliales amplifient la réaction et induisent la destruction des photorécepteurs et du tissu rétinien. Les monocytes/macrophages ainsi que les neutrophiles sont des cellules effectrices importantes dans l'UAE tandis que les cellules T agissent davantage pour initier et maintenir la réponse. Les macrophages franchissent la barrière hémato-rétinienne et infiltrent la rétine, où la libération de médiateurs comme NO (oxyde nitrique) et TNF (facteur de nécrose des tumeurs) peut provoquer de graves lésions rétiniennes et, par conséquent, une perte de vision chez les sujets.
Nous avons étudié l'effet de l'administration locale de Trespérimus sur l'UAE et sur les réponses immunitaires oculaires et systémiques induites par une immunisation avec S-Ag.
Matériels et méthodes
I. Induction de l'UAE chez des rats Lewis
Des rats Lewis femelles de huit semaines (R. Janvier, Le Genest Saint Isle, France) ont été immunisés de manière systémique avec 40 pg d'auto-antigène rétinien antigène S (S-Ag) purifié comme décrit antérieurement {de Kozak Y., Sainte-Laudy J., Benveniste J. et Faure J. -P., Eur. J, Immunol. 1981 ; 11 : 612-617),
II. Protocole des traitements
L'administration de Trespérimus a été réalisée par des injections intravîtréennes (IVT) (5 pL) dans les deux yeux, les jours 6, 9 et 12 après l'immunisation avec S-Ag. A la fin des expériences, c'est-à-dire 19-20 jours après l'immunisation, les rats ont été anesthésiés par injection intrapéritonéale de pentobarbital (Sanofi-Aventis, France) avant la collecte de sang par ponction intracardiaque. Les rats ont ensuite été euthanasiés avec une dose létale de pentobarbital et les deux yeux et des échantillons de sang ont été recueillis pour l'analyse.
Dans une première expérience, un groupe de rats a reçu une solution salée stérile, sensiblement isoosmolaire et physiologique à 9 mM de Trespérimus pour obtenir une solution finale à 1 mM dans le vitré, un groupe témoin de rats a reçu un véhicule (solution salée) et un groupe témoin de rats n'a pas été traité. Les animaux ont été examinés cliniquement avec une lampe à fente à partir du jour 9 après l'immunisation avec S-Ag jusqu'au moment de l'euthanasie. Une histopathologie des yeux a été réalisée et une immunocoloration a été faite sur des coupes obtenues au cryostat. Les ganglions lymphatiques inguinaux ont été prélevés pour l'analyse des cytokines par RT-PC .
Dans une seconde expérience, un groupe de rats a reçu trois injections de Trespérimus dans le vitré et les rats témoins ont reçu une injection de solution salée. Les rats ont été observés cliniquement et soumis à une analyse de l'hypersensibilité de type retardé (HTR). Les niveaux de Trespérimus dans le plasma et les tissus oculaires ont été mesurés 1 h, 3 jours et 8 jours après la troisième injection.
III. Evaluation de la gravité de l'UAE
1. Evaluation clinique
Les animaux ont été examinés avec une lampe à fente le jour 7, puis chaque jour à partir du jour 11 jusqu'au moment de l'euthanasie pour évaluer le moment de déclenchement de la maladie et la gravité de la maladie. L'intensité de l'inflammation oculaire clinique a été notée sur une échelle de 0 à 7 pour chaque oeil comme décrit antérieurement {de Kozak, Eur. J. Imm. 2004). 2. Histopathologie
Au moment de l'euthanasie (jour 19-20 après l'immunisation), les yeux de rats énucléés ont été fixés, traités, des coupes dans la paraffine ont été pratiquées et colorées avec de l'hématoxyline-éosine-safran pour l'évaluation histologique. Les coupes ont été examinées et notées selon la gravité de l'UAE sur une échelle semi-quantitative de 0 à 7 comme suit ; (0) pas de destruction tissulaire, (1-2) destruction des segments externes des bâtonnets et des cônes, (3-4) destruction de la couche nucléaire externe, (5-6) destruction de la couche nucléaire interne, et (7) destruction de la couche de cellules ganglionnaires.
3. Immunohistochimie
Les yeux (2 yeux/groupe) ont été recueillis, des coupes au cryostat ont été réalisées (10 pm) et colorées pour l'immunochimie comme décrit antérieurement le jour 19-20 après l'immunisation. On a utilisé un anticorps primaire contre NOS-2 (Beckton Dickinson Biosciences, Transduction laboratories, San José, USA), un anticorps primaire contre NF-KBp65, puis un anticorps secondaire conjugué à Alexa Fluor® 488 (Molecular Probes, Eugène, OR), des un anticorps primaire anti-CD68 de macrosialine (clone EDI) (Serotec, Oxford, GB) puis un anticorps secondaire conjugué à Alexa 564 (rouge). Les coupes ont été observées par photomicroscopie de fluorescence (FXA ; Microphot ; Nikon, Melville, NY) et des micrographies numérisées ont été obtenues avec un appareil photographique numérique (Spot ; BFI Optilas, Evry, France).
IV. Evaluation de la réponse immunitaire
1. Hypersensibilité de type retardé
La HTR a été estimée par un test auriculaire mesurant la réponse anti-S-Ag spécifique 18 jours après l'immunisation. Des rats ont été sensibilisés avec 10 pg de S-Ag dans l'oreille droite et avec de la solution salée dans l'oreille gauche. Le gonflement auriculaire spécifique a été mesuré 24 et 48 h après la sensibilisation et la différence d'épaisseur (mm) entre les deux oreilles a été calculée.
2. Isolement d'ARN, PCR à transcription inverse dans les ganglions lymphatiques et dans les cellules oculaires
L'ARN total a été isolé à partir de ganglions lymphatiques drainant le site d'immunisation, 19-20 jours après l'immunisation, et à partir de cellules recueillies après centrifugation d'humeur aqueuse/corps vitré provenant d'yeux de chaque groupe.
V. Analyse statistique
Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart type de la moyenne (ETM). Les évaluations cliniques, histologiques et de HTR de l'UAE sont comparés au moyen du test U de Mann-Whitney non paramétrique puis par le test de comparaisons multiples de Bonferroni. Une valeur p ajustée par les tests de comparaison multiple a été calculée dans chaque expérience.
VI. Résultats
1. Pharmacocinétique du Trespérimus dans les tissus oculaires et le plasma après des injections intravitréennes
Les concentrations de Trespérimus dans le plasma, l'humeur aqueuse/vitré et la rétine/choroïde après des injections intravitréennes de Trespérimus à des rats Lewis sont indiquées dans le tableau 1 :
Tableau 1 : Effet d'une injection intravitréenne de Trespérimus sur l'histopathologie de l'UAE le jour 19-20 après immunisation avec S-Ag (M ± ETM)
Concentrations du Trespérimus Rats immunisés
(N = 6) (3 injections IVT)
Temps après l'injection 1 h 3 jours 8 jours humeur Moyenne 270 2,2 1,8 aqueuse/vitré ETM 61 1 1
(μΜ)
rétine/choroïde Moyenne 155 36 11
( M) ETM 25 4 4 plasma Moyenne 0,11 blq blq
(μΜ) ETM 0,03 _ -
Blq : en dessous de la limite inférieure de quantification (6 ng/mL)
Après injection intravitréenne de Trespérimus, les niveaux plasmatiques de l'échantillon testé ont été quantifiés seulement au premier point temporel 1 h après l'injection, avec de faibles concentrations moyennes voisines de 0,1 μΜ (environ 40 ng/mL). Les tissus oculaires ont été hautement exposés au Trespérimus, avec des teneurs significatives (> 10 μΜ) dans la rétine/choroïde 8 jours après l'injection,
2. L'injection intravitréenne de Trespérimus est un traitement efficace de l'UAE ; observation clinique
Le traitement avec le Trespérimus a conduit à une réduction significative de la gravité clinique de l'UAE à partir du jour 13 après l'immunisation, par comparaison avec des rats qui ont reçu des injections de solution salée (jour 13 ; * p < 0,02 ; jours 14 à 19 ; *** p < 0,0006), ou par comparaison avec des rats qui n'ont reçu aucun traitement intraoculaire Cour 12 ; * p < 0,02 ; jour 19 : *** p < 0,0006) (figure 1). La gravité de la maladie a été réduite significativement par le traitement jusqu'à 19 jours après l'immunisation, ce qui indique que la thérapie intraoculaire est très efficace.
3. L'injection intraoculaire de Trespérimus protège la rétine contre la destruction et module l'activité des macrophages
Des rats traités avec trois injections de Trespérimus ont présenté une UAE de très bas degré au niveau histologique (degré moyen de gravité de l'UAE ; 1,45 ± 0,26, n = 10, p = 0,007) par comparaison avec les lésions observées chez les rats témoins ayant subi une injection de solution salée (degré moyen de gravité de l'UAE : 3,25 ± 0,5, n = 10) (figure 2A) et par comparaison avec des rats qui n'ont reçu aucun traitement intraoculaire (degré moyen de gravité de l'UAE ; 3,15 ± 0,6, n = 10, p = 0,08). Le score histopathologique moyen de l'UAE a été basé sur les altérations rétiniennes.
L'examen histopathologique de rétines provenant de rats témoins ayant subi une injection de solution salée (figure 2B) a révélé une uvéite postérieure grave avec une destruction importante de la couche cellulaire de photorécepteurs (a, b, astérisques blancs), une infiltration de l'espace subrétinien par des cellules inflammatoires (flèche) et des exsudats de fibrine dans le corps vitré (tête de flèche). De nombreuses cellules inflammatoires étaient présentes dans le corps vitré au niveau de la papille optique (flèche) (c). Au contraire, chez les rats traités avec le Trespérimus (figure 2C), la couche cellulaire de photorécepteurs était largement épargnée par la destruction (e, astérisques blancs) ou présentait une perte partielle des segments externes (d, flèche) avec infiltration de la choroïde par des cellules inflammatoires (d, tête de flèche). Aucune inflammation n'était visible au niveau de la papille optique (f, flèche).
Comme le montre l'immunocoloration chez des rats témoins ayant subi une injection de solution salée, de nombreux macrophages et lymphocytes positifs pour EDI présentent une expression cytoplasmique et nucléaire de NF-kappaBp65, principalement dans 1e corps vitré où de nombreuses infiltrations par des cellules inflammatoires sont visibles. Au contraire, chez les rats traités avec le Trespérimus, une faible infiltration par des cellules inflammatoires est visible dans les tissus oculaires, avec un nombre réduit de cellules infiltrantes dans les tissus et les milieux oculaires et montrant seulement une expression cytoplasmique de NF- kappaBp65.
4. L'injection întravitréenne de Trespérimus n'a pas d'effet sur la réponse immunitaire systémique in vivo
a. Cytokines dans les ganglions lymphatiques inguinaux ( T-PC )
Aucune différence dans les niveaux de TNF-alpha, IL-2, IFN- gamma, IL-17 n'a été détectée dans les ganglions lymphatiques inguinaux provenant de rats traités et de rats témoins, ce qui indique que le traitement n'a pas d'effet systémique.
b. Hypersensibilité de type retardé
La HTR a été estimée par un test auriculaire mesurant la réponse anti-S-Ag spécifique. Les rats traités avec le Trespérimus n'ont pas présenté de réduction significative du gonflement auriculaire à 24 h et 48 h par comparaison avec les rats témoins qui ont reçu une injection IVT de solution salée (p = 0,8 ; p = 0,4 respectivement), ce qui montre que la réactivité des cellules T à l'égard de S-Ag in vivo n'est pas réduite par le traitement avec le Trespérimus et ce qui confirme que le traitement n'a pas d'effet systémique (figure 3).
En conclusion l'injection de Trespérimus dans le pôle postérieur de l'œil de rat au niveau de la zone postérieure du corps ci lia ire a permis sa diffusion dans les segments antérieur et postérieur de l'œil comme l'a démontré son efficacité sur l'inflammation oculaire antérieure et postérieure dans l'UAE. De plus, des taux faibles (< 90 ng/mL) de Trespérimus ont été trouvés dans le plasma, sans effet sur la réponse immunitaire systémique. En fait, l'effet du Trespérimus a été limité à l'œil, ce qui confirme qu'il ne s'est produit aucune diffusion efficace dans la circulation générale.
Nous avons montré que trois injections intravitréennes de Trespérimus réalisées après une immunisation avec S-Âg pendant la phase afférente de la maladie (jours 6, 9, 12) sont efficaces pour réduire l'inflammation oculaire clinique et préservent les photorécepteurs rétiniens.
Pour examiner le niveau d'action du Trespérimus, l'hypersensibilité de type retardé (HTR) à S-Âg, telle qu'elle est estimée par un test auriculaire, n'a pas été différente chez les rats témoins et les rats traités (figure 3), ce qui suggère que le traitement n'a pas modifié la réactivité des cellules T systémique à S-Âg.
De plus, nous avons montré que le traitement oculaire n'a pas d'effet sur la réponse immunitaire systémique. En effet, dans les ganglions lymphatiques inguinaux drainant le site d'immunisation, le niveau de cytokines inflammatoires comme TNF-alpha, et de cytokines produites par les lymphocytes T comme IL-2, IFN-gamma (interféron-gamma), IL- 17 n'a pas été modifié par le traitement avec le Trespérimus.
Le modèle d'UIE
Le modèle d'uvéite induite par endotoxine est un modèle d'inflammation oculaire aiguë chez le rat ou la souris, induite par injection systémique ou locale de lipopolysaccharide (LPS) de bactéries à gram négative. C'est un modèle pour les uvéites antérieures aiguës humaines qui sont souvent associées à des désordres systémiques, comme au cours de la maladie de Crohn, la spondylathrite ankylosante et le syndrome de Blau.
L'UIE est caractérisée par la rupture de la barrière hémato-oculaire, l'infiltration intraoculaire par des cellules inflammatoires dans les segments antérieurs et postérieurs de l'œil et par la production de NO, de cytokines et de chimiokines inflammatoires par des cellules inflammatoires infiltrées, principalement des macrophages, des leucocytes polymorphonucléaires (PMNs) et par des cellules oculaires de l'endothélium vasculaire, de l'épithélium pigmentaire rétinien, de la microglie et des cellules de Mûller. Bien que cette uvéite inflammatoire soit spontanément résolutive en quelques jours mettant en jeu le système immunitaire inné, elle est à l'origine de lésions importantes des tissus oculaires.
Nous avons étudié l'effet du Tresperimus dans ce modèle d'UIE chez le rat après instillations de gouttes à différentes concentrations.
Matériels et méthodes
1. Induction de l'uvéite à l'endotoxine
Des rats Lewis femelles de huit semaines (R. Janvier, Le Genest Saint Isie, France) pesant environ 250g ont été utilisés dans cette étude et ont reçus une injection, dans le coussinet d'une de leur patte, de 200pg de LPS de Salmonella typhimurium (Sigma) dans 0,1 ml d'eau stérile.
2. Protocole des traitements
Le Trespérimus a été administré par instillations de gouttes à 5% (m/m) et 0,5% (m/m) dans une solution aqueuse d'hyaluronate sodique à 0,1% (m/m), 2 fois par jour dans chaque œil et pendant 4 jours.
Le 3ème jour le LPS a été administré dans le coussinet d'une patte et 24h plus tard le Trespérimus a été administré une dernière fois. Les animaux ont ensuite été examinés avec une lampe à fente, leur sang a été collecté puis ils ont été sacrifiés. Les yeux ont ensuite été prélevés pour analyse.
3. Examen clinique
Les animaux ont été examinés avec une lampe à fente 24h après l'administration du LPS correspondant au maximum de l'inflammation clinique de l'uvéite. Llntensité de l'inflammation a été notée selon une échelle de 1 à 6 pour chaque il comme décrit antérieurement (De Kozak Y. et al., J. Neuroimmunol 1998 ;86(2) ; 171-181) et comme suit: 0, pas de signe d'inflammation; 1, inflammation discrète de l'iris et de la conjonctive; 2, dilatation de l'iris et des vaisseaux de la conjonctive; 3, hyperémie dans l'iris associée à l'effet Tyndall dans la chambre antérieure; 4-6, signes similaires au stade 3 mais avec en plus présence d'une synéchie, ou d'une exsudation fibrinoïde ou d'un hypopion. L'UIE clinique est considérée comme positive si le grade est égal ou supérieur à 1.
4. Histopathologie et décompte des cellules inflammatoires Après l'euthanasie des animaux (soit 24h après l'injection de LPS), les yeux des rats ont été énucléés puis fixés et traités. Des coupes dans la paraffine ont été pratiquées pour l'évaluation histologique. Les cellules inflammatoires infiltrées ont été comptées sur les coupes réalisées au niveau du segment antérieur de l'œil (5 sections par œil) après coloration avec de l'hématoxyline-éosine-safran pour l'évaluation histologique. Le nombre de cellules a été exprimé sous la sous forme de moyenne ± ETM du nombre total de cellules dans chaque œil et pour chaque animal comme décrit précédemment (de Kozak Y. et al, IOVS 1999 Sep ;40( 10) :2275-82).
5. Analyse statistique
Les résultats sont exprimés sous la forme de la moyenne ± ETM et comparés au moyen du test U de Mann-Whitney. P<0,05 est considéré comme significativement pertinent.
6. Résultats
L'effet du Tresperimus a été évalué dans le modèle d'UIE chez le rat. L'inflammation oculaire aiguë et bilatérale induite par injection de LPS est caractérisée par l'infiltration de cellules inflammatoires 4h après l'injection. Elle est maximale entre 18 et 24 heures et disparait après 4 jours.
Le Trespérimus a été administré par instillations 2 fois par jour pendant 4 jours à 5% (m/m) et 0,5% (m/m) dans une solution aqueuse d'hyaluronate sodique à 0,1%. Les résultats (figure 5) sont exprimés en scores cliniques ± ETM pour chaque œil.
En comparaison avec les animaux témoins, le traitement avec le Trespérimus a permis d'obtenir une réduction significative de l'inflammation oculaire (respectivement p= 0,001 et p= 0,0001).
Pour confirmer l'effet clinique observé avec le Tresperimus le nombre total de cellules présentes dans la chambre antérieure de l'œil a été compté et comme illustré en figure 6, il apparaît clairement que l'infiltration des cellules inflammatoires a été réduite significativement (nombre moyen de cellules/coupe: 7,7 ± 0,9, n= 13 coupes, p=0,003 et 7,3 ± 0,7, n=13 coupes, p=0,0004) comparativement aux animaux témoins (moyenne du nombre de cellules/section: 12,2 ± 0,8, n= 17 sections).
Ces résultats illustrent le fait que l'instillation de Trespérimus dans l'œil d'un rat a permis d'obtenir des effets bénéfiques avec réduction de l'inflammation oculaire dans un modèle d'uvéite induite par endotoxine et suggèrent que le Trespérimus permet de traiter les signes cliniques de l'uvéite par instillations de gouttes oculaires et par extension des conjonctivites sévères puisqu'à ce jour ces pathoiogies sont traitées essentiellement par les corticoïdes et des immunosuppresseurs actifs dans ces 2 modèles pharmacologiques animaux.
Exemple 2 : Le syndrome de l'œil sec
Les thérapies actuelles sont essentiellement palliatives et visent à remplacer ou conserver les larmes d'un sujet par l'application fréquente de larmes artificielles. La sécheresse oculaire grave, caractérisée par une lésion cornéenne grave avec un risque accru d'infections secondaires peut être traitée occasionnellement par une thérapie anti-inflammatoire.
Plusieurs modèles animaux ont été développés pour refléter les différents mécanismes pathophysiologiques impliqués dans la KCS. L'effet du Trespérimus a été étudié dans un modèle de souris de sécheresse oculaire utilisant l'inhibition pharmacologique de la production de larmes qui induit des changements épithéliaux de la surface oculaire ressemblant à la KCS humaine, et qui sont exacerbés par un stress environnemental desséchant.
La sécheresse oculaire est induite chez des souris par la combinaison de Scopolamine, qui bloque les récepteurs cholinergiques muscariniques des glandes lacrymales et par la mise en place des souris dans une hotte soufflante qui réduit le degré d'humidité et augmente le flux d'air. La production et le volume des larmes aqueuses, la clairance des larmes et la fonction de la barrière cornéenne sont évalués avant le traitement, puis deux fois par semaine après le traitement. Les résultats sont comparés entre les groupes de souris témoins non traitées et les groupes de souris placées dans la hotte soufflante et traitées avec l'agent anticholinergique Scopolamine traitées ou pas avec le Trespérimus.
Ce modèle de sécheresse oculaire induite expérimentalement conduit à des changements épithéliaux de la surface oculaire, avec une coloration de la cornée par la fluorescéine, une fonction de la barrière épithéliale cornéenne modifiée, une densité réduite des cellules caliciformes conjonctivales et une prolifération épithéliale conjonctivale accrue. Ce modèle animal reproduit les composantes de déficience en eau et évaporative du syndrome de l'œil sec chez l'homme. I. Matériels et méthodes
1. Induction de la sécheresse oculaire avec blocage des récepteurs cholinergiques et dessiccation avec une hotte soufflante
Des souris 129SV/CD-1 mâles ont été utilisées dans cette étude et ont reçu trois injections sous-cutanées de 200μΙ de scopolamine à 2,5 mg/ml dans une solution saline pendant 21 jours. Les souris ont été placées dans une hotte soufflante (humidité < 50 %) pendant toute la durée de l'expérience.
2. Production de larmes aqueuses
La production de larmes (PRIT) a été mesurée avec des fils de coton imprégnés de rouge de phénol (Zone-quick; Menicon, Japon) appliqués à la surface oculaire dans le canthus latéral pendant 60 secondes. Le mouillage du fil a été mesuré en millimètres, au moyen de l'échelle sur le fil de coton.
3. Stabilité du film lacrymal
Le test de stabilité du film lacrimal (TBUT) est utilisé pour évaluer le degré d'ceil sec en mesurant le temps écoulé entre un clignement complet de l'œil et le développement d'un premier signe de tâche sèche sur le film lacrymal.
Un microlitre de fluorescéine sodique à 0,1 % a été appliqué au niveau du sac conjonctival et le temps (en secondes) d'apparition d'une tâche sèche a été mesuré après trois clignements de l'œil. 90 secondes plus tard, les dommages de l'épithélium cornéen ont été mesurés et photographiés à l'aide d'un biomicroscope à lampe à fente au moyen d'une lumière bleu cobalt. Un score clinique a été établi selon l'échelle oculaire de Draize.
II. Résultats
Le volume de larmes a été mesuré pendant trois semaines chez des souris C57B16 en utilisant le test du rouge de phénol. Les résultats reportés sur la figure 7 sont exprimés en volume moyen de larmes (en millimètre) ± l'écart type de la moyenne (ETM). Ils montrent que le volume de larmes a diminué dramatiquement deux jours après le début des injections sous-cutanées de Scopolamine. Des instillations de Trespérimus, deux fois par jour à la dose de 1% (m/m) en solution dans une solution d'hyaluronate sodique à 0,1% dans une solution saline aqueuse (0,6% de NaCI) ont fortement amélioré le volume de larmes du jour 6 au jour 20 par comparaison aux souris traitées par le véhicule composé d'hyaluronate sodique à 0,1% en solution dans une solution saline aqueuse (0,9% NaCI) (analyse de la variance à deux facteurs réalisée par comparaisons multiples de Bonferroni, p<0,0001). En revanche, des instillations de Dexaméthasone à 0,1%, deux fois par jour, n'ont montré aucun effet significatif sur le volume de larmes.
La figure 8 montre que le traitement à la Scopolamine et une exposition à l'air desséché ont conduit à une diminution de la stabilité du film lacrymal comme mesuré par le test du temps de rupture du film lacrymal avec une importante baisse sur les 3 premiers jours puis une diminution progressive jusqu'à 21 jours. L'administration de Trespérimus par instillation à 1%, deux fois par jour, a amélioré significativement la stabilité du film lacrymal du jour 7 au jour 21 par comparaison aux souris traitées par le véhicule composé d'hyaluronate sodique à 0,1% en solution dans une solution saline aqueuse (0,9% NaCI) (p< 0,0001) ; en revanche la Dexaméthasone a seulement montré un effet modeste qui ne s'est pas poursuivi au jour 21.
En conclusion ces résultats ont montré qu'une application topique de Trespérimus a des effets bénéfiques sur le syndrome de l'œil sec en augmentant la sécrétion des larmes et en augmentant la stabilité du film lacrymal, deux paramètres cliniques caractéristiques de l'œil sec. Ces résultats démontrent l'intérêt du Trespérimus en instillations pour traiter les signes cliniques de l'œil sec.
Exemple 3 ; La rétinopathie diabétique
La photocoagulation au laser est toujours le traitement de référence, et la vitrectomie est utilisée en cas de décollement de la rétine. Toutefois, une proportion importante de sujets est réfractaire à la photocoagulation au laser, et avec le temps, l'atrophie épithéliale pigmentaire de la rétine associée aux cicatrices du laser progresse parfois sous la fovéa entraînant une diminution de la vision. Le Ranibizumab a été approuvé récemment pour le traitement de l'œdème maculaire mais d'autres anti-VEGF (Bevamizumab) sont utilisés hors Autorisation de Mise sur le Marché. Un traitement combiné avec des agents anti-VEGF pourrait retarder le traitement au laser.
Les corticostéroïdes permettent d'observer une régression de l'œdème maculaîre et de la néovascularisation. Cependant, les effets indésirables sont fréquents (hypertension oculaire, cataracte, endophtalmie) et de plus, l'efficacité à long terme dans l'œdème maculaîre diabétique n'a pas été prouvée par rapport au traitement au laser.
L'effet du Trespérimus a été évalué chez le rat sur un modèle de rétinopathie diabétique couramment décrit, le modèle de diabète de type I induit par la Streptozotocine. Ce modèle de rat imite la maladie humaine en induisant une hyperglycémie liée à la destruction des cellules bêta du pancréas, cellules qui régulent normalement la glycémie en produisant une hormone, l'insuline. Bien qu'il y ait des changements vasculaires dans ce modèle, la vasculopathie ne progresse pas vers la néovascularisation comme on l'observe chez l'homme.
La Streptozotocine est administrée par injection intraveineuse à des rats à jeun. Une hyperglycémie se développe rapidement dans les cinq jours qui suivent le traitement par la Streptozotocine. Trois semaines après l'induction du diabète, les niveaux de VEGF et des biomarqueurs de l'inflammation sont mesurés dans le vitré. Les mesures par électrorétinogramme (ERG) des ondes a et b et des potentiels oscillatoires sont analysés pour contrôler les lésions des photorécepteurs. Les résultats sont comparés entre groupe témoin de rats non diabétiques et groupe de rats diabétiques, traités avec le Trespérimus ou un véhicule.
Matériels et méthodes
I. Induction du diabète par la Streptozotocine
Le diabète a été induit chez des rats Sprague Dawley (SD) rats (200 g) après un jeun d'une nuit par une seule injection intraveineuse de 60 mg/kg de Streptozotocine (Sigma) dans un tampon citrate de sodium, pH 4.5. Les animau témoins non-diabétiques ont reçu du tampon citrate uniquement. Cinq jours plus tard, les animaux ayant une glycémie supérieure à 5 g/1 ont été considérés diabétiques.
1. Marqueurs de l'inflammation
Trois semaines après l'induction du diabète par la Streptozotocine, les yeux des rats ont été excisés et les vitrés isolés. Plusieurs biomarqueurs de l'inflammation sont mesurés en utilisant un kit de dosage Luminex en multiplex (VEGF, MCP-1, ICAM-1, IL-6, IL-lbeta; Procarta) pour le rat selon les recommandations du fabricant.
2. Electrorétinographie (ERG)
Les rats diabétiques ont été acclimatés à l'obscurité pendant une nuit avant l'examen ERG à l'aide d'un électrorétinographe de la société LKC. Une série de réponses en fonction de l'intensité adaptée à l'obscurité a été enregistrée à l'aide d'une série de flash de type plein champ (Ganzfeld) afin d'obtenir une réponse rétinienne par l'intermédiaire des bâtonnets. L'amplitude et la latence des composants individuels d'ondoiement de l'ERG (ondes a et b, pseudo-oscillations), ainsi que les potentiels oscillatoires ont été mesurés de manière conventionnelle.
II. Résultats
L'effet du Trespérimus a été évalué dans le modèle expérimental de rétinopathie diabétique induite par la Streptozotocine chez des rats SD. La Streptozotocine a détruit les cellules bêta du pancréas et induit une hyperglycémie, imitant ainsi la maladie du diabète de type 1. La rétine des animaux diabétiques a montré des anomalies biochimiques et électrophysiologiques corrélées à l'inflammation.
Des instillations de Trespérimus administrées deux fois par jour pendant deux semaines à la dose de 0,2 % (m/m) dans une solution d'hyaluronate sodique à 0,1 % dans une solution saline aqueuse (0,9% NaCI) n'ont modifié ni la glycémie ni le poids corporel comparé aux rats diabétiques traités par le véhicule composé d'hyaluronate sodique à 0,1% dans une solution saline aqueuse (0,9% NaCI).
Les niveaux de cytokine et de chimiokine ont été évalués sur des échantillons de vitré en utilisant la technologie du dosage Luminex en multiplex. Les résultats reportés sur la figure 9 montrent que les niveaux de MCP-1 et IL-6 dans le milieu vitréen ont dramatiquement augmenté trois semaines après induction du diabète par la Streptozotocine. Le traitement sur deux semaines par des instillations de Trespérimus à la dose de 0,2%, deux fois par jour et dans les deux yeu du jour 7 au jour 21 a réduit significativement les niveaux de MCP-1 et IL-6 dans le vitré des rats diabétiques, suggérant un effet inhibiteur sur le recrutement des monocytes au cours du processus inflammatoire (analyse de variance à un facteur réalisée par comparaisons multiples de Dunnett, p<0,001). Trois semaines après le traitement par la Streptozotocine, l'examen ERG a révélé que les rats diabétiques montraient après adaptation à l'obscurité, une diminution de l'amplitude des ondes a et b, une anomalie des potentiels oscillatoires, et une forte détérioration de l'amplitude des pseudo-oscillations ( licker') (figure 10) quelle que soit l'intensité du flash lumineux. Les cônes et les bâtonnets sont les deux types de photorécepteurs atteints par l'hyperglycémie. La figure 10 montre qu'après deux semaines de traitement par des administrations deux fois par jour d'instillation oculaire de Trespérimus à 0,2%, le Trespérimus a amélioré significativement l'amplitude des pseudo-oscillations comparé au lot témoin (rats diabétiques traités par le véhicule) et aussi a amélioré les amplitudes des ondes a et b et des potentiels oscillatoires, suggérant un effet neuroprotecteur des fonctions rétiniennes et en particulier des cônes et bâtonnets chez les rats diabétiques.
En conclusion ces résultats montrent donc que l'administration topique de Trespérimus a des effets bénéfiques sur la rétine des rats diabétiques en diminuant le niveau d'inflammation au niveau de la rétine et en protégeant les fonctions neuro-rétinienne et en particulier les cônes et les bâtonnets de l'hyperglycémie. Ces résultats démontrent donc l'intérêt du Trespérimus en instillations pour traiter la rétinopathie diabétique chez l'homme et prévenir la dégradation de la vision des sujets diabétiques.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de formule (I) :
dans laquelle :
- n est égal à 6 ou 8,
- A est une liaison, un groupe CH2, un groupe CH(OH), un groupe CHF, un groupe CH(OCH3), un groupe CH2NH ou un groupe CH20,
- R est H ou CH3/
ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci,
pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires.
2. Composé selon la revendication 1 qui est le N-[4-[(3- aminopropyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
3. Composé selon la revendication 2 qui est le tris-chlorhydrate de N-[4-[(3-aminopropyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle.
4. Composé selon la revendication 1 qui est le N-[4-[(3- aminobutyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
5. Composé selon la revendication 4 qui est le tétra-chlorhydrate de N-[4-[(3-aminobutyl)amino]butyl]-carbamate de 2-[[6- [(aminoiminométhyl)amino]hexyl]amino]-2-oxoéthyle.
6. Composé ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci selon l'une quelconque des revendications i à 5 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention de l'uvéite non infectieuse.
7. Composé ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention de la conjonctivite sévère telle que la kérato-conjonctivite vernale,
8. Composé ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention du syndrome de l'œil sec.
9. Composé ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention de la rétinopathie diabétique.
10. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, qui est administré sous la forme de gouttes oculaires.
11. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, qui est administré sous la forme d'injection ou de système implantable.
12. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, qui est administré en association avec un anti-VEGF, un anti-T F, un corticostéroïde, un agent anti-inflammatoire non stéroïdien, un antibiotique ou un immunosuppresseur.
13. Formulation topique aqueuse qui comprend en tant que seule substance active un composé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, et un ou plusieurs excipient(s) pharmaceutiquement acceptable(s) approprié(s) à l'administration topique, et dont la concentration en substance active est de 0,001 % à 1,5 %, de préférence de 0,01% à 1,5%.
14. Formulation topique aqueuse selon la revendication 13 qui se présente sous la forme de gouttes oculaires de pH sensiblement neutre.
15. Formulation topique aqueuse selon la revendication 14 qui comprend de l'acide hyaluronique ou un de ses dérivés et/ou du chlorure de sodium ou du glycérol.
16. Formulation injectable aqueuse qui comprend en tant que seule substance active un composé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5 et un ou plusieurs excipient(s) pharmaceutiquement acceptable(s) approprié(s) à l'administration oculaire injectable, la concentration en substance active étant de 0,1 μΜ à 100 mM, de préférence de 1 μΜ à 10 mM.
17. Formulation injectable aqueuse selon la revendication 16, qui est une formulation intraoculaire ou périoculaire.
18. Formulation injectable aqueuse selon la revendication 17, qui se présente sous la forme d'une solution injectable intravitréenne de pH sensiblement neutre.
19. Formulation injectable aqueuse selon l'une quelconque des revendications 16 à 18 qui comprend du chlorure de sodium ou du glycérol.
20. Formulation injectable aqueuse selon la revendication 17 qui est un implant oculaire.
21. Utilisation d'un composé de formule (I) tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en particulier le Trespérimus ou l'Anispérimus, dans la préparation d'un médicament utile pour le traitement ou la prévention des maladies inflammatoires oculaires, en particulier de l'uvéite, de la conjonctivite sévère, du syndrome de l'œil sec ou de la rétinopathie diabétique,
22. Méthode de traitement ou de prévention d'une maladie inflammatoire oculaire qui comprend l'administration à un sujet en ayant besoin d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de formule (I) tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
23. Méthode selon la revendication 22, dans laquelle la maladie inflammatoire oculaire est l'uvéite, la conjonctivite sévère, le syndrome de l'œil sec ou la rétinopathie diabétique.
24. Méthode selon la revendication 22 ou la revendication 23, dans laquelle le composé de formule (I), ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, est administré sous la forme de gouttes oculaires.
25. Méthode selon la revendication 22 ou la revendication 23, dans laquelle le composé de formule (I), ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, est administré sous la forme d'injection ou de système implantable.
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